KR20180091930A

KR20180091930A - Cgrp 항체 및 그의 용도

Info

Publication number: KR20180091930A
Application number: KR1020187021437A
Authority: KR
Inventors: 씨윤 차이; 바렛 앨런
Original assignee: 일라이 릴리 앤드 캄파니
Priority date: 2016-01-28
Filing date: 2017-01-20
Publication date: 2018-08-16
Also published as: US20190031748A1; CN108473567A; EA201891196A1; CA3007018A1; WO2017132062A1; BR112018010596A2; MX2018009218A; JP2019501152A; EP3408290A1; AU2017211043A1

Abstract

본 발명은 인간 CGRP에 결합하는 항체, 상기 CGRP 항체를 포함하는 조성물 및 키트, 및 인간 CGRP의 검출을 위한 상기 CGRP 항체의 사용 방법에 관한 것이다.

Description

CGRP 항체 및 그의 용도

본 발명은 칼시토닌 유전자-관련 펩티드 (CGRP)에 결합하는 항체 및 환자 샘플에서 CGRP를 검출하기 위한 키트 및 방법에서의 그의 용도에 관한 것이다.

CGRP는 중추 및 말초 신경계의 신경에 의해 분비된 37개 아미노산 뉴로펩티드이다. 이는 말초 및 중추 신경계 둘 다에서, 감각 신경에 넓게 분포되고, 수많은 상이한 생물학적 활성을 나타낸다. 삼차신경 및 다른 신경 섬유로부터 방출될 때, CGRP는 특이적 세포 표면 수용체에 결합함으로써 그의 생물학적 반응을 매개하는 것으로 생각된다. CGRP의 상승된 수준은 편두통, 군발성 두통 및 골관절염 통증을 포함한 여러 병태에서 역할을 한다.

CGRP에 대한 항체는 관련 기술분야에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 8,298,536은 다수의 항-CGRP 항체를 개시한다. 환자 샘플에서 CGRP의 수준을 측정하는 방법이 또한 관련 기술분야에 알려져 있다. 예를 들어, 케이만 케미칼(Cayman Chemical)®은 다양한 환자 샘플에서 CGRP를 측정할 수 있는 CGRP (인간) 효소 면역검정 (EIA) 키트를 판매한다. 그러나, 환자 샘플에서 낮은 수준의 CGRP를 측정하기 위한 더 높은 감수성을 갖는 항체 및 키트에 대한 필요가 여전히 남아있다.

본 발명의 범주 내의 항체, 키트, 및 방법은 환자 샘플에서 낮은 수준의 CGRP를 검출하기 위한 높은 감수성의 목적한 특징을 보유한다. 본 발명은 인간 CGRP (알파 및 베타)에 결합하고 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 2의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 4의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 5의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 항체를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (LCVR), 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열에 의해 주어진 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하는, 인간 CGRP에 결합하는 항체를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열에 의해 주어진 경쇄 (LC), 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열에 의해 주어진 중쇄 (HC)를 포함하는, 인간 CGRP에 결합하는 항체를 제공한다. 보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 각각의 LC가 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 2개의 LC, 및 각각의 HC가 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 2개의 HC를 포함하는, 인간 CGRP에 결합하는 항체를 제공한다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 2의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 4의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 5의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 인간 CGRP에 결합하는 항체를 포함하는 키트를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (LCVR), 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열에 의해 주어진 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하는, 인간 CGRP에 결합하는 항체를 포함하는 키트를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열에 의해 주어진 경쇄 (LC), 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열에 의해 주어진 중쇄 (HC)를 포함하는, 인간 CGRP에 결합하는 항체를 포함하는 키트를 제공한다. 보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 각각의 LC가 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 2개의 LC, 및 각각의 HC가 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 2개의 HC를 포함하는, 인간 CGRP에 결합하는 항체를 포함하는 키트를 제공한다.

