KR20170123606A

KR20170123606A - 키나아제 조절제로서 중수소화 트리아졸로피리다진

Info

Publication number: KR20170123606A
Application number: KR1020177018365A
Authority: KR
Inventors: 패트릭 블라시우스 퓨러; 로날더스 아르노더스 헨드리카 요셉 길리센; 이오아니스 니콜라오스 호유피스; 리에벤 미어포엘; 티모씨 피에트로 슈어렌 페레라; 필리프 제임스 파이
Original assignee: 얀센 파마슈티카 엔.브이.
Priority date: 2014-12-04
Filing date: 2015-12-03
Publication date: 2017-11-08
Also published as: DK3227296T3; MY183207A; TW201636350A; SG11201704078XA; CA2968294C; EA033193B1; WO2016087586A1; IL252356A0; CN107108632A; TWI695837B; PT3227296T; NZ733447A; BR112017010849B1; MX2017007114A; SI3227296T1; PL3227296T3; US20190031670A1; CN107108632B; US10138246B2; AU2015357085B2

Abstract

본 발명은 D가 중수소를 나타내는 화학식 (I)의 트리아졸로피리다진 화합물, 이의 N-옥사이드, 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물, 단백질 티로신 키나아제 조절제, 특히 c-Met의 억제제들로서의 상기 화합물의 용도, 및 세포 또는 대상의 c-Met의 키나아제 활성을 감소 또는 억제하고, 세포 또는 대상내 c-Met 발현을 조절하기 위한 상기 화합물의 용도, 및 대상의 세포증식성 질환 및/또는 c-Met와 관련된 질환들을 예방 또는 치료하기 위한 상기 화합물들의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 본 발명의 화합물을 포함하는 약학적 조성물, 및 암 및 다른 세포증식성 질병들과 같은 질환들을 치료하기 위한 방법에 관한 것이다.

(I)

Description

키나아제 조절제로서 중수소화 트리아졸로피리다진{A DEUTERATED TRIAZOLOPYRIDAZINE AS A KINASE MODULATOR}

본 발명은 단백질 티로신 키나아제 조절제로서 작용하는 신규한 화합물에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 본 발명은 c-Met의 억제제로서 작용하는 신규한 화합물에 관한 것이다.

본 발명은 c-Met를 포함하는, 티로신 키나아제의 억제제로서 작용하는 트리아졸로피리다진에 관한 것이다. WO2007/075567을 비롯하여 트리아졸로피리다진은 유용한 치료학적 특성들을 갖는 것이 보고되었다.

단백질 키나아제는 ATP로부터 말단 포스페이트가 단백질의 티로신, 세린 및/또는 트레오닌 잔기의 히드록시기로 전달되는 것을 촉매하는 신호전달 경로의 효소적 성분이다. 따라서, 단백질 키나아제 기능을 억제하는 화합물은 단백질 키나아제 활성화의 생리학적 결과를 평가하는데 유용한 도구이다. 포유류에서 정상 또는 돌연변이 단백질 키나아제의 과발현 또는 부적절한 발현은 광범위한 연구의 주제가 되어 왔으며, 당뇨병, 혈관신생, 건선, 재협착, 안 질환, 정신분열증, 류마티스성 관절염, 아테롬성동맥경화증, 심혈관 질환 및 암을 포함한 많은 질병들의 발달에 상당한 역할을 한 것으로 입증되어 왔다. 키나아제 억제의 강심성 이득도 연구되었다. 요컨대, 단백질 키나아제의 억제제는 인간 및 동물 질병의 치료에 특히 유용하다.

간세포 성장인자(HGF)(산란 인자(SF)라고도 알려져 있음) 수용체, c-Met는 세포증식, 형태 형성 및 운동성을 조절하는 수용체 티로신 키나아제이다. c-Met 유전자는 140kD 베타 트랜스막 서브유닛 및 50kD 글리코실화된 세포외 알파 서브유닛으로 구성된 세포 표면 수용체로 가공되는 170kD 단백질로 번역된다. c-Met의 돌연변이, c-Met 및/또는 HGF/SF의 과발현, 동일한 세포에 의한 c-Met 및 HGF/SF의 발현, 및 과발현 및/또는 이상 c-Met 신호전달은 다양한 인간 고형 종양에 존재하며, 혈관신생, 종양 발달, 침윤 및 전이에 관여하는 것으로 여겨진다.

예를 들어, 조절되지 않은 c-Met 활성화를 갖는 세포주들은 모두 높은 침윤성 및 전이성이 있다. c-Met 수용체를 발현하는 정상 세포와 형질 전환된 세포 사이의 현저한 차이는 종양 세포에서의 티로신 키나아제 도메인의 인산화가 종종 리간드의 존재와 무관하다는 점이다.

c-Met 돌연변이/변경은 종양 및 암-예를 들면, 유전성 및 산발성 인유두상 신세포암종, 유방암, 대장암, 위암종, 신경교종, 난소암, 간세포 암종, 두경부 편평상피세포암종, 고환암종, 기저세포암종, 간암종, 육종, 악성 늑막중피종, 흑색종, 다발성 골수종, 골육종, 췌장암, 전립선 암, 활막 육종, 갑상선암종, 비-소세포 폐암(NSCLC) 및 소세포 폐암, 방광의 이행세포암종, 고환암종, 기저세포암종, 간암종 - 및 백혈병, 림프종, 및 골수종 - 예를 들면, 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 전골수성 백혈병(APL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 호중구성 백혈병(CNL), 급성 미분화 백혈병(AUL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 전림프구성 백혈병(PML), 연소형 골수단구성 백혈병(JMML), 성인 T-세포 ALL, 삼계열 골수이형성을 갖는 AML(AML/TMDS), 혼합 직계성 백혈병(MLL), 골수형성 이상증후군(MDSs), 골수증식성 질환(MPD), 다발성 골수종, (MM), 골수성 육종, 비-호지킨 림프종 및 호지킨 질병(또는 호지킨 림프종(Hodgkin's lymphoma)이라고도 함)을 포함하는 다수의 인간 질병에서 확인되어 왔다.

다양한 인간 암의 발병 기전에서 비정상적인 HGF/SF-Met 신호전달의 역할 때문에, c-Met 수용체 티로신 키나아제의 억제제는 c-Met가 과발현되지 않거나 다른 방식으로 변형되지 않는 암을 비롯하여, Met 활성이 침윤성/전이성 표현형에 기여하는 암 치료에 광범위하게 응용된다. c-Met의 억제제는 또한 혈관신생을 억제하므로, 류마티스성 관절염, 망막증과 같은 신생 혈관 형성과 관련된 질병의 치료에 유용하다고 믿어진다.

c-Met의 과발현은 또한 특정 질병, 예를 들어, 유방암, 비-소세포 폐암종, 췌장 내분비 신생물(pancreatic endocrine neoplasm), 전립선 암, 식도 선암종, 대장암, 타액선 암종, 미만성 거대 B-세포 림프종 및 자궁 내막암종의 예후에 대한 잠재적으로 유용한 예측 인자로 여겨진다.

인간의 종양에서 비정상적인 Met 신호전달을 약화시키기 위해 많은 전략들이 고안되어 왔다. 이러한 전략들 중 일부는 HGF 길항제와 소분자 억제제의 사용을 포함한다.

하기 구조를 갖는 강력하고 선택적인 c-Met 억제제의 안전성, 약동학적, 약물학적 및 초기 효능이 1상 임상시험에서 탐색 되었다.

(이하, 화합물 A라고 함)

여기에서 예기치 않은 신장 독성이 검출되었다. 이 데이터는 쥐와 개에서 깨끗한 독성 프로파일을 보여주는 전-임상 시험들과 모순된다. 신장 영향의 본질을 이해하기 위해 광범위한 추가 전-임상 실험들이 수행되었다. 대사 데이터는 토끼가 적절한 독성학 종이 될 방향으로 지적했다. 토끼에 대한 독성 연구에서, 화합물 A가 신장 기능에 영향을 미치고, 조직학적 분석 결과 결정 형성이 나타나 결과적으로 신장의 퇴행성 및 염증성 변화가 있음이 밝혀졌다. 추가 연구로 신 세뇨관에서 결정 형성을 통해 신장 손상을 일으키는, 불용성 대사산물의 알데히드 산화효소-의존성, 종-특이적, 생성을 제안되었다. 하기의 대사 산물들은 결정을 형성하는 것으로 확인되었다:

대사산물 1:

6-{디플루오로[6-(1H-피라졸-4-일)[1,2,4]트리아졸로[4,3-b]피리다진-3-일]메틸}퀴놀린-2(1H)-온.

대사산물 2:

6-{디플루오로[6-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)[1,2,4]트리아졸로[4,3-b]피리다진-3-일]메틸}퀴놀린-2(1H)-온.

대사산물 2의 용해도:

pH 4.84에서 0.001mg/ml의 용해도

pH 7.33에서 0.002mg/ml의 용해도.

신장 독성을 회피하기 위해 실행가능한 전략들이 밝혀지지 않았기 때문에, 화합물 A의 추가 임상개발은 포기되었다.

발명의 요약

본 발명은 단백질 티로신 키나아제 조절제, 특히 c-Met의 억제제로서의 신규한 트리아졸로피리다진, 및 세포 또는 대상에서 c-Met의 키나아제 활성을 감소 또는 억제하고, 세포 또는 대상에서 c-Met 발현을 조절하기 위한 상기 화합물의 용도, 및 대상에서 세포증식성 질환(cell proliferative disorder) 및/또는 c-Met와 관련된 질환들을 예방 또는 치료하기 위한 상기 화합물의 용도를 제공한다. 특히, 본 발명은 c-Met와 관련된 세포증식성 질환 및/또는 질환의 치료를 위한 약제로 사용하기 위한 상기 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 암, 세포증식성 질환 및/또는 c-Met와 관련된 질환의 예방 또는 치료, 특히 치료에 사용하기 위한 상기 화합물, 또는 암, 세포증식성 질환 및/또는 c-Met와 관련된 질환의 예방 또는 치료, 특히 치료를 위한 약제를 제조하기 위한 상기 화합물의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 다른 측면은 본 발명의 화합물과 약학적으로 허용가능한 담체를 혼합하여 제조된 약학적 조성물이다.

본 발명의 다른 특징들 및 이점은 이하의 본 발명의 상세한 설명 및 청구의 범위로부터 명백해질 것이다.

도 1: A) EBC-1에 대한 웨스턴블롯; B) EBC-1 세포내에서 액틴으로 정규화된 pMet 단백질 수준; C) Snu-5 B에 대한 웨스턴블롯; D) Snu-5 세포내에서 액틴으로 정규화된 pMet 단백질 수준.

본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물 및 이의 N-옥사이드, 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다:

(I)

상기 식 중에서, D는 중수소를 나타낸다.

일 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다:

(I)

상기 식 중에서, D는 중수소를 나타낸다.

일 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다:

(I)

상기 식 중에서, D는 중수소를 나타낸다.

일 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다:

(I)

상기 식 중에서, D는 중수소를 나타낸다.

합성에 사용된 화학 물질의 기원에 따라 결정되는, 합성된 화합물 내에서 자연 동위 원소 존재량의 일부 변화가 일어난다는 것을 알 것이다. 따라서, 화합물 A의 제제는 본질적으로 소량의 중수소를 함유할 것이다. 이러한 자연 발생 중수소의 농도는 작으므로(천연 존재량은 0.015%임) 본 발명의 화합물의 중수소 함량과 비교하여 중요하지 않다.

본 발명의 화합물은 본 발명에 사용된 용어 "화합물"이 중수소의 존재량이 천연 존재율(0.015%)보다 훨씬 높은, 예를 들면 적어도 1000배 높은(15%) 물질의 조성을 의미한다는 점에서 상기 자연발생 미세 형태와 구별된다.

본 발명의 일 양태에서, 화학식 (I)의 화합물은 퀴놀린의 2-위치(D)의 중수소 함량이 적어도 50%(D/H 비가 적어도 1:1), 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 이다. 바람직하게는, 퀴놀린의 2-위치(D)에서 중수소 함량은 적어도 93%이며, 더욱 바람직하게는 퀴놀린(D)의 2-위치에서 중수소 함량은 적어도 97% 또는 98%이다.

위치가 구체적으로 "H" 또는 "수소"로 지정되거나 그 화학적 표현이 수소를 의미할 때, 자연 존재율 동위원소 조성에서 수소를 갖는 것으로 이해된다.

본 발명의 화학식 (I)의 화합물을 사용하면, 불용성/적은 가용성인 알데히드 산화효소 매개 대사 산물의 형성이 감소된다는 것이 밝혀졌다. 이것은 신장 독성을 감소시킬 수 있다.

또한, 화합물 A의 대사 작용(CYP450 매개 대사 산물 형성의 상향 조절)과 비교하여 본 발명의 화학식 (I)의 화합물은 대사작용 스위치가 있음이 밝혀졌다. 본 화학식 (I)의 화합물의 경우, 화합물 A를 투여할 때 구조

를 갖는 N-데스메틸 대사산물의 형성과 비교하여, 다음의 구조

를 갖는 N-데스메틸 대사산물(활성 대사산물)이 더 많이 형성된다. 이는 화합물 A과 비교하여, 화학식 (I)의 화합물에 대한 치료 유효한 양을 더욱 낮출 수 있다.

또한, 화학식 (I)의 화합물은 OCT2 세포에서 ¹⁴C-메트포르민(Metformin) 흡수 억제를 나타낸다는 것이 밝혀졌다.

이하에 사용되는 바와 같이, 용어 "화학식 (I)의 화합물" 및 "화학식 (I)의 화합물들"은 또한, 이의 N-옥사이드, 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물을 포함하는 것을 의미한다.

약학적으로 허용가능한 염

본 발명의 화합물은 약학적으로 허용가능한 염, 특히 약학적으로 허용가능한 산부가 염의 형태로 존재할 수 있다.

의약에 사용하기 위해, 본 발명의 화합물의 염들은 무독성의 "약학적으로 허용가능한 염들"을 의미한다. FDA 인증받은 약학적으로 허용가능한 염 형태들(Ref. International J. Pharm. 1986, 33, 201-217; J. Pharm. Sci., 1977, Jan, 66(1), p1)은 약학적으로 허용가능한 산성/음이온성 또는 염기성/양이온성 염을 포함한다.

약학적으로 허용가능한 산부가 염은 아세테이트, 벤젠설포네이트, 벤조에이트, 비카보네이트, 비타르트레이트, 브로마이드, 칼슘 에데테이트, 캄실레이트, 카보네이트, 클로라이드, 시트레이트, 디하이드로클로라이드, 에데테이트, 에디실레이트, 에스톨레이트, 에실레이트, 푸마레이트, 글리셉테이트, 글루코네이트, 글루타메이트, 글리콜릴아르사닐레이트, 헥실레조르시네이트, 히드라바민, 히드로브로마이드, 히드로클로라이드, 히드록시나프토에이트, 아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 말산염(malate), 말레인산염(maleate), 만델레이트, 메실레이트, 메틸브로마이드, 메틸니트레이트, 메틸설페이트, 무케이트, 납실레이트, 니트레이트, 파모에이트, 판토테네이트, 포스페이트/디포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 살리실레이트, 스테아레이트, 수바세테이트, 숙시네이트, 설페이트, 탄네이트, 타르트레이트, 테오클레이트, 토실레이트 및 트리에티오다이드를 포함하지만, 여기에 제한되지 않는다. 유기 또는 무기산은 또한 요오드화 수소산, 과염소산, 황산, 인산, 프로피온산, 글리콜산, 메탄설폰산, 히드록시에탄설폰산, 옥살산, 2-나프탈렌설폰산, p-톨루엔설폰산, 시클로헥산설팜산, 사카린산 또는 트리플루오로아세트산을 포함하지만, 여기에 제한되지 않는다. 본 발명의 약학적으로 허용되는 염은 또한 그의 입체화학적 이성질체 형태들을 포함한다.

