KR20180051501A - 과산화수소를 방출하는 항균 조성물 및 제제 - Google Patents

과산화수소를 방출하는 항균 조성물 및 제제 Download PDF

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토마스 존 홀
리암 마이클 그로버
라미 살리브
토마스 패튼
제임스 브레넌
존 레지날드 바렛
이안 스테이플스
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Abstract

항균 활성을 생성하는 조성물이 기재되어 있다. 이 조성물은 제1 상; 제2 상; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 포함하고, 이때 제1 상과 제2 상은 혼화불가능하다. 상기 조성물은 콜로이드, 현탁액 또는 에멀전, 특히 크림 또는 분무제로서 제제화될 수 있다. 상기 조성물을 제조하는 방법뿐만 아니라, 항균 감염의 치료를 위한 상기 조성물의 용도도 기재되어 있다.

Description

과산화수소를 방출하는 항균 조성물 및 제제
본 발명은 항균 조성물 및 제제, 특히 콜로이드, 현탁액 또는 에멀전에 관한 것이다. 상기 조성물 및 제제는 항균 감염, 예컨대, 바이러스, 세균 또는 진균 감염의 치료를 위해 국소 적용될 수 있다.
구순포진은 입술 위 또는 입 주변에서 발생하는 작은 물집이다. 이것은 헤르페스 심플렉스 바이러스(herpes simplex virus)(HSV)에 의해 야기되고 통상적으로 7일 내지 10일 이내에 치료 없이 없어진다. 구순포진은 종종 입 주변에서 따끔거림, 가려움 또는 작열감으로 시작된다. 그 다음, 유체로 충전된 작은 궤양이 가장 흔하게는 아래 입술의 가장자리 위에서 나타날 것이다. 국소 제품, 예컨대, 크림 또는 겔이 구순포진을 치료하는 데 사용될 수 있다. 구순포진의 지속시간을 통상적으로 단지 1일 내지 2일까지 약간 단축할 수 있는 처방 의약들은 많다.
생식기 헤르페스는 헤르페스 심플렉스 바이러스(HSV)에 의해 야기되는 흔한 감염이다. 이것은 생식기 및 주변 부위 위에서 아픈 물집을 야기한다. 헤르페스는 항-바이러스제들에 의해 치료될 수 있다. 그러나, 이들은 부작용, 예컨대, 구역 및 두통을 야기할 수 있다.
HSV 및 다른 바이러스 또는 미생물 감염의 효과적인 치료를 제공하는 국소 제제에 대한 필요성이 남아있다.
본 출원인은 미생물 감염의 부위에서 과산화수소를 방출할 수 있는 조성물이 감염을 예방하거나 억제하는 데 있어서 특히 효과적이라는 것을 발견하였다.
서지허니(Surgihoney)™는 가변적이고 지속된 용량의 반응성 산소 종(ROS)을 전달하는 능력을 가진 화학적으로 조작된 벌꿀이다. 시험관내 및 생체내 연구는 감염의 박멸에 있어서 서지허니의 효능을 입증하였다. 이것은 약물 내성 균주, 예컨대, 메티실린 내성 스타필로코커스 아우레우스(S. aureus)(MRSA) 및 바노마이신 내성 엔테로코커스 패시움(Enterococcus faecium)을 포함한다(Dryden, M., Lockyer, G., Saeed, K., & Cooke, J. (2014). Engineered Honey: In Vitro Antimicrobial Activity of a Novel Topical Wound Care Treatment. Journal of Global Antimicrobial Resistance, 2, 168-172). 상기 물질은 진균에 대해서도 효과적인 것으로 밝혀졌고 바이오필름의 시딩(seeding)을 방지하거나 감소시켰다(Dryden, M., Halstead, F., & Cooke, J. (2015). Engineered Honey to Manage Bacterial Bioburden and Biofilm in Chronic Wounds. EWMA Free Paper Session: Infection and Antimicrobials). 화학적으로 조작된 벌꿀, 예컨대, 첨가된 글루코스 옥시다제를 가진 벌꿀은 국제 특허출원 공보 제WO 2015/166197 Α1호에 개시되어 있다.
현재, 서지허니™는 국소 투여용 사셰(sachet) 형태로 입수될 수 있다. 그러나, 이 형태의 서지허니™의 투여는 불편할 수 있고, 조절된 용량의 적용을 어렵게 만들 수 있고, 임상적으로 최적이 아닐 수 있다.
본 발명에 따라, 친유성 상; 수성 상; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 포함하는, 항균 활성을 생성하는 조성물이 제공된다. 본 발명의 조성물은 콜로이드 또는 현탁액의 형태로 존재할 수 있다.
용어 "콜로이드"는 제2 물질을 통해 분산된 제1 물질의 큰 분자 또는 초미세 입자로 구성된 균질한 비-결정질 물질을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 콜로이드는 겔, 졸 및 에멀전을 포함한다. 상기 입자는 침전되지 않고, 현탁액 중의 입자처럼 통상의 여과 또는 원심분리에 의해 분리될 수 없다.
용어 "현탁액"은 물질의 작은 입자가 액체를 통해 분산되어 있는 혼합물을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 현탁액이 교란되지 않은 상태로 방치된 경우, 입자는 바닥에 침전될 가능성이 있다. 현탁액 중의 입자는 콜로이드 또는 용액 중의 입자보다 더 크다.
본 발명의 조성물은 에멀전의 형태로 존재할 수 있다. 용어 "에멀전"은 한 액체의 미소한 소적이 이 액체에 대한 가용성을 갖지 않거나 이 액체와 혼화불가능한 또 다른 액체에 미세하게 분산되어 있는 것을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 본 발명의 에멀전은 오일 및 물 에멀전, 특히 수중유 에멀전 또는 유중수 에멀전일 수 있다. 상기 조성물은 마이크로에멀전일 수 있다.
본 발명의 조성물은 제1 상(또는 제1 액체 또는 제1 성분) 및 제2 상(또는 제2 액체 또는 제2 성분); 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 포함할 수 있다. 제1 상과 제2 상은 혼합될 수 없다. 예를 들면, 제1 상은 제2 상보다 더 약한 극성을 가질 수 있다. 제1 상은 비-극성 상, 예컨대, 친유성 상 또는 소수성 상, 예를 들면, 오일일 수 있다. 제2 상은 극성 상, 예컨대, 수성 상일 수 있다. 제2 상은 비-수성 용매를 포함할 수 있다. 제2 상의 소적 또는 마이셀(micelle)은 제1 상 내에 분산될 수 있다.
제2 상은 물 및/또는 비-수성 용매를 포함할 수 있다. 조성물의 효소 및 물질은 물 및/또는 비-수성 용매에 용해될 수 있다.
일부 실시양태에서, 제2 상은 물을 포함하지 않을 수 있거나 물을 실질적으로 포함하지 않을 수 있다는 것이 생각될 수 있다. 이러한 환경에서, 제2 상은 비-수성 상으로서 기재될 수 있다. 예를 들면, 효소, 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질은 비-수성 용매에 용해될 수 있다. 비-수성 용매는 제1 상, 예를 들면, 친유성 상과 혼화불가능하다.
일부 실시양태에서, 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소, 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질은 제1 상, 예를 들면, 친유성 상 내에 분산된 마이셀 내에 함유될 수 있다.
일부 조성물에서, 조성물은 이중 에멀전의 형태로 존재할 수 있다. 예를 들면, 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 함유하는 소적은 친유성 상의 소구체(예를 들면, 오일 소구체) 내에 분산될 수 있고, 소구체는 수성 상 내에 분산될 수 있다. 이러한 이중 에멀전은 수중유중수 유형(W/O/W) 에멀전으로서 지칭될 수 있다.
본 발명의 조성물은 에멀전화제(또는 유화제)를 추가로 포함할 수 있다. 에멀전은 에멀전 계면에서 표면 활성제(에멀전화제)의 흡착에 의해 안정화될 수 있다. 에멀전화제는 분산된 상태로 소적을 유지하기 위해 계면 장력을 낮춘다. 에멀전화제는 친수성 부분 및 친유성 부분을 가진다. 물 조합으로 특정 제제에 대한 가장 물리적으로 안정한 에멀전을 생성하기 위해 필요한 에멀전화제(들)의 상대적 양을 계산할 수 있다. 이러한 방법은 친수성-친유성 균형(HLB) 방법으로서 지칭된다("The HLB SYSTEM a time-saving guide to emulsifier selection" ICI Americas Inc., Wlimington, Delaware 19897, 1976, revised 1980). 각각의 에멀전화제는 분자의 친유성 부분 및 친수성 부분의 상대적 성질을 나타내는 HLB 숫자를 할당받는다. 높은 숫자(최대 20의 이론상 숫자)는 주로 친수성 또는 극성을 나타내는 에멀전화제를 표시하는 반면, 낮은 숫자는 친유성 또는 비-극성 특성을 나타낸다. HLB 시스템에 따라, 모든 지방 및 오일은 요구된 HLB를 가진다. 최적 성능을 가진 에멀전은 HLB 요건을 에멀전화제의 HLB 값과 일치시킴으로써 생성될 수 있다. 수중유 에멀전의 경우, 오일 상의 극성이 더 강할수록 에멀전화제(들)의 극성이 더 강해야 한다. 예를 들면, HLB 시스템에 따라, 7의 요구된 HLB를 가진 대두 오일을 에멀전화하기 위해, 7 ± 1의 HLB를 가진 에멀전화제 또는 에멀전화제의 블렌드를 사용할 필요가 있을 것이다 에멀전화제의 HLB는 시행착오를 통해 계산될 수 있거나 결정될 수 있다.
따라서, 본 발명의 조성물의 친유성 상은 안정한 생성물을 보장하기 위해 특정 HLB 숫자의 에멀전화제를 요구할 수 있다. 본 발명의 조성물의 친유성 상은 오일 또는 왁스를 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물의 친유성 상에서 사용될 오일 및 왁스의 예는 하기 오일들 및 왁스들(이들 각각의 요구된 HLB와 함께 이들의 미용 성분 국제 명명법(INCI) 명칭으로 표시됨)을 포함한다:
Figure pct00001
일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 친유성 상은 밀랍을 포함한다.
일부 실시양태에서, 친유성 상은 오일이다. 일부 실시양태에서, 오일은 올리브 오일, 옥수수 오일, 식물성 오일, 해바라기 오일 또는 파라핀 오일로부터 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 오일은 올리브 오일일 수 있다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 오일은 파라핀 오일일 수 있다.
본 발명의 조성물에서 사용될 유중수 에멀전화제는 범위 3 내지 6 내의 HLB 값을 가질 수 있다. 본 발명의 조성물에서 사용될 수중유 에멀전화제는 범위 8 내지 18 내의 HLB 값을 가질 수 있다. 본 발명의 조성물에서 사용될 에멀전화제의 예는 하기 에멀전화제들(이들의 HLB 숫자와 함께 이들의 INCI 명칭으로 표시됨)을 포함한다:
Figure pct00002
일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 에멀전화제는 레시틴을 포함한다.
에멀전화제는 이온성 또는 비-이온성 계면활성제, 및 친유성 지방 양친매성 물질(예를 들면, 지방 알코올 또는 지방산)을 포함한다. 비-이온성 계면활성제는 음이온성 또는 양이온성 계면활성제보다 피부에 덜 자극적일 수 있기 때문에 바람직할 수 있다.
적합한 에멀전화제의 다른 예는 하기 물질들을 포함한다: 계면활성제: 라우릴황산나트륨, 세트리마이드(Cetrimide), 세토마크로골(Cetomacrogol) 1000, PEG 1000 모노스테아레이트, 트리에탄올아민 스테아레이트, 스테아르산나트륨; 지방 양친매성 물질: 세토스테아릴 알코올, 세틸 알코올, 스테아릴 알코올, 글리세릴 모노스테아레이트, 스테아르산, 포스파티딜콜린.
시판되는 에멀전화 왁스의 예는 하기 에멀전화 왁스들을 포함한다: 에멀전화 왁스 BP(세토스테아릴 알코올, 라우릴황산나트륨), 에멀전화 왁스 USNF(세틸 알코올, 폴리소르베이트), 양이온성 에멀전화 왁스 BPC(세토스테아릴 알코올, 세트리마이드), 글리세릴 모노스테아레이트 S.E.(글리세릴 모노스테아레이트, 스테아르산나트륨), 세토마크로골 에멀전화 왁스 BPC(세토스테아릴 알코올, 세토마크로골 1000), 폴라왁스(Polawax)(세틸 알코올, 비-이온성 계면활성제), 레시틴(포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨, 포스파티드산).
본 발명의 조성물에서 사용될 계면활성제는 TWEEN(예를 들면, TWEEN 80), SPAN(예를 들면, SPAN 80), 폴록사머(Poloxamer)(예를 들면, 폴록사머 407) 및 폴리글리세롤 폴리리시놀레에이트(PGPR) 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 바람직한 계면활성제는 폴록사머, 예컨대, 폴록사머 407일 수 있다. 또 다른 바람직한 계면활성제는 PGPR일 수 있다.
계면활성제는 계면활성제 중합체 또는 공중합체를 포함할 수 있다. 예를 들면, 적합한 계면활성제는 측면에 2개의 친수성 블록들을 가진 중심 소수성 블록으로 구성된 삼블록 공중합체일 수 있다.
본 발명에 따라, 항균 활성을 생성하는 조성물로서, 오일; 에멀전화제; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 포함하는 조성물이 제공된다.
본 발명의 조성물은 비-수성 용매를 포함할 수 있다. 비-수성 용매는 극성 용매, 예컨대, 15 초과의 유전 상수를 가진 용매일 수 있다. 비-수성 용매는 유기 용매일 수 있다. 예를 들면, 용매는 글리세롤, 디메틸설폭사이드, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜일 수 있거나 이를 포함할 수 있다. 비-수성 용매는 제1 상, 예를 들면, 친유성 상(예컨대, 오일)과 혼화불가능하다.
바람직한 실시양태에서, 비-수성 용매는 글리세롤일 수 있거나 이를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 마이셀, 바람직하게는 역 마이셀(reverse micelle)을 포함할 수 있다. 각각의 마이셀 내부에는 효소 및 (비정련된 천연 물질, 예컨대, 벌꿀을 포함할 수 있는) 물질이 존재할 수 있고, 마이셀 외부에는 제1 상, 예를 들면, 친유성 상(예컨대, 오일)이 존재할 수 있다. 각각의 역 마이셀 내부에는 물 및/또는 비-수성 용매도 존재할 수 있다. 각각의 마이셀 내부에는 효소가 기질을 전환시키는 데 충분한 물이 존재하지 않을 수 있다.
본 발명의 조성물은 유착을 감소시키는 데 도움을 줄 수 있는 성분을 추가로 포함할 수 있다. 유착은 2개 이상의 소적 또는 마이셀이 합쳐져 단일 소적 또는 마이셀을 형성하는 상황을 기술한다. 유착을 감소시키거나 방지하기 위해, 계면 필름, 즉 친유성 상과 수성 상 사이의 계면의 강도를 강화시킬 수 있다. 이것은 예를 들면, 양친매성 중합체를 포함하는 계면활성제의 농도를 증가시키고/시키거나 알코올, 예컨대, 5개 내지 7개의 탄소 원자를 가진 지방족 알코올을 첨가함으로써 달성될 수 있다.
본 발명의 조성물은 국소 적용, 특히 인간 대상체에게의 국소 적용에 적합할 수 있다. 국소 적용을 위한 조성물은 신체 표면, 예컨대, 피부 또는 점막에 적용될 수 있다. 국소 적용을 위한 본 발명의 조성물은 예를 들면, 크림, 로션 또는 립 밤의 형태로 존재할 수 있다.
용어 "크림"은 국소 사용될 수중유 또는 유중수의 반고체 에멀전을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 수중유(o/w) 크림은 연속 수성 상 내에 분산된 작은 오일 소적으로 구성되고, 유중수(w/o) 크림은 연속 오일 상 내에 분산된 작은 물 소적으로 구성된다. 수중유 크림은 덜 기름지고 물의 사용을 통해 더 용이하게 세척된다. 유중수 크림은 피부의 최외각 층으로부터의 물 손실을 감소시키는 유성 장벽을 제공하기 때문에 더 촉촉하다.
용어 "크림"은 제1 상의 소적이 연속 제2 상 내에 분산되어 있거나 제2 상의 소적이 연속 제1 상 내에 분산되어 있는 반고체 에멀전을 지칭할 수도 있다. 예를 들면, 제1 상은 제2 상보다 더 약한 극성을 가질 수 있다. 제1 상은 비-극성 상, 예컨대, 친유성 상 또는 소수성 상, 예를 들면, 오일일 수 있다. 제2 상은 극성 상, 예컨대, 수성 상일 수 있다. 제2 상은 비-수성 용매를 포함할 수 있다. 제2 상은 물 및/또는 비-수성 용매를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 상은 물을 포함하지 않을 수 있거나 물을 실질적으로 포함하지 않을 수 있다는 것이 생각될 수 있다. 이러한 환경에서, 제2 상은 비-수성 상으로서 기재될 수 있다. 비-수성 용매는 제1 상, 예를 들면, 친유성 상과 혼화불가능하다.
용어 "로션"은 국소 적용을 위한 액체 현탁액 또는 에멀전을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 로션은 현탁제 및/또는 표면 활성제에 의해 현탁액으로 유지된, 미세하게 분말화된 불용성 고체, 또는 하나 이상의 표면 활성제에 의해 안정화된 에멀전(특히 수중유 에멀전)을 포함할 수 있다. 로션은 크림보다 더 낮은 점도를 가진다.
용어 "립 밤"은 갈라진 또는 건조한 입술을 촉촉하게 하고 완화시키기 위해 입의 입술에 국소 적용되는 왁스 유사 물질을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 립 밤은 다른 성분들 중에서 예를 들면, 밀랍 또는 카르나우바 왁스, 캄포르, 세틸 알코올, 라놀린, 파라핀 및 바셀린을 포함할 수 있다.
유리하게는, 본 발명의 조성물은 분무될 수 있다. 예를 들면, 이것은 서지허니를 그의 통상적인 형태로 적용하는 데 있어서 일부 어려움을 극복하는 데 도움을 줄 수 있다. 예를 들면, 일부 환경에서, (점착성 및 점성을 가질 수 있는) 서지허니는 감염 부위에 적용하기 어려울 수 있다. 결과적으로, 본 발명의 조성물은 분무 장치의 이용을 통해 환자에게 전달될 수 있다. 상기 장치는 분무 또는 분사 장치, 예컨대, 펌프 작용 분무기 또는 에어로졸 분무기일 수 있다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 조성물을 포함하는 분무 장치를 제공할 수 있다.
본 발명의 조성물은 대상체에게 내부 투여되기에 적합할 수 있다. 예를 들면, 조성물은 대상체의 호흡관 내로 투여되기에 적합할 수 있다. 서지허니는 그의 통상적인 형태에서 대상체의 호흡관에 용이하게 투여될 수 없다.
본 발명의 조성물은 분사기 또는 흡입기의 이용을 통해 호흡관에 투여될 수 있다. 결과적으로, 본 발명은 본 발명의 조성물을 포함하는 분사기 또는 흡입기를 제공할 수 있다.
분사기는 액체를 흡입에 적합한 에어로졸 소적으로 전환시키는 장치이다. 분사기는 산소, 압축된 공기 또는 초음파 힘을 이용하여 투약 용액을 분쇄하고 치료 용량의 에어로졸 입자를 폐에 직접적으로 전달한다. 매우 다양한 분사기들이 이용될 수 있다. 분사기는 압축된 기체(제트 분사기) 또는 초음파 진동 결정(초음파 분사기)에 의해 구동될 수 있다.
5분 내지 10분 이내에 용액으로부터 작은 충분한 입자를 생성하기 위해, 적어도 6 ℓ/분의 기체 유속이 통상적으로 필요하다. 초음파 분사기는 신속 진동 압전기 결정을 사용하여 에어로졸 입자를 생성한다. 초음파 분사기 기계는 종종 더 작고 더 조용하다.
많은 분사기들이 처방된 약물 용량의 10%만을 폐에 전달한다. 약물의 대부분은 내부 장치 위에 잡혀 있거나 배기 동안 폐기된다. 약물 전달의 효율은 분사기 챔버의 유형 및 부피, 및 이 챔버에서 유도되는 유속에 의존한다. 일부 챔버들은 흡기 동안 입자 전달의 효율을 증가시키고 호기 동안 환경적 손실을 감소시키기 위해 저장기 및 밸브 시스템을 가진다. 호흡에 의해 보조된 개방 환기구 시스템은 약물 전달을 개선하나, 적절한 호기 유동을 가진 환자에 의존한다. 얼굴 마스크 또는 마우스피스(mouthpiece)가 에어로졸 입자의 투여를 위해 사용될 수 있다.
분사기는 많은 호흡기 질환들의 치료를 위해 사용된다. 분사기가 사용될 적응증은 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD)의 악화 관리 및 장기간 치료, 낭성 섬유증, 기관지확장증, 천식 및 HIV/AIDS의 관리, 및 완화 처치에서의 증상 경감을 포함한다.
