KR20170120120A - 항-대리 경쇄 항체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 항-대리 경쇄 항체 및 이의 용도에 관한 것이다. 특히 본 발명은 항-VpreB1 항체 및 이의 용도에 관한 것이다.

Description

항-대리 경쇄 항체
B-림프구에 의해서 생산된 항체(Ig) 분자는 중(H)쇄 및 경(L)쇄로 구축된다. H쇄 및 L쇄의 아미노 말단 도메인의 아미노산 서열은 특히, 항원 조합 부위를 형성하는 3개의 초가변 영역(hypervariable region)(CDR1, CDR2, CDR3)에서 가변성(VH 및 VL)이다. H쇄 및 L쇄의 조립체는 L쇄의 불변 영역(CL)과 중쇄의 제1 불변 영역(CH1) 간의 다이설파이드 결합에 의해서 그리고 VH 도메인과 VL 도메인 간의 비-공유 상호작용에 의해서 안정화된다.
인간 및 다수의 동물, 예컨대 마우스에서, 항체 H쇄 및 L쇄를 암호화하는 유전자는 V 영역의 유전자 단편 암호화 부분의 단계적인 체성 재배열(somatic rearrangement)에 의해서 조립된다. B 림프구 발생의 다양한 단계는 Ig 유전자 자리의 재배열 상태에 의해서 특징 분석된다(예를 들어, 문헌[Melchers, F. & Rolink, A., B-Lymphocyte Development and Biology, Paul, W.E., ed., 1999, Lippincott, Philadelphia] 참고).
B 세포의 전구체(프리(pre)-B 세포)는 완전히 발생된 경쇄 대신에, 이의 VpreB(1-3) 및 λ5라 지칭되는 유전자 세트의 생산, 및 μ 중쇄의 공발현에 의해서 골수에서 식별되어 왔다.
인간 VpreB1의 주요 아이소폼(isoform)(CAG30495)은 145 aa-길이의 폴리펩타이드(서열번호 1)이다. 그것은 Ig V 도메인-유사 구조를 갖지만, 전형적인 V 도메인의 마지막 β-가닥(β7)이 존재하지 않고, 임의의 다른 단백질에 대해서 어떤 상동성도 나타내지 않는 카복실 말단 단부를 갖는다. VpreB2는 142-아미노산 마우스 VpreB2 폴리펩타이드(PI 3373; 서열번호 2), 및 마우스 VpreB2 서열(CAA019641 서열번호 3)의 171 아미노산 길이의 스플라이스 변이체(splice variant)를 비롯한, 몇몇 아이소폼을 갖는다. VpreB1 및 VpreB2 서열은 EP 0 269 127 및 미국 특허 제5,182,205호; 문헌[Collins et al., Genome Biol. 5(10):R84 (2004)]; 및 문헌[Hollins et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 86(14):5552-5556 (1989)]에 개시되어 있다. 인간 VpreB3(서열번호 4)의 주요 아이소폼은 문헌[Collins et al., Genome Biol. 5(10):R84 (2004)]에 개시된, 123 aa-길이의 단백질(CAG30496)이다.
VpreB(1-3)는 또 다른 단백질, λ5에 비-공유 회합되어 있다. 인간 λ5는 209-아미노산 폴리펩타이드(CAA01962; 서열번호 7)인데, 이것은 항체 경쇄에 강한 상동성을 갖고, 그리고 이의 아미노 말단 단부를 향해서, 2개의 기능적으로 구분된 영역(이들 중 하나는 Vλ 도메인의 β7 가닥에 강한 상동성을 나타냄)을 갖는 Ig C 도메인-유사 구조를 보유한다. 인간 λ5-유사 단백질은 213 아미노산(NP_064455; 서열번호 8)을 갖고, 항체 λ 경쇄 불변 영역에 대해서 약 84% 서열 동일성을 나타낸다.
추가 상세사항에 대해서는, 하기 검토 문서를 참고하기 바란다: 문헌[Karasuyama et al., Adv . Immunol . 63: 1-41 (1996)]; [Melchers et al., Immunology Today 14:60-68 (1993)]; 및 [Melchers, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 96:2571-2573 (1999)].
VpreB 및 λ5 폴리펩타이드는 함께 비-공유 회합된 Ig 경쇄-유사 구조를 형성하는데, 이것은 대리 경쇄(surrogate light chain) 또는 위 경쇄(pseudo light chain)라 지칭된다. 초기 프리B 세포의 표면 상에서, 대리 경쇄는 신호 변환자 CD79a/CD79b 이종이량체(heterodimer)와 회합하여 막-결합 Ig μ 중쇄에 다이설파이드-연결되어 B 세포 수용체-유사 구조, 소위 프리B 세포 수용체(프리-BCR)를 형성한다.
서로바디(surrobody)는 항체 레퍼토리(repertoire)의 정상 발생 동안 생산되는 프리-B 세포 수용체(프리-BCR)를 기초로 한다. 항체와 달리, 프리-BCR은 2개의 대리 경쇄 성분인 VpreB 및 λ5와 짝을 이룬 항체 중쇄로 구성된 삼량체이다. VpreB 및 λ5 둘 모두는 유전자 재배열을 겪지 않고, V(D)J 재조합이 시작되기 전에 초기 프리-B 세포에서 발현되는 유전자에 의해서 암호화된다. 프리-BCR은, 그것이 중쇄 및 2개의 비-공유 회합 단백질: VpreB 및 λ5로 구성되고, 즉 그것은 항체에서의 2개의 성분과 대조적으로 3개의 성분을 갖는다는 점에서, 성숙 면역글로불린과 구조적으로 상이하다. 추가로, VpreB는 Vλ Ig 도메인에 상동성이고, λ5는 항체의 Cλ 도메인에 상동성이지만, 각각은 범위를 벗어난(noncanonical) 펩타이드 확장을 갖고: VpreB1은 이의 C 말단 상에 추가적인 21개의 잔기를 갖고; λ5는 이의 N 말단에서 50개 아미노산 확장을 갖는다.
κ-유사 B 세포 수용체(κ-유사 BCR)는 κ-유사 대리 경쇄(κ-유사 SLC)를 사용하여, 식별되어 왔다(Frances et al., EMBO J 13 :5937-43 (1994); Thompson et al., Immunogenetics 48:305-11 (1998); Rangel et al., J Biol Chem 280: 17807-14 (2005)). 문헌[Rangel et al., J Biol Chem 280(18): 17807-17814 (2005)]에는 문헌[Thompson et al., Immunogenetics 48:305-311 (1998)]에 이미 보고된 cDNA 서열에 동일한 것으로 밝혀진, 재배열되지 않은 Vκ 유전자의 산물인 Vκ-유사 단백질의 식별 및 분자 특징 분석이 보고되어 있다. 이에 반해, 문헌[Frances et al., EMBO J 13 :5937-43 (1994)]에는 B 세포 전구체의 표면에서 μ 중쇄와 회합하는 능력을 가져서, B 세포 발생을 위한 λ5 경로에 대한 대안을 제공하는 재배열된 생식계열(germline) JCκ의 식별 및 특징 분석이 보고되어 있다.
κ-유사 프리-BCR 및 λ-유사 프리-BCR은 경쇄 재배열을 촉진시키고, B 세포 전구자(progenitor)의 성숙을 보장하도록 협력 기능을 한다고 제안되어 있다. 검토에 대해서는, 문헌[McKeller and Martinez-Valdez Seminars in Immunology 18:4043 (2006)]을 참고하기 바란다.
서로바디의 설계 및 생산의 추가 상세사항은 문헌[Xu et al., Proc . Natl . Acad. Sci . USA 2008, 105(31): 10756-61], 2008년 10월 2일자로 공개된 PCT 공보 WO 2008/118970, 2008년 7월 11일자로 출원된 미국 가출원 제61/134,929호, 및 문헌[Xu et al., J. Mol . Biol. 2010, 397, 352-360]에 제공되어 있고, 이들의 전체 개시내용은 본 명세서에 명시적으로 참고로 포함된다.
필라멘트성 파지계 조합 항체 라이브러리(filamentous phage-based combinatorial antibody library)의 다양성은 중쇄 및 경쇄 유전자의 셔플링(shuffling)에 의해서(Kang et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 88: 11120-11123, (1991)) 또는 실수 유발(error-prone) 중합효소 연쇄 반응(PCR)에 의해서 라이브러리에 랜덤 돌연변이를 도입함으로써(Gram et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 89:3576-3580, (1992)) 증가될 수 있다고 기술되어 있다. 항체 라이브러리를 생성하기 위한 기본으로서 정의된 프레임워크를 사용하는 것은 문헌 [Barbas et al., Proc . Nat. Acad . Sci . USA 89:4457-4461 (1992)(CD3-H3 랜덤화)]; [Barbas et al., Gene 137:57-62 (2003)(V카파 CDR3로의 랜덤화 확장)]; 및 [Hayanashi et al., Biotechniques 17:310 (1994)(중첩 확장 및 PCR에 의한 항체 CDR 영역의 동시 돌연변이 생성)]에 기술되어 있다. 다른 것에는 CDR-H3 라이브러리를 단일 VL 유전자(Nissim et al., EMBO J. 13:692-698 (1994)), VL 유전자의 제한된 세트(De Kruif et al., J. Mol . Biol . 248:97-105 (1995)); 또는 VL 유전자의 랜덤화된 레퍼토리(Griffiths et al., EMBO J. 13:3245-3260 (1994))와 조합하는 것이 보고되어 있다.
또한 만능(universal) 또는 랜덤화 면역글로불린 경쇄를 사용하여 항체 라이브러리를 제조하는 방법을 기술하는 미국 특허 제5,667,988호; 제6,096,551호; 제7,067,284호를 참고하기 바란다.
문헌[Knappik et al., J. Mol . Biol. 296:57-86 (2000)]에는 인간 항체 라이브러리, 설계된 HuCAL(인간 조합 항체 라이브러리)의 설계 및 작제를 위한 상이한 개념이 기술되어 있다. 이러한 접근법은 면역 반응 동안 빈번하게 사용되는 인간 VH 및 VL 서브패밀리의 각각이 하나의 컨센서스 프레임워크에 의해서 표현되고, 중쇄에 대해서 7개의 HuCAL 컨센서스 유전자를 생성하고, 경쇄에 대해서 7개의 HuCAL 컨센서스 유전자를 생성하고, 이것은 49개의 가능한 조합을 산출한다는 발견을 기초로 한다. 모든 유전자는 코돈 용도, 단백질 응집을 촉진시키는 바람직하지 않은 잔기, 및 모든 CDR에 플랭킹(flanking)한 독특하고 일반적인 제한 부위를 고려하여, 전체 합성에 의해서 제조된다. 이러한 접근법은 필요할 때, 상이한 항체 포맷으로 전환될 수 있는 CDR을 함유하는 모듈식(modular) 항체 유전자를 생성한다. HuCAL 항체 라이브러리의 설계 및 합성은 미국 특허 제6,300,064호; 제6,696,248호; 제6,706,484호; 및 제6,828,422호에 기술되어 있다.
