JP2018527320A - 過酸化水素を放出する抗微生物性の組成物および製剤 - Google Patents

Abstract

抗微生物活性を生じさせるための組成物が記載される。これらの組成物は、第１の相；第２の相；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；および酵素のための基質を含む物質を含み、この第１の相と第２の相とは不混和性である。これらの組成物は、コロイド、懸濁物またはエマルションとして、特に、クリームまたはスプレーとして製剤化され得る。これらの組成物を作製する方法、ならびに抗微生物感染症の処置のためのそれらの使用が記載される。

Description

本発明は、抗微生物性の組成物および製剤、特に、コロイド、懸濁物またはエマルションに関する。これらの組成物および製剤は、抗微生物感染症、例えば、ウイルス、細菌または真菌感染症の処置のための局所適用のためであり得る。

単純疱疹（ｃｏｌｄ ｓｏｒｅ）は、唇上または口の周りに発症する小さい発疹である。これらは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）によって引き起こされ、通常は７〜１０日以内に処置なしに治る。単純疱疹は、口の周りのうずく、かゆいまたはひりひりする感覚で始まる場合が多い。次いで、最も一般的には下唇の縁に、体液で満たされた小さい有痛部（ｓｏｒｅ）が出現する。局所製品、例えば、クリームまたはゲルが、単純疱疹を処置するために使用され得る。多くは、単純疱疹の持続時間を、通常はたった１〜２日僅かに短縮し得る処方薬である。

性器ヘルペスは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）によって引き起こされる一般的な感染症である。これは、性器および周囲の領域上に有痛性の発疹を引き起こす。ヘルペスは、抗ウイルス剤で処置できる。しかし、これらは、悪心および頭痛などの副作用を引き起こし得る。

ＨＳＶおよび他のウイルスまたは微生物感染症の有効な処置を提供する局所製剤が、未だに必要とされている。

本出願人は、微生物感染症の部位において過酸化水素を放出することができる組成物が、感染症を予防または阻害するのに特に有効であることを見出した。

Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（商標）は、変動するおよび持続性の用量の反応性酸素種（ＲＯＳ）を送達する能力を有する、化学操作されたハチミツである。ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでの研究により、感染症の根絶におけるＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙの効力が実証されている。これには、薬物耐性株、例えば、メチシリン耐性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）およびバンコマイシン（vanomycin）耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍが含まれている（Dryden, M.、Lockyer, G.、Saeed, K.およびCooke, J.（２０１４年）. Engineered Honey: In Vitro Antimicrobial Activity of a Novel Topical Wound Care Treatment. Journal of Global Antimicrobial Resistance、２巻、１６８〜１７２頁）。これは、真菌に対して有効であることもまた示され、バイオフィルムの播種を予防または低減させた（Dryden, M.、Halstead, F.およびCooke, J.（２０１５年）. Engineered Honey to Manage Bacterial Bioburden and Biofilm in Chronic Wounds. EWMA Free Paper Session: Infection and Antimicrobials）。化学的に操作されたハチミツ、例えば、グルコースオキシダーゼを添加したハチミツは、ＷＯ２０１５／１６６１９７Ａ１に開示されている。

現在、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（商標）は、局所投与のためのサシェ（ｓａｃｈｅｔ：小袋）形態で入手可能である。しかし、この形態でのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（商標）の投与は、不便であり得、制御された用量の適用を困難にし、臨床的に最適ではない可能性がある。

国際公開第２０１５／１６６１９７号

Dryden, M.、Lockyer, G.、Saeed, K.およびCooke, J.（２０１４年）. Engineered Honey: In Vitro Antimicrobial Activity of a Novel Topical Wound Care Treatment. Journal of Global Antimicrobial Resistance、２巻、１６８〜１７２頁 Dryden, M.、Halstead, F.およびCooke, J.（２０１５年）. Engineered Honey to Manage Bacterial Bioburden and Biofilm in Chronic Wounds. EWMA Free Paper Session: Infection and Antimicrobials

本発明によれば、親油性相；水相；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；および酵素のための基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための組成物が提供される。本発明の組成物は、コロイドまたは懸濁物の形態であり得る。

用語「コロイド」は、第２の物質全体に分散された１種の物質の大きい分子または超微細粒子からなる均質な非結晶性物質を指すために本明細書で使用される。コロイドには、ゲル、ゾルおよびエマルションが含まれる。粒子は沈降せず、懸濁物中の粒子のように通常の濾過または遠心分離によって分離することはできない。

用語「懸濁物」は、物質の小さい粒子が液体全体に分散された混合物を指すために本明細書で使用される。懸濁物が乱されないままの場合、これらの粒子は、底に沈降する可能性が高い。懸濁物中の粒子は、コロイドまたは溶液のいずれか中の粒子よりも大きい。

本発明の組成物は、エマルションの形態であり得る。用語「エマルション」は、それが可溶性でも混和性でもない別の液体中の、一方の液体の微小な液滴の微細な分散物を指すために本明細書で使用される。本発明のエマルションは、油および水のエマルション、特に、水中油型エマルションまたは油中水型エマルションであり得る。組成物は、マイクロエマルションであり得る。

本発明の組成物は、第１の相（または第１の液体、または第１の構成成分）および第２の相（または第２の液体、または第２の構成成分）、基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；ならびに酵素のための基質を含む物質を含み得る。第１の相と第２の相とは不混和性であり得る。例えば、第１の相は、第２の相よりも極性が低くてもよい。第１の相は、非極性相、例えば、親油性相または疎水性相、例えば、油であり得る。第２の相は、極性相、例えば水相であり得る。第２の相は、非水性溶媒を含み得る。第２の相の液滴またはミセルは、第１の相内に分散され得る。

第２の相は、水および／または非水性溶媒を含み得る。組成物の酵素および物質は、水および／または非水性溶媒中に溶解され得る。

一部の実施形態では、第２の相は、水を含まなくてもよい、または実質的に水を含まなくてもよいことが考えられる。かかる状況では、第２の相は、非水性と記載され得る。例えば、酵素および酵素のための基質を含む物質は、非水性溶媒中に溶解され得る。非水性溶媒は、第１の相、例えば親油性相に対して不混和性であり得る。

一部の実施形態では、基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素および酵素のための基質を含む物質は、第１の相、例えば親油性相内に分散されたミセル内に含有され得る。

一部の組成物では、組成物は、ダブルエマルションの形態であり得る。例えば、基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素および酵素のための基質を含む物質を含有する液滴は、親油性相の小球（例えば、油小球）内に分散され得、小球は、水相内に分散され得る。かかるダブルエマルションは、水中油中水型（Ｗ／Ｏ／Ｗ）エマルションと呼ばれ得る。

本発明の組成物は、乳化する作用物質（または乳化剤）をさらに含み得る。エマルションは、エマルション界面における表面活性剤（乳化剤）の吸着によって安定化され得る。乳化剤は、液滴を分散状態で維持するために、界面張力を低下させる。乳化剤は、親水性部分および親油性部分を有する。水と組み合わせた特定の製剤について、物理的に最も安定なエマルションを産生するために必要な乳化剤（単数または複数）の相対的な量を計算することが可能である。このアプローチは、親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）法と呼ばれる（「The HLB SYSTEM a time-saving guide to emulsifier selection」ICI Americas Inc.、Wlimington、Delaware 19897、１９７６年、１９８０年改訂）。各乳化剤には、分子の親油性部分および親水性部分の相対的特性を示すＨＬＢ数が割り当てられる。大きい数（最大で２０の理論的数）は、主に親水性または極性の特性を示す乳化剤を示し、小さい数は、親油性または非極性の特徴を示す。ＨＬＢ系によれば、全ての脂肪および油は、所要ＨＬＢを有する。最適な性能を有するエマルションは、所要ＨＬＢを乳化剤のＨＬＢ値と一致させることによって得られ得る。水中油型エマルションについて、油相の極性が高いほど、乳化剤（単数または複数）の極性は高くなければならない。例えば、ＨＬＢ系に従って７の所要ＨＬＢを有するダイズ油を乳化するために、７±１のＨＬＢを有する乳化剤または乳化剤のブレンドを使用することが必要である。乳化剤のＨＬＢは、試行錯誤を介して計算または決定され得る。

したがって、本発明の組成物の親油性相は、安定な製品を確実にするために、特定のＨＬＢ数の乳化剤を要求し得る。本発明の組成物の親油性相は、油またはワックスを含み得る。本発明の組成物の親油性相における使用のための油およびワックス（それらのＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｏｆ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ、ＩＮＣＩ名による）（それらのそれぞれの所要ＨＬＢを伴う）の例には、以下が含まれる：
Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ Ｍｏｌｕｃｃａｎａ種子油［７］
アーモンド油ＮＦ［６］
無水ラノリンＵＳＰ［１０］
杏仁油［７］
アボカド（Ｐｅｒｓｅａ Ｇｒａｔｉｓｓｉｍａ）油［７］
ババス油［８］
ミツロウ［１２］
ルリジサ（Ｂｏｒａｇｏ Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）種子油［７］
ブラジルナッツ油［８］
安息香酸Ｃ１２〜１５アルキル［１３］
Ｃａｎｎａｂｉｓ Ｓａｔｉｖａ種子油［７］
キャノーラ油［７］
トリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル（Caprylic/Capric Triglyceride）［５］
ニンジン（Ｄａｕｃｕｓ Ｃａｒｏｔａ Ｓａｔｉｖａ）種子油［６］
ヒマシ（Ｒｉｃｉｎｕｓ Ｃｏｍｍｕｎｉｓ）油［１４］
セレシン［８］
セテアリルアルコール［１５．５］
セチルアルコール［１５．５］
セチルエステル［１０］
パルミチン酸セチル［１０］
ココナツ油［８］
Ｄａｕｃｕｓ Ｃａｒｏｔａ Ｓａｔｉｖａ（ニンジン）根抽出物［６］
アジピン酸ジイソプロピル［９］
ジメチコン［５］
イヌバラ（Ｒｏｓａ Ｃａｎｉｎａ）ヒップ油［７］
エミュー油［８］
月見草油［７］
ブドウ（Ｖｉｔｉｓ Ｖｉｎｉｆｅｒａ）種子油［７］
ハイブリッドベニバナ（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ Ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ）油［９］
ミリスチン酸イソプロピル［１１．５］
パルミチン酸イソプロピル［１１．５］
ホホバ（Ｂｕｘｕｓ Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）油［６．５］
ラノリン［１０］
マカダミア（Ｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ）ナッツ油［７］
Ｍａｎｇｉｆｅｒａ Ｉｎｄｉｃａ（マンゴー）シードバター［８］
鉱油［１０．５］
ミリスチン酸ミリスチル［８．５］
オリーブ（Ｏｌｅａ Ｅｕｒｏｐａｅａ）油［７］
Ｏｒｙｚａ Ｓａｔｉｖａ（米糠）油［７］
ラッカセイ油ＮＦ［６］
ワセリン［７］
ＰＰＧ−１５ステアリルエーテル［７］
パルミチン酸レチニル［６］
ベニバナ（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ Ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ）油［８］
ゴマ（Ｓｅｓａｍｕｍ Ｉｎｄｉｃｕｍ）油［７］
シアバター（Ｂｕｔｙｒｏｓｐｅｒｍｕｍ Ｐａｒｋｉｉ）［８］
ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ Ｓｏｊａ）油［７］
ステアリン酸［１５］
ステアリルアルコール［１５．５］
ヒマワリ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ Ａｎｎｕｓ）油［７］
スイートアーモンド（Ｐｒｕｎｕｓ Ａｍｙｇｄａｌｕｓ Ｄｕｌｃｉｓ）油［７］
Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ Ｃａｃａｏ（ココア）シードバター［６］
トコフェロール［６］

一部の実施形態では、本発明の組成物の親油性相は、ミツロウを含む。

一部の実施形態では、親油性相は油である。一部の実施形態では、油は、オリーブ油、トウモロコシ油、植物油、ヒマワリ油またはパラフィン油から選択される。好ましい実施形態では、油は、オリーブ油であり得る。別の好ましい実施形態では、油は、パラフィン油であり得る。

本発明の組成物における使用のための油中水型乳化剤は、３〜６の範囲のＨＬＢ値を有し得る。本発明の組成物における使用のための水中油型乳化剤は、８〜１８の範囲のＨＬＢ値を有し得る。本発明の組成物における使用のための乳化剤の例（それらのＩＮＣＩ名による）（それらのＨＬＢ数を伴う）の例には、以下が含まれる：
ステアロイル乳酸カルシウム［ＨＬＢ＝５．１±１］
セテアレス−２０［ＨＬＢ＝１５．２±１］
セテアリルグルコシド［ＨＬＢ＝１１±１］
セテス−１０［ＨＬＢ＝１２．９±１］
セテス−２［ＨＬＢ＝５．３±１］
セテス−２０［ＨＬＢ＝１５．７±１］
コカミドＭＥＡ［ＨＬＢ＝１３．５±１］
ラウリン酸グリセリル［ＨＬＢ＝５．２±１］
ステアリン酸グリセリル［ＨＬＢ＝３．８±１］
ステアリン酸グリセリル（および）ステアリン酸ＰＥＧ−１００［ＨＬＢ＝１１±１］
ステアリン酸グリセリルＳＥ［ＨＬＢ＝５．８±１］
ジステアリン酸グリコール［ＨＬＢ＝１±１］
ステアリン酸グリコール［ＨＬＢ＝２．９±１］
イソセテス−２０［ＨＬＢ＝１５．７±１］
イソステアレス−２０［ＨＬＢ＝１５±１］
ラウラミドＤＥＡ［ＨＬＢ＝１５±１］
ラウレス−２３［ＨＬＢ＝１６．９±１］
ラウレス−４［ＨＬＢ＝９．７±１］
レシチン［ＨＬＢ＝４±１］
レシチン［ＨＬＢ＝９．７±１］
リノレアミドＤＥＡ［ＨＬＢ＝１０±１］
セスキステアリン酸メチルグルコース［ＨＬＢ＝６．６±１］
オレス−１０［ＨＬＢ＝１２．４±１］
オレス−１０／ポリオキシル１０オレイルエーテル（Polyoxyl 10 Oleyl Ether）ＮＦ［ＨＬＢ＝１２．４±１］
オレス−２［ＨＬＢ＝４．９±１］
オレス−２０［ＨＬＢ＝１２．４±１］
オレス−２０［ＨＬＢ＝１５．３±１］
ステアリン酸ＰＥＧ−１００［ＨＬＢ＝１８．８±１］
ＰＥＧ−２０アーモンドグリセリド［ＨＬＢ＝１０±１］
セスキステアリン酸ＰＥＧ−２０メチルグルコース［ＨＬＢ＝１５±１］
ＰＥＧ−２５水素添加ヒマシ油［ＨＬＢ＝１０．８±１］
ジポリヒドロキシステアリン酸ＰＥＧ−３０［ＨＬＢ＝５．５±１］
ジラウリン酸ＰＥＧ−４［ＨＬＢ＝６±１］
ペルオレイン酸ＰＥＧ−４０ソルビタン（PEG-40 Sorbitan Peroleate）［ＨＬＢ＝９±１］
ＰＥＧ−６０アーモンドグリセリド［ＨＬＢ＝１５±１］
ラウリン酸ＰＥＧ−８［ＨＬＢ＝１３±１］
ラウリン酸ＰＥＧ−８０ソルビタン［ＨＬＢ＝１９．１±１］
ポリソルベート２０［ＨＬＢ＝１６．７±１］
ポリソルベート６０［ＨＬＢ＝１４．９±１］
ポリソルベート８０［ＨＬＢ＝１５±１］
ポリソルベート８５［ＨＬＢ＝１１±１］
ステアロイル乳酸ナトリウム［ＨＬＢ＝８．３±１］
イソステアリン酸ソルビタン［ＨＬＢ＝４．７±１］
ラウリン酸ソルビタン［ＨＬＢ＝８．６±１］
オレイン酸ソルビタン［ＨＬＢ＝４．３±１］
セスキオレイン酸ソルビタン［ＨＬＢ＝３．７±１］
ステアリン酸ソルビタン［ＨＬＢ＝４．７±１］
ステアリン酸ソルビタン（および）ヤシ脂肪酸スクロース［ＨＬＢ＝６±１］
トリオレイン酸ソルビタン［ＨＬＢ＝１．８±１］
ステアラミドＭＥＡ［ＨＬＢ＝１１±１］
ステアレス−２［ＨＬＢ＝４．９±１］
ステアレス−２１［ＨＬＢ＝１５．５±１］

一部の実施形態では、本発明の組成物の乳化剤は、レシチンを含む。

乳化剤には、イオン性または非イオン性界面活性剤、および親油性脂肪両親媒性物質（例えば、脂肪アルコールまたは脂肪酸）が含まれる。非イオン性界面活性剤は、アニオン性またはカチオン性界面活性剤ほど皮膚に対して刺激性でない場合があるので、好まれ得る。

適切な乳化剤の他の例には、界面活性剤：ラウリル硫酸ナトリウム、セトリミド、セトマクロゴール１０００、モノステアリン酸ＰＥＧ １０００、ステアリン酸トリエタノールアミン、ステアリン酸ナトリウム；脂肪両親媒性物質：セトステアリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ステアリン酸、ホスファチジルコリンが含まれる。

市販の乳化ワックスの例には、乳化ワックスＢＰ（セトステアリルアルコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、乳化ワックスＵＳＮＦ（セチルアルコール、ポリソルベート）、カチオン性乳化ワックスＢＰＣ（セトステアリルアルコール、セトリミド）、モノステアリン酸グリセリルＳ．Ｅ．（モノステアリン酸グリセリル、ステアリン酸ナトリウム）、セトマクロゴール乳化ワックスＢＰＣ（セトステアリルアルコール、セトマクロゴール１０００）、ポラワックス（セチルアルコール、非イオン性界面活性剤）、レシチン（ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸）が含まれる。

本発明の組成物における使用のための界面活性剤には、ＴＷＥＥＮ（例えば、ＴＷＥＥＮ ８０）、ＳＰＡＮ（例えば、ＳＰＡＮ ８０）、ポロクサマー（例えば、ポロクサマー４０７）およびポリグリセロールポリリシノレート（ＰＧＰＲ）のうち１または複数が含まれ得る。好ましい界面活性剤は、ポロクサマー４０７などのポロクサマーであり得る。別の好ましい界面活性剤は、ＰＧＰＲであり得る。

界面活性剤には、界面活性剤ポリマーまたはコポリマーが含まれ得る。例えば、適切な界面活性剤は、２つの親水性ブロックが隣接する中央の疎水性ブロックからなるトリブロックコポリマーであり得る。

本発明によれば、油；乳化剤；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；および酵素のための基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための組成物が提供される。

本発明の組成物は、非水性溶媒を含み得る。非水性溶媒は、１５よりも高い比誘電率を有する溶媒などの極性溶媒であり得る。非水性溶媒は、有機溶媒であり得る。例えば、溶媒は、グリセロール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコールであり得る、またはグリセロール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコールを含み得る。非水性溶媒は、第１の相、例えば親油性相（例えば、油）に対して不混和性であり得る。

好ましい実施形態では、非水性溶媒は、グリセロールであり得る、またはグリセロールを含み得る。

一部の実施形態では、本発明の組成物は、ミセル、好ましくは逆ミセルを含み得る。各ミセル内には、酵素および物質（純化されていない天然物質、例えばハチミツを含み得る）が存在し得、ミセルの外側は、第１の相、例えば親油性相（例えば、油）であり得る。各逆ミセル内には、水および／または非水性溶媒もまた存在し得る。各ミセル内には、酵素が基質を変換するのに十分な水が存在しなくてもよい。