본 발명의 분사된 조성물은 호흡기 질환, 예컨대, COPD, 낭성 섬유증, 기관지확장증 또는 천식, 또는 HIV/AIDS와 연관된 호흡기 감염, 또는 말기 질환과 연관된 호흡기 감염을 앓고 있는 대상체에서 미생물 감염, 예를 들면, 바이오필름, 또는 바이오필름을 형성할 수 있는 미생물을 포함하는 미생물 감염을 예방하거나 치료하는 데 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 바이오필름, 또는 바이오필름을 형성할 수 있는 미생물을 포함하는 미생물 감염을 예방하거나 치료하는 데 사용될 수 있다. 바이오필름은 바이오필름 형성 세균, 진균 또는 바이러스를 포함할 수 있다. 바이오필름을 형성할 수 있는 미생물은 세균, 진균 또는 바이러스일 수 있다.
일부 실시양태에서, 미생물 감염을 예방하거나 치료하는 데 사용되는 조성물은 본 발명의 분사된 조성물을 배제할 수 있다.
본 발명의 조성물의 효소는 물질에 존재할 수 있는, 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 임의의 효소 활성(본원에서 "기질 전환 활성"으로서 지칭됨) 이외의 것일 수 있다(즉, 인간 중재의 결과로서 첨가될 수 있다). 즉, 상기 조성물은 물질 및 첨가된 효소를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 물질에는 기질 전환 활성이 존재하지 않을 수 있다.
본 발명의 조성물은 효소가 기질을 전환시키게 하는 데 충분한 유리수를 포함하지 않는 저장 안정성 조성물일 수 있다.
예를 들면, 일부 실시양태에서, 효소 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질은 마이셀(예컨대, 역 마이셀) 내에 캡슐화될 수 있거나 함유될 수 있고, 마이셀 내부에는 효소가 기질을 전환시키게 하는 데 충분한 유리수가 존재하지 않을 수 있다. 비-수성 용매가 마이셀에 존재할 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 조성물은 조성물에서 물로부터 분리되어 있는(또는 구획화되어 있는), 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질에 의해 저장 안정성을 가질 수 있다. 예를 들면, 조성물은 이중 에멀전일 수 있다. 효소 및 물질을 함유하는(그러나, 상기 효소가 기질을 전환시키게 하는 데 충분한 유리수를 갖지 않는) 소적은 오일의 소구체 내에 분산될 수 있고, 오일의 소구체는 수성 상(예를 들면, 물) 내에 분산될 수 있다.
충분한 물의 존재 하에서, 저장 안정성 조성물의 효소는 기질을 전환시키고 과산화수소를 방출할 수 있다. 과산화수소는 매우 다양한 상이한 미생물들에 대해 효과적인 것으로 공지되어 있다. 따라서, 본 발명의 저장 안정성 조성물의 희석 후 항균 활성이 생성된다.
저장 안정성 조성물이 사용되는 경우, 이것은 투여 부위에 존재하여 투여 부위에서 과산화수소의 방출을 유발하는 액체에 의해 희석될 수 있다.
조성물이 충분한 양의 물과 접촉될 때까지 효소가 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 없을 것이기 때문에, 물 또는 임의의 유리수를 포함하지 않는 본 발명의 조성물은 본 발명의 특히 안정한 조성물을 제공할 수 있다.
카탈라제(Catalase)는 물 및 산소로의 과산화수소의 분해를 촉매하는 효소이다. 카탈라제 활성을 결여하는 물질의 사용은 상이한 공급원들로부터의 유사한 물질들, 또는 동일한 공급원으로부터의 상이한 채취물들로부터의 유사한 물질들 사이에 이 활성의 양의 가변성이 없다는 것을 의미한다. 이것은 이러한 물질로부터 생성될 수 있는 항균 활성의 가변성을 감소시킨다. 대안적으로, 물질이 카탈라제 활성을 포함하는 경우, 및 물질을 효소와 접촉시키기 전에 물질에서 카탈라제 활성을 불활성화시키는 것이 가능하지 않거나 바람직하지 않은 경우, 물질로부터 생성될 수 있는 과산화수소에 대한 카탈라제 활성의 효과가 감소되도록 충분한 효소가 사용될 수 있다. 이것도 물질로부터 생성될 수 있는 항균 활성의 가변성을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 물질은 카탈라제 활성을 결여할 수 있다.
카탈라제는 많은 식물들 및 동물들에 존재한다. 카탈라제 활성은 물질의 가공 또는 추출 동안 제거될 수 있거나, 조성물에서의 물질의 사용 전에 불활성화될 수 있다. 카탈라제 활성은 예를 들면, 저온살균에 의해 가열 불활성화될 수 있다. 카탈라제 활성의 가열 불활성화를 위한 적합한 온도는 바람직하게는 적어도 2분 동안 적어도 60℃, 70℃ 또는 80℃이다.
용어 "저장 안정성"은 조성물이 조성물의 희석 후 항균 활성을 생성하는 능력을 보유하면서, 적어도 수일, 적합하게는 적어도 1주 또는 적어도 1개월 또는 2개월 동안 주위 온도에서 저장될 수 있다는 것을 의미하기 위해 본원에서 사용된다. 저장 온도는 37℃ 미만, 바람직하게는 20 내지 25℃일 수 있다. 바람직하게는, 조성물은 광에의 노출로부터 저장될 수 있다.
과산화수소는 일반적으로 주위 온도에서 불안정하다. 본 발명의 저장 안정성 조성물에서 충분한 유리수의 결여는 효소가 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출하지 못하게 함으로써, 주위 온도에서 연장된 기간 동안 조성물의 안정성을 유지하는 데 도움을 준다. 효소가 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수가 없는 한, 본 발명의 저장 안정성 조성물은 일부 물을 포함할 수 있다. 물의 적합한 양은 조성물의 정확한 성분에 따라 달라질 것이다. 그러나, 전형적으로, 본 발명의 저장 안정성 조성물은 20% 미만의 총 물 함량, 예를 들면, 10% 내지 19%의 물을 포함한다.
과산화수소는 조성물에 존재하는 기질의 양 및 효소의 활성에 따라 조성물의 희석 후 지속된 기간 동안 방출될 수 있다. 조성물에서 기질의 양 및/또는 효소의 활성은 조성물의 희석 후 짧은 기간 동안 상대적으로 높은 수준의 과산화수소의 방출, 또는 보다 긴 기간 동안 보다 낮은 수준의 과산화수소의 방출을 제공하도록 선택될 수 있다는 것이 인식될 것이다. 적합하게는, 조성물은 조성물의 희석 후 적어도 24시간, 보다 바람직하게는 적어도 48시간 동안 과산화수소의 지속된 방출을 제공한다. 적합하게는, 조성물은 조성물의 희석 후 적어도 24시간 동안 2 mmol/ℓ 미만의 수준으로 과산화수소의 지속된 방출을 제공한다.
본 발명의 조성물은 적어도 24시간, 보다 바람직하게는 48시간 동안 적어도 0.1, 0.5, 1 또는 1.5 mmol/ℓ의 과산화수소의 지속된 방출을 제공하기에 충분한 효소 및 기질을 포함할 수 있다.
조성물의 희석 후 필요에 따라 기질을 전환시키고 과산화수소를 형성하기에 충분한 효소가 본 발명의 저장 안정성 조성물에 존재해야 한다는 것이 인지될 것이다.
충분한 물의 존재 하에서 본 발명의 저장 안정성 조성물에 의한 과산화수소의 생성의 중요성에 비추어 볼 때, 조성물은 임의의 첨가된 퍼록시다제를 함유하지 않아야 한다는 것이 인지될 것이다.
일부 실시양태에서, 효소는 정제된 효소이다. 용어 "정제된 효소"는 효소가 생성될 때 효소가 원래 존재하는 불순물들 중 적어도 일부로부터 분리되어 있는 효소 제제를 포함하기 위해 본원에서 사용된다. 바람직하게는, 제거되거나 감소된 불순물은 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출하는 효소의 능력을 방해하는 불순물을 포함한다.
효소가 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 한, 정제된 효소가 높은 순도로 존재하는 것이 항상 필요하거나 바람직하지는 않을 수 있다. 일부 환경에서, 상대적으로 비정제된 효소 제제를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 적합한 순도의 예는 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 순도를 포함한다.
그러나, 효소가 생성될 때 원래 존재했었을 수 있는 임의의 카탈라제의 양은 감소되는 것이 바람직하다. 상기 효소는 재조합 또는 비-재조합 수단에 의해 생성되었을 수 있고 재조합 또는 비-재조합 효소일 수 있다. 효소는 미생물 공급원, 바람직하게는 비-유전적으로 변형된 미생물로부터 정제될 수 있다.
효소의 순도는 조성물의 의도된 용도에 따라 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들면, 조성물이 의료 용도를 위한 것인 경우, 의료 등급 또는 의료 장치 등급의 순도가 사용되어야 한다.
따라서, 항균 활성을 생성하는 저장 안정성 조성물로서, 친유성 상; 수성 상; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 정제된 효소; 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 포함하는 저장 안정성 조성물이 본 발명에 따라 제공되고; 이때 상기 조성물은 효소가 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수를 포함하지 않는다.
본 발명에 따라, 항균 활성을 생성하는 저장 안정성 조성물로서, 제1 상; 제2 상; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 포함하는 저장 안정성 조성물이 제공되고, 이때 제1 상과 제2 상은 혼화불가능하고, 상기 조성물은 효소가 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수를 포함하지 않는다.
본 발명에 따라, 항균 활성을 생성하는 저장 안정성 조성물로서, 오일; 에멀전화제; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 포함하는 저장 안정성 조성물이 제공되고, 이때 상기 조성물은 효소가 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수를 포함하지 않는다.
일부 실시양태에서, 효소는 옥시도리덕타제 효소이다. 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 옥시도리덕타제 효소의 예는 글루코스 옥시다제, 헥소스 옥시다제, 콜레스테롤 옥시다제, 갈락토스 옥시다제, 피라노스 옥시다제, 콜린 옥시다제, 피루베이트 옥시다제, 글리콜레이트 옥시다제 및 아미노산 옥시다제를 포함한다. 이들 옥시도리덕타제 효소들에 대한 상응하는 기질은 각각 D-글루코스, 헥소스, 콜레스테롤, D-갈락토스, 피라노스, 콜린, 피루베이트, 글리콜레이트 및 아미노산이다.
하나 이상의 옥시도리덕타제 효소와 옥시도리덕타제 효소에 대한 하나 이상의 기질의 혼합물은 본 발명의 조성물에 존재할 수 있다.
옥시도리덕타제 효소는 글루코스 옥시다제일 수 있고, 기질은 D-글루코스일 수 있다.
물질은 효소에 대한 기질을 포함하는 임의의 물질일 수 있다. 일부 실시양태에서, 물질은 카탈라제 활성을 결여한다.
따라서, 항균 활성을 생성하는 저장 안정성 조성물로서, 친유성 상; 수성 상; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 카탈라제 활성을 결여하고 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 포함하는 저장 안정성 조성물도 본 발명에 따라 제공되고; 이때 상기 조성물은 효소가 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수를 포함하지 않는다.
본 발명에 따라, 항균 활성을 생성하는 저장 안정성 조성물로서, 제1 상; 제2 상; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 카탈라제 활성을 결여하고 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 포함하는 저장 안정성 조성물도 제공되고, 이때 상기 조성물은 효소가 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수를 포함하지 않는다.
항균 활성을 생성하는 저장 안정성 조성물로서, 오일; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 카탈라제 활성을 결여하고 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 포함하는 저장 안정성 조성물도 본 발명에 따라 제공되고, 이때 상기 조성물은 효소가 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수를 포함하지 않는다.
상기 물질은 비정련된 물질일 수 있다. 용어 "비정련된"은 순수한 형태로 가공되지 않은 물질을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 비정련된 물질은 예를 들면, 건조 또는 끓이기에 의해 농축되어 있을 수 있는 물질을 포함한다.
상기 물질은 천연 공급원으로부터의 하나 이상의 기질을 포함할 수 있다(본원에서 "천연 물질"로서 지칭됨). 천연 물질의 예는 수액, 뿌리, 화밀, 꽃, 종자, 과일, 잎 또는 싹을 포함하는 식물 공급원으로부터의 물질을 포함한다. 상기 물질은 비정련된 천연 물질일 수 있다.
적합하게는, 상기 물질은 하기 기질들 중 하나 이상의 기질을 포함한다: D-글루코스, 헥소스, 콜레스테롤, D-갈락토스, 피라노스, 콜린, 피루베이트, 글리콜레이트 또는 아미노산.
물질은 당 물질일 수 있다. 용어 "당 물질"은 하나 이상의 당을 포함하는 임의의 물질을 의미하기 위해 본원에서 사용된다. 용어 "당"은 일반식 Cm(H2O)n을 가진 탄수화물을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 바람직한 당은 단당류, 예컨대, D-글루코스, 헥소스 또는 D-갈락토스를 포함한다. 당 물질은 천연 공급원으로부터의 하나 이상의 당을 포함할 수 있다(본원에서 "천연 당 물질"로서 지칭됨). 천연 당 물질은 비정련된 천연 당 물질일 수 있다. 비정련된 천연 당 물질은 천연 당 생성물일 수 있다(또는 이러한 생성물로부터 유래될 수 있다). 일부 실시양태에서, 비정련된 천연 당 생성물은 벌꿀이다. 일부 실시양태에서, 벌꿀은 카탈라제 활성을 제거하거나 불활성화시키도록 처리된 벌꿀이다.
상기 논의된 바와 같이, 물질 그 자체는 바람직하게는 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소 활성("기질 전환 활성"으로서 지칭됨)을 결여할 수 있다. 물질로부터의 기질 전환 활성의 부재는 상이한 공급원들로부터의 유사한 물질들, 또는 동일한 공급원으로부터의 상이한 채취물들로부터의 유사한 물질들 사이에 이 활성의 양의 가변성이 없다는 장점을 가진다. 이것은 이러한 물질로부터 생성될 수 있는 항균 활성의 가변성도 감소시킨다. 그 다음, 기질 전환 활성은 물질과 접촉되는 효소에 의해서만 제공되므로, 조성물에 존재하는 기질 전환 활성의 양은 조절될 수 있다.
기질 전환 활성은 물질의 가공 또는 추출 동안 제거될 수 있거나, 본 발명의 조성물에서의 물질의 사용 전에 불활성화될 수 있다. 기질 전환 활성은 가열 불활성화, 예를 들면, 저온살균에 의해 불활성화될 수 있다. 기질 전환 활성의 가열 불활성화를 위한 적합한 온도는 바람직하게는 적어도 2분 동안 적어도 80℃이다. 가열 불활성화의 장점은 카탈라제 활성 및 기질 전환 활성 둘 다가 단일 가열 불활성화 단계에서 불활성화될 수 있다는 점이다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 물질은 가공된, 추출된 또는 정련된 물질(즉, 불순물 또는 원치 않는 요소가 가공에 의해 제거된 물질)이다. 바람직하게는, 제거되거나 감소되는 불순물은 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출하는 효소의 능력을 방해할 불순물을 포함한다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 물질은 효소를 위한 정제된 기질을 포함한다. 용어 "정제된 기질"은 기질이 수득되거나 생성될 때 기질이 원래 존재하는 불순물의 적어도 일부로부터 분리되어 있는 기질 제제를 포함하도록 본원에서 사용된다. 정제된 기질은 천연 공급원으로부터 수득될 수 있거나 합성에 의해 생성될 수 있다. 정제된 기질은 가공된, 추출된 또는 정련된 기질(즉, 불순물 또는 원치 않는 요소가 가공에 의해 제거된 기질)일 수 있다.
효소가 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 한, 정제된 기질이 높은 순도로 존재하는 것이 항상 필요하거나 바람직하지는 않을 수 있다. 일부 환경에서, 상대적으로 비정제된 기질 제제를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 적합한 순도의 예는 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 순도를 포함한다. 그러나, 일부 실시양태에서, 정제된 기질은 의료 등급, 의료 장치 등급 또는 약학 등급 기질인 것이 바람직할 수 있다.
특정 실시양태에서, 정제된 기질은 정제된 당 물질이거나 이러한 물질을 포함한다. 정제된 당 물질은 천연 공급원으로부터 수득될 수 있거나(예를 들면, 가공된, 추출된 또는 정련된 천연 당 물질), 합성에 의해 생성될 수 있다. 정제된 당 물질은 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 순도를 가질 수 있다. 정제된 당 물질은 의료 등급, 의료 장치 등급 또는 약학 등급 당 물질일 수 있다. 정제된 당 물질은 하나 이상의 정제된 당 물질, 예를 들면, 정제된 D-글루코스, 헥소스 또는 D-갈락토스를 포함할 수 있다. 예를 들면, 정제된 당 물질은 의료 등급, 의료 장치 등급 또는 약학 등급 D-글루코스, 헥소스 또는 D-갈락토스일 수 있다.
항균 활성을 생성하는 조성물로서, 친유성 상; 수성 상; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 이 효소에 대한 정제된 기질을 포함하는 물질을 포함하는 조성물도 본 발명에 따라 제공된다.
본 발명에 따라, 항균 활성을 생성하는 조성물로서, 제1 상; 제2 상; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 이 효소에 대한 정제된 기질을 포함하는 물질을 포함하는 조성물도 제공되고, 이때 제1 상과 제2 상은 혼화불가능하다.
항균 활성을 생성하는 조성물로서, 오일; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 이 효소에 대한 정제된 기질을 포함하는 물질을 포함하는 조성물도 본 발명에 따라 제공된다.
조성물은 친유성 상; 수성 상; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 이 효소에 대한 정제된 기질을 포함하는 물질을 포함하는, 항균 활성을 생성하는 저장 안정성 조성물일 수 있고, 이때 상기 조성물은 효소가 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수를 포함하지 않는다.
조성물은 제1 상; 제2 상; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 이 효소에 대한 정제된 기질을 포함하는 물질을 포함하는, 항균 활성을 생성하는 저장 안정성 조성물일 수 있고, 이때 제1 상과 제2 상은 혼화불가능하고, 상기 조성물은 효소가 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수를 포함하지 않는다.
조성물은 오일; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 이 효소에 대한 정제된 기질을 포함하는 물질을 포함하는, 항균 활성을 생성하는 저장 안정성 조성물일 수 있고, 이때 상기 조성물은 효소가 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수를 포함하지 않는다.
조성물은 친유성 상; 수성 상; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 카탈라제 활성을 결여하고 상기 효소에 대한 정제된 기질을 포함하는 물질을 포함하는, 항균 활성을 생성하는 저장 안정성 조성물일 수 있고, 이때 상기 조성물은 효소가 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수를 포함하지 않는다.
조성물은 제1 상; 제2 상; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 카탈라제 활성을 결여하고 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 포함하는, 항균 활성을 생성하는 저장 안정성 조성물일 수 있고, 이때 제1 상과 제2 상은 혼화불가능하고, 상기 조성물은 효소가 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수를 포함하지 않는다.
조성물은 오일; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 카탈라제 활성을 결여하고 상기 효소에 대한 정제된 기질을 포함하는 물질을 포함하는, 항균 활성을 생성하는 저장 안정성 조성물일 수 있고, 이때 상기 조성물은 효소가 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수를 포함하지 않는다.
특정 실시양태에서, 효소 및 기질은 정제된 효소 및 기질, 예를 들면, 정제된 글루코스 옥시다제 및 정제된 D-글루코스, 적합하게는 의료 등급, 의료 장치 등급 또는 약학 등급 글루코스 옥시다제 및 D-글루코스이다.
본 발명의 조성물에서 친유성 상 대 수성 상의 비, 또는 제1 상 대 제2 상의 비는 9:1 내지 1:9, 8:1 내지 1:8, 7:1 내지 1:7, 6:1 내지 1:6, 5:1 내지 1:5, 4:1 내지 1:4, 3:1 내지 1:3, 또는 2:1 내지 1:2(v/v), 예를 들면, 4:1 내지 1:4일 수 있다.
