KR20180030656A

KR20180030656A - Cd22에 결합하는 항체 분자

Info

Publication number: KR20180030656A
Application number: KR1020187004552A
Authority: KR
Inventors: 헬렌 마가렛 피니; 스티븐 에드워드 라펙키; 케리 루이스 타이슨; 마이클 존 라이트
Original assignee: 유씨비 바이오파마 에스피알엘
Priority date: 2015-07-16
Filing date: 2016-07-15
Publication date: 2018-03-23
Also published as: US20230065921A1; MX2018000470A; HK1252863A1; GB201601077D0; EA034647B1; JP2018524007A; EA201890315A1; US10590197B2; EP3322730A1; US20180273620A1; CA2992372A1; AU2016293121A1; US20200157215A1; CL2018000108A1; CN107849140A; BR112018000601A2; CO2018000104A2; WO2017009476A1; IL256846A; US11472879B2

Abstract

본 개시내용은 CD22에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함하는 항체 분자에 관한 것으로, 상기 결합 도메인은 서열번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6 또는 7을 포함한다. 본 개시내용은 상기 항체 분자를 포함하는 약학 조성물, 및 치료에 있어서의 상기 항체 분자/조성물의 용도까지도 확장된다.

Description

CD22에 결합하는 항체 분자

본 개시내용은, 본원에 참고로 인용되어 있는 WO2016/009030호 및 GB1601077.9호를 우선권으로 주장한다.

본 개시내용은, 적어도 항원 CD22에 대해 특이적인 항체 분자, 이 항체 분자를 포함하는 제제, 및 치료에 있어서의 이들 중 어느 하나의 용도에 관한 것이다. 또한, 본 개시내용은 상기 항체 분자 및 상기 제제를 제조하는 방법까지 확장된다.

생체 내의 생물학적 메카니즘은 파악하고 이해하기 어려운, 극도로 복잡한 신호 캐스케이드이다. 이러한 신호전달의 일례는 B 세포를 활성화시키기 위해 요구되는 신호전달이다. B 세포 항원 수용체(BCR)는 막 면역글로불린(mIg) 분자 및 관련된 Igα/Igβ(CD79a/CD79b) 이종이량체(α/β)로 구성된다. mIg 서브유닛은 항원에 결합하여, 수용체 응집을 야기하는 반면, α/β 서브유닛은 신호를 세포 내부로 전달도입한다. BCR 응집은 Src 패밀리 키나제(kinases) Lyn, Blk 및 Fyn뿐만 아니라, Syk 및 Btk 티로신 키나제도 신속히 활성화시킨다. 이것은 BCR, 상기 언급된 티로신 키나제, 어댑터(adaptor) 단백질, 예컨대, CD19 및 BLNK, 및 신호전달 효소, 예컨대, PLCγ2, PI3K 및 Vav로 구성된 '시그날로좀(signalosom)'의 형성을 개시시킨다.

시그날로좀으로부터 나오는 신호는 키나제, GTPase 및 전사 인자를 포함하는 다수의 신호전달 캐스케이드들(cascades)을 활성화시킨다. 이것은 세포 대사, 유전자 발현 및 세포골격 조직화의 변화를 야기한다. BCR 신호전달의 복잡성은 생존, 내성(아네르기(anergy)) 또는 아폽토시스(apoptosis), 증식, 및 항체 생성 세포 또는 기억 B 세포로의 분화를 비롯한 많은 상이한 결과들을 가능하게 한다. 반응의 결과는 세포의 성숙 상태, 항원의 성질, BCR 신호전달의 크기 및 지속시간, 및 다른 수용체, 예컨대, CD40, IL-21 수용체 및 BAFF-R로부터의 신호에 의해 결정된다.

많은 다른 막관통 단백질들(이들 중 일부는 수용체임)은 BCR 신호전달의 특정 요소들을 조절한다. 이들 중 몇몇은 CD45, CD19, CD22, PIR-B 및 FcγRIIB1(CD32)을 포함한다. BCR 신호전달의 크기 및 지속시간은 Lyn/CD22/SHP-1 경로, Cbp/Csk 경로, SHIP, Cbl, Dok-1, Dok-3, FcγRIIB1, PIR-B, 및 BCR의 내재화를 포함하는 음성 피드백 루프(negative feedback loops)를 비롯한 음성 피드백 루프에 의해 한정된다. 생체 내에서, B 세포는 항원을 포획하고 이를 그의 세포 표면 상에서 디스플레이하는 항원 제시 세포에 의해 종종 활성화된다. 이러한 막 관련 항원에 의한 B 세포의 활성화는 BCR-유도된 세포골격 재조직화를 요구한다.

자가반응성 B 세포는 자가면역 상태를 직접적으로 또는 간접적으로 야기할 수 있거나 악화시킬 수 있는 병원성 자가항체의 생성을 담당한다. CD20 양성 B 세포의 고갈은 다수의 자가면역 상태들을 성공적으로 치료하는 데 사용됨으로써, B 세포가 다수의 자가면역 질환들, 예컨대, 류마티스성 관절염, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증 및 I형 진성 당뇨병을 야기하거나 유지하는 데 중요할 역할을 수행한다는 것을 결론적으로 확립하였다. B 세포 고갈이 성공적인 치료 방법이었지만, B 세포 생장 및 활성화 상태의 조절도 B 세포 기능을 조절하는 효과적인 방식일 수 있다는 것을 입증하는 증거도 존재한다. 따라서, 일부 부작용들과 관련되어 있는 것으로 밝혀진 B 세포 면역의 장기간 억제 없이 B 세포를 고갈시키지 않고 B 세포 조절이라는 유연성을 제공하는 대안적인 방법이 바람직할 것이다. 또한, 모든 B 세포 반응들 또는 활성들이 유해한 것은 아니고, 증거는 조절 B 세포 집단의 유지가 보호적일 수 있다는 것을 암시한다. 이러한 방식은 부적절한 또는 과도한 BcR 신호전달에 의해 야기된 비정상적인 B 세포 기능을 갖는 질환에 효과적일 것이다. 이러한 질환의 예로는 염증, 자가면역 및 암이 있으나 이들로 한정되지 않는다. 특히 흥미로운 것은 BcR 신호전달을 직접적으로 요구하거나 체액성 면역 반응의 억제 또는 자극을 요구하는 질환이다.

특히, 항원이 작은 면역 복합체에서 항체에 결합될 때, Fc 감마 수용체 IIb(CD32b)와 B 세포 수용체의 동시-라이게이션(Co-ligation)이 일어나 신호전달을 천연적으로 조절한다. 그 다음, CD32b는 BcR 활성화를 길항하는 포스파타제(phophatases) SHP-1 및 SHIP-1을 동원한다. 이 천연 조절 메카니즘이 B 세포 기능을 제어할 수 있을지라도, CD32b의 단백질 서열의 변이에 의해 야기된 CD32b 기능의 파괴는 자가면역 질환을 유발할 수 있고 이 수용체는 자가면역 질환, 예를 들면, SLE의 경우에서 하향조절될 수 있다. 따라서, B 세포 활성을 차단하는 대안적인 방식들은 BcR 기능을 조절하는 대안적인 비천연 방식을 제공하기 때문에 바람직하다. 이들 대안적인 메카니즘들은 천연 메카니즘이 소정의 질환에서 작용하지 않을 때 특히 중요할 가능성이 높다.

CD22는 B 세포 수용체(BCR)의 억제 보조수용체이고 B 세포 활성화를 위한 신호전달 역치를 확립하는 데 결정적인 역할을 수행한다. CD22의 표적화는 보다 더 낮은 반응성을 갖는 B 세포를 초래할 가능성이 있는, 휴면 세포 상의 BCR 복합체 성분의 물리적 하향조절뿐만 아니라, BCR 개입 후 BCR 신호전달의 정도의 제한도 유도한다. 전체 효과는 B 세포에 의해 매개된 후속 자가면역 및 염증 사건을 궁극적으로 감소시키는, B 세포 활성화의 억제이다. 따라서, 항체에 의한 CD22 기능의 조절은 자가면역, 면역결핍 및 악성종양을 포함하는, B 세포 활성화에 의존하는 많은 질환들에서 치료적 이점을 가질 수 있다(예를 들면, 문헌(CD22: an inhibitory enigma. Immunology. 2007. Vol 123: 314-325) 참조). 본 개시는 단독으로 사용될 수 있거나, 예를 들면, 일부 질환들, 예컨대, 자가면역 및 암과 연관된 비정상적인 B 세포 기능을 제어하는 데 유용한 물질, 예컨대, 추가 B 세포 표면 수용체(예컨대, CD79)에 대해 특이적인 항체 또는 이의 결합 단편과 함께 사용될 수 있는, CD22에 대해 특이적인 다수의 항체 분자들을 제공한다.

따라서, 하기 식 (I)의 CDRH1; 하기 식 (II)의 CDRH2; 하기 식 (III)의 CDRH3; 및 토끼목동물로부터의 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 특히 인간 프레임워크 및 토끼목동물로부터의 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 분자를 제공한다:

[식 (I)]

GX₁X₂FSX₃X₄X₅X₆X₇X₈(서열번호 1)

[식 (II)]

X₉IX₁₀X₁₁X₁₂X₁₃X₁₄X₁₅X₁₆TX₁₇YAX₁₈WAKG(서열번호 2)

[식 (III)]

X₁₉X₂₀X₂₁X₂₂X₂₃X₂₄X₂₅X₂₆X₂₇X₂₈X₂₉X₃₀X₃₁X₃₂X₃₃L(서열번호 3)

상기 식에서,

X₁은 F, I 또는 L(예컨대, F)이고, X₂는 S 또는 D이고, X₃은 S, N 또는 G(예컨대, S)이고, X₄는 S, Y, L 또는 G이고, X₅는 Y이거나 부재하고, X₆은 W, Y 또는 D(예컨대, W 또는 Y, 특히 Y)이고, X₇은 M 또는 I이고, X₈은 C 또는 S(특히 S)이고;

X₉는 C 또는 S이고, X₁₀은 Y, D, V 또는 N이고, X₁₁은 T, P, I, G, S 또는 A이고, X₁₂는 G, S 또는 A(특히 G)이고, X₁₃은 S, I 또는 T이고, X₁₄는 S 또는 N이거나 부재하고, X₁₅는 G, D, S, A 또는 T이고, X₁₆은 D, T, S, N, V 또는 G이고, X₁₇은 Y, D 또는 A이고, X₁₈은 T 또는 S(특히 S)이고;

X₁₉는 A이거나 부재하고, X₂₀은 부재하거나 G 또는 Y이고, X₂₁은 부재하거나 P 또는 G이고, X₂₂는 부재하거나 Y, S, D 또는 E이고, X₂₃은 V, G, Y 또는 W이고, X₂₄는 G, Y, S 또는 V이고, X₂₅는 Y, S, G 또는 N이고, X₂₆은 G, A, S 또는 T이고, X₂₇은 Y, G 또는 D이고, X₂₈은 D, I, Y, W 또는 H이고, X₂₉는 L, G, S, Y 또는 K이고, X₃₀은 V, Q, C, S, G, T 또는 D이고, X₃₁은 Y, A 또는 R이고, X₃₂는 L 또는 F이고, X₃₃은 N, Y 또는 D(특히 D)이다.

한 실시양태에서, CDRL1은 하기 식 (IV)를 갖고, CDRL2는 하기 식 (V)를 갖고, CDRL3은 하기 식 (VI)을 갖거나, CDRL3은 하기 식 (VII)을 가진다:

[식 (IV)]

QX₃₄SX₃₅X₃₆X₃₇X₃₈X₃₉X₄₀X₄₁X₄₂LX₄₃(서열번호 4)

[식 (V)]

X₄₄X₄₅SX₄₆LX₄₇S(서열번호 5)

[식 (VI)]

AGYKSX₄₈X₄₉DX₅₀X₅₁TT(서열번호 6)

[식 (VII)]

QX₅₂X₅₃X₅₄X₅₅X₅₆SX₅₇X₅₈X₅₉X₆₀X₆₁X₆₂X₆₃X₆₄(서열번호 7)

상기 식에서,

X₃₄는 A 또는 S(특히 A)이고, X₃₅는 Q 또는 E(특히 Q)이고, X₃₆은 S, N 또는 T(특히 S)이고, X₃₇은 I 또는 V이고, X₃₈은 S, Y 또는 G(예컨대, S 또는 Y)이고, X₃₉는 T, S, G 또는 N(예컨대, S 또는 N)이고, X₄₀은 A, G, N, Y, T 또는 R이고, X₄₁은 부재하거나 N 또는 K이고(특히 부재하고), X₄₂는 부재하거나 E 또는 D이고(특히 부재하고), X₄₃은 A 또는 S(특히 A)이고;

X₄₄는 G, Y, L, A 또는 S이고, X₄₅는 A, S 또는 T(특히 A)이고, X₄₆은 T, R 또는 K(특히 T)이고, X₄₇은 A 또는 S(특히 A)이고;

X₄₈은 D 또는 E(특히 D)이고, X₄₉는 S, A 또는 T이고, X₅₀은 D 또는 E(특히 D)이고, X₅₁은 G, A 또는 S이고;

X₅₂는 S, I 또는 G(예컨대, S 또는 G)이고, X₅₃은 Y, H 또는 G(특히 Y)이고, X₅₄는 Y, D 또는 F(특히 Y)이고, X₅₅는 G, S 또는 Y(예컨대, S 또는 Y)이고, X₅₆은 T, A 또는 S(특히 S)이고, X₅₇은 S, G, V 또는 D이고, X₅₈은 G, S 또는 L이거나 부재하고, X₅₉는 G, R, S 또는 N이고, X₆₀은 S, D 또는 V(예컨대, S 또는 D)이고, X₆₁은 W 또는 Y이거나 부재하고(예컨대, W 또는 Y이고), X₆₂는 A, T 또는 G이거나 부재하고, X₆₃은 N이거나 부재하고(특히 부재하고), X₆₄는 A이거나 부재한다(특히 부재한다).

한 실시양태에서, 식 (I)의 서열은 하기 식 (Ia)로 표시된 바와 같고, 특히 하기 식 (Ib)의 서열이다:

[식 (Ia)]

GX₁X₂FSX₃X₄X₅YX₇X₈(서열번호 8)

[식 (Ib)]

GX₁X₂FSX₃X₄X₅YX₇S(서열번호 9)

상기 식에서,

X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X₇ 및 X₈은 식 (I)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

한 실시양태에서, 식 (II)의 서열은 하기 식 (IIa)로 표시된 바와 같다:

[식 (IIa)]

X₉IX₁₀X₁₁GX₁₃X₁₄X₁₅X₁₆TX₁₇YAX₁₈WAKG(서열번호 10)

상기 식에서,

X₉, X₁₀, X₁₁, X₁₃, X₁₄, X₁₅, X₁₆, X₁₇ 및 X₁₈은 식 (II)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

한 실시양태에서, 식 (II)의 서열은 하기 식 (IIb)로 표시된 바와 같고, 특히 X₁₂가 G인 하기 식 (IIb)의 서열이다:

[식 (IIb)]

X₉IX₁₀X₁₁X₁₂X₁₃X₁₄X₁₅X₁₆TX₁₇YASWAKG(서열번호 11)

상기 식에서,

X₉, X₁₀, X₁₁, X₁₂, X₁₃, X₁₄, X₁₅, X₁₆ 및 X₁₇은 식 (II)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

한 실시양태에서, 식 (III)의 서열은 하기 식 (IIIa)로 표시된 바와 같다:

[식 (IIIa)]

X₁₉X₂₀X₂₁X₂₂X₂₃X₂₄X₂₅X₂₆X₂₇X₂₈X₂₉X₃₀X₃₁X₃₂DL(서열번호 12)

상기 식에서,

X₁₉, X₂₀, X₂₁, X₂₂, X₂₃, X₂₄, X₂₅, X₂₆, X₂₇, X₂₈, X₂₉, X₃₀, X₃₁ 및 X₃₂는 식 (III)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

한 실시양태에서, 식 (IV)의 서열은 하기 식 (IVa)로 표시된 바와 같고, 특히 하기 식 (IVb)의 서열이고, 특히 하기 식 (IVc)의 서열이고, 특히 하기 식 (IVd)의 서열이고, 특히 하기 식 (IVe)의 서열이고, 특히 하기 식 (IVf)의 서열이다:

[식 (IVa)]

QASX₃₅X₃₆X₃₇X₃₈X₃₉X₄₀X₄₁X₄₂LX₄₃(서열번호 13)

[식 (IVb)]

QASQX₃₆X₃₇X₃₈X₃₉X₄₀X₄₁X₄₂LX₄₃(서열번호 14)

[식 (IVc)]

QASQSX₃₇X₃₈X₃₉X₄₀X₄₁X₄₂LX₄₃(서열번호 15)

[식 (IVd)]

QASQSX₃₇X₃₈X₃₉X₄₀X₄₂LX₄₃(서열번호 16)

[식 (IVe)]

QASQSX₃₇X₃₈X₃₉X₄₀LX₄₃(서열번호 17)

[식 (IVf)]

QASQSX₃₇X₃₈X₃₉X₄₀LA(서열번호 18)

상기 식에서,

X₃₅, X₃₆, X₃₇, X₃₈, X₃₉, X₄₀, X₄₁, X₄₂ 및 X₄₃은 식 (IV)에 대해 상기 정의된 바와 같다:

한 실시양태에서, 식 (V)의 서열은 하기 식 (Va)로 표시된 바와 같고, 특히 하기 식 (Vb)의 서열이고, 특히 하기 식 (Vc)의 서열이다:

[식 (Va)]

X₄₄ASX₄₆LX₄₇S (서열번호 19)

[식 (Vb)]

X₄₄ASX₄₆LAS(서열번호 20)

[식 (Vc)]

X₄₄ASTLAS(서열번호 21)

상기 식에서,

X₄₄, X₄₆ 및 X₄₇은 식 (V)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

한 실시양태에서, 식 (VI)의 서열은 하기 식 (VIa)로 표시된 바와 같고, 특히 하기 식 (VIb)의 서열이다:

[식 (VIa)]

AGYKSX₄₈X₄₉DX₅₀X₅₁TT(서열번호 22)

[식 (VIb)]

AGYKSDX₄₉DDX₅₁TT(서열번호 23)

상기 식에서,

X₄₈, X₄₉, X₅₀ 및 X₅₁은 식 (VI)에 대해 정의된 바와 같다.

한 실시양태에서, 식 (VII)의 서열은 하기 식 (VIIa)로 표시된 바와 같고, 특히 하기 식 (VIIb)의 서열이고, 특히 하기 식 (VIIc)의 서열이고, 특히 하기 식 (VIId)의 서열이고, 특히 하기 식 (VIIe)의 서열이다:

[식 (VIIa)]

QX₅₂YX₅₄X₅₅X₅₆SX₅₇X₅₈X₅₉X₆₀X₆₁X₆₂X₆₃X₆₄(서열번호 24)

[식 (VIIb)]

QX₅₂YYX₅₅X₅₆SX₅₇X₅₈X₅₉X₆₀X₆₁X₆₂X₆₃X₆₄(서열번호 25)

[식 (VIIc)]

QX₅₂YYX₅₅SSX₅₇X₅₈X₅₉X₆₀X₆₁X₆₂X₆₃X₆₄(서열번호 26)

[식 (VIId)]

QX₅₂YYX₅₅SSX₅₇X₅₈X₅₉X₆₀X₆₁X₆₂X₆₄(서열번호 27)

[식 (VIIe)]

QX₅₂YYX₅₅SSX₅₇X₅₈X₅₉X₆₀X₆₁X₆₂(서열번호 28)

상기 식에서,

X₅₂, X₅₄, X₅₅, X₅₆, X₅₇, X₅₈, X₅₉, X₆₀, X₆₁, X₆₂, X₆₃ 및 X₆₄는 식 (VII)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

식 (I), (II) 및 (III)의 정의에 속하는 CDR들의 예는 다음과 같이 제공된다:

식 (IV), (V), (VI) 및 (VII)의 정의에 속하는 CDR들의 예는 다음과 같이 제공된다:

일례에서, 본 발명은 임의의 적합한 항체 포맷으로 본원에 기재된 CD22 항체를 제공한다. 따라서, 일례에서, 본 발명은 하기 항체들로부터 유래된 토끼 CDR들을 포함하는, 상기 본원 및 도 35에서 제공된 CDR들을 포함하는 본원에 기재된 결합 도메인들 중 하나 이상의 결합 도메인을 함유하는 항-CD22 항체 또는 이의 단편을 제공한다: 항체 4120, 항체 4126, 항체 4127, 항체 4128, 항체 4130 또는 항체 4132. 상기 CDR들은 임의의 적합한 항체 프레임워크 및 임의의 적합한 항체 포맷 내로 도입될 수 있다. 이러한 항체는 단일클론, 인간화된, 전체 인간 또는 키메라 항체일 수 있으나 이들로 한정되지 않는 전체 항체 및 이의 기능적 활성 단편 또는 유도체를 포함한다. 따라서, 이러한 항체는 전장 중쇄 및 경쇄를 갖는 완전한 항체 분자 또는 이의 단편을 포함할 수 있고, Fab, 변형된 Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, 단일 도메인 항체, scFv, 2가, 3가 또는 4가 항체, 비스-scFv, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디 및 이들 중 임의의 분자의 에피토프 결합 단편일 수 있으나 이들로 한정되지 않는다(예를 들면, 문헌(Holliger and Hudson, 2005, Nature Biotech. 23(9):1126-1136); 및 문헌(Adair and Lawson, 2005, Drug Design Reviews - Online 2(3), 209-217) 참조). 이들 항체 단편들을 생성하고 제조하는 방법은 당분야에서 잘 알려져 있다(예를 들면, 문헌(Verma et al., 1998, Journal of Immunological Methods, 216, 165-181) 참조). 다가 항체는 다중특이성을 포함할 수 있거나 단일특이적일 수 있다(예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO92/22853호 및 제WO05/113605호 참조). 본 발명의 이 양태는 본원에 전술되어 있는 바와 같이 하나 이상의 이성질체화, 탈아미드화, 글리코실화 부위 또는 시스테인 잔기를 제거하도록 아미노산이 CDR 내에서 돌연변이되어 있는 변이체들을 비롯한, 인간화된 버전 및 변형된 버전을 포함하는 이들 항-CD22 항체들의 변이체들까지도 확장된다는 것이 인식될 것이다.

따라서, 일례에서, 서열번호 1, 8 또는 9, 서열번호 2, 10 또는 11 및 서열번호 3 또는 12로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 갖는 중쇄 또는 중쇄 단편을 포함하는 본 개시의 항-CD22 항체 분자(예를 들면, 항체 또는 이의 결합 단편)로서, 예를 들면, CDRH1이 서열번호 1이고 CDRH2가 서열번호 2이고 CDRH3이 서열번호 3인 항-CD22 항체 분자가 제공된다.

따라서, 한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 1, 8 또는 9이고 CDRH2는 서열번호 2이거나; CDRH1은 서열번호 1, 8 또는 9이고 CDRH2는 서열번호 10이거나; CDRH1은 서열번호 1, 8 또는 9이고 CDRH2는 서열번호 11이거나; CDRH1은 서열번호 1, 8 또는 9이고 CDRH3은 서열번호 3이거나; CDRH1은 서열번호 1, 8 또는 9이고 CDRH3은 서열번호 12이거나; CDRH2는 서열번호 2, 10 또는 11이고 CDRH3은 서열번호 3이거나; CDRH2는 서열번호 2, 10 또는 11이고 CDRH3은 서열번호 12이다.

일례에서, 본 개시에 따른 항체 분자는 예를 들면, 서열번호 29 내지 68로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 갖는 중쇄 또는 중쇄 단편을 포함하고, 특히 이때 CDRH1은 서열번호 29 내지 39로부터 독립적으로 선택된 서열을 갖고, CDRH2는 서열번호 40 내지 59로부터 독립적으로 선택된 서열을 갖고, CDRH3은 서열번호 60 내지 68로부터 독립적으로 선택된 서열을 가진다.

일례에서, 서열번호 29, 30, 40, 41 및 60으로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 갖는 중쇄 또는 중쇄 단편을 포함하는 본 개시의 항-CD22 항체 분자(예를 들면, 항체 또는 이의 결합 단편)로서, 예를 들면, CDRH1이 서열번호 29 또는 30이고 CDRH2가 서열번호 40 또는 41이고 CDRH3이 서열번호 60인 항-CD22 항체 분자가 제공된다.

따라서, 한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 29 또는 30이고 CDRH2는 서열번호 40 또는 41이거나; CDRH1은 서열번호 29 또는 30이고 CDRH3은 서열번호 60이거나; CDRH2는 서열번호 40 또는 41이고 CDRH3은 서열번호 60이다.

따라서, 한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 29이고 CDRH2는 서열번호 40이거나; CDRH1은 서열번호 29이고 CDRH3은 서열번호 60이거나: CDRH2는 서열번호 40이고 CDRH3은 서열번호 60이다.

또 다른 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 30이고 CDRH2는 서열번호 41이거나; CDRH1은 서열번호 30이고 CDRH3은 서열번호 60이거나: CDRH2는 서열번호 41이고 CDRH3은 서열번호 60이다.

또 다른 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 29이고, CDRH2는 서열번호 41이다.

일례에서, 서열번호 31, 32, 42, 43, 61 및 62로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 갖는 중쇄 또는 중쇄 단편을 포함하는 본 개시의 항-CD22 항체 분자(예를 들면, 항체 또는 이의 결합 단편)로서, 예를 들면, CDRH1이 서열번호 31 또는 32이고 CDRH2가 서열번호 42 또는 43이고 CDRH3이 서열번호 61 또는 62인 항-CD22 항체 분자가 제공된다.

따라서, 한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 31 또는 32이고 CDRH2는 서열번호 42 또는 43이거나; CDRH1은 서열번호 31 또는 32이고 CDRH3은 서열번호 61 또는 62이거나; CDRH2는 서열번호 42 또는 43이고 CDRH3은 서열번호 61 또는 62이다. 따라서, 한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 31이고 CDRH2는 서열번호 42이거나, CDRH1은 서열번호 31이고 CDRH3은 서열번호 61이거나, CDRH2는 서열번호 42이고 CDRH3은 서열번호 61이다. 한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 31이고 CDRH2는 서열번호 43이거나, CDRH1은 서열번호 31이고 CDRH3은 서열번호 62이거나, CDRH2는 서열번호 43이고 CDRH3은 서열번호 61이다. 또 다른 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 32이고 CDRH2는 서열번호 42이거나, CDRH1은 서열번호 32이고 CDRH3은 서열번호 61이거나, CDRH2는 서열번호 42이고 CDRH3은 서열번호 61이다. 또 다른 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 32이고 CDRH2는 서열번호 43이거나, CDRH1은 서열번호 32이고 CDRH3은 서열번호 62이거나, CDRH2는 서열번호 43이고 CDRH3은 서열번호 62이다.

일례에서, 서열번호 33, 34, 44, 45 및 63으로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 갖는 중쇄 또는 중쇄 단편을 포함하는 본 개시의 항-CD22 항체 분자(예를 들면, 항체 또는 이의 결합 단편)로서, 예를 들면, CDRH1이 서열번호 33이고 CDRH2가 서열번호 44이고 CDRH3이 서열번호 63인 항-CD22 항체 분자가 제공된다.

따라서, 한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고 CDRH2는 서열번호 44 또는 45이거나, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고 CDRH3은 서열번호 63이거나, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고 CDRH3은 서열번호 63이다. 따라서, 한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고 CDRH2는 서열번호 44이거나, CDRH1은 서열번호 33이고 CDRH3은 서열번호 63이거나, CDRH2는 서열번호 44이고 CDRH3은 서열번호 63이다. 한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고 CDRH2는 서열번호 45이거나, CDRH1은 서열번호 34이고 CDRH3은 서열번호 63이거나, CDRH2는 서열번호 45이고 CDRH3은 서열번호 63이다.

또 다른 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고 CDRH2는 서열번호 44이거나, CDRH1은 서열번호 34이고 CDRH3은 서열번호 63이다. 한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고 CDRH2는 서열번호 45이다.

일례에서, 서열번호 35, 36, 46, 47 및 64로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 갖는 중쇄 또는 중쇄 단편을 포함하는 본 개시에 따른 항-CD22 항체 분자(예를 들면, 항체 또는 이의 결합 단편)로서, 예를 들면, CDRH1이 서열번호 35 또는 36이고 CDRH2가 서열번호 46 또는 47이고 CDRH3이 서열번호 64인 항-CD22 항체 분자가 제공된다.

따라서, 한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 35 또는 36이고 CDRH2는 서열번호 46 또는 47이거나, CDRH1은 서열번호 35 또는 36이고 CDRH3은 서열번호 64이거나, CDRH2는 서열번호 46 또는 47이고 CDRH3은 서열번호 64이다. 따라서, 한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 35이고 CDRH2는 서열번호 46이거나, CDRH1은 서열번호 35이고 CDRH3은 서열번호 64이거나, CDRH2는 서열번호 46이고 CDRH3은 서열번호 64이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 35이고 CDRH2는 서열번호 47이거나, CDRH1은 서열번호 36이고 CDRH3은 서열번호 64이거나, CDRH2는 서열번호 47이고 CDRH3은 서열번호 64이다. 또 다른 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 36이고 CDRH2는 서열번호 46이거나, CDRH1은 서열번호 36이고 CDRH2는 서열번호 47이다.

일례에서, 서열번호 37, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 65, 66 및 67로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 갖는 중쇄 또는 중쇄 단편을 포함하는 본 개시에 따른 항-CD22 항체 분자(예를 들면, 항체 또는 이의 결합 단편)로서, 예를 들면, CDRH1이 서열번호 37이고 CDRH2가 서열번호 48, 49, 50, 51, 52 또는 53이고 CDRH3이 서열번호 65, 66 또는 67인 항-CD22 항체 분자가 제공된다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 48, 49, 50, 51, 52 또는 53이고, CDRH3은 서열번호 65, 66 또는 67이다.

따라서, 한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고 CDRH2는 서열번호 48, 49, 50, 51, 52 또는 53이거나, CDRH1은 서열번호 37이고 CDRH2는 서열번호 48이거나, CDRH1은 서열번호 37이고 CDRH2는 서열번호 49이거나, CDRH1은 서열번호 37이고 CDRH2는 서열번호 50이거나, CDRH1은 서열번호 37이고 CDRH2는 서열번호 51이거나, CDRH1은 서열번호 37이고 CDRH2는 서열번호 52이거나, CDRH1은 서열번호 37이고 CDRH2는 서열번호 53이거나, CDRH1은 서열번호 37이고 CDRH3은 서열번호 65이거나, CDRH1은 서열번호 37이고 CDRH3은 서열번호 66이거나, CDRH1은 서열번호 37이고 CDRH3은 서열번호 67이다.

한 실시양태에서, CDRH2는 서열번호 48, 49, 50, 51, 52 또는 53이고 CDRH3은 서열번호 65이다.

따라서, 한 실시양태에서, CDRH2는 서열번호 48이고 CDRH3은 서열번호 65이거나, CDRH2는 서열번호 48이고 CDRH3은 서열번호 66이거나, CDRH2는 서열번호 48이고 CDRH3은 서열번호 67이다.

한 실시양태에서, CDRH2는 서열번호 49이고 CDRH3은 서열번호 65이거나, CDRH2는 서열번호 49이고 CDRH3은 서열번호 66이거나, CDRH2는 서열번호 49이고 CDRH3은 서열번호 67이다.

또 다른 실시양태에서, CDRH2는 서열번호 50이고 CDRH3은 서열번호 65이거나, CDRH2는 서열번호 50이고 CDRH3은 서열번호 66이거나, CDRH2는 서열번호 50이고 CDRH3은 서열번호 67이다.

또 다른 실시양태에서, CDRH2는 서열번호 51이고 CDRH3은 서열번호 65이거나, CDRH2는 서열번호 51이고 CDRH3은 서열번호 66이거나, CDRH2는 서열번호 51이고 CDRH3은 서열번호 67이다.

또 다른 실시양태에서, CDRH2는 서열번호 52이고 CDRH3은 서열번호 65이거나, CDRH2는 서열번호 52이고 CDRH3은 서열번호 66이거나, CDRH2는 서열번호 52이고 CDRH3은 서열번호 67이다.

또 다른 실시양태에서, CDRH2는 서열번호 53이고 CDRH3은 서열번호 65이거나, CDRH2는 서열번호 53이고 CDRH3은 서열번호 66이거나, CDRH2는 서열번호 53이고 CDRH3은 서열번호 67이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 48이고, CDRH3은 서열번호 65이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 49이고, CDRH3은 서열번호 65이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 50이고, CDRH3은 서열번호 65이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 51이고, CDRH3은 서열번호 65이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 52이고, CDRH3은 서열번호 65이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 53이고, CDRH3은 서열번호 65이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 48이고, CDRH3은 서열번호 66이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 49이고, CDRH3은 서열번호 66이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 50이고, CDRH3은 서열번호 66이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 51이고, CDRH3은 서열번호 66이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 52이고, CDRH3은 서열번호 66이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 53이고, CDRH3은 서열번호 66이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 48이고, CDRH3은 서열번호 67이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 49이고, CDRH3은 서열번호 67이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 50이고, CDRH3은 서열번호 67이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 51이고, CDRH3은 서열번호 67이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 52이고, CDRH3은 서열번호 67이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 53이고, CDRH3은 서열번호 67이다.

일례에서, 서열번호 38, 39, 54, 55, 56, 57, 58, 59 및 68로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 갖는 중쇄 또는 중쇄 단편을 포함하는 본 개시의 항-CD22 항체 분자(예를 들면, 항체 또는 이의 결합 단편)로서, 예를 들면, CDRH1이 서열번호 38 또는 39이고 CDRH2가 서열번호 54, 55, 56, 57, 58 또는 59이고 CDRH3이 서열번호 68인 항-CD22 항체 분자가 제공된다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 38 또는 39이고 CDRH2는 서열번호 54, 55, 56, 57, 58 또는 59이거나, CDRH1은 서열번호 38 또는 39이고 CDRH3은 서열번호 68이거나, CDRH2는 서열번호 54, 55, 56, 57, 58 또는 59이고 CDRH3은 서열번호 68이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 38이고 CDRH2는 서열번호 54이거나, CDRH1은 서열번호 38이고 CDRH2는 서열번호 55이거나, CDRH1은 서열번호 38이고 CDRH2는 서열번호 56이거나, CDRH1은 서열번호 38이고 CDRH2는 서열번호 57이거나, CDRH1은 서열번호 38이고 CDRH2는 서열번호 58이거나, CDRH1은 서열번호 38이고 CDRH2는 서열번호 59이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 39이고 CDRH2는 서열번호 68이거나, CDRH1은 서열번호 39이고 CDRH2는 서열번호 54이거나, CDRH1은 서열번호 39이고 CDRH2는 서열번호 55이거나, CDRH1은 서열번호 39이고 CDRH2는 서열번호 56이거나, CDRH1은 서열번호 39이고 CDRH2는 서열번호 57이거나, CDRH1은 서열번호 39이고 CDRH2는 서열번호 58이거나, CDRH1은 서열번호 39이고 CDRH2는 서열번호 59이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 39이고 CDRH2는 서열번호 68이다.

한 실시양태에서, CDRH2는 서열번호 54이고 CDRH3은 서열번호 68이거나, CDRH2는 서열번호 55이고 CDRH3은 서열번호 68이거나, CDRH2는 서열번호 56이고 CDRH3은 서열번호 68이거나, CDRH2는 서열번호 57이고 CDRH3은 서열번호 68이거나, CDRH2는 서열번호 58이고 CDRH3은 서열번호 68이거나, CDRH2는 서열번호 59이고 CDRH3은 서열번호 68이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 38이고, CDRH2는 서열번호 54이고, CDRH3은 서열번호 68이다. CDRH1은 서열번호 38이고, CDRH2는 서열번호 55이고, CDRH3은 서열번호 68이다. CDRH1은 서열번호 38이고, CDRH2는 서열번호 56이고, CDRH3은 서열번호 68이다. CDRH1은 서열번호 38이고, CDRH2는 서열번호 57이고, CDRH3은 서열번호 68이다. CDRH1은 서열번호 38이고, CDRH2는 서열번호 58이고, CDRH3은 서열번호 68이다. CDRH1은 서열번호 38이고, CDRH2는 서열번호 59이고, CDRH3은 서열번호 68이다.

한 실시양태에서, 상기 나열된 중쇄 가변 영역은 본원에 나열된 경쇄 가변 영역과 함께 사용된다.

일례에서, 본 개시에 따른 항체 분자는 예를 들면, 서열번호 69 내지 101로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 갖는 경쇄 또는 경쇄 단편을 추가로 포함하고, 특히 이때 CDRL1은 서열번호 69 내지 74로부터 독립적으로 선택된 서열을 갖고, CDRL2는 서열번호 75 내지 80으로부터 독립적으로 선택된 서열을 갖고, CDRL3은 서열번호 81 내지 101로부터 독립적으로 선택된 서열을 가진다.

일례에서, 본 개시에 따른 항체 분자는 예를 들면, 서열번호 69, 75 및 81로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 갖는 경쇄 또는 경쇄 단편을 포함하고, 특히 이때 CDRL1은 서열번호 69로 제공된 서열을 갖고, CDRL2는 서열번호 75로 제공된 서열을 갖고, CDRL3은 서열번호 81로 제공된 서열을 가진다.

따라서, 한 실시양태에서, CDRL1은 서열번호 69이고 CDRL2는 서열번호 75이거나; CDRL1은 서열번호 69이고 CDRL3은 서열번호 81이거나; CDRL2는 서열번호 75이고 CDRL3은 서열번호 81이다.

일례에서, 본 개시에 따른 항체 분자는 예를 들면, 서열번호 70, 76 및 82로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 갖는 경쇄 또는 경쇄 단편을 포함하고, 특히 이때 CDRL1은 서열번호 70으로 제공된 서열을 갖고, CDRL2는 서열번호 76으로 제공된 서열을 갖고, CDRL3은 서열번호 82로 제공된 서열을 가진다.

따라서, 한 실시양태에서, CDRL1은 서열번호 70이고 CDRL2는 서열번호 76이거나; CDRL1은 서열번호 70이고 CDRL3은 서열번호 82이거나; CDRL2는 서열번호 76이고 CDRL3은 서열번호 82이다.

일례에서, 본 개시에 따른 항체 분자는 예를 들면, 서열번호 71, 77, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 및 98로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 갖는 경쇄 또는 경쇄 단편을 포함하고, 특히 이때 CDRL1은 서열번호 71로 제공된 서열을 갖고, CDRL2는 서열번호 77로 제공된 서열을 갖고, CDRL3은 서열번호 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 및 98로 제공된 서열을 가진다.

따라서, 한 실시양태에서, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL2는 서열번호 77이거나; CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 또는 98이거나; CDRL2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 또는 98이다.

한 실시양태에서, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 83이거나, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 84이거나, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 85이거나, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 86이거나, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 87이거나, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 88이거나, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 89이거나, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 90이거나, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 91이거나, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 92이거나, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 93이거나, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 94이거나, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 95이거나, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 96이거나, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 97이거나, CDRL1은 서열번호 71이고 CDRL3은 서열번호 98이다.

한 실시양태에서, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 83이거나, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 84이거나, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 85이거나, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 86이거나, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 87이거나, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 88이거나, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 89이거나, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 90이거나, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 91이거나, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 92이거나, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 93이거나, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 94이거나, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 95이거나, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 96이거나, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 97이거나, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 98이다.

한 실시양태에서, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 83이거나, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 84이거나, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 85이거나, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 86이거나, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 87이거나, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 88이거나, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 89이거나, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 90이거나, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 91이거나, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 92이거나, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 93이거나, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 94이거나, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 95이거나, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 96이거나, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 97이거나, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRH2는 서열번호 77이고 CDRL3은 서열번호 98이다.

일례에서, 본 개시에 따른 항체 분자는 예를 들면, 서열번호 72, 78 및 99로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 갖는 경쇄 또는 경쇄 단편을 포함하고, 특히 이때 CDRL1은 서열번호 72로 제공된 서열을 갖고, CDRL2는 서열번호 78로 제공된 서열을 갖고, CDRL3은 서열번호 99로 제공된 서열을 가진다.

따라서, 한 실시양태에서, CDRL1은 서열번호 72이고 CDRL2는 서열번호 78이거나; CDRL1은 서열번호 72이고 CDRL3은 서열번호 99이거나; CDRL2는 서열번호 78이고 CDRL3은 서열번호 99이다.

일례에서, 본 개시에 따른 항체 분자는 예를 들면, 서열번호 73, 79 및 100으로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 갖는 경쇄 또는 경쇄 단편을 포함하고, 특히 이때 CDRL1은 서열번호 73으로 제공된 서열을 갖고, CDRL2는 서열번호 79로 제공된 서열을 갖고, CDRL3은 서열번호 100으로 제공된 서열을 가진다.

따라서, 한 실시양태에서, CDRL1은 서열번호 73이고 CDRL2는 서열번호 79이거나; CDRL1은 서열번호 73이고 CDRL3은 서열번호 100이거나; CDRL2는 서열번호 79이고 CDRL3은 서열번호 100이다.

일례에서, 본 개시에 따른 항체 분자는 예를 들면, 서열번호 74, 80 및 101로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 포함하는 가변 영역을 갖는 경쇄 또는 경쇄 단편을 포함하고, 특히 이때 CDRL1은 서열번호 74로 제공된 서열을 갖고, CDRL2는 서열번호 80으로 제공된 서열을 갖고, CDRL3은 서열번호 101로 제공된 서열을 가진다.

따라서, 한 실시양태에서, CDRL1은 서열번호 74이고 CDRL2는 서열번호 80이거나; CDRL1은 서열번호 74이고 CDRL3은 서열번호 101이거나; CDRL2는 서열번호 80이고 CDRL3은 서열번호 101이다.

일례에서, 본 개시에 따른 항체 분자(예컨대, 항체 또는 결합 단편)는 서열번호 29 내지 101로부터 선택된 CDR 서열을 포함하고, 예를 들면, 이때 CDRH1은 서열번호 29 내지 39로부터 독립적으로 선택되고, CDRH2는 서열번호 40 내지 59로부터 독립적으로 선택되고, CDRH3은 서열번호 60 내지 68로부터 독립적으로 선택되고, CDRL1은 서열번호 69 내지 74로부터 독립적으로 선택되고, CDRL2는 서열번호 75 내지 80으로부터 독립적으로 선택되고, CDRL3은 서열번호 81 내지 101로부터 독립적으로 선택된다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 29 또는 30이고, CDRH2는 서열번호 40 또는 41이고, CDRH3은 서열번호 60이고, CDRL1은 서열번호 69이고, CDRL2는 서열번호 75이고, CDRL3은 서열번호 81이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 29이고, CDRH2는 서열번호 40 또는 41이고, CDRH3은 서열번호 60이고, CDRL1은 서열번호 69이고, CDRL2는 서열번호 75이고, CDRL3은 서열번호 81이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 30이고, CDRH2는 서열번호 40 또는 41이고, CDRH3은 서열번호 60이고, CDRL1은 서열번호 69이고, CDRL2는 서열번호 75이고, CDRL3은 서열번호 81이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 29 또는 30이고, CDRH2는 서열번호 40이고, CDRH3은 서열번호 60이고, CDRL1은 서열번호 69이고, CDRL2는 서열번호 75이고, CDRL3은 서열번호 81이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 29 또는 30이고, CDRH2는 서열번호 41이고, CDRH3은 서열번호 60이고, CDRL1은 서열번호 69이고, CDRL2는 서열번호 75이고, CDRL3은 서열번호 81이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 29이고, CDRH2는 서열번호 40이고, CDRH3은 서열번호 60이고, CDRL1은 서열번호 69이고, CDRL2는 서열번호 75이고, CDRL3은 서열번호 81이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 29이고, CDRH2는 서열번호 41이고, CDRH3은 서열번호 60이고, CDRL1은 서열번호 69이고, CDRL2는 서열번호 75이고, CDRL3은 서열번호 81이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 30이고, CDRH2는 서열번호 40이고, CDRH3은 서열번호 60이고, CDRL1은 서열번호 69이고, CDRL2는 서열번호 75이고, CDRL3은 서열번호 81이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 30이고, CDRH2는 서열번호 41이고, CDRH3은 서열번호 60이고, CDRL1은 서열번호 69이고, CDRL2는 서열번호 75이고, CDRL3은 서열번호 81이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 31 또는 32이고, CDRH2는 서열번호 42 또는 43이고, CDRH3은 서열번호 61 또는 62이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 31이고, CDRH2는 서열번호 42 또는 43이고, CDRH3은 서열번호 61 또는 62이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 31이고, CDRH2는 서열번호 42이고, CDRH3은 서열번호 61 또는 62이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 31이고, CDRH2는 서열번호 43이고, CDRH3은 서열번호 61 또는 62이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 31이고, CDRH2는 서열번호 42 또는 43이고, CDRH3은 서열번호 61이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 31이고, CDRH2는 서열번호 42 또는 43이고, CDRH3은 서열번호 62이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 31이고, CDRH2는 서열번호 42이고, CDRH3은 서열번호 61이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 31이고, CDRH2는 서열번호 43이고, CDRH3은 서열번호 61이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 31이고, CDRH2는 서열번호 42이고, CDRH3은 서열번호 62이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 31이고, CDRH2는 서열번호 43이고, CDRH3은 서열번호 62이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 32이고, CDRH2는 서열번호 42 또는 43이고, CDRH3은 서열번호 61 또는 62이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 32이고, CDRH2는 서열번호 42이고, CDRH3은 서열번호 61 또는 62이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 32이고, CDRH2는 서열번호 43이고, CDRH3은 서열번호 61 또는 62이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 32이고, CDRH2는 서열번호 42 또는 43이고, CDRH3은 서열번호 61이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 32이고, CDRH2는 서열번호 42 또는 43이고, CDRH3은 서열번호 62이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 32이고, CDRH2는 서열번호 42이고, CDRH3은 서열번호 61이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 32이고, CDRH2는 서열번호 43이고, CDRH3은 서열번호 61이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 32이고, CDRH2는 서열번호 42이고, CDRH3은 서열번호 62이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 32이고, CDRH2는 서열번호 43이고, CDRH3은 서열번호 62이고, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 또는 98이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 또는 98이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 또는 98이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 또는 98이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 또는 98이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 83이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 83이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 83이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 83이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 84이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 84이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 84이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 84이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 85이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 85이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 85이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 85이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 86이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 86이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 86이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 86이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 87이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 87이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 87이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 87이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 88이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 88이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 88이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 88이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 89이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 89이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 89이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 89이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 90이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 90이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 90이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 90이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 91이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 91이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 91이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 91이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 92이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 92이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 92이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 92이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 93이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 93이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 93이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 93이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 94이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 94이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 94이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 94이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 95이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 95이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 95이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 95이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 96이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 96이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 96이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 96이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 97이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 97이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 97이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 97이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 98이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 98이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 98이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 45이고, CDRH3은 서열번호 63이고, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 98이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 35 또는 36이고, CDRH2는 서열번호 46 또는 47이고, CDRH3은 서열번호 64이고, CDRL1은 서열번호 72이고, CDRL2는 서열번호 78이고, CDRL3은 서열번호 99이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 35이고, CDRH2는 서열번호 46 또는 47이고, CDRH3은 서열번호 64이고, CDRL1은 서열번호 72이고, CDRL2는 서열번호 78이고, CDRL3은 서열번호 99이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 36이고, CDRH2는 서열번호 46 또는 47이고, CDRH3은 서열번호 64이고, CDRL1은 서열번호 72이고, CDRL2는 서열번호 78이고, CDRL3은 서열번호 99이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 35 또는 36이고, CDRH2는 서열번호 46이고, CDRH3은 서열번호 64이고, CDRL1은 서열번호 72이고, CDRL2는 서열번호 78이고, CDRL3은 서열번호 99이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 35 또는 36이고, CDRH2는 서열번호 47이고, CDRH3은 서열번호 64이고, CDRL1은 서열번호 72이고, CDRL2는 서열번호 78이고, CDRL3은 서열번호 99이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 35이고, CDRH2는 서열번호 46이고, CDRH3은 서열번호 64이고, CDRL1은 서열번호 72이고, CDRL2는 서열번호 78이고, CDRL3은 서열번호 99이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 36이고, CDRH2는 서열번호 46이고, CDRH3은 서열번호 64이고, CDRL1은 서열번호 72이고, CDRL2는 서열번호 78이고, CDRL3은 서열번호 99이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 36이고, CDRH2는 서열번호 47이고, CDRH3은 서열번호 64이고, CDRL1은 서열번호 72이고, CDRL2는 서열번호 78이고, CDRL3은 서열번호 99이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 48, 49, 50, 51, 52 또는 53이고, CDRH3은 서열번호 65, 66 또는 67이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 48이고, CDRH3은 서열번호 65, 66 또는 67이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 49이고, CDRH3은 서열번호 65, 66 또는 67이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 50이고, CDRH3은 서열번호 65, 66 또는 67이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 51이고, CDRH3은 서열번호 65, 66 또는 67이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 52이고, CDRH3은 서열번호 65, 66 또는 67이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 53이고, CDRH3은 서열번호 65, 66 또는 67이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 48이고, CDRH3은 서열번호 65이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 49이고, CDRH3은 서열번호 65이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 50이고, CDRH3은 서열번호 65이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 51이고, CDRH3은 서열번호 65이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 52이고, CDRH3은 서열번호 65이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 53이고, CDRH3은 서열번호 65이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 48이고, CDRH3은 서열번호 66이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 49이고, CDRH3은 서열번호 66이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 50이고, CDRH3은 서열번호 66이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 51이고, CDRH3은 서열번호 66이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 52이고, CDRH3은 서열번호 66이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 53이고, CDRH3은 서열번호 66이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 48이고, CDRH3은 서열번호 67이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 49이고, CDRH3은 서열번호 67이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 50이고, CDRH3은 서열번호 67이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 51이고, CDRH3은 서열번호 67이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 52이고, CDRH3은 서열번호 67이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 53이고, CDRH3은 서열번호 67이고, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 38 또는 39이고, CDRH2는 서열번호 54, 55, 56, 57, 58 또는 59이고, CDRH3은 서열번호 68이고, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 38이고, CDRH2는 서열번호 54, 55, 56, 57, 58 또는 59이고, CDRH3은 서열번호 68이고, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 39이고, CDRH2는 서열번호 54, 55, 56, 57, 58 또는 59이고, CDRH3은 서열번호 68이고, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101이다. 한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 38이고, CDRH2는 서열번호 54이고, CDRH3은 서열번호 68이고, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 39이고, CDRH2는 서열번호 54이고, CDRH3은 서열번호 68이고, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 38이고, CDRH2는 서열번호 55이고, CDRH3은 서열번호 68이고, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 39이고, CDRH2는 서열번호 55이고, CDRH3은 서열번호 68이고, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 38이고, CDRH2는 서열번호 56이고, CDRH3은 서열번호 68이고, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 39이고, CDRH2는 서열번호 56이고, CDRH3은 서열번호 68이고, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 38이고, CDRH2는 서열번호 57이고, CDRH3은 서열번호 68이고, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 39이고, CDRH2는 서열번호 57이고, CDRH3은 서열번호 68이고, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 38이고, CDRH2는 서열번호 58이고, CDRH3은 서열번호 68이고, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 39이고, CDRH2는 서열번호 58이고, CDRH3은 서열번호 68이고, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 38이고, CDRH2는 서열번호 59이고, CDRH3은 서열번호 68이고, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101이다.

한 실시양태에서, CDRH1은 서열번호 39이고, CDRH2는 서열번호 59이고, CDRH3은 서열번호 68이고, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101이다.

한 독립적인 양태에서, 본 개시는 서열번호 62, 71, 80 또는 90의 서열, 및 이들 중 어느 한 서열과 적어도 95% 동일하거나 유사한(예컨대, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하거나 유사한) 서열을 포함하는 가변 중쇄 도메인을 제공한다.

한 독립적인 양태에서, 서열번호 102, 111, 122, 131 또는 140의 서열, 및 이들 중 어느 한 서열과 적어도 95% 동일하거나 유사한(예컨대, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하거나 유사한) 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역이 제공된다.

한 독립적인 양태에서, 본 개시는 서열번호 104, 113, 124, 133 또는 142의 서열, 및 이들 중 어느 한 서열과 적어도 95% 동일하거나 유사한(예컨대, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하거나 유사한) 서열을 포함하는 가변 중쇄 도메인, 및 서열번호 60, 69, 78 또는 88의 서열, 및 이들 중 어느 한 서열과 적어도 95% 동일하거나 유사한(예컨대, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하거나 유사한) 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역을 제공한다.

한 실시양태에서, VH 및 VL 쌍은

서열번호 102 또는 이와 적어도 95% 동일하거나 유사한 서열, 및 서열번호 104 또는 이와 적어도 95% 동일하거나 유사한 서열,

서열번호 111 또는 이와 적어도 95% 동일하거나 유사한 서열, 및 서열번호 113 또는 이와 적어도 95% 동일하거나 유사한 서열,

서열번호 122 또는 이와 적어도 95% 동일하거나 유사한 서열, 및 서열번호 124 또는 이와 적어도 95% 동일하거나 유사한 서열,

서열번호 131 또는 이와 적어도 95% 동일하거나 유사한 서열, 및 서열번호 133 또는 이와 적어도 95% 동일하거나 유사한 서열, 및

서열번호 140 또는 이와 적어도 95% 동일하거나 유사한 서열, 및 서열번호 142 또는 이와 적어도 95% 동일하거나 유사한 서열

로부터 선택된다.

한 실시양태에서, 본원에 개시된 비인간 가변 도메인의 인간화된 버전이 제공된다.

문맥이 달리 표시하지 않은 한, 카바트(Kabat) 넘버링이 본원에서 사용된다.

한 실시양태에서, 본 개시에 따른 항체 분자는 인간화되고 본원에 기재된 CDR들 중 하나 이상의 CDR 또는 이의 변이체를 포함한다.

한 실시양태에서, 구축물, 예컨대, 본 개시의 항체 분자에서 사용된 중쇄 가변 영역 인간 프레임워크는 IGHV3-7, IGHV3-9, IGHV3-21, IGHV3-33, IGHV3-66, IGHV4-38-2, IGHV4-4, IGHV4-59, 및 이들 중 어느 한 프레임워크의 변이체를 포함하는 군으로부터 선택되고, 이때 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이상의 아미노산은 시스테인 이외의 아미노산으로 치환되고, 예를 들면, 원래의 토끼목동물 도너 항체 내의 상응하는 위치의 도너 잔기로 치환된다. 에를 들면, 본원에서 제공된 토끼 도너 항체 서열을 참조한다.

한 실시양태에서, 본 개시에 따른 항체 분자는 인간화된다.

전형적으로, 인간 프레임워크는 적합한 J 영역 서열, 예컨대, JH4 또는 JH2 영역을 추가로 포함한다.

한 실시양태에서, 본 개시의 항체 분자에서 사용된 인간 VH 프레임워크는 11, 23, 24, 37, 47, 48, 49, 67, 71, 73, 76, 78 및 94를 포함하는 군으로부터 선택된 적어도 1개의 위치에서 아미노산 치환을 포함하고, 예를 들면, 이때 인간 프레임워크의 원래의 아미노산은 시스테인 이외의 또 다른 아미노산으로 치환되고, 특히 도너 항체의 프레임워크 내의 상응하는 위치의 잔기로 치환된다.

한 실시양태에서, 치환은 적어도 위치 73 및 76에서 만들어진다.

한 실시양태에서, 치환은 적어도 위치 73, 76 및 78에서 만들어진다.

한 실시양태에서, 치환은 적어도 위치 67, 73, 76 및 78에서 만들어진다.

한 실시양태에서, 치환은 적어도 위치 48, 67, 73, 76 및 78에서 만들어진다.

한 실시양태에서, 치환은 적어도 위치 24, 48, 67, 73, 76 및 78에서 만들어진다.

한 실시양태에서, VH 프레임워크가 유형 IGHV3일 때, 치환은 11, 23, 24, 47, 48, 49, 67, 71, 73, 76, 78 및 94, 예컨대, (특히 IGHV3-7에 적합한) 71, 73, 76 및 78, 또는 (특히 IGHV3-9에 적합한) 47, 48, 49, 71, 73, 76, 78 및 94, 또는 (특히 IGHV3-21에 적합한) 48, 49, 71, 73, 76 및 78, 또는 (특히 IGHV3-33에 적합한) 11, (임의적으로 23 및 24), 48, 71, 73, 76 및 78, 또는 (특히 IGHV3-66에 적합한) 48, 49, 67, 71, 73, 76 및 78로부터 선택된 적어도 1개의 위치, 적어도 2개의 위치, 적어도 3개의 위치 또는 적어도 4개의 위치(통상적으로 5개 또는 6개의 위치)에서 만들어질 수 있다.

한 실시양태에서, VH 프레임워크가 유형 IGHV4일 때, 치환은 23, 24, 37, 47, 48, 49, 67, 71, 73, 76 및 78, 예컨대, (특히 IGHV4-38-2에 적합한) 24, 37, (임의적으로 47), (임의적으로 49), 67, 71, 73, 76 및 78, 또는 (특히 IGHV4-4에 적합한) 24, (임의적으로 48), (임의적으로 49), (임의적으로 67), 71, 73, 76 및 78, 또는 (특히 IGHV4-59에 적합한) 23, 24, 37, 49, 67, 71, 73, 76 및 78로부터 선택된 적어도 1개의 위치, 적어도 2개의 위치, 적어도 3개의 위치, 적어도 4개의 위치, 5개 이상의 위치, 예컨대, 6개의 위치에서 만들어질 수 있다.

한 실시양태에서, 치환 후 위치 11은 류신이다.

한 실시양태에서, 치환 후 위치 23은 라이신이다.

한 실시양태에서, 치환 후 위치 24는 알라닌 또는 글리신이다.

한 실시양태에서, 치환 후 위치 37은 발린이다.

한 실시양태에서, 치환 후 위치 47은 류신이다.

한 실시양태에서, 치환 후 위치 48은 이소류신, 발린 또는 세린이다.

한 실시양태에서, 치환 후 위치 49는 알라닌 또는 글리신이다.

한 실시양태에서, 치환 후 위치 67은 페닐알라닌 또는 발린이다.

한 실시양태에서, 치환 후 위치 71은 라이신 또는 아스파라긴이다.

한 실시양태에서, 치환 후 위치 73은 세린이다.

한 실시양태에서, 치환 후 76은 쓰레오닌이다.

한 실시양태에서, 치환 후 78은 발린이다.

한 실시양태에서, 치환 후 94는 아르기닌이다.

인간 VH 프레임워크가 인간 프레임워크의 위치 1에서 글루타민인 한 실시양태에서, 글루타민을 글루탐산(E1)으로 대체하여 균질한 생성물의 발현 및 정제를 제공한다: 항체 및 항체 단편의 N 말단에서 피로글루타메이트로의 글루타민의 전환은 널리 보고되어 있다.

이들 치환들 중 하나 이상의 치환을 조합하여 본 발명의 항체 분자에서 사용할 인간화된 VH 영역을 생성할 수 있다는 것은 인식될 것이다.

본 발명의 한 독립적인 양태에서, 본원에 개시된 임의의 적합한 서열, 예를 들면, 서열번호 107, 108, 109, 110, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 127, 128, 129, 130, 136, 137, 138, 139, 145, 146, 147, 148, 154, 155, 156, 157, 및 이와 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일하거나 유사한(예컨대, 96%, 97%, 98% 또는 99% 유사하거나 동일한) 서열로부터 독립적으로 선택된 서열을 포함하는 인간화된 VH 가변 도메인이 제공된다.

한 실시양태에서, 인간화된 VH 가변 도메인은 본원에 개시된 임의의 적합한 서열, 예를 들면, 서열번호 107, 108, 109, 110, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 127, 128, 129, 130, 136, 137, 138, 139, 145, 146, 147, 148, 154, 155, 156 및 157로부터 독립적으로 선택된 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 본 개시의 인간화된 항체 분자에서 사용된 경쇄 가변 영역 인간 프레임워크는 IGKV1-5, IGKV1-9, IGKV1D-13 및 이들 중 어느 한 프레임워크의 변이체를 포함하는 군으로부터 선택되고, 이때 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산은 시스테인 이외의 아미노산으로 치환되고, 예를 들면, 원래의 토끼목동물 도너 항체 내의 상응하는 위치의 도너 잔기로 치환된다. 예를 들면, 본원에서 제공된 도너 토끼 항체 서열을 참조한다. 전형적으로, 인간 프레임워크는 적합한 J 영역, 예컨대, JK4 영역을 추가로 포함한다.

한 실시양태에서, 본 개시의 항체 분자에서 사용된 인간 VL 프레임워크는 1, 2, 3, 36, 63, 65, 66, 70 및 71을 포함하는 군으로부터 선택된 적어도 1개의 위치에서 아미노산 치환을 포함하고, 예를 들면, 이때 프레임워크의 원래의 아미노산은 시스테인 이외의 또 다른 아미노산으로 치환되고, 특히 도너 항체의 프레임워크 내의 상응하는 위치의 잔기로 치환된다.

