KR20160145406A - Pcr 반응용 조성물을 포함하는 병원성 미생물 핵산 추출용 키트 및 이를 이용한 핵산 추출 방법 - Google Patents

Pcr 반응용 조성물을 포함하는 병원성 미생물 핵산 추출용 키트 및 이를 이용한 핵산 추출 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20160145406A
KR20160145406A KR1020150082021A KR20150082021A KR20160145406A KR 20160145406 A KR20160145406 A KR 20160145406A KR 1020150082021 A KR1020150082021 A KR 1020150082021A KR 20150082021 A KR20150082021 A KR 20150082021A KR 20160145406 A KR20160145406 A KR 20160145406A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
nucleic acid
kit
pcr reaction
binding
reaction column
Prior art date
Application number
KR1020150082021A
Other languages
English (en)
Inventor
유문조
송강희
신은심
Original Assignee
(주)바이오필리아
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by (주)바이오필리아 filed Critical (주)바이오필리아
Priority to KR1020150082021A priority Critical patent/KR20160145406A/ko
Publication of KR20160145406A publication Critical patent/KR20160145406A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 PCR 반응용 조성물을 포함하는 병원성 미생물 핵산 추출용 키트 및 이를 이용한 핵산 추출 방법에 관한 것으로, 핵산과 특이적으로 결합하는 바인딩 물질을 사용함으로써 비전문가도 쉽게 핵산을 추출할 수 있음과 동시에 현장에서의 사용이 용이하고, 추출된 핵산을 PCR 반응용 조성물과 바로 혼합시킴으로써 오염을 최소화한, PCR 반응용 조성물을 포함하는 병원성 미생물 핵산 추출용 키트 및 이를 이용한 핵산 추출 방법에 관한 것이다. 본 발명의 핵산 추출용 키트는 비전문가도 사용할 수 있을 정도로 간편하기 때문에 추출 방법의 표준화가 가능하고, 추출 공정이 간단하고 추출된 핵산을 PCR 반응용 조성물과 바로 혼합시키기 때문에 오염 가능성이 적은바, 현장에서 병원성 미생물의 핵산을 빠르게 확보하여 분석 시간을 단축시킬 수 있다.