본 발명의 조성물은 (존재하는 임의의 에멀전화제를 포함하는) 5% 내지 95%, 10% 내지 95%, 15% 내지 95%, 20% 내지 95%, 25% 내지 95%, 30% 내지 95%, 35% 내지 95%, 40% 내지 95%, 45% 내지 95%, 50% 내지 95%, 55% 내지 95%, 60% 내지 95%, 65% 내지 95%, 70% 내지 95%, 75% 내지 95%, 80% 내지 95%, 85% 내지 95%, 또는 90% 내지 95%(v/v)의 친유성 상 또는 제1 상을 포함할 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 조성물은 (존재하는 임의의 에멀전화제를 포함하는) 5% 내지 95%, 5% 내지 90%, 5% 내지 85%, 5% 내지 80%, 5% 내지 75%, 5% 내지 70%, 5% 내지 65%, 5% 내지 60%, 5% 내지 55%, 5% 내지 50%, 5% 내지 45%, 5% 내지 40%, 5% 내지 35%, 5% 내지 30%, 5% 내지 25%, 5% 내지 20%, 5% 내지 15%, 또는 5% 내지 10%(v/v)의 친유성 상 또는 제1 상을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 5% 내지 95%, 10% 내지 95%, 15% 내지 95%, 20% 내지 95%, 25% 내지 95%, 30% 내지 95%, 35% 내지 95%, 40% 내지 95%, 45% 내지 95%, 50% 내지 95%, 55% 내지 95%, 60% 내지 95%, 65% 내지 95%, 70% 내지 95%, 75% 내지 95%, 80% 내지 95%, 85% 내지 95%, 또는 90% 내지 95%(v/v)의 수성 상 또는 제2 상을 포함할 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 조성물은 5% 내지 95%, 5% 내지 90%, 5% 내지 85%, 5% 내지 80%, 5% 내지 75%, 5% 내지 70%, 5% 내지 65%, 5% 내지 60%, 5% 내지 55%, 5% 내지 50%, 5% 내지 45%, 5% 내지 40%, 5% 내지 35%, 5% 내지 30%, 5% 내지 25%, 5% 내지 20%, 5% 내지 15%, 또는 5% 내지 10%(v/v)의 수성 상 또는 제2 상을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 1% 내지 60%, 1% 내지 50%, 1% 내지 40%, 1% 내지 30%, 1% 내지 20%, 또는 1% 내지 10%(w/v)의 물질, 예를 들면, 벌꿀을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 1% 내지 60%, 5% 내지 60%, 10% 내지 60%, 15% 내지 60%, 20% 내지 60%, 25% 내지 60%, 30% 내지 60%, 35% 내지 60%, 40% 내지 60%, 45% 내지 60%, 또는 50% 내지 60%(w/v)의 물질, 예를 들면, 벌꿀을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 조성물의 그램당 1 내지 1500 유닛, 15 내지 1500 유닛, 30 내지 1500 유닛, 50 내지 1500 유닛, 100 내지 1500 유닛, 1 내지 685 미만 유닛, 15 내지 685 미만 유닛, 30 내지 685 미만 유닛, 50 내지 685 미만 유닛, 100 내지 685 미만 유닛, 500 내지 1000 유닛, 685 내지 1000 유닛, 또는 100 내지 500 유닛의 효소, 바람직하게는 글루코스 옥시다제를 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 85% 이하의 물, 예를 들면, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30% 또는 20% 이하의 물, 또는 20% 미만의 물, 예를 들면, 10% 내지 19%의 물을 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 20%(w/w) 미만의 물을 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 15%(w/w) 미만의 물을 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 12%(w/w) 미만의 물을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 10% 내지 60%(w/w)의 비-수성 용매를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 20% 내지 50%(w/w)의 비-수성 용매를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 35% 내지 40%(w/w)의 비-수성 용매를 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 10% 내지 40%(w/w)의 제1 상, 예를 들면, 친유성 상(예컨대, 오일)을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 20% 내지 30%(w/w)의 제1 상, 예를 들면, 친유성 상(예컨대, 오일)을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 1% 내지 10%(w/w)의 에멀전화제를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 1% 내지 5%(w/w)의 에멀전화제를 포함할 수 있다. 에멀전화제는 바람직하게는 계면활성제이다.
본 발명의 조성물은 효소에 대한 기질을 포함하는 10% 내지 50%(w/w)의 물질을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 20% 내지 40%(w/w)의 물질을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 조성물은 25% 내지 35%(w/w)의 물질을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 20% 내지 50%(w/w)의 비-수성 용매, 20% 내지 30%(w/w)의 제1 상, 예를 들면, 친유성 상(예컨대, 오일), 1% 내지 5%(w/w)의 에멀전화제, 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 20% 내지 40%(w/w)의 물질을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 10% 내지 60%(w/w)의 비-수성 용매, 10% 내지 40%(w/w)의 제1 상, 예를 들면, 친유성 상(예컨대, 오일), 1% 내지 10%(w/w)의 에멀전화제, 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 10% 내지 50%(w/w)의 물질을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 35% 내지 45%(w/w)의 비-수성 용매, 20% 내지 30%(w/w)의 제1 상, 예를 들면, 친유성 상(예컨대, 오일), 1% 내지 5%(w/w)의 에멀전화제, 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 25% 내지 35%(w/w)의 물질을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 30% 내지 60%(v/v)의 용매, 예컨대, 비-수성 극성 용매를 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 30% 내지 60%(v/v)의 제1 상, 예컨대, 친유성 상(예를 들면, 오일)을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 1% 내지 10%(v/v)의 에멀전화제, 예컨대, 계면활성제를 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 효소에 대한 기질을 포함하는 30% 내지 70% 또는 40% 내지 60%(w/w)의 물질, 예를 들면, 벌꿀을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물에서 제1 상 대 제2 상의 비는 ≤1:1(v/v), 예를 들면, 0.1 내지 1:1(v/v)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 상 대 제2 상의 비는 <0.6:1(v/v), 예를 들면, 0.1 내지 <0.6:1(v/v)이다. 일부 실시양태에서, 제1 상 대 제2 상의 비는 ≤0.4:1(v/v), 예를 들면, 0.1 내지 0.4:1(v/v)이다.
본 발명의 조성물에서 제1 상은 조성물의 60%(v/v) 미만으로 존재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 상은 조성물의 10% 내지 60%(v/v) 미만으로 존재한다. 일부 실시양태에서, 제1 상은 조성물의 10% 내지 50%(v/v) 미만으로 존재한다. 일부 실시양태에서, 제1 상은 조성물의 10% 내지 40%(v/v) 미만으로 존재한다. 일부 실시양태에서, 제1 상은 조성물의 10% 내지 30%(v/v) 미만으로 존재한다. 일부 실시양태에서, 제1 상은 조성물의 10% 내지 25%(v/v) 미만으로 존재한다.
본 발명의 조성물은 에멀전화제를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 에멀전화제는 조성물의 최대 25%(v/v), 예를 들면, 조성물의 1% 내지 25%(v/v), 조성물의 5% 내지 25%(v/v) 또는 조성물의 10% 내지 25%(v/v)로 존재한다.
본 발명의 조성물에서 효소에 대한 기질을 포함하는 물질의 양 대 제2 상의 부피의 비는 0.5:1 내지 2:1, 예를 들면, 1:1일 수 있다.
본 발명의 조성물에서 효소에 대한 기질을 포함하는 물질의 양은 조성물의 최대 70%(w/v), 예를 들면, 조성물의 5% 내지 70%(w/v), 10% 내지 70%(w/v), 20% 내지 70%(w/v) 또는 30% 내지 70%(w/v), 또는 조성물의 최대 60%(w/v), 예를 들면, 조성물의 5% 내지 60%(w/v), 10% 내지 60%(w/v), 20% 내지 60%(w/v) 또는 30% 내지 60%(w/v)일 수 있다.
본 발명의 조성물은 에멀전일 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 역 마이셀을 포함하는 에멀전이다. 역 마이셀은 제2 상에 의해 형성될 수 있다.
본 발명의 조성물의 일부 실시양태에서, 효소 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질은 제2 상에 용해된다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 제1 상은 파라핀 오일이거나 이를 포함한다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 제2 상은 글리세롤이거나 이를 포함한다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 에멀전화제는 폴리글리세롤 폴리리시놀레에이트(PGPR)이거나 이를 포함한다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소는 정제된 글루코스 옥시다제이거나 이를 포함하고, 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질은 벌꿀이거나 이를 포함한다.
본 발명의 다른 특정 실시양태에서, 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소는 정제된 글루코스 옥시다제이거나 이를 포함하고, 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질은 정제된 글루코스이거나 이를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 크림이다. 전형적으로, 크림으로서 사용되는 에멀전의 점도는 분무제로서 사용되는 에멀전의 점도보다 더 높을 것이다. 크림은 점도 증가제, 예를 들면, 증점제 또는 겔화제(예를 들면, 하이드로콜로이드)를 조성물에 포함시킴으로써 형성될 수 있다.
하이드로콜로이드는 물에 분산되어 있을 때 점성 분산액 및/또는 겔을 형성하는 그들의 능력을 특징으로 하는 친수성 장쇄 중합체들(다당류 또는 단백질)의 불균질한 군이다(Saha and Bhattacharya, J Food Sci Technol, 2010, 47(6):587-597). 증점 정도는 하이드로콜로이드의 유형 및 성질에 따라 달라진다. 일부는 꽤 높은 농도에서 낮은 점도를 제공하지만, 대다수는 1% 미만의 농도에서 높은 점도를 제공한다. 하이드로콜로이드 분산액의 점도는 주로 입체구조적으로 무질서한 중합체 쇄들의 비-특이적 얽힘으로부터 발생한다. (본원에서 하이드로콜로이드 증점제로서 지칭되는) 증점제로서 사용될 수 있는 하이드로콜로이드는 전분, 변형된 전분, 잔탄(xanthan), 갈락토만난(galactomannan)(예컨대, 구아 검(guar gum), 로커스트 콩 검(locust bean gum) 및 타라 검(tara gum)), 검 아라빅(gum Arabic) 또는 아카시아 검(acacia gum), 검 카라야(gum karaya), 검 트라가칸쓰(gum tragacanth), 곤약 마안난(konjac maanan), 및 셀룰로스 유도체, 예컨대, 카복시메틸 셀룰로스, 메틸 셀룰로스 및 하이드록시프로필메틸 셀룰로스를 포함한다.
일부 하이드로콜로이드는 액체 매질에 담겨진 상호연결된 분자 네트워크를 형성하도록 가교결합된 중합체 분자들로 구성된 겔을 형성할 수 있다. 겔의 유동학적 정의는 '손실 탄성률'(G")보다 더 큰 '저장 탄성률'(G')을 가진 점탄성 시스템이다(de Vries 2004, Gums and stabilizers for the food industry, vol 12. RSC Publ, Oxford, pp 22-30). 하이드로콜로이드는 수소 결합, 소수성 회합 및 양이온-매개된 가교결합을 통한 그들의 중합체 쇄들의 물리적 회합으로 겔을 형성한다. 겔화 유형 하이드로콜로이드(또는 하이드로콜로이드 겔화제)는 알기네이트, 펙틴(pectin), 카라기난(carrageenan), 젤라틴, 젤란(gellan), 한천, 변형된 전분, 메틸 셀룰로스 및 하이드록시프로필메틸 셀룰로스를 포함한다.
하이드로콜로이드의 겔화는 상이한 기작에 의해 일어날 수 있다: 이온이동성(ionotropic) 겔화, 냉경화 겔화 및 열경화 겔화(Burey et al. 2008, Crit Rev Food Sci Nutr 48:361-377). 이온이동성 겔화는 하이드로콜로이드 쇄와 이온의 가교결합, 전형적으로 음으로 하전된 다당류의 양이온-매개된 겔화 과정을 통해 일어난다. 이온이동성 겔화로 겔을 형성할 수 있는 하이드로콜로이드의 예는 알기네이트, 카라기난 및 펙틴을 포함한다. 이온이동성 겔화는 확산 경화 또는 내부 겔화에 의해 수행될 수 있다. 냉경화 겔화에서, 하이드로콜로이드 분말은 온수/끓는 물에 용해되어, 냉각 시 겔을 형성하는 분산액을 형성한다. 한천 및 젤라틴은 이 기작으로 겔을 형성한다. 열경화 겔은 겔에의 열의 적용을 요구한다(예를 들면, 커들란(curdlan), 곤약 글루코만난, 메틸 셀룰로스, 전분 및 구형 단백질).
따라서, 일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 점도 증가제, 예컨대, 증점제 또는 겔화제, 예를 들면, 하이드로콜로이드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 하이드로콜로이드는 다당류 또는 단백질이거나 이를 포함한다. 하이드로콜로이드는 하이드로콜로이드 증점제, 예컨대, 전분, 변형된 전분, 잔탄, 갈락토만난(예컨대, 구아 검, 로커스트 콩 검 및 타라 검), 검 아라빅 또는 아카시아 검, 검 카라야, 검 트라가칸쓰, 곤약 마안난, 또는 셀룰로스 유도체, 예컨대, 카복시메틸 셀룰로스, 메틸 셀룰로스 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로스일 수 있다.
다른 실시양태에서, 하이드로콜로이드는 가교결합된 하이드로콜로이드, 예를 들면, 가교결합된 다당류, 예컨대, 가교결합된 알기네이트, 펙틴, 카라기난, 젤라틴, 젤란, 한천, 아가로스, 변형된 전분 또는 셀룰로스 유도체, 예컨대, 메틸 셀룰로스 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로스이거나 이를 포함한다.
하이드로콜로이드는 예를 들면, 전술된 하이드로콜로이드의 겔화 방법을 포함하는 임의의 적합한 방법에 의해 가교결합될 수 있다: 이온이동성 겔화, 냉경화 겔화 및 열경화 겔화. 특정 실시양태에서, 하이드로콜로이드의 분자는 하이드로콜로이드 겔화제의 이온이동성 겔화의 결과로서 양이온(예를 들면, 칼슘 이온)에 의해 가교결합된다. 본 발명의 조성물에 존재할 수 있는 양이온에 의해 가교결합된 하이드로콜로이드의 예는 알기네이트, 카라기난 또는 펙틴을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 가교결합된 알기네이트, 예를 들면, 칼슘 이온에 의해 가교결합된 알기네이트를 포함한다. 알긴산나트륨이 냉수에서 가용성을 갖기 때문에 알기네이트는 예열 없이 겔을 형성할 수 있다.
가교결합된 알기네이트는 알긴산나트륨 및 (예를 들면, 염화칼슘에 의해 제공된) 칼슘 이온으로부터 형성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 물은 칼슘 이온을 해리시키기 위한 용매로서 사용될 수 있다. 그러나, 이것은 효소, 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질에 의한 과산화수소의 생성을 잠재적으로 활성화시킬 수 있고 조성물의 안정성을 한정하기 때문에, 비-수성 용매, 예컨대, 에탄올 또는 아세트산을 사용하여 칼슘 이온을 해리시키는 것이 바람직할 수 있다.
본 발명자들은 글리세롤이 유리수를 결합시키는 데 사용될 수 있다는 것을 인식하였다. 충분한 글리세롤이 효소, 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질로부터의 과산화수소의 너무 이른 방출을 방지하기 위해 존재하는 한, 이 성질은 물이 알기네이트를 용해시키는 데 사용될 수 있게 한다.
본 발명의 조성물을 제조하는 방법으로서, 친유성 성분, 수성 성분, 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소, 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 혼합하여 조성물을 형성하는 단계를 포함하는 방법도 본 발명에 따라 제공된다.
본 발명에 따라, 본 발명의 조성물을 제조하는 방법으로서, 제1 성분(또는 제1 상의 액체), 제2 성분(제2 상의 액체), 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소, 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 혼합하여 조성물을 형성하는 단계를 포함하는 방법도 제공되고, 이때 제1 성분(또는 제1 상의 액체)와 제2 성분(또는 제2 상의 액체)은 혼화불가능하다.
본 발명의 조성물을 제조하는 방법으로서, 오일, 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소, 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 혼합하여 조성물을 형성하는 단계를 포함하는 방법도 본 발명에 따라 제공된다.
본 발명의 방법은 비-수성 용매, 예컨대, 극성 유기 용매를 혼합하는 단계도 포함할 수 있다.
본 발명의 방법은 유량계를 이용하여 본 발명의 조성물을 형성할 수 있다. 유량계는 전단 속도 및 온도의 조절을 허용할 수 있다.
효소, 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 비-수성 용매에 용해시켜 제1 혼합물을 형성할 수 있다. 에멀전화제를 제1 상, 친유성 상 또는 오일에 첨가하여 제2 혼합물을 형성할 수 있다. 그 다음, 예를 들면, 유량계 또는 혼합기를 이용하여 혼합하는 동안 제1 혼합물을 제2 혼합물에 적가하여 에멀전을 형성할 수 있다.
에멀전을 형성하기 위해, 혼합은 1500 1/s 내지 2500 1/s, 예컨대, 2000 1/s의 전단 속도에서 일어날 수 있다. 혼합은 30℃ 내지 50℃, 예를 들면, 약 37℃에서 일어날 수 있다.
본 발명의 조성물을 제조하는 방법으로서, 에멀전을 형성하기에 충분한 시간 동안 높은 전단 속도 하에서 효소, 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 제2 상의 액체, 제1 상의 액체, 및 임의적으로 에멀전화제를 혼합하는 단계를 포함하는 방법도 본 발명에 따라 제공된다.
에멀전의 성분들이 에멀전화제와 접촉하기 전에 미리 혼합되는 경우 더 안정한 에멀전이 형성될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 미리 혼합된 성분을 에멀전화제와 접촉시키고 높은 전단 속도 하에서 상기 미리 혼합된 성분을 포함하는 혼합물과 에멀전화제를 혼합하기 전에, 효소, 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 제2 상의 액체 및 제1 상의 액체를 높은 전단 속도 하에서 미리 혼합한다.
일부 실시양태에서, 용액을 제1 상의 액체와 접촉시키기 전에, 효소, 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 제2 상의 액체에 용해시켜 용액을 형성한다.
높은 전단 속도는 1000 1/s 내지 4000 1/s일 수 있다. 본 발명자들은 본 발명의 방법을 이용함으로써 제조된 에멀전이 더 높은 전단 속도, 예를 들면, >2000 1/s 내지 4000 1/s, >2000 1/s 내지 3500 1/s, >2500 1/s 내지 4000 1/s, 또는 >2500 1/s 내지 3500 1/s의 전단 속도를 이용함으로써 형성될 때 더 안정하다는 것을 발견하였다.
효소, 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 제2 상의 액체, 제1 상의 액체 및 에멀전화제(존재하는 경우)의 혼합은 20℃ 내지 40℃, 예를 들면, 35℃ 내지 40℃의 온도에서 수행될 수 있다. 효소, 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 제2 상의 액체, 제1 상의 액체 및 에멀전화제(존재하는 경우)의 혼합이 더 높은 온도, 예를 들면, >37.5℃ 내지 40℃, 또는 38℃ 내지 40℃에서 수행될 때 더 안정한 에멀전이 형성될 수 있다.
본 발명의 방법의 일부 실시양태에서, 효소, 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 제2 상의 액체, 제1 상의 액체 및 에멀전화제(존재하는 경우)는 적어도 5분, 예를 들면, 5분 내지 30분 동안 높은 전단 속도 하에서 혼합된다.
본 발명의 방법은 예를 들면, 점도 증가제, 예컨대, 증점제 또는 겔화제, 예를 들면, 하이드로콜로이드를 포함시켜 크림을 형성하는 데 이용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 방법은 높은 전단 속도 하에서 점도 증가제를 효소, 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 제2 상의 액체, 제1 상의 액체 및 에멀전화제(존재하는 경우)와 혼합하여 크림을 형성하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 점도 증가제는 하이드로콜로이드, 예를 들면, 다당류이거나 이를 포함한다.
일부 실시양태에서, 하이드로콜로이드는 하이드로콜로이드 증점제, 예컨대, 전분, 변형된 전분, 잔탄, 갈락토만난(예컨대, 구아 검, 로커스트 콩 검 및 타라 검), 검 아라빅 또는 아카시아 검, 검 카라야, 검 트라가칸쓰, 곤약 마안난, 또는 셀룰로스 유도체, 예컨대, 카복시메틸 셀룰로스, 메틸 셀룰로스 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로스이거나 이를 포함한다.
일부 실시양태에서, 하이드로콜로이드는 하이드로콜로이드 겔화제, 예컨대, 알기네이트, 펙틴, 카라기난, 젤라틴, 젤란, 한천, 아가로스, 변형된 전분, 또는 셀룰로스 유도체, 예컨대, 메틸 셀룰로스 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로스이거나 이를 포함한다.
하이드로콜로이드 겔화제는 양이온의 존재 하에서 이온이동성 겔화로 겔을 형성할 수 있다. 이러한 실시양태에서, 본 발명의 방법은 높은 전단 속도 하에서 양이온을 하이드로콜로이드 겔화제, 효소, 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 제2 상의 액체, 제1 상의 액체 및 에멀전화제(존재하는 경우)와 혼합하여 크림을 형성하는 단계도 포함한다.
일부 실시양태에서, 양이온을 혼합물과 접촉시키기 전에, 이온이동성 겔화로 겔을 형성할 수 있는 하이드로콜로이드 겔화제, 효소, 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 제2 상의 액체, 제1 상의 액체 및 에멀전화제(존재하는 경우)를 혼합하여 혼합물을 형성한다.
일부 실시양태에서, 제1 상의 액체와 접촉시키기 전에, 이온이동성 겔화로 겔을 형성할 수 있는 하이드로콜로이드 겔화제를 제2 상의 액체, 효소, 및 이 효소에 대한 기질을 포함하는 물질과 접촉시킨다.
일부 실시양태에서, 양이온은 칼슘 이온이거나 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, 양이온의 존재 하에서 이온이동성 겔화로 겔을 형성할 수 있는 하이드로콜로이드 겔화제는 알기네이트, 카라기난 또는 펙틴, 예를 들면, 알기네이트이거나 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, 하이드로콜로이드 겔화제는 수성 용액에 제공되고, 제2 상은 글리세롤이고, 이때 글리세롤은 조성물에서 유리수를 결합시킴으로써 효소에 대한 기질을 포함하는 물질로부터의 과산화수소의 효소 촉매 방출을 방지하기에 충분한 양으로 존재한다.
일부 실시양태에서, 미리 혼합된 성분을 에멀전화제(존재하는 경우) 및 양이온(예를 들면, 칼슘 이온)과 접촉시키고, 미리 혼합된 성분, 에멀전화제(존재하는 경우) 및 양이온을 포함하는 혼합물을 높은 전단 속도 하에서 혼합하기 전에, 이온이동성 겔화로 겔을 형성할 수 있는 하이드로콜로이드 겔화제(예를 들면, 알기네이트)를 높은 전단 속도 하에서 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 제2 상의 액체 및 제1 상의 액체와 미리 혼합한다.
에멀전화제(존재하는 경우)를 양이온(예를 들면, 칼슘 이온) 전에 미리 혼합된 성분과 접촉시킬 수 있다. 양이온(예를 들면, 칼슘 이온)을 적가할 수 있다.
