KR20180054796A - 베타 세포 복제 및/또는 생존의 향상 - Google Patents

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KR20180054796A
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다니엘 엘 카우프만
자이드 티안
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더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아
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Abstract

특정 실시형태에서, 포유동물에서 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키는 방법이 제공되며, 여기서 이 방법은 포유동물에게 GABAA 수용체 양성 알로스테릭 조절인자(PAM)와 함께 GABA 수용체 활성화 리간드를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 단독으로 투여된 경우 베타 세포 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능에 대해서 동일한 효과를 달성하는 데 사용되었을 것보다 더 낮은 투여량으로 사용되고/사용되거나 상기 양성 알로스테릭 조절인자는 치료량 미만의 투여량으로 사용된다.

Description

베타 세포 복제 및/또는 생존의 향상
관련 출원에 대한 상호-참조
본 출원은 2015년 10월 14일자로 출원된 특허 제USSN 62/241,566호 및 2016년 1월 18일자로 출원된 제USSN 62/279,908호의 이익 및 우선권을 주장하며, 이들 둘 모두는 모든 목적을 위해서 이들의 전문이 참고로 본 명세서에 포함된다.
정부 지원의 성명
본 발명은 미국 국립 보건원(National Institutes of Health)에 의해서 수여된 증서 번호 DK092480 하에 정보 지원으로 수행되었다. 정부는 본 발명의 특정 권리를 갖는다.
베타 세포(β-세포)는 혈액 중의 글루코스의 수준을 제어하는 호르몬인, 인슐린을 생산 및 분비하는 췌장에서 랑게르한스섬에 위치된 췌장 세포의 유형이다.
췌장은 다음 2가지 주요 기능을 제공한다: (i) 외분비 소포 세포에 의해서 분비되고, 분지화된 도관 네트워크에 의해서 소장으로 안내되는, 소화 효소의 생산; 및 (ii) 랑게르한스섬(islets of Langerhans)의 내분비 세포에 의해서 달성되는, 혈당의 조절. 몇몇 개별 내분비 세포 유형은 췌도(islet)를 포함한다. β-세포 또는 "베타 세포"라고도 지칭되는 췌장 β 세포는 종에 따라서 전체의 약 50 내지 80%에 해당하는 가장 우세한 것이다. B-세포는 혈액 중의 글루코스의 수준을 제어하는 호르몬인 인슐린, C-펩타이드, 신경병 및 혈관 손상과 관련된 당뇨병의 다른 증상을 예방하는 데 도움을 주는, 인슐린 생산의 부산물, 및 내분비 췌장의 부분으로서 기능하고, 혈당 제어에 기여하는, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드(IAP, 또는 IAPP)라고도 알려진, 아밀린을 비롯한 다수의 폴리펩타이드를 생산한다. 글루카곤-생산 α-세포는 다음으로 가장-일반적인 세포 유형이다. 각각 전체의 작은 소수를 차지하는 나머지 췌도 세포는 소마토스타틴을 생산하는 δ-세포, 췌장 폴리펩타이드를 생산하는 PP 세포; 및 그렐린을 생산하는 ε-세포를 포함한다.
베타 세포의 손상된 기능 및 감소된 수는 당뇨병, 비만 및 다른 장애를 비롯한 대사 질환에 관련된다.
GABA가 T 세포-매개된 자가면역 질환의 상이한 모델에서 자가면역 반응을 저해하고, Treg 반응을 향상시키고, 베타-세포 아포토시스를 저해하고, 마우스 베타-세포 복제를 촉진시킬 수 있다는 것을 발견하였다. 이러한 발견을 확장시켜, GABAA-수용체(GABAA-R) 및 GABAB-R 둘 모두의 활성화가 마우스 베타-세포 복제 및 인간 베타-세포 복제를 마찬가지로 촉진시킬 수 있다는 것을 발견하였다. 그러나, GABA는 그의 수용체에 대해서 생체내에서 비교적 낮은 친화도, 신속한 오프-레이트(fast off-rate) 및 짧은 반감기를 갖고, 이는 환자가 치료적 효능을 위해서, 하루에 수회, 수그램의 GABA를 섭취하는 것을 필요로 할 수 있고, 이는 다소 번거롭고, 환자 순응도를 감소시킨다.
놀랍게도, GABAA-R 양성 알로스테릭 조절인자(positive allosteric modulator: PAMS)와 조합된 GABA 수용체 활성화 리간드가 포유동물에서 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능(예를 들어, 인슐린 생산, 혈당에 대한 감응 등)을 촉진시킬 수 있다는 것을 발견하였다. 더욱이, GABA 수용체 활성화 리간드와 PAM의 조합물이 베타 세포에 대한 이러한 효과에서 상승작용적이라는 것은 특히 놀라운 것이었다.
본 명세서에서 고려되는 다양한 실시형태는 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있지만, 이들로 제한될 필요는 없다:
실시형태 1: 포유동물에서 베타 세포의 복제, 성장, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 포유동물에 GABAA 수용체 양성 알로스테릭 조절인자(PAM)를 상기 포유동물에서 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 성장, 및/또는 양, 및/또는 기능을 촉진시키기에 충분한 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
실시형태 2: 실시형태 1에 있어서, 상기 GABAA 수용체 양성 알로스테릭 조절인자(PAM)는 GABAA 수용체 양성 알로스테릭 조절인자(PAM)는 GABA 수용체 활성화 리간드와 함께 투여되는, 방법.
실시형태 3: 실시형태 2에 있어서, GABA 수용체 활성화 리간드는 상기 PAM과 함께 사용되는 경우 어느 하나의 작용제가 단독으로 투여되는 경우보다 상기 포유동물에서 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키기에 더 효과적인, 방법.
실시형태 4: 실시형태 3에 있어서, GABA 수용체 활성화 리간드는 PAM과 함께 사용되는 경우 어느 하나의 작용제가 단독으로 투여되는 경우보다 상기 포유동물에서 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키기에 적어도 10%, 또는 적어도 20%, 또는 적어도 30%, 또는 적어도 40%, 또는 적어도 50%, 또는 적어도 60%, 또는 적어도 70%, 또는 적어도 80%, 또는 적어도 90%, 또는 적어도 100%, 또는 적어도 1.2배, 또는 적어도 1.5배, 또는 적어도 2배, 또는 적어도 3배, 또는 적어도 4배, 또는 적어도 5배, 또는 적어도 10배 더 효과적인, 방법.
실시형태 5: 실시형태 2에 있어서, GABA 수용체 활성화 리간드는 단독으로 투여된 경우 베타 세포 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능에 대해서 동일한 효과를 달성하는 데 사용되었을 것보다 더 낮은 투여량으로 사용되고/사용되거나 상기 양성 알로스테릭 조절인자는 PAM이 단독으로 사용된 경우 PAM이 설계 및/또는 승인되는 활성을 달성하는 데 사용되었을 것보다 더 낮은 투여량으로 사용되는, 방법.
실시형태 6: 실시형태 5에 있어서, GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA 수용체 활성화 리간드가 단독으로 사용되는 경우 베타 세포 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능에 대해서 동일한 효과를 달성하는 데 사용되었을 투여량의 약 95% 미만, 또는 약 90% 미만, 또는 약 80% 미만, 또는 약 70% 미만, 또는 약 60% 미만, 또는 약 50% 미만, 또는 약 40% 미만, 또는 약 30% 미만, 또는 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만으로 사용되는, 방법.
실시형태 7: 실시형태 5 또는 6에 있어서, 상기 양성 알로스테릭 조절인자는 PAM이 단독으로 사용된 경우 PAM이 설계 및/또는 승인되는 활성도를 달성하는 데 사용되었을 투여량의 약 95% 미만, 또는 약 90% 미만, 또는 약 80% 미만, 또는 약 70% 미만, 또는 약 60% 미만, 또는 약 50% 미만, 또는 약 40% 미만, 또는 약 30% 미만, 또는 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만으로 사용되는, 방법.
실시형태 8: 실시형태 5 내지 7 중 어느 하나에 있어서, GABA 수용체 활성화 리간드는 단독으로 투여된 경우 베타 세포 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능에 대해서 동일한 효과를 달성하는 데 사용되었을 것보다 더 낮은 투여량으로 사용되고/사용되거나 상기 양성 알로스테릭 조절인자는 치료량 미만의 투여량으로 사용되는, 방법.
실시형태 9: 실시형태 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 베타 세포의 복제를 촉진시키는, 방법.
실시형태 10: 실시형태 1 내지 9 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 베타 세포의 양을 증가시키는, 방법.
실시형태 11: 실시형태 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 베타 세포의 생존을 촉진시키는, 방법.
실시형태 12: 실시형태 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 베타 세포의 기능을 촉진시키는, 방법.
실시형태 13: 실시형태 12에 있어서, 상기 투여는 인슐린 함량 및/또는 베타 세포에 의해서 분비되는 인슐린의 양을 증가시키는, 방법.
실시형태 14: 실시형태 12에 있어서, 상기 투여는 인슐린 양성 베타 세포의 수를 증가시킴으로써 기능을 촉진시키는, 방법.
실시형태 15: 실시형태 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 포유동물은 인간인, 방법.
실시형태 16: 실시형태 15에 있어서, 상기 포유동물은 제I형 당뇨병으로 진단된 인간인, 방법.
실시형태 17: 실시형태 15에 있어서, 상기 포유동물은 당뇨병 전증(pre-diabetic)으로 진단된, 방법.
실시형태 18: 실시형태 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 포유동물은 비-인간 포유동물인, 방법.
실시형태 19: 실시형태 1 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드 및 상기 PAM은 상승작용적으로 작용하여 상기 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 성장, 및/또는 기능을 개선시키는, 방법.
실시형태 20: 실시형태 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 상기 PAM은 AP325, 및 AP3으로 이루어진 군으로부터 선택된 작용제를 포함하는, 방법.
실시형태 21: 실시형태 20에 있어서, 상기 PAM은 AP325를 포함하는, 방법.
실시형태 22: 실시형태 21에 있어서, 상기 AP325는 신경병증 통증 또는 척수 손상을 위해서 사용되는 것보다 더 낮은 투여량으로 투여되는, 방법.
실시형태 23: 실시형태 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 상기 PAM은 바비투에이트(barbituate), 벤조다이아제핀, 퀴나졸리논, 및 신경스테로이드로 이루어진 군으로부터 선택된 작용제를 포함하는, 방법.
실시형태 24: 실시형태 23에 있어서, 상기 PAM은 바비투에이트를 포함하는, 방법.
실시형태 25: 실시형태 24에 있어서, 상기 PAM은 알로바비탈(5,5-다이알릴바비투레이트), 아모바비탈(5-에틸-5-아이소펜틸-바비투레이트), 아프로바비탈(5-알릴-5-아이소프로필-바비투레이트), 알펜알(5-알릴-5-페닐-바비투레이트), 바비탈(5,5-다이에틸바비투레이트), 브랄로바비탈(5-알릴-5-(2-브로모-알릴)-바비투레이트), 펜토바비탈(5-에틸-5-(1-메틸부틸)-바비투레이트), 페노바비탈(5-에틸-5-페닐바비투레이트), 세코바비탈(5-[(2R)-펜탄-2-일]-5-프로프-2-엔일-바비투레이트)로 이루어진 군으로부터 선택된 바비투레이트를 포함하는, 방법.
실시형태 26: 실시형태 23에 있어서, 상기 PAM은 벤조다이아제핀을 포함하는, 방법.
실시형태 27: 실시형태 26에 있어서, 상기 PAM은 알프라졸람, 브로마제팜, 클로르다이아제폭사이드, 미다졸람, 클로나제팜, 클로라제페이트, 다이아제팜, 에스타졸람, 플루라제팜, 할라제팜, 케타졸람, 로라제팜, 나이트라제팜, 옥사제팜, 프라제팜, 쿠아제팜, 테마제팜, 및 트라이졸람으로 이루어진 군으로부터 선택된 벤조다이아제핀을 포함하는, 방법.
실시형태 28: 실시형태 26에 있어서, 상기 PAM은 알프라졸람을 포함하는, 방법.
실시형태 29: 실시형태 28에 있어서, 상기 알프라졸람은 불안 장애, 공황 장애, 및/또는 우울증으로 인한 불안을 치료하는 데 사용되는 것보다 낮은 투여량으로 투여되는, 방법.
실시형태 30: 실시형태 28에 있어서, 상기 알프라졸람은 경구로 1일당 1.5㎎ 미만 또는 경구로 1일당 1.0㎎ 미만, 또는 경구로 1일당 0.5㎎ 미만의 속방형(immediate release) 정제로서, 또는 경구로 1일당 0.5㎎ 미만, 또는 경구로 1일당 약 0.4㎎ 미만 또는 경구로 1일당 약 0.3㎎ 미만의 서방형(extended release) 정제로서 투여되는, 방법.
실시형태 31: 실시형태 26에 있어서, 상기 PAM은 미다졸람을 포함하는, 방법.
실시형태 32: 실시형태 31에 있어서, 상기 미다졸람은 불안을 감소시키거나, 의료 절차 또는 수술 이전에 수면 또는 마취를 제공하거나, 진정 또는 마취를 유지시키는 데 사용되는 것보다 적은 투여량으로 투여되는, 방법.
실시형태 33: 실시형태 31에 있어서, 상기 미다졸람은 IV로 1㎎ 미만, 또는 IV로 약 0.8㎎ 미만, 또는 IV로 약 0.5㎎ 미만, 또는 IV로 약 0.01㎎/㎏ 미만, 또는 IM으로 약 0.07㎎/㎏ 미만, 또는 IM으로 약 0.05㎎/㎏ 미만, 또는 IM으로 약 0.03㎎/㎏ 미만, 또는 약 0.01㎎/㎏ 미만의 투여량으로 투여되는, 방법.
실시형태 34: 실시형태 26에 있어서, 상기 PAM은 클로나제팜을 포함하는, 방법.
실시형태 35: 실시형태 34에 있어서, 상기 클로나제팜은 발작 장애(결여 발작(absence 발작) 또는 레녹스-가스토 증후군(Lennox-Gastaut syndrome) 포함)을 치료하는 데 사용되는 것보다 적은 투여량으로 투여되거나, 또는 성인에서 공황 장애(광장공포증 포함)를 치료하는 데 사용되는 것보다 적은 투여량으로 투여되는, 방법.
실시형태 36: 실시형태 34에 있어서, 상기 클로나제팜은 경구로 1일당 약 0.5㎎ 미만 또는 경구로 1일당 약 0.25㎎ 미만, 또는 약 0.01㎎/㎏/일 미만, 또는 약 0.005㎎/㎏/일 미만의 투여량으로 투여되는, 방법.
실시형태 37: 실시형태 23에 있어서, 상기 PAM은 신경스테로이드를 포함하는, 방법.
실시형태 38: 실시형태 37에 있어서, 상기 PAM은 알로프레그난올론(3α-하이드록시-5α-프레그난-20-온), 및 프레그난올론으로 이루어진 군으로부터 선택된 신경스테로이드를 포함하는, 방법.
실시형태 39: 실시형태 2 내지 38 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA를 포함하는, 방법.
실시형태 40: 실시형태 2 내지 38 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 바말루졸, 가바마이드, GABOB, 가복사돌, 이보텐산, 아이소구바신, 아이소니페코트산, 머스키몰, 페니부트, 피카밀론, 프로가비드, 퀴스쿠알라민, 프로가비드산(SL 75102), 싸이오머스키몰, 프레가발린, 비가바트린, 6-아미노니코틴산, 호모타우린, 및 XP13512[(±)-1-([(α-아이소부타노일옥시에톡시)카보닐]아미노메틸)-1-사이클로헥산 아세트산]로 이루어진 군으로부터 선택된 작용제를 포함하는, 방법.
실시형태 41: 실시형태 1 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 췌도 이식(islet transplantation) 후 베타 세포 생존을 증가시키는, 방법.
실시형태 42: 실시형태 1 내지 41 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 췌도 이식 후 췌도에서 베타 세포 복제를 증가시키는, 방법.
실시형태 43: 실시형태 1 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 저산소증 및 스트레스로 인한 β-세포 손실을 감소시키기 위해서 췌도 체내이식(implantation) 후 수행되는, 방법.
실시형태 44: 실시형태 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 체내이식 후 최대 3일 동안, 또는 체내이식 후 최대 1주 동안, 또는 체내이식 후 최대 2주 동안, 또는 체내이식 후 최대 3주 동안, 또는 체내이식 후 최대 4주 동안, 또는 체내이식 후 최대 5주 동안, 또는 체내이식 후 최대 6주 동안, 또는 체내이식 후 최대 7주 동안, 또는 체내이식 후 최대 8주 동안, 또는 체내이식 후 최대 3개월 동안, 또는 체내이식 후 최대 4개월 동안, 또는 체내이식 후 최대 5개월 동안, 또는 체내이식 후 최대 6개월 동안 수행되는, 방법.
실시형태 45: 실시형태 2 내지 44 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 알코올이 아닌, 방법.
실시형태 46: 실시형태 2 내지 45 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 카발락톤이 아닌, 방법.
실시형태 47: 실시형태 2 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 스컬캡(skullcap) 또는 스컬캡 구성성분이 아닌, 방법.
실시형태 48: 실시형태 2 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 발레리안(valerian) 또는 발레리안 구성성분이 아닌, 방법.
실시형태 49: 실시형태 2-48 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 휘발성 기체가 아닌, 방법.
실시형태 50: 실시형태 1 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 상기 포유동물은 신경병증 통증, 척수 손상, 불안 장애, 공황 장애, 우울증으로 인한 불안, 발작 장애(결여 발작 또는 레녹스-가스토 증후군 포함), 및 월경 간질로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 병태에 대해서 치료되고 있지 않은, 방법.
실시형태 51: 실시형태 1 내지 50 중 어느 하나에 있어서, 상기 PAM은 의료 절차 또는 수술 이전에 수면 또는 마취를 제공하거나, 또는 진정 또는 마취를 유지시키기 위해서 투여되지 않는, 방법.
실시형태 52: 실시형태 1 내지 51 중 어느 하나에 있어서, BBB-투과성인 상기 PAMS는 CNS 적응증을 위해서 사용되는 것보다 더 적은 용량으로 투여되는, 방법.
실시형태 53: GABA 수용체 활성화 리간드 및 GABAA 수용체 양성 알로스테릭 조절인자(PAM)를 포함하는 약제학적 제형.
실시형태 54: 실시형태 53에 있어서, GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA 수용체 활성화 리간드 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하고/하거나 PAM은 PAM 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하는, 약제학적 제형.
실시형태 55: 실시형태 54에 있어서, GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA 또는 GABA 유사체 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하는, 약제학적 제형.
실시형태 56: 실시형태 55에 있어서, GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA 수용체 활성화 리간드가 단독으로 제공되는 경우 베타 세포 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능에 대해서 동일한 효과를 달성하는 데 제공되었을 투여량의 약 95% 미만, 또는 약 90% 미만, 또는 약 80% 미만, 또는 약 70% 미만, 또는 약 60% 미만, 또는 약 50% 미만, 또는 약 40% 미만, 또는 약 30% 미만, 또는 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만으로 존재하는, 약제학적 제형.
실시형태 57: 실시형태 53 내지 56의 실시형태 중 어느 하나에 있어서, PAM은 PAM 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하는, 약제학적 제형.
실시형태 58: 실시형태 57에 있어서, 상기 양성 알로스테릭 조절인자는 PAM이 단독으로 사용된 경우 PAM이 설계 및/또는 승인되는 활성도를 달성하는 데 존재했을 양의 약 95% 미만, 또는 약 90% 미만, 또는 약 80% 미만, 또는 약 70% 미만, 또는 약 60% 미만, 또는 약 50% 미만, 또는 약 40% 미만, 또는 약 30% 미만, 또는 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만으로 존재하는, 약제학적 제형.
실시형태 59: 실시형태 53 내지 58 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 또는 GABA 유사체 및 상기 PAM은 GABAA 수용체를 발현시키는 세포의 복제를 자극시키는 데 있어서 상승작용적 활성도를 제공하기에 충분한 농도로 존재하는, 약제학적 제형.
