KR20160099716A

KR20160099716A - 간 질환의 치료 방법

Info

Publication number: KR20160099716A
Application number: KR1020167020661A
Authority: KR
Inventors: 카즈코 마츠다
Original assignee: 메디시노바, 인크.
Priority date: 2014-01-10
Filing date: 2015-01-07
Publication date: 2016-08-22
Also published as: US20150209314A1; KR102352729B1; EP3091972A1; CN105934243A; CA2935933C; CA2935933A1; JP2017502056A; WO2015105874A1; ES2917982T3; US20140155484A1; TW201609081A; BR112016015712A2; EP3091972A4; BR112016015712A8; US8962687B2; EP3091972B1; JP2019218379A

Abstract

하기의 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질, 또는 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질의 에스테르, 또는 이의 각각의 약학적으로 허용가능한 염은, 간 지방증, 소엽의 염증, 간의 풍선화 및 간의 반흔(hepatic scarring)에 유용한 것이고,
[화학식 (Ⅰ)]

이 식에서, m, n, X¹ 및 X²는 본원에 정의된 바와 같다.

Description

간 질환의 치료 방법{METHOD OF TREATING LIVER DISORDERS}

관련된 특허 출원에 대한 상호-참조

본 출원은, 이의 전체로 본원에 참고문헌으로 포함된 내용인, 차례로 2012년 12월 5일에 출원된 U.S. 출원 번호 13/706,161의 일부계속출원인, 2014년 1월 10일에 출원된 U.S. 출원 번호 14/152,924의 이익을 청구한다.

본 발명의 분야

본 발명은, 비-알코올성 지방간 질병(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD), 및/또는 비-알코올성 지방간염(non-alcoholic steatohepatitis, NASH), 이들의 하나 또는 그 이상을 유도되거나 이로부터 발생하는 증상, 및/또는 MN-001 및 MN-002와 같은 페녹시알킬카르복실산(phenoxyalkylcarboxylic acids)을 투여함으로써 이의 각각의 부정적인 효과를 치료하는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 배경

비-알코올성 지방간 질병(NAFLD)은, 알코올 소비와 관련되지 않은 간에서의 지방 축적에 관한 것이다. 지방은, 비만, 당뇨병 또는 그 밖의 증상의 결과로서 축적될 수도 있다. 소수의 사람에서, NAFLD는 간 염증, 반흔(scarring) 및 결국, 간부전으로 진행된다. 상기 질환의 이러한 심각한 형태는, 비-알코올성 지방간염(NASH)으로 때때로 불린다. NAFLD 및 NASH, 및 이들의 하나 또는 그 이상을 유도되거나 이로부터 발생하는 증상은, 모든 연령의 사람에게 영향을 미치는, 전 세계적으로 점점 심각해지고 있다. NAFLD 및 NASH는 현재 간 이식에 대한 가장 빨리-증가하는 지표이다.

본 발명의 요약

하나의 측면에서, 본 발명은, 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질, 또는 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질의 에스테르, 또는 이의 각각의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 비-알코올성 지방간 질병(NAFLD) 또는 비-알코올성 지방간염(NASH)으로부터 고통 받는 환자를 치료하는 방법을 제공한다:

[화학식 (Ⅰ)]

이 식에서, m은 2 내지 5의 정수이고, n은 3 내지 8의 정수이고, X^l 및 X²는 각각 독립적으로, 황 원자, 산소 원자, 술피닐 (-S(O)-) 기 또는 술포닐 (-S(O)₂-) 기를 나타내고, 단, X^l 및 X²는 동시에 산소 원자가 아니다(provided that X^l and X² are not simultaneously oxygen atoms).

또 다른 측면에서, 본 발명은, 화학식 (Ι)의 화합물, 또는 이의 에스테르, 또는 이의 각각의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, NAFLD 또는 NASH로부터 고통 받는 환자에서 간 염증을 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 화학식 (Ι)의 화합물은 상기에 정의된 바와 같다.

다른 측면에서, 본 발명은, 화학식 (Ι)의 화합물, 이의 에스테르, 또는 이의 각각의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 지방증, 소엽의 염증(lobular inflammation), 간의 풍선화(hepatic ballooning), 및 간의 반흔(hepatic scarring)의 하나 또는 그 이상으로부터 고통 받는 환자에서 지방증, 소엽의 염증, 간의 풍선화, 및 간의 반흔의 하나 또는 그 이상을 저해하는 방법을 제공하고, 상기 화학식 (Ι)의 화합물은 상기에 정의된 바와 같다. 여기에 사용된 바와 같은, "지방증"[지방 변화, 지방 변성(fatty degeneration) 또는 지방질의 변성(adipose degeneration)으로 또한 불림]은, 세포, 바람직하게 간 세포 내의 지질의 비정상적인 유지를 나타내는 과정이다. 다른 측면에서, 본 발명은, 화학식 (Ι)의 화합물, 이의 에스테르, 또는 이의 각각의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 환자의 간에서 히드록시프롤린 형성을 감소 및/또는 저해하는 방법을 제공하고, 화학식 (Ι)의 화합물은 상기에 정의된 바와 같다. 특정한 바람직한 실시형태에서, 상기 지방증, 소엽의 염증, 간의 풍선화, 간의 반흔, 또는 간-히드록시프롤린 축적은, 과도한 알코올 섭취와 관련되지 않았고; 다시 말해서, 이들은 사실상 실질적으로 비-알코올성이다.

바람직한 실시형태에서, 화학식 (Ⅰ)의 화합물은 화학식 (IA)의 화합물(또는 MN-001)이다:

[화학식 (IA)]

다른 바람직한 실시형태에서, 화학식 (Ⅰ) 및 (IA)의 화합물의 대사물질은, 화학식 (IB)의 화합물(또는 MN-002)이다:

[화학식 (IB)]

하나의 실시형태에서, 상기 환자는 NAFLD로부터 고통 받고 있다. 다른 실시형태에서, 상기 환자는 NASH로부터 고통 받고 있다.

도 1은, 처리된 및 처리되지 않는 마우스(treated and untreated mice)에서 지방증 지수(steatosis scores)를 그래프적으로 나타낸 것이다.
도 2는, 처리된 및 처리되지 않는 마우스에서 소엽의 염증 지수를 그래프적으로 나타낸 것이다.
도 3은, 처리된 및 처리되지 않는 마우스에서 간세포의 풍선화 지수(hepatocyte ballooning scores)를 그래프적으로 나타낸 것이다.
도 4는, 처리된 및 처리되지 않는 마우스에서 섬유증 영역(fibrosis area)의 퍼센트를 그래프적으로 나타낸 것이다.
도 5는, 처리된 및 처리되지 않는 마우스에서 염증 영역을 그래프적으로 나타낸 것이다.
도 6은, 처리된 및 처리되지 않는 마우스에서 간 히드록시프롤린 함량을 그래프적으로 나타낸 것이다.

본 발명의 상세한 설명

정의

본원 및 첨부된 청구범위에서 사용된 바와 같은, 단수형 "a", "an" 및 "the" 는 달리 명확하게 나타내지 않는 한 복수형 표시를 포함한다.

환자에게 약물을 "투여하는 것" 또는 "투여"(및 이러한 어구의 문법적 상응구)는, 자가 투여를 포함하는 직접적 투여 및 약물의 처방전 발행을 포함하는 간접적 투여 둘 다를 포함한다. 예를 들어, 본원에 사용된 바와 같이, 환자에게 약물의 자가 투여를 지시하고 및/또는 환자에게 약물에 대한 처방전을 제공하는 의사는, 환자에게 약물을 투여하는 것이다.

기 앞에 위치한 경우 "C_x"는 기의 탄소 원자의 수가 X인 것을 의미한다("C_X" when placed before a group refers to the number of carbon atoms in that group to be X).

"알킬"은 1 내지 12 개의 탄소 원자를 가지는 1가 비고리형 히드로카르빌 라디칼(monovalent acyclic hydrocarbyl radical)을 의미한다. 알킬의 비 제한적인 예는, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 3가 부틸, 펜틸, 헥실 등을 포함한다.

"아릴"은 10 개까지 탄소 원자를 가지는 1가 방향족 히드로카르빌 라디칼을 의미한다. 아릴의 비제한 예는 페닐 및 나프틸을 포함한다.

"헤테로아릴"은 방향족 고리 내에서 산소, 질소, 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 1 및 4 개의 헤테로원자 및 1 내지 10 개의 탄소 원자의 방향족 기를 의미하고, 상기 헤테로아릴의 질소 및/또는 황 원자(들)은 임의적으로 산화된다(예를 들면, N-산화물, -S(O)- 또는 -S(0)₂-). 이러한 헤테로아릴기는 단일 고리(예를 들면, 피리딜 또는 푸릴) 또는 다가 축합된 고리(multiple condensed rings)(예를 들면, 인돌리지닐 또는 벤조티에닐)을 가질 수 있고, 축합된 고리는 방향족이거나 방향족이 아닐 수 있고, 및/또는 헤테로원자를 함유하거나 헤테로원자를 함유하지 않을 수 있고, 단, 부착 지점(point of attachment)은 방향족 헤테로아릴 기의 원자를 통한 것이다. 헤테로아릴의 비제한적인 예는 피리딜, 피롤릴, 인돌릴, 티오페닐, 및 푸릴을 포함한다.

"시클로알킬"은 3 내지 12 개의 탄소 원자를 가지는 1가의 비-방향족 고리형 히드로카르빌 라디칼을 의미한다. 시클로알킬의 비 제한적인 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실 등을 포함한다.

"헤테로시클릴(Heterocyclyl)"은, 고리 내에 산소, 질소, 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 4 개의 헤테로원자 및 1 내지 10 개의 탄소 원자의 1가의 비-방향족 고리기(monovalent non-aromatic cyclic group)를 의미하고, 헤테로아릴의 질소 및/또는 황 원자(들)는 임의적으로 산화된다(예를 들어, N-산화물, -S(O)- 또는 -S(0)₂-). 이러한 헤테로아릴 기는 단일환(예를 들면, 피페리디닐 또는 테트라히드로푸라닐) 또는 복수의 축합된 고리를 가질 수 있고, 축합된 고리는 방향족이거나 방향족이 아닐 수 있고 및/또는 헤테로원자를 함유하거나 함유하지 않을 수 있으며, 단 부착의 지점은 비-방향족 헤테로시클릴 기의 원자를 통한다. 헤테로시클릴의 비 제한적인 예는 피롤리딘일, 피페리딘일, 피페라진일 등을 포함한다.

"아미노"는 -NH₂를 의미한다.

"알킬아미노"는 -NHR_B를 의미하고, 여기서 R_B는, 임의적으로 1 내지 3개의 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 또는 헤테로시클릴 기로 치환된 C₁-C₆ 알킬이다.

"디알킬아미노"는 -N(R_B)₂를 의미하고, 여기서 R_B는 상기에 정의된 바와 같다.