양이온(예를 들면, 칼슘 이온)은 수성 용액에 제공될 수 있다. 대안적으로, 양이온은 비-수성 용매, 예컨대, 에탄올 또는 아세트산을 사용함으로써 비-수성 용액에 제공될 수 있다.
특정 실시양태에서, 염화칼슘은 에탄올에 제공되고, 알긴산나트륨은 수성 용액에 제공되고, 제2 상은 글리세롤이고, 글리세롤은 알기네이트 용액에서 유리수를 결합시킴으로써 효소에 대한 기질을 포함하는 물질로부터의 과산화수소의 효소 촉매 방출을 방지하기에 충분한 양으로 존재한다. 이것은 조성물이 물과 접촉되어 안정한 조성물을 제공할 때까지 과산화수소의 너무 이른 방출을 방지한다.
전술된 바와 같이, 본 발명의 방법은 유량계를 이용하여 본 발명의 조성물을 형성할 수 있다. 유량계는 전단 속도 및 온도의 조절을 허용할 수 있다. 대안적으로, 높은 전단 속도는 초음파 프로브 또는 균질화기의 이용에 의해 제공될 수 있다.
본 발명의 조성물 및 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 약학 조성물도 본 발명에 따라 제공된다.
약제로서 사용될 본 발명의 조성물도 본 발명에 따라 제공된다.
미생물 감염의 예방 또는 치료에 사용될 본 발명의 조성물도 본 발명에 따라 제공된다.
예방 또는 치료는 바람직하게는 조성물의 국소 투여에 의한 예방 또는 치료이다. 예방 또는 치료는 대상체의 호흡관에의 투여에 의한 예방 또는 치료일 수 있다. 예방 또는 치료는 신체 캐비티(cavity)에의 투여에 의한 예방 또는 치료일 수 있다. 예방 또는 치료는 대상체에의 내부 투여에 의한 예방 또는 치료일 수 있다.
미생물 감염을 예방하거나 치료하는 방법으로서, 유효량의 본 발명의 조성물을 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법도 본 발명에 따라 제공된다.
본 발명은 미생물 감염의 예방 또는 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 본 발명의 조성물의 용도도 제공한다.
미생물 감염은 바이러스 감염, 예를 들면, 헤르페스 심플렉스 바이러스(HSV) 감염일 수 있다. 다른 실시양태에서, 미생물 감염은 진균 감염 또는 세균 감염일 수 있다.
미생물 감염은 코 감염, 예컨대, 부비동염 또는 비부비동염; 호흡관 감염, 예컨대, 상부 호흡관 감염(예를 들면, 편도선염, 후두염 또는 부비동염) 또는 하부 호흡관 감염(예를 들면, 기관지염, 폐렴, 세기관지염 또는 결핵); 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 낭성 섬유증, 기관지확장증 또는 천식과 연관된 감염; HIV/AIDS와 연관된 호흡기 감염; 또는 말기 질환과 연관된 호흡기 감염일 수 있다.
본 발명의 조성물은 바이오필름, 또는 바이오필름을 형성할 수 있는 미생물을 포함하는 미생물 감염을 예방하거나 치료하는 데 사용될 수 있다. 바이오필름은 바이오필름 형성 세균, 진균 또는 바이러스를 포함할 수 있다. 바이오필름을 형성할 수 있는 미생물은 세균, 진균 또는 바이러스일 수 있다.
본 발명의 조성물은 항균 와이프(wipe) 또는 소독, 예를 들면, 병원 소독에서 사용될 수 있거나, 항균 분무제, 예를 들면, 수술 전 환자의 신체의 부분을 소독하기 위한 국소 예방 항균 분무제로서 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 항균제를 포함할 수 있다. 예를 들면, 효소에 의한 기질의 전환을 위한 조건 하에서 수성 용액에서 효소를 물질과 접촉시킨 후, 효소가 기질을 전환시키게 하기에 불충분한 유리수가 존재하는 수준까지 조성물을 건조하여 그의 물 함량을 감소시킴으로써 조성물을 형성하는 경우, 과산화수소가 존재할 수 있다. 그러나, 바람직하게는, 조성물은 임의의 검출가능한 과산화수소를 포함하지 않는다. 이러한 조성물은 예를 들면, 효소가 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수의 부재 하에서 효소를 기질과 접촉시킴으로써 형성될 수 있다. 본 발명의 저장 안정성 조성물에 존재할 수 있는 다른 항균제의 예는 항생제, 항바이러스제 또는 항진균제를 포함한다.
조성물은 의료 등급 또는 의료 장치 등급 조성물, 또는 약학 등급 조성물일 수 있다.
조성물의 각각의 성분은 천연 물질일 수 있다(즉, 각각의 성분은 천연 공급원으로부터 유래하거나 정제된다). 천연 성분만을 함유하는, 본 발명에 따라 사용될 조성물은 약물 기제의 항균 제제에 대한 매력적인 대안을 제공한다.
유리하게는, 물질은 벌꿀이다. 벌꿀은 의료 등급 또는 의료 장치 등급 벌꿀일 수 있다. 일부 실시양태에서, 벌꿀은 벌꿀에 원래 존재하는 카탈라제 활성을 제거하거나 불활성화시키도록 처리된 벌꿀이다. 본 발명의 한 실시양태에 따라, 물질은 저온살균된 벌꿀이고, 효소는 글루코스 옥시다제이다. 일부 실시양태에 따라, 물질은 의료 등급 또는 의료 장치 등급 벌꿀이고, 효소는 의료 등급 또는 의료 장치 등급 효소, 적합하게는 글루코스 옥시다제이다.
벌꿀은 꽃으로부터의 화밀을 사용하는 꿀벌에 의해 만들어진 천연 생성물이다. 벌꿀은 당의 포화된 또는 과포화된 용액이다. 벌꿀은 "꿀벌에 의해 수집되고 꿀벌 자신의 특정 물질과 조합됨으로써 변환되고 침착되고 탈수되고 벌집에 저장되고 남겨져 숙성되고 성숙되는 식물의 화밀로부터, 또는 식물의 살아있는 부분의 분비물 또는 식물의 살아있는 부분 위에서 식물을 빨아먹는 곤충의 배설물로부터 꿀벌에 의해 생성된 달콤한 천연 물질"로서 국제식품규격(Codex Alimentarius) 국제 식품 표준에 정의되어 있다(Revised Codex Standard for Honey, 2001).
화밀은 전형적으로 대략 14%의 단순 당(w/w), 1%의 페놀 화합물 및 85%의 물을 포함한다. 페놀 화합물은 그의 맛, 향 및 색채를 벌꿀에게 제공한다. 벌집의 따뜻한 조건, 전형적으로 36℃에서, 화밀은 매우 신속히 발효할 것이다. 이를 방지하기 위해, 화밀은 먹이수집 꿀벌의 타액 및 하인두 샘으로부터의 효소 함유 분비물과 혼합된다. 벌집에서, 화밀은 꿀벌들 사이에 전달되고 벌집의 셀 내에 저장되기 전에 더 많은 분비물이 첨가된다. 존재하는 효소의 양은 꿀벌의 연령, 식습관 및 생리학적 저장(꿀벌이 먹이수집자일 때 그의 샘은 더 많은 소화 효소를 생성함), 콜로니의 강도, 벌집의 온도 및 화밀 유동 및 그의 당 함량에 따라 달라진다.
꿀벌에 의해 화밀에 첨가되는 효소는 덱스트린 및 당으로의 전분의 전환을 촉매하는 디아스타제(diastase), 프럭토스 및 글루코스로의 수크로스의 전환을 촉매하는 인버타제(Invertase), 및 과산화수소 및 글루콘산으로의 글루코스의 전환을 촉매하는 글루코스 옥시다제를 포함한다. 낮은 용량의 과산화수소는 화밀을 신속히 발효시킬 효모의 성장을 방지한다. 꿀벌이 화밀을 점진적으로 건조시켜 벌꿀을 형성함에 따라, 글루콘산은 벌꿀을 산성(pH 3.5 내지 4.5)으로 만든다. 물은 벌꿀에서 당 분자에 효과적으로 포획되고 추가 화학 반응을 위해 이용될 수 없다. 벌꿀에서의 '유리'수의 양은 물 활성(aw)으로서 측정된다. 벌꿀에서 발견된 aw의 범위는 0.562 및 0.589의 평균 값을 가진 0.47 내지 0.70인 것으로 보고되어 있다(RCIEGG, M; BLANC, B, 1981, The water activity of honey and related sugar solutions. Lebensmittel-Wissenschaft und Technologie 14: 1-6). 숙성된 벌꿀의 aw는 임의의 종의 성장을 뒷받침하기에는 너무 낮고, 이때 물 함량이 17.1% 미만인 경우 발효는 일어나지 않는다(Molan, P. C. (1992). The antibacterial activity of honey: 1. The nature of the antibacterial activity. Bee World, 73(1), 5-28). 벌꿀의 산성도 및 유리수의 결여는 발효의 추가 위험을 방지하고, 글루코스 옥시다제 작동을 중단시킨다. 벌꿀은 화밀로부터 유래한 가변적 양의 카탈라제도 함유한다.
꽃 벌꿀의 전형적인 화학 조성은 다음과 같다:
[표 1]
Figure pct00003
추가로, 벌꿀의 식물 기원을 확인하는 데 사용될 수 있는 미량의 화분뿐만 아니라, 효소 인버타제, 디아스타제, 카탈라제 및 글루코스 옥시다제도 존재한다. 식물화학적 성분도 존재한다. 이것은 벌꿀의 공급원에 따라 달라지지만, 전형적으로 최대 약 1%이다.
일단 희석되면, 천연 벌꿀에 존재하는 글루코스 옥시다제는 희석된 벌꿀에서 글루코스 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있다. 그러나, 벌꿀의 함량(특히 글루코스 옥시다제 활성, 글루코스 및 카탈라제 활성의 함량)의 가변성은 상이한 공급원들로부터의 벌꿀, 또는 동일한 공급원으로부터의 벌꿀의 상이한 채취물들이 그들의 항균 효과에 있어서 매우 가변적일 수 있다는 것을 의미한다.
본 발명의 한 실시양태에 따라, 벌꿀은 저온살균될 수 있다. 벌꿀의 저온살균은 벌꿀에 존재하는 카탈라제 및 글루코스 옥시다제 활성을 불활성화시킨다. 임의적으로, 저온살균된 벌꿀은 채취 후 벌꿀에 존재할 수 있는 임의의 입자(예컨대, 왁스 입자 및 벌 날개)를 제거하도록 여과될 수 있다. 본 발명의 저장 안정성 조성물을 형성하기 위해, 일단 첨가된 글루코스 옥시다제를 불활성화시키지 않고 벌꿀이 글루코스 옥시다제와의 혼합을 용이하게 할 정도로 충분히 액체 상태로 남아 있는 온도(적합하게는 35℃ 내지 40℃)까지 글루코스 옥시다제를 냉각시키면, 글루코스 옥시다제를 저온살균된 벌꿀과 접촉시킨다.
벌꿀은 카탈라제 활성의 가열 불활성화에 충분한 온도에서 저온살균될 수 있다. 적합한 최소 온도는 60℃ 내지 80℃이다. 이 온도는 바람직하게는 적어도 2분 동안 유지되어야 한다.
가열 벌꿀의 부산물이 벌꿀의 가열 및 저장 변화의 표시자로서 사용되는 HMF(하이드록시메틸푸르푸르알데하이드)의 형성이기 때문에, 가열 과정의 조절은 중요할 수 있다. HMF는 산의 존재 하에서 프럭토스의 분해에 의해 형성된다. 가열은 이 반응의 속도를 증가시킨다. 속도의 증가는 가열을 증가시킴에 따라 기하급수적이다. 벌꿀이 정상 벌집 주위 온도에 가까운 40℃를 넘어 상승되는 모든 정도의 경우, HMF는 신속히 증가한다. HMF는 유해 생성물이 아니다. 잼, 당밀, 골든 시럽 등은 벌꿀의 HMF 수준의 10배 내지 100배의 HMF 수준을 가질 수 있다. 그러나, HMF 수준은 벌꿀의 분해의 표시로서 사용되고, 국제식품규격 표준 하에서 40 mg/ℓ는 식용 벌꿀에 대한 EU의 최대 허용가능한 수준이다.
HMF의 축적을 방지하기 위해, 열 교환 기작을 이용하여 카탈라제를 불활성화시키는 온도 수준까지 벌꿀을 신속히 상승시킨 후, 벌꿀의 온도를 최대 40℃ 내지 45℃까지 신속히 낮추는 것이 바람직하다.
이 바람직한 실시양태의 과정 동안 물은 첨가되지 않으므로, 생성된 조성물은 글루코스 옥시다제가 존재하는 글루코스를 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있게 하기에 충분한 유리수를 포함하지 않는다. 저장 안정성 조성물은 저온살균된 벌꿀 및 첨가된 글루코스 옥시다제를 포함한다. 존재하는 검출가능한 과산화수소는 없다. 상기 조성물은 적어도 수일 동안 주위 온도에서 저장될 수 있다.
본 발명의 다른 실시양태에서, 벌꿀은 저온살균되지 않을 수 있다.
일부 바람직한 실시양태에 따라, (저온살균된 또는 저온살균되지 않은) 벌꿀은 크림 상태의 벌꿀이다. 크림 상태의 벌꿀은 결정화를 조절하도록 가공된 벌꿀이다. 크림 상태의 벌꿀은 가공되지 않은 벌꿀에서 일어날 수 있는 보다 큰 결정의 형성을 방해하는, 다수의 작은 결정들을 함유한다. 크림 상태의 벌꿀을 생성하는 방법은 미국 특허 제1,987,893호에 기재되었다. 이 과정에서, 미가공 벌꿀을 먼저 저온살균한 후, 미리 가공된 크림 상태의 벌꿀을 저온살균된 벌꿀에 첨가하여 10%의 크림 상태의 벌꿀과 90%의 저온살균된 벌꿀의 혼합물을 생성한다. 그 다음, 상기 혼합물을 14℃의 조절된 온도에서 놓아둔다. 이 방법은 약 1주 이내에 크림 상태의 벌꿀의 한 회분(batch)을 생성한다. 종자 회분은 정상 벌꿀을 결정화시키고 결정을 원하는 크기까지 분쇄함으로써 만들어질 수 있다. 대규모 생산자는 14℃에서 혼합물을 유지하면서 패들을 이용하여 벌꿀 혼합물을 교반함으로써 이 과정을 변형시켰다. 대안적인 크림 형성 방법에서, 저온살균 단계는 생략될 수 있고, 그 대신에 벌꿀을 37℃까지 서서히 가온할 수 있다.
본 발명의 다른 실시양태에서, (저온살균된 또는 저온살균되지 않은) 벌꿀은 비크림 상태의 벌꿀이다. 예를 들면, 벌꿀은 저온살균된 비크림 상태의 벌꿀일 수 있다.
글루코스 옥시다제는 의료 적용을 위해 의료 등급 또는 의료 장치 등급의 정제된 천연 글루코스 옥시다제 제제일 수 있다. 조성물의 희석 후 과산화수소의 원하는 생성 속도에 따라 글루코스 옥시다제의 활성을 선택할 수 있다. 여러 글루코스 옥시다제 제제들이 상업적으로 입수될 수 있다(글루코스 옥시다제는 참조번호 CAS:9001-37-0에 의해 확인된다). 비-유전적으로 변형된 유기체로부터의 글루코스 옥시다제에 대한 통상의 미생물 공급원은 아스퍼길러스 니게르(Aspergillus niger), 페니실륨 아마가사키엔세(Penicillium amagasakiense), 페니실륨 바리아빌(Penicillium variabile), 페니실륨 노타툼(Penicillium notatum)의 선택된 균주를 포함한다. GMO 아스퍼길루스 니게르로부터의 의료 장치 등급 글루코스 옥시다제는 바이오자임 유케이(Biozyme UK)로부터 입수가능하다(활성 240 iu/mg). 아스퍼길루스 니게르로부터의 식품 표준 글루코스 옥시다제는 바이오-캣 아이엔씨(BIO-CAT INC)로부터 입수가능하다(활성 15,000 유닛/g). 비-유전적으로 변형된 글루코스 옥시다제는 바이오-캣 아이엔씨로부터 입수가능하다(활성 12,000/g). 아스퍼길루스 니게르로부터의 글루코스 옥시다제(GO3B2)는 비비아이 엔자임 리미티드(BBI Enzymes Limited)로부터 입수가능하다(활성 360 유닛/mg). 오염물질: 0.05% 이하의 알파 아밀라제(alpha amylase), 0.05% 이하의 사카라제(Saccharase), 0.05% 이하의 말타제(maltase) 및 2000 이상의 GO/Cat.
효소 활성(예를 들면, 글루코스 옥시다제 활성)은 예를 들면, 1 내지 400 IU/mg, 또는 1 내지 300 IU/mg, 예를 들면, 250 내지 280 IU/mg일 수 있다. 사용된 효소의 양은 조성물의 원하는 용도, 물질에 존재하는 임의의 카탈라제 활성의 양, 물질에 존재하는 기질의 양, 원하는 과산화수소 방출 수준, 및 과산화수소 방출을 위한 원하는 시간 길이를 포함하는 여러 요인들에 의존할 가능성이 있다. 상이한 양의 효소에 대한 과산화수소 방출 정도를 측정하기 위해 당분야에서 통상의 기술을 가진 자는 필요하다면 웰 확산 어세이를 이용하여 효소의 적합한 양을 용이하게 결정할 수 있다. 효소(예컨대, 글루코스 옥시다제)의 적합한 양은 조성물의 0.0001% 내지 0.5%(w/w)일 수 있다. 사용된 효소의 양은 선택된 페놀 표준물(예를 들면, 10%, 20% 또는 30% 페놀 표준)에 해당하는 항균 활성을 생성하는 조성물을 생성하도록 선택될 수 있다.
본 발명의 조성물, 특히 물질이 벌꿀(예를 들면, 저온살균되지 않은 벌꿀)이고 효소가 상기 벌꿀에서 D-글루코스를 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 글루코스 옥시다제인 조성물은 조성물의 그램당 적어도 1 유닛, 바람직하게는 최대 1500 유닛의 글루코스 옥시다제를 포함할 수 있다. 글루코스 옥시다제는 물질에 천연적으로 존재할 수 있는 임의의 글루코스 옥시다제 활성 이외의 것이다(즉, 인간 중재의 결과로서 첨가된다).
"유닛"은 pH 7.0에서 섭씨 25도에서 분당 1 마이크로몰의 글루코스(또는 다른 효소 기질)의 산화를 야기하는 효소의 양으로서 본원에서 정의된다.
본 출원인은 조성물에 존재하는 글루코스 옥시다제 활성의 양을 증가시킴으로써 본 발명의 조성물의 항균 효능을 증가시킬 수 있다는 것을 발견하였다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 조성물의 그램당 15 유닛 초과, 예를 들면, 적어도 30 유닛, 적어도 50 유닛 또는 적어도 100 유닛, 적합하게는 685 유닛 미만, 예를 들면, 100 내지 500 유닛의 글루코스 옥시다제를 포함한다. 이러한 조성물은 조성물의 그램당 최대 15 유닛의 글루코스 옥시다제를 가진 조성물보다 더 우수한 항균 성질을 갖는 것으로 확인되었다. 특히, 이러한 조성물은 MSSA, MRSA, 군 A 및 B 스트렙토코시(Streptococci), 엔테로코커스(Enterococcus), 이. 콜라이(E. coli), 이. 콜라이 ESBL, 세라티아 리쿠에파시엔스(Serr. liquefaciens) Amp C, 클렙시엘라 뉴모니애(Kleb. pneumoniae), 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 악시네토박터 바우만니이(Acinetobacter baumannii) 및 칸디다 알비칸스(Candida albicans)를 포함하는 광범위한 미생물들에 대한 증가된 효능을 가진다.
본 발명의 다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 조성물의 그램당 적어도 500 유닛, 예를 들면, 500 내지 1000 유닛 또는 685 내지 1000 유닛의 글루코스 옥시다제를 포함한다. 이러한 조성물은 훨씬 더 우수한 항균 성질을 갖는 것으로 확인되었다. 특히, 이러한 조성물도 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), MSSA, MRSA, 군 A 및 B 스트렙토코시, 엔테로코커스, 이. 콜라이, 이. 콜라이 ESBL, 세라티아 리쿠에파시엔스 Amp C, 클렙시엘라 뉴모니애, 슈도모나스 애루기노사, 악시네토박터 바우만니이 및 칸디다 알비칸스를 포함하는 광범위한 미생물들에 대한 증가된 효능을 가진다.
본 발명의 조성물은 과산화수소에 의해 치료될 수 있는 임의의 미생물 감염을 치료하는 데 사용될 수 있다. 예는 그람 양성 세균, 그람 음성 세균, 항산성 세균, 바이러스, 효모, 기생충 또는 병원성 미생물 또는 진균에 의해 야기된 감염을 포함한다. 특히, 하기 미생물들에 의해 야기된 감염이 치료될 수 있다: 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 스타필로코커스 아우레우스, 슈도모나스 애루기노사, 칸디다 알비칸스, 프로피오니박테리움 애크네스(Propionibacterium acnes), 스타필로코커스 아우레우스, 스타필로코커스 에피데르미디스(Staphylococcus epidermidis), 스타필로코커스 사프로파이틱스(Staphylococcus saprophytics), 베타 용혈성 스트렙토코시 군 A 또는 B, 캄필로박터 콜라이(Campylobacter coli), 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni), 메티실린 내성 스타필로코커스 아우레우스(MRSA), 메티실린 민감성 스타필로코커스 아우레우스(MSSA), 보트라이티스 시네레아(Botrytis cinerea), 마이코박테리움 튜버큘로시스(Mycobacterium tuberculosis), 크립토스포리듐(Cryptosporidium), 플라스모듐(Plasmodium) 및 톡소플라스마(Toxoplasma).
