KR20150111699A - Method for Preparing Functional Raw Materials Using Stichopus japonicus - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 해삼 효소처리물을 유효성분으로 하는 기능성 원료 제조 방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a method for producing a functional raw material containing an active ingredient of a processed sea cucumber enzyme.
해삼(Stichopus japonicus )은 극피 동물에 속하며 전 세계적으로 1,500여 종 정도가 있으며 우리나라에는 4과 14종이 서식하고 있는 것으로 알려져 있다. 해삼은 우리나라 전 연안에 넓게 분포하고 있으며 이들 중 주로 식용으로 사용되는 돌기해삼은 색깔에 따라 청해삼, 홍해삼, 흑해삼으로 다르게 불리우고 있다. 해삼은 예로부터 “바다의 인삼”이라 하여 최고의 한약재로 사용되어 왔으며 최근 세계적으로 건강, 웰빙에 대한 관심이 높아지면서 자양강장효과, 항암효과, 비만예방, 고혈압 예방 등의 성분이 함유된 해삼의 소비가 중국, 일본을 비롯하여 우리나라에서도 급증하고 있는 실정이다. 이러한 이유로 해양 수산부에서는 우리나라 8대 웰빙 수산물의 하나로 해삼을 지정하고 있으며 지속적으로 그 중요성이 커지고 있다.Sea cucumber ( Stichopus japonicus ) belongs to the echinoderm, and there are about 1,500 species in the world, and 4 and 14 species are known to exist in Korea. Sea cucumbers are widely distributed throughout the coast of Korea. Among them, the sea cucumbers mainly used for edible purposes are differently called blue sea cucumber, red sea cucumber and black sea cucumber depending on their color. Sea cucumber has been used as the best herb medicine since ancient times as "Sea ginseng." With the increasing interest in health and wellness worldwide, consumption of sea cucumber containing ingredients such as nourishing tonic effect, anti-cancer effect, prevention of obesity, Is increasing rapidly in Korea, including China and Japan. For this reason, the Ministry of Maritime Affairs and Fisheries has designated sea cucumber as one of the eight well-being marine products in Korea and its importance is continuously increasing.
그러나 해삼은 점착성이 높은 당단백질로 구성되어 있으며 수분의 함량이 전체의 90%를 차지하고 있기 때문에 유통중에 쉽게 변성될 수 있다. 이에 따라 해삼은 그동안 생 것을 잡아 냉장보관한 후 며칠내로 먹거나 건조 또는 통조림 등의 형태로 가공하여 유통하였다. 그러나, 상기와 같이 건조할 경우 해삼 특유의 풍미를 유지하기 어렵고 육질이 두껍기 때문에 수분탈수 분량 등으로 인한 부패 촉진 현상이 초래되었으며 열건조시에는 영양가 파괴 등의 문제가 나타난다. 또한 통조림으로 가공되는 경우 통조림내의 용액 속에서 오랫동안 담겨져서 해삼 내 수분함량이 지나치게 많게 되고 따라서 씹힘성 등이 저하되며 신선한 맛을 맛볼 수 없을 뿐만 아니라 변성되기도 쉬운 단점이 있다. However, sea cucumber is composed of highly adhesive glycoproteins and can easily be denatured during distribution because the water content accounts for 90% of the total. Accordingly, the sea cucumber has been kept in the refrigerator for a few days, and then processed and distributed in the form of dried or canned food. However, when dried as described above, it is difficult to maintain the unique flavor of the sea cucumber, and since the meat is thick, the corruption is promoted due to the water dehydration amount and the like. In addition, when processed into canned food, it is contained in the solution in canned water for a long time, so that the water content in the sea cucumbers is excessively increased, and thus chewiness and the like are lowered, and fresh taste can not be tasted.
따라서, 영양학적 기능 또는 생리학적 작용에서 활용 가치가 높은 해삼을 편리하게 활용하기 위한 가공 방법의 개발이 요구되고 있다.
Therefore, it is required to develop a processing method for conveniently utilizing sea cucumbers having high utilization value in nutritional function or physiological action.
본 발명의 목적은 해삼을 이용한 기능성 원료의 제조 방법을 제공하는 데 있다.It is an object of the present invention to provide a method for producing a functional raw material using sea cucumber.
본 발명의 기타의 목적이나 구체적인 양태는 이하에서 제시될 것이다.
Other objects and specific embodiments of the present invention will be described below.
