KR20180014010A - 암을 치료하기 위한 항-il-10 항체 및 cpg-c 유형 올리고뉴클레오티드의 조합 - Google Patents

암을 치료하기 위한 항-il-10 항체 및 cpg-c 유형 올리고뉴클레오티드의 조합 Download PDF

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Abstract

본 개시내용은 항-IL-10 항체 또는 그의 항원-결합 단편 및 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조합 요법, 및 암의 치료를 위한 조합 요법의 용도를 기재한다.

Description

암을 치료하기 위한 항-IL-10 항체 및 CPG-C 유형 올리고뉴클레오티드의 조합
본 발명은 암의 치료에 유용한 조합 요법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 항-IL-10 항체 및 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드인 TLR9 효능제를 포함하는 조합 요법에 관한 것이다.
시토카인 합성 억제제 인자 또는 CSIF로 초기에 공지된 인터류킨-10 (IL-10)은 조혈 세포, 특히 면역 세포의 강력한 면역조정제이다. 세포 예컨대 활성화된 Th2 세포, B 세포, 각질세포, 단핵구 및 대식세포는 IL-10을 생산한다. 예를 들어, 문헌 [Moore et al., Annu . Rev. Immunol. 11:165 (1993)]을 참조한다. IL-10은 T 세포, 단핵구 및 대식세포를 포함하는 다수의 세포의 활성화 및 이펙터 기능을 억제한다. 특히, IL-10은 세포 예컨대 Th1 세포, 자연 킬러 세포, 단핵구, 및 대식세포에 의한, IL-1, IFN-γ, 및 TNF의 합성을 포함하는 시토카인 합성을 억제한다. 예를 들어, 문헌 [Fiorentino et al., J. Exp . Med., 170:2081-2095 (1989); Fiorentino et al., J. Immunol. 146:3444 (1991); Hsu et al., Int . Immunol. 4:563 (1992); Hsu et al., Int . Immunol. 4:563 (1992); D'Andrea et al., J. Exp . Med. 178:1041 (1993); de Waal Malefyt et al., J. Exp . Med. 174:915 (1991); Fiorentino et al., J. Immunol. 147:3815 (1991)]을 참조한다.
종양 침윤 대식세포, 수지상 세포, 및 CD4+ 및 CD8+ T 세포에 의한 종양 미세환경에서의 IL-10의 생산은 면역계에 의한 종양 근절을 억제하는 것으로 보여졌다 (예를 들어, 문헌 [Jarnicki, et al. (2006) J. Immunol . 896-904] 참조). IL-10을 IL-10의 길항제로 표적화하는 것은 강력한 면역자극 활성 및 종양 근절을 제공할 수 있다.
일반적으로 면역자극 서열로서 공지된 특정 DNA 서열의 투여는, Th1-연관 시토카인의 분비에 의해 나타내어진 바와 같이 Th1-유형 편향을 갖는 면역 반응을 유도한다. 항원과 면역자극 폴리뉴클레오티드의 투여는 투여된 항원에 대한 Th1-유형 면역 반응을 일으킨다. 문헌 [Roman et al. (1997) Nature Med. 3:849-854]. 예를 들어, 염수 또는 아주반트 명반 중 에스케리키아 콜라이 (이. 콜라이) β-갈락토시다제 (β-Gal)로 피내로 주사된 마우스는 특정한 IgG1 및 IgE 항체, 및 IL-4 및 IL-5를 분비하나 IFN-γ는 분비하지 않는 CD4+ 세포를 생산함으로써 반응하였으며, 이는 T 세포가 우세하게 Th2 하위세트의 것임을 입증한다. 그러나, β-Gal을 코딩하고 면역자극 서열을 함유하는 (염수 중) 플라스미드 DNA로 피하로 (또는 타인(tyne) 피부 스크래치 어플리케이터로) 주사된 마우스는 IgG2a 항체 및 IFN-γ를 분비하나 IL-4 및 IL-5는 분비하지 않는 CD4+ 세포를 생산함으로써 반응하였으며, 이는 T 세포가 우세하게 Th1 하위세트의 것임을 입증한다. 더욱이, 플라스미드 DNA-주사된 마우스에 의한 특정한 IgE 생산은 66-75% 감소되었다. 문헌 [Raz et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:5141-5145]. 일반적으로, 네이키드 DNA 면역화에 대한 반응은 IL-2, TNFα 및 항원-자극된 CD4+ T 세포에 의한 IFN-γ의 생산을 특징으로 하며, 이는 Th1-유형 반응을 나타낸다. 이는 감소된 IgE 생산에 의해 보여진 바와 같이 알레르기 및 천식의 치료에 특히 중요하다. Th1-유형 면역 반응을 자극하는 면역자극 폴리뉴클레오티드의 능력은 박테리아 항원, 바이러스 항원 및 알레르겐으로 입증되었다 (예를 들어, WO 98/55495 참조). 암 면역요법의 효능을 개선시키는 것이 관련 기술분야에서 필요하다.
한 실시양태에서, 본 발명은 개체에게 항-IL-10 항체 및 TLR9 효능제를 포함하는 조합 요법을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 TLR9 효능제는 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드인, 개체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 TLR9 효능제와 조합하여 사용하기 위한 항-IL-10 항체를 포함하는 암을 치료하기 위한 의약을 제공하며, 여기서 TLR9 효능제는 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 항-IL-10 항체와 조합하여 사용하기 위한 TLR9 효능제를 포함하는 암을 치료하기 위한 의약을 제공하며, 여기서 TLR9 효능제는 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드이다.
다른 실시양태는 TLR9 효능제와 조합하여 투여되는 경우 개체에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 항-IL-10 항체의 용도 및 항-IL-10 항체와 조합하여 투여되는 경우 개체에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 TLR9 효능제의 용도를 제공한다. 이러한 실시양태에서, TLR9 효능제는 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드이다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 개체에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 항-IL-10 항체 및 TLR9 효능제의 용도를 제공하며, 여기서 TLR9 효능제는 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 의약은 키트를 포함하고, 키트는 또한 개체에서 암을 치료하기 위해 TLR9 효능제와 조합하여 항-IL-10 항체를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함한다.
도 1은 서열식별번호: 2의 경쇄 서열 및 서열식별번호: 1의 중쇄 서열을 갖는, 항-IL-10 hum12G8의 아미노산 서열을 보여준다. CDR 영역은 밑줄표시되어 있다.
도 2는 서열식별번호: 3의 경쇄 가변 영역 서열 및 서열식별번호: 4의 중쇄 가변 영역 서열을 갖는, 항-IL-10 TC40.11D8의 아미노산 서열을 보여준다.
도 3은 마우스 TC-1 양측 종양 모델에서의 주사된 종양의 종양 성장을 보여준다. 패널 a는 개별 동물에 대한 주사된 종양의 부피 및 군당 완전 퇴행 (CR)의 수를 보여준다. 패널 b는 주사된 종양의 중앙 부피를 68% 신뢰 구간을 나타내는 오차 막대와 함께 보여준다. 패널 c는 치료군 사이의 주사된 종양의 부피를 일별로 비교한다. 패널 d는 치료 사이의 주사된 종양의 부피의 비교를 위한 비조정된 및 다중도-조정된 P-값을 보여준다. 비조정된 p 값은 적정-검열 데이터를 위한 게한-브레슬로우(Gehan-Breslow) 비파라미터 검정 통계의 페토 & 페토(Peto & Peto) 버전에 기초한 양측 p-값을 지칭한다. P-값은 비교되는 2개의 치료 사이의 동물의 20,000 무작위 재할당으로부터 추정되었다. 다중도 조정된 p-값은 주어진 쌍의 치료에 대해 모든 시점에 걸쳐 집단적 오차율을 제어하기 위해 조정된 p-값을 지칭한다. 조정은 순열 분포에 웨스트폴 앤드 영(Westfall and Young)의 맥스티(maxT) 절차를 적용함에 의한 것이었다.
도 4는 마우스 TC-1 양측 종양 모델에서의 비-주사된 종양의 종양 성장을 보여준다. 패널 a는 개별 동물에 대한 비-주사된 종양의 부피 및 군당 완전 퇴행 (CR)의 수를 보여준다. 패널 b는 비-주사된 종양의 중앙 부피를 68% 신뢰 구간을 나타내는 오차 막대와 함께 보여준다. 패널 c는 치료군 사이의 비-주사된 종양의 부피를 일별로 비교한다. 패널 d는 치료 사이의 비-주사된 종양의 부피의 비교를 위한 비조정된 및 다중도-조정된 P-값을 보여준다. 비조정된 p 값은 적정-검열 데이터를 위한 게한-브레슬로우 비파라미터 검정 통계의 페토 & 페토 버전에 기초한 양측 p-값을 지칭한다. P-값은 비교되는 2개의 치료 사이의 동물의 20,000 무작위 재할당으로부터 추정되었다. 다중도 조정된 p-값은 주어진 쌍의 치료에 대해 모든 시점에 걸쳐 집단적 오차율을 제어하기 위해 조정된 p-값을 지칭한다. 조정은 순열 분포에 웨스트폴 앤드 영의 맥스티 절차를 적용함에 의한 것이었다.
도 5는 48시간 동안의 C59-08 및 대조군 ODN 1040의 치료로의 인간 PBMC (2명의 공여자)에서의 IFNα2a 및 IL-10의 유도를 보여준다.
도 6은 24시간 동안의 C59-08로의 치료 후 인간 신세포 암종 조직배양에서의 IFNα-유도성 유전자 (패널 a), 시토카인 (패널 b), 및 면역 활성화 마커 (패널 c)의 mRNA 발현의 유도를 보여준다.
약어. 본 발명의 상세한 설명 및 실시예 전반에 걸쳐 하기 약어가 사용될 것이다:
BOR 최상의 전체 반응
BID 1일 2회 1회분 투여
CBR 임상 이익률
CDR 상보성 결정 영역
CHO 차이니즈 햄스터 난소
CR 완전 반응
DCR 질환 제어율
DFS 무질환 생존
DLT 용량 제한 독성
DOR 반응 지속기간
DSDR 지속적인 안정 질환율
FFPE 포르말린-고정, 파라핀-포매
FR 프레임워크 영역
IgG 이뮤노글로불린 G
IHC 면역조직화학 또는 면역조직화학적
irRC 면역 관련 반응 기준
IV 정맥내
MTD 최대 허용 용량
NCBI 국립 생물 정보 센터
NCI 국립 암 연구소
ORR 객관적 반응률
OS 전체 생존
PD 진행성 질환
PFS 무진행 생존
PR 부분 반응
Q2W 2주마다 1회 투여
Q3W 3주마다 1회 투여
QD 1일에 1회 투여
RECIST 고형 종양의 반응 평가 기준
SD 안정 질환
VH 이뮤노글로불린 중쇄 가변 영역
VK 이뮤노글로불린 카파 경쇄 가변 영역
I. 정의
본 발명이 보다 용이하게 이해될 수 있도록, 특정 기술 및 과학 용어가 하기에 구체적으로 정의된다. 이 문헌의 다른 곳에서 구체적으로 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 다른 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다.
첨부된 청구범위를 포함하여, 본원에 사용된 바와 같이, 단수 형태 단어는, 문맥상 달리 명백하게 지시되지 않는 한, 그의 상응하는 복수 지시대상을 포함한다.
동물, 인간, 실험 대상체, 세포, 조직, 기관, 또는 생물학적 유체에 적용된 바와 같은 "투여"는 외인성 제약, 치료제, 진단제, 또는 조성물과 동물, 인간, 대상체, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체의 접촉을 지칭한다. 용어 "대상체"는 임의의 유기체, 바람직하게는 동물, 보다 바람직하게는 포유동물 (예를 들어, 래트, 마우스, 개, 고양이, 토끼) 및 가장 바람직하게는 인간을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "항체"는 목적하는 생물학적 또는 결합 활성을 나타내는 항체의 임의의 형태를 지칭한다. 따라서, 이는 가장 넓은 의미로 사용되고, 구체적으로 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 인간화, 완전 인간 항체, 키메라 항체 및 낙타화 단일 도메인 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "모 항체"는 항체의 의도된 사용을 위한 변형, 예컨대 인간 치료제로서 사용하기 위한 항체의 인간화 전에 항원에 대한 면역계의 노출에 의해 수득된 항체이다.
일반적으로, 기본 항체 구조 단위는 사량체를 포함한다. 각 사량체는 폴리펩티드 쇄의 2개의 동일한 쌍을 포함하는데, 각 쌍이 1개는 "경쇄" (약 25 kDa)를 갖고 1개는 "중쇄" (약 50-70 kDa)를 갖는다. 각 쇄의 아미노-말단 부분은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100 내지 110개 또는 그 초과의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 중쇄의 카르복시-말단 부분은 주로 이펙터 기능을 담당하는 불변 영역을 정의할 수 있다. 전형적으로, 인간 경쇄는 카파 및 람다 경쇄로 분류된다. 게다가, 인간 중쇄는 전형적으로 뮤, 델타, 감마, 알파, 또는 엡실론으로 분류되고, 각각 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE로서 항체의 이소형을 규정한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되며, 이 때 중쇄는 또한 약 10개 더 많은 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. 일반적으로, 문헌 [Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989)]을 참조한다.
각각의 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역은 항체 결합 부위를 형성한다. 따라서, 일반적으로, 무손상 항체는 2개의 결합 부위를 갖는다. 이중기능적 또는 이중특이적 항체를 제외하고는, 2개의 결합 부위는 일반적으로 동일하다.
전형적으로, 중쇄 및 경쇄 둘 다의 가변 도메인은 비교적 보존된 프레임워크 영역 (FR) 내에 위치하는, 상보성 결정 영역 (CDR)으로도 불리는 3개의 초가변 영역을 포함한다. CDR은 통상적으로 프레임워크 영역에 의해 정렬되며, 이는 특정한 에피토프에 결합하는 것을 가능하게 한다. 일반적으로, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 다는 N-말단에서부터 C-말단으로 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 아미노산을 각 도메인에 할당하는 것은 일반적으로, 문헌 [Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md. ; 5th ed.; NIH Publ. No. 91-3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32: 1-75; Kabat, et al., (1977) J. Biol. Chem. 252: 6609-6616; Chothia, et al., (1987) J Mol. Biol. 196: 901-917 또는 Chothia, et al., (1989) Nature 342: 878-883]의 정의에 따른다.
본원에서 사용된 바와 같이, 달리 나타내지 않는 한, "항체 단편" 또는 "항원 결합 단편"은 항체의 항원 결합 단편, 즉 전장 항체가 결합된 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 유지하는 항체 단편, 예를 들어, 하나 이상의 CDR 영역을 유지하는 단편을 지칭한다. 항체 결합 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체; 단일-쇄 항체 분자, 예를 들어 sc-Fv; 나노바디 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
명시된 표적 단백질에 "특이적으로 결합하는" 항체는 다른 단백질에 비해 이러한 표적에 대한 우선적인 결합을 나타내는 항체이지만, 이러한 특이성은 절대적인 결합 특이성을 요구하지는 않는다. 항체는 그의 결합이, 예를 들어 목적하지 않는 결과 예컨대 가양성을 생성하지 않으면서, 샘플 중 표적 단백질의 존재를 결정하는 경우, 그의 의도된 표적에 대해 "특이적"인 것으로 간주된다. 본 발명에 유용한 항체 또는 그의 결합 단편은 비-표적 단백질과의 친화도보다 적어도 2배 더 큰, 바람직하게는 적어도 10배 더 큰, 보다 바람직하게는 적어도 20배 더 큰, 가장 바람직하게는 적어도 100배 더 큰 친화도로 표적 단백질에 결합할 것이다.
"키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부는 특정 종 (예를 들어, 인간)으로부터 유래되거나 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 한편, 쇄(들)의 나머지는 또 다른 종 (예를 들어, 마우스)으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 항체, 뿐만 아니라 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체의 단편을 지칭한다.
"인간 항체"는 단지 인간 이뮤노글로불린 단백질 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다. 인간 항체는 마우스, 마우스 세포, 또는 마우스 세포로부터 유래된 하이브리도마에서 생산되는 경우에 뮤린 탄수화물 쇄를 함유할 수 있다. 유사하게, "마우스 항체" 또는 "래트 항체"는 각각, 단지 마우스 또는 래트 이뮤노글로불린 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다.
"인간화 항체"는 비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체 뿐만 아니라 인간 항체로부터의 서열을 함유하는 항체의 형태를 지칭한다. 이러한 항체는 비-인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유한다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 이뮤노글로불린의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 이뮤노글로불린 서열의 것이다. 인간화 항체는 또한 임의로 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 이뮤노글로불린의 그것을 포함할 것이다. 접두어 "hum", "hu" 또는 "h"는 인간화 항체를 모 설치류 항체로부터 구분하기 위해 필요한 경우 항체 클론 명칭에 추가된다. 설치류 항체의 인간화 형태는 일반적으로 모 설치류 항체의 동일한 CDR 서열을 포함할 것이지만, 친화도를 증가시키기 위해, 인간화 항체의 안정성을 증가시키기 위해, 또는 다른 이유를 위해 특정 아미노산 치환이 포함될 수 있다.
