KR20170031065A - 시니그린을 포함하는 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물 - Google Patents
시니그린을 포함하는 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 시니그린을 포함하는 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물 및 이를 이용한 반추동물의 메탄 생성억제 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 시니그린이 특정 농도로 처리하는 경우, pH나 건물 소화율 등에는 영향을 미치지 않으면서, 메탄 생성량만 유의적으로 감소시킬 수 있는바, 특정 농도의 시니그린을 반추동물의 메탄 생성을 저감시키는 사료 첨가제 또는 사료 조성물로 유용하게 사용할 수 있을 것으로 기대된다.
또한, 본 발명에 따르면 glucosinolate인 시니그린을 특정 농도로 처리함으로써, 다량 첨가에 의한 반추동물의 생리학적 side effects 발생을 최소화 하면서 메탄 저감 효과가 우수하여 반추동물 메탄으로 손실되는 에너지를 줄이면 실질적으로 사용할 수 있는 에너지가 증가되기 때문에 생산성에 도움을 줄 수도 있다.
본 발명에 따르면, 시니그린이 특정 농도로 처리하는 경우, pH나 건물 소화율 등에는 영향을 미치지 않으면서, 메탄 생성량만 유의적으로 감소시킬 수 있는바, 특정 농도의 시니그린을 반추동물의 메탄 생성을 저감시키는 사료 첨가제 또는 사료 조성물로 유용하게 사용할 수 있을 것으로 기대된다.
또한, 본 발명에 따르면 glucosinolate인 시니그린을 특정 농도로 처리함으로써, 다량 첨가에 의한 반추동물의 생리학적 side effects 발생을 최소화 하면서 메탄 저감 효과가 우수하여 반추동물 메탄으로 손실되는 에너지를 줄이면 실질적으로 사용할 수 있는 에너지가 증가되기 때문에 생산성에 도움을 줄 수도 있다.
Description
본 발명은 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 시니그린을 포함하는 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물 및 이를 이용한 반추동물의 메탄 생성억제 방법에 관한 것이다.
지구온난화가스의 농도 증가로 인하여 지구온난화가 가속되어 기상이변, 작물의 생산량 및 식량부족 등의 사태가 발생하고 있다. 지구 온난화는 지구 표면의 평균온도가 상승하는 현상으로서, 여러 온실가스들이 대기로 들어가 잔류하면서 적외선 복사열을 흡수하거나 재방출하여 유발되어지는 것으로 알려져 있으며, 현재 IPCC (Intergovernmental Panel on Climatic Change)는 이산화탄소(CO2), 메탄(CH4), 아산화질소(N2O), 수소불화탄소(HFCs), 과불화탄소(PFCs) 및 육불화황(SF6)을 6대 온실가스로 선정하였다. 산업화 이후 화석연료의 과다 사용 등으로 인해 온실가스 농도의 증가로 인하여 지구의 기온이 지속적으로 상승하는 추세에 있다.
이중 메탄(CH4)가스는 이산화탄소에 비해 생산되는 양은 적지만 지구온난화에 미치는 영향력이 21배 높기 때문에, 이산화탄소 다음으로 지구 온난화에 큰 영향을 미치는 원인으로 알려져 있다. 이러한 메탄가스는 연못, 습지, 논밭, 반추가축의 장내발효 및 분뇨 분해와 같은 미생물 발효에 의해 생성되거나 석탄, 석유, 천연가스, 배기가스 등 자연과 산업 활동에 의해서도 생성된다. 특히 메탄은 소, 물소, 면양, 산양 및 낙타 등의 위에서 정상적인 소화과정(장내발효)중 발생되는데, 현재 축산 분야에 의해 방출되어지는 메탄가스는 연간 최대 115 Tg 으로 전체 메탄발생량의 13~19%를 차지하고 있다.
따라서, 반추위 내 메탄 발생을 최소화함으로써 동물의 생산성을 향상시키고 지구환경을 보존하기 위한 연구가 절실히 요구되고 있다.
이를 위해, 종래에는 할로겐 화합물이나 아이노포오계(ionophore) 항생제, 2-bromoethanesul- phonate, lumazine 등과 같은 화학물질을 사용하는 방법이 주로 사용되었다. 하지만, 현재까지 제시된 방법들은 메탄가스 발생의 저감 효과가 미미할 뿐만 아니라, 사료의 조성에 따라 메탄 억제 효과가 변하는 문제가 있었다. 또한, 장시간 처리하였을 때 반추 미생물이 그 물질에 대해 적응하거나 그 물질을 분해하여 그 효과가 지속적이지 못하는 문제점도 있었다.