본 발명의 목적은 해삼을 이용한 기능성 원료의 제조 방법을 제공하는 데 있다.It is an object of the present invention to provide a method for producing a functional raw material using sea cucumber.
본 발명자들은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 내장이 제거된 해삼 분쇄물에 단백질 분해효소를 처리하고 여과농축하여 얻어진 해삼을 동결 건조하여 획득한 원료가 일반 해삼 추출물보다 항염, 미백 및 주름개선 등의 기능성 활성이 현저히 우수함을 확인함으로써 완성된 것이다.As shown in the following examples and experimental examples, the present inventors found that raw materials obtained by freeze-drying sea cucumbers obtained by treating proteinaceous enzyme with proteolytic enzymes and concentrating them by filtration, as compared with general sea cucumber extracts, And a wrinkle improvement and the like are remarkably excellent.
단백질 분해효소가 처리된 해삼 기능성 원료는 일반 해삼 추출물보다 생리학적 활성이 우수하며, 이것은 단백질 분해효소 처리 과정 중에서 여러 기능성 물질들이 새로 생성되거나 그러한 물질들의 생성이 증가, 보존력이 증가하였기 때문인 것으로 추정할 수 있다.The functional raw material of the sea cucumber treated with proteolytic enzyme is superior to the ordinary sea cucumber extract in physiological activity. This is presumed to be due to the fact that various functional substances are newly formed in the proteolytic enzyme treatment, .
본 발명의 해삼을 이용한 기능성 원료의 제조 방법은, 일 측면에 있어서는 (a) 해삼 분쇄물에 세린 프로테아제를 처리하는 단계, (b) 상기 세린 프로테아제 처리된 해삼을 여과 및 농축하는 단계, 및 (c) 상기 여과 및 농축된 해삼을 동결 건조하는 단계를 포함하여 구성된다.(A) treating the sea crumbs with serine protease; (b) filtering and concentrating the serine protease-treated sea cucumber; and (c) ), And lyophilizing the filtered and concentrated sea cucumber.
본 명세서에서 해삼(Stichopus japonicus)은 외피의 색깔에 따라 홍해삼, 청해삼, 흑해삼, 해파리해삼 등으로 구분해 부르며, 이들은 모두 같은 종이다. 몸은 앞뒤로 긴 원통 모양이고 등에 혹 모양의 돌기가 여러개 나 있다. 해삼의 폴리씨낭(Polian vesicle)은 가늘고 길며 선단이 뾰족하고, 알에는 두께 25um 내외의 젤라틴 피물을 지닌다. 수축성이 크고 자생력이 매우 강해 상처 후 손상된 부분의 치유력이 높다. The term " Stichopus " japonicus ) are divided into red sea ginseng, blue sea ginseng, black sea ginseng and jellyfish sea gins according to the color of the outer skin, all of the same species. The body is long cylindrical back and forth, and there are several lumps on the back. The Polian vesicle of the sea cucumber is elongated, pointed with a tip, and the egg has a gelatinous substance about 25um thick. It has high shrinkage and strong self-supporting ability, so it has high healing power after wound.
본 명세서에서 "해삼 분쇄물"이란 해삼을 세척한 후 세린 프로테아제를 처리하기 위하여 적절한 크기로 분쇄한 것을 말한다. 그 크기는 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 결정될 수 있으며 한정되지 아니한다. 또한 해삼 분쇄물은 전체 해삼을 사용할 수 있으나 아래의 실시예와 같이 내장을 제거한 해삼을 사용하는 것이 바람직하다. 일반적으로 내장 부위에는 효소를 포함하는 다량의 단백질들이 이미 존재하기 때문에 단백질 분해효소 처리시에 반응이 억제될 수 있으며 가공 시 오염의 가능성이 커진다.In this specification, "sea cucumber crushed product" refers to crushed sea cucumbers and crushed to a proper size for treating serine protease. The size of which can be determined within the ordinary skill in the art and is not limited. In addition, the whole sea cucumber can be used as the crushed sea cucumber, but it is preferable to use sea cucumbers with the viscera removed as in the following examples. In general, large amounts of proteins, including enzymes, are already present in the intestine, which can inhibit the reaction during proteolytic enzyme processing and increase the likelihood of contamination during processing.
