KR20180078547A - 디아세틸 고생산 균주와 케피어 그레인을 이용한 천연조미소재 및 이의 제조방법 - Google Patents

디아세틸 고생산 균주와 케피어 그레인을 이용한 천연조미소재 및 이의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 디아세틸 고생산 균주와 케피어 그레인을 이용한 천연 조미소재 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 천연조미소재는 디아세틸 증가를 통한 치즈 및 버터향이 부여되고 케피어 그레인 내 효모 등에 의해 생성된 짠맛과 감칠맛으로 인해 합성 글루탐산나트륨(MSG) 등을 대체할 수 있는 천연조미소재로 널리 활용이 가능하다.

Description

디아세틸 고생산 균주와 케피어 그레인을 이용한 천연조미소재 및 이의 제조방법{Natural flavoring substance from microorganism producing deacetyl and kefir grain and process for the preparation thererof}
본 발명은 시유로부터 분리한 디아세틸 생산능이 우수한 락토코커스 락티스 서브스페시스 크레모리스 LRCC5306(기탁번호 KCCM11733P) 균주와 케피어 그레인을 우유에 첨가하여 발효시킨 발효유를 건조하여 얻은 분말 형태의 천연조미소재 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 천연조미소재는 디아세틸 증가를 통한 치즈 및 버터향이 부여되고 케피어 그레인 내 효모 및 균주 등에 의해 생성된 짠맛과 감칠맛으로 인해 합성 글루탐산나트륨(MSG) 등을 대체할 수 있는 천연조미소재로 널리 활용이 가능하다.
우리나라 국민의 연령별 주 사망원인을 보면, 20 ~ 30대는 교통사고, 40대는 간질환, 50대 이후에는 혈관질환, 즉 고혈압과 중풍 등으로 조사, 보고되고 있다. 특히 평균수명이 길어지면서 고혈압과 당뇨, 중풍 등의 성인병으로 고생하는 사람의 수가 증가하고 있으며 발생연령도 점차 낮아져 30대, 40대부터 성인병으로 고생하는 사람이 증가하고 있다. 이러한 현상과 관련하여, 최근 현대인들의 건강에 대한 관심과 함께 생활수준의 향상됨에 따른 웰빙(well-being)에 대한 관심이 상호적으로 급속히 높아지면서 음식문화 또한 크게 변화되고 있다. 이에 따라, 자연식품이나, 건강식품, 기능성 식품 등 보다 건강지향적인 식품을 찾고자 하는 노력이 크게 증가하였고, 다수의 사람들이 이와 같은 식습관으로 변화하게 되었다.
이러한 추세에 따라, 최근에는 가공식품의 안전성 및 영양학적 측면의 충족뿐만 아니라 특히 위해성 여부에 대한 소비자들의 인식이 높아져 자연의 맛을 살린 천연조미료 및 기능성 천연식품소재에 대한 관심이 집중되고 있다.
한국 공개특허 제2012-76107호는 글루탐산 생성 균주인 바실러스 서브틸리스(KFCC 11492P)를 이용하여 아미노산 및 펩티드를 함유하는 조미소재를 제공하고 있으며, 한국 등록특허 제10-0572029호는 훈건굴 및 훈연잔사를 이용한 천연조미소재 및 그의 제조방법에 관한 것으로, 인공조미소재를 대체하기 위한 노력이 꾸준히 진행되고 있는 실정이다.
일반적으로, 조미료에는 식품의 맛을 향상시키는 방법으로 글루탐산 나트륨(MSG)이 대표적으로 사용되고 있으며. 이러한 인공 조미료는 조미성능을 발휘하는 물질만으로 구성되어 있어 단위 무게당 조미 특성이 우수하여 많이 사용되고 있다. 그러나 인공 조미료는 짠맛, 신맛, 쓴맛을 완화시켜 맛을 조화롭게는 하지만 자체로 자극적인 맛 또는 강한 자극을 혀에 전달한다. 이러한 인공 조미료의 자극에 길들여지면, 인공 조미료의 첨가 없이는 음식의 맛을 느끼기 어렵게 되고 천연의 은근하고 보다 복합화 된 맛을 느끼지 못하는 상태에 이르게 된다. 뿐만 아니라 인공 조미료는 천연의 재료에 비하여 인체에 대한 독성이 높은 것으로 인식되고 있으며 과도한 사용은 실제로 인체에 문제를 발생하기도 한다. 특히 위나 장이 약한 사람에게는 적은 량을 사용하더라도 문제를 일으킨다.