"포함하는"은, 방법 및 조성물이 인용된 요소들(elements)을 포함하지만 그 외의 것이 배제되지 않는 것을 의미한다. 방법 및 조성물을 정의하기 위해 사용된 경우에 "필수적으로 구성하는(Consisting essentially of)"은, 기재한 목적을 위한 조합에 대한 어떠한 필수적인 중요한 것의 그 밖의 요소를 제외하는 것을 의미한다. 따라서, 본원에 정의된 바와 같은 요소로 필수적으로 구성된 조성물은, 분리 및 정제 방법으로부터의 미량의 오염물질 및 인산 완충 식염수, 보존제 등과 같은 약학적으로 허용가능한 담체를 제외하지 않을 것이다. "구성하는"은, 의도된 결과를 달성하거나 조성물을 생성하기 위한 공정 또는 이러한 발명의 조성물을 투여하기 위한 실질적인 방법 및 미량을 초과하는 요소를 제외하는 것을 의미한다. 이러한 통상적인 용어 및 어구 각각에 의해 정의된 실시형태는 본 발명의 범위 내에 있다.

본원에 이용된 화합물의 "유효량"은, NAFLD 또는 NASH를 가지는 환자에게 투여된 경우에, 의도된 치료 효과, 예를 들어, 환자에서의 의학적 증상의 하나 또는 그 이상의 징후의 완화, 개선, 일시적 완화 또는 제거를 나타낼 수 있는 양이다. 충분한 치료 효과가, 반드시 하나의 투여량(또는 복용량)의 투여에 의해서 발생하는 것이 아니고, 일련의 투여량의 투여 후에만 발생할 수도 있다. 따라서, 유효량은, 하나 이상의 투여량으로 투여될 수 있다.

"비-알코올성 지방간염" 또는 NASH는, 알코올성 간 질환과 유사한 흔한 간 질병이지만, 알코올을 거의 마시지 않거나 전혀 마시지 않는 사람에게 발생한다. NASH에서의 주요한 특징은 염증 및 손상을 동반하는, 간에서의 지방이다. NASH는 간이 영구적으로 손상되고 반흔되고(scarred), 더 이상 적절하게 작동할 수 없는 간경변을 유도할 수 있다. NASH는 U.S. 인구의 2 내지 5 퍼센트로 발생한다. 현재, NASH에 대한 어떠한 특정한 치료가 존재하지 않는다. 미국인의 추가적인 10 내지 20 퍼센트는 이들의 간에서 지방을 가지지만, 실질적인 염증 또는 간 손상, "비-알코올성 지방 간 질병"(NAFLD)으로 불리는 증상을 가지지 않는다. 간에서 지방을 가지는 것은 정상이 아닐지라도, 이 자체로 이는 아마도 약간의 손상 또는 영구적인 손상을 야기한다. 만약 지방이 혈액 테스트 결과 또는 간의 스캔(scans)을 기초로 의심되는 경우에, 이러한 문제는 NAFLD로 나타낸 것이다. 만약 간 생체 검사가 이러한 경우에 실행된다면, 이는 몇몇의 사람이 NASH를 가지면서 다른 사람들이 NAFLD를 가짐을 나타낼 것이다.

NASH는, 알라닌 아미노기전이효소(alanine aminotransferase, ALT) 또는 아스파르테이트 아미노기전이효소(aspartate aminotransferase, AST)와 같은, 일상적인 혈액 테스트 패널(routine blood test panels)에 포함되는, 간 테스트에서 증가를 가지는 것으로 발견된 사람에서 일반적으로 첫 번째로 의심된다. 추가적인 평가가, 간 질병(약물, 바이러스 간염, 또는 알코올의 과도한 사용과 같은)에 대한 어떠한 분명한 이유를 나타내지 않는 경우 및 간의 x 레이 또는 영상 검사(imaging studies)가 지방을 나타내는 경우에, NASH가 의심된다. NASH가 진단되고, 간 생체 검사에 의해 NAFLD로부터 분리된다. 간 생체검사를 위해, 바늘은 간의 작은 조각을 제거하기 위해 피부를 통해 삽입된다. 현미경으로 조직의 검사가 간 세포에 대한 염증 및 손상과 함께 지방을 나타낸 경우에 NASH가 진단된다. 상기 조직이 염증 및 손상 없이 지방을 나타낸다면, NAFLD가 진단된다. 생체검사로부터 알게 된 정보의 중요한 부분은, 반흔 조직이 간에 발생하였는지 여부이다.

NASH는, 간에서 나타나고, 축적되기 위해, 반흔 또는 섬유증을 초래하면서, 서서히 악화될 수 있다. 섬유증이 악화됨으로써, 간경변(cirrhosis)이 발달하고; 상기 간은 심하게 반흔되고, 경화되고, 정상적으로 기능할 수 없게 된다. 심각한 반흔 또는 간경변이 존재하면, 몇몇의 치료가 진행을 중단할 수 있다. 간경변을 가지는 사람은, 유체 유지, 근육 소모(muscle wasting), 장으로부터 출혈, 및 간부전을 경험한다. 간 이식은 오직 간부전을 가지는 후기의 간경변(advanced cirrhosis)에 대한 치료이고, 이식은 NASH를 가지는 사람으로 갈수록 점점 더 수행되고 있다. 예를 들어, NASH는, 간염 C 및 알코올성 간 질병의 배후에, 미국에서 간경변의 주요한 원인 중의 하나로서 평가되고 있다.

"약학적으로 허용가능한"은, 인간 환자를 포함하는 환자에게 투여하기 위해 적합하고 비-독성인 것을 의미한다.

"약학적으로 허용가능한 염"은 환자에게 투여하기 적합하고 비-독성인 염을 의미한다. 비-제한적인 예는 알칼리 금속, 알칼리 토금속, 및 다양한 제1, 제2, 제3 암모늄염을 포함한다. 화학식 (Ⅰ)의 화합물의 에스테르가 양이온 부분(cationic portion)을 포함하는 경우, 예를 들어, 에스테르가 아미노산 에스테르를 포함하는 경우에, 이의 염은 다양한 카르복실산 염, 술폰산 염, 및 광산 염(miner acid salts)을 포함할 수 있다. 염의 특정한 비-제한적인 예는 나트륨 염, 칼륨 염, 및 칼슘 염을 포함한다.

"보호기"는, 기능기에 결합된 경우에, 상응하는 반응 조건 및 화합물의 그 외의 부분에서 수행되는 반응에 비활성인 결과적으로 보호된 기능기를 제공하고, 탈보호 조건하에서 원래의 기능성을 재생하기 위해 반응될 수 있는, 잘 알려진 기능기를 나타낸다. 보호기는 분자의 나머지 부분과 양립할 수 있도록 선택된다. "카르복실산 보호기"는 이들의 합성 동안에 페녹시알킬카르복실산의 카르복실릭 기능기(carboxylic functionality)를 보호한다. 카르복실산 보호기의 비 제한적인 예는 벤질, p-메톡시벤질, p-니트로벤질, 알릴, 벤즈히드릴, 및 트리틸을 포함한다. 카르복실산 보호기의 추가적인 예는, Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis., 2d Ed., 1991, John Wiley & Sons, and McOmie Protective Groups in Organic Chemistry, 1975, Plenum Press와 같은 표준 참고 작업에서 발견되었다. 본원에 기재된 카르복실산을 보호하고 탈보호하기 위한 방법은, 본 분야에서 및 구체적으로 상기의 Greene and Wuts 및 본원에 인용된 참고문헌에서 발견될 수 있다.

의학 증상 또는 환자를 "치료하는 것"은, 임상 결과를 포함하는, 이로운 또는 원하는 결과를 획득하기 위한 단계를 취하는 것을 나타낸다. 본 발명의 다양한 측면 및 실시형태의 목적을 위해, 이로운 또는 원하는 임상적인 결과가 포함되지만, NAFLD 및/또는 NASH의 부정적인 효과 또는 NAFLD 및/또는 NASH의 하나 또는 그 이상의 징후의 감소, 완화, 또는 개선 또는 하나 또는 그 이상의 임상의 결과에서의 개선, 질병의 정도의 축소, 질병 진행의 지연 또는 완행(slowing), 질병 상태의 개선, 일시적 완화(palliation), 또는 안정화, 및 본원에 기재된 그 밖의 이로운 결과로 제한되지 않는다.

바람직한 실시형태

하나의 측면에서, 본 발명은, 하기의 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질, 또는 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질의 에스테르, 또는 이의 각각의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 비-알코올성 지방 간 질병(NAFLD) 또는 비-알코올성 지방간염(NASH)으로부터 고통 받는 환자를 치료하는 방법을 제공한다:

[화학식 (Ⅰ)]

이 식에서, m 은 2 내지 5의 정수이고, n은 3 내지 8의 정수이고, X^l 및 X²는 각각 독립적으로, 황 원자, 산소 원자, 술피닐 기 또는 술포닐 기를 나타내고, 단, X^l 및 X²는 동시에 산소 원자가 아니다.

다른 측면에서, 본 발명은, 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질, 또는 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질의 에스테르, 또는 이의 각각의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, NAFLD 또는 NASH로부터 고통 받는 환자에서 간 염증을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 화학식 (Ⅰ)의 화합물은 상기에 정의된 바와 같다.

본원에 사용된 바와 같은, "이의 대사물질(a metabolite thereof)"은, 화학식 (Ι)의 화합물로서 실질적으로 유사한 치료학적 활성도를 나타내는 대상물질을 나타낸 것이다. 이러한 대사물질의 비-제한적인 예는, -O-(CH₂)_nCO₂H 모이어티를 함유하는 페닐에 부착된, 화학식 (Ι)의 화합물의 -COCH₃ 기가 1-히드록시에틸 (-CH(OH)Me) 기로 대사작용되는 화합물을 포함한다.

이러한 1-히드록시에틸 기를 함유하는 대사물질은, 1-히드록시에틸 기의 1-위치에서 비대칭 중심(asymmetric center)을 함유한다. 라세미 혼합물을 함유하는, 이에 대응하는 거울상 이성질체 및 이의 혼합물은, 본원에 사용된 바와 같은 화학식 (Ι)의 화합물의 대상물질 내에 포함된다.

본원에 사용된 바와 같은, "이의 에스테르"는, 화학식 (Ι)의 화합물에 나타낸 상기 카르복실산의 에스테르 및/또는 페놀릭 히드록시 기(phenolic hydroxy group)의 에스테르, 및 화합물 화학식 (Ⅰ)의 대상물질의 1-히드록시에틸(지방족 히드록시 기) 기의 에스테르를 나타낸다. 페놀릭 및/또는 지방족 히드록시 기의 에스테르는, 이에 상응하는 산으로 카르복실산 R_A-CO₂H를 포함할 수 있고, 여기서, R_A 는 C₁-C₆ 알킬, 아릴, 헤테로아릴, C₃-C₁₂ 시클로알킬, 또는 C₂-C₈ 헤테로시클릴이고, 상기 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 또는 헤테로시클릴은 1-4 C₁-C₃ 알킬, 아릴, CO₂H, 아미노, 알킬아미노, 또는 디알킬아미노 기로 임의적으로 치환된 것이다. 모노-, 디- 또는 트리 인산과 같은 그 밖의 산은 또한 예상된다. 카르복실산의 에스테르는, 이에 상응하는 알코올로서, 화학식 R_A-OH의 화합물을 포함할 수 있지만 이로 제한되지 않고, 여기서 R_A 는 상기에 정의된 것이다. 하나의 실시형태에서, 화학식 (Ι)에서의 카르복실산만이 에스테르화된다. 다른 실시형태에서, 화학식 (Ι)에서의 페놀릭 히드록시 기만이 에스테르화된다. 다른 실시형태에서, R_A 는 C₁-C₄ 알킬이다. 통상의 기술자에게 명백한 것과 같이, 이러한 에스테르는, 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 염을 방출하도록 생체 내에서 가수분해되는 프로드러그(prodrugs)로서 작용한다.