추가 실시양태에서, 키트는 각각의 LC가 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 2개의 LC, 및 각각의 HC가 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 2개의 HC를 포함하는, 인간 CGRP에 결합하는 항체, 및 제2 항-CGRP 항체를 포함한다. 보다 특히, 제2 항-CGRP 항체는 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 13의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 14의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 16의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 17의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함한다. 보다 특정한 실시양태에서, 제2 항-CGRP 항체는 경쇄 (LC) 및 중쇄 (HC)를 포함하며, 여기서 LC는 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HC는 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 제2 항-CGRP 항체는 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 19의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 20의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 22의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 23의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함한다. 보다 특정한 실시양태에서, 제2 항-CGRP 항체는 경쇄 (LC) 및 중쇄 (HC)를 포함하며, 여기서 LC는 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HC는 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 환자 샘플을 본 발명의 항체와 접촉시키는 것을 포함하는, 환자 샘플 밀리리터 (mL)당 0.1 피코그램 (pg) 초과의 인간 CGRP를 검출하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 환자 샘플을 본 발명의 항체와 접촉시키는 것을 포함하는, 환자 샘플에서 0.01 - 2 pg/ml의 인간 CGRP를 검출하는 방법을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 환자 샘플을 본 발명의 항체와 접촉시키는 것을 포함하는, 환자 샘플에서 0.01 - 0.5 pg/ml의 인간 CGRP를 검출하는 방법을 제공한다. 특정한 실시양태에서 본 발명은 환자 샘플을 본 발명의 항체와 접촉시키는 것을 포함하는, 환자 샘플에서 0.02 - 0.2 pg/ml의 인간 CGRP를 검출하는 방법을 제공한다. 보다 특정한 실시양태에서 본 발명은 환자 샘플을 본 발명의 항체와 접촉시키는 것을 포함하는, 환자 샘플에서 0.02 pg/ml의 인간 CGRP를 검출하는 방법을 제공한다. 특정한 실시양태에서, 환자 샘플은 EDTA 혈장, 헤파린 혈장, 혈청, CSF, 또는 활액이다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 방법은 ELISA로 이루어진다.

본 발명은 또한 환자 샘플을 제1 항-CGRP 항체와 접촉시키고, 항체에 결합된 CGRP의 양을 2개의 LC 및 2개의 HC를 포함하는 항체로 검출하는 것을 포함하며, 여기서 각각의 LC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열이고, 각각의 HC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 10의 아미노산 서열인, 환자 샘플에서 인간 CGRP를 검출하는 방법을 제공한다. 특정한 실시양태에서, 환자 샘플은 EDTA 혈장, 헤파린 혈장, 혈청, CSF, 또는 활액이다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 방법은 ELISA로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 제1 항-CGRP 항체는 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 13의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 14의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 16의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 17의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 제1 항-CGRP 항체는 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 19의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 20의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 22의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 23의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 환자 샘플을 2개의 LC 및 2개의 HC를 포함하는 항체와 접촉시키고, 항체에 결합된 CGRP의 양을 제2 항-CGRP 항체로 검출하는 것을 포함하며, 여기서 각각의 LC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열이고, 각각의 HC의 아미노산 서열은 서열식별번호: 10의 아미노산 서열인, 환자 샘플에서 인간 CGRP를 검출하는 방법을 제공한다. 특정한 실시양태에서, 환자 샘플은 EDTA 혈장, 헤파린 혈장, 혈청, CSF, 또는 활액이다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 방법은 ELISA로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 제2 항-CGRP 항체는 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 13의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 14의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 16의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 17의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 제2 항-CGRP 항체는 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 19의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 20의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 22의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 23의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 인간 샘플에서 CGRP의 양을 측정하는데 사용하기 위한, 인간 CGRP에 결합하고 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 2의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 4의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 5의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 인간 샘플에서 CGRP의 양을 측정하는데 사용하기 위한, 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (LCVR), 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열에 의해 주어진 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하는, 인간 CGRP에 결합하는 항체를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 샘플에서 CGRP의 양을 측정하는데 사용하기 위한, 서열식별번호: 9의 아미노산 서열에 의해 주어진 경쇄 (LC), 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열에 의해 주어진 중쇄 (HC)를 포함하는, 인간 CGRP에 결합하는 항체를 제공한다. 보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 인간 샘플에서 CGRP의 양을 측정하는데 사용하기 위한, 각각의 LC가 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 2개의 LC, 및 각각의 HC가 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 2개의 HC를 포함하는, 인간 CGRP에 결합하는 항체를 제공한다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 환자 샘플에서 CGRP를 측정하기 위한 검출 시약의 제조를 위한, 인간 CGRP에 결합하고 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 2의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 4의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 5의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 환자 샘플에서 CGRP를 측정하기 위한 검출 시약의 제조를 위한, 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (LCVR), 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열에 의해 주어진 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하는, 인간 CGRP에 결합하는 항체를 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 환자 샘플에서 CGRP를 측정하기 위한 검출 시약의 제조를 위한, 서열식별번호: 9의 아미노산 서열에 의해 주어진 경쇄 (LC), 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열에 의해 주어진 중쇄 (HC)를 포함하는, 인간 CGRP에 결합하는 항체를 제공한다. 보다 특정한 실시양태에서, 본 발명은 환자 샘플에서 CGRP를 측정하기 위한 검출 시약의 제조를 위한, 각각의 LC가 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 2개의 LC, 및 각각의 HC가 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 2개의 HC를 포함하는, 인간 CGRP에 결합하는 항체를 제공한다.