실시형태 60: 실시형태 53 내지 58 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드 및 상기 PAM은 베타 세포의 복제를 자극시키고/거나 베타 세포의 생존을 촉진시키고/거나 베타 세포의 기능을 개선시키는 데 있어서 상승작용적 활성도를 제공하기에 충분한 농도로 존재하는, 약제학적 제형.
실시형태 61: 실시형태 53 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드 및 상기 PAM은 포유동물에서 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키는 데 있어서 어느 하나의 작용제가 단독으로 투여되는 경우보다 적어도 10%, 또는 적어도 20%, 또는 적어도 30%, 또는 적어도 40%, 또는 적어도 50%, 또는 적어도 60%, 또는 적어도 70%, 또는 적어도 80%, 또는 적어도 90%, 또는 적어도 100%, 또는 적어도 1.2배, 또는 적어도 1.5배, 또는 적어도 2배, 또는 적어도 3배, 또는 적어도 4배, 또는 적어도 5배, 또는 적어도 10배 더 큰 효능을 제공하기에 충분한 농도로 존재하는, 약제학적 제형.
실시형태 62: 실시형태 53 내지 61 중 어느 하나에 있어서, 상기 PAM은 바비투에이트(barbituate), 벤조다이아제핀, 퀴나졸리논, 및 신경스테로이드로 이루어진 군으로부터 선택된 작용제를 포함하는, 약제학적 제형.
실시형태 63: 실시형태 62에 있어서, 상기 PAM은 바비투에이트를 포함하는, 약제학적 제형.
실시형태 64: 실시형태 63에 있어서, 상기 PAM은 알로바비탈(5,5-다이알릴바비투레이트), 아모바비탈(5-에틸-5-아이소펜틸-바비투레이트), 아프로바비탈(5-알릴-5-아이소프로필-바비투레이트), 알펜알(5-알릴-5-페닐-바비투레이트), 바비탈(5,5-다이에틸바비투레이트), 브랄로바비탈(5-알릴-5-(2-브로모-알릴)-바비투레이트), 펜토바비탈(5-에틸-5-(1-메틸부틸)-바비투레이트), 페노바비탈(5-에틸-5-페닐바비투레이트), 세코바비탈(5-[(2R)-펜탄-2-일]-5-프로프-2-엔일-바비투레이트)로 이루어진 군으로부터 선택된 바비투레이트를 포함하는, 약제학적 제형.
실시형태 65: 실시형태 62에 있어서, 상기 PAM은 벤조다이아제핀을 포함하는, 약제학적 제형.
실시형태 66: 실시형태 65에 있어서, 상기 PAM은 알프라졸람, 브로마제팜, 클로르다이아제폭사이드, 미다졸람, 클로나제팜, 클로라제페이트, 다이아제팜, 에스타졸람, 플루라제팜, 할라제팜, 케타졸람, 로라제팜, 나이트라제팜, 옥사제팜, 프라제팜, 쿠아제팜, 테마제팜, 및 트라이졸람으로 이루어진 군으로부터 선택된 벤조다이아제핀을 포함하는, 약제학적 제형.
실시형태 67: 실시형태 65에 있어서, 상기 PAM은 알프라졸람을 포함하는, 약제학적 제형.
실시형태 68: 실시형태 65에 있어서, 상기 PAM은 미다졸람을 포함하는, 약제학적 제형.
실시형태 69: 실시형태 65에 있어서, 상기 PAM은 클로나제팜을 포함하는, 약제학적 제형.
실시형태 70: 실시형태 62에 있어서, 상기 PAM은 신경스테로이드를 포함하는, 약제학적 제형.
실시형태 71: 실시형태 70에 있어서, 상기 PAM은 알로프레그난올론 및 프레그난올론으로 이루어진 군으로부터 선택된 신경스테로이드를 포함하는, 약제학적 제형.
실시형태 72: 실시형태 53 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA를 포함하는, 약제학적 제형.
실시형태 73: 실시형태 53 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 바말루졸, 가바마이드, GABOB, 가복사돌, 이보텐산, 아이소구바신, 아이소니페코트산, 머스키몰, 페니부트, 피카밀론, 프로가비드, 퀴스쿠알라민, 프로가비드산(SL 75102), 싸이오머스키몰, 프레가발린, 비가바트린, 6-아미노니코틴산, 호모타우린, 및 XP13512[(±)-1-([(α-아이소부타노일옥시에톡시)카보닐]아미노메틸)-1-사이클로헥산 아세트산]로 이루어진 군으로부터 선택된 작용제를 포함하는, 약제학적 제형.
실시형태 74: 실시형태 53 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 알코올이 아닌, 약제학적 제형.
실시형태 75: 실시형태 53 내지 74 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 카발락톤이 아닌, 약제학적 제형.
실시형태 76: 실시형태 53 내지 75 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 스컬캡 또는 스컬캡 구성성분이 아닌, 약제학적 제형.
실시형태 77: 실시형태 53 내지 76 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 발레리안 또는 발레리안 구성성분이 아닌, 약제학적 제형.
실시형태 78: GABAA 수용체를 발현시키는 포유동물 세포에서 복제를 촉진시키기 위한 키트로서, 상기 키트는 GABA 수용체 활성화 리간드를 함유하는 용기; 및 GABAA 수용체 양성 알로스테릭 조절인자(PAM)를 함유하는 용기를 포함하는, 키트.
실시형태 79: 실시형태 78에 있어서, GABA 수용체 활성화 리간드 및 PAM은 동일한 용기에 존재하는, 키트.
실시형태 80: 실시형태 78에 있어서, GABA 수용체 활성화 리간드 및 PAM은 별개의 용기에 존재하는, 키트.
실시형태 81: 실시형태 78 내지 80 중 어느 하나에 있어서, GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA 또는 GABA 유사체 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하고/하거나 PAM은 PAM 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하는, 키트.
실시형태 82: 실시형태 78 내지 80 중 어느 하나에 있어서, GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA 또는 GABA 유사체 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하는, 키트.
실시형태 83: 실시형태 82에 있어서, GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA 수용체 활성화 리간드가 단독으로 제공되는 경우 베타 세포 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능에 대해서 동일한 효과를 달성하는 데 제공되었을 투여량의 약 95% 미만, 또는 약 90% 미만, 또는 약 80% 미만, 또는 약 70% 미만, 또는 약 60% 미만, 또는 약 50% 미만, 또는 약 40% 미만, 또는 약 30% 미만, 또는 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만으로 존재하는, 키트.
실시형태 84: 실시형태 78 내지 83 중 어느 하나에 있어서, PAM은 PAM 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하는, 키트.
실시형태 85: 실시형태 78 내지 84 중 어느 하나에 있어서, 상기 양성 알로스테릭 조절인자는 PAM이 단독으로 사용된 경우 PAM이 설계 및/또는 승인되는 활성도를 달성하는 데 존재했을 양의 약 95% 미만, 또는 약 90% 미만, 또는 약 80% 미만, 또는 약 70% 미만, 또는 약 60% 미만, 또는 약 50% 미만, 또는 약 40% 미만, 또는 약 30% 미만, 또는 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만으로 존재하는, 키트.
실시형태 86: 실시형태 78 내지 85 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드 및 상기 PAM은 GABAA 수용체를 발현시키는 세포의 복제를 자극시키는 데 있어서 상승작용적 활성도를 제공하기에 충분한 농도로 존재하는, 키트.
실시형태 87: 실시형태 78 내지 85 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드 및 상기 PAM은 베타 세포의 복제를 자극시키고/거나 베타 세포의 생존을 촉진시키고/거나 베타 세포의 기능을 개선시키는 데 있어서 상승작용적 활성도를 제공하기에 충분한 농도로 존재하는, 키트.
실시형태 88: 실시형태 78 내지 87 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드 및 상기 PAM은 포유동물에서 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키는 데 있어서 어느 하나의 작용제가 단독으로 투여되는 경우보다 적어도 10%, 또는 적어도 20%, 또는 적어도 30%, 또는 적어도 40%, 또는 적어도 50%, 또는 적어도 60%, 또는 적어도 70%, 또는 적어도 80%, 또는 적어도 90%, 또는 적어도 100%, 또는 적어도 1.2배, 또는 적어도 1.5배, 또는 적어도 2배, 또는 적어도 3배, 또는 적어도 4배, 또는 적어도 5배, 또는 적어도 10배 더 큰 효능을 제공하기에 충분한 농도로 존재하는, 키트.
실시형태 89: 실시형태 78 내지 88 중 어느 하나에 있어서, 상기 PAM은 바비투에이트, 벤조다이아제핀, 퀴나졸리논, 및 신경스테로이드로 이루어진 군으로부터 선택된 작용제를 포함하는, 키트.
실시형태 90: 실시형태 89에 있어서, 상기 PAM은 바비투에이트를 포함하는, 키트.
실시형태 91: 실시형태 90에 있어서, 상기 PAM은 알로바비탈(5,5-다이알릴바비투레이트), 아모바비탈(5-에틸-5-아이소펜틸-바비투레이트), 아프로바비탈(5-알릴-5-아이소프로필-바비투레이트), 알펜알(5-알릴-5-페닐-바비투레이트), 바비탈(5,5-다이에틸바비투레이트), 브랄로바비탈(5-알릴-5-(2-브로모-알릴)-바비투레이트), 펜토바비탈(5-에틸-5-(1-메틸부틸)-바비투레이트), 페노바비탈(5-에틸-5-페닐바비투레이트), 세코바비탈(5-[(2R)-펜탄-2-일]-5-프로프-2-엔일-바비투레이트)로 이루어진 군으로부터 선택된 바비투레이트를 포함하는, 키트.
실시형태 92: 실시형태 89에 있어서, 상기 PAM은 벤조다이아제핀을 포함하는, 키트.
실시형태 93: 실시형태 92에 있어서, 상기 PAM은 알프라졸람, 브로마제팜, 클로르다이아제폭사이드, 미다졸람, 클로나제팜, 클로라제페이트, 다이아제팜, 에스타졸람, 플루라제팜, 할라제팜, 케타졸람, 로라제팜, 나이트라제팜, 옥사제팜, 프라제팜, 쿠아제팜, 테마제팜, 및 트라이졸람으로 이루어진 군으로부터 선택된 벤조다이아제핀을 포함하는, 키트.
실시형태 94: 실시형태 92에 있어서, 상기 PAM은 알프라졸람을 포함하는, 키트.
실시형태 95: 실시형태 92에 있어서, 상기 PAM은 클로나제팜을 포함하는, 키트.
실시형태 96: 실시형태 92에 있어서, 상기 PAM은 미다졸람을 포함하는, 키트.
실시형태 97: 실시형태 89에 있어서, 상기 PAM은 신경스테로이드를 포함하는, 키트.
실시형태 98: 실시형태 97에 있어서, 상기 PAM은 알로프레그난올론 및 프레그난올론으로 이루어진 군으로부터 선택된 신경스테로이드를 포함하는, 키트.
실시형태 99: 실시형태 78 내지 98 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA를 포함하는, 키트.
실시형태 100: 실시형태 78 내지 98 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 바말루졸, 가바마이드, GABOB, 가복사돌, 이보텐산, 아이소구바신, 아이소니페코트산, 머스키몰, 페니부트, 피카밀론, 프로가비드, 퀴스쿠알라민, 프로가비드산(SL 75102), 싸이오머스키몰, 프레가발린, 비가바트린, 6-아미노니코틴산, 호모타우린, 및 XP13512[(±)-1-([(α-아이소부타노일옥시에톡시)카보닐]아미노메틸)-1-사이클로헥산 아세트산]로 이루어진 군으로부터 선택된 작용제를 포함하는, 키트.
실시형태 101: 실시형태 78 내지 100 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 알코올이 아닌, 키트.
실시형태 102: 실시형태 78 내지 101 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 카발락톤이 아닌, 키트.
실시형태 103: 실시형태 78 내지 102 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 스컬캡 또는 스컬캡 구성성분이 아닌, 키트.
실시형태 104: 실시형태 78 내지 103 중 어느 하나에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 발레리안 또는 발레리안 구성성분이 아닌, 키트.
정의
용어 "GABA 수용체 활성화 리간드"는 GABA 수용체 중 1종 이상에 대한 효능제인 작용제를 지칭한다. 특정 실시형태에서, GABA 수용체 활성화 리간드는 적어도 GABAA 수용체에 대한 효능제이다.
용어 "GABAA 수용체의 양성 알로스테릭 조절인자" 또는 (PAM)은 척추동물 중추 신경계에서 GABAA 수용체 단백질의 활성도를 증가시키는 분자를 지칭한다. GABAA 수용체 효능제와 달리, GABAA PAM은 감마-아미노부티르산(GABA) 신경전달물질 분자와 동일한 활성 부위에서 결합하지 않는다. 다양한 실시형태에서, PAM은 GABAA 수용체가 이의 클로라이드 채널을 개방하는 것을 촉발시키거나 가능하게 한다.
용어 "베타 세포 기능"은 특히 인슐린 생산, 분비, 및 β-세포 면적과 관련된, 베타 세포의 기능을 지칭한다. 베타 세포 기능의 증가는 베타 세포의 인슐린 함량의 증가 및/또는 베타 세포에 의한 인슐린 분비의 증가 및/또는 인슐린 양성 베타 세포의 수의 증가를 지칭한다.
용어 "치료량 미만의 투여량"은 PAM과 관련하여 사용되는 경우 PAM이 본래 설계 및/또는 승인된 활성도에 대해서 사용된 경우의 PAM의 승인 및/또는 권장 및/또는 인식된 투여량보다 적은 투여량을 지칭한다. 따라서, 예를 들어, 벤조다이아제핀, 예컨대 알프라졸람의 치료량 미만의 투여량은 우울증, 공황 장애, 및/또는 불안을 위한 벤조다이아제핀의 승인 및/또는 권장 및/또한 인식된 투여량보다 적은 투여량을 지칭한다. 특정 실시형태에서 치료량 미만의 투여량은 PAM이 설계 및/또는 승인된 활성도(예를 들어, 우울증, 공황 장애, 및/또는 불안)를 위해서 제안된 투여량의 약 90% 미만, 또는 약 80% 미만, 또는 약 70% 미만, 또는 약 60% 미만, 또는 약 50% 미만, 또는 약 40% 미만, 또는 약 30% 미만, 또는 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만이다.
구 "와 함께" 또는 "와 조합하여"는 본 명세서에 기술된 1종 이상의 다른 약물(예를 들어, 1종 이상의 PAM)과 함께 본 명세서에 기술된 활성제(들)(예를 들어, 1종 이상의 GABA 수용체 활성화 리간드(들))의 사용과 관련하여 사용되는 경우 GABA 수용체 활성화 리간드(들) 및 PAM(들)이 유기체, 및 특히 베타 세포에 대한 그들의 생리학적 활성도에 있어서 적어도 일부의 시간적인 중첩이 존재하도록 투여되는 것을 나타낸다. 따라서, 다양한 실시형태에서, GABA 수용체 활성화 리간드(들) 및 PAM(들)은 동시에 및/또는 순차적으로 투여될 수 있다. 순차적인 투여에서, 제2 투여 작용제가 투여되거나 유기체에서 활성화될 때 제1 투여 약물/작용제가 유기체에 대해서 어느 정도 생리학적 변화를 발휘하는 한, 제2 모이어티의 투여 전에 심지어는 어느 정도의 실질적인 지연(예를 들어, 수분 또는 심지어는 수시간 또는 수일)이 존재할 수 있다.
도 1은 GABA 수용체 소단위를 도시하는 개략도. 이 도면은 단지 벤조다이아제핀 결합 부위를 나타낸다. PAM의 다른 부류에 대해서 다른 결합 부위가 존재한다.
도 2. 인간 췌도(50/웰)를 아프라졸람(30ng/㎖)과 함께 또는 그것 없이 4일 동안 3H 티미딘의 존재 하에서 배지 중에서 인큐베이션시켰다. 도시된 데이터는 배지 만을 갖는 배양물의 것(1로서 지정됨)에 대한 증식의 평균 속도이다. N=3개의 배양물을 사용한 2회의 독립적인 연구. 데이터는 두 연구 모두에서 매우 유사하였다.
도 3 인간 췌도(50 IEQ/웰)를 알프라졸람(30ng/㎖)과 함께 또는 그것 없이 4일 동안 3H 티미딘의 존재 하에서 제시된 투여량의 GABA와 함께 인큐베이션시켰다. 도시된 데이터는 GABA 또는 알프라졸람이 없는 배양물의 것(1로서 지정됨)에 대한 증식의 평균 속도이다. N=2회의 독립적인 연구.
도 4, 패널 A 및 B는 미다졸람을 사용하는 것이 INS-1 세포의 증식을 향상시켰음을 나타낸다. 패널 A)는 10-배의 단계의 넓은 투여량 범위에 걸친 결과를 나타낸다. 패널 B)는 더 작은 용량 증가의 더 작은 용량 범위에 걸친 결과를 나타낸다.
도 5, 패널 An 및 B는, 미다졸람 또는 클로나제팜으로의 치료가 시험관내에서 GABA-유도된 INS-1 세포 증식을 향상시킨다는 것을 나타낸다.
도 6은 AP325 또는 AP3으로의 처리가 시험관내에서 INS-1 세포 증식을 자극시키지 않는다는 것을 나타낸다. 데이터는 적어도 3회의 개별 실험으로부터의, 어떤 치료도 없는 대조군과 비교한, % 세포 증식의 평균 ± SD로서 표현된다. 대조군 세포 증식을 100으로서 지정하였다.
도 7은 AP325가 시험관내에서 GABA-자극된 INS-1 세포 증식을 향상시킨 것을 나타낸다. 데이터는 적어도 3회의 개별 실험으로부터의, 어떤 치료도 없는 대조군과 비교한, 세포 증식의 평균 ± SD로서 표현된다. 대조군 세포 증식을 1로서 지정하였다.
도 8은 AP3이 시험관내에서 GABA-유도된 INS-1 세포 증식을 향상시킨 것을 나타낸다. 데이터는 3회의 개별 실험으로부터의, 어떤 치료도 없는 대조군에 대한 상대적인 세포 증식의 평균 ± SD로서 표현된다. 대조군 세포 증식을 1로서 지정하였다. 대조군으로부터 상당한 차이를 유도한 치료는 실시예 3)에 언급되어 있다.
도 9, 패널 A 내지 H: 패널 A) INS-1 세포에서 GAD 효소 활성도. INS-1 세포 및 293T 세포(성장 단계에서 수확됨), 뿐만 아니라 새로운 마우스 뇌 및 인간 췌도를 사용 시까지 -80C에서 저장하였다. 샘플을 프로테아제 저해제를 갖는 GAD 활성도 검정 완충제 중에서 균질화시켰다. 호모게네이트(homogenate) 내에서의 GAD 효소 활성도를 이미 기술된 바와 같이 표준 CO2 트랩핑 검정법(4회)을 사용하여 평가하였다(문헌[Kaufman et al. (1991) J. Neurochem . 56: 720-723]). 도시된 데이터는 3회의 실험으로부터의 대표적인 검정법으로부터의 평균 CPM +/- SEM이다. 패널 B) INS-1 세포 증식에 대한 PAM의 효과. INS-1 세포를 10-9 내지 10-6M의 용량 범위에서 제시된 PAM과 함께 배양하고, 이의 증식에 대해서 평가하였다. 도시된 데이터는 배지 만을 갖는 배양물의 것(1로서 지정됨)에 대한 증식의 평균 속도이다. 알프라졸람(패널 C), 미다졸람(패널 D), 클로나제팜(패널 E), AP325(패널 F), 또는 AP3(패널 G)을 GABA의 용량 범위와 함께 제시된 농도로 인큐베이션시켰다. 대조군 배양물을 제시된 농도의 GABA 단독과 함께 인큐베이션시켰다. ††††P<0.001 대 배지 단독을 갖는 대조군 배양물. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 대 동일한 용량의 GABA를 갖는 배양물. H) INS-1 세포를 GABA(0.3 mM) 및 미다졸람 또는 클로나제팜(100nM)과 함께, TSPO 저해제 PK11195(1uM)와 함께 또는 그것 없이 48시간 동안 배양하였다.