本発明の組成物は、合体（ｃｏａｌｅｓｃｅｎｃｅ）の低減を補助し得るさらなる構成成分を含み得る。合体は、２またはそれ超の液滴またはミセルが組み合わさって単一の液滴またはミセルを形成する状況を記載する。合体を低減または防止するために、界面フィルム、即ち、親油性相と水相との間の界面の強度が強化され得る。これは、例えば、両親媒性ポリマーを含む界面活性剤の濃度を増加させることによって、および／または５〜７個の炭素原子を有する脂肪族アルコールなどのアルコールを添加することによって達成され得る。

本発明の組成物は、局所適用、特に、ヒト対象への局所適用に適切であり得る。局所適用のための組成物は、皮膚または粘膜などの身体表面に適用され得る。局所適用のための本発明の組成物は、例えば、クリーム、ローションまたはリップバームの形態であり得る。

用語「クリーム」は、局所使用のための、水中油型または油中水型の半固体エマルションを指すために本明細書で使用される。水中油型（ｏ／ｗ）クリームは、連続的な水相中に分散された油の小さい液滴から構成され、油中水型（ｗ／ｏ）クリームは、連続的な油性相中に分散された水の小さい液滴から構成される。水中油型クリームは、あまり脂ぎっておらず、水を使用してより容易に洗浄して除かれる。油中水型クリームは、皮膚の最外層からの水の喪失を低減させる油性バリアを提供するので、より保湿性が高い。

用語「クリーム」は、第１の相の液滴が連続的な第２の相中に分散された、または第２の相の液滴が連続的な第１の相中に分散された、半固体エマルションもまた指し得る。例えば、第１の相は、第２の相よりも極性が低くてもよい。第１の相は、非極性相、例えば、親油性相または疎水性相、例えば、油であり得る。第２の相は、極性相、例えば水相であり得る。第２の相は、非水性溶媒を含み得る。第２の相は、水および／または非水性溶媒を含み得る。一部の実施形態では、第２の相は、水を含まなくてもよい、または実質的に水を含まなくてもよいことが考えられる。かかる状況では、第２の相は、非水性と記載され得る。非水性溶媒は、第１の相、例えば親油性相に対して不混和性であり得る。

用語「ローション」は、局所適用のための液体懸濁物またはエマルションを指すために本明細書で使用される。ローションは、懸濁剤および／もしくは表面活性剤によって懸濁物中に、または１もしくは複数の表面活性剤によって安定化されたエマルション（特に、水中油型エマルション）中に保持された、微細に粉末化された不溶性固体を含み得る。ローションは、クリームよりも低い粘度を有する。

用語「リップバーム」は、ひび割れたまたは乾燥した唇に潤いを与えるまたはそれを軽減するために、口の唇に局所適用されるワックス様物質を指すために本明細書で使用される。リップバームは、他の成分の中でも、例えば、ミツロウまたはカルナバワックス、樟脳、セチルアルコール、ラノリン、パラフィンおよびワセリンを含み得る。

有利なことに、本発明の組成物は、スプレー可能である。例えば、これは、その従来の形態でＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙを適用することにおける困難の一部の克服を補助し得る。例えば、一部の状況では、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（粘着性および粘稠性であり得る）は、感染部位に適用することが困難であり得る。結果として、本発明の組成物は、スプレーデバイスを使用して患者に送達され得る。デバイスは、スプレーまたは霧化デバイス、例えば、ポンプアクションスプレーまたはエアロゾルスプレーであり得る。したがって、本発明は、本発明の組成物を含むスプレーデバイスを提供し得る。

本発明の組成物は、対象への内部投与に適切であり得る。例えば、組成物は、対象の気道中への投与に適切であり得る。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、その従来の形態では、対象の気道に容易に投与されない場合がある。

本発明の組成物は、ネブライザーまたは吸入器を使用して気道に投与され得る。結果として、本発明は、本発明の組成物を含むネブライザーまたは吸入器を提供し得る。

ネブライザーは、液体を、吸入に適切なエアロゾル液滴に変換するデバイスである。ネブライザーは、投薬溶液を離散させ、治療用量のエアロゾル粒子を肺に直接送達するために、酸素、圧縮空気または超音波出力を使用する。広範な種々のネブライザーが利用可能である。ネブライザーは、圧縮ガスによって（ジェットネブライザー）、または超音波的に振動する結晶によって（超音波ネブライザー）、駆動され得る。

５〜１０分間で十分に小さい粒子を溶液から生成するために、少なくとも６Ｌ／分のガス流速が通常必要である。超音波ネブライザーは、エアロゾル粒子を生成するために、迅速に振動する圧電結晶を使用する。超音波ネブライザー機械は、より小さくより静かである場合が多い。

多くのネブライザーは、処方された薬物用量の１０％のみを肺に送達する。薬物の多くは、内部装置に引っかかり、または呼息の間に浪費される。薬物送達の効率は、ネブライザーチャンバーの型および容積、ならびに薬物が駆動される流速に依存する。一部のチャンバーは、吸気の間の粒子送達の効率を増加させ、呼気の間の環境的喪失を低減させるために、レザーバーおよび弁システムを有する。呼吸補助されるオープンベントシステムは、薬物送達を改善するが、適切な呼気流を有する患者に依存する。フェイスマスクまたはマウスピースが、エアロゾル粒子の投与のために使用され得る。

ネブライザーは、多くの呼吸器疾患の処置のために使用される。ネブライザー使用のための適応症には、増悪の管理、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の長期処置、嚢胞性線維症、気管支拡張症、喘息、ＨＩＶ／ＡＩＤＳの管理、ならびに緩和ケアにおける症状軽減が含まれる。

本発明の噴霧される組成物は、呼吸器疾患、例えば、ＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、気管支拡張症もしくは喘息、またはＨＩＶ／ＡＩＤＳ関連呼吸器感染症、または終末期疾患と関連する呼吸器感染症に罹患している対象における、微生物感染症、例えば、バイオフィルムまたはバイオフィルムを形成することが可能な微生物を含む微生物感染症を予防または処置するために使用され得る。

本発明の組成物は、バイオフィルムまたはバイオフィルムを形成することが可能な微生物を含む微生物感染症を予防または処置するために使用され得る。バイオフィルムは、バイオフィルム形成性の細菌、真菌またはウイルスを含み得る。バイオフィルムを形成することが可能な微生物は、細菌、真菌またはウイルスであり得る。

一部の実施形態では、微生物感染症を予防または処置するために使用される組成物は、本発明の噴霧される組成物を排除し得る。

本発明の組成物の酵素は、物質中に存在し得る、基質を変換して過酸化水素を放出できる任意の酵素活性（本明細書で「基質変換活性」と呼ぶ）に対して追加的（即ち、ヒト介入の結果として添加される）であり得る、即ち、組成物は、物質および添加された酵素を含み得る。一部の実施形態では、物質中には基質変換活性が存在しなくてもよい。

本発明の組成物は、酵素が基質を変換するのに十分な自由水を含まない貯蔵安定性組成物であり得る。

例えば、一部の実施形態では、酵素および酵素のための基質を含む物質は、ミセル（例えば、逆ミセル）内にカプセル化または含有され得、これらのミセル内には、酵素が基質を変換するのに十分な自由水が存在しなくてもよい。非水性溶媒が、ミセル中に存在し得る。

あるいは、本発明の組成物は、組成物中の水とは別の（または区画化された）、基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素および酵素のための基質を含む物質のおかげで、貯蔵安定性であり得る。例えば、組成物は、ダブルエマルションであり得る。酵素および物質を含有する（が、酵素が基質を変換するのに十分な自由水は含まない）液滴は、油の小球内に分散され得、油の小球は、水相（例えば、水）内に分散され得る。

十分な水の存在下では、貯蔵安定性組成物の酵素は、基質を変換し過酸化水素を放出することができる。過酸化水素は、広範な種々の異なる微生物に対して有効であることが公知である。したがって、抗微生物活性は、本発明の貯蔵安定性組成物の希釈後に生じる。

貯蔵安定性組成物が使用される場合、これは、投与の部位に存在する液体によって希釈されて、投与部位における過酸化水素の放出をもたらし得る。

水または任意の自由水を含まない本発明の組成物は、本発明の特に安定な組成物を提供し得るが、それは、組成物が十分な量の水と接触するまで、酵素には、基質を変換して過酸化水素を放出することができないからである。

カタラーゼは、過酸化水素の水および酸素への分解を触媒する酵素である。カタラーゼ活性を欠く物質の使用は、異なる供給源由来の類似の物質間、または同じ供給源由来の異なる収穫由来の類似の物質間で、この活性の量における変動性が存在しないことを意味する。これは、かかる物質から生じ得る抗微生物活性における変動性を低減させる。あるいは、物質がカタラーゼ活性を含む場合、および物質を酵素と接触させる前に物質中のカタラーゼ活性を不活性化することが可能でも望ましくもない場合、物質から生じ得る過酸化水素に対するカタラーゼ活性の影響が低減されるように、十分な酵素が使用され得る。これもまた、物質から生じ得る抗微生物活性における変動性を低減させる。一部の実施形態では、物質は、カタラーゼ活性を欠き得る。

カタラーゼは、多くの植物および動物に存在する。カタラーゼ活性は、組成物中の物質の加工もしくは抽出の間に除去され得、または物質の使用前に不活性化され得る。カタラーゼ活性は、例えば低温殺菌によって熱不活性化され得る。カタラーゼ活性の熱不活性化のために適切な温度は、好ましくは少なくとも２分間にわたって、少なくとも６０℃、７０℃または８０℃である。

用語「貯蔵安定性」は、その組成物の希釈後に抗微生物活性を生じさせる能力を保持しつつ、少なくとも数日間、適切には少なくとも１週間または少なくとも１もしくは２カ月間にわたってその組成物を周囲温度で貯蔵できることを意味するために本明細書で使用される。貯蔵温度は、３７℃未満、好ましくは２０〜２５℃であり得る。好ましくは、組成物は、光への曝露を避けて貯蔵される。

過酸化水素は一般に、周囲温度で不安定である。本発明の貯蔵安定性組成物中の十分な自由水の欠如は、酵素が基質を変換して過酸化水素を放出するのを防止し、したがって、周囲温度において延長された期間にわたって組成物の安定性を維持することを助ける。本発明の貯蔵安定性組成物は、酵素が基質を変換するのに十分な自由水が存在しないことを条件として、いくらかの水を含んでもよい。水の適切な量は、組成物の正確な構成成分に依存して変動する。しかし、典型的には、本発明の貯蔵安定性組成物は、２０％未満の総含水量、例えば、１０％〜１９％の水を含む。

過酸化水素は、組成物中に存在する基質の量、および酵素の活性に依存して、組成物の希釈後に持続された期間にわたって放出され得る。組成物中の基質の量および／または酵素の活性は、組成物の希釈後に、より短い期間にわたる比較的高いレベルの過酸化水素の放出、またはより長い期間にわたるより低いレベルの過酸化水素の放出を提供するように選択され得ることが理解される。適切には、組成物は、組成物の希釈後に、少なくとも２４時間、より好ましくは少なくとも４８時間の期間にわたって、過酸化水素の持続的放出を提供する。適切には、組成物は、組成物の希釈後に少なくとも２４時間の期間にわたって、２ｍｍｏｌ／リットル未満のレベルでの過酸化水素の持続的放出を提供する。

本発明の組成物は、少なくとも２４時間、より好ましくは４８時間の期間にわたって、少なくとも０．１、０．５、１または１．５ｍｍｏｌ／リットルの過酸化水素の持続的放出を提供するのに十分な酵素および基質を含み得る。

本発明の貯蔵安定性組成物中には、組成物の希釈後に、必要に応じて基質を変換して過酸化水素を形成するのに十分な酵素が存在すべきであることが理解される。

十分な水の存在下での本発明の貯蔵安定性組成物による過酸化水素の生産の重要性を考慮すると、組成物は、いずれの添加されたペルオキシダーゼも含有するべきでないことが理解される。

一部の実施形態では、酵素は、精製された酵素である。用語「精製された酵素」は、酵素が産生されたときに元々存在していた不純物のうち少なくとも一部からその酵素が分離されている酵素調製物を含むように本明細書で使用される。好ましくは、除去または低減された不純物には、酵素が基質を変換して過酸化水素を放出する能力を他の方法で妨害する不純物が含まれる。

酵素が基質を変換して過酸化水素を放出できることを条件として、精製された酵素が高レベルの純度であることは、常に必要なわけでも望ましいわけでもない場合がある。一部の状況では、比較的粗製の酵素調製物を使用することが望ましい場合がある。適切な純度レベルの例には、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％純粋が含まれる。

しかし、酵素が産生されたときに元々存在していた可能性がある任意のカタラーゼの量が低減されていることが好ましい。酵素は、組換えまたは非組換え手段によって産生されたものであってよく、組換えまたは非組換え酵素であり得る。酵素は、微生物供給源から、好ましくは、遺伝子改変されていない微生物から精製され得る。

酵素の純度のレベルは、組成物の意図した使用に依存して必要に応じて選択され得る。例えば、組成物が医療的使用を意図している場合、医療グレードまたは医療デバイスグレードの純度が使用されるべきである。

したがって、本発明によれば、親油性相；水相；基質を変換して過酸化水素を放出できる精製された酵素；および酵素のための基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための貯蔵安定性組成物であって、酵素が基質を変換するのに十分な自由水を含まない組成物が提供される。

本発明によれば、第１の相；第２の相；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；および酵素のための基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための貯蔵安定性組成物であって、この第１の相と第２の相とは不混和性であり、組成物は、酵素が基質を変換するのに十分な自由水を含まない、組成物が提供される。

本発明によれば、油；乳化剤；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；および酵素のための基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための貯蔵安定性組成物であって、酵素が基質を変換するのに十分な自由水を含まない組成物が提供される。

一部の実施形態では、酵素はオキシドレダクターゼ酵素である。基質を変換して過酸化水素を放出できるオキシドレダクターゼ酵素の例には、グルコースオキシダーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、ピラノースオキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、ピルビン酸オキシダーゼ、グリコール酸（glycollate）オキシダーゼおよびアミノ酸（amioacid）オキシダーゼが含まれる。これらのオキシドレダクターゼ酵素のための対応する基質は、それぞれ、Ｄ−グルコース、ヘキソース、コレステロール、Ｄ−ガラクトース、ピラノース、コリン、ピルビン酸、グリコール酸およびアミノ酸である。

１または複数のオキシドレダクターゼ酵素およびオキシドレダクターゼ酵素のための１または複数の基質の混合物が、本発明の組成物中に存在し得る。

オキシドレダクターゼ酵素はグルコースオキシダーゼであり得、基質はＤ−グルコースであり得る。

物質は、酵素のための基質を含む任意の物質であり得る。一部の実施形態では、物質は、カタラーゼ活性を欠く。

したがって、本発明によれば、親油性相；水相；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；およびカタラーゼ活性を欠き、酵素のための基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための貯蔵安定性組成物であって、酵素が基質を変換するのに十分な自由水を含まない組成物もまた提供される。

本発明によれば、第１の相；第２の相；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；およびカタラーゼ活性を欠き、酵素のための基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための貯蔵安定性組成物であって、この第１の相と第２の相とは不混和性であり、組成物は、酵素が基質を変換するのに十分な自由水を含まない、組成物もまた提供される。

本発明によれば、油；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；およびカタラーゼ活性を欠き、酵素のための基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための貯蔵安定性組成物であって、酵素が基質を変換するのに十分な自由水を含まない組成物もまた提供される。

物質は、純化されていない物質であり得る。用語「純化されていない」は、純粋な形態へと加工されていない物質を指すために本明細書で使用される。純化されていない物質には、例えば乾燥または煮沸によって濃縮されていてもよい物質が含まれる。

物質は、天然供給源由来の１または複数の基質を含み得る（本明細書で「天然物質」と称する）。天然物質の例には、樹液、根、花蜜、花、種子、果実、葉または苗条由来を含む、植物供給源由来の物質が含まれる。物質は、純化されていない天然物質であり得る。

適切には、物質は、以下の基質のうち１または複数を含む：Ｄ−グルコース、ヘキソース、コレステロール、Ｄ−ガラクトース、ピラノース、コリン、ピルビン酸、グリコール酸またはアミノ酸。

物質は糖物質であり得る。用語「糖物質」は、１または複数の糖を含む任意の物質を意味するために本明細書で使用される。用語「糖」は、一般式Ｃ_ｍ（Ｈ_２Ｏ）_ｎを有する炭水化物を指すために本明細書で使用される。好ましい糖には、Ｄ−グルコース、ヘキソースまたはＤ−ガラクトースなどの単糖が含まれる。糖物質は、天然供給源由来の１または複数の糖を含み得る（本明細書で「天然糖物質」と称する）。天然糖物質は、純化されていない天然糖物質であり得る。純化されていない天然糖物質は、天然糖産物であり得る（または天然糖産物に由来し得る）。一部の実施形態では、純化されていない天然糖産物は、ハチミツである。一部の実施形態では、ハチミツは、カタラーゼ活性を除去または不活性化するために処理されたハチミツである。

上で考察したように、物質自体は、好ましくは、基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素活性（「基質変換活性」と呼ぶ）を欠き得る。物質における基質変換活性の非存在は、異なる供給源由来の類似の物質間、または同じ供給源由来の異なる収穫由来の類似の物質間で、この活性の量における変動性が存在しないという利点を有する。これは、かかる物質から生じ得る抗微生物活性における変動性をさらに低減させる。次いで、基質変換活性は、物質と接触した酵素のみによって提供され、したがって、組成物中に存在する基質変換活性の量は、制御できる。

基質変換活性は、本発明の組成物中の物質の加工もしくは抽出の間に除去され得、または物質の使用前に不活性化され得る。基質変換活性は、熱不活性化によって、例えば低温殺菌によって不活性化され得る。基質変換活性の熱不活性化のために適切な温度は、好ましくは少なくとも２分間にわたって、少なくとも８０℃である。熱不活性化の利点は、カタラーゼ活性および基質変換活性の両方が、単一の熱不活性化ステップで不活性化できることである。

本発明の一部の実施形態では、物質は、加工、抽出または純化された物質（即ち、不純物または望ましくない要素が加工によって除去されている物質）である。好ましくは、除去または低減された不純物には、酵素が基質を変換して過酸化水素を放出する能力を他の方法で妨害する不純物が含まれる。

本発明の一部の実施形態では、物質は、酵素のための精製された基質を含む。用語「精製された基質」は、基質が取得または産生されたときに元々存在していた不純物のうち少なくとも一部からその基質が分離されている基質調製物を含むように、本明細書で使用される。精製された基質は、天然供給源から取得され得る、または合成により産生され得る。精製された基質は、加工、抽出または純化された基質（即ち、不純物または望ましくない要素が加工によって除去されている基質）であり得る。

酵素が基質を変換して過酸化水素を放出できることを条件として、精製された基質が高レベルの純度であることは、常に必要なわけでも望ましいわけでもない場合がある。一部の状況では、比較的粗製の基質調製物を使用することが望ましい場合がある。適切な純度レベルの例には、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％純粋が含まれる。しかし、一部の実施形態では、精製された基質が、医療グレード、医療デバイスグレードまたは医薬品グレードの基質であることが望ましい場合がある。

特定の実施形態では、精製された基質は、精製された糖物質である、または精製された糖物質を含む。精製された糖物質は、天然供給源から取得され得（例えば、加工、抽出または純化された天然糖物質）、または合成により産生され得る。精製された糖物質は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％純粋であり得る。精製された糖物質は、医療グレード、医療デバイスグレードまたは医薬品グレードの糖物質であり得る。精製された糖物質には、１または複数の精製された糖物質、例えば、精製されたＤ−グルコース、ヘキソースまたはＤ−ガラクトースが含まれ得る。例えば、精製された糖物質は、医療グレード、医療デバイスグレードまたは医薬品グレードのＤ−グルコース、ヘキソースまたはＤ−ガラクトースであり得る。

本発明によれば、親油性相；水相；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；および酵素のための精製された基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための組成物もまた提供される。