한 실시양태에서, 치환은 적어도 위치 3 및 70에서 만들어진다.

한 실시양태에서, 치환은 적어도 위치 3 및 71에서 만들어진다.

한 실시양태에서, 치환은 적어도 위치 2, 3 및 70에서 만들어진다.

한 실시양태에서, 치환은 적어도 위치 1, 3 및 71에서 만들어진다.

한 실시양태에서, 치환은 적어도 위치 1, 3, 70 및 71에서 만들어진다.

한 실시양태에서, IGKV1-5 인간 프레임워크가 사용될 때, 하나 이상의 치환은 위치 1, 3, 36, 63, 65, 66, 70 및 71, 예를 들면, 3 및 70, 또는 3 및 71, 또는 1, 3 및 70, 또는 3, 36, 63, 65, 66 및 71에서 만들어질 수 있다.

한 실시양태에서, IGKV1-9 인간 프레임워크가 사용될 때, 1개 이상, 2개 이상 또는 3개의 치환은 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택된 위치에서 만들어질 수 있다.

한 실시양태에서, IGKV1D-13 인간 프레임워크가 사용될 때, 1개, 2개 또는 3개의 치환은 2 및 3으로부터 독립적으로 선택된 위치에서 만들어질 수 있다.

한 실시양태에서, VL 프레임워크에서의 치환 후 위치 1은 알라닌이다.

한 실시양태에서, VL 프레임워크에서의 치환 후 위치 2는 페닐알라닌 또는 알라닌이다.

한 실시양태에서, VL 프레임워크에서의 치환 후 위치 3은 발린 또는 글루탐산이다.

한 실시양태에서, VL 프레임워크에서의 치환 후 위치 36은 페닐알라닌이다.

한 실시양태에서, VL 프레임워크에서의 치환 후 위치 63은 라이신이다.

한 실시양태에서, VL 프레임워크에서의 치환 후 위치 65는 아스파르트산이다.

한 실시양태에서, VL 프레임워크에서의 치환 후 위치 66은 아르기닌이다.

한 실시양태에서, VL 프레임워크에서의 치환 후 위치 70은 글루타민이다.

한 실시양태에서, VL 프레임워크에서의 치환 후 위치 71은 티로신이다.

이들 치환들 중 하나 이상의 치환을 조합하여 본 발명의 항체 분자에서 사용할 인간화된 VL 영역을 생성할 수 있다는 것이 인식될 것이다.

한 독립적인 양태에서, 서열번호 106, 115, 126, 135, 144, 153, 및 이와 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일하거나 유사한(예컨대, 96%, 97%, 98% 또는 99% 유사하거나 동일한) 서열로부터 독립적으로 선택된 서열을 포함하는 인간화된 VL 가변 도메인이 제공된다.

한 실시양태에서, 인간화된 VL 가변 도메인은 서열번호 106, 115, 126, 135, 144 및 153으로부터 독립적으로 선택된 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, 서열번호 107, 108, 109 및 110으로부터 독립적으로 선택된 VH 및 서열번호 106으로 표시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 항체 분자가 제공된다.

한 실시양태에서, 서열번호 116, 117, 118, 119, 120 및 121로부터 독립적으로 선택된 VH 및 서열번호 115로 표시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 항체 분자가 제공된다.

한 실시양태에서, 서열번호 127, 128, 129 및 130으로부터 독립적으로 선택된 VH 및 서열번호 126으로 표시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 항체 분자가 제공된다.

한 실시양태에서, 서열번호 136, 137, 138 및 139로부터 독립적으로 선택된 VH 및 서열번호 135로 표시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 항체 분자가 제공된다.

한 실시양태에서, 서열번호 145, 146, 147 및 148로부터 독립적으로 선택된 VH 및 서열번호 144로 표시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 항체 분자가 제공된다.

한 실시양태에서, 서열번호 154, 155, 156 및 157로부터 독립적으로 선택된 VH 및 서열번호 153으로 표시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 항체 분자가 제공된다.

한 실시양태에서, 본 개시의 항체 분자는 전장 항체이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 항체 분자는 Fab 또는 Fab' 단편이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 항체 분자는 scFv이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 항체 분자는 다중특이적, 예를 들면, 이중특이적 또는 삼중특이적이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 다중특이적 항체 분자(예컨대, 이중특이적 항체 분자)는 CD22에 대해 특이적인 결합 도메인 이외에 예를 들면, 본원에 개시된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 항-CD79 CDR 또는 이의 변이체를 포함하는, CD79에 대해 특이적인 결합 도메인, 예컨대, 가변 도메인 또는 가변 도메인 쌍, 특히 본원에 개시된 인간화된 가변 도메인 또는 가변 도메인 쌍을 포함한다.

다중특이적(예컨대, 이중특이적) 포맷에서 본 개시에 따른 조합물은 기능적 시험관내 어세이에서 흥미로운 생물학적 활성, 예를 들면, B 세포 상에서의 CD86, CD71 및/또는 CD40 발현의 억제 이외에 Akt S473의 인산화의 억제, P38의 인산화의 억제 및 IkB의 PLCγ2 Y759 억제 중 어느 하나에 의해 측정된 B 세포 신호전달의 억제를 보인다. 동일한 수준의 활성은 개별 성분 단독 또는 혼합물로 제공된 성분들의 경우 분명하지 않다. 그러나, CD22 및 CD79에 대한 특이성을 갖는 이중특이적 구축물이 제공될 때 상기 활성은 분명하다.

이들 어세이에서 관찰된 일부 B 세포 기능의 억제는 CD22에 대해 특이적인 결합 도메인 및 CD79에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함하는 본 발명의 다중특이적 분자가 B 세포 기능을 변경시키고, 예를 들면, B 세포의 고갈에 대한 치료적 대안을 제공하는 데 사용될 수 있다는 것을 시사한다.

한 실시양태에서, 본 발명의 다중특이적 분자의 결합 도메인 또는 결합 도메인들은 관련 항원에 대해 특이적인 1개 또는 2개(예컨대, 2개)의 항체 가변 도메인(예컨대, 분자가 적어도 삼중특이적인 경우 CD22에 대해 특이적인 적어도 1개의 결합 도메인 및 CD79 또는 추가 항원에 대해 특이적인 추가 결합 도메인)을 각각 독립적으로 포함한다.

한 실시양태에서, 본 개시의 항체 분자는 CD22에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 사용된 항체 또는 이의 결합 단편은 CD79a에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 사용된 항체 또는 이의 결합 단편은 CD79b에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 사용된 항체 또는 이의 결합 단편은 CD79 복합체에 대해 특이적이고, 즉 상기 복합체에 존재하는 에피토프, 예를 들면, CD79a와 CD79b 사이의 상호작용을 포함하는 에피토프를 인식하고 이에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, 결합 도메인이 CD79a 또는 CD79b에 대해 특이적인 경우조차도, 결합 도메인은 복합체 형태로 존재할 때 CD79a 또는 CD79b에 여전히 결합할 것임이 인식될 것이다.

결합 도메인 또는 각각의 결합 도메인에 2개의 가변 영역들이 존재하는 경우, 상기 2개의 가변 영역들은 일반적으로 관련 항원에 대한 특이성을 제공하도록 협력적으로 작동할 것이고, 예를 들면, 이들은 도메인이 특정 항원에 대해 특이적이도록 동족 쌍이거나 친화성 성숙되어 적절한 친화성을 제공한다. 전형적으로, 이들은 중쇄 및 경쇄 가변 영역 쌍(VH/VL 쌍)이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자는 이중특이적이다.

한 실시양태에서, 예를 들면, 제3 결합 도메인이 혈청 알부민, 예를 들면, 인간 혈청 알부민에 대해 특이적인 경우, 본 개시의 분자는 삼중특이적이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자는 CD79 및 CD22에 단일특이적이다. 즉, 상기 분자는 CD79에 결합하는 하나의 결합 도메인 및 CD22에 결합하는 하나의 결합 도메인만을 포함한다.

한 실시양태에서, 본 개시의 다중특이적 분자는 단일 쇄이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 다중특이적 분자는 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 일례에서, 본원에서 사용된 바와 같이, 중쇄 및 경쇄 페어링은 특히, 한 실시양태에서 본 개시의 분자가 다량체를 포함하지 않는 경우, 이량체, 예컨대, 항체, 유닛/단편 또는 성분의 이량체로서 지칭되지 않는다.

한 실시양태에서, 상기 분자는 CD22에 대한 하나 이하의 결합 부위 및 CD79에 대한 하나 이하의 결합 부위를 포함한다.

본원에 명시된 항체 또는 결합 단편과 동일한 에피토프에 결합하는 항체 또는 결합 단편도 제공된다.

한 실시양태에서, 본 개시의 항체 분자, 즉 인간 CD22에 대한 본원에 명시된 항체 또는 결합 단편을 교차차단하거나 상기 항체에 의해 인간 CD22에의 결합으로부터 교차차단되는 항체 또는 결합 단편이 제공된다.

본 개시는 본 개시의 항체 분자를 포함하는 약학 조성물까지도 확장된다.

본 개시는 치료법에 사용하기 위한, 다중특이적 분자를 포함하는 임의의 항체 포맷으로 사용되는 신규 CD22 항체도 제공한다.

본 개시는 치료 유효량의 항체 분자 또는 이를 포함하는 약학 제제를 투여하는 것을 포함하는, 환자를 치료하는 방법도 제공한다.

본 개시는 본원에 개시된 장애의 치료용 의약의 제조를 위한 본 개시에 따른 항체 분자 또는 이를 포함하는 약학 제제의 용도까지도 확장된다.

본 개시는 비인간 CDR들이 이식되기에 적합한, 본원에 개시된 신규 프레임워크까지도 확장된다. 그것은 상응하는 CDR들 없이 아미노산 변화를 갖는 프레임워크가다.

도 1은 CD22 및 CD79b에 대한 특이성을 갖는 항체의 이중특이적 및 2가 조합물에 대한 인산화된 Akt의 상대적 억제 효능의 막대 도표이다.
도 2는 CD22 및 CD79b에 대한 특이성을 갖는 항체의 이중특이적 및 2가 조합물에 대한 인산화된 PLCγ2의 상대적 억제 효능의 막대 도표이다.
도 3은 CD22 및 CD79b에 대한 특이성을 갖는 항체의 이중특이적 및 2가 조합물에 대한 CD86 발현의 상대적 억제 효능의 막대 도표이다.
도 4는 CD22 및 CD79b에 대한 특이성을 갖는 항체의 이중특이적, 2가 또는 혼합물에 대한 인산화된 Akt의 상대적 억제 효능의 막대 도표이다.
도 5는 CD22 및 CD79b에 대한 특이성을 갖는 항체의 이중특이적, 2가 또는 혼합물에 대한 인산화된 PLCγ2의 상대적 억제 효능의 막대 도표이다.
도 6은 항-IgM 자극된 B 세포에서 총 IkB 수준에 대한 CD22와 CD79b의 이중특이적 조합물의 효과의 적정을 보여주는 그래프이다.
도 7은 항-IgM 자극된 B 세포 상에서의 CD86 발현에 대한 CD22와 CD79b의 이중특이적 조합물의 효과의 적정을 보여주는 그래프이다.
도 8은 상이한 V 영역을 가진, CD22 및 CD79b에 대한 특이성을 갖는 이중특이적 단백질에 대한 인산화된 PLCγ2의 억제의 그래프이다.
도 9는 특정 항체 포맷들을 보여주는, 문헌(Chan and Carter, Nature Reviews Immunology vol 10, May 2010, 301)으로부터 발췌한 도면이다.
도 10은 항원 격자 교차특이성에 대한 데이터를 보여주는 표이다. 항원 2 = CD79b 및 항원 3 = CD22. 값은 Syk의 인산화의 퍼센트 억제율(활성화에 대한 음성 값)이고 평가된 다수의 V 영역 조합물들의 평균을 나타낸다.
도 11은 항원 격자 교차특이성에 대한 데이터를 보여주는 표이다. 항원 2 = CD79b 및 항원 3 = CD22. 값은 PLCγ2의 인산화의 퍼센트 억제율(활성화에 대한 음성 값)이고 평가된 다수의 V 영역 조합물들의 평균을 나타낸다.
도 12는 항원 격자 교차특이성에 대한 데이터를 보여주는 표이다. 항원 2 = CD79b 및 항원 3 = CD22. 값은 AKT의 인산화의 퍼센트 억제율(활성화에 대한 음성 값)이고 평가된 다수의 V 영역 조합물들의 평균을 나타낸다.
도 13은 Fab-Y의 CD22 특이성과 조합된 Fab-X의 CD79b 특이성에 대한 각각의 V 영역 조합물에 대한 Syk, PLCγ2 및 AKT의 인산화의 퍼센트 억제율을 보여주는 그래프이다.
도 14는 Fab-Y의 CD79b 특이성과 조합된 Fab-X의 CD22 특이성에 대한 각각의 V 영역 조합물에 대한 Syk, PLCγ2 및 AKT의 인산화의 Syk, PLCγ2 및 AKT 인산화의 퍼센트 억제율을 보여주는 그래프이다.
도 15는 CD79b 및 CD22 특이적 Fab-Kd-Fab 또는 BYbe에 의한, B 세포에서의 항-IgM 유도된 인산화된 PLCγ2의 퍼센트 억제율에 대한 데이터를 보여준다.
도 16은 CD79b 및 CD22 특이적 Fab-Kd-Fab 또는 BYbe에 의한, B 세포에서의 항-IgM 유도된 인산화된 P38의 퍼센트 억제율에 대한 데이터를 보여준다.
도 17은 CD79b 및 CD22 특이적 Fab-Kd-Fab 또는 BYbe에 의한, B 세포에서의 항-IgM 유도된 인산화된 Akt의 퍼센트 억제율에 대한 데이터를 보여준다.
도 18은 CD79b 및 CD22 특이적 Fab-Kd-Fab 또는 BYbe에 의한, B 세포 상에서의 항-IgM 유도된 CD71 발현의 퍼센트 억제율에 대한 데이터를 보여준다.
도 19는 CD79b 및 CD22 특이적 Fab-Kd-Fab 또는 BYbe에 의한, B 세포 상에서의 항-IgM 유도된 CD40 발현의 퍼센트 억제율에 대한 데이터를 보여준다.
도 20은 CD79b 및 CD22 특이적 Fab-Kd-Fab 또는 BYbe에 의한, B 세포 상에서의 항-IgM 유도된 CD86 발현의 퍼센트 억제율에 대한 데이터를 보여준다.
도 21은 CD79b 및 CD22 특이적 VR4447/VR4126 BYbe 및 VR4447/VR4126/VR645 BYbe/알부민에 의한, B 세포 상에서의 CD27 발현의 억제를 보여준다.
도 22는 CD79b 및 CD22 특이적 VR4447/VR4126 BYbe 및 VR4447/VR4126/VR645 BYbe/알부민에 의한, B 세포 상에서의 CD71 발현의 억제를 보여준다.
도 23은 CD79b 및 CD22 특이적 VR4447/VR4126 BYbe 및 VR4447/VR4126/VR645 BYbe/알부민에 의한, B 세포 상에서의 CD86 발현의 억제를 보여준다.
도 24는 CD79b 및 CD22 특이적 VR4447/VR4130 BYbe 및 VR4447/VR4130/VR645 BYbe/알부민에 의한, B 세포 상에서의 CD27 발현의 억제를 보여준다.
도 25는 CD79b 및 CD22 특이적 VR4447/VR4130 BYbe 및 VR4447/VR4130/VR645 BYbe/알부민에 의한, B 세포 상에서의 CD71 발현의 억제를 보여준다.
도 26은 CD79b 및 CD22 특이적 VR4447/VR4130 BYbe 및 VR4447/VR4130/VR645 BYbe/알부민에 의한, B 세포 상에서의 CD86 발현의 억제를 보여준다.
도 27은 VR4447/VR4126 BYbe, VR4447/VR4127 BYbe 및 VR4447/VR4130 BYbe와 함께 배양된 PBMC로부터의 파상풍 변성독소(toxoid) IgG 생성의 억제를 보여준다. 데이터는 3명의 도너들로부터의 풀링된 데이터를 나타낸다.
도 28은 VR4447/VR4126 BYbe, VR4447/VR4127 BYbe 및 VR4447/VR4130 BYbe와 함께 배양된 정제된 B 세포로부터의 파상풍 변성독소 IgG 생성의 억제를 보여준다. 데이터는 2명의 도너들로부터의 풀링된 데이터를 나타낸다.
도 29는 VR4447/VR4126 BYbe, VR4447/VR4127 BYbe, VR4447/VR4130 BYbe, VR4447/VR4126/VR645 BYbe/알부민 및 VR4447/VR4130/VR645 BYbe/알부민과 함께 배양된 PBMC 또는 정제된 B 세포로부터의 파상풍 변성독소 IgG 생성의 억제를 보여준다. 데이터는 단일 도너로부터 표시된다.
도 30은 12개의 건강한 샘플 및 12개의 SLE 환자 샘플로부터의 비자극된 B 세포에서의 기준 인산화 수준을 보여준다.
도 31은 12명의 건강한 지원자(HV) 및 12명의 SLE 도너들로부터의, 항-IgM 유도된 B 세포 NFkB 인산화에 대한 CD79b + CD22 특이적 VR4447/VR4130 BYbe의 효과를 보여준다.
도 32는 12명의 건강한 지원자(HV) 및 12명의 SLE 도너들로부터의, 항-IgM 유도된 B 세포 Akt 인산화에 대한 CD79b + CD22 특이적 VR4447/VR4130 BYbe의 효과를 보여준다.
도 33은 12명의 건강한 지원자(HV) 및 12명의 SLE 도너들로부터의, 항-IgM 유도된 B 세포 Syk 인산화에 대한 CD79b + CD22 특이적 VR4447/VR4130 BYbe의 효과를 보여준다.
도 34는 12명의 건강한 지원자(HV) 및 12명의 SLE 도너들로부터의, 항-IgM 유도된 B 세포 Erk 1 및 2 인산화에 대한 CD79b + CD22 특이적 VR4447/VR4130 BYbe의 효과를 보여준다.
도 35는 본 개시의 서열을 보여준다.

B 세포 수용체 신호전달은 B 세포의 매우 중요한 기능이고 B 세포의 항원 특이적 활성화를 위한 요건이다. BcR 신호전달은 B 세포 발생의 초기 단계부터 기억 B 세포 반응의 활성화 및 발생까지 필수적이다. B 세포 수용체는 CD79a 및 CD79b의 이종이량체성 복합체와 결합하는 표면 면역글로불린(Ig) 분자로 구성된다. 표면 Ig가 항원을 인식할 때, 이것은 Src 패밀리 키나제뿐만 아니라 Syk 및 Btk 티로신 키나제도 포함하는 즉시 신호전달 캐스케이드의 다운스트림 활성화를 야기하는 CD79a/b 복합체의 클러스터링을 야기한다고 생각된다. 그 다음, 이 신호전달 복합체는 어댑터 단백질, 예컨대, CD19 및 BLNK를 동원할 수 있고 PLCγ2 및 PI3K의 활성화를 야기하고, 결과적으로 이 활성화는 추가 다운스트림 경로, 예컨대, B 세포 생장, 생존 및 분화를 조절하는 다운스트림 경로를 활성화시킬 수 있다. 이 신호전달 복합체는 BAFF-R, IL-21R 및 CD40을 통한 신호전달을 통해 다른 제2 신호에 의해 추가로 조절될 수 있고 다른 신호전달 분자, 예컨대, 특히 CD19, CD21, CD83, CD22, CD32b 및 CD45에 의해 조절될 수도 있다. BcR에 의한 항원의 인식 시, 활성화된 제1 반응들 중 하나는 표면 수용체, 예컨대, 보조자극 분자 CD80 및 CD86의 상향조절이다. 이들 분자들은 MHC 클래스 II와 함께 존재하는 항원을 인식하는 T 세포의 생존 및 증폭을 가능하게 하는 추가 생존 및 활성화 신호를 전달하는, T 세포 상의 상응하는 수용체들에 결합한다. 이 반응은 MHC 클래스 II와 함께 존재하는 항원을, IL-2 및 IL-21과 같은 인자를 방출하는 T 세포에게 다시 제시하는 B 세포의 능력에 의해 더 증폭된다. 이들 사이토카인들은 결과적으로 B 세포 수를 크게 증폭시킨다. 따라서, 세포 표면 상에서의 CD86의 하향조절은 B 세포 신호전달의 억제를 표시할 수 있다.

나아가, B 세포 수용체 신호전달의 억제는 다운스트림 기능의 억제를 유발할 수 있다. 이러한 결과들 중 한 결과는 T 세포 기능, 생존 및 분화의 억제를 유발할 보조자극 분자, 예컨대, CD86의 억제(또는 이의 감소된 발현)일 것이다.

따라서, B 세포 수용체 신호전달의 억제는 자가면역 및 암과 연관된 비정상적인 B 세포 기능의 조절에 유리할 수 있다. B 세포 수용체 신호전달은 자가면역 질환에서 B 세포 증식, 분화, 항원 제시 및 사이토카인 방출을 위해 요구된다. 따라서, BcR 활성의 억제는 B 세포 기능, 예컨대, 면역글로불린 분비 및 T 세포 활성화를 조절할 수 있고, 예를 들면, 자가면역 상태와 연관된 부적절한 B 세포 활성을 제어할 수 있다. 또한, 생존 및 생장을 위해 B 세포 수용체 신호전달을 요구하는 일부 B 세포 백혈병들 및 림프종들이 존재하고, 이들은 B 세포 수용체 활성화의 억제제에 의해 제어될 수 있다.

CD22(분화의 클러스터-22로서도 공지되어 있음)는 공지된 단백질이다. CD22는 B 세포 수용체(BCR)의 억제 보조수용체이고 B 세포 활성화를 위한 신호전달 역치를 확립하는 데 매우 중요한 역할을 수행한다. 인간 서열은 유니프롯 입력 번호 P20273으로 입수가능하다(서열번호 244, 및 신호 서열을 갖지 않는 서열번호 244의 아미노산 20-847). 뮤린 버전은 유니프롯 입력 번호 P35329로 입수가능하다. 본 개시는 임의의 종으로부터의 CD22의 모든 형태들, 특히 이의 인간 및 천연 변이체에 관한 것이다. 한 실시양태에서, CD22는 상기 단백질의 인간 형태를 지칭한다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 CD22에 대한 결합 도메인의 친화성은 약 100 nM 이상, 예컨대, 약 50 nM, 20 nM, 10 nM, 1 nM, 500 pM, 250 pM, 200 pM 또는 100 pM 이상, 특히 50 pM 이상의 결합 친화성이다. 한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 사용된 항체 또는 이의 결합 단편은 CD22에 대해 특이적이다.

본원에서 사용된 "CD79"는 CD79a 및 CD79b로 구성된 복합체를 지칭한다. 따라서, CD79에 결합하는 항체 또는 결합 도메인은 CD79a 및/또는 CD79b에 결합할 수 있다. 본원에서 사용된 "CD79a 및/또는 CD79b에 결합"은 CD79a에 대해 특이적이거나, CD79b에 대해 특이적이거나, CD79a 및 CD79b 둘 다에 대해 특이적이거나(즉, CD79a 상의 에피토프를 인식하고 동일한 항체 또는 결합 도메인은 CD79b 상의 에피토프도 인식하거나, 즉 범특이적이거나), CD79a 및 CD79b의 복합체에 대해 특이적이라는 것(즉, 복합체 형태에서 CD79a와 CD79b의 상호작용으로부터 형성된 에피토프를 인식하고 이것은 개별 성분으로부터 복합체를 구별할 수 있다는 것)을 의미한다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 사용된 항체 또는 이의 결합 단편은 CD79 복합체에 대해 특이적이고, 즉 복합체에 존재하는 에피토프, 예를 들면, CD79a와 CD79b 사이의 상호작용을 포함하는 에피토프를 인식하고 이에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, 결합 도메인이 CD79a 또는 CD79b에 대해 특이적인 경우조차도, 2개의 단백질들이 세포 표면 상에서 천연적으로 동시-발현되기 때문에, 결합 도메인은 바람직하게는 복합체 형태로 존재할 때 CD79a 또는 CD79b에 여전히 결합할 것임이 인식될 것이다.

한 실시양태에서, 특정 개시의 결합 도메인을 포함하는 구축물이 제공된다.

본원에서 사용된 결합 도메인을 포함하는 구축물은 그 자신이 특이성을 나타내는 항원에 결합할 수 있도록 결합 도메인을 제공할 수 있는 임의의 구조를 포함한다. 구축물의 예로는 키메라 항원 수용체, 변형된 T 세포 수용체, 항체 분자, 앱타머 등이 있으나, 이들로 한정되지 않는다.

본 발명의 항체 분자는 다른 분자 포맷 또는 구축물 내로 도입될 수 있다는 것이 인식될 것이고, 이때 본 발명에 의해 제공된 결합 도메인은 표적 CD22에 결합함으로써 이를 표적화한다. 예를 들면, 본 발명의 결합 영역, 예를 들면, 단편, 예컨대, Fab 또는 scFv는 예를 들면, 키메라 항원 수용체를 갖는 T 세포(CAR-T 세포)를 형질도입한 후 이들 세포를 환자 내로 전달함으로써 생체 내에서 세포의 방향을 바꾸는 데 사용될 수 있다(Nat. Revs. Drug Disc. 2015. 14. 499-509). 따라서, 본 발명은 본원에 기재된 하나 이상의 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체도 제공한다.

결합 도메인 및/또는 각각의 결합 도메인에 2개의 가변 영역들이 존재하는 경우, 상기 2개의 가변 영역들은 일반적으로 관련 항원에 대한 특이성을 제공하도록 협력적으로 작동할 것이고, 예를 들면, 이들은 도메인이 특정 항원에 대해 특이적이도록 동족 쌍이거나 친화성 성숙되어 적절한 친화성을 제공한다. 전형적으로, 이들은 중쇄 및 경쇄 가변 영역 쌍(VH/VL 쌍)이다.

본원에서 사용된 "다중특이적 분자"는 적어도 2개의 구별되는 항원들, 예를 들면, 상이한 항원들에 대해 특이적으로 결합하는 능력 갖는 분자를 지칭한다. 한 실시양태에서, 다중특이적 분자는 이중특이적, 삼중특이적 또는 사중특이적 분자, 특히 이중특이적 또는 삼중특이적 분자이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자는 이중특이적이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자는 삼중특이적이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 다중특이적 항체 분자(예컨대, 이중특이적 항체 분자)는 CD22에 대해 특이적인 결합 도메인 이외에 또 다른 항원에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함한다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자는 CD79에 단일특이적이고 CD22에 단일특이적이다. 즉, 상기 분자는 CD79에 결합하는 하나의 결합 도메인 및 CD22에 결합하는 하나의 결합 도메인만을 포함한다.

따라서, 한 양태에서, 본 개시는 적어도 CD22 및 CD79a에 대해 특이적인 적합한 포맷의 분자, 및 다중특이적 분자, 예컨대, 이중특이적 포맷 또는 삼중특이적 포맷에서 CD22 및 CD79a에 대해 특이적인 항체/단편 또는 이의 조합물의 용도까지 확장된다.

한 양태에서, 본 개시는 적어도 CD22 및 CD79b에 대해 특이적인 적합한 포맷의 분자, 및 다중특이적 분자, 예컨대, 이중특이적 포맷 또는 삼중특이적 포맷에서 CD22 및 CD79b에 대해 특이적인 항체/단편 또는 이의 조합물의 용도까지 확장된다.

한 양태에서, 본 개시는 적어도 CD22 및 CD79a/b 복합체에 대해 특이적인 적합한 포맷의 분자, 및 다중특이적 분자, 예컨대, 이중특이적 포맷 또는 삼중특이적 포맷에서 CD22 및 CD79a/b 복합체에 대해 특이적인 항체/단편 또는 이의 조합물의 용도까지 확장된다.

한 실시양태에서, 예를 들면, 제3 결합 도메인이 예를 들면, 혈청 담체 단백질에 결합함으로써 분자의 반감기를 연장시킬 수 있는 경우, 본 개시의 분자는 삼중특이적이다.

다양한 단백질들이 혈장에 존재하고 티록신(thyroxine) 결합 단백질, 트랜스타이레틴(transthyretin), α1-산 당단백질, 트랜스페린, 피브리노겐 및 알부민, 또는 이들의 임의의 단편을 포함한다(Bartalena & Robbins, 1993, Clinics in Lab. Med. 13:583-598; Bree et al., 1986, Clin. Pharmacokin. 11:336-342; Gitlin et al. 1964, J. Clin. Invest. 10:1938-1951; Peters, 1985, Adv Protein Chem. 37:161-245; Waldeman & Strober, 1969, Progr. Allergy, 13:1-110). 일례에서, 제3 결합 도메인은 혈청 알부민, 예를 들면, 인간 혈청 알부민에 대해 특이적이다.

다중특이적 분자 포맷

본 발명에서 사용될 적합한 다중특이적 분자의 예는 당분야에서 공지되어 있고, 예를 들면, 본원에 참고로 인용되어 있는 평론(The coming of Age of Engineered Multivalent Antibodies, Nunez-Prado et al Drug Discovery Today Vol 20 Number 5 Mar 2015, page 588-594, D. Holmes, Nature Rev Drug Disc Nov 2011:10; 798, Chan and Carter, Nature Reviews Immunology vol 10, May 2010, 301)에 개시되어 있다.

한 실시양태에서, 다중특이적 포맷은 당분야에서 공지되어 있는 다중특이적 포맷 및 본원에 기재되어 있는 다중특이적 포맷을 포함하고, 예컨대, 분자 포맷은 하기 포맷들을 포함하거나 이들로 구성된 군으로부터 선택된다:

탠덤(tandem) sdAb, 탠덤 sdAb-sdAb(3개의 sdAb들);

(scFv)₂(탠덤 scFv로서도 지칭됨), scFv-dsFv, dsscFv-dsFv(dsFv)₂;

디아바디(diabody), ds디아바디(dsdiabody), 디ds디아바디(didsdiabody);

sc디아바디(scdiabody), dssc디아바디(dsscdiabody), 디dssc디아바디(didsscdiabody);

Dart 항체, 즉 VL₁ 링커 VH₂ 링커 및 VH₁ 링커 VL₂(이때, VH₁ 및 VH₂의 C 말단은 디설파이드 결합에 의해 연결됨);

BiTE^®, dsBiTE, 디dsBiTE;

디-디아바디(Di-diabody)(문헌(Nunez-Prado et al.), 특히 이 문헌 내의 도 1의 분자 번호 25 참조), ds디-디아바디(dsdi-diabody), 디ds디-디아바디(didsdi-diabody);

트리아바디(triabody), ds트리아바디(dstriabody), 디ds트리아바디(didstriabody), 트리ds트리아바디(tridstriabody);

테트라바디(tetrabodies), ds테트라바디(dstetrabody), 디ds테트라바디(didstetrabody), 트리ds테트라바디(tridstetrabody), 테트라ds테트라바디(tetradstetrabody);

tandab(문헌(Nunez-Prado et al.), 특히 이 문헌 내의 도 1의 분자 번호 22 참조), dstandab, 디dstandab, 트리dstandab, 테트라dstandab;

[sc(Fv)₂]₂(문헌(Nunez-Prado et al.), 특히 이 문헌 내의 도 1의 분자 번호 22 참조), ds[sc(Fv)₂]₂, 디ds[sc(Fv)₂]₂, 트리ds[sc(Fv)₂]₂, 테트라ds[sc(Fv)₂]₂;

펜타바디(Pentabody)(문헌(Nunez-Prado et al.), 특히 이 문헌 내의 도 1의 분자 번호 27 참조);

Fab-scFv(비바디(bibody)로서도 지칭됨), Fab'scFv, FabdsscFv(또는 BYbe), Fab'dsscFv;

트리바디(tribody), ds트리바디(dstribody), 디ds트리바디(didstribody)(Fab디dsscFv 또는 TrYbe 또는 Fab-(dsscFv)₂로서도 지칭됨), Fab'디dsscFv;

Fabdab, FabFv, Fab'dab, Fab'Fv;

Fab 단일 링커 Fv(본원에서 국제 특허출원 공보 제WO2014/096390호에 개시된 바와 같이 FabdsFv로서도 지칭됨), Fab' 단일 링커 Fv(본원에서 Fab'dsFv로서도 지칭됨);

FabscFv 단일 링커 Fv, Fab'scFv 단일 링커 Fv;

FabdsscFv 단일 링커 Fv, Fab'dsscFv 단일 링커 Fv;

FvFabFv, FvFab'Fv, dsFvFabFv, dsFvFab'Fv, FvFabdsFv, FvFab'dsFv, dsFvFabdsFv, dsFvFab'dsFv;

FabFvFv, Fab'FvFv, FabdsFvFv, Fab'dsFvFv, FabFvdsFv, Fab'FvdsFv, FabdsFvdsFv, Fab'dsFvdsFv;

디Fab, 디Fab'(화학적으로 접합된 디Fab'를 포함함);

(FabscFv)₂, (Fab)₂scFvdsFv, (Fab)₂dsscFvdsFv, (FabdscFv)₂;

(Fab'scFv)₂, (Fab')₂scFvdsFv, (Fab')₂dsscFvdsFv, (Fab'dscFv)₂;

V_HHC_K(문헌(Nunez-Prado et al.), 특히 이 문헌 내의 도 1의 분자 번호 6 참조);

미니바디(minibody), ds미니바디(dsminibody), 디ds미니바디(didsminibody);

미니항체(miniantibody)(ZIP)[문헌(Nunez-Prado et al.), 특히 이 문헌 내의 도 1의 분자 번호 7 참조], ds미니항체(dsminiantibody)(ZIP) 및 디ds미니항체(didsminiantibody)(ZIP);

트리비-미니바디(tribi-minibody)[문헌(Nunez-Prado et al.), 특히 이 문헌 내의 도 1의 분자 번호 15 참조], ds트리비-미니바디(dstribi-minibody), 디ds트리비-미니바디(didstribi-minibody), 트리ds트리비-미니바디(tridstribi-minibody);

디아바디-CH₃, ds디아바디-CH₃, 디ds디아바디-CH₃, sc디아바디(scdiabody)-CH₃, dssc디아바디(dsscdiabody)-CH₃, 디dssc디아바디(didsscdiabody)-CH₃;

탠덤scFv-CH₃, 탠덤dsscFv-CH₃, 탠덤디dsscFv-CH₃, 탠덤트리dsscFv-CH₃, 탠덤테트라dsscFv-CH₃;

scFv-Fc(본원에서 국제 특허출원 공보 제WO2008/012543호에 기재된 바와 같이 (scFvCH₂CH₃)₂로서도 지칭됨) 및 이의 단일 쇄 버전, dsscFvscFv-Fc, dsscFv-Fc(본원에서 (dsscFvCH₂CH₃)₂로서도 지칭됨), scFv-dsFv-Fc, dsscFv-dsFv-Fc, dsFv-Fc(본원에서 (dsFvCH₂CH₃)₂로서도 지칭됨);

스코피온(scorpion) 분자(트루비온(Trubion)), 즉 미국 특허 제8,409,577호에 기재된 바와 같이 결합 도메인, 링커-CH₂CH₃ 결합 도메인;

SMIP(트루비온), 즉 (scFv-CH₂CH₃)₂;

(dsFvCH₂CH₃)₂, 탠덤 scFv-Fc, 탠덤 dsscFvscFv-Fc, 탠덤 dsscFv-Fc;

scFv-Fc-scFv, dsscFv-Fc-scFv, scFv-Fc-dsscFv;

디아바디-Fc, ds디아바디-Fc, 디ds디아바디-Fc, 트리아바디-Fc, ds트리아바디-Fc, 디ds트리아바디-Fc, 트리ds트리아바디-Fc, 테트라바디-Fc, ds테트라바디-Fc, 디ds테트라바디-Fc, 트리ds테트라바디-Fc, 테트라ds테트라바디-Fc, ds테트라바디-Fc, 디ds테트라바디-Fc, 트리ds테트라바디-Fc, 테트라ds테트라바디-Fc, sc디아바디-Fc, dssc디아바디, 디dssc디아바디;

예를 들면, 상이한 중쇄 가변 영역 및 공통된 경쇄를 갖는 이작용성 또는 삼작용성 항체, 예를 들면, 고정된 서열의 공통된 경쇄 및 (상이한 CDR을 포함하는) 상이한 중쇄, 및 상이한 중쇄들의 이량체화를 유도하기 위한 조작된 CH₃ 도메인을 갖는 메루스(Merus) 이중특이적 항체 포맷(Biclonics^®);

듀오바디(Duobody)(즉, 이때 항체의 한 전장 쇄는 항체의 다른 한 전장 쇄에 대한 상이한 특이성을 가짐);

전장 항체로서, Fab 아암(arm) 교환이 이중특이적 포맷을 생성하는 데 사용된 것인 전장 항체;

이작용성 또는 삼작용성 항체로서, 전장 항체가 '카파/람다 바디' 또는 'κ/λ-바디'로서도 지칭되는, 공통된 중쇄 및 상이한 경쇄를 갖는 것인 이작용성 또는 삼작용성 항체(국제 특허출원 공보 제WO2012/023053호 참조);

중쇄 또는 경쇄의 C 말단 상에 1개, 2개, 3개 또는 4개의 scFv를 갖는 Ig-scFv, 중쇄 또는 경쇄의 N 말단 상에 1개, 2개, 3개 또는 4개의 scFv를 갖는 scFv-Ig, 단일 링커 Ig-Fv, 중쇄 또는 경쇄의 C 말단 상에 1개, 2개, 3개 또는 4개의 dsscFv를 갖는 Ig-dsscFv(1개, 2개, 3개 또는 4개의 디설파이드 결합을 가짐);

중쇄 또는 경쇄의 N 말단 상에 1개, 2개, 3개 또는 4개의 dsscFv를 갖는 Ig-dsscFv(1개, 2개, 3개 또는 4개의 디설파이드 결합을 가짐);

Ig 단일 링커 Fv(국제 특허출원 제PCT/EP2015/064450호 참조);

Ig-dab, dab-Ig, scFv-Ig, V-Ig, Ig-V;

scFabFvFc, scFabdsFvFc(단일 링커 버전 scFavFv), (FabFvFc)₂, (FabdsFvFc)₂, scFab'FvFc, scFab'dsFvFc, (Fab'FvFc)₂, (Fab'dsFvFc)₂; 및

하기 더 상세히 논의되어 있는 DVDIg.

한 실시양태에서, 다중특이적 분자 포맷은 당분야에서 공지되어 있는 다중특이적 분자 포맷 및 본원에 기재되어 있는 다중특이적 분자 포맷을 포함하고, 예컨대, 이때 상기 분자 포맷은 디아바디, sc디아바디, 트리아바디, 트리바디, 테트라바디, 탠덤 scFv, FabFv, Fab'Fv, FabdsFv, Fab-scFv, Fab-dsscFv, Fab-(dsscFv)₂, 디Fab, 디Fab', 탠덤 scFv-Fc, scFv-Fc-scFv, sc디아바디-Fc, sc디아바디-CH₃, Ig-scFv, scFv-Ig, V-Ig, Ig-V, 듀오바디, 및 하기 더 상세히 논의되어 있는 DVDIg를 포함하거나 이들로 구성된 군으로부터 선택된다.

한 실시양태에서, 본 개시의 다중특이적 항체 분자는 Fc 도메인을 포함하지 않고, 즉 CH₂ 및 CH₃ 도메인을 포함하지 않고, 예를 들면, 상기 분자는 탠덤 scFv, scFv-dsFv, dsscFv-dsFv 디dsFv, 디아바디, ds디아바디, 디ds디아바디, sc디아바디((scFv)₂로서도 지칭됨), dssc디아바디, 트리아바디, ds트리아바디, 디ds트리아바디, 트리ds트리아바디, 테트라바디, ds테트라바디, 디ds테트라바디, 트리ds테트라바디, 테트라ds테트라바디, 트리바디, ds트리바디, 디ds트리바디, Fabdab, FabFv, Fab'dab, Fab'Fv, Fab 단일 링커 Fv(국제 특허출원 공보 제WO2014/096390호에 개시됨), Fab' 단일 링커 Fv, FabdsFv, Fab'dsFv, Fab-scFv(비바디로서도 지칭됨), Fab'scFv, FabdsscFv, Fab'dsscFv, Fab디dsscFv, Fab'디dsscFv, FabscFv 단일 링커 Fv, Fab'scFv 단일 링커 Fv, FabdsscFvs 단일 링커 Fv, Fab'dsscFv 단일 링커 Fv, FvFabFv, FvFab'Fv, dsFvFabFv, dsFvFab'Fv, FvFabdsFv, FvFab'dsFv, dsFvFabdsFv, dsFvFab'dsFv, FabFvFv, Fab'FvFv, FabdsFvFv, Fab'dsFvFv, FabFvdsFv, Fab'FvdsFv, FabdsFvdsFv, Fab'dsFvdsFv, 디Fab, 디Fab'(화학적으로 접합된 디Fab'를 포함함), (FabscFv)₂, (Fab)₂scFvdsFv, (Fab)₂dsscFvdsFv, (FabdscFv)₂, 미니바디, ds미니바디, 디ds미니바디, 디아바디-CH₃, ds디아바디-CH₃, 디ds디아바디-CH₃, sc디아바디-CH₃, dssc디아바디-CH₃, 디dssc디아바디-CH₃, 탠덤scFv-CH₃, 탠덤dsscFv-CH₃, 탠덤디dsscFv-CH₃, 탠덤트리dsscFv-CH₃ 및 탠덤테트라dsscFv-CH₃을 포함하는 군으로부터 선택된다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자는 Fc 도메인을 포함하지 않는다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자는 본원에 후술되어 있는 바와 같이 변경된 Fc 도메인을 포함한다.

문맥이 달리 명시하지 않은 한, 본원에서 사용된 "Fc 도메인"은 일반적으로 -(CH₂CH₃)₂를 지칭한다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자는 -CH₂CH₃ 단편을 포함하지 않는다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자는 CH₂ 도메인을 포함하지 않는다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자는 CH₃ 도메인을 포함하지 않는다.

본원에서 사용된 "분자"는 일단 복합체가 형성되면, 예를 들면, 복합체가 2개 이상의 폴리펩티드 쇄들에 의해 형성되면 적절한 조건 하에서 단일 물질로서 취급되기에 적합한 복합체를 포함하는 유기, 특히 단백질성 덩어리를 형성하는 원자들의 군을 지칭하기 위해 생화학적 의미로 사용된다.

문맥이 달리 명시하지 않은 한, 분자와 구축물은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 그럼에도 불구하고, 구축물은 폴리뉴클레오티드 분자를 지칭하는 데 더 자주 사용될 수 있고 분자는 주로 아미노산 서열을 포함하는 물질을 지칭하는 데 더 자주 사용될 수 있다.

본원에서 사용된 "특이성(또는 특이적)"은 파트너들이 상호작용에서 서로만을 인식하거나 비-파트너들에 비해 서로에 대해 상당히 더 높은 친화성, 예를 들면, 배경 수준의 결합 또는 또 다른 관련 없는 단백질에의 결합보다, 예를 들면, 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배 더 높은 친화성을 갖는 경우를 의미한다.

본원에서 사용된 '결합 도메인'은 예를 들면, 도메인을 항원에 대해 특이적인 도메인으로서 특징규명하기에 충분한 친화성으로 표적 항원에 결합할 수 있는 결합 영역, 전형적으로 폴리펩티드를 지칭한다. 한 실시양태에서, 결합 도메인은 적어도 하나의 가변 도메인 또는 이의 유도체, 예를 들면, 한 쌍의 가변 도메인들 또는 이들의 유도체, 예컨대, 한 동족 쌍의 가변 도메인들 또는 이들의 유도체를 함유한다. 전형적으로, 이것은 VH/VL 쌍이다.

임의의 적합한 결합 도메인들이 본 발명의 다중특이적 분자에서 사용될 수 있다. 이들은 임의의 적합한 공급원으로부터 유래될 수 있다.

한 실시양태에서, 생체적합한 프레임워크 구조가 본 개시의 분자의 결합 도메인에서 사용되고, 이러한 구조는 면역글로불린 도메인 이외의 단백질 스카폴드 또는 프레임워크를 기반으로 한다. 예를 들면, 피브로넥틴(fibronectin), 안키린(ankyrin), 리포칼린(lipocalin), 네오카지노스테인(neocarzinostain), 사이토크롬(cytochrome) b, CP1 징크 핑거(zinc finger), PST1, 코일드 코일(coiled coil), LACI-D1, Z 도메인 및 텐드라미사트(tendramisat) 도메인 기반의 구조가 사용될 수 있다(예를 들면, 문헌(Nygren and Uhlen, 1997, Current Opinion in Structural Biology, 7, 463-469) 참조).

본원에서 사용된 용어 '다중특이적 분자'는 애드넥틴(Adnectins), 아피바디(Affibodies), 다핀(Darpins), 파일로머(Phylomers), 아비머(Avimers), 앱타머(Aptamers), 안티칼린(Anticalins), 테트라넥틴(Tetranectins), 마이크로바디(Microbodies), 아필린(Affilins) 및 쿠니츠(Kunitz) 도메인을 비롯한, 생물학적 스카폴드 기반의 결합 물질들도 포함할 수 있다.

본 발명의 다중특이적 분자는 전형적으로 다중특이적 항체 분자이다. 즉, 다중특이적 분자의 결합 도메인들 중 적어도 하나 이상의 결합 도메인은 항체 또는 이의 단편으로부터 유래된다.

결합 도메인이 항체로부터 유래되는 경우, 본원에서 사용된 "결합 도메인 또는 부위"는 항원과 접촉하는 항체의 부분이다. 한 실시양태에서, 결합 도메인은 적어도 하나의 가변 도메인 또는 이의 유도체, 예를 들면, 한 쌍의 가변 도메인들 또는 이들의 유도체, 예컨대, 한 동족 쌍의 가변 도메인들 또는 이들의 유도체를 함유한다. 전형적으로, 이것은 VH/VL 쌍이다.

가변 영역(본원에서 가변 도메인으로서도 지칭됨)은 일반적으로 3개의 CDR들 및 적합한 프레임워크를 포함한다. 한 실시양태에서, 결합 도메인은 2개의 가변 영역들, 즉 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 포함하고, 이들 요소들은 함께 항체 또는 결합 단편의 결합 상호작용의 특이성에 기여한다.

한 실시양태에서, 본 개시의 항체 분자 내의 결합 도메인 내의 가변 도메인은 동족 쌍이다.

본원에서 사용된 "동족 쌍"은 미리 형성된 커플로서, 숙주로부터 단리된 가변 도메인들(또는 이들의 유도체, 예컨대, 이들의 인간화된 버전)의 중쇄 및 경쇄 쌍을 지칭한다. 이 정의는 라이브러리로부터 단리된 가변 도메인을 포함하지 않고, 이때 숙주로부터의 원래의 페어링은 보유되지 않는다. 동족 쌍들은 이들이 숙주에서 종종 친화성 성숙되므로, 이들이 특이성을 나타내는 항원에 대해 라이브러리, 예컨대, 파지 라이브러리로부터 선택된 가변 도메인 쌍들의 조합물보다 더 높은 친화성을 가질 수 있기 때문에 유리할 수 있다.

한 실시양태에서, 본 개시의 항체 분자 내의 결합 도메인은 천연 생성 결합 도메인의 유도체이다.

본원에서 사용된 "천연 생성 도메인의 유도체"는 예를 들면, 바람직하지 않은 성질을 제거함으로써 도메인의 성질을 최적화하기 위해 천연 생성 서열에서 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산이 대체되어 있거나 결실되어 있되 도메인의 특징적인 특징(들)이 보유되어 있는 경우를 의미하기 위한 것이다. 변형의 예는 글리코실화 부위, GPI 앵커 또는 용매 노출된 라이신을 제거하기 위한 변형이다. 이들 변형들은 관련 아미노산 잔기를 보존적 아미노산 치환으로 대체함으로써 달성될 수 있다.

CDR에서의 변형은 예를 들면, 하나 이상의 시스테인을, 예를 들면, 세린 잔기로 대체하는 것을 포함할 수 있다. Asn은 탈아민화를 위한 기질일 수 있고, 이 성향은 Asn 및/또는 인접 아미노산을 대안적인 아미노산으로 대체함으로써, 예컨대, 보존적 치환에 의해 감소될 수 있다. CDR 내의 아미노산 Asp는 이성질체화될 수 있다. 후자는 Asp 또는 인접 아미노산을 대안적인 아미노산으로 대체함으로써, 예컨대, 보존적 치환에 의해 최소화될 수 있다.

가변 영역의 인간화된 버전도 본 명세서의 맥락에서 그의 유도체이다. 인간화는 인간 프레임워크 대신에 비인간 프레임워크의 대체 및 임의적으로 "도너 잔기"로의 하나 이상의 잔기의 복귀-돌연변이를 포함할 수 있다. 본원에서 사용된 "도너 잔기"는 숙주로부터 단리된 원래의 가변 영역에서 발견된 잔기, 특히 인간 프레임워크 내의 소정의 아미노산을 도너 프레임워크 내의 상응하는 위치의 아미노산으로 대체하는 것을 의미한다.

한 실시양태에서, 결합 도메인 또는 각각의 결합 도메인은 항체 또는 항체 단편(에 포함되어 있거나 도입되어 있는) 부분이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 결합 도메인은 면역글로불린/항체 분자에 존재한다.

본원에서 사용된 "항체 분자"는 항체 및 이의 결합 단편을 포함한다.

한 실시양태에서, 본원에서 사용된 용어 "항체"는 면역글로불린 분자의 가변 영역에 위치하는 적어도 하나의 항원 인식 부위(본원에서 결합 부위 또는 결합 도메인으로서도 지칭됨)를 통해 표적 항원, 예컨대, 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질, 폴리펩티드, 펩티드 등에 대해 특이적으로 결합할 수 있는 면역글로불린 분자를 지칭한다.

본원에서 사용된 "항체 단편"은 Fab, 변형된 Fab, Fab', 변형된 Fab', F(ab')₂, Fv, 단일 도메인 항체, scFv, Fv, 2가, 3가 또는 4가 항체, 비스-scFv, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디 및 이들 중 임의의 물질의 에피토프 결합 단편을 포함하나 이들로 한정되지 않는 항체 결합 단편을 지칭한다(예를 들면, 문헌(Holliger and Hudson, 2005, Nature Biotech. 23(9):1126-1136) 및 문헌(Adair and Lawson, 2005, Drug Design Reviews - Online 2(3), 209-217) 참조).

본원에서 사용된 "결합 단편"은 단편을 표적 펩티드 또는 항원에 대해 특이적인 단편으로서 특징규명하기에 충분한 친화성으로 표적 펩티드 또는 항원에 결합할 수 있는 단편을 지칭한다.

이들 항체 단편들을 생성하고 제조하는 방법은 당분야에서 잘 알려져 있다(예를 들면, 문헌(Verma et al., 1998, Journal of Immunological Methods, 216:165-181) 참조). 본 개시에서 사용될 다른 항체 단편은 국제 특허출원 공보 제WO05/003169호, 제WO05/003170호 및 제WO05/003171호에 기재된 Fab 및 Fab' 단편을 포함한다. 다가 항체는 다중특이성, 예를 들면, 이중특이성을 포함할 수 있거나 단일특이적일 수 있다(예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO92/22853호, 제WO05/113605호, 제WO2009/040562호 및 제WO2010/035012호 참조).

항체 또는 항체 단편을 포함하는 구축물은 키메라 항원 수용체(신호전달 도메인에 연결된 막 고착된 항체/단편) 및 변형된 T 세포 수용체(마찬가지로 막 고착된 단백질)를 포함한다.

본원에서 사용된 용어 "Fab 단편"은 경쇄의 V_L(가변 경쇄) 도메인 및 불변 도메인(C_L)을 포함하는 경쇄 단편, 및 중쇄의 V_H(가변 중쇄) 도메인 및 제1 불변 도메인(CH₁)을 포함하는 항체 단편을 지칭한다.

Fv는 2개의 가변 도메인들, 예를 들면, 협력적 가변 도메인들, 예컨대, 한 동족 쌍 또는 친화성 성숙된 가변 도메인들, 즉 V_H 및 V_L 쌍을 지칭한다.

본원에서 사용된 협력적 가변 도메인들은 서로를 보완하고/하거나 둘 다가 항원 결합에 기여하여, Fv(V_H/V_L 쌍)가 해당 항원에 대한 특이성을 갖게 만드는 가변 도메인들이다.

다음은 본 개시의 항체 분자에서 사용될 수 있는 예시적인 항체 포맷들의 목록이다.

본원에서 사용된 "단일 도메인 항체"(본원에서 dab 및 sdAb로서도 지칭됨)는 단일 단량체성 가변 항체 도메인으로 구성된 항체 단편을 지칭한다. 단일 도메인 항체의 예로는 V_H 또는 V_L 또는 V_HH가 있다.

본원에서 사용된 "탠덤-sdAb"는 특히 도메인 항체들이 상이한 항원들에 대한 특이성을 갖는 경우 링커, 예를 들면, 펩티드 링커에 의해 연결된 2개의 도메인 항체들을 지칭한다.

본원에서 사용된 "탠덤-sdAb-sdAb"는 특히 도메인 항체들이 상이한 항원들에 대한 특이성을 갖는 경우 2개의 링커들, 예를 들면, 펩티드 링커들에 의해 일렬로 연결된 3개의 도메인 항체들을 지칭한다.

본원에서 사용된 "dsFv"는 가변 영역내(intra-variable) 디설파이드 결합을 갖는 Fv를 지칭한다. dsFv는 보다 더 큰 분자의 성분일 수 있고, 예를 들면, 가변 도메인들 중 하나는 예를 들면, 아미노산 링커를 통해 또 다른 항체 단편/성분에 연결될 수 있다.

본원에서 사용된 "(dsFv)₂"는 (예를 들면, 2개의 V_H들의 C 말단 사이에서) 예를 들면, 펩티드 링커 또는 디설파이드 결합을 통해 제2 dsFv의 도메인에 연결된 1개의 도메인을 갖는 dsFv를 지칭하고, 이 포맷은 후술되어 있는 (scFv)₂와 유사하되, 각각의 가변 영역 쌍은 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함한다.

본원에서 사용된 "성분"은 특히 성분이 항체 단편, 예컨대, 특히 본원에 기재된 scFv, Fab 또는 다른 단편인 경우 본 개시의 다중특이적 분자의 빌딩 블록 또는 부분을 지칭한다.

본원에서 사용된 "단일 쇄 Fv"(또는 "scFv"로서 약칭됨)는 (예를 들면, 펩티드 링커에 의해) 연결되어 단일 폴리펩티드 쇄를 형성하는 V_H 및 V_L 항체 도메인들을 포함하는 항체 단편을 지칭한다. 중쇄 및 경쇄의 불변 영역은 이 포맷에서 생략되어 있다.

본원에서 사용된 "dsscFv"는 가변 영역내 디설파이드 결합을 갖는 scFv를 지칭한다.

본원에서 사용된 "탠덤 scFv"(본원에서 디scFv 또는 (scFv)₂로서도 지칭됨)는 예를 들면, 도 9b에 나타낸 바와 같이, 단일 Fv간(inter-Fv) 링커가 존재하도록 단일 링커를 통해 연결된 2개의 scFv들을 지칭한다.

본원에서 사용된 "탠덤 dsscFv"(본원에서 scFvdsscFv 또는 dsscFvscFv로서도 지칭됨)는 예를 들면, 도 9b에 나타낸 바와 같이, 단일 Fv간 링커가 존재하도록 단일 링커를 통해 연결된 2개의 scFv들을 지칭하고, 이때 상기 scFv들 중 하나는 가변 영역내 디설파이드 결합을 가진다.

본원에서 사용된 "탠덤 디dsscFv"(본원에서 디dsscFv로서도 지칭됨)는 예를 들면, 도 9b에 나타낸 바와 같이, 단일 Fv간 링커가 존재하도록 단일 링커를 통해 연결된 2개의 scFv들을 지칭하고, 이때 각각의 scFv는 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함한다.

본원에서 사용된 "scFv-dsFv"는 디설파이드 결합을 통해 연결되어 dsFv를 형성하는 2개의 가변 도메인들로 구성된 Fv 도메인에, 예를 들면, 펩티드 링커에 의해 연결된 scFv이다. 이 포맷에서, scFv의 VH 또는 VL은 dsFv의 VH 또는 VL에 연결될 수 있다.

본원에서 사용된 "dsscFv-dsFv"는 디설파이드 결합을 통해 연결되어 dsFv를 형성하는 2개의 가변 도메인들로 구성된 Fv 도메인에, 예를 들면, 펩티드 링커에 의해 연결된 dsscFv이다. 이 포맷에서, dsscFv의 VH 또는 VL은 dsFv의 VH 또는 VL에 연결될 수 있다.

본원에서 사용된 "디아바디"는 제1 Fv의 V_H가 제2 Fv의 V_L에 연결되고 제1 Fv의 V_L이 제2 Fv의 V_H에 연결되도록 2개의 상호-Fv 링커들을 갖는 2개의 Fv 쌍들 V_H/V_L을 지칭한다.

본원에서 사용된 "ds디아바디"는 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함하는 디아바디를 지칭한다.

본원에서 사용된 "디ds디아바디"는 2개의 가변 영역내 디설파이드 결합들, 즉 각각의 가변 영역 쌍 사이에서 1개의 디설파이드 결합을 포함하는 디아바디를 지칭한다.

본원에서 사용된 "sc-디아바디"는 분자가 3개의 링커들을 포함하고 2개의 정상 scFv들을 형성하도록 Fv간 링커를 포함하는 디아바디, 예를 들면, VH₁링커VL₁링커 VH₂링커 VL₂를 지칭한다.

본원에서 사용된 "dssc-디아바디"는 가변 영역내 디설파이드 결합을 갖는 sc-디아바디를 지칭한다.

본원에서 사용된 "디dssc-디아바디"는 각각의 가변 영역 쌍 사이에서 가변 영역내 디설파이드 결합을 갖는 sc-디아바디를 지칭한다.

본원에서 사용된 "Dart"는 VH₁ 및 VH₂의 C 말단들이 디설파이드 결합에 의해 연결되어 있는 VL₁ 링커 VH₂ 링커 및 VH₁ 링커 VL₂를 지칭한다(Paul A. Moore et al Blood, 2011; 117(17):4542-4551).

본원에서 사용된 Bite^®는 하기 포맷으로 2개의 가변 도메인 쌍들을 포함하는 분자를 지칭한다: 링커를 통해 쌍 2로부터의 도메인(예를 들면, VH₂ 또는 VL₂)에 연결된, 쌍 1로부터의 도메인(예를 들면, VH₁)(이때, 상기 제2 도메인은 쌍 2로부터의 남은 도메인(즉, VL₂ 또는 VH₂)에 연결된, 쌍 1로부터의 추가 도메인(예를 들면, VL₁)에 링커에 의해 연결된다).

디-디아바디에 대해서는 문헌(Nunez-Prado et al.), 특히 이 문헌 내의 도 1의 분자 번호 25를 참조한다.

본원에서 사용된 "Ds디-디아바디"는 가변 영역내 디설파이드 결합을 갖는 디-디아바디이다.

본원에서 사용된 "디ds디-디아바디"는 각각의 가변 영역 쌍 사이에서 가변 영역내 디설파이드 결합을 갖는 디-디아바디이다.

본원에서 사용된 "트리아바디"는 3개의 Fv들 및 3개의 상호-Fv 링커들을 포함하는, 디아바디와 유사한 포맷을 지칭한다.

본원에서 사용된 "ds트리아바디"는 가변 도메인 쌍들 중 한 가변 도메인 쌍 사이에서 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함하는 트리아바디를 지칭한다.

본원에서 사용된 "디ds트리아바디"는 2개의 가변 영역내 디설파이드 결합들, 즉 2개의 가변 도메인 쌍들 각각 사이에서 1개의 디설파이드 결합을 포함하는 트리아바디를 지칭한다.

본원에서 사용된 "트리ds트리아바디"는 3개의 가변 영역내 디설파이드 결합들, 즉 각각의 가변 영역 쌍 사이에서 1개의 디설파이드 결합을 포함하는 트리아바디를 지칭한다.

본원에서 사용된 "테트라바디"는 4개의 Fv들 및 4개의 상호-Fv 링커들을 포함하는, 디아바디와 유사한 포맷을 지칭한다.

본원에서 사용된 "ds테트라바디"는 가변 도메인 쌍들 중 한 가변 도메인 쌍 사이에서 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함하는 테트라바디를 지칭한다.

본원에서 사용된 "디ds테트라바디"는 2개의 가변 영역내 디설파이드 결합들, 즉 2개의 가변 도메인 쌍들 각각 사이에서 1개의 디설파이드 결합을 포함하는 테트라바디를 지칭한다.

본원에서 사용된 "트리ds테트라바디"는 3개의 가변 영역내 디설파이드 결합들, 즉 3개의 가변 영역 쌍들 각각 사이에서 1개의 디설파이드 결합을 포함하는 테트라바디를 지칭한다.