치료 요법, 예컨대 본원에 기재된 조합 요법으로 치료되는 암 환자를 지칭하는 경우 "항종양 반응"은, 적어도 하나의 양성 치료 효과, 예컨대 예를 들어, 감소된 암 세포의 수, 감소된 종양 크기, 감소된 말초 기관 내로의 암 세포 침윤 속도, 감소된 종양 전이 또는 종양 성장 속도, 또는 무진행 생존을 의미한다. 암에서의 양성 치료 효과는 다수의 방식으로 측정될 수 있다 (문헌 [W. A. Weber, J. Null. Med. 50: 1S-10S (2009); Eisenhauer et al., 상기 문헌] 참조). 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합 요법에 대한 항종양 반응은 RECIST 1.1 기준, 2차원 irRC, 또는 1차원 irRC를 사용하여 평가된다. 일부 실시양태에서, 항종양 반응은 SD, PR, CR, PFS, 또는 DFS 중 임의의 것이다.
"2차원 irRC"는 문헌 [Wolchok JD, et al. Guidelines for the evaluation of immune therapy activity in solid tumors: immune-related response criteria. Clin Cancer Res. 2009;15(23):7412-7420]에 기재된 기준 세트를 지칭한다. 이들 기준은 각 병변의 가장 긴 직경 및 가장 긴 수직 직경을 곱함 (cm2)으로써 입수된 표적 병변의 2차원 종양 측정값을 이용한다.
"생물요법제"는 종양 유지 및/또는 성장을 지지하거나 또는 항종양 면역 반응을 억제하는 임의의 생물학적 경로 내의 리간드 / 수용체 신호전달을 차단하는 생물학적 분자, 예컨대 항체 또는 융합 단백질을 의미한다. 생물요법제의 부류는 VEGF, EGFR, Her2/neu, 다른 성장 인자 수용체, CD20, CD40, CD-40L, CTLA-4, OX-40, 4-1BB, 및 ICOS에 대한 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "암", "암성", 또는 "악성"은 전형적으로 비조절된 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물에서의 생리학적 조건을 지칭 또는 기재한다. 암의 예는: 심장: 육종 (혈관육종, 섬유육종, 횡문근육종, 지방육종), 점액종, 횡문근종, 섬유종, 지방종 및 기형종; 폐: 기관지원성 암종 (편평 세포, 미분화 소세포, 미분화 대세포, 선암종), 폐포 (세기관지) 암종, 기관지 선종, 육종, 림프종, 연골성 과오종, 중피종; 위장: 식도 (편평 세포 암종, 선암종, 평활근육종, 림프종), 위 (암종, 림프종, 평활근육종), 췌장 (관 선암종, 인슐린종, 글루카곤종, 가스트린종, 카르시노이드 종양, VIP종), 소장 (선암종, 림프종, 카르시노이드 종양, 카포시 육종, 평활근종, 혈관종, 지방종, 신경섬유종, 섬유종), 대장 (선암종, 관상 선종, 융모성 선종, 과오종, 평활근종) 결장직장; 비뇨생식기: 신장 (선암종, 윌름스 종양 [신모세포종], 림프종, 백혈병), 방광 및 요도 (편평 세포 암종, 이행 세포 암종, 선암종), 전립선 (선암종, 육종), 고환 (정상피종, 기형종, 배아성 암종, 기형암종, 융모막암종, 육종, 간질 세포 암종, 섬유종, 섬유선종, 선종양 종양, 지방종); 간: 간세포암 (간세포성 암종), 담관암종, 간모세포종, 혈관육종, 간세포 선종, 혈관종; 골: 골원성 육종 (골육종), 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종, 연골육종, 유잉육종, 악성 림프종 (세망 세포 육종), 다발성 골수종, 악성 거대 세포 종양 척삭종, 골연골종 (골연골성 외골종), 양성 연골종, 연골모세포종, 연골점액섬유종, 유골 골종 및 거대 세포 종양; 신경계: 두개골 (골종, 혈관종, 육아종, 황색종, 변형성 골염), 수막 (수막종, 수막육종, 신경교종증), 뇌 (성상세포종, 수모세포종, 신경교종, 상의세포종, 배세포종 [송과체종], 다형성 교모세포종, 핍지교종, 슈반세포종, 망막모세포종, 선천성 종양), 척수 신경섬유종, 수막종, 신경교종, 육종); 부인과: 자궁 (자궁내막 암종), 자궁경부 (자궁경부 암종, 종양 전 자궁경부 이형성증), 난소 (난소 암종 [장액성 낭선암종, 점액성 낭선암종, 미분류 암종], 과립막 난포막 세포 종양, 세르톨리-라이디히 세포 종양, 미분화배세포종, 악성 기형종), 외음부 (편평 세포 암종, 상피내 암종, 선암종, 섬유육종, 흑색종), 질 (투명 세포 암종, 편평 세포 암종, 포도상 육종 (배아성 횡문근육종), 난관 (암종), 유방; 혈액: 혈액 (골수성 백혈병 [급성 및 만성], 급성 림프모구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 골수증식성 질환, 다발성 골수종, 골수이형성 증후군), 호지킨병, 비 호지킨 림프종 [악성 림프종]; 피부: 악성 흑색종, 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 카포시 육종, 이형성 모반, 지방종, 혈관종, 피부섬유종, 켈로이드, 건선; 및 부신: 신경모세포종을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 또 다른 실시양태에서, 암은 암종, 림프종, 백혈병, 모세포종, 및 육종이다. 이러한 암의 보다 특정한 예는 편평 세포 암종, 골수종, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 신경교종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 급성 골수성 백혈병 (AML), 다발성 골수종, 위장 (관) 암, 신암, 난소암, 간암, 림프모구성 백혈병, 림프구성 백혈병, 결장직장암, 자궁내막암, 신장암, 전립선암, 갑상선암, 흑색종, 연골육종, 신경모세포종, 췌장암, 다형성 교모세포종, 자궁경부암, 뇌암, 위암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장 암종, 및 두경부암을 포함한다. 암의 또 다른 특정한 예는 신세포 암종을 포함한다. 암의 또 다른 특정한 예는 비-호지킨 림프종 또는 피부 T- 세포 림프종이다. 암의 또 다른 특정한 예는 급성 골수성 백혈병 (AML) 또는 골수이형성 증후군이다.
"CpG-C ODN" 또는 "CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드"는 12 내지 100개 염기 길이의 올리고뉴클레오티드이며, 이는 5'-T가 올리고뉴클레오티드의 5'-말단으로부터 0, 1, 2, 또는 3개 염기에 위치되는 것인 하나 이상의 5'-TCG 트리뉴클레오티드, 및 하나 이상의 비메틸화된 CG 디뉴클레오티드를 포함하는 적어도 8개 염기 길이의 적어도 하나의 회문식 서열을 갖는다. 하나 이상의 5'-TCG 트리뉴클레오티드 서열은 회문식 서열의 5'-말단으로부터 0, 1, 또는 2개 염기만큼 분리될 수 있거나 또는 회문식 서열은 하나 이상의 5'-TCG 트리뉴클레오티드 서열의 모두 또는 일부를 함유할 수 있다. 한 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 올리고데옥시뉴클레오티드 (ODN)이다. 한 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 2'-올리고데옥시뉴클레오티드이다. CpG-C ODN은 B 세포를 자극하고, 형질세포양 수지상 세포 (PDC) 성숙을 유도하고 높은 수준의 제I형 인터페론 (예를 들어, IFN-α, IFN-γ 등)의 분비를 유발하는 능력을 갖는다. 일부 실시양태에서, CpG-C ODN은 12 내지 100개 염기 길이이거나, 바람직하게는 12 내지 50개 염기 길이이거나, 바람직하게는 12 내지 40개 염기 길이이거나, 또는 바람직하게는 12-30개 염기 길이이다. 일부 실시양태에서, ODN은 적어도 (하한치) 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 50, 60, 70, 80, 또는 90개 염기 길이이다. 일부 실시양태에서, ODN은 최대 (상한치) 100, 90, 80, 70, 60, 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 또는 30개 염기 길이이다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 회문식 서열은 8 내지 97개 염기 길이이거나, 바람직하게는 8 내지 50개 염기 길이이거나 또는 바람직하게는 8 내지 32개 염기 길이이다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 회문식 서열은 적어도 (하한치) 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 또는 30개 염기 길이이다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 회문식 서열은 최대 (상한치) 50, 48, 46, 44, 42, 40, 38, 36, 34, 32, 30, 28, 26, 24, 22, 20, 18, 16, 14, 12 또는 10개 염기 길이이다. 한 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 올리고데옥시뉴클레오티드이다. 한 실시양태에서, CpG-C ODN의 하나 이상의 뉴클레오티드간 연결은 변형된 연결이다. 한 실시양태에서, CpG-C ODN의 하나 이상의 뉴클레오티드간 연결은 포스포로티오에이트 (PS) 연결이다. 한 실시양태에서, CpG-C ODN의 모든 뉴클레오티드간 연결은 포스포로티오에이트 (PS) 연결이다. 포스포로티오에이트 백본은 CpG-C ODN의 모든 뉴클레오티드간 연결이 포스포로티오에이트 (PS) 연결인 것을 지칭한다.
본원에서 논의되는 CpG-C 유형 ODN 및 서열식별번호: 13-26은 달리 나타내지 않는 한 그의 제약상 허용되는 염 형태로 존재한다. 예시적인 염기성 염은 암모늄 염, 알칼리 금속 염 예컨대 나트륨, 리튬, 및 칼륨 염, 알칼리 토금속 염 예컨대 칼슘 및 마그네슘 염, 아연 염, 유기 염기 (예를 들어, 유기 아민)와의 염 예컨대 N-Me-D-글루카민, N-[1-(2,3-디올레오일옥시)프로필]-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드, 콜린, 트로메타민, 디시클로헥실아민, t-부틸 아민, 및 아미노산 예컨대 아르기닌, 리신과의 염 등을 포함한다. 한 실시양태에서, CpG-C 유형 ODN은 암모늄, 나트륨, 리튬, 또는 칼륨 염 형태로 존재한다. 하나의 바람직한 실시양태에서, CpG-C 유형 ODN은 나트륨 염 형태로 존재한다. CpG-C ODN은 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 용액 중에 제공될 수 있다. 대안적으로, CpG-C ODN은 동결건조된 고체로서 제공될 수 있으며, 이는 투여 전에 멸균수, 염수 또는 제약상 허용되는 완충제 중에서 후속적으로 재구성된다.
본 개시내용의 제약상 허용되는 부형제는 예를 들어, 용매, 벌킹제, 완충제, 장성 조정제, 및 보존제를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Pramanick et al., Pharma Times, 45:65-77, 2013] 참조). 일부 실시양태에서 제약 조성물은 용매, 벌킹제, 완충제, 및 장성 조정제 중 하나 이상으로서 기능하는 부형제를 포함할 수 있다 (예를 들어, 염수 중 염화나트륨은 수성 비히클 및 장성 조정제 둘 다로서의 역할을 할 수 있음). 본 개시내용의 제약 조성물은 비경구 투여를 위해 적합하다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 용매로서 수성 비히클을 포함한다. 적합한 비히클은 예를 들어 멸균수, 염수 용액, 포스페이트 완충 염수, 및 링거액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 등장성이다.
제약 조성물은 벌킹제를 포함할 수 있다. 벌킹제는 제약 조성물이 투여 전에 동결건조될 경우에 특히 유용하다. 일부 실시양태에서, 벌킹제는 동결 또는 분무 건조 동안 및/또는 저장 동안 활성제의 안정화 및 분해의 방지에서 보조하는 보호제이다. 적합한 벌킹제는 당 (모노-, 디- 및 폴리사카라이드) 예컨대 수크로스, 락토스, 트레할로스, 만니톨, 소르비탈, 글루코스 및 라피노스이다.
제약 조성물은 완충제를 포함할 수 있다. 완충제는 pH를 제어하여 가공, 저장, 및 임의로는 재구성 동안 활성제의 분해를 억제한다. 적합한 완충제는 예를 들어 아세테이트, 시트레이트, 포스페이트 또는 술페이트를 포함하는 염을 포함한다. 다른 적합한 완충제는 예를 들어 아미노산 예컨대 아르기닌, 글리신, 히스티딘, 및 리신을 포함한다. 완충제는 염산 또는 수산화나트륨을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 완충제는 조성물의 pH를 4 내지 9의 범위 내로 유지한다. 일부 실시양태에서, pH는 (하한치) 4, 5, 6, 7 또는 8 초과이다. 일부 실시양태에서, pH는 (상한치) 9, 8, 7, 6 또는 5 미만이다. 즉, pH는 하한치가 상한치 미만인 약 4 내지 9의 범위이다.
제약 조성물은 장성 조정제를 포함할 수 있다. 적합한 장성 조정제는 예를 들어 덱스트로스, 글리세롤, 염화나트륨, 글리세린 및 만니톨을 포함한다.
제약 조성물은 보존제를 포함할 수 있다. 적합한 보존제는 예를 들어 항산화제 및 항미생물제를 포함한다. 그러나, 바람직한 실시양태에서, 제약 조성물은 멸균 상태 하에서 제조되고 단일 사용 용기에 존재하고, 따라서 보존제의 포함을 필요로 하지 않는다.
용어 "회문식 서열" 또는 "회문"은 역위 반복인 핵산 서열, 예를 들어 ABCDD'C'B'A'에서, 염기 예를 들어, A 및 A', B 및 B', C 및 C', D 및 D'가 왓슨-크릭(Watson-Crick) 염기 쌍을 형성할 수 있는 것을 지칭한다. 이러한 서열은 단일-가닥일 수 있거나 또는 이중-가닥 구조를 형성할 수 있거나 또는 일부 조건 하에 헤어핀 루프 구조를 형성할 수 있다. 예를 들어, 본원에 사용된 "8개 염기 회문"은 회문식 서열이 8개 염기 길이인 핵산 서열, 예컨대 ABCDD'C'B'A'를 지칭한다. 회문식 서열은 또한 비-회문식 서열을 함유하는 올리고뉴클레오티드의 부분일 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 회문식 서열 부분 및 하나 이상의 비-회문식 서열 부분을 함유할 수 있다. 대안적으로, 올리고뉴클레오티드 서열은 완전히 회문식일 수 있다. 하나 초과의 회문식 서열 부분을 갖는 올리고뉴클레오티드에서, 회문식 서열 부분은 서로 중첩되거나 또는 중첩되지 않을 수 있다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 CpG-C ODN은
(a) N이 뉴클레오시드이고, x = 0, 1, 2 또는 3이고, y = 1, 2, 3 또는 4이고, w = 0, 1 또는 2이고, p= 0 또는 1이고, q = 0, 1 또는 2이고, v= 0 내지 89이고 z = 1 내지 20이고, X1 및 X1'가 자기-상보적 뉴클레오시드이고, X2 및 X2'가 자기-상보적 뉴클레오시드이고, (TCG(Nq))y 서열의 5'-T가 올리고뉴클레오티드의 5' 말단으로부터 0-3개 염기에 있는 것인 5'-Nx(TCG(Nq))yNw(X1X2CGX2'X1'(CG)p)z,Nv (서열식별번호: 13); 및
(b) 적어도 8개 염기 길이의 회문식 서열이며 (X1X2CGX2'X1'(CG)p)z 서열의 처음 (X1X2CGX2'X1')을 포함하는 회문식 서열을 포함하고, 여기서 ODN은 12 내지 100개 염기 길이이다. 일부 실시양태에서, x = 0이고, y = 1이고, w = 0이고, p= 0 또는 1이고, q = 0, 1 또는 2이고, v=0 내지 20이고 z = 1, 2, 3 또는 4이다. 일부 실시양태에서, X1 및 X2는 각각 A 또는 T이다. 일부 실시양태에서, 회문식 서열은 1/3 초과의 A 및 T의 염기 조성을 갖는다. 일부 실시양태에서, CpG-C ODN은 서열식별번호: 16-26으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 CpG-C ODN은 TCGNq(X1X2CGX2'X1'CG)zNv (서열식별번호: 14)로 이루어지며, 여기서 N은 뉴클레오시드이고, q = 0, 1, 2, 3, 4 또는 5이고, v=0 내지 20이고, z= 1 내지 4이고, X1 및 X1'는 자기-상보적 뉴클레오시드이고, X2 및 X2'는 자기-상보적 뉴클레오시드이고, ODN은 적어도 12개 염기 길이이다. 일부 실시양태에서, CpG-C ODN은 서열식별번호: 16-26으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 CpG-C ODN은
5'-TCGNqTTCGAACGTTCGAACGTTNs-3' (서열식별번호: 15)로 이루어지며, 여기서 N은 뉴클레오시드이고, q = 0, 1, 2, 3, 4 또는 5이고, s = 0 내지 20이고, ODN은 적어도 12개 염기 길이이다. 한 실시양태에서, s = 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다. 일부 실시양태에서, CpG-C ODN은
Figure pct00001
로 이루어진 군으로부터 선택된 서열로 이루어진다.
한 실시양태에서, TLR9 효능제는 서열 5'-TCGAACGTTCGAACGTTCGAACGTTCGAAT-3' (서열식별번호: 20)로 이루어진 CpG-C ODN이다. 또 다른 실시양태에서, CpG-C ODN은 5'-TCGAACGTTCGAACGTTCGAACGTTCGAAT-3' (서열식별번호: 20)의 나트륨 염이다. 추가 실시양태에서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 5'-TCGTTCGAACGTTCGAACGTTCGAA-3' (서열식별번호: 17)로 이루어진 서열을 갖는다. 추가 실시양태에서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 5'-TCGTTCGAACGTTCGAACGTTCGAA-3' (서열식별번호: 17)의 나트륨 염이다.
또 다른 실시양태에서, TLR9 효능제 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는
Figure pct00002
로 이루어진 군으로부터 선택된다.