다양한 합성물 항체 라이브러리의 작제가 미국 특허 제8,131,480호에 기술되어 있다.
본 발명은 항-대리 경쇄(SLC) 항체 및 이의 용도에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 대리 경쇄(SLC)에 특이적으로 결합할 수 있는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 일 실시형태에서, 항체, 또는 항원-결합 단편은 SLC의 VpreB 소단위에 특이적으로 결합한다. 또 다른 실시형태에서, VpreB 소단위는 서열번호 1의 인간 VpreB1이다. 다른 일 실시형태에서, VpreB 소단위는 서열번호 2 또는 서열번호 3의 마우스 VpreB2이다. 추가의 또 다른 실시형태에서, VpreB 소단위는 서열번호 4의 인간 VpreB3이다. 또 다른 실시형태에서, 항체, 또는 항원-결합 단편은 SLC의 λ5 소단위에 특이적으로 결합한다. 다른 일 실시형태에서, λ5 소단위는 서열번호 7의 인간 λ5이다. 추가의 또 다른 실시형태에서, λ5 소단위는 서열번호 9의 인간 λ5 디테일(dTail)이다.
일 실시형태에서, 본 발명은 서열번호 36 내지 51로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 항체, 또는 항원-결합 단편을 제공한다. 또 다른 실시형태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호 52 내지 67로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 추가의 또 다른 실시형태에서, 서열번호 36 내지 51로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 항체, 또는 항원-결합 단편은 서열번호 52 내지 67로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 서열을 추가로 포함한다. 다른 일 실시형태에서, 항원-결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, scFv, 및 (scFv)2 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 본 명세서에 기술된, 항체, 또는 항원-결합 단편을 함유하는 조성물을 제공한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 진단성 조성물이다.
다른 일 양상에서, 본 발명은 자가면역 질환의 진단 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 방법은 대상체에서 류마티스 관절염의 진단을 위해서 사용된다. 다른 일 실시형태에서, 대상체는 인간 환자이다. 또 다른 실시형태에서, 방법은 대상체 유래의 생물학적 샘플을 인간 대리 경쇄(SLC)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 단계 및 SLC의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함한다.
추가의 또 다른 양상에서, 본 발명은 백혈병의 진단 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 백혈병은 비정상적인 SLC 발현과 연관된다. 또 다른 실시형태에서, 방법은 상기 대상체 유래의 생물학적 샘플을 인간 대리 경쇄(SLC)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 단계 및 SLC의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함한다.
도 1은 서열번호 1의 인간 VpreB1 아미노산 서열(네이티브 리더 서열 밑줄 표시); 서열번호 2 및 3의 마우스 VpreB2 서열; 서열번호 4의 인간 VpreB3-유사 서열, 및 서열번호 5로 표시된 "삼량체" 내의 절두된 VpreB1 서열의 서열; 서열번호 6의 인간 VpreB1 아미노산 서열(뮤린(murine) Ig 카파 리더 밑줄 표시)을 나타낸 도면. 밑줄은 VpreB 아미노산 서열 내의 리더 서열을 나타낸다.
도 2는 서열번호 7의 인간 λ5 서열; 서열번호 8의 인간 λ5-유사 서열; "λ5 디테일"로서 지정된 "삼량체" 내의 절두된 λ5 서열의 서열(서열번호 9); 및 뮤린 Ig κ 리더 서열을 갖는 서열번호 10의 인간 λ5 디테일 서열을 나타낸 도면. 밑줄은 λ5 아미노산 서열 내의 리더 서열을 나타낸다.
도 3은 서열번호 35로서의 인간 VpreB1-λ5 키메릭(chimeric) 아미노산 서열을 나타낸 도면(뮤린 Ig κ 리더 서열 밑줄 표시).
도 4a 및 도 4b는 (a) 서열번호 11의 인간 Vκ-유사 뉴클레오타이드 서열 및 암호화된 단백질의 아미노산 서열(AJ004956; 서열번호 12)(네이티브 리더 서열 밑줄 표시), 및 (b) 모든 Vκ 패밀리로부터 가능한 Vκ-유사 단백질의 예측된 성숙 아미노산 서열(각각은 AJ004956 Vκ-유사 프로토타입 서열(서열번호 12)과 나란한 상이한 길이의 확장부(서열번호 13 내지 24)를 보유함)을 나타낸 도면.
도 5a 내지 도 5c는 (a) 서열번호 25의 인간 JCκ 뉴클레오타이드 서열 및 암호화된 단백질의 아미노산 서열(서열번호 26)(예측된 성숙 JCκ 단백질과 비교하여 독특한 서열은 두줄 밑줄로 표시되어 있고, 잠재 리더 절단 서열은 한줄 밑줄로 표시됨), (b) 남아있는 카파 J-불변 영역 재배열로부터의 예측된 JCκ-유사 아미노산 서열(J1-J5CK)(서열번호 27 내지 31), 및 (c) 밑줄 표시된 부가된 뮤린 Ig κ 리더 서열(서열번호 32), 밑줄 표시된 부가된 뮤린 Ig κ 리더 서열만을 갖는 재조합된 JCκ(서열번호 33), 및 밑줄 표시된 부가된 뮤린 Ig κ 리더 서열을 갖는 예측된 가공된 JCκ(서열번호 34)를 포함하는, JCκ 조작된 분비 최적화된 변이체를 나타낸 도면.
도 6은 항-인간 VpreB1 Fab 단백질의 경쇄 서열(서열번호 36 내지 51)을 나타낸 도면.
도 7은 항-인간 VpreB1 Fab 단백질의 중쇄 서열(VH)(서열번호 52 내지 67)을 나타낸 도면.
도 8은 항-인간 VpreB1 IgG1(2460B04 IgG1)에 대해서 사용된 특징 분석 방법의 개요를 설명한 도면.
도 9은 항-VpreB1 항체(2460B04 IgG1)가 50% 혈청 중에서 HGF-결합된 2-조각 서로바디를 검출하는 것을 보여주는 도면.
도 10은 항-VpreB1 항체(2460B04 IgG1)가 50% 혈청 중에서 HGF-결합된 3-조각 서로바디를 검출하는 것을 보여주는 도면.
도 11은 항-VpreB1 항체(2460B04 IgG1)가 50% 혈청 중에서 2-조각 서로바디 를 포획하는 것을 보여주는 도면.
도 12는 항-VpreB1 항체(2460B04 IgG1)가 50% 혈청 중에서 3-조각 서로바디를 포획하는 것을 보여주는 도면.
도 13a 내지 도 13d는 검출 시약으로서 사용된 항-VpreB1 mAb(2460B04 IgG1)가 인간 VL ORF를 함유하는 IgG에 결합하지 않는 것을 보여주는 도면.
도 14a 내지 도 14c는 항-VpreB1 mAb가 VL-함유 IgG(448C12-HC)를 포획할 수 없는 것을 보여주는 도면.
도 15a 내지 도 15c는 항-VpreB1 mAb가 VL-함유 IgG(2547C02 HC)를 포획할 수 없는 것을 보여주는 도면.
도 16a 내지 도 16c는 항-VpreB1 mAb가 VL-함유 IgG(2211A01_N56H-HC)를 포획할 수 없는 것을 보여주는 도면.
도 17은 면역이전(pre-immune) 혈청 샘플의 PK 혈청 ELISA 결과를 나타낸 도면.
도 18은 5분 내지 96시간의 시간지점에 걸친 SL-541_αHGF SgG에 대한 PK 혈청 ELISA 결과를 나타낸 도면.
도 19는 168시간 내지 672시간의 시간지점에 걸친 SL-541_αHGF SgG에 대한 PK 혈청 ELISA 결과를 나타낸 도면.
도 20은 5분 내지 96시간의 시간지점에 걸친 SL-656_αHGF SgG에 대한 PK 혈청 ELISA 결과를 나타낸 도면.
도 21은 168시간 내지 672시간의 시간지점에 걸친 SL-656_αHGF SgG에 대한 PK 혈청 ELISA 결과를 나타낸 도면.
도 22는 이중특이성 서로바디의 PK 특성을 나타낸 도면.
A. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 과학 기술적 용어는 본 발명이 속하는 관련 기술 분야의 통상의 기술자가 공통적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 문헌[Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 2nd ed., J. Wiley & Sons (New York, NY 1994)]은 본 출원에서 사용된 많은 용어에 대한 전반적인 지침을 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 제공한다.
관련 기술 분야의 통상의 기술자는 본 발명의 실시에 사용될 수 있는 본 명세서에 기술된 것과 유사하거나 또는 등가의 다수의 방법 및 재료를 인지할 것이다. 게다가, 본 발명은 기술된 방법 및 재료에 어떠한 방식으로든 제한되지 않는다. 본 발명의 목적을 위해서, 하기 용어가 하기에서 정의된다.
본 출원은 전체에서, 단수의 사용은 명시적으로 달리 언급되지 않는 한, 복수를 포함한다.
본 출원에서 "또는"의 사용은 명시적으로 달리 언급되지 않는 한, "및/또는"을 포함한다.
또한, 용어 "포함하다", "포함하는", 그리고 "포함된"은 제한적이지 않다.
본 발명의 문맥에서, 용어 "항체"(Ab)는 V(D)J 유전자 재조합으로부터 유래된 고전적으로 재조합된 중쇄와 VJ 유전자 재조합으로부터 또한 유래된 고전적으로 재조합된 경쇄로부터의 네이티브 항체, 또는 이의 단편을 지칭하기 위해서 사용된다.
"네이티브 항체"는 2개의 동일한 경(L)쇄와 2개의 동일한 중(H)쇄로 구성된, 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질이다. 각각의 경쇄는 공유 다이설파이드 결합(들)에 의해 중쇄에 연결되며, 다이설파이드 연결부의 수는 상이한 면역글로불린 아이소타입의 중쇄들 간에 다양하다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 또한 규칙적으로 이격된 사슬내(intrachain) 다이설파이드 결합 다리를 갖는다. 각각의 중쇄는 한 단부에서 가변 도메인 (VH)을 갖고, 이어서 다수의 불변 도메인을 갖는다. 각각의 경쇄는 한 단부에서 가변 도메인(VL)을 갖고, 이의 다른 단부에서 불변 도메인을 갖고; 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 나란하고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 나란하다. 특정 아미노산 잔기가 경쇄 및 중쇄 가변 도메인들 사이에 경계면을 형성하는 것으로 여겨진다(Chothia et al, J. Mol . Biol. 186:651 (1985); Novotny and Haber, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82:4592 (1985)).
