KR20170041167A - 마르부르크 단클론성 항체 - Google Patents

마르부르크 단클론성 항체 Download PDF

Info

Publication number
KR20170041167A
KR20170041167A KR1020167025601A KR20167025601A KR20170041167A KR 20170041167 A KR20170041167 A KR 20170041167A KR 1020167025601 A KR1020167025601 A KR 1020167025601A KR 20167025601 A KR20167025601 A KR 20167025601A KR 20170041167 A KR20170041167 A KR 20170041167A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
antigen
amino acid
set forth
acid sequence
Prior art date
Application number
KR1020167025601A
Other languages
English (en)
Inventor
조디 베리
에리카 사파이어
Original Assignee
조디 베리
에리카 사파이어
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 조디 베리, 에리카 사파이어 filed Critical 조디 베리
Publication of KR20170041167A publication Critical patent/KR20170041167A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/08—Clostridium, e.g. Clostridium tetani
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/42—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum viral
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/54—F(ab')2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/624—Disulfide-stabilized antibody (dsFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/14011—Filoviridae
    • C12N2760/14111—Ebolavirus, e.g. Zaire ebolavirus
    • C12N2760/14122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/14011—Filoviridae
    • C12N2760/14111—Ebolavirus, e.g. Zaire ebolavirus
    • C12N2760/14134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/14011—Filoviridae
    • C12N2760/14211—Marburgvirus, e.g. lake Victoria marburgvirus
    • C12N2760/14222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/14011—Filoviridae
    • C12N2760/14211—Marburgvirus, e.g. lake Victoria marburgvirus
    • C12N2760/14234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)

Abstract

본 발명은 적어도 2종의 필로바이러스와 교차반응하는 항체를 포함하는 필로바이러스(예를 들어, 마르부르크 바이러스(MARV))에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체 및 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 이러한 항체는 필로바이러스 감염의 예방 및 치료에 유용하다. 본 발명은 또한 MARV-결합 항체, 이들 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 약제학적 조성물 및 이들 분자의 제조방법을 제공한다.