표 1 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드의 모티프 및 서열
Figure pct00003
본원에 기재된 화학식 또는 서열 모티프와 관련하여, 임의의 및 모든 파라미터가 독립적으로 선택된다는 것은 이해된다. 예를 들어, x=0-2인 경우, y는, 총 올리고뉴클레오티드 길이 제한이 충족되는 한, x의 값 (또는 화학식에서의 임의의 다른 선택가능한 파라미터)에 관계없이 독립적으로 선택될 수 있다.
본 개시내용의 모티프에 의해 포괄된 서열을 갖는 추가의 CpG-C 올리고뉴클레오티드는 본원에 기재된 방법 및 의약에 사용하기에 적합하다. 본 개시내용의 모티프에 의해 포괄된 서열을 갖는 복수의 추가의 CpG-C 올리고뉴클레오티드는 디나박스 테크놀로지스 코포레이션(Dynavax Technologies Corporation)의 미국 특허 번호 7,745,606, 8,158,768, 및 8,871,732에 기재되어 있다. 이들 서열은 본원에 참조로 포함된다.
CpG 올리고뉴클레오티드는 관련 기술분야에서 기재되어 왔고 그의 활성은, 면역 반응의 다양한 측면 (예를 들어, 시토카인 분비, 항체 생산, NK 세포 활성화, B 세포 증식, T 세포 증식 등)을 측정하는 표준 검정을 사용하여 용이하게 결정될 수 있다. 예시적인 방법은 WO 97/28259; WO 98/16247; WO 99/11275, WO 98/55495 및 WO 00/61151 뿐만 아니라, 디나박스 테크놀로지스 코포레이션의 미국 특허 번호 7,745,606, 8,158,768, 및 8,871,732에 기재되어 있다. 따라서, 이들 및 다른 방법은 CpG 올리고뉴클레오티드의 면역조정 활성을 검출하고 정량화하는 데 사용될 수 있다.
CpG-C 올리고뉴클레오티드는 변형을 함유할 수 있다. 적합한 변형은, 3'OH 또는 5'OH 기의 변형, 뉴클레오티드 염기의 변형, 당 성분의 변형, 및 포스페이트 기의 변형을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 변형된 염기는 변형된 염기(들)가 왓슨-크릭 염기 쌍형성을 통해 그의 천연 상보성에 대한 동일한 특이성을 유지하는 한 회문식 서열에 포함될 수 있다 (예를 들어, CpG-C 올리고뉴클레오티드의 회문식 부분은 자기-상보적으로 유지됨).
CpG-C 올리고뉴클레오티드는 선형일 수 있거나, 원형일 수 있거나 또는 원형 부분 및/또는 헤어핀 루프를 포함한다. CpG-C 올리고뉴클레오티드는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. CpG-C 올리고뉴클레오티드는 DNA, RNA 또는 DNA/RNA 하이브리드일 수 있다.
CpG-C 올리고뉴클레오티드는 자연 발생 또는 변형된, 비-자연 발생 염기를 함유할 수 있고, 변형된 당, 포스페이트, 및/또는 말단을 함유할 수 있다. 예를 들어, 포스포디에스테르 연결 이외에도, 포스페이트 변형은 메틸 포스포네이트, 포스포로티오에이트, 포스포르아미데이트 (가교 또는 비-가교), 포스포트리에스테르 및 포스포로디티오에이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않고, 임의의 조합으로 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, CpG-C 올리고뉴클레오티드는 포스포로티오에이트 연결 단독, 포스포디에스테르 연결 단독, 또는 포스포디에스테르 및 포스포로티오에이트 연결의 조합을 갖는다.
관련 기술분야에 공지된 당 변형, 예컨대 2'-알콕시-RNA 유사체, 2'-아미노-RNA 유사체, 2'-플루오로-DNA, 및 2'-알콕시- 또는 아미노-RNA/DNA 키메라 및 본원에 기재된 다른 것이 또한 제조되고 임의의 포스페이트 변형과 조합될 수 있다. 염기 변형의 예는 CpG-C 올리고뉴클레오티드의 시토신 (예를 들어, 5-브로모시토신, 5-클로로시토신, 5-플루오로시토신, 5-아이오도시토신)의 C-5 및/또는 C-6에 대한 전자-끄는 모이어티의 첨가 및 CpG-C 올리고뉴클레오티드의 우라실 (예를 들어, 5-브로모우라실, 5-클로로우라실, 5-플루오로우라실, 5-아이오도우라실)의 C-5 및/또는 C-6에 대한 전자-끄는 모이어티의 첨가를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 상기 언급된 바와 같이, CpG-C 올리고뉴클레오티드의 회문식 서열에서의 염기 변형의 사용은 왓슨-크릭 염기 쌍형성을 위해 수반된 염기의 자기-상보성을 방해하여서는 안 된다. 그러나, 회문식 서열의 외부에서, 변형된 염기는 이러한 제한 없이 사용될 수 있다. 예를 들어, 2'-O-메틸-우리딘 및 2'-O-메틸-시티딘은 회문식 서열의 외부에서 사용될 수 있는 반면에, 5-브로모-2'-데옥시시티딘은 회문식 서열 내부 및 외부 둘 다에서 사용될 수 있다. 회문식 서열의 내부 및 외부 둘 다에서 사용될 수 있는 다른 변형된 뉴클레오티드는 7-데아자-8-아자-dG, 2-아미노-dA, 및 2-티오-dT를 포함한다.
대부분의 올리고뉴클레오티드의 듀플렉스 (즉, 이중 가닥) 및 헤어핀 형태는 동적 평형에 있으며, 헤어핀 형태는 일반적으로 낮은 올리고뉴클레오티드 농도 및 보다 높은 온도에서 선호된다. 공유 가닥간 또는 가닥내 가교는, 열-, 이온-, pH-, 및 농도-유도된 입체형태적 변화에 대해, 각각 듀플렉스 또는 헤어핀 안정성을 증가시킨다. 화학적 가교는 물리화학적 및 생물학적 특징화를 위해 폴리뉴클레오티드를 듀플렉스 또는 헤어핀 형태로 고정시키는 데 사용될 수 있다. 입체형태적으로 균질하고 그의 가장 활성인 형태 (듀플렉스 또는 헤어핀 형태)로 "고정된" 가교된 올리고뉴클레오티드는 잠재적으로 그의 비가교된 대응물보다 더 활성일 수 있었다. 따라서, 본 개시내용의 일부 CpG-C 올리고뉴클레오티드는 공유 가닥간 및/또는 가닥내 가교를 함유한다.
듀플렉스 DNA를 화학적으로 가교시키는 다양한 방식은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 임의의 가교 방법은 가교된 폴리뉴클레오티드 생성물이 원하는 면역조정 활성을 보유하는 한 사용될 수 있다. 한 방법은, 예를 들어, 듀플렉스 또는 헤어핀의 말단에서 2개의 대향하는 티미딘 사이에 디술피드 가교를 생성한다. 이러한 가교 방법의 경우, 관심 올리고뉴클레오티드(들)는 5'-DMT-N3-(tBu-SS-에틸)티미딘-3'-포스포르아미다이트 ("T*")로 합성된다. 디술피드 가교를 형성하기 위해, 혼합된 디술피드 결합은 감소되고, 올리고뉴클레오티드는 정제되고, 가닥은 혼성화되고 화합물은 공기-산화되어 헤어핀 형태의 경우 가닥내 가교 또는 듀플렉스 형태의 경우 가닥간 가교를 형성한다. 대안적으로, 올리고뉴클레오티드는 먼저 혼성화되고 이어서 감소되고, 정제되고 공기 산화될 수 있다. 이러한 방법 및 다른 것은 관련 기술분야에 기재되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Glick et al., J Org Chem, 56:6746-6747, 1991, Glick et al., J Am Chem Soc, 114:5447-5448, 1992, Goodwin et al., Tetrahedron Letters 35:1647-1650, 1994, Wang et al., J Am Chem Soc, 117:2981-2991, 1995, Osborne et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 6:2339-2342, 1996 및 Osborne et al., J Am Chem Soc, 118:11993-12003, 1996] 참조).
또 다른 가교 방법은 듀플렉스 또는 헤어핀 구조에서 상쇄된 잔기 사이에 디술피드 가교를 형성한다. 이러한 가교 방법의 경우, 관심 올리고뉴클레오티드(들)는 전환가능한 뉴클레오시드 (예를 들어, 글렌 리서치(Glen Research)로부터 상업적으로 입수가능함)로 합성된다. 이러한 방법은, 예를 들어, A-A 디술피드 또는 C-A 디술피드 가교를 이용하고 다른 염기를 통한 연결이 또한 가능하다. 디술피드-변형된 폴리뉴클레오티드를 형성하기 위해, 전환가능한 뉴클레오시드를 함유하는 폴리뉴클레오티드는 시스타민 (또는 다른 디술피드-함유 아민)과 반응된다. 디술피드 가교를 형성하기 위해, 혼합된 디술피드 결합은 감소되고, 올리고뉴클레오티드는 정제되고, 가닥은 혼성화되고 화합물은 공기-산화되어 헤어핀 형태의 경우 가닥내 가교 또는 듀플렉스 형태의 경우 가닥간 가교를 형성한다. 대안적으로, 올리고뉴클레오티드는 먼저 혼성화되고 이어서 감소되고, 정제되고 공기-산화될 수 있다. 이러한 방법은 관련 기술분야에 기재되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Ferentz et al., J Am Chem Soc, 113:4000-4002, 1991, 및 Ferentz et al., J Am Chem Soc, 115:9006-9014, 1993] 참조).
폴리뉴클레오티드 및 변형된 폴리뉴클레오티드를 제조하는 기술은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 포스포디에스테르 연결을 함유하는 자연 발생 DNA 또는 RNA는 일반적으로 적절한 뉴클레오시드 포스포르아미다이트를 3'-말단에서 고체 지지체에 부착된 성장하는 올리고뉴클레오티드의 5'-히드록시 기에 순차적으로 커플링시킨 후, 중간체 포스파이트 트리에스테르의 포스페이트 트리에스테르로의 산화에 의해 합성된다. 일단 원하는 폴리뉴클레오티드 서열이 합성되면, 폴리뉴클레오티드는 지지체로부터 제거되고, 포스페이트 트리에스테르 기는 포스페이트 디에스테르로 탈보호되고 뉴클레오시드 염기는 수성 암모니아 또는 다른 염기를 사용하여 탈보호된다 (예를 들어, 문헌 [Beaucage "Oligodeoxyribonucleotide Synthesis" in Protocols for Oligonucleotides and Analogs, Synthesis and Properties (Agrawal, ed.) Humana Press, Totowa, NJ, 1993; Warner et al., DNA 3:401, 1984] 및 미국 특허 번호 4,458,066 참조).
CpG-C 올리고뉴클레오티드는 포스페이트-변형된 올리고뉴클레오티드를 함유할 수 있으며, 그의 일부는 올리고뉴클레오티드를 안정화시키는 것으로 공지되어 있다. 따라서, 일부 실시양태는 안정화된 CpG-C 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 변형된 포스페이트 연결 또는 비-포스페이트 연결을 함유하는 올리고뉴클레오티드의 합성은 또한 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Matteucci "Oligonucleotide Analogs: an Overview" in Oligonucleotides as Therapeutic Agents, (D.J. Chadwick and G. Cardew, ed.) John Wiley and Sons, New York, NY, 1997] 참조). 올리고뉴클레오티드에서 당 또는 당 유사체 모이어티에 부착될 수 있는 인 유도체 (또는 변형된 포스페이트 기)는, 모노포스페이트, 디포스페이트, 트리포스페이트, 알킬포스포네이트, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포르아미데이트 등일 수 있다. 상기-언급된 포스페이트 유사체의 제조 및 뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 및 올리고뉴클레오티드로의 그의 혼입은 이미 그 자체로 널리 기재되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Peyrottes et al., Nucleic Acids Res, 24:1841-1848, 1996; Chaturvedi et al., Nucleic Acids Res, 24:2318-2323, 1996; 및 Schultz et al., Nucleic Acids Res, 24:2966-2973, 1996] 참조). 예를 들어, 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드의 합성은 산화 단계가 황화 단계에 의해 대체된다는 것을 제외하고는 자연 발생 올리고뉴클레오티드에 대해 상기 기재된 것과 유사하다 (Zon "Oligonucleoside Phosphorothioates" in Protocols for Oligonucleotides and Analogs, Synthesis and Properties (Agrawal, ed.) Humana Press, pp. 165-190, 1993).
CpG-C 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 리보뉴클레오티드 (단독 또는 주요 당 성분으로서 리보스 함유), 데옥시리보뉴클레오티드 (주요 당 성분으로서 데옥시리보스 함유), 변형된 당 또는 당 유사체를 포함할 수 있다. 따라서, 리보스 및 데옥시리보스 이외에도, 당 모이어티는 펜토스, 데옥시펜토스, 헥소스, 데옥시헥소스, 글루코스, 아라비노스, 크실로스, 릭소스, 및 당 유사체 시클로펜틸 기일 수 있다. 당은 피라노실 또는 푸라노실 형태로 존재할 수 있다. CpG-C 올리고뉴클레오티드에서, 당 모이어티는 바람직하게는 리보스, 데옥시리보스, 아라비노스 또는 2'-O-알킬리보오스의 푸라노시드이고, 당은 각 헤테로시클릭 염기에 아노머 배위로 부착될 수 있다. 당 변형은 2'-알콕시-RNA 유사체, 2'-아미노-RNA 유사체, 2'-플루오로-DNA, 및 2'-알콕시- 또는 아미노-RNA/DNA 키메라를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, CpG-C 올리고뉴클레오티드에서의 당 변형은 2'-O-메틸-우리딘 및 2'-O-메틸-시티딘을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 이들 당 또는 당 유사체 및 이러한 당 또는 유사체가 그 자체로 헤테로시클릭 염기 (핵산 염기)에 부착되는 각 뉴클레오시드의 제조는 공지되어 있고, 따라서 여기서 기재될 필요는 없다. 당 변형은 또한 CpG-C 올리고뉴클레오티드의 제조에서 제조되고 임의의 포스페이트 변형과 조합될 수 있다.
CpG-C 올리고뉴클레오티드에 혼입된 헤테로시클릭 염기, 또는 핵산 염기는 자연 발생 주요 퓨린 및 피리미딘 염기 (즉 상기 언급된 바와 같은 우라실, 티민, 시토신, 아데닌 및 구아닌) 뿐만 아니라, 상기 주요 염기의 자연 발생 및 합성 변형일 수 있다. 따라서, CpG-C 올리고뉴클레오티드는 이노신, 2'-데옥시우리딘 및 2-아미노-2'-데옥시아데노신 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
"CBR" 또는 "임상 이익률"은 CR + PR + 지속적인 SD를 의미한다.
본원에 사용된 "CDR" 또는 "CDR들"은, 달리 나타내지 않는 한, 카바트 넘버링 시스템을 사용하여 정의된 이뮤노글로불린 가변 영역에서의 상보성 결정 영역(들)을 의미한다.
"화학요법제"는 암의 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학요법제의 부류는 다음을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: 알킬화제, 항대사물, 키나제 억제제, 방추체 독 식물 알칼로이드, 세포독성/항종양 항생제, 토포이소머라제 억제제, 광증감제, 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조정제 (SERM), 항-프로게스테론, 에스트로겐 수용체 하향-조절제 (ERD), 에스트로겐 수용체 길항제, 황체형성 호르몬-방출 호르몬 효능제, 항안드로겐, 아로마타제 억제제, EGFR 억제제, VEGF 억제제 및 비정상 세포 증식 또는 종양 성장에 연루된 유전자의 발현을 억제하는 안티센스 올리고뉴클레오티드. 본 발명의 치료 방법에 유용한 화학요법제는 세포증식억제제 및/또는 세포독성제를 포함한다.
본원에 사용된 "코티아"는 문헌 [Al-Lazikani et al., JMB 273: 927-948 (1997)]에 기재된 항체 넘버링 시스템을 의미한다.
"포함하는" 또는 변형 예컨대 "포함하다", "포함한다" 또는 "로 구성된다"는 언어 또는 필요한 함축을 표현하기 위해 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 포괄적인 의미로, 즉 언급된 특색의 존재를 명시하지만, 임의의 본 발명의 실시양태의 작용 또는 유용성을 실질적으로 증진시킬 수 있는 추가적인 특색의 존재 또는 추가를 배제하지 않도록 사용된다.
"보존적으로 변형된 변이체" 또는 "보존적 치환"은 단백질 내의 아미노산을, 유사한 특징 (예를 들어, 전하, 측쇄 크기, 소수성/친수성, 백본 입체형태 및 강성 등)을 갖는 다른 아미노산으로 치환하여, 단백질의 생물학적 활성 또는 다른 목적하는 특성, 예컨대 항원 친화도 및/또는 특이성을 변경시키지 않으면서 변화가 빈번하게 이루어질 수 있도록 하는 것을 지칭한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는, 일반적으로 폴리펩티드의 비-필수 영역 내 단일 아미노산 치환이 생물학적 활성을 실질적으로 변경시키지 않는다는 것을 인식한다 (예를 들어, 문헌 [Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Ed.)] 참조). 게다가, 구조적으로 또는 기능적으로 유사한 아미노산의 치환은 생물학적 활성을 방해할 가능성이 적다. 예시적인 보존적 치환은 하기 표 2에 제시된다.
