KR20170009470A

KR20170009470A - 지표성분 함량이 증진된 오미자 농축액을 포함하는 간세포 보호용 조성물 및 그 제조방법

Info

Publication number: KR20170009470A
Application number: KR1020150101589A
Authority: KR
Inventors: 신선; 박성선; 박성진; 허정무; 성미선; 최준혁; 송미경; 이성철
Original assignee: 종근당건강 주식회사; 문경시
Priority date: 2015-07-17
Filing date: 2015-07-17
Publication date: 2017-01-25

Abstract

본 명세서에는 간세포 보호 효과용 조성물이 개시된다. 더욱 상세하게는 유효성분으로서 오미자 농축액을 포함하며, 상기 오미자 농축액은 농축액 전체 중량을 기준으로 총 쉬잔드린(Schisandrin) 3.80mg/g 이상; 쉬잔드린 C 1.20mg/g 이상; 고미신 A 5.20mg/g 이상; 및 고미신 N 6.10mg/g 이상을 포함함으로써 간세포 보호 효과가 우수한 조성물을 제공한다. 또한, 상기 조성물을 제조하는 제조방법이 개시된다.

Description

지표성분 함량이 증진된 오미자 농축액을 포함하는 간세포 보호용 조성물 및 그 제조방법{Composition for protectng liver cells comprising Schisandra chinensis Concentrate containing elevated amounts of effective ingredients and method for manufacturing the same}

본 명세서에는 지표성분 함량이 증진된 오미자 농축액, 그 농축액의 제조방법, 그 농축액을 유효성분으로 포함하는 간세포 보호용 조성물, 및 그 조성물의 제조방법이 개시된다.

최근 국내외적으로 건강기능식품 시장이 크게 확대되고 있는 추세로, 건강기능식품 소재 중 개별 인정형 제품의 시장규모는 천억원 대 시장에 돌입했으며, 그 중 가장 두드러진 시장은 사람의 간 건강 제품으로 이에 대한 수요가 증가함에 따라 제품개발 또한 점차 증가하고 있는 추세이다.

사람의 간 건강 관련 제품은 2010년 생산실적을 기준으로 전체 건강기능식품 개별인정형 제품의 45%를 차지하고 있으며 헛개나무열매, 밀크씨슬, 표고버섯 균사체 등 천연물 원료를 이용한 제품들이 주를 이루고 있다.

이와 관련 있는 선행기술로는 공개특허공보 제 2011-0050879호(선행기술 1)의 "오미자의 안토시아닌과 쉬잔드린을 포함하는 항산화성 조성물"은 오미자 건과를 볶음 처리하여 분쇄한 가루를 3 내지 10배의 45% 내지 55% 에탄올 용액으로 항산화성이 높으며, 안토시아닌과 쉬잔드린, 고미신 A 및 고미신 N 등의 리그란 함량을 동시에 높게 추출하는 방법으로서 분쇄한 오미자 가루와 에탄올 용액을 혼합하여 18시간 보관하는 방법으로 오미자 추출액 생산하는 추출방법이 개시되었다.

그러나 상기 선행기술 1은 기존의 오미자의 음료에는 쉬잔드린, 고미신 A 및 고미신 N 등의 리그란 물질은 전혀 함유되어 있지 않다.

대한민국 공개특허공보 공개번호 10-2011-0050879 대한민국 공개특허공보 공개번호 10-2009-0095134 대한민국 등록특허공보 등록번호 10-1452863

일 측면에서, 본 발명은 지표성분의 함량이 높은 오미자 농축액을 제공하는 것을 목적으로 한다.

일 측면에서, 본 발명은 지표성분의 함량이 높은 오미자 농축액을 제조하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

다른 측면에서, 본 발명은 간 세포 보호 효과가 우수한 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

다른 측면에서, 본 발명은 간 세포 보호 효과가 우수한 조성물의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

일 측면에서 본 발명은 간세포 보호용 조성물로서, 상기 조성물은, 유효성분으로서 오미자 농축액을 포함하며, 상기 오미자 농축액은, 농축액 전체 중량을 기준으로 총 쉬잔드린(Schisandrin) 3.80mg/g 이상; 쉬잔드린 C 1.20mg/g 이상; 고미신 A 5.20mg/g 이상; 및 고미신 N 6.10mg/g 이상을 포함한 조성물일 수 있다.