본 발명의 항체는 본원에 "CGRP"로서 지칭된, 알파 및 베타 CGRP 둘 다에 결합한다. 본원에 사용된 바와 같이, "항체"는 디술피드 결합에 의해 상호연결된 2개의 중쇄 (HC) 및 2개의 경쇄 (LC)를 포함하는 이뮤노글로불린 분자이다. 각각의 LC 및 HC의 아미노 말단 부분은 그 안에 함유된 상보성 결정 영역 (CDR)을 통한 항원 인식을 담당하는 가변 영역을 포함한다. CDR은 프레임워크 영역 (FR)으로 명명된 보다 보존적인 영역과 산재되어 있다. 가변 영역의 각각에 대해, 중쇄의 가변 영역 (CDRH1, CDRH2 및 CDRH3) 및 경쇄의 가변 영역 (CDRL1, CDRL2, CDRL3) 각각에서 3개의 CDR이 있다. 본 발명의 항체의 LCVR 및 HCVR 영역 내의 CDR 도메인에 대한 아미노산의 할당은 잘 알려진 카바트 넘버링 규정 (Kabat, et al., Ann. NY Acad. Sci. 190:382-93 (1971); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication number 91-3242 (1991)), 및 노쓰 넘버링 규정 (North et al., A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations, Journal of Molecular Biology, 406:228-256 (2011))을 기반으로 한다. 상기 방법에 따라, 본 발명의 CDR이 결정되었다 (표 1).

본원에 사용된 바와 같은 "항체 Fab 단편"은, 무손상 항체의 항원 결합 부위 또는 가변 영역을 포함하는 무손상 항체의 부분으로서 정의되며, 여기서 부분은 무손상 항체의 Fc 영역의 불변 중쇄 도메인 (즉, 항체 이소형에 따라 CH2, CH3, 및 CH4)이 없다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', Fab'- SH, F(ab')₂, 및 Fv 단편; 디아바디; 인접 아미노산 잔기의 하나의 연속된 서열로 이루어진 1차 구조를 갖는 폴리펩티드인 임의의 항체 단편 (본원에서 "단일-쇄 항체 단편" 또는 "단일 쇄 폴리펩티드"로서 지칭됨), 비제한적으로 (1) 단일-쇄 Fv (scFv) 분자 (2) 회합된 중쇄 모이어티가 없는, 단지 1개의 경쇄 가변 도메인만을 함유하는 단일 쇄 폴리펩티드, 또는 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR을 함유하는 그의 단편 및 (3) 회합된 경쇄 모이어티가 없는, 단지 1개의 중쇄 가변 영역만을 함유하는 단일 쇄 폴리펩티드, 또는 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR을 함유하는 그의 단편; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 또는 다가 구조물을 포함한다. 1개 이상의 중쇄를 포함하는 항체 단편에서, 중쇄(들)는 무손상 항체의 비-Fc 영역에서 발견된 임의의 불변 도메인 서열 (예를 들어, CHI)을 함유할 수 있고/거나, 무손상 항체에서 발견된 임의의 힌지 영역 서열을 함유할 수 있다. 바람직하게는, 항체 단편은 Fab 단편이다.

