KR20180043366A - 브로모도메인 억제제로서 사용하기 위한 피리디논 디카복스아미드 - Google Patents

브로모도메인 억제제로서 사용하기 위한 피리디논 디카복스아미드 Download PDF

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안토니 윌리엄 제임스 쿠퍼
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토마스 조지 크리스토퍼 하이호우
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Abstract

본 발명은 화학식(I)의 화합물 및 이의 염, 이러한 화합물을 함유하는 약제 조성물 및 이의 치료에서의 용도에 관한 것이다.

Description

브로모도메인 억제제로서 사용하기 위한 피리디논 디카복스아미드
발명의 분야
본 발명은 브로모도메인 억제제인 특정 화합물, 이의 제조 방법, 이러한 화합물을 포함하는 약제 조성물 및 여러 질병 또는 질환의 치료에서의 이러한 화합물 또는 조성물의 용도에 관한 것이다. 브로모도메인 억제제인 화합물은 여러 질병 및 질환, 예를 들어, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환, 바이러스 감염 및 암의 치료에 유용할 수 있다.
발명의 배경
진핵생물 유기체의 유전체는 세포의 핵 내에서 고도로 유기체화되어 있다. 듀플렉스 DNA의 긴 가닥은 히스톤 단백질 (가장 일반적으로 히스톤 H2A, H2B H3 및 H4 중 두 개의 복사체 포함)의 십량체(octomer)에 둘러싸여 뉴클레오솜을 형성한다. 이후, 뉴클레오솜의 응집 및 폴딩에 의해 이러한 기본 단위가 추가로 압박되어 고도로 축합된 염색질 구조가 형성된다. 다수의 상이한 축합 상태가 가능하며, 이러한 구조의 견고함은 세포 주기 동안 변화되고, 세포 분열 과정 동안 가장 조밀하다. 염색질 구조는 유전자 전사를 조절하는데 중요한 역할을 하는데, 이는 고도로 축합된 염색질로부터 효율적으로 발생할 수 없다. 염색질 구조는 히스톤 단백질, 그 중에서도 특히 히스톤 H3 및 H4에 대한 일련의 전사후 변형에 의해, 그리고 가장 일반적으로 코어 뉴클레오솜 구조를 지나 연장되는 히스톤 테일 내에서 조절된다. 이러한 변형은 아세틸화, 메틸화, 포스포릴화, 유비퀴티닐화 및 SUMO일화를 포함한다. 이러한 후성적 표시는 특수한 효소에 의해 쓰여지고 지워지는데, 이러한 효소는 히스톤 테일 내 특정 잔기 상에 태그를 배치함으로써 후성적 코드를 형성한 후, 염색질 구조의 유전자 특이적 조절 및 이에 의한 전사를 허용하도록 세포에 의해 해석된다.
히스톤 아세틸화는 유전자 전사의 활성화와 가장 일반적으로 관련되는데 그 이유는 변형이 정전학을 변화시킴으로써 DNA와 히스톤 십량체의 상호작용을 느슨하게 하기 때문이다. 이러한 물리적 변화 외에, 특정 단백질은 히스톤 내에서 아세틸화된 리신 잔기에 결합하여 후성적 코드를 판독한다. 브로모도메인은 보통 아세틸화된 리신 잔기에 결합하나 히스톤과 관련해서 배타적이지 않은 단백질내 별개의 소형 (~110개 아미노산) 도메인이다. 브로모도메인을 함유하는 것으로 공지된 약 50개 단백질의 패밀리가 존재하고, 이들은 세포 내에서 다수의 기능을 지닌다.
브로모도메인 함유 단백질의 BET 패밀리는 아주 근접한 두 개의 아세틸화된 리신 잔기에 결합할 수 있는 탠덤(tandem) 브로모도메인을 함유하여 상호작용의 특이성을 증가시키는 4개의 단백질 (BRD2, BRD3, BRD4 및 BRDT)을 포함한다. 각 BET 단백질의 N-종결 단부로부터의 넘버링(numbering)으로, 탠덤 브로모도메인은 전형적으로 결합 도메인(Binding Domain) 1 (BD1) 및 결합 도메인(Binding Domain) 2 (BD2) (Chung et al, J Med. Chem,. 2011, 54, 3827-3838)로 라벨링된다.
Chan 등은 BET 브로모도메인 억제가 인간 단핵구에서 유전자-특이적 방식으로 신호전달하는 시토카인-Jak-STAT에 대한 전사 반응을 억제하고, 이는 BET 억제가 시토카인 활성 억제를 통해 부분적으로 염증을 감소시킴을 암시한다고 보고하고 있다. (Chan et al., Eur. J. Immunol., 2015, 45: 287-297).
Klein 등은 브로모도메인 단백질 억제제 I-BET151가 류마티스성 관절염 활액 섬유 아세포에서 염증 유전자 및 기질 분해 효소의 발현을 억제하는데, 이는 류마티스 관절염에서 후생적 리더 단백질(reader protein)의 표적화에 치료적 잠재력을 제시한다고 보고하고 있다. (Klein et al., Ann. Rheum. Dis., 2014, 0:1-8).
Park-Min 등은 아세틸화된 히스톤에 결합함으로써 염색질 상태를 '판독하는'브로모 및 엑스트라-종결 (BET) 단백질을 표적화하는 I-BET151가 파골세포형성(osteoclastogenesis)을 강력하게 억제한다고 보고하고 있다. (Park-Min et al. Nature Communications, 2014, 5, 5418).
Funabashi 등은 1,2,3,4,-테트라하이드로퀴놀린을 개시하고 있으며, 구성 및 형태 분석을 수행하였다 (Funabashi et al, Bulletin of the Chemical Society of Japan, 1969, 42, 2885-2894).
WO2014/140076는 2,3-이치환된 1-아실-4-아미노-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린 유도체 및 이들의 브로모도메인 억제제로서의 용도를 개시하고 있다.
발명의 개요
본 발명은 하기 화학식(I)의 화합물 및 이의 염에 관한 것이다:
Figure pct00001
상기 식에서,
R1은 -C1-3알킬 또는 사이클로프로필이고;
R2는 H 또는 -C0- 3알킬-C3- 7사이클로알킬이고, 여기서 사이클로알킬 기는 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R5 기로 치환되거나 비치환되고;
R3은 -H, -C1-4알킬, 사이클로프로필 또는 -(CH2)pOR10이고;
R4는 a) 페닐(동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R7 기로 치환되거나 비치환될 수 있음); b) 5 또는 6원 헤테로아릴 기(-C1- 3알킬, -O-C1- 3알킬 또는 할로에 의해 치환되거나 비치환될 수 있음); c) 9 내지 11원 헤테로아릴 기(-C1- 3알킬-R8, -OCH3, -O-C2- 3알킬-R8, 할로, 옥소, -O-CF3 및 -CN로부터 선택되는, 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 기로 치환되거나 비치환될 수 있음); 또는 d) -(CH2)n-페닐이고;
p는 1 또는 2이고;
n은 1 또는 2이고;
R5는 할로, 페닐, -C1- 6알킬-R8, -CO2H, -OCH3, -O-C2- 6알킬-R8, -CN, -OH 또는 -NHR6이고;
R6은 -H, -C(O)OC(CH3)3, -C1- 6알킬, -C3- 7사이클로알킬, 4 내지 7원 헤테로사이클릴 기, 또는 -C2- 3알킬-O-C1- 3알킬이고, 여기서 -C1- 6알킬 및 -C3- 7사이클로알킬 기는 1, 2 또는 3개의 플루오로에 의해 임의로 치환될 수 있고;
R7은 -NR11R12, -C1- 3알킬, 할로, -CO2R10, -CH2OH, -CH(R11)OR10, -C(O)C1- 3알킬, -CH(R10)NR11R12, -CN, -CHF2, -CF3, -OH, -OCHF2, -OCF3, -OCH3, -O-C2- 6알킬-R9, -C1- 6알킬-R9 또는 -O-피페리디닐이고;
R8은 -H, -OR10, -CO2C(CH3)3 또는 -NR11R12이고;
R9는 -H, -OR10 또는 -NR11R12이고;
R10은 -H 또는 -C1-3알킬이고;
R11 및 R12는 각각 독립적으로 -H, -C1- 3알킬 및 -C1- 3알킬NR13R14로부터 선택되거나; R11 및 R12는 이들이 결합되는 질소와 함께 결합하여 -C1- 3알킬, -OH 및 F로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 개의 치환기에 의해 임의로 치환되는, 4 내지 7원 헤테로사이클릴 기를 형성하고;
R13 및 R14는 각각 독립적으로 -H, -C1-3알킬 및 -C(O)CH3로부터 선택된다.
본 발명의 특정 화합물은 특히 BD2 선택적인 브로모도메인 억제제인 것으로 나타났으며, 여러 질병 또는 질환, 예를 들어, 급성 또는 만성 자가 면역 및/또는 염증 질환, 예를 들어, 류마티스 관절염 및 암의 치료에 유용할 수 있다. 따라서, 본 발명은 추가로 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 또는 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제 조성물을 사용하여 이와 관련된 질병 또는 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 본 발명의 화합물을 제조하는 방법에 관한 것이다.
발명의 상세한 설명
화학식(I)의 화합물 및 이의 염은 본원에서 "본 발명의 화합물"로서 지칭된다.
"BD2"는 단백질 BRD2, BRD3, BRD4 또는 BRDT의 BET 패밀리 중 어느 하나의 결합 도메인 2를 나타낸다.
"알킬"은 특정 수의 탄소 원자를 갖는 포화된 탄화수소 사슬을 나타낸다. 예를 들어, 본원에서 사용되는 용어 "C1- 6알킬"은 1 내지 6개의 탄소 원자, 예를 들어, 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형 알킬 기를 나타낸다. 예를 들어, 용어 "C0- 3알킬"은 0 (즉, 없음) 내지 3개의 탄소 원자, 예를 들어, 0 내지 2개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형 알킬 기를 나타낸다. 대표적인 분지형 알킬 기는 1개, 2개, 또는 3개의 분지를 갖는다. "알킬"은 메틸, 에틸, n-프로필, n-부틸, 이소-부틸, 이소-프로필, t-부틸, 펜틸 및 헥실을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
"사이클로알킬"은 고리에 특정 수의 구성원 원자를 갖는 포화된 탄화수소 고리 또는 포화된 스피로-결합된 바이사이클릭 탄화수소 고리를 나타낸다. 예를 들어, 본원에서 사용되는 용어 "C3- 7사이클로알킬"은 3 내지 7개의 구성원 원자, 예를 들어 3개의 구성원 원자를 갖는 사이클로알킬 기를 나타낸다. C3 - 7사이클로알킬 기의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 및 스피로[3.3]헵탄을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
"거울상이성질체 과량" (ee)은 다른 표현된 거울상이성질체에 대한 하나의 거울상이성질체의 초과분을 백분율로 나타낸 것이다. 라세미 변형에서, 두 거울상이성질체는 동일량으로 존재하기 때문에, 거울상이성질체 과량은 제로(0% ee)이다. 그러나, 하나의 거울상이성질체가 풍부하여 생성물의 95% 차지할 경우라면, 거울상이성질체 과량은 90% ee (풍부한 거울상이성질체의 양인 95%에서 다른 거울상이성질체의 양인 5%를 공제한 양)일 것이다.
"거울상이성질체적으로 풍부한"은 거울상이성질체 과량 (ee)이 제로보다 큰 생성물을 나타낸다. 예를 들어, "거울상이성질체적으로 풍부한"은 거울상이성질체 과량이 50% 초과의 ee, 75% 초과의 ee, 및 90% 초과의 ee인 생성물을 나타낸다.
본원에서 사용되는 "거울상이성질체적으로 순수한"은 거울상이성질체 과량이 99% 또는 그 초과인 생성물을 나타낸다.
"반감기" (또는 "반감기들")는 물질의 양의 절반이 시험관내 또는 생체내에서 화학적으로 다른 구분되는 종으로 변환되는데 요구되는 시간을 나타낸다.
"할로"는 할로겐 라디칼, 예를 들어, 플루오로, 클로로, 브로모, 또는 아이오도를 나타낸다.
"헤테로아릴"은 기의 적어도 한 부분이 방향족인 특정 수의 구성원 원자를 갖는 사이클릭 또는 바이사이클릭 기를 나타낸다. 분자의 나머지에 대한 결합 지점은 어떠한 적합한 탄소 또는 질소 원자에 의해서일 수 있다. 예를 들어, 본원에서 사용되는 용어 "5 또는 6원 헤테로아릴"은 질소, 황 및 산소로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함하는, 5 또는 6개의 구성원 원자를 갖는 헤테로아릴 기를 나타낸다. "5 또는 6원 헤테로아릴" 기의 예는 티오펜, 피라졸릴 및 피리디닐을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다. 본원에서 사용되는 용어 "9 내지 11원 헤테로아릴"은 질소 및 산소로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함하는, 9, 10 또는 11개의 구성원 원자를 갖는 바이사이클릭 구조를 나타낸다. "9 내지 11원 헤테로아릴" 기의 예는 2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥시닐, 1H-벤조[d]이미다졸릴, 벤조이미다졸릴, 벤즈아제피닐, 2,3,4,5-테트라하이드로-1H-벤조[d]아제피닐, 퀴녹살리닐, 퀴놀리닐, 인다졸릴, 인돌릴, 1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀리닐, 1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀리닐, 인돌리닐, 벤조푸라닐, 이소퀴놀리닐, 및 2,3-디하이드로벤조푸라닐을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
"헤테로원자"는 질소, 황, 또는 산소 원자, 예를 들어, 질소 원자 또는 산소 원자를 나타낸다.
"헤테로사이클릴"은 특정 수의 구성원 원자를 갖는 지방족 사이클릭 기를 나타낸다. 결합 지점은 어떠한 적합한 탄소 또는 질소 원자에 의해서일 수 있다. 예를 들어, 본원에서 사용되는 용어 "4 내지 7원 헤테로사이클릴"은 하나의 질소 원자를 포함하고, 임의로 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 추가의 헤테로원자를 함유하는 4, 5, 6 또는 7개의 구성원 원자를 갖는 헤테로사이클 기를 나타낸다. "4 내지 7원 헤테로사이클" 기의 예는 모르폴리닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 호모피페라지닐 및 피롤리디닐을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
"구성원 원자"는 사슬 또는 고리를 형성하는 원자 또는 원자들을 나타낸다. 하나 초과의 원자가 사슬에, 그리고 고리 내에 존재하는 경우, 각각의 구성원 원자는 사슬 또는 고리 내 인접하는 구성원 원자에 공유적으로 결합된다. 사슬 또는 고리 상의 치환기를 구성하는 원자는 사슬 또는 고리 내의 구성원 원자가 아니다.
기와 관련하여 "치환된"은 기 내 구성원 원자에 결합된 수소 원자가 치환되는 것을 나타낸다. 용어 "치환된"은 이러한 치환이 치환된 원자 및 치환기의 허용된 원자가에 따르고, 치환이 안정한 화합물(즉, 자발적으로 변형, 예컨대 재배치, 고리화 또는 제거를 거치지 않는 화합물)을 형성한다는 암묵적인 조항을 포함하는 것으로 이해해야 한다. 특정 구체예에서, 단일 원자는 이러한 치환이 허용된 원자가에 따르는 한, 하나 초과의 치환기로 치환될 수 있다. 적합한 치환기는 치환되거나 임의로 치환되는 기 각각에 대해 본원에서 정의된다.
"약제학적으로 허용되는"은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 합당한 유익성/위험성 비에 비례하는, 과도한 독성, 자극 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 사람 및 동물의 조직과의 접촉에 사용하기에 적합한 그러한 화합물, 물질, 조성물 및 투여형을 나타낸다.
"약제학적으로 허용되는 부형제"는 약제 조성물에 형태 또는 컨시스턴시(consistency)를 부여하는 것과 관련된 약제학적으로 허용되는 물질, 조성물 또는 비히클을 나타낸다. 각각의 부형제는 환자에게 투여되었을 때 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 효능을 실질적으로 감소시키지 않을 상호작용 및 약제학적으로 허용되지 않는 약제 조성물을 야기할 상호작용이 피해지도록 혼합되었을 때 약제 조성물의 다른 성분들과 상용성이어야 한다. 또한, 각각의 부형제는 물론 약제학적으로 허용되는, 예를 들어, 충분히 높은 순도여야 한다.
"rac"는 화학식 (I)의 화합물의 라세미 혼합물을 나타낸다. 예를 들어, "rac-(2S,3R,4R)"은 (2S,3R,4R) 거울상이성질체와 (2R,3S,4S) 거울상이성질체의 라세미 혼합물을 의미한다.
문맥이 달리 요구하지 않는 한, 이하의 상세한 설명 및 청구 범위에 걸쳐, 용어 "포함한다" 및 "포함하는" 및 "포함"과 같은 변이형은 명시된 정수 또는 단계 또는 정수 그룹을 포함하나, 다른 정수 또는 단계 또는 정수 또는 단계 그룹을 제외하지 않는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다.
본 발명의 화합물은 고체 또는 액체 형태로 존재할 수 있다. 고체 상태에서, 본 발명의 화합물은 결정질 또는 비결정질 형태로, 또는 이들의 혼합물로서 존재할 수 있다. 결정질 형태로 존재하는 본 발명의 화합물의 경우, 당업자들은 용매 분자가 결정화 동안 결정질 격자내로 혼입되는 경우, 약제학적으로 허용되는 용매화물이 형성될 수 있음을 인지할 것이다. 용매화물은 비수성 용매, 예컨대 에탄올, 이소-프로필 알코올, N,N-디메틸설폭사이드 (DMSO), 아세트산, 에탄올아민, 및 에틸 아세테이트를 포함할 수 있거나, 결정질 격자에 혼입되는 용매로서 물을 포함할 수 있다. 물이 결정질 격자에 혼입되는 용매인 용매화물은 전형적으로 "수화물"로서 언급된다. 수화물은 화학량론적 수화물 뿐만 아니라 다양한 양의 물을 함유하는 조성물을 포함한다. 본 발명은 그러한 모든 용매화물을 포함한다.
다양한 용매화물을 포함하는, 결정질 형태로 존재하는 본 발명의 특정 화합물은 다형성(즉, 상이한 결정질 구조에서 생기는 능력)을 나타낼 수 있는 것으로 추가로 인지될 것이다. 이들 상이한 결정질 형태는 전형적으로 "다형체(polymorph)"로서 알려져 있다. 본 발명은 이러한 다형체를 포함한다. 다형체는 동일한 화학 조성을 갖지만, 패킹, 기하학적 배열 및 결정질 고체 상태의 그 밖의 기술적 성질(descriptive property)이 다르다. 그러므로, 다형체는 상이한 물리적 성질, 예컨대, 형상, 밀도, 경도, 변형성, 안정성 및 용해 성질을 가질 수 있다. 다형체는 전형적으로 식별을 위해 사용될 수 있는, 상이한 융점, IR 스펙트럼, 및 X-선 분말 회절 패턴을 나타낸다. 상이한 다형체는 예를 들어 화합물의 제조에 사용되는 반응 조건 또는 시약을 변경하거나 조절함으로써 생성될 수 있는 것으로 인지될 것이다. 예를 들어, 온도, 압력 또는 용매의 변경이 다형체를 야기할 수 있다. 또한, 하나의 다형체는 특정 조건 하에서 다른 다형체로 자발적으로 변환될 수 있다. 화학식(I)의 화합물의 다형체 형태는 X-선 분말 회절 (XRPD) 패턴, 적외선 (IR) 스펙트럼, Raman 스펙트럼, 시차 주사 열량측정법 (DSC), 열중량 분석 (TGA) 및 고체상 핵자기 공명 (SSNMR)을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아닌 다수의 통상적인 분석 기술을 사용하여 특징화되고 차별화될 수 있다.
화학식 (I)에 따른 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심(키랄 중심으로서 또한 언급됨)을 함유하며, 이에 따라 개별 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 또는 다른 입체이성질체 형태, 또는 이들의 혼합물로서 존재할 수 있다. 키랄 중심, 예컨대 키랄 탄소 원자는 또한 알킬 기와 같은 치환기에 존재할 수 있다. 화학식 (I)에 또는 본원에서 예시되는 어떠한 화학 구조에 존재하는 키랄 중심의 입체화학이 명시되지 않은 경우, 구조는 어떠한 입체이성질체 및 이들의 모든 혼합물을 포함하는 것으로 의도된다. 따라서, 하나 이상의 키랄 중심을 함유하는 화학식 (I)에 따른 화합물은 라세미 혼합물 및 라세메이트를 포함하는 라세미 변형체, 거울상이성질체적으로 풍부한 혼합물, 또는 거울상이성질체적으로-순수한 개별 입체이성질체로서 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 실질적으로 다른 이성질체가 없는 것과 같이 분리된 개별 이성질체(즉, 순수)이든, 또는 혼합물(즉, 라세메이트 및 라세미 혼합물)이든 간에 화학식(I)의 화합물의 모든 이성질체를 포함한다. 실질적으로 다른 이성질체가 없는 것과 같이 분리된 개별 이성질체(즉, 순수)는 다른 이성질체가 10% 미만, 특히 약 1% 미만, 예를 들어, 약 0.1% 미만으로 존재하도록 분리될 수 있다.
단일 입체 중심을 지닌 라세미 화합물은 입체화학(단일 결합)이 없거나 부호 (+/-) 또는 rac를 갖는 것으로 표시된다. 상대 입체화학이 알려져 있는 둘 이상의 입체중심을 갖는 라세미 화합물은 구조에 묘사되는 바와 같이 시스 또는 트랜스로 표시된다. 절대 입체 화학은 알려져 있지 않지만 상대 입체화학은 알려져 있는 분해된 단일 거울상이성질체는 묘사되는 적합한 상대 입체화학과 함께 (R* 또는 S*)와 같이 언급된다.
부분입체이성질체가 표현되고, 상대 입체화학 만 언급되는 경우, 진한(bold) 또는 해시드 솔리드(hashed solid) 결합 부호(
Figure pct00002
)가 사용된다. 절대 입체화학이 알려져 있고, 화합물이 단일 거울상이성질체인 경우, 진한 또는 해시드 Ÿ‡지 부호(
Figure pct00003
)가 경우에 따라 사용된다.
하나 이상의 비대칭 중심을 함유하는 화학식 (I)에 따른 화합물의 개별 입체이성질체는 당업자들에게 공지되어 있는 방법에 의해 분해될 수 있다. 예를 들어, 이러한 분해는 (1) 부분입체이성질체 염, 착물 또는 그 밖의 유도체의 형성에 의해; (2) 입체이성질체-특이적 시약과의 선택적 반응에 의해, 예를 들어, 효소적 산화 또는 환원에 의해; 또는 (3) 키랄 환경에서, 예를 들어 결합된 키랄 리간드를 갖는 실리카와 같은 키랄 지지체 상에서 또는 키랄 용매의 존재 하에서 가스-액체 또는 액체 크로마토그래피에 의해 수행될 수 있다. 요망하는 입체이성질체가 상기 기술된 분리 절차 중 어느 하나에 의해 또 다른 화학적 실체로 변환되는 경우, 요망하는 형태를 유리시키기 위해 추가 단계가 요구되는 것이 이해될 것이다. 대안적으로, 특정 입체이성질체는 광학 활성 시약, 기재, 촉매 또는 용매를 사용하는 비대칭 합성에 의해, 또는 하나의 거울상이성질체를 비대칭 변환에 다른 것으로 변환시킴으로써 합성될 수 있다.
화학식(I)의 화합물의 경우, 호변이성질체(tautomer)가 관찰될 수 있는 것으로 이해될 것이다. 호변이성질체의 생물학적 활성과 관련된 어떠한 언급은 호변 이성질체 둘 모두를 포함하는 것으로 간주되어야 한다
본원에서 화학식(I)의 화합물 및 이의 염에 대한 언급은 화학식(I)의 화합물을 유리 염기로서, 또는 이의 염으로서, 예를 들어 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 일 구체예에서, 본 발명은 유리 염기로서의 화학식(I)의 화합물에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식(I)의 화합물 및 이의 염에 관한 것이다. 추가의 구체예에서, 본 발명은 화학식(I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염에 관한 것이다.
화학식 (I)의 화합물의 염은 약제에서의 이들의 잠재적인 용도로 인해 바람직하게는 약제학적으로 허용된다. 적합한 약제학적으로 허용되는 염은 산 부가염 또는 염기 부가염을 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 염에 대한 검토를 위해, 문헌[Berge et al., J. Pharm. Sci ., 66:1-19, (1977)]을 참고한다. 전형적으로, 약제학적으로 허용되는 염은 적합한 요망되는 산 또는 염기를 이용하여 용이하게 제조될 수 있다. 생성된 염은 용액으로부터 침전될 수 있고 여과에 의해 수집되거나 용매의 증발에 의해 회수될 수 있다.
약제학적으로 허용되는 산 부가염은, 화학식 (I)의 화합물을 임의로 유기 용매와 같은 적합한 용매 중에서 적합한 무기산 또는 유기산 (예컨대 브롬화수소산, 염산, 황산, 질산, 인산, 숙신산, 말레산, 아세트산, 프로피온산, 푸마르산, 시트르산, 타르타르산, 락트산, 벤조산, 살리실산, 글루탐산, 아스파르트산, p-톨루엔설폰산, 벤젠설폰산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 나프탈렌설폰산, 예컨대 2-나프탈렌설폰산, 또는 헥산산)과 반응시켜 대개, 예를 들어 결정화 및 여과에 의해, 또는 증발에 의한 분쇄에 의해 분리되는 염을 제공함으로써 형성될 수 있다. 화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용되는 산 부가염은, 예를 들어 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 설페이트, 니트레이트, 포스페이트, 석시네이트, 말레에이트, 아세테이트, 프로피오네이트, 푸마레이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 벤조에이트, 살리실레이트, 글루타메이트, 아스파르테이트, p-톨루엔설포네이트, 벤젠설포네이트, 메탄설포네이트, 에탄설포네이트, 나프탈렌설포네이트 (예컨대, 2-나프탈렌설포네이트) 또는 헥사노에이트 염일 수 있거나, 이들을 포함할 수 있다.
예를 들어, 화학식 (I)의 화합물의 분리를 위해 그 밖의 비-약제학적으로 허용되는 염, 예를 들어, 포르메이트, 옥살레이트 또는 트리플루오로아세테이트가 사용될 수 있고, 이들은 본 발명의 범위 내에 포함된다.
본 발명은 그 범위 내에 화학식 (I)의 화합물의 염의 모든 가능한 화학량론적 및 비-화학량론적 형태를 포함한다.
상기로부터 본 발명의 범위 내에 화학식 (I)의 화합물 및 이의 염의 용매화물, 이성질체 및 다형체 형태가 포함되는 것이 이해될 것이다.
발명의 진술
제1 양태에서, 하기 화학식(I)의 화합물 및 이의 염이 제공된다:
Figure pct00004
상기 식에서,
R1은 -C1- 3알킬 또는 사이클로프로필이고;
R2는 H 또는 -C0- 3알킬-C3- 7사이클로알킬이고, 여기서 사이클로알킬 기는 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R5 기로 치환되거나 비치환되고;
R3은 -H, -C1- 4알킬, 사이클로프로필 또는 -(CH2)pOR10이고;
R4는 a) 페닐(동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R7 기로 치환되거나 비치환될 수 있음); b) 5 또는 6원 헤테로아릴 기(-C1- 3알킬, -O-C1- 3알킬 또는 할로에 의해 치환되거나 비치환될 수 있음); c) 9 내지 11원 헤테로아릴 기(-C1- 3알킬-R8, -OCH3, -O-C2- 3알킬-R8, 할로, 옥소, -O-CF3 및 -CN로부터 선택되는, 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 기로 치환되거나 비치환될 수 있음); 또는 d) -(CH2)n-페닐이고;
p는 1 또는 2이고;
n은 1 또는 2이고;
R5는 할로, 페닐, -C1- 6알킬-R8, -CO2H, -OCH3, -O-C2- 6알킬-R8, -CN, -OH 또는 -NHR6이고;
R6은 -H, -C(O)OC(CH3)3, -C1- 6알킬, -C3- 7사이클로알킬, 4 내지 7원 헤테로사이클릴 기, 또는 -C2- 3알킬-O-C1- 3알킬이고, 여기서 -C1- 6알킬 및 -C3- 7사이클로알킬 기는 1, 2 또는 3개의 플루오로에 의해 임의로 치환될 수 있고;
R7은 -NR11R12, -C1- 3알킬, 할로, -CO2R10, -CH2OH, -CH(R11)OR10, -C(O)C1- 3알킬, -CH(R10)NR11R12, -CN, -CHF2, -CF3, -OH, -OCHF2, -OCF3, -OCH3, -O-C2- 6알킬-R9, -C1- 6알킬-R9 또는 -O-피페리디닐이고;
R8은 -H, -OR10, -CO2C(CH3)3 또는 -NR11R12이고;
R9는 -H, -OR10 또는 -NR11R12이고;
R10은 -H 또는 -C1- 3알킬이고;
R11 및 R12는 각각 독립적으로 -H, -C1- 3알킬 및 -C1- 3알킬NR13R14로부터 선택되거나; R11 및 R12는 이들이 결합되는 질소와 함께 결합하여 -C1- 3알킬, -OH 및 F로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 개의 치환기에 의해 임의로 치환되는, 4 내지 7원 헤테로사이클릴 기를 형성하고;
R13 및 R14는 각각 독립적으로 -H, -C1- 3알킬 및 -C(O)CH3로부터 선택된다.
일 구체예에서,
R1은 -C1- 3알킬 또는 사이클로프로필이고;
R2는 -C0- 3알킬-C3- 7사이클로알킬이고, 여기서 사이클로알킬 기는 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R5 기로 치환되거나 비치환되고;
R3은 -H, -C1- 4알킬, 사이클로프로필 또는 -(CH2)pOR10이고;
R4는 a) 페닐(동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R7 기로 치환되거나 비치환될 수 있음); b) 5 또는 6원 헤테로아릴 기(-C1- 3알킬, -O-C1- 3알킬 또는 할로에 의해 치환되거나 비치환될 수 있음); c) 9 내지 11원 헤테로아릴 기(-C1- 3알킬-R8, -OCH3, -O-C2- 3알킬-R8, 할로, 옥소, -O-CF3 및 -CN로부터 선택되는, 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 기로 치환되거나 비치환될 수 있음); 또는 d) -(CH2)n-페닐이고;
p는 1 또는 2이고;
n은 1 또는 2이고;
R5는 할로, 페닐, -C1- 6알킬-R8, -CO2H, -OCH3, -O-C2- 6알킬-R8, -CN, -OH 또는 -NHR6이고;
R6은 -H, -C(O)OC(CH3)3, -C1- 6알킬, -C3- 7사이클로알킬, 4 내지 7원 헤테로사이클릴 기, 또는 -C2- 3알킬-O-C1- 3알킬이고, 여기서 -C1- 6알킬 및 -C3- 7사이클로알킬 기는 1, 2 또는 3개의 플루오로에 의해 임의로 치환될 수 있고;
R7은 -NR11R12, -C1- 3알킬, 할로, -CO2R10, -CH2OH, -CH(R11)OR10, -C(O)C1- 3알킬, -CH(R10)NR11R12, -CN, -OH, -OCHF2, -OCF3, -OCH3, -O-C2- 6알킬-R9, -C1- 6알킬-R9 또는 -O-피페리디닐이고;
R8은 -H, -OR10 또는 -NR11R12이고;
R9는 -H, -OR10 또는 -NR11R12이고;
R10은 -H 또는 -C1- 3알킬이고;
R11 및 R12는 각각 독립적으로 -H 및 -C1- 3알킬로부터 선택되거나; R11 및 R12는 이들이 결합되는 질소와 함께 결합하여 -C1- 3알킬, -OH 및 F로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 개의 치환기에 의해 임의로 치환되는, 4 내지 7원 헤테로사이클릴 기를 형성할 수 있는, 화학식(I)의 화합물 및 이의 염이 제공된다.
일 구체예에서, 하기 화학식(Ia)의 화합물 및 이의 염이 제공된다:
Figure pct00005
상기 식에서,
R1은 -C1- 3알킬 또는 사이클로프로필이고;
R2는 -C0- 3알킬-C3- 7사이클로알킬이고, 여기서 사이클로알킬 기는 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R5 기로 치환되거나 비치환되고;
R3은 -H, -C1- 4알킬, 또는 사이클로프로필이고;
R4는 a) 페닐(동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R7 기로 치환되거나 비치환될 수 있음); b) 5 또는 6원 헤테로아릴 기(메틸 또는 메톡시에 의해 치환되거나 비치환될 수 있음); c) 9 내지 11원 헤테로아릴 기(메틸, 플루오로 및 옥소로부터 선택되는, 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 기로 치환되거나 비치환될 수 있음); 또는 d) -(CH2)n-페닐이고;
p는 1 또는 2이고;
n은 1 또는 2이고;
R5는 할로, 페닐, -C1- 6알킬-R8, -CO2H, -O-C2- 6알킬-R8, -CN, -OH 또는 -NHR6이고;
R6은 -H, 또는 -C(O)OC(CH3)3이고;
R7은 -NHCH3, -N(CH3)2, -CH3, -F, -CO2H, -CH2OH, -Cl, -C(O)CH3, -C(O)OCH3, -CH2N(CH3)2, -CN, -OH, -O-C1- 6알킬-R9, -C1- 6알킬-R9 또는 -O-피페리디닐이고;
R8은 -H, -OH, -N(CH3)2 또는 -OCH3이고;
R9는 -H, -OH, -N(CH3)2 또는 모르폴리닐이고;
R10은 -H, 메틸 또는 에틸이다.
일 구체예에서, R1은 메틸, 에틸 또는 사이클로프로필이다.
일 구체예에서, R1은 메틸이다.
일 구체예에서, R2는 H이다.
일 구체예에서, R2는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로헥실, 메틸사이클로부틸, 메틸사이클로펜틸, 메틸사이클로헥실, 에틸사이클로프로필, 에틸 사이클로헥실 또는 스피로[3.3]헵탄일이고, 여기서 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 및 사이클로헥실 기는 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R5 기로 치환되거나 비치환될 수 있다.
일 구체예에서, R2는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 3-플루오로사이클로부틸, 3-페닐사이클로부틸, 6-아미노스피로[3,3]헵탄일, 2-사이클로프로필에틸, (트랜스)-2-메틸사이클로프로필, (트랜스)-4-하이드록시사이클로헥실, 2-하이드록시메틸사이클로프로필, 2-메톡시사이클로프로필, 1-시아노사이클로프로필, 2,2-디플루오로사이클로프로필, 3-(3차)-부톡시카보닐아미노사이클로부틸, (1R*,2R*)-2-에톡시사이클로프로필, (1S*,2S*)-2-에톡시사이클로프로필, (트랜스)-2-에틸사이클로프로필, (1S,2S)-2-하이드록시메틸사이클로프로필, (1R,2R)-, 2-하이드록시메틸사이클로프로필, (1S,2S)-2-에틸사이클로프로필, (1R,2R)-2-에틸사이클로프로필, (1R,2R)-2-메틸사이클로프로필, 2-에톡시사이클로프로필, (시스)-4-하이드록시사이클로헥실, (1S*,2S*)-2-메톡시사이클로프로필, (트랜스)-2-에톡시사이클로프로필, (시스)-2-메틸사이클로프로필, (트랜스)-2-하이드록시메틸사이클로프로필, (트랜스)-2-에톡시사이클로프로필, (1R*,2R*)-2-메틸사이클로프로필, (1R,2R)-2-하이드록시메틸사이클로프로필, (1S,2S)-2-메틸사이클로프로필, (1S*,2S*)-2-하이드록시메틸사이클로부틸메틸, (시스)-3-하이드록시사이클로부틸, 6-(3차)-부톡시카보닐아미노스피로[3.3]헵탄일, 2-페닐사이클로부틸, (시스)-3-하이드록시카보닐사이클로부틸, 1-이소부틸사이클로프로필, 3-메톡시-2,2-디메틸사이클로부틸, 3-에톡시사이클로부틸, 3-메틸사이클로부틸, 3-에톡시-2-메톡시사이클로부틸, 1-프로필사이클로부틸, (1S,3R)-3-하이드록시사이클로펜일, (트랜스)-2-하이드록시사이클로헥실, (시스)-2-하이드록시사이클로헥실, 2,2-디플루오로사이클로프로필, 2-하이드록시사이클로펜일, (트랜스)-2-메톡시사이클로프로필, 2-하이드록시사이클로헥실, (1R,2S)-2-하이드록시사이클로펜일메틸, (시스)-2-하이드록시사이클로펜일메틸, (트랜스)-3-하이드록시사이클로펜일메틸, (시스)-3-하이드록시사이클로펜일메틸, (트랜스)-4-하이드록시사이클로헥실메틸, (시스)-4-하이드록시사이클로헥실메틸, (1R*,2R*)-2-메틸사이클로프로필, (1R,3S)-3-하이드록시사이클로헥실메틸, (1R,2R)-2-하이드록시사이클로부틸, (1S*,3S*)-3-하이드록시사이클로헥실, (1R*,3R*)-3-하이드록시사이클로헥실, (1S*,3R*)-3-하이드록시사이클로헥실, (1R,3S)-3-하이드록시사이클로헥실, 2,2-디메틸사이클로프로필, (1S*,2S*)-2-메틸사이클로프로필, (트랜스)-2-메톡시사이클로부틸, (1R*)-2,2-디메틸사이클로프로필, 또는 (1S*)-2,2-디메틸사이클로프로필이다.
일 구체예에서, R2는 사이클로프로필이다.
일 구체예에서, R2는 (1S, 2S)-2-메틸사이클로프로필이다.
일 구체예에서, R3은 -H, -C1- 4알킬 또는 사이클로프로필이다.
일 구체예에서, R3은 H, 메틸, 에틸 또는 사이클로프로필이다.
일 구체예에서, R3은 H이다.
일 구체예에서, R4는 a) 페닐 (동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R7 기로 치환되거나 비치환될 수 있음); b) 5 또는 6원 헤테로아릴(메틸로 치환되거나 비치환될 수 있음) 또는 c) 9 내지 11원 헤테로아릴(메틸로 치환되거나 비치환될 수 있음)이다.
일 구체예에서, R4는 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R7 기로 치환되거나 비치환된 페닐이다.
일 구체예에서, R4는 페닐, 3-메틸아미노페닐, 3-디메틸아미노페닐,3,5-디메틸페닐, 4-메톡시페닐, 2,3-디메틸페닐, 2-플루오로-3-메틸페닐, 4-플루오로-3-메틸페닐, 4-메톡시-3-메틸페닐, 3-플루오로-5-메틸페닐, 3-메틸페닐, 2-플루오로-5-메틸페닐, 3-메톡시카보닐페닐, 3-하이드록시메틸페닐, 3-메톡시페닐, 3-하이드록시페닐, 3-(2-하이드록시에톡시)페닐, 3-플루오로페닐, 4-플루오로페닐, 4-메틸페닐, 2-플루오로페닐, 3-(모르폴리노)페닐, 3-클로로페닐, 3-아세틸페닐, 2-메틸페닐, 3-2-(디메틸아미노에톡시)페닐, 2-플루오로-3-메틸페닐, 3-(1-하이드록시에틸)페닐, 3-하이드록시페닐, 2,5-디메틸페닐, 4-메톡시카보닐페닐, 3-시아노페닐, 3-(모르폴리노메틸)페닐, 3-(디메틸아미노메틸)페닐, 4-하이드록시메틸, 2-메틸페닐, 2-플루오로-5-메틸, 4-플루오로-3-메톡시페닐, (R*)-3-(1-하이드록시에틸)페닐, 또는 (S*)-3-(1-하이드록시에틸)페닐이다.
일 구체예에서, R4는 메틸 또는 메톡시로 치환되거나 비치환된, 5 또는 6원 헤테로아릴이다.
일 구체예에서, R4는
Figure pct00006
이며, 여기서 *는 알킬 잔기에 대한 결합 지점을 나타내고, R4는 메틸 또는 메톡시로 치환되거나 비치환될 수 있다.
일 구체예에서, R4는 6-메톡시피리딘-3-일, 피리딘-2-일, 피리딘-3-일, 피리딘-4-일, 1-메틸-1H피라졸-4-일 또는 6-메틸피리딘-2-일이다.
일 구체예에서, R4는 메틸로 치환되거나 비치환된, 9 내지 11원 헤테로아릴이다.
일 구체예에서, R4는
Figure pct00007
이며, 여기서 *는 알킬 잔기에 대한 결합 지점을 나타내고, R4는 메틸에 의해 치환되거나 비치환될 수 있다.
일 구체예에서, R4는 (2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-5-일, 퀴놀린-8-일, 1H-벤조[d]이미다졸-4-일, 1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-7-일, 퀴녹살린-5-일, 1H-인다졸-4-일, 1H-인다졸-7-일, 1H-벤조[d]이미다졸-6-일, 2,3,4,5-테트라하이드로-1H-벤조[d]에제핀-7-일, 1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-8-일, 1H-인돌-4-일, 인돌린-4-일, 1-메틸-1H-인돌-4-일, 2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일, 3-메틸-1H-인돌-4-일, 벤조푸란-4-일, 이소퀴놀린-5-일, 1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-7-일, 1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-8-일, 1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-5-일, 1H-인돌-3-일, 1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일, 4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-4-일, 벤조푸란-3-일 또는 2,3-디하이드로벤조푸란-3-일이다.
일 구체예에서, R4는 페닐, 3-메톡시페닐, 3-하이드록시에톡시페닐 또는 인돌린-4-일이다. 또 다른 구체예에서, R4는 페닐이다. 추가의 구체예에서, R4는 3-하이드록시에톡시페닐이다.
일 구체예에서, R5는 할로, 페닐, -C1- 6알킬, -O-C1- 6알킬, -CO2H, -C1- 6알킬-OH, -CN, -OH 또는 -NHR6이다. 또 다른 구체예에서, R5는 -F, 페닐, 메틸, 에틸, n-프로필, -OCH3, -OCH2CH3, -CH2OH, -CN, -OH, -NH2 또는 -NHC(O)OC(CH3)3이다. 추가의 구체예에서, R5는 메틸이다.
일 구체예에서, R7은 -NHCH3, -N(CH3)2, -CH3, -OCH3, -F, -CH2OH, -CN, -CH2-모르폴리닐, -Cl, -C(O)CH3, -OCH2CH2N(CH3)2, -OCH2CH2OH, -C(O)OCH3, -CH2N(CH3)2, -OH, 또는 -CH(CH3)OH이다. 또 다른 구체예에서, R7은 -NHCH3, -N(CH3)2, -CH3, -OCH3, -F, -CH2OH, -CN, -CH2-모르폴리닐, -Cl, -C(O)CH3, -OCH2CH2N(CH3)2, -OCH2CH2OH, -C(O)OCH3, -CH2N(CH3)2, -OH, -CHF2, -CF3 또는 -CH(CH3)OH이다. 또 다른 구체예에서, R7은 -CH(CH3)OH이다.
본 발명은 상기에서 기술된 치환기들의 모든 조합을 포함하는 것으로 이해해야 한다.
본 발명의 화합물은 실시예 1 내지 268의 화합물 및 이들의 염을 포함한다.
추가의 구체예에서, 실시예 269 내지 341의 화합물 및 이들의 염이 제공된다.
추가의 구체예에서, 실시예 1 내지 341의 화합물 및 이들의 염이 제공된다.
일 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
1-벤질-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
rac-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-페닐프로필)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-1-((2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-5-일)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-N3-메틸-1-(3-(메틸아미노)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-1-(3-(디메틸아미노)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-(3-플루오로사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-1-(3,5-디메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-1-(4-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1-(퀴놀린-8-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-1-(2,3-디메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-1-(4-메톡시-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-1-(3-플루오로-5-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N3-메틸-2-옥소-N5-(3-페닐사이클로부틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(6-아미노스피로[3.3]헵탄-2-일)-1-벤질-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-사이클로부틸-N3-사이클로프로필-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-벤조[d]이미다졸-4-일)메틸)-N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-(2-사이클로프로필에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
메틸 3-((5-(사이클로부틸카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)벤조에이트;
N5-사이클로부틸-1-(3-(하이드록시메틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-1-(3-하이드록시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-벤조[d]이미다졸-4-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(R)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-7-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N3-메틸-N5-((시스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((트랜스)-4-하이드록시사이클로헥실)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N5-(2-메톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N5-(1-시아노사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(퀴녹살린-5-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(S*)-1-벤질-N5-(2,2-디플루오로사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
3차-부틸 (3-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)사이클로부틸)카바메이트;
N5-사이클로프로필-1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(4-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1R*,2R*)-2-에톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1S*,2S*)-2-에톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N5-((트랜스)-2-에틸사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(퀴놀린-8-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-인다졸-4-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-인다졸-7-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-(4-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(3,5-디메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(2-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-벤조[d]이미다졸-6-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-(3-(모르폴리노메틸)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1S,2S)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1R,2R)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-(2-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
5-브로모-1-((6-메톡시피리딘-3-일)메틸)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드;
(+/-)1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1R,2R)-2-에틸사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1S,2S)-2-에틸사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-인돌-7-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-클로로벤질)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
rac-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-N5-((1R,2R)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(2-사이클로프로필에틸)-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(6-아미노스피로[3.3]헵탄-2-일)-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(3-플루오로사이클로부틸)-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(2-에톡시사이클로프로필)-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(R)-N5-(3-플루오로사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(R)-N5-(2-사이클로프로필에틸)-N3-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(2-에톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1-((R)-1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1-((R)-1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1-((R)-1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((2,3,4,5-테트라하이드로-1H-벤조[d]아제핀-7-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-(2-((시스)-4-하이드록시사이클로헥실)에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-(2-((트랜스)-4-하이드록시사이클로헥실)에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(2-플루오로벤질)-N5-((1S*,2S*)-2-메톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(4-플루오로벤질)-N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(2-에톡시사이클로프로필)-1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
rac-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(3-플루오로사이클로부틸)-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(2-사이클로프로필에틸)-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
rac-N5-(2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
rac-N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(6-아미노스피로[3.3]헵탄-2-일)-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
rac-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-아세틸벤질)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
rac-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-(o-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(2-에톡시사이클로프로필)-1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-8-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N3-메틸-N5-((1R,2R)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-N5-(2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(3-(2-(디메틸아미노)에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(((+/-)-트랜스)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-에틸사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(3-플루오로사이클로부틸)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(2-사이클로프로필에틸)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
rac-N5-(2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
rac-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(6-아미노스피로[3.3]헵탄-2-일)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
rac-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(R*)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(2-에톡시사이클로프로필)-1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(2-사이클로프로필에틸)-1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(2-에톡시사이클로프로필)-1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-N5-(3-플루오로사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(6-아미노스피로[3.3]헵탄-2-일)-1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(4-플루오로벤질)-N5-((1R*,2R*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(4-플루오로벤질)-N5-((1S*,2S*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((1R*,2R*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((1S*,2S*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1R*,2R*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1S*,2S*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1R*,2R*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1S*,2S*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1R*,2R*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1S*,2S*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-5-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-N5-((트랜스)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(2-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((1S*,2S*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(2-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((1R*,2R*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-(3-플루오로사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-(2-사이클로프로필에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-(2-에톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-N5-((시스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-N5-사이클로프로필-1-(3-(1-하이드록시에틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1R,2R)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(인돌린-4-일메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((1-메틸-1H-인돌-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((3-메틸-1H-인돌-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-인다졸-7-일)메틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-N5-((트랜스)-2-에틸사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(벤조푸란-4-일메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((트랜스)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1-((S*)-1-(m-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-(1-(1H-인돌-4-일)에틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((1S*,2S*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((1R*,2R*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-N5-((1R,2R)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(사이클로프로필(페닐)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-(사이클로부틸메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1-(피리딘-4-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1-(피리딘-2-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1-(피리딘-3-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-1-(2-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-N3-메틸-1-((1-메틸-1H-피라졸-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-1-(2,5-디메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((시스)-3-하이드록시사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-(3,3-디플루오로사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
3차-쿠틸 (6-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)스피로[3.3]헵탄-2-일)카바메이트;
1-벤질-N3-메틸-2-옥소-N5-(2-페닐사이클로부틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(시스)-3-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)사이클로부탄카복실산;
N5-사이클로부틸-1-(이소퀴놀린-5-일메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(S)-N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-사이클로부틸-N3-에틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-(1-이소부틸사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-(3-메톡시-2,2-디메틸사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-(3-에톡시사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N3-메틸-N5-(3-메틸사이클로부틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-(3-에톡시-2-메톡시사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N3-메틸-2-옥소-N5-(1-프로필사이클로프로필)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(S)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
메틸 4-((5-(사이클로부틸카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)벤조에이트;
1-벤질-N5-(2-에톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1-(퀴놀린-5-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1S,3R)-3-하이드록시사이클로펜틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-시아노벤질)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N5-((트랜스)-2-하이드록시사이클로헥실)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N5-((시스)-2-하이드록시사이클로헥실)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((6-메틸피리딘-2-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(R*)-1-벤질-N5-(2,2-디플루오로사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N5-(2-하이드록시사이클로펜틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(3-페닐프로필)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-페네틸-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-(3-(모르폴리노메틸)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-(2-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((시스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-(2-플루오로벤질)-N5-((트랜스)-2-메톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((2-하이드록시사이클로헥실)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-7-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N5-(((1R,2S)-2-하이드록시사이클로펜틸)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N5-(((시스)-2-하이드록시사이클로펜틸)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N5-(((트랜스)-3-하이드록시사이클로펜틸)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N5-(((시스)-3-하이드록시사이클로펜틸)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-(((트랜스)-4-하이드록시사이클로헥실)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-(((시스)-4-하이드록시사이클로헥실)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
메틸 4-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)벤조에이트;
N5-사이클로프로필-1-(3-((디메틸아미노)메틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(2-플루오로벤질)-N5-((1R*,2R*)-2-메톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(R)-N5-(6-아미노스피로[3.3]헵탄-2-일)-N3-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N5-(((1R,3S)-3-하이드록시사이클로헥실)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(4-메톡시-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-N5-((시스)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1R,2R)-2-하이드록시사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(4-(하이드록시메틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(S*)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(S*)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-(o-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(R*)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-(o-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1S*,3S*)-3-하이드록시사이클로헥실)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1R*,3R*)-3-하이드록시사이클로헥실)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1S*,3R*)-3-하이드록시사이클로헥실)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1R,3S)-3-하이드록시사이클로헥실)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-8-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-(6-아미노스피로[3.3]헵탄-2-일)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-N5-((시스)-2-에톡시사이클로프로필)-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-N5-((트랜스)-2-에톡시사이클로프로필)-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-(2,2-디메틸사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(2-플루오로벤질)-N5-((1R*,2R*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(2-플루오로벤질)-N5-((1S*,2S*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(3-플루오로-5-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-5-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N5-((1S*,2S*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N5-((1R*,2R*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1S*,2S*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1R*,2R*)-2-에톡시사이클로프로필)-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1S*,2S*)-2-에톡시사이클로프로필)-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N5-((1R*,2R)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N5-((1S*,2S*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-플루오로벤질)-N5-((1S*,2S*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-플루오로벤질)-N5-((1R*,2R*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-N5-((트랜스)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(4-플루오로-3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-인돌-3-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((1R*,2R*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((1S*,2S*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N5-((트랜스)-2-메톡시사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(2-하이드록시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(3-플루오로-5-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-1-(3-(모르폴리노메틸)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(R*)-1-벤질-N5-(2,2-디메틸사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(S*)-1-벤질-N5-(2,2-디메틸사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-N5-((1R*,2R*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-N5-((1S*,2S*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1R*,2R*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1S*,2S*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1R*,2R*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1S*,2S*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-N5-((1R*,2R*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-N5-((1S*,2S*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N3-메틸-N5-((1R*,2R*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1-((R)-1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N3-메틸-N5-((1S*,2S*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1-((R)-1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(1-(3-메톡시페닐)에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N5-((트랜스)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(벤조푸란-3-일메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-N5-((트랜스)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(R*)-N5-사이클로프로필-1-(3-(1-하이드록시에틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(S*)-N5-사이클로프로필-1-(3-(1-하이드록시에틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((트랜스)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1-((S*)-1-(m-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드; 또는
N5-사이클로프로필-1-((2,3-디하이드로벤조푸란-3-일)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N3-메틸-N5-((1R*,2R*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N3-메틸-N5-((1S*,2S*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((2-메틸-1H-인돌-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-(디플루오로메톡시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(3-(디플루오로메톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(퀴놀린-7-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((S*)-1-(3-메톡시페닐)에틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N5-((1R*,2R*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N5-((1S*,2S*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1R*,2R*)-2-에틸사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1S*,2S*)-2-에틸사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1R*,2R*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1S*,2S*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(2-((트랜스)-4-아미노사이클로헥실)에틸)-1-벤질-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-(2-((시스)-4-아미노사이클로헥실)에틸)-1-벤질-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)메틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(±)-1-벤질-N5-((트랜스)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(3-(2-하이드록시에틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-3차-부틸 2-((트랜스)-2-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)사이클로프로필)아세테이트;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-(3-(2-모르폴리노에틸)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
3-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)벤조산;
1-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(3-(2-(디메틸아미노)에틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(인돌린-4-일메틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1S,2S)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-N5-((트랜스)-2-에틸사이클로프로필)-1-(인돌린-4-일메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-(2-하이드록시에틸)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1S,2R)-2-((디메틸아미노)메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-1-((6-메틸피리딘-2-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N5-((트랜스)-2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-((1-(2-하이드록시에틸)-1H-인돌-3-일)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-1-(3-(2-모르폴리노에틸)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1R,2R)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1R,2R)-2-(에톡시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-하이드록시벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1S,2S)-2-(에톡시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-(2-메톡시에톡시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-((S)-2-하이드록시프로폭시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-1-(3-(2-모르폴리노에톡시)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3-((R)-2-하이드록시프로폭시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N3-에틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1S*,2R*)-2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1R*,2S*)-2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-N3-에틸-1-(인돌린-4-일메틸)-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-N3-에틸-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-(2-((2-아미노에틸)(메틸)아미노)에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-(트랜스-3-하이드록시사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(3-(트리플루오로메틸)벤질)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-(2-((2-아세트아미도에틸)(메틸)아미노)에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N3-메틸-N5-((1R*,2R*)-2-(2-모르폴리노에틸)사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N3-메틸-N5-((1S*,2S*)-2-(2-모르폴리노에틸)사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-(2-모르폴리노에틸)사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(R*)-N5-사이클로프로필-1-(2-하이드록시-1-페닐에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(S*)-N5-사이클로프로필-1-(2-하이드록시-1-페닐에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(S*)-N5-사이클로프로필-1-(2-메톡시-1-페닐에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((2-메틸벤조[d]옥사졸-7-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((R*)-1-(3-메톡시페닐)에틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
(+/-)-1-벤질-N5-((트랜스)-2-((디메틸아미노)메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-피롤로[2,3-c]피리딘-3-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((6-메톡시피리딘-2-일)메틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1-(1-(피리딘-2-일)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1-(피리딘-2-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((4-메톡시피리딘-2-일)메틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-1-((4-메틸피리딘-2-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N5-((1R,2S)-2-((디메틸아미노)메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-(3,5-디메톡시벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
메틸 4-((3-(메틸카바모일)-5-(((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)벤조에이트;
4-((3-(메틸카바모일)-5-(((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)벤조산;
1-(4-(2-아미노에톡시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드; 및
1-벤질-N5-((트랜스)-3-하이드록시사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
또는 이들의 염이다.
일 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
1-벤질-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-벤질-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-((1R,2R)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
N5-사이클로프로필-1-(인돌린-4-일메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드; 또는
1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
또는 이들의 염이다.
일 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
1-벤질-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N3-메틸-N5-((1R*,2R*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드; 또는
1-((1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)메틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드;
또는 이들의 염이다.
일 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은 1-벤질-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 또는 이의 염이다. 또 다른 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은 1-벤질-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이다. 추가의 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은 1-벤질-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드이다.
일 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
Figure pct00008
또는 이의 염이다.
또 다른 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
Figure pct00009
의 약제학적으로 허용되는 염이다.
추가의 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
Figure pct00010
이다.
일 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은 1-벤질-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 또는 이의 염이다. 또 다른 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은 1-벤질-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이다. 추가의 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은 1-벤질-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드이다.
일 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
Figure pct00011
또는 이의 염이다.
또 다른 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
Figure pct00012
의 약제학적으로 허용되는 염이다.
추가의 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
Figure pct00013
이다.
일 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
Figure pct00014
또는 이의 염이다.
또 다른 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
Figure pct00015
의 약제학적으로 허용되는 염이다.
추가의 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
Figure pct00016
이다.
일 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은 1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 또는 이의 염이다. 또 다른 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은 1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이다. 추가의 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은 1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드이다.
일 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
Figure pct00017
또는 이의 염이다.
또 다른 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
Figure pct00018
의 약제학적으로 허용되는 염이다.
추가의 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
Figure pct00019
이다.
일 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
Figure pct00020
또는 이의 염이다.
또 다른 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
Figure pct00021
의 약제학적으로 허용되는 염이다.
추가의 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은
Figure pct00022
이다.
본 발명의 제2 양태에서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제 조성물이 제공된다.
본 발명의 제3 양태에서, 치료, 특히 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다.
본 발명의 제4 양태에서, 치료 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게서 그러한 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제공된다.
본 발명의 제5 양태에서, 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다.
용도의 진술
화학식(I)의 화합물 및 이의 염은 브로모도메인 억제제이고, 이에 따라 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료에 잠재적 유용성을 갖는 것으로 여겨진다.
브로모도메인 억제제는 전신 또는 조직 염증, 감염 또는 저산소증에 대한 염증 반응, 세포 활성화 및 증식, 지질 대사, 섬유증과 관련된 다양한 질병 또는 질환의 치료 및 바이러스 감염의 예방 및 치료에 유용한 것으로 여겨진다.
브로모도메인 억제제는 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 골관절염, 급성 통풍, 건선, 전신홍반루푸스, 다발성경화증, 염증성 창자병 (크론병 및 궤양 대장염), 천식, 만성 폐쇄 기도병, 폐렴, 심근염, 심장막염, 근육염, 습진, 피부염(예컨대, 아토피성 피부염 포함), 탈모증, 백반증, 수포성 피부 질환, 신장염, 맥관염, 고콜레스테롤혈증, 죽상동맥경화증, 알츠하이머병, 쇼그렌 증후군, 타액선염, 중심성 망막정맥폐쇄, 분지 망막정맥폐쇄, 어바인-가스 증후군(백내장후 및 수술후), 망막색소변성증, 평면부염, 산탁맥락망막병증, 망막앞막, 낭포황반부종, 중심와부근 모세혈관확장증, 견인성 황반변증, 유리체 황반견인 증후군, 망막박리, 시신경망막염, 특발성 황반부종, 망막염, 안구 건조(건성 각결막염), 봄철 각결막염, 아토피성 각결막염, 포도막염(예컨대, 앞포도막염, 전체포도막염, 후포도막염, 포도막염 관련 황반부종), 공막염, 당뇨병성 망막증, 당뇨병성 황반 부종, 나이 관련 황반 이영양증, 간염, 췌장염, 원발쓸개관간경화증, 경화쓸개관염, 애디슨병, 뇌하수체염, 갑상샘염, 타입 I 당뇨병, 타입 II 당뇨병, 거세포 동맥염, 루푸스 신장염을 포함하는 신장염, 사구체신염과 같은 기관 관련 맥관염, 거세포 동맥염을 포함하는 맥관염, 베게너 육아종, 결절다발동맥염, 베체트병, 가와사키병, 타카야수 동맥염, 괴저성 농피증, 및 기관 침범을 동반한 혈관염, 및 이식 기관의 급성 거부반응과 같은 광범위한 범위의 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환의 치료에 유용할 수 있다.
일 구체예에서, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환은 고콜레스테롤혈증, 아테롬성동맥경화증 또는 알츠하이머병과 같은 APO-A1의 조절을 통해 매개되는 지질 대사의 장애이다.
또 다른 구체예에서, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환은 호흡기 장애, 예컨대 천식 또는 만성 폐쇄 기도병이다.
또 다른 구체예에서, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환은 류마티스 관절염, 골관절염, 급성 통풍, 건선, 전신홍반성루푸스, 다발성경화증, 또는 염증성 창자병(크론병 또는 궤양대장염)이다.
또 다른 구체예에서, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환은 다발성 경화증이다.
또 다른 구체예에서, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환은 타입 I 당뇨병이다.
또 다른 구체예에서, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환은 류마티스 관절염이다.
브로모도메인 억제제는 우울증 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 박테리아, 바이러스, 진균, 기생충 또는 이들의 독소로의 감염에 대한 염증 반응을 수반하는 질병 또는 질환, 예컨대 패혈증, 패혈증 증후군, 패혈 쇼크, 내독소혈증, 전신염증반응증후군 (SIRS), 다발성 장기 기능이상 증후군, 독소충격증후군, 급성 폐 손상, ARDS (성인 호흡곤란증후군), 급성 신부전, 전격간염, 화상, 급성 췌장염, 수술후 증후군, 사르코이드증, 헤르크스하이머 반응, 뇌염, 척수염, 수막염, 말라리아, 및 인플루엔자, 대상포진, 단순 포진 및 코로나바이러스로의 바이러스 감염과 관련된 SIRS의 치료에 유용할 수 있다. 일 구체예에서, 박테리아, 바이러스, 진균, 기생충 또는 이들의 독소로의 감염에 대한 염증 반응을 수반하는 질병 또는 질환은 급성 패혈증이다.
브로모도메인 억제제는 심근경색증, 뇌혈관 허혈 (뇌졸중), 급성 관동맥 증후군, 신장 재관류 손상, 기관 이식, 관상동맥 우회술, 심폐우회술, 폐, 신장, 간, 위창자 또는 말초 사지 색전증과 같은 허혈-재관류 손상과 관련된 질환의 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 심혈관 질환, 예컨대 관상 동맥 질환(예를 들어, 협심증 또는 심근경색), 뇌혈관 허혈 (뇌졸중), 고혈압성 심장병, 류마티스성 심장 질환, 심근병증, 심방세동, 선천성 심장 질환, 심내막염, 대동맥 동맥류 또는 말초 동맥 질환의 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 특발폐섬유증, 신장 섬유증, 외상후 협착, 켈로이드 흉터 형성, 공피증(국소피부경화증(morphea) 포함) 또는 심장 섬유증과 같은 섬유증 질환의 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 바이러스 감염, 예컨대 단순 포진 감염 및 재활성화, 입술 발진, 대상 포진 감염 및 재활성화, 수두, 띠헤르페스, 인간 파필로마 바이러스(HPV), 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 자궁 신생물, 급성 호흡기병을 포함하는 아데노바이러스 감염, 또는 우두 또는 천연두 및 아프리카 돼지열 바이러스와 같은 폭스바이러스 감염의 치료에 유용할 수 있다. 일 구체예에서, 바이러스 감염은 피부 또는 자궁 상피의 HPV 감염이다. 또 다른 구체예에서, 바이러스 감염은 잠재적 HIV 감염이다.
브로모도메인 억제제는 매우 다양한 골 질환, 예컨대 골다공증, 골감소증, 골관절염 및 강직성 척추염의 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 혈액 암 (예컨대 백혈병, 림프종, 다발성 골수종), 상피 암(폐, 유방 또는 결장 암종을 포함), 정중선 암종, 또는 중간엽, 간, 신장 또는 신경학적 종양을 포함하는 암의 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 뇌종양 (신경 교종), 아교 모세포종, 바나얀-조나나(Bannayan-Zonana) 증후군, 코웬(Cowden)병, 레미트-두크로스(Lhermitte-Duclos)병, 유방암, 염증성 유방암, 대장 암, 윌름(Wilm) 종양, 유잉(Ewing) 육종, 횡문근 육종, 상의세포종, 수모세포종, 대장암, 두경부암, 신장암, 폐암, 간암, 흑색종, 편평 상피 세포암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종암, 골육종, 뼈의 거대 세포 종양, 갑상선암, 림프성 T 세포 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 모양세포성 백혈병, 급성 림프성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 호중 구성 백혈병, 급성 림프성 T 세포 백혈병, 형질 세포종, 면역아세포 대세포 백혈병, 맨틀 세포 백혈병, 다발성 골수종, 거대아구성(megakaryoblastic) 백혈병, 급성 거핵 세포성 백혈병, 골수성 백혈병, 혼합 계통 백혈병, 백혈병, 악성 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 림프성 T 세포 림프종, 버킷 림프종, 난포 림프종, 신경 모세포종, 방광암, 상피암, 외음부암, 자궁 경부암, 자궁 내막암, 신장암, 중피종, 식도암, 타액선암, 간세포암, 위암, 인두암, 구강암, 입암(cancer of the mouth), GIST (위장관 기질 종양), NUT-중심선 육아종 및 고환암으로부터 선택된 하나 이상의 암의 치료에 유용할 수 있다.
일 구체예에서, 암은 백혈병, 예를 들어, 급성 단구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 및 혼합 계통 백혈병(MLL)으로부터 선택된 백혈병이다. 또 다른 구체예에서, 암은 NUT-중심선 육아종이다. 또 다른 구체예에서, 암은 다발성 골수종이다. 또 다른 구체예에서, 암은 폐암, 예컨대 소세포 폐암(SCLC)이다. 또 다른 구체예에서, 암은 신경모세포종이다. 또 다른 구체예에서, 암은 버킷 림프종이다 . 또 다른 구체예에서, 암은 자궁 경부암이다. 또 다른 구체예에서, 암은 식도암이다. 또 다른 구체예에서, 암은 난소암이다. 또 다른 구체예에서, 암은 유방암이다. 또 다른 구체예에서, 암은 결장직장암이다.
브로모도메인 억제제는 전신 염증 반응 증후군과 관련된 질병, 예컨대, 혈증, 화상, 췌장염, 주요 외상, 출혈 및 허혈과 관련된 질병의 치료에 유용할 수 있다. 이러한 구체예에서, 브로모도메인 억제제는 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 급성 신장, 간, 심장이나 위장 부상 및 사망의 발생을 포함하는 SIRS, 쇼크, 다발성 기관 부전 증후군의 발병을 감소시키기 위해 진단 시점에서 투여될 것이다. 또 다른 구체예에서, 브로모도메인 억제제는 패혈증, 출혈, 광범위한 조직 손상, SIRS 또는 MODS (다발성 기관 부전 증후군)의 고 위험과 관련된 외과적 또는 그 밖의 처치 전에 투여될 것이다. 특정 구체예에서, 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환은 패혈증, 패혈증 증후군, 패혈성 쇼크 및 내독소혈증(endotoxaemia)이다. 또 다른 구체예에서, 브로모도메인 억제제는 급성 또는 만성 췌장염의 치료를 위해 처방된다. 또 다른 구체예에서, 브로모도메인은 화상의 치료를 위해 처방된다.
따라서, 본 발명은 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료에 사용될 수 있다.
따라서, 본 발명은 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 일 구체예에서, 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 일 구체예에서, 류마티스 관절염의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 박테리아, 바이러스, 진균, 기생충 또는 이들의 독소로의 감염에 대한 염증 반응을 포함하는 질병 또는 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 허혈-재관류 손상과 관련된 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 심혈관 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 섬유증 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 뼈 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 암의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 추가의 구체예에서, 전신 염증 반응 증후군과 관련된 질병의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다.
또한, 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 일 구체예에서, 급성 또는 만성 자가 면역 및/또는 염증 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 일 구체예에서, 류마티스 관절염의 치료를 위한 의약의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 또 다른 구체예에서, 박테리아, 바이러스, 진균, 기생충 또는 이들의 독소로의 감염에 대한 염증 반응을 포함하는 질병 또는 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 또 다른 구체예에서, 허혈-재관류 손상과 관련된 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 또 다른 구체예에서, 심혈관 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 또 다른 구체예에서, 섬유증 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 또 다른 구체예에서, 바이러스 감염의 치료를 위한 의약의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 또 다른 구체예에서, 암의 치료를 위한 의약의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다. 추가의 구체예에서, 전신 염증 반응 증후군과 관련된 질병의 치료를 위한 의약의 제조에서의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다.
또한, 치료를 필요로 하는 피검체에게서 브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환을 치료하는 방법으로서, 치료학적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 일 구체예에서, 치료를 필요로 하는 피검체에게서 급성 또는 만성 자가 면역 및/또는 염증 질환을 치료하는 방법으로서, 치료학적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 일 구체예에서, 치료를 필요로 하는 피검체에게서 류마티스 관절염을 치료하는 방법으로서, 치료학적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 치료를 필요로 하는 피검체에게서 박테리아, 바이러스, 진균, 기생충 또는 이들의 독소로의 감염에 대한 염증 반응을 포함하는 질병 또는 질환을 치료하는 방법으로서, 치료학적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 치료를 필요로 하는 피검체에게서 허혈-재관류 손상과 관련된 질환을 치료하는 방법으로서, 치료학적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 치료를 필요로 하는 피검체에게서 심현관 질환을 치료하는 방법으로서, 치료학적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 치료를 필요로 하는 피검체에게서 섬유증 질환을 치료하는 방법으로서, 치료학적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 치료를 필요로 하는 피검체에게서 바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 치료학적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 또 다른 구체예에서, 치료를 필요로 하는 피검체에게서 암을 치료하는 방법으로서, 치료학적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 추가의 구체예에서, 치료를 필요로 하는 피검체에게서 전신 염증 반응 증후군과 관련된 질병을 치료하는 방법으로서, 치료학적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
적합하게는, 이러한 치료를 필요로 하는 피검체는 포유동물, 특히 사람이다.
본 발명은 브로모도메인을 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하du, 브로모도메인을 억제시키는 방법을 추가로 제공한다.
본원에서 사용되는 특정 질병 또는 질환의 "치료"에 대한 언급은 이러한 질병 또는 질환의 방지 또는 예방을 포함한다.
약제 조성물/투여 경로/용량
조성물
치료에 사용하기 위해, 화학식(I)의 화합물 뿐만 아니라 이의 약제학적으로 허용되는 염이 미가공 화학물질로서 투여될 수 있는 것이 가능하기는 하지만, 활성 성분을 약제 조성물로서 제공하는 것이 일반적이다. 화학식(I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 일반적으로, 그러나 비필수적으로, 환자에게 투여하기 전에 약제 조성물로 제형될 것이다. 따라서, 또 다른 양태에서, 화학식(I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제 조성물이 제공된다. 화학식(I)의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 염은 상기 기술된 바와 같다. 부형제(들)은 조성물의 다른 성분들과 상용성이고, 이의 수혜자에 대해 유해하지 않다는 측면에서 허용가능해야 한다. 본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 또한 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 혼합함을 포함하여 약제 조성물을 제조하는 방법이 제공된다. 약제 조성물은 본원에서 기술된 질환 중 어느 하나를 치료하는데 사용될 수 있다.
추가의 양태에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는, 브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환의 치료 또는 예방을 위한 약제 조성물에 관한 것이다.
화학식 (I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 약제 조성물에 사용하기 위한 것이므로, 이들은 각각 바람직하게는 실질적으로 순수한 형태로, 예를 들어, 85% 이상의 순도, 특히 98% 이상의 순도(중량 기준의 경우 중량 %)로 제공되는 것으로 용이하게 이해될 것이다.