일 측면에서 본 발명은 간세포 보호용 조성물을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은, 오미자에 용매를 넣고 100 내지 140℃의 온도 및 1.0 내지 2.0kgf/cm² 압력 하에서 추출하는 추출 단계; 및 상기 추출물을 농축하는 농축 단계를 포함할 수 있다.

일 측면에서, 본 발명은 지표성분 함량이 현저히 높은 오미자 농축액을 제공할 수 있다. 이와 같이 지표성분 함량이 현저히 높은 오미자 농축액을 의약 또는 건강기능식품으로 활용함으로써 간의 보호, 즉 간 손상으로부터의 보호, 더 구체적으로 알코올성 간 손상으로부터 간을 보호하는 우수한 효과를 얻을 수 있다.

도 1은 오미자 지표성분들의 열 안정성을 나타낸 그래프이다.
도 2는 오미자 지표성분들의 pH 안정성을 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 오미자 농축액이 알코올 분해에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.

오미자는 오미자과 (Schisandraceae)에 속하는 식물 중 하나인 쉬잔드라 키넨시스(Schisandra chinensis)의 열매를 의미한다. 쉬잔드라 키넨시스(Schisandra chinensis)는 우리나라와 중국을 비롯한 일본, 사할린, 대만 등 동북아시아 지역에 국지적으로 주산지를 형성하고 있다. 또한 낙엽 덩굴성의 다년생 목련과 식물로 5월 초에 홍백색의 향기로운 꽃이 피고, 둥근 형의 과실은 20~30개의 낱알이 한 송이를 이루어 8~9월에 붉게 익으며 9월부터 수확한다.

쉬잔드라 키넨시스(Schisandra chinensis)는 유효성분인 쉬잔드린(schizandrin), 쉬잔드란(schizadran), 쉬잔드린 C(schizadrin C), 에타미그레날(ethamigrenal), 고미신(gomisin)류와 같은 리그난 화합물들을 포함하고 있으며, 혈당의 조절, 신장 독성의 해결, 항산화등의 효능을 나타낸다고 알려져 있다.

다른 측면에서, 상기 오미자 농축액은, 농축액 전체 중량을 기준으로 총 쉬잔드린(Schisandrin)을 3.80mg/g 이상, 3.85mg/g 이상, 3.90mg/g 이상, 3.95mg/g 이상, 4.00mg/g 이상, 4.05mg/g 이상, 4.10mg/g 이상, 또는 4.1 5mg/g 이상 포함할 수 있다.

다른 측면에서, 상기 오미자 농축액은, 농축액 전체 중량을 기준으로 쉬잔드린 C를 1.20mg/g 이상, 1.20mg/g 이상, 1.25mg/g 이상, 1.30mg/g 이상, 1.35mg/g 이상, 1.40mg/g 이상, 1.45mg/g 이상, 또는 1.50mg/g 이상 포함할 수 있다.

다른 측면에서, 상기 오미자 농축액은, 농축액 전체 중량을 기준으로 고미신 A를 5.20mg/g 이상, 5.25mg/g 이상, 5.30mg/g 이상, 5.35mg/g 이상, 5.40mg/g 이상, 5.45mg/g 이상, 5.50mg/g 이상, 또는 5.55mg/g 이상 포함할 수 있다.