도 10은 알프라졸람이 인간 췌도 세포 복제를 향상시킨 것을 나타낸다. 새로운 인간 췌도를 방법에 기술된 바와 같이 제시된 PAM과 함께, 또는 그것 없이, 제시된 용량의 GABA로 처리하였다. 도시된 데이터는 배지 만을 갖는 배양물의 것(1로서 지정됨)에 대한 증식의 평균 속도이다. N=3개의 배양물을 사용한 2회의 독립적인 연구. 결과는 두 연구 모두에서 매우 유사하였다. *p<0.05
도 11은 GABA-결합 부위 차단제/저해제 비쿠쿨린이 췌도 세포 복제를 향상시키는 알프라졸람의 능력을 제거하는 것을 나타낸다. 인간 췌도를 표준 용량 범위의 비쿠쿨린(0 내지 50uM)과 함께 알프라졸람(100nM)과 인큐베이션시켰다. 도시된 데이터는 배지 만을 갖는 배양물의 것(1로서 지정됨)에 대한 증식의 평균 속도이다.
도 12는 알프라졸람이 인간 췌도 세포 복제를 촉진시키는 GABA의 능력을 향상시킨다는 것을 나타낸다. 인간 췌도를 알프라졸람(100ng/㎖)과 함께 다양한 용량 범위의 GABA와 함께 4일 동안 3H 티미딘과 인큐베이션시켰다. 도시된 데이터는 대표적인 연구에서 배지 만을 갖는 배양물의 것(1로서 지정됨)에 대한 증식의 평균 속도이다. N=3개의 배양물을 사용한 2회의 독립적인 연구. GABA, 또는 GABA+알프라졸람 대 대조군 배지의 경우의 ††p<0.01 및 †††p<0.001. GABA+알프라졸람 대 GABA 단독의 경우 *p<0.05 및 ***P<0.01.
본 명세서에 기술된 조성물 및 방법은 GABAA 수용체의 양성 알로스테릭 조절인자와 조합된 GABA 수용체 활성화 리간드가 포유동물에서 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시킬 수 있다는 발견에 관한 것이다. 더욱이, 양성 알로스테릭 조절인자와 조합하여 GABA 수용체 활성화 리간드를 사용하는 것은 단독으로 사용되는 GABA 수용체 활성화 리간드보다 베타 세포 복제 및/또는 생존, 및/또는 기능에 대해서 상당히 더 큰 효과를 제공한다. 특정 이론에 얽매이고자 함은 아니지만, GABA 수용체 활성화 리간드와 PAM의 조합물은 베타 세포 복제 및/또는 생존, 및/또는 기능에 대해서 상승작용적 효과를 갖는 것으로 보인다.
GABA 수용체 활성화 리간드와 PAM의 조합물에 의해서 제공된 개선된 효과를 고려하여, GABA 수용체 활성화 리간드 및/또는 PAM은 포유동물에서(예를 들어, 췌도 세포 이식이 제공된 포유동물에서) 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키기 위해서 GABA 수용체 활성화 리간드 또는 PAM이 단독으로 사용된 경우 사용되었을 것보다 더 낮은 투여량으로 사용될 수 있다.
따라서, 다양한 실시형태에서, 포유동물에서 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키는 방법이 제공되며, 여기서 이 방법은 상기를 필요로 하는 포유동물(예를 들어, 췌도 세포 이식이 제공된 대상체)에게 GABAA 수용체 양성 알로스테릭 조절인자(PAM)와 함께 GABA 수용체 활성화 리간드를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 GABA 수용체 활성화 리간드는 단독으로 투여된 경우 베타 세포 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능에 대해서 동일한 효과를 달성하는 데 사용되었을 것보다 더 낮은 투여량으로 사용되고/사용되거나 상기 양성 알로스테릭 조절인자는 치료량 미만의 투여량으로 사용된다. 특정 실시형태에서 두 작용제 모두의 투여는 베타 세포의 복제를 촉진시킨다. 특정 실시형태에서 두 작용제 모두의 투여는 베타 세포의 생존을 촉진시킨다. 특정 실시형태에서 두 작용제 모두의 투여는 베타 세포의 기능을 촉진시킨다(예를 들어, 인슐린 함량 및/또는 분비를 증가시킨다). 특정 실시형태에서 두 작용제 모두의 투여는 인슐린 양성 베타 세포의 수를 증가시킨다.
특정 실시형태에서 GABA 수용체 활성화 리간드 및 GABAA 수용체 양성 알로스테릭 조절인자(PAM)를 포함하는 약제학적 제형이 제공된다. 특정 실시형태에서 본 명세서에 기술된 방법의 실시를 위한 키트가 또한 고려된다. 다양한 실시형태에서 이러한 키트는 GABA 수용체 활성화 리간드를 함유하는 용기 및 GABAA 수용체 양성 알로스테릭 조절인자(PAM)를 함유하는 용기, 및 임의로 특히, 본 명세서에 기술된 방법에서 이들 작용제의 사용을 교시하는 지시서를 포함한다.
GABA 수용체 활성화 리간드
GABA 수용체 활성화 리간드는 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 이러한 리간드는 예를 들어, GABA 수용체를 위한 네이티브 리간드인 감마-아미노부티르산(GABA)을 포함한다. 다른 GABA 수용체 활성화 리간드는 호모타우린, 바말루졸, 가바마이드, GABOB, 가복사돌, 이보텐산, 아이소구바신, 아이소니페코트산, 머스키몰, 페니부트, 피카밀론, 프로가비드, 퀴스쿠알라민, 프로가비드산(SL 75102), 싸이오머스키몰, 프레가발린, 비가바트린, 6-아미노니코틴산, XP13512((±)-1-([(α-아이소부타노일옥시에톡시)카보닐]아미노메틸)-1-사이클로헥산 아세트산) 등을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
이들 GABA 수용체 활성화 리간드는 예시적이며, 비-제한적인 것으로 의도된다. 다른 GABA 수용체 활성화 리간드는 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있고, 본 명세서에 기술된 방법, 제형 및 키트에서의 이의 용도가 고려된다.
GABA A 수용체 양성 알로스테릭 조절인자(PAM)
GABAA의 양성 알로스테릭 조절인자(PAM)는 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 예시적인 PAMS는 알코올(예를 들어, 에탄올, 아이소프로판올), 아버멕틴(예를 들어, 이버멕틴), 바비투레이트(예를 들어, 페노바비탈), 벤조다이아제핀, 브로마이드(예를 들어, 브로민화칼륨, 카바메이트(예를 들어, 메프로바메이트, 카리소프로돌), 클로랄로스, 클로르메자논, 클로메싸이아졸, 다이하이드로에르골린(예를 들어, 에르골로이드(다이하이드로에르고톡신)), 에타제핀, 에티폭신, 이미다졸(예를 들어, 에토미데이트), 카발락톤(카바(kava)에서 발견됨), 로레클레졸, 신경활성 스테로이드(예를 들어, 알로프레그난올론, 가낙솔론), 비벤조다이아제핀(nonbenzodiazepine)(예를 들어, 잘레플론, 졸피뎀, 조피클론, 에스조피클론), 페트리클로랄, 페놀(예를 들어, 프로포폴), 피페리딘다이온(예를 들어, 글루테티미드, 메티프릴론), 프로프아니디드, 피라졸로피리딘(예를 들어, 에타졸레이트), 퀴나졸리논(예를 들어, 메타쿠알론), 스컬캡 구성성분(예를 들어, 플라보노이드, 예컨대 바이칼레인을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 스쿠텔라리아 종(Scutellaria sp.)), 스티리펜톨, 설포닐알칸(예를 들어, 설폰메탄, 테트로날, 트라이오날), 발레리안 구성성분(예를 들어, 발레르산, 발레렌산), 및 특정 휘발성물질/기체(예를 들어, 클로랄 수화물, 클로로폼, 다이에틸 에터, 세보플루란)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 다양한 실시형태에서 GABA 수용체 활성화 리간드와 조합하여 사용되는 PAM은 알코올, 및/또는 카발락톤, 및/또는 스컬캡 또는 스컬캡 구성성분, 및/또는 발레리안 또는 발레리안 구성성분, 및/또는 휘발성 기체를 제외한다.
특정 실시형태에서 PAM은 바비투에이트, 벤조다이아제핀, 퀴나졸리논, 및 신경스테로이드로 이루어진 군으로부터 선택된 작용제를 포함한다. 예시적인 바비투에이트는 알로바비탈(5,5-다이알릴바비투레이트), 아모바비탈(5-에틸-5-아이소펜틸-바비투레이트), 아프로바비탈(5-알릴-5-아이소프로필-바비투레이트), 알펜알(5-알릴-5-페닐-바비투레이트), 바비탈(5,5-다이에틸바비투레이트), 브랄로바비탈(5-알릴-5-(2-브로모-알릴)-바비투레이트), 펜토바비탈(5-에틸-5-(1-메틸부틸)-바비투레이트), 페노바비탈(5-에틸-5-페닐바비투레이트), 세코바비탈(5-[(2R)-펜탄-2-일]-5-프로프-2-엔일-바비투레이트) 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 벤조다이아제핀은 알프라졸람, 브로마제팜, 클로르다이아제폭사이드, 클로나제팜, 클로라제페이트, 다이아제팜, 에스타졸람, 플루라제팜, 할라제팜, 케타졸람, 로라제팜, 나이트라제팜, 옥사제팜, 프라제팜, 쿠아제팜, 테마제팜, 트라이졸람 등을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
예시적인 신경스테로이드는 알로프레그난올론, 및 프레그난올론을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
특정 실시형태에서 특정 용도의 PAM은 알프라졸람(XANAX(등록상표))을 포함한다.
이들 PAM은 예시적이며, 비-제한적인 것으로 의도된다. 다른 PAM은 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있고, 본 명세서에 기술된 방법, 제형 및 키트에서의 이의 용도가 고려된다.
조합된 제형.
다양한 실시형태에서 1종 이상의 GABA 수용체 활성화 리간드 및 1종 이상의 GABAA 수용체의 양성 알로스테릭 조절인자를 포함하는 약제학적 제형이 고려된다. 특정 실시형태에서 GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA 수용체 활성화 리간드 단독을 포함하는 전형적인, 및/또는 승인 및/또는 제안된 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하고/하거나 PAM은 PAM 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재한다.
특정 실시형태에서 조합된 제형에서 GABA 수용체 리간드는 예를 들어, 본 명세서에 기술된 바와 같이 감마-아미노부티르산(GABA), 호모타우린, 바말루졸, 가바마이드, GABOB, 가복사돌, 이보텐산, 아이소구바신, 아이소니페코트산, 머스키몰, 페니부트, 피카밀론, 프로가비드, 퀴스쿠알라민, 프로가비드산(SL 75102), 싸이오머스키몰, 프레가발린, 비가바트린, 6-아미노니코틴산, XP13512((±)-1-([α-아이소부타노일옥시에톡시)카보닐]아미노메틸)-1-사이클로헥산 아세트산) 등 중 하나 이상을 포함한다.
특정 실시형태에서 조합된 제형에서 PAM은 알코올(예를 들어, 에탄올, 아이소프로판올), 아버멕틴(예를 들어, 이버멕틴), 바비투레이트(예를 들어, 페노바비탈), 벤조다이아제핀, 브로마이드(예를 들어, 브로민화칼륨, 카바메이트(예를 들어, 메프로바메이트, 카리소프로돌), 클로랄로스, 클로르메자논, 클로메싸이아졸, 다이하이드로에르골린(예를 들어, 에르골로이드(다이하이드로에르고톡신)), 에타제핀, 에티폭신, 이미다졸(예를 들어, 에토미데이트), 카발락톤(카바에서 발견됨), 로레클레졸, 신경활성 스테로이드(예를 들어, 알로프레그난올론, 가낙솔론), 비벤조다이아제핀(예를 들어, 잘레플론, 졸피뎀, 조피클론, 에스조피클론), 페트리클로랄, 페놀(예를 들어, 프로포폴), 피페리딘다이온(예를 들어, 글루테티미드, 메티프릴론), 프로프아니디드, 피라졸로피리딘(예를 들어, 에타졸레이트), 퀴나졸리논(예를 들어, 메타쿠알론), 스컬캡 구성성분(예를 들어, 플라보노이드, 예컨대 바이칼레인을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 스쿠텔라리아 종), 스티리펜톨, 설포닐알칸(예를 들어, 설폰메탄, 테트로날, 트라이오날), 발레리안 구성성분(예를 들어, 발레르산, 발레렌산) 중 하나 이상을 포함한다. 다양한 실시형태에서 GABA 수용체 활성화 리간드와 조합하여 사용되는 PAM은 예를 들어, 본 명세서에 기술된 바와 같이, 알코올, 및/또는 카발락톤, 스컬캡 또는 스컬캡 구성성분 등을 제외한다.
특정 실시형태에서 조합된 제형은 GABA 및 알프라졸람을 포함한다.
활성제(들)(예를 들어, 본 명세서에 기술된 GABA 수용체 활성화 리간드(들) 및 PAM(들))는 "네이티브" 형태로, 또는 바람직한 경우, 염, 에스터, 아마이드, 전구약물, 유도체 등의 형태로 제형화 및 투여될 수 있되, 단 그러한 염, 에스터, 아마이드, 전구약물 또는 유도체는 약제학적으로 적합하고, 즉 본 방법(들)에서 효과적이다. 활성제의 염, 에스터, 아마이드, 전구약물 및 다른 유도체는 합성 유기 화학 분야의 통상의 기술자에게 공지되고, 예를 들어 문헌[March (1992) Advanced Organic Chemistry; Reactions, Mechanisms and Structure, 4th Ed. N.Y. Wiley-Interscience]에 기술되고, 상기에 기술된 바와 같은 표준 절차를 사용하여 제조될 수 있다.
예를 들어, 약제학적으로 허용 가능한 염은 염을 형성할 수 있는 기능을 갖는 본 명세서에 기술된 작용제(들)(예를 들어, 본 명세서에 기술된 GABA 수용체 활성화 리간드(들) 및 PAM(들)) 중 임의의 것에 대해서 제조될 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 염은 모 화합물의 활성도를 보유하고, 그것이 투여되는 대상체에 대해서 그리고 그것이 투여되는 것과 관련하여 임의의 유해하거나 뜻밖의 효과를 부여하지 않는 임의의 염이다.
다양한 실시형태에서 약제학적으로 허용 가능한 염은 유기 또는 무기 염기로부터 유래될 수 있다. 염은 1가 또는 다가 이온일 수 있다. 무기 이온, 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 및 마그네슘이 특히 흥미롭다. 유기 염은 아민, 특히 암모늄 염, 예컨대 모노-, 다이- 및 트라이알킬 아민 또는 에탄올 아민으로 제조될 수 있다. 염은 또한 카페인, 트로메타민, 및 유사한 분자로 형성될 수 있다.
약제학적 활성제를 염, 에스터, 아마이드, 전구약물 등으로서 제형화하는 방법은 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 염은 전형적으로 적합한 산과의 반응을 포함하는 종래의 방법을 사용하여 유리 염기로부터 제조될 수 있다. 일반적으로, 약물의 염기 형태를 극성 유기 용매, 예컨대 메탄올 또는 에탄올 중에 용해시키고, 산을 이것에 첨가한다. 생성된 염을 덜 극성인 용매를 첨가함으로써 용액으로부터 침전시키거나 제거할 수 있다. 산 부가 염을 제조하기에 적합한 산은 유기산, 예를 들어, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말산, 말론산, 석신산, 말레산, 푸마르산, 타타르산, 시트르산, 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 살리실산 등, 뿐만 아니라 무기 산, 예를 들어, 염화수소산, 브롬민화수소산, 황산, 질산, 인산 등 둘 모두를 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. 산 부가 염은 적합한 염기로의 처리에 의해서 유리 염기로 재전환될 수 있다. 본 명세서에서 활성제의 특히 바람직한 특정 산 부가 염은 할라이드 염을 포함하고, 예컨대 염화수소산 또는 브로민화수소산을 사용하여 제조될 수 있다. 이에 반해서, 본 발명의 활성제의 염기성 염은 약제학적으로 허용 가능한 염기, 예컨대 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화암모늄, 수산화칼슘, 트라이메틸아민 등을 사용하여 유사한 방식으로 제조된다. 특히 바람직한 염기성 염은 알칼리 금속 염, 예를 들어 나트륨 염 및 구리 염을 포함한다.
염기성 약물의 염 형태의 제조를 위해서, 반대이온의 pKa는 바람직하게는 그 약물의 pKa보다 적어도 약 2 pH 단위 더 낮다. 유사하게, 산성 약물의 염 형태의 제조를 위해서, 반대이온의 pKa는 바람직하게는 그 약물의 pKa보다 적어도 약 2 pH 단위 더 높다. 이는 반대이온이 용액의 pH를 pH최대보다 낮은 수준으로 만들어서 염 안정기(salt plateau)에 도달하게 하며, 여기서 염의 용해도는 유리 산 또는 염기의 용해도보다 우세하다. 활성 약제학적 성분(API) 및 산 또는 염기에서 이온화 가능한 기의 pKa 단위의 차이의 일반 규칙은 양성자 전달을 에너지학적으로 선호되게 한다는 것을 의미한다. API 및 반대이온의 pKa가 상당히 상이하지 않은 경우, 고체 복합체가 형성될 수 있지만, 수성 환경에서 신속하게 불균형이 될 수 있다(즉, 약물의 개별 독립체 및 반대이온으로 분리된다).
바람직하게는, 반대이온은 약제학적으로 허용 가능한 반대이온이다. 적합한 음이온성 염 형태는 아세테이트, 벤조에이트, 벤질레이트, 바이타트레이트, 브로마이드, 카보네이트, 클로라이드, 시트레이트, 에데테이트, 에디실레이트, 에스톨레이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 아이오다이드, 락테이트, 락토비오네이트, 말레이트, 말레에이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸 브로마이드, 메틸 설페이트, 무케이트, 납실레이트, 나이트레이트, 파모에이트(엠보네이트), 포스페이트 및 다이포스페이트, 살리실레이트 및 다이살리실레이트, 스테아레이트, 석시네이트, 설페이트, 타트레이트, 토실레이트, 트라이 트라이에티오다이드, 발러레이트 등을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니며, 적합한 양이온성 염 형태는 알루미늄, 벤자틴, 칼슘, 에틸렌 다이아민, 라이신, 마그네슘, 메글루민, 칼륨, 프로카인, 나트륨, 트로메타민, 아연 등을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
에스터의 제조는 전형적으로는 활성제의 분자 구조 내에 존재하는 하이드록실 및/또는 카복실기의 작용화를 포함한다. 특정 실시형태에서, 에스터는 전형적으로 유리 알코올기의 아실-치환된 유도체, 즉, 화학식 RCOOH의 카복실산으로부터 유래된 모이어티이고, 식 중 R은 알킬이고, 바람직하게는 저급 알킬이다. 에스터는 바람직한 경우, 종래의 수소화분해 또는 가수분해 절차를 사용함으로써 유리 산으로 재전환될 수 있다.
아마이드는 또한 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 공지되거나, 적절한 문헌에 기술된 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 아마이드는 적합한 아민 반응물을 사용하여 에스터로부터 제조될 수 있거나, 또는 이것은 암모니아 또는 저급 알킬 아민과의 반응에 의해서 무수물 또는 산 클로라이드로부터 제조될 수 있다.
다양한 실시형태에서, 본 명세서에서 식별된 활성제(예를 들어, 조합된 GABA 수용체 활성화 리간드(들) 및 PAM(들))는 포유동물에서 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키기 위해서, 비경구 투여, 국소 투여, 경구 투여, 비강 투여(또는 다른 흡입), 직장 투여, 또는 예컨대 에어로졸 또는 경피에 의한 국지 투여에 유용하다.