항체 쇄와 관련하여 용어 "가변"은 항체들 중에서 서열이 상당히 상이한 항체 쇄의 일부분을 지칭하기 위해서 사용되며, 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 관여한다. 이러한 가변성은 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 둘 모두에서 초가변 영역으로 불리는 3개의 분절에 집중된다. 가변 도메인의 보다 상당히 보존된 부분은 프레임워크 영역(FR)으로 불린다. 네이티브 중쇄 및 경쇄 가변 도메인은 각각 4개의 FR(각각 FR1, FR2, FR3 및 FR4)을 포함하는데, 이것은 고리를 형성하여 β-시트 구조를 연결하고, 일부 경우에는 β-시트 구조의 일부를 형성하는 3개의 초가변 영역에 의해서 연결된 β-시트 구성을 주로 채택한다. 각각의 쇄에서 초가변 영역은 FR에 의해서 상당히 근접하게 서로 유지되며, 다른 쇄의 초가변 영역은 항체의 항원-결합 부위를 형성하는 데 기여한다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991), pages 647-669). 불변 도메인은 항원에 대한 항체의 결합에 직접적으로 관여하지 않지만, 항체-의존성 세포 독성에서 항체의 참여와 같은 다양한 효과기(effector) 기능을 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 경우 용어 "초가변 영역"은 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 초가변 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"의 아미노산 잔기를 포함한다(즉, 경쇄 가변 도메인에서 잔기 30 내지 36(L1), 46 내지 55(L2) 및 86 내지 96(L3) 및 중쇄 가변 도메인에서 30 내지 35(H1), 47 내지 58(H2) 및 93 내지 101(H3); MacCallum et al,. J Mol Biol. 262(5):732-45 (1996))
용어 "프레임워크 영역"은 관련 기술 분야에서 인지되는 더 분기되는 CDR 영역들 사이에 존재하는 항체 가변 영역의 일부분을 지칭한다. 이러한 프레임워크 영역은 전형적으로 프레임워크 1 내지 4(FR1, FR2, FR3, 및 FR4)라 칭하며, 3차원 공간에서 중쇄 항체 가변 영역 또는 경쇄 항체 가변 영역에서 발견되는 3개 CDR을 고정시키기 위한 스캐폴드를 제공하여, CDR은 항원-결합 표면을 형성할 수 있다.
이들의 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라서, 항체는 상이한 부류로 배정될 수 있다. 5가지 주요 항체 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM 부류가 있으며, 이들 중 몇 개는 하위부류(아이소타입)로 추가로 분류될 수 있는데, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2이다. 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 면역접합체(immunoadhesin)의 작제에 사용되는 면역글로불린 서열은 IgG 면역글로불린 중쇄 도메인으로부터 유래한다. 인간 면역접합체의 경우, 인간 IgG1 및 IgG3 면역글로불린 서열을 사용하는 것이 바람직하다. IgG1을 사용하는 주요 이점은 IgG1 면역접합체가 고정된 단백질 A에서 효율적으로 정제될 수 있다는 점이다. 그러나, 특정 면역접합체 작제를 위해서 Ig 융합 파트너를 선택할 때, 다른 구조적 특성 및 기능적 특성을 고려해야 한다. 예를 들어, IgG3 힌지는 더 길고 더 가요성이어서, IgG1에 융합될 때 적절하게 폴드되지 않거나 기능을 할 수 없는 더 큰 "접합체(adhesin)" 도메인을 수용할 수 있다. 또 다른 고려사항은 원자가(valency)일 수 있고; IgG 면역접합체는 2가(bivalent) 동종이량체이지만, Ig 하위유형 유사 IgA 및 IgM은 각각 기본적인 Ig 동종이량체 단위의 이량체 또는 오량체 구조를 만들 수 있다. 생체내 응용을 위해서 설계된 VEGF 수용체 Ig-유사 도메인/면역글로불린 키메라의 경우, Fc 영역에 의해서 지정된 약물동력학 특성 및 작동기 기능 또한 중요하다. IgG1, IgG2 및 IgG4는 모두 21일의 생체내 반감기를 갖지만, 보체 시스템을 활성화시킬 때 이들의 상대적인 효력은 상이하다. 더욱이 다양한 면역글로불린은 다양한 수의 알로타입 아이소타입(allotypic isotype)을 보유한다.
면역글로불린의 상이한 부류에 대응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ, 및 μ로 불린다.
임의의 척추동물 종 유래 항체의 "경쇄"는 이들 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파(κ) 및 람다(λ)로 불리는 명백하게 구별되는 두 가지 유형 중 하나로 지정될 수 있다. 본 명세서에서 항체 경쇄에 대한 임의의 언급은 κ 및 λ 경쇄 둘 모두를 포함한다.
"항체 단편"은 전장 항체의 일부분, 일반적으로 이의 항원 결합 또는 가변 도메인의 일부분을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 scFv, 및 (scFv)2 단편을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "항체 결합 영역"은 항원(들)에 결합할 수 있는 면역글로불린 또는 항체 가변 영역의 하나 이상의 부분을 지칭한다. 전형적으로, 항체 결합 영역은 예를 들어, 항체 경쇄(VL)(또는 이의 가변 영역), 항체 중쇄(VH)(또는 이의 가변 영역), 중쇄 Fd 영역, 조합된 항체 경쇄 및 중쇄(또는 이의 가변 영역), 예컨대 Fab, F(ab')2, 단일 도메인, 또는 단일 쇄 항체(scFv), 또는 전장 항체, 예를 들어, IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 하위유형), IgA1, IgA2, IgD, IgE, 또는 IgM 항체이다.
용어 "에피토프"는 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 적어도 약 3 내지 5개, 바람직하게 적어도 약 5 내지 10개, 또는 적어도 약 5 내지 15개의 아미노산의 서열, 전형적으로 약 500개, 또는 약 1,000개 이하의 아미노산의 서열을 지칭하며, 이것은 서열 자체 또는 더 큰 서열의 부분으로 이러한 서열에 반응하여 생성된 항체에 결합하는 서열을 정의한다. 에피토프는 이것이 유래된 모 단백질의 부분과 동일한 서열을 갖는 폴리펩타이드에 제한되지 않는다. 게다가, 바이러스 게놈은 불변 상태에 있으며, 분리체들 간에 상대적으로 높은 수준의 가변성을 나타낸다. 따라서 용어 "에피토프"는 네이티브 서열에 동일한 서열 및 네이티브 서열에 대한 변형, 예컨대 결손, 치환 및/또는 삽입을 포함한다. 일반적으로, 이러한 변형은 사실상 보존성이지만, 비-보존성 변형이 또한 고려된다. 이 용어는 구체적으로 "미모토프(mimotope)", 즉, 연속적인 선형 네이티브 서열을 식별하지 않거나 또는 네이티브 단백질에서 필연적으로 발생되지 않지만, 네이티브 단백질 상의 에피토프를 기능적으로 모방하는 서열을 포함한다. 용어 "에피토프"는 구체적으로 선형 및 컨포메이션성(conformational) 에피토프를 포함한다.
용어 "대리 경쇄 폴리펩타이드" 또는 "SLC 폴리펩타이드"는 VpreB 폴리펩타이드, λ5 폴리펩타이드, Vκ-유사 폴리펩타이드, JCκ 폴리펩타이드, 또는 이의 변이체를 지칭하기 위해서 본 명세서에서 사용된다.
용어 "비-대리 경쇄 분자" 또는 "비-SLC 분자"는 SLC 폴리펩타이드가 아닌 분자를 지칭하기 위해서 본 명세서에서 사용된다. 비-SLC 분자는 사이토카인 또는 항체 단편과 같은 폴리펩타이드일 수 있다.
용어 "VpreB"는 본 명세서에서 가장 넓은 의미로 사용되며, 구체적으로, 서열 번호 1의 인간 VpreB1, 서열 번호 2 및 3의 마우스 VpreB2, 서열 번호 4의 인간 VpreB3-유사 서열, 서열 번호 5의 인간 VpreB dT, 서열번호 6의 인간 VpreB1 아미노산 서열 및 스플라이스 변이체 및 번역후 변형에 의해서 형성된 변이체를 비롯한 아이소폼, 이의 다른 포유동물 상동체, 뿐만 아니라 이러한 네이티브 서열 폴리펩타이드의 변이체를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 임의의 네이티브 서열 또는 변이체 VpreB 폴리펩타이드를 지칭한다(도 1).
용어 "λ5"는 본 명세서에서 가장 넓은 의미로 사용되며, 구체적으로, 서열번호 7의 인간 λ5, 서열번호 8의 인간 5-유사 단백질, 서열번호 9 및 10으로 표현되는 인간 λ5 dT, 및 스플라이스 변이체 및 번역후 변형에 의해서 형성된 변이체를 비롯한 이의 아이소폼, 이의 다른 포유동물 상동체, 뿐만 아니라 이러한 네이티브 서열 폴리펩타이드의 변이체를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 임의의 네이티브 서열 또는 변이체 λ5 폴리펩타이드를 지칭한다(도 2).
λ-유사 서로바디의 구체적인 예는 네이티브 서열의 단편 및 변이체를 비롯한, VpreB 서열, 예컨대 VpreB1, VpreB2, 또는 VpreB3 서열이 네이티브 서열의 단편 및 변이체를 비롯한, λ5 서열에 컨주게이팅된 폴리펩타이드를 포함한다. 이러한 유형의 대표적인 융합체는 2008년 10월 2일자로 공개된 PCT 공보 WO 2008/118970에 제공되어 있고, 이의 전체 개시내용은 참고로 본 명세서에 명시적으로 포함된다. 이종 리더 서열을 갖는 융합체의 예가 도 3(서열번호 35)에 도시되어 있다.
용어 "변이체 VpreB 폴리펩타이드" 및 "VpreB 폴리펩타이드의 변이체"는 상호 교환 가능하게 사용되며, 본 명세서에서 아미노산 변형의 결과로 네이티브 서열 VpreB 폴리펩타이드와는 하나 이상의 아미노산 위치에서 상이한 폴리펩타이드로 정의된다. 본 명세서에서 정의된 바와 같이 "변이체 VpreB 폴리펩타이드"는 네이티브 항체 λ 또는 κ경쇄 서열, 또는 이의 단편과 상이할 것이다. "변이체 VpreB 폴리펩타이드"는 네이티브 서열 VpreB 폴리펩타이드와 바람직하게는 적어도 약 65%, 또는 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 75%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 85%, 또는 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 98%의 서열 동일성을 유지할 것이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, "변이체 VpreB 폴리펩타이드"는 네이티브 항체 λ 또는 κ 경쇄 서열에 대해서 이의 아미노산 서열에서 95% 미만, 또는 90% 미만, 또는 85% 미만, 또는 80% 미만, 또는 75% 미만, 또는 70% 미만, 또는 65% 미만, 또는 60% 미만으로 동일할 것이다. 변이체 VpreB 폴리펩타이드는 구체적으로 VpreB 서열의 C-말단에서 비-Ig-유사 독특한 테일이 부분적으로 또는 완전히 제거된 VpreB 폴리펩타이드를 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다.