본 발명의 CGRP 면역검정은 경쟁적 또는 샌드위치-검정일 수 있다. 제1 및/또는 제2 항체 중 적어도 하나는 검출가능한 표지로 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다. 항체 또는 항체 단편을 검출가능한 표지로 표지하는 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 알려져 있다. 검출가능한 표지의 예는 비제한적으로 방사성 동위원소, 효소, 형광 물질, 발광 물질, 및 입자를 포함한다. 항체를 검출가능한 표지로 표지하는 것은, 예를 들어, 문헌 [Kono et al. (Kaku-Igaku Gijutu, 13(1), 2, (1993))에 기재된 관련 기술분야의 숙련자에게 알려진 방법에 따라 수행될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "키트"는 검정을 수행하기 위해 요구되는 시약 및 다른 물질의 조합과 관련하여 사용된다. 키트가 1종 이상의 항-인간 CGRP 항체, 바람직하게는 본 발명의 CA11 항체를 포함하는 것이 고려된다. 보다 바람직하게는, 키트는 또한 본 발명의 항체 I 또는 항체 II를 포함한다. 용어 "키트"는 시약 및/또는 다른 물질의 특정한 조합으로 제한되는 것으로 의도되지 않는다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "샌드위치 면역검정" 또는 "샌드위치-검정"은 항원 또는 항원의 부분에 대하여 각각 지시된 한 쌍의 항체 (예를 들어, 항체 'A' 및 항체 'B')를 사용하여 항원을 검출하는 검정이다. 예로서 항체의 쌍의 경우에, 항체 'A'는 공유적으로 또는 비공유적으로 리포터 분자 (예를 들어, 전기화학발광을 가능하게 하는 분자 또는 형광을 가능하게 하는 분자)에 표지된다. 항체 'A'의 비-공유 표지화의 예는 항체 'A'에 결합하는 항체 'A'에 대한 2차 표지된 항체를 허용할 것이다. 항체 'B'는 검정 플레이트, 비드, 자석 또는 전극과 같은 고체 지지체 상에 직접적으로 부착된다 (또는 간접적으로 부착되도록 허용됨). 샌드위치 면역검정에 적합한 검출 기술은 전기화학발광, 화학발광, 및 형광원성 화학발광을 포함한다.

"경쟁적 검정"은 항체에 결합하기 위해 표지된 분석물과 경쟁하는 샘플에서의 비표지된 분석물을 지칭한다. 비결합된 분석물을 세척 제거한 후에, 표지된 분석물의 양이 측정된다.

용어 "접촉하는"은 항체가 항원과 상호작용하거나 또는 그에 결합하도록 하는 방식으로 항체, 및 항원을 함유하는 물질을 함께 합치는 것을 지칭한다. 용어 "검출하다" 또는 "검출하는"은 샘플에서의 검출물의 존재 또는 실재를 비표지된 또는 표지된 항체로 확인하는 것을 지칭한다.

본 발명의 항체는 모노클로날 항체 ("mAb")이다. 모노클로날 항체는, 예를 들어, 하이브리도마 기술, 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 합성 기술, 예를 들어, CDR-그라프팅, 또는 관련 기술분야에 알려진 그러한 또는 다른 기술의 조합에 의해 생성될 수 있다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, 항체, 또는 그를 코딩하는 핵산은 단리된 형태로 제공된다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "단리된"은 천연에서 발견되지 않고 세포 환경에서 발견된 다른 거대분자 종이 없거나 또는 실질적으로 없는 단백질, 펩티드 또는 핵산을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은 "실질적으로 없는"은 관심 단백질, 펩티드 또는 핵산이 존재하는 거대분자 종의 80% 초과 (몰 기준으로), 바람직하게는 90% 초과, 보다 바람직하게는 95% 초과를 구성하는 것을 의미한다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "환자"는 인간 대상체를 지칭한다. 용어 "샘플" 또는 환자 샘플은 상호교환가능하게 사용되고, 본원에 사용된 바와 같이, 환자로부터 수득된 샘플을 지칭한다. 샘플은 임의의 생물학적 조직, 세포 또는 유체의 것일 수 있다. 이러한 샘플은 혈장 (뿐만 아니라 EDTA 또는 헤파린 혈장), 혈청 CSF 또는 활액을 포함한다.

