KR20180060201A - 땅콩 지상부 추출물 및 분획물을 포함하는 피부염 치료용 조성물 및 그의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 땅콩 (Arachis hypogaea L.) 지상부의 추출물, 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 개선하기 위한 조성물 및 제조 방법에 관한 것이다.
Description
땅콩 지상부 추출물, 또는 그의 분획물을 포함하는 피부염을 개선시키기 위한 조성물 및 그의 용도에 관한 것이다.
신체는 외부에서 이물질이 침입하면 이로부터 자신을 보호하기 위해 이물질을 제거하고 신체를 보호하기 위한 반응을 보이는데 이것을 면역반응이라고 하며, 이와 달리 과민반응은 우리 몸에 해롭지 않은 것에 대한 비정상적인 면역반응을 지칭하며 오히려 조직을 파괴하는 면역질환(immune disorder)의 일종이다.
면역질환은 면역계의 기능이상에 의해 발생하며, 자가면역질환, 면역결핍증, 알레르기 질환 등을 포함하며, 이중 알레르기 질환은 유전적, 환경적 요인 등이 복합적으로 작용하여 발생한다. 아토피는 외부로부터의 자극에 대하여 비정상적으로 반응하는 과민반응(hypersensitivity)을 일컫는 말이며, 알레르기와 같은 의미로 혼용되고 있다.
아토피 질환은 아토피에 의해 임상적 증상으로 발현되는 경우를 의미하며, 여기에는 아토피 피부염, 천식, 알레르기 비염, 알레르기 결막염 등의 질환들이 모두 포함된다. '아토피 피부염'이라는 용어가 길어서 짧게 '아토피'라고 하지만 두 용어의 정의는 의학적으로 분명히 다르며, 아토피 질환은 상호작용하면서 동시에 또는 시간차를 두고 발현되는 경향을 보이기 때문에 '알레르기 행진'이라는 특성으로 설명하기도 한다. (American Academy of Allergy Asthma & Immunology). 알레르기 행진은 어린 영아가 성장하면서 아토피 피부염, 식품 알레르기, 천식 및 알레르기 비염의 순서로 알레르기 질환을 앓게 되는 현상을 말하며, 알레르기 유발원에 대한 감작의 진행과 관련이 있다. 국내 연구에 의하면, 유전적 요인에 의한 아토피 피부염 발생률은 부모 모두 아토피 질환이 있는 경우 41.7%, 부모 모두 알레르기 병력이 없을 경우 14.7%로 나타나 아토피 피부염 발생과 부모의 알레르기 질환력 사이의 연관성을 보여주고 있다.
아토피 피부염은 알레르기 행진이 일어나는 첫 번째 질환으로 인식되고 있고, 아토피성 질환이 발생할 것을 예측할 수 있는 지표로 이용되고 있으며, 아토피 피부염 시기에 면역반응을 조절하지 않을 경우 알레르기 행진이 가속화되는 것으로 추정되므로 천식, 비염 등을 예방하기 위해서라도 아토피 피부염 조절이 필요하다. 아토피 피부염의 병인은 크게 피부장벽과 연관된 병인(outside-in model)과 비정상적인 면역반응과 연관된 병인(inside-out model)으로 나누고 있으며, 유전과 환경적인 요인에 대한 통합적인 고려가 필요하다.
현재 사용 중인 아토피 질환 치료제는 알레르기 반응의 최종산물인 히스타민 분비를 억제하거나 알레르기 증상의 하나인 염증반응을 억제하는 효과를 가진 스테로이드제 및 항히스타민제에 치중되며, 일부 면역조절제와 광선치료법이 사용되고 있다. 기존 치료제의 경우 알레르기 증상 완화에 효과가 있으나 근본적인 치료방법이 아니며 장기적인 사용시 약물의 효능 감소 및 다양한 부작용 발생의 위험이 있다. 스테로이드제의 부작용은 비만, 당뇨, 고혈압, 우울증 등이 있으며, 항히스타민제의 부작용은 우울증, 집중력 장애, 무기력증, 졸림, 성기능 장애 등이 있으며, 면역억제제의 부작용은 국소자극, 고혈압, 신장독성 등이 있다. 이러한 점에서 스테로이드제, 항히스타민제, 면역억제제를 대체할 수 있는 혹은 기존 치료제의 사용을 낮출 수 있어 장기간 사용시 부작용이 적은 신개념 치료 소재의 개발 필요성이 대두되고 있다.
아토피 피부염의 병인 중 유전적인 요소가 매우 중요한 역할을 하는데, T세포 과다 활성화를 유발하는 인터루킨-4(IL-4), 인터루킨-5(IL-5), 인터루킨-13(IL-13)은 Th2 세포에 의해 분비되며 면역글로불린E(IgE)의 합성을 조절하여 아토피 피부염의 시작에 매우 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다.
Langerhans 세포와 염증성 수지상 상피 세포(inflammatory dendritic epidermal cell: IDEC)는 나이브(naive) T 세포를 Th2 타입으로 전환시킴으로 알러지성 면역반응의 시작에 매우 중요한 역할을 하며, 이 과정에서 IL-4가 매우 중요한 역할을 한다고 알려져 있다. Langerhans 세포 표면에 IgE 에 대한 수용체가 있으며, 음식물이나 공기 중 알레르겐(allergen), 미생물의 수퍼안티겐(superantigen)과 결합하여 염증성 시그널을 분비하게 하고 알러지성 면역반응을 일으킨다. Th2 시토킨 (IL-4, IL-5, IL-13)은 IgE를 생성하기 위한 이소타입 스위칭(isotype switching)을 매개하고 내피세포의 부착 분자(adhesion molecule)의 발현을 높여준다.