약제 조성물은 단위 투여량(unit dose) 당 소정량의 활성 성분을 함유하는 단위 투여량 형태로 제시될 수 있다. 바람직한 단위 투여 조성물은 활성 성분의 1일 투여량 또는 서브 투여량(sub-dose), 또는 이의 적절한 분획을 함유하는 것들이다. 따라서, 그러한 단위 투여량은 1일 1회 초과로 투여될 수 있다. 바람직한 단위 투여 조성물은 본원에서 상기 언급된 바와 같이, 활성 성분의 1일 투여량 또는 서브 투여량 (1일 1회 초과의 투여에 대해), 또는 이의 적절한 분획을 함유하는 것들이다.
약제 조성물은 어떠한 적절한 경로, 예를 들어, 경구(구강 또는 설하 포함), 직장, 흡입, 비강내, 국소(구강, 설하 또는 경피를 포함), 안구(국소, 안구내, 결막하, 공막상, 또는 테논하(sub-Tenon)), 질 또는 비경구(피하, 근육내, 정맥내 또는 피내) 경로에 의한 투여를 위해 구성될 수 있다. 이 조성물은 약학 분야에 알려진 어떠한 방법에 의해, 예를 들어, 활성 성분을 담체(들) 또는 부형제(들)와 회합시킴으로써 제조될 수 있다.
본 발명의 약제 조성물은 안전하고 효과적인 양의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 추출될 수 있고, 이후 환자에게 예컨대 분말 또는 시럽을 제공될 수 있는 벌크 형태로 제조되고 포장될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 약제 조성물은 각각의 물리적으로 이산된 단위가 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유하는 단위 투여 형태로 제조되고 포장될 수 있다. 단위 투여 형태로 제조되는 경우, 본 발명의 약제 조성물은 전형적으로 예를 들어, 0.25 mg 내지 1 g, 또는 0.5 mg 내지 500 mg, 또는 1 mg 내지 100 mg의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유할 수 있다.
본 발명의 약제 조성물은 전형적으로 화학식(I)의 어느 한 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유한다.
화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 부형제들은 전형적으로 요망하는 투여 경로에 의해 환자에게 투여하기에 적합한 투여 형태로 제형될 것이다. 예를 들어, 투여 형태는 (1) 정제, 캡슐, 당의정, 환제, 트로키제, 분말, 시럽, 엘릭시르제, 현탁액, 용액, 에멀젼, 사세 및 카세트와 같은 경구 투여; (2) 멸균 용액, 현탁액 및 재구성 용 분말과 같은 비경구 투여; (3) 경피 패치와 같은 경피 투여; (4) 좌약과 같은 직장 투여; (5) 에어로졸, 용액 및 건조 분말과 같은 흡입; 및 (6) 크림, 연고, 로션, 용액, 페이스트, 스프레이, 포움 및 겔과 같은 국소 투여에 적합한 것들을 포함한다.
적합한 약제학적으로 허용되는 부형제는 선택된 특정 투여 형태에 의거하여 다를 것이다. 또한, 적합한 약제학적으로 허용되는 부형제는 조성물에 제공될 수 있는 특정 기능을 위해 선택될 수 있다. 예를 들어, 특정 약제학적으로 허용되는 부형제는 균일한 투여 형태의 생산을 용이하게 하는 능력으로 선택될 수 있다. 특정 약제학적으로 허용되는 부형제는 안정한 투여 형태의 생산을 용이하게 하는 능력으로 선택될 수 있다. 특정 약제학적으로 허용되는 부형제는 기관, 또는 몸의 일부로부터 피검체에 투여되면 화학식(I)의 화합물 또는 화합물들 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 또 다른 기관 또는 몸의 일부로의 운반 또는 전달을 용이하게 하는 능력으로 선택될 수 있다. 특정 약제학적으로 허용되는 부형제는 피검체 순응성을 증진시키는 능력으로 선택될 수 있다.
적합한 약제학적으로 허용되는 부형제는 하기 유형의 부형제를 포함한다: 희석제, 충전제, 결합제, 붕해제, 윤활제, 활택제, 과립화제, 코팅제, 습윤제, 용매, 조용매, 현탁제, 유화제, 감미제, 향료, 향미 차단제, 착색제, 고결 방지제, 습윤제, 킬레이트제, 가소제, 점도 증가제, 항산화제, 방부제, 안정제, 계면 활성제 및 완충제. 당업자는 특정 약제학적으로 허용되는 부형제가 하나 이상의 기능을 제공할 수 있고, 부형제가 제형 내에 얼마나 많이 존재하고, 다른 부형제가 제형에 존재하는 지에 따라 대체 기능을 수행할 수 있음을 인지할 것이다.
숙련된 기술자는 본 발명에서 사용하기에 적합한 양으로 적합한 약제학적으로 허용되는 부형제를 선택할 수 있도록 당업계의 지식 및 기술을 보유한다. 또한, 약제학적으로 허용되는 부형제를 기술하고 있고, 적합한 약제학적으로 허용되는 부형제를 선택하는데 유용할 수 있는, 숙련된 기술자가 이용할 수 있는 많은 자료가 있다. 예는 Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company), The Handbook of Pharmaceutical Additives ( Gower Publishing Limited), 및 The Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press)를 포함한다.
본 발명의 약제 조성물은 당업자에게 공지되어 있는 기술 및 방법을 사용하여 제조된다. 당업계에서 일반적으로 사용되는 일부 방법이 Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company)에 기술되어 있다.
따라서, 또 다른 양태에서, 본 발명은 성분들을 혼합하는 것을 포함하는, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제 조성물을 제조하는 방법에 관한 것이다. 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제 조성물은 예를 들어, 주위 온도 및 대기압에서의 혼합에 의해 제조될 수 있다.
일 구체예에서, 약제 조성물은 비경구 투여, 특히 정맥내 투여를 위해 구성된다.
일 구체예에서, 약제 조성물은 경구 투여를 위해 구성된다.
일 구체예에서, 약제 조성물은 국소 투여를 위해 구성된다.
비경구 투여용으로 구성된 약제 조성물은 조성물이 의도된 수혜자의 혈액과 등장성이 되도록 항산화제, 완충제, 세균발육저지제(bacteriostat) 및 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 주사 용액; 및 현탁제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현택액을 포함한다. 조성물은 단위 투여량 또는 다회 투여량 용기(container), 예를 들어 밀봉된 앰플 및 바이알로 제공될 수 있고, 사용 직전에 멸균 액체 담체, 예를 들어, 주입을 위한 물의 첨가만이 요구되는 냉동-건조(동결건조) 상태로 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 멸균 분말, 과립 및 정제(tablet)로부터 제조될 수 있다.
경구 투여용으로 구성된 약제 조성물은 개별 단위, 예컨대, 캡슐 또는 정제; 분말 또는 과립; 수성 또는 비수성 액체 중의 용액 또는 현탁액; 식용 포움(foam) 또는 휘프(whip); 또는 수중유형 액체 에멀젼 또는 유중수형 액체 에멀젼으로 제공될 수 있다.
예를 들어, 정제 또는 캡슐 형태의 경구 투여의 경우, 활성 약물 성분은 경구용 비독성 약제학적으로 허용되는 불활성 담체, 예컨대, 에탄올, 글리세롤 및 물 등과 조합될 수 있다. 정제 또는 캡슐 내에 혼입시키기에 적합한 분말은 화합물을 적합한 미세 크기로 감소시키고(예를 들어, 마이크론화(micronisation)에 의해), 유사하게 제조된 약제학적 담체, 예컨대, 식용 탄수화물, 예를 들어, 전분 또는 만니톨과 혼합함으로써 제조될 수 있다. 풍미제, 보존제, 분산제 및 착색제가 또한 제공될 수 있다.
캡슐은 상기 기재된 분말 혼합물을 제조하고, 형성된 젤라틴 시스(sheath)를 충전시킴으로써 제조될 수 있다. 활택제(glidant) 및 윤활제, 예컨대, 콜로이드 실리카, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트 또는 고형 폴리에틸렌 글리콜은 충전 작업 전에 분말 혼합물에 첨가될 수 있다. 붕해제 또는 가용화제, 예컨대, 아가-아가, 칼슘 카보네이트 또는 소듐 카보네이트가 또한 캡슐이 섭취될 때 약제의 이용율(availability)을 개선시키기 위해 첨가될 수 있다.
더구나, 요망되거나 필요한 경우, 적합한 결합제(binder), 활택제, 윤활제, 감미제, 풍미제, 붕해제(붕괴제) 및 착색제가 또한 혼합물 내에 혼입될 수 있다. 적합한 결합제는 전분, 젤라틴, 천연 당, 예컨대, 글루코스 또는 베타-락토오스, 옥수수 감미료, 천연 및 합성 검, 예컨대, 아카시아, 트래거캔스 또는 소듐 알기네이트, 카복시메틸셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜 및 왁스 등을 포함한다. 이러한 투여 형태로 사용된 윤활제는 소듐 올레에이트, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트 및 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 전분, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토나이트 및 잔탄 검 등을 포함한다. 정제는 예를 들어, 분말 혼합물을 제조하고, 과립화시키거나 슬러깅(slugging)시키고, 윤활제 및 붕해제를 첨가하고, 정제로 압착(pressing)시킴으로써 제형화된다. 분말 혼합물은 적합하게 빻아진(comminuted) 화합물을 상기 기재된 희석제 또는 염기와, 임의로, 결합제, 예컨대, 카복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 또는 폴리비닐 피롤리돈, 용해 지연제(retardant), 예컨대, 파라핀, 재흡수 촉진제(resorption accelerator), 예컨대, 4차 염 및/또는 흡수제, 예컨대, 벤토나이트, 카올린 또는 디칼슘 포스페이트와 혼합시킴으로써 제조된다. 분말 혼합물은 결합제, 예컨대, 시럽, 전분 페이스트, 아카디아 점액질(acadia mucilage) 또는 셀룰로스성 또는 폴리머성 물질의 용액으로 습윤시키고, 스크린(screen)에 통과시킴으로써 과립화될 수 있다. 과립화에 대한 대안으로서, 분말 혼합이 타정기를 통해 실행될 수 있고, 결과물은 과립으로 파쇄된 불완전하게 형성된 슬러그이다. 과립은 스테아르산, 스테아레이트 염, 탈크 또는 미네랄 오일의 첨가에 의해 윤활되어 정제 형성 다이(die)에 고착하는 것을 예방할 수 있다. 이후, 윤활된 혼합물은 정제로 압착된다. 화학식(I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 또한 자유 유동 불활성 담체와 함께 조합되고, 과립화 또는 슬러깅 단계를 거치지 않고 곧바로 정제로 압착될 수 있다. 쉘락(shellac)의 실링 코팅제(sealing coat), 당 또는 폴리머성 물질의 코팅 및 왁스의 폴리쉬 코팅(polish coating)으로 이루어진 투명하거나 불투명한 보호 코팅이 제공될 수 있다. 염료는 상이한 단위 투여량을 구별하기 위해 이러한 코팅에 첨가될 수 있다.
경구용 유체, 예컨대, 용액, 시럽 및 엘릭시르제(elixir)는 제시되는 양이 소정량의 화합물을 함유하도록 하는 투여 단위 형태로 제조될 수 있다. 시럽은 적합하게 풍미가 가해진 수용액 중에 화합물을 용해시킴으로써 제조될 수 있지만, 엘릭시르제는 비독성 알코올성 비히클(vehicle)의 사용을 통해 제조된다. 현택액은 비독성 비히클 중에 화합물을 분산시킴으로써 제형화될 수 있다. 가용화제 및 유화제, 예컨대, 에톡실화 이소스테아릴 알코올 및 폴리옥시 에틸렌 소르비톨 에테르, 보존제 및 풍미 첨가제, 예컨대, 페퍼민트 오일 또는 천연 감미료 또는 사카린 또는 그 밖의 인공 감미료 등이 또한 첨가될 수 있다.
경구 투여용 조성물은 치료 활성제의 방출을 지연하거나 달리 제어하기 위해 변형된 방출 프로파일을 제공하도록 설계될 수 있다.
경구 투여용 투여 단위 조성물은 경우에 따라 마이크로캡슐화될 수 있다. 조성물은 또한 예를 들어, 폴리머, 또는 왁스 등으로 미립 물질을 코팅 또는 임베딩시킴으로써 방출을 연장 또는 지속시키도록 제조될 수 있다.
경구 투여에 적합하고/거나 경우 투여를 위해 구성되는 조성물의 경우, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 예를 들어 마이크론화(micronisation)에 의해 얻어진 입도 감소된 형태일 수 있다. 입도 감소된 (예를 들어, 마이크론화된) 화합물 또는 염의 바람직한 입도는 약 0.5 내지 약 10 마이크론의 D50 값 (예를 들어, 레이저 회절을 사용하여 측정되는 경우)으로 정의될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 또한 리포솜 전달 시스템, 예컨대, 소형 단일박막 소포체(unilamellar vesicle), 대형 단일박막 소포체 및 다중박막 소포체(multilamellar vesicle)의 형태로 투여될 수 있다. 리포솜은 다양한 인지질, 예컨대, 콜레스테롤, 스테아릴아민 또는 포스파티딜콜린으로부터 형성될 수 있다.
국소 투여용으로 구성된 약제 조성물은 연고, 크림, 현탁액, 에멀젼, 로션, 분말, 용액, 페이스트, 겔, 포움, 스프레이, 에어로졸(aerosol) 또는 오일로 제형화될 수 있다. 이러한 약제 조성물은 보존제, 약물 침투를 보조하기 위한 용매, 조용매, 연화제, 분사제, 점도 조절제(겔화제), 계면활성제 및 담체를 포함하나, 이로 제한되지 않는 통상적인 첨가제를 포함할 수 있다. 일 구체예에서, 조성물에 대해 0.01 내지 10 중량%, 또는 0.01 내지 1 중량%의 화학식(I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 국소 투여용으로 구성된 약제 조성물이 제공된다.
눈 또는 그 밖의 외부 조직, 예를 들어, 입 및 피부의 치료의 경우, 조성물은 바람직하게는 국소용 연고, 크림, 겔, 스프레이 또는 포움으로서 적용된다. 연고로 제형화될 경우, 활성 성분은 파라핀 또는 수혼화성 연고 기재와 함께 사용될 수 있다. 다르게는, 활성 성분은 수중유형 크림 기재 또는 유중수형 기재의 크림으로 제형화될 수 있다.
눈에 대한 국소 투여용으로 구성된 약제 조성물은 활성 성분이 적합한 담체, 특히 수성 용매에 용해되어 있거나 현탁되어 있는 점안액을 포함한다. 눈에 투여되어야 하는 조성물은 안과적으로 상용가능한 pH 및 삼투질 농도(osmolality)를 가질 것이다. 산, 예컨대, 아세트산, 붕산, 시트르산, 락트산, 인산 및 염산; 염기, 예컨대, 수산화나트륨, 소듐 포스페이트, 소듐 보레이트, 소듐 시트레이트, 소듐 아세테이트, 및 소듐 락테이트; 및 완충제, 예컨대 시트레이트/덱스트로스, 중탄산나트륨 및 염화암모늄을 포함하는, 하나 이상의 안과적으로 허용되는 pH 조절제 및/또는 완충제가 본 발명의 조성물에 포함될 수 있다. 이러한 산, 염기, 및 완충제는 안과적으로 허용되는 범위 내에서 조성물의 pH를 유지하는데 필요한 양으로 포함될 수 있다. 하나 이상의 안과적으로 허용되는 염은 조성물의 삼투질 농도가 안과적으로 허용되는 범위가 되도록 하기에 충분한 양으로 조성물에 포함될 수 있다. 이러한 염은 나트륨, 칼륨 또는 암모늄 양이온 및 클로라이드, 시트레이트, 아스코르베이트, 보레이트, 포스페이트, 바이카보네이트, 설페이트, 티오설페이트 또는 바이설파이트 음이온을 지닌 것들을 포함한다.
안구 전달 장치는 다수의 규정된 방출 속도 및 지속된 투여 동력학 및 침투성을 지닌 하나 이상의 치료제의 제어 방출을 위해 설계될 수 있다. 제어 방출은 약물 확산, 침식, 용해 및 삼투를 증진시킬 폴리머 분자량, 폴리머 결정화도, 코폴리머 비, 가공 조건, 표면 피니쉬, 기하형태, 부형제 첨가 및 폴리머 코팅의, 생분해성/생부식성 폴리머(예를 들어, 폴리(에틸렌 비닐) 아세테이트 (EVA), 수퍼가수분해된(superhydrolyzed) PVA), 하이드록시알킬 셀룰로즈(HPC), 메틸셀룰로즈 (MC), 하이드록시프로필 메틸 셀룰로즈 (HPMC), 폴리카프롤락톤, 폴리(글리콜)산, 폴리(락트)산, 다가무수물의 상이한 선택 및 특성을 포함하는 폴리머 매트릭스의 설계를 통해 얻어질 수 있다.
또한, 안구 전달을 위한 약제 조성물은 상피내 겔화가능한 수성 조성물을 포함한다. 이러한 조성물은 눈 또는 눈물과의 접촉시 겔화를 촉진하는데 효과적인 농도로 겔화제를 포함한다. 적합한 겔화제는 열경화성 폴리머를 포함하나, 이로 제한되지 않는다. 본원에서 사용되는 용어 "동일계 겔화가능한"은 눈 또는 눈물과의 접촉시 겔을 형성하는 저 점도의 액체를 포함할 뿐만 아니라 눈으로의 투여시 실질적으로 증가된 점도 또는 겔 강성을 나타내는 세미-유체(semi-fluid) 및 틱소트로프 겔(thixotropic gel)과 같은 보다 점성의 액체를 포함한다. 예를 들어, 안구 약물 전달에 사용하기 위한 폴리머의 예에 대한 교시를 위해 본원에서 참고로 포함되는 문헌(Ludwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3;57: 1595-639)을 참조한다.
코 또는 흡입 투여용 투여 형태는 에어로졸, 용액, 현탁액, 겔 또는 건조 분말로 편리하게 제형화될 수 있다.
흡입 투여용으로 적합하고/거나 흡입 투여용으로 구성된 조성물의 경우, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 예를 들어, 마이크론화에 의해 얻어진 입도가 감소된 형태인 것이 바람직하다. 입도가 감소된(예를 들어, 마이크론화) 화합물 또는 염의 바람직한 입도는 약 0.5 내지 약 10 마이크론(예를 들어, 레이저 회절을 사용하여 측정된 바와 같은)의 D50 값으로 정의된다.
예를 들어, 흡입 투여용의 에어로졸 제형은 약제학적으로 허용되는 수성 또는 비수성 용매 중의 활성 물질의 용액 또는 미세 현탁액을 포함할 수 있다. 에어로졸 제형은 밀봉된 용기에 무균 형태로 1회 또는 다회 투여량으로 제공될 수 있고, 이것은 분무 장치(atomising device) 또는 흡입기(inhaler)로의 사용을 위해 카트리지(catridge) 또는 리필(refill)의 형태를 취할 수 있다. 다르게는, 밀봉된 용기는 용기의 내용물이 소진되면 폐기의 목적으로 정량 밸브(metering valve)(정량식 흡입기(metered dose inhaler))가 장착된 1회 투여량 코용 흡입기 또는 에어로졸 디스펜서와 같은 일원화 분배 장치(unitary dispensing device)일 수 있다.
투여 형태가 에어로졸 디스펜서를 포함하는 경우, 바람직하게는 가압 하에 있는 적합한 분사제(propellant), 예컨대, 압축 공기, 이산화탄소 또는 유기 분사제, 예컨대, 하이드로플루오로카본(HFC)을 함유한다. 적합한 HFC 분사제는 1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로프로판 및 1,1,1,2-테트라플루오로에탄을 포함한다. 에어로졸 투여 형태는 또한 펌프-분무기(pump-atomiser)의 형태를 취할 수 있다. 가압 에어로졸은 활성 화합물의 용액 또는 현탁액을 함유할 수 있다. 이것은 현탁 제형의 분산 특징 및 균질성을 개선시키기 위해 추가 부형제, 예를 들어, 보조 용매 및/또는 계면활성제의 혼입을 필요로 할 수 있다. 용액 제형은 또한 에탄올과 같은 보조 용매의 첨가를 필요로 할 수 있다.
흡입 투여용으로 적합하고/거나 흡입 투여용으로 구성된 약제 조성물의 경우, 약제 조성물은 건조 분말 흡입가능한 조성물일 수 있다. 그러한 조성물은 분말 기재, 예컨대, 락토오스, 글루코스, 트레할로스, 만니톨 또는 전분, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염(바람직하게는, 입도가 감소된 형태, 예를 들어, 마이크론화 형태), 및 임의로 성능 개질제, 예컨대, L-류신 또는 또 다른 아미노산 및/또는 스테아르산의 금속 염, 예컨대, 마그네슘 또는 칼슘 스테아레이트를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 건조 분말 흡입가능한 조성물은 락토오스, 예를 들어, 락토오스 일수화물과 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염의 건조 분말 블렌드(blend)를 포함한다. 그러한 조성물은 예를 들어, GB 2242134 A호에 기재된 GlaxoSmithKline에 의해 판매되는 DISKUS® 장치와 같은 적합한 장치를 사용하여 환자에게 투여될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 유체 디스펜서, 예를 들어, 유체 디스펜서의 펌프 메카니즘에 사용자에 의해 가해진 힘의 적용시 유체 제형의 정량된 투여량이 분배되는 디스펜싱 노즐 또는 디스펜싱 오리피스(orifice)를 갖는 유체 디스펜서로부터 전달하기 위해 유체 제형으로서 제형화될 수 있다. 그러한 유체 디스펜서에는 일반적으로 다회 정량된 투여량의 유체 제형의 저장소가 제공되고, 투여량은 후속의 펌프 작동시 분배가능하다. 디스펜싱 노즐 또는 오리피스는 비강으로 유체 제형의 스프레이 분배를 위해 사용자의 콧구멍 내의 삽입을 위해 구성될 수 있다. 상기 언급된 유형의 유체 디스펜서는 WO-A-2005/044354호에 기재되고 예시된다.
치료적 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 예를 들어, 환자의 나이 및 체중, 정확히 치료를 요하는 질환 및 이의 중증도, 제형의 성질, 및 투여 경로를 포함하는 다수 인자에 좌우될 것이고, 최종적으로 주치의 또는 수의사의 재량에 좌우될 것이다. 약제 조성물에서, 경구 또는 비경구 투여를 위한 각각의 투여 단위는 유리 염기로서 계산하여 0.01 mg 내지 3000 mg, 더욱 바람직하게는 0.5 mg 내지 1000 mg의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유하는 것이 바람직하다. 코 또는 흡입 투여를 위한 각각의 투여 단위는 유리 염기로서 계산하여, 0.001 mg 내지 50 mg, 더욱 바람직하게는 0.01 mg 내지 5 mg의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유하는 것이 바람직하다.
약제학적으로 허용되는 화학식(I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 유리 염기로서 계산하여, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을, 예를 들어 일당 0.01 mg 내지 3000 mg, 또는 일당 0.5 mg 내지 1000 mg 또는 일당 100 mg 내지 2500mg의 경구 또는 비경구 투여량의, 또는 일당 0.001 mg 내지 50 mg 또는 일당 0.01 내지 5 mg의 비강 또는 흡입 투여량의 일일 투여량(성인 환자에 대해)으로 투여될 수 있다. 이러한 양은 일당 단일 투여량으로 또는 보다 일반적으로 전체 일일 투여량이 동일하도록 일당 소정 회수(예컨대, 2, 3, 4, 5 또는 6회)의 서브-투여량으로 제시될 수 있다. 이의 염의 효과적인 양은 화학식(I)의 화합물 자체의 효과적인 양의 소정 비율로서 결정될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 단독으로 또는 다른 치료제와 병용하여 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 병용 요법(combination therapy)은 적어도 하나의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 투여, 및 적어도 하나의 다른 치료학적 활성제의 사용을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 병용 요법은 적어도 하나의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 적어도 하나의 다른 치료학적 활성제의 투여를 포함한다. 화학식 (I)의 화합물(들) 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 다른 치료학적 활성제(들)는 단일 약제 조성물에 함께 또는 따로 투여될 수 있고, 따로 투여될 경우, 이것은 동시에 또는 어떠한 순서로 순차적으로 일어날 수 있다. 화학식 (I)의 화합물(들) 및 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 다른 치료학적 활성제(들)의 양 및 상대적인 투여 타이밍(timing)은 요망되는 조합된 치료 효과를 달성하기 위해 선택될 것이다. 따라서, 추가의 양태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 하나 이상의 다른 치료학적 활성제와 함께 포함하는 조합물(combination)이 제공된다.
따라서, 일 양태에서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제 조성물은 하나 이상의 그 밖의 치료제, 예를 들어, 항생제, 항바이러스제, 글루코코르티코스테로이드, 무스카린성 길항제, 베타-2 효능제, 및 비타민 D3 유사체로부터 선택된 치료제를 포함하거나 그러한 치료제와 조합하여 사용될 수 있다. 추가의 양태에서, 본 발명에 따른 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 암 치료에 적합한 추가의 치료제와 조합하여 사용될 수 있다. 이러한 추가의 치료제에 대한 예는 문헌(Cancer Principles 및 Practice of Oncology by V.T. Devita 및 S. Hellman (editors), 6th edition (2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishers)에 기술되어 있다. 당업자들은 제제의 조합이 약물의 특정 특징 및 관련된 암을 기반으로 하여 유용할 수 있음을 파악할 수 있을 것이다. 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 조합하여 사용되는 추가의 치료제는 미세소관 저해제(anti-microtubule agent)(예컨대, 디터페노이드(diterpenoid) 및 빈카 알카로이드(vinca alkaloid)); 백금 배위 착물; 알킬화제(예컨대, 질소 머스타드, 옥사자포스포린, 알킬설포네이트, 니트로소우레아, 및 트리아젠); 항생제(예컨대, 안트라사이클린(anthracyclin), 악티노마이신(actinomycin) 및 블레오마이신(bleomycins)); 토포아이소모라제 II 억제제(예컨대, 에피포도필로톡신(epipodophyllotoxin)); 항대사물질(예컨대, 푸린 및 피리미딘 유사체 및 안티-폴레이트(anti-folate) 화합물); 토포아이소머라제 I 억제제 (예컨대, 캄프토테신(camptothecin); 호르몬 및 호르몬 유사체); 신호 전달 경로 억제제 (예컨대, 티로신 수용체 억제제); 비-수용체 티로신 키나제 혈관신생 억제제; 면역치료제; 프로아폽토틱제(proapoptotic agent); 후생적 또는 전사 조절제(예컨대, 히스톤 탈아세틸라제 억제제) 및 세포주기 신호전달 억제제를 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 일반적으로 흡입, 정맥내, 경구 또는 비내 경로에 의해 투여되는 다른 치료제와 함께 투여될 때, 형성되는 약제 조성물은 동일한 경로에 의해 투여될 수 있음이 이해될 것이다. 다르게는, 조성물의 개별 성분은 상이한 경로에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 일 구체예는 하나 또는 두 개의 다른 치료제를 포함하는 조합물을 포함한다.
치료 성분의 활성 및/또는 안정성 및/또는 물리적 특성, 예컨대 용해성을 최적화시키기 위해, 다른 치료 성분(들)은 경우에 따라 염의 형태, 예를 들어, 알칼리 금속 또는 아민 염 또는 산 부가염, 또는 전구약물로서, 또는 에스테르, 예를 들어, 저급 알킬 에스테르로서, 또는 용매화물, 예를 들어, 수화물로서 사용될 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다. 또한, 경우에 따라, 치료 성분은 광학적으로 순수한 형태로 사용될 수 있음이 명백할 것이다.
상기 언급된 조합물은 약제 조성물의 형태로 사용하는데 편리하게 제공될 수 있고, 따라서 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체와 함께 상기 명시된 조합물을 포함하는 약제 조성물은 본 발명의 추가 양태를 나타낸다.
일반적한 합성 경로
본 발명의 화합물은 표준 화학을 포함하는 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 이전에 정의된 어떠한 변수는 달리 명시되지 않는 한 계속해서 이전에 정의된 의미를 가질 것이다. 예시적인 일반적 합성 방법은 하기 반응식에 나타나 있으며, 본 발명의 다른 화합물을 제조하는데 용이하게 적용될 수 있다. 본 발명의 특정 화합물은 실시예 부분에서 제조된다.
화학식(I)의 화합물은 하기 반응식 중 어느 하나에서 기술되는 바와 같이 제조될 수 있다:
반응식 1:
Figure pct00023
상기 식에서, R1, R2, R3 및 R4는 상기에서 기술되는 바와 같고, Hal은 염소 또는 브롬이고, X는 C1-6알킬 기이다.
상기 반응식 1에서 보여진 단계와 관련하여, 하기 반응 조건이 사용될 수 있다:
단계 1: 알킬화이고, 무기 염기, 예컨대 수소화나트륨의 존재 하에, 적합한 용매, 바람직하게는 비양성자성 용매, 예컨대 DMF, THF 또는 2-MeTHF 중에서, 적합한 온도, 예컨대 0℃에서, 화학식 R4CH(R3)Hal의 알킬 또는 벤질 할라이드, 예컨대 화학식 R4CH(R3)Br의 알킬 브로마이드를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 2: 염기 가수분해이고, 적합한 용매 또는 용매 혼합물, 예컨대 메탄올과 THF의 혼합물 중에서, 적합한 온도, 예컨대 실온에서, 어떠한 적합한 무기 염기, 예컨대 LiOH를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 3: 두 단계로 이루어진 아미드 커플링 반응이다. 산 클로라이드를 생성하기 위한 단계 3a는 적합한 촉매, 예컨대 DMF의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 DCM 중에서, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 염소화제, 예컨대 옥살릴 클로라이드를 사용하여 수행될 수 있다. 단계 3b는 임의로 3차 아민, 예컨대 트리에틸아민의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 THF 중에서, 적합한 온도, 예컨대 0℃에서 아민 시약, R1-NH2을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 4: 아민 치환 반응이고, 적합한 용매 또는 용매 혼합물, 예컨대 물과 메탄올의 혼합물 중에서, 적합한 온도, 예컨대 50℃에서 아민 시약, R1-NH2을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 5: 카보닐화 반응이고, 3차 아민, 예컨대 트리에틸아민의 존재 하에, 팔라듐 촉매, 예컨대 팔라듐 아세테이트의 존재 하에, 포스핀 리간드, 예컨대 dppb의 존재 하에, 일산화탄소의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 DMSO 중에서, 적합한 온도, 예컨대 100℃에서 알코올 시약, XOH (X는 C1- 6알킬 기임)를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 6: 가수분해 단계이고, 적합한 용매 또는 용매 혼합물, 예컨대 메탄올 및 THF 중에서, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 무기 염기, 예컨대 NaOH 또는 LiOH 를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 7: 아미드 커플링 반응이고, 적합한 3차 아민, 예컨대 트리에틸아민 또는 DIPEA의 존재 하에, 적합한 아미드 커플링 반응물, 예컨대 HATU의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 DCM 또는 DMF 중에서, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 아민 시약, R2-NH2을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 8: 카보닐화 반응이고, 포스핀 리간드, 예컨대 잔포스(Xantphos)의 존재 하에, 적합한 팔라듐 촉매, 예컨대 팔라듐 (II) 아세테이트의 존재 하에, 친핵성 촉매, 예컨대 DMAP의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 THF의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 80℃에서 금속 카보닐 착물, 예컨대 디코발트 옥타카보닐을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 9: 치환 반응이고, 친핵성 촉매, 예컨대 DMAP의 존재 하에, 3차 아민, 예컨대 트리에틸아민의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 THF의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 45℃에서, 아민 시약, R2-NH2을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 10: 보호기, 예컨대 BOC를 제거하기 위한 임의적 탈보호 단계이고, 적합한 용매, 예컨대 DCM의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 실온에서, 산, 예컨대 TFA을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 11: 피리돈 형성이고, 적합한 용매 또는 용매 혼합물, 예컨대 DMF 및 THF 중에서 적합한 아미드 커플링 시약, EDC, 적합한 친핵성 촉매, 예컨대 DMAP, 및 적합한 온도, 예컨대 실온을 부가하면서, 알킬 또는 벤질 아민, 예컨대 R4CH(R3)NH2를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 12: 브롬화 단계이고, 적합한 용매, 예컨대 2-MeTHF, 적합한 온도, 예컨대 실온에서, 적합한 브롬화 반응물, 예컨대 NBS를 사용하여 수행될 수 있다.
반응식 2:
Figure pct00024
상기 식에서, R1, R2, R3 및 R4는 상기에서 기술되는 바와 같고, Y는 C1- 6알킬 기이고, Hal은 브롬 또는 염소이다.
상기 반응식 2에서 보여진 단계와 관련하여, 하기 반응 조건이 사용될 수 있다:
단계 1: 산 클로라이드 형성이고, 적합한 촉매, 예컨대 DMF의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 DCM 중에서, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 염소화제, 예컨대 옥살릴 클로라이드를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 2: 아민 치환 반응이고, 3차 아민, 예컨대 트리에틸아민의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 THF 중에서, 적합한 온도, 예컨대 0℃에서 아민 시약, R1-NH2을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 3: 카보닐화 반응이고, 3차 아민, 예컨대 트리에틸아민의 존재 하에, 팔라듐 촉매, 예컨대 팔라듐 (II) 아세테이트의 존재 하에, 포스핀 리간드, 예컨대 dppb의 존재 하에, 일산화탄소의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 DMSO 중에서, 적합한 온도, 예컨대 100℃에서 알코올 시약, YOH (Y는 C1- 6알킬 기임)을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 4: 탈메틸화 반응이고, 적합한 용매, 예컨대 아세토니트릴, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 탈메틸화제, 예컨대 TMS-Cl와 함께 NaI를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 5: 알킬화이고, 무기 염기, 예컨대 탄산칼륨의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 DMF 중에서, 적합한 온도, 예컨대 90℃에서 알킬 또는 벤질 할라이드, 예컨대 R4CH(R3)Br 또는 R4CH(R3)Cl을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 6: Mitsunobu 반응이고, 포스핀, 예컨대 트리페닐 포스핀 또는 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 톨루엔 중에서, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 또는 120℃에서 알코올, 예컨대R4CH(R3)OH, Mitsunobu 시약, 예컨대 DIAD를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 7: 가수분해 단계이고, 적합한 용매 또는 용매 혼합물, 예컨대 메탄올 및 THF 또는 1,4-디옥산 및 물 중에서, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 무기 염기, 예컨대 NaOH 또는 LiOH 사용하여 수행될 수 있다.
단계 8: 아미드 커플링 반응이고, 적합한 3차 아민, 예컨대 트리에틸아민 또는 DIPEA의 존재 하에, 아미드 커플링 반응물, 예컨대 HATU의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 DCM 또는 DMF 중에서, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 아민 시약, R2-NH2을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 9: 보호기, 예컨대 BOC를 제거하기 위한 임의적 탈보호 단계이고, 적합한 용매, 예컨대 DCM의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 실온에서, 산, 예컨대 TFA을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 10: 적합한 키랄 HPLC 컬럼 및 적합한 용매 시스템을 사용하는 임의적 키랄 분리이다.
단계 11: 가수분해 단계이고, 적합한 용매 또는 용매 혼합물, 예컨대 메탄올 및 THF 또는 1,4-디옥산 및 물 중에서, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 무기 염기, 예컨대 NaOH 또는 LiOH를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 12: 아미드 커플링 반응이고, 적합한 3차 아민, 예컨대 트리에틸아민 또는 DIPEA의 존재 하에, 아미드 커플링 반응물, 예컨대 HATU의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 DCM 또는 DMF 중에서, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 아민 시약, R2-NH2을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 13: 탈메틸화 반응이고, 적합한 용매, 예컨대 아세토니트릴, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 탈메틸화제, 예컨대 TMS-Cl와 함께 NaI를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 14: 알킬화이고, 무기 염기, 예컨대 탄산칼륨의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 DMF 중에서, 적합한 온도, 예컨대 90℃에서 알킬 또는 벤질 할라이드, 예컨대 R4CH(R3)Br 또는 R4CH(R3)Cl을 사용하여 수행될 수 있다.
반응식 3:
Figure pct00025
상기 식에서, R1, R2, R3 및 R4는 상기에서 기술되는 바와 같고, Hal은 브롬 또는 염소이다.
상기 반응식 3에서 보여진 단계와 관련하여, 하기 반응 조건이 사용될 수 있다:
단계 1: 벤질화이고, 적합한 은 염, 예컨대 실버 카보네이트, 벤질 할라이드, 예컨대 벤질 브로마이드, 적합한 용매, 예컨대 클로로포름을 사용하고, 예를 들어 환류 하에 가열되어 수행될 수 있다.
단계 2: 가수분해 단계이고, 적합한 용매 또는 용매 혼합물, 예컨대 메탄올 및 THF 또는 1,4-디옥산 및 물 중에서, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 무기 염기, 예컨대 NaOH 또는 LiOH를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 3: 두 단계로 이루어진 아미드 커플링 반응이다. 산 클로라이드를 생성하기 위한 단계 3a는 적합한 촉매, 예컨대 DMF의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 DCM 중에서, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 염소화제, 예컨대 옥살릴 클로라이드를 사용하여 수행될 수 있다. 단계 3b는 적합한 용매, 예컨대 THF 중에서, 적합한 온도, 예컨대 0℃에서 아민 시약, R1-NH2을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 4: 카보닐화 반응이고, 포스핀 리간드, 예컨대 잔포스의 존재 하에, 적합한 팔라듐 촉매, 예컨대 팔라듐 (II) 아세테이트의 존재 하에, 3차 아민, 예컨대 트리에틸아민의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 톨루엔의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 80℃에서 2,4,6-트리클로로페닐 포르메이트를 사용하여 사용하여 수행될 수 있다.
단계 5: 치환 반응이고, 친핵성 촉매, 예컨대 DMAP의 존재 하에, 3차 아민, 예컨대 트리에틸아민의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 THF의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 45℃에서 아민 시약, R2-NH2을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 6: 탈벤질화이고, 적합한 온도, 예컨대 80℃에서 적합한 산, 예컨대 TFA을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 7: Mitsunobu 반응이고, 포스핀, 예컨대 트리페닐 포스핀 또는 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 톨루엔 중에서, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 또는 120℃에서 알코올, 예컨대 R4CH(R3)OH, Mitsunobu 시약, 예컨대 DIAD를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 8: 알킬화이고, 무기 염기, 예컨대 탄산칼륨의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 DMF 중에서, 적합한 온도, 예컨대 90℃에서 알킬 또는 벤질 할라이드, 예컨대 R4CH(R3)Br 또는 R4CH(R3)Cl을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 9: 보호기, 예컨대 BOC를 제거하기 위한 임의적 탈보호 단계이고, 적합한 용매, 예컨대 DCM의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 실온에서, 산, 예컨대 TFA을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 10: 설폰아미드 기, 예컨대 토실을 분해하기 위한 임의적 탈보호 단계이고, 적합한 용매 또는 용매 혼합물, 예컨대 메탄올 및 THF의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 70℃에서 무기 염기, 예컨대 세슘 카보네이트를 사용하여 수행될 수 있다.
반응식 4:
Figure pct00026
상기 식에서, R1, R2, R3 및 R4는 상기에서 기술되는 바와 같고, Hal은 브롬 또는 염소이다.
상기 반응식 4에서 보여진 단계와 관련하여, 하기 반응 조건이 사용될 수 있다:
단계 1: 아민 치환 반응이고, 적합한 용매, 예컨대 THF 중에서, 적합한 온도, 예컨대 환류 하에 아민 시약, R1-NH2을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 2: 알킬화이고, 무기 염기, 예컨대 탄산칼륨의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 메탄올 또는 DMF 중에서, 적합한 온도, 예컨대 65℃ 또는 90℃에서 알킬 또는 벤질 할라이드, 예컨대 R4CH(R3)Br 또는 R4CH(R3)Cl를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 3: 아미노 카보닐화 반응이고, 포스핀 리간드, 예컨대 잔포스 또는 Catacxium A의 존재 하에, 적합한 팔라듐 촉매, 예컨대 팔라듐 (II) 아세테이트의 존재 하에, 적합한 친핵성 촉매, 예컨대 DMAP의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 1,4 디옥산 또는 THF의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 80℃에서 아민 시약, 예컨대 R2-NH2, 금속 카보닐 착물, 예컨대 디코발트 옥타카보닐을 사용하여 수행될 수 있다.
단계 4: 설폰아미드 기, 예컨대 토실을 분해하기 위한 임의적 탈보호 단계이고, 적합한 용매 또는 용매 혼합물, 예컨대 메탄올 및 THF의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 70℃에서 무기 염기, 예컨대 세슘 카보네이트를 사용하여 수행될 수 있다.
단계 5: 보호기, 예컨대 BOC를 제거하기 위한 임의적 탈보호 단계이고, 적합한 용매, 예컨대 DCM의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 적합한 산, 예컨대 TFA를 사용하여 수행될 수 있다.
화학식 (VIII), (XIII), (XX), (XXIII) 및 (XXIX)의 화합물은 예를 들어, Sigma Aldrich, Fluorochem, Apollo Scientific 또는 CombiBlocks로부터 상업적으로 입수가능하다. 화학식 R1-NH2, XOH, R2-NH2 R4CH(R3)OH, R3CH(R3)NH2 및 R4CH(R3)Hal의 화합물은 상기 언급된 공급처로부터 상업적으로 입수가능하거나, 당해 널리 공지되어 있거나 본원에서 기술된 방법에 의해 제조될 수 있다.
따라서, 일 구체예에서, 친핵성 촉매, 예컨대 DMAP의 존재 하에, 3차 아민, 예컨대 트리에틸아민의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 THF의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 45℃에서, 화학식 (II)의 화합물을 화학식 (XXVI)의 아민과 반응시켜 화학식(I)의 화합물을 제조하는 방법이 제공된다:
Figure pct00027
상기 식에서, R1, R2, R3 및 R4는 앞서 정의된 바와 같다. 이 단계는 필요에 따라 어떠한 보호기의 제거가 뒤따르고, 필요에 따라 염의 제조가 뒤따를 수 있다.
두번째 구체예에서, 금속 카보닐 착물, 예컨대 디코발트 옥타카보닐의 존재 하에, 포스핀 리간드, 예컨대 잔포스 또는 Catacxium A의 존재 하에, 적합한 친핵성 촉매, 예컨대 DMAP의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 1,4 디옥산 또는 THF의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 80℃에서, 화학식 (III)의 화합물을 화학식 (XXVI)의 아민과 반응시킴으로써 화학식(I)의 화합물을 제조하는 방법이 제공된다:
Figure pct00028
상기 식에서, R1, R2, R3 및 R4는 앞서 정의된 바와 같다. 이 단계는 필요에 따라 어떠한 보호기의 제거가 뒤따르고, 필요에 따라 염의 제조가 뒤따를 수 있다.
세번째 구체예에서, 아미드 커플링 시약, 예컨대 HATU, 3차 아민, 예컨대 트리에틸아민 또는 DIPEA의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 DCM 또는 DMF의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 실온에서 화학식 (IV)의 화합물을 화학식 (XXVI)의 아민과 반응시킴으로써 화학식(I)의 화합물을 제조하는 방법이 제공된다:
Figure pct00029
상기 식에서, R1, R2, R3 및 R4는 앞서 정의된 바와 같다. 이 단계는 필요에 따라 어떠한 보호기의 제거가 뒤따르고, 필요에 따라 염의 제조가 뒤따를 수 있다.
네번째 구체예에서, 무기 염기, 예컨대 탄산칼륨의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 DMF 중에서, 적합한 온도, 예컨대 90℃에서 화학식 (XIV)의 화합물을 화학식 (XXVII)의 화합물과 반응시킴으로써 화학식(I)의 화합물을 제조하는 방법이 제공된다:
Figure pct00030
상기 식에서, R1, R2, R3 및 R4는 앞서 정의된 바와 같고, Hal은 염소 또는 브롬이다. 이 단계는 필요에 따라 어떠한 보호기의 제거가 뒤따르고, 필요에 따라 염의 제조가 뒤따를 수 있다.
다섯번째 구체예에서, Mitsunobu 시약, 예컨대 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 또는 DIAD의 존재 하에, 포스핀, 예컨대 트리페닐 포스핀의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 톨루엔 중에서, 적합한 온도, 예컨대 120℃ 또는 실온에서, 화학식 (XIV)의 화합물을 화학식 (XXVIII)의 화합물과 반응시킴으로써 화학식(I)의 화합물을 제조하는 방법이 제공된다:
Figure pct00031
상기 식에서, R1, R2, R3 및 R4는 앞서 정의된 바와 같다. 이 단계는 필요에 따라 어떠한 보호기의 제거가 뒤따르고, 필요에 따라 염의 제조가 뒤따를 수 있다.
상기 기술된 화합물의 하나 이상의 작용기를 보호하는 것이 유리할 수 있다는 것이 당업자에게 이해될 것이다. 보호기의 예 및 그의 제거 방법은 문헌(T. W. Greene 'Protective Groups in Organic Synthesis'(4th edition, J. Wiley and Sons, 2006)에서 찾을 수 있으며, 이는 이 절차와 관련하여 본 명세서에서 참고 문헌으로 인용된다.
적합한 아민 보호기는 아실 (예를 들어, 아세틸, 카바메이트 (예를 들어, 2',2',2'-트리클로로에톡시카보닐, 벤질옥시카보닐 또는 t-부톡시카보닐) 및 아릴알킬 (예를 들어, 벤질)을 포함하며, 이는 경우에 따라 산 매개 분해 (예를 들어, 산, 예컨대 디옥산 중 염산 또는 디클로로메탄 중 트리플루오로아세트산을 사용하여) 또는 환원적으로 (예를 들어, 벤질 또는 벤질옥시카보닐 기의 수소화분해 또는 아세트산 중의 아연을 사용하는 2',2',2'-트리클로로에톡시카보닐 기의 환원적 제거)에 의해 제거될 수 있다. 그 밖의 적합한 아민 보호기는 트리플루오로아세틸 (-C(O)CF3)을 포함하며, 이는 염기 촉매작용 가수분해에 의해 제거될 수 있다.
상기 기술된 경로 중 어느 하나에서, 여러 기 및 모이어티가 분자에 도입되는 합성 단계의 정확한 순서는 달라질 수 있는 것으로 이해될 것이다. 공정의 한 단계에 도입된 기 또는 모이어티가 후속하는 변형 및 반응에 영향을 받지 않도록 하고, 이에 따라 합성 단계의 순서를 선택하는 것은 당업자의 기술 범위 내에 있을 것이다.
상기 기술된 특정 중간체 화합물은 본 발명의 추가의 양태를 형성한다.
앞서 기술된 반응 또는 공정 중 어느 하나에 대해, 예를 들어, 온도 조절된 오일조 또는 온도 조절된 핫-블록(hot-block) 및 각각의 얼음/염 배쓰(bath) 또는 드라이 아이스/아세톤 배쓰와 같은 통상적인 가열 및 냉각 방법이 사용될 수 있다. 통상적인 분리 방법, 예를 들어, 수성 또는 비수성 용매로부터 또는 이로의 추출이 사용될 수 있다. 유기 용매, 용액, 또는 추출물을 건조시키는 통상적인 방법, 예컨대 무수 황산마그네슘, 또는 무수 황산나트륨과의 진탕 또는 소수성 프릿의 통과가 사용될 수 있다. 통상적인 정제 방법, 예를 들어, 결정화 및 크로마토그래피, 예를 들어, 실리카 크로마토그래피 또는 역상 크로마토그래피가 필요에 따라 사용될 수 있다. 결정화는 통상적인 용매, 예컨대 에틸 아세테이트, 메탄올, 에탄올, 또는 부탄올, 또는 이의 수성 혼합물을 사용하여 수행될 수 있다. 특정 반응 시간 및 온도는 전형적으로 반응-모니터링 기술, 예를 들어, 박층 크로마토그래피 및 LC-MS에 의해 결정될 수 있는 것으로 인지될 것이다.
실시예
일반적인 방법
일반적인 실험 세부사항
표시되는 모든 온도는 ℃이다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 이들 공정, 도식 및 실시예에서 사용되는 기호 및 관례는 현대 과학 문헌(예를 들어, Journal of the American Chemical Society)에서 사용되는 것들과 일치한다. 달리 명시되지 않는 한, 모든 출발 물질은 상업적 공급처로부터 입수되었고, 추가의 정제 없이 사용되었다. 특히, 하기 약어는 실시예에서, 그리고 명세서 전반에서 사용될 수 있다:
약어
AcOH 아세트산
BBr3 보론 트리브로마이드
BOC/Boc 3차-부틸옥시카보닐
BuLi 부틸리튬
Cs2CO3 탄산세슘
CHCl3 클로로포름
코발트 카보닐 디코발트 옥타카보닐
CV 컬럼 용량
DMSO-d6 중수소화된 디메틸설폭사이드
DCM 디클로로메탄
DIAD 디이소프로필 아조디카복실레이트
DIBAL-H 디이소부틸알루미늄 하이드라이드
DIPEA 디이소프로필에틸아민
DMAP 4-디메틸아미노피리딘
DMF 디메틸포름아미드
DMSO 디메틸설폭사이드
DPPA 디페닐포스포릴 아지드
dppb 1,4-비스(디페닐포스피노)부탄
EDC 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드
Et3N 트리에틸아민
EtOAc 에틸 아세테이트
h 시간(들)
HATU O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트
HCl 염산
HCO2H 포름산
IPA 이소프로필 알코올
Isolera Biotage 플래시 정제 시스템
K3CO3 탄산칼륨
KOH 수산화칼륨
LCMS 액체 크로마토그래피-질량 분석
LiOH 수산화리튬
M 몰(농도)
MDAP 질량 특이적 자가-분취(mass directed autoprep)
MeCN 아세토니트릴
MeI 메틸 아이오다이드
MeOH 메탄올
2-MeTHF 2-메틸 테트라하이드로푸란
MgSO4 마그네슘 설페이트
min 분(들)
MTBE 메틸 3차-부틸 에테르
N 노말 (농도)
N2 질소
Na2CO3 소듐 카보네이트
NaI 아이오드화나트륨
NaH 수소화나트륨
NaOH 수산화나트륨
Na(OAc)3BH 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드
Na2SO4 황산나트륨
NBS N-브로모석신이미드
NEt3 트리에틸아민
NMP N-메틸-2-피롤리돈
NUT 고환 내 핵 단백질
Pd/C 탄소 상 팔라듐
PPh3 트리페닐포스핀
RBF 둥근 바닥 플라스크
Rt 체류 시간
rt 실온
sat 포화된
SCX Isolute 강력 양이온 교환 흡수성 SPE
SiO2 이산화규소
SNAP Biotage (실리카) 플래시 크로마토그래피 카트리지
SP4 Biotage 플래시 정제 시스템
SPE 고체상 추출
TBME 3차-부틸 메틸 에테르
Tf2O 트리플루오로메탄설폰산 무수물
TFA 트리플루오로아세트산
THF 테트라하이드로푸란
TMSCl/TMS-Cl 트리메틸실릴 클로라이드
TLC 박층 크로마토그래피
Ts 토실
UPLC 초고성능 액체 크로마토그래피
잔포스 1,1'-(9,9-디메틸-9H-잔텐-4,5-디일)비스[1,1-디페닐포스핀
하기 화합물의 명칭은 화합물 명명 프로그램 "ACD Name Pro 6.02"을 사용하거나 ChemDraw Ultra 12.0의 명명 기능을 사용하여 얻어졌다.
LCMS 방법
포믹 방법
LC 조건
UPLC 분석을 40℃에서 Acquity UPLC CSH C18 컬럼 (50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 ㎛ 패킹 직경)으로 수행하였다.
사용된 용매는 다음과 같았다:
A = 수중 0.1% v/v 포름산 용액
B = 아세토니트릴 중 0.1% v/v 포름산 용액
사용된 구배는 다음과 같았다:
Figure pct00032
UV 검출은 210 nm 내지 350 nm의 파장으로부터 합산된 신호였다.
MS 조건
MS: Waters ZQ
이온화 모드 : 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무
스캔 범위: 100 내지 1000 AMU
스캔 시간: 0.27초
스캔 간 지연: 0.10초
고 pH 방법
LC 조건
UPLC 분석을 40℃에서 Acquity UPLC CSH C18 컬럼 (50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 ㎛ 패킹 직경)으로 수행하였다.
사용된 용매는 다음과 같았다:
A = 암모니아 용액을 사용하여 pH 10으로 조절된 수중 10 mM 탄산수소암모늄
B = 아세토니트릴
사용된 구배는 다음과 같았다:
Figure pct00033
UV 검출은 210 nm 내지 350 nm의 파장으로부터 합산된 신호였다.
MS 조건
MS : Waters ZQ
이온화 모드 : 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무
스캔 범위: 100 내지 1000 AMU
스캔 시간: 0.27초
스캔 간 지연: 0.10초
TFA 방법
LC 조건
UPLC 분석을 40℃에서 Acquity UPLC CSH C18 컬럼 (50 mm x 2.1 mm, i.d. 1.7 ㎛ 패킹 직경)으로 수행하였다.
사용된 용매는 다음과 같았다:
A = 수중 0.1% v/v 트리플루오로아세트산 용액
B = 아세토니트릴 중 0.1% v/v 트리플루오로아세트산 용액
사용된 구배는 다음과 같았다:
Figure pct00034
UV 검출은 210 nm 내지 350 nm의 파장으로부터 합산된 신호였다.
MS 조건
MS: Waters ZQ
이온화 모드 : 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무
스캔 범위: 100 내지 1000 AMU
스캔 시간: 0.27초
스캔 간 지연: 0.10초
일반적인 MDAP 정제 방법
하기에 열거된 것은 화합물 정제에 사용되었거나 사용될 수 있는 질량 특이적 자동 분취 크로마토그래피 (MDAP) 방법의 예이다.
MDAP (고 pH). 15분 또는 25분에 걸쳐 0 내지 100% 용매 B의 용리 구배를 사용하여, 암모니아 용액 (용매 A) 및 아세토니트릴 (용매 B)에 의해 pH 10으로 조절된 수중 10 mM 중탄산암모늄으로 용리되는, Xselect CSH C18 컬럼 (150 mm x 30 mm i.d. 5 ㎛ 패킹 직경) 상에서 HPLC 분석을 주위 온도에서 수행하였다.
UV 검출은 210 nm 내지 350 nm의 파장으로부터의 평균 신호였다. 질량 스펙트럼은 대체 스캔 양성 및 음성 전기 분무를 사용하여 Waters ZQ 질량 분광계로 기록하였다. 이온화 데이터는 가장 가까운 정수로 반올림하였다.
MDAP ( 포믹). 15분 또는 25분에 걸쳐 0 내지 100% 용매 B의 용리 구배를 사용하여, 수중 0.1% 포름산 (용매 A) 및 아세토니트릴 중 0.1% 포름산(용매 B)으로 용리되는, Xselect CSH C18 컬럼 (150 mm x 30 mm i.d. 5 ㎛ 패킹 직경) 상에서 HPLC 분석을 주위 온도에서 수행하였다.
UV 검출은 210 nm 내지 350 nm의 파장으로부터의 평균 신호였다. 질량 스펙트럼은 대체 스캔 양성 및 음성 전기 분무를 사용하여 Waters ZQ 질량 분광계로 기록하였다. 이온화 데이터는 가장 가까운 정수로 반올림하였다.
MDAP ( TFA). 15분 또는 25분에 걸쳐 0 내지 100% 용매 B의 용리 구배를 사용하여, 수중 0.1% v/v 트리플루오로아세트산 용액 (용매 A) 및 아세토니트릴 중 0.1% v/v 트리플루오로아세트산 용액 (용매 B)으로 용리되는, Xselect CSH C18 컬럼 (150 mm x 30 mm i.d. 5 ㎛ 패킹 직경) 상에서 HPLC 분석을 주위 온도에서 수행하였다.
UV 검출은 210 nm 내지 350 nm의 파장으로부터의 평균 신호였다. 질량 스펙트럼은 대체 스캔 양성 및 음성 전기 분무를 사용하여 Waters ZQ 질량 분광계로 기록하였다. 이온화 데이터는 가장 가까운 정수로 반올림하였다.
NMR
VT 스펙트럼에 대해 302 K에서 또는 392-393 K에서 400 MHz 또는 600 MHz NMR 기계에서 스펙트럼을 실행하였다.
중간체 1: 3차-부틸 4-(하이드록시메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-1-카복실레이트
Figure pct00035
아세토니트릴 (10.799 mL) 및 물 (2.70 mL) 중의 (1H-벤조[d]이미다졸-7-일)메탄올 (200 mg, 1.350 mmol, 예를 들어, Apollo Scientific로부터 입수가능함)의 용액에 중탄산나트륨 (227 mg, 2.70 mmol) 및 Boc2O (0.431 mL, 1.856 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (70 mL)로 희석하고, 10% 시트르산 수용액 (3 x 25 mL)로 세척하였다. LCMS는 산 세척물이 일부 생성물을 함유함을 나타냈으며, 수성 상을 진공하에 농축시킨 후, 에틸 아세테이트 (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 부분을 물 (25 mL) 및 염수 (25 mL)로 세척한 후, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 얻었다. 생성물을 디클로로메탄 중의 상태로 50 g SNAP 실리카 카트리지(실리카 카트리지) 상에 로딩하고, 15-60% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는 Biotage SP4 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 진공 하에 증발시켜 황색 검을 얻었다. 플라스크를 에테르와 함께 초음파 처리하고, 한번 더 증발시켰다. 생성물을 추가로 진공 하에 건조시켜 정제된 생성물 - 3차-부틸 4-(하이드록시메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-1-카복실레이트 (262 mg, 1.055 mmol, 78 % 수율)를 황색 검으로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 249.0.
중간체 2: 메틸 1-토실-1H-인돌-4-카복실레이트
Figure pct00036
메틸 1H-인돌-4-카복실레이트 (750 mg, 4.28 mmol, 예를 들어, Sigma-Aldrich로부터 입수가능함)를 0℃에서 질소 하에 DMF (13.591 mL) 중에 용해시켰다. 수소화나트륨 (205 mg, 5.14 mmol, 광유 중 60% 분산물)을 나누어 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고, 30분 동안 교반하기 전에 10분 동안 0℃에서 교반하였다. 토실-Cl (979 mg, 5.14 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, 물 (3.86 mL, 214 mmol)을 적가함으로써 켄칭시킨 후, 포화된 염화리튬 수용액 (140 mL) 상에 부었다. 생성물을 에틸 아세테이트 (3 x 30 mL)로 추출하고, 합한 유기 부분을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (2056 mg)을 얻었다. 잔류물을 50 g SNAP 실리카 카트리지 상에 건조 로딩하고, 0-25% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는 Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 순수한 생성물 - 메틸 1-토실-1H-인돌-4-카복실레이트 (1039 mg, 3.15 mmol, 73.7 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.29 min, [MH]+ = 330.0.
중간체 3: (1-토실-1H-인돌-4-일)메탄올
Figure pct00037
DCM (30.361 mL) 중의 메틸 1-토실-1H-인돌-4-카복실레이트 (1016 mg, 3.08 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시키고, DIBAL-H (톨루엔 중 1M, 13.57 mL, 13.57 mmol)를 1시간에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 추가의 1.5시간 동안 교반하고, 이어서 추가 40분 동안 교반하였다. 반응물을 여전히 -78℃에 있을 때 메탄올 (0.125 mL, 3.08 mmol)로 켄칭시킨 후, 주위 온도로 가온되게 하였다. 반응물을 포화된 로쉘 염(Rochelle's salt) 용액 (60 mL)으로 희석하고, 16시간 동안 교반하였다. 층들을 분리시키고, 수성 상을 디클로로메탄 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (913 mg)을 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄 중의 상태로 50 g SNAP 카트리지 상에 로딩하고, 15-75% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는 Biotage SP4를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 순수한 생성물 - (1-토실-1H-인돌-4-일)메탄올 (901 mg, 2.84 mmol, 92 % 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.07 min, [M+Na]+ = 324.0.
중간체 4: 4-(브로모메틸)-1-토실-1H-인돌
Figure pct00038
(1-토실-1H-인돌-4-일)메탄올 (500 mg, 1.659 mmol) 및 HBr (3995 μL, 수중 48%, 33.2 mmol)를 LCMS로 모니터링하면서 80℃에서 가열하였다. 초기 LCMS는 생성물의 형성을 나타냈고, 반응물을 추가 4시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)에 붓고, 생성물을 디클로로메탄 (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 부분을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 - 4-(브로모메틸)-1-토실-1H-인돌 (564 mg, 1.316 mmol, 79 % 수율)을 자주색 고형물로서 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.35 min, [M-H]- = 362.0, 364.0.
중간체 5: 메틸 1-토실-1H-인돌-7-카복실레이트
Figure pct00039
메틸 1H-인돌-7-카복실레이트 (1 g, 5.71 mmol, 예를 들어, Apollo Scientific로부터 입수가능함)를 0℃에서 질소 하에 DMF (18.12 mL) 중에 용해시켰다. 수소화나트륨 (0.251 g, 광유 중 60% 분산물 6.28 mmol)을 나누어 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고 30분 동안 교반하기 전에 10분 동안 0℃에서 교반하였다. 토실-Cl (1.197 g, 6.28 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, 추가 부분의 수소화나트륨 (0.114 g, 광유 중 60% 분산물 2.85 mmol)을 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 30분 동안 교반하기 전에 10분 동안 교반하였다. 추가 부분의 토실-Cl (0.544 g, 2.85 mmol)을 이 시점에서 첨가하였다. 반응물을 추가 1.5시간 동안 교반하였다. 물 (5.14 mL, 285 mmol)을 적가함으로써 반응을 켄칭시켰다. 반응물을 포화된 염화리튬 수용액 (100 mL) 상에 붓고, 생성물을 에틸 아세테이트 (3 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 부분을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (2158 mg)을 얻었다. 잔류물을 50 g SNAP 실리카 카트리지 상에 건식 로딩하고, 0 - 25% 에틸 아세테이트/ 사이클로헥산으로 용리되는 Biotage SP4 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 순수한 생성물 - 메틸 1-토실-1H-인돌-7-카복실레이트 (1159 mg, 3.52 mmol, 61.6 % 수율)를 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.18 min, [MH]+ = 330.0.
중간체 6: (1-토실-1H-인돌-7-일)메탄올
Figure pct00040
DCM (33.913 mL) 중의 메틸 1-토실-1H-인돌-7-카복실레이트 (1117 mg, 3.39 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시키고, DIBAL-H (14.92 mL, 톨루엔 중 1M, 14.92 mmol)을 15분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 1.5시간 동안 더 교반하였다. 반응물을 여전히 -78℃에 있을 때 메탄올 (6.04 mL, 149 mmol)로 켄칭시킨 후, 주위 온도로 가온되게 하였다. 반응물을 로쉘 염 용액 (60 mL)로 희석하고, 16시간 동안 교반하였다. 층들을 분리시키고, 수성 상을 디클로로메탄 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (1065 mg)을 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄에 로딩하고, 10 - 50% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는 Biotage SP4를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 등명한 오일을 얻었다. 생성물을 공기 건조시켜 - (1-토실-1H-인돌-7-일)메탄올 (901 mg, 2.84 mmol, 84 % 수율)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.07 min, [M-H]- = 300.1.
중간체 7: 7-(브로모메틸)-1-토실-1H-인돌
Figure pct00041
(1-토실-1H-인돌-7-일)메탄올 (500 mg, 1.659 mmol) 및 HBr (3995 μL, 수중 48%, 33.2 mmol)를 80℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 소결 깔때기를 통해 여과하고, 물로 세척하였다. 수거된 침전물을 디클로로메탄 (100 mL) 중에 용해시키고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 - 7-(브로모메틸)-1-토실-1H-인돌 (602 mg, 1.322 mmol, 80 % 수율)을 진한 적색 오일로서 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.34 min, [MH]+ = 364.0, 366.0.
중간체 8: (1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-8-일)메탄올
Figure pct00042
1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-8-카복실산 (500 mg, 2.82 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 상업적으로 입수가능함)에, 보란 테트라하이드로푸란 착물 (8.47 mL, THF 중 1M, 8.47 mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 보란 테트라하이드로푸란 착물 (2.82 mL, THF 중 1M, 2.82 mmol)을 첨가하고, 추가 3시간 동안 계속 교반하였다. 반응물을 메탄올 (10 mL, 247 mmol) 및 염산 (10 mL, 1M, 10.00 mmol)으로 켄칭시키고, 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, EtOAc (20 mL)에 흡수시키고, NaHCO3 (30 mL)로 세척하였다. 수성층을 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하고, 유기층을 염수 (10 mL)로 세척하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물 (ca. 450 mg)을 오렌지색 오일로서 얻었다. 생성물을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 15-75% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 요망하는 생성물 - (1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-8-일)메탄올 (185 mg, 1.077 mmol, 38.2 % 수율)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.40 min, [MH]+ = 164.1.
중간체 9: 5-(브로모메틸)퀴녹살린
Figure pct00043
5-메틸퀴녹살린 (0.180 mL, 1.387 mmol, 예를 들어, Sigma-Aldrich로부터 입수가능함), NBS (289 mg, 1.624 mmol), 벤조일 퍼옥사이드 (37 mg, 0.153 mmol) 및 1,2-디클로로에탄 (4 mL)을 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 NBS (260 mg, 1.461 mmol) 및 벤조일 퍼옥사이드 (31 mg, 0.128 mmol)를 첨가하고, 반응물을 추가 2시간 동안 환류시켰다. 용액을 농축시켜 1.1 g의 갈색 고형물을 얻고, 이를 SiO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-100% 디에틸에테르/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 요망하는 분획을 농축시켜 5-(브로모메틸)퀴녹살린 (310 mg, 0.882 mmol, 63.6 % 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.91 min, [MH]+ = 223, 225.
중간체 10: 4-(브로모메틸)-1H-인다졸, 하이드로브로마이드
Figure pct00044
1H-인다졸-4-일)메탄올 (202 mg, 1.363 mmol, 예를 들어, Apollo Scientific로부터 입수가능함) 및 HBr (3.3 mL, 수중 48%, 27.4 mmol)을 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 형성된 현탁액을 실온으로 냉각되게 하고, 진공 하에 여과시키고, 냉각수로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켜 4-(브로모메틸)-1H-인다졸, 하이드로브로마이드 (213 mg, 0.657 mmol, 48.2 % 수율)를 오프 화이트(off white) 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.85 min, [MH]+ = 211, 213.
중간체 11: 7-(브로모메틸)-1H-인다졸, 하이드로브로마이드
Figure pct00045
(1H-인다졸-7-일)메탄올 (250 mg, 1.687 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 상업적으로 입수가능함) 및 HBr (4 mL, 수중 48%, 33.2 mmol)을 80℃에서 1시간 동안 가열하였다. 현탁액을 실온으로 냉각되게 하고, 진공 하에 여과시키고, 냉각수로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켜 7-(브로모메틸)-1H-인다졸, 하이드로브로마이드 (449 mg, 1.307 mmol, 77 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.84 min, [MH]+ = 211, 213.
중간체 12: 메틸 메틸 3-메틸-1H-인돌-4-카복실레이트
Figure pct00046
메탄올 (20.757 mL) 중의 3-메틸-1H-인돌-4-카복실산 (400 mg, 2.283 mmol, 예를 들어, Apollo Scientific로부터 입수가능함)에 황산 (0.127 mL, 2.260 mmol)을 첨가하고, 반응물을 환류 (650℃) 하에 6시간 동안 가열하였다. 반응물을 주위 온도로 냉각시키고, 5일 동안 방치되게 두었다. 반응 혼합물을 진공 하에 증발시키고, 에틸 아세테이트 (100 mL) 중에 흡수시키고, 물 (2 x 10 mL), 포화된 중탄산나트륨 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척하였다. 유기 층을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 오렌지색 오일 (434 mg)로서 얻었다. 샘플을 DCM 중의 상태로 25 g SNAP 카트리지 상에 로딩하고, 0 - 50 % 디에틸 에테르/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 순수한 생성물을 분리하였다. 요망하는 생성물인 메틸 3-메틸-1H-인돌-4-카복실레이트 (279 mg, 1.401 mmol, 61.4 % 수율)를 밝은 녹색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.92 min, [MH]+ = 190.1.
중간체 13: 메틸 3-메틸-1-토실-1H-인돌-4-카복실레이트
Figure pct00047
메틸 3-메틸-1H-인돌-4-카복실레이트 (266 mg, 1.406 mmol)를 질소 하에 0℃에서 DMF (3.515 mL) 중에 용해시켰다. 수소화나트륨 (광유 중 60% 분산물) (73.1 mg, 1.828 mmol)을 나누어 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고, 30분 동안 교반하기 전에 10분 동안 0℃에서 교반하였다. 토실-Cl (322 mg, 1.687 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, 물 (1 mL, 55.5 mmol)을 조심스럽게 첨가함으로써 켄칭시켰다. 생성물의 침전이 나타났고, 반응 혼합물을 여과하고, 물로 세척하여 연한 녹색 고형물을 회수하였다. 고형물을 진공 하에 건조시켜 요망하는 생성물 - 메틸 3-메틸-1-토실-1H-인돌-4-카복실레이트 (444 mg, 1.228 mmol, 87 % 수율)를 연한 녹색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.31 min, [MH]+ = 344.0.
중간체 14: (3-메틸-1-토실-1H-인돌-4-일)메탄올
Figure pct00048
질소 하에 DCM (6.261 mL) 중의 메틸 3-메틸-1-토실-1H-인돌-4-카복실레이트 (430 mg, 1.252 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시키고, DIBAL-H (2355 μL, 5.51 mmol, 톨루엔 중 2.34 M)를 30분에 걸쳐 적가하고, -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 여전히 -78℃에 있을 때 메탄올 (1520 μL, 37.6 mmol)로 켄칭시키고, 이후, 주위 온도로 가온되게 하였다. 반응물을 로쉘 염 용액 (20 mL)으로 희석하고, 16시간 동안 교반하였다. 층들을 분리시키고, 수성 상을 DCM (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 소수성 프릿을 통해 건조시킨 후, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (481 mg)을 얻었다. 샘플을 DCM 중의 상태로 SNAP 카트리지 (25 g) 상에 로딩하고, 10-62% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 요망하는 생성물 (3-메틸-1-토실-1H-인돌-4-일)메탄올 (311 mg, 0.966 mmol, 77% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.12 min, 올바른 [MH]+에서 이온화되지 않음.
중간체 15: 3차-부틸 7-(하이드록시메틸)-4,5-디하이드로-1H-벤조[d]아제핀-3(2H)-카복실레이트
Figure pct00049
3-(3차-부톡시카보닐)-2,3,4,5-테트라하이드로-1H-벤조[d]아제핀-7-카복실산 (200 mg, 0.686 mmol, 예를 들어, Pharmablock로부터 상업적으로 입수가능함)에, 보란 테트라하이드로푸란 착물 (2.1 mL, THF 중 1M, 2.100 mmol)를 첨가하고, 반응을 실온에서 N2 하에 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고, NaHCO3 (10 mL)로 세척하였다. 수성층을 EtOAc (2 x 10 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 3차-부틸 7-(하이드록시메틸)-4,5-디하이드로-1H-벤조[d]아제핀-3(2H)-카복실레이트 (184 mg, 0.597 mmol, 87 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.03 min, [M+Na]+ = 300.1.