이러한 글루탐산나트륨을 구성하는 L-글루탐산은 미생물 중 효모(yeast)가 생산하는 주요 대사산물 중 하나로 알려져 있으며, 이 점에 착안하여 천연지향적 조미소재 시장에서는 효모엑기스 등을 활용한 조미소재의 확대가 지속되고 있다. 그러나, 천연 추출물을 기반으로 한 조미소재는 감칠맛이 MSG에 비해 강도가 낮고 고가의 시장 가격을 이루고 있어 식품 산업부문에 보편적 적용이 어려운 실정이다.
한편 구 소련의 코카서스 지방에서 유래된 케피어 발효유는 케피어 그레인을 스타터로 하여 우유, 산양유, 마유 등을 첨가하여 발효시키는데, 대부분 재래식으로 배양하기 때문에 배양에 사용하는 우유의 종류, 배양온도나 배양시간, 배양 용기 등이 통일되어 있지 않기 때문에 발효유에 함유되어 있는 미생물의 종류나 양 또한 다양하다. 특히 50종 이상의 유산균, 초산균, 효모가 공생계를 형성하고 있는 천연 발효유제품으로 정기적으로 섭취할 경우 정장작용, 항비만작용, 항염증작용, 항미생물작용 등 다양한 건강 유익효과를 얻을 수 있다고 알려져 있다. 이러한 케피어 종균을 이용하여 제조된 케피어 유제품은 풍부한 유산균과 효모 발효가 잘 어우러져 특유의 청량감과 풍미를 가진 깔끔하고 상큼한 맛을 갖게 된다.
이러한 케피어 내에는 효모가 들어있으므로, 케피어 발효유 제조 시 대사산물로 L-글루탐산이 생성될 것으로 예상되며 이 L-글루탐산에 의해 감칠맛을 부여하게 된다. 또한 케피어 그레인을 이루는 균종 중 하나로써 락토코커스 락티스 균중들은 대사산물로서 디아세틸을 생성하며, 이는 케피어 발효유에 청량감과 함께 독특한 치즈 혹은 버터향을 생성시키게 된다.
따라서, 여러 소재를 활용하여 인공조미소재를 대체할 수 있는 천연조미소재의 발굴이 여전히 제기되고 있는 실정이다.
1. 한국 공개특허 제2012-76107호 2. 한국 등록특허 제10-0572029호
이에 본 발명자들은 디아세틸 생산능이 우수한 신규 균주인 락토코커스 락티스 서브스페시스 크레모리스 LRCC5306(기탁번호 KCCM11733P)와 케피어 그래인을 복합 발효한 발효유를 건조하여 얻은 분말의 경우 디아세틸의 증가로 치즈 및 버터향이 부여되고 짠맛과 감칠맛 등을 보유하게 되어 합성 글루탐산나트륨(MSG)을 대체할 수 있다는 것을 알게 되어 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
따라서 본 발명은 디아세틸 생산능이 우수한 락토코커스 락티스 서브스페시스 크레모리스 LRCC5306(Lactococcus lactis subsp . cremoris , 기탁번호 KCCM11733P) 균주의 동결 건조 분말 및 케피어 그레인을 우유에 첨가하여 발효시킨 발효유를 건조하여 얻은 분말 형태의 천연조미소재를 제공하는데 그 목적이 있다.
또한, 본 발명은 상기 천연조미소재의 제조방법을 제공하는데 그 목적이 있다.
본 발명의 목적은 이상에서 언급한 목적으로 제한되지 않는다. 본 발명의 목적은 이하의 설명으로 보다 분명해 질 것이며, 특허청구범위에 기재된 수단 및 그 조합으로 실현될 것이다.
본 발명은 상기 목적을 달성하기 위하여 아래와 같은 구성을 포함한다.