Description

마르부르크 단클론성 항체{MARBURG MONOCLONAL ANTIBODIES}
본 출원은 2014년 2월 19일자로 출원된 미국 가출원 특허 제61/941,807호 및 2014년 6월 24일자로 출원된 미국 가출원 특허 제62/016,419호에 대한 우선권 및 유익을 주장한다. 이들 기초출원 둘 다의 내용은 그들의 전문이 본 명세서에 참고로 포함된다.
정부 라이센스 권리
본 발명은 미국 국립보건원(National Institutes of Health: NIH)에 의해 부여된 등록번호 1 R01 AI089498-01 하에서 정부 지원에 의해 부분적으로 이루어졌다. 미국 정부는 본 발명에 대해 특정 권리를 가질 수 있다.
본 발명의 기술분야
본 발명은 필로바이러스에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체 및 상기 항체의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 본 발명은 이러한 항체 및 항원-결합 부분을 암호화하는 핵산 및 이러한 항체 및 부분을 사용하고 제조하는 방법을 포함한다.
필로바이러스는 인간과 비인간 영장류 둘 다에서 치명적 출혈열을 야기할 수 있는 외피가 있는 음성 가닥 RNA 바이러스이다. 필로바이러스과는 주로 에볼라바이러스속(Ebolavirus) 및 마르부르크바이러스(Marburgvirus)로 이루어진다. 5종의 공지된 에볼라바이러스(에볼라 바이러스(EBOV), 수단 바이러스(SUDV), 레스턴 바이러스(RESTV), 분디부교 바이러스(BDBV) 및 타이숲 바이러스(TAFV)) 및 마르부르크 바이러스(MARV)로 이름이 붙은 하나의 마르부르크바이러스가 있다. MARV는 추가로 상이한 바이러스주로 다시 분류될 수 있다: 1987년에 출현하고 하나의 치명적 사례를 야기한 Ci67, 무소케(Musoke), Popp, Ravn, 및 2005년에 출현하고 88% 치사율로 큰 발병을 야기한 앙골라(Angola)(Bukreyev et al., 1995. Arch Virol. 140(9):1589-1600; Johnson et al., 1996. Arch Virol. 11:101-114; International Society for Infectious Diseases. 2005. Marburg hemorrhagic fever - Angola, archive no. 20051108.3269. Brookline, Mass. [Online]). 이 중에서, Ravn은 그의 당단백질 서열이, 다른 바이러스주로부터 가장 분기되어 있다.
필로바이러스는 사망률이 90%까지인 인간과 비인간 영장류 둘 다에서의 중증의 질환을 야기할 수 있다. 필로바이러스 당단백질은 에볼라 및 마르부르크바이러스 둘 다의 부착 및 유입을 초래하고, 항체 반응의 중요한 표적이다. 마르부르크 바이러스에 대해 상대적으로 소수의 단클론성 항체(mAb)가 존재한다.
필로바이러스는 그들의 표면 상에서 단일 당단백질(GP)을 발현시킨다. GP는 표적 세포 내로 바이러스의 부착 및 유입을 초래한다. GP는 퓨린에 의해 절단되는 전구체로서 발현되어 2개의 서브유닛을 수득한다: 추정 수용기(receptor)-결합 영역뿐만 아니라 거대한 심하게 글리코실화된 뮤신 도메인을 함유하는 GP1, 및 막 융합을 구동하는 GP2(Feldmann et al., 2001. J Gen Virol. 82(Pt2):2839-2848). 대음세포작용에 의한 세포 유입 후에, GP는 숙주 카텝신에 의해 절단된다.
마르부르크바이러스에 대해 인간에서 사용을 위해 승인된 치료제 또는 백신은 아직 없다. 이와 같이, 필로바이러스(예를 들어, 마르부르크 바이러스 및 에볼라바이러스 속의 구성원의 상이한 바이러스주)의 GP를 인식하고 필로바이러스 감염을 예방 또는 치료하기 위해 사용될 수 있는 단클론성 항체를 개발할 필요가 여전히 존재한다.
본 발명은 필로바이러스에 결합하는 단클론성 항체(및 이의 항원-결합 부분)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 필로바이러스에 특이적으로 결합하고, (i) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 및 (ii) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하되, (a) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 6, 7 및 8에 각각 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 18, 19 및 20에 각각 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; (b) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 30, 31 및 32에 각각 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 42, 43 및 44 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (c) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 54, 55 및 56 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 66, 67 및 68 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, (d) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 78, 79 및 80 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 90, 91 및 92 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, (e) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 102, 103 및 104 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 114, 115 및 116 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, (f) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 126, 127 및 128 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 138, 139 및 140 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 (g) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 150, 151 및 152 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 162, 163 및 164 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분의 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 2, 서열번호 26, 서열번호 50, 서열번호 74, 서열번호 98, 서열번호 122 및 서열번호 146으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분의 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 14, 서열번호 38, 서열번호 62, 서열번호 86, 서열번호 110, 서열번호 134 및 서열번호 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명은 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하되, (a) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; (b) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 26에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; (c) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 62에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; (d) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 86에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; (e) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 110에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; (f) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 122에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (g) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 146에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 158에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분은 (i) 전체 면역글로불린 분자; (b) scFv; (c) Fab 단편; (d) F(ab')2; 및 (e) 이황화 결합된 Fv일 수 있다. 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE 및 IgM으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역글로불린 불변 영역을 포함할 수 있다.
본 발명은 마르부르크바이러스 속의 구성원인 필로바이러스에 결합하는 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분에 관한 것이다. 필로바이러스는 마르부르크 바이러스의 임의의 바이러스주(예를 들어, Ravn, 앙골라, 무소케 또는 Popp 마르부르크 바이러스주)일 수 있다. 일부 실시형태에서, 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분은 마르부르크 바이러스 당단백질에 결합한다. 특정 실시형태에서, 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분은 마르부르크 바이러스 당단백질의 GP1 또는 GP2 서브유닛에 결합한다.
단클론성 항체 또는 항원-결합 부분은 적어도 2종의 팔로바이러스와 교차반응할 수 있다. 이들 필로바이러스 중 적어도 하나는 에볼라바이러스속의 구성원(예를 들어, 에볼라 바이러스, 수단 바이러스, 분디부교 바이러스, 타이숲 바이러스 또는 레스턴 바이러스)일 수 있다. 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분은 에볼라 바이러스 당단백질에 결합할 수 있다.
일 양상에서, 본 발명은 적어도 1종의 본 명세서에 기재된 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분 및 적어도 1종의 약제학적으로 허용가능한 보조제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 다른 양상에서, 본 발명은 적어도 1종의 본 명세서에 기재된 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분 및 적어도 1종의 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 약제학적 조성물은 제2 제제(예를 들어, 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분)를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 적어도 1종의 마르부르크 바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 및 적어도 1종의 에볼라 바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 약제학적 조성물은 적어도 2, 적어도 3 또는 적어도 4종의 마르부르크 바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 적어도 2종의 마르부르크 바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함할 수 있되, 각각의 마르부르크 바이러스-결합 항체 또는 항원-결합 부분은 마르부르크 바이러스 당단백질의 상이한 에피토프(예를 들어, 중복 또는 비중복 에피토프)에 결합한다.
본 발명은 또한 개선, 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 치료적 유효량의 본 명세서에 기재된 임의의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분을 투여하는 단계를 포함하는, 필로바이러스(예를 들어, 마르부르크 바이러스 또는 에볼라 바이러스) 감염을 개선, 예방 또는 치료하는 방법을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 발명은 개선, 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 치료적 유효량의 본 명세서에 기재된 임의의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분을 투여하는 단계를 포함하는, 필로바이러스 감염(예를 들어, 마르부르크 바이러스 또는 에볼라 바이러스)을 개선, 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다. 이러한 방법에서 사용된 항체 또는 항원-결합 부분은 (i) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 및 (ii) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하되, (a) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 6, 7 및 8 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 18, 19 및 20 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; (b) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 30, 31 및 32 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 42, 43 및 44 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (c) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 54, 55 및 56 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 66, 67 및 68 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, (d) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 78, 79 및 80 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 90, 91 및 92 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, (e) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 102, 103 및 104 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 114, 115 및 116 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, (f) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 126, 127 및 128 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 138, 139 및 140 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 (g) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 150, 151 및 152 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 162, 163 및 164 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명은 개선, 예방 또는 치료가 필요한 대상체에서 필로바이러스(예를 들어, 마르부르크 바이러스 또는 에볼라 바이러스) 감염을 개선, 예방 또는 치료하기 위한 의약의 제조에서의 본 명세서에 기재된 임의의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분의 용도를 포함한다. 본 발명은 개선, 예방 또는 치료가 필요한 대상체에서 필로바이러스(예를 들어, 마르부르크 바이러스 또는 에볼라 바이러스) 감염을 개선, 예방 또는 치료하기 위한 본 명세서에 기재된 임의의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분의 용도를 포함한다.
일 양상에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 임의의 항-필로바이러스 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분을 암호화하는 단리된 핵산 분자를 포함한다. 단리된 핵산 분자는 (a) 면역글로불린 경쇄 가변 영역, (b) 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 (c) 본 명세서에 기재된 임의의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분의 면역글로불린 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 암호화할 수 있다. 일부 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 25, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 37, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 73, 서열번호 75, 서열번호 76, 서열번호 77, 서열번호 85, 서열번호 87, 서열번호 88, 서열번호 89, 서열번호 97, 서열번호 99, 서열번호 100, 서열번호 101, 서열번호 109, 서열번호 111, 서열번호 112, 서열번호 113, 서열번호 121, 서열번호 123, 서열번호 124, 서열번호 125, 서열번호 133, 서열번호 135, 서열번호 136, 서열번호 137, 서열번호 145, 서열번호 147, 서열번호 148, 서열번호 149, 서열번호 157, 서열번호 159, 서열번호 160 및 서열번호 161로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 임의의 항-필로바이러스 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분의 (a) 면역글로불린 경쇄 가변 영역, (b) 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 (c) 면역글로불린 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 세그먼트를 포함하는 발현 벡터를 지칭하되, 핵산 세그먼트는 숙주 세포에서 핵산 세그먼트의 발현에 적합한 조절 서열에 조작가능하게 연결된다. 발현 벡터 내 핵산 세그먼트는 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 25, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 37, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 73, 서열번호 75, 서열번호 76, 서열번호 77, 서열번호 85, 서열번호 87, 서열번호 88, 서열번호 89, 서열번호 97, 서열번호 99, 서열번호 100, 서열번호 101, 서열번호 109, 서열번호 111, 서열번호 112, 서열번호 113, 서열번호 121, 서열번호 123, 서열번호 124, 서열번호 125, 서열번호 133, 서열번호 135, 서열번호 136, 서열번호 137, 서열번호 145, 서열번호 147, 서열번호 148, 서열번호 149, 서열번호 157, 서열번호 159, 서열번호 160 및 서열번호 161로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 추가 양상에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 발현 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포에 관한 것이다. 재조합 숙주 세포는 박테리아, 진핵생물 또는 포유류 세포(예를 들어, COS-1, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-1, HepG2, SP2/0, 헬라(HeLa), 골수종 또는 림프종 세포)일 수 있다. 본 발명은 또한 필로바이러스-결합 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 생성하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 핵산 세그먼트가 발현되는 조건 하에서 본 명세서에 기재된 발현 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포를 배양시킴으로써, 필로바이러스-결합 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분을 생성하는 단계, 및, 선택적으로 필로바이러스-결합 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분을 회수하는 단계를 포함한다.
본 발명은 샘플 내에서 필로바이러스 당단백질(예를 들어, 마르부르크 바이러스, 에볼라 바이러스, 수단 바이러스, 분디부교 바이러스, 타이숲 바이러스 또는 레스턴 바이러스 당단백질)을 검출하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 샘플을 본 명세서에 기재된 임의의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분과 접촉시키는 단계를 포함한다. 샘플은 필로바이러스 감염을 갖는 것으로 의심되거나 또는 필로바이러스 감염의 위험에 있는 대상체로부터의 세포, 조직 또는 생물학적 유체일 수 있다.
본 발명의 이들 및 다른 실시형태 및/또는 다른 양상은 다음의 본 발명의 상세한 설명 및 첨부하는 도면을 참고하여 명확하게 될 것이다.
도 1은 마르부르크바이러스 및 에볼라바이러스 당단백질(GP)의 도메인 및 실시예 1에 기재한 항원의 작제물 설계를 개략적으로 나타내는 도면. 마르부르크(MARV) GP 및 뮤신-결실 작제물을 상부에 나타내고; 에볼라(EBOV) GP 및 뮤신-결실 작제물을 하부에 나타낸다. 파선은 결실된 영역을 나타낸다. SS, 신호 서열; IFL, 내부 융합 루프; TM, 막관통. GP 엑토도메인 작제물(GPe)은 막관통(TM) 도메인이 없고, 잔기 1 내지 637로 이루어진다. GP 엑토도메인 뮤신-결실 작제물(GPeΔmuc)은 또한 뮤신-유사 도메인을 결여한다: 모든 MARV 바이러스주에 대해 Δ257-425, EBOV(에볼라 바이러스), SUDV(수단 바이러스), BDBV(분디부교 바이러스)에 대해 Δ314-463 및 RESTV(레스턴 바이러스)에 대해 Δ316-470. 에피토프-맵핑 실험을 위한 대조군으로서, 추가적인 MARV GP 작제물을 GPeΔmucΔw로 칭해지는 GP1 뮤신 도메인(Δ257-425)과 GP2-윙(Δ436-483)을 둘 다 결여하는 S2 세포로부터 정제하였다.
도 2는 CAN30, CAN54 및 CAN40 시리즈 mAb의 특성규명 연구 결과를 나타내는 표이다. 일부 연구에서, 이들 연구는 MARV 및 EBOV 공학처리된 GP(당단백질 엑토도메인, GPe; 당단백질 엑토도메인 및 결실된 뮤신 도메인인 GPeΔmuc; 엔도솜 절단 후 GP 코어와 비슷하도록 효소 절단된 당단백질, GPcl)의 상이한 바이러스주에 결합에 대해 시험하였다. 필로바이러스 종을 다음과 같이 열거한다: M, 무소케; C, Ci67; A, 앙골라 R, Ravn; E, EBOV. 10㎍/㎖에서 mAb 농도가 배경 초과로 OD450 >1.0인 것으로 입증되었을 때 ELISA 분석에 의한 양성 결합을 (+)로 표시하고, 값이 0.5㎍/㎖ 이하로 달성되었다면 (++)은 더 강한 결합을 표시한다. 대조군의 60% 미만의 감염성의 감소에 의해 중화된 슈도바이러스를 갖는 것으로 고려된 항체는 부분적으로 P로 표시된다.
도 3은 MARV-Ravn(각각의 세트에서 좌측 막대), MARV-앙골라(각각의 세트에서 중앙 막대), 및 MARV-Popp(각각의 세트에서 우측 막대)의 GPΔmucΔtm(GPdmuc)에 대한 mAb CAN30G1(G1), CAN30G3(G3), CAN30G4(G4), CAN30G5(G5) 및 CAN30G6(G6)의 결합을 측정하는 ELISA 실험의 결과를 나타내는 막대 그래프를 도시한 도면.
도 4는 다양한 MARV 바이러스주에 대한 mAb CAN40G1(40G1)의 결합을 측정하는 ELISA 실험의 결과를 나타내는 막대 그래프를 도시한 도면. 대조군 mAb는 항-MARV 무소케였다.
도 5a는 다양한 MARV 바이러스주 및 에볼라바이러스 항원에 대한 mAb CAN40G1(40G1)의 결합을 측정하는 ELISA 실험의 결과를 나타내는 막대 그래프를 도시한 도면. ELISA 플레이트를 x-축에 대해 나타낸 각각 10개의 항원으로 코팅하였고, 및 CAN40G1 또는 양성 대조군 항-MARV 무소케 mAb(대조군 mAb)에 대한 면역반응성을 5㎍/㎖로 결합하였다. 실험을 3회 중복하여 수행하고 나서, 표준 편차를 나타낸다.
도 5b는 표시한 항원에 25㎍/㎖의 시작 농도로 CAN40G1(40G1) 또는 양성 대조군 항-MARV 무소케 mAb(대조군 mAb)를 결합하고, 이어서, 2.5x10-5㎍/㎖의 농도로 10까지 희석시킴으로써 결정된 ELISA 결합 곡선을 나타낸다. MARV GPeΔmuc, MARV GPcl, 및 EBOV GPcl에 대한 항체 결합 친화도는 유사하여 곡선이 오버레이 되게 한다는 것을 주목한다.
도 6a는 항-MARV mAb(x-축 상에 표시한 바와 같음)로 치료 후 뮤신-결실 MARV GP를 이용하는 슈도바이러스 중화 분석 결과를 나타내는 막대 그래프를 도시한 도면. MOI 0.1에서 뮤신-결실 MARV GP-위형 VSV의 베로 세포 감염성을 50㎍/㎖ mAb에 의한 치료 후에 나타낸다. 감염성 백분율을 y축 상에 나타낸다. Grp30폴리Ab는 면역화한 마우스로부터의 다클론성 혈청을 풀링하였다. NON은 음성 대조군이며; 항체를 첨가하지 않았다.
도 6b는 항-MARV mAb(x-축 상에 표시한 바와 같음)로 치료 후 전장(뮤신-함유) MARV GP를 이용하는 슈도바이러스 중화 분석 결과를 나타내는 막대 그래프를 도시한 도면. MOI 1.0에서 뮤신-함유 MARV GP-위형 VSV의 베로 세포 감염성을 50㎍/㎖ mAb에 의한 치료 후에 나타낸다. 감염성 백분율을 y축 상에 나타낸다. Grp30폴리Ab는 면역화한 마우스로부터의 다클론성 혈청을 풀링하였다. NON은 음성 대조군이며; 항체를 첨가하지 않았다.
도 7은 mAb 에피토프의 필로바이러스 GP 개략도 및 서열 정렬을 도시한 도면. SS, 신호 서열; IFL, 내부 융합 루프; TM, 막관통. 퓨린 절단 부위를 표시한 화살촉으로 나타낸다. 도 7a는 에볼라 바이러스 GP 개략도 및 작제물 설계를 나타낸다. 파선은 결실된 영역을 나타낸다. GPeΔmuc 작제물은 EBOV, BDBV, SUDV로부터의 314-463 및 RESTV로부터의 316-470을 제거한다. 도 7b는 마르부르크 바이러스 GP 개략도를 나타낸다. 도 7c은 항-GP2 윙 mAb에 대한 펩스캔 한정 에피토프를 나타낸다. 이 영역은 바이러스주 Ravn에 독특한 4개의 잔기를 가진다. 이 도면에서 에피토프 서열은 다음의 서열번호 Ravn(서열번호 198); Ci67(서열번호 199); 무소케(서열번호 200); 앙골라(서열번호 201)를 부여한다. 도 7d는 Ravn GPeΔmuc wt 또는 E465K에 대한 GP2 윙 mAb 반응성이 ELISA에 의해 평가되는 실험 결과를 나타낸다. 10㎍/㎖에서 mAb 농도가 배경 초과로 OD450 >1.0인 것으로 입증되었을 때 ELISA 분석에 의한 양성 결합을 (+)로 표시하고, 값이 0.5㎍/㎖ 이하로 달성되었다면 (++)은 더 강한 결합을 표시한다.
도 8은 마우스 적합 MARV Ravn의 치사 용량으로 시험감염한 마우스를 이용하여 생체내 보호를 시험하는 분석 결과를 나타내는 카플란 마이어(Kaplan Meier) 플롯이다. 마우스를 항-GP 항체; 30G3(CAN30G3), 30G4(CAN30G4), 30G5(CAN30G5), 54G1(CAN54G1), 54G2(CAN54G2), 40G1(CAN40G1), 54G3(CAN54G3) 또는 PBS 단독으로 노출 후 1시간에 처리하였다. 생존 백분율을 y축 상에 나타낸다.
도 9는 뮤린 CAN30G5 모 클론으로부터의 VH 및 VL 서열을 포함하는 뮤린 CAN30G5에 대한 가변(V) 유전자 서열분석 결과를 도시한 도면.
도 10은 뮤린 CAN40G1 모 클론으로부터의 VH 및 VL 서열을 포함하는 뮤린 CAN40G1에 대한 가변(V) 유전자 서열분석 결과를 도시한 도면.
도 11은 뮤린 CAN54G2 모 클론으로부터의 VH 및 VL 서열을 포함하는 뮤린 CAN54G2에 대한 가변(V) 유전자 서열분석 결과를 도시한 도면.
도 12는 면역우성 에피토프를 가리움하기 위한 면역화를 위해 사용될 수 있는 항원-항체 복합체의 다이어그램(예를 들어, 실시예 2 참조).
도 13은 무 마이크로유체 계면 확산에 의해 얻은 Ravn 마르부르크 바이러스 GP와 CAN54G1 Fab 사이의 복합체의 미세결정을 도시한 도면.
본 발명은 적어도 1종의 필로바이러스(예를 들어, 적어도 1종의 필로바이러스 당단백질(GP))에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체 및 항원 결합 부분에 관한 것이다. 본 발명은 또한 필로바이러스 감염의 예방 또는 치료를 위한 약제학적 조성물 및 방법을 제공한다. 필로바이러스과(필로비리다에(Filoviridae))는 2개의 허용되는 속(에볼라바이러스 및 마르부르크바이러스)을 포함한다. 에볼라바이러스속은 EBOV(에볼라 바이러스), SUDV(수단 바이러스), BDBV(분디부교 바이러스), TAFV(타이숲 바이러스) 및 RESTV(레스턴 바이러스)를 포함한다. 마르부르크바이러스 속은 MARV(마르부르크 바이러스)를 포함한다. 본 발명에서의 사용을 위한 MARV의 모든 바이러스주가 상정된다(예를 들어, Ravn, 앙골라, 무소케, Popp 및 Ci67). GP 아미노산 서열의 예는 표 1에 제공된다(서열번호 173 내지 183).
본 명세서에서 사용된 부문 표제는 단지 조직적 목적을 위한 것이며, 기재된 대상을 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 특허, 특허 출원, 논문, 교재 및 협약을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 본 명세서에 인용된 모든 문헌 또는 문헌의 일부는 그들의 전문이 임의의 목적을 위해 본 명세서에 명확하게 포함된다. 포함된 문헌 중 하나 이상 또는 문헌의 일부가 본 출원의 용어의 정의와 상충되는 용어를 정의하는 경우에, 본 출원에 나타나는 정의도 조절한다. 그러나, 본 명세서에 인용된 임의의 참고문헌, 논문, 간행물, 특허, 특허공개 및 특허출원의 언급은 그들이 타당한 선행기술을 구성하거나 세계의 임의의 국가에서 통상적인 일반적 지식의 부분을 형성한다는 지식으로서 또는 임의의 형태의 제안이 아니며, 그렇게 취해져서는 안 된다.
