KR20180015085A

KR20180015085A - 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료를 위한 약제학적 조성물

Info

Publication number: KR20180015085A
Application number: KR1020170096803A
Authority: KR
Inventors: 김동연; 신재수; 조대진; 이공열; 김홍엽; 이해언; 안충암; 송송이; 박종성; 강성영; 박혜린; 주현수; 윤효정; 고한석; 이새봄
Original assignee: 일양약품주식회사
Priority date: 2016-08-01
Filing date: 2017-07-31
Publication date: 2018-02-12
Also published as: TW201808294A; KR102421303B1; AR109209A1; WO2018026150A1

Abstract

본 발명은 라도티닙(Radotinib) 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료를 위한 약제학적 조성물에 관한 것이다.

Description

신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료를 위한 약제학적 조성물 {PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR PREVENTION OR TREATMENT OF NEURODEGENERATIVE DISEASES}

신경퇴행성 질환이란 신경 세포들이 어떤 원인에 의해 소멸하게 되고, 이로 인해 뇌 기능의 이상을 일으키는 질병을 지칭하는 것이다. 대표적인 신경퇴행성 질환으로는 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 파킨슨병 및 루게릭병(amyotrophic lateral sclerosis) 등을 예로 들 수 있다.

파킨슨병(Parkinson's disease)은 대표적인 신경퇴행성 질환중의 하나로, 퇴행성 신경계 질환 중 진행성 질환이며 평균 발병 연령은 60세 전후로 주로 노인에 발생하고, 60 세 이상에서는 1% 정도가 파킨슨병을 앓는다고 알려져 있다. 노령화 사회인 한국에는 파킨슨병 환자가 꾸준히 증가하고 있으며, 남녀비율은 3:2로 남자가 조금 높다. 한국에서는 6-10 만명, 미국에서는 약 150 만명, 전 세계적으로 약 1,000 만명 정도가 파킨슨병을 앓고 있다. 미국의 경우 2040년에 이르면 파킨슨병 유병률이 지금보다 2 배 이상 증가 할 것으로 예상하고 있다. 또한, 역학조사에 의하면 2030년에는 중국에만 약 500 만명 정도의 파킨슨병 환자가 예상되고 있다.

파킨슨병은 느린 운동, 정지시 떨림, 근육 강직, 질질 끌며 걷기, 굽은 자세와 같은 파킨슨 증상들을 특징으로 하는 진행형 신경 퇴행성 질환이다. 주로 흑질(substantianigra)의 불완전한 도파민의 생성 및 작용으로 운동신경 피질의 자극이 감소되어 일어난다. 심각한 인식 장애와 미약한 언어 장애도 발생하는데 만성적이고 진행적이다. 발병할 수 있는 확률은 1 천명중 1 명 정도이지만 나이가 많을수록 발생빈도가 높다.

파킨슨병은 50세 이상의 사람들에게서 약 100명 당 한 사람 꼴로 발병하는데, 미국에서는 흑인보다 백인에게서 그 비율이 더 높다. 파킨슨 병의 직접적인 원인은 특히 흑질과 편도체에 있는 뉴런들이 서서히 죽어가는 것이다. 대부분의 연구는 미상핵과 피각으로 도파민성 축색을 보내는 흑질의 뉴런들에 집중되어 있다. 이 축색들은 D1 수용기는 흥분시키고, D2 수용기는 억제하는데, 파킨슨병의 경우 이 두 종류의 수용기 모두에서 도파민이 상실되면 담창구에서 시상으로 가는 억제적 출력이 증가한다. 연구자들의 추정에 따르면 보통사람들은 45세쯤부터 시작해서 일 년마다 흑질 뉴런의 1%를 약간 넘는 수를 상실한다. 인간 대부분이 필요한 것보다 더 많은 뉴런들을 갖고 있지만 어떤 사람들은 더 적은 수의 뉴런을 가지고 시작하기도 하고 어떤 사람들은 더 빠른 비율로 상실하기도 한다. 생존하는 흑질 뉴런의 수가 정상인의 20~30% 수준으로 감소하면 파킨슨병의 증세가 나타나기 시작한다. 세포상실이 많을수록 증세가 더 심하다.

파킨슨병과 도파민은 서로 밀접한 연관이 있으나 도파민이 파킨슨병에만 관련된 물질은 아니다. 도파민은 뇌의 신경세포에서 만들어지는 물질로 세포와 세포간에 신호를 전달하는데 이용되는 신경 전달 물질 중의 하나이다. 만일 신경 전달 물질의 상호 전달이 비정상적으로 억제되거나 과도하게 전달되는 경우 신경계 기능 전체에 이상을 초래하게 된다. 뇌에는 광범위하게 도파민을 이용하는 신경세포가 있으며, 이것들은 생각과 관련된 전두엽, 감정 등과 관련된 변연계(limbic system), 호르몬과 관련된 뇌하수체에 존재하고 있다.

제임스 파킨슨이 파킨슨병에 대해 처음 기술한 이후로 1960년대까지 효과적인 치료 방법이 없었다. 1950년대에 흰쥐에게 도파민의 고갈을 유발하는 '레셀핀'을 주입할 경우 파킨슨 증후군의 증상이 보이는 것이 확인되었고, 환자들의 부검에서 흑질내의 신경세포가 소실되는 것이 밝혀졌다. 앞에 기술한 도파민은 신경 세포들간에 신호를 전달하는 신경 전달 물질로 사용되는데, 도파민을 체내에 바로 주입하면 뇌의 신경세포까지 도달하지 못한다. 그 이유는 혈액과 뇌조직 사이에는 혈뇌 장벽(blood brain barrier)이 존재하여 오직 뇌에 필요한 물질만 통과할 수 있도록 되어있기 때문이다. 그런 이유로 도파민 자체는 이 장벽을 통과하지 못한다.

대부분 파킨슨병의 주 증상은 선조체에서 도파민이 결핍되어 나타나는 현상이므로 도파민을 보충하고자 하는 것이 파킨슨병 치료의 주된 방법이다. 이중 가장 강력한 효과를 발휘하는 약물이 레보도파이다.