다양한 실시형태에서 본 명세서에 기술된 활성제는 또한 약제학적으로 허용 가능한 담체(들)(부형제(들))와 조합되어 두 작용제 모두를 함유하는 약리학적 조성물을 형성할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 예를 들어, 조성물을 안정화시키거나 활성제(들)의 흡수를 증가 또는 감소시키는 작용을 하는 1종 이상의 생리학적으로 허용 가능한 화합물(들)을 함유할 수 있다. 생리학적으로 허용 가능한 화합물은 예를 들어, 탄수화물, 예컨대 글루코스 또는 수크로스 또는 덱스트란, 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 글루타싸이온, 킬레이팅제, 저분자량 단백질, 보호 및 흡수 향상제, 예컨대 지질, 활성제의 클리어런스 또는 가수분해를 감소시키는 조성물, 또는 부형제 또는 다른 안정화제 및/또는 완충제를 포함할 수 있다.
특히 정제, 캡슐, 젤 캡 등의 제조에서 사용하기 위한 다른 생리학적으로 허용 가능한 화합물은 결합제, 희석제/충전제, 붕괴제, 윤활제 현탁화제 등을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
특정 실시형태에서, 경구 투여형(예를 들어, 정제)을 제조하기 위해서, 예를 들어, 부형제(예를 들어, 락토스, 수크로스, 전분, 만니톨 등), 임의적인 붕괴제(예를 들어 탄산칼슘, 카복시메틸셀룰로스 칼슘, 나트륨 전분 글리콜레이트, 크로스포비돈 등), 결합제(예를 들어 알파-전분, 검 아라빅, 미세결정질 셀룰로스, 카복시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 하이드록시프로필셀룰로스, 사이클로덱스트린 등), 및 임의적인 윤활제(예를 들어, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 폴리에틸렌 글리콜 6000 등)를 활성 성분 또는 성분들(예를 들어, 알아프로클레이트 및 본 명세서에 기술된 다른 화합물, 또는 이의 호변이성질체(들) 또는 입체이성질체(들), 또는 상기 알아프로클레이트 및 다른 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물, 상기 입체이성질체(들), 또는 상기 호변이성질체(들), 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 전구약물)에 첨가하고, 생성된 조성물을 압착한다. 필요한 경우 압착된 생성물을 예를 들어, 맛을 감추기 위해서 또는 장 용해(enteric dissolution) 또는 지속 방출(sustained release)을 위해서 공지된 방법을 사용하여 코팅한다. 적합한 코팅 재료는 에틸-셀룰로스, 하이드록시메틸셀룰로스, 폴리옥시(등록상표)에틸렌 글리콜, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 하이드록시프로필메틸셀룰로스 프탈레이트, 및 유드라짓(Eudragit)(롬 앤 하스(Rohm & Haas), 독일 소재; 메타크릴-아크릴 공중합체)을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
다른 생리학적으로 허용 가능한 화합물은 습윤제, 유화제, 분산제 또는 미생물의 성장 또는 작용을 예방하기에 특히 유용한 보존제를 포함한다. 다양한 보존제는 널리 공지되어 있고, 예를 들어, 페놀 및 아스코르브산을 포함한다. 관련 기술 분야의 통상의 기술자는, 생리학적으로 허용 가능한 화합물을 비롯한, 약제학적으로 허용 가능한 담체(들)의 선택이 예를 들어, 활성제(들)의 투여 경로 및 활성제(들)의 특정 물리화학적 특징에 좌우된다는 것을 인식할 것이다.
특정 실시형태에서 부형제는 멸균성이고, 일반적으로 바람직하지 않은 물질이 존재하지 않는다. 이러한 조성물은 종래의 널리-공지된 멸균 기술에 의해서 멸균화될 수 있다. 다양한 경구 투여형 부형제, 예컨대 정제 및 캡슐의 경우 무균이 필요하지 않다. USP/NF 표준이 통상적으로 충분하다.
약제학적 조성물은 투여 방법에 따라서 다양한 단위 투여형으로 투여될 수 있다. 적합한 단위 투여형은 분말, 정제, 환제, 캡슐, 로젠지(lozenge), 좌제, 패치, 비강 스프레이, 주사제, 이식 가능한 지속-방출 제형, 점액접착성 필름(mucoadherent film), 국소 바니쉬(topical varnish), 지질 복합체 등을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에 기술된 활성제(예를 들어, GABA 수용체 활성화 리간드(들) 및 PAM(들))를 포함하는 약제학적 조성물은 종래의 혼합, 용해, 과립화, 드라제(dragee)-제조, 분쇄(levigating), 유화, 캡슐화, 인트랩핑(entrapping) 또는 동결건조 공정에 의해서 제조될 수 있다. 약제학적 조성물은 1종 이상의 생리학적으로 허용 가능한 담체, 희석제, 부형제 또는 활성제(들)를 약제학적으로 사용될 수 있는 제제로 가공하는 것을 가능하게 하는 보조제를 사용하여 종래의 방식으로 제형화될 수 있다. 적당한 제형은 선택된 투여 경로에 좌우된다.
특정 실시형태에서, 조합된 활성제(예를 들어, GABA 수용체 활성화 리간드(들) 및 PAM(들))는 경구 투여를 위해서 제형화된다. 적합한 제형 또는 경구 투여는 활성제(들)를 관련 기술 분야에 널리 공지된 경구 전달에 적합한 약제학적으로 허용 가능한 담체와 조합함으로써 쉽게 제조될 수 있다. 이러한 담체는 본 명세서에 기술된 활성제(들)가 치료될 환자에 의한 경구 섭취를 위해서, 정제, 환제, 드라제, 캐플렛(caplet), 리젠지(lizenge), 젤캡, 캡슐, 액체, 겔, 슬러리, 현탁액 등으로서 제형화되는 것을 가능하게 한다. 경구 고체 제형, 예컨대, 예를 들어, 분말, 캡슐 및 정제를 위해서, 적합한 부형제는 충전제, 예컨대 당(sugar)(예를 들어, 락토스, 수크로스, 만니톨 및 소비톨), 셀룰로스 제제(예를 들어, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 검 트라가칸트, 메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸-셀룰로스, 소듐 카복시메틸셀룰로스), 합성 중합체(예를 들어, 폴리비닐피롤리돈(PVP)), 과립화제; 및 결합제를 포함할 수 있다. 바람직한 경우, 붕괴제, 에컨대 가교-결합된 폴리비닐피롤리돈, 아가 또는 알긴산 또는 이의 염, 예컨대 소듐 알지네이트가 첨가될 수 있다. 바람직한 경우, 고체 투여형은 표준 기술을 사용하여 당-코팅 또는 장용-코팅될 수 있다. 장용-코팅된 입자의 제조는 예를 들어, 미국 특허 제4,786,505호 및 제4,853,230호에 개시되어 있다.
흡입에 의한 투여를 위해서, 활성제(들)(예를 들어, 본 명세서에 기술된 GABA 수용체 활성화 리간드(들) 및 PAM(들))는 적합한 추진제, 예를 들어 다이클로로다이플루오로메탄, 트라이클로로플루오로메탄, 다이클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체를 사용하여, 가압된 팩 또는 네블라이저로부터의 에어로졸 스프레이의 형태로 편리하게 전달될 수 있다. 가압된 에어로졸의 경우에, 투여량 단위는 밸브를 제공하여 계량된 양을 전달함으로써 결정될 수 있다. 화합물 및 적합한 분말 염기, 예컨대 락토스 또는 전분의 분말 믹스를 함유하는, 예를 들어, 흡입기 또는 취입기에서 사용하기 위한 젤라틴의 캡슐 및 카트리지가 제형화될 수 있다.
특정 실시형태에서 본 명세서에 기술된 활성제는 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 표준 방법에 따라서 전신 투여(예를 들어, 주사 가능한 것으로서)를 위해서 제형화된다. 전신 제형은, 주사, 예를 들어, 피하, 정맥내, 근육내, 척추강내 또는 복강내 주사에 의한 투여를 위해서 설계된 것, 뿐만 아니라 경피, 점막경유 경구 또는 폐를 위해서 설계된 것을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. 주사를 위해서, 본 명세서에 기술된 활성제는 수성 용액, 바람직하게는 생리학적으로 혼화성인 완충제, 예컨대 행크 용액(Hanks solution), 링거 용액, 또는 생리 염수 완충제 및/또는 특정 에멀전 제형으로 제형화될 수 있다. 용액(들)은 제형화제, 예컨대 현탁화제, 안정화제 및/또는 분산화제를 함유할 수 있다. 특정 실시형태에서 활성제(들)는 사용 전에, 적합한 비히클, 예를 들어, 멸균 발열물질-무함유 수를 사용한 구성을 위한 분말 형태로 제공될 수 있다. 점막경유 투여, 및/또는 혈액/뇌 장벽 통과를 위해서, 투과될 장벽에 적절한 침투제가 제형에서 사용될 수 있다. 이러한 침투제는 일반적으로 관련 기술 분야에 공지되어 있다. 주사 가능한 제형 및 흡입 가능한 제형은 일반적으로 멸균 또는 실질적으로 멸균 제형으로 제공된다.
상기에 기술된 제형에 더하여, 활성제(예를 들어, 본 명세서에 기술된 GABA 수용체 활성화 리간드(들) 및 PAM(들))는 또한 데포 제제(depot preparation)로서 제형화될 수 있다. 이러한 지속 작용성(long acting) 제형은 체내이식(예를 들어, 피하 또는 근육내)에 의해서 또는 근육내 주사에 의해서 투여될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 활성제(들)는 적합한 중합체 또는 소수성 재료(예를 들어, 허용 가능한 오일 중의 에멀전으로서) 또는 이온 교환 수지와 함께, 또는 약간 가용성인 유도체로서, 예를 들어, 약간 가용성인 염으로서 제형화될 수 있다.
특정 실시형태에서 본 명세서에 기술된 활성제(들)는 또한 종래의 경피 약물 전달 시스템, 즉, 경피 "패치"를 사용하여 피부를 통해서 전달될 수 있고, 여기서 활성제(들)는 전형적으로 피부에 부착될 약물 전달 장치로서 기능하는 적층된 구조물 내에 함유되어 있다. 이러한 구조물에서, 약물 조성물은 전형적으로 상부 후면층(backing layer) 아래의 층 또는 "저장소"에 함유된다. 이러한 맥락에서 용어 "저장소"는 피부의 표면에 대한 전달을 위해서 궁극적으로 사용 가능한 "활성 성분(들)"의 양을 지칭한다고 인지될 것이다. 따라서, 예를 들어, "저장소"는 패치의 후면층 상의 접착제 또는 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 공지된 다양한 상이한 매트릭스 제형 내의 활성 성분(들)을 포함할 수 있다. 패치는 단일 저장소를 함유할 수 있거나, 그것은 다수의 저장소를 함유할 수 있다.
일 예시적인 실시형태에서, 저장소는 약물 전달 동안 시스템을 피부에 고정시키는 기능을 하는 약제학적으로 허용 가능한 접촉 접착제 재료의 중합체 매트릭스를 포함한다. 적합한 피부 접촉 접착제 재료의 예는 폴리에틸렌, 폴리실록산, 폴리아이소부틸렌, 폴리아크릴레이트, 폴리우레탄 등을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. 대안적으로, 약물-함유 저장소 및 피부 접촉 접착제는 별개의 구별되는 층으로서 존재하고, 접착제는 이 경우 상기에 기술된 바와 같은 중합체 매트릭스일 수 있는 저장소 아래에 놓이거나, 또는 그것은 액체 또는 하이드로겔 저장소일 수 있거나, 또는 일부 다른 형태를 가질 수 있다. 이러한 적층물에서 후면층은 장치의 상부 표면으로서 작용하고, 바람직하게는 "패치"의 주요 구조 요소로서 기능하고, 장치에 상당한 가요성을 제공한다. 후면은 바람직하게는 실질적으로 활성제(들) 및 존재하는 임의의 다른 재료에 대해서 불투과성이다.
대안적으로, 다른 약제학적 전달 시스템이 사용될 수 있다. 예를 들어, 리포솜, 에멀전, 및 마이크로에멀전/나노에멀전이 약제학적 활성 화합물을 보호 및 전달하는 데 사용될 수 있는 전달 비히클의 널리 공지된 예이다. 특정 유기 용매, 예컨대 다이메틸설폭시드가 또한 사용될 수 있지만, 통상적으로 보다 더 큰 독성이 있다.
특정 실시형태에서 조합된 제형은 GABA 수용체 활성화 리간드 및/또는 PAM이 단독으로 사용된 경우 제공되었을 투여량(단위 투여량)의 GABA 수용체 활성화 리간드(들) 및/또는 PAM(들)을 포함한다. 특정 실시형태에서 GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA 수용체 활성화 리간드가 단독으로 제공되는 경우 베타 세포 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키는 데 필요한 GABA 수용체 활성화 리간드의 약 90% 미만, 또는 약 80% 미만, 또는 약 70% 미만, 또는 약 60% 미만, 또는 약 50% 미만, 또는 약 40% 미만, 또는 약 30% 미만, 또는 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만, 또는 약 5% 미만으로 존재한다.
특정 실시형태에서 PAM(들)은 치료량 미만의 투여량으로 제공된다. 이는 PAM이 본래 설계 및/또는 승인된 활성도에 대해서 사용된 경우의 PAM의 승인 및/또는 권장 및/또는 인식된 투여량보다 적은 투여량을 지칭한다.
따라서, 예를 들어, 공황 장애의 치료를 위한 알프라졸람(속방형 정제)의 제안된/승인된 투여량은 1일 3회 경구로 0.5㎎의 초기 용량, 분할된 용량으로 1 내지 10㎎/일의 유지 용량 및 분할된 용량으로 5 내지 6㎎/일의 평균 용량이다. 서방형 알프라졸람 정제의 제안된/승인된 투여량은 1일 1회 0.5㎎ 내지 1㎎이고, 유지 용량은 1일 2회 1 내지 10㎎이고, 평균 용량은 1일 1회 3 내지 6㎎이다. 성인 우울증의 치료를 위한 알프라졸람(속방형 정제)의 제안된/승인된 투여량은 1일 3회 경구로 0.5㎎의 초기 용량이며, 이것은 매일 경구로 분할된 용량으로 3㎎의 평균 유효 용량으로 증가된다. 불안을 위한 노인 용량은 고령 또는 노쇠한 환자에서 경구로 1일 2 내지 3회 0.25㎎의 초기 용량으로 제공되고, 2㎎을 초과하는 매일 용량은 나이든 성인에서 사용하기에 잠재적으로 부적절한 의약으로서 비어스 기준(Beers criteria)을 충족시킨다.
제형에서 치료량 미만의 투여량은 전형적으로 가장 낮은 제안된/승인된 단위 투여형보다 적고, 예를 들어, 알프라졸람의 경우 단위 투여형으로서 0.25㎎ 미만 그리고 치료 방법에서 매일 총 0.5㎎ 미만이다. 특정 실시형태에서 치료량 미만의 투여량은 이러한 제안된/승인된 투여량의 약 90% 미만, 또는 약 80% 미만, 또는 약 70% 미만, 또는 약 60% 미만, 또는 약 50% 미만, 또는 약 40% 미만, 또는 약 30% 미만, 또는 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만이다.
투여량은 예시적이며, 비-제한적인 것으로 의도된다. 대상체에 투여되는 BABA 수용체 활성화 리간드 및 PAM의 실제 투여량은 물리학적 인자 및 생리학적 인자, 예컨대 체중, 병태의 중증도, 이전 또는 동시 치료 중재, 환자의 특발성 및 투여 경로에 의해서 결정될 수 있다. 투여량 및 투여 경로에 따라서, 바람직한 투여량 및/또는 유효량의 투여 횟수는 대상체의 반응에 따라서 달라질 수 있다. 투여에 책임이 있는 의료인은 어떤 경우에도 조성물 중의 활성 성분(들)의 농도 및 개별 대상체의 적절한 용량(들)을 결정할 것이다.
키트.
특정 실시형태에서 키트는 본 명세서에 기술된 방법의 실시를 위해서 제공된다. 다양한 실시형태에서 키트는 본 명세서에 기술된 바와 같이 GABA 활성화 리간드를 함유하는 용기, 및 GABAA 수용체의 양성 알로스테릭 조절인자를 함유하는 용기를 포함한다. 특정 실시형태에서 키트는 GABA 및 알프라졸람을 포함한다.
특정 실시형태에서 GABA 수용체 활성화 리간드(들) 및 PAM(들)은 단위 투여 제형(들)(예를 들어, 정제, 캐플렛, 패치 등)으로 제공될 수 있고/있거나 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 임의로 조합될 수 있다. 특정 실시형태에서 GABA 수용체 활성화 리간드(들) 및 PAM(들)은 별개의 용기에 제공될 수 있다. 특정 실시형태에서 GABA 수용체 활성화 리간드(들) 및 PAM(들)은 동일한 용기에 제공될 수 있다. 특정 실시형태에서 GABA 수용체 활성화 리간드(들) 및 PAM(들)은 조합된 제형으로서 동일한 용기에 제공될 수 있다.
또한, 키트는 본 발명의 방법의 실시를 위한 지시(즉, 프로토콜)를 제공하는 레이블링 및/또는 지시서를 임의로 포함한다. 특정 레이블링 또는 지시서는 포유동물(예를 들어, 췌도 세포 이식이 제공된 포유동물)에서 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키기 위한 GABA 수용체 활성화 리간드(들) 및 PAM(들)의 용도를 기술한다. 레이블링 또는 지시서는 또한 임의로 바람직한 투여량/치료 요법, 반대 적응증 등을 교시할 수 있다.
지시서는 전형적으로 서면 자료 및 인쇄 자료를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 이러한 지시를 저장하고, 이를 최종 사용자에게 알릴 수 있는 임의의 매체가 본 발명에 의해서 고려된다. 이러한 매체는 전자 저장 매체(예를 들어, 자성 디스크, 테이프, 카트리지, 칩), 광학 매체(예를 들어, CD ROM) 등을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. 이러한 매체는 이러한 지시서를 제공하는 인터넷 사이트에 대한 주소를 포함할 수 있다.
실시예
하기 실시예는 예시로 제공되는 것이며, 청구된 발명을 제한하지 않는다.
실시예 1
베타 세포 복제를 향상시키기 위한 알프라졸람과 조합된 GABA 수용체 활성화 리간드의 용도
본 실시예에서 본 발명자들은 GABA와 조합된 벤조다이아제핀 알프라졸람(XANAX(등록상표))을 베타 세포 증식 및/또는 생존에 대한 이의 효과에 대해서 연구하였다. 알프라졸람은 불안 및 공황 장애의 치료를 위해서 널리 처방된다. 1981년 이의 도입 이후에, 이것은 신속하게, 5천만건을 초과하는 처방을 갖는, 블록버스터 약물이 되었다. 지시된 바와 같이 사용된 경우, 이것은 장기간 사용에 대해서 안전하다(www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2011/018276s045lbl.pdf에서의 FDA 승인된 레이블링 및 문헌[Jonas and Cohon (1993) J. Clin. Psychiatry. 54 Suppl:25-45; discussion 6-8] 참고). 본 발명자들은 1) 이의 장기간 안전성 프로파일, 및 2) 적절한 GABAA-R 소단위와 이의 상호작용을 기반으로 알프라졸람을 연구하기로 선택하였다
GABA 수용체 활성화 리간드.
GABA는 인간 소비에 대해서 안전하다. GABA는 기능식품(nutraceutical)으로서 처방전 없이(over the counter) 판매된다. 본 발명자들은 26주 동안의 GABA 치료가 비장 단핵 세포의 총 수 또는 CD4+, CD8+, T 및 B 림프구의 백분율을 상당히 변화시키지 않았고(문헌[Tian et al. (2004) J. Immunol. 173(8): 5298-5304]), 자가반응성 T 세포를 GABA-매개된 저해에 대해서 탈감작시키지 않았다는 것을 발견하였다 (문헌[Tian et al. (2004) J. Immunol. 173(8): 5298-5304; Tian (2011) Autoimmunity, 44: 465-470]). 장기간 경구 GABA 치료는 1950년대 내지 1980년대에 인간 임상 시험에서 간질 발작을 감소시키고, 뇌혈관 장애를 개선시키는 이의 능력에 대해서 수백명의 개인에서 시험되었다(문헌[Otomo et al. (1981) Arzneimittelforschung. 31(9): 1511-1523]; [Loeb et al. (1987) Epilepsy Res. 1(3): 209-212]; [Tower and Roberts eds. Inhibition in the Nervous System and GABA. New York]: [Pergamon Press, 1960; Kuriyama and Sze (1971) Neuropharmacol.. 10(1): 103-108]). 결과는 부작용이 없지만, 임상적 유용성이 없음을 나타내었고, 이는 GABA가 혈액-뇌 장벽을 통과하지 않기 때문일 수 있다.