본 설명에서, 임의의 농도 범위, 백분율 범위, 비율 범위 또는 정수 범위는 달리 표시되지 않는 한, 인용된 범위 내에서 임의의 정수의 값 및 적절할 때 이들의 적절한 분율(예컨대 정수의 1/10 및 1/100)을 포함하도록 이해되어야 한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "약"은 달리 표시되거나 또는 문맥으로부터 명확하지 않은 한, 표시된 범위, 값 또는 구조의 ± 20%를 의미한다. 본 명세서에서 사용되는 단수의 용어는 달리 표시되지 않는 한 열거된 구성성분 중 "하나 이상"을 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 대안의 사용(예를 들어, "또는")은 대안 중 하나, 둘 다 또는 이들의 임의의 조합을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "포함하다(include)" 및 "포함하다(comprise)"는 동의어로 사용된다. 추가로, 본 명세서에 기재된 구성성분(예를 들어, 도메인 또는 영역) 및 치환체의 다양한 조합을 포함하는 폴리펩타이드는 각각의 폴리펩타이드가 개개로 제시되는 것과 동일한 정도로 본 출원에 의해 개시된다는 것이 이해되어야 한다. 따라서, 개개 폴리펩타이드의 특정 구성성분의 선택은 본 개시내용의 범주 내에 있다.
일 양상에서, 본 발명은 필로바이러스에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 결합 도메인 또는 단백질(예를 들어, 항체 또는 항원-결합 부분)은 그것이 친화도 또는 105 M-1 이상의 Ka(즉, 1/M의 단위로 특정 결합 상호작용의 평형 결합 상수)로 표적에 결합하는 한편, 시험 샘플 내에 존재하는 다른 구성성분에 유의하게 결합하지 않는다면, 표적에 "특이적으로 결합한다". 결합 도메인은 "고친화도" 결합 도메인 및 "저친화도" 결합 도메인으로서 분류될 수 있다. "고친화도" 결합 도메인은 적어도 약 107 M-1, 적어도 약 108 M-1, 적어도 약 109 M-1, 적어도 약 1010 M-1, 적어도 약 1011 M-1, 적어도 약 1012 M-1 또는 적어도 약 1013 M-1의 Ka를 지니는 해당 결합 도메인을 지칭한다. "저친화도" 결합 도메인은 약 107 M-1까지, 약 106　M-1까지, 약 105　M-1까지의 Ka를 지니는 해당 결합 도메인을 지칭한다. 대안적으로, 친화도는 M 단위(예를 들어, 약 10-5 M 내지 약 10-13 M)를 지니는 특정 결합 상호작용의 평형 해리 상수(Kd)로서 정의될 수 있다. 본 개시내용에 따른 결합 도메인 폴리펩타이드 및 단일 쇄 폴리펩타이드의 친화도는 전통적인 기법을 이용하여 용이하게 결정될 수 있다(예를 들어, 문헌[Scatchard et al. (1949) Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660]; 및 미국 특허 제5,283,173호, 제5,468,614호, 또는 동등물).
일부 실시형태에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 마르부르크 바이러스 (MARV)의 Gp 상의 적어도 하나의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 항체 또는 항원-결합 부분은 또한 에볼라바이러스속의 구성원(예를 들어, 에볼라 바이러스 (EBOV))의 Gp 상에서 적어도 하나의 에피토프에 결합할 수 있다. 면역원성 선별 작제물은 MARV GP 및 EBOV GP의 다수의 바이러스주에 대해 생성되었다: GPe, GPeΔmuc, GPeΔmucΔw, GPcl. 표 2 및 도 1은 작제물의 특성을 설명하며; (i) MARV GP 및 EBOV GP 엑토도메인 작제물(GPe)은 막관통(TM) 도메인을 결여하고, 잔기 1 내지 637로 이루어지며; (ii) MARV GP 엑토도메인 뮤신-결실 작제물(GPeΔmuc)은 또한 뮤신-유사 도메인: 모든 MARV 바이러스주에 대해 Δ257-425을 결여하고; (iii) EBOV GP 엑토도메인 뮤신-결실 작제물(GPeΔmuc)은 또한 뮤신-유사도메인: EBOV, SUDV, BDBV에 대해 Δ314-463 및 RESTV에 대해 Δ316-470를 결여하며, MARV GP 작제물GPeΔmucΔw는 GP1 뮤신 도메인(Δ257-425)과 GP2-윙(Δ436-483)을 둘 다 결여하거나; 또는, (iv) 절단된 MARV GP(GPcl) 작제물은 엔도솜 프로테아제 절단을 모방하기 위해 효소 처리되었다. 에피토프는 MARV GP의 GP1 또는 GP2 영역에 대응할 수 있다. 본 발명의 항체 또는 항원-결합 부분에 의해 결합된 에피토프는 선형 또는 입체배좌일 수 있다. 항체는 마르부르크 바이러스의 하나 이상의 바이러스주에 결합할 수 있고, 또한 하나 이상의 유형의 필로바이러스에 결합할 수 있다. 본 조성물은 마르부르크 바이러스와 같은 필로바이러스 감염의 수동 또는 능동 면역요법에 대해 사용될 수 있거나, 또는 마르부르크 바이러스 또는 다른 유형의 필로바이러스로부터의 가염 위험에 있는 집단에서 예방적 백신으로서 사용된다.
본 항체 또는 항원-결합 부분은 단클론성 항체, 키메라 항체, 인간화된 항체, 다클론성 항체, 재조합 항체뿐만 아니라 앞서 언급한 것의 항원-결합 부분, 예를 들어, Fab, F(ab')2, Fab', F(ab)', Fv 및 단쇄 Fv(scFv)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 항체의 항원-결합 부분은 본 명세서에 기재된 바와 같은 MARV의 GP 상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체의 일부를 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는, "항체"는 항원-결합 부분을 포함하는 융합 단백질을 포함한다.
본 발명의 항체는 혼성세포 시리즈 CAN30, CAN40 및 CAN54에 의해 생성되는 뮤린 항체를 포함한다(표 1 참조). 또한 혼성세포 시리즈 CAN30, CAN40 및 CAN54에 의해 생성되는 항체의 항원-결합 부분을 포함하는 항체 또는 항원-결합 부분이 본 발명에 의해 포함된다. CAN30G1, CAN30G2, CAN30G3, CAN30G4, CAN30G5, CAN54G1, CAN54G2, CAN54G3 또는 CAN40G1은 혼성세포 클론 또는 대응하는 혼성세포 클론에 의해 생성된 단클론성 항체를 지칭한다. 이들 항체의 다양한 도메인의 아미노산 및 뉴클레오타이드 서열은 표 1에 제공된다. 예를 들어, 30G5, 54G2 및 40G1은 CAN30G5, CAN54G2 및 CAN40G1에 의해 각각 생성되는 혼성세포 클론 또는 단클론성 항체를 지칭한다.
본 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 CDR은 비인간 또는 인간 공급원으로부터 유래될 수 있다. 본 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 프레임워크는 인간, 인간화된, 비인간(예를 들어, 인간에서 항원성을 감소시키도록 변형된 뮤린 프레임워크), 또는 합성 프레임워크(예를 들어, 공통 서열)일 수 있다.
당업계에서 사용되고/되거나 허용된 용어의 2 이상의 정의가 있는 경우에, 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어의 정의는 명확하게 대조적으로 언급되지 않는 한 모든 이러한 의미를 포함하는 것으로 의도된다. 구체적 예는 중쇄와 경쇄 폴리펩타이드 둘 다의 가변 영역 내에서 발견되는 부위를 조합하는 비연속적 항원을 기재하기 위한 용어 "상동성 결정 영역"("CDR")의 사용이다. 이들 특정 영역은, 예를 들어, 본 명세서에 참고로 포함되는 문헌[Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of Proteins of Immunological Interest" (1983) 및 Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]에 의해 기재되었다. 카바트 및 코티아 정의는 서로에 대해 비교할 때 아미노산의 중복 또는 서브세트를 포함한다. 그럼에도 불구하고, 항체 또는 이의 변이체의 CDR을 지칭하기 위한 정의(또는 당업자에게 공지된 다른 정의)의 적용은 달리 표시되지 않는 한, 본 명세서에서 정의되고 사용되는 용어의 범주 내인 것으로 의도된다. 각각의 상기 인용한 참고문헌에 의해 정의된 바와 같은 CDR을 포함하는 적절한 아미노산은 이하의 표에 비교로서 제시한다. 특정 CDR을 포함하는 정확한 아미노산 수는 CDR의 서열 및 크기에 따라서 다를 것이다. 당업자는 어떤 아미노산이 항체의 가변 영역 아미노산 서열에 제공된 특정 CDR을 포함하는지를 일상적으로 결정할 수 있다.
Figure pct00001
CDR은 또한 IMGT(등록상표)(인터내셔날 이뮤노제네틱스 인포메이션 시스템(ImMunoGeneTics information system)(등록상표)) 넘버링을 이용하여 결정될 수 있다. H: 중쇄; K: 카파 또는 L: 경쇄. 카바트 등은 또한 임의의 항체에 적용가능한 가변 도메인 서열에 대한 넘버링 시스템을 정의하였다. 당업자는 서열 그 자체 이상의 임의의 실험 데이터에 대한 신뢰없이 임의의 가변 도메인 서열에 대한 "카바트 넘버링"의 이런 시스템을 분명하게 부여할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, "카바트 넘버링"은 문헌[Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequence of Proteins of Immunological Interest" (1983)]에 의해 제시된 넘버링 시스템을 지칭한다. 카바트 넘버링 시스템의 사용이 명확하게 주목되지 않는 한, 그러나, 본 개시내용의 모든 아미노산 서열에 대해 연속 넘버링이 사용된다.
일 실시형태에서, 본 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 적어도 1종의 중쇄 가변 영역 및/또는 적어도 1종의 경쇄 가변 영역을 함유한다. 중쇄 가변 영역(또는 경쇄 가변 영역) 은 다음의 순서로 아미노-말단으로부터 카복실-말단으로 배열되는 3개의 CDR 및 4개의 프레임워크 영역(FR)을 함유한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 문헌[Kabat, E. A., et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242, 1991. Chothia, C. et al., J. Mol. Biol. 196:901-917, 1987].
본 항체 또는 항원-결합 부분은 약 10-7 M 미만, 약 10-8 M 미만, 약 10-9 M 미만, 약 10-10 M 미만, 약 10-11 M 미만 또는 약 10-12 M 미만의 해리 상수(KD)를 지니는 MARV 당단백질의 입체배좌 또는 비입체배좌 에피토프(또는 둘 다)에 특이적으로 결합할 수 있다.
본 항체 또는 항원-결합 부분은 약 10-7 M 미만, 약 10-8 M 미만, 약 10-9 M 미만, 약 10-10 M 미만, 약 10-11 M 미만 또는 약 10-12 M 미만의 해리 상수(KD)를 지니는 EBOV 당단백질의 입체배좌 또는 비입체배좌 에피토프(또는 둘 다)에 특이적으로 결합할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "서열 동일성"은 2 이상의 폴리뉴클레오타이드 서열 사이의 또는 2 이상의 폴리펩타이드 서열 사이의 관계를 지칭한다. 하나의 서열 내 위치가 비교기 서열의 대응하는 위치에서 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기에 의해 점유될 때, 서열은 해당 위치에서 "동일한" 것으로 언급된다. "서열 동일성" 백분율은 "동일한" 위치의 수를 얻기 위해 동일한 핵산 또는 아민노산 잔기가 서열 둘 다에서 생기는 위치의 수를 결정함으로써 계산된다. 이어서, "동일한" 위치의 수를 비교창 내 위치의 총 수로 나누고, 100을 곱하여서 "서열 동일성"의 백분율을 얻는다. "서열 동일성" 백분율은 비교창에 걸쳐 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교함으로써 결정된다. 핵산 서열에 대한 비교창은, 예를 들어, 길이로 적어도 약 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 또는 1000개 이상의 핵산일 수 있다. 폴리펩타이드 서열에 대한 비교창은, 예를 들어, 길이로 적어도 약 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 300개 이상의 아미노산일 수 있다. 비교를 위해 서열을 최적으로 정렬하기 위해, 비교창에서 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열의 일부는 갭으로 칭해지는 첨가 또는 결실을 포함할 수 있는 한편, 기준 서열은 일정하게 유지된다. 최적의 정렬은 갭이 있을 때 조차도, 기준과 비교기 서열 사이의 "동일한" 위치의 가장 크게 가능한 수를 생성하는 정렬이다. 두 정렬 사이의 "서열 동일성" 백분율은 2004년 9월 1일에 미국 국립생물공학정보센터로부터 입수가능한 프로그램 "BLAST 2 시퀀스"의 버전을 이용하여 결정될 수 있는데, 이 프로그램은 프로그램 BLASTN(뉴클레오타이드 서열 비교용) 및 BLASTP(폴리펩타이드 서열 비교용)을 포함하며, 카를린(Karlin)및 앨트슐(Altschul)의 알고리즘에 기반한다(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90(12):5873-5877, 1993). "BLAST 2 서열"을 이용할 때, 2004년 9월 1일의 디폴트 매개변수인 매개변수는 단어 크기(3), 오픈 갭 페널티(11), 연장 갭 페널티(1), 갭 드롭오프(50), 예상값(10) 및 매트릭스 옵션을 포합하지만 이것으로 제한되지 않는 임의의 다른 필요한 매개변수에 대해 사용될 수 있다. 두 서열이 서로에 대해 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 서열 동일성을 가진다면, 2개의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열은 "실질적으로 유사한 서열 동일성" 또는 "실질적 서열 동일성"을 갖는 것으로 고려된다.
본 발명은 클론 CAN30G1, CAN30G2, CAN30G3, CAN30G4, CAN30G5, CAN54G1, CAN54G2, CAN54G3 또는 CAN40G1에 의해 생성되는 항체의 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역에 대해 가변 중쇄 영역(HCVR 또는 VH) 및 가변 경쇄 영역(LCVR 또는 VL) 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 70% 이상, 약 75% 이상, 약 80% 이상, 약 81% 이상, 약 82% 이상, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100% 동일성을 포함하는 항체 및 항체 단편을 포함하고(표 1 참조), MARV GP의 에피토프에 대해 결합할 수 있다.
관련된 실시형태에서, MARV GP의 에피토프에 대해 항체(또는 항원-결합 부분)는, 예를 들어, CAN30G1, CAN30G2, CAN30G3, CAN30G4, CAN30G5, CAN54G1, CAN54G2, CAN54G3 또는 CAN40G1의 가변 중쇄 영역 및/또는 가변 경쇄 영역의 CDR을 포함한다.
CAN30G5, CAN30G2, CAN30G1, CAN30G3, CAN30G4, CAN54G2 및 CAN40G1로부터의 가변영역의 CDR을 표 1에 나타낸다. 표 1은 또한 뮤린 CAN30G5, CAN30G2, CAN30G1, CAN30G3, CAN30G4, CAN54G2 및 CAN40G1 단클론성 항체의 다양한 영역의 아미노산 및 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 서열번호 14, 서열번호 38, 서열번호 62, 서열번호 86, 서열번호 110, 서열번호 134 및 서열번호 158로 이루어진 군으로부터 선택된 가변 중쇄 영역에 대해 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 81% 이상, 약 82% 이상, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역을 포함하고 MARV GP의 에피토프에 결합할 수 있다.
특정 실시형태에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 서열번호 14, 서열번호 38, 서열번호 62, 서열번호 86, 서열번호 110, 서열번호 134 및 서열번호 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역을 포함하고, MARV GP의 에피토프에 결합할 수 있다.
항체 또는 항원-결합 부분은 서열번호 2, 서열번호 26, 서열번호 50, 서열번호 74, 서열번호 98, 서열번호 122 및 서열번호 146으로 이루어진 군으로부터 선택된 가변 경쇄 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함할 수 있고, MARV GP의 에피토프에 결합할 수 있다.
특정 실시형태에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 서열번호 2, 서열번호 26, 서열번호 50, 서열번호 74, 서열번호 98, 서열번호 122 및 서열번호 146으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하고, MARV GP의 에피토프에 결합할 수 있다.
특정 실시형태에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 서열번호 14, 서열번호 38, 서열번호 62, 서열번호 86, 서열번호 110, 서열번호 134 및 서열번호 158로 이루어진 군으로부터 선택된 가변 중쇄 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역과 서열번호 2, 서열번호 26, 서열번호 50, 서열번호 74, 서열번호 98, 서열번호 122 및 서열번호 146으로 이루어진 군으로부터 선택된 가변 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역을 둘 다 포함하고, MARV GP의 에피토프에 결합할 수 있다.
항체 또는 항원-결합 부분은 가변 경쇄 영역 및 가변 중쇄 영역을 포함할 수 있되, (a) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함하며; (b) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 26에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하며; (c) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 62에 제시된 아미노산 서열을 포함하며; (d) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 86에서 제시된 아미노산 서열을 포함하며; (e) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 110에 제시된 아미노산 서열을 포함하며; (f) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 122에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (g) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 146에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 158에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
항체 또는 항원-결합 부분은 클론 CAN30G5, CAN54G2 또는 CAN40G1에 의해 생성되는 항체에 의해 결합되는 에피토프에 대해 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 100% 동일성으로 중복되거나 또는 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있고/있거나 MARV GP의 에피토프에 결합을 위해 클론 CAN30G5, CAN54G2 또는 CAN40G1에 의해 생성되는 항체와 경쟁한다.
항체 또는 항원-결합 부분은 클론 CAN30G5, CAN54G2 또는 CAN40G1에 의해 생성된 항체에 의해 결합된 에피토프와 중복되는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있고/있거나 MARV GP의 에피토프에 결합을 위해 클론 CAN30G5, CAN54G2 또는 CAN40G1에 의해 생성되는 항체와 경쟁한다.
일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 필로바이러스에 특이적으로 결합하고, (i) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 및 (ii) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하되, (a) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 6, 7 및 8 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 18, 19 및 20 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; (b) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 30, 31 및 32 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 42, 43 및 44 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (c) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 54, 55 및 56 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 66, 67 및 68 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, (d) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 78, 79 및 80 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 90, 91 및 92 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, (e) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 102, 103 및 104 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 114, 115 및 116 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, (f) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 126, 127 및 128 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 138, 139 및 140 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 (g) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 150, 151 및 152 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 162, 163 및 164 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
항체 또는 항원-결합 부분의 가변 중쇄 영역은 클론 CAN30G5, CAN30G2, CAN30G1, CAN30G3, CAN30G4, CAN54G2 또는 CAN40G1에 의해 생성된 항체의 1, 2 또는 3개의 CDR을 포함하는 1, 2 또는 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함할 수 있고, MARV GP의 에피토프에 결합할 수 있다. 항체 또는 항원-결합 부분의 가변 중쇄 CDR3(HCDR3)은 클론 CAN30G5, CAN30G2, CAN30G1, CAN30G3, CAN30G4, CAN54G2 또는 CAN40G1에 의해 생성되는 항체의 HCDR3을 포함할 수 있고, MARV GP의 에피토프에 결합할 수 있다.
항체 또는 항원-결합 부분의 가변 경쇄 영역은 클론 CAN30G5, CAN30G2, CAN30G1, CAN30G3, CAN30G4, CAN54G2 또는 CAN40G1에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 1, 2 또는 3개의 CDR을 포함할 수 있고, MARV GP의 에피토프에 결합할 수 있다.
항체는 인간화된 항체일 수 있다. 본 발명의 인간화된 항체는 항체가 인간 항체와 더 밀접하게 닮아있고, 여전히 그의 항원 결합 능력을 보유하도록 비항원 결합 영역(및/또는 항원-결합 영역)의 아미노산 서열이 변용된 비인간 종으로부터의 항체이다.
인간화된 항체는 항원 결합에 직접 연루되지 않은 가변 영역의 서열을 인간 가변 영역으로부터의 동등한 서열로 대체함으로써 생성될 수 있다. 해당 방법은 중쇄 또는 경쇄 중 적어도 하나로부터의 모든 또는 부분적 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열을 단리, 조작 및 발현시키는 단계를 포함한다. 이러한 핵산의 공급원은 당업자에게 잘 공지되어 있고, 예를 들어, MARV GP의 에피토프에 대해 항체를 생성하는 혼성세포로부터 얻을 수 있다. 이어서, 인간화된 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 재조합 DNA는 적절한 발현 벡터 내로 클로닝될 수 있다.
항체 경쇄 또는 중쇄 가변 영역은 상보성 결정 영역(CDR)으로서 지칭되는 3개의 초가변 영역에 의해 중단되는 프레임워크 영역으로 이루어진다. 인간화된 항체는 비-인간 종으로부터의 항체 분자이고, 비인간 종으로부터의 1, 2 또는 3개의(모든) CDR뿐만 아니라 인간 면역글로불린 분자로부터의 프레임워크 영역을 가질 수 있다.
본 발명의 인간화된 항체는 당업계에 공지된 방법에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 일단 비인간(예를 들어, 뮤린) 항체가 얻어지면, 가변 영역은 서열분석될 수 있고, CDR 및 프레임워크 잔기의 위치가 결정된다. 문헌[Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242. Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol., 196:901-917]. 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 선택적으로 대응하는 불변 영역에 결찰될 수 있다. CDR-접합 항체 분자는 CDR-접합 또는 CDR 치환에 의해 생성될 수 있다. 면역글로불린쇄의 1, 2 또는 모든 CDR은 대체될 수 있다. 예를 들어, 특정 항체의 모든 CDR은 비인간 동물(예를 들어, 마우스, 예컨대 표 1에 나타낸 CDR)의 적어도 일부일 수 있거나 또는 일부의 CDR만이 대체될 수 있다. 사전 결정된 항원(예를 들어, 올리고머 Aβ의 입체배좌 에피토프)에 대한 항체의 결합에 필요한 CDR을 유지하는 것만이 필요하다. Morrison, S. L., 1985, Science, 229:1202-1207. Oi et al., 1986, BioTechniques, 4:214. 미국 특허 제5,585,089호; 제5,225,539호; 제5,693,761호 및 제5,693,762호. 유럽 특허 제519596호. Jones et al., 1986, Nature, 321:552-525. Verhoeyan et al., 1988, Science, 239:1534. Beidler et al., 1988, J. Immunol., 141:4053-4060.
또한 인간, 토끼, 양, 개, 고양이, 소, 말, 염소, 돼지, 원숭이, 유인원, 고릴라, 침팬지, 오리, 거위, 닭, 양서류, 파충류 및 다른 동물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 적어도 1종의 다른 종으로부터의 서열로 대체된 다른 영역과 함께 본 명세서에 개시된 바와 같은 1, 2 또는 모든 CDR을 함유하는 항체 또는 항원-결합 부분이 본 명세서에 의해 포함된다.
키메라 항체는 상이한 부분이 상이한 동물 종으로부터 유래된 분자이다. 예를 들어, 항체는 뮤린 항체 및 인간 면역글로불린 불변 영역으로부터 유래된 가변 영역을 함유할 수 있다. 키메라 항체는 재조합 DNA 기법에 의해 생성될 수 있다. 문헌[Morrison, et al., Proc Natl Acad Sci, 81:6851-6855 (1984)]. 예를 들어, 뮤린(또는 다른 종) 단클론성 항체 분자를 암호화하는 유전자는 뮤린 Fc를 암호화하는 영역을 제거하기 위해 제한 효소에 의해 분해되고, 인간 Fc 불변 영역을 암호화하는 유전자의 동등한 부분은 치환된다. 키메라 항체는 뮤린 V 영역을 암호화하는 DNA가 인간 불변 영역을 암호화하는 DNA에 결찰될 수 있는 재조합 DNA 기법에 의해 생성될 수 있다. 문헌[Better et al., Science, 1988, 240:1041-1043. Liu et al. PNAS, 1987 84:3439-3443. Liu et al., J. Immunol., 1987, 139:3521-3526. Sun et al. PNAS, 1987, 84:214-218. Nishimura et al., Canc. Res., 1987, 47:999-1005. Wood et al. Nature, 1985, 314:446-449. Shaw et al., J. Natl. Cancer Inst., 1988, 80:1553-1559]. 국제 특허 출원 공개 WO1987002671호 및 WO 86/01533호. 유럽 특허 출원 제184, 187호; 제171,496호; 제125,023호; 및 제173,494호. 미국 특허 제4,816,567호.
본 발명의 항체는 전장 항체일 수 있거나 또는 Fab, F(ab')2, Fab', F(ab)', Fv, 단일쇄 Fv(scFv), 2가 폴리펩타이드, 다가 폴리펩타이드, 항체 융합 단백질 및 컨쥬게이트, 이황화 결합된 Fv, Fc, Fd, dAb 단편(예를 들어, Ward et al., Nature, 341:544-546 (1989)), 단리된 CDR, 다이어바디(diabodies), 트라이어바디(triabodies), 테트라바디(tetrabodies), 선형 항체, 단일쇄, 이중 특이성, 다중 특이성 항체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 항체 단편, 또는 이들의 변이체 및/또는 혼합물로부터 형성된 항원-결합 부분을 갖는 항체의 단편(또는 단편들)을 포함할 수 있다. 재조합 방법 또는 합성 링커를 이용하여 항체 단편을 결합함으로써 생성된 단일쇄 항체는 또한 본 발명에 의해 포함된다. 문헌[Bird et al. Science, 1988, 242:423-426. Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, 85:5879-5883].