레보도파는 도파민과 화학적으로 유사한 물질로 실제로는 도파민의 전구물질이다. 레보도파는 혈뇌 장벽을 통과 할 수 있으며 일단 통과된 이 물질은 뇌에서 도파민으로 대사되고 결국은 신경세포에서 이용이 가능하게 된다.

레보도파가 뇌에서 도파민으로 변화하는 것과 비슷하게 도파민 효능제(dopamine agonist)라는 치료제로 로피니롤(ropinirole) 과 프라미펙솔(pramipexole) 등이 있다. 이들은 도파민은 아니지만 도파민과 유사하게 신경전달과정에 반응하도록 만들어진 약물로 초기 파킨슨병 환자들에게 단독으로 혹은 레보도파의 보조제로서 사용되고 있다. 도파민 효능제의 항파킨슨 효과는 D2 수용체에 작용하여 나타나며, D1 혹은 D3 수용체의 작용이 파킨슨병 증상에 어떠한 효과가 있는지는 아직 잘 알려져 있지 않다. 도파민 효능제는 고령의 환자의 경우 혼동이나 환각을 잘 일으킬 수 있으며, 일부 환자에서는 하지의 부종이 나타날 수 있다.

레보도파와 도파민 효능제가 부족한 도파민의 역할을 대신해서 약물 효과를 일으키는 것과는 달리, 도파민성 신경세포가 점차 죽어가는 것을 막기 위하여 사용하는 약제가 있다. B형 모노아민 산화억제제(monoamine oxidase inhibitor, MAO-B)가 대표적인 약제이다. MAO-B 억제제는 다른 치료제들이 가지고 있지 않은 뇌 보호효과(Neuroprotective effect)를 가지고 있으며, 특이하게 다른 치료제와는 달리 발병 초기의 환자부터 말기의 환자까지 사용할 수 있다.

항콜린제제(anticholinergics)인 트리헥시페니딜(Trihexyphenidyl), 벤즈트로핀메실레이트(Benztropine Mesylate), 비페리덴(Biperiden), 디펜히드라민(Diphenhydramine)은 떨림 또는 경축을 조절하는데 도움을 주지만 도파민계 약물에 비하여 효과가 떨어진다.

아만타딘(Amantadine)은 몇가지 작용기전을 가지고 있다. 신경말단에서 도파민 분비를 촉진시키며, 역시 신경말단부에서 도파민의 재흡수를 차단하고 항콜린 작용(antimuscarinic effect) 및 글루타메이트(glutamate) 수용체를 차단시킨다. 아만타딘은 도파민성 작용을 보여 증상 조절에 도움이 될 수 있으나 망상피반(livedo reticularis), 발목 부종, 환시, 혼동 등의 부작용이 있다. 항글루탐산 작용(antiglutamatergic action)은 레보도파에 의한 이상운동증의 조절에 도움이 된다.

파킨슨병의 수술적 치료는 약물치료로 적절히 치료되지 않아 생활에 지장을 받는 파킨슨병 환자를 대상으로 시행하는 것이다. 이때 약물로 적절히 치료되지 않는다는 것은 레보도파나 도파민 효능제에 반응이 없다는 것을 의미하는 것이 아니라, 반응은 있으나 운동변동, 약물에 의한 이상 운동증이 심하여 생활에 지장을 주거나 이외의 약물 부작용 때문에 충분한 용량의 약물을 투여할 수 없는 경우를 의미한다.

그러나 무엇보다도 파킨슨병 환자들의 경우 모든 환자가 동일할 수 없으므로, 획일화된 치료보다는 환자의 운동성, 비운동성 증상을 모두 고려하여 적절한 치료제를 사용하여야 된다. 그러나 현재까지 많은 연구적 성과와 치료적 발전에도 불구하고 파킨슨병은 아직 완치가 불가능한 질병이다. 파킨슨병으로 인한 사망률은 국내뿐만 아니라 세계적으로 매년 증가하고 있는 추세이며, 오늘날 파킨슨병 질환 치료 약물 개발에 많은 관심이 모이고 있다.

이러한 파킨슨병의 잠재적인 치료제로서, 백혈병 치료제로 사용되는 선택적 Bcr-Abl 키나아제 억제제들에서 파킨슨병의 치료와 관련된 효과가 보고된 바 있다. 예를 들어, 중국 공개특허 CN 102406648 A는 퇴행성 신경질환에 대한 이마티닙 메실산염의 용도를 개시하고 있으며, 그 외에도 포나티닙과 같은 백혈병 치료제가 파킨슨병의 치료와 관련된 효과를 가진다는 사실이 보고된 바 있다.

그러나, 이들 물질들은 생체 실험시 혈뇌 장벽(Blood Brain Barrier) 투과에 실패하여 실제로 파킨슨병의 치료제로서의 개발에는 실패한 바 있다. 따라서, 파킨슨병을 효율적으로 치료할 수 있는 새로운 치료제의 개발이 추가로 요구되고 있는 실정이다.

이에 본 발명은 아직까지 완치 방법이 발견되지 않은 파킨슨병을 비롯한 신경퇴행성 질환의 치료를 위한 새로운 접근 방법을 제공하는 것을 그 기술적 과제로 한다.

상기 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 선택적 Bcr-Abl 키나아제 억제제이며 필라델피아 염색체 (Ph+) 양성 만성 골수성 백혈병 (CML) 치료에 쓰이는 약물인 라도티닙(Radotinib)을 유효성분으로 포함하는 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.

이하에서 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 하기 화학식 (I)로 표시되는 라도티닙 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공할 수 있다:

라도티닙은 수용체 티로신 키나아제 억제제의 일종으로서, 4-메틸-N-[3-(4-메틸이미다졸-1-일)-5-트리플루오르메틸-페닐]-3-[4-(3-메틸피라진-2-일)-피리미딘-2-일아미노)벤즈아미드 라고도 표시될 수 있다.

라도티닙은 1 종 이상의 티로신 키나아제, 예를 들어 c-Abl, Bcr-Abl, 수용체 티로신 키나아제인 PDGFR, Flt3, VEGF-R, EGF-R 및 c-Kit 등을 억제하는 것으로 알려 졌으며, 폐암, 위암, 대장암, 췌장암, 간암, 전립선암, 유방암, 만성 또는 급성백혈병, 혈액암, 뇌종양, 방광암, 직장암, 자궁경부암 및 림프종 등 여러 부위의 암에 대해서도 우수한 항암효과를 갖는다고 알려져 있다. 그러나 라도티닙이 파킨슨병 을 포함하는 신경퇴행성 질환에 효과가 있다는 문헌 및 특허는 현재까지 보고된 바 없다.