용어 "변이체 λ5 폴리펩타이드" 및 "λ5 폴리펩타이드의 변이체"는 상호 교환 가능하게 사용되며, 본 명세서에서 아미노산 변형의 결과로 네이티브 서열 λ5 폴리펩타이드와는 하나 이상의 아미노산 위치에서 상이한 폴리펩타이드로 정의된다. 본 명세서에서 정의된 바와 같이 "변이체 λ5 폴리펩타이드"는 네이티브 항체 λ 또는 κ 경쇄 서열, 또는 이의 단편과 상이할 것이다. "변이체 λ5 폴리펩타이드"는 네이티브 서열 λ5 폴리펩타이드와 바람직하게는 적어도 약 65%, 또는 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 75%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 85%, 또는 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 98% 서열 동일성을 유지할 것이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, "변이체 λ5 폴리펩타이드"는 네이티브 항체 λ 또는 κ 경쇄 서열에 대해서 이의 아미노산 서열에서 95% 미만, 또는 90% 미만, 또는 85% 미만, 또는 80% 미만, 또는 75% 미만, 또는 70% 미만, 또는 65% 미만, 또는 60% 미만으로 동일할 것이다. 변이체 λ5 폴리펩타이드는 구체적으로 λ5 서열의 C-말단에서 독특한 테일이 부분적으로 또는 완전히 제거된 λ5 폴리펩타이드를 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다.
용어 "변이체 Vκ-유사 폴리펩타이드" 및 "Vκ-유사 폴리펩타이드의 변이체"는 상호 교환 가능하게 사용되며, 본 명세서에서 아미노산 변형의 결과로 네이티브 서열 Vκ-유사 폴리펩타이드와는 하나 이상의 아미노산 위치에서 상이한 폴리펩타이드로 정의된다. 본 명세서에서 정의된 바와 같이 "변이체 Vκ-유사 폴리펩타이드"는 네이티브 항체 λ 또는 κ 경쇄 서열, 또는 이의 단편과 상이할 것이다(도 4). "변이체 Vκ-유사 폴리펩타이드"는 네이티브 서열 Vκ-유사 폴리펩타이드와 바람직하게는 적어도 약 65%, 또는 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 75%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 85%, 또는 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 98% 서열 동일성을 유지할 것이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, "변이체 Vκ-유사 폴리펩타이드"는 네이티브 항체 λ 또는 κ 경쇄 서열에 대해서 이의 아미노산 서열에서 95% 미만, 또는 90% 미만, 또는 85% 미만, 또는 80% 미만, 또는 75% 미만, 또는 70% 미만, 또는 65% 미만, 또는 60% 미만으로 동일할 것이다. 변이체 Vκ-유사 폴리펩타이드는 구체적으로 Vκ-유사 서열의 C-말단에서 비-Ig-유사 독특한 테일이 부분적으로 또는 완전히 제거된 Vκ-유사 폴리펩타이드를 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다.
용어 "변이체 JCκ 폴리펩타이드" 및 "JCκ 폴리펩타이드의 변이체"는 상호 교환 가능하게 사용되며, 본 명세서에서 아미노산 변형의 결과로 네이티브 서열 JCκ 폴리펩타이드와는 하나 이상의 아미노산 위치에서 상이한 폴리펩타이드로 정의된다(도 5). 본 명세서에서 정의된 바와 같이 "변이체 JCκ 폴리펩타이드"는 네이티브 항체 λ 또는 κ 경쇄 서열, 또는 이의 단편과 상이할 것이다. "변이체 JCκ 폴리펩타이드"는 네이티브 서열 JCκ 폴리펩타이드와 바람직하게는 적어도 약 65%, 또는 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 75%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 85%, 또는 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 98% 서열 동일성을 유지할 것이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, "변이체 JCκ 폴리펩타이드"는 네이티브 항체 λ 또는 κ 경쇄 서열에 대해서 이의 아미노산 서열에서 95% 미만, 또는 90% 미만, 또는 85% 미만, 또는 80% 미만, 또는 75% 미만, 또는 70% 미만, 또는 65% 미만, 또는 60% 미만으로 동일할 것이다. 변이체 JCκ 폴리펩타이드는 구체적으로 JCκ 서열의 N-말단에서 독특한 테일이 부분적으로 또는 완전히 제거된 JCκ 폴리펩타이드를 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다.
아미노산 서열 동일성 백분율은 서열 비교 프로그램 NCBI-BLAST2(Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997))을 사용하여 결정할 수 있다. NCBI-BLAST2 서열 비교 프로그램은 http://www.ncbi.nlm.nih.gov로부터 다운로드하거나, 달리는 National Institute of Health, Bethesda, MD로부터 입수할 수 있다. NCBI-BLAST2는 몇몇 연구 파라미터를 사용하는데, 이들 연구 파라미터 모두는 디폴트 값으로 설정되어 있고, 이것은 예를 들어, 언마스크(unmask) = 예, 가닥 = 모두, 예상된 발생 = 10, 최소 낮은 복잡성 길이 = 15/5, 멀티-패스 e-값 = 0.01, 멀티-패스에 대한 상수 = 25, 최종 갭이 있는 배열에 대한 드롭오프 = 25 및 스코어링 매트릭스 = BLOSUM62를 포함한다.
용어 "VpreB 서열"은 상기에 정의된 바와 같이, "VpreB"의 서열, 또는 이의 단편을 지칭하는 데 사용된다.
용어 "λ5 서열"은 상기에 정의된 바와 같이, "λ5"의 서열, 또는 이의 단편을 지칭하는 데 사용된다.
용어 "Vκ-유사 서열"은 상기에 정의된 바와 같이, "Vκ-유사"의 서열, 또는 이의 단편을 지칭하는 데 사용된다.
용어 "JCκ 서열"은 상기에 정의된 바와 같이, "JCκ"의 서열, 또는 이의 단편을 지칭하는 데 사용된다.
용어 "λ-유사 대리 경쇄"는 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, VpreB 및 λ5 단백질의 비-공유 회합에 의해서 형성된 이량체를 지칭한다.
용어 "κ-유사 대리 경쇄"는 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, Vκ-유사 및 JCκ 단백질의 비-공유 회합에 의해서 형성된 이량체를 지칭한다.
용어 "λ-유사 대리 경쇄 서열"은 본 명세서에서 정의된 바와 같이, 상기에 정의된 바와 같은 "VpreB 서열" 및/또는 "λ5 서열"을 포함하는 임의의 폴리펩타이드 서열을 의미한다. "λ-유사 대리 경쇄 서열"은 본 명세서에서 정의된 바와 같이, 구체적으로, 서열 번호 1의 인간 VpreB1, 서열 번호 2 및 3의 마우스 VpreB2 서열, 및 서열 번호 4의 인간 VpreB3 서열, 서열 번호 5로 표시된 인간 VpreB dT; 및 서열번호 6의 인간 VpreB1 아미노산 서열 및 스플라이스 변이체 및 번역후 변형에 의해서 형성된 변이체를 비롯한 이의 다양한 아이소폼, 이의 다른 포유동물 종의 상동체, 뿐만 아니라 이의 단편 및 변이체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 용어 "λ-유사 대리 경쇄 서열"은 추가로 서열번호 7의 인간 λ5 서열, 서열번호 8의 인간 λ5 -유사 서열, 서열번호 9로 표시된 인간 λ5 디테일, 서열번호 10의 인간 λ5 디테일 서열 및 스플라이스 변이체 및 번역후 변형에 의해서 형성된 변이체를 비롯한 이의 아이소폼, 이의 다른 포유동물 종의 상동체, 뿐만 아니라 이의 단편 및 변이체를 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다. 용어 "λ-유사 대리 경쇄 서열"은 추가로 상기에 정의된 바와 같은 VpreB 및 λ5 서열 둘 모두를 포함하는 서열을 포함한다.
용어 "κ-유사 대리 경쇄 서열"은 본 명세서에서 정의된 바와 같이, 상기에 정의된 바와 같은 "Vκ-유사 서열" 및/또는 "JCκ"를 포함하는 임의의 폴리펩타이드 서열을 의미한다. "κ-유사 대리 경쇄 서열"은 본 명세서에서 정의된 바와 같이, 구체적으로, 서열번호 12 내지 24 중 임의의 것의 인간 Vκ-유사 서열, 및 스플라이스 변이체 및 번역후 변형에 의해서 형성된 변이체를 비롯한 이의 다양한 아이소폼, 이의 다른 포유동물 종의 상동체, 뿐만 아니라 이의 단편 및 변이체를 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다. 용어 "κ-유사 대리 경쇄 서열"은 추가로 서열번호 12 내지 24 중 임의의 것의 인간 Vκ-유사 서열, 서열번호 25 내지 35 중 임의의 것의 인간 JCκ 서열, 및 스플라이스 변이체 및 번역후 변형에 의해서 형성된 변이체를 비롯한 이의 아이소폼, 이의 다른 포유동물 종의 상동체, 뿐만 아니라 이의 단편 및 변이체를 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다. 용어 "κ-유사 대리 경쇄 서열"은 추가로 상기에 정의된 바와 같은 Vκ-유사 서열 및 JCκ 서열 둘 모두를 포함하는 서열을 포함한다.
용어 "대리 경쇄 작제물"은 가장 넓은 의미로 사용되며, 이종 아미노산 서열, 핵산 및 대리 경쇄 서열에 컨주게이팅된 다른 분자를 비롯한 임의의 그리고 모든 추가적인 이종 성분을 포함하며, 여기서 "컨주게이션"은 하기에 정의되어 있다.
"대리 경쇄 작제물"은 또한 본 명세서에서 "서로바디(상표명)," 또는 "서로바디"로서 지칭되며, 두 용어는 상호 교환 가능하게 사용된다. 특정 서로바디(상표명) λ-유사 대리 경쇄 작제물은 문헌[Xu et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 2008, 105(31):10756-61] 및 2008년 10월 2일자로 공개된 PCT 공보 WO 2008/118970에 개시되어 있다. 또한, 미국 특허 공개 제2010-0062950호, 및 문헌[Xu et al., J. Mol. Biol . 2010, 397, 352-360]에 기술된 바와 같은 κ-유사 대리 경쇄 작제물이 고려되고, 이들의 전체 개시내용은 본 명세서에 참고로 명시적으로 포함된다.