이에, 반추동물의 생산성을 증대시킴과 동시에 반추동물에서 메탄 발생을 감소시키는데 효과적인 물질의 개발이 시급한 실정이다.
본 발명은 상기와 같은 종래 기술상의 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명자들은 반추동물의 생산성을 증대시킴과 동시에 반추동물에서 메탄 발생을 감소시킨데 효과적인 물질에 대하여 연구 노력한 결과, 시니그린(sinigrin)이 반추위 내 pH나 건물 소화율에는 영향을 미치지 않으면서 반추위 내 메탄 생성량 저감에 우수한 효과가 있음을 확인하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하게 되었다.
이에, 본 발명의 목적은 시니그린(sinigrin)을 유효성분으로 포함하는, 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 첨가제 조성물을 배합한 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 시니그린(sinigrin)을 동물에게 급여하는 단계를 포함하는 반추동물의 메탄 생성억제 방법을 제공하는 것이다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 시니그린(sinigrin)을 유효성분으로 포함하는, 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물을 제공한다.
본 발명은 상기 사료 첨가제 조성물을 배합한 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로, 상기 시니그린은 10 내지 130 μmol 농도로 배합될 수 있다.
본 발명은 시니그린(sinigrin)을 동물에게 급여하는 단계를 포함하는, 반추동물의 메탄 생성억제 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로, 상기 시니그린을 10 내지 130 μmol 농도로 급여할 수 있다.
본 발명에 따르면, 시니그린이 특정 농도로 처리하는 경우, pH나 건물 소화율 등에는 영향을 미치지 않으면서, 메탄 생성량만 유의적으로 감소시킬 수 있는바, 특정 농도의 시니그린을 반추동물의 메탄 생성을 저감시키는 사료 첨가제 또는 사료 조성물로 유용하게 사용할 수 있을 것으로 기대된다.
또한, 본 발명에 따르면 glucosinolate인 시니그린을 특정 농도로 처리함으로써, 다량 첨가에 의한 반추동물의 생리학적 side effects 발생을 최소화 하면서 메탄 저감 효과가 우수하다. 따라서, 반추동물이 메탄으로 손실되는 에너지를 줄이면 실질적으로 사용할 수 있는 에너지가 증가되기 때문에 생산성에 도움을 주는 장점도 있다.
도 1은 시니그린을 농도별(20, 40, 60, 80 μmol)로 처리한 후 배양시간에 따른 pH 변화를 확인한 결과이다.
도 2는 시니그린을 농도별(20, 40, 60, 80 μmol)로 처리한 후 배양시간에 따른 총가스 생성량(total gas production) 변화를 확인한 결과이다.
도 3은 시니그린을 농도별(20, 40, 60, 80 μmol)로 처리한 후 배양시간에 따른 매탄가스 생성량 변화를 확인한 결과이다.
도 4는 시니그린을 농도별(20, 40, 60, 80 μmol)로 처리한 후 배양시간에 따른 미생물 단백질 합성 변화를 확인한 결과이다.
도 5는 시니그린을 농도별(20, 40, 60, 80 μmol)로 처리한 후 배양시간에 따른 암모니아태 질소(NH3-N) 농도 변화를 확인한 결과이다.
도 6은 시니그린을 농도별(20, 40, 60, 80 μmol)로 처리한 후 배양시간에 따른 건물 소화율 변화를 확인한 결과이다.
도 7은 시니그린을 농도별(20, 40, 60, 80 μmol)로 처리한 후 배양시간에 따른 휘발성 지방산(VFA) 발생량 변화를 확인한 결과이다.
도 8은 HPLC를 이용하여 배양시간에 따른 시니그린 함량 변화 확인 확인한 결과이다.
도 9는 동물 모델에서 기본 사료에 시니그린을 농도별(40, 60, 120 μmol)로 첨가한 후 메탄가스 생성량 변화를 확인한 결과이다.
도 2는 시니그린을 농도별(20, 40, 60, 80 μmol)로 처리한 후 배양시간에 따른 총가스 생성량(total gas production) 변화를 확인한 결과이다.
도 3은 시니그린을 농도별(20, 40, 60, 80 μmol)로 처리한 후 배양시간에 따른 매탄가스 생성량 변화를 확인한 결과이다.
도 4는 시니그린을 농도별(20, 40, 60, 80 μmol)로 처리한 후 배양시간에 따른 미생물 단백질 합성 변화를 확인한 결과이다.