입체화학적 이성질체 형태들

당 분야의 숙련자는 화학식 (I)의 화합물이, 특히 염인 경우, 그의 구조 중에 하나 이상의 비대칭 탄소 원자들을 가질 수 있다는 것을 인지할 것이다. 본 발명은 그의 범주내에 화합물들의 단일 거울상 이성질체 형태, 라세믹 혼합물 및 과량의 거울상 이성질체가 존재하는 거울상 이성질체 혼합물들을 포함하는 것으로 의도된다.

본 명세서에 사용된 용어 "단일 거울상 이성질체"는 화학식 (I)의 화합물이 가질 수 있는 모든 가능한 호모키랄 형태들을 정의한다.

입체화학적으로 순수한 이성질체 형태는 당 분야에 공지된 원리를 적용함으로써 얻어질 수 있다. 부분입체 이성질체는 분별 결정화 및 크로마토그래피 기술과 같은 물리적 분리방법에 의해 분리될 수 있으며, 거울상 이성질체는 부분입체 이성질체 염을 광학 활성 산 또는 염기로 선택적으로 결정화시키거나, 또는 키랄 크로마토그래피로 서로 분리될 수 있다. 순수 입체이성질체는 또한 적절한 입체화학적으로 순수한 출발 물질로부터 또는 입체선택적 반응을 이용하여 합성적으로 제조될 수 있다.

용어 "이성질체"는 동일한 조성 및 분자량을 가지지만, 물리적 및/또는 화학적 특성들이 상이한 화합물들을 의미한다. 상기 물질들은 동일한 수 및 종류의 원자들을 가지지만, 구조가 상이하다. 구조적 차이는 구성(기하 이성질체들) 또는 편광의 면을 회전시킬 수 있는 능력(거울상 이성질체)에 있을 수 있다.

용어 "입체이성질체"는 공간내에서 이들 원자들의 배열이 상이한 동일한 구성의 이성질체들을 의미한다. 거울상 이성질체 및 부분입체 이성질체들은 비대칭적으로 치환된 탄소원자가 키랄 중심으로 작용하는 입체이성질체들이다.

용어 "키랄"은 분자의 거울이미지에서 중합시킬 수 없게 하는, 분자의 구조적 특성을 의미한다.

용어 "거울상 이성질체"는 서로 거울상 이미지들이며, 중첩되지 않는 한 쌍의 분자 종류들 중 하나를 의미한다.

용어 "부분입체 이성질체"는 거울상 이미지가 아닌 입체이성질체를 의미한다.

기호 "R" 및 "S"는 키랄 탄소 원자(들) 주위의 치환체의 배열을 나타낸다.

"라세미체" 또는 "라세믹 혼합물"은 등몰량의 2개의 거울상 이성질체 종류로 구성된 조성물을 의미하며, 상기 조성물은 광학 활성이 없다.

용어 "호모키랄"은 거울상 이성질체 순도의 상태를 나타낸다.

용어 "광학 활성"은 호모키랄 분자 또는 키랄 분자들의 비-라세믹 혼합물이 편광의 면을 회전시키는 정도를 의미한다.

용어 "기하 이성질체"는 탄소-탄소 이중결합, 시클로알킬 고리 또는 가교된 두고리 시스템과 관련하여, 치환기 원자들의 배향이 상이한 이성질체를 의미한다. 탄소-탄소 이중결합의 각 측면상의(H 이외의) 치환체 원자들은 E 또는 Z 배열로 되어있을 수 있다. "E"(반대측면) 배열에서, 치환체는 탄소-탄소 이중결합과 관련하여 반대측에 있으며; "Z"(동일측면) 배열에서, 치환체는 탄소-탄소 이중결합과 관련하여 동일측면 상에 배향된다. 탄소고리형 고리에 부착된 (H 이외의) 치환체 원자들은 시스 또는 트랜스 배열로 되어있을 수 있다. "시스(cis)" 배열에서, 치환체는 고리면과의 관계에서 동일측 상에 있으며; "트랜스" 배열에서, 치환체는 고리 면과 관련하여 반대측 상에 있다. "시스" 및 "트랜스" 종류들의 혼합물을 갖는 화합물은 "시스/트랜스"로 명명된다.

본 발명의 화합물을 제조하는데 사용되는 다양한 치환체 입체이성질체들, 기하 이성질체들 및 이들의 혼합물들이 상업적으로 입수가능하거나, 상업적으로 사용가능한 출발 물질로부터 합성제조될 수 있거나 또는 이성질체 혼합물로서 제조된 후, 당 분야에 통상의 기술을 가진 자들에게 잘 알려진 기술들을 사용하여, 분해된 이성질체로서 얻어질 수 있음이 이해되어야 한다.

이성질체 기술어들 "R", "S", "E", "Z", "시스" 및 "트랜스"는 코어 분자에 대한 원자 구성(들)을 나타내기 위해 본원에서 기술된 바와 같이 사용되며, 문헌(IUPAC Recommendations for Fundamental Stereochemistry(Section E), Pure Appl. Chem., 1976, 45:13-30)에서 정의된 바와 같이, 사용되는 것으로 의도된다.

본 발명의 화합물들은 이성질체-특이적 합성에 의해 개별 이성질체로서 제조되거나, 이성질체 혼합물로부터 분리될 수 있다. 통상적인 분리 기술은 광학 활성 염을 사용하여 이성질체 쌍의 각 이성질체의 유리 염기를 형성하는 단계(이어, 분별 결정화 및 유리 염기의 재생), 이성질체 쌍의 각 이성질체들의 에스테르 또는 아미드를 형성하는 단계(이어, 크로마토그래피 분리 및 키랄 보조제의 제거) 또는 분취 TLC(박층 크로마토그래피) 또는 키랄 HPLC(고성능/압력 액체 크로마토그래피) 컬럼을 사용하여 출발 물질 또는 최종 생성물의 이성질체 혼합물을 분리하는 단계를 포함한다.

다형태 및 용매화물

또한, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 다형성 결정형태를 가질 수 있거나 비정질일 수 있다. 이와 같이, 이러한 형태들은 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다. 또한, 화합물은 예를 들면, 물(즉, 수화물) 또는 일반적인 유기 용매들(예를 들면, 알콜)과 함께 용매화물을 형성할 수 있다. 본 명세서에 사용된 용어 "용매화물"은 본 발명의 화합물과 하나 이상의 용매 분자들의 물리적 연합을 의미한다. 이 물리적 연합은 수소 결합을 포함하여, 다양한 정도의 이온 결합 및 공유 결합을 포함한다. 특정 예에서, 용매화물은 예를 들어, 하나 이상의 용매 분자가 결정질 고체의 결정 격자에 혼입될 때 분리될 수 있을 것이다. 용어 "용매화물"은 용액-상 및 분리 가능한 용매화물을 모두 포함하는 것으로 의도된다. 적합한 용매화물의 비 제한적인 예는 에탄올레이트, 메탄올레이트 등을 포함한다. 본 발명은 본 발명의 화합물의 용매화물을 그의 범주내에 포함하는 것으로 의도된다. 또한, 본 발명의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염 및 N-옥사이드는 용매화물을 형성할 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염 및 N-옥사이드의 용매화물도 본 발명의 범주 내에 포함된다.

따라서, 본 발명의 치료 또는 예방 방법에서, 용어 "투여하는"은 본 발명의 화합물 또는 그의 용매화물로 본원에 기재된 증후군, 질환 또는 질병을 치료, 개선 또는 예방하기 위한 수단을 포함하며, 구체적으로 개시되지는 않았지만, 본 발명의 범주내에 포함되는 것은 명백하다.

본 발명의 화합물의 제조

화학식 (I)의 화합물은 중수소 가스의 존재하에, 그리고 적당한 촉매, 예를 들면, 팔라듐 촉매, 예컨데, 챠콜 10%상의 팔라듐(10% Pd/C), 또는 Pt 촉매, 팔라듐 촉매(특히 챠콜상의 팔라듐이 바람직함), 적당한 용매, 예를 들면, 메탄올, 중수소화 메탄올(d1-MeOD, d4-MeOD), 테트라히드로퓨란, N-메틸-2-피롤리돈(NMP), 또는 이들의 혼합물, 예컨데, 테트라히드로퓨란과 메탄올의 혼합물 또는 테트라히드로퓨란과 중수소화된 메탄올의 혼합물(특히 후자가 바람직함), 그리고 적당한 염기, 예를 들어 트리에틸아민 또는 탄산나트륨(Na₂CO₃)(특히 후자가 바람직함)의 존재하에 화학식 (II)의 중간체의 환원성 중수소화에 의해 제조될 수 있다. 미량의 물이 수소 공급원으로서 작용할 수 있기 때문에, 촉매는 바람직하게 건조된다. 또한, 촉매는 바람직하게는, 촉매결합 수소를 제거하기 위해 중수소 가스로 예비-중수소화된다. 또한, 촉매는 바람직하게는 촉매결합 수소를 제거하기 위해 세척된다. 용매 혼합물 중 중수소화 메탄올 대 테트라히드로퓨란의 v:v 비율은 바람직하게는 1:9 내지 1:2이고, 바람직하게는 1:4이다.

식 중에서 W₁는 클로로, 브로모 또는 요오도를 나타내며, 요오도가 바람직하다.

화학식 (I)의 화합물은 또한, 적당한 용매, 예컨대 알콜, 예를 들면 n-부탄올의 존재하에, 화학식 (III)의 중간체를 화학식 (IV)의 중간체와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

식 중에서, W₂는 적당한 이탈기, 예를 들면 할로, 예컨데, 클로로 등이다.

화학식 (III)의 중간체 합성에 대해서는 본원에 참고로 인용된 WO2007/075567을 참조할 수 있다.

화학식 (I)의 화합물은 또한, 예를 들면 Pd₂dba₃와 같은 적당한 촉매, 예를 들면, P(tBu₃)BF₄와 같은 적당한 리간드, 예를 들면, Na₂CO₃와 같은 적당한 염기, 및 예를 들면 디옥산과 같은 적당한 용매의 존재하에, 화학식 (V)의 중간체를 화학식 (VI)의 중간체와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

상기 식에서, W₃은 적당한 이탈기, 예를 들면 할로, 예컨데, 클로로 등이다.

화학식 (VI)의 중간체 합성에 대해서는 본원에 참고로 인용된 WO2007/075567을 참조할 수 있다.

화학식 (V)의 중간체는 예를 들면, 알콜과 같은 적당한 용매, 예컨대 n-부탄올 내에서, 화학식 (IV)의 중간체를 화학식 (VII)의 중간체와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

식 중에서, W₃은 앞에서 정의된 바와 같다.

본 발명의 구현예는 화학식 (I)의 화합물을 제조하는 방법에 관한 것으로서,

a) 중수소 가스의 존재하에, 그리고 적당한 촉매, 적당한 용매 또는 적당한 용매 혼합물, 및 적당한 염기의 존재하에, 화학식 (II)의 중간체를 환원성 중수소화하고,

식 중에서,

D는 중수소를 나타내고,

W₁은 클로로, 브로모 또는 요오도를 나타낸다.

b) 적당한 용매의 존재하에, 화학식 (III)의 중간체를 화학식 (IV)의 중간체와 반응시키고,

식 중에서,

D는 중수소를 나타내며,

W₂는 적당한 이탈기이다.

c) 적당한 촉매, 적당한 염기, 및 적당한 용매의 존재하에, 화학식 (V)의 중간체를 화학식 (VI)의 중간체와 반응시키는 것을 특징으로 하고,

식 중에서,

D는 중수소를 나타내며,

W₃은 적당한 이탈기이다.

또는, 원하는 경우, 산 처리를 통해 화학식 (I)의 화합물을 치료적으로 활성인 무독성 산부가 염으로 전환시키거나, 또는 역으로 알칼리 처리를 통해 산 부가 염 형태를 유리 염기로 전환시키거나, 또는 원하는 경우, 용매화물 또는 N-옥사이트 형태로 제조하는 것을 특징으로 한다.

각 화합물 합성의 예는 하기와 같다.

실시예 1

a) 촉매 건조: 촉매 10% Pd/C(Escat 1931, BASF)를 사용 전에 건조시켰다. 다음 조건들이 적용되었다.

ㆍ캐비닛 건조기, 85℃/ < 100mbar/24시간 적용 후 85℃/ < 1mbar/24시간 적용

ㆍ비커 글라스에 습식 촉매를 펼침(5mm 미만 높이로 채우고, 용기를 티슈로 덮음)

b) 촉매의 전-중수소화: 건조 촉매 19.3g(10% Pd/C, Escat 1931, BASF), 탄산나트륨 40.6g(2eq., 0.384mol, Aldrich 71347), 1.6ℓ 테트라히드로퓨란(THF)(Aldrich 87371) 및 200ml d1-메탄올(Aldrich 151939)을 함유하는 진탕된 플라스크(6L, 유리)를 질소로 플러싱하였다. 진탕된 플라스크를 밀봉하고, 3 사이클의 중수소/진공으로 퍼징하고, 최종적으로 중수소 대기(1.05bar, 절대)하에 놓았다. 쉐이커를 시작하고, 촉매를 25℃에서 1시간 동안 예비-중수소화하였다.

중수소 대기를 질소로 대체하여 예비-중수소화를 정지시켰다. 마지막으로, 용매를 경사분리로 제거하였다.

c) 환원성 중수소화 과정: 1.6ℓ THF(Aldrich 87371) 및 390ml d1-메탄올(Aldrich 151939) 중의 출발 물질 1(0.192mol) 96.5g의 슬러리를 예비-중수소화 촉매/첨가제 혼합물에 첨가하였다. 진탕된 플라스크를 밀봉하고, 3사이클의 중수소/진공으로 퍼징하고, 최종적으로 중수소 대기(1.05bar)하에 놓았다. 쉐이커를 시작하고, 중수소 흡수를 모니터링했다.(첫시간 반응시간 동안, 중수소 흡수량은 매우 낮은 수준이었다.)

24 시간의 반응시간 후, 중수소 대기를 질소로 대체하여 중수소화를 중단시켰다. 분석 샘플을 취하여, HPLC로 분석하였다. HPLC 분석에 따르면, 출발 물질이 완전히 전환되었다.

반응 혼합물을 1ℓ 디클로로메탄(DCM)으로 희석하고, 촉매를 여과 제거하고, 및 필터 케이크를 DCM 500ml로 세척하였다. 원하는 생성물 2를 분리시키기 위해, 용매를 45℃/진공에서 증발시켜 제거하였다. 대략 100g의 조 생성물을 황색 고체(여전히 무기염을 함유함)로서 분리하였다.

액체-액체 추출: 조 생성물을 1.6ℓ DCM/111M NaOH에 용해시키고, 분별 깔대기로 옮겼다. 혼합 후, 두 층들을 분리하고, 유기층을 1ℓ의 탈이온수로 세척하였다. 모든 수성 층을 1ℓ DCM으로 2회 추출하였다. 2개의 DCM 층들을 조합하고, Na₂SO₄으로 건조시키고, 마지막으로 용매를 증발(45℃/진공)시켜 제거하였다.

생성물 2(화학식 (I)의 화합물) 65.4g을 황백색(off-white) 고체로서 분리하였다. HPLC 분석에 따르면, 물질의 순도는 97%였다. ¹H-NMR 분석에 기초하여, 퀴놀린 모이어티의 2-위치에서의 중수소 함량은 98.6%였다.

출발 물질 1은 하기 반응식에 따라 제조하였다:

단계 1: 적당한 산화제, 예를 들면, mCPBA(메타-클로로퍼벤조산), 및 적당한 용매, 예를 들면, 디클로로메탄의 존재 하에서 수행. 반응은 실온에서 수행하였다.