본 발명은 디아세틸 생산능이 우수한 락토코커스 균주의 동결 건조 분말 및 케피어 그레인을 우유에 첨가하여 발효시킨 발효유를 건조하여 얻은 분말 형태의 천연조미소재를 제공한다.
상기 락토코커스 균주의 배양용 배지에는 펩톤(peptone), 아세트산염(sodium acetate), 구연산아암모늄(ammonium citrate), 마그네슘 설페이트(magnesium sulfate), 망가니즈 설페이트(manganese sulfate), 디포타슘 포스페이트(Dipotassium phosphate), 및 트윈(Tween)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것이 바람직하다. 이는 균주 생장을 위해 도움이 되는 요소이다.
또한 상기 배양용 배지에서 제조된 락토코커스 균주 배양액의 동결 건조 분말은 균주 배양액으로부터 회수한 균체 전체 중량 대해 포도당(glucose), 말토덱스트린(malto-dextrin) 및 전분(starch)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 첨가제를 2 ~ 6 중량% 포함하는 것이 바람직하며, 이는 균주의 동결 건조시 부형제로서 동결 건조 분말 내 유산균의 안정성에 도움이 되는 요소이다.
바람직하게, 상기 락토코커스 균주는 멸균 전의 시유로부터 분리된 락토코커스 락티스 크레모리스 (Lactococcus lactis cremoris) LRCC5306 (기탁번호 KCCM11733P)이다. 이는 디아세틸 생성량이 특히 우수하여 높은 치즈 및 버터 풍미를 부여하는데 유리하다.
또한, 본 발명의 케피어 그레인(kefir grain)은 효모, 락토코커스 락티스, 류코노스탁 메센테로이드, 스트렙토코커스 써모필러스 등의 균주로 구성되어 있으며, 이는 포도당 및 말토덱스트린이 첨가되어 동결 건조된 분말 형태로 우유에 첨가하여 25 ~ 35℃ 온도에서 9 ~ 15 시간 동안 방치할 경우 발효유가 되는 특징이 있다.
본 발명에서의 발효유는 우유 250ml 기준으로 락토코커스 락티스 서브스페시스 크레모리스 균주의 동결 건조 분말 0.1 ~ 0.5 g 및 케피어 그레인 0.1 ~ 0.5 g를 혼합하여 발효시켜 얻은 것으로, 바람직하게는 락토코커스 락티스 서브스페시스 크레모리스 균주의 동결 건조 분말 0.1 ~ 0.3 g 및 케피어 그레인 0.1 ~ 0.3 g을 사용할 수 있다. 본 발명에 따른 천연조미소재는 상기 발효유를 분무 건조하여 얻은 것으로 분말 형태를 갖는다.
또한, 본 발명은 (a) 락토코커스 락티스 서브스페시스 크레모리스 LRCC5306(Lactococcus lactis subsp . cremoris , 기탁번호 KCCM11733P) 균주를 배양한 배양액을 동결 건조하여 유산균 동결 건조 분말을 준비하는 단계; (b) 상기 유산균 동결 건조 분말과 케피어 그레인을 우유에 첨가하고 배양하여 발효유를 제조하는 단계; 및 (c) 상기 발효유를 분무 건조하여 천연조미소재를 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 천연조미소재의 제조방법을 제공한다.
상기 (a) 단계는 유산균 동결 건조 분말를 제조하는 단계로서, 건조 분말은 포도당(glucose), 말토덱스트린(malto-dextrin) 및 전분(starch)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 추가적으로 더 포함한다. 이는 균주의 동결건조 시 부형제로서 동결건조분말 내 유산균의 안정성에 도움이 되는 요소이다.
다음으로, 상기 (b) 단계는 우유 250ml 기준으로 유산균 건조 분말 0.1 ~ 0.5 g 및 케피어 그레인 0.1 ~ 0.5 g을 혼합하여, 바람직하게는 락토코커스 락티스 서브스페시스 크레모리스 균주의 동결 건조 분말 0.1 ~ 0.3 g 및 케피어 그레인 0.1 ~ 0.3 g을 혼합하여, 25 ~ 35℃ 온도에서 9 ~ 15 시간 동안 방치하여 배양하는 단계로서, (b) 단계를 거친 발효유의 경우 치즈, 버터향, 짠맛, 및 감칠맛 등이 부여된다.