약제학적 상호작용은 혈액-뇌 장벽을 통과하고, CNS 뉴론 상의 GABAR을 조절하여 발작 장애, 불안 및 불면증을 개선시킬 수 있는 약물에 초점이 맞춰져 있다. GABA가 혈액-뇌 장벽을 통과하는 데 있어서의 무능함은 CNS 부작용 없이 말초 GABA-R을 조절하는 데 이상적이다. 염증 반응을 하향조절하는 GABA의 능력은 보통이며, 이는 면역계 기능에 대한 간섭이 낮고, 다른 면역억제제와 마찬가지로 백혈구 감소가 없기 때문에 유리하다고 생각된다. GABA의 약한 효과에도 불구하고, 그것은 상이한 유전 배경을 갖는 마우스에서 T1D(문헌[Tian et al. (2004) J. Immunol. 173(8): 5298-5304]: [Soltani et al. (2011) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108: 11692-11697]), EAE(문헌[Bhat (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 107(6): 2580-2585]) 및 류마티스 관절염(문헌[Tian (2011) Autoimmunity, 44: 465-470]), 및 개선된 T2D(문헌[Tian et al. (2011) PloS one. 6(9): e25338])를 효율적으로 예방하였다.
GABA A -R 및 GABA B -R.
GABA-R의 2종의 상이한 유형; GABAA-R 및 GABAB-R이 존재한다. 면역 세포는 주로 GABAA-R을 발현시키고(문헌[Tian et al. (1999) J. Neuroimmunol. 96(1): 21-28]; [Tian et al. (2004) J. Immunol. 173(8): 5298-5304]; [Bhat (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 107(6): 2580-2585]; [Bjurstom et al. (2008) J. Neuroimmunol. 205: 44-50)]), 반면에 β-세포는 GABAA-R 및 GABAB-R 둘 모두를 발현시킨다(문헌[Ligon et al. (1997) Diabetologia, 50(4): 764-773]; [Tian et al. (2013) Diabetes, 62(11): 3760-3765]; [Braun et al. (2010) Diabetes, 59(7): 1694-2701]; [Gu et al. (1993) Life Sci. 52(8): 687-694]; 문헌[Brice et al. (2002) Diabetologia, 45(2): 242-252]; [Martin et al. (1988) Neuropsychobiology, 19(3): 146-148]). GABAA-R은 신속하게 작용하는 클로라이드 채널을 형성하는 상이한 소단위의 오량체이다. GABAB-R은 단지 2개의 소단위의 이종이량체이지만, 이의 특성은 다른 세포 단백질에 의해서 변화될 수 있다(문헌[Schwenk et al. (2010) Nature, 465(7295): 231-235]). GABAB-R은 느리게 작용하는 G-단백질 커플링된 수용체이다(문헌[Bettler et al. (2004) Physiol. Rev. 84(3): 835-867]). 따라서, GABAA-R 및 GABAB-R은 상당히 상이하다(클로라이드 채널 대 G-단백질 커플링된 수용체). 본 실시예에서 본 발명자들의 초점은 GABAA-R에 맞춰져 있는데, 그 이유는 그것이 동시에 자가면역 반응을 저해하고, β-세포 복제 및 생존을 촉진시키는 능력을 갖기 때문이다.
19개의 상이한 GABAA-R 소단위: 6개 유형의 α 소단위, 3개의 상이한 β 소단위, 3개의 γ, 뿐만 아니라 δ, ε, ð 및 θ 소단위, 그리고 3개의 비분류 ρ 소단위가 존재한다. 소단위 중 5개는 상이한 방식으로 조합하여 통상적으로 2개의 α, 2개의 β, 및 나머지 소단위 유형 중 하나로 이루어진 GABAA 채널을 형성한다(도 1의 개략도 참고). 상이한 소단위 조합물을 갖는 GABAA-R은 상이한 약리학적 특성 및 특이적인 효능제 및 길항제를 갖는다(문헌[Olsen and Tobin (1990) FASEB J. 4(5): 1469-1480; Luddens et al. (1995) Neuropharmacology, 34(3): 245-254]). β-세포에서, GABAA-R Cl- 채널의 활성화는 탈분극, 전압-의존성 칼슘 채널의 개방, 및 Ca2+-의존성 Pi3K/Akt 세포 성장 및 생존 신호 경로의 활성화를 유발한다(문헌[Soltani et al. (2011) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108: 11692-11697]; [Purwana et al. (2014) Diabetes; 63(12):4197-4205]; [Braun et al. (2010) Diabetes, 59(7): 1694-2701]).
벤조다이아제핀.
벤조다이아제핀은 GABA-결합 부위에 결합하지 않고, GABAA-R 상의 다른 곳(다이어그램에서 "BZD" 부위)에 결합한다. 이것은 클로라이드 채널을 개방할 수 없지만, 이것은 GABA가 수용체에 결합할 때 Cl- 전도도를 증가시키는 양성 알로스테릭 조절인자로서 작용한다. 혈액-뇌 장벽을 통과하는 능력이 거의 없거나, 전혀 없는 GABA와 달리, 벤조다이아제핀은 혈액-뇌 장벽을 통과하여, CNS 뉴론에 의해서 생산된 GABA의 작용을 향상시킬 수 있다. 상이한 벤조다이아제핀은 상이한 소단위 조성물(하위유형)을 갖는 상이한 GABAA-R에 우선적으로 결합한다.
상이한 GABAA-R 하위유형 특이성을 갖는 벤조다이아제핀은 발작, 불면증, 또는 불안을 개선시키는 데 사용되어 왔다. 본 실시예에서, 본 발명자들은 벤조다이아제핀 알프라졸람(XANAX(등록상표))을 연구하였다. 알프라졸람은 불안 및 공황 장애의 치료를 위해서 널리 처방된다. 1981년 이의 도입 이후에, 이것은 신속하게, 5천만건을 초과하는 처방을 갖는, 블록버스터 약물이 되었다. 지시된 바와 같이 사용된 경우, 이것은 장기간 사용에 대해서 안전하다(www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2011/018276s045lbl.pdf에서의 FDA 승인된 레이블링) 및 문헌[Jonas and Cohon (1993) J. Clin. Psychiatry. 54 Suppl:25-45; discussion 6-8] 참고). 본 발명자들은 1) 이의 장기간 안전성 프로파일, 2) 적절한 GABAA-R 소단위가 인간 췌도에서 발현된다는 것(문헌[Braun et al. (2010) Diabetes, 59(7): 1694-2701]) 및 3) 불량한 글루코스 제어를 갖는 개인에서 HbA1C 수준을 감소시키는 알프라졸람의 능력(문헌[Lustman et al. (1995) Diabetes Care, 18(8): 1133-1139], 하기 참조)을 기반으로 알프라졸람을 연구하도록 선택하였다.
알프라졸람은 불량한 글루코스 제어를 갖는 환자에서 HbA1c를 감소시켰다.
본 발명자들은 인간 β-세포에 의해서 발현된 특정 GABAA-R 하위유형(들)에 결합하는 벤조다이아제핀이 췌도 내에서 국지적으로 방출되는 GABA의 작용을 향상시킬 수 있다는 가설을 세웠다. 임상 연구에서, 알프라졸람을 T1D 또는 T2D를 갖는 불량한 글루코스 제어(약 12의 HbA1c 평균)를 갖는 불안을 갖는 개인 및 불안을 갖지 않는 개인에게 투여하였다. 치료 8주 후, HbA1c 수준은 알프라졸람이 제공된 환자에서 상당히 감소되었고, 위약이 제공된 환자에서는 그렇지 않았다(문헌[Lustman et al. (1995) Diabetes Care, 18(8): 1133-1139]). 이러한 효과는 불안을 갖는 환자 및 불안을 갖지 않은 환자 둘 모두에서 유사하였는데, 이는 HbA1c의 감소가 불안의 개선에 좌우되지 않았다는 것을 나타낸다.
알프라졸람은 시험관내에서 인간 췌도 세포 증식을 촉진시킨다.
파일롯 연구에서, 본 발명자들은 알프라졸람 단독 및 낮은 수준의 GABA과 조합된 알프라졸람이 시험관내에서 인간 췌도 세포 복제를 향상시킬 수 있는지를 시험하였다. 본 발명자들은 알프라졸람 단독을 시험하였는데, 그 이유는 벤조다이아제핀 자체는 GABAA-R 클로라이드 채널을 개방시킬 수 없고, β-세포가 GAD를 발현시키고, GABA를 분비하기 때문이다. 따라서, 본 발명자들은 알프라졸람이 내생적으로 생산된 췌도 GABA의 작용을 향상시킬 수 있다는 가설을 세웠다.
알프라졸람은 0.5 내지 6.0㎎/일로 전달되는 서방형 정제로 처방되며, 이의 농도는 통상적으로 약물이 치료적으로 제공되는 인간의 혈청에서 10 내지 100ng/㎖ 범위이다(문헌[Jones et al. (2007) Therap . Drug Monitor. 29(2): 248-360]; [Fraser and Bryan (1991) J. Analyt . Toxicol ., 15(2): 63-65]). 본 발명자들은 30ng/㎖ 알프라졸람과 함께, 또는 그것 없이 인간 췌도를 배양하였다. 본 발명자들은 알프라졸람이 인간 췌도 세포 증식을 알프라졸람이 없는 배양물과 비교할 때 약 123% 촉진시켰다는 것을 발견하였다(도 2). 본 발명자들이 GABA를 배양물에 첨가하지 않았기 때문에, 알프라졸람이 β-세포로부터 분비된 GABA와 함께 작용하여 췌도 세포 증식을 촉진시켰을 것이다. 이러한 경우, 50개의 배양된 췌도/웰로부터 분비된 GABA는 아마도 매우 신속하게 멀리 확산되고, 알프라졸람의 효과를 제한하였고, 이는 GABA가 배양 배지에 첨가된 본 발명자들의 연구의 결과에 의해서 지지된다(하기 참조).
T1D로 새로 진단된 환자에서,β-세포 양은 상당히 감소되어, 췌도 내에서 분비된 GABA의 수준은 낮을 것이다. 본 발명자들은 알프라졸람과 함께 남아있는 GABA 분비가 잔류하는 β-세포 복제 및 생존에 대한 GABA의 작용을 향상시킬 수 있고, 알프라졸람이 T1D 및 T2D를 갖는 환자에서 HbA1C 수준을 감소시키는 방법을 설명할 수 있다고 상정하였다. 특히, 본 발명자들은 GABA 단일요법이 새로운 당뇨병 NOD 마우스에서 β-세포 복제 및 생존을 향상시킬 수 있다는 것을 발견하였다(문헌[Soltani et al. (2011) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108: 11692-11697]; [Tian et al. (2014) Diabetes. 63(9): 3128-3134]).
본 연구에서 시험된 본 발명자들의 가설은 GABA를 분비하는 잔류하는 β-세포의 능력이 차선적이고, 외인성 GABA 치료가 새로운 당뇨병 마우스에서 β-세포 복제 및 생존을 촉진시키는 데 이롭다는 것이었다. 더욱이, 본 발명자들은 GABA 및 알프라졸람으로의 조합 치료가 β-세포 복제 및 생존을 촉진시키는 능력을 향상시키고/거나 이러한 효과를 달성하는 데 필요한 약물의 양을 감소시킬 수 있는지의 여부를 추가로 시험하였다.
알프라졸람 및 GABA는 시험관내에서 감소된 투여량에서 인간 췌도 세포 복제를 촉진시키는 데 상승작용적으로 작용한다.
본 발명자들은 다음으로 알프라졸람(30ng/㎖)과 함께 또는 그것 없이 다양한 용량 범위의 GABA를 함유한 인간 췌도 배양물에서 인간 췌도 세포 증식을 비교하였다. 0.03mM GABA로의 치료는 인간 췌도 세포 증식 치료를 상당히 향상시키지 않았지만, 알프라졸람과 함께 동일한 용량의 GABA는 인간 췌도 세포 증식을 138% 향상시켰다(도 3). GABA 단독을 사용하여 유사한 수준의 증식을 달성하기 위해서는 10-배 더 높은 수준의 GABA(0.3mM)가 필요하였다. 따라서, 알프라졸람은 상당히 강력한 β-세포 증식을 유도하는 데 필요한 GABA의 양을 상당히 감소시킨다. 이러한 데이터는 GABA와 알프라졸람의 조합물이 시험관내에서 인간 췌도 세포 증식에 대해서 상승작용적인 긍정적인 효과를 갖는다는 것을 나타낸다.
조합된 알프라졸람 GABA는 β-세포 자가면역성을 저해하는 데 상승작용적으로 작용한다.
알프라졸람과 함께 GABA를 투여하는 것의 추가 이점은 자가반응성 T 세포를 상승작용적으로 저해하고, Treg를 촉진시키는 것에 대한 가능성이다. 혈액에서 GABA의 수준은 매우 낮다(GABA를 생산하는 CNS의 외부에 매우 적은 GAD가 존재하고, GABA는 순환 시에 매우 짧은 반감기를 갖는다). GABA가 없는 경우, 알프라졸람 단독은 면역 세포에 대해서 상당한 효과를 갖지 않을 것이지만, 조합 시에, 이것은 아마도 각각의 약물의 감소된 투여량을 사용하여, 염증을 저해하고, Treg를 촉진시키는 데 상승작용적으로 작용할 수 있다. 면역 반응에 대한 알프라졸람+GABA의 효과의 연구는 매우 흥미롭지만, 이것은 인간 β-세포 복제에 초점을 맞춘 본 연구의 범주 외이다. 인간에서 β-세포 복제 및 생존을 향상시키기 위한 알프라졸람의 번역성. 알프라졸람은 인간에서 면역 억제를 유발하지 않거나 감염에 대한 민감성을 증가시키지 않으며(http://labeling.pfizer.com/ShowLabeling.aspx?id=547에서 알프라졸람 자료표 참고), 이는 GABA가 없는 경우, 알프라졸람이 인간 면역 세포 상의 GABA-R을 활성화시킬 수 없다는 것과 일치한다. 알프라졸람의 주요 부작용은 졸음이다.
장기간 알프라졸람 사용 후, 금단 및 리바운드 증상이 일반적으로 발생하여, 투여량의 점차적인 감소가 필요하다(문헌[Verster and Volkerts (2004) CNS Drug Rev., 10(1): 45-76]). 설치류 연구에서, 알프라졸람은 스트레스 받은 래트의 척수에서 EAE 및 염증을 저해하였고(문헌[Nunez-Iglesias et al. (2010) Pharmacol. Biochem., Behav. 97(2): 350-356]), 이는 흥미로운데, 그 이유는 알프라졸람이 면역 세포를 침투하는 것에 대한 뉴론에서 생산된 GABA의 작용을 향상시킬 수 있기 때문이다. 이러한 경우, 그것은 췌도-침투 면역 세포에 대해서 유사한 이로운 작용을 가질 수 있다. 면역계에 영향을 주는 알프라졸람의 유일한 다른 보고는 1) 하나의 군이 알프라졸람이 마우스 림프구의 증식 반응 저해하였고, T 세포에 의한 IL-2의 생산 및 대식세포에 의한 TNF의 생산을 감소시켰다는 것을 보고하였고(문헌[Chang et al. (1991) Int. J. Pharmacol., 13(2-3): 259-266]; [Chang et al. (1992) Int. J. Pharmacol., 14(2): 227-337]), 2) 정반대로, 또 다른 군은 알프라졸람이 미토겐-유도된 림프구 증식 및 NK 세포 활성도를 향상시켰다는 것을 보고하였다는 것이었다(문헌[Fride et al. (1990) Life Sci., 47(26): 2409-2420]).
알프라졸람은 면역계 및 CNS에 대해서 부정적인 부작용을 갖는 다른 벤조다이아제핀, 예컨대 다이아제팜(발륨) 및 로라제팜과 혼동되지 않았다. 본 발명자들은 알프라졸람이 "말초 벤조다이아제핀 수용체"(이것은 현재 외부 미토콘드리아막 상의 전이체 단백질(translocator protein)인 것으로 공지됨)라 이미 공지된 단백질에 유의하게 결합하고(문헌[Papadopoulos et al. (2006) Trend. Pharmacol. Sci. 27(8): 402-409]), 다이아제팜에 대한 2차 결합 부위라는 임의의 보고를 알지 못한다.
상기에 언급된 바와 같이, 알프라졸람은 불량한 글루코스 제어를 갖는 환자에서 HbA1c를 상당히 감소시켰다(문헌[Lustman et al. (1995) Diabetes Care, 18(8): 1133-1139]). 본 발명자들의 파일롯 연구는 보통 수준의 알프라졸람(단독)이 시험관내에서 인간 췌도 세포 증식에 대해서 상당히 강한 효과를 가졌다는 것을 나타낸다(도 2). 알프라졸람과 GABA의 조합물은 인간 췌도 세포 증식에 대해서 상승작용적 효과를 가져서, 유사한 증식 효과를 달성하는 데 10-배 더 높은 수준의 GABA(단독)가 필요하였다(도 3). 이는, GABA와의 조합물에서, 더 낮은 수준의 알프라졸람이 β-세포 복제 및 생존을 촉진시킬 수 있다는 것을 시사한다. 알프라졸람은 혈액 뇌 장벽을 통과할 필요가 없기 때문에, 불안완화(항-불안) 효과를 위해서 사용되는 것보다 더 낮은 투여량의 알프라졸람이 말초에서 β-세포 GABAA-R을 조절하기에 효과적일 수 있다. 추가로, CNS에서, GABAA-R는 뉴론 시냅스 상에서 함께 집단을 이룬 반면, 시냅스 외부의 GABA-R은 확산 분포를 갖는다(문헌[Craig et al. (1994) Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 91(26): 12373-12377]). 집단을 이룬 GABAA-R은 확산된 시냅스 외부의 GABA-R과 비교할 때 GABA에 대해서 3 내지 4배 더 높은 EC50을 갖고, 더 신속하게 비활성화된다고 생각되는데, 그 이유는 GABA에 대한 친화도 감소로 인한 것이다(문헌[Chen et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97(21): 11557-11562]). 집단을 이룬 GABA-R들 간의 단백질-단백질 상호작용은 결합 부위 또는 채널 활성화에 영향을 준다고 생각된다(문헌[Chen et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97(21): 11557-11562]). 특정 이론에 얽매이고자 함은 아니지만, 본 발명자들은 β-세포 상의 GABAA-R이 확산되어 있고 GABA 및 알로스테릭 조절에 대해서 더 감응성일 것이라고 여긴다.
β-세포 재생 및 건강을 촉진시키는 것은 β-세포에 대한 자가면역 반응이 상당히 축소될 수 없다면 거의 쓸모가 없다는 것을 강조해야 한다. 이와 관련하여, 제안된 알프라졸람+GABA 병용 요법은 동시에 자가반응성 T 세포를 저해하고, Treg를 촉진시키는 그의 능력으로 인해서 뛰어난 것으로 여겨진다. 특히, 알프라졸람의 불안완화 용량은 당뇨병 환자에서 HbA1c을 감소시킬 수 있었다(문헌[Lustman et al. (1995) Diabetes Care, 18(8): 1133-1139]). 본 발명자들은 알프라졸람의 불안완화 용량이 β-세포 생존 및 복제를 촉진시키는 데 필요한 경우에도, 단기 알프라졸람 치료의 이익이 부작용(주로 졸음)보다 중요하다고 주장한다. 예를 들어, 췌도 이식의 경우에, 알프라졸람 치료는 저산소증 및 스트레스로 인한 β-세포 손실을 감소시키기 위해서 췌도 체내이식 직후의 기간에 제한될 것이다. 새로 발생한 T1D의 경우에, 알프라졸람 치료는 GABA, 및, 예를 들어, 항-CD3와 조합하여 단기간 제공될 수 있고, 이것은 상승작용적으로 자가면역성을 저해하고, Treg를 유도할 수 있어서, C-펩타이드 수준이 항-CD3 단독으로 치료된 후보다 더 긴 시간 기간 동안 보전되도록 한다.