본 명세서에서 "세린 프로테아제"(serine proteases)는 세린 아미노산 부위를 인지하여 펩타이드 간의 결합을 자르며 세린 엔도펩티다아제(serine endopeptidases)로도 알려져 있다(Hedstrom L. Chem Rev. 2002 Dec;102(12):4501-24.). 진핵생물과 원핵생물 모두에 존재하며 소화, 면역반응, 혈액 응고 작용 등 생체 내 다양한 생리활성에 관여한다. 세린 프로테아제는 계통학적, 구조학적 관점 등에 의하여 여러 분류로 나뉠 수 있으나 단백질 분해 활성을 보이기 위하여 세린을 인지하며 기능을 수행하는 공통점이 있다. 본 발명의 실시예에서는 subtilisin 계열의 세린 프로테아제를 사용하였으며 이는 비특이적인 단백질 분해효소이다(Ottesen Mm AND Svendsen I. Methods Enzymol.1970. 19: 199-215; Philipp M AND Bender ML. Mol. Cell. Biochem. 1983 51 (1): 5-32.). Subtilisin은 여러 알파 헬릭스(alpha0helix) 구조와 하나의 큰 베타 시트(beta-sheet)로 구성되어 있으며 chymotrypsin 계열 등의 다른 세린 프로테아제와는 구조적으로 차이를 보이나, 효소 촉매 부위 및 활성 부위(active site)에서는 유사성을 보인다. Subtilisin은 alcalase(알칼라아제), alcalase 0.6L, alcalase 2.5L, alcalase 2.4L ALK-enzyme, bacillopeptidase A, bacillopeptidase B, Bacillus subtilis alkaline proteinase bioprase, bioprase AL 15, bioprase APL 30, colistinase, subtilisin J, subtilisin S41, subtilisin Sendai, subtilisin GX, subtilisin E, subtilisin BL, genenase I, esperase, maxatase, thermoase PC 10, protease XXVII, thermoase, superase, subtilisin DY, subtilopeptidase, SP 266, savinase 8.0L, savinase 4.0T, kazusase, protease VIII, opticlean, Bacillus subtilis alkaline proteinase, protin A 3L, savinase, savinase 16.0L, savinase 32.0 L EX, rientase 10B, protease S, serine endopeptidase 등으로 불리우고 있다. Subtilisin은 여러 형태로 다양한 회사에서 상품화되어 판매되고 있다. Sigma 사의 Proteinase from Bacillus licheniformis Type VIII(P5380), Alcalase®(P4860), Proteinase bacterial Type XXIV(P8038) 제품, milipore사의 Subtilisin Carlsberg, Bacillus licheniformis(572909), novozyme 사의 Alcalase® 2.4 L 제품 등이 존재하며 일반적으로 효소가 활성을 나타내는 온도의 범위는 30℃ ~ 40℃ 정도이나 해당 효소들의 활성 범위는 20℃ ~ 80℃ 정도이다. Serine proteases herein are known as serine endopeptidases that recognize serine amino acid sites and cleave bonds between peptides (Hedstrom L. Chem Rev. 2002 Dec; 102 (12): 4501- 24.). It is present in both eukaryotes and prokaryotes, and is involved in various physiological activities in vivo such as digestion, immune reaction, and blood coagulation. Although serine proteases can be divided into various classes according to their phylogenetic and structural aspects, they have the common feature of perceiving and functioning serine to exhibit proteolytic activity. In the examples of the present invention, a subtilisin serine protease was used, which is a nonspecific protease (Ottesen Mm AND Svendsen I. Methods Enzymol. 1970. 19: 199-215; Philipp M AND Bender ML. 1983 51 (1): 5-32.). Subtilisin is composed of several alpha-helical structures and one large beta-sheet, and is structurally different from other serine proteases such as the chymotrypsin family. However, the enzyme catalytic site and the active site Similarity. Bacillus subtilis alkaline phosphatase, Bacillus subtilis alkaline phosphatase, Bacillus subtilis alkaline phosphatase, Bacillus subtilis alkaline phosphatase, Bacillus subtilis alkaline phosphatase, Bacillus subtilis alkaline phosphatase, Protease XXVII, thermoase, superase, subtilisin DY, subtilispidase, SP 266, savinase 8.0L, savinase 4.0T, kazusase, subtilisin G, subtilisin E, subtilisin BL, genenase I, esperase, maxatase, protease VIII, opticlean, Bacillus subtilis alkaline proteinase, protin A 3L, savinase, savinase 16.0L, savinase 32.0 L EX, rientase 10B, protease S and serine endopeptidase. Subtilisin has been commercialized and sold in various forms in various companies. Proteinase from Bacillus licheniformis Type VIII (P5380), Alcalase® (P4860), Proteinase bacterial Type XXIV (P8038), Milipore's Subtilisin Carlsberg, Bacillus licheniformis (572909) and novozyme's Alcalase® 2.4 L The range of temperature at which the enzyme is active is about 30 ° C to 40 ° C, but the activity range of the enzyme is about 20 ° C to 80 ° C.