중간체 16: (+/-)-1-(1-브로모에틸)-3-메틸벤젠
Figure pct00050
1-(m-톨릴)에탄올 (200 mg, 1.469 mmol, 예를 들어, Alfa Aesar로부터 상업적으로 입수가능함)을 DCM (5.9 mL) 중에 용해시키고, 0℃에서 N2 하에 교반하였다. PBr3 (0.06 mL, 0.636 mmol)을 적가하고, 반응물을 30분 동안 0℃에서 교반한 후, 실온으로 서서히 가온되게 하였다. 용액을 포화된 중탄산나트륨 수용액 (20 mL)으로 켄칭시키고, 수성층을 DCM (3 x 20 mL)으로 추출하고, 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 (+/-)-1-(1-브로모에틸)-3-메틸벤젠 (250 mg, 1.130 mmol, 77 % 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.20 - 7.34 (m, 3 H) 7.11 (d, J=7.3 Hz, 1 H) 5.44 (q, J=6.8 Hz, 1 H) 2.31 (s, 3 H) 1.97 (d, J=6.8 Hz, 3 H).
중간체 17: (+/-)-1-(1-브로모에틸)-2-메틸벤젠
Figure pct00051
1-(o-톨릴)에탄올 (513 mg, 3.77 mmol, 예를 들어, Alfa Aesar로부터 상업적으로 입수가능함)을 DCM (5 mL) 중에 용해시키고, 0℃에서 N2 하에 교반하였다. PBr3 (0.142 mL, 1.507 mmol)을 적가하고, 반응물을 30분 동안 0℃에서 교반한 후, 실온으로 서서히 가온되게 하였다. 추가 부분의 PBr3 (0.355 mL, 3.77 mmol)를 실온에서 적가하고, 반응물을 1.5시간 동안 교반하였다. 용액을 포화된 중탄산나트륨 수용액 (20 mL)으로 켄칭시키고, 수성층을 DCM (3 x 20 mL)으로 추출하고, 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 (+/-)-1-(1-브로모에틸)-2-메틸벤젠 (670 mg, 2.69 mmol, 71.5 % 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.54 - 7.60 (m, 1 H) 7.15 - 7.27 (m, 3 H) 5.62 (q, J=6.8 Hz, 1 H) 2.37 (s, 3 H) 2.03 (d, J=6.8 Hz, 3 H)
중간체 18: 3차-부틸 5-(하이드록시메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-카복실레이트
Figure pct00052
THF (1 mL) 중의 2-(3차-부톡시카보닐)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-5-카복실산 (113 mg, 0.407 mmol, 예를 들어, ASW MedChem로부터 상업적으로 입수가능함)의 용액에 보란 테트라하이드로푸란 착물 (1.2 mL, THF 중 1M, 1.200 mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고, NaHCO3 (10 mL)로 세척하였다. 수성층을 EtOAc (2 x 10 mL)로 추출하고, 유기층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 600 mg의 무색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 3차-부틸 5-(하이드록시메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-카복실레이트 (110 mg, 0.376 mmol, 92 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.99 min, [MH-tBu]+ = 208.
중간체 19: 6-(브로모메틸)-1H-벤조[d]이미다졸
Figure pct00053
1H-벤조[d]이미다졸-6-일)메탄올 (205 mg, 1.384 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 상업적으로 입수가능함) 및 HBr (3.4 mL, 수중 48%, 28.2 mmol)를 80℃에서 30분 동안 가열하였다. 용액의 pH를 중탄산나트륨 용액을 사용하여 pH 9로 조절하고, EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 6-(브로모메틸)-1H-벤조[d]이미다졸 (90 mg, 0.341 mmol, 24.66 % 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.24 (s, 1 H) 7.55 - 7.67 (m, 2 H) 7.30 (dd, J=8.3, 1.2 Hz, 1 H) 4.73 (s, 2 H).
중간체 20: 3차-부틸 4-(하이드록시메틸)인돌린-1-카복실레이트
Figure pct00054
인돌린-4-일메탄올 (301 mg, 2.018 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 상업적으로 입수가능함)을 DCM (5 mL) 중에 용해시키고, Boc-안하이드라이드 (660 mg, 3.03 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 N2 하에 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화된 중탄산나트륨 수용액 (10 mL)으로 희석하고, DCM (2 x 10 mL)으로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 오렌지색 오일 (776 mg)을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-50% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 3차-부틸 4-(하이드록시메틸)인돌린-1-카복실레이트 (472 mg, 1.704 mmol, 84 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.00 min, [MH]+ = 194.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.52 (br. s., 1 H) 7.12 (t, J=7.7 Hz, 1 H) 6.95 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 5.05 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 4.42 (d, J=5.4 Hz, 2 H) 3.91 (t, J=8.7 Hz, 2 H) 3.00 (t, J=8.7 Hz, 2 H) 1.50 (s, 9 H).
중간체 21: 메틸 2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-7-카복실레이트
Figure pct00055
메탄올 (30 mL) 중의 2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-7-카복실산 (500 mg, 2.84 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 상업적으로 입수가능함)에, 황산 (2.84 mL, 53.3 mmol)을 첨가하고, 반응물을 65℃에서 4시간 동안 교반하였다. 이후, 반응물을 3일 동안 실온에서 두었다. 반응 혼합물을 65℃에서 암모니아 수용액으로 염기성화시켰다. 반응 혼합물을 DCM으로 추출하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (410 mg, 2.156 mmol, 76% 수율)을 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.35 min, [MH]+ = 191.2.
중간체 22: (2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-7-일)메탄올
Figure pct00056
질소 하에, 리튬 보로하이드라이드 (85 mg, 3.88 mmol) 및 메탄올 (4 mL, 99 mmol)을 THF (20 mL) 중에 용해시켰다. 이후, THF (5 mL) 중의 메틸 2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-7-카복실레이트 (410 mg, 2.156 mmol)를 혼합물에 첨가하였다. 이후, 반응물을 불활성 대기 하에 50℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물 및 2M 염산으로 켄칭시켰다. 이후, 반응 혼합물을 물 (50 mL)과 에틸 아세테이트 (50 mL) 사이에서 분배시켰다. 이후, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 진공 하에 제거하여 주로 미반응된 SM을 얻었다. DIBAL-H (1.812 mL, 톨루엔 중 25%, 2.69 mmol)를 0℃로 냉각된 무수 DCM (20 mL) 용액 중의 미정제의 회수된 샘플 (500 mg)에 적가하였다. 반응물을 0℃에서 1시간 동안 질소 하에 교반되게 하였다. 추가의 DIBAL-H (1.812 mL, 톨루엔 중 25%, 2.69 mmol)를 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 교반되게 하였다. 메탄올 (4 mL, 99 mmol)을 용액에 서서히 첨가하고, 이어서 로쉘 염 용액 (40 mL)을 첨가하고, 혼합물을 40분 동안 교반되게 하였다. 유기 층을 분리시키고, 수성 층을 DCM (2 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기물질을 물 (40 mL)로 세척한 후, 염수 (40 mL)로 세척하였다. 유기 층을 소수성 프릿을 통과시키고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (250 mg, 1.541 mmol, 71.5%)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.48 min, [MH]+ = 163.1.
중간체 23: 3차-부틸 7-(하이드록시메틸)-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-1-카복실레이트
Figure pct00057
아세토니트릴 (11 mL) 및 물 (2.75 mL) 중의 (2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-7-일)메탄올 (250 mg, 1.541 mmol)의 용액에 Boc2O (0.501 mL, 2.158 mmol) 및 중탄산나트륨 (259 mg, 3.08 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (70 mL)로 희석하고, 10 % 시트르산 수용액 (3 x 25 mL)으로 세척하였다. 수성층을 에틸 아세테이트 (3 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 부분을 물 (25 mL) 및 염수 (25 mL)로 세척한 후, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 얻었다. 생성물을 디클로로메탄 중의 상태로 SNAP 카트리지 (25 g) 상에 로딩하고, 0-100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 진공 하에 증발시켜 표제 화합물 (128 mg, 0.488 mmol, 31.7% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 263.1.
중간체 24: 벤조푸란-4-일메탄올
Figure pct00058
THF (1 mL) 중의 벤조푸란-4-카복실산 (50 mg, 0.308 mmol, 예를 들어, J&W PharmLab로부터 상업적으로 입수가능함)에, 보란 테트라하이드로푸란 착물 (0.47 mL, THF 중 1M, 0.470 mmol)을 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 NaHCO3 (20 mL)로 켄칭시키고, EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 50 mg의 무색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 10 g 카트리지, 0-50% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하고, 적합한 분획을 농축시켜 벤조푸란-4-일메탄올 (37 mg, 0.225 mmol, 72.9 % 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.72 min, [M-OH]+ = 131.1.
중간체 25: 4-(브로모메틸)벤조푸란
Figure pct00059
벤조푸란-4-일메탄올 (35 mg, 0.236 mmol)을 0℃에서 N2 하에 디에틸 에테르 (1 mL) 및 DCM (1 mL) 중에 용해시켰다. PBr3 (0.04 mL, 0.424 mmol)을 적가하고, 반응물을 실온에서 N2 하에 교반하였다. 30분 후, TLC (50:50 EtOAc:물로 용리)는 비극성 생성물로 완전히 전환되었음을 보여주었다. 용액을 물 (10 mL)로 켄칭시키고, 디에틸 에테르 (3 x 20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 4-(브로모메틸)벤조푸란 (41 mg, 0.117 mmol, 49.3 % 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.15 min, 생성물이 올바른 [MH]+에서 이온화되지 않음.
중간체 26: 1-(1-토실-1H-인돌-4-일)에타논
Figure pct00060
1-(1H-인돌-4-일)에타논 (505 mg, 3.17 mmol, 예를 들어, Activate Scientific로부터 상업적으로 입수가능함)을 0℃에서 N2 하에 DMF (5 mL) 중에 용해시켰다. 수소화나트륨 (167 mg, 4.18 mmol, 광유 중 60%)을 나누어 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고 30분 동안 교반하기 전에 10분 동안 0℃에서 교반하였다. 토실-Cl (726 mg, 3.81 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 추가의 수소화나트륨 (140 mg, 3.50 mmol, 광유 중 60%)를 첨가하고, 반응물을 10분 동안 교반한 후, 토실-Cl (721 mg, 3.78 mmol)를 첨가하고, 반응물을 20분 동안 교반하였다. 반응물을 물 (20 mL)로 켄칭시키고, 밤새 방치되게 두었다. 이를 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 1.33 g의 갈색 고형물을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 25 g 카트리지, 0-50% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 1-(1-토실-1H-인돌-4-일)에타논 (899 mg, 2.58 mmol, 81 % 수율)을 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.23 min, [MH]+ = 314.0.
중간체 27: (+/-)-1-(1-토실-1H-인돌-4-일)에탄올
Figure pct00061
1-(1-토실-1H-인돌-4-일)에타논 (899 mg, 2.87 mmol)을 0℃에서 N2 하에 메탄올 (9 mL) 중에 용해시켰다. 소듐 보로하이드라이드 (170 mg, 4.49 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온으로 가온되게 하였다. 1.5시간 동안 교반한 후, 추가의 소듐 보로하이드라이드 (121 mg, 3.20 mmol)를 첨가하고, 반응물을 밤새 교반하였다. 용액을 농축시켜 오렌지색 고형물을 얻었다. 이를 EtOAc (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 1.05 g의 미정제 생성물을 오렌지색 오일로서 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 25 g 카트리지, 0-50% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 1-(1-토실-1H-인돌-4-일)에탄올 (862 mg, 2.460 mmol, 86 % 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.12 min, [M-H]- = 314.1.
중간체 28: (+/-)-4-(1-브로모에틸)-1-토실-1H-인돌
Figure pct00062
1-(1-토실-1H-인돌-4-일)에탄올 (160 mg, 0.507 mmol)을 0℃에서 N2 하에 디에틸 에테르 (1 mL) 및 DCM (1 mL) 중에 용해시켰다. PBr3 (0.07 mL, 0.742 mmol)을 적가하고, 반응물을 실온에서 N2 하에 2시간 동안 교반하였다. 추가의 PBr3 (0.07 mL, 0.742 mmol)을 첨가하고, 반응물을 3시간 동안 교반하였다. 추가의 PBr3 (0.07 mL, 0.742 mmol)을 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (20 mL)로 켄칭시키고, Et2O (2 x 20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 4-(1-브로모에틸)-1-토실-1H-인돌 (275 mg, 0.509 mmol, 100 % 수율)을 분홍색 고형물로서 얻고, 이를 추가의 합성에서 미정제인 채로 사용하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.32 min, 생성물이 올바른 [MH]+에서 이온화되지 않음.
중간체 29: 5-(브로모메틸)-2-메톡시피리딘
Figure pct00063
(6-메톡시피리딘-3-일)메탄올 (250 mg, 1.797 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 상업적으로 입수가능함)을 대기에 개방된 50 mL 둥근-바닥 플라스크 내 클로로포름(20 mL) 중에 용해시키고, 삼브롬화인(0.188 mL, 1.989 mmol)을 0℃에서 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 수성층을 DCM (3 x 30 mL)으로 추출하고, 유기층을 합하고, 염수 (30 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통과시키고, 진공 하에서 증발시켰다. 형성된 오일을 DCM에 로딩하고, 0-40% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 Biotage Isolera SNAP 25 g 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하여 표제 화합물 (160 mg, 0.792 mmol, 44.1% 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹):Rt = 0.93 min, [MH]+ = 202.
중간체 30: 2,4,6-트리클로로페닐 포르메이트
Figure pct00064
포름산 (57.3 mL, 1519 mmol) 및 아세트산 무수물 (115 mL, 1216 mmol)을 교반하고, 60℃로 1.5시간 동안 가열한 후, 주위 온도로 냉각되게 하였다. 형성된 용액을 2,4,6-트리클로로페놀 (30 g, 152 mmol, 예를 들어, Sigma-Aldrich로부터 입수가능함) 및 소듐 아세테이트 (12.46 g, 152 mmol)을 함유하는 플라스크에 부었다. 혼합물을 3.5시간 동안 교반한 후, 톨루엔 (300 mL)으로 희석하고, 물 (2 x 200 mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발 건조시켜 백색의 바늘 모양 결정 (32.45 g)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.15 min, [M+Na]+ = 249.8.
중간체 31: 3차-부틸 ((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)카바메이트
Figure pct00065
(1S,2S)-2-메틸사이클로프로판카복실산 (200 mg, 1.998 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함) 및 트리에틸아민 (0.9 mL, 6.46 mmol)을 3차-부탄올 (4 mL) 중에 용해시켰다. 디페닐 포스포릴아지드 (0.47 mL, 2.181 mmol)를 첨가하고, 반응물을 90℃에서 가열하였다. 반응물을 TLC ( 50:50 EtOAc:사이클로헥산으로 용리, 닌하이드린으로 가시화)를 수행하였다. 2시간 후, TLC는 덜 극성인 생성물 뿐만 아니라 잔류 SM의 형성을 보여주었다. 반응물을 3일 동안 교반하였다. 용액을 EtOAc (10 mL)과 중탄산나트륨 용액 (10 mL) 사이에서 분배시키고, EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 1.08 g의 황색 고형물을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 25 g 카트리지, 0-50% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 3차-부틸 ((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)카바메이트 (223 mg, 1.172 mmol, 58.7 % 수율)를 백색 결정질 고형물로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 2.05 - 2.14 (m, 1 H) 1.43 (br. s., 9 H) 1.04 (d, J=5.9 Hz, 3 H) 0.78 (m, J=8.9, 6.0, 6.0, 3.1 Hz, 1 H) 0.59 (dt, J=8.9, 4.3 Hz, 1 H) 0.39 (q, J=6.0 Hz, 1 H).
중간체 32: (1S,2S)-2-메틸사이클로프로판아민 하이드로클로라이드
Figure pct00066
3차-부틸 ((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)카바메이트 (215 mg, 1.256 mmol)를 디옥산 중의 4 M HCl(16 mL, 64.0 mmol) 중에서 교반하였다. 반응물을 TLC (50:50 EtOAc:사이클로헥산, 닌하이드린으로 시각화)를 거치게 하였다. 30분 후, 용액을 농축시켜 (1S,2S)-2-메틸사이클로프로판아민 하이드로클로라이드 (151 mg, 1.123 mmol, 89 % 수율)를 오프 화이트 고형물로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.27 (br. s., 3 H) 2.25 (br. s., 1 H) 1.06 - 1.18 (m, 1 H) 0.99 (d, J=6.1 Hz, 3 H) 0.85 (ddd, J=9.4, 5.6, 3.8 Hz, 1 H) 0.48 (dt, J=7.5, 5.9 Hz, 1 H).
중간체 33: 메틸 1-벤질-5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00067
수소화나트륨 (5.17 g, 광유 중 60% 분산물 129 mmol)을 0℃에서 DMF (200 mL) 및 THF (200 mL) 중의 메틸 5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로-3-피리딘카복실레이트 (25 g, 108 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 상업적으로 입수가능함)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반하여, 진한 현탁액을 얻었다. 벤질 브로마이드 (14.10 mL, 119 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 추가 2시간 동안 교반하고, 실온으로 가온되게 한 후, 형성되는 등명한 갈색 용액을 물 (400 mL)에 첨가하고, EtOAc (2 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 물 (2 x 200 mL)로 세척하고, 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 메틸 1-벤질-5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (31 g, 96 mmol, 89 % 수율)를 베이지색 고형물로서 얻었다. 이 물질을 정제하지 않고 다음 단계로 옮겼다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.98 min, [MH]+ = 322.0 & 324.1.
1H NMR (400 MHz, CHCl3-d) δ ppm 8.16 (d, J=2.9 Hz, 1 H) 7.62 (d, J=2.9 Hz, 1 H) 7.30 - 7.43 (m, 5 H) 5.15 (s, 2 H) 3.92 (s, 3 H).
중간체 34: 1-벤질-5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00068
물 (200 mL) 중의 수산화리튬 (6.91 g, 289 mmol)을 메틸 1-벤질-5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (31 g, 96 mmol), THF (200 mL) 및 메탄올 (200 mL)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 진공 하에 대략 절반 부피로 증발시켜, 진한 현탁액을 얻었다. 이를 물 (200 mL)로 희석하고, 아세트산을 사용하여 pH 5로 산성화시킨 후, EtOAc (2 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 오프-화이트 고형물을 얻었다. 생성물을 에테르 (200 mL) 중에 현탁시키고, 초음파 처리하고, 사이클로헥산 (100 mL)으로 희석하고, 여과에 의해 수거하여 1-벤질-5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실산 (23 g, 74.6 mmol, 78 % 수율)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.01 min, [MH]+ = 308.0 & 310.1.
1H NMR (400 MHz, CHCl3-d) δ ppm 14.02 (br. s., 1 H) 8.55 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 7.73 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 7.40 - 7.47 (m, 3 H) 7.31 - 7.37 (m, 2 H) 5.25 (s, 2 H).
중간체 35: 1-벤질-5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00069
1-벤질-5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실산 (28 g, 91 mmol)을 DCM (300 mL) 중에 현탁시키고, 옥살릴 클로라이드 (23.86 mL, 273 mmol) 및 DMF (0.352 mL, 4.54 mmol)를 첨가한 후, 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공 하에 증발시켜 갈색 잔류물을 얻은 후, 이를 THF (300 mL) 중에 용해시키고, Et3N (12.67 mL, 91 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 얼음 배쓰에서 냉각시킨 후, 메탄아민 (91 mL, THF 중 2M, 182 mmol)을 30분에 걸쳐 적가하고, 혼합물을 추가 1시간 동안 0℃에서 교반하였다. 용매를 진공 하에 증발시키고, 고체 잔류물을 물 (300 mL)과 DCM (300 mL) 사이에서 분배시키고, 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 1-벤질-5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (27.6 g, 86 mmol, 95 % 수율)를 갈색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.97 min, [MH]+ = 321.0 & 323.1.
1H NMR (400 MHz, CHCl3-d) δ ppm 9.57 (br. s., 1 H) 8.60 (d, J=2.9 Hz, 1 H) 7.62 (d, J=2.9 Hz, 1 H) 7.34 - 7.48 (m, 3 H) 7.29 - 7.33 (m, 2 H) 5.20 (s, 2 H) 3.00 (d, J=4.9 Hz, 3 H).
중간체 36: 에틸 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00070
1-벤질-5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (23 g, 71.6 mmol), DMSO (60 mL), 에탄올 (70 g, 1519 mmol), Et3N (19.96 mL, 143 mmol), dppb (3.05 g, 7.16 mmol) 및 팔라듐 아세테이트 (1.608 g, 7.16 mmol)를 스틸 Parr 용기에 넣고, 이후 이를 50 psi가 되도록 채움으로써 일산화탄소로 퍼징시키고, 이후 압력을 해제시키고, 이후, 50 psi로 재충전시키고, 밤새 100℃에서 가열하였다. 혼합물을 물 (200 mL)로 희석하고, EtOAc (2 x 300 mL)로 추출하고, 유기 층을 물 (2 x 300 mL)로 세척한 후, 건조시키고, 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 에테르 (200 mL)로 분쇄시키고, 고형물을 여과에 의해 수거하여 에틸 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (21.2 g, 67.4 mmol, 94 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.99 min, [MH]+ = 315.2.
1H NMR (400 MHz, CHCl3-d) δ ppm 9.37 (br. s., 1 H) 9.03 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 8.38 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 7.34 - 7.42 (m, 3 H) 7.28 - 7.34 (m, 2 H) 5.25 (s, 2 H) 4.35 (q, J=7.1 Hz, 2 H) 2.99 (d, J=4.9 Hz, 3 H) 1.37 (t, J=7.2 Hz, 3 H).
중간체 37: 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00071
수산화나트륨 (99 mL, 199 mmol)을 메탄올 (100 mL) 및 THF (100 mL)의 혼합물 중의 에틸 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (20.8 g, 66.2 mmol)의 용액에 첨가하고, 형성된 용액을 2시간 동안 실온에서 교반한 후, 진공 하에 증발시켜 대략 100 mL 용량을 얻었다. 혼합물을 물 (200 mL)로 희석하고, 여과하여 진회색 고형물을 제거하고, 여액을 MTBE (200 mL)로 세척한 후, 2M HCl를 사용하여 pH 4로 산성화시키고, 형성된 현탁액을 2시간 동안 교반한 후, 여과하고, 생성물을 물로 세척한 후, 진공 오븐에서 건조시켜 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (15.2 g, 53.1 mmol, 80 % 수율)을 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.58 min, [MH]+ = 287.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.19 (br. s., 1 H) 9.14 - 9.34 (m, 1 H) 8.88 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.70 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 7.25 - 7.42 (m, 5 H) 5.33 (s, 2 H) 2.82 (d, J=4.6 Hz, 3 H).
중간체 38: 메틸 2-(벤질옥시)-5-브로모니코티네이트
Figure pct00072
메틸 5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (5 g, 21.55 mmol, 예를 들어, Sigma-Aldrich로부터 입수가능함)를 클로로포름 (100 mL) 중에 용해시킨 후, 실버 카보네이트 (11.88 g, 43.1 mmol) 및 벤질 브로마이드 (3.33 mL, 28.0 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 환류 하에 밤새 가열하였다. 혼합물을 여과하고, 여액을 진공 하에 증발시켜 담황색 액체를 얻었다. 이를 DCM (5 mL) 중에 용해시키고, 50 g 실리카 컬럼 상에 로딩한 후, 0-50% EtOAc/사이클로헥산으로 용리시키고, 생성물-함유 분획 진공 하에 증발시켜 메틸 2-(벤질옥시)-5-브로모니코티네이트 (4.65 g, 14.43 mmol, 67.0 % 수율)를 무색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 1.37 min, [MH]+ = 322.1, 324.1.
1H NMR (400 MHz, CHCl3-d) δ ppm 8.35 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.29 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 7.51 (d, J=7.6 Hz, 2 H) 7.38 (t, J=7.5 Hz, 2 H) 7.28 - 7.34 (m, 1 H) 5.51 (s, 2 H) 3.93 (s, 3 H).
중간체 39: (R)-메틸 2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00073
(R)-1-페닐에탄아민 (8.93 mL, 70.2 mmol)을 무수 DMF (43 mL) 및 무수 THF (173 mL)의 혼합물 중의 메틸 2-옥소-2H-피란-3-카복실레이트 (10.3 g, 66.8 mmol, 예를 들어, Sigma-Aldrich로부터 입수가능함)의 용액에 첨가하였다. 형성된 암적색 용액을 30분 동안, N2 하에 교반하였다. EDC (16.66 g, 87 mmol) 및 DMAP (0.506 g, 4.14 mmol)를 첨가하고, 형성된 현탁액을 주말에 거쳐 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 증발시켜 갈색 슬러리를 얻었다. 잔류물을 EtOAc과 물 사이에서 분배시키고, 수성 층을 제거하였다. 유기 층을 (3x 2 M aq. HCl, 1x 염수)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, EtOAc로 용리되는 실리카를 통해 여과하였다. 여액을 진공 하에 증발시켜 생성물을 갈색 오일(12.94 g)로서 얻었다.
LCMS (2 min TFA): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 258.1.
중간체 40: (R)-메틸 5-브로모-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00074
NBS (10.74 g, 60.4 mmol)을 2-MeTHF (150 mL) 중의 (R)-메틸 2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (12.94 g, 50.3 mmol)의 암갈색 용액에 한번에 첨가하였다. 초기 현탁액이 밝은 갈색 용액으로 되었고, 15분 동안 교반하였으며, 이때 진한 갈색 용액이었다. 반응 혼합물을 세척하고[3x sat. aq. NaHCO3 (40 mL), 1x aq. 10% 소듐 티오설페이트 (20 mL), 1x 염수 (10 mL)], MgSO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 검정색 오일을 얻었다. 잔류물을 톨루엔 (40 mL) 중에 용해시키고, 셀라이트를 통해 여과하고, 톨루엔 (80 mL)로 세척하고, 진공 하에 증발시켜 생성물 (19.62 g)을 검정색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 min TFA): Rt = 1.02 min, [MH]+ = 336.0 & 337.9.
중간체 41: (R)-5-브로모-N-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00075
메틸아민 용액 (74 mL, 40% aq., 855 mmol)을 메탄올 (133 mL) 중의 (R)-메틸 5-브로모-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (19.2 g, 40.0 mmol)의 용액에 첨가하였다. 형성된 용액을 응축기의 상부에 장착된 벌룬으로 50℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 90분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 증발시켜 흑색 검을 얻고, 이를 EtOAc 중에 현탁시켰다. 현탁액을 EtOAc로 용리되는 실리카를 통해 여과하고, 여액을 증발시켜 생성물 (13.1 g)을 갈색 검으로서 얻었다.
LCMS (2 min TFA):Rt = 1.01 min, [MH]+ = 335.1 & 337.1
중간체 42: (R)-메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00076
잔포스 (1.65 g, 2.85 mmol) 및 팔라듐(II) 아세테이트 (0.877 g, 3.91 mmol)를 DMF (220 mL) 중의 (R)-5-브로모-N-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (13.1 g, 39.1 mmol), 트리에틸아민 (16.34 mL, 117 mmol) 및 메탄올 (15.81 mL, 391 mmol)의 용액에 첨가하였다. 일산화탄소를 갈색 현탁액이 형성될 때까지 혼합물을 통해 살포하였다. 반응물을 일산화탄소의 벌룬 아래에 유지시키고, 60℃로 4시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, N2를 살포하여 어떠한 잔류하는 일산화탄소를 제거하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, EtOAc로 헹구고 여액을 진공 하에 증발시켜 검정색 슬러리를 얻었다. 잔류물을 EtOAc (350 mL)과 물 (100 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성층을 제거하고, 유기 층을 세척하고(2x 물 [50 mL], 1x 염수 [50 mL]), MgSO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 흑색 검을 얻었다. 검을 톨루엔 (60 mL) 중에 용해시키고, Biotage 340 g 실리카 컬럼 상에 로딩시켰다. 컬럼을 사이클로헥산:EtOAc (20 -> 66%)로 용리시켰다. 생성물 함유 분획을 증발시켜 생성물 (7.43 g)을 갈색 검으로서 얻었다.
LCMS (2 min TFA): Rt = 0.94 min, [MH]+ = 315.2.
중간체 43: (R)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00077
수산화나트륨 (1.891 g, 47.3 mmol)을 메탄올 (70 mL) 중의 (R)-메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (7.43 g, 23.64 mmol)의 용액에 첨가하였다. 물을 교반된 현탁액에 첨가하고, 형성된 용액을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 증발시켜 옅은 갈색 고형물을 얻고, 2M aq. HCl (100 mL)로 산성화시켰다. 아세톤 (10 mL)를 첨가하고, 현탁액을 15분 동안 교반하고, 여과하였다. 필터 케이크를 세척하고[물:아세톤 (1:1, 20 mL), 아세톤 (20 mL)], 진공 하에 건조시켜 생성물 (6.40 g)을 베이지색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min TFA):Rt = 0.82 min, [MH]+ = 301.0.
중간체 44: (S*)-메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00078
메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (700 mg, 3.33 mmol), 1-(1-브로모에틸)-3-메틸벤젠 (800 mg, 4.02 mmol), 탄산칼륨 (1310 mg, 9.48 mmol) 및 DMF (5 mL)를 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. 현탁액을 농축시키고, EtOAc (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 1.2 g의 오렌지색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-100% (EtOAc 중 25% EtOH)/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 (+/-)-메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (710 mg, 1.946 mmol, 58.4 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다. 677 mg의 라세메이트를 키랄 분리에 제공하였다.
분석 방법:
라세메이트 (~0.5 mg)를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 20 μL를 컬럼 상에 주입하였다. (컬럼: 4.6 mm id x 25 cm 키랄팍(Chiralpak) IA, 로트 번호 IA00CE-MC024). 이를 50% EtOH/헵탄, f=11.0 mL/min, 검출기 파장 215 nm, 4. Ref 550,100로 용리시켰다.
제조 방법:
라세메이트 (~80 mg)를 DCM (1 mL) 및 EtOH (2 mL) 중에 용해시켰다. 3 mL의 용액을 컬럼 상에 주입하였다. (컬럼: 30 mm x 25 cm Chirapak IA (5 ㎛), Lot No IA11157-01). 이를 50% EtOH/헵탄, f=30 mL/min, 검출기 파장 = 215 nm, 4. Ref 550,100로 용리시켰다.
총 14회 주입이 있었다. 7-8 분으로부터의 분획을 크게 하고(bulked), 피크 1로 라벨링하고, 8-9분으로부터의 분획을 크게 하고, 믹스로 라벨링하고, 9-12분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 믹스 분획을 진공 처리하고, 상기 제조 방법을 사용하여 재처리하였다. 커진 분획을 회전 증발기를 사용하여 진공 처리한 후, 상기 분석 방법에 의해 기술된 바와 같이 최종 분석을 위한 칭량된 플라스크로 옮기었다.
제1 용리 이성질체: (S*)-메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (289 mg, 0.792 mmol, 23.78 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.05 min, [M-H]- = 329.1.
중간체 45: (S*)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00079
(S*)-메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (289 mg, 0.880 mmol), 수산화리튬 (66 mg, 2.76 mmol), 1,4-디옥산 (3 mL) 및 물 (3 mL)을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 아세트산 (0.050 mL, 0.880 mmol)을 사용하여 pH 4로 산성화시킨 후, EtOAc (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, EtOAc (20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 (S*)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (277 mg, 0.705 mmol, 80 % 수율)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.94 min, [M-H]- = 313.2.
중간체 46: 메틸 5-브로모-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00080
(1-브로모에틸)벤젠 (0.706 mL, 5.17 mmol)을 DMF (10 mL) 중의 메틸 5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (1.0 g, 4.31 mmol) 및 탄산칼륨 (0.715 g, 5.17 mmol)의 교반된 현탁액에 첨가하였다. 백색 현탁액을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc과 물 사이에 분배시켰다. 수성층을 제거하고, 유기 층을 (2x 물)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 무색 오일을 얻었다. 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, 25 g Biotage 실리카 SNAP 컬럼 상에 로딩시키고, 사이클로헥산:EtOAc (5 -> 40%)로 용리하였다. 생성물 함유 분획을 진공 하에 증발시켜 생성물 (824 mg)을 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 min TFA): Rt = 1.02 min, [MH]+ = 335.9 & 337.9.
중간체 47: 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00081
메틸아민 용액 (3.167 mL, 40% aq., 36.6 mmol)을 메탄올 (8 mL) 중의 메틸 5-브로모-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (820 mg, 2.439 mmol)의 용액에 첨가하였다. 형성된 용액을 벌룬이 장착된 밀봉된 시스템에서 4시간 동안 50℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 증발시켜 생성물 (793 mg)을 무색 검으로서 얻었다.
LCMS (2 min TFA): Rt = 1.01 min, [MH]+ = 335.0 & 337.0.
중간체 48: 2-(벤질옥시)-5-브로모니코틴산
Figure pct00082
메틸 2-(벤질옥시)-5-브로모니코티네이트 (4.6 g, 14.28 mmol)를 THF (50 mL) 및 메탄올 (50 mL) 중에 용해시킨 후, 물 (50 mL) 중의 LiOH (1.368 g, 57.1 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 물 (100 mL) 중에 현탁시키고, 2M HCl를 사용하여 pH 4로 산성화시킨 후, 10% MeOH/DCM (3 x 100 mL, 낮은 용해도)로 추출하고, 유기 층을 물로 세척하고, 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 2-(벤질옥시)-5-브로모니코틴산 (4.15 g, 13.47 mmol, 94 % 수율)을 무색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.68 min, [MH]+ = 308.2, 310.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.43 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 8.18 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 7.47 (d, J=7.1 Hz, 2 H) 7.37 (t, J=7.3 Hz, 2 H) 7.27 - 7.33 (m, 1 H) 5.43 (s, 2 H).
중간체 49: 2-(벤질옥시)-5-브로모-N-메틸니코틴아미드
Figure pct00083
2-(벤질옥시)-5-브로모니코틴산 (4.2 g, 13.63 mmol)을 DCM (50 mL) 중에 현탁시키고, 옥살릴 클로라이드 (2.386 mL, 27.3 mmol)를 첨가하고, 이어서 DMF (0.053 mL, 0.682 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반한 후, 진공 하에 증발시켰다. 잔류물을 THF (50 mL) 중에 용해시킨 후, 메탄아민 (13.63 mL, THF 중 2M, 27.3 mmol)을 첨가하고, 형성된 현탁액을 2시간 동안 실온에서 교반한 후, 진공 하에 증발시켰다. 잔류물을 THF (50 mL) 중에 용해시키고, 메탄아민 (13.63 mL, THF 중 2M, 27.3 mmol)을 첨가한 후, 형성된 혼합물을 2시간 동안 교반한 후, 진공 하에 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc (100 mL)와 물 (100 mL) 사이에서 분배시키고, 수성 층을 추가의 EtOAc (100 mL)로 추출하고, 합한 유기물질을 염수로 세척하고, 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 황색 검과 같은 고형물을 얻었다. 이를 DCM (20 mL)과 메탄올 (5 mL)의 혼합물에 어렵게 용해시킨 후, 50 g 실리카 컬럼 상에 로딩시키고, 이후 이를 진공 라인을 사용하여 흡입시키고, 건조시켰다. 컬럼을 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리시켜 2-(벤질옥시)-5-브로모-N-메틸니코틴아미드 (2.35 g, 7.32 mmol, 53.7 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 1.19 min, [MH]+ = 321.1, 323.1.
1H NMR (400 MHz, CHCl3-d) δ ppm 8.65 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 8.31 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 7.87 (br. s., 1 H) 7.33 - 7.48 (m, 5 H) 5.53 (s, 2 H) 2.94 (d, J=4.9 Hz, 3 H).
중간체 50: 2,4,6-트리클로로페닐 6-(벤질옥시)-5-(메틸카바모일)니코티네이트
Figure pct00084
2-(벤질옥시)-5-브로모-N-메틸니코틴아미드 (2 g, 6.23 mmol), 잔포스 (0.721 g, 1.245 mmol), 팔라듐 아세테이트 (0.140 g, 0.623 mmol) 및 Et3N (1.302 mL, 9.34 mmol)을 적하 깔때기 및 상부에 질소 버블러가 있는 응축기가 구비된 삼목 플라스크에서 배합하였다. 톨루엔 (30 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 질소 하에 80℃에서 가열한 후, 톨루엔 (20 mL) 중의 2,4,6-트리클로로페닐 포르메이트 (2.106 g, 9.34 mmol)의 용액을 30분에 걸쳐 적가하고, 18시간 동안 계속 가열하였다.
별도로, 2-(벤질옥시)-5-브로모-N-메틸니코틴아미드 (0.6 g, 1.868 mmol), 잔포스 (0.216 g, 0.374 mmol), 팔라듐 아세테이트 (0.042 g, 0.187 mmol) 및 Et3N (0.391 mL, 2.80 mmol)을 적하 깔때기 및 상부에 질소 버블러가 있는 응축기가 구비된 삼목 플라스크에서 배합하였다. 톨루엔 (30 mL)을 첨가하고, 혼합물을 질소 하에 20분 동안 80℃에서 가열한 후, 톨루엔 (20 mL) 중의 2,4,6-트리클로로페닐 포르메이트 (0.632 g, 2.80 mmol)의 용액을 30분에 걸쳐 적가하고, 2시간 동안 계속 가열하였다.
두 개의 별도의 반응물들을 합하고, EtOAc (100 mL)로 희석하고, 물 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척하고, 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 이를 DCM (10 mL) 중에 용해시키고, 50 g 실리카 컬럼 상에 로딩시킨 후, 0-50% EtOAc/사이클로헥산으로 용리시키고, 생성물-함유 분획 진공 하에 증발시켜 베이지색 고형물을 얻었다. 생성물을 0-50% EtOAc/사이클로헥산으로 용리되는 50 g 실리카 카트리지에서 다시 컬럼 처리하고, 순수한 분획을 수거하고, 진공 하에 증발시켜 2,4,6-트리클로로페닐 6-(벤질옥시)-5-(메틸카바모일)니코티네이트 (1.65 g, 3.54 mmol, 56.9 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 1.52 min, [MH]+ = 465.3.
1H NMR (400 MHz, CHCl3-d) δ ppm 9.31 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 9.10 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 7.80 (d, J=3.7 Hz, 1 H) 7.38 - 7.53 (m, 7 H) 5.68 (s, 2 H) 2.98 (d, J=4.6 Hz, 3 H).
중간체 51: 2-(벤질옥시)-N5-사이클로부틸-N3-메틸피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00085
2,4,6-트리클로로페닐 6-(벤질옥시)-5-(메틸카바모일)니코티네이트 (1.65 g, 3.54 mmol)를 THF (20 mL) 중에 용해시키고, Et3N (0.988 mL, 7.09 mmol)을 첨가하였다. 사이클로부탄아민 (0.605 mL, 7.09 mmol) 및 DMAP (0.022 g, 0.177 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 45℃에서 15분 동안 가열하였다. 반응물을 추가 40분 동안 가열한 후, 냉각되게 하고, 진공 하에 농축시켰다. 미정제 무색 오일을 이후 에틸 아세테이트 (30 mL)와 물 (30 mL) 사이에서 분배시켰다. 생성물을 에틸 아세테이트 (2 x 30 mL)로 추출하고, 합한 에틸 아세테이트 층을 건조시키고(Na2SO4), 진공 하에 증발시켰다. 미정제 잔류물을 디클로로메탄에 로딩하고, 20-100 % 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 생성물 - 2-(벤질옥시)-N5-사이클로부틸-N3-메틸피리딘-3,5-디카복스아미드 (1.025 g, 3.02 mmol, 85 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.01 min, [MH]+ = 340.0.
중간체 52: N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00086
TFA (2 mL, 26.0 mmol)을 2-(벤질옥시)-N5-사이클로부틸-N3-메틸피리딘-3,5-디카복스아미드 (1.18 g, 3.48 mmol)에 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 가열한 후, 추가 20분 동안 가열하고, 이후 냉각되게 하고 진공 하에 증발시켜 회색 고형물을 얻었다. 미정제 생성물을 에테르 (5 mL)로 분쇄하고, 생성물을 여과에 의해 수거하여 N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (718 mg, 2.88 mmol, 83 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.55 min, [MH]+ = 250.0.
중간체 53: 2-(벤질옥시)-N5-사이클로프로필-N3-메틸피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00087
반응물, 2,4,6-트리클로로페닐 6-(벤질옥시)-5-(메틸카바모일)니코티네이트 (771 mg, 1.656 mmol), 사이클로프로판아민 (327 mg, 5.73 mmol), Et3N (461 μL, 3.31 mmol) 및 DMAP (10.11 mg, 0.083 mmol)를 2-메틸테트라하이드로푸란 (20 mL) 중에서 배합하고, 밤새 45℃로 가열한 후, 반응물을 냉각시키고, 진공 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 최소량의 DCM 중의 상태로 50 g SNAP 실리카 카트리지에 적용하고, 사이클로헥산 중의 5-50% (3:1 EtOAc:EtOH)로 용리시켰다. 적합한 분획을 진공 하에 농축시켜 2-(벤질옥시)-N5-사이클로프로필-N3-메틸피리딘-3,5-디카복스아미드 (485.2 mg, 1.417 mmol, 86 % 수율)를 크림색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 326.3.
1H NMR (400 MHz, CHCl3-d) δ ppm 8.88 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.72 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 7.88 (br. s., 1 H) 7.32 - 7.50 (m, 5 H) 6.40 (br. s., 1 H) 5.62 (s, 2 H) 2.87 - 2.99 (m, 4 H) 0.82 - 0.95 (m, 2 H) 0.57 - 0.70 (m, 2 H).
중간체 54: N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00088
2-(벤질옥시)-N5-사이클로프로필-N3-메틸피리딘-3,5-디카복스아미드 (485 mg, 1.491 mmol)를 TFA (5 mL, 64.9 mmol) 중에 흡수시키고, 3시간 동안 90℃로 가열하고, 반응물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 Et2O (20 mL) 중에서 30분 동안 교반한 후, 주말에 거쳐 방치되게 두었다. 형성된 침전물을 여과에 의해 수거하여 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (364.9 mg, 1.474 mmol, 99 % 수율)를 크림색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.45 min, [MH]+ = 236.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.79 (br. s., 1 H) 9.41 (d, J=4.9 Hz, 1 H) 8.76 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.44 (d, J=3.7 Hz, 1 H) 8.19 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 2.76 - 2.87 (m, 4 H) 0.64 - 0.71 (m, 2 H) 0.51 - 0.57 (m, 2 H).
중간체 55: 3차-부틸 4-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-1-카복실레이트
Figure pct00089
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (192 mg, 0.815 mmol), 3차-부틸 4-(하이드록시메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-1-카복실레이트 (184 mg, 0.741 mmol) 및 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (612 μL, 2.334 mmol)을 톨루엔 (3.7 mL) 중에서 배합하고, 반응 혼합물을 30분 동안 Biotage 개시제 마이크로웨이브 내 5 mL 마이크로웨이브 바이알(microwave vial)에서 120℃로 가열하였다. 바이알을 추가 30분 동안 120℃의 마이크로웨이브에 다시 넣었다. 추가 부분의 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (428 μL, 1.630 mmol)을 첨가하고, 반응물을 30분 동안 120℃의 마이크로웨이브에 다시 넣었다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 부분을 염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄 중의 상태로 50 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 10 - 70% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 생성물 - 3차-부틸 4-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-1-카복실레이트 (91 mg, 0.195 mmol, 26.4 % 수율)를 갈색 유리로 얻었으며, 이를 이후 반응에서 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.03 min, [MH]+ = 466.2.
중간체 56: 3차-부틸 4-((5-(사이클로부틸카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-1-카복실레이트
Figure pct00090
N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (55 mg, 0.221 mmol), 3차-부틸 4-(하이드록시메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-1-카복실레이트 (69 mg, 0.278 mmol) 및 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (0.182 mL, 0.695 mmol)을 톨루엔 (1.5 mL) 중에서 배합하고, 반응 혼합물을 30분 동안 Biotage 개시제의 5 mL 마이크로웨이브 바이알에서 120℃로 가열하였다. 반응물을 20분 동안 120℃의 마이크로웨이브에 다시 넣었다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 부분을 염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 10 - 50% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 생성물 3차-부틸 4-((5-(사이클로부틸카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-1-카복실레이트 (54 mg, 0.113 mmol, 51.0 % 수율)을 갈색 유리로서 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.12 min, [MH]+ = 480.2.
중간체 57: 2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00091
1-벤질-5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (2 g, 6.23 mmol), 잔포스 (0.360 g, 0.623 mmol), 팔라듐 아세테이트 (0.070 g, 0.311 mmol) 및 Et3N (1.302 mL, 9.34 mmol)를 적하 깔때기 및 상부에 질소 버블러가 있는 응축기가 구비된 삼목 플라스크에서 배합하였다. 톨루엔 (30 mL)을 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 질소 하에 20분 동안 가열한 후, 톨루엔 (20 mL) 중의 2,4,6-트리클로로페닐 포르메이트 (2.106 g, 9.34 mmol)의 용액을 30분에 걸쳐 적가하고, 2시간 동안 계속 가열하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (50 mL)로 희석하고, 물 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척하고, 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 이를 DCM (10 mL) 중에 용해시키고, 50 g 실리카 컬럼 상에 로딩시킨 후, 0-50% EtOAc/사이클로헥산으로 용리시키고, 생성물-함유 분획을 진공 하에 증발시켜 2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (2.52 g, 5.41 mmol, 87 % 수율)를 베이지색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=1.36min, [MH]+ = 465, 467.
1H NMR (400 MHz, CHCl3-d) δ ppm 9.32 (br. d, J=4.4 Hz, 1 H) 9.20 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.58 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 7.30 - 7.50 (m, 7 H) 5.29 (s, 2 H) 3.01 (d, J=4.9 Hz, 3 H).
중간체 58: 5-브로모-2-메톡시니코티노일 클로라이드
Figure pct00092
5-브로모-2-메톡시니코틴산 (15 g, 64.6 mmol, 예를 들어, Apollo Scientific로부터 입수가능함)을 DCM (100 mL) 중에 현탁시킨 후, 옥살릴 클로라이드 (16.98 mL, 194 mmol)를 첨가하고, 이어서 DMF (5.01 mL, 64.6 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 DCM (100 mL) 중에 재용해시키고, 증발 건조시켜 5-브로모-2-메톡시니코티노일 클로라이드 (16.33 g, 65.2 mmol, 101 % 수율)를 얻고, 이를 즉시 다음 단계에 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, CHCl3-d) δ ppm 8.49 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.44 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 4.06 (s, 3 H).
중간체 59: 5-브로모-2-메톡시-N-메틸니코틴아미드
Figure pct00093
5-브로모-2-메톡시니코티노일 클로라이드 (16 g, 63.9 mmol)를 2-메틸테트라하이드로푸란 (100 mL) 중에 용해시키고, Et3N (8.90 mL, 63.9 mmol)을 첨가하고, 이어서 메탄아민 (31.9 mL, THF 중 2M, 63.9 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반한 후, 물 (200 mL)에 첨가하고, EtOAc (200 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수 (200 mL)로 세척하고, 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 5-브로모-2-메톡시-N-메틸니코틴아미드 (14.8 g, 60.4 mmol, 95 % 수율)를 담황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.83 min, [MH]+ = 245.1, 247.1.
1H NMR (400 MHz, CHCl3-d) δ ppm 8.62 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 8.29 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 7.80 (br. s., 1 H) 4.09 (s, 3 H) 3.02 (d, J=4.9 Hz, 3 H).
중간체 60: 부틸 6-메톡시-5-(메틸카바모일)니코티네이트
Figure pct00094
(9,9-디메틸-9H-잔텐-4,5-디일)비스(디페닐포스핀) (2.479 g, 4.28 mmol), 트리에틸아민 (18.58 g, 184 mmol), 디아세톡시팔라듐 (0.962 g, 4.28 mmol) 및 5-브로모-2-메톡시-N-메틸니코틴아미드 (15 g, 61.2 mmol)를 500 mL RBF에서 배합한 후, DMF (100 mL) 및 1-부탄올 (28.0 mL, 306 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 일산화탄소로 10분 동안 퍼징한 후, 대략 1.5 리터의 CO를 함유하는 벌룬을 첨가하고, 혼합물을 밤새 90℃에서 가열하였다. 이후, 혼합물을 냉각시키고, 물 (500 mL)로 희석하고, EtOAc (2 x 500 mL)로 추출하였다. 유기물질을 물 (200 mL)로 세척하고, 건조시키고, 진공 하에 증발시키고, 형성된 검정색 오일을 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리되는 340 g 실리카 컬럼 상의 크로마토그래피에 의해 정제하여 부틸 6-메톡시-5-(메틸카바모일)니코티네이트 (11 g, 41.3 mmol, 67.5 % 수율)를 담황색 결정질 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 1.04 min, [MH]+ = 267.2.
중간체 61: 메틸 6-메톡시-5-(메틸카바모일)니코티네이트
Figure pct00095
일산화탄소를 DMF (150 mL) 중의 5-브로모-2-메톡시-N-메틸니코틴아미드 (10.6 g, 43.3 mmol), 잔포스 (1.502 g, 2.60 mmol), 트리에틸아민 (12.06 mL, 87 mmol), 팔라듐(II) 아세테이트 (0.486 g, 2.163 mmol) 및 메탄올 (17.50 mL, 433 mmol)의 혼합물을 통해 황색/녹색 현탁액이 형성될 때까지 부드럽게 버블링시켰다. 현탁액을 일산화탄소의 벌룬 하에 유지시키고, 5시간 동안 60℃로 가열하였다. LCMS는 상당한 SM을 나타냈으며, 이에 따라 반응물을 밤새 (16시간) 두었다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하였다. 용액을 물 (300 mL)로 희석하고, EtOAc (3 x 300 mL)로 추출하고, 합한 유기물질을 다시 염수 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 이후, 합한 유기물질을 건조시키고(Na2SO4), 진공 하에 증발시켜 갈색 고형물을 얻었다. 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, 340 g Biotage 실리카 SNAP 컬럼 상에 로딩시키고, 20 -> 80% EtOAc/사이클로헥산으로 용리시켰다. 생성물 함유 분획을 진공 하에 증발시켜 황색 고형물 - 메틸 6-메톡시-5-(메틸카바모일)니코티네이트 (4 g, 17.84 mmol, 41.2 % 수율)를 얻었다.
수율이 예상보다 낮음에 따라, 보유된 수성 층을 LCMS에 의해 분석하여 추가의 생성물을 함유함을 발견하였다. 이에 따라, 이를 추가로 DCM (3 x 100 mL)으로 추출하고, 합한 유기물질을 건조시키고(Na2SO4), 진공 하에 농축시켰다(DMF를 제거하기 위해 연장된 기간 동안). 수성층을 LCMS에 의해 다시 분석하고, 더 이상 생성물을 함유하지 않음을 발견하였다. 유기 상으로부터의 미정제 생성물인, 황색 고형물을 DCM 중에 흡수시키고, SNAP 실리카 카트리지 (100 g)에 첨가하고, 20 -> 80% EtOAc/사이클로헥산으로 용리시켰다. 생성물 함유 분획을 진공 하에 증발시켜 황색 고형물 - 메틸 6-메톡시-5-(메틸카바모일)니코티네이트 (1.9 g, 8.47 mmol, 19.59 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.67 min, [MH]+ = 225.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.82 (d, J=2.2 Hz, 1 H) 8.55 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 8.30 (br. d, J=3.9 Hz, 1 H) 4.05 (s, 3 H) 3.87 (s, 3 H) 2.82 (d, J=4.6 Hz, 3 H).
중간체 62: 메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00096
아이오드화나트륨 (4.88 g, 32.6 mmol)을 아세토니트릴 (100 mL) 중의 메틸 6-메톡시-5-(메틸카바모일)니코티네이트 (3.65 g, 16.28 mmol)의 용액에 첨가하고, 이 용액을 10분 동안 질소 하에 교반하였다. TMS-Cl (10.40 mL, 81 mmol)을 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (100 mL)로 켄칭시키고, 혼합물을 DCM/MeOH의 믹스로 5회 추출하고, 합한 유기 상을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 진공 하에서 증발시켰다. 미정제 물질을 DCM 중에 용해시키고, 100 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩시키고, EtOAc 중 0-100% 에탄올로 용리시켰다. 적합한 분획을 진공 하에 증발시키고, 요망하는 생성물 - 메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (1.5 g, 7.14 mmol, 43.8 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.47 min, [MH]+ = 211.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.25 (br. s, 1 H) 9.55 (br. d, J=4.4 Hz, 1 H) 8.63 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.32 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 3.80 (s, 3 H) 2.82 (d, J=4.9 Hz, 3 H).
중간체 63: 부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00097
TMSCl (15.84 mL, 124 mmol) 및 아이오드화나트륨 (18.58 g, 124 mmol)을 실온에서 아세토니트릴 (200 mL) 중의 부틸 6-메톡시-5-(메틸카바모일)니코티네이트 (11 g, 41.3 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반한 후, 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 EtOAc (200 mL)와 포화된 소듐 티오설페이트 용액 (200 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (6.5 g, 25.8 mmol, 62.4 % 수율)를 담황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.66 min, [MH]+ = 253.2.
중간체 64: 메틸 1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00098
메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (580 mg, 2.76 mmol), 1-(브로모메틸)-3-메톡시벤젠 (0.580 mL, 4.14 mmol), 탄산칼륨 (770 mg, 5.57 mmol) 및 DMF (5 mL)를 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이를 LiCl (20 mL)로 세척하고, EtOAc (40 mL)과 물 (40 mL) 사이에서 분배시키고, 수성 상을 EtOAc (2 x 40 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 무색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 100 g 카트리지, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 메틸 1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (683 mg, 1.861 mmol, 67.4 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 331.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.22 (br. d, J=4.6 Hz, 1 H) 8.93 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.70 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 7.27 (t, J=7.9 Hz, 1 H) 6.92 (m, J=1.7 Hz, 1 H) 6.84 - 6.90 (m, 2 H) 5.30 (s, 2 H) 3.84 (s, 3 H) 3.73 (s, 3 H) 2.83 (s, 3 H).
중간체 65: 1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00099
메틸 1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (670 mg, 2.028 mmol), 수산화리튬 (146 mg, 6.08 mmol), 1,4-디옥산 (3 mL) 및 물 (3 mL)을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 아세트산 (1 mL, 17.47 mmol)를 첨가하고, 용액을 EtOAc (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (641 mg, 1.824 mmol, 90% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.81 min, [MH]+ = 317.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.09 (br. s, 1 H) 9.26 (br. q, J=4.4, 4.4, 4.4 Hz, 1 H) 8.84 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.70 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 7.27 (t, J=7.9 Hz, 1 H) 6.91 - 6.94 (m, 1 H) 6.84 - 6.90 (m, 2 H) 5.29 (s, 2 H) 3.73 (s, 3 H) 2.82 (d, J=4.9 Hz, 3 H).
중간체 66: 부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00100
DMF (11.8 mL) 중의 부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (447 mg, 1.772 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (490 mg, 3.54 mmol) 및 4-(브로모메틸)-1-토실-1H-인돌 (1033 mg, 2.84 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (1.596 mL, 89 mmol)로 켄칭시키고, 물 (100 mL) 및 포화된 염화리튬 수용액 (20 mL)에 부었다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 30 mL)로 추출하고, 합한 유기물질을 염수 (10 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (1.74 g)을 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄 중의 상태로 50 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 20 - 100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 순수한 생성물 - 부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (907 mg, 1.609 mmol, 91 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.34 min, [MH]+ = 536.1.
중간체 67: 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00101
실온에서 질소 하에 교반된, 메탄올 (1.703 mL) 및 THF (3.406 mL) 중의 부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (821 mg, 1.533 mmol)의 용액에 고체 세슘 카보네이트 (3995 mg, 12.26 mmol)를 하나의 충전물로 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시킨 후, 1,4-디옥산 (1.703 mL) 및 물 (1.703 mL)로 희석하였다. 혼합물을 70℃에서 4.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 중탄산나트륨 (30 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 수성 상을 2M HCl로 산성화시키고, 에틸 아세테이트 (8 x 30 mL)로 추출하였다. 추출 후, 고형물 침전물이 유기 상에 잔류하였고, 이를 여과해 내어 일부 요망하는 미정제 생성물(251 mg)을 얻었다. 후처리한 여액을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 갈색 고형물을 얻었다. 고형물을 에테르 (30 mL)로 분쇄하고, 여과하여 추가의 생성물(539 mg)을 얻었다. 이 잔류물을 물 (20 mL) 중에 현탁시키고, 2M HCl를 사용하여 pH 4가 되게 하였다. 현탁액을 여과하고, 물 (2 x 5 mL) 및 디에틸 에테르 (2 x 10 mL)로 세척하였다. 수거된 고형물(213 mg)을 디클로로메탄 (10 mL) 중에 현탁시키고, 이전의 미정제 생성물의 배치와 합하였다. 합한 현탁액을 초음파 처리하고, 질소 스트림 하에 블로운 다운(blown down)시키고, 진공 하에 건조시켜 최종 생성물 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (432 mg, 1.222 mmol, 80 % 수율)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.77 min, [MH]+ = 326.2.
중간체 68: 부틸 1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00102
실온에서 DMF (4 mL) 중의 부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (695.9 mg, 2.76 mmol) 및 탄산칼륨 (769.4 mg, 5.57 mmol)의 교반된 현탁액은 그것에 첨가되는 DMF (6 mL) 중의 1-(브로모메틸)-2-플루오로-3-메틸벤젠 (607.4 mg, 2.99 mmol)의 용액을 지녔다. 혼합물을 질소 하에 실온에서 73시간 동안 교반한 후, 물 (20 mL)과 에틸 아세테이트 (25 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기 상을 추가의 물 (20 mL)로 세척하고, 합한 수성 상을 에틸 아세테이트 (25 mL)로 역추출하였다. 합한 유기 상을 소수성 프릿에 장착된 카트리지를 통해 여과시킴으로써 건조시키고, 용매를 진공 하에 증발시켜 담황색 오일을 얻고, 이를 밤새 방치시켜 담황색 고형물로 결정화시켰다. 고형물을 디클로로메탄 (ca. 5 mL) 중에 재용해시키고, 사이클로헥산 중의 20-60% 에틸 아세테이트의 구배로 용리되는, 50 g SNAP 실리카 카트리지에 적용시켜 정제하였다. 요구되는 분획들을 합하고, 진공 하에 증발시켜 요망하는 생성물을 백색 고형물 (958.7 mg)로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.26 min, [MH]+ = 375.2.
중간체 69: 1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00103
질소 하에 아세토니트릴 (10 mL) 및 THF (10 mL) 중의 부틸 1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (953.7 mg, 2.55 mmol)의 교반된 용액에 수산화리튬 (1.0 M 수용액) (5.1 mL, 5.10 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 하에 혼합물로부터 증발시키고, 잔류물을 진공 하에 건조시킨 후, 2 M 염산 수용액 (20 mL)과 에틸 아세테이트 (150 mL) 사이에서 분배시켰다[고형물은 두 상에서 가용성이 낮았다]. 수성 상을 추가의 에틸 아세테이트 (75 mL)로 추출하고, 합한 유기 상을 물 (20 mL) 및 포화된 염수 용액 (30 mL)으로 세척하였다. 유기 상을 소수성 프릿이 장착된 카트리지를 통해 여과시킴으로써 건조시키고, 용매 진공 하에 증발시켰다. 고체 잔류물을 메탄올 (10 mL + 5 mL)로 2회 분쇄하고, 고형물을 진공 하에 건조시켜 요망하는 생성물을 백색 고형물 (621.7 mg)로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 319.1.
중간체 70: 메틸 1-(3-하이드록시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00104
DCM (5 mL) 중의 메틸 1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (0.990 g, 3.00 mmol)를 N2 하에 0℃로 냉각시키고, BBr3 (15 mL, DCM 중 1 M, 15 mmol)을 적가하고, 반응물을 1.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (30 mL)로 켄칭시키고, DCM (2 x 30 mL)으로 추출한 후, 수성층을 EtOAc (2 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 675 mg의 황색 고형물을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 40-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 메틸 1-(3-하이드록시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (473 mg, 1.346 mmol, 44.9 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.74 min, [MH]+ = 317.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.46 (br. s, 1 H) 9.23 (br. d, J=4.6 Hz, 1 H) 8.90 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.70 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 7.05 - 7.20 (m, 1 H) 6.65 - 6.76 (m, 3 H) 5.26 (s, 2 H) 3.78 - 3.90 (m, 3 H) 2.82 (d, J=4.9 Hz, 3 H).
중간체 71: 메틸 1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00105
메틸 1-(3-하이드록시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (450 mg, 1.423 mmol), 1,3-디옥솔란-2-온 (475 mg, 5.39 mmol), 탄산칼륨 (600 mg, 4.34 mmol) 및 DMF (10 mL)를 90℃에서 5시간 동안 가열하였다. 용액을 EtOAc (40 mL) 및 LiCl 용액 (40 mL) 사이에서 분배시키고, 수성 상을 EtOAc (2 x 40 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 900 mg의 황색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 10 g 카트리지, 0-100% (EtOAc 중 25% EtOH)/사이클로헥산로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 메틸 1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (446 mg, 1.114 mmol, 78 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.74 min, [MH]+ = 361.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.22 (br. q, J=4.9, 4.9, 4.9 Hz, 1 H) 8.94 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.70 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 7.25 (t, J=7.8 Hz, 1 H) 6.82 - 6.94 (m, 3 H) 5.30 (s, 2 H) 4.81 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 3.95 (t, J=5.0 Hz, 2 H) 3.84 (s, 3 H) 3.69 (q, J=5.3 Hz, 2 H) 2.82 (d, J=4.6 Hz, 3 H).
중간체 72: 1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00106
메틸 1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (440 mg, 1.221 mmol), 수산화리튬 (86 mg, 3.59 mmol), 1,4-디옥산 (3 mL) 및 물 (3 mL)을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 아세트산 (1 mL, 17.47 mmol)을 첨가하고, 용액을 EtOAc (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (343 mg, 0.891 mmol, 73.0 % 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.66 min, [MH]+ = 347.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.27 (br. q, J=4.2, 4.2, 4.2 Hz, 1 H) 8.85 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 8.71 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 7.27 (t, J=7.8 Hz, 1 H) 6.80 - 6.99 (m, 3 H) 5.30 (s, 2 H) 4.82 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 3.96 (app. t, J=5.0 Hz, 2 H) 3.70 (ABq, J=5.1 Hz, 2 H) 2.83 (d, J=4.9 Hz, 3 H).
중간체 73: 메틸 1-(3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00107
메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (500.2 mg, 2.380 mmol), 1-(브로모메틸)-3-메틸벤젠 (0.354 mL, 2.62 mmol) 및 탄산칼륨 (140 mg, 1.013 mmol)을 무수 DMF (10 mL) 중에서 질소 하에 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시킨 후, 물 (20 mL)과 에틸 아세테이트 (20 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성 상을 추가의 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기 상을 소수성 프릿이 장착된 카트리지를 통해 여과시킴으로써 건조시켰다. 용매를 증발시키고, 진공 하에 건조시켜 요망하는 생성물을, 담황색 검 (588.2 mg)으로서 얻었다. 생성물을 추가의 정제 없이 이후 단계에서 사용하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.00 min, [MH]+ = 315.2.
중간체 74: 1-(3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00108
THF (10 mL) 및 물 (5.00 mL) 중의 메틸 1-(3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (583.9 mg, 1.858 mmol) 및 수산화리튬 (92.4 mg, 3.86 mmol)의 혼합물을 질소 하에 실온에서 16.75시간 동안 교반하였다. 이후, 혼합물을 2M 염산 용액(2 mL)을 사용하여 pH 0로 산성화시켰다. 물 (30 mL)를 첨가하고, 형성된 침전물을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 추출하였다. 층들을 분리시키고, 수성 층을 추가의 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 소수성 프릿을 함유하는 카트리지를 통해 여과한 후, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 중의 현탁액으로서 25 g SNAP 실리카 카트리지에 적용하였다. 카트리지 상부 상에 잔류하는 침전물을 제거하고, 요망하는 생성물의 일부가 보유되었다. 카트리지를 에틸 아세테이트 중의 0-7.5% 에탄올 (0.3% 아세트산과 함께)의 구배로 용리시켰다. 요구되는 분획들을 이전에 얻은 고형물과 합하고, 증발시키고, 진공 하에 건조시켜 요망하는 생성물을 백색 고형물 (355.4 mg)로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.88 min, [MH]+ = 301.2.
중간체 75: 메틸 1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00109
2-(브로모메틸)-1-플루오로-4-메틸벤젠 (412 mg, 2.027 mmol)을 DMF (15 mL) 중의 메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (426 mg, 2.027 mmol) 및 탄산칼륨 (560 mg, 4.05 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반되게 두었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 진공 하에 농축시키고, DCM (3 mL) 중에 로딩시키고, 0-60% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 Biotage Isolera SNAP 25g 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (310 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.00 min, [MH]+ = 333.0.
중간체 76: 1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00110
메틸 1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (310 mg, 0.933 mmol)를 THF (4 mL) 및 물 (4 mL) 중에 흡수시켰다. 수산화리튬 (44.7 mg, 1.866 mmol)을 용액에 첨가하고, 반응물을 밤새 실온에서 교반하였다. 2M aq. HCl (1.399 mL, 2.80 mmol)를 첨가하고, 형성된 고형물을 물로 세척하여 생성물 (290 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.89 min, [MH]+ = 319.0.
중간체 77: 5-브로모-N-메틸-1-(4-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
메탄올 (1 mL) 중의 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (136 mg, 0.589 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (285 mg, 2.060 mmol) 및 1-(브로모메틸)-4-메틸벤젠 (327 mg, 1.766 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응물을 물 (530 μL, 29.4 mmol)로 켄칭시키고, 물 (10 mL)에 부었다. 생성물을 에틸 아세테이트 (4 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 염수 (10 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (414 mg)을 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄에 로딩하고, 15 - 75% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 순수한 생성물 - 5-브로모-N-메틸-1-(4-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (120 mg, 0.358 mmol, 60.8 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.04 min, [MH]+ = 335.0, 337.0.
중간체 78: 5-브로모-N-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00112
1-(브로모메틸)-3-메틸벤젠 (0.263 mL, 1.948 mmol)을 메탄올 (4 mL) 중의 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (300 mg, 1.298 mmol) 및 탄산칼륨 (359 mg, 2.60 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 65℃로 가열하고, 이후 추가의 1-(브로모메틸)-3-메틸벤젠 (0.263 mL, 1.948 mmol) 및 탄산칼륨 (359 mg, 2.60 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 추가 1시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, 유기 층을 물 (2 x 20 mL)로 세척하였다. 이를 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 형성된 황색 오일을 DCM 중에 용해시키고, 0 - 70% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 25 g Biotage SNAP 실리카 컬럼 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성물을 진공 하에 밤새 건조되게 두어 5-브로모-N-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (205.8 mg, 0.614 mmol, 47.3 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.05 min, [MH]+ = 335.0 & 337.0.
중간체 79: 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-7-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00113
메탄올 (2.164 mL) 중의 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (300 mg, 1.298 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (359 mg, 2.60 mmol) 및 7-(브로모메틸)-1-토실-1H-인돌 (568 mg, 1.558 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 총 5시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응물을 물 (1.170 mL, 64.9 mmol)로 켄칭시키고, 디클로로메탄 (30 mL) 중에 흡수시켰다. 용액을 물 (20 mL)로 세척하고, 수성 상을 디클로로메탄 (2 x 10 mL)로 역추출하였다. 합한 유기 부분을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (700 mg)을 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 15-65% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 잔류물을 추가로 진공 하에 건조시켜 - 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-7-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (326 mg, 0.570 mmol, 43.9 % 수율)를 오렌지색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.22 min, [MH]+ = 513.9, 515.9.
중간체 80: N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-7-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00114
건조된 마이크로웨이브 바이알에, 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-7-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (297 mg, 0.577 mmol) 및 Pd(OAc)2 (12.96 mg, 0.058 mmol)를 첨가하고, 무수 1,4-디옥산 (3.849 mL) 중에 흡수시켰다. 잔포스 (33.4 mg, 0.058 mmol), DMAP (141 mg, 1.155 mmol) 및 사이클로프로필아민 (81 μL, 1.155 mmol)을 첨가한 후, 디코발트 옥타카보닐 (59.2 mg, 0.173 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 즉시 밀봉하고, 40분 동안 80℃에서 마이크로웨이브 조사 하에 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 디클로로메탄 (30 mL)에 흡수시키고, 2M HCl (30 mL)로 세척하였다. 산 층을 디클로로메탄 (2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 부분을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켰다. 미정제 잔류물 (396 mg)을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 10-50% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는 Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 - N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-7-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (251 mg, 0.290 mmol, 50.3 % 수율)를 오렌지색 고형물로서 얻고, 이를 추가의 정제 없이 후속 화학반응에 사용하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.09 min, [MH]+ = 519.0.
중간체 81: 메틸 1-((1H-인다졸-7-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00115
DIAD (0.185 mL, 0.952 mmol)를 톨루엔 (4 mL) 중의 메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (100 mg, 0.476 mmol), (1H-인다졸-7-일)메탄올 (106 mg, 0.714 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 상업적으로 입수가능함) 및 트리페닐포스핀 (250 mg, 0.952 mmol) 중의 현탁액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 N2 하에 1.5시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 (1H-인다졸-7-일)메탄올 (106 mg, 0.715 mmol), DIAD (0.185 mL, 0.950 mmol) 및 트리페닐포스핀 (250 mg, 0.953 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 계속 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 ~1.2 g의 미정제 생성물을 오렌지색 오일로서 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 25 g 카트리지, 0-100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하여 메틸 1-((1H-인다졸-7-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (76 mg, 0.167 mmol, 35.2 % 수율)를 담황색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.80 min, [MH]+ = 341.1.
중간체 82: 1-((1H-인다졸-7-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00116
메틸 1-((1H-인다졸-7-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (76 mg, 0.223 mmol)를 1,4-디옥산 (2 mL) 중에 용해시켰다. 물 (2 mL)을 첨가한 후, LiOH (11 mg, 0.459 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 디옥산을 진공 하에 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트와 포화 NaHCO3 용액 사이에서 분배시켰다. 수성층을 분리시켰다. 수성층을 아세트산 (4 mL, 69.9 mmol)을 사용하여 pH 5로 산성화시키고, 에틸 아세테이트 (5 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고(Na2SO4), 농축시켜 640 mg의 백색 고형물을 얻었다. 이를 물 (5 mL) 중에 재용해시키고, 2M HCl 용액을 사용하여 pH를 pH 5로 조절하였다. 이후, 이를 에틸 아세테이트로 추출하고, 합한 유기 층을 건조시키고(Na2SO4), 농축시켜 544 mg의 백색 고형물을 얻었다. 이를 물 (모든 물질을 가용화시키기 위해 첨가되는 소량의 DMSO 및 MeOH과 함께) 중에 용해시키고, 역상 30 g C18 컬럼 상에 로딩시켰다. 이를 10 컬럼 용량에 대해 0-95% MeCN/0.1% 포름산을 지닌 물로 용리시키고, 요망하는 생성물을 함유하는 분획을 진공 하에 농축시켜 1-((1H-인다졸-7-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (17 mg, 0.047 mmol, 21% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.72 min, [MH]+ = 327.1.