본원에서 사용된 "테트라ds테트라바디"는 4개의 가변 영역내 디설파이드 결합들, 즉 각각의 가변 도메인 사이에서 1개의 디설파이드 결합을 포함하는 테트라바디를 지칭한다.

본원에서 사용된 "트리바디"(Fab(scFv)₂로서도 지칭됨)는 경쇄의 C 말단에 부착된 제1 scFv 및 중쇄의 C 말단에 부착된 제2 scFv를 갖는 Fab 단편을 지칭한다.

본원에서 사용된 "ds트리바디"는 2개의 위치들 중 1개의 위치에서 dsscFv를 포함하는 트리바디를 지칭한다.

본원에서 사용된 "디ds트리바디" 또는 "TrYbe"는 2개의 dsscFv들을 포함하는 트리바디를 지칭한다.

본원에서 사용된 "dsFab"는 가변 영역내 디설파이드 결합을 갖는 Fab를 지칭한다.

본원에서 사용된 "dsFab'"는 가변 영역내 디설파이드 결합을 갖는 Fab'를 지칭한다.

scFab는 단일 쇄 Fab 단편이다.

scFab'는 단일 쇄 Fab' 단편이다.

dsscFab는 단일 쇄로서의 dsFab이다.

dsscFab'는 단일 쇄로서의 dsFab'이다.

본원에서 사용된 "Fabdab"는 임의적으로 링커를 통해 그의 중쇄 또는 경쇄에 부착된 도메인 항체를 갖는 Fab 단편을 지칭한다.

본원에서 사용된 "Fab'dab"는 임의적으로 링커를 통해 그의 중쇄 또는 경쇄에 부착된 도메인 항체를 갖는 Fab' 단편을 지칭한다.

본원에서 사용된 "FabFv"는 중쇄의 CH1 및 경쇄의 CL 각각의 C 말단에 부착된 추가 가변 영역을 갖는 Fab 단편을 지칭한다(예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO2009/040562호 참조). 이 포맷은 그의 PEG화된 버전으로서 제공될 수 있다(예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO2011/061492호 참조).

본원에서 사용된 "Fab'Fv"는 FabFv와 유사하되, Fab 부분이 Fab'에 의해 대체되어 있다. 이 포맷은 그의 PEG화된 버전으로서 제공될 수 있다.

본원에서 사용된 "FabdsFv"는 Fv간 디설파이드 결합이 부착된 C 말단 가변 영역을 안정화시키는 FabFv를 지칭한다(예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO2010/035012호 참조). 이 포맷은 그의 PEG화된 버전으로서 제공될 수 있다.

본원에서 사용된 "Fab 단일 링커 Fv" 및 "Fab' 단일 링커"는 예를 들면, 펩티드 링커에 의해 가변 도메인에 연결된 Fab 또는 Fab' 단편을 지칭하고, 상기 가변 도메인은 가변 영역내 도메인 디설파이드 결합을 통해 제2 가변 도메인에 연결되어, dsFv를 형성한다(예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO2014/096390호 참조).

본원에서 사용된 "Fab-scFv"(비바디로서도 지칭됨)는 임의적으로 링커를 통해 경쇄 또는 중쇄의 C 말단 상에 부착된 scFv를 갖는 Fab 분자이다.

본원에서 사용된 "Fab'-scFv"는 임의적으로 링커를 통해 경쇄 또는 중쇄의 C 말단 상에 부착된 scFv를 갖는 Fab' 분자이다.

본원에서 사용된 "FabdsscFv" 또는 "BYbe"는 단일 쇄 Fv의 가변 영역들 사이에서 디설파이드 결합을 갖는 Fab-scFv이다.

본원에서 사용된 "Fab'dsscFv"는 단일 쇄 Fv의 가변 영역들 사이에서 디설파이드 결합을 갖는 Fab'scFv이다.

본원에서 사용된 "FabscFv-dab"는 한 쇄의 C 말단에 부착된 scFv 및 다른 한 쇄의 C 말단에 부착된 도메인 항체를 갖는 Fab를 지칭한다.

본원에서 사용된 "Fab'scFv-dab"는 한 쇄의 C 말단에 부착된 scFv 및 다른 한 쇄의 C 말단에 부착된 도메인 항체를 갖는 Fab'를 지칭한다.

본원에서 사용된 "FabdsscFv-dab"는 한 쇄의 C 말단에 부착된 dsscFv 및 다른 한 쇄의 C 말단에 부착된 도메인 항체를 갖는 Fab를 지칭한다.

본원에서 사용된 "Fab'dsscFv-dab"는 한 쇄의 C 말단에 부착된 dsscFv 및 다른 한 쇄의 C 말단에 부착된 도메인 항체를 갖는 Fab'를 지칭한다.

본원에서 사용된 "FabscFv 단일 링커 Fv"는 Fv의 도메인이 Fab의 중쇄 또는 경쇄에 연결되어 있고 scFv가 다른 한 Fab 쇄에 연결되어 있고 Fv의 도메인들이 가변 영역내 디설파이드에 의해 연결되어 있는 Fab 단일 링커 Fv를 지칭한다.

본원에서 사용된 "FabdsscFv 단일 링커 Fv"는 scFv가 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함하는 FabscFv 단일 링커 Fv를 지칭한다.

본원에서 사용된 "Fab'scFv 단일 링커 Fv"는 Fv의 도메인이 Fab의 중쇄 또는 경쇄에 연결되어 있고 scFv가 다른 한 Fab 쇄에 연결되어 있고 Fv의 도메인들이 가변 영역내 디설파이드에 의해 연결되어 있는 Fab' 단일 링커 Fv를 지칭한다.

본원에서 사용된 "Fab'dsscFv 단일 링커 Fv"는 scFv가 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함하는 Fab'scFv 단일 링커 Fv를 지칭한다.

본원에서 사용된 "FvFabFv"는 Fab의 중쇄 및 경쇄의 N 말단에 부착된 제1 Fv의 도메인, 및 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 부착된 제2 Fv의 도메인을 갖는 Fab를 지칭한다.

본원에서 사용된 "FvFab'Fv"는 Fab'의 중쇄 및 경쇄의 N 말단에 부착된 제1 Fv의 도메인, 및 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 부착된 제2 Fv의 도메인을 갖는 Fab'를 지칭한다.

본원에서 사용된 "dsFvFabFv"는 Fab의 중쇄 및 경쇄의 N 말단에 부착된 제1 Fv의 도메인, 및 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 부착된 제2 Fv의 도메인을 갖는 Fab를 지칭하고, 이때 제1 Fv는 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함한다.

본원에서 사용된 "FvFabdsFv"는 Fab의 중쇄 및 경쇄의 N 말단에 부착된 제1 Fv의 도메인, 및 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 부착된 제2 Fv의 도메인을 갖는 Fab를 지칭하고, 이때 제2 Fv는 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함한다.

본원에서 사용된 "dsFvFab'Fv"는 Fab'의 중쇄 및 경쇄의 N 말단에 부착된 제1 Fv의 도메인, 및 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 부착된 제2 Fv의 도메인을 갖는 Fab'를 지칭하고, 이때 제1 Fv는 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함한다.

본원에서 사용된 "FvFab'dsFv"는 중쇄 및 경쇄의 N 말단에 부착된 제1 Fv의 도메인, 및 Fab'의 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 부착된 제2 Fv의 도메인을 갖는 Fab'를 지칭하고, 이때 제2 Fv는 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함한다.

본원에서 사용된 "dsFvFabdsFv"는 Fab의 중쇄 및 경쇄의 N 말단에 부착된 제1 Fv의 도메인, 및 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 부착된 제2 Fv의 도메인을 갖는 Fab를 지칭하고, 이때 제1 Fv는 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함하고 제2 Fv도 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함한다.

본원에서 사용된 "dsFvFab'dsFv"는 Fab'의 중쇄 및 경쇄의 N 말단에 부착된 제1 Fv의 도메인, 및 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 부착된 제2 Fv의 도메인을 갖는 Fab'를 지칭하고, 이때 제1 Fv는 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함하고 제2 Fv도 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함한다.

본원에서 사용된 "FabFvFv"는 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 일렬로 부착된 두 쌍의 Fv들을 갖는 Fab 단편을 지칭한다(예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO2011/086091호 참조).

본원에서 사용된 "Fab'FvFv"는 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 일렬로 부착된 두 쌍의 Fv들을 갖는 Fab' 단편을 지칭한다(예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO2011/086091호 참조).

본원에서 사용된 "FabdsFvFv"는 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 일렬로 부착된 두 쌍의 Fv들을 갖는 Fab 단편을 지칭하고, 이때 C 말단에 직접적으로 부착된 제1 Fv 쌍은 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함한다(예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO2011/086091호 참조).

본원에서 사용된 "Fab'dsFvFv"는 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 일렬로 부착된 두 쌍의 Fv들을 갖는 Fab' 단편을 지칭하고, 이때 C 말단에 직접적으로 부착된 제1 Fv 쌍은 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함한다(예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO2011/086091호 참조).

본원에서 사용된 "FabFvdsFv"는 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 일렬로 부착된 두 쌍의 Fv들을 갖는 Fab 단편을 지칭하고, 이때 분자의 "C" 말단에서 제2 Fv 쌍은 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함한다.

본원에서 사용된 "Fab'FvdsFv"는 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 일렬로 부착된 두 쌍의 Fv들을 갖는 Fab' 단편을 지칭하고, 이때 분자의 "C" 말단에서 제2 Fv 쌍은 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함한다.

본원에서 사용된 "FabdsFvdsFv"는 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 일렬로 부착된 두 쌍의 Fv들을 갖는 Fab 단편을 지칭하고, 이때 제1 Fv 쌍 및 제2 Fv 쌍은 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함한다.

본원에서 사용된 "Fab'dsFvdsFv"는 중쇄 및 경쇄의 C 말단에 일렬로 부착된 두 쌍의 Fv들을 갖는 Fab' 단편을 지칭하고, 이때 제1 Fv 및 제2 Fv는 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함한다.

본원에서 사용된 "디Fab"는 그들의 중쇄의 C 말단을 통해 연결된 2개의 Fab 분자들을 지칭한다.

본원에서 사용된 "디Fab'"는 그들의 힌지 영역에서 하나 이상의 디설파이드 결합을 통해 연결된 2개의 Fab' 분자를 지칭한다.

디Fab 및 디Fab' 분자는 그들의 화학적으로 접합된 형태를 포함한다.

본원에서 사용된 "(FabscFv)₂"는 2개의 scFv들이 부착되어 있는, 예를 들면, 중쇄 또는 경쇄, 예컨대, 중쇄의 C 말단에 부착되어 있는 디Fab 분자를 지칭한다.

본원에서 사용된 "(Fab'scFv)₂"는 2개의 scFv들이 부착되어 있는, 예를 들면, 중쇄 또는 경쇄, 예컨대, 중쇄의 C 말단에 부착되어 있는 디Fab' 분자를 지칭한다.

본원에서 사용된 "(Fab)₂scFvdsFv"는 scFv 및 dsFv가 예를 들면, 중쇄 C 말단 각각으로부터 하나씩 부착되어 있는 디Fab를 지칭한다.

본원에서 사용된 "(Fab')₂scFvdsFv"는 scFv 및 dsFv가 예를 들면, 중쇄 C 말단 각각으로부터 하나씩 부착되어 있는 디Fab'를 지칭한다.

본원에서 사용된 "(Fab)₂dsscFvdsFv"는 dsscFv 및 dsFv가 예를 들면, 중쇄 C 말단으로부터 부착되어 있는 디Fab를 지칭한다.

본원에서 사용된 "(Fab')₂dsscFvdsFv"는 dsscFv 및 dsFv가 예를 들면, 중쇄 C 말단으로부터 부착되어 있는 디Fab'를 지칭한다.

본원에서 사용된 "미니바디"는 (VL/VH-CH₃)₂를 지칭한다.

본원에서 사용된 "ds미니바디"는 1개의 VL/VH가 가변 영역내 디설파이드 결합을 포함하는 (VL/VH-CH₃)₂를 지칭한다.

본원에서 사용된 "디ds미니바디"는 (dsFv-CH₃)₂를 지칭한다.

'카파/람다 바디' 또는 'κ/λ-바디'는 2개의 중쇄들 및 2개의 경쇄들을 갖는 정상 IgG의 포맷으로 존재하고, 이때 상기 2개의 경쇄들은 서로 상이하고, 하나는 람다 경쇄(VL-CL)이고 다른 하나는 카파 경쇄(VK-CK)이다. 중쇄는 국제 특허출원 공보 제WO2012/023053호에 기재된 바와 같이 CDR에서 조차도 동일하다.

본원에서 사용된 "scFv-Fc"는 분자가 2개의 결합 도메인들을 갖도록, 예를 들면, 힌지를 통해 불변 영역 단편 -(CH₂CH₃)의 CH₂ 도메인의 N 말단에 부착된 scFv를 지칭한다.

본원에서 사용된 "dsscFv-Fc"는 분자가 2개의 결합 도메인들을 갖도록 예를 들면, 힌지를 통해 불변 영역 단편 -(CH₂CH₃)₂의 CH₂ 도메인의 N 말단에 부착된 dsscFv 및 제2 CH₂ 도메인의 N 말단에 부착된 scFv를 지칭한다.

본원에서 사용된 "디dsscFv-Fc"는 분자가 2개의 결합 도메인들을 갖도록, 예를 들면, 힌지를 통해 불변 영역 단편 -(CH₂CH₃)₂의 CH₂ 도메인의 N 말단에 부착된 scFv를 지칭한다.

본원에서 사용된 "탠덤 scFv-Fc"는 분자가 4개의 결합 도메인들을 갖도록, 예를 들면, 힌지를 통해 불변 영역 단편 -(CH₂CH₃)의 CH₂ 도메인의 N 말단에 일렬로 각각 하나씩 부착된 2개의 탠덤 scFv들을 지칭한다.

본원에서 사용된 "sc디아바디-Fc"는 예를 들면, 힌지를 통해 불변 영역 단편 -CH₂CH₃의 CH₂ 도메인의 N 말단에 각각 하나씩 부착된 2개의 sc디아바디들이다.

본원에서 사용된 "scFv-Fc-scFv"는 -CH₂CH₃ 단편의 중쇄 및 경쇄 둘 다의 N 말단 및 C 말단에 각각 하나씩 부착된 4개의 scFv들을 지칭한다.

본원에서 사용된 "sc디아바디-CH₃"는, 예를 들면, 힌지를 통해 CH₃ 도메인에 각각 연결된 2개의 sc디아바디 분자들을 지칭한다.

본원에서 사용된 "IgG-scFv"는 각각의 중쇄 또는 각각의 경쇄의 C 말단 상에서 scFv를 갖는 전장 항체이다.

본원에서 사용된 "scFv-IgG"는 각각의 중쇄 또는 각각의 경쇄의 N 말단 상에서 scFv를 갖는 전장 항체이다.

본원에서 사용된 "V-IgG"는 각각의 중쇄 또는 각각의 경쇄의 N 말단 상에서 가변 도메인을 갖는 전장 항체이다.

본원에서 사용된 "IgG-V"는 각각의 중쇄 또는 각각의 경쇄의 C 말단 상에서 가변 도메인을 갖는 전장 항체이다.

DVD-Ig(이중 V 도메인 IgG로서도 공지되어 있음)는 각각의 중쇄 및 각각의 경쇄의 N 말단 상에서 하나씩 4개의 추가 가변 도메인들을 갖는 전장 항체이다.

본원에서 사용된 "듀오바디" 또는 "Fab-아암 교환"은 혼합 시 2개의 상이한 단일클론 항체들의 불변 도메인(전형적으로 CH₃) 내의 일치되고 상보적인 조작된 아미노산 변화가 이종이량체의 형성을 유발하는 경우의 이중특이적 IgG 포맷 항체이다. 제1 항체로부터의 중쇄:경쇄 쌍은 잔기 조작의 결과로서 제2 항체의 중쇄:경쇄 쌍과 회합하는 것을 선호할 것이다. 예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO2008/119353호, 제WO2011/131746호 및 제WO2013/060867호를 참조한다.

한 실시양태에서, 본 개시에 따른 항체 분자는 하기 식을 갖는 이중특이적 단백질 복합체이다:

A-X:Y-B

상기 식에서,

A-X는 제1 융합 단백질이고;

Y-B는 제2 융합 단백질이고;

X:Y는 이종이량체-테더(tether)이고;

:는 X와 Y 사이의 결합 상호작용이고;

A는 Fab 또는 Fab' 단편으로부터 선택된 이중특이적 제1 단백질 성분이고;

B는 Fab 또는 Fab'로부터 선택된 이중특이적 제2 단백질 성분이고;

X는 항원 또는 항체 또는 이의 결합 단편으로부터 독립적으로 선택된, 결합 쌍의 제1 결합 파트너이고;

Y는 항원 또는 항체 또는 이의 결합 단편으로부터 독립적으로 선택된, 결합 쌍의 제2 결합 파트너이되;

X가 항원일 때 Y는 X로 표시된 항원에 대해 특이적인 항체 또는 이의 결합 단편이고, Y가 항원일 때 X는 Y로 표시된 항원에 대해 특이적인 항체 또는 이의 결합 단편이다.

한 양태에서, a) 하기 식 (I)의 폴리펩티드 쇄; 및 b) 하기 식 (II)의 폴리펩티드 쇄를 포함하거나 이들로 구성된 다중특이적 항체 분자가 제공된다:

[식 (I)]

V_H-CH₁-X-(V₁)_p

[식 (II)]

V_L-C_L-Y-(V₂)_q

상기 식에서,

V_H는 중쇄 가변 도메인을 나타내고;

CH₁은 중쇄 불변 영역의 도메인, 예를 들면, 이의 도메인 1을 나타내고;

X는 결합 또는 링커, 예를 들면, 아미노산 링커를 나타내고;

Y는 결합 또는 링커, 예를 들면, 아미노산 링커를 나타내고;

V₁은 dab, scFv, dsscFv 또는 dsFv를 나타내고;

V_L은 가변 도메인, 예를 들면, 경쇄 가변 도메인을 나타내고;

C_L은 불변 영역으로부터의 도메인, 예를 들면, 경쇄 불변 영역 도메인, 예컨대, C카파를 나타내고;

V₂는 dab, scFv, dsscFv 또는 dsFv를 나타내고;

p는 0 또는 1이고;

q는 0 또는 1이고;

p가 1일 때 q는 0 또는 1이고, q가 1일 때 p는 0 또는 1이다. 즉, p 및 q는 둘 다 0을 나타내지 않는다.

한 실시양태에서, 다중특이적 항체 분자는 CD22에 대한 하나 이하의 결합 도메인 및 CD79에 대한 하나 이하의 결합 도메인을 포함한다.

한 실시양태에서, q는 0이고 p는 1이다.

한 실시양태에서, q는 1이고 p는 1이다.

한 실시양태에서, V₁은 dab이고 V₂는 dab이고 이들은 함께 임의적으로 디설파이드 결합에 의해 연결되는 협력적 쌍의 가변 영역들, 예컨대, 동족 V_H/V_L 쌍의 단일 결합 도메인을 형성한다.

한 실시양태에서, V_H 및 V_L은 CD79, 예를 들면, CD79a 또는 CD79b에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, V₁은 CD79, 예를 들면, CD79a 또는 CD79b에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, V₂는 CD79, 예를 들면, CD79a 또는 CD79b에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, V₁ 및 V₂는 함께 (예를 들면, 결합 도메인으로서) CD79, 예를 들면, CD79a 또는 CD79b에 대해 특이적이고, V_H 및 V_L은 CD22에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, V₁은 CD22에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, V₂는 CD22에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, V₁ 및 V₂는 함께 (예를 들면, 하나의 결합 도메인으로서) CD22에 대해 특이적이고, V_H 및 V_L은 CD79에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, V₁은 CD22에 대해 특이적이고, V₂는 알부민에 대해 특이적이고, V_H 및 V_L은 CD79에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, V₁은 알부민에 대해 특이적이고, V₂는 CD22에 대해 특이적이고, V_H 및 V_L은 CD79에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, V₁은 CD79에 대해 특이적이고, V₂는 알부민에 대해 특이적이고, V_H 및 V_L은 CD22에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, V₁은 알부민에 대해 특이적이고, V₂는 CD79에 대해 특이적이고, V_H 및 V_L은 CD22에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, V₁은 CD22에 대해 특이적인 dsscFv이고, V₂는 알부민에 대해 특이적인 dsscFv이고, V_H 및 V_L은 CD79에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, V₁은 알부민에 대해 특이적인 dsscFv이고, V₂는 CD22에 대해 특이적인 dscFv이고, V_H 및 V_L은 CD79에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, V₁은 CD79에 대해 특이적인 dsscFv이고, V₂는 알부민에 대해 특이적인 dsscFv이고, V_H 및 V_L은 CD22에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, V₁은 알부민에 대해 특이적인 dsscFv이고, V₂는 CD79에 대해 특이적인 dsscFv이고, V_H 및 V_L은 CD22에 대해 특이적이다.

상기 구축물들에서 V₁, V₂, V_H 및 V_L은 결합 도메인을 각각 나타낼 수 있고 본원에서 제공된 서열들 중 임의의 서열을 포함할 수 있다.

X 및 Y는 임의의 적합한 링커를 나타낼 수 있고, 예를 들면, X 및 Y는 독립적으로 SGGGGSGGGGS(서열번호 271) 또는 SGGGGTGGGGS(서열번호 272)일 수 있다.

한 실시양태에서, V₁ 및/또는 V₂가 dab, dsFv 또는 dsscFv일 때, V₁ 및/또는 V₂의 가변 도메인 V_H와 V_L 사이의 디설파이드 결합은 위치 V_H44와 V_L100 사이에서 형성된다.

다중특이적 항체 분자에서 하나 이상의 가변 영역 쌍들이 VH와 VL 사이에서 디설파이드 결합을 포함하는 경우, 이것은 임의의 적합한 위치, 예컨대, 하기 나열된 잔기들 중 2개의 잔기들 사이에 존재할 수 있다(문맥이 달리 표시하지 않은 한, 카바트 넘버링이 하기 목록에서 사용된다). 카바트 넘버링이 언급되는 경우 언제나 관련 문헌은 참고문헌(Kabat et al., 1987, in Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Department of Health and Human Services, NIH, USA)이다.

한 실시양태에서, 디설파이드 결합은 하기 위치들을 포함하는 군으로부터 선택된 위치, 및 분자에 위치한 가변 영역 쌍에서 그에 상응하는 위치에 존재한다:

V_H37 + V_L95C(예를 들면, 문헌(Protein Science 6, 781-788 Zhu et al (1997)) 참조);

V_H44 + V_L100(예를 들면, 문헌(Biochemistry 33 5451-5459 Reiter et al (1994)); 문헌(Journal of Biological Chemistry Vol. 269 No. 28 pp.18327-18331 Reiter et al (1994)); 또는 문헌(Protein Engineering, vol.10 no.12 pp.1453-1459 Rajagopal et al (1997)) 참조);

V_H44 + V_L105(예를 들면, 문헌(J Biochem. 118, 825-831 Luo et al (1995)) 참조);

V_H45 + V_L87(예를 들면, 문헌(Protein Science 6, 781-788 Zhu et al (1997)) 참조);

V_H55 + V_L101(예를 들면, 문헌(FEBS Letters 377 135-139 Young et al (1995)) 참조);

V_H100 + V_L50(예를 들면, 문헌(Biochemistry 29 1362-1367 Glockshuber et al (1990)) 참조);

V_H100b + V_L49;

V_H98 + V_L46(예를 들면, 문헌(Protein Science 6, 781-788 Zhu et al (1997)) 참조);

V_H101 + V_L46;

V_H105 + V_L43(예를 들면, 문헌(Proc. Natl. Acad. Sci. USA Vol. 90 pp.7538-7542 Brinkmann et al (1993)); 또는 문헌(Proteins 19, 35-47 Jung et al (1994)) 참조); 및

V_H106 + V_L57(예를 들면, 문헌(FEBS Letters 377 135-139 Young et al (1995) 참조).

한 실시양태에서, 디설파이드 결합은 위치 V_H44와 V_L100 사이에서 형성된다.

본원에서 사용된 "단일특이적"은 1회만 표적 항원에 결합하는 능력을 지칭한다.

따라서, 한 실시양태에서, 본 발명의 다중특이적 분자는 각각의 항원에 단일특이적이다.

따라서, 한 실시양태에서, 본 개시에 따른 다중특이적 분자의 결합 도메인은 단일특이적이다. 이것은, 본 개시의 분자들은 1회 넘게 표적 항원에 결합함으로써 항원을 교차결합시킬 수 없기 때문에 일부 치료적 적용에서 유리하다. 따라서, 한 실시양태에서, 본 개시의 이중특이적 또는 다중특이적 분자는 예를 들면, 동일한 세포 또는 2개의 상이한 세포들 상의 2개의 상이한 위치들에서 동일한 표적에 2회 결합함으로써 교차결합할 수 없다.

특히 동일한 세포 또는 상이한 세포들 상의 CD79b와 관련하여, 교차결합은 예를 들면, 표적 항원의 활성을 자극하는 신호를 생체 내에서 생성할 수 있다.

일례에서, 본 발명의 다중특이적 분자는 CD22에 대한 하나 이하의 결합 도메인 및 CD79에 대한 하나 이하의 결합 도메인을 함유한다. 각각의 결합 도메인은 단일특이적이다.

따라서, 일례에서, 다중특이적 분자는 CD22에 대해 1가이고 CD79에 대해 1가이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 다중특이적 분자에서 사용된 각각의 항체 또는 항체 단편은 1가이다.

따라서, 한 실시양태에서, 본 개시의 다중특이적 분자의 결합 도메인은 1가이다.

따라서, 한 실시양태에서, 본 개시의 다중특이적 분자의 결합 도메인은 1가이고 단일특이적이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 다중특이적 분자는 임의의 적합한 방식으로 조합되거나 연결되어, 예를 들면, 본원에 전술되어 있는 바와 같은 다중특이적 분자를 구축하는 2개 이상의 단일특이적 1가 결합 도메인들, 예컨대, Fab, Fab', scFv, VH, VL, VHH, Fv, dsFv로 구성된다.

또 다른 실시양태에서, 예를 들면, 본 개시의 분자가 적어도 3개의 결합 도메인들을 포함하는 경우, 2개 또는 3개의 결합 도메인들(예를 들면, 항체, 단편, 또는 항체와 단편의 조합물)은 상이한 항원 특이성, 예를 들면, 3개의 상이한 표적 항원들에의 결합을 가질 수 있다.

불변 영역

본 개시의 항체, 예를 들면, 전장 항체 또는 다중특이적 분자의 항체 불변 영역 도메인은 존재하는 경우 다중특이적 항체 분자의 제안된 기능 및 특히 요구될 수 있는 이펙터(effector) 기능을 유념하면서 선택될 수 있다. 예를 들면, 불변 영역 도메인은 인간 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM 도메인일 수 있다. 특히, 항체 분자가 치료적 용도를 위한 것이고 항체 이펙터 기능이 요구될 때, 인간 IgG 불변 영역 도메인, 특히 IgG1 및 IgG3 이소타입(isotypes)의 인간 IgG 불변 영역 도메인이 사용될 수 있다. 대안적으로, 항체 분자가 치료적 목적을 위한 것이고 항체 이펙터 기능이 요구되지 않을 때 IgG2 및 IgG4 이소타입이 사용될 수 있다.

이들 불변 영역 도메인들의 서열 변이체도 사용될 수 있다는 것이 인식될 것이다. 예를 들면, 위치 241에서 세린이 문헌(Angal et al., 1993, Molecular Immunology, 1993, 30:105-108)에 기재된 바와 같이 프롤린으로 교체되어 있는 IgG4 분자가 사용될 수 있다. 따라서, 항체가 IgG4 항체인 실시양태에서, 항체는 돌연변이 S241P를 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 항체 중쇄는 CH₁ 도메인을 포함하고, 항체 경쇄는 카파 또는 람다 CL 도메인을 포함한다.

한 실시양태에서, 항체 중쇄는 CH₁ 도메인, CH₂ 도메인 및 CH₃ 도메인을 포함하고, 항체 경쇄는 카파 또는 람다 CL 도메인을 포함한다.

4종의 인간 IgG 이소타입들은 상이한 친화성으로 활성화 Fcγ 수용체(FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIIa), 억제 FcγRIIb 수용체 및 보체의 제1 성분(C1q)에 결합하여, 매우 상이한 이펙터 기능들을 제공한다(Bruhns P. et al., 2009. Specificity and affinity of human Fcgamma receptors and their polymorphic variants for human IgG subclasses. Blood. 113(16):3716-25). 문헌(Jeffrey B. Stavenhagen, et al. Cancer Research 2007 Sep 15; 67(18):8882-90)도 참조한다.

IgG와 FcγR 또는 C1q의 결합은 힌지 영역 및 CH₂ 도메인에 위치한 잔기에 의존한다. CH₂ 도메인의 2개 영역들은 FcγR 및 C1q 결합에 매우 중요하고, IgG2 및 IgG4에서 특유의 서열을 가진다. 위치 233-236에서 인간 IgG1 또는 IgG2 잔기로의 치환, 및 위치 327, 330 및 331에서 인간 IgG4 잔기로의 치환은 ADCC 및 CDC를 크게 감소시키는 것으로 밝혀졌다(Armour KL. et al., 1999. Recombinant human IgG molecules lacking Fcgamma receptor I binding and monocyte triggering activities. Eur J Immunol. 29(8):2613-24 and Shields RL. et al., 2001. High resolution mapping of the binding site on human IgG1 for Fc gamma RI, Fc gamma RII, Fc gamma RIII, and FcRn and design of IgG1 variants with improved binding to the Fc gamma R. J Biol Chem. 276(9):6591-604). 더욱이, 일부 연구자들(Idusogie et al.)은 K322를 비롯한 상이한 위치들에서의 알라닌 치환이 보체 활성화를 상당히 감소시켰다는 것을 입증하였다(Idusogie EE. et al., 2000. Mapping of the C1q binding site on rituxan, a chimeric antibody with a human IgG1 Fc. J Immunol. 164(8):4178-84). 유사하게, 뮤린 IgG2A의 CH₂ 도메인 내의 돌연변이는 FcγRI 및 C1q에의 결합을 감소시키는 것으로 확인되었다(Steurer W. et al., 1995. Ex vivo coating of islet cell allografts with murine CTLA4/Fc promotes graft tolerance. J Immunol. 155(3):1165-74).

한 실시양태에서, 사용된 Fc 영역은 돌연변이되고, 특히 본원에 기재된 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 돌연변이는 결합 및/또는 이펙터 기능을 제거하기 위한 것이다.

한 실시양태에서, Fc 돌연변이는 Fc 영역의 결합을 제거하기 위한 돌연변이, 이펙터 기능을 증가시키거나 제거하기 위한 돌연변이, 반감기를 증가시키기 위한 돌연변이 및 이들의 조합물을 포함하는 군으로부터 선택된다.

pH 7.4에서는 FcRn에 결합하지 않으나 pH 6.0에서 FcRn에 선택적으로 결합하는 일부 항체들은 다양한 동물 모델들에서 보다 더 높은 반감기를 나타낸다. CH₂ 도메인과 CH₃ 도메인 사이의 계면에 위치한 여러 돌연변이들, 예컨대, T250Q/M428L(Hinton PR. et al., 2004. Engineered human IgG antibodies with longer serum half-lives in primates. J Biol Chem. 279(8):6213-6) 및 M252Y/S254T/T256E + H433K/N434F(Vaccaro C. et al., 2005. Engineering the Fc region of immunoglobulin G to modulate in vivo antibody levels. Nat Biotechnol. 23(10):1283-8)는 생체 내에서 FcRn에 대한 결합 친화성 및 IgG1의 반감기를 증가시키는 것으로 밝혀졌다.

그러나, 증가된 FcRn 결합과 개선된 반감기 사이에 직접적인 관계가 항상 존재하는 것은 아니다(Datta-Mannan A. et al., 2007. Humanized IgG1 Variants with Differential Binding Properties to the Neonatal Fc Receptor: Relationship to Pharmacokinetics in Mice and Primates. Drug Metab. Dispos. 35: 86-94).

IgG4 서브클래스는 감소된 Fc 수용체(FcγRIIIa) 결합을 보이지만, 다른 IgG 서브클래스의 항체들은 일반적으로 강한 결합을 보인다. 이들 다른 IgG 서브타입들의 감소된 수용체 결합은 Pro238, Aps265, Asp270, Asn270(Fc 탄수화물의 상실), Pro329, Leu234, Leu235, Gly236, Gly237, Ile253, Ser254, Lys288, Thr307, Gln311, Asn434 및 His435를 포함하는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산을 변형시킴으로써, 예를 들면, 대체함으로써 달성될 수 있다.

한 실시양태에서, 본 개시에 따른 분자는 IgG 서브클래스, 예를 들면, IgG1, IgG2 또는 IgG3의 Fc를 갖고, 이때 상기 Fc는 위치 S228, L234 및/또는 D265 중 1개, 2개 또는 모든 위치에서 돌연변이된다.

한 실시양태에서, Fc 영역 내의 돌연변이는 S228P, L234A, L235A, L235A, L235E 및 이들의 조합물로부터 독립적으로 선택된다.

Fc 영역의 이펙터 기능을 감소시키거나 증가시키는 것이 요구될 수 있다. 세포 표면 분자, 특히 면역 세포 상의 세포 표면 분자를 표적화하여 이펙터 기능을 제거하는 항체가 요구된다. 일부 실시양태들에서, 예를 들면, 자가면역의 치료를 위해, 음성 Fc 수용체 결합(FcγRIIb 또는 CD32b)의 증가에 의한 면역 세포 상에서의 향상된 Fc 결합이 바람직할 수 있다(문헌(Stavenhagen JB, et al., Advances in Enzyme Regulation 2007 December 3 and Veri MC, et al. Arthritis Rheum, 2010 Mar 30;62(7):1933-43) 참조). 대조적으로, 종양학에서 사용될 항체의 경우, 이펙터 기능의 증가는 치료적 활성을 개선할 수 있다.

다수의 돌연변이들이 인간 IgG1의 CH₂ 도메인에서 만들어졌고 시험관 내에서 ADCC 및 CDC에 대한 그들의 효과가 시험되었다(Idusogie EE. et al., 2001. Engineered antibodies with increased activity to recruit complement. J Immunol. 166(4):2571-5). 특히, 위치 333에서의 알라닌 치환은 ADCC 및 CDC 둘 다를 증가시키는 것으로 보고되었다. 일부 연구자들(Lazar et al.)은 FcγRIIIa에 대한 보다 더 높은 친화성 및 FcγRIIb에 대한 보다 더 낮은 친화성을 가짐으로써 ADCC를 향상시키는 삼중 돌연변이체(S239D/I332E/A330L)를 기술하였다(Lazar GA. et al., 2006. Engineered antibody Fc variants with enhanced effector function. PNAS 103(11): 4005-4010). 동일한 돌연변이들이 증가된 ADCC를 갖는 항체를 생성하는 데 사용되었다(Ryan MC. et al., 2007. Antibody targeting of B-cell maturation antigen on malignant plasma cells. Mol. Cancer Ther., 6: 3009-3018). 일부 연구자들(Richards et al.)은 대식세포에 의한 표적 세포의 향상된 식세포작용을 매개하는 개선된 FcγRIIIa 친화성 및 FcγRIIa/FcγRIIb 비를 갖는 약간 상이한 삼중 돌연변이체(S239D/I332E/G236A)를 연구하였다(Richards JO et al 2008. Optimization of antibody binding to Fcgamma RIIa enhances macrophage phagocytosis of tumor cells. Mol Cancer Ther. 7(8):2517-27).

IgG4 항체들은 그들의 이펙터 기능의 결여로 인해 세포 고갈 없는 수용체 차단에 적합한 IgG 서브클래스를 대표한다. IgG4 분자는 Fab-아암 교환으로서 지칭되는 동적 과정에서 절반-분자를 교환할 수 있다. 이 현상은 치료적 항체와 내재성(endogenous) IgG4 사이에 일어날 수 있다. S228P 돌연변이는 이 재조합 과정을 방해함으로써, 덜 예측불가능한 치료적 IgG4 항체의 디자인을 가능하게 하는 것으로 확인되었다(Labrijn AF. et al., 2009. Therapeutic IgG4 antibodies engage in Fab-arm exchange with endogenous human IgG4 in vivo. Nat Biotechnol. 27(8):767-71). 이 기술은 이중특이적 항체 분자를 생성하는 데 이용될 수 있다.

당업자는 항체가 다양한 번역 후 변형들을 겪을 수 있다는 것도 이해할 것이다. 이들 변형들의 유형 및 정도는 종종 항체를 발현하는 데 사용된 숙주 세포주 및 배양 조건에 의존한다. 이러한 변형들은 글리코실화, 메티오닌 산화, 디케토피페라진 형성, 아스파르테이트 이성질체화 및 아스파라긴 탈아미드화에서의 변형을 포함할 수 있다. 흔한 변형은 (문헌(Harris, RJ. Journal of Chromatography 705:129-134, 1995)에 기재된 바와 같이) 카복시펩티다제의 작용으로 인한 카복시 말단 염기성 잔기(예컨대, 라이신 또는 아르기닌)의 상실이다. 따라서, 항체 중쇄의 C 말단 라이신은 존재하지 않을 수 있다.

친화성

본 개시의 항체 분자는 CD22에 대해 특이적인 적어도 하나의 결합 도메인을 포함한다.

본 발명의 다중특이적 분자는 항원 CD22에 대해 특이적인 결합 도메인 및 항원 CD79a 및/또는 CD79b에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함한다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 사용된 결합 도메인은 CD22에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 사용된 결합 도메인은 CD79a에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 사용된 결합 도메인은 CD79b에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 사용된 결합 도메인은 CD79 복합체에 대해 특이적이고, 즉 상기 복합체에 존재하는 에피토프, 예를 들면, CD79a와 CD79b 사이의 상호작용을 포함하는 에피토프를 인식하고 이에 대해 특이적이다.

CD79에 대한 결합 도메인은 CD79a 및/또는 CD79b에 결합할 수 있다.

CD79a(면역글로불린 알파 및 B 세포 항원 수용체 복합체와 연관된 단백질 알파 쇄로서도 공지되어 있음)는 공지된 단백질이다. CD79a의 발현은 B 림프구로 제한된다. 인간 서열은 입력 번호 P11912 하에 유니프롯(UniProt)에서 입수가능하다(서열번호 162, 및 신호 서열을 갖지 않는 서열번호 162의 아미노산 33-226). 뮤린 버전은 입력 번호 11911 하에 유니프롯에서 입수가능하다. 본 개시는 임의의 종으로부터의 CD79a의 모든 형태들, 특히 이들의 인간 및 임의의 천연 변이체에 관한 것이다. 한 실시양태에서, CD79a는 이 단백질의 인간 형태를 지칭한다.

CD79b(면역글로불린과 연관된 베타 및 클러스터 분화 79B로서도 공지되어 있음)는 공지된 단백질이다. CD79b의 발현은 B 림프구로 제한된다. 인간 서열은 입력 번호 P40259 하에 유니프롯에서 입수가능하다(서열번호 163, 및 신호 서열을 갖지 않는 서열번호 163의 아미노산 29-229). 뮤린 버전은 입력 번호 P15530 하에 유니프롯에서 입수가능하다. 본 개시는 임의의 종으로부터의 CD79b의 모든 형태들, 특히 이들의 인간 및 임의의 천연 변이체에 관한 것이다. 한 실시양태에서, CD79b는 이 단백질의 인간 형태를 지칭한다.

한 실시양태에서, CD79에 대해 특이적인 결합 도메인은 CD79a에 결합한다.

한 실시양태에서, CD79에 대해 특이적인 결합 도메인은 CD79b에 결합한다.

한 실시양태에서, CD79에 대해 특이적인 결합 도메인은 CD79a와 CD79b의 복합체에 결합한다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 CD79에 대한 결합 도메인의 친화성은 약 100 nM 이상, 예컨대, 약 50 nM, 20 nM, 10 nM, 1 nM, 500 pM, 250 pM, 200 pM 또는 100 pM 이상, 특히 50 pM 이상의 결합 친화성이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 CD79a에 대한 결합 도메인의 친화성은 약 100 nM 이상, 예컨대, 약 50 nM, 20 nM, 10 nM, 1 nM, 500 pM, 250 pM, 200 pM 또는 100 pM 이상, 특히 50 pM 이상의 결합 친화성이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 CD79b에 대한 결합 도메인의 친화성은 약 100 nM 이상, 예컨대, 약 50 nM, 20 nM, 10 nM, 1 nM, 500 pM, 250 pM, 200 pM 또는 100 pM 이상, 특히 50 pM 이상의 결합 친화성이다.

CD22에 대한 결합 도메인의 친화성은 CD79에 대한 결합 도메인의 친화성과 동일할 수 있거나 상이할 수 있다는 것이 인식될 것이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 다중특이적 항체 분자 또는 이의 항체/단편 성분은 표적 항원 또는 항원들에 대한 개선된 친화성을 제공하도록 프로세싱된다. 이러한 변이체는 CDR의 돌연변이유발(Yang et al., J. Mol. Biol., 254, 392-403, 1995), 쇄 셔플링(Marks et al., Bio/Technology, 10, 779-783, 1992), 이. 콜라이(E. coli)의 돌연변이유발자 균주의 사용(Low et al., J. Mol. Biol., 250, 359-368, 1996), DNA 셔플링(Patten et al., Curr. Opin. Biotechnol., 8, 724-733, 1997), 파지 디스플레이(Thompson et al., J. Mol. Biol., 256, 77-88, 1996) 및 성적(sexual) PCR(Crameri et al., Nature, 391, 288-291, 1998)을 비롯한 다수의 친화성 성숙 프로토콜들에 의해 수득될 수 있다. (상기) 문헌(Vaughan et al.)은 이들 친화성 성숙 방법들을 논의한다.

항체 및 이의 생성

본 발명에서 사용될 결합 도메인은 당분야에서 공지되어 있는 임의의 적합한 방법에 의해 생성될 수 있고, 예를 들면, 상업적으로 입수가능한 항체를 비롯한 비인간 항체로부터 CDR을 수득하여 인간 프레임워크 내로 이식할 수 있거나, 대안적으로 비인간 가변 영역 및 인간 불변 영역 등으로 키메라 항체를 제조할 수 있다.

전형적으로, 본 발명에서 사용될 결합 도메인은 선택된 항원에 결합하는 항체, 예컨대, CD22, 또는 CD79a 및/또는 CD79b에 결합하는 항체로부터 유래된 결합 도메인이다.

CD22 및 CD79 항체의 예는 당분야에서 공지되어 있고 이들은 본 발명의 분자에서 직접적으로 사용될 수 있거나 본원에 기재된 방법의 이용을 통해 적합성에 대해 스크리닝될 수 있고, 필요하다면, 본원에 기재된 방법의 이용을 통해 추후에 변형될, 예를 들면, 인간화될 수 있다. 임상에서의 CD22 항체의 예로는 에프라투주맙(epratuzumab) 및 이노투주맙(inotuzumab)이 있다. 다른 치료 항체는 당분에 기재되어 있다(예를 들면, 미국 특허출원 공보 제2003202975호 및 국제 특허출원 공보 제WO14/011520호에 개시된 항-CD22 항체, 국제 특허출원 공보 제WO14011521호 및 제WO15021089호에 개시된 항-CD79b 항체). 비인간 항-CD22 항체는 클론 SP104로부터의 토끼 단일클론 항체 LS-C2210357(LSBio), 클론 4C3으로부터의 마우스 단일클론 LS-C174778, 마우스 단일클론 LS-C4802, 클론 1B1로부터의 마우스 단일클론 LS-B9996, 클론 2E6으로부터의 마우스 단일클론 LS-C340404, 마우스 단일클론 LS-C312263, 마우스 단일클론 LS-C152867, 마우스 단일클론 LS-C87523, 클론 FRB4로부터의 마우스 단일클론 LS-C134333, 마우스 단일클론 LS-C134336, 클론 HIB22로부터의 마우스 단일클론 LS-C40961, 마우스 단일클론 LS-C134332, 산타 크루즈 바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnology)로부터의 하기 항체들을 포함한다: sc-271579, sc-377304, sc-7032, sc-18909, sc-7932, sc-7323, sc-7307, sc-7031, sc-20053, sc-189000, sc-136440, sc-136507, sc-53031, sc-73363, sc-53032, 애브캄(Abcam) 토끼 단일클론 Ab33859(EP498Y), 마우스 단일클론 항체 AA 1-687 카탈로그 번호 ABIN1999423, 클론 HIB22로부터의 바이오레전드(Biolegend) 워크숍 번호 V CD22.14로부터의 마우스 단일클론.

상업적으로 입수가능한 항-CD79a 항체는 클론 HM57로부터의 마우스 단일클론 LS-B4504(LSBio), 마우스 단일클론 LS-B8330, 마우스 단일클론 LS-C44954, 토끼 단일클론 LS-B9093, 클론 JCB117로부터의 마우스 단일클론 LS-B8513, 클론 SP18로부터의 토끼 단일클론 LS-C210607, 클론 5E2로부터의 마우스 단일클론 LS-C175441, 클론 3D3으로부터의 마우스 단일클론 LS-C338670, 클론 HM47/A9로부터의 마우스 단일클론 LS-C88120, 마우스 단일클론 LS-C191714, 마우스 단일클론 LS-C87592, 마우스 단일클론 LS-C44955, 마우스 단일클론 LS-C95934, 마우스 단일클론 LS-C121584, 마우스 단일클론 LS-C121585, 마우스 단일클론 LS-C204347, 마우스 단일클론 LS-C88122, 애브캄 마우스 단일클론 ab3121[HM47/A9], 토끼 단일클론 ab79414, 및 토끼 단일클론 ab133483을 포함한다.

상업적으로 입수가능한 CD79b 항체는 마우스 단일클론 애브캄 항체 ab33295, 래트 단일클론 ab23826, 마우스 단일클론 ab103422, 토끼 단일클론 ab134103, 토끼 단일클론 ab134147, 및 토끼 단일클론 ab183343을 포함한다.

이러한 상업적으로 입수가능한 항체는 추가 치료적 항체의 발견에 유용한 수단일 수 있다.

당업자는 당분야에서 공지되어 있는 임의의 적합한 방법을 이용하여 본 발명의 다중특이적 분자에서 사용될 항체를 생성할 수 있다.

항체를 생성하는 데 사용될, 예를 들면, 숙주를 면역화시키는 데 사용되거나 패닝(panning), 예컨대, 파지 디스플레이에서 사용될 항원 폴리펩티드는 당분야에서 잘 알려져 있는 과정에 의해 발현 시스템을 포함하는 유전학적으로 조작된 숙주 세포로부터 제조될 수 있거나 천연 생물학적 공급원으로부터 회수될 수 있다. 본원에서, 용어 "폴리펩티드"는 펩티드, 폴리펩티드 및 단백질을 포함한다. 달리 특정되어 있지 않은 한, 이들은 상호교환적으로 사용된다. 항원 폴리펩티드는 일부 경우들에서 보다 더 큰 단백질, 예컨대, 융합 단백질, 예를 들면, 친화성 태그 또는 유사한 물질에 융합된 융합 단백질의 부분일 수 있다. 한 실시양태에서, 숙주는 관련 단백질 또는 폴리펩티드로 형질감염된, 예를 들면, CD79a 및 CD79b로 동시-형질감염된 세포, 예컨대, 섬유모세포에 의해 면역화될 수 있다.

동물의 면역화가 필요한 경우, 잘 알려져 있는 상용적인 프로토콜을 이용하여 폴리펩티드를 동물, 바람직하게는 비인간 동물에게 투여함으로써, 항원 폴리펩티드에 대해 생성된 항체를 수득할 수 있다(예를 들면, 문헌(Handbook of Experimental Immunology, D. M. Weir (ed.), Vol 4, Blackwell Scientific Publishers, Oxford, England, 1986) 참조). 많은 온혈 동물들, 예컨대, 토끼, 마우스, 래트, 양, 소, 낙타 또는 돼지가 면역화될 수 있다. 그러나, 마우스, 토끼, 돼지 및 래트가 일반적으로 가장 적합하다.

단일클론 항체는 당분야에서 공지되어 있는 임의의 방법, 예컨대, 하이브리도마 기법(Kohler & Milstein, 1975, Nature, 256:495-497), 트리오마(trioma) 기법, 인간 B 세포 하이브리도마 기법(Kozbor et al 1983, Immunology Today, 4:72) 및 EBV-하이브리도마 기법(Cole et al Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, pp77-96, Alan R Liss, Inc., 1985)에 의해 제조될 수 있다.

항체는 예를 들면, 문헌(Babcook, J. et al 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93(15):7843-7848l); 및 국제 특허출원 공보 제WO92/02551호, 제WO2004/051268호 및 제WO2004/106377호에 기재된 방법에 의한 특정 항체의 생성을 위해 선택된 단일 림프구로부터 생성된 면역글로불린 가변 영역 cDNA들을 클로닝하고 발현시킴으로써 단일 림프구 항체 방법의 이용을 통해 생성될 수도 있다.

본 개시에서 사용될 항체는 당분야에서 공지되어 있는 다양한 파지 디스플레이 방법들의 이용을 통해 생성될 수도 있고 문헌(Brinkman et al., in J. Immunol. Methods, 1995, 182: 41-50); 문헌(Ames et al., J. Immunol. Methods, 1995, 184:177-186); 문헌(Kettleborough et al., Eur. J. Immunol. 1994, 24:952-958); 문헌(Persic et al., Gene, 1997 187 9-18); 문헌(Burton et al., Advances in Immunology, 1994, 57:191-280); 국제 특허출원 공보 제WO90/02809호, 제WO91/10737호, 제WO92/01047호, 제WO92/18619호, 제WO93/11236호, 제WO95/15982호 및 제WO95/20401호; 미국 특허 제5,698,426호, 제5,223,409호, 제5,403,484호, 제5,580,717호, 제5,427,908호, 제5,750,753호, 제5,821,047호, 제5,571,698호, 제5,427,908호, 제5,516,637호, 제5,780,225호, 제5,658,727호, 제5,733,743호 및 제5,969,108호; 및 국제 특허출원 공보 제WO20011/30305호에 개시된 항체들을 포함한다.

일례에서, 본 개시의 다중특이적 분자는 전체 인간 분자이고, 특히 가변 도메인들 중 하나 이상의 가변 도메인은 전체 인간 가변 도메인이다.

전체 인간 분자는 중쇄 및 경쇄 둘 다의 가변 영역 및 불변 영역(존재하는 경우)이 반드시 동일한 항체로부터 유래될 필요는 없지만 모두 인간으로부터 유래되거나 인간 유래의 서열과 실질적으로 동일한 분자이다. 전체 인간 항체의 예로는 예를 들면, 전술되어 있는 파지 디스플레이 방법에 의해 생성된 항체; 및 뮤린 면역글로불린 가변 영역 유전자 및 임의적으로 불변 영역 유전자가 예를 들면, 유럽 특허 제0546073호, 미국 특허 제5,545,806호, 제5,569,825호, 제5,625,126호, 제5,633,425호, 제5,661,016호 및 제5,770,429호, 및 유럽 특허 제0438474호 및 제0463151호에 일반적인 용어로 기재되어 있는 그들의 인간 대응물들로 대체되어 있는 마우스에 의해 생성된 항체가 있을 수 있다.

일례에서, 본 개시에 따른 다중특이적 분자의 결합 도메인은 인간화된다.

본원에서 사용된 "인간화된"(CDR-이식된 항체를 포함함)은 비인간 종으로부터의 하나 이상의 상보성 결정 영역들(CDR) 및 인간 면역글로불린 분자로부터의 프레임워크 영역을 갖는 분자를 지칭한다(예를 들면, 미국 특허 제5,585,089호 및 국제 특허출원 공보 제WO91/09967호 참조). 전체 CDR보다는 오히려 CDR의 특이성 결정 잔기를 전달하는 것만이 필요할 수 있다는 것이 인식될 것이다(예를 들면, 문헌(Kashmiri et al., 2005, Methods, 36, 25-34) 참조). 인간화된 항체는 임의적으로 CDR의 기원인 비인간 종으로부터 유래된 하나 이상의 프레임워크 잔기를 추가로 포함할 수 있다.

본원에서 사용된 용어 "인간화된 항체 분자"는 어셉터(acceptor) 항체(예를 들면, 인간 항체)의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역 프레임워크 내로 이식된, 도너 항체(예를 들면, 뮤린 단일클론 항체)로부터의 하나 이상의 CDR(원하는 경우 하나 이상의 변형된 CDR을 포함함)을 함유하는 중쇄 및/또는 경쇄를 갖는 항체 분자를 지칭한다. 검토를 위해서는 문헌(Vaughan et al., Nature Biotechnology, 16, 535-539, 1998)을 참조한다. 한 실시양태에서, 전체 CDR이 전달되기보다는 오히려, 본원에 전술되어 있는 CDR들 중 어느 한 CDR로부터의 특이성 결정 잔기들 중 하나 이상의 특이성 결정 잔기만이 인간 항체 프레임워크에게 전달된다(예를 들면, 문헌(Kashmiri et al., 2005, Methods, 36, 25-34) 참조). 한 실시양태에서, 본원에 전술되어 있는 CDR들 중 하나 이상의 CDR로부터의 특이성 결정 잔기만이 인간 항체 프레임워크에게 전달된다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 전술되어 있는 CDR들 각각으로부터의 특이성 결정 잔기만이 인간 항체 프레임워크에게 전달된다.

CDR 또는 특이성 결정 잔기가 이식될 때, CDR의 기원인 도너 항체의 클래스/유형을 유념하면서 마우스, 영장류 및 인간 프레임워크 영역들을 비롯한 임의의 적절한 어셉터 가변 영역 프레임워크 서열을 사용할 수 있다. 적절하게는, 본 발명에 따른 인간화된 항체는 인간 어셉터 프레임워크 영역뿐만 아니라 본원에서 제공된 CDR들 중 하나 이상의 CDR도 포함하는 가변 도메인을 가진다.

본 개시에서 사용될 수 있는 인간 프레임워크의 예는 KOL, NEWM, REI, EU, TUR, TEI, LAY 및 POM이다(상기 문헌(Kabat et al.)). 예를 들면, KOL 및 NEWM은 중쇄를 위해 사용될 수 있고, REI는 경쇄를 위해 사용될 수 있고, EU, LAY 및 POM은 중쇄 및 경쇄 둘 다를 위해 사용될 수 있다. 대안적으로, 인간 생식세포주 서열이 사용될 수 있고; 이들은 웹사이트(http://www2.mrc-lmb.cam.ac.uk/vbase/list2.php)에서 입수가능하다.

본 개시의 인간화된 항체 분자에서, 어셉터 중쇄 및 경쇄는 반드시 동일한 항체로부터 유래될 필요는 없고, 원하는 경우 상이한 쇄들로부터 유래된 프레임워크 영역을 갖는 복합 쇄를 포함할 수 있다.

프레임워크 영역은 어셉터 항체의 서열과 정확히 동일한 서열을 가질 필요가 없다. 예를 들면, 희귀 잔기들이 그 어셉터 쇄 클래스 또는 유형에 대해 더 자주 발견되는 잔기로 교체될 수 있다. 대안적으로, 어셉터 프레임워크 영역 내의 선택된 잔기는 도너 항체 내의 동일한 위치에서 발견되는 잔기에 상응하도록 교체될 수 있다(문헌(Reichmann et al., 1998, Nature, 332, 323-324) 참조). 이러한 교체는 도너 항체의 친화성을 회복하기 위해 필요한 최소한의 수준으로 유지되어야 한다. 어셉터 프레임워크 영역에서 교체될 필요가 있을 수 있는 잔기를 선택하는 프로토콜은 국제 특허출원 공보 제WO91/09967호에 기재되어 있다.

프레임워크의 유도체는 대안적인 아미노산, 예를 들면, 도너 잔기로 대체된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 아미노산을 가질 수 있다.

도너 잔기는 도너 항체, 즉 CDR의 최초 기원인 항체로부터의 잔기이고, 특히 도너 서열로부터의 상응하는 위치의 잔기가 채택된다. 도너 잔기는 인간 수용체 프레임워크으로부터 유래된 적합한 잔기(어셉터 잔기)로 대체될 수 있다.

항체 가변 도메인 내의 잔기는 통상적으로 카바트 등(Kabat et al.)에 의해 고안된 시스템에 따라 넘버링된다. 이 시스템은 문헌(Kabat et al., 1987, in Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Department of Health and Human Services, NIH, USA)(이하, "(상기) 문헌(Kabat et al.)")에 기재되어 있다. 이 넘버링 시스템은 달리 표시되어 있는 경우를 제외하고 본 명세서에서 사용된다.

카바트 잔기 표시는 항상 아미노산 잔기의 일차 넘버링과 직접적으로 상응하지는 않는다. 실제 일차 아미노산 서열은 엄격한 카바트 넘버링보다 더 적은 아미노산 또는 추가 아미노산을 함유할 수 있고, 이러한 더 적은 아미노산 또는 추가 아미노산은 기본 가변 도메인 구조의 구조적 성분(프레임워크 또는 상보성 결정 영역(CDR))의 단축 또는 이러한 구조적 성분 내로의 삽입에 상응한다. 항체의 서열과 "표준" 카바트 넘버링된 서열에서 상동한 잔기를 정렬함으로써 소정의 항체에 대해 잔기의 정확한 카바트 넘버링을 결정할 수 있다.

중쇄 가변 도메인의 CDR은 카바트 넘버링 시스템에 따라 잔기 31-35(CDR-H1), 잔기 50-65(CDR-H2) 및 잔기 95-102(CDR-H3)에 위치한다. 그러나, 초티아(Chothia)(Chothia, C. and Lesk, A.M. J. Mol. Biol., 196, 901-917 (1987))에 따르면, CDR-H1에 해당하는 루프는 잔기 26부터 잔기 32까지 걸쳐 있다. 따라서, 달리 표시되어 있지 않은 한, 본원에서 사용된 'CDR-H1'은 카바트 넘버링 시스템과 초티아의 위상적 루프 정의의 조합에 의해 기재된 바와 같이 잔기 26부터 35까지를 지칭하기 위한 것이다.

경쇄 가변 도메인의 CDR은 카바트 넘버링 시스템에 따라 잔기 24-34(CDR-L1), 잔기 50-56(CDR-L2) 및 잔기 89-97(CDR-L3)에 위치한다.

일례에서, 예를 들면, 3개의 CDR들을 포함하는 중쇄 가변 영역(예를 들면, VH)을 포함하는, CD79에 대해 특이적인 본 개시의 항체 분자 내의 결합 도메인이 제공되고, 이때 CDRH1은 서열번호 158로 제공된 서열을 갖고, CDRH2는 서열번호 159로 제공된 서열을 갖고, CDRH3은 서열번호 160으로 제공된 서열을 가진다.

한 실시양태에서, 예를 들면, CDRH1에 대해 서열번호 175, CDRH2에 대해 서열번호 176 및 CDRH3에 대해 서열번호 177의 3개 중쇄 CDR들을 포함하는 중쇄 가변 영역(예를 들면, VH)을 포함하는, CD79에 대해 특이적인 본 개시의 항체 분자 내의 결합 도메인이 제공된다.

한 실시양태에서, 예를 들면, CDRL1에 대해 서열번호 161, CDRL2에 대해 서열번호 162 및 CDRL3에 대해 서열번호 163, 164, 165 또는 166의 3개 경쇄 CDR들을 포함하는 경쇄 가변 영역(예를 들면, VL)을 포함하는, CD79에 대해 특이적인 본 개시의 항체 분자 내의 결합 도메인이 제공된다.

한 실시양태에서, 예를 들면, CDRL1에 대해 서열번호 178, CDRL2에 대해 서열번호 179 및 CDRL3에 대해 서열번호 180, 181, 182 또는 183의 3개 경쇄 CDR들을 포함하는 경쇄 가변 영역(예를 들면, VL)을 포함하는, CD79에 대해 특이적인 본 개시의 항체 분자 내의 결합 도메인이 제공된다.

일례에서, 예를 들면, 3개의 CDR들을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 3개의 CDR들을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, CD79에 대해 특이적인 본 개시의 항체 분자 내의 결합 도메인이 제공되고, 이때 CDRH1은 서열번호 158로 제공된 서열을 갖고, CDRH2는 서열번호 159로 제공된 서열을 갖고, CDRH3은 서열번호 160으로 제공된 서열을 갖고, CDRL1은 서열번호 161로 제공된 서열을 갖고, CDRL2는 서열번호 162로 제공된 서열을 갖고, CDRL3은 서열번호 163, 164, 165 또는 166으로 제공된 서열을 가진다.

일례에서, 예를 들면, 3개의 CDR들을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 3개의 CDR들을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, CD79에 대해 특이적인 본 개시의 항체 분자 내의 결합 도메인이 제공되고, 이때 CDRH1은 서열번호 175로 제공된 서열을 갖고, CDRH2는 서열번호 176으로 제공된 서열을 갖고, CDRH3은 서열번호 177로 제공된 서열을 갖고, CDRL1은 서열번호 178로 제공된 서열을 갖고, CDRL2는 서열번호 179로 제공된 서열을 갖고, CDRL3은 서열번호 180, 181, 182 또는 183으로 제공된 서열을 가진다.