실시예 2
시험관내에서 INS-1 세포 증식에 대한 미다졸람 및 클로나제팜의 효과의 시험
본 실험의 목적은 시험관내에서 INS-1 세포 증식에 대한 하기 화합물의 효과를 시험하는 것이었다:
미다졸람(MW 325): 6.25mM에서 액체 중에서 가용성임; 및
클로나제팜(MW315): 50mM에서 에탄올 중에서 용해됨.
방법:
1. 3H-티미딘 혼입 검정법: 1x105/웰의 INS-1 세포를 제시된 농도의 개별 화합물로 3회 처리하였고, 0.3μCi/웰의 3H-티미딘의 존재 하에서 48시간(최적의 시간 기간) 동안 10% FCS RPMI164 배지 중에서 배양하였다. 세포를 수확하였고, 개별 웰에서 3H-티미딘 흡수의 수준을 베타-카운터에 의해서 측정하였다.
2. MTT 검정법: 1x105/웰의 INS-1 세포를 10% FCS RPMI164 배지(페놀-무함유) 중에서 제시된 화합물로 44시간 동안 4회 처리하였다. 세포를 20㎖의 MTT(20㎎/㎖)에 4시간 동안 노출시키고, 배양된 세포의 상청액을 제거하였다. 생성된 산물을 100㎖ DMSO 중에 용해시키고, 마이크로플레이트 리더에서 540/650nm의 흡광도에서 측정하였다.
결과:
1. 클로나제팜이 아닌, 미다졸람으로의 치료는, 시험관내에서 INS-1 세포의 증식을 향상시키는 일부 능력을 갖는다. 본 발명자들은 10-4 내지 10-9M의 클로나제팜으로의 치료는 INS-1 세포의 증식을 상당히 변화시키지는 않았다는 것을 발견하였다. 10-5M의 미다졸람으로의 치료는 INS-1 세포에 대해서 약간의 독성을 가졌고, 10-7 내지 10-8M로의 치료는 시험관내에서 INS-1 세포 증식을 상당히 향상시켰다(도 4A, p<0.05). 이러한 결과를 기반으로, 본 발명자들은 다음에 이들 약물을 추가로 중간에 투여하면서 더 적은 용량에 대해서 시험하였고, 10-7 내지 3x10-8M의 미다졸람이 시험관내에서 INS 세포의 증식을 상당히 향상시켰다는 것을 관찰하였다(도 4B). 세포 증식의 유사한 패턴이 MTT 검정법(데이터 나타내지 않음)에 의해서 관찰되었다.
2. 미다졸람 또는 클로나제팜으로의 치료는 시험관내에서 GABA 자극된 INS-1 세포 증식을 향상시킨다. 다음으로, 본 발명자들은 시험관내에서 GABA-유도된 INS-1 세포 증식에 대한 미다졸람 및 클로나제팜의 효과를 시험하였다. 본 발명자들은 1 내지 0.1mM에서 GABA로의 치료가 시험관내에서 INS-1 세포 증식을 자극시켰다는 것을 발견하였다. 10-7 또는 3x10-8M에서 미다졸람으로의 치료는 GABA-유도된 INS-1 세포 증식을 향상시켰다. 0.03 내지 0.01mM에서 GABA로의 치료는 INS-1 세포 증식을 유도하는 데 실패하였지만, 이러한 낮은 용량의 GABA와 10-7 또는 3x10-8M의 미다졸람 둘 모두로의 치료는 INS-1 세포 증식을 상당히 향상시켰다. 낮은 용량의 GABA와 미다졸람 둘 모두로 치료된 세포에서 INS-1 세포 증식 정도는 미다졸람 단독으로 치료된 세포에서의 증식 정도보다 더 높았는데, 이는 미다졸람이 GABA-유도된 세포 증식을 증가시켰다는 것을 나타낸다. 유사하게, 10-7 또는 3x10-8M에서 클로나제팜으로의 치료는 시험관내에서 GABA-자극된 INS-1 세포 증식을 상당히 향상시켰다. GABA-유도된 세포 증식에 대한 이들 약물의 유사한 패턴의 약리학적 효과는 MTT 검정법에 의해서 검출되었다.
미다졸람 또는 클로나제팜의 향상된 효과는 일부 벤조다이아제핀에 결합할 수 있는 전이체 단백질(18 kDa)(TSPO)에 의해서 매개되지 않는다.
미다졸람 및 클로나제팜의 효과가 TSPO를 통해서 부분적으로 매개되었는지의 여부를 시험하기 위해서, 본 발명자들은 미다졸람 또는 클로나제팜 향상된 GABA-유도된 INS-1 세포 증식에 대한 PK11195의 TSPO 저해제의 영향을 시험하였다. 본 발명자들은 클로나제팜 또는 PK11195이 아닌, 제시된 GABA 또는 미다졸람이 INS-1 세포 증식을 유도하였다는 것을 발견하였다. GABA와 미다졸람 둘 모두, 또는 GABA와 클로나제팜 둘 모두로의 치료는, 세포 증식을 향상시켰는데, 이는 PK11195에 의해서 영향을 받지 않았다. 이들 데이터는 미다졸람 또는 클로나제팜에 의한 INS-1 세포의 향상된 증식이 INS-1 세포에서 TSPO를 활성화시킴으로써 매개되지 않았다는 것을 나타내었다
실시예 3
시험관내에서 INS-1 세포 증식에 대한 AP325 및 AP3의 효과의 시험
본 실험의 목적은 시험관내에서 INS-1 세포 증식에 대한 하기 화합물의 효과를 시험하는 것이었다:
AP325(MW 310): 50mM에서 DMSO 중에 가용성임; 및
AP3(MW 276.33): 50mM에서 DMSO 중에 용해됨.
방법:
1. 3H-티미딘 혼입 검정법: 1x105/웰의 INS-1 세포를 제시된 농도의 개별 화합물로 3회 처리하였고, 0.3uCi/웰의 3H-티미딘의 존재 하에서 48시간(최적의 시간 기간) 동안 10% FCS RPMI164 배지 중에서 배양하였다. 세포를 수확하였고, 개별 웰에서 3H-티미딘 흡수의 수준을 베타-카운터에 의해서 측정하였다.
2. MTT 검정법: 1x105/웰의 INS-1 세포를 10% FCS RPMI164 배지(페놀-무함유) 중에서 제시된 화합물로 44시간 동안 4회 처리하였다. 세포를 20㎖의 MTT(20㎎/㎖)에 4시간 동안 노출시키고, 배양된 세포의 상청액을 제거하였다. 생성된 산물을 100㎖ DMSO 중에 용해시키고, 마이크로플레이트 리더에서 540/650nm의 흡광도에서 측정하였다.
결과:
AP325 또는 AP3(단독)으로의 처리는 시험관내에서 INS-1 세포의 증식을 자극시키지 않는다.
본 발명자들은 10-4 내지 10-5M에서 AP325 또는 AP3으로의 처리가 시험관내에서 INS-1 세포 증식을 유의하게 저해하였다는 것을 발견하였다(도 6). 10-6 내지 10-10에서 두 화합물로의 처리는 INS-1 세포의 증식을 저해하지 않았지만, 그러한 처리는 INS-1 세포의 증식을 상당히 증가시키지는 않았다. 특히, 10-7 내지 10-8에서, AP3가 아닌 AP325로의 처리는 INS-1 세포의 증식을 약간 증가시켰다(하지만 이것은 상당하지는 않았음). 세포 생존의 유사한 패턴이 MTT 검정법(데이터 나타내지 않음)에 의해서 관찰되었다. 따라서, 높은 용량에서 두 화합물 모두는 INS-1 세포에 대해서 독성을 가졌고, 10-6 내지 10-10에서 이들 화합물은 시험관내에서 INS 세포 증식의 어떤 자극도 나타내지 않았다.
AP325로의 처리는 시험관내에서 GABA-자극된 INS-1 세포 증식을 향상시킨다.
다음으로, 본 발명자들은 시험관내에서 GABA-유도된 INS-1 세포 증식에 대한 AP325 또는 AP3의 효과를 시험하였다. 본 발명자들은 1 내지 0.1mM에서 GABA로의 처리가 시험관내에서 INS-1 세포 증식을 자극시켰지만, 0.03 또는 0.01mM에서 GABA로의 처리는 시험관내에서 INS-1 세포 증식을 상당히 자극시킨 것은 아니었다는 것을 발견하였다(도 7). 10-6M에서 AP325로의 처리는 INS-1 세포의 증식을 상당히 변화시킨 것은 아니었다(데이터 나타내지 않음). 그러나, AP325 10-7 내지 10-8M로의 처리, 특히 3x10-7 내지 3x10-8M에서의 AP325로의 처리는 GABA-유도된 INS-1 세포 증식을 상당히 향상시켰다. 특히, 0.03 또는 0.01mM에서 GABA 단독으로의 처리는 본 발명자들의 실험 조건에서 INS-1 세포 증식을 자극시키는 데 실패하였지만, 0.03mM GABA와 함께 3x10-7 내지 10-8M에서 AP325로의 처리는 INS-1 세포 증식을 상당히 촉진시켰다. 추가로, 0.01mM GABA와 함께 10-7에서 AP325로의 처리는 또한 시험관내에서 INS-1 세포 증식을 상당히 자극시켰다. 유사한 패턴의 데이터가 MTT 검정법(데이터 나타내지 않음)으로부터 얻어졌다. 따라서, 이들 데이터는 AP325가 시험관내에서 GABA 자극된 INS-1 세포 증식을 향상시켰다는 것을 나타내었다.
AP3으로의 처리는 시험관내에서 GABA-자극된 INS-1 세포 증식을 향상시킨다.
AP3의 분석은, 10-6M에서 AP3으로의 처리가 INS-1 세포의 증식을 상당히 변화시킨 것은 아니었다는 것을 나타내었다(데이터 나타내지 않음). 그러나, 3x10-7 내지 3x10-8M에서 AP3으로의 처리는 0.1mM GABA-유도된 INS-1 세포 증식을 상당히 향상시켰다(도 8). 특히, 0.03mM GABA와 함께 3x10-7 내지 10-8M에서 AP3으로의 처리는 INS-1 세포 증식을 상당히 촉진시켰다. 추가로, 0.01mM GABA와 함께 10-7 내지 10-8에서 AP3으로의 처리는 또한 시험관내에서 INS-1 세포 증식을 상당히 자극시켰다. 유사한 패턴의 데이터가 MTT 검정법(데이터 나타내지 않음)으로부터 얻어졌다. 따라서, 이들 데이터는 AP3이 시험관내에서 GABA 자극된 INS-1 세포 증식을 향상시켰다는 것을 나타내었다.
결론:
AP325 및 AP3은 시험관내에서 GABA-유도된 INS-1 세포 증식을 향상시킬 수 있다.
실시예 4
임상적으로 사용 가능한 GABA 수용체 양성 알로스테릭 조절인자는 β-세포 복제를 촉진시킬 수 있다.
제1형 당뇨병(T1D) 연구의 주요 목적은 인간 β-세포 복제를 안전하게 촉진시키는 치료를 개발하는 것이다. 최근에 β-세포에 대한 γ-아미노부티르산 수용체(GABA-R)의 활성화가 이의 생존 및 복제를 촉진시킬 수 있다는 것을 인지하였다. 뉴론 GABAA-R에 대한 GABA의 작용을 향상시키는 다수의 양성 알로스테릭 조절인자(PAM)가 임상적으로 사용된다. 당뇨병을 치료하는 데 도움을 주기 위해서 이러한 GABAA-R PAM을 재목적화(repurposing)하는 것은, β-세포 복제 및 생존을 향상시키는 β-세포로부터 분비되거나, 또는 외인성으로 투여된 GABA의 능력을 향상시키는 이의 가능성 및 안정성으로 인해서 이론적으로 매력적이다. 본 발명에서, 본 발명자들은 임상적으로 사용 가능한 GABAA-R PAM이 INS-1 β-세포 복제를 향상시킬 수 있고, 이것이 외인성 GABA 적용에 의해서 증폭된다는 것을 나타낸다. 추가로, GABAA-R PAM은 시험관내에서 인간 췌도 세포 복제를 촉진시켰다. 이러한 효과는 GABAA-R 길항제에 의해서 제거되었는데, 이는 β-세포로부터 방출된 GABA가 PAM에 의해서 향상될 수 있는 자가분비 유사분열-전 효과(autocrine pro-mitotic effect)를 가질 수 있다는 것을 시사한다. PAM과 낮은 수준의 외인성 GABA의 조합물은 인간 β-세포 복제를 촉진시키는 능력을 증가시켰다. 이러한 연구는 T1D 치료를 위한 잠재적인 신규 부류의 약물을 확인하며, 당뇨병 환자에서 HbA1c를 감소시키는 GABAA-R PAM의 과거 관찰을 설명할 수 있다.
도입부
T1D 연구의 목적은 β-세포 복제를 안전하게 촉진시킬 수 있는 접근법을 개발하는 것이다. 그러나, 인간 β-세포 복제를 향상시킬 수 있는 몇몇 작용제가 발견되어 있다. 설치류 및 인간 β-세포는 GABA-R, 즉 GABAA-R 및 GABAB-R 둘 모두를 발현시킨다고 오랫동안 공지되어 있었지만(문헌[Braun et al. (GABA) (2010) Diabetes, 59: 1694-1701]), 이의 활성화가 β-세포 생존, 복제 및 양을 촉진시킬 수 있다는 것은 최근에 밝혀졌다(문헌[Ligon et al. (2007) Diabetologia, 50: 764-773; Soltani et al. (2011) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108: 11692-11697]; [Tian et al. (2013) Diabetes, 62: 3760-3765]; [Prud'homme et al. (2103) Transplantation, 96(7): 616-623]; [Purwana et al. (2014) Diabetes, 63(12): 4197-4205]). GABAA-R PAM은 GABA의 작용을 향상시킨다. 이것은 GABA-결합 부위에 결합하지 않고, GABAA-R 상의 다른 부분에 결합하고, 이것은 GABAA-R 클로라이드 채널을 개방할 수 없지만, 이것은 GABA가 수용체에 결합할 때 Cl- 전도도를 증가시킨다. GABA는 혈액 뇌 장벽(BBB)을 통과하는 능력이 거의 없거나 전혀 없기 때문에, CNS 장애, 예컨대 발작, 불면증, 및 불안을 치료하기 위해서 CNS 뉴론에 의해서 분비된 GABA의 작용을 향상시키기 위해서 BBB-투과성 GABAA-R PAM, 예컨대 벤조다이아제핀이 개발되었다. 이론적으로, 이러한 PAM은 β-세포 미토제네시스(mitogenesis)를 촉진시키기 위해서 췌도 내에 방출된 GABA의 작용을 개선시키도록 재목적화될 수 있다.
본 발명에서, 본 발명자들은 β-세포 복제를 촉진시키는 이의 능력에 대해서 임상적으로-사용 가능한 GABAA-R PAM을 시험하였다. 구체적으로, 본 발명자들은 β-세포주 INS-1의 복제를 촉진시키는 이들의 능력에 대해서, 알프라졸람, 미다졸람, 및 클로나제팜(이것은 벤조다이아제핀의 상이한 부류를 나타냄)을 시험하였다. 알프라졸람은 불안을 치료하는 데 널리 사용되어 왔으며, 1년에 거의 5천만건이 이의 의약에 대해서 처방된다. 이것은 지시된 바와 같이 사용되는 경우 장기간 사용에 안전하다(문헌[Jonas et al. (1993) J. Clin. Psychiatry, 54 Suppl: 25-45; discussion 46-28]) 및 http://www.fda.gov/safety/medwatch/safetyinformation/ucm271398.htm). 또한, 본 발명자들은 말초-제한적인, 새로 개발된 비-벤조다이아제핀 GABAA-R PAM, AP3을 시험하였다. 이어서, 본 발명자들은, 외인성 GABA과 함께 또는 이것 없이, 인간 췌도 세포 복제에 대한 알프라졸람의 효과를 시험관내에서 관찰하였다.
연구 설계 및 방법
알프라졸람, 미다졸람, 클로나제팜, PK11195, 및 비쿠쿨린을 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)로부터 구입하였고, AP3은 알지악스 파마슈티컬스 게엠베하(Algiax Pharmaceuticals GmbH)에 의해서 제공되었다. 알프라졸람(DMSO 중의 10mM), 미다졸람(물 중의 6.25mM), 클로나제팜(ETOH 중의 50mM), 또는 AP3(DMSO 중의 50mM)의 스톡 용액을 배지 중에 제시된 농도로 희석시켰다.
증식 검정법.
1x105/웰의 INS-1 세포를 제시된 농도의 개별 화합물로 3회 처리하였고, 3H-티미딘(0.3μCi/웰)의 존재 하에서 48시간(최적의 시간 기간) 동안 10% FCS RPMI164 배지 중에서 배양하였다. 개별 세포에서 3H-티미딘 흡수의 수준을 신틸레이션 카운터에 의해서 측정하였다.
새로운 인간 췌도를 인테그레이티드 아일럿 디스트리뷰션 프로그램(Integrated Islet Distribution Program)으로부터 입수하였고, 췌도(50 내지 75IEQ/웰)를 3H 티미딘(0.2μCi/웰)의 존재 하에서, 제시된 PAM과 함께, 또는 그것 없이 제시된 투여량의 GABA으로 4일 동안 처리하였다.
결과
INS-1 세포는 벤조다이아제핀-결합 GABA A -R 소단위를 발현시킨다.
GABA는 INS-1 세포 증식을 향상시킬 수 있지만(문헌[Soltani et al. (2011) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108: 11692-11697]), INS-1 세포가 벤조다이아제핀에 감응성인 GABAA-소단위를 발현시키는지의 여부는 알려져 있지 않다. 본 발명자들은 qRT-PCR을 사용하여 벤조다이아제핀에 대한 감응성을 부여하는 GABAA-R 소단위(α1, α2, α3, 및 α5)의 발현에 대해서 INS-1 세포 RNA를 시험하였다. 본 발명자들은 α1, α3, 및 α5 전사물뿐만 아니라 ß1, γ1, γ2, γ3 소단위(데이터 도시되지 않음)를 검출하였는데, 이는 INS-1 세포가 벤조다이아제핀에 감응성인 GABAA-R을 발현시킬 수 있다는 것을 나타낸다.
INS-1 세포는 GABA를 합성하는 비교적 낮은 능력을 갖는다.
β-세포는 GAD를 발현시키고, GABA(이는 자가분비 방식으로 작용할 수 있음)를 분비한다. INS-1 세포가 또한 GABA를 합성하는지의 여부는 알려져 있지 않다. 따라서 본 발명자들은 INS-1 세포에서 GAD 효소 활성도를 시험하였다. 본 발명자들은 INS-1 세포에서 GAD 활성이 인간 췌도에서의 활성도보다 상당히 낮았고, 이는 결국 마우스 뇌에서보다 낮았음을 발견하였다(도 9, 패널 A). 그럼에도 불구하고, INS-1 세포에서 GAD 활성도는 음성 대조군 293T 세포의 것보다 일관되게 약 2-배 더 높았는데, 이는 이것이 자가분비 방식으로 작용할 수 있는 낮은 수준의 GABA를 생산할 수 있다는 것을 시사한다.
GABA A -Rs PAM은 시험관내에서 INS-1 증식을 촉진시킨다.
