KR20170049854A

KR20170049854A - 진피 고초균 발효물을 이용한 세정제 조성물

Info

Publication number: KR20170049854A
Application number: KR1020150150700A
Authority: KR
Inventors: 손정화
Original assignee: 손정화
Priority date: 2015-10-29
Filing date: 2015-10-29
Publication date: 2017-05-11
Also published as: KR101863414B1

Abstract

본 발명은 스타필로코쿠스 아우레우스(S. aureus), 캔디다 알비칸스(C. albicans), 말라세지아 퍼퍼(M. furfur) 및 아스퍼질러스 니거(A. niger)에 대해서 항균 활성을 나타낼 뿐만 아니라, 그 자체로도 높은 세정력을 보이고 또한 SLS(Sodium Lauryl Sulfate)에 의한 섬유아세포 사멸 저해 활성도 우수한 진피 고초균 발효물을 이용한 세정제 조성물을 개시한다.

Description

진피 고초균 발효물을 이용한 세정제 조성물{Washing Agent Composition Using a Fermentation Products of Bacillus subtilis of Citrus Sunki Peels}

본 발명은 진피(Citrus Sunki Peels) 고초균 발효물을 이용한 세정제 조성물에 관한 것이다.

세정제는 일반적으로 세정력과 기포력을 발휘하는 물질인 계면활성제 이외에 향, 기타 세정 보조제를 포함하여 조성된다.

세정제에 주로 사용되는 계면활성제로는 알킬벤젠술포네이트, 알파올레핀술페이트, 소듐 또는 암모늄라우릴설페이트, 알킬베타인, 아민옥사이드, 에톡시화 알콜에테르, 알킬폴리 글루코사이드, 지방산 아마이드 등이 있는데, 이러한 계면활성제들은 경우에 따라 주부 습진 같은 피부 염증과 피부 자극을 유발하고 세척 후 피세정 물질 표면에 잔류하여 인체에 직접적인 독성의 원인이 되기도 한다.

계면활성제의 이러한 인체 독성으로 인하여 천연물을 이용한 세정제를 개발하고자 하는 노력이 있어 왔는데, 그러한 기술로서 예컨대 키토산을 이용한 것(한국 특허 제0486861호), 야자유 지방산 등을 이용한 것(한국 공개특허 제2004-0099828호), 유백피 추출물을 이용한 것(한국 특허 제0163118호), 자작나무 추출물을 이용한 것(한국 특허 제0112396호) 등이 있다.

천연물을 이용한 경우 인체 독성이 낮을 뿐만 아니라 생분해성이기 때문에 환경 독성이 적은 장점이 있다.

본 발명도 항균 활성을 가지면서 세정력이 우수하고 계면활성제에 의한 인체 독성을 완화시키는 활성을 가진 진피 고초균 발효물을 이용한 세정제를 개시한다.

본 발명의 목적은 진피 고초균 발효물을 이용한 세정제 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명자는 아래의 실시예, 비교예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 진피 분말의 고초균 발효물이 스타필로코쿠스 아우레우스(S. aureus), 캔디다 알비칸스(C. albicans), 말라세지아 퍼퍼(M. furfur) 및 아스퍼질러스 니거(A. niger)에 대해서 항균 활성을 나타낼 뿐만 아니라, 그 자체로도 높은 세정력을 보이고 또한 소듐라우릴설페이트(Sodium Lauryl Sulfate; 이하 "SLS")에 의한 사람 유래의 섬유아세포 사멸 저해 활성도 매우 높음을 확인할 수 있었는데, 이러한 진피 고초균 발효물의 항균 활성은 그 추출물보다 뚜렷하게 높았으며, 나아가 세정력과 SLS에 의한 섬유아세포 사멸 저해 활성도 그 추출물보다 뚜렷하게 높았다. 상기 SLS는 샴푸, 헤어컨디셔너, 바디워시, 입욕제, 세정제 등에 포함되어 있는 계면활성제로서 세포막에 결합하여 세포대사 억제와 세포막을 파괴하여 피부 자극을 유발한다고 알려져 있는 물질이다(대한피부과학회지 35(3):491-498, 1997).

