KR20160113302A - 호중구감소증을 치료하기 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

호중구감소증을 치료하기 위한 조성물 및 방법 Download PDF

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KR20160113302A
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링타오 우
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칠드런＇스 하스피틀 로스 앤젤레스
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Abstract

본 발명은 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환을 앓을 가능성을 감소시키고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추기 위해 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체를 이용하는 방법에 관계한다. 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체는 단일 조성물에서 또는 별개의 조성물에서 제공될 수 있다. 치료 효과량의 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체는 동시에 또는 순차적으로 개체에 투여될 수 있다. 이들 방법과 조성물로 치료가능한 질환은 다양한 형태의 호중구감소증 및 미생물 감염을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 본 발명은 또한, 본원에서 설명된 치료의 효력을 결정하기 위한 방법에 관계한다.

Description

호중구감소증을 치료하기 위한 조성물 및 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING NEUTROPENIA}
연방 정부의 지원을 받은 연구에 관한 진술
본 발명은 국립보건원에 의해 수여된 보조금 번호 CA120512 및 ARRA-CA120512 하에 정부 지원을 받아 만들어졌다. 정부는 본 발명에서 일정한 권리를 갖는다.
발명의 분야
본 발명은 레티노이드 효현제 및 과립구 집락 자극 인자 (G-CSF 또는 GCSF)로 질환을 치료하기 위한 조성물, 방법 및 키트에 관계한다. 본 발명은 또한, 세포 요법을 위해 탈체 변형된 세포 (가령, 조혈 줄기 세포 [HSCs]로부터 유래된 과립구 [예로서, 호중구, 호산구 및 호염기구])로 질환을 치료하기 위한 조성물, 방법 및 키트에 관계한다. 상기 질환은 다양한 형태의 호중구감소증을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다.
배경
본원에서 인용된 모든 간행물은 마치 각 개별 간행물 또는 특허 출원이 참조로서 편입되는 것으로 특정적으로 및 개별적으로 지시되는 것과 동일한 정도로 전체적으로 참조로서 편입된다. 하기 설명은 본 발명을 이해하는데 유용할 수 있는 정보를 포함한다. 본원에서 제공된 임의의 정보가 현재 청구된 발명의 선행 기술이거나 또는 이와 유관하고, 또는 구체적으로 또는 함축적으로 참고된 임의의 간행물이 선행 기술인 것으로 인정되지 않는다.
가장 통상의 과립구인 호중구는 병원체 감염에 대항하여 일차적으로 방어하는 순환 백혈구의 최대 70%를 구성한다. 암 화학요법-유도된 호중구감소증은 미생물 감염에 대한 감수성을 야기하는, 혈류 내에 호중구의 숫자에서 유의미한 감소로 표시되는 혈액학적 장애이다. 암 환자의 약 15-40%는 화학요법-유도된 호중구감소증 때문에, 치료 지체 및/또는 용량 감소를 필요로 한다. 호중구감소증으로 인한 사망률은 고형 종양을 앓는 환자에서 약 5% 및 일부 혈액학적 악성에서 11%이다.
호중구 생산은 조혈 줄기 세포 (HSC)의 과립구형성 동안 균형화된 증식 및 분화를 필요로 한다. GCSF는 2 십년 이상 동안 후천성 및 선천성 호중구감소증을 치료하는데 이용되고 있는데, 그 이유는 이것이 HSC의 과립구형성을 증진하여 호중구를 재건하기 때문이다. 하지만, GCSF 투여에 대한 응답으로 재건된 다수의 호중구는 미성숙하고, 따라서 암 화학요법-유도된 호중구감소증 (CCIN) 환자의 감염 및 감염-관련된 사망률 둘 모두를 감소시키는데 실패하는 무효한 GCSF 요법을 유발한다. 증거는 CCIN에 대한 GCSF의 일차적인 예방적 이용의 비용 효율이 결정적이지 않다는 것을 뒷받침하고, 그리고 최근 연구는 화학요법의 첫 번째 코스 동안 GCSF의 일차적인 예방적 이용이 전체 건강 비용에서 57% 증가와 연관된다는 것을 보여주었다. US에서, CCIN의 비용은 외래환자 에피소드마다 $1,893 내지 열성 호중구감소증 입원마다 $38,583의 범위에서 변하였다. CCIN의 임상적 및 경제적 부담에서 실제적인 차이가 암 유형, 동시이환 및 감염의 유형에 따라 존재한다. CCIN에서 감소된 염증 반응 때문에, 감염의 증상 및 징후가 약화되거나 또는 심지어 부재한다. 따라서, 화학요법은 열성 호중구감소증 (33.5%) 및 비-열성 호중구감소증 (40.6%) 환자 둘 모두에 대한 대부분의 비용을 구성한다. 2015년에만 열성 호중구감소증 입원 (FNH)에 대한 추정된 비용이 약 $2.1 십억이다. 이러한 비용은 비-열성 호중구감소증, 새로운 화학요법을 필요로 하는 재발된 암 환자, 선천성 호중구감소증, 특발성 중증 만성 호중구감소증, 주기 호중구감소증, 그리고 방사선유발 호중구감소증의 치료에 대한 비용을 포함하지 않는다. 따라서, GCSF의 예방적 이용에도 불구하고, 호중구감소증은 실제적인 이환율, 사망률, 그리고 건강 관리 비용으로 인해, 암 환자에 대한 치명적인 문제로서 여전히 남아있다. 따라서, 치료의 대안적 방식이 이들 호중구감소성 환자에 대해 시급하게 요구된다.
본원에서, 본 발명자는 감염 및 감염-관련된 사망률을 감소시키는 것에 대한 레티노이드 효현제 (가령, Am80) 및 G-CSF의 조합의 상승 효과를 보여준다. 호중구감소증 및 호중구감소증-관련된 질환을 치료하기 위해, 감염 및 감염-관련된 사망률에 대항하여 성숙 호중구의 재건에 대한 레티노이드 효현제 (가령, Am80) 및 G-CSF의 상승 효과를 활용하는 조성물, 방법 및 키트가 본원에서 제공된다.
발명의 요약
본 발명의 다양한 구체예는 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 방법을 제공한다. 상기 방법은 레티노이드 효현제를 제공하고; G-CSF 또는 이의 유사체를 제공하고; 그리고 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체의 치료 효과량을 개체에 투여하고, 따라서 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 것을 포함하거나 또는 이들로 구성될 수 있다. 다양한 구체예에서, 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체는 한 가지 조성물 또는 별개의 조성물 내에 있을 수 있다. 다양한 구체예에서, 상기 방법은 화학요법제 및/또는 항균성 작용제를 개체에 제공하고 투여하는 것을 더욱 포함할 수 있다.
본 발명의 다양한 구체예는 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체를 포함하는 조성물을 제공한다. 다양한 구체예에서, 조성물은 화학요법제 및/또는 항균성 작용제를 더욱 포함할 수 있다.
본 발명의 다양한 구체예는 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추기 위한 키트를 제공한다. 키트는 다음을 포함한다: 일정량의 레티노이드 효현제; 일정량의 G-CSF 또는 이의 유사체; 그리고 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추기 위해 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체를 이용하기 위한 사용설명서. 다양한 구체예에서, 키트는 화학요법제 및/또는 항균성 작용제 및 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추기 위해 화학요법제 및/또는 항균성 작용제를 이용하는 사용설명서를 더욱 포함할 수 있다.
본 발명의 다양한 구체예는 성숙 과립구를 산출하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 세포 (가령, HSC, 골수 과립구성 선조체 세포 및 조혈 CD34+ 세포)를 제공하고, 그리고 세포를 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체로 자극하고, 따라서 성숙 과립구를 산출하는 것을 포함한다. 본 발명의 다양한 구체예는 재건된 성숙 과립구를 포함하는 조성물을 더욱 제공한다. 다양한 구체예에서, 조성물은 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체를 더욱 포함한다. 일정한 구체예에서, 과립구는 호중구이다.
본 발명의 다양한 구체예는 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 방법을 제공한다. 상기 방법은 세포 (가령, HSC, 골수 과립구성 선조체 세포, 그리고 조혈 CD34+ 세포)를 제공하고, 세포를 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체로 자극하고, 따라서 과립구를 산출하고 산출된 과립구를 개체에 투여하고, 따라서 개체에서 질환을 치료하는 것을 포함한다. 일정한 구체예에서, 과립구는 호중구이다. 다양한 구체예에서, 과립구를 산출하는 것은 과립구의 형성을 자극하는 것이다.
본 발명의 다양한 구체예는 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 방법을 제공한다. 상기 방법은 세포 (가령, HSC, 골수 과립구성 선조체 세포, 그리고 조혈 CD34+ 세포)를 제공하고, 세포를 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체로 자극하고, 그리고 자극된 세포를 개체에 투여하고, 따라서 개체에서 질환을 치료하는 것을 포함한다.
레티노이드 효현제의 실례는 타미바로텐 (Am80, 레티노벤조익산, 암노이드, 타미바로), CH55, ITYA (ITYA-01115), Am580, BD4, 또는 NRX195183 (AGN195183으로서 또한 지칭됨), 또는 이들의 기능적 등가물, 유사체, 또는 유도체를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. G-CSF 또는 이의 유사체의 실례는 야생형 G-CSF, 재조합 G-CSF, G-CSF 단위체 또는 이합체, 재조합 인간 G-CSF (rhG-CSF) 이합체, G-CSF 돌연변이체, G-CSF 융합 단백질, G-CSF 단편, 변형된 G-CSF 폴리펩티드, 페길화된 G-CSF, 당화된 G-CSF, 그리고 특정한 리신 (Lys 17)에서 Y-모양 분지된 폴리에틸렌 글리콜로 변형된 G-CSF (YPEG-G-CSF)를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다.
본 발명의 다양한 조성물, 방법 및 키트는 다양한 형태의 호중구감소증 및 호중구감소증-관련된 질환을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 다양한 질환의 치료에서 유용성을 찾는다. 무제한적 실례로서, 본 발명의 조성물, 방법 및 키트는 암 요법 (가령, 화학요법 및 방사선 요법) 및/또는 미생물 감염의 치료와 함께 이용될 수 있다.
본 발명의 다양한 구체예는 치료가 필요한 개체에서 치료의 효력을 결정하기 위한 방법을 제공한다. 이들 방법은 개체로부터 표본을 제공하고, 여기서 개체는 효과량의 레티노이드 효현제 및 효과량의 G-CSF가 투여되었고, 반응성 산소 종 (ROS)의 생산 수준을 검정하고, 그리고 ROS 생산이 참조 표본의 것보다 높으면 치료가 유효하다고 결정하거나, 또는 ROS 생산이 참조 표본과 동일하거나 또는 참조 표본에 비하여 낮으면 치료가 유효하지 않다고 결정하는 것을 포함한다.
도면의 간단한 설명
예시적인 구체예가 참조된 도면에서 도해된다. 본원에서 개시된 구체예와 도면은 제한보다는 예시로서 고려되는 것으로 의도된다.
도면 1은 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, 세포 주기의 인산화 조절, RA 표적 유전자 발현, 그리고 유리 CAK 및 TFIIH-내포 CAK 둘 모두에 의한 일반적인 전사를 묘사한다.
도면 2는 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, MAT1 단백질의 M30 및 pM9 단편으로의 내재적으로 프로그램된 개열이 RARα의 CAK 인산화를 감소시키고, 균형화된 골수조혈성 확대 및 분화의 기초가 되는 과립구형성을 야기한다는 것을 묘사한다. CMP: 통상적인 골수성 선조체; GMP: 과립구/단핵구 선조체; 그리고 Gra: 과립구.
도면 3은 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, RA와 비교하여, Am80이 RARα를 선별적으로 활성화시켜 골수성 확대 및 분화 둘 모두를 자극하기 위한 신규한 전사 반응을 유도한다는 것을 묘사한다. 리본 위쪽 화살표는 증가된 발현을 지시하고, 그리고 리본 아래쪽 화살표는 감소된 발현을 지시한다.
도면 4는 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, 생쥐 모형이 인간 호중구감소증과 유사하다는 것을 확립하기 위해 인간 (왼쪽 패널) 및 생쥐 (오른쪽)에서 화학요법 유도된 호중구감소증의 비교를 묘사한다.
도면 5는 본 발명의 구체예에 따라서, EC50 시험이 Am80 및 Am80-GCSF 조합의 인간 동등한 낮은 및 중간 용량이 호중구-감소 시기에서 호중구의 회복을 효과적으로 증진한다는 것을 보여준다는 것을 묘사한다.
도면 6은 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, 호중구-감소 시기에서 호중구감소성 생쥐에서 Am80의 중간 용량에 의해 유도된 호중구가 G-CSF 또는 Am80-GCSF에 의해 유도된 것들보다 더욱 큰 살균 활성을 전시한다는 것을 묘사한다.
도면 7은 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, 호중구-감소 시기에서 호중구감소성 생쥐에서 Am80의 낮은 용량에 의해 유도된 호중구가 GCSF 또는 Am80-GCSF에 의해 유도된 것들보다 더욱 큰 살균 활성을 전시한다는 것을 묘사한다.
도면 8은 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, 호중구-회복 시기에서 호중구감소성 생쥐에서 Am80-GCSF 조합의 더욱 낮은 용량에 의해 유도된 호중구가 Am80 또는 GCSF에 의해 유도된 것들보다 더욱 큰 살균 활성을 전시한다는 것을 묘사한다.
도면 9는 본 발명의 구체예에 따라서, 생존 생쥐 모형이 낮은 용량의 Am80-GCSF가 호중구감소성 생쥐의 감염-관련된 사망률을 감소시킨다는 것을 증명한다는 것을 묘사한다.
도면 10은 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, Am80의 분자 신호전달을 묘사한다.
도면 11은 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, Am80 및 G-CSF의 조합이 백혈병성 성장을 저해하면서 Am80 또는 G-CSF 단독보다 더욱 큰 ROS 생산을 증진한다는 것을 묘사한다.
도면 12는 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, Am80 및 GCSF의 조합이 정상적인 조혈 CD34+ 전구체 세포에서 Am80 또는 G-CSF 단독보다 더욱 큰 ROS 생산을 증진한다는 것을 묘사한다.
도면 13은 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, G-CSF 치료가 Am80 또는 ATRA로 치료된 환자와 비교하여 비-APL (급성 전골수성 백혈병) AML 환자 모구의 성장을 증진한다는 것을 묘사한다.
도면 14는 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, Am80-GCSF가 건강한 인간 공여자로부터 단리된 말초혈 단핵 세포에서 ROS 생산을 유의미하게 증진한다는 것을 묘사한다.
도면 15는 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, Am80-GCSF가 급성 골수성 백혈병 환자로부터 획득된 건강한 골수 (BM) 세포 또는 말초혈 (PB) 단핵 세포에서 훨씬 큰 ROS 생산을 증진한다는 것을 묘사한다.
발명의 상세한 설명
본원에서 인용된 모든 참고문헌은 마치 완전히 진술된 것처럼 전체적으로 참조로서 편입된다. 달리 정의되지 않으면, 본원에서 이용된 기술 용어와 과학 용어는 본 발명이 속하는 당해 분야의 평균적 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. Allen et al., Remington: The Science and Practice of Pharmacy 22 nd ed., Pharmaceutical Press (September 15, 2012); Hornyak et al., Introduction to Nanoscience and Nanotechnology, CRC Press (2008); Singleton and Sainsbury, Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 3 rd ed., 개정판, J. Wiley & Sons (New York, NY 2006); Smith, March's Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 7 th ed., J. Wiley & Sons (New York, NY 2013); Singleton, Dictionary of DNA and Genome Technology 3 rd ed., Wiley-Blackwell (November 28, 2012); 그리고 Green and Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 4th ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (Cold Spring Harbor, NY 2012)은 본 출원에서 이용된 용어 중에서 다수에 대한 일반적인 보도를 당업자에게 제공한다. 항체를 제조하는 방법에 관한 참고문헌의 경우에, Greenfield, Antibodies A Laboratory Manual 2 nd ed., Cold Spring Harbor Press (Cold Spring Harbor NY, 2013); K
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hler and Milstein, Derivation of specific antibody-producing tissue culture and tumor lines by cell fusion, Eur. J. Immunol. 1976 Jul, 6(7):511-9; Queen and Selick, Humanized immunoglobulins, U. S. 특허 번호 5,585,089 (1996 Dec); 그리고 Riechmann et al., Reshaping human antibodies for therapy, Nature 1988 Mar 24, 332(6162):323-7을 참조한다.
당업자는 본 발명의 실시에 이용될 수 있는, 본원에서 설명된 것들과 유사하거나 균등한 많은 방법과 재료를 인식할 것이다. 본 발명의 다른 특질 및 이점은 본 발명의 구체예의 다양한 특질을 실례로서 도해하는 첨부 도면과 합쳐진 다음의 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다. 실제로, 본 발명은 설명된 방법과 물질에 결코 국한되지 않는다. 편의를 위해, 본원의 명세서, 실시예 및 첨부된 청구항에서 이용된 일정한 용어가 여기에서 집합된다.