다른 측면에서, 상기 오미자 농축액은, 농축액 전체 중량을 기준으로 고미신 N을 6.10mg/g 이상, 6.15mg/g 이상, 6.20mg/g 이상, 6.25mg/g 이상, 6.30mg/g 이상, 6.35mg/g 이상, 또는 6.40mg/g 이상일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 조성물에 있어서, 상기 오미자 농축액은, 농축액 전체 중량을 기준으로 쉬잔드린(Schisandrin) 4.00mg/g 이상; 쉬잔드린 C 1.40mg/g 이상; 고미신 A 5.40mg/g 이상; 및 고미신 N 6.30mg/g 이상을 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 조성물에 있어서, 상기 오미자 농축액은, 농축액 전체 중량을 기준으로 쉬잔드린(Schisandrin) 4.15mg/g 이상; 쉬잔드린 C 1.52mg/g 이상; 고미신 A 5.55mg/g 이상; 및 고미신 N 6.40mg/g 이상을 포함할 수 있다.

오미자 지표성분들의 함량 상한선은 오미자 본래의 한계로 인해 자연적으로 제한된다. 예컨대, 본 발명의 일 실시예에 따른 조성물에 있어서, 상기 오미자 농축액은, 농축액 전체 중량을 기준으로 쉬잔드린(Schisandrin) 50mg/g 이하; 쉬잔드린 C 20mg/g 이하; 고미신 A 50mg/g 이하; 또는 고미신 N 60mg/g 이하를 포함할 수 있다.

일 실시예에서, 상기 오미자 농축액은 알코올에 의한 세포독성으로부터 간세포를 보호하는 용도로 사용될 수 있다.

일 측면에서 본 발명은 간세포 보호용 조성물을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은, 오미자에 용매를 넣고 100 내지 140℃의 온도 및 1.0 내지 2.0kgf/cm²의 압력 하에서 추출하는 추출 단계; 및 상기 추출물을 농축하는 농축 단계를 포함할 수 있다.

일 측면에서, 상기 추출 온도는 100℃ 이상, 100℃ 초과, 105℃ 이상, 110℃ 이상, 115℃ 이상, 또는 120℃ 이상일 수 있다.

일 측면에서, 상기 압력은 1.0kgf/cm² 이상, 1.2kgf/cm² 이상, 1.4kgf/cm² 이상, 1.6kgf/cm² 이상, 1.8kgf/cm² 이상, 또는 2.0kgf/cm² 이상일 수 있다. 다른 측면에서, 상기 압력은 2.0kgf/cm² 이하, 1.8kgf/cm² 이하, 또는 1.6kgf/cm² 이하일 수 있다.

일 실시예에서, 상기 추출 단계는, 110 내지 130℃의 온도 및 1.3 내지 1.7kgf/cm² 압력 하에서 추출하는 것일 수 있다.

일 실시예에서, 상기 추출 단계는 6 내지 12시간 동안 수행하는 것을 포함할 수 있다.

일 실시예에서, 상기 농축 단계는 감압기로 0.5~50Brix로 농축하는 것을 포함할 수 있다.

일 실시예에서, 상기 추출단계는, 65% 내지 85%의 에탄올로 1차 추출하는 1차 추출공정; 및 상기 1차 추출공정 후 남은 오미자에 물을 넣고 2차 추출하는 2차 추출공정을 포함할 수 있다.

일 실시예에서, 상기 추출단계는, 60 내지 80℃의 온도에서 65% 내지 85%의 에탄올로 1차 추출하는 1차 추출공정; 및 100 내지 140℃의 온도 및 1.0 내지 2.0kgf/cm² 압력 하에서 2차 추출하는 2차 추출공정을 포함할 수 있다.

일 실시예에서, 상기 방법은, 상기 1차 추출공정 및 2차 추출공정을 각각 2회 이상 반복할 수 있다.

이하 본 발명을 일실시예에 따라 오미자 농축액을 포함하는 조성물의 제조방법을 구체적으로 설명하면 다음과 같다.

제1공정: 건 오미자 원료 선별 단계(S1)

오미자 농축액을 만들기 위해 먼저 건 오미자 원료를 선별한다. 본 발명에서 실시된 오미자의 시료는 경북 문경산 원료로 지표성분 함량을 분석하여, 기준에 적합한 원료만을 구입하여 사용하였다. 본 발명에서 사용되는 오미자 농축액은 생물인 관계로 채취되는 지역의 환경에 따라서 약간에 차이는 있으나, 오미자의 주성분은 큰 차이가 없으므로 국내산이나 해외산 어느 지역에서나 생산되는 것이면 족하다.