중간체 83: 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00117
메틸 5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (2 g, 8.62 mmol, 예를 들어, CombiBlocks로부터 상업적으로 입수가능함) 및 THF 중의 2M 메틸아민 (13 mL, 26.0 mmol)을 N2 하에 환류시켰다. 4시간 후, 백색 침전물이 형성되었다. THF (15 mL)를 첨가하고, 용액을 1시간 동안 환류시켰다. THF 중의 2M 메틸아민 (13 mL, 26.0 mmol)을 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 환류시켰다. 추가의 THF 중의 2M 메틸아민 (22 mL, 44.0 mmol)를 첨가하고, 반응물을 밤새 환류시켰다. 용액을 농축시켜 황색 고형물을 얻었다. 이를 THF 중의 2M 메틸아민(15 mL, 30.0 mmol) 및 THF (15 mL)를 지닌 2 x 20 mL 마이크로웨이브 바이알로 옮기고, 둘 모두를 80℃에서 1시간 동안 가열하였다. 제1 마이크로웨이브 바이알로부터의 현탁액을 농축시키고, 디에틸 에테르로부터 분쇄시켜 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (880 mg)를 얻었다. 제2 마이크로웨이브 바이알로부터의 현탁액을 농축시키고, 디에틸 에테르로부터 분쇄시켜 추가의 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (880 mg)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.50 min, [MH]+ = 231.0, 233.0.
중간체 84: 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00118
메탄올 (2.164 mL) 중의 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (300 mg, 1.298 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (359 mg, 2.60 mmol) 및 4-(브로모메틸)-1-토실-1H-인돌 (568 mg, 1.559 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응물을 물 (1.170 mL, 64.9 mmol)로 켄칭시키고, 디클로로메탄 (30 mL) 중에 흡수시켰다. 용액을 물 (20 mL)로 세척하고, 수성 상을 디클로로메탄 (2 x 10 mL)로 역추출하였다. 합한 유기 부분을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (607 mg)을 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 20 - 100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 - 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (312 mg, 0.546 mmol, 42.0 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.24 min, [MH]+ = 513.9, 515.9.
중간체 85: N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00119
건조된 마이크로웨이브 바이알에, 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (301 mg, 0.585 mmol) 및 Pd(OAc)2 (13.14 mg, 0.059 mmol)를 첨가하고, 무수 1,4-디옥산 (2.5 mL) 중에 흡수시켰다. 잔포스 (33.9 mg, 0.059 mmol), DMAP (143 mg, 1.170 mmol) 및 사이클로프로필아민 (82 μL, 1.170 mmol)을 첨가한 후, 디코발트 옥타카보닐 (60.0 mg, 0.176 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 즉시 밀봉하고, 40분 동안 80℃에서 마이크로웨이브 조사 하에 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 디클로로메탄 (30 mL)에 흡수시키고, 2M HCl (30 mL)로 세척하였다. 산 층을 디클로로메탄 (2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 부분을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켰다. 미정제 잔류물 (361 mg)을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 10-50% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는 Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 황색 고형물 - N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (255 mg, 0.320 mmol, 54.6 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.10 min, [MH]+ = 519.1.
중간체 86: N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((3-메틸-1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00120
톨루엔 (2.267 mL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (80 mg, 0.340 mmol) 및 (3-메틸-1-토실-1H-인돌-4-일)메탄올 (161 mg, 0.510 mmol)의 용액에 트리페닐포스핀 (268 mg, 1.020 mmol) 및 DIAD (198 μL, 1.020 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 질소 하에 실온에서 교반하였다. 추가 부분의 (3-메틸-1-토실-1H-인돌-4-일)메탄올 (90 mg, 0.285 mmol)을 톨루엔 (1 mL) 중의 현탁액으로서 첨가하였다. 반응물을 4일 동안 교반하였다. 추가 부분의 트리페닐포스핀 (89 mg, 0.340 mmol) 및 DIAD (66 μL, 0.340 mmol)를 첨가하고, 반응물을 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)에 부었다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 15 mL)로 추출하고, 합한 유기물질을 염수 (10 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 황색 오일 (1.376 g)로서 얻었다. 오일을 디클로로메탄 중의 상태로 SNAP 카트리지 (50 g) 상에 로딩하고, 이를 0-50% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((3-메틸-1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (61 mg, 0.097 mmol, 28.6 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.15 min, [MH]+ = 533.3.
중간체 87: 3차-부틸 4-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)인돌린-1-카복실레이트
Figure pct00121
DIAD (0.09 mL, 0.463 mmol)를 톨루엔 (2 mL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (50 mg, 0.213 mmol), 3차-부틸 4-(하이드록시메틸)인돌린-1-카복실레이트 (79 mg, 0.319 mmol) 및 트리페닐포스핀 (117 mg, 0.446 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 N2 하에 2시간 동안 교반하였다. 3차-부틸 4-(하이드록시메틸)인돌린-1-카복실레이트 (79 mg, 0.319 mmol), DIAD (0.09 mL, 0.463 mmol) 및 트리페닐포스핀 (122 mg, 0.465 mmol)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 밤새 교반하였다. 반응물을 농축시켜 오렌지색 오일 (926 mg)을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 100 g 카트리지, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 3차-부틸 4-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)인돌린-1-카복실레이트 (41 mg, 0.075 mmol, 35.1 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.08 min, [MH]+ = 467.2.
1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.83 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.47 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 7.60 - 7.71 (m, 1 H) 7.14 (t, J=7.9 Hz, 1 H) 6.73 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 5.24 (s, 2 H) 4.00 (t, J=8.7 Hz, 2 H) 3.14 (t, J=8.7 Hz, 2 H) 2.93 (s, 3 H) 2.80 (tt, J=7.3, 3.7 Hz, 1 H) 1.56 (s, 9 H) 0.74 - 0.82 (m, 2 H) 0.58 - 0.65 (m, 2 H).
중간체 88: (+/-)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-(1-토실-1H-인돌-4-일)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00122
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (53 mg, 0.225 mmol), 4-(1-브로모에틸)-1-토실-1H-인돌 (102 mg, 0.270 mmol), 탄산칼륨 (52 mg, 0.376 mmol) 및 DMF (2 mL)를 90℃에서 5시간 동안 교반한 후, 밤새 교반하였다. 별도로, N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (42 mg, 0.179 mmol), 4-(1-브로모에틸)-1-토실-1H-인돌 (102 mg, 0.270 mmol), 탄산칼륨 (45.0 mg, 0.326 mmol) 및 DMF (1.5 mL)를 90℃에서 8시간 동안 교반하였다. 형성된 현탁액을 합하고, EtOAc (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, EtOAc (20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 요망하는 생성물 (66 mg)을 황색 오일로서 얻었다. 이를 MDAP (고 pH, 1 mL로 주입, 1:1 DMSO:MeOH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 (+/-)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-(1-토실-1H-인돌-4-일)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (42 mg, 0.071 mmol, 31.5 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.15 min, [MH]+ = 533.1.
중간체 89: 3차-부틸 7-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-1-카복실레이트
Figure pct00123
DIAD (0.087 mL, 0.446 mmol)를 톨루엔 (2 mL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (50 mg, 0.213 mmol), 3차-부틸 4-(하이드록시메틸)-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-1-카복실레이트 (66.9 mg, 0.255 mmol) 및 트리페닐포스핀 (117 mg, 0.446 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 N2 하에 밤새 교반하였다. 추가의 DIAD (0.087 mL, 0.446 mmol) 및 트리페닐포스핀 (117 mg, 0.446 mmol)를 첨가하고, 반응물을 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축시키고, DCM에 로딩하고, SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 10 g 카트리지, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 이를 추가로 MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하여 표제 화합물 (14 mg, 0.029 mmol, 13.7% 수율)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.07 min, [MH]+ = 480.2.
중간체 90: 부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-((1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-8-일)메틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00124
DIAD (324 ㎕, 1.665 mmol)를 톨루엔 (3.7 mL) 중의 부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (140 mg, 0.555 mmol), (1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-8-일)메탄올 (136 mg, 0.832 mmol) 및 트리페닐포스핀 (437 mg, 1.665 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응물을 질소 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)에 붓고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 염수 (10 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 황색 오일 (1.3704 g)로서 얻었다. 오일을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 15-75% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 정제된 생성물 - 부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-((1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-8-일)메틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (112 mg, 0.248 mmol, 44.7 % 수율)를 황색 유리로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.27 min, [MH]+ = 398.3.
중간체 91: 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-((1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-8-일)메틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00125
부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-((1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-8-일)메틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (104 mg, 0.262 mmol)를 1,4-디옥산 (534 μL) 중에 현탁시켰다. 물 (534 μL)을 첨가한 후, 수산화리튬 (15 mg, 0.626 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. HCl (2M, 0.313 mL)를 첨가하고, 용매를 진공 하에 증발시켜 요구되는 생성물 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-((1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-8-일)메틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (134 mg)을 황색 유리로서 얻었다. 그러나, 샘플이 후처리에서 LiCl를 함유하였다. 순도는 정량적 수율을 가정하여 중량을 기준으로 66 %로 추정되었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 342.1.
중간체 92: 6-메톡시-5-(메틸카바모일)니코틴산
Figure pct00126
메틸 6-메톡시-5-(메틸카바모일)니코티네이트 (1.9 g, 8.47 mmol)를 THF (16 mL) 및 물 (16 mL) 중에 흡수시켰다. 수산화리튬 (0.223 g, 9.32 mmol)을 첨가하고, 반응물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 2M HCl(aq) (4.66 mL, 9.32 mmol)를 첨가하자, 백색 침전물이 형성되었고, 이를 여과하고, 추가의 THF/물 (40 mL, 1:1)로 세척하였다. 잔류물 및 여액 둘 모두를 LCMS에 의해 분석하고, 생성물을 함유함을 발견하고, 이에 따라 이들을 다시 합치고 (MeOH로 세척), 진공 하에 농축시켜 백색 고형물로서 요망하는 생성물 - 6-메톡시-5-(메틸카바모일)니코틴산 (2.84 g)을 얻었다. 샘플은 무기 불순물(LiCl)로 인해 잔류 물질로 ~60% 순도인 것으로 추정되었다. 이 물질을 후속 반응에서 미정제인 채로 사용하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.54 min, [MH]+ = 211.1.
중간체 93: 2-메톡시-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)피리딘-3,5-디카복스아미드 및
중간체 94: 2-메톡시-N3-메틸-N5-((1R,2R)-2-메틸사이클로프로필)피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00127
DMF (6 mL) 중의 6-메톡시-5-(메틸카바모일)니코틴산 (710 mg, 2.027 mmol), HATU (1002 mg, 2.63 mmol) 및 DIPEA (0.708 mL, 4.05 mmol)의 용액을 5분 동안 교반한 후 (+/-)-(트랜스)-2-메틸사이클로프로판아민 (159 mg, 2.229 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 EtOAc (30 mL)로 희석한 후, 물 (30 mL)을 첨가하고, 층들을 분리시켰다. 수성 층을 추가로 EtOAc (4 x 20 mL)로 추출하고, 수성 층을 분석하고, 단지 소량의 생성물을 지녔음을 발견하였다. 합한 유기물질을 물 (2 x 10 mL) 및 염수 (10 mL)로 역-추출한 후, 유기상을 건조시키고(Na2SO4), 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 이를 DCM 중에 흡수시키고, SNAP 실리카 카트리지 (25 g)에 첨가하고, 0-60% (25% EtOH/EtOAc)/사이클로헥산으로 용리되는 SP4 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 수거하고, 진공 하에 농축시켜 황색 오일로서 미정제 생성물 - (+/-)-2-메톡시-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)피리딘-3,5-디카복스아미드 (695 mg, 1.980 mmol, 98 % 수율)를 얻었다. 큰 고형물을 키랄 분리를 위해 제공하였다.
분석 방법:
컬럼: 키랄팍 AD-H (250 x 4.6 mm)
유량: 1 mL/min
검출: 280 nm에서의 UV 다이오드 어레이 (밴드 폭 140 nm, 기준 400 nm 밴드 폭 100 nm)
이동 상 A: 헵탄
이동 상 B: 프로판-2-올
등용매 방법 - 90:10 이동 상 A : 이동 상 B
실행시간 - 30 min
제조 방법:
샘플 제조 - 초음파 처리로 30 mL 에탄올 중에 전체 샘플을 용해시킴
컬럼: 키랄팍 AD-H (250 x30 mm, 5 마이크론)
유량: 42.5 mL/min (압력 85 bar)
검출: 280 nm에서의 UV 다이오드 어레이 (밴드 폭 140 nm, 기준 400 nm 밴드 폭 100 nm)
이동 상 A: 헵탄
이동 상 B: 프로판-2-올
등용매 방법 - 90:10 이동 상 A : 이동 상 B
실행시간 - 30 min
Rheodyne 밸브를 통해 0.3 mL 수동 주입
제1 용리 이성질체를 함유하는 분획을 12분과 13분 사이에 1 L Duran 병에 수거하였다. 제2 용리 이성질체를 함유하는 분획을 14분과 16분 사이에 1 L Duran 병에 수거하였다. 이성질체 분획을 증발 건조시키고(Rotavapor, 30℃ 배쓰 온도), 이후 에탄올 (3 x 4 mL)에 흡수시키고, 테어드(tared) 20 mL 유리 바이알로 옮겼다. 50 μL 샘플을 최종 키랄 hplc 분석을 위해 취하고, 큰 샘플을 질소 가스의 스트림 하에 건조되도록 블로운 다운시켰다. 최종 키랄 HPLC 분석은 제1 용리 이성질체가 UV에 의해 99.3 % 키랄 순수한 2-메톡시-N3-메틸-N5-((1R,2R)-2-메틸사이클로프로필)피리딘-3,5-디카복스아미드 (190 mg, 0.722 mmol, 35.6 % 수율)임을 나타냈다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.66 min, [MH]+ = 264.1.
제2 용리 이성질체의 키랄 HPLC 분석은 제1 용리 이성질체의 3.1% (UV에 의해)의 존재를 나타냈으며, 숄더(shoulder)가 주된 이성질체 피크에서 분명하게 나타났으며, 따라서, 샘플 중 제1 용리 이성질체의 정확한 비율을 정확히 평가할 수 없었다 - 2-메톡시-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)피리딘-3,5-디카복스아미드 (216 mg, 0.820 mmol, 40.5 % 수율)
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.66 min, [MH]+ = 264.1.
중간체 95: N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00128
아이오드화나트륨 (166 mg, 1.109 mmol)을 아세토니트릴 (3 mL) 중의 2-메톡시-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)피리딘-3,5-디카복스아미드 (146 mg, 0.555 mmol) 및 TMS-Cl (0.354 mL, 2.77 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM (현탁액으로서) 중에 흡수시키고, 0-50% (20% MeOH/DCM)/DCM으로 용리되는 SNAP 실리카 (25 g) 카트리지에 첨가하였다. 요망하는 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 갈색 고형물로서 요망하는 생성물 - N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (187 mg, 0.548 mmol, 99 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.54 min, [MH]+ = 250.1.
중간체 96: N3-메틸-N5-((1R,2R)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00129
아이오드화나트륨 (56.9 mg, 0.380 mmol)을 아세토니트릴 (1 mL) 중의 2-메톡시-N3-메틸-N5-((1R,2R)-2-메틸사이클로프로필)피리딘-3,5-디카복스아미드 (50 mg, 0.190 mmol) 및 TMS-Cl (0.121 mL, 0.950 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM (현탁액으로서) 중에 흡수시키고, 0-50% (20% MeOH/DCM)/DCM으로 용리되는 SNAP 실리카 10 g 카트리지에 첨가하였다. 요망하는 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 황색 고형물로서 요망하는 생성물 - N3-메틸-N5-((1R,2R)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (60 mg)를 얻었다. 추가 물질로 인해, 생성물은 무기 불순물로 오염된 것으로 추정되며, 79% 순도로 추정되었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.54 min, [MH]+ = 250.1.
중간체 97: 5-브로모-1-(3-플루오로벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00130
메탄올 (1 mL) 중의 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (150 mg, 0.649 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (179 mg, 1.298 mmol) 및 1-(브로모메틸)-3-플루오로벤젠 (116 μL, 0.946 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 6시간 동안 65℃로 가열하였다. 추가 부분의 탄산칼륨 (90 mg, 0.649 mmol) 및 1-(브로모메틸)-3-플루오로벤젠 (119 μL, 0.974 mmol)을 첨가하고, 추가 2.7시간 동안 계속 교반하였다. 반응물을 물 (585 μL, 32.5 mmol)로 켄칭시키고, 진공 하에 농축시키고, 물 (15 mL)에 부었다. 생성물을 에틸 아세테이트 (10 mL), 및 디클로로메탄 (3 x 10 mL, 에틸 아세테이트 중에서의 불용성으로 인해)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켰다. 진공 하에서 다시 증발시키기 전에 잔류물에 (프릿 건조된) DCM 부분을 첨가하여 미정제 생성물 (286 mg)을 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄 중 건조 상태로 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 15 - 75% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는 Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 순수한 생성물 - 5-브로모-1-(3-플루오로벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (135 mg, 0.398 mmol, 61.3 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.96 min, [MH]+ = 338.9, 340.9.
중간체 98: 5-브로모-1-((6-메톡시피리딘-3-일)메틸)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00131
5-(브로모메틸)-2-메톡시피리딘 (144 mg, 0.714 mmol)을 DMF (5 mL) 중의 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (165 mg, 0.714 mmol) 및 탄산칼륨 (197 mg, 1.428 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반되게 두었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기 용액을 진공 하에 농축시키고, DCM (3 mL) 중에 로딩시키고, 0-100% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 Biotage Isolera SNAP 25g 실리카 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (152 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.83 min, [MH]+ = 352.0 & 353.9.
중간체 99: 메틸 1-(3-아세틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00132
DMF (8.326 mL) 중의 메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (350 mg, 1.665 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (460 mg, 3.33 mmol) 및 1-(3-(클로로메틸)페닐)에타논 (371 μL, 2.498 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.3시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 1-(3-(클로로메틸)페닐)에타논 (124 μL, 0.833 mmol)를 첨가하고, 반응물 교반을 3.75시간 동안 계속하였다. 반응물을 포화된 염화리튬 수용액 (100 mL)에 부었다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (4 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 염수 (10 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 오렌지색 검으로서 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 15-75% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 생성물 (431 mg)을 무색 검으로서 얻었다. 이를 에틸 아세테이트 (60 mL) 중에 용해시키고, 물 (2 x 20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하였다. 수성층을 디에틸 에테르 (2 x 20 mL)로 역추출하였다. 합한 유기 층을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 - 메틸 1-(3-아세틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (420 mg, 1.165 mmol, 70.0 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.82 min, [MH]+ = 343.1.
중간체 100: 1-(3-아세틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00133
메틸 1-(3-아세틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (355 mg, 1.037 mmol)를 1,4-디옥산 (3.116 mL) 중에 현탁시켰다. 물 (2.116 mL)을 첨가한 후, 수산화리튬 (62.1 mg, 2.59 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. HCl (2M, 1.295 mL)를 첨가하고, 용매를 진공 하에 증발시켜 요구되는 생성물 - 1-(3-아세틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (503 mg)을 백색 고형물로서 얻었다. 그러나, 샘플이 후처리에서 LiCl를 함유하였다. 순도는 중량을 기준으로 하여 정량적 수율을 가정하여 67 %로 추정되었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.72 min, [MH]+ = 329.1.
중간체 101: rac-부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00134
부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (158 mg, 0.626 mmol), 1-(1-브로모에틸)-3-메틸벤젠 (197 mg, 0.990 mmol), 탄산칼륨 (172 mg, 1.245 mmol) 및 DMF (1.4 mL)를 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. LiCl 용액 (20 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 EtOAc (40 mL)과 물 (40 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성 상을 EtOAc (2 x 40 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 299 mg의 황색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 25 g 카트리지, 0-50% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 rac-부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (193 mg, 0.469 mmol, 74.9 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.28 min, [MH]+ = 371.
중간체 102: rac-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00135
부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (200 mg, 0.540 mmol), 수산화리튬 (39 mg, 1.629 mmol), 1,4-디옥산 (2 mL) 및 물 (2 mL)을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 아세트산 (1 mL, 17.47 mmol)를 첨가하고, 용액을 EtOAc (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 rac-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (188 mg, 0.538 mmol, 100 % 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.94 min, [MH]+ = 315.
중간체 103: rac-부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(o-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00136
부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (300 mg, 1.189 mmol), 1-(1-브로모에틸)-2-메틸벤젠 (670 mg, 3.37 mmol), 탄산칼륨 (329 mg, 2.378 mmol) 및 DMF (4 mL)를 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 LiCl 용액(20 mL)으로 세척하고, EtOAc (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 790 mg의 오렌지색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 100 g 카트리지, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 rac-부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(o-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (410 mg, 0.996 mmol, 84 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.28 min, [MH]+ = 371.
중간체 104: rac-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(o-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00137
부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(o-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (410 mg, 1.107 mmol), 수산화리튬 (82 mg, 3.42 mmol), 1,4-디옥산 (3 mL) 및 물 (3 mL)을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 아세트산 (1 mL, 17.47 mmol)를 첨가하고, 용액을 EtOAc (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 rac-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(o-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (438 mg, 1.254 mmol, 113 % 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.92 min, [MH]+ = 315.
중간체 105: 부틸 1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00138
부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (198 mg, 0.785 mmol), 1-(브로모메틸)-3-메톡시벤젠 (0.165 mL, 1.177 mmol), 탄산칼륨 (220 mg, 1.592 mmol) 및 DMF (2 mL)를 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 LiCl 용액(20 mL)으로 세척하고, EtOAc (40 mL)와 물 (40 mL) 사이에서 분배시키고, 수성 상을 EtOAc (2 x 40 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 680 mg의 오렌지색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 100 g 카트리지, 0-80% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 부틸 1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (266 mg, 0.643 mmol, 82 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.15 min, [MH]+ = 373.
중간체 106: 1-(3-하이드록시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00139
DCM (0.6 mL) 중의 부틸 1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (135 mg, 0.362 mmol)를 N2 하에 0℃로 냉각시키고, BBr3 (1.8 mL, DCM 중 1M, 1.800 mmol)를 적가하였다. 2시간 후, 반응물을 실온으로 가온시키고, 더 많은 BBr3 (1.8 mL, DCM 중 1M, 1.800 mmol)를 첨가하였다. 추가 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 메탄올 (20 mL)로 켄칭시키고, 농축시켰다. 이를 3번 반복하여 미정제 1-(3-하이드록시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (157 mg, 0.390 mmol, 107 % 수율)을 오렌지색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.66 min, [MH]+ = 303.
중간체 107: N5-사이클로프로필-1-(3-하이드록시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00140
1-(3-하이드록시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (158 mg, 0.392 mmol), HATU (222 mg, 0.584 mmol), DIPEA (0.28 mL, 1.603 mmol), 사이클로프로판아민 (0.054 mL, 0.784 mmol) 및 DMF (2 mL)를 실온에서 N2 하에 1시간 동안 교반하였다. LiCl 용액 (20 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 EtOAc (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 476 mg의 황색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-100% (EtOAc 중 25% EtOH)/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 147 mg의 백색 고형물을 얻었다. 이를 추가로 MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 N5-사이클로프로필-1-(3-하이드록시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (46 mg, 0.121 mmol, 30.9 % 수율)를 요망하는 생성물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.69 min, [MH]+ = 342.
중간체 108: 5-브로모-1-(3-클로로벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00141
1-(브로모메틸)-3-클로로벤젠 (0.097 mL, 0.736 mmol)을 DMF (5 mL) 중의 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (170 mg, 0.736 mmol) 및 탄산칼륨 (203 mg, 1.472 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반되게 두었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 진공 하에 농축시키고, DCM (3 mL) 중에 로딩시키고, 0-60% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 Biotage Isolera SNAP 25g 실리카 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (220 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.06 min, [MH]+ = 354.9 & 356.9.
중간체 109: 5-브로모-1-(4-플루오로벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00142
메탄올 (3 mL) 중의 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (150 mg, 0.649 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (179 mg, 1.298 mmol) 및 1-(브로모메틸)-4-플루오로벤젠 (118 μL, 0.947 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 10.5시간 동안 65℃로 가열하였다. 가열을 주말 동안 중지시켰다. 이후, 추가 부분의 1-(브로모메틸)-4-플루오로벤젠 (81 μL, 0.649 mmol) 및 탄산칼륨 (90 mg, 0.649 mmol)를 첨가하고, 추가 5시간 동안 계속 가열하였다. 추가 부분의 1-(브로모메틸)-4-플루오로벤젠 (81 μL, 0.649 mmol)를 첨가하고, 반응을 2.5시간 동안 지속시켰다. 반응물을 물 (585 μL, 32.5 mmol)로 켄칭시키고, 진공 하에 농축시키고, 물 (20 mL)에 부었다. 생성물을 에틸 아세테이트 (4 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (336 mg)을 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄에 로딩하고, 15 - 75% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 순수한 생성물 - 5-브로모-1-(4-플루오로벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (127 mg, 0.374 mmol, 57.7 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.96 min, [MH]+ = 339.0, 341.0.
중간체 110: 5-브로모-1-(3-(브로모메틸)벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00143
5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (118 mg, 0.511 mmol), 1,3-비스(브로모메틸)벤젠 (162 mg, 0.613 mmol) 및 탄산칼륨 (106 mg, 0.766 mmol)을 아세토니트릴 (2 mL) 중에 현탁시키고, 반응 혼합물을 65℃에서 N2 하에 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 추가로 80℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 추가의 정제 없이 후속 반응에 미정제인 채로 사용하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.07 min, [MH]+ = 415.0.
중간체 111: 5-브로모-N-메틸-1-(3-(모르폴리노메틸)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00144
아세토니트릴 (2 mL) 중의 5-브로모-1-(3-(브로모메틸)벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (118 mg, 0.285 mmol) (미반응된 SM 및 그 밖의 불순물을 함유한 선행 단계의 추정 순도로부터 가정한 투입 질량)의 미정제 용액을 모르폴린 (124 mg, 1.425 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 N2 하에 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, MeOH 중에 현탁시켰다. 이를 2 g SCX 카트리지 (MeOH으로 사전 용리됨) 상에 로딩시키고, MeOH (40 mL)로 용리시키고, 이어서 MeOH 중 2M NH3 (40 mL)로 용리시켰다. 모든 분획을 합하고, 농축시켜 318 mg의 미정제 담황색 고형물을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 25 g 카트리지, 330 mL에 대해 0-100% (25% 에탄올/에틸 아세테이트)/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 요망하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 5-브로모-N-메틸-1-(3-(모르폴리노메틸)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (79 mg, 0.188 mmol, 66.0 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.45 min, [MH]+ = 420, 422.
중간체 112: 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1-(퀴녹살린-5-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00145
5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (213 mg, 0.922 mmol), 5-(브로모메틸)퀴녹살린 (308 mg, 1.383 mmol), 탄산칼륨 (254 mg, 1.838 mmol) 및 메탄올 (2 mL)을 65℃에서 1시간 동안 교반하였다. 형성된 용액을 농축시켜 815 mg의 오렌지색 오일을 얻었다. 이를 EtOAc (10 mL)과 물 (10 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 400 mg의 갈색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1-(퀴녹살린-5-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (127 mg, 0.306 mmol, 33.2 % 수율)를 오렌지색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.87 min, [MH]+ = 373, 375.
중간체 113: 5-브로모-1-(4-메톡시벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00146
5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (205 mg, 0.887 mmol), 1-(브로모메틸)-4-메톡시벤젠 (274 mg, 1.363 mmol), 탄산칼륨 (250 mg, 1.809 mmol) 및 메탄올 (2 mL)을 65℃에서 N2 하에 1.5시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 1-(브로모메틸)-4-메톡시벤젠 (324 mg, 1.611 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 형성된 용액을 농축시켜 오렌지색 고형물을 얻었다. 이를 EtOAc (10 mL)와 물 (10 mL) 사이에서 분배시키고, 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 650 mg의 오렌지색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-100% 디에틸에테르/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 5-브로모-1-(4-메톡시벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (85 mg, 0.218 mmol, 24.55 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.97 min, [MH]+ = 351, 353.
중간체 114: 1-((1H-인다졸-4-일)메틸)-5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00147
5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (130 mg, 0.563 mmol), 4-(브로모메틸)-1H-인다졸, 하이드로브로마이드 (214 mg, 0.731 mmol), 탄산칼륨 (223 mg, 1.614 mmol) 및 DMF (4 mL)를 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. LiCl 용액 (20 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 EtOAc (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 430 mg의 오렌지색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-100% (EtOAc 중 25% EtOH)/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 1-((1H-인다졸-4-일)메틸)-5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (234 mg, 0.453 mmol, 81 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.78 min, [MH]+ = 361, 363.
중간체 115: 1-((1H-인다졸-7-일)메틸)-5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00148
5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (312 mg, 1.350 mmol), 7-(브로모메틸)-1H-인다졸, 하이드로브로마이드 (415 mg, 1.421 mmol), 탄산칼륨 (558 mg, 4.04 mmol) 및 DMF (5 mL)를 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. LiCl 용액 (20 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 EtOAc (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 크림색 고형물을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-60% (EtOAc 중 25% EtOH)/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 1-((1H-인다졸-7-일)메틸)-5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (396 mg, 0.877 mmol, 65.0 % 수율)를 오프 화이트 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.86 min, [MH]+ = 361, 363.
중간체 116: 1-벤질-5-브로모-N-사이클로프로필-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00149
1-벤질-5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복실산 (1.09 g, 3.54 mmol)을 DCM (10 mL) 중에 용해시키고, 옥살릴 클로라이드 (0.929 mL, 10.61 mmol) 및 DMF (0.014 mL, 0.177 mmol)를 첨가한 후, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용액을 진공 하에 농축시키고, THF (10 mL) 중에 용해시키고, 사이클로프로판아민 (0.735 mL, 10.61 mmol)을 용액에 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반한 후, 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 DCM (50 mL)과 포화된 중탄산나트륨 용액 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 생성물 (1.07 g)을 오렌지색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) : Rt = 1.07 min, MH+ = 346.9 & 348.9.
중간체 117: 5-브로모-1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00150
5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (195 mg, 0.844 mmol), 탄산칼륨 (233 mg, 1.688 mmol)을 DMF (5 mL)의 용액으로 실온에서 교반하고, 4-(브로모메틸)-1-플루오로-2-메틸벤젠 (257 mg, 1.266 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 에틸 아세테이트 (30 mL) 중에 재용해시키고, 물 (30 mL)로 세척하였다. 용액을 진공 하에 농축시키고, DCM에 로딩하고, 0-55% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 Biotage Isolera SNAP 25g 실리카 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (188 mg)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹):Rt = 1.07 min, [MH]+ = 353.0 & 355.0.
중간체 118: 5-브로모-1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00151
1-(브로모메틸)-2-플루오로-3-메틸벤젠 (176 mg, 0.866 mmol)을 DMF (5 mL) 중의 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (200 mg, 0.866 mmol) 및 탄산칼륨 (239 mg, 1.731 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반되게 두었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기 용액을 진공 하에 농축시키고, DCM (3 mL) 중에 로딩시키고, 0-60% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 Biotage Isolera SNAP 25g 실리카 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (200 mg)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt =1.08 min, MH+ = 353.0 & 354.9.
중간체 119: 5-브로모-1-(3,5-디메틸벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00152
1-(브로모메틸)-3,5-디메틸벤젠 (155 mg, 0.779 mmol)을 DMF (5 mL) 중의 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (180 mg, 0.779 mmol) 및 탄산칼륨 (215 mg, 1.558 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반되게 두었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기 용액을 진공 하에 농축시키고, DCM (3 mL) 중에 로딩시키고, 0-60% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는, Biotage Isolera SNAP 25g 실리카 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (160 mg)을 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt =1.14 min, [MH]+ = 349.0 & 351.0.
중간체 120: 5-브로모-1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00153
2-(브로모메틸)-1-플루오로-4-메틸벤젠 (0.264 mL, 1.948 mmol)을 DMF (5 mL) 중의 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (300 mg, 1.298 mmol) 및 탄산칼륨 (359 mg, 2.60 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시키고, 유기 층을 2x 물로 세척하였다. 유기 층을 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 황색 오일을 DCM 중에 용해시키고, 25 g Biotage SNAP 컬럼 상에 로딩시키고, 이를 사이클로헥산:에틸 아세테이트 (0 - 75%)로 용리시켰다. 생성물 함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 제거하여 생성물 (330 mg)을 담황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹):Rt = 1.07 min, [MH]+ = 352.9 & 354.9
중간체 121: 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1-(퀴놀린-8-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00154
8-(브로모메틸)퀴놀린 (288 mg, 1.298 mmol)을 DMF (5 mL) 중의 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (200 mg, 0.866 mmol) 및 탄산칼륨 (239 mg, 1.731 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반되게 두었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 진공 하에 농축시키고, DCM (3 mL) 중에 로딩시키고, 0-80% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 Biotage Isolera SNAP 25g 실리카 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (220 mg)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹):Rt = 1.01 min, [MH]+ = 372.1 & 374.1.
중간체 122: 3차-부틸 5-((5-(메톡시카보닐)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-카복실레이트
Figure pct00155
DIAD (0.11 mL, 0.566 mmol)를 톨루엔 (2 mL) 중의 메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (60 mg, 0.285 mmol), 3차-부틸 5-(하이드록시메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-카복실레이트 (110 mg, 0.418 mmol) 및 트리페닐포스핀 (152 mg, 0.580 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 N2 하에 1시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 DIAD (0.11 mL, 0.566 mmol) 및 트리페닐포스핀 (150 mg, 0.571 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 추가 1시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 DIAD (0.11 mL, 0.566 mmol) 및 트리페닐포스핀 (150 mg, 0.571 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 추가 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, 수성층을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 1.3 g의 오렌지색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 100 g 카트리지, 0-100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 3차-부틸 5-((5-(메톡시카보닐)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-카복실레이트 (522 mg, 0.236 mmol, 83 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.13 min, [MH]+ = 456.3.
중간체 123: 1-((2-(3차-부톡시카보닐)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-5-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00156
3차-부틸 5-((5-(메톡시카보닐)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-카복실레이트 (522 mg, 0.241 mmol), 수산화리튬 (25 mg, 1.044 mmol), 1,4-디옥산 (3 mL) 및 물 (3 mL)을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이 용액을 포화된 중탄산나트륨 수용액 (20 mL)으로 희석하고, EtOAc (2 x 20 mL)로 추출한 후, 수성층을 아세트산을 사용하여 pH 4로 산성화시키고, 이후, EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 1-((2-(3차-부톡시카보닐)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-5-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (71 mg, 0.145 mmol, 60.1 % 수율)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.03 min, [MH]+ = 442.
중간체 124: 3차-부틸 5-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-카복실레이트
Figure pct00157
1-((2-(3차-부톡시카보닐)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-5-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (67 mg, 0.152 mmol), HATU (88 mg, 0.231 mmol), DIPEA (0.08 mL, 0.458 mmol), 사이클로프로판아민 (0.03 mL, 0.433 mmol) 및 DMF (1 mL)를 실온에서 N2 하에 2시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 HATU (92 mg, 0.242 mmol), DIPEA (0.08 mL, 0.458 mmol) 및 사이클로프로판아민 (0.03 mL, 0.433 mmol)을 첨가하고, 반응물을 추가 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 추가 부분의 HATU (84 mg, 0.221 mmol), DIPEA (0.08 mL, 0.458 mmol) 및 사이클로프로판아민 (0.03 mL, 0.426 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 추가 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 세척하고, EtOAc (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 25 g 카트리지, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리되고, 이어서 EtOAc 중 25% EtOH로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 31 mg의 무색 오일을 얻었다. 이를 추가로 MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 3차-부틸 5-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-카복실레이트 (4.2 mg, 7.87 ㎛ol, 5.18 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.04 min, [MH]+ = 481.
중간체 125: 3차-부틸 (6-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)스피로[3.3]헵탄-2-일)카바메이트
Figure pct00158
2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (80 mg, 0.172 mmol), N,N-디메틸피리딘-4-아민 (5 mg, 0.041 mmol), 3차-부틸 (6-아미노스피로[3.3]헵탄-2-일)카바메이트 (78 mg, 0.344 mmol), 트리에틸아민 (0.08 mL, 0.574 mmol) 및 THF (1 mL)를 45℃에서 N2 하에 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 200 mg의 오프 화이트 고형물을 얻고, 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 10 g 카트리지, 0-60% (EtOAc 중 25% EtOH)/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 요망하는 분획을 농축시켜 3차-부틸 (6-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)스피로[3.3]헵탄-2-일)카바메이트 (86 mg, 0.148 mmol, 86 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=1.09 min, [MH]+ = 495.
중간체 126: 3차-부틸 7-((5-브로모-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-4,5-디하이드로-1H-벤조[d]아제핀-3(2H)-카복실레이트
Figure pct00159
DIAD (0.1 mL, 0.514 mmol)를 톨루엔 (3 mL) 중의 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (100 mg, 0.433 mmol), 3차-부틸 7-(하이드록시메틸)-4,5-디하이드로-1H-벤조[d]아제핀-3(2H)-카복실레이트 (180 mg, 0.649 mmol) 및 트리페닐포스핀 (134 mg, 0.511 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 N2 하에 1시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 DIAD (0.1 mL, 0.514 mmol) 및 트리페닐포스핀 (136 mg, 0.519 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 추가 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, 수성층을 더 많은 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 1.06 g의 황색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 100 g 카트리지, 0-100% 에틸아세테이트/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 3차-부틸 7-((5-브로모-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-4,5-디하이드로-1H-벤조[d]아제핀-3(2H)-카복실레이트 (193 mg, 0.354 mmol, 82 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=1.22 min, [MH]+ = 490, 492.
중간체 127: 3차-부틸 7-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-4,5-디하이드로-1H-벤조[d]아제핀-3(2H)-카복실레이트
Figure pct00160
3차-부틸 7-((5-브로모-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-4,5-디하이드로-1H-벤조[d]아제핀-3(2H)-카복실레이트 (190 mg, 0.387 mmol), 코발트 카보닐 (40 mg, 0.117 mmol), 사이클로프로판아민 (0.054 mL, 0.775 mmol), DMAP (97 mg, 0.794 mmol), 팔라듐 아세테이트 (5 mg, 0.022 mmol) 및 잔포스 (13 mg, 0.022 mmol)를 마이크로웨이브 바이알에서 배합하고, 탈기시키고, 1,4-디옥산 (3.5 mL)를 첨가하고, 바이알을 80℃에서 40분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시키고, 물과 EtOAc 사이에서 분배시키고, 2M HCl로 세척하고, EtOAc (2 x 30 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 240 mg의 녹색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 25 g 카트리지, 0-50% (EtOAc 중 25% EtOH)/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 175 mg의 황색 오일을 얻었다. 이를 추가로 MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 3차-부틸 7-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-4,5-디하이드로-1H-벤조[d]아제핀-3(2H)-카복실레이트 (99 mg, 0.160 mmol, 41.3 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=1.06 min, [MH]+ = 495.
중간체 128: 부틸 1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00161
4-(브로모메틸)-1-플루오로-2-메틸벤젠 (0.805 g, 3.96 mmol)을 DMF (20 mL) 중의 부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (1 g, 3.96 mmol) 및 탄산칼륨 (1.096 g, 7.93 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반되게 두었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 진공 하에 농축시키고, DCM (3 mL) 중에 로딩시키고, 0-60% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 Biotage Isolera SNAP 25 g 실리카 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (900 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.24 min, [MH]+ = 375.1.
중간체 129: 1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00162
부틸 1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (900 mg, 2.404 mmol)를 THF (10 mL) 및 물 (10 mL) 중에 흡수시켰다. 수산화리튬 (115 mg, 4.81 mmol)을 용액에 첨가하고, 반응물을 밤새 실온에서 교반하였다. 2M aq. HCl (3.61 mL, 7.21 mmol)를 첨가하고, 형성된 고형물을 물로 세척하여 생성물 (1 g)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 319.0.
중간체 130: 부틸 1-(3-플루오로벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00163
1-(브로모메틸)-3-플루오로벤젠 (0.729 mL, 5.95 mmol)을 DMF (20 mL) 중의 부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (1 g, 3.96 mmol) 및 탄산칼륨 (1.096 g, 7.93 mmol)의 교반된 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트 (40 mL)와 물 (40 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 물 (2 x 40 mL)로 세척하였다. 이를 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 형성된 황색 오일을 DCM 중에 용해시키고, 0-75% 에틸 아세테이트/사이클로헥산의 구배를 사용하는 100 g Biotage SNAP 실리카 컬럼에 의해 정제하였다. 깨끗한 생성물 함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성물을 진공 하에 2시간 동안 건조되게 두어 부틸 1-(3-플루오로벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (1.23 g, 3.41 mmol, 86 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.16 min, [MH]+ = 361.1.
중간체 131: 1-(3-플루오로벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00164
수중 수산화나트륨 (3.41 mL, 2.5 M, 8.53 mmol)을 메탄올 (10 mL) 및 THF (10 mL) 중의 부틸 1-(3-플루오로벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (1.23 g, 3.41 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 밤새 방치되게 두었다. 반응 혼합물을 2M HCl를 사용하여 pH 7로 중성화시키고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 이를 에틸 아세테이트 (40 mL)와 물 (40 mL) 사이에서 분배시키고, 유기 층을 물 (2 x 40 mL)로 추출하고; 수성층을 둥근-바닥 플라스크에 넣고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 고형물을 3시간 동안 진공 하에 건조되게 두어 1-(3-플루오로벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (1.252 g, 3.29 mmol, 96 % 수율)을 12 mol% NaCl 불순물과 함께 백색 고형물로서 얻었다. 불순물을 추가 합성에 전달하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.82 min, [MH]+ = 305.0.
중간체 132: 5-브로모-1-(2-플루오로벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00165
1-(브로모메틸)-2-플루오로벤젠 (0.392 mL, 3.25 mmol)을 DMF (8 mL) 중의 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (500 mg, 2.164 mmol) 및 탄산칼륨 (598 mg, 4.33 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 실온에서 2시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시키고, 유기 층을 2x 물로 세척하였다. 유기 층을 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 황색 오일을 DCM 중에 용해시키고, 50 g Biotage SNAP 컬럼 상에 로딩시키고, 이를 사이클로헥산:에틸 아세테이트 (0 - 75%)로 용리시켰다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성물을 진공 하에 밤새 건조되게 두어 생성물 (536.3 mg)을 담황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.98 min, [MH]+ = 338.9 & 340.9
중간체 133: 메틸 1-(4-플루오로벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00166
1-(브로모메틸)-4-플루오로벤젠 (0.207 mL, 1.665 mmol)을 DMF (15 mL) 중의 메틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (350 mg, 1.665 mmol) 및 탄산칼륨 (460 mg, 3.33 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반되게 두었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분리시켰다. 유기 용액을 진공 하에 농축시키고, DCM (3 mL) 중에 로딩시키고, 0-60% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 Biotage Isolera SNAP 25 g 실리카 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (428 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹):Rt = 0.92 min, [MH]+ = 319.0.
중간체 134: 1-(4-플루오로벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00167
메틸 1-(4-플루오로벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (330 mg, 1.037 mmol)를 THF (4 mL) 및 물 (4.00 mL) 중에 흡수시켰다. 수산화리튬 (49.7 mg, 2.074 mmol)을 용액에 첨가하고, 반응물을 밤새 실온에서 교반하였다. 2M aq. HCl (1.555 mL, 3.11 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 물 (10 mL)과 10% MeOH/DCM (10 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성층을 추가로 10% MeOH/DCM (2 x 10 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 합하고, 소수성 프릿을 통과시키고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (123.5 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.82 min, [MH]+ = 305.0.
중간체 135: N5-사이클로프로필-1-(3-포르밀벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00168
질소 하에 실온에서 DMF (5.101 mL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (300 mg, 1.275 mmol) 및 탄산칼륨 (353 mg, 2.55 mmol)의 교반된 용액에 3-(브로모메틸)벤즈알데하이드 (381 mg, 1.913 mmol)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 염화리튬 수용액 (60 mL)에 붓자, 이 시점에서 생성물이 침전하였다. 현탁액을 에틸 아세테이트 (150 mL, 다음에 2 x 50 mL)로 추출하여 잘 녹지 않는 침전물을 용해시켰다. 합한 유기물질을 염수 (2 x 20 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 황색 오일 (588 mg)로서 얻었다. 오일을 SNAP 카트리지 (25 g) 상에 건식 로딩하고, 15-75 % (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 요망하는 생성물 - N5-사이클로프로필-1-(3-포르밀벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (369 mg, 0.992 mmol, 78 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.72 min, [MH]+ = 354.1.
중간체 136: (+/-)-(트랜스)-메틸 2-(2-(3차-부톡시)-2-옥소에틸)사이클로프로판카복실레이트
Figure pct00169
질소 하에 THF (25 mL) 중의 디이소프로필아민 (5.70 mL, 40 mmol)의 용액을 -78℃에서 n-부틸리튬 (25 mL, 40.0 mmol, 헥산 중 1.6M)으로 처리하였다. 형성된 혼합물을 5분 동안 교반한 후, 0℃에서 30분 동안 교반하고, 이후에 다시 -78℃로 냉각시켰다. 용액을 THF (10 mL) 중의 3차-부틸 아세테이트 (5.37 mL, 40.0 mmol)를 적가함으로써 처리하고, 형성된 혼합물을 이 온도에서 30분 동안 교반한 후, THF (15 mL) 중의 (E)-메틸 4-브로모부트-2-에노에이트 (7.16 g, 40 mmol, 예를 들어, Sigma-Aldrich로부터 입수가능함)로 처리하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고(오렌지색 용액), 이후 취한 분취물을 DCM으로 희석하고, 물로 세척하고, 상 분리기를 사용하여 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 총 1.5시간 후, 반응 혼합물을 포화된 NH4Cl 수용액으로 처리하고, 실온으로 가온시켰다. 혼합물을 물과 AcOEt 사이에서 분배시키고, 층들을 분리시켰다. 수성층을 AcOEt로 추출하고, 합한 유기물질을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 (+/-)-(트랜스)-메틸 2-(2-(3차-부톡시)-2-옥소에틸)사이클로프로판카복실레이트 (8.30 g, 38.7 mmol, 97 % 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
메탄올 (140 mL) 중의 (E)-메틸 4-브로모부트-2-에노에이트 (NMR에 의해 25%)로 오염된 (+/-)-(트랜스)-메틸 2-(2-(3차-부톡시)-2-옥소에틸)사이클로프로판카복실레이트 (8.30 g, 38.7 mmol)의 용액을 탄소 상 팔라듐 (1.5 g, 1.41 mmol, 50% 습윤, 10% w/w)으로 처리하고, 형성된 혼합물을 수소 (1 bar) 하에 4시간 동안 교반하였다. 이후, 팔라듐을 여과해 내고, AcOEt로 헹구었다. 트리에틸아민 (2.70 mL, 19.37 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 AcOEt와 물 사이에서 분배시키고, 층들을 분리시켰다. 수성 상을 AcOEt로 추출하고, 합한 유기물질을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 (+/-)-(트랜스)-메틸 2-(2-(3차-부톡시)-2-옥소에틸)사이클로프로판카복실레이트 (7 g, 32.7 mmol, 84 % 수율)를 오렌지색/적색 오일로서 얻고, 이를 다음 반응에 직접 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.68 (s, 3 H) 2.23 (d, J=7.1 Hz, 2 H) 1.67 (dqd, J=8.9, 6.8, 6.8, 6.8, 4.2 Hz, 1 H) 1.43 - 1.53 (m, 10 H) 1.23 - 1.29 (m, 1 H) 0.81 (ddd, J=8.3, 6.3, 4.5 Hz, 1 H)
중간체 137: (+/-)-(트랜스)-2-(2-(3차-부톡시)-2-옥소에틸)사이클로프로판카복실산
Figure pct00170
실온에서 THF (15 mL) 중의 (+/-)-(트랜스)-메틸 2-(2-(3차-부톡시)-2-옥소에틸)사이클로프로판카복실레이트 (1071 mg, 5 mmol)의 용액을 NaOH (5 mL, 10.00 mmol, 2M aq.)로 처리하고, 형성된 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 2상 혼합물로서 잔류함에 따라, MeOH (5 mL)를 첨가하고, 반응물을 밤새 교반하였다. 이후, 용매를 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 물 중에 용해시키고, HCl (2N aq.)로 처리한 후, AcOEt로 2회 추출하였다. 합한 유기물질을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 Et2O로의 분쇄 후, (+/-)-(트랜스)-2-(2-(3차-부톡시)-2-옥소에틸)사이클로프로판카복실산 (720 mg, 3.60 mmol, 72 % 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.26 (ABq, J=7.1, 5.6 Hz, 2 H) 1.70 - 1.83 (m, 1 H) 1.43 - 1.57 (m, 10 H) 1.29 - 1.39 (m, 1 H) 0.87 - 0.95 (m, 1 H). 교환가능한 양성자는 관찰되지 않음.
중간체 138: (+/-)-3차-부틸 2-((트랜스)-2-(((벤질옥시)카보닐)아미노)사이클로프로필)아세테이트
Figure pct00171
톨루엔 (12 mL) 중의 (+/-)-(트랜스)-2-(2-(3차-부톡시)-2-옥소에틸)사이클로프로판카복실산 (720 mg, 3.60 mmol)의 용액을 트리에틸아민 (1.50 mL, 10.79 mmol)로 처리한 후, 디페닐 포스포르아지데이트 (0.930 mL, 4.32 mmol)로 처리하고, 이어서 2분 후에 벤질 알코올 (0.748 mL, 7.19 mmol)로 처리하였다. 형성된 혼합물을 110℃에서 교반하고, LCMS를 수행하였다. 버블링이 매우 급속하게 발생하였다. 4시간 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc와 포화된 NaHCO3 수용액 사이에서 분배시키고, 층들을 분리시켰다. 이후, 수성 상을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기물질을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 미정제 생성물 (ca. 1.6 g)의 정제를 Biotage SP4 (50 g 실리카 컬럼, 30% EtOAc/헥산) 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 수행하여 (+/-)-3차-부틸 2-((트랜스)-2-(((벤질옥시)카보닐)아미노)사이클로프로필)아세테이트 (660 mg, 2.16 mmol, 60 % 수율)를 황색 오일로서 얻고, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.20 min, [M+Na]+ = 328.2.
중간체 139: (+/-)-3차-부틸 2-((트랜스)-2-아미노사이클로프로필)아세테이트
Figure pct00172
실온에서 메탄올 (40 mL) 중의 (+/-)-3차-부틸 2-((트랜스)-2-(((벤질옥시)카보닐)아미노)사이클로프로필)아세테이트 (660 mg, 2.16 mmol)의 용액을 탄소 상 팔라듐 (150 mg, 0.14 mmol) (50% 습윤, 10% w/w)으로 처리하고, 형성된 혼합물을 수소의 대기 (1 bar)하에서 5시간 동안 교반하였다. 촉매를 셀라이트의 패드를 통해 제거하고, 메탄올로 헹구었다. 합한 유기물질을 진공 하에 농축시켜 (+/-)-3차-부틸 2-((트랜스)-2-아미노사이클로프로필)아세테이트 (380 mg, 2.219 mmol, 103 % 수율)를 담황색 오일로서 얻었다. 추가의 실험은 이 생성물이 선형 사슬 아민으로 오염되었음(요망하는 생성물에 유리하게 2:1의 비로)을 나타냈다. 이 혼합물을 미정제된 채로 후속 반응에 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.08 - 2.17 (m, 2 H) 1.42 - 1.55 (m, 10 H) 0.92 - 1.05 (m, 1 H) 0.54 - 0.62 (m, 1 H) 0.34 - 0.42 (m, 1 H). 교환가능한 양성자는 관찰되지 않았음.
중간체 140: 2-((1S,2S)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온
중간체 141: 2-((1R,2R)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온
Figure pct00173
2-((트랜스)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (3.2 g)을 키랄 HPLC에 의해 정제하였다. 라세메이트 (300 mg)를 가열하면서 EtOH (2 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 2 mL의 용액을 컬럼 (50% EtOH/헵탄, 유량 = 30 mL/min, 검출 파장 = 215 nm, 4. Ref 550, 100, 컬럼 30 mm x 25 cm 키랄팍 AD-H (5 ㎛), 로트 번호 ADH12143-01) 상에 주입하였다. 주입 총수 = 11. 11-15.5분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 18-28분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 진공 하에 농축시킨 후, 칭량된 플라스크로 옮기었다. 최종 화합물을 DCM 및 헵탄으로부터 회수하여 고형물을 얻었다.
피크 1에 상응하는 분획을 수거하여 중간체 140 (1.38 g)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.65 min, [M-OH]+ = 200.2.
피크 2에 상응하는 분획을 수거하여 중간체 141 (1.36 g)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.65 min, [M-OH]+ = 200.2.
중간체 142: 2-((1S,2S)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온
Figure pct00174
2-((1S,2S)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (200 mg, 0.92 mmol) 및 N1,N1,N8,N8-테트라메틸나프탈렌-1,8-디아민 (592 mg, 2.76 mmol)을 DCM (8 mL) 중에 용해시켰다. 트리메틸옥소늄 테트라플루오로보레이트 (409 mg, 2.76 mmol)를 서서히 첨가하고, 반응 혼합물을 질소 하에 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM과 물 사이에서 분배시킨 후, 수성층을 DCM (2 x 20 mL)으로 추출하고, 유기 층을 물 (20 mL), 및 포화된 중탄산나트륨 용액 (20 mL)으로 세척하였다. 이를 소수성 프릿을 통과시키고, ~5 mL으로 농축시켰다. 용액을 0 - 100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산의 구배를 사용하는 Biotage SNAP 컬럼 (25 g)을 사용하여 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 농축시키고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 생성물을 질소 스트림 하에 건조시켜 2-((1S,2S)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (193 mg, 0.709 mmol, 77 % 수율)을 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 232.4.
중간체 143: (1S,2S)-2-(메톡시메틸)사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드
Figure pct00175
히드라진 하이드레이트 (0.023 mL, 0.745 mmol)를 에탄올 (7 mL) 중의 2-((1S,2S)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (193 mg, 0.71 mmol)의 현탁액에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 2일 동안 40℃로 가열하고, 이후 추가의 히드라진 하이드레이트 (0.023 mL, 0.75 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 밤새 50℃로 가열하고, 추가의 히드라진 하이드레이트 (0.023 mL, 0.75 mmol)를 첨가하였다. 질소 하에 4시간 동안 계속 가열하였다. 현탁액을 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 여과하고, 에탄올로 세척하였다. 여액을 2M HCl을 사용하여 pH 1로 산성화시키고, 용매를 ~10 mL로 농축시켰다. 백색 침전물을 여과해 내고, DCM으로 세척하였다. 여액을 둥근-바닥 플라스크에 넣고, 용매를 ~3 mL로 농축시켰다. 일부 백색 침전물이 인지되었고, 이에 따라 에틸 아세테이트를 첨가하고, 현탁액을 소수성 프릿을 통과시켜 잔류하는 고형물을 여과해 냈다. 생성물을 질소 스트림 하에 건조되게 두어 미정제 (1S,2S)-2-(메톡시메틸)사이클로프로판아민, HCl 염 (106 mg, 0.51 mmol, 71 % 수율)을 오렌지색 오일로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.37 - 3.43 (m, 1 H) 3.33 (s, 3 H) 3.28 (dd, J=10.4, 6.5 Hz, 1 H) 2.57 - 2.65 (m, 1 H) 1.75 - 1.85 (m, 1 H) 1.27 - 1.35 (m, 1 H) 0.81 - 0.89 (m, 1 H). 교환가능한 양성자는 관찰되지 않음.
중간체 144: (1S,2S)-2-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)사이클로프로판카브알데하이드
Figure pct00176
2-((1S,2S)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (287 mg, 1.32 mmol)을 DCM (10 mL) 중에서 교반하고, Dess-Martin 페리오디난 (616 mg, 1.45 mmol)을 질소 하에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 질소 하에 90분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 소듐 티오설페이트 용액 (수중 10%, 50 mL)으로 켄칭시키고, DCM과 포화된 중탄산나트륨 용액 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 sat. 중탄산나트륨 용액 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통과시켰다. 용매를 진공 하에 ~5 mL로 농축시키고, 형성된 오일을 25 g Biotage SNAP 컬럼 및 0 - 70% 에틸 아세테이트/사이클로헥산의 구배를 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 농축시키고, 생성물을 질소 스트림 하에 건조되게 두어 (1S,2S)-2-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)사이클로프로판카브알데하이드 (235 mg, 1.092 mmol, 83 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.75 min, [MH]+ = 216.4.
중간체 145: 2-((1S,2R)-2-((디메틸아미노)메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온
Figure pct00177
소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (370 mg, 1.75 mmol)를 DCM (6 mL) 중의 (1S,2S)-2-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)사이클로프로판카브알데하이드 (235 mg, 1.09 mmol) 및 디메틸아민 (THF 중 2M, 0.573 mL, 1.15 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 질소 하에 90분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 sat. 중탄산나트륨 용액으로 켄칭시키고, DCM (2 x 20 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 소수성 프릿을 통과시키고, ~5 mL로 농축시켰다. 이를 25 g Biotage SNAP 컬럼 및 0 - 75% (DCM 중의 20% 메탄올성 암모니아)/DCM의 구배를 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 생성물을 질소 스트림 하에 건조되게 두어 2-((1S,2R)-2-((디메틸아미노)메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (76.1 mg, 0.31 mmol, 29 % 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.81 min, [MH]+ = 245.3.
중간체 146: (1S,2R)-2-((디메틸아미노)메틸)사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드
Figure pct00178
히드라진 하이드레이트 (15 μL, 0.478 mmol)를 에탄올 (5 mL) 중의 2-((1S,2R)-2-((디메틸아미노)메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (76 mg, 0.31 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 90분 동안 50℃로 가열하고, 이후 추가의 히드라진 하이드레이트 (15 μL, 0.48 mmol)를 첨가하고, 질소 하에 밤새 계속 가열하였다. 현탁액을 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 여과하고, 에탄올로 세척하였다. 여액을 2M HCl를 사용하여 pH 1로 산성화시키고, 이를 ~ 10 mL로 농축시켰다. 형성된 백색 침전물을 여과에 의해 제거하고, 에탄올로 세척하고, 여액을 ~5 mL로 농축시켰다. 이를 소수성 프릿을 통과시키고, 질소 스트림 하에 건조되게 두어 불순한 (1S,2R)-2-((디메틸아미노)메틸)사이클로프로판아민 하이드로클로라이드 (95.8 mg, 0.19 mmol, 61 % 수율)를 황색 고형물로서 얻었다. 미정제 생성물은 순도가 ~30% 였고, 추가의 정제 없이 후속 합성에 사용하였다.
중간체 147: 2-((1R,2R)-2-(에톡시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온
Figure pct00179
미어웨인(Meerwein)의 시약 (525 mg, 2.76 mmol)을 DCM (5 mL) 중의 2-((1R,2R)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (200 mg, 0.921 mmol) 및 N1,N1,N8,N8-테트라메틸나프탈렌-1,8-디아민 (592 mg, 2.76 mmol)의 현탁액에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 90분 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 DCM (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, 수성층을 DCM (20 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 sat. 중탄산나트륨 용액으로 세척하였다. (10 mL) 및 소수성 프릿을 통과시켰다. 용매를 진공 하에 제거하고, 형성된 오일을 DCM 중에 용해시켰다. 이를 10 g Biotage SNAP 컬럼 및 0 - 100% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 형성된 오일을 MDAP (포믹)에 의해 정제하고, 생성물-함유 분획을 농축시켰다. 생성물을 질소 스트림 하에 건조시켜 2-((1R,2R)-2-(에톡시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (145 mg, 0.59 mmol, 64 % 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.94 min, [MH]+ = 246.4.
중간체 148: (1R,2R)-2-(에톡시메틸)사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드
Figure pct00180
하이드라진 모노하이드레이트 (0.029 mL, 0.59 mmol)를 에탄올 (8 mL) 중의 2-((1R,2R)-2-(에톡시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (145 mg, 0.59 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 밤새 40℃로 가열하고, 이후 추가의 하이드라진 모노하이드레이트 (0.029 mL, 0.59 mmol)를 첨가하고, 온도를 50℃로 증가시켰다. 4시간 동안 계속 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 에탄올로 세척하였다. 여액을 2M HCl을 사용하여 pH 1로 산성화시키고, 용매를 ~10 mL로 농축시켰다. 형성된 백색 침전물을 여과해 내고, DCM으로 세척하였다. 여액 중에 추가의 백색 침전물이 형성되었고, 이에 따라 이를 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 생성물을 질소 스트림 하에 건조되게 두어 (1R,2R)-2-(에톡시메틸)사이클로프로판아민 하이드로클로라이드 염 (160 mg, 0.42 mmol, 71 % 수율)을 오프-화이트 고형물로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.70 (dd, J=10.3, 6.1 Hz, 1 H) 3.55 - 3.63 (m, 2 H) 3.40 (dd, J=10.5, 6.8 Hz, 1 H) 2.67 (dt, J=7.6, 3.8 Hz, 1 H) 1.70 - 1.81 (m, 1 H) 1.23 - 1.32 (m, 4 H) 1.04 - 1.11 (m, 1 H). 교환가능한 양성자는 관찰되지 않았음.
중간체 149: 2-((1S,2S)-2-(에톡시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온
Figure pct00181
미어웨인의 시약 (350 mg, 1.84 mmol)을 DCM (5 mL) 중의 2-((1S,2S)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (200 mg, 0.92 mmol) 및 N1,N1,N8,N8-테트라메틸나프탈렌-1,8-디아민 (395 mg, 1.84 mmol)의 용액에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 DCM (30 mL)과 물 (30 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 물 (20 mL) 및 sat. 중탄산나트륨 용액(20 mL)으로 세척하고, 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 ~10 mL로 농축시켰다. 이를 25 g Biotage SNAP 컬럼 및 0 - 100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산의 구배를 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 생성물을 질소 스트림 하에 밤새 건조되게 두어 2-((1S,2S)-2-(에톡시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (188 mg, 0.74 mmol, 80 % 수율)를 담황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.94 min, [MH]+ = 246.2.
중간체 150: (1S,2S)-2-(에톡시메틸)사이클로프로판아민 하이드로클로라이드
Figure pct00182
히드라진 하이드레이트 (0.072 mL, 0.81 mmol)를 에탄올 (7 mL) 중의 2-((1S,2S)-2-(에톡시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (188 mg, 0.77 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 6시간 동안 40℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 얼음 배쓰에서 냉각시키고, 여과하고, 냉각된 에탄올로 세척하였다. 여액을 2M HCl을 사용하여 pH 1로 산성화시키고, 용매를 ~5 mL로 농축시켰다. 잔류하는 백색 침전물을 여과해 내고, DCM으로 세척하고, 여액을 둥근-바닥 플라스크 안에 넣었다. 용매를 진공 하에 제거하고, 상당량의 백색 침전물이 관찰되었다. 이를 여과해 내고, DCM으로 세척하고, 여액의 용매를 진공 하에 제거하였다. 생성물을 질소 스트림 하에 2시간 동안 건조되게 두어 (1R,2R)-2-(에톡시메틸)사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드 염 (21 mg, 0.04 mmol, 5 % 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.70 (dd, J=10.5, 5.9 Hz, 1 H) 3.55 - 3.64 (m, 2 H) 3.40 (dd, J=10.5, 6.6 Hz, 1 H) 2.67 (dt, J=7.6, 3.8 Hz, 1 H) 1.70 - 1.80 (m, 1 H) 1.22 - 1.32 (m, 4 H) 1.04 - 1.11 (m, 1 H). 교환가능한 양성자는 관찰되지 않음.
중간체 151: (±)-2-((트랜스)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온
Figure pct00183
(±)-2-((트랜스)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (150 mg, 0.69 mmol) 및 N1,N1,N8,N8-테트라메틸나프탈렌-1,8-디아민 (443 mg, 2.07 mmol)를 DCM (7 mL) 중에 용해시키고, 트리메틸옥소늄 테트라플루오로보레이트 (320 mg, 2.16 mmol)를 서서히 첨가하고, 반응물을 N2 하에 실온에서 교반하였다. 30분 후, 현탁액을 DCM (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, DCM (2 x 20 mL)으로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 520 mg의 황색 고형물을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-50% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 요망하는 분획을 농축시켜 (±)-2-((트랜스)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (62 mg, 0.24 mmol, 35 % 수율)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 232.2.
중간체 152: (±)-(트랜스)-2-(메톡시메틸)사이클로프로판아민 하이드로클로라이드
Figure pct00184
(±)-2-((트랜스)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (68 mg, 0.29 mmol)을 메틸아민 (에탄올 중 33%, 0.5 mL, 4.02 mmol)에 첨가하고, 이후 용액을 1시간 동안 마이크로웨이브에서 120℃로 가열하였다. 백색 침전물이 형성되었고, 이를 진공 하에 여과하였다. 여액을 진공 (250 mbar, rt) 하에 증발시켰다. 디옥산 중의 4 M HCl (1.25 mL, 5.00 mmol)를 첨가하고, 이를 농축시켜 (±)-(트랜스)-2-(메톡시메틸)사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드 (147 mg, 0.267 mmol, 91 % 수율)를 백색 결정질 고형물로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.35 (br. s., 3 H) 3.27 - 3.33 (m, 1 H) 3.24 (s, 3 H) 3.13 (dd, J=10.5, 7.1 Hz, 1 H) 2.41 - 2.47 (m, 1 H) 1.44 (td, J=6.6, 3.7 Hz, 1 H) 0.93 (ddd, J=9.8, 5.7, 4.0 Hz, 1 H) 0.66 (dt, J=7.6, 6.0 Hz, 1 H)
중간체 153: 2-((1R,2R)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온
Figure pct00185
2-((1R,2R)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (205 mg, 0.94 mmol) 및 N1,N1,N8,N8-테트라메틸나프탈렌-1,8-디아민 (602 mg, 2.81 mmol)를 DCM (10 mL) 중에 용해시키고, 트리메틸옥소늄 테트라플루오로보레이트 (410 mg, 2.77 mmol)를 서서히 첨가하고, 반응물을 N2 하에 실온에서 교반하였다. 1.5시간 후, 현탁액을 DCM (20 mL)과 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, DCM (2 x 20 mL)으로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물 (863 mg)을 황색 고형물로서 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-50% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 요망하는 분획을 농축시켜 2-((1R,2R)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (193 mg, 0.75 mmol, 80 % 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 232.4.
중간체 154: (1R,2R)-2-(메톡시메틸)사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드
Figure pct00186
히드라진 하이드레이트 (0.043 mL, 0.88 mmol)를 에탄올 (7 mL) 중의 2-((1R,2R)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)이소인돌린-1,3-디온 (194 mg, 0.84 mmol)의 현탁액에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 밤새 50℃로 가열하였다. 백색 침전물을 진공 하에 여과하였다. 여액을 디옥산 중의 4M HCl (5 mL, 20.00 mmol)을 사용하여 pH 1로 산성화시키고, 농축시켜 (1R,2R)-2-(메톡시메틸)사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드 (240 mg, 0.84 mmol, 100 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.33 (br. s., 3 H) 3.30 (dd, J=10.5, 6.1 Hz, 1 H) 3.24 (s, 3 H) 3.13 (dd, J=10.6, 7.2 Hz, 1 H) 2.45 (dd, J=8.1, 3.7 Hz, 1 H) 1.44 (dt, J=6.4, 3.4 Hz, 1 H) 0.92 (ddd, J=9.8, 5.7, 4.0 Hz, 1 H) 0.67 (dt, J=7.6, 6.1 Hz, 1 H)
중간체 155: (+/-)-2-((트랜스)-2-(메톡시카보닐)사이클로프로필)아세트산
Figure pct00187
0℃에서 DCM (2 mL) 중의 (+/-)-(트랜스)-메틸 2-(2-(3차-부톡시)-2-옥소에틸)사이클로프로판카복실레이트 (321 mg, 1.50 mmol)의 용액을 TFA (2 mL)로 적가 처리하고, 형성된 혼합물을 이 온도에서 1.5시간 동안 교반하였다. 분취물을 진공 하에 농축시키자, 완전한 전환을 나타냈다. 잔류하는 용액을 진공 하에 농축시키고, Et2O로, 그 다음에 DCM으로 공동 증발시켜 (+/-)-2-((트랜스)-2-(메톡시카보닐)사이클로프로필)아세트산 (200 mg, 1.27 mmol, 84 % 수율)을 매우 연한 갈색 오일로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.72 (s, 3 H) 2.40 - 2.46 (m, 2 H) 1.71 - 1.81 (m, 1 H) 1.55 - 1.61 (m, 1 H) 1.31 - 1.37 (m, 1 H) 0.85 - 0.92 (m, 1 H). 교환가능한 양성자는 관찰되지 않음.
중간체 156: (+/-)-(트랜스)-메틸 2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로판카복실레이트
Figure pct00188
0℃에서 THF (20 mL) 중의 (+/-)-2-((트랜스)-2-(메톡시카보닐)사이클로프로필)아세트산 (967 mg, 6.11 mmol)의 용액을 보란 테트라하이드로푸란 착물 (THF 중 1M, 15.29 mL, 15.29 mmol)로 처리하고, 형성된 혼합물을 이 온도에서 1.5시간 동안 교반하였다. 전체 2시간 후, 형성된 혼합물을 메탄올 (4.95 mL, 122.0 mmol)로 처리하고, 5분 후, 진공 하에 농축시켰다. 50 g 실리카 컬럼을 사용하고, 50% GLOBAL 구배 (헥산 중 AcOEt)의 구배를 사용하는 SP4 플래시 크로마토그래피에 의해 이러한 잔류물의 정제를 수행하여 진공 하에서의 농축 후, - (+/-)-(트랜스)-메틸 2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로판카복실레이트 (1.6 g, 11.10 mmol, 60 % 수율)를 무색 오일로서 얻고, 이후 (+/-)-(트랜스)-메틸 2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로판카복실레이트 (404 mg, 2.80 mmol, 15 % 수율)의 추가의 배치를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.74 (t, J=6.5 Hz, 2 H) 3.65 - 3.69 (m, 3 H) 1.51 - 1.67 (m, 2 H) 1.40 - 1.50 (m, 2 H) 1.17 - 1.24 (m, 1 H) 0.73 - 0.81 (m, 1 H). 교환가능한 양성자는 관찰되지 않음.
