KR20160045271A - 개똥쑥 발효 초고압 추출물을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 개똥쑥(Artemisia annua)을 발효, 초고압 처리 및 추출하여 얻은 개똥쑥 발효 초고압 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 개똥쑥을 효모, 유산균류, 바실러스 속 균류 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 이용하여 발효하고 상기 발효물에 100∼3000MPa의 압력에서 40∼90℃의 온도로 1∼24 시간을 처리하는 초고압 추출법을 이용하여 활성성분 중 플라보노이드를 높은 수율로 수득한 개똥쑥 발효 초고압 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 항산화 효과와, 주름 개선 효과가 우수하고, 온도변화에 대해 변색과 분리 및 침전이 발생하지 않는 우수한 안정성을 갖는다.

Description

개똥쑥 발효 초고압 추출물을 함유하는 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION COMPRISING THE VERY HIGH-PRESSURE EXTRACT OF WORMWOOD FERMENTATION}

본 발명은 항산화 효과 및 주름 개선 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부의 노화는 자유 라디칼(free radical)에 의한 생체물질의 산화적 손상에 기인한다. 즉 과산화수소, 히드록시 라디칼, 슈퍼옥사이드 라디칼 등의 활성산소와 같은 반응성이 높은 자유 라디칼은 세포막을 구성하는 지질을 과산화시켜 세포막을 파괴하고 단백질을 산화시키며 핵산을 공격하여 산화적 손상을 일으켜 생체물질을 파괴하고 결국 세포를 죽게한다.

따라서 피부의 노화 방지 또는 지연은 생체물질의 산화적 손상을 억제함으로써 가능하게 된다.

화장료의 목표는 아름답고 건강한 피부를 유지하는 것이며, 아울러 나이가 들면서 자연적으로 생기는 피부의 노화를 지연시키는 데 있다. 노화로 인해 가장 크게 나타나는 피부 특성은 주름과 탄력저하, 피부 칙칙함을 들 수 있다. 또한, 노화에 따라 피부에 잔주름이 생기고 탄력이 떨어지는 현상이 나타난다. 이를 위해 여러 천연식물성분들의 피부생리활성을 검색하여 안전성이 우수하고 피부 미용 효과가 우수한 물질들을 개발하기 위한 연구가 현재 활발히 진행되고 있다.

지금까지 항산화작용을 갖는 것으로 알려진 물질은 아스코르빈산(ascorbic acid), 디엘-알파토코페롤(dl-α-tocopherol), 베타카로틴(β-carotene), 디부틸히드록실톨루엔(BHT) 등이 있다.

그러나 이러한 물질들은 합성품으로 사용되기 때문에, 장기간 사용하거나 다량으로 사용시 피부 안전성의 문제를 일으킬 수 있으므로 보다 안전하고 유용하게 피부에 적용할 수 있는 새로운 항산화 화장료의 개발이 절실하게 요구되고 있는 실정이다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐만 아니라, 최근 천연재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다.

천연 재료 중 하나로, 개똥쑥(Artemisia annua)은 쌍떡잎식물 초롱꽃목 국화과 쑥속에 속하는 한해살이풀로 다른 이름은 황화호(黃花蒿), 취호(臭蒿), 향사초(香絲草), 마뇨호(馬尿蒿), 황향호(黃香蒿), 계슬엽(鷄葉), 추호(秋蒿), 잔잎쑥, 개땅쑥 등으로 부른다. 풀 전체에 털이 없고 특이한 냄새가 나며 줄기는 녹색으로 가지가 많이 갈라진다. 잎은 어긋나고 2∼3회 가늘게 깃꼴로 깊게 갈라진다. 길이는 4∼7 cm로 피침모양이고 겉에 잔털과 선점(腺點)이 있다. 잎 가운데가 빗살 모양으로 되어 있고 위쪽 잎이 작다. 꽃은 6∼9월에 녹황색으로 피며, 작은 두상화서가 모여 전체적으로 원추화서를 이룬다. 두상화서는 공 모양이고 지름 1.5 cm이다. 총포 조각은 털이 없고 2∼3줄로 배열하며, 외포 조각은 긴 타원형으로 녹색이다. 열매는 수과로 길이 약 0.7 mm이며 9월에 담갈색으로 익는다.