본 발명의 폴리펩타이드의 문맥에서, 제1 아미노산 서열에 대한 용어 "이종 아미노산 서열"은 적어도 본 명세서에서 대리 경쇄 작제물 내에 존재하는 형태가 아닌, 제1 아미노산 서열과 자연적으로 회합되지 않은 아미노산 서열을 지칭하는 데 사용된다. 따라서, VpreB, λ5, Vκ-유사, 및 JCκ에 대한 "이종 아미노산 서열"은 이의 네이티브 환경에서 네이티브 VpreB, λ5, Vκ-유사, 또는 JCκ와 회합되지 않은 임의의 아미노산 서열이다. 이들은 i) VpreB와 함께, B 세포 발생 시에 대리 경쇄를 형성하는 λ5 서열과 상이한 λ5 서열, 예컨대 아미노산 서열 변이체, 예를 들어, 절두된 및/또는 유도체화된 λ5 서열; ii) λ5와 함께, B 세포 발생 시에 대리 경쇄를 형성하는 VpreB 서열과 상이한 VpreB 서열, 예컨대 아미노산 서열 변이체, 예를 들어, 절두된 및/또는 유도체화된 VpreB 서열, iii) JCκ와 함께, B 세포 발생 시에 κ-유사 대리 경쇄를 형성하는 Vκ-유사 서열과 상이한 Vκ-유사 서열, 예컨대 아미노산 서열 변이체, 예를 들어, 절두된 및/또는 유도체화된 Vκ-유사 서열; 및 iv) Vκ-유사와 함께, B 세포 발생 시에 κ-유사 대리 경쇄를 형성하는 JCκ 서열과 상이한 JCκ 서열, 예컨대 아미노산 서열 변이체, 예를 들어, 절두된 및/또는 유도체화된 JCκ 서열을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다.
VpreB 또는 λ5에 대한 "이종 아미노산 서열"은 또한 네이티브 서열 VpreB 또는 λ5을 비롯한, 상응하는 VpreB 또는 λ5와 공유 회합된, 예를 들어 이것에 융합된 VpreB 또는 λ5 서열을 포함하는데, 그 이유는 이들의 네이티브 환경에서, VpreB 및 λ5 서열은 서로에 공유 회합, 예를 들어, 서로에 융합되어 있지 않기 때문이다. 유사하게, Vκ-유사 또는 JCκ에 대한 "이종 아미노산 서열"은 또한 네이티브 서열 Vκ-유사 또는 JCκ를 비롯한, 상응하는 Vκ-유사 또는 JCκ와 공유 회합, 예를 들어 이것에 융합된 Vκ-유사 또는 JCκ 서열을 포함하는데, 그 이유는 이들의 네이티브 환경에서, Vκ-유사 또는 JCκ 서열은 서로에 공유 회합, 예를 들어, 서로에 융합되어 있지 않기 때문이다. 이종 아미노산 서열은 또한 항체 및 중쇄 서열 및 이의 단편을 비롯한 항체 서열, 예컨대, 예를 들어, 항체 경쇄 및 중쇄 가변 영역 서열, 및 항체 경쇄 및 중쇄 불변 영역 서열을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다.
용어 "컨주게이팅되다", "컨주게이팅된", 그리고 "컨주게이션"은 임의의 그리고 모든 형태의 공유 또는 비-공유 연결을 지칭하고, 직접적인 유전적 또는 화학적 융합, 연결기 또는 가교 결합제를 통한 커플링, 및 예를 들어, 반 데르 발스 힘을 통하거나 또는 루이신 지퍼의 사용에 의한 비-공유 회합을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용된 가요성 연결기("flexible linker")는 이의 화학적 구조에 기초하여 의도된 배경 및 환경 내에서 3차원 공간에 고정되는 것으로 예측되지 않는 임의의 연결기를 지칭하는 데 사용된다.
용어 "융합"은 이들의 암호 뉴클레오타이드 서열의 틀내(in-frame) 조합에 의해 하나의 폴리펩타이드 쇄 내에서의 상이한 기원의 아미노산 서열의 조합을 지칭하기 위해서 본 명세서에서 사용된다. 용어 "융합"은 이의 말단 중 하나에 대한 융합에 추가하여, 내부 융합, 즉, 폴리펩타이드 쇄 내의 상이한 기원의 서열의 삽입을 명백히 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "펩타이드", "폴리펩타이드" 및 "단백질"은 모두 공유 "펩타이드 연결부"에 의해 결합된 아미노산의 1차 서열을 지칭한다. 일반적으로, 펩타이드는 약 2 내지 약 50개의 아미노산의 소수의 아미노산으로 이루어지며, 단백질보다 짧다. 용어 "폴리펩타이드"는 본 명세서에서 정의된 바와 같이 펩타이드 및 단백질을 포함한다.
용어 "아미노산" 또는 "아미노산 잔기"는 전형적으로 알라닌(Ala); 아르기닌(Arg); 아스파라진(Asn); 아스파트산 (Asp); 시스테인(Cys); 글루타민(Gln); 글루탐산(Glu); 글리신(Gly); 히스티딘(His); 아이소루신(Ile): 루신(Leu); 라이신(Lys); 메티오닌(Met); 페닐알라닌(Phe); 프롤린(Pro); 세린(Ser); 트레오닌(Thr); 트립토판(Trp); 티로신(Tyr); 및 발린(Val)으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산과 같이 관련 기술 분야의 인지된 정의를 갖는 아미노산을 지칭하지만, 변형된, 합성의 또는 희귀 아미노산이 바람직하게 사용될 수 있다. 따라서, 37 CFR 1.822(b)(4)에 열거된 변형된 비통상 아미노산이 본 정의에 구체적으로 포함되며, 본 명세서에 참고로 명시적으로 포함된다. 아미노산은 다양한 하위-군으로 세분될 수 있다. 따라서, 아미노산은 비극성 측쇄를 갖는 것(예를 들어, Ala, Cys, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val); 음으로 하전된 측쇄를 갖는 것(예를 들어, Asp, Glu); 양으로 하전된 측쇄를 갖는 것(예를 들어, Arg, His, Lys); 또는 하전되지 않은 측쇄를 갖는 것(예를 들어, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, 및 Tyr)으로 구분될 수 있다. 아미노산은 작은 아미노산(Gly, Ala), 친핵성 아미노산(Ser, His, Thr, Cys), 소수성 아미노산(Val, Leu, Ile, Met, Pro), 방향족 아미노산(Phe, Tyr, Trp, Asp, Glu), 아마이드(Asp, Glu), 및 염기성 아미노산(Lys, Arg)으로 또한 분류될 수 있다.
용어 "폴리뉴클레오타이드(들)"는 핵산, 예컨대 DNA 분자 및 RNA 분자 그리고 이들의 유사체(예를 들어, 뉴클레오타이드 유사체 또는 핵산 화학을 사용하여 생성된 DNA 또는 RNA)를 지칭한다. 바람직하게는, 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어, 관련 기술 분야에서 인지되는 핵산 화학을 사용하여 합성적으로 또는 예를 들어 중합효소를 사용하여 효소적으로 제조될 수 있고, 원하는 경우 변형될 수 있다. 전형적인 변형은 메틸화, 비오티닐화 및 다른 관련 기술 분야에 공지된 변형을 포함한다. 추가로, 핵산 분자는 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있으며, 원하는 경우, 검출 가능한 모이어티에 연결된다.
참조 폴리펩타이드와 관련된 용어 "변이체"는 네이티브 폴리펩타이드와 비교하였을 때, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이 또는 변형(즉, 변경(alteration))을 보유한 폴리펩타이드를 지칭한다. "아미노산 변형"에 의해 생성된 변이체는 예를 들어, 네이티브 아미노산 서열 내의 적어도 하나의 아미노산을 치환, 결손, 삽입 및/또는 화학적으로 변형시킴으로써 생산될 수 있다.
"아미노산 변형"은 미리 결정된 아미노산 서열의 아미노산 서열 내 변화를 지칭한다. 예시적인 변형은 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결손을 포함한다.
지정된 위치"에서 아미노산 변형"은 지정된 잔기의 치환 또는 결손, 또는 지정된 잔기에 인접한 적어도 하나의 아미노산 잔기의 삽입을 지칭한다. 지정된 잔기에 "인접한" 삽입은 이의 하나 내지 두 개 잔기 이내의 삽입을 의미한다. 삽입은 지정된 잔기의 N-말단 또는 C-말단일 수 있다.
"아미노산 치환"은 미리 결정된 아미노산 서열 내의 적어도 하나의 기존 아미노산을 상이한 또 다른 "대체" 아미노산 잔기로 대체하는 것을 지칭한다. 대체 잔기 또는 잔기들은 "자연 발생 아미노산 잔기"(즉, 유전자 코드에 의해 암호화됨)일 수 있고, 알라닌(Ala); 아르기닌(Arg); 아스파라진(Asn); 아스파트산(Asp); 시스테인(Cys); 글루타민(Gln); 글루탐산(Glu); 글리신(Gly); 히스티딘(His); 아이소루신(Ile): 루신(Leu); 라이신(Lys); 메티오닌(Met); 페닐알라닌(Phe); 프롤린(Pro); 세린(Ser); 트레오닌(Thr); 트립토판(Trp); 티로신(Tyr); 및 발린(Val)으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 하나 이상의 비-자연 발생 아미노산 잔기로의 치환 또한 본 명세서에서 아미노산 치환의 정의에 포함된다.
"비-자연 발생 아미노산 잔기"는 상기에 열거된 자연 발생 아미노산 잔기 이외의 잔기를 지칭하며, 이것은 폴리펩타이드 쇄에서 인접 아미노산 잔기(들)에 공유 결합할 수 있다. 비-자연 발생 아미노산 잔기의 예는 노르류신, 오르니틴, 노르발린, 호모세린 및 문헌[Ellman et al. Meth . Enzym . 202:301 336 (1991)]에 기술된 것과 같은 다른 아미노산 잔기 유사체를 포함한다. 이러한 비-자연 발생 아미노산 잔기를 생성하기 위해서, 문헌[Noren et al. Science 244:182 (1989)] 및 상기 Ellman 등의 문헌의 절차가 사용될 수 있다. 간략하게 설명하면, 이들 절차는 비-자연 발생 아미노산 잔기로 억제인자(suppressor) tRNA를 화학적으로 활성화시키고, 이어서 시험관내에서 RNA를 전사 및 해석하는 것을 포함한다.
"아미노산 삽입"은 미리 결정된 아미노산 서열에 적어도 하나의 아미노산을 혼입하는 것을 지칭한다. 삽입은 하나 또는 두 개의 아미노산 잔기의 삽입으로 통상 이루어질 것이지만, 본 출원은 더 큰 "펩타이드 삽입", 예를 들어, 약 3개 내지 약 5개, 또는 심지어는 최대 약 10개의 아미노산 잔기의 삽입을 고려한다. 삽입된 잔기(들)는 상기에서 개시된 것과 같이 자연 발생 또는 비-자연 발생될 수 있다.
"아미노산 결손"은 미리 결정된 아미노산 서열로부터 적어도 하나의 아미노산 잔기를 제거하는 것을 지칭한다.
용어 "돌연변이 생성(mutagenesis)"은 달리 명시되지 않는 한, 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열을 변경시키는 임의의 관련 기술 분야에서 인지된 기술을 지칭한다. 바람직한 유형의 돌연변이 생성은 실수 유발 PCR 돌연변이 생성, 포화 돌연변이 생성, 또는 다른 부위 지향성 돌연변이 생성을 포함한다.