중간체 157: (+/-)-(트랜스)-메틸 2-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)사이클로프로판카복실레이트
Figure pct00189
실온에서 DCM (15 mL) 중의 (+/-)-(트랜스)-메틸 2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로판카복실레이트 (404 mg, 2.80 mmol)의 용액을 이미다졸 (286 mg, 4.20 mmol)로, 그 다음에 TBDMS-Cl (507 mg, 3.36 mmol)로, 그 다음에 DMAP (34.2 mg, 0.28 mmol)로 처리하고, 형성된 혼합물을 이 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 백색 침전물이 매우 빨리 형성되었다. 혼합물을 DCM 및 물로 희석하고, 층들을 분리시켰다. 수성 상을 DCM으로 추출하고, 합한 유기물질을 상 분리기를 사용하여 건조시키고, 이후 진공 하에 농축시켜 (+/-)-(트랜스)-메틸 2-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)사이클로프로판카복실레이트 (724 mg, 2.80 mmol, 100 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.65 - 3.71 (m, 5 H) 1.39 - 1.59 (m, 4 H) 1.14 - 1.21 (m, 1 H) 0.90 (s, 9 H) 0.71 - 0.77 (m, 1 H) 0.05 (s, 6 H)
중간체 158: (+/-)-(트랜스)-2-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)사이클로프로판카복실산
Figure pct00190
실온에서 메탄올 (8 mL) 중의 (+/-)-(트랜스)-메틸 2-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)사이클로프로판카복실레이트 (724 mg, 2.80 mmol)의 용액을 NaOH (2.80 mL, 5.60 mmol, 수중 2N)로 처리하고, 형성된 혼합물을 이 온도에서 16시간 동안 교반한 후, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 AcOEt와 물 사이에서 분배시키고, 혼합물을 HCl (2.80 mL, 5.60 mmol, 2M aq.)로 처리하였다. 층들을 분리시키고, 수성 상을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기물질을 MgSO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 (+/-)-(트랜스)-2-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)사이클로프로판카복실산 (549 mg, 2.25 mmol, 80 % 수율)을 담황색 고형물로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.66 - 3.72 (m, 2 H) 1.51 - 1.56 (m, 3 H) 1.42 (ddd, J=8.2, 4.6, 3.5 Hz, 1 H) 1.21 - 1.29 (m, 1 H) 0.90 (s, 9 H) 0.81 - 0.86 (m, 1 H) 0.06 (s, 6 H). 교환가능한 양성자는 관찰되지 않음.
중간체 159: (+/-)-벤질 ((트랜스)-2-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)사이클로프로필)카바메이트
Figure pct00191
톨루엔 (40 mL) 중의 (+/-)-(트랜스)-2-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)사이클로프로판카복실산 (2.31 g, 9.45 mmol)의 용액을 트리에틸아민 (3.95 mL, 28.4 mmol)으로, 그 다음에 디페닐 포스포르아지데이트(2.444 mL, 11.34 mmol)로 처리하고, 이어서 2분 후에 벤질 알코올 (1.966 mL, 18.90 mmol)로 처리하였다. 형성된 혼합물을 110℃에서 교반하였다. 6시간 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc와 물 사이에서 분배시키고, 층들을 분리시켰다. 수성 상을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기물질을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 100 g 실리카 컬럼을 사용하고, 50% GLOBAL 구배 (헥산 중의 EtOAc)의 구배를 사용하는 SP4 플래시 크로마토그래피에 의한 미정제물 (ca. 4 g)의 정제를 수행하여 진공 하에서의 농축 후, (+/-)-벤질 ((트랜스)-2-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)사이클로프로필)카바메이트 (1.57 g, 4.49 mmol, 48 % 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 1.55 min, [MH]+ = 350.3.
중간체 160: (+/-)-(트랜스)-2-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)사이클로프로판아민
Figure pct00192
실온에서 메탄올 (30 mL) 중의 (+/-)-벤질 ((트랜스)-2-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)사이클로프로필)카바메이트 (1.4 g, 4.01 mmol)의 용액을 탄소 상 팔라듐 (300 mg, 0.28 mmol, 10% w/w, 50% 습윤)으로 처리하고, 형성된 현탁액을 이 온도에서 수소의 대기 (1 bar) 하에 16시간 동안 교반하였다. 촉매를 여과해 내고, 메탄올로 헹구었다. 합한 유기물질을 진공 하에 농축시켜 (+/-)-(트랜스)-2-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)사이클로프로판아민 (920 mg, 4.27 mmol, 107 % 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.64 - 3.67 (m, 2 H) 1.40 - 1.55 (m, 2 H) 1.33 (dt, J=13.6, 6.8 Hz, 1 H) 0.91 (s, 9 H) 0.70 - 0.77 (m, 1 H) 0.45 - 0.51 (m, 1 H) 0.29 (dt, J=6.8, 5.3 Hz, 1 H) 0.07 (s, 6 H). 교환가능한 양성자는 관찰되지 않음.
중간체 161: (1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)메탄올, 하이드로클로라이드
Figure pct00193
THF (16 mL) 중의 1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-카복실산 (400 mg, 2.47 mmol, 예를 들어, Sigma-Aldrich로부터 입수가능함)의 용액에, 보란 테트라하이드로푸란 착물 (THF 중 1 M, 4.93 mL, 4.93 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이후, 반응물을 메탄올 (0.998 mL, 24.67 mmol) 및 염산 (1M, 3.08 mL, 6.17 mmol)으로 켄칭시키고, 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 밤새 방치되게 두었다. 침전물이 반응 혼합물 중에 인지되었고, 이를 여과해 내어 (1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)메탄올, 하이드로클로라이드 (306 mg, 1.33 mmol, 54 % 수율)를 오프-화이트 고형물로서 얻고, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.43 min, [MH]+ = 149.1.
중간체 162: 메틸 2-메틸-1H-인돌-4-카복실레이트
Figure pct00194
메탄올 (20.8 mL) 중의 황산 (0.127 mL, 2.26 mmol)에 2-메틸-1H-인돌-4-카복실산 (400 mg, 2.28 mmol, 예를 들어, Apollo Scientific로부터 입수가능함)을 첨가하고, 반응물을 환류(65℃) 하에 18시간 동안 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 중탄산나트륨으로 중화시키고, 진공 하에 증발시키고, 디클로로메탄 (40 mL) 중에 흡수시켰다. 유기 층을 물 (20 mL)로 세척하고, 수성층을 디클로로메탄 (2 x 20 mL)로 역추출하였다. 유기 층을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 오렌지색 고형물로서 요망하는 생성물 - 메틸 2-메틸-1H-인돌-4-카복실레이트 (430 mg, 2.16 mmol, 95 % 수율)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.94 min, [MH]+ = 190.2.
중간체 163: 메틸 2-메틸-1-토실-1H-인돌-4-카복실레이트
Figure pct00195
메틸 2-메틸-1H-인돌-4-카복실레이트 (430 mg, 2.273 mmol)를 질소 하에 0℃에서 DMF (5.7 mL) 중에 용해시켰다. 수소화나트륨 (광유 중 60 % 분산물, 136 mg, 3.41 mmol)을 나누어 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고, 30분 동안 교반하기 전에 10분 동안 0℃에서 교반하였다. 토실-Cl (563 mg, 2.95 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 완료시, 반응물을 0℃로 냉각시키고, 물 (8 mL)로 켄칭시켰다. 침전물이 반응 혼합물 중에서 인지되었고, 이를 여과해 내고, 물 (2 x 10 mL)로 세척하였다. 고형물을 진공 하에 건조시켜 메틸 2-메틸-1-토실-1H-인돌-4-카복실레이트 (680 mg, 1.88 mmol, 83 % 수율)를 갈색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.36 min, [MH]+ = 344.1.
중간체 164: (2-메틸-1-토실-1H-인돌-4-일)메탄올
Figure pct00196
질소 하에 DCM (9.8 mL) 중의 메틸 2-메틸-1-토실-1H-인돌-4-카복실레이트 (675 mg, 1.97 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시키고, DIBAL-H (톨루엔 중 2.34 M, 3.70 mL, 8.65 mmol)를 30분에 걸쳐 적가하고, 반응물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이후, 반응물을 여전히 -78℃에 있을 때 메탄올 (795 μL, 19.66 mmol)로 켄칭시킨 후, 주위 온도로 가온되게 하였다. 반응물을 로쉘 염 용액 (50 mL)으로 희석하고, 16시간 동안 교반하였다. 층들을 분리시키고, 수성층을 디클로로메탄 (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기물질을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 갈색 오일(692 mg)로서 얻었다. 샘플을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 카트리지 상에 로딩하고, 15 - 65 % 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 요망하는 생성물 (2-메틸-1-토실-1H-인돌-4-일)메탄올 (535 mg, 1.61 mmol, 82 % 수율)을 무색 검으로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.12 min, [MH]+ = 316.1.
중간체 165: 4-(브로모메틸)-2-메틸-1-토실-1H-인돌
Figure pct00197
(2-메틸-1-토실-1H-인돌-4-일)메탄올 (254 mg, 0.81 mmol)을 DCM (1611 μL) 중에 용해시키고, 0℃에서 N2 하에 교반하였다. PBr3 (114 μL, 1.21 mmol)을 적가하고, 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이후, 반응물을 수성 중탄산나트륨 (1 mL)으로 켄칭시키고, 물 (25 mL)에 붓고, 디클로로메탄 (3 x 25 mL)으로 추출하였다. 합한 유기물질을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 4-(브로모메틸)-2-메틸-1-토실-1H-인돌 (351 mg, 0.56 mmol, 69.1 % 수율)을 자주색 검으로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.40 min, [MH]+ = 378.1, 380.0.
중간체 166: 퀴놀린-7-일메탄올
Figure pct00198
THF (1 mL) 중의 퀴놀린-7-카복실산 (200 mg, 1.16 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 상업적으로 입수가능함)에, 보란 테트라하이드로푸란 착물 (THF 중 1M, 3.46 mL, 3.46 mmol)을 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 이후, 반응물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고, NaHCO3 용액(10 mL)으로 세척하고, 수성층을 EtOAc (2 x 10 mL)로 추출하고, 유기층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 271 mg의 황색 오일을 얻었다. 이를 플래시 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 25 g 카트리지, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하고, 적합한 분획을 농축시켜 퀴놀린-7-일메탄올 (140 mg, 0.79 mmol, 69 % 수율)을 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.71 min, [MH]+ = 160.1.
중간체 167: 7-(브로모메틸)퀴놀린
Figure pct00199
HBr (수중 48%, 1 mL, 8.84 mmol) 중의 퀴놀린-7-일메탄올 (63 mg, 0.40 mmol)의 용액을 2.5시간 동안 80℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 7-(브로모메틸)퀴놀린 (115 mg, 0.26 mmol, 65 % 수율, 50% 순도)을 갈색 고형물로서 얻었다. 이를 다음 반응에 미정제인 채로 사용하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.60 min, [MH]+ = 222.1, 224.1.
중간체 168: 1-(1-브로모에틸)-3-메톡시벤젠
Figure pct00200
1-(3-메톡시페닐)에탄올 (1000 mg, 6.57 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함)을 DCM (6.6 mL) 중에 용해시키고, 0℃에서 N2 하에 교반하였다. PBr3 (273 μL, 2.89 mmol)을 적가하고, 반응물을 0℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 PBr3 (62.0 μL, 0.657 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온으로 가온시키고, 밤새 교반하였다. 반응물을 다시 0℃로 냉각시키고, 추가 부분의 PBr3 (186 μL, 1.971 mmol)를 첨가하였다. 18.5시간 후, 반응물을 물 (3 mL)로 켄칭시키고, 중탄산나트륨으로 중화시키고, 물을 사용하여 최대 50 mL로 희석하였다. 수성층을 DCM (3 x 20 mL)으로 추출하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 1-(1-브로모에틸)-3-메톡시벤젠 (1384 mg, 5.79 mmol, 88 % 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.18 min, 올바른 [MH]+에서 이온화되지 않음.
중간체 169: 2-(3-(브로모메틸)페닐)에탄올
Figure pct00201
보란 테트라하이드로푸란 착물 (THF 중 1M, 4.37 mL, 4.37 mmol)을 0℃에서 2-(3-(브로모메틸)페닐)아세트산 (500 mg, 2.18 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 상업적으로 입수가능함)의 THF (20 mL) 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온으로 가온되게 하고, 2시간 동안 교반하였다. 과잉 시약을 0℃에서 MeOH를 서서히 첨가함으로써 켄칭시켰다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM에 로딩하고, SNAP 25 g 실리카 카트리지를 사용하고, 0-100% EtOAc/사이클로헥산의 구배로 용리되는 Biotage Isolera 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 진공 하에 농축 후 2-(3-(브로모메틸)페닐)에탄올 (440 mg, 2.05 mmol, 94% 수율)을 갈색 잔류물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.87 min, [MH]+ = 216
중간체 170: 메틸 1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-카복실레이트
Figure pct00202
DMF (10 mL) 중의 메틸 1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-카복실레이트 (501.7 mg, 2.85 mmol; 예를 들어, Matrix Scientific로부터 상업적으로 입수가능함)의 용액을 질소 하에 얼음 배쓰에서 대략 0℃로 냉각시켰다. 이 교반 혼합물에 수소화나트륨 (광유 중 60% 분산물 179.1 mg, 4.48 mmol)을 나누어 첨가하여 밝은 황색 용액을 얻었다. 이를 0℃에서 대략 10분 동안 교반하고, 이후 4-톨루엔설포닐 클로라이드 (700.1 mg, 3.67 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 교반하면서 실온으로 가온되게 하고, 추가 2.25시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 물 (10 mL)을 첨가하고, 이를 추가 5분 동안 교반하였다. 이 혼합물에 포화된 수성 리튬 클로라이드 (25 mL) 및 물 (25 mL)을 첨가하였다. 형성된 탁한 황색 용액을 에틸 아세테이트 (3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 상들을 합하고, 소수성 프릿이 장착된 카트리지를 통해 여과시켰다. 여액을 진공 하에 증발시켜 밝은 황색 고형물; 메틸 1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-카복실레이트 (837.9 mg, 2.54 mmol, 89 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH) Rt = 1.07 min, [MH]+에 대해 m/z = 331
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.62 (d, J=5.4 Hz, 1 H) 8.09 (dd, J=5.6, 0.7 Hz, 1 H) 7.79 (d, J=8.3 Hz, 2 H) 7.73 (d, J=3.7 Hz, 1 H) 7.42 (d, J=3.2 Hz, 1 H) 7.24 - 7.31 (m, 2 H) 4.04 (s, 3 H) 2.37 (s, 3 H)
중간체 171: (1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)메탄올
Figure pct00203
에탄올 (10.0 mL) 및 2-메틸테트라하이드로푸란 (10.0 mL) 중의 메틸 1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-카복실레이트 (836.7 mg, 2.53 mmol) 및 칼슘 클로라이드 (560.1 mg, 5.05 mmol)의 혼합물을 질소 하에 교반하면서 얼음 배쓰에서 0℃로 냉각시켰다. 이 혼합물에 소듐 보로하이드라이드 (148.1 mg, 3.91 mmol)를 나누어 첨가하고, 이후 혼합물을 얼음 배쓰로부터 제거하고, 실온으로 가온되게 하였다. 혼합물을 실온에서 28시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 40℃로 가온시키고, 추가 19시간 동안 교반한 후, 실온으로 냉각되게 하였다. 혼합물에 포화된 수성 암모늄 (10 mL)을 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 형성된 혼합물을 진공 하에 농축시켜 유기 용매를 제거하였다. 이에 염수 (10 mL), 물 (25 mL) 및 에틸 아세테이트 (30 mL)를 첨가하고, 층들을 분리시켰다. 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 30 mL)로 추출하고, 합한 유기 상을 합하고, 물 (2 x 30 mL)로 세척하였다. 유기 상을 소수성 프릿이 장착된 카트리지를 통해 여과하고, 카트리지를 메탄올 (대략 50 mL) 및 디클로로메탄 (대략 30 mL)으로 세척하였다. 여액을 진공 하에 증발시켜 백색 고형물을 얻고, 이를 메탄올 중에 현탁시키고, 20 g Isolute 아미노프로필 이온 교환 컬럼의 상부에 직접 적용하였다. 컬럼을 6 컬럼 용량의 메탄올로 용리시켰다. 요구되는 분획들을 합하고, 질소 스트림 하에 증발시켜 유리질의 오렌지색 고형물; (1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)메탄올 (605.2 mg, 1.60 mmol, 63 % 수율)을 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH) Rt = 0.94 min, [MH]+에 대해 m/z = 303
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.42 (d, J=5.9 Hz, 1 H) 7.84 (d, J=5.9 Hz, 1 H) 7.80 (d, J=8.3 Hz, 2 H) 7.62 (d, J=3.7 Hz, 1 H) 7.26 - 7.31 (m, 2 H) 6.71 (d, J=3.2 Hz, 1 H) 4.95 (s, 2 H) 4.23 (br. s., 1 H) 2.38 (s, 3 H)
중간체 172: 3차-부틸 3-포르밀-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-카복실레이트
Figure pct00204
아세토니트릴 (5 mL) 중의 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카브알데하이드 (304 mg, 2.08 mmol; 예를 들어, Enamine으로부터 상업적으로 입수가능함) 및 디-3차-부틸 디카보네이트 (0.580 mL, 2.50 mmol)의 현탁액에 DMAP (28 mg, 0.23 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 질소 하에 실온에서 6.5시간 동안 교반한 후, 밤새 방치되게 두었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켜 갈색 고형물을 얻고, 이를 디클로로메탄 (3 mL) 중에 용해시키고, 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩시키고, 사이클로헥산 중의 30-50% 에틸 아세테이트의 구배로 용리되는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 요구되는 분획들을 합하고, 진공 하에 농축시킨 후, 잔류물을 디클로로메탄 (6 mL) 중에 용해시키고, 테어드 바이알로 옮기고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 백색 고형물; 3차-부틸 3-포르밀-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-카복실레이트 (420.7 mg, 1.71 mmol, 82 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH) Rt = 0.97 min, [MH]+에 대해 m/z = 247
중간체 173: 3차-부틸 3-(하이드록시메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-카복실레이트
Figure pct00205
에탄올 (10 mL) 중의 3차-부틸 3-포르밀-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-카복실레이트 (420 mg, 1.71 mmol)의 용액을 질소 하에 교반하면서 0℃로 냉각시킨 후, 소듐 보로하이드라이드 (126.6 mg, 3.35 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되게 하고, 1.25시간 동안 교반하였다. 염산 수용액 (2 M, 4 방울)을 첨가하고, 바로 이어서 포화된 중탄산나트륨 용액(1 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 포화된 중탄산나트륨 수용액 (50 mL)과 에틸 아세테이트 (50 mL) 사이에 분배시켰다. 상들을 분리시키고, 수성 상을 추가의 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 상들을 합하고, 소수성 프릿을 함유하는 카트리지를 통해 여과하고, 용매 진공 하에 증발시켰다. 잔류물을 디클로로메탄/메탄올 (10 mL)의 1:1 혼합물에 용해시키고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 및 진공 하에 건조시켜 백색 고형물을 얻고, 이를 디클로로메탄 (5 mL) 중에 용해시키고, 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩시키고, 이를 사이클로헥산 중의 50-100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리되는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 요구되는 분획들을 진공 하에 농축시킨 후, 디클로로메탄/메탄올 (10 mL)의 1:1 혼합물 중에 용해시키고, 테어드 바이알로 옮기고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 백색 고형물; 3차-부틸 3-(하이드록시메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-카복실레이트 (199.7 mg, 0.80 mmol, 47 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 0.72 min, [MH]+에 대해 m/z = 249
중간체 174: 1-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-1H-인돌-3-카브알데하이드
Figure pct00206
DMF (2 mL) 중의 현탁액에 (2-브로모에톡시)(3차-부틸)디메틸실란 (0.088 mL, 0.41 mmol; 예를 들어, Sigma-Aldrich로부터 입수가능함)을 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 질소 하에 20.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 두고, 2일 동안 방치되게 두었다. 포화된 중탄산나트륨 수용액(10 mL)를 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (10 mL)로 추출하였다. 상들을 분리시키고, 수성 상을 추가의 에틸 아세테이트 (2 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상들을 합하고, 소수성 프릿을 함유하는 카트리지를 통해 여과시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 (5 mL) 중에 용해시키고, 테어드 바이알로 옮기고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 오일을 디클로로메탄 (3 mL) 중에 용해시키고, 10 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩시키고, 이를 사이클로헥산 중의 20-70% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시켰다. 요구되는 분획들을 진공 하에 농축시킨 후, 디클로로메탄 (6 mL) 중에 용해시키고, 테어드 바이알로 옮기고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 황색 오일; 1-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-1H-인돌-3-카브알데하이드 (98.8 mg, 0.33 mmol, 95 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 1.38 min, [MH]+에 대해 m/z = 304
중간체 175: (1-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-1H-인돌-3-일)메탄올
Figure pct00207
에탄올 (2 mL) 중의 1-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-1H-인돌-3-카브알데하이드 (97.5 mg, 0.32 mmol)의 용액을 질소 하에 교반하면서 0℃로 냉각시킨 후, 소듐 보로하이드라이드 (25 mg, 0.66 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되게 하고, 6시간 동안 교반하였다. 물 (3 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 포화된 중탄산나트륨 수용액 (10 mL)과 에틸 아세테이트 (10 mL) 사이에서 분배시켰다. 상들을 분리시키고, 수성 상을 추가의 에틸 아세테이트 (2 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 상들을 합하고, 소수성 프릿을 함유하는 카트리지를 통해 여과시키고, 진공 하에 농축시켰다. 형성된 오일을 디클로로메탄/메탄올 (6 mL)의 1:1 혼합물 중에 용해시키고, 테어드 바이알로 옮기고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 황색 오일; (1-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-1H-인돌-3-일)메탄올 (88.5 mg, 0.29 mmol, 90 % 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.74 (d, J=8.1Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.1Hz, 1 H) 7.25 (dt , J=7.1Hz, 1.2Hz, 1 H) 7.18 (s, 1 H) 7.16 (dt , J=7.1Hz, 1.0Hz, 1 H) 4.88 (d, J=4.9Hz, 2 H) 4.23 (t, J=5.6Hz, 2 H) 3.93 (t, J=5.6Hz, 2 H) 1.37 (br t, J=5.4Hz 1 H) 0.86 (s, 9 H) -0.09 (2, 6 H).
중간체 176: 5-브로모-N-에틸-2-메톡시니코틴아미드
Figure pct00208
0℃로 냉각된 DCM (100 mL) 중의 5-브로모-2-메톡시니코틴산 (15 g, 64.6 mmol, 예를 들어, Combiblocks로부터 상업적으로 입수가능함)의 용액에 옥살릴 디클로라이드 (16.98 mL, 194.0 mmol)를 첨가하고, 이어서 0℃에서 DMF (5.01 mL, 64.6 mmol)를 서서히 첨가하였다. 이후, 반응 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물 중 소량의 분취물을 취하고, MeOH로 켄칭시키자, TLC는 SM의 완전한 전환을 나타내었다. 이후, 반응 혼합물을 농축시키고, DCM (150 mL) 중에 재용해시키고, 에탄아민 하이드로클로라이드 (7.91 g, 97 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 후, 물을 첨가하고, 유기물질을 에틸 아세테이트 (2 x 300 mL)로 추출하였다. 유기 층을 분리시키고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 16% EtOAc/n-헥산으로 용리되는 실리카 겔 100-200 컬럼 상의 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 수거된 순수한 분획을 감압 하에 농축시켜 요망하는 생성물 5-브로모-N-에틸-2-메톡시니코틴아미드 (11 g, 41.0 mmol, 64 % 수율)를 오프-화이트 고형물로서 얻었다.
LCMS (10 min RND-FA-10-MIN): Rt = 4.22 min, [MH]+ = 261.
LCMS 조건: RND -FA-10-MIN:
컬럼: Acquity BEH C18 (100 mm x 2.1 mm, 1.7 ㎛)
이동 상: A: ACN 중 0.05% 포름산; B: 수중 0.05% 포름산
시간 (분)/%B: 0/97, 0.4/97, 7.5/2, 9.5/2, 9.6/97, 10/97
컬럼 온도: 35℃, 유량: 0.45 mL/min
중간체 177: 부틸 5-(에틸카바모일)-6-메톡시니코티네이트
Figure pct00209
DMF (100 mL) 중의 5-브로모-N-에틸-2-메톡시니코틴아미드 (11 g, 41.0 mmol)의 용액에 스틸 봄(steel bomb)에서 트리에틸아민 (17.16 mL, 123 mmol), 1-부탄올 (11.98 mL, 205 mmol) 및 잔포스 (1.662 g, 2.87 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 아르곤으로 탈기시켰다. 이후, 팔라듐(II) 아세테이트 (0.921 g, 4.10 mmol)를 첨가하고, 반응물을 일산화탄소 대기 하에 실온에서 교반하였다. 이후, 스틸 봄을 폐쇄하고, 반응물을 일산화탄소 대기 (100 psi) 하에 110℃에서 18시간 동안 교반하였다. 냉각 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여액을 에틸 아세테이트 & 냉각수 사이에서 분배시켰다. 유기 상을 포화된 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 25% EtOAc/n-헥산으로 용리되는 실리카 겔 100-200 컬럼 상의 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 수거된 순수한 분획을 감압 하에 농축시켜 요망하는 생성물 - 부틸 5-(에틸카바모일)-6-메톡시니코티네이트 (4.4 g, 12.57 mmol, 30.6 % 수율)를 얻었다.
LCMS (10 min RND-ABC-10-MIN-V): Rt = 4.70 min, [MH]+ = 281.1.
LCMS 조건: RND -ABC-10-MIN-V
컬럼: Xbridge C18 (50 mm x 4.6 mm, 2.5 ㎛),
이동 상: A: 수중 5 mM 중탄산암모늄(pH 10); B: ACN
시간 (분)/%ACN: 0/5, 0.5/5, 1/15, 6/98, 9/98, 9.5/5, 10/5
컬럼 온도: 35℃, 유량: 1.3 mL
중간체 178: 5-(에틸카바모일)-6-메톡시니코틴산
Figure pct00210
THF (40 mL), 아세토니트릴 (40 mL) 및 물 (40 mL) 중의 부틸 5-(에틸카바모일)-6-메톡시니코티네이트 (4.4 g, 12.56 mmol)의 용액에 실온에서 LiOH (0.601 g, 25.1 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 후, 용매를 진공 하에 증발시키고, 물을 첨가하고, 반응물을 1N HCl(pH = 2가 될 때까지)로 산성화시킨 후, 에틸 아세테이트 (2 x 200 mL)로 추출하였다. 유기 상을 분리시키고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 얻었으며, 이를 n-펜탄(2 x 10 mL)으로 세척하여 순수한 생성물 - 5-(에틸카바모일)-6-메톡시니코틴산 (3 g, 12.13 mmol, 97 % 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (10 min RND-FA-10-MIN): Rt = 2.83 min, [MH]+ = 225.1.
LCMS 조건: RND -FA-10-MIN:
컬럼: Acquity BEH C18 (100 mm x 2.1 mm, 1.7 ㎛)
이동 상: A: ACN 중 0.05% 포름산; B: 수중 0.05% 포름산
시간 (분)/%B: 0/97, 0.4/97, 7.5/2, 9.5/2, 9.6/97, 10/97
컬럼 온도: 35℃, 유량: 0.45 mL/min
중간체 179: (+/-)-N3-에틸-2-메톡시-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00211
0℃에서 질소 하에 교반된 DMF (24 mL) 중의 5-(에틸카바모일)-6-메톡시니코틴산 (2.8 g, 11.24 mmol)의 용액에 DIPEA (5.89 mL, 33.7 mmol) 및 HATU (8.55 g, 22.48 mmol)를 첨가하고, 반응물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. (+/-)-(트랜스)-2-메틸사이클로프로판아민 (0.959 g, 13.49 mmol, 예를 들어, ChemBridge corporation로부터 상업적으로 입수가능함)을 0℃에서 반응 혼합물에 첨가하고, 반응물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 종결 후, 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (2 x 250 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 농축시켜 (+/-)-N3-에틸-2-메톡시-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)피리딘-3,5-디카복스아미드 (6 g, 8.22 mmol, 73 % 수율)를 얻었다. 이를 정제 없이 다음 단계에 취하였다.
LCMS (10 min RND-FA-10-MIN): Rt = 3.36 min, [MH]+ = 278.1.
LCMS 조건: RND -FA-10-MIN:
컬럼: Acquity BEH C18 (100 mm x 2.1 mm, 1.7 ㎛)
이동 상: A: ACN 중 0.05% 포름산; B: 수중 0.05% 포름산
시간 (분)/%B: 0/97, 0.4/97, 7.5/2, 9.5/2, 9.6/97, 10/97
컬럼 온도: 35℃, 유량: 0.45 mL/min
중간체 180: (+/-)-N3-에틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00212
아세토니트릴 (30 mL) 중의 (+/-)-N3-에틸-2-메톡시-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)피리딘-3,5-디카복스아미드 (6 g, 8.22 mmol), TMSCl (3.15 mL, 24.66 mmol) 및 아이오드화나트륨 (3.70 g, 24.66 mmol)의 용액을 질소 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 종결 후, 반응 혼합물을 EtOAc (300 mL)로 희석하고, 소듐 티오설페이트 용액 (50 mL)으로 세척하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중 0-10% MeOH로 용리되는 100-200 메쉬 실리카 겔 컬럼을 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 수거하고, 농축시키고, 건조시켜 (+/-)-N3-에틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (2 g, 7.22 mmol, 88 % 수율)를 오프 화이트 고형물로서 얻었다.
LCMS (4.5 min RND-FA-4.5-MIN): Rt = 1.37 min, [MH]+ = 264.3.
LCMS 조건: RND -FA-4.5-MIN
컬럼: Acquity BEH C18 (50 mm x 2.1 mm, 1.7 ㎛)
이동 상: A: 수중 0.05% 포름산; B: ACN 중 0.05% 포름산
시간 (분)/%B: 0/3, 0.4/3, 3.2/98, 3.8/98, 4.2/3, 4.5/3
컬럼 온도: 35℃, 유량: 0.6 mL/min
중간체 181: 2-(벤질옥시)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00213
2,4,6-트리클로로페닐 6-(벤질옥시)-5-(메틸카바모일)니코티네이트 (1022 mg, 2.19 mmol), (1S,2S)-2-메틸사이클로프로판아민 하이드로클로라이드 (260 mg, 2.42 mmol), DMAP (39 mg, 0.319 mmol), 트리에틸아민 (0.92 mL, 6.60 mmol) 및 THF (10 mL)를 45℃에서 N2 하에 교반하였다. 4시간 동안 교반한 후, DMAP (22 mg, 0.18 mmol) 및 트리에틸아민 (0.3 mL, 2.15 mmol)를 첨가하고, 반응물을 밤새 교반하였다. 이후, 현탁액을 EtOAc (20 mL)와 중탄산나트륨 용액(20 mL) 사이에서 분배시키고, EtOAc (20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물 (1.57 g)을 크림색 고형물로서 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 100 g 카트리지, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 요망하는 분획을 농축시켜 2-(벤질옥시)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)피리딘-3,5-디카복스아미드 (321 mg, 0.85 mmol, 39 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.98 min, [MH]+ = 340.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.67 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 8.53 (br. d, J=3.9 Hz, 1 H) 8.46 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 8.24 - 8.32 (m, 1 H) 7.44 - 7.50 (m, 2 H) 7.38 (t, J=7.2 Hz, 2 H) 7.28 - 7.34 (m, 1 H) 5.55 (s, 2 H) 2.80 (d, J=4.6 Hz, 3 H) 2.51 - 2.57 (m, 1 H) 1.06 (d, J=6.1 Hz, 3 H) 0.87 - 0.98 (m, 1 H) 0.74 (dt, J=8.6, 4.6 Hz, 1 H) 0.48 (dt, J=7.3, 5.5 Hz, 1 H)
중간체 182: N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00214
2-(벤질옥시)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)피리딘-3,5-디카복스아미드 (320 mg, 0.94 mmol)를 TFA (3 mL, 38.9 mmol) 중에서 90℃에서 교반하였다. 1시간 후, 샘플을 농축시켜 미정제 생성물 (633 mg)을 적색 오일로서 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-50% (EtOAc 중 25% EtOH)/EtOAc으로 용리)에 의해 정제하였다. 요망하는 분획을 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (297 mg, 0.94 mmol, 100 % 수율)를 크림색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.54 min, [MH]+ = 250.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.77 (br. d, J=5.9 Hz, 1 H) 9.37 - 9.45 (m, 1 H) 8.76 (d, J=2.9 Hz, 1 H) 8.42 (d, J=3.9 Hz, 1 H) 8.18 (dd, J=6.8, 2.7 Hz, 1 H) 2.83 (d, J=4.6 Hz, 3 H) 2.47 - 2.53 (obs, 1 H) 1.04 (d, J=6.1 Hz, 3 H) 0.84 - 0.95 (m, 1 H) 0.71 (dt, J=8.9, 4.5 Hz, 1 H) 0.46 (dt, J=7.3, 5.5 Hz, 1 H)
중간체 183: (S*)-부틸 1-(1-(3-메톡시페닐)에틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00215
부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (200 mg, 0.79 mmol) 및 탄산칼륨 (219 mg, 1.59 mmol)을 질소 하에 실온에서 DMF (4.0 mL) 중에서 교반한 후, 1-(1-브로모에틸)-3-메톡시벤젠 (286 mg, 1.33 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 3:1 염수:물 (50 mL)에 붓고, 수성층을 에틸 아세테이트 (3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 DMF 중의 오렌지색 용매화물로서 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 카트리지 상에 로딩하고, 15 - 75 % 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 요망하는 생성물 (+/-)-부틸 1-(1-(3-메톡시페닐)에틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (268 mg, 0.66 mmol, 83 % 수율)를 오렌지색 검으로서 얻었다.
라세메이트 (257 mg)를 가열하면서 EtOH (~8-10 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 컬럼 (10% EtOH (0.2% v/v 이소프로필아민을 지닌)/헵탄 (0.2% v/v 이소프로필아민을 지닌), 유량 = 42.5 mL/min (압력: 83 bar), 검출: UV 280 nm에서의 다이오드 어레이 (밴드폭 140 nm, 기준 400 nm, 밴드폭 100 nm), 컬럼 키랄팍 AD-H (250 x 30 mm, 5 ㎛)을 Rheodyne 밸브를 통해 0.3 mL 수동 주입을 하였다. 19-21분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 22-24분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 진공 하에 농축시킨 후, EtOH 중에 흡수시키고, 질소 가스의 스트림 하에 건조되게 블로운 다운시킨 칭량된 플라스크로 옮기었다.
피크 1에 상응하는 분획을 수거하여 중간체 183 (102 mg, 0.25 mmol, 32 %)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.22 min, [MH]+ = 387.2.
또한, 피크 2에 상응하는 분획을 수거하여 요망하지 않는 거울상이성질체 (115 mg, 0.28 mmol, 36 % 수율)를 얻었다.
중간체 184: (S*)-1-(1-(3-메톡시페닐)에틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00216
(S*)-부틸 1-(1-(3-메톡시페닐)에틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (100 mg, 0.26 mmol)를 1,4-디옥산 (863 μL) 중에 현탁시켰다. 물 (863 μL)을 첨가하고, 이어서 수산화리튬 (17 mg, 0.71 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 2M HCl로 중화시키고, 진공 하에 증발시켜 (S*)-1-(1-(3-메톡시페닐)에틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (121 mg, 0.22 mmol, 85 % 수율)을 백색 고형물로서 얻었다. 순도는 잔류물 중 NaCl의 예상된 양을 기준으로 하여 60%로 추정되었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.87 min, [MH]+ = 331.1.
중간체 185: 부틸 1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00217
부틸 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (2 g, 7.93 mmol), 1-(브로모메틸)-3-메톡시벤젠 (1.6 mL, 11.43 mmol), 탄산칼륨 (2.2 g, 15.92 mmol) 및 DMF (10 mL)를 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 LiCl (20 mL)로 세척하고, EtOAc (40 mL)와 물 (40 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성 상을 EtOAc (2 x 40 mL)로 추출하고, 합한 유기물질을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물 (~2.49 g)을 오렌지색 고형물로서 얻었다. 이를 SiO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 100 g 카트리지, 10-75% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 부틸 1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (2.01 g, 4.86 mmol, 61 % 수율)를 오프 화이트 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.16 min, [MH]+ = 373.2.
중간체 186: 부틸 1-(3-하이드록시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00218
DCM (8 mL) 중의 부틸 1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (500 mg, 1.34 mmol)를 N2 하에 0℃로 냉각시키고, BBr3 (DCM 중 1M, 6.71 mL, 6.71 mmol)를 적가하였다. 10분 후, 반응물을 물 (40 mL)로 켄칭시키고, DCM (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 이후, 유기 추출물을 포화된 NaHCO3 용액으로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 농축시켜 부틸 1-(3-하이드록시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (328 mg, 0.82 mmol, 61 % 수율)를 오프-화이트 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.00 min, [MH]+ = 359.2.
중간체 187: (S)-부틸 1-(3-(2-하이드록시프로폭시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트
Figure pct00219
부틸 1-(3-하이드록시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (100 mg, 0.28 mmol), (S)-2-메틸옥시란 (0.098 mL, 1.40 mmol, 예를 들어, Alfa Aesar로부터 상업적으로 입수가능함) 및 Et3N (0.078 mL, 0.56 mmol)의 혼합물을 DMF (1 mL) 중에 용해시키고, 반응 혼합물을 150℃에서 30분 동안 2 mL 마이크로웨이브 바이알에서 가열하였다.
별도로, 부틸 1-(3-하이드록시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (35 mg, 0.10 mmol), (S)-2-메틸옥시란 (0.034 mL, 0.49 mmol) 및 Et3N (0.027 mL, 0.20 mmol)의 혼합물을 DMF (0.5 mL) 중에 용해시키고, 반응 혼합물을 150℃에서 30분 동안 2 mL 마이크로웨이브 바이알에서 가열하였다.
두 반응 혼합물을 합하고, 에틸 아세테이트와 물 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 분리시키고, 수성 층을 추가로 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고(Na2SO4), 농축시켜 미정제 생성물 (148 mg)을 담황색로서 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 10 g 카트리지, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 (S)-부틸 1-(3-(2-하이드록시프로폭시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (115 mg, 0.25 mmol, 89 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.84 (d, J=2.4 Hz, 1 H) 8.64 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 7.26 (t, J=7.9 Hz, 1 H) 6.86 - 6.97 (m, 3 H) 5.27 (s, 2 H) 4.28 (t, J=6.6 Hz, 2 H) 4.01 - 4.13 (m, 1 H) 3.79 - 3.89 (m, 2 H) 2.93 (s, 3 H) 1.66 - 1.77 (m, 2 H) 1.37 - 1.50 (m, 2 H) 1.24 (d, J=6.6 Hz, 3 H) 0.96 (t, J=7.5 Hz, 3 H). 교환가능한 양성자는 관찰되지 않았음.
중간체 188: (S)-1-(3-(2-하이드록시프로폭시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00220
(S)-부틸 1-(3-(2-하이드록시프로폭시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (115 mg, 0.28 mmol)를 1,4-디옥산 (3 mL) 중에 용해시켰다. 물 (3 mL)을 첨가하고, 이어서 LiOH (14 mg, 0.59 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 디옥산을 진공 하에 제거하고, 아세트산 (0.032 mL, 0.55 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 분리시키고, 수성 층을 추가의 에틸 아세테이트 (4 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고(Na2SO4), 농축시켜 (S)-1-(3-(2-하이드록시프로폭시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (106 mg, 0.27 mmol, 96 % 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.72 min, [MH]+ = 361.2.
중간체 189: 1-((1-(3차-부톡시카보닐)인돌린-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산
Figure pct00221
3차-부틸 4-((5-(부톡시카보닐)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)인돌린-1-카복실레이트 (380 mg, 0.79 mmol)를 THF (3 mL) 및 물 (3 mL) 중에 흡수시켰다. LiOH (37.6 mg, 1.57 mmol)를 용액에 첨가하고, 반응물을 밤새 실온에서 교반하였다. HCl (2M, aq.)를 첨가하여 용액을 ~pH 5로 산성화시켰다. 이후, 반응 혼합물을 DCM을 사용하여 추출하였다. 유기 층을 합하고, 소수성 프릿을 통과시키고, 진공 하에 농축시켜 1-((1-(3차-부톡시카보닐)인돌린-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (312 mg, 0.73 mmol, 93% 수율)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.07 min, [MH]+ = 428
중간체 190: N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((2-메틸-1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00222
실온에서 질소 하에 DMF (2.3 mL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (60 mg, 0.26 mmol) 및 탄산칼륨 (106 mg, 0.77 mmol)의 교반된 용액에 DMF (2.3 mL) 중의 용액으로서 4-(브로모메틸)-2-메틸-1-토실-1H-인돌 (322 mg, 0.51 mmol, 60% wt)을 첨가하고, 반응물을 3시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 탄산칼륨 (70.5 mg, 0.51 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 19시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (20 mg, 0.09 mmol) 및 탄산칼륨 (35.3 mg, 0.26 mmol)을 첨가하였다. 22.5시간 후, 추가 부분의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (30 mg, 0.13 mmol)를 첨가하였다. 24시간 후, 반응 혼합물을 포화된 수성 LiCl (25 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (20 mL, 이후 2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 부분을 염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (379 mg)을 얻었다. 샘플을 디클로로메탄 중의 상태로 50 g SNAP 카트리지 상에 로딩하고, 0 - 50 % (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르와 함께 초음파 처리하고, 다시 진공 하에 증발시켜 N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((2-메틸-1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (78 mg, 0.14 mmol, 30 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.17 min, [MH]+ = 533.4.
중간체 191: (+/-)-N3-에틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00223
DMF (2 mL) 중의 (+/-)-N3-에틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (100 mg, 0.36 mmol), 4-(브로모메틸)-1-토실-1H-인돌 (201 mg, 0.54 mmol) 및 K2CO3 (100 mg, 0.72 mmol)의 용액을 질소 하에 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 16시간 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 이를 DCM 중의 0-5% MeOH로 용리되는 100-200 메쉬 실리카 겔 컬럼을 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 수거하고, 농축시키고, 건조시켜 (+/-)-N3-에틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (150 mg, 0.24 mmol, 67 % 수율)를 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (5.5 min RND-FA-5-5 -MIN-50): Rt = 3.10 min, [MH]+ = 547.3.
LCMS 조건: RND -FA-5-5 -MIN-50
컬럼: Acquity BEH C18 (50 mm x 2.1 mm, 1.7 ㎛)
이동 상: B: ACN 중 0.05% 포름산; A: 수중 0.05% 포름산
시간 (분)/%A: 0/97, 0.4/97, 4.0/2, 4.5/2, 5/97, 5.5/97
컬럼 온도: 35℃, 유량: 0.45 mL/min
중간체 192: (+/-)-3차-부틸 4-((3-(에틸카바모일)-5-(((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)인돌린-1-카복실레이트
Figure pct00224
질소 하에 실온에서 교반된, 톨루엔 (5 mL) 중의 (+/-)-N3-에틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (150 mg, 0.541 mmol), 트리페닐포스핀 (426 mg, 1.624 mmol) 및 DIAD (0.316 mL, 1.624 mmol)의 용액에 3차-부틸 4-(하이드록시메틸)인돌린-1-카복실레이트 (215 mg, 0.812 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, DCM (2 x 100 mL)으로 추출하였다. 유기 상을 포화된 염수 (25 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켜 (+/-)-3차-부틸 4-((3-(에틸카바모일)-5-(((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)인돌린-1-카복실레이트 (400 mg, 0.259 mmol, 47.8 % 수율)를 갈색 고형물로서 얻었다. 이 화합물을 다음 반응에서 미정제인 채로 사용하였다.
LCMS (5.5 min RND-FA-5-5 -MIN-50): Rt = 3.06 min, [MH]+ = 395.2.
LCMS 조건: RND -FA-5-5 -MIN-50
컬럼: Acquity BEH C18 (50 mm x 2.1 mm, 1.7 ㎛)
이동 상: B: ACN 중 0.05% 포름산; A: 수중 0.05% 포름산
시간 (분)/%A: 0/97, 0.4/97, 4.0/2, 4.5/2, 5/97, 5.5/97
컬럼 온도: 35℃, 유량: 0.45 mL/min
중간체 193: (+/-)-N3-에틸-1-(3-메톡시벤질)-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00225
DMF (2 mL) 중의 (+/-)-N3-에틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (300 mg, 1.08 mmol), 1-(브로모메틸)-3-메톡시벤젠 (326 mg, 1.62 mmol) 및 K2CO3 (299 mg, 2.17 mmol)의 용액을 질소 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 EtOAc (100 mL)로 희석하고, 물 (50 mL)로 세척하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 이를 100-200 메쉬 실리카 겔 컬럼을 사용하고, DCM 중의 0-10% MeOH로 용리되는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 수거하고, 농축시키고, 건조시켜 (+/-)-N3-에틸-1-(3-메톡시벤질)-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (320 mg, 0.69 mmol, 64 % 수율)를 오프 화이트 고형물로서 얻었다.
LCMS (5.5 min RND-FA-5-5 -MIN-50): Rt = 2.54 min, [MH]+ = 384.1.
LCMS 조건: RND -FA-5-5 -MIN-50
컬럼: Acquity BEH C18 (50 mm x 2.1 mm, 1.7 ㎛)
이동 상: B: ACN 중 0.05% 포름산; A: 수중 0.05% 포름산
시간 (분)/%A: 0/97, 0.4/97, 4.0/2, 4.5/2, 5/97, 5.5/97
컬럼 온도: 35℃, 유량: 0.45 mL/min
중간체 194: (+/-)-N3-에틸-1-(3-하이드록시벤질)-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00226
-10℃에서 질소 하에 교반된 DCM (2 mL) 중의 (+/-)-N3-에틸-1-(3-메톡시벤질)-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (320 mg, 0.69 mmol)의 용액에 BBr3 (1.385 mL, 1.39 mmol, DCM 중 1M)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, DCM (2 x 100 mL)으로 추출하였다. 유기 상을 포화된 염수 (25 mL), 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 얻었다. 이를 100-200 메쉬 실리카 겔 컬럼을 사용하고, DCM 중의 0-10% MeOH로 용리되는, 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 수거하고, 농축시키고, 건조시켜 (+/-)-N3-에틸-1-(3-하이드록시벤질)-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (150 mg, 0.40 mmol, 57 % 수율)를 오프 화이트 고형물로서 얻었다.
LCMS (5.5 min RND-FA-5-5 -MIN-50): Rt = 2.19 min, [MH]+ = 370.1.
LCMS 조건: RND -FA-5-5 -MIN-50
컬럼: Acquity BEH C18 (50 mm x 2.1 mm, 1.7 ㎛)
이동 상: B: ACN 중 0.05% 포름산; A: 수중 0.05% 포름산
시간 (분)/%A: 0/97, 0.4/97, 4.0/2, 4.5/2, 5/97, 5.5/97
컬럼 온도: 35℃, 유량: 0.45 mL/min
중간체 195: (+/-)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N5-((트랜스)-2-하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00227
1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (120 mg, 0.35 mmol)을 DMF (5 mL) 중에 흡수시키고, HATU (145 mg, 0.38 mmol)를 첨가하고, 이어서 DIPEA (0.121 mL, 0.69 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되게 한 후, (+/-)-((트랜스)-2-아미노사이클로프로필)메탄올 (30.2 mg, 0.35 mmol)를 첨가하고, 반응물을 밤새 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 (+/-)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N5-((트랜스)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (51 mg, 0.12 mmol, 35% 수율)를 오렌지색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.62 min, [MH]+ = 416
중간체 196: (+/-)-N5-((트랜스)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00228
1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (150 mg, 0.43 mmol)을 DMF (4 mL) 중에 흡수시키고, HATU (181 mg, 0.48 mmol)를 첨가하고, 이어서 DIPEA (0.151 mL, 0.87 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되게 한 후, (+/-)-(트랜스)-2-에톡시사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드 (65.6 mg, 0.48 mmol)를 첨가하고, 반응물을 밤새 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 (+/-)-N5-((트랜스)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (130 mg, 0.30 mmol, 70% 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.74 min, [MH]+ = 430
중간체 197: N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1-(3-(2-옥소에틸)벤질)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00229
Dess-Martin 페리오디난 (237 mg, 0.56 mmol)을 0℃에서 DCM (4 mL) 중의 1-(3-(2-하이드록시에틸)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (165 mg, 0.43 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되게 하고, 밤새 교반하였다. 반응물을 sat. 중탄산나트륨 용액으로 켄칭시키고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 소수성 프릿을 통과시키고, 진공 하에 농축시켜 미정제 N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1-(3-(2-옥소에틸)벤질)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (150 mg, 0.20 mmol, 46% 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.78 min, [MH]+ = 382
중간체 198: N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(3-(2-옥소에틸)벤질)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00230
Dess-Martin 페리오디난 (149 mg, 0.35 mmol)을 0℃에서 DCM (2.5 mL) 중의 N5-사이클로프로필-1-(3-(2-하이드록시에틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (100 mg, 0.27 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되게 하고, 48시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭시키고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 소수성 프릿을 통과시키고, 진공 하에 농축시켜 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(3-(2-옥소에틸)벤질)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (100 mg, 0.27 mmol, 101% 수율)를 백색 고형물로서 얻고, 이를 다음 단계에서 미정제인 채로 사용하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.70 min, [MH]+ = 368
중간체 199: (+/-)-3차-부틸 4-((5-(((트랜스)-2-에틸사이클로프로필)카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)인돌린-1-카복실레이트
Figure pct00231
1-((1-(3차-부톡시카보닐)인돌린-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (70 mg, 0.16 mmol)을 DMF (1.5 mL) 중에 흡수시키고, HATU (68.5 mg, 0.18 mmol), 그 다음에 DIPEA (0.086 mL, 0.491 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되게 한 후, (+/-)-트랜스-2-에틸사이클로프로판아민 (15.34 mg, 0.18 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함)를 첨가하고, 반응물을 밤새 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, EtOAc (15 mL)와 시트르산 용액 (aq, 15 mL, 10% w/v) 사이에서 분배시켰다. 이후, EtOAc 층을 포화된 NaHCO3 (aq), 물 및 염수로 세척하였다. EtOAc 층을 진공 하에 농축시키고, DCM에 로딩하고, SNAP 10 g 실리카 카트리지를 사용하고, 0-70% EtOAc/사이클로헥산의 구배로 용리되는 Biotage Isolera 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 (+/-)-3차-부틸 4-((5-(((트랜스)-2-에틸사이클로프로필)카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)인돌린-1-카복실레이트 (54mg, 0.11 mmol, 67% 수율)를 무색 잔류물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.21 min, [MH]+ = 495
중간체 200: 3차-부틸 (트랜스-4-(2-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)에틸)사이클로헥실)카바메이트
Figure pct00232
DMF (1 mL) 중의 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (50.4 mg, 0.18 mmol), HATU (87.3 mg, 0.23 mmol) 및 3차-부틸 (트랜스-4-(2-아미노에틸)사이클로헥실)카바메이트 (52.3 mg, 0.22 mmol; Matrix Scientific로부터 상업적으로 입수가능함)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.061 mL, 0.35 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 질소 스트림 하에 농축시켰다. 잔류물을 디메틸설폭사이드/메탄올의 1:1 혼합물로 2 mL가 되게 하고, MDAP (2 x 1 mL 주입; 고 pH)에 의해 직접 정제하였다. 두 주입물로부터 요구되는 분획을 합하고, 진공 하에 농축시킨 후, 디클로로메탄/메탄올 (10 mL)의 1:1 혼합물 중에 용해시키고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 백색 고형물; 3차-부틸 (트랜스-4-(2-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)에틸)사이클로헥실)카바메이트 (78.4 mg, 0.15 mmol, 87 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 1.16 min, [MH]+에 대해 m/z = 511
중간체 201: 3차-부틸 (시스-4-(2-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)에틸)사이클로헥실)카바메이트
Figure pct00233
DMF (1 mL) 중의 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (51 mg, 0.18 mmol), HATU (89.2 mg, 0.24 mmol) 및 3차-부틸 시스-4-(2-아미노에틸)사이클로헥실)카바메이트 (52.2 mg, 0.22 mmol, 예를 들어, Matrix Scientific로부터 상업적으로 입수가능함)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.062 mL, 0.36 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 질소 스트림 하에 농축시켰다. 잔류물을 디메틸설폭사이드로 1 mL가 되도록 만들고, MDAP (1 mL 주입; 고 pH)에 의해 직접 정제하였다. 요구되는 분획들을 합하고, 진공 하에 농축시킨 후, 디클로로메탄/메탄올 (10 mL)의 1:1 혼합물 중에 용해시키고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 백색 고형물; 3차-부틸 (시스-4-(2-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)에틸)사이클로헥실)카바메이트 (74.4 mg, 0.15 mmol, 82 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 1.16 min, [MH]+에 대해 m/z = 511
중간체 202: N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1-((1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00234
마이크로웨이브 바이알(마이크로웨이브 바이알) 내 톨루엔 (1.5 mL) 중의 (1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)메탄올 (143.5 mg, 0.38 mmol)과 N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (77.1 mg, 0.31 mmol)의 혼합물에 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (0.162 mL, 0.62 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, 혼합물을 총 40분 동안 마이크로웨이브 반응기에서 100℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 질소 스트림 하에 증발시켜 점성의 검정색 오일을 얻고, 이를 디클로로메탄 (대략 3 mL) 중에 재용해시키고, 25 g SNAP 카트리지의 상부에 직접 적용시키고, SP4 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 컬럼을 사이클로헥산 중의 0-40% 에틸 아세테이트:에탄올 (3:1)의 구배로 용리시켰다. 요구되는 분획들을 합하고, 진공 하에 증발시켜 오렌지색 검을 얻고, 이를 DMSO (대략 1 mL) 중에 재용해시키고, 추가로 MDAP (1 mL 주입, 고 pH)에 의해 정제하였다. 주입 바이알 내 잔류하는 샘플 (대략 0.5 mL)을 DMSO 중의 1 mL로 만들고, 또한 MDAP (1 mL 주입, 고 pH)에 의해 정제하였다. 두 주입으로부터 요구되는 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 무색 검; N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1-((1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (36.5 mg, 0.07 mmol, 22 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH) Rt = 1.09 min, [MH]+에 대해 m/z = 534
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9.48 (br. d, J=3.4 Hz, 1 H) 8.84 (br. s., 1 H) 8.64 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 8.36 (d, J=5.6 Hz, 1 H) 7.74 - 7.92 (m, 3 H) 7.63 (d, J=3.4 Hz, 1 H) 7.28 (d, J=8.3 Hz, 2 H) 6.99 - 7.19 (m, 1 H) 6.89 (d, J=3.2 Hz, 1 H) 5.54 (s, 2 H) 2.90 (d, J=4.2 Hz, 3 H) 2.48 - 2.57 (m, 1 H) 2.37 (s, 3 H) 1.10 (d, J=5.9 Hz, 3 H) 0.86 - 1.00 (m, 1 H) 0.68 - 0.79 (m, 1 H) 0.54 - 0.65 (m, 1 H)
중간체 203: 메틸 3-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)벤조에이트
Figure pct00235
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (42.1 mg, 0.18 mmol), 메틸 3-(브로모메틸)벤조에이트 (45.9 mg, 0.20 mmol; 예를 들어, Alfa Aesar로부터 상업적으로 입수가능함) 및 탄산칼륨 (52.1 mg, 0.38 mmol)을 무수 DMF (1 mL) 중에서 질소 하에 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (5 mL)과 에틸 아세테이트 (5 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성 상을 추가의 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하고, 합한 유기 상을 소수성 프릿이 장착된 카트리지를 통해 여과시켰다. 용매를 질소 스트림 하에 증발시키고, 잔류물을 디클로로메탄/메탄올 (6 mL)의 1:1 혼합물 중에 용해시키고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 백색 고형물; 메틸 3-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)벤조에이트 (65.5 mg, 0.17 mmol, 95 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 0.82 min, [MH]+에 대해 m/z = 384
중간체 204: 3차-부틸 3-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-카복실레이트
Figure pct00236
마이크로웨이브 바이알 내 톨루엔 (1.5 mL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (53 mg, 0.23 mmol) 및 3차-부틸 3-(하이드록시메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-카복실레이트 (69.2 mg, 0.28 mmol)의 현탁액에 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (0.186 mL, 0.71 mmol; 예를 들어, TCI로부터 상업적으로 입수가능함)을 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, 총 60분 동안 마이크로웨이브 반응기에서 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 (2 mL)을 사용하여 바이알에 옮기고, 질소 스트림 하에 농축시켜 암갈색 오일을 얻었다. 이를 디메틸설폭사이드/메탄올 (3 mL)의 1:1 혼합물로 3 mL가 되게 하고, MDAP (3 x 1 mL 주입, 고 pH)에 의해 직접 정제하였다. 요구되는 분획들을 합하고, 진공 하에 농축시킨 후, 디클로로메탄/메탄올 (10 mL)의 1:1 혼합물 중에 용해시키고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 황색 고형물; 3차-부틸 3-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-카복실레이트 (44.3 mg, 0.10 mmol, 42 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 0.90 min, [MH]+에 대해 m/z = 466
중간체 205: 1-((1-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-1H-인돌-3-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00237
마이크로웨이브 바이알 내 톨루엔 (1.5 mL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (57 mg, 0.24 mmol) 및 (1-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-1H-인돌-3-일)메탄올 (85.1 mg, 0.28 mmol)의 현탁액에 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (0.200 mL, 0.76 mmol; 예를 들어, TCI로부터 상업적으로 입수가능함)을 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, 마이크로웨이브 반응기에서 30분 동안 80℃로 가열한 후, 마이크로웨이브 반응기에서 30분 동안 120℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 (1 mL)을 사용하여 바이알로 옮기고, 질소 스트림 하에 농축시켜 암갈색 오일을 얻었다. 이를 디메틸설폭사이드/메탄올의 1:1 혼합물로 3 mL가 되게 하고, MDAP (1 x 3 mL 주입: 고 pH)에 의해 직접 정제하였다. 요구되는 분획들을 질소 스트림 하에 농축시킨 후, 디클로로메탄/메탄올 (2 x 4 mL)의 1:1 혼합물 중에 용해시키고, 합하고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 옅은 갈색 고형물; 1-((1-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-1H-인돌-3-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (34.3 mg, 0.07 mmol, 27 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH) Rt = 1.37 min, [M-H]-에 대해 m/z = 521,
중간체 206: (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00238
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (400 mg, 1.230 mmol)을 DMF (5 mL) 중에 흡수시켰다. DIPEA (0.644 mL, 3.69 mmol), 그 다음에 HATU (701 mg, 1.84 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. (+/-)-(트랜스)-2-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)사이클로프로판아민 (318 mg, 1.48 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 EtOAc와 sat. NaHCO3 (25 mL 각각) 사이에서 분배시켰다. 수성층을 EtOAc (25 mL)로 재추출하고, 합한 유기물질을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 소수성 프릿을 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 미정제 생성물을 최소량의 DCM 중의 상태로 25 g ULTRA SNAP 카트리지에 적용하고, 10-60% (3:1 EtOAc:EtOH)/사이클로헥산로 용리되는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (203.1 mg, 0.35 mmol, 28 % 수율)를 크림색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 1.33 min, [MH]+ = 523.4.
중간체 207: (+/-)-3차-부틸 (2-((2-((트랜스)-2-(1-((1H-인돌-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)사이클로프로필)에틸)(메틸)아미노)에틸)카바메이트
Figure pct00239
(+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (50 mg, 0.12 mmol)를 질소 하에 DCM (5 mL) 중에 현탁시켰다. Et3N (0.034 mL, 0.25 mmol), 그 다음에 메실-Cl (10.49 μL, 0.14 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 교반하였다. 45분 후, 반응물을 DCM (5 mL)으로 희석하고, 이후 물 (10 mL)로 세척한 후, 소수성 프릿을 통해 용리시키고, 진공 하에 농축시켜 적색 오일을 얻었다. 오일을 아세토니트릴 (5 mL) 중에 흡수시켰다. 이후, Et3N (0.034 mL, 0.245 mmol)을 3차-부틸 (2-(메틸아미노)에틸)카바메이트 (32.0 mg, 0.18 mmol)를 첨가하고, 반응물을 밤새 80℃로 가열하였다. 추가 부분의 Et3N (0.034 mL, 0.245 mmol) 및 3차-부틸 (2-(메틸아미노)에틸)카바메이트 (32.0 mg, 0.18 mmol)를 첨가하고, 주말에 걸쳐 80℃에서 계속 교반하였다. 반응물은 비등 건조시킴으로써 잔류물을 최소량의 DCM 중의 상태로 10 g ULTRA SNAP 카트리지에 적용하고, DCM 중 1-10% (메탄올 중 2M NH3)로 용리되는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 진공 하에 농축시켜 (+/-)-3차-부틸 (2-((2-((1S,2S)-2-(1-((1H-인돌-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)사이클로프로필)에틸)(메틸)아미노)에틸)카바메이트 (44 mg, 0.07 mmol, 54 % 수율)를 갈색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 1.03 min, [MH]+ = 565.5.
실시예
실시예 1: 1-벤질-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00240
1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (5.5 g, 19.21 mmol)을 DCM (100 mL) 중에 현탁시키고, Et3N (3.21 mL, 23.05 mmol), HATU (9.50 g, 24.98 mmol) 및 사이클로프로필아민 (1.625 mL, 23.05 mmol)을 첨가한 후, 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 물 (100 mL), 0.5 M HCl (100 mL) 및 포화된 중탄산나트륨 용액 (100 mL)로 세척하고, 유기 층을 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 담황색 고형물을 얻었다. 고형물을 에테르 (20 mL) 중에 현탁시키고, 초음파 처리한 후, 여과하고, 고형물을 진공 오븐에서 건조시켜 1-벤질-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (5.25 g, 16.14 mmol, 84 % 수율)를 무색 고형물로서 얻었다.
생성물을 유사한 방법에 의해 제조된 또 다른 배치(2.4 g)와 합하고, 합한 물질을 20분 동안 에탄올 (200 mL) 중에 환류시킴으로써 용해시킨 후, 실리사이클 티오우레아 팔라듐 스캐빈징 수지(scavenging resin) (10 g)를 첨가하고, 혼합물을 추가 30분 동안 가열하였다. 혼합물을 Buchner 플라스크로 여과하고, 1시간에 걸쳐 실온으로 냉각되게 한 후, 얼음 배쓰에서 1시간 동안 냉각시키고, 형성된 고형물을 여과에 의해 수거하고, 진공 오븐에서 건조시켜 1-벤질-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (6.76 g, 20.78 mmol)를 무색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.84 min, [MH]+= 326.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.35 (d, J=4.9 Hz, 1 H) 8.80 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.72 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.54 (d, J=3.9 Hz, 1 H) 7.25 - 7.42 (m, 5 H) 5.29 (s, 2 H) 2.75 - 2.89 (m, 4 H) 0.65 - 0.72 (m, 2 H) 0.53 - 0.59 (m, 2 H).
실시예 2: 1-벤질-N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00241
2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (401 mg, 0.861 mmol), 사이클로부탄아민 (0.15 mL, 1.757 mmol), N,N-디메틸피리딘-4-아민 (23 mg, 0.188 mmol), 트리에틸아민 (0.48 mL, 3.44 mmol) 및 THF (8 mL)를 45℃에서 N2 하에 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 600 mg의 오프 화이트 고형물을 얻고, 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-100% 에틸아세테이트/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 요망하는 분획을 농축시켜 1-벤질-N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (295 mg, 0.782 mmol, 91 % 수율)를 오프 화이트 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.91 min, [MH]+ = 340.
실시예 3: N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00242
THF (1.5 mL)를 5-브로모-N-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (100 mg, 0.298 mmol), 디코발트 옥타카보닐 (28.3 mg, 0.075 mmol), DMAP (109 mg, 0.895 mmol), 잔포스 (10.36 mg, 0.018 mmol) 및 팔라듐 (II) 아세테이트 (3.35 mg, 0.015 mmol)를 함유하는 밀봉된 마이크로웨이브 바이알에 첨가하고, N2로 플러싱하였다. 사이클로프로필아민 (0.042 mL, 0.597 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브 조사에 의해 30분 동안 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 EtOAc과 물 사이에 분배시켰다. 수성층을 제거하고, 유기 층을 세척하고(1x 물, 2x 2 M aq. HCl, 1x 염수), MgSO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 황색 잔류물을 얻었다. 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, 10 g Biotage 실리카 SNAP 컬럼 상에 로딩시키고, 사이클로헥산:EtOAc (50 - 100%)로 용리시켰다. 생성물 함유 분획을 진공 하에 증발시켜 갈색 검을 얻었다. 검을 TBME와 함께 교반하고, 진공 하에 증발시켜 생성물 (41 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min TFA): Rt = 0.85 min, [MH]+ = 340.1.
실시예 4: rac-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-페닐프로필)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00243
DMF (1 mL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (40 mg, 0.170 mmol), (1-브로모프로필)벤젠 (41 mg, 0.206 mmol)의 현탁액에 K2CO3 (29 mg, 0.210 mmol)를 첨가하고, 반응물을 질소 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MDAP (포믹)에 의해 정제하고, 요망하는 생성물을 함유하는 분획을 농축시켜 rac-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-페닐프로필)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (25 mg, 0.064 mmol, 37.4 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.97 min, [MH]+ = 354.
실시예 5: N5-사이클로부틸-1-((2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-5-일)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00244
N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (50 mg, 0.201 mmol), (2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-5-일)메탄올 (50.0 mg, 0.301 mmol) 및 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (0.166 mL, 0.632 mmol)을 톨루엔 (1.5 mL) 중에서 배합하고, 반응 혼합물을 Biotage Initiator 마이크로웨이브 상의 5 mL 마이크로웨이브 바이알에서 30분 동안 120℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 부분을 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 갈색 오일로서 얻었다. 생성물을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 50 - 100 % 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 - 76 mg의 생성물을 얻었다. 샘플을 MeOH/DMSO (1 mL, 1:1) 중에 용해시키고, MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 용매를 진공 하에 증발시켜 요구되는 생성물 - N5-사이클로부틸-1-((2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-5-일)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (40 mg, 0.096 mmol, 47.7 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.95 min, [MH]+ = 398.1.
실시예 6: N5-사이클로부틸-N3-메틸-1-(3-(메틸아미노)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00245
N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (25 mg, 0.100 mmol), (3-(메틸아미노)페닐)메탄올 (20.64 mg, 0.150 mmol) 및 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (0.083 mL, 0.316 mmol)을 톨루엔 (0.75 mL) 중에서 배합하고, 반응 혼합물을 5 mL 마이크로웨이브 바이알에서 30분 동안 120℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 8 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (170 mg)을 얻었다. 잔류물을 MeOH/DMSO (1:1, 2 x 1 mL) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 건조시켜 백색 분말을 남겼다. 분획을 디클로로메탄 중에서 합하고, 진공 하에 증발시키고, 디에틸 에테르로 초음파 처리하고, 번 더 증발시켜 생성물 - N5-사이클로부틸-N3-메틸-1-(3-(메틸아미노)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (17 mg, 0.046 mmol, 46.0 % 수율)를 오프 화이트 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.72 min, [MH]+ = 369.1.
실시예 7: N5-사이클로부틸-1-(3-(디메틸아미노)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00246
N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (40 mg, 0.160 mmol), (3-(디메틸아미노)페닐)메탄올 (0.034 mL, 0.241 mmol) 및 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (0.133 mL, 0.505 mmol)을 톨루엔 (1.2 mL) 중에서 배합하고, 반응 혼합물을 5 mL 마이크로웨이브 바이알에서 30분 동안 120℃로 가열하였다. 반응물을 추가의 30 분 동안 120℃에서 마이크로웨이브에 다시 넣었다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 부분을 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 갈색 오일로서 얻었다. 샘플을 메탄올 중에 로딩시키고, 순차적으로 용매: 메탄올, 2M 암모니아/메탄올을 사용하는 설폰산 (SCX) 5g에 대한 SPE에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (78 mg)을 갈색 유리로서 얻었다. 샘플을 MeOH/DMSO (1 mL, 1:1) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 진공 하에 증발시켜 담황색 고형물 (8.1 mg)을 얻었다. 이를 디클로로메탄 중의 상태로 10 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 10-40% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로부터 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 N5-사이클로부틸-1-(3-(디메틸아미노)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (6.3 mg, 0.016 mmol, 10.27 % 수율)를 담황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.77 min, [MH]+ = 383.4.
실시예 8: 1-벤질-N5-(3-플루오로사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00247
2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (53 mg, 0.114 mmol), 3-플루오로사이클로부탄아민 하이드로클로라이드 (29 mg, 0.231 mmol), N,N-디메틸피리딘-4-아민 (3 mg, 0.025 mmol), 트리에틸아민 (0.063 mL, 0.455 mmol) 및 THF (1 mL)를 45℃에서 밤새 N2 하에 가열하였다. 형성된 오프 화이트 현탁액을 농축시켜 100 mg의 오프 화이트 고형물을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 10 g 카트리지, 0-100% 에틸아세테이트/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 요망하는 분획을 농축시켜 1-벤질-N5-(3-플루오로사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (32 mg, 0.076 mmol, 66.9 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.90 min, [MH]+ = 358.
실시예 9-18: N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드의 아미드 어레이
모노머
Figure pct00248
Figure pct00249
DMSO (11.4 mL) 중에 용해된 N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (475 mg)의 저장 용액(stock solution)을 제조하였다. 0.6 mL의 이 용액을 각각의 열거된 브로마이드 모노머 (0.301 mmol)에 첨가하였다. 탄산칼륨 (41.6 mg, 0.301 mmol)을 각각의 반응 용기에 첨가하고, 반응물을 밤새 교반되게 두었다. 이후, 샘플을 정제 전에 여과하였다. (N.B . 용해도는 모든 샘플에서 문제시된다. 문제를 먼저 각 샘플에 50 μL의 암모니아를 첨가함으로써 해결하였다. 이것으로 문제를 해결하는데 실패한 샘플에 대해, 포름산 한 방울을 첨가하고, 용액을 다시 여과하였다). 이후, 샘플을 DMSO (0.8 mL) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 건조시켜 후속 표에 열거된 바와 같은 요구되는 생성물을 얻었다.
실시예
Figure pct00250
Figure pct00251
Figure pct00252
* 모든 LCMS를 2 min 고 pH를 사용하여 수행하였다.
실시예 19: 1-벤질-N3-메틸-2-옥소-N5-(3-페닐사이클로부틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00253
2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (53 mg, 0.114 mmol), N,N-디메틸피리딘-4-아민 (3 mg, 0.025 mmol), 3-페닐사이클로부탄아민 하이드로클로라이드 (39 mg, 0.212 mmol), 트리에틸아민 (0.06 mL, 0.430 mmol) 및 THF (1 mL)를 45℃에서 N2 하에 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 140 mg의 오프 화이트 고형물을 얻고, 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 10 g 카트리지, 0-100% 에틸아세테이트/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 요망하는 분획을 농축시켜 1-벤질-N3-메틸-2-옥소-N5-(3-페닐사이클로부틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (40 mg, 0.087 mmol, 76 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=1.12 min, [MH]+ = 416.
실시예 20: N5-(6-아미노스피로[3.3]헵탄-2-일)-1-벤질-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00254
3차-부틸 (6-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)스피로[3.3]헵탄-2-일)카바메이트 (75 mg, 0.152 mmol)를 DCM (5 mL) 중에 용해시키고, TFA (1 mL, 12.98 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 N2 하에 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 2 g SCX 카트리지 (MeOH로 사전-컨디셔닝됨) 상에 로딩시키고, MeOH (40 mL)로 용리시키고, 이어서 MeOH 중의 2M NH3 (40 mL)로 용리시켰다. 생성물을 함유하는 암모니아 분획을 합하고, 농축시켜 N5-(6-아미노스피로[3.3]헵탄-2-일)-1-벤질-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (49.6 mg, 0.113 mmol, 74.6 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.55 min, [MH]+ = 395.