한방에서는 풍한경열, 악창개선, 해열, 진정작용 등의 효능이 있는 것으로 알려져 있으며 한국, 일본, 타이완, 몽골, 시베리아 등에 분포한다.

이러한 개똥쑥의 주요 유효성분으로는 플라보노이드, 아르테미시닌 유도체, 테르페노이드(terpenoide)계열이 있으며 정유 성분이 다량 함유되어 있다.

현재까지 개똥쑥의 주요 성분인 아르테미시닌(artermisinin) 유도체와 플라보노이드의 다양한 약리 효과에 대한 연구가 진행되어왔다. 특히 아르테수네이트(Artesunate)는 개똥쑥 활성 성분인 아르테미시닌의 반합성 유도체이며, 다제 내성 말라리아에 대하여 현저한 치료효과를 갖는다.(Artesunate for the Treatment of Severe Falciparum Malaria. N Engl J Med. 2008;358:1829-1836)

또한 아르테수네이트의 항 종양 활성을 검토 한 결과 가장 효과를 보인 것은 백혈병과 대장암이며 항 종양 작용을 나타내는 농도는 보통의 항암제와 같은 수준이었다. 또한 일반 항암제에 내성 암세포에 대해서도 항 종양활성을 보여주었고 독성이 낮기 때문에 암 치료의 유망한 후보로 연구되고 있다. 개똥쑥의 플라노이드 성분 또한 항말라리아 효과를 나타내는 것으로 알려져 치료제에 사용하고 있다. (The anti-malarial artesunate is also active against cancer. Int J Oncol. 2001;18(4):767-73)

이에, 본 발명자들은 상기 종래 기술보다 높은 수율로 플라보노이드 성분을 포함하여, 항산화 효과 및 주름 개선 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해 본 발명은 개똥쑥을 발효시킨 후 초고압 처리 및 추출하여 얻은, 개똥쑥 발효 초고압 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

바람직하게는 상기 발효는 개똥쑥을 효모균, 유산균, 바실러스속 균 및 이의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 균으로 20 내지 40 ℃의 온도 조건 하에서 pH 5 내지 7을 유지하면서, 1 내지 7일간 발효시켜 얻은 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 바람직하게는 상기 효모균이 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisisae)인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 바람직하게는 상기 초고압 처리를 100 내지 3000 MPa의 압력에서 40 내지 90℃의 온도로 1 내지 24 시간 동안 처리하여 얻는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 바람직하게는 상기 추출이 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸에테르, 부틸렌글리콜 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 바람직하게는 상기 개똥쑥 발효 초고압 추출물이 상기 화장료 조성물의 전체 중량을 기준으로 0.0001 내지 30.0 중량%의 양으로 함유되는 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는 상기 화장료 조성물이 항산화 효과를 주는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 바람직하게는 상기 화장료 조성물이 주름 개선 도움에 사용되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명의 또 다른 목적은 상기 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하여 항산화 효과를 주거나 주름 개선에 도움을 주는 것을 특징으로 하는 화장 방법에 의해 달성된다.

본 발명은 플라보노이드 함량이 증가되었으며, 항산화 효과 및 주름 개선 효과가 뛰어난 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 하기의 정의를 가지며 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미에 부합된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.

용어 약이라는 것은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 25, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.

본 명세서를 통해, 문맥에서 달리 필요하지 않으면, 포함하다 및 포함하는이란 말은 제시된 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군을 포함하나, 임의의 다른 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군이 배제되지는 않음을 내포하는 것으로 이해하여야 한다.

