JPH11133028A - 抗ヒトプレｂ細胞レセプター抗体 - Google Patents
抗ヒトプレｂ細胞レセプター抗体Info
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- JPH11133028A JPH11133028A JP29609097A JP29609097A JPH11133028A JP H11133028 A JPH11133028 A JP H11133028A JP 29609097 A JP29609097 A JP 29609097A JP 29609097 A JP29609097 A JP 29609097A JP H11133028 A JPH11133028 A JP H11133028A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ヒトプレＢ細胞とヒトプロＢ細胞とを区別し
て、ヒトプレＢ細胞を特異的に検出すること。 【解決手段】 ヒトプレＢ細胞の膜表面に発現している
ヒトプレＢ細胞レセプターを認識しかつヒトプロＢ細胞
レセプターを認識しない抗体を提供する。
て、ヒトプレＢ細胞を特異的に検出すること。 【解決手段】 ヒトプレＢ細胞の膜表面に発現している
ヒトプレＢ細胞レセプターを認識しかつヒトプロＢ細胞
レセプターを認識しない抗体を提供する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヒトプレＢ細胞レ
セプターを認識する抗体に関する。
セプターを認識する抗体に関する。
【０００２】
【従来の技術】Ｂ細胞は、骨髄の造血幹細胞からプロＢ
細胞、プレＢ細胞、未熟Ｂ細胞、成熟Ｂ細胞の各段階を
経て形質細胞に分化することが知られている。
細胞、プレＢ細胞、未熟Ｂ細胞、成熟Ｂ細胞の各段階を
経て形質細胞に分化することが知られている。
【０００３】Ｂ細胞の表面には抗原認識レセプターとし
て免疫グロブリン（以下、Ｉｇと記載することがある）
が発現している。この抗原認識レセプターは、重鎖と軽
鎖の２種のポリペプチドから構成されているが、Ｂ細胞
の分化につれて、その構成が変化する。
て免疫グロブリン（以下、Ｉｇと記載することがある）
が発現している。この抗原認識レセプターは、重鎖と軽
鎖の２種のポリペプチドから構成されているが、Ｂ細胞
の分化につれて、その構成が変化する。
【０００４】以下にマウスを例として、Ｂ細胞の分化と
その抗原認識レセプターについて説明する。
その抗原認識レセプターについて説明する。
【０００５】プロＢ細胞では、プロＢ細胞レセプターが
細胞表面に発現していることが知られている。プロＢ細
胞レセプターは、代替重鎖（ＳＨ鎖）と呼ばれる重鎖
（Ｈ鎖）に、λ５およびＶｐｒｅＢと呼ばれる二つのポ
リペプチドが会合した代替軽鎖（サロゲイトライト鎖
（ＳＬ鎖））が会合している。代替軽鎖は、λ５分子
（以下λ５ということがある）とＶｐｒｅＢ分子（以下
ＶｐｒｅＢということがある）が会合して通常の軽鎖
（Ｌ鎖）の代わりをすることからそう呼ばれている。λ
５が軽鎖の定常領域に相当し、ＶｐｒｅＢが軽鎖の可変
領域に相当する。
細胞表面に発現していることが知られている。プロＢ細
胞レセプターは、代替重鎖（ＳＨ鎖）と呼ばれる重鎖
（Ｈ鎖）に、λ５およびＶｐｒｅＢと呼ばれる二つのポ
リペプチドが会合した代替軽鎖（サロゲイトライト鎖
（ＳＬ鎖））が会合している。代替軽鎖は、λ５分子
（以下λ５ということがある）とＶｐｒｅＢ分子（以下
ＶｐｒｅＢということがある）が会合して通常の軽鎖
（Ｌ鎖）の代わりをすることからそう呼ばれている。λ
５が軽鎖の定常領域に相当し、ＶｐｒｅＢが軽鎖の可変
領域に相当する。
【０００６】プレＢ細胞では、プレＢ細胞レセプターが
細胞表面に発現していることが知られている。プレＢ細
胞レセプターは、μ鎖と呼ばれる重鎖（Ｈ鎖）に、λ５
およびＶｐｒｅＢと呼ばれる二つのポリペプチドが会合
した代替軽鎖（ＳＬ鎖）が会合している。
細胞表面に発現していることが知られている。プレＢ細
胞レセプターは、μ鎖と呼ばれる重鎖（Ｈ鎖）に、λ５
およびＶｐｒｅＢと呼ばれる二つのポリペプチドが会合
した代替軽鎖（ＳＬ鎖）が会合している。
【０００７】未熟Ｂ細胞および成熟Ｂ細胞では、抗原認
識レセプターとして、μ鎖に通常のＬ鎖が結合したＢ細
胞レセプターが発現している。
識レセプターとして、μ鎖に通常のＬ鎖が結合したＢ細
胞レセプターが発現している。
【０００８】前記からわかるように、λ５およびＶｐｒ
ｅＢは、プロＢ細胞およびプレＢ細胞にのみ細胞の膜表
面に発現する。
ｅＢは、プロＢ細胞およびプレＢ細胞にのみ細胞の膜表
面に発現する。
【０００９】ヒトＢ細胞の分化と抗原認識レセプターに
ついても、前記と同様の知見が報告されている。
ついても、前記と同様の知見が報告されている。
【００１０】従来、ヒトプレＢ細胞レセプターと反応す
る抗体としては、以下に示すものが知られている。それ
ぞれの反応性等を表１に示す。 抗ヒトプレＢ細胞レセプター抗体：ＳＬＣ１、ＳＬＣ
２，ＳＬＣ３、ＳＬＣ４（Ｃｅｌｌ、７３巻、７３−８
６ページ、１９９３年） 抗ヒトプレＢ細胞レセプター抗体：９Ｃ２（Ｅｕｒ．
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏ．、２４巻、２５７−２６４ペー
ジ、１９９４年）
る抗体としては、以下に示すものが知られている。それ
ぞれの反応性等を表１に示す。 抗ヒトプレＢ細胞レセプター抗体：ＳＬＣ１、ＳＬＣ
２，ＳＬＣ３、ＳＬＣ４（Ｃｅｌｌ、７３巻、７３−８
６ページ、１９９３年） 抗ヒトプレＢ細胞レセプター抗体：９Ｃ２（Ｅｕｒ．
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏ．、２４巻、２５７−２６４ペー
ジ、１９９４年）
【００１１】
【表１】
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】Ｂ細胞分化の異常は、
白血病を引き起こす。Ｂ細胞が分化のどの段階で異常増
殖したかを知ることは、白血病の治療上重要である。特
に、小児の急性リンパ性白血病では、プロＢ細胞あるい
はプレＢ細胞の異常増殖が原因であることが多い。現
在、一般的に診断で使われているＢ細胞表面マーカーと
しては、抗ＣＤ１０抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０
抗体、抗ＣＤ２１抗体がある。これらの抗体をＢ細胞と
反応させ、その結果により、当該Ｂ細胞がどの段階のも
のか知ろうとしている。しかし、抗ＣＤ１９抗体、抗Ｃ
Ｄ２０抗体および抗ＣＤ２１抗体は未熟Ｂ細胞や成熟Ｂ
細胞とも反応し、抗ＣＤ１０抗体はＴ細胞や上皮細胞に
も反応する。したがって、これらの抗体では、ヒトプロ
Ｂ細胞またはヒトプレＢ細胞のみを特異的に検出するこ
とは不可能であった。
白血病を引き起こす。Ｂ細胞が分化のどの段階で異常増
殖したかを知ることは、白血病の治療上重要である。特
に、小児の急性リンパ性白血病では、プロＢ細胞あるい
はプレＢ細胞の異常増殖が原因であることが多い。現
在、一般的に診断で使われているＢ細胞表面マーカーと
しては、抗ＣＤ１０抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０
抗体、抗ＣＤ２１抗体がある。これらの抗体をＢ細胞と
反応させ、その結果により、当該Ｂ細胞がどの段階のも
のか知ろうとしている。しかし、抗ＣＤ１９抗体、抗Ｃ
Ｄ２０抗体および抗ＣＤ２１抗体は未熟Ｂ細胞や成熟Ｂ
細胞とも反応し、抗ＣＤ１０抗体はＴ細胞や上皮細胞に
も反応する。したがって、これらの抗体では、ヒトプロ
Ｂ細胞またはヒトプレＢ細胞のみを特異的に検出するこ
とは不可能であった。
【００１３】本発明は、ヒトプレＢ細胞レセプターを認
識しかつヒトプロＢ細胞レセプターを認識しない抗体を
提供し、もってヒトプレＢ細胞とヒトプロＢ細胞とを区
別して、ヒトプレＢ細胞を特異的に検出することを可能
にすることを課題とする。
識しかつヒトプロＢ細胞レセプターを認識しない抗体を
提供し、もってヒトプレＢ細胞とヒトプロＢ細胞とを区
別して、ヒトプレＢ細胞を特異的に検出することを可能
にすることを課題とする。
【００１４】
【課題を解決するための手段】本発明の抗体は、ヒトプ
レＢ細胞レセプターを認識しかつヒトプロＢ細胞レセプ
ターを認識しない抗体である。
レＢ細胞レセプターを認識しかつヒトプロＢ細胞レセプ
ターを認識しない抗体である。
【００１５】
１．抗体の活性フラグメント 本発明においては、抗体は活性フラグメントをも包含す
るものである。活性フラグメントとは、抗原抗体反応活
性を有する抗体のフラグメントを意味し、具体的には、