표 2. 예시적인 보존적 아미노산 치환
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명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 사용된 "로 본질적으로 이루어진다", 및 변형 예컨대 "로 본질적으로 이루어지다" 또는 "로 본질적으로 이루어진"은 임의의 열거된 요소 또는 요소 군의 포함, 및 명시된 투여 요법, 방법, 또는 조성물의 기본 또는 신규 특성을 실질적으로 변화시키지 않는, 열거된 요소 이외의 유사한 또는 상이한 특성의 다른 요소의 임의적인 포함을 나타낸다. 비-제한적인 예로서, 열거된 아미노산 서열로 본질적으로 이루어진 항-IL-10 항체는 또한 결합 화합물의 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않는, 하나 이상의 아미노산 잔기의 치환을 포함하는, 하나 이상의 아미노산을 포함할 수 있다.
"DCR" 또는 "질환 제어율"은 CR + PR + SD를 의미한다.
"DSDR" 또는 "지속적인 안정 질환율"은 ≥ 23주 동안의 SD를 의미한다.
본원에 사용된 "프레임워크 영역" 또는 "FR"은 CDR 영역을 제외한 이뮤노글로불린 가변 영역을 의미한다.
본원에 사용된 "카바트"는 엘빈 에이. 카바트(Elvin A. Kabat)에 의해 개척된 이뮤노글로불린 정렬 및 넘버링 시스템을 의미한다 ((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.).
본원에 사용된 "모노클로날 항체" 또는 "mAb" 또는 "Mab"는, 실질적으로 동종인 항체의 집단을 지칭하고, 즉 집단을 포함하는 항체 분자는 미량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 아미노산 서열에서 동일하다. 대조적으로, 통상적인 (폴리클로날) 항체 제제는 전형적으로, 상이한 에피토프에 대해 종종 특이적인 그의 가변 도메인, 특히 그의 CDR에서 상이한 아미노산 서열을 갖는 다수의 상이한 항체를 포함한다. 수식어 "모노클로날"은 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 수득됨에 따른 항체의 특징을 나타내며, 임의의 특정한 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al. (1975) Nature 256: 495]에 최초로 기재된 하이브리도마 방법에 의해 만들어질 수 있거나 또는 재조합 DNA 방법에 의해 만들어질 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567 참조). "모노클로날 항체"는 또한, 예를 들어 문헌 [Clackson et al. (1991) Nature 352: 624-628 및 Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222: 581-597]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 또한 문헌 [Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731]을 참조한다.
"비-반응자 환자"는, 본원에 기재된 조합 요법으로의 치료에 대한 특정 항종양 반응을 지칭하는 경우, 환자가 항종양 반응을 나타내지 않았다는 것을 의미한다.
"ORR" 또는 "객관적 반응률"은 일부 실시양태에서 CR + PR을 지칭하고, ORR(제24주)은 본 발명의 조합으로의 치료 24주 후에 코호트에서 각각의 환자에서 irRECIST를 사용하여 측정된 CR 및 PR을 지칭한다.
"환자" 또는 "대상체"는 요법이 요구되거나 또는 임상 검정, 역학적 연구에 참여 중이거나 또는 대조군으로서 사용되는 임의의 단일 대상체를 지칭하며 인간 및 포유동물 수의학적 환자, 예컨대 소, 말, 개, 및 고양이를 포함한다.
"항-IL-10 항체"는 IL-10에 결합하여 IL-10의 활성을 억제하는 길항제 항체를 의미한다. IL-10에 대한 대체 명칭 또는 동의어는: 인터류킨-10, 시토카인 합성 억제제 인자 또는 CSIF를 포함한다. 인간 IL-10 아미노산 서열은 미국 특허 6217857에서 발견될 수 있다. 성숙 인간 IL-10 단백질의 아미노산 서열은
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이다.
본 발명의 임의의 치료 방법, 의약 및 용도에 유용한 항-IL-10 항체는, IL-10에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 (mAb) 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. mAb는 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체일 수 있고, 인간 불변 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 불변 영역으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직한 실시양태에서, 인간 불변 영역은 IgG1 또는 IgG4 불변 영역이다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 단편은 Fab, Fab'-SH, F(ab')2, scFv 및 Fv 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 치료 방법, 의약 및 용도의 일부 바람직한 실시양태에서, 항-IL-10 항체는 (a) 항-IL-10 hum12G8의 서열식별번호: 5, 6, 및 7의 경쇄 CDR 및 서열식별번호: 8, 9 및 10의 중쇄 CDR을 포함하는, 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 본 발명의 치료 방법, 의약 및 용도의 다른 바람직한 실시양태에서, 항-IL-10 항체는 (a) 항-IL-10 hum11D8의 서열식별번호: 31, 32 및 33의 경쇄 CDR 및 서열식별번호: 34, 35 및 36의 중쇄 CDR을 포함하는, 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다.
본 발명의 치료 방법, 의약 및 용도의 다른 바람직한 실시양태에서, 항-IL-10 항체는 인간 IL-10에 특이적으로 결합하고 (a) 서열식별번호: 11을 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 그의 변이체, 및 (b) 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 그의 변이체를 포함하는, 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 본 발명의 치료 방법, 의약 및 용도의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 항-IL-10 항체는 인간 IL-10에 특이적으로 결합하고 (a) 서열식별번호: 4를 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 그의 변이체, 및 (b) 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 그의 변이체를 포함하는, 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 중쇄 가변 영역 서열의 변이체는 프레임워크 영역 (즉, CDR의 외부)에 17개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖고, 바람직하게는 프레임워크 영역에 10, 9, 8, 7, 6 또는 5개 미만의 보존적 아미노산 치환을 갖는 것을 제외하고는 참조 서열과 동일하다. 경쇄 가변 영역 서열의 변이체는 프레임워크 영역 (즉, CDR의 외부)에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖고, 바람직하게는 프레임워크 영역에 4, 3 또는 2개 미만의 보존적 아미노산 치환을 갖는 것을 제외하고는 참조 서열과 동일하다.
하기 표 3은 본 발명의 치료 방법, 의약 및 용도에 사용하기 위한 예시적인 항-IL-10 mAb의 아미노산 서열의 목록을 제공하고, 서열은 도 1-2에 제시된다.
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본원에서 사용된 "항-IL-10 hum 12G8 변이체"는 경쇄 CDR 외부에 위치하는 위치에서의 3, 2 또는 1개의 보존적 아미노산 치환 및 중쇄 CDR 외부에 위치하는 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 보존적 아미노산 치환을 갖는 것을 제외하고는, 항-IL-10 hum 12G8에서의 것과 동일한 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하는 모노클로날 항체를 의미하고, 예를 들어, 변이체 위치는 FR 영역 또는 불변 영역 내에 위치한다. 다시 말해서, 항-IL-10 hum 12G8 및 항-IL-10 hum 12G8 변이체는 동일한 CDR 서열을 포함하지만, 각각 그의 전장 경쇄 및 중쇄 서열 내의 3 또는 6개 이하의 다른 위치에 보존적 아미노산 치환을 갖기 때문에 서로 상이하다. 항-IL-10 hum 12G8 변이체는 하기 특성과 관련하여 항-IL-10 hum 12G8과 실질적으로 동일하다: IL-10에 대한 결합 친화도 및 생체내 중화 효과.
본원에 사용된 "RECIST 1.1 반응 기준"은 적절하게는 반응이 측정되고 있는 맥락에 기초하여, 표적 병변 또는 비표적 병변에 대해 문헌 [Eisenhauer et al., E.A. et al., Eur. J Cancer 45:228-247 (2009)]에 제시된 정의를 의미한다.
"반응자 환자"는, 본원에 기재된 조합 요법으로의 치료에 대한 특정 항종양 반응을 지칭하는 경우, 환자가 항종양 반응을 나타내었다는 것을 의미한다.
"지속 반응"은 치료제 또는 본원에 기재된 조합 요법으로의 치료의 중지 후의 지속되는 치료 효과를 의미한다. 일부 실시양태에서, 지속 반응은 치료 지속기간과 적어도 동일하거나, 치료 지속기간보다 적어도 1.5, 2.0, 2.5 또는 3배 더 긴 지속기간을 갖는다.
"조직 절편"은 조직 샘플의 단일 부분 또는 조각, 예를 들어, 정상 조직의 또는 종양의 샘플로부터 절단된 얇은 조직 슬라이스를 지칭한다.
본원에 사용된 암을 "치료하다" 또는 "치료하는"은 암을 갖거나 또는 암으로 진단된 대상체에게 항-IL-10 항체 및 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드의 조합 요법을 투여하여, 적어도 하나의 양성 치료 효과, 예컨대 예를 들어, 감소된 암 세포 수, 감소된 종양 크기, 감소된 말초 기관 내로의 암 세포 침윤 속도, 또는 감소된 종양 전이 또는 종양 성장 속도를 달성하는 것을 의미한다. 암에서의 양성 치료 효과는 다수의 방식으로 측정될 수 있다 (문헌 [W. A. Weber, J. Nucl. Med. 50:1S-10S (2009)] 참조). 예를 들어, 종양 성장 억제와 관련하여, NCI 표준에 따르면 T/C ≤ 42%가 최소 수준의 항종양 활성이다. T/C < 10%는 높은 항종양 활성 수준으로 간주되며, T/C (%) = 치료된 것의 중앙 종양 부피/대조군의 중앙 종양 부피 x 100이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조합 요법에 대한 반응은 RECIST 1.1 기준 또는 irRC (2차원 또는 1차원)를 사용하여 평가되고 본 발명의 조합에 의해 달성된 치료는 PR, CR, OR, PFS, DFS 및 OS 중 임의의 것이다. "종양 진행까지의 시간"으로 또한 지칭되는 PFS는 치료 동안의 및 치료 후의 암이 성장하지 않는 시간의 길이를 나타내고, 환자가 CR 또는 PR을 경험한 시간의 양 뿐만 아니라, 환자가 SD를 경험한 시간의 양을 포함한다. DFS는 치료 동안의 및 치료 후의 환자가 질환없이 유지되는 시간의 길이를 지칭한다. OS는 나이브한 또는 치료받지 않은 개체 또는 환자와 비교하여 기대 수명에서의 연장을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 조합에 대한 반응은 RECIST 1.1 반응 기준을 사용하여 평가된 PR, CR, PFS, DFS, OR 또는 OS 중 임의의 것이다. 암 환자를 치료하는 데 효과적인, 본 발명의 조합에 대한 치료 요법은 환자의 질환 상태, 연령, 및 체중, 및 대상체에서 항암 반응을 도출하는 요법의 능력과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 본 발명의 임의의 측면 중 한 실시양태가 모든 대상체에서 양성 치료 효과를 달성하는 데 효과적이지 않을 수는 있으나, 관련 기술 분야에 공지된 임의의 통계적 검정 예컨대 스튜던트(Student's) t-검정, 카이(chi)2-검정, 만 앤드 휘트니((Mann and Whitney)에 따른 U-검정, 크루스칼-왈리스(Kruskal-Wallis) 검정 (H-검정), 존키어-테르프스트라(Jonckheere-Terpstra)-검정 및 윌콕슨(Wilcoxon)-검정에 의해 결정 시 통계적으로 유의한 수의 대상체에서 효과적이어야 한다.
용어 "치료 요법", "투여 프로토콜" 및 "투여 요법"은 상호교환가능하게 사용되며 본 발명의 조합에서의 각 치료제의 용량 및 투여 타이밍을 지칭한다.
암으로 진단되었거나 암을 갖는 것으로 추정되는 대상체에 적용된 바와 같은 "종양"은 임의의 크기의 악성이거나 잠재적으로 악성인 신생물 또는 조직 덩어리를 지칭하고, 원발성 종양 및 속발성 신생물을 포함한다. 고형 종양은 통상적으로 낭 또는 액체 영역을 함유하지 않는 조직의 비정상적 성장 또는 덩어리이다. 고형 종양의 상이한 유형은 이들을 형성하는 세포 유형에 대해 명명된다. 고형 종양의 예는 육종, 암종, 및 림프종이다. 백혈병 (혈액의 암)은 일반적으로 고형 종양을 형성하지 않는다 (National Cancer Institute, Dictionary of Cancer Terms).
"종양 부하"로 또한 지칭되는 "종양 부담"은, 신체 전반에 걸쳐 분포된 종양 물질의 총량을 지칭한다. 종양 부담은 림프절 및 골수를 포함하여, 신체 전반에 걸친, 암 세포의 총 수 또는 종양(들)의 총 크기를 지칭한다. 종양 부담은 관련 기술분야에 공지된 다양한 방법, 예컨대, 예를 들어 대상체로부터 분리 시, 예를 들어, 캘리퍼를 사용하여, 또는 신체 내에 있는 경우 영상화 기술, 예를 들어 초음파, 골 스캔, 컴퓨터 단층촬영 (CT) 또는 자기 공명 영상화 (MRI) 스캔을 사용하여 종양(들)의 치수를 측정하는 것에 의해 결정될 수 있다.
용어 "종양 크기"는 종양의 길이 및 폭으로서 측정될 수 있는 종양의 총 크기를 지칭한다. 종양 크기는 관련 기술분야에 공지된 다양한 방법, 예컨대, 예를 들어 대상체로부터의 분리 시, 예를 들어 캘리퍼를 사용하여, 또는 신체 내에 있는 동안 영상화 기술, 예를 들어 골 스캔, 초음파, CT 또는 MRI 스캔을 사용하여 종양(들)의 치수를 측정하는 것에 의해 결정될 수 있다.
"1차원 irRC"는 문헌 [Nishino M, Giobbie-Hurder A, Gargano M, Suda M, Ramaiya NH, Hodi FS. Developing a Common Language for Tumor Response to Immunotherapy: Immune-related Response Criteria using Unidimensional measurements. Clin Cancer Res. 2013;19(14):3936-3943]에 기재된 기준 세트를 지칭한다. 이들 기준은 각 병변의 가장 긴 직경 (cm)을 이용한다.
본원에 사용된 "가변 영역" 또는 "V 영역"은 상이한 항체 사이에 서열에서 가변적인 IgG 쇄의 절편을 의미한다. 이는 경쇄에서 카바트 잔기 109 및 중쇄에서 113까지 연장된다.
임의의 IL-10 항체가 본 발명의 조합에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 사용될 항-IL-10 항체는 US 8,226,947 및 US 7,662,379에 기재된 것이며, 그의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 또 다른 실시양태에서, 항-IL-10 항체는 서열식별번호: 2의 서열을 갖는 2개의 동일한 경쇄 및 서열식별번호: 1의 서열을 갖는 2개의 동일한 중쇄를 포함하는, 항-IL-10 hum12G8이다. hum12G8의 중쇄 및 경쇄 둘 다를 코딩하는 핵산을 함유하는 플라스미드는, 각각 PTA-5922 및 PTA-5923으로서, 2004년 5월 6일에 ATCC에 기탁되었다. 추가 실시양태에서, 항-IL-10 항체는 미국 특허 공개 번호 US2012/0321617에 기재된 것들 (인간화 hVH20/hVL7, hVH20/hVL8, hVH26/hVL7 및 키메라 cB-N10)이다.
II. 방법, 용도 및 의약
본 발명의 한 측면에서, 본 발명은 항-IL-10 항체 및 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조합 요법을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
조합 요법은 또한 1종 이상의 추가의 치료제를 포함할 수 있다. 추가의 치료제는, 예를 들어, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드 이외의 화학요법제, 생물요법제, 면역요법제, 면역원성 작용제 (예를 들어, 약독화된 암성 세포, 종양 항원, 종양 제시 세포 예컨대 종양 유래 항원 또는 핵산으로 펄스된 수지상 세포, 면역 자극 시토카인 (예를 들어, IL-2, IFNα2, GM-CSF), 면역 자극 시토카인 예컨대 비제한적으로 GM-CSF를 코딩하는 유전자로 형질감염된 세포), 및 방사선일 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역요법제는 시토카인, 소분자 아주반트, 및 항체 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 시토카인은 케모카인, 인터페론, 인터류킨, 림포카인, 및 종양 괴사 인자 중 하나 이상을 포함한다. 추가의 치료제의 특정 투여량 및 투여 스케줄은 추가로 달라질 수 있고, 최적 용량, 투여 스케줄 및 투여 경로는 사용되고 있는 특정한 치료제에 기초하여 결정될 것이다.
화학요법제의 예는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 시클로포스파미드; 알킬 술포네이트 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸라멜라민; 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 두오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CBI-TMI 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴; 항생제 예컨대 에네디인 항생제 (예를 들어, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 phiI1, 예를 들어, 문헌 [Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186 (1994)] 참조; 디네미신 A를 포함하는 디네미신; 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색소단백질 에네디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신 (모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 폴산 유사체 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항부신제 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 폴산 보충제 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 메이탄시노이드 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; 라족산; 리족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히 T-2 독소, 베라큐린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어 파클리탁셀 및 도세탁셀; 클로람부실; 겜시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체 예컨대 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드 예컨대 레티노산; 카페시타빈; 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다. 또한, 종양 상의 호르몬 작용을 조절하거나 또는 억제하는 작용을 하는 항호르몬제, 예컨대, 예를 들어, 타목시펜, 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 토레미펜 (파레스톤)을 포함하는 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조정제 (SERM); 부신에서 에스트로겐 생산을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제, 예컨대, 예를 들어, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메게스트롤 아세테이트, 엑세메스탄, 포르메스탄, 파드로졸, 보로졸, 레트로졸, 및 아나스트로졸; 및 항안드로겐 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드, 및 고세렐린; 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체가 포함된다.
본 발명의 조합 요법의 각 치료제는 단독으로 또는 치료제 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 부형제 및 희석제를 포함하는 의약 (본원에서 제약 조성물로도 지칭됨)으로 표준 제약 실시에 따라 투여될 수 있다.