"부위 지향성 돌연변이 생성"은 관련 기술 분야 표준 기술이며, 제한된 미스매칭을 제외한, 돌연변이될 단일-가닥의 파지 DNA에 상보적인 합성된 올리고뉴클레오타이드 프라이머를 사용하여 수행되어, 바람직한 돌연변이를 나타낸다. 간략하게 설명하면, 합성 올리고뉴클레오타이드를 단일-가닥의 파지 DNA에 상보적인 가닥의 합성을 지시하는 프라이머로 사용하고, 생성된 이중-가닥 DNA를 파지-지원 숙주 박테리아 내로 형질전환시킨다. 형질전환된 박테리아 배양물을 상부 한천에 도말하여, 파지를 보유한 단일 세포로부터 플락 형성을 허용한다. 이론적으로, 새로운 플락의 50%는 단일 가닥으로 돌연변이된 형태를 갖는 파지를 함유할 것이며; 50%는 본래 서열을 가질 것이다. 정확한 매치의 혼성화를 허용하는 온도, 그러나 본래 가닥과의 미스매치는 혼성화를 방지하기에 충분한 온도에서 카이나제 합성 프라이머로 혼성화시킴으로써 관심 플락을 선택한다. 이어서, 이러한 프로브와 혼성화되는 플락을 선택하고, 시퀀싱하고, 배양하여, DNA를 회수한다.
용어 "벡터"는 세포에서 자가 복제가 가능한 rDNA 분자를 지칭하기 위해서 사용되며, 이 분자에 DNA 분절, 예를 들어 유전자 또는 폴리뉴클레오타이드가 작동 가능하게 연결되어, 부착된 분절의 복제를 야기할 수 있다. 하나 이상의 폴리펩타이드를 암호화하는 유전자의 발현을 지시할 수 있는 벡터를 본 명세서에서 "발현 벡터"라 칭한다. 용어 "제어 서열"은 특정 숙주 유기체 내에서 작동 가능하게 연결된 암호 서열의 발현에 필요한 DNA 서열을 지칭한다. 원핵 세포에 적합한 제어 서열은 예를 들어, 프로모터, 임의로 작동인자(operator) 서열, 및 리보좀 결합 부위를 포함한다. 진핵 세포는 프로모터, 폴리아데닐화 신호, 및 인핸서를 사용하는 것으로 공지되어 있다. 벡터는 추가 DNA 분절이 결찰될 수 있는, 원형의 이중-가닥의 DNA 루프를 지칭하는 "플라스미드"일 수 있다. 벡터는 파지 벡터 또는 바이러스 벡터일 수 있는데, 여기서 추가 DNA 분절은 바이러스 게놈으로 결찰될 수 있다. 적합한 벡터, 예를 들어, 박테리아 복제 원점을 갖는 박테리아 벡터 및 에피좀성 포유동물 벡터는 이들이 도입된 숙주 세포 내에서 자가 복제할 수 있다. 벡터, 예를 들어 비-에피좀성 포유동물 벡터는 숙주 세포로 도입될 때, 숙주 세포 게놈에 통합되어, 숙주 게놈과 함께 복제될 수 있다.
핵산은 또 다른 핵산 서열과 기능적인 상관관계에 있도록 배치될 때 "작동 가능하게 연결"되어 있다. 예를 들어, 프리서열(presequence) 또는 분비성 리더에 대한 DNA는 그것이 폴리펩타이드의 분비에 참여하는 프리단백질로 발현되는 경우, 폴리펩타이드용 DNA에 작동 가능하게 연결되거나; 프로모터 또는 인핸서는 그것이 서열의 전사에 영향을 주는 경우 암호 서열에 작동 가능하게 연결되거나; 리보좀 결합 부위는 그것이 해석을 실행하도록 위치된 경우, 암호 서열에 작동 가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동 가능하게 연결된"이란 연결될 DNA 서열이 인접되며, 분비성 리더의 경우, 인접되어 있고, 판독(reading) 상 내에 있다는 것을 의미한다. 그러나, 인핸서는 인접되어 있을 필요는 없다. 연결은 편리한 제한 부위에서 결찰에 의해 달성된다. 이러한 부위가 존재하지 않는다면, 합성 올리고뉴클레오타이드 어댑터 또는 연결기를 통상적인 방식에 따라 사용한다.
"파지 디스플레이 라이브러리"는 파지 코트 단백질과 융합으로 클론된 단백질 서열의 수집을 나타내는 단백질 발현 라이브러리다. 따라서, 구 "파지 디스플레이 라이브러리"는 본 명세서에서 파지(예를 들어, 필라멘트성 파지)의 수집을 지칭하며 여기서 파지는 외부(전형적으로 이종) 단백질을 발현시킨다. 외부 단백질은 파지가 접촉하는 다른 모이어티와의 상호작용(결합)에 자유롭다. 외부 단백질을 나타내는 각 파지는 파지 디스플레이 라이브러리의 "구성원"이다.
용어 "필라멘트성 파지"는 이의 표면 상에서 이종 폴리펩타이드를 나타낼 수 있는 바이러스 입자를 지칭하고, f1, fd, Pf1, 및 M13을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다. 필라멘트성 파지는 선택 가능한 마커, 예컨대 테트라사이클린(예를 들어, "fd-tet")을 포함할 수 있다. 다양한 필라멘트성 파지 디스플레이 시스템은 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Zacher et al. Gene 9: 127-140 (1980), Smith et al. Science 228: 1315-1317 (1985)]; 및 [Parmley and Smith Gene 73: 305-318 (1988)]을 참고하기 바란다).
용어 "패닝(panning)"은 파지 운반 화합물, 예컨대 표적에 대해 높은 친화도 및 특이성을 갖는 항체의 식별 및 단리에서 스크리닝 과정의 다수 순환을 지칭하는 데 사용된다.
"숙주 세포"는 본 명세서에 기술된 분자를 암호화하는 핵산(들) 및/또는 핵산을 함유하는 벡터(들)의 형질변환을 위한 수용체일 수 있거나 또는 수용체인 개별 세포 또는 세포 배양물을 포함한다. 본 발명의 방법에서, 숙주 세포는 진핵 세포, 예컨대 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 또는 인간 배아 신장(HEK) 293 세포일 수 있다. 다른 적합한 숙주 세포는 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 공지되어있다.
B. 상세한 설명
본 발명의 방법을 수행하기 위한 기술은 관련 기술 분야에 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌[Ausubel et al., Current Protocols of Molecular Biology, John Wiley and Sons (1997)]; [Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition, J. Sambrook and D. W. Russell, eds., Cold Spring Harbor, New York, USA, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001]; [O'Brian et al., Analytical Chemistry of Bacillus Thuringiensis, Hickle and Fitch, eds., Am. Chem. Soc, 1990]; [Bacillus thuringiensis : biology, ecology and safety, T.R. Glare and M. O'Callaghan, eds., John Wiley, 2000]; [Antibody Phage Display, Methods and Protocols, Humana Press, 2001]; 및 [Antibodies, G. Subramanian, ed., Kluwer Academic, 2004]를 비롯한, 표준 실험 문헌에 기술되어 있다. 돌연변이 생성은 예를 들어, 부위-지향성 돌연변이 생성(Kunkel et al., Proc . Natl . Acad . Sci USA 82:488-492 (1985))을 사용하여 수행될 수 있다. PCR 증폭 방법은 미국 특허 제4,683,192호, 제4,683,202호, 제4,800,159호 및 제4,965,188호, 및 문헌[PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification, H. Erlich, ed., Stockton Press, New York (1989)]; 및 [ PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et al., eds., Academic Press, San Diego, Calif. (1990)] 을 비롯한 몇몇 문헌에 기술되어 있다.
본 발명은 대리 경쇄(SLC)에 대한 항체에 관한 것이다. 항체는 VpreB 소단위, λ5 소단위에 대해서 안내될 수 있거나, 이들 항체 각각으로서 융합 접합부는 대리 경쇄에 특이적으로 결합할 것이다.
항-SLC 항체는 다양한 응용을 위해서 사용될 수 있다. 한 응용은 약동학/약력학 연구, 면역조직화학(immunohistochemistry) 연구에서 또는 시험관내 진단 용도를 위한 복합 생물 유체 중에서의 SLC-함유 단백질의 검출이다.
항-SLC 항체에 대한 또 다른 응용은 진단 목적을 위해서이다. SLC의 부재 또는 결핍과 연관된 관련 기술 분야에 공지된 다수의 병태가 존재한다. 예를 들어, λ5-결핍 마우스는 B-세포 발생에서 극적인 감소를 나타내는 반면(Kitamura D, Kudo A, Schaal S, Muller W, Melchers F, Rajewsky K. B 세포 발생에서 람다 5 단백질의 중요한 역할. Cell. 1992;69(5):823-831), 인간 λ5 유전자에서의 돌연변이는 무감마글로불린혈증(agammaglobulinemia)을 유발한다(Minegishi Y, Coustan-Smith E, Wang YH, Cooper MD, Campana D, Conley ME. 인간 람다5/14.1 유전자에서의 돌연변이는 B 세포 결핍 및 무감마글로불린혈증을 유발함. J Exp Med . 1998;187(l):71-77.). 인간에서, SLC를 발현하는 자가-반응성 B 세포가 식별되어 있고, 이들 세포는 RA를 갖는 환자의 관절에 축적된다고 밝혀져 있다(Meffre et al., (2000) Nature Immunology 1, 207 - 213). 따라서, SLC는 다중(poly)-반응성 세포 및 비정상적인 프리-BCR 기능에 대한 마커일 수 있다. 따라서, 항-SLC 항체는 비정상적인 SLC 발현 및 B 세포 기능과 연관된 특정 백혈병 및 자가면역 질환을 진단하기 위한 유용한 시약일 수 있다.
또한, 융합 단백질, 비-공유 헤테로머로서, 또는 세포 집단으로서의 SLC 복합체의 정제가 또한 항-SLC 항체의 용도를 위해서 고려될 수 있다. 연구 시약으로서, 항-SLC 항체를 사용하여 시험관내에서 SLC-함유 복합체의 생물물리학적 특징 및 기능적 특징을 평가할 수 있다. SLC-복합체에 대한 정량화, 친화도 측정, 유효 또는 억제 농도, 면역침강법 및 면역흡착법 응용이 항-SLC 항체를 위한 중요한 용도의 예이다.