실시예

항체 발현 및 정제

CGRP-반응성 항체 CA11을 HEK293 세포에서 일시적으로 발현하였다. 항체는 마우스 IgG1/카파이고, 단백질 G를 사용하여 정제하였다. 간략하게, mIgG1 CA11의 LC 및 HC 벡터로 형질감염된 세포로부터의 HEK293 상청액 2 L를 형질감염 5일 후에 수확하고, 밤새 냉장실에서 5 mL, 단백질 G 칼럼 (지이 헬쓰케어(GE Healthcare) #17-0405-03) 상에 2 mL/분으로 로딩하였다. 다음 날, 단백질 G 칼럼을 5 칼럼 부피의 PBS, pH 7.4로 5 mL/분으로 세척하였다. 결합된 CA11 항체를 단백질 G 칼럼으로부터 5 mL/분으로 10 mM 시트르산, pH 약 3으로 용리하고, 1/10 부피의 1 M 트리스, pH 8로 즉시 중화시켰다. CA11 항체를 PBS, pH 7.4로 완충제 교환하고, 밀리포어 원심 농축기에서 1.7 mg/mL로 농축시켰다. 항체의 순도를 SDS-PAGE 및 크기-배제 크로마토그래피를 사용하여 평가하였다. N-말단 서열분석 및 MALDI-TOF를 사용하여 CA11 항체의 아이덴티티를 추가로 검증하였다. 비아코어(BIAcore)™ 결합을 수행하여 CGRP 펩티드에 대한 CA11 항체의 결합 친화도를 결정하였다. 예시된 항체의 서열은 표 1에 제공된다.

표 1. 예시된 항체의 아미노산 서열의 서열식별번호.

CGRP Fab 결합 ELISA

ELISA 기반 검정을 사용하여 CA11 및 모 ("C1WT") Fab 분자의 상대적인 친화도를 측정하였다. 간략하게, 96 웰 플레이트를 밤새 4℃에서 PBS 7.4 중 염소 항-인간 카파 (서던 바이오테크(Southern Biotech) #2060-01)를 함유하는 1μg/mL 용액의 50 μL/웰을 첨가하여 코팅하였다. 인큐베이션 후에, 플레이트를 실온에서 1시간 동안 카세인/PBS 용액 (써모-피셔 사이언티픽(Thermo-Fisher Scientific) #37528)의 200 μL/웰로 블로킹하였다. 플레이트를 0.1% 트윈®-20을 함유하는 PBS (PBS-T)로 3회 세척하였다. 50 μL의 각각의 Fab를 2 μg/mL의 농도로 정규화하고, 플레이트 상의 별개의 칼럼에 첨가하고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 50 μL의 N-말단 비오틴 표지된 인간 CGRP (앱젠트(Abgent) 주문형 합성된 펩티드 #355061532)와 함께 인큐베이션하기 전에 PBS-T로 3회 세척하였다. 20 nM에서 시작하여, N-말단 비오틴 표지된 CGRP 펩티드의 3배 연속 희석물을 포획된 Fab에 첨가하고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS-T로 3회 세척하였다. 포획된 Fab로부터의 인간 CGRP 펩티드의 해리를 용이하게 하기 위해, 추가적인 200 μL의 PBS-T를 각각의 웰에 첨가하고 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척하고, PBS-T 중 1:1000 희석된 알칼리성 포스파타제 접합된 뉴트라비딘 (피어스 #31002) 50 μL를 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척하고, 물 중 25배 희석된 알칼리성 포스파타제 기질 50 μL를 첨가하였다. 비색 발색 후에, 플레이트를 몰레큘라 디바이시스 VMax 키네틱 ELISA 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 판독하고, 560 nm에서의 흡광도를 인간 CGRP 농도의 함수로서 기록하고, 마이크로소프트(Microsoft)® 엑셀로 플롯팅하였다.

표 2. ELISA 결합 데이터.

표 2에 제시된 데이터는 CA11이 CGRP에 결합한다는 것을 입증한다.

높은 감수성 CGRP MSD (메소 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery)®) ELISA

메소 스케일 디스커버리® (MSD) 검정을 사용하여 인간 CGRP를 검출하는데 있어서의 CA11 항체의 능력을 결정하였다. 플레이트를, 150 μL/웰의 3% 차단제 A/PBS를 첨가하고, 650 rpm으로 회전 하에 실온에 60분 동안 인큐베이션함으로써 블로킹하였다. 플레이트를 PBS-T로 3회 세척하고, 희석된 비오틴-표지된 항-CGRP 항체 (항체 I; 0.1% 차단제 A/PBS 중 0.1 μg/mL)를 스트렙타비딘 플레이트의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 회전 (650 rpm) 하에 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다.

