KR20170098941A - 인간 dpp-4를 검출하기 위한 검정법 - Google Patents

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Abstract

본 개시내용은 인간 환자로부터 수득된 샘플 내의 DPP-4 수준의 검출 및 측정을 위한 견고하고, 민감하며, 특이적인 검정법을 제공한다. 본 개시내용은 인간 DPP-4를 인식하는 신규 항-DPP-4 모노클로날 항체, 및 하나 이상의 이러한 항체를 포함하는 검정 키트를 추가로 제공한다.

Description

인간 DPP-4를 검출하기 위한 검정법
전자 제출된 서열 목록에 관한 언급
ASCII 텍스트 파일 (파일명 DPP4-100P1_sequence_listing.txt; 크기: 26,741 바이트; 및 생성일: 2014년 12월 15일) 내의 전자 제출된 서열 목록의 내용이 전문이 본원에 참조로 포함된다.
배경
디펩티딜 펩티다제 IV (DPP-4) (CD26 또는 아데노신 데아미나제 결합 단백질로도 알려짐)는 위치 2에 프롤린 또는 알라닌이 있는 폴리펩티드의 N-말단으로부터의 N-말단 디펩티드의 가수분해를 촉매하는 프롤릴 올리고펩티다제 패밀리 내의 제II형 막횡단 세린 프로테아제이다 (효소 위원회(Enzyme Commission) (EC) 번호 3.4.14.5 (BRENDA | IUBMB)). GLP-1, GLP-2, 위 억제 폴리펩티드 (GIP), 뇌하수체 아데닐레이트 시클라제-활성화 폴리펩티드 (PACAP) 및 뉴로펩티드 Y를 포함하는 다수의 케모카인 및 펩티드 호르몬이 DPP-4에 의해 절단되고 불활성화된다. 예를 들어, 문헌 [Yaron A., Naider F. Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 28, 31-81 (1993)]; [Mentlein R. Regul Pept. 85(1):9-24 (1999)]을 참조한다. 결과적으로, DPP-4는 케모카인 및 펩티드 호르몬을 억제하는 이의 능력을 통해 글루코스 대사, 식욕 및 통증 조절을 조절한다.
조절성 프로테아제로서의 이의 역할에 더하여, DPP-4는 또한 여러 분자에 결합하고 세포내 신호 전달을 유도한다. 특히, DPP-4는 아데노신 데아미나제 (ADA)를 포함하는 여러 리간드에 결합하는 것에 의해 T-세포 공동자극 / 증식 및 림프구-상피 세포 부착을 유도한다. 예를 들어, 문헌 [Gines et al., Biochem. J. 361:203-209 (2002)]를 참조한다. DPP-4는 또한 T-세포 성숙 및 이동, 시토카인 분비, 항체 생산, B 세포의 면역글로불린 아이소형 변환, 및 세포독성 T 세포의 활성화를 강화하는 것으로 보고되었다. 문헌 [Ohnuma et al., Front Biosci. 13:2299-310 (2008)].
DPP-4는 2번 염색체 (2q24.3)에 위치하는 유전자가 코딩하는 110 kDa 당단백질이고 (Abbott et al. Immunogenetics. 40(5):331-8 (1994)), 766개의 아미노산으로 이루어지는 동종이량체로서 기능한다. 각각의 단량체는 2개의 도메인으로 이루어진다: 알파/베타 히드롤라제 도메인 및 8날 베타-프로펠러 도메인. DPP-4는 간, 폐, 신장, 상피 세포 및 림프구를 포함하는 여러 조직에서 널리 발현된다. 문헌 [Heike et al. Clin Exp Immunol. 74:431-434 (1988)]; [Gorrell et al., Scand J Immunol. 54:249-264 (2001)]. T 세포 활성화 시, 휴지 중인 T 세포에서 DPP-4 발현이 상향 조절된다. 핵심 촉매 도메인을 포함하여 세포외 도메인의 대부분 (잔기 39-766)을 함유하는 가용성 활성 형태의 DPP-4가 또한 관찰되었다. 문헌 [Ikushima H, et al. Cell Immunol. 215(1):106-10 (2002)].
DPP-4 유전자가 녹아웃(knock-out)된 마우스는 경구 글루코스 부하 시의 개선된 글루코스 내성, 증가된 인슐린 및 GLP-1 활성; 식이-유도 비만에 대한 저항성; 및 고지방 식이 후의 증가된 인슐린 민감성을 나타낸다. 문헌 [Marguet et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 97(12):6874-9 (2000)]; [Conarello et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 100(11):6825-30 (2003)]. 대사 장애 및 혈당 제어에서의 이의 역할에 더하여, DPP-4는 면역 기능, 세포 이동, 세포 내로의 바이러스 진입, 암 전이 및 염증을 제어하는 것에서 또한 연루된다. 예를 들어, 문헌 [Aytac et al., Curr Drug Targets Immune Endocr Metabol Disord 4(1):11-8 (2004)]을 참조한다.
더욱 최근에, DPP-4 발현이 인터루킨-13 (IL-13)에 의해 고도로 유도되는 것으로 보고되었다. 예를 들어, 문헌 [Zhang et al., Am J Respir Crit Care Med 189:A4875 (2014)]; [Shiobara et al., Am J Respir Crit Care Med 189:A4239 (2014)]; [Brightling et al., Am J Respir Crit Care Med 189:A6670 (2014)]; 미국 가출원 번호 61/931,878 (2014년 1월 27일 출원); 및 미국 가출원 번호 61/990,932 (2014년 5월 9일 출원)을 참조하고, 이들 각각은 모든 면에서 전문이 본원에서 참조로 포함된다. IL-13은 미변형 분자 질량이 약 12 kDa인, 아미노산 114개의 시토카인이다. 문헌 [McKenzie, A. N., et al. J Immunol, 1993. 150:5436-44]; [Minty, A., et al. Nature, 1993. 362:248-50]. IL-13 수준이 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 특발성 폐 섬유증, 및 아토피성 피부염을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다수의 질환 또는 장애에서 질환 중증도와 상관되는 것으로 나타났다. 예를 들어, 천식 환자 및 알레르기성 염증의 설치류 모델에서, 상승된 IL-13 수준이 질환 중증도와 상관되는 것으로 보고되었다 (미국 특허 출원 공개 번호 2012-0052060 (2012년 3월 1일 공개)를 참조하고, 이는 전문이 본원에 참조로 포함된다).
만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD)은 다양한 정도의 만성 기관지염, 소기도 질환, 및 폐공기증이 있는 환자 집단을 포함하고, 현재의 천식 기반 요법에 불량하게 반응하는 진행성의 비가역적인 폐 기능 감퇴를 특징으로 한다. 문헌 [Zheng et al., J Clin Invest, 2000. 106:1081-93]에서, 마우스 폐에서의 IL-13의 과발현이 인간 COPD의 측면들을 반영하는, 폐공기증, 상승된 점액 생산 및 염증을 야기하였음이 실연되었다. 따라서, 이는 IL-13이 COPD의 발병기전에서, 특히 천식-유사 특색이 있는 환자에서 중요한 역할을 한다는 것을 나타낸다.
IL-13은 염증성 장 질환의 발병기전에서 또한 역할을 할 수 있고, 섬유증 병태, 예컨대 특발성 폐 섬유증 (IPF)과 연관되었다. 예를 들어, 문헌 [Jovani, M., et al. Curr Drug Targets. 2013.12:1444-52]; 및 [Rafii, R., et al. J Thorac Dis. 2013. 1:48-73]을 참조한다
아토피성 피부염은 다른 아토피성 장애 예컨대 알레르기 비염 및 천식과 종종 연관되는 통상적인 만성 염증성 피부 질환이다 (Bieber, New England Journal of Medicine, 2008, 358: 1483-1494). IL-13 mRNA의 상향 조절이 아토피성 피부염의 아급성 및 만성 병변에서 관찰되었다 (Tazawa et al., Arch. Dermatol. Res., 2004, 295:459-464; Purwar et al,, J. Invest. Derm., 2006, 126, 1043-1051; Oh et al., J Immunol., 2011, 186:7232-42).
상승된 DPP-4 수준이 천식, COPD 및 AD 환자에서 관찰되었다 (예를 들어, 미국 가출원 번호 61/931,878 (2014년 1월 27일 출원); 및 미국 가출원 번호 61/990,932 (2014년 5월 9일 출원)을 참조하고, 이들 각각은 전문이 본원에 참조로 포함된다). 추가적으로, 천식 환자를 수반하는 2B상 임상 연구에서, 높은 혈청 DPP-4 수준이 IL-13 항체 길항제 (트랄로키누맙(tralokinumab))로 치료된 환자에서의 개선된 반응률을 예측하여, DPP-4가 IL-13-매개 폐 질환 또는 장애 (예를 들어, 천식, IPF 또는 COPD) 또는 IL-13-매개 만성 염증성 피부 질환 또는 장애 (예를 들어, 아토피성 피부염)를 포함하는 IL-13-매개 질환 또는 장애에 대한 예측성 바이오마커로 확인되었다. 문헌 [Brightling et al., Am J Respir Crit Care Med 189:A6670 (2014)]; 및 미국 가출원 번호 61/931,878 (2014년 1월 27일 출원); 및 미국 가출원 번호 61/990,932 (2014년 5월 9일 출원)를 참조하고, 이들 각각은 전문이 본원에서 참조로 포함된다. 따라서, 증가된 DPP-4 수준이 특정한 IL-13-매개 질환 또는 장애와 상관되는 것으로 공지되고, DPP-4 혈청 수준이 항-IL-13 요법에 대한 환자 반응을 예측하는 것으로 공지되었지만, IL-13-매개 질환 또는 장애를 앓는 환자를 포함하지만 이에 제한되지 않는 환자에서 DPP-4 수준의 양을 측정하고/하거나 DPP-4 수준의 변화를 결정하기 위한 특이적이고 민감한 검정법이 여전히 요구된다. 환자 내의 혈청 DPP-4 수준을 측정하는데 사용될 수 있는 시판 시약이 있지만, 이러한 시판 시약 또는 키트는 로트 대 로트 차이로 인해 검정법 변동을 도입할 뿐만 아니라/도입하거나 매우 민감하지 않은 폴리클로날 항체에 의존한다. 따라서, 환자 내의 DPP-4 수준의 양을 측정하고/하거나 DPP-4 수준의 변화를 결정하기 위한 특이적이고 민감한 항체, 시약 및/또는 면역검정법이 아직도 여전히 요구된다.
간략한 개요
본 개시내용은 항-디펩티딜 펩티다제-4 (DPP-4) 항체를 제공하고, 이는 예를 들어 대상체 내의 DPP-4 수준을 결정하기 위한 진단 검정법에서 사용될 수 있다. 본 개시내용의 예시적인 항-DPP-4 항체는 (1) 특허절차상 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약의 규정 하에 2015년 1월 8일에 아메리칸 타입 컬처 컬렉션(American Type Culture Collection) (ATCC) (미국 20110-2209 버지니아주 머내서스 유니버시티 블러바드 10801)에 기탁되었고, ATCC 수탁 번호 PTA-121870을 부여받은 하이브리도마에 의해 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6; (2) 특허절차상 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약의 규정 하에 2015년 1월 8일에 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC) (미국 20110-2209 버지니아주 머내서스 유니버시티 블러바드 10801)에 기탁되었고, ATCC 수탁 번호 PTA-121871을 부여받은 하이브리도마에 의해 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7; (3) 특허절차상 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약의 규정 하에 2015년 1월 8일에 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC) (미국 20110-2209 버지니아주 머내서스 유니버시티 블러바드 10801)에 기탁되었고, ATCC 수탁 번호 PTA-121872를 부여받은 하이브리도마에 의해 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15; 및 (4) 특허절차상 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약의 규정 하에 2015년 1월 8일에 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC) (미국 20110-2209 버지니아주 머내서스 유니버시티 블러바드 10801)에 기탁되었고, ATCC 수탁 번호 PTA-121873을 부여받은 하이브리도마에 의해 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11을 포함한다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 항체 또는 항체들이 (1) ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, (2) ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, (3) ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 또는 (4) ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11, 또는 이의 임의의 조합물의 결합을 경쟁적으로 억제하고/하거나 이와 동일한 DPP-4 에피토프에 결합하는, 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 2개 이상의 이같은 항체를 제공한다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) VHCDR1, VHCDR2 및 VHCDR3이 있는 중쇄 가변 도메인 (VH), 및 3개의 경쇄 CDR VLCDR1, VLCDR2, 및 VLCDR3이 있는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하고, 여기서 단리된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체의 CDR이 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 CDR과 동일한, DPP-4에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를 제공한다.
특정 측면에서, 본 개시내용이 제공하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 VH 및 VL과 동일한 VH 및 VL을 포함할 수 있다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 상기 기술된 바와 같은 항원-결합 항체 단편을 제공한다. 특정 측면에서, 항체 단편은 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, 또는 단일쇄 항체 분자일 수 있다.
본 개시내용은 ATCC에 수탁 번호 121870 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121871 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121872 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121873 하에 기탁된 하이브리도마, 및/또는 이들의 조합물을 추가로 제공한다. 특정 측면에서, 본 개시내용은 ATCC에 수탁 번호 121870 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121871 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121872 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121873 하에 기탁된 하이브리도마, 및/또는 이들의 조합물을 포함하는 항체-생산 세포 배양물을 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본원에서 제공되는 바와 같은 하이브리도마 또는 본원에서 제공되는 바와 같은 항체-생산 세포 배양물에 의해 생산된 단리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를 제공한다.
특정 측면에서, 본 개시내용이 제공하는 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 본 개시내용이 제공하는 하이브리도마 또는 세포 배양물에 의해 생산된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 항체 m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15, 또는 R11A9.11을 포함함)는 이에 융합된 이종 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 예를 들어, 특정 측면에서, 이종 폴리펩티드는 안정화 폴리펩티드, 태그, 표지, 또는 이들의 조합물이다.
특정 측면에서, 본 개시내용이 제공하는 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 본 개시내용이 제공하는 하이브리도마 또는 세포 배양물에 의해 생산된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 항체 m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15, 또는 R11A9.11을 포함함)는 이종 모이어티에 접합된다. 특정 측면에서, 이종 모이어티는 펩티드, 단백질, 효소, 지질, 이종 항체 또는 이의 단편, 검출가능한 표지, 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 중 하나 이상을 포함한다. 특정 측면에서, 이종 모이어티는, 예를 들어, 비오틴, 또는 루테늄 킬레이트이다.
본 개시내용은 본 개시내용이 제공하는 바와 같은 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 및/또는 본 개시내용이 제공하는 하이브리도마 또는 세포 배양물에 의해 생산된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 항체 m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15, 및/또는 R11A9.11을 포함함)를 포함하는 조성물을 추가로 제공한다. 특정 측면에서, 조성물은 적어도 2개의 이같은 항체의 조합물을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본 개시내용이 제공하는 바와 같은 항체, 또는 이의 서브유닛, 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 본 개시내용이 제공하는 하이브리도마 또는 세포 배양물에 의해 생산된 항체 또는 이의 단편, 또는 이의 서브유닛, 단편, 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 항체 m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15, 또는 R11A9.11을 포함함)을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 개시내용은 제공된 바와 같은 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 추가로 제공한다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 본 개시내용이 제공하는 바와 같은 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 본 개시내용이 제공하는 하이브리도마 또는 세포 배양물에 의해 생산된 항체 또는 이의 단편, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 항체 m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15, 또는 R11A9.11을 포함함)를 코딩하는 2개 이상의 핵산 분자를 포함하는 조성물을 제공한다. 특정 측면에서, 2개 이상의 핵산 분자는 동일한 벡터 내에 위치한다. 본 개시내용은 동일한 벡터 내에 위치하는 2개 이상의 제공된 바와 같은 핵산 분자를 포함하는 벡터를 추가로 제공한다. 특정 측면에서, 2개 이상의 핵산 분자는 적어도 2개의 별개의 벡터 내에 위치한다. 본 개시내용은 이러한 2개의 별개의 벡터를 추가로 제공한다.
본 개시내용은 제공된 벡터, 또는 2개 이상의 제공된 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포를 추가로 제공한다. 본 개시내용은 (a) 제공된 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 (b) 항체, 이의 서브유닛, 단편 또는 유도체를 회수하는 단계를 포함하는, 본 개시내용이 제공하는 바와 같은 항-DPP-4 항체, 또는 이의 서브유닛, 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 본 개시내용이 제공하는 하이브리도마 또는 세포 배양물에 의해 생산된 항체, 또는 이의 서브유닛, 단편, 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 항체 m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15, 및/또는 R11A9.11를 포함함)를 제조하는 방법을 추가로 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본 개시내용이 제공하는 바와 같은 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 본 개시내용이 제공하는 하이브리도마 또는 세포 배양물에 의해 생산된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 항체 m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15, 또는 R11A9.11을 포함함)를 포함하는, 샘플 내의 DPP-4 수준을 측정하기 위한 키트를 제공한다. 특정 측면에서, 키트는 적어도 2개의 이같은 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 포함한다. 키트는 고체 지지체 및/또는 검출 시약을 추가로 포함할 수 있다. 특정 측면에서, 적어도 2개의 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체 중 하나는 포착 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고, 적어도 2개의 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체 중 하나는 검출 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있다. 특정 측면에서, 검출 항체는 검출가능한 표지를 포함할 수 있고, 예를 들어, 검출가능한 표지는 비오틴일 수 있고, 키트는 검출 시약 예컨대 스트렙타비딘-양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP) 접합체 및 HRP에 대한 비색 기질을 포함할 수 있거나, 또는 검출가능한 표지는 루테늄 킬레이트일 수 있다. 특정 측면에서,
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고/있거나;
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고/있거나;
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고/있거나;
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고/있거나;
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고/있거나;
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고/있거나;
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고/있거나;
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있다.