도 5는 시니그린을 농도별(20, 40, 60, 80 μmol)로 처리한 후 배양시간에 따른 암모니아태 질소(NH3-N) 농도 변화를 확인한 결과이다.
도 6은 시니그린을 농도별(20, 40, 60, 80 μmol)로 처리한 후 배양시간에 따른 건물 소화율 변화를 확인한 결과이다.
도 7은 시니그린을 농도별(20, 40, 60, 80 μmol)로 처리한 후 배양시간에 따른 휘발성 지방산(VFA) 발생량 변화를 확인한 결과이다.
도 8은 HPLC를 이용하여 배양시간에 따른 시니그린 함량 변화 확인 확인한 결과이다.
도 9는 동물 모델에서 기본 사료에 시니그린을 농도별(40, 60, 120 μmol)로 첨가한 후 메탄가스 생성량 변화를 확인한 결과이다.
본 발명자들은 시니그린(sinigrin)이 반추동물의 번식생리 및 생산성에 부작용을 일으킨다는 종래의 연구와 상이하게, 특정 농도로 시니그린(sinigrin)을 처리하는 경우, 반추위 내 pH나 건물 소화율에는 영향을 미치지 않으면서 반추위 내 메탄 생성량을 현저히 저감시킴을 확인하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하게 되었다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 시니그린(sinigrin)을 유효성분으로 포함하는, 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물을 제공한다.
본 발명에서 "반추동물"은 아목 루미난시아(Ruminantia)의 임의의 우제류 포유동물로서, 소화 형태상 한번 삼킨 먹이를 다시 게워 내어 씹는 특성을 가지며, 반추위(rumen)라고 불리우는 위가 서너 개의 실로 나뉘어 있는 동물을 의미한다. 이러한 반추동물의 예로는 사슴, 영양, 버팔로, 소, 양, 낙타, 염소, 기린 등이 있으나, 이것으로 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물에 유효성분을 포함되는 시니그린(sinigrin)은 화학식 1의 구조를 가질 수 있다. 또한, 시니그린은 식물 추출물로부터 얻을 수 있고, 화학적으로 합성될 수도 있으나, 화학적으로 합성된 것도 추출된 것과 동일한 효과를 나타낸다는 것은 당업자에게 자명하다.
[화학식 1]
본 발명의 일 실시예에 따르면, in vitro 반추위 발효 시험을 통해, 특정 농도로 시니그린을 처리하면서 총 가스 생성량과 메탄 생성량 변화를 확인한 결과, 시니그린을 첨가하지 않은 대조구에 비하여, 시니그린을 첨가한 시험구에서 총 가스 생성량 및 메탄 생성량이 유의적으로 감소함을 확인하였다(실시예 3 및 4 참조).
본 발명의 다른 실시예에 따르면, 특정 농도로 시니그린을 처리하면서 pH 변화, 암모니아태 질소, 건물 소화율 변화 등을 확인한 결과, 대조구와 모든 시험구 사이에 유의적인 차이는 나타나지 않음을 확인하였다(실시예 2, 6 및 7 등 참조).
또한, 본 발명의 다른 실시예에 따르면, in vivo에서 시니그린을 처리한 모든 시험구에서 메탄 생성량이 유의적으로 감소하는 것을 확인하였다(실시예 10 참조).
따라서, 시니그린이 특정 농도로 처리되는 경우, pH나 건물 소화율 등에는 영향을 미치지 않으면서, 메탄 생성량만 유의적으로 감소시킬 수 있음을 in vitro 상으로 확인하였을 뿐만 아니라, in vivo 상으로도 더욱 확인하였는바, 특정 농도의 시니그린을 반추동물의 메탄 생성을 저감시키는 사료 첨가제로 사용하여 사료 조성물에 첨가할 수 있다.
이에, 본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 상기 사료 첨가제 조성물을 배합한 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 조성물을 제공하며, 이때, 시니그린은 10 내지 130 μmol 농도로 배합되는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는, 20 내지 80 μmol 농도로 배합될 수 있다.
본 발명에서 용어, "사료"는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미한다.
본 발명에 따른 사료 조성물은 시니그린 이외에 탄수화물, 단백질, 지방, 무기질, 비타민, 광물질 및 물과 같은 사료에 통상적으로 첨가되는 성분들이 포함될 수 있으며, 이러한 각 성분의 종류에 있어서는 특별히 제한되는 바가 없으며, 당분야에서 통상적으로 사용되는 것은 모두 사용 가능하다.