달리 명시되지 않거나, 또는 문맥으로부터 암시되지 않으면, 다음의 용어 및 관용구는 아래에 제공된 의미를 포함한다. 명시적으로 달리 언급되지 않거나, 또는 문맥으로부터 명백하지 않으면, 아래 용어 및 관용구는 상기 용어 또는 관용구가 관련되는 당해 분야에서 획득된 의미를 배제하지 않는다. 이들 정의는 특정 구체예를 설명하는데 보조하기 위해 제공되고, 그리고 청구된 발명을 한정하는 것으로 의도되지 않는데, 그 이유는 발명의 범위가 단지 청구항에 의해서만 한정되기 때문이다. 달리 규정되지 않으면, 본원에서 이용된 모든 기술 용어와 과학 용어는 본 발명이 속하는 당해 분야의 평균적 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "포함하는" 또는 "포함한다"는 한 구체예에 유용하지만, 유용한 지의 여부에 상관없이 특정되지 않은 요소의 포함에 개방적인 조성물, 방법, 그리고 이들의 개별 성분(들)에 관하여 이용된다. 전반적으로, 본원에서 이용된 용어는 일반적으로 "열린" 용어로서 의도되는 것으로 당업자에 의해 이해될 것이다 (가령, 용어 "포함하는"은 "포함하지만 한정되지 않는" 것으로 해석되어야 하고, 용어 "갖는"은 "최소한 갖는" 것으로 해석되어야 하고, 용어 "내포한다"는 "내포하지만 한정되지 않는" 것으로 해석되어야 하고, 기타 등등이다).
달리 명시되지 않으면, 본 출원의 특정 구체예를 설명하는 문맥에서 (특히, 청구항의 문맥에서) 이용된 용어 "a," "an" "the" 및 유사한 지시대상은 단수와 복수 둘 모두를 커버하는 것으로 해석될 수 있다. 본원에서 값의 범위의 열거는 단지, 상기 범위 내에 속하는 각 별개 값을 개별적으로 지칭하는 속기 방법으로서 역할하는 것으로 의도된다. 본원에서 달리 지시되지 않으면, 각 개별 값은 마치 본원에서 개별적으로 언급되는 것처럼 명세서 내로 통합된다. 본원에서 설명된 모든 방법은 본원에서 달리 지시되지 않으면 또는 만약 그렇지 않으면, 문맥에 의해 명백하게 부인되지 않으면 임의의 적절한 순서로 수행될 수 있다. 본원에서 일정한 구체예에 대하여 제공된 임의의 모든 실례, 또는 예시적인 언어 (가령, "예를 들면")의 이용은 본 출원을 단지 더욱 효과적으로 조명하기 위한 것으로만 의도되고, 그리고 만약 그렇지 않으면 청구되는 본 출원의 범위에 제한을 제기하지 않는다. 약어, "가령"은 라틴어 예컨대 (exempli gratia)로부터 유래되고, 그리고 무제한적 실례를 지시하기 위해 본원에서 이용된다. 따라서, 약어 "가령"은 용어 "예로서"와 동의어이다. 명세서 내에 어떤 언어도 본 출원의 실시에 필수적인 임의의 청구되지 않은 원소를 지시하는 것으로 해석되지 않아야 한다.
본원에서 이용된 바와 같이, 질환, 장애 또는 의학적 상태에 관하여 이용될 때 용어 "치료한다," "치료," "치료하는," 또는 "개선"은 치료적 처치 및 예방적 또는 방지적 조치 둘 모두를 지칭하고, 여기서 목적은 증상 또는 질환의 진행 또는 심각도를 예방하거나, 반전시키거나, 경감하거나, 개선하거나, 저해하거나, 줄이거나, 속도를 늦추거나 또는 중단시키는 것이다. 용어 "치료하는"은 질환의 최소한 하나의 부정적인 효과 또는 증상을 감소시키거나 또는 경감하는 것을 포함한다. 치료는 일반적으로, 하나 또는 그 이상의 증상 또는 임상적 마커가 감소되면 "효과적"이다. 대안으로, 치료는 질환, 장애 또는 의학적 상태의 진행이 감소되거나 또는 중단되면 "효과적"이다. 다시 말하면, "치료"는 증상 또는 마커의 향상뿐만 아니라, 치료의 부재에서 예상되는 증상의 진행 또는 악화의 휴지 또는 최소한 늦춤을 포함한다. 또한, "치료"는 유익한 결과를 추구하거나 또는 획득하고, 또는 치료가 궁극적으로 실패하더라도 질환이 발생하는 개체의 기회를 낮추는 것을 의미할 수 있다. 치료가 필요한 대상에는 질환을 이미 앓고 있는 대상뿐만 아니라 질환에 걸리기 쉬운 대상 또는 질환이 예방되어야 하는 대상이 포함된다.
"유익한 결과" 또는 "원하는 결과"는 질환 상태의 심각도를 줄이거나 또는 완화하고, 질환 상태가 악화되는 것을 예방하고, 질환 상태를 치료하고, 질환 상태가 발생하는 것을 예방하고, 질환 상태가 발생하는 환자의 기회를 낮추고, 이환율 및 사망률을 감소시키고, 그리고 환자의 수명 또는 기대 수명을 연장하는 것을 포함할 수 있지만, 이들에 결코 국한되지 않는다. 무제한적 실례로서, "유익한 결과" 또는 "원하는 결과"는 하나 또는 그 이상의 증상(들)의 경감, 결함 정도의 축소, 호중구감소증의 안정된 (다시 말하면, 악화되지 않는) 상태, 호중구감소증의 지체 또는 늦춤, 그리고 호중구감소증과 연관된 증상의 개선 또는 완화일 수 있다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "투여하는"은 본원에서 개시된 바와 같은 작용제를, 이들 작용제의 원하는 부위에서 최소한 부분적인 국부화를 야기하는 방법 또는 루트에 의해 개체 내로 배치하는 것을 지칭한다.
"질환" 및 "질환 상태"는 본원에서 이용된 바와 같이, 임의의 형태의 호중구감소증 또는 호중구감소증-관련된 상태, 질환 또는 장애를 포함할 수 있지만 이들에 결코 한정되지 않는다. "호중구감소증"은 본원에서 이용된 바와 같이, 혈액 내에 호중구의 비정상적으로 낮은 수준에 의해 특징화되는 과립구 장애를 지칭한다. 호중구감소증은 백혈구의 감소된 생산에 기인 (예로서, 제한 없이 골수에 영향을 주는 치료제, 골수에 영향을 주는 유전성/선천성 장애, 알코올중독, 비기능항진증, 갑상선기능항진증, 루푸스, 재생불량성 빈혈, 암 (특히, 혈액암), 방사선 요법, 비타민 B12, 엽산염 또는 구리 결핍 및/또는 살충제에 노출에 기인)할 수 있다. 호중구감소증은 또한, 백혈구의 파괴에 기인 (예로서, 제한 없이 바이러스 감염, 급성 세균 감염, 일정한 자가면역 질환, 화학요법 치료 및/또는 치료제에 기인)할 수 있다. 호중구감소증은 또한, 백혈구의 소외, 격리 및/또는 이주에 기인 (예로서, 제한 없이 혈액투석, 말라리아 및/또는 세균 감염에 기인)할 수 있다. 일정한 약제, 예를 들면, 플레카이니드, 페니토인, 인도메타신, 프로필티오우라실, 카비마졸, 클로르프로마진, 트리메토프림/술파메톡사졸 (코트리목사졸), 클로자핀, 티클로디핀 및 일정한 항정신병 약제 역시 호중구감소증을 유발할 수 있다. 본 발명의 방법과 조성물은 상기 원인 중에서 한 가지로부터 기인하는 호중구감소증을 치료하고, 저해하고, 이의 심각도를 감소시키고 및/또는 이의 예방을 증진하는데 이용될 수 있다. 본 발명의 방법과 조성물은 호중구감소증을 치료하고, 이를 저해하고, 이의 심각도를 감소시키고 및/또는 이의 예방을 증진함으로써, 호중구감소증-관련된 질환, 예를 들면, 세균, 진균, 바이러스, 기생충 감염뿐만 아니라 호중구감소증의 상기 원인 중에서 한 가지로부터 발생하는 선천성 면역의 방사선 손상을 치료하고, 이들을 저해하고, 이들의 심각도를 감소시키고 및/또는 이들의 예방을 증진하는데 또한 이용될 수 있다.
용어 "표본" 또는 "생물학적 표본"은 본원에서 이용된 바와 같이, 생물학적 생물체로부터 채취되거나 또는 단리된 표본, 예를 들면, 개체로부터 종양 표본을 표시한다. 예시적인 생물학적 표본은 생체액 표본; 혈청; 혈장; 소변; 타액; 종양 표본; 종양 생검 및/또는 조직 표본 등을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 상기 용어는 또한, 전술한 표본의 혼합물을 포함한다. 용어 "표본"은 또한, 처리되지 않은 또는 사전 처리된 (또는 전처리된) 생물학적 표본을 포함한다. 일부 구체예에서, 표본은 개체로부터 하나 또는 그 이상의 세포를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 표본은 종양 세포 표본일 수 있다, 예를 들면, 표본은 암성 세포, 종양으로부터 세포, 및/또는 종양 생검을 포함할 수 있다.
용어 "기능적"은 "등가물", "유사체", "유도체" 또는 "변이체" 또는 "단편"과 함께 이용될 때, 생물학적 활성을 소유하는 실체 또는 분자가 이의 등가물, 유사체, 유도체, 변이체 또는 단편인 실체 또는 분자의 생물학적 활성과 실제적으로 유사하다는 것을 지칭한다.
본원에서 이용된 바와 같이, "개체"는 인간 또는 동물을 의미한다. 통상적으로, 동물은 척추동물, 예를 들면, 영장류, 설치류, 가축 또는 게임 동물이다. 영장류는 침팬지, 시노몰로구스 원숭이, 거미 원숭이, 그리고 마카크, 예를 들면, 붉은털 원숭이를 포함한다. 설치류는 생쥐, 쥐, 우드척, 흰담비, 토끼 및 햄스터를 포함한다. 가축 및 게임 동물은 소, 말, 돼지, 사슴, 들소, 버펄로, 고양이 종, 예를 들면, 집고양이, 그리고 개 종, 예를 들면, 개, 여우, 늑대를 포함한다. 용어 "환자", "개체" 및 "피험자"는 본원에서 교체가능하게 이용된다. 한 구체예에서, 개체는 포유동물이다. 포유동물은 인간, 비인간 영장류, 생쥐, 쥐, 개, 고양이, 말, 또는 소일 수 있지만, 이들 실례에 한정되지 않는다. 이에 더하여, 본원에서 설명된 방법은 가축 및/또는 애완 동물을 치료하는데 이용될 수 있다.
"포유동물"은 본원에서 이용된 바와 같이, 제한 없이 인간과 비인간 영장류, 예를 들면, 침팬지와 기타 유인원과 원숭이 종; 경작용 동물, 예를 들면, 소, 양, 돼지, 염소와 말; 사육 포유동물, 예를 들면, 개와 고양이; 설치류, 예를 들면, 생쥐, 쥐와 기니 피그를 비롯한 실험 동물, 기타 등등을 포함하는 포유류 (Mammalia)의 임의의 구성원을 지칭한다. 상기 용어는 특정 연령 또는 성별을 표시하지 않는다. 따라서, 수컷 또는 암컷인지에 상관없이, 성체와 신생 개체뿐만 아니라 태아가 상기 용어의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다.
"호중구감소증-유도" 또는 "호중구 감소" 시기는 본원에서 이용된 바와 같이, 암 화학요법-유도된 호중구감소증을 지칭하고, 그리고 도면 4, 왼쪽 패널 인간 0 - 12 일자 및 오른쪽 패널 생쥐 0 - 3 일자에서 보여지는 바와 같이, 말초혈 (PB) 절대적 호중구 수치 (ANC)에서 감소와 일치한다.
"호중구감소증-회복" 또는 "호중구-회복" 또는 "호중구 유도" 시기는 본원에서 이용된 바와 같이, 최저점 또는 트로프 이후에, PB 호중구 숫자 (ANC)에서 회복을 지칭한다. 도면 4 12-24 일자 (왼쪽 패널) 및 3-9 일자 (오른쪽 패널)를 참조한다.
"개체"는 치료가 필요한 질환 (가령, 호중구감소증 또는 호중구감소증-관련된 장애) 또는 질환에 관련된 하나 또는 그 이상의 합병증으로 고통받거나 또는 이를 앓는 것으로 이전에 진단되거나 또는 확인되었고, 그리고 임의선택적으로, 상기 질환 또는 상기 질환에 관련된 하나 또는 그 이상의 합병증에 대한 치료를 이미 겪은 개체일 수 있다. 대안으로, 개체는 또한, 질환 또는 질환에 관련된 하나 또는 그 이상의 합병증을 앓는 것으로 이전에 진단되지 않았던 개체일 수 있다. 가령, 개체는 질환에 대한 하나 또는 그 이상의 위험 인자 또는 질환에 관련된 하나 또는 그 이상의 합병증을 전시하는 개체 또는 위험 인자를 전시하지 않는 개체일 수 있다. 특정 질환에 대해 치료가 "필요한 개체"는 질환을 앓는 것으로 의심되는, 질환을 앓는 것으로 진단된, 질환에 대해 이미 치료되었거나 또는 치료를 받고 있는, 질환에 대해 치료되지 않은, 또는 질환이 발생할 위험에 처해있는 개체일 수 있다.
용어 "통계학적으로 유의한" 또는 "유의미하게"는 차이가 있는 통계학적 증거를 지칭한다. 이것은 귀무 가설이 실제로 참일 때, 귀무 가설을 거부하는 결정을 내리는 확률로서 규정된다. 결정은 종종, p-값을 이용하여 내려진다.
본원에서 달리 규정되지 않으면, 본 출원과 관련하여 이용된 과학 용어 및 기술적인 용어는 본 발명이 속하는 당해 분야의 평균적 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 본 발명은 본원에서 설명된 특정 방법론, 프로토콜, 그리고 시약 등에 한정되지 않고, 이에 따라서 변할 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 본원에서 이용된 용어는 단지 특정 구체예를 설명하는 것을 목적으로 하고 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 의도되지 않으며, 상기 범위는 오로지 청구항에 의해서만 규정된다.
과립구 집락 자극 인자 (G-CSF 또는 GCSF)는 혈류 내에 호중구의 숫자에서 빠른 증가를 유도한다. 유감스럽게도, G-CSF에 의해 유도된 호중구는 분화 과정 동안 초기에 과립구형성 동안 호중구 작동체 기능의 부적당한 발달로부터 발생하는 그들의 손상된 살균 기능과 함께, 불량하게 분화된다.
레티노산 (RA)은 RARα 활성화를 통해 수임된 골수성 선조체의 분화를 증진하면서, 레티노산 수용체 감마 (RARγ) 활성화를 통해 조혈 줄기 세포 (HSC)의 자기재생을 증강한다. Am-80은 RARα에 선별적으로 결합하지만 RARγ에는 그렇지 않도록 설계된 올-트랜스 레티노산 (ATRA 또는 RA) 효현제이다. Am80의 이러한 선택적 성질은 과립구성 분화를 충분히 증진할 수 있다.
우리는 최근에, Am-80 (타미바로텐)이 세균 감염을 방지함에 있어서 G-CSF보다 뛰어난 성숙 호중구를 유도하면서 근소한 골수조혈성 확대를 증강한다는 것을 발견하였다. 이러한 효과는 세포 주기 및 일반적인 전사 둘 모두를 조절하는 CAK 복합체에 의해 매개되는 RARα 인산화를 저해함에 의해 RA 표적 유전자의 신규한 선택적 발현을 유도하는 전사 인자 RARα의 Am80-유도된 선택적 활성화로부터 발생한다.
다양한 호중구감소성 생쥐 모형을 이용한 포괄적인 생체내 연구를 통해, 우리는 비록 Am-80이 호중구감소성 생쥐 모형에서 호중구-감소 시기에서 G-CSF 또는 Am80-G-CSF 조합보다 훨씬 높은 살균 활성을 갖긴 하지만, 이것이 Am80-G-CSF 조합에 의해 유도된 것들보다 호중구-회복 시기에서 세균 감염에 대항하여 더욱 낮은 효율을 전시한다는 것을 발견하였다. 이것은 다음을 지시한다: a) Am-80은 조혈 줄기 세포 (HSC)로부터 재건 호중구보다 호중구 분화를 더욱 효과적으로 증진할 수 있다; b) 생쥐 호중구감소증의 초기 발달 단계 (호중구-감소 시기)에서 Am80-유도된 훨씬 높은 호중구 살균 활성은 현존하는 PB 및 BM 과립구성 전구체의 성숙 호중구로의 Am80-증진된 분화로부터 발생한다; c) 낮은 용량의 Am80-GCSF 치료로, Am80은 미생물 감염에 대항하여, GCSF-재건된 다수의 과립구성 전구체를 성숙 호중구로 효과적으로 분화할 수 있다; 그리고 d) Am80-GCSF 조합은 호중구감소성 생쥐의 감염 및 감염-관련된 사망률을 감소시킬 수 있는 성숙 호중구의 재생에서 GCSF보다 뛰어나다. G-CSF 투여에 대한 응답으로 재건된 다수의 호중구는 미성숙하고, 따라서 호중구-감소 및 호중구-회복 시기 둘 모두에서 감염에 대항하여 무효한 살균 활성을 유발한다. HSC의 골수성 확대를 증진함에 있어서 G-CSF의 기능과 함께 호중구 성숙을 증강하는 것에 대한 Am80의 효과를 상승 작용함으로써, 우리는 연속적 세균 감염의 배경에서, Am80 및 G-CSF의 조합이 Am80 또는 GCSF 단독보다 호중구감소성 생쥐의 사망률을 현저하게 감소시킨다는 것을 증명하였다.