세린 프로테아제를 처리하기 위한 적정 효소 반응 조건은 효소의 농도와 온도 및 처리 시간 등이 있으며, 일반적으로 효소의 농도가 높은 경우 처리 시간이 짧아질 수 있으나 비용 및 제조기간이 고려되어야 한다. 본 발명의 실시예에서는 내장이 제거된 분쇄 해삼의 부피와 동량의 물을 첨가하였으며 노보자임(novozymes)의 알칼라아제 2.4L(Alcalase® 2.4 L, 2.4 AU-A/g)를 처리하였다. 첨가하는 알칼라아제의 양은 임의적으로 선택 가능하나 효소가 활성을 나타낼 수 있는 농도와 반응의 효율성을 고려할 때 총 부피의 0.01%(v/v) ~ 5%(v/v)의 농도 범위가 바람직할 수 있으며 0.1%(v/v) ~ 1%(v/v)의 농도 범위가 더욱 바람직하다. 상기 효소의 처리 온도의 범위는 20℃ ~ 80℃ 인 것이 바람직하며 55℃ ~ 70℃ 범위인 것이 더욱 바람직하다. 또한 적절한 효소 처리 시간은 처리 농도 및 온도에 의하여 결정될 수 있는데 너무 짧은 경우에는 효소의 반응이 충분하게 이루어지지 않을 수 있으며 너무 오래 처리할 경우에는 단백질 변성, 부패가 일어나며 제조기간이 오래 걸려 비효율적일 수 있다. 바람직하게는 30분 내지 12시간 동안 효소를 처리할 수 있으며 더욱 바람직하게는 1시간 내지 3시간 동안 처리할 수 있다. 효소처리 후 반응을 비활성화하기 위하여 고온 처리, 계면활성제 처리, 억제효소 처리 등을 수행할 수 있으며 본 발명의 실시예에서는 90℃에서 20분간 유지하였다.The optimum enzyme reaction conditions for treating serine protease are enzyme concentration, temperature, and treatment time. In general, when enzyme concentration is high, treatment time may be shortened, but cost and manufacturing period should be considered. In the examples of the present invention, water equivalent to the volume of the ground sea cucumber whose internal organs were removed was added, and 2.4 liters of novozymes (Alcalase® 2.4 L, 2.4 AU-A / g) were treated. The amount of the alkalase to be added may be arbitrarily selected, but a concentration range of 0.01% (v / v) to 5% (v / v) of the total volume is preferable considering the concentration at which the enzyme can exhibit its activity and the efficiency of the reaction And a concentration range of 0.1% (v / v) to 1% (v / v) is more preferable. The range of the treatment temperature of the enzyme is preferably 20 ° C to 80 ° C, and more preferably 55 ° C to 70 ° C. In addition, the appropriate enzyme treatment time can be determined by the treatment concentration and temperature. If the enzyme treatment time is too short, the enzyme reaction may not be sufficiently performed. If it is treated for too long, protein denaturation and decay may occur. have. Preferably 30 minutes to 12 hours, and more preferably 1 hour to 3 hours. In order to inactivate the reaction after the enzyme treatment, high temperature treatment, surfactant treatment, inhibition enzyme treatment and the like can be carried out. In the example of the present invention, the reaction was maintained at 90 ° C for 20 minutes.
본 명세서에서, "여과"는 고체와 액체 혼합물 중 일정 크기 이상의 물질을 분리시키는 작업으로, 중력여과, 감압여과, 가압여과 방식 등이 존재하며 여과체, 여과지, 여과포, 자동 흡입 여과기, 압착 여과기 등의 통상의 방법을 사용하여 수행할 수 있다. 또한 여과를 용이하게 하기 위하여 식품 첨가물 공전에 수록된 이산화규소, 규산칼슘, 규조토, 벤토나이트, 활성탄 등의 여과 보조제를 1종 이상 첨가할 수 있다.In this specification, "filtration" is an operation for separating a substance having a predetermined size or more from a mixture of a solid and a liquid, and there is a gravity filtration, a reduced pressure filtration, a pressure filtration system and the like, and a filtration body, a filter paper, a filter cloth, an automatic suction filter, Can be carried out using conventional methods. In order to facilitate filtration, at least one filter aid such as silicon dioxide, calcium silicate, diatomaceous earth, bentonite, and activated carbon may be added to the food additives.