한 실시양태에서, 서열번호 171 및 173, 171 및 174, 172 및 173, 172 및 174, 188 및 189, 및 188 및 190으로부터 선택된, CD79b에 대해 특이적인 VH 및 VL을 포함하는 항체 분자가 제공된다.

VH, VL 및 CDR 서열을 포함하는, 이들 항-CD79 항체들(항체 4447 및 항체 4450)의 서열은 본원의 도 35에서 제공되어 있다. VH, VL 및 CDR 서열을 포함하는, 항-CD22 항체들(항체 4120, 4126, 4127, 4128, 4130, 4132)의 서열은 본원의 도 35에서 제공되어 있고, 이들은 본 발명의 분자에서 결합 도메인으로서 조합될 수 있다.

한 실시양태에서, 본원에 개시된 서열을 갖는 한 쌍의 가변 도메인을 포함하는 가변 도메인 또는 결합 도메인, 또는 이의 변이체가 제공된다.

일례에서, 서열번호 240으로 제공된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호 242로 제공된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 알부민에 대해 특이적인 결합 도메인이 제공된다.

한 실시양태에서, 결합 도메인 또는 도메인들은 인간화된다.

일례에서, 본원에서 제공된 하나 이상의 CDR은 바람직하지 않은 잔기 또는 부위, 예컨대, 시스테인 잔기 또는 아스파르트산(D) 이성질체화 부위 또는 아스파라긴(N) 탈아미드화 부위를 제거하도록 변형될 수 있다.

예를 들면, CDR들 중 어느 한 CDR 내의 하나 이상의 시스테인 잔기는 또 다른 아미노산, 예컨대, 세린으로 치환될 수 있다.

일례에서, 아스파라긴 탈아미드화 부위는 아스파라긴 잔기(N) 및/또는 인접 잔기를 임의의 다른 적합한 아미노산으로 돌연변이시킴으로써 하나 이상의 CDR로부터 제거될 수 있다. 일례에서, 아스파라긴 탈아미드화 부위, 예컨대, NG 또는 NS는 예를 들면, NA 또는 NT로 돌연변이될 수 있다.

일례에서, 아스파르트산 이성질체화 부위는 아스파르트산 잔기(D) 및/또는 인접 잔기를 임의의 다른 적합한 아미노산으로 돌연변이시킴으로써 하나 이상의 CDR로부터 제거될 수 있다. 일례에서, 아스파르트산 이성질체화 부위, 예컨대, DG 또는 DS는 예를 들면, EG, DA 또는 DT로 돌연변이될 수 있다.

일례에서, N-글리코실화 부위, 예컨대, NLS는 아스파라긴 잔기(N)를 임의의 다른 적합한 아미노산, 예를 들면, SLS 또는 QLS로 돌연변이시킴으로써 제거될 수 있다. 일례에서, N-글리코실화 부위, 예컨대, NLS는 세린 잔기(S)를, 트레오닌(T)을 제외한 임의의 다른 잔기로 돌연변이시킴으로써 제거될 수 있다.

당업자는 활성이 유지되는 지를 확인하기 위한 임의의 적합한 어세이, 예컨대, 본원에 기재된 어세이에서 CDR 또는 인간화된 서열의 변이체를 시험할 수 있다.

예를 들면, ELISA 또는 표면 플라스몬 공명 방법, 예컨대, 비아코어(BIAcore)를 비롯한 임의의 적합한 어세이를 이용하여 항원에의 특이적 결합을 시험할 수 있고, 이때 항원(CD22 또는 CD79)에의 결합이 측정될 수 있다. 이러한 어세이는 단리된 천연 또는 재조합 CD22 또는 CD79(a 및/또는 b) 또는 적합한 융합 단백질/폴리펩티드를 사용할 수 있다. 일례에서, 결합은 예를 들면, 표면 플라스몬 공명, 예컨대, 비아코어에 의해 재조합 CD22(예컨대, 서열번호 244로 제공된 서열, 또는 서열번호 244의 아미노산 20-847) 또는 CD79(예컨대, 서열번호 245 및 서열번호 246으로 제공된 서열, 및 서열번호 245의 아미노산 33-226 및 서열번호 246의 아미노산 29-229)를 사용함으로써 측정된다. 대안적으로, 단백질은 세포, 예컨대, HEK 세포 상에서 발현될 수 있고 친화성은 유세포분석(flow cytometry) 기반의 친화성 측정을 이용함으로써 측정될 수 있다.

본 발명에 따른 항체 분자와 CD22의 결합을 교차차단하는 항체, 특히 서열번호 107, 108, 109 또는 110으로 제공된 중쇄 서열 및 서열번호 106으로 제공된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자; 또는 서열번호 116, 117, 118, 119, 120 또는 121로 제공된 중쇄 서열 및 서열번호 115로 제공된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자; 또는 서열번호 127, 128, 129 또는 130으로 제공된 중쇄 서열 및 서열번호 126으로 제공된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자; 또는 서열번호 136, 137, 138 또는 139로 제공된 중쇄 서열 및 서열번호 135로 제공된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자; 또는 서열번호 145, 146, 147 또는 148로 제공된 중쇄 서열 및 서열번호 144로 제공된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자; 또는 서열번호 154, 155, 156 또는 157로 제공된 중쇄 서열 및 서열번호 153으로 제공된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자는 CD22에의 결합에 유사하게 유용할 수 있으므로 본 발명의 항체 분자, 예컨대, 다중특이적 분자에서 유사하게 유용할 수 있다. 따라서, 본 발명은 항원 CD22에 대해 특이적인 결합 도메인 및 항원 CD79b에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함하는 항체 분자, 예컨대, 다중특이적 분자로서, CD22에 대한 결합 도메인이 본원에 전술되어 있는 항체 분자들 중 어느 한 항체 분자와 CD22의 결합을 교차차단하고/하거나 이들 항체들 중 어느 한 항체에 의해 CD22에의 결합으로부터 교차차단되는 것인 항체 분자, 예컨대, 다중특이적 분자도 제공한다. 한 실시양태에서, 이러한 항체는 본원에 전술되어 있는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 교차차단 항체는 본원에 전술되어 있는 항체에 의해 결합된 에피토프와 접하고/하거나 중첩되는 에피토프에 결합한다.

또 다른 실시양태에서, 교차차단 중화 항체는 본원에 전술되어 있는 항체에 의해 결합된 에피토프와 접하고/하거나 중첩되는 에피토프에 결합한다.

교차차단 항체는 당분야의 임의의 적합한 방법을 이용함으로써, 예를 들면, 경쟁 ELISA 또는 비아코어 어세이를 이용함으로써 확인될 수 있고, 이때 교차차단 항체와 항원(CD22 및/또는 CD79)의 결합은 본 발명의 항체의 결합을 방해하거나, 그 반대의 경우도 가능하다. 이러한 교차차단 어세이는 세포에 의해 발현된 단리된 천연 또는 재조합 CD22 또는 CD79(a 및/또는 b) 또는 적합한 융합 단백질/폴리펩티드를 사용할 수 있다. 일례에서, 재조합 CD22 또는 이의 적합한 단편 또는 천연 변이체(예컨대, 서열번호 224로 제공된 서열 또는 서열번호 244의 아미노산 20-847로 제공된 서열) 또는 CD79, 예컨대, 서열번호 245로 제공된 서열 또는 서열번호 245의 아미노산 33-226으로 제공된 서열(CD79a) 및/또는 서열번호 246으로 제공된 서열 또는 서열번호 246의 아미노산 29-229로 제공된 서열을 사용하여 예를 들면, 85% 이상, 예컨대, 90% 이상, 특히 95% 이상까지 결합 및 교차차단을 측정한다.

이러한 교차차단 항체는 하나 이상의 기능 어세이에서 본원에 기재된 다중특이적 항체 분자와 필적할만한 활성을 가질 수 있다.

본 개시는 본원에 개시된 신규 폴리펩티드 서열, 및 이와 적어도 80% 유사하거나 동일한, 예를 들면, 85% 이상, 예컨대, 90% 이상, 특히 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 유사하거나 동일한 서열까지도 확장된다.

본원에서 사용된 "동일성"은 정렬된 서열들의 임의의 특정 위치에서 아미노산 잔기가 서열들 사이에 동일하다는 것을 표시한다. 본원에서 사용된 "유사성"은 정렬된 서열들의 임의의 특정 위치에서 아미노산 잔기가 서열들 사이에 유사한 유형의 아미노산 잔기라는 것을 표시한다. 예를 들면, 류신은 이소류신 또는 발린 대신에 치환될 수 있다. 종종 서로 치환될 수 있는 다른 아미노산들은

- 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판(방향족 측쇄를 갖는 아미노산);

- 라이신, 아르기닌 및 히스티딘(염기성 측쇄를 갖는 아미노산);

- 아스파르테이트 및 글루타메이트(산성 측쇄를 갖는 아미노산);

- 아스파라긴 및 글루타민(아미드 측쇄를 갖는 아미노산); 및

- 시스테인 및 메티오닌(황 함유 측쇄를 갖는 아미노산)

을 포함하나 이들로 한정되지 않는다.

동일성 및 유사성의 정도는 용이하게 계산될 수 있다(Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing. Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin, A.M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987, Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991, the BLAST™ software available from NCBI (Altschul, S.F. et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410; Gish, W. & States, D.J. 1993, Nature Genet. 3:266-272. Madden, T.L. et al., 1996, Meth. Enzymol. 266:131-141; Altschul, S.F. et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402; Zhang, J. & Madden, T.L. 1997, Genome Res. 7:649-656).

링커

링커가 예컨대, 본 발명의 임의의 다중특이적 분자에서 사용되는 경우, 한 문맥에서의 링커의 본원 교시는 상이한 문맥들에서의 링커에 동등하게 적용될 수 있다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 사용된 링커는 예를 들면, 서열 251 내지 314로 제시된 서열들로부터 선택된, 길이가 50개 이하의 잔기인 아미노산 링커이다.

(S)는 서열 219 내지 223에서 임의적이다.

강성 링커의 예로는 펩티드 서열 GAPAPAAPAPA(서열번호 273), PPPP(서열번호 274) 및 PPP가 있다.

다른 링커들은 표 3에 제시되어 있다:

이펙터 분자

원하는 경우, 본 발명에서 사용될 다중특이적 분자는 하나 이상의 이펙터 분자(들)에 접합될 수 있다. 이펙터 분자는 단일 이펙터 분자를 포함할 수 있거나 본 발명의 다중특이적 분자에 부착될 수 있는 단일 모이어티(moiety)를 형성하도록 연결된 2개 이상의 이러한 분자들을 포함할 수 있다는 것이 인식될 것이다. 이펙터 분자에 연결된 본 개시에 따른 항체 또는 다중특이적 분자를 수득하고자 하는 경우, 이것은 항체 단편이 직접적으로 또는 커플링제를 통해 이펙터 분자에 연결되는 표준 화학적 또는 재조합 DNA 절차에 의해 제조될 수 있다. 이러한 이펙터 분자를 항체에 접합시키는 기법은 당분야에서 잘 알려져 있다(문헌(Hellstrom et al., Controlled Drug Delivery, 2nd Ed., Robinson et al., eds., 1987, pp. 623-53); 문헌(Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev., 62:119-58); 및 문헌(Dubowchik et al., 1999, Pharmacology and Therapeutics, 83, 67-123) 참조). 구체적인 화학적 절차는 예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO 93/06231호, 제WO 92/22583호, 제WO 89/00195호, 제WO 89/01476호 및 제WO 03/031581호에 기재된 화학적 절차들을 포함한다. 대안적으로, 이펙터 분자가 단백질 또는 폴리펩티드인 경우, 예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO 86/01533호 및 유럽 특허 제0392745호에 기재된 바와 같이 재조합 DNA 절차를 이용하여 연결을 달성할 수 있다.

한 실시양태에서, 본 개시의 다중특이적 분자는 이펙터 분자를 포함할 수 있다.

본원에서 사용된 용어 "이펙터 분자"는 예를 들면, 항신생물성 물질, 약물, 독소, 생물학적 활성 단백질, 예를 들면, 효소, 다른 항체 또는 항체 단편, 합성 또는 천연 생성 중합체, 핵산 및 이의 단편, 예를 들면, DNA, RNA 및 이들의 단편, 방사성핵종, 특히 방사성요오다이드, 방사성동위원소, 킬레이팅된 금속, 나노입자 및 레포터 기, 예컨대, 형광 화합물, 또는 NMR 또는 ESR 분광법에 의해 검출될 수 있는 화합물을 포함한다.

이펙터 분자의 예로는 세포에게 유해한(예를 들면, 세포를 사멸시키는) 임의의 물질을 비롯한 세포독소 또는 세포독성 물질이 있을 수 있다. 예로는 콤브레스타틴(combrestatins), 돌라스타틴(dolastatins), 에포틸론(epothilones), 스타우로스포린(staurosporin), 메이탄시노이드(maytansinoids), 스폰기스타틴(spongistatins), 리족신(rhizoxin), 할리콘드린(halichondrins), 로리딘(roridins), 헤미아스털린(hemiasterlins), 탁솔(taxol), 사이토칼라신(cytochalasin) B, 그라미시딘(gramicidin) D, 에티듐 브로마이드(ethidium bromide), 에메틴(emetine), 미토마이신(mitomycin), 에토포사이드(etoposide), 테노포사이드(tenoposide), 빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine), 콜히친(colchicin), 독소루비신(doxorubicin), 다우노루비신(daunorubicin), 디하이드록시 안쓰라신 디온(dihydroxy anthracin dione), 미톡산트론(mitoxantrone), 미쓰라마이신(mithramycin), 악티노마이신(actinomycin) D, 1-데하이드로테스토스테론(dehydrotestosterone), 글루코코르티코이드(glucocorticoids), 프로카인(procaine), 테트라카인(tetracaine), 리도카인(lidocaine), 프로프라놀롤(propranolol) 및 푸로마이신(puromycin), 및 이들의 유사체들 및 상동체들이 있다.

이펙터 분자는 항대사물질(예를 들면, 메토트렉세이트(methotrexate), 6-머캡토푸린(mercaptopurine), 6-티오구아닌(thioguanine), 사이타라빈(cytarabine), 5-플루오로우라실(fluorouracil), 데카바진(decarbazine)), 알킬화제(예를 들면, 메클로레타민(mechlorethamine), 티오테파(thiotepa), 클로람부실(chlorambucil), 멜팔란(melphalan), 카무스틴(carmustine)(BSNU) 및 로무스틴(lomustine)(CCNU), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 부설판(busulfan), 디브로모만니톨(dibromomannitol), 스트렙토조토신(streptozotocin), 미토마이신(mitomycin) C 및 시스-디클로로디아민(cis-dichlorodiamine) 백금(II)(DDP) 시스플라틴), 안쓰라사이클린(anthracyclines)(예를 들면, 다우노루비신(daunorubicin)(이전 명칭: 다우노마이신(daunomycin)) 및 독소루비신), 항생제(예를 들면, 닥티노마이신(dactinomycin)(이전 명칭: 악티노마이신(actinomycin)), 블레오마이신(bleomycin), 미쓰라마이신, 안쓰라마이신(anthramycin)(AMC), 칼리케아미신(calicheamicins) 또는 듀오카마이신(duocarmycins)), 및 항-유사분열성 물질(예를 들면, 빈크리스틴 및 빈블라스틴)을 포함하나 이들로 한정되지 않는다.

다른 이펙터 분자는 킬레이팅된 방사성핵종, 예컨대, ¹¹¹In 및 ⁹⁰Y, Lu¹⁷⁷, 비스무쓰²¹³, 캘리포르늄²⁵², 이리듐¹⁹² 및 텅스텐¹⁸⁸/레늄¹⁸⁸; 또는 약물, 예컨대, 알킬포스포콜린(alkylphosphocholines), 토포이소머라제(topoisomerase) I 억제제, 변성독소 및 슈라민(suramin)(그러나, 이들로 한정되지 않음)을 포함할 수 있다.

다른 이펙터 분자는 단백질, 펩티드 및 효소를 포함한다. 관심 있는 효소는 단백질용해성 효소, 하이드롤라제(hydrolases), 라이아제(lyases), 이소머라제(isomerases) 및 트랜스퍼라제(transferases)를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 관심 있는 단백질, 폴리펩티드 및 펩티드는 면역글로불린, 독소, 예컨대, 애브린(abrin), 리신(ricin) A, 슈도모나스(pseudomonas) 외독소, 또는 디프테리아(diphtheria) 독소, 단백질, 예컨대, 인슐린, 종양 괴사 인자, α-인터페론, β-인터페론, 신경 성장 인자, 혈소판 유래의 성장 인자 또는 조직 플라스미노겐 활성화제, 혈전제 또는 항-혈관신생제, 예를 들면, 안지오스타틴(angiostatin) 또는 엔도스타틴(endostatin), 또는 생물학적 반응 변형제, 예컨대, 림포카인, 인터류킨-1(IL-1), 인터류킨-2(IL-2), 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 신경 성장 인자(NGF) 또는 다른 성장 인자 및 면역글로불린을 포함하나 이들로 한정되지 않는다.

다른 이펙터 분자는 예를 들면, 진단에 유용한 검출가능한 물질을 포함할 수 있다. 검출가능한 물질의 예로는 다양한 효소들, 보결분자단들, 형광 물질들, 발광 물질들, 생체발광 물질들, 방사성 핵종들, (양전자 방출 단층촬영술에서 사용될) 양전자 방출 금속들 및 비방사성 상자성 금속 이온들이 있다. 진단제로서 사용될 항체에 접합될 수 있는 금속 이온에 대해서는 일반적으로 미국 특허 제4,741,900호를 참조한다. 적합한 효소는 호스라디쉬 퍼록시다제(horseradish peroxidase), 알칼리성 포스파타제(alkaline phosphatase), 베타-갈락토시다제(beta-galactosidase) 또는 아세틸콜린에스터라제(acetylcholinesterase)를 포함하고; 적합한 보결분자단은 스트렙타비딘(streptavidin), 아비딘(avidin) 및 바이오틴(biotin)을 포함하고; 적합한 형광 물질은 움벨리페론(umbelliferone), 플루오레세인(fluorescein), 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민(rhodamine), 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실(dansyl) 클로라이드 및 파이코에리쓰린(phycoerythrin)을 포함하고; 적합한 발광 물질은 루미놀(luminol)을 포함하고; 적합한 생체발광 물질은 루시퍼라제(luciferase), 루시페린(luciferin) 및 에쿠오린(aequorin)을 포함하고; 적합한 방사성 핵종은 ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹¹¹In 및 ⁹⁹Tc를 포함한다.

또 다른 예에서, 이펙터 분자는 생체 내에서 항체의 반감기를 증가시킬 수 있고/있거나, 항체의 면역원성을 감소시킬 수 있고/있거나, 항체가 상피 장벽을 가로질러 면역 시스템에게 전달되는 것을 향상시킬 수 있다. 이러한 유형의 적합한 이펙터 분자의 예로는 중합체, 알부민, 알부민 결합 단백질 또는 알부민 결합 화합물, 예컨대, 국제 특허출원 공보 제WO05/117984호에 기재된 이펙터 분자들을 포함한다.

이펙터 분자가 중합체인 경우, 이 분자는 일반적으로 합성 또는 천연 생성 중합체, 예를 들면, 임의적으로 치환된 직쇄 또는 분지쇄 폴리알킬렌, 폴리알케닐렌 또는 폴리옥시알킬렌 중합체, 또는 분지된 또는 비분지된 폴리사카라이드, 예를 들면, 동종폴리사카라이드 또는 이종폴리사카라이드일 수 있다.

상기 언급된 합성 중합체 상에 존재할 수 있는 구체적인 임의적 치환기는 하나 이상의 하이드록시, 메틸 또는 메톡시 기를 포함한다.

합성 중합체의 구체적인 예로는 임의적으로 치환된 직쇄 또는 분지쇄 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(프로필렌글리콜), 폴리(비닐알코올) 또는 이들의 유도체, 특히 임의적으로 치환된 폴리(에틸렌글리콜), 예컨대, 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 또는 이들의 유도체가 있다.

기능 어세이

전형적으로, 본 발명에서 사용될 적합한 결합 도메인은 기능 어세이에서 하나 이상의 결합 도메인 쌍을 시험함으로써 확인될 수 있다. 예를 들면, 항원 CD22에 대해 특이적인 결합 도메인 및 항원 CD79a 및/또는 CD79b에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함하는 항-CD22 항체 분자, 예컨대, 다중특이적 분자는 하나 이상의 기능 어세이에서 시험될 수 있다.

본원에서 사용된 "기능 어세이"는 어세이 조건에 따라 단백질 복합체, 항체 복합체 또는 항체들의 혼합물의 하나 이상의 원하는 성질 또는 활성을 확인하는 데 이용될 수 있는 어세이이다. 적합한 기능 어세이는 결합 어세이, 아폽토시스 어세이, 항체 의존적 세포 매개 세포독성(ADCC) 어세이, 보체 의존적 세포독성(CDC) 어세이, 세포 생장 또는 증식의 억제(세포증식억제 효과) 어세이, 세포 사멸(세포독성 효과) 어세이, 세포 신호전달 어세이, 사이토카인 생성 어세이, 항체 생성 및 이소타입 전환, 및 세포 분화 어세이일 수 있다.

본 개시에 따른 다중특이적 항체의 효능은 당분야에서 통상의 기술을 갖는 자에게 일반적으로 공지되어 있는 방법에 의해 이러한 모델들에서 개별 항체 또는 항체들(또는 단편들)의 혼합물과 비교될 수 있다.

기능 어세이는 결과의 신뢰성을 향상시키기 위해 필요하다면 다회 반복될 수 있다. 당업자에게 공지되어 있는 다양한 통계학적 검증들이 통계학적으로 유의한 결과를 확인함으로써 생물학적 기능을 갖는 다중특이적 분자를 확인하는 데 이용될 수 있다.

적합한 기능 어세이의 예는 본원의 실시예에 기재되어 있고, B 세포 활성화의 마커, 예컨대, 인산화된 Akt 발현, 인산화된 P38 발현, PLCγ 신호전달, CD40 발현, CD71 발현 및/또는 CD86 발현의 억제를 검출함으로써 측정될 때 항-IgM을 사용한 자극 후 B 세포 활성화를 억제하는 본 발명의 다중특이적 분자의 능력을 측정하는 것을 포함한다.

일례에서, 본 발명의 항체 분자, 예컨대, 다중특이적 항체는 항-IgM 자극된 B 세포에서 CD86 발현의 억제에 대한 5 nM 미만의 IC50을 가진다.

한 실시양태에서, 생체내 어세이, 예컨대, 마우스 종양 모델, 자가면역 질환의 모델, 바이러스-감염된 또는 세균-감염된 설치류 또는 영장류 모델 등을 비롯한 동물 모델이 본 개시의 분자를 시험하는 데 사용될 수 있다.

본원에서 사용된 "융합 단백질"은 또 다른 물질, 예를 들면, 결합 파트너 X 또는 Y(적절한 경우)에 융합된 단백질 성분, 예를 들면, A 또는 B를 포함한다. 한 실시양태에서, 융합 단백질은 재조합 기법에 의해 유전적 구축물로부터 발현된, 예를 들면, 숙주에서 DNA 구축물로부터 발현된 번역 단백질이다.

연쇄 X:Y의 기능은 A와 B의 상승작용적 기능이 실현될 수 있도록 단백질 A와 B를 서로 가까이 유지하는 것이다.

본원에서 사용된 "이종이량체-연쇄"는 2개의 결합 파트너들을 함께 유지하기에 충분한 총 친화성을 가진, 서로 사이의 상호작용(예컨대, 결합)을 형성하는 2개의 상이한 결합 파트너 X 및 Y를 포함하는 연쇄를 지칭한다. 한 실시양태에서, X 및/또는 Y는 동종이량체를 형성하기에 부적합하다.

"이종이량체적으로 테더링된(heterodimerically-tethered)"과 "이종이량체-테더"는 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 한 실시양태에서, 본원에서 사용된 "동종이량체를 형성하기에 부적합한"은 일단 형성되면 X-Y의 이종이량체의 형성이 더 바람직하다는 것, 예를 들면, 안정하다는 것, 예컨대, 열역학적으로 안정하고/하거나 물리학적으로 안정하다는(예를 들면, 응집의 결여에 의해 입증됨) 것을 의미한다.

한 실시양태에서, X-Y 상호작용은 X-X 또는 Y-Y 상호작용보다 더 유리할 수 있다. 이것은 융합 단백질 A-X와 B-Y가 혼합될 때 동종이량체 X-X 또는 Y-Y의 형성을 감소시킨다. 또한, 이것은 동종이량체의 제거를 비교적 단순하게 만들고, 예를 들면, 한 정제 단계, 예컨대, 컬럼 크로마토그래피가 본 개시에 따른 실질적으로 순수한 융합 단백질 및/또는 이중특이적 단백질 복합체를 제공한다.

한 실시양태에서, 결합 파트너들 중 하나(또는 적어도 하나)는 동종이량체를 형성할 수 없고, 예를 들면, 결합 파트너의 아미노산 서열은 동종이량체의 형성을 제거하거나 최소화도록 돌연변이된다.

한 실시양태에서, 결합 파트너들 둘 다는 동종이량체를 형성할 수 없고, 예를 들면, 결합 파트너들 중 하나는 펩티드이고, 다른 한 결합 파트너는 상기 펩티드에 대해 특이적인 V_HH이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자에서 사용된 scFv는 동종이량체를 형성할 수 없다.

본원에서 사용된 "동종이량체를 형성할 수 없는"은 동종이량체를 형성하는 낮은 또는 제로 성향을 의미한다. 본원에서 사용된 "낮은"은 5% 이하, 예컨대, 4%, 3%, 2%, 1% 또는 0.5% 이하의 응집체를 의미한다.

한 실시양태에서, :는 예를 들면, 인력, 예컨대, 반 데르 발스(Van der Waals) 힘, 예컨대, 수소 결합 기반의 결합 상호작용, 및 예를 들면, 항원, 예컨대, 펩티드에 대한 항체 특이성 기반의 정전기적 상호작용이다.

한 실시양태에서, :는 공유 결합이 아니다.

본원에서 사용된 "복합체를 형성한다"는 복합체가 조립되고 융합 단백질들이 함께 유지되는 적절한 조건 하에서 융합 단백질 성분 A-X 및 B-Y가 접촉할 때 충분히 특이적이고 강한, 결합 상호작용 또는 화학반응을 비롯한 상호작용을 의미한다.

본원에서 사용된 "함께 유지되는"은 결합 후에 복합체가 마치 한 분자인 것처럼 취급될 수 있고 많은 경우들에서 단일 분자처럼 거동하고 작용하도록 성분들(융합 단백질들)이 서로 인접하여 유지되는 것을 의미한다. 한 실시양태에서, 유지는 복합체가 본원 개시된 방법에서 사용되기에 적합하게, 즉 적어도 하나의 기능 스크린에서 사용되기에 적합하게 만든다.

한 실시양태에서, 결합 상호작용은 가역적이다.

본원에서 사용된 바와 같이, X 및 Y와 관련될 때 특이성은 상호작용에서 결합 파트너 X와 Y가 서로만을 인식하거나 비-파트너에 비해 서로에 대해 상당히 더 높은 친화성, 예를 들면, 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배 더 높은 친화성을 갖는 경우를 의미한다.

한 실시양태에서, X와 Y 사이의 결합 상호작용은 낮은 해리 상수를 가진다.

낮은 해리 상수의 예로는 1-9x10^-2 s^-1 이하, 예를 들면, 1-9x10^-3 s^-1, 1-9x10^-4 s^-1, 1-9x10^-5 s^-1, 1-9x10^-6 s^-1 또는 1-9x10^-7 s^-1이 있다. 특히 적합한 해리 상수는 1x10^-4 s^-1 이하, 예를 들면, 1x10^-5 s^-1, 1x10^-6 s^-1 또는 1x10^-7 s^-1을 포함한다.

이론에 의해 구속받고자 하는 것은 아니지만, 낮은 해리 상수(해리 속도로서도 지칭됨)는 분자로 하여금 이중특이적 단백질 복합체를 특히 기능 스크리닝 어세이에 유용하게 만들 정도로 충분히 안정하게 한다고 생각된다.

한 실시양태에서, 서로에 대한 X 및 Y의 친화성은 5 nM 이상, 예를 들면, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이상이다.

한 실시양태에서, 서로에 대한 X 및 Y의 친화성은 900 pM 이상, 예컨대, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200, 100 또는 50 pM 이상이다.

또 다른 실시양태에서, 서로에 대한 X 및 Y의 친화성은 10 pM 이상, 예를 들면, 9, 8, 7, 6 또는 5 pM이다.

친화성은 상호작용의 결합 및 해리 속도로부터 계산된 값이다. 본원에서 사용된 용어 "친화성"은 분자(예를 들면, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너(예를 들면, 펩티드) 사이의 비공유 상호작용의 총 합계의 강도를 지칭한다. 그의 결합 파트너에 대한 분자의 친화성은 일반적으로 평형 해리 상수(K_D)로 표시될 수 있다. 친화성은 본원 기재된 방법들, 예컨대, 표준 플라스몬 공명 방법, 특히 비아코어를 비롯한, 당분야에서 공지되어 있는 통상의 방법들에 의해 측정될 수 있다.

한 실시양태에서, 본 개시에 따른 다수의 이중특이적 단백질 복합체들은 동시에 또는 본질적으로 동시에 시험된다.

본원에서 사용된 "동시에"는 샘플들/분자들/복합체들이 동일한 분석, 예를 들면, 동일한 "실행(run)"에서 분석되는 경우를 의미한다.

한 실시양태에서, "동시에"는 신호 출력물이 본질적으로 동일한 시간에 기계에 의해 분석되는 동시적 분석을 의미한다. 이 신호는 수득된 결과를 해석하기 위한 데콘볼루션(deconvolution)을 요구할 수 있다.

유리하게는, 다수의 이중특이적 단백질 복합체들의 시험은 다수의 이중특이적 단백질 복합체들의 보다 효율적인 스크리닝 및 새롭고 흥미로운 관계의 확인을 가능하게 한다. 관심 있는 표적 항원 CD22 및 CD79에 대한 명확히 상이한 가변 영역들은 생물학적 기능에서의 미묘한 뉘앙스에 접근할 수 있게 한다.

한 실시양태에서, 다수의 이중특이적 단백질 복합체들은 상기 정의된 다중체를 사용하고 이를 하나 이상의 기능 어세이로 분석함으로써 시험된다.

본원에서 사용된 용어 "생물학적 기능"은 시험되는 생물학적 물질에 천연적으로 존재하거나 이러한 생물학적 물질의 목적인 활성, 예를 들면, 세포, 단백질 또는 유사한 물질의 천연 활성을 지칭한다. 이상적으로, 상기 기능의 존재는 살아있는 포유동물 세포를 사용하는 어세이를 비롯한 시험관내 기능 어세이를 이용함으로써 시험될 수 있다. 본원에서 사용된 "천연 기능"은 비정상적인 기능, 예컨대, 암과 연관된 기능을 포함한다.

한 실시양태에서, 본 개시에 따른 다중특이적 항체 분자는 신규 또는 상승작용적 기능을 가진다.

본원에서 사용된 용어 "상승작용적 기능"은 본 개시의 이중특이적 단백질 복합체의 제1 단백질 및 제2 단백질이 함께 사용되지 않을 때 관찰되지 않는 생물학적 활성, 또는 이들이 함께 사용되지 않을 때 관찰된 생물학적 활성보다 더 높은 생물학적 활성, 예를 들면, 이중특이적 형태에서만 관찰되는 활성을 지칭한다. 따라서, "상승작용적"은 신규 생물학적 기능을 포함한다.

본원에서 사용된 "신규 생물학적 기능"은 2개 이상의 상승작용적 물질들[단백질 A 및 단백질 B]이 (이중특이적 복합체로서 또는 다른 방식으로) 함께 존재할 때까지 분명하지 않거나 부재하는 기능, 또는 종래 미확인된 기능을 지칭한다.

본원에서 사용된 "더 높은"은 개별 비복합체화된 이중특이적 성분 또는 성분들이 관련 기능 어세이에서 활성(본원에서 새로운 활성 또는 신규 생물학적 기능으로서도 지칭됨)을 갖지 않는 경우 이중특이적 복합체에서 0으로부터의 증가, 즉 약간의 활성을 비롯한 활성의 증가를 의미한다. 본원에서 사용된 "더 높은"은 개별 비복합체화된 이중특이적 성분들 또는 2가 결합 도메인들에 비해 관련 기능 어세이에서 이중특이적 복합체에서 상가적 초과의 기능, 예를 들면, 관련 활성의 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200% 또는 300% 이상의 증가도 포함한다.

한 실시양태에서, 신규 상승작용적 기능은 더 높은 억제 활성이다.

한 실시양태에서, 본 발명의 다중특이적 항체 분자는 단독으로 또는 혼합물로 제공된, CD22에 대한 2가 결합 도메인 및 CD79a에 대한 2가 결합 도메인의 활성의 합계보다 더 높은 억제 활성을 가진다.

한 실시양태에서, 결합 쌍의 제1 결합 파트너 X 및 제2 결합 파트너 Y 중 적어도 하나는 펩티드 및 단백질로부터 독립적으로 선택되고; 예를 들면, 제1 결합 파트너 또는 제2 결합 파트너는 펩티드이다.

적합한 펩티드는 GCN4, Fos/Jun(인간 및 뮤린 Fos는 각각 유니프롯 번호 P01100 및 P01101을 갖고, 인간 및 뮤린 jun은 각각 유니프롯 번호 P05412 및 P05627을 가짐), 인간 인플루엔자 헤마글루티닌(HA), 폴리히스티딘(His), 녹색 형광 단백질(GFP) 및 FLAG를 포함하는 군을 포함한다. 다른 펩티드들도 본 개시에서 사용되기에 적합한 것으로서 고려되고, 특히 적합한 펩티드는 단백질 정제용 친화성 태그인데, 이는 이러한 펩티드가 그들 각각의 결합 파트너에 높은 친화성으로 결합하는 성향을 갖기 때문이다.

본원에서 사용된 용어 "펩티드"는 펩티드 결합에 의해 연결된 아미노산들의 짧은 중합체를 지칭하고, 이때 상기 펩티드는 2개 내지 100개의 아미노산들, 예를 들면, 5개 내지 99개, 예컨대, 6개 내지 98개, 7개 내지 97개, 또는 8개 내지 96개의 아미노산들을 함유한다. 한 실시양태에서, 본 개시에서 사용된 펩티드는 50개 이하의 아미노산 잔기들, 예를 들면, 40개, 30개 또는 10개 이하의 아미노산 잔기들의 아미노산 서열이다. 본 개시에서 사용된 펩티드는 목적에 알맞은 충분한 길이를 갖고, 예를 들면, 펩티드가 링커인 경우, 이 펩티드는 그에 연결되는 단편이 그의 생물학적 기능을 수행할 수 있게 하기에 적합한 길이를 가질 필요가 있고; 대안적으로, 펩티드가 결합 파트너인 경우, 이 펩티드는 또 다른 물질, 예컨대, 항체에 대해 특이적으로 결합할 수 있어야 한다.

한 실시양태에서, 결합 쌍의 다른 결합 파트너(대안적인 제1 또는 제2 결합 파트너)는 단백질이다.

본원에서 사용된 "단백질"은 100개 이상의 아미노산들의 아미노산 서열을 지칭한다. 한 실시양태에서, 본원에서 사용된 "단백질"은 이차 또는 삼차 구조를 갖는 아미노산 서열을 지칭한다.

한 실시양태에서, 이중특이적 단백질 복합체의 제1 단백질 A 및/또는 제2 단백질 B는 항체 또는 항체 단편이다. 이러한 이중특이적 단백질 복합체는 이중특이적 항체 복합체로서 지칭될 수 있다.

한 실시양태에서, 본 개시의 이중특이적 항체 복합체에서 사용된 각각의 항체 또는 단편은 1개의 결합 부위를 포함한다.

융합 단백질(A-X 또는 B-Y)에서 사용된 전장 항체 또는 항체 단편은 단일특이적, 다가 또는 이중특이적일 수 있다.

유리하게는, 2개의 이중특이적 항체들 또는 항체 단편들의 사용은 본 개시의 분자, 예컨대, 본원에 기재된 이중특이적 항체 복합체가 최대 4개의 상이한 항원들에 잠재적으로 특이적이게 할 수 있다(즉, 상기 복합체는 사중특이적일 수 있다). 이것은 친화력(avidity) 유형 효과가 조사될 수 있게 한다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자 또는 이의 성분, 예컨대, 제1 융합 단백질 A-X에서 사용된 항체 또는 항체 단편은 단일특이적 항체 또는 항체 단편, 예를 들면, Fab, Fab', scFv 또는 유사한 물질이고 특히 CD22에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자 또는 이의 성분, 예컨대, 제2 융합 단백질 B-Y에서 사용된 항체 또는 항체 단편은 단일특이적 항체 또는 항체 단편, 예를 들면, Fab, Fab', scFv 또는 유사한 물질이고, 특히 CD79a 및/또는 CD79b에 대해 특이적이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자 또는 이의 성분, 예컨대, 제2 융합 단백질 B-Y에서 사용된 항체 또는 항체 단편은 다가이고, 즉 2개 이상의 결합 도메인들을 가진다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자 또는 이의 성분, 예컨대, 제1 융합 단백질 A-X에서 사용된 항체 또는 항체 단편은 1가이고, 본 개시의 분자 또는 이의 성분, 예컨대, 제2 융합 단백질 B-X에서 사용된 항체 또는 항체 단편은 1가이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자 또는 이의 성분, 예컨대, 제1 융합 단백질 A-X에서 사용된 항체 또는 항체 단편은 1가이고, 본 개시의 분자 또는 이의 성분, 예컨대, 제2 융합 단백질 B-Y에서 사용된 항체 또는 항체 단편은 다가이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자 또는 이의 성분, 예컨대, 제1 융합 단백질 A-X에서 사용된 항체 또는 항체 단편은 다가이고, 본 개시의 분자 또는 이의 성분, 예컨대, 제2 융합 단백질 B-Y에서 사용된 항체 또는 항체 단편은 1가이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자 또는 이의 성분, 예컨대, 제1 융합 단백질 A-X에서 사용된 항체 또는 항체 단편은 다가이고, 본 개시의 분자 또는 이의 성분, 예컨대, 제2 융합 단백질 B-Y에서 사용된 항체 또는 항체 단편은 다가이다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자 또는 이의 성분, 예컨대, 이중특이적 항체 복합체의 제1 항체, 제2 항체, 또는 제1 항체 및 제2 항체 둘 다는 IgG 포맷일 수 있고, 예를 들면, 항-CD22 항체 및/또는 항-CD79 항체는 IgG 포맷으로 제공될 수 있다.

한 실시양태에서, 항체 단편은 단편 항원(Fab) 단편, 단일 쇄 가변 단편(scFv) 및 단일 도메인 항체(sdAb)로 구성된 군으로부터 선택되고, 예컨대, scFv는 제1 융합 단백질(A-X) 또는 제2 융합 단백질(B-Y)에서 사용된다. 유리하게는, 소규모의 scFv는 이중특이적 항체 복합체의 정확한 폴딩을 용이하게 할 수 있다.

한 실시양태에서, 본 개시의 이중특이적 항체 복합체의 제1 항체/단편(A), 제2 항체/단편(B), 또는 제1 항체/단편 및 제2 항체/단편 둘 다가 Fab일 수 있다.

한 실시양태에서, 본 개시의 이중특이적 항체 복합체의 제1 항체/단편, 제2 항체/단편, 또는 제1 항체/단편 및 제2 항체/단편 둘 다가 V_HH이다.

본 개시의 이중특이적 복합체와 관련하여 사용된 "융합 단백질"은 결합 파트너에 부착된 단백질, 예를 들면, 항체 또는 항체 단편을 지칭한다.

편의를 위해, 본 개시의 이중특이적 단백질 복합체는 본원에서 A-X:Y-B로서 지칭된다. 그러나, 본 발명자들의 실험이 결합 파트너 X 및 Y가 본 방법에 악영향을 미치지 않으면서 역전될 수 있다는 것, 즉 A-Y 및 B-X일 수 있다는 것을 시사하기 때문에, 이 명명법은 융합 단백질 A-X 및 B-Y가 어떻게 디자인되는 지를 한정하기 위한 것이 아니다. 따라서, A와 B 및 X와 Y는 본 기술의 설명을 돕기 위해 언급되는 명목상의 표지이다.

본원에서 사용된 "부착된"은 직접적으로 또는 링커, 예컨대, 펩티드 링커(이의 예들은 이하에 논의되어 있음)를 통해 간접적으로 연결된 또는 회합된 상태를 의미한다. "직접적으로 연결된"은 함께 융합된(예를 들면, 펩티드 결합) 또는 화학적으로 접합된 상태를 포함한다.

본원에서 사용된 "결합 파트너"는 결합 쌍의 한 성분 부분을 지칭한다.

한 실시양태에서, 결합 파트너의 친화성은 높고, 5 nM 이상, 예컨대, 900, 800, 700, 600, 500, 400 또는 300 pM 이상이다.

본원에서 사용된 "결합 쌍"은 서로 특이적으로 결합하는 2개의 결합 파트너들을 지칭한다. 결합 쌍의 예는 펩티드와 이에 대해 특이적인 항체 또는 결합 단편, 또는 효소와 리간드, 또는 효소와 이 효소의 억제제를 포함한다.

한 실시양태에서, 제1 결합 파트너(X)는 전장 항체, Fab, Fab', scFv, 펩티드 및 sdAb를 포함하는 군으로부터 선택되고, 이때 sdAb의 예로는 VH 또는 VL 또는 V_HH가 있다.

한 실시양태에서, 제2 파트너(Y)는 전장 항체, Fab, Fab', scFv, 펩티드 및 sdAb를 포함하는 군으로부터 선택되고, 이때 sdAb의 예로는 VH 또는 VL 또는 V_HH가 있다.

한 실시양태에서, A가 항체 또는 이의 단편인 경우, 제1 결합 파트너(X)는 제1 항체 또는 항체 단편의 중쇄 또는 경쇄의 C 말단에 부착되고, 예를 들면, 제1 결합 파트너는 제1 항체 또는 항체 단편의 중쇄의 C 말단에 부착된다.

또 다른 실시양태에서, B가 항체 또는 이의 단편인 경우, 제2 결합 파트너(Y)는 제2 항체 또는 항체 단편의 중쇄 또는 경쇄의 C 말단에 부착되고, 예를 들면, 제2 결합 파트너는 제2 항체 또는 항체 단편의 중쇄의 C 말단에 부착된다.

한 실시양태에서, X는 항체 또는 단편(단백질 A)의 중쇄의 C 말단에 부착되고, Y는 항체 또는 단편(단백질 B)의 C 말단에 부착된다.

한 실시양태에서, X는 링커(예컨대, ASGGGG 또는 ASGGGGSG)를 통해 항체 또는 단편(단백질 A)의 중쇄의 C 말단에 부착되고, Y는 링커(예컨대, ASGGGG 또는 ASGGGGSG)를 통해 항체 또는 단편(단백질 B)의 C 말단에 부착된다.

한 실시양태에서, 제1 또는 제2 결합 파트너(X 또는 Y)는 펩티드이다.

적합한 결합 쌍의 예로는 GCN4(서열번호 247) 또는 이의 변이체, 및 GCN4에 대해 특이적인 scFv인 52SR4(서열번호 249) 또는 이의 변이체가 있을 수 있다.

한 실시양태에서, 제1 결합 파트너(명목상 X)는 GCN4(예를 들면, 서열번호 247로 표시됨) 또는 이의 변이체(예를 들면, His 태그를 갖지 않음)이고, 제2 결합 파트너(명목상 Y)는 GCN4에 대해 특이적인 scFv(예를 들면, 서열번호 249로 표시됨) 또는 이의 변이체이다.

한 실시양태에서, 제1 결합 파트너(명목상 X)는 GCN4에 대해 특이적인 sFv(예를 들면, 서열번호 249로 표시됨) 또는 이의 변이체이고, 제2 결합 파트너(명목상 Y)는 GCN4(예를 들면, 서열번호 247로 표시됨) 또는 이의 변이체이다.

GCN4 변이체는 서열번호 247과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. GCN4 변이체는 서열번호 248의 뉴클레오티드 서열, 또는 엄격한 조건 하에서 서열번호 145와 혼성화하는 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열도 포함한다.

GCN4에 대해 특이적인 적합한 scFv는 52SR4(서열번호 146) 또는 이의 변이체이다. 52SR4의 변이체는 서열번호 250과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 52SR4 변이체는 서열번호 146의 뉴클레오티드 서열, 또는 엄격한 조건 하에서 서열번호 248과 혼성화하는 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열도 포함한다.

본 발명자들은 단일 쇄 항체 52SR4 및 펩티드 GCN4가 본 개시의 이중특이적 단백질 복합체에서 사용되기에 적합한 결합 쌍이라는 것을 발견하였다.

대안적으로, 임의의 적합한 항체/단편 및 항원(예컨대, 펩티드)이 X 및 Y로서 사용될 수 있다.

한 실시양태에서, 제1 결합 파트너(X) 및 제2 결합 파트너(Y)는 단백질이다.

한 실시양태에서, 제1 결합 파트너(X)는 효소 또는 이의 활성 단편이고 제2 결합 파트너(Y)는 리간드이거나, 그 반대의 경우도 가능하다.

한 실시양태에서, 제1 결합 파트너(X)는 효소 또는 이의 활성 단편이고 제2 결합 파트너(Y)는 그 효소의 억제제이거나, 그 반대의 경우도 가능하다.

본원에서 사용된 "활성 단편"은 물질에 대한 전체 아미노산 서열보다 더 짧고 본질적으로 동일한 생물학적 활성 또는 관련 생물학적 활성, 예를 들면, 50% 초과, 예컨대, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 활성을 보유하는 아미노산 단편을 지칭한다.

또 다른 실시양태에서, 제1 결합 파트너 X는 글루타티온(GSH)이고 제2 결합 파트너 Y는 글루타티온-S-트랜스퍼라제(GST)이거나, 그 반대의 경우도 가능하다.

또 다른 실시양태에서, X는 Fos이고 Y는 Jun이거나, 그 반대의 경우도 가능하다.

또 다른 실시양태에서, X는 His이고 Y는 항-His이거나, 그 반대의 경우도 가능하다.

또 다른 실시양태에서, 결합 쌍은 칼모듈린 결합 펩티드이고 Y는 칼모듈린이거나, 그 반대의 경우도 가능하다.

또 다른 실시양태에서, X는 말토스 결합 단백질이고 Y는 항-말토스 결합 단백질 또는 이의 단편이거나, 그 반대의 경우도 가능하다.

다른 효소-리간드 조합물도 결합 파트너에서 사용될 것으로 예상된다. 단백질 정제용으로 당분야에서 공지되어 있는 친화성 태그들은 그들 각각의 결합 파트너에 높은 친화성으로 결합하는 성향을 갖기 때문에 이들도 적합하다.

한 실시양태에서, 제1 또는 제2 결합 파트너(X 또는 Y)는 단백질 또는 펩티드이다.

한 실시양태에서, 제1 융합 단백질 및 제2 융합 단백질은 하나 이상의 펩티드 링커를 포함한다. 상기 링커는 융합 단백질 내의 다양한 위치들에서 도입될 수 있다. 예를 들면, 링커는 결합 파트너와 이에 부착된 단백질 사이에서 도입될 수 있다.

한 실시양태에서, 링커는 펩티드 링커이다.

본원에서 사용된 용어 "펩티드 링커"는 아미노산 서열을 갖는 펩티드를 지칭한다. 다양한 적합한 펩티드 링커들이 당업자에게 공지되어 있을 것이다.

한 실시양태에서, 펩티드 링커는 합성 유래의, 즉 합성 화학 기법에 의해 제조된 펩티드 링커일 수 있다.

한 실시양태에서, 이중특이적 단백질 복합체의 결합 파트너들은 펩티드 링커를 통해 그들 각각의 단백질에 연결된다.

한 실시양태에서, 융합 단백질은 번역 융합체, 즉 융합 단백질의 발현에 사용된 유전적 구축물을 포함하는 숙주 세포에서 발현된 융합 단백질이다.

한 실시양태에서, 융합 단백질은 임의적으로 펩티드 링커를 통해 A를 X에 접합시키거나 B를 Y에 접합시킴으로써 제조된다.

한 실시양태에서, 펩티드 링커는 길이가 50개 이하의 아미노산, 예를 들면, 20개 이하의 아미노산이다.

일반적으로, 융합 단백질을 재조합적으로 발현하는 것이 더 효율적일 것이므로, 숙주 세포에 의해 발현될 수 있는 직접적인 펩티드 결합 또는 펩티드 링커가 유리할 수 있다.

한 실시양태에서, 형성된 복합체는 추가 정제 단계를 요구하지 않는다.

한 실시양태에서, 형성된 복합체는 하나의 정제 단계, 예를 들면, 컬럼 크로마토그래피를 요구한다.

한 실시양태에서, 본 방법은 예를 들면, 본 개시에 따른 융합 단백질의 발현 후 적어도 하나의 정제 단계를 추가로 포함한다.

본원에서 사용된 "기능 어세이"는 어세이 조건에 따라 단백질 복합체, 항체 복합체 또는 항체들의 혼합물의 하나 이상의 원하는 성질 또는 활성을 확인하는 데 이용될 수 있는 어세이이다. 적합한 기능 어세이는 결합 어세이, 아폽토시스 어세이, 항체 의존적 세포 매개 세포독성(ADCC) 어세이, 보체 의존적 세포독성(CDC) 어세이, 세포 생장 또는 증식의 억제(세포증식억제 효과) 어세이, 세포 사멸(세포독성 효과) 어세이, 세포 신호전달 어세이, 사이토카인 생성 어세이, 항체 생성 및 이소타입 전환, 및 세포 분화 어세이일 수 있다. 한 실시양태에서, 생체내 어세이, 예컨대, 마우스 종양 모델, 자가면역 질환의 모델, 바이러스-감염된 또는 세균-감염된 설치류 또는 영장류 모델 등을 비롯한 동물 모델이 본 개시의 분자를 시험하는 데 사용될 수 있다.

이중특이적 항체 복합체와 관련하여, 본 개시에 따른 이중특이적 항체 복합체의 효능은 당분야에서 통상의 기술을 갖는 자에게 일반적으로 공지되어 있는 방법에 의해 이러한 모델들에서 개별 항체 또는 항체들(또는 단편들)의 혼합물과 비교될 수 있다.

기능 어세이는 결과의 신뢰성을 향상시키기 위해 특정 이중특이적 항체 복합체의 상이한 샘플들을 사용하거나 사용하지 않으면서 필요하다면 다회 반복될 수 있다. 당업자에게 공지되어 있는 다양한 통계학적 검증들이 통계학적으로 유의한 결과를 확인함으로써 생물학적 기능을 갖는 이중특이적 항체 복합체를 확인하는 데, 특히 본 발명의 다중특이적 분자에서 사용될 최적 가변 영역 쌍을 확인하는 데 이용될 수 있다.

조성물 및 의학적 용도

한 양태에서, 본 개시에 따른 분자 또는 성분, 예컨대, 융합 단백질, 이종이량체적으로 테더링된 이중특이적 단백질 복합체, 융합 단백질 또는 상기 이중특이적 단백질 복합체를 비롯한 본 발명의 분자를 포함하는 조성물, 또는 본원에 정의된 다중체, 어레이 또는 라이브러리가 제공된다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자, 예를 들면, 본원에 기재된 항체, 다중특이적 분자 및 이중특이적 단백질 복합체는 치료적 적용에 적합하고 질환을 치료하는 신규 요법을 제공할 수 있다. 따라서, 추가 양태에서, 치료법에 사용하기 위한 본 개시의 항체 분자, 예를 들면, 전술되어 있는 이중특이적 단백질 복합체가 제공된다. 본원에 기재된 이중특이적 단백질 복합체를 비롯한 본 개시의 분자는 다양한 질환들, 예컨대, 암의 치료에 적합하다.

본원에 기재된 다중특이적 분자 및 이중특이적 단백질 복합체를 비롯한 본 개시의 항체 분자는 다양한 자가면역 질환들에서 면역 및 자가면역 반응을 조절하기 위해 B 세포 기능을 억제하는 데에도 특히 적합하다.

따라서, 본 개시는 치료 유효량의 본 개시의 분자, 예를 들면, 본 개시의 다중특이적 분자 또는 이중특이적 단백질 복합체를 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 질환을 치료하는 방법까지 확장된다.

한 양태에서, 하나 이상의 본 개시의 분자, 예를 들면, 본 개시의 다중특이적 분자를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.

약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제를 비롯한 다양한 상이한 성분들이 상기 조성물에 포함될 수 있다. 임의적으로, 상기 조성물은 본 발명의 다중특이적 분자 집단의 특성을 변경시킴으로써, 예를 들면, 항체의 기능을 감소시킬 수 있고/있거나, 안정화시킬 수 있고/있거나, 지연시킬 수 있고/있거나, 조절할 수 있고/있거나 활성화시킬 수 있는 추가 분자를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 고체 또는 액체 형태로 존재할 수 있고, 특히 분말, 정제, 용액 또는 에어로졸의 형태로 존재할 수 있다.

본 발명은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 본 발명의 항체 분자 또는 다중특이적 분자를 포함하는 약학 또는 진단 조성물도 제공한다. 따라서, 병리학적 상태 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, 또는 이러한 치료용 의약의 제조를 위한 본 발명의 다중특이적 분자의 용도가 제공된다.

병리학적 상태

병리학적 상태 또는 장애는 예를 들면, 감염(바이러스, 세균, 진균 및 기생충), 감염과 관련된 내독성 쇼크, 관절염, 예컨대, 류마티스성 관절염, 천식, 예컨대, 중증 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 골반 염증성 질환, 알츠하이머병, 염증성 장 질환, 크론병, 궤양성 결장염, 페이로니병(Peyronie's Disease), 복강 질환, 담낭 질환, 필로니달병(Pilonidal disease), 복막염, 건선, 혈관염, 수술 유착, 졸중, I형 당뇨병, 라임병, 수막뇌염, 자가면역 포도막염, 중추 및 말초 신경계의 면역 관련 염증성 장애, 예컨대, 다발성 경화증, 루푸스(예컨대, 전신 홍반 루푸스) 및 귈랑-바레(Guillain-Barr) 증후군, 아토피성 피부염, 자가면역 간염, 섬유화 폐포염, 그레이브스병, IgA 신장병증, 특발성 저혈소판자색반, 메니에르병(Meniere's disease), 천포창, 원발성 담관 간경화증, 사르코이드증, 경피증, 베게너 육아종증, 다른 자가면역 장애, 췌장염, 외상(수술), 이식편-대-숙주 질환, 이식 거부, 허혈성 질환, 예컨대, 심근경색 및 죽상동맥경화증을 포함하는 심장 질환, 혈관내 응고, 골 재흡수, 골다공증, 골관절염, 치주염, 위산감소증, 및 유방암, 폐암, 위암, 난소암, 간세포암, 결장암, 췌장암, 식도암, 두경부암, 신장암, 특히 신장 세포 암종, 전립선암, 간암, 흑색종, 육종, 골수종, 신경모세포종, 태반 융모막암종, 자궁경부암 및 갑상선암, 및 이들의 전이성 형태를 포함하는 암으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.

한 실시양태에서, 장애는 암, 예를 들면, 림프구성 백혈병, 예컨대, 급성 림프모구성 백혈병 또는 만성 림프구성 백혈병을 비롯한 백혈병; 또는 골수성 백혈병, 예컨대, 급성 골수성 백혈병 또는 만성 골수성 백혈병이다.

한 실시양태에서, 자가면역 질환은 하기 질환들을 포함한다: 급성 파종 뇌척수염(adem), 급성 괴사 출혈성 백색질뇌염, 애디슨병(Addison's disease), 부신 기능저하, 저코르티솔증, 원혈 탈모증, 아밀로이드증, 강직성 척추염, 척추관절염, 스트룸펠-마리병(Strumpell-marie disease), 항-GBM/항-TBM 신염, 항인지질 증후군(aps), 자가면역 혈관부종, 자가면역 재생불량성 빈혈, 자가면역 자율신경기능이상, 자가면역 간염, 자가면역 고지질혈증, 자가면역 면역결핍, 자가면역 내이 질환(AIED), 자가면역 림프증식성 증후군(ALPS), 커낼-스미쓰(Canale-Smith) 증후군, 자가면역 심근염, 자가면역 난소염, 자가면역 췌장염(AIP), 자가면역 다선성 증후군(I형, II형 및 III형), 자가면역 망막병증(AR), 자가면역 저혈소판자색반(ATP), 자가면역 갑상선 질환, 자가면역 두드러기, 축삭/신경 신경병증, 발로병(balo disease), 베체트병(Behcet's disease), 수포성 유사천포창, 심근병증, 캐슬맨병(Castleman disease), 복강 질환, 샤가스병(chagas disease), 만성 염증성 탈수초 다발신경병증(CIDP), 만성 재발성 다초점성 골수염(CRMO), 처그-스트라우스(Churg-Strauss) 증후군, 반흔성 유사천포창/양성 점막성 유사천포창(CP), 크론병, 염증성 장 질환, 결장염, 장염, 회장염, 코간스(Cogans) 증후군, 한랭응집소 질환, 선천성 심장 차단, 콕사키(Coxsackie) 심근염, 크레스트병(crest disease), 한랭글로불린혈증, 탈수초 신경병증, 헤르페스모양 피부염, 듀링병(Duhring's disease), 피부근염, I형 당뇨병, 원판상 홍반 루푸스(DLE), 드레슬러(Dressler's) 증후군, 자궁내막증, 수포성 표피박리증(EB) 및 후천성 EB(EBA), 호산구성 위장염, 식도염, 호산구성 근막염, 슐만(schulman's) 증후군, 결절성 홍반, 실험 알레르기성 뇌척수염, 에반스(Evans) 증후군, 섬유화 폐포염, 거대 세포 동맥염(측두 동맥염), 거대 세포 심근염, 사구체신염(비증식성: 국소 분절 사구체경화증 및 막 사구체신염, 증식성: IgA 신장병증), 굿파스처(goodpasture's) 증후군, 다발혈관염을 갖는 육아종증(GPA)(이전에 베게너 육아종증으로서 지칭됨), 그레이브스병(Graves' disease), 귈랑-바레 증후군, 밀러 피셔(Miller Fisher) 증후군, 급성 모터 축삭 신경병증, 급성 모터 감각 축삭 신경병증, 급성 범자율신경 신경병증, 빅커스태프(Bickerstaff's) 뇌간 뇌염, 하시모토(Hashimoto's) 뇌염, 하시모토 갑상선염, 용혈성 빈혈, 헤노흐-쇤라인(Henoch-Schonlein) 자색반, 임신 포진, 저감마글로불린혈증, 특발성 폐 섬유증, 특발성 저혈소판자색반(ITP), IgA 신장병증(IGAN), 버거(berger's) 증후군, 후두염동반성 사구체신염, IgA 천포창, IgG4 관련 경화 질환, 면역-조절된 불임, 봉입체(inclusion body) 근염, 인슐린 의존성 진성 당뇨병, 간질 방광염, 이삭(Isaac's) 증후군, 신경근긴장증, 소아 관절염, 소아 근염, 가와사키(Kawasaki) 증후군, 램버트-이튼(Lambert-Eaton) 증후군, 백혈구파괴성 혈관염, 편평태선, 경화성 태선, 목질 결막염, 선형 IgA 피부병(LAD), 유사천포창, 루푸스(SLE), 라임병, 메니에르병, 현미경적 다발혈관염(MPA), 혼합된 결합 조직 질환(MCTD), 단일클론 감마병증, 무렌(Mooren's) 궤양, 무샤-하버만병(Mucha-Habermann disease), 다발성 경화증, 중증 근무력증, 근염, 기면증, 시신경척수염(devic's), 신경근긴장증, 이삭 증후군(후천성, 부신생물성, 유전성), 호중구감소증, 눈 반흔성 유사천포창, 시신경염, 난소염, 안구간대경련-근간대경련 증후군, 고환염, 재발성 류마티즘, 판다스(pandas)(스트렙토코커스와 관련된 소아 자가면역 신경정신병학적 장애), 부신생물성 자가면역 다발장기 증후군(PAMS), 부신생물성 소뇌 변성, 부신생물성 천포창(PNP), 발작성 야간 혈색소뇨증(PNH), 패리 롬버그(Parry Romberg) 증후군, 파소네이지-터너(Parsonnage-Turner) 증후군, 평면부염(주변 포도막염), 임신 유사천포창(PG), 심상성 천포창(PV), 낙엽상 천포창(PF), 말초 신경병증, 혈관주변 뇌척수염, 악성 빈혈, POEMS 증후군, 결절성 다발동맥염(PAN), 류마티스성 다발근육통, 다발근염, 심근경색후 증후군, 심막절개후 증후군, 프로게스테론 피부염, 원발성 담관 간경화증, 하노트(Hanot) 증후군, 원발성 경화 담관염(PSC), 경화 담관염, 건선, 건선성 관절염, 괴저성 농피증, 순수 적혈구 무형성증, 라스무센(Rasmussen's) 뇌염, 만성 국소 뇌염(CFE), 레이노(Raynauds) 현상, 반응성 관절염, 레이터(Reiter's) 증후군, 레코버린(recoverin) 관련 망막병증(RAR), 반사 교감신경 이영양증, 재발성 다발연골염, 하지불안 증후군, 후복막 섬유증, 류마티스 열, 류마티스성 관절염, 사르코이드증, 슈미츠(Schmidt) 증후군, 공막염, 경피증, 전신 경화증, 쇼그렌 증후군, 정자 및 고환 자가면역, 강직 사람/인간 증후군, 아급성 세균성 심내막염(SBE), 수삭(Susac's) 증후군, 교감신경성 안염, 다카야스(Takayasu's) 동맥염, 측두 동맥염/거대 세포 동맥염, 폐색성 혈전혈관염, 부에르거병(Buerger's disease), 저혈소판자색반(TTP), 톨로사-헌트(Tolosa-Hunt) 증후군, 횡단 척수염, 궤양성 결장염, 미분화된 결합 조직 질환(UCTD), 포도막염, 류마티스성 다발근육통, 다카야스 동맥염, 측두 동맥염, 부에르거병, 피부 혈관염, 가와사키병, 결절성 다발동맥염, 베체트 증후군, 처그-스트라우스 증후군, 피부 혈관염, 헤노흐-쇤라인 자색반, 현미경적 다발혈관염, 베게너 육아종증, 골퍼(golfer's) 혈관염, 대소수포성 피부병, 및 비틸리고베게너(Vitiligowegener's) 육아종증(현재 다발혈관염을 갖는 육아종증(GPA)으로서 지칭됨).