본 개시내용은 면역검정법이 적어도 2개의 항-DPP-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체의 사용을 포함하고, 여기서 항-DPP-4 항체 중 하나는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7의 결합을 경쟁적으로 억제하고/하거나 이와 동일한 DPP-4 에피토프에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고, 항-DPP-4 항체 중 하나는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 결합을 경쟁적으로 억제하고/하거나 이와 동일한 DPP-4 에피토프에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를 포함하는, 하나 이상의 샘플 내의 DPP-4 수준을 검출하는 면역검정법을 추가로 제공한다.
특정 측면에서, 면역검정법은 항-DPP-4 항체 중 하나는 3개의 중쇄 CDR VHCDR1, VHCDR2 및 VHCDR3이 있는 VH, 및 3개의 경쇄 CDR VLCDR1, VLCDR2, 및 VLCDR3이 있는 VL을 포함하고, 여기서 단리된 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체의 CDR이 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7의 CDR과 동일한 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고, 2개 이상의 항-DPP-4 항체 중 하나는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) VHCDR1, VHCDR2 및 VHCDR3이 있는 VH, 및 3개의 경쇄 CDR VLCDR1, VLCDR2, 및 VLCDR3이 있는 VL을 포함하고, 여기서 단리된 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체의 CDR이 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 CDR과 동일한 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있는 적어도 2개의 항-DPP-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체의 사용을 포함한다.
특정 측면에서, 면역검정법은 2개 이상의 항-DPP-4 항체 중 하나는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7의 VH 및 VL과 동일한 VH 및 VL을 포함하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있고, 2개 이상의 항-DPP-4 항체 중 하나는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 VH 및 VL과 동일한 VH 및 VL을 포함하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체일 수 있는 적어도 2개의 항-DPP-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체의 사용을 포함한다.
특정 측면에서, 면역검정법은 고체 지지체에 부착된 제1 항-DPP-4 "포착" 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 제2 항-DPP-4 "검출" 항체 또는 이의 항원-결합 단편 (예를 들어, 항체 m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15, 및/또는 R11A9.11을 포함함)의 사용을 포함하는 샌드위치 면역검정법일 수 있다. 예를 들어, 면역검정법은 포착 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 고체 지지체에 부착하는 단계; 샘플 내에 존재한다면 DPP-4가 포착 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 결합하게 하는데 충분한 조건 하에 테스트 샘플 또는 대조군 샘플을 적용하는 단계; 포착 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 이미 결합된 DPP-4에 결합하게 하는데 충분한 조건 하에 검출 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 적용하는 단계; 및 DPP-4에 결합된 검출 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 양을 측정하는 단계를 포함할 수 있다. 특정 측면에서, 검출 항체는 검출 항체는 검출가능한 표지를 포함할 수 있고, 예를 들어, 검출가능한 표지는 비오틴일 수 있고, 키트는 검출 시약 예컨대 스트렙타비딘-양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP) 접합체 및 HRP에 대한 비색 기질을 포함할 수 있거나, 또는 검출가능한 표지는 루테늄 킬레이트일 수 있다.
특정 측면에서, 면역검정법은 포착 항체 및 검출 항체의 사용을 포함할 수 있고, 여기서
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고/이거나;
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고/이거나;
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고/이거나;
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고/이거나;
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고/이거나;
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고/이거나;
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고/이거나;
포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 제공된 면역검정법 또는 키트, 및/또는 제공된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 2개 이상의 이같은 항체의 조합물 (예를 들어, 항체 m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15, 및/또는 R11A9.11을 포함함)를 사용하여 샘플을 검정하는 것을 포함하는, 대상체로부터 수득된 샘플 내의 DPP-4의 양을 측정하는 방법을 제공한다. 특정 측면에서, 샘플은 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 소변, 가래, 기관지폐포 세척액, 폐 상피 세포, 또는 코 용종, 또는 피부 중 하나 이상일 수 있다. 특정 측면에서, 대상체는 IL-13-매개 질환 또는 장애, 폐 질환 또는 장애, 및 만성 염증성 피부 질환 또는 장애로 이루어진 군으로부터 선택된 질환 또는 병태가 있다. 예를 들어, 질환 또는 병태는 천식, 아토피성 천식, 코르티코스테로이드 미경험 천식, 만성 천식, 코르티코스테로이드 저항성 천식, 코르티코스테로이드 불응성 천식, 흡연으로 인한 천식, 코르티코스테로이드로 제어되지 않는 천식, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 궤양성 결장염 (UC), 아토피성 피부염 (AD), 알레르기 비염, 만성 코굴염, 피부 섬유증, 알레르기성 접촉 피부염, 습진 및/또는 건선일 수 있다. 특정 측면에서, 샘플이 대상체로부터 수득될 수 있고, 샘플 내의 DPP-4 수준의 측정을 위해 제출될 수 있다. 특정 측면에서, 대상체는 천식 환자일 수 있고, 환자로부터 취해진 샘플은 혈청일 수 있다.
도면의 간단한 설명
도 1: RIMMS 프로토콜을 위한 배출 림프절 주사 부위. 인간 DPP-4에 대해 특이적인 마우스 및 래트 모노클로날 항체를 다중 부위에서의 반복적 면역화(Repetitive Immunization at Multiple Sites) (RIMMS) 프로토콜 (Kilpatrick, K., et al., Hybridoma 16:381-389 (2009))을 사용하여 생산하였다. 간략하게, 2마리의 위스타(Wistar) 래트를 각각 제0일, 제2일, 제5일, 제7일, 제9일 및 제13일에 30, 15, 7, 3, 3, 및 3 ㎍ CD26으로 도 1에 나타난 바와 같은 배수 림프절 부위 A, B, 및 C 내로 면역화시켰다. 마우스 면역화는 동일한 일정을 따랐지만, 각각의 시점의 항원의 양을 절반으로 하였다.
도 2A-D: 항-DPP-4 마우스 및 래트 항체가 직접 결합 ELISA를 사용하여 나타난 바와 같이 인간 DPP-4에 대해 특이적이다. 인간 DPP-4로 면역화된 2마리의 래트 (R9472 및 R9473)로부터의 면역-전 혈청 (왼쪽) 또는 제13일의 테스트-채혈 혈청 (우측)을 사용한 인간 DPP-4 (r-DPP-4-his) (A) 또는 인간 gp130-his (B)에 대한 직접 결합 ELISA. 제13일의 래트 혈청은 인간 DPP4에 특이적으로 결합하는 한편, 면역-전 혈청을 사용하는 경우에는 특이적 결합이 보이지 않는다. 인간 DPP-4-로 면역화된 5마리의 마우스 (ms9447, ms9448, ms9449, ms9450 및 ms9451)로부터의 면역-전 혈청 (왼쪽) 또는 제13일의 테스트-채혈 혈청 (우측)을 사용한 인간 DPP-4 (r-DPP-4-his) (C) 또는 인간 gp130-his (D)에 대한 직접 결합 ELISA. 제13일의 마우스 혈청은 인간 DPP4에 특이적으로 결합하는 한편, 면역-전 혈청을 사용하는 경우에는 특이적 결합이 보이지 않는다.
도 3a-b: 면역검정법에서 m3B7.6 항체 (a) 또는 m5B7.7 (b)을 포착 항체로 사용한 인간 DPP-4의 검출. a. 샌드위치 ELISA 검정법에서 m3B7.6을 포착 항체로, R11A2.15, R11A9.11, 또는 대조군 항체 R222113 (R&D 시스템즈(R&D Systems) 카탈로그 번호 MAB1180)을 검출 항체로 사용하여 DPP-4를 PBS 또는 1％ 정상 인간 혈청 (NHS)에 첨가하였다. m3B7.6 + R11A2.15 또는 m3B7.6 + R11A9.11이 샌드위치 ELISA 검정법에서 인간 DPP-4를 측정하는 것에서 최상의 민감도를 제공하였다. b. 샌드위치 ELISA 검정법에서 m5B7.7을 포착 항체로, R11A2.15, R11A9.11, 또는 대조군 항체 R222113 (R&D 시스템즈 카탈로그 번호 MAB1180)을 검출 항체로 사용하여 DPP-4를 PBS 또는 1％ 정상 인간 혈청 (NHS)에 첨가하였다. m5B7.7 + R11A2.15 또는 m5B7.7 + R11A9.11이 샌드위치 ELISA 검정법에서 인간 DPP-4를 측정하는 것에서 최상의 민감도를 제공하였다. 이러한 결과들은, 도 2에서 보고된 결과와 조합되어, 항체 m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15, 및 R11A9.11이 내인성 및 재조합 인간 DPP4 양쪽 모두를 검출한다는 것을 실연한다. 또한, DPP-4를 검출한 항체 m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15, 및 R11A9.11에 비교하여, 시판 항체 (R222113)는 이러한 면역검정법에서 DPP4를 검출하는데 실패하였다.
도 4a-e: 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 및 m5B7.7이 서로 경쟁하는 한편, 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 및 R11A9.11이 서로 경쟁한다. a. 도 4b-e에 나타난 바와 같은 m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15, 및 R11A9.11의 상대적 결합 특이성 및 경쟁 프로파일을 결정하는데 사용된 OCTET 검정법의 개략도. 간략하게, 먼저 테스트 항체를 비오틴화시킨 후, 5분 동안 200 ㎕로 20 ㎍/ml 농도로 스트렙타비딘 바이오센서 상에서 포착하였다. 그 후, 바이오센서를 200 ㎕의 PBS 완충제로 1분 동안 세정하고 나서, 5분 동안 10 ㎍/mL의 재조합 인간 DPP-4와 함께 인큐베이션하고, 1분 동안 200 ㎕의 PBS 완충제로 세정하였다. 경쟁자 항체와 테스트 항체를 각각 20 ㎍/ml의 최종 농도로 1:1 비로 혼합하고, 5분 동안 200 ㎕로 바이오센서 상에 로딩하였다. 테스트 항체에 대한 추가적인 결합을 나타내는 경쟁자 항체는 상이한 에피토프가 있는 것으로 생각되었다. 그렇지 않으면, 이들은 동일한 에피토프를 공유하는 것으로 간주되었다. B . m3B7.6 (a)를 테스트 항체로 사용한 OCTET 검정법 결과. m5B7.7 (b)은 m3B7.6 (a)과 동일한 결합 프로파일을 나타낸 한편, R11A2.15 (c) 및 R11A9.11 (d)는 m3B7.6 (a)과 상이한 결합 프로파일을 나타냈다. 이러한 결과를 기초로, 항체 m3B7.6 및 m5B7.7은 동일하거나 중첩되는 에피토프를 공유한다. C . m5B7.7 (b)을 테스트 항체로 사용한 OCTET 검정법 결과. m3B7.6 (a)은 m5B7.7 (b)과 동일한 결합 프로파일을 나타낸 한편, R11A2.15 (c) 및 R11A9.11 (d)은 m5B7.7 (b)과 상이한 결합 프로파일을 나타냈다. 이러한 결과를 기초로, 항체 m5B7.7 및 m3B7.6은 동일하거나 중첩되는 에피토프를 공유한다. D . R11A2.15 (c)를 테스트 항체로 사용한 OCTET 검정법 결과. R11A9.11 (d)은 R11A2.15 (c)와 동일한 결합 프로파일을 나타낸 한편, m3B7.6 (a) 및 m5B7.7 (b)은 R11A2.15 (c)와 상이한 결합 프로파일을 나타냈다. 이러한 결과를 기초로, 항체 R11A2.15 및 R11A9.11은 동일하거나 중첩되는 에피토프를 공유한다. E . R11A9.11 (d)을 테스트 항체로 사용한 OCTET 검정법 결과. R11A2.15(c)는 R11A9.11 (d)과 동일한 결합 프로파일을 나타낸 한편, m3B7.6 (a) 및 m5B7.7 (b)은 R11A9.11 (d)과 상이한 결합 프로파일을 나타냈다. 이러한 결과를 기초로, 항체 R11A9.11 및 R11A2.15는 동일하거나 중첩되는 에피토프를 공유한다.
상세한 설명
본 개시내용은 항-DPP-4 모노클로날 항체, 하나 이상의 이러한 항체를 포함하는 검정 키트, 및 인간 환자로부터 수득된 샘플 내의 DPP-4 수준의 검출 및 측정을 위한 하나 이상의 이러한 항체를 사용하는 견고하고, 민감하며 특이적인 면역검정법을 제공한다.
본 명세서 및 첨부된 특허청구범위에서, 문맥적으로 명확하게 달리 지시되지 않는 한 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 복수의 지시대상을 포함한다. 용어 "a" (또는 "an"), 뿐만 아니라 용어 "하나 이상", 및 "적어도 하나"는 본원에서 상호교환가능하게 사용될 수 있다.
또한, 본원에서 사용된 경우의 "및/또는"은 2개의 상술된 특색 또는 성분 각각을 다른 것과 함께 또는 다른 것 없이 구체적으로 개시하는 것으로 여겨져야 한다. 따라서, 본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 문구에서 사용된 바와 같은 용어 "및/또는"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A" (단독), 및 "B" (단독)을 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, "A, B, 및/또는 C"와 같은 문구에서 사용된 바와 같은 용어 "및/또는"는 하기의 측면 각각을 포괄하는 것으로 의도된다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A (단독); B (단독); 및 C (단독).
측면들이 본원에서 "포함하는"이라는 언어로 기술되는 모든 경우에, "~로 이루어지는" 및/또는 "본질적으로 ~로 이루어지는"이라는 표현으로 기술된, 다른 면에서는 유사한 측면들이 또한 제공된다.
명세서 및 특허청구범위 전반에 걸쳐 수치와 관련하여 사용된 바와 같은 용어 "약"은 관련 분야의 기술자에게 익숙하고 허용될 수 있는 정확도 구간을 가리킨다. 일반적으로, 이같은 정확도 구간은 ± 10％이다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 개시내용이 관련되는 분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, 문헌 [Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press]; [The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press]; 및 [Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press]이 본 개시내용에서 사용된 다수의 용어의 일반적인 사전을 통상의 기술자에게 제공한다.
단위, 접두사 및 기호는 이의 국제 단위계(Systeme International de Unites) (SI)에서 허용되는 형태로 표기된다. 수치 범위는 범위를 규정하는 숫자를 포함한다. 달리 지시되지 않는 한, 아미노산 서열은 왼쪽에서 오른쪽으로 아미노에서 카르복시 방향으로 기재된다. 본원에서 제공되는 제목은 명세서 전체를 참조로 얻을 수 있는 본 개시내용의 측면 또는 다양한 측면의 제한이 아니다. 따라서, 바로 아래에서 정의되는 용어들은 명세서 전문을 참조로 더욱 충분하게 정의된다.
"단리된" 물질, 조성물, 물체, 및/또는 물질, 조성물 또는 물체의 임의의 조합, 또는 이의 임의의 문법적 변형, 예를 들어, 단리된 생물학적 물질은 이의 자연 환경에 있지 않은 물질이다. 특정 수준의 정제가 요구되지 않는다. 예를 들어, 단리된 항체는 이의 천연 또는 자연 환경에서 생산되지 않은 또는 이의 천연 또는 자연 환경에 위치하지 않는 항체이다. 재조합으로 생산된 생물학적 물질은 본원에서 개시된 바와 같이 단리된 것으로 간주되고, 비-천연 세포, 예컨대 하이브리도마에서 생산된 물질도 그러하다. 임의의 적절한 기술에 의해 분리되었거나, 분획화되었거나, 또는 부분적으로 또는 실질적으로 정제되었으면, 물질, 예를 들어, 생물학적 물질이 또한 "단리된" 것으로 간주된다. 특정 측면에서, 단리된 물질, 예를 들어, 단리된 생물학적 물질은 "비-천연 발생"일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "비-천연 발생" 물질, 조성물, 물체, 및/또는 물질, 조성물 또는 물체의 임의의 조합, 또는 이의 임의의 문법적 변형은 관련 분야의 통상의 기술자가 "천연 발생"인 것으로 잘 이해하거나 또는 판사 또는 행정 기관 예컨대 미국 특허상표청, 또는 사법 기관이 "천연 발생"인 것으로 결정 또는 해석하거나 또는 임의의 시점에 결정 또는 해석할 수 있는 형태의 물질, 조성물, 물체, 및/또는 물질, 조성물 또는 물체의 임의의 조합을 명시적으로 배제하지만, 이들만 배제하는 조건부 용어이다. 예를 들어, 용어 "비-천연 발생" 항체는 자연에 존재하는 항체, 예를 들어, 정상 환경의 항원성 자극에 노출된 마우스의 면역계에 자연적으로 존재할 항체, 또는 행정 기관, 예를 들어, 미국 특허상표청, 또는 사법 기관, 예를 들어, 연방 법원이 "천연 발생"인 것으로 최종적으로 결정한 항체를 명시적으로 배제한다.
