KR20170019457A - 땅콩 알레르기의 치료를 위한 핵산 - Google Patents

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이뮤노믹 쎄라퓨틱스, 인크.
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Abstract

땅콩 알레르기의 치료를 위한 DNA 백신이 본원에 제공된다. 백신은 리소솜 연관된 막 단백질 (LAMP)의 내강 도메인과 프레임내 융합된 1개 이상의 땅콩 알레르겐성 에피토프에 대한 코딩 서열 및 LAMP의 표적화 서열을 포함한다. 백신은 다가 분자일 수 있고/거나, 2종 이상의 DNA 구축물을 포함하는 다가 백신의 일부로서 제공될 수 있다.

Description

땅콩 알레르기의 치료를 위한 핵산 {NUCLEIC ACIDS FOR TREATMENT OF PEANUT ALLERGIES}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2014년 6월 23일에 출원된 미국 출원 번호 62/015,981의 우선권을 주장하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
기술 분야
개시된 대상은 분자 생물학 및 의학의 분야에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 개시된 대상은 DNA 백신으로서 사용하기 위한 핵산, 및 땅콩 알레르기 반응을 앓고 있거나 그에 감수성인 대상체를 치료하기 위한 그의 사용 방법에 관한 것이다.
알레르기 반응은 면역계가 알레르겐으로 지칭되는 유해한 외래 물질과 반응할 경우 일어난다. 음식 알레르기는 잠재적으로 생명을 앗아가는 전신 쇼크인 아나필락시스의 높은 위험으로 인해 중요한 공중 보건 사안이다 (Sampson et al. (1992) N. Engl . J. Med. 327:380-384; Bock et al. (2001) J. Allergy Clin . Immunol. 107:191-193). 어린 아이들은 일반 대중보다 음식 알레르기르 발생시킬 위험이 보다 크다 (Lack et al. (2003) N. Engl . J. Med 348:977-985; Zimmerman et al. (1989) J. Allergy Clin . Immunol . 83:764-770; Green et al. (2007) Pediatrics 120:1304-1310). 삶의 처음 3년 동안, 어린이의 6-8%는 음식에 의해 유발되는 알레르기 반응을 경험한다 (Bock (1987) Allergy 45:587-596; Burks and Sampson (1993) Curr . Prob . Pediatr. 23:230-252; Jansen et al. (1994) J. Allergy Clin . Immunol. 93;2:446-456; Sampson (1999) J. Allergy Clin . Immunol. 103;5:717-728). 우유, 달걀, 및 땅콩은 3가지 가장 흔한 음식 알레르겐이며 (Sampson (1988) J. Allergy Clin . Immunol. 81:635-645), 5세까지, 우유 또는 달걀 알레르기를 갖는 어린이의 80-85%는 그의 알레르기를 벗어날 것이다 (Host et al. (1997) J. Allergy Clin . Immunol . 99:S490). 대조적으로, 유아의 단지 20%만이 땅콩에 대한 내성을 발생시킨다 (Skolnick et al. (2001) J. Allergy Clin. Immunol. 107;2:367-374).
음식 알레르겐, 특히 땅콩에의 노출에 의해 유발되는 아나필락시스는 히스타민의 과다생성을 특징으로 하는 중증 면역 반응을 초래하며, 연간 미국 아나필락시스 응급실 방문의 절반에 원인이 있다. 땅콩에 대한 이러한 극도의 반응은 미국에서 매년 아나필락시스의 30,000건이 넘는 발생 및 100-200건의 사망을 초래한다. 미량의 땅콩은 수천의 개별적으로 브랜드화되지만, 표지되지 않은, 패키징된 음식 품목에서 통상적으로 발견된다. 150만명 초과의 미국인이 땅콩 알레르기로부터의 증상을 앓고 있으며, 증상은 종종 삶 전반에 걸쳐 지속된다. 많은 사람이 미량에의 노출 시 위험한 반응을 경험한다.
땅콩 알레르기 증상을 완화하기 위한 치료는 없으며; 땅콩 알레르기를 앓고 있는 개인 및 초등 학교와 같은 기관은 노출 또는 섭취 및 잠재적으로 치명적인 아나필락시스 에피소드의 위험을 피하기 위해 엄격한 수단을 취해야 한다. 땅콩 알레르기의 진단은 아나필락시스의 위험을 피하기 위해 일정한 식이 경계를 유지할 것을 요구한다 (Yunginger et al. (1988) JAMA 260:1450-1452). 어린이의 경우, 이 경계는 또한 부모, 학교, 및 돌보는 사람에 의해 실시되어야 한다. 지난 10년에 걸쳐, 땅콩 알레르기의 유병률은 2배가 되어 성인 미국인의 2%에 영향을 미쳤다 (Sampson (1999) J. Allergy Clin . Immunol. 103;5:717-728; Sicherer et al. (2003) J. Allergy Clin . Immunol. 112:1203-1207). 건초열 및 짧은 돼지풀 화분과 같은 많은 다른 알레르기에 대한 증상은 삶을 위협하지는 않지만, 땅콩 알레르기 개체에 대해서는, 1/1000만큼 적은 땅콩의 섭취가 아나필락시스 쇼크 및 사망을 유도할 수 있다 (Taylor et al. (2002) J. Allergy Clin. Immunol. 109 (1):24-30; Wensing et al. (2002) J. Allergy Clin . Immunol. 110(6):915-920). 땅콩의 우발적 섭취는 모든 음식-유도된 아나필락시스 쇼크의 2/3와 관련되었다 (Bock et al. (2001) J. Allergy Clin . Immunol. 107:191-193). 우발적 섭취가 아나필락시스를 촉발하는 경우, 에피네프린의 주사는 기도 통로를 개방하는 데 사용된다 (Stark and Sullivan (1986) J. Allergy Clin . Immunol. 78:76-83; Sampson (2003) Pediatrics 111(6):1601-1608).
음식 알레르기는 개체가 경구 내성을 발생시키는 데 실패하고, 대신 후속의 알레르겐 노출에 감작화될 경우에 일어난다 (Till et al. (2004) J. Allergy Clin . Immunol. 113(6):1025-1034). 알레르기 환자에서, 알레르겐은 유형 2 헬퍼 CD4+ T 림프구 (Th2)를 선호적으로 활성화시키며, 이는 대부분의 알레르기 증상의 기저에 있는 염증을 조정하는 것을 돕는 전-알레르기성 시토카인 인터루킨 IL-4, IL-5, 및 IL-13을 생성한다 (Woodfolk (2007) J. Allergy Clin . Immunol. 118(2):260-294). IL-4는 항체-생성 B 세포가 알레르겐-특이적 이뮤노글로불린 (Ig) E를 분비하도록 지시한다 (Del Prete et al. (1988) J. Immunol. 140:4193-4198; Swain et al. (1990) J. Immunol. 145:3796-3806). 중화 IgG와는 달리, IgE는 비만 세포 및 호산구에 의해 발현되는 그의 고 친화도 수용체 Fc--εRI에 결합하며 (Blank et al. (1989) Nature 337:187-190; Benhamou et al. (1990) J. Immunol. 144:3071-3077), 따라서 이들 세포를 감작화한다. 후속 노출 시, IgE는 불쾌한 알레르겐에 결합하고, 가교하고, 비만 세포가 알레르기 반응을 촉발하는 휘발성 화학물질을 탈과립화하고 방출하도록 지시하는 신호를 변환한다.
내성을 야기하기 위한 증가하는 용량의 알레르겐의 투여인 면역요법은 알레르기성 질환에 대한 표준 치료이지만, 빈번한 아나필락시스 반응으로 인해 땅콩 알레르기의 치료에 대해 승인되지 않았다 (Nelson et al. (1997) J. Allergy Clin . Immunol 99;6:744-751; Oppenheimer et al. (1992) J. Allergy Clin . Immunol 90:256-262). 또한, 면역요법의 유용성은 치료의 길이에 의해 제한되며, 이는 최대 36개월의 매주 또는 격주 주사를 요구하고, 다양한 정도의 성공 및 순응성을 초래한다 (Bousquet et al. (1998) J. Allergy Clin . Immunol 102:558-562; Rank and Li (2007) Mayo Clin . Proc. 82(9):1119-1123; Ciprandi et al. (2007) Allergy Asthma Proc. 28:40-43).
한 측면에서, 신호 서열을 코딩하는 서열; 소기관내 안정화/트래피킹 도메인을 코딩하는 서열; 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 서열로서, 땅콩 알레르겐 도메인은 땅콩 알레르겐에 대한 자연-발생 신호 서열을 포함하지 않는 적어도 1종의 땅콩 알레르겐을 포함하는 것인 서열; 막횡단 도메인을 코딩하는 서열; 및 엔도솜/리소솜 표적화 도메인을 코딩하는 서열을 순차적인 순서로 포함하는 단리된 또는 정제된 핵산이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 땅콩 알레르겐은 Ara H1, Ara H2, Ara H3, AraH3del, 적어도 1개의 땅콩 알레르겐성 에피토프를 갖는 Ara H1, Ara H2, 또는 Ara H3의 부분, 또는 이들의 임의의 조합이다.
또 다른 측면은 신호 서열을 코딩하는 서열; 소기관내 안정화/트래피킹 도메인을 코딩하는 서열; 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 서열로서, 땅콩 알레르겐 도메인은 땅콩 알레르겐에 대한 자연-발생 신호 서열을 포함하지 않는 적어도 1종의 땅콩 알레르겐을 포함하는 것인 서열; 막횡단 도메인을 코딩하는 서열; 및 엔도솜/리소솜 표적화 도메인을 코딩하는 서열을 순차적인 순서로 포함하는 1종 이상의 단리된 또는 정제된 핵산을 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 땅콩 알레르겐은 Ara H1, Ara H2, Ara H3, Ara H3del, 적어도 1개의 땅콩 알레르겐성 에피토프를 갖는 Ara H1, Ara H2, 또는 Ara H3의 부분, 또는 이들의 임의의 조합이다.
또 다른 측면에서, 본원에 개시된 DNA 백신을 알레르겐-특이적 IgE 반응의 생성을 감소 또는 제거하기에 충분한 양으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 알레르기 반응을 감소, 제거, 또는 예방하는 방법이 제공된다.
상기 언급된 본원에 개시된 대상의 특정 측면은 전체적으로 또는 부분적으로 본원에 개시된 대상에 의해 다루어지며, 다른 측면은 설명이 진행됨에 따라 하기 본원에 최량으로 기재된 바와 같은 수반된 실시예 및 도면과 함께 취해질 경우에 명백하게 될 것이다.
도 1은 알레르겐-LAMP1 단백질의 개략적 제시이다.
도 2는 알레르겐 도메인에 3종의 땅콩 알레르겐 (AraHl, AraH2, 및 AraH3, 모두는 그의 천연 또는 자연 발생 신호 서열이 결여됨)을 포함하는 핵산의 벡터 지도를 나타낸다.
도 3은 도 2의 핵산에 의해 코딩되는 단백질의 개략도를 나타낸다.
도 4는 본 개시내용에 따른 구축물로부터의 땅콩 알레르겐 Ara H1, H2, 및 H3의 공동-발현을 나타내는 웨스턴 블롯을 나타낸다.
도 5는 진피내 (ID) 또는 근육내 (IM) 주사에 의한 Ara H1-LAMP, Ara H2-LAMP, 및 Ara-H3del-LAMP 플라스미드의 조합물 또는 단일 다가 -Ara H1/H2/H3-LAMP 플라스미드 (H1-3 다가 플라스미드)로의 면역화 후의 마우스에서의 IgG1 항체 수준을 나타내며; 3개의 막대의 각각의 세트는 하기를 나타낸다: 면역화 후, 좌측 막대, 제49일; 중앙 막대, 제70일, 우측 막대, 제84일.
도 6A-6B는 Ara H1-LAMP, Ara H2-LAMP, 및 Ara-H3del-LAMP 플라스미드의 조합물 또는 단일 다가 Ara H1/H2/H3-LAMP 플라스미드로의 면역화 후의 마우스에서의 IgG2a 항체 수준을 나타낸다: A) 진피내 (ID) 주사; 3개의 막대의 각각의 세트는 하기를 나타낸다: 면역화후, 좌측 막대, 제21일; 중앙 막대, 제35일; 우측 막대, 제49일; 및 B) 진피내 (ID) 또는 근육내 (IM) 주사; 면역화후, 청색 막대, 제49일; 적색 막대, 제70일; 녹색 막대, 제84일.
도 7은 본원에 나타낸 예방적 연구에 대한 프로토콜의 대표적인 실시양태를 나타낸다.
도 8은 ARA-LAMP-vax (Ara H1, Ara H2, 및 Ara H3del 플라스미드의 조합물로 정의됨)로의 면역화 후의 마우스에서의 IgG1 및 IgG2a 항체 수준을 나타낸다. 면역화 프로토콜: 5주령 암컷 C3H/HeJ 마우스 (N=10 마우스/군)를 제0일, 제7일, 및 제14일에 Ara-LAMP DNA 백신으로 면역화하였다 (제-3주, 제-2주, 제-1주). 대조군은 LAMP-만의 벡터를 받았다. CPE는 조 땅콩 추출물로 정의된다.
도 9는 ARA-LAMP-vax로의 면역화 및 감작화 후 제58일에서의 마우스에서의 IgG1 및 IgG2a 항체 수준을 나타낸다. 감작화 프로토콜: 마우스를 10 mg 땅콩 페이스트 (PN) + 20 ug 콜레라 독소 (CT)로, 위내로 (i.g.) 제0주 (W)에 초기에 3회, 및 그 후 W5를 통해 매주 감작화한 후, W6 및 W8에 50 mg PN + 20 ug CT로, i.g., 2회 부스팅하였다.
도 10은 ARA-LAMP-vax로의 면역화 및 감작화 후 제92일에서의 마우스에서의 IgG1 및 IgG2a 항체 수준을 나타낸다. PN 챌린지 이전, PN-CT 감작화의 5 라운드 후의 항체 역가 - 제92일. 감작화 프로토콜은 계속되었다.
도 11은 ARA-LAMP-vax로의 면역화, 감작화 및 아나필락시스 챌린지 후의 마우스에서의 IgG1 및 IgG2a 항체 수준을 나타낸다. 아나필락시스 챌린지: 그 후, 마우스를 W12에 200 mg 땅콩 페이스트 (PN), i.g.로 챌린지하였다.
도 12는 ARA-LAMP-vax의 예방적 메카니즘을 뒷받침하는 면역화, 감작화, 및 아나필락시스 챌린지 후의 마우스에서의 IgE 항체 수준을 나타내며; 2개의 막대의 각각의 세트는 하기를 나타낸다: 좌측 막대, 대조군 벡터, 우측 막대, Ara H-LAMP 백신; 다른 세트의 막대로부터 개별적으로 멀리 놓인 가장 좌측 막대는 프리블리드 (PreBleed)를 나타낸다.
도 13은 도 9 내지 12에 나타낸 데이터의 요약을 나타낸다.
도 14는 도 9 내지 12에 나타낸 데이터의 또 다른 요약을 나타내며; 하부 차트는 데이터 점을 나타내는 2개의 선을 나타내고, 상부 선은 대조군 벡터를 나타내고, 하부 선은 ARA-LAMP vax를 나타낸다.
도 15는 본원에 나타낸 예방적 연구에 대한 대표적인 프로토콜을 예시한다.
도 16은 바이오젝트(Bioject) B2000 바늘 없는 장치를 통한 진피내 주사 (ID)에 의해 전달된 경우에 ARA-LAMP-vax에 대한 또는 단일 다가 Ara H1/H2/H3-LAMP 플라스미드에 대한 IgG1 (패널 A), IgG2a (패널 B), 및 IgE (패널 C) 반응을 나타낸다. 28, 57, 92, 108, 140, 및 171일 시점은 x-축 상에 나타내어지며, 그의 각각은 하기를 나타내는 3개의 막대를 나타낸다: 대조군 벡터 (좌측 막대), 3개의 플라스미드의 조합 (중앙 막대) 및 단일 다중-알레르겐 플라스미드 (우측 막대).