Description

PCR 반응용 조성물을 포함하는 병원성 미생물 핵산 추출용 키트 및 이를 이용한 핵산 추출 방법{PATHOGENIC MICROORGANISM NUCLEIC ACID EXTRACTING KIT HAVING PCR REAGENT AND NUCLEIC ACID EXTRACTING METHOD USING THE SAME}
본 발명은 PCR 반응용 조성물을 포함하는 병원성 미생물 핵산 추출용 키트 및 이를 이용한 핵산 추출 방법에 관한 것으로, 핵산과 특이적으로 결합하는 바인딩 물질을 사용함으로써 비전문가도 쉽게 핵산을 추출할 수 있음과 동시에 현장에서의 사용이 용이하고, 추출된 핵산을 PCR 반응용 조성물과 바로 혼합시킴으로써 오염을 최소화한, PCR 반응용 조성물을 포함하는 병원성 미생물 핵산 추출용 키트 및 이를 이용한 핵산 추출 방법에 관한 것이다
신종 인풀루엔자 A, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS) 등은 병원성 미생물의 변이로 인한 새로운 질병으로, 발발했을 당시 치료제가 없어 많은 사람들이 사망했었다. 이러한 변종 미생물로 인한 감염성 질환이 발견됐을 때에는 치료할 수 있는 백신을 개발할 때까지 감염된 객체들을 격리시키는 것이 중요한데, 증상만으로 감염 여부를 판단하는 것은 애매하기 때문에 정확한 판단을 위해서는 감염된 객체들의 검체 내에 변종 미생물의 핵산이 포함되어 있는지 여부를 분석해야 한다.
종래 기술로 핵산을 추출하기 위해서는 많은 시약들이 필요하고, 피펫 등 전문가만이 사용할 수 있는 장비가 필요하므로 전문 인력 및 실험실이 반드시 필요하다. 그러나 검체를 실험실로 이송하기까지 시간이 오래 걸리고, 이송하는 과정에서 오염, 변질될 가능성이 있기 때문에 급성 감염성 질환의 경우에는 그 실효성이 떨어진다.
따라서 현장에서 비전문가도 핵산 추출이 가능한 핵산 추출용 키트의 개발이 시급하다.
본 발명자는 핵산과 특이적으로 결합하는 바인딩 물질 및 PCR 반응용 조성물을 핵산 추출용 키트에 포함시킴으로써 상기 종래 기술의 문제점을 해결할 수 있는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 PCR 반응용 조성물을 포함하는 병원성 미생물 핵산 추출용 키트를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 키트를 이용한 핵산 추출 방법을 제공하는 것이다.
상기 본 발명의 목적을 달성하기 위해, 본 발명은
검체 내 세포를 용해시켜 세포 내부로부터 핵산을 방출시키는, 세포 용해(cell lysis) 조성물이 구비되어 있는 세포 용해부; 상기 세포 용해부에서 방출된 핵산과 특이적으로 결합할 수 있는 바인딩 물질이 구비되어 있는 핵산 결합부; 상기 바인딩 물질로부터 핵산을 분리하는, 분리 버퍼(elution buffer)가 구비되어 있는 핵산 분리부; PCR 반응용 조성물이 구비되어 있는, PCR 반응용 컬럼; 및 상기 핵산 분리부에서 분리된 핵산을 상기 PCR 반응용 컬럼으로 이송시키는 이송부를 포함하는 핵산 추출용 키트를 제공한다.
상기 이송부는 모세관일 수 있다.
상기 PCR 반응용 컬럼과 이송부는 결합한 형태일 수 있다.
상기 핵산 추출용 키트는 불순물을 제거하기 위한, 워싱 버퍼가 구비된 불순물 세척부를 추가로 포함할 수 있다.
상기 PCR 반응용 컬럼은 PCR 반응기의 웰에 대응하는 형상을 가질 수 있다.
상기 검체는 병원성 미생물에 감염된 것으로 의심되는 객체의 분변, 소변, 눈물, 타액, 피부의 외부 분비물, 호흡관의 외부 분비물, 장관의 외부 분비물, 소화관의 외부 분비물, 혈장, 혈청, 혈액, 척수액, 림프액, 체액 및 조직으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.
상기 핵산 추출용 키트는 상기 세포 용해부, 상기 핵산 결합부, 상기 핵산 분리부 및 상기 PCR 반응용 컬럼이 직렬로 연결된 일체형 형태일 수 있고, 이때 상기 4가지 구성부들은 서로 분리가 가능한 형태일 수 있다.
본 발명은 상기 핵산 추출용 키트를 제공하는 단계, 상기 키트의 세포 용해부에 검체를 도입하여 검체 내 세포를 용해(lysis)시키는 단계, 상기 용해 단계에서 획득된 물질을 상기 키트의 핵산 결합부에 도입하여 상기 핵산과 특이적으로 결합하는 바인딩 물질과 핵산을 결합시키는 단계, 상기 핵산과 결합된 바인딩 물질을 상기 키트의 핵산 분리부로 이동시킴으로써 상기 바인딩 물질로부터 핵산을 분리하는 단계, 및 상기 핵산 분리 단계에서 분리된 핵산을 상기 키트의 PCR 반응용 컬럼으로 이송시키는 단계를 포함하는 핵산 추출 방법을 포함하는 핵산 추출 방법을 제공한다.
본 발명의 핵산 추출용 키트는 비전문가도 사용할 수 있을 정도로 간편하기 때문에 추출 방법의 표준화가 가능하고, 추출 공정이 간단하고 추출된 핵산을 PCR 반응용 조성물과 바로 혼합시키기 때문에 오염 가능성이 적은바, 현장에서 병원성 미생물의 핵산을 빠르게 확보하여 분석 시간을 단축시킬 수 있다.
본 발명은 검체 내 세포를 용해시켜 세포 내부로부터 핵산을 방출시키는, 세포 용해(cell lysis) 조성물이 구비되어 있는 세포 용해부; 상기 세포 용해부에서 방출된 핵산과 특이적으로 결합할 수 있는 바인딩 물질이 구비되어 있는 핵산 결합부; 상기 바인딩 물질로부터 핵산을 분리하는, 분리 버퍼(elution buffer)가 구비되어 있는 핵산 분리부; PCR 반응용 조성물이 구비되어 있는, PCR 반응용 컬럼; 및 상기 핵산 분리부에서 분리된 핵산을 상기 PCR 반응용 컬럼으로 이송시키는 이송부를 포함하는 핵산 추출용 키트를 제공한다.
상기 핵산과 특이적으로 결합할 수 있는 바인딩 물질은 이에 한정되지는 않지만, 실리카, 유리, 소결 유리, 제어 공극 유리, 소결 유리, 알루미나, 지르코니아, 티타니아, 불용성 합성 중합체, 불용성 다당류, 금속 및 자성을 띠는 금속으로 이루어진 군에서 하나 이상 선택될 수 있다.
상기 바인딩 물질이 자성을 띠는 물질일 경우, 자성체를 이용하여 바인딩 물질을 이동시킬 수 있다.
상기 세포 용해 조성물, 분리 버퍼는 고형물의 형태일 수 있다.
상기 세포 용해 조성물은 핵산 결합부 내에 존재할 수 있다.
상기 PCR 반응용 조성물은 동결건조된 고형물일 수 있고, 실시간(Real- time) PCR 반응용 조성물일 수 있다.
상기 이송부는 모세관일 수 있다.
상기 PCR 반응용 컬럼과 이송부는 결합한 형태일 수 있다.
상기 핵산 추출용 키트는 불순물을 제거하기 위한, 워싱 버퍼가 구비된 불순물 세척부를 추가로 포함할 수 있다.
상기 PCR 반응용 컬럼은 PCR 증폭기의 웰에 대응하는 형상을 가질 수 있다.
상기 핵산 추출용 키트는 상기 세포 용해부, 상기 핵산 결합부, 상기 핵산 분리부 및 상기 PCR 반응용 컬럼이 직렬로 연결된 일체형 형태일 수 있고, 이때 상기 4 가지 구성부들은 서로 분리가 가능한 형태일 수 있다.
상기 검체는 병원성 미생물에 감염된 것으로 의심되는 객체의 분변, 소변, 눈물, 타액, 피부의 외부 분비물, 호흡관의 외부 분비물, 장관의 외부 분비물, 소화관의 외부 분비물, 혈장, 혈청, 혈액, 척수액, 림프액, 체액 및 조직으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.
상기 병원성 미생물은 인플루엔자 A, 인플루엔자 B, 조류 인플루엔자, 결핵균, 성병관련 병원균일 수 있다.
본 발명은 상기 핵산 추출용 키트를 제공하는 단계, 상기 키트의 세포 용해부에 검체를 도입하여 검체 내 세포를 용해(lysis)시키는 단계, 상기 용해 단계에서 획득된 물질을 상기 키트의 핵산 결합부에 도입하여 상기 바인딩 물질과 핵산을 결합시키는 단계, 상기 핵산과 결합된 바인딩 물질을 상기 키트의 핵산 분리부로 이동시킴으로써 상기 바인딩 물질로부터 핵산을 분리하는 단계, 및 상기 핵산 분리 단계에서 분리된 핵산을 상기 키트의 PCR 반응용 컬럼으로 이송시키는 단계를 포함하는 핵산 추출 방법을 포함하는 핵산 추출 방법을 제공한다.

