KR20160130992A

KR20160130992A - 항암제를 벡터화하기 위한 조성물

Info

Publication number: KR20160130992A
Application number: KR1020167021534A
Authority: KR
Inventors: 캐롤라인 로빅; 장-프랑수아 마이어
Original assignee: 게르브
Priority date: 2014-02-07
Filing date: 2015-02-06
Publication date: 2016-11-15
Also published as: FR3017295B1; MX2016010217A; ZA201605463B; CA2938861A1; HK1225983A1; EP3102214B1; US20160346202A1; RU2016132461A3; CN106255503A; ES2917883T3; RU2016132461A; FR3017295A1; CN106255503B; WO2015118113A1; AU2015214230A1; SG11201606513UA; KR102396686B1; EP3102214A1; JP2017505326A

Abstract

본 발명은 20% 내지 40%(v/v)의, 항암제를 함유하는, 액적 형태의 수상(aqueous phase); 및 60% 내지 80%(v/v)의, 요오드유 및, 조성물의 전체 용적에 대한 계면활성제의 질량의, 0.3% 내지 5%의 비율의, 적어도 하나의 화학식 (I)을 가지는 계면활성제를 함유하는 지질상(lipid phase)을 함유하는 안정한 유중수 에멀젼에 관한 것이고, 상기 계면활성제에 대한 화학식 (I)은 하기이다:
[화학식 I]

식 중, s는 0 또는 1의 값을 가지고; m은 2 내지 30의 정수이고; R₁은 화학식 (II)의 기이고
[화학식 II]

(식 중, n은 4 내지 10의 정수이고, o는 1 내지 4의 정수이고, p는 3 내지 7의 정수이고, q는 2 내지 10의 정수이고, r은 0 또는 1의 값을 가짐);
R₂는 수소 원자이거나, R₁과 동일하고; R₃은 각각 개별적으로 수소 원자이거나, R₁과 동일하다.
본 발명은 또한 상기 조성물로부터 얻은 에멀젼, 이의 제조 방법, 및 암 및 이것의 전이의 치료를 위한 이의 용도에 관한 것이다.

Description

항암제를 벡터화하기 위한 조성물{COMPOSITION FOR VECTORIZING AN ANTI-CANCER AGENT}

본 발명은 요오드유(iodized oil) 및 계면활성제를 포함하는 항암제를 벡터화하기 위한 조성물, 즉 항암제, 요오드유 및 이 계면활성제를 포함하는 유중수 에멀젼(water-in-oil emulsion) 형태의 조성물을 제조하기 위한 용도의 조성물에 관한 것이다.

100년이 넘도록, 요오드유, 예컨대 리피오돌(Lipiodol)^® 제품은 방사성 검사, 예컨대 림프조영술에서 또는 간 병변의 진단을 위해 조영제(contrast product)로서 사용되어 있다. 리피오돌^®은 양귀비유의 요오드화 지방산의 에틸 에스테르로 주로 이루어진다.

30년이 넘도록, 이 요오드유는 중재적 방사선학 시술에 사용되어 왔다. 리피오돌^®은 간 종양에 의해 선택적으로 흡수되는 이의 경향을 특징으로 한다. 이것은 따라서 경동맥 화학색전술(TransArterial ChemoEmbolization: TACE)이라 불리는 기법에서 간세포 암종의 치료를 위한 항암제 벡터로서 제시되었다(Nakamura et al.: Radiology, 1989; 170:783-6 및 J.M. Idee - B. Guiu: Critical Reviews in Oncology/Hematology, 2013; 88(3):530-49). 요오드유, 특히 리피오돌^®은 동맥 순환의 일시적 색전술을 유도하여서, 이의 서행을 발생시키는 것으로 또한 공지되어 있다. 대부분의 항암제가 수용성임을 고려하면, 서로에 가용성이 아닌 2개의 상을 혼합하기에 적합한 "에멀젼" 형태는 요오드유 및 항암제를 혼합하기에 가장 합당한 것으로 보인다. 이것은 동맥내로 또는 전신으로 유화되지 않은 채 투여될 때 너무 독성이고 충분히 효과적이지 않은 항암제를 종양에 수송하고 전달하기에 가장 적합한 것으로 보인다.

"유중수(water-in-oil)" 에멀젼, 일명 "역전(inverse)" 에멀젼은 W/O(유중수)라 칭하는 에멀젼이다. 이것은 지질상 중의 수상의 액적의 분산액이다. "수중유(oil-in-water)" 에멀젼은 O/W(수중유)라 칭하는 "직접" 에멀젼이다. W/O 에멀젼과 달리, 이것은 수상 중의 지질상의 액적의 분산액이다. 용어 "에멀젼의 센스(sense)"는 에멀젼의 W/O 또는 O/W 성질을 언급할 때 사용된다.

수성 연속 상 중의 항암제를 포함하는, 수중유(O/W) 에멀젼은 혈액 중에 항암제를 신속히 방출하는 상당한 단점을 가진다. 치료제의 상당 부분이 따라서 표적화된 부위에 도달하지 않고, 이것은 한편으로 전신 독성을 유도할 수 있고, 다른 한편으로 이 치료제의 효율을 감소시킬 수 있다. 더욱이, 이 유형의 O/W 에멀젼은 폐 또는 심지어 뇌 색전증을 발생시킬 위험을 가진다. 이 위험은 이 에멀젼의 오일의 액적의 크기가 10 ㎛ 미만일 때 증가한다. 액적의 크기를 증가시킬 때, 이 에멀젼의 불안정성이 증가하므로, 이 두번째 단점은 피하기 어렵다.

또한 "역전 에멀젼"이라 불리고, 요오드유 및 항암제를 포함하는, 유중수(W/O) 에멀젼은 O/W 에멀젼보다 문헌에 덜 흔히 언급되어 있다. 이것은 종양에서 치료제를 더 천천히 방출하고, 수중유 에멀젼보다 더 높은 점도를 가지는 것으로 기재되어 있다(De Baere et al., Radiology 1995; 194:165-170). 이러한 이유는 종양 내에 항암제를 벡터화하기 위한 W/O 에멀젼 형태의 선택으로 이어진다. 그러나, 이 W/O 에멀젼은 혈액과의 접촉 시 이의 안정성의 결여 및 종양의 상류에서의 혈관 분기로 인해 항상 충분히 효과적인 것은 아니다. 실제로, 항암제의 종양 표적화를 증가시키고, 동시에 치료 효율 및 치료의 관용성을 개선하기 위해, 에멀젼은 이것이 종양에 도달하는 순간까지 안정하게 머물러야 하고, 종양 병변에서의 이의 분포는 완전하고 균일해야 한다.

에멀젼을 안정화하기 위한 다양한 제안이 따라서 선행 기술에서 제안되었다. 다수의 저자가 O/W 에멀젼을 안정화시키기 위해 높은 HLB(8 초과)를 가지는 계면활성제의 사용을 제안하였다.

높은 또는 심지어 매우 높은 HLB를 가지는 계면활성제, 예컨대 소르비탄의 폴리옥시에틸렌화 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌화 소르비탄 모노스테아레이트 또는 폴리소르베이트 60(몬타녹스(Montanox)^® 60, HLB = 14.9) 및 폴리옥시에틸렌화 소르비탄 모노라우레이트 또는 폴리소르베이트 20(몬타녹스 20^®, HLB = 16.7)의 사용은, 6개월 동안 안정한, 이다루비신 및 리피오돌^®에 기초한 수중유 에멀젼을 제조하는 것에 기재되어 있다.

JPH0647559는 10% 내지 30%의 리피오돌^®, 항암제 및 0.1% 내지 2%의, 다르게는 폴리옥시에틸렌 수소화 캐스터유(HLB = 14)로 공지된, HCO-60인, 친수성 계면활성제를 포함하는 O/W 에멀젼을 기술한다. 이것은, 선험적으로(a priori), 리시놀레산에 접합된 PEG-60이다.

EP 0 294 534는 아미노산(페닐알라닌, 알라닌, 류신, 이소류신, 글리신, 세린 또는 타우린), 지방산, 예컨대 펠라르곤산, 올레산(HLB = 17) 또는 리놀레산(HLB = 16) 또는 지용성 비타민, 예컨대 비타민 E와 같은 유기 화합물을 사용하여 유화된 요오드유로부터 제조된 에멀젼 형태의 조영제를 기술한다.

EP 0 581 842는, 요오드화되고 인지질 및 사이클로펜타페난트렌 유도체, 예컨대 스테롤의 혼합물을 사용하여 유화된 양귀비씨 오일로부터 유도된, 지방산의 에스테르를 포함하는 수중유 에멀젼을 기술한다.

출원 EP 0 294 534 및 EP 0 581 842는 다른 문헌을 언급한다. DE 26 02 907이 50% 내지 60%의 요오드화 트리글리세라이드, 2% 내지 10%의 폴리옥시에틸렌 소르비탄의 지방산 에스테르(HLB = 13 내지 17) 및 2% 내지 40%의 물을 함유하는 수중유 에멀젼을 기술한다는 것이 특히 발견되었다. 그라임스(Grimes) 등(J. Pharm. Sci. 1979 Jan;68(1):52-6)은 요오드유를 포함하는 에멀젼을 얻기 위한 폴리소르베이트 80(HLB = 15), 소르비탄 모노올레이트(HLB = 8.6) 및 포스파티딜콜린의 용도를 기술한다. 베르메스(Vermess) 등은 53%(v/v)의 리피오돌^®, 10%의 알콜 및 0.45%의 소야 레시틴을 함유하는 에멀젼(US 4 404 182 또는 J. Comput. Assist. Tomogr. 3: 25-31, 1979)을 기술한다. 이 수중유 에멀젼은 2 내지 3 ㎛의 입자 크기를 가진다. 슈마허(Schumacher) 등(Europ. J. Radiol. 5, 167-174, 1985)은 유화제, 예컨대 폴리옥시에틸렌-4-소르비탄 모노라우레이트(트윈(Tween)^® 80, 세르바(Serva): HLB = 15.3), 글리세롤 폴리에틸렌 글리콜 리시놀리에이트(크레모포어(Cremophor)^® EL: HLB = 14.5), 디아세틸포스페이트 DP(시그마(Sigma)), 난(egg)으로부터의 레시틴(Fluka GmbH), 독시폴리젤라틴(게린푼돌(Gelinfundol)^® 5.5%, Biotest GmbH) 및 덱스트란 60(마크로덱스(Macrodex)^®4.5%, RL Knoll)을 사용하여 제조된 요오드유를 함유하는 다양한 에멀젼을 기술한다. GB 676 738은 요오드유 및 합성 비이온성 유화제, 예컨대 폴리하이드록시 알콜의 지방산 모노에스테르(소르비톨 및 라우르산, 팔미트산, 스테아르산 또는 올레산의 모노에스테르, 글리세롤 및 지방산의 모노에스테르, 예컨대 글리세릴 모노스테아레이트 및 글리세릴 모노올레이트, 글리콜의 모노에스테르, 예컨대 지방산, 예컨대 팔미트산, 스테아르산 또는 라우르산을 가지는 에틸렌 글리콜, 테트라에틸렌 글리콜 또는 도데카에틸렌 글리콜)를 함유하는 에멀젼을 기술하고, 이 에스테르가 폴리알킬렌 옥사이드와 반응하여 폴리옥시알킬렌 유도체를 형성할 수 있다. US 3 356 575는 요오드유, 글리세롤 및 레시틴을 함유하는 에멀젼을 기술한다. US 4 917 880은 10%의 요오드유 및, 수상에서, 1.2%의 정제된 난 인지질과 함께 2.25%의 글리세롤 및 0.1%의 페닐알라닌을 포함하는 에멀젼을 기술한다.

아미오다론(화학식 (2-부틸-3-벤조푸라닐)[4-[2-(디에틸아미노)에톡시]-3,5-디요오도페닐]메타논의 항부정맥 약제)의 사용은 37℃에서 4주까지 리피오돌^®(44%(v/v)) 및 독소루비신 또는 피라루비신의 수중유 에멀젼을 안정화시키는 것이 가능하게 한다. 이 특성은, 이 약제 중의, 부형제인, 폴리소르베이트 80(높은 HLB를 가지는 유화제임)의 존재로 인한 것이다(Boulin et al., Digestive and Liver Disease 43 (2011) 905 - 911). 동일한 팀에 의해 추가의 연구가 이루어져서, 아미오다론이 실제로 리피오돌^® 및 이다루비신에 기초한 에멀젼의 안정성의 개선을 제공하지 않고, 항암제에서 세포독성을 증가시키는 것으로 보이지 않는다는 것을 나타낼 수 있었다. 이다루비신 및 리피오돌^®의 단독 사용이 따라서 더욱 추천된다.

나카무라(Nakamura) 등(Radiology, 1989; 170:783-6)은 이온성 조영제, 메글루민 나트륨 디아트리조에이트(하이파큐(Hypaque)^®, 가스트로그라핀(Gastrografin)^® 또는 유로그라핀(Urografin)^®)을 포함하는 1 ㎖의 증류수 및 3 ㎖의 리피오돌^®을 혼합함으로써 얻은 다양한 에멀젼의 시각적 외관을 나타낸다(도 1). 에멀젼 C가 24시간 후 상 분리를 겪지 않는 것으로 나타나지만, 이 도면에서 이 에멀젼이 사실 안정하지 않다는 것을 쉽게 알아차릴 수 있고, 이것을 함유하는 관의 하부 부분은 이의 상부 부분보다 깨끗하다. 이 문헌은 또한 2-3/1의 비율의 리피오돌^® 및 독소루비신 또는 미토마이신의 에멀젼의 조제를 기술한다. 얻은 에멀젼이 W/O 에멀젼이라는 것이 표시된다. 이 에멀젼의 사용의 경우에 항암제의 방출의 최저 양이 강조된다(도 2). 이 에멀젼의 주사 후 가시화된 혈장 피크가 그러나 상당히 남아 있다. 계면활성제의 사용이 없으므로, 이 에멀젼이 충분히 안정할 리가 없다. 실제로, 이의 에멀젼의 동맥내 주사 2분 후, 이 항암제 단독의 주사 후 측정된 혈장 농도와 비교하여, 83% 낮은(((3500 - 600)/3500) x 100) 독소루비신의 혈장 농도가 관찰된다. 5분 후, 이 감소는 80%이다.