또한, 본 발명에 따른 사료 조성물은 가루 및 펠릿과 같은 종래의 사료 조성물의 형태로 제조될 수 있으나, 이것을 제한되지 않고, 당업계의 공지된 다양한 형태의 사료로 제조할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 시니그린(sinigrin)을 동물에게 급여하는 단계를 포함하는 반추동물의 메탄 생성억제 방법을 제공한다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예
1. 실험준비 및 실험방법
1-1. 반추위 내 미생물 접종액 준비
In vitro 반추위 발효 시험을 위한 반추위 내 미생물 접종액 준비는 캐눌라(cannula)가 장착된 착유우의 반추위 내에서 채취한 내용물을 8겹의 cheese cloth를 이용하여 위액과 고형물을 분리하였다. 분리된 위액만을 보온병을 이용하여 39℃로 유지하여 실험실로 즉시 운반한 후, rubber stopper가 장착되어 있는 5L bioreactor를 이용하여 CO2 gas를 지속적으로 주입시켜 혐기상태를 유지한 39℃ artificial saliva와 반추위액을 각각 1:1로 혼합하였다. 건초(볏짚, 20g/L)와 농후사료(20g/L)를 기질로 사용하여 계대배양을 하였으며, 24시간 동안 39℃ incubator에서 배양하였다. 반추위액은 원심분리(2500rpm × 15min) 후 상층액을 취하여 이를 반추위 내 미생물 접종을 위한 접종액으로 사용하였다.
1-2.
In vitro
반추위 발효
반추위 내 미생물 발효 특성에 대한 in vitro 배양 조건은 serum bottle (200 mL)을 이용하여 시니그린을 처리하지 않은 대조구와 시니그린을 농도별(20, 40, 60, 80 μmol)로 처리한 각 시험구에 시험사료 1.7g(조사료:농후사료=7:3)과 artificial saliva (100 mL)를 주입한 후, 실시예 1-1에 의해 준비된 접종액(inoculum)(5 mL)을 접종하여 CO2 gas 분주와 함께 rubber stopper와 알루미늄 뚜껑을 고정 장치로 이용하여 밀봉하였다. 모든 배양 조건은 혐기상태를 유지하면서 실시되었으며, 접종이 끝난 후 즉시 39℃ incubator에서 배양을 실시하였다.
실시예
2.
시니그린
첨가에 따른 pH 변화 확인
실시예 1-2에 따라 대조구와 시험구에 미생물 접종액을 접종하고 배양하면서 pH metter (Orion 3 star, Thermo scientific, USA)를 이용하여 시간대별(0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 24 시간)로 pH를 측정하였다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 시니그린을 첨가하지 않은 대조구와 시니그린을 첨가한 시험구 모두 배양이 진행될수록 pH가 감소하는 경향을 나타냄을 확인할 수 있었다. 정상적인 반추위 미생물 발효에 적합한 범위 내에서 조사된 바, 부(-)의 영향은 없었다.
상기 결과로부터, 시니그린을 반추위액에 첨가할 경우 반추위 내 pH에는 큰 영향을 미치지 않는다는 것을 알 수 있었다.
실시예
3.
시니그린
첨가에 따른
총가스
생성량(total gas production) 변화 확인
실시예 1-2에 따라 대조구와 시험구에 미생물 접종액을 접종하고 배양하면서 gas production matter (Model Ab-5210, AITEC Inc., Canada)를 이용하여 시간대별(0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 24 시간)로 총가스 생성량을 측정하였다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 대조구에 비하여 배양시간이 증가할수록 시니그린을 첨가한 시험구의 총가스 생성량이 감소함을 확인할 수 있었다. 특히, 배양 6시간 이후부터 대조구에 비하여 모든 시험구에서 유의적으로 낮은 총가스 생성량을 나타내었다(p < 0.05). 또한, 배양 24시간대에 대조구가 유의적으로 가장 높은 146.13 mL의 총가스 생성량을 보인 반면(p < 0.05), 40 μmol의 시니그린을 처리한 시험구에서 유의적으로 가장 낮은 99.80 mL의 총가스 생성량을 나타내었다(p < 0.05).
실시예
4.