한 실시양태에서, 자가면역 질환은 ANCA 혈관염, IgA 신장병증(버거병), 심상성 천포창/수포성 유사천포창, ITP, 원발성 담관 간경화증, 자가면역 갑상선염(그레이브스병), 하시모토병, 루푸스 신염, 막 사구체신염(또는 막 신장병증), APS, 중중 근무력증, 시신경척수염, 원발성 쇼그렌 증후군, 자가면역 호중구감소증, 자가면역 췌장염, 피부근염, 자가면역 포도막염, 자가면역 망막병증, 베체트병, IPF, 전신 경화증, 간 섬유증, 자가면역 간염, 원발성 경화 담관염, 백반증, 굿파스처 증후군, 폐 폐포 단백질증, 만성 자가면역 두드러기, 건선, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 축삭 척추관절염, 이식(GvHD를 포함함), 천식, COPD, 거대 세포 동맥염, 불응성 자가면역 혈구감소증, 에반스 증후군(자가면역 용혈성 빈혈), I형 당뇨병, 사르코이드증, 다발근염, 궤양성 결장염, 크론병, 복강 질환, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 국소 분절 사구체경화증, 만성 라임병(라임 보렐리아증), 편평태선, 강직 사람 증후군, 확장성 심근병증, 자가면역 (림프구성) 난소염, 후천성 수포성 표피박리증, 자가면역 위축성 위염, 악성 빈혈, 아토피성 피부염, 죽상동맥경화증, 다발성 경화증, 라스무센 뇌염, 귈랑-바레 증후군, 후천성 신경근긴장증 및 졸중을 포함하거나 이들로 구성된 군으로부터 선택된다.

한 실시양태에서, 장애는 암, 예를 들면, 백혈병, 예를 들면, 림프구성 백혈병, 예컨대, 급성 림프모구성 백혈병 또는 만성 림프구성 백혈병; 골수성 백혈병, 예컨대, 급성 골수성 백혈병 또는 만성 골수성 백혈병; 또는 림프종, 예컨대, 미만성 거대 B 세포 림프종, 또는 호지킨 또는 비-호지킨 림프종이다.

본 발명은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 본 개시의 분자, 예컨대, 본원에 기재된 다중특이적 분자를 포함하는 약학 또는 진단 조성물도 제공한다. 따라서, 치료 및 의약의 제조에 사용하기 위한 본 개시의 분자, 예컨대, 본원에 기재된 다중특이적 분자의 용도가 제공된다.

통상적으로 상기 조성물은 일반적으로 약학적으로 허용가능한 담체를 포함할 멸균 약학 조성물의 부분으로서 공급될 것이다. 본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 보조제를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 본 발명의 다중특이적 분자를 첨가하고 혼합하는 단계를 포함하는, 약학 또는 진단 조성물을 제조하는 방법도 제공한다.

본원에서 사용된 용어 "약학적으로 허용가능한 부형제"는 본 개시의 조성물의 원하는 특성을 향상시키기 위한 약학적으로 허용가능한 제제화 담체, 용액 또는 첨가제를 지칭한다. 부형제는 당분야에서 잘 알려져 있고 완충제(예를 들면, 구연산염 완충제, 인산염 완충제, 아세트산염 완충제 및 중탄산염 완충제), 아미노산, 우레아, 알코올, 아스코르브산, 인지질, 단백질(예를 들면, 혈청 알부민), EDTA, 염화나트륨, 리포좀, 만니톨, 소르비톨 및 글리세롤을 포함한다. 용액 또는 현탁액은 리포좀 또는 생분해가능한 마이크로스피어 내에 캡슐화될 수 있다. 제제는 일반적으로 멸균 제조 과정을 이용함으로써 실질적으로 멸균 형태로 제공될 것이다.

이것은 제제를 위해 사용되는 완충된 용매 용액을 제조하고 여과로 멸균하는 단계, 항체를 멸균 완충된 용매 용액에 무균 현탁하는 단계, 및 당분야에서 통상의 기술을 갖는 자에게 익숙한 방법으로 제제를 멸균 용기 내에 분배하는 단계를 포함할 수 있다.

약학적으로 허용가능한 담체는 그 자체가 조성물을 제공받는 개체에게 유해한 항체의 생성을 유도하지 않아야 하고 독성을 나타내지 않아야 한다. 적합한 담체는 느리게 대사되는 큰 거대분자, 예컨대, 단백질, 폴리펩티드, 리포좀, 폴리사카라이드, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 중합체성 아미노산, 아미노산 공중합체 및 불활성 바이러스 입자일 수 있다.

약학적으로 허용가능한 염, 예를 들면, 무기산 염, 예컨대, 염화수소산염, 브롬화수소산염, 인산염 및 황산염, 또는 유기산의 염, 예컨대, 아세트산염, 프로피온산염, 말론산염 및 벤조산염이 사용될 수 있다.

치료 조성물의 약학적으로 허용가능한 담체는 액체, 예컨대, 물, 식염수, 글리세롤 및 에탄올을 추가로 함유할 수 있다. 이러한 담체는 약학 조성물이 환자에 의한 섭취를 위해 정제, 환제, 당의정, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리 및 현탁액으로서 제제화될 수 있게 한다.

본 개시의 분자, 예컨대, 본원에 기재된 다중특이적 분자는 예를 들면, 용액 또는 현탁액의 형태로 용매에 분산되어 전달될 수 있다. 상기 분자는 적절한 생리학적 용액, 예를 들면, 생리학적 식염수, 약학적으로 허용가능한 용매 또는 완충된 용액에 현탁될 수 있다. 당분야에서 공지되어 있는 완충된 용액은 약 4.0 내지 5.0의 pH를 달성하도록 물 1 ㎖당 0.05 mg 내지 0.15 mg의 에데트산이나트륨, 8.0 mg 내지 9.0 mg의 NaCl, 0.15 mg 내지 0.25 mg의 폴리소르베이트, 0.25 mg 내지 0.30 mg의 무수 시트르산, 및 0.45 mg 내지 0.55 mg의 구연산나트륨을 함유할 수 있다. 상기 언급된 바와 같이, 현탁액은 예를 들면, 동결건조된 항체로부터 제조될 수 있다.

약학적으로 허용가능한 담체의 철저한 논의는 문헌(Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company, N.J. 1991))에서 입수가능하다.

본원에서 사용된 용어 "치료 유효량"은 표적화된 질환 또는 병태를 치료하거나, 완화시키거나 예방하기 위해, 또는 검출가능한 치료 또는 예방 효과를 나타내기 위해 필요한 치료제의 양을 지칭한다. 임의의 항체에 대한 치료 유효량은 세포 배양 어세이 또는 동물 모델, 통상적으로 설치류, 토끼, 개, 돼지 또는 영장류에서 먼저 추정될 수 있다. 동물 모델은 투여의 적절한 농도 범위 및 경로를 결정하는 데 이용될 수도 있다. 그 다음, 이러한 정보는 인간에게의 투여에 유용한 용량 및 경로를 결정하는 데 이용될 수 있다.

인간 대상체를 위한 정확한 치료 유효량은 질환 상태의 중증도, 대상체의 일반적인 건강, 대상체의 연령, 체중 및 성별, 식습관, 투여의 시간 및 빈도, 약물 조합(들), 반응 민감성 및 치료법에 대한 내성/반응에 의존할 것이다. 이 양은 상용적인 실험에 의해 결정될 수 있고 임상의의 판단 내에 있다. 일반적으로, 치료 유효량은 0.01 mg/kg 내지 50 mg/kg, 예를 들면, 0.1 mg/kg 내지 20 mg/kg일 것이다. 대안적으로, 용량은 하루에 1 내지 500 mg, 예컨대, 하루에 10 내지 100, 200, 300 또는 400 mg일 수 있다. 약학 조성물은 소정의 양의 본 발명의 활성 물질을 함유하는 단위 제형으로 편리하게 제공될 수 있다.

조성물은 환자에게 개별적으로 투여될 수 있거나, 다른 물질, 약물 또는 호르몬과 함께(예를 들면, 동시에, 순차적으로 또는 별도로) 투여될 수 있다.

본 개시의 다중특이적 분자가 투여되는 용량은 치료될 병태의 성질, 존재하는 염증의 정도, 및 항체 분자가 예방적으로 사용되는 것인지 아니면 기존 병태를 치료하기 위해 사용되는 것인지의 여부에 의존한다.

용량의 빈도는 다중특이적 분자의 반감기 및 그의 효과의 지속시간에 의존할 것이다. 항체 분자가 짧은 반감기(예를 들면, 2시간 내지 10시간)를 갖는 경우, 하루에 하나 이상의 용량을 제공할 필요가 있을 수 있다. 대안적으로, 다중특이적 분자가 긴 반감기(예를 들면, 2일 내지 15일)를 갖는 경우, 단지 하루에 1회, 주마다 1회 또는 심지어 1개월 또는 2개월마다 1회 용량을 제공할 필요가 있을 수 있다.

본 개시에서, 최종 제제의 pH는 다중특이적 분자의 등전점의 값과 유사하지 않고, 상기 제제의 pH가 7인 경우, 8 내지 9의 pI 또는 이보다 더 높은 pI가 적절할 수 있다. 이론에 의해 구속받고자 하는 것은 아니지만, 이것은 궁극적으로 개선된 안정성을 갖는 최종 제제를 제공할 수 있다고, 예를 들면, 항체 또는 단편이 용액에 남아있다고 생각된다.

본 발명의 약학 조성물은 경구, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수내, 경막내, 심실내, 경진피, 경피(예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO98/20734호 참조), 피하, 복강내, 코내, 장, 국소, 설하, 질내 또는 직장 경로를 포함하나 이들로 한정되지 않는 임의의 수의 경로들에 의해 투여될 수 있다. 하이포스프레이(Hyposprays)도 본 발명의 약학 조성물을 투여하는 데 사용될 수 있다.

조성물의 직접적인 전달은 일반적으로 피하, 복강내, 정맥내 또는 근육내 주사에 의해 달성될 것이거나, 조직의 사이질 공간으로 전달될 것이다. 조성물은 관심 있는 특정 조직 내로 투여될 수도 있다. 용량 치료는 단회 용량 일정 또는 다회 용량 일정일 수 있다.

생성물이 주사 또는 주입을 위한 생성물인 경우, 상기 생성물은 유성 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액 또는 에멀젼의 형태를 취할 수 있고 제제화제, 예컨대, 현탁제, 보존제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 대안적으로, 다중특이적 분자는 사용 전에 적절한 멸균 액체에 의해 재구성될 건조된 형태로 존재할 수 있다. 조성물이 위장관을 이용하는 경로에 의해 투여되어야 하는 경우, 상기 조성물은 항체를 분해로부터 보호하되, 일단 위장관으로부터 흡수되면 이중특이적 단백질 복합체를 방출하는 물질을 함유할 필요가 있을 것이다.

본 개시에 따른 분무가능한 제제는 예를 들면, 포일 외피로 포장된 단회 용량 유닛(예를 들면, 밀봉된 플라스틱 용기 또는 바이알)으로서 제공될 수 있다. 각각의 바이알은 일정 부피, 예를 들면, 2 ㎖의 용매/용액 완충제에 유닛 용량을 함유한다.

본원에서 사용된 용어 "변이체"는 상응하는 야생형 펩티드 또는 단백질의 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열에 비해 적어도 하나의 아미노산 서열 또는 뉴클레오티드 서열 변경을 함유하는 펩티드 또는 단백질을 지칭한다. 변이체는 상응하는 야생형 펩티드 또는 단백질에 대한 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 포함할 수 있다. 그러나, 변이체가 그의 상응하는 야생형 펩티드 또는 단백질과 실질적으로 유사한 기능을 나타내는 한, 변이체는 80% 미만의 서열 동일성을 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 본 개시의 구축물은 적어도 삼중특이적이다. 이 상황에서, 추가 특이성은 임의의 관심 있는 항원, 예를 들면, 반감기를 연장시키기 위한 항원, 예컨대, 알부민 또는 Fc 신생아 수용체(FcRn); 이펙터 기능, 예컨대, Fc 수용체 또는 보조자극 분자를 활성화시키거나 억제하기 위한 항원; 조직 또는 세포 표적화 항원; 또는 혈액/뇌 장벽(BBB) 전달을 보조하기 위한 항원, 예컨대, 트랜스페린 수용체 또는 LRP1에 대해 유도될 수 있다.

본 개시는 특정 항원 특이성을 갖는 상기 신규 포맷을 포함하는 조성물, 예컨대, 약학 조성물까지도 확장된다.

추가 양태에서, 본 개시는 치료에 있어서 상기 포맷 및 상기 조성물의 용도를 포함한다.

본 발명은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 본 발명의 항체 분자 또는 다중특이적 분자를 첨가하고 혼합하는 단계를 포함하는, 약학 또는 진단 조성물을 제조하는 방법도 제공한다.

항체 분자 또는 다중특이적 분자는 약학 또는 진단 조성물에서 유일한 활성 성분일 수 있거나, 다른 항체 성분 또는 비-항체 성분, 예컨대, 스테로이드 또는 다른 약물 분자를 비롯한 다른 활성 성분을 동반할 수 있다.

약학 조성물은 적합하게는 치료 유효량의 본 발명의 항체를 포함한다. 본원에서 사용된 용어 "치료 유효량"은 표적화된 질환 또는 상태를 치료하거나, 완화시키거나 예방하기 위해, 또는 검출가능한 치료 또는 예방 효과를 나타내기 위해 필요한 치료제의 양을 지칭한다. 임의의 항체에 대한 치료 유효량은 세포 배양 어세이 또는 동물 모델, 통상적으로 설치류, 토끼, 개, 돼지 또는 영장류에서 먼저 추정될 수 있다. 동물 모델은 투여의 적절한 농도 범위 및 경로를 결정하는 데 이용될 수도 있다. 그 다음, 이러한 정보는 인간에게의 투여에 유용한 용량 및 경로를 결정하는 데 이용될 수 있다.

인간 대상체를 위한 정확한 치료 유효량은 질환 상태의 중증도, 대상체의 일반적인 건강, 대상체의 연령, 체중 및 성별, 식습관, 투여의 시간 및 빈도, 약물 조합(들), 반응 민감성 및 치료법에 대한 내성/반응에 의존할 것이다. 이 양은 상용적인 실험에 의해 결정될 수 있고 임상의의 판단 내에 있다. 일반적으로, 치료 유효량은 0.01 mg/kg 내지 500 mg/kg, 예를 들면, 0.1 mg/kg 내지 200 mg/kg, 예컨대, 100 mg/kg일 것이다.

약학 조성물은 용량당 소정의 양의 본 발명의 활성 물질을 함유하는 단위 제형으로 편리하게 제공될 수 있다.

본원에서 사용된 "물질"은 투여될 때 생리학적 효과를 갖는 물질을 지칭한다.

본원에서 사용된 "약물"은 치료 용량에서 적절한 생리학적 효과를 갖는 화학 물질을 지칭한다.

한 실시양태에서, 본 개시에 따른 항체 또는 단편은 면역억제 요법, 예컨대, 스테로이드, 특히 프레드니손과 함께 사용된다.

한 실시양태에서, 본 개시에 따른 항체 또는 단편은 리툭시맙 또는 다른 B 세포 요법과 함께 사용된다.

한 실시양태에서, 본 개시에 따른 항체 또는 단편은 임의의 B 세포 또는 T 세포 조절제 또는 면역조절제와 함께 사용된다. 예로는 메토트렉세이트, 마이크로페니올레이트 및 아자티오프린이 있다.

본 발명의 항체 분자가 투여되는 용량은 치료될 병태의 성질, 존재하는 염증의 정도, 및 항체 분자가 예방적으로 사용되는 것인지 아니면 기존 상태를 치료하기 위해 사용되는 것인지의 여부에 의존한다.

용량의 빈도는 항체 분자의 반감기 및 그의 효과의 지속시간에 의존할 것이다. 항체 분자가 짧은 반감기(예를 들면, 2시간 내지 10시간)를 갖는 경우, 하루에 하나 이상의 용량을 제공할 필요가 있을 수 있다. 대안적으로, 항체 분자가 긴 반감기(예를 들면, 2일 내지 15일) 및/또는 긴 지속 약력학(PD) 프로파일을 갖는 경우, 단지 하루에 1회, 주마다 1회 또는 심지어 1개월 또는 2개월마다 1회 용량을 제공할 필요가 있을 수 있다.

한 실시양태에서, 용량은 격주마다, 즉 한 달에 2회 전달된다.

한 실시양태에서, 용량은 추가 용량의 투여 전에 항-약물(이 경우 항-항체) 반응이 약해지도록 간격을 두고 투여된다.

본원에서 사용된 "반감기"는 순환계, 예를 들면, 혈청/혈장에서의 분자의 지속시간을 지칭하기 위한 것이다.

본원에서 사용된 "약력학"은 본 개시에 따른 분자의 생물학적 작용의 프로파일 및 특히 지속시간을 지칭한다.

치료 조성물의 약학적으로 허용가능한 담체는 액체, 예컨대, 물, 식염수, 글리세롤 및 에탄올을 추가로 함유할 수 있다. 추가로, 보조 물질, 예컨대, 습윤화제, 유화제 또는 pH 완충 물질이 이러한 조성물에 존재할 수 있다. 이러한 담체는 약학 조성물이 환자에 의한 섭취를 위해 정제, 환제, 당의정, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리 및 현탁액으로서 제제화될 수 있게 한다.

투여에 적합한 제형은 비경구 투여, 예를 들면, 주사 또는 주입, 예를 들면, 볼루스 주사 또는 연속 주입에 의한 투여에 적합한 제형을 포함한다. 생성물이 주사 또는 주입을 위한 생성물인 경우, 상기 생성물은 유성 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액 또는 에멀젼의 형태를 취할 수 있고 제제화제, 예컨대, 현탁제, 보존제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 대안적으로, 항체 분자는 사용 전에 적절한 멸균 액체에 의해 재구성될 건조된 형태로 존재할 수 있다.

일단 제제화되면, 본 발명의 조성물은 대상체에게 직접적으로 투여될 수 있다. 치료될 대상체는 동물일 수 있다. 그러나, 하나 이상의 실시양태에서, 조성물은 인간 대상체에게 투여되도록 개조된다.

적합하게는, 본 개시에 따른 제제에서 최종 제제의 pH는 항체 또는 단편의 등전점의 값과 유사하지 않고, 예를 들면, 단백질의 pI가 8 내지 9의 범위 내에 있거나 이보다 더 높은 경우, 7의 제제 pH가 적절할 수 있다. 이론에 의해 구속받고자 하는 것은 아니지만, 이것은 궁극적으로 개선된 안정성을 갖는 최종 제제를 제공할 수 있다고, 예를 들면, 항체 또는 단편이 용액에 남아있다고 생각된다.

일례에서, 4.0 내지 7.0 범위 내의 pH에서 약학 제제는 1 내지 200 mg/㎖의 본 개시에 따른 항체 분자, 1 내지 100 mM의 완충제, 0.001% 내지 1%의 계면활성제, a) 10 내지 500 mM의 안정화제, b) 10 내지 500 mM의 안정화제 및 5 내지 500 mM의 긴장성 물질, 또는 c) 5 내지 500 mM의 긴장성 물질을 포함한다.

본 발명의 약학 조성물은 경구, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수내, 경막내, 심실내, 경진피, 경피(예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO98/20734호 참조), 피하, 복강내, 코내, 장, 국소, 설하, 질내 또는 직장 경로를 포함하나 이들로 한정되지 않는 임의의 수의 경로들에 의해 투여될 수 있다. 하이포스프레이도 본 발명의 약학 조성물을 투여하는 데 사용될 수 있다. 전형적으로, 치료 조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로서 주사가능한 조성물로서 제조될 수 있다. 주사 전에 액체 비히클 중의 용액 또는 현탁액에 적합한 고체 제형도 제조될 수 있다.

조성물의 직접적인 전달은 일반적으로 피하, 복강내, 정맥내 또는 근육내 주사에 의해 달성될 것이거나, 조직의 사이질 공간으로 전달될 것이다. 조성물은 병변 내로 투여될 수도 있다. 용량 치료는 단회 용량 일정 또는 다회 용량 일정일 수 있다.

조성물 중의 활성 성분은 항체 분자일 것임이 인식될 것이다. 따라서, 상기 활성 성분은 위장관에서의 분해에 민감할 것이다. 따라서, 조성물이 위장관을 이용하는 경로에 의해 투여되어야 하는 경우, 상기 조성물은 항체를 분해로부터 보호하되, 일단 위장관으로부터 흡수되면 항체를 방출하는 물질을 함유할 필요가 있을 것이다.

한 실시양태에서, 제제는 흡입을 비롯한 국소 투여용 제제로서 제공된다.

적합한 흡입가능한 제제는 흡입가능한 분말, 추진제 기체를 함유하는 계량 에어로졸 또는 추진제 기체를 갖지 않는 흡입가능한 용액을 포함한다. 활성 물질을 함유하는 본 개시에 따른 흡입가능한 분말은 상기 언급된 활성 물질만으로 구성될 수 있거나, 상기 언급된 활성 물질과 생리학적으로 허용가능한 부형제의 혼합물로 구성될 수 있다.

이들 흡입가능한 분말은 모노사카라이드(예를 들면, 글루코스 또는 아라비노스), 디사카라이드(예를 들면, 락토스, 사카로스, 말토스), 올리고사카라이드 및 폴리사카라이드(예를 들면, 덱스트란), 폴리알코올(예를 들면, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨), 염(예를 들면, 염화나트륨, 탄산칼슘) 또는 이들 서로의 혼합물을 포함할 수 있다. 모노사카라이드 또는 디사카라이드가 적절하게 사용되고, 특히(그러나, 배타적으로는 아님) 수화물 형태의 락토스 또는 글루코스가 사용된다.

폐에서의 침착을 위한 입자는 10 ㎛ 미만, 예컨대, 1 내지 9 ㎛, 예를 들면, 1 내지 5 ㎛의 입자 크기를 요구한다. 활성 성분(예컨대, 항체 또는 단편)의 입자 크기는 가장 중요하다.

흡입가능한 에어로졸을 제조하는 데 사용될 수 있는 추진제 기체는 당분야에서 공지되어 있다. 적합한 추진제 기체는 탄화수소, 예컨대, n-프로판, n-부탄 또는 이소부탄 및 할로탄화수소, 예컨대, 메탄, 에탄, 프로판, 부탄, 사이클로프로판 또는 사이클로부탄의 염소첨가된 및/또는 불소첨가된 유도체로부터 선택된다. 상기 언급된 추진제 기체들은 단독으로 또는 이들의 혼합몰로서 사용될 수 있다.

특히 적합한 추진제 기체는 TG11, TG12, TG134a 및 TG227로부터 선택된 할로겐첨가된 알칸 유도체이다. 상기 언급된 할로겐첨가된 탄화수소들 중 TG134a(1,1,1,2-테트라플루오로에탄) 및 TG227(1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로프로판) 및 이들의 혼합물이 특히 적합하다.

추진제 기체 함유 흡입가능한 에어로졸은 다른 성분, 예컨대, 보조용매, 안정화제, 표면 활성제(계면활성제), 항산화제, 윤활제, 및 pH를 조절하기 위한 수단도 함유할 수 있다. 이들 성분들 전부가 당분야에서 공지되어 있다.

본 발명에 따른 추진제 기체 함유 흡입가능한 에어로졸은 최대 5 중량%의 활성 물질을 함유할 수 있다. 본 발명에 따른 에어로졸은 예를 들면, 0.002 내지 5 중량%, 0.01 내지 3 중량%, 0.015 내지 2 중량%, 0.1 내지 2 중량%, 0.5 내지 2 중량% 또는 0.5 내지 1 중량%의 활성 성분을 함유한다.

대안적으로, 폐에의 국소 투여는 예를 들면, 장치, 예컨대, 분무기, 예를 들면, 압축기에 연결된 분무기(예를 들면, 파리 레스퍼레이토리 이퀴프먼트 인코포레이티드(Pari Respiratory Equipment, Inc.)(미국 버지니아주 리치몬드 소재)에 의해 제작된 파리 마스터(Pari Master)(R) 압축기에 연결된 파리 LC-제트 플러스(Pari LC-Jet Plus)(R) 분무기)를 이용하여 액체 용액 또는 현탁액 제제를 투여하는 것일 수도 있다.

본 발명의 항체 또는 다중특이적 분자는 예를 들면, 용액 또는 현탁액의 형태로 용매에 분산되어 전달될 수 있다. 상기 항체 또는 분자는 적절한 생리학적 용액, 예를 들면, 식염수, 또는 약학적으로 허용가능한 용매 또는 완충된 용액에 현탁될 수 있다. 당분야에서 공지되어 있는 완충된 용액은 약 4.0 내지 5.0의 pH를 달성하도록 물 1 ㎖당 0.05 mg 내지 0.15 mg의 에데트산이나트륨, 8.0 mg 내지 9.0 mg의 NaCl, 0.15 mg 내지 0.25 mg의 폴리소르베이트, 0.25 mg 내지 0.30 mg의 무수 시트르산, 및 0.45 mg 내지 0.55 mg의 구연산나트륨을 함유할 수 있다. 현탁액은 예를 들면, 동결건조된 항체를 사용할 수 있다.

치료 현탁액 또는 용액 제제는 하나 이상의 부형제도 함유할 수 있다. 부형제는 당분야에서 잘 알려져 있고 완충제(예를 들면, 구연산염 완충제, 인산염 완충제, 아세트산염 완충제 및 중탄산염 완충제), 아미노산, 우레아, 알코올, 아스코르브산, 인지질, 단백질(예를 들면, 혈청 알부민), EDTA, 염화나트륨, 리포좀, 만니톨, 소르비톨 및 글리세롤을 포함한다. 용액 또는 현탁액은 리포좀 또는 생분해가능한 마이크로스피어 내에 캡슐화될 수 있다. 제제는 일반적으로 멸균 제조 과정을 이용함으로써 실질적으로 멸균 형태로 제공될 것이다.

이것은 제제를 위해 사용되는 완충된 용매/용액을 제조하고 여과로 멸균하는 단계, 항체를 멸균 완충된 용매 용액에 무균 현탁하는 단계, 및 당분야에서 통상의 기술을 갖는 자에게 익숙한 방법으로 제제를 멸균 용기 내에 분배하는 단계를 포함할 수 있다.

본원에 개시된 항체는 분무를 통한 전달에 적합할 수 있다.

본 발명의 항체는 유전자 요법의 이용에 의해 투여될 수 있다는 것도 예상된다. 이를 달성하기 위해, 항체 쇄들이 DNA 서열로부터 발현되고 제자리에서 조립되도록 적절한 DNA 성분의 제어 하에서 항체 분자의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 DNA 서열을 환자 내로 도입한다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자, 예컨대, 본원에 기재된 항체 분자는 관심 있는 항원 또는 항원들의 활성을 기능적으로 변경시키는 데 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 개시의 항체 분자는 상기 항원 또는 항원들의 활성을 직접적으로 또는 간접적으로 중화시킬 수 있거나, 길항할 수 있거나 촉진할 수 있다.

한 실시양태에서, 실험실 시약으로서 사용하기 위한 본 개시의 분자(이를 포함하는 융합 단백질, 이중특이적 단백질 복합체 또는 조성물을 포함함)가 제공된다.

또한, 본 개시는 본 개시의 분자 또는 이의 성분을 포함하는 키트까지 확장된다. 한 실시양태에서, 상기 키트는

a) 결합 쌍의 제1 결합 파트너(X)에 부착된, CD22 또는 CD79a 및/또는 CD79b에 대해 특이적인 제1 항체 또는 항체 단편(A)을 포함하는 하나 이상의 융합 단백질(A-X); 및

b) 제1 결합 파트너에 대해 특이적인, 결합 쌍의 제2 결합 파트너(Y)에 부착된, CD22 또는 CD79a 및/또는 CD79b에 대해 특이적인 제2 항체 또는 항체 단편(B)을 포함하는 하나 이상의 융합 단백질(B-Y)

을 포함하고, 예를 들면, 이때 제1 결합 파트너(X)는 펩티드 또는 폴리펩티드이고 제2 결합 파트너(Y)는 이에 대해 특이적인 항체 또는 항체 단편이고;

제2 결합 파트너 Y는 제1 결합 파트너 X에 대해 특이적이고 제2 결합 파트너는 예를 들면, 이에 대해 특이적인 항체 또는 항체 단편이고; 상기 2개의 결합 파트너들의 특이적 상호작용(예컨대, 결합 상호작용)은 a) 및 b)로부터의 상기 2개의 융합 단백질들을 물리적으로 함께 존재하게 하여 이중특이적 단백질 복합체를 형성하는 이종이량체-테더를 형성하고;

A 또는 B 중 적어도 하나는 CD22에 대해 특이적이고 다른 하나는 CD79a 및/또는 CD79b에 대해 특이적이고, 상기 융합 단백질(들)은 복합체화된 또는 비복합체화된 형태로 존재한다.

유리하게는, 키트는 본 개시의 이중특이적 단백질 복합체를 포함할 수 있거나, 복합체화된 또는 비-복합체화된 형태로 존재하는 융합 단백질을 포함할 수 있다. 전자의 경우, 이중특이적 단백질 복합체는 사용의 편의 및 용이함을 제공하는, "상자로부터 꺼내어" 사용할 준비가 된 상태인 반면, 후자의 경우, 이중특이적 단백질 복합체는 상이한 융합 단백질들의 조합을 이용함으로써 사용자의 요구에 따라 조립될 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 키트는 사용 설명서도 포함한다.

또 다른 실시양태에서, 키트는 하나 이상의 기능 어세이를 수행하기 위한 하나 이상의 시약도 포함한다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자(이를 포함하는 융합 단백질, 이중특이적 단백질 복합체 또는 조성물을 포함함)는 실험실 시약으로서 사용되기 위해 제공된다.

추가 양태

추가 양태에서, 상기 정의된 다중특이적 분자 또는 융합 단백질을 비롯한 본원에 기재된 구축물을 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 예를 들면, DNA 서열이 제공된다.

한 실시양태에서, 본 개시에 따른 다중특이적 분자 또는 이중특이적 단백질 복합체 또는 항체를 비롯한 본원에 기재된 구축물을 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 예를 들면, DNA 서열이 제공된다.

또한, 본원의 개시는 상기 정의된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터까지 확장된다.

본원에서 사용된 용어 "벡터"는 그 자신에 연결되어 있는 또 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 벡터의 일례는 추가 DNA 분절이 라이게이션될 수 있는 환형 이중 가닥 DNA 루프인 "플라스미드"이다. 또 다른 유형의 벡터는 추가 DNA 분절이 바이러스 게놈 내로 라이게이션될 수 있는 바이러스 벡터이다. 일부 벡터들은 이들이 도입되는 숙주 세포에서 자가 복제할 수 있다(예를 들면, 세균 복제기점을 갖는 세균 벡터 및 에피좀성 포유동물 벡터). 다른 벡터들(예를 들면, 비-에피좀성 포유동물 벡터)은 숙주 세포의 게놈 내로 삽입될 수 있고, 여기서 이들은 나중에 숙주 게놈과 함께 복제된다. 플라스미드는 벡터의 가장 흔히 사용되는 형태이기 때문에, 본 명세서에서 용어 "플라스미드"와 "벡터"는 상호교환적으로 사용될 수 있다.

벡터를 구축할 수 있는 일반적인 방법, 형질감염 방법 및 배양 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다. 이와 관련하여, 문헌("Current Protocols in Molecular Biology", 1999, F. M. Ausubel (ed), Wiley Interscience, New York and the Maniatis Manual produced by Cold Spring Harbor Publishing)을 참조한다.

본원에서 사용된 용어 "선택 마커"는 마커 유전자를 함유하는 벡터로 형질전환되어 있거나 형질감염되어 있는 세포를 확인할 수 있게 하는 발현을 갖는 단백질을 지칭한다. 광범위한 선택 마커들이 당분야에서 공지되어 있다. 예를 들면, 전형적으로 선택 마커 유전자는 벡터가 도입되어 있는 숙주 세포에게 약물, 예컨대, G418, 하이그로마이신 또는 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여한다. 선택 마커는 예를 들면, 시각적으로 식별가능한 마커, 예컨대, 형광 마커일 수도 있다. 형광 마커의 예로는 로다민, FITC, TRITC, 알렉사 플루오르(Alexa Fluors) 및 이들의 다양한 접합체들이 있다.

본 개시의 항체를 코딩하는 하나 이상의 DNA 서열을 포함하는 하나 이상의 클로닝 또는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포도 제공된다. 본 개시의 항체 분자를 코딩하는 DNA 서열의 발현을 위해 임의의 적합한 숙주 세포/벡터 시스템이 사용될 수 있다. 세균, 예를 들면, 이. 콜라이 및 다른 미생물 시스템이 사용될 수 있거나, 진핵, 예를 들면, 포유동물 숙주 세포 발현 시스템도 사용될 수 있다. 적합한 포유동물 숙주 세포는 CHO, 골수종 또는 하이브리도마 세포를 포함한다.

본 개시는 본 개시의 분자를 코딩하는 DNA로부터의 단백질의 발현을 유발하기에 적합한 조건 하에서 본 개시의 벡터를 함유하는 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 상기 분자를 단리하는 단계를 포함하는, 본 개시에 따른 분자 또는 이의 성분을 제조하는 방법도 제공한다.

본원에 기재된 이중특이적 단백질 복합체를 비롯한 본 개시의 분자는 진단/검출 키트에서 사용될 수 있다. 키트는 예를 들면, 둘 다 동일한 유형의 세포 상에 존재하는 2개의 항원들에 대해 특이적인 이중특이적 항체 복합체를 포함할 수 있고, 이때 양성 진단은 항원들 둘 다가 성공적으로 검출되는 경우에만 이루어질 수 있다. 비복합체화된 형태로 2개의 별도의 항체들 또는 항체 단편들을 사용하기보다는 본 개시의 분자, 예컨대, 본원에 기재된 이중특이적 항체 복합체를 사용함으로써 검출의 특이성을 크게 향상시킬 수 있다.

한 실시양태에서, 본 개시의 분자, 예컨대, 이중특이적 항체 복합체는 고체 표면 상에 고정된다. 고체 표면은 예를 들면, 칩 또는 ELISA 플레이트일 수 있다.

샘플에서 제1 펩티드 및 제2 펩티드의 존재를 검출하기 위한 본 개시에 따른 분자, 예를 들면, 본원에 기재된 이중특이적 단백질 복합체의 용도도 제공되고, 이로써 상기 분자는 검출제로서 사용된다.

본 개시의 분자, 예컨대, 본원에 기재된 이중특이적 항체 복합체는 예를 들면, 결합된 항체-항원 복합체의 검출을 용이하게 하는 형광 마커에 접합될 수 있다. 이러한 이중특이적 항체 복합체는 면역형광 현미경관찰을 위해 사용될 수 있다. 대안적으로, 이중특이적 항체 복합체는 웨스턴 블롯팅 또는 ELISA를 위해 사용될 수도 있다.

한 실시양태에서, 본 개시에 따른 분자 또는 이의 성분을 정제하는 방법이 제공된다.

한 실시양태에서, 불순물이 컬럼 상에서 체류되고 항체가 비결합된 분획에서 유지되도록 비결합 모드로 음이온 교환 크로마토그래피를 수행하는 단계를 포함하는, 본 개시에 따른 분자 또는 이의 성분을 정제하는 방법이 제공된다. 상기 단계는 예를 들면, 약 6 내지 8의 pH에서 수행될 수 있다.

상기 방법은 예를 들면, 약 4 내지 5의 pH에서 수행되는 양이온 교환 크로마토그래피를 이용하는 초기 포획 단계도 포함할 수 있다.

상기 방법은 생성물 및 방법 관련 불순물이 생성물 스트림으로부터 적절하게 해상되도록 추가 크로마토그래피 단계(들)도 포함할 수 있다.

정제 방법은 하나 이상의 한외여과 단계, 예컨대, 농축 및 정용여과 단계도 포함할 수 있다.

상기 사용된 "정제된 형태"는 적어도 90%의 순도, 예컨대, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%(중량/중량) 이상의 순도를 의미하기 위한 것이다.

본 명세서의 문맥에서, "포함하는"은 "비롯한"으로서 해석되어야 한다.

또한, 일부 요소들을 포함하는 본 개시의 양태는 관련 요소들로 "구성"되거나 "본질적으로 구성"된 대안적인 실시양태까지 확장되기 위한 것이다.

긍정적으로 언급된 실시양태는 본원에서 부인에 대한 근거로서 사용될 수 있다.

본원에서 언급된 모든 참고문헌들은 참고로 구체적으로 도입된다.

본원의 부제들(sub-headings)은 본 명세서를 구조화하는 데 도움을 주기 위해 사용되고 본원에서 기술적 용어들의 의미를 구축하는 데 사용되기 위한 것이 아니다.

본 개시의 서열은 도 35에서 제공되어 있다.

단락

1. CD22에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함하는 항체 분자로서, 상기 결합 도메인은, 하기 식 (I)의 CDRH1, 하기 식 (II)의 CDRH2 및 하기 식 (III)의 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)과, 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 것인 항체 분자:

[식 (I)]

GX₁X₂FSX₃X₄X₅X₆X₇X₈(서열번호 1)

[식 (II)]

[식 (III)]

상기 식에서,

X₁₉는 A이거나 부재하고, X₂₀은 G 또는 Y이거나 부재하고, X₂₁은 P 또는 G이거나 부재하고, X₂₂는 Y, S, D 또는 E이거나 부재하고, X₂₃은 V, G 또는 W이고, X₂₄는 G, S, Y 또는 V이고, X₂₅는 Y, S, G 또는 N이고, X₂₆은 G, A, S 또는 T이고, X₂₇은 Y, A, G 또는 D이고, X₂₈은 W, D, I, Y 또는 H이고, X₂₉는 L, G, S, Y 또는 K이고, X₃₀은 V, Q, C, S, G, T 또는 D이고, X₃₁은 Y, A 또는 R이고, X₃₂는 L 또는 F이고, X₃₃은 N, Y 또는 D(특히 D)이다.

2. CD22에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함하는 항체 분자로서, 상기 결합 도메인은, 하기 식 (IV)의 CDRL1, 하기 식 (V)의 CDRL2 및 하기 식 (VI) 또는 식 (VII)의 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)과, 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는 것인 항체 분자:

[식 (IV)]

[식 (V)]

X₄₄X₄₅SX₄₆LX₄₇S(서열번호 5)

[식 (VI)]

AGYKSX₄₈X₄₉DX₅₀X₅₁TT(서열번호 6)

[식 (VII)]

상기 식에서,

3. CD22에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함하는 항체 분자로서, 상기 결합 도메인은, 하기 식 (I)의 CDRH1, 하기 식 (II)의 CDRH2 및 하기 식 (III)의 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)과, 하기 식 (IV)의 CDRL1, 하기 식 (V)의 CDRL2 및 하기 식 (VI) 또는 식 (VII)의 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 것인 항체 분자:

[식 (I)]

GX₁X₂FSX₃X₄X₅X₆X₇X₈(서열번호 1)

[식 (II)]

[식 (III)]

[식 (IV)]

[식 (V)]

X₄₄X₄₅SX₄₆LX₄₇S(서열번호 5)

[식 (VI)]

AGYKSX₄₈X₄₉DX₅₀X₅₁TT(서열번호 6)

[식 (VII)]

상기 식들에서,

X₁₉는 A이거나 부재하고, X₂₀은 부재하거나 G 또는 Y이고, X₂₁은 부재하거나 P 또는 G이고, X₂₂는 부재하거나 Y, S, D 또는 E이고, X₂₃은 V, G, Y 또는 W이고, X₂₄는 G, Y, S 또는 V이고, X₂₅는 Y, S, G 또는 N이고, X₂₆은 G, A, S 또는 T이고, X₂₇은 Y, G 또는 D이고, X₂₈은 D, I, Y, W 또는 H이고, X₂₉는 L, G, S, Y 또는 K이고, X₃₀은 V, Q, C, S, G, T 또는 D이고, X₃₁은 Y, A 또는 R이고, X₃₂는 L 또는 F이고, X₃₃은 N, Y 또는 D(특히 D)이고;

X₁₉는 A이거나 부재하고, X₂₀은 G 또는 Y이거나 부재하고, X₂₁은 P, D 또는 G이거나 부재하고, X₂₂는 Y, S, D 또는 E이거나 부재하고, X₂₃은 V, G 또는 W이고, X₂₄는 G, S, Y 또는 V이고, X₂₅는 Y, S, G 또는 N이고, X₂₆은 G, A, S 또는 T이고, X₂₇은 Y, A, G 또는 D이고, X₂₈은 W, D, I, Y 또는 H이고, X₂₉는 L, G, S, Y 또는 K이고, X₃₀은 V, Q, C, S, G, T 또는 D이고, X₃₁은 Y, A 또는 R이고, X₃₂는 L 또는 F이고, X₃₃은 N, Y 또는 D(특히 D)이다.

4. 제1 단락 내지 제3 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH1은 하기 식 (Ia)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (Ia)]

GX₁X₂FSX₃X₄X₅YX₇X₈(서열번호 8)

상기 식에서,

5. 제4 단락에 있어서, CDRH1은 하기 식 (Ib)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (Ib)]

GX₁X₂FSX₃X₄X₅YX₇S (서열번호 9)

상기 식에서,

X₁, X₂, X₃, X₄, X₅ 및 X₇은 식 (I)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

6. 제1 단락 내지 제5 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH2는 하기 식 (IIa)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (IIa)]

상기 식에서,

7. 제6 단락에 있어서, CDRH2는 하기 식 (IIb), 특히 X₁₂가 G인 하기 식 (IIb)의 서열을 갖는 것인 항체 분자:

[식 (IIb)]

상기 식에서,

8. 제1 단락 내지 제7 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH3은 하기 식 (IIIa)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (IIIa)]

상기 식에서,

9. 제1 단락 내지 제8 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRL1은 하기 식 (IVa)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (IVa)]

상기 식에서,

X₃₅, X₃₆, X₃₇, X₃₈, X₃₉, X₄₀, X₄₁, X₄₂ 및 X₄₃은 식 (IV)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

10. 제9 단락에 있어서, CDRL1은 하기 식 (IVb)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (IVb)]

QASQX₃₆X₃₇X₃₈X₃₉X₄₀X₄₁X₄₂LX₄₃(서열번호 14)

상기 식에서,

X₃₆, X₃₇, X₃₈, X₃₉, X₄₀, X₄₁, X₄₂ 및 X₄₃은 식 (IV)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

11. 제9 단락 또는 제10 단락에 있어서, CDRL1은 하기 식 (IVc)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (IVc)]

QASQSX₃₇X₃₈X₃₉X₄₀X₄₁X₄₂LX₄₃(서열번호 15)

상기 식에서,

X₃₇, X₃₈, X₃₉, X₄₀, X₄₁, X₄₂ 및 X₄₃은 식 (IV)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

12. 제9 단락 내지 제11 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRL1은 하기 식 (IIId)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (IIId)]

QASQSX₃₇X₃₈X₃₉X₄₀X₄₂LX₄₃(서열번호 16)

상기 식에서,

X₃₇, X₃₈, X₃₉, X₄₀, X₄₂ 및 X₄₃은 식 (IV)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

13. 제9 단락 내지 제11 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRL1은 하기 식 (IVe)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (IVe)]

QASQSX₃₇X₃₈X₃₉X₄₀LX₄₃(서열번호 17)

상기 식에서,

X₃₇, X₃₈, X₃₉, X₄₀ 및 X₄₃은 식 (IV)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

14. 제9 단락 내지 제13 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRL1은 하기 식 (IVf)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (IVf)]

QASQSX₃₇X₃₈X₃₉X₄₀LA(서열번호 18)

상기 식에서,

X₃₇, X₃₈, X₃₉ 및 X₄₀은 식 (IV)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

15. 제1 단락 내지 제14 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRL2는 하기 식 (Va)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (Va)]

X₄₄ASX₄₆LX₄₇S(서열번호 19)

상기 식에서,

16. 제15 단락에 있어서, CDRL2는 하기 식 (Vb)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (Vb)]

X₄₄ASX₄₆LAS(서열번호 20)

상기 식에서,

X₄₄ 및 X₄₆은 식 (V)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

17. 제16 단락에 있어서, CDRL2는 하기 식 (Vc)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (Vc)]

X₄₄ASTLAS(서열번호 21)

상기 식에서,

X₄₄는 식 (V)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

18. 제1 단락 내지 제17 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRL3은 하기 식 (VIa)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (VIa)]

AGYKSX₄₈X₄₉DX₅₀X₅₁TT(서열번호 22)

상기 식에서,

X₄₉, X₅₀ 및 X₅₁은 식 (V)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

19. 제18 단락에 있어서, CDRL3은 하기 식 (VIb)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (VIb)]

AGYKSDX₄₉DDX₅₁TT(서열번호 23)

상기 식에서,

X₄₉ 및 X₅₁은 식 (VI)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

20. 제1 단락 내지 제17 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRL3은 하기 식 (VIIa)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (VIIa)]

상기 식에서,

21. 제20 단락에 있어서, CDRL3은 하기 식 (VIIb)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (VIIb)]

상기 식에서,

X₅₂, X₅₅, X₅₇, X₅₈, X₅₉, X₆₀, X₆₁, X₆₂, X₆₃ 및 X₆₄는 식 (VII)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

22. 제21 단락에 있어서, CDRL3은 하기 식 (VIIc)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (VIIc)]

상기 식에서,

X₅₂, X₅₅, X₅₆, X₅₇, X₅₈, X₅₉, X₆₀, X₆₁, X₆₂, X₆₃ 및 X₆₄는 식 (VII)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

23. 제21 단락 또는 제22 단락에 있어서, CDRL3은 하기 식 (VIId)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (VIId)]

상기 식에서,

X₅₂, X₅₅, X₅₇, X₅₈, X₅₉, X₆₀, X₆₁, X₆₂ 및 X₆₄는 식 (VII)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

24. 제21 단락 또는 제22 단락에 있어서, CDRL3은 하기 식 (VIIe)를 갖는 것인 항체 분자:

[식 (VIIe)]

QX₅₂YYX₅₅SSX₅₇X₅₈X₅₉X₆₀X₆₁X₆₂(서열번호 28)

상기 식에서,

X₅₂, X₅₅, X₅₇, X₅₈, X₅₉, X₆₀, X₆₁ 및 X₆₂는 식 (VII)에 대해 상기 정의된 바와 같다.

25. 제1 단락 내지 제3 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH1은 서열번호 29 내지 39로부터 독립적으로 선택되고, CDRH2는 서열번호 40 내지 59로부터 독립적으로 선택되고, CDRH3은 서열번호 60 내지 68로부터 독립적으로 선택되는 것인 항체 분자.

26. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH1은 서열번호 29 또는 30이고, CDRH2는 서열번호 40 또는 41이고, CDRH3은 서열번호 60인 항체 분자.

27. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH1은 서열번호 31 또는 32이고, CDRH2는 서열번호 42 또는 43이고, CDRH3은 서열번호 61 또는 62인 항체 분자.

28. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이고, CDRH3은 서열번호 63인 항체 분자.

29. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH1은 서열번호 35 또는 36이고, CDRH2는 서열번호 46 또는 47이고, CDRH3은 서열번호 64인 항체 분자.

30. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 48, 49, 50, 51, 52 또는 53이고, CDRH3은 서열번호 65, 66 또는 67인 항체 분자.

31. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH1은 서열번호 38 또는 39이고, CDRH2는 서열번호 54, 55, 56, 57, 58 또는 59이고, CDRH3은 서열번호 68인 항체 분자.

32. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 내지 제31 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRL1은 서열번호 69 내지 74로부터 독립적으로 선택되고, CDRL2는 서열번호 75 내지 80으로부터 독립적으로 선택되고, CDRL3은 서열번호 81 내지 101로부터 독립적으로 선택되는 것인 항체 분자.

33. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 내지 제32 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRL1은 서열번호 69이고, CDRL2는 서열번호 75이고, CDRL3은 서열번호 81인 항체 분자.

34. 제32 단락에 있어서, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이고, CDRL3은 서열번호 82인 항체 분자.

35. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 내지 제32 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이고, CDRL3은 서열번호 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 또는 98인 항체 분자.

36. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 내지 제32 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRL1은 서열번호 72이고, CDRL2는 서열번호 78이고, CDRL3은 서열번호 99인 항체 분자.

37. 제32 단락에 있어서, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이고, CDRL3은 서열번호 100인 항체 분자.

38. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 내지 제32 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이고, CDRL3은 서열번호 101인 항체 분자.

39. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 내지 제38 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH1은 서열번호 29 또는 30으로 제공된 서열을 갖고, CDRH2는 서열번호 40 또는 41로 제공된 서열을 갖고, CDRH3은 서열번호 60으로 제공된 서열을 갖고, CDRL1은 서열번호 69로 제공된 서열을 갖고, CDRL2는 서열번호 75로 제공된 서열을 갖고, CDRL3은 서열번호 81로 제공된 서열을 갖는 것인 항체 분자.

40. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 내지 제38 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH1은 서열번호 31 또는 32로 제공된 서열을 갖고, CDRH2는 서열번호 42 또는 43으로 제공된 서열을 갖고, CDRH3은 서열번호 61 또는 62로 제공된 서열을 갖고, CDRL1은 서열번호 70으로 제공된 서열을 갖고, CDRL2는 서열번호 76으로 제공된 서열을 갖고, CDRL3은 서열번호 82로 제공된 서열을 갖는 것인 항체 분자.

41. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 내지 제38 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34로 제공된 서열을 갖고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45로 제공된 서열을 갖고, CDRH3은 서열번호 63으로 제공된 서열을 갖고, CDRL1은 서열번호 71로 제공된 서열을 갖고, CDRL2는 서열번호 77로 제공된 서열을 갖고, CDRL3은 서열번호 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 또는 98로 제공된 서열을 갖는 것인 항체 분자.

42. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 내지 제38 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH1은 서열번호 35 또는 36으로 제공된 서열을 갖고, CDRH2는 서열번호 46 또는 47로 제공된 서열을 갖고, CDRH3은 서열번호 64로 제공된 서열을 갖고, CDRL1은 서열번호 72로 제공된 서열을 갖고, CDRL2는 서열번호 78로 제공된 서열을 갖고, CDRL3은 서열번호 99로 제공된 서열을 갖는 것인 항체 분자.

43. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 내지 제38 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH1은 서열번호 37로 제공된 서열을 갖고, CDRH2는 서열번호 48, 49, 50, 51, 52 또는 53으로 제공된 서열을 갖고, CDRH3은 서열번호 65, 66 또는 67로 제공된 서열을 갖고, CDRL1은 서열번호 73으로 제공된 서열을 갖고, CDRL2는 서열번호 79로 제공된 서열을 갖고, CDRL3은 서열번호 100으로 제공된 서열을 갖는 것인 항체 분자.

44. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제25 단락 내지 제38 단락 중 어느 한 단락에 있어서, CDRH1은 서열번호 38 또는 39로 제공된 서열을 갖고, CDRH2는 서열번호 54, 55, 56, 57, 58 또는 59로 제공된 서열을 갖고, CDRH3은 서열번호 68로 제공된 서열을 갖고, CDRL1은 서열번호 74로 제공된 서열을 갖고, CDRL2는 서열번호 80으로 제공된 서열을 갖고, CDRL3은 서열번호 101로 제공된 서열을 갖는 것인 항체 분자.

45. 제1 단락 내지 제44 단락 중 어느 한 단락에 있어서, VH 및 VL은 인간화된 것인 항체 분자.

46. 제45 단락에 있어서, 중쇄의 가변 도메인(VH)은 위치 11, 23, 24, 37, 47, 48, 49, 67, 71, 73, 76, 78 및 94 중 적어도 하나의 위치에서의 잔기가 도너 잔기인 인간 프레임워크 영역을 포함하고 경쇄의 가변 도메인(VL)은 위치 1, 2, 3, 36, 63, 65, 66, 70 및 71 중 적어도 하나의 위치에서의 잔기가 도너 잔기인 인간 프레임워크 영역을 포함하는 것인 항체 분자.

47. 제1 단락 내지 제3 단락, 제45 단락 및 제46 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 서열번호 107, 108, 109, 110, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 127, 128, 129, 130, 136, 137, 138, 139, 145, 146, 147, 148, 154, 155, 156 및 157로부터 독립적으로 선택된 VH를 포함하는 항체 분자.

48. 제1 단락 내지 제3 단락 및 제47 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 서열번호 106, 115, 126, 135, 144 및 153으로부터 독립적으로 선택된 서열을 포함하는 VL 가변 도메인을 포함하는 항체 분자.

49. 제1 단락 내지 제3 단락, 제47 단락 및 제48 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 서열번호 107, 108, 109 및 110으로부터 독립적으로 선택된 VH 및 서열번호 106으로 표시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 항체 분자.

50. 제1 단락 내지 제3 단락, 제47 단락 및 제48 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 서열번호 116, 117, 118, 119, 120 및 121로부터 독립적으로 선택된 VH 및 서열번호 115로 표시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 항체 분자.

51. 제1 단락 내지 제3 단락, 제47 단락 및 제48 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 서열번호 127, 128, 129 및 130으로부터 독립적으로 선택된 VH 및 서열번호 126으로 표시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 항체 분자.

52. 제1 단락 내지 제3 단락, 제47 단락 및 제48 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 서열번호 136, 137, 138 및 139로부터 독립적으로 선택된 VH 및 서열번호 135로 표시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 항체 분자.

53. 제1 단락 내지 제3 단락, 제47 단락 및 제48 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 서열번호 145, 146, 147 및 148로부터 독립적으로 선택된 VH 및 서열번호 144로 표시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 항체 분자.

54. 제1 단락 내지 제3 단락, 제47 단락 및 제48 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 서열번호 154, 155, 156 및 157로부터 독립적으로 선택된 VH 및 서열번호 153으로 표시된 서열을 갖는 VL을 포함하는 항체 분자.

55. 제1 단락 내지 제54 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 각각의 결합 도메인은 2개의 항체 가변 도메인을 포함하는 것인 항체 분자.

56. 제55 단락에 있어서, 2개의 항체 가변 도메인은 VH/VL 쌍인 항체 분자.

57. 제1 단락 내지 제45 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 경쇄의 가변 도메인은 서열번호 106, 115, 126, 135, 144 및 153의 경쇄 가변 도메인에 대한 적어도 80%의 동일성 또는 유사성을 갖는 서열을 포함하고, 중쇄의 가변 도메인은 서열번호 107, 108, 109, 110, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 127, 128, 129, 130, 136, 137, 138, 139, 145, 146, 147, 148, 154, 155, 156 및 157의 중쇄 가변 도메인에 대한 적어도 80%의 동일성 또는 유사성을 갖는 서열을 포함하는 것인 항체 분자.

58. 제1 단락 내지 제57 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 항체는 전장 항체인 항체 분자.

59. 제1 단락 내지 제57 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 항체는 scFv, Fv, Fab 또는 Fab' 단편인 항체 분자.

60. 제1 단락 내지 제57 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 분자는 다중특이적 단백질, 예컨대, 이중특이적 또는 삼중특이적 단백질인 항체 분자.

61. 제60 단락에 있어서, 다중특이적 분자가 CD22에 대해 특이적인 하나의 결합 도메인, 및 CD79a 및/또는 CD79b에 대해 특이적인 하나의 결합 도메인을 포함하는 것인 항체 분자.

62. 제1 단락 내지 제61 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 분자 포맷은 디아바디, sc디아바디, 트리아바디, 탠덤 scFv, FabFv, Fab'Fv, FabdsFv, Fab-scFv, Fab-dsscFv, Fab-(dsscFv)₂ 디Fab, 디Fab', 트리바디, 탠덤 scFv-Fc, scFv-Fc-scFv, sc디아바디-Fc, sc디아바디-CH3, Ig-scFv, scFv-Ig, V-Ig, Ig-V, 듀오바디 및 DVD-Ig로부터 선택되는 것인 항체 분자.

63. 제1 단락 내지 제62 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 인간 혈청 알부민과 같은 혈청 알부민에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함하는 항체 분자.

64. 제1 단락 내지 제63 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 결합 도메인 또는 도메인들은 인간화된 것인 항체 분자.

65. 제1 단락 내지 제64 단락 중 어느 한 단락에 있어서, 하나 이상의 CDR 내의 하나의 아미노산은 또 다른 아미노산으로 치환된 것인 항체 분자.

66. 제1 단락 내지 제65 단락 중 어느 한 단락에 정의된 하나 이상의 항체 분자를 포함하는 조성물.

67. 제1 단락 내지 제65 단락 중 어느 한 단락에 정의된 항체 분자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열.

68. 제67 단락에 정의된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터.

69. 치료법에 사용하기 위한, 제1 단락 내지 제65 단락 중 어느 한 단락에 따른 항체 분자 또는 제66 단락에 따른 조성물.

70. 치료법에 사용하기 위한, 특히 본원에 기재된 병태 또는 장애의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 제1 단락 내지 제65 단락 중 어느 한 단락에 따른 항체 분자 또는 제66 단락에 따른 조성물의 용도.

71. 치료 유효량의 제1 단락 내지 제65 단락 중 어느 한 단락에 따른 항체 분자 또는 제66 단락 따른 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 환자를 치료하는 방법.

참조문헌

실시예

실시예에서 사용된 용어 "Fab-Kd-Fab"는 하기 식을 갖는 이중특이적 단백질 복합체를 기술한다:

A-X:Y-B

상기 식에서,

A-X는 제1 융합 단백질이고;

Y-B는 제2 융합 단백질이고;

X:Y는 이종이량체-테더이고;

A는 항원, 예컨대, CD22 또는 CD79에 대해 특이적인 Fab 단편을 포함하고;

B는 항원, 예컨대, CD22 또는 CD79에 대해 특이적인 Fab 단편을 포함하고;

X는 결합 쌍의 제1 결합 파트너, 예컨대, scFv이고;

Y는 결합 쌍의 제2 결합 파트너, 예컨대, 펩티드이고;

:는 X와 Y 사이의 상호작용(예컨대, 결합 상호작용)이다.

실시예 1 - 기능 어세이를 위한 Fab'-A(Fab-scFv[A-X]) 및 Fab'-B(Fab-펩티드[B-Y])의 제조

클로닝 방법 :

제한 효소 부위 DNA 서열을 플랭킹하는 PCR 또는 유전자 합성으로 항체 가변 영역 DNA를 생성하였다. 이들 부위들은 가변 중쇄의 경우 HindIII 및 XhoI이었고 가변 경쇄의 경우 HindIII 및 BsiWI이었다. 이것은 중쇄 가변 영역이 2개의 중쇄 벡터들(FabB-Y를 갖는 pNAFH 및 FabA-Xds[디설파이드 안정화됨]를 갖는 pNAFH) 내로 라이게이션될 수 있게 만드는데, 이는 이들이 상보적 제한 부위를 갖기 때문이다. 이것은 가변 영역 업스트림(또는 5')을 뮤린 불변 영역 및 펩티드 Y(GCN4) 또는 scFv X(52SR4)에 라이게이션시킴으로써 전체 판독 프레임을 생성한다. 경쇄를, 동일한 상보적 제한 부위를 다시 사용하는 표준 사내 뮤린 불변 카파 벡터(pMmCK 또는 pMmCK S171C) 내로 클로닝하였다. 가변 영역이 토끼로부터 단리되는 경우 pMmCK S171C 벡터가 사용된다. 전체 개방 판독 프레임을 플랭킹하는 프라이머를 사용하여 서열분석함으로써 클로닝 사건을 확인하였다.