제2공정: 1차 추출 단계(S2)

상기 제 1공정에서 선별한 건 오미자 100중량부에 대하여 주정 65도 내지 85도의 에탄올 400-600중량부를 혼합하여 60℃-80℃로 6-12시간 동안 추출기로 중탕 후 1차 추출한다.

상기 주정 65도 내지 85도의 에탄올은 통상 시중에서 유통되는 에탄올을 구입하여 사용한 것이다.

본 공정에서 추출된 오미자 추출액은 별도 보관하고 추출기에는 1차 추출된 오미자만 남게 된다.

제3공정: 2차 추출 단계(S3)

상기 제 2공정에서 1차 추출이 끝난 오미자 100중량부에 대하여 주정 65도 내지 85도의 에탄올 400-600중량부를 혼합하여 60℃-80℃로 6-12시간 동안 추출기로 중탕 후 2차 추출한다.

본 공정은 1차 공정과 동일한 공정으로 한 번 더 실시되는 것이며, 다만, 1차 추출된 오미자 원료에 제2공정과 동일조건에서 실시된다.

제4공정: 3차 추출 단계(S4)

상기 제3공정에서 2차 추출된 오미자 추출액을 분리한 후 추출기에 남은 오미자 100중량부에 대하여 정제수 400-600중량부를 혼합하여 100-140℃에서 1.0 내지 2.0kgf/cm²의 압력으로 6-12시간 동안 추출기로 중탕 후 3차 추출한다.

제5공정: 4차 추출 단계(S5)

상기 3차 추출된 오미자 추출액을 분리한 후 추출기에 남은 오미자 100중량부에 대하여 정제수 400-600중량부를 혼합하여 100-140℃에서 1.0 내지 2.0kgf/cm²의 압력으로 6-12시간 동안 추출기로 중탕 후 4차 추출한다.

상기 제4공정과 제5공정에서 실시되는 오미자 추출액은 에탄올 대신에 정제수를 상기 제2공정과 제3공정과 같은 동일조건으로 실시된다.

제6공정: 여과 단계(S6)

상기 제 2, 3, 4, 5공정에서 추출된 오미자 추출액을 모두 혼합한 후 별도의 여과기를 통하여 여과한다.

본 공정에서 여과되는 오미자 추출액은 제2공정과 제3공정에서는 에탄올을 혼합하여 추출기로 추출한 액과, 제3공정과 제4공정에서 추출된 오미자 추출액은 정제수를 이용한 추출액을 혼합하여 여과한 것이다.

제7공정: 농축 단계(S7)

상기 제 6공정에서 여과된 오미자추출물을 감압 농축하여 50Brix 이상으로 농축한다.

본 공정에서 실시되는 농축공정은 감액농축기로 60℃-80℃에서 600-700㎜hg의 진공 감압 상태에서 농축한다.

이와 같이 농축되는 본 발명의 오미자 농축액은 50Brix 이상으로 농축한다.

제8공정: 살균 단계(S8)

상기 제7공정에서 실시된 오미자 농축액을 80℃-100℃에서 5-30분 동안 가열하여 살균처리한다.

일 실시예에서, 상기 조성물은 화장료, 식품 또는 의약 조성물일 수 있다.

본 명세서에 따른 약학 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 연질 또는 경질 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용되는 것이면 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 염산, 황산, 질산, 인산, 불화수소산, 브롬화수소산, 포름산 아세트산, 타르타르산, 젖산, 시트르산, 푸마르산, 말레산, 숙신산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 톨루엔술폰산, 나프탈렌술폰산 등을 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 목적하는 바에 따라 비경구 투여하거나 경구 투여할 수 있으며, 하루에 체중 1 ㎏당 0.1~500 ㎎, 바람직하게는 1~100 ㎎의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 예컨대, 체중 대비 5~10mg/kg/일 투여할 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강 상태, 식이, 투여 시간, 투여 방법, 배설률, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 연질 또는 경질 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 연고, 크림 등의 외용제, 좌제, 주사제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은, 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 비경구, 경구 등의 다양한 경로로 투여될 수 있으며, 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명의 일 측면에 있어서, 식품 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다.