라울(Raoul) 등(Cancer, 1992, vol. 70, No. 3, 585-90)은 10 ㎖의 리피오돌^® 및 2.5 ㎖의 이옥사글레이트(Hexabrix^®)를 혼합함으로써 제조된, 50 ㎎의 독소루비신을 포함하는 에멀젼을 기술한다. 얻은 에멀젼(이의 W/O 또는 O/W 센스가 기재되지 않음)은 독소루비신 단독의 동맥내 주사에 의해 생기는 것보다 상당히 낮은 혈장 피크를 발생시킨다. 그러나, 이 혈장 피크는 혈액으로의 항암제의 상당한 통과를 나타낸다. 실제로, 이 에멀젼의 동맥내 주사 2분 후, 이 항암제 단독의 주사 후 측정된 혈장 농도와 비교하여, 59% 낮은(((2200 - 900)/2200) x 100) 독소루비신의 혈장 농도가 관찰된다. 이 감소가 이후 불과 33%(((1050 - 700)/1050) x 100)이므로, 주사 후 5분에 상응하는 계산이 훨씬 더 불리하다. 색전술이 이 에멀젼의 주사 후 수행될 때, 이 감소는 각각 2분 및 5분에 82%(((2200 - 400)/2200) x 100) 및 43%(((700 - 400)/700) x 100)이다.

이 다양한 에멀젼은, "수중유" 형태에 있을 때, 높은 HLB를 가지는 계면활성제를 사용하여 안정화되더라도, 불충분한 항암제 벡터화 능력을 가지고, 이의 사용은 여전히 상당한 색전증의 위험을 나타낸다. 수중유 에멀젼의 경우에, 보통 수용성인 항암제가 수성 연속 상에 있고, 따라서 혈류 중에 매우 신속히 희석되므로, 이 불충분한 벡터화 능력은 바로 에멀젼의 성질에 의해 설명된다. 또한, 이 에멀젼 중 몇몇은 유럽 약전에 수록된 유화제이고, 부작용을 발생시키는, 합성 유화제, 예컨대 트윈^®(높은 HLB) 또는 스판(Span)^®(더 낮거나 더 높은 HLB)을 함유한다. 폴리소르베이트, 예컨대 트윈^®은 잠재적으로 독성인 것으로 기재되어 있다. 소르비탄 에스테르, 예컨대 스판^®은 비경구 주사에 의한 사용에 추천되지 않는다(Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2009).

흔히, "유중수" 에멀젼이라 간행물에 기재된 에멀젼은 이의 성질의 에멀젼이 아니다. 이것이 실제로 W/O 형태로 있을 때, 이 에멀젼은 불충분한 안정성 및 불충분한 항암제 벡터화 능력을 가진다. 동맥내로 주사된 항암제의 양의 상당 부분이 표적화된 병변에 도달하지 않으므로, 이것은 따라서 주사 후 불충분한 효율을 가진다(Raoul et al., 1992).

출원인은, 20℃에서 적어도 24시간 동안 안정하고 선행 기술 에멀젼과 비교하여 일반적으로 개선된 벡터화 능력을 가지는, 항암제를 포함하는 유중수 에멀젼을 제조하는 것이 가능하게 하는 조성물을 개발하였다.

이 에멀젼은 따라서 2개의 주요 이점을 가진다: 이의 안정성이 병원 약국에서 적어도 24시간 전에 조제되게 허용하고, 환자에게 매우 제한된 위험을 제시하면서, 동시에 개선된 치료 효율을 가지므로, 이것이 병원 환경에서 용이하게 사용될 수 있다.

이 에멀젼은, 영상화 방법에 의해 추정될 수 있는, 종양에 존재하는 요오드유(예를 들어, 리피오돌^®)의 양을 종양에 실제로 존재하는 항암제의 양과 상관시킬 수 있게 하는 이점을 또한 가진다. 대부분의 선행 기술 에멀젼의 경우, 종양에 존재하는 것으로 예상된 요오드유의 양은 결코 이 종양에 존재하는 항암제의 양의 표시가 아니다. 본 발명에 따른 에멀젼은 따라서 종양의 심장에 항암제가 효과적으로 투여된다는 것을 확인하기를 추구할 때 긍정 오류를 감소시킬 수 있다.

따라서, 본 발명의 대상은

- 20% 내지 40%(v/v)의, 항암제를 포함하는 액적(droplet) 형태의, 수상(aqueous phase), 바람직하게는 20% 내지 35%(v/v), 더 바람직하게는 25%(v/v)의 수상,

- 60% 내지 80%, 바람직하게는 65% 내지 80%(v/v), 더 바람직하게는 75%(v/v)의, 요오드유 및, 조성물의 전체 용적(total volume)에 대해 계면활성제의 중량(weight) 기준으로, 0.3% 내지 5%, 바람직하게는 0.5% 내지 2%, 더 바람직하게는 1%의 비율의, 적어도 하나의 화학식 (I)의 계면활성제를 포함하는 지질상을 포함하는, 유중수 에멀젼 형태의 조성물로서, 상기 계면활성제의 화학식 (I)은 하기인, 조성물에 관한 것이다:

[화학식 I]

식 중,

- s는 0 또는 1이고,

- m은 2 내지 30의 정수를 나타내고,

- R₁은 하기 화학식 (II)의 기(group of formula (II))를 나타내고,

[화학식 II]

식 중, n은 4 내지 10의 정수를 나타내고, o는 1 내지 4의 정수를 나타내고, p는 3 내지 7의 정수를 나타내고, q는 2 내지 10의 정수를 나타내고, r은 0 또는 1이고,

- R₂는 수소 원자를 나타내거나, R₁과 동일하고,

- R₃은 각각 독립적으로 수소 원자를 나타내거나, R₁과 동일하다.

바람직하게는, 상기 화학식 (I)에서, R₃은 각각 수소 원자를 나타낸다. 상기 계면활성제의 화학식 (I)은 이후 하기 화학식 (I')를 가진다:

[화학식 I']

계면활성제의 비율은 에멀젼 형태의 조성물의 전체 용적에 대해 계면활성제의 중량 기준으로 표시된다. 수성 또는 지질상의 비율은 에멀젼 형태의 조성물의 전체 용적에 대해 상의 용적으로서 표시된다.

이 조성물은 항암제를 벡터화하기 위한 것이다. 본 발명은 또한 항암제 벡터(anti-cancer agent vector)로서의 이 조성물의 용도에 관한 것이다.

이 조성물은 유중수 에멀젼(또한 "역전 에멀젼" 또는 W/O 에멀젼으로 공지됨)의 형태이다. 이러한 에멀젼은 액적의 형태로 분산된 지질상 및 수상으로 이루어진다. 조성물의 요오드유는 지질상에 있다. 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제는 수성과 지질상 사이의 계면에 있다. 본원의 목적을 위해, 수성 및 지질상의 비율의 계산을 위해, 계면활성제가 지질상에 있는 것으로 고려될 것이다.

특히, 하기 실시형태가 유리하다:

본 발명에 따른 에멀젼은 유리하게는 안정하다. 용어 "안정한 에멀젼"은 종래의 온도(20℃) 및 대기압(1 bar) 조건 하에 및 이의 조제 후 24시간 내에, 에멀젼 형태의 전체 조성물에 대해 5 용적%(5% by volume) 미만의 가시적 상 분리를 가지는 에멀젼을 의미하도록 의도된다. 바람직하게는, "안정한 에멀젼"은 상기 언급된 조건 하에 및 이의 조제 후 24시간 내에 가시적 상 분리를 나타내지 않는 에멀젼을 의미하도록 의도된다. 가시적 상 분리는 용액이 더 이상 눈에 균일하게 보이지 않을 때, 즉 적어도 2개의 상의 외관이 관찰될 때 그 자체를 입증한다.

더 바람직하게는, 용어 "안정한 에멀젼"은 평균 액적 크기가 10% 미만, 특히 5% 미만으로 변하는, 바람직하게는 평균 액적 크기가 변하지 않는 에멀젼을 의미하도록 의도되고, 평균 크기는 이의 조제 24시간 후에 광학 현미경(예를 들어, Leica DM2000 LED 현미경)에 의해 측정된다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 에멀젼의 동맥내 주사는 이 주사 0분 내지 5분 후에 항암제 단독의 동맥내 주사에 비해 90% 초과, 바람직하게는 94% 초과, 더 바람직하게는 97% 초과, 훨씬 더 바람직하게는 99% 초과의 항암제의 혈장 농도의 감소를 유도한다. 유리하게는, 이 혈장 농도 및 이 감소는 당해 분야의 당업자에게 공지된 프로토콜에 따른 혈장 동역학 측정에 의해 확인된다.

항암제를 포함하는 특정한 생성물의 주사 후 항암제의 혈장 농도 피크와 항암제 단독의 주사 후 얻은 것과의 차이의 표현은 특히 홍(Hong) 등의 문헌(Clin. Cancer Res. 2006: 12(8))에 언급되어 있다.

에멀젼이 20%(v/v) 미만의 수상을 포함할 때, 항암제는 이것 내에 용해되기 어렵다. 에멀젼이 40% 초과의 수상을 포함할 때, 에멀젼 형태의 조성물의 점도는 너무 높다. 이것은 요오드유를 포함하는 지질 연속 상 중의 수상의 액적의 농도를 증가시킬 때 전체 조성물의 점도가 증가하기 때문이다.

수상은 항암제를 치료학적 유효량으로 포함한다. 용어 "치료학적 유효량"은 암을 치료하거나 이의 진행을 느리게 할 수 있는 용량을 의미하도록 의도된다. 바람직하게는, 항암제가 안트라사이클린으로부터 선택될 때, 치료학적 유효량은 20 내지 150 ㎎, 더 바람직하게는 50 내지 100 ㎎의 항암제의 양을 나타낸다.

지질상의 밀도는 바람직하게는 1.10 내지 1.30, 더 바람직하게는 1.20 내지 1.30, 훨씬 더 바람직하게는 1.28이다. 바람직하게는, 수상 및 지질상은 동일한 밀도(즉, 이들은 동일한 밀도를 가짐) 또는 서로 5% 이하 다른 밀도를 가진다.

수상의 밀도를 증가시키기 위해, 농후화제(densifying agent)가 여기에 첨가될 수 있다(항암제를 포함하는 이 상의 농후화가 이후 수행됨). 반대로, 요오드유를 포함하는 지질상의 밀도를 감소시키기 위해, 1 미만의 밀도를 가지는 제2 오일이 첨가될 수 있다(요오드유를 포함하는 지질상의 "탈농후화(dedensification)"가 이후 수행됨).

유리한 일 실시형태에서, 수상은 따라서 농후화제, 바람직하게는 적어도 하나의 비이온성 요오드화 조영제를 또한 포함할 수 있다. 농후화제로서 사용될 수 있는 비이온성 요오드화 제품은 바람직하게는 이오비트리돌(제네틱스(Xenetix)^®), 이오파미돌(이오파미론(Iopamiron)^®, 이소뷰(Isovue)^®), 이오메프롤(이오메론(Iomeron)^®), 이오베르솔(ioversol)(옵티레이(Optiray)^®, 옵티젝트(Optiject)^®), 이오헥솔(옴니파큐(Omnipaque)^®), 이오펜톨(이마고파큐(Imagopaque)^®), 이옥시톨(옥실란(Oxilan)^®), 이오프로마이드(울트라비스트(Ultravist)^®), 메트리자미드(아미파큐(Amipaque)^®), 이오사르콜(멜리트라스트(Melitrast)^®), 이오트롤란(이소비스트(Isovist)^®), 이오딕사놀(비시파큐(Visipaque)^®), 이오시메놀 및 이오시미드(유니비스트(Univist)^®) 및 이들의 혼합물로부터 선택된다. 이오비트리돌은 바람직한 비이온성 요오드화 제품이다. 제네틱스^®250 및 제네틱스^® 300 제품은 각각 1.28 및 1.34의 밀도를 가진다. 이 비이온성 요오드화 조영제는 수상 중에 항암제의 우수한 용해도를 허용하고 에멀젼을 탈안정화시키지 않는다는 것의 이점을 가진다.

이온성 요오드화 조영제, 예컨대 이옥사글린산(헥사브릭스(Hexabrix)^®) 또는 메글루미나 및/또는 나트륨 디아트리조에이트(하이파큐^®, 가스트로그라핀^®, 가스트로뷰(Gastroview)^® 또는 유로그라핀^®)의 사용이 표시되지 않는데, 왜냐하면 이 조영제들이 수상 중에 항암제의 용해도를 감소시키거나, 심지어 이의 용해를 방지하고/하거나, 조성물의 삼투질 농도를 증가시키는 단점을 가지기 때문이다.