본 발명은 이러한 실험 결과에 기초하여 제공되는 것으로서, 본 발명의 세정제 조성물은 진피의 고초균 발효물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.

본 명세서에서, "진피"란 제주 자생귤인 진귤(Citrus sunki)의 과피를 말하며, 진피의 생리 활성으로서 항산화 활성, 항미생물 활성, 항염증 활성, 혈압 강하 활성 등이 보고되어 있다(Jeong WS, Park SW, Chung SK. Food Sci. Biotechnol. 6: 292~296(1997); Kim YC, Koh KS, Koh JS. Food Sci. Biotechnol. 10:483~487(2001); Cho C, Park BJ, Chung SH, Kim CB, Cha BS, Byun MW. Food Sci. Biotechnol. 13:384~386(2004); Murakami A, et al. Carcinogenesis 21:1843~1850(2000)).

또 본 명세서에서, 상기 "유효성분"이란 단독으로 세정력을 나타내거나 또는 그 자체는 세정력이 없는 보조제(담체)와 함께 활성을 나타내는 성분을 말한다.

본 발명의 유효성분인 발효물의 제조를 위하여 사용될 수 있는 고초균은 청국장, 된장, 치즈 등 식품의 발효에 관여하는 바실러스속 미생물(Bacillus sp.)이면 특별한 제한 없이 모두 사용될 수 있는데, 구체적으로 바실러스 섭틸리스(B. subtilis), 바실러스 리크네포르미스(B. lichneformis), 바실러스 메가테리움(B. megaterium), 바실러스 아밀로리퀘파시엔스(B. amyloliquefaciens), 바실러스 낫토(B. natto), 바실러스 안스라시스(B. antharcis), 바실러스렌투스(B. lentus), 바실러스 퍼미러스(B. pumilus), 바실러스 더링지엔시스(B. thuringiensis), 바실러스 알베이(B. alvei), 바실러스 아조토픽산스(B. azotofixans), 바실러스 매세란스(B. macerans), 바실러스 포리믹사(B. polymyxa), 바실러스 파필리에(B. popilliae), 바실러스 코아글란스(B. coagulans), 바실러스 스테아로더모필러스(B. stearothermophilus), 바실러스 파스퇴리(B. pasteurii), 바실러스 패리커스(B. sphaericus), 바실러스 패스티디오서스(B. fastidiosus) 등이 사용될 수 있다. 바람직하게는 아래의 실시예에서 사용된 바실러스 섭틸리스(B. subtilis)이 사용될 수 있다.

본 발명의 유효성분인 발효물의 제조시, 진피에 고초균을 접종·발효시키기 전에 그 고초균에 의한 발효를 촉진하기 위해서 그 진피에 고초균의 탄소원을 첨가할 수 있다. 이러한 탄소원은 당업계에 알려진 임의의 것을 사용할 수 있는데, 통상은 올리고당, 유당, 포도당, 과당, 설탕, 이들의 혼합물 등이 사용될 것이다. 이러한 탄소원은 의도한 발효 시간, 발효 정도 등을 고려하여 임의의 범위로 첨가될 수 있다. 통상은 진피 100 중량부 기준 1 중량부 내지 50 중량부의 범위로 첨가될 것이다.

또 본 발명의 유효성분인 발효물의 제조를 위한 고초균에 의한 발효는 15℃~45℃의 범위 내에서 이루어질 수 있으며, 바람직하게는 35℃~40℃의 범위 내에서 이루어질 수 있다. 발효 온도가 위 범위보다 낮을 경우 발효 속도가 느려질 수 있고 또한 원하지 발효 산물이 생겨날 수 있으며, 발효 온도가 위 범위보다 높을 경우도 발효 미생물의 사멸에 따라 마찬가지로 발효 속도가 느려지거나 원하지 발효 산물이 생겨날 수 있다.

또한 고초균에 의한 발효 후에 숙성 단계가 추가로 포함될 수 있는데, 이러한 숙성 단계는 접종된 미생물의 생장이 정지된 후에도 미생물에 의한 발효 산물이 안정화되기 위한 것인데, 이러한 숙성 단계는 3일 내지 12개월 정도 수행될 수 있다.

또한 고초균에 의한 발효는 혐기적 조건과 호기적 조건 모두에서 배양이 가능하기 때문에 배양 조건이 혐기적이든 호기적이든 무방하다.