本発明によれば、第１の相；第２の相；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；および酵素のための精製された基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための組成物であって、この第１の相と第２の相とは不混和性である、組成物もまた提供される。

本発明によれば、油；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；および酵素のための精製された基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための組成物もまた提供される。

組成物は、親油性相；水相；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；および酵素のための精製された基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための貯蔵安定性組成物であって、酵素が基質を変換するのに十分な自由水を含まない組成物であり得る。

組成物は、第１の相；第２の相；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；および酵素のための精製された基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための貯蔵安定性組成物であって、この第１の相と第２の相とは不混和性であり、組成物は、酵素が基質を変換するのに十分な自由水を含まない、組成物であり得る。

組成物は、油；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；および酵素のための精製された基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための貯蔵安定性組成物であって、酵素が基質を変換するのに十分な自由水を含まない組成物であり得る。

組成物は、親油性相；水相；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；およびカタラーゼ活性を欠き、酵素のための精製された基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための貯蔵安定性組成物であって、酵素が基質を変換するのに十分な自由水を含まない組成物であり得る。

組成物は、第１の相；第２の相；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；およびカタラーゼ活性を欠き、酵素のための基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための貯蔵安定性組成物であって、この第１の相と第２の相とは不混和性であり、組成物は、酵素が基質を変換するのに十分な自由水を含まない、組成物であり得る。

組成物は、油；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；およびカタラーゼ活性を欠き、酵素のための精製された基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための貯蔵安定性組成物であって、酵素が基質を変換するのに十分な自由水を含まない組成物であり得る。

特定の実施形態では、酵素および基質は、精製されている、例えば、精製されたグルコースオキシダーゼおよび精製されたＤ−グルコース、適切には、医療グレード、医療デバイスグレードまたは医薬品グレードのグルコースオキシダーゼおよびＤ−グルコースである。

本発明の組成物中の親油性相対水相の比、または第１の相対第２の相の比は、９：１〜１：９、８：１〜１：８、７：１〜１：７、６：１〜１：６、５：１〜１：５、４：１〜１：４、３：１〜１：３または２：１〜１：２（ｖ／ｖ）、例えば、４：１〜１：４であり得る。

本発明の組成物は、５〜９５％、１０〜９５％、１５〜９５％、２０〜９５％、２５〜９５％、３０〜９５％、３５〜９５％、４０〜９５％、４５〜９５％、５０〜９５％、５５〜９５％、６０〜９５％、６５〜９５％、７０〜９５％、７５〜９５％、８０〜９５％、８５〜９５％または９０〜９５％（ｖ／ｖ）の親油性相または第１の相（存在する任意の乳化剤を含む）を含み得る。

あるいは、本発明の組成物は、５〜９５％、５〜９０％、５〜８５％、５〜８０％、５〜７５％、５〜７０％、５〜６５％、５〜６０％、５〜５５％、５〜５０％、５〜４５％、５〜４０％、５〜３５％、５〜３０％、５〜２５％、５〜２０％、５〜１５％または５〜１０％（ｖ／ｖ）の親油性相または第１の相（存在する任意の乳化剤を含む）を含み得る。

本発明の組成物は、５〜９５％、１０〜９５％、１５〜９５％、２０〜９５％、２５〜９５％、３０〜９５％、３５〜９５％、４０〜９５％、４５〜９５％、５０〜９５％、５５〜９５％、６０〜９５％、６５〜９５％、７０〜９５％、７５〜９５％、８０〜９５％、８５〜９５％または９０〜９５％（ｖ／ｖ）の水相または第２の相を含み得る。

あるいは、本発明の組成物は、５〜９５％、５〜９０％、５〜８５％、５〜８０％、５〜７５％、５〜７０％、５〜６５％、５〜６０％、５〜５５％、５〜５０％、５〜４５％、５〜４０％、５〜３５％、５〜３０％、５〜２５％、５〜２０％、５〜１５％または５〜１０％（ｖ／ｖ）の水相または第２の相を含み得る。

本発明の組成物は、１〜６０％、１〜５０％、１〜４０％、１〜３０％、１〜２０％または１〜１０％（ｗ／ｖ）の物質、例えばハチミツを含み得る。

本発明の組成物は、１〜６０％、５〜６０％、１０〜６０％、１５〜６０％、２０〜６０％、２５〜６０％、３０〜６０％、３５〜６０％、４０〜６０％、４５〜６０％または５０〜６０％（ｗ／ｖ）の物質、例えばハチミツを含み得る。

本発明の組成物は、組成物１グラム当たり、１〜１５００単位、１５〜１５００単位、３０〜１５００単位、５０〜１５００単位、１００〜１５００単位、１〜＜６８５単位、１５〜＜６８５単位、３０〜＜６８５単位、５０〜＜６８５単位、１００〜＜６８５単位、５００〜１０００単位、６８５〜１０００単位または１００〜５００単位の酵素、好ましくはグルコースオキシダーゼを含み得る。

本発明の組成物は、８５％以下の水、例えば、８０％以下、７０％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下もしくは２０％以下の水、または２０％未満の水、例えば、１０〜１９％の水を含み得る。本発明の組成物は、２０％（ｗ／ｗ）未満の水を含み得る。本発明の組成物は、１５％（ｗ／ｗ）未満の水を含み得る。本発明の組成物は、１２％（ｗ／ｗ）未満の水を含み得る。

本発明の組成物は、１０〜６０％（ｗ／ｗ）の非水性溶媒を含み得る。一部の実施形態では、本発明の組成物は、２０〜５０％（ｗ／ｗ）の非水性溶媒を含み得る。一部の実施形態では、本発明の組成物は、３５〜４０％（ｗ／ｗ）の非水性溶媒を含み得る。

本発明の組成物は、１０〜４０％（ｗ／ｗ）の第１の相、例えば親油性相（例えば、油）を含み得る。組成物は、２０〜３０％（ｗ／ｗ）の第１の相、例えば親油性相（例えば、油）を含み得る。

本発明の組成物は、１〜１０％（ｗ／ｗ）の乳化剤を含み得る。組成物は、１〜５％（ｗ／ｗ）の乳化剤を含み得る。乳化剤は、好ましくは、界面活性剤である。

本発明の組成物は、１０〜５０％（ｗ／ｗ）の、酵素のための基質を含む物質を含み得る。組成物は、２０〜４０％（ｗ／ｗ）の物質を含み得る。一部の実施形態では、組成物は、２５〜３５％（ｗ／ｗ）の物質を含み得る。

本発明の組成物は、２０〜５０％（ｗ／ｗ）の非水性溶媒、２０〜３０％（ｗ／ｗ）の第１の相、例えば親油性相（例えば、油）、１〜５％（ｗ／ｗ）の乳化剤および２０〜４０％（ｗ／ｗ）の、酵素のための基質を含む物質を含み得る。

本発明の組成物は、１０〜６０％（ｗ／ｗ）の非水性溶媒、１０〜４０％（ｗ／ｗ）の第１の相、例えば親油性相（例えば、油）、１〜１０％（ｗ／ｗ）の乳化剤および１０〜５０％（ｗ／ｗ）の、酵素のための基質を含む物質を含み得る。

本発明の組成物は、３５〜４５％（ｗ／ｗ）の非水性溶媒、２０〜３０％（ｗ／ｗ）の第１の相、例えば親油性相（例えば、油）、１〜５％（ｗ／ｗ）の乳化剤および２５〜３５％（ｗ／ｗ）の、酵素のための基質を含む物質を含み得る。

本発明の組成物は、３０〜６０％（ｖ／ｖ）の溶媒、例えば、非水性の極性溶媒を含み得る。

本発明の組成物は、３０〜６０％（ｖ／ｖ）の第１の相、例えば親油性相（例えば、油）を含み得る。

本発明の組成物は、１〜１０％（ｖ／ｖ）の乳化剤、例えば、界面活性剤を含み得る。

本発明の組成物は、３０〜７０％または４０〜６０％（ｗ／ｗ）の、酵素のための基質を含む物質、例えばハチミツを含み得る。

本発明の組成物中の第１の相対第２の相の比は、≦１：１（ｖ／ｖ）、例えば０．１〜１：１（ｖ／ｖ）であり得る。一部の実施形態では、第１の相対第２の相の比は、＜０．６：１（ｖ／ｖ）、例えば０．１〜＜０．６：１（ｖ／ｖ）である。一部の実施形態では、第１の相対第２の相の比は、≦０．４：１（ｖ／ｖ）、例えば０．１〜０．４：１（ｖ／ｖ）である。

本発明の組成物中の第１の相は、組成物の６０％（ｖ／ｖ）未満で存在し得る。一部の実施形態では、第１の相は、組成物の１０％〜６０％（ｖ／ｖ）未満で存在する。一部の実施形態では、第１の相は、組成物の１０％〜５０％（ｖ／ｖ）未満で存在する。一部の実施形態では、第１の相は、組成物の１０％〜４０％（ｖ／ｖ）未満で存在する。一部の実施形態では、第１の相は、組成物の１０％〜３０％（ｖ／ｖ）未満で存在する。一部の実施形態では、第１の相は、組成物の１０％〜２５％（ｖ／ｖ）未満で存在する。

本発明の組成物は、乳化剤を含み得る。一部の実施形態では、乳化剤は、組成物の最大２５％（ｖ／ｖ）、例えば、組成物の１〜２５％（ｖ／ｖ）、組成物の５〜２５％（ｖ／ｖ）、または組成物の１０〜２５％（ｖ／ｖ）で存在する。

本発明の組成物中の酵素のための基質を含む物質の量対第２の相の体積の比は、０．５：１〜２：１、例えば１：１であり得る。

本発明の組成物中の酵素のための基質を含む物質の量は、組成物の最大７０％（ｗ／ｖ）、例えば、組成物の５〜７０％（ｗ／ｖ）、１０〜７０％（ｗ／ｖ）、２０〜７０％（ｗ／ｖ）もしくは３０〜７０％（ｗ／ｖ）、または最大６０％（ｗ／ｖ）、例えば、組成物の５〜６０％（ｗ／ｖ）、１０〜６０％（ｗ／ｖ）、２０〜６０％（ｗ／ｖ）もしくは３０〜６０％（ｗ／ｖ）であり得る。

本発明の組成物は、エマルションであり得る。特定の実施形態では、本発明の組成物は、逆ミセルを含むエマルションである。逆ミセルは、第２の相によって形成され得る。

本発明の組成物の一部の実施形態では、酵素、および酵素のための基質を含む物質は、第２の相中に溶解されている。

本発明の特定の実施形態では、第１の相は、パラフィン油である、またはパラフィン油を含む。

本発明の特定の実施形態では、第２の相は、グリセロールである、またはグリセロールを含む。

本発明の特定の実施形態では、乳化剤は、ポリグリセロールポリリシノレート（ＰＧＰＲ）である、またはポリグリセロールポリリシノレート（ＰＧＰＲ）を含む。

本発明の特定の実施形態では、基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素は、精製されたグルコースオキシダーゼである、または精製されたグルコースオキシダーゼを含み、酵素のための基質を含む物質は、ハチミツである、またはハチミツを含む。

本発明の他の特定の実施形態では、基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素は、精製されたグルコースオキシダーゼである、または精製されたグルコースオキシダーゼを含み、酵素のための基質を含む物質は、精製されたグルコースである、または精製されたグルコースを含む。

一部の実施形態では、本発明の組成物は、クリームである。典型的には、クリームとして使用されるエマルションの粘度は、スプレーとして使用されるエマルションの粘度よりも高い。クリームは、組成物中に粘度増加剤、例えば、増粘剤またはゲル化剤（例えば、親水コロイド）を含めることによって形成され得る。

親水コロイドは、水中に分散された場合に粘稠性の分散物および／またはゲルを形成するそれらの能力を特徴とする、親水性の長鎖ポリマー（多糖またはタンパク質）の不均一な群である（SahaおよびBhattacharya、J Food Sci Technol、２０１０年、４７巻（６号）：５８７〜５９７頁）。増粘の程度は、親水コロイドの型および性質によって変動する。一部は、かなり高い濃度で低い粘度を提供するが、ほとんどは１％を下回る濃度で高い粘度を提供する。親水コロイド分散物の粘度は、主に、コンフォメーション的に無秩序なポリマー鎖の非特異的な絡まりから生じる。増稠剤として使用され得る親水コロイド（本明細書で親水コロイド増粘剤と呼ぶ）には、デンプン、加工デンプン、キサンタン、ガラクトマンナン（例えば、グアーガム、ローカストビーンガムおよびタラガム）、アラビアゴムまたはアカシアゴム、カラヤゴム、トラガカントゴム、コンニャクマンナン（maanan）、ならびにセルロース誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースが含まれる。

一部の親水コロイドは、液体媒体中に浸漬された相互接続された分子ネットワークを形成するように架橋されたポリマー分子からなるゲルを形成できる。ゲルのレオロジー的定義は、「損失弾性率」（Ｇ”）よりも大きい「貯蔵弾性率」（Ｇ’）を有する粘弾性の系である（de Vries ２００４年、Gums and stabilizers for the food industry、１２巻、RSC Publ、Oxford、２２〜３０頁）。親水コロイドは、水素結合、疎水性会合、およびカチオン媒介性架橋を介したそれらのポリマー鎖の物理的会合によってゲルを形成する。ゲル化型親水コロイド（または親水コロイドゲル化剤）には、アルギネート、ペクチン、カラギーナン、ゼラチン、ゲラン、寒天、加工デンプン、メチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースが含まれる。

親水コロイドのゲル化は、異なる機構：イオノトロピー性（ionotropic）ゲル化、冷却固化（cold-set）ゲル化および加熱固化（heat-set）ゲル化によって起こり得る（Bureyら、２００８年、Crit Rev Food Sci Nutr ４８巻：３６１〜３７７頁）。イオノトロピー性ゲル化は、負に荷電した多糖の、イオン、典型的にはカチオン媒介性のゲル化プロセスによる、親水コロイド鎖の架橋を介して起こる。イオノトロピー性ゲル化によってゲルを形成し得る親水コロイドの例には、アルギネート、カラギーナンおよびペクチンが含まれる。イオノトロピー性ゲル化は、拡散固化（diffusion setting）または内部ゲル化のいずれかによって実施され得る。冷却固化ゲル化では、親水コロイド粉末が、冷却の際にゲルを形成する分散物を形成するために、温水／沸騰水中に溶解されている。寒天およびゼラチンは、この機構によってゲルを形成する。加熱固化ゲルは、ゲル（例えば、カードラン、コンニャクグルコマンナン、メチルセルロース、デンプンおよび球状タンパク質）への熱の適用を必要とする。

したがって、一部の実施形態では、本発明の組成物は、粘度増加剤、例えば、増粘剤またはゲル化剤、例えば、親水コロイドを含む。特定の実施形態では、親水コロイドは、多糖もしくはタンパク質である、または多糖もしくはタンパク質を含む。親水コロイドは、親水コロイド増粘剤、例えば、デンプン、加工デンプン、キサンタン、ガラクトマンナン（例えば、グアーガム、ローカストビーンガムおよびタラガム）、アラビアゴムもしくはアカシアゴム、カラヤゴム、トラガカントゴム、コンニャクマンナン、またはセルロース誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロースであり得る。

他の実施形態では、親水コロイドは、架橋親水コロイド、例えば、架橋多糖、例えば、架橋アルギネート、ペクチン、カラギーナン、ゼラチン、ゲラン、寒天、アガロース、加工デンプン、またはセルロース誘導体、例えば、メチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロースである、あるいは架橋親水コロイド、例えば、架橋多糖、例えば、架橋アルギネート、ペクチン、カラギーナン、ゼラチン、ゲラン、寒天、アガロース、加工デンプン、またはセルロース誘導体、例えば、メチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む。

親水コロイドは、例えば、上記親水コロイドのゲル化のための方法：イオノトロピー性ゲル化、冷却固化ゲル化および加熱固化ゲル化を含む、任意の適切な方法によって架橋され得る。特定の実施形態では、親水コロイドの分子は、親水コロイドゲル化剤のイオノトロピー性ゲル化の結果として、カチオン（例えば、カルシウムイオン）によって架橋される。本発明の組成物中に存在し得る、カチオンによって架橋された親水コロイドの例には、アルギネート、カラギーナンまたはペクチンが含まれる。

特定の実施形態では、本発明の組成物は、架橋アルギネート、例えば、カルシウムイオンによって架橋されたアルギネートを含む。アルギン酸ナトリウムは冷水中に可溶性であるので、アルギネートは、事前の加熱なしにゲルを形成できる。

架橋アルギネートは、アルギン酸ナトリウムおよびカルシウムイオン（例えば、塩化カルシウムによって提供される）から形成され得る。一部の実施形態では、水が、カルシウムイオンを解離させるための溶媒として使用され得る。しかし、これは、酵素および酵素のための基質を含む物質による過酸化水素の産生を潜在的に活性化し得、組成物の安定性を制限し得るので、カルシウムイオンを解離させるために、非水性溶媒、例えば、エタノールまたは酢酸を使用することが好まれ得る。

本発明者らは、自由水を結合するためにグリセロールが使用され得ることを認識していた。この特性により、酵素および酵素のための基質を含む物質からの過酸化水素の早すぎる放出を防止するのに十分なグリセロールが存在することを条件として、アルギネートを溶解させるために水を使用することができる。

本発明によれば、親油性構成成分、水性構成成分、基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素、および酵素のための基質を含む物質を混合して組成物を形成するステップを含む、本発明の組成物を作製する方法もまた提供される。

本発明によれば、第１の構成成分（または第１の相の液体）、第２の構成成分（または第２の相の液体）、基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素、および酵素のための基質を含む物質を混合して組成物を形成するステップを含み、この第１の構成成分（または第１の相の液体）と第２の構成成分（または第２の相の液体）とは不混和性である、本発明の組成物を作製する方法もまた提供される。

本発明によれば、油、基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素、および酵素のための基質を含む物質を混合して組成物を形成するステップを含む、本発明の組成物を作製する方法もまた提供される。

本発明の方法は、非水性溶媒、例えば、極性有機溶媒を混合するステップもまた含み得る。

本発明の方法は、本発明の組成物を形成するためにレオメーターを使用し得る。レオメーターは、剪断速度および温度の制御を可能にし得る。

酵素および酵素のための基質を含む物質は、第１の混合物を形成するために非水性溶媒中に溶解され得る。乳化剤は、第２の混合物を形成するために、第１の相、親油性相または油に添加され得る。次いで、第１の混合物は、エマルションを形成するために、例えば、レオメーターまたはミキサーを使用して混合しながら、第２の混合物に滴下され得る。

エマルションを形成するために、混合するステップは、１５００ １／ｓ〜２５００ １／ｓの間、例えば、２０００ １／ｓの剪断速度で行われ得る。混合するステップは、３０℃および５０℃、例えば、約３７℃で行われ得る。

本発明によれば、酵素、酵素のための基質を含む物質、第２の相の液体、第１の相の液体、および任意選択で乳化剤を、エマルションを形成するのに十分な時間にわたって高い剪断速度下で混合するステップを含む、本発明の組成物を作製する方法がさらに提供される。

より安定なエマルションは、乳化剤との接触の前に、エマルションの成分が予め混合される場合に形成され得る。したがって、一部の実施形態では、予め混合された成分を乳化剤と接触させ、予め混合された成分および乳化剤を含む混合物を高い剪断速度下で混合する前に、酵素、酵素のための基質を含む物質、第２の相の液体および第１の相の液体が、高い剪断速度下で予め混合される。