시니그린
첨가에 따른 메탄 생성량 변화 확인
실시예 1-2에 따라 대조구와 시험구에 미생물 접종액을 접종하고 배양하면서 3-way stopper가 연결된 주사기를 이용하여 시간대별(0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 24 시간)로 가스 샘플을 채취한 후, 가스 크로마토그래피(gas chromatography; GC)를 이용하여 메탄 생성량을 측정하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 모든 배양 시간에 걸쳐, 대조구에 비하여 시니그린을 첨가한 시험구에서의 메탄 생성량이 유의적으로 감소함을 확인할 수 있었다(p < 0.05). 특히, 80 μmol의 시니그린을 처리하는 경우, 24시간 배양시, 메탄 생성량이 대조구에 비하여 90% 이상 감소함을 확인할 수 있었다.
실시예
5.
시니그린
첨가에 따른 미생물 단백질 합성 변화 확인
실시예 1-2에 따라 대조구와 시험구에 미생물 접종액을 접종하고 배양하면서 시간대별(0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 24 시간)로 배양액을 채취하여 원심분리기(Brushless D.C. motor centrifuge VS-6000CF, Vision scientific Co., LTD., Korea)를 이용하여 원심분리(2,500 rpm × 15분)를 실시하였다. 원심분리 후 상층액을 취하여 Lowry 등(1951)의 방법에 따라 미생물 단백질 합성(microbial protein synthesis; MPS) 변화를 측정하였다.
그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 시니그린을 첨가한 시험구에서 배양 시간이 증가할수록 MPS가 감소하는 경향을 나타냄을 확인할 수 있었다. 배양 24시간대에서, 대조구는 다른 시험구에 비해서 유의적으로 높게 나타난 반면(p < 0.05), 60 umol의 시니그린을 처리한 시험구에서는 다소 낮게 나타났으나(p < 0.05), 대조구와 시험구 사이에 유의적인 차이는 나타나지 않음을 확인할 수 있었다.
실시예
6.
시니그린
첨가에 따른 암모니아태 질소(NH
3
-N) 농도 변화 확인
실시예 1-2에 따라 대조구와 시험구에 미생물 접종액을 접종하고 배양하면서 시간대별(0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 24 시간)로 배양액을 채취하여 원심분리기(Brushless D.C. motor centrifuge VS-6000CF, Vision scientific Co., LTD., Korea)를 이용하여 원심분리(2,500 rpm × 15분)를 실시하였다. 원심분리 후 상층액을 취하여 Chaney와 MArbach (1962)의 방법에 따라 spectrophotometer(Spectroic PC system 4D-5210, Thermo scientific, USA)를 이용하여 암모니아태 질소(NH3-N) 농도를 측정하였다.
그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 대조구와 모든 시험구에서 배양이 진행 될수록 암모니아태 질소(NH3-N) 농도가 감소하는 경향을 나타냄을 확인할 수 있었다. 특히, 배양 4~6시간대에서, 대조구와 모든 시험구의 암모니아태 질소(NH3-N) 농도가 급격히 감소하였으나, 대조구와 시험구 사이에 유의적인 차이는 나타나지 않음을 확인할 수 있었다.
상기 결과로부터, 시니그린을 반추위액에 첨가할 경우 반추위 내에서 암모니아태 질소 농도에는 큰 영향을 미치지 않는다는 것을 알 수 있었다.
실시예
7.
시니그린
첨가에 따른 건물 소화율 변화 확인
실시예 1-2에 따라 대조구와 시험구에 미생물 접종액을 접종하고 배양하면서 Van Soest 등(1967)의 방법을 이용하여 시간대별(0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 24 시간)로 건물 소화율을 측정하였다. 한편, 시험사료 건물함량은 분석 직전 60℃ dry oven에서 72시간 동안 건조하였다.
그 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이, 대조구와 모든 시험구에서 배양이 진행 될수록 건물소화율이 증가하는 양상을 나타내었으며, 대조구와 시험구 사이에 유의적인 차이는 나타나지 않음을 확인할 수 있었다.
상기 결과로부터, 시니그린을 반추위액에 첨가할 경우 반추위 내에서 건물 소화율에는 큰 영향을 미치지 않는다는 것을 알 수 있었다.
실시예
8.
시니그린
첨가에 따른 휘발성 지방산(
VFA
) 발생량 변화 확인
실시예 1-2에 따라 대조구와 시험구에 미생물 접종액을 접종하고 배양하면서 가스 크로마토그래피(gas chromatography; GC)를 이용하여 시간대별(0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 24 시간)로 휘발성 지방산(Volatile Fatty Acids; VFA)을 측정하였다.
그 결과, 도 7에 나타낸 바와 같이, 대조구와 모든 시험구에서 배양이 진행 될수록 VFA 농도가 증가하는 양상을 나타냄을 확인할 수 있었다.