실시예 21: (+/-)-N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00255
N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (50 mg, 0.201 mmol), 1-페닐에탄올 (0.036 mL, 0.301 mmol) 및 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (0.166 mL, 0.632 mmol)을 톨루엔 (1.5 mL) 중에서 배합하고, 반응 혼합물을 Biotage Initiator 마이크로웨이브 내 5 mL 마이크로웨이브 바이알에서 30분 동안 120℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 부분을 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 갈색 오일로서 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 10 - 40% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로부터 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켰다. 잔류물을 MeOH/DMSO (2 x 1 mL, 1:1) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH, 2회 주입)에 의해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 중의 상태로 10 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 20-100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (16 mg, 0.045 mmol, 22.57 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.97 min, [MH]+ = 354.0.
실시예 22: 1-벤질-N5-사이클로부틸-N3-사이클로프로필-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00256
1-벤질-5-브로모-N-사이클로프로필-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (250 mg, 0.720 mmol), 코발트 카보닐 (61.6 mg, 0.180 mmol), DMAP (176 mg, 1.440 mmol), 팔라듐 (II) 아세테이트 (8.08 mg, 0.036 mmol), 사이클로부탄아민 (0.123 mL, 1.440 mmol) 및 잔포스 (20.83 mg, 0.036 mmol)를 마이크로웨이브 바이알에 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, THF (3.3 mL)를 첨가하고, 반응물을 Biotage Initiator 마이크로웨이브에서 40분 동안 80℃에서 가열하였다. 형성된 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 오렌지색 잔류물을 얻었다. 잔류물을 DCM 중에 흡수시키고, 0-100% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 Biotage Isolera SNAP 50g 실리카 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (40 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹):Rt = 1.02 min, [MH]+ = 366.3.
실시예 23: 1-((1H-벤조[d]이미다졸-4-일)메틸)-N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00257
3차-부틸 4-((5-(사이클로부틸카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-1-카복실레이트 (54 mg, 0.113 mmol)를 DCM (2 mL) 중에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (500 μL, 6.49 mmol)을 조심스럽게 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 90분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 SCX 컬럼 상에 로딩시키고, MeOH (2 CV)로 세척한 후, 메탄올성 암모니아 (2M) (4 CV)로 용리시켰다. 적합한 분획을 합하고, 감압 하에서 증발시켜 갈색 고형물을 얻었다. 샘플을 MeOH/DMSO (1 mL, 1:1) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 진공 하에 증발시켜요구되는 생성물 - 1-((1H-벤조[d]이미다졸-4-일)메틸)-N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (24 mg, 0.063 mmol, 56.2 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.97 min, [MH]+ = 354.0.
실시예 24: 1-벤질-N5-(2-사이클로프로필에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00258
트리에틸아민 (0.060 mL, 0.429 mmol), DMAP (6.56 mg, 0.054 mmol), 2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (50 mg, 0.107 mmol) 및 2-사이클로프로필에탄아민 (18.28 mg, 0.215 mmol)를 THF (1.5 mL) 중에 용해시키고, 45℃에서 질소 하에 1시간 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM에 로딩하고, 0-100% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 Biotage Isolera SNAP 25g 실리카 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (35 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.97 min, MH+ = 354.0.
실시예 25: 메틸 3-((5-(사이클로부틸카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)벤조에이트
Figure pct00259
N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (100 mg, 0.401 mmol), 메틸 3-(하이드록시메틸)벤조에이트 (100 mg, 0.602 mmol) 및 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (0.416 mL, 1.586 mmol)을 톨루엔 (3 mL) 중에서 배합하고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브 바이알에서 30분 동안 120℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 부분을 염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 10 - 50% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 밝은 갈색 고형물 (91 mg)을 얻었다. 잔류물을 MeOH/DMSO (1 mL, 1:1) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 진공 하에 증발시켜 요구되는 생성물 - 메틸 3-((5-(사이클로부틸카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)벤조에이트 (44 mg, 0.111 mmol, 27.6 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 398.0.
실시예 26: N5-사이클로부틸-1-(3-(하이드록시메틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00260
DCM (881 μL) 중의 메틸 3-((5-(사이클로부틸카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)벤조에이트 (35 mg, 0.088 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시키고, DIBAL-H (톨루엔 중 1M, 299 μL, 0.299 mmol)를 1시간에 걸쳐 적가하였다. -78℃에서 추가 1시간 후, 보충분의 DIBAL-H (톨루엔 중 1M, 88 μL, 0.088 mmol)를 20분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 70분 동안 더 교반하였다. 반응물을 여전히 -78℃에 있을 때 메탄올 (157 μL, 3.87 mmol)로 켄칭시킨 후, 주위 온도로 가온되게 하였다. 반응물을 디클로로메탄 (3 mL) 및 로쉘 염 용액 (3 mL)으로 희석하고, 밤새 교반하였다. 층들을 분리시키고, 수성 상을 디클로로메탄 (2 x 5 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (38 mg)을 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄 중의 상태로 10 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 15-75% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 - N5-사이클로부틸-1-(3-(하이드록시메틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (7 mg, 0.019 mmol, 21.52 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.75 min, [MH]+ = 370.3.
실시예 27: N5-사이클로부틸-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00261
메탄올 (535 μL) 중의 N5-사이클로부틸-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (100 mg, 0.401 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (111 mg, 0.802 mmol) 및 1-(브로모메틸)-3-메톡시벤젠 (84 μL, 0.602 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응 플라스크를 밤새 방치되게 두고, 이 시간 동안 용매를 증발시켰다. 잔류물을 H2O (10 mL)로 희석하고, EtOAc (4 × 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (188 mg)을 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄에 로딩하고, 15 - 75% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는 Biotage SP4를 통해 정제하였다. 관련 분획을 다시 합하고, 진공 하에 증발시켰다. 잔류물 N5-사이클로부틸-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (142 mg, 0.384 mmol, 96 % 수율)를 오프 화이트 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.93 min, [MH]+ = 370.3.
실시예 28: N5-사이클로부틸-1-(3-하이드록시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00262
0℃에서 무수 디클로로메탄 중의 N5-사이클로부틸-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (75 mg, 0.134 mmol)의 용액에 질소 대기 하에 BBr3 (디클로로메탄 중 1M, 402 μL, 0.402 mmol)를 서서히 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온시키면서 밤새 교반하였다. 추가 부분의 BBr3 (디클로로메탄 중 1M , 402 μL, 0.402 mmol)를 첨가하고, 반응물을 추가 3시간 동안 교반하였다. 염수를 조심스럽게 첨가함으로써 반응물을 켄칭시키고, 중탄산나트륨으로 중화시켰다. 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고, 수성층을 디클로로메탄 (12 x 10 mL)로 추출하였다. 진한 에멀젼이 추출 동안 형성되었고, LCMS이 수성 상에 생성물의 존재를 나타내었다. 수성 상을 추가의 에틸 아세테이트 (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 디클로로메탄 분획을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켰다. 합한 에틸 아세테이트 부분을 염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 디클로로메탄 분획으로부터의 잔류물에 첨가하고, 진공 하에 증발시켰다. 미정제 잔류물 (86 mg)을 메탄올 중에 건식 상태로 10 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 이를 10 - 50% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 N5-사이클로부틸-1-(3-하이드록시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (41 mg, 0.115 mmol, 86 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.76 min, [MH]+ = 356.2.
실시예 29: N5-사이클로부틸-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00263
DMF (0.985 mL) 중의 1,3-디옥솔란-2-온 (28.6 mg, 0.325 mmol), 탄산칼륨 (40.8 mg, 0.295 mmol) 및 N5-사이클로부틸-1-(3-하이드록시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (35 mg, 0.098 mmol)의 용액을 135℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 물 (30 mL)과 에틸 아세테이트 (10 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성 상을 추가의 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하고, 합한 유기 부분을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켰다. 샘플을 DMSO (1 mL) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 건조시켜 요구되는 생성물 - N5-사이클로부틸-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (28 mg, 0.070 mmol, 71.2 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.77 min, [MH]+ = 400.2.
실시예 30: 1-((1H-벤조[d]이미다졸-4-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00264
3차-부틸 4-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-1-카복실레이트 (83 mg, 0.178 mmol)를 DCM (3.2 mL) 중에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (783 μL, 10.16 mmol)을 조심스럽게 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 90분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 SCX 컬럼 상에 로딩시키고, MeOH (2 CV)로 세척하고, 메탄올성 암모니아 (2M) (4 CV)로 용리시켰다. 적합한 분획을 합하고, 감압 하에서 증발시켜 갈색 고형물 - 1-((1H-벤조[d]이미다졸-4-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (60 mg, 0.164 mmol, 92 % 수율)를 얻었다. 19 mg의 생성물을 메탄올 (1 mL) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)를 통해 정제하였다. 관련 분획을 질소 스트림 하에 블로운 다운하여 1-((1H-벤조[d]이미다졸-4-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (9 mg, 0.025 mmol, 13.81 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.43 min, [MH]+ = 366.1.
실시예 31: - (R)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00265
HATU (95 mg, 0.250 mmol)를 DMF (0.5 mL) 중의 (R)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (50 mg, 0.166 mmol) 및 DIPEA (0.058 mL, 0.333 mmol)의 용액에 첨가하였다. 용액을 5분 동안 교반하고, 사이클로프로필아민 (0.014 mL, 0.200 mmol)을 첨가하였다. 형성된 용액을 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 진공 하에 EtOH와 공비 건조시켜 백색 고형물 (50 mg)을 얻었다.
LCMS (2 min TFA): Rt = 0.85 min, [MH]+ = 340.1.
실시예 32: N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-7-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00266
KOH (15.2 mg, 0.271 mmol)를 질소 하에 실온에서 DCM (2.5 mL) 중의 1-((1H-벤조[d]이미다졸-4-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (42 mg, 0.115 mmol)의 용액에 첨가하였다. 메틸 아이오다이드 (7.91 μL, 0.126 mmol)를 격렬하게 교반하면서 적가하였다. 1시간 후, 추가 부분의 메틸 아이오다이드 (7.19 μL, 0.115 mmol) 및 KOH (14.6 mg, 0.260 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 23시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (20.71 μL, 1.149 mmol)로 켄칭시키고, 물 (10 mL)로 희석하고, 생성물을 디클로로메탄 (4 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 부분을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 증발 건조시켰다. 잔류물을 MeOH/DMSO (1 mL, 1:1) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 건조시켜: N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-7-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (2.1 mg, 5.53 ㎛ol, 4.82 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.40 min, [MH]+ = 380.2.
실시예 33: (+/-)-1-벤질-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
및
실시예 114: (+/-)-1-벤질-N3-메틸-N5-((시스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00267
DIPEA (0.275 mL, 1.572 mmol)를 DMF (4 mL) 중의 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (150 mg, 0.524 mmol), 2-메틸사이클로프로판아민 (74.5 mg, 1.048 mmol, 예를 들어, UkrOrgSyntez로부터 상업적으로 입수가능함), 및 HATU (299 mg, 0.786 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이 시간 후, 추가의 HATU (299 mg, 0.786 mmol) 및 DIPEA (0.275 mL, 1.572 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 추가의 20분 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시키고, 유기 층을 2x 물로 세척하였다. 이를 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 형성된 오렌지색 오일을 1:1 DMSO:메탄올 중에 용해시키고, MDAP에 의해 정제하였다. 두 개의 부분입체이성체 생성물을 MDAP로부터 얻었다. 용매를 감압 하에 제거하고, 생성물을 진공 하에 4시간 동안 건조되게 두어:
(+/-)-1-벤질-N3-메틸-N5-((시스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (22.5 mg, 0.066 mmol, 12.65 % 수율)를 백색 고형물로서 얻고,
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.87 min, [MH]+ = 340.1.
(+/-)-1-벤질-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (120 mg, 0.354 mmol, 67.5 % 수율)를 담황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 340.1.
실시예 34: 1-벤질-N5-((트랜스)-4-하이드록시사이클로헥실)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00268
DMF (1 mL) 중의 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (48 mg, 0.168 mmol), 4-아미노사이클로헥산올 (44.1 mg, 0.383 mmol) 및 2-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일)-1,1,3,3-테트라메틸이소우로늄 헥사플루오로포스페이트(V) (HATU) (81 mg, 0.213 mmol)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (DIPEA) (0.059 mL, 0.335 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.25시간 동안 교반한 후, 질소 스트림 하에 농축시켰다. 용액을 메탄올로 1 mL가 되게 만들고, 직접 MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 요구되는 분획을 질소 스트림 하에 증발시킨 후, 디클로로메탄/메탄올 (4 mL)의 1:1 혼합물 중에 용해시키고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 요망하는 생성물을 담황색 고형물; 1-벤질-N5-((트랜스)-4-하이드록시사이클로헥실)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (61.8 mg, 0.161 mmol, 96 % 수율)로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.77 min, [MH]+ = 384.3.
실시예 35: (+/-)-1-벤질-N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00269
DIPEA (0.092 mL, 0.524 mmol)를 DMF (2 mL) 중의 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (50 mg, 0.175 mmol), (2-아미노사이클로프로필)메탄올 (30.4 mg, 0.349 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함), 및 HATU (100 mg, 0.262 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 오렌지색 용액을 질소 하에 1시간 동안 교반하고, 밤새 반응되게 두었다. 추가의 (2-아미노사이클로프로필)메탄올 (30.4 mg, 0.349 mmol), HATU (100 mg, 0.262 mmol), 및 DIPEA (0.092 mL, 0.524 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 질소 하에 추가 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에서 분배시키고: 수성층을 2x 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 2x 물로 세척하고, 소수성 프릿을 통과시켜. 용매를 감압 하에 제거하고, 형성된 오렌지색 오일을 DCM 중에 용해시켰다. 이를 10 g Biotage SNAP 컬럼 상에 로딩시키고, 이를 에틸 아세테이트:메탄올 (0 - 20%)로 용리시켰다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 이후, 생성물을 5시간 동안 진공 하에 건조되게 두어 1-벤질-N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (19.4 mg, 0.055 mmol, 31.3 % 수율)를 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.73 min, [MH]+ = 356.1.
실시예 36: (+/-)-1-벤질-N5-(2-메톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00270
DMF (2 mL) 중의 2-메톡시사이클로프로판아민, HCl 염 (30.4 mg, 0.349 mmol, 예를 들어, ZereneX로부터 상업적으로 입수가능함)를 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (50 mg, 0.175 mmol), HATU (100 mg, 0.262 mmol), 및 DIPEA (0.092 mL, 0.524 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 형성된 갈색 용액을 질소 하에 2시간 동안 교반하였다. 추가의 2-메톡시사이클로프로판아민, HCl 염 (30.4 mg, 0.349 mmol), HATU (100 mg, 0.262 mmol), 및 DIPEA (0.092 mL, 0.524 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 질소 하에 추가 1시간 동안 교반하고, 밤새 반응되게 두었다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시키고, 수성층을 2x 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 2x 물 및 1x 염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 형성된 오렌지색 오일을 DCM 중에 용해시키고, 10 g Biotage SNAP 컬럼 상에 로딩시키고, 이를 사이클로헥산:에틸 아세테이트 (50 - 100%)로 용리시켰다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 고형물을 DMSO:메탄올 (1:1) 중에 용해시키고, MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 2일 동안 진공 하에 건조되게 두어 1-벤질-N5-(2-메톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (13.6 mg, 0.038 mmol, 21.91 % 수율)를 담황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.82 min, [MH]+ = 356.1.
실시예 37: N5-사이클로프로필-1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00271
건조된 마이크로웨이브 바이알에, Pd(OAc)2 (8 mg, 0.036 mmol), 잔포스 (14.5mg, 0.025 mmol) 및 DMAP (88 mg, 0.719 mmol)를 첨가하고, 이어서 디코발트 옥타카보닐 (36.9 mg, 0.108 mmol) 및 사이클로프로필아민 (50.7 μL, 0.719 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 즉시 밀봉하고, 질소 하에 두었다. 5-브로모-1-(3-플루오로벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (122 mg, 0.360 mmol)를 1,4-디옥산 (2.5 mL) 중의 용액으로서 첨가하고, 바이알을 마이크로웨이브 조사 하에 40분 동안 80℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 에틸 아세테이트 (30 mL) 중에 흡수시키고, 2M HCl (10 mL)로 세척하였다. 산 층을 에틸 아세테이트 (2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 부분을 염수 (10 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켰다. 미정제 잔류물 (163 mg)을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 15-75% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 황색 유리를 얻었다. 샘플을 DMSO (1 mL) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 건조시켜 - N5-사이클로프로필-1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (38 mg, 0.105 mmol, 29.2 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.82 min, [MH]+ = 344.1.
실시예 38: (+/-)-1-벤질-N5-(1-시아노사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00272
DIPEA (0.183 mL, 1.048 mmol)를 DMF (2 mL) 중의 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (100 mg, 0.349 mmol), 1-아미노사이클로프로판카보니트릴, HCl 염 (57.4 mg, 0.699 mmol, 예를 들어, Sigma-Aldrich로부터 입수가능함), 및 HATU (199 mg, 0.524 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 2시간 동안 교반하였다. 이후, 이를 에틸 아세테이트와 물 사이에서 분배시키고, 수성 층을 2x 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 2x 물로 세척하였다. 이후, 이를 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 형성된 갈색-오렌지색 오일을 DCM 중에 용해시키고, 10 g Biotage SNAP 컬럼 상에 로딩시키고, 이를 사이클로헥산:에틸 아세테이트 (20 - 80%)로 용리시켰다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 고형물을 진공 하에 밤새 건조되게 두어 1-벤질-N5-(1-시아노사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (100 mg, 0.285 mmol, 82 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.83 min, [MH]+ = 351.1.
실시예 39: N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(퀴녹살린-5-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00273
5-브로모-N-메틸-2-옥소-1-(퀴녹살린-5-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (50 mg, 0.134 mmol), 코발트 카보닐 (14 mg, 0.041 mmol), 사이클로프로판아민 (0.019 mL, 0.268 mmol), DMAP (33 mg, 0.270 mmol), 팔라듐 아세테이트 (2 mg, 8.91 ㎛ol) 및 Catacxium A (3 mg, 8.37 ㎛ol)을 마이크로웨이브 바이알에서 배합하고, 탈기시켰다. 1,4-디옥산 (1.5 mL)를 첨가하고, 바이알을 80℃에서 40분 동안 가열하였다. 형성된 용액을 셀라이트를 통해 여과하고, 물과 EtOAc 사이에서 분배시키고, 2M HCl로 세척하고, EtOAc (2 x 30 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 70 mg의 녹색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-100% (에틸아세테이트 중 25% 에탄올)/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 10 mg의 황색 오일을 얻었다. 이를 추가로 추가로 MDAP (포믹)에 의해 정제하고, 적합한 분획을 농축시켜 표제 생성물을, 4 mg 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.72 min, [MH]+ = 376.
실시예 40: (S*)-1-벤질-N5-(2,2-디플루오로사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00274
DIPEA (0.183 mL, 1.048 mmol)를 DMF (3 mL) 중의 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (100 mg, 0.349 mmol), 2,2-디플루오로사이클로프로판아민, HCl 염 (65.0 mg, 0.699 mmol, 예를 들어, Manchester Organics로부터 상업적으로 입수가능함), 및 HATU (199 mg, 0.524 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 3시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 형성된 오렌지색 오일을 DMSO/메탄올 (1:1) 중에 용해시켰다. 용액을 MDAP (포믹)에 의해 정제하고, 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성물을 진공 하에 밤새 건조되게 두어 (+/-)-1-벤질-N5-(2,2-디플루오로사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (29 mg, 0.080 mmol, 22.98 % 수율)를 담황색 고형물로서 얻었다. 라세미 혼합물을 키랄 및 키랄 분취용 HPLC에 의해 분리시켰다:
키랄 분취용 정제:
샘플을 DMSO (3 mL) 중에 용해시켰다. 3000 μL를 크로마토그래피 조건: 용매 A: 암모니아 용액을 사용하여 pH 10으로 조절된 수중 10 mM 중탄산암모늄, 용매 B: 아세토니트릴, 유량: 40 mL/min을 사용하는 CSH C18 150 x 30 mm, 5 ㎛ 컬럼 상에 주입하였다. 구배: 하기와 같음:
Figure pct00275
분별화는 다이오드 어레이 & 질량 분석 신호의 혼합에 의해 결정하였다: UV 검출: 파장 210 nm 내지 350 nm에서 합산된 신호. MS: Waters ZQ, 이온화 모드: Alt Pos/Neg Electrospray, 스캔 범위: 100 내지 1000 AMU, 스캔 시간: 0.5 s, 스캔 간 지연: 0.2 s. 유량 및 구배는 주입 동안 주입기를 통과하는 흐름이 감소된 두 개의 펌프에 의해 제공되었다. 잔여 흐름은 전체 흐름이 일정하게 유지되도록 컬럼의 헤드에 도입된다. 분획을 합하고, 질소 블로우다운 스트림 하에 40℃에서 건조시키고, 추가로 키랄 정제에 의해 정제하였다.
키랄 분석 방법:
대략 0.5 mg의 라세메이트를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 주입; 20 μL의 샘플 용액을 30% EtOH/헵탄, 1 mL/min의 속도로 용리되고, 215 nm의 파장에서 분석되는 컬럼 (4.6 mm id x 25 cm 키랄팍 IC 로트 번호 IC00CE-OG021)에 주입하였다.
키랄 제조 방법:
대략 30 mg의 라세메이트를 EtOH (2 mL) 중에 용해시켰다. 주입; 2 mL의 샘플 용액을 30% EtOH/헵탄, 30 mL/min의 속도로 용리되고, 215 nm의 파장으로 분석되는 컬럼 (30 mm x 25 cm 키랄팍 IC 로트 번호 IC10028-01)에 주입하였다. 16-20분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 이것이 요망하는 단일(미지의) 거울상이성질체를 백색 고형물 (6 mg)로서 제공하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.88 min, [MH]+ = 362.1.
실시예 41: 3차-부틸 (3-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)사이클로부틸)카바메이트
Figure pct00276
1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (400 mg, 1.397 mmol)을 DMF (9 mL) 중에 흡수시키고, HATU (584 mg, 1.537 mmol)를 첨가하고, 이어서 DIPEA (0.488 mL, 2.79 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되게 한 후, 3차-부틸 (3-아미노사이클로부틸)카바메이트 (260 mg, 1.397 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 상업적으로 입수가능함)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM에 로딩하고, 0-100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산의 구배를 사용하는 SNAP 25 g 실리카 카트리지를 사용하여 Biotage Isolera 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켰다. 얻어진 고형물을 최소량의 DCM 중에 용해시키고, 0-100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산의 구배를 사용하는, SNAP 25 g 실리카 카트리지를 사용하는 Biotage Isolera 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 생성물 (530 mg, 1.166 mmol, 83% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.00 min, [MH]+ = 455.2.
실시예 42: N5-사이클로프로필-1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00277
건조된 마이크로웨이브 바이알에, 5-브로모-1-(4-플루오로벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (123 mg, 0.363 mmol) 및 Pd(OAc)2 (6.0 mg, 0.027 mmol)를 첨가하고, 무수 1,4-디옥산 (2.5 mL) 중에 흡수시켰다. 잔포스 (13.3 mg, 0.023 mmol), DMAP (89 mg, 0.725 mmol) 및 사이클로프로필아민 (51.1 μL, 0.725 mmol)을 첨가하고, 이어서 디코발트 옥타카보닐 (37.2 mg, 0.109 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 즉시 밀봉하고, 마이크로웨이브 조사 하에 40분 동안 80℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 에틸 아세테이트 (30 mL) 중에 흡수시키고, 2M HCl (10 mL)로 세척하였다. 산 층을 에틸 아세테이트 (2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 부분을 염수 (10 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켰다. 미정제 잔류물 (195 mg)을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 15-65% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 황색 유리를 얻었다. 샘플을 DMSO (1 mL) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 건조시켜 백색 고형물을 얻었다. 고형물을 추가로 밤새 진공 하에 건조시켜 - N5-사이클로프로필-1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (47 mg, 0.130 mmol, 35.9 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 344.2.
실시예 43: N5-사이클로프로필-1-(4-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00278
5-브로모-1-(4-메톡시벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (100 mg, 0.285 mmol), 코발트 카보닐 (27 mg, 0.079 mmol), 사이클로프로판아민 (0.04 mL, 0.577 mmol), DMAP (66 mg, 0.540 mmol), 팔라듐 아세테이트 (3 mg, 0.013 mmol) 및 잔포스 (8 mg, 0.014 mmol)를 마이크로웨이브 바이알에서 배합하고 탈기시켰다. 1,4-디옥산 (3 mL)를 첨가하고, 바이알을 80℃에서 40분 동안 가열하였다. 용액을 셀라이트를 통해 여과하고, 물과 EtOAc 사이에서 분배시키고, 2M HCl로 세척하고, EtOAc (2 x 30 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 120 mg의 녹색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-100% (에틸아세테이트 중 25% 에탄올)/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 60 mg의 갈색 오일을 얻었다. 이를 MDAP (포믹)에 의해 정제하고, 적합한 분획을 농축시켜 N5-사이클로프로필-1-(4-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (37 mg, 0.094 mmol, 32.9 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.82 min, [MH]+ = 356.
실시예 44: N5-사이클로프로필-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00279
DMF (2 mL) 중의 1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (70 mg, 0.221 mmol)의 용액에 HATU (126 mg, 0.332 mmol)를 첨가하고, 이어서 사이클로프로판아민 (26 mg, 0.455 mmol) 및 DIPEA (0.155 mL, 0.885 mmol)를 첨가하였다. 형성된 반응 혼합물을 실온에서 N2 하에 7시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 277 mg의 황색 오일을 얻고, SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 40-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 N5-사이클로프로필-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (97 mg, 0.232 mmol, 100 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.84 min, [MH]+ = 356.
실시예 45: N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00280
THF (1.5 mL) 중의 사이클로프로판아민 (0.041 mL, 0.597 mmol)을 5-브로모-N-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (100 mg, 0.298 mmol), DMAP (109 mg, 0.895 mmol), 잔포스 (8.63 mg, 0.015 mmol), 팔라듐 아세테이트 (3.34 mg, 0.015 mmol), 및 코발트 카보닐 (25.5 mg, 0.075 mmol)을 함유하는 밀봉된 마이크로웨이브 바이알에 첨가하였다. 형성된 현탁액을 30분 동안 마이크로웨이브 조사에 의해 80℃로 가열하였다. 청색 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에 분배시키고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하고, 유기 층을 물 (2 x 20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하였다. 이를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 황색 고형물을 DCM 중에 용해시키고, 20 - 100% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 10 g Biotage SNAP 실리카 컬럼에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성물을 진공 하에 밤새 건조되게 두어 N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (52.7 mg, 0.155 mmol, 52.0 % 수율)를 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 340.1.
실시예 46: 1-벤질-N5-((1R*,2R*)-2-에톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
및
실시예 47: 1-벤질-N5-((1S*,2S*)-2-에톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00281
DIPEA (0.549 mL, 3.14 mmol)를 DMF (5 mL) 중의 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (300 mg, 1.048 mmol), 2-에톡시사이클로프로판아민, HCl 염 (212 mg, 2.096 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함), 및 HATU (598 mg, 1.572 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 형성된 적색 용액을 질소 하에 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에서 분배시키고, 수성층을 2x 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 2x 물 및 1x 염수로 세척하였다. 이를 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 형성된 적색 오일을 DCM 중에 용해시키고, 25 g Biotage SNAP 실리카 컬럼 상에 로딩시키고, 이를 사이클로헥산:에틸 아세테이트 (30 - 100%)로 용리시켯다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성물을 24시간 동안 진공 하에 건조되게 두어 (+/-)-(트랜스)-1-벤질-N5-(2-에톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (213.4 mg, 0.578 mmol, 55.1 % 수율)를 담황색 고형물로서 얻었다. 이 라세미 혼합물을 키랄 HPLC에 의해 정제하였다:
분석 방법:
대략 0.5 mg의 부분입체이성질체를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 주입; 20 μL의 샘플 용액을 30% EtOH/헵탄, 1 mL/min의 속도로 용리되고, 215 nm의 파장에서 분석되는 컬럼 (4.6 mm id x 25 cm 키랄팍 IC 로트 번호 IC00CE-OG021)에 주입하였다.
제조 방법:
대략 200 mg의 부분입체이성질체를 EtOH (4 mL) 중에 용해시켰다. 주입; 2 mL의 샘플 용액을 30% EtOH/헵탄, 30 mL/min의 속도로 용리되고, 215 nm의 파장으로 분석되는 컬럼 (30 mm x 25 cm 키랄팍 IC 로트 번호 IC10028-01)에 주입하였다. 17-19분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 21-25분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다.
이것이 단일 거울상이성질체 1 (실시예 46)을 백색 고형물 (87 mg)로서 제공하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.88 min, [MH]+ = 370.1.
이것이 단일 거울상이성질체 2 (실시예 47)를 백색 고형물 (71 mg)로서 제공하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.88 min, [MH]+ = 370.2.
실시예 48: (+/-)-1-벤질-N5-((트랜스)-2-에틸사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00282
DIPEA (0.275 mL, 1.572 mmol)를 DMF (3 mL) 중의 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (150 mg, 0.524 mmol), HATU (299 mg, 0.786 mmol), 및 (+/-)-(트랜스)-2-에틸사이클로프로판아민 (89 mg, 1.048 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시키고, 유기 층을 2x 물 및 1x 염수로 세척하였다. 이를 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 오일을 1:1 DMSO:메탄올 중에 용해시키고, MDAP (TFA)에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성물을 진공 하에 4시간 동안 건조되게 두어 (+/-)-1-벤질-N5-((트랜스)-2-에틸사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (150.7 mg, 0.426 mmol, 81 % 수율)를 담황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.99 min, [MH]+ = 354.1.
실시예 49: N5-사이클로프로필-1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00283
5-브로모-1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (180 mg, 0.510 mmol), 코발트 카보닐 (43.6 mg, 0.127 mmol), DMAP (125 mg, 1.019 mmol), 팔라듐 (II) 아세테이트 (5.72 mg, 0.025 mmol), 사이클로프로필아민 (0.036 mL, 0.510 mmol) 및 잔포스 (14.74 mg, 0.025 mmol)를 마이크로웨이브 바이알에 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, THF (3.3 mL)를 첨가한 후, 반응 혼합물을 Biotage Initiator 마이크로웨이브에서 30분 동안 90℃에서 가열하였다. 형성된 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고, 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 생성물 (70 mg)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.92 min, MH+ = 358.1.
실시예 50: N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(퀴놀린-8-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00284
5-브로모-N-메틸-2-옥소-1-(퀴놀린-8-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (220 mg, 0.591 mmol), 코발트 카보닐 (50.5 mg, 0.148 mmol), DMAP (144 mg, 1.182 mmol), 팔라듐 (II) 아세테이트 (6.63 mg, 0.030 mmol), 사이클로프로필아민 (0.042 mL, 0.591 mmol) 및 잔포스 (17.10 mg, 0.030 mmol)를 마이크로웨이브 바이알에 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, THF (3.3 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 Biotage Initiator 마이크로웨이브에서 30분 동안 80℃에서 가열하였다. 형성된 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고, 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하여 요망하는 생성물 (100 mg)을 백색 포움으로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.82 min, [MH]+ = 377.1.
실시예 51: 1-((1H-인다졸-4-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00285
1-((1H-인다졸-4-일)메틸)-5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (140 mg, 0.388 mmol), 코발트 카보닐 (39 mg, 0.114 mmol), 사이클로프로판아민 (0.05 mL, 0.722 mmol), DMAP (93 mg, 0.761 mmol), 팔라듐 아세테이트 (5 mg, 0.022 mmol) 및 잔포스 (11 mg, 0.019 mmol)를 마이크로웨이브 바이알에서 배합하고 탈기시켰다. 1,4-디옥산 (3 mL)를 첨가하고, 바이알을 80℃에서 40분 동안 가열하였다. 용액을 셀라이트를 통해 여과하고, 물과 EtOAc 사이에서 분배시키고, 2M HCl로 세척하고, EtOAc (2 x 30 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 560 mg의 녹색/청색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-100% (에틸아세테이트 중 25% 에탄올)/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 27 mg의 백색 고형물을 얻었다. 이를 추가의 MDAP (포믹)에 의해 정제하고, 적합한 분획을 농축시켜 1-((1H-인다졸-4-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (10 mg, 0.025 mmol, 6.35 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.67 min, [MH]+ = 366.
실시예 52: 1-((1H-인다졸-7-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00286
1-((1H-인다졸-7-일)메틸)-5-브로모-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (204 mg, 0.565 mmol), 코발트 카보닐 (54 mg, 0.158 mmol), 사이클로프로판아민 (0.08 mL, 1.155 mmol), DMAP (147 mg, 1.203 mmol), 팔라듐 아세테이트 (6 mg, 0.027 mmol) 및 잔포스 (14 mg, 0.024 mmol)를 마이크로웨이브 바이알에서 배합하고 탈기시켰다. 1,4-디옥산 (4 mL)를 첨가하고, 바이알을 80℃에서 40분 동안 가열하였다. 용액을 셀라이트를 통해 여과하고, 물과 EtOAc 사이에서 분배시키고, 2M HCl로 세척하고, EtOAc (2 x 30 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 250 mg의 녹색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-60% (에틸아세테이트 중 25% 에탄올)/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 114 mg의 황색 고형물을 얻었다. 이를 추가의 MDAP (포믹)에 의해 정제하고, 적합한 분획을 농축시켜 1-((1H-인다졸-7-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (38 mg, 0.094 mmol, 16.57 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.75 min, [MH]+ = 366.
실시예 53: N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-(4-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00287
건조된 마이크로웨이브 바이알에, 5-브로모-N-메틸-1-(4-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (120 mg, 0.358 mmol) 및 Pd(OAc)2 (4.5 mg, 0.020 mmol)를 첨가하고, 무수 1,4-디옥산 (2.5 mL) 중에 흡수시켰다. 잔포스 (15 mg, 0.026 mmol), DMAP (87 mg, 0.716 mmol) 및 사이클로프로필아민 (50.5 μL, 0.716 mmol)을 첨가하고, 이어서 디코발트 옥타카보닐 (36.7 mg, 0.107 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 즉시 밀봉하고, 마이크로웨이브 조사 하에 40분 동안 80℃에서 가열하였다. 바이알을 추가의 20분 동안 마이크로웨이브로 반송하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 에틸 아세테이트 (30 mL) 중에 흡수시키고, 2M HCl (10 mL)로 세척하였다. 산 층을 에틸 아세테이트 (2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 부분을 염수 (10 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켰다. 미정제 잔류물을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 15-65% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 황색 유리를 얻었다. 샘플을 DMSO (1 mL) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 건조시켜 백색 고형물 (68 mg)을 얻었다. 샘플을 키랄 정제 크로마토그래피에 제공하였다:
샘플을 3 mL의 DMSO 중에 용해시켰다. 1500 μL를 CSH C18 150 x 30 mm, 5 ㎛ 컬럼상에 주입하였다. 용매 A: 암모니아 용액을 사용하여 pH 10으로 조절된 수중 10 mM 중탄산암모늄, 용매 B: 아세토니트릴, 유량: 40 mL/min. 구배: 하기와 같음:
Figure pct00288
분별화는 다이오드 어레이 & 질량 분석 신호의 혼합에 의해 결정하였다: UV 검출: 파장 210 nm 내지 350 nm에서 합산된 신호. MS: Waters QDA, 이온화 모드: Positive Electrospray, 스캔 범위: 120 내지 800 AMU, 스캔 시간: 0.5 s, 스캔 간 지연: 0.1 s. 유량 및 구배는 주입 동안 주입기를 통과하는 흐름이 감소된 두 개의 펌프에 의해 제공되었다. 잔여 흐름은 전체 흐름이 일정하게 유지되도록 컬럼의 헤드에 도입된다. 분획을 합하고, 질소 블로우다운 스트림 하에 40℃에서 건조시켜 N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-(4-메틸벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (51 mg, 0.150 mmol, 42.0 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.89 min, [MH]+ = 340.1.
실시예 54: N5-사이클로프로필-1-(3,5-디메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00289
5-브로모-1-(3,5-디메틸벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (160 mg, 0.458 mmol), 코발트 카보닐 (39.2 mg, 0.115 mmol), DMAP (112 mg, 0.916 mmol), 팔라듐 (II) 아세테이트 (5.14 mg, 0.023 mmol), 사이클로프로필아민 (0.032 mL, 0.458 mmol) 및 잔포스 (13.26 mg, 0.023 mmol)를 마이크로웨이브 바이알에 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, THF (3.3 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 Biotage Initiator 마이크로웨이브에서 30분 동안 80℃에서 가열하였다. 형성된 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고, 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 형성된 생성물을 DCM에 로딩하고, 0-60% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 Biotage Isolera SNAP 10g 실리카 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 생성물 (49 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.98 min, [MH]+ = 354.1.
실시예 55: N5-사이클로프로필-1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00290
5-브로모-1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (200 mg, 0.566 mmol), 코발트 카보닐 (48.4 mg, 0.142 mmol), DMAP (138 mg, 1.133 mmol), 팔라듐 (II) 아세테이트 (6.36 mg, 0.028 mmol), 사이클로프로필아민 (0.040 mL, 0.566 mmol) 및 잔포스 (16.38 mg, 0.028 mmol)를 마이크로웨이브 바이알에 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, THF (3.3 mL)를 첨가하고, 이후, 반응 혼합물을 Biotage Initiator 마이크로웨이브에서 30분 동안 80℃에서 가열하였다. 형성된 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고, 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하고, 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켰다. 형성된 생성물을 DCM에 로딩하고, 0-60% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는, Biotage Isolera SNAP 10 g 실리카 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 생성물 (50 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹):Rt = 0.91 min, [MH]+ = 358.1.
실시예 56: N5-사이클로프로필-1-(2-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00291
THF (2 mL) 중의 사이클로프로판아민 (0.061 mL, 0.885 mmol)을 5-브로모-1-(2-플루오로벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (150 mg, 0.442 mmol), 코발트 카보닐 (42.0 mg, 0.111 mmol), 잔포스 (12.80 mg, 0.022 mmol), DMAP (162 mg, 1.327 mmol), 및 팔라듐 아세테이트 (4.95 mg, 0.022 mmol)를 함유하는 밀봉된 마이크로웨이브 바이알에 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 마이크로웨이브 조사에 의해 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 추가 15분 동안 마이크로웨이브 조사에 의해 80℃로 가열하였다. 이후, 이를 추가 20분 동안 마이크로웨이브 조사에 의해 80℃로 가열하였다. 이후, 이를 에틸 아세테이트 (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에 분배시키고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 이후 물 (2 x 20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 형성된 오렌지색 오일을 DCM 중에 용해시키고, 25g Biotage SNAP 실리카 컬럼 및 0 - 100% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성물을 진공 하에 2일 동안 건조되게 두어 N5-사이클로프로필-1-(2-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (59.6 mg, 0.174 mmol, 39.2 % 수율)를 담황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.82 min, [MH]+ = 344.1.
실시예 57: N5-사이클로프로필-1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00292
THF (2 mL) 중의 사이클로프로판아민 (0.059 mL, 0.849 mmol)을 5-브로모-1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (150 mg, 0.425 mmol), 코발트 카보닐 (40.3 mg, 0.106 mmol), 잔포스 (12.29 mg, 0.021 mmol), 팔라듐 아세테이트 (4.76 mg, 0.021 mmol), 및 DMAP (156 mg, 1.274 mmol)을 함유하는 밀봉된 마이크로웨이브 바이알에 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 마이크로웨이브 조사에 의해 80℃로 가열하였다. 이를 추가 30분 동안 마이크로웨이브 조사에 의해 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에 분배시키고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하고, 유기 층을 물 (2 x 20 mL)로 세척하였다. 이를 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 갈색 오일을 DCM 중에 용해시키고, 25 g Biotage SNAP 실리카 컬럼 및 0 - 100% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 제거하고, 고형물을 DMSO/메탄올 (1:1) 중에 용해시켰다. 이를 MDAP (포믹)에 의해 정제하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성물을 진공 하에 4시간 동안 건조되게 두어 N5-사이클로프로필-1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (41.2 mg, 0.115 mmol, 27.1 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 358.1.
실시예 58: 1-((1H-벤조[d]이미다졸-6-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00293
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (60 mg, 0.255 mmol), 6-(브로모메틸)-1H-벤조[d]이미다졸 (88 mg, 0.417 mmol), 탄산칼륨 (75 mg, 0.543 mmol) 및 DMF (2 mL)를 90℃에서 N2 하에 밤새 교반한 후, 추가 3시간 동안 교반하였다. 형성된 현탁액을 농축시키고, EtOAc (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 83 mg의 무색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 10 g 카트리지, 0-100% (DCM 중의 MeOH 중의 20% 2M NH3)/DCM으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 12 mg의 백색 고형물을 얻었다. 이를 추가로 MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 1-((1H-벤조[d]이미다졸-6-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (7 mg, 0.017 mmol, 6.76 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.40 min, [MH]+ = 366.
실시예 59: N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-(3-(모르폴리노메틸)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드, 포름산 염
Figure pct00294
건조된 마이크로웨이브 바이알에, 5-브로모-N-메틸-1-(3-(모르폴리노메틸)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (79 mg, 0.188 mmol) 및 N,N-디메틸피리딘-4-아민 (46 mg, 0.377 mmol)를 첨가하고, 무수 1,4-디옥산 (2 mL) 중에 현탁시켰다. 디아세톡시팔라듐 (3 mg, 0.013 mmol), (9,9-디메틸-9H-잔텐-4,5-디일)비스(디페닐포스핀) (8 mg, 0.014 mmol) 및 사이클로프로필아민 (0.027 mL, 0.385 mmol)을 첨가하고, 이어서 디코발트 옥타카보닐 (20 mg, 0.058 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, 마이크로웨이브 조사 하에 40분 동안 80℃에서 가열하고, 이어서 80℃에서 추가 30분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 카트리지 (2.5 g)를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트와 물 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 분리시키고, 건조시키고(Na2SO4), 농축시켜 ~82 mg의 미정제 황색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 10 g 카트리지, 330 mL에 대해 MeOH 중의 0-10%의 2M NH3/DCM으로 용리)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 진공 하에 농축시켜 10 mg의 담황색 오일을 얻었다. 이를 MeOH (2 mL) 중에 용해시키고, 2 g SCX 카트리지 (MeOH로 사전-용리됨) 상에 로딩시키고, MeOH (40 mL)로 용리시키고, 이어서 MeOH 중의 2M NH3 (40 mL)로 용리시켰다. 요망하는 생성물을 함유하는 암모니아 분획을 진공 하에 농축시켜 8 mg의 담황색 오일을 얻었다. 이를 추가로 MDAP (고 pH)에 의해 정제하고, 요망하는 생성물을 함유하는 분획을 농축시켜 N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-(3-(모르폴리노메틸)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드, 포름산 염 (4 mg, 7.65 ㎛ol, 4.07 % 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.80 min, [MH]+ = 425.
실시예 60: 1-벤질-N5-((1S,2S)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
및
실시예 84: 1-벤질-N5-((1R,2R)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00295
DIPEA (0.842 mL, 4.82 mmol)를 DMF (10 mL) 중의 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (897 mg, 3.13 mmol), (2-아미노사이클로프로필)메탄올 (210 mg, 2.410 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함), 및 HATU (1283 mg, 3.37 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 90분 동안 교반하고, 이후 추가의 HATU (1283 mg, 3.37 mmol) 및 DIPEA (0.842 mL, 4.82 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 2일 동안 용액 상태로 방치되게 두었다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시키고, 수성 층을 2x 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 2x 물 및 1x 염수로 세척한 후, 소수성 프릿을 통과시켰다. 용매를 감압 하에 제거하고, 형성된 적색 오일을 DCM 중에 용해시켰다. 이를 25 g Biotage SNAP 실리카 컬럼 상에 로딩시키고, 이를 사이클로헥산/에틸 아세테이트 (0 - 100%)로 용리시켰다. 분별화시 생성물이 보이지 않음에 따라 컬럼을 에틸 아세테이트/메탄올 (0 - 20%)로 플러싱하였다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 형성된 옅은 오렌지색 고형물을 DMSO:메탄올 (1:1) 중에 용해시키고, MDAP (TFA)에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성물을 1시간 동안 진공 하에 건조되게 두어 키랄 분리를 위해 제공하였다.
분석 방법:
대략 0.5 mg 라세메이트를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 주입; 20 μL의 샘플 용액을 40% EtOH/헵탄, 1 mL/min의 속도로 용리되고, 215 nm의 파장에서 분석되는 컬럼 (4.6 mm id x 25 cm 키랄팍 IA 로트 번호 IA00CE-KL030)에 주입하였다.
제조 방법:
대략 266 mg 라세메이트를 가열하면서 EtOH (4 mL) 중에 용해시켰다. 주입; 2 mL의 샘플 용액을 40% EtOH/헵탄, 30 mL/min의 속도로 용리되고, 215 nm의 파장으로 분석되는 컬럼 (30 mm x 25 cm 키랄팍 IA 로트 번호 IA11321-01)에 주입하였다. 17-22분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 이 이성질체는 이성질체의 앞 부분에 달린 관련된 불순물을 함유하였다. 25.5-38분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 회전 증발기를 사용하여 진공 처리한 후, 상기 분석 방법에 의해 기술된 바와 같이 최종 분석을 위한 칭량된 플라스크로 옮기었다.
피크 1: 이것이 단일 거울상이성질체를 담황색 고형물 (129 mg)로서 제공하였으나, 이는 불순한 것으로 나타났다.
피크 2: 이것이 단일 거울상이성질체 (실시예 60)를 담황색 고형물(86 mg)로서 제공하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.73 min, [MH]+ = 356.1.
피크 1에 상응하는 샘플을 키랄 분취용 HPLC에 의해 추가로 정제하였다:
키랄 정제
샘플을 DMSO (6 mL) 중에 용해시켰다. 크로마토그래피 조건: 용매 A: 수중 0.1% v/v 포름산 용액, 용매 B: 아세토니트릴 중 0.1% v/v 포름산 용액, 유량: 40 mL/min을 사용하는 Xselect CSH C18 (150 mm x 30 mm, 5 ㎛) 컬럼에 3000 μL 주입을 하였다. 구배: 하기와 같음:
Figure pct00296
분별화는 다이오드 어레이 & 질량 분석 신호의 혼합에 의해 결정하였다: UV 검출: 파장 210 nm 내지 350 nm에서 합산된 신호. MS: Waters ZQ, 이온화 모드: Alt Pos/Neg Electrospray, 스캔 범위: 100 내지 1000 AMU, 스캔 시간: 0.5 s, 스캔 간 지연: 0.2 s. 유량 및 구배는 주입 동안 주입기를 통과하는 흐름이 감소된 두 개의 펌프에 의해 제공되었다. 잔여 흐름은 전체 흐름이 일정하게 유지되도록 컬럼의 헤드에 도입된다. 분획을 합하고, 질소 블로우다운 스트림 하에 40℃에서 건조시켰다. 이것이 단일 거울상이성질체 (실시예 84)를 백색 고형물 (89 mg)로서 제공하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.73 min, [MH]+ = 356.1.
실시예 61: (+/-)-1-(2-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00297
THF (2.5 mL)를 5-브로모-1-(2-플루오로벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (150 mg, 0.442 mmol), 팔라듐 아세테이트 (4.95 mg, 0.022 mmol), 코발트 카보닐 (42.0 mg, 0.111 mmol), (+/-)-(트랜스)-2-메틸사이클로프로판아민 (62.9 mg, 0.885 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 상업적으로 입수가능함), 잔포스 (12.80 mg, 0.022 mmol), 및 DMAP (162 mg, 1.327 mmol)를 함유하는 밀봉된 마이크로웨이브 바이알에 첨가하였다. 반응 혼합물을 40분 동안 마이크로웨이브 조사에 의해 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 추가 35분 동안 마이크로웨이브 조사에 의해 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에 분배시키고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하고, 유기 층을 물 (2 x 20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하였다. 이를 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 형성된 오렌지색 오일을 DCM 중에 용해시키고, 25 g Biotage SNAP 실리카 컬럼 및 10 - 100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산의 구배를 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 분획을 합하고, 용매를 진공 하에 제거하고, 생성물을 DMSO:메탄올 (1:1) 중에 용해시키고, MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성물을 진공 하에 2시간 동안 건조되게 두어 1-(2-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (60.2 mg, 0.168 mmol, 38.1 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 358.1.
실시예 62: 5-브로모-1-((6-메톡시피리딘-3-일)메틸)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드
Figure pct00298
5-브로모-1-((6-메톡시피리딘-3-일)메틸)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (150 mg, 0.426 mmol), 코발트 카보닐 (36.4 mg, 0.106 mmol), DMAP (104 mg, 0.852 mmol), 팔라듐 (II) 아세테이트 (4.78 mg, 0.021 mmol), 사이클로프로판아민 (24.32 mg, 0.426 mmol) 및 잔포스 (12.32 mg, 0.021 mmol)를 마이크로웨이브 바이알에 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, THF (3.3 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 Biotage Initiator 마이크로웨이브에서 30분 동안 80℃에서 가열하였다. 형성된 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고, 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하고, 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켰다. 형성된 생성물을 DCM에 로딩하고, 0-60% 사이클로헥산/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 Biotage Isolera SNAP 10g 실리카 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (64 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.72 min, [MH]+= 357.1
실시예 63: (+/-)1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00299
5-브로모-1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (150 mg, 0.425 mmol), 코발트 카보닐 (36.3 mg, 0.106 mmol), DMAP (104 mg, 0.849 mmol), 팔라듐 (II) 아세테이트 (4.77 mg, 0.021 mmol), (+/-)-(트랜스)-2-메틸사이클로프로판아민 (30.2 mg, 0.425 mmol, 예를 들어, UkrOrgSynthesis Ltd.로부터 상업적으로 입수가능함) 및 잔포스 (12.29 mg, 0.021 mmol)를 마이크로웨이브 바이알에 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, THF (3.3 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 Biotage Initiator 마이크로웨이브에서 30분 동안 80℃에서 가열하였다. 형성된 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고, 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (67 mg)을 갈색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.99 min, MH+ = 372.1.
실시예 64: 1-벤질-N5-((1R,2R)-2-에틸사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
및
실시예 65: 1-벤질-N5-((1S,2S)-2-에틸사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00300
1-벤질-N5-(((+/-)-트랜스)-2-에틸사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (예를 들어, 실시예 48, ~148 mg)를 키랄 분리를 위해 제공하였다.
분석 방법:
대략 0.5 mg 라세메이트를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 주입; 20 μL의 샘플 용액을 15% EtOH/헵탄, 1 mL/min의 속도로 용리되고, 215 nm의 파장에서 분석되는 컬럼 (4.6 mm id x 25 cm 키랄셀(Chiralcel) OJ-H 로트 번호 OJH0CE-QL055)에 주입하였다.
제조 방법:
대략 144 mg 라세메이트를 가열하면서 EtOH (3 mL) 중에 용해시켰다. 주입; 1.5 mL의 샘플 용액을 15% EtOH/헵탄, 15 mL/min의 속도로 용리되고, 215 nm의 파장으로 분석되는 컬럼 (2 cm x 25 cm 키랄셀 OJ 로트 번호 OJ00CJ-PD002)에 주입하였다. 8-11분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하고; 11-13분으로부터의 분획을 크게하고 믹스로 라벨링하고; 13-20분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 믹스 분획을 크게 하고, 진공 처리하고, 상기 제조 방법을 사용하여 재처리하였다.
이것이 거울상이성질체 1 (실시예 64)을 담황색 고형물 (67 mg)로서 제공하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.99 min, [MH]+ = 354.1.
이것이 거울상이성질체 2 (실시예 65)를 담황색 고형물 (65 mg)로서 제공하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.99 min, [MH]+ = 354.1.
실시예 66: 1-((1H-인돌-7-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00301
질소 하에 실온에서 교반된, 메탄올 (399 μL) 및 THF (797 μL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-7-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (124 mg, 0.120 mmol)의 용액에 고체 세슘 카보네이트 (117 mg, 0.359 mmol)를 하나의 충전물로 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시킨 후, 디클로로메탄 (20 mL) 및 물 (15 mL)에 흡수시켰다. 수성 상을 2M HCl (1 mL)로 산성화시키고, 디클로로메탄 (5 x 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기물질을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (99 mg)을 얻었다. 샘플을 MeOH/DMSO (1 mL, 1:1) 중에 용해시키고, MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 건조시켜 백색 고형물 (55 mg)을 얻었다. 샘플을 9 mL의 DMSO 중에 용해시켰다. 3000 μL을 다음에 열거된 크로마토그래피 조건을 사용하는 CSH C18 150 x 30 mm, 5 ㎛ 컬럼에 주입하였다. 용매 A: 수중 0.1% TFA 산, 용매 B: 아세토니트릴 중 0.1% TFA, 유량: 40 mL/min. 구배: 하기와 같음:
Figure pct00302
분별화는 다이오드 어레이 & 질량 분석 신호의 혼합에 의해 결정하였다: UV 검출: 파장 210 nm 내지 350 nm에서 합산된 신호. MS: Waters ZQ, 이온화 모드: Positive Electrospray, 스캔 범위: 100 내지 1000 AMU, 스캔 시간: 0.5 s, 스캔 간 지연: 0.2 s. 유량 및 구배는 주입 동안 주입기를 통과하는 흐름이 감소된 두 개의 펌프에 의해 제공되었다. 잔여 흐름은 전체 흐름이 일정하게 유지되도록 컬럼의 헤드에 도입된다. 분획을 합하고, 질소 블로우다운 스트림 하에 40℃에서 건조시켜 여전히 불순한 두 개의 샘플을 제공하였다.
샘플 1 = 11.8 mg (순도: 80%), 샘플 2 = 57 mg (순도: 83%).
불순한 샘플을 다시 합하고, 키랄 분취용 HPLC에 의해 정제하였다:
분석 방법:
대략 0.5 mg 샘플을 50%EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 20 μL의 샘플 용액을 40% EtOH (+0.2% 이소프로필아민)/헵탄, 유량 = 1.0 mL/min로 용리되고, 검출 파장 = 215 nm, 4. Ref 550,100인 컬럼 (컬럼 4.6 mm id x 25 cm 키랄팍 IC, 로트 번호 IC00CE-OG021)에 주입하였다.
제조 방법:
대략 68 mg 샘플을 EtOH (4 mL) 중에 용해시켰다. 주입; 2 mL의 용액을 40% EtOH (+0.2% 이소프로필아민)/헵탄 (+0.2% 이소프로필아민), 유량 = 30 mL/min로 용리되고, 검출 파장, 215 nm, 4. Ref 550,100, 주입 총수 = 2인, 컬럼 (컬럼: 30 mm x 25 cm 키랄팍, 로트 번호 IC10028-01)에 주입하였다. 10-11분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 15-18분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 회전 증발기를 사용하여 진공 처리한 후, 상기 분석 방법에 의해 기술된 바와 같이 최종 분석을 위한 칭량된 플라스크로 옮기었다. 피크 2의 요망하는 생성물을 추가의 진공 하에 건조시켜 - 1-((1H-인돌-7-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (18.8 mg, 0.049 mmol, 41.0 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 365.1.
실시예 67: 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00303
질소 하에 실온에서 교반된, 메탄올 (535 μL) 및 THF (1.070 mL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (208 mg, 0.160 mmol)의 용액에 고체 세슘 카보네이트 (157 mg, 0.481 mmol)를 하나의 충전물로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반하였다. 온도를 70℃로 올리고, 1시간 동안 계속 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 물 (15 mL) 및 디클로로메탄 (10 mL)에 흡수시켰다. 수성층을 디클로로메탄 (8 x 10 mL)로 추출하고, 합한 유기물질을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켰다. LCMS는 수성 상에 잔류 생성물을 나타냈고, 이를 2M HCl (1 mL)로 산성화시키고, 디클로로메탄 (3 x 10 mL)으로 추가로 추출하였다. 합한 유기물질을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켰다. 미정제 잔류물 (136 mg)을 키랄 정제 크로마토그래피를 위해 제공하였다.
분석 방법:
대략 0.5 mg 샘플을 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 20 μL를 40% EtOH (+0.2% 이소프로필아민)/헵탄, 유량 = 1.0 mL/min로 용리되고, 검출 파장 = 215 nm, 4. Ref 550,100인 컬럼 (컬럼: 4.6 mm id x 25 cm 키랄팍 IC, 로트 번호 IC00CE-OG021)에 주입하였다.
제조 방법:
대략 135 mg 샘플을 가열 및 원심분리하면서 EtOH (5 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 2.5 mL의 용액을 40% EtOH (+0.2% 이소프로필아민)/헵탄 (+0.2% 이소프로필아민), 유량 = 30 mL/min으로 용리되고, 검출 파장, 215 nm, 4. Ref 550,100, 주입 총수 = 2인 컬럼 (컬럼: 30 mm x 25 cm 키랄팍, 로트 번호 IC10028-01)에 주입하였다. 9.5-10.5분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 12.5-14분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 회전 증발기를 사용하여 진공 처리한 후, 상기 분석 방법에 의해 기술된 바와 같이 최종 분석을 위한 칭량된 플라스크로 옮기었다. 피크 2는 요망하는 생성물이었고, 진공 하에 건조시켜 - 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (52.8 mg, 0.138 mmol, 86 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.79 min, [MH]+ = 365.1.
실시예 68: 1-(3-클로로벤질)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00304
5-브로모-1-(3-클로로벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (220 mg, 0.619 mmol), 코발트 카보닐 (52.9 mg, 0.155 mmol), DMAP (151 mg, 1.237 mmol), 팔라듐 (II) 아세테이트 (6.94 mg, 0.031 mmol), 사이클로프로판아민 (0.044 mL, 0.619 mmol) 및 잔포스 (17.90 mg, 0.031 mmol)를 마이크로웨이브 바이알에 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, THF (3 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 Biotage Initiator 마이크로웨이브에서 30분 동안 80℃에서 가열하였다. 형성된 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고, 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다.생성물 함유 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (81mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹):Rt = 0.92 min, [MH]+ = 360.0.
실시예 69-74: 1-(3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산의 아미드 어레이
모노머
Figure pct00305
Figure pct00306
DMF (5 mL) 중에 용해된 1-(3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (300 mg, 1.0 mmol) 및 HATU (380 mg, 1.0 mmol)의 저장 용액에 DIPEA (520 μL, 3.0 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 진탕시키고, 분산을 돕기 위해 초음파처리하였다. 이 혼합물의 분취물(0.5 mL)을 바이알 내 적합한 아민 (0.12 mmol)에 첨가하고, 이후에 밀봉하였다. 주의: 실시예 72를 제조하기 위해 사용된 모노머 아민을 함유하는 반응물에 추가의 DIPEA (50 μL, 0.286 mmol)를 첨가하였다. 각각의 바이알을 진탕한 후 실온에서 18시간 동안 방치되게 하였다. 주의: 실시예 71을 제조하는데 사용되는 모노머 아민을 함유하는 반응물에 추가의 HATU (0.038 g, 0.100 mmol) 및 DIPEA (0.052 mL, 0.300 mmol)를 첨가한 후, 이 혼합물을 실온에서 1시간 동안 방치되게 두었다. 샘플을 그대로 주입하고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 플레이트 블로우다운 장치(plate blowdown apparatus)에서 질소 스트림 하에 건조시켜 요구되는 생성물을 얻었다. 실시예 69를 제조하기 위해 사용된 모노머 아민으로부터 유도된 생성물에 여전히 불순물이 존재하는지 측정하였으며, 이에 따라 MeOH:DMSO (1 mL, 1:1) 중에 용해시킴으로써 다시 정제하고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 증발시켜 요구되는 생성물을 얻었다. 실시예 71을 제조하기 위해 사용되는 아민 모노머로부터 유도된 생성물을 DCM (0.5 mL) 중에 용해시키고, TFA (0.5 mL)를 첨가하고, 바이알을 캡핑시키고, 분산을 돕기 위해 초음파처리하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 방치되게 둔 후, 용매를 제거하였다. 잔류물을 MeOH (0.5 mL) 중에 재용해시키고, SCX-2 SPE 카트리지 (100 mg, MeOH (1 mL)로 사전 컨디셔닝됨)의 상부에 적용하였다. 카트리지를 추가의 MeOH (1 mL)로 용리시키고, 이어서 2M NH3/MeOH (1 mL)로 용리시켰다. 용매를 플레이트 블로우다운 장치에서 질소 스트림 하에 건조시켜 하기 표에 보여지는 요구되는 생성물을 얻었다.
실시예
Figure pct00307
Figure pct00308
* 모든 LCMS를 2 min 포믹을 사용하여 수행하였다.
실시예 75 - 79: (R)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산의 아미드 어레이
DMF (5 mL) 중의 (R)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-페닐에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (30 mg, 0.1 mmol) 및 HATU (380 mg)의 저장 용액에 DIPEA (520 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 진탕시키고, 분산을 돕기 위해 초음파처리하였다. 혼합물을 마이크로닉 바이알 내 사전 칭량된 아민의 세트(0.100 mmol)에 분취하였다(0.5 mL). 이들을 캡핑시키고, 진탕시키고, 실온에서 18시간 동안 방치되게 두었다. 샘플을 MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 건조시켜 요구되는 생성물을 얻었다. 실시예 75는 DIPEA의 첨가시 반응 혼합물에 첨가되는 추가의 DIPEA (50 μL)를 가졌다.
Figure pct00309
Figure pct00310
Figure pct00311
모든 LCMS는 2분 포믹 방법을 사용하여 수행되었다.
실시예 80: N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((2,3,4,5-테트라하이드로-1H-벤조[d]아제핀-7-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드, 하이드로클로라이드
Figure pct00312
3차-부틸 7-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-4,5-디하이드로-1H-벤조[d]아제핀-3(2H)-카복실레이트 (100 mg, 0.202 mmol) 및 TFA (1 mL, 12.98 mmol)를 DCM (4 mL)중에 30분 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 5 g SCX 카트리지 (MeOH로 사전-컨디셔닝됨)로 로딩하고, MeOH (20 mL)로 용리시키고, 이어서 MeOH 중 2M NH3 (20 mL)로 용리시켰다. 생성물을 함유하는 암모니아 분획을 합하고, 농축시켜 79 mg의 무색 오일을 얻었다. 이를 추가의 MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 DCM (30 mL)과 sat. 중탄산나트륨 용액 (30 mL) 사이에서 분배시키고, 수성층을 DCM (2 x 30 mL)으로 추출하고, 추가의 DCM 중의 5% MeOH(3 x 30 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 104 mg의 백색 고형물을 얻었다. 이를 추가의 MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((2,3,4,5-테트라하이드로-1H-벤조[d]아제핀-7-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (44 mg, 0.100 mmol, 49.7 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다. 이를 MeOH (1 mL) 중에 용해시키고, 디에틸 에테르 중의 1M HCl (0.11 mL, 0.110 mmol)을 첨가하고, 샘플을 블로우 다운(blown down)시켜 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((2,3,4,5-테트라하이드로-1H-벤조[d]아제핀-7-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드, 하이드로클로라이드 (42 mg, 0.088 mmol, 43.4 % 수율)를 오렌지색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.46 min, [MH]+ = 395.
실시예 81: 1-벤질-N5-(2-((시스)-4-하이드록시사이클로헥실)에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
및
실시예 85: 1-벤질-N5-(2-((트랜스)-4-하이드록시사이클로헥실)에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00313
DMF (1 mL) 중의 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (50.1 mg, 0.175 mmol), 4-(2-아미노에틸)사이클로헥산올 (53.9 mg, 0.376 mmol, 예를 들어, TCI로부터 상업적으로 입수가능함) 및 HATU (80.5 mg, 0.212 mmol)의 용액에 DIPEA (0.061 mL, 0.350 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.25시간 동안 교반하였다. 추가의 HATU (43 mg, 0.113 mmol) 및 DIPEA (0.0305 mL, 0.175 mmol)를 첨가하고, 1시간 동안 계속 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 질소 스트림 하에 농축시킨 후, DMSO/메탄올의 2:1 혼합물로 2 mL가 되도록 만들고, 직접 MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 두 개의 부분입체이성체 생성물을 질소 스트림 하에 별도로 농축시켰다.
시스-이성질체: 추가로 진공 하에 건조시켜 백색 고형물, 1-벤질-N5-(2-((시스)-4-하이드록시사이클로헥실)에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (33.9 mg, 0.082 mmol, 47.1 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.86 min, [MH]+ = 412.2.
트랜스-이성질체: DMSO (1 mL) 중에 용해시키고, re-MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 요구되는 분획을 질소 스트림 하에 농축시킨 후, 디클로로메탄/메탄올의 1:1 혼합물 중에 용해시키고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 백색 고형물로서, 1-벤질-N5-(2-((트랜스)-4-하이드록시사이클로헥실)에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (19.9 mg, 0.048 mmol, 27.6 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 412.2.
실시예 82: (+/-)-1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00314
1-(4-플루오로벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (200 mg, 0.657 mmol)을 DMF (5 mL) 중에 흡수시키고, HATU (275 mg, 0.723 mmol)를 첨가하고, 이어서 DIPEA (0.230 mL, 1.315 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되게 한 후, (+/-)-(트랜스)-2-메틸사이클로프로판아민 (46.7 mg, 0.657 mmol)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL) 중에 흡수시켰다. 유기 층을 포화된 중탄산나트륨 수용액 (20 mL) 및 물 (20 mL)로 세척하였다. 유기층을 합하고, 진공 하에 농축시켰다. 고형물을 DCM 중에 흡수시키고, 0-60% EtOAc/사이클로헥산의 구배를 사용하는, SNAP 25 g 실리카 카트리지를 사용하는 Biotage Isolera 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 생성물 (152 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.92 min, [MH]+ = 358.1.
실시예 83: 1-(2-플루오로벤질)-N5-((1S*,2S*)-2-메톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00315
THF (2.3 mL)를 5-브로모-1-(2-플루오로벤질)-N-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카복스아미드 (120 mg, 0.354 mmol), 2-메톡시사이클로프로판아민, HCl 염 (46.2 mg, 0.531 mmol, 예를 들어, ZereneX로부터 상업적으로 입수가능함), 팔라듐 아세테이트 (3.96 mg, 0.018 mmol), 코발트 카보닐 (33.6 mg, 0.088 mmol), 잔포스 (10.24 mg, 0.018 mmol), 및 DMAP (130 mg, 1.061 mmol)를 함유하는 밀봉된 마이크로웨이브 바이알에 첨가하였다. 반응 혼합물을 35분 동안 마이크로웨이브 조사에 의해 80℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 20분 동안 마이크로웨이브 조사에 의해 80℃로 가열한 후, 추가 20분 동안 마이크로웨이브 조사에 의해 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에 분배시키고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하고, 유기 층을 물 (2 x 20 mL)로 세척하였다. 이를 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 형성된 오렌지색 고형물을 DMSO:메탄올 (1:1) 중에 용해시키고, MDAP (TFA)에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 둥근-바닥 플라스크에 넣고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 이를 진공 하에 4시간 동안 건조되게 두어 1-(2-플루오로벤질)-N5-(2-메톡시사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (23 mg, 0.062 mmol, 17.41 % 수율)를 연한 오렌지색 고형물로서 얻고, 이를 키랄 분취용 HPLC에 의해 정제하였다:
분석 방법:
대략 0.5 mg 라세메이트를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 주입; 20 μL의 샘플 용액을 15% EtOH/헵탄, 1.0 mL/min의 속도로 용리되고, 215 nm의 파장으로 분석되는 컬럼 (4.6 mm id x 25 cm 키랄셀 OJ-H 로트 번호 OJH0CE-RK007)에 주입하였다.
제조 방법:
대략 20 mg 라세메이트를 EtOH (2 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 2 mL의 샘플 용액을 15% EtOH/헵탄, 30 mL/min의 속도로 용리되고, 215 nm의 파장으로 분석되는 컬럼 (30 mm x 25 cm 키랄셀 OJ-H 로트 번호 OJH10027-01)에 주입하였다. 23.5-26분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 이것이 단일 거울상이성질체 (실시예 83)를 담황색 고형물 (9 mg)로서 제공하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.83 min, [MH]+ = 374.1.
실시예 86: 1-(4-플루오로벤질)-N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00316
1-(4-플루오로벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (200 mg, 0.657 mmol)을 DMF (5 mL) 중에 흡수시키고, HATU (275 mg, 0.723 mmol)를 첨가하고, 이어서 DIPEA (0.230 mL, 1.315 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되게 한 후, (2-아미노사이클로프로필)메탄올 (57.3 mg, 0.657 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (152 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.75 min, [MH]+ = 374.1.
실시예 87: N5-(2-에톡시사이클로프로필)-1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00317
1-(4-플루오로벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (200 mg, 0.657 mmol)을 DMF (5 mL) 중에 흡수시키고, HATU (275 mg, 0.723 mmol)를 첨가하고, 이어서 DIPEA (0.230 mL, 1.315 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되게 한 후, 2-에톡시사이클로프로판아민 (66.5 mg, 0.657 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 (102 mg)을 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 388.1.
실시예 88: rac-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00318
5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (185 mg, 0.589 mmol), HATU (338 mg, 0.889 mmol), DIPEA (0.308 mL, 1.766 mmol), 사이클로프로판아민 (0.082 mL, 1.177 mmol) 및 DMF (2 mL)를 실온에서 N2 하에 1시간 동안 교반하였다. LiCl 용액 (20 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 EtOAc (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 686 mg의 황색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 376 mg의 오렌지색 오일을 얻었다. 이를 추가로 MDAP (TFA)에 의해 정제하고, 적합한 분획을 농축시켜 rac-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (61 mg, 0.155 mmol, 26.4 % 수율)를 무색 오일을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt=0.96 min, [MH]+ = 354.
실시예 89-94: 1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산의 아미드 어레이
DMF (5 mL) 중의 1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (316 mg, 1 mmol) 및 HATU (380 mg)의 저장 용액에 DIPEA (520 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 진탕시키고, 분산을 돕기 위해 초음파 처리하였다. 혼합물을 사전 칭량된 아민 세트 (하기 표에 보여지는 바와 같은)로 분취하였다(0.55 mL). 이를 캡핑시키고, 진탕시키고, 실온에서 18시간 동안 방치되게 두었다. 샘플을 MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 건조시켜 요구되는 생성물을 얻었다. 실시예 93를 DCM (0.5 mL) 중에 용해시키고, TFA (0.5 mL)로 처리하고, 용액을 실온에서 2시간 동안 캡핑된 바이알에서 방치되게 두었다. 반응 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 MeOH (0.5 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 MeOH-사전 컨디셔닝된 100 mg SCX-2 카트리지에 적용하고, 이를 이후 MeOH (1 mL)로 세척한 후, MeOH 중 2M 암모니아 용액(1 mL)으로 세척하였다. 염기성 세척액을 증발 건조시켜 최종 탈보호된 화합물을 유리 염기(하기 표에서 보여지는 바와 같이)로서 얻었다.
모노머
Figure pct00319
Figure pct00320
실시예
Figure pct00321
Figure pct00322
모든 LCMS를 2분 포믹 방법을 사용하여 수행하였다.