(수상이 농후화제를 포함하는 상기 실시형태와 조합되거나 조합되지 않을 수 있는) 또 다른 유리한 실시형태에서, 지질상은 1 미만의 밀도를 가지는 적어도 하나의 비요요드유, 바람직하게는 0.96 미만의 밀도를 가지는 비요요드유, 훨씬 더 바람직하게는 린시드유, 대두유, 팜유, 코코넛유, 캐스터유, 옥수수유, 면실유, 땅콩유, 참깨유, 해바라기유, 홍화유, 아몬드유, 올리브유, 양귀비유 및 하기의 지방산 트리글리세라이드의 혼합물을 포함하거나 이것으로 이루어진 오일로부터 선택된 비요요드유를 또한 포함할 수 있되:

(식 중, R은 3개 내지 35개의 탄소 원자를 포함하는 지방족 사슬임), 단 상기 지방산의 95% 초과는 예를 들어 명칭 미글리올(Miglyol)^®, 예를 들어 오일 미글리올^® 810, 오일 미글리올^®812(카프릴산/카프르산 트리글리세라이드), 오일 미글리올^® 818(카프릴산/카프르산/리놀레산 트리글리세라이드), 오일 미글리올^® 612(글리세릴 트리헥사노에이트) 하에 판매되는 C8 및/또는 C10, 또는 다른 프로필렌 글리콜 디카프릴레이트 디카프레이트 미글리올^® 유도체이다. (R = C8 + C10) > 95%의 표현은, 혼합물의 트리글리세라이드가, 95% 초과가 C8 및/또는 C10 지방산(카프르산 또는 카프릴산)인 지방산의 트리글리세라이드라는 것을 의미한다. 지방산이 C8 지방산일 때, R은 7개의 탄소 원자를 포함하는 사슬이고, 지방산이 C10 지방산을 포함할 때, R은 9개의 탄소 원자를 포함하는 사슬이다.

기재된 다양한 비요오드유(non-iodized oil)의 밀도는 하기 표에 기재되어 있다:

이 정확한 실시형태에서, 요오드유 및 상기 정의된 바와 같은 1종 이상의 비요요드유를 포함하는 지질상의 밀도는 이후 바람직하게는 0.9 내지 1.2, 더 바람직하게는 0.95 내지 1.10, 훨씬 더 바람직하게는 1.05이다.

수상 액적의 크기는 바람직하게는 1 내지 200 ㎛에 포함되고, 더 바람직하게는 5 내지 100 ㎛에 포함되고, 훨씬 더 바람직하게는 5 내지 50 ㎛에 포함되고, 또는 심지어 5 내지 10 ㎛에 포함된다. 이 크기는 에멀젼의 안정성을 훨씬 더 개선한다. 크기는 광학 현미경(예를 들어, Leica DM2000 LED 현미경)을 사용하여 측정될 수 있다.

바람직하게는, 수상 액적은 균일하게 분포된다. 균일성은 광학 현미경을 사용하여 확인되고, 액적의 응집체가 관찰되는 경우, 이 액적은 균일하게 분포되지 않는다.

본 발명에 따른 에멀젼 형태의 조성물에서의 수상/지질상 용적 비율은 유리하게는 1/2(즉, 0.5) 내지 1/4(즉, 0.25), 바람직하게는 2/5(즉, 0.4) 내지 3/10(즉, 0.3), 더 바람직하게는 1/3(즉, 대략 0.33)이다. 1/2 미만의 비율은 W/O 에멀젼을 확실히 얻는 것이 가능하게 한다. 실제로, 지질상과 수상 사이의 1/1 비율은 자연히 O/W 센스를 증대시킨다. W/O 센스를 증가시키기 위해, 첨가되는 요오드유의 양은 증가해야 한다. 1/4 비율 초과에서, 색전증의 위험은 상당해진다. 이것은, 수상 중에 치료학적 유효량의 항암제를 용해시키기 위해, 이 수상이 충분한 용적을 가질 필요가 있기 때문이다. 요오드유를 포함하고 수상보다 용적이 4배 많은 지질상을 가지는 것은 일반적으로 사용된 요오드유의 용량이 승인 한계보다 많도록 한다. 리피오돌^®과 같은 제품에 관한 법적 공지에서, 중재적 방사선학 시술에서 주사된 용적이 15 ㎖를 초과하지 않아야 한다는 것이 표시된다.

본 발명에 따른 에멀젼 형태의 조성물의 수상 및 지질상의 용적 백분율 및 수상/지질상 용적 비율은 역전 (W/O) 에멀젼을 조직적으로 얻는 것이 가능하게 하고, 이것은 항암제의 종양으로의 운반을 개선하는 것이 가능하게 한다.

유리하게는, 본 발명에 따른 조성물은 100 내지 200 mPa.s에 포함되고, 바람직하게는 120 내지 170 mPa.s에 포함되고, 더 바람직하게는 150 내지 165 mPa.s에 포함되는 20℃에서의 점도, 및/또는 40 내지 80 mPa.s에 포함되고, 바람직하게는 50 내지 70 mPa.s에 포함되고, 더 바람직하게는 60 내지 70 mPa.s에 포함되는 37℃에서의 점도를 가진다. 직경이 40 ㎜인 4° 원추-평판 셀을 가지는, 맬버른 인스트루먼츠 키넥수스 프로 레오미터(Malvern Instruments Kinexus Pro rheometer)를 사용하여 점도 값을 얻는다. 0.16 내지 10 Pa의 범위의 부과 응력에서 측정을 수행한다.

요오드유

용어 "지방산"은 적어도 4개의 탄소 원자의 탄소 기반 사슬을 가지는, 포화 또는 불포화, 지방족 카복실산을 의미하는 것으로 의도된다. 천연 지방산은 4개 내지 28개의 탄소 원자(일반적으로 짝수)의 탄소 기반 사슬을 가진다. 용어 "장쇄 지방산"은 14개 내지 22개의 탄소의 길이에 사용되고, 용어 "매우 장쇄인 지방산"은 22개 초과의 탄소가 있는 경우에 사용된다. 반대로, 용어 "단쇄 지방산"은 4개 내지 10개의 탄소, 특히 6개 내지 10개의 탄소 원자, 특히 8개 또는 10개의 탄소 원자의 길이에 사용된다. 당해 분야의 당업자는 관련 명명법 및 특히 용도에 대해 알고 있다:

- Ci-Cp는 Ci 내지 Cp 지방산의 범위를 나타냄,

- Ci+Cp는 Ci 지방산과 Cp 지방산의 전체.

예를 들어,

- 14개 내지 18개의 탄소 원자를 가지는 지방산은 "C14-C18 지방산"으로 기재되고,

- C16 지방산과 C18 지방산의 전체는 C16+C18로 기재되고;

- 포화 지방산의 경우, 당해 분야의 당업자는 하기 명명법 Ci: 0(여기서, i는 지방산의 탄소 원자의 수임)를 이용할 것이다. 팔미트산은 예를 들어 명명법(C16 :0)에 의해 표시될 것이다;

- 불포화 지방산의 경우, 당해 분야의 당업자는 하기 명명법 Ci: x n-N(여기서, N은 산 기(acid group)의 반대인 탄소로부터 시작하는 불포화 지방산에서의 이중 결합의 위치일 것이고, i는 지방산의 탄소 원자의 수이고, x는 이 지방산의 이중 결합(불포화)의 수임)를 이용할 것이다. 올레산은 예를 들어 명명법(C18 :1 n-9)에 의해 표시될 것이다.

유리하게는, 본 발명에 따른 요오드유는 요오드화 지방산의 유도체, 바람직하게는 요오드화 지방산의 에틸 에스테르, 더 바람직하게는 양귀비유, 올리브유, 유채유, 땅콩유, 대두유 또는 월넛유의 요오드화 지방산의 에틸 에스테르, 훨씬 더 바람직하게는 양귀비유 또는 올리브유의 요오드화 지방산의 에틸 에스테르를 포함하거나 이들로 이루어진다. 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 요오드유는 양귀비유의 요오드화 지방산의 에틸 에스테르를 포함하거나 이것으로 이루어진다(상기 양귀비는 또한 푸른색 종자의 오피움 포피(opium poppy) 또는 파파베르 솜니페룸 변형 니그룸(Papaver somniferum var. nigrum)으로 공지됨). 양귀비씨 오일로서도 공지된, 양귀비유는 바람직하게는, 적어도 70%의 리놀레산 및 적어도 10%의 올레산인, 80% 초과의 불포화 지방산(특히, 리놀레산(C18 :2 n-6) 및 올레산(C18 :1 n-9))을 함유한다. 요오드유는 불포화 지방산의 각각의 이중 결합에 대해 1개의 요오드 원자의 결합을 허용하는 조건 하에 양귀비유와 같은 오일의 완전한 요오드화(Wolff et al. 2001, Medicine 80, 20-36), 이후 에스테르교환으로부터 얻어진다.

본 발명에 따른 요오드유는 바람직하게는 29% 내지 53%(w/w), 더 바람직하게는 37% 내지 39%(w/w)의 요오드를 함유한다.

요오드유의 예로서, 리피오돌^®, 브라시오돌(Brassiodol)^®(유채유(브라시카 컴페스티스(Brassica compestis))로부터 유래), 요디올(Yodiol)^®(땅콩유로부터 유래), 오리오돌(Oriodol)^®(양귀비유로부터 유래하지만, 지방산 트리글리세라이드의 형태임) 및 두롤리오파큐(Duroliopaque)^®(올리브유로부터 유래)를 언급할 수 있다.

바람직하게는, 요오드유는 조영제로서 사용되고 소정의 중재적 방사선학 시술에서 사용되는 요오드유인 리피오돌^®이다. 이 오일은 양귀비씨 오일의 요오드화 지방산과 비요오드화 지방산의 에틸 에스테르의 혼합물이다. 이것은 양귀비씨 오일로부터 유래한 장쇄 요오드화 지방산(특히, C18 지방산)의 에틸 에스테르의 혼합물, 바람직하게는 에틸 모노요오도스테아레이트과 에틸 디요오도스테아레이트의 혼합물로 주로(특히, 84% 초과로) 이루어진다. 요오드유는 또한 올리브유로부터 유래한 스테아르산(C18 :0)의 모노요오드화 에틸 에스테르에 기초한 오일일 수 있다. 두롤리오파큐^®라 불리는 이 유형의 제품은 몇 년 전에 판매되었다.

리피오돌^®의 주요 특징은 하기와 같다:

바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물에 존재하는 요오드유의 양은 15 ㎖를 초과하지 않는다.

바람직하게는, 지질상은 상기 정의된 바와 같은 요오드유 및 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제로 본질적으로 이루어진다. 본 발명의 특정한 일 실시형태에서, 지질상은 상기 정의된 바와 같은 요오드유, 상기 정의된 바와 같은 비요요드유 및 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제로 본질적으로 이루어진다.

항암제

본 발명에 따른 조성물에 의해 벡터화되거나 본 발명에 따른 에멀젼 형태의 조성물에 포함된 항암제는 바람직하게는 안트라사이클린, 백금 착체(platinum complexe), 안트라사이클린 관련 화합물, 예컨대 미톡산트론 및 네모루비신, 항생제, 예컨대 미토마이신 C(Ametycine^®), 블레오마이신 및 악티노마이신 D, 다른 항종양성 화합물, 예컨대 이리노테칸, 5-플루오로우라실(Adrucil^®), 소라페닙(Nevaxar^®), 수니티닙(Sutent^®), 레고라페닙, 브리바닙, 오란티닙, 린시티닙, 에를로티닙, 카보잔티닙, 포레티닙, 티반티닙, 포테무스틴, 타우로무스틴(TCNU), 카르무스틴, 사이토신 C, 사이클로포스폰아마이드, 사이토신 아라비노사이드(또는 시타라빈), 파클리탁셀, 도세탁셀, 메토트렉세이트, 에버롤리무스(Afinitor^®), PEG-아르기닌 데이미나아제, 테가푸르/기메라실/오테라실 복합제(Teysuno^®), 무파르포스타트, 페레티노인, 젬시타빈, 베바시주맙(Avastin^®), 라무시루맙, 플록수리딘, 면역자극제, 예컨대 GM-CSF(과립대식세포 집락 자극 인자) 및 이의 재조합 형태: 몰그라모스팀 또는 사르그라모스팀(Leukine^®), OK-432(Picibanil^®), 인터류킨-2, 인터류킨-4 및 종양 괴사 인자-알파(TNF알파), ¹²⁵l 표지된 항-CEA(암태아성 항원) 항체, 상기 언급된 화합물 중 하나가 로딩된 미소구체(microsphere), 방사성 원소, 상기 방사성 원소와 킬레이트의 착체, 철 화합물(철 산화물의 초소 초상자성 입자 또는 USPIO) 및/또는 가돌리늄 킬레이트에 기초한 자기 입자, 방사성 미소구체, 핵산 서열 또는 이들 화합물의 1종 이상의 혼합물(바람직하게는, 1종 이상의 안트라사이클린의 혼합물 또는 안트라사이클린과 상기 언급된 바와 같은 방사성 원소의 혼합물, 또는 안트라사이클린과 철 화합물) 및/또는 가돌리늄 킬레이트에 기초한 입자의 혼합물로부터 선택된다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물의 수상은 수상 중에 0.5% 내지 2.5%(w/v), 더 바람직하게는 1% 내지 2%(w/v)의 항암제를 포함한다.

에멀젼 형태의 조성물은 1종 이상의 항암제를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 적어도 하나의 항암제는 수용성이고, 즉 이것은 수상 중에 50% 초과로 가용성이다. 따라서, 에멀젼 형태의 조성물이 오직 1종의 항암제를 포함할 때, 상기 물질은 바람직하게는 수용성이고, 따라서 분산된 수상 중에 있다. 에멀젼 형태의 조성물이 몇몇 항암제를 포함할 때, 이들 중 몇몇은 연속 지질상 중에 있을 수 있다.

바람직한 항암제는 안트라사이클린, 미토마이신 C, 백금 착체, 방사성 원소 및 상기 기재된 이의 착체로부터 선택된다. 항암제는 더 바람직하게는 안트라사이클린 및 훨씬 더 바람직하게는 독소루비신, 에피루비신, 네모루비신 및 이다루비신으로부터 선택된다.