단계 2: TosCl(토실 클로라이드; 4-메틸벤젠설포닐 클로라이드), 적당한 염기, 예를 들면, NaOAc(소듐 아세테이트), 및 적당한 용매, 예를 들면, 디클로로메탄의 존재하에 수행, 이어서, LiOH 및 적당한 용매, 예를 들면, 알콜, 예컨대, 메탄올의 존재하에 반응하였다.

단계 3: NaI,(CF₃SO₂)₂O(트리플릭 무수물; 트리플루오로메탄설폰산 무수물)의 존재하에, 적당한 용매, 예를 들면, 아세토니트릴 및 피리딘의 존재하에 수행.

출발 물질 3 합성

실온에서 출발 물질 4(400g)(화합물 A; WO2007/075567), mCBA(메타-클로로퍼벤조산)(1.2eq.) 및 디클로로메탄(10V)(1V는 출발 물질 kg당 1ℓ임)을 17시간 동안 혼합하였다. 혼합물을 pH > 8이 될 때까지 Na₂CO₃의 포화 수용액으로 중화하였다. 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, pH가 약 7이 될 때까지 고체를 물로 세척하였다. 고체를 진공하에 실온에서 건조시켰다. 수율: 출발 물질 3 410g.

출발 물질 2 합성

출발 물질 3(410g), TosCl(토실 클로라이드; 4-메틸벤젠설포닐 클로라이드)(2eq.) 및 디클로로메탄(20V)(1V는 출발 물질 kg당 1리터임)을 혼합하였다. NaOAc(4eq.)를 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반 하였다. 용매를 진공하에 제거하였다. 메탄올을 첨가하였다(20V). 혼합물을 교반하였다. LiOH.H₂O를 첨가하고(5eq.), 그 혼합물을 실온에서 17시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 16V의 메탄올을 제거하고, 20V의 물을 첨가하였다. 혼합물을 약 6의 pH가 될 때까지 진한 HCl로 중화하였다. 혼합물을 0.5시간 동안 교반하고 여과하였다. 고체를 진공하에 50℃에서 건조시켰다. 고체를 물(10V)로 0.5시간 동안 슬러리화하였다. 혼합물을 여과하였다. 고체를 진공하에 50℃에서 건조시켰다. 슬러리화 단계 및 건조 단계를 1회 반복하였다. 수율: 출발 물질 2 375g.

출발 물질 1 합성

출발 물질 2(190g), 피리딘(1eq.) 및 아세토니트릴(10eq.)을 혼합하고, 혼합물을 0℃ 이하로 냉각시켰다.(CF₃SO₂)₂O(4eq.)를 천천히 적가하고, 반응 온도를 5℃ 이하로 조절하였다. 첨가후, 혼합물을 20℃로 가열하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃ 이하로 냉각시켰다. (CF₃SO₂)₂O(1eq.)를 적가하였다. NaI(7V)(1V는 출발 물질 kg 당 1리터임)를 천천히 첨가하고, 반응 온도를 5℃ 이하로 조절하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 50℃로 가열하고, 50℃에서 17시간 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트를 첨가하고, 혼합물을 물, 10% Na₂S₂O₃ 용액, 염수로 세척하였다. 유기층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 겔 크로마토그래피로 정제하였다. 수율: 출발 물질 1 98.5g.

실시예 2:

ㆍ중간체 1의 합성:

실온에서 3-클로로퍼옥시벤조산(13.5g, 78.4mmol)을 CHCl₃(300mL) 중의 6-요오도퀴놀린(CAS 13327-31-6)(10g, 39.2mmol)에 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 2일 동안 교반한 다음, K₂CO₃ 10% 수용액에 부었다. 유기층을 디클로로메탄(DCM)으로 추출하였다. 유기층을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 건조될 때까지 증발시켜, 중간체 1 10.5g(99%)을 수득하였다.

ㆍ중간체 2의 합성:

중간체 1(5.2g, 19.2mmol) 및 D₂O(100mL) 중의 NaOD 용액(D₂O 중 40%)(3.4mL, 48.4mmol)의 혼합물을 100℃로 2일 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. D₂O를 첨가하고 침전물을 여과하고, D₂O로 세척하고, 건조시켜 중간체 2 4.9g(96%)를 수득하였다.

ㆍ중간체 3의 합성:

MeOH(메탄올)(130mL) 중의 중간체 2(4.8g, 17.64mmol), HCOO^-NH₄ ⁺(6.68g, 0.106mol) 및 라니(Raney)의 Ni(6.2g, 0.106mol)의 혼합물을 60℃로 1.5시간 동안가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, D₂O에 붓고, K₂CO₃로 염기화하고, 및 EtOAc(에틸 아세테이트)로 추출하였다. 유기층을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고 건조될 때까지 증발시켰다.

잔류물(4g)을 실리카겔(불규칙한 SiOH 35-40㎛ 80g, 이동상: 100% DCM으로부터 95% DCM 5% CH₃OH 0.1% NH₄OH로 구배)상에서 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 건조될 때까지 증발시켜, 중간체 3 2.9g(83%)을 수득하였다.

ㆍ중간체 4의 합성:

N₂하의 실온에서 디메틸설폭시드(DMSO)(25mL) 중의 CuSO₄.5H₂O(1.95g, 7.8mmol)의 용액에 (+)-나트륨 L-아스코르베이트(2.32g, 11.7mmol)를 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 에틸브로모디플루오로아세테이트(0.55mL, 4.3mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 1.5시간 동안 교반한 다음, 중간체 3(1g, 3.9mmol)을 첨가하였다. 50℃에서 15시간 동안 가열한 후, 혼합물을 10℃로 냉각시키고, NH₂-NH₂·H₂O(4.76mL, 78.1mmol)를 첨가하였다. H₂O(12mL)를 적가하고(발열 반응), 혼합물을 실온에서 20분동안 교반하였다. EtOAc를 첨가하고, 혼합물을 Celite®의 짧은 패드를 통해 여과하였다. 유기층을 추출하고, 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 건조될 때까지 증발시켰다.

잔류물(1g)을 실리카겔 상에서 크로마토그래피(실리카 겔 30㎛ 40g, 이동상: 100% DCM으로부터 90% DCM 10% CH₃OH 0.1% NH₄OH로 구배)로 정제하였다. 순수한 분획물을 수집하고, 건조될 때까지 증발시켜 중간체 4 0.42g(45%)를 수득하였다.

ㆍ중간체 5의 합성:

디옥산(18.4mL) 중의 3,6-디클로로피리다진(4.57g, 0.0031mol), (1-메틸-1H-피라졸-4-일)보론산 피나콜 에스테르(3.82g, 0.0184mol) 및 Na₂CO₃ 2M 용액(18.3mL)의 용액을 1분 동안 교반하였다. PdCl₂(PPh₃)₂(1.29g, 0.0018mol)를 첨가하고, 용액을 80℃에서 15시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물에 부었다. K₂CO₃을 첨가하고, 혼합물을 Celite®의 짧은 패드를 통해 여과하였다. 유기층을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 증발 건조시켰다. Celite®를 CH₂Cl₂로 세척하고, 여과액을 건조시키고(MgSO₄), 증발시켰다. 잔류물을 CH₂Cl₂로부터 결정화시켰다. 침전물을 여과하고, 건조시켜 중간체 5의 제1 배치 1.5g(42%)를 수득하였다. 여과액을 실리카겔 상에서 크로마토그래피(30g의 SiOH15-40㎛, 이동상: CH₂Cl₂100%로부터 CH₂Cl₂ 95%/CH₃OH 5%로의 구배)로 정제하였다. 순수한 분획물을 수집하고, 건조될 때까지 증발시켜, 중간체 5의 제2 배치 1.58g(44%)를 수득하였다.

전체적인 수득율=86%

ㆍ화학식 (I)의 화합물의 합성:

n부탄올(30mL) 중의 중간체 4(0.41g, 1.7mmol) 및 중간체 5[943541-20-6](0.335g, 1.7mmol)의 혼합물을 125℃에서 15시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 건조될 때까지 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 크로마토그래피(40g의 불규칙한 SiOH 35-40㎛, 이동상: 100% DCM으로부터 90% DCM 10% CH₃OH 0.1% NH₄OH로의 구배)로 정제하였다. 순수한 분획물을 수집하고, 건조될 때까지 증발시켰다. 잔류물(0.41g)을 아키랄 SFC(초임계 유체 크로마토그래피)(정지상: 2 에틸피리딘 6㎛ 150x21.2mm, 이동상: 85% CO₂, 15% MeOH)로 정제하였다. 순수한 분획물을 수집하고 건조될 때까지 증발시켰다. 잔류물(0.387g)을 디이소프로필에테르로부터 결정화시켰다. 침전물을 여과하고, 건조시켜 화학식 (I)의 화합물 0.315g(48%, 퀴놀린 모이어티의 2-위치의 중수소 함량=93-94%)을 수득하였다. M.P.=201.6℃(DSC).

실시예 3

ㆍ중간체 6의 합성:

n부탄올(12mL) 중의 중간체 4(0.42g, 1.76mmol) 및 3,6-디클로로피리다진(0.788g, 5.3mmol)의 혼합물을 130℃에서 2시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 건조될때까지 증발시켰다. DCM을 첨가하고, 혼합물을 K₂CO₃의 10% 수용액과 함께 교반하였다. 유기층을 추출하고, 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 건조될때까지 증발시켰다. 잔류물(0.9g)을 실리카겔 상에서 크로마토그래피(40g의 불규칙한 SiOH 35-40㎛, 이동상: 100% DCM으로부터 95% DCM 5% CH₃OH 0.1% NH₄OH로의 구배)로 정제하였다. 순수한 분획물을 수집하고, 건조될 때까지 증발시켜, 중간체 6 0.385g(66%)을 수득하였다.

ㆍ화학식 (I)의 화합물의 합성

밀봉된 관에서, 중간체 6(183mg, 0.55mmol), (1-메틸-1H-피라졸-4-일)보론산 피나콜 에스테르(343mg, 1.65mmol), P(tBu₃)BF₄(47.9mg, 0.165mmol) 및 디옥산(4mL) 중의 Na₂CO₃ 2M(1.65mL, 3.3mmol)의 수용액을 10분동안 N₂로 퍼징하였다. Pd₂dba₃(101mg, 0.11mmol)을 첨가하고, 혼합물을 추가로 5분동안 퍼징하였다. 혼합물을 85℃에서 15시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각시켰다. (1-메틸-1H-피라졸-4-일)보론산 피나콜 에스테르(343mg, 1.65mmol), P(tBu₃)BF₄(47.9mg, 0.165mmol), Pd₂dba₃(101mg, 0.11mmol), 및 Na₂CO₃ 2M(1.65mL, 3.3mmol)의 수용액을 첨가하고, 혼합물을 5시간 동안 85℃로 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, H₂O+K₂CO₃ 중에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 건조될 때까지 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피(24g의 불규칙 SiOH 35-40㎛, 이동상: 100% DCM으로부터 95% DCM 5% CH₃OH 0.1% NH₄OH로 구배)로 정제하였다. 순수한 분획물을 수집하고, 건조될 때까지 증발시켜, 화학식 (I)의 화합물 58mg(28%, 퀴놀린 모이어티의 2-위치의 중수소 함량은 93-94%임)을 수득하였다.

실시예 1에서 중수소/수소의 함량을 측정하는데 사용된 NMR 방법

기구 Bruker Avance 300

용매 CDCl₃

샘플 준비 0.7ml CDCl₃ 중 10-25mg, 여과됨

프로브 헤드 5mm QNP 1H/13

펄스 프로그램 zg30

스캔 횟수 16 또는 254

온도 29℃

휴식시간 4.6초

화학적 이동 ¹H-NMR 예측에 따르면, 8.84ppm의 화학적 이동이 예상된다(ChemOffice). 적분 및 예상 화학적 이동에 기초하여, 수소 신호는 해당 위치에 8.9 ~ 9.0ppm의 범위로 할당되었다.

실시예 2 및 3에서 중수소/수소의 함량을 측정하기 위해 사용된 NMR 방법

기구 Bruker Avance III 500

용매 DMSO 또는 CDCl₃

시료 준비 0.7ml CDCl₃ 또는 DMSO에서 ~ 4mg

프로브 헤드 5mm TXI Z-GRD(¹H/¹³C/¹⁵N)

펄스 프로그램 zg30

스캔 횟수 16

온도 22℃

휴식시간 1초

화학적 이동 9.02ppm의 적분 및 화학적 이동을 기준으로 측정한 중수소/수소 비율.

실시예 1에서 생성물 순도를 측정하기 위한 분석적 HPLC 방법

기구 Agilent Chemstation 1100

컬럼 Agilent Eclipse Plus, C18 4.6 x 100mm, 3.5um

용매 A: 물 + 0.1% TFA; B: ACN + 0.1% TFA

구배 10분내에 1% B에서 100%로, 100% B에서 2분; 게시시간: 2분

유속 1.0ml/분

검출: UV(220nm)

온도 30℃

샘플 농도 1.0mg MeOH 중 0.5mg 생성물

주입 용량 1.0μL

실행시간 14분

체류시간: 생성물 2(화학식 (I)의 화합물): 5.1분

생물학적 활성

이하의 대표적인 분석들은 본 발명의 범위 내에서 화합물의 생물학적 활성을 측정하는데 있어서 수행될 수 있다. 이들은 본 발명을 비-제한적인 방식으로 설명하기 위해 제공된다.

Met 증폭을 전달하고, 화학식 (I)의 화합물에 의한 Met 신호전달에 의존하는 암 세포의 증식 억제

Alamar blue를 이용한 증식 분석

180㎕ 성장배지내의 96-웰 플레이트 상에 세포를 시딩하였다. 성장 곡선 시험에 따라, 웰 당 세포의 양은 각 세포주마다 상이하였다. 세포를 가습된 5% CO₂ 대기에서 37℃의 배양기에서 하룻밤 배양하였다. 다음날: 복합 플레이트를 제조하고, 4㎕의 화합물을 196㎕의 예열된 배지에 첨가하였다. 이것의 20μl를 180μl의 세포에 첨가하였다. 가습된 5% CO₂ 대기에서 37℃에 화합물을 첨가한 후 이것을 4일간 배양하였다. 4일 후, Alamar blue 용액 40μl를 첨가하였다. 이것을 37℃에서 4시간 동안 가습된 5% CO₂ 대기에서 배양하였다(세포주에 의존하여, 이것은 성장 곡선 시험동안 다른시간의 배양 전에 시험되었다). 4시간 후, 여기 530nm, 방출 590nm에서 형광을 측정하였다. 대조군(DMSO 처리)의 형광을 100%로 취하고, 화합물과 함께 배양한 세포들의 형광을 대조군에 대하여 %로 계산하였다. 따라서 용량 반응 곡선을 만들 수 있고, IC₅₀을 계산할 수 있었다.

성장 배지, 사용된 세포 배양 배지:

Snu -5 배지에 대하여

EBC -1 배지에 대하여

결과:

화학식 (I)의 화합물에 의한 투여량 반응에서 Met의 인산화 억제

웨스턴 블롯

세포주: EBC-1 및 Sun-5

샘플들을 SDS-PAGE 상에서 러닝하였다. 그후, 겔을 I-블롯 기계(Invitrogen) 상에서 러닝하였다. 원리: 단백질이 전기에 의해, PDVF 막으로 이동되었다.

PDVF 막을 먼저 블로킹 완충액(오디세이 블로킹 완충액(Odyssey Blocking buffer)(PBS); Licor)으로 실온에서 1시간 동안 블로킹하였다. 블로킹 후, 막을 1차 항체와 함께 4℃에서 밤새 배양하였다. 다음날 블롯을 TBS-tween 0.1%으로 3회 5분 세척하였다. 2차 항체를 실온에서 1시간 동안 블롯 위에 놓았다. 배양 후, 블롯을 TBS-트윈 0.1%로 3회 5분동안 세척하였다. 블롯은 신호를 스캔했다.