항체 또는 항원-결합 부분은 단일특이성, 이중 특이성 또는 다중특이성일 수 있다. 다중특이성 또는 이중특이성 항체 또는 단편은 하나의 표적 폴리펩타이드의 상이한 에피토프(예를 들어, MARV GP의 에피토프)에 특이적일 수 있거나 또는 하나 이상의 표적 폴리펩타이드에 특이적인 항원-결합 도메인(예를 들어, MARV GP의 상이한 에피토프에 특이적인 항원-결합 도메인; MARV GP의 입체배좌 에피토프에 특이적인 항원-결합 도메인 및 MARV GP의 다른 항원; MARV GP의 에피토프에 특이적인 항원-결합 도메인 및 EBOV GP의 에피토프 또는 MARV GP 및 다른 종류의 항원, 예컨대 단백질, 펩타이드 등의 에피토프에 특이적인 항원-결합 도메인)을 함유할 수 있다. 일 실시형태에서, 다중특이성 항체 또는 항원-결합 부분은 적어도 2개의 상이한 가변 도메인을 포함하되, 각각의 가변 도메인은 별도의 항원에 또는 동일한 항원 상의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다.
일부 실시형태에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 하나 이상의 MARV 바이러스주의 GP에 결합한다. 특정 실시형태에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 MARV의 GP 및 에볼라바이러스속의 적어도 하나의 구성원의 GP에 결합한다. 판필로바이러스 항체의 일 예는 항체 CAN40G1이다. 판필로바이러스 항체는 다중 필로바이러스에 의한 감염을 중화 또는 예방할 수 있다.
본 항체는 다른 기능성 분자, 예를 들어 다른 펩타이드 또는 단백질에 연결되거나 또는 공동발현될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 이의 단편은 제2 결합 특이성을 지니는 이중 특이성 또는 다중특이성 항체를 생성하기 위해 하나 이상의 다른 분자 독립체, 예컨대 다른 항체 또는 항체 단편에(예를 들어, 화학 결합, 유전자 융합, 비공유 결합 또는 기타에 의해) 기능적으로 연결될 수 있다. 예를 들어, 본 발명은 이중 특이성 항체를 포함하되, 면역글로불린 중 하나의 암은 MARV GP의 에피토프에 특이적이고, 면역글로불린의 다른 암은 제2 치료적 표적에 대해 특이적이거나 또는 치료적 모이어티에 컨쥬게이팅된다. 다른 실시형태에서, 본 발명은 치료적 목적을 위해 포획, 검출, 제거를 위한 MARV GP의 에피토프와 리간드 둘 다에 특이적인 이중 특이성 항체를 포함한다.
모든 항체 아이소타입은 IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA (IgA1, IgA2), IgD 또는 IgE를 포함하는 본 발명에 의해 포함된다. 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 포유류(예를 들어, 마우스, 인간) 항체 또는 이의 항원-결합 부분일 수 있다. 항체의 경쇄는 카파 또는 람다 유형을 가질 수 있다.
화학적으로 및/또는 효소적으로 처리된 항체 또는 항원-결합 부분은 또한 본 출원에 포함된다(예컨대 탈글리코실화, 페길화 등). 항체 또는 항원-결합 부분은 글리코실화 부위(예를 들어 비글리코실화) 등의 침묵과 같이 분자적으로 조작될 수 있다.
항체 또는 항원-결합 부분은 펩타이드로부터 형성될 수 있다. 펩타이드는 또한 생물학적 활성, 예를 들어 항원의 결합을 나타내는 펩타이드의 변이체, 유사체, 오솔로그, 상동체 및 유도체를 포함할 수 있다. 펩타이드는 또한 아미노산의 하나 이상의 유사체(예를 들어, 비천연 유래 아미노산, 비관련 생물학적 시스템에서 천연 유래로만 생기는 아미노산, 포유류 시스템으로부터의 변형된 아미노산 등을 포함함), 치환된 결합뿐만 아니라 당업계에 공지된 다른 변형을 지니는 펩타이드를 함유할 수 있다. 특정 예에서, 특이적 아미노산은 치환, 결실, 침묵 또는 첨가될 수 있다.
본 출원은 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원-결합 부분의 글리코실화 변이체를 포함한다. 이들 변용은 결합 활성과 같은 펩타이드 생물학적 특성에 대해 실질적인 효과를 갖지 않지만, 반감기 및/또는 생체이용가능성을 개선시킬 수 있다. 예를 들어, 항체는 예컨대 항원에 대한 결합을 개선시키기 위해 프레임워크 영역 내에 아미노산 치환을 가질 수 있다. 다른 예에서, 선택된, 소수의 수용체(acceptor) 프레임워크 잔기는 대응하는 공여 아미노산에 의해 대체될 수 있다. 공여체 프레임워크는 성숙 또는 생식계열 인간 항체 프레임워크 서열 또는 공통 서열일 수 있다. 아미노산 치환의 표현형을 침묵으로 제조하는 방법에 관한 가이드는 문헌[Bowie et al., Science, 247: 1306-1310 (1990). Cunningham et al., Science, 244: 1081-1085 (1989). Ausubel (ed.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Inc. (1994). T. Maniatis, E. F. Fritsch and J. Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989). Pearson, Methods Mol. Biol. 243:307-31 (1994). Gonnet et al., Science 256:1443-45 (1992)]에서 제공된다.
항체 또는 항원-결합 부분은 유도체화되거나 또는 다른 기능성 분자에 연결될 수 있다. 예를 들어, 항체는 (화학적 결합, 유전자 융합, 비공유 상호작용 등에 의해) 다른 분자(예컨대 스트렙타비딘 코어 영역 또는 폴리히스티딘 태그)와의 결합을 매개할 수 있는 하나 이상의 다른 독립체, 예컨대 다른 항체, 검출가능한 제제, 세포독성제, 약제학적 제제, 단백질 또는 펩타이드에 기능적으로 연결될 수 있거나, 또는 혈액 뇌 장벽(예를 들어 콜레라 독소 A 서브유닛에 대한 융합)을 가로지른 흡수를 촉진시키거나, 차단하거나 또는 단백질 정제에서 유용한 수용기, 아미노산 링커, 신호 서열, 면역원성 담체 또는 리간드, 예컨대 글루타티온-S-트랜스퍼라제, 히스티딘 태그 및 스타필로코커스 단백질 A와 상호작용할 수 있다. 일 유형의 유도체화된 단백질은 (동일한 유형의 또는 상이한 유형의) 2 이상의 단백질을 가교함으로써 생성된다. 적합한 가교제는 적절한 스페이서(예를 들어, m-말레이미도벤조일-N-하이드록시숙신이미드 에스터) 또는 동종 이작용성(예를 들어, 다이숙신이미딜 수베레이트)에 의해 분리된 2개의 별개의 반응기를 갖는 이종이작용성인 것을 포함한다. 이러한 링커는 일리노이주 락포드에 소재한 피어스 케미컬 컴퍼니사(Pierce Chemical Company)로부터 입수가능하다. 단백질이 유도체화(또는 표지)될 수 있는 유용한 검출가능한 제제는 형광 화합물, 다양한 효소, 보결 분자단, 발광 물질, 생발광 물질 및 방사성 물질을 포함한다. 비제한적이고, 예시적인 형광 검출가능한 제제는 플루오레세인, 플루오레세인 아이소티오사이아네이트, 로다민, 및 피코에리트린을 포함한다. 단백질 또는 항체는 검출가능한 효소, 예컨대 알칼린 포스파타제, 겨자무 과산화효소, 베타-갈락토시다제, 아세틸콜린에스터라제, 글루코스 옥시다제 등에 의해 유도체화될 수 있다. 단백질은 또한 보결분자단(예를 들어, 스트렙타비딘/바이오틴 및 아비딘/바이오틴)에 의해 유도체화될 수 있다.
본 폴리펩타이드는 본 명세서에 개시된항체 또는 이의 항원-결합 부분의 기능적으로 활성인 변이체일 수 있으며, 예를 들어, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5% 또는 약 1% 미만의 아미노산 잔기가 치환 또는 결실되지만, MARV GP의 에피토프에 대한 결합을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 본질적으로 동일한 면역학적 특성을 보유한다.
본 발명은 또한 MARV GP의 에피토프에 특이적으로 결합하는 본 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 암호화하는 핵산을 포함한다. 핵산은, 예를 들어, 본 항체의 모두 또는 일부, 예를 들어 항체 또는 이의 단편, 유도체, 돌연변이체 또는 변이체의 쇄 중 하나 또는 둘 다를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 핵산은 하나 이상의 추가적인 서열, 예를 들어, 조절 서열을 포함할 수 있고/있거나 더 큰 핵산, 예를 들어 벡터의 부분일 수 있다. 핵산은 본 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 생성하기 위해 세포에서 발현될 수 있다. 본 발명의 단리된 핵산은 서열번호 2, 서열번호 26, 서열번호 50, 서열번호 74, 서열번호 98, 서열번호 122 및 서열번호 146에 대해 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 100% 동일성을 포함하는 펩타이드를 암호화하는 서열을 포함할 수 있다. 본 발명의 단리된 핵산은 서열번호 14, 서열번호 38, 서열번호 62, 서열번호 86, 서열번호 110, 서열번호 134 및 서열번호 158에 대해 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 100% 동일성을 포함하는 펩타이드를 암호화하는 서열을 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 25, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 37, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 73, 서열번호 75, 서열번호 76, 서열번호 77, 서열번호 85, 서열번호 87, 서열번호 88, 서열번호 89, 서열번호 97, 서열번호 99, 서열번호 100, 서열번호 101, 서열번호 109, 서열번호 111, 서열번호 112, 서열번호 113, 서열번호 121, 서열번호 123, 서열번호 124, 서열번호 125, 서열번호 133, 서열번호 135, 서열번호 136, 서열번호 137, 서열번호 145, 서열번호 147, 서열번호 148, 서열번호 149, 서열번호 157, 서열번호 159, 서열번호 160 및 서열번호 161로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
다른 양상에서, 본 발명은 본 항체 또는 이의 일부를 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터를 제공한다. 본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 임의의 핵산 분자 또는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터를 포함한다. 벡터의 예는 플라스미드, 바이러스 벡터, 비에피솜 포유류 벡터 및 발현 벡터, 예를 들어, 재조합 발현 벡터를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 발명의 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 핵산의 발현에 적합한 형태로 본 발명의 핵산을 포함할 수 있다. 재조합 발현 벡터는 발현을 위해 사용될 숙주 세포에 기반하여 선택되는 하나 이상의 조절 서열을 포함하는데, 이는 발현될 핵산 서열에 작동가능하게 연결된다. 조절 서열은, 예를 들어, 조절된 핵산 상에 직접적으로, 또는 하나 이상의 다른 분자(예를 들어, 조절 서열 및/또는 핵산에 결합하는 폴리펩타이드)의 작용을 통해 그것의 효과를 발휘할 수 있다. 조절 서열의 예는 프로모터, 인핸서 및 다른 발현 제어 구성요소(예를 들어, 폴리아데닐화 신호)를 포함한다. 조절 서열의 추가적인 예는, 예를 들어, 문헌[Goeddel, 1990, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. and Baron et al., 1995, Nucleic Acids Res. 23:3605-06]에 기재되어 있다. 조절 서열은 다수 유형의 숙주 세포에서 뉴클레오타이드 서열의 구성적 발현을 지시하는 것(예를 들어, SV40 초기 유전자 인핸서, 라우스 육종 바이러스 프로모터, 거대세포바이러스 프로모터 등), 특정 숙주 세포에서만 뉴클레오타이드 서열의 발현을 지시하는 것(예를 들어, 조직-특이적 조절 서열, 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 문헌[Voss et al., 1986, Trends Biochem. Sci. 11:287, Maniatis et al., 1987, Science 236:1237]), 및 특정 치료 또는 조건에 반응한 뉴클레오타이드 서열의 유도성 발현을 지시하는 것(예를 들어, 포유류 세포에서 메탈로티오닌 프로모터, 원핵생물과 진핵생물 시스템 둘 다에서 반응성인 tet-반응성 및/또는 스트렙토마이신 등)을 포함한다. 발현 벡터의 설계는 형질전환될 숙주 세포, 목적으로 하는 단백질의 발현 수준 등의 선택으로서 이러한 인자에 의존할 수 있다는 것이 당업자에 의해 인식될 것이다. 본 발명의 발현 벡터는 숙주 세포 내로 도입될 수 있고, 이에 의해 본 명세서에 기재된 바와 같은 핵산에 의해 암호화된 융합 단백질 또는 펩타이드를 포함하는 단백질 또는 펩타이드를 생성할 수 있다.
변화는 돌연변이에 의해 핵산 내로 도입될 수 있고, 이에 의해 그것이 암호화하는 폴리펩타이드(예를 들어, 본 항체 또는 이의 단편)의 아미노산 서열에서의 변화를 야기한다. 돌연변이는 당업계에 공지된 임의의 기법을 이용하여 도입될 수 있다. 일 실시형태에서, 하나 이상의 특정 아미노산 잔기는, 예를 들어, 부위-지정 돌연변이유발 프로토콜을 이용하여 변화된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 무작위로 선택된 잔기는, 예를 들어, 무작위 돌연변이유발 프로토콜을 이용하여 변화된다. 그러나, 이는 돌연변이체 폴리펩타이드가 발현되고 목적으로 하는 특성(예를 들어, MARV GP에 대한 결합)에 대해 선별될 수 있도록 이루어진다.
본 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 기능적으로 활성인 변이체를 암호화하는 핵산 분자는 또한 본 발명에 의해 포함된다. 이들 핵산 분자는 중간 엄격, 높은 엄격 또는 매우 높은 엄격 조건 하에서 임의의 본 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 암호화하는 핵산과 혼성화할 수 있다. 혼성화 반응을 수행하기 위한 가이드는 본 명세서에서 참고로 포함되는 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. 6.3.1-6.3.6, 1989]에서 발견될 수 있다. 본 명세서에서 지칭되는 구체적 혼성화 조건은 다음과 같다: 1) 중간 엄격 혼성화 조건: 약 45℃에서 6XSSC, 다음에 60℃에서 0.2XSSC, 0.1% SDS 중에서 1회 이상의 세척; 2) 높은 엄격 혼성화 조건: 약 45℃에서 6XSSC, 다음에 65℃에서 0.2XSSC, 0.1% SDS 중에서 1회 이상의 세척; 3) 매우 높은 엄격 혼성화 조건: 65℃에서 0.5M 인산 나트륨, 7% SDS, 다음에 65℃에서 0.2XSSC, 1% SDS에서 1회 이상의 세척.
본 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 암호화하는 핵산은 적합한 발현 시스템에서 발현될 수 있는 발현 벡터 내로 도입될 수 있고, 이어서, 발현된 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 단리 또는 정제된다. 선택적으로, 본 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 암호화하는 핵산은 무세포 번역 시스템에서 번역될 수 있다. 미국 특허 제4,816,567호. 문헌[Queen et al., Proc Natl Acad Sci USA, 86:10029-10033 (1989)].
본 항체 또는 이의 일부는 목적으로 하는 항체의 경쇄 및 중쇄(또는 이의 일부)를 암호화하는 DNA에 의해 형질전환된 숙주 세포에 의해 생성될 수 있다. 항체는 표준 기법을 이용하여 이들 배양 상청액 및/또는 세포로부터 단리 및 정제될 수 있다. 예를 들어, 숙주 세포는 항체의 경쇄, 중쇄 또는 둘 다를 암호화하는 DNA에 의해 형질전환될 수 있다. 재조합 DNA 기법은 또한 결합을 위해 필수적이지 않은 경쇄 및 중쇄 중 하나 또는 둘 다를 암호화하는 DNA의 일부 또는 모두, 예를 들어, 불변 영역을 제거하기 위해 사용될 수 있다.
본 핵산은 원핵세포 및 진핵세포, 예를 들어, 박테리아 세포(예를 들어, 이콜라이(E. coli)), 효모 세포, 식물 세포, 곤충 세포 및 포유류 세포를 포함하는 다양한 적합한 세포에서 발현될 수 있다. 다수의 포유류 세포주는 당업계에 공지되어 있고, 미국 미생물 보존센터(American Type Culture Collection: ATCC)로부터 입수가능한 불멸 세포주를 포함한다. 세포의 비제한적 예는 원숭이 신장 세포(COS, 예를 들어, COS-1, COS-7), HEK293, 새끼 햄스터 신장(BHK, 예를 들어, BHK21), 중국 햄스터 난소(CHO), NS0, PerC6, BSC-1, 인간 간세포 암종 세포(예를 들어, Hep G2), SP2/0, 헬라(HeLa), 마딘-다비(Madin-Darby) 소 신장(MDBK), 골수종 및 림프종 세포의 모 세포, 유도체 및/또는 공학 처리된 변이체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 포유류 유래 또는 포유류-유사 특징의 모든 세포주를 포함한다. 공학처리된 변이체는, 예를 들어, 변형된 글리칸 프로파일 및/또는 부위-특이적 통합 부위 유도체를 포함한다.
본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 핵산을 포함하는 세포를 제공한다. 세포는 혼성세포 또는 형질감염체일 수 있다. 세포의 유형은 상기 논의된다.
본 항체 또는 항원-결합 부분은 다양한 세포에서 발현될 수 있다. 세포의 유형은 상기 논의된다.
대안적으로, 본 항체 또는 항원-결합 부분은 당업계에 잘 공지된 고체상 절차에 의해 합성될 수 있다. 고체상 펩타이드 합성: 문헌[A Practical Approach by E. Atherton and R. C. Sheppard, published by IRL at Oxford University Press (1989). Methods in Molecular Biology, Vol. 35: Peptide Synthesis Protocols (ed. M. W.Pennington and B. M. Dunn), chapter 7. Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd Ed., Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984). G. Barany and R. B. Merrifield, The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, editors E. Gross and J. Meienhofer, Vol. 1 and Vol. 2, Academic Press, New York, (1980), pp. 3-254. M. Bodansky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin (1984)].
면역원 및 선별 펩타이드로서 사용되지만 이들로 제한되지 않는 본 항원 및 작제물을 제조하기 위해 전통적인 방법이 사용될 수 있다.
본 발명에서, 마르부르크바이러스(MARV) 및 에볼라바이러스(EBOV) 당단백질(GP) 항원은 초파리 S2 및 스포돕테라 Sf9에서 안정한 세포주 발현에 의해, 또는 Gnt-/- HEK293 세포에서 일시적 형질감염에 의해 생성되었다. 단백질은 퀴아젠(Qiagen) 스트라탁틴 또는 로슈(Roche) 항-HA 친화도 수지를 각각 이용하는 정제를 용이하게 하기 위해 C 말단에서 스트렙 또는 HA 태그에 의해 공학처리되었다.
면역원성 선별 작제물은 MARV GP 및 EBOV GP의 다수의 바이러스주에 대해 생성되었다: GPe, GPeΔmuc, GPeΔmucΔw, GPcl. 표 2 및 도 1은 작제물의 특성을 설명하며; (i) MARV GP 및 EBOV GP 엑토도메인 작제물(GPe)은 막관통(TM) 도메인을 결여하고, 잔기 1 내지 637로 이루어지며; (ii) MARV GP 엑토도메인 뮤신-결실 작제물(GPeΔmuc)은 또한 뮤신-유사 도메인: 모든 MARV 바이러스주에 대해 Δ257-425을 결여하고; (iii) EBOV GP 엑토도메인 뮤신-결실 작제물(GPeΔmuc)은 또한 뮤신-유사도메인: EBOV, SUDV, BDBV에 대해 Δ314-463 및 RESTV에 대해 Δ316-470를 결여하며, MARV GP 작제물GPeΔmucΔw는 GP1 뮤신 도메인(Δ257-425)과 GP2-윙(Δ436-483)을 둘 다 결여하거나; 절단된 MARV GP(GPcl) 작제물은 엔도솜 프로테아제 절단을 모방하기 위해 생성되었다. 작제물을 37℃에서 1시간 동안 0.01㎎ 트립신과 함께 1㎎ MARV Ravn GPeΔmuc의 인큐베이션에 의해 생성하였다. 절단된 EBOV GP를 서몰리신에 의한 처리에 의해 생성하였다. GPe 단백질을 수퍼로스 6에 의해 추가로 정제하고, 모든 다른 GP 단백질을 수퍼덱스 200(Superdex 200) 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제하였다.
다클론성 항혈청 또는 단클론성 항체를 포함하는 본 발명의 항체를 준비하기 위해 전통적인 방법을 사용할 수 있다.
다클론성 항체를 생성하기 위해, 포유류(예를 들어 마우스, 햄스터 또는 토끼)를 포유류에서 항체 반응을 유발하는 에피토프의 면역원성 형태에 의해 면역화시킬 수 있다. 면역화 후에, 항혈청을 얻을 수 있고, 요망된다면, 다클론성 항체를 혈청으로부터 단리시킬 수 있다.
일 실시형태에서, 본 발명은 MARV GP의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체를 발현시키는 혼성세포를 제조하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 다음의 단계들을 함유한다: MARV GP(예를 들어, 본 명세서에 개시된 뮤신 결실된 MARV GP 또는 다른 펩타이드)의 에피토프를 포함하는 조성물을 이용하여 동물을 면역화시키는 단계; 동물로부터 비장세포를 단리시키는 단계; 비장세포로부터 혼성세포를 생성하는 단계; 및 MARV GP의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체를 생성하는 혼성세포를 선택하는 단계. 문헌[Kohler and Milstein, Nature, 256: 495, 1975. Harlow, E. and Lane, D. Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988].
마우스는 항원과 함께 피하로, 복강내로 또는 정맥내로 면역화될 수 있다. 면역화 후에, 하나 이상의 부스트가 제공될 수도 있고 제공되지 않을 수도 있다. 혈장 내 항체의 역가는, 예를 들어, ELISA(효소-결합 면역흡착 분석), 다른 면역분석 절차 또는 유세포분석에 의해 모니터링될 수 있다. MARV GP의 에피토프에 대해 충분한 역가의 항체를 지니는 마우스를 융합을 위해 사용한다. 마우스는 희생 및 비장의 제거 3일 전에 항원에 의해 부스팅될 수도 있고 되지 않을 수도 있다. 마우스는 희생 전 및 비장의 제거 전에 상이한 항원에 의해 부스팅될 수도 있고 되지 않을 수도 있다. 마우스 비장세포는 단리되고 마우스 골수종 세포주에 PEG와 함께 융합된다. 이어서, 얻어진 혼성세포는 항원-특이적 항체의 생성을 위해 선별된다. 세포는 플레이팅되고, 이어서, 선택적 배지에서 인큐베이션된다. 이어서, 개개 웰로부터의 상청액은 항원에 대해 단클론성 항체에 대해 ELISA에 의해 선별된다. 항체 분비 혼성세포는 재플레이팅되고, 선별되고 나서, 항-항원 단클론성 항체에 대해 여전히 양성이라면, 희석을 제한함으로써 다시 클로닝될 수 있다.
항원, 예를 들어, MARV GP의 에피토프의 면역원성을 증가시키기 위해 사용될 수 있는 보조제는 펩타이드 또는 펩타이드의 조합물에 대해 면역 반응을 증가시키도록 작용하는 임의의 화합물 또는 화합물들을 포함한다. 보조제의 비제한적 예는 명반, 인산알루미늄, 수산화알루미늄, MF59(4.3% w/v 스쿠알렌, 0.5% w/v 폴리솔베이트 80(트윈(Tween) 80), 0.5% w/v 솔비탄 트라이올레이트(스판 85)), CpG-함유 핵산, QS21(사포닌 보조제), MPL(모노포스포릴 지질 A), 3DMPL(3-O-데아실화된 MPL), 아퀼라사(Aquilla)의 추출물, ISCOMS(예를 들어, 문헌[Sjolander et al. (1998) J. Leukocyte Biol. 64:713]; WO90/03184; WO96/11711; WO 00/48630; WO98/36772; WO00/41720; WO06/134423 및 WO07/026190), LT/CT 돌연변이체, 폴리(D,L-락타이드-코-글리콜라이드)(PLG) 마이크로입자, Quil A, 인터류킨, 프로인트, N-아세틸-무라밀-L-트레오닐-D-아이소글루타민(thr-MDP), N-아세틸-노르-무라밀-L-알라닐-D-아이소글루타민(CGP 11637, 노르-MDP로서 지칭됨), N-아세틸무라밀-L-닐알라-D-아이소글루타민일-L-알라닌-2-(1'-2'-딥-알미토일-sn-글리세로-3-하이드록시포스포릴옥시)-에틸아민(MTP-PE로서 지칭되는 CGP 19835A), 및 2% 스쿠알렌/트윈 80 에멀전 중에서 박테리아로부터 추출된 3가지 성분(모노포스포릴 지질 A, 트레할로스 다이마이콜레이트 및 세포벽 골격(MPL+TDM+CWS))을 함유하는 RIBI를 포함한다.
면역화된 동물은 면역원을, 예컨대, 이하로 제한되는 것은 아니지만, 마우스, 토끼, 래트, 햄스터, 염소, 말, 원숭이, 개코원숭이 및 인간에게 투여할 때 회복가능한 항체를 생성할 수 있는 임의의 동물일 수 있다. 일 양상에서, 숙주는 유전자이식이며, 인간 항체를 생성하고, 예를 들어, 마우스는 인간 면역글로불린 유전자 세그먼트를 발현시킨다. 미국 특허 제8,236,311호; 제7,625,559호 및 제5,770,429호(이들 각각의 개시내용은 본 명세서에 전문이 참고로 포함됨). 문헌[Lonberg et al., Nature 368(6474): 856-859, 1994. Lonberg, N., Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101, 1994. Lonberg, N. and Huszar, D., Intern. Rev. Immunol., 13: 65-93, 1995. Harding, F. and Lonberg, N., Ann. N.Y. Acad. Sci., 764:536-546, 1995].
숙주가 면역화되고 항체가 생성된 후에, 항체를 분석하여 그들이 관심 대상의 항원에 특이적이라는 것을 확인하고, 그들이 다른 항원과의 임의의 교차반응성을 나타내는지의 여부를 결정한다. 이러한 분석을 수행하는 한 가지 방법은 미국 특허 공개 제2004/0126829호에 기재된 바와 같은 혈청 선별 분석이다. MARV GP의 에피토프에 대한 항체는 다양한 공지된 기법에 의해 항원에 결합하는 것을 특징으로 할 수 있다.
예를 들어, ELISA에서, 마이크로타이터 플레이트를 PBS 중의 항원으로 코팅하고, 이어서, PBS 중에서 희석시킨 소 혈청 알부민(BSA)과 같은 부적절한 단백질로 차단시킨다. 항원-면역화된 마우스로부터의 혈장의 희석을 각각의 웰에 첨가하고 나서, 인큐베이션시킨다. 플레이트를 세척하고, 이어서, 효소(예를 들어, 알칼린 포스파타제)에 컨쥬게이팅된 2차 항체와 함께 인큐베이션시켰다. 세척 후에, 플레이트를 효소의 기질(예를 들어, ABTS)과 함께 연구하고, 구체적 OD에서 분석하였다. 다른 실시형태에서, 선택된 단클론성 항체가 독특한 에피토프에 결합하는지의 여부를 결정하기 위해, 항체는 바이오틴일화될 수 있고, 이어서, 스트렙타비딘 표지된 프로브에 의해 검출될 수 있다. 항-항원 항체를 웨스턴 블롯팅에 의해 항원과의 반응성에 대해 시험할 수 있다.
항체를 또한 시험관내 다중복합 비드-기반 면역분석에 의해 분석할 수 있다. 다중복합 비드 기반 면역분석, 예컨대 루미넥스(Luminex)(등록상표) xMAP(등록상표) 기법은 색-암호화 비드에 결합된 항원-함유(또는 에피토프-함유) 펩타이드(또는 단백질)의 라이브러리를 이용하여 하나의 분석물의 측정 또는 다중 분석물의 동시 측정을 허용한다. 각각의 비드는 레이저에 의해 여기될 때 그것이 방출하는 독특한 파장에 의해 동정된다. 정량화는 비드-결합 항체 비드에 의해 포획된 특이적 분석물에 대해 친화도를 지니는 형광 표지된 검출 항체를 이용하여 샌드위치 분석에 의해 수행된다. 제2 레이저에 의한 여기는 결합된 검출 항체의 양을 판독한다. 문헌[Houser, Brett, Using Bead-Based Multiplexing Immunoassays to Explore Cellular Response to Drugs, Drug Discover and Development, May 9, 2011]. 루미넥스(Luminex)(등록상표) xMAP(등록상표) 면역분석에서 사용될 수 있는 비드는 매그플렉스(MagPlex)(등록상표), 마이크로플렉스(MicroPlex)(등록상표), 룸아비딘(LumAvidin)(등록상표), 세로맵(SeroMAP)(상표명) 마이크로스피어 등을 포함한다. 매그플렉스(MagPlex)(등록상표) 마이크로스피어는 형광 염료로 내부에 표지되고 리간드(또는 생체분자)의 공유 부착을 위한 표면 카복실기를 함유하는 초상자성 마이크로스피어이다. 문헌[Baker et al., Conversion of a Capture ELISA to a Luminex® xMAP® Assay using a Multiplex Antibody Screening Method, J. Vis. Exp., (65), e4084 10.3791/4084, DOI: 10.3791/4084 (2012). Fulton et al., Advanced multiplexed analysis with the FlowMetrix system. Clinical Chemistry, 43, 1749-1756 (1997). Carson et al., Simultaneous quantitation of 15 cytokines using a multiplexed flow cytometric assay, J. Immunol. Methods, 227, 41-52 (1999)].
일 실시형태에서, 샘플 내 MARV GP의 에피토프에 대한 항체의 존재를 검출하기 위해, GP는 xMAP(등록상표) 플랫폼을 다중복합화하는 것에 기반하여 매그플렉스(MagPlex)(등록상표) 마이크로스피어에 결합되고, 매그픽스(MagPix)(등록상표) 기기(텍사스주 오스틴에 소재한 루미넥스 코포레이션(Luminex Corporation)) 상에서 분석하였다. 이어서, 샘플을 GP-결합 마이크로스피어와 접촉하고 나서, 면역분석을 사용하여 GP에 특이적인 항체를 검출하고 정량화한다.
상이한 펩타이드, 예를 들어, 본 명세서에 개시된 바와 같은 Ravn GPeΔmuc, 앙골라 GPeΔmuc, 무소케 GPeΔmuc, Ci67 GPeΔmuc, Ravn GPe, 앙골라 GPe, EBOV GPe, SUDV GPe, BDBV GPe, RESTV GPe, EBOV GPeΔmuc, SUDV GPeΔmuc, BDBV GPeΔmuc, RESTV GPeΔmuc, Ravn GPeΔmucΔw 펩타이드는 매그플렉스(MagPlex)(등록상표) 마이크로스피어의 상이한 세트 또는 영역에 결합될 수 있다. 각각의 이들 영역은 독특한 내부 형광 염료를 갖기 때문에, 면역분석은 상이한 펩타이드에 특이적인 항체 간을 구별할 수 있다.