본 발명의 조합 요법의 각 치료제는 동시에 (즉, 동일한 의약으로), 공동으로 (즉, 임의의 순서로 하나의 투여 직후에 다른 것이 투여되는 개별 의약으로) 또는 임의의 순서로 순차적으로 투여될 수 있다. 조합 요법의 치료제가 상이한 투여 형태 (하나의 작용제는 정제 또는 캡슐이고 또 다른 작용제는 멸균 액체임)이고/거나 상이한 투여 스케줄로 투여되는 경우, 예를 들어 적어도 매일 투여되는 화학요법제 및 덜 빈번하게, 예컨대 매주 1회, 2주마다 1회 또는 3주마다 1회 투여되는 생물요법제인 경우, 순차적 투여가 특히 유용하다.
일부 실시양태에서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 항-IL-10 항체의 투여 전에 투여되는 반면, 다른 실시양태에서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 항-IL-10 항체의 투여 후에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 항-IL-10 항체와 공동으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 종양내로 또는 정맥내로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 항-IL-10 항체는 종양내로 또는 정맥내로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 종양내로 투여되고 항-IL-10 항체는 정맥내로 투여된다.
일부 실시양태에서, 조합 요법의 치료제 중 적어도 1종이 작용제가 동일한 암을 치료하기 위한 단독요법으로서 사용되는 경우에 전형적으로 사용되는 동일한 투여 요법 (용량, 빈도 및 치료 지속기간)을 사용하여 투여된다. 다른 실시양태에서, 환자는 조합 요법의 치료제 중 적어도 1종을, 작용제가 단독요법으로 사용되는 경우보다 낮은 총량, 예를 들어 더 적은 용량, 덜 빈번한 투여, 및/또는 더 짧은 치료 지속기간으로 받는다.
본 발명의 조합 요법의 각 소분자 치료제는 경구로, 또는 정맥내, 근육내, 복강내, 피하, 직장, 국소 및 경피 투여 경로를 포함하여 비경구로 투여될 수 있다.
본 발명의 조합 요법은 종양을 제거하기 위한 수술 전에 또는 그 후에 사용될 수 있고, 방사선 요법 전에, 그 동안 또는 그 후에 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 조합 요법은 생물요법제 또는 화학요법제로 이전에 치료받은 적이 없는, 즉 치료-나이브인 환자에게 투여된다. 다른 실시양태에서, 조합 요법은 생물요법제 또는 화학요법제로의 선행 요법 후 지속 반응을 달성하는 데 실패한, 즉 치료-경험이 있는 환자에게 투여된다.
본 발명의 조합 요법은 전형적으로 촉진에 의해 또는 관련 기술분야에 널리 공지된 영상화 기술, 예컨대 MRI, 초음파 또는 CAT 스캔에 의해 발견되기에 충분히 큰 종양을 치료하는 데 사용된다.
본 발명의 조합 요법을 위한 투여(dosage) 요법 (본원에서 또한 투여(administration) 요법으로 지칭됨)을 선택하는 것은 엔티티의 혈청 또는 조직 회전율, 증상의 수준, 엔티티의 면역원성, 및 치료될 개체에서의 표적 세포, 조직 또는 기관의 접근성을 포함하는 여러 인자들에 따라 달라진다. 바람직하게는, 투여 요법은 환자에게 전달되는 각 치료제의 양을 허용가능한 수준의 부작용에 부합하여 최대화한다. 따라서, 조합물의 각 생물요법제 및 화학요법제의 용량 양 및 투여 빈도는 부분적으로 특정 치료제, 치료될 암의 중증도, 및 환자 특징에 따라 달라진다. 항체, 시토카인, 및 소분자의 적절한 용량을 선택하는 것에 대한 안내가 이용가능하다. 예를 들어, 문헌 [Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:601-608; Milgrom et al. (1999) New Engl. J. Med. 341:1966-1973; Slamon et al. (2001) New Engl. J. Med. 344:783-792; Beniaminovitz et al. (2000) New Engl. J. Med. 342:613-619; Ghosh et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:24-32; Lipsky et al. (2000) New Engl. J. Med. 343:1594-1602; Physicians' Desk Reference 2003 (Physicians' Desk Reference, 57th Ed); Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57th edition (November 2002)]을 참조한다. 적절한 투여 요법의 결정은, 예를 들어, 치료에 영향을 주는 것으로 관련 기술분야에 공지되었거나 의심되는, 또는 치료에 영향을 줄 것으로 예상되는 파라미터 또는 인자를 사용하여 임상의에 의해 이루어질 수 있고, 예를 들어 환자의 임상 병력 (예를 들어, 선행 요법), 치료될 암의 유형 및 병기 및 조합 요법의 치료제 중 1종 이상에 대한 반응의 바이오마커에 따라 달라질 것이다.
본 발명의 조합 요법의 생물요법제는 연속 주입에 의해, 또는 예를 들어, 매일, 격일, 1주마다 3회, 또는 1주, 2주, 3주, 1개월, 2개월마다 1회 등의 간격으로의 투여에 의해 투여될 수 있다. 매주 총 용량은 일반적으로 적어도 0.05 μg/kg, 0.2 μg/kg, 0.5 μg/kg, 1 μg/kg, 10 μg/kg, 100 μg/kg, 0.2 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 10 mg/kg, 25 mg/kg, 50 mg/kg 체중 또는 그 초과이다. 예를 들어, 문헌 [Yang et al. (2003) New Engl. J. Med. 349:427-434; Herold et al. (2002) New Engl. J. Med. 346:1692-1698; Liu et al. (1999) J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67:451-456; Portielji et al. (20003) Cancer Immunol. Immunother. 52:133-144]을 참조한다.
본 발명의 한 실시양태에서, 조합 요법의 항-IL-10 항체는 항-IL-10 hum 12G8이며, 이는 1 mg/kg Q3W, 2 mg/kg Q3W, 3 mg/kg Q3W, 4 mg/kg Q3W, 5 mg/kg Q3W, 6 mg/kg Q3W, 7 mg/kg Q3W, 8 mg/kg Q3W, 9 mg/kg Q3W, 10 mg/kg Q3W, 11 mg/kg Q3W, 12 mg/kg Q3W, 13 mg/kg Q3W, 14 mg/kg Q3W 및 15 mg/kg Q3W로 이루어진 군으로부터 선택된 용량으로 정맥내로 투여된다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, 조합 요법의 항-IL-10 항체는 항-IL-10 hum 12G8이며, 이는 1 mg/kg Q3W의 용량으로 정맥내로 투여된다. 본 발명의 추가 실시양태에서, 조합 요법의 항-IL-10 항체는 항-IL-10 hum 12G8이며, 이는 3 mg/kg Q3W의 용량으로 정맥내로 투여된다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, 조합 요법의 항-IL-10 항체는 항-IL-10 hum 12G8이며, 이는 10 mg/kg Q3W의 용량으로 정맥내로 투여된다. 본 발명의 다른 실시양태에서, 조합 요법의 항-IL-10 항체는 항-IL-10 hum 12G8이며, 이는 제1일에 70 mg, 210 mg 또는 700 mg Q3W의 용량으로, 임의로 7회의 추가의 투여 동안 정맥내로 투여된다.
본 발명의 바람직한 실시양태에서, 조합 요법의 항-IL-10 항체는 항-IL-10 hum 12G8 또는 항-IL-10 hum 12G8 변이체이며, 이는 1 mg/kg Q3W, 2 mg/kg Q3W, 3 mg/kg Q3W, 4 mg/kg Q3W, 5 mg/kg Q3W, 6 mg/kg Q3W, 7 mg/kg Q3W, 8 mg/kg Q3W, 9 mg/kg Q3W, 10 mg/kg Q3W, 11 mg/kg Q3W, 12 mg/kg Q3W, 13 mg/kg Q3W, 14 mg/kg Q3W 및 15 mg/kg Q3W로 이루어진 군으로부터 선택된 용량으로 액체 의약으로 투여된다.
본 발명의 한 실시양태에서, 조합 요법의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 서열식별번호: 20의 올리고뉴클레오티드이며, 이는 0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0 또는 16.0 mg으로 이루어진 군으로부터 선택된, 또는 0.1-16 mg의 용량으로 종양내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 매주 2회, 매주 1회, 격주, 3주마다 1회, 1개월 1회, 또는 격월로 투여된다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0 또는 16.0 mg으로 이루어진 군으로부터 선택된, 또는 0.1-16 mg의 용량으로 4회 동안 매주 종양내로 투여된다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0 또는 16.0 mg으로 이루어진 군으로부터 선택된 용량으로 제1일 및 제8일 또는 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 종양내로 투여된다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 2.0, 4.0 또는 8.0 mg으로 이루어진 군으로부터 선택된 용량으로 제1일, 제8일, 제15일, 제22일, 제43일, 제50일, 제57일 및 제64일에 종양내로 투여된다. 본 발명의 다른 실시양태에서, 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 1.0 또는 4.0 mg의 용량으로 제1일, 제8일, 제15일, 제22일에, 이어서 임의로 6회의 추가의 투여 동안 Q3W 종양내로 투여된다.
CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는, 항-IL-10 항체의 효과와 함께 암을 치료하는 데 효과적인 용량을 달성하는 임의의 용량 및 투여 스케줄에 따라 투여될 수 있다. CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드와의 조합에서의 항-IL-10 항체의 최적 용량은 이들 작용제 중 하나 또는 둘 다의 용량 증량 또는 용량 감량에 의해 확인될 수 있다. 한 실시양태에서, 조합 요법은 3주마다 1회 항-IL-10 hum 12G8의 1-10 mg/kg 정맥내 주입 및 매주 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드의 1-16 mg의 종양내 투여를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조합 요법은 3주마다 1회 항-IL-10 hum 12G8의 1 또는 3 mg/kg 정맥내 주입 및 매주 그의 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드의 2, 4 또는 8 mg의 종양내 투여를 포함한다. 추가 실시양태에서, 조합 요법은 3주마다 1회 항-IL-10 hum 12G8의 10 mg/kg 정맥내 주입 및 매주 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드의 2, 4 또는 8 mg의 종양내 투여를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조합 요법은 3주마다 제1일에 항-IL-10 hum 12G8의 1, 3 또는 10 mg/kg 정맥내 주입 및 제1일, 제8일, 제15일, 제22일, 제43일, 제50일, 제57일 및 제64일에 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드의 4 mg의 종양내 투여를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조합 요법은 3주마다 제1일에 항-IL-10 hum 12G8의 1, 3 또는 10 mg/kg 정맥내 주입 및 4주 동안 매주에 이어 3주마다 제1일에 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드의 4 mg의 종양내 투여를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조합 요법은 3주마다 제1일에 항-IL-10 hum 12G8의 1, 3 또는 10 mg/kg 정맥내 주입 및 4주 동안 매주에 이어 3주 휴식 후 이어서 매주 제1일에 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드의 4 mg의 종양내 투여를 포함한다. 또 다른 추가 실시양태에서, 조합 요법은 적어도 4 또는 8회의 사이클 동안 3주마다 제1일에 항-IL-10 hum 12G8의 1, 3 또는 10 mg/kg 정맥내 주입 및 제1일, 제8일, 제15일, 제22일, 제43일, 제50일, 제57일 및 제64일에 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드의 4 mg의 종양내 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 환자는 적어도 12주, 24주, 예를 들어 8회의 3-주 사이클 동안 조합 요법으로 치료된다. 다른 실시양태에서, 환자는 10, 11 또는 12회 용량의 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드로 치료된다. 일부 실시양태에서, 조합 요법으로의 치료는 환자가 PD 또는 CR의 증거를 나타낼 때까지 계속된다. 바람직한 실시양태에서, 조합 요법의 항-IL-10 항체는 항-IL-10 hum 12G8이며, 이는 제1일에 70 mg, 210 mg 또는 700 mg의 용량으로 7회의 추가의 투여 동안 Q3W 정맥내로 투여되고 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 1.0 또는 4.0 mg의 용량으로 제1일, 제8일, 제15일, 제22일에 이어서 6회의 추가의 투여 동안 Q3W 종양내로 투여된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 조합 요법의 항-IL-10 항체는 항-IL-10 hum 12G8이며, 이는 제1일에 210 mg 또는 700 mg의 용량으로 Q3W 정맥내로 투여되고 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 1.0 또는 4.0 mg의 용량으로 제1일, 제8일, 제15일, 제22일에 이어 Q3W 종양내로 투여된다. 상기 실시양태의 바람직한 측면에서, 항-IL-10 hum 12G8이 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드와 동일한 날에 투여되는 경우, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가 먼저 투여된다. 상기 실시양태의 바람직한 측면에서, 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 올리고데옥시뉴클레오티드이고, 포스포티오에이트 백본을 갖는다. 상기 실시양태의 추가의 바람직한 측면에서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 포스포티오에이트 백본을 갖는 올리고데옥시뉴클레오티드인 서열식별번호: 20의 나트륨 염이다.
본 발명은 또한 상기 기재된 바와 같은 항-IL-10 항체 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 의약을 제공한다. 항-IL-10 항체가 생물요법제, 예를 들어 mAb인 경우, 항체는 통상적인 세포 배양 및 회수/정제 기술을 사용하여 CHO 세포에서 생산될 수 있다. 항-IL-10 항체는 완충제 중에서 동결건조되고 정맥내 주사를 위해 재구성될 수 있다. 본 발명은 또한 TLR9 효능제 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 의약을 제공하며, 여기서 TLR9 효능제는 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드이다. CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 종양내 주사를 위해 생리학적 완충제 중에서 재구성될 수 있다.
본원에 기재된 의약은 제1 용기 및 제2 용기 및 패키지 삽입물을 포함하는 키트로서 제공될 수 있다. 제1 용기는 항-IL-10 항체를 포함하는 의약의 적어도 1회 용량을 함유하고, 제2 용기는 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드를 포함하는 의약의 적어도 1회 용량을 함유하고, 패키지 삽입물 또는 라벨은 의약을 사용하여 암에 대해 환자를 치료하기 위한 지침서를 포함한다. 제1 및 제2 용기는 동일하거나 또는 상이한 형상 (예를 들어, 바이알, 시린지 및 병) 및/또는 물질 (예를 들어, 플라스틱 또는 유리)로 구성될 수 있다. 키트는 의약을 투여하는 데 유용할 수 있는 다른 물질, 예컨대 희석제, 필터, IV 백 및 라인, 바늘 및 시린지를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 치료 방법, 의약 및 용도의 일부 실시양태에서, 개체는 인간이고 암은 고형 종양이고, 일부 실시양태에서, 고형 종양은 방광암, 유방암, 투명 세포 신장암, 두경부의 편평 세포 암종, 폐 편평 세포 암종, 악성 흑색종, 비소세포 폐암 (NSCLC), 난소암, 췌장암, 전립선암, 신세포암 (RCC), 소세포 폐암 (SCLC) 또는 삼중 음성 유방암이다. 일부 실시양태에서, 암은 NSCLC, 자궁내막암, 요로상피암, 두경부의 편평 세포 암종 또는 흑색종이다.
본 발명의 상기 치료 방법, 의약 및 용도의 다른 실시양태에서, 개체는 인간이고 암은 헴 악성종양이고, 일부 실시양태에서, 헴 악성종양은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL), EBV-양성 DLBCL, 원발성 종격 대 B-세포 림프종, T-세포/조직구-풍부 대 B-세포 림프종, 여포성 림프종, 호지킨 림프종 (HL), 외투 세포 림프종 (MCL), 다발성 골수종 (MM), 골수 세포 백혈병-1 단백질 (Mcl-1), 골수이형성 증후군 (MDS), 피부 T-세포 림프종, 비-호지킨 림프종 (NHL), 또는 소림프구성 림프종 (SLL)이다.
상기 치료 방법, 의약 및 용도의 한 실시양태에서, 개체는 인간이고, 암은 흑색종, 경부의 편평 세포암, 유방암 및 비-호지킨 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 암은 전이성 또는 절제불가능한 흑색종, 경부의 진행성 편평 세포암, 피부 전이를 갖는 유방암, 또는 무통성 비-호지킨 림프종이다. 추가 실시양태에서, 환자는 항-PD1 요법에 실패한 전이성 또는 절제불가능한 흑색종, 방사선 후 진행된 경부의 진행성 편평 세포암, 피부 전이를 갖는 유방암, 적어도 하나의 선행 요법에 실패한 무통성 비-호지킨 림프종을 갖는다. 또 다른 추가 실시양태에서, 암은 흑색종, 두경부암, 유방암 및 B-세포 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 치료 방법, 의약 및 용도의 한 실시양태에서, 개체는 인간이고, 암은 신세포 암종, 비소세포 폐암, 방광암 및 결장직장암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
하기에 열거되는 예시적인 구체적 실시양태를 포함하는 본 발명의 이들 및 다른 측면은 본원에 함유된 교시로부터 명백할 것이다.
본 발명의 예시적인 구체적 실시양태
1. 항-IL-10 항체 또는 그의 항원-결합 단편 및 TLR9 효능제를 포함하는 조합 요법을 개체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 TLR9 효능제는 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드인, 개체에서 암을 치료하는 방법.
2. 실시양태 1에 있어서, 항-IL-10 항체가 모노클로날 항체인 방법.
3. 개체에서 암을 치료하기 위한, TLR9 효능제와 조합하여 사용하기 위한 항-IL-10 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 의약이며, 여기서 항-IL-10 항체는 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편이고 TLR9 효능제는 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드인 의약.
4. 개체에서 암을 치료하기 위한, 항-IL-10 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 조합하여 사용하기 위한 TLR9 효능제를 포함하는 의약이며, 여기서 TLR9 효능제는 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드인 의약.
5. 실시양태 3 또는 4에 있어서, 제약상 허용되는 부형제를 추가로 포함하는 의약.