사용된 항체:

1차 항체들:

ㆍ세포 신호전달 기술 #3077, 항-pMet(Tyr1234/1235) 토끼 mAb, 1/2,000

ㆍ세포 신호전달 기술 #3127, 항-Met(25H2) 마우스 mAb, 1/1,000

ㆍSigma A1978, 항-b-Act 마우스 mAb, 1/30,000

2차 항체들:

ㆍInvitrogen #A21076, Alexa Fluor® 680 염소 항-토끼 IgG(H+L), 1/4,000

ㆍRockland #610-732-124, 마우스 IgG(H&L) 항체 IRDye800® 접합된 예비-흡착됨, 1/4,000

결과들은 도 1에 도시되어 있다.

뉴질랜드 백색 토끼에서 화합물(I), 화합물 A 및 이들의 대사산물들의 생체 내 약동학적 측정.

수컷 뉴질랜드 토끼들(Crl: KBL(NZW), 찰스강, 프랑스) 및 암컷 뉴질랜드 토끼들(NZW INRA A1077, Center Lago)을 사용하였다. 화합물(화학식 (I)의 화합물 및 화합물 A)마다 1마리의 수컷 토끼 및 2마리의 암컷 토끼들을 2.6±0.2kg의 평균 중량으로 사용하였다. 각각의 개별 동물로부터 완전한 혈장 농도 시간-프로필을 얻었다. 표준 식이와 수돗물을 자유롭게 사용할 수 있었다. 화학식 (I)의 화합물 및 화합물 A를 모두 최종 농도 1mg/ml로 10%(w/v) SBE-B-CD(설포부틸 에테르-베타-시클로덱스트린) 연구 등급(Captisol) 용액에 용해시켰다. HCl 및 PVP K30을 첨가하여, 화합물의 용해를 촉진시켰다. 전체 용해 후, NaOH에 의해 pH를 2.6/2.7까지 상승시켰다. 제형을 실온에서 보관하고, 광으로부터 보호하고, 제조 당일에 LC-MS/MS로 정량분석하였다. 제형의 안정성은 투여 당일에 체크하였다. 10㎖/kg으로 위관 영양법에 의해 동물에게 경구 투여하여, 10㎎/㎏의 최종 투여량을 얻었다. 각각의 투여된 동물로부터, 경구투여 후 30분, 1, 2, 4, 7 및 24시간에 혈액 샘플을 채취하였다. 측부 귀 정맥에서 Multivette® 600 K3E 튜브(Sarstedt)로 다중 샘플링하여 혈액을 수집했다. 시료를 용융 얼음 바로위에 놓고, 약 1900 x g에서 10분동안 4℃에서 원심분리하여, 혈장을 얻었다. 모든 샘플을 일광으로부터 차폐하고, 분석 전 -18℃ 이하에서 보관되었다. 혈장 샘플은 자격을 갖춘 연구 LC-MS/MS 방법을 사용하여, 화합물 (I), 화합물 A, 대사산물 1, 대사산물 2, N-데스메틸 대사산물 3(N-데스메틸 대사산물 4의 곡선에서 계산됨) 및 N-데스메틸 대사산물 4에 대하여 분석하였다. 이 방법의 핵심 분석 성능(선형도, 정량화의 상한 및 하한, 정확도 및 정밀도)이 혈장 농도와 함께 보고되었다. 혈장의 정량화 한계(Lower limit of Quantification, LLOQ)는 모든 화합물에서 1.00ng/ml이었다. Phoenix^TM Professional(버전 6.2.1)을 사용하여 제한된 약동학적 분석을 수행하였다. lin/log 보간법이 적용된 lin/log 사다리꼴 법칙을 사용한 비-구획 분석이 모든 데이터에 사용되었다.

결과

수컷 및 암컷 토끼에 화합물 (I) 10mg/kg을 1회 경구투여한 후, 화학식 (I)의 화합물 및 그의 대사산물의 기본 약동학 파라미터. 화합물 A도 검출되었다(불순물).

* ND: 측정되지 않음

** MRT: 평균 체류시간(시간)

수컷 및 암컷 토끼에 화합물 A 10mg/kg을 1회 경구투여한 후, 화합물 A 및 그의 대사산물의 기본 약동학 파라미터.

* ND: 측정되지 않음

** MRT: 평균 체류시간(시간)

대사산물 1:

6-{디플루오로[6-(1H-피라졸-4-일)[1,2,4]트리아졸로[4,3-b]피리다진-3-일]메틸}퀴놀린-2(1H)-온

대사산물 2:

6-{디플루오로[6-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)[1,2,4]트리아졸로[4,3-b]피리다진-3-일]메틸}퀴놀린-2(1H)-온

N-데스메틸 대사산물 3;

N-데스메틸 대사산물 4;

6-{디플루오로[6-(1H-피라졸-4-일)[1,2,4]트리아졸로[4,3-b]피리다진-3-일]메틸}퀴놀린

화학식 (I)의 화합물에 의한 OCT2 ( SLC22A2 ) 수송 억제에 대한 시험관내 연구

OCT2에 의해 부모세포로부터 또는 안정적으로 형질감염된 중국 햄스터 난소(CHO) 세포들을 사용하여 시험하였다. ¹⁴C-메트포르민을 OCT2 기질로 사용하였다.

OCT2에 의해 부모세포로부터 및 안정적으로 형질감염된 CHO 세포주는 Solvo Biotechnology(헝가리)로부터 수득하였다.

0.03mg/mL L-프롤린, 1% L-글루타민, 페니실린(50-100U/mL), 스트렙토마이신(50-100μg/mL) 및 10%(v/v) 태아 송아지 또는 소혈청(FCS)을 보충한, "CHO 배양배지"로 추가로 지칭되는, DMEM-F12(Dulbecco's Modified Eagle Medium)에서 CHO 세포들을 배양하였다.

1. OCT2 억제 시험

화합물 제형들

필요한 경우, 방사성-표지되지 않은 화합물과 방사성-표지된 화합물을 혼합하여 적절한 화학적 및 방사능 농도를 얻었다. 하기 표에 개시된 용매를 사용하여 스톡 용액(200x)을 제조하였다. 적절한 용매 조절들이 포함되었다. 시험 항목 및 필요한 모든 참조 및 억제 화합물은 이하 표에 언급되어 있다.

부모세포로부터 및 OCT2 로 형질감염된 CHO 세포주들:

배양 과정

T =-24시간

CHO 부모세포 및 OCT2 세포 둘다 CHO 배양 배지 중 24웰 플레이트(1㎖/웰, 400,000세포/웰)에 접종하였다.

실험일

pH 7.4의 10mM HEPES가 보충된 행크 평형 염 용액(Hank's Balanced Salt Solution)^+Ca,+Mg(HBSS^+/+)에서 수송 실험을 수행하였다. 세포와 판에 첨가된 모든 배지는 37℃에서 유지했다.

배양하기 전, 각 웰의 세포들을 37℃에서 1mL HBSS^+/+ + 10mM Hepes pH 7.4로 2회 세척하였다. 다음으로, 참조 기질 및 억제제(또는 억제제 용매)를 함유하는 배양 배지를 첨가하였다(250㎕/웰).

용량 투여시(0분), 액체 섬광 계수(Liquid Scintillation Counting, LSC)에 의한 초기 농도의 측정을 위해, 투여 용액 150㎕를 3회 샘플링하였다. 배양기동안, 플레이트를 37℃에서 유지했다.

반응을 멈추기 위해, 빙냉 HBSS^+/+ 1.5mL를 각 웰에 첨가하고, 액체를 흡인하였다. 다시, 각 웰에 빙냉 HBSS^+/+ 2mL를 첨가하고, 플레이트를 기울어진 상태로 흡인하였다. 최종 웰을 흡인한 다음, 세포들에 접촉하지 않도록 주의하면서 모든 웰들을 다시 흡인하였다.

세포를 용해시키기 위해, 포유동물 단백질 추출제(Mammalian Protein Extraction Reagent)(M-PER) 용해 완충액 250μL를 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 최소 10분(400rpm)동안 진탕시켰다. LSC의 경우, 150μL 샘플/웰을 취하고, 단백질 분석의 경우, 25μL 샘플/웰을 취하였다. 단백질 분석은 바이신코닉산(bicinchoninic acid)(BCA) 방법에 따라 수행되었다.

데이터 분석

데이터는 분당 단백질 1mg당 피코몰(picomoles) 및 대조군(용매 대조군=DMSO)의 백분율로 표시한다. 시그마플롯(Sigmaplot)을 사용하여 IC₅₀ 값을 계산하였다.

결과 및 논의

¹⁴C-메트포르민(OCT2 기질)의 흡수는 OCT2 형질감염된 CHO 세포들에서 부모 세포들에 비해 훨씬 높았다(7.39 및 17.2배). 이 흡수는 양성 대조군 억제제인 300μM 퀴니딘(85.5% 및 100%)에 의해 억제되었다. 이 데이터는 사용된 분석 조건이 OCT2 의존성 수송에 대한 시험 화합물의 억제 효과를 연구하는데 효과적으로 작용함을 나타낸다.

화학식 (I)의 화합물은 OCT2 세포들에서 ¹⁴C-메트포르민 흡수 억제를 나타내었으며, IC₅₀은 0.67±0.02μM이었다.

세포독성 시험

화학식 (I)의 화합물의 세포 독성을 100μM에서 측정하였으며, 이는 CHO 부모세포 및 OCT2 세포 모두에서 측정하였다. 또한 1% 트리톤(Triton)-X100 조건이 양성 대조군 세포독성 시약으로 포함되었다. 배양 1분 후, 상등액을 흡인하고, 건조한 세포를 1mL HBSS^+/+ + 10mM Hepes pH 7.4(37℃)로 2회 세척하였다. 완충액 흡입 후, HBSS^+/+ + 10mM Hepes pH 7.4의 PrestoBlue^TM 생존력 시약(Life Technologies)의 1/10 희석액을 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 60분간 배양하고, 빛으로부터 보호하였다. 각 웰을 흑색의 96-웰 플레이트에서 샘플링(150μL)하고, 형광을 측정하였다(여기: 560nm/12nm 대역, 방출: 590nm/12nm 대역).

결과 및 논의

100μM에서 화학식 (I)의 화합물에 대해 세포독성 효과는 관찰되지 않았다. 양성 대조군 세포독성 시약인, Triton X-100의 1% 용액으로 생존율이 크게 떨어졌다(이하 표 참조). 이것은 가능한 억제효과들이 세포 생존력의 상실과 관련이 없음을 나타낸다.

치료/예방 방법; 화합물의 용도

본 발명의 다른 양태에서, 본 발명의 화합물은 c-Met 활성을 포함하는 티로신 키나아제 활성 또는 발현을 억제하고, c-Met 활성을 포함하는 키나아제 활성 또는 발현을 감소시키고, 세포 또는 대상에서 c-Met의 발현을 조절하는데 사용될 수 있거나, 또는 대상에서 c-Met 키나아제 활성 또는 발현과 관련된 질환을 치료하는데 사용될 수 있다. c-Met 활성의 억제는 c-Met 발현을 간접적으로 조절하는 것으로 생각된다.

이러한 양태에 대한 일 구현예에서, 본 발명은 c-Met의 키나아제 활성을 감소 또는 억제하고, 세포를 화학식 (I)의 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 c-Met의 발현을 조절하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한, c-Met의 키나아제 활성을 감소 또는 억제하고, 대상에게 화학식 (I)의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, 대상의 c-Met의 발현을 조절하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 세포를 화학식 (I)의 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 세포증식을 억제하는 방법을 제공한다. 본 발명은 c-Met의 키나아제 활성을 감소 또는 억제하고, c-Met의 발현을 조절하기 위한 화학식 (I)의 화합물을 추가로 제공한다.

본 명세서에 사용된 용어 "대상"은 치료, 관찰 또는 실험의 피험대상인 동물, 바람직하게는 포유류, 가장 바람직하게는 인간을 의미한다.

본 명세서에 사용된 용어 "접촉"은 화합물이 세포에 의해 흡수되도록, 화합물을 세포에 첨가하는 것을 의미한다.

이러한 양태에 대한 다른 구현예에서, 본 발명은 세포증식성 질환 또는 c-Met와 관련된 질환이 발병할 위험이 있는(또는 발병하기 쉬운) 대상을 치료하기 위한 예방적 및 치료학적 방법을 제공한다. 이러한 질환들은 c-Met 발현(또는 과다 발현) 및/또는 c-Met 변이와 관련된 기존의 질환들을 포함한다.

일 예에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 예방적 유효량의 약학적 조성물을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 세포증식성 질환 또는 c-Met와 관련된 질환을 예방하는 방법을 제공한다. 상기 예방제의 투여는 질병 또는 질환이 예방되거나, 또는 선택적으로 이의 진행이 지연되도록, 세포증식성 질환 또는 c-Met과 관련된 질환의 증상 특징이 발현되기 전에 발생할 수 있다. 본 발명은 세포증식성 질환 또는 c-Met와 관련된 질환을 예방하는데 사용하기 위한 화학식 (I)의 화합물을 제공한다. 본 발명은 세포증식성 질환 또는 c-Met와 관련된 질환을 예방하기 위한 약제를 제조하기 위한, 화학식 (I)의 화합물의 용도를 제공한다.

또 다른 예에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 치료적으로 유효한 양의 약학적 조성물을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상의 세포증식성 질환 또는 c-Met와 관련된 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다. 상기 치료제의 투여는 상기 치료제가 세포증식성 질환 또는 c-Met와 관련된 질환을 보완하는 치료법으로서 역할을 하도록, 질병의 특징적인 증상의 발현과 동시에 발생할 수 있다. 본 발명은 세포증식성 질환 또는 c-Met와 관련된 질환을 치료하기 위한, 화학식 (I)의 화합물을 제공한다. 본 발명은 세포증식성 질환 또는 c-Met와 관련된 질환을 치료하기 위한 약제를 제조하기 위한, 화학식 (I)의 화합물의 용도를 제공한다.

또 다른 예에서, 본 발명은 c-Met 발현 또는 c-Met 활성의 수준 조절이 세포증식성 질환 또는 c-Met와 관련된 질환을 개선시키기 위해 작용할 수 있도록, 대상에서 세포증식성 질환 또는 c-Met와 관련된 질환을 조절하는 방법에 관한 것으로서, 이 방법은 화학식 (I)의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 치료학적 유효량의 약학적 조성물을 대상에게 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명은 c-Met 발현 수준 또는 c-Met 활성 수준의 조절이 세포증식성 질환 또는 c-Met와 관련된 질환을 개선시키기 위해 작용할 수 있도록, 세포증식성 질환 또는 c-Met와 관련된 질환을 조절하는데 사용하기 위한 화학식 (I)의 화합물을 제공한다. 본 발명은 c-Met 발현 수준 또는 c-Met 활성 수준의 조절이 세포증식성 질환 또는 c-Met와 관련된 질환을 개선시키기 위해 작용할 수 있도록, 세포증식성 질환 또는 c-Met와 관련된 질환을 조절하기 위한 약제를 제조하기 위한 화학식 (I)의 화합물의 용도를 제공한다.

용어 "예방적 유효량"이란 용어는 연구원, 수의사, 의사 또는 다른 임상의에 의해 추구되는 질환의 개시를 대상에서 억제 또는 지연시키는 활성 화합물 또는 약제의 양을 의미한다.

본원에서 사용된 용어 "치료학적 유효량"은 연구원, 수의사, 의사 또는 다른 임상의에 의해 추구되는 대상에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 활성 화합물 또는 약제의 양을 의미하며, 치료되는 질병 또는 질환의 증상을 개선시키는 양을 포함한다.