바람직한 실시형태에서, 화학식 (Ⅰ)의 화합물은 화학식 (IA)의 화합물이다:

[화학식 (IA)]

다른 바람직한 실시형태에서, 화학식 (Ⅰ) 및 (IA)의 화합물의 대사물질은 화학식 (IB)의 화합물이다:

[화학식 (IB)]

하나의 실시형태에서, 상기 환자는 NAFLD로부터 고통 받는다. 다른 실시형태에서, 상기 환자는 NASH로부터 고통 받는다. 다른 실시형태에서, 상기 화합물은 경구적으로 투여된다. 다른 실시형태에서, 상기 화합물은 정제 또는 캡슐로서 투여된다. 다른 실시형태에서, 화학식 (IA)의 화합물은 실질적으로 다른 다형체 형태 프리인 사방정계 다형체 형태 A로 존재한다(the compound of Formula (IA) is present in polymorphic form A that is substantially free of other polymorphic forms). 다른 실시형태에서, 상기 화합물은, 상기 화합물은 액체 제형(liquid dosage form)으로서 투여된다. 다른 실시형태에서, 상기 화합물은, 1 회, 2 회 또는 3 회로 나눠진, 100 내지 4,000 mg/day의 양으로 투여된다.

이론에 의해 얽매이지 않으면서, 본원에 사용된 화합물은, 이의 항-염증성 활성에 대한 일부로 인하여, NAFLD 및/또는 NASH를 치료하는데 있어서 효과적이다. 다양한 수용체 부위가 본원에 사용된 화합물에 의해 차단될 수 있는 것으로 여겨진다. 만약에 있다면, 염증성 질병의 알려진 저해제의 몇몇은, 단일 분자에서 활성도의 그 다음의 부위(following sites)의 모두를 포함한다(embody): 1) 류코트리엔 합성, 2) 류코트리엔 D-4 수용체, 3) 류코트리엔 E-4 수용체, 4) cAMP PDE III, 5) cAMP PDE IV, 6) 트롬복산A-2의 합성, 7) 호산구 이동 및 8) 20 림프구 이동의 저해. 상기 매커니즘은, 핵분열-유사 결과를 생산하기 위해, 소위 "염증성 케스케이드(inflammatory cascade)"에서 반응하는 다양한 세포 중에서 상이한 특이성을 가지고 상이한 정도(different degrees)로 포함되고 협력한다. 다양한 작용 부위를 차단함으로써, 본원에 사용된 화합물은, NAFLD 및/또는 NASH를 치료하기 위해 효과적인 것으로 고려된다.

본원에 사용된 화합물의 효능은, 예를 들어, 본원의 하기에 기재된 바와 같은 STAM 마우스 모델에서, 또는 "Protection from liver fibrosis by a peroxisome proliferator-activated receptor δ agonist," Keiko Iwaisako et al., PNAS 2012, 109 (21) E1369-E1376에 기재된 절차를 적용하여, 본 분야의 통상의 기술자에게 잘 알려진 방법에 의해 테스트될 수 있다.

합성

화학식 (Ι)의 화합물의 합성 및 특정한 생물학적 활성은, 참고문헌으로 이의 전체가 본원에 포함된, U.S. Pat. No. 4,985,585에 기재된 것이다.

예를 들어, 화학식 (IC)의 화합물을 제공하기 위해, 화학식 (IA)의 화합물은, 화학식 (Ⅲ)의 화합물과 화학식 (Ⅱ)의 페놀을 반응시킴으로써 제조된 것이다:

[화학식 (Ⅱ)]

(이 식에서, R 은 카르복실산 보호기이다)

[화학식 (Ⅲ)]

[화학식 (IC)]

.

산 보호 기, 또는 R 기의 비-제한적인 예는, C₁-C₆ 알킬, 벤질, 벤즈히드릴, 및 트리틸을 포함하고, 상기 벤질, 벤즈히드릴 또는 트리틸 기는 1-6 C₁-C₆ 알킬, 할로, 및/또는 C₁-C₆ 알콕시 기로 임의적으로 치환된 것이다. 화학식 (Ⅲ)의 브로모 기 이외의 이탈기가 사용될 수 있는 것이 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 이러한 그 외의 이탈기의 비-제한적인 예는 클로로 또는 토실레이트를 포함한다.

화학식 (IC)의 보호된 카르복실산을 탈보호는 화학식(IA)의 화합물을 제공한다. 본 내용에 기초해서 분명한 바와 같이, 화학식(IC)의 화합물은, 몇몇 실시형태에서 본 발명에 따라 유용하다. 탈보호 방법의 비-제한적인 예는, Pd/C 또는 Pt/C와 같은 촉매 및 H₂ 하에서 알칼리 가수분해 및 수소화 분해를 포함한다.

반응은, 예를 들면, 이로 제한되지 않는, 아세톤, 메틸에틸케톤, 디에틸케톤, 또는 디메틸포름아미드를 포함하는, 비활성 유기 용매에서 수행된다. 친핵성 치환 반응은, 포타슘 카르보네이트, 또는 소듐 카르보네이트와 같은 무기 염기의 존재에서, 및 임의적으로 요오드화 칼륨(potassium iodide)의 존재에서 용매의 실온 이하의 온도에서 환류 온도까지의 온도에서 실행될 수 있다. 반응은, 박막 층 크로마토그래피 및 ¹H-NMR와 같은 잘 알려진 방법에 의해 결정된 바와 같이 실질적인 생산물을 제공하기 위해 충분한 시간 동안 수행된다. 본원에서 사용되는 그 밖의 화합물은 출발 물질의 적절한 치환 시 및 본원에 기재된 절차 후 및/또는 통상의 기술자에 널리 알려진 방법에 의해 제조된다. 또한, 미국특허 제5,290,812호를 참고하라(이의 전체가 참고문헌으로 본원에 포함됨).

화학식 (IA)의 화합물은, 형태 A 결정으로 나타낸, 근본적으로 순수한 사방정계 다형체를 제공하기 위한 조절된 조건 하에서 재결정된다(예를 들면, 90 % 이상, 바람직하게는 적어도 95 % 형태 A). 다형체 A 및 이의 제조를 위한 공정은 U.S. Pat. Nos. 7,060,854 및 7,064,146에 기재되어 있고; 이의 전체는 참고문헌으로 본원에 포함된다. 화학식 (I)의 화합물의 모든 다형체 형태는 활성이 있지만, 다형체 형태 A가 바람직하다. 특정 조건 하에서, 이러한 다형체의 용해도 및 생체이용률은 그 외의 다형체에 비해 우수하고, 따라서 형태 A는 개선된 고체 제형을 제공할 수도 있다.

황색 내지 오렌지 용액을 수득하기 위해서, 25 내지 40 ℃에서 에탄올 5 내지 10 중량부에 화학식(IA)의 화합물을 용해함으로써, 형태 A 결정이 수득될 수 있다. 에탄올 용액은 1 내지 10 부의 물로 채우고(The ethanol solution is charged with 1-10 parts of water), 20 내지 25 ℃에서 15 내지 60분 동안 교반한 후, 5 내지 10℃에서 추가적으로 1 내지 4시간, 바람직하게 2.0 내지 3.0 시간 동안 교반하여 회백색 현탁액을 결과적으로 수득하였다. 이러한 현탁액에 5 내지 15부의 물을 첨가하고, 혼합물을 5 내지 10 ℃에서 추가적으로 1 내지 4 시간, 바람직하게는 1.5 내지 2.0 시간 동안 교반한다. 고체의, 흰색 내지 회백색의 생성물은, 진공 여과에 의해서 분리되고, 필터 케이크(filter cake)를 물로 세정하고 25 내지 40℃에서 12 내지 24 시간 동안 진공에서 건조된다.

화학식 (Ι)의 화합물의 특정한 대사물질(예를 들어, 화학식 (IB)의 화합물)과 같은, 거울상 이성질체 형태로 존재하는 본원에서 사용된 화합물에 대해, 2개의 거울상 이성질체는 광학적으로 분해될 수 있다(the two enantiomers can be optically resolved). 이러한 분해능(resolution)은, 예를 들어, 이로 제한되지 않는, 이에 대응하는 카르복실산 화합물과 (S)-(-)-l-(l-나프틸) 에틸아민과 같은 염기의 부분입체 이성질체 염을 형성함으로써(by forming diastereomeric salt of a base such as (S)-(-)-1-(1-naphthyl) ethylamine with the corresponding carboxylic acid compound), 또는 비대칭 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 상기 거울상 이성질체를 분리함으로써, 실행된다. 이러한 화합물에 대한 중간 생성물, 거울상 이성질체 형태로 또한 존재하는 중간생성물은 유사하게 분해될 수 있다(Intermediates to such compounds, which intermediates also exist in enantiomeric forms can be similarly resolved).

투여 및 제형

본원에 사용된 화합물은 경구 또는 정맥 내, 근육 내 및 피하 주사 또는 경피적 방법에 의해 투여될 수 있다. 효과적인 투여량 레벨은, 예를 들면, 매일 약 100 내지 4000 mg으로 다양할 수 있다. 하나의 실시형태에서, 일일 투여량 범위는, 1 회, 2 회 또는 3 회로 제공된, 250 내지 2,000 mg이다. 하나의 실시형태에서, 일일 투여량 범위는, 1 회, 2 회 또는 3 회로 제공된, 100, 200, 300, 400, 또는 500 mg와 같은 100 내지 500 mg이다. 하나의 실시형태에서, 일일 투여량 범위는, 1 회, 2 회 또는 3 회로 제공된, 250, 500, 750, 1,000, 1,250, 1,500, 1,750, 또는 2,000 mg와 같은, 250 내지 2,000 mg이다. 하나의 실시형태에서, 일일 투여량 범위는, 1 회, 2 회 또는 3 회로 제공된, 1,000, 2,000, 3,000, 또는 4,000 mg와 같은, 1000 내지 4,000 mg이다. 다른 실시형태에서, 투여량은, 하루에 두 번 1000 mg이다. 다른 실시형태에서, 적절한 투여량은 1000 mg qd, 1000 mg bid, 및 750 mg tid을 포함한다.

실제의 양은 치료되는 환자의 환경에 따라 다를 것이다. 통상의 기술자가 인식하는 바와 같이, 활성 물질의 작용을 변경하는 많은 인자는, 환자의 연령, 체중, 성별, 식이요법 및 증상, 투여의 시간 및 투여의 속도 및 경로와 같은, 치료하는 의사에 의해 고려될 것이다. 증상의 제공된 세트에 대한 최적의 투여량은, 통상적인 투여량 결정 테스트를 사용해서 통상의 기술자에 의해 확인될 수 있다.