본 발명자들은 시험관내에서 INS-1 세포의 증식에 대한 각각의 PAM의 상이한 농도의 영향을 시험하였다. 클로나제팜 또는 AP3을 사용하지 않고, 10 및/또는 100nM에서 알프라졸람 또는 미다졸람으로의 치료는, INS-1 세포의 증식을 상당히 자극시켰다(도 9, 패널 B). 추가로, 0.03 내지 0.3mM에서의 GABA(단독)으로의 치료는 이전 관찰과 유사하게, INS-1 세포 증식을 자극시켰다(도 9, 패널 C 내지 G)(문헌[Soltani et al. (2011) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108: 11692-11697]). 0.01mM GABA로의 치료는 INS-1 증식을 자극시키지 않았지만(도 9, 패널 C 내지 G), 30 또는 100nM 알프라졸람의 존재 하에서 동일한 용량의 GABA는 INS-1 세포 증식을 상당히 증가시켰고, 이는 알프라졸람 단독 또는 심지어는 GABA 단독의 10-배 더 높은 농도의 것보다 상당히 더 높았다(0.1mM, 도 9, 패널 C). 그러나, 높은 농도의 GABA(0.1 또는 0.3mM)에서, 알프라졸람은 GABA의 유사분열-전 효과를 향상시키는 능력이 더 낮았는데, 그 이유는 아마도 고 농도의 GABA는 최대 GABAA-R 반응을 이미 유도하였기 때문일 것이다. 유사하게, 낮은 용량의 미다졸람, 클로나제팜, 또는 AP3은 GABA-자극된 INS-1 세포 증식을 향상시켰다(도 9, 패널 D-G). 따라서, GABAA-R PAM은 GABA-유도된 β-세포 증식을 증가시킬 수 있다.
일부 벤조다이아제핀은 이전에 "말초 벤조다이아제핀 수용체"라 이미 지칭된 미토콘드리아 전이체 단백질(TSPO)에 결합한다. 알프라졸람은 TSPO에 결합하지 않는다(문헌[Schmoutz et al. (2014) Behav. Brain. Res. 271: 269-276]). 미다졸람 및 클로나제팜이 TSPO를 통해서 INS-1 세포 증식를 향상시킬 수 있는지를 시험하기 위해서, INS-1 세포를 TSPO 저해제 PK11195와 함께 배양시키고, 미다졸람 또는 클로나제팜의 존재 하에서 0.3mM GABA로 자극시켰다. PK1119로의 처리는 INS-1 세포 복제를 향상시키는 GABA 및 시험된 벤조다이아제핀의 능력에 영향을 주지 않았으며(도 9, 패널 H), 이는 이러한 효과가 TSPO를 통해서 매개되지 않았다는 것을 나타낸다.
알프라졸람은 인간 췌도 세포 복제를 촉진시키는 췌도-생산된 GABA의 능력을 향상시킨다.
본 발명자들은 다음으로 PAM이 인간 췌도 세포 복제를 향상시킬 수 있는지의 여부를 시험하였다. 본 발명자들은 알프라졸람을 시험하는 것에 초점을 맞췄는데, 그 이유는 이의 안전성 기록 및 알프라졸람 치료가 당뇨병 환자에서 HbA1c를 감소시켰다는 발견으로 인한 것이었다(문헌[Lustman et al. (1995) Diabetes Care18: 1133-1139]). 본 발명자들은 인간 췌도를 다양한 용량 범위의 알프라졸람과 함께 배양하였고, 낮은 용량의 알프라졸람이 인간 췌도 세포 증식을 촉진시켰다는 것을 발견하였다(도 10). 면역조직학적 연구는 GABA가 인간 β-세포 복제를 증가시키지만, α-세포 복제에 대해서는 어떤 효과도 없고(문헌[Purwana et al. (2014) Diabetes, 63(12): 4197-4205]) 및 본 발명자들의 미발표 관찰), 다른 췌도 세포 유형이 GABA-R을 발현시키지 않는 것을 발견하였기 때문에, 대다수의 복제하는 췌도 세포는 β-세포일 것이다. Ca2+ 채널 차단제인 니페디핀(1uM)을 이들 배양물에 첨가하는 것은 알프라졸람의 유사분열-전 효과(데이터 나타내지 않음)를 차단하였고, 이는 이러한 PAM이 PI3K/Akt 경로의 GABAA-R-매개된 활성화를 향상시킨다는 것과 일관된다(문헌[et al. (2011) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108: 11692-11697]).
알프라졸람은 GABA와 독립적으로 GABAA-R을 상당히 활성화시킬 수 없기 때문에, 알프라졸람은 췌도 β-세포로부터 분비된 GABA와 함께 작용하여 이의 기저 수준을 초과하게 β-세포 복제를 증가시킨 것 같다. 본 발명자들은 GABAA-R에 대한 GABA 결합을 경쟁적으로 저해하는 GABAA-R 길항제인 비쿠쿨린과 함께 알프라졸람을 인간 췌도 배양물에 첨가하였다(문헌[Johnston (2013) Br. J. Pharmacol. 169: 328-336]). 본 발명자들은 비쿠쿨린 적용이 췌도 세포 증식을 촉진시키는 알프라졸람의 능력을 제거하였다는 것을 발견하였다(도 11). 이는, 췌도-생산된 GABA가 자가분비 방식으로 β-세포 복제를 촉진시킬 수 있고, 향상된 GABAA-R 활성도가 β-세포 복제를 더 높은 수준으로 독려할 수 있다는 것을 시사한다.
알프라졸람과 GABA의 조합물은 시험관내에서 낮은 투여량에서 인간 췌도 세포 복제를 촉진시키는 향상된 능력을 갖는다.
본 발명자들은 다음으로 알프라졸람이 시험관내에서 인간 췌도 세포 복제를 촉진시키는 외인성 GABA의 능력을 증가시킬 수 있는지의 여부를 시험하였다. 인간 췌도를 100nM 알프라졸람의 존재 또는 부재 하에서 상이한 농도의 GABA로 처리하거나 처리하지 않았다. 본 발명자들은 0.3 내지 3mM에서의 GABA(단독)는 용량 의존적인 방식으로 인간 췌도 세포 증식을 상당히 향상시켰지만, 더 낮은 농도에서는 그렇지 않음을 발견하였다(도 12). 알프라졸람과 GABA로의 공동-처리는 인간 췌도 세포 증식을 상응하는 GABA(단독) 용량에 비해서 상당히 증가시켰다(도 12). 특히, 0.03mM GABA로의 처리는 인간 췌도 세포 증식 치료를 상당히 향상시키지는 않았지만, 알프라졸람과 함께 동일한 용량의 GABA는 인간 췌도 세포 증식을 상당히 향상시켰다(도 12). GABA 단독을 사용하여 유사한 수준의 증식을 달성하기 위해서는 10-배 더 높은 수준의 GABA(0.3mM)가 필요하였다. 따라서, 알프라졸람은 β-세포 증식을 유도하는 데 필요한 GABA의 양을 상당히 감소시킨다.
논의
GABA-R 활성화는 아포토시스로부터 β-세포를 보호하고, 이의 복제를 촉진시킬 수 있다(문헌[Ligon et al. (2007) Diabetologia, 50: 764-773]; [Soltani et al. (2011) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108: 11692-11697]; [Tian et al. (2013) Diabetes, 62: 3760-3765]; [Prud'homme et al. (2103) Transplantation, 96(7): 616-623]; [Purwana et al. (2014) Diabetes, 63(12): 4197-4205]). 경구 GABA 처리는 인간 β-세포 복제를 수배, 전형적으로는 췌도 제노플랜트(xenoplant)에서 성인 인간 β-세포의 1% 미만으로부터 약 2 내지 3%로 증가시키는데(문헌[Tian et al. (2013) Diabetes, 62: 3760-3765]; [Purwana et al. (2014) Diabetes, 63(12): 4197-4205]), 이는 태어난 직후 일어나는 β-세포 복제의 최대 수준과 유사하다. 이러한 향상은 GABA 치료 5주 후에 감소하지 않았고, 인간 췌도 제노플랜트에서 증가된 β-세포 양 및 기능으로 이어졌다(문헌[Purwana et al. (2014) Diabetes, 63(12): 4197-4205]). 따라서, 췌도 내에서 생산된 GABA의 활성도 및 외인성 GABA의 효과를 향상시키도록 임상적으로 사용 가능한 PAM을 재목적화하는 것은 T1D를 치료하는 것을 돕기 위한 매력적인 전략이다.
본 발명자들은 먼저 3종의 임상적으로 사용 가능한 BBB-투과성 벤조다이아제핀 PAM, 뿐만 아니라 말초 제한된 비-벤조다이아제핀 PAM이 INS-1 세포 증식을 촉진시킬 수 있는지의 여부를 확인하였다. 본 발명자들은 INS-1 세포가 벤조다이아제핀 감응성을 부여할 수 있는 GABAA-R 소단위를 발현시키고, 이들 세포가 낮은 수준의 GABA를 생산할 수 있음을 발견하였다. 본 발명자들은 4종의 시험된 PAM 중 2종이 시험된 투여량 중 적어도 하나에서 INS-1 복제를 촉진시키는, 낮기는 하지만 유의한 능력을 가짐을 관찰하였다. GABA가 배양물 배지에 외인성으로 제공된 경우, 시험된 PAM 모두는 INS-1 세포 증식을 유도하는 낮은 수준의 GABA의 능력을 증가시켰다. 사실, INS-1 세포 복제를 촉진시키는 능력을 거의 갖지 않거나 전혀 갖지 않는 낮은 수준의 외인성 GABA는 PAM 각각의 나노몰 수준의 존재 하에서 그러한 능력을 가졌다.
본 발명자들이 INS-1 세포에 대해서 시험한 4종의 PAM 중에서, 본 발명자들은 인간 췌도 세포 복제에 대한 이의 효과를 연구하기 위해서 알프라졸람의 연구를 수행하였는데, 그 이유는 알프라졸람의 안전성 프로파일 및 알프라졸람 치료가 당뇨병에서 HbA1c 수준을 감소시켰다는 이전의 관찰 때문이었다((문헌[Lustman et al. (1995) Diabetes Care18: 1133-1139]), 하기 참조). 본 발명자들은 알프라졸람(단독)이 시험관내에서 인간 췌도 세포 복제를 향상시켰다는 것을 관찰하였는데, 이는 그것이 β-세포로부터 분비된 GABA와 함께 작용하였기 때문일 가능성이 가장 크다. 사실, 길항제 비쿠쿨린을 사용하여 GABA 결합을 차단하는 것은 췌도 세포 복제를 향상시키는 알프라졸람의 능력을 제거하였다. 이는 β-세포로부터 방출된 GABA가 β-세포에 대해서 유사분열-전 활성도를 가질 수 있고, 이러한 활성도는 PAM에 의해서 향상될 수 있음을 시사한다. 이러한 배양물에 니페디핀을 첨가하는 것은 알프라졸람의 유사분열-전 효과를 차단하였고, 이는 그것이 PI3K/Akt 경로의 GABAA-R-매개된 활성화를 향상시킨다는 것을 시사한다(문헌[Soltani et al. (2011) Proc . Natl . Acad. Sci . USA, 108: 11692-11697]).
조합 시에, 알프라졸람 및 외인성 GABA는 인간 β-세포 복제를 촉진시키는 더 큰 능력을 가졌고, 10-배 더 높은 수준의 GABA의 것과 유사한 β-세포 복제의 수준을 달성하였다. 면역조직학적 분석은 GABA가 인간 β-세포 복제를 증가시키지만, α-세포 복제에 대해서는 어떤 효과도 없고(문헌[Purwana et al. (2014) Diabetes, 63(12): 4197-4205]), 및 본 발명자들의 미발표 관찰), 췌도 δ 및 PP 세포가 GABA-R을 발현시키지 않는다고 알려져 있기 때문에, 본 발명자의 검정법에서 복제를 겪은 대다수의 췌도 세포는 β-세포일 것이다.
1990년대에 불량하게 제어되는 당뇨병을 갖는 불안을 갖는 개인 및 불안을 갖지 않는 개인을 알프라졸람으로 치료하는 임상 연구를 수행하여 불안을 감소시키는 것이 불안을 갖는 환자가 그의 당뇨병을 더 양호하게 관리하는 것을 도울 수 있는지를 결정하였다. 예상치 못한 발견은 알프라졸람 치료는 불안을 앓고 있는 환자인지의 여부에 관계없이 HbA1c 수준을 감소시켰고, 위약은 그렇지 않다는 것이었다(문헌[Lustman et al. (1995) Diabetes Care18: 1133-1139]). 이러한 결과는 알프라졸람이 신경전달물질 및 신경호르몬 방출을 무디게 하는 데서 기원된 것으로 생각된다. 본 발명자들의 발견에 비추어, HbA1C에 대한 알프라졸람의 이로운 효과는 β-세포 생존 및 복제를 촉진시키는 췌도 GABA의 능력을 적어도 부분적으로 향상시키는 것으로부터 발생할 수 있는 것이 가능하다.
본 발명자들은 본 발명자들의 발견이 임상적인 이익으로 이어질 수 있는 몇몇 상이한 경로를 생각한다. 첫번째로, CNS 적응증을 위해서 사용되는 것보다 더 낮은 용량으로 BBB-투과성 PAM을 사용하여 당뇨병에서 β-세포 양 및 기능을 향상시키는 것이 가능할 수 있다. 두번째로, T1D 발생 이후에 β-세포 양의 총량은 중재 요법(interventive therapy)의 성공을 결정하는 주요 인자이기 때문에, 단기간 PAM 치료는 잔류하는 β-세포 양을 보존하는 것을 도울 수 있고, 이에 의해서 중재 요법의 결과를 개선시킬 수 있다. 이러한 맥락에 따라서, GABA 치료는 새로운 당뇨병 NOD 마우스에서 β-세포 복제 및 생존을 향상시켰고(문헌[Soltani et al. (2011) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108: 11692-11697]; [Tian et al. (2014) Diabetes, 63: 3128-3134]), 이는 GABA-R 활성도를 향상시키는 것이 β-세포 양이 거의 남아있지 않은 경우에도 β-세포 자가반응성의 존재 하에서 이로울 수 있다는 것을 나타낸다. 세번째로, 단기간 PAM 처리는 인간 췌도 이종이식에서 β-세포 생존을 개선시키는 GABA 치료의 능력에 의해서 제안된 바와 같이, 췌도 이식 이후에 저산소증 및 스트레스로 인해서 β-세포 손실을 감소시키는 것을 도울 수 있다(문헌[Tian et al. (2013) Diabetes, 62: 3760-3765]; [Purwana et al. (2014) Diabetes, 63(12): 4197-4205]). 마지막으로, 면역 세포는 또한 GABA-R을 발현시키고, 이의 활성화는 염증전 면역 반응을 저해하여 GABA 치료는 T1D, 실험적 자가면역 뇌척수염, 류마티스 관절염 및 T2D의 마우스 모델에서 질환을 개선시킬 수 있다(문헌[Soltani et al. (2011) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108: 11692-11697]; [Prud'homme et al. (2103) Transplantation, 96(7): 616-623]; [Tian et al. (2014) Diabetes, 63: 3128-3134; Mendu et al. (2011) Mol. Immunol. 48: 399-407]; [Bhat et al. (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 107: 2580-2585]; [Huang et al. (2015) J. Cell Physiol. 230: 1438-1447]; [Duthey et al. (2010) Exp. Dermatol. 19: 661-666]; [Tian et al. (2011) PLoS One, 6(9): e25338]; [Tian et al. (2014) J. Immunol. 173: 5298-5304]; [Tian et al. (2011) Autoimmunity, 44: 465-470]). 따라서, 낮은 용량의 GABA와 조합된, 말초-제한된 GABAA-R PAM, 또는 임상 용량 미만의 용량의 BBB-투과성 PAM의 사용은, CNS 효과를 회피하고, β-세포 양/기능을 촉진시킬 뿐만 아니라 자가반응성 T 세포 반응을 제어하는 것을 도울 수 있다.
본 명세서에 기술된 실시예 및 실시형태는 단지 예시적인 목적을 위한 것이며, 이에 비추어 다양한 변형 또는 변화가 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 제안될 것이고, 본 출원의 사상 및 이해범위 및 첨부된 청구범위의 범주 내에 포함되어야 한다는 것이 이해된다. 본 명세서에 인용된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 모든 목적을 위해서 이들의 전문이 참고로 포함된다.

Claims (104)

  1. 포유동물에서 베타 세포의 복제, 성장, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키는 방법으로서, 상기 포유동물에게 GABAA 수용체 양성 알로스테릭 조절인자(positive allosteric modulator: PAM)를 상기 포유동물에서 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 양, 및/또는 기능을 촉진시키기에 충분한 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 GABAA 수용체 양성 알로스테릭 조절인자(PAM)는 GABA 수용체 활성화 리간드와 함께 투여되는, 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 상기 PAM과 함께 사용되는 경우 어느 하나의 작용제가 단독으로 투여되는 경우보다 상기 포유동물에서 상기 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키기에 더 효과적인, 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 PAM과 함께 사용되는 경우 어느 하나의 작용제가 단독으로 투여되는 경우보다 상기 포유동물에서 상기 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키기에 적어도 10%, 또는 적어도 20%, 또는 적어도 30%, 또는 적어도 40%, 또는 적어도 50%, 또는 적어도 60%, 또는 적어도 70%, 또는 적어도 80%, 또는 적어도 90%, 또는 적어도 100%, 또는 적어도 1.2배, 또는 적어도 1.5배, 또는 적어도 2배, 또는 적어도 3배, 또는 적어도 4배, 또는 적어도 5배, 또는 적어도 10배 더 효과적인, 방법.
  5. 제2항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 단독으로 투여된 경우 베타 세포 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능에 대해서 동일한 효과를 달성하는 데 사용되었을 것보다 더 낮은 투여량으로 사용되고/사용되거나 상기 양성 알로스테릭 조절인자는 상기 PAM이 단독으로 사용된 경우 상기 PAM이 설계 및/또는 승인되는 활성도를 달성하는 데 사용되었을 것보다 더 낮은 투여량으로 사용되는, 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 상기 GABA 수용체 활성화 리간드가 단독으로 사용되는 경우 베타 세포 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능에 대해서 동일한 효과를 달성하는 데 사용되었을 상기 투여량의 약 95% 미만, 또는 약 90% 미만, 또는 약 80% 미만, 또는 약 70% 미만, 또는 약 60% 미만, 또는 약 50% 미만, 또는 약 40% 미만, 또는 약 30% 미만, 또는 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만으로 사용되는, 방법.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서, 상기 양성 알로스테릭 조절인자는 상기 PAM이 단독으로 사용된 경우 상기 PAM이 설계 및/또는 승인되는 상기 활성도를 달성하는 데 사용되었을 상기 투여량의 약 95% 미만, 또는 약 90% 미만, 또는 약 80% 미만, 또는 약 70% 미만, 또는 약 60% 미만, 또는 약 50% 미만, 또는 약 40% 미만, 또는 약 30% 미만, 또는 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만으로 사용되는, 방법.
  8. 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 단독으로 투여된 경우 베타 세포 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능에 대해서 동일한 효과를 달성하는 데 사용되었을 것보다 더 낮은 투여량으로 사용되고/사용되거나 상기 양성 알로스테릭 조절인자는 치료량 미만의 투여량으로 사용되는, 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 베타 세포의 복제를 촉진시키는, 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 베타 세포의 양을 증가시키는, 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 베타 세포의 생존을 촉진시키는, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 베타 세포의 기능을 촉진시키는, 방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 투여는 인슐린 함량 및/또는 베타 세포에 의해서 분비되는 인슐린의 양을 증가시키는, 방법.
  14. 제12항에 있어서, 상기 투여는 인슐린 양성 베타 세포의 수를 증가시킴으로써 기능을 촉진시키는, 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유동물은 인간인, 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 포유동물은 제I형 당뇨병으로 진단된 인간인, 방법.
  17. 제15항에 있어서, 상기 포유동물은 당뇨병 전증(pre-diabetic)으로 진단된, 방법.
  18. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유동물은 비-인간 포유동물인, 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드 및 상기 PAM은 상승작용적으로 작용하여 상기 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 성장, 및/또는 기능을 개선시키는, 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PAM은 AP325 및 AP3으로 이루어진 군으로부터 선택된 작용제를 포함하는, 방법.