상기 (c) 단계의 발효유에는 포도당(glucose), 말토덱스트린(malto-dextrin) 및 전분(starch)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 첨가제를 발효유 전체 중량에 대해 2 ~ 6 중량% 더 포함할 수 있다. 이는 유산균의 생장 안정성에 도움이 되기에 감칠맛과 디아세틸 생산을 높여 치츠 풍미의 향상에 도움이 된다.
본 발명에 따른 천연조미소재는 디아세틸 증가를 통한 치즈 및 버터향이 부여되고 케피어 그레인 내 효모 등에 의해 생성된 짠맛과 감칠맛으로 인해 합성 글루탐산나트륨(MSG) 등을 대체할 수 있는 천연조미료로 제공될 수 있다.
본 발명에 따른 락토코커스 락티스 크레모리스 균주와 케피어 그레인을 복합 발효하여 제조된 케피어 발효유는 케피어 고유의 청량감과 감칠맛에 디아세틸 특유의 치즈 및 버터 풍미를 함께 갖추었으며, 이를 건조할 경우 성상 및 풍미를 보존할 수 있어 식품 등에 천연조미소재로 적용이 가능하다.
도 1은 비교에 1 내지 3, 및 실시예 1의 발효유에 대해 전자혀로 맛 성분을 분석하여 나타낸 그래프이다.
도 2는 실시예 1의 발효유를 분무 건조하여 얻은 조미소재에 대해 전자혀로 맛 성분을 분석하여 나타낸 그래프이다.
이하, 실시예를 통해 본 발명을 상세하게 설명한다. 본 발명의 실시예는 발명의 요지가 변경되지 않는 한 다양한 형태로 변형될 수 있다. 그러나 본 발명의 권리범위가 이하의 실시예에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되면 공지 구성 및 기능에 대한 설명은 생략한다. 본 명세서에서 "포함"한다는 것은 특별한 기재가 없는 한 다른 구성요소를 더 포함할 수 있음을 의미한다.
제조예 1: LRCC5306 균주 분말의 제조
락토코커스 락티스 서브스페시스 크레모리스 LRCC5306 균주를 발효유에 접종하기 편리한 분말형태로 제조하였다.
구체적으로, 바이알 형태로 영하 80℃에서 보관중인 균주를 MRS-BCP 고체배지에 접종하고 30℃에서 24시간 배양하여 콜로니를 형성시킨 다음, MRS 액상배지 50ml에 접종하고 동일한 조건으로 배양하여 종균배양액을 제조하였다.
다음으로, 제조된 종균배양액 50ml을 3L MRS 액상배지에 접종하고 상기와 동일한 조건으로 배양하였으며 배양 종료 후 원심분리(10,000rpm, 10분)하여 균체만을 회수하였다. 회수된 균체 전체 중량 대해 말토덱스트린 5 중량%를 첨가한 다음 동결 건조하여 유산균 분말을 완성하였다. 완성된 유산균 분말은 약 230g이었으며 분말 내 생균수는 3.1 x 1010 CFU/g인 것으로 확인되었다.
비교예 및 실시예 : 발효유의 제조
상기에서 제조된 락토코커스 락티스 서브스페시스 크레모리스 LRCC5306 균주의 동결 건조 분말과 케피어 그레인을 이용하여 케피어 발효유를 제조하였다.
구체적으로, 케피어 그레인은 상용으로 판매되는 미국 듀폰 사의 발효스타터(CHOOZIT DT, Dupont, USA)를 이용하였다. 상용으로 판매되는 우유 250ml에 LRCC5306 균주의 동결 건조 분말 0.1 g 및 케피어 그레인 0.1 g을 우유에 첨가한 다음 30℃로 유지되는 배양기에서 12시간 방치하여 발효유를 제조하였다(실시예 1).
대조군으로서, LRCC5306 균주 분말 단독(비교예 2) 및 케피어 그레인 단독(비교예 3)으로 발효한 발효유를 준비하였다.