피부에서 IL-4는 T세포 유형 중 특히 아토피 피부염의 특징적인 병리현상인 Th2 세포의 불균형적인 활성 증대를 유도한다는 사실이 밝혀져 있으며, 동시에 B세포를 자극하여 IgE 생산을 증대시킴으로써 비만세포에 의한 히스타민 분비를 촉진하여 홍반, 발적, 가려움증 등의 아토피 반응을 유발하는 핵심 사이토카인이다. 그러므로 IL-4의 생산 및 이 반응의 최종 결과물인 T 세포의 과도한 증식을 동시에 억제할 수 있는 물질은 일반적인 면역억제 물질보다 아토피 피부염의 치료에 더욱 적합한 효능을 제공할 수 있을 것으로 기대한다. 피부에서 IL-4는 필라그린(filaggrin)이 자연보습인자(NMF)로 전환되는 과정에 필요한 단백분해효소인 caspase-14의 발현 또한 현저히 저하시키며 (Hvid et al., Exp. Dermatol. 20, 633-636 (2011)), 데스모글라인 1(desmoglein 1) 등의 교소체 단백질을 분해하는 klk7 펩티다제의 발현을 촉진시켜 표피의 박리를 유도하고 경표피 수분 손실을 증가시킨다.
무모 마우스에서 DNCB(2,4-dinitrochlorobenzen)와 아세톤을 이용하여 등 피부에 자극을 주면 자극된 국소 부위에 지연형 알러지 반응을 유도하게 되고 비정상적인 면역기능을 일으키고 피부장벽을 망가트릴 수 있다. 이처럼 DNCB를 이용하여 아토피 피부염과 유사한 모델을 만들어 그 개체의 피부장벽기능과 면역기능에 관련된 인 비보 모델을 만들 수 있다. DNCB로 아토피 피부염을 유도한 마우스의 경표피 수분손실량(TEWL)과 pH는 증가하며 수화(hydration)는 감소하게 된다.
Balb/c 마우스에서 옥사졸론(4-ethoxymethylene-2-phenyloxazolone)과 아세톤을 마우스의 귀 부분에 도포하면 아토피와 비슷한 병변을 가지게 된다. 옥사졸론-아토피피부염 유도된 귀는 발적을 일으키면서 비정상적인 면역반응과 대조군과 비교하였을 때 귀 두께가 두꺼워진다. 이와 같은 옥사졸론 모델을 만들어 그 개체의 피부장벽기능과 면역기능에 관련된 인 비보 실험을 할 수 있다.
만약 DNCB와 옥사졸론 등으로 아토피 피부염과 같은 병변을 유도 한 후 피부장벽 기능이나, 귀 두께, 면역학적 기능을 정상작동 하게 하는 물질이 있다면 아토피 피부염에 대한 치료 또는 예방에 매우 바람직한 후보가 될 수 있을 것이다.
땅콩은 학명이 Arachis hypogaea L.로서 콩과 (leguminosae)에 속하는 한새살이 풀로 1년생 초본이며, 높이는 50~60cm이다. 잎은 어긋나고 1회 짝수 깃모양 겹잎이며 엽병이 길며 소엽은 4개이고 거꿀달걀모양 또는 달걀모양으로 끝이 둥글며 짧은 돌기가 있고 밑부분이 예저이고 탁엽은 크며 끝이 길게 뾰족해 진다. 꽃은 황색으로 7~9월에 피고, 잎겨드랑이에 1개씩 달리고 화경이 없으며 접형화의 대처럼 보이는 것은 꽃받침통이고 끝에 꽃받침조각과 꽃잎 및 수술이 달린다. 꽃받침통 안에 1개의 씨방이 있으며, 실 같은 암술대가 밖으로 나오고, 수정되면 씨방 밑부분이 길게 자라서 씨방이 땅속으로 들어간다. 열매는 협과로 긴타원모양이며 10월에 익는다. 두껍고 딱딱하며 황백색으로 겉에 그물같은 맥이 있고 1~3개의 종자가 들어 있으며 종자는 타원형 또는 긴타원 모양이고 씨껍질은 적갈색이다. 주지는 밑부분에서 갈라져 옆으로 비스듬히 자라기 때문에 사방으로 퍼지며 털이 있으며, 모래땅에서 재배한다 (국가 생물종 지식 정보시스템).
땅콩은 식물성 오일과 단백질 자원으로 매우 중요한 유지 작물이며, 직접 식용이나 버터, 마가린, 식용유 등 다양한 방법으로 이용되고 있다(Lee et al., 2004). 땅콩은 천연 폴리페놀 화합물인 레스베라트롤이 다량 함유되어 있다고 알려져 있으며, 땅콩 새싹은 기능성 영양성분이 풍부하고 수분함량이 높고 식미가 우수하며 식품소재로서의 이용 범위가 넓은 장점을 지니고 있다. 이러한 땅콩 새싹은 암, 당뇨, 심장병 예방, 항산화 작용, 염증 억제, 노화 방지, 동맥경화, 혈중 콜레스테롤 저하 및 기억력 증진 등의 효능과 효과가 잘 알려져 있으며 특히 레스베라트롤은 적포도, 땅콩, 오디 등에 함유되어 다양한 약리효과들이 보고되고 있다.
그러나, 땅콩 지상부에 대한 연구는 미비하며, 땅콩 지상부의 추출물이 IL-4의 발현을 저해시켜 아토피 피부염에 효능이 있다는 것에 대하여는 알려진 바 없다.
일 양상은 땅콩 (Arachis hypogaea L.) 지상부의 추출물, 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 개선하기 위한 조성물을 제공한다.
다른 양상은 초음파 조사하에 땅콩 지상부를 물, C1 내지 C6의 알코올 또는 이들의 혼합물과 접촉시키는 단계를 포함하는 땅콩 지상부 추출물을 제조하는 방법을 제공한다.