또한 본 명세서에서, "농축"이란 수분의 함량이 높은 물질에서 고형물의 농도를 높이는 작업으로 상압가열농축 및 진공농축 등의 증발농축, 물을 얼음 결정으로 석출시키는 냉동농축, 한외여과 및 역삼투를 사용한 막농축 등의 통상의 방법을 사용하여 수행할 수 있다. In the present specification, the term "concentration" refers to an operation for increasing the concentration of solids in a substance having a high water content, such as evaporation concentration such as heating at atmospheric pressure and vacuum concentration, freezing concentration in which water is precipitated with ice crystals, ultrafiltration and reverse osmosis And concentration of the used membrane, and the like.
본 명세서에서, "동결 건조"란 예비 동결과정을 거칠 수 있으며 시중의 동결건조기 등 제품을 사용하여 기존의 식품 동결건조 조건과 동일하게 동결건조하여도 무방하다. 동결 건조 후 분쇄방법은 분쇄효율 및 분쇄입자의 고른 산포율을 높이기 위하여 동결건조물을 그대로 분쇄할 수 있는 시중의 냉동 파쇄 및 분쇄방식의 식품분쇄기를 사용할 수 있다. 또한 분쇄물을 망체에 통과시켜 통상 식품 및 화장품 원료로 사용하기에 적합한 크기의 분말을 획득할 수 있으며 그 크기는 한정되지 아니한다.In the present specification, the term "freeze-drying" may be a preliminary freezing process, and freeze-drying may be carried out in the same manner as the conventional freeze-drying conditions using a commercially available freeze- In the method of pulverization after freeze-drying, a commercially available freezer pulverizing and grinding type food pulverizer capable of pulverizing the freeze-dried material as it is can be used in order to increase the grinding efficiency and the uniform scattering rate of the pulverized particles. The pulverized material can be passed through a netting to obtain powders of a size suitable for use as food and cosmetic raw materials, and the size thereof is not limited.
본 명세서에서, 상기 "기능성"이란 인체의 생리학적 작용에 있어서 유용한 효과를 말한다. 이러한 기능성으로서, 아래의 실험예에서 확인된 항염 활성, 미백 활성, 주름개선 활성 이외에, 예컨대 항암 활성(대한민국 공개특허공보 제 10-2011-0135908호), 피부 자극 완화 활성, 피부 보습 활성, 피부 상처 개선 효과(대한민국 공개특허공보 제 10-2011-0084132호), 항균 활성(대한민국 공개특허공보 제10-2012-0033535호) 등을 들 수 있다. In the present specification, the term "functional" refers to a useful effect on the physiological function of the human body. In addition to the anti-inflammatory activity, whitening activity and wrinkle-reducing activity confirmed in the following Experimental Examples, anticancer activity (Korean Patent Publication No. 10-2011-0135908), skin irritation relaxation activity, skin moisturizing activity, skin wounds (Korean Patent Publication No. 10-2011-0084132), and antibacterial activity (Korean Patent Publication No. 10-2012-0033535).
다른 측면에 있어서, 본 발명은 (a) 해삼 분쇄물에 세린 프로테아제를 처리하는 단계, (b) 상기 세린 프로테아제 처리된 해삼을 여과 및 농축하는 단계, 및 (c) 상기 여과 및 농축된 해삼을 동결 건조하는 단계를 통하여 획득한 해삼을 이용한 기능성 원료를 유효성분으로 하는 식품 조성물에 관한 것이다.In another aspect, the present invention provides a method for treating sea cucumber, comprising the steps of: (a) treating the sea crumbs with serine protease, (b) filtering and concentrating the serine protease treated sea cucumber, and (c) The present invention relates to a food composition containing a functional raw material using sea cucumber obtained through a drying step as an active ingredient.
본 발명에 의하여 제공되는 식품 조성물은 항염증 활성을 지니는 것을 특징으로 한다. The food composition provided by the present invention is characterized by having anti-inflammatory activity.