실험예 1: pH, 성상, 및 디아세틸 함량 분석(1) 및 전자혀를 통한 맛 성분 분석(2)
상기 비교예 및 실시예에서 제조한 발효유는 pH 및 성상, 디아세틸 함량을 분석하여 [표 1]에 나타내었으며, 전자혀(Taste Sensing System SA402B, Insent co. Ltd., 일본)로 각각의 맛 성분을 분석하여 맛 프로필을 비교하였으며 발효 전의 우유(비교예 1)를 영점으로 잡았을 때의 비교값을 [도 1]에 나타내었다.
항 목 비교예1
(Blank)		 비교예 2
(LRCC5306 균주 단독)		 비교예 3
(케피어 그레인
단독)		 실시예 1
pH 6.4 5.2 4.3 3.8
성상 액상 반고상 고상 고상
디아세틸
(mg/kg)		 0.0 17.6 1.7 23.7
상기 [표 1]과 [도 1]의 결과를 보면, LRCC5306 균주 단독으로 발효할 경우(비교예 2), pH가 다소 감소하긴 하지만 일반적인 발효유 수준으로 떨어지지는 않는 것으로 확인되었으며 이에 따라 전자혀에서 신맛과 짠맛이 다소 증가하는 것으로 나타났다. 디아세틸 생성량은 약 17.6 mg/kg으로 확인되었다.
아울러, 케피어 그레인 단독으로 발효할 경우(비교예 3), pH는 4.3으로 일반적인 발효유가 생성되었으며 신맛이 다소 증가하고 짠맛과 감칠맛(전미)는 급격히 증가한 것으로 나타났으나 디아세틸 생성량은 1.7 mg/kg으로 확인되었다.
반면 LRCC5306 균주와 케피어 그레인을 복합발효할 경우(실시예 1), pH는 3.8이었으며 신맛, 짠맛, 감칠맛(전미) 등이 케피어 그레인 단독발효에 비해서도 더 높은 수준으로 증가한 것으로 확인되었다. 이때의 디아세틸 생성량은 23.7 mg/kg으로서, LRCC5306 균주 단독, 또는 케피어 그레인 단독으로 발효하였을 때에 비해서도 높은 수준의 디아세틸이 생성된 것으로 확인되었으며 이는 복합발효를 할 경우 각각의 미생물이 분비하는 대사산물이 상호 보완작용을 한 것으로 추정된다.
실험예 2: 아미노산 성분 비교
상기 비교예 및 실시예에서 제조한 발효유의 아미노산 성분을 비교하기 위하여, UPLC-MS/MS(Ultra Performance Liquid Chromatography - Tandem Mass Spectrometer) 시스템으로 아미노산 조성을 분석하였으며 [표 2]에 나타내었다.
아미노산 비교예1
(Blank)		 비교예2
(LRCC5306 균주
단독)		 비교예3
(케피어 그레인
단독)		 실시예 1
Histidine 1.71 2.16 2.94 3.51
Asparagine 2.55 5.31 11.27 13.37
Serine 4.16 8.23 12.11 14.27
Arginine - 0.36 1.01 1.63
Glycine 1.11 1.65 1.89 2.16
Aspartic acid 1.31 4.72 13.18 13.84
Glutamic acid 0.07 0.15 3.14 4.27
Threonine - - - -
Alanine 0.57 1.13 2.28 3.25
Proline 3.53 4.01 4.39 4.44
Cysteine 7.52 9.45 29.95 35.96
Lysine 2.73 3.52 10.82 12.74
Tyrosine 2.15 2.27 9.17 12.9
Methionine - - - -
Valine 1.89 1.93 2.03 1.98
Isoleucine 3.42 5.32 6.94 8.8
Leucine 7.13 7.23 7.93 8.39
Phenylalanine 0.78 1.15 5.66 6.32
Tryptophan - - 1.11 1.76
상기 [표 2]의 결과를 보면, [도 1]의 전자혀 분석결과와 유사하게 균주와 케피어 그레인을 복합발효할 경우 각각을 단독으로 발효할 경우와 대비하여 더 풍부한 아미노산이 생성된것으로 확인되었다.
실험예 3: 발효유 건조 분말에 대한 전자혀를 통한 맛 성분 분석
상기 실시예 1에서 제조한 LRCC5306 균주와 케피어 그레인을 복합발효한 발효유를 분무 건조하여 조미소재로 제조하였다.