라도티닙은 그 자체 또는 약제학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 상기에서 '약제학적으로 허용가능한'이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 말하며, 상기 염으로는 약제학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 예시될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 산 부가염들은 라도티닙과 염산, 브롬산, 황산, 인산, 메탄술폰산, 톨루엔술폰산, 벤젠술폰산, 아세트산, 프로피온산, 아스코르브산, 시트르산, 말론산, 푸마르산, 말레산, 락트산, 살리실산, 설팜산 및 타르타르산으로부터 선택되는 약제학적으로 허용 가능한 무기 또는 유기산으로부터 형성될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 이 염들은, 예를 들어, 적절한 용매의 존재하에서 라도티닙에 적절한 산을 처리함으로써, 공지된 방법으로 제조될 수 있다.

라도티닙은 결정 형태 또는 용매 화합물(예를 들어, 수화물)의 형태일 수 있고 양 형태는 본 발명의 범위 내에 포함된다. "용매 화합물" 이란 용어는 용질(본 발명에서, 라도티닙과 같은 화합물) 및 용매에 의해 형성된 다양한 화학양론의 착물이다. 이러한 용매들은 용질의 생물학적 활성을 방해하지 않아야 한다. 예를 들어, 용매는 물, 에탄올, 메탄올, 에틸아세테이트 또는 아세톤일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 용매화 방법은 일반적으로 당업계에 공지되어 있다.

라도티닙의 약제학적으로 허용가능한 염은 용매화되지 않은 형태 및 용매화된 형태 둘 다를 포함할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 약학적 유효량의 라도티닙을 포함할 수 있다. 여기서 "약학적 유효량"이란 음성 대조군에 비해 그 이상의 반응을 나타내는 양을 말하며 바람직하게는 인간을 포함하는 포유류의 파킨슨병을 포함하는 신경퇴행성 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 말한다. 환자가 인간인 경우의 치료 용량은 일반적으로 상태의 심각성 및 라도티닙이 단독으로 또는 다른 약물과 조합하여 투여되는가에 따라 50 mg 내지 2,000 mg/day, 더욱 바람직하게는 100 mg 내지 1,000 mg/day일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 약제학적 조성물은 1 일 1 회, 또는 분할하여 경구 또는 비경구적 경로를 통해 투여될 수 있다. 그러나 상기 약학적 유효량은 질환 및 이의 중증정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등과 같은 여러 인자에 따라 적절히 변화될 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 신경퇴행성 질환이 파킨슨병(Parkinson's disease)일 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 담체는 불활성일 수 있으며, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 및 말티톨 등을 포함하는 당류, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 및 감자 전분 등을 포함하는 전분류, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 등을 포함하는 셀룰로즈류, 및 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 등과 같은 충전제로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

예를 들어, 상기 약제학적 조성물은 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 동물, 예를 들어 포유류, 특히 인간의 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료를 위해 사용될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물의 투여 경로는, 이에 한정되지는 않으나, 경구적 또는 비경구적으로 투여 될 수 있다. 비경구적 투여 경로로는 예를 들면, 경피, 비강, 복강, 근육, 피하, 정맥 주사 등의 여러 경로가 포함될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

예를 들어 비경구적으로 투여하는 경우 본 발명의 약학적 조성물은 적합한 비경구용 담체와 함께 주사제, 경피 투여제, 좌제, 에어로졸 또는 비강 흡입제의 형태로 당 업계에 공지된 방법에 따라 제형화 될 수 있다. 상기 주사제의 경우에는 반드시 멸균되어야 하며 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염으로부터 보호되어야 한다. 주사제의 경우 적합한 담체의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌글리콜 및 액체 폴리에틸렌글리콜 등), 이들의 혼합물 및/또는 식물유를 포함하는 용매 또는 분산매질일 수 있다. 보다 바람직하게는, 적합한 담체로는 행크스 용액, 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline) 또는 주사용 멸균수, 10% 에탄올, 40% 프로필렌 글리콜 및 5% 덱스트로즈와 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 상기 주사제를 미생물 오염으로부터 보호하기 위해서는 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르빈산, 티메로살 등과 같은 다양한 항균제 및 항진균제를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 주사제는 대부분의 경우 당 또는 나트륨 클로라이드와 같은 등장화제를 추가로 포함할 수 있다. 이들 제형은 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Edition, 1975, Mack Publishing Company, Easton, PA)에 기술되어 있다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 약제학적 조성물은 대상에게 경구 투여되기 위한 것일 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 경구 투여의 형태는 분말, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 구강 분산성 정제, 당의정제, 에어로졸, 겔제, 환제, 연질 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 수성 의약품, 시럽제, 엘릭시르제(elixir), 웨이퍼 및 포제(sachet)로부터 선택될 수 있다.

흡입 투여제의 경우, 라도티닙은 적합한 추진제, 예를 들면, 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체를 사용하여, 가압 팩 또는 연무기로부터 에어로졸 스프레이 형태로 편리하게 전달할 수 있다. 가압 에어로졸의 경우, 투약 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브를 제공하여 결정할 수 있다. 예를 들면, 흡입기 또는 취입기에 사용되는 캡슐 및 카트리지는 적합한 분말 기제의 분말 혼합물을 함유하도록 제형화 할 수 있다.

그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다 (Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Edition, 1995, Mack Publishing Company, Easton, PA).

본원의 약제학적 조성물은 라도티닙 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함함으로써 파킨슨병과 같은 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료에 효과를 나타낼 수 있다. 특히, 라도티닙은 신경퇴행성 질환 치료제의 매우 중요한 요소인 혈뇌 장벽(Blood Brain Barrier) 투과율에 있어서 우수한 특성을 가진다.