도 17은 본원에 나타낸 치료적 연구에 대한 프로토콜의 대표적인 실시양태를 나타낸다.
도 18은 ARA-LAMP-vax로의 백신 치료 이전의 마우스에서의 혈청 땅콩 특이적 IgE 항체 수준을 나타낸다.
도 19는 ARA-LAMP-vax로의 백신 치료 이전 및 후의 마우스에서의 혈청 땅콩 특이적 IgE 항체 수준을 나타낸다.
도 20은 ARA-LAMP-vax 및 치료적 프로토콜을 사용한 제15주에서의 마우스에서의 아나필락시스 챌린지 결과 (증상 점수, 패널 A; 체온, 패널 B)를 나타낸다.
도 21은 ARA-LAMP-vax 및 치료적 프로토콜을 사용한 제15주에서의 경구 챌린지 후의 마우스에서의 혈장 히스타민 수준을 나타낸다.
도 22는 ARA-LAMP-vax 및 치료적 프로토콜을 사용한 제15주에서의 마우스에서의 IL-4 시토카인 수준을 나타낸다.
도 23은 ARA-LAMP-vax 및 치료적 프로토콜을 사용한 제15주에서의 마우스에서의 IFN-γ 수준을 나타낸다.
이하, 본 개시내용의 다양한 예시적인 실시양태에 대해 상세하게 언급이 이루어질 것이다. 예시적인 실시양태의 하기 논의는 본원에 폭넓게 개시된 바와 같이, 본 발명에 대한 제한으로서 의도되지 않음이 이해되어야 한다. 오히려, 하기 논의는 독자에게 본 발명의 특정 측면 및 특징의 보다 상세한 이해를 제공하기 위해 제공된다. 본 발명의 실시는, 달리 지시되지 않는다면, 관련 기술분야의 기술 내의 통상적인 분자 생물학, 미생물학, 및 재조합 DNA 기술을 채용한다. 이러한 기술은 문헌에 충분히 설명되어 있고, 이들 분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있으며, 따라서 본원에서 상세화될 필요가 없다. 유사하게, 의학적 치료를 위한 본 발명의 실시는 관련 기술분야에 공지된 표준 프로토콜을 따르며, 이들 프로토콜은 본원에서 상세화될 필요가 없다.
본 발명의 실시양태를 상세하게 기재하기 전에, 본원에 사용된 용어는 단지 특정한 실시양태를 기재하는 목적을 위한 것이며, 제한으로 의도되지 않음이 이해되어야 한다. 추가로, 값의 범위가 제공되는 경우, 하한의 단위의 1/10까지 각각의 개재하는 값은, 맥락이 명백하게 달리 나타내지 않는다면, 그 값의 상한 및 하한 사이가 또한 구체적으로 개시된 것으로 이해된다. 언급된 범위 중의 임의의 언급된 값 또는 개재하는 값, 및 그 언급된 범위 중의 임의의 다른 언급된 또는 개재하는 값 사이의 각각의 보다 작은 범위는 본 발명 내에 포함된다. 이들보다 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 범위에 포함되거나 제외될 수 있으며, 각각의 범위는 어느 하나, 둘 다 아닌, 또는 둘 다의 한계가 보다 작은 범위에 포함되는 경우에 또한 본 발명 내에 포함되며, 언급된 범위에서 임의의 구체적으로 제외된 한계가 적용된다. 언급된 범위가 한계 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 경우, 그들 포함된 한계 중 어느 하나 또는 둘 다를 제외한 범위는 또한 본 발명에 포함된다. 따라서, 값의 범위가 제시되는 경우, 그 범위 내의 각각의 값, 및 그 범위 내에 해당하는 각각의 범위는 본질적으로 역시 인용되고, 각각의 및 모든 값 및 값의 각각의 및 모든 가능한 범위의 구체적 인용의 회피는 그들 값 및 범위의 누락이 아니며, 대신 독자를 위한 편의 및 이 개시내용의 간결성을 위한 것임이 이해되어야 한다.
달리 정의되지 않는다면, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 용어가 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 재료가 이하 기재된다. 본원에 언급된 모든 간행물은 그와 관련되어 간행물이 인용된 방법 및/또는 재료를 개시 및 기재하기 위해 본원에 참조로 포함된다. 본 개시내용은 이것이 임의의 포함된 간행물과 충돌하지 않는 정도로 지배한다.
본원에 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수 형태는 맥락이 명백하게 달리 나타내지 않는다면 복수 언급대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "알레르겐"에 대한 언급은 복수의 이러한 알레르겐을 포함하며, "샘플"에 대한 언급은 1종 이상의 샘플 및 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 그의 등가물에 대한 언급을 포함하는 등이다. 더욱이, 등가의 용어를 사용하여 기재될 수 있는 용어의 사용은 그들 등가의 용어의 사용을 포함한다. 따라서, 예를 들어, 용어 "대상체"의 사용은 용어 "동물", "인간", 및 의학적 치료가 적용되는 것을 지시하는 관련 기술분야에 사용되는 다른 용어를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본원에 사용된 용어 "포함하는"은 구축물, 조성물, 및 방법이 인용된 요소 및/또는 단계를 포함하지만, 다른 요소 및/또는 단계를 배제하지 않음을 의미하는 것으로 의도된다. 구축물, 조성물, 및 방법을 정의하는 데 사용되는 경우, "로 본질적으로 이루어진"은 인용된 구축물, 조성물, 및 방법에 대한 임의의 본질적 중요성의 다른 요소 및 단계를 배제하는 것을 의미한다. 따라서, 본원에 정의된 바와 같은 요소로 본질적으로 이루어진 조성물은 단리 및 정제 방법으로부터의 미량의 오염물 및 제약상 허용되는 담체, 예컨대 인산염 완충 염수, 보존제 등을 배제하지 않을 것이다. "로 이루어진"은 본 발명의 조성물의 투여를 위한 다른 성분 및 실질적 방법 단계의 미량 초과 요소를 배제하는 것을 의미한다. 각각의 이들 전이 용어에 의해 정의된 실시양태는 본 발명의 범위 내에 있다.
"키메라 DNA"는 자연에서 보다 큰 분자와 연관하여 발견되지 않는 보다 큰 DNA 분자 내의 DNA의 확인가능한 절편이다. 따라서, 키메라 DNA가 단백질 절편을 코딩하는 경우, 절편 코딩 서열은 임의의 자연 발생 게놈에서 코딩 서열에 플랭킹되지 않는 DNA에 의해 플랭킹될 것이다. 플랭킹 DNA가 폴리펩티드 서열을 코딩하는 경우, 코딩된 단백질은 "키메라 단백질" (즉, 함께 융합된 비-자연 발생 아미노산 서열을 갖는 것)로 지칭된다. 대립유전자 변이 또는 자연 발생 돌연변이 사건은 본원에 정의된 바와 같은 키메라 DNA 또는 키메라 단백질을 발생시키지 않는다.
본원에 사용된 용어 "폴리뉴클레오티드" 및 "핵산 분자"는 임의의 길이의 뉴클레오티드의 중합체 형태를 지칭하기 위해 호환적으로 사용된다. 폴리뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 및/또는 그의 유사체를 함유할 수 있다. 뉴클레오티드는 임의의 3-차원 구조를 가질 수 있으며, 공지된 또는 미공지된 임의의 기능을 수행할 수 있다. 용어 "폴리뉴클레오티드"는 예를 들어, 단일-, 이중-가닥 및 삼중 나선 분자, 유전자 또는 유전자 단편, 엑손, 인트론, mRNA, tRNA, rRNA, 리보자임, 안티센스 분자, cDNA, 재조합 폴리뉴클레오티드, 분지된 폴리뉴클레오티드, 압타머, 플라스미드, 벡터, 임의의 서열의 단리된 DNA, 임의의 서열의 단리된 RNA, 핵산 프로브, 및 프라이머를 포함한다. 핵산 분자는 또한 변형된 핵산 분자를 포함할 수 있다 (예를 들어, 변형된 염기, 당, 및/또는 뉴클레오티드간 링커를 포함함).
본원에 사용된 용어 "펩티드"는 2종 이상의 서브유닛 아미노산, 아미노산 유사체, 또는 펩티드모방체의 화합물을 지칭한다. 서브유닛은 펩티드 결합에 의해 또는 다른 결합 (예를 들어, 에스테르, 에테르 등으로서)에 의해 연결될 수 있다. 용어 "펩티드"는 본원에서 포괄적으로 펩티드 (즉, 2개 내지 약 20개의 잔기의 폴리아미노산), 폴리펩티드 (즉, 약 20개의 잔기 내지 약 100개의 잔기의 펩티드), 및 단백질 (즉, 약 100개 이상의 잔기를 갖는 펩티드)을 지칭하기 위해 사용된다.
본원에 사용된 용어 "아미노산"은 글리신 및 D 또는 L 광학 이성질체 둘 다를 비롯한 자연 및/또는 비자연 또는 합성 아미노산, 및 아미노산 유사체 및 펩티드모방체를 지칭한다. 3개 이상의 아미노산의 펩티드는 펩티드 쇄가 짧은 경우에 통상적으로 올리고펩티드로 지칭된다. 용어 "단백질"은 용어 "폴리펩티드"를 포함하는 반면, "폴리펩티드"는 전장 단백질보다 작을 수 있다.
용어 "알레르겐"은 개체에의 그의 반복된 노출 시 알레르기, 즉, IgE-매개된 반응을 유도하는 것으로 보고된 임의의 자연 발생 단백질 또는 단백질의 혼합물을 지칭한다. 알레르겐은 알레르기 반응을 유발할 수 있는 임의의 화합물, 물질, 또는 재료이다. 알레르겐은 통상적으로 면역 반응을 유발할 수 있는 화합물, 물질, 또는 재료인 항원의 하위범주로 이해된다. 본 발명을 실시하기 위해, 알레르겐은 다른 것들 중에서도 자연 또는 천연 알레르겐, 변형된 자연 알레르겐, 합성 알레르겐, 재조합 알레르겐, 알레르고이드, 및 이들의 혼합물 또는 조합으로부터 선택될 수 있다. 땅콩 알레르겐, 특히 IgE-매개된 즉시형 과민증을 유발할 수 있는 것들이 특정한 관심대상이다. 그의 화학적 또는 생화학적 성질의 측면에서, 알레르겐은 천연 또는 재조합 단백질 또는 펩티드, 천연 또는 재조합 단백질 또는 펩티드의 단편 또는 말단절단된 형태, 융합 단백질, 합성 화합물 (화학적 알레르겐), 알레르겐을 모방하는 합성 화합물, 또는 화학적으로 또는 물리적으로 변경된 알레르겐, 예컨대 열 변성에 의해 변형된 알레르겐을 나타낼 수 있다.
"에피토프"는 통상적으로 면역계의 성분에 의해 특이적으로 인식되거나 특이적으로 결합된 짧은 펩티드 서열 또는 올리고사카라이드로 구성된 구조이다. T-세포 에피토프는 일반적으로 선형 올리고펩티드인 것으로 나타났다. 2개의 에피토프는 이들이 동일한 항체에 의해 특이적으로 결합될 수 있는 경우, 서로에 대해 상응한다. 2개의 에피토프는 둘 다가 동일한 B 세포 수용체에 또는 동일한 T 세포 수용체에 결합할 수 있고, 한 항체의 그의 에피토프에의 결합이 다른 에피토프에 의한 결합을 실질적으로 방지하는 (예를 들어, 약 30% 미만, 바람직하게는, 약 20% 미만, 및 보다 바람직하게는, 약 10%, 5%, 1%, 또는 약 0.1% 미만의 다른 에피토프가 결합하는) 경우, 서로에 대해 상응한다.
본원에 사용된 바와 같이, 2개의 핵산 코딩 서열은 서열 또는 그의 상보적 서열이 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 경우, 서로에 대해 "상응한다".
본원에 사용된 바와 같이, 또 다른 서열과 특정 퍼센트 (예를 들어, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%)의 "서열 동일성"을 갖는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 영역 (또는 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 영역)은 수동으로 또는 관련 기술분야에 통상적인 소프트웨어 프로그램을 사용하여 최대로 정렬될 경우, 염기 (또는 아미노산)의 퍼센트가 2개의 서열을 비교할 때 동일한 것을 의미한다.
2개의 뉴클레오티드 서열은 뉴클레오티드의 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 및 바람직하게는 적어도 약 80%, 및 가장 바람직하게는 적어도 약 90 또는 95%가 DNA 서열의 한정된 길이에 걸쳐 매칭되는 경우, "실질적으로 상동성"이거나 "실질적으로 유사"하다. 유사하게, 2개의 폴리펩티드 서열은 폴리펩티드의 아미노산 잔기의 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 66%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 및 바람직하게는 적어도 약 80%, 및 가장 바람직하게는 적어도 약 90 또는 95% 또는 98%가 폴리펩티드 서열의 한정된 길이에 걸쳐 매칭되는 경우, "실질적으로 상동성"이거나 "실질적으로 유사"하다. 실질적으로 상동성인 서열은 서열 데이터 뱅크에서 이용가능한 표준 소프트웨어를 사용하여 서열을 비교함으로써 확인될 수 있다. 실질적으로 상동성인 핵산 서열은 또한 서던 혼성화 실험에서, 예를 들어, 그 특정한 시스템에 대해 정의된 바와 같은 엄격한 조건 하에서 확인될 수 있다. 적절한 혼성화 조건을 정의하는 것은 관련 기술분야의 기술 내에 있다. 예를 들어, 엄격한 조건은 42℃에서 5xSSC 및 50%> 포름아미드에서의 혼성화, 및 60℃에서 0.1 x SSC 및 0.1% 소듐 도데실 술페이트에서의 세척일 수 있다.
도메인 서열의 "보존적으로 변형된 변이체"가 또한 제공될 수 있다. 특정한 핵산 서열에 관하여, 용어 보존적으로 변형된 변이체는 동일한 또는 본질적으로 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 그러한 핵산, 또는 핵산이 아미노산 서열을 코딩하지 않는 경우, 본질적으로 동일한 서열을 지칭한다. 구체적으로, 축중성 코돈 치환은 1개 이상의 선택된 (또는 모든) 코돈의 제3 위치가 혼합된-염기 및/또는 데옥시이노신 잔기로 치환된 서열을 생성함으로써 달성될 수 있다 (Batzer et al (1991) Nucleic Acid Res. 19: 508; Ohtsuka et al (1985) J. Biol . Chem. 260: 2605-2608; Rossolini et al (1994) Mol . Cell . Probes 8: 91-98).
용어 야생형 단백질의 "생물학적 활성 단편", "생물학적 활성 형태", "생물학적 활성 등가물", 및 "기능적 유도체"는 활성의 검출에 적합한 검정을 사용하여 측정된 바와 같이 야생형 단백질의 생물학적 활성과 적어도 실질적으로 동등한 (예를 들어, 유의하게 상이하지 않은) 생물학적 활성을 갖는 물질을 의미한다. 예를 들어, 트래피킹 도메인을 포함하는 생물학적 활성 단편은 트래피킹 도메인을 포함하는 전장 폴리펩티드와 동일한 구획에 공동-편재할 수 있는 것이다.
세포는 이러한 핵산이 세포 내부에 도입된 경우에 외인성 또는 이종성 핵산에 의해 "형질전환", "형질도입", 또는 "형질감염"된 것이다.
형질전환 DNA는 세포의 게놈을 구성하는 염색체 DNA와 통합 (공유 연결)되거나 되지 않을 수 있다. 예를 들어, 원핵생물, 효모, 및 포유동물 세포에서, 형질전환 DNA는 에피솜 요소, 예컨대 플라스미드 상에 유지될 수 있다. 진핵 세포에서, 안정하게 형질전환된 세포는 형질전환 DNA가 이것이 염색체 복제를 통해 딸 세포에 의해 유전되도록 염색체 내로 통합된 것이다. 이 안정성은 형질전환 DNA를 함유하는 딸 세포의 집단으로 구성된 세포주 또는 클론을 확립하는 진핵 세포의 능력에 의해 입증된다. "클론"은 유사분열에 의해 단일 세포 또는 공통 조상으로부터 유래된 세포의 집단이다. "세포주"는 많은 세대 (예를 들어, 적어도 약 10) 동안 시험관내에서 안정한 성장을 할 수 있는 1차 세포의 클론이다.