유리하게는, 항암제는 중격제(intercalating agent), 예컨대 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 네모루비신, 미톡산트론 및 피라루비신; 알킬화제, 예컨대 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 로바플라틴, 사이클로포스폰아마이드 및 미토마이신 C, 포테무스틴; 토포아이소머라제 1형 저해제, 예컨대 이리노테칸; 토포아이소머라제 2형 저해제, 예컨대 독소루비신 및 미톡산트론; 티로신 키나제 저해제, 예컨대 에버롤리무스; 멀티키나제 저해제, 예컨대 소라페닙, 항대사물질, 예컨대 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트 및 젬시타빈, 상기 기재된 바와 같은 방사성 원소, 이 방사성 원소와 대환식 킬레이트의 착체, 철 화합물에 기초한 자기 입자, 방사성 미소구체, 핵산 서열 및 이들의 혼합물로부터 선택된다.

바람직하게는, 상기 언급된 안트라사이클린은 독소루비신(또는 화이자(Pfizer)에 의해 명칭 아드리블라스틴(Adriblastine)^® 하에 판매되는 아드리아마이신), 에피루비신(Farmorubicin^®), 이다루비신(Zavedos^®), 다우노루비신, 피라루비신, 네모루비신 및 이들 화합물의 1종 이상의 혼합물로부터 선택된다.

바람직하게는, 상기 언급된 백금 착체는 시스플라틴(Platinol AQ^®), 카보플라틴, 미리플라틴, 옥살리플라틴(Eloxatine^®), 로바플라틴 및 이들 화합물의 1종 이상의 혼합물로부터 선택된다.

바람직하게는, 상기 언급된 방사성 원소는 레늄 186(¹⁸⁶Re), 레늄 188(¹⁸⁸Re), 이트리움 90(⁹⁰Y), 루테튬 177(¹⁷⁷Lu), 홀뮴 166(¹⁶⁶Ho), 요오드 125(¹²⁵I), 요오드 131(¹³¹I), 인 32(³²P), 스트론튬 89(⁸⁹Sr), 사마륨 153(¹⁵³Sm), 구리 67(⁶⁷Cu), 주석 117m(^117mSn), 비스무트 213(²¹³Bi), 비스무트 212(²¹²Bi), 아스타틴 211(²¹¹At), 라듐 223(²²³Ra), 인듐 111(¹¹¹In), 갈륨 67(⁶⁷Ga), 갈륨 68(⁶⁸Ga), 준안정 테크네튬 99(99mTc) 및 이들 화합물의 1종 이상의 혼합물로부터 선택된다. 임의로 선형 또는 대환식 킬레이트와 착체형성된 형태의 방사성 원소는 바람직하게는 ¹⁸⁸Re, ⁹⁰Y, ¹⁷⁷Lu, ¹⁶⁶Ho, ¹³¹I, ¹¹¹In, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga 및 99mTc, 또는 훨씬 더 바람직하게는 ¹⁸⁸Re, ⁹⁰Y, ¹⁷⁷Lu, ¹⁶⁶Ho 및 ¹³¹I로부터 선택된다. 바람직하게는, 상기 언급된 이 방사성 원소의 착체의 킬레이트는 선형 킬레이트 및 대환식 킬레이트, 예컨대 DOTA, PCTA, DTPA, NOTA, 및 이들의 유도체, 더 바람직하게는 대환식 킬레이트, 예컨대 DOTA, PCTA, NOTA, 및 이들의 유도체로부터 선택된다. 이트리움 90(⁹⁰Y), 및 이트리움 90 및 상기 정의된 바와 같은 대환식 킬레이트의 착체는 이의 각각의 카테고리에서 바람직한 화합물이다.

바람직하게는, 상기 언급된 핵산 서열은 데옥시리보핵산(DNA) 및 리보핵산(RNA) 서열로부터 선택되고, 더 바람직하게는 유전자 치료 벡터, 예컨대 아데노바이러스(DNA 바이러스) 벡터, 레트로바이러스(RNA 바이러스) 벡터, 아데노 관련 바이러스 또는 AAV로부터 유래한 벡터, 및 다른 바이러스(예컨대, 단순 포진 바이러스(Herpes Simplex virus: HSV), 폭스바이러스, 인플루엔자 바이러스)로부터 유래한 벡터로부터 선택된 바이러스 벡터, 및 비바이러스 벡터, 예컨대 다중양이온 또는 나노입자(특히, 수산화인회석 또는 변형 수산화인회석(예컨대, 폴리-L-리신(PLL) 변형 수산화인회석)의 나노입자)에 의해 벡터화된 DNA 또는 RNA 서열, 및 간섭 RNA(소간섭 RNA의 경우 siRNA) 또는 이중 가닥 RNA(dsRNA) 서열로부터 선택된다.

핵산 서열은 바람직하게는 p53 단백질을 코딩하거나, Rb 단백질(특히, Rb1 유전자)을 코딩하는 유전자, 또는 인터류킨 12(IL-12)를 코딩하는 유전자, 또는 이의 각각의 전사물(즉, RNA 형태)의, 네이티브 또는 변형 서열 또는 네이티브 또는 변형 서열의 일부로부터 선택된다.

이들 항암제의 상업용 형태는 보통 동결건조 형태 또는 분체 형태(즉, 분말 형태)이다. 항암제의 이 동결건조물 또는 분말은 약제학적 분야에 관습적으로 사용된 부형제: 락토스(용해 및 동결건조 물질), 메틸 파라-하이드록시벤조에이트(항산화제) 및/또는 염화나트륨(NaCl)을 함유할 수 있다.

본 명세서의 목적을 위해, 용어 "철 화합물에 기초한 입자"는 일반적으로 철(III), 일반적으로 철 산화물 또는 수산화물을 포함하는, 철 화합물을 포함하거나 이것으로 이루어진 입자를 의미하도록 의도된다. 용어 철 산화물의 초소 입자 또는 USPIO가 흔히 사용된다.

일반적으로, 자기 입자(magnetic particle)는 전체적으로 또는 부분적으로 철 수산화물; 철 산화물 수화물; 페라이트; 혼합 철 산화물, 예컨대 코발트, 니켈, 망간, 베릴륨, 마그네슘, 칼슘, 바륨, 스트론튬, 구리, 아연 또는 백금의 혼합 철 산화물; 또는 이들의 혼합물로 이루어진다.

특히 바람직한 일 변형에 따르면, 자기 입자는 초상자성(superparamagnetic)이다.

자기 입자는, 적절한 코팅에 의해 피복되기 전에, 이후 바람직하게는 5 내지 200 ㎚, 심지어 더 훨씬 10 내지 60 ㎚ 또는 10 내지 20 ㎚의 결정 직경을 가진다.

유리한 일 실시형태에서, 철 화합물에 기초한 자기 입자는 바람직하게는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 유형, 더 바람직하게는 1500 내지 3000에 포함되는 몰 질량을 가지는 PEG의 친수성 화합물에 의해 피복된다.

또 다른 유리한 실시형태에서, 철 화합물에 기초한 자기 입자는 불포화, 바람직하게는 일불포화, 지방산, 훨씬 더 바람직하게는 올레산(C18 :1 n-9)에 의해 피복된다. 이렇게 지용성이 된 자기 입자는 연속 지질상 중에 현탁된다.

본 명세서의 목적을 위해, 용어 "페라이트"는 일반식 [x Fe₂O₃, y MO_z](식 중, M은 자기장의 영향 하에 자화될 수 있는 금속, 예컨대 Fe, Co, Ru, Mg 또는 Mn을 의미함)의 철 산화물을 의미하고, 자화 가능한 금속이 임의로 방사성일 수 있다.

바람직하게는, 본 발명의 조성물의 자기 입자는 페라이트, 특히 마그헤마이트(γ Fe₂O₃) 또는 마그네타이트(Fe₃O₄), 또는 그 외 코발트(Fe₂CoO₄) 또는 망간(Fe₂MnO₄)의 혼합 페라이트를 포함한다. 이 맥락에서, 페라이트, 및 바람직하게는 본질적으로(즉, 90중량% 초과, 바람직하게는 95중량% 초과, 훨씬 더 바람직하게는 98중량% 초과로) 마그헤마이트 또는 마그네타이트 또는 이들의 혼합물로 전부 또는 부분적으로 이루어진 자기 입자가 가장 특히 바람직하다.

바람직하게는, 상기 언급된 방사성 미소구체는 이트리움 90(SIR-Spheres^®(SIRTeX Medical Ltd 회사에 의해 판매됨))에 의해 표지된 양이온 교환 수지(예를 들어, 폴리비닐 알콜 또는 스티렌 및 디비닐벤젠을 포함하는 공중합체, 예컨대 Aminex 50W-X4(Biorad 회사로부터 구입)를 포함)로 이루어지거나, 이트리움 90이 혼입된 유리로 이루어지거나(TheraSphere^®(BTG 회사에 의해 판매됨)), 중합체, 예컨대 폴리락트산(PLLA) 및 상기 언급된 방사성 원소 중 하나(홀뮴(166Ho)은 이러한 경우 바람직한 방사성 원소임)로 이루어진다. 더 바람직하게는, 이것은 ⁸⁹Y₂O₃의 형태의 이트리움이고, 이것은 유리로 이루어진 미소구체로 혼입되고, 상기 미소구체는 차가운 이트리움 ⁸⁹Y를 방사성 이트리움 ⁹⁰Y로 전환함으로써 이것이 방사성이 되도록 만들기 위해 이후 중성자에 의해 조사된다. 훨씬 더 바람직하게는, 양이온 교환 수지로 이루어지거나 유리로 이루어진 미소구체는 각각 20 내지 60 ㎛, 및 20 내지 30 ㎛의 직경을 가진다. SIR-Spheres 유형의 미소구체는 특히 특허 EP 0 740 581 B1의 대상이다.

바람직하게는, 상기 언급된 화합물 중 하나가 로딩된 미소구체에 안트라사이클린, 예컨대 독소루비신, 에피루비신 또는 이다루비신 또는 토포아이소머라제 유형 I 저해제, 예컨대 이리노테칸 또는 백금 착체, 예컨대 시스플라틴이 로딩된다. 이 미소구체는 바람직하게는 폴리비닐 알콜(PVA)로부터 제조된다. 바람직하게는, 이것은 PVA의 하이드로겔로 이루어지고, 더 바람직하게는 양으로 하전될 때 상기 언급된 화합물이 부착하는 설포네이트 SO₃ ^- 기에 의해 변형된 PVA의 중합체로 이루어지거나(DC Beads^®, DC-Beads M1^® 및 LC-Beads^®(Biocompatibles 회사에 의해 판매)), 이것은 단량체, 예컨대 비닐 아세테이트 및 메틸 아크릴레이트로부터 제조되고, 이들은, 함께 조합될 때, 양으로 하전될 때 단순한 이온 결합에 의해 상기 언급된 화합물이 부착하는 카복실레이트 COO- 기에 의해 변형된 PVA/아크릴산 공중합체(폴리(나트륨 아크릴레이트-코-비닐 알콜의 공중합체))를 형성한다(Hepasphere^® 또는 Quadrasphere^®(Merit Medical에 의해 판매)). 이 미소구체는 또한 폴리포스파젠 중합체로 이루어질 수 있고, 이후 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신 또는 이리노테칸(Embozene Tandem^® 미소구체(Celonova Biosciences 회사에 의해 판매))이 로딩된다. 이것은 또한 가교결합되고 글리세롤 에테르 기에 의해 치환된 가수분해된 감자 전분으로부터 얻은 중합체로 이루어질 수 있고, 이후 독소루비신, 악티노마이신 D, 타우로무스틴, 시스플라틴, 카보플라틴, 미토마이신 C, 포테무스틴, 카르무스틴, 이리노테칸, 5-FU, 플록수리딘 또는 도세탁셀, ¹²⁵I 표지된 항-CEA(암태아성 항원) 항체 또는 99mTc-DTPA 착체(Embocept^® S 미소구체(Pharmacept에 의해 판매))이 로딩된다.

계면활성제

용어 "계면활성제"가 물/오일 유형의 계면에 대해 특정한 친화도를 이에 부여하여서, 이 계면의 자유 에너지를 낮추고 분산된 시스템을 안정화시키는 능력을 이것에 제공하는, 양친매성 구조를 가지는 조성물을 의미한다는 것이 상기된다.

본 발명에 따른 조성물은 적어도 하나의 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제를 포함한다. 이것은 따라서 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제 또는 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제의 혼합물을 포함할 수 있다.

계면활성제는 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I) 또는 (I')(바람직하게는, 식 중, s는 0 또는 1이고, m은 2 내지 10의 정수를 나타내고, R₁은 상기 정의된 바와 같은 화학식 (II)의 기(식 중, n은 5 내지 7의 정수를 나타내고, o는 1 내지 3의 정수를 나타내고, p는 3 내지 5의 정수를 나타내고, q는 2 내지 5의 정수를 나타내고, r은 0 또는 1임)를 나타냄)를 가진다. 훨씬 더 바람직하게는, 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I) 또는 (I')에서, R₁로 표시되는 화학식 (II) 내에 s는 1이고, m은 2 내지 5의 정수를 나타내고, n은 7이고, o는 1이고, p는 5이고, q는 2 내지 4의 정수를 나타내고, r은 1이다.

HLB(친수성-친유성 균형(hydrophilic-lipophilic balance)을 의미)는, 계면활성제의 특징인, 당해 분야의 당업자에게 널리 공지된, 양이다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 계면활성제는 낮은 HLB를 가지는 계면활성제, 즉 1 내지 8에 포함되는, 바람직하게는 1 내지 6에 포함되는 HLB 값을 가지는 계면활성제이다. HLB는 더블유.씨. 그리핀(W.C. Griffin)의 논문("Classification of Surface-active agents by "HLB"", Journal of the Society of Cosmetic Chemists, 1949, 311-326)에 예시된 바대로 수중유 또는 유중수 에멀젼의 유형을 결정할 수 있게 한다. 이 논문은 특히, HLB가 4 내지 6인 계면활성제의 경우, W/O 유형의 에멀젼이 관찰되는 반면, HLB가 8 내지 18인 계면활성제의 경우, O/W 유형의 에멀젼이 대신에 관찰된다는 것을 나타낸다.