CHO-S의 배양 :

현탁 CHOS 세포를 2 mM(100x) 글루타맥스로 보충된 CDCHO 배지(인비트로겐(Invitrogen))에 미리 적응시켰다. 세포를 진탕기 항온처리기(쿠너 아게(Kuner AG), 스위스 비르스펠덴 소재) 상에서 140 rpm에서 교반된 상태로 대수 생장기에서 유지하고 8% CO₂로 보충된 37℃에서 배양하였다.

전기천공 형질감염 :

형질감염 전, CEDEX 세포 카운터(이노바티스 아게(Innovatis AG), 독일 빌레펠트 소재)를 이용하여 세포 수 및 생존력을 측정하였고 요구된 양의 세포(2x10⁸개의 세포/㎖)를 원심분리 원추 튜브 내로 옮기고 10분 동안 1400 rpm에서 회전시켰다. 펠렛화된 세포를 멸균 얼스 균형 염 용액((Earls Balanced Salts Solution)에 재현탁하고 추가 10분 동안 1400 rpm에서 회전시켰다. 상청액을 버렸고 펠렛을 원하는 세포 밀도까지 재현탁하였다.

2x10⁸개 세포/㎖ 혼합물을 위해 400 ㎍ 및 800 ㎕의 최종 농도로 벡터 DNA를 피펫으로 큐벳(바이오라드(Biorad)) 내에 넣었고 사내 전기천공 시스템을 이용하여 전기천공하였다.

형질감염된 세포를, 2 mM 글루타맥스로 강화된 ProCHO 5 배지 및 항생제 항유사분열(100X) 용액(500 중 1)을 함유하는 1X3 ℓ 삼각 플라스크 내로 직접 옮겼고, 세포를 37℃, 5% CO₂ 및 140 rpm 진탕으로 설정된 쿠너 진탕기 항온처리기에서 배양하였다. 공급 보충제 2 g/ℓ ASF(AJINOMOTO)를 형질감염시킨 지 24시간 후에 첨가하였고 온도를 추가 13일 배양 동안 37℃까지 낮추었다. 4일째 날, 3 mM 부티르산나트륨(n-부티르산 나트륨 염, 시그마(Sigma) B-5887)을 배양물에 첨가하였다.

14일째 날, 배양물을 튜브로 옮겼고 4000 rpm에서 30분 동안 원심분리한 후 세포로부터 상청액을 분리하였다. 보유된 상청액을, 0.22 ㎛ 사르토 브란(SARTO BRAN) P 밀리포어(Millipore)에 이어 0.22 ㎛ 감마 금 필터를 통해 더 여과하였다. 최종 발현 수준을 단백질 G-HPLC로 측정하였다.

대규모(1.0 ℓ) 정제 :

악타 익스프레스(AKTA Xpress) 시스템 및 히스트랩 엑셀(HisTrap Excel) 예비팩킹된 니켈 컬럼(지이 헬쓰케어(GE Healthcare))을 사용하여 친화성 포획으로 Fab-A 및 Fab-B를 정제하였다. 배양 상청액을 0.22 ㎛ 멸균 여과하였고, 필요하다면 약산 또는 약염기를 사용하여 pH를 중성까지 조절한 후 컬럼 상에 적재하였다. 15 내지 25 mM 이미다졸을 함유하는 이차 세척 단계를 이용하여 니켈 수지로부터 임의의 약하게 결합된 숙주 세포 단백질/비특이적 His 결합제를 제거하였다. 10 mM 인산나트륨(pH 7.4) + 1 M NaCl + 250 mM 이미다졸을 사용하여 용출을 수행하였고 2 ㎖ 분획을 수집하였다. 1 컬럼 부피가 용출되면, 용출 피크를 더 선명하게 하여 결과적으로 총 용출 부피를 감소시키기 위해 시스템을 10분 동안 중단시켰다. 가장 깨끗한 분획을 풀링하였고 완충제를 PBS(시그마)(pH 7.4)로 교환하고 0.22 ㎛ 여과하였다. 최종 풀(pools)을 A280 스캔, SE-HPLC(G3000 방법) 및 SDS-PAGE(환원 및 비환원)로 분석하였고 PTS 엔도세이프(Endosafe) 시스템을 이용하여 내독소에 대해 분석하였다.

실시예 2 - CD79/CD22 이중특이적이되 2가가 아닌 조합물이 Akt 신호전달을 억제한다는 것을 입증하기 위한, 이종이량체적으로 테더링된 이중특이적 단백질 복합체 포맷의 Fab '-A( Fab - scFv [A-X]) 및 Fab '-b( Fab -펩티드[B-Y])의 용도

혈소판 성분채집술 추체로부터 유래된 인간 PBMC를 동결된 분취액으로서 보관하였다. 어세이를 수행하기 전, 세포를 해동시키고 DMEM(라이프 테크놀로지스(Life Technologies))으로 세척하고 37℃/5% CO₂ 환경에 적응시켰다. 이 기간 동안, 10% 소 혈청 및 2 mM 글루타민을 함유하는 DMEM으로 세포 표면 단백질 CD22 및 CD79b에 대한 항원 특이성을 갖는 등몰(200 nM) 양의 Fab'-A(Fab-scFv) 및 Fab'-B(Fab-펩티드)를 희석함으로써 이중특이적 또는 2가 항체의 격자를 생성하였다. 이 격자는 표 4에 표시되어 있다.

Fab'A-X와 Fab'B-Y를 (37℃/5% CO₂ 환경에서) 90분 동안 함께 항온처리한 후, V-바닥 96웰 플레이트에서 2.5x10⁵개의 PBMC와 혼합하였다. 그 다음, PBMC와 이중특이적 또는 2가 조합물을 추가 90분 동안 함께 항온처리하였다. 이 시간 후, 200 nM의 염소 F(ab')₂ 항-인간 IgM(서던 바이오테크놀로지)을 첨가함으로써 37℃에서 8분 동안 B 세포를 활성화시켰다. 그 후, 동등한 부피의 사이토픽스 완충제(비디 바이오사이언시스)를 첨가함으로써 신호전달 반응을 중단시켰다. 그 다음, 플레이트를 15분 동안 실온에서 방치한 후, 5분 동안 500g에서 원심분리하였다. 여분의 상청액을 세포 펠렛으로부터 버렸고 이 세포 펠렛을 유동 완충제(PBS + 1% BSA + 0.01% NaN₃)에 재현탁하고 1회 더 세척하였다. 이어서, 세포를 30분 동안 빙냉 펌 완충제 III(비디 바이오사이언시스)에 재현탁한 후 유동 완충제로 2회 세척하였다.

그 다음, 형광 표지된 항-CD20 항체(비디 바이오사이언시스), 및 단백질 상의 위치 473에서 변형된 세린 잔기를 인식하는 형광 표지된 항-인 Akt 항체를 사용하여 세포를 염색하였다. 그 다음, 플레이트를 재현탁하고 실온의 암실에서 1시간 동안 항온처리하였다. 이 시간 후, 플레이트를 추가 2회 세척하고 25 ㎕의 유동 완충제에 재현탁하였다. 인텔리사이트 HTFC™ 유세포분석기를 이용하여 CD20 및 Akt의 세포 발현을 측정하였다.

데이터 분석 소프트웨어 팩키지 포어사이트(Forecyt)™(인텔리사이트)를 이용하여 B 세포가 다른 세포 집단과 상이하다는 것을 확인하였고 각각의 웰에 대해 Akt 수준의 기하평균을 계산하였다. 그 다음, 모든 데이터들을 최대 반응(항-IgM 단독) 마이너스 배경(세포 단독)의 퍼센트 억제율로서 표현하였다. CD22와 CD79b의 조합물의 상대적 효과는 표 5에 표시되어 있다(↓= 억제, ↑= 자극 및 ↔ = 전체 효과 없음).

이 데이터는 막대 도표의 형태로도 표시되어 있고(도 1), 데이터는 평균 값을 나타내고, 오차 막대는 95% 신뢰구간이다. 데이터는 CD22와 CD79b의 조합물이 항-IgM으로 자극된 B 세포에서 인-Akt 발현을 억제할 수 있다는 것을 보여준다. 대조적으로, CD22와 CD22의 조합물은 상승된 수준의 인-Akt 발현을 나타내었다.

실시예 3 - CD79/CD22 이중특이적이되 2가가 아닌 조합물이 PLCγ2 신호전달을 억제한다는 것을 입증하기 위한, 이종이량체적으로 테더링된 이중특이적 단백질 복합체 포맷의 Fab'-A(Fab-scFv[A-X]) 및 Fab'-b(Fab-펩티드[B-Y])의 용도

혈소판 성분채집술 추체로부터 유래된 인간 PBMC를 동결된 분취액으로서 보관하였다. 어세이를 수행하기 전, 세포를 해동시키고 DMEM(라이프 테크놀로지스)으로 세척하고 37℃/5% CO₂ 환경에 적응시켰다. 이 기간 동안, 10% 소 혈청 및 2 mM 글루타민을 함유하는 DMEM으로 세포 표면 단백질 CD22 및 CD79b에 대한 항원 특이성을 갖는 등몰(200 nM) 양의 Fab'-A(Fab-scFv[A-X]) 및 Fab'-B(Fab-펩티드[B-Y])를 희석함으로써 이중특이적 또는 2가 항체의 격자를 생성하였다. 이 격자는 표 4에 표시되어 있다.

Fab'A-X와 Fab'B-Y를 (37℃/5% CO₂ 환경에서) 90분 동안 함께 항온처리한 후, V-바닥 96웰 플레이트에서 2.5x10⁵개의 PBMC와 혼합하였다. 그 다음, PBMC와 이중특이적 또는 2가 조합물을 추가 90분 동안 함께 항온처리하였다. 이 시간 후, 200 nM의 염소 F(ab')₂ 항-인간 IgM(서던 바이오테크놀로지)을 첨가함으로써 37℃에서 8분 동안 B 세포를 활성화시켰다. 그 후, 동등한 부피의 사이토픽스 완충제(비디 바이오사이언시스)를 첨가함으로써 신호전달 반응을 중단시켰다. 그 다음, 플레이트를 15분 동안 실온에서 방치한 후, 5분 동안 500g에서 원심분리하였다. 여분의 상청액을 세포 펠렛으로부터 버렸고 이 세포 펠렛을 유동 완충제에 재현탁하고 1회 더 세척하였다. 이어서, 세포를 30분 동안 빙냉 펌 완충제 III(비디 바이오사이언시스)에 재현탁한 후 유동 완충제로 2회 세척하였다.

그 다음, 형광 표지된 항-CD20 항체(비디 바이오사이언시스), 및 단백질 상의 위치 759에서 변형된 티로신 잔기를 인식하는 형광 표지된 항-인 PLCγ2 항체를 사용하여 세포를 염색하였다. 그 다음, 플레이트를 재현탁하고 실온의 암실에서 1시간 동안 항온처리하였다. 이 시간 후, 플레이트를 추가 2회 세척하고 25 ㎕의 유동 완충제에 재현탁하였다. 인텔리사이트 HTFC™ 유세포분석기를 이용하여 CD20 및 PLCγ2의 세포 발현을 측정하였다.

데이터 분석 소프트웨어 팩키지 포어사이트™(인텔리사이트)를 이용하여 B 세포가 다른 세포 집단과 상이하다는 것을 확인하였고 각각의 웰에 대해 PLCγ2 수준의 기하평균을 계산하였다. 그 다음, 모든 데이터들을 최대 반응(항-IgM 단독) 마이너스 배경(세포 단독)의 퍼센트 억제율로서 표현하였다. CD22와 CD79b의 조합물의 상대적 효과는 표 6에 표시되어 있다(↓= 억제, ↑= 자극 및 ↔ = 전체 효과 없음).

이 데이터는 막대 도표로서 표현될 수도 있고(도 2), 데이터는 평균 값을 나타내고, 오차 막대는 95% 신뢰구간이다. 데이터는 CD22와 CD79b의 조합물 및 CD79b와 CD79b의 조합물 모두가 항-IgM으로 자극된 B 세포에서 인-PLCγ2 발현을 억제할 수 있다는 것을 보여준다. 대조적으로, CD22와 CD22의 조합물은 상승된 수준의 인-PLCγ2 발현을 나타내었다.

실시예 4 - CD79/CD22 이중특이적 조합물이 CD86 발현을 억제한다는 것을 입증하기 위한, 이종이량체적으로 테더링된 이중특이적 단백질 복합체 포맷의 Fab'-A(Fab-scFv[A-X]) 및 Fab '-b( Fab -펩티드[B-Y])의 용도

혈소판 성분채집술 추체로부터 유래된 인간 PBMC를 동결된 분취액으로서 보관하였다. 어세이를 수행하기 전, 세포를 해동시키고 DMEM(라이프 테크놀로지스)으로 세척하고 37℃/5% CO₂ 환경에 적응시켰다. 이 기간 동안, 10% 소 혈청 및 2 mM 글루타민을 함유하는 DMEM으로 세포 표면 단백질 CD22 및 CD79b에 대한 항원 특이성을 갖는 등몰(200 nM) 양의 Fab'-X(Fab-scFv) 및 Fab'-Y(Fab-펩티드)를 희석함으로써 이중특이적 또는 2가 항체의 격자를 생성하였다. 이 격자는 표 4에 표시되어 있다.

Fab'A-X와 Fab'B-Y를 (37℃/5% CO₂ 환경에서) 90분 동안 함께 항온처리한 후, V-바닥 96웰 플레이트에서 2.5x10⁵개의 PBMC와 혼합하였다. 그 다음, PBMC와 이중특이적 또는 2가 조합물을 추가 90분 동안 함께 항온처리하였다. 이 시간 후, 200 nM의 염소 F(ab')₂ 항-인간 IgM(서던 바이오테크놀로지)을 첨가함으로써 37℃에서 24시간 동안 B 세포를 활성화시켰다. 이 시간 후, 플레이트를 얼음 위에 놓고 빙냉 유동 완충제(PBS + 1% BSA + 0.01% NaN₃)로 1회 세척하였다. 그 다음, 세포를 형광 표지된 항-CD19 항체(비디 바이오사이언스) 및 형광 표지된 항-CD86 항체로 염색하고 암실에서 1시간 동안 얼음 위에서 항온처리하였다. 이 시간 후, 플레이트를 추가 2회 세척하고 25 ㎕의 유동 완충제에 재현탁하였다. 인텔리사이트 HTFC™ 유세포분석기를 이용하여 CD19 및 CD86의 세포 발현을 측정하였다.

데이터 분석 소프트웨어 팩키지 포어사이트™(인텔리사이트)를 이용하여 B 세포가 다른 세포 집단과 상이하다는 것을 확인하였고 각각의 웰에 대해 CD86 수준의 기하평균을 계산하였다. 그 다음, 모든 데이터들을 최대 반응(항-IgM 단독) 마이너스 배경(세포 단독)의 퍼센트 억제율로서 표현하였다. CD22와 CD79b의 조합물의 상대적 효과는 표 7에 표시되어 있다(↓= 억제, ↑= 자극 및 ↔ = 전체 효과 없음).

이 데이터는 막대 도표의 형태로도 표시되어 있고(도 3), 데이터는 평균 값을 나타내고, 오차 막대는 95% 신뢰구간이다. 데이터는 CD22와 CD79b의 조합물 및 CD79b와 CD79b의 조합물 모두가 항-IgM으로 자극된 B 세포 상에서의 CD86 발현을 억제할 수 있다는 것을 보여준다. 대조적으로, CD22와 CD22의 조합물은 상승된 수준의 CD86 발현을 나타내었다.

실시예 5 - CD22 및 CD79b의 억제 효과는 항체들이 이중특이적 배향으로 정렬될 때에만 재현될 수 있다 .

혈소판 성분채집술 추체로부터 유래된 인간 PBMC를 동결된 분취액으로서 보관하였다. 어세이를 수행하기 전, 세포를 해동시키고 DMEM(라이프 테크놀로지스)으로 세척하고 37℃/5% CO₂ 환경에 적응시켰다. 이 기간 동안, 10% 소 혈청 및 2 mM 글루타민을 함유하는 DMEM으로 세포 표면 단백질 CD22 및 CD79b에 대한 항원 특이성을 갖는 등몰(200 nM) 양의 Fab'-X(Fab-scFv) 및/또는 Fab'-Y(Fab-펩티드)를 희석함으로써 이중특이적, 2가 또는 항체들의 혼합물의 조합물을 생성하였다. 이들 조합물들은 표 8에 제시되어 있다. 적정 곡선 실험을 위해, 이들 조합물들을 2.5분의 1 희석으로 단계적으로 8회 희석하여 이 조합물에 대한 용량 적정을 생성하였다.

Fab'A-X 및/또는 Fab'B-Y를 (37℃/5% CO₂ 환경에서) 90분 동안 함께 항온처리한 후, V-바닥 96웰 플레이트에서 2.5x10⁵개의 PBMC와 혼합하였다. 그 다음, PBMC와 Fab'A-X 및/또는 Fab'B-Y 조합물을 추가 90분 동안 함께 항온처리하였다. 이 시간 후, 200 nM의 염소 F(ab')₂ 항-인간 IgM(서던 바이오테크놀로지)을 첨가함으로써 37℃에서 8분 동안 B 세포를 활성화시켰다. 그 후, 동등한 부피의 사이토픽스 완충제(비디 바이오사이언시스)를 첨가함으로써 신호전달 반응을 중단시켰다. 그 다음, 플레이트를 15분 동안 실온에서 방치한 후, 5분 동안 500g에서 원심분리하였다. 여분의 상청액을 세포 펠렛으로부터 버렸고 이 세포 펠렛을 유동 완충제(PBS + 1% BSA + 0.01% NaN₃)에 재현탁하고 1회 더 세척하였다. 이어서, 세포를 30분 동안 빙냉 펌 완충제 III(비디 바이오사이언시스)에 재현탁한 후 유동 완충제로 2회 세척하였다.

그 다음, 형광 표지된 항-CD20 항체(비디 바이오사이언시스), 위치 473에서 변형된 세린 잔기를 인식하는 항-인 Akt 항체, 및 위치 759에서 변형된 티로신 잔기를 인식하는 항-인 PLCγ2 항체를 사용하여 세포를 염색하였다. 그 다음, 플레이트를 재현탁하고 실온의 암실에서 1시간 동안 항온처리하였다. 이 시간 후, 플레이트를 추가 2회 세척하고 25 ㎕의 유동 완충제에 재현탁하였다. 인텔리사이트 HTFC™ 유세포분석기를 이용하여 CD20, Akt 및 PLCγ2의 세포 발현을 측정하였다.

데이터 분석 소프트웨어 팩키지 포어사이트™(인텔리사이트)를 이용하여 B 세포가 다른 세포 집단과 상이하다는 것을 확인하였고 각각의 웰에 대해 Akt 및 PLCγ2 수준의 기하평균을 계산하였다. 그 다음, 모든 데이터들을 최대 반응(항-IgM 단독) 마이너스 배경(세포 단독)의 퍼센트 억제율로서 표현하였다. 도 4 및 5는 CD22와 CD79b의 이중특이적 조합물뿐만 아니라 CD22 항체와 CD79b 항체의 혼합물도 인산화된 Akt 및 PLCγ2 발현을 억제하였다는 것을 보여준다(데이터는 평균 값을 나타내고 오차 막대는 95% 신뢰구간이다).

CD22와 CD79b의 이중특이적 조합물의 사용 시 확인된 억제를 검증하기 위해, CD22 항체와 CD79b 항체의 혼합물과 함께 이 조합물을 적정하였고 총 세포내 IkB(신호전달 판독대상) 및 CD86(24시간 후 활성화 마커)의 억제를 B 세포에서 측정하였다.

도 6에서 확인될 수 있는 바와 같이, CD22-X/CD79b-Y의 조합물은 총 IkB 단백질의 수준에 의해 측정될 때 항-IgM 자극 후 NF-kB 신호 활성화를 억제할 수 있었으나, CD22-X/CD79b-X의 조합물은 억제할 수 없었다. 그래프패드 프리즘(Graphpad Prism) 6을 이용한 4 파라미터 로지스틱 곡선 피트를 이용함으로써 추정된 IC₅₀은 7.5 nM이었다(데이터는 평균 값을 나타내고 오차 막대는 표준 편차이다). 추가로, CD22-X/CD79b-Y의 조합물의 적정은 24시간 후 B 세포 상에서의 항-IgM 유도된 CD86 발현을 억제할 수 있었으나 CD22-X/CD79b-X의 조합물은 억제할 수 없었다(도 7 참조).

혈소판 성분채집술 추체로부터 유래된 인간 PBMC를 동결된 분취액으로서 보관하였다. 어세이를 수행하기 전, 세포를 해동시키고 DMEM(라이프 테크놀로지스)으로 세척하고 37℃/5% CO₂ 환경에 적응시켰다. 이 기간 동안, 10% 소 혈청 및 2 mM 글루타민을 함유하는 DMEM으로 세포 표면 단백질 CD22 및 CD79b에 대한 항원 특이성을 갖는 등몰(500 nM) 양의 Fab'-X(Fab-scFv) 및 Fab'-Y(Fab-펩티드)를 희석함으로써 이중특이적 조합물을 생성하였다. 이들 조합물들을 2.5분의 1 희석으로 단계적으로 8회 희석하여 이 조합물에 대한 용량 적정을 생성하였다. Fab'-X와 Fab'-Y를 (37℃/5% CO₂ 환경에서) 90분 동안 함께 항온처리한 후, 2.5x10⁵개의 PBMC를 V-바닥 96웰 플레이트에 첨가하였다. 그 다음, PBMC를 Fab'-X와 Fab'-Y의 조합물에 첨가하고 추가 90분 동안 함께 항온처리하였다. 이 시간 후, 200 nM의 염소 F(ab')₂ 항-인간 IgM(서던 바이오테크놀로지)을 첨가함으로써 37℃에서 24시간 동안 B 세포를 활성화시켰다. 세포 표면 활성화 마커의 검출을 가능하게 하기 위해, 플레이트를 얼음 위에 놓고 빙냉 유동 완충제(PBS + 1% BSA + 0.01% NaN₃)로 1회 세척하였다. 그 다음, 세포를 형광 표지된 항-CD19 항체(비디 바이오사이언스) 및 형광 표지된 항-CD86 항체로 염색하고 암실에서 1시간 동안 얼음 위에서 항온처리하였다. 이 시간 후, 플레이트를 추가 2회 세척하고 25 ㎕의 유동 완충제에 재현탁하였다. 인텔리사이트 HTFC™ 유세포분석기를 이용하여 CD19 및 CD86의 세포 발현을 측정하였다. 데이터 분석 소프트웨어 팩키지 포어사이트™(인텔리사이트)를 이용하여 B 세포가 다른 세포 집단과 상이하다는 것을 확인하였고 각각의 웰에 대해 CD86 수준의 기하평균을 계산하였다. 그 다음, 모든 데이터들을 최대 반응(항-IgM 단독) 마이너스 배경(세포 단독)의 퍼센트 억제율로서 표현하였다. 도 7에서 볼 수 있는 바와 같이, CD22-X/CD79b-Y의 조합물의 적정은 24시간 후 B 세포 상에서의 항-IgM 유도된 CD86 발현을 억제할 수 있었다. 그래프패드 프리즘 6을 이용한 4 파라미터 로지스틱 곡선 피트를 이용함으로써 추정된 IC₅₀은 10.3 nM이었다(데이터는 평균 값을 나타내고 오차 막대는 표준 편차이다).

실시예 6 - CD22 및 CD79b 이중특이적 단백질의 억제 효과는 상이한 항체 V 영역들에 의해 재현될 수 있다 .

면역화 : 선택된 항원을 코딩하는 DNA를 유전자 합성 또는 상업적 공급원으로부터 수득하고 강력한 항시적(constitutive) 프로모터를 갖는 발현 벡터 내로 클로닝하였다. 그 다음, 사내 전기천공 시스템을 이용하여 플라스미드 DNA를 Rab-9 토끼 섬유모세포(ATCC^®CRL-1414™) 내로 형질감염시켰다. 24시간 후, 세포를 유세포분석으로 항원 발현에 대해 확인하고 사용될 때까지 액체 질소에서 분취물로서 동결하였다. 동일한 세포 상에서의 동시-발현, 또는 단일 또는 다중 형질감염된 세포들의 혼합물의 제조를 통해 토끼 1마리당 최대 6개의 항원들을 면역화시켰다. 토끼를 3회 용량의 세포로 면역화시켰다.

항체 발견 : 문헌(Zubler et al. (1985))에 기재된 방법과 유사한 방법을 이용하여 B 세포 배양물을 제조하였다. 요약하건대, 10% FCS(피에이에이 래보러토리스 리미티드(PAA laboratories ltd)), 2% HEPES(시그마 알드리치(Sigma Aldrich)), 1% L-글루타민(깁코 비알엘(Gibco BRL)), 1% 페니실린/스트렙토마이신 용액(깁코 비알엘), 0.1% β-머캡토에탄올(깁코 비알엘), 3% 활성화된 비장세포 배양 상청액 및 감마-조사된 돌연변이체 EL4 뮤린 흉선종 세포(5x10⁴/웰)로 보충된 200 ㎕/웰 RPMI 1640 배지(깁코 비알엘)를 사용하여, 면역화된 토끼로부터의 비장 또는 PBMC 유래의 B 세포를 5% CO₂의 대기 하에 37℃에서 7일 동안 바코딩된 96웰 조직 배양 플레이트에서 웰당 대략 2000개 내지 5000개 세포의 밀도로 배양하였다.

토끼의 면역화에 사용된 항원으로 동시-형질감염된 HEK293 세포를 사용한 균질한 형광 기반의 결합 어세이를 이용하여 B 세포 배양물 상청액에서 항원 특이적 항체의 존재를 확인하였다. 스크리닝은 매트릭스 플레이트메이트(Platemate) 액체 핸들러(handler)를 이용하여 10 ㎕의 상청액을 바코딩된 96웰 조직 배양 플레이트로부터, 표적 항원으로 형질감염된 HEK293 세포를 함유하는 바코딩된 384웰 흑색-벽 어세이 플레이트(대략 3000개의 세포/웰) 내로 옮기는 단계를 포함하였다. 염소 항-토끼 IgG Fcγ 특이적 Cy-5 접합체(잭슨(Jackson))로 결합을 확인하였다. 플레이트를 어플라이드 바이오시스템스(Applied Biosystems) 8200 세포 검출 시스템 상에서 판독하였다.

일차 스크리닝 후, 아비소 온닉스 히트-픽킹 로봇(Aviso Onyx hit-picking robot)을 이용하여 양성 상청액들을 96웰 바코딩된 마스터 플레이트 상에서 통합하였고 세포 배양 플레이트 내의 B 세포를 -80℃에서 동결하였다. 그 다음, 별도로 항원으로 형질감염된 HEK293 세포, 및 항원의 공급원으로서의 재조합 단백질로 코팅된 수퍼아비딘(Superavidin)™ 비드(뱅스 래보러토리스(Bangs Laboratories))에 대한 균질한 형광 기반의 결합 어세이에서 마스터 플레이트를 스크리닝하였다. 각각의 웰에 대한 항원 특이성을 확인하기 위해 이것을 수행하였다.

관심 있는 웰의 선택으로부터 항체 가변 영역 유전자의 회수를 가능하게 하기 위해, 불균질한 B 세포 집단을 함유하는 소정의 웰에서 항원 특이적 B 세포를 확인할 수 있도록 데콘볼루션(deconvolution) 단계를 수행하였다. 형광 초점(Fluorescent foci) 방법(Clargo et al., 2014. Mabs 2014 Jan 1: 6(1) 143-159; 유럽 특허 제1570267B1호)을 이용하여 이것을 달성하였다. 요약하건대, 양성 웰로부터의 면역글로불린 분비 B 세포를 표적 항원으로 형질감염된 HEK293 세포, 또는 바이오티닐화된 표적 항원 및 염소 항-토끼 Fcγ 단편 특이적 FITC 접합체(잭슨)의 1:1200 최종 희석물로 코팅된 스트렙타비딘 비드(뉴 잉글랜드 바이오랩스(New England Biolabs))와 혼합하였다. 1시간 동안 37℃에서 정적 항온처리를 수행한 후, 항원 특이적 B 세포는 그 B 세포를 둘러싸는 형광 할로의 존재로 인해 확인될 수 있었다. 그 다음, 올림푸스(Olympus) 현미경을 이용함으로써 확인된 다수의 이들 개별 B 세포 클론들을 에펜도르프 미세조작기(Eppendorf micromanipulator)로 채취하여 PCR 튜브 내에 침착시켰다. 형광 초점 방법을 다시 이용하여 면역화된 토끼의 골수로부터 직접적으로 유래된 불균질한 B 세포 집단으로부터 항원 특이적 B 세포를 확인하였다.

중쇄 및 경쇄 가변 영역 특이적 프라이머를 사용한 역전사(RT)-PCR로 단일 세포로부터 항체 가변 영역 유전자를 회수하였다. 3' 말단 및 5' 말단에서 제한 부위를 도입함으로써, 가변 영역이 마우스 Fab-X 및 Fab-Y(VH) 또는 마우스 카파(VL) 포유동물 발현 벡터 내로 클로닝될 수 있게 하는 네스티드(nested) 이차 PCR로 2 라운드의 PCR을 수행하였다. Fab-X 및 Fab-Y 발현 벡터를 위한 중쇄 및 경쇄 구축물을, 펙틴(Fectin) 293(라이프 테크놀로지스)을 사용하여 HEK-293 세포 내로 동시-형질감염시켰거나, 엑스피펙타민(Expifectamine)(라이프 테크놀로지스)을 사용하여 Expi293 세포 내로 동시-형질감염시켰고, 재조합 항체를 5 ㎖의 부피로 6웰 조직 배양 플레이트에서 발현시켰다. 5일 내지 7일 발현 후, 상청액을 수거하였다. 항원으로 형질감염된 HEK293 세포 및 재조합 단백질 또는 항원 형질감염된 HEK 세포로 코팅된 수퍼아비딘™ 비드(뱅스 래보러토리스)에 대한 균질한 형광 기반의 결합 어세이에서 상청액을 시험하였다. 클로닝된 항체의 특이성을 확인하기 위해 이것을 수행하였다.

소규모 Fab A-X 및 Fab B-Y의 제조 (소규모(50 ㎖) Expi293 형질감염)

Expi293 세포를 0.5x10⁶개의 생존 세포/㎖의 최종 농도까지 Expi293™ 발현 배지에서 상용적으로 하위배양하고 120 rpm, 8% CO₂ 및 37℃에서 궤도 진탕 항온처리기(멀티트론(Multitron), Infors HT)에서 항온처리하였다.

형질감염 당일, 자동화된 세포 카운터(Vi-CELL, 벡크만 코울터(Beckman Coulter))를 이용하여 세포 생존력 및 농도를 측정하였다. 2.5x10⁶개 생존 세포/㎖의 최종 세포 농도를 달성하기 위해, 적절한 부피의 세포 현탁액을 멸균 250 ㎖ 삼각 진탕 플라스크에 첨가하고 각각의 50 ㎖ 형질감염을 위해 새로운 미리 가온된 Expi293™ 발현 배지를 첨가함으로써 42.5 ㎖의 부피에 도달되게 하였다.

각각의 형질감염을 위한 지질-DNA 복합체를 제조하기 위해, 총 50 ㎍의 중쇄 및 경쇄 플라스미드 DNA를 Opti-MEM^®I 배지(라이프 테크놀로지스)로 2.5 ㎖의 총 부피까지 희석하였고 135 ㎕의 엑스피펙타민™ 293 시약(라이프 테크놀로지스)을 Opti-MEM^®I 배지로 2.5 ㎖의 총 부피까지 희석하였다. 모든 희석물들을 약하게 혼합하고 실온에서 5분 이하의 시간 동안 항온처리한 후, 각각의 DNA 용액을 각각의 희석된 엑스피펙타민™ 293 시약에 첨가하여 5 ㎖의 총 부피를 수득하였다. DNA-엑스피펙타민™ 293 시약 혼합물을 약하게 혼합하고 실온에서 20분 내지 30분 동안 항온처리하여 DNA-엑스피펙타민™ 293 시약 복합체가 형성되게 하였다.

DNA-엑스피펙타민™ 293 시약 복합체 항온처리가 완료된 후, 5 ㎖의 DNA-엑스피펙타민™ 293 시약 복합체를 각각의 진탕 플라스크에 첨가하였다. 진탕 플라스크를 120 rpm, 8% CO₂ 및 37℃에서 궤도 진탕 항온처리기(멀티트론, Infors HT)에서 항온처리하였다.

형질감염시킨 지 대략 16시간 내지 18시간 후, 250 ㎕의 엑스피펙타민™ 293 형질감염 인핸서 1(라이프 테크놀로지스) 및 2.5 ㎖의 엑스피펙타민™ 293 형질감염 인핸서 2(라이프 테크놀로지스)를 각각의 진탕 플라스크에 첨가하였다.

형질감염시킨 지 7일 후, 세포 배양물을 수거하였다. 세포를 50 ㎖ 스핀 튜브(팔콘(Falcon)) 내로 옮기고 4000 rpm에서 30분 동안 회전시킨 후, 0.22 ㎛ 스테리컵(Stericup)(머크 밀리포어(Merk Millipore))을 통해 멸균 여과하였다. 정화되고 멸균 여과된 상청액을 4℃에서 저장하였다. 최종 발현 수준을 단백질 G-HPLC로 측정하였다.

소규모(50 ㎖) 정제 : 소규모 진공 기반의 정제 시스템을 이용하여 친화성 포획으로 Fab-X 및 Fab-Y 둘 다를 별도로 정제하였다. 요약하건대, 50 ㎖의 배양 상청액을 0.22 ㎛ 멸균 여과한 후, 500 ㎕의 Ni 세파로스 비드(지이 헬쓰케어)를 첨가하였다. 그 다음, 상청액 비드 혼합물을 약 1시간 동안 텀블링시킨 후, 진공을 적용함으로써 상청액을 제거하였다. 그 다음, 비드를 세척제 1(50 mM 인산나트륨 1 M NaCl pH 6.2) 및 세척제 2(0.5 M NaCl)로 세척하였다. 50 mM 아세트산나트륨(pH 4.0) + 1 M NaCl을 사용하여 용출을 수행하였다. 용출된 분획을 PBS(시그마, pH 7.4)로 완충제 교환하고 0.22 ㎛ 여과하였다. 최종 풀을 A280 스캔, SE-UPLC(BEH200 방법) 및 SDS-PAGE(환원 및 비환원)로 분석하였고 PTS 엔도세이프 시스템을 이용하여 내독소에 대해 분석하였다.

혈소판 성분채집술 추체로부터 유래된 인간 PBMC를 동결된 분취액으로서 보관하였다. 어세이를 수행하기 전, 세포를 해동시키고 RPMI 1640(라이프 테크놀로지스)으로 세척하고 37℃/5% CO₂ 환경에 적응시켰다. 이 기간 동안, 10% 태아 소 혈청, 50 유닛/㎖ 페니실린, 50 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 및 2 mM L-글루타민을 함유하는 RPMI 1640으로 세포 표면 단백질 CD22 및 CD79b에 대한 항원 특이성을 갖는 등몰(200 nM) 양의 Fab'-X(Fab-scFv) 및/또는 Fab'-Y(Fab-펩티드)를 희석함으로써 이중특이적 항체, 2가 항체 또는 항체 혼합물의 조합물을 생성하였다. 3개의 상이한 CD79b Fab-Y들과 3개의 상이한 CD22 Fab-X들의 이들 조합물들은 표 9에 표시되어 있다.

Fab'A-X와 Fab'B-Y를 (37℃/5% CO₂ 환경에서) 60분 동안 함께 항온처리한 후, V-바닥 96웰 플레이트에서 2.5x10⁵개의 PBMC와 혼합하였다. 그 다음, PBMC와 Fab'A-X 및/또는 Fab'B-Y 조합물을 추가 90분 동안 함께 항온처리하였다. 이 시간 후, 12.5 ㎍/㎖의 염소 F(ab')₂ 항-인간 IgM(서던 바이오테크놀로지)을 첨가함으로써 37℃에서 10분 동안 B 세포를 활성화시켰다. 그 다음, 동등한 부피의 사이토픽스 완충제(비디 바이오사이언시스)를 첨가함으로써 신호전달 반응을 중단시켰다. 그 다음, 플레이트를 15분 동안 실온에서 방치한 후, 5분 동안 500g에서 원심분리하였다. 여분의 상청액을 세포 펠렛으로부터 버렸고 이 세포 펠렛을 유동 완충제(PBS + 1% BSA + 0.1% NaN₃ + 2 mM EDTA)에 재현탁하고 1회 더 세척하였다. 그 다음, 세포를 30분 동안 빙냉 펌 완충제 III(비디 바이오사이언시스)에 재현탁한 후 유동 완충제로 2회 세척하였다. 그 다음, 형광 표지된 항-CD20 항체(비디 바이오사이언시스), 및 위치 759에서 변형된 티로신 잔기를 인식하는 항-인 PLCγ2 항체를 사용하여 세포를 염색하였다. 그 다음, 플레이트를 재현탁하고 실온의 암실에서 1시간 동안 항온처리하였다. 이 시간 후, 플레이트를 추가 2회 세척하고 40 ㎕의 유동 완충제에 재현탁하였다. 인텔리사이트 HTFC™ 유세포분석기를 이용하여 CD20 및 PLCγ2의 세포 발현을 측정하였다.

데이터 분석 소프트웨어 팩키지 포어사이트™(인텔리사이트)를 이용하여 B 세포가 다른 세포 집단과 상이하다는 것을 확인하였고 각각의 웰에 대해 PLCγ2 수준의 기하평균을 계산하였다. 그 다음, 모든 데이터들을 최대 반응(항-IgM 단독) 마이너스 배경(세포 단독)의 퍼센트 억제율로서 표현하였다.

도 8에서 볼 수 있는 바와 같이, 데이터는 모든 상이한 항체 V 영역들을 사용하는, CD22와 CD79b의 조합물이 항-IgM으로 자극된 B 세포에서 인-PLCγ2 발현을 억제할 수 있다는 것을 보여준다.

실시예 7: 신규 이중특이적 항체 표적을 확인하기 위한, 이종이량체적으로 테더링된 단백질 복합체들의 큰 패널의 격자 스크리닝

도입 : 상기 실시예들에서 이중특이적 포맷 및 스크리닝 방법을 성공적으로 검증한 후, 스크리닝을 더 큰 수의 항원 쌍들까지 확장하였다. B 세포 상에서 발현된 23개의 상이한 항원들에 대한 항체 가변(V) 영역 쌍들의 패널을 생성하였다. Fab-Kd-Fab[즉, A-X:Y-B, 이때 A 및 B는 Fab 단편임] 포맷을 사용하여, 315개의 상이한 항원 쌍 조합물들 각각의 다수의 V 영역 조합물들을 나타내는, 이종이량체적으로 테더링된 단백질 복합체들의 격자를 형성하였다. 이중특이적 항체에 의한 중재를 위한 신규 표적 쌍을 선택하기 위해 고속대량 유세포분석 어세이에서 BCR(B 세포 수용체) 신호전달을 조절하는 능력에 대해 이들 조합물들을 스크리닝하였다.

항체를 실시예 6에 기재된 바와 같이 단리하였다.

스크리닝 어세이

37℃로 설정된 수조를 이용하여 도너 PBMC들을 신속히 해동하고 50 ㎖ 팔콘 튜브로 조심스럽게 옮겼다. 그 후, 이들을 어세이 배지로 5 ㎖까지 적가 희석하여 삼투압 쇼크를 최소화하였다. 그 다음, 세포를 20 ㎖까지 조심스럽게 희석한 후, 최종 배지 희석제를 첨가하여 50 ㎖의 부피를 만들었다. 그 후, 세포를 5분 동안 500g에서 회전시킨 후, 상청액을 제거하고 세포를 1 ㎖의 배지에 재현탁하였다. 그 다음, 세포를 카운팅하고 1.66x10⁶개 세포/㎖까지 희석한 후, 웰당 30 ㎕를 V-바닥 TC 플레이트 내로 분배하여, 5.0x10⁴개 세포/웰의 최종 어세이 농도를 제공하였다. 그 다음, 세포 플레이트가 요구될 때까지 이 세포 플레이트를 37℃ 및 5% CO₂ 항온처리기에서 덮여진 상태로 저장하여, 최소 1시간의 휴면을 상기 세포 플레이트에게 제공하였다. Fab-X 시약과 Fab-Y 시약을 어세이 배지 중의 5x 최종 어세이 농도에서 등몰 비로 혼합하고 37℃ 및 5% CO₂에서 90분 동안 항온처리하였다. 샘플을 96웰 U-바닥 폴리프로필렌 플레이트에서 제조하고 항온처리 동안 덮어두었다.

10 ㎕의 5x Fab-KD-Fab 혼합물을, 세포를 함유하는 적절한 시험 웰에 첨가하고 30초 동안 1000 rpm에서 진탕함으로써 혼합한 후, 37℃ 및 5% CO₂에서 90분 동안 항온처리하였다. 그 다음, 세포를 10 ㎕의 항-인간 IgM으로 자극하였다. 자극제의 최종 어세이 농도는 어세이 패널 판독대상에 따라 달라졌고, 3개의 항체 칵테일 A, B 및 C(이하에 상세히 기재됨)를 50 ㎍/㎖(칵테일 A 및 C) 또는 25 ㎍/㎖(칵테일 B)의 최종 어세이 농도에서 자극하였다. 그 후, 어세이 플레이트를 30초 동안 1000 rpm에서 약하게 혼합한 후, 5분(항체 칵테일 A 및 C) 또는 2분(항체 칵테일 B) 동안 37℃ 및 5% CO₂에서 항온처리하였다. 150 ㎕의 빙냉 BD 사이토픽스를 모든 웰들에 첨가하여 어세이를 중단하고 실온에서 15분 동안 항온처리하였다. 그 다음, 고정된 세포를 5분 동안 500g에서 회전시켜 세포를 펠렛화하였고 바이오텍(BioTek) ELx405 플레이트 세척제를 사용하여 상청액을 제거하였다. 플레이트를 30초 동안 2400 rpm에서 볼텍싱함으로써 펠렛을 재현탁하였다. 이어서, 100 ㎕의 빙냉 BD 세포 투과가능화 완충제 III을 첨가함으로써 30분 동안 4℃에서 세포를 투과가능하게 만들었다. 그 다음, 세포를 100 ㎕ FACS 완충제로 세척하고 5분 동안 500g에서 회전시켰다. 상청액을 ELx405로 다시 제거한 후, 이를 사용하여 200 ㎕의 FACS 완충제를 신속히 분배함으로써 임의의 잔류 투과가능화 완충제를 씻어내었다. 세포를 500g에서 다시 회전시켰고 뒤집어 상청액을 제거하였다. 이전 회전 단계 동안 항체 칵테일을 FACS 완충제로 제조하고 광으로부터 차폐된 상태로 보관하였다. 그 후, 세포를 볼텍싱(2400 RPM, 30초)으로 재현탁한 후, 20 ㎕의 항체 칵테일을 모든 웰들에 첨가하였고 플레이트를 1000 rpm에서 30초 동안 진탕하였다. 그 다음, 세포를 실온의 암실에서 60분 동안 항온처리하였다.

이어서, 세포를 500g에서 회전시키면서 200 ㎕ FACS 완충제로 2회 세척하였고, 각각의 단계 후 상청액을 제거하였다. 마지막으로, 세포를 2400 rpm에서 30초 동안 볼텍싱함으로써 재현탁한 후, 최종 20 ㎕의 FACS 완충제를 첨가하였다. 그 다음, 플레이트(들)를 인텔리사이트 HTFC/iQue 기계 상에서 판독하였다.

FACS 완충제 = PBS + 1% BSA + 0.05% NaN₃ + 2 mM EDTA

항체 칵테일 A = 1:2 CD20 PerCp-Cy5.5(비디 바이오사이언시스) + 1:5 PLCγ2 AF88 + 1:10 Akt AF647 + 1:50 ERK1/2 PE(FACS 완충제로 희석됨)

항체 칵테일 B = 1:2 CD20 PerCp-Cy5.5(비디 바이오사이언시스) + 1:5 Syk PE + 1:5 BLNK AF647(FACS 완충제로 희석됨)

항체 칵테일 C = 1:5 CD20 PerCp-Cy5.5(바이오레전드(Biolegend)) + 1:5 PLCγ2 AF488 + 1:10 Akt AF647 + 1:5 Syk PE(FACS 완충제로 희석됨)

Fab-X + Fab-Y 조합물을 항체 칵테일 A 및 B 또는 C 단독으로 스크리닝하였다. 모든 스크린들을 2명의 상이한 혈액 도너들로부터의 원추 세포에 대해 수행하였다. 상업적으로 입수가능한 소프트웨어 수단을 이용하여 데이터를 포획하고 평가하였다. 총 2500개의 Fab-X + Fab-Y 조합물들을 315개의 상이한 항원 조합물들에 대해 스크리닝하였다.

결과

B 세포 기능을 억제하는 항원들의 신규 조합물을 찾는 본 실시예에서, 각각의 Fab-Kd-Fab[즉, A-X:Y-B, 이때 A 및 B는 Fab 단편임] 조합물에 의한 BCR 신호전달 캐스케이드 단백질의 인산화 유도의 퍼센트 억제율을 계산하였고, 양성 조합물에 대한 기준을 V 영역들의 적어도 하나의 조합물에 의한 적어도 2개의 인-판독대상들의 적어도 30% 억제로서 설정하였다. 이 역치에 따르면, 조사된 315개 중 11개의 신규 항원 쌍 조합물들이 요구된 기준을 충족시켰다. 이것은 원하는 활성의 조합물을 찾기 위한 다수의 조합물들의 스크리닝의 중요성, 및 CD79b와 CD22의 조합물의 활성이 얼마나 드문 지를 입증하는 3.5% 히트율을 나타낸다.

도 10 내지 12는 항원 격자 교차특이성에 대한 데이터를 보여준다. 값들은 각각 Syk, PLCγ2 및 AKT의 인산화의 퍼센트 억제율(활성화에 대한 음성 값)이고 평가된 다수의 V 영역 조합물들의 평균을 나타낸다. 315개의 상이한 항원 조합물들을 시험하였고, 확인될 수 있는 바와 같이 항체의 상이한 조합물들에 의한 BCR 신호전달에 대한 효과는 강한 억제, 예를 들면, Fab-Y 상의 항원 3(CD22)과 조합된 Fab-X 상의 항원 2(CD79b)(인 Syk의 69.66% 억제) 및 Fab-X 상의 항원 3(CD22)과 조합된 Fab-Y 상의 항원 2(CD79b)(도 11에 나타낸 인 Syk의 52.32% 억제)부터 활성화, 예를 들면, X 상의 항원 6 및 Y 상의 항원 11(마이너스 118.10% 인 Syk, 도 11)까지 상당히 다양하였다.

도 10 내지 12에 나타낸 평균 % 값을 나타내는 각각의 데이터 점은 도 13에서 Fab-X 상의 항원 2(CD79b)와 Fab-Y 상의 항원 3(CD22)에 대해 표시되어 있다. 이 경우, 상이한 항체 V 영역들의 23개 상이한 조합물들을 평가하였다. 대안적인 배향의 동일한 항원 조합물, 즉 Fab-Y 상의 항원 2(CD79b)와 Fab-X 상의 항원 3(CD22)은 도 14에 표시되어 있다. 이 경우, 상이한 항체 V 영역들의 9개 상이한 조합물들을 평가하였다. 모든 V 영역들은 억제를 보이지만, 유리하게는 이 방법도 최적 V 영역 조합물의 선택에 사용될 수 있다.

실시예 8 - Fab-Kd-Fab 스크리닝 포맷에서의 항원 CD79b 및 항원 CD22 동시-표적화의 활성과 분자적으로 연결된 이중특이적 BYbe 포맷에서의 항원 CD79b 및 항원 CD22 동시-표적화의 활성의 비교

도입 : Fab-Kd-Fab 이종이량체적으로 테더링된 스크리닝 복합체에서 확인된 CD79b/CD22 표적 쌍 활성이 대안적 치료 분자적으로 연결된 포맷에서 유사한 원하는 활성으로 해석될 수 있는지를 확인하기 위해, 항원 CD79b 특이성(VR4447) 및 항원 CD22 특이성(VR4130)을 BYbe 포맷으로 생성하였다. 이 BYbe 포맷은 링커 SGGGGSGGGGS(서열번호 17)를 통해 항-항원 CD79b Fab(VR4447)의 중쇄에 융합된 디설파이드 안정화된(ds) 단일 쇄(sc)-Fv로서 항-항원 CD22 V 영역(VR4130)으로 구성된다.

방법 :

기능 스크리닝을 위한 BYbe의 정제를 다음과 같이 수행하였다:

기능 스크리닝 BYbe(Fab-dsscFv[Fab 중쇄의 C 말단 상에 부착된 scFv]) 포맷을 다음과 같이 정제하였다. 표준 expiHEK 또는 CHO 발현으로부터의 정화된 세포 배양 상청액을 0.22 ㎛ 멸균 여과하였다. 여과된 상청액을, PBS(pH 7.4)(시그마 알드리치 케미칼스(Sigma Aldrich Chemicals))로 평형화된 50 ㎖ 감마바인드플러스(GammabindPlus) 세파로스 XK26 컬럼(지이 헬쓰케어) 상에 2 ㎖/분의 속도로 적재하였다. 적재 후, 컬럼을 PBS(pH 7.4)로 세척한 후 0.1 M 글리신/HCl(pH 2.7)로 용출하였다. 용출 후, 280 nm에서 흡광도를 측정하였고, 용출 피크를 수집한 후 25분의 1 부피의 2 M 트리스/HCl(pH 8.5)로 중화시켰다. 10 kDa(BYbes) 분자량 컷오프 막을 갖는 아미콘 울트라(Amicon Ultra)-15 농축기를 이용하고 스윙 아웃 로터(swing out rotor)로 4000xg에서 원심분리함으로써 상기 중화된 샘플을 농축하였다. 농축된 샘플을 PBS(pH 7.4)로 평형화된 XK16/60 또는 XK26/60 수퍼덱스200 컬럼(지이 헬쓰케어)에 적용하였다. 상기 컬럼을 각각 1 ㎖/분 또는 2.6 ㎖/분의 속도로 PBS(pH 7.4)의 등용매 구배로 현상하였다. 분획을 수집하였고, 280 nm에서 흡광도로 검출하면서 1 ㎖/분의 속도에서 0.2 M 인산염(pH 7.0)의 등용매 구배로 현상된 TSK 겔 G3000SWXL(5 ㎛, 7.8X300 mm) 컬럼 상에서 크기 배제 크로마토그래피로 분석하였다. 선택된 단량체 분획을 풀링하였고, 10 kDa 분자량 컷오프 막을 갖는 아미콘 울트라-15 농축기를 이용하고 스윙 아웃 로터로 4000xg에서 원심분리하여 1 mg/㎖ 초과의 농도까지 농축하였다. 최종 샘플을 농도에 대해서는 A280 스캐닝 UV-가시광선 분광계(Cary 50Bio)로 분석하였고; % 단량체에 대해서는 280 nm에서 흡광도로 검출하면서 1 ㎖/분의 속도에서 0.2 M 인산염(pH 7.0)의 등용매 구배로 현상된 TSK 겔 G3000SWXL(5 ㎛, 7.8x300 mm) 컬럼 상에서 크기 배제 크로마토그래피로 분석하였고; 53분 동안 (겔당) 50 mA에서 4-20% 트리스-글리신 1.5 mm 겔(노벡스(Novex)) 상에서의 환원 및 비환원 SDS-PAGE 실행으로 분석하였고; 내독소에 대해서는 리뮬러스 아베보사이트 용해물(Limulus Amebocyte Lysate)(LAL) 검사 카트리지를 갖춘 찰스 리버의 엔도세이프^®휴대용 검사 시스템으로 분석하였다.

기능 어세이

활성화 마커 어세이: 항원 CD79b 특이적 Fab'-Y와 항원 CD22 특이적 Fab'-X를 등몰 농도로 (37℃ 및 5% CO₂ 환경에서) 60분 동안 함께 항온처리하였다. 조합물을 1:4 연속 희석으로 100 nM의 출발 몰농도로부터 적정하였다. 항원 CD79b 및 CD22 특이적 BYbe도 1:4 연속 희석으로 100 nM의 출발 몰농도로부터 적정하였다. V-바닥 96웰 플레이트에서, 1.5x10⁵개의 PBMC를, 적정된 Fab'-X 및 Fab'-Y 조합물 또는 적정된 BYbe가 첨가된 웰에 첨가하였다. Fab'-X 및 Fab'-Y 조합물 또는 BYbe를 추가 90분 동안 세포와 함께 항온처리하였다. 이 시간 후, 25 ㎍/㎖의 염소 F(ab')₂ 항-인간 IgM(서던 바이오테크놀로지)을 첨가함으로써 37℃ 및 5% CO₂에서 24시간 동안 B 세포를 활성화시켰다.

100 ㎕의 빙냉 FACS 완충제(PBS + 1% BSA + 0.1% NaN₃ + 2 mM EDTA)를 상기 웰에 첨가하였고, 플레이트를 밀봉하고 대략 15분 동안 젖은 얼음으로 덮은 후, 4℃에서 5분 동안 500xg에서 원심분리하였다. 여분의 상청액을 세포 펠렛으로부터 버렸고 플레이트를 30초 동안 2000 rpm에서 진탕하였다.

그 다음, 세포를 형광 표지된 항-CD19 항체, 항-CD20 항체, 항-CD71 항체, 항-CD40 항체 및 항-CD86 항체(비디 바이오사이언시스)의 칵테일로 염색하였다. 플레이트를 짧게 진탕시키고 암실 내의 젖은 얼음 위에서 1시간 동안 항온처리하였다. 이 시간 후, 플레이트를 2회 세척하고 20 ㎕의 FACS 완충제에 재현탁하였다. 인텔리사이트 iQUE^® 스크리너 유세포분석기를 이용하여 CD19, CD20, CD71, CD40 및 CD86의 세포 발현을 측정하였다.

데이터 분석 소프트웨어 팩키지 포어사이트™(인텔리사이트)를 이용하여 B 세포가 다른 세포 집단과 상이하다는 것을 확인하였고 각각의 웰에 대해 CD71, CD40 및 CD86 수준의 기하평균을 계산하였다. 그 다음, 모든 데이터들을 최대 반응(항-IgM 단독) 마이너스 배경(세포 단독)의 퍼센트 억제율로서 표현하였다.

인유동(PhosFlow) 어세이 : 항원 CD79b 특이적 Fab'-Y 및 항원 CD22 특이적 Fab'-X를 등몰 농도로 (37℃ 및 5% CO₂ 환경에서) 60분 동안 함께 항온처리하였다. 조합물을 1:4 연속 희석으로 100 nM의 출발 몰농도로부터 적정하였다. 항원 CD79b 및 항원 CD22 특이적 BYbe도 1:4 연속 희석으로 100 nM의 출발 몰농도로부터 적정하였다. V-바닥 96웰 플레이트에서, 5.0x10⁴개의 PBMC를 웰에 첨가하였고, 이것에 적정된 Fab'-X와 Fab'-Y의 조합물 또는 적정된 BYbe를 첨가하였다. Fab'-X와 Fab'-Y의 조합물 또는 BYbe를 추가 90분 동안 세포와 함께 항온처리하였다. 이 시간 후, 25 ㎍/㎖의 염소 F(ab')₂ 항-인간 IgM(서던 바이오테크놀로지)을 첨가함으로써 37℃ 및 5% CO₂에서 15분 동안 B 세포를 활성화시켰다. 그 후, 동등한 부피의 사이토픽스 완충제(비디 바이오사이언시스)를 첨가함으로써 신호전달 반응을 중단시켰다. 그 다음, 플레이트를 15분 동안 실온에서 방치한 후, 5분 동안 500xg에서 원심분리하였다. 여분의 상청액을 세포 펠렛으로부터 버렸고 이 세포 펠렛을 FACS 완충제(PBS + 1% BSA + 0.01% NaN₃ + 2 mM EDTA)에 재현탁하고 1회 더 세척하였다. 이어서, 세포를 30분 동안 빙냉 펌 완충제 III(비디 바이오사이언시스)에 재현탁한 후, 유동 완충제로 2회 세척하였다.

그 다음, 세포를 형광 표지된 항-CD20 항체(비디 바이오사이언시스) 및 항-인산화된 PLCγ2, 항-인산화된 Akt 및 항-인산화된 p38 항체(비디 바이오사이언시스)로 염색하였다. 그 다음, 플레이트를 재현탁하고 실온의 암실에서 1시간 동안 항온처리하였다. 이 시간 후, 플레이트를 2회 세척하고 20 ㎕의 FACS 완충제에 재현탁하였다. 인텔리사이트 iQUE^® 유세포분석기를 이용하여 CD20, 및 인-PLCγ2, 인-Akt 및 인-p38의 세포 발현을 측정하였다.

데이터 분석 소프트웨어 팩키지 포어사이트™(인텔리사이트)를 이용하여 B 세포가 다른 세포 집단과 상이하다는 것을 확인하였고 각각의 웰에 대해 PLCγ2, Akt 및 p38 수준의 기하평균을 계산하였다. 그 다음, 모든 데이터들을 최대 반응(항-IgM 단독) 마이너스 배경(세포 단독)의 퍼센트 억제율로서 표현하였다.

결과

인유동 어세이 : 도 15의 데이터는 Fab-Kd-Fab 또는 BYbe 포맷에서의 항원 CD79b 및 항원 CD22의 표적화가 항-IgM으로 자극된 B 세포에서 인산화된 PLCγ2를 억제할 수 있다는 것을 보여준다. 도 16의 데이터는 Fab-Kd-Fab 또는 BYbe 포맷에서의 항원 CD79b 및 항원 CD22의 표적화가 항-IgM으로 자극된 B 세포에서 인산화된 P38을 억제할 수 있다는 것을 보여준다. 도 17의 데이터는 Fab-Kd-Fab 또는 BYbe 포맷에서의 항원 CD79b 및 항원 CD22의 표적화가 항-IgM으로 자극된 B 세포에서 인산화된 Akt를 억제할 수 있다는 것을 보여준다.

활성화 마커 어세이 : 도 18에서 확인될 수 있는 바와 같이, 데이터는 Fab-Kd-Fab 또는 BYbe 포맷에서의 항원 CD79b 및 항원 CD22의 표적화가 항-IgM으로 자극된 B 세포 상에서의 CD71 발현을 억제할 수 있다는 것을 보여준다. 도 19의 데이터는 Fab-Kd-Fab 또는 BYbe 포맷에서의 항원 CD79b 및 항원 CD22의 표적화가 항-IgM으로 자극된 B 세포 상에서의 CD40 발현을 억제할 수 있다는 것을 보여준다. 도 20의 데이터는 Fab-Kd-Fab 또는 BYbe 포맷에서의 항원 CD79b 및 항원 CD22의 표적화가 항-IgM으로 자극된 B 세포 상에서의 CD86 발현을 억제할 수 있다는 것을 보여준다.

실시예 9 - 생체내 반감기의 연장을 위해 항-알부민 결합 도메인이 더 추가된, 분자적으로 연결된 이중특이적 BYbe 포맷에서 항원 CD79b 및 항원 CD22 동시-표적화의 활성화의 비교

도입 : Fab-Kd-Fab 이종이량체적으로 테더링된 스크리닝 복합체에서 확인된 CD79b/CD22 표적 쌍 활성이 생체내 반감기 연장에서 표적화된 항-알부민을 가진, 잠재적 치료 분자적으로 연결된 포맷에서 유사한 원하는 활성으로 해석될 수 있는지를 확인하기 위해, 서열 SGGGGSGGGGS(서열번호 17)를 갖는 링커를 통해 항-알부민 항체 단편을 실시예 8에 기재된 BYbe 포맷의 항원 CD22 Fab의 경쇄에 융합시켰다. 항원 CD79b 특이성(VR4447) 및 항원 CD22 특이성(VR4130 및 VR4126)을, 항-알부민 단편(VR0645)이 추가되거나 추가되지 않은 BYbe 포맷으로 생성하였다.