우리는 합동된 Am80-GCSF 치료가 일관된 세균 감염의 존재에서 호중구감소성 생쥐의 사망률을 현저하게 감소시키는데 있어서 Am80보다 훨씬 크다는 것을 보여주는데, 이것은 비록 Am80에 의한 RARα의 선택적 활성화가 효과적인 호중구 분화에 기여할 수 있긴 하지만, Am80-매개된 근소한 골수성 확대가 일관된 세균 감염을 겪는 호중구감소성 상태의 배경에서 호중구의 더욱 큰 재생에 대한 요구에 부합하지 못한다는 것을 암시한다. 이들 조사 결과는 HSC의 골수성 확대를 증진함에 있어서 G-CSF의 기능과 함께 호중구 성숙을 증강하는 것에 대한 Am80의 상승 효과의 필요를 지시하는데, 이러한 상승 효과는 암 화학요법-유도된 호중구감소증의 치료를 위한 현재 G-CSF 요법으로부터 발생하는 무력함을 극복할 수 있다.
이런 이유로, 이들 조사 결과에 근거하여, 우리는 암 화학요법-유도된 호중구감소증뿐만 아니라 선천성 호중구감소증 (가령, 코스트만 증후군, 주기 호중구감소증, 그리고 체디아크 히가시)이 포함하지만 이들에 한정되지 않는 질환을 치료하기 위한 효과적인 요법으로서 레티노이드 효현제 및 G-CSF의 조합을 활용하는 것을 제안한다. 우리는 또한, 탈체 과립구 산출, 특히, 호중구 산출을 위해, 호중구감소증의 지속 기간을 감소시키는 수혈 요법을 위해, AML 환자의 HSC 이식을 위해, 그리고 급성 방사선 증후군에 대항하여 방사선방호 요법으로서 레티노이드 효현제 및 G-CSF의 조합을 이용하는 것을 제안한다.
치료 방법
확립된 인간 및 생쥐 호중구감소성 모형 (도면 4)에서, GCSF 또는 Am80은 호중구감소증의 초기 발달에서 화학요법 약물에 의해 유도된 호중구-감소를 예방할 수 없다. 다른 한편, 비록 GCSF에 의한 호중구의 빠르게 증가된 숫자가 호중구-회복 기간 동안 호중구감소증 지속 기간을 단축할 수 있긴 하지만, 이들 증가된 호중구는 미생물 감염에 대항하는데 미성숙하다. 상이한 시기의 호중구감소증을 커버하는 일련의 호중구감소성 생쥐 모형을 이용함으로써, 본 발명자는 Am80 단독 또는 Am80-GCSF의 조합이 미생물 감염에 효과적으로 대항할 수 있는 지의 문제를 다루었다. 호중구-감소 생쥐 모형 (도면 6, 7)으로부터 결과는 HSC로부터 호중구 재건이 화학요법 약물에 의해 여전히 저해되는 초기 생쥐 호중구감소증 발달 시기에서, Am80 단독이 현존하는 과립구성 전구체를 감염에 대항하여 성숙 호중구로 분화시키는데 있어서 GCSF 또는 Am80-GCSF보다 뛰어나다는 것을 보여주었다. 하지만, 과립구형성이 호중구의 재건을 위해 점진적으로 소생되는 후속 호중구 회복 기간에서, 세균 감염에 대항하기 위해 많은 양의 성숙 호중구를 상승적으로 재건하고 분화하는 것은 Am80 또는 GCSF 단독이 아닌 Am80-GCSF 조합이다 (도면 8). 게다가, 연속적 세균혈증의 상태 하에 상이한 호중구감소성 생쥐 생존 모형의 이용을 통해, 우리는 Am80-GCSF 상승작용이 호중구감소성 생쥐의 감염 및 감염-관련된 사망률을 감소시키는데 충분한 양의 성숙 호중구를 재건하는데 충분하다는 것을 보여준다 (도면 9). 이들 조사 결과는 Am80이 HSC로부터 호중구를 재건하는 것보다 호중구 분화를 증진하는데 더욱 효과적이고, 그리고 HSC의 골수성 확대를 증진하는데 있어서 GCSF 기능과 함께 호중구 분화를 증강하는 Am80 효과를 상승 작용함으로써, Am80-GCSF 조합이 호중구감소성 상태에서 미생물에 대항하는 성숙 호중구의 더욱 많은 양에 대한 요구에 부합한다는 것을 규정한다. 따라서, 우리의 연구는 Am80-GSCF 조합이 호중구 분화와 함께 골수성 확대를 조정할 수 있다는 것을 지시하고, Am80-GCSF 조합 치료의 이용에 의한 효과적인 암 화학요법 유도된 호중구감소증 (CCIN) 요법을 개발하는 기회를 제공한다.
다양한 구체예에서, 본 발명은 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환의 발생 가능성을 감소시키고, 질환의 심각도를 감소시키고, 질환의 예방을 증진하고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 방법을 제공한다. 상기 방법은 레티노이드 효현제를 제공하고; G-CSF 또는 이의 유사체를 제공하고; 그리고 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체의 치료 효과량을 개체에 투여하고, 따라서 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환이 발생할 가능성을 감소시키고, 질환의 심각도를 감소시키고, 질환의 예방을 증진하고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 것을 포함하거나 또는 이들로 구성될 수 있다. 다양한 구체예에서, 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체는 한 가지 조성물 내에 있다. 다른 구체예에서, 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체는 별개의 조성물 내에 있다.
본 발명의 다양한 구체예에 따라서, 질환은 호중구감소증 또는 미생물 감염이다. 일정한 구체예에서, 미생물 감염은 세균, 바이러스, 진균 또는 기생충 감염이다. 일정한 구체예에서, 호중구감소증은 화학요법-유도된 호중구감소증, 선천성 호중구감소증, 특발성 호중구감소증, 주기 호중구감소증, 자가면역 호중구감소증; 또는 방사선 호중구감소증이다.
다양한 구체예에서, 본 발명은 개체에서 호중구감소증을 치료하고, 호중구감소증을 예방하고, 호중구감소증이 발생할 가능성을 감소시키고, 호중구감소증의 심각도를 감소시키고, 호중구감소증의 예방을 증진하고 및/또는 호중구감소증의 진행을 늦추는 방법을 제공한다. 상기 방법은 레티노이드 효현제를 제공하고; G-CSF 또는 이의 유사체를 제공하고; 그리고 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체의 치료 효과량을 개체에 투여하고, 따라서 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환이 발생할 가능성을 감소시키고, 질환의 심각도를 감소시키고, 질환의 예방을 증진하고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 것을 포함하거나 또는 이들로 구성될 수 있다. 다양한 구체예에서, 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체는 한 가지 조성물 내에 있다. 다른 구체예에서, 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체는 별개의 조성물 내에 있다. 한 구체예에서, 호중구감소증은 암 화학요법 유도된 호중구감소증 (CCIN)이다.
다양한 구체예에서, 감염성 질환은 감염성 세균에 의해 유발된다. 감염성 세균의 실례는 다음을 포함한다: 헬리코박터 파일로리스 (Helicobacter pyloris), 보렐리아 부르그도르페리 (Borelia burgdorferi), 레지오넬라 뉴모필리아 (Legionella pneumophilia), 미코박테리아 종 (가령, 결핵균 (M. tuberculosis), 미코박테리움 아비움 (M, avium), 미코박테리움 인트라셀룰라레 (M. intracellulare), 미코박테리움 칸사이 (M. kansaii), 미코박테리움 고르도내 (M, gordonae)), 황색포도상구균 (Staphylococcus aureus), 나이세리아 고노르호애 (Neisseria gonorrhoeae), 수막염균 (Neisseria meningitidis), 리스테리아 모노사이토게네스 (Listeria monocytogenes), 스트렙토콕쿠스 피오게네스 (Streptococcus pyogenes) (그룹 A 스트렙토콕쿠스 (Streptococcus)), 스트렙토콕쿠스 아갈락티애 (Streptococcus agalactiae) (그룹 B 스트렙토콕쿠스 (Streptococcus)), 스트렙토콕쿠스 (Streptococcus) (비리단스 (viridans) 그룹), 스트렙토콕쿠스 파이칼리스 (Streptococcus faecalis), 스트렙토콕쿠스 보비스 (Streptococcus bovis), 스트렙토콕쿠스 (Streptococcus) (혐기성 종), 스트렙토콕쿠스 뉴모니아 (Streptococcus pneumoniae), 병원성 캄필로박터 (Campylobacter) 종, 엔테로콕쿠스 (Enterococcus) 종, 헤모필루스 인플루엔자 (Haemophilus influenzae), 탄저균 (Bacillus anthracis), 코리네박테리움 디프테리아 (corynebacterium diphtheriae), 코리네박테리움 종, 돼지단독균 (Erysipelothrix rhusiopathiae), 클로스트리듐 퍼프린젠스 (Clostridium perfringens), 클로스트리듐 테타니 (Clostridium tetani), 엔테로박터 아이로게네스 (Enterobacter aerogenes), 클렙시엘라 뉴모니아 (Klebsiella pneumoniae), 파스투렐라 물토시다 (Pasturella multocida), 박테로이데스 (Bacteroides) 종, 푸소박테리움 누클레아툼 (Fusobacterium nucleatum), 스트렙토바실루스 모닐리포르미스 (Streptobacillus moniliformis), 트레포네마 팔리둠 (Treponema pallidium), 프람베지아 트레포네마 (Treponema pertenue), 렙토스피라 (Leptospira), 그리고 악티노미세스 이스라아이리이 (Actinomyces israelli). 본원에서 설명된 조성물과 방법은 이들 세균 병원체로 감염을 치료하는데 이용에 예기된다. 다른 감염성 생물체 (가령, 원생생물)은 다음을 포함한다: 열대열원충 (Plasmodium falciparum) 및 톡소포자충 (Toxoplasma gondii). 본원에서 설명된 조성물과 방법은 이들 병원체로 감염을 치료하는데 이용에 예기된다.
다양한 구체예에서, 감염성 질환은 바이러스 감염에 의해 유발될 수 있다. 감염성 바이러스의 실례는 다음을 포함한다: 레트로바이러스과 (Retroviridae) (가령, HIV); 피코르나바이러스과 (Picornaviridae) (가령, 소아마비 바이러스, A형 간염 바이러스; 장바이러스, 인간 콕사키 바이러스, 리노바이러스, 에코바이러스); 칼시바이러스과 (Calciviridae) (가령, 위소장염을 유발하는 균주); 토가바이러스과 (Togaviridae) (가령, 말 뇌염 바이러스, 풍진 바이러스); 플라비바이러스과 (Flaviridae) (가령, 뎅기 바이러스, 뇌염 바이러스, 황열병 바이러스); 코로나바이러스과 (Coronaviridae) (가령, 코로나바이러스); 랍도바이러스과 (Rhabdoviridae) (가령, 수포성 구내염 바이러스, 광견병 바이러스); 필로바이러스과 (Filoviridae) (가령, 에볼라 바이러스); 파라믹소바이러스과 (Paramyxoviridae) (가령, 파라인플루엔자 바이러스, 유행성 이하선염 바이러스, 홍역 바이러스, 호흡기 합포체 바이러스); 오소믹소바이러스과 (Orthomyxoviridae) (가령, 인플루엔자 바이러스); 분가바이러스과 (Bungaviridae) (가령, 한탄 바이러스, 분가 바이러스, 플레보바이러스 및 나이로바이러스); 아레나바이러스과 (Arena viridae) (출혈열 바이러스); 레오바이러스과 (Reoviridae) (가령, 레오바이러스, 오르비바이러스 및 로타바이러스); 버나바이러스과 (Birnaviridae); 헤파드나바이러스과 (Hepadnaviridae) (B형 간염 바이러스); 파보바이러스과 (Parvoviridae) (파보바이러스); 파포바바이러스과 (Papovaviridae) (유두종 바이러스, 폴리오마 바이러스); 아데노바이러스과 (Adenoviridae) (대부분의 아데노바이러스); 헤르페스바이러스과 (Herpesviridae) (단순 헤르페스 바이러스 (HSV) 1 및 HSV-2, 수두 대상 포진 바이러스, 시토메갈로바이러스 (CMV), 헤르페스 바이러스); 폭스바이러스과 (Poxviridae) (천연두 바이러스, 우두 바이러스, 폭스 바이러스); 그리고 이리도바이러스과 (Iridoviridae) (가령, 아프리카 돼지 열병 바이러스); 그리고 미분류된 바이러스 (가령, 해면상 뇌병증의 병인체, 델타 간염의 병인체 (B형 간염 바이러스의 결함성 위성인 것으로 생각됨), 비-A형, 비-B형 간염의 병인체 (부류 1= 내적으로 전파; 부류 2= 비경구 전파 (즉, C형 간염); 노워크 및 관련된 바이러스, 그리고 아스트로바이러스). 본원에서 설명된 조성물과 방법은 이들 바이러스 병원체로 감염을 치료하는데 이용에 예기된다.
본원에서 설명된 조성물과 방법으로 치료될 수 있는 진균 감염의 실례는 다음을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다: 아스페르길루스증; 아구창 (칸디다 알비칸스 (Candida albicans)에 의해 유발됨); 효모균증 (크립토콕쿠스 (Cryptococcus)에 의해 유발됨); 그리고 히스토플라스마증. 따라서, 감염성 균류의 실례는 다음을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다, 크립토콕쿠스 네오포르만스 (Cryptococcus neoformans), 히스토플라스마 캅슐라툼 (Histoplasma capsulatum), 콕시디오이데스 임미티스 (Coccidioides immitis), 블라스토미세스 더마티티디스 (Blastomyces dermatitidis), 클라미디아 트라코마티스 (Chlamydia trachomatis), 칸디다 알비칸스 (Candida albicans), 그리고 아스페르길루스 (Aspergillus) 종. 본원에서 설명된 조성물과 방법은 이들 진균 병원체로 감염을 치료하는데 이용에 예기된다.
다양한 구체예에서, 개체는 인간이다. 다양한 구체예에서, 개체는 인간, 원숭이, 유인원, 개, 고양이, 소, 말, 염소, 돼지, 토끼, 생쥐 및 쥐를 포함하지만 이들에 한정되지 않는 포유류 개체이다. 일부 구체예에서, 개체는 세균, 바이러스, 진균 및 기생충 감염을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 일관된 미생물 감염을 갖는다.
다양한 구체예에서, 레티노이드 효현제는 타미바로텐 (Am80, 레티노벤조익산, 암노이드, 타미바로), CH55, ITYA (ITYA-01115), Am580, BD4, 또는 NRX195183 (AGN195183으로서 또한 지칭됨), 또는 이들의 기능적 등가물, 유사체, 또는 유도체, 또는 이들의 조합이다. 다양한 구체예에서, 레티노이드 효현제는 RARα-특이적 효현제이다. 한 구체예에서, 레티노이드 효현제는 Am80, 또는 Am80의 기능적 등가물, 유사체, 유도체 또는 염이다.
다양한 구체예에서, G-CSF 또는 이의 유사체는 임의의 공급원, 예를 들면, 쥐, 생쥐, 기니 피그, 개, 고양이, 토끼, 돼지, 소, 말, 염소, 당나귀 또는 인간으로부터 유래될 수 있다. 본 발명에 따라서, G-CSF 또는 이의 유사체의 실례는 야생형 G-CSF, 재조합 G-CSF, G-CSF 단위체 또는 이합체, 재조합 인간 G-CSF (rhG-CSF) 이합체, G-CSF 돌연변이체, G-CSF 융합 단백질, G-CSF 단편, 변형된 G-CSF 폴리펩티드, 페길화된 G-CSF, 당화된 G-CSF, 그리고 특정한 리신 (Lys 17)에서 Y-모양 분지된 폴리에틸렌 글리콜로 변형된 G-CSF (YPEG-G-CSF)를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 이들 다양한 G-CSF 및 G-CSF 등가물, 유사체, 유도체, 변이체 또는 단편은 야생형 G-CSF와 실제적으로 유사한 또는 이들보다 훨씬 우수한 생물학적 활성을 소유하는 기능적 분자이다. 추가 정보는 예로서, US 8557546 (재조합 인간 G-CSF 이합체 및 신경학적 질환의 치료를 위한 이의 용도); US 8530417 (Y-모양 폴리에틸렌 글리콜 변형된 G-CSF, 이의 제조 및 용도); US 8507221 (GCSF를 융합 상대로서 이용하여 관심되는 펩티드의 발현을 위한 과정); US 8058398 (변형된 G-CSF 폴리펩티드); US 7655766 (페길화된 G-CSF의 위치 이성질체를 포함하는 조성물); 그리고 US 7402304 (G-CSF 유사체 조성물을 이용하는 방법)에서 발견될 수 있는데, 이들은 마치 완전히 진술된 것처럼 전체적으로 본원에 참조로서 편입된다.