저온살균 과정은 벌꿀에 존재하는 임의의 효소 활성을 불활성화시키므로, 상이한 공급원들로부터의 저온살균된 벌꿀들 사이에, 또는 동일한 공급원으로부터의 벌꿀의 상이한 채취물들 사이에 카탈라제 및 기질 전환 활성의 가변성은 없다. 기질 전환 활성의 양은 정의된 양 및 활성의 효소를 가진 정제된 글루코스 옥시다제 제제의 첨가에 의해 조절될 수 있다. 따라서, 벌꿀의 상이한 유형들 및 채취물들 사이에 항균 성질의 본질적인 가변성은 상당히 감소되고, 낮은 항균 효능을 가진 벌꿀의 항균 성질은 개선된다.
본 발명의 조성물은 대상체 또는 건강관리 제공제에 의해 결정된 적절한 빈도로 투여될 수 있다. 적합하게는, 본 발명의 조성물은 적어도 수일 동안 날마다, 예를 들면, 주마다, 그러나 바람직하게는 하루에 수회, 날마다 또는 이틀마다 투여될 수 있다.
투여되는 본 발명의 조성물의 양은 많은 요인들, 예컨대, 조성물의 항균 성질의 강도, 및 치료되는 대상체의 연령 및 상태에 의존할 것이다. 그러나, 많은 적용에 있어서 각각의 투여는 0.1 내지 100 g, 0.5 내지 100 g, 1 내지 100 g, 2 내지 100 g, 5 내지 100 g, 0.1 내지 10 g, 0.5 내지 10 g, 또는 1 내지 10 g의 본 발명의 조성물을 포함할 것으로 예상된다.
본 발명의 바람직한 실시양태에 따라, 본 발명의 조성물은 멸균 상태의 조성물이다.
본 발명의 조성물은 임의의 적합한 수단에 의해 멸균될 수 있다. 본 출원인은 글루코스 옥시다제를 포함하는 조성물이 감마 방사선에의 노출에 의한 멸균 후 글루코스 옥시다제 활성(및, 이로써, 희석 시 과산화수소를 방출하는 능력)을 보유한다는 것을 발견하였다. 감마 방사선의 적합한 수준은 10 내지 70 kGy, 바람직하게는 25 내지 70 kGy, 보다 바람직하게는 35 내지 70 kGy이다.
본 발명의 조성물은 바람직하게는 오존처리(ozonation)에 의해 멸균되지 않고, 오존, 또는 오존처리에 의해 멸균된 임의의 성분을 포함하지 않는다. 구체적으로, 본 발명의 조성물은 오존처리된 벌꿀 또는 오존처리된 오일을 포함하지 않아야 한다.
광에 노출되지 않도록 저장되는 본 발명의 멸균된 조성물은 적어도 6개월 동안 안정성을 유지할 것으로 예상된다. 예를 들면, 이러한 조성물은 고밀도 폴리에틸렌/저밀도 폴리에틸렌(HDPE/LDPE) 튜브 또는 폴리에스테르-알루미늄-폴리에틸렌(PET/AI/PE) 사셰로 포장될 수 있다.
본 발명의 조성물은 바람직하게는 의료 등급 또는 의료 장치 등급 조성물이다. 바람직하게는, 비정련된 천연 물질은 벌꿀, 적합하게는 의료 등급 또는 의료 장치 등급 벌꿀이다.
바람직하게는, 본 발명의 조성물은 크림 상태의 벌꿀, 보다 바람직하게는 크림 상태의 저온살균되지 않은 벌꿀을 포함한다. 이러한 조성물은 큰 결정의 존재 또는 수가 크림 형성 과정에 의해 최소화되기 때문에 용이하게 국소 투여될 수 있다.
벌꿀을 포함하는 본 발명의 조성물의 경우, 조성물이 멸균되는 경우 조성물에서 저온살균된 벌꿀을 사용할 필요성이 없을 수 있다는 것인 인지될 것이다. 그 대신에 저온살균되지 않은 벌꿀(바람직하게는 크림 상태의 벌꿀) 또는 다른 비정련된 천연 물질을 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 저온살균되지 않은 벌꿀, 및 첨가된 정제된 글루코스 옥시다제를 포함한다.
따라서, 본 발명의 저장 안정성 조성물은 저온살균되지 않은 벌꿀, 및 충분한 유리수의 존재 하에서 상기 벌꿀 내의 D-글루코스를 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 첨가된 정제된 글루코스 옥시다제를 포함할 수 있고, 이때 상기 조성물은 글루코스 옥시다제가 D-글루코스를 전환시키게 하기에 충분한 유리수를 포함하지 않는다.
이러한 조성물은 조성물의 그램당 적어도 1 유닛, 예를 들면, 최대 1500 유닛의 글루코스 옥시다제를 포함할 수 있다. 적합하게는, 이러한 조성물은 조성물의 그램당 15 유닛 초과의 글루코스 옥시다제, 예를 들면, 조성물의 그램당 적어도 100 유닛 또는 100 내지 500 유닛의 글루코스 옥시다제, 또는 조성물의 그램당 적어도 500 유닛 또는 500 내지 1000 유닛의 글루코스 옥시다제를 포함한다.
이러한 조성물의 벌꿀은 크림 상태의 저온살균되지 않은 벌꿀을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 약학 조성물일 수 있다.
본 발명의 조성물은 인간 또는 동물 대상체에게 투여되기에 적합한 형태로 존재할 수 있다. 적합한 형태는 국소 투여를 위해 개조된 형태를 포함한다. 국소 투여에 적합한 형태는 국소 연고, 크림, 로션, 오일, 도찰제, 액체, 겔 또는 용해가능한 스트립을 포함한다. 저장 안정성 조성물이 사용되는 경우, 이것은 투여 부위에 존재하는 액체(예를 들면, 침)에 의해 희석되어, 투여 부위에서 과산화수소의 방출을 유발할 수 있다.
본 발명의 조성물은 항균 활성을 생성하는 능력을 제공하도록 요구되는 경우 적어도 하나의 적합한 항균 또는 면역자극 성분, 부형제 또는 보조제, 또는 임의의 다른 적합한 성분과 함께 존재할 수 있다. 그러나, 바람직하게는, 상기 조성물은 임의의 항생제를 포함하지 않는다.
본 발명의 조성물은 "서지허니"를 포함할 수 있다. 서지허니는 첨가된 정제된 글루코스 옥시다제를 가진, 저온살균되지 않은 벌꿀이다. 상이한 항균 효능을 가진 서지허니의 3개 상이한 제제들이 제조되었다:
SH1 서지허니: 0.1%(w/w)의 첨가된 글루코스 옥시다제를 가진, 저온살균되지 않은 벌꿀. 사용된 효소는 바이오-캣 아이엔씨로부터 입수될 수 있는, 아스퍼길러스 니게르로부터의 식품 등급 글루코스 옥시다제(활성 15,000 유닛/g)이었다. SH1 서지허니의 밀봉된 사셰를 11/6-14.2 kGy의 표적 용량에서 감마 방사선으로 조사하였다.
SH2 서지허니: 0.1%(w/w)의 첨가된 글루코스 옥시다제를 가진, 저온살균되지 않은 벌꿀. 사용된 효소는 비비아이 엔자임 리미티드로부터 입수될 수 있는, 아스퍼길러스 니게르로부터의 글루코스 옥시다제(GO3B2)(활성 274 유닛/mg)이었다. 유닛 정의: pH 7.0에서 섭씨 25도에서 분당 1 마이크로몰의 글루코스의 산화를 야기하는 효소의 양. 오염물질: 0.05% 이하의 알파 아밀라제, 0.05% 이하의 사카라제, 0.05% 이하의 말타제 및 2000 이상의 GO/Cat.
SH3 서지허니: 0.25%(w/w)의 첨가된 글루코스 옥시다제를 가진, 저온살균되지 않은 벌꿀. 사용된 효소는 비비아이 엔자임 리미티드로부터의 글루코스 옥시다제(GO3B2)(활성 274 유닛/mg)이었다.
따라서, SH1 서지허니는 조성물의 그램당 15 유닛의 글루코스 옥시다제를 함유하고, SH2 서지허니는 조성물의 그램당 274 유닛의 글루코스 옥시다제를 함유하고, SH3 서지허니는 조성물의 그램당 685 유닛의 글루코스 옥시다제를 함유한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물(특히, 벌꿀 및 첨가된 글루코스 옥시다제를 포함하는 본 발명의 조성물 - 이하에서 "활성 벌꿀"로서 지칭됨)은 하기 물질이 아니거나 이를 포함하지 않는다:
포마드(Pommade)
활성 벌꿀 25%
백색 바셀린
경질 액체 파라핀
활석
고령토
산화아연
일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물(특히, 벌꿀 및 첨가된 글루코스 옥시다제를 포함하는 본 발명의 조성물 - 이하에서 "활성 벌꿀"로서 지칭됨)은 하기 물질이 아니거나 이를 포함하지 않는다:
립 밤
바셀린 5594 50%
미세결정질 왁스 9%
사이클로메티콘 D5 31%
활성 벌꿀 10%
일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물(특히, 벌꿀 및 첨가된 글루코스 옥시다제를 포함하는 본 발명의 조성물 - 이하에서 "활성 벌꿀"로서 지칭됨)은 하기 물질이 아니거나 이를 포함하지 않는다:
크림
벌꿀 15%
카보머 2.63%
디메티콘 0.13%
라우릴설포석신산이나트륨 0.05%
에데트산이나트륨 0.13%
글리세롤 5.26%
수화된 콜로이드성 실리카 0.33%
폴록사머 0.26%
수산화나트륨 0.41%
정제수 85.03%
일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 포함하지 않는다:
하기 성분들로 서지허니 SH1을 포함하는 크림 제제를 제조하였다:
(친유성 상을 위한) 밀랍;
(에멀전화제로서) 콩 레시틴;
물; 및
SH1 서지허니.
일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 하기 성분들을 포함하는 에멀전을 포함하지 않는다:
10 ㎖의 글리세롤에 용해된 10 g 서지허니;
10 ㎖의 파라핀 오일;
1 ㎖의 폴리글리세롤 폴리리시놀레에이트(PGPR).
일부 실시양태에서, 본 발명의 방법은 실시예 7에 언급된 바와 같이 서지허니 에멀전을 제조하는 하기 방법을 포함하지 않는다:
10 g의 서지허니를 10 ㎖의 글리세롤에 용해시켰다. 그 다음, 10 ㎖의 파라핀 오일을, 부착된 재킷 펠티에(Jacket Peltier) 및 시준판 기하구조(vane geometry)를 가진 유량계(TA Instruments AR-G2)에 첨가하였다. 그 다음, 1 ㎖의 PGPR(폴리글리세롤 폴리리시놀레에이트)을 첨가하였다. 그 후, 하기 조건 하에서 유량계를 시작하였다: 전단 속도 2000 1/s, 37.5℃로 설정된 온도. 2분 후, 10 ㎖의 서지허니-글리세롤 용액을 적가하였다. 일단 총 10분이 경과하면, 에멀전을 재킷 펠티에로부터 용기로 옮겼다.
첨부된 도면을 참조하면서 본 발명의 실시양태를 단지 예로써 기재한다.
도 1은 서지허니의 세포독성 활성에 대한 어세이의 결과를 보여주고;
도 2A는 서지허니 SH1, SH2 및 SH3에 대한 상이한 과산화수소 생성 속도를 보여주고;
도 2B는 서지허니 SH1, SH2 및 SH3에서 페놀 활성과 최대 과산화수소 활성 사이의 관계를 보여주고;
도 3은 상이한 시험 유기체들에 대한 서지허니 1(S1), 서지허니 3(S3) 및 메디허니(Medihoney)(MH)에 대한 시간 사멸 곡선을 보여주고: (a) 스타필로코커스 아우레우스; (b) 메티실린 내성 스타필로코커스 아우레우스(MRSA); (c) 이. 콜라이; (d) 반코마이신 내성 엔테로코커스(VRE); (e) 슈도모나스 애루기노사; (f) 클렙시엘라; (g) 이. 콜라이 ESBL; (h) 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis);
도 4는 서지허니를 함유하는 에멀전에서 역 마이셀의 광학 현미경관찰 영상을 보여준다.
실시예 1
서지허니 크림 제제
하기 성분들을 사용하여 서지허니 SH1을 포함하는 크림 제제를 제조하였다:
(친유성 상을 위한) 밀랍;
(에멀전화제로서) 콩 레시틴;
물; 및
SH1 서지허니.
크림은 물과 접촉될 때 과산화수소를 생성하는 그의 능력에 의해 판단될 때 수년 동안 안정한 상태로 남아 있다.
실시예 2
서지허니의 항-바이러스 활성
SH1 또는 SH2 서지허니를 세포 배양 배지 중의 헤르페스 심플렉스 바이러스 1형 또는 2형(HSV1 또는 HSV2)(세포 배양 배지 중의 벌꿀과 바이러스의 50% 혼합물)과 혼합한 후 37℃에서 1시간 동안 항온처리하였다. 그 다음, 상기 혼합물로부터 일련의 희석물을 제조하였고, 이 희석물들을 Vero 세포 위에 플레이팅하였다. SH1 서지허니는 바이러스의 역가를 1 log까지 감소시켰다. SH2 서지허니는 HSV1 및 HSV2 둘 다에 대한 살바이러스 활성을 가졌다(역가의 >6 log 감소). 실험은 반복될 수 있었다.
실시예 3
서지허니의 항-바이러스 활성
SH1 또는 SH2 서지허니를 헤르페스 심플렉스 바이러스(HSV)(50 ㎍ 벌꿀 및 50 ㎕ 바이러스)와 혼합하고 37℃에서 1시간 동안 항온처리하였다. 그 다음, 혼합물로부터 일련의 희석물들(10-2, 10-3, 10-4, 10-5)을 제조하였고, 이 희석물들을 플라크 감소 어세이에서 사용하였다. 벌꿀을 갖지 않거나 대조군 벌꿀을 가진 대조군들도 수행하였다. 각각의 희석물에 대해 형성된 바이러스 플라크의 수를 기록하였다. 결과는 하기 표에 제시되어 있다.
[표 2]
Figure pct00004
결과는 SH1 및 SH2 서지허니가 두 실험들에서 HSV에 대한 강한 살바이러스 활성을 가졌다는 것을 보여준다.
실시예 4
서지허니의 세포독성 활성
SH1 또는 SH2 서지허니(10-2, 10-3, 10-4 및 10-5까지 희석된 50 ㎍ 벌꿀)를 2일 동안 세포 위에서 항온처리하였다. 생존 세포의 수 및 세포의 총 수를 카운팅하였다(퍼센트 생존율 = 생존/총 x 100). 결과는 하기 표 및 도 1에 제시되어 있다.
결과는 SH1 서지허니가 10-2 희석물에서 세포독성을 가졌고 10-3 및 10-4 희석물에서 세포증식억제 활성을 가졌다는 것, 및 SH2 서지허니가 10-2, 10-3 및 10-4 희석물에서 세포증식억제 활성을 가졌다는 것을 보여준다. SH1 및 SH2 서지허니는 10-5 희석물에서 세포독성 또는 세포증식억제 활성을 갖지 않았다.
서지허니가 살바이러스 활성을 갖되 세포독성 또는 세포증식억제 활성을 갖지 않는 용량으로 투여될 수 있다는 결론이 실시예 3 및 4의 결과로부터 도출된다.
[표 3]
Figure pct00005
실시예 5
서지허니의 항균 활성
스타필로코커스 아우레우스(NCIMB 9518)에 대한 서지허니(SH) 및 서양종(Apis mellifera)(꿀벌)에 의해 제조된 2종의 원형 변형된 벌꿀의 항균 활성을 시험하였다. 본 발명자들은 샘플로부터의 과산화수소의 생성 수준을 변화시키는 능력에 대해 다수의 변형된 유형의 서지허니도 조사하였다.
방법: 스타필로코커스 아우레우스의 표준 균주에 대한 바이오어세이 방법을 이용하여 서지허니(SH)를 2종의 변형된 벌꿀인 원형 1(PT1) 및 원형 2(PT2)와 비교하였다. 추가 작업은 이들 제제들로부터의 과산화수소의 생성 속도를 연구하였다.
결과: 서지허니 항균 활성은 주로 과산화수소 생성에 기인하는 것으로 밝혀졌다. 서지허니의 변형에 의해, 2종의 더 강력한 벌꿀 원형은 2배 내지 3배 더 큰 항세균 활성 및 최대 10배 더 큰 과산화물 활성을 생성하는 것으로 밝혀졌다.
결론: 서지허니는 우수한 항균 활성을 보인다. 2종의 추가 벌꿀 원형은 과산화물 활성의 입증된 증가로 인해 향상될 수 있는 항균 활성을 가진 것으로 밝혀졌다.
방법
1. 바이오어세이 방법에 의한 벌꿀 활성의 측정
스타필로코커스 아우레우스(NCIMB 9518)를 사용하여 서지허니(S) 및 2종의 변형된 벌꿀인 원형 1(PT1) 및 원형 2(PT2)의 항세균 활성을 측정하였고 동등한 퍼센트 페놀로서 표현하였다. 3일 동안 반복 시험된 3개의 샘플 복제물들로부터 평균 값을 계산하였다.
어세이 방법. 이용된 한천 웰 확산 방법은 문헌(Microbiology Standard Methods Manual for the New Zealand Dairy Industry (1982) [Bee Products Standards Council: Proposed standard for measuring the non-peroxide activity of honey. In. New Zealand: Bee Products Standards Council; 1982.])에 기재된 억제 물질에 대한 펀치 플레이트 어세이로부터 개조되었다.
접종물 제조. 블랭크 및 희석제로서 멸균 영양분 브로쓰 및 1 cm 경로를 가진 큐벳을 사용하여 540 nm에서 측정된 0.5의 흡광도까지 밤샘 배양물을 조절하였다.
어세이 플레이트 제조. 0.5 흡광도까지 조절된 부피 100 ㎕의 배양물을 사용하여 150 ㎖의 영양분 한천을 시딩함으로써 어세이 플레이트를 제조하였다. 상기 한천을 빙빙 돌려 철저히 혼합하고 평탄한 표면 위에 배치된 큰 페트리 디쉬 내에 부었다. 한천이 경화되자마자, 플레이트를 밤새 뒤집어 놓은 후 다음 날 사용하였다. 어세이를 위해, 7.0 mm 직경 웰을 한천의 표면 내로 절단하기 전에, 이들 시딩된 플레이트들을 4℃로부터 제거하고 15분 동안 실온에서 세워 두었다. 250 ㎕의 시험 물질(샘플 또는 표준물)을 각각의 웰 내에 넣었다.
카탈라제 용액. 증류수 중의 200 mg/㎖ 소 간 카탈라제 용액(시그마 C9322, 2900 유닛/mg)을 날마다 새로 제조하였다.
샘플 제조. 4 g의 샘플을 4 ㎖의 일반 증류수에 첨가하여 일차 샘플 용액을 제조하였고 혼합을 보조하기 위해 30분 동안 37℃에서 놓아두었다. 이차 용액을 제조하기 위해, 2 ㎖의 일차 샘플 용액을 2 ㎖의 일반 증류수에 첨가하고 총 활성 시험을 위해 혼합하였고, 2 ㎖의 일차 샘플 용액을 2 ㎖의 카탈라제 용액에 첨가하고 비-과산화물 활성을 위해 혼합하였다.
페놀 표준물의 제조. 페놀을 물에 용해시킴으로써 표준물(w/v) 10%, 30% 및 50% 페놀을 제조하였다. 페놀 표준물을 사용 전에 실온의 암실로 가져갔고 시험 웰에 첨가하기 전에 철저히 혼합하였다. 각각의 표준물을 삼중으로 시험하기 위해 3개의 웰에 넣었다. 표준물을 1개월의 만료일로 4℃에서 보관하였다.
샘플 및 표준물 적용. 250 ㎕를 3개의 웰 각각에 첨가함으로써 모든 샘플들 및 표준물들을 삼중으로 시험하였다.
플레이트 항온처리. 샘플의 적용 후, 플레이트를 37℃에서 대략 18시간 동안 항온처리하였다. 웰의 직경(7.0 mm)을 포함하는 억제 대역의 직경을 기록하였다.
샘플의 항세균 활성의 계산. 각각의 페놀 표준물 주변의 투명한 대역의 평균 직경을 계산하고 제곱하였다. 투명한 대역의 평균 직경의 제곱에 대하여 % 페놀의 표준물 그래프를 작도하였다. 선형 회귀를 이용하여 최적합 직선을 수득하였고 이 선의 방정식을 사용하여 투명한 대역의 직경의 평균 측정치의 제곱으로부터 각각의 희석된 벌꿀 샘플의 활성을 계산하였다. (서지허니의 밀도가 1.35 g/㎖라고 가정하면서) 희석을 허용하기 위해, 이 수치를 계수 4.69와 곱한 후, 샘플의 활성을 동등한 페놀 농도(% w/v)로서 표현하였다.