一部の実施形態では、溶液を第１の相の液体と接触させる前に、酵素および酵素のための基質を含む物質が、第２の相の液体中に溶解されて溶液を形成する。

高い剪断速度は、１０００ １／ｓ〜４０００ １／ｓであり得る。本発明者らは、本発明の方法を使用して作製されたエマルションが、より高い剪断速度、例えば、＞２０００ １／ｓ〜４０００ １／ｓ、＞２０００ １／ｓ〜３５００ １／ｓ、＞２５００ １／ｓ〜４０００ １／ｓまたは＞２５００ １／ｓ〜３５００ １／ｓを使用して形成された場合に、安定であることを見出した。

酵素、酵素のための基質を含む物質、第２の相の液体、第１の相の液体および乳化剤（存在する場合）の混合は、２０℃〜４０℃、例えば、３５℃〜４０℃の温度で実施され得る。より安定なエマルションは、酵素、酵素のための基質を含む物質、第２の相の液体、第１の相の液体および乳化剤（存在する場合）の混合が、より高い温度、例えば、＞３７．５℃〜４０℃または３８℃〜４０℃で実施される場合に形成され得る。

本発明の方法の一部の実施形態では、酵素、酵素のための基質を含む物質、第２の相の液体、第１の相の液体および乳化剤（存在する場合）は、少なくとも５分間、例えば、５〜３０分間にわたって高い剪断速度下で混合される。

本発明の方法は、例えば、粘度増加剤、例えば、増粘剤またはゲル化剤、例えば、親水コロイドを含めることによって、クリームを形成するために使用され得る。

一部の実施形態では、本発明の方法は、粘度増加剤を、酵素、酵素のための基質を含む物質、第２の相の液体、第１の相の液体および乳化剤（存在する場合）を高い剪断速度下で混合してクリームを形成するステップをさらに含む。

一部の実施形態では、粘度増加剤は、親水コロイド、例えば多糖である、または親水コロイド、例えば多糖を含む。

一部の実施形態では、親水コロイドは、親水コロイド増粘剤、例えば、デンプン、加工デンプン、キサンタン、ガラクトマンナン（例えば、グアーガム、ローカストビーンガムおよびタラガム）、アラビアゴムもしくはアカシアゴム、カラヤゴム、トラガカントゴム、コンニャクマンナン、またはセルロース誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロースである、あるいは親水コロイド増粘剤、例えば、デンプン、加工デンプン、キサンタン、ガラクトマンナン（例えば、グアーガム、ローカストビーンガムおよびタラガム）、アラビアゴムもしくはアカシアゴム、カラヤゴム、トラガカントゴム、コンニャクマンナン、またはセルロース誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む。

一部の実施形態では、親水コロイドは、親水コロイドゲル化剤、例えば、アルギネート、ペクチン、カラギーナン、ゼラチン、ゲラン、寒天、アガロース、加工デンプン、またはセルロース誘導体、例えば、メチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロースである、あるいは親水コロイドゲル化剤、例えば、アルギネート、ペクチン、カラギーナン、ゼラチン、ゲラン、寒天、アガロース、加工デンプン、またはセルロース誘導体、例えば、メチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む。

親水コロイドゲル化剤は、カチオンの存在下でイオノトロピー性ゲル化によってゲルを形成することが可能であり得る。かかる実施形態では、本発明の方法は、カチオンを、親水コロイドゲル化剤、酵素、酵素のための基質を含む物質、第２の相の液体、第１の相の液体および乳化剤（存在する場合）を高い剪断速度下で混合してクリームを形成するステップをさらに含む。

一部の実施形態では、カチオンを混合物と接触させる前に、イオノトロピー性ゲル化によってゲルを形成することが可能な親水コロイドゲル化剤、酵素、酵素のための基質を含む物質、第２の相の液体、第１の相の液体および乳化剤（存在する場合）は混合されて、混合物を形成する。

一部の実施形態では、第１の相の液体との接触の前に、イオノトロピー性ゲル化によってゲルを形成することが可能な親水コロイドゲル化剤は、第２の相の液体、酵素、および酵素のための基質を含む物質と接触させられる。

一部の実施形態では、カチオンは、カルシウムイオンである、またはカルシウムイオンを含む。

特定の実施形態では、カチオンの存在下でイオノトロピー性ゲル化によってゲルを形成することが可能な親水コロイドゲル化剤は、アルギネート、カラギーナンもしくはペクチン、例えばアルギネートである、またはアルギネート、カラギーナンもしくはペクチン、例えばアルギネートを含む。

特定の実施形態では、親水コロイドゲル化剤は水溶液中に提供され、第２の相はグリセロールであり、グリセロールは、組成物中の自由水を結合するのに十分な量で存在し、それによって、酵素のための基質を含む物質からの過酸化水素の放出を酵素が触媒するのを防止する。

一部の実施形態では、予め混合された成分を乳化剤（存在する場合）およびカチオン（例えば、カルシウムイオン）と接触させる前に、イオノトロピー性ゲル化によってゲルを形成することができる親水コロイドゲル化剤（例えば、アルギネート）は、酵素のための基質を含む物質、第２の相の液体および第１の相の液体と高い剪断速度下で予め混合され、予め混合された成分、乳化剤（存在する場合）およびカチオンを含む混合物が、高い剪断速度下で混合される。

乳化剤（存在する場合）は、カチオン（例えば、カルシウムイオン）の前に、予め混合された成分と接触させられ得る。カチオン（例えば、カルシウムイオン）は、滴下され得る。

カチオン（例えば、カルシウムイオン）は、水溶液中に提供され得る。あるいは、カチオンは、非水性溶媒、例えば、エタノールまたは酢酸を使用して、非水性溶液中に提供される。

特定の実施形態では、塩化カルシウムはエタノール中に提供され、アルギン酸ナトリウムは水溶液中に提供され、第２の相はグリセロールであり、グリセロールは、アルギネート溶液中の自由水を結合するのに十分な量で存在し、それによって、酵素のための基質を含む物質からの過酸化水素の放出を酵素が触媒するのを防止する。これは、組成物が水と接触するまで、過酸化水素の早すぎる放出を防止し、それによって、安定な組成物を提供する。

上記のように、本発明の方法は、本発明の組成物を形成するためにレオメーターを使用し得る。レオメーターは、剪断速度および温度の制御を可能にし得る。あるいは、高い剪断速度は、超音波プローブまたはホモジナイザーの使用によって提供され得る。

本発明によれば、本発明の組成物と、薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤とを含む医薬組成物もまた提供される。

本発明によれば、医薬としての使用のための、本発明の組成物もまた提供される。

本発明によれば、微生物感染症の予防または処置における使用のための、本発明の組成物がさらに提供される。

予防または処置は、好ましくは、組成物の局所投与による。予防または処置は、対象の気道への投与により得る。予防または処置は、体腔への投与により得る。予防または処置は、対象への内部投与により得る。

本発明によれば、本発明の組成物の有効量を、かかる処置を必要とする対象に投与するステップを含む、微生物感染症の予防または処置の方法もまた提供される。

本発明は、微生物感染症の予防または処置のための医薬の製造における、本発明の組成物の使用もまた提供する。

微生物感染症は、ウイルス感染症、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染症であり得る。他の実施形態では、微生物感染症は、真菌感染症または細菌感染症であり得る。

微生物感染症は、鼻の感染症、例えば、副鼻腔炎もしくは鼻副鼻腔炎；気道感染症、例えば、上気道感染症（例えば、扁桃炎、喉頭炎または副鼻腔炎）もしくは下気道感染症（例えば、気管支炎、肺炎、細気管支炎または結核）；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、気管支拡張症、喘息と関連する感染症、またはＨＩＶ／ＡＩＤＳ関連呼吸器感染症、または終末期疾患と関連する呼吸器感染症であり得る。

本発明の組成物は、バイオフィルムまたはバイオフィルムを形成することが可能な微生物を含む微生物感染症を予防または処置するために使用され得る。バイオフィルムは、バイオフィルム形成性の細菌、真菌またはウイルスを含み得る。バイオフィルムを形成することが可能な微生物は、細菌、真菌またはウイルスであり得る。

本発明の組成物は、手術前に患者の身体の部分を消毒するために、抗微生物性ワイプにおいて、消毒において、例えば、病院での消毒において、または抗微生物性スプレーとして、例えば、局所の予防的抗微生物性スプレーとして使用され得る。

本発明の組成物は、抗微生物剤を含み得る。例えば、組成物が、酵素による基質の変換のための条件下で酵素を水溶液中の物質と接触させ、次いで、組成物を乾燥させて、酵素が基質を変換するのに不十分な自由水が存在するレベルまでその含水量を低減させることによって形成される場合、過酸化水素が存在してもよい。しかし、好ましくは、組成物は、いずれの検出可能な過酸化水素も含まない。かかる組成物は、例えば、酵素が基質を変換するのに十分な自由水の非存在下で酵素を基質と接触させることによって形成され得る。本発明の貯蔵安定性組成物中に存在し得る他の抗微生物剤の例には、抗生物質、抗ウイルス剤または抗真菌剤が含まれる。

組成物は、医療グレードもしくは医療デバイスグレードの組成物、または医薬品グレードの組成物であり得る。

組成物の各構成成分は、天然物質であり得る（即ち、各構成成分は、天然供給源に由来するまたは天然供給源から精製される）。天然成分のみを含有する、本発明に従う使用のための組成物は、薬物ベースの抗微生物製剤に対する魅力的な代替法を提供する。

有利なことには、物質はハチミツである。ハチミツは、医療グレードまたは医療デバイスグレードのハチミツであり得る。一部の実施形態では、ハチミツは、ハチミツ中に元々存在しているカタラーゼ活性を除去または不活性化するために処理されたハチミツである。本発明の実施形態によれば、物質は低温殺菌されたハチミツであり、酵素はグルコースオキシダーゼである。一部の実施形態によれば、物質は、医療グレードまたは医療デバイスグレードのハチミツであり、酵素は、医療グレードまたは医療デバイスグレードの酵素、適切には、グルコースオキシダーゼである。

ハチミツは、花由来の花蜜を使用してミツバチによって作製された天然産物である。ハチミツは、糖の飽和溶液または過飽和溶液である。ハチミツは、Ｃｏｄｅｘ Ａｌｉｍｅｎｔａｒｉｕｓ国際食品基準において、「ハチが収集し、ハチ自身の特定の物質と合わせることによって変質され、預けられ、脱水され、貯蔵され、蜂巣の中に置かれて熟れ成熟する、植物の花蜜から、または植物の生きた部分の分泌物もしくは植物の生きた部分上の植物吸汁昆虫の排泄物からミツバチによって生成された天然の甘味物質」と定義されている（Revised Codex Standard for Honey、２００１年）。

花蜜は、典型的には、およそ１４％の単糖（ｗ／ｗ）、１％のフェノール化合物および８５％の水を含む。フェノール化合物は、ハチミツにその味、芳香および色を与える。巣箱の温かい条件、典型的には３６℃では、花蜜は、非常に急速に発酵する。これを防止するために、花蜜は、採食ハチの唾液腺および下咽頭腺からの酵素を含有する分泌物と混合される。巣箱において、花蜜は、ハチからハチへと渡り、巣箱の巣室中で貯蔵される前に、より多くの分泌物が添加される。存在する酵素の量は、ハチの齢、食餌および生理的段階（ハチが、その腺がより多くの消化酵素を産生する採食者である場合）、コロニーの強度、巣箱の温度、ならびに花蜜の流れおよびその糖含量によって変動する。

ハチによって花蜜に添加される酵素には、デンプンのデキストリンおよび糖への変換を触媒するジアスターゼ、スクロースのフルクトースおよびグルコースへの変換を触媒するインベルターゼ、ならびにグルコースの過酸化水素およびグルコン酸への変換を触媒するグルコースオキシダーゼが含まれる。低用量の過酸化水素は、花蜜を急速に発酵させる酵母の増殖を防止する。ハチが花蜜を徐々に乾燥させてハチミツを形成するにつれて、グルコン酸はハチミツを酸性（ｐＨ３．５とｐＨ４．５との間）にする。水は、ハチミツ中の糖分子に効果的に捕捉され、さらなる化学反応に利用可能でない。ハチミツ中の「自由」水の量は、水分活性（ａ_ｗ）として測定される。ハチミツにおいて見出されるａ_ｗの範囲は、０．５６２および０．５８９の平均値で、０．４７〜０．７０であると報告されている（RCIEGG, M；BLANC, B、１９８１年、The water activity of honey and related sugar solutions. Lebensmittel-Wissenschaft und Technologie、１４巻：１〜６頁）。熟れたハチミツのａ_ｗは、任意の種の増殖を支持するには低すぎ、含水量が１７．１％を下回る場合には発酵は生じない（Molan, P. C.（１９９２年）. The antibacterial activity of honey: 1. The nature of the antibacterial activity. Bee World、７３巻（１号）、５〜２８頁）。ハチミツの酸性度、および自由水の欠如は、発酵のさらなるリスクを防止し、グルコースオキシダーゼの働きを停止させる。ハチミツは、花蜜に起源する多様な量のカタラーゼもまた含有する。

花のハチミツの典型的な化学的組成は以下である：

さらに、ハチミツの植物学的起源を同定するために使用され得る微量の花粉、ならびに酵素インベルターゼ、ジアスターゼ、カタラーゼおよびグルコースオキシダーゼが存在する。植物化学的構成成分もまた存在する。これは変動するが、典型的には、ハチミツの供給源に依存して、最大約１％である。

希釈されると、天然ハチミツ中に存在するグルコースオキシダーゼは、希釈されたハチミツ中のグルコース基質を変換して過酸化水素を放出できる。しかし、ハチミツの内容物（特に、グルコースオキシダーゼ活性、グルコース、およびカタラーゼ活性の内容物）における変動性は、異なる供給源由来のハチミツ、または同じ供給源由来のハチミツの異なる収穫が、それらの抗微生物有効性において非常に可変性であり得ることを意味する。

本発明の実施形態によれば、ハチミツは、低温殺菌され得る。ハチミツの低温殺菌は、ハチミツ中に存在するカタラーゼおよびグルコースオキシダーゼ活性を不活性化する。任意選択で、低温殺菌されたハチミツは、収穫後のハチミツ中に存在し得る任意の粒子（例えば、ワックス粒子およびハチの羽）を除去するために濾過され得る。本発明の貯蔵安定性組成物を形成するために、グルコースオキシダーゼは、添加されたグルコースオキシダーゼを不活性化せず、ハチミツがグルコースオキシダーゼとの混合を促進するのに十分に液状のままである温度（適切には、３５〜４０℃）にそれが冷却されたところで、低温殺菌されたハチミツと接触させられる。

ハチミツは、カタラーゼ活性の熱不活性化に十分な温度で低温殺菌され得る。適切な最低温度は、６０℃〜８０℃である。この温度は、好ましくは少なくとも２分間にわたって維持すべきである。

ハチミツを加熱することの副産物は、ハチミツにおける加熱および貯蔵変化の指標として使用されるＨＭＦ（ヒドロキシメチルフルフルアルデヒド）の形成であるので、加熱プロセスの制御は重要であり得る。ＨＭＦは、酸の存在下でのフルクトースの分解によって形成される。加熱は、この反応のスピードを増加させる。スピードの増加は、熱の増加と共に指数関数的である。ハチミツが通常の巣箱の周囲温度に近い４０℃を超えて度数が上がる毎に、ＨＭＦは迅速に増加する。ＨＭＦは有害産物ではない。ジャム、モラセス、糖蜜などは、ハチミツのＨＭＦの１０〜１００倍のＨＭＦレベルを有し得る。しかし、ＨＭＦレベルは、ハチミツの分解の指標として使用され、Ｃｏｄｅｘ Ａｌｉｍｅｎｔａｒｉｕｓ Ｓｔａｎｄａｒｄの下では、４０ｍｇ／ｌが、卓上ハチミツについてのＥＵでの最大の許容されるレベルである。

ＨＭＦの蓄積を防止するために、ハチミツは、カタラーゼを不活性化するための温度レベルまで迅速に昇温され、次いで、ハチミツは、熱交換機構を使用して、４０℃と４５℃との間の最大まで、温度が急速に低下されることが好ましい。

この好ましい実施形態のプロセスの間には水は添加されず、したがって、得られた組成物は、グルコースオキシダーゼが存在するグルコースを変換して過酸化水素を放出するのに十分な自由水を含まない。貯蔵安定性組成物は、低温殺菌されたハチミツ、および添加されたグルコースオキシダーゼを含む。検出可能な過酸化水素は存在しない。組成物は、少なくとも数日間にわたって周囲温度で貯蔵できる。

本発明の他の実施形態では、ハチミツは、低温殺菌されていなくてもよい。

一部の好ましい実施形態によれば、ハチミツ（低温殺菌されたまたは低温殺菌されていない）は、クリーム状ハチミツである。クリーム状ハチミツは、結晶化を制御するために加工されたハチミツである。クリーム状ハチミツは、多数の小さい結晶を含有し、加工されていないハチミツ中で生じ得るより大きい結晶の形成を防止する。クリーム状ハチミツを産生するための方法は、米国特許第１，９８７，８９３号に記載されている。このプロセスでは、生ハチミツは、最初に低温殺菌され、次いで、以前に加工されたクリーム状ハチミツがこの低温殺菌されたハチミツに添加されて、１０％のクリーム状ハチミツおよび９０％の低温殺菌されたハチミツの混合物を産生する。次いで、この混合物は、１４℃の制御された温度に置かれる。この方法は、約１週間でクリーム状ハチミツのバッチを産生する。シードバッチは、通常のハチミツを結晶化させ、それらの結晶を所望のサイズに破砕することによって作製され得る。大規模生産者は、混合物を１４℃に維持しつつ、ハチミツ混合物を撹拌するためにへらを使用することによって、このプロセスを改変している。クリーム状にする代替的な方法では、低温殺菌ステップは省いてもよく、その代わり、ハチミツは、３７℃まで緩徐に温められる。

本発明の他の実施形態では、ハチミツ（低温殺菌されたまたは低温殺菌されていない）は、クリーム状にされていないハチミツである。例えば、ハチミツは、低温殺菌された、クリーム状にされていないハチミツであり得る。

グルコースオキシダーゼは、医療適用のための医療グレードまたは医療デバイスグレードの、精製された天然グルコースオキシダーゼ調製物であり得る。グルコースオキシダーゼの活性は、組成物の希釈後の所望の速度の過酸化水素の産生に依存して選択され得る。いくつかのグルコースオキシダーゼ調製物が市販されている（グルコースオキシダーゼは、参照記号ＣＡＳ：９００１−３７−０によって同定される）。遺伝子改変されていない生物由来のグルコースオキシダーゼについての一般的な微生物供給源には、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ａｍａｇａｓａｋｉｅｎｓｅ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｖａｒｉａｂｉｌｅ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｎｏｔａｔｕｍの選択された株が含まれる。ＧＭＯ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ由来の医療デバイスグレードのグルコースオキシダーゼは、Ｂｉｏｚｙｍｅ ＵＫから活性２４０ｉｕ／ｍｇで入手可能である。Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ由来の食品規格のグルコースオキシダーゼは、ＢＩＯ−ＣＡＴ ＩＮＣから活性１５，０００単位／ｇで入手可能である。遺伝子改変されていないグルコースオキシダーゼは、ＢＩＯ−ＣＡＴ ＩＮＣから活性１２，０００／ｇで入手可能である。Ａｐｓｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ由来のグルコースオキシダーゼ（ＧＯ３Ｂ２）は、ＢＢＩ Ｅｎｚｙｍｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄから活性３６０単位／ｍｇで入手可能である。夾雑物：０．０５％以下のアルファアミラーゼ、０．０５％以下のサッカラーゼ、０．０５％以下のマルターゼおよび２０００以上のＧＯ／Ｃａｔ。