본원에서 상호교환가능하게 사용된 바와 같은 "폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 임의 길이의 뉴클레오티드 중합체를 지칭하고, DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 염기, 및/또는 이의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 폴리머라제에 의해 중합체 내로 혼입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드, 예컨대 메틸화된 뉴클레오티드 및 이의 유사체를 포함할 수 있다. 상기 설명은 RNA 및 DNA를 포함하여 본원에서 지칭되는 모든 폴리뉴클레오티드에 적용된다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "발현"은 유전자가 생화학적 물질, 예를 들어, 본원에서 제공되는 수송체 분자를 생산하는 프로세스를 지칭한다. 이러한 프로세스는 일시적 발현 및 안정적 발현 양쪽 모두뿐만 아니라 유전자 녹다운을 비제한적으로 포함하여, 세포 내에서의 유전자의 기능적 존재의 임의의 양상을 포함한다. 이는 유전자가 하나 이상의 mRNA로 전사되는 것, 및 이같은 mRNA가 하나 이상의 폴리펩티드로 번역되는 것을 비제한적으로 포함한다. 최종 생성물이 생화학적 물질이면, 발현은 이러한 생화학적 물질 및 임의의 전구체의 생성을 포함한다.
"발현 생성물"은 핵산, 예를 들어, 유전자의 전사에 의해 생산된 메신저 RNA, 또는 폴리펩티드일 수 있다. 본원에 기술된 발현 생성물은 전사-후 변형, 예를 들어, 폴리아데닐화가 있는 핵산, 또는 번역-후 변형, 예를 들어, 메틸화, 글리코실화, 지질 부가, 다른 단백질 서브유닛과의 회합, 단백질분해성 절단 등이 있는 폴리펩티드를 추가로 포함한다.
용어 "벡터" 또는 "발현 벡터"는 숙주 세포 내로의 도입 및 숙주 세포 내에서의 관심 발현 생성물의 발현을 위한 비히클로서 사용되는 벡터를 의미하도록 본원에서 사용된다. 관련 분야의 기술자에게 공지된 바와 같이, 이같은 벡터는 플라스미드, 파지, 바이러스 및 레트로바이러스로 이루어진 군으로부터 쉽게 선택될 수 있다. 일반적으로, 벡터는 선별 마커, 특정 핵산의 클로닝을 용이하게 하기 위한 적합한 제한 부위, 및 진핵생물 또는 원핵생물 세포에 진입하고/하거나 진핵생물 또는 원핵생물 세포에서 복제하는 능력을 포함할 수 있다. 벡터의 예는 바이러스 벡터, 네이키드(naked) DNA 또는 RNA 발현 벡터, 플라스미드, 코스미드 또는 파지 벡터, 양이온성 축합제와 회합된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 리포솜 내에 캡슐화된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 및 특정 진핵생물 세포, 예컨대 생산자 세포를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
용어 "숙주 세포"는 재조합 DNA 기술을 사용하여 구축되고 적어도 하나의 발현 생성물을 코딩하는 벡터를 보유하는 세포를 지칭한다. 재조합 숙주로부터 발현 생성물을 단리하기 위한 공정의 기술에서, 용어 "세포" 및 "세포 배양물"은 명확하게 달리 상술되지 않는 한 발현 생성물의 출처를 표기하도록 상호교환가능하게 사용되고, 즉 "세포"로부터의 발현 생성물의 회수는 스피닝(spinning)으로 침강된 전체 세포로부터의 회수, 또는 배지 및 현탁된 세포 양쪽 모두를 함유하는 세포 배양물로부터의 회수를 의미한다.
용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 임의 길이의 아미노산 중합체를 지칭하도록 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있고, 변형된 아미노산을 포함할 수 있으며, 비-아미노산이 이에 개입될 수 있다. 이러한 용어는 자연적으로, 또는 조정, 예를 들어, 디술피드 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작 또는 변형, 예컨대 표지 성분과의 접합에 의해 변형된 아미노산 중합체를 또한 포함한다. 예를 들어, 하나 이상의 아미노산 유사체 (예를 들어, 비천연 아미노산 등을 포함함), 뿐만 아니라 관련 기술 분야에 공지된 다른 변형을 함유하는 폴리펩티드가 이러한 정의에 또한 포함된다. 본 개시내용의 폴리펩티드는 항체를 기초로 하기 때문에, 특성 실시양태에서, 폴리펩티드가 단일쇄 또는 회합된 쇄로서 발생할 수 있는 것으로 이해된다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "DPP-4"는 DPP-4 유전자 (cDNA: 서열식별번호(SEQ ID NO): 7)가 코딩하는 디펩티딜 펩티다제 IV 단백질 (EC 3.4.14.5; 유니프롯(Uniprot): P27487 (막-결합 형태: 서열식별번호: 5; 가용성 형태: 서열식별번호: 6))을 지칭한다. DPP-4는 DPP-IV, 아데노신 데아미나제 복합체화 단백질 2, 또는 CD26 (분화 클러스터 26)으로도 알려져 있다. DPP-4는 어트랙틴(attractin), FAP, DPP8 및 DPP9에 관련된다. DPP-4는 혈행 (혈장), 및 상피, 내피 및 림프양 세포를 포함하는 여러 세포 유형의 표면 양쪽 모두에 존재하는, 고도로 보존된 다기능성 제II형 막횡단 당단백질이다. DPP-4는 T-세포 공동자극, 케모카인 생물학, II형 당뇨병, 및 종양 생물학에서 수반되는 세린 프로테아제 패밀리의 일부이다 (Zhong et al., Atherosclerosis 2013;226:305-314). DPP-4의 내인성 기질은 광범위한 프롤린-함유 펩티드 예컨대 성장 인자, 케모카인, 신경펩티드 및 혈관작용성 펩티드를 포함한다 (Gorrell, M., Clin. Sci. 108, 277-292, 2005; McIntosh, C. H. S., et al. Int. J. Biochem. Cell Biol. 38, 860-872, 2006). 제어되지 않는 천식과 연관되는 먼지 진드기 알레르기 비염이 있는 아동의 코 상피에서 상승된 DPP-4 전사체 (및 다른 Th2 시그너처 유전자)를 발견한 지오반니니-차미(Giovannini-Chami)에 의해 염증성 호흡 질환 예컨대 천식에서의 DPP-4의 역할이 제안된다 (Giovannini-Chami et al., European Respiratory Journal. 2012 May;39(5):1197-205). 용어 DPP-4는 이의 단편, 변이체 (예를 들어, 관련 분야에 공지된 K1R, V7I, S437I, T557I, D663E 변이체), 및 유도체 (예를 들어, 글리코실화 또는 무글리코실화 단백질 형태의 DPP-4 단백질, 또는 다른 식으로 화학적으로 변형된 형태의 단백질)를 또한 포함한다.
예를 들어 "DPP-4 수준" 또는 "DPP-4의 양"에서와 같은 용어 "수준" 또는 "양"은 생물학적 샘플 내의 DPP-4 (단백질 발현)의 존재 또는 발현을 검출하기 위한 분석 방법을 사용하여 측정되고, 생물학적 샘플 내의 DPP-4의, DPP-4에 대한 또는 DPP-4에 상응하는 존재, 부재, 절대적인 양 또는 농도, 상대적인 양 또는 농도, 역가, 발현 수준, 측정된 수준의 비 등을 가리키는 치수를 지칭한다. "값" 또는 "수준"의 정확한 성질은 DPP-4를 검출하는데 사용된 특정한 분석 방법 (예를 들어, 본원에서 제공되는 바와 같은 면역검정법)의 구체적인 디자인 및 성분에 좌우된다. 예를 들어, 미국 2010/00221752를 참조한다.
DPP-4를 언급할 때 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "상승된 DPP-4", "높은 DPP-4", "상승된 DPP-4 수준", 또는 "높은 DPP-4 수준"은 정상 수준 또는 범위보다 더 높은 생물학적 샘플 (예를 들어, 혈액 혈청) 내의 수준을 지칭한다. DPP-4에 대한 정상 수준 또는 범위는 표준 관행에 따라 정의된다. 따라서, 특정 생물학적 샘플에서 측정된 수준을 유사한 정상 샘플에서 결정된 수준 또는 수준 범위와 비교할 수 있다. DPP-4가 테스트 샘플 내에 정상 샘플 내에서보다 더 높은 수준 또는 범위로 존재하는 경우에 DPP-4 수준이 상승되었다고 한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체" (또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체)는 적어도 항원에 결합할 수 있는 항체의 최소의 부분, 예를 들어, B 세포에 의해 생산된 전형적인 항체의 경우 적어도 중쇄의 가변 도메인 (VH) 및 경쇄의 가변 도메인 (VL)을 지칭한다. 척추동물계에서의 기본적인 항체 구조가 비교적 잘 이해되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988)]을 참조한다. 달리 언급되지 않는 한, 항체 "단편", "변이체", 또는 "유도체"는 항원-결합 "단편", "변이체", 또는 "유도체"를 지칭한다.
본원에 개시된 바와 같은 항체를 지칭할 때의 용어 "단편", "변이체", "유도체" 및 "유사체"는 기준 항체의 활성, 예를 들어, 항원-결합 활성의 적어도 일부를 유지하지만 구조적으로 상이한 임의의 항체를 포함할 수 있다. 항체 단편은, 예를 들어, Fab, Fab' 및 F(ab')2, Fd, Fv, 단일쇄 Fv (scFv), 단일쇄 항체, 디술피드-연결 Fv (sdFv) 단편을 포함한다. 변이체는 상기 기술된 바와 같은 단편을 포함하고, 아미노산 치환, 결실 또는 삽입으로 인해, 예를 들어 가변 도메인 내에서, 아미노산 서열이 변경된 항체를 또한 포함한다. 변이체는 자발적으로 발생할 수 있거나, 또는 의도적으로 구축될 수 있다. 의도적으로 구축된 변이체는 관련 기술 분야에 공지된 돌연변이유발 기술을 사용하여 생산할 수 있다. 변이체 항체는 보존적 또는 비-보존적 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 포함할 수 있다. 변이는 항체가 기준 항체의 기능을 유지한다는 제약, 예를 들어, 기준 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 것, 또는 기준 항체를 경쟁적으로 억제하는 것에 의해서만 제한된다. 유도체는 천연 항체에서 발견되지 않는 추가적인 특색을 나타내도록 변경된 항체이다. 예는 항체의 항원-결합 도메인을 포함하는 융합 단백질, 또는 접합된 항체를 포함한다. "유도체" 항체는 관능성 측기의 반응에 의해 화학적으로 유도체화된 하나 이상의 아미노산을 또한 포함할 수 있다. 20개의 표준 아미노산의 하나 이상의 표준 또는 합성 아미노산 유도체를 함유하는 항체가 "유도체"로서 또한 포함된다. 예를 들어, 4-히드록시프롤린이 프롤린을 교체할 수 있고, 5-히드록시리신이 리신을 교체할 수 있고, 3-메틸히스티딘이 히스티딘을 교체할 수 있고, 호모세린이 세린을 교체할 수 있으며, 오르니틴이 리신을 교체할 수 있다.
경쇄 및 중쇄 양쪽 모두 구조적 및 기능적으로 상동성인 영역으로 나뉠 수 있다. 용어 "불변" 및 "가변"은 기능적으로 사용된다. 이와 관련하여, 경쇄 부분의 가변 도메인 (VL) 및 중쇄 부분의 가변 도메인 (VH) 양쪽 모두가 항원 인식 및 특이성을 결정한다는 것이 이해될 것이다. 역으로, 경쇄의 불변 도메인 (CL) 및 중쇄의 불변 도메인 (CH1, CH2 또는 CH3)은 중요한 생물학적 성질 예컨대 분비, 태반을 통과하는 이동성, Fc 수용체 결합, 보체 결합 등을 부여한다.
상기 지시된 바와 같이, 가변 영역은 결합 분자가 항원 상의 에피토프를 선택적으로 인식하고 이에 특이적으로 결합하게 한다. 즉, 항체의 VL 도메인 및 VH 도메인, 또는 상보성 결정 영역 (CDR)의 서브세트가 조합되어, 3차원 항원-결합 부위를 규정하는 가변 영역을 형성한다. 이러한 4요소 결합 분자 구조가 Y의 각각의 팔의 끝부분에 존재하는 항원-결합 부위를 형성한다. 더욱 구체적으로, 각각의 VH 및 VL 쇄 상의 3개의 CDR에 의해 항원-결합 부위가 규정된다.
항체에서, 각각의 항원-결합 도메인에 존재하는 6개의 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"은 수성 환경에서 항체가 이의 3차원 형상을 취할 때 항원-결합 도메인을 형성하도록 특이적으로 배치되는 아미노산들의 짧은 비-인접 서열이다. "프레임워크" 영역으로 지칭되는, 항원-결합 도메인 내의 나머지 아미노산은 분자간 가변성을 덜 나타낸다. 프레임워크 영역은 주로 β-시트 형상을 채택하고, CDR은 이러한 β-시트 구조를 연결하고, 일부 경우에는 이의 일부를 형성하는 루프를 형성한다. 따라서, 프레임워크 영역은 사슬간 비-공유결합 상호작용에 의해 CDR을 정확한 배향으로 배치하는 것을 제공하는 스캐폴드를 형성하는 작용을 한다. 배치된 CDR에 의해 형성된 항원-결합 도메인은 면역반응성 항원 상의 에피토프에 상보적인 표면을 규정한다. 이러한 상보적인 표면은 항체가 이의 동족 에피토프에 비-공유결합으로 결합하는 것을 촉진한다. 각각 CDR 및 프레임워크 영역을 이루는 아미노산은, 이들이 정확하게 규정되어 있기 때문에, 관련 분야의 통상의 기술자에 의해 임의의 소정의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역에 대해 쉽게 확인될 수 있다 (본원에 전문이 참조로 포함된 문헌 ["Sequences of Proteins of Immunological Interest", Kabat, E., et al., U.S. Department of Health and Human Services, (1983)]; 및 [Chothia and Lesk, J. Mol. Biol., 196:901-917 (1987)]을 참조한다).
용어의 2개 이상의 정의가 관련 분야에서 사용되고/되거나 인정되는 경우, 본원에서 사용된 바와 같은 용어의 정의는 대조적인 것으로 명시적으로 언급되지 않는 한 모든 이같은 의미를 포함하도록 의도된다. 구체적인 예는 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 양쪽 모두의 가변 영역 내에서 확인되는 비-인접 항원 조합 부위를 기술하는 용어 "상보성 결정 영역" ("CDR")의 사용이다. 이러한 특정 영역이 본원에 참조로 포함된 문헌 [Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of Proteins of Immunological Interest" (1983)] 및 [Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]에 의해 기술되었고, 서로 비교되는 경우 정의들이 아미노산 잔기의 중복 또는 서브세트를 포함한다. 그럼에도 불구하고, 항체 또는 이의 변이체의 CDR을 지칭하기 위해 어느 한쪽의 정의를 적용하는 것이 본원에서 정의 및 사용되는 바와 같은 이러한 용어의 범주 내에 속하는 것으로 의도된다.
항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체는 폴리클로날, 모노클로날, 인간, 인간화, 또는 키메라 항체, 단일쇄 항체, 에피토프-결합 단편, 예를 들어, Fab, Fab' 및 F(ab')2, Fd, Fv, 단일쇄 Fvs (scFv), 단일쇄 항체, 디술피드-연결 Fv (sdFv), VL 또는 VH 도메인을 포함하는 단편, Fab 발현 라이브러리에 의해 생산되는 단편을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. ScFv 분자는 관련 기술 분야에 공지되어 있고, 예를 들어, 미국 특허 5,892,019에 기술되어 있다. 본 개시내용에 포함되는 면역글로불린 또는 항체 분자는 임의 유형 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, 및 IgY), 클래스 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 서브클래스의 면역글로불린 분자일 수 있다.
"특이적으로 결합한다"는 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체가 이의 항원-결합 도메인을 통해 에피토프에 결합한다는 것과 결합이 항원-결합 도메인과 에피토프 사이의 어떤 상보성을 수반한다는 것을 일반적으로 의미한다. 이러한 정의에 따르면, 무작위의 관련되지 않은 에피토프에 결합할 것보다 더욱 용이하게 항체가 이의 항원-결합 도메인을 통해 에피토프에 결합할 때 항체가 이러한 에피토프에 "특이적으로 결합한다"고 한다.
항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체가 소정의 에피토프에 대한 기준 항체 또는 항원-결합 단편의 결합을 어느 정도 차단하는 정도로 이러한 에피토프에 우선적으로 결합하면, 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체가 소정의 에피토프에 대한 기준 항체 또는 항원-결합 단편의 결합을 경쟁적으로 억제한다고 한다. 관련 분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어, 경쟁 ELISA 검정법에 의해 경쟁적 억제를 결정할 수 있다. 적어도 90％, 적어도 80％, 적어도 70％, 적어도 60％, 또는 적어도 50％만큼 결합 분자가 소정의 에피토프에 대한 기준 항체 또는 항원-결합 단편의 결합을 경쟁적으로 억제한다고 할 수 있다.