Claims (9)

  1. 검체 내 세포를 용해시켜 세포 내부로부터 핵산을 방출시키는, 세포 용해(cell lysis) 조성물이 구비되어 있는 세포 용해부;
    상기 세포 용해부에서 방출된 핵산과 특이적으로 결합할 수 있는 바인딩 물질이 구비되어 있는 핵산 결합부;
    상기 바인딩 물질로부터 핵산을 분리하는, 분리 버퍼(elution buffer)가 구비되어 있는 핵산 분리부;
    PCR 반응용 조성물이 구비되어 있는, PCR 반응용 컬럼; 및
    상기 핵산 분리부에서 분리된 핵산을 상기 PCR 반응용 컬럼으로 이송시키는 이송부를 포함하는 핵산 추출용 키트.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 이송부가 모세관(capillary tube)인 것을 특징으로 하는 핵산 추출용 키트.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 PCR 반응용 컬럼과 이송부가 결합한 것을 특징으로 하는 핵산 추출용 키트.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 핵산 추출용 키트는 불순물을 제거하기 위한, 워싱 버퍼가 구비된 불순물 세척부를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 핵산 추출용 키트.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 PCR 반응용 컬럼은 PCR 반응기의 웰에 대응하는 형상을 갖는 것을 특징으로 하는 핵산 추출용 키트.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 검체는 병원성 미생물에 감염된 것으로 의심되는 객체의 분변, 소변, 눈물, 타액, 피부의 외부 분비물, 호흡관의 외부 분비물, 장관의 외부 분비물, 소화관의 외부 분비물, 혈장, 혈청, 혈액, 척수액, 림프액, 체액 및 조직으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는 핵산 추출용 키트.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 핵산 추출용 키트는 상기 세포 용해부, 상기 핵산 결합부, 상기 핵산 분리부 및 상기 PCR 반응용 컬럼이 직렬로 연결된 일체형 형태인 것을 특징으로 하는 핵산 추출용 키트.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 직렬로 연결된 상기 세포 용해부, 상기 핵산 결합부, 상기 핵산 분리부 및 상기 PCR 반응용 컬럼은 서로 분리가 가능한 형태인 것을 특징으로 하는 핵산 추출용 키트.
  9. 제1항의 핵산 추출용 키트를 제공하는 단계;
    상기 키트의 세포 용해부에 검체를 도입하여 검체 내 세포를 용해(lysis)시키는 단계;
    상기 용해 단계에서 획득된 물질을 상기 키트의 핵산 결합부에 도입하여 상기 핵산과 특이적으로 결합하는 바인딩 물질과 핵산을 결합시키는 단계;
    상기 핵산과 결합된 바인딩 물질을 상기 키트의 핵산 분리부로 이동시킴으로써 상기 바인딩 물질로부터 핵산을 분리하는 단계; 및
    상기 핵산 분리 단계에서 분리된 핵산을 상기 키트의 PCR 반응용 컬럼으로 이송시키는 단계를 포함하는 핵산 추출 방법.
KR1020150082021A 2015-06-10 2015-06-10 Pcr 반응용 조성물을 포함하는 병원성 미생물 핵산 추출용 키트 및 이를 이용한 핵산 추출 방법 KR20160145406A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020150082021A KR20160145406A (ko) 2015-06-10 2015-06-10 Pcr 반응용 조성물을 포함하는 병원성 미생물 핵산 추출용 키트 및 이를 이용한 핵산 추출 방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020150082021A KR20160145406A (ko) 2015-06-10 2015-06-10 Pcr 반응용 조성물을 포함하는 병원성 미생물 핵산 추출용 키트 및 이를 이용한 핵산 추출 방법