6. TLR9 효능제와 조합하여 투여되는 경우 개체에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 항-IL-10 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 용도이며, 여기서 TLR9 효능제는 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드인 용도.
7. 항-IL-10 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 조합하여 투여되는 경우 개체에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 TLR9 효능제의 용도이며, 여기서 TLR9 효능제는 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드인 용도.
8. 개체에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 항-IL-10 항체 또는 그의 항원-결합 단편 및 TLR9 효능제의 용도이며, 여기서 TLR9 효능제는 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드인 용도.
9. 제1 용기, 제2 용기 및 패키지 삽입물을 포함하며, 여기서 제1 용기는 항-IL-10 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 의약의 적어도 1회 용량을 포함하고, 제2 용기는 TLR9 효능제를 포함하는 의약의 적어도 1회 용량을 포함하고, 패키지 삽입물은 의약을 사용하여 암에 대해 개체를 치료하기 위한 지침서를 포함하고, 여기서 TLR9 효능제는 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드인 키트.
10. 실시양태 1 내지 9 중 어느 한 실시양태에 있어서, 항-IL-10 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 서열식별번호: 11 및 서열식별번호: 12의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
11. 실시양태 1 내지 9 중 어느 한 실시양태에 있어서, 항-IL-10 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 (a) 서열식별번호: 5, 6 및 7의 경쇄 CDR 및 서열식별번호: 8, 9 및 10의 중쇄 CDR을 포함하는 것인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
12. 실시양태 1 내지 9 중 어느 한 실시양태에 있어서, 항-IL-10 항체가 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항-IL-10 모노클로날 항체이고, 여기서 중쇄는 서열식별번호: 1을 포함하고 경쇄는 서열식별번호: 2를 포함하는 것인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
13. 실시양태 1 내지 9 중 어느 한 실시양태에 있어서, 항-IL-10 항체가 항-IL-10 hum 12G8 또는 항-IL-10 hum 12G8 변이체인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
14. 실시양태 1 내지 9 중 어느 한 실시양태에 있어서, 항-IL-10 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 (a) 서열식별번호: 31, 32 및 33의 경쇄 CDR 및 서열식별번호: 34, 35 및 36의 중쇄 CDR을 포함하는 것인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
15. 실시양태 1 내지 9 중 어느 한 실시양태에 있어서, 항-IL-10 항체가 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항-IL-10 모노클로날 항체이고, 여기서 중쇄는 서열식별번호: 29를 포함하고 경쇄는 서열식별번호: 30을 포함하는 것인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
16. 실시양태 1 내지 9 중 어느 한 실시양태에 있어서, 항-IL-10 항체가 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL-10 모노클로날 항체이고, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 4를 포함하고 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 3을 포함하는 것인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
17. 실시양태 1 내지 16 중 어느 한 실시양태에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가
(a) N이 뉴클레오시드이고, x = 0, 1, 2 또는 3이고, y = 1, 2, 3 또는 4이고, w = 0, 1 또는 2이고, p= 0 또는 1이고, q = 0, 1 또는 2이고, v= 0 내지 89이고 z = 1 내지 20이고, X1 및 X1'가 자기-상보적 뉴클레오시드이고, X2 및 X2'가 자기-상보적 뉴클레오시드인 5'-Nx(TCG(Nq))yNw(X1X2CGX2'X1'(CG)p)z,Nv (서열식별번호: 13); 및
(b) 적어도 8개 염기 길이인 회문식 서열이며, (X1X2CGX2'X1'(CG)p)z 서열의 처음 (X1X2CGX2'X1')을 포함하는 회문식 서열
로 이루어지고, 여기서 올리고뉴클레오티드는 12 내지 100개 염기 길이인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
18. 실시양태 17에 있어서, x = 0이고, y = 1이고, w = 0이고, p= 0 또는 1이고, q = 0, 1 또는 2이고, v=0 내지 20이고 z = 1, 2, 3 또는 4인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
19. 실시양태 1 내지 16 중 어느 한 실시양태에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가 TCGNq(X1X2CGX2'X1'CG)zNv (서열식별번호: 14)로 이루어지며, 여기서 N은 뉴클레오시드이고, q = 0, 1, 2, 3, 4 또는 5이고, v=0 내지 20이고, z= 1 내지 4이고, X1 및 X1'는 자기-상보적 뉴클레오시드이고, X2 및 X2'는 자기-상보적 뉴클레오시드이고, 올리고뉴클레오티드는 적어도 12개 염기 길이인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
20. 실시양태 1 내지 16 중 어느 한 실시양태에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가 5'-TCGNqTTCGAACGTTCGAACGTTNs-3' (서열식별번호: 15)로 이루어지며, 여기서 N은 뉴클레오시드이고, q = 0, 1, 2, 3, 4 또는 5이고, s = 0 내지 20이고, 올리고뉴클레오티드는 적어도 12개 염기 길이인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
21. 실시양태 1 내지 16 중 어느 한 실시양태에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가
Figure pct00007
로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
22. 실시양태 1 내지 16 중 어느 한 실시양태에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가 5'-TCGAACGTTCGAACGTTCGAACGTTCGAAT-3' (서열식별번호: 20)로 이루어진 서열을 갖는 것인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
23. 실시양태 1 내지 9 중 어느 한 실시양태에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가 5'-TCGTTCGAACGTTCGAACGTTCGAA-3' (서열식별번호: 17)로 이루어진 서열을 갖는 것인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
24. 실시양태 1 내지 9 중 어느 한 실시양태에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가 서열식별번호: 17의 서열을 갖는 나트륨 염이고, 올리고뉴클레오티드가 포스포로티오에이트 백본을 갖는 올리고데옥시뉴클레오티드인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
25. 실시양태 1 내지 9 중 어느 한 실시양태에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가 서열식별번호: 17의 서열을 갖는 나트륨 염이고, 올리고뉴클레오티드가 포스포로티오에이트 백본을 갖는 올리고데옥시뉴클레오티드인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
26. 암으로 진단된 인간 개체에게 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드를 매주 1 내지 16 mg의 용량으로 종양내로, 및 항-IL-10 hum 12G8을 3주마다 1회 1 내지 10 mg/kg의 용량으로 정맥내로 투여하는 것, 바람직하게는 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드를 매주 1, 2, 4, 8 또는 16 mg의 용량으로 종양내로, 및 항-IL-10 hum 12G8을 3주마다 1회 1, 3 또는 10 mg/kg의 용량으로 정맥내로 투여하는 것을 포함하는, 암으로 진단된 인간 개체를 치료하는 방법.
27. 인간 개체에서 암을 치료하기 위한, 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드와 조합하여 사용하기 위한 항-IL-10 hum 12G8을 포함하는 의약이며, 여기서 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 개체에게 매주 1 내지 16 mg의 용량으로 종양내로 투여되고, 항-IL-10 hum 12G8은 3주마다 1회 1 내지 10 mg/kg의 용량으로 정맥내로 투여되고, 바람직하게는 여기서 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 개체에게 매주 1, 2, 4, 8 또는 16 mg의 용량으로 종양내로 투여되고, 항-IL-10 hum 12G8은 3주마다 1회 1, 3 또는 10 mg/kg의 용량으로 정맥내로 투여되는 것인 의약.
28. 인간 개체에서 암을 치료하기 위한, 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드와 조합하여 사용하기 위한 항-IL-10 hum 12G8을 포함하는 의약이며, 여기서 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 개체에게 4주 동안 매주에 이어 3주마다 1회 1 내지 16 mg의 용량으로 종양내로 투여되고, 항-IL-10 hum 12G8은 3주마다 1회 1 내지 10 mg/kg의 용량으로 정맥내로 투여되는 것인 의약.
29. 인간 개체에서 암을 치료하기 위한, 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드와 조합하여 사용하기 위한 항-IL-10 hum 12G8을 포함하는 의약이며, 여기서 항-IL-10 hum 12G8은 제1일에 70 mg, 210 mg 또는 700 mg의 용량으로 Q3W 정맥내로 투여되고, 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드는 제1일, 제8일, 제15일, 제22일에 이어서 Q3W 1.0 또는 4.0 mg의 용량으로 종양내로 투여되는 것인 의약.
30. 실시양태 1 내지 29 중 어느 한 실시양태에 있어서, 암이 고형 종양인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
31. 실시양태 1 내지 29 중 어느 한 실시양태에 있어서, 암이 방광암, 유방암, 투명 세포 신장암, 두/경부 편평 세포 암종, 폐 편평 세포 암종, 악성 흑색종, 비소세포 폐암 (NSCLC), 난소암, 췌장암, 전립선암, 신세포암, 소세포 폐암 (SCLC) 또는 삼중 음성 유방암인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
32. 실시양태 1 내지 29 중 어느 한 실시양태에 있어서, 암이 NSCLC, RCC, 자궁내막암, 요로상피암, 두경부의 편평 세포 암종 또는 흑색종인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
33. 실시양태 1 내지 29 중 어느 한 실시양태에 있어서, 암이 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종, 호지킨 림프종 (HL), 외투 세포 림프종 (MCL), 다발성 골수종 (MM), 골수 세포 백혈병-1 단백질 (Mcl-1), 골수이형성 증후군 (MDS), 비-호지킨 림프종 (NHL), 피부 T- 세포 림프종, 또는 소림프구성 림프종 (SLL)인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
34. 실시양태 1 내지 29 중 어느 한 실시양태에 있어서, 암이 흑색종, 두경부의 편평 세포암, 유방암 또는 B-세포 림프종인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
35. 실시양태 1 내지 29 중 어느 한 실시양태에 있어서, 암이 전이성 또는 절제불가능한 흑색종, 경부의 진행성 편평 세포암, 피부 전이를 갖는 유방암, 또는 무통성 비-호지킨 림프종인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
36. 실시양태 1 내지 29 중 어느 한 실시양태에 있어서, 암이 항-PD1 또는 항-CTLA-4 요법에 실패한 전이성 또는 절제불가능한 흑색종, 방사선 후 진행된 경부의 편평 세포암, 피부 전이를 갖는 유방암, 적어도 하나의 선행 요법에 실패한 무통성 비-호지킨 림프종인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
37. 실시양태 1 내지 29 중 어느 한 실시양태에 있어서, 암이 신세포 암종, 비소세포 폐암, 방광암 및 결장직장암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
38. 실시양태 1 내지 16 및 26 내지 37 중 어느 한 실시양태에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가 서열식별번호: 20의 서열을 갖는 나트륨 염이고, 올리고뉴클레오티드가 포스포로티오에이트 백본을 갖는 올리고데옥시뉴클레오티드인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
39. 실시양태 1 내지 16 및 26 내지 37 중 어느 한 실시양태에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가 서열식별번호: 20의 서열이고, 올리고뉴클레오티드가 포스포로티오에이트 백본을 갖는 올리고데옥시뉴클레오티드인 방법, 의약, 용도 또는 키트.
일반적 방법
분자 생물학의 표준 방법은 문헌 [Sambrook, Fritsch and Maniatis (1982 & 1989 2nd Edition, 2001 3rd Edition) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA)]에 기재되어 있다. 표준 방법은 또한 박테리아 세포에서의 클로닝 및 DNA 돌연변이유발 (Vol. 1), 포유동물 세포 및 효모에서의 클로닝 (Vol. 2), 당접합체 및 단백질 발현 (Vol. 3), 및 생물정보학 (Vol. 4)을 기재하는 문헌 [Ausbel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols. 1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY]에 나타난다.
면역침전, 크로마토그래피, 전기영동, 원심분리, 및 결정화를 포함하는 단백질 정제를 위한 방법이 기재되어 있다 (Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). 화학적 분석, 화학적 변형, 번역후 변형, 융합 단백질의 생산, 단백질의 글리코실화가 기재되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York; Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, pp. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO; pp. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., pp. 384-391] 참조). 폴리클로날 및 모노클로날 항체의 생산, 정제, 및 단편화가 기재되어 있다 (Coligan, et al. (2001) Current Protcols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow and Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow and Lane, 상기 문헌). 리간드/수용체 상호작용을 특징화하기 위한 표준 기술이 이용가능하다 (예를 들어, 문헌 [Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York] 참조).
모노클로날, 폴리클로날, 및 인간화 항체가 제조될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Sheperd and Dean (eds.) (2000) Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY; Kontermann and Dubel (eds.) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, New York; Harlow and Lane (1988) Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp. 139-243; Carpenter, et al. (2000) J. Immunol. 165:6205; He, et al. (1998) J. Immunol. 160:1029; Tang et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:27371-27378; Baca et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:10678-10684; Chothia et al. (1989) Nature 342:877-883; Foote and Winter (1992) J. Mol. Biol. 224:487-499]; 미국 특허 번호 6,329,511 참조).
인간화에 대한 대안은 파지 상에 디스플레이된 인간 항체 라이브러리 또는 트랜스제닉 마우스의 인간 항체 라이브러리를 사용하는 것이다 (Vaughan et al. (1996) Nature Biotechnol. 14:309-314; Barbas (1995) Nature Medicine 1:837-839; Mendez et al. (1997) Nature Genetics 15:146-156; Hoogenboom and Chames (2000) Immunol. Today 21:371-377; Barbas et al. (2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; Kay et al. (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA; de Bruin et al. (1999) Nature Biotechnol. 17:397-399).
항원의 정제는 항체의 생성에 필수적이지는 않다. 동물은 관심 항원을 보유하는 세포로 면역화될 수 있다. 이어서, 비장세포는 면역화 동물로부터 단리될 수 있고, 비장세포는 골수종 세포주와 융합하여 하이브리도마를 생성할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Meyaard et al. (1997) Immunity 7:283-290; Wright et al. (2000) Immunity 13:233-242; Preston et al., 상기 문헌; Kaithamana et al. (1999) J. Immunol. 163:5157-5164] 참조).
항체는, 예를 들어 소형 약물 분자, 효소, 리포솜, 폴리에티렌 글리콜 (PEG)에 접합될 수 있다. 항체는 치료, 진단, 키트 또는 다른 목적에 유용하고, 예를 들어 염료, 방사성동위원소, 효소, 또는 금속, 예를 들어 콜로이드성 금에 커플링된 항체를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Le Doussal et al. (1991) J. Immunol. 146:169-175; Gibellini et al. (1998) J. Immunol. 160:3891-3898; Hsing and Bishop (1999) J. Immunol. 162:2804-2811; Everts et al. (2002) J. Immunol. 168:883-889] 참조).
형광 활성화 세포 분류 (FACS)를 포함하는 유동 세포측정법에 대한 방법이 이용가능하다 (예를 들어, 문헌 [Owens, et al. (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001) Flow Cytometry, 2nd ed.; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ] 참조). 예를 들어, 진단 시약으로서 사용하기 위한, 핵산 프라이머 및 프로브를 포함하는 핵산, 폴리펩티드, 및 항체를 변형시키는 데 적합한 형광 시약이 이용가능하다 (Molecular Probesy (2003) Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR; Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, MO).
면역계 조직학의 표준 방법이 기재되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Muller-Harmelink (ed.) (1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY; Hiatt, et al. (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, and Wilkins, Phila, PA; Louis, et al. (2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY] 참조).
예를 들어, 항원 단편, 리더 서열, 단백질 폴딩, 기능적 도메인, 글리코실화 부위, 및 서열 정렬을 결정하기 위한 소프트웨어 패키지 및 데이터베이스가 이용가능하다 (예를 들어, 진뱅크(GenBank), 벡터 NTI(Vector NTI)® 스위트(Suite) (인포르맥스, 인크(Informax, Inc), 메릴랜드주 베데스다); GCG 위스콘신 패키지(Wisconsin Package) (악셀리스, 인크.(Accelrys, Inc.), 캘리포니아주 샌디에고); 데시퍼(DeCypher)® (타임로직 코포레이션(TimeLogic Corp.), 네바다주 크리스탈 베이); 문헌 [Menne, et al. (2000) Bioinformatics 16: 741-742; Menne, et al. (2000) Bioinformatics Applications Note 16:741-742; Wren, et al. (2002) Comput. Methods Programs Biomed. 68:177-181; von Heijne (1983) Eur. J. Biochem. 133:17-21; von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14:4683-4690)] 참조).
실시예
실시예 1: C59-08에 의한 인간 세포의 면역조정
C59-08은 포스포로티오에이트 백본 및 5'OH 및 3'OH를 갖는 올리고데옥시뉴클레오티드 5'-TCGAACGTTCGAACGTTCGAACGTTCGAAT-3' (서열식별번호: 20)의 나트륨 염이다.
인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 표준 피콜(Ficoll) 분리 방법을 사용하여 피콜-파크(Ficoll-Paque)™ PLUS (지이 헬스케어 바이오-사이언시스(GE Healthcare Bio-Sciences), 펜실베니아주 피츠버그)로 2명의 공여자로부터의 백혈구 연층으로부터 단리하였다. 단리된 PBMC를 2% 소 태아 혈청 (FBS), 및 2 mM 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA)을 함유하는 포스페이트 완충 염수 (PBS) 중에서 2회 세척하였다. 세포를 재현탁시키고 96-웰 U-바닥 플레이트 내에서 웰당 1 x 106개 세포로 10% FBS, 2 mM L-글루타민, 100 U/mL 페니실린 및 100 μg/mL 스트렙토마이신을 함유하는 RPMI 1640 중에서 배양하였다. 세포를 0.016 μM 내지 5 μM의 범위의 용량의 C59-08 또는 7 μM 대조군 ODN 1040의 존재 하에 37℃, 5% CO2에서의 가습 인큐베이터 내에서 0.2 mL의 최종 부피에서 48시간 동안 배양하였다. 상청액을 수거하고 메소 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery) 인간 IFNα2a 및 인간 IL-10 조직 배양 키트 (메릴랜드주 록빌)를 사용하여 IFNα2a 및 IL-10에 대해 검정하였다.