또 다른 양상은 상기 조성물을 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 개선시키기에 유효한 양으로 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 개체의 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 개선시키는 방법을 제공한다.
일 양상은 땅콩 (Arachis hypogaea L.) 지상부의 추출물, 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 개선하기 위한 조성물을 제공한다.
상기 땅콩 지상부는 잎, 꽃, 줄기, 새싹 또는 그 조합일 수 있고, 건조 추출물일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 추출물은 친수성 용매 (hydrophilic solvent)로 하여 추출된 것일 수 있고, 상기 친수성 용매는 물, C1 내지 C6의 알코올 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 상기 알코올은 C1 내지 C10, C1 내지 C6 또는 C1 내지 C4의 하나 이상의 -OH기를 갖는 화합물일 수 있다. 상기 알코올은 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, n-부탄올, sec-부탄올, 이소부탄올, tert-부탄올 또는 이들의 혼합물일 수 있다.
상기 땅콩 지상부 추출물은 조추출물, 분획물, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 조추출물은 상기 땅콩 지상부를 추출 용매와 접촉시켜 얻어지는 것으로서 특정 성분을 포함하는 것으로 분리하지 않은 것을 말한다. 상기 분획물은 상기 조추물에 대하여 특정 성분을 포함하는 물질을 분리한 것을 말한다. 상기 분리는 유기 용매를 사용한 분리, 크로마토그래피 또는 여과일 수 있다. 상기 크로마토그래피는 이온교환 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 크기배제 크로마토그래피, HPLC, 또는 그 조합일 수 있다.
상기 추출은 상기 땅콩 지상부를 상기 추출 용매 중에 첨가하고 인큐베이션하는 것일 수 있다. 상기 땅콩 지상부는 세절되거나 분쇄되어 미분화된 입자의 형태를 가질 수 있다. 상기 땅콩 지상부는 건조되거나 세척된 것일 수 있다. 상기 인큐베이션은 실온 내지 환류 온도에서 교반 또는 교반 없이 수행되는 것일 수 있다. 인큐베이션 온도는 선택되는 용매에 따라 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들면, 실온 내지 환류 온도, 30 내지 환류 온도, 40 내지 환류 온도, 50 내지 환류 온도, 60 내지 환류 온도, 또는 65 내지 환류 온도일 수 있다. 상기 추출 시간은 추출 조건에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 상기 추출 시간은 2 내지 4시간, 예를 들면 2.5 내지 3.5 시간일 수 있다. 상기 추출 용매는 땅콩 지상부의 5 내지 15배, 예를 들면, 5 내지 13배, 5 내지 11배, 8 내지 15배, 8 내지 13배, 8 내지 11배, 또는 9 내지 11배일 수 있다. 상기 추출은 1회 이상, 예를 들면 1 내지 5회, 1 내지 4회, 1 내지 3회, 2 내지 5회, 또는 2 내지 4회 추출되는 것일 수 있다. 얻어진 조추출물은 여과, 농축 및 건조될 수 있다. 상기 건조는 감압 건조될 수 있다.
일 구체예에서, 상기 추출물은 초음파 조사하에 추출된 것일 수 있다. 상기 초음파 조사는 실온, 10 내지 25℃, 10 내지 30℃, 10 내지 40℃, 10 내지 45℃, 10 내지 50℃, 10 내지 55℃, 10 내지 60℃, 10 내지 65℃, 또는 10 내지 70℃에서 수행되는 것일 수 있다. 상기 초음파 조사 시간은 10 내지 30분. 10 분 내지 1시간, 10 분 내지 2시간, 10 분 내지 3시간, 10 분 내지 4시간, 10 분 내지 5시간, 10 분 내지 6시간, 10 분 내지 9시간, 10 분 내지 12시간, 10 분 내지 24시간 동안 수행되는 것일 수 있다. 상기 초음파 조사는 밀페된 용기 중에 수행되는 것일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 추출물은 유기 용매를 사용하여 더 추출될 수 있다. 상기 유기용매는 에틸아세테이트(EtOAc), 헥산, 메틸렌클로리드(CH2Cl2), 부탄올, 아세톤, 아세토니트릴 또는 이들의 조합일 수 있다. 상기 유기 용매에 의한 추출은 상기 추출물을 상기 유기 용매 중에 첨가하여 인큐베이션 하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 추출 조건은 선택되는 용매에 따라 적절하게 선택할 수 있으며, 상기 인큐베이션은 실온 내지 환류 온도에서 교반 또는 교반 없이 수행되는 것일 수 있다. 인큐베이션 온도는 선택되는 용매에 따라 적절하게 선택될 수 있고, 예를 들면, 실온 내지 환류 온도, 30℃ 내지 환류 온도, 40℃ 내지 환류 온도, 50℃ 내지 환류 온도, 60℃ 내지 환류 온도, 또는 65℃ 내지 환류 온도일 수 있다. 상기 추출 시간은 추출 조건에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 상기 추출 시간은 2 내지 4시간, 예를 들면 2.5 내지 3.5 시간일 수 있다. 상기 추출 용매는 땅콩 지상부의 5 내지 15배, 예를 들면, 5 내지 13배, 5 내지 11배, 8 내지 15배, 8 내지 13배, 8 내지 11배, 또는 9 내지 11배일 수 있다. 상기 추출은 1회 이상, 예를 들면 1 내지 5회, 1 내지 4회, 1 내지 3회, 2 내지 5회, 또는 2 내지 4회 추출되는 것일 수 있다. 얻어진 추출물은 여과, 농축 및 건조될 수 있다. 상기 건조는 감압 건조될 수 있다.