본 명세서에 따른 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 캐러멜, 겔, 바 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.

본 명세서에 따른 식품 조성물에 있어서, 상기 유효 성분의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 5000mg/kg/일, 보다 구체적으로는 50 mg/kg/일 내지 500 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.

본 명세서에 따른 식품 조성물은, 예를 들어, 츄잉껌, 캐러멜 제품, 캔디류, 빙과류, 과자류 등의 각종 식품류, 청량 음료, 미네랄 워터, 알코올 음료 등의 음료 제품, 비타민이나 미네랄 등을 포함한 건강기능성 식품류일 수 있다.

상기 외에 본 발명의 일 측면인 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 기능성 식품 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 포함되는 것이 일반적이다.

[제조예 1]

경북 문경산의 오미자 100중량부에 대하여 주정 75%의 에탄올 500중량부를 혼합하여 70℃로 9시간 동안 추출기로 중탕 후 1차 추출하였다. 본 공정에서 추출된 오미자 추출액은 별도 수거하고 추출기에 남은 1차 추출된 오미자 100중량부에 대하여 주정 75도의 에탄올 500중량부를 혼합하여 70℃로 9시간 동안 추출기로 중탕하여 2차 추출하였다. 2차 추출된 오미자 추출액을 분리한 후 추출기에 남은 오미자 100중량부에 대하여 정제수 500중량부를 혼합하여 121℃에서 2.0kgf/cm²의 압력으로 9시간 동안 추출기로 중탕하여 3차 추출하였다. 상기 3차 추출된 오미자 추출액을 분리한 후 추출기에 남은 오미자 100중량부에 대하여 정제수 500중량부를 혼합하여 121℃에서 1.5kgf/cm²의 압력으로 9시간 동안 추출기로 중탕하여 4차 추출하였다. 상기 1, 2, 3, 4차 추출된 각 오미자 추출액을 모두 혼합한 후 별도의 여과기를 통하여 여과하였다. 여과된 오미자 추출물을 감압농축기로 70℃에서 650㎜hg의 진공 감압 상태에서 농축감압 농축하여 50Brix 이상으로 농축하였다. 얻어진 오미자 농축액을 90℃에서 20분 동안 가열하여 살균처리하였다.

이상과 같이 제조된 오미자 농축액의 최종 수율은 약 50%로 원물 1 kg을 이용하여 농축액을 제조하면 500g의 농축액을 얻을 수 있는 추출 농축 조건이 확립된 것이다.

상기와 같이 하여 얻어진 오미자 농축액의 지표성분인, 총 쉬잔드린, 쉬잔드린 C, 고미신 A, 고미신 N을 분석한 결과 아래의 표1과 같이 확인되었다.

지표성분	함량(mg/g)
총 쉬잔드린	4.23
쉬잔드린 C	1.58
고미신 A	5.59
고미신 N	6.46

[ 실시예 1] 오미자 농축액의 추출 조건 확립

오미자 농축액 제조에 있어 최적 추출조건을 찾기 위하여, 온도 60℃ 내지 90℃의 추출기에서 에탄올 : 정제수의 부피비를 0 : 100 내지 100 : 0까지 조정하여 추출물의 기능성분 함량을 분석하였다.

이때 추출시간은 8시간으로 하여 추출하였고, 오미자농축액의 기능성분은 고성능 액체크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 분석하였다.

컬럼은 CAPCELL PAK C18(4.6 x 150, 5㎛)를 이용하였으며, 검출기는 UV Detector를 사용하였다. 이때 크로마토그램은 254nm의 파장에서 얻었으며, 이동 상의 조성은 주정 65% 내지 85%의 메탄올 70중량%와 물 30중량%를 조성 변화없이 등용매(isocratic)로 전개하였다. 흐름 속도는 0.6ml/min로 유지하면서 정량분석 하였다.