Ｆ（ａｂ′）2 、Ｆａｂ′、Ｆａｂ、Ｆｖなどを挙げる
ことができる。例えば、本発明の抗体をペプシンで分解
するとＦ（ａｂ’）2 が得られ、パパインで分解すると
Ｆａｂが得られる。Ｆ（ａｂ’）2 を２−メルカプトエ
タノールなどの試薬で還元して、モノヨード酢酸でアル
キル化するとＦａｂ’が得られる。Ｆｖは重鎖可変領域
と軽鎖可変領域とをリンカーで結合させた一価の抗体活
性フラグメントである。
るものである。活性フラグメントとは、抗原抗体反応活
性を有する抗体のフラグメントを意味し、具体的には、
Ｆ（ａｂ′）2 、Ｆａｂ′、Ｆａｂ、Ｆｖなどを挙げる
ことができる。例えば、本発明の抗体をペプシンで分解
するとＦ（ａｂ’）2 が得られ、パパインで分解すると
Ｆａｂが得られる。Ｆ（ａｂ’）2 を２−メルカプトエ
タノールなどの試薬で還元して、モノヨード酢酸でアル
キル化するとＦａｂ’が得られる。Ｆｖは重鎖可変領域
と軽鎖可変領域とをリンカーで結合させた一価の抗体活
性フラグメントである。
【００１６】これらの活性フラグメントを保持し、その
他の部分を他の動物のフラグメントに置換することでキ
メラ抗体が得られる。本明細書において、「キメラ抗
体」とは、可変領域または抗原結合ドメインと定常領域
またはエフェクタードメインとがそれぞれ遺伝的に異な
った種に属する免疫グロブリン断片から構成されている
抗体である。例えば、マウスモノクローナル抗体の可変
（Ｖ）領域断片は、ヒト定常（Ｃ）領域断片、例えばγ
１またはγ４と連結され得る。
他の部分を他の動物のフラグメントに置換することでキ
メラ抗体が得られる。本明細書において、「キメラ抗
体」とは、可変領域または抗原結合ドメインと定常領域
またはエフェクタードメインとがそれぞれ遺伝的に異な
った種に属する免疫グロブリン断片から構成されている
抗体である。例えば、マウスモノクローナル抗体の可変
（Ｖ）領域断片は、ヒト定常（Ｃ）領域断片、例えばγ
１またはγ４と連結され得る。
【００１７】２．遺伝子工学的な製法 本発明の抗体は、遺伝子工学的な方法を用いても得られ
る。例えば、プレＢ細胞レセプターのμ鎖とＳＬ鎖の会
合物質で免疫した動物の脾細胞、リンパ球又は本発明の
モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマからｍＲ
ＮＡを採取し、これをもとにｃＤＮＡライブラリーを作
製する。次に、該ｃＤＮＡライブラリーにより抗体を発
現させる。抗原と反応する抗体を産生するクローンをス
クリーニングによりｃＤＮＡライブラリーから得、得ら
れたクローンを培養し、培養混合物から目的とする抗体
を、塩析、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニテ
ィークロマトグラフィー等の方法を組み合わせて精製す
ることができる。
る。例えば、プレＢ細胞レセプターのμ鎖とＳＬ鎖の会
合物質で免疫した動物の脾細胞、リンパ球又は本発明の
モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマからｍＲ
ＮＡを採取し、これをもとにｃＤＮＡライブラリーを作
製する。次に、該ｃＤＮＡライブラリーにより抗体を発
現させる。抗原と反応する抗体を産生するクローンをス
クリーニングによりｃＤＮＡライブラリーから得、得ら
れたクローンを培養し、培養混合物から目的とする抗体
を、塩析、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニテ
ィークロマトグラフィー等の方法を組み合わせて精製す
ることができる。
【００１８】３．検出方法 本発明の抗体を用いたヒトプレＢ細胞またはプレＢ細胞
レセプターの検出は、ＥＬＩＳＡ法、ＦＡＣＳ法、免疫
沈降または顕微鏡観察のいずれにおいても可能である。
レセプターの検出は、ＥＬＩＳＡ法、ＦＡＣＳ法、免疫
沈降または顕微鏡観察のいずれにおいても可能である。
【００１９】４．イムノトキシンとしての使用 抗体に毒素を結合させたイムノトキシンを作製すること
は、例えば、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ８７巻（１９９０年）８２９１−８２９５ペー
ジに記載の方法により可能である。本発明の抗体にもこ
の方法を適用して毒素を結合させイムノトキシンを作製
することが可能である。このイムノトキシンをプレＢ細
胞由来の白血病患者に投与することで、患者体内で増殖
したプレＢ細胞に選択的に毒素を作用させ、該細胞を死
滅させ、該細胞由来の白血病を治療することができる。
毒素としては、エキソトキシン、ジフテリアトキシン等
がある。
は、例えば、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ８７巻（１９９０年）８２９１−８２９５ペー
ジに記載の方法により可能である。本発明の抗体にもこ
の方法を適用して毒素を結合させイムノトキシンを作製
することが可能である。このイムノトキシンをプレＢ細
胞由来の白血病患者に投与することで、患者体内で増殖
したプレＢ細胞に選択的に毒素を作用させ、該細胞を死
滅させ、該細胞由来の白血病を治療することができる。
毒素としては、エキソトキシン、ジフテリアトキシン等
がある。
【００２０】５．複合物としての使用 本発明の抗体またはその活性フラグメントは、単独でも
用いられるが、必要に応じて、アルブミン、ポリエチレ
ングリコール等の物質と結合させ、新たな複合物として
用いることができる。このような複合物は、一般に、生
体内では、長時間分解されずにその効果を最大限まで発
揮することが多い。活性フラグメントに、アルブミン、
ポリエチレングリコール等の物質を付加する方法は、例
えば、アンティボディーズ、ア・ラボラトリー・マニュ
アル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ）（コールドスプリングハーバー・ラ
ボラトリー、１９８８年出版）に記載されている。一般
的には、ＳＰＤＰ（ファルマシア製）等の２価反応性試
薬を用いれば、活性フラグメントをアルブミン等と容易
に結合させることができる。
用いられるが、必要に応じて、アルブミン、ポリエチレ
ングリコール等の物質と結合させ、新たな複合物として
用いることができる。このような複合物は、一般に、生
体内では、長時間分解されずにその効果を最大限まで発
揮することが多い。活性フラグメントに、アルブミン、
ポリエチレングリコール等の物質を付加する方法は、例
えば、アンティボディーズ、ア・ラボラトリー・マニュ
アル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ）（コールドスプリングハーバー・ラ
ボラトリー、１９８８年出版）に記載されている。一般
的には、ＳＰＤＰ（ファルマシア製）等の２価反応性試
薬を用いれば、活性フラグメントをアルブミン等と容易
に結合させることができる。
【００２１】
【実施例】以下に本発明の実施例を示し、より具体的に
本発明を説明するが、本発明は以下に限定されるもので
はなく、免疫する動物、対象とする細胞株、標識抗体等
は、目的に応じて適宜他のものが使用可能である。
本発明を説明するが、本発明は以下に限定されるもので
はなく、免疫する動物、対象とする細胞株、標識抗体等
は、目的に応じて適宜他のものが使用可能である。
【００２２】＜実施例１＞抗体の作製 １．抗原の作製 １）抗原遺伝子組み換え体の作製 （１）λ５遺伝子およびＶｐｒｅＢ遺伝子の作製 ヒトλ５遺伝子およびヒトＶｐｒｅＢ遺伝子は、ヒトプ
レＢ白血病細胞株Ｎａｌｍ６から常法によりｍＲＮＡを
調製し、該ｍＲＮＡについて、下記のプライマーでＲＴ
−ＰＣＲ法を行うことにより作製した。作製したｍＲＮ
Ａについてそれぞれシークエンスを行い、ヒトλ５およ
びヒトＶｐｒｅＢ遺伝子の塩基配列を有することを確認
した。
レＢ白血病細胞株Ｎａｌｍ６から常法によりｍＲＮＡを
調製し、該ｍＲＮＡについて、下記のプライマーでＲＴ
−ＰＣＲ法を行うことにより作製した。作製したｍＲＮ
Ａについてそれぞれシークエンスを行い、ヒトλ５およ
びヒトＶｐｒｅＢ遺伝子の塩基配列を有することを確認
した。
【００２３】λ５プライマ ５’プライマ 5'-GGA ACT CGA GCC ACA AGG ACC TCT G
AC CCT-3' ３’プライマ 5'-GGA AGC GGC CGC AGG CCT TTG GGT G
GG GTC GG-3' ＶｐｒｅＢプライマ ５’プライマー 5'-GGA ACT CGA GGG AGT CAG AGC TCT
GCA TGT-3' ３’プライマー 5'-GGA AGC GGC CGC AGG GGA TGC GTG
CCT CTG CT-3'