플레이트를 세척하고, 25 μl의 인간 건강한 공여자 혈청, 헤파린 혈장, CSF, 또는 활액 샘플 (또는 표준물; 알파-CGRP; 바켐(Bachem))을 웰에 첨가하고, 회전 하에 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척하고, 25 μL의 술포-태그 표지된-항-CGRP (CA11) (0.5 μg/mL)를 첨가하고, 플레이트를 회전 하에 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척하고, 150 uL/웰 2X MSD 리드 버퍼 T를 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 MSD 기기에서 판독하고, 미지의 것을 MSD 디스커버리 워크벤치 소프트웨어 또는 등가물 상에서 로그-로그 4-5 PL 피트를 사용하여 계산하였다. 인간 공여자 샘플로부터의 CGRP 농도는 표 2에 요약된다.

각각의 매트릭스에서의 스파이크 및 회수를 결정하기 위해, 상이한 농도의 CGRP 표준물을 인간 EDTA 혈장, 헤파린 혈장, 혈청, CSF 또는 활액에 스파이킹하였다. 각각의 매트릭스에서의 CGRP 회수는 표 3에 요약된다.

표 2. 건강한 공여자에서의 CGRP 수준의 요약.

표 2에서의 데이터는 CA11 항체로의 CGRP MSD 검정이 건강한 공여자에서 CGRP를 검출하였다는 것을 입증한다.

표 3. CGRP의 스파이크 및 회수

표 3에서의 데이터는 CA11 항체로의 CGRP MSD 검정이 인간 EDTA 혈장, 혈청, 헤파린, CSF, 및 활액에서 CGRP를 검출하였다는 것을 입증한다.

퀀테릭스(Quanterix)™ 시모아(Simoa)™ 검정

비드 (0.5 mg/ml)를 퀀테릭스™ 프로토콜에 따라 항체 II에 접합하였다. 비드 (5백만개 비드/mL)의 10 ml 용액, 비오티닐화 CA11 항체 (0.1 μg/mL)의 10 mL 용액, 및 스트렙타비딘-베타-갈락토시다제 (SBG; 150 pM)의 10 mL 용액을 제조하고, 별개의 15 mL 병에 옮겼다. 비드, CA11 항체, 보정기, SBG, 및 공급된 레조루핀-베타-D 갈락토피라노시드 RGP 시약을 시모아™ HD-1 분석기 사용자 지침서에 따라 기기에 로딩하였다. 실행을 시작하고, 시모아™ HD-1 분석기 사용자 가이드의 홈브루 챕터에 따라 기기 상에서 실행하였다. 결합 데이터는 표 4에 제시된다.

CA11 항체로의 퀀테릭스™ 검정에서의 스파이크 및 회수를 결정하기 위해, CGRP를 인간 혈장에 스파이킹하였다. 회수된 스파이킹된 CGRP의 백분율은 표 5에 요약된다.

CA11 항체로의 CGRP 퀀테릭스™ 검정에서의 감수성을 결정하기 위해, 건강한 공여자 혈장에서의 CGRP 수준을 검출하였다. 건강한 공여자 혈장으로부터 검출된 CGRP의 농도는 표 6에 제시된다.

표 4. CGRP 퀀테릭스™ 검정 결합 데이터.

*AEB = 비드당 평균 효소

표 4에서의 데이터는 CA11 항체로의 CGRP 퀀테릭스™ 검정이 0.02 pg/ml만큼 낮은 혈장에서 인간 CGRP를 검출하였다는 것을 입증한다.

표 5. EDTA 혈장에서의 CGRP 스파이크 및 회수.

표 5에서의 데이터는 CA11 항체로의 CGRP 퀀테릭스™ 검정이 77% 내지 99%의 범위에서 퍼센트 회수를 갖는 EDTA 혈장에서 스파이킹된 CGRP를 검출하였다는 것을 입증한다.

표 6. 건강한 공여자에서의 혈장 CGRP 수준 (그룹당 n=9 공여자).

표 6에서의 데이터는 CA11 항체로의 CGRP 퀀테릭스™ 검정이 건강한 공여자 EDTA 혈장에서 약 0.93 pg/mL CGRP, 및 건강한 공여자 헤파린 혈장에서 약 1.02 pg/mL CGRP를 검출하였다는 것을 입증한다.