레티노이드 효현제 또는 G-CSF 또는 이의 유사체의 효과량의 전형적인 용량은 공지된 치료 화합물이 이용되는 경우에 제조업체에 의해 권장되고, 그리고 또한, 세포에서 시험관내 반응 또는 동물 모델에서 생체내 반응에 의해 당업자에게 지시된 바와 같은 범위 내에 있을 수 있다. 이런 용량은 전형적으로, 유관한 생물학적 활성을 상실하지 않으면서 농도 또는 양에서 약 1 크기 자릿수까지 감소될 수 있다. 실제 용량은 의사의 판단, 환자의 상태, 그리고 예로서, 유관한 배양된 세포 또는 조직배양된 조직 표본의 시험관내 반응성, 또는 적절한 동물 모형에서 관찰된 반응에 근거된 치료 방법의 유용성에 의존할 수 있다. 다양한 구체예에서, 레티노이드 효현제 또는 G-CSF 또는 이의 유사체는 효과량의 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체를 개체에 투여하기 위해, 하루 1회 (SID/QD), 하루 2회 (BID), 하루 3회 (TID), 하루 4회 (GID), 또는 그 이상 투여될 수 있는데, 여기서 효과량은 본원에서 설명된 용량 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다.
다양한 구체예에서, 레티노이드 효현제는 약 0.001 내지 0.01 mg/kg, 0.01 내지 0.1 mg/kg, 0.1 내지 0.5 mg/kg, 0.5 내지 5 mg/kg, 5 내지 10 mg/kg, 10 내지 20 mg/kg, 20 내지 50 mg/kg, 50 내지 100 mg/kg, 100 내지 200 mg/kg, 200 내지 300 mg/kg, 300 내지 400 mg/kg, 400 내지 500 mg/kg, 500 내지 600 mg/kg, 600 내지 700mg/kg, 700 내지 800mg/kg, 800 내지 900mg/kg, 또는 900 내지 1000 mg/kg에서 투여된다. 일부 구체예에서, 레티노이드 효현제는 하루 1-3 회 또는 주당 1-7 회 투여된다. 다른 일부 구체예에서, 레티노이드 효현제는 약 1-10 일, 10-20 일, 20-30 일, 30-40 일, 40-50 일, 50-60 일, 60-70 일, 70-80 일, 80-90 일, 90-100 일, 1-6 개월, 6-12 개월, 또는 1-5 년 동안 투여된다. 한 구체예에서, 레티노이드 효현제는 Am80, 또는 Am80의 기능적 등가물, 유사체, 유도체 또는 염이다. 여기서, "mg/kg"은 개체의 체중 kg당 mg을 지칭한다. 일정한 구체예에서, 레티노이드 효현제는 인간에 투여된다.
다양한 구체예에서, 레티노이드 효현제의 효과량은 약 0.01 내지 0.05μg/kg/일, 0.05-0.1μg/kg/일, 0.1 내지 0.5μg/kg/일, 0.5 내지 5 μg/kg/일, 5 내지 10 μg/kg/일, 10 내지 20 μg/kg/일, 20 내지 50 μg/kg/일, 50 내지 100 μg/kg/일, 100 내지 150 μg/kg/일, 150 내지 200 μg/kg/일, 200 내지 250 μg/kg/일, 250 내지 300 μg/kg/일, 300 내지 350 μg/kg/일, 350 내지 400 μg/kg/일, 400 내지 500 μg/kg/일, 500 내지 600 μg/kg/일, 600 내지 700μg/kg/일, 700 내지 800μg/kg/일, 800 내지 900μg/kg/일, 900 내지 1000 μg/kg/일, 0.01 내지 0.05 mg/kg/일, 0.05-0.1 mg/kg/일, 0.1 내지 0.5 mg/kg/일, 0.5 내지 1 mg/kg/일, 1 내지 5 mg/kg/일, 5 내지 10 mg/kg/일, 10 내지 15 mg/kg/일, 15 내지 20 mg/kg/일, 20 내지 50 mg/kg/일, 50 내지 100 mg/kg/일, 100 내지 200 mg/kg/일, 200 내지 300 mg/kg/일, 300 내지 400 mg/kg/일, 400 내지 500 mg/kg/일, 500 내지 600 mg/kg/일, 600 내지 700 mg/kg/일, 700 내지 800 mg/kg/일, 800 내지 900 mg/kg/일, 900 내지 1000 mg/kg/일 또는 이들의 조합 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다. 여기서, "μg/kg/일" 또는 "mg/kg/일"은 하루에 개체의 체중 kg당 μg 또는 mg을 지칭한다.
다양한 구체예에서, G-CSF 또는 이의 유사체는 약 0.01 내지 0.1 mcg/kg, 0.1 내지 0.5 mcg/kg, 0.5 내지 5 mcg/kg, 5 내지 10 mcg/kg, 10 내지 20 mcg/kg, 20 내지 50 mcg/kg, 50 내지 100 mcg/kg, 100 내지 200 mcg/kg, 200 내지 300 mcg/kg, 300 내지 400 mcg/kg, 400 내지 500 mcg/kg, 500 내지 600 mcg/kg, 600 내지 700mcg/kg, 700 내지 800mcg/kg, 800 내지 900mcg/kg, 또는 900 내지 1000 mcg/kg에서 투여된다. 일부 구체예에서, G-CSF 또는 이의 유사체는 하루 1-3 회 또는 주당 1-7 회 투여된다. 다른 일부 구체예에서, G-CSF 또는 이의 유사체는 약 1-10 일, 10-20 일, 20-30 일, 30-40 일, 40-50 일, 50-60 일, 60-70 일, 70-80 일, 80-90 일, 90-100 일, 1-6 개월, 6-12 개월, 또는 1-5 년 동안 투여될 수 있다. 여기서, "mcg/kg"은 개체의 체중 kg당 mcg을 지칭한다. 일정한 구체예에서, G-CSF 또는 이의 유사체는 인간에 투여된다.
다양한 구체예에서, 섭생 용량은 생쥐 및 인간 사이에 전환될 수 있다. 표 1은 전환의 전형 차트를 제공한다. 무제한적 실례로서, ATRA-유도된 완전 관해 (CRs) 후, 재발한 APL 환자의 임상적 치료를 위해, 이들 환자는 휴지기 없이 최대 56 일 동안 6 내지 9 mg/m2 Am80을 매일 (경구) 제공받는다. 추가의 무제한적 실례로서, 호중구감소증 (선천성, 특발성 또는 주기) 환자는 피하 주사에 의해 0.5-40 mcg/kg/일 G-CSF를 제공받고, 그리고 화학요법-유도된 호중구감소증 환자는 피하 주사에 의해 4-69 mcg/kg/일 (7-20 일) G-CSF를 제공받는다.
일부 구체예에서, 생쥐 및 인간 사이에 섭생 용량의 전환
Am80 G-CSF
생쥐 인간 생쥐 인간
0.5 mg/kg 1.5 mg/m2 또는 0.04 mg/kg 25 mcg/kg 76.0125 mcg/m2 또는 2.027 mcg/kg
1.0 mg/kg 3 mg/m2 또는 0.08 mg/kg 50 mcg/kg 152.025 mcg/m2 또는 4.054 mcg/kg
5.0 mg/kg 15 mg/m2 또는 0.4 mg/kg 250 mcg/kg 760.125 mcg/m2 또는 20.27 mcg/kg
일부 구체예에서, 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체는 질환의 호중구-감소 시기 (즉, 개체에서 질환이 발생하지 않았지만 질환이 발생할 개연성이 있거나 또는 발생하는 과정에 있을 때)에 투여될 수 있다. 다른 구체예에서, 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체는 질환의 치료 시기 (즉, 개체에서 이미 질환이 발생했을 때)에 투여될 수 있다. 무제한적 실례로서, 표적 질환은 호중구감소증이고, 그리고 개체는 화학요법 또는 방사선요법이 처방된 암 환자이다. 이러한 전형 환경에서, 환자는 환자에서 호중구감소증이 아직 발생하지 않았거나, 또는 호중구감소증이 발생하는 과정에 있거나, 또는 호중구감소증이 이미 발생했을 때 본원에서 설명된 방법으로 치료될 수 있다.
본 발명에 따라서, 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체는 적절한 투여 방식, 예를 들면, 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체 각각에 대해 제조업체에 의해 권장된 투여 방식을 이용하여 투여될 수 있다. 본 발명에 따라서, 에어로졸, 코, 경구, 경점막, 경피, 비경구, 이식가능한 펌프, 연속 주입, 국소 적용, 캡슐 및/또는 주사를 포함하지만 이들에 한정되지 않는 다양한 루트가 청구된 방법의 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체를 투여하는데 활용될 수 있다. 다양한 구체예에서, 레티노이드 효현제는 정맥내, 근육내, 피하, 복막내, 경구 또는 흡입을 통해 투여된다. 다양한 구체예에서, G-CSF 또는 이의 유사체는 정맥내, 근육내, 피하, 복막내, 경구 또는 흡입을 통해 투여된다. 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체는 동일한 또는 별개의 루트를 통해 투여될 수 있다.
다양한 구체예에서, 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체는 동시에 또는 순차적으로 투여된다. 다양한 구체예에서, 레티노이드 효현제는 G-CSF 또는 이의 유사체를 투여하기 전에, 투여하는 동안 또는 투여한 후에 투여된다. 추가 구체예에서, 레티노이드 효현제 및/또는 G-CSF 또는 이의 유사체는 식품과 함께 또는 식품 없이 투여된다. 무제한적 실례로서, 레티노이드 효현제 (가령, Am80)은 예로서, 전술한 용량에서 매일 투여될 수 있고, 그리고 G-CSF 또는 이의 유사체는 예로서, 전술한 용량에서 매일, 주 1회, 격주, 2주마다 및/또는 월 1회 투여될 수 있다. 다른 무제한적 실례로서, 레티노이드 효현제는 예로서, 전술한 용량에서 매일, 주 1회, 격주, 2주마다 및/또는 월 1회 투여될 수 있고, 그리고 G-CSF 또는 이의 유사체는 예로서, 전술한 용량에서 매일 투여될 수 있다. 게다가, 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체 각각은 매일, 주 1회, 격주, 2주마다 및/또는 월 1회 투여될 수 있고, 여기서 레티노이드 효현제는 G-CSF 또는 이의 유사체가 전술한 용량에서 투여되는 일자와 상이한 일자에서 전술한 용량에서 투여된다.
다양한 구체예에서, 상기 방법은 화학요법제를 개체에 제공하고 투여하는 것을 더욱 포함할 수 있다. 본 발명에 따라서, 레티노이드 효현제, G-CSF 또는 이의 유사체, 그리고 화학요법제는 동시에 또는 순차적으로 투여된다. 또한, 본 발명에 따라서, 레티노이드 효현제 및/또는 G-CSF 또는 이의 유사체는 화학요법제를 투여하기 전에, 투여하는 동안 또는 투여한 후에 투여된다. 일부 구체예에서, 레티노이드 효현제, G-CSF 또는 이의 유사체, 그리고 화학요법제는 한 가지 조성물 또는 별개의 조성물 내에 있다.
화학요법제의 실례에는 악티노마이신, 알리트레티노인, 올-트랜스 레티노산, 아자시티딘, 아자티오프린, 베바시주맙, 벡사토텐, 블레오마이신, 보르테조밉, 카르보플라틴, 카페시타빈, 세툭시맙, 시스플라틴, 클로람부실, 시클로포스파미드, 시타라빈, 다우노루비신, 도세탁셀, 독시플루리딘, 독소루비신, 에피루비신, 에포틸론, 에를로티닙, 에토포시드, 플루오르우라실, 제피티닙, 젬시타빈, 히드록시우레아, 이다루비신, 이마티닙, 이필리무맙, 이리노테칸, 메클로레타민, 멜팔란, 메르캅토퓨린, 메토트렉사트, 미톡산트론, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 파니투맙, 페멕트렉시드, 리툭시맙, 타플루포시드, 테니포시드, 티오구아닌, 토포테칸, 트레티노인, 발루비신, 베무라페닙, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈, 보리노스탯, 로미뎁신, 5-플루오르우라실 (5-FU), 6-메르캅토퓨린 (6-MP), 클라드리빈, 클로파라빈, 플록수리딘, 플루다라빈, 펜토스타틴, 미토마이신, 익사베필론, 에스트라무스틴, 프레드니손, 메틸프레드니솔론, 덱사메타손 또는 이들의 조합이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
다양한 구체예에서, 상기 방법은 항균성 작용제를 개체에 제공하고 투여하는 것을 더욱 포함할 수 있다. 본 발명에 따라서, 레티노이드 효현제, G-CSF 또는 이의 유사체, 그리고 항균성 작용제는 동시에 또는 순차적으로 투여된다. 또한, 본 발명에 따라서, 레티노이드 효현제 및/또는 G-CSF 또는 이의 유사체는 항균성 작용제를 투여하기 전에, 투여하는 동안 또는 투여한 후에 투여된다. 일부 구체예에서, 레티노이드 효현제, G-CSF 또는 이의 유사체, 그리고 항균성 작용제는 한 가지 조성물 또는 별개의 조성물 내에 있다. 항균성 작용제는 항균성, 항바이러스성, 항진균성, 또는 항기생충성 작용제, 또는 이들의 조합일 수 있다.
제약학적 조성물
다양한 구체예에서, 본 발명은 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체를 포함하는 조성물을 제공한다. 한 구체예에서, 레티노이드 효현제 및 G-CSF는 동일한 조성물 내에 있다. 다른 구체예에서, 레티노이드 효현제 및 G-CSF는 별개의 조성물 내에 있다. 본 발명에 따라서, 조성물은 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환을 앓을 가능성을 감소시키고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추는데 이용될 수 있다. 본 발명에 따라서, 질환은 호중구감소증 또는 미생물 감염일 수 있다. 또한, 본 발명에 따라서, 조성물은 세포 (HSC, 골수 과립구성 선조체 세포, 그리고 조혈 CD34+ 세포를 포함하지만 이들에 한정되지 않음)를 자극하여 과립구, 그리고 특히, 호중구를 산출하는데 이용될 수 있다.
다양한 구체예에서, 레티노이드 효현제는 타미바로텐 (AM 80, 레티노벤조익산, 암노이드, 타미바로), CH55, ITYA (ITYA-01115), Am580, BD4, 또는 NRX195183 (AGN195183으로서 또한 지칭됨), 또는 이들의 기능적 등가물, 유사체, 또는 유도체, 또는 이들의 조합이다. 다양한 구체예에서, 레티노이드 효현제는 RARα-특이적 효현제이다. 한 구체예에서, 레티노이드 효현제는 Am80, 또는 Am80의 기능적 등가물, 유사체, 유도체 또는 염이다.
다양한 구체예에서, 조성물 내에 레티노이드 효현제는 개체의 체중 킬로그램당 mg 단위로 제공된다; 예로서, 약 0.001 내지 0.01 mg/kg, 0.01 내지 0.1 mg/kg, 0.1 내지 0.5 mg/kg, 0.5 내지 5 mg/kg, 5 내지 10 mg/kg, 10 내지 20 mg/kg, 20 내지 50 mg/kg, 50 내지 100 mg/kg, 100 내지 200 mg/kg, 200 내지 300 mg/kg, 300 내지 400 mg/kg, 400 내지 500 mg/kg, 500 내지 600 mg/kg, 600 내지 700mg/kg, 700 내지 800mg/kg, 800 내지 900mg/kg, 또는 900 내지 1000 mg/kg. 한 구체예에서, 레티노이드 효현제는 Am80, 또는 Am80의 기능적 등가물, 유사체, 유도체 또는 염이다. 일정한 구체예에서, 조성물은 인간에 투여된다.
다양한 구체예에서, 조성물 내에 G-CSF 또는 이의 유사체는 개체의 체중 kg당 mcg 단위로 제공된다; 예로서, 약 0.01 내지 0.1 mcg/kg, 0.1 내지 0.5 mcg/kg, 0.5 내지 5 mcg/kg, 5 내지 10 mcg/kg, 10 내지 20 mcg/kg, 20 내지 50 mcg/kg, 50 내지 100 mcg/kg, 100 내지 200 mcg/kg, 200 내지 300 mcg/kg, 300 내지 400 mcg/kg, 400 내지 500 mcg/kg, 500 내지 600 mcg/kg, 600 내지 700mcg/kg, 700 내지 800mcg/kg, 800 내지 900mcg/kg, 또는 900 내지 1000 mcg/kg. 일정한 구체예에서, 조성물은 인간에 투여된다.
한 구체예에서, 조성물은 화학요법제를 더욱 포함한다. 다른 구체예에서, 조성물은 항균성 작용제를 더욱 포함한다. 다양한 구체예에서, 조성물은 정맥내, 근육내, 피하, 복막내, 경구 또는 흡입을 통한 투여를 위해 조제된다.
본 발명에 따라서, 포유동물에서 질환의 치료에 유용한 레티노이드 효현제 및/또는 G-CSF 또는 이의 유사체는 종종, 자연발생 면역글로불린 또는 다른 생물학적 분자가 실제적으로 없게 제조될 것이다. 바람직한 레티노이드 효현제 및/또는 G-CSF 또는 이의 유사체는 또한, 포유동물에 투여될 때 최소 독성을 전시할 것이다.
다양한 구체예에서, 본 발명에 따른 제약학적 조성물은 임의의 제약학적으로 허용되는 부형제를 내포할 수 있다. "제약학적으로 허용되는 부형제"는 일반적으로 안전하고, 비-독성이고, 그리고 바람직한 제약학적 조성물을 제조하는데 유용한 부형제를 의미하고, 그리고 수의학적 용도뿐만 아니라 인간 제약학적 용도를 위해 허용되는 부형제를 포함한다. 이런 부형제는 고체, 액체, 반고체, 또는, 에어로졸 조성물의 경우에, 가스일 수 있다. 부형제의 실례는 전분, 당, 미정질 셀룰로오스, 희석제, 제립화 작용제, 윤활제, 결합제, 붕해제, 적심제, 유화제, 착색제, 방출 작용제, 코팅제, 감미제, 풍미제, 방향제, 보존제, 항산화제, 가소제, 겔화제, 농후제, 경화제, 유착제, 현탁제, 계면활성제, 보습제, 담체, 안정제, 그리고 이들의 조합을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다.