본 발명자들은 여러 천연물들 중에서 개똥쑥 발효 추출물을 함유하는 화장료로서의 응용가능성을 연구 및 다양한 실험을 거쳐 항산화 및 주름 개선 효과를 측정한 결과 화장품으로서의 효능을 기대할 수 있다는 것을 발견하게 되었다. 이와 같이 우수한 효능을 가지고 있는 플라보노이드의 성분을 최대한 높은 수율로 수득하여, 더욱 탁월한 효과를 보이는 화장료 조성물을 개발하였다.

본 발명은 개똥쑥을 발효, 초고압 처리 및 추출하여 얻은 개똥쑥 발효 초고압 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로 더욱 상세하게는 개똥쑥을 효모균, 유산균, 바실러스속 균 및 이의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 발효 미생물을 이용하여 발효하고 이를 초고압을 처리하여 플라보노이드 성분 함량이 증가된 개똥쑥 발효 초고압 추출물을 유효 성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

상술한 바와 같은 본 발명의 화장료 조성물은 개똥쑥을 발효시킨 후 초고압 처리 및 추출하여 얻은 개똥쑥 발효 초고압 추출물을 함유하는 화장료 조성물이다.

상기와 같은 성분으로 이루어지는 본 발명의 화장료 조성물은 피부의 항산화 효과 및 주름 개선을 위한 화장료 조성물로 적합하다.

본 발명은 다양한 효능을 가지고 있는 플라보노이드 성분을 최대한 높은 수율로 수득하기 위해, 개똥쑥을 발효시킨 후 초고압처리 및 추출공정을 거쳤다. 이러한 처리에 의해, 유효성분의 함량이 증가됨을 확인하였고, 이를 화장료에 적용하여 항산화 효과, 주름 개선 효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 개똥쑥 발효 초고압 추출물은 발효를 개똥쑥을 효모균, 유산균 및 바실러스속 균으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균으로 20 내지 40 ℃의 온도 조건 하에서 pH 5 내지 7을 유지하면서, 1 내지 7일간 발효시켜 얻을 수 있으며, 보다 바람직하게는 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisisae)를 이용하여 발효시키는 것이며, 가장 바람직하게는 사카로미세스 세레비시아 KCTC 7904 균주를 이용하여 발효시키는 것이다.

본 발명에 사용되는 개똥쑥은 일반적으로 알려진 방법으로 제조된 개똥쑥을 사용하였으며, 이들은 충분히 세척한 다음 분쇄한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 분쇄된 개똥쑥을 100g/L로 사카로미세스 속 (사카로미세스 세레비시아 KCTC 7904) 균주 배양액에 첨가하였다. 여기에 탄소원으로 포도당 1 ~ 4%, 바람직하게는 1 ~ 2%를 첨가하였으며, 펩톤 0.1 ~ 1%, 바람직하게는 0.2 ~ 0.5%를 추가로 첨가하여 배양하였다. 배양은 5 L 발효조를 이용하여 20 내지 40℃의 온도 조건 하에서, pH 5-7로 유지하면서 1 내지 7일간 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거하였다.

또한, 바람직하게는, 상기 초고압 처리는 100 내지 3000 MPa의 압력에서 40 내지 90 ℃의 온도로 1 내지 24 시간 동안 처리하며, 바람직하게는 500 내지 1000 MPa의 압력에서 40 내지 60℃의 온도로 12∼24시간 처리하는 것이며, 가장 바람직하게는 압력 1000 MPa의 압력에서 50℃의 온도로 24 시간 동안 처리한다.

또한 바람직하게는, 상기 추출은 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸에테르, 부틸렌글리콜 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 추출용매를 사용하여 추출되며, 보다 바람직하게는 에탄올, 70% 에탄올 수용액 또는 물을 사용하여 추출되며, 가장 바람직하게는 70% 에탄올 수용액을 사용하여 추출한다.