본원에 개시된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체는 항원의 에피토프(들) 또는 일부분(들), 예를 들어, 이들이 인식하거나 특이적으로 결합하는 표적 다당류의 측면에서 기술 또는 상술될 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용에서 제공되는 항체의 항원-결합 도메인과 특이적으로 상호작용하는 인간 DPP-4의 일부분이 "에피토프"이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "IL-13-매개 질환 또는 장애"는 이러한 장애가 있는 대상체 내의 비정상적인 수준의 IL-13 (단독으로 또는 다른 매개물과 함께)에 의해 야기되거나, 이에 의해 악화되거나, 이와 연관되거나 또는 이에 의해 연장되는 임의의 병리를 지칭한다. IL-13-매개 질환 또는 장애의 비제한적인 예는 천식, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 궤양성 결장염 (UC), 아토피성 피부염 (AD), 알레르기 비염, 또는 만성 코굴염을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "폐 질환 또는 장애"는 적어도 부분적으로 폐 또는 호흡계에 영향을 미치는 임의의 병리를 지칭한다. 비제한적인 예는 천식, 아토피성 천식, 코르티코스테로이드 미경험 천식, 만성 천식, 코르티코스테로이드 저항성 천식, 코르티코스테로이드 불응성 천식, 흡연으로 인한 천식, 코르티코스테로이드로 제어되지 않는 천식, IPF, COPD, 알레르기 비염, 또는 만성 코굴염을 포함한다. 특정 측면에서, 폐 질환 또는 장애는 IL-13-매개 질환 또는 장애이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "만성 염증성 피부 질환 또는 장애"는 적어도 부분적으로 피부에 영향을 미치는 임의의 병리를 지칭한다. 비제한적인 예는 아토피성 피부염, 피부 섬유증, 알레르기성 접촉 피부염, 습진 또는 건선을 포함한다. 특정 측면에서, 만성 염증성 피부 질환 또는 장애는 IL-13-매개 질환 또는 장애이다.
용어 "천식"은 가역적 기류 폐쇄 및/또는 기관지 과민성으로서 존재하고 일부 경우에는 기저 염증과 연관되는 질환을 지칭한다. 천식의 예는 알레르기성 천식, 아토피성 천식, 코르티코스테로이드 미경험 천식, 만성 천식, 코르티코스테로이드 저항성 천식, 코르티코스테로이드 불응성 천식, 흡연으로 인한 천식, 코르티코스테로이드로 제어되지 않는 천식, 및 예를 들어, 본원에 전문이 참조로 포함된 문헌 [Expert Panel Report 3: Guidelines for the Diagnosis and Management of Asthma, National Asthma Education and Prevention Program (2007) ("NAEPP Guidelines")]에 언급된 바와 같은 기타 천식을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "COPD"는 만성 폐쇄성 폐 질환을 지칭한다. 용어 "COPD"는 2가지 주요 병태를 포함한다: 폐공기증 및 만성 폐쇄성 기관지염.
용어 "특발성 폐 섬유증" (IPF)은 폐의 진행성 흉터형성 또는 폐의 섬유증을 특징으로 하는 질환을 지칭한다. 이는 폐포가 점진적으로 섬유증성 조직으로 교체되는 특정 유형의 간질성 폐 질환이다. IPF에서, 진행성 흉터형성이 정상적인 얇고 유연한 조직이 두꺼워지고 경직되는 것을 야기하고, 이는 폐가 확장되는 것을 더욱 어렵게 하여 산소가 혈류 내로 쉽게 들어가는 것을 방지한다. 예를 들어, 문헌 [Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2000. 161:646-664]를 참조한다.
용어 "궤양성 결장염" (UC)은 특징적인 궤양 또는 개방성 상처를 포함하는, 결장직장에 영향을 미치는 위장 (GI) 관의 염증성 장애를 지칭한다. UC는 증상이 악화된 기간 및 비교적 증상이 없는 기간이 있는 간헐적 질환이다. 활성 질환의 증상은 장기간 (수주) 동안 지속되는 혈액과 혼합된 지속적인 설사, 체중 감소, GI 관으로부터의 만성 실혈, 빈혈, 복부 통증, 및 경미한 불편함 내지 고통스러운 장 운동 또는 장 운동을 동반한 고통스러운 복부 경련을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Danese, et al. N Engl J Med. 2011 365(18):1713-25]를 참조한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "아토피성 피부염"은 다른 아토피성 장애 예컨대 알레르기 비염 및 천식과 종종 연관되는, 염증성이고, 재발성이며, 비-전염성이고 소양성인 만성 피부 장애를 지칭한다 (Bieber, New England Journal of Medicine, 2008, 358: 1483-1494). 용어 "아토피성 피부염"은 "신경피부염", "아토피성 습진" 또는 "내인성 습진"과 같은 뜻이다. 발생하는 장소 또는 이의 외관 또는 이를 유발하는 스트레스 요인으로부터 이름이 붙여지는 특정 형태의 아토피성 피부염 또한 본 개시내용에 따라 용어 "아토피성 피부염"에 포함된다. 이는 굴측성 습진, 연속종 습진, 사마귀 습진, 종두상 습진, 원판상 습진, 발한이상성 습진, 미생물성 습진, 화폐상 습진, 지루성 습진 및 기타 형태의 습진; 입주위 피부염 및 눈주위 피부염을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 아토피성 피부염은 빈번하게 발생하는 박테리아성 2차 감염 예컨대 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 감염으로 인한 것, 화농피부증 예컨대 접촉전염 농가진 및 이의 파생물, 뿐만 아니라 턱수염 모낭염 또는 바이러스성 2차 감염을 또한 포함한다. IL-13이 질환의 발병기전에서 수반되고, 중요한 생체내 유도인자이다. 예를 들어, 문헌 [Oh et al., J. Immunol. 186:7232-42 (2011)]; [Tazawa et al., Arch. Dermatol. Res. 295:459-464 (2004)]; [Metwally et al. Egypt J. Immunol. 11:171-7 (2004)]을 참조한다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "대상체" 또는 "환자"는 임의의 인간 또는 비-인간 동물을 포함하는 임의의 대상체, 특히 포유동물 대상체를 지칭한다. 용어 "비-인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어, 포유동물 및 비-포유동물, 예컨대 비-인간 영장류, 양, 개, 고양이, 말, 소, 곰, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다.
본 개시내용의 일부 측면에서, 대상체는 미경험 대상체이다. 미경험 대상체는 요법, 예를 들어, 치료제가 투여되지 않은 대상체이다. 일부 측면에서, 미경험 대상체는 IL-13-매개 질환 또는 장애, 예를 들어, 천식, IFP, COPD, AD, 또는 UC에 걸린 것으로 진단되기 전에 치료제로 치료되지 않았다. 또 다른 측면에서, 대상체에게 IL-13-매개 질환 또는 장애에 걸린 것으로 진단되기 전에 요법 및/또는 1회 이상의 용량의 치료제 (예를 들어, IL-13-매개 질환 또는 장애, 폐 질환 또는 장애, 만성 염증성 피부 질환 또는 장애 또는 염증성 장 질환 또는 장애와 연관된 염증 반응을 조정할 수 있는 치료제)가 제공되었다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "IL-13 길항제"는 시험관 내 또는 생체 내에서의 IL-13의 발현, 활성 또는 반감기, 또는 IL-13-매개 질환 또는 장애가 있는 대상체에서 IL-13에 의해 야기되거나 악화되는 증상, 병리 또는 후유증에 영향을 미칠 수 있는 임의의 작용제를 지칭한다. IL-13 길항제는 직접적으로 또는 간접적으로 IL-13 활성을 억제, 감소 또는 중화시킬 수 있거나, IL-13 발현을 억제 또는 감소시킬 수 있거나, IL-13 반감기를 감소시킬 수 있거나, 또는 IL-13으로 인한 증상의 악화를 방지할 수 있는, 하기 정의된 바와 같은 임의의 "치료제"일 수 있다. 특정 측면에서, IL-13 길항제는 항-IL-13 모노클로날 항체, 예를 들어, 트랄로키누맙 (서열식별번호: 3 및 4), 또는 전문이 본원에 참조로 포함된 미국 특허 출원 공개 번호 2012-0052060 (2012년 3월 1일 공개)에 기술된 기타 항-IL-13 모노클로날 항체이다. 다른 측면에서, IL-13 길항제는 (a) 항-인간-IL-13 항체, 예를 들어, 레브리키주맙(Lebrikizumab) (서열식별번호: 1 및 2) (MILR1444A / RG3637, 로슈(Roche)/제넨테크(Genentech)), ABT-308 (애보트(Abbott)), GSK679586 (글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline)) 또는 QAX576 (노바티스(Novartis)); (b) 항-인간-IL-13Rα1 항체, 예를 들어, 머크(Merck) MK6105; (c) IL-13-독소 접합체 예컨대 IL-13-PE38QQR (네오팜 인크(NeoPharm, Inc.)); (d) IL-4 뮤테인 애로반트(Aerovant)™ (애로반스 인크(Aerovance, Inc.)); (e) 항-IL-4Rα 항체 예컨대 듀필루맙(dupilumab)/REGN668 (리제네론(Regeneron)); (f) IL-4Rα에 대해 지시된 이중 가닥 올리고뉴클레오티드 예컨대 AIR645 (아이시스(Isis)); 또는 (g) IL-4 / IL-13 이중특이적 항체 예컨대 GSK2434735 (글락소스미스클라인)를 비제한적으로 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "치료제"는 원하는 효과, 일반적으로는 원하는 이로운 효과를 일으키도록 대상체에게 투여되는 임의의 치료적으로 활성인 물질을 지칭한다. 예를 들어, 용어 치료제는 항체 또는 이의 활성 단편, 펩티드, 지질, 단백질 약물, 단백질 접합체 약물, 효소, 올리고뉴클레오티드, 리보자임, 유전 물질, 프리온, 바이러스, 박테리아, 및 진핵생물 세포를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 통상적으로 소형 분자 약물 및 생물제제로 지칭되는 고전적인 저분자량 치료제를 포함한다. 치료제는 대상체에게 투여되었을 때 원하는 치료적으로 활성인 물질로 대사되는 전구약물일 수도 있다. 일부 측면에서, 치료제는 예방제이다. 추가적으로, 치료제는 약학적으로 제형될 수 있다. 또한 치료제는 어떤 다른 형태의 에너지 예컨대 빛 또는 초음파 에너지에 의해 또는 전신 투여될 수 있는 다른 순환 분자에 의해 활성화되는 방사성 동위원소 또는 작용제일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "샘플"은 임의의 생물학적 체액 또는 조직, 예컨대 대상체로부터 수득된 전혈, 혈청, 근육, 타액을 포함한다. 샘플은 임의의 생물학적 체액 또는 조직, 예컨대 전혈, 혈청, 근육, 타액, 소변, 활액, 골수, 뇌척수액, 코 분비물, 가래, 양수, 기관지폐포 세척액, 폐 조직, 말초혈 단핵 세포, 총 백혈구, 림프절 세포, 지라 세포, 편도 세포, 또는 피부를 포함한다. 일부 구체적 측면에서, 이러한 샘플은 혈액 또는 이의 분획, 근육, 피부, 또는 이들의 조합물이다. 관련 분야에 공지된 임의의 수단으로 샘플을 수득할 수 있다.
본 개시내용의 방법 및 시스템을 적용하기 위해, 환자로부터의 샘플을 임의의 시점에 수득할 수 있다. 일부 경우에, 연속적인 샘플을 요법을 시작한 후 또는 요법을 중단한 후에 환자로부터 수득할 수 있다. 예를 들어, 건강관리 제공자 (예를 들어, 의사) 또는 건강관리 혜택 제공자가 샘플을 요청할 수 있고, 동일하거나 상이한 건강관리 제공자 (예를 들어, 간호사, 병원) 또는 임상 실험실이 샘플을 수득 및/또는 프로세싱할 수 있으며, 프로세싱 후, 결과가 또 다른 건강관리 제공자, 건강관리 혜택 제공자 또는 환자에게 전송될 수 있다. 유사하게, 하나 이상의 점수의 측정/결정, 점수 비교, 점수 평가, 및 치료 결정이 하나 이상의 건강관리 제공자, 건강관리 혜택 제공자, 및/또는 임상 실험실에 의해 수행될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "건강관리 제공자"는 직접적으로 생존 대상체, 예를 들어, 인간 환자와 상호작용하고 이에게 투여하는 개체 또는 기관을 지칭한다. 건강관리 제공자의 비제한적인 예는 의사, 간호사, 기술자, 치료사, 약사, 상담사, 대체 의학 종사자, 의료 시설, 의원, 병원, 응급실, 진료소, 응급 치료 센터, 대체 의학 진료소/시설, 및 일반 의료 유형, 전문 의료 유형, 수술 유형 및/또는 임의의 다른 유형의 치료, 평가, 유지, 요법, 투약 및/또는 권고를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 환자의 모든 건강 상태 또는 이의 임의의 일부분에 관련된 일반적 및/또는 전문적 치료, 평가, 유지, 요법, 투약, 및/또는 권고를 제공하는 임의의 기타 실체를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "임상 실험실"은 생존 대상체, 예를 들어, 인간으로부터 유래된 물질의 검사 또는 프로세싱을 위한 시설을 지칭한다. 프로세싱의 비제한적인 예는, 예를 들어, 생존 대상체, 예를 들어, 인간의 임의의 질환 또는 손상의 진단, 예방, 또는 치료 또는 이의 건강의 평가를 위해 정보를 제공하는 것을 목적으로 하는 인체로부터 유래된 물질의 생물학적, 생화학적, 혈청학적, 화학적, 면역혈액학적, 혈액학적, 생물물리학적, 세포학적, 병리학적, 유전학적, 또는 기타 검사를 포함한다. 이러한 검사는 샘플을 수집하거나 또는 다른 방식으로 수득하거나, 제조하거나, 생존 대상체, 예를 들어, 인간의 신체, 또는 생존 대상체, 예를 들어, 인간의 신체로부터 수득된 샘플 내의 다양한 물질의 존재 또는 부재를 결정하거나, 측정하거나 또는 다른 방식으로 기술하는 절차를 또한 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "건강관리 혜택 제공자"는 하나 이상의 건강관리 혜택, 혜택 계획, 건강 보험, 및/또는 건강관리 비용 계산 프로그램을 제공하거나, 제시하거나, 제안하거나, 전제적으로 또는 부분적으로 지불하거나, 또는 환자가 이에 접하게 하는 것에 다른 방식으로 연관되는 개별적인 단체, 조직, 또는 그룹을 포함한다.
일부 측면에서, 건강관리 제공자는 DPP-4를 측정하기 위해 본원에서 개시된 면역검정법 또는 키트 중 임의의 것을 투여할 수 있거나 또는 또 다른 건강관리 제공자에게 이를 투여 또는 사용하도록 지시할 수 있다. 건강관리 제공자는 하기 행동을 실시할 수 있거나 또 다른 건강관리 제공자 또는 환자에게 하기 행동을 수행하도록 지시할 수 있다: 샘플을 수득함, 샘플을 프로세싱함, 샘플을 제출함, 샘플을 수신함, 샘플을 전달함, 샘플을 분석 또는 측정함, 샘플을 정량함, 샘플을 분석/측정/정량한 후 수득된 결과를 제공함, 샘플을 분석/측정/정량한 후 수득된 결과를 수신함, 하나 이상의 샘플을 분석/측정/정량한 후 수득된 결과를 비교/채점함, 하나 이상의 샘플로부터의 비교/점수를 제공함, 하나 이상의 샘플로부터의 비교/점수를 수득함, 요법 (예를 들어, IL-13-매개 질환 또는 장애 예컨대 천식, IPF, COPD, AD, 또는 UC를 치료하는 치료제)을 투여함, 요법 투여를 시작함, 요법 투여를 중지함, 요법 투여를 계속함, 요법 투여를 일시적으로 중단함, 투여되는 치료제의 양을 증가시킴, 치투여되는 치료제의 양을 감소시킴, 일정량의 치료제를 계속 투여함, 치료제의 투여 빈도를 증가시킴, 치료제의 투여 빈도를 감소시킴, 치료제에서 동일한 투약 빈도를 유지함, 요법 또는 치료제를 적어도 또 다른 요법 또는 치료제로 교체함, 요법 또는 치료제를 적어도 또 다른 요법 또는 추가 치료제와 조합함.
일부 측면에서, 건강관리 혜택 제공자는, 예를 들어, 샘플 수집, 샘플 프로세싱, 샘플 제출, 샘플 수신, 샘플 전달, 샘플 분석 또는 측정, 샘플 정량, 샘플을 분석/측정/정량한 후 수득된 결과의 제공, 샘플을 분석/측정/정량한 후 수득된 결과의 전달, 하나 이상의 샘플을 분석/측정/정량한 후 수득된 결과의 비교/채점, 하나 이상의 샘플로부터의 비교/점수의 전달, 요법 또는 치료제 투여, 요법 또는 치료제 투여의 시작, 요법 또는 치료제 투여의 중지, 요법 또는 치료제의 계속적인 투여, 요법 또는 치료제 투여의 일시적인 중단, 투여되는 치료제의 양의 증가, 투여되는 치료제의 양의 감소, 일정량의 치료제의 계속적인 투여, 치료제의 투여 빈도의 증가, 치료제의 투여 빈도의 감소, 치료제에서의 동일한 투약 빈도의 유지, 요법 또는 치료제의 적어도 또 다른 요법 또는 치료제로의 교체, 요법 또는 치료제와 적어도 또 다른 요법 또는 추가 치료제의 조합을 허가하거나 또는 거부할 수 있다.