도 1은 α-시누클레인 전형성 피브릴(Preformed Fibrils, PFFs)을 주입하여 파킨슨병 질환 모델을 유도하고 라도티닙 처리 일정을 보여주는 개략도 (A) 및 알라마 블루(Alamar Blue) 분석법을 통하여 분석한 라도티닙의 신경세포 생존율 증진 효과를 나타낸 그래프 (B)이다.
도 2는 α-시누클레인 PFFs로 유도된 신경세포모델에서 LDH(lactate dehydrogenase) 분석법을 수행하여 측정한 라도티닙의 신경세포 사멸율 감소 효과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 α-시누클레인 PFFs로 유도된 신경세포모델에서 TUNEL 염색을 통해 분석한 라도티닙의 신경세포 사멸율 감소 효과를 보여주는 염색 이미지 (A) 및 그래프 (B)이다.
도 4는 α-시누클레인 PFFs로 유도로 인해 신경세포모델에서 관찰되는 Lewy Body(LB)/Lewy Neurites(LN)-like pathology 현상을 라도티닙이 감소시키는 효과를 보여주는 염색 이미지 (A) 및 그래프 (B)이다.
도 5는 α-시누클레인 PFFs로 유도된 신경세포모델에서 라도티닙의 c-Abl 활성 저해 효과를 나타내는 웨스턴 블롯 이미지 (A) 및 정량 결과 (B)이다.
도 6은 HEK293T 세포에 A53T α-시누클레인 점돌연변이를 유도하고 라도티닙을 처리하여, 라도티닙의 A53T α-시누클레인 축적 감소 효과를 나타내는 염색 이미지 (A) 및 그래프 (B)이다.
도 7은 A53T 형질전환 마우스에서의 라도티닙의 혈중 및 뇌 내의 α-시누클레인 형성 억제 효과를 나타내는 그래프이다.
도 8은 뇌 내 α-시누클레인 투여 질환 모델에서 라도티닙의 α-시누클레인 형성 억제, 도파민 생성 증진 및 운동능력 회복 효과를 보여주는 그래프이다.
도 9는 뇌 내 α-시누클레인 투여 질환 모델에서, 라도티닙 투여 후 α-시누클레인이 α-시누클레인 분해 효소들이 함유된 오토파지 부분(autophagic compartment)으로 이동함을 보여주는 그래프이다.
도 10은 A53T 형질전환 마우스에서, 라도티닙 투여 후 α-시누클레인과 오토파지 클리어런스(autophagic clearance)에 관여하는 파킨(Parkin)이 α-시누클레인 분해 효소들이 함유된 오토파지 부분으로 이동함을 보여주는 그래프이다.
도 11은 사람유래 M17 신경아세포종 세포주(Human M17 neuroblastoma cell)와 뇌 내 α-시누클레인 투여 마우스모델에서, 라도티닙의 파킨 활성 증진 효과를 보여주는 그래프이다.
도 12는 A53T 형질전환 마우스와 뇌 내 α-시누클레인 투여 마우스모델에서, 라도티닙이 세포 사멸에 관여하는 단백질인 캐스페이즈-3(Caspase-3)의 활성을 억제시킴을 보여주는 그래프이다.

아래에서는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예를 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.

실시예 1

본 실시예에서는 α-시누클레인 PFFs 유도된 신경세포모델에서 라도티닙의 신경세포생존율 증진 효과를 확인하였다.

1) 세포주

수정 후 15.5 일의 C57BL/6 마우스에서 분리된 초대배양피질신경세포(primary cortical neurons)

2) 시험방법

A) 수정 후 15.5 일의 C57BL/6 마우스에서 분리된 초대배양피질신경세포(primary cortical neurons)를 7 일간 배양 후, 7 일째 (7 DIV; days in vitro)에 α-시누클레인 PFFs를 처리하여 파킨슨병 질환 모델을 유도하였다. 이 때, 라도티닙 1 μM 과 대조군으로 DMSO를 처리하고 14 일 동안 배양하면서, 라도티닙 처리군에는 이틀에 한번씩 라도티닙을 추가로 처리하였다 (도 1의 A).

B) 배양 21일 (21 DIV)째에 세포생존율을 확인하고자 알라마 블루(Alamar Blue) 분석법을 수행하였다. 그 결과, α-시누클레인 PFFs 유도로 세포생존율이 약 43% 감소하였는데, 라도티닙이 세포생존율 감소를 31% 회복시키는 것으로 나타났다 (도 1의 B). 수치는 평균 ± SEM 으로 표시되었다 (one-way ANOVA, Tukey's multiple comparison test, P* < 0.05, P** < 0.01, n = 7-10).

즉, 본 실험을 통하여 라도티닙이 α-시누클레인 PFFs 로 유도되는 신경세포생존율 감소를 회복시킴을 확인 할 수 있었다.

실시예 2

본 실시예에서는 α-시누클레인 PFFs 유도된 신경세포모델에서 라도티닙의 신경세포사멸 감소 효과를 LDH 분석법을 통하여 확인하였다.

1) 세포주

2) 시험방법

초대배양피질신경세포(primary cortical neurons)를 7 일간 (7 DIV; days in vitro) 배양 후, α-시누클레인 PFFs를 처리하여 파킨슨병 질환 모델을 유도하였다. 이 때, 라도티닙 1 μM 과 대조군으로 DMSO를 처리하고 14 일 동안 배양하면서, 라도티닙 처리군에는 이틀에 한번씩 라도티닙을 추가로 처리하였다.

21 DIV에 손상된 세포에서 분비되는 LDH 수준을 측정하여 세포사멸율을 보여주는 LDH 분석법을 수행하였다. 그 결과, α-시누클레인 PFFs 유도로 증가된 신경세포사멸 (26%)을 라도티닙이 감소 (17%)시킨 것을 확인하였다 (도 2). 수치는 평균 ± SEM 으로 표시되었다 (one-way ANOVA, Tukey's multiple comparison test, P** < 0.01, P*** < 0.001, n = 4).

즉, 본 실험에서 LDH 분석법을 통하여, α-시누클레인 PFFs로 유도되는 신경세포사멸을 라도티닙이 억제함을 확인 할 수 있었다.

실시예 3

본 실시예에서는 α-시누클레인 PFFs 유도된 신경세포모델에서 라도티닙의 신경세포사멸 감소 효과를 TUNEL stain을 통하여 확인하였다.