AC CCT-3' ３’プライマ 5'-GGA AGC GGC CGC AGG CCT TTG GGT G
GG GTC GG-3' ＶｐｒｅＢプライマ ５’プライマー 5'-GGA ACT CGA GGG AGT CAG AGC TCT
GCA TGT-3' ３’プライマー 5'-GGA AGC GGC CGC AGG GGA TGC GTG
CCT CTG CT-3'
【００２４】（２）ベクターへの挿入 サイトメガロウィルスのプロモーターとイムノグロブリ
ンのμ鎖のエンハンサーをもつ哺乳類動物用の発現ベク
ターＢＣＭＧＳＨｙｇ（この製法については、Ｊ．Ｅｘ
ｐ．Ｍｅｄ．１７２巻、９６９−９７２ページに記載の
方法に従った。）に、（１）で作製したλ５遺伝子およ
びＶｐｒｅＢ遺伝子を常法により挿入した。
ンのμ鎖のエンハンサーをもつ哺乳類動物用の発現ベク
ターＢＣＭＧＳＨｙｇ（この製法については、Ｊ．Ｅｘ
ｐ．Ｍｅｄ．１７２巻、９６９−９７２ページに記載の
方法に従った。）に、（１）で作製したλ５遺伝子およ
びＶｐｒｅＢ遺伝子を常法により挿入した。
【００２５】（３）形質転換体の作製 マウスμ鎖を発現する宿主Ｌｔｋ- （マウスμ鎖）に、
（２）で作製したベクターを、エレクトロポーレーショ
ン法により導入し(この方法については、Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．１７２巻、９６９−９７２ページを参照のこ
と）、キメラのプレＢ細胞レセプター（マウスμ鎖／ヒ
トλ５／ヒトＶｐｒｅＢ）を発現および分泌する形質転
換体Ｌｔｋ- （マウスμ鎖／ヒトλ５／ヒトＶｐｒｅ
Ｂ）を作製した。
（２）で作製したベクターを、エレクトロポーレーショ
ン法により導入し(この方法については、Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．１７２巻、９６９−９７２ページを参照のこ
と）、キメラのプレＢ細胞レセプター（マウスμ鎖／ヒ
トλ５／ヒトＶｐｒｅＢ）を発現および分泌する形質転
換体Ｌｔｋ- （マウスμ鎖／ヒトλ５／ヒトＶｐｒｅ
Ｂ）を作製した。
【００２６】（４）形質転換体の選別 形質転換体Ｌｔｋ- （マウスμ鎖／ヒトλ５／ヒトＶ
ｐｒｅＢ）を、０．２ｍｇ／ｍｌのハイグロマイシンと
Ｇ４１８を含む１０％ＦＣＳ−ＲＰＭＩ１６４０を培地
として、９６穴プレートで、３７℃、５％ＣＯ2 下で培
養した。 培養上清を下記の条件１のＥＬＩＳＡ法により測定し
た。１２００ウェル中、約６００ウェルにコロニーが発
現し、そのうち４０５ｎｍでの吸光度の高い１６ウェル
を陽性として選択した。
ｐｒｅＢ）を、０．２ｍｇ／ｍｌのハイグロマイシンと
Ｇ４１８を含む１０％ＦＣＳ−ＲＰＭＩ１６４０を培地
として、９６穴プレートで、３７℃、５％ＣＯ2 下で培
養した。 培養上清を下記の条件１のＥＬＩＳＡ法により測定し
た。１２００ウェル中、約６００ウェルにコロニーが発
現し、そのうち４０５ｎｍでの吸光度の高い１６ウェル
を陽性として選択した。
【００２７】ＥＬＩＳＡ条件１ ９６穴プレートのコーティング：ヤギ抗マウスＩｇＭ
（１０μｇ／ｍｌ）でコーティングした。 試料：形質転換体Ｌｔｋ- （マウスμ鎖／ヒトλ５／ヒ
トＶｐｒｅＢ）の培養上清 検出用抗体：アルカリフォスファターゼ標識ヤギ抗マウ
スＩｇＭ（サザンバイオテクノロジーアソシエイツ（Ｓ
ｏｕｔｈｅｒｎ ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＡｓｓｏ
ｃｉａｔｅｓ）社製を３００倍希釈） 基質：ＰＮＰＰ（ｐ−ニトロフェニルフォスフェート、
シグマ社製）
（１０μｇ／ｍｌ）でコーティングした。 試料：形質転換体Ｌｔｋ- （マウスμ鎖／ヒトλ５／ヒ
トＶｐｒｅＢ）の培養上清 検出用抗体：アルカリフォスファターゼ標識ヤギ抗マウ
スＩｇＭ（サザンバイオテクノロジーアソシエイツ（Ｓ
ｏｕｔｈｅｒｎ ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＡｓｓｏ
ｃｉａｔｅｓ）社製を３００倍希釈） 基質：ＰＮＰＰ（ｐ−ニトロフェニルフォスフェート、
シグマ社製）
【００２８】のＥＬＩＳＡを数回繰り返し、さら
に、陽性株については、限界希釈法を用いてクローン化
し、プレＢ細胞レセプター（マウスμ鎖／ヒトλ５／ヒ
トＶｐｒｅＢ）を高発現する陽性株を選択した。該陽性
株をＬｔｋ- １７−７２と名付けた。
に、陽性株については、限界希釈法を用いてクローン化
し、プレＢ細胞レセプター（マウスμ鎖／ヒトλ５／ヒ
トＶｐｒｅＢ）を高発現する陽性株を選択した。該陽性
株をＬｔｋ- １７−７２と名付けた。
【００２９】２）抗原蛋白質の大量培養 前記でとった形質転換体Ｌｔｋ- １７−７２を、５％Ｆ
ＣＳ−ＲＰＭＩ１６４０培地で、複数の１Ｌ容ローラボ
トルにて３７℃で培養した。１本のローラボトルに２０
０ｍｌの培地を注入して、２週間培養した。２週間の培
養後、培地中のプレＢ細胞レセプター（マウスμ鎖／ヒ
トλ５／ヒトＶｐｒｅＢ）の濃度を前記と同様にＥＬＩ
ＳＡ条件１により測定した結果、約５ｎｇ／ｍｌの濃度
であった。
ＣＳ−ＲＰＭＩ１６４０培地で、複数の１Ｌ容ローラボ
トルにて３７℃で培養した。１本のローラボトルに２０
０ｍｌの培地を注入して、２週間培養した。２週間の培
養後、培地中のプレＢ細胞レセプター（マウスμ鎖／ヒ
トλ５／ヒトＶｐｒｅＢ）の濃度を前記と同様にＥＬＩ
ＳＡ条件１により測定した結果、約５ｎｇ／ｍｌの濃度
であった。
【００３０】３）抗原の精製 （１）濃縮 ２）の培養上清２Ｌを集め、濃縮装置（ＭＩＮＩＴＡＮ
（登録商標、ミリポア社製））を使用して約１０倍に濃
縮した。
（登録商標、ミリポア社製））を使用して約１０倍に濃
縮した。
【００３１】（２）精製 ビーズ（ＣＮＢｒ活性化セファロース４Ｂ、ファルマ
シア社製）にラット抗マウスμ鎖抗体を常法により付
け、カラムに充填した。 このカラムに濃縮した培養上清を２週間循環させて通
し、培養上清中のプレＢ細胞レセプター（マウスμ鎖／
ヒトλ５／ヒトＶｐｒｅＢ）を抗原蛋白質としてビーズ
に結合させた抗原−ビーズ結合体を作製した。合計で約
２０Ｌの培養上清について前記の濃縮および精製を行い
抗原蛋白質５０μｇを５００μｌの抗原ビーズに結合さ
せた抗原蛋白質−ビーズ結合体を作製した（培地中の抗
原蛋白質の回収率は５０％であった。）。
シア社製）にラット抗マウスμ鎖抗体を常法により付
け、カラムに充填した。 このカラムに濃縮した培養上清を２週間循環させて通
し、培養上清中のプレＢ細胞レセプター（マウスμ鎖／
ヒトλ５／ヒトＶｐｒｅＢ）を抗原蛋白質としてビーズ
に結合させた抗原−ビーズ結合体を作製した。合計で約
２０Ｌの培養上清について前記の濃縮および精製を行い
抗原蛋白質５０μｇを５００μｌの抗原ビーズに結合さ
せた抗原蛋白質−ビーズ結合体を作製した（培地中の抗
原蛋白質の回収率は５０％であった。）。
【００３２】２．免疫 前記で作製した抗原蛋白質−ビーズ結合体をメスのＢＡ
ＬＢ／ｃマウスの四肢付け根皮下に、１匹あたり１μｇ
／１０μｌのビーズを免疫した。２回目以降の免疫に
は、抗原蛋白質−ビーズ結合体をＰＢＳの懸濁液にし
て、１匹あたり１μｇ／１０μｌのビーズを７日おきに
合計７回免疫した。その後、８週間おいてから抗原蛋白
質−ビーズ結合体より溶出させた抗原蛋白質溶液（抗原
蛋白質量３０μｇ）を尾より静注して追加免疫した。前
記抗原蛋白質溶液（抗原蛋白質−ビーズ結合体を０．１
Ｍグリシン（ｐＨ２．７）で溶出した液）のＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥ電気泳動の結果を図８に示す。電気泳動の結果、
μ鎖、λ５、ＶｐｒｅＢのバンドが見られ抗原蛋白質が
これらからなる分泌型プレＢ細胞レセプター（マウスμ
鎖／ヒトλ５／ヒトＶｐｒｅＢ）であることが確認され
た。
ＬＢ／ｃマウスの四肢付け根皮下に、１匹あたり１μｇ
／１０μｌのビーズを免疫した。２回目以降の免疫に
は、抗原蛋白質−ビーズ結合体をＰＢＳの懸濁液にし
て、１匹あたり１μｇ／１０μｌのビーズを７日おきに
合計７回免疫した。その後、８週間おいてから抗原蛋白
質−ビーズ結合体より溶出させた抗原蛋白質溶液（抗原
蛋白質量３０μｇ）を尾より静注して追加免疫した。前
記抗原蛋白質溶液（抗原蛋白質−ビーズ結合体を０．１
Ｍグリシン（ｐＨ２．７）で溶出した液）のＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥ電気泳動の結果を図８に示す。電気泳動の結果、
μ鎖、λ５、ＶｐｒｅＢのバンドが見られ抗原蛋白質が
これらからなる分泌型プレＢ細胞レセプター（マウスμ
鎖／ヒトλ５／ヒトＶｐｒｅＢ）であることが確認され