"레플리콘"은 생체내에서 DNA 복제의 자율 단위로서 기능하는 임의의 유전적 요소 (예를 들어, 플라스미드, 염색체, 바이러스)이다.
본원에 사용된 "바이러스 벡터"는 생체내에서, 생체외에서, 또는 시험관내에서 숙주 세포 내로 전달되는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 또는 바이러스 입자를 지칭한다. 바이러스 벡터의 예는 아데노바이러스 벡터, 아데노-연관된 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 유전자 이동이 아데노바이러스 벡터에 의해 매개되는 측면에서, 벡터 구축물은 아데노바이러스 캡시드 단백질과 연관하여, 아데노바이러스 게놈 또는 그의 일부, 및 선택된 비-아데노 바이러스 유전자를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다.
본원에 사용된 "핵산 전달 벡터"는 세포 내로 관심 폴리뉴클레오티드를 수송할 수 있는 핵산 분자이다. 바람직하게는, 이러한 벡터는 발현 제어 서열에 작동적으로 연결된 코딩 서열을 포함한다. 그러나, 관심 폴리뉴클레오티드 서열은 반드시 코딩 서열을 포함하지는 않는다. 예를 들어, 관심 폴리뉴클레오티드 서열은 표적 분자에 결합하는 압타머일 수 있다. 또 다른 예에서, 관심 서열은 조절 서열에 결합하여 조절 서열의 조절을 억제하는 조절 서열의 상보적 서열일 수 있다. 또 다른 예에서, 관심 서열은 그 자체가 조절 서열 (예를 들어, 세포에서 조절 인자를 적정하기 위한)이다.
본원에 사용된 "핵산 전달 비히클"은 삽입된 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 운반할 수 있고 (예를 들어, 예컨대 유전자 또는 유전자 단편, 안티센스 분자, 리보자임, 압타머 등), 상기 기재된 바와 같은 핵산 전달 벡터와 연관하여 발생하는 임의의 분자 또는 분자의 군 또는 거대분자로 정의된다.
본원에 사용된 "핵산 전달" 또는 "핵산 이동"은 도입에 사용되는 방법과 무관하게, 외인성 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 예컨대 트랜스진)의 숙주 세포 내로의 도입을 지칭한다. 도입된 폴리뉴클레오티드는 숙주 세포에서 안정하게 또는 일시적으로 유지될 수 있다. 안정한 유지는 전형적으로 도입된 폴리뉴클레오티드가 숙주 세포와 혼화성인 복제 기점을 함유하거나, 숙주 세포의 레플리콘, 예컨대 염색체외 레플리콘 (예를 들어, 플라스미드) 또는 핵 또는 미토콘드리아 염색체 내로 통합되는 것을 요구한다.
본원에 사용된 "발현"은 폴리뉴클레오티드가 mRNA로 전사되고/거나 펩티드, 폴리펩티드, 또는 단백질로 번역되는 과정을 지칭한다. 폴리뉴클레오티드가 게놈 DNA로부터 유래되는 경우, 발현은 게놈 DNA로부터 전사된 mRNA의 스플라이싱을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 "전사적 제어 하에서" 또는 "작동적으로 연결된"은 발현 제어 요소 및 코딩 서열의 적절한 병치에 의해 제어되는 폴리뉴클레오티드 서열의 발현 (예를 들어, 전사 또는 번역)을 지칭한다. 한 측면에서, DNA 서열은 발현 제어 서열이 그 DNA 서열의 전사를 제어 및 조절하는 경우에 발현 제어 서열에 "작동적으로 연결된다".
본원에 사용된 "코딩 서열"은 적절한 발현 제어 서열의 제어 하에서 정치될 경우에 폴리펩티드로 전사 및 번역되는 서열이다. 코딩 서열의 경계는 5' (아미노) 말단의 시작 코돈 및 3' (카르복시) 말단의 번역 정지 코돈에 의해 결정된다. 코딩 서열은 원핵생물 서열, 진핵생물 mRNA로부터의 cDNA, 진핵생물 (예를 들어, 포유동물) DNA로부터의 게놈 DNA 서열, 및 심지어 합성 DNA 서열을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 이러한 합성 DNA 서열은 서열이 발현되는 것으로 의도되는 유기체에 대해 최적화된 코돈인 것들을 포함할 수 있다. 폴리아데닐화 신호 및 전사 종결 서열은 통상적으로 코딩 서열의 3'에 위치할 것이다.
본원에 사용된 "유전적 변형"은 세포의 정상적인 뉴클레오티드 서열에의 임의의 첨가 또는 그의 결실 또는 파괴를 지칭한다. 관련 기술분야에 인식된 방법은 바이러스 매개된 유전자 이동, 리포솜 매개된 이동, 형질전환, 형질감염 및 형질도입, 예를 들어, 바이러스-매개된 유전자 이동, 예컨대 DNA 바이러스, 예컨대 아데노바이러스, 아데노-연관된 바이러스 및 헤르페스 바이러스에 기재한 벡터, 뿐만 아니라 레트로바이러스 기재 벡터의 사용을 포함한다.
본원에 사용된 "리소솜/엔도솜 구획"은 막에 LAMP 분자를 함유하는 막-결합된 산성 공포, 항원 프로세싱에서 기능하는 가수분해 효소, 및 항원 인식 및 제시를 위한 MHC 부류 II 분자를 지칭한다. 이 구획은 세포내이입, 포식작용, 및 포음작용을 비롯한 임의의 다양한 메카니즘에 의해 세포 표면으로부터 내재화된 외래 재료의, 및 특수화된 자가용해 현상에 의해 이 구획으로 전달되는 세포내 재료의 분해를 위한 부위로서 기능한다 (예를 들어, 문헌 [de Duve (1983) Eur . J. Biochem. 137: 391] 참조). 본원에 사용된 용어 "엔도솜"은 리소솜을 포함한다.
본원에 사용된 "리소솜-관련된 소기관"은 리소자임을 포함하는 임의의 소기관을 지칭하며, MIIC, CUV, 멜라노솜, 분비성 과립, 용해성 과립, 혈소판-밀집 과립, 호염기 과립, 버르벡 과립, 포식리소솜, 분비성 리소솜 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 이러한 소기관은 만노스 6-포스페이트 수용체가 결여되며, LAMP를 포함하지만, MHC 부류 II 분자를 포함할 수 있거나, 포함하지 않을 수 있다. 검토를 위해, 예를 들어, 문헌 [Blott and Griffiths (2002) Nature Reviews , Molecular Cell Biology; DellAngelica et al. (2000) The FASEB Journal 14: 1265-1278]을 참조한다.
본원에 사용된 "리소솜 연관된 막 단백질" 또는 "LAMP"는 엔도솜/리소솜 구획 또는 리소솜-관련된 소기관의 막에서 발견되는 도메인을 포함하며, 내강 도메인을 추가로 포함하는 임의의 단백질을 지칭한다. 예시적인 LAMP는 LAMP-1, LAMP-2, CD63/LAMP-3 (DC-LAMP), 또는 그의 상동체, 이종상동체, 변이체 (예를 들어, 대립유전자 변이체) 및 변형된 형태 (예를 들어, 자연 발생 또는 조작된 1개 이상의 돌연변이를 포함함)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, LAMP는 포유동물 리소솜 연관된 막 단백질, 예를 들어, 예컨대 인간 또는 마우스 리소솜 연관된 막 단백질이다. 예시적인 LAMP는 서열식별번호(SEQ ID NO): 22, 23, 24, 25, 또는 30과 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 포함한다. 개시된 핵산 분자에 따라 사용될 수 있는 LAMP 펩티드를 코딩하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 10, 11, 12, 13, 또는 29와 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 임의의 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "안정화 도메인"은 단백질을 활성이도록 및/또는 그의 자연 입체형태이도록 유지하는 것을 돕는 도메인을 의미하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 용어 "트래피킹 도메인"은 단백질을 세포의 특정 부분으로 표적화하는 것을 돕는 도메인을 의미하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 "표적화 도메인"은 본 발명의 키메라 단백질을 바람직한 부위, 예컨대 항원 프로세싱 및 MHC II에의 결합이 일어나는 세포 소기관 또는 구획으로 지정하는 폴리펩티드 서열을 나타낸다. 따라서, "표적화 도메인"은 세포 구획/소기관으로의 전달에 요구되는 일련의 아미노산을 지칭한다. 바람직하게는, 표적화 도메인은 어댑터 또는 AP 단백질 (예를 들어, 예컨대 AP1, AP2, 또는 AP3 단백질)에 결합하는 서열이다. 예시적인 표적화 도메인 서열은 예를 들어 문헌 [DellAngelica, 2000]에 기재되어 있다.
본원에 사용된 "엔도솜/리소솜 표적화 도메인"은 엔도솜/리소솜 구획 또는 리소솜-관련된 소기관으로의 전달에 요구되는 일련의 아미노산을 지칭한다. 예를 들어, 리소솜의 외막으로의 LAMP 트래피킹은 카르복시-말단 세포질 꼬리에서의 티로신 인식 서열 (YXX Ø) (여기서, Y는 티로신 잔기이고, X는 임의의 아미노산일 수 있고, Ø는 큰 소수성 잔기임)인 엔도솜/리소솜 표적화 도메인에의 어댑터 단백질의 결합에 의해 매개된다. 예시적인 티로신 인식 서열은 아미노산 서열 YQTI, YQRI, YEQF, 및 YHTL을 포함한다.
본원에 사용된 생체내 핵산 전달, 핵산 이동, 핵산 요법 등은 유기체, 예컨대 인간 또는 비-인간 포유동물의 체내로 직접 외인성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터의 도입을 지칭하며, 그에 의해 외인성 폴리뉴클레오티드가 생체내에서 이러한 유기체의 세포 내로 도입된다.
본원에 사용된 용어 "계내"는 핵산이 표적 세포와 근접하게 이동되는 (예를 들어, 핵산이 전신적으로 투여되지 않는) 생체내 핵산 전달의 유형을 지칭한다. 예를 들어, 계내 전달 방법은 핵산을 부위로 (예를 들어, 조직, 예컨대 종양 또는 심장 근육 내로) 직접 주사하는 것, 핵산을 개방 수술 분야를 통해 세포(들) 또는 조직과 접촉시키는 것, 또는 핵산을 의학적 접근 장치, 예컨대 카테터를 사용하여 부위에 전달하는 것을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "단리된" 및 "정제된"은 세포 및 다르게는, 폴리뉴클레오티드, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 항체, 또는 그의 단편이 자연에서 통상적으로 그와 연관된 구성요소로부터 분리된 것을 의미하기 위해 때로 호환적으로 사용된다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드에 관하여, 단리된 폴리뉴클레오티드는 이것이 염색체에서 통상적으로 그와 연관된 5' 및 3' 서열로부터 분리된 것이다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백한 바와 같이, 비-자연 발생 폴리뉴클레오티드, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 항체, 또는 그의 단편은 이를 그의 자연 발생 대응물로부터 구별하기 위해 "단리"를 요구하지는 않는다. 더욱이, 용어 "단리된" 및 "정제된"은 전체적 단리 및 전체적 순도를 암시하지는 않는다. 이들 용어는 폴리뉴클레오티드 등과 연관하여 자연적으로 발견되는 일부 또는 모든 다른 재료로부터의 부분적 및 전체적 순도 둘 다를 나타내기 위해 사용된다. 따라서, 이들 용어는 1종의 자연적으로 연관된 물질로부터의 단리 또는 정제 (예를 들어, RNA로부터의 DNA의 단리 또는 정제), 동일한 일반적 부류의 분자의 다른 물질 (예를 들어, 샘플 중의 모든 단백질에 비해 20% 순도를 나타내는 특정한 단백질)로부터의 단리 또는 정제, 또는 임의의 조합을 의미할 수 있다. 단리 및 정제는 100%를 포함하여, 약 1% 내지 약 100%의 임의의 수준을 의미할 수 있다. 따라서, 세포의 "단리된" 또는 "정제된" 집단은 이것이 자연에서 그와 연관된 세포 및 물질이 실질적으로 없다. 물론, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 값의 분수를 비롯한 모든 구체적인 값이 각각의 특정한 값이 본원에 열거되어야 할 필요 없이 이들 범위 내에 포함됨을 인식할 것이다. 각각의 값은 간결성을 위해 구체적으로 개시되지 않지만; 그러나, 독자는 각각의 및 모든 구체적인 값이 본 발명에 의해 본질적으로 개시 및 포함됨을 이해해야 한다.
본원에 사용된 "표적 세포" 또는 "수용자 세포"는 개별 세포 또는 외인성 핵산 분자, 폴리뉴클레오티드, 및/또는 단백질의 수용자인 것이 바람직하거나, 수용자이었던 세포를 지칭한다. 상기 용어는 또한 단일 세포의 자손을 포함하는 것으로 의도되며, 자손은 자연적, 우발적, 또는 고의적 돌연변이로 인해 기원의 모 세포와 (형태에서 또는 게놈 또는 총 DNA 보체에서) 반드시 완전히 동일하지는 않을 수 있다. 표적 세포는 다른 세포와 (예를 들어, 조직에서와 같이) 접촉될 수 있거나, 유기체의 체내에서 순환하여 발견될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "항원 제시 세포" 또는 "APC"는 그의 표면 상에 주조직적합성 복합체 분자, 또는 그의 부분, 또는 대안적으로 1종 이상의 비-전통적 MHC 분자, 또는 그의 부분과 연관하여 항원을 제시하는 임의의 세포를 지칭한다. 적합한 APC의 예는 하기에 상세하게 논의되며, 전체 세포, 예컨대 대식세포, 수지상 세포, B 세포, 혼성 APC, 및 수양 항원 제시 세포를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "조작된 항원-제시 세포"는 그의 표면 상에 비-자연 분자 모이어티를 갖는 항원-제시 세포를 지칭한다. 예를 들어, 이러한 세포는 그의 표면 상에 공동-자극제를 자연적으로 갖지 않을 수 있거나, 그의 표면 상에 자연 공동-자극제 외에 추가의 인공 공동-자극제를 가질 수 있거나, 그의 표면 상에 비-자연 부류 II 분자를 발현할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "면역 이펙터 세포"는 항원에 결합할 수 있고, 면역 반응을 매개하는 세포를 지칭한다. 이들 세포는 T 세포, B 세포, 단핵구, 대식세포, NK 세포, 및 세포독성 T 림프구 (CTL), 예를 들어 CTL 세포주, CTL 클론, 및 종양, 염증성, 또는 다른 침윤물로부터의 CTL을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "대상체" 및 "환자"는 본 발명이 관련된 동물을 지시하기 위해 호환적으로 사용된다. 용어 동물은 인간 및 비-인간 동물을 포함하는 것으로 이해되어야 하며; 2가지 사이의 구별이 바람직한 경우, 용어 인간 및/또는 비-인간 동물이 사용된다. 일부 실시양태에서, 대상체 또는 환자는 척추동물, 바람직하게는 포유동물, 보다 바람직하게는 인간이다. 포유동물은 뮤린, 원숭이, 인간, 농장 동물 (예를 들어, 소, 양, 돼지), 경기용 동물 (예를 들어 말), 및 애완동물 (예를 들어, 개 및 고양이)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
임상적 알레르기 증상은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있으며, 본원에서 완전한 목록은 요구되지 않는다. 비-제한적 예는 통상적인 증상, 예컨대 눈 및 코의 발적 및 가려움, 가려운 코감기, 기침, 쌕쌕거림, 숨참, 가려움, 및 조직의 부기를 갖는 피부, 눈, 코, 상부 및 하부 기도에서의 반응을 포함하는 비염, 결막염, 천식, 두드러기, 습진을 포함한다.