바이어코어(Biacore)(상표명) 분석은 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 기반하여 단백질-단백질 상호작용 및 결합 친화도를 측정함으로써 항체를 특성규명하는데 사용될 수 있다. 문헌[Karlsson et al., Analysis of active antibody concentration, Journal of Immunological Methods, (1993) 166, 75-84. Markey F., Measuring concentration, Biajournal, 1999, 2: 8 - 11]. 항체 역가는 또한 방사선면역분석법에 의해 측정될 수 있다.
MARV GP의 에피토프에 바람직하게는 고친화도로 결합하는 항체를 생성하는 혼성세포는 이어서 다시 클로닝되고, 추가로 특성규명될 수 있다. 이어서, (ELISA에 의해) 모세포의 반응성을 보유하는 각각의 혼성세포로부터의 하나의 클론은 세포 뱅크의 제조 및 항체 정제를 위해 선택될 수 있다.
항-항원 항체를 정제하기 위해, 배양한 혼성세포로부터의 상청액은 단백질 A-세파로스(뉴저지주 피츠카타웨이에 소재한 파마시아(Pharmacia))를 이용한 친화도 크로마토그래피 전에 여과되고 농축될 수 있다.
본 항체 또는 항원-결합 부분은 시험관내 및 생체내 치료 및/또는 예방 효용을 가진다. 예를 들어, 이들 항체는 배양물에서, 예를 들어, 시험관내 또는 생체밖에서 세포에, 또는 예를 들어, MARV 감염과 같은 필로바이러스 감염을 예방하고, 감염의 개시를 저해 또는 지연시키거나, 감염의 진행을 늦추기 위해, 생체내에서 대상체에 투여될 수 있다. 본 발명은 샘플 내에서 필로바이러스 당단백질(예를 들어, 마르부르크 바이러스, 에볼라 바이러스, 수단 바이러스, 분디부교 바이러스, 타이숲 바이러스 또는 레스턴 바이러스 당단백질)을 검출하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 샘플을 본 명세서에 기재된 임의의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분과 접촉시키는 단계를 포함한다. 샘플은 필로바이러스 감염을 갖는 것으로 의심되거나 또는 필로바이러스 감염의 위험에 있는 대상체로부터의 세포, 조직 또는 생물학적 유체일 수 있다.
본 출원에 의해 포함되는 필로바이러스 감염은 마르부르크바이러스 및 에볼라바이러스를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 조성물을 받는 감염된 대상체는 경증, 중증등 또는 중증의 증상을 지니고 감염의 초기, 중기 또는 후기에 있을 수 있다. 다른 경우에, 바이러스에 노출 중인 것으로 의심되는 개체는 또한 이러한 치료를 받을 수 있고, 따라서 바이러스의 확산은 중단될 수 있거나 또는 증상이 발생할 그들의 위험은 감소 또는 제한될 수 있다. 다시 말해서, 항-MARV 치료는 MARV 감염, 다른 필로바이러스 감염을 예방하거나, 또는 감염의 치명적 증상의 개시를 저해하는 방법으로서 적용될 수 있다.
본 조성물, 항체 및 항원-결합 부분은 필로바이러스 감염의 개선, 예방 및/또는 치료를 위해 대상체에게 투여될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 감염 또는 질환을 개선 또는 감소 또는 감소시키는 것은 감염의 개시를 지연시키는 것, 감염 증상을 약화시키는 것, 감염의 지속기간을 단축시키는 것, 환자에서(예를 들어, 혈액에서) 바이러스 역가를 감소시키는 것 또는 감염 진행을 늦추는 것을 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 출원에 의해 포함된 필로바이러스 감염은 마르부르크 바이러스 및 에볼라바이러스를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 하나 이상의 항체 또는 일부는 대상체에게 투여될 수 있다. 투여되는 하나 이상의 항체 또는 항원-결합 부분은 (i) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 및 (ii) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있되, (a) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 6, 7 및 8 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 18, 19 및 20 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; (b) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 30, 31 및 32 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 42, 43 및 44 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (c) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 54, 55 및 56 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 66, 67 및 68 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, (d) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 78, 79 및 80 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 90, 91 및 92 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, (e) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 102, 103 및 104 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 114, 115 및 116 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, (f) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 126, 127 및 128 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 138, 139 및 140 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 (g) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 150, 151 및 152 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 162, 163 및 164 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명 필로바이러스 감염으로 진단된 개체에게 약제학적 유효량의 약제학적 조성물을 투여하거나 또는 필로바이러스 감염의 증상을 나타내는 단계를 포함한다. 약제학적 유효량의 본 발명의 약제학적 조성물은 필로바이러스 감염에 노출되거나 또는 필로바이러스 감염에 접촉될 위험에 있는 개체에게 투여될 수 있다. 대상체에게 투여될 약제학적 유효량은 연령, 체중, 질환 중증도, 투여 용량 및 빈도의 개개의 차이 및 요법에 대한 개체의 반응을 고려하여 의사 또는 다른 의료인에 의해 결정될 수 있다. 본 발명의 치료적 또는 예방적 유효량의 항체 또는 항원-결합 부분에 대한 예시적, 비제한적 범위는 약 0.001 내지 약 60㎎/㎏ 체중, 약 0.01 내지 약 30㎎/㎏ 체중, 약 0.01 내지 약 25㎎/㎏ 체중, 약 0.5 내지 약 25㎎/㎏ 체중, 약 0.1 내지 약 20㎎/㎏ 체중, 약 10 내지 약 20㎎/㎏ 체중, 약 0.75 내지 약 10㎎/㎏ 체중, 약 1 내지 약 10㎎/㎏ 체중, 약 2 내지 약 9㎎/㎏ 체중, 약 1 내지 약 2㎎/㎏ 체중, 약 3 내지 약 8㎎/㎏ 체중, 약 4 내지 약 7㎎/㎏ 체중, 약 5 내지 약 6㎎/㎏ 체중, 약 8 내지 약 13㎎/㎏ 체중, 약 8.3 내지 약 12.5㎎/㎏ 체중, 약 4 내지 약 6㎎/㎏ 체중, 약 4.2 내지 약 6.3㎎/㎏ 체중, 약 1.6 내지 약 2.5㎎/㎏ 체중, 약 2 내지 약 3㎎/㎏ 체중, 또는 약 10㎎/㎏ 체중이다.
항체 또는 이의 항원-결합 부분은 단독으로 또는 다른 치료제, 예를 들어, 제2 단클론성 또는 다클론성 항체 또는 항원-결합 부분, 또는 필로바이러스 감염을 치료하기 위한 다른 치료제(예를 들어 바이러스제)와 조합하여 투여될 수 있다. 제2 치료제는 다른 항-필로바이러스 항체 또는 항원-결합 부분일 수 있고, 임의의 본 명세서에 기재된 항체 또는 일부일 수 있다. 일 실시형태에서, 약제학적 조성물은 적어도 1종의 마르부르크 바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 및 적어도 1종의 에볼라 바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 약제학적 조성물은 적어도 2, 적어도 3 또는 적어도 4종의 마르부르크 바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 적어도 2종의 마르부르크 바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함할 수 있되, 각각의 마르부르크 바이러스-결합 항체 또는 항원-결합 부분은 마르부르크 바이러스 당단백질의 상이한 에피토프에 결합한다. 본 명세서에서 사용되는 "상이한 에피토프"는 중복 또는 비중복일 수 있다.
약제학적 조성물, 치료 조성물 또는 면역원성 조성물은 하나 이상의 다른 활성제와 함께 항체를 함유할 수 있다. 대안적으로, 본 조성물은 연속적으로, 동시에 또는 하나 이상의 다른 활성제와 조합하여 투여될 수 있다. 본 조성물과 조합하여 사용될 수 있는 활성제의 비제한적 예는 항-EBOV 단클론성 항체를 포함한다. 본 조성물과 조합하여 사용될 수 있는 다른 활성제는 마르부르크 바이러스 감염 또는 관련된 필로바이러스 감염에 유용한 것을 포함한다. 예를 들어, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 다른 표적과 결합하는 하나 이상의 추가적인 항체와 함께 공동제형화되고/되거나 공동투여될 수 있다. 추가적인 항체는 다른 항-필로바이러스 항체 또는 항원-결합 부분일 수 있고, 임의의 본 명세서에 기재된 항체 또는 일부일 수 있다. 일 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 일부는 적어도 하나의 에볼라 바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 부분과 함께 공동제형화되거나 또는 공동투여된다. 본 발명의 항체 또는 일부는 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 또는 적어도 4종의 다른 마르부르크 바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 부분과 함께 공동제형화되거나 또는 공동투여된다. 본 발명의 항체 또는 일부는 적어도 1종의 다른 마르부르크 바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 부분과 함께 공동제형화되거나 또는 공동투여될 수 있되, 각각의 마르부르크 바이러스-결합 항체 또는 항원-결합 부분은 마르부르크 바이러스 당단백질의 상이한 에피토프에 결합한다. 본 명세서에서 사용되는 "상이한 에피토프"는 중복 또는 비중복일 수 있다.
본 발명은 추가로 백신 및 면역원-함유 조성물을 포함한다. 백신 및 면역원-함유 조성물은 존재하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분 중 하나 이상에 의해 인식 및/또는 결합되는 하나 이상의 에피토프를 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 백신 및 면역원-함유 조성물은 CAN30G1, CAN30G2, CAN30G3, CAN30G4, CAN30G5, CAN54G1, CAN54G2, CAN54G3 또는 CAN40G1 중 하나 이상, 또는 임의의 이들 항체의 항원-결합 부분에 의해 인식 및/또는 결합된 하나 이상의 에피토프를 포함한다. 백신 및 면역원-함유 조성물은 에피토프를 함유할 수 있거나, 또는 에피토프를 갖는 펩타이드 또는 단백질을 함유할 수 있다. 일 실시형태에서, 에피토프-함유 부분, 단편 또는 펩타이드는 MARV GP로부터 유래된다. 에피토프-함유 부분, 단편 또는 펩타이드는 또한 화학적으로 또는 재조합적으로 합성될 수 있다.
본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 함유하는 조성물을 제공한다. 조성물은 존재하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 암호화하는 단리된 핵산을 함유할 수 있다. 본 조성물은 또한 약제학적으로 허용가능한 담체를 함유할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 담체는 생리적으로 양립가능한 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 등장 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 약제학적 조성물은 필로바이러스 감염의 개시를 예방하기 위해 또는 중증도 또는 지속기간을 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 상기 논의한 바와 같이, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 MARV GP에 특이적이다.
본 발명은 또한 필로바이러스 감염을 치료 또는 예방하기 위한 유효량으로 적어도 하나의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 함유하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여함으로써 대상체에서 필로바이러스 감염을 개선, 치료 또는 예방하는 방법을 특징으로 한다.
특정 실시형태에서, 본 조성물은 대상체에게 약 1㎍ 내지 1㎎/㎏ 체중, 약 10㎍ 내지 800㎍/㎏ 체중, 약 20㎍ 내지 600㎍/㎏ 체중, 약 30㎍ 내지 500㎍/㎏ 체중, 약 10㎍ 내지 400㎍/㎏ 체중, 약 20㎍ 내지 400㎍/㎏ 체중, 약 60㎍ 내지 100㎍/㎏ 체중, 약 10㎍ 내지 200㎍/㎏ 체중, 약 100㎍ 내지 200㎍/㎏ 체중, 약 50㎍/㎏ 체중, 또는 약 100㎍/㎏ 체중의 범위에 있는 용량으로 투여될 수 있다. 용량은 또한 약 10㎎/㎏의 체중 내지 약 5g/kg 체중, 약 5㎎/㎏의 체중 내지 약 2g/kg 체중, 약 50㎎/㎏의 체중 내지 약 4g/kg 체중, 약 100㎎/㎏의 체중 내지 약 3g/kg 체중, 약 0.1g/kg 체중 내지 약 1g/kg 체중, 약 0.2g/kg 체중 내지 약 0.8g/kg 체중, 약 0.2g/kg의 체중 내지 약 4g/kg 체중, 약 10㎎/㎏의 체중 내지 약 50㎎/㎏ 체중, 약 0.2g/kg 체중, 약 0.4g/kg 체중, 약 0.8g/kg 체중, 약 5㎎/㎏ 체중 내지 약 500㎎/㎏ 체중, 적어도 약 10㎎/㎏ 체중, 적어도 약 15㎎/㎏ 체중, 적어도 약 20㎎/㎏ 체중, 적어도 약 25㎎/㎏ 체중, 적어도 약 30㎎/㎏ 체중 또는 적어도 50㎎/㎏ 체중, 약 100㎎/㎏ 체중까지, 약 150㎎/㎏ 체중까지, 약 200㎎/㎏ 체중까지, 약 250㎎/㎏ 체중까지, 약 300㎎/㎏ 체중까지, 또는 약 400㎎/㎏ 체중까지의 범위이다. 다른 실시형태에서, 면역글로불린의 용량은 다소 차이가 있을 수 있다.
질량/용적 단위를 이용하여, 본 조성물은 대상체에게 약 0.1㎎/㎖ 내지 약 2000㎎/㎖ 범위의 용량에서, 또는 그 사이의 임의의 양, 예를 들어 0.1, 0.5, 1, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 10 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160 180, 200, 250, 500, 750, 1000, 1500, 2000㎎/㎖, 또는 그 사이의 임의의 양; 또는 약 1㎎/㎖ 내지 약 2000㎎/㎖, 또는 그 사이의 임의의 양, 예를 들어, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0, 15.0, 20.0, 25.0, 30.0, 35.0, 40.0, 50.0 60.0, 70.0, 80.0, 90.0, 100, 120, 140, 160 180, 200, 250, 500, 750, 1000, 1500, 2000㎎/㎖ 또는 그 사이의 임의의 양; 또는 약 10㎎/㎖ 내지 약 1000㎎/㎖ 또는 그 사이의 임의의 양 15, 예를 들어, 10.0, 15.0, 20.0, 25.0, 30.0, 35.0, 40.0, 50.0 60.0, 70.0, 80.0, 90.0, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 250, 500, 750, 1000㎎/㎖, 또는 그 사이의 임의의 양; 또는 약 30㎎/㎖ 내지 약 1000㎎/㎖ 또는 그 사이의 임의의 양, 예를 들어 30.0, 35.0, 40.0, 50.0 60.0, 70.0, 80.0, 90.0, 100, 120, 140, 160 180, 200, 250, 500, 750, 1000㎎/㎖로 투여될 수 있다.
세포 배양 분석 및 동물 연구로부터 얻은 데이터는 인간 또는 다른 동물 종에서 사용하기 위한 투약량 범위가 제형화하는데 사용될 수 있다. 일 실시형태에서, 이러한 화합물의 투약량은 독성이 거의 또는 전혀 없이 ED50을 포함하는 순환 농도 범위 내에 놓인다. 투약량은 사용되는 제형 및 이용되는 투여 경로에 따라서 이 범위 내에서 다를 것이다. 다른 실시형태에서, 치료적 유효 용량은 세포 배양 분석으로부터 처음에 추정될 수 있다. 용량은 세포 배양물에서 결정되는 바와 같은 IC50(즉, 증상의 절반의 최대 저해를 달성하는 시험 화합물의 농도)을 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성하기 위해 동물 모델에서 제형화될 수 있다. 문헌[Sonderstrup, Springer, Sem. Immunopathol. 25: 35-45, 2003. Nikula et al., Inhal. Toxicol. 4(12): 123-53, 2000].
조성물은 유효량의 본 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 함유하도록 제형화되되, 상기 양은 치료될 대상체 및 치료될 병태에 의존한다. 일 실시형태에서, 본 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 약 0.01㎎ 내지 약 10g, 약 0.1㎎ 내지 약 9g, 약 1㎎ 내지 약 8g, 약 1㎎ 내지 약 7g, 약 5㎎ 내지 약 6g, 약 10㎎ 내지 약 5g, 약 20㎎ 내지 약 1g, 약 50㎎ 내지 약 800㎎, 약 100㎎ 내지 약 500㎎, 약 0.01mg 내지 약 10g, 약 0.05㎍ 내지 약 1.5㎎, 약 10㎍ 내지 약 1㎎ 단백질, 약 30㎍ 내지 약 500㎍, 약 40pg 내지 약 300pg, 약 0.1㎍ 내지 약 200㎎, 약 0.1㎍ 내지 약 5㎍, 약 5㎍ 내지 약 10㎍, 약 10㎍ 내지 약 25㎍, 약 25㎍ 내지 약 50㎍, 약 50㎍ 내지 약 100㎍, 약 100㎍ 내지 약 500㎍, 약 500㎍ 내지 약 1㎎, 약 1㎎ 내지 약 2㎎의 범위에 있는 용량으로 투여된다. 임의의 특정 대상체에 대한 구체적 용량 수준은 구체적 펩타이드의 활성, 연령, 체중, 일반적 건강상태, 성별, 식이요법, 투여시간, 투여경로 및 배설 속도, 약물 조합 및 요법을 겪고 있는 특정 질환의 중증도를 포함하는 다양한 인자에 따른다.
투여의 지속기간은 다를 수 있으며: 이는 약 10분 내지 약 1일, 약 30분 내지 약 20시간, 약 1시간 내지 약 15시간, 약 2시간 내지 약 10시간, 약 3시간 내지 약 8시간, 약 4시간 내지 약 6시간, 약 1일 내지 약 1주, 약 2주 내지 약 4주, 약 1개월 내지 약 2개월, 약 2개월 내지 약 4개월, 약 4개월 내지 약 6개월, 약 6개월 내지 약 8개월, 약 8개월 내지 약 1년, 약 1년 내지 약 2년 또는 약 2년 내지 약 4년 이상의 범위에 있을 수 있다. 투여의 지속기간은 약 1개월, 약 3개월, 약 6개월, 약 1년, 약 18개월, 약 2년, 약 5년 또는 약 10년일 수 있다. 일 실시형태에서, 치료는 대상체의 자연적 수명의 나머지에 지속될 수 있다.
조성물은 대상체의 연령, 체중 및 병태, 사용되는 특정 조성물 및 투여 경로에 적절한 스케줄로 그리고 일정 시간에 걸쳐 단일 용량 치료로 또는 다회 용량 치료로 투여될 수 있다. 일 실시형태에서, 본 발명에 따른 조성물의 단일 용량이 투여된다. 다른 실시형태에서, 다회 용량이 투여된다. 투여 빈도는 임의의 다양한 인자, 예를 들어, 증상의 중증도, 목적으로 하는 면역보호 정도, 조성물이 예방적 목적인지 또는 치료적 목적인지의 여부에 따라서 다를 수 있다. 예를 들어, 조성물은 1일 당 약 1회, 1개월 당 1회, 1개월 당 2회, 1개월 당 3회, 2개월 당 약 1회, 2주마다(qow), 1주 1회(qw), 1주 당 2회(biw), 1주 당 3회(tiw), 1주 당 4회, 1주 당 5회, 1주 당 6회, 격일로(qod), 매일(qd), 1일 2회(qid), 1일 3회(tid), 6개월마다 약 1회, 1년에 약 1회, 2년마다 약 1회, 또는 5년마다 약 1회 등으로 투여된다. 조성물은 또한 1일 당 1회 이상 투여될 수 있다.
치료의 유효성은 특정 기간, 예를 들어, 약 3개월마다, 약 6개월마다, 약 9년마다, 약 1년마다 등 후에 전체 투여 과정 동안 평가될 수 있다. 투여 스케줄(용량 및 빈도)은 임의의 후속 투여를 위해 그에 따라서 조절될 수 있다. 미국 특허 제8,066,993호 및 제7,968,293호.
본 발명의 조성물 또는 핵산, 폴리펩타이드 또는 항체는 당업계에 공지된 임의의 경로에 의해 당업계에 공지된 임의의 경로, 예를 들어, 전신으로, 국부로 또는 국소로; 동맥내, 척추강내(IT), 근육내, 정맥내(IV), 비경구, 흉강내, 국소, 경구, 장, 비강내, 폐내 또는 흡입, 피하, 기관내, 경피 또는 경점막에 의해 단독으로 또는 약제학적 조성물로서 전달될 수 있다. 비경구로 투여가능한 조성물을 제조하기 위한 실제 방법은 당업자에게 공지되어 있거나 또는 명확할 것이고, 상세하기 기재되어 있다. 문헌[Bai, J. Neuroimmunol. 80: 65-75, 1997. Warren, J. Neurol. Sci. 152: 31-38, 1997. Tonegawa, J. Exp. Med. 186: 507-515, 1997]. 조성물을 주사에 의해 투여할 때, 투여는 연속 주입에 의해 또는 단일 또는 다회 볼루스 주사에 의할 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 단편은 당업계에 공지된 반감기 연장 비히클에 연결될 수 있다. 이러한 비히클은 Fc 도메인, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 및 덱스트란을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이러한 비히클은, 예를 들어, 미국 특허 출원 제09/428,082호 및 WO 99/25044호에 기재되어 있다.
본 항체 또는 이의 단편은 개선된 효과기 기능 프로파일을 지니고 글리코-변형(예를 들어, 탈글리코실화 등)될 수 있다.
약제학적 기법은 또한 본 발명의 조성물/제제의 작용 동안 제어하기 위해 사용될 수 있다. 제어 방출 제제는 항체를 복합체화, 캡슐화 또는 흡수하는 중합체의 사용을 통해 제조될 수 있다. WO1999040939. 특정 실시형태에서, 조성물은, 예를 들어, 이식물, 경피 패치 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템의 형태를 취한다. 생분해성, 생체양립성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리산 무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오쏘에스터 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978] 참조.
본 발명의 약제학적 조성물은 다양한 형태일 수 있다. 이들은, 예를 들어, 액체, 반고체 및 고체 제형, 예컨대 액체 용액(예를 들어, 주사용 및 주입가능한 용액), 분산물 또는 현탁액, 정제, 알약, 분말, 리포좀 및 좌약을 포함한다. 바람직한 형태는 의도된 투여 방식 및 치료 용도에 의존한다. 액체 제형은 직접적으로 투여될 수 있다. 동결건조된 분말 제형은 투여 전에 생리적으로 양립가능한 매질로 재구성될 수 있다.
본 발명의 조성물은 액체 용액 또는 현탁액 중 하나로서, 또는 주사 전에 용액 또는 액체 비히클 중의 현탁액에 적합한 고체 형태로서 주사용으로 제조될 수 있다. 조성물은 또한 고체 형태로 제조될 수 있고, 유화되거나, 활성 성분은 지속 전달을 위해 사용되는 리포좀 비히클 또는 다른 미립자 담체에서 캡슐화될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 오일 에멀전, 유중수 에멀전, 수중유 에멀전, 부위-특이적 에멀전, 장기 체류 에멀전, 끈적한 에멀전, 마이크로입자, 마이크로스피어, 나노스피어, 나노입자 및 다양한 천연 또는 합성 중합체, 예컨대 비재흡수성 불침투성 중합체, 예컨대 에틸렌비닐 아세테이트 공중합체 및 하이트렐(Hytrel)(등록상표) 공중합체, 팽윤성 중합체, 예컨대 하이드로겔 또는 재흡수성 중합체, 예컨대 콜라겐 및 특정 폴리산 또는 폴리에스터, 예컨대 백신의 지속 방출을 가능하게 하는 재흡수성 봉합을 만들기 위해 사용되는 것의 형태일 수 있다.
예로서, 정맥내로 주사가능한 면역글로불린 제제는 생리적으로 양립가능한 매질 중에서 분포된 면역글로불린을 함유할 수 있다. 본 조성물에 적합한 매질은 염화 나트륨의 등장성 양을 지니는 또는 염화 나트륨의 등장성 양이 없는 멸균 주사용수(WFI)일 수 있다. 예를 들어, 희석제는 멸균 WFI, 염화나트륨 용액을 포함한다(문헌[Gahart, B.L. & Nazareno, A.R., Intravenous Medications: a handbook for nurses and allied health professionals, p. 516-521, Mosby, 1997] 참조).
약제학적 조성물 중의 면역글로불린 농도는 약 0.1%(w/w) 내지 약 30%(w/w), 약 0.5%(w/w) 내지 약 20% (w/w), 약 1%(w/w) 내지 약 15%(w/w), 약 2%(w/w) 내지 약 3%(w/w) 또는 약 5%(w/w) 내지 약 10%(w/w)의 범위에 있을 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 조성물은, 예를 들어, 비활성 희석제 또는 동화 식용 담체와 함께 경구 투여될 수 있다. 화합물(및 원한다면 다른 성분)은 또한 경질 또는 연질 껍질 젤라틴 캡슐에 동봉되거나, 정제로 압착되거나 또는 대상체의 식이요법에 직접 혼입될 수 있다. 경구 치료 투여를 위해, 화합물은 부형제와 함께 혼입될 수 있고, 삼킬 수 있는 정제, 협측 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭시르, 현탁액, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 사용된다. 비경구 투여 이외에 의해 본 발명의 화합물을 투여하기 위해, 본 화합물을 그의 불활성화를 방지하기 위한 물질로 코팅하거나 또는 본 화합물을 그의 불활성화를 방지하기 위한 물질과 함께 공동투여하는 것이 필요할 수 있다. 정제, 캡슐 또는 현탁액을 통한 경구 투여용 조성물은 락토스, 글루코스 및 수크로스와 같은 당을 포함하는 보조제; 옥수수 전분 및 감자 전분과 같은 전분; 카복시메틸셀룰로스나트륨, 에틸셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트를 포함하는 셀룰로스 및 이의 유도체; 분말 트래거캔스; 맥아; 젤라틴; 탈크; 스테아르산; 스테아르마그네슘; 황산칼슘; 식물성 오일, 예컨대 땅콩유, 면실유, 참깨유, 올리브유 및 옥수수유; 폴리올, 예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린, 솔비탈, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 한천; 알긴산; 물; 등장 식염수 및 인산염 완충 용액을 이용하여 제조된다. 습윤제, 윤활제, 예컨대 라우릴황산나트륨, 안정제, 정제화제, 항-산화제, 보존제, 착색제 및 향미제가 또한 제공될 수 있다.
크림, 로션 및 연고는 트라이글리세라이드 베이스와 같은 적절한 베이스를 이용하여 국소 적용을 위해 제조될 수 있다. 이러한 크림, 로션 및 연고는 표면 활성제를 함유할 수 있다. 예를 들어, 비강 전달을 위한 에어로졸 제형이 또한 제조될 수 있으며, 이때 적합한 추진 보조제가 사용된다. 다른 보조제가 또한 그것이 투여되는 방법과 관계없이 조성물에 첨가될 수 있으며, 예를 들어, 항-미생물제가 장기간의 저장 기간에 걸쳐 미생물 성장을 방지하기 위해 조성물에 첨가될 수 있다. 치료 조성물은 전형적으로 제조 및 저장 조건 하에서 멸균이며 안정하여야 한다.
본 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 포유류 대상체에게 전달을 위해 조성물로 제형화된다. 조성물은 단독으로 투여되고/되거나 약제학적으로 허용가능한 비히클 또는 부형제와 혼합된다. 적합한 비히클은, 예를 들어, 물, 식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등 및 이들의 조합물이다. 추가로, 비히클은 소량의 보조 물질, 예컨대 습윤제 또는 유화제, pH 완충제 또는 애주번트를 함유할 수 있다. 본 발명의 조성물은 또한 보조 물질, 예컨대 약학적 제제, 사이토카인 또는 다른 생물학적 반응 변형제를 포함할 수 있다. 제형의 제조 방법은 공지되어 있거나 또는 당업자에게 명확할 것이다. 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 21st edition] 참조.
본 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 약제학적으로 허용가능한 담체와 조합될 수 있다. 약제학적 허용가능한 담체는 본 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 흡수 또는 클리어런스율을 안정화시키거나 증가시키거나 또는 감소시키는 작용을 하는 생리적으로 허용가능한 화합물을 함유할 수 있다. 생리적으로 허용가능한 화합물은, 예를 들어, 탄수화물, 예컨대 글루코스, 수크로스 또는 덱스트란, 항산화제, 예컨대 아스코브산 또는 글루타티온, 킬레이트제, 저분자량 단백질, 세정제, 리포좀 담체 또는 부형제 또는 다른 안정제 및/또는 완충제를 포함할 수 있다. 다른 생리적으로 허용가능한 화합물은 습윤제, 유화제, 분산제 또는 보존제를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 21st edition] 참조.
일 양상에서, 본 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 약제학적으로 허용가능한 담체, 예를 들어, 수성 담체 중에 용해된다. 수용액의 예는, 예를 들어, 물, 식염수, 인산염 완충 식염수, 행크스 용액, 링거용액, 덱스트로스/식염수, 글루코스 용액 등을 포함한다. 제형은 생리적 조건에 근사할 것이 필요하다면 약제학적으로 허용가능한 보조 물질, 예컨대 완충제, 등장 조절제, 습윤제, 세정제 등을 함유할 수 있다. 첨가제는 또한 추가적인 활성 성분, 예컨대 살균제 또는 안정제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 용액은 아세트산나트륨, 락트산나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 솔비탄 모노라우레이트 또는 트리에탄올아민 올레이트를 함유할 수 있다.