본원에서 사용되는 화합물은, 액체, 분말, 크림, 에멀젼, 알약, 트로치(troche), 좌제, 현탁액, 용액 등을 포함하는, 어떠한 약학적으로 허용가능한 형태로 제형화될 수 있다. 본원에서 사용된 이러한 화합물을 함유하는 치료학적 조성물은, 알려지고 수립된 관행에 따라 일반적으로 하나 또는 그 이상의 약학적으로 허용가능한 성분으로 제형화될 것이다. 일반적으로, 정제는, 담체(예를 들면, 개질된 전분)를, 단독으로 또는 10 중량%의 카르복시메틸 셀룰로오스(Avicel)와 함께, 변형된 녹말과 같은 담체를 사용하여 형성된다. 상기 제형은 정제 형성 공정에서 1,000 내지 3,000 파운드 압력으로 압축된다. 정제는 바람직하게 평균 경도 약 1.5 내지 8.0 kp/cm², 바람직하게는 5.0 내지 7.5 kp/cm²인 것을 나타낸다. 분해 시간(Disintegration time)은 약 30 초 내지 약 15 또는 20 분까지 다양하다.

경구용 제형은, 본원에 사용된 치료학적 활성 화합물이 칼슘 카르보네이트, 칼슘 포스페이트 또는 카올린과 같은 비활성 고체 희석제와 혼합되는 경질 젤라틴 캡슐, 또는 상기 화합물이 유성 배지(oleaginous medium), 예를 들어, 액체 파라핀 또는 올리브 오일과 혼합된 연질 젤라틴 캡슐로서 제공될 수 있다. 적합한 담체는 마그네슘 카르보네이트, 마그네슘 스테아레이트, 활석(talc), 당, 락토오스, 펙틴, 덱스트린, 녹말, 젤라틴, 트래거캔스, 메틸셀룰로오스, 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스, 저융점 왁스, 코코아버터 등을 포함한다.

본원에 사용된 화합물은, 현탁화제, 예를 들어, 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 히드록시프로필메틸 셀룰로오스, 소듐 알기네이트, 폴리비닐피롤리돈, 검 트래거캔스 및 검 아카시아, 예를 들면, 자연적으로 발생하는 포스파타이드, 예를 들면, 레시틴과 같은 분산 또는 습윤 제제, 또는 지방산과 알칼리성 산화물의 축합 생성물, 예를 들면, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트, 또는 긴 사슬 지방족 알코올과 에틸렌 산화물의 축합 생성물, 예를 들면, 헵타데카에틸렌-옥시세타놀, 또는 지방산 및 헥시톨로부터 유래된 부분 에스테르와 에틸렌 산화물의 축합 생성물, 예를 들면, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모놀레이트 또는 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 부분 에스테르와 에틸렌 산화물의 축합 생성물, 예를 들면, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모놀레이트와 같은, 약학적으로 허용되는 부형제와 수성의 현탁액으로 제형화될 수 있다. 이러한 수성 현탁액은 하나 이상의 보존제, 예를 들면, 에틸- 또는 -n-프로필-p-히드록시벤조에이트, 하나 이상의 착색제, 하나 이상의 향미제, 및 하나 이상의 감미제, 예를 들면, 글리세롤, 소르비톨, 수크로오스, 사카린 또는 소듐 또는 칼슘 시클라메이트를 또한 포함할 수 있다.

적합한 제형은, 이의 전체로 참고문헌으로 본원에 포함되는 내용, U.S. Pat. Nos. 4,788,055; 4,816,264; 4,828,836; 4,834,965; 4,834,985; 4,996,047; 5,071,646; 및 5,133,974에 기재된 바와 같은 지속 방출 투여 형태를 또한 포함한다.

경구 투여에 적합한 다른 형태는 에멀젼, 시럽, 엑릭시르제(elixir), 수용액을 포함하는 액체 형태 제제, 또는 액체 형태 제제를 사용하기 직전에 변환시키는 것을 의도하는 고체 형태 제제를 포함한다. 에멀젼은, 용액, 예를 들면, 수성 프로필렌 글리콜 용액에서 제조될 수도 있거나, 에멀젼화제, 예를 들면, 레시틴, 소르비탄 모노올레이트 또는 아카시아를 함유할 수도 있다. 수용액은, 활성 성분을 물에 용해하고 적합한 착색제, 향미제, 안정화제, 및 증점제를 첨가함으로써 제조될 수 있다. 고체 형태 제제는, 활성 성분과 함께, 착색제, 향미제, 안정화제, 완충용액, 인공 및 천연 감미제, 분산제, 증점제, 가용화제 등을 함유할 수 있다.

본원에 사용된 화합물은, 비경구 투여[예를 들면, 주사, 예를 들면, 볼루스 주사(bolus injection) 또는 지속적 주입]를 위해 제조될 수 있으며, 앰플, 사전-충진된 시린지(pre-filled syringes), 소량 주입(small volume infusion)에서 단일 투여 형태 또는 추가된 보존제를 포함하는 다회 투여 용기에 보존될 수 있다. 상기 조성물은, 예를 들어, 수성의 폴리에틸렌 글리콜에서 용액으로서, 오일 또는 수성 비히클에서 현탁액, 용액 또는 에멀젼으로 이러한 형태를 취할 수도 있다. 오일 또는 비수성 담체, 희석제, 용매 또는 비히클의 예는, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일(예를 들면, 올리브 오일) 및 주사 가능한 유기 에스테르(예를 들면, 에틸 올레이트)를 포함하고, 성형 제제, 예를 들면, 보존제, 습윤제, 에멀젼화제 또는 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 성형 제제(formulatory agent)를 함유할 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은, 멸균 고체의 무균성 분리 또는 적합한 비히클과 사용하기 전에 구성하기 위한 용액, 예를 들어, 멸균 ,발열원-프리 물(pyrogen-free water)로부터 동결건조(lyophilisation)에 의해 수득된 분말 형태일 수 있다.

본원에 사용된 화합물은 연고, 크림 또는 로션, 또는 경피성 패치로서 표피에 국소 투여하기 위해 제형화될 수도 있다. 연고 및 크림은, 적합한 증점제 및/또는 겔화제의 첨가와 함께, 예를 들어, 수성 또는 유성 베이스로 제형화될 수도 있다. 로션은 수성 또는 유성 베이스로 제형화될 수 있고, 일반적으로 하나 또는 그 이상의 에멀젼화제, 안정화제, 분산제, 현탁제, 증점제, 또는 착색제를 함유할 것이다. 입으로 국소 투여에 적합한 제형은, 향미 베이스(flavored base)에 활성화제를 포함하는 로젠지(lozenge), 보통 수크로오스 및 아카시아 또는 트래거캔스; 젤라틴 및 글리세린 또는 수크로오스 및 아카시아와 같은 비활성 베이스에 활성 성분을 포함하는 캔디(pastille); 및 적합한 액체 담체에서 활성 성분을 포함하는 마우스워시를 포함한다.

본원에 사용된 화합물은 좌약으로서 투여하기 위해 제형화될 수도 있다. 이러한 제형에서, 지방산 글리세라이드 또는 코코아버터의 혼합물과 같은 저융점 왁스가 먼저 용해되고, 활성 성분이 예를 들어, 교반에 의해서 균일하게 분산된다. 상기 용해된 균일한 혼합물은 편리한 크기의 몰드에 부어지고, 냉각되고 고체화되게 한다.

본원에 사용된 화합물은 질 내 투여를 위해 제조될 도수 있다. 활성 성분과 함께 포함하는 질 좌약(Pessaries), 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 폼(foams), 또는 스프레이가 본 분야에서 적합한 것으로 알려져 있다.

본원에 사용된 화합물은 비강 투여를 위해 제형화될 수도 있다. 상기 용액 또는 현탁액이, 통상적인 수단, 예를 들면, 점적기(dropper), 피펫, 또는 스프레이로 비강에 직접적으로 적용된다. 상기 제형은, 단일 또는 다수 투여 형태로 제공될 수도 있다. 환자는 점적기 또는 피펫을 통해 용액 또는 현탁액의 적합한 미리 결정된 부피를 투여할 수 있다. 스프레이는, 예를 들어, 계량 세분화된 분무 스프레이 펌프(metering atomizing spray pump)에 의해서 투여될 수도 있다.

본원에 사용된 화합물은, 비강 내 투여를 포함하는, 특히 기도에 대한 에어로졸 투여를 위해 제형화될 수도 있다. 화합물은 일반적으로, 예를 들면, 약 5 마이크론 이하의 작은 입자 크기를 가질 것이다. 이러한 입자 크기는, 예를 들어, 미분화(micronization)에 의해 본 분야에서 공지된 수단에 의해 수득될 수도 있다. 상기 활성 성분은, 클로로플루오로카본(CFC)(예를 들면, 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 또는 디클로로테트라플루오로에탄), 이산화탄소 또는 그 밖의 적합한 기체와 같은 적합한 추진제로 가압된 팩 내에 제공된다. 상기 에어로졸은 레시틴과 같은 계면활성제를 통상적으로 또한 함유할 수도 있다. 약물 투여량은 계량 밸브에 의해 조절될 수도 있다. 대안적으로, 상기 활성 성분은, 건조 분말의 형태로서, 예를 들어, 락토오스, 녹말, 히드록시프로필메틸 셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리딘과 같은 녹말 유도체와 같은 적절한 분말 베이스에서의 분말 혼합물의 형태로 제공될 수도 있다. 분말 담체는 비강 내에서 겔을 형성할 것이다. 상기 분말 조성물은, 예를 들, 분말이 흡입기에 의해서 투여될 수도 있는 젤라틴 또는 블리스터(blister) 팩의 단일 투여 형태, 예를 들어, 캡슐 또는 카트리지 내에 존재할 수도 있다.

원하는 경우, 제형은 활성 성분의 지속 방출 투여 또는 조절된 방출 투여를 위해 개조된 장용성 코팅(enteric coating)으로 제조될 수 있다. 본 발명의 목적을 위해서 사용될 수도 있는 일반적인 형태의 조절된 방출 형태는, 당 스피어(sugar sphere)와 같은 비활성 코어, 내부 약물-함유 제2 층으로 코팅된 제1 층, 및 상기 내층으로부터 약물 방출을 조절하기 위한 제3 층 또는 외부의 멤브레인을 포함한다.

상기 코어는 수용성 또는 팽창성 물질의 것이 바람직하고, 비드 또는 펠렛으로 제조된 어떠한 다른 약학적으로 허용가능한 물-수용성 또는 물-팽창성 물질로서 통상적으로 사용된 어떠한 이러한 물질일 수도 있다. 코어는, 수크로오스/녹말(Sugar Spheres NF), 수크로오스 결정과 같은 물질의 스피어, 또는 일반적으로 미세결정질 셀룰로오스 및 락토오스와 같은 부형제로 구성된 압출되고 건조된 스피어일 수도 있다.