  21. 제20항에 있어서, 상기 PAM은 AP325를 포함하는, 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 AP325는 신경병증 통증 또는 척수 손상을 위해서 사용되는 것보다 더 낮은 투여량으로 투여되는, 방법.
  23. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PAM은 바비투에이트(barbituate), 벤조다이아제핀, 퀴나졸리논, 및 신경스테로이드로 이루어진 군으로부터 선택된 작용제를 포함하는, 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 PAM은 바비투에이트를 포함하는, 방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 PAM은 알로바비탈(5,5-다이알릴바비투레이트), 아모바비탈(5-에틸-5-아이소펜틸-바비투레이트), 아프로바비탈(5-알릴-5-iso프로프yl-바비투레이트), 알펜알(5-알릴-5-페닐-바비투레이트), 바비탈(5,5-di에틸바비투레이트), 브랄로바비탈(5-알릴-5-(2-브로모-알릴)-바비투레이트), 펜토바비탈(5-에틸-5-(1-메틸부틸)-바비투레이트), 페노바비탈(5-에틸-5-페닐바비투레이트), 세코바비탈(5-[(2R)-펜탄-2-일]-5-프로프-2-엔일-바비투레이트)로 이루어진 군으로부터 선택된 바비투레이트를 포함하는, 방법.
  26. 제23항에 있어서, 상기 PAM은 벤조다이아제핀을 포함하는, 방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 PAM은 알프라졸람, 브로마제팜, 클로르다이아제폭사이드, 미다졸람, 클로나제팜, 클로라제페이트, 다이아제팜, 에스타졸람, 플루라제팜, 할라제팜, 케타졸람, 로라제팜, 나이트라제팜, 옥사제팜, 프라제팜, 쿠아제팜, 테마제팜, 및 트라이졸람으로 이루어진 군으로부터 선택된 벤조다이아제핀을 포함하는, 방법.
  28. 제26항에 있어서, 상기 PAM은 알프라졸람을 포함하는, 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 알프라졸람은 불안 장애, 공황 장애, 및/또는 우울증으로 인한 불안을 치료하는 데 사용되는 것보다 적은 투여량으로 투여되는, 방법.
  30. 제28항에 있어서, 상기 알프라졸람은 경구로 1일당 1.5㎎ 미만 또는 경구로 1일당 1.0㎎ 미만, 또는 경구로 1일당 0.5㎎ 미만의 속방형(immediate release) 정제로서, 또는 경구로 1일당 0.5㎎ 미만, 또는 경구로 1일당 약 0.4㎎ 미만 또는 경구로 1일당 약 0.3㎎ 미만의 서방형(extended release) 정제로서 투여되는, 방법.
  31. 제26항에 있어서, 상기 PAM은 미다졸람을 포함하는, 방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 미다졸람은 불안을 감소시키거나, 의료 절차 또는 수술 이전에 수면 또는 마취를 제공하거나, 진정 또는 마취를 유지시키는 데 사용되는 것보다 적은 투여량으로 투여되는, 방법.
  33. 제31항에 있어서, 상기 미다졸람은 IV로 1㎎ 미만, 또는 IV로 약 0.8㎎ 미만, 또는 IV로 약 0.5㎎ 미만, 또는 IV로 약 0.01㎎/㎏ 미만, 또는 IM으로 약 0.07㎎/㎏ 미만, 또는 IM으로 약 0.05㎎/㎏ 미만, 또는 IM으로 약 0.03㎎/㎏ 미만, 또는 약 0.01㎎/㎏ 미만의 투여량으로 투여되는, 방법.
  34. 제26항에 있어서, 상기 PAM은 클로나제팜을 포함하는, 방법.
  35. 제34항에 있어서, 상기 클로나제팜은 발작 장애(결여 발작(absence seizure) 또는 레녹스-가스토 증후군(Lennox-Gastaut syndrome) 포함)를 치료하는 데 사용되는 것보다 적은 투여량으로 투여되거나, 또는 성인에서 공황 장애(광장공포증 포함)를 치료하는 데 사용되는 것보다 적은 투여량으로 투여되는, 방법.
  36. 제34항에 있어서, 상기 클로나제팜은 경구로 1일당 약 0.5㎎ 미만 또는 경구로 1일당 약 0.25㎎ 미만, 또는 약 0.01㎎/㎏/일 미만, 또는 약 0.005㎎/㎏/일 미만의 투여량으로 투여되는, 방법.
  37. 제23항에 있어서, 상기 PAM은 신경스테로이드를 포함하는, 방법.
  38. 제37항에 있어서, 상기 PAM은 알로프레그난올론(3α-하이드록시-5α-프레그난-20-온), 및 프레그난올론으로 이루어진 군으로부터 선택된 신경스테로이드를 포함하는, 방법.
  39. 제2항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA를 포함하는, 방법.
  40. 제2항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 바말루졸, 가바마이드, GABOB, 가복사돌, 이보텐산, 아이소구바신, 아이소니페코트산, 머스키몰, 페니부트, 피카밀론, 프로가비드, 퀴스쿠알라민, 프로가비드산(SL 75102), 싸이오머스키몰, 프레가발린, 비가바트린, 6-아미노니코틴산, 호모타우린, 및 XP13512[(±)-1-([(α-아이소부타노일옥시에톡시)카보닐]아미노메틸)-1-사이클로헥산 아세트산]로 이루어진 군으로부터 선택된 작용제를 포함하는, 방법.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 췌도 이식(islet transplantation) 후 베타 세포 생존을 증가시키는, 방법.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 췌도 이식 후 췌도에서 베타 세포 복제를 증가시키는, 방법.
  43. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 저산소증 및 스트레스로 인한 β-세포 손실을 감소시키기 위해서 췌도 체내이식(implantation) 후 수행되는, 방법.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 체내이식 후 최대 3일 동안, 또는 체내이식 후 최대 1주 동안, 또는 체내이식 후 최대 2주 동안, 또는 체내이식 후 최대 3주 동안, 또는 체내이식 후 최대 4주 동안, 또는 체내이식 후 최대 5주 동안, 또는 체내이식 후 최대 6주 동안, 또는 체내이식 후 최대 7주 동안, 또는 체내이식 후 최대 8주 동안, 또는 체내이식 후 최대 3개월 동안, 또는 체내이식 후 최대 4개월 동안, 또는 체내이식 후 최대 5개월 동안, 또는 체내이식 후 최대 6개월 동안 수행되는, 방법.
  45. 제2항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 알코올이 아닌, 방법.
  46. 제2항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 카발락톤이 아닌, 방법.
  47. 제2항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 스컬캡(skullcap) 또는 스컬캡 구성성분이 아닌, 방법.
  48. 제2항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 발레리안(valerian) 또는 발레리안 구성성분이 아닌, 방법.
  49. 제2항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 휘발성 기체가 아닌, 방법.
  50. 제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유동물은 신경병증 통증, 척수 손상, 불안 장애, 공황 장애, 우울증으로 인한 불안, 발작 장애(결여 발작 또는 레녹스-가스토 증후군 포함), 및 월경 간질로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 병태에 대해서 치료되고 있지 않은, 방법.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PAM은 의료 절차 또는 수술 이전에 수면 또는 마취를 제공하거나, 또는 진정 또는 마취를 유지시키기 위해서 투여되지 않는, 방법.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, BBB-투과성인 상기 PAMS는 CNS 적응증을 위해서 사용되는 것보다 더 적은 용량으로 투여되는, 방법.
  53. GABA 수용체 활성화 리간드 및 GABAA 수용체 양성 알로스테릭 조절인자(PAM)를 포함하는 약제학적 제형.
  54. 제53항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA 수용체 활성화 리간드 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하고/하거나 상기 PAM은 상기 PAM 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하는, 약제학적 제형.
  55. 제54항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA 또는 GABA 유사체 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하는, 약제학적 제형.
  56. 제55항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 상기 GABA 수용체 활성화 리간드가 단독으로 제공되는 경우 베타 세포 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능에 대해서 동일한 효과를 달성하는 데 제공되었을 투여량의 약 95% 미만, 또는 약 90% 미만, 또는 약 80% 미만, 또는 약 70% 미만, 또는 약 60% 미만, 또는 약 50% 미만, 또는 약 40% 미만, 또는 약 30% 미만, 또는 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만으로 존재하는, 약제학적 제형.
  57. 제53항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PAM은 상기 PAM 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하는, 약제학적 제형.
  58. 제57항에 있어서, 상기 양성 알로스테릭 조절인자는 상기 PAM이 단독으로 사용된 경우 상기 PAM이 설계 및/또는 승인되는 활성도를 달성하는 데 존재했을 양의 약 95% 미만, 또는 약 90% 미만, 또는 약 80% 미만, 또는 약 70% 미만, 또는 약 60% 미만, 또는 약 50% 미만, 또는 약 40% 미만, 또는 약 30% 미만, 또는 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만으로 존재하는, 약제학적 제형.
  59. 제53항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 또는 GABA 유사체 및 상기 PAM은 GABAA 수용체를 발현시키는 세포의 복제를 자극시키는 데 있어서 상승작용적 활성도를 제공하기에 충분한 농도로 존재하는, 약제학적 제형.
  60. 제53항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드 및 상기 PAM은 베타 세포의 복제를 자극시키고/거나 베타 세포의 생존을 촉진시키고/거나 베타 세포의 기능을 개선시키는 데 있어서 상승작용적 활성도를 제공하기에 충분한 농도로 존재하는, 약제학적 제형.
  61. 제53항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드 및 상기 PAM은 포유동물에서 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키는 데 있어서 어느 하나의 작용제가 단독으로 투여되는 경우보다 적어도 10%, 또는 적어도 20%, 또는 적어도 30%, 또는 적어도 40%, 또는 적어도 50%, 또는 적어도 60%, 또는 적어도 70%, 또는 적어도 80%, 또는 적어도 90%, 또는 적어도 100%, 또는 적어도 1.2배, 또는 적어도 1.5배, 또는 적어도 2배, 또는 적어도 3배, 또는 적어도 4배, 또는 적어도 5배, 또는 적어도 10배 더 큰 효능을 제공하기에 충분한 농도로 존재하는, 약제학적 제형.
  62. 제53항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PAM은 바비투에이트, 벤조다이아제핀, 퀴나졸리논, 및 신경스테로이드로 이루어진 군으로부터 선택된 작용제를 포함하는, 약제학적 제형.
  63. 제62항에 있어서, 상기 PAM은 바비투에이트를 포함하는, 약제학적 제형.
  64. 제63항에 있어서, 상기 PAM은 알로바비탈(5,5-다이알릴바비투레이트), 아모바비탈(5-에틸-5-아이소펜틸-바비투레이트), 아프로바비탈(5-알릴-5-iso프로프yl-바비투레이트), 알펜알(5-알릴-5-페닐-바비투레이트), 바비탈(5,5-di에틸바비투레이트), 브랄로바비탈(5-알릴-5-(2-브로모-알릴)-바비투레이트), 펜토바비탈(5-에틸-5-(1-메틸부틸)-바비투레이트), 페노바비탈(5-에틸-5-페닐바비투레이트), 세코바비탈(5-[(2R)-펜탄-2-일]-5-프로프-2-엔일-바비투레이트)로 이루어진 군으로부터 선택된 바비투레이트를 포함하는, 약제학적 제형.
  65. 제62항에 있어서, 상기 PAM은 벤조다이아제핀을 포함하는, 약제학적 제형.
  66. 제65항에 있어서, 상기 PAM은 알프라졸람, 브로마제팜, 클로르다이아제폭사이드, 미다졸람, 클로나제팜, 클로라제페이트, 다이아제팜, 에스타졸람, 플루라제팜, 할라제팜, 케타졸람, 로라제팜, 나이트라제팜, 옥사제팜, 프라제팜, 쿠아제팜, 테마제팜, 및 트라이졸람으로 이루어진 군으로부터 선택된 벤조다이아제핀을 포함하는, 약제학적 제형.
  67. 제65항에 있어서, 상기 PAM은 알프라졸람을 포함하는, 약제학적 제형.
  68. 제65항에 있어서, 상기 PAM은 미다졸람을 포함하는, 약제학적 제형.
  69. 제65항에 있어서, 상기 PAM은 클로나제팜을 포함하는, 약제학적 제형.
  70. 제62항에 있어서, 상기 PAM은 신경스테로이드를 포함하는, 약제학적 제형.
  71. 제70항에 있어서, 상기 PAM은 알로프레그난올론 및 프레그난올론으로 이루어진 군으로부터 선택된 신경스테로이드를 포함하는, 약제학적 제형.
  72. 제53항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA를 포함하는, 약제학적 제형.
  73. 제53항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 바말루졸, 가바마이드, GABOB, 가복사돌, 이보텐산, 아이소구바신, 아이소니페코트산, 머스키몰, 페니부트, 피카밀론, 프로가비드, 퀴스쿠알라민, 프로가비드산(SL 75102), 싸이오머스키몰, 프레가발린, 비가바트린, 6-아미노니코틴산, 호모타우린, 및 XP13512[(±)-1-([(α-아이소부타노일옥시에톡시)카보닐]아미노메틸)-1-사이클로헥산 아세트산]로 이루어진 군으로부터 선택된 작용제를 포함하는, 약제학적 제형.
  74. 제53항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 알코올이 아닌, 약제학적 제형.
  75. 제53항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 카발락톤이 아닌, 약제학적 제형.
  76. 제53항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 스컬캡 또는 스컬캡 구성성분이 아닌, 약제학적 제형.
  77. 제53항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 발레리안 또는 발레리안 구성성분이 아닌, 약제학적 제형.
  78. GABAA 수용체를 발현시키는 포유동물 세포에서 복제를 촉진시키기 위한 키트로서,
    GABA 수용체 활성화 리간드를 함유하는 용기; 및
    GABAA 수용체 양성 알로스테릭 조절인자(PAM)를 함유하는 용기를 포함하는, 키트.
  79. 제78항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드 및 상기 PAM은 동일한 용기에 존재하는, 키트.
  80. 제78항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드 및 상기 PAM은 별개의 용기에 존재하는, 키트.
  81. 제78항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA 또는 GABA 유사체 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하고/하거나 상기 PAM은 상기 PAM 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하는, 키트.
  82. 제78항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA 또는 GABA 유사체 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하는, 키트.
  83. 제82항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 상기 GABA 수용체 활성화 리간드가 단독으로 제공되는 경우 베타 세포 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능에 대해서 동일한 효과를 달성하는 데 제공되었을 투여량의 약 95% 미만, 또는 약 90% 미만, 또는 약 80% 미만, 또는 약 70% 미만, 또는 약 60% 미만, 또는 약 50% 미만, 또는 약 40% 미만, 또는 약 30% 미만, 또는 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만으로 존재하는, 키트.
  84. 제78항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PAM은 상기 PAM 단독을 포함하는 치료적 제형에서보다 더 낮은 단위 투여량으로 존재하는, 키트.
  85. 제78항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 양성 알로스테릭 조절인자는 상기 PAM이 단독으로 사용된 경우 상기 PAM이 설계 및/또는 승인되는 활성도를 달성하는 데 존재했을 양의 약 95% 미만, 또는 약 90% 미만, 또는 약 80% 미만, 또는 약 70% 미만, 또는 약 60% 미만, 또는 약 50% 미만, 또는 약 40% 미만, 또는 약 30% 미만, 또는 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만으로 존재하는, 키트.
  86. 제78항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드 및 상기 PAM은 GABAA 수용체를 발현시키는 세포의 복제를 자극시키는 데 있어서 상승작용적 활성도를 제공하기에 충분한 농도로 존재하는, 키트.
  87. 제78항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드 및 상기 PAM은 베타 세포의 복제를 자극시키고/거나 베타 세포의 생존을 촉진시키고/거나 베타 세포의 기능을 개선시키는 데 있어서 상승작용적 활성도를 제공하기에 충분한 농도로 존재하는, 키트.
  88. 제78항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드 및 상기 PAM은 포유동물에서 베타 세포의 복제, 및/또는 생존, 및/또는 기능을 촉진시키는 데 있어서 어느 하나의 작용제가 단독으로 투여되는 경우보다 적어도 10%, 또는 적어도 20%, 또는 적어도 30%, 또는 적어도 40%, 또는 적어도 50%, 또는 적어도 60%, 또는 적어도 70%, 또는 적어도 80%, 또는 적어도 90%, 또는 적어도 100%, 또는 적어도 1.2배, 또는 적어도 1.5배, 또는 적어도 2배, 또는 적어도 3배, 또는 적어도 4배, 또는 적어도 5배, 또는 적어도 10배 더 큰 효능을 제공하기에 충분한 농도로 존재하는, 키트.
  89. 제78항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PAM은 바비투에이트, 벤조다이아제핀, 퀴나졸리논, 및 신경스테로이드로 이루어진 군으로부터 선택된 작용제를 포함하는, 키트.
  90. 제89항에 있어서, 상기 PAM은 바비투에이트를 포함하는, 키트.
  91. 제90항에 있어서, 상기 PAM은 알로바비탈(5,5-다이알릴바비투레이트), 아모바비탈(5-에틸-5-아이소펜틸-바비투레이트), 아프로바비탈(5-알릴-5-iso프로프yl-바비투레이트), 알펜알(5-알릴-5-페닐-바비투레이트), 바비탈(5,5-di에틸바비투레이트), 브랄로바비탈(5-알릴-5-(2-브로모-알릴)-바비투레이트), 펜토바비탈(5-에틸-5-(1-메틸부틸)-바비투레이트), 페노바비탈(5-에틸-5-페닐바비투레이트), 세코바비탈(5-[(2R)-펜탄-2-일]-5-프로프-2-엔일-바비투레이트)로 이루어진 군으로부터 선택된 바비투레이트를 포함하는, 키트.
  92. 제89항에 있어서, 상기 PAM은 벤조다이아제핀을 포함하는, 키트.
  93. 제92항에 있어서, 상기 PAM은 알프라졸람, 브로마제팜, 클로르다이아제폭사이드, 미다졸람, 클로나제팜, 클로라제페이트, 다이아제팜, 에스타졸람, 플루라제팜, 할라제팜, 케타졸람, 로라제팜, 나이트라제팜, 옥사제팜, 프라제팜, 쿠아제팜, 테마제팜 및 트라이졸람으로 이루어진 군으로부터 선택된 벤조다이아제핀을 포함하는, 키트.
  94. 제92항에 있어서, 상기 PAM은 알프라졸람을 포함하는, 키트.
  95. 제92항에 있어서, 상기 PAM은 클로나제팜을 포함하는, 키트.
  96. 제92항에 있어서, 상기 PAM은 미다졸람을 포함하는, 키트.
  97. 제89항에 있어서, 상기 PAM은 신경스테로이드를 포함하는, 키트.
  98. 제97항에 있어서, 상기 PAM은 알로프레그난올론 및 프레그난올론으로 이루어진 군으로부터 선택된 신경스테로이드를 포함하는, 키트.
  99. 제78항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 GABA를 포함하는, 키트.
  100. 제78항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 바말루졸, 가바마이드, GABOB, 가복사돌, 이보텐산, 아이소구바신, 아이소니페코트산, 머스키몰, 페니부트, 피카밀론, 프로가비드, 퀴스쿠알라민, 프로가비드산(SL 75102), 싸이오머스키몰, 프레가발린, 비가바트린, 6-아미노니코틴산, 호모타우린, 및 XP13512[(±)-1-([(α-아이소부타노일옥시에톡시)카보닐]아미노메틸)-1-사이클로헥산 아세트산]로 이루어진 군으로부터 선택된 작용제를 포함하는, 키트.
  101. 제78항 내지 제100항 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 알코올이 아닌, 키트.
  102. 제78항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 카발락톤이 아닌, 키트.
  103. 제78항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 스컬캡 또는 스컬캡 구성성분이 아닌, 키트.
  104. 제78항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GABA 수용체 활성화 리간드는 발레리안 또는 발레리안 구성성분이 아닌, 키트.
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