본 발명의 유효성분인 발효물은 감압 저온 건조 또는 동결 건조 등의 방식으로 발효물 자체를 농축시켜 얻어지는 액상, 또는 분말상의 형태일 수 있고, 발효물을 여과할 경우 여액과 그 여과 잔사로 분리된 형태일 수 있으며, 그 여액과 여과 잔사를 농축·건조하여 얻은 액상 또는 분말상의 형태일 수도 있다. 또한 그 발효물을 적절한 추출 용매(예컨대 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매)로 추출하여 사용할 수도 있다.

한편 본 발명의 조성물은 그 유효성분인 발효물을 최종 제품의 용도, 성상, 제형, 배합 목적 등에 따라 세정력 등을 나타낼 수 있는 한 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 99.99 중량% 범위 내에서 결정될 것이다. 구체적인 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.

본 발명의 세정제 조성물은 바람직하게는 항균용 세정제 조성물이다. 이때 항균성은 스타필로코쿠스 아우레우스(S. aureus), 캔디다 알비칸스(C. albicans), 말라세지아 퍼퍼(M. furfur) 및 아스퍼질러스 니거(A. niger)에 대한 항균성을 의미한다.

본 발명의 항균용 세정제 조성물에서 그 유효성분인 진피 고초균 발효물은 진피에 시호(Bupleurum falcatum)가 추가로 첨가·발효되어 얻어진 것이 바람직하다. 시호가 첨가되어 얻어진 발효물은 아래의 실험예가 보여주듯이 캔디다 알비칸스(C. albicans) 및 아스퍼질러스 니거(A. niger)에 대해서 진피만의 고초균 발효물에 비해서 높은 항균 활성을 보인다.

시호는 산시호라고도 불리우며 한의학에서는 간기(肝氣)를 통하게 하고 양을 상승시키는 효능이 있어 해열, 해독, 진통, 소염, 두통, 월경통, 자궁하수, 탈항 등의 치료 목적으로 이용하여 왔고(제주특별자치도농업기술원장과 재단법인제주테크노파크원장, 제주의 약용식물, p139-141 2010년; 완역중약대사전, 정담, p2622-2632, 1999), 최근 연구결과에서는 혈소판 응집억제 효과(Arch Pharm Res. 2007 ; 30(5) : 561-4), 폐암억제 효과(Biochem Pharmacol. 2006 ; 72(3) : 308-19) 및 B형 간염 억제 효과가 있다고 보고되었으며(Chem Pharm Bull (Tokyo). 2011, 59(11):1329-39) 특히, 고지방식이 랫드의 체중 및 혈중 지질농도를 감소시키는 것으로 보고되어 있다(대한본초학회, 2000 ; 15(1) : 67-71).

본 발명의 조성물은 그 유효성분인 발효물 이외에 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 계면활성제는 양이온성 계면활성제, 음이온성계면활성제, 양쪽성 계면활성제 또는 비이온성계면활성제를 세정제의 용도 즉 의류 세탁용인지, 주방 용기의 세정용인지, 또는 손이나 얼굴, 몸 등 인체 세정용인지를 고려하여, 전술한 바의 알킬벤젠술포네이트, 알파올레핀술페이트, 소듐 또는 암모늄라우릴술페이드, 알킬베타인, 아민옥사이드, 에톡시화 알콜에테르, 알킬폴리 글루코사이드, 지방산 아마이드 등을 포함하여 공지된 것 중 임의의 것을 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 이러한 계면활성제는 본 발명의 조성물에는 본 발명의 유효성분인 발효물의 세정력을 향상시키거나 기포력을 높일 목적으로 조성물 전체 중량 기준 10 중량% 전후로 포함될 수 있다.

본 발명의 조성물은 의류용 세제, 주방 용기용 세제, 인체에 적용을 위한 세정제 등으로 제품화될 수 있으며, 성상은 액상 또는 분말상일 수 있다.

다른 측면에 있어서, 본 발명은 진피 고초균 발효물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 항균용 조성물은 그 유효성분 이외에 분산제와 담체를 포함하여 제조될 수 있다.