결과는 도 5에 제시된다. C59-08은 0.2 μM의 최적 농도에서 인간 PBMC에서 IFNα2a 및 IL-10 생산 둘 다를 유도한다.
실시예 2: C59-08에 의한 인간 종양 시편의 면역조정
인간 종양 조직배양
환자로부터의 인간 종양 시편을 상업적 공급원 (바이오-옵션스(Bio-Options), 폴리오(Folio), 컨버전트 바이오(Conversant Bio), 및 보스턴 바이오소스(Boston BioSource)) 및 로체스터 대학교로부터 입수하였다.
신선한 종양 조직을 수술 후 1시간 내에 수집하고 AQIX 수송 배지 (AQIX, 영국) 내에 위치시켰다. 조직을 4℃에서 머크 리서치 래보러토리즈(Merck Research Laboratories) (캘리포니아주 팔로 알토)로 밤새 수송하였다.
종양을 울트라퓨어™ 저융점 아가로스 (인비트로젠(Invitrogen), 캘리포니아주 칼스배드)에 포매하고 맥일웨인™ 조직 세단기 (스토엘팅 캄파니(Stoelting Co.), 일리노이주 우드 데일)로 400 μm 절단하였다. 종양 절편을 먼저 밀리셀-CM(Millicell-CM) 세포 배양 인서트 (밀리포어(Millipore), 캘리포니아주 빌러리카) 상에 놓고 공기와 4.5 g/L 글루코스, L-글루타민, 피루브산나트륨 (미디어테크, 인크.(Mediatech, Inc.), 버지니아주 마나사스), 10% FBS (SAFC 바이오사이언시스(SAFC Biosciences), 캔자스주 레넥사), 100 U/ml 페니실린, 및 100 ug/ml 스트렙토마이신으로 보충된 1 ml DMEM의 배지 사이의 계면에서 37℃, 5% CO2에서의 가습 인큐베이터 내에서 배양하였다.
종양 절편을 0.1, 0.5, 및 1 μM C59-08 또는 1 μM 대조군 ODN 1040의 존재 하에 24시간 동안 배양하였다. 종양 샘플을 드라이 아이스에서 순간 동결시키고 처리 전에 37℃에서 저장하였다.
RNA 단리 및 실시간 정량적 PCR
총 RNA를 폴리트론 균질화기를 사용하여 RNA STAT-60 (텔-테스트(Tel-Test), 텍사스주 프렌즈우드)으로의 균질화에 의해 단리하였다. 총 RNA를 제조업체의 프로토콜에 따라 추출하였다. 이소프로판올로의 침전 후에, 총 RNA를 상-고정 경량 튜브를 사용하여 페놀:클로로포름:이소아밀 알콜 (25:24:1) (시그마-알드리치(Sigma-Aldrich), 미주리주 세인트 루이스)로 재-추출하였다.
DNase-처리된 총 RNA를 제조업체의 프로토콜에 따라 퀀티텍트(QuantiTect) 리버스 트랜스크립션 (퀴아젠(Qiagen), 캘리포니아주 발렌시아)을 사용하여 역전사시켰다. 프라이머를 라이프 테크놀로지스(Life Technologies) (캘리포니아주 포스터 시티)로부터 상업적으로 입수하였다. 각 샘플로부터의 10 ng의 cDNA에 대한 실시간 정량적 PCR을 각각 250 nM의 FAM-표지된 프로브와 900 nM의 비표지된 프라이머를 사용하여 플루이다임 바이오마크(Fluidigm Biomark) 서열 검출 시스템 (플루이다임, 캘리포니아주 포스터 시티)에서의 택맨(TAQMAN)™ RTqPCR 반응에서 수행하였다. 유비퀴틴의 수준을 개별 반응에서 측정하고, Δ-Δ Ct 방법에 의해 데이터를 정규화하기 위해 사용하였다. 각 샘플에 대한 유비퀴틴 및 관심 유전자에 대한 평균 사이클 역치 (Ct) 값을 사용하여, 하기 방정식을 정규화된 값을 입수하기 위해 사용하였다: 1.8(Ct 유비퀴틴 - Ct 관심 유전자) x 104.
치료 결과
인간 종양의 C59-08로의 생체외 치료는 신세포 암종 (RC) (n = 5), 비소세포 폐암 (NSCLC) (n = 3), 및 방광암 (n = 1) 및 결장직장암 (n = 1) 조직배양에서 IFNα-유도성 유전자 (IFNα2, MCP1, MCP2, OAS2, IP-10, GBP1, ISG-54, MxB, 및 TRAIL), 시토카인 (IFNβ, IL-10, IL-12, IL-6 및 TNFα), 및 면역 활성화 마커 (CD80, CD86, CD40, CD70 및 OX40L)를 유도하였다. RCC 공여자로부터의 시편에 대한 대표적인 데이터는 도 6에 제시된다: (a) IFNα-유도성 유전자; (b) 시토카인; 및 (c) 면역 활성화 마커.
실시예 3: 동물 모델에서의 항-IL-10 및 종양내 C59-08의 조합의 항종양 활성
TC40.11D8은 마우스 IL-10에 대해 표적화된 마우스 IgG1/카파 모노클로날 항체이다. 마우스 IgG1 이소형 대조군은 아데노바이러스 헥손 25에 특이적인 마우스 모노클로날 항체이다. 항체 둘 다를 내부 공급원으로부터 동결된 (-80℃) 스톡으로서 입수하였다.
항체의 제제
제제 완충제는 단백질을 안정화시키고 침전을 방지하기 위해 각 항체에 대해 특이적이다. TC40.11D8 및 마우스 IgG1 이소형 대조군 둘 다에 대한 제제는 75 mM 염화나트륨, 10 mM 인산나트륨, 3% 수크로스, pH 7.3이었다.
올리고데옥시뉴클레오티드
시티딘 포스포-구아노신 (CpG)-기반 포스포로티오에이트 올리고데옥시뉴클레오티드 (ODN) CpG 1826 5'-tccatgacgttcctgacgtt-3' (서열식별번호: 27) (인비보젠(InvivoGen), 캘리포니아주 샌디에고)는 마우스 TLR9 특이적인 효능제이다. CpG 1826은 CpG 클래스 B 유형 서열을 갖는다. CpG-기반 포스포로티오에이트 ODN C59-08 (디나박스, 캘리포니아주 버클리)은 인간 및 마우스 TLR9 둘 다를 활성화시키는 효능제이다. C59-08은 CpG 클래스 C 유형 서열을 갖는다. 대조군 ODN (5'-TGA CTG TGA ACC TTA GAG ATG A-3') (서열식별번호: 37) (디나박스, 캘리포니아주 버클리)은 포스포로티오에이트 백본을 갖는 비-CpG 서열을 갖는다.
올리고데옥시뉴클레오티드의 제제
CpG 1826을 0.9% 염화나트륨 중에서 2 mg/mL의 농도로 재구성하고, 분취하고, -20℃에서 저장하였다. C59-08을 포스페이트 완충 염수 (PBS) 중에서 4.53 mg/mL의 농도로 재구성하고, 분취하고, -20℃에서 저장하였다. 대조군 ODN을 PBS 중에서 4.47 mg/mL의 농도로 재구성하고, 분취하고, -20℃에서 저장하였다.
동물
대략 7 내지 8주령 암컷 C57BL/6J 마우스를 잭슨 래보러토리(Jackson Laboratory) (캘리포니아주 새크라멘토)로부터 입수하였다. 통상적인 동물 사료 및 물을 무제한으로 제공하였다. 동물을 연구의 시작 전에 1주 동안 수용하였다. 연구의 시작 (즉, 종양 이식)에서의 동물의 평균 중량은 19 그램이었다.
연구에서 동물의 관리 및 사용을 수반하는 절차는 머크 리서치 래보러토리즈의 동물 실험 윤리 위원회에 의해 검토되고 승인되었다. 본 연구 동안, 동물의 관리 및 사용은 실험 동물 관리 평가 인증 협회 (AAALAC), 동물 복지법, 미국 수의과 의사 협회 (AVMA)의 안락사에 대한 안락사 패널, 및 실험 동물의 관리 및 사용에 관한 실험 동물 조사 연구소 (ILAR) 가이드의 지침에 명시된 원칙에 따라 수행되었다.
종양 세포주 제조 및 이식
존스 홉킨스 대학교 (메릴랜드주 볼티모어)에 의해 제공된 TC-1 세포주는 인간 유두종 바이러스 (HPV-16) E6 및 E7 및 c-Ha.ras 종양유전자로 동시형질전환된 마우스 1차 폐 상피 세포로부터 유래된 것이다 (Lin KY et al. Cancer Res. 1996 Jan 1, 56(1):21-6). TC-1 세포는 C57BL6/J 계통에 대해 동계이다.
TC-1 세포를 10% 소 태아 혈청 및 0.4 mg/mL 제네티신(Geneticin)으로 보충된 DMEM 중에서 배양하였다. 전면생장 미만 TC-1 세포를 0.1 mL의 혈청-무함유 DMEM 중에서 각 동물의 하부 배측 측복부 둘 다 (우측 측복부에 1 x 105개 및 좌측 측복부에 0.5 x 105개)에 피하로 (SC) 주사하였다. 동물을 먼저 이식에 사용된 부위에서 전기 클리퍼로 면도하였다.
종양 측정 및 체중
종양을 제1 투여 전날 및 이후 1주 2회 측정하였다. 종양 길이 및 폭을 전자 캘리퍼를 사용하여 측정하고 종양 부피를 식 부피 (mm3) = 0.5 x 길이 x 폭2 (여기서, 길이는 보다 긴 치수임)을 사용하여 결정하였다. 동물을 제1 투여 전날 및 이후 1주 2회 칭량하였다. 편향을 방지하기 위해, 중량 또는 종양 부피에 의한 임의의 이상치를 제거하고 남아있는 마우스를 우측 측복부에서의 종양 (주사된 종양으로서 지칭됨) 부피에 기초하여 다양한 치료군으로 군별화하였다.
투여 용액 제조
항체의 동결된 스톡을 해동시키고 습윤 얼음으로 옮겼다. 반복되는 동결 해동을 피하기 위해, 스톡의 각 바이알을 1회 해동시키고, 1회 사용에 충분한 부피의 분취액을 만들었다. 이러한 목적을 위해, 폴리프로필렌, 저 부착 튜브를 사용하였다. 분취물을 -80℃에서 저장하였다. 각 투여 전에, 하나의 분취물을 해동시키고 적절한 희석제 중에서 공칭 농도로 희석하였다. 각 투여 전에, ODN (대조군 ODN, CpG 1826, 및 C59-08)의 분취물을 해동시키고 0.9% 염화나트륨 중에서 공칭 농도로 희석하였다.
항체 및 올리고데옥시뉴클레오티드의 투여
이소형 대조군 mIgG1 및 항-IL-10 mIgG1을 제0일, 제4일, 제8일, 및 제12일에 10 mg/kg으로 복강내로 (IP) 투여하였다. 대조군 ODN (2.5 mg/kg), CpG 1826 (1 mg/kg), 및 C59-08 (2.5 mg/kg)을 제0일, 제4일, 제8일, 및 제12일에 단지 우측 종양에만 종양내 (IT) 투여하였다.
통계적 방법
종양 부피를 각 추적일에 치료 사이에서 비교하였다. 개별 동물의 추적은 과도한 종양 부담 또는 다른 이유 때문에 조기에 종결될 수 있었다. 이유 및 마지막 측정에서의 종양 크기에 따라서, 마지막으로 관찰된 종양 부피를 그 동물에 대한 모든 이후 일수에서의 부피의 하한계 (적정-검열 데이터)로서 취급하였다.
주어진 일에서 2개의 치료군을 비교하기 위해, 적정-검열 데이터를 허용하는 비파라미터 만-휘트니(Mann-Whitney) (또는 윌콕슨(Wilcoxon) 순위 합계) 검정의 일반화를 사용하였다: 게한-브레슬로우 검정의 페토 앤드 페토 버전. 양측 p-값을 비교되는 2개의 치료 사이의 동물의 20,000 무작위 재할당으로부터 추정하였다. 주어진 쌍의 치료에 대해 모든 시점에 걸쳐 집단적 오차율을 제어하기 위해, p-값을 웨스트폴 앤드 영의 맥스티 절차를 순열 분포에 적용함으로써 다중도 조정하였다. 0.05 미만의 p-값을 사용하여 통계적 유의성을 규정하였다.
설명의 목적을 위해, 각 일 및 치료군에 대한 부피를 그의 중앙값에 의해 요약하였다. 검열을 허용하기 위해, 각 일 및 치료군에 대한 분포 함수를, 로그 스케일에서의 그린우드 식을 사용하는 신뢰 대역을 갖는, 카플란-마이어 방법에 의해 추정하였다. 중앙값을 신뢰 대역을 반전시킴으로써 획득한 신뢰 구간에서, 분포 함수의 50번째 백분위수로 추정하였다. 데이터를 요약하기 위한 통상의 "평균 ± SE" 포맷에 비교가능하게 되기 위해, 68% 신뢰 수준을 사용하였으며, 이는 후자가 평균에 대해 대략 68% 신뢰 구간이기 때문이다.
동물의 추적을 조기에 종결시키는 경우, 이유를 카테고리화하고 동물의 데이터를 하기와 같이 취급하였다: (1) 종양 부담: 마지막으로 측정된 값에서의 적정-검열; (2) 종양 궤양화: 역치 (1000 mm3)를 초과하였다면, 마지막으로 측정된 값에서의 적정-검열; 그렇지 않았다면 이후에는 동물을 제외시킴; (3) 중량 손실/병 (질병의 증거와 함께 죽은 것으로 발견된 것 포함): 이후에는 동물을 제외시킴; 및 (4) 치료와 비관련됨 (예를 들어, 질병의 어떠한 증거도 갖지 않는 죽은 것으로 발견된 사고, 관리 종결): 역치 (1000 mm3)를 초과하였다면, 마지막으로 측정된 값에서의 적정-검열; 그렇지 않았다면 이후에는 동물을 제외시킴.
치료 결과
TC-1 종양-보유 C57BL/6J 마우스를 우측 측복부에서의 종양의 평균 부피가 대략 60 mm3 (39 mm3 - 87 mm3)에 도달하였을 때 제1 투여 전날에 5개 치료군으로 군별화하였다: (1) mIgG1 이소형 대조군 + 대조군 ODN; (2) mIgG1 이소형 대조군 + C59-08; (3) 항-IL-10 + CpG 1826; (4) 항-IL-10 + 대조군 ODN; 및 (5) 항-IL-10 + C59-08. 좌측에서의 종양의 부피의 범위는 0 mm3 - 113 mm3이었다. 종양의 완전 퇴행 (CR)을, 종양이 동물이 군별화된 날에 측정가능하였다면, 측정이 수행되었던 시점에서의 측정가능한 종양의 부재로서 규정하였다.
결과는 도 3 및 4에 제시된다. 종양내 CpG 1826 (군 3) 또는 C59-08 (군 5)과 조합된 항-IL-10은 적어도 3마리의 동물에서 주사된 종양의 CR을 일으켰다 (도 3a). 그러나, 단지 C59-08 (군 5)과 조합된 항-IL-10만이 비-주사된 종양의 CR (10마리 동물 중 3마리)을 일으켰다 (도 4a). C59-08 단독요법 (군 2)을 포함하는 다른 치료는 주사된 또는 비-주사된 종양의 CR을 일으키지 않았다.
대조군 치료, 항-IL-10 단독요법, 및 C59-08 단독요법과 비교하여, C59-08와 조합된 항-IL-10의 투여 (IT)는 제6일, 제9일, 및 제12일에 대해 주사된 종양의 유의하게 감소된 부피를 일으켰다 (p < 0.05, 시점에 걸쳐 다중도 조정됨) (도 3b-d). 대조군 치료 및 항-IL-10 단독요법과 비교하여, C59-08과 조합된 항-IL-10의 투여 (IT)는 제6일, 제9일, 및 제12일에 대해 비-주사된 종양의 유의하게 감소된 부피를 일으켰다 (p < 0.05, 시점에 걸쳐 다중도 조정됨) (도 4b-d).
실시예 4: 진행성 종양을 갖는 대상체에서의 C59-08과 조합된 항-IL-10 hum 12G8
C59-08의 용량 수준과 조합된 HUM12G8의 증가하는 용량에 대해 검정하는 1b상 용량 증량 연구를 수행한다. 연구는 제안된 확장 코호트를 갖는 표준 3 + 3 설계를 HUM12G8의 MTD 또는 MAD에 사용할 것이다. 종양이 주사에 대해 접근가능한 부위에 존재하는 진행성 종양을 갖는 대상체가 연구에 적격이다. 진행성 종양을 갖는 적격 대상체는; 항-PD1 요법에 실패한 전이성 또는 절제불가능한 흑색종, 방사선 후 진행된 두경부의 편평 세포암, 피부 전이를 갖는 유방암, 적어도 하나의 선행 요법에 실패한 무통성 비-호지킨 림프종 또는 B-세포 림프종을 포함할 것이다. 각 코호트의 모든 대상체는 TLR 효능제 또는 항-IL10 요법을 받은 적이 없어야 할 것이다.