SEQUENCE LISTING <110> Eli Lilly and Company <120> CGRP ANTIBODIES AND USES THEREOF <130> X20842 <150> 62/288045 <151> 2016-01-28 <160> 28 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Ser Ile Tyr Leu His 1 5 10 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 Tyr Arg Ala Lys Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 Gln Gln Gly Ser Thr Ile Pro Phe Thr 1 5 <210> 4 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Ser Val Met His 1 5 10 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 5 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 6 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 6 Ala Lys Ser 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Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys 325 330 335 Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys 340 345 350 Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp 355 360 365 Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys 370 375 380 Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser 385 390 395 400 Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr 405 410 415 Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser 420 425 430 Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 435 <210> 11 <211> 645 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 11 gaaatcgtgc tgacccagag ccccaccacc atggccgcca gccctggcga gaagatcacc 60 atcacctgct ccgccagcag cagcatcagc tccatctacc tgcactggta tcagcagaag 120 cccggcttca gccctaaggt gctgatctac cgggccaaaa acctggccag cggcgtgccc 180 gccagattca gcggcagcgg ctccggcacc agctacagcc tgaccatcgg caccatggag 240 gccgaggacg tggccaccta ctactgccag cagggcagca ccatcccctt caccttcggc 300 agcggcacca agctggagat caagcgggct gatgcggcgc ccactgtatc catcttccca 360 ccatccagtg agcagttaac atctggaggt gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc 420 taccccaaag acatcaatgt caagtggaag attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc 480 ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa gacagcacct acagcatgag cagcaccctc 540 acgttgacca aggacgagta tgaacgacat aacagctata cctgtgaggc cactcacaag 600 acatcaactt cacccattgt caagagcttc aacaggaatg agtgt 645 <210> 12 <211> 1317 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 12 gaagtgcagc tgcagcagag cggccctgag ctggtgaagc ctggcgccag cgtgaagatg 60 agctgtaagg ccagcggcta caccttcacc aggagcgtga tgcactgggt gaagcagaag 120 cccggccagg gcctggagtg gatcggctac atcaacccct acaacgacgg caccaagtac 180 aacgagaagt tcaagggcaa ggccaccctg accagcgaca agagcagcag caccgcctac 240 atggagctgt ccagcctgac aagcgaggat agcgccgtgt actactgtgc caagtcgggc 300 aatgacggct actggggcca gggcaccaca ctgaccgtgt ccagcgccaa aacgacaccc 360 ccatctgtct atccgctagc ccctggatct gccgcccaga ccaacagcat ggtgaccctg 420 ggctgtctgg tgaagggcta cttccctgag cctgtgacag tgacctggaa cagcggctct 480 ctgtctagcg gcgtgcacac attccctgcc gtgctgcaga gcgacctgta caccctgagc 540 agcagcgtga ccgtgcctag cagcacatgg cctagcgaga ccgtgacatg caacgtggcc 600 caccctgcct cttctaccaa ggtggacaag aagatcgtgc ccagagactg cggctgcaag 660 ccttgcatct gcaccgtgcc tgaggtgagc agcgtgttca tcttcccacc caagcccaag 720 gacgtgctca ccatcaccct cacccccaag gtcacgtgtg ttgtggtaga catcagcaag 780 gatgatcccg aggtccagtt cagctggttt gtagatgatg tggaggtgca cacagctcag 840 acgcaacccc gggaggagca gttcaacagc actttccgct cagtcagtga acttcccatc 900 atgcaccagg actggctcaa tggcaaggag ttcaaatgca gggtcaacag tgcagctttc 960 cctgccccca tcgagaaaac catctccaaa accaaaggca gaccgaaggc tccacaggtg 1020 tacaccattc cacctcccaa ggagcagatg gccaaggata aagtcagtct gacctgcatg 1080 ataacagact tcttccctga agacattact gtggagtggc agtggaatgg gcagccagcg 1140 gagaactaca agaacactca gcccatcatg gacacagatg gctcttactt cgtctacagc 1200 aagctcaatg tgcagaagag caactgggag gcaggaaata ctttcacctg ctctgtgtta 1260 catgagggcc tgcacaacca ccatactgag 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Pro 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 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175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 28 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 28 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Gly Asn Tyr 20 25 30 Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Glu Gly Thr Gly Lys Thr Val Tyr Ile Gln Lys Phe 50 55 60 Ala Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ser Asp Tyr Val Ser Gly Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 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Claims