た。
【００３３】３．モノクローナル抗体の作製 １）ハイブリドーマの作製 追加免疫３日後に、免疫したマウスの脾臓から脾細胞
２．２×１０8 個を取り出し、マウスミエローマ細胞Ｐ
ＡＩと４：１の割合でポリエチレングリコール（ベーリ
ンガー社製）細胞融合した。こうして得られたハイブリ
ドーマを９６穴プレート１０枚にまき、１００倍希釈の
ＨＡＴ（ベーリンガー社製）と５００倍希釈のＩＬ−６
（形質転換体Ｘ６３ＢＣＭＧＮｅｏ（この製法について
はＪ．ＥＸｐ．Ｍｅｄ．１７１巻、３８９−４００ペー
ジを参照のこと）の培養上清）を加えた２０％ＦＣＳ−
ＩＭＤＭ（ギブコ社製）で培養した。
２．２×１０8 個を取り出し、マウスミエローマ細胞Ｐ
ＡＩと４：１の割合でポリエチレングリコール（ベーリ
ンガー社製）細胞融合した。こうして得られたハイブリ
ドーマを９６穴プレート１０枚にまき、１００倍希釈の
ＨＡＴ（ベーリンガー社製）と５００倍希釈のＩＬ−６
（形質転換体Ｘ６３ＢＣＭＧＮｅｏ（この製法について
はＪ．ＥＸｐ．Ｍｅｄ．１７１巻、３８９−４００ペー
ジを参照のこと）の培養上清）を加えた２０％ＦＣＳ−
ＩＭＤＭ（ギブコ社製）で培養した。
【００３４】２）スクリーニング （１）ＥＬＩＳＡ 約２週間、ハイブリドーマを培養した。７６８ウェル
（プレート８枚）中、約６００ウェルにコロニーが発現
した。コロニーをつくったハイブリドーマの培養上清
を、下記の条件２のＥＬＩＳＡ法で測定した。
（プレート８枚）中、約６００ウェルにコロニーが発現
した。コロニーをつくったハイブリドーマの培養上清
を、下記の条件２のＥＬＩＳＡ法で測定した。
【００３５】ＥＬＩＳＡ条件２ ９６穴プレートのコーティング：以下の４種類の抗体
を９６穴プレートにそれぞれコーティングした。コーテ
ィングに用いた各抗体は、１０μｇ／ｍｌの濃度のもの
を用い、プレートの各ウェルに５０μｌずつ加え、４℃
で一晩静置した。その後、０．０５％ｔｗｅｅｎ２０−
ＰＢＳで洗浄した後、４％ＢＳＡ−０．２％ｔｗｅｅｎ
２０−ＰＢＳをブロッキング液として２００μｌずつ各
ウェルに加え、４℃で一時間静置した。 Ａ：ヤギ抗マウスμ鎖抗体（サザンバイオテクノロジー
アソシエイツ社製）でコーティングしてブロッキングし
た後、Ｌｔｋ- １７−７２の培養上清の１０倍濃縮液を
コーティングした。 Ｂ：ヤギ抗マウスμ鎖抗体（同上）でコーティングし
た。 Ｃ：ヒトＩｇＭ（μ鎖およびλ鎖）（サザンバイオテク
ノロジーアソシエイツ社製）でコーティングした。 Ｄ：ヒトＩｇＭ（μ鎖およびκ鎖）（サザンバイオテク
ノロジーアソシエイツ社製）でコーティングした。
を９６穴プレートにそれぞれコーティングした。コーテ
ィングに用いた各抗体は、１０μｇ／ｍｌの濃度のもの
を用い、プレートの各ウェルに５０μｌずつ加え、４℃
で一晩静置した。その後、０．０５％ｔｗｅｅｎ２０−
ＰＢＳで洗浄した後、４％ＢＳＡ−０．２％ｔｗｅｅｎ
２０−ＰＢＳをブロッキング液として２００μｌずつ各
ウェルに加え、４℃で一時間静置した。 Ａ：ヤギ抗マウスμ鎖抗体（サザンバイオテクノロジー
アソシエイツ社製）でコーティングしてブロッキングし
た後、Ｌｔｋ- １７−７２の培養上清の１０倍濃縮液を
コーティングした。 Ｂ：ヤギ抗マウスμ鎖抗体（同上）でコーティングし
た。 Ｃ：ヒトＩｇＭ（μ鎖およびλ鎖）（サザンバイオテク
ノロジーアソシエイツ社製）でコーティングした。 Ｄ：ヒトＩｇＭ（μ鎖およびκ鎖）（サザンバイオテク
ノロジーアソシエイツ社製）でコーティングした。
【００３６】抗原抗体反応：各プレートを０．０５％
ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳで洗浄した後、各ウェルに４％
ＢＳＡ−０．２％ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳを希釈液とし
て３０μｌずつ各ウェルに加え、さらに前記のハイブリ
ドーマの培養上清を３０μｌずつ各ウェルに加えて混合
し、室温で２時間静置し抗原抗体反応させた。 呈色反応：抗原抗体反応後、各プレートを０．０５％
ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳで洗浄した後、アルカリフォス
ファターゼ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（サザンバイオ
テクノロジー社製を５００倍希釈）を検出用抗体として
１００μｌずつ各ウェルに加え、室温で１時間静置し
た。その後、各プレートを０．０５％ｔｗｅｅｎ２０−
ＰＢＳで洗浄した後、ＰＮＰＰを基質として各ウェルに
１００μｌずつ加え、室温で３０分間静置して、呈色さ
せた。
ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳで洗浄した後、各ウェルに４％
ＢＳＡ−０．２％ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳを希釈液とし
て３０μｌずつ各ウェルに加え、さらに前記のハイブリ
ドーマの培養上清を３０μｌずつ各ウェルに加えて混合
し、室温で２時間静置し抗原抗体反応させた。 呈色反応：抗原抗体反応後、各プレートを０．０５％
ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳで洗浄した後、アルカリフォス
ファターゼ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（サザンバイオ
テクノロジー社製を５００倍希釈）を検出用抗体として
１００μｌずつ各ウェルに加え、室温で１時間静置し
た。その後、各プレートを０．０５％ｔｗｅｅｎ２０−
ＰＢＳで洗浄した後、ＰＮＰＰを基質として各ウェルに
１００μｌずつ加え、室温で３０分間静置して、呈色さ
せた。
【００３７】その後、４０５ｎｍにおける吸光度を測
定した。４０５ｎｍにおける吸光度が高くなるものを陽
性とし、Ａのコーティングで陽性となり、Ｂ、Ｃおよび
Ｄのコーティングで陰性となる培養上清を産生するハイ
ブリドーマを選択した。その結果、コロニーを作った６
００ウェルのハイブリドーマのうち２８ウェルのハイブ
リドーマが選択された。
定した。４０５ｎｍにおける吸光度が高くなるものを陽
性とし、Ａのコーティングで陽性となり、Ｂ、Ｃおよび
Ｄのコーティングで陰性となる培養上清を産生するハイ
ブリドーマを選択した。その結果、コロニーを作った６
００ウェルのハイブリドーマのうち２８ウェルのハイブ
リドーマが選択された。
【００３８】（２）細胞表面染色 前記で陽性株として選んだハイブリドーマ１４クローン
から、ヒトプレＢ白血病細胞株Ｎａｌｍ６の細胞表面に
発現しているプレＢ細胞レセプターとの反応が陽性とな
るクローンを選択するために、細胞表面染色を行った。
具体的には、９６ウェルプレートの各ウェルに１×１０
6 個のＮａｌｍ６細胞を入れ、それぞれに各クローンの
培養上清を５０μｌ加え、室温で３０分間反応させた。
その後、二次抗体として、ＰＥ標識ヤギ抗マウスκ鎖抗
体（２μｇ／ｍｌ）を１００μｌ各ウェルに加えた。
から、ヒトプレＢ白血病細胞株Ｎａｌｍ６の細胞表面に
発現しているプレＢ細胞レセプターとの反応が陽性とな
るクローンを選択するために、細胞表面染色を行った。
具体的には、９６ウェルプレートの各ウェルに１×１０
6 個のＮａｌｍ６細胞を入れ、それぞれに各クローンの
培養上清を５０μｌ加え、室温で３０分間反応させた。
その後、二次抗体として、ＰＥ標識ヤギ抗マウスκ鎖抗
体（２μｇ／ｍｌ）を１００μｌ各ウェルに加えた。
【００３９】この試料を、ファックスキャリバー（ＦＡ
ＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ、ベクトンデッキンソン社製）に
て測定した。交差反応性の対象として、成熟Ｂ細胞株Ｄ
ａｕｄｉ、ＬＢＷ−４についても同様に細胞表面染色し
てＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒにて測定した。その結果、
前記２８クローン中、７クローンがＮａｌｍ６で陽性と
なり、ＤａｕｄｉおよびＬＢＷ−４で陰性となった。
ＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ、ベクトンデッキンソン社製）に
て測定した。交差反応性の対象として、成熟Ｂ細胞株Ｄ
ａｕｄｉ、ＬＢＷ−４についても同様に細胞表面染色し
てＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒにて測定した。その結果、
前記２８クローン中、７クローンがＮａｌｍ６で陽性と
なり、ＤａｕｄｉおよびＬＢＷ−４で陰性となった。