제1 층 내에서 실질적으로 불수용성 물질(water-insoluble material)은, 일반적으로 (용매 내에 분산되거나 용해됨) "GI 불용성" 또는 "GI 부분적으로 불용성" 필름 형성하는 중합체이다. 에틸 셀룰로오스, 셀룰로오스 아세테이트, 셀룰로오스 아세테이트 부티레이트, 에틸 아크릴레이트/메틸 메타크릴레이트 코폴리머(Eudragit NE-30-D) 및 아미노 메타크릴레이트 코폴리머 타입 A 및 B(Eudragit RL30D 및 RS30D), 및 실리콘 엘라스토머와 같은 폴리메틸아크릴레이트가 예로서 언급될 수도 있다. 보통, 폴리머와 함께 가소제가 사용된다. 대표적인 가소제는, 디부틸세바케이트, 프로필렌 글리콜, 트리에틸시트레이트, 트리부틸시트레이트, 캐스터 오일, 아세틸화 모노글리세라이드, 아세틸 트리에틸시트레이트, 아세틸 부틸시트레이트, 디에틸 프탈레이트, 디부틸 프탈레이트, 트리아세틴, 분별증류된 정제 코코넛 오일(중쇄 트리글리세라이드)을 포함한다.

활성 성분을 함유하는 제2 층은 결합제(binder)로서 중합체와 함께 또는 중합체 없이 활성 성분(약물)로 구성될 수도 있다. 사용된 경우에, 상기 결합제는 일반적으로 친수성일 수도 있지만, 수용성(water-soluble) 또는 불수용성(water-insoluble)일 수도 있다. 활성 약물을 함유하는 제2 층에서 사용되는 대표적인 중합체는, 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체, 폴리에틸렌 글리콜, 젤라틴, 폴리비닐 알코올과 같은 폴리알킬렌 글리콜, 녹말 및 이의 유도체, 히드록시프로필메틸 셀룰로오스(HPMC), 히드록시프로필 셀룰로오스, 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 히드드록시에틸 셀룰로오스, 카르복시에틸 셀룰로오스, 카르복시메틸 히드록시에틸 셀룰로오스와 같은 셀룰로오스 유도체, 아크릴산 중합체, 폴리메타크릴레이트 또는 어떠한 다른 약학적으로 허용가능한 중합체이다. 제2 층에서 약물 대 친수성 폴리머의 비는 일반적으로 1:100 내지 100:1(w/w)의 범위에 있다.

약물 방출을 조절하기 위한, 제3 층 또는 멤브레인에서 사용하기 위해 적합한 중합체는, 상기에 언급된 것들과 같은, 가소제와 임의적으로 결합된, 예를 들면, 에틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 셀룰로오스 프탈레이트, 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트, 셀룰로오스 아세테이트 트리멜리테이트, 폴리메타크릴레이트, 또는 이들의 혼합물과 같은, pH 의존 용해도를 갖는 중합체 또는 불수용성 중합체로부터 선택될 수 있다.

임의적으로, 상기 조절된 방출층은, 조절된 방출층의 삼투성 및 이로 인한 방출 속도를 조절하기 위해서, 상기 중합체와 함께 상이한 용해성 특성을 가지는 또 다른 물질을 포함한다. 예를 들면, 에틸 셀룰로오스와 함께 변형제(modifier)로서 사용될 수도 있는 대표적인 중합체는, HPMC, 히드록시에틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 폴리비닐 알코올, 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트 또는 암모니오 메타크릴레이트 공중합체 및 메타크릴산 공중합체 또는 이들의 혼합물와 같은 pH 의존 용해성을 갖는 중합체를 포함한다. 수크로오스, 락토오스, 및 약학적 등급 계면활성제와 같은 첨가제는 또한 필요에 따라 조절된 방출층에 포함될 수도 있다.

또한, 단일 투여 형태의 제형이 본원에 제공된다. 이러한 형태에서, 상기 제형은 활성 성분(예를 들어, 이로 제한되지 않는, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 에스테르, 또는 이의 각각의 염)의 적절한 양을 함유하는 단일 투여량으로 분할된다. 단일 투여 형태는, 바이알(vials) 또는 앰플에서 포장된 정제, 캡슐 및 분말과 같은, 제제의 분리된 양을 함유하는 패키지, 포장된 제제일 수도 있다. 또한, 단일 투여 형태는 이 자체로 캡슐, 정제, 카시에(cachet) 또는 로젠지이거나, 또는 이는 패키징된 형태의 임의의 어떠한 것의 적절한 수 일 수 있다.

그 외의 적합한 약학적 담체 및 이들의 제형은 Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pa에 기재되어 있다.

실시예

실시예 1: 비-알코올성 지방간염(NASH)의 치료

비알코올성 지방간염을 가지는 250 명의 성인은, 6 개월까지, MN-001 또는 MN-002, 각각 500 mg의 일일 투여량, 또는 플라세보를 받도록 임의적으로 배정된다. 상기 일차 결과는, 지방증, 소엽의 염증, 간세포의 풍선화(hepatocellular ballooning), 및/또는 섬유증에 대한 표준화된 점수의 합성물의 용도를 평가하는 것과 같이, 비알코올성 지방간염의 조직학적 특징에서의 개선이다. 상기 결과는, 본 분야의 통상의 기술자에게 알려진 하기의 방법으로 분석된다.

실시예 2: 비-알코올성 지방간 질병( NAFLD )의 치료

임의적으로 추출된, 이중-맹검(double-blind), 플라세보-조절된 연구는, 초음파(US)로 진단되고 간 생검(40 명의 환자)에 의해 확인된 NAFLD를 가지는 50 명의 환자에서 실행된다. 상기 환자는 MN-001 또는 MN-002(6 개월까지 각각의 500 mg의 일일 투여량) 또는 플라세보를 받도록 임의적으로 추출되었다. 모든 환자는 동일한 행동의 체중 감소 프로그램에 참가한다. 모든 환자는 복부의 US(abdominal US)에 의해 매달 평가된다. 간 효소 레벨, 지질 프로파일(lipid profile), 인슐린 레벨, 및 인체 측정학의 파라미터가 또한 모니터되었고, 모든 환자는 영양상의 후속 평가를 받는다. 환자는 또한 연구의 말에 2차 간 생검을 받는다. 혈청 알라닌 아미노기 전이 효소 레벨 및 US에 의한 지방증은 비-제한적인 종말점으로서 측정된다. 상기 결과는 본 분야의 통상의 기술자에게 알려진 하기의 방법으로 분석된다.

실시예 3: 비-알코올성 지방간염의 STAM 모델에서 MN-001의 치료학적으로 이로운 효과

STAM™은, C57BL/6 마우스에서 화학 및 식이요법의 조정(chemical and dietary interventions)의 조합에 의해 형성된, 비-알코올성 지방간염(NASH), 이의 증상 및 관련된 간 질환에 대한 모델이다. 텔미사르탄(Telmisartan)은, STAM 마우스에서 항-NASH, 항-섬유증 및 항-염증성 효과를 가지는 것으로 나타내고, 따라서, 본 연구에서 양성 조절로서 사용되었다. 이러한 연구에 따라, 및 하기에 기재된 바와 같이, 텔미사르탄을 가지는 치료는, 보고된 데이터에 따라 비히클 그룹과 비교하여, 간 중량, NAS, 섬유증 영역 및 염증 영역을 현저하게 감소시키고, 이로 인하여 본 발명에 사용된 화합물의 유용성을 입증하기 위한 본원에 사용된 바와 같은 상기 STAM 마우스의 유용성의 증거를 제공한다.

MN-001으로의 치료는, 본 연구에서 MN-001의 항-섬유화 효과(anti-fibrotic effect)를 나타내는, 투여량 의존적인 방식으로 비히클과 비교된 섬유증을 현저하게 감소된다. MN-001의 높은 투여량은, 이의 항-섬유증의 특성을 지지하는, 간 히드록시프롤린 함량을 감소키는 경향이 있다. 높은 투여량의 MN-001로의 치료는, NAFLS 활성 지수(NAFLS activity score, NAS)를 현저하게 감소시킨다. NAS에서의 개선은, 예를 들어, 소엽의 염증 및 간세포의 풍선화 지수에서의 감소에 기인하였다. 특히, MN-001의 높은 투여량은 풍선화 지수를 현저하게 감소시킨다. 간세포의 풍선화는 산화적 스트레스-유도된 간세포 손상으로부터 유도되고, NASH의 질병 진행과 연관되었기 때문에(Fujii H et al. J. Atheroscler . Thromb. 2009;16:893, Rangwala F et al. J. Pathol. 2011; 224:401), 이론에 얽매이지 않고, MN-001이 간세포의 손상 및 풍선화를 저해함으로써 NASH 병리학을 개선할 수 있다고 예상된다.

MN-001의 낮은 투여량으로의 치료는, MN-0001의 항-염증성 효과를 나타내는, 비히클과 비교된 염증 영역을 현저하게 감소시킨다.

마지막으로, 다양한 투여량으로 투여된, MN-001은, 본 연구에서 항-NASH, 항-섬유증 및 항-염증성 효과의 하나 또는 그 이상을 나타낸다. 이러한 및 그 밖의 결과는 하기에 논의되어 있다.

물질 및 방법

테스트 물질

MN-001은 MediciNove Inc에 의해 제공되어 있다. 투여량 용액을 제조하기 위해, MN-001은 중량을 측정하였고, 0.2 % 메티셀룰로오스(methycellulose)(비히클)에 용해되었다. 텔미사르탄(Micardis®)은, Boehringer Ingelheim GmbH(독일)로부터 구입되었고, 순수한 물에 용해되었다.

NASH의 유도

탄생 후에 2 일 200 μg 스트렙토조토신(streptozotocin)(STZ, Sigma-Aldrich, USA) 용액의 단일 피하 주사 및 4 주 후에 높은 지방 식단(HFD, 57 kcal% 지방, cat#: HFD32, CLEA Japan, 일본)으로 제공에 의해 50 마리의 수컷 마우스에 유도되었다. 10 마리의 수컷 한배 새끼(Ten male littermates)는 STZ 처리 없이 정상 식단으로 제공되었고, 정상 그룹에 대해 사용되었다.

약물 투여의 경로

비히클, MN-001 및 텔미사르탄은 10 mL/kg의 부피로 경구 경로에 의해 투여되었다.

치료 투여량

MN-001은 하루 한 번 10, 30, 및 100 mg/kg 의 투여량으로 투여되었다. 텔미사르탄은 하루 한 번 10 mg/kg의 투여량으로 투여되었다.

동물

C57BL/6 마우스(15-일-임신한 암컷)은 Charles River Laboratories Japan (Kanagawa, Japan)으로부터 입수되었다. 본 연구에서 사용된 모든 동물은, 일본의 동물 사용에 대한 약물학적 협회 가이드라인(Japanese Pharmacological Society Guidelines for Animal Use)에 따라 거처가 제공되었고, 보호되었다.

환경

상기 동물은, 온도(23 ± 2 ℃), 습도(45 ± 10 %), 조명(12 시간 인공적인 주 및 야 주기; 8:00 내지 20:00까지의 빛) 및 공기 교환의 조절된 조건 하에서 SPF 시설에서 유지되었다. 높은 압력(20 ± 4 Pa)는 시설의 오염을 예방하기 위해 실험적인 공간에서 유지되었다.