1) 세포주

2) 시험방법

21 DIV에 TUNEL 염색을 통하여 신경세포사멸을 관찰하였다. A) 도 3의 A는 TUNEL-양성(positive) 신경세포를 나타내며, B) 도 3의 B는 TUNEL-양성 신경세포수를 정량한 결과이다. 그 결과, α-시누클레인 PFFs 유도로 증가 (52%)된 TUNEL-양성 신경세포수가 라도티닙 처리군에서는 감소(36%)한 것을 보아, α-시누클레인 PFFs로 유도되는 신경세포사멸을 라도티닙이 억제하는 것으로 나타났다. 수치는 평균 ± SEM 으로 표시되었다 (one-way ANOVA, Tukey's multiple comparison test, P* < 0.05, P** < 0.01, n = 3-5).

즉, 본 실험에서, TUNEL 염색을 통하여 α-시누클레인 PFFs로 유도되는 신경세포사멸을 라도티닙이 억제함을 확인하였다.

실시예 4

본 실시예에서는 α-시누클레인 PFFs로 유도된 신경세포모델에서 라도티닙의 LB/LN-like pathology 감소 효과를 확인하였다.

1) 세포주

수정 후 15.5일의 C57BL/6 마우스에서 분리된 초대배양피질신경세포(primary cortical neurons)

2) 시험방법

초대배양피질신경세포(primary cortical neurons)에 α-시누클레인 PFFs를 처리하고 일정 시간 동안 배양 하면, 뉴런들 사이에 파킨슨병 유발 주요 인자인 α-시누클레인이 축적되어 질환 모델이 유발된다. 이와 같이 α-시누클레인이 축적되는 현상은 Lewy Body(LB)/Lewy Neurites(LN)-like pathology 라고도 알려져 있고, 파킨슨병의 주요 특징 중 하나이다.

7 DIV에 α-시누클레인 PFFs를 처리하고, 10 일 간 배양 후 17 DIV에 α-시누클레인에 대한 항체인 pSer129로 면역염색하여 LB/LN-like pathology를 확인하였다.

A) 도 4의 A는 축적된 α-시누클레인을 pSer129를 이용한 면역염색을 통하여 나타낸 것이고, B) 도 4의 B는 α-시누클레인 신호를 정량한 결과를 나타낸 것이다. α-시누클레인 처리 후 대조군에서는 α-시누클레인이 축적되어 LB/LN-like pathology가 형성된 것을 볼 수 있었고, 라도티닙 처리군에서는 LB/LN-like pathology가 약 50% 감소한 것으로 나타났다. 이와 같이, α-시누클레인 PFFs로 유도된 LB/LN-like pathology가 라도티닙에 의해 감소하는 것을 관찰하였다.

수치는 평균 ± SEM 으로 표시되었다 (one-way ANOVA, Tukey's multiple comparison test, P*** < 0.001, P**** < 0.0001, n = 4).

즉, 본 실험을 통하여, α-시누클레인 PFFs로 유도된 LB/LN-like pathology가 라도티닙에 의해 감소하는 것을 확인 할 수 있었다.

실시예 5

본 실시예에서는 α-시누클레인 PFFs로 유도된 신경세포모델에서 라도티닙의 c-Abl 활성 저해 효과를 확인하였다.

1) 세포주

2) 시험방법

파킨슨병 환자들에서 발견되는 특징 중 하나인 c-Abl 키나아제의 활성 증가 현상을 라도티닙이 저해시키는지 확인하기 위하여 본 실험을 수행하였다. 초대배양피질신경세포(primary cortical neurons)를 배양하여 7 DIV에 α-시누클레인 PFFs를 처리하고, 7 일 간 배양 후 14 DIV에 세포 용출물을 이용해 웨스턴 블롯으로 c-Abl 활성을 확인하였다.

A) 도 5의 A는 p-Tyr245 c-Abl 단백질 양을 측정하여 나타낸 웨스턴 블롯 결과이며, B) 도 5의 B는 그 양을 정량하여 그래프로 나타낸 것이다. 실험 결과, α-시누클레인 PFFs 유도 모델에서 c-Abl 활성이 증가 (1.4)하였으며, 라도티닙이 증가된 c-Abl 활성을 유의하게 저해 (0.8)하는 것으로 나타났다. 수치는 평균 ± SEM 으로 표시되었다 (one-way ANOVA, Tukey's multiple comparison test, P*** < 0.001, P**** < 0.0001, n = 3).

즉, 본 실험을 통하여 PFF에 의해 활성화된 c-Abl 키나아제 활성이 라도티닙에 의하여 감소함을 확인 할 수 있었다.

실시예 6

본 실시예에서는 HEK293T 세포모델에서 라도티닙의 A53T α-시누클레인 축적 감소 효과를 확인하였다.

1) 세포주

Wild-type HEK293T 세포

2) 실험방법

Wild-type HEK293T 세포에 myc-tagged A53T α-시누클레인 플라스미드를 형질주입하여 A53T α-시누클레인 축적을 유도하였다. 여기에 라도티닙 1 μM을 처리하고, PBS 처리한 대조군과 비교하여 α-시누클레인 면역염색으로 myc-A53T α-시누클레인 축적을 관찰하였다.

A) 도 6의 A는 myc-A53T α-시누클레인이 과발현된 HEK293T세포를 면역염색하여 나타낸 이미지이며, 화살표는 축적된 A53T α-시누클레인을 나타낸다. B) 도 6의 B는 image J software (NIH, Bethesda) 로 축적된 A53T α-시누클레인을 정량한 결과이다. myc-A53T α-시누클레인 과발현모델에서 A53T α-시누클레인이 축적 (36) 되어있는 것을 볼 수 있었고, 라도티닙이 A53T α-시누클레인 축적을 감소 (7) 시키는 것으로 확인되었다. 이와 같이, A53T 점돌연변이로 유도된 질환모델에서도 α-시누클레인 축적이 라도티닙에 의해 감소하였다. 수치는 평균 ± SEM 으로 표시되었다 (P*** < 0.001).

즉, 본 실험을 통하여 A53T 점돌연변이로 유도된 α-시누클레인 축적이 라도티닙에 의해 감소됨을 확인하였다.

실시예 7

본 실시예에서는 라도티닙과 닐로티닙의 α-시누클레인 형성 억제 효과를 비교하기 위한 생체실험 (in vivo test)을 실시하였다.