"면역학적 생체내 검사"의 예는 피부 단자 검사 (Skin Prick Test: SPT), 결막염 유발 검사 (Conjunctival Provocation Test: CPT), 알레르겐으로의 기관지 챌린지 (Bronchial Challenge with Allergen: BCA), 및 1종 이상의 알레르기 증상이 모니터링되는 다양한 임상적 검사이다. 예를 들어, 문헌 [Haugaard et al., J Allergy Clin Immunol, Vol. 91, No. 3, pp 709-722, March 1993]을 참조한다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 담체"는 관련 기술분야에 공지된 임의의 표준 제약 담체, 예컨대 인산염 완충 염수 용액, 물, 및 에멀젼, 예컨대 수중유 또는 유중수 에멀젼, 및 다양한 유형의 습윤화제를 포함한다. 조성물은 또한 안정화제 및 보존제를 포함할 수 있다. 담체, 안정화제 및 보조제의 예에 대해서는, 문헌 [Martin Remington's Pharm. Sci., 15th Ed. (Mack Publ. Co., Easton (1975))]을 참조한다.
본원에 사용된 "치료 유효량"은 비정상적인 생리학적 반응을 방지하고/거나, 수정하고/거나, 정상화하기에 충분한 양을 의미하기 위해 본원에서 사용된다. 한 측면에서, "치료 유효량"은 예를 들어, 임상적 알레르기 증상, 항체 생성, 시토카인 생성, 열 또는 백혈구 카운트, 또는 히스타민의 수준과 같은 병리학의 임상적으로 유의한 특징을 적어도 약 30 퍼센트, 보다 바람직하게는 적어도 50 퍼센트, 가장 바람직하게는 적어도 90 퍼센트 감소시키기에 충분한 양이다.
"항체"는 특이적 에피토프에 결합하는 항체 및 그의 단편을 비롯한 임의의 이뮤노글로불린이다. 상기 용어는 폴리클로날, 모노클로날, 및 키메라 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체)를 포함한다. "항체 결합 부위"는 항원에 특이적으로 결합하는 중쇄 및 경쇄 가변 및 초가변 영역으로 구성된 항체 분자의 그러한 구조적 부분이다. 예시적인 항체 분자는 무손상 이뮤노글로불린 분자, 실질적으로 무손상 이뮤노글로불린 분자, 및 Fab, Fab', F(ab')2, 및 F(v) 부분을 비롯한 파라토프를 함유하는 이뮤노글로불린 분자의 그러한 부분이며, 여기서, 부분은 본원에 기재된 치료 방법에 사용하기에 바람직하다.
용어 "구강점막 투여"는 활성 성분의 국소적 또는 전신적 효과를 얻기 위해 활성 성분이 환자의 구강 또는 인두의 점막과 접촉하도록 허용하는, 투여 형태가 혀 아래 또는 구강의 다른 어디에나 정치되는 투여 경로를 지칭한다. 구강점막 투여 경로의 예는 설하 투여이다. 용어 "설하 투여"는 활성 성분의 국소적 또는 전신적 효과를 얻기 위해 투여 형태가 혀 밑에 정치되는 투여 경로를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "진피내 전달"은 피부의 진피로의 백신의 전달을 의미한다. 그러나, 백신은 반드시 배타적으로 진피에 위치하지는 않을 것이다. 진피는 인간 피부의 표면으로부터 약 1.0 내지 약 2.0 mm에 위치한 피부의 층이지만, 개체 사이의 및 신체의 상이한 부분에서의 특정량의 변이가 있다. 일반적으로, 이는 피부의 표면 아래 1.5 mm를 지남으로써 진피에 도달하는 것이 예상될 수 있다. 진피는 표면에서 각질층 및 표피 및 아래에서 피하층 사이에 위치한다. 전달 방식에 따라, 백신은 궁극적으로 단독으로 또는 일차적으로 진피 내에 위치할 수 있거나, 이는 궁극적으로 표피 및 진피 내에 분포될 수 있다.
알레르기 면역요법, 알레르기 치료, 또는 알레르기 환자를 위해 설계된 개입을 기재하는 다른 용어의 맥락에서, 본원에 사용된 용어 "예방하다" 또는 "예방적으로"는 모든 환자의 적어도 20%에서 IgE 반응의 예방을 의미한다. 용어 "예방하다"는 모든 환자에서 IgE 매개된 질환의 발생으로부터의 전체적 예방을 요구하지는 않으며, 이러한 정의는 알레르기 증상을 감소시키는 메카니즘을 통해 알레르기를 치료하기 위한 본 발명의 범위 밖이고, 관련 기술분야에서의 용어의 사용과 불일치한다. 알레르기 치료는 환자의 100%에서 100% 유효하지는 않으며, 따라서 "예방하다"의 절대적 정의는 본 발명의 맥락 내에서 적용되지 않음이 알레르기 면역요법의 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 관련 기술분야에 인식된 예방의 개념은 본 발명에 의해 고려된다.
폭넓게 말해서, 본 개시내용은 폴리핵산, 폴리아미노산, 및 폴리핵산 및 폴리아미노산을 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 폴리핵산 및 그의 조성물은 폴리핵산이 투여되는 대상체의 체내에서 보호적 면역 반응을 유발하는 땅콩 알레르겐성 서열 (폴리아미노산)의 세포내 생성을 위한 핵산 (예를 들어, DNA, RNA) 백신으로서 생각될 수 있다. 폴리핵산은, 투여되는 경우, IgE 항체, 과립구 (예를 들어, 호산구), 및 다른 물질의 생성을 포함하는 Th2-유형 반응보다는, APC, NK 세포, 및 T 세포에 의한 인터페론의 생성과 함께 땅콩 알레르겐-특이적 T-헬퍼 유형 1 (Th1) 세포 반응을 활성화시킴으로써 IgG 항체의 생성 및 MHC-II 경로를 통한 세포-매개된 면역 반응을 선호적으로 유발한다. 어느 정도, MHC-II 및 MHC-I 반응 둘 다가 생성될 수 있지만; 그러나, 본 발명은 일차적으로 또는 실질적으로 MHC-II 반응인 반응을 제공한다. 일부 실시양태에서, 면역계는 알레르기성 IgE / Th2 반응 대신 IgG / Th1 반응에 선호적으로 재균형화된다. 바람직하게는, 핵산은 항생제 저항성 유전자를 코딩하지 않는다.
구체적으로, 땅콩 알레르겐을 MHC II/엔도솜 경로 내로 지정하는 리소솜 연관된 막 단백질 ("LAMP") 키메라 구축물을 이용하는 신규한 땅콩 알레르기 DNA 백신이 본원에 제공된다. 본원에 기재된 핵산 분자, 벡터, 및 제약 조성물을 포함하는 개시된 백신은 땅콩 알레르기 환자에게 땅콩에 대한 민감성을 유의하게 감소 또는 제거하는 안전하고, 저알레르기성이며, 비용-효과적인 요법을 제공한다.
개시된 핵산은, 대상체에게 투여되는 경우, 항원을 항원 제시 세포의 리소솜 구획 내로 격리시키며, 알레르기 환자에서 Th2에서 Th1로의 반응 조정을 실행한다. 또 다른 이점은 본원에 개시된 구축물이 우발적 알레르겐 노출을 예방하도록 설계되었다는 점이다. 알레르겐은 유의한 양의 알레르겐이 투여 시 전신적으로 노출되지 않도록 핵산으로서 코딩된다. 이는 고 정확도 리소솜 트래피킹을 위해 LAMP 내에서 코딩된다. 리소솜에서, 알레르겐은 단백질분해, 알레르겐성 에피토프의 MHC-II에의 노출 및 헬퍼 T-세포에의 제시를 겪는다. 따라서, 본원에 개시된 요법을 받는 대상체는 유리 알레르겐에의 노출 없이 임상적 반응을 나타낸다.
따라서, 일부 실시양태에서, 신호 서열을 코딩하는 핵산 서열; 소기관내 안정화/트래피킹 도메인을 코딩하는 핵산 서열; 각각 1개 이상의 땅콩 알레르겐성 에피토프를 포함하는 단일 땅콩 알레르겐 또는 2종 이상의 땅콩 알레르겐을 포함할 수 있는 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 핵산 서열로서, 적어도 1종의 땅콩 알레르겐은 땅콩 알레르겐에 대한 천연 신호 서열을 포함하지 않는 것인 핵산 서열; 막횡단 도메인을 코딩하는 핵산 서열; 및 엔도솜/리소솜 표적화 도메인을 코딩하는 핵산 서열을 순차적인 순서로 포함하는 단리된 또는 정제된 핵산 분자가 제공된다.
본원에 제공된 단리된 또는 정제된 핵산 분자는 신호 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 신호 서열은 LAMP의 신호 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 신호 서열은 세포질 세망 전위 서열이다. 예시적인 LAMP 신호 서열은 LAMP-1, LAMP2, LAMP-3 (DC-LAMP), LIMP II, 또는 ENDOLYN의 신호 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 LAMP 신호 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 1-27, 서열식별번호: 22의 아미노산 1-27, 서열식별번호: 23의 아미노산 1-28, 서열식별번호: 24의 아미노산 5-27, 및 서열식별번호: 25의 아미노산 1-24와 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 포함한다. 개시된 핵산 분자에 따라 사용될 수 있는 LAMP 신호 서열을 코딩하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 18의 뉴클레오티드 1-86, 서열식별번호: 19의 뉴클레오티드 1-86, 서열식별번호: 20의 뉴클레오티드 1-86, 서열식별번호: 21의 뉴클레오티드 1-86, 서열식별번호: 10의 뉴클레오티드 1-84, 서열식별번호: 11의 뉴클레오티드 1-81, 서열식별번호: 12의 뉴클레오티드 1-72, 및 서열식별번호: 13의 뉴클레오티드 13-81과 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 임의의 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 기재된 단리된 또는 정제된 핵산 분자는 리소솜 연관된 막 단백질 (LAMP)을 코딩하는 서열을 포함하는 소기관내 안정화/트래피킹 도메인을 코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 예를 들어, 소기관내 안정화/트래피킹 도메인은 LAMP의 내강 도메인을 포함할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 소기관내 안정화/트래피킹 도메인은 LAMP1, LAMP2, LAMP-3 (DC-LAMP), LIMP II, 또는 ENDOLYN의 내강 도메인을 포함한다. 예시적인 소기관내 안정화/트래피킹 도메인은 서열식별번호: 1의 아미노산 28-380, 서열식별번호: 22의 아미노산 28-381, 서열식별번호: 23의 아미노산 29-375, 서열식별번호: 24의 아미노산 28-433, 또는 서열식별번호: 25의 아미노산 25-162와 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 소기관내 안정화/트래피킹 도메인은 서열식별번호: 18의 뉴클레오티드 87-1146, 서열식별번호: 19의 뉴클레오티드 87-1146, 서열식별번호: 20의 뉴클레오티드 87-1146, 서열식별번호: 21의 뉴클레오티드 87-1146, 서열식별번호: 10의 뉴클레오티드 85-1125, 서열식별번호: 11의 뉴클레오티드 82-1143, 서열식별번호: 12의 뉴클레오티드 73-486, 또는 서열식별번호: 13의 뉴클레오티드 82-1299와 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩될 수 있다.
본원에 기재된 핵산 분자는 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 서열은 1개 이상의 알레르겐성 에피토프를 포함하는 1종 이상의 땅콩 알레르겐 단백질, 폴리펩티드, 또는 펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 땅콩 알레르겐 도메인은 바람직하게는 땅콩 알레르겐(들)으로부터의 자연 발생 신호 서열을 포함하지 않는다. 전장 미만의 땅콩 알레르겐성 서열이 사용되는 경우, 바람직하게는, 전장 땅콩 알레르겐 단백질의 1개 이상의 에피토프는 알레르겐성 단백질 내의 그의 자연적 위치의 맥락에서 제공된다. 땅콩 알레르겐 도메인은 각각 1개 이상의 알레르겐성 에피토프를 함유하는 2종 이상의 알레르겐을 포함할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 서열은 3종의 땅콩 알레르겐을 코딩하는 서열을 포함한다. 특정 알레르겐성 단백질은 2개 이상의 에피토프를 함유하는 것으로 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 서열은 땅콩 알레르겐성 단백질의 전체 알레르겐성 코딩 영역 (즉, 신호 서열이 결여된 코딩 영역), 또는 그의 실질적 부분을 포함한다. 일부 땅콩 알레르겐 도메인은 그의 자연-발생 관계에서 2개 이상의 에피토프를 포함할 것이다. 대안적으로, 2개 이상의 공지된 땅콩 알레르겐성 에피토프는 1개의 코딩 영역으로 융합될 수 있다. 또 다시, 예시적인 실시양태에서, 2종 이상의 땅콩 알레르겐성 단백질, 또는 그의 알레르겐성 영역이 땅콩 알레르겐 도메인에 존재한다. 2개 이상의 에피토프가 단일 에피토프 도메인에 존재하도록 조작되는 경우, 에피토프는 동일한 항원성 단백질로부터의 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, 단리된 또는 정제된 핵산 분자는 2개 이상의 땅콩 알레르겐성 에피토프를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 핵산 서열은 2종 이상의 땅콩 알레르겐을 코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 핵산 서열은 3종의 땅콩 알레르겐을 코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 땅콩 알레르겐은 Ara H1, Ara H2, Ara H3, AraH3del, 적어도 1개의 땅콩 알레르겐성 에피토프를 갖는 그의 부분, 또는 이들의 임의의 조합이다.
일부 실시양태에서, 적어도 1종의 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 핵산 서열은 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 16, 서열식별번호: 17, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 18의 뉴클레오티드 1147-2943, 서열식별번호 19의 뉴클레오티드 1147-1600, 서열식별번호: 20의 뉴클레오티드 1147-2623, 서열식별번호: 21의 뉴클레오티드 1147-2949, 서열식별번호: 21의 뉴클레오티드 2962-3414, 및/또는 서열식별번호: 21의 뉴클레오티드 3427-4902와 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, Ara H 땅콩 알레르겐 도메인은 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 1의 아미노산 383 내지 983, 서열식별번호: 1의 아미노산 988 내지 1138, 서열식별번호: 1의 아미노산 1143 내지 1634, 및/또는 서열식별번호: 1의 아미노산 383 내지 1634와 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 땅콩 알레르겐성 에피토프 또는 땅콩 알레르겐은 링커에 의해 분리된다. 예를 들어, 링커는 아미노산 서열 GGGG 또는 GGGGS를 포함할 수 있다.
본원에 제공된 단리된 또는 정제된 핵산 분자는 막횡단 도메인을 추가로 포함한다. 막횡단 도메인은 생물학적 막의 양측 상에 부분적으로 존재하는 단백질의 널리 특징화된 물리적 및 기능적 요소이다. 일반적으로, 막횡단 도메인은 성질상 소수성 또는 친지질성이며, 생물학적 막에서 단백질을 앵커링하도록 기능하는 아미노산의 선형 서열이다. 이러한 서열은 종종 20-25개 잔기 길이이다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이러한 서열을 잘 알고 있으며, 본 발명에 사용하기에 적합한 막횡단 서열을 용이하게 얻거나 조작할 수 있다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 LAMP, 예를 들어 LAMP-1, LAMP2, LAMP-3 (DC-LAMP), LIMP II, 또는 ENDOLYN (그러나, 이에 제한되지 않음)의 막횡단 도메인을 포함한다. 개시된 핵산 분자에 따라 사용될 수 있는 막횡단 도메인을 코딩하는 예시적인 뉴클레오티드 서열운 서열식별번호: 10의 뉴클레오티드 1126-1188, 서열식별번호: 11의 뉴클레오티드 1144-1212, 서열식별번호: 12의 뉴클레오티드 487-555, 서열식별번호: 13의 뉴클레오티드 1300-1395, 또는 서열식별번호: 29의 뉴클레오티드 1141-1212와 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 임의의 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 LAMP 막횡단 도메인은 서열식별번호: 23의 아미노산 376-396, 서열식별번호: 22의 아미노산 382-404, 서열식별번호: 24의 아미노산 434-466, 서열식별번호: 25의 아미노산 163-185, 또는 서열식별번호: 30의 아미노산 381-404와 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
핵산 분자는 엔도솜/리소솜 표적화 도메인을 코딩하는 핵산 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 엔도솜/리소솜 표적화 도메인은 카르복시-말단 세포질 꼬리에서의 티로신 인식 서열 (YXXØ 신호) (여기서, Y는 티로신 잔기이고, X는 임의의 아미노산일 수 있고, Ø는 큰 소수성 잔기임)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 티로신 인식 서열 (YXXØ 신호)은 아미노산 서열 YQTI, YQRI, YEQF, 또는 YHTL을 포함한다. 엔도솜/리소솜 표적화 도메인을 코딩하는 핵산 서열은 서열식별번호: 21의 뉴클레오티드 5005 내지 5016, 서열식별번호: 10의 뉴클레오티드 1213 내지 1224, 서열식별번호: 11의 뉴클레오티드 1237 내지 1248, 또는 서열식별번호: 12의 뉴클레오티드 580 내지 591을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 엔도솜/리소솜 표적화 도메인을 코딩하는 핵산 서열은 서열식별번호: 13의 뉴클레오티드 1420 내지 1431을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 개시된 핵산 분자는 서열식별번호: 18, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 20, 서열식별번호: 21, 또는 서열식별번호: 27과 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 본원에 제공된 개시된 핵산 분자는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 또는 서열식별번호: 28과 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열을 포함할 수 있다.