총 활성: 과산화수소(H2O2)에 기인한 활성을 포함하는 모든 활성.
비-과산화물 활성: 샘플을 카탈라제 효소로 처리함으로써 H2O2를 제거한다.
2. H 2 O 2 방법에 의한 벌꿀 활성의 측정
머코쿠안트(Merckoquant)® 1.10011. & 1.10081을 이용하여 상기 활성을 측정하였다.
과산화물 시험 키트. 동등한 mg/ℓ H2O2로서 표현된 농도.
샘플을 정제수로 1:10으로 희석하였다. 5분 항온처리 후, 모든 샘플들을 12시간에 걸쳐 매시간 H2O2 생성에 대해 측정한 후 24시간 및 48시간 시점에서 H2O2 생성에 대해 측정하였다.
측정 방법. 퍼록시다제는 산소를 과산화물로부터 유기 산화환원 표시제로 옮기고, 그 후 상기 표시제는 청색 산화 생성물로 전환된다. 시험 스트립의 반응 대역과 색채 스케일의 시야를 시각적으로 비교함으로써 과산화물 농도를 반정량적으로 측정한다. 시험 스트립의 반응 대역을 1초 동안 서지허니 샘플 내에 담구어, 과량의 액체가 상기 스트립으로부터 흡착지 수건 위로 흘러넘치게 하고, 15초(카탈로그 번호 110011) 및 5초(카탈로그 번호 110081) 후 상기 반응 대역에서 형성된 색채의 측정치는 색채 시야 스케일과 더 정확히 일치하였다.
결과
1. 활성 평가
벌꿀 샘플의 변형에 의해 생성된 항균 활성은 서지허니 단독에 비해 PT1 및 PT2의 사용 시 페놀 활성을 각각 2배 및 거의 3배 증가시켰다. 서지허니(SH) 및 2종의 변형된 원형인 PT1 및 PT2의 3개 샘플들에 대한 결과는 하기 표에 제시되어 있다.
[표 4]
Figure pct00006
2. H 2 O 2 방법에 의한 벌꿀 활성의 측정
원형 변형물은 서지허니의 최대 7배 및 10배 과산화수소 활성을 생성하는 것으로 관찰된다. 상기 3개의 샘플들에 대한 결과는 도 2A에 제시되어 있다. 3개의 벌꿀 원형들 각각에 대한 과산화수소 생산량의 최대 수준을 수득하고 이를 총 페놀 활성에 대해 작도함으로써 선형 관계를 관찰한다(도 2B).
논의
이 작업으로부터의 결과는 서지허니 및 2종의 변형된 원형인 PT1 및 PT2의 주요 항균 활성이 과산화수소에 기인한다는 것을 보여준다. 이것은 다양한 화초 공급원들로부터의 일부 다른 벌꿀과 유사한 발견이다. 그러나, 이전 작업과 달리 샘플들로부터의 과산화수소의 입수가능성은 향상될 수 있고 12시간에서 서지허니 단독에 대한 값의 각각 7배 및 10배이다. 항균 활성과 3종의 벌꿀 원형들로부터의 과산화수소의 최대 생산량 사이에 현저한 선형 관계가 있다.
이 과산화물 활성은 미생물 감염을 치료하거나 예방하는 데 이상적으로 적합한 강력한 항균 활성을 제공한다. 과산화수소는 효과적인 항균제이고 식물성 세균, 효모 및 포자에 대한 그의 강력한 활성 때문에 살생물제로서 이미 사용되고 있다. 과산화수소는 세포 성분의 화학적 산화를 통해 그의 항균 효과를 생성한다.
과산화수소의 인간 독성은 농도 의존적이고, 한 연구는 항균 및 인간 독성에 대한 구별 농도가 중첩될 것이라고 주장하였다. 대조적으로, 벌꿀의 일부 제제들은 이러한 독성 없이 다량보다는 오히려 낮은 농도의 과산화수소를 시간의 경과에 따라 연속적으로 공급함으로써 효과적인 항균제인 것으로 밝혀졌다. 실제로, 생리학적 수준의 과산화수소가 포유동물 세포에 적용되는 경우 이 세포에서 생물학적 반응의 자극 및 특정 생화학적 경로의 활성화가 있다는 강력한 증거가 있다.
분명히, 서지허니 및 2종의 변형된 원형인 PT1 및 PT2는 적어도 24시간에 걸쳐 효과적인 과산화수소 방출을 제공한다.
결론
서지허니 및 2종의 변형된 원형인 PT1 및 PT2는 스타필로코커스 아우레우스의 표준 균주에 대한 강력한 항균 활성을 갖는 것으로 확인되었다. 이 항균 활성은 과산화수소에 기인하는 것으로 밝혀졌다. 상기 활성은 측정가능하고 과산화수소 활성의 관점에서 기재될 수 있다. 이들 변형된 벌꿀들은 효과적이고 독성을 나타내지 않고 투여하기에 용이하다.
실시예 6
서지허니의 시험관내 항균 활성
이 실시예는 원반 확산 방법, 최소 억제 농도(MIC) 및 최소 살생 농도(MBC) 측정, 및 시간 살세균 측정으로 서지허니에 대한 다양한 세균 단리물들의 민감성을 시험하는 것을 기술한다.
요약
결과: 서지허니는 광범위한 그람 양성 및 그람 음성 세균 및 진균에 대한 고도로 강력한 억제 및 살생 활성을 나타낸다. MIC/MBC는 국소 임상 사용에서 달성될 가능성이 있는 농도보다 상당히 더 낮다. 스타필로코커스 아우레우스에 대한 서지허니 1 MIC/MBC는 31 및 125 gms/ℓ이고 서지허니 3 MIC/MBC는 0.12 및 0.24 gms/ℓ이다.
살생 속도는 효능에 의존한다. 서지허니 1에서, 시험된 모든 유기체들에 대한 가장 적은 강력한 완전한 살생 활성은 48시간 이내에 일어난다. 서지허니 3의 경우, 가장 많은 강력한 살생 활성은 30분 이내에 일어난다. 최대 1주 동안 서지허니 접종물 제제의 유지는 완전한 살생 활성을 나타내었고 세균 지속을 나타내지 않았다.
결론: 서지허니는 벌꿀의 치유 성질의 효과와 생체조작된 생성물의 강력한 항균 활성을 겸비한 고활성 국소 치료제로서 넓은 잠재력을 가진다. 이 물질은 다중약물 내성 세균에 대한 고활성을 가진다. 이 물질은 시험된 다른 벌꿀보다 더 높은 활성을 갖고 항균 활성 면에서 화학적 소독제에 필적할만하다.
이 연구는 서지허니의 시험관내 성질을 조사한다. 서지허니는 천연 벌꿀의 모든 확립된 치유 성질을 보유하나, 그의 항균 활성은 효능이 요구될 때마다 설정될 수 있다. 이 연구는 서지허니 1, 2 및 3의 최소 억제 농도(MIC) 및 최소 살세균 농도(MBC), 및 시간 사멸 곡선을 결정하였다.
방법
서지허니는 효능 등급 1, 2 및 3으로서 제공되었다. 이 물질은 반고체 형태로 사셰 내의 멸균 약학 등급 제품으로서 제공되었다.
연조직 미생물학 샘플로부터 임상 단리물을 채취하였다. 스타필로코커스 아우레우스의 18개 단리물들, 즉 12개의 메티실린 민감성(MSSA) 단리물들 및 6개의 메티실린 내성(MRSA) 단리물들, β 용혈성 스트렙토코시의 6개 단리물들, 란세필드(Lancefield) 군 A(2), B(2), C(1), G(1), 반코마이신 내성 엔테로코커스 패시움(E. faecium)을 포함하는 엔테로코커스 종의 5개 단리물들, 연장된 스펙트럼 β 락타마제 생산자를 포함하는 에스케리키아 콜라이의 6개 단리물들, 클렙시엘라 종의 2개 단리물들, 1개의 세라티아 마르세센스(Serratia Marcescens) Amp C 생산자, 슈도모나스 애루기노사의 4개 단리물들, 악시네토박터 류오피이(Acinetobacter lwoffii)의 1개 단리물, 프로피오니박테리움 애크네스의 1개 단리물, 박테로이데스 프라길리스(Bacteroides fragilis)의 1개 단리물, 칸디다 알비칸스의 2개 단리물들, 칸디다 글라브라타(Candida glabrata)의 1개 단리물, 및 아스퍼길러스 푸미가테스(Aspergillus fumigates )의 1개 단리물을 서지허니에 대하여 시험하였다.
한천 확산
반전면(semiconfluent) 성장을 제공하는 농도에서 시험 유기체로 이미 접종된 이소세니테스트(isosenitest) 한천에서 6 mm 웰을 절단하였다. 파일럿 연구에서 시험 서지허니 및 다른 벌꿀을 상기 웰에 첨가하였다.
서지허니 효능 S1, S2 및 S3을, 전세계에서 유럽인, 남아메리카인, 뉴질랜드인, 예맨인 및 수단인으로부터 공급된 다양한 벌꿀들, 의료용 벌꿀인 메디허니, 및 은(실버 아쿠아셀(Silver Aquacell)) 및 요오드(요도플렉스(Iodoflex))를 함유하는 항균 드레싱과 비교하기 위해 파일럿 연구를 먼저 수행하였다. 웰들을 스타필로코커스 아우레우스로 접종된 플레이트에서 절단하고 시험 벌꿀로 충전시켰거나, 상기 드레싱의 경우 이들을 2x2 cm로 절단하고 접종된 플레이트의 표면 위에 놓았다.
상기 파일럿 연구 후, 서지허니 효능 S1, S2 및 S3을 피부 병변으로부터의 다양한 세균 단리물들에 대해 단독으로 시험하였다. 웰을 상기 3가지 효능의 대략 2 gms 순수 서지허니의 제제로 표면까지 충전시키고 희석하고 동등한 부피의 멸균수로 에멀전화하였다. 18시간 내지 24시간 호기성 항온처리(칸디다 및 아스퍼길러스 종의 경우 더 길고, 프로피오니박테리움 종 및 박테로이데스 종의 경우 혐기성 항온처리) 후, 대역 크기를 측정하였다.
최소 억제 농도 및 최소 살세균 농도
서지허니 제품을 37℃까지 가온하여 액화시켰고, 5 gms를 10 ㎖의 멸균 탈이온수와 혼합하였다. 이 희석물은 일련의 희석을 위한 '순수' 물질로서 간주되었다. 최소 억제 농도(MIC) 및 최소 살세균 농도(MBC) 측정을 수행하기 위해 영국 항균 화학요법 학회(BSAC) 방법을 이용하였다(Andrews JM. Determination of minimum inhibitory concentrations. J Antimicrob 372 Chemother 2001; 48(Supp 1): 5-16). 서지허니 제품을 마이크로타이터 트레이 웰에서 순수물부터 1024분의 1까지 연속적으로 희석하였다. 75 ㎕의 각각의 벌꿀 희석물을 마이크로타이터 트레이의 스트립 내의 각각의 웰에 첨가하였다. 순수물 농도는 250 gm/ℓ의 농도를 나타내었고 2048분의 1 희석물 농도는 대략 0.12 gm/ℓ를 나타내었다.
순수한 배양물로부터의 각각의 유기체에 대한 4개의 형태학적으로 동일한 콜로니들을 채취하여 0.5 맥파랜드(McFarland) 밀도를 생성함으로써 시험 유기체를 준비하였다. 이것을 1:10으로 더 희석하였다.
대조군을 포함하는 모든 웰들을 75 ㎕의 시험 단리물 제제로 접종하였다. 웰 트레이를 18시간 동안 37℃에서 항온처리하였다. MIC는 검출가능한 혼탁도를 보이지 않는 가장 많이 희석된 웰로서 간주되었다.
MIC 웰, 및 MIC 웰 주변의 웰을 혈액 한천 위에서 하위배양하고 18시간 동안 37℃에서 항온처리하여 MBC를 측정하였다. MBC는 항온처리 후 성장을 보이지 않는 가장 많이 희석된 농도이었다.
시간 사멸 곡선
0.5 맥파레인(MacFarlane) 밀도의 시험 유기체 0.1 ㎖를 채취하고 이를 3 ㎖의 영양분 브로쓰에 접종함으로써 시험 유기체 접종물을 준비하였다. 시험 접종물을 3개의 개별 비쥬(bijous), 대조군 및 3개의 시험 제제로 나누었고, 0.5 g의 서지허니 1(S1), 서지허니 3(S3) 또는 메디허니(MH)를 첨가하였다. 3회 반복된, 연속 희석 1:10 및 혈액 한천 플레이트 위에의 0.1 ㎖ 플레이팅으로 접종물의 콜로니 카운트를 측정하였다.
시험 접종물 및 대조군 접종물을 30℃에서 유지하여 표피 병변의 온도를 시뮬레이션하였다. 콜로니 카운트를 0.5시간, 2시간, 4시간, 24시간, 48시간, 72시간 및 168시간에서 삼중으로 전술된 바와 같이 수행하였다.
혈액 한천 위에 플레이팅하여 시험 유기체 생존을 측정하기 전에, 0.1 ㎖의 원 접종물을 영양분 브로쓰 내로 접종하여 서지허니의 임의의 잔류 효과를 중화시키고 37℃에서 72시간 동안 항온처리함으로써 말기 배양을 수행하였다.
결과
억제 대역 크기
파일럿 비교 연구는 모든 서지허니 효능이 의료 등급 벌꿀인 메디허니를 포함하는 시험된 임의의 다른 벌꿀보다 더 큰 항균 활성을 가진다는 것을 입증하였다. S1에 대한 억제 대역은 임의의 다른 벌꿀에 의해 생성된 억제 대역보다 더 컸다. 은 드레싱은 이 드레싱 아래에서 일부 억제 효과를 생성하였으나, 서지허니의 경우에 있었던 억제 대역은 없었다. 요오드 드레싱은 S1(36 mm)보다 더 크고 S3(67 mm)과 동등한, 스타필로코커스 아우레우스에 대한 큰 억제 대역(대략 70 mm)을 생성하였다.
정량적 대역 크기 시험에서, 모든 효능에서 서지허니는 시험된 모든 세균들, 즉 다수의 항생제 내성 세균들을 포함하는 그람 양성 세균 및 그람 음성 세균 둘 다, 및 진균 종들에 대하여 한천 확산에서 억제 대역을 생성하였다. 각각의 종에 대한 대역 크기는 서지허니 효능 제제의 증가에 따라 증가하였다(표 5). 서지허니의 억제 효과는 은 드레싱과 마찬가지로 활성 물질과의 직접적인 접촉에만 의존하는 것이 아니라, 표 5에 나열된 광범위한 대역들을 생성하는 웰 이외의 확산된 웰에도 의존하였다.
MIC 및 MBC
서지허니는 시험된 모든 단리물들에 대한 유의한 항균 활성을 나타내었다. MIC 및 MBC는 단리물이 다중약물 내성을 나타내든 아니면 높은 민감성을 나타내든 관계없이 동일한 종의 단리물들 사이에 매우 일관되었다. 표 6은 시험된 단리물 종에 대한 MIC 및 MBC 값을 희석 비로 나열하고, 표 7은 리터당 MIC 및 MBC를 그램으로 보여준다. 효능의 정도는 서지허니의 등급과 함께 상승하였다. 각각의 단리물에 대한 MBC는 대다수의 경우에서 단일 희석물 내에서 MIC와 가까웠다.
서지허니의 국소 농도는 대략 500 gms/ℓ로 추정된다. 스타필로코커스 아우레우스에 대한 서지허니 1 MIC/MBC는 각각 31 및 125 gms/ℓ이고 서지허니 3 MIC/MBC는 각각 0.12 및 0.24 gms/ℓ이다.
시간 사멸 곡선
서지허니는 세균을 신속히 사멸시킨다. 대조군의 밀리리터당 콜로니 형성 유닛(cfu/㎖) 수치는 대략 105의 cfu/㎖로 시작하여 꾸준히 상승한 반면, 서지하니 접종물에서 cfu/㎖은 서지허니의 두 효능과 접촉한 후 신속히 떨어졌다. 30분까지 cfu 수치는 S1 및 S3 둘 다에 대한 대다수의 경우에서 100배 떨어졌다(도 3). S1의 경우, 세균 성장은 대다수의 경우에서 2시간까지 검출될 수 없었고 S3의 경우 30분까지 검출될 수 없었다. 엔테로코시는 더 굴하지 않고 48시간 동안 지속되는 듯하였다. 영양분 브로쓰에서의 말기 배양 후 혈액 한천 위에서의 플레이팅이 S1 또는 S3 접종물에서 임의의 유기체를 검출하지 못하였기 때문에 모든 유기체들에 대한 살생 활성은 완전하였다.
논의
서지허니는 인간 소비를 위한 대다수의 시판되는 벌꿀과 달리 농업 첨가물 또는 항균 잔류물을 갖지 않는다는 점에서 그 단어의 현재 의미 면에서 유기 벌꿀이기도 한 천연 벌꿀이다. 이 물질은 그의 향상된 활성을 위해 특정 식물 화밀 공급원에 의존하는 벌꿀, 예컨대, 마누카(manuka)와 달리 특정 화밀 공급원에 의존하지 않는다. 항균 활성은 일관된 측정된 효능을 가진 상이한 등급의 생성을 가능하게 하는 제조 과정에 의해 서지허니에서 조절될 수 있다.
이 연구는 시험된 세균 및 진균의 모든 종들에 대한 고도로 강력한 항균 활성 물질로서의 서지허니의 효능을 명확히 입증하였다. 서지허니를 전세계로부터 유래된 다양한 벌꿀들 및 의료 등급 벌꿀인 메디허니와 비교하는 예비 파일럿 연구에서, 서지허니는 유의하게 더 큰 항균 효능을 나타내었다. 통상적으로 사용되는 국소 소독제인 은 및 요오드와의 비교 시, 서지허니 3은 요오드 드레싱만큼 크고, 드레싱과의 직접적인 접촉 시 세균을 억제하는 데 있어서 유일하게 효과적인 은 드레싱(Aquacel Ag)보다 더 큰 항균 효과를 생성하였다.
MIC 및 MBC 시험은 서지허니가 500 gms/ℓ로 추정된, 국소 치료에서 달성될 가능성이 있는 농도보다 10배 내지 1000배 더 낮은 농도에서 미생물을 억제할 뿐만 아니라 사멸시키기도 한다는 것을 보여준다. 서지허니의 살생 활성은 그의 억제 활성에 가까운 농도에서 일어난다. 따라서, 서지허니가 국소 적용될 때 다중미생물 억제 및 박멸에 있어서 높은 활성을 가질 잠재력이 있다.
살생 활성의 속도는 서지허니 3의 경우 30분 이내 및 서지허니 1의 경우 2시간 이내에서 극도로 빠르다는 것이 시간 사멸 곡선에 의해 확인된다. 엔테로코시가 다소 더 굴하지 않는 듯하지만, 이것은 그람 양성 유기체 및 그람 음성 유기체 둘 다의 경우 사실이다. 진균인 칸디다 종 아스퍼길러스 종도 성장을 억제하고 유기체를 사멸시키기 위해 보다 높은 농도 및 보다 연장된 노출을 요구한다.
이 시험관내 연구는 그의 효능이 조절될 수 있는 높은 항균 활성을 가진 서지허니의 잠재력을 입증하였다.
결론
이 시험관내 결과는 강력한 무독성 항균제로서의 서지허니의 임상 용도를 뒷받침한다.
[표 5]
Figure pct00007
[표 6]
Figure pct00008
[표 7]
Figure pct00009
실시예 7
서지허니 에멀전
제조
10 g의 서지허니를 10 ㎖의 글리세롤에 용해시켰다. 그 다음, 10 ㎖의 파라핀 오일을, 부착된 재킷 펠티에 및 시준판 기하구조를 가진 유량계(TA Instruments AR-G2)에 첨가하였다. 그 다음, 1 ㎖의 PGPR(폴리글리세롤 폴리리시놀레에이트)을 첨가하였다. 그 후, 하기 조건 하에서 유량계를 시작하였다: 전단 속도 2000 1/s, 37.5℃로 설정된 온도. 2분 후, 10 ㎖의 서지허니-글리세롤 용액을 적가하였다. 일단 총 10분이 경과하면, 에멀전을 재킷 펠티에로부터 용기로 옮겼다.
광학 현미경관찰
광학 현미경관찰은 에멀전이 서지허니를 캡슐화한 역 마이셀을 함유하였다는 것을 보여주었다. 이러한 마이셀은 도 4에서 관찰될 수 있다. 평균 마이셀 직경은 178 ㎛인 것으로 발견되었다.
과산화수소 시험
(시그마 알드리치(Sigma Aldrich)(콴토픽스(Quantofix)®)로부터 구입된) 과산화수소 스틱 시험을 이용하여 에멀전에서 과산화수소를 검출하였다. 물의 첨가 전 및 후에 상기 시험을 수행하였고, 상기 시험은 물의 첨가 전에 에멀전이 과산화수소를 생성하지 않았고 물의 첨가 후에 에멀전이 과산화수소에 대한 양성을 나타내는 것으로 시험되었다는 것을 보여주었다. 양성 시험은 청색으로의 색채 변화에 의해 표시되었다.
안정성 시험
에멀전은 적어도 4주 동안 주위 조건에서 저장된 후 과산화수소를 생성하는 그의 성능을 유지하였다.