유리하게는, 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제는 특히 상기 표시된 비율 범위로 요오드유 중에 가용성이다.

유리하게는, 본 발명에 따른 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제는 폴리글리세릴 폴리리시놀리에이트 및 PEG-30 디폴리하이드록시스테아레이트로부터 선택된다.

폴리글리세릴 폴리리시놀리에이트 또는 PGPR(팔스가드(Palsgaard)^®4125, 팔스가드^®4150, 팔스가드^®4110, 팔스가드^®4120 또는 팔스가드^®4175)은 친수성 기로서 폴리글리세롤(바람직하게는 적어도 75%의 디- 및 트리글리세롤 및 10% 초과의 감소헵타글리세롤로 이루어진) 및 소수성 기로서 인터에스테르화 리시놀레이쿼스(ricinoleiques) 지방산을 가지는 계면활성제이다. 이것은 1.5의 HLB를 가진다.

이것은 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 계면활성제에 상응하고; 식 중,

- s는 1이고,

- m은 2 내지 5의 정수를 나타내고,

- R₁은 상기 정의된 바와 같은 화학식 (II)의 기를 나타내고, 식 중, n은 7이고, o는 1이고, p는 5이고, q는 2 내지 4이고, r은 1이고,

- R₂는 R₁ 및/또는 수소 원자를 나타낸다.

바람직하게는, 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제는 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제의 혼합물이고; 식 중,

- s는 1이고,

- m은 2, 3, 4 또는 5이고,

- R₁은 상기 정의된 바와 같은 화학식 (II)의 기를 나타내고, 식 중, n은 7이고, o는 1이고, p는 5이고, q는 2, 3 또는 4이고, r은 1이고,

- R₂는 R₁ 및/또는 수소 원자를 나타낸다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제는 하기 화학식의 화합물로부터 선택된 계면활성제의 혼합물이다:

또는

및

5-6의 HLB로서 PEG-30 디폴리하이드록시스테아레이트(Croda 회사에 의해 판매되는, 시트롤(Cithrol)^® DPHS 및 이전에 알라셀(Arlacel)^®). 명칭 PEG는 INCI가 규정한 명명법 관례에 따르고, 상기 기재된 30 값은 에틸렌 옥사이드 단량체 단위의 평균 수에 상응한다.

이것은 상기 정의된 바와 같은 화학식 1의 계면활성제에 상응하고; 식 중,

- s는 0이고,

- m은 30이고,

- R₁은 상기 정의된 바와 같은 화학식 (II)의 기이고, 식 중, n은 9이고, o는 1이고, p는 5이고, q는 7이고, r는 0이고,

- R₂는 R₁과 동일하다.

본 발명에 따른 조성물의 용도

제2 대상에 따라, 본 발명은 항암제를 벡터화하기 위한 상기 정의된 바와 같은 조성물의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 바람직하게는 경동맥 화학색전술에 의해 암 또는 이것의 전이(metastases)의 치료에서의 이의 용도를 위한, 상기 정의된 바와 같은 에멀젼 형태의 조성물에 관한 것이다. 유리한 일 실시형태에서, 본 발명은 바람직하게는 경동맥 화학색전술에 의해 암 또는 이의 전이의 치료를 위한 약제의 제조를 위한, 본 발명에 따른 조성물의 용도에 관한 것이다. 경동맥 화학색전술은 치료학적 유효량의 항암제를 종양에 전달하기 위해 항암제와 조합되어 혈관을 막기 위한 물질의 경동맥 경피적 도입으로 정의된다. 바람직하게는, 이렇게 치료되는 암은 간암(특히, 원발성 간암, 예컨대 간세포 암종 또는 HCC), 담관암종, 결장암, 신경내분비 종양, 유방암, 신장암 및 흑색종으로부터 선택된 원발성 암의 간 전이로부터 선택된다.

간 종양의 화학색전술은 바람직하게는 하기 연속 단계를 수행함으로써 수행된다:

a) 대퇴 동맥으로부터의 경피적 카테터 삽입,

b) 울혈이 2차 분지 또는 3차 분지에서 관찰될 때까지 본 발명에 따른 에멀젼의 투여,

c) 임의로, 에멀젼이 투여된 후 종양에서의 색전제의 투여.

바람직하게는, 이렇게 투여된 본 발명에 따른 에멀젼은 20 ㎖ 이하의 요오드유, 더 바람직하게는 15 ㎖ 이하의 요오드유를 포함한다.

카테터라 칭하는 관을 간 동맥에 넣고 이어서 암성 병변을 관류시키는 이 동맥의 분지로 넣는 것으로 이루어지는 카테터 설치는 유리하게는 영상화 기법의 보조에 의해 수행된다. 중재적 방사선사에게 더욱이 가능한 한 최적으로 이 카테터를 배치하게 하도록 가이던스 소프트웨어가 제공된다.

용어 "색전제"는 혈관에서의 혈류를, 한정적으로 또는 일시적으로, 느리게 하거나 중지시킬 수 있게 하는 1종 이상의 화합물을 의미하도록 의도된다. "색전제"의 예로서, 젤라틴 스펀지, 젤라틴 폼 입자(겔폼(Gelfoam)^®,스폰겔(Spongel)^®, 쿠라스폰(Curaspon)^®), 폴리비닐 알콜(PVA) 또는 예를 들어 트리스아크릴젤라틴, PVA(Ivalon^®, Contour^®) 등에 기초한 보정된 미소구체를 언급할 수 있다.

유리하게는, 화학색전 시술 전에, 혈관촬영술 또는 MR 앤지오(자기 공명 혈관조영술 또는 MRA)를 이용하여 수행되는 혈관조영술 또는 동맥조영술, 및 보통 조영제의 주사(예를 들어, 혈관촬영술의 경우: 수용성 요오드화 조영제, 예컨대 이오비트리돌(제네틱스^®) 또는 이오헥솔(옴니파큐^®), 및 MR 앤지오의 경우: 가돌리늄 킬레이트, 예컨대 가도테르산(Dotarem^®) 또는 가도부트롤(Gadovist^®))가 종양(들)의 내장 혈관화 및 동맥 관류를 찾아내기 위해 수행된다.

이 화학색전술 기법은 단독으로 또는 하기 언급된 하나 이상의 다른 기법과 조합되어 사용될 수 있다. 이것은 또한 이 다른 기법 중 하나에 의해 대체될 수 있다.

항암제가 방사성 원소 또는 방사성 원소와 상기 언급된 대환식 킬레이트의 착체로부터 선택될 때, 사용된 기법은 내부 선택적 방사선치료제 또는 방사선색전술이다. 이것은 종양을 관류시키는 간 동맥의 분지로 본 발명에 따른 조성물을 직접적으로 주입하는 것으로 이루어진다. 이 기법은 종양에 매우 상당한 조사를 전달하지만, 건강한 간 및 환자의 다른 장기를 상당히 조사하지 않는 이점을 가진다.

항암제가 철 화합물에 기초한 자기 입자(USPIO)로부터 선택될 때, 사용된 기법은 자기 발열요법 절제(magnetic hyperthermia ablation)이다. 이것은 종양 조직의 수준에서의 국소 온도 증가를 유도하는 것으로 이루어지고, 종양 세포는 건강한 세포보다 온도 증가에 더 민감하다. 이 온도 증가는 외부 자극을 사용하는 것 및 특히 치료하고자 하는 부위로 교번 자기장을 인가하는 것에 의해 발생한다. 발열요법의 2개의 유형은 도달되는 온도에 따라 구별된다: 46℃를 초과하는 온도의 경우, 조직 괴사를 유도할 수 있고, 용어 열절제(thermoablation)가 그러면 사용되고; 42℃ 내지 46℃의 온도는 다양한 구조 및 효소 단백질의 기능을 변형시켜서, 세포 발생 및 분화를 변형시키고, 가능하게는 아폽토시스를 유도하고, 용어 보통의 발열요법이 그러면 사용된다. 세포가 죽지 않는 경우, 이것은 이온화 방사선 또는 화학치료제에 더 민감해진다.

항암제가 상기 언급된 바와 같은 바이러스 벡터 또는 비바이러스 벡터(non-viral vector)에 의해 벡터화된 데옥시리보핵산(DNA) 및 리보핵산(RNA)의 서열 또는 간섭 RNA(소간섭 RNA의 경우 siRNA) 또는 이중 가닥 RNA(dsRNA) 서열로부터 선택된 핵산 서열일 때, 사용된 기법은 때때로 또한 "유전자치료법"라 불리는 유전자 치료이다. 이 접근법의 원칙은 발현 생성물이 종양 세포의 사멸을 (직접적으로 또는 간접적으로) 유도하는 외래 유전자를 도입하는 것이다. 개략적으로, a) 종양 세포막 항원의 변형에 의한 면역 방어의 유도("면역자극"); b) 종양 세포의 게놈으로의 종양 "억제자" 유전자의 전달, 또는 마지막으로 c) 비활성 항암제 프로드럭을 종양 세포에 독성을 나타내는 분자로 전환할 수 있게 하는 "자살" 유전자의 전달의 3개의 접근법이 이용될 수 있다.

모든 이들 다양한 기법은 당해 분야의 당업자에게 공지되어 있다. 당업자는 본 발명에 따른 조성물을 사용하여 이들 기법을 수행하기 위해 조정되어야 하는 매개변수를 어떻게 용이하게 선택하는지를 알 것이다.

달리 표시되지 않은 한, 용어 "치료하는" 및 "치료"는 개체의 편안함, 웰빙 및 생존을 개선하는 것을 목표로 하는 임의의 행동을 의미하도록 의도되고, 이 용어는 따라서 둘 다 경감, 감소, 완화 및 치유를 포괄한다.

본 발명에 따른 에멀젼 형태의 조성물의 제조

에멀젼 형태의 조성물은 바람직하게는 즉석으로(extemporaneously) 조제된다.

본 발명은 또한

a) 요오드유 중에 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제를 혼합하는 단계, 및

b) 단계 a)에서 얻은 용액을 항암제를 포함하는 수용액과 혼합하는 단계를 포함하는, 상기 정의된 바와 같은 에멀젼 형태의 조성물을 제조하는 방법에 관한 것이다.

단계 a)에서 얻은 용액과 혼합된 수용액은 상기 정의된 바와 같은 농후화제를 또한 포함할 수 있다.

단계 a)에서 제조된 지질상은 상기 정의된 바와 같은 비요요드유를 또한 포함할 수 있다.

단계 b)에서 수행된 혼합은 당해 분야의 당업자에게 공지된 임의의 수단에 의해 수행될 수 있다. 바람직하게는, 3방향 탭을 사용한다. 계면활성제를 포함하는 요오드유를 제1 주사기에 위치시키고, 이것을 3방향 탭에 부착한다. 항암제를 포함하는 수용액을 제2 주사기에 위치시키고, 이것을 또한 90°로 이 3방향 탭에 부착한다.

2개의 상의 혼합은 2개의 주사기의 플런저를 교대로 밀어서 수행된다(바람직하게는 20회 내지 35회). 바람직하게는, 모든 혼합물을 하나의 주사기를 통해 통과시키고, 이후 1초 내지 2초마다 다른 주사기를 통해 통과시킨다. 탭의 제3 채널은, 에멀젼의 투여의 경우, 종양 병변에 관한 한, 형광투시 제어 하에, 선택적으로 전진하는 카테터를 부착할 수 있게 한다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물의 제조는 10 내지 40℃, 더 바람직하게는 20 내지 30℃의 온도에서 수행된다.

본 발명에 따른 조성물을 위한 마케팅 형태

본 발명은 또한 암을 치료하기 위한 이의 용도를 위한, 동시에, 별개로 또는 시간에 걸쳐 분산되어 사용하기 위한, 복합제품(combination product)으로서의,

- 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제,

- 요오드유,

- 항암제를 포함하는 키트에 관한 것이다.

(일반적으로 수용액 중에 용해된) 계면활성제, 요오드유 및 항암제는 3개의 상이한 용기에 있다. 일반적으로, [수용액 중의 계면활성제/요오드유/항암제]의 혼합은 본 발명에 따른 에멀젼 형태의 조성물을 생성시킨다.

더욱이, 본 발명은 암을 치료하기 위한 이의 용도를 위한, 동시에, 별개로 또는 시간에 걸쳐 분산되어 사용하기 위한, 복합제품으로서의,

- 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제 및 요오드유를 포함하는 조성물,

- 항암제를 포함하는 키트에 관한 것이다.

조성물 및 항암제(바람직하게는 동결건조 형태로 제공됨)는 2개의 상이한 용기에 있다. 바람직하게는, 항암제는 즉석으로 또는 시술 바로 전날에 수용액 중에 용해된다. 바람직하게는, 조성물은 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제, 요오드유 및 임의로 비요요드유의 혼합물로 이루어진다. 일반적으로, 수용액 중의 조성물 및 항암제의 혼합은 본 발명에 따른 에멀젼 형태의 조성물을 생성시킨다.

본 발명은 또한 항암제를 벡터화하기 위한 복합제품으로서의,

- 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제,

- 요오드유를 포함하는 키트의 용도에 관한 것이다. 계면활성제 및 요오드유는 2개의 상이한 용기에 있다.

본 발명은 또한 항암제를 벡터화하기 위한 생성물로서의,

- 요오드유 중에 용해된 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I) 또는 (I')의 계면활성제를 포함하는 조성물의 용도에 관한 것이다. 계면활성제는 동일한 용기 내에 요오드유 중에 용해된다.

용어 "용기"는 생성물을 함유할 수 있는 임의의 약제학적으로 허용되는 리셉터클을 의미하도록 의도된다. 예의 방식으로, 앰플, 병 또는 프리필드 주사기를 언급할 수 있다.