개시된 핵산 분자는 데옥시리보핵산 (DNA)을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 신호 서열을 코딩하는 서열; 소기관내 안정화/트래피킹 도메인을 코딩하는 서열; 각각 1개 이상의 땅콩 알레르겐성 에피토프를 포함하는 단일 땅콩 알레르겐 또는 2종 이상의 땅콩 알레르겐을 포함할 수 있는 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 서열로서, 적어도 1종의 땅콩 알레르겐은 땅콩 알레르겐에 대한 자연-발생 신호 서열을 포함하지 않는 것인 서열; 막횡단 도메인을 코딩하는 서열; 및 엔도솜/리소솜 표적화 도메인을 코딩하는 서열을 순차적인 순서로 포함하는 단리된 또는 정제된 핵산은 단일 키메라 또는 조작된 핵산 상에 존재한다. 개시된 단리된 또는 정제된 핵산의 각각의 도메인을 코딩하는 서열은 관련 기술분야에 공지되고 널리 실시되는 기술을 사용하여 임의의 순서로 조합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 도메인은 이들이 키메라 단백질을 코딩하는 단일 오픈 리딩 프레임을 포함하도록 조합 및 배열되며, 여기서, 오픈 리딩 프레임은 키메라 단백질의 발현에 충분한 전사 요소에 작동적으로 연결된다. 따라서, 핵산은 발현 벡터, 예컨대 플라스미드, 파지미드, 바이러스 벡터 등을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 핵산은 포유동물 세포, 예컨대 인간 세포에서의 발현에 적합한 전사 요소를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 1개의 플라스미드 내에 땅콩 알레르겐, 예를 들어 Ara H1, Ara H2, Ara H3, 및/또는 AraH3del을 제공한다. 대표적인 예로서, 본원에 개시된 단일 다가 Ara H1/H2/H3 LAMP 플라스미드는 단일 플라스미드에 주요 땅콩 알레르겐, 즉, Ara H1, Ara H2, 및 Ara H3을 포함한다. 또한, 단일 다가 AraH1/H2/H3del LAMP 플라스미드가 본원에 제공된다. 플라스미드는 또한 단일 플라스미드에 2종의 땅콩 알레르겐의 조합, 예를 들어 Ara H1 및 Ara H2, Ara H2 및 Ara H3, 또는 Ara H1 및 Ara H3을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 각각 그 자신의 플라스미드 상에 땅콩 알레르겐, 예를 들어 Ara H1, Ara H2, AraH3, 및/또는 Ara H3del을 제공한다. 대표적인 예로서, ARA-LAMP vax 조성물은 별개의 플라스미드에 의해 코딩되는 주요 땅콩 알레르겐, 즉, Ara H1, Ara H2, 및 Ara H3del을 포함한다. 또한, 별개의 플라스미드에 의해 코딩되는 Ara H1, Ara H2, 및 Ara H3을 포함하는 조성물이 본원에 제공된다. 이러한 예에서, 조성물은 적어도 2종의 DNA 백신의 혼합물을 포함하며, 여기서, 각각의 백신은 1종의 땅콩 알레르겐의 서열을 포함한다. 백신 구축물은 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 순차적으로 최대 1:10 (예를 들어, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8 및 1:9)의 비율로 함께 혼합될 수 있다. 바람직한 비율은 1:1이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 핵산은 숙주에서 면역 반응을 유도하는 DNA 백신이다. 일부 실시양태에서, DNA 백신은 신호 서열을 코딩하는 서열; 소기관내 안정화/트래피킹 도메인을 코딩하는 서열; 각각 1개 이상의 땅콩 알레르겐성 에피토프를 포함하는 단일 땅콩 알레르겐 또는 2종 이상의 땅콩 알레르겐을 포함할 수 있는 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 서열로서, 적어도 1종의 땅콩 알레르겐은 땅콩 알레르겐에 대한 자연-발생 신호 서열을 포함하지 않는 것인 서열; 막횡단 도메인을 코딩하는 서열; 및 엔도솜/리소솜 표적화 도메인을 코딩하는 서열을 순차적인 순서로 포함하는 이전에 기재된 단리된 또는 정제된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, DNA 백신은 신호 서열을 코딩하는 서열; 소기관내 안정화/트래피킹 도메인을 코딩하는 서열; 각각 1개 이상의 땅콩 알레르겐성 에피토프를 포함하는 단일 땅콩 알레르겐 또는 2종 이상의 땅콩 알레르겐을 포함할 수 있는 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 서열로서, 적어도 1종의 땅콩 알레르겐은 땅콩 알레르겐에 대한 자연-발생 신호 서열을 포함하지 않는 것인 서열; 막횡단 도메인을 코딩하는 서열; 및 엔도솜/리소솜 표적화 도메인을 코딩하는 서열을 순차적인 순서로 포함하는 적어도 2종의 단리된 또는 정제된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, DNA 백신은 신호 서열을 코딩하는 서열; 소기관내 안정화/트래피킹 도메인을 코딩하는 서열; 각각 1개 이상의 땅콩 알레르겐성 에피토프를 포함하는 단일 땅콩 알레르겐 또는 2종 이상의 땅콩 알레르겐을 포함할 수 있는 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 서열로서, 적어도 1종의 땅콩 알레르겐은 땅콩 알레르겐에 대한 자연-발생 신호 서열을 포함하지 않는 것인 서열; 막횡단 도메인을 코딩하는 서열; 및 엔도솜/리소솜 표적화 도메인을 코딩하는 서열을 순차적인 순서로 포함하는 적어도 3종의 단리된 또는 정제된 핵산을 포함한다.
본원에 제공된 핵산 또는 벡터를 발현하는 숙주 세포가 추가로 제공된다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 포유동물 숙주 세포, 바람직하게는 인간 세포이다.
또한, 신호 서열; 소기관내 안정화/트래피킹 도메인; 각각 1개 이상의 땅콩 알레르겐성 에피토프를 포함하는 단일 땅콩 알레르겐 또는 2종 이상의 땅콩 알레르겐을 포함할 수 있는 땅콩 알레르겐 도메인으로서, 적어도 1종의 땅콩 알레르겐은 땅콩 알레르겐에 대한 자연-발생 신호 서열을 포함하지 않는 것인 땅콩 알레르겐 도메인; 막횡단 도메인; 및 엔도솜/리소솜 표적화 도메인을 포함하는 폴리펩티드가 본원에 제공된다.
본원에 제공된 폴리펩티드의 일부 실시양태에서, 신호 서열은 LAMP의 신호 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 신호 서열은 세포질 세망 전위 서열이다. 예시적인 LAMP 신호 서열은 LAMP-1, LAMP2, LAMP-3 (DC-LAMP), LIMP II, 또는 ENDOLYN의 신호 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 LAMP 신호 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 1-27, 서열식별번호: 22의 아미노산 1-27, 서열식별번호: 23의 아미노산 1-28, 서열식별번호: 24의 아미노산 5-27, 및 서열식별번호: 25의 아미노산 1-24와 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 포함한다.
폴리펩티드는 소기관내 안정화/트래피킹 도메인을 추가로 포함한다. 예를 들어, 소기관내 안정화/트래피킹 도메인은 LAMP의 내강 도메인을 포함할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 소기관내 안정화/트래피킹 도메인은 LAMP1, LAMP2, LAMP-3 (DC-LAMP), LIMP II, 또는 ENDOLYN의 내강 도메인을 포함한다. 예시적인 소기관내 안정화/트래피킹 도메인은 서열식별번호: 1의 아미노산 28-380, 서열식별번호: 22의 아미노산 28-381, 서열식별번호: 23의 아미노산 29-375, 서열식별번호: 24의 아미노산 28-433, 또는 서열식별번호: 25의 아미노산 25-162와 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 기재된 폴리펩티드는 땅콩 알레르겐 도메인을 추가로 포함한다. 땅콩 알레르겐 도메인은 1개 이상의 알레르겐성 에피토프를 포함하는 1종 이상의 땅콩 알레르겐 단백질, 폴리펩티드, 또는 펩티드를 포함한다. 땅콩 알레르겐 도메인은 바람직하게는 땅콩 알레르겐(들)으로부터의 자연 발생 신호 서열을 포함하지 않는다. 전장 미만의 땅콩 알레르겐성 서열이 사용되는 경우, 바람직하게는, 전장 땅콩 알레르겐 단백질의 1개 이상의 에피토프는 알레르겐성 단백질 내의 그의 자연적 위치의 맥락에서 제공된다. 땅콩 알레르겐 도메인은 각각 1개 이상의 알레르겐성 에피토프를 함유하는 2종 이상의 알레르겐을 포함할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 땅콩 알레르겐 도메인은 3종의 땅콩 알레르겐을 포함한다. 특정 알레르겐성 단백질은 2개 이상의 에피토프를 함유하는 것으로 공지되어 있다. 일부 땅콩 알레르겐 도메인은 그의 자연-발생 관계에서 2개 이상의 에피토프를 포함할 것이다. 2개 이상의 에피토프가 단일 에피토프 도메인에 존재하도록 조작되는 경우, 에피토프는 동일한 항원성 단백질로부터의 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 땅콩 알레르겐은 Ara H1, Ara H2, Ara H3, AraH3del, 적어도 1개의 땅콩 알레르겐성 에피토프를 갖는 그의 부분, 또는 이들의 임의의 조합이다.
일부 실시양태에서, Ara H 땅콩 알레르겐 도메인은 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 1의 아미노산 383 내지 983, 서열식별번호: 1의 아미노산 988 내지 1138, 서열식별번호: 1의 아미노산 1143 내지 1634, 및/또는 서열식별번호: 1의 아미노산 383 내지 1634과 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 땅콩 알레르겐성 에피토프 또는 땅콩 알레르겐은 링커에 의해 분리된다. 예를 들어, 링커는 아미노산 서열 GGGG 또는 GGGGS를 포함할 수 있다.
본원에 제공된 폴리펩티드는 막횡단 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 LAMP, 예를 들어 LAMP-1, LAMP2, LAMP-3 (DC-LAMP), LIMP II, 또는 ENDOLYN (그러나, 이에 제한되지 않음)의 막횡단 도메인을 포함한다. 예시적인 LAMP 막횡단 도메인은 서열식별번호: 1의 아미노산 1637-1660, 서열식별번호: 23의 아미노산 376-396, 서열식별번호: 22의 아미노산 382-404, 서열식별번호: 24의 아미노산 434-466, 서열식별번호: 25의 아미노산 163-185, 또는 서열식별번호: 30의 아미노산 381-404와 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
기재된 폴리펩티드는 엔도솜/리소솜 표적화 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 엔도솜/리소솜 표적화 도메인은 카르복시-말단 세포질 꼬리에 티로신 인식 서열 (YXXØ 신호) (여기서, Y는 티로신 잔기이고, X는 임의의 아미노산일 수 있고, Ø는 큰 소수성 잔기임)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 티로신 인식 서열 (YXXØ 신호)은 아미노산 서열 YQTI, YQRI, YEQF, 또는 YHTL을 포함한다. 일부 실시양태에서, 엔도솜/리소솜 표적화 도메인은 아미노산 서열 LIRT를 포함한다.
일부 실시양태에서, 기재된 폴리펩티드는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 또는 서열식별번호: 28과 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 81% 동일한, 적어도 약 82% 동일한, 적어도 약 83% 동일한, 적어도 약 84% 동일한, 적어도 약 85% 동일한, 적어도 약 86% 동일한, 적어도 약 87% 동일한, 적어도 약 88% 동일한, 적어도 약 89% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 적어도 약 91% 동일한, 적어도 약 92% 동일한, 적어도 약 93% 동일한, 적어도 약 94% 동일한, 적어도 약 95% 동일한, 적어도 약 96% 동일한, 적어도 약 97% 동일한, 적어도 약 98% 동일한, 적어도 약 99% 동일한, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 핵산 분자 중 적어도 1종을 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 또한, 적어도 1종의 본원에 개시된 벡터를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 또는 서열식별번호: 28을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함할 수 있다. 예를 들어, 핵산은 서열식별번호: 20, 서열식별번호: 21, 서열식별번호: 27, 서열식별번호: 19, 또는 서열식별번호: 18에 의해 코딩될 수 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 2종의 본원에 개시된 핵산 분자 또는 벡터를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 적어도 3종의 본원에 개시된 핵산 분자 또는 벡터를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 예를 들어, 적어도 3종의 개시된 핵산 분자는 서열식별번호: 6을 코딩하는 핵산 분자, 서열식별번호: 7을 코딩하는 핵산 분자, 및 서열식별번호: 8을 코딩하는 핵산 분자를 포함할 수 있다. 예시적인 핵산 서열은 서열식별번호: 27, 서열식별번호: 19, 및 서열식별번호: 18을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 제약 조성물은 각각 본원에 개시된 핵산 분자를 포함하는 적어도 2종의 벡터를 포함한다. 추가로, 제1, 제2, 및 제3 벡터를 포함하며, 제1 벡터는 서열식별번호: 6을 코딩하는 핵산 분자를 포함하고, 제2 벡터는 서열식별번호: 7을 코딩하는 핵산 분자를 포함하고, 제3 벡터는 서열식별번호: 8을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 것인 제약 조성물이 본원에 제공된다. 예시적인 핵산 서열은 서열식별번호: 20, 서열식별번호: 27, 서열식별번호: 19, 및 서열식별번호: 18을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 제약 조성물은 제약상 허용되는 담체를 추가로 포함한다. 본 개시내용의 핵산 또는 벡터는 정제된 또는 단리된 분자로서 제공될 수 있다. 핵산 또는 벡터는 또한 조성물의 일부로서 제공될 수 있다. 조성물은 본질적으로 핵산 또는 벡터로 이루어질 수 있으며, 이는 핵산 또는 벡터가 코딩 서열의 발현에 적합한 조성물에서 유일한 핵산 또는 벡터임을 의미한다. 대안적으로, 조성물은 본원에 개시된 바와 같은 핵산 또는 벡터를 포함할 수 있다. 예시적인 실시양태에서, 조성물은 1종 이상의 제약상 허용되는 물질 또는 담체, 예를 들어, 염수와 함께, 본원에 개시된 바와 같은 핵산 또는 벡터를 포함하는 제약 조성물이다. 일부 실시양태에서, 조성물은 세포에 의한 핵산의 흡수를 촉진시키는 물질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 핵산을 특정 세포 유형, 예컨대 면역 세포 (예를 들어, APC 또는 항원 제시 세포)로 전달하는 것을 돕는 표적화 분자를 포함한다. 다른 실시양태에서, 핵산은 세포 또는 조직으로의 핵산의 전달을 위한 전달 비히클 또는 전달 벡터의 일부이다. 바람직한 실시양태에서, 본원에 개시된 제제는 예를 들어, 염수 중 네이키드 DNA를 포함한다. 다른 바람직한 실시양태에서, DNA 백신은 근육내 (IM) 또는 진피내 (ID) 주사에 의해 전달된다.