상기 추출은 조추출물, 또는 그 분획물을 HPLC하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 HPLC는 반분취 (semi-preparative) HPLC일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 조성물은 땅콩 지상부 추출물을 분획화하여 수득된 분획물을 유효성분으로 포함하는 것일 수 있다. 상기 분획물은 상기 땅콩 지상부 추출물을 물에 현탁시킨 후, 메틸렌클로리드(CH2Cl2), 에틸아세테이트(EtOAc) 또는 부탄올 (n-BuOH)을 분획화 용매로 하여 추출함으로써 얻어진 것으로서, 상기 분획물은 분획화 용매에 따라 각각 메틸렌클로리드 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 또는 부탄올 분획물일 수 있다. 바람직하게는 상기 분획물은 에틸아세테이트 분획물 또는 물 분획물일 수 있다.
일 구체예에서 상기 땅콩 지상부 추출물 또는 그의 분획물은 면역세포의 과활성화를 억제시켜 면역기능을 안정화 또는 회복시키거나, 인터루킨-4(Interleukin-4, IL-4)의 발현을 저해함으로써 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 예방, 개선 또는 치료하는 것일 수 있다.
상기 피부염은 피부 소양증, 지루성 피부염, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 당뇨병성 피부염, 모낭염, 여드름, 알레르기성 피부염 및 신경성 피부염으로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있다.
따라서 상기 조성물 중에 상기 땅콩 지상부 추출물 또는 그의 분획물은 세포에서 IL-4의 발현을 억제시키거나, 피부염을 개선시키거나, 특히 아토피성 피부염을 개선시키거나, 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 개선시키기에 유효한 양으로 포함될 수 있다. 상기 유효한 양은 당업자가 선택되는 세포 또는 개체에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 상기 유효한 양은 상기 조성물 당 0.1 mg 내지 1,000 mg, 예를 들면, 0.1 mg 내지 500 mg, 0.1 mg 내지 100 mg, 0.1 mg 내지 50 mg, 0.1 mg 내지 25 mg, 1 mg 내지 1,000 mg, 1 mg 내지 500 mg, 1 mg 내지 100 mg, 1 mg 내지 50 mg, 1 mg 내지 25 mg, 5mg 내지 1,000 mg, 5 mg 내지 500 mg, 5 mg 내지 100 mg, 5 mg 내지 50 mg, 5 mg 내지 25 mg, 10mg 내지 1,000 mg, 10 mg 내지 500 mg, 10 mg 내지 100 mg, 10 mg 내지 50 mg, 또는 10 mg 내지 25 mg일 수 있다. 상기 조성물은 인 비트로 또는 개체 중의 세포에서 IL-4의 발현을 억제시키기 위한 것일 수 있다. 개체 중의 세포는 예를 들면 IL-4 발현 증가에 의하여 피부염이 진행되고 있는 부위, 또는 IL-4의 침적에 의하여 염증이 과도하게 진행되어 외부적으로 피부염 증상을 보이는 부위에 위치하는 것일 수 있다. 상기 피부염은 아토피성 피부염일 수 있고, 상기 2차 질병은 피부장벽 기능 약화로 인한 피부감염증일 수 있다.
상기 조성물은 화장품학적으로, 약학적으로, 또는 식품적으로 허용가능한 부형제 또는 담체를 더 포함하는 것일 수 있다. 상기 조성물은 약학, 식품 또는 화장료 조성물일 수 있고, 또는 약학, 식품 또는 화장료의 유효성분으로 첨가되는 것인 조성물일 수 있다.
상기 식품 조성물은 땅콩 지상부 추출물 또는 그의 분획물을 단독 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 약학적 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.
본 발명의 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.
상기 식품 조성물은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 상기 식품 조성물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 이러한 첨가제는 조성물 100 중량부당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택될 수 있다.
상기 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 경구 투여 제형은 과립제, 산제, 액제, 정제, 캅셀제, 건조시럽제, 또는 그 조합일 수 있다. 경구 투여 제형은 주사제, 또는 피부외용제일 수 있다. 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다.
상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예컨대 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제등을 필요에 따라서 적절하게 배합할 수 있다.
상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.
상기 조성물은 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함할 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.
상기 조성물은 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 예방 또는 치료하기 위한 화장용 조성물일 수 있다.
상기 조성물은 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 예방 또는 치료하기 위한 식품용 조성물일 수 있다.
다른 양상은 초음파 조사하에 땅콩 지상부를 물, C1 내지 C6의 알코올 또는 이들의 혼합물과 접촉시키는 단계를 포함하는 땅콩 지상부 추출물을 제조하는 방법을 제공한다.
또한 상기 방법은 상기 추출물을 물에 현탁시킨 후 메틸렌클로리드, 에틸아세테이트, 부탄올 또는 이들의 조합으로 분획화하는 단계를 더 포함할 수 있다.
또 다른 양상은 상기한 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 개체의 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 개선시키는 방법을 제공한다.
투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피 (transdermal), 점막, 코안 (intranasal), 기관내 (intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 상처가 존재하는 부위에 국소적으로 투여하는 것일 수 있다.
상기 조성물은 개체의 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 효율적으로 개선시키기 위해 스테로이드, 항염증제, 항히스타민제, 항생제, 및 항진균제와 같은 약물과 함께 복합적으로 투여될 수 있고, 상기 복합 투여는 순차적, 동시적, 또는 개별적으로 개체에 투여되는 것일 수 있다.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 아토피 피부염의 개선을 필요로 하는 개체일 수 있다.