고체 제형은 본 발명에서 사용될 수 있다. 그들은, 예를 들어, 알약, 정제, 분말 또는 캡슐로서 제형화될 수 있다. 고체 조성물에 대해, 예를 들어, 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 사카린나트륨, 탈쿰, 셀룰로스, 글루코스, 수크로스, 탄산마그네슘 등을 포함하는 전통적인 고체 담체가 사용될 수 있다. 적합한 약제학적 부형제는 예를 들어, 전분, 셀룰로스, 탈크, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 벼, 밀가루, 백악, 실리카겔, 스테아르산마그네슘, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 염화나트륨, 건조탈지유, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 물, 에탄올을 포함한다.
경점막 또는 경피 투여를 위해, 침투될 장벽에 적절한 침투제는 제형에서 이용될 수 있다. 이러한 침투제는 일반적으로 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 경점막 투여를 위해, 담즙염 및 푸시딘산 유도체를 포함한다. 추가로, 침투를 용이하게 하기 위해 세정제가 사용될 수 있다. 경점막 투여는 비강 스프레이를 통하거나 또는 좌약을 이용할 수 있다. 문헌[Sayani, Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 13: 85-184, 1996]. 국소, 경피 투여를 위해, 제제는 연고, 크림, 고약, 분말 및 겔로 제형화된다. 경피 전달 시스템은 또한, 예를 들어, 패치를 포함할 수 있다.
흡입을 위해, 본 조성물은 건조 분말 에어로졸, 액체 전달 시스템, 공기 분사 네뷸라이저, 추진제 시스템 등을 포함하는 당업계에 공지된 임의의 시스템을 이용하여 전달될 수 있다. 문헌[Patton, Biotechniques 16: 141-143, 1998]. 또한, 예를 들어, 듀라 파마슈티칼스(Dura Pharmaceuticals)(캘리포니아주 샌디에이고에 소재), 아라다이른(Aradigrn)(캘리포니아주 헤이워드에 소재), 에어로겐(Aerogen)(캘리포니아주 산타클라라에 소재), 인헤일 쎄라퓨틱 시스템즈(Inhale Therapeutic Systems)(캘리포니아주 산 카를로스에 소재) 등에 의한 폴리펩타이드 거대분자용의 제품 및 흡입 전달 시스템이 본 발명에서 사용될 수 있다. 예를 들어, 약제학적 제형은 에어로졸 또는 미스트의 형태로 투여될 수 있다. 에어로졸 투여를 위해, 제형은 계면활성제 및 추진제와 함께 미세하게 분할된 형태로 공급될 수 있다. 다른 양상에서, 호흡 조직에 제형을 전달하기 위한 장치는 제형이 증기화되는 흡입기이다. 다른 액체 전달 시스템은, 예를 들어, 공기 분사 네뷸라이저를 포함한다.
본 조성물은 또한 지속 전달 또는 지속 방출 메커니즘으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 생분해성 미소구체 또는 캡슐 또는 펩타이드의 지속 전달을 가능하게 하는 다른 생분해성 중합체 입체배지가 본 발명의 제형에 포함될 수 있다(예를 들어, 문헌[Putney, Nat. Biotechnol. 16: 153-157, 1998] 참조).
일 양상에서, 조성물은 이식물 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제형과 같이 신체로부터의 빠른 제거에 대해 펩타이드를 보호하는 담체와 함께 제조된다. 생분해성, 생체양립성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리산 무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오쏘에스터 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이러한 제형의 제조방법은 당업자에게 명확할 것이다. 리포좀 현탁액은 또한 약제학적으로 허용가능한 담체로서 사용될 수 있다. 미국 특허 제4,522,811호.
일 양상에서, 본 발명의 핵산, 폴리펩타이드 또는 항체를 포함하는 약제학적 제형은 지질 단일층 또는 이중층, 예를 들어 리포좀에 혼입된다. 미국 특허 제6,110,490호; 제6,096,716호; 제5,283,185호 및 제5,279,833호. 본 발명의 양상은 또한 본 발명의 핵산, 펩타이드 또는 폴리펩타이드가 단일층 또는 이중층의 표면에 부착된 제형을 제공한다. 예를 들어, 펩타이드는 하이드라자이드-PEG-(다이스테아로일포스파티딜) 에탄올아민-함유 리포좀에 부착될 수 있다(예를 들어, 문헌[Zalipsky, Bioconjug. Chem. 6: 705-708, 1995] 참조). 리포좀 또는 지질막의 임의의 형태, 예컨대 평면 지질막 또는 무결함 세포(예를 들어, 적혈구 세포)의 세포막이 사용될 수 있다. 리포좀 제형은 정맥내, 경피(예를 들어, 문헌[Vutla, J. Pharm. Sci. 85: 5-8, 1996]), 경점막 또는 경구를 포함하는 임의의 수단에 의할 수 있다. 본 발명은 또한 본 발명의 핵산, 펩타이드 및/또는 폴리펩타이드가 마이셀 및/또는 리포좀 내에 혼입된 약제학적 제제를 제공한다(예를 들어, 문헌[Suntres, J. Pharm. Pharmacol. 46: 23-28, 1994; Woodle, Pharm. Res. 9: 260-265, 1992]). 리포좀 및 리포좀 제형은 표준 방법에 따라 제조될 수 있고, 또한 당업계에 잘 공지되어 있다. 문헌[Akimaru, Cytokines Mol. Ther. 1: 197-210, 1995. Alving, Immunol. Rev. 145: 5-31, 1995. Szoka, Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9: 467, 1980]. 미국 특허 제4, 235,871호; 제4,501,728호 및 제4,837,028호.
용이한 투여 및 투약량의 균일함을 위한 제형 단위로 비경구 또는 경구 조성물을 제형화하는 것이 유리하다. 본 명세서에서 사용되는 제형 단위는 치료될 대상체에 대해 일원화된 투약량으로서 적합한 물리적으로 별개의 단위를 지칭하며; 각각의 단위는 필요한 약제학적 담체와 함께 목적으로 하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 활성 화합물의 사전결정된 양을 함유한다.
또한 본 발명에 의해 패키징 물질 및 약제학적 조성물을 포함하는 제조 물품이 포함된다. 조성물은 상기 기재한 바와 같은 약제학적으로 허용가능한 담체 및 약제학적 유효량의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 패키징 물질은 조성물이 필로바이러스 감염을 치료 또는 예방하는데 유용하다는 것을 나타내도록 표지될 수 있다. 패키징 물질은 일반적으로, 예를 들어, 유리, 플라스틱, 호일 및 판지를 포함하는 약제학적 제제를 패키징하기 위해 사용되는 임의의 적합한 물질일 수 있다.
키트의 추가적인 구성성분은 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 사용을 위한 설명서; 다른 치료제, 표지 또는 치료제에 항체를 결합하는데 유용한 제제, 다른 시약 또는 투여를 위해 항체를 제조하기 위한 다른 물질; 약제학적으로 허용가능한 담체; 및 대상체에게 투여를 위한 장치 또는 다른 물질.
사용을 위한 설명서는 치료적 적용, 제시된 투약량, 투약 간격 및/또는 투여 방식 등에 대한 설명을 포함할 수 있다. 다른 설명서는 표지 또는 치료제에 대한 항체의 결합에 대한 또는, 예를 들어 비반응 컨쥬게이션 성분으로부터 컨쥬게이션팅된 항체의 정제를 위한 설명서를 포함할 수 있다.
키트는 본 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 적어도 하나의 핵산, 및 핵산의 발현을 위한 설명서를 함유할 수도 있고 함유하지 않을 수도 있다. 키트의 다른 가능한 성분은 발현 벡터 및 세포를 포함한다.
본 항체, 이의 항원-결합 부분, 조성물 및 방법은 모든 척추동물, 예를 들어, 인간, 마우스, 래트, 기닉픽, 햄스터, 개, 소, 말, 염소, 양, 돼지, 원숭이, 유인원, 고릴라, 침팬지, 토끼, 오리, 거위, 닭, 양서류, 파충류 및 기타 동물을 포함하는 포유류 및 비포유류에서 사용될 수 있다. 대상체는 척추동물, 실험 동물 또는 유전자이식 동물일 수 있다. 본 조성물 및 방법은 수의학적 용도를 위한 것일 수 있다.
본 발명은 순수하게 본 발명의 예시인 것이며 임의의 방법으로 제한하지 않는 것으로 의도되는, 다음의 실시예에 의해 추가로 명확하게 될 것이다.
실시예
실시예 1: 항원 제조
마르부르크바이러스(MARV; Ravn 및 앙골라 바이러스주) 및 에볼라바이러스 당단백질(GP) 항원은 초파리 S2 및 스포돕테라 Sf9에서 안정한 세포주 발현에 의해, 또는 Gnt-/- HEK293 세포에서 일시적 형질감염에 의해 생성되었다. 단백질은 스트렙탁틴(퀴아젠(Qiagen)) 또는 항-HA 친화도 수지(로슈(Roche))를 각각 이용하는 정제를 용이하게 하기 위해 C-말단에서 스트렙탁틴 또는 HA 태그에 의해 공학처리되었다. GP 엑토도메인 작제물(GPe)은 막관통(TM) 도메인이 없고, 잔기 1 내지 637로 이루어진다. GP 엑토도메인 뮤신-결실 작제물(GPeΔmuc)은 또한 뮤신-유사 도메인을 결여한다: 모든 MARV 바이러스주에 대해 Δ257-425, EBOV(에볼라 바이러스), SUDV(수단 바이러스), BDBV(분디부교 바이러스)에 대해 Δ314-463 및RESTV(레스턴 바이러스)에 대해 Δ316-470. 에피토프-맵핑 실험을 위한 대조군으로서, 추가적인 MARV GP 작제물을 GPeΔmucΔw으로 칭해지는 GP1 뮤신 도메인(Δ257-425)과 GP2-윙(Δ436-483)을 둘 다 결여하는 S2 세포로부터 정제하였다. GP 및 GP 작제물 서열을 표 1에 제공한다. 엔도솜 카텝신 프로테아제 절단을 모방하기 위해, 37℃에서 1시간 동안 pH 7.5로 TBS 중에서 1:100의 비로 MARV Ravn 바이러스주 GPeΔmuc을 트립신과 함께 인큐베이션함으로써 절단된 MARV GP(GPcl)를 생성하였다. 1mM CaCl2를 함유하는 TBS pH 7.5에서 실온으로 밤새 1:50의 비로 서몰리신에 의한 처리에 의해 절단된 EBOV GP를 생성하였다. GPe 단백질을 수퍼로스 6에 의해 추가로 정제하고, 모든 다른 GP 단백질을 수퍼덱스 200(Superdex 200) 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 공학처리된 펩타이드에 대한 GP 개략도 및 작제물 설계를 도 1의 다이어그램에 나타내고, GP 작제물의 요약을 표 2에 나타낸다.
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
실시예 2: GP - Fab 복합체의 생성
Ravn GPeΔmuc(서열번호 169)를 초파리 S2 세포에서 생성하고 나서, C-말단의 스트렙탁틴 태그를 통해 스트렙탁틴 친화도에 의해 정제하고, 삼량체 부분을 슈퍼덱스(Superdex) 200 사이징 칼럼 상에서 단리시켰다. CAN30G4 Fab 단편을 CAN30G4 IgG 항체(CAN30G4 항체의 서열을 표 1에 제공함)의 표준 파파인 분해에 의해 생성하였고, 모노(Mono) Q 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 5몰 과량의 Fab를 삼량체 GPeΔmuc에 첨가하고 나서, 4℃에서 밤새 결합시켰다. 생성된 복합체를 CAN30G4 Fab-Ravn GPeΔmuc로서 지칭하고, 이어서, 마우스를 면역화하기 위해 사용하였다(실시예 3 참조). 항원-항체 복합체의 다이어그램을 도 12에 나타낸다(그러나 화학적 가교 시약이 없음).
도 13은 mAb CAN54G1로부터의 Fab 단편과의 복합체에서 마르부르크 바이러스 GP(Ravn)의 결정을 나타낸다. 이 복합체는 다수의 조건에서 결정을 응집한다.
실시예 3: 마르부르크 바이러스( MARV )에 대한 단클론성 항체의 유도체화 및 선별
마르부르크 바이러스(MARV)에 대한 단클론성 항체(mAb)를 MARV의 당단백질(GP)에서 에피토프와 관련된 항체를 생성하기 위해 마우스를 면역화함으로써 생성하였다. 마우스의 면역화를 표준 작업 절차에 따라 수행하였다. 6주령 암컷 BALB/c 마우스(유니버시티 오브 매니토바(University of Manitoba), 프로토콜 관리 및 평가 위원회에 의해 승인된 동물 용도 프로토콜을 이용함)에 제1일에 프로인트 완전 보조제(CFA)(브렌태그 바이오섹터(Brenntag Biosector)) 중의 20㎍의 비활성 MARV Ravn GPeΔmuc(서열번호 169) 또는 MARV 앙골라 GPeΔmuc(서열번호 170)를 이용하여 피하로(SC) 주사하였다. 제32일에 마우스는 총 용적 100㎕로 불완전 프로인트 애주번트(IFA)(브렌태그 바이오섹터) 중의 복강내(I.P.)로 주사한 20㎍의 동일한 MARV GP를 받았다. 제56일에, 마우스는 IFA로 총 용적 100㎕ I.P.로 20㎕의 동일한 항원을 받았다. 이 시점에 시험 출혈로부터의 혈청 분석은 MARV GP에 대한 특이적 혈청 IgG를 나타내었다(데이터 미제시). 마우스는 융합을 수행하기 전에 5㎍ 정제된 GP(IP에 의해 PBS 중에서)의 최종 푸쉬 전에 재조합 MARV GP 단백질(IFA I.P. 중의 10㎍)의 1 내지 2회 부스터를 받았다. 표준 프로토콜을 이용하여 혼성세포주를 생성하고, 단클론성 항체를 단백질 G 수지 상에서 정제하였다. 마우스 혈청을 Ravn GPeΔmuc에 대해 선별하고 나서, 비장 융합 및 혼성세포 선별을 Ravn GP와 특이적이고 강한 상호작용을 하는 해당 마우스에 대해 수행하였다. 최종 푸쉬 후 3일에 비장을 채취하고 나서, 마우스를 과다 용량의 마취에 의해 안락사시키고 나서, 심장천자에 의해 방혈시켰다. 후속적으로 비장을 무균 조건 하에서 절단시키고, 세포 융합을 본질적으로 표준 기법에 따라 수행하였다. 양성 선택 IgG-분비 클론에 대규모 생성을 실시하고 나서, 후속적으로 면역학적 방법에 의해 특성규명하였다. 제조업자의 설명서에 따라 상업적 뮤린 아이소타이핑 딥스틱 시험(로슈)을 이용하여 아이소타이핑을 수행하였다. 혼성세포 배양물 상청액을 30kDa 컷오프 밀리포어(Millipore)(YM-30) 막(둘 다 매사추세츠주 빌러리카에 소재한 밀리포어사제)을 지니는 아미콘(Amicon) 교반 질소 농축기를 이용하여 5 내지 10배로 농축하였다. S2 세포로부터 정제한 앙골라 GPeΔmuc에 의해 면역화한 마우스로 항체 40G1을 수득하였다. Gnt -/- HEK293 세포로부터 정제한 Ravn GPeΔmuc로 면역화시킨 마우스는 항체 30G1, 30G3, 30G4 및 30G5가 상승되었다. 마우스를 Ravn GPeΔmuc로 면역화시키고, 이어서 30G4 Fab에 결합한 Ravn GPeΔmuc의 복합체(CAN30G4 Fab-Ravn GPeΔmuc)로 부스팅하고 나서, 표 4에 제시한 바와 같이 항체 54G1, 54G2 및 54G3를 상승시켰다.
Figure pct00018
항체를 Ravn GP 또는 앙골라 GP 중 하나에 대한 ELISA 방법을 통해 선별하였다. 간략하게, 96-웰 막시소프(MaxiSorp) 플레이트(NUNC)를 항원의 200ng/웰로 코팅하고 나서, 커버를 씌우고, 4℃에서 밤새 인큐베이션시켰다. 플레이트를 밀리큐 워터(Milli-Q water)로 5X 세척하여 임의의 비결합 항원을 제거하였고, 이어서, 차단 완충제(인산염 완충 식염수(PBS) 중의 5% 탈지유 분말(SMP))로 차단하였다. 플레이트를 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션시키고, 이어서, 밀리큐 워터 중에서 5X 세척하였다. 이어서 플레이트를 혼성세포 상청액으로 코팅하고 나서, 1㎍/㎖에서 시작해서 희석 완충제(PBS 중에서 2.5% SMP)로 2배 연속 희석시켰다. 37℃에서 1시간 인큐베이션 기간 후에, 플레이트를 이어서 밀리큐 워터(Milli-Q water) 중에서 5X 세척하였다. 이어서, 염소 항-마우스 IgG-HRP를 희석 완충제 중에서 1:2000 희석으로 플레이트에 첨가하고 나서, 37℃에서 1시간 동안 다시 인큐베이션시켰다. 이어서, 플레이트를 세척하고 나서, 기질을 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 15분, 30분 또는 1시간 후에(실온에서 인큐베이션) 405㎚ 파장을 이용하여 판독하였다.
이 면역화 및 선별로부터, 마르부르크 Ravn GP에 대해 27개 항체의 패널이 그리고 마르부르크 앙골라 GP에 대해 1개가 상승되었다(표 3).
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
선택된 항-마르부르크 GP mAb에 대해 사용한 면역원 및 부스팅 면역원의 목록을 표 4에 제공한다.
Figure pct00022
실시예 4: 마우스 항-마르부르크 GP 단클론성 항체의 ELISA 시험
마르부르크 GP, GPe, GPeΔmuc의 다수의 바이러스주에 대한 mAb의 결합을 시험하기 위해, 그리고 mAb가 에볼라 바이러스 (EBOV) GP, GPe 및 GpeΔmuc의 다양한 바이러스주에 대해 교차반응성인지의 여부를 결정하기 위해 ELISA를 수행하였다. ELISA 플레이트를 200ng/웰의 항원으로 코팅하였다. 웰을 5% 탈지유로 차단시키고, 이어서 연속희석시킨 생성된 mAb로 프로빙하기 시작하였다(0.1㎍/㎖ 내지 1㎍/㎖). 결합을 상업적 염소 항-마우스 IgG-HRP로 검출하였다. 기질과 함께 최소 15분 인큐베이션 후에 플레이트를 405㎚에서 판독하였다.
CAN30, CAN54 및 CAN40 시리즈 mAb를 모두 MARV(무소케, Ci67, 앙골라 및 Ravn) 및 EBOV 공학처리된 GP(GPe, GPeΔmuc 및 GPcl)의 상이한 바이러스주에 결합을 위해 시험하였다. 도 2는 표 형태로 결과를 열거한다. 결과는 다중 마르부르크 바이러스주에서 MARV GPeΔmuc 및 GPcl에 대한 모든 항체의 결합을 나타낸다. CAN30G1, CAN30G4, CAN40G1 및 CAN54G3은 시험한 모든 MARV 바이러스주의 GP에 대한 결합을 나타낸다. 시험한 모든 다른 mAb는 단지 MARV Ravn GPe에 대한 결합을 나타내었다. CAN30G1, CAN40G1, CAN54G1 및 CAN54G3은 MARV Ravn GPeΔmucΔw에 대한 결합을 나타내었다. CAN40G1은 단지 교차반응성 mAb이며, EBOV GPeΔmuc 및 EBOV GPcl에 대한 결합을 나타낸다.
도 3은 마르부르크 바이러스 Ravn GPeΔmuc, 앙골라 GPeΔmuc 및 Popp GPeΔmuc에 대한 결합을 시험하기 위해 CAN30 시리즈 mAb를 이용할 때의 ELISA 결과를 나타낸다. 도 3에서 나타내는 바와 같이, CAN30G6을 제외한 모든 CAN30 mAb는 Ravn GpeΔmuc, 앙골라 GPeΔmuc 및 Popp GPeΔmuc에 대한 결합을 나타내었다.
CAN40G1(항-MARV 앙골라 mAb)은 다양한 MARV 바이러스주 및 에볼라바이러스에 대한 교차반응성에 대해 시험하였다. 교차반응성을 결정하기 위해, MARV의 Ravn, 앙골라, Popp 및 무소케 바이러스주의 GPeΔmuc, 에볼라바이러스 EBOV, SUDV 및 BDBV의 GPeΔmuc, 또는 코팅 항원으로서 절단된 MARV 및 EBOV GP(GPcl)을 이용하여 ELISA를 수행하였다. CAN40G1은 MARV 앙골라, EBOV, SUDV, 및 BDBV의 완전한, 뮤신-함유 엑토토메인에 대한 그리고 EBOV 및 RESTV의 분비된 sGP에 대한 결합에 대해 추가로 평가하였다. 도 4, 도 5a 및 도 5b에서 나타낸 바와 같이, CAN40G1은 다중 MARV 바이러스주로부터의 MARV GP 및 뮤신-결실 GP에 결합한다. CAN40G1은 또한 EBOV GP뿐만 아니라 EBOV GPeΔmuc에 대해 교차반응성이다.
혼성세포 융합으로부터 생성된 CAN30G4 Fab-RavnGPeΔmuc 및 CAN54 mAb로 부스팅한 동물에 대해, 교차반응성은 앙골라 바이러스주 GPΔmuc로 면역화한 CAN40G1에 비해 독특한 GP1 및 GP2 에피토프로 향하였다. CAN54 mAb는 또한 RavnGPeΔmuc(예를 들어 CAN30 융합)에 의한 면역화에 의해 유발된 면역우성 GP2 윙으로부터 떨어지도록 지시되었지만, 그러나, 하나의 mAb 클론은 몇몇 CAN30 mAb에 의해 유발되는 GP2 윙에 대해 면역인식을 야기하지만, 마르부르크 바이러스주를 가로지른 GP에 대한 특이성은 GPe 및 GPeΔmuc에 대해 독특하였다.
실시예 5: 마우스 항-마르부르크 GP 단클론성 항체로 수행한 웨스턴 블롯
4 내지 12% 구배 SDS-PAGE 겔을 MARV 및 EBOV 단백질의 조합과 함께 200볼트에서 1.5시간 동안 실행한다. 이어서, 겔을 최소 1시간 동안 45볼트에서 나이트로셀룰로스 막에 옮긴다. 막을 1xTBST 중에서 5% 탈지유를 이용하여 4℃에서 밤새 차단시킨다. 다음날 mAb(1° Ab)를 항체에 따라서 2㎍/㎖ 내지 5㎍/㎖ 범위의 농도에서 1xTBST 중의 2.5% 탈지유 중에서 희석시키고 나서 2시간 동안 실온(RT)에서 전달된 단백질을 함유하는 막을 프로빙하기 위해 사용하였다. 이어서, 막을 1xTBST로 세척하여 비결합 1° Ab를 제거하고, 실온에서 1.5시간동안 1:4000 내지 1:5000의 희석으로 항-마우스 IgG-HRP(2° Ab)로 프로빙하였다.
실시예 6: 마우스 항-마르부르크 GP 단클론성 항체를 이용하여 수행한 슈도바이러스 중화 분석
항체를 MARV GP와 위형인 재조합 수포성 구내염 바이러스(VSV)의 중화에 대해 시험하였다. VSV G 유전자(VSVΔG) 대신 GFP를 함유하고 MARV Ravn의 당단백질을 보유하는 VSV 슈도비리온을 앞서 기재한 바와 같이 생성하였다(Takeda et al. Proc Natl Acad Sci USA, 1997. 94(26): 14764-14769). 전장 MARV Ravn GP(VSVΔG-GP) 또는 뮤신-결실 Δ257-425 GP(VSVΔG-GPΔmuc) 중 하나를 보유하는 VSVΔG를 이용하여 3회 중복해서 실험을 수행하였다. 슈도비리온을 1시간 동안 RT에서 항-VSV G mAb에서 인큐베이션시키고, 이어서, 추가적인 시간 동안 DMEM-10%FBS 중에서 각각의 항-MARV GP mAb의 2.5, 10 또는 50㎍/㎖와 함께 인큐베이션시켰다. 슈도비리온/mAb 복합체를 감염 다중도(MOI) 0.01로 베로 세포에 첨가하였다. 48시간 후에, 감염을 GFP-발현세포를 계수화함으로써 평가하였다.
도 6a에 나타낸 바와 같이, mAb CAN30G4 및 CAN30G5는 뮤신-결실 MARV GP에 대해 20% 이하로 감염성을 억제시킬 수 있었다. 대조적으로, 면역화한 마우스(Grp30폴리Ab)로부터의 방혈 시 얻은 다클론성 혈청은 단지 약간 더(대략 10% 감염성을 보유) 중화되었다.
이 패널에서 가장 중화성인 mAb는 뮤신-함유 마르부르크 바이러스 GP-위형을 50%로 중화시킨 반면, 다클론성 혈청은 동일한 바이러스를 대략 40% 감염성으로 중화시켰다(도 6b). 뮤신-결실 바이러스가 뮤신-함유 바이러스보다 중화하기가 더 용이한 이유에 대한 한 가지 가능한 설명은 에볼라 바이러스에 대해 시사된 것과 같이 거대 뮤신-유사 도메인이 GP에 대한 항체 에피토프에 대한 접근을 제한할 수 있다는 것이다. 해당 분야에서 최근의 연구는 단클론성 항체의 칵테일이 개개 mAb 단독보다 에볼라 바이러스에 대한 더 양호한 생체내 보호를 제공하고, 따라서, 이들 mAb의 일부의 조합은 임의의 단일 mAb 단독에 걸쳐 중화 능력을 개선시킬 수 있다는 것을 시사한다. mAb CAN30G3, CAN30G5, CAN54G1 및 CAN54G2는 뮤신 함유(전장) 바이러스를 대략 50% 중화시켰다(도 6b). 항체가 GP2 윙으로부터 떨어지도록 지시된 실시예 둘 다에서(CAN54G1 및 CAN54G3), 중화는 GP1 및 GP2쪽으로 향한 다른 항체와 동등하였다(예를 들어 CAN30G1 및 CAN40G1).
실시예 7: 핀 펩타이드에 의한 에피토프 맵핑
10개 아미노산만큼 중복되는 15량체를 설계하고 신호 펩타이드 서열 및 세포질 꼬리와 함께 뮤신 도메인 및 막관통 도메인을 제거함으로써 마르부르크 무소케 GP(NCBI 수탁 번호 NC_001608) 및 마르부르크 Ravn GP(NCBI 수탁번호 AB_04Y1906)의 GP1 및 GP2 서브유닛을 뒤덮도록 핀 펩타이드를 설계하였다(Feldmann et al., 2001, J Gen Virol. 82(Pt 12):2839-2848; Will et al., 1993, J Virol. 67(3):1203-1210). MARV-앙골라 및 MARV-무소케는 GP 단백질 서열에서 대략 93% 동일하고, MARV 및 RAVV는 GP 단백질 서열에서 대략 78% 동일하다. 앙골라와 무소케 사이의 유사성 때문에, 무소케와 Ravn 핀을 설계하였다. 보존적 치환을 지니는 펩타이드의 이량체화를 방지하기 위해 내부 시스테인을 메티오닌으로 대체하였다.
분석을 위해, 몇 초동안 메탄올 중에서 린스하고 공기 건조시킴으로써 핀들을 활성화시켰다. 이어서, 핀을 96-웰 둥근 바닥 플라스크 플레이트에서 200㎕의 차단 완충제(PBS 중에서 1% SMP + 1% 트윈-20)로 차단시키고, 2시간 동안 실온에서 인큐베이션시켰다. 이어서, 핀을 세척 용액(PBS 중에서 0.9% w/v NaCl + 0.05% 트윈-20)을 이용하여 3X, ~1분/세척으로 세척하였다. 이어서, 핀을 새로운 96-웰 둥근 바닥 플레이트에서 희석 완충제 중의 상청액 중의 100㎕의 1/5 희석(PBS 중에서 0.1% SMP + 0.1% 트윈-20)으로 즉시 코팅하였고, 4℃에서 밤새 커버를 씌운 채로 두었다. 다음날, 핀을 세척 용액 중에서 3X 세척하였고, 이어서, 100㎕/웰로 희석 완충제 중에서 염소 항-마우스 IgG-HRP의 1:5000 희석으로 1시간 동안 실온에서 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 후에, 핀을 세척 용액 중에서 3x 세척하였다. 이어서, ABTS 기질을 96-웰 편평 바닥 막시소프(MaxiSorp) 플레이트에 대해 200㎕/웰로 적용하고 나서, 15분, 30분 및 1시간에 판독을 취하였다.
표 5는 에피토프 맵핑의 결과를 나타낸다. 도 7a, 도 7b, 도 7c 및 도 7d는 CAN30G3, CAN30G4, CAN30G5 및 CAN54G2에 대한 MARV GP 단백질 및 에피토프의 개략도를 나타낸다. 결과는 CAN30G3, CAN30G4, CAN30G5 및 CAN54G2가 중복 에피토프에 따른 MARV의 GP2 서브유닛에 결합한다는 것을 나타냄에도 불구하고, 특이성은 N-말단의 잔기에 대해 더 특이적으로 조절된다. 이들 적합한 차이는 상이한 마르부르크 바이러스주에 걸친 특이성에 반영된다(도 2, 도 6a 및 도 6b). CAN40G1은 입체배좌 에피토프에 결합할 수 있다. CAN54G1은 GP2에 결합하는 것으로 나타나지만, 다른 GP2 특이적 항체에 의해 결합되는 N-말단 잔기의 바깥 영역에 있다.
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
실시예 8: 마우스 생체내 보호 실험
감염성 마르부르크 바이러스에 의한 모든 절차를 생물 안전도 4(BSL-4) 시설에서 수행하였다. BALB/c 마우스를 1000 플라크-형성 단위(p.f.u.) 마우스-적합 MARV를 이용하여 복강내(IP)로 시험감염시켰다. 1시간 노출 후에, 마우스를 500㎍ (PBS 용액 중의 1.0㎎/㎖ mAb의 0.5㎖)의 정제한 단클론성 항체 또는 PBS 단독으로 IP 처리하였다. 하나의 연구는 또한 1.0㎎/㎖에서 500㎍의 항-HA IgG로 처리한 음성 대조군을 포함하였다. 감염에 대한 임상 징후를 연구가 끝나는 시점인 노출 후 28일동안 모니터링하고, 마우스를 안락사시켰다.
2회의 별도의 연구를 수행하였다. 표 6은 mAb의 특징뿐만 아니라 생체내 보호 연구로부터의 결과를 나타낸다. 도 8은 두 생체내 연구로부터의 결과를 나타내는 선형 그래프이다. CAN30G5 및 CAN54G2는 연구 둘 다에서 각각 100% 및 90% 생존으로 가장 큰 보호를 나타내었다. CAN30G3 및 CAN30G4는 50% 초과의 보호를 나타낸 반면, CAN40G1은 40% 보호를 나타내었다. 이 경우에, CAN54G2 및 CAN30G3은 에피토프 맵핑(실시예 7) 및 교차반응성(도 2)에 기반하여 동등한 효능을 나타내는 것으로 예측되었지만, 마우스 적합 모델에서 마르부르크 Ravn 시험감염에 대해 생체내에서 현저한 차이가 있었다.
Figure pct00026
실시예 9: V-유전자 서열분석
RNA를 RNeasy 미니키트를 이용하여 모 혼성세포 클론 세포주로부터 단리시켰다. RNA로부터 V 유전자의 증폭을 퀴아젠 원스텝(Qiagen OneStep) RT-PCR 키트를 이용하여 수행하였다. 몇몇 조합의 프라이머 세트를 사용하였다. PCR 증폭 반응 결과를 분석 아가로스 겔 상에서 PCR 산물을 시험함으로써 결정하였고, 대략 300 내지 500bp에서 시각화한 밴드는 클로닝을 위해 단리시킨 겔이었다. 추출한 DNA를 TOPO TA 클로닝 매뉴얼에서의 저 용융 아가로스 방법을 이용하여 pCR2.1-TOPO 벡터 내로 직접 TA 클로닝시켰다. 클론 반응을 M13 정방향 및 M13 역방향 프라이머를 이용하여 양방향으로 서열분석하였다. DNA스타 레이저진 소프트웨어(DNAStar Lasergene Software)를 이용하여 서열 데이터를 분석하였다.
도 9 내지 도 11은 IMGT/V-탐색(Quest) 기준 디렉토리 세트에 대해 그리고 CAN30G5, CAN54G2 및 CAN40G1에 대한 NCBI 면역글로불린 블라스트 검색에 대해 비교한 얻어진 정렬된 V-유전자 서열을 나타낸다. 도면은 뮤린 모 클론의 VH와 VL 서열 둘 다에 대한 결과를 포함한다.
실시예 10: 생체내 에볼라 바이러스 감염 모델에서 판필로바이러스 mAb 의 효능
판필로바이러스 뮤린 항체 CAN40G1을 생체내 에볼라 바이러스 감염 모델에서 시험하였다. BALB/c 마우스를 판(pan) 내로 분리시키고, 시험감염 3일 전에 BSL-4 설비 내로 이동시켰다. 마우스를 표적화한 1000 PFU 마우스 적합 에볼라 바이러스(ma-EBOV)를 이용하여 i.p.로 시험감염시켰다. 처리하지 않은 그룹을 제외한 모든 그룹을 시험감염 후 1 내지 2시간에 그리고 시험감염 후 3일에 500㎕의 사전 제형화한 mAb를 이용하여 i.p. 처리하였다. 마우스를 양성 대조군 항-EBOV mAb; CAN40G1; 또는 항체 없음(처리 없음)으로 처리하였다. 마우스를 질환의 징후에 대해 모니터링하고, 체중을 매일 확인하였다. 연구를 시험감염 후 28일에 종결하였다. 시험감염 후 10일에 그룹에 대한 생존 데이터를 표 7에 나타낸다.
시험감염 후 10일에 ma- EBOV로 시험감염한 마우스의 생존 백분율
처리군 생존 백분율
양성 대조군 항-EBOV mAb 100
CAN40G1 20
처리 없음 0
본 발명의 범주는 본 명세서에서 상기에 구체적으로 나타내고 기재한 것으로 제한되지 않는다. 당업자는 물질, 입체배치, 구성 및 치수의 도시된 예에 대한 적합한 대안이 있다는 것을 인식할 것이다. 특허 및 다양한 간행물을 포함하는 수많은 참고문헌이 본 발명의 설명에 인용되고 논의된다. 이러한 기준의 인용 및 논의는 단지 본 발명의 설명을 명확히 하기 위해 제공되며, 임의의 참고문헌이 본 명세서에 기재된 본 발명에 대한 선행기술이라는 용인은 아니다. 본 명세서에 인용되고 논의되는 모든 참고문헌은 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 포함된다. 본 명세서에 기재되는 것의 변화, 변형 및 다른 실행은 본 발명의 정신과 범주로부터 벗어나는 일 없이 당업자에 대해 일어날 것이다. 본 발명의 특정 실시형태를 나타내고 기재하였지만, 본 발명의 정신과 범주로부터 벗어나는 일 없이 변화 및 변형이 만들어질 수 있다는 것은 당업자에게 분명할 것이다. 앞서 언급한 설명 및 수반하는 도면에 제시된 사항은 단지 예시의 방법에 의해 제공되며 제한되지 않는다.