본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.As used herein, the term " active ingredient "alone means an ingredient which exhibits the desired activity or which can exhibit activity together with a carrier which itself is not active.
본 발명의 식품 조성물은 건강 보조식품, 건강기능성식품, 특수 영양 보충용 식품, 기능성 음료 등이 포함될 수 있다.The food composition of the present invention may include health supplements, health functional foods, special nutritional supplement foods, functional beverages and the like.
본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 감미제, 풍미제, 생리활성 성분, 미네랄 등이 포함될 수 있다.The food composition of the present invention may contain sweetening agents, flavoring agents, physiologically active ingredients, minerals and the like in addition to the active ingredients thereof.
감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다. Sweetening agents may be used in an amount that sweetens the food in a suitable manner, and may be natural or synthetic. Preferably, natural sweeteners are used. Examples of natural sweeteners include sugar sweeteners such as corn syrup solids, honey, sucrose, fructose, lactose and maltose.
풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다. Flavors may be used to enhance taste or flavor, both natural and synthetic. Preferably, a natural one is used. When using natural ones, the purpose of nutritional fortification can be performed in addition to the flavor. Examples of natural flavoring agents include those obtained from apples, lemons, citrus fruits, grapes, strawberries, peaches, and the like, or those obtained from green tea leaves, Asiatica, Daegu, Cinnamon, Chrysanthemum leaves and Jasmine. Also, those obtained from ginseng (red ginseng), bamboo shoots, aloe vera, banks and the like can be used. The natural flavoring agent may be a liquid concentrate or a solid form of extract. Synthetic flavors may be used depending on the case, and synthetic flavors such as esters, alcohols, aldehydes, terpenes and the like may be used.
생리 활성 물질로서는 카테킨, 에피카테킨, 갈로가테킨, 에피갈로카테킨 등의 카테킨류나, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤, 칼시페롤, 티아민, 리보플라빈 등의 비타민류 등이 사용될 수 있다.Examples of the physiologically active substance include catechins such as catechin, epicatechin, gallocatechin and epigallocatechin, and vitamins such as retinol, ascorbic acid, tocopherol, calciferol, thiamine and riboflavin.
미네랄로서는 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물, 게르마늄, 요오드, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 칼륨, 셀레늄, 규소, 나트륨, 황, 바나듐, 아연 등이 사용될 수 있다.As the mineral, calcium, magnesium, chromium, cobalt, copper, fluoride, germanium, iodine, iron, lithium, magnesium, manganese, molybdenum, phosphorus, potassium, selenium, silicon, sodium, sulfur, vanadium and zinc can be used.
또한 본 발명의 식품 조성물은 상기 감미제 등 이외에도 필요에 따라 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등을 포함할 수 있다. In addition, the food composition of the present invention may contain preservatives, emulsifiers, acidifiers, thickeners and the like as needed in addition to the above sweeteners.
이러한 보존제, 유화제 등은 그것이 첨가되는 용도를 달성할 수 있는 한 극미량으로 첨가되어 사용되는 것이 바람직하다. 극미량이란 수치적으로 표현할 때 식품 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.0005중량％ 내지 약 0.5중량％ 범위를 의미한다.Such preservatives, emulsifiers and the like are preferably added in a very small amount as long as they can attain an application to which they are added. The term " trace amount " means, when expressed numerically, in the range of 0.0005% by weight to about 0.5% by weight based on the total weight of the food composition.
사용될 수 있는 보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등을 들 수 있다. Examples of the preservative which can be used include calcium sodium sorbate, sodium sorbate, potassium sorbate, calcium benzoate, sodium benzoate, potassium benzoate and EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid).
사용될 수 있는 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다.Examples of the emulsifier which can be used include acacia gum, carboxymethyl cellulose, xanthan gum, pectin and the like.
사용될 수 있는 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등을 들 수 있다. 이러한 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.Examples of the acidulant that can be used include acid, malic acid, fumaric acid, adipic acid, phosphoric acid, gluconic acid, tartaric acid, ascorbic acid, acetic acid, and phosphoric acid. Such an acidulant may be added so that the food composition has a proper acidity for the purpose of inhibiting the growth of microorganisms other than the purpose of enhancing the taste.
사용될 수 있는 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등을 들 수 있다. Agents that may be used include suspending agents, sedimentation agents, gel formers, bulking agents and the like.