또한, 건강관리 혜택 제공자는, 예를 들어, 요법 처방의 허가 또는 거부, 요법에 대한 적용 범위의 허가 또는 거부, 요법의 비용에 대한 보상의 허가 또는 거부, 요법에 대한 적격성의 결정 또는 거부 등이 가능하다.
일부 측면에서, 임상 실험실은, 예를 들어, 샘플을 수집 또는 수득할 수 있거나, 샘플을 프로세싱할 수 있거나, 샘플을 제출할 수 있거나, 샘플을 수신할 수 있거나, 샘플을 전달할 수 있거나, 샘플을 분석 또는 측정할 수 있거나, 샘플을 정량할 수 있거나, 샘플을 분석/측정/정량한 후 수득된 결과를 제공할 수 있거나, 샘플을 분석/측정/정량한 후 수득된 결과를 수신할 수 있거나, 하나 이상의 샘플을 분석/측정/정량한 후 수득된 결과를 비교/채점할 수 있거나, 하나 이상의 샘플로부터의 비교/점수를 제공할 수 있거나, 하나 이상의 샘플로부터의 비교/점수를 수득할 수 있거나, 또는 기타 관련 활동을 할 수 있다.
바이오마커로서의 DPP -4
상승된 DPP-4 수준이 천식, COPD 및 AD 환자에서 관찰되었다 (예를 들어, 각각 전문이 본원에서 참조로 포함된 미국 가출원 번호 61/931,878 (2014년 1월 27일 출원); 및 미국 가출원 번호 61/990,932 (2014년 5월 9일 출원)를 참조한다). 추가적으로, 천식 환자의 2B상 임상 연구에서, 높은 혈청 DPP-4 수준이 IL-13 항체 길항제 (트랄로키누맙)로 치료된 환자에서의 개선된 반응률을 예측하여, DPP-4가 IL-13-매개 폐 질환 또는 장애 (예를 들어, 천식, IPF 또는 COPD) 또는 IL-13-매개 만성 염증성 피부 질환 또는 장애 (예를 들어, 아토피성 피부염)을 포함하는 IL-13-매개 질환 또는 장애에 대한 예측적 바이오마커로서 확인되었다. 각각 전문이 본원에서 참조로 포함된 문헌 [Brightling et al., Am J Respir Crit Care Med 189:A6670 (2014)]; 및 미국 가출원 번호 61/931,878 (2014년 1월 27일 출원); 및 미국 가출원 번호 61/990,932 (2014년 5월 9일 출원)를 참조한다.
따라서, 천식, IPF, COPD, AD 및 UC, 뿐만 아니라 기타 염증성 질환, 폐 질환 또는 장애, 또는 만성 염증성 피부 질환 또는 장애가 있는 환자에서의 상승된 DPP-4 수준을 IL-13 활성을 중화시키는 요법을 포함하지만 이에 제한되지 않는 특정 요법이 이로울 수 있는 환자를 확인하는데 사용할 수 있다. 환자 내의 DPP-4 수준을 측정하는데 유용한, 항-DPP-4 항체 및 본원에 개시된 항-DPP4 항체를 사용하는 면역검정법 및 키트가 제공된다.
항- DPP -4 항체
본 개시내용은 단리된 항-DPP-4 항체 및 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 특정 측면에서, 본원에서 제공되는 항-DPP-4 항체 및 항원-결합 단편은 인간 DPP-4에 결합할 수 있다.
특히, 본 개시내용은 인간 DPP-4에 결합하는 2개의 마우스 모노클로날 항체 및 2개의 래트 모노클로날 항체를 제공한다. 이러한 항체들은 표준 하이브리도마 기술에 의해 생산되었고, 이러한 항체들을 생산하는 하이브리도마들이 부다페스트 조약 하에 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (버지니아주 머내서스)에 2015년 1월 8일에 기탁되었다. 마우스 항-DPP-4 항체는 본원에서 m3B7.6 및 m5B7.7로 지칭되고, 래트 항-DPP-4 항체는 본원에서 R11A2.15 및 R11A9.11로 지칭된다. 이러한 항체들의 항원-결합 단편, 변이체, 및/또는 유도체가 또한 제공된다. 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15, 및 R11A9.11 중 하나 이상을 경쟁적으로 억제할 수 있다는 점에서 이러한 항체들과 관련되는 항체가 또한 제공된다. 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6은 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (버지니아주 머내서스) (ATCC)에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산되고, 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7은 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산되고, 래트 모노클로날 항체 R11A2.15는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산되며, 래트 모노클로날 항체 R11A9.11은 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된다.
특정 측면에서, 항체가 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11와 동일한 DPP-4 에피토프에 결합하는, 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체가 제공된다.
특정 측면에서, 항체가 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11가 DPP-4, 예를 들어, 인간 DPP-4에 결합하는 것을 경쟁적으로 억제하는, 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체가 제공된다. 예를 들어, 모노클로날 항체 m3B7.6 및 m5B7.7이 인간 DPP-4에 결합하는 것에 대해 서로를 경쟁적으로 억제할 수 있고, 모노클로날 항체 R11A9.11 및 R11A2.15가 인간 DPP-4에 결합하는 것에 대해 서로를 경쟁적으로 억제할 수 있다.
특정 측면에서, 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) VHCDR1, VHCDR2 및 VHCDR3이 있는 중쇄 가변 도메인 (VH), 및 3개의 경쇄 CDR VLCDR1, VLCDR2, 및 VLCDR3이 있는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하고, 여기서 단리된 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체의 CDR이 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 CDR과 동일한, 단리된 항-DPP-4 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체가 제공된다.
특정 측면에서, 항체가 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 VH 및 VL과 동일한 VH 및 VL을 포함하는, 단리된 항-DPP-4 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체가 제공된다.
관련 분야의 통상의 기술자는, 하나 이상의 기탁된 하이브리도마로부터 하나 이상의 항체를 수득할 때, 과도한 실험 없이, 발현된 항체를 단리, 클로닝 및 시퀀싱하여 VH, VL, 및 CDR 영역을 결정할 수 있다.
특정 측면에서, 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 121870 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121871 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121872 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121873 하에 기탁된 하이브리도마, 또는 이들의 조합물을 포함하는 하이브리도마가 제공된다.
특정 측면에서, 본원에서 제공되는 바와 같은 항-DPP-4 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 발현시키는데 사용될 수 있는 항체-생산 세포 배양물이 제공된다. 특정 측면에서, 세포 배양물은 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 121870 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121871 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121872 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121873 하에 기탁된 하이브리도마, 또는 이들의 조합물을 포함한다.
본 개시내용이 제공하는 임의의 항-DPP-4 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체는 추가적인 폴리펩티드, 예를 들어, 분비를 지시하는 신호 펩티드를 추가로 포함할 수 있다. 추가적으로, 본 개시내용이 제공하는 항-DPP-4 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체는, 본원에 기술된 바와 같이, 예를 들어, 융합 폴리펩티드, Fab 단편, scFv, 또는 기타 유도체일 수 있다.
특정 측면에서, 본 개시내용이 제공하는 항-DPP-4 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체는 융합 단백질의 일부일 수 있고, 즉, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 이종 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같은 용어 "이종 폴리펩티드"는 폴리펩티드가 항-DPP-4 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체와 상이한 물체로부터 유래된다는 것을 의미한다. 비제한적인 예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체에 융합될 "이종 폴리펩티드"는 동일한 종의 비-면역글로불린 폴리펩티드, 또는 면역글로불린 또는 비-면역글로불린 이종 폴리펩티드로부터 유래될 수 있다. 일부 측면에서, 이종 폴리펩티드는, 예를 들어, 안정화 폴리펩티드, 태그, 표지, 또는 이들의 조합물일 수 있다.
특정 측면에서, 본 개시내용이 제공하는 항-DPP-4 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체는 정상적으로는 항체와 회합되지 않는 이종 아미노산 서열 또는 하나 이상의 다른 모이어티 (예를 들어, 펩티드, 단백질, 효소, 지질, 이종 항체 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체, 검출가능한 표지, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 또는 임의의 상기 작용제 중 2개 이상의 조합물)를 포함할 수 있다. 추가 측면에서, 본 개시내용이 제공하는 항-DPP-4 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체는 효소, 형광 표지, 화학발광 표지, 생물발광 표지, 방사성 표지, 또는 임의의 상기 검출가능한 표지 중 2개 이상의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된 검출가능한 표지를 포함할 수 있다. 특정 측면에서, 검출가능한 표지는 비오틴이고, 이는 효소, 예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP)에 예를 들어 접합된 스트렙타비딘과 상호작용할 수 있다. 특정 측면에서, 검출가능한 표지는 루테늄 킬레이트이고, 이는 전류에 노출되면 빛을 방출할 수 있다. 기타 검출가능한 표지가 관련 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다.
하나 이상의 상기 언급된 바와 같은 항-DPP-4 항체 또는 단편을 포함하는 조성물이 본원에서 또한 제공된다. 특정 측면에서, 조성물은 본원의 다른 곳에서 기술된 바와 같은 "포착" 항체 및 "검출" 항체를 포함한다. 본원에서 제공된 바와 같은 조성물은 비제한적으로 완충제, 담체, 및 보존제를 포함할 수 있다. 보존제, 안정화제, 완충제, 항산화제 및/또는 기타 첨가물은 완충제 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 기타 유기 산; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제 예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥사놀; 3'-펜타놀; 및 m-크레솔; 저분자량 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물; 킬레이팅제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스, 또는 소르비톨; 염-형성 카운터 이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물 (예를 들어 Zn-단백질 착물); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN)™, 플루로닉(PLURONIC)™, 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함할 수 있다. 본원에서 제공된 바와 같은 조성물은 단일 바이알 또는 저장소에서 혼합될 수 있거나, 또는 2개 이상의 바이알 또는 저장소에서, 또는 본원의 다른 곳에서 기술된 바와 같은 키트의 일부분으로서 제공될 수 있다.
폴리뉴클레오티드
본 개시내용은 임의의 본원에서 제공되는 항-DPP-4 항체 또는 이의 서브유닛 (예를 들어, 중쇄 또는 경쇄), 단편, 변이체 또는 유도체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 특정 측면에서, 본원에서 제공되는 항-DPP-4 항체 또는 이의 서브유닛 (예를 들어, 중쇄 또는 경쇄), 단편, 변이체 또는 유도체를 단독으로 또는 총괄적으로 코딩하는, 단리된 폴리뉴클레오티드, 또는 2개 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드 조성물이 제공된다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 항체가 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) VHCDR1, VHCDR2 및 VHCDR3이 있는 중쇄 가변 도메인 (VH), 및 3개의 경쇄 CDR VLCDR1, VLCDR2, 및 VLCDR3이 있는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하고, 여기서 단리된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체의 CDR이 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 CDR과 동일한, 항-DPP-4 항체 또는 이의 서브유닛 (예를 들어, 중쇄 또는 경쇄), 단편, 변이체 또는 유도체를 코딩하는 핵산을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 개시내용은 항체가 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 VH 및 VL과 동일한 VH 및 VL을 포함하는, 항-DPP-4 항체 또는 이의 서브유닛 (예를 들어, 중쇄 또는 경쇄), 단편, 변이체 또는 유도체를 코딩하는 핵산을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 또한 제공한다.
본 개시내용은 본원에서 제공되는 항-DPP-4 항체 또는 이의 서브유닛 (예를 들어, 중쇄 또는 경쇄), 단편, 변이체 또는 유도체를 단독으로 또는 총괄적으로 코딩하는 2개 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 조성물을 추가로 제공한다.
특정 측면에서, 본원에서 제공되는 항-DPP-4 항체 또는 이의 서브유닛 (예를 들어, 중쇄 또는 경쇄), 단편, 변이체 또는 유도체의 디스플레이, 스크리닝, 단리, 클로닝 및/또는 발현을 용이하게 하는 벡터, 또는 2개 이상의 벡터가 제공된다. 특정 측면에서, 벡터 또는 벡터들은 발현 벡터이다.
특정 측면에서, 폴리뉴클레오티드 조성물의 2개 이상의 핵산 분자는 동일한 벡터 내에 위치할 수 있다. 특정 측면에서, 폴리뉴클레오티드 조성물의 2개 이상의 핵산 분자는 적어도 2개의 별개의 벡터 내에 위치할 수 있다.
본원에서 제공되는 항-DPP-4 항체 또는 이의 서브유닛 (예를 들어, 중쇄 또는 경쇄), 단편, 변이체 또는 유도체를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드(들)를 발현하도록 발현 벡터가 사용된다. 재조합 발현 벡터는 포유동물, 미생물, 바이러스 또는 곤충 유전자로부터 유래된 적절한 전사 또는 번역 조절 요소에 작동가능하게 연결된, 수송체 분자의 폴리펩티드 쇄를 코딩하는 합성 또는 cDNA-유래 DNA 단편이 있는 복제가능한 DNA 구축물이다. 전사 단위는, 하기에 상세하게 기술된 바와 같이, (1) 유전자 발현에서 조절 역할이 있는 유전 요소 또는 요소들, 예를 들어, 전사 프로모터 또는 인핸서, (2) mRNA로 전사되고 단백질로 번역되는 구조 또는 코딩 서열, 및 (3) 적합한 전사 및 번역 개시 및 종결 서열의 어셈블리를 일반적으로 포함한다. 이같은 조절 요소는 전사를 제어하게 위한 오퍼레이터 서열을 포함할 수 있다. 숙주에서 복제되는 능력 (일반적으로 복제 기원에 의해 부여됨), 및 형질전환체의 인식을 용이하게 하기 위한 선별 유전자가 추가적으로 혼입될 수 있다.
특정 측면에서, 프로모터에 작동가능하게 회합된 핵산 분자, 또는 2개 이상의 동일하거나 상이할 수 있는 프로모터에 작동가능하게 회합된 2개 이상의 핵산 분자를 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오티드, 또는 2개 이상의 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 조성물이 제공된다.
서로 기능적으로 관련될 때 핵산 영역들이 "작동가능하게 회합"된다. 예를 들어, 신호 펩티드 (분비 리더)에 대한 DNA가 폴리펩티드의 분비에 참여하는 전구체로서 발현되면 신호 펩티드 (분비 리더)에 대한 DNA가 이러한 폴리펩티드에 대한 DNA와 작동가능하게 회합되거나, 프로모터가 코딩 서열의 전사를 제어하면 프로모터가 이러한 서열과 작동가능하게 회합되거나, 리보솜 결합 부위가 번역을 허용하도록 배치되면 리보솜 결합 부위가 코딩 서열과 작동가능하게 회합된다.
발현 제어 서열 및 발현 벡터의 선택은 숙주 선택에 좌우될 것이다. 광범위한 발현 숙주/벡터 조합을 이용할 수 있다. 진핵생물 숙주에 대한 유용한 발현 벡터는, 예를 들어, SV40, 소 유두종 바이러스, 아데노바이러스 및 사이토메갈로바이러스로부터의 발현 제어 서열을 포함하는 벡터를 포함한다. 박테리아 숙주에 대한 유용한 발현 벡터는 공지된 박테리아 플라스미드, 예컨대 pCR 1, pBR322, pMB9 및 이들의 유도체를 포함하는 이. 콜라이(E. coli)로부터의 플라스미드, 더 넓은 숙주 범위의 플라스미드, 예컨대 M13 및 필라멘트형 단일 가닥 DNA 파지를 포함한다.
특정 측면에서, 본원에서 제공된 바와 같은 폴리뉴클레오티드를 포함하는 단리된 숙주 세포가 제공된다. 특정 측면에서, 본원에서 제공되는 폴리뉴클레오티드 조성물의 2개 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 단리된 숙주 세포가 제공된다.
본원에서 제공되는 수송체 분자의 발현을 위한 적절한 숙주 세포는 적합한 프로모터의 제어 하의 원핵생물, 효모, 곤충 또는 고급 진핵생물 세포를 포함한다. 원핵생물은 그람 음성 또는 그람 양성 생물, 예를 들어 이. 콜라이 또는 바실루스(bacillus)를 포함한다. 고급 진핵생물 세포는 하기 기술된 바와 같은 포유동물 기원의 확립된 세포주를 포함한다. 무세포 번역 시스템을 또한 사용할 수 있다. 항체 생산을 포함하여 단백질을 생산하는 방법에 관한 추가적인 정보를, 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 2008/0187954, 미국 특허 번호 6,413,746 및 6,660,501, 및 국제 특허 공개 번호 WO 04009823에서 확인할 수 있고, 이들 각각은 이에 의해 전문이 본원에 참조로 포함된다.