다양한 구체예에서, 본 발명에 따른 제약학적 조성물은 임의의 투여 루트를 통한 전달을 위해 조제될 수 있다. "투여 루트"는 에어로졸, 코, 경구, 경점막, 경피, 비경구, 경장, 또는 국소 또는 국부가 포함되지만 이들에 국한되지 않는 당분야에 공지된 임의의 투여 경로를 지칭할 수 있다. "비경구"는 안와내, 주입, 동맥내, 관절내, 심장내, 피내, 근육내, 복강내, 폐내, 척주내, 흉골내, 척수강내, 자궁내, 정맥내, 거미막하, 피막하, 피하, 경점막, 또는 경기관을 비롯하여, 주사와 일반적으로 연관된 투여 루트를 지칭한다. 비경구 루트를 통하여, 조성물은 주입 또는 주사를 위한 용액 또는 현탁액의 형태, 또는 냉동건조된 분말일 수 있다. 비경구 루트를 통하여, 조성물은 주입 또는 주사를 위한 용액 또는 현탁액의 형태일 수 있다. 경장 루트를 통하여, 제약학적 조성물은 정제, 겔 캡슐, 당-코팅된 정제, 시럽, 현탁액, 용액, 분말, 과립, 유제, 마이크로스피어 또는 나노스피어 또는 제어된 방출을 가능하게 하는 지질 소포 또는 중합체 소포의 형태일 수 있다. 전형적으로, 조성물은 주사에 의해 투여된다. 이들 투여를 위한 방법은 당업자에게 공지되어 있다.
다양한 구체예에서, 조성물은 하루 1-3 회 또는 주당 1-7 회 투여된다. 다양한 구체예에서, 조성물은 약 1-10 일, 10-20 일, 20-30 일, 30-40 일, 40-50 일, 50-60 일, 60-70 일, 70-80 일, 80-90 일, 90-100 일, 1-6 개월, 6-12 개월, 또는 1-5 년 동안 투여될 수 있다. 본 발명에 따라서, 조성물은 정맥내, 근육내, 피하, 복막내, 경구 또는 흡입을 통한 투여를 위해 조제될 수 있다. 다양한 구체예에서, 조성물은 효과량의 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체를 개체에 투여하기 위해, 하루 1회 (SID/QD), 하루 2회 (BID), 하루 3회 (TID), 하루 4회 (GID), 또는 그 이상 투여될 수 있는데, 여기서 효과량은 본원에서 설명된 용량 중에서 임의의 한 가지 또는 그 이상이다.
다양한 구체예에서, 본 발명에 따른 제약학적 조성물은 임의의 제약학적으로 허용되는 담체를 내포할 수 있다. "제약학적으로 허용되는 담체"는 본원에서 이용된 바와 같이, 관심되는 화합물을 신체의 한 조직, 장기, 또는 부분으로부터 신체의 다른 조직, 장기, 또는 부분으로 운반하거나 또는 수송하는데 관련된 제약학적으로 허용되는 물질, 조성물, 또는 운반제를 지칭한다. 예로서, 담체는 액체 또는 고체 충전물, 희석제, 부형제, 용매, 또는 피막화 물질, 또는 이들의 조합일 수 있다. 담체의 각 성분은 제제의 다른 성분과 양립해야 한다는 점에서, "제약학적으로 허용가능"해야 한다. 또한, 접촉하게 되는 임의의 조직 또는 장기와의 접촉 동안 이용하기에 적합해야 하는데, 이것은 치료적 이익을 과도하게 능가하는 독성, 자극, 알레르기성 반응, 면역원성, 또는 임의의 다른 합병증의 위험을 유발하지 않아야 한다는 것을 의미한다.
본 발명에 따른 제약학적 조성물은 또한, 경구 투여를 위해 피막화되거나, 정제화되거나 또는 유제 또는 시럽으로 제조될 수 있다. 제약학적으로 허용되는 고체 또는 액체 담체가 조성물을 증강하거나 또는 안정시키기 위해, 또는 조성물의 제조를 용이하게 하기 위해 첨가될 수 있다. 액체 담체에는 시럽, 땅콩 기름, 올리브 기름, 글리세린, 식염수, 알코올과 물이 포함된다. 고체 담체에는 전분, 락토오스, 황산칼슘, 이수화물, 백토, 스테아르산마그네슘 또는 스테아르산, 활석, 팩틴, 아카시아, 한천 또는 젤라틴이 포함된다. 담체는 또한, 단독으로 또는 왁스와 함께, 지속된 방출 물질, 예를 들면, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트를 포함할 수 있다.
제약학적 제조물은 정제 형태의 경우에 제분, 혼합, 과립화, 그리고 필요할 때, 압축; 또는 경성 젤라틴 캡슐 형태의 경우에 제분, 혼합 및 충전을 수반하는 약학의 전통적인 기술에 따라 만들어진다. 액체 담체가 이용될 때, 제조물은 시럽, 엘릭시르, 유제 또는 수성 또는 비-수성 현탁액의 형태일 것이다. 이런 액체 제제는 직접적으로 p.o. 투여되거나 또는 연성 젤라틴 캡슐 내로 채워질 수 있다.
본 발명에 따른 제약학적 조성물은 치료 효과량으로 전달될 수 있다. 정확한 치료 효과량은 제공된 개체에서 치료 효능의 면에서 가장 효과적인 결과를 산출하는 조성물의 양이다. 이러한 양은 치료 화합물의 특징 (활성, 약물동력학, 약력학, 그리고 생체이용률 포함), 개체의 생리학적 상태 (연령, 성별, 질병 유형과 시기, 전반적인 신체 조건, 제공된 용량에 반응성, 그리고 약제 유형 포함), 제제 내에 제약학적으로 허용되는 담체 또는 담체들의 성격, 그리고 투여 루트가 포함되지만 이들에 국한되지 않는 다양한 인자에 따라 변할 것이다. 임상과 약리학 분야에서 숙련자는 일과적인 실험을 통해, 예를 들면, 화합물의 투여에 대한 개체의 반응을 모니터링하고 용량을 이에 따라 조정함으로써 치료 효과량을 결정할 수 있을 것이다. 추가 보도를 위해, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Gennaro ed. 20th edition, Williams & Wilkins PA, USA) (2000)을 참조한다.
환자에 투여 전에, 포물란트가 조성물에 첨가될 수 있다. 액체 제제가 바람직할 수 있다. 가령, 이들 포물란트는 오일, 중합체, 비타민, 탄수화물, 아미노산, 염, 완충액, 알부민, 계면활성제, 증량제 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
탄수화물 포물란트는 당 또는 당 알코올, 예를 들면, 단당류, 이당류 또는 다당류, 또는 수용성 글루칸을 포함한다. 사카라이드 또는 글루칸은 프룩토오스, 덱스트로스, 락토오스, 글루코오스, 만노오스, 소르보스, 자일로오스, 말토오스, 수크로오스, 덱스트란, 풀루란, 덱스트린, 알파 및 베타 시클로덱스트린, 가용성 전분, 히드록시에틸 전분 및 카르복시메틸셀룰로오스, 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. "당 알코올"은 -OH 기를 갖는 C4 내지 C8 탄화수소로서 규정되고, 그리고 갈락티톨, 이노시톨, 만니톨, 자일리톨, 소르비톨, 글리세롤 및 아라비톨을 포함한다. 전술한 이들 당 또는 당 알코올은 개별적으로 또는 합동으로 이용될 수 있다. 당 또는 당 알코올이 수성 제조물에 가용성이기만 하면, 이용된 양에 대한 고정된 한계가 없다. 한 구체예에서, 당 또는 당 알코올 농도는 1.0 w/v % 및 7.0 w/v % 사이, 더욱 바람직하게는 2.0 및 6.0 w/v % 사이이다.
아미노산 포물란트는 카르니틴, 아르기닌, 그리고 베타인의 좌선성 (L) 형태를 포함한다; 하지만, 다른 아미노산이 첨가될 수도 있다.
일부 구체예에서, 포물란트로서 중합체는 2,000 및 3,000 사이에 평균 분자량을 갖는 폴리비닐피롤리돈 (PVP), 또는 3,000 및 5,000 사이에 평균 분자량을 갖는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함한다.
또한, 동결건조 전 또는 재구성 후, 용액에서 pH 변화를 최소화하기 위해 조성물에서 완충액을 이용하는 것이 바람직하다. 구연산염, 인산염, 숙신산염, 그리고 글루타민산염 완충액 또는 이들의 혼합물을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 대부분의 생리학적 완충액이 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, 농도는 0.01 내지 0.3 몰이다. 제제에 첨가될 수 있는 계면활성제는 EP 번호 270,799 및 268,110에서 도시된다.
순환 반감기를 증가시키기 위한 다른 약물 전달 시스템은 리포솜이다. 리포솜 전달 시스템을 제조하는 방법은 Gabizon et al., Cancer Research (1982) 42:4734; Cafiso, Biochem Biophys Acta (1981) 649:129; 그리고 Szoka, Ann Rev Biophys Eng (1980) 9:467에서 논의된다. 다른 약물 전달 시스템은 당분야에서 공지되고 예로서, Poznansky et al., Drug Delivery Systems (R. L. Juliano, ed., Oxford, N.Y. 1980), pp. 253-315; M. L. Poznansky, Pharm Revs (1984) 36:277에서 설명된다.
액체 제약학적 조성물이 제조된 후에, 이것은 분해를 예방하고 무균을 보존하기 위해 동결건조될 수 있다. 액체 조성물을 동결건조하기 위한 방법은 당업자에게 공지된다. 이용 직전에, 조성물은 추가 성분을 포함할 수 있는 무균 희석제 (가령, 링거액, 증류수, 또는 무균 식염수)로 재구성될 수 있다. 재구성 시에, 조성물은 당업자에게 공지되어 있는 이들 방법을 이용하여 개체에 투여된다.
본 발명의 조성물은 전통적인, 널리 공지된 살균 기술에 의해 살균될 수 있다. 결과의 용액은 이용을 위해 포장되거나 또는 무균 조건 하에 여과되고 동결건조되고, 동결건조된 제조물은 투여에 앞서 무균 용액과 합동될 수 있다. 조성물은 생리학적 상태를 근사하기 위해 필요에 따라 제약학적으로-허용되는 보조 물질, 예를 들면, pH 조정제 및 완충제, 긴장성 조정제 등, 예를 들면, 아세트산나트륨, 젖산나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 그리고 안정제 (가령, 1-20% 말토오스 등)를 내포할 수 있다.
세포 요법
다양한 구체예에서, 본 발명은 과립구, 그리고 특히, 호중구를 산출하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 세포 (HSC, 골수 과립구성 선조체 세포 및 조혈 CD34+ 세포를 포함하지만 이들에 한정되지 않음)를 제공하고, 그리고 세포를 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체로 자극하고, 따라서 과립구, 그리고 특히, 호중구를 산출하는 것을 포함한다. 본 발명에 따라서, 상기 방법은 자극된 세포 및/또는 산출된 과립구, 그리고 특히, 호중구를 배양하는 것을 더욱 포함할 수 있다. 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, 상기 방법은 자극된 세포 및/또는 산출된 과립구, 그리고 특히, 호중구를 단리하는 것을 더욱 포함한다. 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, 상기 방법은 자극된 세포 및/또는 산출된 과립구, 그리고 특히, 호중구를 질환의 치료를 원하는 개체에 투여하는 것을 더욱 포함한다. 다양한 구체예에서, 본 발명은 과립구, 그리고 특히, 호중구를 산출하는 키트를 제공한다. 키트는 다음을 포함한다: 일정량의 레티노이드 효현제; 일정량의 G-CSF 또는 이의 유사체; 세포 (HSC, 골수 과립구성 선조체 세포, 그리고 조혈 CD34+ 세포를 포함하지만 이들에 한정되지 않음)를 자극하여 과립구, 그리고 특히, 호중구를 산출하기 위해 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체를 이용하기 위한 사용설명서.
다양한 구체예에서, 본 발명은 설명된 방법에 따라 및/또는 설명된 키트를 이용하여, 산출된 과립구, 또는 특히, 호중구를 포함하는 조성물을 제공한다. 다양한 구체예에서, 본 발명은 설명된 방법에 따라 및/또는 설명된 키트를 이용하여, 자극된 세포를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, 이들 조성물은 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체를 더욱 포함한다. 본 발명의 다양한 구체예에 따라서, 이들 조성물은 제약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체를 더욱 포함한다. 본 발명에 따라서, 이들 조성물은 수혈 및 이식을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 다양한 루트를 통해 개체에 투여를 위해 조제될 수 있다. 추가 구체예에서, 본 발명은 이들 설명된 조성물 중에서 최소한 한 가지를 개체에 투여함으로써, 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 방법을 제공한다. 무제한적 실례로서, 개체는 호중구감소증을 앓는 환자일 수 있고, 그리고 산출된 과립구, 또는 특히, 호중구를 포함하는 조성물이 상기 환자 내로 수혈될 수 있다. 다른 무제한적 실례로서, 개체는 AML 환자일 수 있고, 그리고 자극된 HSC 및/또는 골수 세포를 포함하는 조성물이 환자에 이식될 수 있다.
다양한 구체예에서, 본 발명은 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환을 앓을 가능성을 감소시키고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 방법을 제공한다. 상기 방법은 세포 (HSC, 골수 과립구성 선조체 세포, 그리고 조혈 CD34+ 세포를 포함하지만 이들에 한정되지 않음)를 제공하고, 세포를 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체로 자극하고, 따라서 과립구, 또는 특히, 호중구를 산출하고; 그리고 산출된 과립구, 또는 특히, 호중구를 개체에 투여하고, 따라서 개체에서 질환을 치료하는 것을 포함한다. 다양한 구체예에서, 질환은 호중구감소증 또는 AML이다. 다양한 구체예에서, 산출된 과립구, 또는 특히, 호중구는 수혈 또는 이식을 통해 개체에 투여된다.
다양한 구체예에서, 본 발명은 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환을 앓을 가능성을 감소시키고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 방법을 제공한다. 상기 방법은 세포 (HSC, 골수 세포, CD34+ 세포, 그리고 줄기 세포를 포함하지만 이들에 한정되지 않음)를 제공하고; 세포를 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체로 자극하고; 그리고 자극된 세포를 개체에 투여하고, 따라서 개체에서 질환을 치료하는 것을 포함한다. 다양한 구체예에서, 질환은 호중구감소증 또는 AML이다. 다양한 구체예에서, 자극된 세포는 수혈 또는 이식을 통해 개체에 투여된다.
본 발명의 키트
다양한 구체예에서, 본 발명은 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추기 위한 키트를 제공한다. 키트는 다음을 포함한다: 일정량의 레티노이드 효현제; 일정량의 G-CSF 또는 이의 유사체; 그리고 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추기 위해 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체를 이용하기 위한 사용설명서.
다양한 구체예에서, 레티노이드 효현제는 타미바로텐 (Am80, 레티노벤조익산, 암노이드, 타미바로), CH55, ITYA (ITYA-01115), Am580, BD4, 또는 NRX195183 (AGN195183으로서 또한 지칭됨), 또는 이들의 기능적 등가물, 유사체, 또는 유도체, 또는 이들의 조합이다. 다양한 구체예에서, 레티노이드 효현제는 RARα-특이적 효현제이다. 한 구체예에서, 레티노이드 효현제는 Am80, 또는 Am80의 기능적 등가물, 유사체, 유도체 또는 염이다.
다양한 구체예에서, G-CSF 또는 이의 유사체는 임의의 공급원, 예를 들면, 쥐, 생쥐, 기니 피그, 개, 고양이, 토끼, 돼지, 소, 말, 염소, 당나귀 또는 인간으로부터 유래될 수 있다. 본 발명에 따라서, G-CSF 또는 이의 유사체의 실례는 야생형 G-CSF, 재조합 G-CSF, G-CSF 단위체 또는 이합체, 재조합 인간 G-CSF (rhG-CSF) 이합체, G-CSF 돌연변이체, G-CSF 융합 단백질, G-CSF 단편, 변형된 G-CSF 폴리펩티드, 페길화된 G-CSF, 당화된 G-CSF, 그리고 특정한 리신 (Lys 17)에서 Y-모양 분지된 폴리에틸렌 글리콜로 변형된 G-CSF (YPEG-G-CSF)를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 이들 다양한 G-CSF 및 G-CSF 등가물, 유사체, 유도체, 변이체 또는 단편은 야생형 G-CSF와 실제적으로 유사한 또는 이들보다 훨씬 우수한 생물학적 활성을 소유하는 기능적 분자이다. 추가 정보는 예로서, US 8557546 (재조합 인간 G-CSF 이합체 및 신경학적 질환의 치료를 위한 이의 용도); US 8530417 (Y-모양 폴리에틸렌 글리콜 변형된 G-CSF, 이의 제조 및 용도); US 8507221 (GCSF를 융합 상대로서 이용하여 관심되는 펩티드의 발현을 위한 과정); US 8058398 (변형된 G-CSF 폴리펩티드); US 7655766 (페길화된 G-CSF의 위치 이성질체를 포함하는 조성물); 그리고 US 7402304 (G-CSF 유사체 조성물을 이용하는 방법)에서 발견될 수 있는데, 이들은 마치 완전히 진술된 것처럼 전체적으로 본원에 참조로서 편입된다.