그러한 분산제로서 물, 알코올(예: 메틸 알코올, 에틸 알코올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜, 글리세린 등), 케톤(예: 아세톤, 메틸 에틸 케톤 등), 에테르(예: 디옥산, 테트라하이드로푸란, 셀로솔브, 디에틸렌 글리콜 디메틸 에테르 등), 지방족 탄화수소(예: 헥산, 케로센 등), 방향족 탄화수소(예:벤젠, 톨루엔, 크실렌, 나프탈렌, 메틸 나프탈렌 등), 할로겐화 탄화수소(예: 클로로포름, 카본 테트라클로라이드 등), 산 아미드(예: 디메틸 포름아디드 등), 에스테르(예: 메틸 아세테이트 에스테르, 에틸 아세테이트 에스테르, 부틸 아세테이트 에스테르, 지방산 글리세린 에스테르 등), 니트롤(예: 아세토니트릴 등), 계면 활성제(고급 알코올 설페이트 에스테르, 알킬 설폰산, 알킬 알릴 설폰산, 4급 암모늄 염, 옥시 알킬 아민, 지방산 에스테르, 폴리알킬렌 옥시드 화합물, 안하이드로 소르비톨 화합물) 등을 들 수 있는데, 상기 분산제는 단독으로 또는 2종 이상의 혼합물로 본 발명의 항균용 조성물에 포함되어 제조될 수 있다.

담체의 경우로서는 점토(예: 카올린, 벤토나이트, 산 점토 등), 활석(예: 활석 분말, 납석 분말 등), 실리카(예: 규조토, 규산 무수물, 운모 분말 등), 알루미나, 황 분말, 활성탄 등이 예시될 수 있으며, 이들 담체도 단독으로 또는 2종 이상의 혼합물로서 본 발명의 항균용 조성물에 포함되어 제조될 수 있다.

본 발명의 항균용 조성물은 액체상, 고체상 및 기체상 중 임의의 상으로 제조될 수 있다. 또 본 발명의 항균용 조성물은 경구, 비경구 등 임의의 방식으로 투여될 수 있으며, 바람직하게는 인체에 적용될 경우 국소 투여 방식으로 투여될 수 있다. 경구 투여 방식의 제형은 정제, 환제, 분제, 액제, 임의의 식품 첨가된 형태 등을 들 수 있으며, 비경구 방식의 제형은 주사제, 국소 투여제(크림, 연고 등), 좌약, 분무제 등을 들 수 있다.

본 발명의 항균용 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 화장료 조성물로 파악할 수 있다.

본 발명의 항균용 조성물이 화장료 조성물로 파악될 경우 그 화장료 조성물은 특히 비듬 억제용 사용될 수 있다. 그것은 아래의 실험예가 보여주듯이, 본 발명의 유효성분인 진피 고초균 발효물 등이 비듬균인 말라세지아 퍼퍼(M. furfur)에 대해서 높은 항균 활성을 보여주기 때문이다.

본 발명의 화장료 조성물은 그 유효성분을 포함하는 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 비타민, 색소 및 항료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등을 들 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 그 유효성분과 전술한 바의 담체 성분을 포함시켜 당업계에 공지된 화장료 조성물의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 천연물로서 진피 고초균 발효물을 이용한 세정제 조성물을 제공할 수 있다. 본 발명의 세정제 조성물은 의류용 세제, 주방 용기용 세제, 인체에 적용을 위한 세정제 등으로 제품화될 수 있으며, 성상은 액상 또는 고형상일 수 있다.

본 발명의 세정제 조성물에 포함되는 진피 고초균 발효물은 높은 세정력을 보일 뿐만 아니라 스타필로코쿠스 아우레우스(S. aureus) 등에 대해서 항균 활성을 가지고 계면활성제의 인체 자극 완화 효과를 가지며 천연물로서 생분해성이어서 환경 독성이 낮은 효과도 아울러 가진다.