다양한 포유동물 또는 곤충 세포 배양 시스템을 본원에서 제공되는 항-DPP-4 항체 또는 이의 서브유닛 (예를 들어, 중쇄 또는 경쇄), 단편, 변이체 또는 유도체를 발현시키는데 또한 사용할 수 있다. 적절한 포유동물 숙주 세포주의 예는 HEK-293 및 HEK-293T, 문헌 [Gluzman, Cell 23:175, 1981]에 기술된 원숭이 신장 세포의 COS-7 세포주, 및 예를 들어 L 세포, C127, 3T3, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO), NS0, HeLa 및 BHK 세포주를 포함하는 기타 세포주를 포함한다. 포유동물 발현 벡터는 비-전사 요소 예컨대 복제 기원, 발현될 유전자와 작동가능하게 회합된 적절한 프로모터 및 인핸서, 및 기타 5' 또는 3' 측면의 비-전사 서열, 및 5' 또는 3' 비-번역 서열, 예컨대 리보솜 결합 부위, 폴리아데닐화 부위, 스플라이스 도너 및 어셉터 부위, 및 전사 종결 서열을 포함할 수 있다. 곤충 세포에서의 이종 단백질 생산을 위한 배큘로바이러스 시스템이 문헌 [Luckow and Summers, BioTechnology 6:47 (1988)]에서 검토된다.
본원에서 제공되는 숙주 세포는 (a) 숙주 세포를 배양하는 단계 및 (b) 숙주 세포로부터 발현된 항체, 단편, 또는 서브유닛을 단리하는 단계를 포함하는, 본원에서 제공되는 항-DPP-4 항체 또는 이의 서브유닛 (예를 들어, 중쇄 또는 경쇄), 단편, 변이체 또는 유도체를 제조하는 방법에서 사용될 수 있다.
DPP -4 수준을 검출하기 위한 검정법
본 개시내용은 인간 DPP-4 상의 독특한 에피토프를 인식하는 적어도 하나, 예를 들어, 적어도 2개의 항-DPP-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용하는 면역검정법을 사용하여 샘플을 검정하는 것을 포함하는, 대상체로부터 수득된 샘플 내의 DPP-4 수준을 측정하는 방법을 제공한다. 이러한 방법에서 사용하기 위한 예시적인 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11, 및/또는 본원에 기술된 바와 같은 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체 중 하나 이상을 포함한다.
이러한 방법은 대상체로부터 수득된 샘플 내의 DPP-4의 검출을 위한 특이적으로 민감한 면역검정법의 사용을 수반한다. 적어도 하나, 예를 들어, 적어도 2개의 본원에서 제공되는 항-DPP-4 항체, 예를 들어, ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11, 및/또는 본원에서 기술된 바와 같은 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를 이용하는 면역검정법에서 샘플을 검정한다.
예를 들어, 본 개시내용은 인간 DPP-4 상의 독특한 에피토프를 인식하는 적어도 하나, 예를 들어, 적어도 2개의 항-DPP-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를 이용하는 면역검정법에서 샘플을 검정하는 것을 포함하는, 대상체로부터 수득된 샘플 내의 DPP-4 수준을 측정하는 방법을 제공한다. 한 측면에서, 적어도 2개의 항-DPP-4 항체 중 하나는 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7과 동일한 DPP-4 에피토프에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를 포함하고, 적어도 2개의 항-DPP-4 항체 중 하나는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11과 동일한 DPP-4 에피토프에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를 포함한다.
또 다른 측면에서, 적어도 2개의 항-DPP-4 항체 중 하나는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7이 DPP-4에 결합하는 것을 경쟁적으로 억제하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를 포함하고, 적어도 2개의 항-DPP-4 항체 중 하나는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11이 DPP-4에 결합하는 것을 경쟁적으로 억제하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를 포함한다.
또 다른 측면에서, 2개 이상의 항-DPP-4 항체 중 하나는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) VHCDR1, VHCDR2 및 VHCDR3이 있는 중쇄 가변 도메인 (VH), 및 3개의 경쇄 CDR VLCDR1, VLCDR2, 및 VLCDR3이 있는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하고, 여기서 단리된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체의 CDR이 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7의 CDR과 동일한 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 2개 이상의 항-DPP-4 항체 중 하나는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) VHCDR1, VHCDR2 및 VHCDR3이 있는 중쇄 가변 도메인 (VH), 및 3개의 경쇄 CDR VLCDR1, VLCDR2, 및 VLCDR3이 있는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하고, 여기서 단리된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체의 CDR이 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 CDR과 동일한 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다.
또 다른 측면에서, 2개 이상의 항-DPP-4 항체 중 하나는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7의 VH 및 VL과 동일한 VH 및 VL을 포함하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 2개 이상의 항-DPP-4 항체 중 하나는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 VH 및 VL과 동일한 VH 및 VL을 포함하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다.
이러한 항체 또는 이의 단편 중 임의의 것이 하나 이상의 이종 폴리펩티드, 예를 들어, 안정화 폴리펩티드, 태그, 표지, 또는 이들의 조합물에 융합될 수 있거나, 또는 이종 모이어티, 예를 들어, 펩티드, 단백질, 효소, 지질, 이종 항체 또는 이의 단편, 검출가능한 표지, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 또는 임의의 이러한 작용제 중 2개 이상의 조합물에 접합될 수 있다. 특정 측면에서, 항체는 검출가능한 표지 예컨대 비오틴 또는 루테늄 킬레이트를 포함한다. 다른 검출가능한 표지가 관련 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고, 본 개시내용에 포함된다.
특정 측면에서, 면역검정법은 제1 항-DPP-4 "포착" 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 고체 지지체에 부착하고, 샘플 또는 표준물로부터의 항원을 포착 항체에 결합하게 한 후, 제2 항-DPP-4 "검출" 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 첨가하고, 이를 효소 반응, 전기화학발광 반응, 방사성, 또는 기타 검출 방법으로 검출하는 샌드위치 면역검정법, 예를 들어, 효소-결합 면역흡착 검정법 (ELISA) 또는 샌드위치 전기화학발광 (ECL) 검정법을 포함한다.
특정 측면에서, 면역검정법은 하기를 포함한다: 먼저, 포착 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 고체 지지체, 예를 들어, 관련 분야의 통상의 기술자에게 공지된 멀티-웰 플레이트 또는 기타 검정법 장치에 결합하게 한다. 일정 기간 동안, 예를 들어, 철야로 포착 항체가 부착되게 한 후, 미결합 항체를 제거한다. 그 후, 임의의 미결합 포착 항체를 제거하도록 플레이트를 세정할 수 있다. 그 후, 비-특이적 단백질이 고체 지지체의 임의의 미결합 영역에 결합하게 하도록 플레이트를 차단 용액으로 처리할 수 있다. 전형적인 차단 용액은 관련되지 않은 단백질, 예를 들어, 탈지 분유 또는 혈청 알부민을 포함한다. 그 후, 임의의 미결합 차단 용액을 제거하도록 플레이트를 다시 세정할 수 있다. 다음으로, DPP-4를 함유할 것으로 추정되는 샘플을 플레이트에 첨가한다. 전형적으로는 샘플을 단계 희석하고, 이중 또는 삼중으로 플레이팅한다. 표준량의 DPP-4 또는 이의 적절한 단편을 포함하는 대조군 및 다양한 음성 대조군이 또한 포함된다. 일정 기간, 예를 들어, 1시간 동안 실온에서 항원이 포착 항체에 결합하게 한다. 인큐베이션 후, 임의의 미결합 항원을 제거하도록 플레이트를 세정할 수 있다.
다음으로, 검출 항체를 첨가한다. 전형적으로 검출 항체는 포착 항체와 상이한 DPP-4 에피토프에 결합하는 항-DPP-4 항체이다. 검출 항체는 표지되거나 또는 표지되지 않을 수 있다. 검출 항체가 표지되지 않은 경우, 관련 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 바와 같이, 표지된 2차 항체를 검출에 사용할 수 있다. 검출 항체는 효소, 예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시다제 또는 알칼리성 포스파타제로 직접적으로 표지될 수 있거나, 또는 효소가 결합하게 할 태그로 표지될 수 있다. 예를 들어, 검출 항체가 비오틴에 접합될 수 있고, 효소에 접합된 스트렙타비딘이 비오틴 태그에 결합하게 함으로써 후속 단계에서 효소가 부착될 수 있다. 대안적으로, 검출 항체가 화학발광, 형광, 또는 전기화학발광 태그에 접합될 수 있다. 후자의 예는 루테늄 킬레이트이다. 인큐베이션 후, 임의의 미결합 검출 항체를 제거하도록 플레이트를 세정할 수 있다.
검출 항체의 검출은 사용되는 검출 항체의 유형을 기초로 달라질 방법에 의해 달성된다. 검출 항체에 비오틴 태그가 부착되었으면, 효소에 접합된 스트렙타비딘을 첨가하고, 미결합 스트렙타비딘을 세정으로 제거하고, 비색 반응을 제공하는 기질을 첨가하고, 예를 들어 분광광도계에서, 이러한 반응을 판독할 수 있다. 검출 항체가 루테늄 킬레이트에 접합되었으면, 플레이트에 전류를 적용하고, 빛 방출을 측정한다.
특정 측면에서, 방법은 환자 샘플 내의 DPP-4 수준을 직접적으로 측정하고, 여기서 예를 들어 정제된 전장 DPP-4 또는 DPP-4 단편을 사용하여 표준 곡선 상에 면역검정법 결과를 플롯팅함으로써 절대 수준을 계산한다. 그 후, 검출 항체로부터의 검출된 신호를 플레이트 내에 포함된 다양한 표준물 및 대조군을 기초로 정량할 수 있다. 표준 곡선 상에 결과를 플롯팅함으로써, 예를 들어 ng/mL 또는 pg DPP-4/mL 단백질로, 테스트 샘플 내의 DPP-4의 절대적인 수준 또는 양을 계산할 수 있다.
본원에서 제공되는 면역검정법 및 방법의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다. 본원에서 제공되는 면역검정법 및 방법의 특정 측면에서, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다.
본원에서 제공되는 면역검정법 및 방법의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다. 본원에서 제공되는 면역검정법 및 방법의 특정 측면에서, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다.
본원에서 제공되는 면역검정법 및 방법의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다. 본원에서 제공되는 면역검정법 및 방법의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다.
본원에서 제공되는 면역검정법 및 방법의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다. 본원에서 제공되는 면역검정법 및 방법의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다.
본원에서 제공되는 면역검정법 및 방법의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다. 본원에서 제공되는 면역검정법 및 방법의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다.
본원에서 제공되는 면역검정법 및 방법의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다. 본원에서 제공되는 면역검정법 및 방법의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다.
다양한 대상체 샘플을 본원에서 제시되는 방법에서 사용할 수 있다. 샘플의 예시적이고 비제한적인 예는 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 가래, 코 용종, 코 점액, 기관지폐포 세척액, 피부 세포 또는 폐 조직, 예를 들어, 폐 상피 세포 중 하나 이상을 포함한다. 구체적 측면에서, 샘플은 혈청 샘플, 피부 세포 또는 폐 조직이다.
특정 측면에서, 본원에 개시된 방법은 대상체에게 DPP-4 검정법의 결과 및/또는 적어도 부분적으로 DPP-4 수준을 기초로 하는 진단의 결과를 통지하는 것을 포함한다. 구두로, 서면으로, 및/또는 전자적으로 환자에게 통지할 수 있다. 이러한 진단은 환자의 의료 기록에 기록될 수도 있다.
용어 "의료 기록" 또는 "환자의 의료 기록"은 하기 중 하나 이상을 전형적으로 포함하는 환자의 검사 및/또는 치료의 보고서를 지칭한다: 환자의 병력 및 호소 증상, 의사의 진찰 소견, 진단 테스트 및 절차의 결과, 및 환자의 투약 및 치료 절차. 의료 기록은 전형적으로 1명 이상의 의사 및/또는 의사의 보조자에 의해 작성되고, 이는 의료 관리를 필요로 하는 다양한 질병 또는 손상, 및/또는 접종, 및/또는 알레르기, 및/또는 치료, 및/또는 예후, 및/또는 빈번하게 부모, 형제자매 및/또는 직업에 관한 건강 정보가 기재되거나, 처방되거나 또는 다른 방식으로 기록된 기록 및/또는 이력이다. 일부 경우에, 기록은 상태 진단 시에 의사가 리뷰할 수 있다.
의료 기록은 종이 형태일 수 있고/있거나 컴퓨터 판독가능 매체에서 유지될 수 있다. 의료 기록은 실험실, 의원, 병원, 건강관리 유지 기구, 보험 회사, 및/또는 개인 의료 기록 웹사이트에 의해 유지될 수 있다. 일부 측면에서, DPP-4 수준을 적어도 부분적으로 기초로 하는 진단이 의료 경보 물품 예컨대 카드, 착용품, 및/또는 무선주파수 확인 (RFID) 태그에 기록된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "착용품"은 태그, 팔찌, 목걸이, 팔 밴드, 또는 머리 밴드를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 대상체의 신체에 착용될 수 있는 임의의 물품을 지칭한다.
특정 측면에서, 방법은 하나 이상의 추가적인 검정법을 지시 및/또는 수행하는 것을 수반할 수 있다. 예를 들어, DPP-4 수준이 정상 범위 내인 (즉, 상승되지 않은) 것으로 결정되면, 거짓 음성 결과를 배제하기 위해 DPP-4 검정법을 반복할 수 있고/있거나, 대상체의 상태를 모니터링하기 위해 하나 이상의 추가적인 DPP-4 검정법을 수행할 수 있다. DPP-4 수준이 상승된 것으로 결정되면, 거짓 양성 결과를 배제하기 위해 DPP-4 검정법을 반복하는 것이 바람직할 수 있다.
DPP -4 검출 방법, 검정법, 및 키트
본 개시내용은 샘플 내의 DPP-4 수준 또는 DPP-4의 양의 결정 또는 분석을 용이하게 하는 방법, 검정법 및 키트를 제공한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 방법, 검정법 및 키트는 대상체로부터의 샘플 내의 DPP-4 수준 또는 DPP-4의 양을 결정하기 위해 건강관리 제공자, 건강관리 혜택 제공자, 또는 임상 실험실에 의해 수행되거나 사용된다.
특정 측면에서, 예를 들어, "현장 진료(point of care)" 진단 키트로서 제형된 본원에서 기술된 바와 같은 면역검정법을 사용하여, 환자를 치료하는 건강관리 전문가에 의해, 환자로부터 수득된 샘플에 면역검정법이 수행된다. 일부 측면에서, 샘플이 환자로부터 수득되고, 예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 면역검정법을 사용하여, 건강관리 전문가의 지시에 따라 샘플 내의 DPP-4 수준을 측정하기 위해 제출되며, 예를 들어, 임상 실험실에 제출된다.
특정 측면에서, IL-13-매개 질환 또는 장애에 걸렸거나 또는 걸린 것으로 추정되는 환자는 폐 질환 또는 장애, 염증성 장 질환 또는 장애, 또는 만성 염증성 피부 병태로 진단되었다. 특정 측면에서, IL-13-매개 병리가 있거나 또는 있는 것으로 추정되는 질환 또는 장애는 천식, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 궤양성 결장염 (UC), 아토피성 피부염, 알레르기 비염, 또는 만성 코굴염이다.
본 개시내용은 본원에 개시된 바와 같은 면역검정법의 실행에서 사용하기 위한 키트를 또한 제공한다. 이같은 키트는 하나 이상의 항-DPP-4 항체를 예를 들어 포함하는, 방법에서 이용되는 다양한 시약 (예를 들어, 농축 형태) 중 하나 이상이 각각의 용기에 있는 용기들을 포함할 수 있다. 하나 이상의 항-DPP-4 항체, 예를 들어, 포착 항체가 고체 지지체에 이미 부착되어 제공될 수 있고, 하나 이상의 항체, 예를 들어, 검출 항체가 검출가능한 표지, 예를 들어, 비오틴 또는 루테늄 킬레이트에 이미 접합되어 제공될 수 있다. 키트는 검출가능한 표지를 항체에 커플링시키기 위한 시약 (뿐만 아니라 표지 자체), 완충제, 및/또는 본원에서 제공되는 검정법의 실행을 지원하는 시약 및 기구를 또한 제공할 수 있다. 특정 측면에서, 검출 항체에 결합하는 표지된 2차 항체가 제공된다. 본 개시내용에 따라 제공되는 키트는 본원에서 제공되는 검정법을 실행하는데 필요한 적절한 용기, 플레이트 및 임의의 다른 시약 또는 물질을 추가로 포함할 수 있다.
샘플 내의 DPP-4 수준을 측정하기 위한 키트는 하나 이상의 본원에서 제공되는 항-DPP-4 항체 또는 이의 단편, 예를 들어, 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11, 및/또는 또한 본원에서 기술된 바와 같은 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 관련 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함할 수 있다.
특정 측면에서, 본원에서 제공되는 바와 같은 키트는 2개의 단리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편인 포착 항체 및 검출 항체를 포함한다. 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다.
특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다.
본원에서 제공되는 키트의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다. 본원에서 제공되는 키트의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다.
본원에서 제공되는 키트의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다. 본원에서 제공되는 키트의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다.
본원에서 제공되는 키트의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다. 본원에서 제공되는 키트의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다.