오미자의 지표성분인 쉬잔드린 C, 고미신 A, 고미신 N의 함량 분석결과 오미자 원물 대비 4배수의 용매를 이용하여 8시간, 70℃에서 70 : 30 비율로 에탄올과 정제수를 혼합한 조건에서 가장 높게 나타났다.

[ 실험예 1] 오미자 농축액의 열 및 pH 안정성 시험

상기 제조된 오미자 농축액에 대하여, 열 안정성 실험은 4℃, 30℃, 50℃, 70℃, 90℃, 100℃로 30분간 처리한 후 HPLC로 지표성분의 함량을 측정하였고, pH 안정성 실험은 수산화나트륨과 염산을 이용하여 오미자 농축액의 pH를 3, 7, 10으로 조정하여 24시간 방치 후 지표성분의 함량을 측정하였다.

그 결과는 도 1 및 도 2에 나타나 있다. 상기 제조예 1에서 제조한 오미자 농축액은 열 및 pH 안정성 실험 결과 85% 이상 지표성분 함량을 유지하였다.

[ 실험예 2] 오미자 농축액의 간세포 보호 효과

표준화된 오미자 농축액의 간세포 보호 효과를 확인하기 위해 오미자 농축액을 처리한 HepG2 cell에 4% 알코올 자극을 주어 세포독성을 유도하였을 때, 오미자 농축액에 의해 알콜에 의한 세포독성이 완화되는 효과를 확인하였다.

본 발명의 실험에 사용한 HepG2 cell은 한국 세포주은행(KCLB)에서 분양 받아 10% FBS, 100 units/ml penicillin, 100㎍ streptomucin을 첨가한 RPMI 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ incubator에서 배양하였다. 오미자 농축액의 간세포 보호효과는 MTT assay를 이용하여 측정하였다.

HepG2 cell을 2x10⁴cell로 96 well plate에 배양하고 24시간 후 non-FBS 배지로 교환하여, 오미자 농축액을 농도별로(400㎍/㎍, 200㎍/㎖, 100㎍/㎖) 처리하고 1시간 후에 4% 알코올을 처리하여 24시간 배양하였다.

그 후 MTT 용액(5mg/ml)을 3시간 처리하여 형성된 formazan은 DMSO(150㎖)로 용해시킨 다음 microplate reader(Bio Rad laboratories Inc., California, USA)로 595nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 오미자 농축액은 세포 독성을 나타내지 않았으며, 4% 에탄올로 자극을 준 HepG2 cell에서 세포 보호효과를 확인하였다.

[ 실험예 3] 알코올 유도 간독성에 대한 오미자 농축액의 간 보호 효과

1-1 알코올을 이용한 간 독성 유발

중앙실험동물(주)에서 체중 230-240g 내외의 수컷 Sprague Dawley 흰쥐실험동물로 사용하였으며 항온항습(실내온도 22±2℃, 상대습도 55±10%)과 12시간(07:00~19:00) 간격의 명암주기 환경에서 자유롭게 공급된 증류수와 고형사료로 3-4일간 사육하였다.

3-4일간 적응시킨 실험동물을 12시간 절식 후 시장에 출시된 고도주 제품 (알콜농도 40%, 용량 700 mL)을 흰쥐 체중 기준으로 투여하였고, 알콜 투여 30분 후 상기 제조예 1에 의해 제조된 오미자 농축액을 체중 대비 7.5mg/kg 투여하였고, 대조군으로는 동량의 물을 경구 투여 하였다. 오미자 농축액을 투여한 후 60분, 90분, 150분, 240분, 300분, 360분의 혈중 에탄올 농도를 측정하여 경시적인 알코올 분해율을 측정하였다.