본 약학적 조성물에 대한 치료적 및 예방적 유효량을 결정하는 방법이 당 업계에 공지되어 있다.

본 화합물에 대한 치료적 및 예방적 유효량을 결정하는 방법들이 당 업계에 공지되어 있다.

본원에 사용된 용어 "조성물"은 특정 량의 특정 성분을 포함하는 생성물 뿐만 아니라 특정 량의 특정 성분의 조합으로부터 직접 또는 간접적으로 생성되는 임의의 생성물을 포함하는 것으로 의도된다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어들 "c-Met와 관련된 질환" 또는 "c-Met 수용체 티로신 키나아제와 관련된 질환"은 c-Met 활성, 예를 들면 c-Met의 과잉활성과 관련되거나 연관되는 질병들, 및 이 질병들을 수반하는 질환들을 포함한다. 용어 "c-Met의 과잉활성"은 1) c-Met를 정상적으로 발현하지 않는 세포에서의 c-Met 발현; 2) 정상적으로 활성 c-Met을 보유하지 않은 세포에 의한 c-Met 활성; 3) 원하지 않는 세포증식을 유도하는, 증가된 c-Met 발현; 또는 4) c-Met의 구성적 활성화를 유도하는 돌연변이들을 의미한다. "c-Met와 관련된 질환"의 예로는 비정상적으로 많은 양의 c-Met 또는 c-Met의 돌연변이로 인한 c-Met의 과도한 자극으로 인한 질환, 또는 비정상적으로 많은 양의 c-Met 또는 c-Met의 돌연변이로 인한 비정상적으로 많은 양의 c-Met 활성으로 인한 질환들을 포함한다.

c-Met의 과잉활성은 세포증식성 질환, 종양성 질환 및 암과 같은 다수의 질병의 발병 기전에 연루되어 있다는 것이 알려져있다.

용어 "세포증식성 질환"는 다세포 생물에 해를 입히는(즉, 불편함 또는 기대수명 단축) 다세포 생물에서 세포의 하나 이상의 서브셋의 원하지 않는 세포증식을 의미한다. 세포증식성 질환는 여러 유형의 동물과 인간에서 발생할 수 있다. 세포증식성 질환는 종양성 질환(본원에서 사용된 바와 같이, "종양성 질환"은 비정상적 또는 조절되지 않은 세포 성장으로 인한 종양을 의미함) 및 기타 세포증식성 질환을 포함한다.

c-Met와 관련된 세포증식성 질환의 예들은 종양들 및 암들, 예를 들면, 유전성 및 산발성 인유두상 신세포암종, 유방암, 대장암, 위암종, 신경교종, 난소암, 간세포 암종, 두경부 편평상피세포암종, 고환암종, 기저세포암종, 간암종, 육종, 악성 늑막중피종, 흑색종, 다발성 골수종, 골육종, 췌장암, 전립선 암, 활막 육종, 갑상선암종, 비-소세포 폐암(NSCLC) 및 소세포 폐암, 방광의 이행세포암종, 고환암종, 기저세포암종, 간암종 - 백혈병, 림프종 및 골수종, 예를 들면, 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 전 골수성 백혈병(APL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 호중구성 백혈병(CNL), 급성 미분화 백혈병(AUL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 전림프구성 백혈병(PML), 연소형 골수단구성 백혈병(JMML), 성인 T세포 ALL, 삼계열 골수이형성증을 갖는 AML(AML/TMDS), 혼합 직계성 백혈병(MLL), 골수형성 이상증후군(MDS), 골수증식성 질환(MPD), 다발성 골수종, (MM), 골수성 육종, 비-호지킨 림프종 및 호지킨 질병(또는, 호지킨 림프종이라고도 함)을 포함 - 및 류마티스, 관절염 및 망막병증과 같은 새로운 혈관 형성과 관련된 질병들을 포함한다.

c-Met의 과잉활성이 그들의 병인 발생과 관련되어 있는, 다른 세포증식성 질환는 c-Met가 과발현되지 않거나 다른 방식으로 변형된 암을 포함하여, 침윤성/전이성 표현형에 c-Met 활성이 기여하는 암들을 포함한다.

이러한 양태에 대한 또다른 구현예에서, 본 발명은 대상에서 세포증식성 질환 또는 c-Met와 관련된 질환의 발병을 치료 또는 억제하기 위한 병용 요법을 포함한다. 병용 요법은 치료적 또는 예방적 유효량의 화학식 (I)의 화합물 및 화학요법, 방사선 요법, 유전자 요법 및 면역 요법을 포함하는 하나 이상의 다른 항-세포증식 요법을 대상에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 화학요법과 병용하여 투여될 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 화학요법은 화학요법제를 포함하는 치료법을 의미한다. 따라서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 및 다른 화학요법제의 조합에 관한 것이다. 다양한 화학요법제들이 본원에 개시된 병용 치료방법들에 사용될 수 있다. 예로서 고려되는 화학요법제는 백금 화합물(백금 함유 항암제)(예를 들면, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴); 탁산 화합물(예를 들면, 파클리탁셀, 도세탁솔); 캄포토테신 화합물(이리노테칸, 토포테칸); 빈카 알칼로이드(vinca alkaloids)(예를 들면, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈); 항-종양 뉴클레오시드 유도체(예를 들면, 5-플루오로우라실, 류코보린, 겜시타빈, 카페시타빈); 알킬화제(예를 들면, 시클로포스파미드, 카르무스틴, 로무스틴, 티오테파); 에피포도필로톡신/포도필로톡신(예를 들면, 에토포시드, 테니포시드); 아로마타제 억제제(예를 들면, 아나스트로졸, 레트로졸, 엑세메스탄); 항-에스트로겐 화합물(예를 들면, 타목시펜, 풀베스트란트), 항엽산제(예를 들면, 페메트렉시드 이나트륨염(premetrexed disodium)); 저메틸화제(예를 들면, 아자시티딘); 생물학적 제제(예를 들면, 겜투자맙, 세툭시맙, 리툭시맙, 퍼투주맙, 트라스투주맙, 베바시주맙, 에를로티닙); 항생제/안트라사일린(예를 들면, 이다루비신, 악티노마이신 D, 블레오마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 마이토마이신 C, 닥티노마이신, 카르미노마이신, 다우노마이신); 항대사제(예를 들면, 클로파라빈, 아미노프테린, 시토신 아라비노사이드, 메토트렉세이트); 튜불린-결합제(예를 들면, 콤브레타스타틴, 콜키친, 노코다졸); 토포아이소머라제 억제제(예를 들면, 캄토테신); 분화제(예를 들면, 레티노이드, 비타민 D 및 레티노산); 레티노산 대사 차단제(RAMBA)(예를 들면, 아큐탄); 키나아제 억제제(예를 들면, 플라보페리돌, 이마티닙 메실레이트, 게피티닙); 파네실트랜스퍼라제 억제제(예컨대, 티피파닙); 히스톤 데아세틸라제 억제제; 유비퀴틴-프로테아좀 경로의 억제제(예를 들면, 보르테조밉, 욘델리스); FGFR(섬유아세포 성장인자 수용체) 억제제를 포함하지만, 여기에 제한되지는 않는다.

일 구현예에서, 본 명세서에 설명된 바와 같이 특히 병용하여 사용될 수 있는 화학요법제들은 특히 화학식 (I)의 화합물의 OCT2 억제 활성의 견지에서, 백금 화합물들(백금 함유 항암제)(예를 들면, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴)이다. 이러한 조합은 백금 화합물의 부작용을 감소시킬 수 있으며, 따라서 백금 화합물을 사용하여 보다 긴 치료기간을 제공할 수 있다. 따라서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 및 백금 함유 항암제, 예를 들면, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴의 조합에 관한 것이다. 일 양태에서, 본 발명은 백금 함유 항암제, 예를 들면 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴을 제1 유효성분으로, 및, 화학식 (I)의 화합물을 제2 유효성분으로 함유하고, 암 환자의 치료시에 동시에, 별도로 또는 순차적으로 사용하기 위한 조합물로서 함유하는 생성물에 관한 것이다.

본 발명의 조합에서, 백금 함유 항암제, 예컨대 예를 들면, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴 및 화학식 (I)의 화합물은 각각 독립적으로 판매될 수 있지만, 이들을 조합사용하기 위한 표시 또는 지시를 갖는, 별도의 약학 투여형태로 제형화될 수 있다. 상기 표시 또는 지시는 환자 리플릿 등의 형태, 또는 예를 들면, 서면 또는 구두 형식의 임의의 통신의 형태로 될 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 설명된 바와 같이 특히 조합하여 사용될 수 있는 화학요법제는 FGFR 억제제이다. 이러한 조합들은 특히 화학식 (I)의 c-Met 억제제가 FGFR 억제제, 특히 본 발명에 설명된 FGFR 억제제에 대한 종양 또는 암의 내성을 방지하고, 내성을 지연시키거나, 내성 발생을 방지하거나, 내성 발생을 방지하거나 내성발생을 지연시키기 위해 사용될 수 있다는 점에서 특히 중요할 수 있다.

일 양태에서, 본 발명은 암 환자의 치료시에 동시에, 별도로 또는 순차적으로 사용하기 위한 조합물로서, 제1 유효성분으로 FGFR 억제제 함유하고, 제2 유효성분으로 화학식 (I)의 화합물을 함유하는 생성물에 관한 것이다.

FGFR 억제제 및 화학식 (I)의 화합물은 동시에(예를 들면, 별도의 또는 단일의 조성물로) 또는 임의의 순서로 순차적으로 투여될 수 있다. 후자의 경우, 두 화합물은 유리한 또는 상승 효과가 달성되는 것을 보장하기에 충분한 양 및 방식으로 기간내에 투여될 것이다. 바람직한 투여방법 및 투여 순서 및 조합의 각 성분에 대한 각각의 투여량 및 투여 방식은 투여되는 본 발명의 조합물의 다른 특정 약제 및 화합물, 그들의 투여 경로, 치료되고자하는 특정 종양 및 치료되고자 하는 특정 숙주에 따라 달라질 것이 분명할 것이다. 최적의 투여 방법 및 투여 순서, 및 투여량 및 투여 요법(regime)은 당 분야의 숙련자에 의해 통상적인 방법을 사용하여 및 본원에 설명된 정보를 고려하여, 용이하게 결정될 수 있다. 조합 화합물의 중량비는 당업자에 의해 결정될 수 있다. 상기 비율 및 정확한 투여량 및 투여빈도는 조합의 특정 화합물, 치료되는 특정 질환, 치료되는 질환의 중증도, 연령, 체중, 성별, 식이, 투여시간 및 특정 환자의 일반적인 물리적 상태, 투여 방식 뿐만 아니라 당업자에게 잘 알려진 바와 같이 개인이 복용할 수 있는 다른 약제에 따라 다르다. 또한, 유효 1일 양은 치료받는 대상의 반응 및/또는 본 발명의 조합들을 처방하는 의사의 평가에 따라 낮아지거나 증가될 수 있음이 명백하다. FGFR 억제제 및 화학식 (I)의 화합물에 대한 중량/중량 비율은 1/10 내지 10/1, 더욱 상세하게는 1/5 내지 5/1, 더욱더 상세하게는 1/3 내지 3/1일 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 조합들 중 FGFR 억제제 및 화학식 (I)의 화합물은 임의의 순서로, 별도의 투여 스케줄에 따라 순차적으로 투여된다. 이 경우, 두 화합물들은 유리한 또는 상승 효과가 달성되도록 보장하기에 충분한 양 및 방식으로 일정 기간내에 투여될 것이다.

본 발명의 조합에서, FGFR 억제제 및 화학식 (I)의 화합물은 서로 독립적으로 판매될 수 있지만, 이들의 병용 사용에 대한 표시 또는 지시와 함께 별도의 약학적 투여 형태로 제형화될 수 있다. 상기 표시 또는 지시는 환자 리플릿 등의 형태일 수 있거나, 예를 들면 서면 또는 구두 형식의 임의의 통신의 형태일 수 있다.

본 발명의 조합에서, FGFR 억제제 및 화학식 (I)의 화합물은 동일한 투여 경로 또는 상이한 투여 경로를 통해 투여될 수 있다.

일 구현예서, 본 발명의 조합 중 FGFR 억제제 및 화학식 (I)의 화합물은 동일한 투여 경로, 특히 경구 경로를 통해 투여된다.

본 발명은 또한 특히 FGFR 티로신 키나아제 활성 매개 질병, 특히 암의 치료에서, 동시에, 별도로 또는 순차적으로 사용하는 것에 대한 지침서와 함께 본 발명에 따른 조합들을 포함하는 약학적 제품 또는 상업용 패키지에 관한 것이다.

일 구현예에서, 본 발명의 조합에서, FGFR 억제제 및 화학식 (I)의 화합물은 동시에 투여된다.

FGFR 억제제로서 화합물 X 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 용매화물을 포함하는 본 발명의 조합의 경우, 화합물 X가 리소좀성 성질을 나타내고, 장기적인 타겟이 셧다운되기 때문에, 화학식 (I)의 화합물보다 덜 빈번하게 상기 화합물을 투여하는 것이 유리할 수 있다.

본 발명의 조합 중 FGFR 억제제 및 화학식 (I)의 화합물은 또한 단일 제형으로 함께 제형화될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명은 약학적으로 허용가능한 담체 및 제1 유효성분으로서 FGFR 억제제, 특히 N-(3,5-디메톡시페닐)-N'-(1-메틸에틸)-N-[3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)퀴녹살린-6-일]에탄-1,2-디아민 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 용매화물, 및 N-(2-플루오로-3,5-디메톡시페닐)-N-(1H-이미다졸-2-일메틸)-3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)피리도[2,3-b]피라진-6-아민 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 용매화물; 및 제2 유효성분으로서 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

FGFR 억제제의 예

*) N-(3,5-디메톡시페닐)-N'-(1-메틸에틸)-N-[3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)퀴녹살린-6-일]에탄-1,2-디아민(화합물 X)은 하기 화학식으로 나타낸다:

*) N-(2-플루오로-3,5-디메톡시페닐)-N-(1H-이미다졸-2-일메틸)-3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)피리도[2,3-b]피라진-6-아민(화합물 Y)이 하기 화학식으로 나타낸다:

화합물 N-(3,5-디메톡시페닐)-N'-(1-메틸에틸)-N-[3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)퀴녹살린-6-일]에탄-1,2-디아민(화합물 X) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 용매화물, 및 N-(2-플루오로-3,5-디메톡시페닐)-N-(1H-이미다졸-2-일메틸)-3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)피리도[2,3-b]피라진-6-아민(화합물 Y) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 용매화물, 및 그의 화학적 합성은 WO2011/135376 및 WO2013/061080에 기술되어 있으며, 이들 문헌은 본원에 참고문헌으로 인용된다. 이들은 특정 단백질 티로신 키나아제, 특히 FGFR의 활성 억제제 또는 조절제로서 기술되어 있으며, 따라서 상기 화합물은 상기 티로신 키나아제, 특히 FGFR에 의해 매개되는 질병 상태 또는 질환의 치료 또는 예방, 특히 치료에 유용하다. 상기 화합물은 암의 치료 또는 예방, 특히 치료에 유용하다.

WO2011/135376에는 화합물 X가 염산염으로 예시되어 있다. WO2013/061080에는 화합물 Y가 황산염, 염산염, 인산염, 젖산염, 푸마레이트 염으로 예시되어 있다.