본원에서 제공되는 키트의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다. 본원에서 제공되는 키트의 특정 측면에서, 포착 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이다.
특정 측면에서, 검출 항체는 검출가능하게 표지된다. 특정 측면에서, 검출가능한 표지는 비오틴이고, 검출 시약은 스트렙타비딘-양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP) 접합체 및 HRP에 대한 비색 기질을 포함한다. 특정 측면에서, 검출가능한 표지는 루테늄 킬레이트이다. 본원의 다른 곳에서 기술된 바와 같은 다른 항체, 표지 및 시약을 본원에서 제공되는 바와 같은 키트에서 또한 사용할 수 있다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 적어도 하나, 예를 들어, 적어도 2개의 항-DPP-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체, 예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은, 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 및/또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11, 또는 또한 본원에서 기술된 바와 같은, 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 관련 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 사용을 포함하는, 하나 이상의 샘플 내의 DPP-4 수준을 검출하기 위한 면역검정법을 제공한다.
특정 측면에서, 본원에서 제공되는 면역검정법은 고체 지지체에 부착된 제1 항-DPP-4 "포착" 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 제2 항-DPP-4 "검출" 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 샌드위치 면역검정법, 예를 들어, ELISA 검정법 또는 ECL 검정법이다. 이러한 면역검정법은 본원에서 제공되는 방법 또는 관련 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고 이해되는 방법에 의해 수행된다. 한 측면에서, 면역검정법은 포착 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 고체 지지체에 부착하는 단계; 테스트 샘플 또는 대조군 샘플을 적용하여, 샘플 내에 존재한다면 DPP-4가 포착 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체에 결합하게 하는 단계; 포착 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체에 이미 결합된 DPP-4에 결합할 수 있는 검출 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 적용하는 단계; 및 DPP-4에 결합된 검출 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체의 양을 측정하는 단계를 포함한다. 특정 측면에서, 검정법은 세정 단계, 차단 단계 및 인큐베이션 단계를 추가로 포함할 수 있다.
특정 측면에서, 검출 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체는 검출가능한 표지, 예를 들어, 비오틴 또는 루테늄 킬레이트를 추가로 포함한다.
본 개시내용의 특정 항체의 제조 및 본 개시내용의 항체를 사용하는 방법을 상세하게 기술하는 하기의 비제한적 실시예를 참조로 본 개시내용의 측면들이 추가로 정의될 수 있다. 물질 및 방법 양쪽 모두에 대한 다수의 변형이 본 개시내용의 범주를 벗어나지 않으면서 실행될 수 있다는 것이 관련 분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다.
실시예
실시예 1: 인간 DPP -4에 대해 특이적인 래트 및 마우스 모노클로날 항체의 생성 및 특성화
인간 DPP-4에 대해 특이적인 마우스 및 래트 모노클로날 항체를 하기 방법으로 생산하였다. 다중 부위에서의 반복적 면역화 (RIMMS) 프로토콜 (Kilpatrick, K., et al., Hybridoma 16:381-389 (2009))을 사용하여 동물을 면역화시켰다. 간략하게, 5마리의 Balb/c 마우스 및 2마리의 위스타 래트 (모두 4-6주령)에서, 각각의 투약일에 완전 프로인트 아주반트 (시그마(Sigma)) (1차 라운드의 경우이고, 후속 면역화에서는 불완전 프로인트 아주반트) 내에 혼합된 r-인간 DPP4-His (R&D 시스템즈 카탈로그 번호 1180)를 6개의 배면 부위에서, 타이터맥스(TiterMax) (시그마) 아주반트 내에 혼합된 항원을 6개의 복면 부위에서 피하 주사하였다. 총계로, 각각의 동물에게 도 1에 나타난 바와 같은 12개의 부위에서 주사를 제공하였다. 테스트 채혈물을 제13일에 수집하고, 사전-채혈물 및 면역화 혈청 양쪽 모두를 ELISA 플레이트에 결합된 DPP-4 (r-DPP-4-His, R&D 시스템즈 카탈로그 번호 1180) 및 음성 대조군 당단백질 130 (r-gp130-His)을 사용하여 직접 결합 ELISA에 의해 테스트하였다. 고-결합 ELISA 플레이트의 웰을 4℃에서 철야로 PBS 내의 r-인간 DPP-4-His 또는 gp130-His의 2 ㎍/mL 용액 50 ㎕로 코팅하였다. 그 후, 플레이트를 200 ㎕/웰의 세정 완충제 (PBS/0.1％ 트윈-20®)로 3회 세정하였다. 세정 후, 150 ㎕/웰의 차단 완충제 (PBS/3％ 탈지 분유/0.1％ 트윈-20®)를 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 그 후, 플레이트를 상기에 언급된 바와 같이 3회 세정하였다.
사전-혈청 및 테스트-혈청을 PBS, pH 7.2 완충제에서 최초의 1:100 희석에서 1:218,600의 최종 희석까지 단계 희석하였다. 50 ㎕의 각각의 희석된 샘플을 플레이트에 첨가하고, 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 상기에 언급된 바와 같이 3회 세정하였다. 세정 후, 50 ㎕의 검출 항체를 각각의 웰에 첨가하였다. 마우스 군의 경우, PBS에 1:8000 희석된 당나귀 항-마우스 (H+L):HRP (잭슨 이뮤노리서치(Jackson Immunoresearch), 카탈로그 번호 715-035-151)를 사용하였다. 래트 군의 경우, PBS에 1:8000 희석된 당나귀 항-래트(H+L):HRP (잭슨 이뮤노리서치, 카탈로그 번호 715-035-153)를 사용하였다. 플레이트를 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 그 후, 플레이트를 3회 세정하고, 실온으로 미리 가온된 50 ㎕/웰의 TMB 기질 (KPL, 카탈로그 번호 52-00-04)을 첨가하였다. 플레이트를 암실에서 10분 동안 실온에서 인큐베이션하고, 50 ㎕의 정지 용액 (1 M HCl)을 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 분광광도계에서 λ = 450 nm로 판독하였다.
DPP-4에 대한 사전-채혈물 및 면역화된 혈청 항체 역가가 도 2에서 제시된다. 제16일 및 제19일에, 견고한 혈청 역가를 나타내는 래트 및 마우스로부터 림프절을 수집하고, 하기와 같이 하이브리도마를 생성시켰다. 제19일에, 동물로부터 림프절을 수집하고, 림프구 세포를 림프 조직으로부터 추출하고, 70 ㎛ 세포 여과기로 여과하였다. 제조사의 권장 프로토콜을 사용하여 MACS, 스트렙타비딘 마이크로비드 (밀테니 바이오텍(Miltenyi Biotec) 카탈로그 # 130-048-101)를 사용함으로써 항원 특이적 B 세포를 단리하였다. 그 후, DPP4 특이적 B 세포를 PEG (로슈) 융합 방법에 따라 골수종 P3x/63Ag8.653 세포와 1:1 비로 융합시켰다. 융합된 세포를 1×HAT가 보충된 하이브리도마 성장 배지 (엑스-셀(Ex-Cell) 610 + 10％ 하이-FBS(Hi-FBS) + 1％ 페니실린-스트렙토마이신 + 1× BM-컨디메드 H1(BM-condimed H1) 하이브리도마 클로닝 보충물)에 2.5×104개의 B 세포/웰의 밀도로 시딩하였다. 융합 7일 후, HAT 함유 배지를 1×HT가 보충된 성장 배지로 교체하였다.
하이브리도마 상청액을 인간 DPP-4에 대한 항체 결합에 대해 스크리닝하고, 4개의 하이브리도마-생산 항체를 추가 조사를 위해 선택하였다: 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 (IgG1/κ), 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 (IgG1/κ), 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 (IgG2a/κ), 및 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 (IgG2a/κ). 이러한 4개의 모노클로날 항체를 발현하는 하이브리도마 세포주를 부다페스트 조약 하에 2015년 1월 8일에 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 PTA-121870 (m3B7.6), 수탁 번호 PTA-121871 (m5B7.7), 수탁 번호 PTA-121872 (R11A2.15), 및 수탁 번호 PTA-121873 (R11A9.11) 하에 기탁하였다.
실시예 2: DPP -4를 검출하기 위한 샌드위치 ELISA 검정법
물질 및 방법
A. HRP 검출 시스템을 이용하는 DPP-4 샌드위치 ELISA 프로토콜
HRP-기반 샌드위치 ELISA 검정법을 하기와 같이 수행하였다. 구체적 상세사항 예컨대 항-DPP-4 포착 항체, 테스트될 샘플, 및 항-DPP-4 검출 항체는 다양한 실시예에서 구체적 실험에 대해 언급된다. 표준 ELISA 프로토콜에 대한 변형이 관련 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고, 본 개시내용에 따라 사용될 수 있다.
고-결합 ELISA 플레이트를 항-DPP-4 포착 mAb, 예를 들어, m3B7.6 또는 m5B7.7 (PBS 내의 5 ㎍/mL; 50 ㎕L/웰)로 코팅하고, 4℃에서 철야로 인큐베이션하였다. 플레이트를 200 ㎕/웰 세정 완충제 (PBS/0.1％ 트윈-20®)로 3회 세정하였다. 세정 후, 150 ㎕/웰의 차단 완충제 (PBS/3％ 탈지 분유/0.1％ 트윈-20®)를 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 그 후, 플레이트를 상기에 언급된 바와 같이 3회 세정하였다.
표준 곡선을 위해, DPP-4 표준물 (예를 들어, R&D 시스템즈 카달로그 # 1180-SE로부터 입수가능한 표준물)을 PBS, pH 7.2 완충제 또는 1％ 정상 인간 혈청에서 단계 희석하였고, 예를 들어, 500 ng/mL에서 0.49 ng/ml까지 2배 희석하였다. 50 마이크로리터 (50 ㎕)의 각각의 표준물 또는 희석된 샘플을 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 또 다시, 플레이트를 상기 언급된 바와 같이 3회 세정하였다. 세정 후, 50 ㎕의 검출 mAb R11A2.15, R11A9.11 또는 222113.11 (2 ㎍/ml)을 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 또 다시, 플레이트를 상기 언급된 바와 같이 3회 세정하였다. 세정 후, PBS에 1:8000 희석된 50 ㎕의 당다귀 항-래트(H+L)-HRP 접합체 (잭슨 이뮤노리서치 카탈로그 # 712-035-153)를 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 또 다시, 플레이트를 상기 언급된 바와 같이 3회 세정하였다. 세정 후, 실온으로 미리 가온된 50 ㎕/웰의 TMB 기질 (KPL, 카탈로그 번호 52-00-04)을 첨가하고, 플레이트를 암실에서 10분 동안 실온에서 인큐베이션하고, 50 ㎕의 TMB 정지 용액 (1 M HCl)을 각각의 웰에 첨가하였다. 마지막으로, 플레이트를 분광광도계에서 λ = 450 nm로 판독하였다.
결과
마우스 m3B7.6 및 m5B7.7을 포착 항체로 사용한 결과가 각각 도 3a 및 도 3b에서 제시된다. 2개의 마우스 및 2개의 래트 mAb (mAb R11A2.15 또는 R11A9.11)가 검출 하한 (LLOD)이 유사한, 인간 CD26에 대한 4개의 상이한 검출제 쌍을 형성하고, 샌드위치 ELISA 검정법에서 인간 DPP-4를 측정하는 것에서 높은 민감도를 제공하였다. 대조적으로, 시판되는 래트 mAb (R222113) (인간 DPPIV/CD26 MAb (클론(Clone) 222113), R&D 시스템즈로부터의 래트 IgG2A 카탈로그 번호 MAB1180)는 2개의 마우스 mAb m3B7.6 및 m5B7.7과 쌍을 이루었을 때 샌드위치 ELISA 검정법에서 인간 DPP-4를 측정하는 것에서 더 적은 인간 CD26을 검출하였고 유의하게 덜 민감하였다. 도 3a-b를 참조한다. 이러한 결과들은 본원에서 제공되는 항체 (m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15 및 R11A9.11)가 시판되는 래트 항체 R222113과 비교하여 면역검정법에서 인간 CD26을 검출하는데 더 우수하다는 것을 실연한다. 또한, 본원에서 제공되는 항체 (m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15 및 R11A9.11)는 내인성 및 재조합 인간 CD26 양쪽 모두를 검출하여, 이들을 진단 시약으로서 유용하게 한다.
도 3에 나타난 바와 같이, m3B7.6 + R11A2.15, m3B7.6 + R11A9.11, m5B7.7 + R11A2.15 및/또는 m5B7.7 + R11A9.11이 샌드위치 ELISA 검정법에서 인간 DPP-4를 측정하는데 효과적이다. 또한, 쌍 선택과 관계없이, 연구에서의 DPP-4의 혈청 농도는 1-2 ㎍/ml이었다.
실시예 3: OCTET를 사용한 항- DPP -4 mAb 에피토프 비닝 (binning)
4개의 항-DPP-4 항체 (m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15 및 R11A9.11)에 대한 에피토프 비닝을 OCTET에 의해 수행하였다. 테스트 항체를 비오틴화하고, 5분 동안 200 ㎕/웰로 20 ㎍/ml 농도로 스트렙타비딘 바이오센서 상에서 포착한 후, 200 ㎕의 PBS 완충제로 1분 동안 세정하였다. 그 후, 바이오센서를 5분 동안 10 ㎍/mL의 재조합 인간 DPP4와 함께 인큐베이션하고, 200 ㎕의 PBS 완충제로 1분 동안 세정하였다. 경쟁자 항체를 20 ㎍/ml의 최종 농도로 테스트 항체와 1:1 비로 혼합하고, 5분 동안 200 ㎕로 바이오센서와 함께 인큐베이션하였다.
이러한 검정법의 개략도가 도 4a에서 제시되고, 4개의 상이한 항체 (m3B7.6, m5B7.7, R11A2.15 및 R11A9.11)를 테스트 항체로 한 결과가 도 4b-e에서 각각 제시된다. 결과는 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 및 m5B7.7이 서로 경쟁한다는 것과 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 및 R11A9.11이 서로 경쟁한다는 것을 실연하였다. 마우스 항체는 래트 항체와 경쟁하지 않고, 따라서 에피토프를 공유하지 않는다. 이러한 데이터를 기초로, 본 발명가들은 2개의 마우스 항체 (m3B7.6 및 m5B7.7)가 동일하거나 중첩되는 에피토프를 공유하는 한편, 2개의 래트 항체 (R11A2.15 및 R11A9.11)가 마우스 항체들이 공유하는 에피토프와 상이한 에피토프 또는 중첩 에피토프를 공유한다고 결론지었다.
***
구체적 측면들에 관한 상기 설명은 다른 이들이, 관련 분야의 기술 내의 지식을 적용하는 것에 의해, 본 개시내용의 일반적인 개념에서 벗어나지 않으면서 과도한 실험 없이 이같은 구체적 측면을 다양한 용도를 위해 쉽게 변형하고/하거나 개조할 수 있도록 본 개시내용의 일반적인 성질을 충분하게 나타낼 것이다. 따라서, 이같은 개조 및 변형은 본원에서 제시된 교시내용 및 지침을 기초로 하는 개시된 측면의 등가물의 의미 및 범위 내에 있는 것으로 의도된다. 본원에서의 문구 및 용어는 설명을 목적으로 하고 제한을 목적으로 하지 않아서, 본 명세서의 용어 또는 문구가 교시 내용 및 지침의 견지에서 통상의 기술자에 의해 해석되어야 한다는 것을 이해하여야 한다.
본 개시내용의 범위 및 영역은 상기 기술된 예시적인 측면 중 임의의 것에 의해 제한되지 않아야 하고, 하기의 특허청구범위 및 이의 등가물에 따라서만 규정되어야 한다.
본 명세서에서 인용된 모든 출판물, 특허, 특허 출원 및/또는 기타 문서는 각각의 개별적인 출판물, 특허, 특허 출원 및/또는 기타 문서가 모든 면에서 참조로 포함되는 것으로 개별적으로 지시되는 것과 동일한 정도로 모든 면에서 전문이 참조로 포함된다.