상기 투여는 땅콩 지상부 추출물 또는 그의 분획물을 개체당 일당 0.1 mg 내지 1,000 mg, 예를 들면, 0.1 mg 내지 500 mg, 0.1 mg 내지 100 mg, 0.1 mg 내지 50 mg, 0.1 mg 내지 25 mg, 1 mg 내지 1,000 mg, 1 mg 내지 500 mg, 1 mg 내지 100 mg, 1 mg 내지 50 mg, 1 mg 내지 25 mg, 5mg 내지 1,000 mg, 5 mg 내지 500 mg, 5 mg 내지 100 mg, 5 mg 내지 50 mg, 5 mg 내지 25 mg, 10mg 내지 1,000 mg, 10 mg 내지 500 mg, 10 mg 내지 100 mg, 10 mg 내지 50 mg, 또는 10 mg 내지 25 mg을 투여하는 것일 수 있다.
일 양상에 따른 땅콩 (Arachis hypogaea L.) 지상부의 추출물, 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는 개체에서 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 개선하기 위한 조성물에 의하면, 아토피 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 개선시키는데 사용될 수 있다.
다른 양상에 따른 초음파 조사하에 땅콩 지상부를 물, C1 내지 C6의 알코올 또는 이들의 혼합물과 접촉시키는 단계를 포함하는 땅콩 지상부 추출물을 제조하는 방법에 의하면, 땅콩 지상부의 추출물, 또는 그의 분획을 효율적으로 제조할 수 있다.
또 다른 양상에 따른 상기 조성물을 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 개선시키기에 유효한 양으로 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 개체의 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 개선시키는 방법에 의하면, 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 앓는 개체에 투여되어, 개체의 상기 질환을 효율적으로 개선시킬 수 있다.
도 1은 RBL-H23 세포에 땅콩 지상부 추출물 및 분획물 처리 후 IL-4 발현량을 측정한 것이다.
도 2는 땅콩 지상부의 HPLC 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 3는 무모 마우스에서 땅콩 지상부 추출물 처리 후 시간 경과에 따른 경피 수분 손실량(TEWL)을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 무모 마우스에서 땅콩 지상부 추출물을 처리한 후 수분 함유량(hydration)을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 무모 마우스에서 땅콩 지상부 추출물을 처리한 후 피부표면 pH를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 6는 무모 마우스에서 땅콩 지상부 추출물을 처리한 후 피부 표현형의 비교 사진을 나타낸 것이다.
도 7은 Balb/c 마우스에서 땅콩 지상부 추출물을 처리한 후 귀 표현형의 사진 및 귀 두께를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 Balb/c 마우스에서 땅콩 지상부 추출물을 처리한 후 혈청내 IgE 및 IL-4 의 단백질양을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 땅콩 지상부의 HPLC 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 3는 무모 마우스에서 땅콩 지상부 추출물 처리 후 시간 경과에 따른 경피 수분 손실량(TEWL)을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 무모 마우스에서 땅콩 지상부 추출물을 처리한 후 수분 함유량(hydration)을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 무모 마우스에서 땅콩 지상부 추출물을 처리한 후 피부표면 pH를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 6는 무모 마우스에서 땅콩 지상부 추출물을 처리한 후 피부 표현형의 비교 사진을 나타낸 것이다.
도 7은 Balb/c 마우스에서 땅콩 지상부 추출물을 처리한 후 귀 표현형의 사진 및 귀 두께를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 Balb/c 마우스에서 땅콩 지상부 추출물을 처리한 후 혈청내 IgE 및 IL-4 의 단백질양을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
1: 땅콩 지상부 추출물 및 그의
분획물의
제조 및 그 효과의 확인
본 실시예에서는 땅콩 지상부 추출물 및 그의 분획물을 제조하고, 상기 추출물 및 그의 분획물이 아토피 피부염 개선에 미치는 효과를 확인하였다.
1. 땅콩 지상부 추출물 및 그의
분획물의
제조
(1) 땅콩 지상부 추출물의 제조
본 실시예에서 사용된 땅콩 지상부는 생장하여 땅콩을 수확하고 남은 지상부를 대한민국 경상북도 영주시에서 직접 채집하여 건조한 것을 사용하였다.
(1-1) 땅콩 지상부-메탄올 추출물의 제조
땅콩 지상부 전초 1.2 kg을 세절하여 BANDELIN electronic GmbH & Co. KG에서 제조한 초음파 기기인 BANDELIN SONOREX Ultrasonic baths의 조(bath)에 담긴 물 중 99% 메탄올 6.1 L에 담그고 3 시간 동안 초음파를 조사하였다. 이를 3회 반복하여 얻은 추출액을 감압 건조하여 농축함으로써 농축물 67.0 g (이하 '땅콩 지상부-메탄올 추출물'이라 한다)을 얻었다.
(1-2) 땅콩 지상부-에탄올 추출물의 제조
땅콩 지상부 전초 480 g을 사용하고, 95 % 에탄올 12 L를 사용한 것을 제외하고 동일한 과정에 의하여 땅콩 지상부-에탄올 추출물 20.4 g을 얻었다.
(1-3) 땅콩 지상부 추출물의
분획물의
제조
실시예 (1-1)에서 제조한 땅콩 지상부-메탄올 추출물 67.0 g을 670 ml의 증류수에 현탁시키고 계통학적 분획방법에 따라 동량의 메틸렌클로리드(CH2Cl2), 에틸아세테이트(EtOAc) 및 부탄올 (n-BuOH)로 각각 3회씩 추출하여 분획한 후 감압농축하여 메틸렌클로리드 층 19.4 g, 에틸아세테이트 층 1.44 g, 부탄부층 1.44 g, 및 물층 23.7 g을 획득하여 각각 CH2Cl2 분획, EtOAc 분획, n-BuOH 분획 및 물 분획으로 하였다.