키트는 최소한 하나의 발명 조성물을 포함하는, 물질 또는 성분의 기계조립이다. 따라서, 일부 구체예에서, 키트는 앞서 설명된 바와 같이, 치료적 작용제로 복합화된 약물 전달 분자를 포함하는 조성물을 내포한다.
발명 키트에서 형성된 성분의 정확한 성격은 의도된 목적에 의존한다. 한 구체예에서, 키트는 특히, 포유류 개체를 치료하는 목적으로 형성된다. 다른 구체예에서, 키트는 특히, 인간 개체를 치료하는 목적으로 형성된다. 추가의 구체예에서, 키트는 개체, 예를 들면, 하지만 제한 없이, 경작용 동물, 사육 동물, 그리고 실험 동물을 치료하는 수의학적 적용을 위해 형성된다.
사용설명서는 키트 내에 포함될 수 있다. "사용설명서"는 전형적으로, 원하는 결과를 달성하기 위해 키트의 성분을 이용하는데 활용될 수 있는 기술을 설명하는 확실한 표현을 포함한다. 임의선택적으로, 키트는 또한, 다른 유용한 성분, 예를 들면, 희석제, 완충액, 제약학적으로 허용되는 담체, 주사기, 카테터, 살포기, 피펫팅 또는 계측 도구, 붕대용 재료 또는 당업자에 의해 쉽게 인정되는 다른 유용한 용품을 내포한다.
키트 내에 조립된 물질 또는 성분은 그들의 실시가능성과 유용성을 보존하는 임의의 편의하고 적합한 방식으로 의사에 제공되고 보관될 수 있다. 예로서, 이들 성분은 용해된, 탈수된, 또는 냉동건조된 형태일 수 있다; 이들은 실온, 냉장 온도 또는 동결 온도에서 제공될 수 있다. 이들 성분은 전형적으로, 적합한 포장 재료(들)에 내포된다. 본원에서 이용된 바와 같이, 관용구 "포장 재료"는 키트의 내용물, 예를 들면, 발명 조성물 등을 수용하는데 이용되는 하나 또는 그 이상의 물리적 구조를 지칭한다. 포장 재료는 가급적 무균, 오염체-없는 환경을 제공하기 위해 널리 공지된 방법에 의해 구축된다. 본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "포장물"은 개별 키트 성분을 유지할 수 있는, 적절한 고체 매트릭스 또는 물질, 예를 들면, 유리, 플라스틱, 종이, 포일 등을 지칭한다. 따라서, 예로서, 포장물은 본원에서 설명된 바와 같은 조성물의 적합한 양을 내포하는데 이용된 유리 바이알일 수 있다. 포장 재료는 일반적으로, 키트 및/또는 이의 성분의 내용물 및/또는 목적을 지시하는 외부 라벨을 갖는다.
일부 구체예에서, 본원에서 설명된 방법, 조성물 및 키트가 필요한 개체는 제한 없이, 골수에 영향을 주는 약제 (가령, 암 약물, 정신병약, 항경련 약물), 골수에 영향을 주는 유전성 및/또는 선천성 장애, 방사선 요법을 받는 환자, 비타민 B12 결핍, 엽산 결핍 또는 이들의 조합으로부터 기인하는 감소된 백혈구 생산을 갖는 개체이다.
추가의 구체예에서, 본원에서 설명된 방법, 조성물 및 키트가 필요한 개체는 제한 없이, 급성 세균 감염, 자가면역 질환 (가령, 전신성 홍반성 루푸스), 술폰아미드 약제의 이용, 또는 이들의 조합에 기인한 손상된 백혈구, 파괴된 백혈구 및/또는 감소된 양의 백혈구를 갖는 개체이다.
추가의 구체예에서, 본원에서 설명된 방법, 조성물 및 키트가 필요한 개체는 제한 없이, 혈액투석, 말라리아, 세균 감염 또는 이들의 조합에 기인한 백혈구 (가령, 호중구)의 격리 및/또는 이주를 겪는 개체이다.
다양한 구체예에서, 본원에서 설명된 방법, 조성물 및 키트는 화학요법 및/또는 방사선 요법을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 다른 요법과 함께 이용될 수 있다. 화학요법 및/또는 방사선 요법은 종종, 백혈구의 숫자를 감소시키고, 호중구감소증을 유발한다. 본 발명의 방법, 조성물 및 키트를 화학요법 및/또는 방사선 요법과 동시에 또는 순차적으로 적용하는 것은 호중구감소증을 예방하고, 호중구감소증을 저해하고 및/또는 호중구감소증의 심각도를 감소시킬 수 있다. 유사하게, 본 발명의 방법, 조성물 및 키트를 항경련제 및/또는 정신병약과 동시에 또는 순차적으로 적용하는 것은 상기 약물의 이용으로부터 기인하는 호중구감소증을 예방하고, 호중구감소증을 저해하고 및/또는 호중구감소증의 심각도를 감소시킬 수 있다. 추가적으로, 본 발명의 방법, 조성물 및 키트를 미생물 감염 (가령, 세균, 진균, 바이러스 및 기생충 감염) 및/또는 자가면역 질환 또는 방사선유발 호중구감소증을 치료하는데 이용되는 치료적 작용제와 동시에 또는 순차적으로 적용하는 것은 미생물 감염 및/또는 자가면역 질환으로 인해 및/또는 미생물 감염 및/또는 자가면역 질환을 치료하는데 이용될 수 있는 치료적 작용제로 인해 발생할 수 있는 호중구감소증을 예방하고, 이를 저해하고 및/또는 이의 심각도를 감소시킬 수 있다.
치료 효력을 사정하기 위한 방법
본원에서 설명된 바와 같이, GCSF와 합동으로 승인된 것보다 낮은 용량의 Am80을 이용하면, 호중구감소성 생쥐의 감염-관련된 사망률은 Am80 또는 GCSF 단독과 비교하여 현저하게 감소되었다. 게다가, 정상적인 및 악성 조혈 전구체 둘 모두에서 GCSF와 합동으로 Am80 치료는 미생물 감염에 대항하는데 있어서 필수적인 호중구 기능인 반응성 산소 종 (ROS) 생산을 증가시켰다. ROS 생산 생물학적 검정은 세균 및 진균 감염 둘 모두에 대항하는 호중구 살균 기능에 근거하여, 본원에서 설명된 조합 치료 방법의 효력을 사정하는데 이용될 수 있다. 호중구감소증 요법에 대한 현재 임상적 종결점은 호중구 수치 및 열성 호중구감소증의 발생을 포함하는데, 이들 중에서 어느 것도 미생물에 대항하는 호중구의 능력에 대한 정보를 제공하지 못한다. ROS 생산 생물학적 검정은 세균 또는 진균 자극에 대한 응답으로 호중구 ROS 생산의 참조값에 근거된 호중구 살균 활성의 모니터링을 허용한다. 호중구 ROS 생산의 이런 확립된 기준선 값은 GCSF에 대한 추가 요법으로서 Am80의 최적 투약 및 일정을 확인하는데 결정적인 신속한 기능적 임상적 종결점을 전달한다.
따라서, 치료가 필요한 개체에서 치료의 효력을 결정하기 위한 방법이 본원에서 제공된다. 이들 방법은 개체로부터 표본을 제공하고, 여기서 개체는 효과량의 레티노이드 효현제 및 효과량의 G-CSF가 투여되었고, 반응성 산소 종 (ROS)의 생산 수준을 검정하고, 그리고 ROS 생산이 참조 표본의 것보다 높으면 치료가 유효하다고 결정하거나, 또는 ROS 생산이 참조 표본과 동일하거나 또는 참조 표본에 비하여 낮으면 치료가 유효하지 않다고 결정하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 치료가 유효한 것으로 간주되지 않으면, Am80 또는 GCSF 또는 둘 모두의 용량이 증가될 수 있다.
일부 구체예에서, 효력이 평가되는 개체는 화학요법 치료 (GCSF와 함께 또는 없이)를 받고 있거나 또는 화학요법 치료를 받았다. 일부 구체예에서, 효력이 평가되는 개체는 호중구감소증에 대한 치료를 받고 있거나 또는 호중구감소증에 대한 치료를 받았다.
한 구체예에서, 표본은 혈액, 말초혈, 골수 세포, 혈장, 조직 또는 이들의 조합이다. 다양한 구체예에서, 표본은 호중구감소증에 대한 치료 전, 치료 동안 또는 치료 후 획득된다. 예시적인 구체예에서, ROS 생산은 Babior, Blood 1999, vol. 93, page: 1464; Dahlgren et al., J Immunol Methods, 1999, Vol. 232, Page: 3; Weiss, Acta Physiol Scand Suppl, 1986, Vol. 548, page: 9; Charles et al., Infect Immun, 2008, Vol. 76, page: 2439; Wei et al., J Biomed Opt, 2010, vol. 15, page: 027006에서 설명된 바와 같이 결정될 수 있다. 일부 구체예에서, ROS 생산은 세균 및 진균 감염을 모의하는 자극제, 예를 들면, fMLP, PMA, ZAS 또는 이들의 조합을 이용하여 계측된다.
본원에서 설명된 방법의 다양한 구체예에서, 참조값은 반응성 산소 종 (ROS)의 생산의 양/수준에 근거된다. 한 구체예에서, 참조값은 건강한 공여자로부터 골수 세포에서 ROS 생산에 근거된다. 다른 구체예에서, 참조값은 건강한 공여자로부터 말초혈 단핵 세포에서 ROS 생산에 근거된다. 추가 구체예에서, 참조값은 급성 골수성 백혈병을 앓고 있거나 또는 앓았던 개체로부터 건강한 골수 세포에서 ROS 생산에 근거된다. 추가 구체예에서, 참조값은 급성 골수성 백혈병을 앓고 있거나 또는 앓았던 개체로부터 건강한 말초혈 세포에서 ROS 생산에 근거된다. (어떤 다른 세포 유형? 임의의 더욱 넓은 구체예?) 참조값을 결정하는데 이용될 수 있는 다른 세포 유형은 당업자에게 명백할 것이다. 추가 구체예에서, 참조값은 상이한 (가령, 초기) 시점으로부터, 예를 들면, 호중구감소증의 진단 동안, 호중구감소증의 치료 전, 호중구감소증에 대한 치료 후 또는 이들의 조합에서 개체로부터 획득된 표본에서 ROS 생산의 양/수준이다.
다양한 구체예에서, 참조값과 비교하여 개체 (가령, 호중구감소증에 대한 치료를 받고 있는 개체)에서 ROS 생산의 양/수준은 최소한 또는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 증가된다. 다양한 구체예에서, 참조값과 비교하여 개체 (가령, 호중구감소증에 대한 치료를 받고 있는 개체)에서 ROS 생산의 양/수준은 최소한 또는 약 1-배, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 10-배, 15-배, 20-배, 25-배, 30-배, 35-배, 40-배, 45-배, 50-배, 55-배, 60-배, 65-배, 70-배, 75-배, 80-배, 85-배, 90-배, 95-배, 100-배 또는 이들의 조합으로 증가된다.
실시예
다음 실시예는 단지 예시적인 목적으로만 제공되고, 그리고 본 발명의 범위를 어떤 방식으로도 한정하는 것으로 의도되지 않는다.
실시예 1: Am80의 선택적 활성에 의해 유도된 골수조혈성 확대 대 골수조혈성 분화
세균에 노출된 호중구감소성 생쥐의 사망률을 감소시키는 성숙 호중구의 재건에 대한 Am80-GCSF의 상승 효과의 기초가 되는 기전은 무엇인가? 세포 특이적 전사 패턴은 세포 운명의 마스터 조절인자인 전사 인자를 조정함으로써 변경될 수 있다. 올-트랜스 레티노산 (ATRA 또는 RA)은 2가지 부류의 전사 인자, 레티노산 수용체 (RARα, -β, -γ) 및 레티노이드 X 수용체 (RXRα, -β, -γ)에 높은 친화성 결합 및 이들의 전사활성화를 갖는다. 이전 연구는 RA가 RARα 활성화를 통해 수임된 골수성 선조체의 분화를 증진하면서, RARγ 활성화를 통해 HSC 자기재생을 증강한다는 것을 보여준다. RA의 이런 범-작용은 다양한 정상 조직 및 종양 조직에서 RARα, -β, -γ 아형을 활성화함으로써 분화를 증진하면서 증식을 저해하는데 강력한 효과를 발휘한다. 대조적으로, Am80은 RARγ이 아닌 RARα에 선별적으로 결합하고, 따라서 APL 환자의 치료에서 RA-활성화된 RARγ에 의해 유도된 부작용을 방지하도록 설계된 레티노이드 효현제이다. 우리는 Am80이 세균 감염에 대항하여 호중구의 분화를 유의미하게 증강하면서 근소한 골수성 확대를 증진한다는 것을 증명하는데, 이것은 효과적인 호중구 분화를 유도하는데 실패하면서 골수성 확대를 심하게 증강하는 G-CSF와 대조적이다. 합동된 Am80-GCSF 치료가 일관된 세균 감염의 존재에서 호중구감소성 생쥐의 사망률을 현저하게 감소시키는데 있어서 Am80보다 훨씬 크다는 발견은 비록 Am80에 의한 RARα의 선택적 활성화가 효과적인 호중구 분화에 기여할 수 있긴 하지만, Am80-매개된 근소한 골수성 확대가 호중구감소증과 일치하는 일관된 세균 감염의 배경에서 충분한 숫자의 성숙 호중구에 대한 요구에 부합하지 못한다는 것을 암시한다. 이들 조사 결과는 골수성 확대 및 호중구 분화 둘 모두를 충분히 균형 잡고, 따라서 암 화학요법-유도된 호중구감소증의 치료에 대한 현재 G-CSF 요법으로부터 발생하는 무력함을 극복하기 위해 합동된 Am80-GSCF를 이용해야 하는 필요성을 지시한다.
실시예 2: Am80-G-CSF의 상승 효과를 조정하는 신호전달 경로
RARα는 CDK7, 사이클린 H 및 MAT1 단백질로 구성되는 사이클린-의존성 키나아제-활성화 키나아제 (CAK) 복합체에 대한 기질이다. CAK는 상이한 CDK의 인산화-활성화에 의한 세포 주기 진행을 조절하기 위한 유리 CAK로서, 또는 이것이 RNA 중합효소 II C 말단 도메인 (RNA PII)의 인산화를 통해 전사를 매개하는 TFIIH 복합체의 키나아제 아단위로서 세포 내에 존재한다. 흥미롭게도, 유리 CAK 또는 TFIIH-내포 CAK는 RARα를 인산화하여 과립구성 분화를 저해하고 (도면 1), 반면 내재적으로 프로그램된 또는 RA-매개된 MAT1 단백질 단편화에 의해 매개된 RARα의 CAK 인산화에서 감소는 RA 표적 유전자의 RARα-의존성 전사를 통해 과립구성 분화를 유도한다 (도면 2). 우리는 최근에, Am80 효과가 RARα의 CAK 인산화를 저해함으로써 RA 표적 유전자의 선택적 발현을 유도하는 RARα 전사 인자의 이의 선택적 활성화로부터 발생한다는 것을 발견하였다. Am80-유도된 골수조혈성 확대는 세포 주기 저해제 p21 Cip/Kip 의 감소된 수준, 하지만 호중구 작동체 CD18, 이차성 과립 LL-37, 그리고 골수성-특이적 전사 인자 CCAAT/인핸서 결합 단백질-엡실론 (C/EBPε)의 증가된 발현에 의해 보여지는 바와 같이, RA 표적 유전자의 변경된 전사 발현 패턴의 기초가 된다. RA 표적 유전자의 이러한 Am80-유도된 선택적 발현은 RA 자극과 상이하고, 그리고 호중구 살균 기능의 효과적인 발달, 유의미한 MAT1 단편화, 감소된 RARα 인산화, 그리고 G-CSF 또는 RA와 비교하여 정상적인 또는 악성 조혈 전구체에서 반응성 산소 종 (ROS)의 훨씬 높은 생산과 연관된다. 이들 데이터는 과립구형성을 위한 전사 반응의 제어에서 레티노이드-매개된 CAK-RARα 신호전달 경로를 통해, RARα에 Am80의 선택적 결합이 근소한 골수조혈성 확대 및 효과적인 호중구 분화를 조정하는 신규한 전사 반응을 유도한다는 것을 암시한다 (도면 3). Am80-GCSF 조합이 호중구감소성 생쥐의 사망률을 현저하게 감소시킨다는 우리의 발견과 함께 이들 연구에 근거하여, 특정 이론에 의해 한정됨 없이, 우리는 Am80-GCSF 조합의 상승 효과가 골수조혈성 전구체의 최적 확대 및 호중구의 효과적인 말단 분화 둘 모두를 교차-조절하고, 감염 및 감염-유도된 사망률의 감소를 야기하는 CAK-RARα 작용 방식을 매개하는데 의존할 수 있다고 생각한다. 우리의 연구는 암 화학요법-유도된 호중구감소성 환자를 치료하기 위해 Am80 또는 GCSF의 단일 섭생을 이용할 때의 결함을 극복하는 효과적인 요법을 제공한다.