ATCC PTA-121870 20150108 ATCC PTA-121871 20150108 ATCC PTA-121872 20150108 ATCC PTA-121873 20150108
SEQUENCE LISTING <110> MEDIMMUNE LLC <120> ASSAY TO DETECT HUMAN DPP-4 <130> DPP4-100P1 <140> <141> <160> 7 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 445 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(445) <223> Lebrikizumab Heavy chain <400> 1 Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ala Tyr 20 25 30 Ser Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Ala Met Ile Trp Gly Asp Gly Lys Ile Val Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Gly Asp Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ala Met Asp Asn Trp Gly Gln Gly Ser 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 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cgctccttct ctgaacgctc 540 acttccgagg agacgccgac gatgaagaca ccgtggaagg ttcttctggg actgctgggt 600 gctgctgcgc ttgtcaccat catcaccgtg cccgtggttc tgctgaacaa aggcacagat 660 gatgctacag ctgacagtcg caaaacttac actctaactg attacttaaa aaatacttat 720 agactgaagt tatactcctt aagatggatt tcagatcatg aatatctcta caaacaagaa 780 aataatatct tggtattcaa tgctgaatat ggaaacagct cagttttctt ggagaacagt 840 acatttgatg agtttggaca ttctatcaat gattattcaa tatctcctga tgggcagttt 900 attctcttag aatacaacta cgtgaagcaa tggaggcatt cctacacagc ttcatatgac 960 atttatgatt taaataaaag gcagctgatt acagaagaga ggattccaaa caacacacag 1020 tgggtcacat ggtcaccagt gggtcataaa ttggcatatg tttggaacaa tgacatttat 1080 gttaaaattg aaccaaattt accaagttac agaatcacat ggacggggaa agaagatata 1140 atatataatg gaataactga ctgggtttat gaagaggaag tcttcagtgc ctactctgct 1200 ctgtggtggt ctccaaacgg cactttttta gcatatgccc aatttaacga cacagaagtc 1260 ccacttattg aatactcctt ctactctgat gagtcactgc agtacccaaa gactgtacgg 1320 gttccatatc caaaggcagg agctgtgaat ccaactgtaa agttctttgt tgtaaataca 1380 gactctctca gctcagtcac caatgcaact tccatacaaa tcactgctcc tgcttctatg 1440 ttgatagggg atcactactt gtgtgatgtg acatgggcaa cacaagaaag aatttctttg 1500 cagtggctca ggaggattca gaactattcg gtcatggata tttgtgacta tgatgaatcc 1560 agtggaagat ggaactgctt agtggcacgg caacacattg aaatgagtac tactggctgg 1620 gttggaagat ttaggccttc agaacctcat tttacccttg atggtaatag cttctacaag 1680 atcatcagca atgaagaagg ttacagacac atttgctatt tccaaataga taaaaaagac 1740 tgcacattta ttacaaaagg cacctgggaa gtcatcggga tagaagctct aaccagtgat 1800 tatctatact acattagtaa tgaatataaa ggaatgccag gaggaaggaa tctttataaa 1860 atccaactta gtgactatac aaaagtgaca tgcctcagtt gtgagctgaa tccggaaagg 1920 tgtcagtact attctgtgtc attcagtaaa gaggcgaagt attatcagct gagatgttcc 1980 ggtcctggtc tgcccctcta tactctacac agcagcgtga atgataaagg gctgagagtc 2040 ctggaagaca attcagcttt ggataaaatg ctgcagaatg tccagatgcc ctccaaaaaa 2100 ctggacttca ttattttgaa tgaaacaaaa ttttggtatc agatgatctt gcctcctcat 2160 tttgataaat ccaagaaata tcctctacta ttagatgtgt atgcaggccc atgtagtcaa 2220 aaagcagaca ctgtcttcag actgaactgg gccacttacc ttgcaagcac agaaaacatt 2280 atagtagcta gctttgatgg cagaggaagt ggttaccaag gagataagat catgcatgca 2340 atcaacagaa gactgggaac atttgaagtt gaagatcaaa ttgaagcagc cagacaattt 2400 tcaaaaatgg gatttgtgga caacaaacga attgcaattt ggggctggtc atatggaggg 2460 tacgtaacct caatggtcct gggatcggga agtggcgtgt tcaagtgtgg aatagccgtg 2520 gcgcctgtat cccggtggga gtactatgac tcagtgtaca cagaacgtta catgggtctc 2580 ccaactccag aagacaacct tgaccattac agaaattcaa cagtcatgag cagagctgaa 2640 aattttaaac aagttgagta cctccttatt catggaacag cagatgataa cgttcacttt 2700 cagcagtcag ctcagatctc caaagccctg gtcgatgttg gagtggattt ccaggcaatg 2760 tggtatactg atgaagacca tggaatagct agcagcacag cacaccaaca tatatatacc 2820 cacatgagcc acttcataaa acaatgtttc tctttacctt agcacctcaa aataccatgc 2880 catttaaagc ttattaaaac tcatttttgt tttcattatc tcaaaactgc actgtcaaga 2940 tgatgatgat ctttaaaata cacactcaaa tcaagaaact taaggttacc tttgttccca 3000 aatttcatac ctatcatctt aagtagggac ttctgtcttc acaacagatt attaccttac 3060 agaagtttga attatccggt cgggttttat tgtttaaaat catttctgca tcagctgctg 3120 aaacaacaaa taggaattgt ttttatggag gctttgcata gattccctga gcaggatttt 3180 aatctttttc taactggact ggttcaaatg ttgttctctt ctttaaaggg atggcaagat 3240 gtgggcagtg atgtcactag ggcagggaca ggataagagg gattagggag agaagatagc 3300 agggcatggc tgggaaccca agtccaagca taccaacacg agcaggctac tgtcagctcc 3360 cctcggagaa gagctgttca cagccagact ggcacagttt tctgagaaag actattcaaa 3420 cagtctcagg aaatcaaata tgcaaagcac tgacttctaa gtaaaaccac agcagttgaa 3480 aagactccaa agaaatgtaa gggaaactgc cagcaacgca ggcccccagg tgccagttat 3540 ggctataggt gctacaaaaa cacagcaagg gtgatgggaa agcattgtaa atgtgctttt 3600 aaaaaaaaat actgatgttc ctagtgaaag aggcagcttg aaactgagat gtgaacacat 3660 cagcttgccc tgttaaaaga tgaaaatatt tgtatcacaa atcttaactt gaaggagtcc 3720 ttgcatcaat ttttcttatt tcatttcttt gagtgtctta attaaaagaa tattttaact 3780 tccttggact cattttaaaa aatggaacat aaaatacaat gttatgtatt attattccca 3840 ttctacatac tatggaattt ctcccagtca tttaataaat gtgccttcat tttttcagaa 3900 aaaaaaaaaa aaa 3913

Claims (51)

  1. 아메리칸 타입 컬처 컬렉션(American Type Culture Collection) (ATCC)에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 결합을 경쟁적으로 억제하고/하거나 이와 동일한 디펩티딜 펩티다제-4 (DPP-4) 에피토프에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체.
  2. 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) VHCDR1, VHCDR2 및 VHCDR3이 있는 중쇄 가변 도메인 (VH), 및 3개의 경쇄 CDR VLCDR1, VLCDR2, 및 VLCDR3이 있는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는, 디펩티딜 펩티다제-4 (DPP-4)에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이며, 여기서 단리된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체의 CDR은 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 CDR과 동일한 것인, 디펩티딜 펩티다제-4 (DPP-4)에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체.
  3. 제2항에 있어서, 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7, ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 VH 및 VL과 동일한 VH 및 VL을 포함하는 단리된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 단편이 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, 또는 단일쇄 항체 분자인 단리된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체.
  5. 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 121870 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121871 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121872 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121873 하에 기탁된 하이브리도마, 및 이들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된 하이브리도마.
  6. 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 121870 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121871 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121872 하에 기탁된 하이브리도마, ATCC에 수탁 번호 121873 하에 기탁된 하이브리도마, 또는 이들의 조합물을 포함하는 항체-생산 세포 배양물.
  7. 제5항의 하이브리도마 또는 제6항의 항체-생산 세포 배양물에 의해 생산된 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체.
  8. 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체가 이에 융합된 이종 폴리펩티드를 추가로 포함하는 것인, 제1항 내지 제4항 또는 제7항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 제5항의 하이브리도마 또는 제6항의 세포 배양물에 의해 생산된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체.
  9. 제8항에 있어서, 이종 폴리펩티드가 안정화 폴리펩티드, 태그, 표지, 또는 이들의 조합물인 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체.
  10. 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체가 이종 모이어티에 접합된 것인, 제1항 내지 제4항 또는 제7항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 제5항의 하이브리도마 또는 제6항의 세포 배양물에 의해 생산된 항체 또는 이의 단편, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체.
  11. 제10항에 있어서, 이종 모이어티가 펩티드, 단백질, 효소, 지질, 이종 항체 또는 이의 단편, 검출가능한 표지, 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 중 하나 이상을 포함하는 것인 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체.
  12. 제11항에 있어서, 이종 모이어티가 비오틴 또는 루테늄 킬레이트를 포함하는 것인 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체.
  13. 제1항 내지 제4항 또는 제7항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 제5항의 하이브리도마 또는 제6항의 세포 배양물에 의해 생산된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 포함하는 조성물.
  14. 적어도 2개의 제1항 내지 제4항 또는 제7항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 단편, 또는 제5항의 하이브리도마 또는 제6항의 세포 배양물에 의해 생산된 항체 또는 이의 단편, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체의 조합물을 포함하는 조성물.
  15. 제1항 내지 제4항 또는 제7항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 서브유닛, 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 제5항의 하이브리도마 또는 제6항의 세포 배양물에 의해 생산된 항체 또는 이의 단편, 또는 이의 서브유닛, 단편, 변이체 또는 유도체를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
  16. 제1항 내지 제4항 또는 제7항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 제5항의 하이브리도마 또는 제6항의 세포 배양물에 의해 생산된 항체 또는 이의 단편, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 코딩하는 2개 이상의 핵산 분자를 포함하는 조성물.
  17. 제16항에 있어서, 2개 이상의 핵산 분자가 동일한 벡터 내에 위치하는 것인 조성물.
  18. 제15항의 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 제16항 또는 제17항의 2개 이상의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  19. 제16항에 있어서, 2개 이상의 핵산 분자가 적어도 2개의 별개의 벡터 내에 위치하는 것인 조성물.
  20. 제19항의 벡터.
  21. 제18항의 벡터 또는 제20항의 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
  22. (a) 제21항의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 (b) 항체, 이의 서브유닛, 단편 또는 유도체를 회수하는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제4항 또는 제7항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항-DPP-4 항체, 또는 이의 서브유닛, 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 제5항의 하이브리도마 또는 제6항의 세포 배양물에 의해 생산된 항체 또는 이의 단편, 또는 이의 서브유닛, 단편, 변이체 또는 유도체를 제조하는 방법.
  23. 제1항 내지 제4항 또는 제7항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 제5항의 하이브리도마 또는 제6항의 세포 배양물에 의해 생산된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 포함하는, 샘플 내의 디펩티딜 펩티다제-4 (DPP-4) 수준을 측정하기 위한 키트.
  24. 적어도 2개의 제1항 내지 제4항 또는 제7항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 제5항의 하이브리도마 또는 제6항의 세포 배양물에 의해 생산된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 포함하는, 샘플 내의 디펩티딜 펩티다제-4 (DPP-4) 수준을 측정하기 위한 키트.
  25. 제23항 또는 제24항에 있어서, 고체 지지체 및 검출 시약을 추가로 포함하는 키트.
  26. 제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 포착 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 및 검출 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 포함하는 키트.
  27. 제26항에 있어서,
    (a) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (b) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (c) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (d) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (e) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (f) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (g) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (h) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체인 키트.
  28. 제23항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 검출 항체가 검출가능한 표지를 포함하는 것인 키트.
  29. 제28항에 있어서, 검출가능한 표지가 비오틴이고, 검출 시약이 스트렙타비딘-양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP) 접합체 및 HRP에 대한 비색 기질을 포함하는 것인 키트.
  30. 제29항에 있어서, 검출가능한 표지가 루테늄 킬레이트인 키트.
  31. 적어도 2개의 항-디펩티딜 펩티다제-4 (DPP-4) 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 여기서 항-DPP-4 항체 중 하나는 아메리칸 타입 컬처 컬렉션 (ATCC)에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7의 결합을 경쟁적으로 억제하고/하거나 이와 동일한 DPP-4 에피토프에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를 포함하고, 항-DPP-4 항체 중 하나는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 결합을 경쟁적으로 억제하고/하거나 이와 동일한 DPP-4 에피토프에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를 포함하는 것인, 하나 이상의 샘플 내의 DPP-4 수준을 검출하는 방법.
  32. 제31항에 있어서, 2개 이상의 항-DPP-4 항체 중 하나는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) VHCDR1, VHCDR2 및 VHCDR3이 있는 중쇄 가변 도메인 (VH), 및 3개의 경쇄 CDR VLCDR1, VLCDR2, 및 VLCDR3이 있는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하고, 여기서 단리된 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체의 CDR이 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7의 CDR과 동일한 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 2개 이상의 항-DPP-4 항체 중 하나는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) VHCDR1, VHCDR2 및 VHCDR3이 있는 중쇄 가변 도메인 (VH), 및 3개의 경쇄 CDR VLCDR1, VLCDR2, 및 VLCDR3이 있는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하고, 여기서 단리된 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체의 CDR이 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 CDR과 동일한 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체인 방법.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서, 2개 이상의 항-DPP-4 항체 중 하나는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7의 VH 및 VL과 동일한 VH 및 VL을 포함하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 2개 이상의 항-DPP-4 항체 중 하나는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A2.15, 또는 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 래트 모노클로날 항체 R11A9.11의 VH 및 VL과 동일한 VH 및 VL을 포함하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체인 방법.
  34. 제31항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 검정법이 고체 지지체에 부착된 제1 항-DPP-4 "포착" 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 제2 항-DPP-4 "검출" 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 샌드위치 면역검정법인 방법.
  35. 제34항에 있어서,
    (a) 포착 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 고체 지지체에 부착하는 단계;
    (b) 샘플 내에 존재한다면 DPP-4가 포착 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 결합하게 하는데 충분한 조건 하에 테스트 샘플 또는 대조군 샘플을 적용하는 단계;
    (c) 포착 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 이미 결합된 DPP-4에 결합하게 하는데 충분한 조건 하에 검출 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 적용하는 단계; 및
    (d) DPP-4에 결합된 검출 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 양을 측정하는 단계
    를 포함하는 면역검정법.
  36. 제35항에 있어서, 검출 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 검출가능한 표지를 추가로 포함하는 것인 면역검정법.
  37. 제36항에 있어서, 검출가능한 표지가 비오틴인 면역검정법.
  38. 제37항에 있어서, 검출가능한 표지가 루테늄 킬레이트인 면역검정법.
  39. 제34항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (b) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (c) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (d) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (e) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (f) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (g) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (h) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체인 면역검정법.
  40. 제34항 내지 제39항 중 어느 한 항의 면역검정법; 제23항 내지 제30항 중 어느 한 항의 키트; 및/또는 제1항 내지 제4항 또는 제7항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 제5항의 하이브리도마 또는 제6항의 세포 배양물에 의해 생산된 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체를 사용하여 샘플을 검정하는 것을 포함하는, 대상체로부터 수득된 샘플 내의 디펩티딜 펩티다제-4 (DPP-4)의 양을 측정하는 방법.
  41. 제40항에 있어서, 대상체로부터 수득된 샘플이 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 소변, 가래, 기관지폐포 세척액, 폐 상피 세포, 또는 코 용종, 또는 피부 중 하나 이상인 방법.
  42. 제40항 또는 제41항에 있어서, 대상체에 IL-13-매개 질환 또는 장애, 폐 질환 또는 장애, 및 만성 염증성 피부 질환 또는 장애로 이루어진 군으로부터 선택된 질환 또는 병태가 있는 것인 방법.
  43. 제42항에 있어서, 질환 또는 병태가 천식, 아토피성 천식, 코르티코스테로이드 미경험 천식, 만성 천식, 코르티코스테로이드 저항성 천식, 코르티코스테로이드 불응성 천식, 흡연으로 인한 천식, 코르티코스테로이드로 제어되지 않는 천식, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 궤양성 결장염 (UC), 아토피성 피부염 (AD), 알레르기 비염, 만성 코굴염, 피부 섬유증, 알레르기성 접촉 피부염, 습진 및 건선으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  44. 제40항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플이 대상체로부터 수득되고, 샘플 내의 DPP-4 수준의 측정을 위해 제출되는 것인 방법.
  45. 제40항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 면역검정법이 고체 지지체에 부착된 제1 항-DPP-4 "포착" 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 제2 항-DPP-4 "검출" 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 샌드위치 면역검정법을 포함하는 것인 방법.
  46. 제45항에 있어서, 면역검정법이
    (a) 포착 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 고체 지지체에 부착하는 단계;
    (b) 샘플 내에 존재한다면 DPP-4가 포착 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 결합하게 하는데 충분한 조건 하에 환자 샘플 또는 대조군 샘플을 적용하는 단계;
    (c) 포착 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 이미 결합된 DPP-4에 결합하게 하는데 충분한 조건 하에 검출 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 적용하는 단계; 및
    (d) DPP-4에 결합된 검출 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 양을 측정하는 단계
    를 포함하는 것인 방법.
  47. 제46항에 있어서, 검출 항체, 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체가 검출가능한 표지를 포함하는 것인 방법.
  48. 제47항에 있어서, 검출가능한 표지가 비오틴인 방법.
  49. 제48항에 있어서, 검출가능한 표지가 루테늄 킬레이트인 방법.
  50. 제45항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (b) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (c) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (d) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (e) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (f) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121872 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A2.15 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (g) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121870 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m3B7.6 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이거나;
    (h) 포착 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121873 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 래트 모노클로날 항체 R11A9.11 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체이고, 검출 항체가 ATCC에 수탁 번호 PTA-121871 하에 기탁된 하이브리도마로부터 생산된 바와 같은 마우스 모노클로날 항체 m5B7.7 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체인 방법.
  51. 제40항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 천식 환자이고, 환자로부터 취해진 샘플이 혈청을 포함하는 것인 방법.
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