또한 본 발명의 식품 조성물은 향미나 기호성을 향상시키고 기능성을 향상시키기 위하여 천연물 유래의 분말 또는 추출물을 포함할 수 있는데, 선지 분말 또는 추출물, 콩나물 분말 또는 추출물, 조개 분말 또는 추출물, 굴 분말 또는 추출물, 산미나리 분말 또는 추출물, 무 즙 또는 추출물, 오이 즙 또는 추출물, 부추 즙 또는 추출물, 시금치 즙 또는 추출물, 연근 즙 또는 추출물, 칡 즙 또는 추출물, 솔잎 즙 또는 추출물, 인삼 즙 또는 추출물, 백화사설초 분말 또는 추출물, 감초 분말 또는 추출물, 갈화 분말 또는 추출물, 갈근 분말 또는 추출물, 사인 분말 또는 추출물, 박 분말 또는 추출물, 생강 분말 또는 추출물, 대추 분말 또는 추출물, 인진 분말 또는 추출물, 지구자 분말 또는 추출물, 수비계 분말 또는 추출물, 백출 분말 또는 추출물, 저령 분말 또는 추출물, 진피(진귤의 껍질) 분말 또는 추출물, 구기자 분말 또는 추출물, 녹차 분말 또는 추출물, 오미자 분말 또는 추출물, 헛개나무 분말 또는 추출물, 지치 분말 또는 추출물, 노근 분말 또는 추출물, 계피 분말 또는 추출물, 데커시놀 등이 예시될 수 있다. 이러한 추출물은 추출 대상을 혼합하여 얻어질 수도 있다.In addition, the food composition of the present invention may contain a powder or extract derived from a natural product in order to improve the flavor or palatability and improve the functionality. Examples of the powder include a pregelatinized powder or extract, a soybean powder or extract, a shell powder or extract, Ginseng extract or extract, cucumber juice or extract, leek juice or extract, spinach juice or extract, lotus juice or extract, juice or extract, pine needles or extract, ginseng juice or extract, Extracts, licorice powder or extracts, garlic powder or extracts, powder or extract of purple powder, powder or extract of sinensis, powder or extract of sinensis, powder or extract of ginger, powder or extract of ginger, jujube powder or extract, Powder or extract, dried powder or extract, Extracts, dandelion powder or extract, ginger powder or extract, green tea powder or extract, omija powder or extract, hinoki powder or extract, dirt powder or extract, oak root powder or extract, cinnamon powder or extract, A knol and the like can be exemplified. Such an extract may be obtained by mixing the object to be extracted.
본 발명의 식품 조성물은 분말 자체, 착즙액 자체, 음료, 정제, 현탁액, 과립, 에멀젼, 캡슐, 시럽 등의 형태로 제형화될 수 있다.The food composition of the present invention may be formulated in the form of powder itself, juice itself, beverage, tablet, suspension, granule, emulsion, capsule, syrup and the like.
또한 본 발명은 (a) 해삼 분쇄물에 세린 프로테아제를 처리하는 단계, (b) 상기 세린 프로테아제 처리된 해삼을 여과 및 농축하는 단계, 및 (c) 상기 여과 및 농축된 해삼을 동결 건조하는 단계를 통하여 획득한 해삼을 이용한 기능성 원료를 유효성분으로 하는 화장품 조성물에 관한 것이다. The present invention also relates to a method for producing a sea cucumber which comprises the steps of (a) treating cereal protease with a crushed sea cucumber, (b) filtering and concentrating the serine protease-treated sea cucumber, and (c) lyophilizing the filtered and concentrated sea cucumber The present invention relates to a cosmetic composition containing as an active ingredient a functional raw material using sea cucumbers.
본 발명에 의하여 제공되는 화장품 조성물은 항염증 활성, 미백 활성 및 주름개선 활성을 지니는 것을 특징으로 한다. The cosmetic composition provided by the present invention is characterized by having anti-inflammatory activity, whitening activity and wrinkle-reducing activity.
본 발명의 화장품 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩 또는 분말 등의 형태로 제조될 수 있다.The cosmetic compositions of the present invention can be prepared in various forms including, for example, emulsions, lotions, creams (oil-in-water type, oil-in-water type, multiphase), solutions, suspensions (anhydrous and aqueous) ), A gel, a mask, a pack or a powder or the like.