본원에 기술된 FGFR 키나아제 억제제 화합물 X 및 Y는 FGFR 조절해제에 의해 질병이 유발되는 환자 하위-그룹에서 상기 표적화제를 사용할 새로운 기회를 제공하는 분화된 선택도 프로필을 갖는다. 본원에 기술된 FGFR 키나아제 억제제 화합물 X 및 Y는 추가의 키나아제, 특히 VEGFR, 더욱 상세하게는 VEGFR2 및 PDGFR, 특히 PDGFR-베타에 대한 감소된 억제 작용을 나타내며, 분화된 부작용 또는 독성 프로필을 가질 기회를 제공하며, 이러한 징후들을 보다 효과적으로 치료할 수 있게 한다. VEGFR2 및 PDGFR-베타 억제제는 각각 고혈압 또는 부종과 같은 독성 들과 관련되어있다. VEGFR2 억제제의 경우, 이 고혈압 효과는 종종 용량을 제한하고, 특정 환자 그룹에서는 금기될 수 있으며, 임상 관리가 필요한다. 본원에 기재된 FGFR 키나아제 억제제 화합물 X 및 Y는 FGFR1, 2, 3 및 4 억제제들이다.

혈관 내피성장인자( VEGFR )

혈관 내피성장인자(VEGF)인, 폴리펩티드는 시험관내 내피세포들의 분열을 촉진하며, 생체내 혈관형성반응을 자극한다. VEGF는 또한, 부적절한 혈관신생과 연관되어있다. VEGFR(들)은 단백질 티로신 키나아제(PTKs)이다. PTK는 세포 기능에 관여하는 단백질의 특정 티로신 잔기들의 인산화를 촉매하여, 세포 성장, 생존 및 분화를 조절한다.

VEGF에 대한 3가지 PTK 수용체가 확인되었다: VEGFR-1(Flt-1); VEGFR-2(Flk-1 또는 KDR) 및 VEGFR-3(Flt-4). 이 수용체들은 혈관신생에 관여하며, 신호 전달에 참여한다. 특히 중요한 것은 내피 세포에서 주로 발현되는 트랜스막 수용체 PTK인 VEGFR-2이다. VEGF에 의한 VEGFR-2의 활성화는 종양 혈관신생을 개시하는 신호 전달 경로에서 중요한 단계이다. VEGF 발현은 종양 세포를 구성할 수 있으며, 또한 특정 자극에 반응하여 상향 조절될 수 있다. 그러한 자극 중 하나는 저산소 상태이며, VEGF 발현은 종양 및 관련 숙주 조직 모두에서 상향조절된다. VEGF 리간드는 그의 세포외 VEGF 결합부위와 결합함으로써 VEGFR-2를 활성화시킨다. 이것은 VEGFR의 수용체 이합체화 및 VEGFR-2의 세포내 키나아제 도메인에서의 티로신 잔기의 자가 인산화를 유도한다. 키나아제 도메인은 ATP로부터 티로신 잔기로 인산염을 전달하여, VEGFR-2의 하류에 있는 신호전달 단백질에 대한 결합 부위를 제공하여, 궁극적으로 혈관신생을 개시한다.

PDGFR

악성 종양은 조절되지 않는 세포증식의 산물이다. 세포 성장은 성장-촉진 요인과 성장-억제 요인 사이의 정교한 균형에 의해 제어된다. 정상 조직에서, 이러한 요인들의 생성과 활성은 기관의 정상적인 완전성과 기능을 유지하는, 제어되고 조절된 방식으로 분화된 세포를 성장시킨다. 악성 세포는 이 제어를 회피하며; (다양한 기작을 통해) 자연적 균형이 교란되고, 조절되지 않고 비정상적인 세포 성장이 일어난다. 종양 발달에서 중요한 성장 인자는 세포 표면 티로신 키나아제 수용체(PDGFR)를 통해 신호하고 성장, 증식 및 분화를 비롯한 다양한 세포 기능들을 자극하는 펩티드 성장인자들의 구성원을 포함하는 혈소판-유도 성장인자(PDGF)이다.

*) 하기 구조식을 갖는 BGJ398 (3-(2,6-디클로로-3,5-디메톡시페닐)-1-[6-[4-(4-에틸피페라진-1-일)아닐리노]피리미딘-4-일]-1-메틸우레아)

*) 하기 구조식을 갖는 AZD-4547 (N-(5-(3,5-디메톡시페네틸)-1H-피라졸-3-일)-4-((3S,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)벤즈아미드)

*) 하기 구조식을 갖는 PD 173074 (N-[2-[[4-(디에틸아미노)부틸]아미노]-6-(3,5-디메톡시페닐)피리도[2,3-d]피리미딘-7-일]-N'-(1,1-디메틸에틸)우레아)

*) 하기 구조식을 갖는 LY-2874455 ((R,E)-2-(4-(2-(5-(1-(3,5-디클로로피리딘-4-일)에톡시)-1H-인다졸-3-일)비닐)-1H-피라졸-1-일)에탄올)

*) 브리바닙(Brivanib)(알라니네이트) (S)-(R)-1-((4-((4-플루오로-2-메틸-1H-인돌-5-일)옥시)-5-메틸피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일)옥시)프로판-2-일 2-아미노프로파노에이트.

*) 인테다닙(Intedanib)

*) 도비티닙(Dovitinib)

*) 세디라닙(Cediranib)

*) 마시티닙(Masitinib)

*) 오란티닙(Orantinib)

*) 포나티닙(Ponatinib)(AP24534)

*) E-7080(렌바티닙(lenvatinib))

*) E-3810(루시타닙(lucitanib))

*) BAY1163877, TAS-120, ARQ087, ASP5878, FF284,

*) 항체 또는 관련 화합물, 예컨대 예를 들면 HGS1036/FP-1039; MFGR1877S; AV-370; GP369/AV-396b; HuGAL-FR21; 단일클론 항체(BAY1179470, RG-7444)

본원에 기술된 조합들을 위한 추가의 유용한 제제들은 허용된 화학 치료제에 내성인 종양 세포에서 화학민감성을 확립하고, 약물-민감성 악성 종양에서 상기 화합물의 효능을 강화시키기 위한 항종양제와 병용하여 사용가능한 것으로 밝혀진 칼슘 길항제, 베라파밀을 포함한다. Simpson WG, The calcium channel blocker verapamil and cancer chemotherapy. Cell Calcium. 1985 Dec;6(6):449-67을 참조한다. 또한, 본 발명의 화합물과 조합하여 사용가능한 것으로서 화학요법제가 부상되고 있는 것이 고려된다.

본 발명의 다른 구현예에서, 본 발명의 화합물은 방사선 요법과 병용 투여될 수 있다. 본원에 사용된, "방사선 요법"은 방사선 요법을 필요로 하는 대상을 방사선에 노출시키는 것을 포함하는 요법을 의미한다. 이러한 치료는 당업자에게 공지되어있다. 방사선 요법의 적절한 계획은 방사선 요법이 단독으로 또는 다른 화학요법제와 함께 사용되는 임상 요법에서 이미 사용된 것과 유사할 것이다.

본 발명의 다른 구현예에서, 본 발명의 화합물은 유전자 요법과 병용 투여될 수 있다. 본 명세서에 사용된, "유전자 요법"은 종양 발생에 관여하는 특정 유전자들을 표적으로 하는 치료를 의미한다. 가능한 유전자 치료 전략에는 결함 암-억제 유전자의 복원, 성장 인자 및 그의 수용체를 코딩하는 유전자들에 상응하는 안티센스 DNA에 의한 세포 형질도입 또는 형질감염, RNA-계 전략들, 예컨대 리보자임, RNA 디코이(decoy), 안티센스 메신저 RNA 및 작은 간섭 RNA(siRNA) 분자들, 및 소위 '자살유도 유전자(suicide gene)'를 포함한다.

본 발명의 다른 구현예에서, 본 발명의 화합물은 면역 요법과 병용 투여될 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, "면역 요법"은 상기 단백질에 특이적인 항체들을 통한 종양 발생에 관여되는 특정 단백질을 표적으로 하는 치료를 의미한다. 예를 들면, 혈관 내피성장인자에 대한 단일클론 항체가 암 치료에 사용되어왔다.

본 발명의 화합물 이외에 제2 약제가 사용되는 경우, 두 약제는 어느 정도의 순서로, 거의 동시에, 또는 별도의 투여 계획에 따라 (예를 들면, 별도의 또는 단일 조성물로) 동시에 투여될 수 있다. 후자의 경우, 두 화합물은 유리한 또는 상승 효과가 달성되는 것을 보장하기에 충분한 양 및 방식으로 일정 기간내에 투여될 것이다. 조합의 각 성분에 대한 바람직한 투여방법 및 투여순서 및 각각의 투여량 및 투여방식은 본 발명의 화합물과 함께 투여되는 특정 화학요법제, 이들의 투여경로, 치료되는 특정 종양 및 치료되는 특정 숙주에 따라 다를 것이 분명할 것이다.

당업자가 이해할 수 있는 바와 같이, 적절한 용량의 화학요법제는 일반적으로 화학요법제를 단독으로 또는 다른 화학요법제와 조합하여 투여하는 임상 요법에서 이미 사용된 양과 유사하거나 또는 그 양보다 작을 것이다.

최적의 투여방법 및 투여순서 및, 투여량 및 투여방법은 당 분야의 숙련자에 의해 통상적인 방법을 사용하여 및 본원에 기재된 정보를 고려하여 용이하게 결정될 수 있다.

단지 일례로서, 백금 화합물은 치료과정마다 체 표면적의 평방미터당 1 내지 500mg(mg/㎡), 예를 들면, 50 내지 400mg/㎡, 특히 시스플라틴에 대하여는 약 75mg/㎡의 투여량으로, 및 카보플라틴에 대하여는 약 300mg/㎡의 투여량으로 유리하게 투여된다. 시스플라틴은 경구로 흡수되지 않으므로, 정맥내, 피하, 종양내 또는 복강내 주사로 전달해야한다.

단지 일례로서, 탁산 화합물은 치료과정마다 체 표면적의 평방미터당 50 내지 400mg(mg/㎡), 예를 들면, 75 내지 250mg/㎡, 특히 파클리탁셀에 대하여는 약 175 내지 250mg/㎡의 투여량으로, 및 도세탁셀에 대하여는 약 75 내지 150mg/㎡의 투여량으로 유리하게 투여된다.

단지 일례로써, 캄토테신 화합물은 치료과정마다 체 표면적의 평방미터당 0.1 내지 400mg(mg/㎡), 예를 들면, 1 내지 300mg/㎡, 특히 이리노테칸에 대하여는 약 100 내지 350mg/㎡의 투여량으로, 및 토포테칸에 대하여는 약 1 내지 2mg/㎡의 투여량으로 유리하게 투여된다.

단지 일례로서, 빈카 알칼로이드는 치료과정마다 체 표면적의 평방미터당 2 내지 30mg(mg/㎡), 특히 빈블라스틴에 대하여는 약 3 내지 12mg/㎡의 투여량으로, 빈크리스틴에 대하여는 약 1 내지 2mg/㎡의 투여량으로, 및 비노렐빈에 대하여는 약 10 내지 30mg/㎡의 투여량으로 유리하게 투여될 수 있다.

단지 일례로서, 항-종양 뉴클레오시드 유도체는 체 표면적의 평방미터당 200 내지 2500mg(mg/㎡), 예를 들면, 700 내지 1500mg/㎡의 투여량으로 유리하게 투여될 수 있다. 5-플루오로우라실(5-FU)은 일반적으로 200 내지 500mg/㎡(바람직하게는, 3 내지 15mg/kg/일)의 투여량 범위로 정맥내 투여를 통해 사용된다. 겜시타빈은 약 800 내지 1200mg/㎡의 투여량으로 유리하게 투여되며, 및 카페시타빈은 치료과정마다 약 1000 내지 2500mg/㎡의 양으로 유리하게 투여된다.

단지 일례로서, 알킬화제는 치료과정마다 체 표면적의 평방미터당 100 내지 500mg(mg/㎡), 예를 들면, 120 내지 200mg/㎡의 투여량으로, 특히 시클로포스파미드에 대하여는 약 100 내지 500mg/㎡의 투여량으로, 클로람부실에 대하여는 약 0.1 내지 0.2mg/kg 체중의 투여량으로, 카무스틴에 대하여는 약 150 내지 200mg/㎡의 투여량으로, 및 로무스틴에 대하여는 약 100 내지 150mg/㎡의 투여량으로 유리하게 투여될 수 있다.

단지 일례로써, 포도필로톡신 유도체는 치료과정마다 체 표면적의 평방미터당 30 내지 300mg(mg/㎡), 예를 들면, 50 내지 250mg/㎡의 투여량으로, 특히 에토포시드에 대하여는 약 35 내지 100㎎/㎡의 투여량으로, 및 테니포시드에 대하여는 약 50 내지 250㎎/㎡의 투여량으로 유리하게 투여될 수 있다.

단지 일례로써, 안트라사이클린 유도체는 치료과정마다 체 표면적의 평방미터당 10 내지 75mg(mg/㎡), 예를 들면, 15 내지 60mg/㎡의 투여량으로, 특히 독소루비신에 대하여는 약 40 내지 75㎎/㎡의 투여량으로, 다우노루비신에 대하여는 약 25 내지 45㎎/㎡의 투여량으로, 및 이다루비신에 대하여는 약 10 내지 15㎎/㎡의 투여량으로 유리하게 투여될 수 있다.

단지 일례로써, 항-에스트로겐 화합물은 치료되는 특정 약제 및 질환에 따라 매일 약 1 내지 100mg의 투여량으로 유리하게 투여될 수 있다. 타목시펜은 유리하게는 1일 2회 5 내지 50mg, 바람직하게는 10 내지 20mg의 투여량으로 경구투여되어, 치료 효과를 달성하고 유지하기에 충분한 시간 동안 치료를 계속한다. 토레미펜은 1일 1회 약 60mg의 투여량으로 유리하게 경구 투여되어, 치료 효과를 달성하고 유지하기에 충분한 시간 동안 치료를 계속한다. 아나스트로졸은 유리하게는 1일 1회 약 1mg의 투여량으로 경구투여된다. 드롤록시펜은 유리하게는 1일 1회 약 20~100mg의 투여량으로 경구투여된다. 랄록시펜은 유리하게는 1일 1회 약 60mg의 투여량으로 경구투여된다. 엑세메스탄은 유리하게는 1일 1회 약 25mg의 투여량으로 경구투여된다.

단지 일례로써, 생물학적 제제는 치료과정마다 체 표면적의 평방미터당 약 1 내지 5mg(mg/㎡)의 투여량으로, 또는 상이할 경우 당 업계에 공지된 투여량으로 유리하게 투여될 수 있다. 예를 들면, 트라스투주맙은 유리하게는 치료과정마다 1 내지 5mg/㎡, 특히 2 내지 4mg/㎡의 투여량으로 투여된다.

투여량은 예를 들면, 치료과정마다 1회, 2회 또는 그 이상 투여될 수 있으며, 이는 예를 들면, 7, 14, 21 또는 28일마다 반복될 수 있다.

본 발명의 화합물은 대상에게 전신적으로, 예컨대 정맥내, 경구, 피하, 근육내, 피부내 또는 비경구로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 국소적으로 대상에게 투여될 수 있다. 국소 전달 시스템의 비-제한적인 예는 혈관내 약물 전달 카테터, 와이어, 약동학 스텐트 및 내강내 포장(endoluminal paving)을 포함하는 관내 의료장치들의 용도를 포함한다. 특히, 본 발명의 화합물은 경구 투여된다.

본 발명의 화합물은 표적 부위에서 화합물의 높은 국소 농도를 달성하기 위해, 표적제와 조합하여 대상에게 추가 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 약물 또는 제제를 수시간 내지 수주의 기간동안 표적 조직과 접촉하여 유지시키는 목적으로 빠른-방출(속방) 또는 느린-방출(서방)을 위해 제형화될 수 있다.