분무 시험
에멀전은 펌프-작용 분무 병에 첨가되었고 분무가능한 것으로 확인되었다.
실시예 8
서지허니 에멀전의 안정성에 대한 상이한 파라미터들의 효과
실시예 7에 기재된 서지허니 에멀전 제조 방법에서 한 번에 1개의 파라미터를 변화시킨 효과를 조사하였다. 변화 및 이의 효과는 하기 요약되어 있다.
i) 오일 상 대 서지허니-글리세롤 상의 비율
10 ㎖ 초과의 오일 부피 및 10 ㎖ 미만의 오일 부피를 시험하였다. 서지허니-글리세롤 상의 부피에 비해 더 낮은 부피의 오일이 사용되었을 때 에멀전은 더 안정하다는 것을 확인하였다. 오일의 부피가 6 ㎖ 미만이었을 때, 에멀전은 72시간에 걸쳐 총 부피에서 3% 미만으로 분리한다는 것을 발견하였다. 4 ㎖의 부피는 72시간에 걸쳐 총 부피의 단지 1.3%의 분리를 허용하였다. 이 안정성은 실시예 7에 기재된 방법의 안정성보다 훨씬 더 큼으로써, 동일한 시간에 걸쳐 총 부피의 9.4%의 분리를 가진 에멀전을 제공하였다.
ii) PGPR의 부피
최대 4 ㎖ 및 1 ㎖ 미만의 PGPR 부피를 시험하였다. 더 높은 양의 PGPR이 사용되었을 때 에멀전은 더 안정하였다. 4 ㎖의 부피에서, PGPR은 보다 낮은 부피의 사용 시 안정성보다 더 큰 안정성, 및 실시예 7에 기재된 에멀전의 안정성보다 훨씬 더 큰 안정성을 제공하였다.
iii) 전단 속도
1000 1/s 내지 3000 1/s의 전단 속도를 시험하였다. 에멀전은 보다 높은 전단 속도가 적용되었을 때 보다 안정하였다. 3000 1/s의 전단 속도는 가장 안정한 에멀전을 생성하였다. 실시예 7에 기재된 바와 같이 제조된 에멀전의 경우 72시간에 걸쳐 총 부피의 9.4%의 분리 부피가 관찰된 것에 비해, 이 전단 속도에서 제조된 에멀전의 경우 동일한 시간에 걸쳐 총 부피의 단지 4.6%의 분리가 관찰되었다.
iv) 온도
20℃ 내지 40℃의 온도를 시험하였다. 온도가 증가함에 따라 에멀전의 안정성에 대한 인지가능한 추세는 없었다. 그러나, 40℃의 온도는 가장 안정한 에멀전을 생성하였다. 이 에멀전의 경우 72시간에 걸쳐 총 부피의 단지 3.1%의 분리가 관찰되었다.
v) 전단 길이
실시예 7에 기재된 제조 방법에서 사용된 전단 시간 이외에 20분 및 30분의 전단 시간을 시험하였다. 그러나, 전단 시간의 연장에 의해 생성된 유의한 차이는 없었다.
vi) 시약 첨가 순서
시약이 유량계에 첨가되는 속도의 변화 효과를 시험하였다. 유량계를 시작하기 전에 모든 성분들의 첨가 효과를, 서지허니-글리세롤 및 오일 성분을 먼저 첨가하고 1분 내지 2분 후 PGPR을 첨가한 효과와 비교하였다. PGPR이 마지막으로 첨가되었을 때 가장 안정한 에멀전이 형성되었다. 생성된 에멀전은 120시간에 걸쳐 총 부피의 2.8%의 분리 부피를 제공하였다.
vii) 글리세롤에 용해된 서지허니의 농도
서지허니(g) 대 글리세롤(㎖)의 하기 비를 시험하였다: 1 g:1 ㎖; 0.5 g:1 ㎖; 2 g:1 ㎖. 가장 안정한 에멀전을 생성한 비는 실시예 7에 기재된 제조 방법에서 사용된 비와 동일한 비인 1 g:1 ㎖이었다.
viii) 염화나트륨
염화나트륨이 에멀전의 극성 층에 용해될 때, 염화나트륨은 이 층의 극성을 증가시킨다. 염화나트륨은 에멀전의 지질 층과 정전기 상호작용도 형성한다. 정전기 상호작용 및 증가된 극성은 안정성을 개선할 수 있고 유착을 감소시킬 수 있다. 그러나, 염화나트륨(1 g, 2 g 또는 4 g)의 첨가는 에멀전의 안정성에 영향을 미치는 것으로 발견되지 않았다.
변화의 효과는 하기 표에 요약되어 있다:
[표 8]
Figure pct00010
실시예 9
높은 안정성을 가진 서지허니 에멀전
실시예 8에 기재된 변화로부터의 결과를 이용하여 서지허니 에멀전을 제조하는 추가 방법을 디자인하였다. 이 방법은 이하에 기재되어 있다.
제조
10 g의 서지허니를 10 ㎖의 글리세롤에 용해시켰다. 그 다음, 4, 6, 8 또는 10 ㎖의 파라핀 오일을, 부착된 재킷 펠티에 및 시준판 기하구조를 가진 유량계(TA Instruments AR-G2)에 첨가하였다. 그 다음, 10 ㎖의 서지허니-글리세롤 용액을 유량계에 첨가하였다. 그 후, 하기 조건 하에서 유량계를 시작하였다: 전단 속도 3000 1/s, 온도 40℃, 갭 4000 ㎛, 실행 시간 10분. 1분 후, 4 ㎖의 PGPR(폴리글리세롤 폴리리시놀레에이트)을 첨가하였다. 일단 총 10분이 경과하면, 에멀전을 유량계로부터 용기로 옮겼다.
[표 9]
Figure pct00011
모든 제제들이 매우 안정하다는 것을 확인하였고, 이때 사용된 파라핀 오일의 부피가 증가함에 따라 약간의 안정성 증가가 관찰되었다.
실시예 10
서지허니 크림 제제
1.5 g의 서지허니를 1.5 ㎖의 글리세롤에 용해시켰다. 그 다음, 1 g의 알긴산나트륨을 서지허니-글리세롤 용액에 용해시켰다. 그 다음, 10 ㎖의 파라핀 오일을 부착된 재킷 펠티에 및 시준판 기하구조를 가진 유량계(TA Instruments AR-G2)에 첨가하였다. 이어서, 1 ㎖의 PGPR(폴리글리세롤 폴리리시놀레에이트)을 첨가하였다. 그 후, 하기 조건 하에서 유량계를 시작하였다: 전단 속도 2000 1/s, 37.5℃로 설정된 온도, 갭 4000 ㎛, 실행 시간 10분. 2분 후, 1.5 ㎖의 서지허니-알기네이트 및 글리세롤 용액을 유량계에 첨가하였다. 3분 후, 8 ㎖의 염화칼슘 용액을 유량계에 적가하였다. 일단 총 10분이 경과하면, 에멀전을 재킷 펠티에로부터 용기로 옮겼다.
실시예 11
비-수성 서지허니 크림 제제
실시예 10에 기재된 방법은 물을 사용하여 염화칼슘을 이의 이온으로 해리한다. 이것은 서지허니를 잠재적으로 활성화시켜 과산화수소를 생성할 수 있었고, 크림 제제의 안정성을 한정할 수 있었다. 그러나, 본 발명자들은 비-수성 용매, 예컨대, 에탄올 또는 아세트산을 사용하여 염화칼슘을 해리할 수 있다는 것을 인식하였다. 본 발명자들은 글리세롤이 유리수에 결합할 수 있다는 것도 인식하였다. 충분한 글리세롤이 과산화수소의 너무 이른 방출을 방지하도록 존재하는 한, 이 성질은 물이 알기네이트를 용해하는 데 사용될 수 있게 한다.
하기 방법은 염화칼슘을 위한 용매로서 에탄올을 사용하고, 알기네이트 용액에서 유리수에 결합하도록 글리세롤을 사용한다.
1 g의 알긴산나트륨을 15 ㎖의 물에 용해시킨다. 그 다음, 30 ㎖의 글리세롤을 알기네이트 용액에 첨가하고 혼합한다. 그 다음, 30 g의 서지허니를 상기 용액에 용해시킨다. 그 후, 10 ㎖의 파라핀 오일을 부착된 재킷 펠티에 및 시준판 기하구조를 가진 유량계(TA Instruments AR-G2)에 첨가한다. 이어서, 10 ㎖의 서지허니 용액을 유량계에 첨가한다. 그 후, 하기 조건 하에서 유량계를 시작한다: 전단 속도 3000 1/s, 온도 40℃, 갭 4000 ㎛, 실행 시간 10분. 1분 후, 4 ㎖의 PGPR(폴리글리세롤 폴리리시놀레에이트)을 첨가한다. 2분 후, 8 ㎖의 비-수성 염화칼슘 용액(에탄올 중의 1 M 염화칼슘)을 유량계에 적가한다. 일단 총 10분이 경과하면, 에멀전을 유량계로부터 용기로 옮긴다.
실시예 7 내지 11의 에멀전 제제의 요약
[표 10]
Figure pct00012

Claims (154)

  1. 친유성 상; 수성 상; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 포함하는, 항균 활성을 생성하는 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서,
    콜로이드 또는 현탁액의 형태인 조성물.
  3. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    에멀전의 형태인 조성물.
  4. 청구항 1 내지 청구항 3 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 친유성 상은 오일 또는 왁스를 포함하는 조성물.
  5. 청구항 4에 있어서,
    상기 오일 또는 왁스는 알류리테스 몰루카나(Aleurites Moluccana) 종자 오일; 포도(비티스 비니페라(Vitis Vinifera)) 종자 오일; 아몬드 오일 NF; 하이브리드 홍화(카르타무스 틴크토리우스(Tinctorius)) 오일; 무수 라놀린 USP; 이소프로필 미리스테이트; 살구씨(Apricot Kernel) 오일; 이소프로필 팔미테이트; 아보카도(페르세아 그라티시마(Persea Gratissima)) 오일; 호호바(벅서스 치넨시스(Buxus Chinensis)) 오일; 바바수(Babassu) 오일; 라놀린; 밀랍; 마카다미아(테르니폴리아(Ternifolia)) 너트 오일; 보리지(Borage)(보라고 오피시날리스(Borago Officinalis)) 종자 오일; 망기페라 인디카(Mangifera Indica )(망고) 종자 버터; 브라질 너트 오일; 미네랄 오일; C12-15 알킬 벤조에이트; 미리스틸 미리스테이트; 칸나비스 사티바(Cannabis Sativa) 종자 오일; 올리브(올레아 유로패아(Olea Europaea)) 오일; 카놀라 오일; 오리자 사티바(Oryza Sativa)(쌀겨) 오일; 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드; 땅콩 오일 NF; 당근(다우쿠스 카로타 사티바(Daucus Carota Sativa)) 종자 오일; 바셀린; 피마자(리시누스 콤무니스(Ricinus Communis)) 오일; PPG-15 스테아릴 에테르; 세레신(Ceresin); 레티닐 팔미테이트; 세테아릴 알코올; 홍화(카르타무스 틴크토리우스) 오일; 세틸 알코올; 참깨(세사뭄 인디쿰(Sesamum Indicum)) 오일; 세틸 에스테르; 시어(Shea) 버터(부티로스페르뭄 파르키이(Butyrospermum Parkii)); 세틸 팔미테이트; 대두(글리신 소야(Glycine Soja)) 오일; 코코넛 오일; 스테아르산; 다우쿠스 카로타 사티바(당근) 뿌리 추출물; 스테아릴 알코올; 디이소프로필 아디페이트; 해바라기(헬리안투스 안누스(Helianthus Annus)) 오일; 디메티콘; 감편도(프루누스 아미그달루스 둘시스(Prunus Amygdalus Dulcis)) 오일; 개장미(로사 카니나(Rosa Canina)) 힙 오일; 테오브로마 카카오(Theobroma Cacao)(코코아) 종자 버터; 에뮤(Emu) 오일; 토코페롤; 및 달맞이꽃 오일로부터 선택되는 조성물.
  6. 청구항 4 또는 청구항 5에 있어서,
    상기 오일 또는 왁스는 밀랍인 조성물.
  7. 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 있어서,
    하나 이상의 에멀전화제를 추가로 포함하는 조성물.
  8. 청구항 7에 있어서,
    상기 에멀전화제는 친수성-친유성 균형(HLB) 값을 갖거나, 상기 에멀전화제는 범위 3 내지 6 또는 8 내지 18 내의 조합된 HLB 값을 갖는 조성물.
  9. 청구항 8에 있어서,
    상기 에멀전화제는 칼슘 스테아로일 락틸레이트; 세테아레쓰(Ceteareth)-20; 세테아릴 글루코사이드; 세테쓰(Ceteth)-10; 세테쓰-2; 세테쓰-20; 코카마이드(Cocamide) MEA; 글리세릴 라우레이트; 글리세릴 스테아레이트; 글리세릴 스테아레이트 (및) PEG-100 스테아레이트; 글리세릴 스테아레이트 SE; 글리콜 디스테아레이트; 글리콜 스테아레이트; 이소세테쓰(Isoceteth)-20; 이소스테아레쓰(Isosteareth)-20; 라우라마이드(Lauramide) DEA; 라우레쓰(Laureth)-23; 라우레쓰-4; 레시틴; 리놀레아마이드(Linoleamide) DEA; 메틸 글루코스 세스퀴스테아레이트; 올레쓰(Oleth)-10; 올레쓰-10/폴리옥실 10 올레일 에테르 NF; 올레쓰-2; 올레쓰-20; 올레쓰-20; PEG-100 스테아레이트; PEG-20 아몬드 글리세라이드; PEG-20 메틸 글루코스 세스퀴스테아레이트; PEG-25 수소첨가된 피마자 오일; PEG-30 디폴리하이드록시스테아레이트; PEG-4 디라우레이트; PEG-40 소르비탄 페롤레에이트; PEG-60 아몬드 글리세라이드; PEG-8 라우레이트; PEG-80 소르비탄 라우레이트; 폴리소르베이트 20; 폴리소르베이트 60; 폴리소르베이트 80; 폴리소르베이트 85; 나트륨 스테아로일 락틸레이트; 소르비탄 이소스테아레이트; 소르비탄 라우레이트; 소르비탄 올레에이트; 소르비탄 세스퀴올레에이트; 소르비탄 스테아레이트; 소르비탄 스테아레이트 (및) 수크로스 코코에이트; 소르비탄 트리올레에이트; 스테아라마이드(Stearamide) MEA; 스테아레쓰(Steareth)-2; 및 스테아레쓰-21로부터 선택되는 조성물.
  10. 청구항 7 내지 청구항 9 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 에멀전화제는 레시틴인 조성물.
  11. 청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 항에 있어서,
    국소 적용을 위해 제제화된 조성물.
  12. 청구항 1 내지 청구항 11 중 어느 한 항에 있어서,
    크림 또는 로션의 형태인 조성물.
  13. 청구항 1 내지 청구항 12 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소는 상기 물질에 존재할 수 있는, 상기 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 임의의 효소 활성에 추가적인 조성물.
  14. 청구항 1 내지 청구항 13 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 상기 효소가 상기 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수(free water)를 포함하지 않는 저장 안정성 조성물인 조성물.
  15. 청구항 1 내지 청구항 14 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소는 정제된 효소인 조성물.
  16. 청구항 1 내지 청구항 15 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소는 옥시도리덕타제(oxidoreductase) 효소인 조성물.
  17. 청구항 16에 있어서,
    상기 옥시도리덕타제 효소는 글루코스 옥시다제(glucose oxidase)인 조성물.
  18. 청구항 1 내지 청구항 17 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 물질은 상기 효소에 대한 정제된 기질을 포함하는 조성물.
  19. 청구항 18에 있어서,
    상기 정제된 기질은 정제된 당을 포함하는 조성물.
  20. 청구항 19에 있어서,
    상기 정제된 당은 D-글루코스, 헥소스 또는 D-갈락토스를 포함하는 조성물.
  21. 청구항 1 내지 청구항 17 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 물질은 비정련된 천연 물질인 조성물.
  22. 청구항 21에 있어서,
    상기 비정련된 천연 물질은 카탈라제(catalase) 활성이 없는 조성물.
  23. 청구항 21 또는 청구항 22에 있어서,
    상기 비정련된 천연 물질은 비정련된 천연 당 물질인 조성물.
  24. 청구항 23에 있어서,
    상기 비정련된 천연 당 물질은 벌꿀인 조성물.
  25. 청구항 24에 있어서,
    상기 벌꿀은 저온살균되지 않은 벌꿀, 바람직하게는 크림 상태의 저온살균되지 않은 벌꿀인 조성물.
  26. 청구항 1 내지 청구항 25 중 어느 한 항에 있어서,
    임의의 검출가능한 과산화수소를 포함하지 않는 조성물.
  27. 청구항 1 내지 청구항 26 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 멸균 조성물인 조성물.
  28. 청구항 1 내지 청구항 27 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 친유성 상 대 수성 상의 비는 9:1 내지 1:9, 8:1 내지 1:8, 7:1 내지 1:7, 6:1 내지 1:6, 5:1 내지 1:5, 4:1 내지 1:4, 3:1 내지 1:3, 또는 2:1 내지 1:2(v/v)인 조성물.
  29. 청구항 1 내지 청구항 28 중 어느 한 항에 있어서,
    5% 내지 95%, 10% 내지 95%, 15% 내지 95%, 20% 내지 95%, 25% 내지 95%, 30% 내지 95%, 35% 내지 95%, 40% 내지 95%, 45% 내지 95%, 50% 내지 95%, 55% 내지 95%, 60% 내지 95%, 65% 내지 95%, 70% 내지 95%, 75% 내지 95%, 80% 내지 95%, 85% 내지 95%, 또는 90% 내지 95%(v/v)의 친유성 상(존재하는 임의의 에멀전화제를 포함함)을 포함하는 조성물.
  30. 청구항 1 내지 청구항 28 중 어느 한 항에 있어서,
    5% 내지 95%, 5% 내지 90%, 5% 내지 85%, 5% 내지 80%, 5% 내지 75%, 5% 내지 70%, 5% 내지 65%, 5% 내지 60%, 5% 내지 55%, 5% 내지 50%, 5% 내지 45%, 5% 내지 40%, 5% 내지 35%, 5% 내지 30%, 5% 내지 25%, 5% 내지 20%, 5% 내지 15%, 또는 5% 내지 10%(v/v)의 친유성 상(존재하는 임의의 에멀전화제를 포함함)을 포함하는 조성물.
  31. 청구항 1 내지 청구항 30 중 어느 한 항에 있어서,
    5% 내지 95%, 10% 내지 95%, 15% 내지 95%, 20% 내지 95%, 25% 내지 95%, 30% 내지 95%, 35% 내지 95%, 40% 내지 95%, 45% 내지 95%, 50% 내지 95%, 55% 내지 95%, 60% 내지 95%, 65% 내지 95%, 70% 내지 95%, 75% 내지 95%, 80% 내지 95%, 85% 내지 95%, 또는 90% 내지 95%(v/v)의 수성 상을 포함하는 조성물.
  32. 청구항 1 내지 청구항 31 중 어느 한 항에 있어서,
    5% 내지 95%, 5% 내지 90%, 5% 내지 85%, 5% 내지 80%, 5% 내지 75%, 5% 내지 70%, 5% 내지 65%, 5% 내지 60%, 5% 내지 55%, 5% 내지 50%, 5% 내지 45%, 5% 내지 40%, 5% 내지 35%, 5% 내지 30%, 5% 내지 25%, 5% 내지 20%, 5% 내지 15%, 또는 5% 내지 10%(v/v)의 수성 상을 포함하는 조성물.
  33. 청구항 1 내지 청구항 32 중 어느 한 항에 있어서,
    1% 내지 60%, 1% 내지 50%, 1% 내지 40%, 1% 내지 30%, 1% 내지 20%, 또는 1% 내지 10%(w/v)의 상기 물질을 포함하는 조성물.
  34. 청구항 1 내지 청구항 32 중 어느 한 항에 있어서,
    1% 내지 60%, 5% 내지 60%, 10% 내지 60%, 15% 내지 60%, 20% 내지 60%, 25% 내지 60%, 30% 내지 60%, 35% 내지 60%, 40% 내지 60%, 45% 내지 60%, 또는 50% 내지 60%(w/v)의 상기 물질을 포함하는 조성물.
  35. 청구항 1 내지 청구항 34 중 어느 한 항에 있어서,
    20% 미만의 물, 바람직하게는 10% 내지 19%의 물을 포함하는 조성물.
  36. 청구항 1 내지 청구항 35 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물의 그램당 1 내지 1500 유닛, 15 내지 1500 유닛, 30 내지 1500 유닛, 50 내지 1500 유닛, 100 내지 1500 유닛, 1 내지 685 미만 유닛, 15 내지 685 미만 유닛, 30 내지 685 미만 유닛, 50 내지 685 미만 유닛, 100 내지 685 미만 유닛, 500 내지 1000 유닛, 685 내지 1000 유닛, 또는 100 내지 500 유닛의 상기 효소, 바람직하게는 글루코스 옥시다제를 포함하는 조성물.
  37. 청구항 1 내지 청구항 36 중 어느 한 항에 있어서,
    적어도 24시간 동안 0.1 내지 2 mmol/리터 미만의 과산화수소의 지속된 방출을 제공하기에 충분한 효소 및 기질을 포함하는 조성물.