Claims (43)

  1. 필로바이러스에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체, 또는 이의 항원-결합 부분으로서, 상기 항체 또는 항원-결합 부분은 (i) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 및 (ii) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하되,
    (a) 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 6, 7 및 8 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 18, 19 및 20 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
    (b) 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 30, 31 및 32 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 42, 43 및 44 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    (c) 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 54, 55 및 56 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 66, 67 및 68 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나,
    (d) 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 78, 79 및 80 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 90, 91 및 92 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나,
    (e) 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 102, 103 및 104 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 114, 115 및 116 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나,
    (f) 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 126, 127 및 128 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 138, 139 및 140 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
    (g) 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 150, 151 및 152 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 162, 163 및 164 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 필로바이러스에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체, 또는 이의 항원-결합 부분.
  2. 제1항에 있어서,
    (a) 상기 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 2, 서열번호 26, 서열번호 50, 서열번호 74, 서열번호 98, 서열번호 122 및 서열번호 146으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    (b) 상기 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 14, 서열번호 38, 서열번호 62, 서열번호 86, 서열번호 110, 서열번호 134 및 서열번호 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    (a) 상기 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
    (b) 상기 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 26에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
    (c) 상기 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 62에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
    (d) 상기 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 86에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
    (e) 상기 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 110에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
    (f) 상기 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 122에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    (g) 상기 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 146에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 158에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분은 (i) 전체 면역글로불린 분자; (b) scFv; (c) Fab 단편; (d) F(ab')2; 및 (e) 이황화 결합된 Fv로 이루어진 군으로부터 선택된, 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE 및 IgM으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역글로불린 불변 영역을 포함하는, 단클론성 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 필로바이러스는 마르부르크(Marburgvirus) 속의 구성원인, 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  7. 제6항에 있어서, 상기 필로바이러스는 Ravn, 앙골라(Angola), 무소케(Musoke) 및 Popp 마르부르크 바이러스주로 이루어진 군으로부터 선택된, 항체 또는 항원-결합 부분.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분은 상기 마르부르크 바이러스 당단백질에 결합하는, 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분은 상기 마르부르크 바이러스 당단백질의 GP1 서브유닛에 결합하는, 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분은 상기 마르부르크 바이러스 당단백질의 GP2 서브유닛에 결합하는, 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분은 적어도 2종의 필로바이러스에 대해 교차반응성인, 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  12. 제11항에 있어서, 상기 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분은 상기 에볼라바이러스(Ebolavirus) 속의 구성원인 필로바이러스에 결합하는, 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분은 에볼라(Ebola) 바이러스, 수단(Sudan) 바이러스, 분디부교(Bundibugyo) 바이러스, 타이숲(Tai Forest) 바이러스 또는 레스턴(Reston) 바이러스 중 적어도 1종에 결합하는, 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분.
  14. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분은 상기 에볼라 바이러스 당단백질에 결합하는, 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분 및 적어도 1종의 약제학적으로 허용가능한 보조제를 포함하는 약제학적 조성물.
  16. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분 및 적어도 1종의 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  17. 제15항 또는 제16항에 있어서, 제2 제제를 더 포함하는, 약제학적 조성물.
  18. 제17항에 있어서, 상기 제2 제제는 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분인, 약제학적 조성물.
  19. 제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 적어도 1종의 마르부르크 바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 및 적어도 1종의 에볼라 바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는, 약제학적 조성물.
  20. 제15항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 적어도 2, 적어도 3 또는 적어도 4종의 마르부르크 바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는, 약제학적 조성물.
  21. 제15항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 적어도 2종의 마르부르크 바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하고, 각각의 마르부르크 바이러스-결합 항체 또는 항원-결합 부분은 상기 마르부르크 바이러스 당단백질의 상이한 에피토프에 결합하는, 약제학적 조성물.
  22. 필로바이러스 감염의 개선, 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 치료적 유효량의 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분을 투여하는 단계를 포함하는, 필로바이러스 감염을 개선, 예방 또는 치료하는 방법.
  23. 마르부르크 바이러스 감염 또는 에볼라 바이러스 감염의 개선, 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 치료적 유효량의 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분을 투여하는 단계를 포함하는, 마르부르크 바이러스 감염 또는 에볼라 바이러스 감염을 개선, 예방 또는 치료하는 방법.
  24. 필로바이러스 감염의 개선, 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 필로바이러스에 특이적으로 결합하는 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 치료적 유효량의 하나 이상의 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 투여하는 단계를 포함하는, 필로바이러스 감염을 개선, 예방 또는 치료하는 방법.
  25. 마르부르크 바이러스 감염 또는 에볼라 바이러스 감염의 개선, 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 마르부르크 바이러스에 특이적으로 결합하는 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 치료적 유효량의 하나 이상의 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 투여하는 단계를 포함하는, 마르부르크 바이러스 감염 또는 에볼라 바이러스 감염을 개선, 예방 또는 치료하는 방법.
  26. 제24항 또는 제25항에 있어서, 상기 하나 이상의 항체 또는 항원-결합 부분은 (i) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 및 (ii) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하되,
    (a) 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 6, 7 및 8 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 18, 19 및 20 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
    (b) 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 30, 31 및 32 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 42, 43 및 44 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    (c) 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 54, 55 및 56 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 66, 67 및 68 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나,
    (d) 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 78, 79 및 80 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 90, 91 및 92 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나,
    (e) 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 102, 103 및 104 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 114, 115 및 116 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나,
    (f) 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 126, 127 및 128 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 138, 139 및 140 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
    (g) 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 150, 151 및 152 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 162, 163 및 164 각각에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  27. 필로바이러스 감염의 개선, 예방 또는 치료가 필요한 대상체에서 필로바이러스 감염을 개선, 예방 또는 치료하기 위한 의약의 제조에서 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분의 용도.
  28. 제27항에 있어서, 상기 필로바이러스 감염은 마르부르크 바이러스 감염 또는 에볼라 바이러스 감염인, 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분의 용도.
  29. 필로바이러스 감염의 개선, 예방 또는 치료가 필요한 대상체에서 필로바이러스 감염을 개선, 예방 또는 치료하기 위한 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분의 용도.
  30. 제29항에 있어서, 상기 필로바이러스 감염은 마르부르크 바이러스 감염 또는 에볼라 바이러스 감염인, 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분의 용도.
  31. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분을 암호화하는 단리된 핵산 분자 .
  32. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분의 (a) 면역글로불린 경쇄 가변 영역, (b) 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 (c) 면역글로불린 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 암호화하는 단리된 핵산 분자.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서, 상기 핵산 분자는 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 25, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 37, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 73, 서열번호 75, 서열번호 76, 서열번호 77, 서열번호 85, 서열번호 87, 서열번호 88, 서열번호 89, 서열번호 97, 서열번호 99, 서열번호 100, 서열번호 101, 서열번호 109, 서열번호 111, 서열번호 112, 서열번호 113, 서열번호 121, 서열번호 123, 서열번호 124, 서열번호 125, 서열번호 133, 서열번호 135, 서열번호 136, 서열번호 137, 서열번호 145, 서열번호 147, 서열번호 148, 서열번호 149, 서열번호 157, 서열번호 159, 서열번호 160 및 서열번호 161로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
  34. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분의 (a) 면역글로불린 경쇄 가변 영역, (b) 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 (c) 면역글로불린 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 세그먼트를 포함하는 발현 벡터로서, 상기 핵산 세그먼트는 숙주 세포 내 상기 핵산 세그먼트의 발현에 적합한 조절 서열에 조작가능하게 연결된, 발현 벡터.
  35. 제34항에 있어서, 상기 핵산 세그먼트는 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 25, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 37, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 73, 서열번호 75, 서열번호 76, 서열번호 77, 서열번호 85, 서열번호 87, 서열번호 88, 서열번호 89, 서열번호 97, 서열번호 99, 서열번호 100, 서열번호 101, 서열번호 109, 서열번호 111, 서열번호 112, 서열번호 113, 서열번호 121, 서열번호 123, 서열번호 124, 서열번호 125, 서열번호 133, 서열번호 135, 서열번호 136, 서열번호 137, 서열번호 145, 서열번호 147, 서열번호 148, 서열번호 149, 서열번호 157, 서열번호 159, 서열번호 160 및 서열번호 161로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 발현 벡터.
  36. 제34항 또는 제35항의 발현 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포.
  37. 제36항에 있어서, 상기 세포는 박테리아, 진핵 또는 포유류 세포인, 재조합 숙주 세포.
  38. 제36항 또는 제37항에 있어서, 상기 세포는 COS-1, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-1, HepG2, SP2/0, 헬라(HeLa), 골수종 또는 림프종 세포인, 재조합 숙주 세포.
  39. 필로바이러스-결합 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 생성하는 방법으로서,
    핵산 세그먼트가 발현되는 조건 하에서 제34항 또는 제35항의 발현 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포를 배양시킴으로써, 상기 필로바이러스-결합 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분을 생성하는 단계를 포함하는, 필로바이러스-결합 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 생성하는 방법.
  40. 제39항에 있어서, 상기 필로바이러스-결합 단클론성 항체 또는 항원-결합 부분을 회수하는 단계를 더 포함하는, 필로바이러스-결합 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 방법.
  41. 샘플 내 필로바이러스 당단백질을 검출하는 방법으로서, 상기 샘플을 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원-결합 부분과 접촉시키는 단계를 포함하는, 샘플 내 필로바이러스 당단백질을 검출하는 방법.
  42. 제41항에 있어서, 상기 샘플은 필로바이러스 감염을 갖는 것으로 의심되거나 또는 필로바이러스 감염의 위험에 있는 대상체로부터의 세포, 조직 또는 생물학적 유체인, 샘플 내 에볼라바이러스 GP를 검출하는 방법.
  43. 제41항 또는 제42항에 있어서, 상기 필로바이러스 당단백질은 마르부르크 바이러스, 에볼라 바이러스, 수단 바이러스, 분디부교 바이러스, 타이숲 바이러스 또는 레스턴 바이러스 당단백질인, 샘플 내 에볼라바이러스 GP를 검출하는 방법.
KR1020167025601A 2014-02-19 2015-02-19 마르부르크 단클론성 항체 KR20170041167A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461941807P 2014-02-19 2014-02-19
US61/941,807 2014-02-19
US201462016419P 2014-06-24 2014-06-24
US62/016,419 2014-06-24
PCT/US2015/016708 WO2015127140A2 (en) 2014-02-19 2015-02-19 Marburg monoclonal antibodies