2. 땅콩 지상부 추출물 및 그의
분획물이
IL-4 발현에 미치는 영향
본 실험에서 사용한 랫트 호염기성 백혈병 세포(rat basophilic leukemia cell)인 RBL-2H3 세포는 한국세포주은행 (Korea Cell Line Bank; Seoul, Korea)에서 분양받아 사용하였다.
RBL-2H3 세포를 웰당 5x105개 농도로 6공 평판 배양기 (6-well plate)의 각 웰에 접종하여 10% 우태아혈청 (fetal bovine serum: FBS)과 1% 페니실린/스트렙토마이신이 함유된 DMEM (Dulecco' Modified Eagle Medium) 배지 중에서 37℃, 5% CO2 조건의 인큐베이터에서 배양하고, 16시간 후에 1μM의 시클로스포린(cyclosporine) A와 시료를 10μg/ml의 농도로 첨가하고 1 시간 동안 배양하여 전처리하였다. 시료는 실시예 (1)에서 제조된 땅콩 지상부 추출물 또는 그의 분획물이다. 다음으로, 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트(phorbol 12-myristate 13-acetate: PMA) 50 ng/ml와 이오노미신(ionomycin) 1μM을 첨가하고 동일한 조건에서 9시간 동안 배양하였다. PMA와 이오노미신은 인터페론, 페르포린, IL-2, 및 IL-4와 같은 시토킨의 세포내 생산을 자극하기 위하여 사용된다.
세포는 RNeasy mini kit (Qiagen)을 사용하여 QIAsymphony 또는 QIAQube (Qiagen) 기기에 장착하여 RNA를 추출하였다. 추출한 RNA는 Agilent 2100 BioAnalyzer (Agilent Technologies, SantaClara, CA, USA)를 사용하여 견고성(integrity)을 확인하였다. cDNA는 ImProm-II Reverse Transcription System (Promega, Madison, WI, USA)을 이용하여 1㎍의 RNA를 cDNA로 합성하였다. PCR은 GeneAmp PCR System 9700 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA)을 사용하여 수행하였다.
PCR 반응은 0.02 ㎕ Ex taq polymerase (TAKARA, Otsu, Shiga, Japan), 2 ㎕ Ex taq polymerase buffer, 1.6 ㎕ dNTP (10 mM), 2 ㎕ 포워드 프라이머 (20uM), 2 ㎕ 리버스 프라이머 (20 uM), 11.38 ㎕ nuclease free water와 1㎕의 합성한 first-strand cDNA를 잘 섞어 총 20 ㎕ 용량의 반응 혼합물에 대하여 PCR을 수행하였다.
IL-4의 PCR 조건은 94℃에서 4분 (1 cycle), 94℃에서 30초, 60℃에서 30초 그리고 72℃에서 30초 (25 cycles), 72℃에서 5분 (1 cycle)이었고, 베타-액틴 조건은 94℃에서 4분 (1 cycle), 94℃에서 30초, 55℃에서 30초 그리고 72℃에서 30초 (20 cycles), 72℃에서 5분 (1 cycle) 이었다. RT-PCR 결과는 QIAxcel advanced (Qiagen)기기를 사용하여 밴드의 강도를 측정하였다. 효능에 대한 분석은 [PMA + 이오노미신(ionomycin)](PI) 처리군의 비율을 100으로 하여 이와 비교하여 결정하였다. RT-PCR에 사용된 프라이머는 표 1에 나타낸 바와 같다.
| Forward sequence | Reverse sequence | |
| IL-4 | CCACCTTGCTGTCACCCTGTTCTGCT | GTGTTGTGAGCGTGGACTCATTCACG |
| β-액틴 | ACCGTGAAAAGATGACCCAG | TGTCAGCTGTGGTGGTGAAG |
표 2는 땅콩 지상부 추출물 및 분획물이 IL-4 발현에 미치는 영향을 PI 처리군을 100으로 하여 그에 대한 비율로 IL-4가 저해되는 정도를 나타낸 것이다.
| 시료 | IL-4 발현 (%) |
| 무처리군 | 35.4 |
| PI | 100.0 |
| PI + CsA | 24.4 |
| PI + 땅콩 지상부 추출물 | 15.7 |
| PI + 땅콩 지상부 CHCl2 분획물 | 6.8 |
| PI + 땅콩 지상부 EtOAc 분획물 | 0.0 |
| PI + 땅콩 지상부 n-BuOH 분획물 | 54.2 |
| PI + 땅콩 지상부 H2O 분획물 | 13.3 |
표 2에서, CsAs는 시클로스포린 A를 나타낸다.
표 2 및 도 1에 나타낸 바와 같이, 땅콩 지상부 추출물 및 분획물은 RBL-2H3 세포에서 IL-4의 발현을 저해시켰다. 이는 땅콩 지상부 추출물 및 분획물이 아토피 증상완화에 도움이 될 수 있음을 보여주는 결과이다.
또한 각 분획은 CHCl2 〈 EtOAc 〈 n-BuOH 〈 물 순으로 극성이 높다. 표 2를 참조하면 각 분획마다 IL-4 발현의 억제 정도에 있어 현저한 차이를 갖는 것으로 나타났으며, 특히 CHCl2, EtOAc 및 물 분획이 현저한 효과를 갖는 것으로 보였다.
3. 땅콩 지상부의
HPLC
성분 패턴 분석
땅콩 지상부의 구체적인 성분을 분석하기 위해 땅콩 지상부 분획물의 HPLC 분석을 수행하였다. 구체적으로, 시료를 10㎕ 주입하여, Agilent 1200 Series HPLC system/DAD를 이용하여, 역상 컬럼 (YMC triart C18 (4.6 ×150 mm, 5 μm)을 사용하였다. 컬럼의 온도는 40℃를 유지하였고, 용출 용매로 A는 물, B는 아세토니트릴을 gradient solvent system으로서 1㎖/분의 유속으로 5%의 A, 95 %의 B의 조성으로 시작하여, 용출 용매 B의 부피를 90%(3분), 10%(23분), 및 10%(25분)로 점차적으로 흘려주었다. 이때 컬럼에서 분리된 각각의 성분을 자외선 검출기를 이용하여 280 nm에서 검출하였다.