본 개시내용은 또한 본원에 개시된 핵산 분자, 벡터 및 제약 조성물의 사용 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 치료 유효량의 본원에 개시된 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물을 땅콩 알레르기 반응의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 땅콩 알레르기 반응을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IgE 반응의 생성을 감소시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 혈장 히스티딘 수준을 감소시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IL-4의 생성을 감소시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IFN-γ 수준을 증가시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 임상적 알레르기 증상을 감소, 제거 또는 예방한다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 근육내 (IM) 주사에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 진피내 (ID) 주사에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 알레르겐-특이적 IgG 반응의 생성을 유도 또는 증가시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IgE 반응을 약화시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 치료 유효량의 본원에 개시된 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물을 땅콩 알레르기 반응의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 대상체는 투여 이전에 땅콩 알레르겐에 노출된 것인, 상기 대상체에서 땅콩 알레르기 반응을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IgE 반응의 생성을 감소시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 혈장 히스티딘 수준을 감소시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IL-4의 생성을 감소시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IFN-γ 수준을 증가시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 임상적 알레르기 증상을 감소, 제거 또는 예방한다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 근육내 (IM) 주사에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 진피내 (ID) 주사에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 알레르겐-특이적 IgG 반응의 생성을 유도 또는 증가시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IgE 반응을 약화시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 치료 유효량의 본원에 개시된 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물을 땅콩 알레르기 반응의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 대상체는 인간인, 상기 대상체에서 땅콩 알레르기 반응을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IgE 반응의 생성을 감소시키기에 충분한 양으로 투여된다. 추가의 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 혈장 히스티딘 수준을 감소시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IL-4의 생성을 감소시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IFN-γ 수준을 증가시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 임상적 알레르기 증상을 감소, 제거 또는 예방한다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 근육내 (IM) 주사에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 진피내 (ID) 주사에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 알레르겐-특이적 IgG 반응의 생성을 유도 또는 증가시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IgE 반응을 약화시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 치료 유효량의 본원에 개시된 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물을 땅콩 알레르기 반응의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 대상체는 투여 이전에 땅콩 알레르겐에 노출된 것이고, 여기서 대상체는 인간인, 상기 대상체에서 땅콩 알레르기 반응을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IgE 반응의 생성을 감소시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 혈장 히스티딘 수준을 감소시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IL-4의 생성을 감소시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IFN-γ 수준을 증가시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 임상적 알레르기 증상을 감소, 제거 또는 예방한다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 근육내 (IM) 주사에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 진피내 (ID) 주사에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 알레르겐-특이적 IgG 반응의 생성을 유도 또는 증가시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자, 벡터 또는 제약 조성물은 IgE 반응을 약화시키기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
다른 실시양태에서, 방법은 대상체에게 본원에 개시된 핵산, 벡터, 제약 조성물, 또는 DNA 백신을 알레르겐-특이적 IgG 반응의 생성을 유도 또는 증가시키기에 충분한 양으로 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 땅콩 알레르기 반응을 예방한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 임상적 알레르기 증상을 감소, 제거 또는 예방한다. 추가의 실시양태에서, DNA 백신은 땅콩 알레르기 반응을 예방하기 위해 대상체에게 예방적으로 투여된다. 추가의 실시양태에서, DNA 백신은 땅콩 알레르기 반응을 치료하기 위해 대상체에게 치료적으로 투여된다.
본원에 개시된 백신을 사용하는 것을 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법이 또한 이 개시내용에 의해 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 1종 이상의 땅콩 알레르겐에 대한 알레르기 반응을 발생시킬 위험이 있는 대상체 또는 이를 앓고 있는 대상체를 예방적으로 치료 또는 치료적으로 치료하는 방법이다. 다른 실시양태에서, 방법은 대상체에게 본 발명에 따른 DNA 백신을 APC에 의한 DNA 백신의 흡수 및 발현을 유발하기에 충분한 양으로 투여하는 것을 포함한다. 본 발명을 특정한 작용 메카니즘에 제한하는 것은 아니지만, DNA 백신의 발현은 APC 상의 코딩된 알레르겐성 에피토프(들)의 제시, 및 IgG 면역 반응의 발생을 초래한다.
본 발명의 특정한 예에서, 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 또는 서열식별번호: 28, 또는 이들 서열 중 적어도 1종의 부분을 코딩하는 핵산 서열, 및/또는 또 다른 땅콩 알레르겐 코딩 서열이 세포에 투여된다. 본 발명의 또 다른 특정한 예에서, 별개의 DNA 구축물 상에서 발견되는 적어도 2종의 땅콩 알레르겐이 조합으로 세포에 투여된다. 바람직한 실시양태에서, 세포는 항원 제시 세포, 예컨대 수지상 세포이다. 바람직하게는, 수지상 세포는 인간 수지상 세포이다. 본 발명은 근육내 주사, 진피내 주사, 피하 주사, 전기천공, 유전자 총 백신화, 또는 리포솜-매개된 이동을 비롯한, 핵산 백신에 대한 유효한 전달 방법인 것으로 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 투여될 수 있다.
본 발명은 세포에 투여되는 경우에 증가된 특이적 항체 반응을 초래하는 제제를 제공한다. 땅콩 알레르겐에 대한 증가된 항체 반응은 IgE-매개된 알레르기 질환의 치료에 유용하다. IgE는 그의 세포 제한 및 동족 알레르겐에 결합 시 초래된 세포내 신호화에 관련된 특정 특성을 갖는다. IgE는 B 세포가 Th2 세포에 의해 분비된 IL-4를 받는 경우에 땅콩 알레르겐에 대해 생성된다. 이는 B 세포가 IgE 부류 항체를 생성하도록 지시한다. B 세포에 의한 분비 시, IgE는 비만 세포 및 호산구에 의해 발현되는 그의 고 친화도 수용체인 Fc-eRI에 결합하며, 이는 이들 세포 및 동물이 장래의 알레르겐 노출에 감작화되는 것을 초래한다. 결과적으로, 알레르기의 증상은 땅콩 알레르겐의 섭취, 흡입, 또는 그와의 점막 접촉 시 촉발될 수 있다. 항체의 결합 특성으로 인해, 땅콩 알레르기 증상을 감소시키는 하나의 방법은 다른 항체 부류와의 경쟁을 통한 IgE에 의한 결합에 이용가능한 유리 알레르겐을 킬레이트화하는 것임이 제안되었다. 특히, IgG를 증가시키는 알레르기 제제는 알레르기 질환을 감소시키기 위한 경로인 것으로 제안되었다. 본원에 기재된 발명은 증진된 IgG 생성을 유도하며, 따라서 IgE 대 IgG의 비율의 임상적으로 유의한 방식으로의 감소를 유발한다.
실시예
이하, 본 발명을 발명의 예시적인 실시양태를 참조로 설명할 것이다. 하기 실시예는 독자에게 본 발명의 구성 및 구축물의 활성의 보다 양호한 이해를 제공하기 위한 것으로 의도되며, 본 발명의 범위에 대한 제한으로 간주되지 않아야 한다.
실시예 1: 일반적 재료 및 방법
천연 서열 (대조군 플라스미드)로서 및 인간 LAMP-1 (실험 플라스미드)를 갖는 키메라로서 땅콩 알레르겐 Ara H1, Ara H2, 및 Ara H3을 코딩하는 유전적 서열 (각각의 서열은 LAMP의 내강 및 막횡단 도메인 사이에 삽입됨)을 제조하였다. 이전의 연구는 항원성 서열이 인간 사용을 위해 최적화되어야 함을 보였으며, 따라서 모든 불필요하거나 유해한 요소 (잠적 스플라이스 부위, 2차 RNA/DNA 구조, 2차 ORF)는 RNA 안정성 및 단백질 발현을 최대화하기 위해 제거하였다. AraH1-LAMP는 서열식별번호: 15를 포함하였다. AraH2-LAMP는 서열식별번호: 12를 포함하였다. 최종 최적화된 서열을 화학적으로 합성하고, 항생제 무함유 pDNA-VACC-울트라 벡터 (네이처 파마슈티칼스(Nature Pharmaceuticals), 미국 네브라스카주 링컨)의 LAMP 오픈 리딩 프레임 (ORF) 내로 삽입하였다. 키메라 단백질의 발현을 각각의 플라스미드에 대해 NIH3T3 세포의 형질감염 및 후속의 웨스턴 블롯 분석에 의해 결정하였다. 리소솜으로의 세포 트래피킹을 공초점 현미경겸사에 의해 및 세포 용해물을 이뮤노블롯팅함으로써 확인하였다.
AraH3del 유전자를 진아트/인비트로젠(GeneArt/Invitrogen) 온라인 유전자 설계 소프트웨어를 사용하여 인간 사용을 위해 코돈 최적화하였다. 합성 유전자를 진아트/인비트로젠 (라이프 테크놀로지즈(Life Technologies), 미국 뉴욕주 그랜드 아일랜드)에 의해 제작하였다. 합성 유전자를 N LAMP - C LAMP 유전자 내로 삽입하여 N LAMP-AraH3del- C LAMP (서열식별번호: 27)를 생성한 후, 이를 발현 벡터 내로 삽입하였다. 산성 및 염기성 서브유닛 내로의 천연 AraH3 단백질의 단백질분해성 프로세싱에 기초하여 결실을 생성하였다. 산성 서브유닛을 생성하고, 단일 플라스미드로서 사용하였다.
단일 다가 구축물 (서열식별번호: 21을 포함하는 AraH1/H2/H3-LAMP)을 LAMP-vax 면역화 벡터 내로 삽입된 각각의 우성 땅콩 알레르겐 (Ara H1, Ara H2, Ara H3)을 코딩하는 DNA를 합성함으로써 제조하였다 (도 2 및 3). 이 단일 다가 땅콩 구축물에서, 5 아미노산 링커 서열 (GGGGS)을 Ara H1 및 Ara H2 사이에 및 Ara H2 및 Ara H3 사이에 삽입하였다. 웨스턴 블롯 분석은 Ara-LAMP-vax 단일 다가 구축물로부터의 땅콩 알레르겐 Ara H1, H2, 및 H3의 공동-발현을 나타내었다 (도 4). ARA-LAMP vax 조성물은 각각 pDNAVACC-울트라 벡터 (네이처 테크놀로지 코포레이션(Nature Technology Corp.), 미국 네브라스카주 링컨)에 LAMP의 내강 및 막횡단 도메인 내에 LAMP-vax 면역화 벡터 내로 삽입된 단일 땅콩 알레르겐 (Ara H1, H2, 또는 H3del)을 코딩하는 DNA (즉, 서열식별번호: 18, 19, 및 20)를 포함하는 3종의 플라스미드를 포함하였다. Ara-LAMP-vax는 또한 본원에서 Ara-H-LAMP로 지칭된다. 각각의 플라스미드는 형질감염된 세포 배양물에서 키메라 Ara/LAMP 단백질을 발현하였으며, 마우스는 치료의 결과로서 알레르겐-특이적 항체를 생성하였음이 확립되었다. 각각의 벡터의 발현을 형질감염된 세포에서 단독으로 및 조합으로 평가하였다.
모든 동물 실험은 실험 동물 복지청 (Office of Laboratory Animal Welfare: OLAW)의 동물 윤리 위원회의 승인된 시설을 준수하여 수행하였다. BALB/c 마우스를 Ara-LAMP-vax 단일 다가 구축물 또는 Ara-LAMP-vax 3종-플라스미드 조성물 중 어느 하나로 근육내 (IM) 또는 진피내 (ID) 주사에 의해 면역화하고, 면역 반응을 특징화하였다. 대조군 마우스를 블랭크 벡터 (즉, Ara-LAMP 구축물이 없는 pDNAVACC-울트라 벡터; "대조군 벡터")로 동일한 농도로 면역화하였다. 항원 챌린지 전날, 마우스를 이전에 기재된 바와 같이 수동 피부 아나필락시스 (PCA) 검사를 위해 제조하였다 (Saloga et al (1993) J. Clin . Invest. 91(1):133-40; Li et al (1999) J. Immunol . 162:5624-5630).
치료 효능을 결정하기 위해, 나이브 마우스를 땅콩에 대해 감작화한 후, 2주 후에 Ara-LAMP-vax 제제 (동물당 50 μg의 단일 다가 Ara-LAMP-vax 플라스미드/200 μL PBS 또는 동물당 50 μg의 각각의 AraH1-LAMP-vax 플라스미드, AraH2-LAMP-vax 플라스미드, 및 AraH3-LAMP-vax 플라스미드/200 μL PBS)로 2주 간격으로 3회 면역화하였다. 면역화 후, 마우스를 8주 동안 1주 1회 볼-말단 마우스 급식 바늘을 사용한 20 μg의 콜레라 독소 (CT)를 갖는 10 mg의 땅콩 페이스트 (PN)의 투여를 통해 음식 알레르기를 실험적으로 유도함으로써 땅콩으로 챌린지하고, 알레르기 증상에 대해 점수화하였다.
예방 효율성을 결정하기 위해, 땅콩 나이브 BALB/c 마우스를 제0일, 제14일 및 제28일에 Ara-LAMP-vax (동물당 50 μg의 단일 다가 Ara-LAMP-vax 플라스미드/200 μL PBS 또는 동물당 50 μg의 각각의 AraH1-LAMP-vax 플라스미드, AraH2-LAMP-vax 플라스미드, 및 AraH3-LAMP-vax 플라스미드의 제제/200 μL PBS)로 3회 면역화한 후, 땅콩 추출물 및 콜레라 독소로 감작화하였다 (도 7). 혈청 샘플을 각각의 백신화 날짜에, 그 후 제42일까지 매주 수집하였다.
항원 챌린지 시, 알레르기 증상을 맹검의 독립적 조사자에 의해 0-5 스케일에 따라 점수화하였으며, 여기서, 0은 증상 없음을 나타내고, 5는 사망이었다 (Li et al. (2001) J. Allergy Clin . Immunol. 108:639-646). 히스타민 수준을 결정하기 위해, 혈청을 수집하고, 챌린지 30-40분 후에 검정하였다. 조직학적 연구를 귀 샘플에 대해 광 현미경검사를 사용하여 수행하여 전신적 아나필락시스의 결과로서 비만 세포 탈과립화의 정도를 결정하였다.
마우스를 매주 채혈하고, 혈청을 -80℃에서 저장하였다. 마우스를 희생시키고, 각각의 백신 제제에 의해 생성된 면역 반응을 검정하고, IgG 아형, IgE 및 시토카인에 대한 항체 수준을 측정하였다. T-세포 및 B-세포의 면역학적 반응을 ELISPOT, ELISA, 세포 증식 검정, 및 시토카인 검정에 의해 평가하였다. 임의의 백신 제제가 알레르겐 누출을 초래하는 지를 결정하기 위해, 혈청 샘플을 샌드위치 ELISA에 의해 땅콩 알레르겐에 대해 검정하였다.
시토카인 검정을 위해, 상청액을 ELISA에 의해 IFN-γ 및 IL-4의 존재에 대해 검정하였다. 매칭된 항체 쌍을 IFN-γ 및 IL-4에 대해 사용하고, 제조자의 지시서에 따라 수행하였다. 표준 곡선을 마우스 재조합 IFN-감마 및 IL-4로 생성하였다. 모든 항체 및 시토카인은 미국 캘리포니아주 칼즈배드에 소재하는 인비트로젠으로부터 구입하였다. IFN-γ 및 IL-4 검정의 검출 한계는 각각 20 및 10 pg/ml이었다.