이 실험에서 사용된 구축물의 설명

방법

항-알부민 추가 특이성을 갖거나/갖지 않는 BYbe의 정제

BYbe(Fab-dsscFv[Fab 중쇄의 C 말단 상에 부착된 scFv]) 및 항-알부민을 갖는 BYbe(Fab-2xdsscFv[Fab 중쇄 및 경쇄의 C 말단 상에 부착된 scFv들]) 포맷을 다음과 같이 정제하였다. 표준 expiHEK 또는 CHO 발현으로부터의 정화된 세포 배양 상청액을 0.22 ㎛ 멸균 여과하였다. 여과된 상청액을, PBS(pH 7.4)(시그마 알드리치 케미칼스)로 평형화된 50 ㎖ 감마바인드플러스 세파로스 XK26 컬럼(지이 헬쓰케어) 상에 2 ㎖/분의 속도로 적재하였다. 적재 후, 컬럼을 PBS(pH 7.4)로 세척한 후 0.1 M 글리신/HCl(pH 2.7)로 용출하였다. 용출 후, 280 nm에서 흡광도를 측정하였고, 용출 피크를 수집한 후 25분의 1 부피의 2 M 트리스/HCl(pH 8.5)로 중화시켰다. 10 kDa 또는 30 kDa 분자량 컷오프 막을 갖는 아미콘 울트라-15 농축기를 이용하고 스윙 아웃 로터로 4000xg에서 원심분리함으로써 상기 중화된 샘플을 농축하였다. 농축된 샘플을 PBS(pH 7.4)로 평형화된 XK16/60 또는 XK26/60 수퍼덱스 200 컬럼(지이 헬쓰케어)에 적용하였다. 상기 컬럼을 각각 1 ㎖/분 또는 2.6 ㎖/분의 속도로 PBS(pH 7.4)의 등용매 구배로 현상하였다. 분획을 수집하였고, 280 nm에서 흡광도로 검출하면서 1 ㎖/분의 속도에서 0.2 M 인산염(pH 7.0)의 등용매 구배로 현상된 TSK 겔 G3000SWXL(5 ㎛, 7.8X300 mm) 컬럼 상에서 크기 배제 크로마토그래피로 분석하였다. 선택된 단량체 분획을 풀링하였고, 10 kDa 또는 30 kDa 분자량 컷오프 막을 갖는 아미콘 울트라-15 농축기를 이용하고 스윙 아웃 로터로 4000xg에서 원심분리하여 1 mg/㎖ 초과의 농도까지 농축하였다. 최종 샘플을 농도에 대해서는 A280 스캐닝 UV-가시광선 분광계(Cary 50Bio)로 분석하였고; % 단량체에 대해서는 280 nm에서 흡광도로 검출하면서 1 ㎖/분의 속도에서 0.2 M 인산염(pH 7.0)의 등용매 구배로 현상된 TSK 겔 G3000SWXL(5 ㎛, 7.8x300 mm) 컬럼 상에서 크기 배제 크로마토그래피로 분석하였고; 53분 동안 (겔당) 50 mA에서 4-20% 트리스-글리신 1.5 mm 겔(노벡스) 상에서의 환원 및 비환원 SDS-PAGE 실행으로 분석하였고; 내독소에 대해서는 리뮬러스 아베보사이트 용해물(LAL) 검사 카트리지를 갖춘 찰스 리버의 엔도세이프^®휴대용 검사 시스템으로 분석하였다.

100 nM의 각각의 구축물 정제된 단백질을, 10% 태아소 혈청 및 2 mM 글루타맥스를 함유하는 RMPI 1640 배지(R10 배지)에서 37℃/5% CO₂에서 60분 동안 5명의 개별 도너들로부터 유래된 인간 PBMC와 미리 항온처리하였다. 60분 후, B 세포만을 자극하도록 디자인된 25 ㎍/㎖의 염소 항-IgM 항체로 세포를 자극하였다. 24시간 후, 플레이트를 얼음 위에 놓아 임의의 추가 세포 활성화를 중단시킨 후, 빙냉 유세포분석 완충제(PBS + 1% BSA + 0.01% NaN₃)로 1회 세척하였다. 모든 상청액을 제거하였고 세포 펠렛을 재현탁하였다. 세포를 얼음 위에 놓고 항-CD19 항체, 항-CD20 항체, 항-CD27 항체, 항-CD71 항체 및 항-CD86 항체의 칵테일을 첨가하였다. 세포를 60분 동안 항온처리한 후, 유세포분석 완충제로 2회 세척하였다. iQUE 고속대량 유세포분석기를 이용하여 항-CD27 항체, 항-CD71 항체 및 항-CD86 항체와 CD19/CD20 양성 B 세포의 결합에 대한 데이터를 생성하였다. 포어사이트 소프트웨어를 사용하여 항-CD27 항체, 항-CD71 항체 및 항-CD86 항체와 B 세포의 결합에 대한 막대그래프를 생성하고 기하평균 강도 판독치를 유도하였다. 이 데이터를 엑셀 내로 불러왔고 각각의 조합물에 대한 퍼센트 억제율 값을 생성하였다. 그 다음, 데이터를 그래프패드 프리즘내로 불러왔고 각각의 조합물에 대해 '+'로 표시된 평균을 갖는 휘스커(whisker) 도표를 생성하였다.

도 21은 VR4447/VR4126 BYbe 및 VR4447/VR4126/VR645 BYbe/알부민에 의해 유도된, B 세포 상에서의 CD27 발현의 억제를 보여준다. 검사된 5명의 도너들 전체에서 이들 둘 다가 항-IgM 유도된 CD27의 일관되게 유사한 수준의 억제를 보였다. 도 22는 VR4447/VR4126 BYbe 및 VR4447/VR4126/VR645 BYbe/알부민에 의해 유도된, B 세포 상에서의 CD71 발현의 억제를 보여준다. 5명의 도너들 전체에서 이들 둘 다가 항-IgM 유도된 CD71의 일관되게 유사한 수준의 억제를 보였다. 도 23은 VR4447/VR4126 BYbe 및 VR4447/VR4126/VR645 BYbe/알부민에 의해 유도된, B 세포 상에서의 CD86 발현의 억제를 보여준다. 5명의 도너들 전체에서 이들 둘 다가 항-IgM 유도된 CD86의 일관되게 유사한 수준의 억제를 보였다.

도 24는 VR4447/VR4130 BYbe 및 VR4447/VR4130/VR645 BYbe/알부민에 의해 유도된, B 세포 상에서의 CD27 발현의 억제를 보여준다. 검사된 5명의 도너들 전체에서 이들 둘 다가 항-IgM 유도된 CD27의 일관되게 유사한 수준의 억제를 보였다. 도 25는 R4447/VR4130 BYbe 및 VR4447/VR4130/VR645 BYbe/알부민에 의해 유도된, B 세포 상에서의 CD71 발현의 억제를 보여준다. 5명의 도너들 전체에서 이들 둘 다가 항-IgM 유도된 CD71의 일관되게 유사한 수준의 억제를 보였다. 도 26은 R4447/VR4130 BYbe 및 VR4447/VR4130/VR645 BYbe/알부민에 의해 유도된, B 세포 상에서의 CD86 발현의 억제를 보여준다. 5명의 도너들 전체에서 이들 둘 다가 항-IgM 유도된 CD86의 일관되게 유사한 수준의 억제를 보였다.

실시예 10 - 항-알부민이 더 추가되었거나 추가되지 않은, 분자적으로 연결된 이중특이적 BYbe의 사용 시 기억 B 세포 기능에 대한 항원 CD79b 및 항원 CD22의 동시-표적화의 효과

도입: CD79b/CD22의 표적화가 장기간 배양에서 배양된 B 세포에 대한 기능적 효과를 갖는 지를 평가하기 위해, 단리 또는 혼합된 PBMC 배양에서 B 세포로부터의 IgG 생성을 측정하였다. 리콜(recall) 항원 파상풍 변성독소에 대한 특이적 항체의 측정은 기억 B 세포 기능의 판독결과를 제공한다.

항원 CD79b 특이성(VR4447) 및 항원 CD22 특이성(VR4126, VR4127 및 VR4130)을, 항-알부민 단편(VR0645)이 추가되었거나 추가되지 않은 BYbe 포맷으로 생성하였다. 서열 SGGGGSGGGGS(서열번호 17)를 갖는 링커를 통해 항-알부민 항체 단편을 실시예 8에 기재된 바와 같이 BYbe 포맷의 항원 CD22 Fab의 경쇄에 융합시켰다.

이 실험에서 사용된 구축물의 설명

방법

항-알부민 추가 특이성을 갖거나/갖지 않는 BYbe의 정제 :

BYbe(Fab-dsscFv[Fab 중쇄의 C 말단 상에 부착된 scFv]) 및 항-알부민을 갖는 BYbe(Fab-2xdsscFv[Fab 중쇄 및 경쇄의 C 말단 상에 부착된 scFv들]) 포맷을 실시예 9에 기재된 바와 같이 정제하였다.

B 세포의 활성화 및 파상풍 변성독소 특이적 IgG의 측정

10% 태아소 혈청 및 2 mM 글루타맥스를 함유하는 1640 배지(R10 배지)에서 최대 3명의 개별 도너들로부터 유래된 인간 PBMC 또는 정제된 B 세포를 6일 동안 500 ng/㎖ CD40L, 1 ㎍/㎖ CpG 및 50 ng/㎖ IL-21로 자극하였다. 정제된 단백질의 구축물을 0일째 날에 100 nM의 최종 농도로 첨가하고 어세이의 지속시간 동안 배양 배지에서 유지하였다. 6일 후, 상청액을 수거하고 파상풍 변성독소 특이적 IgG의 양을 ELISA로 검출하였다. 요약하건대, 맥시소르프(Maxisorp) 절반-웰 ELISA 플레이트(넌크(Nunc))를 4℃에서 하룻밤 동안 PBS 중의 10 ㎍/㎖ 파상풍 변성독소로 코팅하였다. 그 다음, 상기 플레이트를, 2시간 동안 0.05% 트윈20을 함유하는 PBS 중의 5% 밀크로 차단하였다. 상청액을 희석한 후, 실온에서 2시간 동안 첨가하였다. 상기 플레이트를 PBS-0.05% 트윈 20으로 세척하였고, 5% 밀크-PBS 0.05% 트윈20으로 1 ㎍/㎖까지 희석된 퍼록시다제-염소 항-인간 IgG(H+L)를 사용하여 파상풍 결합된 항체를 검출하였다. TMB 기질 용액(KPL)을 사용하여 플레이트를 현상하였고, 시너지(Synergy) 2 마이크로플레이트 판독기(바이오텍)를 이용하여 450 nM에서 흡광도를 측정하였다. 데이터를 엑셀 내로 불러왔고 시험 항체 없이 배양된 세포와 비교하여 퍼센트 억제율을 계산하였다. 그 후, 데이터를 그래프패드 프리즘^® 내로 불러오고 막대 도표로서 작도하였다.

도 27은 VR4447/VR4126 BYbe, VR4447/VR4127 BYbe 및 VR4447/VR4130 BYbe와 함께 배양된 PBMC로부터의 파상풍 변성독소 IgG 생성의 억제를 보여준다. 데이터는 3명의 도너들로부터의 풀링된 데이터를 나타낸다.

도 28은 VR4447/VR4126 BYbe, VR4447/VR4127 BYbe 및 VR4447/VR4130 BYbe와 함께 배양된 정제된 B 세포로부터의 파상풍 변성독소 IgG 생성의 억제를 보여준다. 데이터는 2명의 도너들로부터의 풀링된 데이터를 나타낸다.

도 29는 VR4447/VR4126 BYbe, VR4447/VR4127 BYbe, VR4447/VR4130 BYbe, VR4447/VR4126/VR645 BYbe/알부민 및 VR4447/VR4130/VR645 BYbe/알부민과 함께 배양된 PBMC 또는 정제된 B 세포로부터의 파상풍 변성독소 IgG 생성의 억제를 보여준다. 데이터는 단일 도너로부터 표시된다.

실시예 11 - SLE 환자 B 세포에서의 BCR 신호전달의 이상조절 및 SLE B 세포 기능에 대한 항원 CD79b 및 항원 CD22의 동시-표적화의 효과

도입: CD79b/CD22의 조합물이 자가면역 질환을 갖는 사람을 치료하는 데 사용될 수 있는지를 평가하기 위해, 본 발명자들은 전신 홍반성 루푸스(SLE)를 갖는 환자로부터의 B 세포를 모델 시스템으로서 사용하였다. B 세포 기능에 관여하되 강강한 지원자에 비해 SLE 환자에서 이상조절되는 것으로 공지되어 있는 신호전달 단백질의 활성화 상태에 대한 CD79b/CD22 조합물(VR4447/VR4130)의 영향을 시험하였다. 이 실험에서, 12명의 SLE 환자들 및 12명의 건강한 지원자들로부터의 B 세포를 그의 활성화 상태에 미치는 CD79b와 CD22의 동시-표적화의 효과에 대해 비교하였다.

방법:

인유동 어세이: 웰당 2x10⁵개의 PBMC를 사용하여 모든 어세이들을 수행하였다.

처리된 샘플에서 항원 CD79b 및 항원 CD22 특이적 BYbe를 100 nM의 농도로 시험하였다. 건강한 지원자 및 SLE를 갖는 환자 둘 다로부터의 PBMC를 37℃에서 90분 동안 BYbe와 함께 미리 항온처리하였다. 비처리된 샘플에서, 이 항원처리 기간 동안 BYbe를 단순히 누락하였다. 이 시간 후, 세포를 37℃ 및 5% CO₂에서 10분 동안 25 ㎍/㎖의 염소 F(ab')₂ 항-인간 IgM(서던 바이오테크놀로지)으로 활성화시켰고 고정제(사이토픽스 - 비디 바이오사이언시스)를 첨가하여 반응을 중단시켰다. 비자극된 샘플에서, 이 항온처리 기간 동안 항-인간 IgM을 단순히 누락시켰다. 실온에서 15분 후, 세포를 펠렛화한 후(5분 동안 500xg) 빙냉 펌 완충제 III(비디 바이오사이언시스)에 재현탁한 후, 유동 완충제(PBS + 1% BSA + 0.01% NaN₃ + 2 mM EDTA)로 2회 세척하였다. 그 다음, 세포를 항-CD20, 항-인산화된(p) NF-κB, 항-pSyk, 항-pAtk 및 항-pErk1&2로 염색하고 1시간 동안 실온의 암실에서 항온처리하였다. 최종적으로, 플레이트를 유동 완충제로 2회 세척한 후, iQUE 유세포분석기(인텔리사이트) 상에서 측정하였다. 그 다음, B 세포에서의 pNF-κB, pSyk, pAkt 및 pErk1&2 발현의 기하평균(평균 형광 강도, MFI)을 계산하고 그래프 형태로 표현하였다.

결과:

도 30은 NF-κB, Syk, Akt 및 Erk1&2(비자극 및 비처리)의 기준 인산화가 건강한 지원자로부터의 B 세포에 비해 SLE 환자 B 세포에서 상승된다는 것을 보여준다.

도 31 내지 34는 CD79/CD22 BYbe가 건강한 지원자 및 SLE 환자에서 pNF-κB, pSyk, pAkt 및 pErk1&2를 동등하게 억제할 수 있다는 것을 보여준다.

결론:

이 데이터는 SLE 환자로부터의 B 세포가 건강한 지원자와 비교될 때 임의의 시험관내 자극 전에 활성화된다는 것을 보여준다. B 세포 수용체를 통한 세포의 자극 시, 건강한 지원자 및 SLE 환자는 배경 신호에 비해 향상된 수준의 활성화를 보인다. 건강한 지원자 및 SLE 환자에서, 이 신호는 CD79b/CD22 조합물에 의해 실질적으로 차단된다. 이 데이터는 CD79b/CD22 조합물이 건강한 지원자 및 기저 자가면역 질환을 갖는 사람으로부터의 B 세포를 억제할 수 있다는 것을 시사하고, 이것은 이 경로가 B 세포 활성화에 근본적으로 중요하다는 것을 시사한다.

실시예 12 - 인간화 방법

CDR들을 토끼 항체 V 영역으로부터 인간 생식세포주 항체 V 영역 프레임워크 상으로 이식함으로써, 이전 실시예에서 수득되었고 본원의 도 35에서 제공된 토끼 항체의 인간화된 버전을 디자인하였다. 항체의 활성의 회복 가능성을 개선하기 위해, 토끼 V 영역으로부터의 다수의 프레임워크 잔기들도 디자인된 인간화된 서열 내에 보유되었다. 문헌(Adair et al. (1991)(Humanised antibodies. WO91/09967))에 의해 요약된 프로토콜을 이용하여 이들 잔기들을 선택하였다. 조합된 초티아/카바트 정의가 사용된 CDRH1을 제외하고, 도너 서열로부터 어셉터 서열로 이식된 CDR들은 카바트(Kabat et al., 1987)에 의해 정의된 바와 같다(문헌(Adair et al., 1991 Humanised antibodies. WO91/09967) 참조). 통상적으로, 토끼 항체의 VH 유전자는 선택된 인간 VH 어셉터 유전자보다 더 짧다. 인간 어셉터 서열과 정렬될 때, 토끼 항체의 VH 영역의 프레임워크 1은 전형적으로 인간화된 항체 내에 보유되는 N 말단 잔기를 결여한다. 토끼 항체 VH 영역의 프레임워크 3도 전형적으로 베타 시트 가닥 D와 E 사이의 루프에서 1개 또는 2개의 잔기(75, 또는 75 및 76)를 결여한다: 인간화된 항체에서 갭은 선택된 인간 어셉터 서열로부터의 상응하는 잔기로 채워진다.

인간화된 서열은 도 35에서 제공되고 도너 잔기는 굵은 글자체 및 밑줄로 표시되어 있다. 변이체 CDR 서열도 제공된다.

CD79 항체 Ab 4447

인간 V 영역 IGKV1D-13 및 JK4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4447 경쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4447 VK 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 2, 3, 36, 46, 49 및 70(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 글루타민(Q2), 발린(V3), 류신(L36), 글루타민(Q46), 히스티딘(H49) 및 글루타민(Q70).

인간 V 영역 IGHV3-48 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4447의 중쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4447 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 24, 48, 49, 71, 73 및 78(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 발린(V24), 이소류신(I48), 글리신(G49), 라이신(K71), 세린(S73) 및 발린(V78).

인간 V 영역 IGHV4-59 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4447의 중쇄 CDR들에 대한 대안적인 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4447 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 37, 67, 71, 73 및 78(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 발린(V37), 페닐알라닌(F67), 라이신(K71), 세린(S73) 및 발린(V78). 인간 프레임워크의 위치 1에서 글루타민 잔기를 글루탐산(E1)으로 대체하여 균질한 생성물의 발현 및 정제를 제공하였다: 항체 및 항체 단편의 N 말단에서 피로글루타메이트로의 글루타민의 전환은 널리 보고되어 있다. 일부 경우, CDRL3은 한 쌍의 시스테인 잔기를 제거하도록 돌연변이될 수 있다(CDRL3 변이체).

CD79 항체 Ab 4450

인간 V 영역 IGKV1-6 및 JK4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4450 경쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4450 VK 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 3 및 70(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 아스파르트산(D3) 및 글루타민(Q70). 일부 경우, CDRL3은 잠재적 아스파르테이트 이성질체화 부위를 변형시키도록 돌연변이될 수 있다(CDRL3 변이체 1-3).

인간 V 영역 IGHV3-66 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4450의 중쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4450 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 24, 48, 49, 73 및 78(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 발린(V24), 이소류신(I48), 글리신(G49), 세린(S73) 및 발린(V78).

인간 V 영역 IGHV4-59 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4450의 중쇄 CDR들에 대한 대안적인 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4450 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 37, 67, 71, 73 및 78(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 발린(V37), 페닐알라닌(F67), 아르기닌(R71), 세린(S73) 및 발린(V78). 인간 프레임워크의 위치 1에서 글루타민 잔기를 글루탐산(E1)으로 대체하여 균질한 생성물의 발현 및 정제를 제공하였다.

CD22 항체 Ab 4120

인간 V 영역 IGKV1D-13 및 JK4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4120 경쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4120 VK 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 2 및 3(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 페닐알라닌(F2) 및 글루탐산(E3).

인간 V 영역 IGHV3-33 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4120의 중쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4120 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 11, 48, 71, 73, 76 및 78(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 류신(L11), 이소류신(I48), 라이신(K71), 세린(S73), 쓰레오닌(T76) 및 발린(V78). 인간 프레임워크의 위치 1에서 글루타민 잔기를 글루탐산(E1)으로 대체하여 균질한 생성물의 발현 및 정제를 제공하였다. 일부 경우, CDRH1 및 CDRH2는 시스테인 잔기를 제거하도록 돌연변이될 수 있다(각각 CDRH1 변이체 및 CDRH2 변이체).

인간 V 영역 IGHV4-38-2 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4120의 중쇄 CDR들에 대한 대안적인 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4120 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 24, 37, 49, 67, 71, 73, 76 및 78(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 알라닌(A24), 발린(V37), 알라닌(A49), 페닐알라닌(F67), 라이신(K71), 세린(S73), 쓰레오닌(T76) 및 발린(V78). 인간 프레임워크의 위치 1에서 글루타민 잔기를 글루탐산(E1)으로 대체하여 균질한 생성물의 발현 및 정제를 제공하였다. 일부 경우, CDRH1 및 CDRH2는 시스테인 잔기를 제거하도록 돌연변이될 수 있다(각각 CDRH1 변이체 및 CDRH2 변이체).

CD22 항체 Ab 4126

인간 V 영역 IGKV1-5 및 JK4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4126 경쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4126 VK 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 3 및 70(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 발린(V3) 및 글루타민(Q70).

인간 V 영역 IGHV3-7 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4126의 중쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4126 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 71, 73, 76 및 78(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 라이신(K71), 세린(S73), 쓰레오닌(T76) 및 발린(V78). 일부 경우, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 시스테인 잔기를 제거하도록 돌연변이될 수 있다(각각 CDRH1 변이체, CDRH2 변이체 및 CDRH3 변이체).

인간 V 영역 IGHV4-4 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4126의 중쇄 CDR들에 대한 대안적인 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4126 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 24, 48, 49, 67, 71, 73, 76 및 78(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 알라닌(A24), 발린(V48), 알라닌(A49), 페닐알라닌(F67), 라이신(K71), 세린(S73), 쓰레오닌(T76) 및 발린(V78). 인간 프레임워크의 위치 1에서 글루타민 잔기를 글루탐산(E1)으로 대체하여 균질한 생성물의 발현 및 정제를 제공하였다. 일부 경우, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 시스테인 잔기를 제거하도록 돌연변이될 수 있다(각각 CDRH1 변이체, CDRH2 및 CDRH3 변이체).

CD22 항체 Ab 4127

인간 V 영역 IGKV1-5 및 JK4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4127 경쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4127 VK 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 1, 3 및 70(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 알라닌(A1), 발린(V3) 및 글루타민(Q70). 일부 경우, CDRL3은 잠재적 아스파르트산 이성질체화 부위를 변형시키도록 돌연변이될 수 있다(CDRL3 변이체 1-15).

인간 V 영역 IGHV3-9 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4127의 중쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4127 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 47, 48, 49, 71, 73, 76, 78 및 94(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 류신(L47), 이소류신(I48), 글리신(G49), 라이신(K71), 세린(S73), 쓰레오닌(T76), 발린(V78) 및 아르기닌(R94). 일부 경우, CDRH1 및 CDRH2는 시스테인 잔기를 제거하도록 돌연변이될 수 있다(각각 CDRH1 변이체 및 CDRH2 변이체).

인간 V 영역 IGHV4-38-2 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4127의 중쇄 CDR들에 대한 대안적인 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4127 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 24, 37, 47, 67, 71, 73, 76 및 78(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 알라닌(A24), 발린(V37), 류신(L47), 페닐알라닌(F67), 라이신(K71), 세린(S73), 쓰레오닌(T76) 및 발린(V78). 인간 프레임워크의 위치 1에서 글루타민 잔기를 글루탐산(E1)으로 대체하여 균질한 생성물의 발현 및 정제를 제공하였다. 일부 경우, CDRH1 및 CDRH2는 시스테인 잔기를 제거하도록 돌연변이될 수 있다(각각 CDRH1 변이체 및 CDRH2 변이체).

CD22 항체 Ab 4128

인간 V 영역 IGKV1-5 및 JK4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4128 경쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4128 VK 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 3, 36, 63, 65, 66 및 71(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 발린(V3), 페닐알라닌(F36), 라이신(K63), 아스파르트산(D65), 아르기닌(R66) 및 티로신(Y71).

인간 V 영역 IGHV3-33 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4128의 중쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4128 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 11, 23, 24, 48, 71, 73, 76 및 78(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 류신(L11), 라이신(K23), 글리신(G24), 이소류신(I48), 라이신(K71), 세린(S73), 쓰레오닌(T76) 및 발린(V78). 인간 프레임워크의 위치 1에서 글루타민 잔기를 글루탐산(E1)으로 대체하여 균질한 생성물의 발현 및 정제를 제공하였다. 일부 경우, CDRH1 및 CDRH2는 시스테인 잔기를 제거하도록 돌연변이될 수 있다(각각 CDRH1 변이체 및 CDRH2 변이체).

인간 V 영역 IGHV4-59 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4128의 중쇄 CDR들에 대한 대안적인 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4128 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 23, 24, 37, 49, 67, 71, 73, 76 및 78(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 라이신(K23), 글리신(G24), 발린(V37), 알라닌(A49), 페닐알라닌(F67), 라이신(K71), 세린(S73), 쓰레오닌(T76) 및 발린(V78). 인간 프레임워크의 위치 1에서 글루타민 잔기를 글루탐산(E1)으로 대체하여 균질한 생성물의 발현 및 정제를 제공하였다. 일부 경우, CDRH1 및 CDRH2는 시스테인 잔기를 제거하도록 돌연변이될 수 있다(각각 CDRH1 변이체 및 CDRH2 변이체).

CD22 항체 Ab 4130

인간 V 영역 IGKV1-9 및 JK4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4130 경쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4130 VK 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 1, 2 및 3(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 알라닌(A1), 알라닌(A2) 및 발린(V3).

인간 V 영역 IGHV3-66 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4130의 중쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4130 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 48, 49, 67, 71, 73, 76 및 78(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 이소류신(I48), 글리신(G49), 발린(V67), 라이신(K71), 세린(S73), 쓰레오닌(T76) 및 발린(V78). 일부 경우, CDRH2는 시스테인 잔기를 제거하고/하거나 잠재적 아스파라긴 탈아미드화 부위를 변형시키도록 돌연변이될 수 있다(CDRH2 변이체 1-5). CDRH3도 잠재적 아스파라긴 탈아미드화 부위를 변형시키도록 돌연변이될 수 있다(CDRH3 변이체 1-2).

인간 V 영역 IGHV4-4 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4130의 중쇄 CDR들에 대한 대안적인 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4130 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 24, 71, 73, 76 및 78(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 알라닌(A24), 라이신(K71), 세린(S73), 쓰레오닌(T76) 및 발린(V78). 인간 프레임워크의 위치 1에서 글루타민 잔기를 글루탐산(E1)으로 대체하여 균질한 생성물의 발현 및 정제를 제공하였다. 일부 경우, CDRH2는 시스테인 잔기를 제거하고/하거나 잠재적 아스파라긴 탈아미드화 부위를 변형시키도록 돌연변이될 수 있다(CDRH2 변이체 1-5). CDRH3도 잠재적 아스파라긴 탈아미드화 부위를 변형시키도록 돌연변이될 수 있다(CDRH3 변이체 1-2).

CD22 항체 Ab 4132

인간 V 영역 IGKV1-5 및 JK4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4132 경쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4132 VK 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 3 및 71(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 발린(V3) 및 티로신(Y71).

인간 V 영역 IGHV3-21 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4132의 중쇄 CDR들에 대한 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4132 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 48, 49, 71, 73, 76 및 78(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 세린(S48), 글리신(G49), 아스파라긴(N71), 세린(S73), 쓰레오닌(T76) 및 발린(V78). 일부 경우, CDRH1은 시스테인 잔기를 제거하도록 돌연변이될 수 있다(CDRH1 변이체). CDRH2도 시스테인 잔기를 제거하고/하거나 잠재적 아스파라긴 탈아미드화 부위를 변형시키도록 돌연변이될 수 있다(CDRH2 변이체 1-5).

인간 V 영역 IGHV4-4 및 JH4 J 영역(IMGT, http://www.imgt.org/)을 항체 4132의 중쇄 CDR들에 대한 대안적인 어셉터로서 선택하였다. 상기 CDR들 이외에, 4132 VH 유전자로부터의 하기 프레임워크 잔기들(도너 잔기들) 중 하나 이상의 잔기는 위치 24, 48, 67, 71, 73, 76 및 78(카바트 넘버링)에서 보유될 수 있다: 각각 알라닌(A24), 세린(S48), 페닐알라닌(F67), 아스파라긴(N71), 세린(S73), 쓰레오닌(T76) 및 발린(V78). 인간 프레임워크의 위치 1에서 글루타민 잔기를 글루탐산(E1)으로 대체하여 균질한 생성물의 발현 및 정제를 제공하였다. 일부 경우, CDRH1은 시스테인 잔기를 제거하도록 돌연변이될 수 있다(CDRH1 변이체). CDRH2도 시스테인 잔기를 제거하고/하거나 잠재적 아스파라긴 탈아미드화 부위를 변형시키도록 돌연변이될 수 있다(CDRH2 변이체 1-5).