초고압 처리한 개똥쑥 발효 추출물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과가 완료되면 본 발명에서는 상기 추출단계에서 얻어진 추출액을 농축조로 이송하여 감압농축하고 이를 동결 건조하였다. 감압농축은 로터리감압농축기를 이용하여 농축하였으며 농축 조건은 1,000 ml 라운드플라스크에 700 ml의 추출물을 넣고 650 mmHg ~ 750 mmHg의 압력으로 50 ~ 70℃, 600 ~ 1200 rpm으로 회전하면서 2시간동안 감압 농축하였다. 감압 농축한 농축액은 예비동결을 수행하여 -40℃로 온도를 낮추고 -40℃로 2 ~ 4시간 동안 유지한 후 트랩 냉동을 통하여 -80℃까지 떨어트리고, 진공을 10 ~ 30 mTorr로 유지한 다음 120분에 걸쳐 -40℃까지 다시 올린다. 그 후 -20℃로 240분, 0℃로 40분, 15℃ 340분, 30℃로 130분 유지하고 완전히 건조될 때까지 1300분으로 유지하였다.

개똥쑥 발효 초고압 추출물은 개똥쑥을 발효하여 얻은 발효물을 초고압 처리 후 추출한 추출액이거나, 상기 추출액을 진공, 농축 후 동결건조시킨 분말이거나, 상기 분말을 추출용매와 배합한 배합물이 바람직하다.

또한, 개똥쑥 발효 초고압 추출물은 특정의 범위에 한정하는 것은 아니나, 바람직하게는 화장료 조성물의 총 중량에 대해 0.0001 ~ 30중량% 함유되는 것이 좋다. 상기 추출물의 함량이 0.0001중량% 미만인 경우에는 주름 개선 효과가 나타나지 않으며, 30중량% 이상인 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효성분 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클린징 제형은 클렌징폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

< 실시예 1> 개똥쑥 발효 초고압 추출물 제조

개똥쑥을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 300메시 체를 통과할 수 있도록 분쇄물을 미세하게 만들었다.

이 분쇄물을 10g/L되도록 분쇄된 개똥쑥을 사카로미세스 속(사카로미세스 세레비시아 KCTC 7904) 균주 배양액에 첨가하였다. 여기에 탄소원으로 포도당 2%(W/V)를 첨가하였으며, 펩톤 0.5%(W/V)를 추가로 첨가하여 배양하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여, 37℃에서, pH 6으로 유지하면서, 5일간 배양하였다. 미생물 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거하였다.

배양균이 1차 제거된 개똥쑥 발효물을 초고압처리기를 이용하여 압력 1000MPa 하에서 온도를 50℃로 승온시키고 24시간 동안 초고압 처리한 후 실온으로 냉각시켰다.

초고압 처리한 개똥쑥 발효물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #2 여과지로 여과하였다.

여과가 완료되면 본 발명에서는 상기 추출단계에서 얻어진 추출액을 농축조로 이송하여 50℃ 이하에서 감압농축 후 동결 건조하였다. 동결건조물을 50% 글리세린을 이용하여 2%가 되게 녹여 개똥쑥 발효 초고압 추출물(실시예 1)을 제조하였다.

< 비교예 1> 개똥쑥 추출물 제조

비교예 1은 개똥쑥의 일반 유기용매 추출물로서, 개똥쑥을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 분쇄한 후 300메시 체에 통과시켜 분쇄물을 미세하게 만들었다. 최종 농도가 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물은 감압농축 후 동결 건조하였다. 이 파우더를 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 개똥쑥 추출물(비교예 1)을 제조하였다.

< 비교예 2> 개똥쑥 발효 추출물 제조

비교예 2는 개똥쑥을 발효하여 추출물로 제조한 것으로서, 개똥쑥을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 300메시 체를 통과할 수 있도록 분쇄물을 미세하게 만들었다. 이것을 10g/L되게 개똥쑥을 사카로미세스 속 (사카로미세스 세레비시아 KCTC 7904) 균주 배양액에 첨가하였다. 여기에 탄소원으로 포도당 2%(W/V)를 첨가하였으며, 펩톤 0.5%(W/V)를 추가로 첨가하여 배양하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여, 37℃에서, pH 6으로 유지하면서, 5일간 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거하였다.