酵素活性（例えば、グルコースオキシダーゼ活性）は、例えば、１〜４００ＩＵ／ｍｇ、または１〜３００ＩＵ／ｍｇ、例えば２５０〜２８０ＩＵ／ｍｇの範囲であり得る。使用される酵素の量は、組成物の所望の使用、物質中に存在する任意のカタラーゼ活性の量、物質中に存在する基質の量、所望のレベルの過酸化水素放出、および過酸化水素放出のための所望の長さの時間を含むいくつかの因子に依存する可能性が高い。酵素の適切な量は、異なる量の酵素について過酸化水素放出の程度を決定するために、必要に応じてウェル拡散アッセイを使用して、当業者によって容易に決定され得る。酵素（例えば、グルコースオキシダーゼ）の適切な量は、組成物の０．０００１％〜０．５％ｗ／ｗであり得る。使用される酵素の量は、選択されたフェノール標準（例えば、１０％、２０％ならびに３０％のフェノール標準）と等価な抗微生物活性を生じさせるための組成物を産生するために選択され得る。

本発明の組成物、特に、物質がハチミツ（例えば、低温殺菌されていないハチミツ）であり、酵素が、ハチミツ中のＤ−グルコースを変換して過酸化水素を放出することが可能なグルコースオキシダーゼである組成物は、組成物１グラム当たり、少なくとも１単位の、好ましくは最大１５００単位のグルコースオキシダーゼを含み得る。グルコースオキシダーゼは、物質中に天然に存在し得る任意のグルコースオキシダーゼ活性に対して追加的である（即ち、ヒト介入の結果として添加される）。

「単位」は、ｐＨ７．０で２５℃で１分当たり１マイクロモルのグルコース（または他の酵素基質）の酸化を引き起こす酵素の量として本明細書で定義される。

本出願人は、本発明の組成物の抗微生物効力が、組成物中に存在するグルコースオキシダーゼ活性の量を単純に増加させることによって増加され得ることを見出した。

本発明の一部の実施形態では、本発明の組成物は、組成物１グラム当たり、１５単位超、例えば、少なくとも３０単位、少なくとも５０単位または少なくとも１００単位の、適切には６８５単位未満、例えば、１００〜５００単位のグルコースオキシダーゼを含む。かかる組成物は、組成物１グラム当たり最大１５単位のグルコースオキシダーゼを含む組成物よりも優れた抗微生物特性を有することが見出された。特に、かかる組成物は、ＭＳＳＡ、ＭＲＳＡ、Ａ群およびＢ群の連鎖球菌、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅ．ｃｏｌｉ ＥＳＢＬ、Ｓｅｒｒ．ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ Ａｍｐ Ｃ、Ｋｌｅｂ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉならびにＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓを含む、広範な微生物に対する増加した効力を有する。

本発明の他の実施形態では、本発明の組成物は、組成物１グラム当たり、少なくとも５００単位、例えば、５００〜１０００単位または６８５〜１０００単位のグルコースオキシダーゼを含む。かかる組成物は、さらにより優れた抗微生物特性を有することが見出された。特に、かかる組成物は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、ＭＳＳＡ、ＭＲＳＡ、Ａ群およびＢ群の連鎖球菌、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅ．ｃｏｌｉ ＥＳＢＬ、Ｓｅｒｒ．ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ Ａｍｐ Ｃ、Ｋｌｅｂ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉならびにＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓを含む、広範な微生物に対するさらに増加した効力を有する。

本発明の組成物は、過酸化水素によって処置され得る任意の微生物感染症を処置するために使用され得る。例には、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、抗酸細菌、ウイルス、酵母、寄生性または病原性の微生物または真菌によって引き起こされる感染症が含まれる。特に、以下の微生物によって引き起こされる感染症が処置され得る：Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｓ、ベータ溶血性連鎖球菌Ａ群またはＢ群、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｃｏｌｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、メチシリン感受性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ、ＰｌａｓｍｏｄｉｕｍおよびＴｏｘｏｐｌａｓｍａ。

低温殺菌プロセスは、ハチミツ中に存在する任意の酵素活性を不活性化し、したがって、異なる供給源由来の低温殺菌されたハチミツ間、または同じ供給源由来のハチミツの異なる収穫間で、カタラーゼおよび基質変換活性における変動性は存在しない。基質変換活性の量は、規定された量および活性の酵素を有する、精製されたグルコースオキシダーゼ調製物の添加によって制御され得る。したがって、ハチミツの異なる型間および収穫間での抗微生物特性における固有の変動性は、かなり低減され、低い抗微生物効力を有するハチミツの抗微生物特性は、改善される。

本発明の組成物は、対象またはヘルスケア提供者によって決定される適切な頻度で投与され得る。適切には、本発明の組成物は、少なくとも数日毎、例えば、毎週投与され得るが、好ましくは、１日数回、毎日、または１日おきに投与され得る。

投与される本発明の組成物の量は、組成物の抗微生物特性の強度、ならびに処置される対象の年齢および状態などの多くの因子に依存する。しかし、多くの適用について、各投与は、０．１〜１００ｇ、０．５〜１００ｇ、１〜１００ｇ、２〜１００ｇ、５〜１００ｇ、０．１〜１０ｇ、０．５〜１０ｇまたは１〜１０ｇの本発明の組成物を含むと予測される。

本発明の好ましい実施形態によれば、本発明の組成物は、無菌である。

本発明の組成物は、任意の適切な手段によって無菌化され得る。本出願人は、グルコースオキシダーゼを含む組成物が、ガンマ線照射への曝露による無菌化後に、グルコースオキシダーゼ活性（およびしたがって、希釈の際に過酸化水素を放出する能力）を保持することを見出した。ガンマ線照射の適切なレベルは、１０〜７０ｋＧｙ、好ましくは２５〜７０ｋＧｙ、より好ましくは３５〜７０ｋＧｙである。

本発明の組成物は、好ましくは、オゾン化によって無菌化されておらず、オゾンも、オゾン化による無菌化に供されたいずれの構成成分も含まない。特に、本発明の組成物は、オゾン処理ハチミツもオゾン化油も含むべきではない。

光への曝露を避けて貯蔵される本発明の無菌化された組成物は、少なくとも６カ月間にわたって安定性を保持すると予測される。例えば、かかる組成物は、高密度ポリエチレン／低密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ／ＬＤＰＥ）チューブ中またはポリエステル−アルミニウム−ポリエチレン（ＰＥＴ／ＡＩ／ＰＥ）サシェ中に包装され得る。

本発明の組成物は、好ましくは、医療グレードまたは医療デバイスグレードの組成物である。好ましくは、純化されていない天然物質は、ハチミツ、適切には、医療グレードまたは医療デバイスグレードのハチミツである。

好ましくは、本発明の組成物は、クリーム状ハチミツ、より好ましくは、クリーム状の低温殺菌されていないハチミツを含む。大きい結晶の存在または数は、クリーム状にするプロセスによって最小化されているので、かかる組成物は、容易に局所投与され得る。

ハチミツを含む本発明の組成物について、組成物が無菌化される場合、組成物において低温殺菌されたハチミツを使用する必要がない場合があることが理解される。その代わり、低温殺菌されていないハチミツ（好ましくはクリーム状ハチミツ）または他の純化されていない天然物質を使用することが好ましい場合がある。一部の実施形態では、本発明の組成物は、低温殺菌されていないハチミツおよび添加された精製されたグルコースオキシダーゼを含む。

したがって、本発明の貯蔵安定性組成物は、低温殺菌されていないハチミツ、および十分な自由水の存在下でハチミツ中のＤ−グルコースを変換して過酸化水素を放出できる添加された精製されたグルコースオキシダーゼを含み得、この組成物は、グルコースオキシダーゼがＤ−グルコースを変換するのに十分な自由水を含まない。

かかる組成物は、組成物１グラム当たり、少なくとも１単位、例えば、最大１５００単位のグルコースオキシダーゼを含み得る。適切には、かかる組成物は、組成物１グラム当たり１５単位超のグルコースオキシダーゼ、例えば、組成物１グラム当たり少なくとも１００単位もしくは１００〜５００単位のグルコースオキシダーゼ、または組成物１グラム当たり少なくとも５００単位もしくは５００〜１０００単位のグルコースオキシダーゼを含む。

かかる組成物のハチミツは、クリーム状の低温殺菌されていないハチミツを含み得る。

本発明の組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤を含む医薬組成物であり得る。

本発明の組成物は、ヒトまたは動物対象への投与に適切な形態であり得る。適切な形態には、局所投与のために適応された形態が含まれる。局所投与に適切な形態には、局所軟膏、クリーム、ローション、油、リニメント剤、液体、ゲルまたは溶けるストリップが含まれる。貯蔵安定性組成物が使用される場合、これは、投与の部位に存在する液体によって（例えば、唾液によって）希釈されて、投与部位における過酸化水素の放出をもたらし得る。

本発明の組成物は、抗微生物活性を生じさせる能力を提供することが望まれる場合、少なくとも１種の適切な抗微生物性もしくは免疫賦活性の構成成分、賦形剤もしくはアジュバント、または任意の他の適切な構成成分と共に存在し得る。しかし、好ましくは、組成物は、いずれの抗生物質も含まない。

本発明の組成物は、「Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ」を含み得る。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、添加された精製されたグルコースオキシダーゼを含む、低温殺菌されていないハチミツである。異なる抗微生物効力を有する、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの３つの異なる調製物が作製されている：

ＳＨ１ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ：０．１％（ｗ／ｗ）の添加されたグルコースオキシダーゼを含む、低温殺菌されていないハチミツ。使用した酵素は、ＢＩＯ−ＣＡＴ ＩＮＣからの活性１５，０００単位／ｇのＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ由来の食品グレードのグルコースオキシダーゼであった。ＳＨ１ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの密封サシェに、１１／６〜１４．２ｋＧｙの標的線量でガンマ線照射した。

ＳＨ２ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ：０．１％（ｗ／ｗ）の添加されたグルコースオキシダーゼを含む、低温殺菌されていないハチミツ。使用した酵素は、ＢＢＩ Ｅｎｚｙｍｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄからの活性２７４単位／ｍｇのＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ由来のグルコースオキシダーゼ（ＧＯ３Ｂ２）であった。単位の定義：ｐＨ７．０で２５℃で１分当たり１マイクロモルのグルコースの酸化を引き起こす酵素の量。夾雑物：０．０５％以下のアルファアミラーゼ、０．０５％以下のサッカラーゼ、０．０５％以下のマルターゼおよび２０００以上のＧＯ／Ｃａｔ。

ＳＨ３ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ：０．２５％（ｗ／ｗ）の添加されたグルコースオキシダーゼを含む、低温殺菌されていないハチミツ。使用した酵素は、ＢＢＩ Ｅｎｚｙｍｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄからの活性２７４単位／ｍｇのグルコースオキシダーゼ（ＧＯ３Ｂ２）であった。

したがって、ＳＨ１ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、組成物１グラム当たり１５単位のグルコースオキシダーゼを含有し、ＳＨ２ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、組成物１グラム当たり２７４単位のグルコースオキシダーゼを含有し、ＳＨ３ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、組成物１グラム当たり６８５単位のグルコースオキシダーゼを含有する。

一部の実施形態では、本発明の組成物（特に、ハチミツおよび添加されたグルコースオキシダーゼを含む本発明の組成物−以下で「活性ハチミツ」と呼ぶ）は、以下ではない、または以下を含まない：
ポマード
活性ハチミツ ２５％
白色ワセリン
軽質液体パラフィン
タルク
カオリン
酸化亜鉛

一部の実施形態では、本発明の組成物（特に、ハチミツおよび添加されたグルコースオキシダーゼを含む本発明の組成物−以下で「活性ハチミツ」と呼ぶ）は、以下ではない、または以下を含まない：
リップバーム
ワセリン５５９４ ５０％
微結晶性ワックス ９％
シクロメチコン Ｄ５ ３１％
活性ハチミツ １０％

一部の実施形態では、本発明の組成物（特に、ハチミツおよび添加されたグルコースオキシダーゼを含む本発明の組成物−以下で「活性ハチミツ」と呼ぶ）は、以下ではない、または以下を含まない：
クリーム
ハチミツ １５％
カルボマー ２．６３％
ジメチコン ０．１３％
スルホコハク酸ラウリル二ナトリウム ０．０５％
エデト酸二ナトリウム ０．１３％
グリセロール ５．２６％
コロイド状ケイ酸（Silica Colloidal Hydrated） ０．３３％
ポロクサマー ０．２６％
水酸化ナトリウム ０．４１％
精製水 ８５．０３％

一部の実施形態では、本発明の組成物は、以下を含まない：

Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ ＳＨ１を含むクリーム製剤を、以下の成分を用いて作製した：
ミツロウ（親油性相のため）；
ダイズレシチン（乳化剤として）；
水；および
ＳＨ１ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ。

一部の実施形態では、本発明の組成物は、以下の成分を含むエマルションを含まない：
１０ｍｌのグリセロール中に溶解された１０ｇのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ；
１０ｍｌのパラフィン油；
１ｍｌのポリグリセロールポリリシノレート（ＰＧＰＲ）。

一部の実施形態では、本発明の方法は、実施例７に列挙されるような、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙエマルションの調製のための以下の方法を含まない：
１０ｇのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙを、１０ｍｌのグリセロール中に溶解させた。次いで、１０ｍｌのパラフィン油を、Ｊａｃｋｅｔ Ｐｅｌｔｉｅｒおよび羽根型ジオメトリーが取り付けられたレオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＡＲ−Ｇ２）に添加した。次いで、１ｍｌのＰＧＰＲ（ポリグリセロールポリリシノレート）を添加した。次いで、レオメーターを、以下の条件下で開始させた；剪断速度２０００ １／ｓ、温度設定３７．５℃。２分後、１０ｍｌのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ−グリセロール溶液を滴下した。合計で１０分間が経過したところで、エマルションをＪａｃｋｅｔ Ｐｅｌｔｉｅｒから容器に移した。

ここで本発明の実施形態を、添付の図面を参照してあくまで例として記載する。

図１は、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの細胞毒活性についてのアッセイ結果を示す。 図２Ａは、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ ＳＨ１、ＳＨ２、およびＳＨ３についての様々な過酸化水素産生速度を示す。 図２Ｂは、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ ＳＨ１、ＳＨ２、およびＳＨ３のフェノール活性と最大過酸化水素活性との関係を示す。 図３は、様々な試験生物におけるＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ１（Ｓ１）、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ３（Ｓ３）、およびＭｅｄｉｈｏｎｅｙ（ＭＨ）の時間死滅曲線を示す：（ａ）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ；（ｂ）メチシリン抵抗性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）；（ｃ）Ｅ．ｃｏｌｉ；（ｄ）バンコマイシン抵抗性腸球菌（ＶＲＥ）；（ｅ）Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；（ｆ）Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ；（ｇ）Ｅ．ｃｏｌｉ ＥＳＢＬ；（ｈ）Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ。 図３は、様々な試験生物におけるＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ１（Ｓ１）、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ３（Ｓ３）、およびＭｅｄｉｈｏｎｅｙ（ＭＨ）の時間死滅曲線を示す：（ａ）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ；（ｂ）メチシリン抵抗性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）；（ｃ）Ｅ．ｃｏｌｉ；（ｄ）バンコマイシン抵抗性腸球菌（ＶＲＥ）；（ｅ）Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；（ｆ）Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ；（ｇ）Ｅ．ｃｏｌｉ ＥＳＢＬ；（ｈ）Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ。 図３は、様々な試験生物におけるＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ１（Ｓ１）、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ３（Ｓ３）、およびＭｅｄｉｈｏｎｅｙ（ＭＨ）の時間死滅曲線を示す：（ａ）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ；（ｂ）メチシリン抵抗性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）；（ｃ）Ｅ．ｃｏｌｉ；（ｄ）バンコマイシン抵抗性腸球菌（ＶＲＥ）；（ｅ）Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；（ｆ）Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ；（ｇ）Ｅ．ｃｏｌｉ ＥＳＢＬ；（ｈ）Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ。 図４は、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを含む、エマルション中の逆ミセルの光学顕微鏡画像を示す。

（実施例１）
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙクリーム製剤
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ ＳＨ１を含むクリーム製剤を、以下の成分を用いて作製した：
ミツロウ（親油性相用）；
ダイズレシチン（乳化剤として）；
水；および
ＳＨ１ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ。

クリームは、水と接触した際に過酸化水素を生じる能力で判断すると、何年間も安定なままである。

（実施例２）
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの抗ウイルス活性
ＳＨ１またはＳＨ２ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを、細胞培養培地で単純ヘルペスウイルス１型または２型（ＨＳＶ１またはＨＳＶ２）と混合し（細胞培養培地におけるハチミツおよびウイルスの５０％混合物）、次いで、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、混合物から希釈系列を作製し、希釈液をＶｅｒｏ細胞にプレーティングした。ＳＨ１ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、ウイルスの力価を１ｌｏｇ低下させた。ＳＨ２ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２の両方に対して殺ウイルス性であった（力価６ｌｏｇ超降下）。実験は繰り返し可能であった。

（実施例３）
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの抗ウイルス活性
ＳＨ１またはＳＨ２ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）と混合し（ハチミツ５０μｇおよびウイルス５０μｌ）、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、混合物から希釈系列（１０^−２、１０^−３、１０^−４、１０^−５）を作製し、希釈液をプラーク減少法に使用した。ハチミツ無し、または対照ハチミツによる対照も実施した。各希釈度について、形成されたウイルスのプラーク数を記録した。結果を以下の表に示す。

結果は、両実験において、ＳＨ１およびＳＨ２ ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙがＨＳＶに対し強力に殺ウイルス性であったことを示している。

（実施例４）
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの細胞毒活性
ＳＨ１またはＳＨ２ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（１０^−２、１０^−３、１０^−４、１０^−５に希釈したハチミツ５０μｇ）を、細胞において２日間インキュベートした。生細胞数および細胞の総数を計数した（パーセンテージ生存率＝生細胞／総数ｘ１００）。結果を以下の表および図１に示す。

結果は、ＳＨ１ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙが１０^−２希釈では細胞毒性であり、１０^−３および１０^−４希釈では細胞増殖抑制性であったこと、ならびにＳＨ２ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙが１０^−２、１０^−３および１０^−４希釈で細胞増殖抑制性であったことを示している。ＳＨ１およびＳＨ２ Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、１０^−５希釈では細胞毒性でも細胞増殖抑制性でもなかった。

実施例３および４の結果から、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙが、殺ウイルス性ではあるが細胞毒性または細胞増殖抑制性ではない用量で投与可能であることが結論付けられる。

（実施例５）
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの抗微生物活性
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ＳＨ）、およびＡｐｉｓ ｍｅｌｌｉｆｅｒａ（ミツバチ）が作る２種のプロトタイプ改変ハチミツの、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＮＣＩＭＢ９５１８）に対する抗微生物活性について試験した。本発明者らは、試料からの過酸化水素産生レベルを変化させる能力についても、いくつかの改変型Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを調べた。

方法：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ標準株に対するバイオアッセイ方法を使用して、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ＳＨ）を、２種の改変ハチミツ、プロトタイプ１（ＰＴ１）およびプロトタイプ２（ＰＴ２）と比較した。さらなる研究により、これらの調製物からの過酸化水素生成速度について調査した。

結果：Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの抗微生物活性は、大部分が過酸化水素の産生によるものであることが示された。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの改変により、２種のより強力なハチミツプロトタイプでは、２〜３倍の間の抗細菌活性、および最大１０倍の過酸化物活性が生じることが示された。

結論：Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは良好な抗微生物活性を示す。２種のさらなるハチミツプロトタイプは、実証された過酸化物活性の増大により増強されうる抗微生物活性を有することが示された。

方法
１．バイオアッセイ方法によるハチミツ活性の決定
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（Ｓ）、ならびに２種の改変ハチミツ、プロトタイプ１（ＰＴ１）およびプロトタイプ２（ＰＴ２）の抗細菌活性を、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＮＣＩＭＢ９５１８）を使用して測定し、相当するパーセンテージフェノールで表した。試験を行い、３日繰り返した試料反復３つの平均値を算出した。