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20160145406A true KR20160145406A (ko) 2016-12-20

Family

ID=57734417

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020150082021A KR20160145406A (ko) 2015-06-10 2015-06-10 Pcr 반응용 조성물을 포함하는 병원성 미생물 핵산 추출용 키트 및 이를 이용한 핵산 추출 방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20160145406A (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220148582A (ko) 2021-04-29 2022-11-07 주식회사 한국과학 Pcr 진단용 시료 채취 진단 방법 및 이를 실행하기 위한 pcr 진단용 시료 채취 도구

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220148582A (ko) 2021-04-29 2022-11-07 주식회사 한국과학 Pcr 진단용 시료 채취 진단 방법 및 이를 실행하기 위한 pcr 진단용 시료 채취 도구

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6392857B2 (ja) 核酸サンプルを回収するためのシステム及び方法
AU2016271428B2 (en) A component of a device, a device, and a method for purifying and testing biomolecules from biological samples
EP3636769B1 (en) Sample nucleic acid measurement test kit, reagent, and application thereof
CN108624586B (zh) 一种核酸提取试剂盒及其应用方法
US20170369930A1 (en) Method for identifying pathogens of bacterial infectious diseases by using bacteria-derived nanovesicles
JP6735276B2 (ja) 核酸サンプルを収集するためのシステム及び方法
US20080213870A1 (en) Methods for obtaining modified DNA from a biological specimen
US8481261B2 (en) Nucleic acid extraction method
CN102839169B (zh) 肠道病毒rna提取试剂盒及相应提取纯化肠道病毒rna的方法
CN111484991A (zh) 用于病毒核酸高通量全自动化提取的试剂盒及提取方法
CN109371010A (zh) 一种磁珠法血浆游离dna提取试剂盒及提取方法
CN103952397A (zh) 一种使用磁珠从血清或血浆样品中分离游离核酸的方法
CN104962553A (zh) 微量核酸释放剂提取病毒dna的使用方法
JP2006311803A (ja) 核酸精製方法、及び核酸精製器具
JP2016501011A (ja) 非溶出試料の一段階核酸増幅法
CN201648403U (zh) 一种无仪器核酸提取装置
KR20190033263A (ko) 세포외소포체 용해 버퍼 및 이를 이용한 핵산 추출 방법
CN113637668A (zh) 一种同时提取血浆和血细胞病原菌dna的试剂盒及应用
KR20160145406A (ko) Pcr 반응용 조성물을 포함하는 병원성 미생물 핵산 추출용 키트 및 이를 이용한 핵산 추출 방법
ES2665280T3 (es) Métodos para la extracción y purificación de componentes de muestras biológicas
CN109207472B (zh) Dna病毒核酸提取试剂盒及其使用方法
WO2022106423A1 (en) Apparatus
CN109439655B (zh) 适用于超微量细胞核酸提取的试剂盒及方法
CN102808038A (zh) 一种猪细小病毒lamp快速检测引物、检测试剂盒及其检测方法
CN109957563A (zh) 磁珠法ffpe组织中dna提取方法