용어 "약제학적으로 허용되는 리셉터클"은 생성물과 상호작용하지 않는 임의의 리셉터클, 바람직하게는 화합물을 요오드유로 방출하지 않고 요오드유를 열화시키지 않는 임의의 리셉터클을 의미하도록 의도된다.

이하에 보이는 실시예는 본 발명의 비제한적인 예시의 방식으로 제시된다.

도 1: 여러 에멀젼의 화학색전(TACE) 시술에 의한 주사 후 간세포 암종을 보유하는 랫트에서의 독소루비신의 혈장 동역학.

도 2: 여러 에멀젼의 화학색전(TACE) 시술에 의한 주사 후 간세포 암종을 보유하는 토끼에서의 독소루비신의 혈장 동역학.

도 3: 투여된 에멀젼에 따라 종양에서 측정된 리피오돌^®의 양과 상기 종양에서 측정된 독소루비신의 양 사이의 연구의 결과.

실시예 1:

1. 본 발명에 따른 에멀젼 형태의 조성물의 제조 :

1.1. 리피오돌 ^® 및 안트라사이클린의 에멀젼

50 ㎎의 독소루비신(아드리블라스티나^®)을 2.5 ㎖의 제네틱스^® 250(250 ㎎의 요오드/㎖) 중에 재구성하였다. 우수한 용해를 위해 30초 동안 수동 교반 후에, 얻은 용액을 20 ㎖의 루어 락 주사기(luer lock syringe)에 의해 제거하였다. 이 주사기를 이후 3방향 탭에 위치시켰다.

PGPR(1% w/v 전체, 100 ㎎ - Interchim)을 수동 교반에 의해 7.5 ㎖의 리피오돌^® 중에 용해시켰다.

얻은 오일을 20 ㎖의 루어 락 주사기에 의해 제거하고, 이것을 또한 90°로 3방향 탭에 위치시켰다. 오일로 물에 의해 시작하여 중간 힘에서의 34회 통과, 즉 17회 전후 이동을 수행하였다.

이 에멀젼의 경우, 선택된 수상 및 지질상의 용적은 각각 2.5 ㎖(즉, 25% v/v) 및 7.5 ㎖(즉, 75% v/v)이다. 수상/지질상 비율은 1/3이었다.

다른 에멀젼을 하기에 의해 준비하였다:

- 항암제로서의 독소루비신의, 이다루비신(Zavedos^®), 미토마이신 C(Kyowa) 또는 에피루비신(Farmorubicine^®)에 의한 대체, 및/또는

- 농후화제의 비도입, 또는

- 농후화제 제네틱스^® 250의, 제네틱스(Xenetix)^® 300(300 ㎎의 요오드/㎖), 이오파미론^® 350, 이오파미론^® 300, 이오메론^® 300, 울트라비스트^® 300 또는 옴니파큐^® 240에 의한 대체, 또는

- 계면활성제 PGPR의, 시트롤™ DPHS(PEG-30 디폴리하이드록시스테아레이트)에 의한 대체, 또는

- 계면활성제의 비율의 변경.

시트롤™ DPHS의 경우, 초음파(바이알 트위터(Vial tweeter), 3 x 45초)를 사용하여 용해를 얻었다.

에멀젼의 센스의 검정(Verification of the sense of the emulsion):

에멀젼이 제조되면, 이의 센스를 단순한 가시적 시험에 의해 검증하였다. 1개는 수상(적절한 경우 제네틱스^® 250 또는 제네틱스^®300)을 가지고, 다른 1개는 요오드유(리피오돌^®)를 가지는 2개의 병을 준비하였다.

새로 제조된 에멀젼의 방울을 2개의 병의 각각에 첨가하였다. 방울은 리피오돌^®의 병에서 분산되었고, 제네틱스^®의 병에서 분산되지 않았고; 에멀젼은 따라서 실제로 W/O(유중수) 에멀젼이다.

적색의 독소루비신 액적은 오일의 황색 배경에서 분명히 보였다. 광학 현미경을 사용하여 수상 액적의 크기를 평가하였다.

제조된 주요 에멀젼은 하기 표에 기재되어 있다:

(상기 표에서 '무'는 'None'을 의미함.)

화학식 (I)의 계면활성제 및 다양한 항암제를 사용하여 제조된 이 다양한 에멀젼은 모두 예상에 따라 안정성을 나타냈다.

1.2. 리피오돌 ^® 및 방사성 원소의 에멀젼

1.2.1. 리피오돌 ^® 및 ⁹⁰ YCl ₃ 의 에멀젼

완충제 용액(트리스)을 산 용액(이트리움 클로라이트, 0.05M Hl)의 형태의 이트리움 90의 방사성 용액에 첨가하여, 생성된 용액이 환자에서 사용하기에 적합한 pH(6<pH<9)가 되게 하였다. 최종 용적이 10 ㎖를 초과하지 않도록, 얻은 용액을 생리 식염수의 용적 중에 희석할 수 있었다. 1%(w/v)의 PGPR을 상기 기재된 기법에 따라 7.5 ㎖의 리피오돌^® 중에 용해시켰다. 7.5 ㎖의 리피오돌^® 및 1%의 PGPR로 이루어진 지질상을 이후 수상에 첨가하고, 이렇게 얻은 현탁액의 흡인 및 재현탁에 의한 교반에 의해 에멀젼을 제조하였다.

1.2.2. DOTA와 착체형성된 리피오돌 ^® 및 ⁹⁰ YCl ₃ 의 에멀젼

방사성 용액을 pH 6-7에서 완충제 중의 DOTA(1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸-N,N',N",N"'-테트라아세트산)의 용액에 첨가하고, 매질을 80℃에서 30분 동안 가열하였다.

최종 용적이 10 ㎖를 초과하지 않도록, 생리 식염수의 용적을 이 용액에 첨가하였다. 1%(w/v)의 PGPR을 상기 기재된 기법에 따라 7.5 ㎖의 리피오돌^® 중에 용해시켰다.

7.5 ㎖의 리피오돌^® 및 1%의 PGPR로 이루어진 지질상을 이후 수상에 첨가하고, 이렇게 얻은 현탁액의 격렬한 교반에 의해 에멀젼을 제조하였다.

1.3. 리피오돌 ^® 및 철 기반 자기 입자의 에멀젼

1.3.1. 리피오돌 ^® , 철 기반 자기 입자 및 안트라사이클린의 에멀젼

올레산에 의해 피복된 철 화합물에 기초한 자기 나노입자(선행 기술로부터 공지된 기법에 따라 합성됨)를 전부 60 g의 리피오돌^® 중에 60℃에서 24시간 동안 용해시켰다. 나안에 보이는 응집체의 부재에 주목함으로써 상기 자기 나노입자의 전체 용해를 가시적으로 평가하였다. 상온으로 돌아간 후, 용액을 저장하고 사용하여 에멀젼을 제조하였다.

아드리블라스티나^®의 50 ㎎ 병을 2.5 ㎖의 제네틱스^® 250에 의해 재구성하였다. 우수한 용해를 위해 30초 동안 수동으로 교반을 수행하였다. 얻은 용액을 20 ㎖의 루어 락 주사기에 의해 제거하고, 이것을 3방향 탭에 위치시켰다.

PGPR(1% w/v 전체, 100 ㎎)을 자기 입자를 포함하는 7.5 ㎖의 리피오돌^® 중에 분산시켰다.

얻어진 용액을 20 ㎖의 루어 락 주사기에 의해 제거하고, 이것을 또한 3방향 탭에 위치시켰다. 오일로 물에 의해 시작하여 중간 힘에서의 30회 통과, 즉 15회 전후 이동을 수행하였다.

1.3.2. 리피오돌 ^® 및 철 기반 자기 입자의 에멀젼

하기 화학식의 젬-비스포스포네이트의 층에 의해 피복된 철 화합물에 기초한 자기 나노입자(선행 기술로부터 공지된 기법에 따라 합성됨; 특히 WO 2004/058275 참조)를 PEG 2000에 커플링시키고, 전부 60℃에서 24시간 동안 10 g의 생리 식염수 중에 용해시켜서, 0.5M 철 농도를 얻었다.

나안에 보이는 응집체의 부재에 주목함으로써 상기 자기 나노입자의 전체 용해를 가시적으로 평가하였다. 상온으로 돌아간 후, 용액을 저장하고 사용하여 에멀젼을 제조하였다.

2.5 ㎖의 얻은 용액을 20 ㎖의 루어 락 주사기에 의해 제거하고, 이것을 3방향 탭에 위치시켰다. PGPR(1% w/v 전체, 100 ㎎)을 7.5 ㎖의 리피오돌^® 중에 용해시켰다. 얻은 용액을 20 ㎖의 루어 락 주사기에 의해 제거하고, 이것을 또한 90°로 3방향 탭에 위치시켰다. 오일로 물에 의해 시작하여 중간 힘에서의 30회 통과, 즉 15회 전후 이동을 수행하였다.

2. 본 발명에 따르지 않는 에멀젼과의 비교

문단 1.1에 기재된 것과 동일한 프로토콜 또는 약간 상이한 프로토콜(문단 1.1의 프로토콜과 비교되는 차이는 하기 표에 표시됨: 수성 및 지질상의 각각의 용적은 이의 비율에 기초하여 계산됨)에 따른 에멀젼을 본 발명에 따르지 않는 PGPR의 농도, 또는 낮거나 높은 HLB를 가지는 계면활성제, 예컨대 스판^® 패밀리(소르비탄의 지방산 에스테르)의 계면활성제, 크레모포어^® 패밀리(글리세롤 폴리에틸렌 글리콜 리시놀리에이트), 트윈^® 패밀리(소르비탄의 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르) 또는 플루로닉(Pluronic)^® 패밀리(에틸렌 옥사이드 및 프로필렌 옥사이드에 기초한 블록 공중합체(BASF에 의해 판매됨))의 높은 HLB를 가지는 계면활성제, 및 낮은 HLB(HLB = 6.7)를 가지는 시트롤^® PG32IS 계면활성제를 사용하여 제조하였다.

비이온성 요오드화 조영제 이외의 농후화제, 예컨대 PVP(폴리비닐피롤리돈), 글리세롤, 또는 그 외 덱스트란 T40(시그마)을 시험하였지만, 사용될 수 있는 최대 양은 요오드유, 예컨대 리피오돌^®의 밀도에 근접할 수 있게 하지 않는다. 이옥사글린산(Hexabrix^®)은 항암제, 예컨대 독소루비신을 용이하게 용해시키고 조성물의 삼투질 농도를 상당히 증가시킬 수 있게 하지 않는다.

제조된 주요 에멀젼은 하기 표에 기재되어 있다:

스판^® 80(Croda)은 소르비탄 모노올레이트이다. 또한 폴리소르베이트 80이라 불리는 트윈^® 80(Croda)은 PEG-20 소르비탄 모노올레이트이다. 크레모포어^® EL(BASF)은 화학 명칭으로서 폴리옥실 35 캐스터유를 가진다. 시트롤^® PG32IS는 폴리글리세릴-3-디이소스테아레이트이다. 이것은 따라서 화학식 (I)의 계면활성제와 같이 분지되지 않는다.

스판^® 80(HLB = 4.3) 이외의 스판^®을 시험하였다: 스판^® 20(HLB = 8.6), 스판^® 65(HLB = 2.1), 스판^® 83(HLB = 3.7) 및 스판^® 85(HLB = 1.8). 이 계면활성제에 의해 제조된 에멀젼은 모두 제조된 직후 상 분리를 겪었다. 이 화합물에 의해 에멀젼을 제조하는 것이 가능하지 않으므로 플루로닉^® 화합물(BASF)에 의해 수행된 시험은 또한 결정적이 아니다.

따라서, 얻은 비교용 에멀젼은 모두 불충분한 안정성, 또는 본 발명에 따르지 않는 센스를 나타냈다.

3. 본 발명에 따른 에멀젼의 생체내 ( In vivo ) 평가 및 본 발명에 따르지 않는 에멀젼과의 비교

3.1. 동물 모델: N1-S1 세포의 투여에 의해 유도된 암을 가지는 랫트

3.1.1. 재료 및 방법

문헌[Garin et al. (Lab Anim. 2005 Jul; 39(3): 314-20)]에 기재된 종양 유도 방법을 미리 마취된 암컷 스프라그-다울리(Sprague-Dawley) 랫트(공급자: Depre 또는 Janvier(프랑스))에서 사용하였다.

100 ㎕의 IMDM 배지(이소코브(Iscove)의 변형 둘베코 배지) 중에 현탁된 6 x 10⁶개의 N1-S1 랫트 간세포 암종 종양 세포(또한 노비코프(Novikoff) 세포라 불리는, 명칭 CRL-1604™ 하에, ATCC에 기탁됨)를 대략 50초에 걸친 느린 주사에 의해 암컷 랫트의 좌측엽의 간피막 하에 투여하였다.

정보의 방식으로, N1-S1 종양 세포주를 초기에 수컷 스프라그-다울리 랫트에서 4-디메틸아미노아조벤젠의 경구 투여에 의해 유도된 간세포암으로부터 얻었다.

8개의 그룹(각각 4마리의 동물)을 형성하였다.

시험된 생성물(그룹마다 1개의 생성물):

수상과 지질상 사이의 비율은 1/3이었다(25 ㎕의 수상 및 75 ㎕의 리피오돌^®). 시험된 4개의 에멀젼 조성물은 역전 (W/O) 에멀젼이었다.

(상기 표에서 '예'는 'Yes'를 의미하고, '무'는 'No'를 의미함.)

"대조군" 생성물:

독소루비신 단독(0.9% NaCl) 또는, 적절한 경우, 에피루비신 단독을 4마리의 랫트의 그룹 중 하나에 대조군으로서 주사하였다.

생성물의 투여:

이 방법은 당해 분야의 당업자에게 널리 공지되어 있으며, 따라서 당업자들은 필요한 것으로 입증될 경우 소정의 매개변수를 어떻게 조정할지를 스스로 알고 있다.