アッセイ方法。使用した寒天ウェル拡散法は、Microbiology Standard Methods Manual for the New Zealand Dairy Industry（１９８２年）［Bee Products Standards Council: Proposed standard for measuring the non-peroxide activity of honey. In. New Zealand：Bee Products Standards Council;１９８２年.］に記載されている、阻止物質用のパンチプレートアッセイから考案された。

接種材料調製。一晩培養物を、ブランクとしての滅菌ニュートリエントブロス、および希釈剤および経路１ｃｍのキュベットを使用して５４０ｎｍで測定すると吸光度０．５となるように調節した。

アッセイプレート調製。吸光度０．５に調節した体積１００μｌの培養物を使用してニュートリエント寒天１５０ｍｌに播種し、アッセイプレートを作製した。寒天を回転させて完全に混合し、水平面に配置した大型のペトリ皿に注いだ。寒天が固まるとすぐに、翌日使用する前に一晩、プレートを上下逆に配置した。アッセイのため、これらの播種済みプレートを４℃から取り出し、室温で１５分間静置させた後、寒天表面に直径７．０ｍｍのウェルをくり抜いた。試験物質２５０μｌ（試料または標準物質）を各ウェル中に配置した。

カタラーゼ溶液。ウシ肝臓由来のカタラーゼ（Ｓｉｇｍａ Ｃ９３２２、２９００ユニット／ｍｇ）の２００ｍｇ／ｍｌ蒸留水溶液を、毎日新しく調製した。

試料調製。試料４ｇを一般的な蒸留水４ｍｌに添加して一次試料溶液を調製し、混合を促進するため３７℃に３０分間配置した。二次溶液を調製するため、総活性試験用には一次試料溶液２ｍｌを一般的な蒸留水２ｍｌに添加して混合し、非過酸化物活性用には一次試料溶液２ｍｌをカタラーゼ溶液２ｍｌに添加して混合した。

フェノール標準物質の調製。フェノールを水に溶解させることにより、標準物質（ｗ／ｖ）１０％、３０％、５０％フェノールを調製した。使用前にフェノール標準物質を室温の暗所に運び、試験ウェルに添加する前に完全に混合した。３連で試験するため各標準物質を３つのウェルに配置した。標準物質を使用期限１カ月で４℃に保った。

試料および標準物質のアプライ。試料および標準物質は全て、３つのウェルそれぞれに２５０μｌ添加することにより３連で試験した。

プレートのインキュベーション。試料をアプライした後、プレートを３７℃で約１８時間インキュベートした。ウェルの直径（７．０ｍｍ）を含めた阻止円の直径を記録した。

試料の抗細菌活性の算出。各フェノール標準物質の周囲の透明円の平均直径を算出して二乗した。透明円の平均直径の二乗に対する％フェノールの標準物質グラフをプロットした。線形回帰を使用して最も適合する直線を得、この直線の方程式を使用して透明円の直径の平均測定値の二乗から各希釈ハチミツ試料の活性を算出した。希釈してあることを考慮して（Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの密度を１．３５ｇ／ｍｌであるとみなして）、この数値に係数４．６９を乗じ、次いで試料の活性を相当するフェノール濃度（％ｗ／ｖ）で表した。

総活性：過酸化水素（Ｈ_２Ｏ_２）による活性も含めた全ての活性。

非過酸化物活性：カタラーゼ酵素で試料を処理することにより、Ｈ_２Ｏ_２が除去される。

２．Ｈ_２Ｏ_２法によるハチミツ活性の決定
Ｍｅｒｃｋｏｑｕａｎｔ（登録商標）１．１００１１．および１．１００８１を使用して活性を測定した。

過酸化物試験キット。濃度は相当するｍｇ／Ｌ Ｈ_２Ｏ_２として表した。

試料を精製水で１：１０に希釈した。５分間のインキュベーション後、１２時間の期間にわたって１時間毎に、その後は２４時間および４８時間時点で、Ｈ_２Ｏ_２産生について全ての試料を測定した。

決定方法。ペルオキシダーゼは過酸化物から有機酸化還元指示薬に酸素を移し、次いで有機酸化還元指示薬が青色の酸化産物に変換される。目視により試験紙片の反応ゾーンをカラースケールの範囲（ｆｉｅｌｄｓ ｏｆ ａ ｃｏｌｏｕｒ ｓｃａｌｅ）と比較することで、過酸化物濃度を半定量的に測定する。試験紙片の反応ゾーンをＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ試料に１秒間浸漬し、過剰量の液体を紙片から吸水性のペーパータオルに流出させ、１５秒後（Ｃａｔ．Ｎｏ．１１００１１）、５秒後（Ｃａｔ．Ｎｏ．１１００８１）、反応ゾーンで形成された色の決定は、カラースケールの範囲（ｃｏｌｏｕｒ ｆｉｅｌｄｓ ｓｃａｌｅ）と、より正確に一致した。

結果
１．活性の評定
ハチミツ試料の改変で生じた抗微生物活性により、ＰＴ１およびＰＴ２では、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ単独と比較してそれぞれ２倍およびほぼ３倍のフェノール活性の増大がもたらされた。３つの試料、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ＳＨ）、ならびに２種の改変プロトタイプ、ＰＴ１およびＰＴ２の結果を以下の表に示す。

２．Ｈ_２Ｏ_２法によるハチミツ活性の決定
プロトタイプ改変物では、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの最大７倍および１０倍の過酸化水素活性が生じることが観察される。３つの試料についての結果を図２Ａに示す。３つのハチミツプロトタイプそれぞれについての最大レベルの過酸化水素産生量を採用し、これを総フェノール活性に対してプロットすることにより、直線関係が観察される（図２Ｂ）。

考察
本研究の結果は、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ、ならびに２種の改変プロトタイプ、ＰＴ１およびＰＴ２の主な抗微生物活性が、過酸化水素によるものであることを示している。これは、様々な花に由来する他の特定のハチミツと類似した発見である。しかし、以前の研究とは異なり、試料由来の過酸化水素の利用可能性は増強可能であり、１２時間時点でＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ単独での値のそれぞれ７倍および１０倍である。３つのハチミツプロトタイプ由来の、抗微生物活性と過酸化水素の最大産生量との間には顕著な直線関係がある。

この過酸化物活性は、微生物感染症を治療または予防するのに申し分なく適した強力な抗微生物活性を示す。過酸化水素は有効な抗微生物薬であり、栄養細菌、酵母および胞子に対するその強力な活性ゆえに既に殺生物剤として使用されている。過酸化水素は、細胞構成成分の化学的酸化を介してその抗微生物効果を生じる。

ヒトに対する過酸化水素の毒性は濃度依存性であり、ある研究では、抗微生物毒性およびヒトに対する毒性に関するそれぞれの濃度が重複しうることが主張されている。一方、ある特定のハチミツ調製物が、大量に、ではなく時間をかけて継続的に低濃度の過酸化水素を供給することにより、このような毒性なしに有効な抗微生物剤となることが示されている。実際、生理的レベルの過酸化水素が哺乳動物細胞に適用される場合、これらの細胞において生物学的応答が刺激され特定の生化学的経路が活性化されるという強力な証拠が存在する。

Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ、ならびに２種の改変プロトタイプ、ＰＴ１およびＰＴ２は明らかに、少なくとも２４時間にわたって有効な過酸化水素放出を示す。

結論
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ、ならびに２種の改変プロトタイプ、ＰＴ１およびＰＴ２は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ標準株に対し強力な抗微生物活性を有することが示された。これらの抗微生物活性は過酸化水素によるものであることが示された。活性は計測可能であり、過酸化水素活性に換算して表すことができる。これらの改変ハチミツは、有効かつ非毒性で投与が容易である。

（実施例６）
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙのｉｎ ｖｉｔｒｏでの抗微生物活性
本実施例では、ディスク拡散法、最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）および最小殺菌濃度（ＭＢＣ）の決定、ならびに時間殺細菌測定による、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙに対する広範な細菌分離株の感受性試験について記載する。

概要
結果：Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、広範なグラム陽性およびグラム陰性細菌ならびに真菌に対する非常に強力な阻止活性および殺菌活性を示す。ＭＩＣ／ＭＢＣは、臨床での局所使用で実現される可能性のある濃度より顕著に小さい。Ｓｔａｐｈ．Ａｕｒｅｕｓに対するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ１のＭＩＣ／ＭＢＣは３１および１２５ｇｍ／Ｌであり、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ３のＭＩＣ／ＭＢＣは０．１２および０．２４ｇｍ／Ｌである。

殺菌スピードは効力によって決まる。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ１では、強力かつ完全な最小の殺菌活性が、試験を行った生物全てで４８時間以内に発生する。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ３では、最も強力な殺菌活性が３０分以内に発生する。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ接種材料調製物を最大１週間維持することで、完全な殺菌活性および細菌が残存していないことが示された。

結論：Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、ハチミツの治癒特性の効果を生物工学産物の強力な抗微生物活性と組み合わせた、非常に活性な局所治療剤として広い可能性を有する。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは多剤抵抗性細菌に対して非常に活性である。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、試験を行った他のハチミツより活性であり、抗微生物活性において化学消毒薬と同等である。

本研究では、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙのｉｎ−ｖｉｔｒｏでの特性を調べる。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは天然のハチミツについて確立された治癒特性を全て保持しているが、その抗微生物活性を、必要とされるいかなる効力にでも設定することができる。本研究では、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ１、２および３の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）および最小殺細菌濃度（ＭＢＣ）、ならびに時間死滅曲線を決定した。

方法
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、効力グレード１、２および３として提供した。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、小袋に入った半流動形態の、滅菌済み医薬グレード製品として提示した。

軟部組織微生物学試料から臨床分離株を収集した。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ分離株１８株、うちメチシリン感受性（ＭＳＳＡ）１２株およびメチシリン抵抗性（ＭＲＳＡ）６株、β溶血性連鎖球菌分離株６株、うちランスフィールド群Ａ（２）、Ｂ（２）、Ｃ（１）、Ｇ（１）、バンコマイシン抵抗性Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍを含むＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．分離株５株、広域スペクトルβラクタマーゼ産生株を含むＥｓｃｈ．ｃｏｌｉ６株、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｓｐｐ．２株、Ｓｅｒｒａｔｉａ Ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ ＡｍｐＣ産生株１株、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ４株、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｌｗｏｆｆｉｉ１株、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ１株、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ１株、およびＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ２株、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ１株、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｅｓ１株を、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙに対して試験した。

寒天拡散
セミコンフルエントな増殖をもたらすような濃度で試験生物を既に接種してあるｉｓｏｓｅｎｉｔｅｓｔ寒天に６ｍｍのウェルをくり抜いた。パイロット研究では、試験Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙおよび他のハチミツをウェルに添加した。

Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ効力Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３を、世界中、ヨーロッパ、南アメリカ、ニュージーランド、イエメン、スーダンの様々なハチミツ、および医療用ハチミツ、Ｍｅｄｉｈｏｎｅｙ、ならびに銀（Ｓｉｌｖｅｒ Ａｑｕａｃｅｌｌ）およびヨウ素（Ｉｏｄｏｆｌｅｘ）を含む抗微生物ドレッシングと比較するため、まずパイロット研究を実施した。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓを接種したプレートにウェルをくり抜いて試験ハチミツで満たすか、ドレッシングの場合はこれらを２ｘ２ｃｍに切断して接種済みプレート表面に配置した。

パイロット研究後、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ効力Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３を単独で、皮膚病変由来の細菌分離株の範囲に対して試験した。３種の効力の未希釈のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ約２ｇｍを等体積の滅菌水で希釈および乳化させた調製物で、ウェルを表面まで満たした。１８〜２４時間の好気的インキュベーション（ＣａｎｄｉｄａおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．ではこれより長く、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．およびＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．では嫌気的に）後、円のサイズを測定した。

最小発育阻止濃度および最小殺細菌濃度
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ製品を３７℃に温めてこれを液体化し、５ｇｍを滅菌脱イオン水１０ｍＬと混合した。この希釈液を、段階希釈用の「未希釈の」物質とみなした。最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）および最小殺細菌濃度（ＭＢＣ）を実施するため、Ｔｈｅ Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（ＢＳＡＣ）法を使用した（Andrews JM. Determination of minimum inhibitory concentrations. J Antimicrob ３７２ Chemother ２００１年;４８（Supp１）:５〜１６頁）。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ製品を、マイクロタイタートレイのウェルで未希釈から１０２４倍で１まで段階希釈した。各ハチミツ希釈液７５μＬを、マイクロタイタートレイのストリップの各ウェルに添加した。未希釈の濃度は濃度２５０ｇｍ／Ｌに相当し、２０４８倍希釈での１は約０．１２ｇｍ／Ｌに相当した。

ＭｃＦａｒｌａｎｄ密度０．５が作り出されるように、各生物につき純粋培養物から形態的に同一コロニーを４つ採取することにより試験生物を調製した。これを１：１０にさらに希釈した。

対照も含めた全てのウェルに試験分離株調製物７５μＬを接種した。ウェルトレイを３７℃で１８時間インキュベートした。検出可能な濁度を示さない最も薄いウェルをＭＩＣとみなした。

ＭＩＣウェルおよびＭＩＣウェルの周囲のウェルを血液寒天に継代し、３７℃で１８時間インキュベートしてＭＢＣを決定した。ＭＢＣはインキュベーション後に増殖を示さない最も薄い濃度であった。

時間死滅曲線
ＭａｃＦａｒｌａｎｅ密度０．５の試験生物０．１ｍＬを採取し、これをニュートリエントブロス３ｍＬに播種することにより試験生物接種材料を調製した。試験接種材料を３つの独立したビジュー、対照および３つの試験調製物に分け、そこにＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ１（Ｓ１）、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ３（Ｓ３）またはＭｅｄｉｈｏｎｅｙ（ＭＨ）０．５ｇを添加した。１：１０で段階希釈し、０．１ｍＬを血液寒天プレートにプレーティングすることにより、接種材料のコロニー数を決定し、３回繰り返した。

表層皮膚病変の温度をシミュレートするため、試験および対照接種材料を３０℃に保った。０．５、２、４、２４、４８、７２および１６８時間時点で、３連で上記の通りコロニー計数を実施した。

Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの残留効果を中和するため、元の接種材料０．１ｍｌをニュートリエントブロスに播種し、３７℃で７２時間インキュベートし、その後試験生物が生存しているか決定するため血液寒天にプレーティングすることにより、最終培養を実施した。

結果
阻止円サイズ。
パイロット比較研究により、全てのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ効力が、医療グレードのハチミツ、Ｍｅｄｉｈｏｎｅｙを含む、試験を行った任意の他のハチミツよりも大きな抗微生物活性を有することが実証された。Ｓ１での阻止円は、任意の他のハチミツにより生じた阻止円より大きかった。銀ドレッシングでは、ドレッシングの下である程度の阻止効果が生じたが、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙで見られたような阻止円は見られなかった。ヨウ素ドレッシングでは、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓに対して、Ｓ１より大きく（３６ｍｍ）Ｓ３と同等である（６７ｍｍ）大きな阻止円（約７０ｍｍ）が生じた。

定量的円サイズ試験では、複数の抗生物質に抵抗性の細菌を含むグラム陽性およびグラム陰性細菌の両方の、試験を行った全ての細菌、ならびに真菌の種に対する寒天拡散において、全ての効力のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙで阻止円が生じた。各種における円サイズは、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ効力調製物が増加するにつれて増大した。表５。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの阻止効果は、銀ドレッシングのように、活性な薬剤と直接接触することによるばかりでなく、ウェルを越えて十分に拡散されて表５に列挙する広範な円を生じた。

ＭＩＣおよびＭＢＣ
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、試験を行った全ての分離株に対して顕著な抗微生物活性を示した。分離株が多剤抵抗性であれ非常に感受性であれ、ＭＩＣおよびＭＢＣは同じ種の分離株の間では非常にばらつきがなかった。表６には、試験を行った分離株の種について希釈率でＭＩＣおよびＭＢＣ値を列挙し、表７には１リットル当たりのグラム数でＭＩＣおよびＭＢＣを示す。効力の程度はＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙのグレードに合わせて上昇した。ほとんどの場合で、各分離株のＭＢＣは１回の希釈でのＭＩＣに近かった。

Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの局所濃度は約５００ｇｍ／Ｌと推定される。Ｓｔａｐｈ．Ａｕｒｅｕｓに対するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ１のＭＩＣ／ＭＢＣはそれぞれ３１および１２５ｇｍ／Ｌであり、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ３のＭＩＣ／ＭＢＣはそれぞれ０．１２および０．２４ｇｍ／Ｌである。

時間死滅曲線。
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは細菌を急速に死滅させる。１ミリリットル当たりのコロニー形成単位（ｃｆｕ／ｍＬ）約１０５から開始すると、対照におけるｃｆｕ／ｍＬ数は絶えず上昇したが、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ接種材料では、両方の効力のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙと接触させた後ｃｆｕ／ｍＬが急速に低下した。ほとんどの場合、３０分までにはＳ１およびＳ３の両方でｃｆｕ数が１０００分の１に低下した（図３）。Ｓ１では、ほとんどの場合２時間までに細菌増殖が検出不能となり、Ｓ３では３０分までに検出不能となった。腸球菌はより丈夫であると思われ、４８時間残存した。ニュートリエントブロスおよびその後血液寒天にプレーティングすることによる最終培養で、Ｓ１またはＳ３接種材料において生物が検出されなかったことから、殺菌活性は全ての生物について完全であった。

考察
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、ヒトが摂取するための市販のハチミツの大部分とは異なり、農業添加物または抗微生物残渣を有しないという点で、現行の言葉の意味では有機物でもある天然のハチミツである。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、活性の増強のため特定の植物の花蜜供給源に依存するマヌカなどのハチミツとは異なり、特定の花蜜供給源に依存するものではない。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの抗微生物活性は、ばらつきのない測定効力を有する様々なグレードを生じることができる調製プロセスにより制御可能である。

本研究により、試験を行った細菌および真菌の種全てに対して活性である、非常に強力な抗微生物薬としてのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙの効能が明らかに実証された。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを、世界中から供給される様々なハチミツ、および医療グレードのハチミツ、Ｍｅｄｉｈｏｎｅｙと比較する予備的パイロット研究で、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは顕著により大きい抗微生物効能を示した。通常使用される局所消毒薬の銀およびヨウ素との比較により、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ３は、ヨウ素ドレッシングと同等、かつドレッシングと直接接触した場合にのみ細菌を阻止するのに有効な銀ドレッシング（Ａｑｕａｃｅｌ Ａｇ）より大きい抗微生物効果を生じた。

ＭＩＣおよびＭＢＣ試験では、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙが、局所治療剤で実現される可能性のある推定５００ｇｍ／Ｌという濃度の１０〜１０００分の１の濃度で、微生物を阻止するだけでなく死滅までさせることが示される。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの殺菌活性は、その阻止活性に近い濃度で発生する。したがって、局所適用すると、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙが多微生物阻止および根絶において非常に活性となる可能性がある。

時間死滅曲線により、殺菌活性のスピードが、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ３では３０分以内、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ１では２時間以内と極めて急速であることが示される。これは、グラム陽性およびグラム陰性生物両方の場合であるが、腸球菌は僅かにより丈夫であると思われる。真菌、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐｐ．、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．にも、増殖を阻止し生物を死滅させるにはより高い濃度およびより長期の曝露が必要である。

これらのｉｎ ｖｉｔｒｏ研究により、効力が制御可能である、高い抗微生物活性を有するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙの可能性が実証された。

結論
これらのｉｎ ｖｉｔｒｏでの結果は、強力かつ非毒性の抗微生物薬としてのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙの臨床での使用を支持するものである。

（実施例７）
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙエマルション

調製
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ１０ｇをグリセロール１０ｍｌに溶解させた。次いで、パラフィン油１０ｍｌを、Ｊａｃｋｅｔ Ｐｅｌｔｉｅｒおよび羽根型ジオメトリーを取り付けたレオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＡＲ−Ｇ２）に添加した。次いでＰＧＰＲ（ポリグリセロールポリリシノレート）１ｍｌを添加した。次いでレオメーターを以下の条件で起動した；剪断速度２０００ １／ｓ、温度は３７．５℃に設定。２分後、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ−グリセロール溶液１０ｍｌを滴下により添加した。合計１０分が経過したところで、エマルションをＪａｃｋｅｔ Ｐｅｌｔｉｅｒから容器に移した。