본 발명은 또한 화학식 (I)의 화합물을 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 약학적 조성물은 약 0.1mg 내지 1000mg, 바람직하게는 약 100 내지 500mg의 화합물을 함유할 수 있으며, 선택된 투여 방식에 적합한 임의의 형태로 구성될 수 있다.

문구 "약학적으로 허용가능한"은 동물, 또는 인간에게 적절하게 투여될 때 부작용, 알레르기 반응 또는 다른 부적당한 반응을 일으키지 않는 분자 개체 및 조성물을 의미한다. 수의학적 용도는 본 발명에 동등하게 포함되며, "약학적으로 허용가능한" 조성물은 임상적 및/또는 수의학적 용도의 조성물을 포함한다.

담체들은 결합제, 현탁제, 윤활제, 착향제, 감미료, 방부제, 염료 및 코팅제를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 필수 및 비활성 약학적 부형제를 포함한다. 경구 투여에 적합한 조성물은 고체 형태, 예컨대 환제, 정제, 당의정, 캡슐(각각 속방성, 시간 방출 및 서방성 제형을 포함함), 과립 및 분말, 및 액체 형태들, 예컨대 용액, 시럽, 엘릭서, 에멀젼 및 현탁액을 포함한다. 비경구 투여에 유용한 형태들은 무균 용액, 에멀젼 및 현탁액을 포함한다.

본 발명의 약학적 조성물은 또한 본 발명의 화합물의 서방성을 위한 약학적 조성물을 포함한다. 상기 조성물은 본 발명의 서방형 담체(전형적으로, 중합성 담체) 및 화합물을 포함한다.

서방형 생분해성 담체는 당 업계에 잘 알려져 있다. 이들은 활성 화합물을 포획하고 적합한 환경(예를 들면, 수성, 산성, 염기성 등) 하에서 서서히 분해/용해되어, 체액내에 분해/용해되고, 활성 화합물(들)을 그 안에 방출하는 입자들을 형성할 수 있는 물질이다. 입자들은 바람직하게는 나노 입자들(즉, 직경 약 1 내지 500nm, 바람직하게는 직경 약 50-200nm, 및 가장 바람직하게는 직경 약 100nm의 범위임)이다.

본 발명은 또한 본 발명의 약학적 조성물을 제조하는 방법을 제공한다. 유효성분으로서의 화학식 (I)의 화합물은 종래의 약학적 배합 기술에 따라 약학적 담체와 친밀하게 혼합되며, 담체는 투여, 예를 들면 경구 또는 비경구 투여, 예컨대 근육내 투여를 위해 필요한 제제의 형태에 따라 다양한 형태를 취할 수 있다. 경구 투여형태로 조성물을 제조하는 경우, 임의의 통상적인 약학적 매질이 사용될 수 있다. 따라서, 액상 경구 제제, 예컨대, 예를 들면 현탁액, 엘릭서 및 용액의 경우, 적합한 담체 및 첨가제는 물, 글리콜, 오일, 알콜, 향료, 방부제, 착색제 등을 포함하며; 고체 경구 제제, 예컨대 예를 들면, 분말, 캡슐, 당의정, 겔 캡 및 정제의 경우, 적합한 담체 및 첨가제는 전분, 당, 희석제, 과립화제, 윤활제, 결합제, 붕 해제 등을 포함한다. 투여가 용이하기 때문에, 정제 및 캡슐이 가장 유리한 경구투여 단위형태를 나타내며, 이 경우 고체 약학적 담체가 명백하게 사용된다. 원하는 경우, 정제는 표준 기술로 (당)코팅되거나 장용 코팅될 수 있다. 비경구용으로, 담체는 일반적으로 멸균수를 포함할 것이지만, 예를 들어 용해도를 보조하거나 또는 보존하기 위한 목적으로 다른 성분들이 포함될 수 있다. 주사 가능한 현탁액도 또한 제조될 수 있으며, 이 경우 적합한 액체 담체, 현탁제 등이 사용될 수 있다. 서방형을 제조하는 경우, 예를 들면 서방형 담체, 전형적으로 중합성 담체 및 본 발명의 화합물을 먼저 유기 용매에 용해 또는 분산시킨다. 그후, 수득된 유기 용액을 수용액에 첨가하여, 수중유형 에멀젼을 얻는다. 바람직하게는, 수용액은 계면활성제(들)을 포함한다. 이어서, 수중유형 에멀젼으로부터 유기 용매를 증발시켜, 본 발명의 서방형 담체 및 화합물을 함유하는 입자들의 콜로이드성 현탁액을 얻는다.

본 발명의 약학적 조성물은 투여 단위당, 예를 들면, 정제, 캡슐, 분말, 주사제, 티스푼 한작은술 등마다, 상기 유효량을 전달하는데 필요한 양의 유효성분을 함유할 것이다. 본 발명의 약학적 조성물은 투여 단위당, 예를 들면, 정제, 캡슐, 분말, 주사제, 좌제, 티스푼 한작은술 등마다, 1일당 약 0.01mg 내지 200mg/kg 체중을 함유할 것이다. 바람직하게는, 상기 범위는 1일당 약 0.03 내지 약 100mg/kg 체중, 가장 바람직하게는 약 0.05 내지 약 10mg/kg 체중이다. 상기 화합물은 1일 1 내지 5회 요법으로 투여될 수 있다. 그러나, 투여량은 환자의 요구, 치료되는 질환의 중증도 및 사용되는 화합물에 따라 다양할 수 있다. 매일 투여 또는 사후-정기 투여가 사용될 수 있다.

바람직하게는 상기 조성물들은 단위 투여 형태, 예컨대 정제, 환제, 캡슐, 분말, 과립, 멸균 비경구 용액 또는 현탁액, 계량된 에어로졸 또는 액체 스프레이, 점안제, 앰풀, 자동-주사기 장치 또는 좌제의 형태로 있으며; 경구용, 비강내, 설하 또는 직장 투여용, 또는 흡입 또는 통기투여용으로 투여될 수 있다. 대안적으로, 조성물은 주 1회 또는 월 1회 투여에 적합한 형태; 예를 들면, 데카노에이트 염과 같은 활성 화합물의 불용성 염으로 제공될 수 있으며; 근육내 주사를 위한 데포 제제를 제공하도록 적용될 수 있다. 정제와 같은 고형 조성물을 제조하기 위해, 주요 유효성분은 약학적 담체, 예를 들면 종래의 정제용 성분들, 예컨대 콘스타치, 락토스, 수크로스, 소르비톨, 탈크, 스테아르산, 스테아린산 마그네슘, 인산 제이 칼슘 또는 검, 및 다른 약학적 희석제, 예를 들면 물과 혼합되어, 본 발명의 화합물의 균질한 혼합물을 함유하는 고체 예비 제형 조성물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 형성한다. 상기 예비 제형 조성물을 균질한 것으로 언급하는 경우, 유효성분이 조성물 전체에 고르게 분산되어, 조성물이 정제, 환제 및 캡슐과 같은 유효 투여 형태로 용이하게 균등 세분될 수 있음을 의미한다. 이어서, 상기 고체 예비 제형 조성물은 본 발명의 유효성분 0.1 내지 약 500mg을 함유하는 상기 유형의 단위 투여 형태로 세분된다. 신규한 조성물의 정제 또는 환제는 피복되거나, 연장된 작용의 이점을 부여하는 투여 형태를 제공하기 위해 혼합될 수 있다. 예를 들면, 정제 또는 환제는 내부 투여형태 및 외부 투여형태 성분을 포함할 수 있으며, 후자는 전자 투여형태 성분에 대한 엔벨로프의 형태로 되어 있다. 두 성분들은 위장에서의 붕해에 저항하는 역할을 하는 장내 층에 의해 분리될 수 있으며, 내부 성분이 십이지장으로 그대로 전달되거나, 방출이 지연되도록 허용한다. 장내 층 또는 코팅에 다양한 물질이 사용될 수 있으며, 이러한 물질들은 쉘락, 아세틸 알콜 및 셀룰로스 아세테이트와 같은 물질을 갖는 다수의 중합체 산을 포함한다.

화학식 (I)의 화합물이 구강내 또는 주사에 의해 투여되기 위해 혼입될 수 있는 액체 형태는 수용액, 적절하게 향미된 시럽, 수성 또는 오일 현탁액 및 식용오일을 갖는 향미제 에멀젼, 예컨대 면실유, 참기름, 코코넛 오일 또는 피넛 오일 뿐만 아니라 엘릭서 및 유사한 약학적 부형제들을 포함한다. 수성 현탁액에 적합한 분산제 또는 현탁제에는 합성 및 천연 검, 예컨대 트라가칸트, 아카시아, 알기네이트, 덱스트란, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 폴리비닐-피롤리돈 또는 젤라틴이 포함된다. 적절하게 향미된 현탁제 또는 분산제의 액체 형태는 또한 합성 및 천연 검, 예를 들면, 트라가칸트, 아카시아, 메틸-셀룰로스 등을 포함할 수 있다. 비경구 투여를 위해, 멸균 현탁액 및 용액이 바람직하다. 정맥내 투여가 바람직한 경우, 적당한 방부제를 일반적으로 함유하는 등장성 제제가 사용된다.

유리하게는, 화학식 (I)의 화합물은 1일 1회 투여량으로 투여될 수 있거나, 또는 총 1일 투여량은 1일 2회, 3회 또는 4회로 분배 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 적합한 비강내 부형제의 국소 사용을 통해, 또는 당 업계의 숙련자에게 잘 알려진 경피 피부 패치를 통해, 비강내 형태로 투여될 수 있다. 경피 전달 시스템의 형태로 투여되기 위해, 투여량 투여는 물론 투여량 요법 전체에 걸쳐 간헐적이기보다는 연속적일 것이다.

예를 들면, 정제 또는 캡슐 형태로 경구 투여하기 위해, 유효 약물 성분은 약학적으로 허용가능한 경구 무독성 비활성 담체, 예컨대 에탄올, 글리세롤, 물 등과 조합될 수 있다. 또한, 원하는 경우 또는 필요한 경우, 적합한 결합제; 윤활제, 붕 해제 및 착색제도 또한 혼합물에 혼입될 수 있다. 적합한 결합제는 전분, 젤라틴, 천연 당, 예컨대 글루코스 또는 베타-락토스, 옥수수 감미료, 천연 및 합성 검, 예컨대 아카시아, 트라가칸트 또는 올레산 나트륨, 스테아르산 나트륨, 스테아르산 마그네슘, 벤조산 나트륨, 아세트산 나트륨, 염화나트륨 등을 포함하지만, 여기에 제한되지는 않는다. 붕해제는 전분, 메틸 셀룰로오스, 한천, 벤토나이트, 크산탄 검 등을 포함하지만, 여기에 제한되지 않는다.

본 발명의 화합물의 1일 투여량은 1일당 성인 1인당 1 내지 5000mg의 광범위한 범위로 다양할 수 있다. 경구 투여의 경우, 조성물은 바람직하게는 치료될 환자에 대한 투여량의 증상 조절을 위한 유효 성분 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0, 10.0, 15.0, 25.0, 50.0, 100, 150, 200, 250 및 500mg을 함유하는 정제들의 형태로 제공된다. 유효량의 약물은 통상적으로 1일당 약 0.01mg/kg 내지 약 200mg/kg 체중의 투여량 수준으로 공급된다. 특히, 그 범위는 1일당 약 0.03 내지 약 100mg/kg 또는 약 0.03 내지 약 15mg/kg, 및 더욱 상세하게는 약 0.05 내지 약 10mg/kg이다. 본 발명의 화합물은 1일당 최대 4회 이상, 바람직하게는 1일당 1 내지 2회 요법으로 투여될 수 있다.

투여될 최적 투여량은 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있으며, 사용된 특정 화합물, 투여 방식, 제제의 강도, 투여 방식 및 질병 질환의 진행에 따라 달라질 것이다. 또한, 환자 연령, 체중, 식이 요법 및 투여시간을 포함하여, 치료받는 특정 환자와 관련된 요인들은 투여량을 조정하기 위해 필요할 것이다.

본 발명의 화합물은 또한 리포좀 전달 시스템의 형태, 예컨대 작은 단일라멜라 소포, 큰 단일라멜라 소포 및 다중라멜라 소포의 형태로 투여될 수 있다. 리포솜은 양친매성 지질, 예컨대 포스파티딜콜린, 스핑고미엘린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜콜린, 카디오리핀, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티드산, 포스파티딜이노시톨, 디아실 트리메틸암모늄 프로판, 디아실 디메틸암모늄 프로판 및 스테아릴아민, 중성 지질, 예컨대 트리글리세리드들, 및 이들의 조합들로부터 형성될 수 있다. 이들은 콜레스테롤을 함유하고 있거나, 콜레스테롤이 없을 수도 있다.

본 발명의 화합물은 또한 국소투여될 수 있다. 임의의 전달장치, 예컨대 혈관내 약물전달 카테터, 와이어, 약동학적 스텐트 및 내강 내 포장이 사용될 수 있다. 이러한 장치의 전달 시스템은 관리자에 의해 제어되는 속도로 화합물을 전달하는 국소 주입 카테터를 포함할 수 있다.

본 발명은 관내 의료 장치, 바람직하게는 스텐트 및 치료 용량의 본 발명의 화합물을 포함하는 약물 전달 장치를 제공한다.

용어 "스텐트"는 카테터에 의해 전달될 수있는 임의의 장치를 의미한다. 스텐트는 수술적 외상으로 인한 혈관 조직의 원하지 않는 안쪽 성장과 같은 신체적 이상으로 인한 혈관 폐쇄를 방지하기 위해 일상적으로 사용된다. 그것은 종종 폐색을 완화하기 위해, 덕트의 루멘 내부에 남겨두기에 적합한 관형의 확장 격자-형 구조를 가지고 있다. 스텐트는 루멘 벽-접촉 표면 및 루멘-노출 표면을 갖는다. 루멘-벽 접촉 표면은 관의 외부쪽 표면이고, 루멘-노출 표면은 관의 내부 표면이다. 스텐트는 중합성, 금속성 또는 중합성 및 금속성일 수 있으며, 및 선택적으로 생분해성일 수 있다.

통상적으로, 스텐트는 비-팽창된 형태로 루멘 내에 삽입되고, 자발적으로, 또는 제2의 장치의 도움으로 원위치에서 확장된다. 통상적인 확장방법은 혈관벽 성분들과 관련된 폐색을 전단 및 분쇄하고, 확대 내강을 얻기 위해, 협착된 혈관 또는 신체 통로내에서 팽창된 카테터-장착 혈관성형술 풍선을 사용하여 발생한다. 미국특허 제6,776,796호(Falotico et al.)에 기술된 바와 같은 자가-팽창성 스텐트도 또한 이용될 수 있다. 스텐트를, 염증 및 증식을 예방하는 약물, 약제 또는 화합물과의 함께 조합하면, 혈관성형술 후 재협착에 가장 효과적인 치료법이 제공될 수 있다.

화학식 (I)의 화합물은 다수의 방식 및 임의의 수의 생체적합성 물질을 이용할때 스텐트에 혼입되거나 부착될 수 있다. 일 실시양태에서, 화합물은 중합체 매트릭스, 예컨대 중합체 폴리피롤에 직접 혼입된 후, 스텐트의 외부 표면 상에 코팅된다. 상기 화합물은 중합체를 통한 확산에 의해 매트릭스로부터 용리된다. 스텐트, 및 약물을 스텐트 상에 코팅하는 방법은 당해 기술 분야에서 상세히 논의되어 있다. 다른 실시양태에서, 스텐트는 먼저 화합물, 에틸렌-코-비닐아세테이트 및 폴리부틸메타크릴레이트의 용액을 포함하는 기재 층으로서 코팅된다. 그 다음, 스텐트는 폴리부틸메타크릴레이트만을 포함하는 외부 층으로 추가 코팅된다. 외부 층은 화합물이 너무 빨리 용출되어 주변 조직으로 들어가는 것을 방지하는 확산 장벽 역할을 한다. 외부 층 또는 탑 코트의 두께는 화합물이 매트릭스로부터 용리하는 속도를 결정한다. 스텐트 및 코팅 방법은 WIPO 공보 WO9632907, 미국공개번호 제2002/0016625호 및 그에 개시된 참고문헌들에 상세히 논의되어있다.