이하 본 발명을 실시예, 비교예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예, 비교예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 > 진피 및/또는 시호의 고초균 발효물의 제조

<실시예 1> 진피 고초균 발효물의 제조예 1

물 100 중량부에, 물 100 중량부 기준, 진피 분말 7.0 중량부와 접종 미생물의 탄소원으로서 당밀 2.0 중량부를 첨가하여 균일하게 혼합하였다. 이 혼합물에 nutrient broth 배지에서 준비한 고초균(Bacillus subtilis) 2%(v/v) 접종하여 38℃에서 7일 동안 발효시켜 액상의 진피 고초균 발효물을 제조하였다. 다음 그 액상의 발효물을 멸균 온도 121℃에서 20분 정도 멸균하고 감압 농축하여 고형상의 발효물을 얻었다.

<실시예 2> 시호의 고초균 발효물의 제조예 2

상기 <실시예 1>과 동일한 방법으로 시호의 고초균 액상 발효물과 고형상의 발효물을 제조하되, 진피 분말 대신에 시호(지상부) 분말 7.0 중량부를 사용하였다.

<실시예 3> 진피와 시호의 고초균 발효물의 제조

상기 <실시예 1>과 동일한 방법으로 진피와 시호의 고초균 액상 발효물과 고형상의 발효물을 제조하되, 진피 분말 7.0 중량부 대신에 진피 분말 3.5 중량부 및 시호 분말 3.5 중량부를 사용하였다.

< 비교예 > 진피 및/또는 시호 추출물의 제조

<비교예 1> 진피 추출물의 제조

70% 에탄올 100 중량부에, 에탄올 100 중량부 기준 진피 분말 30 중량부를 넣고 24시간 동안 상온에서 교반·추출하였다. 그 추출액을 2㎛ 여과지로 여과한 후 그 여과액을 감압 농축하여 고형상의 추출물을 얻었다.

<비교예 2> 시호 추출물의 제조

상기 <비교예 1>과 동일한 방법으로 시호 추출물을 제조하되, 진피 분말 대신에 동량의 시호(지상부) 분말 30 중량부 사용하였다.

<비교예 3> 진피와 시호 추출물의 제조

상기 <비교예 1>과 동일한 방법으로 진피와 시호 추출물을 제조하되, 진피 분말 대신에 진피 분말 15 중량부 및 시호 분말 15 중량부를 사용하였다.

< 제조예 및 비교 제조예 > 세제의 제조

<제조예> 세제의 제조

아래 [표 1]의 성분 및 함량으로 상기 실시예의 고형상의 발효물과 계면활성제가 포함된 세제를 제조하였다.

세제의 성분 및 함량(중량%)

성분	제조예 1	제조예 2	제조예 3	제조예 4	제조예 5
계면활성제	10	10	10	10	10
<실시예 1>의 발효물	5	-	-	-	-
<실시예 2>의 발효물	-	5	-	-	-
<실시예 3>의 발효물	-	-	5	-	-
물	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100
* 계면활성제는 지방산에탄올아미드와 알칼에테르설페이트 그리고 알킬아미노프로필베타인이 1:0.1:0.1 중량비의 혼합물이다.

<비교 제조예> 세제의 제조

아래 [표 2]의 성분 및 함량으로 상기 비교예의 고형상의 추출물과 계면활성제가 포함된 세제를 제조하였다. 아래 [표 2]에서 <비교 제조예 4>는 상기 실시예의 발효물과 비교예의 추출물을 전혀 포함시키지 않고 계면활성제만을 포함시켜 제조한 것이다.

세제의 성분 및 함량(중량%)

성분	비교 제조예 1	비교 제조예 2	비교 제조예 3	비교 제조예 4
계면활성제	10	10	10	10
<비교예 1>의 추출물	5	-	-	-
<비교예 2>의 추출물	-	5	-	-
<비교예 3>의 추출물	-	-	5	-
물	to 100	to 100	to 100	to 100
* 계면활성제는 지방산에탄올아미드와 알칼에테르설페이트 그리고 알킬아미노프로필베타인이 1:0.1:0.1 중량비의 혼합물이다.

< 실험예 > 항균 활성 실험, 세정력 시험 및 피부 독성 평가 실험

< 실험예 1> 항균 활성 실험

<실험예 1-1> 사용 균주 및 배지

실험에는 아래 [표 3]의 세균 2종, 효모 2종 및 진균 2종을 사용하였으며, 균주의 배지는 NB(nutrient broth)는 Acumedia(USA)사의 것을, PDB(potato dextrose broth)는 Difco(USA)사의 것을 사용하였고, YM(yeast malt medium)은 직접 제조하여 사용하였다.