실시예
9. 배양시간에 따른
시니그린
함량 변화 확인
실시예 1-2에 따라 대조구와 시험구에 미생물 접종액을 접종하고 배양하면서 시간대별(0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 24 시간)로 배양액을 채취하여 원심분리기(Brushless D.C. motor centrifuge VS-6000CF, Vision scientific Co., LTD., Korea)를 이용하여 원심분리(2,500 rpm × 15분)를 실시하였다. 원심분리 후 상층액을 취하여 HPLC를 이용하여 시니그린 함량을 분석하였다.
그 결과, 도 8에 나타낸 바와 같이, 7.4분에 시니그린의 피크를 확인할 수 있었다. 또한, 배양 0~6시간의 sinigrin 함량을 분석한 결과, 하기 표 1에 나타낸 바와 같이, 시간이 지남에 따라서 양이 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
[표 1]
추가적으로, 원심분리 후 상층액을 취하여 GC/MS를 이용하여 시니그린 가수분해물 함량을 분석하였다.
그 결과, 하기 표 2에 나타낸 바와 같이, 배양 24시간에서는 모든 시험구에서 가수분해 산물이 측정되지 않았다. 시니그린의 가수분해 물질로는 Allyl isothiocyanate가 있는데, 상기 물질은 휘발성이 강한 물질이여서 배양이 진행되면서 사라진 것으로 판단된다.
[표 2]
실시예
10. 동물 모델에서
시니그린의
메탄 생성량
저감
효과 확인
In vivo 상에서 시니그린에 의한 메탄 생성량 저감 효과를 확인하기 위해서, 흑염소를 실험동물로 공시하여 시니그린에 의한 메탄 생성량 저감 효과를 확인하였다.
보다 구체적으로, 평균 체중 37.3 kg (±1.99) 흑염소 (재래 × 보아 교잡종) 4두 (5번 : 35.6 kg, 6번 : 39 kg, 7번 : 35.5 kg, 9번 :39 kg)를 호흡챔버로 이동시켰으며, 이 때, 실험은 사료 적응 기간을 포함하여 전 기간에 걸쳐서 호흡챔버 내에서 진행하였다. 실험 전, 티모시를 급여 사료로 하여 자유 급여하였으며, 실험기간 동안에는 각 실험동물 체중의 1.5%/일을 오전, 오후로 나누어 2회 급여하였다. 이 때, 시니그린 처리구는 기본 사료에 각 시니그린 40 μ㏖(T1), 60 μ㏖(T2) 및 120μ㏖(T3)씩 첨가하여 대조구를 포함한 4처리 실험을 실시하였다. 실험기간은 3주 동안 적응기간을 두었으며, 처리구에 대한 메탄저감 효과는 적응기간 이후 3일 동안의 측정값을 이용하였다.
그 결과, 도 9에 나타낸 바와 같이, 적응기 3주 동안은 다소 데이터 변동이 있는 것으로 나타났으나, 메탄 측정 3일 동안은 대조구를 제외한 시니그린 40 μ㏖(T1), 60 μ㏖(T2) 및 120 μ㏖(T3) 처리구에서 메탄 저감 효과를 나타내는 것을 확인하였으며, 또한, 메탄 측정 3일 동안의 평균 메탄 함량을 대조구와 비교한 결과, 40 μ㏖(T1)은 약 1.18%, 60 μ㏖(T2)은 약 8.95% 및 120 μ㏖(T3)은 약 54.73% 감소하는 것을 확인하였다. 상기 실험 결과, 120 μ㏖ 처리구가 메탄 저감 효과가 가장 크게 나타났으나, 경제성을 고려하였을 때 60 μ㏖을 급여하여도 무방하다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
Claims (5)
- 시니그린(sinigrin)을 유효성분으로 포함하는, 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물.
- 제1항의 사료 첨가제 조성물을 배합한 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 조성물.
- 제2항에 있어서,
상기 시니그린은 10 내지 130 μmol 농도로 배합되는 것을 특징으로 하는, 사료 조성물.
- 시니그린(sinigrin)을 동물에게 급여하는 단계를 포함하는, 반추동물의 메탄 생성억제 방법.
- 제4항에 있어서,
상기 시니그린을 10 내지 130 μmol 농도로 급여하는 것을 특징으로 하는, 방법.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR20150127732 | 2015-09-09 | ||
KR1020150127732 | 2015-09-09 |
Publications (2)
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