닐로티닙(Nilotinib, 4-methyl-N-[3-(4-methyl-1H-imidazol-1-yl)-5-(trifluoromethyl)phenyl]-3-[(4-pyridin-3-ylpyrimidin-2-yl)amino]benzamide)은 라도티닙과 유사한 티로신 키나아제 저해제(Tyrosine kinase inhibitor) 계열의 선택적 Bcr-Abl 키나아제 억제제로서, 필라델피아 염색체 (Ph+) 양성 만성 골수성 백혈병(Chronic Myelogenous Leukaemia) 치료용 치료제로서 사용되어 왔으며, 또한 유전자 변형 혹은 독소 유발 파킨슨병 동물 모델에서도 신경보호 효과를 나타내었다는 보고가 있다.

본 실시예 및 이하의 실시예들에서는, 닐로티닙과 유사하게 선택적 Bcr-Abl 키나아제 억제제이나 닐로티닙 보다 안전하고 더 우수한 약동학적 성질을 가지는 본 발명의 라도티닙이 닐로티닙에 비하여 한층 증가된 신경퇴행성 질환의 예방 및 치료효과를 가진다는 점을 실험을 통하여 증명하고자 하였다.

1) 실험동물

7-8 개월령의 수컷 A53T 형질전환 마우스

2) 실험물질

라도티닙, 닐로티닙(Nilotinib)

3) 시험방법

A53T 돌연변이는 α-시누클레인 중합체의 증가가 특징적이다. 이러한 형질을 바탕으로 7-8 개월령의 수컷 A53T 형질전환 마우스에 라도티닙 또는 닐로티닙 3 mg/kg, 10 mg/kg을 각각 6 주간 하루 한 번 경구투여 하고, 혈액과 뇌를 채취하여 함유된 α-시누클레인 양을 ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)로 측정하였다.

그 결과 도 7 및 아래의 표 1에 나타난 바와 같이 A53T 형질전환 마우스의 뇌와 혈액 모두에서 α-시누클레인 발현이 월등히 증가되었으며, 라도티닙과 닐로티닙 투여 시 농도의존적으로 α-시누클레인 수치가 감소한 것이 확인되었다. 또한, 동일용량의 라도티닙은 닐로티닙보다 α-시누클레인을 약 58~69%나 더 감소시키는 것으로 나타났다.

즉, 본 실험을 통하여 닐로티닙에 비하여 더욱 우수한 라도티닙의 α-시누클레인 형성 억제 효과를 확인하였다.

실시예 8

실시예 8에서는 라도티닙과 닐로티닙의 뇌 내 α-시누클레인 투여 질환모델에서의 α-시누클레인 형성 억제, 도파민 생성 및 운동능 평가 시험을 비교하여 실시하였다.

1) 실험동물 : 수컷 C57BL/6 마우스

2) 시험물질 : 라도티닙, 닐로티닙

3) 시험방법 :

뇌 내 α-시누클레인 투여에 따른 혈중 α-시누클레인 수치 변화 및 라도티닙에 의한 α-시누클레인 형성 억제를 확인하며, 이러한 과정과 파킨(Parkin)간의 연관성을 확인하기 위해 아래와 같이 시험이 수행되었다.

수컷 C57BL/6 마우스 뇌 내 흑질(Substantia nigra) 부위에 3 주간 렌티바이러스(Lentiviral) α-시누클레인을 양측성 정위 투여하였다. 이 후, 라도티닙 또는 닐로티닙 10 mg/kg을 3 주간 매일 1 회 경구 투여하여 뇌와 혈액 내 분포하는 α-시누클레인 양과 도파민 수치를 ELISA로 확인하고, 이에 따른 운동능의 변화를 로타로드(Rotarod) 테스트와 폴(Pole) 테스트로 평가하였다. 로타로드 테스트는 움직이는 막대 위에서 마우스가 버티는 시간을 재는 방법이고, 폴 테스트는 고정된 막대에서 바닥까지 내려오는 데 걸리는 시간을 측정하는 방법이기 때문에, 로타로드 테스트 결과 수치가 높고 폴 테스트 결과 수치가 낮을수록 우수한 운동능을 지닌다고 판단할 수 있다.

그 결과 도 8 및 아래의 표 2에 나타난 바와 같이 라도티닙 또는 닐로티닙의 투여로 뇌 와 혈액 내의 α-시누클레인 발현이 대조군에 비해 확연히 감소하는 것으로 확인되었고, 도파민 수치 및 운동능은 정상에 가깝게 회복되었다. 이러한 변화는 라도티닙에서 더욱 뚜렷하게 나타났으며, 라도티닙 투여군은 닐로티닙 투여군보다 α-시누클레인이 65~73%나 더 감소하였고, 도파민 분비 및 운동능 회복 평가 결과 2.4 배 정도 우수한 효능을 보였다.

즉, 본 실험을 통하여, 뇌 내 α-시누클레인 투여 질환모델에서 라도티닙이 닐로티닙에 비해 더욱 우수한 효과로 α-시누클레인 형성을 억제하고 도파민 생성을 촉진시키며 운동능을 향상시킴을 확인 할 수 있었다.

실시예 9

본 실시예에서는 라도티닙과 닐로티닙의 투여에 의해 α-시누클레인의 오토파지 클리어런스(autophagic clearance)가 촉진되는 정도를 비교 시험하였다.

1) 실험동물

수컷 C57BL/6 마우스

2) 시험물질

라도티닙, 닐로티닙

3) 시험방법

축적된 α-시누클레인이 라도티닙 투여에 의해 오토파지 클리어런스가 촉진되는 것을 확인하고자 아래와 같은 시험을 실시 하였다.

수컷 C57BL/6 마우스의 뇌 내 흑질(Substantia nigra) 부위에 3 주간 렌티바이러스 α-시누클레인을 양측성 정위 투여하였다. 이 후, 3 주간 라도티닙 또는 닐로티닙 10 mg/kg을 하루 1 회 경구 투여하였다. 이 후, 흑질 조직을 채취하여 AV(Autophagic Vacuole)을 분리해 각각 AV-10 (Phagophores+Autophagosomes), AV-20 (Autophagosomes), 리소좀 (Lysosome) 내의 α-시누클레인 수치를 ELISA로 확인하였다.