본 발명의 화합물 및 생체적합성 물질/중합체의 용액은 다양한 방법으로 스텐트 내로 또는 스텐트 상에 혼입될 수 있다. 예를 들면, 용액을 스텐트에 분무하거나, 스텐트를 용액에 침지시킬 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 스텐트 상에 용액이 분무되고, 이어서 건조시킨다. 다른 실시양태에서, 용액은 하나의 극성으로 전기적으로 대전될 수 있고, 스텐트가 반대 극성으로 전기적으로 대전될 수 있다. 이러한 방식으로, 상기 용액과 스텐트가 서로 끌어 당길 것이다. 이러한 유형의 분무 공정을 사용할 때, 폐기물이 감소될 수 있고, 코팅 두께에 대한 보다 많은 제어가 달성될 수 있다. 화합물은 하나의 조직과 접촉하는 스텐트의 외부 표면에만 부착되는 것이 바람직하다. 그러나, 일부 화합물의 경우, 전체 스텐트가 코팅될 수 있다. 스텐트에 도포된 화합물의 투여량과 약물의 방출을 제어하는 중합체 코팅의 조합은 약물의 유효성 측면에서 중요하다. 화합물은 바람직하게는 적어도 3일 내지 약 6개월 이상, 바람직하게는 7 내지 30일 동안 스텐트 상에 남는다.

임의의 수의 비-부식성 생체적합성 중합체가 본 발명의 화합물과 함께 이용될 수 있다. 다른 중합체가 다른 스텐트에 사용될 수 있다는 점에 유의하는 것이 중요하다. 예를 들면, 상기 에틸렌-코-비닐아세테이트 및 폴리부틸메타크릴레이트 매트릭스는 스테인레스 스틸 스텐트와 함께 잘 작용한다. 니켈 및 티타늄의 합금과 같은 초탄성 특성들을 나타내는 재료를 비롯한 다른 재료들로 형성된 스텐트와 함께 다른 중합체들이 보다 효과적으로 사용될 수 있다.

재협착은 관상동맥혈관 성형술 후 심각한 이환률과 사망률의 원인이 된다. 재 협착은 탄성 반동, 혈전 형성, 내막 과형성 및 세포외 기질 재형성을 포함한 4 가지 과정들의 조합을 통해 발생한다. 일부 성장 인자가 최근 재협착으로 이끄는 이러한 과정에 관여하는 것으로 확인되었다. Schiele TM et. al., 2004, "Vascular restenosis - striving for therapy." Expert Opin Pharmacother. 5(11):2221-32를 참조한다. 혈관 평활근 세포(VSMC)는 c-Met 수용체를 발현한다. c-Met에 대한 리간드인, 간세포 성장 인자에 노출되면, 이러한 세포가 이동성 표현형을 나타내도록 자극된다. Taher et.al., Hepatocyte growth factor triggers signaling cascades mediating vascular smooth muscle cell migration. Biochem Biophys Res Commun. (2002) 298(1):80-6; Morishita R, Aoki M, Yo Y, Ogihara T. Hepatocyte growth factor as cardiovascular hormone: role of HGF in the pathogenesis of cardiovascular disease. Endocr J. (2002) Jun;49(3):273-84를 참조한다. 기질로부터 동맥 내막으로의 VSMC 이동은 아테롬성동맥경화증 및 재협착의 발생에 중요한 역할을 하기 때문에, c-Met 키나아제 활성의 길항제는 상기 질병들의 치료시에 실행가능한 치료전략이 존재하는 것으로 믿어지고 있다.

따라서, 본 발명은 혈관벽에서 재협착, 내막 과형성 또는 염증을 포함하는, c-Met와 관련된 질환의 치료 방법을 제공하며, 이 방법은 스텐트와 같은 혈관내 의료장치로부터 본 발명의 화합물을 치료적 유효량으로 방출함으로써, 제어된 방출을 포함한다. 본 발명은 또한, 혈관벽에서 재협착, 내막 과형성 또는 염증을 포함하는, c-Met와 관련된 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식 (I)의 화합물을 제공한다.

스텐트를 신체의 내강 내로 도입하는 방법은 잘 알려져 있으며, 본 발명의 화합물-코팅된 스텐트들은 바람직하게는 카테터를 사용하여 도입된다. 당업자라면 알 수 있는 바와 같이, 스텐트 삽입위치에 따라 방법들이 약간 다를 것이다. 관상동맥 스텐트 삽입의 경우, 스텐트를 포함한 풍선 카테터를 관상 동맥에 삽입하고, 스텐트를 원하는 부위에 배치한다. 풍선이 팽창되어, 스텐트가 확장된다. 스텐트가 팽창함에 따라, 스텐트가 루멘 벽과 접촉한다. 스텐트가 일단 배치되면, 풍선이 수축되어 제거된다. 상기 스텐트는 루멘 벽 표면과 직접 접촉하면서, 상기 화합물을 함유하는 루멘-접촉 표면과 함께 제자리에 남는다. 스텐트 삽입은 필요에 따라 항응고 요법을 수반할 수 있다.

본 발명의 스텐트에 사용하기 위한 화합물 전달을 위한 최적 조건은 사용되는 상이한 국소 전달 시스템 뿐만 아니라 사용된 화합물의 특성 및 농도에 따라 달라질 수 있다. 최적화될 수 있는 조건은 예를 들면, 화합물의 농도, 전달 부피, 전달 속도, 혈관 벽의 관통 깊이, 근위 팽창 압력, 천공의 양 및 크기 및 약물전달 카테터 풍선의 적합성을 포함한다. 예를 들어 평활근 세포의 증식능력 또는 혈관내성 또는 내강 직경의 변화에 의해 측정되는, 재협착으로 인한 상당한 동맥 막힘이 발생하지 않도록 손상 부위에서의 평활근 세포증식의 억제를 위해 조건들이 최적화될 수 있다. 최적의 조건들은 일상적인 계산 방법들을 사용하는 동물 모델 연구로부터의 데이터에 기초하여 결정될 수 있다.

본 발명의 화합물을 투여하기 위한 또다른 대안 방법은 접합체를 의도된 작용 부위, 즉 혈관 내피세포 또는 종양세포로 향하게 하는 표적 제제에 화합물을 접합시키는 방법일 수 있다. 항체 및 비-항체 표적 제제들 모두 사용될 수 있다. 표적 제제와 그것의 상응하는 결합 파트너 사이의 특이적 상호작용으로 인해, 본 발명의 화합물은 표적 부위 또는 그 부근에서 높은 국소 농도로 투여될 수 있고, 따라서 표적 부위에서의 질환을 보다 효과적으로 치료할 수 있다.

항체 표적제는 종양 세포, 종양 혈관계 또는 종양 기질의 표적가능한 또는 접근가능한 성분에 결합하는 항체들 또는 이의 항원-결합 단편들을 포함한다. 종양 세포, 종양 혈관계 또는 종양 기질의 "표적가능한 또는 접근가능한 성분"은 바람직하게는 표면-발현, 표면-접근 또는 표면-국소화된 성분이다. 항체 표적제는 또한 괴사성 종양세포로부터 방출되는, 세포내 성분에 결합하는 항체들 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 바람직하게는, 상기 항체들은 투과성으로 유도될 수 있는 세포내에, 또는 실질적으로 모든 종양 세포 및 정상 세포의 세포 고스트내에 존재하는 불용성 세포내 항원(들)에 결합하는 단일클론 항체들 또는 이의 항원-결합 단편들이지만, 포유동물의 정상적인 살아있는 세포의 외부에 존재하지 않거나 접근 불가능할 수 있다. 본 발명에서, 표적가능한 또는 접근가능한 성분은 표적조직상에서 또는 표적조직 근처에서 접근 가능하고 발현되기 때문에, c-Met 수용체일 수 있다.

본원에 사용된 용어 "항체"는 임의의 면역학적 결합제, 예컨대 IgG, IgM, IgA, IgE, F(ab')₂, 1가 단편, 예컨대 Fab', Fab, Dab 뿐만 아니라 조작된 항체들, 예컨대 재조합 항체들, 인간화 항체들, 이중특이적 항체들 등을 광범위하게 의미한다. 항체는 다중클론성 또는 단일클론성일 수 있지만, 단일클론이 바람직하다. 사실상 임의의 고형 종양 유형의 세포 표면에 대한 면역특이성을 갖는 매우 광범위한 항체 집합체가 당해 분야에 존재한다(Thorpe 등의 미국특허 제5,855,866호에서 고형 종양에 대한 단일클론 항체들의 요약 표 참조). 종양에 대한 항체들을 생산하고 분리하는 방법은 당업자들에게 공지되어있다(Thorpe 등의 미국특허 제5,855,866호 및 Thorpe 등의 미국특허 제6,34,2219호).

항체들에 치료 모이어티를 접합시키는 기술은 잘 알려져 있으며, 예를 들면 Amon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985)를 참조한다. 비-항체 표적 제제에 본 발명의 화합물을 부착시키기 위해 유사한 기술을 또한 적용할 수 있다. 당업자는 소분자, 올리고펩티드, 폴리사카라이드 또는 다른 폴리음이온성 화합물과 같은 비-항체 표적제와 접합체를 형성하는 방법을 알고 있거나 결정할 수 있을 것이다.

혈액 내에서 합리적으로 안정적인 임의의 연결 모이어티가 본 발명의 화합물을 표적제와 연결시키는데 사용될 수 있지만, 생물학적으로-방출가능한 결합 및/또는 선택적으로 절단가능한 스페이서 또는 링커가 바람직하다. "생물학적으로-방출가능한 결합" 및 "선택적으로 절단가능한 스페이서 또는 링커"는 순환에서 여전히 합리적인 안정성을 가지지만, 특정 조건, 즉 특정 환경 내에서 또는 특정 작용제와 접촉시에만 또는 선택적으로 방출가능하거나 절단가능하거나 가수분해될 수 있다. 이러한 결합들은 예를 들면, 미국특허 제5,474,765호 및 제5,762,918호에 기술된 바와 같이, 디설파이드 및 트리설파이드 결합 및 산-불안정 결합, 미국특허 제5,474,765호 및 제5,762,918호에 기술된 바와 같은 펩티드 결합, 에스테르, 아미드, 포스포디에스테르 및 글리코시드를 포함하는 효소-민감성 결합을 포함한다. 이러한 선택적-방출 디자인 특징은 의도된 표적 부위에서 접합체로부터 화합물의 지속적인 방출을 용이하게한다.

본 발명은 표적제에 접합된 유효량의 본 발명의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, 표적제에 접합된 치료적으로 유효량의 화학식 (I)의 화합물을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, c-Met, 특히 종양과 관련된 질환의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 또한, c-Met, 특히 종양과 관련된 질환의 치료에 사용하기 위한 표적제에 접합된 화학식 (I)의 화합물을 제공한다. 본 발명은 또한, c-Met, 특히 종양과 관련된 질환의 치료용 약제를 제조하기 위한 표적제에 접합된 화학식 (I)의 화합물의 용도를 제공한다.

항체 또는 성장인자, 또는 폴리사카라이드와 같은 단백질이 표적제로서 사용되는 경우, 이들은 바람직하게는 주사가능한 조성물의 형태로 투여된다. 주사가능한 항체 용액은 정맥, 동맥 또는 척수액에 2분 내지 약 45분, 바람직하게는 10 내지 20분동안 투여될 것이다. 특정 경우, 피부 및/또는 특정 체강에 가까운 영역으로 제한된 종양에 대해 피부내 및 공동내 투여가 유리하다. 또한, 뇌에 위치한 종양에는 척수강 내 투여가 사용될 수 있다.

표적제에 접합된 본 발명의 화합물의 치료적 유효량은 개체, 질병 유형, 질병 상태, 투여 방법 및 다른 임상 변수들에 따라 다르다. 유효 투여량은 동물 모델의 데이터를 사용하여 쉽게 결정할 수 있다. 고형 종양을 갖는 실험 동물은 임상 환경으로 옮기기 전에 적절한 치료 용량을 최적화하기 위해 자주 사용된다. 이러한 모델은 효과적인 항암 전략을 예측하는데 매우 신뢰할 만한 것으로 알려져 있다. 예를 들면, 고형 종양을 갖는 마우스는 유익한 항 종양 효과를 최소한의 독성으로 제공하는 치료제의 작용 범위를 결정하기 위한 사전-임상 시험에 널리 사용된다.

HGF/MET 경로는 T 세포 활성을 조절함으로써 직접적으로 뿐만 아니라 T 세포의 아네르기를 일으키는 효소를 유도함으로써 간접적으로 조절함으로써 보다 면역억제성의 종양 미세환경을 유도하는 것과 연관되어 있다. 따라서, 화학식 (I)의 화합물에 의한 Met 경로 억제는 체크포인트 차단제(체크포인트 차단제는 예를 들면 PD-1 및 CTLA-4의 차단제를 포함함)에 대한 면역반응을 준비시킬 뿐만 아니라 종양유도성 면역억제를 완화시키고, 숙주면역을 활성화시킬 수 있다.

상기 명세서는 예시의 목적을 위해 제공된 실시예들과 함께 본 발명의 원리들을 교시하고 있지만, 본 발명의 실시는 하기 청구범위 및 그의 균등물의 범주 내에 있는 통상적인 모든 변형들, 조정들 및/또는 수정들을 포함한다는 것을 이해할 것이다.

Claims

하기 화학식 (I)의 화합물, 이의 N-옥사이드, 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물:

(I)
식 중에서, D는 중수소를 나타낸다.
제1항에 있어서, 상기 화합물은
염기인, 화합물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 퀴놀린의 2-위치(D 위치)의 중수소 함량이 93% 이상인, 화합물.
제3항에 있어서, 퀴놀린의 2-위치(D 위치)의 중수소 함량이 95% 이상인, 화합물.
제4항에 있어서, 퀴놀린의 2-위치(D 위치)의 상기 중수소 함량이 98% 이상인, 화합물.
전술한 항들 중 어느 한 항에 따른 화합물로서, 약제로 사용하기 위한, 화합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 암을 치료하기 위한, 화합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 세포증식성 질환을 치료하기 위한, 화합물.
약학적으로 허용가능한 담체, 및 유효 성분으로서 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 치료적 유효량을 포함하는, 약학적 조성물.
중수소 가스의 존재하에, 그리고 적당한 촉매, 적당한 용매 또는 용매 혼합물 및 적당한 염기의 존재하에, 화학식 (II)의 중간체의 환원성 중소수화를 특징으로 하고,
또는 원하는 경우, 산 처리를 통해 화학식 (I)의 화합물을 치료적으로 활성인 무독성 산 부가 염으로 전환시키거나, 또는 역으로 알칼리 처리를 통해 산 부가 염 형태를 유리 염기로 전환시키거나, 또는 원하는 경우, 용매화물 또는 N-옥사이트 형태로 제조하는 것을 특징으로 하는, 제1항의 화합물을 제조하는 방법:

상기 식에서,
W₁은 클로로, 브로모 또는 요오도를 나타내고,
D는 중수소를 나타낸다.
암의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물.
세포증식성 질환의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물 및 다른 화학요법제의 조합물.
제13항에 있어서, 상기 화학요법제가 키나아제 억제제인, 조합물.
제14항에 있어서, 상기 키나아제 억제제가 FGFR 억제제인, 조합물.
제13항에 있어서, 화학요법제가 백금 함유 항암제인, 조합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상의 c-Met의 키나아제 활성을 감소시키는 방법.