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20170041167A true KR20170041167A (ko) 2017-04-14

Family

ID=53877480

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167025601A KR20170041167A (ko) 2014-02-19 2015-02-19 마르부르크 단클론성 항체

Country Status (8)

Country Link
US (2) US20170065702A1 (ko)
EP (2) EP3145546B1 (ko)
KR (1) KR20170041167A (ko)
AU (2) AU2015218909A1 (ko)
CA (2) CA2939572A1 (ko)
IL (1) IL247285A0 (ko)
SG (2) SG11201606051YA (ko)
WO (2) WO2015127140A2 (ko)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20180030118A1 (en) * 2015-02-19 2018-02-01 Emergent Biosolutions Canada Inc. Humanzied filovirus antibodies and uses thereof
DK3262411T3 (da) 2015-02-25 2022-04-19 Univ Vanderbilt Antibody-mediated neutralization of marburg virus
CN107771182A (zh) * 2015-05-29 2018-03-06 豪夫迈·罗氏有限公司 人源化抗埃博拉病毒糖蛋白抗体和使用方法
HUE045145T2 (hu) 2015-07-15 2019-12-30 Hoffmann La Roche Etinil-származékok metabotróp glutamátreceptor-modulátorokként
EP3254691A1 (en) * 2016-06-07 2017-12-13 Abivax Polyclonal antibodies for use in the prevention and/or treatment of ebola virus disease
CN106868025B (zh) * 2017-03-13 2020-01-21 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 用酵母制备三聚体埃博拉病毒糖蛋白突变体的方法
AU2018356538B2 (en) * 2017-10-25 2023-09-28 Nouscom Ag Eukaryotic cell line
US20210340185A1 (en) * 2018-08-29 2021-11-04 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois Ebola vaccine compositions and methods of using same
CA3148318A1 (en) * 2019-08-23 2021-03-04 Jennifer D. Wu Materials and methods for activating antigen-specific t cell responses
JP2021187810A (ja) * 2020-06-04 2021-12-13 東亞合成株式会社 抗ウイルス性ペプチドおよびその利用
CN114230666B (zh) * 2021-12-20 2022-09-02 南京诺唯赞生物科技股份有限公司 一种t7 rna聚合酶的单克隆抗体及其制备方法

Family Cites Families (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
US4501728A (en) 1983-01-06 1985-02-26 Technology Unlimited, Inc. Masking of liposomes from RES recognition
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
JPS6147500A (ja) 1984-08-15 1986-03-07 Res Dev Corp Of Japan キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
JPS61134325A (ja) 1984-12-04 1986-06-21 Teijin Ltd ハイブリツド抗体遺伝子の発現方法
WO1987002671A1 (en) 1985-11-01 1987-05-07 International Genetic Engineering, Inc. Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US4837028A (en) 1986-12-24 1989-06-06 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
NZ230747A (en) 1988-09-30 1992-05-26 Bror Morein Immunomodulating matrix comprising a complex of at least one lipid and at least one saponin; certain glycosylated triterpenoid saponins derived from quillaja saponaria molina
US5283173A (en) 1990-01-24 1994-02-01 The Research Foundation Of State University Of New York System to detect protein-protein interactions
US5279833A (en) 1990-04-04 1994-01-18 Yale University Liposomal transfection of nucleic acids into animal cells
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
US5283185A (en) 1991-08-28 1994-02-01 University Of Tennessee Research Corporation Method for delivering nucleic acids into cells
US5585250A (en) * 1993-08-20 1996-12-17 The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services Dampening of an immunodominant epitope of an antigen for use in plant, animal and human compositions and immunotherapies
US5908635A (en) 1994-08-05 1999-06-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method for the liposomal delivery of nucleic acids
AUPM873294A0 (en) 1994-10-12 1994-11-03 Csl Limited Saponin preparations and use thereof in iscoms
US6096716A (en) 1994-12-12 2000-08-01 The Board Of Regents, The University Of Texas System Liposome-mediated transfection of central nervous system cells
AUPO517897A0 (en) 1997-02-19 1997-04-11 Csl Limited Chelating immunostimulating complexes
AUPP807399A0 (en) 1999-01-08 1999-02-04 Csl Limited Improved immunogenic lhrh composition and methods relating thereto
AU783344B2 (en) 1999-02-17 2005-10-20 Csl Limited Immunogenic complexes and methods relating thereto
US7630836B2 (en) * 2001-05-30 2009-12-08 The Kitasato Institute Polynucleotides
US20040126829A1 (en) 2001-12-18 2004-07-01 Hildebrand William H. Anti-HLA assay and methods
US6875433B2 (en) * 2002-08-23 2005-04-05 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Monoclonal antibodies and complementarity-determining regions binding to Ebola glycoprotein
KR100835786B1 (ko) * 2003-07-08 2008-06-09 제넨테크, 인크. Ｉｌ-１７ａ／ｆ 이종 폴리펩티드 및 그의 치료 용도
RS51908B (en) 2004-02-06 2012-02-29 University Of Massachusetts CLOSTRIDIUM DIFFICILE TOXIN ANTIBODIES AND THEIR USES
CA2566498A1 (en) * 2004-05-14 2005-12-08 The Regents Of The University Of California Methods for treating cancer using anti-wnt2 monoclonal antibodies and sirna
CA2573293A1 (en) * 2004-07-10 2006-02-16 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods for discovering antibodies specific to cancer cells and antibodies discovered thereby
CA2572427A1 (en) 2004-07-18 2006-01-18 Heather L. Davis Immuno stimulating complex and oligonucleotide formulations for inducing enhanced interferon-gamma responses
WO2006134423A2 (en) 2004-07-18 2006-12-21 Coley Pharmaceutical Group, Ltd. Methods and compositions for inducing innate immune responses
US20090061485A1 (en) * 2004-12-22 2009-03-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of Producing an Antibody Using a Cell in Which the Function of Fucose Transporter Is Inhibited
MX2009003393A (es) * 2006-10-02 2009-05-11 Regeneron Pharma Anticuerpos humanos de alta afinidad para el receptor de il-4 humano.
EP2217270A4 (en) * 2007-10-30 2012-12-26 Int Aids Vaccine Initiative ANTIGEN-ANTIBODY COMPLEXES AS VACCINES AGAINST HIV-1
WO2009132251A2 (en) * 2008-04-25 2009-10-29 Dyax Corp. Methods and compositions comprising anti-idiotypic antibodies to anti-mmp-14 antibodies
CA2735279A1 (en) * 2008-08-29 2010-03-04 Symphogen A/S Anti-cd5 antibodies
EP2198884A1 (en) * 2008-12-18 2010-06-23 Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) Monoclonal antibodies directed against LG4-5 domain of alpha3 chain of human laminin-5
CN102341411A (zh) 2008-12-31 2012-02-01 比奥根艾迪克Ma公司 抗-淋巴细胞毒素抗体
PT2552959T (pt) * 2010-03-26 2017-04-21 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anticorpos para muc16 e métodos de utilização dos mesmos
US9505847B2 (en) * 2011-08-22 2016-11-29 Cnj Holdings Inc Clostridium difficile antibodies
KR102351881B1 (ko) * 2012-04-12 2022-01-18 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 필로바이러스 공통 항원, 이로부터 제조된 핵산 구조체 및 백신, 및 이를 사용하는 방법
US9708601B2 (en) * 2012-04-26 2017-07-18 Vaccinex, Inc. Fusion proteins to facilitate selection of cells infected with specific immunoglobulin gene recombinant vaccinia virus

Also Published As

Publication number Publication date
EP3145546A4 (en) 2017-10-25
EP3107567A4 (en) 2017-10-25
AU2015221388A1 (en) 2016-08-04
WO2015123777A1 (en) 2015-08-27
EP3145546A2 (en) 2017-03-29
WO2015127140A2 (en) 2015-08-27
CA2939572A1 (en) 2015-08-27
CA2939034A1 (en) 2015-08-27
EP3145546B1 (en) 2020-12-09
WO2015127140A3 (en) 2015-10-01
US20170226192A1 (en) 2017-08-10
EP3107567A1 (en) 2016-12-28
AU2015218909A1 (en) 2016-08-04
SG10201806481XA (en) 2018-09-27
SG11201606051YA (en) 2016-09-29
US20170065702A1 (en) 2017-03-09
IL247285A0 (en) 2016-09-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3145546B1 (en) Marburg monoclonal antibodies
CA2731686C (en) Neutralizing anti-influenza a virus antibodies and uses thereof
EP2486053B1 (en) Rsv-specific binding molecule
JP6483337B2 (ja) デングウイルス血清型１のｅタンパク質に対して特異性を有するヒトモノクローナル抗体およびその使用
US20170183396A1 (en) Ebola monoclonal antibodies
US9902765B2 (en) Antibodies against chikungunya virus and uses thereof
US10654915B2 (en) Antibodies useful in passive influenza immunization
US11370829B2 (en) Antibodies that potently neutralize RSV and uses thereof
AU2023219176A1 (en) Human monoclonal antibodies that broadly target coronaviruses
US20170158753A1 (en) Monoclonal antibodies directed against envelope glycoproteins from multiple filovirus species
WO2022127793A1 (zh) 呼吸道合胞病毒特异性结合分子
US10611827B2 (en) Non-human primate-derived pan-ebola and pan-filovirus monoclonal antibodies directed against envelope glycoproteins
CN115873106A (zh) 抗chikv抗体及其用途
JP2022507836A (ja) 新規の抗ジカウイルス抗体及びその使用
KR20240006575A (ko) SARS-CoV-2에 대한 사람 중화 모노클로날 항체 및 이의 용도
CA2938129A1 (en) Humanized beta-amyloid binding molecules and uses thereof
WO2021249547A1 (en) Anti-coronavirus antibodies and uses thereof
US9637537B2 (en) Monoclonal antibodies targeting neutralizing epitopes on H7 influenza viruses
US9233152B2 (en) Monoclonal antibodies targeting neutralizing epitopes on H5 influenza virus of clade 2.3
EP4238988A1 (en) Antibodies against sars-cov-2 and uses thereof
WO2022132904A1 (en) Human monoclonal antibodies targeting sars-cov-2
CN104628850B (zh) Rsv-特异性结合分子
CN114761042A (zh) Il-38特异性抗体
WO2022268120A1 (en) Anti-rsv antibodies and uses thereof
WO2024137381A1 (en) Monoclonal antibodies for treating sars-cov-2 infection

Legal Events

Date Code Title Description
N231 Notification of change of applicant