光学顕微鏡
光学顕微鏡により、エマルションが、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを被包する逆ミセルを含むことが明らかとなった。このようなミセルは図４で観察できる。平均ミセル直径は１７８μｍと判明した。

過酸化水素試験
過酸化水素スティック試験（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｑｕａｎｔｏｆｉｘ（登録商標））より購入）を使用して、エマルション中の過酸化水素を検出した。試験は水を添加する前後に実施され、水を添加する前のエマルションでは過酸化水素が生じておらず、水を添加した後のエマルションは過酸化水素について陽性を示すことを試験した。陽性試験は色が青色に変化することで示された。

安定性試験
エマルションは、周囲条件下で少なくとも４週間保存した後に、過酸化水素を生成する能力を維持していた。

スプレー試験
エマルションは、ポンプアクション式のスプレーボトルに添加され、スプレー可能であることが判明した。

（実施例８）
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙエマルションの安定性に対する様々なパラメータの効果
実施例７に記載するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙエマルション調製方法を、１回に１パラメータ変更する効果を調べた。変更およびそれによる効果を以下にまとめる。

ｉ）Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ−グリセロール相に対する油相の割合
油の体積１０ｍｌ超、および１０ｍｌ未満で試験を行った。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ−グリセロール相の体積と比較してより小さい体積の油を使用すると、エマルションがより安定となることが判明した。油の体積が６ｍｌ未満であると、エマルションは７２時間経過して総体積の３％未満が分離することが判明した。体積４ｍｌでは、７２時間経過して総体積の１．３％だけが分離した。この安定性は、同じ期間経過して総体積の９．４％が分離するエマルションをもたらした、実施例７に記載する方法によるものよりはるかに大きい。

ｉｉ）ＰＧＰＲの体積
ＰＧＰＲ体積最大４ｍｌ、および１ｍｌ未満で試験を行った。より多くの量のＰＧＰＲを使用するとエマルションがより安定となった。体積４ｍｌでは、ＰＧＰＲはより小さい体積を使用したときよりも大きな安定性、および実施例７に記載するエマルションのものよりもはるかに大きな安定性をもたらした。

ｉｉｉ）剪断速度
剪断速度１０００ １／ｓ〜３０００ １／ｓで試験を行った。より大きな剪断速度を適用すると、エマルションがより安定となった。剪断速度３０００ １／ｓで最も安定なエマルションが生じた。実施例７に記載するように調製したエマルションでは７２時間経過して総体積の９．４％の体積が分離したのと比較して、この剪断速度で調製したエマルションでは、同じ期間経過して総体積の４．６％だけが分離したことが観察された。

ｉｖ）温度
温度２０℃〜４０℃で試験を行った。温度が増大するにつれてエマルションの安定性に関して目立った傾向は見られなかった。しかし、温度４０℃で最も安定なエマルションが生じた。このエマルションでは７２時間経過して総体積の３．１％だけが分離したことが観察された。

ｖ）剪断期間
実施例７に記載した調製方法で使用したものに加えて、剪断時間２０分および３０分で試験を行った。しかし、剪断時間を延長することにより顕著な差は生じなかった。

ｖｉ）試薬添加の順序
試薬をレオメーターに添加する順序を変更する効果について試験を行った。レオメーターを起動させる前に構成成分を全て添加する効果を、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ−グリセロールおよび油構成成分をまず添加し、次いで１〜２分後にＰＧＰＲを添加する効果と比較した。ＰＧＰＲを最後に添加した場合に最も安定なエマルションが形成された。生じたエマルションでは、１２０時間経過して総体積の２．８％の体積が分離した。

ｖｉｉ）グリセロールに溶解させるＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ濃度
以下の比率のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ｇ）とグリセロール（ｍｌ）について試験を行った：１ｇ：１ｍｌ；０．５ｇ：１ｍｌ；２ｇ：１ｍｌ。最も安定なエマルションが生じた比率は１ｇ：１ｍｌであり、これは実施例７に記載する調製方法で使用したものと同じ比率であった。

ｖｉｉｉ）塩化ナトリウム
塩化ナトリウムをエマルションの極性層に溶解させると、この層の極性が増大する。塩化ナトリウムは、エマルションの脂質層との静電気的相互作用も形成する。静電気的相互作用および極性の増大により、安定性が改善し、合体が低下する可能性があった。しかし、塩化ナトリウム（１ｇ、２ｇまたは４ｇ）の添加が、エマルションの安定性に影響を与えるとは認められなかった。

変更の効果を以下の表にまとめる：

（実施例９）
高い安定性のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙエマルション
実施例８に記載する変更による結果を使用して、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙエマルションを調製するさらなる方法を設計した。この方法を以下に記載する。

調製
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ１０ｇをグリセロール１０ｍｌに溶解させた。次いで、パラフィン油４、６、８、または１０ｍｌを、Ｊａｃｋｅｔ Ｐｅｌｔｉｅｒおよび羽根型ジオメトリーを取り付けたレオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＡＲ−Ｇ２）に添加した。次いでＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ−グリセロール溶液１０ｍｌをレオメーターに添加した。次いでレオメーターを以下の条件で起動した；剪断速度３０００ １／ｓ、温度４０℃、ギャップ４０００μｍ、稼働時間１０分間。次いで１分後、ＰＧＰＲ（ポリグリセロールポリリシノレート）４ｍｌを添加した。合計１０分が経過したところで、エマルションをレオメーターから容器に移した。

製剤全てが非常に安定であることが判明し、使用したパラフィン油の体積が増加するにつれて安定性の僅かな増加が観察された。

（実施例１０）
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙクリーム製剤
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ１．５ｇをグリセロール１．５ｍｌに溶解させた。次いで、アルギン酸ナトリウム１ｇをＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ−グリセロール溶液に溶解させた。次に、パラフィン油１０ｍｌを、Ｊａｃｋｅｔ Ｐｅｌｔｉｅｒおよび羽根型ジオメトリーを取り付けたレオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＡＲ−Ｇ２）に添加した。次いでＰＧＰＲ（ポリグリセロールポリリシノレート）１ｍｌを添加した。次いでレオメーターを以下の条件で起動した；剪断速度２０００ １／ｓ、温度は３７．５℃に設定、ギャップ４０００μｍ、稼働時間１０分間。２分後、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ−アルギネートおよびグリセロール溶液１．５ｍｌをレオメーターに添加した。３分後、塩化カルシウム溶液８ｍｌを滴下によりレオメーターに添加した。合計１０分が経過したところで、エマルションをＪａｃｋｅｔ Ｐｅｌｔｉｅｒから容器に移した。

（実施例１１）
非水性Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙクリーム製剤
実施例１０に記載する方法では、水を使用して塩化カルシウムをイオンに解離させる。これにより、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙが活性化されて過酸化水素を生じ、クリーム製剤の安定性が制限される可能性があった。しかし本発明者らは、エタノールまたは酢酸などの非水性溶媒を使用して塩化カルシウムを解離させることができることを理解した。本発明者らは、グリセロールが自由水に結合できることも理解した。この特性により、過酸化水素の早すぎる放出を防止するのに十分なグリセロールが存在することを条件として、アルギネートを溶解させるために水を使用することができる。

下記の方法では、塩化カルシウムの溶媒としてのエタノール、およびアルギネート溶液中の自由水に結合させるためのグリセロールを使用する。

アルギン酸ナトリウム１ｇを水１５ｍｌに溶解させる。次にグリセロール３０ｍｌをアルギネート溶液に添加して混合する。次いで、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ３０ｇを溶液に溶解させる。次いで、パラフィン油１０ｍｌを、Ｊａｃｋｅｔ Ｐｅｌｔｉｅｒおよび羽根型ジオメトリーを取り付けたレオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＡＲ−Ｇ２）に添加する。次いでＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ溶液１０ｍｌをレオメーターに添加する。次いでレオメーターを以下の条件で起動する；剪断速度３０００ １／ｓ、温度４０℃、ギャップ４０００μｍ、稼働時間１０分間。１分後、ＰＧＰＲ（ポリグリセロールポリリシノレート）４ｍｌを添加する。２分後、非水性塩化カルシウム溶液（塩化カルシウムの１Ｍエタノール溶液）８ｍｌを滴下によりレオメーターに添加する。合計１０分が経過したところで、エマルションをレオメーターから容器に移す。

実施例７〜１１のエマルション製剤の概要：

Claims (154)