SEQUENCE LISTING <110> UCB <120> xxx <130> PF0063 <160> 274 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH1 of formula (I) <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is F, I or L <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is S or D <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is S, N or G <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, Y, L or G <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is Y or absent <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is W, Y or D <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is M or I <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is C or S <400> 1 Gly Xaa Xaa Phe Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 2 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH2 of formula (II) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is C or S <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is Y, D, V or N <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is T, P, I, G, S or A <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is G, S, or A <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is S, I or T <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, N or absent <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is G, D, S, A or T <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is D, T, S, N, V or G <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is Y, D or A <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> Xaa is T or S <400> 2 Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Tyr Ala Xaa Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 3 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDHR3 of formula (III) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is A or absent <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is absent, G or Y <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is absent, P or G <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is absent, Y, S, D or E <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is V, G, Y or W <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is G, Y, S or V <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is Y, S, G or N <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is G, A, S or T <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is Y, G or D <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is D, I, Y, W or H <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is L, G, S, Y or K <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa is V, Q, C, S, G, T or D <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Xaa is Y, A or R <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> Xaa is L or F <220> <221> misc_feature <222> (15)..(15) <223> Xaa is N, Y or D <400> 3 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu 1 5 10 15 <210> 4 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL1 has a formula (IV) <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is A or S <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is Q or E <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is S, N or T <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is I or V <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, Y or G <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is T, S, G or N <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is A, G, N, Y, T or R <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is absent, N or K <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is absent, E or D <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Xaa is A or S <400> 4 Gln Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL2 has a formula (V) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is G, Y, L, A or S <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is A, S or T <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is T, R or K <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is A or S <400> 5 Xaa Xaa Ser Xaa Leu Xaa Ser 1 5 <210> 6 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL3 has a formula (VI) <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is D or E <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, A or T <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is D or E <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is G, A or S <400> 6 Ala Gly Tyr Lys Ser Xaa Xaa Asp Xaa Xaa Thr Thr 1 5 10 <210> 7 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL3 has a formula (VII) <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is S, I or G <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is Y, H or G <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is Y, D or F <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is G, S or Y <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is T, A or S <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is S, G, V or D <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is G, S, L or absent <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is G, R, S or N <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is S, D or V <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa is W, Y or absent <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Xaa is A, T, G or absent <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> Xaa is N or absent <220> <221> misc_feature <222> (15)..(15) <223> Xaa is A or absent <400> 7 Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH1 formula (Ia) <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is F, I or L <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is S or D <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is S, N or G <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, Y, L or G <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is Y or absent <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is M or I <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is C or S <400> 8 Gly Xaa Xaa Phe Ser Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa 1 5 10 <210> 9 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH1 formula (Ib) <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is F, I or L <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is S or D <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is S, N or G <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, Y, L or G <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is Y or absent <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is M or I <400> 9 Gly Xaa Xaa Phe Ser Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Ser 1 5 10 <210> 10 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH2 formula (IIa) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is C or S <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is Y, D, V or N <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is T, P, I, G, S or A <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is S, I or T <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, N or absent <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is G, D, S, A or T <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is D, T, S, N, V or G <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is Y, D or A <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> Xaa is T or S <400> 10 Xaa Ile Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Tyr Ala Xaa Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 11 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH2 formula (IIb) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is C or S <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is Y, D, V or N <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is T, P, I, G, S or A <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is G, S, or A <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is S, I or T <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, N or absent <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is G, D, S, A or T <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is D, T, S, N, V or G <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is Y, D or A <400> 11 Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Tyr Ala Ser Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 12 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDHR3 formula (IIIa) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is A or absent <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is absent, G or Y <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is absent, P or G <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is absent, Y, S, D or E <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is V, G, Y or W <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is G, Y, S or V <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is Y, S, G or N <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is G, A, S or T <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is Y, G or D <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is D, I, Y, W or H <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is L, G, S, Y or K <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa is V, Q, C, S, G, T or D <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Xaa is Y, A or R <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> Xaa is L or F <400> 12 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Leu 1 5 10 15 <210> 13 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula (IVa) <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is Q or E <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is S, N or T <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is I or V <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, Y or G <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is T, S, G or N <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is A, G, N, Y, T or R <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is absent, N or K <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is absent, E or D <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Xaa is A or S <400> 13 Gln Ala Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 14 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula (IVb) <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is S, N or T <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is I or V <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, Y or G <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is T, S, G or N <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is A, G, N, Y, T or R <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is absent, N or K <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is absent, E or D <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Xaa is A or S <400> 14 Gln Ala Ser Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 15 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula (IVc) <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is I or V <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, Y or G <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is T, S, G or N <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is A, G, N, Y, T or R <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is absent, N or K <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is absent, E or D <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Xaa is A or S <400> 15 Gln Ala Ser Gln Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 16 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula (IVd) <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is I or V <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, Y or G <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is T, S, G or N <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is A, G, N, Y, T or R <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is absent, E or D <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa is A or S <400> 16 Gln Ala Ser Gln Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 17 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula (IVe) <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is I or V <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, Y or G <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is T, S, G or N <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is A, G, N, Y, T or R <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is A or S <400> 17 Gln Ala Ser Gln Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 18 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula (IVf) <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is I or V <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, Y or G <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is T, S, G or N <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is A, G, N, Y, T or R <400> 18 Gln Ala Ser Gln Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Ala 1 5 10 <210> 19 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula (Va) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is G, Y, L, A or S <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is T, R or K <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is A or S <400> 19 Xaa Ala Ser Xaa Leu Xaa Ser 1 5 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula (Vc) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is G, Y, L, A or S <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is T, R or K <400> 20 Xaa Ala Ser Xaa Leu Ala Ser 1 5 <210> 21 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula V <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is G, Y, L, A or S <400> 21 Xaa Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 22 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula (VIa) <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is D or E <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, A or T <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is D or E <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is G, A or S <400> 22 Ala Gly Tyr Lys Ser Xaa Xaa Asp Xaa Xaa Thr Thr 1 5 10 <210> 23 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula (VIb) <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is S, A or T <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is G, A or S <400> 23 Ala Gly Tyr Lys Ser Asp Xaa Asp Asp Xaa Thr Thr 1 5 10 <210> 24 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula (VIIa) <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is S, I or G <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is Y, D or F <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is G, S or Y <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is T, A or S <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is S, G, V or D <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is G, S, L or absent <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is G, R, S or N <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is S, D or V <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa is W, Y or absent <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Xaa is A, T, G or absent <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> Xaa is N or absent <220> <221> misc_feature <222> (15)..(15) <223> Xaa is A or absent <400> 24 Gln Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 25 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula (VIIb) <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is S, I or G <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is G, S or Y <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is T, A or S <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is S, G, V or D <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is G, S, L or absent <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is G, R, S or N <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is S, D or V <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa is W, Y or absent <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Xaa is A, T, G or absent <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> Xaa is N or absent <220> <221> misc_feature <222> (15)..(15) <223> Xaa is A or absent <400> 25 Gln Xaa Tyr Tyr Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 26 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula (VIIc) <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is S, I or G <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is G, S or Y <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is S, G, V or D <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is G, S, L or absent <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is G, R, S or N <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is S, D or V <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa is W, Y or absent <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Xaa is A, T, G or absent <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> Xaa is N or absent <220> <221> misc_feature <222> (15)..(15) <223> Xaa is A or absent <400> 26 Gln Xaa Tyr Tyr Xaa Ser Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 27 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula (VIId) <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is S, I or G <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is G, S or Y <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is S, G, V or D <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is G, S, L or absent <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is G, R, S or N <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is S, D or V <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa is W, Y or absent <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Xaa is A, T, G or absent <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> Xaa is A or absent <400> 27 Gln Xaa Tyr Tyr Xaa Ser Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 28 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> formula (VIIe) <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is S, I or G <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is G, S or Y <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is S, G, V or D <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is G, S, L or absent <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is G, R, S or N <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is S, D or V <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa is W, Y or absent <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Xaa is A, T, G or absent <400> 28 Gln Xaa Tyr Tyr Xaa Ser Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 29 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4120 CDRH1 <400> 29 Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr Tyr Met Cys 1 5 10 <210> 30 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH1 variant <400> 30 Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr Tyr Met Ser 1 5 10 <210> 31 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4126 CDRH1 <400> 31 Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr Tyr Tyr Met Cys 1 5 10 <210> 32 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4126 CDRH1 variant <400> 32 Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr Tyr Tyr Met Ser 1 5 10 <210> 33 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRH1 <400> 33 Gly Phe Ser Phe Ser Asn Leu Tyr Tyr Met Cys 1 5 10 <210> 34 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRH1 variant <400> 34 Gly Phe Ser Phe Ser Asn Leu Tyr Tyr Met Ser 1 5 10 <210> 35 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4128 CDRH1 <400> 35 Gly Leu Asp Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Cys 1 5 10 <210> 36 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4128 CDRH1 variant <400> 36 Gly Leu Asp Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Ser 1 5 10 <210> 37 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4130 CDRH1 <400> 37 Gly Phe Asp Phe Ser Gly Gly Tyr Asp Ile Ser 1 5 10 <210> 38 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4132 CDRH1 <400> 38 Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr Trp Ile Cys 1 5 10 <210> 39 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4132 CDRH1 variant <400> 39 Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr Trp Ile Ser 1 5 10 <210> 40 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4120 CDRH2 <400> 40 Cys Ile Tyr Thr Gly Ser Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 41 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4120 CDRH2 variant <400> 41 Ser Ile Tyr Thr Gly Ser Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 42 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4126 CDRH2 <400> 42 Cys Ile Asp Pro Ala Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 43 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4126 CDRH2 variant <400> 43 Ser Ile Asp Pro Ala Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 44 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRH2 <400> 44 Cys Ile Asp Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 45 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRH2 variant <400> 45 Ser Ile Asp Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 46 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4128 CDRH2 <400> 46 Cys Ile Val Thr Gly Ser Ser Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 47 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4128 CDRH2 variant <400> 47 Ser Ile Val Thr Gly Ser Ser Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 48 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4130 CDRH2 <400> 48 Cys Ile Tyr Gly Gly Ile Asn Ser Val Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 49 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4130 CDRH2 variant 1 <400> 49 Cys Ile Tyr Gly Gly Ile Asn Ala Val Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 50 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4130 CDRH2 variant 2 <400> 50 Cys Ile Tyr Gly Gly Ile Asn Thr Val Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 51 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4130 CDRH2 variant 3 <400> 51 Ser Ile Tyr Gly Gly Ile Asn Ser Val Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 52 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4130 CDRH2 variant 4 <400> 52 Ser Ile Tyr Gly Gly Ile Asn Ala Val Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 53 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4130 CDRH2 variant 5 <400> 53 Ser Ile Tyr Gly Gly Ile Asn Thr Val Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala 1 5 10 15 Lys Gly <210> 54 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4132 CDRH2 <400> 54 Cys Ile Asn Ser Gly Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 1 5 10 15 Gly <210> 55 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4132 CDRH2 variant 1 <400> 55 Cys Ile Asn Ala Gly Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 1 5 10 15 Gly <210> 56 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4132 CDRH2 variant 2 <400> 56 Cys Ile Asn Thr Gly Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 1 5 10 15 Gly <210> 57 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4132 CDRH2 variant 3 <400> 57 Ser Ile Asn Ser Gly Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 1 5 10 15 Gly <210> 58 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4132 CDRH2 variant 4 <400> 58 Ser Ile Asn Ala Gly Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 1 5 10 15 Gly <210> 59 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4132 CDRH2 variant 5 <400> 59 Ser Ile Asn Thr Gly Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 1 5 10 15 Gly <210> 60 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4120 CDRH3 <400> 60 Gly Pro Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Asp Leu Gln Tyr Leu Tyr Leu 1 5 10 15 <210> 61 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4126 CDRH3 <400> 61 Ala Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Ile Gly Cys Tyr Phe Asp Leu 1 5 10 15 <210> 62 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4126 CDRH3 variant <400> 62 Ala Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Ile Gly Ser Tyr Phe Asp Leu 1 5 10 15 <210> 63 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRH3 <400> 63 Asp Tyr Tyr Ser Ser Asp Trp Gly Val Arg Phe Asn Leu 1 5 10 <210> 64 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4128 CDRH3 <400> 64 Gly Gly Gly Ala Gly Tyr Ser Gly Ala Phe Asp Leu 1 5 10 <210> 65 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4130 CDRH3 <400> 65 Asp Val Ser Asn Ser Asp His Tyr Thr Arg Leu Asp Leu 1 5 10 <210> 66 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4130 CDRH3 variant 1 <400> 66 Asp Val Ser Asn Ala Asp His Tyr Thr Arg Leu Asp Leu 1 5 10 <210> 67 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4130 CDRH3 variant 2 <400> 67 Asp Val Ser Asn Thr Asp His Tyr Thr Arg Leu Asp Leu 1 5 10 <210> 68 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4132 CDRH3 <400> 68 Glu Trp Val Ser Gly Tyr Tyr Lys Asp Ala Phe Asp Leu 1 5 10 <210> 69 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4120 CDRL1 <400> 69 Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala Leu Ala 1 5 10 <210> 70 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4126 CDRL1 <400> 70 Gln Ala Ser Gln Asn Ile Gly Ser Gly Leu Ala 1 5 10 <210> 71 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL1 <400> 71 Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Gly Asn Asn Glu Leu Ser 1 5 10 <210> 72 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4128 CDRL1 <400> 72 Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Tyr Leu Ser 1 5 10 <210> 73 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4130 CDRL1 <400> 73 Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asn Thr Lys Asp Leu Ala 1 5 10 <210> 74 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4132 CDRL1 <400> 74 Gln Ala Ser Glu Thr Ile Ser Ser Arg Leu Ala 1 5 10 <210> 75 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4120 CDRL2 <400> 75 Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 76 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4126 CDRL2 <400> 76 Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 77 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL2 <400> 77 Leu Ala Ser Arg Leu Ala Ser 1 5 <210> 78 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4128 CDRL2 <400> 78 Ala Ser Ser Lys Leu Ser Ser 1 5 <210> 79 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4130 CDRL2 <400> 79 Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 80 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4132 CDRL2 <400> 80 Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 81 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4120 CDRL3 <400> 81 Gln Ser Tyr Tyr Gly Thr Ser Ser Gly Gly Ser Trp Ala 1 5 10 <210> 82 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4126 CDRL3 <400> 82 Gln Ser His Asp Tyr Ser Ser Val Arg Ser Tyr Gly Asn Ala 1 5 10 <210> 83 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 <400> 83 Ala Gly Tyr Lys Ser Asp Ser Asp Asp Gly Thr Thr 1 5 10 <210> 84 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 variant 1 <400> 84 Ala Gly Tyr Lys Ser Glu Ser Asp Asp Gly Thr Thr 1 5 10 <210> 85 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 variant 2 <400> 85 Ala Gly Tyr Lys Ser Asp Ala Asp Asp Gly Thr Thr 1 5 10 <210> 86 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 variant 3 <400> 86 Ala Gly Tyr Lys Ser Asp Thr Asp Asp Gly Thr Thr 1 5 10 <210> 87 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 variant 4 <400> 87 Ala Gly Tyr Lys Ser Asp Ser Asp Glu Gly Thr Thr 1 5 10 <210> 88 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 variant 5 <400> 88 Ala Gly Tyr Lys Ser Asp Ser Asp Asp Ala Thr Thr 1 5 10 <210> 89 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 variant 6 <400> 89 Ala Gly Tyr Lys Ser Asp Ser Asp Asp Ser Thr Thr 1 5 10 <210> 90 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 variant 7 <400> 90 Ala Gly Tyr Lys Ser Glu Ser Asp Glu Gly Thr Thr 1 5 10 <210> 91 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 variant 8 <400> 91 Ala Gly Tyr Lys Ser Glu Ser Asp Asp Ala Thr Thr 1 5 10 <210> 92 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 variant 9 <400> 92 Ala Gly Tyr Lys Ser Glu Ser Asp Asp Ser Thr Thr 1 5 10 <210> 93 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 variant 10 <400> 93 Ala Gly Tyr Lys Ser Asp Ala Asp Glu Gly Thr Thr 1 5 10 <210> 94 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 variant 11 <400> 94 Ala Gly Tyr Lys Ser Asp Ala Asp Asp Ala Thr Thr 1 5 10 <210> 95 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 variant 12 <400> 95 Ala Gly Tyr Lys Ser Asp Ala Asp Asp Ser Thr Thr 1 5 10 <210> 96 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 variant 13 <400> 96 Ala Gly Tyr Lys Ser Asp Thr Asp Glu Gly Thr Thr 1 5 10 <210> 97 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 variant 14 <400> 97 Ala Gly Tyr Lys Ser Asp Thr Asp Asp Ala Thr Thr 1 5 10 <210> 98 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4127 CDRL3 variant 15 <400> 98 Ala Gly Tyr Lys Ser Asp Thr Asp Asp Ser Thr Thr 1 5 10 <210> 99 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4128 CDRL3 <400> 99 Gln Ile Tyr Tyr Ser Ala Ser Gly Ser Arg Asp Trp Thr 1 5 10 <210> 100 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4130 CDRL3 <400> 100 Gln Gly Gly Phe Ser Ser Ser Asp Leu Asn Val 1 5 10 <210> 101 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4132 CDRL3 <400> 101 Gln Gly Tyr Tyr Tyr Ser Ser Gly Ser Asp Tyr Gly 1 5 10 <210> 102 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4120 VL region <400> 102 Ala Phe Glu Leu Ser Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Gly Thr Ser Ser 85 90 95 Gly Gly Ser Trp Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Val Lys 100 105 110 <210> 103 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4120 VL region <400> 103 gcattcgaat tgagccagac tccagcctcc gtggaggcag ctgtgggagg cacagtcacc 60 atcaagtgcc aggccagtca gagcattagc actgcattag cctggtatca gcagaaacca 120 gggcagcgtc ccaagctcct gatctatggt gcatccactc tggcatctgg ggtctcatcg 180 cggttcaaag gcagtggatc tgggacagag ttcactctca ccatcagcga cctggagtgt 240 gccgatgctg ccacttacta ctgtcaaagc tattatggta cgagtagtgg tggttcttgg 300 gctttcggcg gagggaccaa ggtggtcgtc aaa 333 <210> 104 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4120 VH region <400> 104 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Cys Ile Tyr Thr Gly Ser Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Ser 65 70 75 80 Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Asp Leu Gln Tyr Leu Tyr 100 105 110 Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 105 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4120 VH region <400> 105 cagtcattgg aggagtccgg gggagacctg gtcaagcctg gggcatccct gacactcacc 60 tgcacagcct ctggattctc cttcagtagt agctactaca tgtgctgggt ccgccagtct 120 ccagggaagg ggctggagtg gatcgcatgc atttatactg gtagtagtgg tgacacttac 180 tacgcgagct gggcgaaagg ccgattcacc atctccaaaa cctcgtcgac cacggtgtct 240 ctgcaaatga ccagtctgac agccgcggac acggccactt atttctgtgc gagagggcct 300 tatgttggtt atggttatga tcttcaatac ttgtacttgt ggggcccggg gaccctcgtc 360 accgtctcga gt 372 <210> 106 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4120 gL1 V-region IGKV1D-13 framework <400> 106 Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Gly Thr Ser Ser 85 90 95 Gly Gly Ser Trp Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 107 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4120 gH1 V-region - IGHV3-33 framework <400> 107 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Ala Cys Ile Tyr Thr Gly Ser Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Ser 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Gly Pro Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Asp Leu Gln Tyr 100 105 110 Leu Tyr Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 108 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4120 gH2 V-region - IGHV3-33 framework <400> 108 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Ala Ser Ile Tyr Thr Gly Ser Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Ser 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Gly Pro Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Asp Leu Gln Tyr 100 105 110 Leu Tyr Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 109 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4120 gH4 V-region - IGHV4-38-2 framework <400> 109 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Ala Cys Ile Tyr Thr Gly Ser Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Ser 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Gln 65 70 75 80 Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Gly Pro Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Asp Leu Gln Tyr 100 105 110 Leu Tyr Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 110 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4120 gH5 V-region - IGHV4-38-2 framework <400> 110 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Ala Ser Ile Tyr Thr Gly Ser Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Ser 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Gln 65 70 75 80 Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Gly Pro Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Asp Leu Gln Tyr 100 105 110 Leu Tyr Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 111 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4126 VL region <400> 111 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Gly Ser Gly 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser His Asp Tyr Ser Ser Val 85 90 95 Arg Ser Tyr Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 <210> 112 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4126 VL region <400> 112 gacattgtga tgacccagac tccagcctcc gtggaggcag ctgtgggagg cacagtcacc 60 atcaagtgcc aggccagtca gaacattggt agtggtttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggcagcctc ccaagctcct gatctattat gcatccactc tggcatctgg ggtcccatca 180 aggttcaaag gcagtggatc tgggacacag ttcactctca ccatcagcga cctggagtgt 240 gccgacgctg ccacttacta ctgtcaaagt catgattata gtagtgttcg gagttacggt 300 aatgctttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaa 336 <210> 113 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4126 VH region <400> 113 Gln Gln His Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Ala Cys Ile Asp Pro Ala Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Thr 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val 65 70 75 80 Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Ala Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Ile Gly Cys Tyr 100 105 110 Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 114 <211> 378 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4126 VH region <400> 114 cagcagcacc tggaggagtc cgggggaggc ctggtcaagc ctggaggaac cctgacactc 60 acctgcaaag cctctggaat cgacttcagt agctactact acatgtgctg ggtccgccag 120 gctccaggga aggggctgga gtgggtcgcg tgcattgatc ctgctagtag tggtactact 180 tactacgcga cctgggcgaa aggccgattc accatctcca aaacctcgtc gaccacggtg 240 actctgcaaa tgaccagtct gacagccgcg gacacggcca cctatttctg tgcgagggca 300 tatggtagtg ggggtagtgg ttatataggg tgctactttg acttgtgggg ccaaggcacc 360 ctcgtcaccg tctcgagt 378 <210> 115 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4126 gL3 V-region - IGKV1-5 framework <400> 115 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Gly Ser Gly 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser His Asp Tyr Ser Ser Val 85 90 95 Arg Ser Tyr Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 116 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4126 gH12 V-region - IGHV3-7 framework <400> 116 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Ala Cys Ile Asp Pro Ala Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Thr 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ala Lys Thr Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Ile Gly Cys 100 105 110 Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 117 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4126 gH3 V-region - IGHV3-7 framework <400> 117 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Ala Cys Ile Asp Pro Ala Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Thr 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ala Lys Thr Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Ile Gly Ser 100 105 110 Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 118 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4126 gH4 V-region - IGHV3-7 framework <400> 118 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Ala Ser Ile Asp Pro Ala Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Thr 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ala Lys Thr Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Ile Gly Ser 100 105 110 Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 119 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4126 gH13 V-region - IGHV4-4 framework <400> 119 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Ala Cys Ile Asp Pro Ala Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Thr 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Gln 65 70 75 80 Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Ile Gly Cys 100 105 110 Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 120 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4126 gH6 V-region - IGHV4-4 framework <400> 120 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Ala Cys Ile Asp Pro Ala Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Thr 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Gln 65 70 75 80 Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Ile Gly Ser 100 105 110 Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 121 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4126 gH7 V-region - IGHV4-4 framework <400> 121 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Ala Ser Ile Asp Pro Ala Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Thr 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Gln 65 70 75 80 Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Ile Gly Ser 100 105 110 Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 122 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4127 VL region <400> 122 Ala Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Lys Ser Val Pro Met Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Gly Asn 20 25 30 Asn Glu Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Arg Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val 65 70 75 80 Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Tyr Lys Ser Asp 85 90 95 Ser Asp Asp Gly Thr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Val Glu 100 105 110 <210> 123 <211> 336 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4127 VL region <400> 123 Gly Cys Cys Ala Thr Cys Gly Thr Gly Ala Thr Gly Ala Cys Cys Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ala Cys Thr Cys Cys Ala Thr Cys Thr Thr Cys Cys Ala Ala 20 25 30 Gly Thr Cys Thr Gly Thr Cys Cys Cys Thr Ala Thr Gly Gly Gly Ala 35 40 45 Gly Gly Cys Ala Cys Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala 50 55 60 Ala Cys Thr Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Cys Ala Gly Thr Cys Ala 65 70 75 80 Gly Ala Gly Thr Gly Thr Thr Thr Ala Thr Gly Gly Thr Ala Ala Thr 85 90 95 Ala Ala Cys Gly Ala Ala Thr Thr Ala Thr Cys Cys Thr Gly Gly Thr 100 105 110 Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Ala Gly Gly 115 120 125 Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Cys Cys Ala Ala Gly Cys Thr Cys 130 135 140 Cys Thr Gly Ala Thr Cys Thr Ala Thr Thr Thr Gly Gly Cys Ala Thr 145 150 155 160 Cys Cys Ala Gly Gly Cys Thr Gly Gly Cys Ala Thr Cys Gly Gly Gly 165 170 175 Gly Gly Thr Cys Cys Cys Ala Thr Cys Gly Cys Gly Gly Thr Thr Thr 180 185 190 Ala Gly Cys Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly Gly Ala Thr Cys Thr Gly 195 200 205 Gly Gly Ala Cys Ala Cys Ala Gly Thr Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr 210 215 220 Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys Gly Thr Gly 225 230 235 240 Cys Ala Gly Thr Gly Thr Gly Ala Cys Gly Ala Thr Gly Cys Thr Gly 245 250 255 Cys Cys Ala Cys Thr Thr Ala Cys Thr Ala Cys Thr Gly Thr Gly Cys 260 265 270 Ala Gly Gly Cys Thr Ala Thr Ala Ala Ala Ala Gly Thr Gly Ala Thr 275 280 285 Ala Gly Thr Gly Ala Thr Gly Ala Thr Gly Gly Cys Ala Cys Thr Ala 290 295 300 Cys Thr Thr Thr Cys Gly Gly Cys Gly Gly Ala Gly Gly Gly Ala Cys 305 310 315 320 Cys Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Cys Gly Ala Ala 325 330 335 <210> 124 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4127 VH region <400> 124 Gln Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Leu Tyr 20 25 30 Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Ile 35 40 45 Gly Cys Ile Asp Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr 65 70 75 80 Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Tyr Ser Ser Asp Trp Gly Val Arg Phe Asn Leu Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 125 <211> 366 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4127 VH region <400> 125 Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Thr 1 5 10 15 Cys Cys Gly Gly Gly Gly Gly Ala Gly Ala Cys Cys Thr Gly Gly Thr 20 25 30 Cys Ala Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Gly Gly Cys Ala Thr Cys Cys 35 40 45 Cys Thr Gly Ala Cys Ala Cys Thr Cys Ala Cys Cys Thr Gly Cys Ala 50 55 60 Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Gly Gly Ala Thr Thr Cys Thr Cys 65 70 75 80 Cys Thr Thr Cys Ala Gly Thr Ala Ala Thr Cys Thr Cys Thr Ala Thr 85 90 95 Thr Ala Cys Ala Thr Gly Thr Gly Thr Thr Gly Gly Gly Thr Cys Cys 100 105 110 Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr Thr Gly Ala Thr Cys 130 135 140 Gly Gly Ala Thr Gly Cys Ala Thr Thr Gly Ala Thr Ala Thr Thr Ala 145 150 155 160 Gly Cys Ala Gly Thr Ala Gly Thr Gly Gly Thr Ala Gly Cys Ala Cys 165 170 175 Thr Thr Ala Cys Thr Ala Cys Gly Cys Gly Ala Gly Cys Thr Gly Gly 180 185 190 Gly Cys Gly Ala Ala Ala Gly Gly Cys Cys Gly Ala Thr Thr Cys Ala 195 200 205 Cys Cys Ala Thr Cys Thr Cys Cys Ala Ala Ala Ala Cys Cys Thr Cys 210 215 220 Gly Thr Cys Gly Ala Cys Cys Ala Cys Gly Gly Thr Gly Ala Cys Thr 225 230 235 240 Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala Thr Gly Ala Cys Cys Ala Gly Thr Cys 245 250 255 Thr Gly Ala Cys Ala Gly Cys Cys Gly Cys Gly Gly Ala Cys Ala Cys 260 265 270 Gly Gly Cys Cys Ala Cys Cys Thr Ala Thr Thr Thr Cys Thr Gly Thr 275 280 285 Gly Cys Gly Ala Gly Ala Gly Ala Thr Thr Ala Cys Thr Ala Thr Thr 290 295 300 Cys Thr Ala Gly Thr Gly Ala Cys Thr Gly Gly Gly Gly Thr Gly Thr 305 310 315 320 Thr Ala Gly Ala Thr Thr Thr Ala Ala Cys Thr Thr Gly Thr Gly Gly 325 330 335 Gly Gly Cys Cys Ala Gly Gly Gly Cys Ala Cys Cys Cys Thr Cys Gly 340 345 350 Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Cys Thr Cys Gly Ala Gly Thr 355 360 365 <210> 126 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4127 gL3 V-region - IGKV1-5 framework <400> 126 Ala Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Gly Asn 20 25 30 Asn Glu Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Arg Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu 65 70 75 80 Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Tyr Lys Ser Asp 85 90 95 Ser Asp Asp Gly Thr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 127 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4127 gH3 V-region - IGHV3-9 framework <400> 127 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Leu 20 25 30 Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu 35 40 45 Ile Gly Cys Ile Asp Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ala Lys Thr Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ser Ser Asp Trp Gly Val Arg Phe Asn 100 105 110 Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 128 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4127 gH4 V-region - IGHV3-9 framework <400> 128 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Leu 20 25 30 Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu 35 40 45 Ile Gly Ser Ile Asp Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ala Lys Thr Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ser Ser Asp Trp Gly Val Arg Phe Asn 100 105 110 Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 129 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4127 gH6 V-region - IGHV4-38-2 framework <400> 129 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Leu 20 25 30 Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu 35 40 45 Ile Gly Cys Ile Asp Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Gln 65 70 75 80 Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ser Ser Asp Trp Gly Val Arg Phe Asn 100 105 110 Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 130 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4127 gH7 V-region - IGHV4-38-2 framework <400> 130 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Leu 20 25 30 Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu 35 40 45 Ile Gly Ser Ile Asp Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Gln 65 70 75 80 Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Ser Ser Asp Trp Gly Val Arg Phe Asn 100 105 110 Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 131 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4128 VL region <400> 131 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ser Ser Lys Leu Ser Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Asp Arg Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ile Tyr Tyr Ser Ala Ser Gly 85 90 95 Ser Arg Asp Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Val Glu 100 105 110 <210> 132 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4128 VL region <400> 132 gacattgtga tgacccagac tccagcctcc gtggaggcag ctgtgggagg cacagtcacc 60 atcaagtgcc aggccagtga aagcattagc aactacttat cctggtttca gcagaaacca 120 gggcagcctc ccaagctcct gatctatgct tcatccaaac tgtcatctgg ggtcccatcg 180 cggttcaaag gcgatagatc tgggacagag tacactctca ccatcagcga cctggagtgt 240 gccgatgctg ccacttacta ctgtcaaatc tattattcgg ctagtggcag tcgtgattgg 300 actttcggcg gagggaccaa ggtggtcgtc gaa 333 <210> 133 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4128 VH region <400> 133 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Glu Gly Ser 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Lys Gly Ser Gly Leu Asp Phe Ser Ser Tyr Trp 20 25 30 Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ala 35 40 45 Cys Ile Val Thr Gly Ser Ser Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu 65 70 75 80 Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Gly Gly Ala Gly Tyr Ser Gly Ala Phe Asp Leu Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 134 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4128 VH region <400> 134 cagtcgttgg aggagtccgg gggagacctg gtccagcctg agggatccct gacactcacc 60 tgcaaaggct ccgggttaga cttcagtagc tactggatat gctgggtccg ccaggctcca 120 gggaaggggc tggagtggat cgcatgcatt gttactggta gtagtgataa cacttactac 180 gcgagctggg cgaaaggccg attcaccatc tccaaaacct cgtcgaccac ggtgactctg 240 caaatgacca gtctgacagc cgcggacacg gccacctatt tctgtgcgag aggtggtggt 300 gctggttata gtggtgcctt tgacttgtgg ggccaaggga ccctcgtcac cgtctcgagt 360 <210> 135 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4128 gL1 V-region - IGKV1-5 framework <400> 135 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ser Ser Lys Leu Ser Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Asp Arg Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ile Tyr Tyr Ser Ala Ser Gly 85 90 95 Ser Arg Asp Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 136 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4128 gH1 V-region - IGHV3-33 framework <400> 136 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Gly Ser Gly Leu Asp Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Cys Ile Val Thr Gly Ser Ser Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Thr Val 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Gly Gly Gly Ala Gly Tyr Ser Gly Ala Phe Asp Leu Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 137 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4128 gH2 V-region - IGHV3-33 framework <400> 137 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Gly Ser Gly Leu Asp Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ser Ile Val Thr Gly Ser Ser Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Thr Val 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Gly Gly Gly Ala Gly Tyr Ser Gly Ala Phe Asp Leu Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 138 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4128 gH4 V-region - IGHV4-59 framework <400> 138 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Lys Gly Ser Gly Leu Asp Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Cys Ile Val Thr Gly Ser Ser Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Gln Val 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Gly Gly Gly Ala Gly Tyr Ser Gly Ala Phe Asp Leu Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 139 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4128 gH5 V-region - IGHV4-59 framework <400> 139 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Lys Gly Ser Gly Leu Asp Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ser Ile Val Thr Gly Ser Ser Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Gln Val 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Gly Gly Gly Ala Gly Tyr Ser Gly Ala Phe Asp Leu Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 140 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4130 VL region <400> 140 Ala Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Ser Ile Ser Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asn Thr 20 25 30 Lys Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu 65 70 75 80 Glu Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Phe Ser Ser 85 90 95 Ser Asp Leu Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Val Lys 100 105 110 <210> 141 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4130 VL region <400> 141 gccgccgtgc tgacccagac tccatctccc gtgtctgcag ctgtgggagg cacagtcagc 60 atcagttgcc agtccagtca gagtgtttat aatacaaagg acttagcctg gtatcagcag 120 aaaccagggc agcctcccaa gctcctgatc tatggtacat ccactctggc atctggggtc 180 tcatcacggt tcagcggcag tggatctggg acagagttca ctctcaccat cagcgacctg 240 gagtgtgacg atgctgccac ttattactgt caaggcggtt ttagtagtag tgatttgaat 300 gttttcggcg gagggaccaa ggtggtggtc aaa 333 <210> 142 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4130 VH region <400> 142 Gln Gln Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Arg Pro Glu Gly 1 5 10 15 Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Gly Gly 20 25 30 Tyr Asp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Cys Ile Tyr Gly Gly Ile Asn Ser Val Thr Asp Tyr Ala Ser 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val 65 70 75 80 Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Asp Val Ser Asn Ser Asp His Tyr Thr Arg Leu Asp Leu 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 143 <211> 369 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4130 VH region <400> 143 cagcagcagc tggaggagtc cgggggagac ctggtcaggc ctgagggatc cctgacactc 60 acctgcacag cctctggatt cgacttcagt ggcggctacg acatttcctg ggtccgccag 120 gctccaggga aggggctgga gtggatcgga tgcatttatg gtggtatcaa tagtgtcact 180 gactacgcga gctgggcgaa aggccgagtc accatctcca aaacctcgtc gaccacggtg 240 actctgcaga tgaccagtct gacagccgcg gacacggcca cctatttctg tgcgagagat 300 gttagtaata gcgatcatta tactcggttg gatctctggg gccaaggcac cctggtcacc 360 gtctcgagt 369 <210> 144 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4130 gL3 V-region - IGKV1-9 framework <400> 144 Ala Ala Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asn Thr 20 25 30 Lys Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Phe Ser Ser 85 90 95 Ser Asp Leu Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 145 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4130 gH8 V-region - IGHV3-66 framework <400> 145 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Gly Gly 20 25 30 Tyr Asp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Cys Ile Tyr Gly Gly Ile Asn Ser Val Thr Asp Tyr Ala Ser 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Val Ser Asn Ser Asp His Tyr Thr Arg Leu Asp 100 105 110 Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 146 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4130 gH3 V-region - IGHV3-66 framework <400> 146 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Gly Gly 20 25 30 Tyr Asp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Ser Ile Tyr Gly Gly Ile Asn Ser Val Thr Asp Tyr Ala Ser 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Val Ser Asn Ser Asp His Tyr Thr Arg Leu Asp 100 105 110 Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 147 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4130 gH9 V-region - IGHV4-4 framework <400> 147 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Gly Gly 20 25 30 Tyr Asp Ile Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Cys Ile Tyr Gly Gly Ile Asn Ser Val Thr Asp Tyr Ala Ser 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Gln 65 70 75 80 Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Val Ser Asn Ser Asp His Tyr Thr Arg Leu Asp 100 105 110 Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 148 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4130 gH5 V-region - IGHV4-4 framework <400> 148 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Gly Gly 20 25 30 Tyr Asp Ile Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Ser Ile Tyr Gly Gly Ile Asn Ser Val Thr Asp Tyr Ala Ser 50 55 60 Trp Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Gln 65 70 75 80 Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Val Ser Asn Ser Asp His Tyr Thr Arg Leu Asp 100 105 110 Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 149 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4132 VL region <400> 149 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Thr Ile Ser Ser Arg 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Tyr Ser Ser Gly 85 90 95 Ser Asp Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Val Lys 100 105 110 <210> 150 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4132 VL region <400> 150 gacattgtga tgacccagac tccagcctcc gtggaggcag ctgtgggagg cacagtcacc 60 atcaagtgcc aggccagtga gaccattagt agtagattag cctggtatca gcagaagcta 120 gggcagcctc ccaaactcct gatctattct gcatccactc tggcgtctgg ggtcccatcg 180 cggttcaaag gcagtggatc tgggacagag tacactctca ccatcagcgg cgtgcagtgt 240 gccgatgctg ccacttatta ctgtcaaggc tattattata gtagtggtag tgattatggt 300 ttcggcggag ggaccaaggt ggtcgtcaaa 330 <210> 151 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4132 VH region <400> 151 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ser 35 40 45 Gly Cys Ile Asn Ser Gly Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Asn Ser Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu 65 70 75 80 Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Trp Val Ser Gly Tyr Tyr Lys Asp Ala Phe Asp Leu Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 152 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4132 VH region <400> 152 cagtcgttgg aggagtccgg gggagacctg gtcaagcctg gggcatccct gacactcacc 60 tgcacagcct ctggattctc cttcagtagc agctactgga tatgctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg gagcggatgc attaatagtg gtactggtgg cactgcctac 180 gcgagctggg cgaaaggccg attcaccatc tccaattcct cgtcgaccac ggtgactctt 240 caaatgacca gtctgacagc cgcggacacg gccacctatt tctgtgcgag agaatgggtt 300 agtggttatt ataaagatgc ttttgatctc tggggccagg gcaccctggt caccgtctcg 360 agt 363 <210> 153 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4132 gL1 V-region - IGKV1-5 framework <400> 153 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Thr Ile Ser Ser Arg 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Tyr Ser Ser Gly 85 90 95 Ser Asp Tyr Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 154 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4132 gH1 V-region - IGHV3-21 framework <400> 154 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ser Gly Cys Ile Asn Ser Gly Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Asn Asp Ser Ala Lys Thr Ser Val 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Glu Trp Val Ser Gly Tyr Tyr Lys Asp Ala Phe Asp Leu 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 155 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4132 gH2 V-region - IGHV3-21 framework <400> 155 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ser Gly Ser Ile Asn Ser Gly Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Asn Asp Ser Ala Lys Thr Ser Val 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Glu Trp Val Ser Gly Tyr Tyr Lys Asp Ala Phe Asp Leu 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 156 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4132 gH4 V-region - IGHV4-4 framework <400> 156 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ser Gly Cys Ile Asn Ser Gly Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Asn Asp Ser Ser Lys Thr Gln Val 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Glu Trp Val Ser Gly Tyr Tyr Lys Asp Ala Phe Asp Leu 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 157 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4132 gH5 V-region - IGHV4-4 framework <400> 157 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ser Gly Ser Ile Asn Ser Gly Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Asn Asp Ser Ser Lys Thr Gln Val 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Glu Trp Val Ser Gly Tyr Tyr Lys Asp Ala Phe Asp Leu 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 158 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4447 CDRH1 <400> 158 Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr Ala Val Ser 1 5 10 <210> 159 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4447 CDRH2 <400> 159 Ile Ile Tyr Ile Glu Thr Gly Thr Thr Trp Tyr Ala Asn Trp Ala Lys 1 5 10 15 Gly <210> 160 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4447 CDRH3 <400> 160 Glu Pro Tyr Glu Pro Tyr Asp Asp Ser Asn Ile Tyr Tyr Gly Met Asp 1 5 10 15 Pro <210> 161 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4447 CDRL1 <400> 161 Gln Ala Ser Gln Ser Val Val Ser Gly Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 162 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4447 CDRL2 <400> 162 Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 163 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4447 CDRL3 <400> 163 Leu Gly Glu Phe Ser Cys Ser Ser His Asp Cys Asn Ala 1 5 10 <210> 164 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4447 CDRL3 variant 1 <400> 164 Leu Gly Glu Phe Ser Ser Ser Ser His Asp Ser Asn Ala 1 5 10 <210> 165 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4447 CDRL3 variant 2 <400> 165 Leu Gly Glu Phe Ser Cys Ser Ser His Asp Ser Asn Ala 1 5 10 <210> 166 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4447 CDRL3 variant 3 <400> 166 Leu Gly Glu Phe Ser Ser Ser Ser His Asp Cys Asn Ala 1 5 10 <210> 167 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4447 VL region <400> 167 Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Pro Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Val Ser Gly 20 25 30 Asn Tyr Leu Ala Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln 35 40 45 Leu Ile His Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val 65 70 75 80 Gln Cys Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Glu Phe Ser Cys 85 90 95 Ser Ser His Asp Cys Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val 100 105 110 Lys <210> 168 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4447 VL region <400> 168 gcccaagtgc tgacccagac tccgtcccct gtgtctgcac ctgtgggagg cacagtcacc 60 atcaattgcc aggccagtca gagtgttgtt agtggcaatt acctagcctg gcttcagcag 120 aaaccagggc agcctcccaa gcaactgatc cattctgcat ccactctggc atctggggtc 180 tcatcgcggt tcagcggcag tggatctggg acacaattca ctctcaccat cagcggcgtg 240 cagtgtgaag atgctgccac ttactactgt ctaggcgaat ttagttgtag tagtcatgat 300 tgtaatgctt tcggcggagg gaccgaggtg gtggtcaaa 339 <210> 169 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4447 VH region <400> 169 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr Ala 20 25 30 Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Ile Ile Tyr Ile Glu Thr Gly Thr Thr Trp Tyr Ala Asn Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Thr Ile 65 70 75 80 Thr Ser Pro Ser Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Glu 85 90 95 Pro Tyr Glu Pro Tyr Asp Asp Ser Asn Ile Tyr Tyr Gly Met Asp Pro 100 105 110 Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 170 <211> 369 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4447 VH region <400> 170 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60 tgcaccgtct ctggattctc cctcagtaac tatgcagtaa gctgggtccg ccaggctcca 120 ggggagggac tggaatggat cgggatcatt tatattgaaa ctggtaccac atggtacgcg 180 aactgggcga aaggccgatt caccatctcc aaaacctcga ccacggtgga tctgacaatc 240 accagtccgt caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagaacc ttatgaacct 300 tatgatgata gtaatattta ctacggcatg gacccctggg gcccaggcac cctcgtcacc 360 gtctcgagt 369 <210> 171 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4447 gL1 V-region - IGKV1D-13 framework <400> 171 Ala Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Val Ser Gly 20 25 30 Asn Tyr Leu Ala Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Gln 35 40 45 Leu Ile His Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Glu Phe Ser Cys 85 90 95 Ser Ser His Asp Cys Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 172 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4447 gL2 V-region - IGKV1D-13 framework <400> 172 Ala Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Val Ser Gly 20 25 30 Asn Tyr Leu Ala Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Gln 35 40 45 Leu Ile His Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Glu Phe Ser Ser 85 90 95 Ser Ser His Asp Ser Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 173 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4447 gH1 V-region - IGHV3-48 framework <400> 173 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Ile Glu Thr Gly Thr Thr Trp Tyr Ala Asn Trp Ala 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ala Lys Asn Ser Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Pro Tyr Glu Pro Tyr Asp Asp Ser Asn Ile Tyr Tyr Gly 100 105 110 Met Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 174 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4447 gH3 V-region - IGHV4-59 framework <400> 174 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Ile Glu Thr Gly Thr Thr Trp Tyr Ala Asn Trp Ala 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Gln Val Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Pro Tyr Glu Pro Tyr Asp Asp Ser Asn Ile Tyr Tyr Gly 100 105 110 Met Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 175 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4450 CDRH1 <400> 175 Gly Phe Ser Leu Asn Asn Tyr Val Met Val 1 5 10 <210> 176 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4450 CDRH2 <400> 176 Ile Ile Tyr Val Ser Gly Asn Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 177 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4450 CDRH3 <400> 177 Asp Ala Gly His Ser Asp Val Asp Val Leu Asp Ile 1 5 10 <210> 178 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4450 CDRL1 <400> 178 Gln Ser Ser Gln Ser Ile Tyr Asn Asn Asn Asp Leu Ala 1 5 10 <210> 179 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4450 CDRL2 <400> 179 Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser 1 5 <210> 180 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4450 CDRL3 <400> 180 Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Asp Gly Ile Ala 1 5 10 <210> 181 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4450 CDRL3 - variant 1 <400> 181 Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Glu Gly Ile Ala 1 5 10 <210> 182 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4450 CDRL3 - variant 2 <400> 182 Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Asp Ala Ile Ala 1 5 10 <210> 183 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 4450 CDRL3 - variant 3 <400> 183 Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Asp Ser Ile Ala 1 5 10 <210> 184 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4450 VL region <400> 184 Ala Ile Asp Met Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Gln Ser Ile Tyr Asn Asn 20 25 30 Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val 65 70 75 80 Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Gly Ser Gly 85 90 95 Gly Asp Gly Ile Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Val Glu 100 105 110 <210> 185 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4450 VL region <400> 185 gccattgata tgacccagac tccatccccc gtgtctgcag ctgtgggagg cacagtcacc 60 atcaattgcc agtccagtca gagtatttat aataataatg acttagcctg gtatcagcag 120 aaaccagggc agcctcccaa gctcctgatc tacgaagcat ccaaactggc atctggggtc 180 ccatcgcggt tcaaaggcag tggatctggg acacagttca ctctcaccat cagtggcgtg 240 cagtgtgatg atgctgccac ttactactgt cagggcggtg gtagtggtgg tgatggcatt 300 gctttcggcg gagggaccaa ggtggtcgtc gaa 333 <210> 186 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4450 VH region <400> 186 Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Ala Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Tyr Val 20 25 30 Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Ile Ile Tyr Val Ser Gly Asn Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Val Thr 65 70 75 80 Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Ala 85 90 95 Gly His Ser Asp Val Asp Val Leu Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 187 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rabbit Ab 4450 VH region <400> 187 cagtcggtgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg gggcacccct gacactcacc 60 tgcacagtct ctggattctc cctcaataac tatgtaatgg tctgggtccg ccaggctcca 120 gggaaggggc tggaatggat cggaatcatt tatgttagtg gtaatgcata ctacgcgagc 180 tgggcaaaag gccgattcac catctccaga acctcgacca cggtggatct gaaagtgacc 240 agtctgacaa ccgaggacac ggccacctat ttctgtgcca gagatgctgg tcatagtgat 300 gtcgatgttt tggatatttg gggcccgggc accctcgtca ccgtctcgag t 351 <210> 188 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4450 gL1 V-region - IGKV1-6 framework <400> 188 Ala Ile Asp Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Ile Tyr Asn Asn 20 25 30 Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Gly Ser Gly 85 90 95 Gly Asp Gly Ile Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 189 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4450 gH1 V-region - IGHV3-66 framework <400> 189 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Tyr 20 25 30 Val Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Val Ser Gly Asn Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Ala Gly His Ser Asp Val Asp Val Leu Asp Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 190 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4450 gH3 V-region - IGHV4-59 framework <400> 190 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Tyr 20 25 30 Val Met Val Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Val Ser Gly Asn Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Ala Gly His Ser Asp Val Asp Val Leu Asp Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 191 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH1 dAbH1 <400> 191 Gly Ile Asp Leu Ser Asn Tyr Ala Ile Asn 1 5 10 <210> 192 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH2 dAbH1 <400> 192 Ile Ile Trp Ala Ser Gly Thr Thr Phe Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 193 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH3 dAbH1 <400> 193 Thr Val Pro Gly Tyr Ser Thr Ala Pro Tyr Phe Asp Leu 1 5 10 <210> 194 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL1 dAbL1 <400> 194 Gln Ser Ser Pro Ser Val Trp Ser Asn Phe Leu Ser 1 5 10 <210> 195 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL2 dAbL1 <400> 195 Glu Ala Ser Lys Leu Thr Ser 1 5 <210> 196 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL3 dAbL1 <400> 196 Gly Gly Gly Tyr Ser Ser Ile Ser Asp Thr Thr 1 5 10 <210> 197 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable domain of anti-albumin antibody (no ds) <400> 197 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ile Ile Trp Ala Ser Gly Thr Thr Phe Tyr Ala Thr Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Thr Val Pro Gly Tyr Ser Thr Ala Pro Tyr Phe Asp Leu Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 198 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable domain of anti-albumin antibody (ds) <400> 198 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ile Ile Trp Ala Ser Gly Thr Thr Phe Tyr Ala Thr Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Thr Val Pro Gly Tyr Ser Thr Ala Pro Tyr Phe Asp Leu Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 199 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable domain of anti-albumin antibody (no ds) <400> 199 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Pro Ser Val Trp Ser Asn 20 25 30 Phe Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gly Gly Tyr Ser Ser Ile 85 90 95 Ser Asp Thr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 200 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable domain of anti-albumin antibody (ds) <400> 200 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Pro Ser Val Trp Ser Asn 20 25 30 Phe Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gly Gly Tyr Ser Ser Ile 85 90 95 Ser Asp Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 201 <211> 847 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human CD22 <400> 201 Met His Leu Leu Gly Pro Trp Leu Leu Leu Leu Val Leu Glu Tyr Leu 1 5 10 15 Ala Phe Ser Asp Ser Ser Lys Trp Val Phe Glu His Pro Glu Thr Leu 20 25 30 Tyr Ala Trp Glu Gly Ala Cys Val Trp Ile Pro Cys Thr Tyr Arg Ala 35 40 45 Leu Asp Gly Asp Leu Glu Ser Phe Ile Leu Phe His Asn Pro Glu Tyr 50 55 60 Asn Lys Asn Thr Ser Lys Phe Asp Gly Thr Arg Leu Tyr Glu Ser Thr 65 70 75 80 Lys Asp Gly Lys Val Pro Ser Glu Gln Lys Arg Val Gln Phe Leu Gly 85 90 95 Asp Lys Asn Lys Asn Cys Thr Leu Ser Ile His Pro Val His Leu Asn 100 105 110 Asp Ser Gly Gln Leu Gly Leu Arg Met Glu Ser Lys Thr Glu Lys Trp 115 120 125 Met Glu Arg Ile His Leu Asn Val Ser Glu Arg Pro Phe Pro Pro His 130 135 140 Ile Gln Leu Pro Pro Glu Ile Gln Glu Ser Gln Glu Val Thr Leu Thr 145 150 155 160 Cys Leu Leu Asn Phe Ser Cys Tyr Gly Tyr Pro Ile Gln Leu Gln Trp 165 170 175 Leu Leu Glu Gly Val Pro Met Arg Gln Ala Ala Val Thr Ser Thr Ser 180 185 190 Leu Thr Ile Lys Ser Val Phe Thr Arg Ser Glu Leu Lys Phe Ser Pro 195 200 205 Gln Trp Ser His His Gly Lys Ile Val Thr Cys Gln Leu Gln Asp Ala 210 215 220 Asp Gly Lys Phe Leu Ser Asn Asp Thr Val Gln Leu Asn Val Lys His 225 230 235 240 Thr Pro Lys Leu Glu Ile Lys Val Thr Pro Ser Asp Ala Ile Val Arg 245 250 255 Glu Gly Asp Ser Val Thr Met Thr Cys Glu Val Ser Ser Ser Asn Pro 260 265 270 Glu Tyr Thr Thr Val Ser Trp Leu Lys Asp Gly Thr Ser Leu Lys Lys 275 280 285 Gln Asn Thr Phe Thr Leu Asn Leu Arg Glu Val Thr Lys Asp Gln Ser 290 295 300 Gly Lys Tyr Cys Cys Gln Val Ser Asn Asp Val Gly Pro Gly Arg Ser 305 310 315 320 Glu Glu Val Phe Leu Gln Val Gln Tyr Ala Pro Glu Pro Ser Thr Val 325 330 335 Gln Ile Leu His Ser Pro Ala Val Glu Gly Ser Gln Val Glu Phe Leu 340 345 350 Cys Met Ser Leu Ala Asn Pro Leu Pro Thr Asn Tyr Thr Trp Tyr His 355 360 365 Asn Gly Lys Glu Met Gln Gly Arg Thr Glu Glu Lys Val His Ile Pro 370 375 380 Lys Ile Leu Pro Trp His Ala Gly Thr Tyr Ser Cys Val Ala Glu Asn 385 390 395 400 Ile Leu Gly Thr Gly Gln Arg Gly Pro Gly Ala Glu Leu Asp Val Gln 405 410 415 Tyr Pro Pro Lys Lys Val Thr Thr Val Ile Gln Asn Pro Met Pro Ile 420 425 430 Arg Glu Gly Asp Thr Val Thr Leu Ser Cys Asn Tyr Asn Ser Ser Asn 435 440 445 Pro Ser Val Thr Arg Tyr Glu Trp Lys Pro His Gly Ala Trp Glu Glu 450 455 460 Pro Ser Leu Gly Val Leu Lys Ile Gln Asn Val Gly Trp Asp Asn Thr 465 470 475 480 Thr Ile Ala Cys Ala Ala Cys Asn Ser Trp Cys Ser Trp Ala Ser Pro 485 490 495 Val Ala Leu Asn Val Gln Tyr Ala Pro Arg Asp Val Arg Val Arg Lys 500 505 510 Ile Lys Pro Leu Ser Glu Ile His Ser Gly Asn Ser Val Ser Leu Gln 515 520 525 Cys Asp Phe Ser Ser Ser His Pro Lys Glu Val Gln Phe Phe Trp Glu 530 535 540 Lys Asn Gly Arg Leu Leu Gly Lys Glu Ser Gln Leu Asn Phe Asp Ser 545 550 555 560 Ile Ser Pro Glu Asp Ala Gly Ser Tyr Ser Cys Trp Val Asn Asn Ser 565 570 575 Ile Gly Gln Thr Ala Ser Lys Ala Trp Thr Leu Glu Val Leu Tyr Ala 580 585 590 Pro Arg Arg Leu Arg Val Ser Met Ser Pro Gly Asp Gln Val Met Glu 595 600 605 Gly Lys Ser Ala Thr Leu Thr Cys Glu Ser Asp Ala Asn Pro Pro Val 610 615 620 Ser His Tyr Thr Trp Phe Asp Trp Asn Asn Gln Ser Leu Pro Tyr His 625 630 635 640 Ser Gln Lys Leu Arg Leu Glu Pro Val Lys Val Gln His Ser Gly Ala 645 650 655 Tyr Trp Cys Gln Gly Thr Asn Ser Val Gly Lys Gly Arg Ser Pro Leu 660 665 670 Ser Thr Leu Thr Val Tyr Tyr Ser Pro Glu Thr Ile Gly Arg Arg Val 675 680 685 Ala Val Gly Leu Gly Ser Cys Leu Ala Ile Leu Ile Leu Ala Ile Cys 690 695 700 Gly Leu Lys Leu Gln Arg Arg Trp Lys Arg Thr Gln Ser Gln Gln Gly 705 710 715 720 Leu Gln Glu Asn Ser Ser Gly Gln Ser Phe Phe Val Arg Asn Lys Lys 725 730 735 Val Arg Arg Ala Pro Leu Ser Glu Gly Pro His Ser Leu Gly Cys Tyr 740 745 750 Asn Pro Met Met Glu Asp Gly Ile Ser Tyr Thr Thr Leu Arg Phe Pro 755 760 765 Glu Met Asn Ile Pro Arg Thr Gly Asp Ala Glu Ser Ser Glu Met Gln 770 775 780 Arg Pro Pro Pro Asp Cys Asp Asp Thr Val Thr Tyr Ser Ala Leu His 785 790 795 800 Lys Arg Gln Val Gly Asp Tyr Glu Asn Val Ile Pro Asp Phe Pro Glu 805 810 815 Asp Glu Gly Ile His Tyr Ser Glu Leu Ile Gln Phe Gly Val Gly Glu 820 825 830 Arg Pro Gln Ala Gln Glu Asn Val Asp Tyr Val Ile Leu Lys His 835 840 845 <210> 202 <211> 226 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human CD79a <400> 202 Met Pro Gly Gly Pro Gly Val Leu Gln Ala Leu Pro Ala Thr Ile Phe 1 5 10 15 Leu Leu Phe Leu Leu Ser Ala Val Tyr Leu Gly Pro Gly Cys Gln Ala 20 25 30 Leu Trp Met His Lys Val Pro Ala Ser Leu Met Val Ser Leu Gly Glu 35 40 45 Asp Ala His Phe Gln Cys Pro His Asn Ser Ser Asn Asn Ala Asn Val 50 55 60 Thr Trp Trp Arg Val Leu His Gly Asn Tyr Thr Trp Pro Pro Glu Phe 65 70 75 80 Leu Gly Pro Gly Glu Asp Pro Asn Gly Thr Leu Ile Ile Gln Asn Val 85 90 95 Asn Lys Ser His Gly Gly Ile Tyr Val Cys Arg Val Gln Glu Gly Asn 100 105 110 Glu Ser Tyr Gln Gln Ser Cys Gly Thr Tyr Leu Arg Val Arg Gln Pro 115 120 125 Pro Pro Arg Pro Phe Leu Asp Met Gly Glu Gly Thr Lys Asn Arg Ile 130 135 140 Ile Thr Ala Glu Gly Ile Ile Leu Leu Phe Cys Ala Val Val Pro Gly 145 150 155 160 Thr Leu Leu Leu Phe Arg Lys Arg Trp Gln Asn Glu Lys Leu Gly Leu 165 170 175 Asp Ala Gly Asp Glu Tyr Glu Asp Glu Asn Leu Tyr Glu Gly Leu Asn 180 185 190 Leu Asp Asp Cys Ser Met Tyr Glu Asp Ile Ser Arg Gly Leu Gln Gly 195 200 205 Thr Tyr Gln Asp Val Gly Ser Leu Asn Ile Gly Asp Val Gln Leu Glu 210 215 220 Lys Pro 225 <210> 203 <211> 229 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human CD79b <400> 203 Met Ala Arg Leu Ala Leu Ser Pro Val Pro Ser His Trp Met Val Ala 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Leu Ser Ala Glu Pro Val Pro Ala Ala Arg Ser Glu 20 25 30 Asp Arg Tyr Arg Asn Pro Lys Gly Ser Ala Cys Ser Arg Ile Trp Gln 35 40 45 Ser Pro Arg Phe Ile Ala Arg Lys Arg Gly Phe Thr Val Lys Met His 50 55 60 Cys Tyr Met Asn Ser Ala Ser Gly Asn Val Ser Trp Leu Trp Lys Gln 65 70 75 80 Glu Met Asp Glu Asn Pro Gln Gln Leu Lys Leu Glu Lys Gly Arg Met 85 90 95 Glu Glu Ser Gln Asn Glu Ser Leu Ala Thr Leu Thr Ile Gln Gly Ile 100 105 110 Arg Phe Glu Asp Asn Gly Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Lys Cys Asn Asn 115 120 125 Thr Ser Glu Val Tyr Gln Gly Cys Gly Thr Glu Leu Arg Val Met Gly 130 135 140 Phe Ser Thr Leu Ala Gln Leu Lys Gln Arg Asn Thr Leu Lys Asp Gly 145 150 155 160 Ile Ile Met Ile Gln Thr Leu Leu Ile Ile Leu Phe Ile Ile Val Pro 165 170 175 Ile Phe Leu Leu Leu Asp Lys Asp Asp Ser Lys Ala Gly Met Glu Glu 180 185 190 Asp His Thr Tyr Glu Gly Leu Asp Ile Asp Gln Thr Ala Thr Tyr Glu 195 200 205 Asp Ile Val Thr Leu Arg Thr Gly Glu Val Lys Trp Ser Val Gly Glu 210 215 220 His Pro Gly Gln Glu 225 <210> 204 <211> 44 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GCN4(7P14P) sequence <400> 204 Ala Ser Gly Gly Gly Arg Met Lys Gln Leu Glu Pro Lys Val Glu Glu 1 5 10 15 Leu Leu Pro Lys Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu Val Ala Arg Leu Lys 20 25 30 Lys Leu Val Gly Glu Arg His His His His His His 35 40 <210> 205 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GCN4(7P14P) sequence <400> 205 Gly Cys Thr Ala Gly Cys Gly Gly Ala Gly Gly Cys Gly Gly Ala Ala 1 5 10 15 Gly Ala Ala Thr Gly Ala Ala Ala Cys Ala Ala Cys Thr Thr Gly Ala 20 25 30 Ala Cys Cys Cys Ala Ala Gly Gly Thr Thr Gly Ala Ala Gly Ala Ala 35 40 45 Thr Thr Gly Cys Thr Thr Cys Cys Gly Ala Ala Ala Ala Ala Thr Thr 50 55 60 Ala Thr Cys Ala Cys Thr Thr Gly Gly Ala Ala Ala Ala Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gly Gly Thr Thr Gly Cys Cys Ala Gly Ala Thr Thr Ala Ala Ala Gly 85 90 95 Ala Ala Ala Thr Thr Ala Gly Thr Thr Gly Gly Cys Gly Ala Ala Cys 100 105 110 Gly Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Cys Ala 115 120 125 Thr Cys Ala Cys 130 <210> 206 <211> 262 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 52SR4 ds scFv sequence <400> 206 Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Ser Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Ser Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Asp Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Thr 145 150 155 160 Asp Tyr Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Cys Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ser Ala 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Val Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val 195 200 205 Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Gly Asp Ser Ala Arg Tyr Tyr 210 215 220 Cys Val Thr Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser Ala Ala Ala His His His His His His Glu Gln Lys Leu 245 250 255 Ile Ser Glu Glu Asp Leu 260 <210> 207 <211> 792 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 52SR4 ds scFv sequence <400> 207 gatgcggtgg tgacccagga aagcgcgctg accagcagcc cgggcgaaac cgtgaccctg 60 acctgccgca gcagcaccgg cgcggtgacc accagcaact atgcgagctg ggtgcaggaa 120 aaaccggatc atctgtttac cggcctgatt ggcggcacca acaaccgcgc gccgggcgtg 180 ccggcgcgct ttagcggcag cctgattggc gataaagcgg cgctgaccat taccggcgcg 240 cagaccgaag atgaagcgat ttatttttgc gtgctgtggt atagcgacca ttgggtgttt 300 ggctgcggca ccaaactgac cgtgctgggt ggaggcggtg gctcaggcgg aggtggctca 360 ggcggtggcg ggtctggcgg cggcggcagc gatgtgcagc tgcagcagag cggcccgggc 420 ctggtggcgc cgagccagag cctgagcatt acctgcaccg tgagcggctt tctcctgacc 480 gattatggcg tgaactgggt gcgccagagc ccgggcaaat gcctggaatg gctgggcgtg 540 atttggggcg atggcattac cgattataac agcgcgctga aaagccgcct gagcgtgacc 600 aaagataaca gcaaaagcca ggtgtttctg aaaatgaaca gcctgcagag cggcgatagc 660 gcgcgctatt attgcgtgac cggcctgttt gattattggg gccagggcac caccctgacc 720 gtgagcagcg cggccgccca tcaccatcac catcacgaac agaaactgat tagcgaagaa 780 gatctgtaat ag 792 <210> 208 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge linker sequence <400> 208 Asp Lys Thr His Thr Cys Ala Ala 1 5 <210> 209 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge linker sequence <400> 209 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 <210> 210 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge linker sequence <400> 210 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Thr Cys Pro Pro Cys 1 5 10 15 Pro Ala <210> 211 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge linker sequence <400> 211 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Thr Cys Pro Pro Cys 1 5 10 15 Pro Ala Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 20 25 <210> 212 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge linker sequence <400> 212 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Gly Lys Pro Thr Leu 1 5 10 15 Tyr Asn Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala Gly Thr Cys Tyr 20 25 30 <210> 213 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge linker sequence <400> 213 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Gly Lys Pro Thr His 1 5 10 15 Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly Thr Cys Tyr 20 25 30 <210> 214 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge linker sequence <400> 214 Asp Lys Thr His Thr Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 <210> 215 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge linker sequence <400> 215 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp 1 5 10 15 Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Ala 20 25 <210> 216 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge linker sequence <400> 216 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Ser Cys Pro Ala 1 5 10 <210> 217 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 217 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu 1 5 <210> 218 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 218 Asp Lys Thr His Thr Ser 1 5 <210> 219 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 219 Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 220 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 221 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 221 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 222 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 222 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 Gly Gly Gly Gly Ser 20 <210> 223 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 223 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25 <210> 224 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 224 Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gly Ala Ser Ala Ser 1 5 10 <210> 225 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 225 Ala Ala Ala Gly Ser Gly Xaa Gly Gly Gly Ser Gly Ala Ser Ala Ser 1 5 10 15 <210> 226 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 226 Ala Ala Ala Gly Ser Gly Xaa Gly Gly Gly Ser Xaa Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 Gly Ala Ser Ala Ser 20 <210> 227 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (17)..(17) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 227 Ala Ala Ala Gly Ser Gly Xaa Gly Gly Gly Ser Xaa Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 Xaa Gly Gly Gly Ser Gly Ala Ser Ala Ser 20 25 <210> 228 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (17)..(17) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (22)..(22) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 228 Ala Ala Ala Gly Ser Gly Xaa Gly Gly Gly Ser Xaa Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 Xaa Gly Gly Gly Ser Xaa Gly Gly Gly Ser Gly Ala Ser Ala Ser 20 25 30 <210> 229 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 229 Ala Ala Ala Gly Ser Gly Xaa Ser Gly Ala Ser Ala Ser 1 5 10 <210> 230 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 230 Pro Gly Gly Asn Arg Gly Thr Thr Thr Thr Arg Arg Pro Ala Thr Thr 1 5 10 15 Thr Gly Ser Ser Pro Gly Pro Thr Gln Ser His Tyr 20 25 <210> 231 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 231 Ala Thr Thr Thr Gly Ser Ser Pro Gly Pro Thr 1 5 10 <210> 232 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 232 Ala Thr Thr Thr Gly Ser 1 5 <210> 233 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 233 Glu Pro Ser Gly Pro Ile Ser Thr Ile Asn Ser Pro Pro Ser Lys Glu 1 5 10 15 Ser His Lys Ser Pro 20 <210> 234 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 234 Gly Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 1 5 10 15 <210> 235 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 235 Gly Gly Gly Gly Ile Ala Pro Ser Met Val Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 236 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 236 Gly Gly Gly Gly Lys Val Glu Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 237 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 237 Gly Gly Gly Gly Ser Met Lys Ser His Asp Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 238 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 238 Gly Gly Gly Gly Asn Leu Ile Thr Ile Val Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 239 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 239 Gly Gly Gly Gly Val Val Pro Ser Leu Pro Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 240 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 240 Gly Gly Glu Lys Ser Ile Pro Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 241 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 241 Arg Pro Leu Ser Tyr Arg Pro Pro Phe Pro Phe Gly Phe Pro Ser Val 1 5 10 15 Arg Pro <210> 242 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 242 Tyr Pro Arg Ser Ile Tyr Ile Arg Arg Arg His Pro Ser Pro Ser Leu 1 5 10 15 Thr Thr <210> 243 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 243 Thr Pro Ser His Leu Ser His Ile Leu Pro Ser Phe Gly Leu Pro Thr 1 5 10 15 Phe Asn <210> 244 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 244 Arg Pro Val Ser Pro Phe Thr Phe Pro Arg Leu Ser Asn Ser Trp Leu 1 5 10 15 Pro Ala <210> 245 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 245 Ser Pro Ala Ala His Phe Pro Arg Ser Ile Pro Arg Pro Gly Pro Ile 1 5 10 15 Arg Thr <210> 246 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 246 Ala Pro Gly Pro Ser Ala Pro Ser His Arg Ser Leu Pro Ser Arg Ala 1 5 10 15 Phe Gly <210> 247 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 247 Pro Arg Asn Ser Ile His Phe Leu His Pro Leu Leu Val Ala Pro Leu 1 5 10 15 Gly Ala <210> 248 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 248 Met Pro Ser Leu Ser Gly Val Leu Gln Val Arg Tyr Leu Ser Pro Pro 1 5 10 15 Asp Leu <210> 249 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 249 Ser Pro Gln Tyr Pro Ser Pro Leu Thr Leu Thr Leu Pro Pro His Pro 1 5 10 15 Ser Leu <210> 250 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 250 Asn Pro Ser Leu Asn Pro Pro Ser Tyr Leu His Arg Ala Pro Ser Arg 1 5 10 15 Ile Ser <210> 251 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 251 Leu Pro Trp Arg Thr Ser Leu Leu Pro Ser Leu Pro Leu Arg Arg Arg 1 5 10 15 Pro <210> 252 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 252 Pro Pro Leu Phe Ala Lys Gly Pro Val Gly Leu Leu Ser Arg Ser Phe 1 5 10 15 Pro Pro <210> 253 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 253 Val Pro Pro Ala Pro Val Val Ser Leu Arg Ser Ala His Ala Arg Pro 1 5 10 15 Pro Tyr <210> 254 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 254 Leu Arg Pro Thr Pro Pro Arg Val Arg Ser Tyr Thr Cys Cys Pro Thr 1 5 10 15 Pro <210> 255 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 255 Pro Asn Val Ala His Val Leu Pro Leu Leu Thr Val Pro Trp Asp Asn 1 5 10 15 Leu Arg <210> 256 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 256 Cys Asn Pro Leu Leu Pro Leu Cys Ala Arg Ser Pro Ala Val Arg Thr 1 5 10 15 Phe Pro <210> 257 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 257 Asp Leu Cys Leu Arg Asp Trp Gly Cys Leu Trp 1 5 10 <210> 258 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 258 Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp 1 5 10 <210> 259 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 259 Met Glu Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp Gly Asp 1 5 10 15 <210> 260 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 260 Gln Arg Leu Met Glu Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp 1 5 10 15 Glu Asp Asp Glu 20 <210> 261 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 261 Gln Gly Leu Ile Gly Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp 1 5 10 15 Gly Arg Ser Val 20 <210> 262 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 262 Gln Gly Leu Ile Gly Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp 1 5 10 15 Gly Arg Ser Val Lys 20 <210> 263 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 263 Glu Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp Glu Asp Asp 1 5 10 15 <210> 264 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 264 Arg Leu Met Glu Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp Glu 1 5 10 15 Asp Asp <210> 265 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 265 Met Glu Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp Glu Asp Asp 1 5 10 15 <210> 266 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 266 Met Glu Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp Glu Asp 1 5 10 15 <210> 267 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 267 Arg Leu Met Glu Asp Ile Cys Leu Ala Arg Trp Gly Cys Leu Trp Glu 1 5 10 15 Asp Asp <210> 268 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 268 Glu Val Arg Ser Phe Cys Thr Arg Trp Pro Ala Glu Lys Ser Cys Lys 1 5 10 15 Pro Leu Arg Gly 20 <210> 269 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 269 Arg Ala Pro Glu Ser Phe Val Cys Tyr Trp Glu Thr Ile Cys Phe Glu 1 5 10 15 Arg Ser Glu Gln 20 <210> 270 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Flexible linker sequence <400> 270 Glu Met Cys Tyr Phe Pro Gly Ile Cys Trp Met 1 5 10 <210> 271 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> linker <400> 271 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 272 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> linker <400> 272 Ser Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 273 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide sequence <400> 273 Gly Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala 1 5 10 <210> 274 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide sequence <400> 274 Pro Pro Pro Pro 1

Claims

CD22에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함하는 항체 분자로서, 상기 결합 도메인은, 하기 식 (I)의 CDRH1, 하기 식 (II)의 CDRH2 및 하기 식 (III)의 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)과, 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 것인, CD22에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함하는 항체 분자:
[식 (I)]
GX₁X₂FSX₃X₄X₅X₆X₇X₈(서열번호 1)
[식 (II)]
X₉IX₁₀X₁₁X₁₂X₁₃X₁₄X₁₅X₁₆TX₁₇YAX₁₈WAKG (서열번호 2)
[식 (III)]
X₁₉X₂₀X₂₁X₂₂X₂₃X₂₄X₂₅X₂₆X₂₇X₂₈X₂₉X₃₀X₃₁X₃₂X₃₃L (서열번호 3)
상기 식들에서,
X₁은 F, I 또는 L(예컨대, F)이고, X₂는 S 또는 D이고, X₃은 S, N 또는 G(예컨대, S)이고, X₄는 S, Y, L 또는 G이고, X₅는 Y이거나 부재하고, X₆은 W, Y 또는 D(예컨대, W 또는 Y, 특히 Y)이고, X₇은 M 또는 I이고, X₈은 C 또는 S(특히 S)이고;
X₉는 C 또는 S이고, X₁₀은 Y, D, V 또는 N이고, X₁₁은 T, P, I, G, S 또는 A이고, X₁₂는 G, S 또는 A(특히 G)이고, X₁₃은 S, I 또는 T이고, X₁₄는 S 또는 N이거나 부재하고, X₁₅는 G, D, S, A 또는 T이고, X₁₆은 D, T, S, N, V 또는 G이고, X₁₇은 Y, D 또는 A이고, X₁₈은 T 또는 S(특히 S)이고;
X₁₉는 A이거나 부재하고, X₂₀은 부재하거나 G 또는 Y이고, X₂₁은 부재하거나 P 또는 G이고, X₂₂는 부재하거나 Y, S, D 또는 E이고, X₂₃은 V, G, Y 또는 W이고, X₂₄는 G, Y, S 또는 V이고, X₂₅는 Y, S, G 또는 N이고, X₂₆은 G, A, S 또는 T이고, X₂₇은 Y, G 또는 D이고, X₂₈은 D, I, Y, W 또는 H이고, X₂₉는 L, G, S, Y 또는 K이고, X₃₀은 V, Q, C, S, G, T 또는 D이고, X₃₁은 Y, A 또는 R이고, X₃₂는 L 또는 F이고, X₃₃은 N, Y 또는 D(특히 D)이다.
CD22에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함하는 항체 분자로서, 상기 결합 도메인은, 하기 식 (IV)의 CDRL1, 하기 식 (V)의 CDRL2, 및 하기 식 (VI) 또는 식 (VII)의 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)과, 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는 것인, CD22에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함하는 항체 분자:
[식 (IV)]
QX₃₄SX₃₅X₃₆X₃₇X₃₈X₃₉X₄₀X₄₁X₄₂LX₄₃(서열번호 4)
[식 (V)]
X₄₄X₄₅SX₄₆LX₄₇S (서열번호 5)
[식 (VI)]
AGYKSX₄₈X₄₉DX₅₀X₅₁TT (서열번호 6)
[식 (VII)]
QX₅₂X₅₃X₅₄X₅₅X₅₆SX₅₇X₅₈X₅₉X₆₀X₆₁X₆₂X₆₃X₆₄(서열번호 7)
상기 식들에서,
X₃₄는 A 또는 S(특히 A)이고, X₃₅는 Q 또는 E(특히 Q)이고, X₃₆은 S, N 또는 T(특히 S)이고, X₃₇은 I 또는 V이고, X₃₈은 S, Y 또는 G(예컨대, S 또는 Y)이고, X₃₉는 T, S, G 또는 N(예컨대, S 또는 N)이고, X₄₀은 A, G, N, Y, T 또는 R이고, X₄₁은 부재하거나 N 또는 K이고(특히 부재하고), X₄₂는 부재하거나 E 또는 D이고(특히 부재하고), X₄₃은 A 또는 S(특히 A)이고;
X₄₄는 G, Y, L, A 또는 S이고, X₄₅는 A, S 또는 T(특히 A)이고, X₄₆은 T, R 또는 K(특히 T)이고, X₄₇은 A 또는 S(특히 A)이고;
X₄₈은 D 또는 E(특히 D)이고, X₄₉는 S, A 또는 T이고, X₅₀은 D 또는 E(특히 D)이고, X₅₁은 G, A 또는 S이고;
X₅₂는 S, I 또는 G(예컨대, S 또는 G)이고, X₅₃은 Y, H 또는 G(특히 Y)이고, X₅₄는 Y, D 또는 F(특히 Y)이고, X₅₅는 G, S 또는 Y(예컨대, S 또는 Y)이고, X₅₆은 T, A 또는 S(특히 S)이고, X₅₇은 S, G, V 또는 D이고, X₅₈은 G, S 또는 L이거나 부재하고, X₅₉는 G, R, S 또는 N이고, X₆₀은 S, D 또는 V(예컨대, S 또는 D)이고, X₆₁은 W 또는 Y이거나 부재하고(예컨대, W 또는 Y이고), X₆₂는 A, T 또는 G이거나 부재하고, X₆₃은 N이거나 부재하고(특히 부재하고), X₆₄는 A이거나 부재한다(특히 부재한다).
CD22에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함하는 항체 분자로서, 상기 결합 도메인은, 하기 식 (I)의 CDRH1, 하기 식 (II)의 CDRH2 및 하기 식 (III)의 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)과, 하기 식 (IV)의 CDRL1, 하기 식 (V)의 CDRL2 및 하기 식 (VI) 또는 식 (VII)의 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 것인, CD22에 대해 특이적인 결합 도메인을 포함하는 항체 분자:
[식 (I)]
GX₁X₂FSX₃X₄X₅X₆X₇X₈(서열번호 1)
[식 (II)]
X₉IX₁₀X₁₁X₁₂X₁₃X₁₄X₁₅X₁₆TX₁₇YAX₁₈WAKG (서열번호 2)
[식 (III)]
X₁₉X₂₀X₂₁X₂₂X₂₃X₂₄X₂₅X₂₆X₂₇X₂₈X₂₉X₃₀X₃₁X₃₂X₃₃L (서열번호 3)
[식 (IV)]
QX₃₄SX₃₅X₃₆X₃₇X₃₈X₃₉X₄₀X₄₁X₄₂LX₄₃(서열번호 4)
[식 (V)]
X₄₄X₄₅SX₄₆LX₄₇S (서열번호 5)
[식 (VI)]
AGYKSX₄₈X₄₉DX₅₀X₅₁TT (서열번호 6)
[식 (VII)]
QX₅₂X₅₃X₅₄X₅₅X₅₆SX₅₇X₅₈X₅₉X₆₀X₆₁X₆₂X₆₃X₆₄(서열번호 7)
상기 식들에서,
X₁은 F, I 또는 L(예컨대, F)이고, X₂는 S 또는 D이고, X₃은 S, N 또는 G(예컨대, S)이고, X₄는 S, Y, L 또는 G이고, X₅는 Y이거나 부재하고, X₆은 W, Y 또는 D(예컨대, W 또는 Y, 특히 Y)이고, X₇은 M 또는 I이고, X₈은 C 또는 S(특히 S)이고;
X₉는 C 또는 S이고, X₁₀은 Y, D, V 또는 N이고, X₁₁은 T, P, I, G, S 또는 A이고, X₁₂는 G, S 또는 A(특히 G)이고, X₁₃은 S, I 또는 T이고, X₁₄는 S 또는 N이거나 부재하고, X₁₅는 G, D, S, A 또는 T이고, X₁₆은 D, T, S, N, V 또는 G이고, X₁₇은 Y, D 또는 A이고, X₁₈은 T 또는 S(특히 S)이고;
X₁₉는 A이거나 부재하고, X₂₀은 부재하거나 G 또는 Y이고, X₂₁은 부재하거나 P 또는 G이고, X₂₂는 부재하거나 Y, S, D 또는 E이고, X₂₃은 V, G, Y 또는 W이고, X₂₄는 G, Y, S 또는 V이고, X₂₅는 Y, S, G 또는 N이고, X₂₆은 G, A, S 또는 T이고, X₂₇은 Y, G 또는 D이고, X₂₈은 D, I, Y, W 또는 H이고, X₂₉는 L, G, S, Y 또는 K이고, X₃₀은 V, Q, C, S, G, T 또는 D이고, X₃₁은 Y, A 또는 R이고, X₃₂는 L 또는 F이고, X₃₃은 N, Y 또는 D(특히 D)이고;
X₃₄는 A 또는 S(특히 A)이고, X₃₅는 Q 또는 E(특히 Q)이고, X₃₆은 S, N 또는 T(특히 S)이고, X₃₇은 I 또는 V이고, X₃₈은 S, Y 또는 G(예컨대, S 또는 Y)이고, X₃₉는 T, S, G 또는 N(예컨대, S 또는 N)이고, X₄₀은 A, G, N, Y, T 또는 R이고, X₄₁은 부재하거나 N 또는 K이고(특히 부재하고), X₄₂는 부재하거나 E 또는 D이고(특히 부재하고), X₄₃은 A 또는 S(특히 A)이고;
X₄₄는 G, Y, L, A 또는 S이고, X₄₅는 A, S 또는 T(특히 A)이고, X₄₆은 T, R 또는 K(특히 T)이고, X₄₇은 A 또는 S(특히 A)이고;
X₄₈은 D 또는 E(특히 D)이고, X₄₉는 S, A 또는 T이고, X₅₀은 D 또는 E(특히 D)이고, X₅₁은 G, A 또는 S이고;
X₅₂는 S, I 또는 G(예컨대, S 또는 G)이고, X₅₃은 Y, H 또는 G(특히 Y)이고, X₅₄는 Y, D 또는 F(특히 Y)이고, X₅₅는 G, S 또는 Y(예컨대, S 또는 Y)이고, X₅₆은 T, A 또는 S(특히 S)이고, X₅₇은 S, G, V 또는 D이고, X₅₈은 G, S 또는 L이거나 부재하고, X₅₉는 G, R, S 또는 N이고, X₆₀은 S, D 또는 V(예컨대, S 또는 D)이고, X₆₁은 W 또는 Y이거나 부재하고(예컨대, W 또는 Y이고), X₆₂는 A, T 또는 G이거나 부재하고, X₆₃은 N이거나 부재하고(특히 부재하고), X₆₄는 A이거나 부재한다(특히 부재한다).
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, CDRH1은 하기 식 (Ia)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (Ia)]
GX₁X₂FSX₃X₄X₅YX₇X₈(서열번호 8)
상기 식에서,
X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X₇ 및 X₈은 식 (I)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제4항에 있어서, CDRH1은 하기 식 (Ib)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (Ib)]
GX₁X₂FSX₃X₄X₅YX₇S (서열번호 9)
상기 식에서,
X₁, X₂, X₃, X₄, X₅ 및 X₇은 식 (I)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, CDRH2는 하기 식 (IIa)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (IIa)]
X₉IX₁₀X₁₁GX₁₃X₁₄X₁₅X₁₆TX₁₇YAX₁₈WAKG (서열번호 10)
상기 식에서,
X₉, X₁₀, X₁₁, X₁₃, X₁₄, X₁₅, X₁₆, X₁₇ 및 X₁₈은 식 (II)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제6항 있어서, CDRH2는 하기 식 (IIb), 특히 X₁₂가 G인 하기 식 (IIb)의 서열을 갖는 것인 항체 분자:
[식 (IIb)]
X₉IX₁₀X₁₁X₁₂X₁₃X₁₄X₁₅X₁₆TX₁₇YASWAKG (서열번호 11)
상기 식에서,
X₉, X₁₀, X₁₁, X₁₂, X₁₃, X₁₄, X₁₅, X₁₆ 및 X₁₇은 식 (II)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, CDRH3은 하기 식 (IIIa)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (IIIa)]
X₁₉X₂₀X₂₁X₂₂X₂₃X₂₄X₂₅X₂₆X₂₇X₂₈X₂₉X₃₀X₃₁X₃₂DL (서열번호 12)
상기 식에서,
X₁₉, X₂₀, X₂₁, X₂₂, X₂₃, X₂₄, X₂₅, X₂₆, X₂₇, X₂₈, X₂₉, X₃₀, X₃₁ 및 X₃₂는 식 (III)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, CDRL1은 하기 식 (IVa)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (IVa)]
QASX₃₅X₃₆X₃₇X₃₈X₃₉X₄₀X₄₁X₄₂LX₄₃(서열번호 13)
상기 식에서,
X₃₅, X₃₆, X₃₇, X₃₈, X₃₉, X₄₀, X₄₁, X₄₂ 및 X₄₃은 식 (IV)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제9항에 있어서, CDRL1은 하기 식 (IVb)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (IVb)]
QASQX₃₆X₃₇X₃₈X₃₉X₄₀X₄₁X₄₂LX₄₃(서열번호 14)
상기 식에서,
X₃₆, X₃₇, X₃₈, X₃₉, X₄₀, X₄₁, X₄₂ 및 X₄₃은 식 (IV)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제9항 또는 제10항에 있어서, CDRL1은 하기 식 (IVc)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (IVc)]
QASQSX₃₇X₃₈X₃₉X₄₀X₄₁X₄₂LX₄₃(서열번호 15)
상기 식에서,
X₃₇, X₃₈, X₃₉, X₄₀, X₄₁, X₄₂ 및 X₄₃은 식 (IV)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, CDRL1은 하기 식 (IIId)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (IIId)]
QASQSX₃₇X₃₈X₃₉X₄₀X₄₂LX₄₃(서열번호 16)
상기 식에서,
X₃₇, X₃₈, X₃₉, X₄₀, X₄₂ 및 X₄₃은 식 (IV)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, CDRL1은 하기 식 (IVe)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (IVe)]
QASQSX₃₇X₃₈X₃₉X₄₀LX₄₃(서열번호 17)
상기 식에서,
X₃₇, X₃₈, X₃₉, X₄₀ 및 X₄₃은 식 (IV)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제9항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, CDRL1은 하기 식 (IVf)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (IVf)]
QASQSX₃₇X₃₈X₃₉X₄₀LA (서열번호 18)
상기 식에서,
X₃₇, X₃₈, X₃₉ 및 X₄₀은 식 (IV)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, CDRL2는 하기 식 (Va)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (Va)]
X₄₄ASX₄₆LX₄₇S (서열번호 19)
상기 식에서,
X₄₄, X₄₆ 및 X₄₇은 식 (V)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제15항에 있어서, CDRL2는 하기 식 (Vb)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (Vb)]
X₄₄ASX₄₆LAS (서열번호 20)
상기 식에서,
X₄₄ 및 X₄₆은 식 (V)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제16항에 있어서, CDRL2는 하기 식 (Vc)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (Vc)]
X₄₄ASTLAS (서열번호 21)
상기 식에서,
X₄₄는 식 (V)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, CDRL3은 하기 식 (VIa)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (VIa)]
AGYKSX₄₈X₄₉DX₅₀X₅₁TT (서열번호 22)
상기 식에서,
X₄₉, X₅₀ 및 X₅₁은 식 (V)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제18항에 있어서, CDRL3은 하기 식 (VIb)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (VIb)]
AGYKSDX₄₉DDX₅₁TT (서열번호 23)
상기 식에서,
X₄₉ 및 X₅₁은 식 (VI)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, CDRL3은 하기 식 (VIIa)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (VIIa)]
QX₅₂YX₅₄X₅₅X₅₆SX₅₇X₅₈X₅₉X₆₀X₆₁X₆₂X₆₃X₆₄(서열번호 24)
상기 식에서,
X₅₂, X₅₄, X₅₅, X₅₆, X₅₇, X₅₈, X₅₉, X₆₀, X₆₁, X₆₂, X₆₃ 및 X₆₄는 식 (VII)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제20항에 있어서, CDRL3은 하기 식 (VIIb)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (VIIb)]
QX₅₂YYX₅₅X₅₆SX₅₇X₅₈X₅₉X₆₀X₆₁X₆₂X₆₃X₆₄(서열번호 25)
상기 식에서,
X₅₂, X₅₅, X₅₇, X₅₈, X₅₉, X₆₀, X₆₁, X₆₂, X₆₃ 및 X₆₄는 식 (VII)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제21항에 있어서, CDRL3은 하기 식 (VIIc)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (VIIc)]
QX₅₂YYX₅₅SSX₅₇X₅₈X₅₉X₆₀X₆₁X₆₂X₆₃X₆₄(서열번호 26)
상기 식에서,
X₅₂, X₅₅, X₅₆, X₅₇, X₅₈, X₅₉, X₆₀, X₆₁, X₆₂, X₆₃ 및 X₆₄는 식 (VII)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제21항 또는 제22항에 있어서, CDRL3은 하기 식 (VIId)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (VIId)]
QX₅₂YYX₅₅SSX₅₇X₅₈X₅₉X₆₀X₆₁X₆₂X₆₄(서열번호 27)
상기 식에서,
X₅₂, X₅₅, X₅₇, X₅₈, X₅₉, X₆₀, X₆₁, X₆₂ 및 X₆₄는 식 (VII)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제21항 또는 제22항에 있어서, CDRL3은 하기 식 (VIIe)를 갖는 것인 항체 분자:
[식 (VIIe)]
QX₅₂YYX₅₅SSX₅₇X₅₈X₅₉X₆₀X₆₁X₆₂(서열번호 28)
상기 식에서,
X₅₂, X₅₅, X₅₇, X₅₈, X₅₉, X₆₀, X₆₁ 및 X₆₂는 식 (VII)에 대해 상기 정의된 바와 같다.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, CDRH1은 서열번호 29 내지 39로부터 독립적으로 선택되고, CDRH2는 서열번호 40 내지 59로부터 독립적으로 선택되며, CDRH3은 서열번호 60 내지 68로부터 독립적으로 선택되는 것인 항체 분자.
제1항 내지 제3항 및 제25항 중 어느 한 항에 있어서, CDRH1은 서열번호 29 또는 30이고, CDRH2는 서열번호 40 또는 41이며, CDRH3은 서열번호 60인 항체 분자.
제1항 내지 제3항 및 제25항 중 어느 한 항에 있어서, CDRH1은 서열번호 31 또는 32이고, CDRH2는 서열번호 42 또는 43이며, CDRH3은 서열번호 61 또는 62인 항체 분자.
제1항 내지 제3항 및 제25항 중 어느 한 항에 있어서, CDRH1은 서열번호 33 또는 34이고, CDRH2는 서열번호 44 또는 45이며, CDRH3은 서열번호 63인 항체 분자.
제1항 내지 제3항 및 제25항 중 어느 한 항에 있어서, CDRH1은 서열번호 35 또는 36이고, CDRH2는 서열번호 46 또는 47이며, CDRH3은 서열번호 64인 항체 분자.
제1항 내지 제3항 및 제25항 중 어느 한 항에 있어서, CDRH1은 서열번호 37이고, CDRH2는 서열번호 48, 49, 50, 51, 52 또는 53이며, CDRH3은 서열번호 65, 66 또는 67인 항체 분자.
제1항 내지 제3항 및 제25항 중 어느 한 항에 있어서, CDRH1은 서열번호 38 또는 39이고, CDRH2는 서열번호 54, 55, 56, 57, 58 또는 59이며, CDRH3은 서열번호 68인 항체 분자.
제1항 내지 제3항 및 제25항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, CDRL1은 서열번호 69 내지 74로부터 독립적으로 선택되고, CDRL2는 서열번호 75 내지 80으로부터 독립적으로 선택되며, CDRL3은 서열번호 81 내지 101로부터 독립적으로 선택되는 것인 항체 분자.
제1항 내지 제3항 및 제25항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, CDRL1은 서열번호 69이고, CDRL2는 서열번호 75이며, CDRL3은 서열번호 81인 항체 분자.
제32항에 있어서, CDRL1은 서열번호 70이고, CDRL2는 서열번호 76이며, CDRL3은 서열번호 82인 항체 분자.
제1항 내지 제3항 및 제25항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, CDRL1은 서열번호 71이고, CDRL2는 서열번호 77이며, CDRL3은 서열번호 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97 또는 98인 항체 분자.
제1항 내지 제3항 및 제25항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, CDRL1은 서열번호 72이고, CDRL2는 서열번호 78이며, CDRL3은 서열번호 99인 항체 분자.
제32항에 있어서, CDRL1은 서열번호 73이고, CDRL2는 서열번호 79이며, CDRL3은 서열번호 100인 항체 분자.
제1항 내지 제3항 및 제25항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, CDRL1은 서열번호 74이고, CDRL2는 서열번호 80이며, CDRL3은 서열번호 101인 항체 분자.
제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, VH 및 VL은 인간화된 것인 항체 분자.
제39항에 있어서, 중쇄의 가변 도메인(VH)은 위치 11, 23, 24, 37, 47, 48, 49, 67, 71, 73, 76, 78 및 94 중 적어도 하나의 위치에서의 잔기가 도너 잔기인 인간 프레임워크 영역을 포함하고, 경쇄의 가변 도메인(VL)은 위치 1, 2, 3, 36, 63, 65, 66, 70 및 71 중 적어도 하나의 위치에서의 잔기가 도너 잔기인 인간 프레임워크 영역을 포함하는 것인 항체 분자.
제1항 내지 제3항, 제39항 및 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 107, 108, 109, 110, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 127, 128, 129, 130, 136, 137, 138, 139, 145, 146, 147, 148, 154, 155, 156 및 157로부터 독립적으로 선택된 VH를 포함하는 항체 분자.
제1항 내지 제3항 및 제39항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 106, 115, 126, 135, 144 및 153으로부터 독립적으로 선택된 서열을 포함하는 VL 가변 도메인을 포함하는 항체 분자.
제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 정의된 하나 이상의 항체 분자를 포함하는 조성물.
제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 정의된 항체 분자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열.
제44항에 정의된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터.
치료법에 사용하기 위한, 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 따른 항체 분자 또는 제43항에 따른 조성물.