【００４０】前記の細胞表面染色と同様にして、細胞お
よび抗体を懸濁する緩衝液を０．１％ＢＳＡ−０．０５
％サポニン−１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．３）−Ｐ
ＢＳとして、細胞内染色を行い、ファックスキャリバー
にて測定した。交差反応性の対象として、成熟Ｂ細胞株
Ｄａｕｄｉ、ＬＢＷ−４についても同様に細胞内染色し
てＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒにて測定した。その結果、
前記７クローン中、１クローンがＮａｌｍ６で陽性とな
り、ＤａｕｄｉおよびＬＢＷ−４で陰性となった。
よび抗体を懸濁する緩衝液を０．１％ＢＳＡ−０．０５
％サポニン−１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．３）−Ｐ
ＢＳとして、細胞内染色を行い、ファックスキャリバー
にて測定した。交差反応性の対象として、成熟Ｂ細胞株
Ｄａｕｄｉ、ＬＢＷ−４についても同様に細胞内染色し
てＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒにて測定した。その結果、
前記７クローン中、１クローンがＮａｌｍ６で陽性とな
り、ＤａｕｄｉおよびＬＢＷ−４で陰性となった。
【００４１】３）クローニング 前記最終的に残った１クローンのハイブリドーマを限界
希釈法により、９６穴プレートに１細胞／ウェルとなる
ように撒いた後、１０日間培養した。１コロニー／ウェ
ルとなったコロニーを１０個選択し、ＥＬＩＳＡ条件２
にてＥＬＩＳＡ法により、Ａのコーティングでの吸光度
を測定した。最も吸光度が高くなったハイブリドーマを
ＨＳＬ２と名付け、該ハイブリドーマを工業技術院生命
工学工業技術研究所に平成９年１０月１６日に寄託した
（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１６４７６）。このハイブリ
ドーマＨＳＬ２が産生する抗体をＨＳＬ２抗体と呼ぶ。
希釈法により、９６穴プレートに１細胞／ウェルとなる
ように撒いた後、１０日間培養した。１コロニー／ウェ
ルとなったコロニーを１０個選択し、ＥＬＩＳＡ条件２
にてＥＬＩＳＡ法により、Ａのコーティングでの吸光度
を測定した。最も吸光度が高くなったハイブリドーマを
ＨＳＬ２と名付け、該ハイブリドーマを工業技術院生命
工学工業技術研究所に平成９年１０月１６日に寄託した
（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１６４７６）。このハイブリ
ドーマＨＳＬ２が産生する抗体をＨＳＬ２抗体と呼ぶ。
【００４２】なお、同様の操作で、ヒトｐｒｅＢ細胞レ
セプターを認識する抗体で、特にＶｐｒｅＢを認識する
抗体が取得された。この抗体を産生するハイブリドーマ
をＨＳＬ９６と名付け、該ハイブリドーマを工業技術院
生命工学工業技術研究所に平成９年５月３０日に寄託し
た（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１６２５１）。このハイブ
リドーマが産生する抗体をＨＳＬ９６抗体と呼ぶ。ま
た、同様の操作で、ヒトｐｒｅＢ細胞レセプターを認識
する抗体で、特にλ５を認識する抗体が取得された。こ
の抗体を産生するハイブリドーマをＨＳＬ１１と名付け
た。このハイブリドーマが産生する抗体をＨＳＬ１１抗
体と呼ぶ。
セプターを認識する抗体で、特にＶｐｒｅＢを認識する
抗体が取得された。この抗体を産生するハイブリドーマ
をＨＳＬ９６と名付け、該ハイブリドーマを工業技術院
生命工学工業技術研究所に平成９年５月３０日に寄託し
た（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１６２５１）。このハイブ
リドーマが産生する抗体をＨＳＬ９６抗体と呼ぶ。ま
た、同様の操作で、ヒトｐｒｅＢ細胞レセプターを認識
する抗体で、特にλ５を認識する抗体が取得された。こ
の抗体を産生するハイブリドーマをＨＳＬ１１と名付け
た。このハイブリドーマが産生する抗体をＨＳＬ１１抗
体と呼ぶ。
【００４３】４．モノクローナル抗体の大量産生 生後７週目のＩＣＲｎｕ／ｎｕ マウス（チャールス・
リーバ社製）の腹腔にプリスタン０．５ｍｌを注入し、
その５日後に、各マウスにハイブリドーマＨＳＬ９６を
１×１０7 個注入した。約２週間後、腹水を回収し、カ
プリル酸法（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ８章、３００ページ、１９８
８年 Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ出版、に記載の方法）にしたがって精製
し、モノクローナル抗体を得た。モノクローナルマウス
Ｉｇアイソタイピングキット（ファーミンジェン社製）
を用いて該抗体のサブクラスがＩｇＧ1κ であることを
確認した。
リーバ社製）の腹腔にプリスタン０．５ｍｌを注入し、
その５日後に、各マウスにハイブリドーマＨＳＬ９６を
１×１０7 個注入した。約２週間後、腹水を回収し、カ
プリル酸法（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ８章、３００ページ、１９８
８年 Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ出版、に記載の方法）にしたがって精製
し、モノクローナル抗体を得た。モノクローナルマウス
Ｉｇアイソタイピングキット（ファーミンジェン社製）
を用いて該抗体のサブクラスがＩｇＧ1κ であることを
確認した。
【００４４】＜実施例２＞抗体の特異性の確認１ーＥＬ
ＩＳＡ法 ＥＬＩＳＡ条件２と同様の条件で、下記各試料を下記各
コーティングした抗原蛋白質と反応させ、４０５ｎｍで
の吸光度を測定した。 コーティングした抗原蛋白質： Ｌｔｋ- １７−７２の培養上清の１０倍濃縮液（プレ
Ｂ細胞レセプター） ヒトＩｇＭ（ヒトμ鎖およびヒトκ鎖）（１０μｇ／
ｍｌ） ヒトＩｇＭ（ヒトμ鎖およびヒトλ鎖）（１０μｇ／
ｍｌ） 試料： ハイブリドーマＨＳＬ２の培養上清（ＨＳＬ２抗体） ハイブリドーマＨＳＬ９６の培養上清（ＨＳＬ９６抗
体） ハイブリドーマＨＳＬ１１の培養上清（ＨＳＬ１１抗
体） マウスハイブリドーマ１４１ＰＦ１１の培養上清（抗
ヒトκ鎖抗体） マウスハイブリドーマＨＰ６０５４の培養上清（抗ヒ
トλ鎖抗体） 検出用抗体： アルカリフォスファターゼ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体
の５００倍希釈液 基質：ＰＮＰＰ
ＩＳＡ法 ＥＬＩＳＡ条件２と同様の条件で、下記各試料を下記各
コーティングした抗原蛋白質と反応させ、４０５ｎｍで
の吸光度を測定した。 コーティングした抗原蛋白質： Ｌｔｋ- １７−７２の培養上清の１０倍濃縮液（プレ
Ｂ細胞レセプター） ヒトＩｇＭ（ヒトμ鎖およびヒトκ鎖）（１０μｇ／
ｍｌ） ヒトＩｇＭ（ヒトμ鎖およびヒトλ鎖）（１０μｇ／
ｍｌ） 試料： ハイブリドーマＨＳＬ２の培養上清（ＨＳＬ２抗体） ハイブリドーマＨＳＬ９６の培養上清（ＨＳＬ９６抗
体） ハイブリドーマＨＳＬ１１の培養上清（ＨＳＬ１１抗
体） マウスハイブリドーマ１４１ＰＦ１１の培養上清（抗
ヒトκ鎖抗体） マウスハイブリドーマＨＰ６０５４の培養上清（抗ヒ
トλ鎖抗体） 検出用抗体： アルカリフォスファターゼ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体
の５００倍希釈液 基質：ＰＮＰＰ
【００４５】結果を図２に示す。ＨＳＬ２抗体はプレＢ
細胞レセプターを認識し、ヒトμ鎖、κ鎖またはλ鎖と
は反応しないことが分かる。したがって、ＨＳＬ２はヒ
トプレＢ細胞レセプターのμ鎖の部分のみを認識してい
るわけではないことが分かった。
細胞レセプターを認識し、ヒトμ鎖、κ鎖またはλ鎖と
は反応しないことが分かる。したがって、ＨＳＬ２はヒ
トプレＢ細胞レセプターのμ鎖の部分のみを認識してい
るわけではないことが分かった。
【００４６】＜実施例３＞抗体の特異性の確認２−ＦＡ
ＣＳ法 １．細胞表面免疫染色 下記細胞株とＨＳＬ２抗体またはＨＳＬ９６抗体をそれ
ぞれ反応させて、細胞表面染色を行い、ファックスキャ
リバー（ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ、ベクトンデッキン
ソン社製）にて測定した。 細胞株： プロＢ白血病細胞株ＲＳ４；１１ プレＢ白血病細胞株６９７ 成熟Ｂ細胞株ＬＢＷ−４ Ｔ白血病細胞株Ｊｕｒｋａｔ