그 결과 도 9 및 아래의 표 3에 나타난 바와 같이 라도티닙 및 닐로티닙 투여 후 대조군에 비해 AV-20 과 리소좀의 α-시누클레인의 수치가 높아졌음이 확인 되었으며, 이를 통해 α-시누클레인이 분해를 위해 다양한 분해 효소들이 함유된 AV-20 (Autophagosome) 과 리소좀으로 이동한 것으로 판단되었다. 이러한 변화는 라도티닙에서 더 뚜렷하게 관찰되며, 닐로티닙에 비해 라도티닙 투여군에서 약 2.5 배 많은 양의 α-시누클레인이 AV-20 과 리소좀에서 관찰되었다.

즉, 본 실험을 통하여, 라도티닙에 의하여 AV-20과 리소좀내 α-시누클레인의 양이 증가하여 오토파지 클리어런스가 촉진되며, 이러한 효과는 닐로티닙과 비교하여도 더욱 우수한 것임을 확인하였다.

실시예 10

본 실시예에서는 축적된 α-시누클레인 및 파킨의 오토파지 클리어런스가 라도티닙과 닐로티닙의 투여에 의해 촉진되는 정도를 비교 시험하였다.

1) 실험동물

A53T 형질전환 마우스

2) 시험물질

라도티닙, 닐로티닙

3) 시험방법

축적된 α-시누클레인 및 파킨의 오토파지 클리어런스가 라도티닙 투여에 의해 촉진되는 것을 확인하고자 아래와 같은 시험을 실시하였다.

α-시누클레인 올리고머화(oligomerization) 증가가 특징인 A53T 형질전환 마우스에 3 주간 라도티닙 또는 닐로티닙 10 mg/kg을 하루 1 회 경구 투여하였다. 이 후, 흑질 조직을 채취하여 Autophagic Vacuole (AV)을 분리해 각각 AV-10 (Phagophores+Autophagosomes), AV-20 (Autophagosomes), 리소좀 (Lysosome) 내의 α-시누클레인과 파킨의 수치를 ELISA로 확인하였다.

그 결과 도 10 및 아래의 표 4에 나타난 바와 같이 A53T 마우스는 주령이 증가할수록 흑질 내 α-시누클레인 및 파킨의 축적량이 전반적으로 증가하는 것이 확인되었다. 또한, 라도티닙 및 닐로티닙 투여 시 대조군에 비해 AV-20 과 리소좀에서 α-시누클레인과 파킨이 높은 수치로 확인 되었으며, 이를 통해 α-시누클레인과 파킨이 분해를 위해 다양한 분해 효소들이 함유된 Autophagosome (AV-20) 과 리소좀으로 이동한 것으로 판단되었다. 또한, 이러한 변화는 라도티닙에서 더 뚜렷하게 관찰되었으며, 5 개월령 마우스의 경우 닐로티닙에 비해 라도티닙 투여군에서 약 2.5 배 많은 양의 α-시누클레인과 파킨이 AV-20 과 리소좀에서 관찰되었다.

즉, 본 실험을 통하여, 축적된 α-시누클레인 및 파킨의 오토파지 클리어런스가 라도티닙 투여에 의해 촉진되며, 이러한 효과는 닐로티닙에 비해 더욱 우수한 것임을 확인하였다.

실시예 11

본 실시예에서는 α-시누클레인 제거의 주요한 인자인 파킨(Parkin) 활성 증진 시험을 라도티닙과 닐로티닙에 대해 비교하여 실시하였다.

1) 실험동물

C57BL/6 수컷 마우스

2) 세포주

사람유래 M17 신경아세포종 세포주 (Human M17 neuroblastoma cell)

3) 시험물질

라도티닙, 닐로티닙

4) 시험방법

파킨은 유비퀴틴화 (Ubiquitination) 를 통해 단백질 분해를 촉진하므로 파킨의 활성은 α-시누클레인 제거의 주요한 인자로 작용한다. 따라서, 라도티닙 투여가 파킨의 활성에 미치는 영향을 평가하고자 아래와 같이 시험을 실시하였다.

먼저, 사람유래 M17 신경아세포종 세포주 (Human M17 neuroblastoma cell)에 라도티닙 또는 닐로티닙 10 μM을 처리하여 ELISA로 파킨의 E3 활성을 측정하였다. 또한, 수컷 C57BL/6 마우스의 뇌 내 흑질 (Substantia nigra) 부위에 3 주간 Lentiviral α-시누클레인을 양측성 정위 투여하고, 이 후 3 주간 라도티닙 및 닐로티닙 10 mg/kg 각각을 하루에 한 번 경구 투여하여, 뇌를 채취 해 뇌 내의 파킨의 수치를 ELISA로 측정하였다.

그 결과 도 11 및 아래의 표 5에 나타난 바와 같이 라도티닙 및 닐로티닙을 각각 처리한 M17 세포에서 유비퀴틴 활성을 나타내는 E3 활성이 대조군에 비해 크게 증가하였으며, 라도티닙군은 닐로티닙군에 비해 약 2.7 배 높은 활성을 나타냈다. 또한, α-시누클레인 을 투여한 마우스에서도 라도티닙 및 닐로티닙 처치 시 파킨 수치가 대조군에 비해 향상되었으며, 라도티닙 투여군에서 닐로티닙 투여군에 비해 약 2.6 배 더 높은 파킨 수치를 나타내는 것으로 확인되었다.

즉, 본 실험을 통하여, 라도티닙을 통하여 α-시누클레인 제거의 주요한 인자인 파킨이 활성화되며, 이러한 활성은 닐로티닙에 비해 더욱 우수한 것임을 확인 할 수 있었다.

실시예 12

본 실시예에서는 라도티닙의 세포 사멸에 관여하는 단백질인 캐스페이즈-3 활성 억제능을 닐로티닙과 비교하여 실시하였다.

1) 실험동물

C57BL/6 마우스, A53T 형질전환 마우스

2) 시험물질

라도티닙, 닐로티닙

3) 시험방법

세포 사멸에 관여하는 단백질인 캐스페이즈-3의 활성은 파킨슨병 질환모델에서 증가하는 성향을 나타내며, 라도티닙 투여를 통해 그 활성이 억제되는 것을 확인하고자 아래와 같은 시험을 실시하였다.