배양균이 1차 제거된 개똥쑥 발효물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과가 완료된 추출액을 농축조로 이송하여 여과된 추출물을 감압농축하고 이를 동결 건조하였다. 이 파우더를 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 개똥쑥 발효 추출물(비교예 2)을 제조하였다.

< 비교예 3> 개똥쑥 초고압 추출물 제조

개똥쑥을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 300메시 체를 통과할 수 있도록 미세하게 분쇄한 개똥쑥 분쇄물을 초고압처리기를 이용하여 압력 1000MPa 하에서 온도를 50℃로 승온시키고 24시간 처리한 후 실온으로 냉각시켰다.

초고압 처리한 개똥쑥 추출물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과가 완료되면 본 발명에서는 상기 추출 단계에서 얻어진 추출액을 농축조로 이송하여 여과된 추출물을 감압 농축하고 이를 동결 건조하였다. 동결건조물을 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 개똥쑥 초고압 추출물(비교예 3)을 제조하였다.

< 실험예 1> 개똥쑥의 유효성분 함량 측정

실시예 1, 및 비교예 1 내지 3의 개똥쑥 추출물의 플라보노이드 각각의 함량을 분석하였으며 그 결과를 아래의 표 1에 나타내었다.

	실시예 1	비교예 1	비교예 2	비교예 3	함량
플라보노이드	2.98	2.02	2.04	2.45	%

실시예 1 및 비교예 1 내지 3의 개똥쑥 추출물의 유효성분 함량 측정 결과, 실시예 1의 플라보노이드 성분 함량이 비교예 1 내지 3 에 비하여 현저히 높은 것을 확인할 수 있었다.

상기의 결과로부터 본 발명의 개똥쑥을 발효 후 고압처리하여 추출하는 처리 조건(실시예 1)에서 추출된 개똥쑥 추출물은 플라보노이드 성분이 다른 추출 조건(비교예 1 내지 3)과 비교하여 크게 증가한 것을 확인할 수 있었다.

< 실험예 2> 항산화 효과 측정

본 발명의 실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 제조한 추출물에 대하여 항산화작용을 펜톤반응(Fenton reaction)에 의한 지질 과산화반응계(lipid peroxidation system)을 이용한 티오바르비츄릭산법(TBA assay)로 측정하였다. 즉, 에틸리놀레이트 10 ㎕, 0.2% 소디움도데실설폭시드(SDS), 염화제일철 10μmol, 과산화수소 2μmol을 함유하는 25mM 트리즈마(Trizma)염산/0.75mM 염화칼륨완충액 5㎖에 실시예 1 및 비교예 1 내지 3에서 제조한 개똥쑥 추출물의 디메틸설폭시드(DMSO) 시험용액을 가한 후 55도에서 16시간동안 항온 시킨 후, 4% 디부틸히드록실톨루엔(BHT) 50㎕를 가하여 반응을 정지시킨다. 이 용액 0.3㎖를 시험관에 넣고 0.05N 염산 3.0㎖, 0.67% 티오바르비츄릭산(TBA)용액을 가하고 30분간 끓인다. 이 반응액을 냉각시킨 후 85% 부탄올 4.0ml을 가하고 원심분리 후 부탄올 층의 흡광도를 535nm에서 측정하였고 각 추출물의 항산화 효과는 다음의 공식으로 산출하였다.

그 결과는 하기 표 2에 나타내었다.

시험물질	항산화 효과(%)
	실험농도(10㎍/ml)	실험농도(50㎍/ml)	실험농도(100㎍/ml)
실시예1	36	63	85
비교예1	26	45	64
비교예2	24	46	67
비교예3	30	54	70

실시예 1 및 비교예 1 내지 3의 개똥쑥 추출물들의 항산화 효과는 대부분 높은 활성을 나타냈으며 실시예 1 및 비교예 1 내지 3의 개똥쑥 추출물과 기존 항산화제인 아스코르빈산(ascorbic acid), 디엘-알파토코페롤(dl-α-tocopherol), 베타카로틴(β-carotene) 및 디부틸히드록실톨루엔(BHT)의 항산화 작용을 실험예2와 같은 방법으로 측정하여 50% 억제농도인 IC50을 비교하였다.