본 발명의 항체는 예를 들어, 항체 라이브러리, 예컨대 미국 특허 제8,131,480호에 기술된 다양한 항체 라이브러리를 스크리닝함으로써 수득될 수 있고, 이것은 바람직한 실시형태에서 다양한 항체 라이브러리를 발현시키기 위해서 파지 벡터를 사용한다. 방법은 일반적으로 클로닝 및 발현을 위해서 필라멘트성 파지(파지미드) 표면 발현 벡터 시스템을 사용하는 것을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Kang et al., Proc. Natl . Acad . Sci ., USA, 88:4363-4366 (1991)]; [Barbas et al., Proc . Natl. Acad . Sci ., USA, 88:7978-7982 (1991)]; [Zebedee et al., Proc . Natl . Acad. Sci ., USA, 89:3175-3179 (1992)]; [Kang et al., Proc . Natl . Acad . Sci ., USA, 88: 11120-11123 (1991)]; [Barbas et al., Proc . Natl . Acad . Sci ., USA, 89:4457-4461 (1992)]; [Gram et al., Proc . Natl . Acad . Sci ., USA, 89:3576-3580 (1992)]; [Brinkman et al., J. Immunol . Methods 182:41-50 (1995)]; [Ames et al., J. Immunol . Methods 184: 177-186 (1995)]; [Kettleborough et al., Eur . J. Immunol. 24:952-958 (1994)]; [Persic et al., Gene 187 9-18 (1997)]; [Burton et al., Advances in Immunology 57: 191-280 (1994)]; 및 미국 특허 제5,698,426호; 제5,233,409호; 제5,580,717호; 제5,427,908호; 제5,750,753호; 제5,821,047호; 제5,403,484호; 제5,571,698호; 제5,516,637호; 제5,780,225호; 제5,658,727호; 제5,733,743호; 제5,837,500호; 제5,969,108호; 제6,326,155호; 제5,885,793호; 제6,521,404호; 제6,492,160호; 제6,492,123호; 제6,489,123호; 제6,342,588호; 제6,291,650호; 제6,225,447호; 제6,180,336호; 제6,172,197호; 제6,140,471호; 제5,994,519호; 제6,969,108호; 제5,871,907호; 및 제5,858,657호를 참고하기 바란다.
도입된 파지 유전자 및 디스플레이 단백질 유전자가 발현되는 것을 허용하고, 파지 입자가 숙주 세포로부터의 조립되고, 제거되는 것을 허용하도록 배양된 재조합 숙주 세포를 형질변환시키기 위해서 벡터를 사용한다. 이어서, 제거된 파지 입자를 숙주 세포 배양 배지로부터 수확(수집)하고, 목적하는 항체 결합 특성에 대해서 스크리닝한다. 전형적으로, 수확된 입자를 미리 선택된 황원과의 결합에 대해서 "패닝"한다. 강하게 결합된 입자를 수집하고, 입자의 개별 종을 클론에 의해서 단리하고, 항원에 대한 결합에 대해서 추가로 스크리닝한다. 목적하는 항원 결합 특이성의 결합 부위를 생성하는 파지를 선택한다.
본 발명은 하기 비제한적인 실시예로 추가로 기술된다.
실시예
실시예 1 - 항- VpreB1 Fab의 식별
씨 레인(Sea Lane) 소유의 Fab 단편 라이브러리를 4회 순환을 위해서 인간 VpreB-1에 대해서 패닝하였다. 전형적으로, 3 내지 4회 순환의 패닝 후에, 풍부해진 파지 풀로부터의 개별 클론을 인간 VpreB1에 대해서 ELISA에 의해서 분석하였고, 양성 클론을 시퀀싱하여 이의 중쇄 서열 및 경쇄 서열을 결정하였다. 이러한 연구로부터, Fab 클론 분석은 16개의 독특한 인간 VpreB1 결합부(binder)를 식별하였다(표 1). 표 2에서 추가로 특징 분석된 바와 같이, 카파 경쇄 및 람다 경쇄 둘 모두는 4개의 상이한 중쇄 프레임워크로 식별되었다.
Figure pct00001
Figure pct00002
특이성 항-인간 VpreB1 Fab 클론의 아미노산 서열을 결정하고, 가변 영역 서열을 식별하고, FASTA 프로그램을 사용하여 분석하였다. 항-인간 VpreB1 Fab 클론의 경쇄 서열(VL)은 도 6에 도시된 바와 같이 정렬되었다. 이러한 정렬 내에서, 가변 경쇄는 잔기 수 3에서 그리고 불변 경쇄(Cκ 또는 Cλ)로의 가변 경쇄 서열 전이가 회살표로 경계지워진 지점에서 시작한다. 항-인간 VpreB1 Fab 클론의 중쇄 서열(VH)은 도 7에 도시된 바와 같이 정렬되었다. 이러한 정렬 내에서, 가변 중쇄는 잔기 수 1에서 그리고 불변 경쇄로의 가변 중쇄 및 J-쇄 서열 전이가 화살표로 경계지워진 지점에서 시작한다.
실시예 2 - 선택된 항- VpreB1 IgG mAb의 특징 분석
ELISA 분석을 수행하여 인간 VpreB1에 대해서 친화도를 갖는 개별적인 패닝된 파지 Fab 항체의 SgG-결합 친화도, 선택성 및 혈청 배경을 특징 분석하였다. 도 8은 항-인간 VpreB1 IgG1(2460B04 IgG1)의 특징 분석의 개요를 제공한다. SgG 단백질은 본 명세서에서 "서로바디"라고도 지칭되는 대리 경쇄(SLC) 작제물을 지칭하고, 두 용어는 상호 교환 가능하게 사용된다. 일반적으로, 2-조각 포맷은 SLC 융합체 및 항체 중쇄를 포함하는 반면, 3-조각 포맷은 2개의 SLC 폴리펩타이드 및 항체 중쇄를 포함한다.
검출
검출 항체로서 항-인간 VpreB1 IgG1(2460B04 IgG1)을 평가하기 위해서, HGF-특이성 S2gG 및 S3gG를 ELISA에서 표지되지 않은 항-VpreB1 항체, 비오틴-표지된 항-VpreB1 항체 및 DIG-표지된 항-VpreB1 항체에 의해서 검출하였다. 2-조각 또는 3-조각 서로바디를 검출하기 위한 검정법에서, 웰을 HGF(0.001mg/mL 0.1mL)로 코팅하고, 1% BSA-PBST를 블로킹 및 희석 완충제로서 사용하고, S2gG 또는 S3gG를 50% 혈청 중에 순차적으로 희석시켰다. HGF-결합된 S2gG 또는 S3gG를 비오티닐화된 항-VpreB1 IgG 및 HRP-컨주게이팅된 스트렙타비딘에 의해서 검출하였다. 도 9에서 보여주는 바와 같이, 항-VpreB1 항체는 50% 혈청 중에서 HGF-결합된 2-조각 서로바디를 검출한다. 유사하게, 항-VpreB1 항체는 또한 50% 혈청 중에서 HGF-결합된 3-조각 서로바디를 검출한다(도 10). 검출 검정법에서 사용된 상이한 SLC 작제물에 대한 EC50 값이 하기 표 3에 제공되어 있다.
Figure pct00003
포획
항-VpreB1 IgG(2460B04 IgG1)에 의한 2-조각 또는 3-조각 서로바디 포획을 평가하기 위한 검정법에서, 웰을 항-VpreB1 IgG(0.001mg/mL 0.1mL)로 코팅하고, 1% BSA-PBST를 블로킹 및 희석 완충제로서 사용하고, S2gG 또는 S3gG를 50% 혈청 중에 순차적으로 희석시켰다. HGF-결합된 S2gG를 HRP-컨주게이팅된 염소 항-E tag Ab에 의해서 검출하였다. 도 11에서 보여주는 바와 같이, 항-VpreB1 항체는 50% 혈청 중에서 2-조각 서로바디를 포획한다. 항-VpreB1 항체는 또한 50% 혈청 중에서 3-조각 서로바디를 포획한다(도 12).
친화도
SgG에 대한 항-인간 VpreB1 IgG mAb(2460B04 IgG1)의 결합 친화도를 포르테바이오 옥텟(ForteBio Octet)("옥텟 분석법") 상에서 바이오레이어 인터페로메트리(Biolayer Interferometry)에 의해서 시험하였다. 속도론적 결합 분석법을 수행하고, 겉보기 친화도를 표 4에 보고한다. 결과는 2-조각 또는 3-조각 서로글로불린에 나노몰 미만의 친화도로 결합하는 것을 나타낸다.
Figure pct00004
항-인간 VpreB1 IgG mAb(2460B04 IgG1)는 인간, 마우스 또는 필리핀 원숭이(Cynomolgus monkey) 혈청의 존재하에서 깨끗한 배경을 보여주었다. 이는, 2460B04 IgG1 항체가 약동학(PK) 연구에서 유용할 것이라는 것을 제안한다. 이러한 결과에 의해서 제안된 추가 응용은 인간, 마우스 및 원숭이 혈청(15ng/mL)에서 최소한의 교차 반응성을 갖는 검출 시약으로서, 인간, 마우스 및 원숭이 혈청에서 최소한의 교차 반응성을 갖는 포획 시약으로서, 그리고 VpreB1-함유 라이브로리 작제에서 라이브러리를 풍부하게 하기 위한 친화도 항체로서이다.
교차 반응성
인간 VL에 대한 항-VpreB1 mAb(2460B04 IgG1)의 교차-반응성을 ELISA에 의해서 시험하였다. 표 5는 항-VpreB1 mAb의 교차-반응성을 시험하기 위해서 사용된 방법의 개요를 제공한다. 표 6은 인간 VL ORF를 함유하는 IgG의 단백질 서열 유사성을 확인한다.
Figure pct00005
Figure pct00006
검출 시약으로서 사용되는 경우, 항-VpreB1 mAb는 인간 VL ORF를 함유하는 IgG에 결합하지 않는다(도 13a 내지 도 13d). 마찬가지로, 포획시약으로서 사용되는 경우, 항-VpreB1 mAb는 VL-함유된 IgG(448C12-HC)를 포획할 수 없다(도 14a 내지 도 14c). 항-VpreB1 mAb는 또한 2547C02 HC(도 15a 내지 도 15c) 또는 2211 A01 N56H-HC(도 16a 내지 도 16c)로 표현된 VL-함유된 IgG를 포획할 수 없다. 따라서, 전통적인 경쇄 단백질에 대해서 어떤 교차 반응성도 존재하지 않는 것으로 여겨진다.
실시예 3 - 필리핀 원숭이에서의 서로바디의 약동학 연구
항-VpreB1 IgG mAb의 유용성을 필리핀 원숭이에서 서로바디의 약동학(PK) 연구에서 추가로 보여주었다. 필리핀 원숭이에서 서로바디의 PK 프로파일을 반감기(T1/2), 최대 혈장/혈청 농도(Cmax), 제거 속도 상수, AUC0-t(마지막 데이터 지점까지의 혈장 농도-시간 곡선하 면적), 및 클리어런스의 측정에 의해서 평가하였다. 본 발명자들은 또한 단일-주사로부터 생성된 항-SgG 반응을 시험하였다. 필리핀 원숭이 PK 연구에서 사용된 서로바디 시험품이 표 7에서 확인된다.