ＣＳ法 １．細胞表面免疫染色 下記細胞株とＨＳＬ２抗体またはＨＳＬ９６抗体をそれ
ぞれ反応させて、細胞表面染色を行い、ファックスキャ
リバー（ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ、ベクトンデッキン
ソン社製）にて測定した。 細胞株： プロＢ白血病細胞株ＲＳ４；１１ プレＢ白血病細胞株６９７ 成熟Ｂ細胞株ＬＢＷ−４ Ｔ白血病細胞株Ｊｕｒｋａｔ
【００４７】具体的には、０．１％ＢＳＡ−ＰＢＳで２
回洗浄した各細胞を緩衝液０．１％ＢＳＡ−ＰＢＳに２
×１０7 個／ｍｌになるように懸濁し、１０分間氷上で
静置した。各細胞を９６穴プレートの各ウェルに５０μ
ｌ（１×１０6 個）取り、それぞれにビオチン標識ＨＳ
Ｌ２抗体またはビオチン標識ＨＳＬ９６抗体を１μｇ／
ｍｌを１００μｌ加え、室温で３０分間反応させた。そ
の後、ＰＥ標識ストレプトアビジン（２μｇ／ｍｌ）を
１００μｌ各ウェルに加え、発色させた。この試料を、
ファックスキャリバー（ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ、ベ
クトンデッキンソン社製）にて測定した。
回洗浄した各細胞を緩衝液０．１％ＢＳＡ−ＰＢＳに２
×１０7 個／ｍｌになるように懸濁し、１０分間氷上で
静置した。各細胞を９６穴プレートの各ウェルに５０μ
ｌ（１×１０6 個）取り、それぞれにビオチン標識ＨＳ
Ｌ２抗体またはビオチン標識ＨＳＬ９６抗体を１μｇ／
ｍｌを１００μｌ加え、室温で３０分間反応させた。そ
の後、ＰＥ標識ストレプトアビジン（２μｇ／ｍｌ）を
１００μｌ各ウェルに加え、発色させた。この試料を、
ファックスキャリバー（ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ、ベ
クトンデッキンソン社製）にて測定した。
【００４８】結果を図３に示す。細胞表面染色において
は、ＨＳＬ２抗体によりプレＢ白血病細胞が免疫染色さ
れるが、プロＢ白血病細胞株、成熟Ｂ細胞株およびＴ白
血病細胞株はＨＳＬ２によっては免疫染色されないこと
が確認された。
は、ＨＳＬ２抗体によりプレＢ白血病細胞が免疫染色さ
れるが、プロＢ白血病細胞株、成熟Ｂ細胞株およびＴ白
血病細胞株はＨＳＬ２によっては免疫染色されないこと
が確認された。
【００４９】２．細胞内免疫染色 前記の細胞表面染色と同様にして、細胞および抗体を懸
濁する緩衝液を０．１％ＢＳＡ−０．０５％サポニン−
１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．３）−ＰＢＳとして、
細胞内染色を行い、ファックスキャリバーにて測定し
た。結果を図４に示す。ＨＳＬ２抗体により、プレＢ白
血病細胞株は細胞内も免疫染色されるが、プロＢ白血病
細胞株、成熟Ｂ細胞株およびＴ白血病細胞株は細胞内も
免疫染色されないことが確認された。また、ＨＳＬ９６
抗体は、細胞内染色においては、プロＢ白血病細胞株を
免疫染色する点で、完全には、プレＢ細胞とプロＢ細胞
を区別できないが、ＨＳＬ２抗体は、完全にプレＢ細胞
とプロＢ細胞とを区別することができ、この点におい
て、ＨＳＬ９６抗体とは異なった効果を奏するものであ
る。
濁する緩衝液を０．１％ＢＳＡ−０．０５％サポニン−
１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．３）−ＰＢＳとして、
細胞内染色を行い、ファックスキャリバーにて測定し
た。結果を図４に示す。ＨＳＬ２抗体により、プレＢ白
血病細胞株は細胞内も免疫染色されるが、プロＢ白血病
細胞株、成熟Ｂ細胞株およびＴ白血病細胞株は細胞内も
免疫染色されないことが確認された。また、ＨＳＬ９６
抗体は、細胞内染色においては、プロＢ白血病細胞株を
免疫染色する点で、完全には、プレＢ細胞とプロＢ細胞
を区別できないが、ＨＳＬ２抗体は、完全にプレＢ細胞
とプロＢ細胞とを区別することができ、この点におい
て、ＨＳＬ９６抗体とは異なった効果を奏するものであ
る。
【００５０】３．形質転換体Ｘ６３−Ａｇ８．６５３の
細胞内免疫染色 マウスミエローマ細胞Ｘ６３−Ａｇ８．６５３（Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．，１２３巻、１５４８ページ参照）に実
施例１の１．で作製したヒトλ５遺伝子またはヒトＶｐ
ｒｅＢ遺伝子をエレクトロポーレーション法により下記
の２通りに導入し、形質転換体を作製した。 λ５のみを導入（Ｘ６３／λ５） ＶｐｒｅＢのみを導入（Ｘ６３／ＶｐｒｅＢ）
細胞内免疫染色 マウスミエローマ細胞Ｘ６３−Ａｇ８．６５３（Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．，１２３巻、１５４８ページ参照）に実
施例１の１．で作製したヒトλ５遺伝子またはヒトＶｐ
ｒｅＢ遺伝子をエレクトロポーレーション法により下記
の２通りに導入し、形質転換体を作製した。 λ５のみを導入（Ｘ６３／λ５） ＶｐｒｅＢのみを導入（Ｘ６３／ＶｐｒｅＢ）
【００５１】前記の各形質転換体について、前記と同様
にサポニン緩衝液を用いて細胞内免疫染色を行い、ファ
ックスキャリバーにて測定した。結果を図５に示す。Ｈ
ＳＬ２抗体が組み換えＶｐｒｅＢ分子または組み換えλ
５分子のいずれとも反応しないことが確認された一方
で、ＨＳＬ９６抗体は、組み換えＶｐｒｅＢ分子とは反
応するが、組み換えλ５分子とは反応しないことが確認
された。
にサポニン緩衝液を用いて細胞内免疫染色を行い、ファ
ックスキャリバーにて測定した。結果を図５に示す。Ｈ
ＳＬ２抗体が組み換えＶｐｒｅＢ分子または組み換えλ
５分子のいずれとも反応しないことが確認された一方
で、ＨＳＬ９６抗体は、組み換えＶｐｒｅＢ分子とは反
応するが、組み換えλ５分子とは反応しないことが確認
された。
【００５２】＜実施例４＞抗体の特異性の確認３−免疫
沈降 ハイブリドーマＨＳＬ２の培養上清１ｍｌをプロテイン
Ｇセファロース（ファルマシア社製）２０μｌと（５０
％Ｖ／Ｖ）と４℃で一晩混合した。この混合液を１００
００ｒｐｍで５分間遠心分離して抗体が結合したプロテ
インＧセファロースを取り分けた。該プロテインＧセフ
ァロースを溶解液（１％ＮＰ−４０、１５０ｍＭ Ｎａ
Ｃｌ）で洗浄した。アイソトープ35Ｓメチオニン・シス
テインで内部標識したプレＢ白血病細胞株Ｎａｌｍ６ま
たはプロＢ白血病細胞株ＲＳ４；１１を１×１０5 個と
溶解液（１％ＮＰ−４０、１５０ｍＭ ＮａＣｌ）とを
混合し細胞溶解液を得た。抗体結合プロテインＧセファ
ロースを細胞溶解液に懸濁し、２時間混合した。別に、
前記培養上清を実施例２で作製した２種のＸ６３−Ａｇ
８．６５３形質転換体と反応させた。この混合液を１０
０００ｒｐｍで５分間遠心分離して免疫沈降物（前記プ
ロテインＧセファロースに結合したＮａｌｍ６由来の蛋
白質）を取り分けた。
沈降 ハイブリドーマＨＳＬ２の培養上清１ｍｌをプロテイン
Ｇセファロース（ファルマシア社製）２０μｌと（５０
％Ｖ／Ｖ）と４℃で一晩混合した。この混合液を１００
００ｒｐｍで５分間遠心分離して抗体が結合したプロテ
インＧセファロースを取り分けた。該プロテインＧセフ
ァロースを溶解液（１％ＮＰ−４０、１５０ｍＭ Ｎａ
Ｃｌ）で洗浄した。アイソトープ35Ｓメチオニン・シス
テインで内部標識したプレＢ白血病細胞株Ｎａｌｍ６ま
たはプロＢ白血病細胞株ＲＳ４；１１を１×１０5 個と
溶解液（１％ＮＰ−４０、１５０ｍＭ ＮａＣｌ）とを
混合し細胞溶解液を得た。抗体結合プロテインＧセファ
ロースを細胞溶解液に懸濁し、２時間混合した。別に、
前記培養上清を実施例２で作製した２種のＸ６３−Ａｇ
８．６５３形質転換体と反応させた。この混合液を１０
０００ｒｐｍで５分間遠心分離して免疫沈降物（前記プ
ロテインＧセファロースに結合したＮａｌｍ６由来の蛋
白質）を取り分けた。
【００５３】比較対照のため以下の抗体を用いた。 ＨＳＬ１１抗体（ヒトプレＢ細胞レセプターのλ５を
認識する抗体） ＨＳＬ９６抗体（ヒトプレＢ細胞レセプターのＶｐｒ
ｅＢを認識する抗体） コントロール（マウスＩｇＧ1κ） 抗ヒトμ鎖抗体（細胞溶解物の免疫沈降の場合のみ）
認識する抗体） ＨＳＬ９６抗体（ヒトプレＢ細胞レセプターのＶｐｒ
ｅＢを認識する抗体） コントロール（マウスＩｇＧ1κ） 抗ヒトμ鎖抗体（細胞溶解物の免疫沈降の場合のみ）
【００５４】免疫沈降物を洗浄液（１％ＮＰ−４０、６
５０ｍＭ ＮａＣｌ）約１ｍｌで洗浄することを４回繰
り返し、電気泳動用の試料とした。免疫沈降物を２−メ
ルカプトエタノール存在下で９５℃で５分間還元した
後、１３％アクリルアミドゲルに展開した。結果を図６
および図７に示す。
５０ｍＭ ＮａＣｌ）約１ｍｌで洗浄することを４回繰