TACE 시술 전날(D-1)에, 동물을 MRI(Bruker, 2.35 T)에 의해 영상화하여서, 종양 성장을 확인하였다. TACE 시술 당일(D0)에, 랫트를 다시 영상화하여서, 치료 전의 간 종양의 크기 및 이어서 용적(영상 프로세싱 소프트웨어 사용)을 측정하였다.

종양 유도 방법을 수행한 7일 후, 생성물(용적: 100 ㎕)을 위십이지장 동맥을 통해 미리 마취된 동물에 주사하였다.

에멀젼의 주사 후 이 에멀젼에 함유된 항암제의 혈장 동역학의 측정:

동맥내 주사 후 0분, 5분, 10분, 20분, 30분 및 45분의 시간에 300 ㎕의 혈액 샘플을 목동맥의 카테터 설치 후 취했다. 항암제의 평가를 위해 원심분리 후 150 ㎕의 혈장을 이후 회수하고 헤파린화하였다. 항암제의 혈장 동역학의 연구를 따라서 수행하였다.

혈장 독소루비신 검정을 고성능 액체 크로마토그래피(또는 HPLC)에 의해 헤파린화된 랫트 혈장에서 수행하고, 크로마토그래피는 형광 검출기가 장착된다. 40%의 아세토니트릴에 의한 산성 배지(아세트산암모늄, pH 3.5) 중의 침전에 의해 혈장 샘플을 제조하였다. 200 ㎕의 랫트 혈장(리튬 헤파리네이트)이 필요하였다. 조박스(Zorbax) 300SB-C18 4.6 x 150 ㎜에서의 역상 HPLC, 3.5 ㎛의 칼럼(조박스 300SB-C18 4.6 x 12.5 ㎜, 5 ㎛의 전치칼럼이 구비) 및 형광 검출(여기 파장 480 ㎚, 방출 파장 560 ㎚)에 의해 10 ㎕의 추출물을 분석하였다.

5 mM 아세트산암모늄(pH 3.5/아세토니트릴 구배)에 의해 30분에 걸쳐 분석을 수행하였다. 보정 곡선(2 ㎍/ℓ 내지 1600 ㎍/ℓ의 DOX 보정 범위 - 2 ㎍/ℓ 내지 400 ㎍/ℓ의 DOXol 보정 범위)을 통해 샘플을 평가하였다. HPLC 피크의 면적이 정량의 상한보다 높을 때, 10 ㎕ 대신에 5 ㎕를 주사하여서 범위에 포함된 독소루비신의 면적을 얻었다. T0, 5분, 10분, 20분, 30분 및 45분의 시간에 블라인드로 검정을 수행하였다.

종양 및 건강한 간의 샘플의 조직학적 평가:

동물을 O₂의 분당 1 ℓ의 이소플루란 가스 마취(5%)에 의해 마취시켰다. 부검을 수행하고, 혈액, 혈장, 종양 및 건강한 간 샘플을 취해서 독소루비신 및 에피루비신의 검정을 수행하였다. 종양의 조직학적 분석을 위해 취해진 종양 및 건강한 간 샘플을 동결(비고정)시켰다.

시편의 샘플이 위치한 슬라이드의 프로세싱(절편화, H&E에 대한 고정 등) 후, H&E(헤마톡실린-에오신) 염색을 수행하여서, 종양 부분과 이의 건강한 간 환경 사이의 우수한 구별을 얻었다. 독소루비신의 존재 또는 부재에 특정한 형광의 측정을 수행하고, 형광 수준을 1(약한 형광) 내지 6(강한 형광)의 규모로 표시하였다. 이 형광은 고려 중인 조직에 존재하는 독소루비신의 양과 비례한다. 모든 이 기법은 당해 분야의 당업자에게 널리 공지되어 있다.

3.1.2. 얻은 결과

3.1.2.1. 항암제의 혈장 동역학

시간의 함수로서 평균 농도를 나타내는 도 1의 그래프에서 하기 포인트에 주목할 수 있다:

독소루비신 농도 피크는 동물의 8개의 그룹에 대해 5분에 있다. 최고 피크(즉, 최고 혈장 농도)는 평균 2447 ㎍/ℓ로 독소루비신 단독(대조군 독소루비신)의 주사에 대한 것이다. 이것에 농도 피크의 평균이 1287 ㎍/ℓ인, 즉 독소루비신 단독의 주사에 대해 얻은 것보다 실제로 2배 더 낮은 값인, E22 생성물(에멀젼 센스 O/W - 계면활성제 없이 제네틱스^® 250을 가지면서 1/1 비율)을 투여받는 그룹, 이어서 E23 생성물(에멀젼 센스 W/O - 계면활성제도 농후화제도 없이 1/3 비율)을 투여받는 그룹, 이어서 E21 생성물(에멀젼 센스 O/W - 계면활성제도 농후화제도 없이 1/1 비율)을 투여받는 그룹이 후행하다. 10분 내지 45분의 샘플링 시간 사이에, 독소루비신 단독 및 E21, E22 및 E23 생성물을 투여받은 그룹은 E21, E22 및 E23 생성물을 투여받은 그룹에 대해 더 낮은 값으로 동일한 감소가 따른다(45분에, "대조군 독소루비신 단독" 그룹 = 112 ㎍/ℓ, "E21" 그룹 = 106 ㎍/ℓ, "E22" 그룹 = 63 ㎍/ℓ 및 "E23" 그룹 = 143 ㎍/ℓ).

E1(에멀젼 센스 W/O - 계면활성제로서 제네틱스^® 250과 PGPR을 가지면서 1/3), E2(PGPR을 가지고, 농후화제 없이, 에멀젼 센스 W/O), E4(에피루비신, PGPR 및 제네틱스^® 250을 가지면서, 에멀젼 센스 W/O) 및 E11(독소루비신, 시트롤™ DPHS 및 제네틱스^® 250을 가지면서, 에멀젼 센스 W/O) 생성물을 투여받은 그룹의 경우, 독소루비신 농도는 독소루비신 단독 또는 E21, E22 및 E23 생성물을 투여받은 그룹의 것보다 훨씬 더 낮고, 이것은 모든 샘플링 시점에서의 경우이다.

혈장 동역학의 분석은 본 발명 E1, E2, E11(도 1) 및 E4(도 1에 도시되지 않은 결과)에 따른 조성물의 주사 후 혈장 피크가 없다는 것을 보여준다.

오직 독소루비신 단독을 투여받는 동물과 비교하여 혈장 독소루비신 수준의 94% 초과만큼 감소는 따라서 본 발명에 따른 안정한 W/O 에멀젼을 투여받는 암컷 랫트에 대해 관찰되었다.

본 발명에 따르지 않는 E21, E22 및 E23 에멀젼을 투여받는 암컷 랫트의 경우, 이의 주사 5분 후 혈장 피크가 관찰되었다.

오직 독소루비신 단독을 투여받는 동물과 비교하여, 혈장 독소루비신 수준의 기껏해야 59% 만큼의 감소는 본 발명에 따르지 않는 에멀젼을 투여받는 암컷 랫트에 대해 관찰되었다.

W/O 에멀젼의 센스 및 화학식 I의 계면활성제(PGPR 또는 PEG-30 디폴리하이드록시스테아레이트)를 사용하여 개선된 이의 안정성은 본 발명에 따른 조성물의 효과적인 임상 사용을 고안하는 것이 가능하게 한다.

3.1.2.2. 종양 및 건강한 간 샘플의 조직학적 평가

슬라이드 및 특히 H&E 염색의 분석은, 건강한 조직과 관련하여 명확히 경계가 주어진, N1S1 세포가 이식된 모든 동물에서 HCC 유형(두껍고 치밀한 끈으로 연결된 다각형 세포)의 종양의 존재를 나타내는 것이 가능하게 한다.

니콘 인텐시라이트(Nikon Intensilight) C-HGFI 예비중심화 섬유 조명 시스템이 장착된 니콘 에클립스(Nikon Eclipse) 80i ABS 현미경을 사용하여 형광을 측정하였다. 하마마쓰(Hamamatsu) NDP.view 2.5 가시화 소프트웨어에 의해 영상을 보았다. 조직의 자발형광을 대조군 동물의 절편에서 결정하였다. 에멀젼 조성물을 받은 동물로부터의 종양 및 건강한 간 샘플에 대해 관찰된 형광의 수준으로부터 이 형광 수준을 추론할 수 있다.

이 절편에 대한 이 측정은 수행된 분류의 순서에서(블라인드 결정): E1(점수 6), E21(점수 1), E22(점수 3) 및 E23(점수 2)으로 종양의 수준에서의 독소루비신의 양의 차이를 나타낸다.

E1 에멀젼은 따라서 본 발명에 따르지 않는 에멀젼보다 훨씬 더 큰 정도로 종양 수준에서 항암제를 유지할 수 있게 한다.

본 발명에 따른 에멀젼의 조성물은 항암제를 벡터화하기 위한 이의 큰 능력을 나타내는데, 왜냐하면 이것이 이 항암제가 종양에 머물고 혈관 구획으로 향하지 않게 허용하기 때문이다.

3.2. 동물 모델: VX2 암 세포의 투여에 의해 유도된 암을 가지는 토끼

3.2.1. 재료 및 방법

문헌[Hong et al. (Clin Cancer Res 2006; 12 (8): 2563-2567)]에 기재된 종양 유도 방법을 미리 마취된 뉴질랜드 토끼(NZ; 공급자: Charles River(프랑스))에서 사용하였다.

VX2 종양 조직의 단편을 토끼의 좌측엽의 간피막 하에 이식하였다(NZ 토끼의 간마다 25 ㎎의 단편). 좌간엽에서의 종양을 가지는 이 토끼를 후속하여 "VX2 토끼"라 칭할 것이다.

3개의 그룹(각각 6마리의 동물)을 형성하였다.

시험된 생성물(그룹마다 1개의 생성물):

- E1(본 발명에 따른 에멀젼)

- E21(본 발명에 따르지 않는 에멀젼)

- "대조군" 생성물: 독소루비신 단독(0.9% NaCl)을 6마리의 토끼의 그룹 중 하나에서 대조군으로서 주사하였다.

생성물의 투여:

TACE 시술 당일(D0)에, 동물을 MRI(Bruker, 2.35 T)에 의해 영상화하여서, 종양 성장을 확인하고, 치료 전(D0)의 간 종양의 크기 및 이어서 용적(영상 프로세싱 소프트웨어 사용)을 측정하였다.

종양 유도 방법을 수행한 19일 후, TACE를 수행하였다. 따라서, 생성물(용적: 300 ㎕)을 대퇴 동맥을 통해 형광투시법(X선 영상화)에 의해 안내된 카테터를 사용하여 미리 마취된 동물로 주사하여, 간 종양으로 공급되는 동맥까지 도달되게 하였다(오직 선택도가 달성되는 주사). TACE를 전용 룸에서 및 임상 실행(중재적 방사선학)에 밀접한 조건 하에 수행하였다.

동맥내 주사 후 0분, 5분, 15분, 30분 또는 45분 시간에 300 ㎕의 혈액 샘플을 귀 정맥의 카테터 삽입 후 취했다. 원심분리 후 200 ㎕의 혈장을 회수하고, 항암제를 평가하기 위해 헤파린화하였다. 항암제의 혈장 동역학의 연구를 따라서 수행하였다.

상기 기재된 것과 동일한 조건 하에 혈장 독소루비신 검정을 VX2 토끼의 헤파린화 혈장에서 수행하였다. 상기 기재된 것과 동일한 조건 하에 분석을 또한 수행하였다.

종양 및 건강한 간 샘플에 전달된 독소루비신 및 리피오돌 ^® 의 양의 평가 및 조직학적 평가:

TACE(X선 영상화에 의한 가이던스 하에 생성물의 동맥내 주사)를 수행한 후 1일(D1)에 동물을 O₂의 분당 1 ℓ의 이소플루란(5%) 가스 마취에 의해 마취시켰다. 부검을 수행하고, 혈액, 혈장, 종양 및 건강한 간 샘플을 취해서, 독소루비신 및 리피오돌^® 검정을 수행하였다. 종양의 조직학적 분석을 위해 취해진 종양 및 건강한 간 샘플을 동결(비고정)시켰다.

조직의 조직학적 분석을 위해, 종양 및 건강한 간 샘플을 동결(비고정)시켰다. 연속 절편 7 ㎛ 두께를 저온 유지 장치(cryostat)에서 절단하고, 이후 -80℃에서 저장하였다.

조직의 H&E 또는 HE 지형학적 염색은 헤마톡실린에 의한 핵 염색, 이어서 1% 에오신에 의한 세포질 염색으로 이루어진다. HE 염색된 조직을 백색광 현미경에서 직접 분석하였다.

리피오돌^®은 은염색 방법에 의해 나타나고, 이것은 2.5% 질산은 용액 중에 조직을 항온처리하고, 이후 증류수 중의 2회 풍부한 세정에 의해 수행된다. 조직을 이후 헤마톡실린에 의해 대조염색하고 백색광 현미경 하에 관찰하였다.

독소루비신을 나타내기 위해, 조직을 4% 완충제 포르몰 용액 중에 후고정하고, PBS 중에 세정하고, 이후 형광(프로롱(Prolong) 변색방지(antifade) 시약)을 보전하고 핵을 대조염색하는 4',6'-디아미디노-2-페닐인돌(DAPI)을 함유하는 마운팅 배지를 사용하여 마운팅하였다. TRITC(테트라메틸로다민) 필터를 사용하여 동시형광에 의해 조직을 관찰하였다.

리피오돌^® 또는 독소루비신의 양 및 또한 확산을 점수 매김 방법을 이용하여 각각의 염색된 슬라이드에서 반정량적으로 평가하였다.