표 4 검정 치료(들)
Figure pct00008
용량 증량
HUM12G8의 증가하는 용량과 조합된, 면역 활성화를 증가시키기 위한 C59-08의 보다 높은 고정 용량의 투여를 받는 하기 3개의 투여 코호트를 선택하였다. 파트 A의 모든 용량 수준은 3+3 설계를 따를 것이다. HUM12G8의 용량 증량을 계속하여 예비 MTD 또는 MAD를 확인한다. 각 코호트에 대한 용량은 하기와 같다:
1) 1 mg C59-08 종양내로 및 70 mg HUM12G8 정맥내로
2) 4 mg C59-08 종양내로 및 70 mg HUM12G8 정맥내로
3) 4 mg C59-08 종양내로 및 210 mg HUM12G8 정맥내로
4) 4 mg C59-08 종양내로 및 700 mg HUM12G8 정맥내로
4 mg C59-08 및 70 mg HUM12G8 조합 (코호트 2)이 내약성이 없는 경우, C59-08을 후속 코호트 (3 & 4)에 대해 1 mg 용량으로 감량한다.
본원에 인용된 모든 참고문헌은 각각의 개별 공보, 데이터베이스 엔트리 (예를 들어, 진뱅크 서열 또는 진ID 엔트리), 특허 출원, 또는 특허가 구체적이고도 개별적으로 참조로 포함된다고 나타내는 바와 동일한 정도로 참조로 포함된다. 미국 출원 62/169,321 및 62/168,470은 본원에 참조로 포함된다. 이러한 참조로 포함된다는 진술은 심지어 이러한 인용에 참조로 포함된다는 명확한 진술이 바로 이어지지 않는 경우에도, 37 C.F.R. §1.57(b)(1)에 따라 출원인에 의해, 각각의 및 모든 개별 공보, 데이터베이스 엔트리 (예를 들어, 진뱅크 서열 또는 진ID 엔트리), 특허 출원 또는 특허 (이들 각각은 37 C.F.R. §1.57(b)(2)에 따라 명백하게 확인됨)에 관한 것으로 의도된다. 명세서 내에, 존재하는 경우, 참조로 포함된다는 명확한 진술을 포함시키는 것은 참조로 포함된다는 이 일반적 진술을 어떠한 방식으로도 약화시키지 않는다. 본원의 참고문헌의 인용은 이러한 참고문헌이 선행 기술과 관련이 있음을 인정하는 것으로 의도되지 않거나 또는 이들 공보 또는 문헌의 내용 또는 일자로서 어떠한 인정도 받지 않아야 한다. 참조가 본 명세서에 제공된 정의와 충돌하는 본 용어에 대한 정의를 제공하는 경우, 본 명세서에 제공된 정의가 본 발명을 해석하는 데 사용될 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> MERCK SHARP & DOHME CORP. DYNAVAX TECHNOLOGIES CORPORATION CHARTASH, ELLIOTT KEITH SADEKOVA, SVETLANA PHAN, UYEN TRUONG KASTELEIN, ROBERT A. COFFMAN, ROBERT L. GUIDUCCI, CRISTIANA JANSSEN, ROBERT S. <120> COMBINATION OF AN ANTI-IL-10 ANTIBODY AND A CPG-C TYPE OLIGONUCLEOTIDE FOR TREATING CANCER <130> 24128 <140> PCT/US2016/034285 <141> 2016-05-26 <150> 62/169321 <151> 2015-06-01 <150> 62/168470 <151> 2015-05-29 <160> 39 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 449 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 His Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Thr Leu Asp Ala Thr Tyr Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Arg Gly Phe Ser Val Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 2 <211> 213 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Thr Ser Gln Asn Ile Phe Glu Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Ser Pro Leu Gln Ala Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 3 <211> 111 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 3 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asp Tyr 20 25 30 Gly His Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Trp Arg Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr 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8 <211> 10 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 8 Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr His Met Ala 1 5 10 <210> 9 <211> 17 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 9 Ser Ile Thr Leu Asp Ala Thr Tyr Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Arg 1 5 10 15 Gly <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 10 His Arg Gly Phe Ser Val Trp Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 11 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 His Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Thr Leu Asp Ala Thr Tyr Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Arg Gly Phe Ser Val Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 115 120 <210> 12 <211> 111 <212> PRT <213> Homo 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<222> (7)..(8) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (7)..(8) <223> This region may encompass 0-2 nucleotides wherein some positions may be absent <220> <221> modified_base <222> (12)..(13) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (12)..(13) <223> This region may encompass 0-2 nucleotides wherein some positions may be absent <220> <221> modified_base <222> (17)..(18) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (17)..(18) <223> This region may encompass 0-2 nucleotides wherein some positions may be absent <220> <221> modified_base <222> (22)..(23) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (22)..(23) <223> This region may encompass 0-2 nucleotides wherein some positions may be absent <220> <221> modified_base <222> (24)..(25) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (24)..(25) <223> This region may encompass 0-2 nucleotides wherein some positions may be absent <220> <221> modified_base <222> (26)..(27) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (26)..(185) <223> This region may encompass 1-20 'nncgnncg' repeats wherein some positions may be absent <220> <221> modified_base <222> (30)..(31) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (32)..(33) <223> May or may not be present <220> <221> modified_base <222> (34)..(35) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (38)..(39) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (40)..(41) <223> May or may not be present <220> <221> modified_base <222> (42)..(43) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (46)..(47) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (48)..(49) <223> May or may not be present <220> <221> modified_base <222> (50)..(51) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (54)..(55) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (56)..(57) <223> May or may not be present <220> <221> modified_base <222> (58)..(59) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (62)..(63) <223> a, c, t or g <220> <221> 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t or g <220> <221> misc_feature <222> (144)..(145) <223> May or may not be present <220> <221> modified_base <222> (146)..(147) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (150)..(151) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (152)..(153) <223> May or may not be present <220> <221> modified_base <222> (154)..(155) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (158)..(159) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (160)..(161) <223> May or may not be present <220> <221> modified_base <222> (162)..(163) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (166)..(167) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (168)..(169) <223> May or may not be present <220> <221> modified_base <222> (170)..(171) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (174)..(175) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (176)..(177) <223> May or may not be present <220> <221> modified_base <222> (178)..(179) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (182)..(183) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (184)..(185) <223> May or may not be present <220> <221> modified_base <222> (186)..(274) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (186)..(274) <223> This region may encompass 0-89 nucleotides wherein some positions may be absent <220> <223> See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 13 nnntcgnntc gnntcgnntc gnnnnnncgn ncgnncgnnc gnncgnncgn ncgnncgnnc 60 gnncgnncgn ncgnncgnnc gnncgnncgn ncgnncgnnc gnncgnncgn ncgnncgnnc 120 gnncgnncgn ncgnncgnnc gnncgnncgn ncgnncgnnc gnncgnncgn ncgnncgnnc 180 gnncgnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnn 274 <210> 14 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (4)..(8) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (4)..(8) <223> This region may encompass 0-5 nucleotides wherein some positions may be absent <220> <221> misc_feature <222> (9)..(40) <223> This region may encompass 1-4 'nncgnncg' repeats wherein some positions may be absent <220> <221> modified_base <222> (9)..(10) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (13)..(14) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (17)..(18) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (21)..(22) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (25)..(26) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (29)..(30) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (33)..(34) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (37)..(38) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (41)..(60) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (41)..(60) <223> This region may encompass 0-20 nucleotides wherein some positions may be absent <220> <223> See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 14 tcgnnnnnnn cgnncgnncg nncgnncgnn cgnncgnncg nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 60 <210> 15 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (4)..(8) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (4)..(8) <223> This region may encompass 0-5 nucleotides wherein some positions may be absent <220> <221> modified_base <222> (27)..(46) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (27)..(46) <223> This region may encompass 0-20 nucleotides wherein some positions may be absent <220> <223> See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 15 tcgnnnnntt cgaacgttcg aacgttnnnn nnnnnnnnnn nnnnnn 46 <210> 16 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 16 tcgtcgaacg ttcgagatga t 21 <210> 17 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 17 tcgttcgaac gttcgaacgt tcgaa 25 <210> 18 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 18 tcgaacgttc gaacgttcga acgtt 25 <210> 19 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 19 tcgaacgttc gaacgttcga atttt 25 <210> 20 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 20 tcgaacgttc gaacgttcga acgttcgaat 30 <210> 21 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 21 tcgtaacgtt cgaacgttcg aacgtta 27 <210> 22 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 22 tcgtaacgtt cgaacgttcg aacgtt 26 <210> 23 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 23 tcgtaacgtt cgaacgttcg aacgt 25 <210> 24 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 24 tcgtaacgtt cgaacgttcg aacg 24 <210> 25 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 25 tcgtaacgtt cgaacgttcg aac 23 <210> 26 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 26 tcgtaacgtt cgaacgttcg aa 22 <210> 27 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 27 tccatgacgt tcctgacgtt 20 <210> 28 <211> 160 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro 1 5 10 15 Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg 20 25 30 Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu 35 40 45 Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala 50 55 60 Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu 85 90 95 Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu 100 105 110 Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe 115 120 125 Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp 130 135 140 Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn 145 150 155 160 <210> 29 <211> 448 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Ile 50 55 60 Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Val Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 30 <211> 218 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asp Tyr 20 25 30 Gly His Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Ile Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn 85 90 95 Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 31 <211> 15 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 31 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asp Tyr Gly His Ser Phe Met His 1 5 10 15 <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 32 Arg Ala Ser Thr Leu Glu Ser 1 5 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 33 Gln Gln Gly Asn Glu Asp Pro Trp Thr 1 5 <210> 34 <211> 10 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 34 Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr Gly Val His 1 5 10 <210> 35 <211> 16 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 35 Val Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Ile Ser 1 5 10 15 <210> 36 <211> 10 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 36 Asn Arg Gly Tyr Asp Val Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 37 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 37 tgactgtgaa ccttagagat ga 22 <210> 38 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(20) <223> This sequence may encompass 1-4 'tcgnn' repeats wherein some positions may be absent <220> <221> modified_base <222> (4)..(5) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (4)..(5) <223> This region may encompass 0-2 nucleotides wherein some positions may be absent <220> <221> modified_base <222> (9)..(10) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (9)..(10) <223> This region may encompass 0-2 nucleotides wherein some positions may be absent <220> <221> modified_base <222> (14)..(15) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (14)..(15) <223> This region may encompass 0-2 nucleotides wherein some positions may be absent <220> <221> modified_base <222> (19)..(20) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (19)..(20) <223> This region may encompass 0-2 nucleotides wherein some positions may be absent <220> <223> See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 38 tcgnntcgnn tcgnntcgnn 20 <210> 39 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(32) <223> This sequence may encompass 1-4 'nncgnncg' repeats wherein some positions may be absent <220> <221> modified_base <222> (1)..(2) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (5)..(6) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (7)..(8) <223> May or may not be present <220> <221> modified_base <222> (9)..(10) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (13)..(14) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (15)..(16) <223> May or may not be present <220> <221> modified_base <222> (17)..(18) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (21)..(22) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (23)..(24) <223> May or may not be present <220> <221> modified_base <222> (25)..(26) <223> a, c, t or g <220> <221> modified_base <222> (29)..(30) <223> a, c, t or g <220> <221> misc_feature <222> (31)..(32) <223> May or may not be present <220> <223> See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 39 nncgnncgnn cgnncgnncg nncgnncgnn cg 32

Claims (24)

  1. 항-IL-10 항체 또는 그의 항원-결합 단편 및 TLR9 효능제를 포함하는 조합 요법을 개체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 TLR9 효능제는 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드인, 인간 환자에서 암을 치료하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 항-IL-10 항체가 모노클로날 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 또는 완전 인간 항체인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 항-IL-10 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 (a) 서열식별번호: 5, 6 및 7의 경쇄 CDR 및 서열식별번호: 8, 9 및 10의 중쇄 CDR을 포함하는 것인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 항-IL-10 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 서열식별번호: 11 및 서열식별번호: 12의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
  5. 제1항에 있어서, 항-IL-10 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 항-IL-10 hum 12G8 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 항-IL-10 hum 12G8 변이체 또는 그의 항원 결합 단편인 방법.
  6. 제1항에 있어서, 항-IL-10 항체가 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항-IL-10 모노클로날 항체이고, 여기서 중쇄는 서열식별번호: 1을 포함하고 경쇄는 서열식별번호: 2를 포함하는 것인 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가
    (a) N이 뉴클레오시드이고, x = 0, 1, 2 또는 3이고, y = 1, 2, 3 또는 4이고, w = 0, 1 또는 2이고, p = 0 또는 1이고, q = 0, 1 또는 2이고, v = 0 내지 89이고 z = 1 내지 20이고, X1 및 X1'가 자기-상보적 뉴클레오시드이고, X2 및 X2'가 자기-상보적 뉴클레오시드인 5'-Nx(TCG(Nq))yNw(X1X2CGX2'X1'(CG)p)z,Nv (서열식별번호: 13); 및
    (b) 적어도 8개 염기 길이의 회문식 서열이며, (X1X2CGX2'X1'(CG)p)z 서열의 처음 (X1X2CGX2'X1')을 포함하는 회문식 서열
    로 이루어지고, 여기서 올리고뉴클레오티드는 12 내지 100개 염기 길이인 방법.
  8. 제7항에 있어서, x = 0이고, y = 1이고, w = 0이고, p= 0 또는 1이고, q = 0, 1 또는 2이고, v = 0 내지 20이고 z = 1, 2, 3 또는 4인 방법.
  9. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가 TCGNq(X1X2CGX2'X1'CG)zNv (서열식별번호: 14)로 이루어지며, 여기서 N은 뉴클레오시드이고, q = 0, 1, 2, 3 또는 4이고, v = 0 내지 20이고, z = 1 내지 4이고, X1 및 X1'는 자기-상보적 뉴클레오시드이고, X2 및 X2'는 자기-상보적 뉴클레오시드이고, 올리고뉴클레오티드는 적어도 12개 염기 길이인 방법.
  10. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가
    5'-TCGNqTTCGAACGTTCGAACGTTNs-3' (서열식별번호: 15)로 이루어지며, 여기서 N은 뉴클레오시드이고, q = 0, 1, 2, 3 또는 4이고, s = 0 내지 20이고, 올리고뉴클레오티드는 적어도 12개 염기 길이인 방법.
  11. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가 5'-TCGAACGTTCGAACGTTCGAACGTTCGAAT-3' (서열식별번호: 20)로 이루어진 서열을 갖는 것인 방법.
  12. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가 5'-TCGTTCGAACGTTCGAACGTTCGAA-3' (서열식별번호: 17)로 이루어진 서열을 갖는 것인 방법.
  13. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가 서열식별번호: 17의 서열을 갖는 나트륨 염이고, 올리고뉴클레오티드가 포스포로티오에이트 백본을 갖는 올리고데옥시뉴클레오티드인 방법.
  14. 암으로 진단된 인간 개체에게 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드를 매주 1 내지 16 mg의 용량으로 종양내로, 및 항-IL-10 hum 12G8을 3주마다 1회 1 내지 10 mg/kg의 용량으로 정맥내로 투여하는 것, 바람직하게는 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드를 매주 1, 2, 4, 8 또는 16 mg의 용량으로 종양내로, 및 항-IL-10 hum 12G8을 3주마다 1회 1, 3 또는 10 mg/kg의 용량으로 정맥내로 투여하는 것을 포함하는, 암으로 진단된 인간 개체를 치료하는 방법.
  15. 암으로 진단된 인간 개체에게 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드를 4주 동안 매주 이어서 3주마다 1회 1 내지 16 mg의 용량으로 종양내로, 및 항-IL-10 hum 12G8을 3주마다 1회 1 내지 10 mg/kg의 용량으로 정맥내로 투여하는 것을 포함하는, 암으로 진단된 인간 개체를 치료하는 방법.
  16. 암으로 진단된 인간 개체에게 서열식별번호: 20의 CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드를 제1일, 제8일, 제15일, 제22일에, 이어서 3주마다 1회 1.0 또는 4.0 mg의 용량으로 종양내로 및 항-IL-10 hum 12G8을 제1일에 이어서 3주마다 1회 70 mg, 210 mg 또는 700 mg의 용량으로 정맥내로 투여하는 것을 포함하는, 암으로 진단된 인간 개체를 치료하는 방법.
  17. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 흑색종, 목의 편평 세포암, 유방암 및 비-호지킨 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  18. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 흑색종, 두경부암, 유방암 및 B-세포 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  19. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 전이성 또는 절제불가능한 흑색종, 목의 진행성 편평 세포암, 피부 전이를 갖는 유방암, 및 무통성 비-호지킨 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  20. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 신세포 암종, 비소세포 폐암, 방광암 및 결장직장암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  21. 제1항 내지 제6항, 제14항, 제15항, 제17항, 제19항 및 제20항 중 어느 한 항에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가 서열식별번호: 20의 서열을 갖는 나트륨 염이고, 올리고뉴클레오티드가 포스포로티오에이트 백본을 갖는 올리고데옥시뉴클레오티드인 방법.
  22. 제16항 또는 제18항에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드가 서열식별번호: 20의 서열을 갖는 나트륨 염이고, 올리고뉴클레오티드가 포스포로티오에이트 백본을 갖는 올리고데옥시뉴클레오티드인 방법.
  23. 제1항 내지 제6항, 제14항, 제15항, 제17항, 제19항 및 제20항 중 어느 한 항에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드 서열이 서열식별번호: 20이고, 올리고뉴클레오티드가 포스포로티오에이트 백본을 갖는 올리고데옥시뉴클레오티드인 방법.
  24. 제16항 또는 제18항에 있어서, CpG-C 유형 올리고뉴클레오티드 서열이 서열식별번호: 20이고, 올리고뉴클레오티드가 포스포로티오에이트 백본을 갖는 올리고데옥시뉴클레오티드인 방법.
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