축산

상기 동물은, 케이지 당 최대 4 마리의 마우스로 폴리카르보네이트 케이지 KN-600 (Natsume Seisakusho, Japan)에 거처를 제공하였다. 살균된 PULMASμ(Material Research Center, Japan)는 잠자리에 사용되었고, 일주일에 한 번 교체되었다.

식품 및 음료

멸균된 고체의 HFD는 상기 케이지의 윗면에 금속 뚜껑(metal lid)에 설치된, 임의로(ad libitum ) 제공되었다. 순수한 물은, 고무 마개 및 빨대 튜브가 갖춰진 물병으로부터 임의로 제공되었다. 물병은 일주일에 한 번 교체되었고, 깨끗해지고, 오토클레이브에서 멸균되었고, 재사용되었다.

동물 및 케이지 식별(cage identification)

마우스는 귀고리에 새겨진 숫자에 의해 식별되었다. 각각의 케이지는 특정한 식별 코드로 표시되었다.

전혈 (whole blood) 및 혈장 생화학의 측정

비-금식 혈액 글루코스(Non-fasting blood glucose)는 LIFE CHECK (EIDIA, Japan)을 사용하여 전혈에서 측정되었다. 혈장 생화학에 대해, 혈액은 항응고제(Novo-Heparin, Mochida Pharmaceutical, Japan)로 폴리프로필렌 튜브에서 수집되었고, 4 ℃에서 15 분 동안 1,000 xg에서 원심분리되었다. 상청액은 수집되었고, 사용될 때까지 - 80 ℃에서 저장되었다. 혈장 ALT 및 AST 레벨은 FUJI DRI-CHEM 7000(Fujifilm, Japan)에 의해 측정되었다.

간 생화학의 측정

간 히드록시프롤린 함량

간 히드록시프롤린 함량을 수량화하기 위해, 냉동된 간 샘플(32-40 mg)은 하기와 같은 알칼리-산 가수분해 방법에 의해 가공처리되었다. 간 샘플은 100 % 아세톤으로 탈지되었고, 공기에서 건조되었고, 65 ℃에서 2N NaOH에서 용해되었고, 20 분 동안 121 ℃에서 오토클레이브되었다. 상기 용해된 샘플(400 μL)은 20 분 동안 121 ℃에서 400 μL의 6N HCl으로 산-가수분해되었고(acid-hydrolyzed), 10 mg/mL 활성탄소를 함유하는 400 μL의 4N NaOH으로 중성화되었다. AC 완충용액(2.2 M 아세트산/0.48 M 시트르산, 400 μL)은 상기 샘플에 첨가되었고, 그 후에 상기 상청액을 수집하기 위해 원심분리되었다. 히드록시프롤린의 표준 곡선은, 16 μg/mL에서 시작하는 트랜스-4-히드록시-L-프롤린(Sigma-Aldrich)의 계열 희석(serial dilutions)으로 구성되었다. 상기 제조된 샘플 및 기준(standards)(각각 400 μL)은, 400 μL 클로라민 T 용액(Wako Pure Chemical Industries)으로 혼합되었고, 실온에서 25 분 동안 배양되었다. 상기 샘플은 그리고 난 다음에 Ehrlich's 용액(400 μL)과 혼합되었고, 색을 발생시키기 위해(to develop the color) 20 분 동안 65 ℃로 가열되었다. 샘플이 얼음에서 냉각되고, 침전물을 제거하기 위해 원심분리된 후에, 각각의 상청액의 흡광도(optical density)는 560 nm에서 측정되었다. 히드록시프롤린의 농도는 히드록시프롤린 표준 곡선으로부터 계산되었다. 간 샘플의 단백질 농도는 BCA 단백질 분석 키트(Thermo Fisher Scientific, USA)를 사용하여 측정되었고, 상기 계산된 히드록시프롤린 수치를 정상화하기 위해 사용되었다. 간 히드록시프롤린 레벨은 mg 단백질 당 μg 로서 표현되었다.

조직병리학 분석

HE 염색에 대해, 부분(sections)은 Bouin's 용액에 예비고정된(prefixd) 좌측면 간 조직(left lateral liver tissue)의 파라핀 블록으로부터 절단되었고, Lillie-Mayer's 헤마톡실린(Muto Pure Chemicals, Japan) 및 에오신 용액(Wako Pure Chemical Industries)으로 염색되었다. NAS는 Kleiner (Kleiner DE. et al., Hepatology, 2005;41:1313)의 기준에 따라 계산되었다. 콜라겐 증착을 시각화하기 위해, Bouin's 고정된 좌측면 간 부분(Bouin's fixed left lateral liver sections)은, 피크로-시리우스 레드 용액(picro-Sirius red solution)(Waldeck, Germany)을 사용하여 염색되었다.

면역조직화학을 위해, 부분은 조직-Tek O.C.T. 화합물에 끼워진 냉동된 좌측면 간 조직으로부터 절단되었고, 아세톤에 고정되었다. 내인성 페록시다아제 활성도는 5 분 동안 0.03% H2O2를 사용하여 차단된 다음에, 10 분 동안 블록 에이스(Block Ace)(Dainippon Sumitomo Pharma, Japan)으로 배양되었다. 상기 부분은, 실온에서 1 시간 항-α-SMA(Epitomics, USA) 또는 항-F4/80 항체(BMA Biomedicals, Switzerland)의 200-배 희석으로 배양되었다. 이차 항체[HRP-염소 항-토끼 항체(HRP-Goat anti-rat antibody), Invitrogen, USA]로 배양 후에, 효소-기질 반응은 3,3'-디아미노벤지딘/H2O2 용액(Nichirei, Japan)을 사용하여 실행되었다.

섬유증 영역의 정량 분석을 위해, 염증 영역, 및 α-SMA의 반-정량(semi-quantification), 시리우스 레드-염색된, F4/80 및 α-SMA-면역염색된 부분의 명시야 이미지(bright field images)는, 200-배 확대로 디지털 카메라(DFC280; Leica, Germany)를 사용하여 중심 정맥(central vein) 주위에 포착되었고(captured), 5 필드/부분(5 fields/section)에서의 양성 영역은 ImageJ 소프트웨어(National Institute of Health, USA)를 사용하여 측정되었다.

정량적인 RT- PCR

전체 RNA는 제조자의 지시에 따라 RNAiso(Takara Bio, Japan)을 사용하여 간 샘플로부터 추출되었다. RNA의 1 μg는, 20 μL의 최종 부피로, 4.4 mM MgCl₂ (Roche, Switzerland), 40 U RNase 저해제(Toyobo, Japan), 0.5 mM dNTP(Promega, USA), 6.28 μM 임의의 헥사머(Promega), 5 x 제1 가닥 완충용액(first strand buffer)(Promega), 10 mM 디티오트레이톨(Invitrogen) 및 200 U MMLV-RT(Invitrogen)를 함유하는 반응 혼합물을 사용하여 역-전사되었다. 상기 반응은 37 ℃에서 1 시간 동안 실행된 다음에, 99 ℃에서 5 분 동안 실행되었다. 리얼-타입 PCR은 리얼-타임 PCR DICE 및 SYBR 프리믹스 Taq(Takara Bio)를 사용하여 수행되었다. 상대적인 mRNA 발현 레벨을 계산하기 위해, 각각의 유전자의 발현은, 기준 유전자 36B4 (유전자 부호: Rplp0)의 것으로 정상화되었다. PCR-프라이머 세트 및 플레이트 레이아웃의 정보는 표 1에 기재되어 있다.

통계 테스트

통계적인 분석은, GraphPad Prism 4 (GraphPad Software, USA)에서 본페르로니 다준 비교 테스트(Bonferroni Multiple Comparison Test)를 사용하여 실행되었다. P 수치 < 0.05는 통계학적으로 중요한 것으로 고려되었다. 추세 또는 동향은, 단측 t-테스트가 P 수치 < 0.10로 되돌아가는 경우에, 추정되었다(A trend or tendency was assumed when a one-tailed t-test returned P values < 0.10). 결과는 평균 ± SD로서 나타내었다.

실험적인 설계 및 처리

연구 그룹

그룹 1: 정상

10 마리의 정상 마우스가 9 주가 될 때까지 어떠한 처리 없이 임의로 정상 식단으로 제공되었다.

그룹 2: 비히클

10 마리의 NASH 마우스는 6 내지 9 주 동안 매일 한 번 10 mL/kg의 부피로 비히클을 경구적으로 투여하였다.

그룹 3: MN-001-저 투여량(MN-001-low dose)

10 마리의 NASH 마우스는, 6 내지 9 주 동안 매일 한 번 10 mg/kg의 투여량으로 MN-001이 추가된 비히클을 경구적으로 투여하였다.

그룹 4: MN-001-중간 투여량(MN-001--middle dose)

10 마리의 NASH 마우스는 6 내지 9 주 동안 매일 한 번 30 mg/kg의 투여량으로 MN-001이 추가된 비히클을 경구적으로 투여하였다.

그룹 5: MN-001-고 투여량(MN-001-high dose)

10 마리의 NASH 마우스는 6 내지 9 주 동안 매일 한 번 100 mg/kg의 투여량으로 MN-001이 추가된 비히클을 경구적으로 투여하였다.

그룹 6 : 텔미사르탄

6 마리의 NASH 마우스는 6 내지 9 주 동안 매일 한 번 10 mg/kg의 투여량으로 텔미사르탄이 추가된 순수한 물을 경구적으로 투여하였다.

동물 모니터링 및 희생(sacrifice)

생존능력, 임상 증상 및 행동은 매일 모니터되었다. 체중은 처리 전에 기록되었다. 마우스는, 각각의 투여 후 대략 60 분에서의 독성, 빈사상태(moribundity) 및 사망(mortality)의 중요한 임상적인 신호에 대해 관찰되었다. 상기 동물은, 에테르 마취 하에 직접적인 심장 천자(direct cardiac puncture)를 통한 출혈을 통해 희생되었다(Wako Pure Chemical Industries).

결과

조직학의 분석( Histological analyses)

HE 염색 및 NAFLD 활성도 지수

비히클 그룹으로부터의 간 부분은, 심각한 미크로- 및 마크로베스큘라르 지방 축적(severe micro- and macrovesicular fat deposition), 간세포의 풍선화 및 염증성 세포 침윤(inflammatory cell infiltration)을 나타내었다. 이러한 관찰과 일치하여, NAS는 정상 그룹과 비교하여 비히클 그룹에서 현저하게 증가되었다. 상기 텔미사르탄 그룹은, 비히클 그룹과 비교하여 NAS에서 현저한 감소와 함께, 간세포의 풍선화 및 염증성 세포 침윤에서의 현저한 개선을 나타내었다. MN-100-높은 투여량 그룹은, 간세포의 풍선화에서의 현저한 개선 및 염증성 세포 침윤에서의 보통의 개선을 나타내었다. NAS는, 비히클 그룹과 비교하여 MN-001-높은 그룹에서 현저하게 감소되었다. 상기 MN-001-low 및 -middle 그룹은, 비히클 그룹과 비교하여 간세포의 풍선화에서 보통의 감소를 나타내었다. 비히클 그룹과 그 밖의 그룹 중 어떠한 것 사이에서 NAS에서의 어떠한 현저한 차이가 없었다(정상: 0.0 ± 00, 비히클: 5.3 ± 0.5, MN-001-low: 4.7 ± 0.5, MN-001-middle: 4.7 ± 0.5, MN-001-high: 3.3 ± 0.8, 텔미사르탄: 2.6 ± 0.7). 도 1 내지 3 및 하기의 표를 참고하라.