경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 2의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 4의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 5의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 인간 CGRP에 결합하는 항체 또는 그의 항체 단편.
제1항에 있어서, LCVR이 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖고 HCVR이 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 것인 항체.
제1항에 있어서, 경쇄 (LC) 및 중쇄 (HC)를 포함하며, 여기서 LC는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖고 HC는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항체.
제1항에 있어서, 2개의 LC 및 2개의 HC를 포함하며, 여기서 각각의 LC는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖고 각각의 HC는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항체.
제1항에 있어서, 항체가 항체 Fab 단편인 항체.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 검출가능한 표지로 표지되는 것인 항체.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는 키트.
제7항에 있어서, 제2 CGRP 항체를 추가로 포함하는 키트.
제8항에 있어서, 제2 CGRP 항체가 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 13의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 14의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 16의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 17의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 것인 키트.
제8항에 있어서, 제2 CGRP 항체가 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 19의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 20의 아미노산 서열, CDRL3에서의 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 22의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 23의 아미노산 서열, CDRH3에서의 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 것인 키트.
환자 샘플을 제1 CGRP 항체와 접촉시키고, 상기 제1 CGRP 항체에 결합된 CGRP의 양을 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 제2 항-CGRP 항체로 검출하는 것을 포함하는, 환자 샘플에서 인간 CGRP를 검출하는 방법.
제11항에 있어서, 환자 샘플이 혈장 또는 EDTA 혈장, 헤파린 혈장, 혈청, CSF, 또는 활액인 방법.
제11항에 있어서, 방법이 샌드위치 면역검정으로 이루어진 것인 방법.
제11항에 있어서, 제1 CGRP 항체가 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 13의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 14의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 16의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 17의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
제11항에 있어서, 제1 CGRP 항체가 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 19의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 20의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 22의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 23의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
제11항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 CGRP 항체가 검출가능한 표지로 표지되는 것인 방법.
제11항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 CGRP 항체가 검출가능한 표지로 표지되는 것인 방법.
환자 샘플을 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 제1 항-CGRP 항체와 접촉시키고, 상기 제1 CGRP 항체에 결합된 CGRP의 양을 제2 CGRP 항체로 검출하는 것을 포함하는, 환자 샘플에서 인간 CGRP를 검출하는 방법.
제18항에 있어서, 환자 샘플이 EDTA 혈장, 헤파린 혈장, 혈청, CSF, 또는 활액인 방법.
제18항에 있어서, 방법이 샌드위치 면역검정으로 이루어진 것인 방법.
제18항에 있어서, 제2 CGRP 항체가 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 13의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 14의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 16의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 17의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
제18항에 있어서, 제2 CGRP 항체가 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 CDRL1에서의 서열식별번호: 19의 아미노산 서열, CDRL2에서의 서열식별번호: 20의 아미노산 서열, 및 CDRL3에서의 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HCVR은 CDRH1에서의 서열식별번호: 22의 아미노산 서열, CDRH2에서의 서열식별번호: 23의 아미노산 서열, 및 CDRH3에서의 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
제18항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 CGRP 항체가 검출가능한 표지로 표지되는 것인 방법.
제18항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 CGRP 항체가 검출가능한 표지로 표지되는 것인 방법.
환자 샘플을 제1 CGRP 항체와 접촉시키고, 상기 제1 CGRP 항체에 결합된 CGRP의 양을 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 제2 항-CGRP 항체로 검출하는 것을 포함하는, 환자 샘플 1 밀리리터 (mL)에서 0.02 내지 2 피코그램 (pg)의 인간 CGRP를 검출하는 방법.
환자 샘플을 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 제1 항-CGRP 항체와 접촉시키고, 상기 제1 CGRP 항체에 결합된 CGRP의 양을 제2 CGRP 항체로 검출하는 것을 포함하는, 환자 샘플 1 mL에서 0.02 내지 2 pg의 인간 CGRP를 검출하는 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 환자 샘플에서 CGRP의 양을 측정하는데 사용하기 위한 항체.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 환자 샘플에서 CGRP를 측정하기 위한 검출 시약의 제조를 위한 항체.