り返し、電気泳動用の試料とした。免疫沈降物を２−メ
ルカプトエタノール存在下で９５℃で５分間還元した
後、１３％アクリルアミドゲルに展開した。結果を図６
および図７に示す。
【００５５】図６の右半分はプレＢ白血病細胞株Ｎａｌ
ｍ６の細胞溶解物を各抗体で免疫沈降した結果を示す。
各レーンは、右からＨＳＬ２抗体、ＨＳＬ１１抗体、Ｈ
ＳＬ９６抗体、抗ヒトμ鎖抗体、コントロール（マウス
ＩｇＧ1κ ）により免疫沈降した結果を示す。ＨＳＬ２
抗体により免疫沈降した結果、λ５、ＶｐｒｅＢおよび
μ鎖のバンドが現れ、ＨＳＬ２抗体でプレＢ細胞レセプ
ターが免疫沈降されたことが確認された。
ｍ６の細胞溶解物を各抗体で免疫沈降した結果を示す。
各レーンは、右からＨＳＬ２抗体、ＨＳＬ１１抗体、Ｈ
ＳＬ９６抗体、抗ヒトμ鎖抗体、コントロール（マウス
ＩｇＧ1κ ）により免疫沈降した結果を示す。ＨＳＬ２
抗体により免疫沈降した結果、λ５、ＶｐｒｅＢおよび
μ鎖のバンドが現れ、ＨＳＬ２抗体でプレＢ細胞レセプ
ターが免疫沈降されたことが確認された。
【００５６】図６の左半分はプロＢ白血病細胞株ＲＳ
４；１１の細胞溶解物を各抗体で免疫沈降した結果を示
す。各レーンは、右からＨＳＬ２抗体、ＨＳＬ１１抗
体、ＨＳＬ９６抗体、抗ヒトμ鎖抗体、コントロール
（マウスＩｇＧ1κ ）により免疫沈降した結果を示す。
左端のレーンはマーカーである。ＨＳＬ２抗体のレーン
には、λ５およびＶｐｒｅＢのバンドが見られず、ＨＳ
Ｌ２抗体でプロＢ細胞レセプターが免疫沈降されないこ
とが確認された。
４；１１の細胞溶解物を各抗体で免疫沈降した結果を示
す。各レーンは、右からＨＳＬ２抗体、ＨＳＬ１１抗
体、ＨＳＬ９６抗体、抗ヒトμ鎖抗体、コントロール
（マウスＩｇＧ1κ ）により免疫沈降した結果を示す。
左端のレーンはマーカーである。ＨＳＬ２抗体のレーン
には、λ５およびＶｐｒｅＢのバンドが見られず、ＨＳ
Ｌ２抗体でプロＢ細胞レセプターが免疫沈降されないこ
とが確認された。
【００５７】図７の左半分は組み換えλ５を各抗体で免
疫沈降させた結果を示す。各レーンは、右からＨＳＬ２
抗体、ＨＳＬ１１抗体、ＨＳＬ９６抗体、コントロール
（マウスＩｇＧ1κ ）により免疫沈降した結果を示す。
ＨＳＬ２抗体のレーンには、λ５のバンドが見られず、
ＨＳＬ２抗体でλ５が免疫沈降されないことが確認され
た。
疫沈降させた結果を示す。各レーンは、右からＨＳＬ２
抗体、ＨＳＬ１１抗体、ＨＳＬ９６抗体、コントロール
（マウスＩｇＧ1κ ）により免疫沈降した結果を示す。
ＨＳＬ２抗体のレーンには、λ５のバンドが見られず、
ＨＳＬ２抗体でλ５が免疫沈降されないことが確認され
た。
【００５８】図７の左半分は組み換えＶｐｒｅＢを各抗
体で免疫沈降させた結果を示す。各レーンは、右からＨ
ＳＬ２抗体、ＨＳＬ１１抗体、ＨＳＬ９６抗体、コント
ロール（マウスＩｇＧ1κ ）により免疫沈降した結果を
示す。ＨＳＬ２抗体のレーンには、ＶｐｒｅＢのバンド
が見られず、ＨＳＬ２抗体でＶｐｒｅＢが免疫沈降され
ないことが確認された。
体で免疫沈降させた結果を示す。各レーンは、右からＨ
ＳＬ２抗体、ＨＳＬ１１抗体、ＨＳＬ９６抗体、コント
ロール（マウスＩｇＧ1κ ）により免疫沈降した結果を
示す。ＨＳＬ２抗体のレーンには、ＶｐｒｅＢのバンド
が見られず、ＨＳＬ２抗体でＶｐｒｅＢが免疫沈降され
ないことが確認された。
【００５９】＜実施例５＞免疫染色した細胞の顕微鏡で
の観察 １．免疫染色したプレＢ細胞の顕微鏡での観察 プレＢ白血病細胞株Ｎａｌｍ６およびプロＢ白血病細胞
株ＲＳ４；１１を実施例３の１．と同様にして、ビオチ
ン標識ＨＳＬ２抗体と反応させて細胞内を免疫染色し
た。ＦＩＴＣ標識ストレプトアビジンをビオチン標識Ｈ
ＳＬ２抗体と反応させ、その蛍光を蛍光顕微鏡で観察し
た。結果を図１に示す。プレＢ白血病細胞株Ｎａｌｍ６
では蛍光が観察されるが、プロＢ白血病細胞株ＲＳ４；
１１は蛍光が観察されなかった。これにより、ＨＳＬ２
抗体を反応させて細胞内免疫染色した結果、顕微鏡観察
することで、容易にプレＢ細胞をプロＢ細胞を区別し、
プレＢ細胞のみを検出することができることが確認され
た。また、細胞表面を染色した場合も、同様にＨＳＬ２
抗体によりプレＢ細胞のみで蛍光が観察され、プレＢ細
胞のみを検出することができることが確認された。
の観察 １．免疫染色したプレＢ細胞の顕微鏡での観察 プレＢ白血病細胞株Ｎａｌｍ６およびプロＢ白血病細胞
株ＲＳ４；１１を実施例３の１．と同様にして、ビオチ
ン標識ＨＳＬ２抗体と反応させて細胞内を免疫染色し
た。ＦＩＴＣ標識ストレプトアビジンをビオチン標識Ｈ
ＳＬ２抗体と反応させ、その蛍光を蛍光顕微鏡で観察し
た。結果を図１に示す。プレＢ白血病細胞株Ｎａｌｍ６
では蛍光が観察されるが、プロＢ白血病細胞株ＲＳ４；
１１は蛍光が観察されなかった。これにより、ＨＳＬ２
抗体を反応させて細胞内免疫染色した結果、顕微鏡観察
することで、容易にプレＢ細胞をプロＢ細胞を区別し、
プレＢ細胞のみを検出することができることが確認され
た。また、細胞表面を染色した場合も、同様にＨＳＬ２
抗体によりプレＢ細胞のみで蛍光が観察され、プレＢ細
胞のみを検出することができることが確認された。
【００６０】前記の実施例２ないし４の特異性の結果
を、表２に示す。既存の抗体の反応部位はλ５のみまた
はＶｐｒｅＢのみであり、ヒトμ鎖、ヒトλ５およびヒ
トＶｐｒｅＢの複合体を認識している抗体はＨＳＬ２の
みである。
を、表２に示す。既存の抗体の反応部位はλ５のみまた
はＶｐｒｅＢのみであり、ヒトμ鎖、ヒトλ５およびヒ
トＶｐｒｅＢの複合体を認識している抗体はＨＳＬ２の
みである。
【００６１】
【表２】
【００６２】本発明のＨＳＬ２抗体は、ヒトμ鎖、ヒト
λ５またはヒトＶｐｒｅＢのいずれとも、それらが単体
で存在するときにはそれらを認識せず、ヒトμ鎖、ヒト
λ５およびヒトＶｐｒｅＢが会合してプレＢ細胞レセプ
ターとなったときに、初めて該プレＢ細部レセプターを
認識する抗体であることが分かった。すなわち、プレＢ
細胞レセプターの立体構造がＨＳＬ２抗体が該プレＢ細
胞レセプターを認識する要件であることが分かった。
λ５またはヒトＶｐｒｅＢのいずれとも、それらが単体
で存在するときにはそれらを認識せず、ヒトμ鎖、ヒト
λ５およびヒトＶｐｒｅＢが会合してプレＢ細胞レセプ
ターとなったときに、初めて該プレＢ細部レセプターを
認識する抗体であることが分かった。すなわち、プレＢ
細胞レセプターの立体構造がＨＳＬ２抗体が該プレＢ細
胞レセプターを認識する要件であることが分かった。
【００６３】
【発明の効果】本発明の抗体により、ヒトのリンパ球の
中からヒトプレＢ細胞の識別が可能である。白血病の疑
いのある患者の血液等の検体からリンパ球を分離し、該
リンパ球の細胞表面または細胞内を本発明の抗体で免疫
染色してファックスキャリバーで測定または顕微鏡で観
察する。このとき、染色されている細胞が観察された場
合、該細胞はヒトプレＢ細胞であると特定でき、該患者
がヒトプレＢ細胞の異常増殖による白血病に罹患してい
ると診断することが可能である。このように本発明の抗
体は、検体をファックスキャリバーで測定または顕微鏡
で観察することにより診断を可能とするので、臨床診断
の効率を飛躍的に向上させる。
中からヒトプレＢ細胞の識別が可能である。白血病の疑
いのある患者の血液等の検体からリンパ球を分離し、該
リンパ球の細胞表面または細胞内を本発明の抗体で免疫
染色してファックスキャリバーで測定または顕微鏡で観
察する。このとき、染色されている細胞が観察された場
合、該細胞はヒトプレＢ細胞であると特定でき、該患者
がヒトプレＢ細胞の異常増殖による白血病に罹患してい
ると診断することが可能である。このように本発明の抗
体は、検体をファックスキャリバーで測定または顕微鏡
で観察することにより診断を可能とするので、臨床診断
の効率を飛躍的に向上させる。
【００６４】
配列番号：１ 配列の長さ：３０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 配列 GGAACTCGAG CCACAAGGAC CTCTGACCCT 30
【００６５】配列番号：２ 配列の長さ：３２ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 配列 GGAAGCGGCC GCAGGCCTTT GGGTGGGGTC GG 32
【００６６】配列番号：３ 配列の長さ：３０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 配列 GGAACTCGAG GGAGTCAGAG CTCTGCATGT 30