수컷 C57BL/6 마우스의 뇌 내 흑질 (Substantia nigra) 부위에 3 주간 렌티바이러스(Lentiviral) α-시누클레인을 양측성 정위 투여하여 만든 질환모델과 α-시누클레인 중합체 증가가 특징인 A53T 형질전환 마우스 (7-8 개월령)에 3 주간 라도티닙 또는 닐로티닙 10 mg/kg을 매일 1 회 경구 투여한 후 변화되는 캐스페이즈-3 수치를 측정하였다.

그 결과 도 12 및 아래의 표 6에 나타난 바와 같이 두 질환 모델 모두에서 캐스페이즈-3 가 매우 높은 비율로 증가한 것으로 보이며, 라도티닙 및 닐로티닙 투여 후 대조군과 유사한 수준까지 캐스페이즈-3의 활성이 감소한 것으로 확인된다. 이러한 효과는 라도티닙 투여군이 닐로티닙 투여군에 비해 α-시누클레인 모델, A53T 마우스에서 각각 약 58% 및 약 82% 더 높은 것으로 관찰되었다.

즉, 라도티닙 투여 시 중뇌 흑질의 과도한 세포 사멸이 닐로티닙에 비해 더 우수한 비율로 감소되는 것으로 확인되었다.

실시예 13

본 실시예에서는 마우스에서 라도티닙 및 닐로티닙의 혈뇌 장벽(Blood Brain Barrier) 투과율 시험을 비교 실시하였다.

1) 실험동물

6 주령 수컷 ICR 마우스

2) 실험물질

라도티닙, 닐로티닙

3) 시험방법

생체 내로 투여된 라도티닙의 흡수 및 작용점인 뇌에서의 분포를 확인 하고자 아래와 같은 시험을 실시하였으며, 대조약으로는 닐로티닙을 사용하였다.

ICR 마우스, 6 주령, 수컷에 시험물질인 라도티닙과 닐로티닙을 각각 50 mg/kg의 용량으로 경구투여 하였다. 투여 전 및 투여 후 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12 시간에 각각 채혈하여 혈장을 분리하고, 뇌를 적출하여 LC-MS/MS로 라도티닙과 닐로티닙의 농도를 분석하였다.

그 결과 아래의 표 7에 나타난 바와 같이 A) 라도티닙과 닐로티닙의 혈장 및 뇌조직에서의 약물동태 수치들이 확인되었으며, 이를 바탕으로 B) 혈장 및 뇌조직에서의 닐로티닙 대비 라도티닙의 흡수율을 비교할 수 있었다. 라도티닙은 닐로티닙 보다 혈장에서는 흡수비율이 닐로티닙보다 약간 낮았으나, 오히려 뇌에서는 약 3.28 배의 AUC₀ _-24를 나타냈으며, 이를 통해 라도티닙이 닐로티닙에 비해 혈뇌 장벽 투과 효과가 더 우수한 것으로 확인되었다.

즉, 상기 실험 결과로부터, 라도티닙이 닐로티닙보다 3 배 이상 우수한 혈뇌 장벽 투과능을 가진다는 사실을 확인할 수 있었다. 혈뇌 장벽 투과능은 뇌질환 치료제 약물 개발의 매우 중요한 요소 중 하나로서, 라도티닙이 신경퇴행성 질환의 치료에 더욱 효과적일 것이라고 해석될 수 있다.

파킨슨병을 포함하는 신경퇴행성 질환에 대한 라도티닙이 가지는 우수한 치료 효과를 확인하기 위한 실험 결과, 신경세포에서 라도티닙의 α-시누클레인 PFFs로 유도된 신경독성 감소 효과, α-시누클레인 PFFs로 유도된 LB/LN-like pathology 감소 효과, A53T α-시누클레인 축적 감소 효과, α-시누클레인 PFFs로 유도된 c-Abl 활성 억제 효과를 확인하였다.

동물실험에서는 A53T 형질전환 마우스에서 라도티닙이 혈중 및 뇌 내의 α-시누클레인 형성을 억제하였고, 뇌 내 α-시누클레인 투여 질환 모델에서 라도티닙 투여군이 닐로티닙 투여군에 비해 α-시누클레인이 65~73%나 더 감소하였으며, 도파민 분비 및 운동능 회복 평가 결과 약 2.4 배 정도 우수한 효능을 보인다는 결과를 확인하였다. 이는 라도티닙이 파킨을 활성화하여 α-시누클레인의 분해를 위한 오토파지 부분으로의 이동을 촉진시켜 오토파지 클리어런스를 촉진시킨 결과이며, 세포사멸에 관여하는 단백질인 캐스페이즈-3의 활성억제와도 관련이 있다.

라도티닙은 CML 치료에 있어서 비슷한 효과를 보이는 닐로티닙에 비하여 동물실험에서 행동학적으로도 2 배 가까운 우수한 효력을 나타내었다. 이는 두 약물을 동량 (50 mg/kg)으로 투여했을 때, 라도티닙이 닐로티닙에 비하여, 혈장 내 흡수는 조금 낮지만, 높은 혈뇌 장벽 투과율로 인해 뇌조직내 분포는 약 3 배정도 높았기 때문에 가능한 것으로 해석되었다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며, 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims

하기 화학식 (I)로 표시되는 라도티닙(Radotinib) 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료를 위한 약제학적 조성물:
제1항에 있어서, 상기 신경퇴행성 질환이 파킨슨병인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 동물에게 투여되기 위한, 약제학적 조성물.
제4항에 있어서, 상기 동물은 포유류인, 약제학적 조성물.
제5항에 있어서, 상기 포유류는 인간인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 대상에게 경구 투여되기 위한, 약제학적 조성물.
제7항에 있어서, 상기 경구 투여의 형태는 분말, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 구강 분산성 정제, 당의정제, 에어로졸, 겔제, 환제, 연질 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 수성 의약품, 시럽제, 엘릭시르제(elixir), 웨이퍼 및 포제(sachet)로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 대상에게 비경구 투여되기 위한, 약제학적 조성물.
제9항에 있어서, 상기 비경구 투여의 형태는 주사제, 경피 투여제, 좌제, 에어로졸 및 비강 흡입제로부터 선택되는, 약제학적 조성물.