그 결과는 하기 표 3에 나타내었다.

시험물질	IC50(10㎍/ml)
실시예1	38.2
비교예1	48.5
비교예2	46.8
비교예3	43.2
아스코르빈산 (ascorbic acid)	21.90
디엘-알파토코페롤 (dl-α-tocopherol)	3.36
베타카로틴 (β-carotene)	29.8
디부틸히드록실톨루엔 (BHT)	<1

실시예 1 및 비교예 1 내지 3의 개똥쑥 추출물들은 다른 항산화제들에 비교할만한 높은 활성을 나타내었다. 특히 이러한 개똥쑥 추출물들은 천연물 혼합물임에도 불구하고 유의할만한 항산화 활성을 가지고 있음을 알 수 있다.

< 실험예 3> 피부 주름 개선 효과의 평가

개똥쑥 발효 초고압 추출물 크림(제형예 1) 및 비교제형예 1 내지 비교제형예 3의 크림의 주름 개선 효과를 다음과 같이 평가하였다.

실험자(35세-50세의 여성) 40명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 제형예 1에서 제조된 크림을 얼굴 왼쪽 부위에는 비교제형예 1 내지 비교제형예 3의 크림을 각각 1일 2회씩 사용하여 6주 후의 주름 개선 효과를 육안으로 평가하여 주름 개선 정도를 확인하였다. 이 평가를 토대로 한 주름 개선 효과 결과는 하기 표 4에 나타내었다

실험제품	주름 개선 효과			유효율(%)
	우수	약간	없음
제형예1	7	2	1	83.3
비교제형예1	4	3	3	58.4
비교제형예2	5	3	3	61.5
비교제형예3	5	3	2	66.7

상기 표 4에 나타난 바와 같이 개똥쑥 발효 초고압 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 피부 주름 개선 효과가 가장 우수함을 알 수 있었다. 본 화장료를 피부에 도포한 대부분의 피검자들에게서 피부 자극을 관찰할 수 없었다.

개똥쑥 추출물을 함유한 화장료중 크림의 처방예는 하기 표 5에 나타내었다. 여기서 개똥쑥 추출물은 실시예 1 및 비교예 1 내지 비교예 3의 것을 말한다.

성분	함량 (단위:중량%)
개똥쑥 추출물	5.0
글리세린	5.0
소듐히아루로네이트	4.0
폴리소르베이트 60	1.5
광물유	5.0
스쿠알란	3.0
디메치콘	2.0
트리에탄올아민	1.0
친유형모노스테아린글리세린	2.0
세테아릴알코올	2.2
스테아릭애씨드	1.5
소르비탄스테아레이트	0.6
소듐마그네슘실리케이트	0.1
베타인	3.0
방부제	미량
향	미량
색소	미량
정제수	잔량
계	100

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (7)

1. 개똥쑥을 발효시킨 후 초고압 처리 및 추출하여 얻은, 개똥쑥 발효 초고압 추출물을 함유하는 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 발효는 상기 개똥쑥을 효모균, 유산균 및 바실러스속 균으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균으로 20 내지 40 ℃의 온도 조건 하에서 pH 5 내지 7을 유지하면서, 1 내지 7일간 발효시켜 얻은 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   상기 초고압 처리는 100 내지 3000 MPa의 압력에서 40 내지 90 ℃의 온도로 1 내지 24 시간 동안 처리하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   상기 추출은 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸에테르, 부틸렌글리콜 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
5. 제1항에 있어서,
   상기 개똥쑥 발효 초고압 추출물은 상기 화장료 조성물의 전체 중량을 기준으로 0.0001 내지 30.0 중량%의 양으로 함유되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
6. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 항산화 효과를 주는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
7. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 주름 개선용으로 사용되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.