1. 親油性相；水相；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；および前記酵素のための基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための組成物。
2. コロイドまたは懸濁物の形態である、請求項１に記載の組成物。
3. エマルションの形態である、請求項１または２に記載の組成物。
4. 前記親油性相が、油またはワックスを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
5. 前記油またはワックスが、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ Ｍｏｌｕｃｃａｎａ種子油；ブドウ（Ｖｉｔｉｓ Ｖｉｎｉｆｅｒａ）種子油；アーモンド油ＮＦ；ハイブリッドベニバナ（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ Ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ）油；無水ラノリンＵＳＰ；ミリスチン酸イソプロピル；杏仁油；パルミチン酸イソプロピル；アボカド（Ｐｅｒｓｅａ Ｇｒａｔｉｓｓｉｍａ）油；ホホバ（Ｂｕｘｕｓ Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）油；ババス油；ラノリン；ミツロウ；マカダミア（Ｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ）ナッツ油；ルリジサ（Ｂｏｒａｇｏ Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）種子油；Ｍａｎｇｉｆｅｒａ Ｉｎｄｉｃａ（マンゴー）シードバター；ブラジルナッツ油；鉱油；安息香酸Ｃ１２〜１５アルキル；ミリスチン酸ミリスチル；Ｃａｎｎａｂｉｓ Ｓａｔｉｖａ種子油；オリーブ（Ｏｌｅａ Ｅｕｒｏｐａｅａ）油；キャノーラ油；Ｏｒｙｚａ Ｓａｔｉｖａ（米糠）油；トリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル；ラッカセイ油ＮＦ；ニンジン（Ｄａｕｃｕｓ Ｃａｒｏｔａ Ｓａｔｉｖａ）種子油；ワセリン；ヒマシ（Ｒｉｃｉｎｕｓ Ｃｏｍｍｕｎｉｓ）油；ＰＰＧ−１５ステアリルエーテル；セレシン；パルミチン酸レチニル；セテアリルアルコール；ベニバナ（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ Ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ）油；セチルアルコール；ゴマ（Ｓｅｓａｍｕｍ Ｉｎｄｉｃｕｍ）油；セチルエステル；シアバター（Ｂｕｔｙｒｏｓｐｅｒｍｕｍ Ｐａｒｋｉｉ）；パルミチン酸セチル；ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ Ｓｏｊａ）油；ココナツ油；ステアリン酸；Ｄａｕｃｕｓ Ｃａｒｏｔａ Ｓａｔｉｖａ（ニンジン）根抽出物；ステアリルアルコール；アジピン酸ジイソプロピル；ヒマワリ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ Ａｎｎｕｓ）油；ジメチコン；スイートアーモンド（Ｐｒｕｎｕｓ Ａｍｙｇｄａｌｕｓ Ｄｕｌｃｉｓ）油；イヌバラ（Ｒｏｓａ Ｃａｎｉｎａ）ヒップ油；Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ Ｃａｃａｏ（ココア）シードバター；エミュー油；トコフェロール；月見草油から選択される、請求項４に記載の組成物。
6. 前記油またはワックスがミツロウである、請求項４または５に記載の組成物。
7. １または複数の乳化剤をさらに含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
8. 前記乳化剤が、３〜６または８〜１８の範囲の親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）値を有するか、または前記乳化剤が、３〜６または８〜１８の範囲の合わせたＨＬＢ値を有する、請求項７に記載の組成物。
9. 前記乳化剤が、ステアロイル乳酸カルシウム；セテアレス−２０；セテアリルグルコシド；セテス−１０；セテス−２；セテス−２０；コカミドＭＥＡ；ラウリン酸グリセリル；ステアリン酸グリセリル；ステアリン酸グリセリル（および）ステアリン酸ＰＥＧ−１００；ステアリン酸グリセリルＳＥ；ジステアリン酸グリコール；ステアリン酸グリコール；イソセテス−２０；イソステアレス−２０；ラウラミドＤＥＡ；ラウレス−２３；ラウレス−４；レシチン；リノレアミドＤＥＡ；セスキステアリン酸メチルグルコース；オレス−１０；オレス−１０／ポリオキシル１０オレイルエーテルＮＦ；オレス−２；オレス−２０；オレス−２０；ステアリン酸ＰＥＧ−１００；ＰＥＧ−２０アーモンドグリセリド；セスキステアリン酸ＰＥＧ−２０メチルグルコース；ＰＥＧ−２５水素添加ヒマシ油；ジポリヒドロキシステアリン酸ＰＥＧ−３０；ジラウリン酸ＰＥＧ−４；ペルオレイン酸ＰＥＧ−４０ソルビタン；ＰＥＧ−６０アーモンドグリセリド；ラウリン酸ＰＥＧ−８；ラウリン酸ＰＥＧ−８０ソルビタン；ポリソルベート２０；ポリソルベート６０；ポリソルベート８０；ポリソルベート８５；ステアロイル乳酸ナトリウム；イソステアリン酸ソルビタン；ラウリン酸ソルビタン；オレイン酸ソルビタン；セスキオレイン酸ソルビタン；ステアリン酸ソルビタン；ステアリン酸ソルビタン（および）ヤシ脂肪酸スクロース；トリオレイン酸ソルビタン；ステアラミドＭＥＡ；ステアレス−２；ステアレス−２１から選択される、請求項８に記載の組成物。
10. 前記乳化剤がレシチンである、請求項７から９のいずれか一項に記載の組成物。
11. 局所適用のために製剤化されている、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
12. クリームまたはローションの形態である、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
13. 前記酵素が、前記物質中に存在し得る、前記基質を変換して過酸化水素を放出できる任意の酵素活性に対して追加的である、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
14. 前記組成物が、前記酵素に前記基質を変換させるに十分な自由水を含まない貯蔵安定性組成物である、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
15. 前記酵素が、精製された酵素である、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
16. 前記酵素がオキシドレダクターゼ酵素である、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
17. 前記オキシドレダクターゼ酵素がグルコースオキシダーゼである、請求項１６に記載の組成物。
18. 前記物質が、前記酵素のための精製された基質を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
19. 前記精製された基質が、精製された糖を含む、請求項１８に記載の組成物。
20. 前記精製された糖が、Ｄ−グルコース、ヘキソースまたはＤ−ガラクトースを含む、請求項１９に記載の組成物。
21. 前記物質が、純化されていない天然物質である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の組成物。
22. 前記純化されていない天然物質が、カタラーゼ活性を欠く、請求項２１に記載の組成物。
23. 前記純化されていない天然物質が、純化されていない天然糖物質である、請求項２１または２２に記載の組成物。
24. 前記純化されていない天然糖物質がハチミツである、請求項２３に記載の組成物。
25. 前記ハチミツが、低温殺菌されていないハチミツ、好ましくはクリーム状の低温殺菌されていないハチミツである、請求項２４に記載の組成物。
26. 任意の検出可能な過酸化水素を含まない、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
27. 無菌組成物である、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
28. 前記親油性相対前記水相の比が、９：１〜１：９、８：１〜１：８、７：１〜１：７、６：１〜１：６、５：１〜１：５、４：１〜１：４、３：１〜１：３または２：１〜１：２（ｖ／ｖ）である、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
29. ５〜９５％、１０〜９５％、１５〜９５％、２０〜９５％、２５〜９５％、３０〜９５％、３５〜９５％、４０〜９５％、４５〜９５％、５０〜９５％、５５〜９５％、６０〜９５％、６５〜９５％、７０〜９５％、７５〜９５％、８０〜９５％、８５〜９５％または９０〜９５％（ｖ／ｖ）の親油性相（存在する任意の乳化剤を含む）を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
30. ５〜９５％、５〜９０％、５〜８５％、５〜８０％、５〜７５％、５〜７０％、５〜６５％、５〜６０％、５〜５５％、５〜５０％、５〜４５％、５〜４０％、５〜３５％、５〜３０％、５〜２５％、５〜２０％、５〜１５％または５〜１０％（ｖ／ｖ）の親油性相（存在する任意の乳化剤を含む）を含む、請求項１から２８のいずれか一項に記載の組成物。
31. ５〜９５％、１０〜９５％、１５〜９５％、２０〜９５％、２５〜９５％、３０〜９５％、３５〜９５％、４０〜９５％、４５〜９５％、５０〜９５％、５５〜９５％、６０〜９５％、６５〜９５％、７０〜９５％、７５〜９５％、８０〜９５％、８５〜９５％または９０〜９５％（ｖ／ｖ）の水相を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
32. ５〜９５％、５〜９０％、５〜８５％、５〜８０％、５〜７５％、５〜７０％、５〜６５％、５〜６０％、５〜５５％、５〜５０％、５〜４５％、５〜４０％、５〜３５％、５〜３０％、５〜２５％、５〜２０％、５〜１５％または５〜１０％（ｖ／ｖ）の水相を含む、請求項１から３１のいずれか一項に記載の組成物。
33. １〜６０％、１〜５０％、１〜４０％、１〜３０％、１〜２０％または１〜１０％（ｗ／ｖ）の前記物質を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
34. １〜６０％、５〜６０％、１０〜６０％、１５〜６０％、２０〜６０％、２５〜６０％、３０〜６０％、３５〜６０％、４０〜６０％、４５〜６０％または５０〜６０％（ｗ／ｖ）の前記物質を含む、請求項１から３２のいずれか一項に記載の組成物。
35. ２０％未満の水、好ましくは１０〜１９％の水を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
36. 前記組成物１グラム当たり、１〜１５００単位、１５〜１５００単位、３０〜１５００単位、５０〜１５００単位、１００〜１５００単位、１〜＜６８５単位、１５〜＜６８５単位、３０〜＜６８５単位、５０〜＜６８５単位、１００〜＜６８５単位、５００〜１０００単位、６８５〜１０００単位または１００〜５００単位の前記酵素、好ましくはグルコースオキシダーゼを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
37. 少なくとも２４時間の期間にわたって、０．１ｍｍｏｌ／リットル〜２ｍｍｏｌ／リットル未満の過酸化水素の持続的放出を提供するのに十分な酵素および基質を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
38. 医薬としての使用のための、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
39. 微生物感染症の予防または処置における使用のための、請求項１から３７のいずれか一項に記載の組成物。
40. 微生物感染症の予防または処置のための医薬の製造における、請求項１から３７のいずれか一項に記載の組成物の使用。
41. 前記予防または処置が、前記組成物の局所投与による、請求項３９または４０に記載の使用。
42. 請求項１から３７のいずれか一項に記載の組成物の有効量を、かかる処置を必要とする対象に投与するステップを含む、微生物感染症の予防または処置の方法。
43. 前記組成物が前記対象に局所投与される、請求項４２に記載の方法。
44. 前記微生物感染症が、ウイルス感染症、好ましくは単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染症である、請求項３９から４１のいずれか一項に記載の使用、または請求項４２もしくは４３に記載の方法。
45. 前記微生物感染症が真菌感染症である、請求項３９から４１のいずれか一項に記載の使用、または請求項４２もしくは４３に記載の方法。
46. 前記微生物感染症が細菌感染症である、請求項３９から４１のいずれか一項に記載の使用、または請求項４２もしくは４３に記載の方法。
47. 親油性構成成分、水性構成成分、基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素、および前記酵素のための基質を含む物質を混合して前記組成物を形成するステップを含む、請求項１から３７のいずれか一項に記載の組成物を作製する方法。
48. 第１の相；第２の相；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；および前記酵素のための基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための組成物であって、前記第１の相と前記第２の相とが不混和性である、組成物。
49. 前記第１の相が、前記第２の相よりも極性が低い、請求項４８に記載の組成物。
50. 前記第１の相が非極性相であり、前記第２の相が極性相である、請求項４８または請求項４９に記載の組成物。
51. 前記第１の相が親油性相であり、前記第２の相が水相である、請求項４８から５０のいずれか一項に記載の組成物。
52. 前記第２の相が、非水性溶媒、任意選択でグリセロール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールを含む、請求項４８から５１のいずれか一項に記載の組成物。
53. 前記第１の相が、油、任意選択でオリーブ油、トウモロコシ油、植物油、ヒマワリ油もしくはパラフィン油であるか、または油、任意選択でオリーブ油、トウモロコシ油、植物油、ヒマワリ油もしくはパラフィン油を含む、請求項４８から５２のいずれか一項に記載の組成物。
54. 乳化剤、好ましくは界面活性剤を含み、任意選択で、前記界面活性剤が、ＴＷＥＥＮ、ＳＰＡＮ、ポロクサマーもしくはポリグリセロールポリリシノレートであるか、またはＴＷＥＥＮ、ＳＰＡＮ、ポロクサマーもしくはポリグリセロールポリリシノレートを含む、請求項４８から５３のいずれか一項に記載の組成物。
55. 油；乳化剤；基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素；および前記酵素のための基質を含む物質を含む、抗微生物活性を生じさせるための組成物。
56. 非水性溶媒を含む、請求項５５に記載の組成物。
57. 前記非水性溶媒が極性溶媒である、請求項５６に記載の組成物。
58. 前記非水性溶媒が有機溶媒である、請求項５６または請求項５７に記載の組成物。
59. 前記非水性溶媒が、グリセロール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコールであるか、またはグリセロール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコールを含む、請求項５６から５８のいずれか一項に記載の組成物。
60. 前記油が、オリーブ油、トウモロコシ油、植物油、ヒマワリ油もしくはパラフィン油であるか、またはオリーブ油、トウモロコシ油、植物油、ヒマワリ油もしくはパラフィン油を含む、請求項５５から５９のいずれか一項に記載の組成物。
61. 前記乳化剤が、界面活性剤であるか、または界面活性剤を含む、請求項５５から６０のいずれか一項に記載の組成物。
62. 前記界面活性剤が、ＴＷＥＥＮ、ＳＰＡＮ、ポロクサマーもしくはポリグリセロールポリリシノレートであるか、またはＴＷＥＥＮ、ＳＰＡＮ、ポロクサマーもしくはポリグリセロールポリリシノレートを含む、請求項６１に記載の組成物。
63. 前記酵素が、前記物質中に存在し得る、前記基質を変換して過酸化水素を放出できる任意の酵素活性に対して追加的である、請求項４８から６２のいずれか一項に記載の組成物。
64. 前記酵素に前記基質を変換させるに十分な自由水を含まない、請求項４８から６３のいずれか一項に記載の組成物。
65. 貯蔵安定性である、請求項４８から６４のいずれか一項に記載の組成物。
66. 前記組成物の希釈後に少なくとも２４時間の期間にわたって、２ｍｍｏｌ／リットル未満のレベルでの過酸化水素の持続的放出を提供する、請求項４８から６５のいずれか一項に記載の組成物。
67. 少なくとも２４時間の期間にわたって、少なくとも０．１、０．５、１または１．５ｍｍｏｌ／リットルの過酸化水素の持続的放出を提供する、請求項４８から６６のいずれか一項に記載の組成物。
68. 前記酵素が、精製された酵素である、請求項４８から６７のいずれか一項に記載の組成物。
69. 前記酵素が、オキシドレダクターゼ酵素、好ましくはグルコースオキシダーゼである、請求項４８から６８のいずれか一項に記載の組成物。
70. 前記物質が、カタラーゼ活性を欠く、請求項４８から６９のいずれか一項に記載の組成物。
71. 前記物質が、純化されていない物質、例えば、純化されていない天然物質である、請求項４８から７０のいずれか一項に記載の組成物。
72. 前記物質が、好ましくはグルコースを含む糖物質である、請求項４８から７１のいずれか一項に記載の組成物。
73. 前記物質が、ハチミツであるか、またはハチミツを含む、請求項４８から７２のいずれか一項に記載の組成物。
74. 前記物質が、前記酵素のための精製された基質、好ましくは、精製された糖、例えば、精製されたグルコースを含む、請求項４８から７０のいずれか一項に記載の組成物。
75. １０〜６０％、好ましくは２０〜５０％、より好ましくは３５〜４５％（ｗ／ｗ）の非水性溶媒を含む、請求項４８から７４のいずれか一項に記載の組成物。
76. １０〜４０％、好ましくは２０〜３０％（ｗ／ｗ）の油を含む、請求項４８から７５のいずれか一項に記載の組成物。
77. １〜１０％、好ましくは１〜５％（ｗ／ｗ）の乳化剤を含む、請求項４８から７６のいずれか一項に記載の組成物。
78. １０〜５０％、好ましくは、より好ましくは２０〜４０％（ｗ／ｗ）の、前記酵素のための基質を含む物質を含む、請求項４８から７７のいずれか一項に記載の組成物。
79. ２０〜５０％（ｗ／ｗ）の非水性溶媒、２０〜３０％（ｗ／ｗ）の油、１〜５％（ｗ／ｗ）の乳化剤、および２０〜４０％（ｗ／ｗ）の、前記酵素のための基質を含む物質を含む、請求項４８から７４のいずれか一項に記載の組成物。
80. １０〜６０％（ｗ／ｗ）の非水性溶媒、１０〜４０％（ｗ／ｗ）の油、１〜１０％（ｗ／ｗ）の乳化剤、および１０〜５０％（ｗ／ｗ）の、前記酵素のための基質を含む物質を含む、請求項４８から７４のいずれか一項に記載の組成物。
81. ３５〜４５％（ｗ／ｗ）の非水性溶媒、２０〜３０％（ｗ／ｗ）の油、１〜５％（ｗ／ｗ）の乳化剤、および２５〜３５％（ｗ／ｗ）の、前記酵素のための基質を含む物質を含む、請求項４８から７４のいずれか一項に記載の組成物。
82. 前記第１の相対前記第２の相の比が≦１：１（ｖ／ｖ）である、請求項４８から７４のいずれか一項に記載の組成物。
83. 前記第１の相対前記第２の相の比が＜０．６：１（ｖ／ｖ）である、請求項８２に記載の組成物。
84. 前記第１の相対前記第２の相の比が≦０．４：１（ｖ／ｖ）である、請求項８２に記載の組成物。
85. 前記第１の相が、前記組成物の６０％（ｖ／ｖ）未満で存在する、請求項４８から７４または８２から８４のいずれか一項に記載の組成物。
86. 前記第１の相が、前記組成物の１０％〜６０％（ｖ／ｖ）未満で存在する、請求項８５に記載の組成物。
87. 前記第１の相が、前記組成物の１０％〜４０％（ｖ／ｖ）未満で存在する、請求項８５に記載の組成物。
88. 前記第１の相が、前記組成物の１０％〜３０％（ｖ／ｖ）未満で存在する、請求項８５に記載の組成物。
89. 前記第１の相が、前記組成物の１０％〜２５％（ｖ／ｖ）未満で存在する、請求項８５に記載の組成物。
90. 前記組成物の最大２５％（ｖ／ｖ）で存在する乳化剤を含む、請求項４８から７４または８２から８９のいずれか一項に記載の組成物。
91. 前記乳化剤が、前記組成物の１〜２５％（ｖ／ｖ）で存在する、請求項９０に記載の組成物。
92. 前記乳化剤が、前記組成物の５〜２５％（ｖ／ｖ）で存在する、請求項９０に記載の組成物。
93. 前記乳化剤が、前記組成物の１０〜２５％（ｖ／ｖ）で存在する、請求項９０に記載の組成物。
94. 前記酵素のための基質を含む前記物質の量対前記第２の相の体積の比が０．５：１〜２：１である、請求項４８から７４または８２から９３のいずれか一項に記載の組成物。
95. 前記酵素のための基質を含む前記物質の量対前記第２の相の体積の比が１：１である、請求項９４に記載の組成物。
96. 前記組成物中の前記酵素のための基質を含む前記物質の量が、前記組成物の最大７０％（ｗ／ｖ）である、請求項４８から７４または８２から９５のいずれか一項に記載の組成物。
97. 前記組成物中の前記酵素のための基質を含む前記物質の量が、前記組成物の５〜７０％（ｗ／ｖ）である、請求項９６に記載の組成物。
98. 前記組成物中の前記酵素のための基質を含む前記物質の量が、前記組成物の１０〜７０％（ｗ／ｖ）である、請求項９６に記載の組成物。
99. 前記組成物中の前記酵素のための基質を含む前記物質の量が、前記組成物の２０〜７０％（ｗ／ｖ）である、請求項９６に記載の組成物。
100. 前記組成物中の前記酵素のための基質を含む前記物質の量が、前記組成物の３０〜７０％（ｗ／ｖ）である、請求項９６に記載の組成物。
101. エマルションであり、好ましくは、前記エマルションが逆ミセルを含む、請求項４８から１００のいずれか一項に記載の組成物。
102. 前記逆ミセルが、前記第２の相によって形成される、請求項１０１に記載の組成物。
103. 前記酵素、および前記酵素のための基質を含む前記物質が、前記第２の相中に溶解されている、請求項４８から１０２のいずれか一項に記載の組成物。
104. 前記第１の相が、パラフィン油であるか、またはパラフィン油を含む、請求項４８から１０３のいずれか一項に記載の組成物。
105. 前記第２の相が、グリセロールであるか、またはグリセロールを含む、請求項４８から１０４のいずれか一項に記載の組成物。
106. 前記乳化剤が、ポリグリセロールポリリシノレート（ＰＧＰＲ）であるか、またはポリグリセロールポリリシノレート（ＰＧＰＲ）を含む、請求項４８から１０５のいずれか一項に記載の組成物。
107. 基質を変換して過酸化水素を放出できる前記酵素が、精製されたグルコースオキシダーゼであるか、または精製されたグルコースオキシダーゼを含み、前記酵素のための基質を含む前記物質が、ハチミツである、またはハチミツを含む、請求項４８から１０６のいずれか一項に記載の組成物。
108. 基質を変換して過酸化水素を放出できる前記酵素が、精製されたグルコースオキシダーゼであるか、または精製されたグルコースオキシダーゼを含み、前記酵素のための基質を含む前記物質が、精製されたグルコースであるか、または精製されたグルコースを含む、請求項４８から１０６のいずれか一項に記載の組成物。
109. クリームである、請求項４８から１０８のいずれか一項に記載の組成物。
110. 粘度増加剤をさらに含む、請求項４８から１０９のいずれか一項に記載の組成物。
111. 前記粘度増加剤が、親水コロイドであるか、または親水コロイドを含む、請求項１１０に記載の組成物。
112. 前記親水コロイドが、多糖であるか、または多糖を含む、請求項１１１に記載の組成物。
113. 前記親水コロイドが、親水コロイド増粘剤であるか、または親水コロイド増粘剤を含む、請求項１１１または１１２に記載の組成物。
114. 前記親水コロイド増粘剤が、デンプン、加工デンプン、キサンタン、ガラクトマンナン（例えば、グアーガム、ローカストビーンガムおよびタラガム）、アラビアゴムもしくはアカシアゴム、カラヤゴム、トラガカントゴム、コンニャクマンナン、またはセルロース誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロースである、請求項１１３に記載の組成物。
115. 前記親水コロイドが、架橋親水コロイドであるか、または架橋親水コロイドを含む、請求項１１１または１１２に記載の組成物。
116. 前記架橋親水コロイドが架橋多糖である、請求項１１５に記載の組成物。
117. 前記架橋多糖が、架橋アルギネート、ペクチン、カラギーナン、ゼラチン、ゲラン、寒天、アガロース、加工デンプン、またはセルロース誘導体、例えば、メチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロースである、請求項１１６に記載の組成物。
118. 前記親水コロイドの分子が、カチオンによって架橋される、請求項１１５または１１６に記載の組成物。
119. 前記親水コロイドが、アルギネート、カラギーナンまたはペクチンである、請求項１１８に記載の組成物。
120. 前記親水コロイドが、カルシウムイオンによって架橋されたアルギネートである、請求項１１９に記載の組成物。
121. 組成物を形成するために、第１の構成成分、第２の構成成分、基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素、および前記酵素のための基質を含む物質を混合するステップを含み、前記第１の構成成分と第２の構成成分とが不混和性である、組成物を作製する方法。
122. 組成物を形成するために、油、基質を変換して過酸化水素を放出できる酵素、および前記酵素のための基質を含む物質を混合するステップを含む、組成物を作製する方法。
123. 非水性溶媒を混合するステップを含む、請求項１２１または１２２に記載の方法。
124. 前記酵素、前記酵素のための基質を含む前記物質、前記第２の相の液体、前記第１の相の液体、および任意選択で乳化剤を、エマルションを形成するのに十分な時間にわたって高い剪断速度下で混合するステップを含む、請求項４８から１２０のいずれか一項に記載の組成物を作製する方法。
125. 予め混合された成分を前記乳化剤と接触させ、前記予め混合された成分および前記乳化剤を含む混合物を高い剪断速度下で混合する前に、前記酵素、前記酵素のための基質を含む前記物質、前記第２の相の液体および前記第１の相の液体が、前記高い剪断速度下で予め混合される、請求項１２４に記載の方法。
126. 前記溶液を形成するために、溶液を前記第１の相の前記液体と接触させる前に、前記酵素、および前記酵素のための基質を含む前記物質が、前記第２の相の前記液体中に溶解される、請求項１２４または１２５に記載の方法。
127. 前記高い剪断速度が１０００ １／ｓ〜４０００ １／ｓである、請求項１２４から１２６のいずれか一項に記載の方法。
128. 前記高い剪断速度が＞２５００ １／ｓ〜３５００ １／ｓである、請求項１２４から１２７のいずれか一項に記載の方法。
129. 前記混合するステップが、２０℃〜４０℃で実施される、請求項１２４から１２８のいずれか一項に記載の方法。
130. 前記混合するステップが、３５℃〜４０℃で実施される、請求項１２４から１２９のいずれか一項に記載の方法。
131. 前記混合するステップが、３８℃〜４０℃で実施される、請求項１２４から１３０のいずれか一項に記載の方法。
132. 前記酵素、前記酵素のための基質を含む前記物質、前記第２の相の液体、前記第１の相の液体および前記乳化剤（存在する場合）が、少なくとも５分間にわたって高い剪断速度下で混合される、請求項１２４から１３１のいずれか一項に記載の方法。
133. 前記酵素、前記酵素のための基質を含む前記物質、前記第２の相の液体、前記第１の相の液体および前記乳化剤（存在する場合）が、５〜３０分間にわたって高い剪断速度下で混合される、請求項１２４から１３２のいずれか一項に記載の方法。
134. クリームを形成するために、粘度増加剤を、前記酵素、前記酵素のための基質を含む前記物質、前記第２の相の液体、前記第１の相の液体および前記乳化剤（存在する場合）と前記高い剪断速度下で混合するステップをさらに含む、請求項１２４から１３３のいずれか一項に記載の方法。
135. 前記粘度増加剤が、親水コロイドであるか、または親水コロイドを含む、請求項１３４に記載の方法。
136. 前記親水コロイドが、多糖であるか、または多糖を含む、請求項１３５に記載の方法。
137. 前記親水コロイドが、親水コロイド増粘剤であるか、または親水コロイド増粘剤を含む、請求項１３５または１３６に記載の方法。
138. 前記親水コロイド増粘剤が、デンプン、加工デンプン、キサンタン、ガラクトマンナン（例えば、グアーガム、ローカストビーンガムおよびタラガム）、アラビアゴムもしくはアカシアゴム、カラヤゴム、トラガカントゴム、コンニャクマンナン、またはセルロース誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロースである、請求項１３７に記載の方法。
139. 前記親水コロイドが、親水コロイドゲル化剤であるか、または親水コロイドゲル化剤を含む、請求項１３５または１３６に記載の方法。
140. 前記親水コロイドゲル化剤が、アルギネート、ペクチン、カラギーナン、ゼラチン、ゲラン、寒天、アガロース、加工デンプン、またはセルロース誘導体、例えば、メチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む、請求項１３９に記載の方法。
141. 前記親水コロイドゲル化剤が、カチオンの存在下でイオノトロピー性ゲル化によってゲルを形成することが可能であり、クリームを形成するために、前記方法が、前記カチオンを、前記親水コロイドゲル化剤、前記酵素、前記酵素のための基質を含む前記物質、前記第２の相の液体、前記第１の相の液体および前記乳化剤（存在する場合）と前記高い剪断速度下で混合するステップをさらに含む、請求項１３９または１４０に記載の方法。
142. 前記カチオンを混合物と接触させる前に、前記混合物を形成するために、前記親水コロイドゲル化剤、前記酵素、前記酵素のための基質を含む前記物質、前記第２の相の液体、前記第１の相の液体および前記乳化剤（存在する場合）が混合される、請求項１４１に記載の方法。
143. 前記カチオンが、非水性溶液、例えば、エタノールまたは酢酸中に提供される、請求項１４２に記載の方法。
144. 前記カチオンが、カルシウムイオンであるか、またはカルシウムイオンを含む、請求項１４１から１４３のいずれか一項に記載の方法。
145. 前記第１の相の前記液体との接触の前に、前記親水コロイドゲル化剤が、前記第２の相の前記液体、前記酵素、および前記酵素のための基質を含む前記物質と接触させられる、請求項１４１から１４４のいずれか一項に記載の方法。
146. 前記親水コロイドゲル化剤が、アルギネート、カラギーナンもしくはペクチンである、またはアルギネート、カラギーナンもしくはペクチンを含む、請求項１４１から１４５のいずれか一項に記載の方法。
147. 前記親水コロイドゲル化剤が、アルギネートであるか、またはアルギネートを含む、請求項１４６に記載の方法。
148. 前記親水コロイドゲル化剤が水溶液中に提供され、前記第２の相がグリセロールであり、前記グリセロールが、前記組成物中の自由水を結合するのに十分な量で存在し、それによって、前記酵素のための基質を含む前記物質からの過酸化水素の放出を前記酵素が触媒するのを防止する、請求項１４１から１４７のいずれか一項に記載の方法。
149. 請求項４８から１２０のいずれか一項に記載の組成物と、薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤とを含む医薬組成物。
150. 医薬としての使用のための、請求項４８から１２０のいずれか一項に記載の組成物または請求項１４９に記載の医薬組成物。
151. 微生物感染症の予防または処置における使用のための、請求項４８から１２０のいずれか一項に記載の組成物または請求項１４９に記載の医薬組成物。
152. 微生物感染症の予防または処置のための医薬の製造における、請求項４８から１２０のいずれか一項に記載の組成物または請求項１４９に記載の医薬組成物の使用。
153. 請求項４８から１２０のいずれか一項に記載の組成物または請求項１４９に記載の医薬組成物の有効量を、かかる処置を必要とする対象に投与するステップを含む、微生物感染症を予防または処置する方法。
154. 前記微生物感染症が、鼻の感染症、例えば、副鼻腔炎もしくは鼻副鼻腔炎；気道感染症、例えば、上気道感染症（例えば、扁桃炎、喉頭炎または副鼻腔炎）もしくは下気道感染症（例えば、気管支炎、肺炎、細気管支炎または結核）；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、気管支拡張症、喘息と関連する感染症、またはＨＩＶ／ＡＩＤＳ関連呼吸器感染症、または終末期疾患と関連する呼吸器感染症である、請求項１５１に記載の組成物、請求項１５２に記載の使用、または請求項１５３に記載の方法。

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