상기와 같은 조건에서 검출 시간이 이를수록 비극성, 늦을수록 극성에 가까운 성분이 검출된다. 도 2를 참조하면, 다수의 강한 세기의 피크가 검출되었고, 상기 피크가 밀집하여 검출되는 시간이 다양한 구획으로서 존재하는 것으로 관찰되었다.
4. 땅콩 지상부-메탄올 추출물이
DNCB에
의하여 아토피 피부염 유도된 무모 마우스(hairless mouse)에서 피부 장벽기능에 미치는 영향
6 주령(암컷, 23-27g) 무모 마우스(hairless mouse, 오리엔트바이오에서 구입)를 3개의 군으로 분리하였다: 무처리군(n=2), 2,4-디니트로클로로벤젠(2,4-dinitrochlorobenzene: DNCB) 유도 후 비히클 처리군(n=4), DNCB 유도 후 땅콩 지상부 추출물 처리군(n=4). DNCB는 물중 99% 아세톤과 올리브 오일을 부피 기준으로 3:1로 섞은 용액을 용매로 사용하였다. 비히클은 프로필렌 글리콜과 에탄올을 부피 기준으로 7:3으로 섞은 것을 사용하였다. 군 분리 후 7일 동안 1일 1회 1(v/v/)% DNCB 용액을 마우스 등에 200㎕ 씩 도포하였다. 마지막 도포 후 일주일 간 처리하지 않고 일주일 후 2일 간격으로 총 7번 0.1(v/v)% DNCB 용액을 위와 같은 방법으로 도포하였다. 0.1(v/v)% DNCB 용액을 도포하며 14일 동안 비히클을 용매로 한 땅콩 지상부 추출물 1(v/v)% 용액과 비히클을 오전 및 오후로 나누어 1일 2회로 마우스 등에 200㎕ 씩 각각 도포하였다.
시료가 도포된 마우스 피부에 대하여, 경피수분손실량 (TEWL, Trans Epidermal Water Loss)은 AquaFlux (Biox, London, UK)를 이용해서 측정하였고, 피부 수분 함유량(hydration)과 pH는 Skin-O-Mat (COSMOMEP, Berlin, Germany)를 이용하여 측정하였다. 처음 DNCB에 의하여 아토피 피부염을 유도하기 전, 유도 후 7일 후, 14일 후 및 21일 후 측정하였다.
그 결과, 무모 마우스에서 땅콩 지상부 추출물 처리 후 시간경과에 따른 경피 수분 손실량(TEWL) 차이를 나타낸 도 3에 나타낸 바와 같이, 땅콩 지상부 추출물은 무모 마우스에서 대조군인 비히클에 비해 경피 수분 손실량이 무처리군과 비슷한 정도로 낮아진 것을 확인할 수 있다. 따라서 땅콩 지상부 추출물이 무모 마우스에서 비히클에 비해 확연하게 피부장벽 기능이 강화시키는 것을 알 수 있다.
또한 도 4에 나타낸 바와 같이, 땅콩 지상부 추출물이 무모 마우스에서 대조군인 비히클에 비해 수분함유량(hydration)을 높이는 것을 확인 할 수 있고, 따라서 땅콩 지상부 추출물이 무모 마우스에서 비히클에 비해 피부장벽 기능을 강화시키는 것을 알 수 있다.
피부 장벽이 무너지면 피부 표면의 pH 값이 상승하게 되는데, 무모 마우스에서 땅콩 지상부 처리 후 시간 경과에 따른 피부 pH 값을 측정한 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 땅콩 지상부 추출물은 무모 마우스에서 대조군인 비히클에 비해 pH 값이 크게 변하지 않는 것으로 보였다. 따라서 땅콩 지상부 추출물에 의해 피부 장벽 기능이 강화된 것을 알 수 있다.
도 6은 무모 마우스에서 땅콩 지상부 추출물 처리 후 시간 경과에 따른 피부 표현형의 비교사진을 나타낸 것이다. 상기 도 6에서 알 수 있는 바와 같이, 땅콩 지상부 추출물은 무모 마우스에서 DNCB-아토피 피부염 유도 후 7 일째부터 대조군인 비히클 군보다 피부 상태를 좋게 하였다. DNCB-아토피 피부염을 유도하면 각질이 심하게 일어나며 피부가 각화되는 것을 볼 수 있는데, 1% 땅콩 지상부 추출물을 처리했을 때 피부의 각화와 각질의 양이 감소하는 것을 확인할 수 있다. 따라서, 땅콩 지상부 추출물이 피부 장벽 기능을 확연하게 강화시킨다는 것을 알 수 있다.
5. 땅콩 지상부 에탄올 추출물이 옥사졸론(4-에톡시메틸렌-2-페닐옥사졸론)에 의하여 아토피 피부염이 유도된
Balb
/c 마우스에서 비정상적인 면역학적 기능에 미치는 영향
(5-1).
Balb
/c 마우스에서 아토피 피부염 유도 및 표현형 측정
6 주령(암컷, 17-20g) 무모 마우스(hairless mouse, 오리엔트 바이오에서 구입)를 3개의 군으로 분리하였다: 무처리군(n=2), 옥사졸론-아토피 피부염 유도 후 비히클 처리군(n=4), 옥사졸론-아토피 피부염 유도 후 땅콩 지상부 에탄올 추출물 처리군(n=4). 옥사졸론은 물 중 99% 아세톤을 용매로 사용하였다. 비히클은 프로필렌 글리콜과 에탄올을 부피 기준으로 7:3으로 섞은 것을 사용하였다.