실시예 95: 1-(3-아세틸벤질)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00323
실온에서 교반된, DMF (2041 μL) 중의 1-(3-아세틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (250 mg, 0.510 mmol), 및 HATU (291 mg, 0.765 mmol)의 용액에 사이클로프로필아민 (71.9 μL, 1.020 mmol) 및 DIPEA (178 μL, 1.020 mmol)를 첨가하였다. 그리고, 반응물을 ~18시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 HATU (194 mg, 0.510 mmol) 및 반응물을 추가 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (45 mL)에 붓고, 수성층을 에틸 아세테이트 (3 x 20 mL) 및 디에틸 에테르 (2 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 오렌지색 오일 (425 mg)로서 얻었다. 오일을 디클로로메탄 중의 상태로/메탄올 25 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 15-75% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 요망하는 생성물 (203 mg)을 투명한 검으로서 얻었다. 생성물을 에틸 아세테이트 (50 mL)에 흡수시키고, 물 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척하였다. 유기 층을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 - 1-(3-아세틸벤질)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (148 mg, 0.383 mmol, 75 % 수율)를 얻었다. 또한, SP4 크로마토그래피로부터 혼합된 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 투명한 검을 얻고, 이를 에틸 아세테이트 (50 mL)에 흡수시키고, 물 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척하였다. 유기 층을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 추가로 - 1-(3-아세틸벤질)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (38 mg, 0.095 mmol, 18.65 % 수율)를 투명한 유리로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.75 min, [MH]+ = 368.2.
실시예 96: rac-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-(o-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00324
5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(o-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (190 mg, 0.604 mmol), HATU (355 mg, 0.934 mmol), DIPEA (0.32 mL, 1.832 mmol), 사이클로프로판아민 (0.084 mL, 1.209 mmol) 및 DMF (2 mL)를 실온에서 N2 하에 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 LiCl 용액(20 mL)으로 세척하고, EtOAc (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 449 mg의 적색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 rac-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-(o-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (183 mg, 0.466 mmol, 77 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.93 min, [MH]+ = 354.
실시예 97: 1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00325
1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (200 mg, 0.628 mmol)을 DMF (5 mL) 중에 흡수시키고, HATU (263 mg, 0.691 mmol)를 첨가하고, 이어서 DIPEA (0.219 mL, 1.257 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되게 한 후, (2-아미노사이클로프로필)메탄올 (54.7 mg, 0.628 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 이를 추가의 MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하여 생성물 (140 mg)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.83 min, [MH]+ = 388.1.
실시예 98: N5-(2-에톡시사이클로프로필)-1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00326
1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (200 mg, 0.628 mmol)을 DMF (5 mL) 중에 흡수시키고, HATU (263 mg, 0.691 mmol)를 첨가하고, 이어서 DIPEA (0.219 mL, 1.257 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되게 한 후, 2-에톡시사이클로프로판아민 (63.6 mg, 0.628 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 생성물 (141 mg, 0.351 mmol, 55.9% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.98 min, [MH]+ = 402.2.
실시예 99: N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-8-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00327
DMF (1 mL) (실온에서 교반된) 중의 5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-((1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-8-일)메틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (132 mg, 0.255 mmol), 및 HATU (146 mg, 0.383 mmol)의 용액에 사이클로프로필아민 (54.0 μL, 0.766 mmol) 및 DIPEA (89 μL, 0.510 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 16시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 HATU (48.5 mg, 0.128 mmol)를 첨가하고, 반응을 17시간 동안 계속하였다. 추가 부분의 HATU (48.5 mg, 0.128 mmol)를 첨가하고, 반응물을 20.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 염화리튬 수용액 (15 mL)에 붓고, 수성 물질을 에틸 아세테이트 (4 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 오렌지색 오일 (311 mg)로서 얻었다. 샘플을 디클로로메탄 중의 상태로 25 g SNAP 카트리지 상에 로딩하고, 10 - 50 % (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 황색 고형물 (99 mg)을 얻었다. 샘플을 1:1 MeOH:DMSO (2 x 1 mL) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 진공 하에 증발시켜 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-8-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (47 mg, 0.117 mmol, 46.0 % 수율)를 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.86 min, [MH]+ = 381.2.
실시예 100: (+/-)-1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00328
DIPEA (0.276 mL, 1.578 mmol)를 DMF (4 mL) 중의 1-(3-플루오로벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (200 mg, 0.526 mmol), (+/-)-(트랜스)-2-메틸사이클로프로판아민 (74.8 mg, 1.052 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 상업적으로 입수가능함), 및 HATU (300 mg, 0.789 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 이후 추가의 (+/-)-(트랜스)-2-메틸사이클로프로판아민 (74.8 mg, 1.052 mmol), HATU (300 mg, 0.789 mmol), 및 DIPEA (0.276 mL, 1.578 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 용액 상태로 밤새 방치되게 두었다. 형성된 오렌지색 오일을 1:1 DMSO:메탄올 중에 용해시키고, MDAP (TFA)에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성물을 진공 하에 2시간 동안 건조되게 두어 (+/-)-1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (72 mg, 0.201 mmol, 38.3 % 수율)를 진한 오렌지색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.93 min, [MH]+ = 358.2.
실시예 101: 1-벤질-N3-메틸-N5-((1R,2R)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
및
실시예 102: 1-벤질-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00329
(+/-)-(트랜스)-2-메틸사이클로프로판아민 (149 mg, 2.096 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 상업적으로 입수가능함)을 DMF (6 mL) 중의 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (300 mg, 1.048 mmol), HATU (598 mg, 1.572 mmol), 및 DIPEA (0.549 mL, 3.14 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 주말에 걸쳐 반응되게 두었다. 추가의 (+/-)-(트랜스)-2-메틸사이클로프로판아민 (149 mg, 2.096 mmol), HATU (598 mg, 1.572 mmol), 및 DIPEA (0.549 mL, 3.14 mmol)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시키고, 수성층을 2x 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 2x 물 및 1x 염수로 세척하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 형성된 오렌지색 오일을 DCM 중에 용해시키고, 25 g Biotage SNAP 실리카 컬럼 상에 로딩시키고, 이를 사이클로헥산:에틸 아세테이트 (0 - 80%)로 용리시켰다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성물을 2일 동안 진공 하에 건조되게 두었다. 생성물을 추가로 MDAP (포믹)에 의해 정제하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 깨끗한 생성물을 1일 동안 진공 하에 건조되게 두어 (+/-)-1-벤질-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (70 mg, 0.206 mmol, 19.68 % 수율)를 담황색 고형물로서 얻었다. 라세미 혼합물을 키랄 HPLC에 의해 정제하였다:
분석 방법:
대략 0.5 mg 라세메이트를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 주입; 20 μL의 샘플 용액을 15% EtOH/헵탄, 1.0 mL/min의 속도로 용리되고, 215 nm의 파장으로 분석되는 컬럼 (4.6 mm id x 25 cm 키랄셀 OJ-H 로트 번호 OJH0CE-QL055))에 주입하였다.
제조 방법:
대략 70 mg 라세메이트를 EtOH (0.5 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 0.5 mL의 샘플 용액을 5% EtOH (+0.2% 이소프로필아민)/헵탄 (+0.2% 이소프로필아민), 30 mL/min의 속도로 용리되고, 215 nm의 파장으로 분석되는 컬럼 (30 mm x 25 cm 키랄셀 OJ-H 로트 번호 OJH10027-01)에 주입시켰다.
34-41 분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다.
이것이 단일 거울상이성질체 1 (실시예 101)을 백색 고형물 (20 mg)로서 제공하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 340.1.
44-54 분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다.
이것이 단일 거울상이성질체 2 (실시예 102)를 백색 고형물 (23 mg)로서 제공하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 340.1.
1H NMR (400 MHz, CHCl3-d) δ ppm 9.52 (br. s., 1 H) 8.66 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.46 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 7.29 - 7.41 (m, 5 H) 6.39 (br. s., 1 H) 5.25 (s, 2 H) 2.99 (d, J=4.9 Hz, 3 H) 2.55 (dd, J=7.1, 3.7 Hz, 1 H) 1.14 (d, J=6.1 Hz, 3 H) 0.97 (app. dquind, J=9.2, 6.0, 6.0, 6.0, 6.0, 3.3 Hz, 1 H) 0.77 (ddd, J=9.3, 5.5, 3.8 Hz, 1 H) 0.61 - 0.67 (m, 1 H)
실시예 102의 제조를 위한 대안의 공정:
디클로로메탄 (25.5 mL) 중의 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (1.7 g) 및 (1S,2S)-2-메틸사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드 (0.639 g, 1 eq)의 현탁액에 트리에틸아민 (2.48 mL, 3 eq)을 첨가하였다. 프로필 포스폰산 무수물(에틸 아세테이트 중 50%, 3.53 mL, 1.1 eq)을 냉각시키면서 적가하여 온도를 20℃ 미만으로 유지시켰다. 이후, 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. HPLC에 의해 종결되면, 포화된 중탄산나트륨 용액 (10 mL)를 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후, 층들을 분리시키고, 수성 상을 DCM (5 vol)으로 역추출하였다. 합한 DCM 층을 물 (2x 10 mL)로 세척하였다. DCM 층을 이후 황산나트륨 상에서 건조시키고, 120 mL/min로 2 렌티클 R55SP 제타 카본 쿠노(2 lenticle R55SP zeta carbon cuno) 카트리지를 통해 펌핑하였다. 카트리지를 DCM (17 mL)으로 세척하고, 합한 DCM 용액을 농축 건조시켜 황색 포움을 얻었다. 포움을, 용액으로부터 침전된 고형물을 30분 동안 교반한 후, 에틸 아세테이트 (34 mL) 중에 용해시키고, 슬러리를 5 ± 3℃에서 냉각시키고, 적어도 2시간 동안 에이징시켰다. 이후, 고형물을 진공 하에 여과해 내고, 냉각된 에틸 아세테이트 (3.4 mL)로 세척하였다. 이후, 생성물을 진공 하에 40℃ 내지 일정한 프로브 온도에서 건조시켰다. 수율: 52.6%.
실시예 103: 1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-N5-(2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00330
1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (200 mg, 0.628 mmol)을 DMF (5 mL) 중에 흡수시키고, HATU (263 mg, 0.691 mmol)를 첨가하고, 이어서 DIPEA (0.219 mL, 1.257 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되게 한 후, 2-메틸사이클로프로판아민 (44.7 mg, 0.628 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 생성물 (166 mg, 0.447 mmol, 71.1% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.00 min, [MH]+ = 372.1.
실시예 104: N5-사이클로프로필-1-(3-(2-(디메틸아미노)에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00331
2-브로모-N,N-디메틸에탄아민 (23 mg, 0.151 mmol, 예를 들어, City Chemical LLC로부터 상업적으로 입수가능함)을 실온에서 N2하에 N5-사이클로프로필-1-(3-하이드록시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (46 mg, 0.135 mmol) 및 수소화나트륨 (11 mg, 광유 중 60% 분산물 0.275 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 1.5시간 후, 추가 부분의 수소화나트륨 (10 mg, 광유 중 60% 분산물 0.25 mmol) 및 2-브로모-N,N-디메틸에탄아민 (40 mg, 0.263 mmol)을 첨가하였다. 또 다른 1시간 동안 교반한 후, 추가 부분의 2-브로모-N,N-디메틸에탄아민 (102 mg, 0.674 mmol) 및 수소화나트륨 (20 mg, 광유 중 60% 분산물 0.50 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응물을 물 (20 mL)로 켄칭시키고, EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 193 mg의 백색 고형물을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 25 g 카트리지, 0-50% (EtOAc 중 25% EtOH)/EtOAc로 용리), 다음에 DCM 중의 20% MeOH 중의 2M NH3)에 의해 정제하고, 적합한 분획을 수거하여 N5-사이클로프로필-1-(3-(2-(디메틸아미노)에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (6 mg, 0.012 mmol, 9.18 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.46 min, [MH]+ = 413.
실시예 105: N5-(((+/-)-트랜스)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00332
DIPEA (0.276 mL, 1.578 mmol)를 DMF (4 mL) 중의 1-(3-플루오로벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (200 mg, 0.526 mmol), 2-에톡시사이클로프로판아민, HCl 염 (106 mg, 1.052 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함), 및 HATU (300 mg, 0.789 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 90분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, 유기 층을 물 (2 x 20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하였다. 이를 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 형성된 오렌지색 오일을 DCM 중에 용해시키고, 25 g Biotage SNAP 실리카 컬럼 및 0 - 100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산의 구배를 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 분획이 불순한 것으로 밝혀졌고, 이에 따라 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 제거하고, 형성된 오렌지색 오일을 DMSO/메탄올 (1:1) 중에 용해시켰다. 이후, 이를 MDAP (TFA)에 의해 정제하고, 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성물을 2일 동안 진공 하에 건조되게 두어 N5-(2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (200 mg, 0.516 mmol, 98% 수율)를 연한 오렌지색 고형물로서, 부분입체 이성질체의 혼합물로서 얻고, 이들을 키랄 HPLC에 의해 분해하였다:
샘플을 9 mL의 DMSO 중에 용해시켰다. 열거된 크로마토그래피 조건을 사용하는 CSH C18 150 x 30 mm, 5 ㎛. 컬럼에 3000 μL 주입을 하였다. 용매 A: 수중 0.1% v/v 포름산 용액, 용매 B: 아세토니트릴 중 0.1% v/v 포름산 용액, 유량: 40 mL/min. 구배: 하기와 같음:
Figure pct00333
분별화는 다이오드 어레이 & 질량 분석 신호의 혼합에 의해 결정하였다: UV 검출: 파장 210 nm 내지 350 nm에서 합산된 신호. MS: Waters SQ, 이온화 모드: Alt. Pos./Neg. Electrospray, 스캔 범위: 100 내지 1000 AMU, 스캔 시간: 0.5 s, 스캔 간 지연: 0.2 s. 유량 및 구배는 주입 동안 주입기를 통과하는 흐름이 감소된 두 개의 펌프에 의해 제공되었다. 잔여 흐름은 전체 흐름이 일정하게 유지되도록 컬럼의 헤드에 도입된다. 분별화로 샘플을 다수 용기로 수거하였고, 적합한 분획을 합하고, Biotage V10 증발기를 사용하여 건조시켰다. 이것이 트랜스-부분입체이성질체(실시예 105)를 백색 고형물 (106 mg)로서 제공하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 388.1.
실시예 106: (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-에틸사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00334
실온에서 교반된 DMF (500 μL) 중의 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (25 mg, 0.077 mmol), 및 HATU (35.1 mg, 0.092 mmol)의 용액에 (+/-)-(트랜스)-2-에틸사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드 (18.69 mg, 0.154 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함) 및 DIPEA (26.8 μL, 0.154 mmol)를 첨가하고, 반응물을 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DMSO (0.5 mL)로 희석하고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 진공 하에 증발시켜 순수한 생성물 (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-에틸사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (15 mg, 0.036 mmol, 47.2 % 수율)를 오프 화이트 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.93 min, [MH]+ = 393.2.
실시예 107-112: 1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산의 아미드 어레이
DMF (5.5 mL) 중의 1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (337 mg, 0.97 mmol) 및 HATU (374 mg)의 저장 용액에 DIPEA (550 μL)를 첨가하였다. 용액을 진탕시키고, 분산을 돕기 위해 초음파 처리하고, 사전 칭량된 아민의 세트(하기 표에 보여진 바와 같음)로 분취하였다(0.55 mL). 추가의 DIPEA (55 μL)를 실시예 107 반응 혼합물에 첨가하여 아민 모노머의 HCl 염을 보충하였다. 실온에서 18시간 후, 샘플을 그대로 주입하고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 건조시켜 요구되는 생성물을 얻었다. 실시예 111을 DCM (0.5 mL) 중에 용해시키고, TFA (0.5 mL)로 처리하고, 용액을 실온에서 2시간 동안 캡핑된 바이알에서 방치되게 두었다. 반응 혼합물을 증발시키고, 실시예 111을 MeOH (0.5 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 MeOH-사전 컨디셔닝된 100 mg SCX-2 카트리지에 적용시키고, 이를 이후 MeOH (1 mL)로 세척한 후, MeOH 중 2 M 암모니아 용액(1 mL)으로 세척하였다. 염기성 세척액을 증발 건조시켜 최종 탈보호된 화합물을 유리 염기(하기 표에서 보여지는 바와 같이)로서 얻었다. 실시예 111을 다시 MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 건조시켜 요구되는 생성물을 얻었다.
모노머
Figure pct00335
실시예
Figure pct00336
Figure pct00337
Figure pct00338
모든 LCMS를 2 min 포믹 방법을 사용하여 수행하였다.
실시예 113: (R*)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 - 거울상이성질체 1
Figure pct00339
rac-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (예를 들어, 실시예 88 , 117 mg)를 EtOH (3 mL) 중에 용해시키고, 키랄 크로마토그래피로 정제하였다:
분석 방법:
대략 0.5 mg의 라세메이트를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 20 μL를 컬럼 (컬럼: 4.6 mm id x 25 cm 키랄팍 AD-H, 로트 번호 ADH0CE-PC014) 상에 주입하였다. 이를 25% EtOH/헵탄, 유량 = 1.0 mL/min, 검출 파장 = 215 nm, 4. Ref 550,100로 용리시켰다.
제조 방법:
대략 117 mg의 라세메이트를 3 mL EtOH 중에 용해시켰다. 주입; 1 mL의 용액을 컬럼 (컬럼: 30 mm x 25 cm 키랄팍 AD-H, 로트 번호 ADH12143-01)에 주입하였다. 이를 25% EtOH/헵탄, 유량 = 30 mL/min로 용리시킴, 검출 파장 = 215 nm, 4. Ref 550,100. 주입 총수: 3. 10.5-13.5분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 15.5-24 분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 피크 1에 대해 합한 분획을 진공 하에 증발시켜 순수한 거울상이성질체 1을 백색 고형물 (51 mg)로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.96 min, [MH]+ = 354.
실시예 115: N5-(2-에톡시사이클로프로필)-1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00340
1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (200 mg, 0.628 mmol)을 DMF (5 mL) 중에 흡수시키고, HATU (263 mg, 0.691 mmol)를, 이후에 DIPEA (0.219 mL, 1.257 mmol)를 흡수시켰다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되게 한 후, 2-에톡시사이클로프로판아민 (47.7 mg, 0.471 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 생성물 (100 mg, 0.249 mmol, 52.9% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.97 min, [MH]+ = 402.2.
실시예 116-118 및 130: 1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산의 아미드 어레이
모노머
Figure pct00341
DMF (5.5 mL) 중에 용해된 1-(2-플루오로-3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (350 mg, 1.1 mmol)의 저장 용액에 HATU (502 mg, 2.13 mmol) 및 DIPEA (570 μL, 3.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 분산을 돕기 위해 초음파 처리하고, 추가의 DMF (5.5 mL)를 첨가하였다. 이 혼합물의 분취물 (1.0 mL)을 바이알 내 DMF (0.3 mL) 중의 적합한 아민 (0.12 mmol)에 첨가하고, 이후 밀봉하고, 초음파처리하고, 실온에서 3시간 동안 방치되게 두었다. 샘플을 1 mL로 감소시킨 후, 그대로 주입하고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 플레이트 드라이어(plate dryer)를 사용하여 건조시켜 표에 보이는 요구되는 생성물을 얻었다.
DCM (0.5 mL) 및 TFA (0.5 mL)를 실시예 130을 제조하기 위해 사용되는 아민 모노머로부터 유도된 생성물에 첨가하고, 바이알을 캡핑하고, 2시간 동안 실온에서 방치되게 두었다. 용매를 플레이트 드라이어를 사용하여 제거하였다. 잔류물을 MeOH (0.5 mL) 중에 재용해시키고, SCX-2 SPE 카트리지 (1 g, MeOH (1 mL)사전 컨디셔닝됨)의 상부에 적용하였다. 카트리지를 추가의 MeOH (1 mL), 그 다음에 2M NH3/MeOH (1 mL)로 용리시켰다. 용매를 샘플로부터 질소 스트림 하에 증발시켰다. 잔류물을 DCM (1 mL) 중에 용해시키고, 아미노프로필 카트리지 (100 mg)(CHCl3로 사전 컨디셔닝됨)에 적용하고, 이를 추가의 CHCl3 (1 mL)로 용리시키고, 농축시켜 요망하는 실시예 130를 제공하였다.
실시예
Figure pct00342
Figure pct00343
실시예 119: 1-(4-플루오로벤질)-N5-((1R*,2R*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 - 거울상이성질체 1
및
실시예 120: 1-(4-플루오로벤질)-N5-((1S*,2S*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 - 거울상이성질체 2
Figure pct00344
1-(4-플루오로벤질)-N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (예를 들어, 실시예 86, 145 mg)를 EtOH (9 mL) 중에 용해시키고, 키랄 크로마토그래피로 정제하였다:
분석 방법:
대략 0.5 mg 라세메이트를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 이것의 20 μL를 컬럼 (컬럼 4.6 mm id x 25 cm 키랄팍 AD-H, 로트 번호 ADH0CE-PC014) 상에 주입하고, 60% EtOH/헵탄, 유량 = 1.0 mL/min, 검출 파장 215 nm, 4. Ref 550,100로 용리시켰다.
제조 방법:
대략 145 mg 라세메이트를 가열하면서 9 mL EtOH 중에 용해시켰다. 주입; 3 mL의 용액을 컬럼 (컬럼: 30 mm x 25 cm 키랄팍 AD-H, 로트 번호 ADH12143-01)에 주입하고, 60% EtOH/헵탄, 유량 = 25 mL/min, 검출 파장 215 nm, 4. Ref 550,100로 용리시켰다. 주입 총수 = 3. 14-19분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 22-31분으로부터의 분획을 크게하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 회전 증발기를 사용하여 진공 처리한 후, 상기 분석 방법에 의해 기술된 바와 같이 최종 분석을 위한 칭량된 플라스크로 옮기었다. 피크 1로부터 합한 분획을 진공 하에 증발시켜 순수한 거울상이성질체 1을 무색 고형물(72 mg)로서 얻었다.
HPLC-UV: RT ~11.0분, > 99.5%의 면적 HPLC @ 215 nm에 의한 이성질체 순도.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.75 min, [MH]+ = 374.1
피크 2로부터 합한 분획을 진공 하에 증발시켜 순수한 거울상이성질체 2를 무색 고형물 (65 mg)로서 얻었다.
HPLC-UV: RT ~19.0분, 98.3%의 면적 HPLC @ 215 nm에 의한 이성질체 순도.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.76 min, [MH]+ = 374.2.
실시예 121: 1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((1R*,2R*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 - 거울상이성질체 1
및
실시예 122: 1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((1S*,2S*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 - 거울상이성질체 2
Figure pct00345
(+/-)-1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (예를 들어, 실시예 82, 90 mg)를 EtOH (2 mL) 중에 용해시키고, 키랄 크로마토그래피로 정제하였다:
분석 방법:
대략 0.5 mg 라세메이트를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 20 μL 의샘플을 컬럼 (컬럼: 4.6 mm id x 25 cm 키랄셀 OJ-H, 로트 번호 OJH0CE-QL055) 상에 주입하고, 이를 5% EtOH (+0.2% 이소프로필아민)/헵탄, 유량 = 1.0 mL/min, 검출 파장 = 215 nm, 4. Ref 550,100로 용리시켰다.
제조 방법:
대략 90 mg의 라세메이트를 가열하면서 2 mL EtOH 중에 용해시켰다. 주입: 1 mL의 용액을 컬럼 (컬럼: 30 mm x 25 cm 키랄셀 OJ-H, 로트 번호 OJH10027-01)에 주입하였다. 이를 5% EtOH (+0.2% 이소프로필아민)/헵탄 (+0.2% 이소프로필아민), 유량 = 30 mL/min, 검출 파장 = 215 nm, 4. Ref 550, 100로 용리시켰다. 주입 총수 = 3. 31-38분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 38-43분으로부터의 분획을 크게 하고, 믹스로 라벨링하였다. 43-54분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 믹스 분획을 크게 하고, 진공 처리하고, 상기 제조 방법을 사용하여 재처리하였다. 커진 분획을 회전 증발기를 사용하여 진공 처리한 후, 상기 분석 방법에 의해 기술된 바와 같이 최종 분석을 위한 칭량된 플라스크로 옮기었다. 피크 1로부터 합한 분획을 진공 하에 증발시켜 순수한 거울상이성질체 1을 무색 고형물 (44 mg)로서 얻었다.
HPLC-UV: RT ~30분, > 99.5%의 면적 HPLC @ 215 nm에 의한 이성질체 순도
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.92 min, [MH]+ = 358.2
피크 2로부터 합한 분획을 진공 하에 증발시켜 순수한 거울상이성질체 2를 무색 고형물 (43 mg)로서 얻었다.
HPLC-UV: RT ~40분, 97%의 면적 HPLC @ 215 nm에 의한 이성질체 순도.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.92 min, [MH]+ = 358.1.
실시예 123: N5-((1R*,2R*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 - 거울상이성질체 1
및
실시예 124: N5-((1S*,2S*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 - 거울상이성질체 1
Figure pct00346
N5-(2-에톡시사이클로프로필)-1-(4-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (예를 들어, 실시예 87, 98 mg)를 EtOH (2 mL) 중에 용해시키고, 키랄 크로마토그래피로 정제하였다:
분석 방법:
대략 0.5 mg 라세메이트를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 20 μL의 샘플을 컬럼 (컬럼: 4.6 mm id x 25 cm 키랄셀 OJ-H, 로트 번호 OJH0CE-QL055) 상에 주입하였다. 이를 40% EtOH/헵탄, 유량 = 1.0 mL/min, 검출 파장 = 215 nm, 4. Ref 550,100로 용리시켰다.
제조 방법:
대략 98 mg 라세메이트를 가열하면서 2 mL EtOH 중에 용해시켰다. 주입: 2 mL의 용액을 컬럼 (컬럼: 30 mm x 25 cm 키랄셀 OJ-H, 로트 번호 OJH10027-01)에 주입하였다. 이를 40% EtOH/헵탄, 유량 = 30 mL/min, 검출 파장 = 215 nm, 4. Ref 550, 100로 용리시켰다. 주입 총수 = 1. 7.5-11분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 13.5-21분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 회전 증발기를 사용하여 진공 처리한 후, 상기 분석 방법에 의해 기술된 바와 같이 최종 분석을 위한 칭량된 플라스크로 옮기었다. 피크 1로부터 합한 분획을 진공 하에 증발시켜 순수한 거울상이성질체 1을 무색 고형물 (45 mg)로서 얻었다.
HPLC-UV: RT ~7.5분, > 99.5%의 면적 HPLC @ 215 nm에 의한 이성질체 순도
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 388.2
피크 2로부터 합한 분획을 진공 하에 증발시켜 순수한 거울상이성질체 2를 무색 고형물 (44 mg)로서 얻었다.
HPLC-UV: RT ~13.5분, > 99.5%의 면적 HPLC @ 215 nm에 의한 이성질체 순도.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.92 min, [MH]+ = 358.1.
실시예 125: N5-((1R*,2R*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 - 거울상이성질체 1
및
실시예 126: N5-((1S*,2S*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 - 거울상이성질체 2
Figure pct00347
N5-(2-에톡시사이클로프로필)-1-(4-플루오로-3-메틸벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (예를 들어, 실시예 98, 144 mg)를 EtOH (2 mL) 중에 용해시키고, 키랄 크로마토그래피로 정제하였다:
분석 방법:
대략 0.5 mg 라세메이트를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 20 μL 의 샘플을 컬럼 (컬럼: 4.6 mm id x 25 cm 키랄셀 OJ-H, 로트 번호 OJH0CE-QL055) 상에 주입하였다. 이를 25% EtOH/헵탄, 유량 = 1.0 mL/min, 검출 파장 = 215 nm, 4. Ref 550, 100로 용리시켰다.
제조 방법:
대략 144 mg 라세메이트를 가열하면서 2 mL EtOH 중에 용해시켰다. 주입; 1 mL의 용액을 컬럼 (컬럼: 30 mm x 25 cm 키랄셀 OJ-H, 로트 번호 OJH10027-01)에 주입하였다. 이를 25% EtOH/헵탄, 유량 = 30 mL/min, 검출 파장 = 215 nm, 4. Ref 550, 100로 주입하였다. 주입 총수 = 2. 8-9.5분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 12-17분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 회전 증발기를 사용하여 진공 처리한 후, 상기 분석 방법에 의해 기술된 바와 같이 최종 분석을 위한 칭량된 플라스크로 옮기었다. 피크 1로부터 합한 분획을 진공 하에 증발시켜 순수한 거울상이성질체 1을 무색 고형물 (56 mg)로서 얻었다.
HPLC-UV: RT ~7.0분, > 99.5%의 면적 HPLC @ 215 nm에 의한 이성질체 순도.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.98 min, [MH]+ = 402.2
피크 2로부터 합한 분획을 진공 하에 증발시켜 순수한 거울상이성질체 2를 무색 고형물 (66 mg)로서 얻었다.
HPLC-UV: RT ~11.5분, > 99.5%의 면적 HPLC @ 215 nm에 의한 이성질체 순도.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.99 min, [MH]+ = 402.3.
실시예 127: N5-((1R*,2R*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
및
실시예 128: N5-((1S*,2S*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00348
(+/-)-N5-((트랜스)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-플루오로벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (예를 들어, 실시예 105, ~ 100 mg)를 키랄 분리를 위해 제공하였다:
분석 방법:
대략 0.5 mg 부분입체이성질체를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 20 μL의 샘플 용액을 20% EtOH/헵탄, 1 mL/min의 속도로 용리되고, 215 nm의 파장으로 분석되는 컬럼 (4.6 mm id x 25 cm 키랄셀 OJ-H 로트 번호 OJH0CE-QL055)에 주입하였다.
제조 방법:
대략 100 mg 부분입체이성질체를 가열하면서 EtOH (1 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 1 mL의 샘플 용액을 30 mL/min의 속도로 20% EtOH/헵탄으로 용리되고, 215 nm의 파장으로 분석되는 컬럼 (30 mm x 25 cm 키랄셀 OJ-H 로트 번호 OJH10027-01)에 주입하였다. 10-14분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 15.5-21분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다.
피크 1: 이것이 단일 거울상이성질체 (실시예 127)를 백색 고형물 (40 mg)로서 제공하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 388.2.
피크 2: 이것이 단일 거울상이성질체 (실시예 128)를 백색 고형물 (40 mg)로서 제공하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 388.2.
실시예 129: N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-5-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00349
3차-부틸 5-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-카복실레이트 (5 mg, 10.40 μmol) 및 TFA (0.1 mL, 1298 ㎛ol)를 실온에서 30분 동안 DCM (0.4 mL) 중에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 500 mg SCX 카트리지 (MeOH로 사전-컨디셔닝됨) 상에 로딩시키고, MeOH (5 mL)로 용리시키고, 이어서 MeOH 중의 2M NH3 (5 mL)로 용리시켰다. 생성물을 함유하는 암모니아 분획을 합하고, 농축시켜 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-((1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-5-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (4 mg, 9.46 ㎛ol, 91 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.42 min, [MH]+ = 381.
실시예 131: 1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-N5-(2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00350
1-(2-플루오로-5-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (120 mg, 0.377 mmol)을 DMF (3 mL) 중에 흡수시키고, HATU (158 mg, 0.415 mmol)를 첨가하고, 이어서 DIPEA (0.132 mL, 0.754 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되게 한 후, (2-아미노사이클로프로필)메탄올 (32.8 mg, 0.377 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (90 mg, 0.232 mmol, 61.6% 수율)을 오렌지색-백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.81 min, [MH]+ = 388.2.
실시예 132: (+/-)-N5-((트랜스)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00351
1-(3-메톡시벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (200 mg, 0.632 mmol)을 DMF (3 mL) 중에 흡수시키고, HATU (264 mg, 0.696 mmol)을 첨가하고, 이어서 DIPEA (0.221 mL, 1.265 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되게 한 후, (2-아미노사이클로프로필)메탄올 (55.1 mg, 0.632 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (161 mg, 0.418 mmol, 66.1% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.74 min, [MH]+ = 386.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.35 (br. q, J=4.5, 4.5, 4.5 Hz, 1 H) 8.80 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.69 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.56 (br. d, J=4.2 Hz, 1 H) 7.27 (t, J=7.8 Hz, 1 H) 6.82 - 6.92 (m, 3 H) 5.25 (s, 2 H) 4.48 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 3.73 (s, 3 H) 3.30 - 3.42 (m, 2 H) 2.82 (d, J=4.9 Hz, 3 H) 2.71 (m, J=7.3, 3.4 Hz, 1 H) 1.22 (dqd, J=9.1, 6.1, 6.1, 6.1, 3.4 Hz, 1 H) 0.64 - 0.72 (m, 2 H).
실시예 133: 1-(2-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((1S*,2S*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
및
실시예 134: 1-(2-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((1R*,2R*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00352
(+/-)-1-(2-플루오로벤질)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (예를 들어, 실시예 61, ~30 mg)를 키랄 분리를 위해 제공하였다:
분석 방법:
대략 0.5 mg 라세메이트를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 주입; 20 μL의 샘플 용액을 10% EtOH(+0.2% 이소프로필아민)/헵탄, 1 mL/min의 속도로 용리되고, 215 nm의 파장으로 분석되는 컬럼 (4.6 mm id x 25 cm 키랄팍 IA 로트 번호 IA00CE-MC024)에 주입하였다.
제조 방법:
대략 30 mg 라세메이트를 EtOH (2 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 0.5 mL의 샘플 용액을 20 mL/min의 속도로 10% EtOH (+0.2% 이소프로필아민)/헵탄 (+0.2% 이소프로필아민)으로 용리되고, 215 nm의 파장으로 분석되는 컬럼 (2 cm x 25 cm 키랄팍 IA (5 ㎛) 로트 번호 IA00CJ-KF008)에 주입하였다. 34-37분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하고; 37-40분으로부터의 분획을 크게 하고, 믹스로 라벨링하였다. 40-50분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 믹스 분획을 진공 처리하고, 상기 제조 방법을 사용하여 재처리하였다.
피크 1: 이것이 단일 거울상이성질체 (실시예 133)를 백색 고형물 (11 mg)로서 제공하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 358.2.
피크 2: 이것이 단일 거울상이성질체 (실시예 134)를 백색 고형물 (10 mg)로서 제공하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 358.2.
실시예 135-138: 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산의 아미드 어레이
모노머
Figure pct00353
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (358 mg)의 저장 용액을 DMF (7.7 mL) 중에서, HATU (502 mg), 및 DIPEA (0.57 mL)과 함께 제조한 후, 캡핑시키고, 초음파 처리한 후, 열거된 아민 모노머를 함유하는 바이알(0.12 mmol)에 분취하였다(0.7 mL). 이를 밀봉하고, 초음파 처리한 후, 실온에서 18시간 동안 방치되게 하였다. 이후, 샘플을 직접 주입하고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 플레이트 드라이어를 사용하여 제거하여 실시예 표에 표시되어 있는 요구되는 생성물을 얻었다.
실시예
Figure pct00354
Figure pct00355
* 모든 LCMS를 2 min 포믹을 사용하여 수행하였다.
실시예 139: (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00356
실온에서 교반된 DMF (1.217 mL) 중의 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (150 mg, 0.304 mmol, 66중량% 순도), 및 HATU (174 mg, 0.456 mmol)의 용액에 (트랜스)-2-메틸사이클로프로판아민 (43.3 mg, 0.609 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함) 및 DIPEA (106 μL, 0.609 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (4 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 황색 고형물 (223 mg)로서 얻었다. 고형물을 디클로로메탄 중의 상태로/메탄올 10 g SNAP 카트리지 상에 로딩하고, 0 - 50 % (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는 Biotage SP4를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 정제된 생성물 (48 mg)을 얻었다.
생성물이 실리카 상에 침전된 것으로 나타났고, 컬럼을 에틸 아세테이트 중 50 % 에탄올로 플러싱하였다. 회수된 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 추가의 생성물을 황색 고형물 (91 mg)로서 얻었다. 이 샘플을 MeOH:DMSO (1:1, 1 mL) 중에 용해시키고, MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 용매를 생성물의 초기 배치(48 mg)와 합하고, 진공 하에 증발시켜 (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (98 mg, 0.259 mmol, 85 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.86 min, [MH]+ = 379.2.
실시예 140: (+/-)-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-N5-((시스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00357
DMF (3 mL) 중의 1-(3-메틸벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (200.5 mg, 0.668 mmol) 및 HATU (310 mg, 0.815 mmol)의 용액에 2-메틸사이클로프로판아민 (94.1 mg, 1.323 mmol, 예를 들어, Fluorochem으로부터 상업적으로 입수가능함) 및 DIPEA (0.233 mL, 1.335 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 실온에서 0.5시간 동안 계속 교반하면서 추가의 HATU (129 mg, 0.339 mmol) 및 DIPEA (0.117 mL, 0.668 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 스트림 하에 농축시킨 후, DMSO을 사용하여 3 mL가 되게 하였다. 이후, 이를 직접 MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 시스-부분입체이성질체에 상응하는 적당한 분획을 질소 스트림 하에 농축시킨 후, 디클로로메탄/메탄올 (4 mL, 1:1)의 혼합물 중에 용해시키고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 크림색 고형물로서 생성물 - (±)-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-N5-((시스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (11.3 mg, 0.032 mmol, 4.79 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.96 min, [MH]+ = 354.2.
트랜스-부분입체이성질체에 상응하는 적합한 분획을 또한 합하고, 진공 하에 농축시킨 후, 디클로로메탄/메탄올 (10 mL, 1:1)의 혼합물 중에 용해시키고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 백색 고형물로서 생성물 - (±)-N3-메틸-1-(3-메틸벤질)-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (172.6 mg, 0.488 mmol, 73.1 % 수율)를 얻었다.
실시예 141: (+/-)-N5-사이클로프로필-1-(3-(1-하이드록시에틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00358
-78℃에서 질소 하에 THF (10 mL) 중의 N5-사이클로프로필-1-(3-포르밀벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (183 mg, 0.518 mmol)의 용액에 메틸마그네슘 브로마이드의 용액(디에틸 에테르 중 3M) (0.690 mL, 2.071 mmol)을 적가하였다. 반응물을 -78℃에서 45분 동안 교반하였다. 반응물을 여전히 -78℃에 있을 때 메탄올로 켄칭시켰다. 용액을 주위 온도로 가온시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (50 mL) 중에 현탁시키고, 물 (50 mL)로 세척하였다. 어느 정도의 불용성 고형물이 수성 층에 잔류하였다. 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 역추출하고, 합한 유기물질을 염수 (10 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 황색 유리(202 mg)로서 얻었다. 고형물을 최소량의 디클로로메탄 중의 상태로 SNAP 카트리지 (10 g) 상에 로딩하고, 15-75 % (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 담황색 검(145 mg)을 얻었다. 샘플을 MeOH:DMSO (2 x 1 mL, 1:1) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 요망하는 생성물 - N5-사이클로프로필-1-(3-(1-하이드록시에틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (62 mg, 0.156 mmol, 30.1 % 수율)를 황색 고형물로서 얻었다. 이 생성물을 디에틸 에테르 중에서 함께 초음파 처리함으로써 유사한 방식으로 제조된 생성물의 제2 배치와 합하고, 진공 하에 증발시킴으로써 - N5-사이클로프로필-1-(3-(1-하이드록시에틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (86.4 mg, 0.222 mmol, 42.9 % 수율)를 담황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.69 min, [MH]+ = 370.2.
실시예 142: N5-((1R,2R)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00359
(+/-)-N5-((트랜스)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (161 mg, 0.418 mmol, 예를 들어, 실시예 132로부터)를 이의 두 개의 거울상이성질체로 분리시켰다:
분석 방법:
라세메이트 (~0.5 mg)를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시키고, 20 uL를 컬럼 상에 주입하였다.(컬럼: 4.6 mm id x 25 cm 키랄팍 IA, 로트 번호 IA00CE-KL030). 이를 50% EtOH (+0.2% 이소프로필아민)/헵탄, f=1.0 mL/min, 검출기 파장 230 nm, 4. Ref 550,100로 용리시켰다.
제조 방법:
라세메이트 (~151 mg)를 가열하면서 DCM (2 mL) 및 EtOH (4 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 3 mL의 용액을 컬럼 (컬럼: 30 mm x 25 cm 키랄팍 IA (5 ㎛), 로트 번호 IA11157-01)에 주입하였다. 이를 50% EtOH (+0.2% 이소프로필아민)/헵탄 (+0.2% 이소프로필아민), 유량 = 30 mL/min, 검출기 파장 = 215 nm, 4. Ref 550, 100로 용리시켰다. 주입 총수: 2. 18-23분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 26.5-36분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 회전 증발기를 사용하여 진공 처리한 후, 상기 분석 방법에 의해 기술된 바와 같이 최종 분석을 위한 칭량된 플라스크로 옮기었다. 최종 물질을 DCM 및 헵탄으로부터 회수하여 고형물을 얻었다.
피크 1, 실시예 142를 수거하여 백색 고형물로서 얻었다. (46 mg, 0.119 mmol, 28.6% 수율)
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.75 min, [MH]+ = 386.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.35 (br. q, J=4.2 Hz, 1 H) 8.80 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.69 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.56 (br. d, J=4.4 Hz, 1 H) 7.27 (t, J=7.8 Hz, 1 H) 6.82 - 6.92 (m, 3 H) 5.25 (s, 2 H) 4.48 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 3.73 (s, 3 H) 3.31 - 3.43 (m, 2 H) 2.82 (d, J=4.9 Hz, 3 H) 2.69 - 2.75 (m, 1 H) 1.22 (dqd, J=9.1, 6.1, 6.1, 6.1, 3.4 Hz, 1 H) 0.63 - 0.72 (m, 2 H).
실시예 143: N5-사이클로프로필-1-(인돌린-4-일메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00360
3차-부틸 4-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)인돌린-1-카복실레이트 (43 mg, 0.092 mmol) 및 TFA (0.5 mL, 6.49 mmol)를 실온에서 30분 동안 DCM(2 mL) 중에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, SCX 카트리지 (5 g, MeOH로 사전-컨디셔닝됨) 상에 로딩시키고, MeOH (20 mL)로 용리시키고, 이어서 MeOH 중의 2M NH3 (20 mL)로 용리시켰다. 생성물을 함유하는 암모니아 분획을 합하고, 농축시켜 N5-사이클로프로필-1-(인돌린-4-일메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (30 mg, 0.074 mmol, 80 % 수율)를 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.45 min, [MH]+ = 367.2.
1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.81 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.43 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 6.97 (t, J=7.8 Hz, 1 H) 6.61 (d, J=7.8 Hz, 1 H) 6.47 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 5.22 (s, 2 H) 3.49 (t, J=8.4 Hz, 2 H) 2.98 (t, J=8.4 Hz, 2 H) 2.94 (s, 3 H) 2.79 (tt, J=7.3, 3.8 Hz, 1 H) 0.74 - 0.81 (m, 2 H) 0.58 - 0.63 (m, 2 H).
실시예 144: N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((1-메틸-1H-인돌-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00361
DMF (900 μL) 중의 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (50 mg, 0.137 mmol, 예를 들어, 실시예 67)의 용액에 탄산칼륨 (47.4 mg, 0.343 mmol) 및 아이오도메탄 (17.16 μL, 0.274 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 아이오도메탄 (8.58 μL, 0.137 mmol)를 첨가하고, 19시간 동안 계속 교반하였다. 추가 부분의 탄산칼륨 (114 mg, 0.823 mmol) 및 아이오도메탄 (42.9 μL, 0.686 mmol)을 첨가하였다. 반응을 추가의 24시간 동안 지속시킨 후, 진공 하에 농축시키고, 탈지면을 통해 여과하였으나, 필터가 막히게 되었다. 필터를 메탄올로 세척하고, 세척물을 합하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 1 mL 바이알 내로 탈지면을 통해 재여과시키고, DMSO를 사용하여 최대 1 mL로 희석하였다. 용액을 MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 관련 분획을 질소 스트림 하에 건조시켜 요구되는 생성물 N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((1-메틸-1H-인돌-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (12.3 mg, 0.031 mmol, 22.50 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.89 min, [MH]+ = 379.3.
실시예 145: N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00362
3차-부틸 7-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-1-카복실레이트 (10 mg, 0.021 mmol)를 IPA 중의 HCl (0.634 μL, 0.021 mmol) 중에 용해시키고, 실온에서 3일에 걸쳐 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 메탄올 중에 용해시키고, 사전-컨디셔닝된 SCX 컬럼 (1 g) 상에 로딩시켰다. 이후 메탄올 (10 mL)을 컬럼을 통과시키고, 이어서 2M 메탄올성 암모니아를 통과시켰다. 메탄올성 암모니아 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (3.7 mg, 9.75 ㎛ol, 46.8% 수율)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.42 min, [MH]+ = 380.2.
실시예 146: 1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00363
DMF (3 mL) 중의 N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (187 mg, 0.548 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (151 mg, 1.095 mmol) 및 1-(브로모메틸)-3-메톡시벤젠 (165 mg, 0.821 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (30 mL)을 첨가함으로써 켄칭시킨 후, EtOAc (30 mL)를 첨가하였다. 층들을 분리시키고, 수성 층을 추가로 EtOAc (2 x 30 mL)로 추출하였다. 이후, 합한 유기물질을 물 (2 x 30 mL) 및 이후 염수 (2 x 20 mL)로 역추출하였다. 유기 층을 건조시키고(Na2SO4), 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 황색 오일로서 얻었다. 이를 DCM 중에 흡수시키고, SNAP (25 g) 실리카 카트리지에 첨가하고, 이를 40->100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리되는 플래시 SP4 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 순수한 분획을 수거하고, 진공 하에 농축시켜 무색 오일로서 요망하는 생성물 - 1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (115 mg, 0.311 mmol, 56.8 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 370.1.
실시예 147: N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((3-메틸-1H-인돌-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00364
질소 하에 실온에서 교반된 메탄올 (376 μL) 및 THF (751 μL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((3-메틸-1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (60 mg, 0.113 mmol)의 용액에 고체 세슘 카보네이트 (147 mg, 0.451 mmol)를 하나의 충전물로 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 70℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 에틸 아세테이트 (30 mL) 및 물 (10 mL) 중에 흡수시켰다. 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 10 mL)로 추출하고, 합한 유기물질을 염수 (10 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (38 mg)을 얻었다. 샘플을 MeOH:DMSO (1 mL, 1:1) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 건조시켜 N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((3-메틸-1H-인돌-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (21 mg, 0.055 mmol, 49.3 % 수율)를 오프 화이트 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.83 min, [MH]+ = 379.2.
실시예 148: 1-((1H-인다졸-7-일)메틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00365
DMF (2 mL) 중의 1-((1H-인다졸-7-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (17 mg, 0.052 mmol)의 용액에 HATU (30 mg, 0.079 mmol)를 첨가하고, 이어서 (1S,2S)-2-메틸사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드 (8 mg, 0.074 mmol) 및 DIPEA (0.036 mL, 0.209 mmol)를 첨가하였다. 형성된 반응 혼합물을 실온에서 N2 하에 2.5시간 동안 교반하였다(황색 용액 형성). 미정제 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 LiCl의 포화 용액 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 분리시키고, 수성 층을 추가로 에틸 아세테이트로 추출하였다. LCMS는 수성 층 중에 여전히 어느 정도의 생성물이 있음을 나타냈고, 이에 따라 이를 추가의 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고(Na2SO4), 농축시켜 ~5629 mg의 무기물로 오염된 미정제 백색 고형물을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 10 g 카트리지, 0-100%의 에틸 아세테이트/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하여 1-((1H-인다졸-7-일)메틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (17 mg, 0.040 mmol, 77 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.82 min, [MH]+ = 380.0.
실시예 149: (+/-)-N5-((트랜스)-2-에틸사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00366
1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (150 mg, 0.433 mmol)을 DMF (5 mL) 중에 흡수시키고, HATU (181 mg, 0.476 mmol)를 첨가하고, 이어서 DIPEA (0.076 mL, 0.433 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되게 한 후, (트랜스)-2-에틸사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드 (57.9 mg, 0.476 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함)를 첨가하고, 반응물을 밤새 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 에틸 아세테이트 (20 mL)와 시트르산 용액 (20 mL) 사이에서 분배시켰다. 에틸 아세테이트 층을 분리시키고, 중탄산나트륨 용액 (20 mL)으로 세척한 후, 물 (20 mL)로 세척하였다. 에틸 아세테이트 층을 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (152 mg, 0.368 mmol, 85% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다. 이후, 고형물을 메탄올 중에 용해시키고, 사전-준비된 2 g 아미노프로필 카트리지를 통과시켰다. 생성물 함유 분획을 합하여 표제 화합물 (101 mg, 0.244 mmol, 56.4%)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 414.2.
실시예 150: 1-(벤조푸란-4-일메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00367
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (44 mg, 0.187 mmol), 4-(브로모메틸)벤조푸란 (45 mg, 0.213 mmol), 탄산칼륨 (55 mg, 0.398 mmol) 및 DMF (1 mL)를 90℃에서 3시간 동안 교반하였다. 현탁액을 EtOAc (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, EtOAc (20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 300 mg을 황색 오일로서 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 25 g 카트리지, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 20 mg의 무색 오일로서 얻었다. 이를 MDAP (Formic, 1 mL로 주입되는 샘플, 1:1 DMSO:MeOH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 1-(벤조푸란-4-일메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (13 mg, 0.032 mmol, 17.12 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.87 min, [MH]+ = 366.1.
실시예 151: N5-((트랜스)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1-((S*)-1-(m-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드, cPr 입체 중심에서의 부분입체이성질체의 1:1 혼합물
Figure pct00368
(S*)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1-(1-(m-톨릴)에틸)-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (147 mg, 0.468 mmol), HATU (263 mg, 0.692 mmol), DIPEA (0.25 mL, 1.431 mmol), (+/-)-((트랜스)-2-아미노사이클로프로필)메탄올 (85 mg, 0.976 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함) 및 DMF (2 mL)를 실온에서 N2 하에 1시간 동안 교반하였다.
추가의 HATU (283 mg, 0.744 mmol), DIPEA (0.25 mL, 1.431 mmol) 및 (+/-)-((트랜스)-2-아미노사이클로프로필)메탄올 (79 mg, 0.907 mmol)를 첨가하고, 반응물을 30분 동안 교반하였다. 용액을 농축시키고, EtOAc (20 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분배시키고, EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 590 mg의 황색 오일을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g 카트리지, 0-50% (EtOH 중의 25% EtOAc)/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 N5-((트랜스)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1-((S*))-1-(m-톨릴)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (204 mg, 0.468 mmol, 100 % 수율)를 cPr 입체중심에서 부분입체이성질체들의 혼합물로서, 그리고, 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 384.2.
실시예 152: (+/-)-1-(1-(1H-인돌-4-일)에틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00369
메탄올 (0.5 mL) 및 THF (1 mL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(1-(1-토실-1H-인돌-4-일)에틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (40 mg, 0.075 mmol)의 용액에 질소 하에 실온에서, 세슘 카보네이트 (186 mg, 0.571 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용액을 EtOAc (10 mL)와 물 (10 mL) 사이에서 분배시키고, EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 50 mg을 오프 화이트 고형물로서 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 25 g 카트리지, 0-100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 1-(1-(1H-인돌-4-일)에틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (27 mg, 0.064 mmol, 86 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.85 min, [MH]+ = 379.2.
실시예 153: 1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00370
1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (80 mg, 0.231 mmol)을 DMF (2.5 mL) 중에 흡수시키고, HATU (97 mg, 0.254 mmol)를 첨가하고, 이어서 DIPEA (0.081 mL, 0.462 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반되게 한 후, (1S,2S)-2-메틸사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드 (27.3 mg, 0.254 mmol)를 첨가하고, 반응물을 밤새 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 에틸 아세테이트 (20 mL)와 시트르산 용액 (20 mL) 사이에서 분배시켰다. 에틸 아세테이트 층을 분리시키고, 중탄산나트륨 용액 (20 mL)으로 세척한 후, 물 (20 mL)로 세척하였다. 에틸 아세테이트 층을 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (8 mg, 0.020 mmol, 8.67% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.76 min, [MH]+ = 400.2.
1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 8.81 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.52 (d, J=2.9 Hz, 1 H) 7.27 (t, J=7.9 Hz, 1 H) 6.84 - 7.00 (m, 3 H) 5.27 (s, 2 H) 4.03 (app. t, J=4.6 Hz, 2 H) 3.85 (app. t, J=4.8 Hz, 2 H) 2.94 (s, 3 H) 2.48 (dt, J=7.3, 3.6 Hz, 1 H) 1.11 (d, J=6.1 Hz, 3 H) 0.91 - 1.03 (m, 1 H) 0.78 (ddd, J=9.2, 5.3, 4.2 Hz, 1 H) 0.52 - 0.59 (m, 1 H).
실시예 154: 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((1S*,2S*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
및
실시예 155: 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((1R*,2R*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00371
실온에서 교반되는 DMF (1.217 mL) 중의 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (150 mg, 0.304 mmol), 및 HATU (174 mg, 0.456 mmol)의 용액에 (+/-)-((트랜스)-2-아미노사이클로프로필)메탄올 (53.0 mg, 0.609 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함) 및 DIPEA (106 ㎕, 0.609 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (4 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 황색 오일 (214 mg)로서 얻었다. 오일을 DCM/메탄올 중의 상태로 25 g SNAP 카트리지 상에 로딩시키고, 5-25% (80:20 DCM:메탄올)/DCM으로 용리되는 Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시키고, 디에틸 에테르로 초음파 처리하고, 다시 증발시켜 순수한 생성물 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (109 mg, 0.263 mmol, 86 % 수율)룰 백색 고형물로서 얻고, 이를 키랄 정제 크로마토그래피에 제공하였다.
분석 방법:
라세메이트 (~0.5 mg)를 50% EtOH/헵탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 20 uL를 컬럼 상에 주입하였다. (컬럼: 4.6 mm id x 25 cm 키랄팍 AD-H, 로트 번호 ADH0CE-PC014). 이를 50% EtOH/헵탄, f=1.0 mL/min, 검출기 파장 = 215 nm, 4. Ref 550,100로 용리시켰다.
제조 방법:
라세메이트 (~107 mg)를 EtOH (1 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 1 mL의 용액을 컬럼 상에 주입하였다. (컬럼: 30 mm x 25 cm 키랄팍 AD-H (5 ㎛), 로트 번호 ADH13231-01). 이를 50% EtOH/헵탄, f=30 mL/min, 검출기 파장 = 215 nm, 4. Ref 550,100로 용리시켰다. 분획 수거: 17-26분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하고, 34-50분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 회전 증발기를 사용하여 진공 처리한 후, 상기 분석 방법에 의해 기술된 바와 같이 최종 분석을 위한 칭량된 플라스크로 옮기었다.
제1 용리 거울상이성질체 - 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((1S*,2S*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (48 mg, 0.116 mmol, 38.0 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.69 min, [MH]+ = 395.2.
제2 용리 거울상이성질체 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((1R*,2R*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (49 mg, 0.118 mmol, 38.8 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.70 min, [MH]+ = 395.2.
실시예 156: 1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-N5-((1R,2R)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00372
DMF (1 mL) 중의 N3-메틸-N5-((1R,2R)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (60 mg, 0.190 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (52.6 mg, 0.380 mmol) 및 1-(브로모메틸)-3-메톡시벤젠 (57.4 mg, 0.285 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (20 mL)을 첨가함으로서 켄칭시키고, 이후 EtOAc (20 mL)를 첨가하였다. 층들을 분리시키고, 수성 층을 추가의 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하였다. 이후, 합한 유기물질을 물 (20 mL) 및 이후 염수 (2 x 20 mL)로 역추출하였다. 유기 층을 건조시키고(Na2SO4), 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 황색 오일로서 얻었다. 이를 DCM 중에 흡수시키고, SNAP (10 g) 실리카 카트리지에 첨가하고, 이를 40->100% EtOAc/사이클로헥산으로 용리되는 플래시 SP4 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 수거하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 생성물을 무색 오일 (58 mg)로서 얻었다. 샘플을 DCM/MeOH 중에 흡수시키고, 진공 하에 45℃에서 농축시켰다(x3). 형성된 무색 검 - 1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-N5-((1R,2R)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (46 mg, 0.125 mmol, 65.5 % 수율)을 다시 분석하였다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.91 min, [MH]+ = 370.1.
실시예 157 - 268:
실시예 157 - 268을 이전의 실시예와 유사한 방식으로 제조하였다.
Figure pct00373
Figure pct00374
Figure pct00375
Figure pct00376
Figure pct00377
Figure pct00378
Figure pct00379
Figure pct00380
Figure pct00381
Figure pct00382
Figure pct00383
Figure pct00384
Figure pct00385
Figure pct00386
Figure pct00387
Figure pct00388
Figure pct00389
Figure pct00390
실시예 269: 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N3-메틸-N5-((1R*,2R*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
실시예 270: 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N3-메틸-N5-((1S*,2S*)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00391
실온에서 교반된 DMF (1.2 mL) 중의 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (150 mg, 0.30 mmol), 및 HATU (174 mg, 0.46 mmol)의 용액에 (+/-)-(트랜스)-2-메틸사이클로프로판아민 (43.3 mg, 0.61 mmol, 예를 들어, Enamine로부터 상업적으로 입수가능함) 및 DIPEA (106 μL, 0.61 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (4 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 염수로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 황색 고형물 (223 mg)로서 얻었다. 고형물을 디클로로메탄/메탄올 중의 상태로 10 g SNAP 카트리지 상에 로딩하고, 0 - 50 % (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 정제된 생성물 (48 mg)을 얻었다. 생성물이 실리카 상에 침전된 것으로 나타났고, 컬럼을 에틸 아세테이트 중 50 % 에탄올로 플러싱하였다. 회수된 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 추가의 불순한 생성물을 황색 고형물 (91 mg)로서 얻었다. 샘플을 1:1 MeOH:DMSO (1 mL) 중에 용해시키고, MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 요망하는 분획을 생성물의 이전 배치의 잔류물과 합하고, 진공 하에 증발시켜 (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (98 mg, 0.26 mmol, 85 % 수율)를 얻었다.
라세메이트 (98 mg)를 가열하면서 EtOH (~8-10 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 0.7 mL를 Rheodyne 밸브를 통해 컬럼 (15% iPrOH/헵탄, 유량 = 42.5 mL/min (압력: 94 bar), 검출: 280 nm에서 UV Diode Array (밴드폭 1 40 nm, 기준 400 nm, 밴드폭 100 nm), 컬럼 키랄팍 AD-H (250 x 30 mm, 5 ㎛)에 수동 주입하였다. 8-20.5분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 22-26분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 진공 하에 농축시킨 후, EtOH 중에 흡수시키고, 질소 가스의 스트림 하에 건조하게 블로우 다운된 칭량된 플라스크에 옮기었다.
피크 1에 상응하는 분획을 수거하여 실시예 269 (34 mg, 0.09 mmol, 30 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.86 min, [MH]+= 379.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.25 (br. s., 1 H) 9.40 - 9.49 (m, 1 H) 8.77 - 8.82 (m, 1 H) 8.56 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.52 (d, J=3.9 Hz, 1 H) 7.34 - 7.41 (m, 2 H) 7.06 (t, J=7.7 Hz, 1 H) 6.83 (d, J=7.1 Hz, 1 H) 6.50 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.54 (s, 2 H) 2.84 (d, J=4.6 Hz, 3 H) 2.43 - 2.49 (m, 1 H) 1.02 (d, J=6.1 Hz, 3 H) 0.84 - 0.93 (m, 1 H) 0.70 (dt, J=8.9, 4.5 Hz, 1 H) 0.40 - 0.48 (m, 1 H)
피크 2에 상응하는 분획을 수거하여 실시예 270 (37 mg, 0.10 mmol, 32 % 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.86 min, [MH]+= 379.2.
실시예 271: 1-((1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00392
아세토니트릴 (2.3 mL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (55 mg, 0.23 mmol)의 현탁액에 트리페닐포스핀 (184 mg, 0.70 mmol), 트리에틸아민 (0.068 mL, 0.49 mmol) 및 DIAD (0.136 mL, 0.701 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 질소 하에 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 추가분의 트리페닐포스핀 (184 mg, 0.70 mmol) 및 DIAD (0.136 mL, 0.70 mmol)를 첨가하였다. 21시간 후, 반응 혼합물을 포화된 중탄산나트륨 (10 mL) 수용액에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (727 mg)을 얻었다. 잔류물을 메탄올 중에 건식 상태로 50 g SNAP 카트리지 상에 로딩시키고, 18-88% (80:20 DCM:2M 메탄올성 암모니아)/DCM으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 불량한 분리가 달성되었고, 생성물을 함유하는 모든 분획을 다시 합하고, 진공 하에 증발시켜 투명한 유리(41 mg)를 얻었다. 샘플을 1:1 MeOH:DMSO (1 mL) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 건조시켜 1-((1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (3.2 mg, 8.32 ㎛ol, 4 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.66 min, [MH]+ = 366.4.
실시예 272: N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((2-메틸-1H-인돌-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00393
질소 하에 실온에서 교반된 메탄올 (469 μL) 및 THF (939 μL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((2-메틸-1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (75 mg, 0.14 mmol)의 용액에 고체 세슘 카보네이트 (144 mg, 0.44 mmol)를 하나의 충전물로 첨가하였다. 반응 혼합물을 타이머로 8시간 동안 70℃로 가열한 후, 실온으로 냉각시켰다. 혼합물을 10시간 동안 방치되게 둔 후, 추가 6시간 동안 가열을 재개하였다. 추가 부분의 세슘 카보네이트 (92 mg, 0.28 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 추가 18시간 동안 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 물 (50 mL)과 에틸 아세테이트 (20 mL) 사이에서 분배시켰다. 층들을 분리시키고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 염수 (10 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 황색 고형물 (45 mg)로서 얻었다. 샘플을 디클로로메탄 중의 상태로 10 g SNAP 카트리지 상에 로딩하고, 13-63% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 요망하는 생성물 N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-((2-메틸-1H-인돌-4-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (38 mg, 0.10 mmol, 68 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 379.2.
실시예 273: 1-(3-(디플루오로메톡시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00394
N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (55 mg, 0.22 mmol), 1-(브로모메틸)-3-(디플루오로메톡시)벤젠 (62.8 mg, 0.27 mmol), 탄산칼륨 (69 mg, 0.50 mmol) 및 DMF (2 mL)를 90℃에서 교반하였다. 1.5시간 후, 현탁액을 EtOAc (10 mL)과 LiCl 용액 사이에서 분배시켰다. (10 mL), EtOAc (2 x 10 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물 (150 mg)을 무색 오일로서 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 25 g 카트리지, 10-65% (EtOAc 중 25% EtOH)/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 요망하는 분획을 농축시켜 1-(3-(디플루오로메톡시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2 디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (39 mg, 0.087 mmol, 39.2 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다. 이를 추가로 MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 1-(3-(디플루오로메톡시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (39 mg, 0.09 mmol, 39 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.97 min, [MH]+ = 406.2.
실시예 274: N5-사이클로프로필-1-(3-(디플루오로메톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00395
N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (99 mg, 0.42 mmol), 1-(브로모메틸)-3-(디플루오로메톡시)벤젠 (120 mg, 0.51 mmol), 탄산칼륨 (110 mg, 0.80 mmol) 및 DMF (4 mL)를 90℃에서 교반하였다. 1시간 후, 현탁액을 EtOAc (10 mL)과 LiCl 용액 사이에서 분배시켰다. (10 mL), EtOAc (2 x 10 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물 (200 mg)을 크림색 고형물로서 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 25 g 카트리지, 10-65% (EtOAc 중 25% EtOH)/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 요망하는 분획을 농축시켜 50 mg을 백색 고형물로서 얻었다. 이를 추가로 MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 N5-사이클로프로필-1-(3-(디플루오로메톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (37 mg, 0.09 mmol, 20 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.90 min, [MH]+ = 392.2.
실시예 275: N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(퀴놀린-7-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00396
질소 하에 실온에서 DMF (850 μL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (40 mg, 0.17 mmol) 및 탄산칼륨 (94 mg, 0.68 mmol)의 교반된 용액에 DMF (850 μL) 중의 용액으로서 7-(브로모메틸)퀴놀린 (110 mg, 0.25 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 포화된 염화리튬 수용액 (30 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 15 mL)로 추출하였다. 유기 물질을 농축시켜 미정제 생성물을 오렌지색 오일 (64 mg)로서 얻었다. 샘플을 디클로로메탄 중의 상태로/메탄올 10 g SNAP 카트리지 상에 로딩하고, 10 - 50% 2M 메탄올성 암모니아/DCM으로 용리되는 Biotage SP4 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 황색 고형물 (25 mg)을 얻었다. 샘플을 1:1 MeOH:DMSO (1 mL) 중에 용해시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 관련 분획을 진공 하에 증발시켜 요망하는 생성물 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(퀴놀린-7-일메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (14 mg, 0.04 mmol, 22 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.78 min, [MH]+ = 377.4.
실시예 276: 1-((S*)-1-(3-메톡시페닐)에틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00397
실온에서 교반된, DMF (2.1 mL) 중의 (S*)-1-(1-(3-메톡시페닐)에틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (116 mg, 0.21 mmol), 및 HATU (155 mg, 0.41 mmol)의 용액에 DIPEA (74 μL, 0.424 mmol) 및 (1S,2S)-2-메틸사이클로프로판아민 하이드로클로라이드 (27 mg, 0.25 mmol)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 추가 부분의 (1S,2S)-2-메틸사이클로프로판아민 하이드로클로라이드 (8 mg, 0.07 mmol)를 첨가하였다. 21시간 후, 반응 혼합물을 포화된 LiCl 수용액에 붓고, 에틸 아세테이트 (1 x 15 mL, 이후 2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기물질을 염수 (10 mL)로 세척하고, 소수성 프릿을 통해 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 황색 오일 (176 mg)로서 얻었다. 오일을 디클로로메탄 중의 상태로 10 g SNAP 카트리지 상에 로딩하고, 8-38% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 투명한 검(86 mg)을 얻었다. 샘플을 1:1 MeOH:DMSO (1 mL) 중에 용해시키고, MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 용매를 질소 스트림 하에 건조시키고, 잔류물을 디에틸 에테르로 초음파 처리하고, 진공 하에 증발시켜 1-((S*)-1-(3-메톡시페닐)에틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (60 mg, 0.15 mmol, 71 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.97 min, [MH]+ = 384.2.
실시예 277: 1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N5-((1R*,2R*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
실시예 278 1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N5-((1S*,2S*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00398
(+/-)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N5-((트랜스)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (50 mg)를 키랄 분리를 위해 제공하였다. 라세메이트 (50 mg)를 EtOH (1 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 1 mL의 용액을 컬럼 (80% EtOH (+ 0.2% 이소프로필아민)/헵탄 (+ 0.2% 이소프로필아민), 유량 = 20 mL/min, 검출 파장 = 215 nm, 4. Ref 550, 100, 컬럼 30 mm x 25 cm 키랄팍 AD-H (5 ㎛), 로트 번호 ADH12143-01)에 주입하였다. 주입 총수 = 1. 18-23분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 36-55분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 진공 하에 농축시킨 후, 칭량된 플라스크로 옮기었다. 최종 화합물을 DCM 및 헵탄으로부터 회수하여 고형물을 얻었다.
피크 1에 상응하는 분획을 수거하여 - 실시예 277 - 1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N5-((1R*,2R*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (18 mg, 36%)를 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.62 min, [MH]+ = 416
피크 2에 상응하는 분획을 수거하여 - 실시예 278 - 1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N5-((1S*,2S*)-2-(하이드록시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (18 mg, 36%)를 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.62 min, [MH]+ = 416
실시예 279: N5-((1R*,2R*)-2-에틸사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
실시예 280: N5-((1S*,2S*)-2-에틸사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드-
Figure pct00399
(+/-)-N5-(-2-에틸사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (102 mg)를 키랄 분리를 위해 제공하였다. 라세메이트 (102 mg)를 가열하면서 EtOH (~10 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 0.5 mL를 Rheodyne 밸브를 통해 컬럼 (80% iPrOH/헵탄, 유량 = 40 mL/min, 검출: 280 nm에서 UV Diode Array (밴드폭 140 nm, 기준 400 nm 밴드폭 100 nm), 컬럼 30 mm x 25 cm 키랄팍 AD-H (5 ㎛)에 수동 주입하였다. 16.5-18분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 20.5-22.5분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 진공 하에 농축시킨 후, EtOH (3 x 4 mL) 중에 흡수시키고, 칭량된 바이알로 옮기었다. 용매를 질소 스트림 하에 제거하여 두 개의 생성물을 얻었다.
피크 1에 상응하는 분획을 수거하여 - 실시예 279 - N5-((1R*,2R*)-2-에틸사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (40 mg, 40%)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 414
피크 2에 상응하는 분획을 수거하여 - 실시예 280 - N5-((1S*,2S*)-2-에틸사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (41mg, 41%)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.84 min, [MH]+ = 414
실시예 281: N5-((1R*,2R*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
실시예 282: N5-((1S*,2S*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드-
Figure pct00400
(+/-)-N5-((트랜스)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (126 mg)를 키랄 분리를 위해 제공하였다. 라세메이트 (126 mg)를 가열하면서 EtOH (~10 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 0.6 mL를 컬럼 (80% iPrOH/헵탄, 유량 = 42.5 mL/min, 검출: 280 nm에서 UV Diode Array(밴드폭 140 nm, 기준 400 nm 밴드폭 100 nm), 컬럼 30 mm x 25 cm 키랄팍 AD-H (5 ㎛)에 Rheodyne 밸브를 통해 수동 주입하였다. 23-26분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 29-33분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 진공 하에 농축시킨 후, EtOH (3 x 4 mL) 중에 흡수시키고, 칭량된 바이알로 옮기었다. 용매를 질소 스트림 하에 제거하여 두 개의 생성물을 얻었다.