실시예 2: ARA - LAMP 예방적 연구
땅콩 알레르겐 Ara H1, Ara H2, 및/또는 Ara H3을 포함하는 DNA 구축물을 예방적 유효성에 대해 마우스 모델에서 시험하였다. 땅콩 알레르겐 Ara H1, Ara H2, 및 Ara H3을 코딩하는 다가 LAMP 플라스미드 (실시예 1에 따라 생성된 AraH1/H2/H3-LAMP)를 각각 단일 땅콩 알레르겐을 코딩하는 플라스미드인 3종 플라스미드 믹스 (AraH1-LAMP, AraH2-LAMP, 및 ARAH3del-LAMP, 실시예 1에 따라 제조됨)와 비교하였다. BALB/c 마우스를 50 μg의 단일 다가 땅콩 플라스미드 또는 50 μg의 각각의 개별 플라스미드 중 어느 하나로 3주 동안 매주 진피내 (ID) 또는 근육내 (IM) 주사 중 어느 하나에 의해 면역화하였다. 마지막 면역화 5주 후에, IgG1 및 IgG2a 항체 역가를 ELISA에 의해 검정하였다. 다가 플라스미드는 면역원성인 것으로 밝혀졌지만, 항체 반응의 규모는 다중 플라스미드에서의 단일 알레르겐 전달보다 더 낮았다 (도 5 및 6). 임의의 하나의 특정한 이론에 구애되기를 원하지는 않지만, 항원 경쟁, 예컨대 MHC-II 제시에 대한 에피토프 접근은 모든 항원에 대한 면역 반응을 제한할 수 있는 것으로 믿어진다. 면역화 후 가장 강한 반응은 진피내 (ID) 주사에 의해 전달된 다중 플라스미드에서였다.
도 7에 나타낸 대표적인 프로토콜을 추가의 예방적 연구에 사용하였다. 마우스를 제0일, 제7일, 및 제14일에 단일 다가 Ara H-LAMP DNA 백신으로 면역화하였다 (제-3주, 제-2주, 제-1주). IgG1 및 IgG2a 항체 수준을 면역화 후에 측정하였으며, IgG2a 수준은 대조군 벡터에 비해 단일 다가 백신에서 유의하게 더 높은 것으로 밝혀졌다 (도 8). 그 후, 마우스를 땅콩 페이스트 (PN) 및 콜레라 독소 (CT)로 제0주에 초기에 3회, 그 후 제5주를 통해 매주 감작화한 후, 제6주 및 제8주에 2회 부스팅하였다. 제58일 (제5주)에서의 IgG2a 항체 수준은 대조군 벡터에 비해 다가 백신에서 유의하게 더 높았다 (도 9). 2회의 부스팅 후, 제92일에서의 IgG2a 항체 수준은 또한 대조군 벡터에 비해 단일 다가 백신에서 유의하게 더 높았다 (도 10). IgG2a 항체 수준의 이 유의한 차이는 제12주에 땅콩 페이스트로의 챌린지 후에 계속되었다 (도 11). IgE 반응의 약화는 단일 다가 백신에서 전반적으로 나타났으며 (도 12), 이는 다가 백신의 예방적 메카니즘을 뒷받침한다. 도 13 및 14는 예방적 연구의 요약을 나타낸다.
흥미롭게도, 단일 다가 플라스미드로의 세포 형질감염은 모든 Ara h 알레르겐이 단일 알레르겐을 코딩하는 플라스미드와 유사한 양으로 융합 단백질을 생성하였음을 나타내었다. 따라서, 링커 서열의 동일성의 길이를 변형하는 것은 모든 알레르겐에 대한 면역원성을 개선시킬 수 있다. 이들 결과는 우수한 시험관내 발현 및 폭넓은 면역원성을 갖는 다가 알레르기 플라스미드가 성공적으로 설계될 수 있음을 예증한다. 추가로, 이들 결과는 본원에 개시된 DNA 백신이 땅콩 알레르기에 대해 대상체를 예방적으로 치료하는 데 사용될 수 있음을 나타낸다.
바이오젝트 ID 전달을 사용하여 AraH1-LAMP, AraH2-LAMP, 및 AraH3del-LAMP 플라스미드의 조합물 대 단일 다가 AraH1/H2/H3-LAMP 플라스미드를 비교하는 추가의 예방적 연구를 도 15에 나타낸 대표적인 프로토콜에 따라 수행하였다. 5주령 암컷 C3H/HeJ 마우스 (N=10 마우스/군)를 제0일, 제7일, 및 제14일 (제-3주, 제-2주, 제-1주)에 Ara H1-LAMP, Ara H2-LAMP, 및 Ara H3del-LAMP 플라스미드의 조합물 (각각 50 ug) 또는 단일 다가 AraH1/H2/H3 LAMP DNA 플라스미드 (50 ug) 중 어느 하나로 면역화하였다. 그 후, 마우스를 10 mg 땅콩 페이스트 (PN) + 20 ug CT로, 위내로 (i.g.) 제0주 (W)에 초기에 3회, 그 후 W5를 통해 매주 감작화한 후, W6 및 W8에 50 mg PN + 20 ug CT로, i.g., 2회 부스팅하였다. 대조군 벡터 (50 ug)를 받은 마우스는 대조군으로서 포함되었다. 그 후, 마우스를 W12, W16, 및 W20에 200 mg PN으로, i.g., 챌린지하였다. 면역학적 반응을 결정하였다.
도 16의 결과는 단일 AraH1-LAMP-vax, AraH2-LAMP-vax, 및 Ara-H3del-LAMP-vax 플라스미드의 조합물 및 단일 다가 Ara H1/H2/H3-LAMP 플라스미드 둘 다가 바이오젝트 B2000 바늘 없는 장치를 통한 진피내 주사 (ID)에 의해 전달된 경우에 강한 IgG2a 반응을 유도하였음을 나타낸다. 그러나, 단일 다가 Ara H1/H2/H3 LAMP 플라스미드는 전체로서 보다 강한 항체 반응을 유도하였으며, 또한 땅콩-특이적 IgE를 억제하였다.
실시예 3: ARA - LAMP 치료적 연구
치료적 치료를 제공하는 본원에 개시된 DNA 백신의 능력을 결정하기 위한 실험을 또한 수행하였다. 대표적인 프로토콜을 도 17에 나타내며, 여기서, 마우스를 먼저 땅콩 페이스트 및 콜레라 독소를 사용하여 감작화한 후, 본원에 개시된 ARA-LAMP-vax 3종-플라스미드 (AraH1-LAMP, AraH2-LAMP, 및 Ara-H3del-LAMP, 실시예 1에 따라 제조됨) 조성물로 치료하였다. 도 18은 ARA-LAMP-vax, 3종 플라스미드 믹스로의 백신 치료 이전의 주 동안의 IgE 항체 수준을 나타내며, 각각의 플라스미드는 단일 땅콩 알레르겐을 코딩한다.
백신 치료 후, 제15주에서의 IgE 항체 수준은 다가 DNA 백신을 사용하였을 경우에 감소하였다 (도 19). 제15주에서의 아나필락시스 챌린지 결과 (증상 점수, 도 20, 패널 A; 체온, 도 20, 패널 B; 도 21)는 ARA-LAMP-vax 3종-플라스미드 조성물의 투여가 대조군 벡터에 비해 보다 덜 중증 증상 및 보다 적은 혈장 히스타민 수준을 초래하였음을 나타내었다. 또한, 보다 적은 전-알레르기성 시토카인인 IL-4가 ARA-LAMP-vax 3종-플라스미드 조성물의 투여에서 발견된 반면 (도 22), IFN-γ의 수준은 대조군 벡터에 비해 상승하였다 (도 23). 이들 결과는 본원에 개시된 DNA 백신이 치료적 치료에 사용될 수 있음을 나타낸다.
참고문헌
명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 및 다른 참고문헌은 본원에 개시된 대상이 관련되는 관련 기술분야의 통상의 기술자의 수준을 지시한다. 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 및 다른 참고문헌은 각각의 개별 간행물, 특허 출원, 특허, 및 다른 참고문헌이 구체적으로 및 개별적으로 참고로 포함되는 것으로 지시되는 것과 동일한 정도로 본원에 참고로 포함된다. 다수의 특허 출원, 특허, 및 다른 참고문헌이 본원에 참조되었지만, 이러한 참고문헌은 임의의 이들 문헌이 관련 기술분야의 통상적인 일반적 기술의 일부를 형성하는 것의 허용이 되지 않음이 이해될 것이다.
상기 대상을 이해의 명확성의 목적으로 예시 및 실시예의 방식으로 일부 상세하게 설명하였지만, 특정 변화 및 변형이 첨부된 청구항의 범위 내에서 실시될 수 있음이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해될 것이다.
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SEQUENCE LISTING <110> IMMUNOMIC THERAPEUTICS, INC. <120> NUCLEIC ACIDS FOR TREATMENT OF PEANUT ALLERGIES <130> 100957.000019 <140> PCT/2015/037240 <141> 2015-06-23 <150> 62/015,981 <151> 2014-06-23 <160> 37 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1672 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 1 Met Ala Pro Arg Ser Ala Arg Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15 Leu Leu Leu Gly Leu Met His Cys Ala Ser Ala Ala Met Phe Met Val 20 25 30 Lys Asn Gly Asn Gly Thr Ala Cys Ile Met Ala Asn Phe Ser Ala Ala 35 40 45 Phe Ser Val Asn Tyr Asp Thr Lys Ser Gly Pro Lys Asn Met Thr Leu 50 55 60 Asp Leu Pro Ser Asp Ala Thr Val Val Leu Asn Arg Ser Ser Cys Gly 65 70 75 80 Lys Glu Asn Thr Ser Asp Pro Ser Leu Val Ile Ala Phe Gly Arg Gly 85 90 95 His Thr Leu Thr Leu Asn Phe Thr Arg Asn Ala Thr Arg Tyr Ser Val 100 105 110 Gln Leu Met Ser Phe Val Tyr Asn Leu Ser Asp Thr His Leu Phe Pro 115 120 125 Asn Ala Ser Ser Lys Glu Ile Lys Thr 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polypeptide <400> 9 Gly Ile Glu Glu Thr Ile Cys Ser Ala Ser Val Lys Lys Asn Leu Gly 1 5 10 15 Arg Ser Ser Asn Pro Asp Ile Tyr Asn Pro Gln Ala Gly Ser Leu Arg 20 25 30 Ser Val Asn Glu Leu Asp Leu Pro Ile Leu Gly Trp Leu Gly Leu Ser 35 40 45 Ala Gln His Gly Thr Ile Tyr Arg Asn Ala Met Phe Val Pro His Tyr 50 55 60 Thr Leu Asn Ala His Thr Ile Val Val Ala Leu Asn Gly Arg Ala His 65 70 75 80 Val Gln Val Val Asp Ser Asn Gly Asn Arg Val Tyr Asp Glu Glu Leu 85 90 95 Gln Glu Gly His Val Leu Val Val Pro Gln Asn Phe Ala Val Ala Ala 100 105 110 Lys Ala Gln Ser Glu Asn Tyr Glu Tyr Leu Ala Phe Lys Thr Asp Ser 115 120 125 Arg Pro Ser Ile Ala Asn Gln Ala Gly Glu Asn Ser Ile Ile Asp Asn 130 135 140 Leu Pro Glu Glu Val Val Ala Asn Ser Tyr Arg Leu Pro Arg Glu Gln 145 150 155 160 Ala Arg Gln Leu Lys Asn Asn Asn Pro Phe Lys Phe Phe Val Pro Pro 165 170 175 Phe Asp His Gln Ser Met Arg Glu Val Ala 180 185 <210> 10 <211> 1227 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 10 atggtgtgct tccgcctctt cccggttccg ggctcagggc tcgttctggt ctgcctagtc 60 ctgggagctg tgcggtctta tgcattggaa cttaatttga cagattcaga aaatgccact 120 tgcctttatg caaaatggca gatgaatttc acagttcgct atgaaactac aaataaaact 180 tataaaactg taaccatttc agaccatggc actgtgacat ataatggaag catttgtggg 240 gatgatcaga atggtcccaa aatagcagtg cagttcggac ctggcttttc ctggattgcg 300 aattttacca aggcagcatc tacttattca attgacagcg tctcattttc ctacaacact 360 ggtgataaca caacatttcc tgatgctgaa gataaaggaa ttcttactgt tgatgaactt 420 ttggccatca gaattccatt gaatgacctt tttagatgca atagtttatc aactttggaa 480 aagaatgatg ttgtccaaca ctactgggat gttcttgtac aagcttttgt ccaaaatggc 540 acagtgagca caaatgagtt cctgtgtgat aaagacaaaa cttcaacagt ggcacccacc 600 atacacacca ctgtgccatc tcctactaca acacctactc caaaggaaaa accagaagct 660 ggaacctatt cagttaataa tggcaatgat acttgtctgc tggctaccat ggggctgcag 720 ctgaacatca ctcaggataa ggttgcttca gttattaaca tcaaccccaa tacaactcac 780 tccacaggca gctgccgttc tcacactgct ctacttagac tcaatagcag 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Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 13 atgggccgat gctgcttcta cacggcgggg acgttgtccc tgctcctgct ggtgaccagc 60 gtcacgctgc tggtggcccg ggtcttccag aaggctgtag accagagtat cgagaagaaa 120 attgtgttaa ggaatggtac tgaggcattt gactcctggg agaagccccc tctgcctgtg 180 tatactcagt tctatttctt caatgtcacc aatccagagg agatcctcag aggggagacc 240 cctcgggtgg aagaagtggg gccatacacc tacagggaac tcagaaacaa agcaaatatt 300 caatttggag ataatggaac aacaatatct gctgttagca acaaggccta tgtttttgaa 360 cgagaccaat ctgttggaga ccctaaaatt gacttaatta gaacattaaa tattcctgta 420 ttgactgtca tagagtggtc ccaggtgcac ttcctcaggg agatcatcga ggccatgttg 480 aaagcctatc agcagaagct ctttgtgact cacacagttg acgaattgct ctggggctac 540 aaagatgaaa tcttgtccct tatccatgtt ttcaggcccg atatctctcc ctattttggc 600 ctattctatg agaaaaatgg gactaatgat ggagactatg tttttctaac tggagaagac 660 agttacctta actttacaaa aattgtggaa tggaatggga aaacgtcact tgactggtgg 720 ataacagaca agtgcaatat gattaatgga acagatggag attcttttca cccactaata 780 accaaagatg aggtccttta tgtcttccca 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tgaatgccca caccatcgtg 4560 gtggctctga acggccgcgc ccacgtccaa gtggtggaca gcaacggcaa tcgggtgtac 4620 gatgaagaac tgcaggaagg acacgtcctg gtggtgcccc agaattttgc cgtggccgcc 4680 aaggcccagt ccgagaacta tgagtatctg gccttcaaga ccgacagccg gccctctatc 4740 gccaatcaag ccggcgagaa cagcatcatc gacaacctgc ccgaggaagt ggtggccaac 4800 agctaccggc tgcctagaga gcaggcccgg cagctgaaga acaacaaccc tttcaagttc 4860 ttcgtgcccc cattcgacca ccagagcatg agagaggtgg ccgaattcac gctgatcccc 4920 atcgctgtgg gtggtgccct ggcggggctg gtcctcatcg tcctcatcgc ctacctcgtc 4980 ggcaggaaga ggagtcacgc aggctaccag actatctag 5019 <210> 22 <211> 416 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 22 Met Pro Arg Gln Leu Ser Ala Ala Ala Ala Leu Phe Ala Ser Leu Ala 1 5 10 15 Val Ile Leu His Asp Gly Ser Gln Met Arg Ala Lys Ala Phe Pro Glu 20 25 30 Thr Arg Asp Tyr Ser Gln Pro Thr Ala Ala Ala Thr Val Gln Asp Ile 35 40 45 Lys Lys Pro Val Gln Gln Pro Ala Lys Gln Ala Pro His Gln Thr Leu 50 55 60 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cacacctttt ccccaatgcg agctccaaag aaatcaagac tgtggaatct 420 ataactgaca tcagggcaga tatagataaa aaatacagat gtgttagtgg cacccaggtc 480 cacatgaaca acgtgaccgt aacgctccat gatgccacca tccaggcgta cctttccaac 540 agcagcttca gccggggaga gacacgctgt gaacaagaca ggccttcccc aaccacagcg 600 ccccctgcgc cacccagccc ctcgccctca cccgtgccca agagcccctc tgtggacaag 660 tacaacgtga gcggcaccaa cgggacctgc ctgctggcca gcatggggct gcagctgaac 720 ctcacctatg agaggaagga caacacgacg gtgacaaggc ttctcaacat caaccccaac 780 aagacctcgg ccagcgggag ctgcggcgcc cacctggtga ctctggagct gcacagcgag 840 ggcaccaccg tcctgctctt ccagttcggg atgaatgcaa gttctagccg gtttttccta 900 caaggaatcc agttgaatac aattcttcct gacgccagag accctgcctt taaagctgcc 960 aacggctccc tgcgagcgct gcaggccaca gtcggcaatt cctacaagtg caacgcggag 1020 gagcacgtcc gtgtcacgaa ggcgttttca gtcaatatat tcaaagtgtg ggtccaggct 1080 ttcaaggtgg aaggtggcca gtttggctct gtggaggagt gtctgctgga cgagaacagc 1140 ctcgaggtga ccttcagaca gggcggagaa gagaatgagt gccagtttca gcggctgaac 1200 gcccagaggc ccgacaacag aatcgagagc gagggcggct acatcgagac atggaacccc 1260 aacaaccagg aatttcagtg cgctggggtg gccctgagca ggaccgtgct gagaagaaat 1320 gccctgaggc ggcccttcta cagcaacgcc cccctggaaa tctacgtgca gcagggcagc 1380 ggctacttcg gcctgatctt tcccggatgc ccctccacct atgaggaacc cgctcaggaa 1440 ggcagacggt atcagagcca gaagcctagc agacggttcc aagtgggcca ggacgatccc 1500 agccaacagc agcaggactc tcaccagaag gtgcaccgct tcgacgaggg cgacctgatc 1560 gctgtgccaa ccggcgtggc cttctggatg tacaacgacg aggataccga cgtcgtgacc 1620 gtgaccctga gcgacaccag ctccatccac aaccagctgg accagttccc caggcggttt 1680 tacctggccg gcaatcagga acaggaattt ctgagatacc agcagcagca gggctccaga 1740 ccccactaca gacagatcag ccctagagtg cggggcgacg aacaggaaaa tgagggcagc 1800 aacatcttct ccggctttgc ccaggaattt ctgcagcacg ccttccaggt ggaccggcag 1860 accgtggaaa acctgagagg cgagaacgag agagaggaac agggcgccat