점수 규모는 하기와 같다:

- 양: 0(부재) 내지 5(확산된 존재)의 점수,

- 확산: 0((리피오돌^®의 경우) 혈관 루멘으로 제한됨, 또는 (독소루비신의 경우) 형광의 부재) 내지 3(대략 10개 이상의 열의 세포의 혈관으로부터의 거리에서의 확산)의 점수.

마지막으로, 독소루비신 및 리피오돌^®의 분포의 상관관계를 하기 등급에 따라 평가하였다:

- 우수(Good): 연속 절편에서 동일한 조직 구조의 수준에서 화합물을 검출하였다(오직 리피오돌^®이 존재하는 아주 희귀한 구조를 제외하고).

- 부분 또는 매우 부분(Partial or very partial): 오직 약간의 구조가 공통된 2개의 화합물을 가지고, 다른 구조가 리피오돌^® 단독을 함유하였다.

- 무(No): 리피오돌^®을 함유하는 구조에서 독소루비신의 전체 부재.

종양에서의 독소루비신의 검정을 고성능 액체 크로마토그래피(또는 HPLC)에 의해 수행하고, 크로마토그래피는 형광 검출기가 장착된다. GentleMacs™ 분해자 내에서 아세테이트 완충제(pH 3.5) 중에 분쇄하고, 이후 분쇄된 간 물질(대조군) 중에 (1/4의 인자로) 희석하고, 이후 40%의 아세토니트릴에 의해 산성 배지(아세트산암모늄, pH 3.5) 중에 침전시킴으로써 샘플을 제조하였다. 10 ㎕의 추출물을 상기 표시된 조건에 따라 역상 HPLC에 의해 분석하였다.

5 mM 아세트산암모늄(pH 3.5/아세토니트릴 구배)에 의해 34분에 걸쳐 분석을 수행하였다. 토끼 간에서 제작된 보정 곡선(100 ng/g 내지 20 000 ng/g)을 통해 샘플을 평가하였다.

분쇄되고 리피오돌^®(500 ㎍I/g 내지 24 000 ㎍I/g)이 도핑된 토끼 간의 보정 곡선에 대해, GentleMacs™ 분해자 내에서 물 중에 분쇄한 후 X선 형광에 의해 전체 요오드를 측정함으로써 종양에서의 리피오돌^®의 평가를 수행하였다.

3.2.2. 얻은 결과

3.2.2.1. 항암제의 혈장 동역학

시간의 함수로서 평균 농도를 나타내는 도 2의 그래프에서 하기 시점을 주목할 수 있다:

혈장 독소루비신 농도 피크는 동물의 4개의 그룹에 대해 5분에 있다. 최고 피크는 563±282 ㎍/ℓ의 평균(±SD)으로 독소루비신 단독(대조군 독소루비신)의 주사에 대한 것이다. 이것에 농도 피크의 평균(±SD)이 275±78 ㎍/ℓ인, E21 생성물(에멀젼 센스 O/W - 계면활성제 없이 제네틱스^® 250 없이 1/1 비율)을 투여받는 그룹, 이어서 19±6 ㎍/ℓ의 평균(±SD)으로 E1 생성물(에멀젼 센스 O/W - 1%의 계면활성제를 가지고 농후화제를 가지면서 1/3 비율)을 투여받는 그룹이 후행한다. 15분 내지 45분의 샘플링 시간 사이에, 독소루비신 단독 및 E21 생성물을 투여받은 그룹은 E21 생성물을 투여받은 그룹에 대해 더 낮은 값으로 동일한 감소가 따른다. E1 생성물을 투여받은 그룹에 관한 결과는 심지어 주사 후 5분에 혈장에서 발견되는 매우 낮은 농도로 인해 감소하지만 매우 평평한(스케일 효과) 것으로 보이는 외관을 가지는 곡선을 나타낸다.

E1 생성물을 투여받은 그룹의 경우, 독소루비신 농도는 E21 생성물을 투여받은 그룹의 것보다 훨씬 더 낮고, 심지어 독소루비신 단독과 비교하여 훨씬 더 현저하고, 이것은 모든 샘플링 시점에서이다.

혈장 동역학의 분석은 본 발명에 따른 E1 조성물의 주사 후 혈장 피크가 없다는 것을 보여준다(도 2).

오직 독소루비신 단독을 투여받는 동물과 비교하여 혈장 독소루비신 수준의 98% 초과만큼 감소는 따라서 본 발명에 따른 안정한 W/O 에멀젼을 투여받는 VX2 토끼에 대해 관찰되었다.

본 발명에 따르지 않는 E21 에멀젼을 투여받은 VX2 토끼의 경우, 이의 주사 5분 후 혈장 피크가 관찰되었다.

오직 독소루비신 단독을 투여받는 동물과 비교하여 혈장 독소루비신 수준의 51% 초과만큼 감소는 따라서 본 발명에 따르지 않는 에멀젼을 투여받는 토끼에 대해 관찰되었다(도 2).

또 다른 동물 모델에서, 이 결과는 W/O 에멀젼의 센스 및 화학식 I의 계면활성제(PGPR)를 사용하여 개선된 이의 안정성은 본 발명에 따른 조성물의 효과적인 임상 사용을 고안하는 것이 가능하게 한다는 것을 확인시켜준다.

3.2.2. 항암제의 전달

본 발명에 따른 생성물 E1의 주사 후 전달된 양의 결정은 본 발명에 따르지 않는 에멀젼 E21보다 상당히 더 높은 종양 수준으로 존재하는 독소루비신의 양을 보여준다(표 1).

[표 1]

본 발명에 따른 W/O 안정한 에멀젼을 투여받은 VX2 토끼의 경우, 본 발명에 따르지 않는 에멀젼을 투여받은 토끼보다 독소루비신의 더 높은 전달이 따라서 관찰되었다.

리피오돌^®의 양이 또한 결정되고, 본 발명에 따르지 않는 에멀젼 E21과 비교하여 본 발명에 따른 에멀젼 E1에 의해 종양에서 발견된 리피오돌^®의 더 높은 양을 보여준다(표 2).

[표 2]

독소루비신 및 리피오돌^® 농도의 결정은 2개의 측정 사이에 상관관계가 존재하는지를 평가할 수 있게 한다(도 3). 도 3에서, 본 발명에 따른 W/O 안정한 에멀젼(E1)을 받은 VX2 토끼의 경우, 높은 상관관계가 따라서 종양에서 독소루비신과 리피오돌^® 농도 사이에 관찰된다(r²=0.95). 본 발명에 따르지 않은 E21 에멀젼을 투여받은 토끼의 경우, 상관관계가 관찰되지 않았다.

E1 에멀젼을 투여받는 VX2 토끼의 경우, 독소루비신 및 리피오돌^®의 더 높은 병존 전달이 따라서 본 발명에 따르지 않는 에멀젼 E21을 투여받는 토끼와 비교하여 관찰되었다.

3.2.3. 종양 및 건강한 간 샘플의 조직학적 평가

슬라이드 및 특히 H&E 염색의 분석은, 건강한 조직과 관련하여 명확히 경계가 주어진, VX2 종양 단편이 이식된 모든 동물에서 HCC 유형(두껍고 치밀한 끈으로 연결된 다각형 세포)의 종양의 존재를 나타내는 것이 가능하게 한다.

세포 규모에서, 독소루비신은 이의 작용 기전이 제시하는 것처럼 핵 또는 핵 부스러기에서 관찰되었다. 독소루비신 분포를 반정량적으로(블라인드 판독) 평가하고, 점수는 E1 생성물의 투여 후 (점수 3.5±0.84) 및 E21 생성물의 투여 후(점수 1.75±0.96) 종양에서의 독소루비신의 양의 차이를 나타낸다. E1 생성물은 더 많은 독소루비신을 종양으로 전달한다.

리피오돌^®과 관련하여, 종양 분포를 주사된 양과 관련하여 정규화 후 반정량적으로 평가하고, 점수는 에멀젼 사이의 종양에서 리피오돌^®의 양의 어떠한 차이도 나타내지 않는다.

E1 에멀젼은 따라서 본 발명에 따르지 않는 에멀젼보다 종양에 훨씬 더 많은 항암제를 전달하게 한다. 따라서, 본 발명에 따른 에멀젼의 조성물이 항암제를 벡터화하기 위한 이의 큰 능력을 갖는 것이 명확하게 나타나는데, 왜냐하면 이것이 이 항암제가 종양에 머물게 하고, 혈관 구획으로 향하지 않게 허용하기 때문이다.

마지막으로, 2개의 화합물의 조직 상관관계는 E1 그룹에서 종양의 수준에서 우수하지만, E21 그룹의 경우 매우 부분적으로 그러하여서, 검정에 의해 얻은 결과를 확인시켜준다.

건강한 간에서의 생성물의 독성과 관련하여, E1 및 E21 생성물을 투여받은 동물 및 대조군 동물(주사가 없는 VX2 토끼)에서의 괴사, 염증, 맥관질 또는 담관성 섬유증/증식에 대한 점수의 차이가 없었다.

Claims

유중수 에멀젼 형태의 조성물에 있어서,
- 20% 내지 40%(v/v)의, 항암제를 포함하는 액적 형태의 수상,
- 60% 내지 80%(v/v)의, 요오드유(iodized oil) 및, 조성물의 전체 용적에 대해 계면활성제의 중량 기준으로, 0.3% 내지 5%의 비율의, 적어도 하나의 화학식 (I)의 계면활성제를 포함하는 지질상,
을 포함하며,
상기 계면활성제의 화학식 (I)은 하기인, 조성물:
[화학식 I]

식 중,
- s는 0 또는 1이고,
- m은 2 내지 30의 정수를 나타내고,
- R₁은 하기 화학식 (II)의 기를 나타내고,
[화학식 II]

식 중, n은 4 내지 10의 정수를 나타내고, o는 1 내지 4의 정수를 나타내고, p는 3 내지 7의 정수를 나타내고, q는 2 내지 10의 정수를 나타내고, r은 0 또는 1이고,
- R₂는 수소 원자를 나타내거나, R₁과 동일하고,
- R₃은 각각 독립적으로 수소 원자를 나타내거나, R₁과 동일함.
제1항에 있어서,
R₃은 각각 수소 원자를 나타내는, 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 조성물은 안정한 것을 특징으로 하는, 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항암제는,
안트라사이클린, 백금 착체, 미톡산트론, 네모루비신, 미토마이신 C, 블레오마이신, 악티노마이신 D, 이리노테칸, 5-플루오로우라실, 소라페닙, 수니티닙, 레고라페닙, 브리바닙, 오란티닙, 린시티닙, 에를로티닙, 카보잔티닙, 포레티닙, 티반티닙, 포테무스틴, 타우로무스틴(TCNU), 카르무스틴, 사이토신 C, 사이클로포스폰아마이드, 사이토신 아라비노사이드, 파클리탁셀, 도세탁셀, 메토트렉세이트, 에버롤리무스, PEG-아르기닌 데이미나아제, 테가푸르/기메라실/오테라실 복합제, 무파르포스타트, 페레티노인, 젬시타빈, 베바시주맙 및 라무시루맙, 플록수리딘, GM-CSF, 몰그라모스팀, 사르그라모스팀, OK-432, 인터류킨-2, 인터류킨-4 및 TNF알파, ¹²⁵I 표지된 항-CEA(암태아성 항원) 항체, 이들 화합물 중 하나가 로딩된 미소구체, 방사성 원소 및 상기 방사성 원소와 대환식 킬레이트의 착체, 철 화합물 및/또는 가돌리늄 킬레이트에 기초한 자기 입자, 방사성 미소구체, 데옥시리보핵산 및 리보핵산 서열로부터 선택된 핵산 서열 및 이들의 혼합물로부터 선택된 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 안트라사이클린은,
독소루비신, 에피루비신, 네모루비신 및 이다루비신으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 수상은,
비이온성 요오드화 조영제들(nonionic iodinated contrast products) 및 이들의 혼합물로부터 선택된 농후화제(densifying agent)를 또한 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 지질상은,
린시드유, 대두유, 팜유, 코코넛유, 캐스터유, 옥수수유, 면실유, 땅콩유, 참깨유, 해바라기유, 홍화유, 아몬드유, 올리브유, 양귀비유 및 하기 화학식의 지방산 트리글리세라이드들의 혼합물을 포함하거나 이것으로 이루어진 오일로부터 선택된, 비요오드유를 또한 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물:

식 중, R은 3개 내지 35개의 탄소 원자를 포함하는 지방족 사슬이되, 지방산들 중 95% 초과는 C8 및/또는 C10임.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 계면활성제는,
1 내지 8의 HLB를 가지는 것을 특징으로 하는, 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 계면활성제는,
폴리글리세릴 폴리리시놀리에이트 및 PEG-30 디폴리하이드록시스테아레이트로부터 선택된 것을 특징으로 하는, 조성물.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 요오드유는,
양귀비유의 요오드화 지방산의 에틸 에스테르 또는 올리브유의 요오드화 지방산의 에틸 에스테르를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 수상 액적의 크기는 1 내지 200 ㎛인 것을 특징으로 하는, 조성물.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은,
100 내지 200 mPa.s에 포함되는 20℃에서의 점도 및/또는 40 내지 80 mPa.s에 포함되는 37℃에서의 점도를 가지는 것을 특징으로 하는, 조성물.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
암 또는 그것의 전이의 치료에서의 용도를 위한, 조성물.
a) 요오드유 중에 제1항 또는 제2항에 정의된 바와 같은 계면활성제를 혼합하는 단계, 및
b) 단계 a)에서 얻은 용액을 항암제를 포함하는 수용액과 혼합하는 단계
를 포함하는, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 제조하는 방법.
- 제1항 또는 제2항에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 계면활성제,
- 요오드유,
를 포함하는, 항암제를 벡터화 하기 위한 복합제품(combination product)으로서의 키트의 용도.
제1항, 제2항, 제3항, 제8항 내지 제10항 및 제12항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 항암제 벡터로서의 용도.