군 분리 후 첫 날 1(v/v)% 옥사졸론 용액을 마우스 양쪽 귀에 15㎕ 씩 한번 도포하였다. 일주일간 순치시킨 후 2일 간격으로 총 11번 0.1% 옥사졸론 용액을 위와 같은 방법으로 도포하여 아토피 피부염과 같은 병변을 유도하였다. 0.1% 옥사졸론 용액을 도포하며 21일 동안 비히클을 용매로 한 1 % 땅콩 지상부 추출물 용액과 비히클을 오전 및 오후로 나누어 마우스 양쪽 귀에 15㎕ 씩 각각 도포하였다. 귀 두께는 디지털 자를 이용하여 유도하기 전에 첫 측정 후 일주일을 주기로 측정하였다. 처음 1% 옥사졸론 용액으로 유도를 시작한지 28일 째 되는 날 마우스를 해부하여 귀조직, 혈액, 및 비장을 채취하고 사진을 촬영하였다.
그 결과, BALB/c 마우스에서 땅콩 지상부 처리 후 21일째의 귀 표현형과 귀 두께의 차이를 나타낸 도 7에서 알 수 있는 바와 같이, 땅콩 지상부 추출물을 처리한 BALB/c 마우스에서는 대조군인 비히클에 비해 홍반 현상이 적어진 것을 확인할 수 있고 각질 또한 제거된 것을 확인할 수 있다. 옥사졸론을 마우스의 귀에 도포할 경우 비정상적인 면역반응에 의해 귀 두께는 두꺼워지고 각질이 일어나게 되는데, 땅콩 지상부 추출물을 처리한 실험군의 경우 대조군인 비히클에 비해 귀 두께가 감소한 것을 확인할 수 있다. 따라서 땅콩 지상부 추출물은 아토피 피부장벽 기능이 강화시킬 수 있음을 알 수 있다.
(5-2) 아토피 피부염 동물 모델의 혈장 내
IgE
및 IL-4의 변화
상기 혈액 중 혈장에서 아토피피부염의 마커로 쓰이며 아토피 피부염에서 가장 중요한 요인 중 하나인 면역글로불린E(IgE)와 면역세포의 시토킨 중 하나인 인터루킨-4(IL-4)의 단백질 양을 ELISA 실험법을 이용하여 측정하였다.
구체적으로, 마우스 마취시킨 후에 0.18M EDTA 30㎕가 들어있는 주사기를 이용하여 복부대동맥에서 혈액을 채취하였다. 상기 채취된 혈액을 원심분리기를 이용하여 4℃, 8000rpm에서 15분간 원심분리하여 혈장 및 혈구를 분리하였다. 상기 혈장에서 mouse IgE ELISA quantitation kit (Bethy Laboratories, Montgomery, TX, USA)와 mouse IL-4 ELISA quantitation kit (Bethy Laboratories, Montgomery, TX, USA)를 사용하여, 혈장 내 IgE 및 IL-4를 검출하였다.
그 결과, 도 8에 나타낸 바와 같이 땅콩 지상부 추출물은 BALB/c 마우스에서 대조군인 비히클에 비해 혈장 내 IgE 단백질 양은 변화가 없었으나, IL-4 단백질 양은 현저히 감소하는 경향을 확인하였다.
Claims (15)
- 땅콩 (Arachis hypogaea L.) 지상부의 추출물, 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 개선하기 위한 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 땅콩 지상부는 건조된 것인 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 추출물은 친수성 용매 (hydrophilic solvent)로 하여 추출된 것인 조성물.
- 청구항 3에 있어서, 상기 친수성 용매는 물, C1 내지 C6의 알코올 또는 이들의 혼합물인 조성물.
- 청구항 4에 있어서, 상기 알코올은 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, n-부탄올, sec-부탄올, 이소부탄올, tert-부탄올 또는 이들의 혼합물인 것인 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 추출물은 초음파 조사하에 추출된 것인 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 분획물은 상기 땅콩 지상부 추출물을 물에 현탁 시킨 후, 메틸렌클로리드(CH2Cl2), 에틸아세테이트(EtOAc) 또는 부탄올 (n-BuOH)로 추출하여 분획화하여 얻어진 메틸렌클로리드 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 또는 부탄올 분획물인 것인 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 추출물은 면역기능을 안정화시키는 것인 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 추출물은 IL-4의 발현을 저해하는 것인 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 피부염은 피부 소양증, 지루성 피부염, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 당뇨병성 피부염, 모낭염, 여드름, 알레르기성 피부염 및 신경성 피부염으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 화장품학적으로, 약학적으로, 또는 식품적으로 허용가능한 부형제 또는 담체를 더 포함하는 것인 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 약학, 식품 또는 화장료의 유효성분으로 첨가되는 것인 조성물.
- 초음파 조사하에 땅콩 지상부를 물, C1 내지 C6의 알코올 또는 이들의 혼합물과 접촉시키는 단계를 포함하는 땅콩 지상부 추출물을 제조하는 방법.
- 청구항 13에 있어서, 상기 방법은 상기 추출물을 물에 현탁시킨 후 메틸렌클로리드, 에틸아세테이트, 부탄올 또는 이들의 조합으로 분획화하는 단계를 더 포함하는 것인 방법.
- 청구항 1 내지 14 중 어느 하나의 조성물을 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 개선시키기에 유효한 양으로 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 개체의 피부염 또는 그로부터 야기되는 2차 질병을 개선시키는 방법.
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