1-2 혈중 알콜 농도 효소 측정

채취한 혈액은 시료투여 후 60분, 90분, 150분, 240분, 300분, 360분 까지 6회 안구 채혈법으로 채취하였고, 혈액은 혈청 분리관에 넣어 원심분리 (4℃, 2,500 rpm, 10 min) 하고, 혈중 알코올 농도는 효소법으로 분석하였다. 그 결과는 도 3에 나타나 있다. 도 3에 나타난 바와 같이, 주정 투여 후 90분의 혈중 알코올 농도가 가장 높았고, 주정 투여 60분을 알코올의 기준 농도 대비 360분의 혈중 알코올 분해율은 40% 에탄올 (A) 76.92%, 오미자 농축액 집단 (B) 97.14%, 40% 에탄올+물 집단 (C) 83.33%로 B 집단이 A, C 집단 보다 평균 17% 더 높았다.

[ 제형예 1] 오미자 농축액을 포함하는 조성물

상기 제조예 1에 의해 제조된 오미자 농축액을 기능적으로 또한 제품적으로 완성도를 높이고, 최적화하기 위해 아래와 같이 조성물을 제조하였다.

품명	함량 (%)
오미자농축액	37.5
대두유	39.5
팜유	14.56
밀납	5.0

Claims

간세포 보호용 조성물로서,
상기 조성물은, 유효성분으로서 오미자 농축액을 포함하며,
상기 오미자 농축액은, 농축액 전체 중량을 기준으로
총 쉬잔드린(Schisandrin) 3.80mg/g 이상;
쉬잔드린 C 1.20mg/g 이상;
고미신 A 5.20mg/g 이상; 및
고미신 N 6.10mg/g 이상을 포함한 간세포 보호용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 오미자 농축액은, 농축액 전체 중량을 기준으로
쉬잔드린(Schisandrin) 4.00mg/g 이상;
쉬잔드린 C 1.40mg/g 이상;
고미신 A 5.40mg/g 이상; 및
고미신 N 6.30mg/g 이상을 포함한 간세포 보호용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 오미자 농축액은, 농축액 전체 중량을 기준으로
쉬잔드린(Schisandrin) 4.15mg/g 이상;
쉬잔드린 C 1.52mg/g 이상;
고미신 A 5.55mg/g 이상; 및
고미신 N 6.40mg/g 이상을 포함한 간세포 보호용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 오미자 농축액은 알코올에 의한 세포독성으로부터 간세포를 보호하는 것인 간세포 보호용 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 간세포 보호용 조성물을 제조하는 방법으로서,
상기 방법은,
오미자에 용매를 넣고 100 내지 140℃의 온도 및 1.0 내지 2.0kgf/cm² 압력 하에서 추출하는 추출 단계; 및
상기 추출물을 농축하는 농축 단계를 포함하는 간세포 보호용 조성물의 제조방법.
제5항에 있어서, 상기 추출 단계는,
110 내지 130℃의 온도 및 1.3 내지 1.7kgf/cm² 압력 하에서 추출하는 것인, 간세포 보호용 조성물의 제조방법.
제5항에 있어서, 상기 추출 단계는 6 내지 12시간 동안 수행하는 것을 포함하는, 간세포 보호용 조성물의 제조방법.
제5항에 있어서, 상기 농축 단계는 감압기로 0.5~50Brix로 농축하는 것을 포함하는 간세포 보호용 조성물의 제조방법.
제5항에 있어서, 상기 추출단계는,
65% 내지 85%의 에탄올로 1차 추출하는 1차 추출공정; 및
상기 1차 추출공정 후 남은 오미자에 물을 넣고 2차 추출하는 2차 추출공정을 포함하는, 간세포 보호용 조성물의 제조방법.
제9항에 있어서, 상기 추출단계는,
60 내지 80℃의 온도에서 65% 내지 85%의 에탄올로 1차 추출하는 1차 추출공정; 및
100 내지 140℃의 온도 및 1.0 내지 2.0kgf/cm² 압력 하에서 2차 추출하는 2차 추출공정을 포함하는, 간세포 보호용 조성물의 제조방법.
제10항에 있어서, 상기 방법은, 상기 1차 추출공정 및 2차 추출공정을 각각 2회 이상 반복하는, 간세포 보호용 조성물의 제조방법.