사용 균주 및 배지

분류	균주	배양온도(℃)	배지
세균	Staphylococcus aureus KCTC 1927	37	NB
세균	Pseudomonas aeruginosa KCTC 1636	37	NB
효모	Candida tropicalis KCTC 7901	37	YM
효모	Candida albicans KCTC 7270	37	YM
진균	Malassezia furfur KCCM 12679	37	PDB
진균	Aspergillus niger ATCC 13076	37	PDB

<실험예 1-2> 원판 확산법에 따른 항균 활성 실험

MHA(Muller Hinton Agar)배지에 균액의 농도가 약 10⁵-10⁶ CFU/mL 가량 되도록 도말하였다. 멸균 디스크에 에탄올을 이용하여 1 mg/mL 농도로 희석한 시료(고형상의 추출물임) 20㎕를 천천히 흡수시킨 후 용매를 완전히 증발시키고 배지 표면에 상기 디스크를 밀착시켰다. 37℃에서 배양한 후 디스크 주변에 형성된 clear zone의 크기(mm)로 항균 활성을 판단하였다.

결과를 아래의 [표 4]에 나타내었다.

항균 활성(clear zone, mm)

균주	실시예1	실시예2	실시예3	비교예1	비교예2	비교예3
Staphylococcus aureus KCTC 1927	13	-	16	8	-	8
Pseudomonas aeruginosa KCTC 1636	-	-	-	-	-	-
Candida tropicalis KCTC 7901	-	-	-	-	-	-
Candida albicans KCTC 7270	14	12	16	9	13	13
Malassezia furfur KCCM 12679	12	11	12	10	9	9
Aspergillus niger ATCC 13076	13	12	16	10	11	11

상기 [표 4]의 결과는 진피 고초균 발효물의 경우(실시예 1) 슈도모나스 애루지노사(P. aeruginosa), 캔디다 트로피칼리스(C. tropicalis)에 대해 항균 활성을 보이지 않았으나, 나머지 4종의 미생물에 대해서 항균 활성을 나타내었으며, 이는 그 70% 에탄올 추출물(비교예 1)의 항균 활성보다 대체로 높게 나타났다. 시호 고초균 발효물의 경우(실시예 2) 캔디다 알비칸스(C. albicans), 말라세지아 퍼퍼(M. furfur) 및 아스퍼질러스 니거(A. niger)에 대해서 항균 활성을 보였고, 말라세지아 퍼퍼(M. furfur) 및 아스퍼질러스 니거(A. niger)에 한해서는 그 70% 에탄올 추출물(비교예 2)보다 높은 항균 활성을 나타내었다. 그리고 진피와 시호의 고초균 발효물의 경우(실시예 3)는 그 70% 추출물(비교예 3)보다 모두 높은 항균 활성을 보였다.

< 실험예 2> 세정력 시험

세정력 시험은 KSM 2715 시험방법에 따라 세척 온도 15℃, 세제 농도 10㎖/L, 교반기 회전수를 125±5rpm으로 하고 세탁 10분(1회), 헹굼 3분(2회) 후 자연건조하고 세척 전후의 오염포(JIS 오염포)의 반사율을 색차계를 이용하여 측정한 후 세척력(세척력(%)=[(세척 후 반사율 - 세척 전 반사율)/(백포 반사율 - 세척 전 반사율)] × 100)을 백분율로 구하였다. 결과를 아래의 [표 5]에 나타내었다.

세정력 시험에서는 상기 실시예에서 얻어진 액상의 발효물 자체(계면활성제와 혼합되지 아니한 것으로서 발효 종료 후의 발효 원액임)의 세정력을 함께 평가하였다.