  38. 청구항 1 내지 청구항 37 중 어느 한 항에 있어서,
    약제로서 사용하기 위한 조성물.
  39. 청구항 1 내지 청구항 37 중 어느 한 항에 있어서,
    미생물 감염의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 조성물.
  40. 미생물 감염의 예방 또는 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 청구항 1 내지 청구항 37 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  41. 청구항 39 또는 청구항 40에 있어서,
    상기 예방 또는 치료는 상기 조성물의 국소 투여에 의한 것인 용도.
  42. 미생물 감염을 예방하거나 치료하는 방법으로서, 유효량의 청구항 1 내지 청구항 37 중 어느 한 항에 따른 조성물을 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  43. 청구항 42에 있어서,
    상기 조성물은 상기 대상체에게 국소 투여되는 방법.
  44. 청구항 39 내지 청구항 43 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 미생물 감염은 바이러스 감염, 바람직하게는 헤르페스 심플렉스 바이러스(herpes simplex virus)(HSV) 감염인 용도 또는 방법.
  45. 청구항 39 내지 청구항 43 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 미생물 감염은 진균 감염인 용도 또는 방법.
  46. 청구항 39 내지 청구항 43 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 미생물 감염은 세균 감염인 용도 또는 방법.
  47. 청구항 1 내지 청구항 37 중 어느 한 항에 따른 조성물의 제조 방법으로서, 친유성 성분, 수성 성분, 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소, 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 혼합하여 상기 조성물을 형성하는 단계를 포함하는 방법.
  48. 제1 상; 제2 상; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 포함하는, 항균 활성을 생성하는 조성물로서, 상기 제1 상과 제2 상은 혼화불가능한 조성물.
  49. 청구항 48에 있어서,
    상기 제1 상은 상기 제2 상보다 더 약한 극성을 갖는 조성물.
  50. 청구항 48 또는 청구항 49에 있어서,
    상기 제1 상은 비-극성 상이고, 상기 제2 상은 극성 상인 조성물.
  51. 청구항 48 내지 청구항 50 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제1 상은 친유성 상이고, 상기 제2 상은 수성 상인 조성물.
  52. 청구항 48 내지 청구항 51 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제2 상은 비-수성 용매, 임의적으로 글리세롤, 디메틸설폭사이드, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하는 조성물.
  53. 청구항 48 내지 청구항 52 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제1 상은 오일, 임의적으로 올리브 오일, 옥수수 오일, 식물성 오일, 해바라기 오일 또는 파라핀 오일이거나 이를 포함하는 조성물.
  54. 청구항 48 내지 청구항 53 중 어느 한 항에 있어서,
    에멀전화제, 바람직하게는 계면활성제를 포함하고, 임의적으로 상기 계면활성제는 TWEEN, SPAN, 폴록사머(Poloxamer) 또는 폴리글리세롤 폴리리시놀레에이트이거나 이를 포함하는 조성물.
  55. 오일; 에멀전화제; 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소; 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 포함하는, 항균 활성을 생성하는 조성물.
  56. 청구항 55에 있어서,
    비-수성 용매를 포함하는 조성물.
  57. 청구항 56에 있어서,
    상기 비-수성 용매는 극성 용매인 조성물.
  58. 청구항 56 또는 청구항 57에 있어서,
    상기 비-수성 용매는 유기 용매인 조성물.
  59. 청구항 56 내지 청구항 58 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 비-수성 용매는 글리세롤, 디메틸설폭사이드, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜이거나 이를 포함하는 조성물.
  60. 청구항 55 내지 청구항 59 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 오일은 올리브 오일, 옥수수 오일, 식물성 오일, 해바라기 오일 또는 파라핀 오일이거나 이를 포함하는 조성물.
  61. 청구항 55 내지 청구항 60 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 에멀전화제는 계면활성제이거나 이를 포함하는 조성물.
  62. 청구항 61에 있어서,
    상기 계면활성제는 TWEEN, SPAN, 폴록사머 또는 폴리글리세롤 폴리리시놀레에이트이거나 이를 포함하는 조성물.
  63. 청구항 48 내지 청구항 62 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소는 상기 물질에 존재할 수 있는, 상기 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 임의의 효소 활성에 추가적인 조성물.
  64. 청구항 48 내지 청구항 63 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소가 상기 기질을 전환시키게 하기에 충분한 유리수를 포함하지 않는 조성물.
  65. 청구항 48 내지 청구항 64 중 어느 한 항에 있어서,
    저장 안정성인 조성물.
  66. 청구항 48 내지 청구항 65 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물의 희석 후 적어도 24시간 동안 2 mmol/리터 미만의 수준으로 과산화수소의 지속된 방출을 제공하는 조성물.
  67. 청구항 48 내지 청구항 66 중 어느 한 항에 있어서,
    적어도 24시간 동안 적어도 0.1, 0.5, 1 또는 1.5 mmol/리터 과산화수소의 지속된 방출을 제공하는 조성물.
  68. 청구항 48 내지 청구항 67 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소는 정제된 효소인 조성물.
  69. 청구항 48 내지 청구항 68 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소는 옥시도리덕타제 효소, 바람직하게는 글루코스 옥시다제인 조성물.
  70. 청구항 48 내지 청구항 69 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 물질은 카탈라제 활성이 없는 조성물.
  71. 청구항 48 내지 청구항 70 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 물질은 비정련된 물질, 예컨대, 비정련된 천연 물질인 조성물.
  72. 청구항 48 내지 청구항 71 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 물질은 바람직하게는 글루코스를 포함하는 당 물질인 조성물.
  73. 청구항 48 내지 청구항 72 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 물질은 벌꿀이거나 이를 포함하는 조성물.
  74. 청구항 48 내지 청구항 70 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 물질은 상기 효소에 대한 정제된 기질, 바람직하게는 정제된 당, 예컨대, 정제된 글루코스를 포함하는 조성물.
  75. 청구항 48 내지 청구항 74 중 어느 한 항에 있어서,
    10% 내지 60%, 바람직하게는 20% 내지 50%, 보다 바람직하게는 35% 내지 45%(w/w)의 비-수성 용매를 포함하는 조성물.
  76. 청구항 48 내지 청구항 75 중 어느 한 항에 있어서,
    10% 내지 40%, 바람직하게는 20% 내지 30%(w/w)의 오일을 포함하는 조성물.
  77. 청구항 48 내지 청구항 76 중 어느 한 항에 있어서,
    1% 내지 10%, 바람직하게는 1% 내지 5%(w/w)의 에멀전화제를 포함하는 조성물.
  78. 청구항 48 내지 청구항 77 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소에 대한 기질을 포함하는 10% 내지 50%, 바람직하게는 20% 내지 40%(w/w)의 물질을 포함하는 조성물.
  79. 청구항 48 내지 청구항 74 중 어느 한 항에 있어서,
    20% 내지 50%(w/w)의 비-수성 용매, 20% 내지 30%(w/w)의 오일, 1% 내지 5%(w/w)의 에멀전화제, 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 20% 내지 40%(w/w)의 물질을 포함하는 조성물.
  80. 청구항 48 내지 청구항 74 중 어느 한 항에 있어서,
    10% 내지 60%(w/w)의 비-수성 용매, 10% 내지 40%(w/w)의 오일, 1% 내지 10%(w/w)의 에멀전화제, 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 10% 내지 50%(w/w)의 물질을 포함하는 조성물.
  81. 청구항 48 내지 청구항 74 중 어느 한 항에 있어서,
    35% 내지 45%(w/w)의 비-수성 용매, 20% 내지 30%(w/w)의 오일, 1% 내지 5%(w/w)의 에멀전화제, 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 25% 내지 35%(w/w)의 물질을 포함하는 조성물.
  82. 청구항 48 내지 청구항 74 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제1 상 대 상기 제2 상의 비는 ≤1:1(v/v)인 조성물.
  83. 청구항 82에 있어서,
    상기 제1 상 대 상기 제2 상의 비는 <0.6:1(v/v)인 조성물.
  84. 청구항 82에 있어서,
    상기 제1 상 대 상기 제2 상의 비는 ≤0.4:1(v/v)인 조성물.
  85. 청구항 48 내지 청구항 74 및 청구항 82 내지 청구항 84 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제1 상은 상기 조성물의 60%(v/v) 미만으로 존재하는 조성물.
  86. 청구항 85에 있어서,
    상기 제1 상은 상기 조성물의 10% 내지 60%(v/v) 미만으로 존재하는 조성물.
  87. 청구항 85에 있어서,
    상기 제1 상은 상기 조성물의 10% 내지 40%(v/v) 미만으로 존재하는 조성물.
  88. 청구항 85에 있어서,
    상기 제1 상은 상기 조성물의 10% 내지 30%(v/v) 미만으로 존재하는 조성물.
  89. 청구항 85에 있어서,
    상기 제1 상은 상기 조성물의 10% 내지 25%(v/v) 미만으로 존재하는 조성물.
  90. 청구항 48 내지 청구항 74 및 청구항 82 내지 청구항 89 중 어느 한 항에 있어서,
    에멀전화제를 포함하고, 상기 에멀전화제는 상기 조성물의 최대 25%(v/v)로 존재하는 조성물.
  91. 청구항 90에 있어서,
    상기 에멀전화제는 상기 조성물의 1% 내지 25%(v/v)로 존재하는 조성물.
  92. 청구항 90에 있어서,
    상기 에멀전화제는 상기 조성물의 5% 내지 25%(v/v)로 존재하는 조성물.
  93. 청구항 90에 있어서,
    상기 에멀전화제는 상기 조성물의 10% 내지 25%(v/v)로 존재하는 조성물.
  94. 청구항 48 내지 청구항 74 및 청구항 82 내지 청구항 93 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질의 양 대 상기 제2 상의 부피의 비는 0.5:1 내지 2:1인 조성물.
  95. 청구항 94에 있어서,
    상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질의 양 대 상기 제2 상의 부피의 비는 1:1인 조성물.
  96. 청구항 48 내지 청구항 74 및 청구항 82 내지 청구항 95 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물에서 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질의 양은 상기 조성물의 최대 70%(w/v)인 조성물.
  97. 청구항 96에 있어서,
    상기 조성물에서 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질의 양은 상기 조성물의 5% 내지 70%(w/v)인 조성물.
  98. 청구항 96에 있어서,
    상기 조성물에서 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질의 양은 상기 조성물의 10% 내지 70%(w/v)인 조성물.
  99. 청구항 96에 있어서,
    상기 조성물에서 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질의 양은 상기 조성물의 20% 내지 70%(w/v)인 조성물.
  100. 청구항 96에 있어서,
    상기 조성물에서 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질의 양은 상기 조성물의 30% 내지 70%(w/v)인 조성물.
  101. 청구항 48 내지 청구항 100 중 어느 한 항에 있어서,
    에멀전인 조성물로서, 바람직하게는 상기 에멀전은 역 마이셀(reverse micelles)을 포함하는 조성물.
  102. 청구항 101에 있어서,
    상기 역 마이셀은 상기 제2 상에 의해 형성되는 조성물.
  103. 청구항 48 내지 청구항 102 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소, 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질은 상기 제2 상에 용해되어 있는 조성물.
  104. 청구항 48 내지 청구항 103 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제1 상은 파라핀 오일이거나 이를 포함하는 조성물.
  105. 청구항 48 내지 청구항 104 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제2 상은 글리세롤이거나 이를 포함하는 조성물.
  106. 청구항 48 내지 청구항 105 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 에멀전화제는 폴리글리세롤 폴리리시놀레에이트(PGPR)이거나 이를 포함하는 조성물.
  107. 청구항 48 내지 청구항 106 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소는 정제된 글루코스 옥시다제이거나 이를 포함하고, 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질은 벌꿀이거나 이를 포함하는 조성물.
  108. 청구항 48 내지 청구항 106 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소는 정제된 글루코스 옥시다제이거나 이를 포함하고, 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질은 정제된 글루코스이거나 이를 포함하는 조성물.
  109. 청구항 48 내지 청구항 108 중 어느 한 항에 있어서,
    크림인 조성물.
  110. 청구항 48 내지 청구항 109 중 어느 한 항에 있어서,
    점도 증가제를 추가로 포함하는 조성물.
  111. 청구항 110에 있어서,
    상기 점도 증가제는 하이드로콜로이드이거나 이를 포함하는 조성물.
  112. 청구항 111에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드는 다당류이거나 이를 포함하는 조성물.
  113. 청구항 111 또는 청구항 112에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드는 하이드로콜로이드 증점제이거나 이를 포함하는 조성물.
  114. 청구항 113에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드 증점제는 전분, 변형된 전분, 잔탄(xanthan), 갈락토만난(galactomannan)(예컨대, 구아 검(guar gum), 로커스트 콩 검(locust bean gum) 및 타라 검(tara gum)), 검 아라빅(gum Arabic) 또는 아카시아 검(acacia gum), 검 카라야(gum karaya), 검 트라가칸쓰(gum tragacanth), 곤약 마안난(konjac maanan), 또는 셀룰로스 유도체, 예컨대, 카복시메틸 셀룰로스, 메틸 셀룰로스 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로스인 조성물.
  115. 청구항 111 또는 청구항 112에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드는 가교결합된 하이드로콜로이드이거나 이를 포함하는 조성물.
  116. 청구항 115에 있어서,
    상기 가교결합된 하이드로콜로이드는 가교결합된 다당류인 조성물.
  117. 청구항 116에 있어서,
    상기 가교결합된 다당류는 가교결합된 알기네이트, 펙틴(pectin), 카라기난(carrageenan), 젤라틴, 젤란(gellan), 한천, 아가로스, 변형된 전분, 또는 셀룰로스 유도체, 예컨대, 메틸 셀룰로스 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로스인 조성물.
  118. 청구항 115 또는 청구항 116에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드의 분자는 양이온에 의해 가교결합되는 조성물.
  119. 청구항 118에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드는 알기네이트, 카라기난 또는 펙틴인 조성물.
  120. 청구항 119에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드는 칼슘 이온에 의해 가교결합된 알기네이트인 조성물.
  121. 제1 성분, 제2 성분, 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소, 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 혼합하여 조성물을 형성하는 단계를 포함하는, 조성물의 제조 방법으로서, 상기 제1 성분과 제2 성분은 혼화불가능한 방법.
  122. 오일, 기질을 전환시켜 과산화수소를 방출할 수 있는 효소, 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 혼합하여 조성물을 형성하는 단계를 포함하는, 조성물의 제조 방법.
  123. 청구항 121 또는 청구항 122에 있어서,
    비-수성 용매를 혼합하는 단계를 포함하는 방법.
  124. 에멀전을 형성하기에 충분한 시간 동안 높은 전단 속도 하에서 효소, 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 제2 상의 액체, 제1 상의 액체 및 임의적으로 에멀전화제를 혼합하는 단계를 포함하는, 청구항 48 내지 청구항 120 중 어느 한 항에 따른 조성물의 제조 방법.
  125. 청구항 124에 있어서,
    미리 혼합된 성분을 에멀전화제와 접촉시키고 높은 전단 속도 하에서 상기 미리 혼합된 성분 및 에멀전화제를 포함하는 혼합물을 혼합하기 전에 상기 효소, 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 상기 제2 상의 액체 및 상기 제1 상의 액체를 높은 전단 속도 하에서 미리 혼합하는 방법.
  126. 청구항 124 또는 청구항 125에 있어서,
    용액을 상기 제1 상의 액체와 접촉시키기 전에 상기 효소 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질을 상기 제2 상의 액체에 용해시켜 용액을 형성하는 방법.
  127. 청구항 124 내지 청구항 126 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 높은 전단 속도는 1000 1/s 내지 4000 1/s인 방법.
  128. 청구항 124 내지 청구항 127 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 높은 전단 속도는 >2500 1/s 내지 3500 1/s인 방법.
  129. 청구항 124 내지 청구항 128 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 혼합은 20℃ 내지 40℃에서 수행되는 방법.
  130. 청구항 124 내지 청구항 129 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 혼합은 35℃ 내지 40℃에서 수행되는 방법.
  131. 청구항 124 내지 청구항 130 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 혼합은 38℃ 내지 40℃에서 수행되는 방법.
  132. 청구항 124 내지 청구항 131 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소, 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 상기 제2 상의 액체, 상기 제1 상의 액체 및 상기 에멀전화제(존재하는 경우)는 적어도 5분 동안 높은 전단 속도 하에서 혼합되는 방법.
  133. 청구항 124 내지 청구항 132 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소, 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 상기 제2 상의 액체, 상기 제1 상의 액체 및 상기 에멀전화제(존재하는 경우)는 5분 내지 30분 동안 높은 전단 속도 하에서 혼합되는 방법.
  134. 청구항 124 내지 청구항 133 중 어느 한 항에 있어서,
    높은 전단 속도 하에서 점도 증가제를 상기 효소, 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 상기 제2 상의 액체, 상기 제1 상의 액체 및 상기 에멀전화제(존재하는 경우)와 혼합하여 크림을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  135. 청구항 134에 있어서,
    상기 점도 증가제는 하이드로콜로이드이거나 이를 포함하는 방법.
  136. 청구항 135에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드는 다당류이거나 이를 포함하는 방법.
  137. 청구항 135 또는 청구항 136에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드는 하이드로콜로이드 증점제이거나 이를 포함하는 방법.
  138. 청구항 137에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드 증점제는 전분, 변형된 전분, 잔탄, 갈락토만난(예컨대, 구아 검, 로커스트 콩 검 및 타라 검), 검 아라빅 또는 아카시아 검, 검 카라야, 검 트라가칸쓰, 곤약 마안난, 또는 셀룰로스 유도체, 예컨대, 카복시메틸 셀룰로스, 메틸 셀룰로스 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로스인 방법.
  139. 청구항 135 또는 청구항 136에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드는 하이드로콜로이드 겔화제이거나 이를 포함하는 방법.
  140. 청구항 139에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드 겔화제는 알기네이트, 펙틴, 카라기난, 젤라틴, 젤란, 한천, 아가로스, 변형된 전분, 또는 셀룰로스 유도체, 예컨대, 메틸 셀룰로스 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로스를 포함하는 방법.
  141. 청구항 139 또는 청구항 140에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드 겔화제는 양이온의 존재 하에서 이온이동성(ionotropic) 겔화에 의해 겔을 형성할 수 있고, 상기 방법은 높은 전단 속도 하에서 상기 양이온을 상기 하이드로콜로이드 겔화제, 상기 효소, 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 상기 제2 상의 액체, 상기 제1 상의 액체 및 상기 에멀전화제(존재하는 경우)와 혼합하여 크림을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  142. 청구항 141에 있어서,
    상기 양이온을 상기 혼합물과 접촉시키기 전에 상기 하이드로콜로이드 겔화제, 상기 효소, 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질, 상기 제2 상의 액체, 상기 제1 상의 액체 및 상기 에멀전화제(존재하는 경우)를 혼합하여 혼합물을 형성하는 방법.
  143. 청구항 142에 있어서,
    상기 양이온은 비-수성 용액, 예컨대, 에탄올 또는 아세트산에 제공되는 방법.
  144. 청구항 141 내지 청구항 143 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 양이온은 칼슘 이온이거나 이를 포함하는 방법.
  145. 청구항 141 내지 청구항 144 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제1 상의 액체와 접촉시키기 전에 상기 하이드로콜로이드 겔화제를 상기 제2 상의 액체, 상기 효소, 및 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질과 접촉시키는 방법.
  146. 청구항 141 내지 청구항 145 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드 겔화제는 알기네이트, 카라기난 또는 펙틴이거나 이를 포함하는 방법.
  147. 청구항 146에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드 겔화제는 알기네이트이거나 이를 포함하는 방법.
  148. 청구항 141 내지 청구항 147 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하이드로콜로이드 겔화제는 수성 용액에 제공되고, 상기 제2 상은 글리세롤이며, 상기 글리세롤은 상기 조성물에서 유리수에 결합함으로써 상기 효소에 대한 기질을 포함하는 물질로부터의 과산화수소의 효소 촉매 방출을 방해하기에 충분한 양으로 존재하는 방법.
  149. 청구항 48 내지 청구항 120 중 어느 한 항에 따른 조성물, 및 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 약학 조성물.
  150. 청구항 48 내지 청구항 120 및 청구항 149 중 어느 한 항에 있어서,
    약제로서 사용하기 위한 조성물 또는 약학 조성물.
  151. 청구항 48 내지 청구항 120 및 청구항 149 중 어느 한 항에 있어서,
    미생물 감염의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 조성물 또는 약학 조성물.
  152. 미생물 감염의 예방 또는 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 청구항 48 내지 청구항 120 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 청구항 149에 따른 약학 조성물의 용도.
  153. 미생물 감염의 예방 또는 치료 방법으로서, 유효량의 청구항 48 내지 청구항 120 중 어느 한 항에 따른 조성물 또는 청구항 149에 따른 약학 조성물을 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  154. 청구항 151 내지 청구항 153 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 미생물 감염은 코 감염, 예컨대, 부비동염 또는 비부비동염; 호흡관 감염, 예컨대, 상부 호흡관 감염(예를 들면, 편도선염, 후두염 또는 부비동염) 또는 하부 호흡관 감염(예를 들면, 기관지염, 폐렴, 세기관지염 또는 결핵); 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 낭성 섬유증, 기관지확장증 또는 천식과 연관된 감염; HIV/AIDS와 연관된 호흡기 감염; 또는 말기 질환과 연관된 호흡기 감염인 조성물, 용도 또는 방법.
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