실시예 3: 암 화학요법 약물에 의해 유도된 호중구감소증 및 호중구 회복
Ding et al. (Blood 2013 Vol 121 page 996), Trillet-Lenoir et al. (Eur J Cancer 1993; Vol 29A (3), page 319), Lalami et al. (Ann Oncol 2006; Vol 17 (3), page 507) 및 Abdul Rasool Hassan et al. (Asian Pac J Cancer Prev, 2011; Vol 12(6), page 1425)에 의해 보여지는 바와 같이, 암 화학요법이 호중구감소증을 유도하는데 이용될 수 있다. 암 화학요법에 의해 유도된 심각한 호중구감소증의 중간 지속 기간은 인간에서 3-6 일 (ANC <0.5 x 109/L) 및 생쥐에서 2-3 일이고, 반면 GCSF는 호중구의 숫자를 증가시킴으로써 인간 및 생쥐 둘 모두에서 호중구감소성 지속 기간을 단축할 수 있다 (도면 4). 우리의 연구는 생쥐 호중구감소증의 2/3 기간을 호중구-감소 (어떤 섭생도 인간 또는 생쥐에서 호중구의 감소를 예방할 수 없다) 시기 및 호중구-회복 (BM 기능이 여전히 저해된다) 시기로서 분할하는데 (도면 4, 오른쪽 패널), 이들 시기 동안 미생물 감염에 대한 위험이 유의미하게 증가된다. 호중구감소증의 전체 주기는 호중구감소증 유도, 호중구감소증 감소, 호중구감소증 회복, 그리고 정상적인 시기까지 호중구 복귀를 커버한다 (도면 4, 오른쪽 패널). 호중구감소성 생쥐의 사망률을 감소시키는 것에 대한 Am80-GCSF 조합의 효과가 연속적 세균혈증 상태를 겪는 생쥐 호중구감소증의 전체 주기 동안 시험되었다.
실시예 4: Am80 및 Am80-GCSF 조합의 인간 동등한 낮은 및 중간 용량은 호중구-감소 시기에서 호중구의 회복을 효과적으로 증진한다.
Am80 효과를 생체내에서 평가하기 위해, 우리는 먼저, 호중구감소성 생쥐에서 성숙 호중구를 재건하는 것에 대한 상이한 인간 동등한 높은, 중간, 그리고 낮은 용량의 Am80 및 GCSF (도면 5a)의 반극대 효과적인 농도 (EC50)를 시험하였다. 정상적인 C57BL6/J 생쥐는 생쥐 호중구를 감소시키기 위해 단일 분량의 시클로포스파미드 (CPA)로 주사되었다. CPA의 주사후 4 시에, 생쥐는 생쥐가 희생되기 전 연속 3 일 동안 운반제, Am80, GCSF, 또는 Am80-GCSF로 처리되었다 (도면 5b). 블랭크 생쥐의 말초혈 (PB)의 피콜 분리는 성숙 호중구가 하층으로 분류된다는 것을 보여주었다 (도면 5c). 모든 다른 처리와 비교하여, 낮은 및 중간 용량의 Am80 또는 Am80-GCSF 둘 모두 호중구 수준을 지속하는 것에 대한 더욱 우수한 EC50 효과를 보여주었고 (도면 5d, 오른쪽 패널), 반면 낮은 용량의 Am80 및 Am80-GCSF는 중간 용량에서보다 우수하게 과립구성 형태 분화를 증강시켰다 (도면 5e). 게다가, 골수 (BM) 세포의 다밀도 퍼콜 분리는 블랭크 생쥐의 성숙 BM 호중구가 3번째 층으로 분류된다는 것을 지시하였다 (도면 5f). 특히, 비록 중간 용량의 GCSF가 3번째 층 BM 세포의 최대 회복을 유도하긴 했지만 (도면 5g, 오른쪽 패널), 이들 세포는 과립구성 형태 분석에 의해 보여지는 바와 같이, 낮은 용량의 Am80-GCSF에 의해 유도된 것들보다 덜 분화된다 (도면 5h, 위쪽 대 아래쪽 패널). 종합하면, 이들 결과는 낮은 및 중간 용량의 Am80 및 Am80-GCSF가 생쥐 호중구감소증의 초기 단계에서 PB 및 BM 호중구 둘 모두의 중간 정도 수준을 지속할 수 있다는 것을 암시한다. *: P <0.05; **: P <0.01; ***: P <0.005. 데이터는 유사한 결과를 갖는 2가지 독립된 실험을 나타낸다.
실시예 5: 호중구-감소 시기에서 호중구감소성 생쥐에서 Am80의 중간 용량에 의해 유도된 호중구는 G-CSF 또는 Am80-GCSF에 의해 유도된 것들보다 더욱 큰 살균 활성을 전시한다.
도면 6a 실험 설계. C57BL/6J 생쥐 (n=19)는 5개 군으로 무작위로 나누어졌다 (대조의 경우에 3마리 및 각 실험군의 경우에 4마리). 생쥐 호중구감소증은 0 일자에 CPA의 IP 주사에 의해 유도되었다. CPA 주사 후 4 시에, 상이한 섭생이 경구에 의해 Am80 또는 SC에 의해 GCSF 또는 경구에 의해 운반제로 하루 1회 생쥐에 제공되었다. 생쥐는 꼬리 정맥 주사를 통해 2 일자에 6.3 x 106 CFU의 황색포도상구균 (S. aureus)으로 공격되었다. 3 시간 감염 후, 각 100 μl 혈액이 호중구의 초기 살균 활성의 분석을 위해 꼬리로부터 수집되었다. 생쥐는 감염후 16 시에 희생되었고, 이 시점에서 PB 및 심장이 수확되었다. (도면 6b) PB에서 WBC 및 호중구의 Vetscan 분석. 블랭크 생쥐를 제외하고, 호중구 유도는 모든 다른 군에서 관찰되지 않았다 (도면 6c-e). 호중구의 살균 활성은 생존가능한 세포외 세균의 혈액 한천 분석을 이용함으로써, PB에서 감염후 3 시 (도면 6c) 및 16 시 (도면 6d)뿐만 아니라 심장 (패널 e)에서 결정되었다. 호중구 유도가 GCSF 또는 Am80 또는 Am80-GCSF 생쥐에서 세균 감염에 의해 조사되지 않았기 때문에, 이것은 Am80 생쥐에서 유의미하게 증가된 호중구 살균 활성이 생쥐 호중구감소증의 초기 발달 단계에서 현존하는 과립구성 전구체의 성숙 호중구로의 Am80-증진된 분화로부터 발생한다는 것을 지시한다. *: P <0.05; **: P<0.01; ***: P <0.005. A+G: Am80-GCSF.
실시예 6: 호중구-감소 시기에서 Am80-GCSF 군의 첨가로 더욱 낮은 용량의 이용
생쥐 (C57BL6/J)는 5개 군으로 무작위로 나누어졌다 (대조의 경우 3마리 및 각 실험군의 경우에 4마리, n = 19마리 생쥐). C57BL/6J 생쥐 (n=19)는 5개 군으로 무작위로 나누어졌다 (대조의 경우에 3마리 및 각 실험군의 경우에 4마리). 생쥐 호중구감소증의 유도 및 처리에 대한 절차는 중간 용량 시험과 동일하다 (슬라이드 6을 참고한다). 생쥐는 꼬리 정맥 주사를 통해 2 일자에 6.3 x 106 CFU의 황색포도상구균 (S. aureus)으로 공격되었다. 3 시간 감염 후, 각 100 μl 혈액이 호중구의 초기 살균 활성을 결정하기 위해 꼬리로부터 수집되었다. 생쥐는 3 일자에 희생되었고, 이 시점에서 PB 및 비장이 수확되었다. (도면 7a). PB에서 WBC 및 호중구의 Vetscan 분석이 수행되었다 (도면 7b). 블랭크 생쥐를 제외하고, 호중구 유도는 모든 다른 군에서 관찰되지 않았다 (도면 7c-e). 호중구의 살균 활성은 생존가능한 세포외 세균의 혈액 한천 분석을 이용함으로써, PB에서 감염후 3 시 (패널 c) 및 16 시 (패널 d)뿐만 아니라 비장 (패널 e)에서 결정되었다. 호중구 유도가 GCSF 또는 Am80 또는 Am80-GCSF 생쥐에서 세균 감염에 의해 조사되지 않았기 때문에, 이것은 Am80 생쥐에서 유의미하게 증가된 호중구 살균 활성이 생쥐 호중구감소증의 초기 발달 단계에서 현존하는 과립구성 전구체의 성숙 호중구로의 Am80-증진된 분화로부터 발생한다는 것을 지시한다. *: P <0.05; **: P<0.01; ***: P <0.005. 예방 시기에서 호중구감소성 생쥐에서 Am80의 더욱 낮은 용량에 의해 유도된 호중구는 G-CSF 또는 Am80+GCSF에 의해 유도된 것들보다 더욱 큰 살균 활성을 전시한다.
실시예 7: 호중구-회복 시기에서 Am80-GCSF 군의 첨가로 더욱 낮은 용량의 이용
생쥐 (C57BL6/J)는 5개 군으로 무작위로 나누어졌다 (대조의 경우 3마리 및 각 실험군의 경우에 4마리, n = 19마리 생쥐). 예시된 바와 같이 (도면 8a), 생쥐는 CPA 주사 (200mg/kg) 후 2 일에 섭생이 제공되었다. 연속 3 일간 처리 후, 생쥐는 안락사 전 최대 16 시간 동안 황색포도상구균 (S. aureus)으로 공격되었다. 우리는 세균 감염 후 모든 군에서 말초혈 (PB) 호중구의 유의미한 증가를 발견하였다 (도면 8b). 감염후 3 및 16 시에 수집된 PB가 호중구 살균 활성을 분석하는데 이용되었다. 독립된 사멸 검정은 Am80 단독이 아닌 Am80-GCSF 조합에 의해 유도된 호중구가 훨씬 많은 세균을 사멸시킨다는 것을 보여주었다 (도면 8c). 호중구 생산을 사정함으로써, 우리는 GCSF 또는 Am80-GCSF보다 Am80이 BM 및 PB 둘 모두에서 더욱 적은 숫자의 호중구를 유도한다는 것을 발견하였다 (도면 8d, 8e). 비록 GCSF가 Am80-GCSF와 비교하여 BM에서 훨씬 많은 호중구 및 PB에서 유사한 양을 유도하긴 했지만 (도면 8d, 8e; 아래쪽 패널), GCSF-유도된 호중구는 Am80-GCSF에 의해 유도된 것들과 비교하여 훨씬 낮은 살균 활성을 전시하였다 (도면 8c). 게다가, Am80-GCSF 조합에 의해 유도된 호중구는 더욱 우수한 과립구성 형태 분화를 전시하였다 (도면 8d, 8e; 왼쪽 패널). 이들 결과는 BM 기능이 여전히 저해되는 호중구-회복 동안, 단지 극소수 숫자의 과립구성 전구체만 Am80에 의해 성숙 호중구로 분화되는데 가용하고, 반면 GCSF에 의해 유도된 대량의 호중구는 세균 사멸에 결함이 있다는 것을 지시한다. 하지만, 낮은 용량의 Am80-GCSF 처리로, Am80은 미생물 감염에 대항하여, GCSF-재건된 과립구성 전구체를 성숙 호중구로 효과적으로 분화할 수 있다. P <0.05; **: P<0.01; ***: P <0.005.
실시예 8: 더욱 낮은 용량의 Am80-GCSF 조합의 이용은 연속적 세균혈증을 겪는 호중구감소성 생쥐의 감염-관련된 사망률을 유의미하게 감소시킨다
Am80이 감염에 대항하여 GCSF-재건된 대량의 과립구성 전구체를 성숙 호중구로 실제로 분화할 수 있으면, Am80-GCSF 조합은 암 화학요법 유도된 호중구감소증에서 감염-관련된 사망률을 효과적으로 감소시킬 것이다. 우리는 전체 호중구감소증 기간 내내 세균혈증을 경험하는 호중구감소성 생쥐를 이용함으로써 이러한 가설을 검증하였다. 예시된 바와 같이 (도면 9a), 생쥐는 최대 8 일자까지, CPA 주사 후 4 시에 상이한 섭생이 제공되었다. 황색포도상구균 (S. aureus) 감염이 3 일자에 수행되었고, 그리고 생존율이 9 일자에 계산되었다. 3가지 독립된 실험으로, 우리는 Am80-GCSF가 GCSF 또는 Am80 단독보다 생존율을 훨씬 많이 증가시킨다는 것을 결정하였다 (도면 9b-d). 생존 생쥐에서 재건된 호중구의 살균 능력을 평가하기 위해, 생존 블랭크 및 Am80-GCSF 생쥐는 11 일자에, 안락사 전 15 분 동안 황색포도상구균 (S. aureus)으로 더욱 감염되었다. 김자 및 그람 염색 둘 모두로 새로 단리된 PB의 병렬 분석은 감염된 생쥐에서 대 세균혈증이 없는 비감염된 생쥐에서 호중구 식균작용을 결정하였다 (도면 9e). GCSF가 통상적으로, 화학 약물 후 ≥24 시에 CCIN에 제공되기 때문에, 우리는 각 용량에 대해 2번의 독립된 실험으로, 예시된 바와 같이 (도면 9f, 9j), CPA후 24 시에 낮은 및 중간 용량의 Am80-GCSF 처리를 더욱 시험하였다. 낮은 용량 시험으로부터 결과는 GCSF 군이 단지 12.5% 생존율을 갖고, 반면 블랭크 또는 Am80-GCSF 군에서는 사망률이 전혀 관찰되지 않는다는 것을 보여주었다 (도면 9g-i). 하지만, 중간-용량 시험에서, Am80-GCF (55.6%) 및 GCSF (11.1%) 군 사이에 생존율은 통계학적 차이가 없었다 (도면 9k-m). 종합하면, 이들 생존 생쥐 모형은 낮은 용량의 Am80-GCSF가 호중구감소성 생쥐의 감염-관련된 사망률을 감소시킨다는 것을 증명한다.
실시예 9: CD34+ 세포에서 Am80 및 RA의 효과
Am80에 의한 CD34+ 세포 (도면 10b)에서 MAT1 단편화 (이것은 과립구성 분화를 지시한다) (도면 10a) 및 레티노산 수용체 (RARα) 저인산화 (즉, 과립구성 분화의 증진을 지시하는 RARα의 감소된 인산화)의 진행성 유도를 묘사하는 웨스턴 블롯. 신규한 유전자 전사 패턴은 올-트랜스 레티노산 (ATRA 또는 RA)과 대조적으로, Am80에 의해 유도된다. C/EBPε, CD18 및 과립 LL-37의 유의미한 상향조절, 그리고 p21Cip/Kip mRNA 수준에서 감소가 Am80 투여 이후에 관찰되었다 (도면 10c).
실시예 10: 백혈병 세포 및 CD34+ 세포에서 섭생 효과
Am80-GCSF는 포르밀-메티오닐-류실-페닐알라닌 (f-Met-Leu-Phe; fMLP) (도면 11c)의 존재에서 또는 PMA (도면 11d)의 존재에서 6 일자에 과립구성 분화 (도면 11b) 및 ROS 생산을 유의미하게 증진하면서 NB4 세포 증식 (도면 11a)을 저해한다. *, P < 0.04 최소한. G-CSF는 fMLP 또는 PMA의 존재에서 NB4 세포에서 ROS 생산을 유도하는데 실패한다.
Am80-GCSF는 Am80 또는 GCSF 단독과 비교하여, fMLP (도면 12c)의 존재에서 또는 PMA (도면 12d)의 존재에서 5 일자에, Am80 또는 GCSF보다 훨씬 큰 호중구 분화 (도면 12a, 12b) 및 훨씬 높은 ROS 생산을 증진하면서 GCSF와 유사한 골수조혈성 확대를 유도한다. *, P<0.02 최소한.
실시예 11: Am80 또는 GCSF 또는 ATRA 처리 이후에 AML 환자 모구
급성 골수성 백혈병 환자로부터 PB 일차 모구의 증식이 검정되고 (도면 13a) 정량되었다 P <0.05 (도면 13b). AML PB 일차 모구의 과립구성 형태가 분석되고 (도면 13c) 정량되었다; Am80 대 G-CSF, P <4.0E-8; Am80 대 대조, P <6.02E-7 (도면 13d).
급성 골수성 백혈병 환자로부터 BM 일차 모구의 증식이 8 일자에 검정되고 (도면 13e) 정량되었다, Am80 대 G-CSF, P <0.008; G-CSF 대 대조, P <0.032 (도면 13f). AML BM 일차 모구의 과립구성 형태가 분석되고 (도면 13g) 정량되었다; Am80 대 G-CSF, P <9.9E-4; Am80 대 RA, P <1.0E-4 (도면 13h). 더욱 높은 성장률이 AML BM 일차 모구에서 G-CSF에 의해 유도되었고 (도면 13i), 그리고 세포 증식이 정량되었다; G-CSF 대 대조, P <0.018 (도면 13j). 이들 데이터는 G-CSF 치료가 Am80 또는 ATRA로 치료된 환자와 비교하여 비-APL (급성 전골수성 백혈병) AML 환자 모구의 성장을 증진한다는 것을 암시한다.