세척력(%)

구분	세척력(%)
제조예 1	98%
제조예 2	62%
제조예 3	92%
비교 제조예 1	48%
비교 제조예 2	46%
비교 제조예 3	47%
비교 제조예 4	45%
실시예 1의 발효액	94%
실시예 2의 발효액	51%
실시예 3의 발효액	82%

상기 [표 5]의 결과는 비교예의 추출물이 포함된 <비교 제조예 1 내지 3>의 경우 계면활성제만이 포함된 <비교 제조예 4>에 비하여 약간 높은 세척력을 보임에 그쳤으나, 실시예의 발효물이 포함된 <제조예 1 내지 3>의 경우 <비교 제조예 4>에 비하여 뚜렷하게 높은 세척력을 보였으며, 특히 진피의 고초균 발효물이 포함된 <제조예 1>의 세제가 뚜렷하게 높은 세척력을 나타내었다. 또한 계면활성제가 혼합되지 아니한 액상의 발효물 자체의 세척력에 있어서도 진피의 고초균 발효물은 매우 높은 세척력을 나타내었다.

< 실험예 3> 피부 독성에 대한 세포 실험

피부 독성에 의한 세포실험에서는 샴푸, 헤어컨디셔너, 바디워시, 입욕제 등에 포함된 물질로서 피부 자극을 유발하는 물질로 알려진 라우릴황산나트륨(SLS)에 의한 섬유아세포의 사멸이 상기 실시예의 발효물 및 비교예의 추출물에 의하여 어느 정도로 저해되는가를 평가하였다.

사람 유래의 섬유아세포 Hs68를 96 well plate 웰당 1× 10⁵cells/mL 농도로 넣고 아래의 [표 4]와 같이 시료를 첨가하고 이를 3일간 배양한 다음, 3-(4,5-dimethylthiazol)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide(MTT; Sigma, St. Louis, MO, USA) 100㎍을 첨가하고 4시간 동안 더 배양하였다. Plate를 1,000rpm에서 10분간 원심분리하고 조심스럽게 배지를 제거한 다음, dimethylsulfoxide(DMSO; Sigma, St. Louis, MO, USA) 150㎕를 가하여 MTT의 환원에 의해 생성된 formazan 침전물을 용해시킨 후 microplate reader(Bio-TEK instrumenis. Inc., Winooski Vermont, WI, USA)를 사용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 무처리군에 대한 흡광도 값과 비교하여 세포 생존율을 백분율로 나타내었다.

결과를 3회 반복 실험의 평균값±SE로 아래의 [표 6]에 나타내었다.

세포 사멸에 대한 저해 효과

시료명	섬유아세포 생존율(%)
0.002% SLS	43.72±4.83
0.002% SLS + 0.2% <실시예 1>의 발효물	78.25±5.42
0.002% SLS + 0.2% <실시예 2>의 발효물	62.67±2.91
0.002% SLS + 0.2% <실시예 3>의 발효물	69.43±4.64
0.002% SLS + 0.2% <비교예 1>의 추출물	46.94±5.27
0.002% SLS + 0.2% <비교예 2>의 추출물	54.72±4.91
0.002% SLS + 0.2% <비교예 3>의 추출물	48.94±5.28

상기 [표 6]의 결과에 있어서는 진피의 고쵸균 발효물은 SLS에 의한 섬유아세포의 사멸을 저해하는 효과가 뚜렷하게 높았다. 그러나 진피 추출물은 거의 저해 효과를 나타내지 못하였다. 시호 고초균 발효물의 경우나 진피와 시호의 고초균 발효물의 경우도 그 각 추출물에 비해 뚜렷하게 높은 저해 효과를 나타내었다.

Claims

진피의 고초균 발효물을 유효성분을 포함하는 세정제 조성물.
제1항에 있어서,
상기 세정제 조성물은 항균용 세정제 조성물이고,
그 항균용 세정제 조성물은 스타필로코쿠스 아우레우스(S. aureus), 캔디다 알비칸스(C. albicans), 말라세지아 퍼퍼(M. furfur) 및 아스퍼질러스 니거(A. niger)에 대해 항균 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서,
상기 세정제 조성물은 의류 세탁용, 주방용기 세정용 또는 인체 세정용인 것을 특징으로 하는 세정제 조성물.
진피의 고초균 발효물을 유효성분을 포함하는, 스타필로코쿠스 아우레우스(S. aureus), 캔디다 알비칸스(C. albicans), 말라세지아 퍼퍼(M. furfur) 및 아스퍼질러스 니거(A. niger)에 대해 항균 활성을 갖는 항균용 조성물.
제4항에 있어서,
상기 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 항균용 조성물.