【００６７】配列番号：４ 配列の長さ：３２ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 配列 ＧＧＡＡＧＣＧＧＣＣ ＧＣＡＧＧＧＧＡＴＧ ＣＧＴＧＣＣＴＣＴＧ ＣＴ
３２
３２
【図面の簡単な説明】
【図１】プレＢ白血病細胞株Ｎａｌｍ６またはプロＢ白
血病細胞株ＲＳ４；１１それぞれとＨＳＬ２抗体と反応
させて細胞内を免疫染色してＦＩＴＣにより発色させた
結果を示す顕微鏡写真である。
血病細胞株ＲＳ４；１１それぞれとＨＳＬ２抗体と反応
させて細胞内を免疫染色してＦＩＴＣにより発色させた
結果を示す顕微鏡写真である。
【図２】プレＢ細胞レセプター、ヒトＩｇＭ（ヒトμ鎖
およびヒトκ鎖）またはヒトＩｇＭ（ヒトμ鎖およびヒ
トλ鎖）に対する本発明のＨＳＬ２抗体ならびに比較対
照のＨＳＬ９６抗体、ＨＳＬ１１抗体、抗ヒトκ鎖抗体
および抗ヒトλ鎖抗体のそれぞれのＥＬＩＳＡの結果を
示す図である。
およびヒトκ鎖）またはヒトＩｇＭ（ヒトμ鎖およびヒ
トλ鎖）に対する本発明のＨＳＬ２抗体ならびに比較対
照のＨＳＬ９６抗体、ＨＳＬ１１抗体、抗ヒトκ鎖抗体
および抗ヒトλ鎖抗体のそれぞれのＥＬＩＳＡの結果を
示す図である。
【図３】本発明のＨＳＬ２抗体および比較対照のＨＳＬ
９６抗体により、各細胞の細胞表面を免疫染色してＦＡ
ＣＳで測定した結果を示す図である。
９６抗体により、各細胞の細胞表面を免疫染色してＦＡ
ＣＳで測定した結果を示す図である。
【図４】本発明のＨＳＬ２抗体および比較対照のＨＳＬ
９６抗体により、各細胞の細胞内を免疫染色してＦＡＣ
Ｓで測定した結果を示す図である。
９６抗体により、各細胞の細胞内を免疫染色してＦＡＣ
Ｓで測定した結果を示す図である。
【図５】本発明のＨＳＬ２抗体および比較対照のＨＳＬ
９６抗体により、ヒトλ５遺伝子またはヒトＶｐｒｅＢ
遺伝子を導入した形質転換体を免疫染色してＦＡＣＳで
測定した結果を表す図である。
９６抗体により、ヒトλ５遺伝子またはヒトＶｐｒｅＢ
遺伝子を導入した形質転換体を免疫染色してＦＡＣＳで
測定した結果を表す図である。
【図６】本発明のＨＳＬ２抗体ならびに比較対照のＨＳ
Ｌ９６抗体、ＨＳＬ１１抗体、抗ヒトμ鎖抗体およびマ
ウスＩｇＧ1 κにより、ヒトプレＢ細胞およびヒトプロ
Ｂ細胞を免疫沈降して免疫沈降物を電気泳動した結果を
表す電気泳動写真である。
Ｌ９６抗体、ＨＳＬ１１抗体、抗ヒトμ鎖抗体およびマ
ウスＩｇＧ1 κにより、ヒトプレＢ細胞およびヒトプロ
Ｂ細胞を免疫沈降して免疫沈降物を電気泳動した結果を
表す電気泳動写真である。
【図７】本発明のＨＳＬ２抗体ならびに比較対照のＨＳ
Ｌ９６抗体、ＨＳＬ１１抗体およびマウスＩｇＧ1 κに
より、ヒトλ５遺伝子を導入した形質転換体、ヒトＶｐ
ｒｅＢ遺伝子を導入した形質転換体およびヒトプレＢ細
胞を免疫沈降して免疫沈降物を電気泳動した結果を表す
電気泳動写真である。
Ｌ９６抗体、ＨＳＬ１１抗体およびマウスＩｇＧ1 κに
より、ヒトλ５遺伝子を導入した形質転換体、ヒトＶｐ
ｒｅＢ遺伝子を導入した形質転換体およびヒトプレＢ細
胞を免疫沈降して免疫沈降物を電気泳動した結果を表す
電気泳動写真である。
【図８】本発明の抗体を作製するために免疫原に用いた
キメラのプレＢ細胞レセプター（マウスμ鎖／ヒトλ５
／ヒトＶｐｒｅＢ）の電気泳動写真である。
キメラのプレＢ細胞レセプター（マウスμ鎖／ヒトλ５
／ヒトＶｐｒｅＢ）の電気泳動写真である。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成９年１０月３０日
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１
【補正方法】変更
【補正内容】
【図１】
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図６
【補正方法】変更
【補正内容】
【図６】
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図７
【補正方法】変更
【補正内容】
【図７】
【手続補正４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図８
【補正方法】変更
【補正内容】
【図８】
Claims (2)
- 【請求項１】 ヒトプレＢ細胞レセプターを認識しかつ
ヒトプロＢ細胞レセプターを認識しない抗ヒトプレＢ細
胞レセプター抗体。 - 【請求項２】 ハイブリドーマＨＳＬ２（工業技術院生
命工学工業研究所に受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１６４７６
で寄託されているハイブリドーマ）が産生するモノクロ
ーナル抗体またはその活性フラグメントである請求項１
に記載の抗ヒトプレＢ細胞レセプター抗体。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29609097A JPH11133028A (ja) | 1997-10-29 | 1997-10-29 | 抗ヒトプレｂ細胞レセプター抗体 |
| PCT/JP1998/003384 WO1999006541A1 (fr) | 1997-07-29 | 1998-07-29 | Anticorps du recepteur des cellules pre-b non humaines |
| EP98935272A EP1001020A4 (en) | 1997-07-29 | 1998-07-29 | NON-HUMAN PRE-B CELL RECEPTOR ANTIBODIES |
| US09/494,252 US6335175B1 (en) | 1997-07-29 | 2000-01-31 | Anti-human pre-B cell receptor antibody |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29609097A JPH11133028A (ja) | 1997-10-29 | 1997-10-29 | 抗ヒトプレｂ細胞レセプター抗体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11133028A true JPH11133028A (ja) | 1999-05-21 |
Family
ID=17829000
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29609097A Withdrawn JPH11133028A (ja) | 1997-07-29 | 1997-10-29 | 抗ヒトプレｂ細胞レセプター抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11133028A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20170120120A (ko) * | 2015-02-02 | 2017-10-30 | 아이2 파마슈티컬스, 인크. | 항-대리 경쇄 항체 |
| EP3253408A4 (en) * | 2015-02-05 | 2018-09-26 | Stc.Unm | Anti-pre-bcr antagonists and methods |
-
1997
- 1997-10-29 JP JP29609097A patent/JPH11133028A/ja not_active Withdrawn
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20170120120A (ko) * | 2015-02-02 | 2017-10-30 | 아이2 파마슈티컬스, 인크. | 항-대리 경쇄 항체 |
| EP3253408A4 (en) * | 2015-02-05 | 2018-09-26 | Stc.Unm | Anti-pre-bcr antagonists and methods |
| US10988533B2 (en) | 2015-02-05 | 2021-04-27 | Unm Rainforest Innovations | Anti-pre-BCR antagonists and methods |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20040412 |
|
| A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20050720 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20050725 |