시리우스 레드 염색

비히클 그룹으로부터의 간 부분은, 정상 그룹과 비교하여 간 소엽의 주변 영역(pericentral region)에서의 증가된 콜라겐 축적을 나타내었다. 섬유증 영역(시리우스 레드-양성 영역)의 퍼센트는 정상 그룹과 비교하여 비히클 그룹에서 현저하게 증가되었다. 상기 섬유증 영역은, 상기 비히클 그룹과 비교하여 텔미사르탄 그룹 및 MN-001 처리 그룹 둘 다에서 현저하게 감소되었다(정상: 0.29 ± 0.08 %, 비히클: 0.97 ± 0.19 %, MN-001-low: 0.76 ± 0.19 %, MN-001-middle: 0.76 ± 0.16 %, MN-001-high: 0.69 ± 0.18 %, 텔미사르탄: 0.62 ± 0.09 %). 도 4를 참고하라.

F4/80 면역염색

비히클 그룹으로부터의 간 절편은, 정상 그룹과 비교된 간 소엽에서 F4/80-양성 세포의 크기 및 증가된 수를 나타내었다. 염증 영역(F4/80-positive area)의 퍼센트는 정상 그룹과 비교하여 상기 비히클 그룹에서 현저하게 증가되었다. 상기 염증 영역은 상기 비히클 그룹과 비교하여 텔미사르탄 그룹 및 MN-001-low 그룹 둘 다에서 현저하게 감소되었다. 비히클 그룹과 다른 어떠한 그룹 사이의 염증 영역에서 어떠한 현저한 차이도 없었다(정상: 3.26 ± 0.66 %, 비히클: 6.56 ± 1.19 %, MN-001-low: 5.18 ± 0.85 %, MN-001-middle: 6.33 ± 0.84 %, MN-001-high: 6.31 ± 0.76 %, 텔미사르탄: 4.46 ± 0.88 %). 도 5를 참고하라.

알파- SMA 면역염색

비히클 그룹으로부터의 간 부분은, 정상 그룹과 비교된 상기 간 소엽에서 증가된 α-SMA-양성 세포(α-SMA-positive cells)를 나타내었다. α-SMA-양성 영역의 퍼센트는 상기 정상 그룹과 비교된 상기 비히클 그룹에서 현저하게 증가되었다. 상기 α-SMA-양성 영역은, 상기 비히클 그룹과 비교하여 MN-001-low 및 -high 그룹에서 감소하는 경향이 있다. 상기 비히클 그룹과 다른 어떠한 그룹 사이의 α-SMA-양성 영역에서 현저한 차이도 없었다(정상: 0.07 ± 0.03 %, 비히클: 0.15 ± 0.08 %, MN-001-low: 0.10 ± 0.05 %, MN-001-middle: 0.11 ± 0.04 %, MN-001-high: 0.11 ± 0.04 %, 텔미사르탄: 0.12 ± 0.05%).

체중 변화 및 전반적인 증상(general condition)

체중은 텔미사르탄 그룹을 제외하고 모두에서 처리 기간 동안 서서히 증가되었다. 비히클 그룹의 평균 체중은 처리 기간 동안에 정상 그룹과 비교하여 보다 낮았다. 텔미사르탄 그룹의 평균 체중은, 11 일 내지 22 일에 비히클 그룹보다 현저하게 더 낮아졌다. 처리 기간 동안에 비히클 그룹과 다른 어떠한 그룹 사이에서 평균 체중에서 현저한 차이가 없었다. 본 연구에서, 동물의 어떠한 것도 전반적인 증상에서의 악화(deterioration)를 나타내지 않았다.

희생의 날에서의 체중(Body weight at the day of sacrifice)

희생에서의 평균 체중은 정상 그룹과 비교하여 상기 비히클 그룹에서 현저하게 낮아졌다. 상기 텔미사르탄 그룹은 상기 비히클 그룹과 비교하여 평균 체중에서 현저한 감소를 나타내었다. 상기 비히클 그룹과 다른 어떠한 그룹 사이에 평균 체중에서 현저한 차이가 없었다(정상: 25.0 ± 0.4 g, 비히클: 20.5 ± 1.9 g, MN-001-low: 21.1 ± 1.3 g, MN-001-middle: 20.3 ± 1.0 g, MN-001-high: 20.6 ± 1.5 g, 텔미사르탄: 18.0 ± 1.9 g).

간 중량 및 간-대-체중 비(Liver weight and liver-to-body weight ratio)

평균 간 중량은, 정상 그룹과 비교하여 비히클 그룹에서 현저하게 증가되었다. 상기 텔미사르탄 그룹은 상기 비히클 그룹과 비교하여 평균 간 중량에서 현저한 감소를 나타내었다. 상기 간 중량은, 상기 비히클 그룹과 비교하여 MN-001-middle 그룹에서 감소하는 경향이 있다. 상기 비히클 및 다른 어떠한 그룹 사이의 평균 간 중량에서 현저한 차이가 없었다(정상: 1083 ± 83 mg, 비히클: 1555 ± 112 mg, MN-001-low: 1567 ± 165 mg, MN-001-middle: 1439 ± 118 mg, MN-001-high: 1480 ± 145 mg, 텔미사르탄: 1172 ± 90 mg).

간-대-체중 비는, 정상 그룹과 비교하여 상기 비히클 그룹에서 현저하게 증가되었다. 텔미사르탄 그룹은 비히클 그룹과 비교하여 평균 간-대-체중 비에서 현저한 감소를 나타내었다. 상기 간-대-체중 비는, 상기 비히클 그룹과 비교하여 MN-001-middle 및 -high 그룹에서의 감소를 나타내는 경향이 있다. 상기 비히클 그룹과 MN-001-low 그룹 사이의 평균 간-대-체중 비에서의 현저한 차이는 없었다(정상: 4.3 ± 0.3 %, 비히클: 7.6 ± 0.6 %, MN-001-low: 7.4 ± 0.8 %, MN-001-middle: 7.1 ± 0.5 %, MN-001-high: 7.2 ± 0.6 %, 텔미사르탄: 6.5 ± 0.4 %).

전혈 (Whole blood) 및 생화학

전혈 글루코스(도 3.1 및 표 3) 혈액 글루코스 레벨은, 상기 정상 그룹과 비교하여 상기 비히클 그룹에서 현저하게 증가되었다. 텔미사르탄 그룹은 비히클 그룹과 비교하여 혈액 글루코스 레벨에서 현저한 증가를 나타내었다. 상기 비히클 그룹과 다른 어떠한 그룹 사이의 혈액 글루코스 레벨에서의 어떠한 현저한 차이가 없었다(정상: 192 ± 40 mg/dL, 비히클: 632 ± 95 mg/dL, MN-001-low: 614 ± 98 mg/dL, MN-001-middle: 609 ± 78 mg/dL, MN-001-high: 671 ± 124 mg/dL, 텔미사르탄: 876 ± 29 mg/dL).

혈장 ALT(Plasma ALT)

혈장 ALT 레벨은 정상 그룹과 비교된 상기 비히클 그룹에서 증가하는 경향이 있다. 혈장 ALT 레벨은 상기 비히클 그룹과 비교하여 텔미사르탄 그룹에서 감소하는 경향이 있다. 상기 비히클 그룹과 다른 어떠한 그룹 사이의 혈장 ALT 레벨에서 어떠한 현저한 차이가 없었다(정상: 31 ± 10 U/L, 비히클: 51 ± 22 U/L, MN-001-low: 71 ± 60 U/L, MN-001-middle: 48 ± 23 U/L, MN-001-high: 54 ± 11 U/L, 텔미사르탄: 37 ± 6 U/L).

혈장 AST

혈장 AST 레벨은 정상 그룹과 비교하여 상기 비히클 그룹에서 감소하는 경향이 있었다. 혈장 AST 레벨은 비히클 그룹과 비교하여 MN-001-middle 및 -high 그룹에서 증가하는 경향이 있었다. 상기 비히클 그룹과 MN-001-low 그룹 사이의 혈장 AST 레벨에서의 어떠한 현저한 차이도 없었다(정상: 300 ± 77 U/L, 비히클: 193 ± 95 U/L, MN-001-low: 214 ± 210 U/L, MN-001-middle: 270 ± 114 U/L, MN-001-high: 385 ± 183 U/L, 텔미사르탄: 190 ± 28 U/L).

간 히드록시프롤린 함량

정상 그룹과 비히클 그룹 사이의 간 히드록시프롤린 함량에서 어떠한 현저한 차이도 없었다. 상기 간 히드록시프롤린 함량은, 비히클 그룹과 비교된 상기 텔미사르탄 그룹에서 증가를 나타내는 경향이 있다. 상기 간 히드록시프롤린 함량은, 상기 비히클 그룹과 비교하여 MN-001-high 그룹에서 감소를 나타내는 경향이 있다. 상기 비히클 그룹과 다른 어떠한 그룹 사이의 간 히드록시프롤린 함량에서 어떠한 현저한 차이가 없었다(정상: 0.61 ± 0.12 μg/mg 단백질, 비히클: 0.67 ± 0.16 μg/mg 단백질, MN-001-low: 0.78 ± 0.34 μg/mg 단백질, MN-001-middle: 0.63 ± 0.12 μg/mg 단백질, MN-001-high: 0.55 ± 0.14 μg/mg 단백질, 텔미사르탄: 0.87 ± 0.23 μg/mg 단백질). 도 6을 참고하라.

유전자 발현 분석

알파- SMA

알파-SMA mRNA 발현 레벨은, 정상 그룹과 비교하여 비히클 그룹에서 상향-조절되는 경향이 있었다(Alpha-SMA mRNA expression levels tended to be up-regulated in the Vehicle group compared with the Normal group). 알파-SMA mRNA 발현 레벨은, 상기 비히클 그룹과 비교하여 텔미사르탄에서 상향-조절되는 경향이 있었다. 비히클 그릅과 다른 어떠한 그룹 사이의 α-SMA mRNA 발현 레벨에서 현저한 차이가 없었다(정상: 1.00 ± 0.44, 비히클: 4.08 ± 2.56, MN-001-low: 36.8 ± 111, MN-001-middle: 3.13 ± 2.52, MN-001-high: 5.78 ± 3.45, 텔미사르탄: 5.21 ± 1.43).