실시예 12: Am80-GCSF는 말초혈 단핵 세포에서 및 골수 (BM) 세포에서 ROS 생산을 증진한다
단핵 세포의 상층이 3명의 정상적인 인간 공여자의 PB로부터 단리되고 낮은 용량의 Am80, GCSF, 또는 Am80-GCSF를 포함하는 과립구-계통 배지에서 최대 4 일 동안 배양되었다 (도면 14a, b). 각 공여자에서, Am80-GCSF에 의해 유도된 호중구는 Am80 또는 GCSF 단독과 비교하여 fMLP (도면 14c) 또는 PMA (도면 14d)의 존재에서 훨씬 높은 수준의 ROS 생산을 전시하였다. Am80-GCSF는 정상적인 인간 공여자로부터 단리된 말초혈 단핵 세포에서 ROS 생산을 유의미하게 증진한다.
급성 골수성 백혈병 (AML) 환자로부터 새로 단리된 골수 (BM) 세포 또는 말초혈 (PB) 단핵 세포가 과립구-계통 유도 배지에서 배양되고 3 일자에 계수되었다 (도면 15a(i), 15b(i) 및 15c(i)). ROS 생산이 fMLP (도면 15a(ii), 15b(ii) 및 15c(ii)) 또는 PMA (도면 15a(iii), 15b(iii) 및 15c(iii))의 존재에서 검정되었다. Am80-GCSF는 Am80 또는 GCSF 단독과 비교하여 훨씬 큰 ROS 생산을 증진한다.
앞서 설명된 다양한 방법과 기술은 본 출원을 실행하기 위한 다수의 방식을 제공한다. 당연히, 설명된 모든 목적 또는 이점이 본원에서 설명된 임의의 특정 구체예에 따라 반드시 달성될 수 있는 것은 아닌 것으로 이해된다. 따라서, 예로서, 당업자는 이들 방법이 본원에서 교시되거나 또는 제안된 바와 같은 다른 목적 또는 이점을 반드시 달성하는 것은 아니지만, 본원에서 교시된 바와 같은 한 가지 이점 또는 일군의 이점을 달성하거나 또는 최적화하는 방식으로 수행될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 다양한 대안이 본원에서 언급된다. 일부 바람직한 구체예는 한 가지, 다른, 또는 여러 특질을 특정적으로 포함하고, 반면 다른 구체예는 한 가지, 다른, 또는 여러 특질을 특정적으로 배제하고, 반면 또 다른 구체예는 한 가지, 다른, 또는 여러 유리한 특질의 포함에 의해 특정 특질을 경감하는 것으로 이해된다.
게다가, 당업자는 상이한 구체예로부터 다양한 특질의 적용가능성을 인식할 것이다. 유사하게, 상기 논의된 다양한 원소, 특질과 단계뿐만 아니라 각각의 이런 원소, 특질 또는 단계에 대한 다른 공지된 등가물이 본원에서 설명된 원리에 따른 방법을 수행하기 위해 당업자에 의해 다양한 조합에서 이용될 수 있다. 다양한 구체예에서, 다양한 원소, 특질, 그리고 단계 중에서 일부는 특정적으로 포함될 것이고, 그리고 다른 일부는 특정적으로 배제될 것이다.
비록 본 출원이 일정한 구체예와 실례의 문맥에서 개시되긴 했지만, 본 출원의 구체예는 특정적으로 개시된 구체예를 뛰어 넘어 다른 대안적 구체예 및/또는 용도와 변형 및 이들의 등가물까지 미치는 것으로 당업자에 의해 이해될 것이다.
본 출원을 실행하기 위한 본 발명자들에게 공지된 최적 방식을 비롯하여, 본 출원의 바람직한 구체예가 본원에서 설명된다. 이들 바람직한 구체예에서, 변이는 전술한 설명을 읽은 후, 당업자에게 명백해질 것이다. 당업자는 타당하면 이런 변형을 이용할 수 있고, 그리고 본 출원은 본원에서 특정적으로 설명된 것과 달리 실시될 수 있는 것으로 예기된다. 따라서, 본 출원의 많은 구체예는 근거 법률에 의해 허용되면, 여기에 청부된 청구항에서 언급된 요부의 모든 변형과 등가물을 포함한다. 게다가, 모든 가능한 변이에서 상기-설명된 원소의 임의의 조합은 본원에서 달리 지시되지 않으면 또는 문맥에 의해 달리 명백하게 부인되지 않으면 본 출원에 의해 포괄된다.
본원에서 참조된 모든 특허, 특허 출원, 특허 출원의 공보, 그리고 다른 자료, 예를 들면, 논문, 서적, 명세서, 간행물, 문서, 기타 등등은 이들과 연관된 임의의 출원 파일 이력, 이들 중에서 본 문서와 불일치하거나 또는 충돌하는 것, 또는 이들 중에서 본 문서와 현재 또는 추후 연관된 청구항의 가장 넓은 범위에 대하여 제한하는 효과를 가질 수 있는 것을 제외하고, 모든 점에서 전체적으로 본원에 참조로서 편입된다. 실례로서, 임의의 편입된 자료와 연관된 용어의 설명, 정의 및/또는 이용, 그리고 본 문서와 연관된 용어의 설명, 정의 및/또는 이용 사이에 임의의 불일치 또는 갈등이 있으면, 본 문서에서 용어의 설명, 정의 및/또는 이용이 우선할 것이다.
본원에서 개시된 출원의 구체예는 출원의 구체예의 원리를 예시하는 것으로 이해된다. 이용될 수 있는 다른 변형은 본 출원의 범위 내에 있을 수 있다. 따라서, 실례로서, 하지만 제한 없이, 본 출원의 구체예의 대안적 형상이 본원에서 교시에 따라 활용될 수 있다. 따라서, 본 출원의 구체예는 도시되고 설명된 바와 정확하게 일치하는 구체예에 한정되지 않는다.
본 발명의 다양한 구체예가 상세한 설명에서 전술된다. 이들 설명이 상기 구체예를 직접적으로 설명하긴 하지만, 당업자는 도시되고 본원에서 설명된 특정한 구체예에 대한 변형 및/또는 변이를 생각할 수 있는 것으로 이해된다. 이러한 설명의 범위에 들어가는 임의의 이런 변형 또는 변이 역시 그 안에 포함되는 것으로 의도된다. 구체적으로 언급되지 않으면, 본 명세서와 청구항에서 단어와 관용구는 당해 분야에서 당업자에게 일상적이고 익숙한 의미가 제공되는 것으로 본 발명자들에 의해 의도된다.
출원을 제출하는 시점에서 출원인에게 공지된 본 발명의 다양한 구체예의 전술한 설명이 제공되었고, 그리고 예시와 설명의 목적으로 의도된다. 본 설명은 완전한 것으로 의도되지 않을 뿐만 아니라 본 발명을 개시된 정밀한 형태까지 한정하는 것으로 의도되지 않고, 그리고 상기 교시에 비추어 많은 변형과 변이가 가능하다. 설명된 구체예는 본 발명의 원리 및 이의 실질적인 적용을 설명하는데 조력하고, 그리고 당업자가 다양한 구체예에서 및 예기된 특정 용도에 적합하도록 다양하게 변형하여 본 발명을 활용할 수 있게 하는데 조력한다. 이런 이유로, 본 발명은 발명을 실행하기 위해 개시된 특정 구체예에 한정되지 않는 것으로 의도된다.
본 발명의 특정 구체예가 도시되고 설명되긴 했지만, 본원에서 교시에 근거하여, 본 발명 및 이의 더욱 넓은 양상으로부터 벗어나지 않으면서 변화와 변형이 만들어질 수 있고, 이런 이유로, 첨부된 청구항이 모든 이런 변화와 변형이 본 발명의 진정한 사상과 범위 안에 있다는 점에서 이들을 범위 내에 포괄한다는 것은 당업자에게 명백할 것이다.

Claims (44)

  1. 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환의 발생 가능성을 감소시키고, 질환의 심각도를 감소시키고, 질환의 예방을 증진하고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 방법에 있어서,
    레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체를 제공하고; 그리고
    레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체의 치료 효과량을 개체에 투여하고, 따라서 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환을 앓을 가능성을 감소시키고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  2. 청구항 1에 있어서, 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체는 한 가지 조성물에서 제공되는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 청구항 1에 있어서, 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체는 별개의 조성물에서 제공되는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 청구항 1에 있어서, 질환은 호중구감소증 또는 미생물 감염인 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 청구항 1에 있어서, 질환은 화학요법-유도된 호중구감소증, 선천성 호중구감소증, 특발성 호중구감소증, 주기 호중구감소증, 또는 자가면역 호중구감소증인 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 청구항 1에 있어서, 개체는 인간인 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 청구항 1에 있어서, 레티노이드 효현제는 타미바로텐 (Am80, 레티노벤조익산, 암노이드, 타미바로), CH55, ITYA (ITYA-01115), Am580, BD4, 또는 NRX195183, 또는 이들의 조합인 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 청구항 1에 있어서, 레티노이드 효현제는 정맥내, 근육내, 피하, 복막내, 경구 또는 흡입을 통해 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 청구항 1에 있어서, G-CSF 또는 이의 유사체는 정맥내, 근육내, 피하, 복막내, 경구 또는 흡입을 통해 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 청구항 1에 있어서, 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체는 동시에 또는 순차적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 청구항 1에 있어서, 레티노이드 효현제는 G-CSF 또는 이의 유사체를 투여하기 전에, 투여하는 동안 또는 투여한 후에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 청구항 1에 있어서, 레티노이드 효현제는 약 0.001 내지 0.01 mg/kg, 0.01 내지 0.1 mg/kg, 0.1 내지 0.5 mg/kg, 0.5 내지 5 mg/kg, 5 내지 10 mg/kg, 10 내지 20 mg/kg, 20 내지 50 mg/kg, 50 내지 100 mg/kg, 100 내지 200 mg/kg, 200 내지 300 mg/kg, 300 내지 400 mg/kg, 400 내지 500 mg/kg, 500 내지 600 mg/kg, 600 내지 700mg/kg, 700 내지 800mg/kg, 800 내지 900mg/kg, 또는 900 내지 1000 mg/kg에서 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 청구항 1에 있어서, 레티노이드 효현제는 하루 1-3 회 또는 주당 1-7 회 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 청구항 1에 있어서, 레티노이드 효현제는 약 1-10 일, 10-20 일, 20-30 일, 30-40 일, 40-50 일, 50-60 일, 60-70 일, 70-80 일, 80-90 일, 90-100 일, 1-6 개월, 6-12 개월, 또는 1-5 년 동안 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 청구항 1에 있어서, G-CSF 또는 이의 유사체는 약 0.01 내지 0.1 mcg/kg, 0.1 내지 0.5 mcg/kg, 0.5 내지 5 mcg/kg, 5 내지 10 mcg/kg, 10 내지 20 mcg/kg, 20 내지 50 mcg/kg, 50 내지 100 mcg/kg, 100 내지 200 mcg/kg, 200 내지 300 mcg/kg, 300 내지 400 mcg/kg, 400 내지 500 mcg/kg, 500 내지 600 mcg/kg, 600 내지 700mcg/kg, 700 내지 800mcg/kg, 800 내지 900mcg/kg, 또는 900 내지 1000 mcg/kg에서 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 청구항 1에 있어서, G-CSF 또는 이의 유사체는 하루 1-3 회 또는 주당 1-7 회 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 청구항 1에 있어서, G-CSF 또는 이의 유사체는 약 1-10 일, 10-20 일, 20-30 일, 30-40 일, 40-50 일, 50-60 일, 60-70 일, 70-80 일, 80-90 일, 90-100 일, 1-6 개월, 6-12 개월, 또는 1-5 년 동안 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 청구항 1에 있어서, 화학요법 작용제를 개체에 제공하고 투여하는 것을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 청구항 17에 있어서, 레티노이드 효현제, G-CSF 또는 이의 유사체, 그리고 화학요법제는 동시에 또는 순차적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 청구항 17에 있어서, 레티노이드 효현제 및/또는 G-CSF 또는 이의 유사체는 화학요법제를 투여하기 전에, 투여하는 동안 또는 투여한 후에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 청구항 1에 있어서, 항균성 작용제를 개체에 제공하고 투여하는 것을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  22. 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체를 포함하는 조성물.
  23. 청구항 21에 있어서, 레티노이드 효현제는 타미바로텐 (Am80, 레티노벤조익산, 암노이드, 타미바로), CH55, ITYA (ITYA-01115), Am580, BD4, 또는 NRX195183, 또는 이들의 조합인 것을 특징으로 하는 조성물.
  24. 청구항 21에 있어서, 레티노이드 효현제는 약 0.001 내지 0.01 mg/kg, 0.01 내지 0.1 mg/kg, 0.1 내지 0.5 mg/kg, 0.5 내지 5 mg/kg, 5 내지 10 mg/kg, 10 내지 20 mg/kg, 20 내지 50 mg/kg, 50 내지 100 mg/kg, 100 내지 200 mg/kg, 200 내지 300 mg/kg, 300 내지 400 mg/kg, 400 내지 500 mg/kg, 500 내지 600 mg/kg, 600 내지 700mg/kg, 700 내지 800mg/kg, 800 내지 900mg/kg, 또는 900 내지 1000 mg/kg인 것을 특징으로 하는 조성물.
  25. 청구항 21에 있어서, G-CSF 또는 이의 유사체는 약 0.01 내지 0.1 mcg/kg, 0.1 내지 0.5 mcg/kg, 0.5 내지 5 mcg/kg, 5 내지 10 mcg/kg, 10 내지 20 mcg/kg, 20 내지 50 mcg/kg, 50 내지 100 mcg/kg, 100 내지 200 mcg/kg, 200 내지 300 mcg/kg, 300 내지 400 mcg/kg, 400 내지 500 mcg/kg, 500 내지 600 mcg/kg, 600 내지 700mcg/kg, 700 내지 800mcg/kg, 800 내지 900mcg/kg, 또는 900 내지 1000 mcg/kg인 것을 특징으로 하는 조성물.
  26. 청구항 21에 있어서, 제약학적으로 허용되는 부형제를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  27. 청구항 21에 있어서, 제약학적으로 허용되는 담체를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  28. 청구항 21에 있어서, 조성물은 정맥내, 근육내, 피하, 복막내, 경구 또는 흡입을 통한 투여를 위해 조제되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  29. 청구항 21에 있어서, 화학요법제를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  30. 청구항 21에 있어서, 항균성 작용제를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  31. 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환을 앓을 가능성을 감소시키고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추기 위한 키트에 있어서,
    일정량의 레티노이드 효현제;
    일정량의 G-CSF 또는 이의 유사체; 그리고
    개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환을 앓을 가능성을 감소시키고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추기 위해 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체를 이용하기 위한 사용설명서를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  32. 과립구를 산출하는 방법에 있어서,
    세포를 제공하고; 그리고
    세포를 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체로 자극하고, 따라서 과립구를 산출하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  33. 청구항 0에 있어서, 과립구는 호중구인 것을 특징으로 하는 방법.
  34. 청구항 0에 있어서, 산출된 과립구 및/또는 자극된 세포를 배양하는 것을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  35. 청구항 0에 있어서, 산출된 과립구 및/또는 자극된 세포를 단리하는 것을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  36. 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환을 앓을 가능성을 감소시키고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 방법에 있어서,
    세포를 제공하고;
    세포를 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체로 자극하고, 따라서 과립구를 산출하고; 그리고
    산출된 과립구를 개체에 투여하고, 따라서 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환을 앓을 가능성을 감소시키고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  37. 청구항 35에 있어서, 과립구는 호중구인 것을 특징으로 하는 방법.
  38. 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환을 앓을 가능성을 감소시키고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 방법에 있어서,
    세포를 제공하고;
    세포를 레티노이드 효현제 및 G-CSF 또는 이의 유사체로 자극하고; 그리고
    자극된 세포를 개체에 투여하고, 따라서 개체에서 질환을 치료하고, 질환을 예방하고, 질환을 앓을 가능성을 감소시키고, 질환의 심각도를 감소시키고 및/또는 질환의 진행을 늦추는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  39. 치료가 필요한 개체에서 치료의 효력을 결정하기 위한 방법에 있어서,
    (a) 개체로부터 표본을 제공하고, 여기서 개체는 효과량의 레티노이드 효현제 및 효과량의 G-CSF가 투여되었고;
    (b) 반응성 산소 종 (ROS)의 생산 수준을 검정하고; 그리고
    (c) ROS 생산이 참조 표본의 것보다 높으면 치료가 유효하다고 결정하거나, 또는 ROS 생산이 참조 표본과 동일하거나 또는 참조 표본에 비하여 낮으면 치료가 유효하지 않다고 결정하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  40. 청구항 39에 있어서, 표본은 말초혈, 골수 세포, 혈장, 조직 또는 이들의 조합인 것을 특징으로 하는 방법.
  41. 청구항 39에 있어서, 개체는 호중구감소증의 치료를 받고 있거나 또는 받았던 것을 특징으로 하는 방법.
  42. 청구항 39에 있어서, 표본은 호중구감소증에 대한 치료 전, 치료 동안 또는 치료 후 획득되는 것을 특징으로 하는 방법.
  43. 청구항 39에 있어서, 참조값은 호중구감소증을 앓지 않는 개체의 개체군으로부터 ROS 생산의 평균 또는 중간 수준인 것을 특징으로 하는 방법.
  44. 청구항 39에 있어서, 참조값은 레티노이드 효현제 및 G-CSF를 포함하는 요법을 받았던 개체의 개체군으로부터 ROS 생산의 평균 또는 중간 수준인 것을 특징으로 하는 방법.
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