구체적으로, 실시예 1의 발효유에 말토덱스트린 4 중량%를 첨가한 다음 분무건조기(Spray dryer)를 이용하여 220로 유지되는 조건으로 건조하였다. 건조된 분말의 맛 성분 프로필을 분석하여 도 2에 나타내었다.
상기 [도 2]의 결과를 보면, 본 발명에 따른 실시예 1의 경우 신맛, 짠맛, 감칠맛(전미) 등이 전반적으로 증가하였으며 감칠맛(후미)도 다소 증가한 것으로 확인되었다. 또한 디아세틸의 함량 역시 461.5 mg/kg인 것으로 나타났으며 관능상으로도 발효유 풍미 외에 치즈 풍미도 함께 느껴지는 것으로 확인되었다.
따라서, 상기 실험예를 통해, 본 발명에 따른 천연조미소재는 디아세틸 증가를 통한 치즈 및 버터향이 부여되고 케피어 그레인 내 효모 등에 의해 생성된 짠맛과 감칠맛으로 인해 합성 글루탐산나트륨(MSG) 등을 대체할 수 있는 천연조미료임을 알 수 있었다.
이상으로 본 발명에 대해 상세히 설명하였다. 다만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되지 않고, 이하의 특허청구범위에 의해 정해진다.

Claims (8)

  1. 디아세틸 생산능이 우수한 락토코커스 락티스 서브스페시스 크레모리스 LRCC5306(Lactococcus lactis subsp . cremoris , 기탁번호 KCCM11733P) 균주의 동결 건조 분말 및 케피어 그레인을 우유에 첨가하여 발효시킨 발효유를 건조하여 얻은 분말 형태의 천연조미소재.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 발효유는 우유 250ml 기준으로 락토코커스 락티스 서브스페시스 크레모리스 균주의 동결 건조 분말 0.1 ~ 0.5 g 및 케피어 그레인 0.1 ~ 0.5 g를 혼합하여 발효시켜 얻은 것을 특징으로 하는 천연조미소재.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 발효유에는 포도당(glucose), 말토덱스트린(malto-dextrin) 및 전분(starch)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 첨가제를 발효유 전체 중량에 대해2 ~ 6 중량% 더 포함하는 것을 특징으로 하는 천연조미소재.
  4. (a) 락토코커스 락티스 서브스페시스 크레모리스 LRCC5306(Lactococcus lactis subsp. cremoris , 기탁번호 KCCM11733P) 균주를 배양한 배양액을 동결 건조하여 유산균 동결 건조 분말을 준비하는 단계;
    (b) 상기 유산균 동결 건조 분말과 케피어 그레인을 우유에 첨가하고 배양하여 발효유를 제조하는 단계; 및
    (c) 상기 발효유를 분무 건조하여 천연조미소재를 수득하는 단계;
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 천연조미소재의 제조방법.
  5. 제 4 항에 있어서, 상기 (a) 단계의 동결 건조 분말은 포도당(glucose), 말토덱스트린(malto-dextrin) 및 전분(starch)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 첨가제를 균주 배양액으로부터 회수한 균체 전체 중량에 대해 2 ~ 6 중량% 더 포함하는 것을 특징으로 하는 천연조미소재의 제조방법.
  6. 제 4 항에 있어서, 상기 (b) 단계는 우유 250ml 기준으로 유산균 건조 분말 0.1 ~ 0.5 g 및 케피어 그레인 0.1 ~ 0.5 g을 혼합하여 발효시켜 얻은 것을 특징으로 하는 천연조미소재의 제조방법.
  7. 제 4 항에 있어서, 상기 (c) 단계의 발효유에는 포도당(glucose), 말토덱스트린(malto-dextrin) 및 전분(starch)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 첨가제를 발효유 전체 중량에 대해 2 ~ 6 중량% 더 포함하여 발효시킨 것을 특징으로 하는 천연조미소재의 제조방법.
  8. 제 4 항에 있어서, 상기 (b) 단계의 배양은 25 ~ 35℃ 온도에서 9 ~ 15 시간 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 천연조미소재의 제조방법.
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