피크 1에 상응하는 분획을 수거하여 - 실시예 281 - N5-((1R*,2R*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (44 mg, 29%)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.74 min, [MH]+ = 430
피크 2에 상응하는 분획을 수거하여 - 실시예 282 - N5-((1S*,2S*)-2-에톡시사이클로프로필)-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (47 mg, 32%)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.74 min, [MH]+ = 430
실시예 283: N5-(2-((트랜스)-4-아미노사이클로헥실)에틸)-1-벤질-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 하이드로클로라이드
Figure pct00401
1,4-디옥산 (1 mL) 중의 3차-부틸 ((트랜스)-4-(2-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)에틸)사이클로헥실)카바메이트 (75.5 mg, 0.15 mmol)의 현탁액에 염화수소 (1,4-디옥산 중 4M, 1.5 mL, 6.00 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 백색 고형물; N5-(2-((트랜스)-4-아미노사이클로헥실)에틸)-1-벤질-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 하이드로클로라이드 (64.6 mg, 0.15 mmol, 98 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 0.57 min, [MH]+에 대해 m/z = 411
실시예 284: N5-(2-((시스)-4-아미노사이클로헥실)에틸)-1-벤질-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 하이드로클로라이드
Figure pct00402
1,4-디옥산 (1 mL) 중의 3차-부틸 ((시스)-4-(2-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)에틸)사이클로헥실)카바메이트 (70 mg, 0.14 mmol)의 현탁액에 염화수소 (1,4-디옥산 중 4M, 1.5 mL, 6.00 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 N5-(2-((시스)-4-아미노사이클로헥실)에틸)-1-벤질-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 하이드로클로라이드 (66.4 mg, 0.15 mmol, 108 % 수율) (대략 0.5 eq. 1,4-디옥산 함유)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 0.62 min, [MH]+에 대해 m/z = 411
실시예 285: 1-((1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)메틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00403
메탄올 (1 mL) 및 물 (0.25 mL) 중의 N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1-((1-토실-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (36.5 mg, 0.07 mmol) 및 수산화칼륨 (8.9 mg, 0.16 mmol)의 용액을 50℃에서 2시간 동안 질소 하에 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 물 (3 mL) 및 디클로로메탄 (3 mL) 중에 현탁시키고, 층들을 분리시켰다. 수성층을 추가의 디클로로메탄 (3 x 3 mL)로 추출하였다. 수성층을 추가의 물 (대략 10 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 다시 추출하였다. 수성층에 염수 (대략 2 mL)를 첨가하고, 이를 에틸 아세테이트 (2 x 5 mL) 및 디클로로메탄 (2 x 5 mL)로 다시 추출하였다. 모든 유기 상들을 합하고, 소수성 프릿이 장착된 카트리지를 통해 여과시켰다. 여액을 진공 하에 증발시켜 백색 고형물을 얻었다; 1-((1H-피롤로[3,2-c]피리딘-4-일)메틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (18.7 mg, 0.05 mmol, 72 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH) Rt = 0.74 min, [MH]+에 대해 m/z = 380
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.63 (br. s., 1 H) 9.32 (q, J=4.6 Hz, 1 H) 8.83 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.73 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 8.57 (d, J=4.2 Hz, 1 H) 8.00 (d, J=5.9 Hz, 1 H) 7.45 - 7.53 (m, 1 H) 7.31 (d, J=5.9 Hz, 1 H) 6.67 (d, J=2.9 Hz, 1 H) 5.65 (s, 2 H) 2.77 (d, J=4.9 Hz, 3 H) 2.49 - 2.57 (obs, 1 H) 1.05 (d, J=6.1 Hz, 3 H) 0.87 - 0.98 (m, 1 H) 0.74 (dt, J=8.6, 4.6 Hz, 1 H) 0.48 (dt, J=7.3, 5.5 Hz, 1 H)
실시예 286: (±)-1-벤질-N5-((트랜스)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00404
2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (189 mg, 0.41 mmol), (±)-(트랜스)-2-(메톡시메틸)사이클로프로판아민 하이드로클로라이드 (147 mg, 0.27 mmol), DMAP (8 mg, 0.07 mmol), 트리에틸아민 (0.11 mL, 0.79 mmol) 및 THF (2.5 mL)를 45℃에서 N2 하에 교반하였다. 1시간 동안 교반한 후, 2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (187 mg, 0.40 mmol)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 현탁액을 EtOAc (10 mL)와 중탄산나트륨 용액(10 mL) 사이에서 분배시키고, EtOAc (2 x 10 mL)로 추출하고, 소수성 프릿 상에서 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물 (560 mg)을 황색 고형물로서 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g, 0-100% (에틸 아세테이트 중 25% 에탄올)/사이클로헥산으로 용리)에 의해 정제하였다. 요망하는 분획을 농축시켜 백색 고형물을 얻었다. 이를 MDAP (TFA)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 농축시켜 (±)-1-벤질-N5-((트랜스)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (54 mg, 0.13 mmol, 49 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.82 min, [MH]+ = 370.2.
실시예 287: N5-사이클로프로필-1-(3-(2-하이드록시에틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00405
2-(3-(브로모메틸)페닐)에탄올 (247 mg, 1.15 mmol)을 THF (15 mL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (270 mg, 1.15 mmol) 및 탄산칼륨 (317 mg, 2.30 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반되게 두었다. 반응 혼합물을 50℃로 가열하고, N2 하에 밤새 교반되게 두었다. 이후, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM과 물 사이에서 분리시켰다. 유기 용액을 진공 하에 농축시키고, DCM에 로딩하고, SNAP 25 g 실리카 카트리지를 사용하고, 0-10% EtOH/EtOAc의 구배로 용리되는 Biotage Isolera 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여, 진공 하에 농축 후 - N5-사이클로프로필-1-(3-(2-하이드록시에틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (310 mg, 0.08 mmol, 23% 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.69 min, [MH]+ = 370
실시예 288: (+/-)-3차-부틸 2-((트랜스)-2-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)사이클로프로필)아세테이트
Figure pct00406
THF (15 mL) 중의 2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (1033 mg, 2.219 mmol) 및 트리에틸아민 (0.619 mL, 4.44 mmol)의 혼합물을 (+/-)-3차-부틸 2-((트랜스)-2-아미노사이클로프로필)아세테이트 (380 mg, 2.22 mmol) 및 DMAP (27.1 mg, 0.22 mmol)로 처리하고, 형성된 혼합물을 50℃에서 교반하였다. 2시간 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc와 포화된 NaHCO3 용액 사이에서 분배시키고, 층들을 분리시켰다. 수성 상을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기물질을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 50% GLOBAl 구배(헥산 중 AcOEt)로 용리되는 25 g 실리카 컬럼 상의 Biotage SP4 플래시 크로마토그래피에 의해 잔류물을 정제하고, 적합한 분획을 농축시켜 여전히 불순한 생성물을 얻었다. 53 mg을 MDAP (포믹)에 의해 정제하여 3차-부틸 5-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)펜타노에이트 (1 mg, 2.27 ㎛ol, 0.1 % 수율)를 얻었다. 잔류하는 불순한 생성물 (243 mg)을 DMSO (3 mL) 중에 용해시키고, 하기 조건을 사용하는 분취용 HPLC에 의해 정제하였다:
분취용 HPLC 방법:
주입: 3 mL
컬럼: CSH C18 컬럼: 150 x 30 mm, 5 ㎛
이동 상: B: 아세토니트릴; A: 수중 10 mM 중탄산암모늄, 암모니아 용액으로 pH 10으로 조절됨.
시간 (min)/%A: 0/80, 3/80, 3.5/69, 25/58, 32/58, 35/1, 41/1
온도: rt, 유량: 40 mL/min
UV/MS 검출
UV 검출: 210 nm 내지 350 nm의 파장으로부터 합산된 신호.
MS: Waters QDA
이온화 모드: Positive Electrospray
스캔 범위: 120 내지 800 AMU
스캔 시간: 0.5 s
스캔 간 지연: 0.1 s
분획을 합하고, Biotage V10 증발기를 사용하여 건조시켜(+/-)-3차-부틸 2-((트랜스)-2-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)사이클로프로필)아세테이트 (143 mg, 0.33 mmol, 15%)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 1.06 min, [MH]+ = 440.3.
실시예 289: N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-(3-(2-모르폴리노에틸)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00407
DCM (3 mL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(3-(2-옥소에틸)벤질)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (100 mg, 0.27 mmol), 모르폴린 (0.047 mL, 0.54 mmol) 및 트리에틸아민 (0.152 mL, 1.09 mmol)의 혼합물을 실온에서 45분동안 교반하였다. 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (231 mg, 1.09 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 9일 동안 방치되게 두었다. Sat. NaHCO3 (aq, 40 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 유기 상을 분리시켰다. 수성 상을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기물질을 소수성 프릿을 통과시키고, 진공 하에 농축시켰다. 이후, 형성된 화합물을 MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 증발시켜 N5-사이클로프로필-N3-메틸-1-(3-(2-모르폴리노에틸)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (30 mg, 0.07 mmol, 25% 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.44 min, [MH]+ = 439
실시예 290: 3-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)벤조산
Figure pct00408
테트라하이드로푸란 (1.5 mL) 및 물 (0.25 mL) 중의 메틸 3-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)벤조에이트 (62 mg, 0.16 mmol) 및 수산화리튬 (9.4 mg, 0.39 mmol)의 용액을 질소 하에 실온에서 75시간 동안 교반하였다. 추가의 테트라하이드로푸란 (1.5 mL) 및 물 (0.5 mL)을 첨가하고(용매가 증발되었기 때문에), 2시간 동안 계속 교반하였다. 이후, 6시간 동안 방치되게 둔 후, 추가 5시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물/아세토니트릴 (5:1)로 총 부피 2 mL로 희석하고, MDAP (2 x 1 mL 주입, 포믹)에 의해 정제하였다. 두 주입으로부터 요구되는 분획을 질소 스트림 하에 증발시키고, 잔류물을 아세토니트릴 (ca. 2 x 5 mL) 중에 현탁시키고, 합하고, 질소 스트림 하에 증발시키고, 진공 하에 건조시켜 백색 고형물; 3-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)벤조산 (40.8 mg, 0.11 mmol, 68 % 수율)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 0.69 min, [MH]+에 대해 m/z = 370
실시예 291: 1-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 하이드로클로라이드
Figure pct00409
1,4-디옥산 (0.75 mL) 중의 3차-부틸 3-((5-(사이클로프로필카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-카복실레이트 (44 mg, 0.10 mmol)의 현탁액에 염화수소 (1,4-디옥산 중 4M, 0.75 mL, 3.00 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16.75시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄/메탄올 (4 mL)의 혼합물을 사용하는 테어드 바이알로 옮기고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 베이지색 고형물; 1-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드, 하이드로클로라이드 (38.5 mg, 0.10 mmol, 101 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 0.57 min, [MH]+에 대해 m/z = 366
실시예 292: N5-사이클로프로필-1-(3-(2-(디메틸아미노)에틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00410
DCM (3 mL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(3-(2-옥소에틸)벤질)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (81 mg, 0.22 mmol), 디메틸아민 하이드로클로라이드 (19.78 mg, 0.24 mmol) 및 트리에틸아민 (0.154 mL, 1.10 mmol)의 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반하였다. 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (187 mg, 0.882 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. Sat. NaHCO3 (aq, 40 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 유기 상을 분리시켰다. 수성 상을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기물질을 소수성 프릿을 통과시키고, 진공 하에 농축시켰다. 이후, 형성된 화합물을 MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 증발시켜 미정제 생성물을 얻었다. 이 미정제 생성물을 SNAP 10 g 실리카 카트리지를 사용하고, 0-40% EtOAc/사이클로헥산의 구배로 용리되는 Biotage Isolera 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 진공 하에서의 농축 후, - N5-사이클로프로필-1-(3-(2-(디메틸아미노)에틸)벤질)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (10 mg, 0.03 mmol, 11% 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.45 min, [MH]+ = 397
실시예 293: 1-(인돌린-4-일메틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00411
N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (300 mg, 1.204 mmol), 인돌린-4-일메탄올 (269 mg, 1.81 mmol) 및 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (0.995 mL, 3.79 mmol)을 톨루엔 (12.0 mL) 중에서 배합하고, 반응 혼합물을 5 mL 마이크로웨이브 바이알에서 30분 동안 120℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 증발시키고, 메탄올 중에 로딩시키고, 설폰산 (SCX) 10 g 카트리지를 사용하고 순차적으로 용매: 메탄올, 2M 암모니아/메탄올로 용리되는 SPE에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물 (711 mg)을 오렌지색/갈색 검으로서 얻었다. 잔류물을 디클로로메탄 중의 상태로/메탄올 50 g SNAP 카트리지 상에 로딩하고, 15-75% (3:1 에틸 아세테이트:에탄올)/사이클로헥산으로 용리되는, Biotage SP4 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 관련 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 1-(인돌린-4-일메틸)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (284 mg, 0.64 mmol, 53 % 수율)를 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.85 min, [MH]+ = 381.3.
실시예 294: 1-벤질-N5-((1S,2S)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00412
트리에틸아민 (0.228 mL, 1.64 mmol)을 THF (8 mL) 중의 2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (381 mg, 0.82 mmol), (1S,2S)-2-(메톡시메틸)사이클로프로판아민, HCl 염 (106 mg, 0.55 mmol), 및 DMAP (16.66 mg, 0.14 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 밤새 45℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 sat. 중탄산나트륨 용액 사이에서 분배시키고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 형성된 오일을 DCM 중에 용해시키고, 25 g Biotage SNAP 컬럼 및 0-100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산, 이어서 0-20% 메탄올/에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 Biotage Isolera 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 생성물을 진공 하에 밤새 건조되게 두어 1-벤질-N5-((1S,2S)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (90 mg, 0.24 mmol, 45 % 수율)를 옅은 오렌지색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.82 min, [MH]+ = 370.5.
실시예 295: (+/-)-N5-((트랜스)-2-에틸사이클로프로필)-1-(인돌린-4-일메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00413
(+/-)-3차-부틸 4-((5-(((트랜스)-2-에틸사이클로프로필)카바모일)-3-(메틸카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)인돌린-1-카복실레이트 (54 mg, 0.11 mmol)를 HCl (IPA 중 5-6M, 2 mL, 11.00 mmol) 중에 용해시키고, 실온에서 3일 동안 교반되게 두었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, MeOH 중에 용해시키고, 사전-컨디셔닝된 SCX 컬럼 (1 g)에 로딩시켰다. 이후, MeOH를 컬럼을 통과시키고, 이어서 메탄올성 암모니아를 통과시켰다. 메탄올성 암모니아 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 형성된 고형물을 MDAP (고 pH)에 의해 정제하여 용매 제거 후에 - (+/-)-N5-((트랜스)-2-에틸사이클로프로필)-1-(인돌린-4-일메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (7 mg, 0.02 mmol, 16% 수율)를 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.61 min, [MH]+ = 395
실시예 296: 1-(3-(2-하이드록시에틸)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00414
2-(3-(브로모메틸)페닐)에탄올 (173 mg, 0.80 mmol)을 DMF (6 mL) 중의 N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (200 mg, 0.80 mmol) 및 탄산칼륨 (222 mg, 1.61 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반되게 두었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, EtOAc과 물 사이에서 분리시켰다. 유기 용액을 진공 하에 농축시키고, DCM에 로딩하고, 30-100% EtOAc/사이클로헥산의 구배로 용리되는 SNAP 25 g 실리카 크로마토그래피를 사용하는 Biotage Isolera 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 1-(3-(2-하이드록시에틸)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (165 mg, 0.43 mmol, 54% 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.77 min, [MH]+ = 384
실시예 297: 1-벤질-N5-((1S,2R)-2-((디메틸아미노)메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00415
(1R,2S)-2-((디메틸아미노)메틸) 사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드 (95 mg, 0.22 mmol, 35% w/w)를 THF (5 mL) 중의 2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (113 mg, 0.24 mmol), 트리에틸아민 (0.092 mL, 0.66 mmol), 및 DMAP (6.74 mg, 0.06 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 밤새 45℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 sat. 중탄산나트륨 용액 사이에서 분배시키고, 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 형성된 오일을 DCM 중에 용해시키고, 50 g Biotage SNAP 실리카 컬럼을 사용하고, 주된 출발 물질 불순물을 제거하도록 0-100% (에틸 아세테이트 중 25% 에탄올)/사이클로헥산의 구배로 용리되고, 이어서 0-100% (DCM 중 20% 메탄올성 암모니아)/사이클로헥산의 구배로 용리되는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 농축시키고, 오일을 1:1 DMSO:메탄올 중에 용해시키고, MDAP (포믹)에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 농축시키고, 생성물을 밤새 질소 스트림 하에 건조되게 두어 1-벤질-N5-((1S,2R)-2-((디메틸아미노)메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (2.2 mg, 5.75 ㎛ol, 3 % 수율)를 황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.52 min, [MH]+ = 383.5.
실시예 298: N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-1-((6-메틸피리딘-2-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00416
톨루엔 (1 mL) 중의 N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (42.8 mg, 0.17 mmol), (6-메틸피리딘-2-일)메탄올 (26.9 mg, 0.22 mmol 예를 들어, Sigma-Aldrich로부터 입수가능함) 및 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (0.090 mL, 0.34 mmol; 예를 들어, TCI로부터 상업적으로 입수가능함)의 혼합물을 밀봉된 바이알에서 0.5시간 동안 마이크로웨이브 반응기에서 100℃로 가열하였다. 휘발성 물질을 질소 스트림 하에 혼합물로부터 증발시키고, 잔류물을 3:1 메탄올/DMSO (2 mL) 중에 재용해시키고, MDAP (2 x 1 mL 주입, 포믹)에 의해 정제하였다. 두 주입으로부터 요구되는 분획을 합하고, 증발시키고, 진공 하에 건조시켜 암갈색 오일성 잔류물을 얻었다. 잔류물을 3:1 메탄올/DMSO (1 mL) 중에 재용해시키고, 추가로 MDAP (1 x 1 mL 주입, 포믹)에 의해 정제하였다. 요구되는 분획들을 합하고, 증발시키고, 진공 하에 건조시켜 담황색 유리로서 N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-1-((6-메틸피리딘-2-일)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (42.2 mg, 0.12 mmol, 69 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 0.63 min, [MH]+에 대해 m/z = 355
실시예 299: (+/-)-1-벤질-N5-((트랜스)-2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00417
(+/-)-2-((트랜스)-2-(1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)사이클로프로필)아세트산 (100 mg, 0.26 mmol)을 THF (5 mL) 중에 현탁시키고, Et3N (0.073 mL, 0.52 mmol)을 첨가한 후, 혼합물을 10분 동안 교반하고, 이소부틸 클로로포르메이트 (0.041 mL, 0.31 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반한 후, 얼음 배쓰에서 냉각시키고, NaBH4 (19.74 mg, 0.52 mmol)를 한번에 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 추가의 NaBH4 (20 mg)를 첨가하고, 혼합물을 또 다른 1시간 동안 0℃에서 교반하였다. 혼합물을 sat. NH4Cl (aq, 10 mL)을 첨가함으로써 켄칭시킨 후, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고, 미정제 생성물을 DCM 중에 용해시키고, 10 g 실리카 컬럼 상에 로딩시키고, 0-25% EtOH/EtOAc로 용리되는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 진공 하에 증발시켜 (+/-)-1-벤질-N5-(-2-((트랜스)-2-하이드록시에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (2.2 mg, 5.96 ㎛ol, 2% 수율)를 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.83 min, [MH]+ = 370
실시예 300: N5-사이클로프로필-1-((1-(2-하이드록시에틸)-1H-인돌-3-일)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00418
테트라하이드로푸란 (1 mL) 중의 1-((1-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-1H-인돌-3-일)메틸)-N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (34 mg, 0.07 mmol)의 용액에 TBAF (THF 중 1M, 0.13 mL, 0.13 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 용매를 질소 스트림 하에 증발시켜 녹색/갈색 오일을 얻고, 이를 디클로로메탄 (2 mL) 중에 용해시키고, 10 g SNAP 실리카 카트리지 상에 로딩하고, 에틸 아세테이트 중의 0-10% 에탄올의 구배로 용리되는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 요구되는 분획들을 합하고, 진공 하에 농축시킨 후, 디클로로메탄/메탄올 (10 mL)의 1:1 혼합물 중에 용해시키고, 테어드 바이알로 옮기고, 질소 스트림 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 크림색 고형물; N5-사이클로프로필-1-((1-(2-하이드록시에틸)-1H-인돌-3-일)메틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (12.1 mg, 0.03 mmol, 46 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 0.79 min, [MH]+에 대해 m/z = 409
실시예 301: N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-1-(3-(2-모르폴리노에틸)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00419
DCM (4 mL) 중의 N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1-(3-(2-옥소에틸)벤질)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (150 mg, 0.39 mmol), 모르폴린 (0.069 mL, 0.79 mmol) 및 트리에틸아민 (0.219 mL, 1.57 mmol)의 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반하였다. 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (333 mg, 1.57 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. Sat. NaHCO3 (aq, 40 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 유기 상을 분리시켰다. 수성 상을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기물질을 소수성 프릿을 통과시키고, 진공 하에 농축시켰다. 이후, 형성된 화합물을 MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 증발시켰다. 고형물을 MeOH 중에 용해시키고, 사전-준비된 아미노프로필 컬럼 (1 g)을 통과시켰다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-1-(3-(2-모르폴리노에틸)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (31 mg, 0.07 mmol, 17% 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.51 min, [MH]+ = 453
실시예 302: 1-벤질-N5-((1R,2R)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00420
2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (135 mg, 0.29 mmol), (1R,2R)-2-(메톡시메틸)사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드 (76 mg, 0.28 mmol), DMAP (3.54 mg, 0.03 mmol), 트리에틸아민 (0.121 mL, 0.87 mmol) 및 THF (3 mL)를 실온에서 N2 하에 교반하였다. 밤새 교반한 후, 이를 농축시켜 미정제 생성물 (320 mg)을 얻었다. 이를 SO2 상의 크로마토그래피 (Biotage SNAP 50 g, 0-50% (에틸 아세테이트 중 25% 에탄올)/에틸 아세테이트로 용리)에 의해 정제하였다. 요망하는 분획을 농축시켜 1-벤질-N5-((1R,2R)-2-(메톡시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (39 mg, 0.10 mmol, 33 % 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.82 min, [MH]+ = 370.5.
실시예 303: 1-벤질-N5-((1R,2R)-2-(에톡시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00421
트리에틸아민 (0.116 mL, 0.83 mmol)을 THF (5 mL) 중에 2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (214 mg, 0.46 mmol), (1S,2S)-2-(에톡시메틸)사이클로프로판아민, HCl 염 (160 mg, 0.42 mmol), 및 DMAP (12.73 mg, 0.10 mmol)을 함유하는 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 4시간 동안 45℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 포화된 중탄산나트륨 용액으로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 형성된 오일을 DCM 중에 용해시키고, 25 g Biotage SNAP 실리카 컬럼을 사용하고, 0 - 100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산의 구배로 용리되는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 합하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 생성물을 진공 하에 밤새 건조되게 두어 1-벤질-N5-((1R,2R)-2-(에톡시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (31.3 mg, 0.08 mmol, 20 % 수율)를 담황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.88 min, [MH]+ = 384.5.
실시예 304: 1-(3-하이드록시벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00422
DCM (6 mL) 중의 1-(3-메톡시벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (520 mg, 1.41 mmol)를 N2 하에 0℃로 냉각시키고, BBr3 (2.82 mL, 2.82 mmol, DCM 중 1M)을 적가하고, N2 하에 실온에서 6시간 동안 교반되게 하였다. 반응물을 MeOH로 켄칭시키고, 진공 하에 농축시켰다. 반응 혼합물을 MeOH 중에 용해시키고, 실리카 상에 로딩시키고, SNAP 50 g 실리카 카트리지를 사용하고, 0-100% EtOAc/사이클로헥산의 구배로 용리되는, Biotage Isolera 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 미정제 생성물을 얻고, 이를 추가로 MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 1-(3-하이드록시벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (75 mg, 0.21 mmol, 15% 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.77 min, [MH]+ = 356
실시예 305: 1-벤질-N5-((1S,2S)-2-(에톡시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00423
트리에틸아민 (0.020 mL, 0.146 mmol)을 2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (37.4 mg, 0.08 mmol), (1R,2R)-2-(에톡시메틸)사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드 염 (21 mg, 0.07 mmol), 및 DMAP (2.2 mg, 0.02 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 5시간 동안 45℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 포화된 중탄산나트륨 용액 (15 mL)으로 희석하고, 유기 층을 에틸 아세테이트 (2 x 15 mL)로 추출하였다. 유기 층을 소수성 프릿을 통과시키고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 형성된 오일을 DCM 중에 용해시키고, 10 g Biotage SNAP 실리카 컬럼을 사용하고, 0-100% 에틸 아세테이트/사이클로헥산의 구배로 용리되는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 4시간 동안 진공 하에 건조되게 두어 1-벤질-N5-((1S,2S)-2-(에톡시메틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (1.8 mg, 4.69 ㎛ol, 6 % 수율)를 담황색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.88 min, [MH]+ = 384.2.
실시예 306: 1-(3-(2-메톡시에톡시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00424
톨루엔 (1.0 mL) 중의 1-(3-하이드록시벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (55.8 mg, 0.16 mmol), 2-메톡시에탄올 (0.025 mL, 0.31 mmol) 및 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (0.082 mL, 0.31 mmol; 예를 들어, TCI로부터 상업적으로 입수가능함)의 혼합물을 밀봉된 바이알에서 30분 동안 마이크로웨이브 반응기에서 100℃로 가열하였다. 용매를 질소 스트림 하에 반응 혼합물로부터 증발시켰다. 갈색 오일성 잔류물을 메탄올 (2 mL) 중에 재용해시키고, MDAP (2 x 1 mL 주입, 포믹)에 의해 정제하였다. 두 주입으로부터 요망하는 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켜 담황색 끈적이는 고형물; 1-(3-(2-메톡시에톡시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (62.2 mg, 0.15 mmol, 96 % 수율)을 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 0.89 min, [MH]+에 대해 m/z = 414
실시예 307: 1-(3-((S)-2-하이드록시프로폭시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00425
DMF (2 mL) 중의 (S)-1-(3-(2-하이드록시프로폭시)벤질)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (102 mg, 0.28 mmol)의 용액에 HATU (161 mg, 0.43 mmol)를 첨가하고, 이어서 (1S,2S)-2-메틸사이클로프로판아민, 하이드로클로라이드 (61 mg, 0.57 mmol) 및 DIPEA (0.247 mL, 1.415 mmol)를 첨가하였다. 형성된 반응 혼합물을 실온에서 N2 하에 (황색 용액 형성) 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 MDAP (포믹)에 의해 직접 정제하였다. 요망하는 생성물을 함유하는 분획을 sat. NaHCO3 용액과 DCM 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 추출하고(2 x 20 mL), 건조시키고(Na2SO4), 진공 하에 농축시켜 1-(3-((S)-2-하이드록시프로폭시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (71 mg, 0.16 mmol, 55 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.82 min, [MH]+ = 414.3.
실시예 308: N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-1-(3-(2-모르폴리노에톡시)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00426
톨루엔 (1.0 mL) 중의 1-(3-하이드록시벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (45.6 mg, 0.13 mmol), 2-모르폴리노에탄올 (31.0 μL, 0.26 mmol; 예를 들어, Acros로부터 상업적으로 입수가능함) 및 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (67.3 μL, 0.26 mmol; 예를 들어, TCI로부터 상업적으로 입수가능함)의 혼합물을 밀봉된 바이알에서 총 1시간 동안 마이크로웨이브 반응기에서 100℃로 가열하였다. 혼합물을 질소 스트림 하에 증발시켜 용매를 제거하고, 잔류물을 메탄올 (1 mL) 중에 재용해시키고, MDAP (1 x 1 mL 주입, 고 pH)에 의해 정제하였다. 요구되는 분획을 용매 질소 스트림 하에 증발시켜 크림색 고형물; N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-1-(3-(2-모르폴리노에톡시)벤질)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (41.6 mg, 0.09 mmol, 69 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 0.51 min, [MH]+에 대해 m/z = 469
실시예 309: 1-(3-((R)-2-하이드록시프로폭시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00427
1-(3-하이드록시벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (43.6 mg, 0.12 mmol), (R)-2-메틸옥시란 (43.0 μL, 0.61 mmol; 예를 들어, Alfa Aesar로부터 상업적으로 입수가능함), 트리에틸아민 (34.2 μL, 0.25 mmol) 및 DMF (1 mL)의 혼합물을 밀봉된 바이알에서 30분 동안 마이크로웨이브 반응기에서 150℃로 가열하였다. 추가의 (R)-2-메틸옥시란 (43.0 μL, 0.61 mmol) 및 트리에틸아민 (34.2 μL, 0.25 mmol)을 첨가하고, 바이알을 다시 밀봉하고, 혼합물을 150℃에서 추가 2시간 동안 가열하였다. 혼합물을 질소 스트림 하에 대략 0.3 mL의 용량으로 농축시키고, 메탄올을 사용하여 1 mL로 희석하고, MDAP (1 x 1 mL 주입, 포믹)에 의해 직접적으로 정제하였다. 요구되는 분획을 질소 스트림 하에 용매가 증발되게 하여 크림색 고형물; 1-(3-((R)-2-하이드록시프로폭시)벤질)-N3-메틸-N5-((1S,2S)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (29.4 mg, 0.07 mmol, 58.0 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 0.82 min, [MH]+에 대해 m/z = 414
실시예 310: (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N3-에틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00428
메탄올 (2 mL) 중의 (+/-)-N3-에틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (50 mg, 0.08 mmol), NaOH (6.44 mg, 0.16 mmol)의 용액을 질소 하에 70℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 농축시켜 미정제 화합물을 얻었다. 이를 100-200 메쉬 실리카 겔 컬럼을 사용하고, DCM 중 0-5% MeOH로 용리되는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 수거하고, 농축시키고, 건조시켜 (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N3-에틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (30 mg, 0.07 mmol, 85 % 수율)를 황색 고형물로서 얻었다.
별도로, 메탄올 (2 mL) 중의 (+/-)-N3-에틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1-((1-토실-1H-인돌-4-일)메틸)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (100 mg, 0.16 mmol), NaOH (12.88 mg, 0.32 mmol)의 용액을 질소 하에 70℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 농축시켜 미정제 화합물을 얻었다. 이를 100-200 메쉬 실리카 겔 컬럼을 사용하고, DCM 중 0-5% MeOH로 용리되는, 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 수거하고, 농축시키고, 건조시켜(+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N3-에틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (70 mg, 0.15 mmol, 93 % 수율)를 황색 고형물로서 얻었다.
생성물의 두 배치를 합하고, 하기 개략적으로 기술된 조건들을 따르는 분취용 HPLC에 제공하였다:
분취용 HPLC 조건:
이동 상 A: 10mM 중탄산암모늄 (aq.)
이동 상 B: 아세토니트릴
컬럼: Kromosil 패킹된 C18 (250 * 25 mm)
방법 T/%B = 0/50, 11/50,11.5/100, 18/100,18.5/50,22/50
유량: 20 mL/min
용해도: ACN+물+THF
온도: 주위 온도
예비 정제 후, 화합물 분획을 동결 건조시켜 (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N3-에틸-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드(35 mg, 0.09 mmol, 41 % 수율)를 오프 화이트 고형물로서 얻었다.
LCMS (4.5 min RND-FA-4.5-MIN): Rt = 1.97 min, [MH]+ = 393.2.
LCMS 조건: RND-FA-4.5-MIN
컬럼: Acquity BEH C18 (50 mm x 2.1 mm, 1.7 ㎛)
이동 상: B: ACN 중 0.05% 포름산; A: 수중 0.05% 포름산
시간 (분)/%B: 0/3, 0.4/3, 3.2/98, 3.8/98, 4.2/3, 4.5/3
컬럼 온도: 35℃, 유량: 0.6 mL/min
실시예 311: 1-벤질-N5-((1S*,2R*)-2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
실시예 312: 1-벤질-N5-((1R*,2S*)-2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00429
라세메이트, (+/-)-1-벤질-N5-((트랜스)-2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (31 mg)를 가열하면서 EtOH (2 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 2 mL를 컬럼 (30% EtOH/헵탄, 유량 = 30 mL/min), 검출: UV 파장, 215 nm, 4. Ref 550, 100), 컬럼: 30 mm x 25 cm 키랄셀 OJ-H (5 ㎛) 로트 번호 OJH10027-01에 주입하였다. 10.5-13분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 17-21분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 진공 하에 농축시킨 후, 칭량된 플라스크로 옮기었다.
피크 1에 상응하는 분획을 수거하여 실시예 311 (12 mg)을 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.83 min, [MH]+= 370.3.
피크 2에 상응하는 분획을 수거하여 실시예 312 (13 mg)를 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.83 min, [MH]+ = 370.3.
실시예 313: (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00430
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((1S,2R)-2-(2-((3차-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (203 mg, 0.39 mmol)를 THF (10 mL) 중에 흡수시키고, TBAF (THF 중 1M, 0.777 mL, 0.78 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭시킨 후, EtOAc와 염수 (각각 25 mL) 사이에서 분배시켰다. 수성층을 EtOAc (25 mL)로 재추출하고, 합한 유기물질을 Na2SO4로 건조시키고, 소수성 프릿을 통해 여과시키고, 진공 하에 농축시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 미정제 생성물을 최소량의 DCM 중의 상태로 10 g ULTRA SNAP 카트리지에 적용하고, DCM 중의 10-50% (3:1 EtOAc:EtOH)로 용리되는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 진공 하에 농축시켜 (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (148 mg, 0.34 mmol, 89 % 수율)를 크림색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.79 min, [MH]+ = 409.4
실시예 314: (+/-)-N3-에틸-1-(인돌린-4-일메틸)-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00431
0℃에서 질소 하에 교반된 DCM (10 mL) 중의 (+/-)-3차-부틸 4-((3-(에틸카바모일)-5-(((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)카바모일)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)메틸)인돌린-1-카복실레이트 (400 mg, 0.26 mmol)의 용액에 TFA (1.396 mL, 18.12 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 이를 100-200 메쉬 실리카 겔 컬럼을 사용하고, DCM 중의 0-10% MeOH로 용리되는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 수거하고, 농축시키고, 건조시켜 요망하는 생성물을 얻었으며, 이는 여전히 불순하였다. 생성물을 추가로 하기 조건을 따르는 분취용 HPLC에 의해 정제하였다:
분취용 HPLC 조건:
이동 상 A: 10 mM 암모늄 아세테이트 (aq., pH 9)
이동 상 B: 아세토니트릴
컬럼: Xselect CSH C18 (150 * 19 mm), 5 ㎛
방법 T/%B = 0/35, 9.5/35, 10/100, 13/100, 13.5/35,16/35
유량: 18 mL/min
용해도: ACN+물+THF
온도: 주위
예비 정제 후, 화합물을 동결 건조시키고, DCM (100 mL)으로 희석하고, 물로 세척한 후, 유기 상을 포화된 염수 (25 mL)로 세척한 후, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켜 요망하는 생성물을 얻었다. 화합물을 n-펜탄으로 분쇄하고, 여과하고, 여액을 농축시켜 (+/-)-N3-에틸-1-(인돌린-4-일메틸)-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (30 mg, 0.07 mmol, 28 % 수율)를 오프 화이트 고형물로서 얻었다.
LCMS (4.5 min RND-FA-4.5-MIN): Rt = 1.43 min, [MH]+ = 395.2.
LCMS 조건: RND-FA-4.5-MIN
컬럼: Acquity BEH C18 (50 mm x 2.1 mm, 1.7 ㎛)
이동 상: B: ACN 중 0.05% 포름산; A: 수중 0.05% 포름산
시간 (분)/%B: 0/3, 0.4/3, 3.2/98, 3.8/98, 4.2/3, 4.5/3
컬럼 온도: 35℃, 유량: 0.6 mL/min
실시예 315: (+/-)-N3-에틸-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00432
DMF (2 mL) 중의 (+/-)-N3-에틸-1-(3-하이드록시벤질)-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (150 mg, 0.40 mmol), 1,3-디옥솔란-2-온 (139 mg, 1.58 mmol) 및 K2CO3 (164 mg, 1.19 mmol)의 용액을 질소 하에 90℃에서 6시간 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, DCM (2 x 25 mL)으로 추출하였다. 유기 상을 포화된 염수 (25 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켜 미정제 생성물을 얻었다. 이를 100-200 메쉬 실리카 겔 컬럼을 사용하고, DCM 중 0-10% MeOH로 용리되는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 수거하고, 농축시키고, 건조시켜 (+/-)-N3-에틸-1-(3-(2-하이드록시에톡시)벤질)-N5-((트랜스)-2-메틸사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (45 mg, 0.10 mmol, 26 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (4.5 min RND-FA-4.5-MIN): Rt = 1.74 min, [MH]+ = 414.2.
LCMS 조건: RND-FA-4.5-MIN
컬럼: Acquity BEH C18 (50 mm x 2.1 mm, 1.7 ㎛)
이동 상: B: ACN 중 0.05% 포름산; A: 수중 0.05% 포름산
시간 (분)/%B: 0/3, 0.4/3, 3.2/98, 3.8/98, 4.2/3, 4.5/3
컬럼 온도: 35℃, 유량: 0.6 mL/min
실시예 316: (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-(2-((2-아미노에틸)(메틸)아미노)에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00433
(+/-)-3차-부틸 (2-((2-((트랜스)-2-(1-((1H-인돌-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복스아미도)사이클로프로필)에틸)(메틸)아미노)에틸)카바메이트 (44 mg, 0.08 mmol)를 DCM (5 mL) 중에 흡수시키고, TFA (0.5 mL, 6.49 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 교반하였다. 90분 후, 반응물을 진공 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 진공 하에 농축시켜 (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-(2-((2-아미노에틸)(메틸)아미노)에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (3.9 mg, 7.98 ㎛ol, 10 % 수율)를 크림색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.81 min, [MH]+ = 465.4.
실시예 317: 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-(트랜스-3-하이드록시사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00434
1-((1H-인돌-4-일)메틸)-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실산 (56.0 mg, 0.17 mmol) 및 HATU (101.1 mg, 0.27 mmol)의 혼합물에 DMF (1.5 mL) 중의 트랜스-3-아미노사이클로부탄올, 하이드로클로라이드 (30.7 mg, 0.25 mmol, 예를 들어, Activate Scientific로부터 상업적으로 입수가능함)의 용액을 첨가하였다. N,N-디이소프로필에틸아민 (0.105 mL, 0.602 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소 스트림 하에 농축시키고, 아세토니트릴을 사용하여 총 2 mL의 용량으로 희석하고, MDAP (2 x 1 mL 주입, 포믹)에 의해 직접 정제하였다. 두 주입으로부터 요구되는 분획을 합하고, 진공 하에 증발시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 및 메탄올 (1:1, ~6 mL) 중에 현탁시키고, 테어드 바이알에 옮기고, 용매를 질소 스트림 하에 증발시켜 크림색 고형물; 1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-(트랜스-3-하이드록시사이클로부틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (60.7 mg, 0.15 mmol, 89 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹) Rt = 0.70 min, [MH]+에 대해 m/z = 395
실시예 318: N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(3-(트리플루오로메틸)벤질)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00435
톨루엔 (1 mL) 중의 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (51.0 mg, 0.217 mmol)의 혼합물에 마이크로웨이브 바이알에서 (3-(트리플루오로메틸)페닐)메탄올 (0.038 mL, 0.28 mmol, 예를 들어, Alfa Aesar로부터 상업적으로 입수가능함) 및 2-(트리부틸포스포르아닐리덴)아세토니트릴 (0.114 mL, 0.43 mmol; 예를 들어, TCI로부터 상업적으로 입수가능함)을 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고, 혼합물을 마이크로웨이브 반응기에서 30분 동안 100℃에서 가열하였다. 휘발성 물질을 질소 스트림 하에 증발시켜 진한 갈색 점성 오일을 얻고, 이를 DMSO (2 mL) 중에 재용해시키고, MDAP (2 x 1 mL 주입, 고 pH)에 의해 직접 정제하였다. 두 주입으로부터의 요구되는 분획을 질소 스트림 하에 증발시키고, 메탄올 (대략 0.5 mL 각각) 및, 디클로로메탄 (대략 2 mL 각각) 중에 재용해시키고, 합하였다. 이 용액을 질소 스트림 하에 증발시키고, 잔류물을 진공 하에 건조시켜 연한 황색 오일성 고형물을 얻고, 이를 DMSO (2 mL) 중에 재용해시키고, 추가로 MDAP (2 x 1 mL 주입, 포믹)에 의해 정제하였다. 두 주입물로부터 요구되는 분획을 질소 스트림 하에 증발시키고, 메탄올 (대략 각각 2 mL) 및 디클로로메탄 (대략 2 mL 각각) 중에 재용해시키고, 합하였다. 이 용액을 질소 스트림 하에 증발시키고, 잔류물을 진공 하에 건조시켜 밝은 황색 오일성 고형물을 얻었다. 이를 추가로 샘플을 디클로로메탄 (대략 3 mL) 중에 재용해시키고, SP4 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되는 10 g SNAP 카트리지의 상부에 직접 적용되게 함으로써 정제하였다. 컬럼을 사이클로헥산 중 0-50% 에틸 아세테이트:에탄올 (3:1)의 구배로 용리시켰다. 요구되는 분획들을 합하고, 진공 하에 증발시켜 백색 고형물; N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1-(3-(트리플루오로메틸)벤질)-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (54.7 mg, 0.14 mmol, 64 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH) Rt = 0.98 min, [MH]+에 대해 m/z = 394
실시예 319: (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-(2-((2-아세트아미도에틸)(메틸)아미노)에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00436
(+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-(2-((2-아미노에틸)(메틸)아미노)에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (36.2 mg, 0.08 mmol)를 DCM (5 mL) 중에 흡수시켰다. Et3N (0.022 mL, 0.16 mmol), 다음에 AcCl (6.09 ㎕, 0.09 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, MDAP (고 pH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 진공 하에 농축시켜 (+/-)-1-((1H-인돌-4-일)메틸)-N5-((트랜스)-2-(2-((2-아세트아미도에틸)(메틸)아미노)에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (9.7 mg, 0.02 mmol, 23 % 수율)를 크림색 고형물로서 얻었다.
LCM (2 min 고 pH): Rt = 0.79 min, [MH]+ = 507.4.
실시예 320: 1-벤질-N3-메틸-N5-((1R*,2R*)-2-(2-모르폴리노에틸)사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
실시예 321: 1-벤질-N3-메틸-N5-((1S*,2S*)-2-(2-모르폴리노에틸)사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00437
(+/-)-1-벤질-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-(2-모르폴리노에틸)사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (80 mg)를 키랄 HPLC에 의해 정제하였다. 라세메이트를 가열하면서 EtOH (2 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 1 mL의 용액을 컬럼 (15% EtOH (+0.2% 이소프로필아민)/헵탄 (+0.2% 이소프로필아민), 유량 = 30 mL/min, 검출 파장 = 215 nm, 4. Ref 550, 100, 컬럼 30 mm x 25 cm 키랄셀 OJ-H (5 ㎛), 로트 번호 OJH10027-01)에 주입하였다. 주입 총수 = 2. 21-25분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 29-34분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 라벨링하였다. 커진 분획을 진공 하에 농축시킨 후, 칭량된 플라스크로 옮기었다. 최종 화합물을 DCM 및 헵탄으로부터 회수하여 고형물을 얻었다.
피크 1에 상응하는 분획을 수거하여 1-벤질-N3-메틸-N5-((1R*,2R*)-2-(2-모르폴리노에틸)사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (24 mg, 0.06 mmol)를 단일의 미지의 거울상이성질체 (실시예 320)로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.58 min, [MH]+ = 439.4.
피크 2에 상응하는 분획을 수거하여 1-벤질-N3-메틸-N5-((1S*,2S*)-2-(2-모르폴리노에틸)사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (25 mg, 0.06 mmol)를 단일의 미지의 거울상이성질체 (실시예 321)로서 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.58 min, [MH]+ = 439.4.
실시예 322: (+/-)-1-벤질-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-(2-모르폴리노에틸)사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00438
(+/-)-1-벤질-N5-((트랜스)-2-(2-하이드록시에틸)사이클로프로필)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (100 mg, 0.27 mmol)를 DCM (5 mL) 중에 현탁시킨 후, Dess-Martin 페리오디난 (230 mg, 0.54 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 밤새 실온에서 교반한 후, 물로 세척하고, 유기 층을 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 무색의 검과 같은 고형물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM (5 mL) 중에 현탁시키고, 모르폴린 (0.047 ml, 0.541 mmol)을 첨가하고, 이어서 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (287 mg, 1.353 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반한 후, 포화된 중탄산나트륨 용액으로 세척한 후, 유기 층을 건조시키고, 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 MDAP (고 pH)에 의해 정제하여 (+/-)-1-벤질-N3-메틸-N5-((트랜스)-2-(2-모르폴리노에틸)사이클로프로필)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (80 mg, 0.18 mmol, 67 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.88 min, [MH]+ = 439.4.
실시예 323: 1-벤질-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00439
2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (1 g, 2.15 mmol)를 THF (25 mL) 중에 흡수시키고, 암모니아 (21.47 mL, 10.74 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 밤새 50℃로 가열하였다. 두꺼운 침전물이 형성되었다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc와 sat. NaHCO3 (50 mL 각각) 사이에서 분배시켰다. 수성 상을 EtOAc (2 x 50 mL)로 재추출하고, 합한 유기물질을 소수성 프릿을 통해 용리시킨 후, 진공 하에 농축시켜 백색의 반-고형물을 얻었다. 미정제 생성물을 최소 용량의 DCM 중의 20% MeOH 중에 흡수시키고, 실리카 (~2 g)를 첨가하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 실리카를 25 g SNAP 카트리지에 적용시키고, 사이클로헥산 중 10-100% (3:1 EtOAc:EtOH)로 용리되는, 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 진공 하에 농축시켜 1-벤질-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (128 mg, 0.43 mmol, 20 % 수율)를 크림색 고형물로서 얻었다.
불량한 회수율로 인해, 실험을 반복하였다. 2,4,6-트리클로로페닐 1-벤질-5-(메틸카바모일)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복실레이트 (1 g, 2.15 mmol)를 THF (25 mL) 중에 흡수시키고, 암모니아 (21.47 mL, 10.74 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 50℃에서 총 5시간 동안 교반하였다. 이후, 반응물을 냉각시키고, 여과하였다. 여과 케이크를 EtOAc (5 mL)로 세척하고, 진공 오븐 내에서 주말 동안 건조시켜 1-벤질-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (562 mg, 1.87 mmol, 87 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다.
LCMS (2 min 고 pH): Rt = 0.74 min, [MH]+ = 286.3.
실시예 324: (R*)-N5-사이클로프로필-1-(2-하이드록시-1-페닐에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
실시예 325: (S*)-N5-사이클로프로필-1-(2-하이드록시-1-페닐에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00440
트리플루오로에탄올 (4 mL) 중에 N5-사이클로프로필-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (100 mg, 0.43 mmol)를 함유하는 플라스크에 실온에서 2-페닐옥시란 (0.06 mL, 0.553 mmol, 예를 들어, Sigma-Aldrich로부터 입수가능함)를 첨가하였다. 반응물을 75℃로 가열하고, 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 이후, 반응물을 추가 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 및 미정제 출발 물질을 에탄올 (4 mL) 중에 재용해시키고, 피리딘 (0.069 mL, 0.85 mmol) 다음에 추가의 2-페닐옥시란 (0.063 mL, 0.55 mmol)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 가열 환류시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 진한 오일로서 얻었다. 이를 DCM 중에 흡수시키고, 0-40% (25% EtOH/EtOAc)/사이클로헥산으로 용리되는 플래시 SP4 크로마토그래피 (10 g SNAP 실리카 카트리지)에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 함께 수거하고, 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 오렌지색 포움으로서 얻었다. NMR는 요망하지 않은 부수적인 2차 알코올: (+/-)-N5-사이클로프로필-1-(2-하이드록시-2-페닐에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드)로서 할당된 주 성분을, 주 성분으로서 요망하는 생성물: (+/-)-N5-사이클로프로필-1-(2-하이드록시-1-페닐에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드)과 함께 80:20 비로 두 생성물의 존재를 나타냈다.
미정제 생성물을 키랄 HPLC에 의해 정제하였다. 미정제 생성물 (120 mg)을 EtOH (3 mL) 중에 용해시켰다. 주입: 1 mL의 용액을 컬럼 (40% EtOH (+0.2% 이소프로필아민)/헵탄 (+0.2% 이소프로필아민), 유량 = 30 mL/min, 검출 파장 = 215 nm, 4. Ref 550, 100, 컬럼 30 mm x 25 cm 키랄셀 IC (5 ㎛), 로트 번호 IC10028-01)에 주입하였다. 주입 총수 = 3. 12.5-14분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 1로 라벨링하였다. 15-16분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 2로 표시하고, 이는 동일한 방법을 사용하는 추가의 키랄 정제에 요구된다. 18.5-21분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 3으로 라벨링하였다. 29-31.5분으로부터의 분획을 크게 하고, 피크 4로 라벨링하였다. 커진 분획을 진공 하에 농축시킨 후, 칭량된 플라스크로 옮기었다. 최종 화합물을 DCM 및 헵탄으로부터 회수하여 고형물을 얻었다.
피크 1 및 3은 요망하지 않는 레지오이성질체 알코올의 두 거울상이성질체에 상응하는 것으로 확인되었다.
피크 2에 상응하는 분획을 수거하여: 실시예 324 - (R*)-N5-사이클로프로필-1-(2-하이드록시-1-페닐에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (6 mg, 0.02 mmol, 4 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.74 min, [MH]+ = 356.3.
피크 4에 상응하는 분획을 수거하여: 실시예 325 - (S*)-N5-사이클로프로필-1-(2-하이드록시-1-페닐에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (8 mg, 0.02 mmol, 5 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.74 min, [MH]+ = 356.3.
실시예 326: (S*)-N5-사이클로프로필-1-(2-메톡시-1-페닐에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드
Figure pct00441
실온에서 DCM (1 mL) 중의 (S*)-N5-사이클로프로필-1-(2-하이드록시-1-페닐에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (4.5 mg, 0.01 mmol)의 용액에 프로톤 스폰지(Proton Sponge) (27.1 mg, 0.13 mmol)를 첨가하고, 이어서 미어웨인의 염 (9.4 mg, 0.06 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 추가의 프로톤 스폰지 (27.1 mg, 0.13 mmol) 및 미어웨인의 염 (9.4 mg, 0.06 mmol)을 첨가하고, 반응물을 밤새 교반하고, 이 시간 동안 DCM이 증발되었다. 추가의 DCM (1 mL)을 첨가하였다. 반응물을 추가 2시간 동안 교반하였다. 추가의 프로톤 스폰지 (27.1 mg, 0.13 mmol) 및 미어웨인 염 (9.4 mg, 0.06 mmol)을 첨가하고, 반응물을 추가 4시간 동안 교반한 후, 주말에 걸쳐 교반하였고, 이 시간 동안 DCM이 증발되었다. 반응물을 DCM으로 희석하고, 포화된 NaHCO3 수용액 (10 mL)으로 켄칭시키고, DCM (10 mL)으로 희석하였다. 층들을 분리시키고, 수성층을 추가의 DCM (2 x 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기물질을 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 프로톤 스폰지를 제거하기 위해, 미정제 생성물을 MeOH (20 mL) 중에 흡수시키고, 사전컨디셔닝된 SCX 카트리지 (1 g)에 첨가하였다. 생성물을 프로톤 스폰지 보유된 MeOH를 사용하여 이 컬럼으로부터 용리시켰다. MeOH 분획을 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 40% EtOAc/사이클로헥산으로 용리되는, SNAP (10 g 카트리지) SP4 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 분획을 밤새 부분 증발되게 둔 후, 적합한 분획을 진공 하에 농축시켜 요망하는 황색 오일로서 생성물 - (S*)-N5-사이클로프로필-1-(2-메톡시-1-페닐에틸)-N3-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3,5-디카복스아미드 (2.0 mg, 5.41 ㎛ol, 43 % 수율)를 얻었다.
LCMS (2 분 포믹): Rt = 0.88 min, [MH]+ = 370.2.
실시예 327 - 341:
실시예 324 - 341을 이전의 실시예와 유사한 방식으로 제조하였다.
Figure pct00442
Figure pct00443
Figure pct00444
생물학적 데이터
화학식(I)의 화합물은 하기 검정 중 하나 이상으로 시험될 수 있다:
시간 분해 형광 공명 에너지 전이(Time Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer)(TR-FRET) 검정
브로모도메인 결합을 시간 분해 형광 공명 에너지 전이 (time resolved fluorescent resonance energy transfer (TR-FRET)) 경합 분석을 이용하여 평가하였다. 이 접근법을 가능하게 하기 위해, 알려져 있는 고친화도의 pan-BET 상호작용 소분자를 원적외선 형광 염료(비교 화합물 X)인 Alexa Fluor® 647로 라벨링하였다. 비교 화합물 X는 브로모도메인 결합의 리포터(reporter)로서 작용하고, TR-FRET 쌍의 어셉터 형광단 성분(acceptor fluorophore component)이다. 안티-6*His 항체에 컨쥬게이션된 유로퓸 킬레이트를 TR-FRET 쌍의 도너 형광단으로서 사용하였다. 안티-6*His 항체는 본 연구에 사용된 각각의 BET 탠덤 브로모도메인 단백질 작제물의 아미노-말단에 첨가되는 6개의 히스티딘 정제 에피토프에 선택적으로 결합한다. 도너 및 어셉터 형광단이 20-80 Å 사이로 아주 근접하게 있을 때, TR-FRET 신호가 생성되며, 이는 비교 화합물 X가 브로모도메인 단백질에 결합함으로써 이 검정에서 가능하게 된다.
비교 화합물 X: 4-((Z)-3-(6-((5-(2-((4S)-6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트리아졸로[4,3-a][1,4]디아제핀-4-일)아세트아미도)펜틸)아미노)-6-옥소헥실)-2-((2E,4E)-5-(3,3-디메틸-5-설포-1-(4-설포부틸)-3H-인돌-1-이움-2-일)펜타-2,4-디엔-1-일리덴)-3-메틸-5-설포인돌린-1-일)부탄-1-설포네이트)
Figure pct00445
DMF (40㎕) 중의 N-(5-아미노펜틸)-2-((4S)-6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트리아졸로[4,3-a][1,4]디아제핀-4-일)아세트아미드 (제법에 대해, 비교 화합물 J, WO2011/054848A1 참조, 1.7 mg, 3.53 ㎛ol)의 용액에 또한 DMF (100㎕) 중의 AlexaFluor647-ONSu (2.16 mg, 1.966 ㎛ol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 DIPEA (1 ㎕, 5.73 ㎛ol)로 염기성화시키고, 볼텍스 믹서(vortex mixer)로 밤새 교반하였다.
반응 혼합물을 증발 건조시켰다. 고형물을 아세토니트릴/물/아세트산 (5/4/1, <1ml) 중에 용해시키고, 여과하고, Phenomenex Jupiter C18 분취용 컬럼에 적용하고, 다음의 구배로 용리시켰다(A = 수중 0.1% 트리플루오로아세트산, B= 0.1% TFA/90% 아세토니트릴/10% 물): 유량 = 10ml/min., AU = 20/10 (214nm):
5-35%, t=0분: B = 5%; t=10분: B = 5%; t=100분: B = 35%; t=115분: B = 100% (분리 구배: 0.33%/분)
주 성분이 26-28%B 범위에 대해 용리되었지만, 두 개의 피크로 구성되는 것으로 나타났다. 성분 "둘 모두"를 함유해야 하는 중간 분획(F1.26)을 분석용 HPLC에 의해 분석하였다(Spherisorb ODS2, 60분에 걸쳐 1 내지 35%): 28%B에서 단일 성분 용리.
분획 F1.25/26&27을 합하고, 증발 건조시켰다. DMF와 함께 옮기고, 증발 건조시키고, 무수 에테르로 분쇄하고, 청색 고형물을 밤새 <0.2mbar에서 건조시켰다: 1.54mg.
분석용 HPLC (Sphersisorb ODS2, 60분에 걸쳐 1 내지 35%B): MSM10520-1: [M+H]+ (obs): M-29에 상응하는 661.8/-. 이는 M-29인 1320.984의 계산된 질량에 대해 [(M+2H)/2]+와 동일시된다. 이는 Alexa Fluor 647 염료로의 표준 발생률이고, 질량 분석기의 조건 하에서의 두 개의 메틸렌 기의 이론적 손실을 나타낸다.
검정 원리: TR-FRET 신호를 생성하기 위해, 도너 형광단을 λ337 nm에서 레이저에 의해 여기시키고, 이어서 λ618 nm에서 방출되게 하였다. 어셉터 형광단이 아주 인접하여 있다면, 에너지 전이가 일어날 수 있으며, 이는 λ665 nm에서 Alexa Fluor® 647의 방출을 유도한다. 경합 화합물의 존재 하에, 비교 화합물 X는 브로모도메인에 결합하는 것에서 벗어날 수 있다. 변위가 발생하면, 어셉터 형광단은 더 이상 도너 형광단에 근접하지 않는데, 이는 형광 에너지 전이를 막고, 이어서 λ665 nm에서 lexa Fluor® 647 방출의 손실을 막는다.
BET 패밀리 (BRD2, BRD3, BRD4 및 BRDT)와의 결합에 대한 화학식(I)의 화합물의 비교 화합물 X와의 경합은 브로모도메인 1 (BD1) 및 브로모도메인 2 (BD2) 둘 모두에 걸친 단백질 절단체(protein truncate)를 사용하여 평가하였다. BD1 또는 BD2에 대한 차등 결합(differential binding)을 모니터링하기 위해, 주요 티로신의 알라닌으로의 단일 잔기 변이가 아세틸 리신 결합 포켓(pocket)에서 이루어졌다. 이 접근법을 검증하기 위해, BET 패밀리 구성원 각각에 대해 이중 잔기 변이체 탠덤 도메인 단백질을 생성시켰다. 형광 편광 접근법을 이용하여, 비교 화합물 X에 대한 단일 및 이중 변이체 각각에 대한 결합 친화도를 결정하였다. 비교 화합물 X에 대해 이중 변이체 탠덤 단백질의 친화도는 비변이 야생형 탠덤 BET 단백질과 비교하여 크게 감소되었다(Kd로 > 1000 배 감소). 비교 화합물 X에 대해 단일 변이체 브로모도메인 탠덤 단백질의 친화도는 상응하는 비변이 BET 단백질과 동등하였다. 이들 데이터는 티로신의 알라닌으로의 단일 변이가 변이된 브로모도메인과 비교 화합물 X 간의 상호작용의 Kd를 > 1000 배 만큼 감소시킴을 입증하였다. TR-FRET 경합 검정에서, 비교 화합물 X는 비-변이 브로모도메인에 대한 Kd와 동등한 농도로 사용되며, 이는 변이된 브로모도메인에서의 결합이 검출되지 않음을 보장한다.
단백질 생성: 재조합 인간 브로모도메인 [(BRD2 (1-473) (Y113A) 및 (Y386A), BRD3 (1-435) (Y73A) 및 (Y348A) BRD4 (1-477) (Y97A) 및 (Y390A) 및 BRDT (1-397) (Y66A) 및 (Y309A)]을 N-말단에 6-His 태그를 지니는 E. coli 세포(BRD2/3/4에 대해 pET15b 벡터에서, 그리고 BRDT에 대해 pET28a 벡터에서)에서 발현시켰다. His-태깅된 브로모도메인 펠릿을 50mM HEPES (pH7.5), 300mM NaCl, 10mM 이미다졸 & 1㎕/ml 프로테아제 억제제 칵테일(cocktail) 중에 재현탁시키고, 초음파 처리를 이용하여 E. coli 세포로부터 추출하고, 니켈 세파로즈 고성능 컬럼을 사용하여 정제하고, 단백질을 세척한 후, 20 컬럼 용량에 대해 완충제 50mM HEPES (pH7.5), 150mM NaCl, 500mM 이미다졸과 함께 0-500mM 이미다졸의 선형 구배로 용리시켰다. 최종 정제를 Superdex 200 분취 등급 크기 배제 컬럼에 의해 완료하였다. 정제된 단백질을 -80℃에서 20mM HEPES pH 7.5 및 100mM NaCl 중에 저장하였다. 단백질 실체를 펩티드 질량 지문법(peptide mass fingerprinting)에 의해 확인하고, 예상된 분자량을 질량 분광법에 의해 확인하였다.
브로모도메인 BRD2 , 3, 4 및 T, BD1 + BD2 변이체 TR-FRET 경합 검정에 대한 프로토콜: 모든 검정 성분을 50 mM HEPES pH7.4, 50mM NaCl, 5% 글리세롤, 1mM DTT 및 1mM CHAPS로 구성된 검정 완충액에 용해시켰다. 비교 화합물 X를 이 브로모도메인에 대해 2*Kd와 동일한 농도로, 20 nM 단일 변이체, 탠덤 브로모도메인 단백질을 함유하는 검정 완충제로 희석하였다. 브로모도메인 및 비교 화합물 X를 함유하는 용액을 Greiner 384 웰 블랙 저용적 미세역가 플레이트에서 시험 화합물 또는 DMSO 비히클 (이 검정에서 최대 0.5% DMSO가 사용됨)의 투여량 반응 희석물에 첨가하고, 이어서 30분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 3nM의 동일 용량의 항-6*His 유로퓸 킬레이트를 모든 웰에 첨가한 후, 실온에서 추가 30분 동안 인큐베이션을 수행하였다. λ337 nm에서 도너 형광단을 여기시키고, 이어서 50 ㎲ec의 지연 후, λ615 nm 및 λ665 nm에서 각각 도너 및 어셉터 형광단의 방출을 측정함으로써 Perkin Elmer Multimode 플레이트 판독기를 사용하여 TR-FRET를 검출하였다. 이들 검정을 제어하기 위해, 각각 비억제된 (DMSO 비히클) 및 억제된 (WO 2011/054846A1의 실시예 11의 10*IC50 농도) TR-FRET 검정의 16 개의 복제물을 각 미세역가 플레이트 상에 포함시켰다.
이후, 하기 형태의 cA 4 파라미터 커브 피트(four parameter curve fit)에 적용시켰다:
y = a + (( b - a) / ( 1 + ( 10 ^ × / 10 ^ c ) ^ d )
상기 식에서, 'a'는 최소값이고, 'b'는 힐 슬로프(Hill slope)이고, 'c'는 pIC50이고, 'd'는 최대값이다.
모든 화합물 (실시예 1-341)을 각각 실질적으로 상기 기술된 바와 같은 BRD4 BD1 및 BRD4 BD2 TR-FRET 검정에서 시험하였다. 당업자들은 기능 활성에 대한 시험관내 결합 검정 및 세포-기반 검정이 실험적 다양성의 영향을 받음을 인식할 것이다. 따라서, 이하에 주어진 pIC50 값은 단지 예시적인 것으로 이해해야 한다. pIC50 값은 log10 단위로 표시된다.
모든 시험된 화합물은 상기 기술된 적어도 하나의 검정에서 pIC50 ≥ 4.0인 것으로 나타났다.
실시예 159, 160, 163, 168, 169, 171, 173, 177-180, 185, 186, 190, 194, 196, 198-201, 206, 208, 211, 213, 214, 217, 219, 222, 243, 248, 250, 267, 268, 324, 334, 335 및 339는 BRD4 BD2 검정에서 pIC50 ≥ 4.0 및 < 6.0인 것으로 나타났다.
다른 시험된 모든 화합물이 BRD4 BD2 검정에서 pIC50 ≥ 6.0인 것으로 나타났다.
실시예 1은 상기 기술된 BRD4 BD2 TR-FRET 검정에서 평균 pIC50가 7.1 (n = 13)이었고, 상기 기술된 BRD4 BD1 TR-FRET 검정에서 평균 pIC50가 4.8 (n = 11)이었다.
실시예 102는 상기 기술된 BRD4 BD2 TR-FRET 검정에서 평균 pIC50가 7.6 (n = 17)이었고, 상기 기술된 BRD4 BD1 TR-FRET 검정에서 평균 pIC50가 5.1 (n = 17)이었다.
실시예 153은 상기 기술된 BRD4 BD2 TR-FRET 검정에서 평균 pIC50가 7.2 (n = 9)였고, 상기 기술된 BRD4 BD1 TR-FRET 검정에서 평균 pIC50가 4.5 (n = 10)였다.
BRD4 BD1에 비한 BRD4 BD2에 대한 선택도 계산
BRD4 BD1에 비한 BRD4 BD2에 대한 선택도를 하기와 같이 계산하였다:
선택도 = BRD4 BD2 pIC50 - BRD4 BD1 pIC50
실시예 1-167, 170-172, 174-184, 186-207, 209-213, 215-267 및 269-341는 상기 기술된 TR-FRET 검정 중 적어도 하나에서 ≥ 1 log 단위의 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2에 대한 선택성을 갖는 것으로 나타났으며, 따라서 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2가 적어도 10배 선택적이다.
실시예 1-156, 215, 221, 223, 224, 228, 229, 231-236, 238-242, 244-247, 249, 251-266 및 269-321는 상기 기술된 TR-FRET 검정 중 적어도 하나에서 ≥ 2 log 단위의 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2에 대한 선택성을 갖는 것으로 나타났으며, 따라서 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2가 적어도 100배 선택적이다.
실시예 1은 상기 기술된 TR-FRET 검정 중 적어도 하나에서 2.4 log 단위의 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2에 대한 선택성을 갖는 것으로 나타났으며, 따라서 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2가 적어도 100배 선택적이다.
실시예 102는 상기 기술된 TR-FRET 검정 중 적어도 하나에서 2.5 log 단위의 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2에 대한 선택성을 갖는 것으로 나타났으며, 따라서 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2가 적어도 100배 선택적이다.
실시예 153은 상기 기술된 TR-FRET 검정 중 적어도 하나에서 2.7 log 단위의 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2에 대한 선택성을 갖는 것으로 나타났으며, 따라서 BRD4 BD1에 비해 BRD4 BD2가 적어도 100배 선택적이다.

Claims (37)

  1. 하기 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염:
    Figure pct00446

    상기 식에서,
    R1은 -C1- 3알킬 또는 사이클로프로필이고;
    R2는 H 또는 -C0- 3알킬-C3- 7사이클로알킬이고, 여기서 사이클로알킬 기는 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R5 기로 치환되거나 비치환되고;
    R3은 -H, -C1- 4알킬, 사이클로프로필 또는 -(CH2)pOR10이고;
    R4는 a) 페닐(동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 R7 기로 치환되거나 비치환될 수 있음); b) 5 또는 6원 헤테로아릴 기(-C1- 3알킬, -O-C1- 3알킬 또는 할로에 의해 치환되거나 비치환될 수 있음); c) 9 내지 11원 헤테로아릴 기(-C1- 3알킬-R8, -OCH3, -O-C2- 3알킬-R8, 할로, 옥소, -O-CF3 및 -CN로부터 선택되는, 동일하거나 상이할 수 있는 1, 2 또는 3개의 기로 치환되거나 비치환될 수 있음); 또는 d) -(CH2)n-페닐이고;
    p는 1 또는 2이고
    n은 1 또는 2이고;
    R5는 할로, 페닐, -C1- 6알킬-R8, -CO2H, -OCH3, -O-C2- 6알킬-R8, -CN, -OH 또는 -NHR6이고;
    R6은 -H, -C(O)OC(CH3)3, -C1- 6알킬, -C3- 7사이클로알킬, 4 내지 7원 헤테로사이클릴 기, 또는 -C2- 3알킬-O-C1- 3알킬이고, 여기서 -C1- 6알킬 및 -C3- 7사이클로알킬 기는 1, 2 또는 3개의 플루오로에 의해 임의로 치환될 수 있고;
    R7은 -NR11R12, -C1- 3알킬, 할로, -CO2R10, -CH2OH, -CH(R11)OR10, -C(O)C1- 3알킬, -CH(R10)NR11R12, -CN, -CHF2, -CF3, -OH, -OCHF2, -OCF3, -OCH3, -O-C2- 6알킬-R9, -C1- 6알킬-R9 또는 -O-피페리디닐이고;
    R8은 -H, -OR10, -CO2C(CH3)3 또는 -NR11R12이고;
    R9는 -H, -OR10 또는 -NR11R12이고;
    R10은 -H 또는 -C1- 3알킬이고;
    R11 및 R12는 각각 독립적으로 -H, -C1- 3알킬 및 -C1- 3알킬NR13R14로부터 선택되거나; R11 및 R12는 이들이 결합되는 질소와 함께 결합하여 -C1- 3알킬, -OH 및 F로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 개의 치환기에 의해 임의로 치환되는, 4 내지 7원 헤테로사이클릴 기를 형성할 수 있고;
    R13 및 R14는 각각 독립적으로 -H, -C1- 3알킬 및 -C(O)CH3로부터 선택된다.
  2. 제1항에 있어서, R1이 메틸, 에틸 또는 사이클로프로필인, 화합물 또는 이의 염.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R2가 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로헥실, 메틸사이클로부틸, 메틸사이클로펜틸, 메틸사이클로헥실, 에틸사이클로프로필, 에틸 사이클로헥실 또는 스피로[3.3]헵탄일이고, 여기서 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 및 사이클로헥실 기는 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R5 기로 치환되거나 비치환될 수 있는, 화합물 또는 이의 염.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 -H, 메틸, 에틸 또는 사이클로프로필인, 화합물 또는 이의 염.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R4가 a) 페닐(동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R7 기로 치환되거나 비치환될 수 있음); 또는 b) 5 또는 6원 헤테로아릴(메틸 또는 메톡시로 치환되거나 비치환될 수 있음) 또는 c) 9 내지 11원 헤테로아릴(메틸로 치환되거나 치환될 수 있음)인, 화합물 또는 이의 염.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R4가 동일하거나 상이할 수 있는 1 또는 2개의 R7 기로 치환되거나 비치환된 페닐인, 화합물 또는 이의 염.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R5가 할로, 페닐, -C1- 6알킬, -O-C1-6알킬, -CO2H, -C1- 6알킬-OH, -CN, -OH 또는 -NHR6인, 화합물 또는 이의 염.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, R7이 -NHCH3, -N(CH3)2, -CH3, -OCH3, -F, -CH2OH, -CN, -CH2-모르폴리닐, -Cl, -C(O)CH3, -OCH2CH2N(CH3)2, -OCH2CH2OH, -C(O)OCH3, -CH2N(CH3)2, -OH-CHF2, -CF3 또는 -CH(CH3)OH인, 화합물 또는 이의 염.
  9. 실시예 1 내지 341로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 염.
  10. Figure pct00447
    인 화합물 또는 이의 염.
  11. Figure pct00448
    인 화합물.
  12. Figure pct00449
    의 약제학적으로 허용되는 염인 화합물.
  13. Figure pct00450
    인 화합물 또는 이의 염.
  14. Figure pct00451
    인 화합물 또는 이의 염.
  15. Figure pct00452
    인 화합물.
  16. Figure pct00453
    의 약제학적으로 허용되는 염인 화합물.
  17. Figure pct00454
    인 화합물 또는 이의 염.
  18. Figure pct00455
    인 화합물 또는 이의 염.
  19. Figure pct00456
    인 화합물.
  20. Figure pct00457
    의 약제학적으로 허용되는 염인 화합물.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에서 정의된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 약제 조성물.
  22. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에서 정의된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 하나 이상의 다른 치료학적 활성제와 함께 포함하는 조합물.
  23. 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에서 정의된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  24. 브로모도메인 억제제(bromodomain inhibitor)가 처방되는 질병 또는 질환의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에서 정의된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  25. 제24항에 있어서, 질병 또는 질환이 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환인 화합물.
  26. 제24항에 있어서, 질병 또는 질환이 박테리아, 바이러스, 진균, 기생충 또는 이들의 독소에 의한 감염에 대한 염증 반응을 포함하는 화합물.
  27. 제24항에 있어서, 질병 또는 질환이 바이러스 감염인 화합물.
  28. 제24항에 있어서, 질병 또는 질환이 암인 화합물.
  29. 제24항에 있어서, 질병 또는 질환이 류마티스 관절염인 화합물.
  30. 브로모도메인 억제제가 처방되는 질병 또는 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에서 정의된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도.
  31. 치료를 필요로 하는 피검체에게서 브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환의 치료 방법으로서, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에서 정의된, 치료적 유효량의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 치료 방법.
  32. 제31항에 있어서, 질병 또는 질환이 급성 또는 만성 자가면역 및/또는 염증 질환인, 치료 방법.
  33. 제31항에 있어서, 질병 또는 질환이 박테리아, 바이러스, 진균, 기생충 또는 이들의 독소에 의한 감염에 대한 염증 반응을 포함하는, 치료 방법.
  34. 제31항에 있어서, 질병 또는 질환이 바이러스 감염인, 치료 방법.
  35. 제31항에 있어서, 질병 또는 질환이 암인, 치료 방법.
  36. 제31항에 있어서, 질병 또는 질환이 류마티스 관절염인, 치료 방법.
  37. 제31항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 피검체가 인간인, 치료 방법.
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