cgtgactgtg 1920 aagggcggcc tgaggatcct gagccccgac gaagaggatg agtcctctag aagccccccc 1980 aaccgccggg aagagttcga tgaggaccgc agcagacctc agcagcgggg gaagtacgac 2040 gagaacaggc ggggctacaa 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ggcgttttca gtcaatatat tcaaagtgtg ggtccaggct 1080 ttcaaggtgg aaggtggcca gtttggctct gtggaggagt gtctgctgga cgagaacagc 1140 acgctgatcc ccatcgctgt gggtggtgcc ctggcggggc tggtcctcat cgtcctcatc 1200 gcctacctcg tcggcaggaa gaggagtcac gcaggctacc agactatcta g 1251 <210> 30 <211> 416 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 30 Met Ala Pro Arg Ser Ala Arg Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15 Leu Leu Leu Gly Leu Met His Cys Ala Ser Ala Ala Met Phe Met Val 20 25 30 Lys Asn Gly Asn Gly Thr Ala Cys Ile Met Ala Asn Phe Ser Ala Ala 35 40 45 Phe Ser Val Asn Tyr Asp Thr Lys Ser Gly Pro Lys Asn Met Thr Leu 50 55 60 Asp Leu Pro Ser Asp Ala Thr Val Val Leu Asn Arg Ser Ser Cys Gly 65 70 75 80 Lys Glu Asn Thr Ser Asp Pro Ser Leu Val Ile Ala Phe Gly Arg Gly 85 90 95 His Thr Leu Thr Leu Asn Phe Thr Arg Asn Ala Thr Arg Tyr Ser Val 100 105 110 Gln Leu Met Ser Phe Val Tyr Asn Leu Ser Asp Thr His Leu Phe Pro 115 120 125 Asn Ala Ser Ser Lys Glu Ile Lys Thr Val Glu Ser Ile Thr Asp Ile 130 135 140 Arg Ala Asp Ile Asp Lys Lys Tyr Arg Cys Val Ser Gly Thr Gln Val 145 150 155 160 His Met Asn Asn Val Thr Val Thr Leu His Asp Ala Thr Ile Gln Ala 165 170 175 Tyr Leu Ser Asn Ser Ser Phe Ser Arg Gly Glu Thr Arg Cys Glu Gln 180 185 190 Asp Arg Pro Ser Pro Thr Thr Ala Pro Pro Ala Pro Pro Ser Pro Ser 195 200 205 Pro Ser Pro Val Pro Lys Ser Pro Ser Val Asp Lys Tyr Asn Val Ser 210 215 220 Gly Thr Asn Gly Thr Cys Leu Leu Ala Ser Met Gly Leu Gln Leu Asn 225 230 235 240 Leu Thr Tyr Glu Arg Lys Asp Asn Thr Thr Val Thr Arg Leu Leu Asn 245 250 255 Ile Asn Pro Asn Lys Thr Ser Ala Ser Gly Ser Cys Gly Ala His Leu 260 265 270 Val Thr Leu Glu Leu His Ser Glu Gly Thr Thr Val Leu Leu Phe Gln 275 280 285 Phe Gly Met Asn Ala Ser Ser Ser Arg Phe Phe Leu Gln Gly Ile Gln 290 295 300 Leu Asn Thr Ile Leu Pro Asp Ala Arg Asp Pro Ala Phe Lys Ala Ala 305 310 315 320 Asn Gly Ser Leu Arg Ala Leu Gln Ala Thr Val Gly Asn Ser Tyr Lys 325 330 335 Cys Asn Ala Glu Glu His Val Arg Val Thr Lys Ala Phe Ser Val Asn 340 345 350 Ile Phe Lys Val Trp Val Gln Ala Phe Lys Val Glu Gly Gly Gln Phe 355 360 365 Gly Ser Val Glu Glu Cys Leu Leu Asp Glu Asn Ser Thr Leu Ile Pro 370 375 380 Ile Ala Val Gly Gly Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val Leu Ile 385 390 395 400 Ala Tyr Leu Val Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln Thr Ile 405 410 415 <210> 31 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 31 Tyr Gln Thr Ile 1 <210> 32 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 32 Tyr Gln Arg Ile 1 <210> 33 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 33 Tyr Glu Gln Phe 1 <210> 34 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 34 Tyr His Thr Leu 1 <210> 35 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 35 Gly Gly Gly Gly 1 <210> 36 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 36 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 37 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 37 Leu Ile Arg Thr 1

Claims (50)

  1. 신호 서열을 코딩하는 핵산 서열;
    소기관내 안정화/트래피킹 도메인을 코딩하는 핵산 서열;
    땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 핵산 서열로서, 땅콩 알레르겐 도메인은 땅콩 알레르겐에 대한 천연 신호 서열을 포함하지 않는 적어도 1종의 땅콩 알레르겐을 포함하는 것인 핵산 서열;
    막횡단 도메인을 코딩하는 핵산 서열; 및
    엔도솜/리소솜 표적화 도메인을 코딩하는 핵산 서열
    을 순차적인 순서로 포함하는 단리된 또는 정제된 핵산 분자.
  2. 제1항에 있어서, 신호 서열이 리소솜 연관된 막 단백질 (LAMP)의 신호 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 LAMP가 LAMP-1, LAMP2, LAMP-3 (DC-LAMP), LIMP II, 또는 ENDOLYN인 핵산 분자.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 신호 서열이 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 27을 포함하는 것인 핵산 분자.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 소기관내 안정화/트래피킹 도메인이 리소솜 연관된 막 단백질 (LAMP)을 포함하는 것인 핵산 분자.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 소기관내 안정화/트래피킹 도메인이 LAMP의 내강 도메인을 포함하는 것인 핵산 분자.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 소기관내 안정화/트래피킹 도메인이 LAMP1, LAMP2, LAMP-3 (DC-LAMP), LIMP II, 또는 ENDOLYN의 내강 도메인을 포함하는 것인 핵산 분자.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 소기관내 안정화/트래피킹 도메인이 서열식별번호: 1의 아미노산 28 내지 380을 포함하는 것인 핵산 분자.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 핵산 서열이 2개 이상의 땅콩 알레르겐성 에피토프를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 핵산 서열이 2종 이상의 땅콩 알레르겐을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 땅콩 알레르겐 도메인을 코딩하는 핵산 서열이 3종의 땅콩 알레르겐을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1종의 땅콩 알레르겐이 Ara H1, Ara H2, Ara H3, Ara H3del 또는 이들의 조합을 포함하는 것인 핵산 분자.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 땅콩 알레르겐 도메인이 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 및/또는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  14. 제9항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 땅콩 알레르겐성 에피토프 또는 땅콩 알레르겐이 링커에 의해 분리된 것인 핵산 분자.
  15. 제14항에 있어서, 링커가 아미노산 서열 GGGG 또는 GGGGS를 포함하는 것인 핵산 분자.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 막횡단 도메인이 LAMP의 막횡단 도메인을 포함하는 것인 핵산 분자.
  17. 제16항에 있어서, LAMP가 LAMP-1, LAMP2, LAMP-3 (DC-LAMP), LIMP II, 또는 ENDOLYN인 핵산 분자.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 막횡단 도메인이 서열식별번호: 1의 아미노산 1637 내지 1660을 포함하는 것인 핵산 분자.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 엔도솜/리소솜 표적화 도메인이 YXXØ 신호를 포함하는 것인 핵산 분자.
  20. 제19항에 있어서, YXXØ 신호가 아미노산 서열 YQTI, YQRI, YEQF, 또는 YHTL을 포함하는 것인 핵산 분자.
  21. 제1항에 있어서, 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 또는 서열식별번호: 8을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 분자가 데옥시리보핵산 (DNA)을 포함하는 것인 핵산 분자.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  24. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 따른 핵산 분자를 포함하는 세포.
  25. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 핵산 분자에 의해 코딩되는 폴리펩티드.
  26. 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 또는 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  27. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 따른 핵산 분자를 포함하는 제약 조성물.
  28. 제23항에 따른 벡터를 포함하는 제약 조성물.
  29. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 따른 적어도 2종의 핵산 분자를 포함하는 제약 조성물.
  30. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 따른 3종의 핵산 분자를 포함하는 제약 조성물.
  31. 제30항에 있어서, 서열식별번호: 6을 코딩하는 핵산 분자, 서열식별번호: 7을 코딩하는 핵산 분자, 및 서열식별번호: 8을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 제약 조성물.
  32. 제23항에 따른 적어도 2종의 벡터를 포함하는 제약 조성물.
  33. 제23항에 따른 3종의 벡터를 포함하는 제약 조성물.
  34. 제33항에 있어서, 서열식별번호: 6을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터, 서열식별번호: 7을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터, 및 서열식별번호: 8 또는 서열식별번호: 28을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터를 포함하는 제약 조성물.
  35. 제27항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 제약상 허용되는 담체를 추가로 포함하는 제약 조성물.
  36. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 땅콩 알레르기 반응의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 핵산 분자.
  37. 제27항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 땅콩 알레르기 반응의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 제약 조성물.
  38. 치료 유효량의 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 핵산 분자, 제23항의 벡터, 또는 제27항 내지 제35항 중 어느 한 항의 제약 조성물을 땅콩 알레르기 반응의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 땅콩 알레르기 반응을 예방 또는 치료하는 방법.
  39. 제38항에 있어서, 대상체가 투여 이전에 땅콩 알레르겐에 노출된 것인 방법.
  40. 제38항 또는 제39항에 있어서, 핵산 분자, 벡터, 또는 제약 조성물이 IgE 반응의 생성을 감소시키기에 충분한 양으로 투여되는 것인 방법.
  41. 제38항 또는 제39항에 있어서, 핵산 분자, 벡터, 또는 제약 조성물이 혈장 히스티딘 수준을 감소시키기에 충분한 양으로 투여되는 것인 방법.
  42. 제38항 또는 제39항에 있어서, 핵산 분자, 벡터, 또는 제약 조성물이 IL-4의 생성을 감소시키기에 충분한 양으로 투여되는 것인 방법.
  43. 제38항 또는 제39항에 있어서, 핵산 분자, 벡터, 또는 제약 조성물이 IFN-γ 수준을 증가시키기에 충분한 양으로 투여되는 것인 방법.
  44. 제38항 또는 제39항에 있어서, 방법이 적어도 1종의 임상적 알레르기 증상을 감소, 제거 또는 예방하는 것인 방법.
  45. 제38항 또는 제39항에 있어서, 핵산 분자, 벡터, 또는 제약 조성물이 근육내 주사 (IM)에 의해 대상체에게 투여되는 것인 방법.
  46. 제38항 또는 제39항에 있어서, 핵산 분자, 벡터, 또는 제약 조성물이 진피내 (ID) 주사에 의해 대상체에게 투여되는 것인 방법.
  47. 제38항 또는 제39항에 있어서, 핵산 분자, 벡터, 또는 제약 조성물이 알레르겐-특이적 IgG 반응의 생성을 유도 또는 증가시키기에 충분한 양으로 투여되는 것인 방법.
  48. 제38항 또는 제39항에 있어서, 핵산 분자, 벡터, 또는 제약 조성물이 IgE 반응을 약화시키기에 충분한 양으로 투여되는 것인 방법.
  49. 제38항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체게 인간인 방법.
  50. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 엔도솜/리소솜 표적화 도메인이 아미노산 서열 LIRT를 포함하는 것인 핵산 분자.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220063460A (ko) * 2020-11-10 2022-05-17 (주)프로테옴텍 밀가루 유래의 오메가-5-글리아딘의 신규 에피토프 중합체 및 이의 용도

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10149904B2 (en) 2015-02-20 2018-12-11 The Board Of Trusteees Of The Leland Stanford Junior University Mixed allergen compositions and methods for using the same
US10166286B2 (en) 2015-02-20 2019-01-01 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Mixed allergen compositions and methods for using the same
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CA3044074A1 (en) 2016-11-16 2018-05-24 Immunomic Therapeutics, Inc. Nucleic acids for treatment of allergies
CN110799529A (zh) * 2017-04-22 2020-02-14 免疫治疗有限公司 改良lamp构建物
MA49791A (fr) 2017-07-18 2020-05-27 Before Brands Inc Procédés de fabrication de compositions d'allergènes mixtes
US20210163549A1 (en) 2018-05-11 2021-06-03 Astellas Pharma Inc. Nucleic acid for treating crustacean allergy
TW202003542A (zh) 2018-05-11 2020-01-16 日商安斯泰來製藥股份有限公司 用於塵蟎過敏治療之核酸
CN109115737B (zh) * 2018-07-27 2021-03-26 青岛大学 一种三螺旋pH生物传感器及其应用
MX2021008873A (es) 2019-01-23 2021-11-04 Before Brands Inc Métodos para la preparacion de composiciones alergenicas mixtas.
WO2020186190A2 (en) * 2019-03-13 2020-09-17 Psomagen, Inc. Epitope-based approach for allergy treatments and inhibitors for crohn's disease
CN112225815A (zh) * 2020-09-30 2021-01-15 四川携光生物技术有限公司 一种牛奶、小麦、花生及大豆过敏原融合蛋白及其构建方法、应用
CN114438088A (zh) * 2020-11-03 2022-05-06 韩达 一种溶酶体靶向的核酸嵌合体的制备及应用
WO2022099695A1 (en) * 2020-11-16 2022-05-19 Jiangsu Cell Tech Medical Research Institute Co., Ltd. Cd164 fusion and uses thereof
CN115057927B (zh) * 2022-05-30 2024-02-20 南开大学 一种花生过敏原Ara h1特异性纳米抗体及其应用

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993018185A1 (en) * 1992-03-03 1993-09-16 The Salk Institute For Biological Studies Receptor internalization signals
CN1705492A (zh) * 2002-08-29 2005-12-07 新加坡国立大学 用于诱发抗过敏原保护性免疫应答的重组核酸
ES2831723T3 (es) * 2012-06-15 2021-06-09 Immunomic Therapeutics Inc Acidos nucleicos para tratar alergias
US9774230B2 (en) * 2015-11-25 2017-09-26 Caterpillar Inc. Generator set having coupling member between flywheel and generator

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220063460A (ko) * 2020-11-10 2022-05-17 (주)프로테옴텍 밀가루 유래의 오메가-5-글리아딘의 신규 에피토프 중합체 및 이의 용도

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