TNF-α

TNF-α mRNA 발현 레벨은, 상기 정상 그룹과 비교하여 상기 비히클 그룹에서 상향-조절되는 경향이 있었다. 상기 비히클 그룹과 다른 어떠한 그룹 사이의 TNF-α mRNA 발현 레벨에서 현저한 차이가 없었다(정상: 1.00 ± 0.48, 비히클: 9.88 ± 19.3, MN-001-low: 3.42 ± 2.53, MN-001-middle: 7.97 ± 9.30, MN-001-high: 9.74 ± 3.34, 텔미사르탄: 8.35 ± 2.84).

CCR2

CCR2 mRNA 발현 레벨은 상기 정상 그룹과 비교하여 상기 비히클 그룹에서 현저하게 상향-조절되었다. CCR2 mRNA 발현 레벨은, 상기 비히클 그룹과 비교하여 MN-001-low 및 -middle 그룹에서 현저하게 하향-조절되었다(down-regulated). 비히클 그룹과 다른 어떠한 그룹 사이의 CCR2 mRNA 발현 레벨에서의 현저한 차이가 없었다(정상: 1.00 ± 0.27, 비히클: 6.83 ± 9.89, MN-001-low: 0.13 ± 0.09, MN-001-middle: 0.22 ± 0.35, MN-001-high: 3.86 ± 1.43, 텔미사르탄: 3.21 ± 0.85).

MCP -1

MCP-1 mRNA 발현 레벨은 정상 그룹과 비교하여 상기 비히클 그룹에서 현저하게 상향-조절되었다. MCP-1 mRNA 발현 레벨은 상기 비히클 그룹과 비교하여 MN-001-low 그룹에서 현저하게 하향-조절되었다. MCP-1 mRNA 발현 레벨은, 상기 비히클 그룹과 비교하여 MN-001-high 및 텔미사르탄에서 하향-조절되는 경향이 있었다.

비히클 그룹과 다른 어떠한 그룹 사이의 MCP-1 mRNA 발현 레벨에서의 현저한 차이가 없었다(정상: 1.00 ± 0.35, 비히클: 2.17 ± 42.2, MN-001-low: 1.97 ± 2.06, MN-001-middle: 4.00 ± 7.78, MN-001-high: 3.64 ± 1.52, 텔미사르탄: 2.69 ± 0.95).

콜라겐 타입 1

콜라겐 타입 1 mRNA 발현 레벨은, 정상 그룹과 비교하여 비히클 그룹에서 상향-조절되는 경향이 있었다. 콜라겐 타입 1 mRNA 발현 레벨은 현저하게 이다.

TIMP -1

TIMP-1 mRNA 발현 레벨은 정상 그룹과 비교하여 상기 비히클 그룹에서 현저하게 상향-조절되었다. TIMP-1 mRNA 발현 레벨은, 상기 비히클 그룹과 비교하여 MN-001-low 및 -middle 그룹에서 현저하게 하향-조절되었다. 상기 비히클 그룹 및 다른 어떠한 그룹 사이의 TIMP-1 mRNA 발현 레벨에서의 어떠한 현저한 차이가 없었다(정상: 1.00 ± 0.37, 비히클: 9.78 ± 7.28, MN-001-low: 2.20 ± 1.52, MN-001-middle: 3.64 ± 1.66, MN-001-high: 10.6 ± 5.83, 텔미사르탄: 7.82 ± 2.62).

결론적으로, 다양한 투여량으로 투여된, MN-001은, 본 연구에서 항-NASH, 항-섬유증 및 항-염증성 효과의 하나 또는 그 이상을 나타내었다.

Claims

하기의 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질, 또는 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질의 에스테르, 또는 이의 각각의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 지방증으로부터 고통 받는 환자에서 지방증을 저해하는 방법:
[화학식 (Ⅰ)]

이 식에서, m은 2 내지 5의 정수이고, n은 3 내지 8의 정수이고, X^l 및 X²는 각각 독립적으로, 황 원자, 산소 원자, 술피닐 기 또는 술포닐 기를 나타내고, 단, X^l 및 X²는 동시에 산소 원자가 아닌 것인, 방법.
제1항에 있어서,
상기 화학식 (Ⅰ)의 화합물은
[화학식 (ⅠA)]

화학식 (ⅠA)의 것인, 방법.
제1항에 있어서,
상기 화학식 (Ⅰ)의 화합물의 대사물질은
[화학식 (ⅠB)]

화학식 (ⅠB)의 화합물인 것인, 방법.
제1항에 있어서,
상기 화합물은 경구적으로 투여되는 것인, 방법.
제4항에 있어서,
상기 화합물은 정제 또는 캡슐로서 투여되는 것인, 방법.
제2항에 있어서,
상기 화합물은, 실질적으로 다른 다형체 형태 프리인 사방정계 다형체 형태 A로 존재하는 것인, 방법.
제1항에 있어서,
상기 화합물은 액체 제형(liquid dosage form)으로서 투여되는 것인, 방법.
제1항에 있어서,
상기 화합물은, 1 회, 2 회 또는 3 회로 나눠진, 100 내지 4,000 mg/day의 양으로 투여되는 것인, 방법.
하기의 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질, 또는 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질의 에스테르, 또는 이의 각각의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 소엽의 염증(lobular inflammation)으로부터 고통 받는 환자에서 소엽의 염증을 저해하는 방법:
[화학식 (Ⅰ)]

이 식에서, m은 2 내지 5의 정수이고, n은 3 내지 8의 정수이고, X^l 및 X²는 각각 독립적으로, 황 원자, 산소 원자, 술피닐 기 또는 술포닐 기를 나타내고, 단, X^l 및 X²는 동시에 산소 원자가 아닌 것인, 방법.
제9항에 있어서,
상기 화학식 (Ⅰ)의 화합물은
[화학식 (ⅠA)]

화학식 (ⅠA)의 것인, 방법.
제9항에 있어서,
상기 화학식 (Ⅰ)의 화합물의 대사물질은
[화학식 (ⅠB)]

화학식 (ⅠB)의 화합물인 것인, 방법.
제9항에 있어서,
상기 화합물은 경구적으로 투여되는 것인, 방법.
제12항에 있어서,
상기 화합물은 정제 또는 캡슐로서 투여되는 것인, 방법.
제10항에 있어서,
상기 화합물은, 실질적으로 다른 다형체 형태 프리인 사방정계 다형체 형태 A로 존재하는 것인, 방법.
제9항에 있어서,
상기 화합물은, 액체 제형으로서 투여되는 것인, 방법.
제9항에 있어서,
상기 화합물은, 1 회, 2 회 또는 3 회로 나눠진, 100 내지 4,000 mg/day의 양으로 투여되는 것인, 방법.
하기의 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질, 또는 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질의 에스테르, 또는 이의 각각의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 간의 풍선화(hepatic ballooning)로부터 고통 받는 환자에서 간의 풍선화를 저해하는 방법:
[화학식 (Ⅰ)]

이 식에서, m은 2 내지 5의 정수이고, n은 3 내지 8의 정수이고, X^l 및 X²는 각각 독립적으로, 황 원자, 산소 원자, 술피닐 기 또는 술포닐 기를 나타내고, 단, X^l 및 X²는 동시에 산소 원자가 아닌 것인, 방법.
제17항에 있어서,
상기 화학식 (Ⅰ)의 화합물은
[화학식 (ⅠA)]

화학식 (ⅠA)의 것인, 방법.
제17항에 있어서,
상기 화학식 (Ⅰ)의 화합물의 대사물질은
[화학식 (ⅠB)]

화학식 (ⅠB)의 화합물인 것인, 방법.
제17항에 있어서,
상기 화합물은 경구적으로 투여되는 것인, 방법.
제20항에 있어서,
상기 화합물은 정제 또는 캡슐로서 투여되는 것인, 방법.
제18항에 있어서,
상기 화합물은, 실질적으로 다른 다형체 형태 프리인 사방정계 다형체 형태 A로 존재하는 것인, 방법.
제17항에 있어서,
상기 화합물은 액체 제형으로서 투여되는 것인, 방법.
제17항에 있어서,
상기 화합물은, 1 회, 2 회 또는 3 회로 나눠진, 100 내지 4,000 mg/day의 양으로 투여되는 것인, 방법.
하기의 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질, 또는 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질의 에스테르, 또는 이의 각각의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 간의 반흔(hepatic scarring)으로부터 고통 받는 환자에서 간의 반흔을 저해하는 방법:
[화학식 (Ⅰ]

이 식에서, m은 2 내지 5의 정수이고, n은 3 내지 8의 정수이고, X^l 및 X²는 각각 독립적으로, 황 원자, 산소 원자, 술피닐 기 또는 술포닐 기를 나타내고, 단, X^l 및 X²는 동시에 산소 원자가 아닌 것인, 방법.
제25항에 있어서,
상기 화학식 (Ⅰ)의 화합물은
[화학식 (ⅠA)]

화학식 (ⅠA)의 것인, 방법.
제25항에 있어서,
상기 화학식 (Ⅰ)의 화합물의 대사물질은
[화학식 (ⅠB)]

화학식 (ⅠB)의 화합물인 것인, 방법.
제25항에 있어서,
상기 화합물은 경구적으로 투여되는 것인, 방법.
제28항에 있어서,
상기 화합물은 정제 또는 캡슐로서 투여되는 것인, 방법.
제26항에 있어서,
상기 화합물은, 실질적으로 다른 다형체 형태 프리인 사방정계 다형체 형태 A로 존재하는 것인, 방법.
제25항에 있어서,
상기 화합물은 액체 제형으로서 투여되는 것인, 방법.
제25항에 있어서,
상기 화합물은, 1 회, 2 회 또는 3 회로 나눠진, 100 내지 4,000 mg/day의 양으로 투여되는 것인, 방법.
하기의 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질, 또는 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 대사물질의 에스테르, 또는 이의 각각의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 증진된 간의 히드록시프롤린 레벨로부터 고통 받는 환자에서 증진된 간의 히드록시프롤린 레벨을 감소 및/또는 저해하는 방법:
[화학식 (Ⅰ)]

이 식에서, m은 2 내지 5의 정수이고, n은 3 내지 8의 정수이고, X^l 및 X²는 각각 독립적으로, 황 원자, 산소 원자, 술피닐 기 또는 술포닐 기를 나타내고, 단, X^l 및 X²는 동시에 산소 원자가 아닌 것인, 방법.
제33항에 있어서,
상기 화학식 (Ⅰ)의 화합물은
[화학식 (ⅠA)]

화학식 (ⅠA)의 것인, 방법.
제33항에 있어서,
상기 화학식 (Ⅰ)의 화합물의 대사물질은
[화학식 (ⅠB)]

화학식 (ⅠB)의 화합물인 것인, 방법.
제33항에 있어서,
상기 화합물은 경구적으로 투여되는 것인, 방법.
제36항에 있어서,
상기 화합물은 정제 또는 캡슐로서 투여되는 것인, 방법.
제34항에 있어서,
상기 화합물은, 실질적으로 다른 다형체 형태 프리인 사방정계 다형체 형태 A로 존재하는 것인, 방법.
제33항에 있어서,
상기 화합물은, 액체 제형으로서 투여되는 것인, 방법.
제33항에 있어서,
상기 화합물은, 1 회, 2 회 또는 3 회로 나눠진, 100 내지 4,000 mg/day의 양으로 투여되는 것인, 방법.