Figure pct00007
표적의 검출 - PK 필리핀 원숭이 혈청에서의 특이성 서로바디
생물학적 나이브 필리핀 원숭이를 사용하여 도 17에서 확인되는 바와 같이 5종의 SgG 시험품을 평가하였다. 3마리의 원숭이를 시험품 군 각각에서 사용하였다. 5개의 군 중에는, 각각 체중이 3.37 내지 5.67kg인 총 15마리의 원숭이가 있었고, 각각의 원숭이에 대해서 건강 보고서를 유지시켰다. 각각의 군의 평균 체중은 4.34 내지 4.87kg이었다. i.v.에 의해서 단일 10mg/mL 주사를 제공하였다. 각각의 원숭이 혈청을 수집하고, 최대 28일에 준비하였다. 혈청 수집에 대한 시간 지점은 짧은 간격(0 및 5분), 중간 간격(1, 4, 8 및 24시간) 및 긴 간격(48시간(2일), 72시간(3일), 96시간(4일), 168시간(7일), 240시간(lO일), 336시간(14일), 408시간(17일), 504시간(21일), 576시간(24일) 및 672시간(28일))을 포함하였다. ELISA 검정법을 필리핀 원숭이 혈청에서 SgG를 검출하기 위해서 사용하였다. 플레이트 당 하나의 PK 시간지점을 검정하였고, 2mL의 깊은 웰 블록에서 표준/샘플의 연속적인 희석을 수행하였다. 1:3의 연속적인 희석은 80uL 1% BSA-PBST + 400uL 샘플을 포함하였다. HGF-결합, PIGF-결합 및 복합 ELISA 각각에 대해서 하나의 희석물을 제조하였다.
5개의 시험 군 각각에서 모든 원숭이로부터의 면역이전 혈청 샘플을 SgG 단백질에 대해서 깨끗하게 하였다(도 17). 5분 내지 96시간의 시간지점에 걸쳐서 SL-541_αHGF SgG에 대해서 수집된 ELISA 데이터의 예가 도 18에 제공되어 있고, 168시간 내지 672시간의 시간지점에 걸친 이러한 SgG 구조에 대한 데이터가 도 19에 제공되어 있다. 5분 내지 96시간의 시간지점에 걸쳐서 SL-656_αHGF IgG에 대해서 수집된 ELISA 데이터의 예가 도 20에 제공되어 있고, 168시간 내지 672시간의 시간지점에 걸친 이러한 SgG 구조에 대한 데이터가 도 21에 제공되어 있다. 결과는, 시험 대상체의 반감기가 6일 내지 10일 범위인 것을 나타낸다. 이들 결과는 치료용 서로바디의 PK 특성을 측정하기 위한 VpreB1 IgG mAb(2460B04 IgG1)의 유용성을 추가로 보여준다. PK 연구는 잠재 치료 약물의 분포, 대사 및 제거를 측정하는 데 도움을 준다. 이들 데이터는 시험용 치료 제품과 허가된 치료제 간의 전통적인 비교에 기초를 제공할 뿐만 아니라 제품에 대한 최적의 투여 스케줄 및 휴약 기간을 결정하는 데 도움을 준다. 따라서, VpreB1 IgG mAb는 임상적인 효능량 및 클리어런스 시간 둘 모두를 설정하여 임상 관련 용량을 성취함으로써 서로바디의 적절한 투여를 결정하는 데 유용하다.
본 발명자들은 또한 이중특이성 서로바디의 PK 특성을 관찰하였고, 그것이 필리핀 원숭이에서 모체(parental)에 대등함을 발견하였다(도 22). 필리핀 원숭이의 나이브 군(n=3)에 서로바디의 단일 IV 용량(10 mg/kg)을 투여하고, 이의 혈청을 28일 기간에 걸쳐서 시험하였다. 이중특이성 서로바디의 전체 PK 특성은 단일특이성 HGF 및 PIGF 서로바디에 매우 유사함을 발견하였다.
상기 설명에서 본 발명은 특정 실시형태를 참고로 설명되어 있지만, 본 발명은 그것으로 제한되지 않는다. 실제로, 본 명세서에 나타내어지고, 기술된 것에 더하여 본 발명의 다양한 변형은 상기 설명으로부터 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 자명할 것이고, 이것은 첨부된 청구범위의 범주에 속한다.
본 명세서에 인용된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 각각의 개별 간행물, 특허 또는 특허 출원이 참고로 그렇게 포함되어 있다고 구체적으로 그리고 개별적으로 언급된 것과 같은 동일한 정도로 모든 목적을 위해서 그의 전문이 참고로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> SEA LANE BIOTECHNOLOGIES, LLC <120> ANTI-SURROGATE LIGHT CHAIN ANTIBODIES <130> SLN-0028-WO <140> PCT/US2016/015166 <141> 2016-01-27 <150> 62/111,018 <151> 2015-02-02 <160> 67 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 145 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ser Trp Ala Pro Val Leu Leu Met Leu Phe Val Tyr Cys Thr Gly 1 5 10 15 Cys Gly Pro Gln Pro Val Leu His Gln Pro Pro Ala Met Ser Ser Ala 20 25 30 Leu Gly Thr Thr Ile Arg Leu Thr Cys Thr Leu Arg Asn Asp His Asp 35 40 45 Ile Gly Val Tyr Ser Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly His Pro 50 55 60 Pro Arg Phe Leu Leu Arg Tyr Phe Ser Gln Ser Asp Lys Ser Gln Gly 65 70 75 80 Pro Gln Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly Ser Lys Asp Val Ala Arg Asn 85 90 95 Arg Gly Tyr Leu Ser Ile Ser Glu Leu Gln Pro Glu Asp Glu Ala Met 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Met Gly Ala Arg Ser Ser Glu Lys Glu Glu Arg Glu 115 120 125 Arg Glu Trp Glu Glu Glu Met Glu Pro Thr Ala Ala Arg Thr Arg Val 130 135 140 Pro 145 <210> 2 <211> 142 <212> PRT <213> Mus 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Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser 65 70 75 acc cgg gaa tcc ggg gtc cct gac cga ttc agt ggc agc ggg tct ggg 289 Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 80 85 90 aca gat ttc act ctc acc atc agc agc ctg cag gct gaa gat gtg gca 337 Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala 95 100 105 110 gtt tat tac tgt cag caa tat tat agt act cct ccc aca gtg ctt cag 385 Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Val Leu Gln 115 120 125 cct cga aca caa acc tcc tcc cca tac gct ggg cca gta ggt ctt tgc 433 Pro Arg Thr Gln Thr Ser Ser Pro Tyr Ala Gly Pro Val Gly Leu Cys 130 135 140 tgc agc agc tgc ttc ctc tgc aca cag ccc cca aca tgc atg ctt cct 481 Cys Ser Ser Cys Phe Leu Cys Thr Gln Pro Pro Thr Cys Met Leu Pro 145 150 155 ctg tgt gtt ggg gag gtc act ctc ttg att tat tcg ttg gag ggt ttg 529 Leu Cys Val Gly Glu Val Thr Leu Leu Ile Tyr Ser Leu Glu Gly Leu 160 165 170 cag ggc cca gga tta aat taagagactt gacttttgct ggatctcttt 577 Gln Gly Pro Gly Leu 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Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 43 Ala Leu Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser 1 5 10 15 Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly 20 25 30 Asn Asp Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asp Ser Trp 85 90 95 Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val 100 105 110 Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys 115 120 125 Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 130 135 140 Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn 145 150 155 160 Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 165 170 175 Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 180 185 190 Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His 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<400> 49 Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu 1 5 10 15 Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Lys Lys 20 25 30 Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val 35 40 45 Ile Tyr Lys Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln 65 70 75 80 Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Trp Asp Ser Ser Ser 85 90 95 Ala His Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Lys Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala 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Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 54 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Pro Ala Gly Pro Trp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 <210> 55 <211> 136 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 55 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Thr Ala Tyr 20 25 30 Ala Ile 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Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr 20 25 30 Glu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Lys Tyr Asp Gly Ala Asn Lys Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Ser Pro Tyr Gly Pro Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 <210> 60 <211> 138 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 60 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ala His 20 25 30 Gly Leu Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Ile Thr Gly Thr Ala Thr Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Trp Ser Asn Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 <210> 61 <211> 139 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 61 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Pro Phe Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gln Trp Trp 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PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 63 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Gly Tyr Gly Gly Thr Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Ala Gly Tyr Asp Arg Tyr Gly Tyr Gly Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140 <210> 64 <211> 137 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 64 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys 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Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140 <210> 67 <211> 136 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 67 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Ala Asn Ser Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asp Gly Gly Ala Tyr Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135

Claims (16)

  1. 대리 경쇄(surrogate light chain: SLC)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체는 상기 SLC의 VpreB 소단위에 특이적으로 결합하는, 항체, 또는 항원-결합 단편.
  3. 제2항에 있어서, 상기 VpreB 소단위는 서열번호 1의 인간 VpreB1인, 항체, 또는 항원-결합 단편.
  4. 제2항에 있어서, 상기 VpreB 소단위는 서열번호 2 또는 서열번호 3의 마우스 VpreB2인, 항체, 또는 항원-결합 단편.
  5. 제2항에 있어서, 상기 VpreB 소단위는 서열번호 4의 인간 VpreB 3인, 항체, 또는 항원-결합 단편.
  6. 제1항에 있어서, 상기 항체는 상기 SLC의 λ5 소단위에 특이적으로 결합하는, 항체, 또는 항원-결합 단편.
  7. 제6항에 있어서, 상기 λ5 소단위는 서열번호 7의 인간 λ5인, 항체, 또는 항원-결합 단편.
  8. 제6항에 있어서, 상기 λ5 소단위는 서열번호 9의 인간 λ5 디테일(dTail)인, 항체, 또는 항원-결합 단편.
  9. 제3항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 36 내지 51로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 항체, 또는 항원-결합 단편.
  10. 제3항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 52 내지 67로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 항체, 또는 항원-결합 단편.
  11. 제9항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 52 내지 67로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 항체, 또는 항원-결합 단편.
  12. 제2항에 있어서, 상기 항원-결합 단편은 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, scFv 단편, 및 (scFv)2 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체, 또는 항원-결합 단편을 포함하는 조성물.
  14. 제13항에 있어서, 진단성 조성물인, 조성물.
  15. 인간 대상체의 류마티스 관절염의 진단 방법으로서, 상기 대상체 유래의 생물학적 샘플을 인간 대리 경쇄(SLC)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 단계, 및 상기 SLC의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 진단 방법.
  16. 백혈병 또는 비정상적인 SLC 발현과 연관된 자가면역 질환의 진단 방법으로서, 상기 대상체 유래의 생물학적 샘플을 인간 대리 경쇄(SLC)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 단계, 및 상기 SLC의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 진단 방법.
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