본 발명의 화장품 조성물은 그 유효성분 이외에 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다. The cosmetic composition of the present invention may contain an acceptable carrier in cosmetic preparations in addition to the active ingredients thereof.
여기서 "화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다.As used herein, the term " acceptable carrier for cosmetic preparation "refers to a compound or composition which is already known and used in the cosmetic preparations, or which is a compound or composition to be developed in the future, and which has no toxicity, instability or irritability It says.
상기 담체는 본 발명의 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 0.1 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 0.1 중량% 내지 약 5 중량 %로 포함될 수 있다. The carrier may be included in the composition of the present invention in an amount of from 0.1% by weight to about 99.99% by weight, preferably from about 0.1% by weight to about 5% by weight of the composition, based on the total weight thereof.
그러나 상기 비율은 본 발명의 화장품의 제조되는 전술한 바의 형태에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴이나 손)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다. However, since the above ratio depends on the above-described form of the cosmetic product of the present invention and its specific application area (face or hands) or its preferable application amount, the ratio is in any aspect the range of the present invention Should not be construed as limiting.
한편 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. Examples of the carrier include alcohols, oils, surfactants, fatty acids, silicone oils, humectants, moisturizers, viscosifiers, emulsifiers, stabilizers, sunscreens, coloring agents and perfumes.
상기 담체로서 사용될 수 있는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료의 성분들은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.The components of the alcohol, oil, surfactant, fatty acid, silicone oil, wetting agent, moisturizer, viscosifier, emulsion, stabilizer, sunscreen agent, coloring agent and fragrance which can be used as the carrier are already well known in the art, The substance / composition can be selected and used.
본 명세서에서 특별히 정의되지 아니한 용어는 국어사전적 의미나 당업계에서 일반적으로 통용되는 의미를 따른다.
Terms that are not specifically defined in this specification are intended to have a Korean national meaning or a meaning commonly used in the art.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 해삼을 이용한 기능성 원료 제조 방법을 제공할 수 있다. 본 발명의 기능성 원료는 식품이나 화장품으로 제품화될 수 있다.As described above, according to the present invention, it is possible to provide a method for producing a functional raw material using sea cucumber. The functional raw material of the present invention can be produced into food or cosmetics.
본 발명의 해삼 효소처리물을 이용한 기능성 원료는 일반 해삼 추출물보다 생리학적 활성이 우수하며, 이것은 단백질 분해효소 처리 과정 중에서 여러 기능성 물질들이 새로 생성되거나 그러한 물질들의 생성이 증가, 보존력이 증가하였기 때문인 것으로 보인다.
The functional raw material using the enzyme-treated sea cucumber of the present invention is superior to the general sea cucumber extract in physiological activity. This is because various functional materials are newly formed in the proteolytic enzyme treatment, see.
이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described with reference to Examples and Experimental Examples. However, the scope of the present invention is not limited by these Examples and Experimental Examples.
<< 실시예Example > > 해삼을 이용한 기능성 원료 제조 방법Method of manufacturing functional materials using sea cucumber
해삼의 내장을 제거 후 분쇄기를 사용하여 분쇄물을 수득한 후에 물을 1.0배 첨가하여 반응액을 준비하였다. After removing the viscera of the sea cucumber, a pulverized product was obtained using a pulverizer, and water was added 1.0-fold to prepare a reaction solution.
그 후 세린 프로테아제(serine proteases)인 알칼라아제 2.4L(novozymes)을 총 부피의 0.5%(v/v)를 첨가하여 온도 60±5℃에서 2시간-3시간을 유지하면 용액 상태로 변환되었다. 이어서 효소의 비활성화를 시키기 위하여 온도 90℃에서 20분간 교반하였다.After that, 0.5% (v / v) of the total volume of alginase 2.4 l (novozymes), serine proteases, was added and maintained at 60 ± 5 ° C for 2 hours to 3 hours, . Followed by stirring at 90 DEG C for 20 minutes to inactivate the enzyme.
반응이 끝난 다음 여과성을 개선하기 위해서 여과보조제를 0.5%~1.0%(w/v) 첨가하였으며 이취와 탈색효과를 지닌 활성탄(A.C)을 0.1%(w/v)를 첨가하였다. 용액을 여과하기 위해 필터프레스(압착여과기)를 통과하여 여액을 수득하였다. 용액의 고형분 함량은 5~6%선이며, 진공농축기를 사용하여 농축액(고형분 30%정도)을 조정하여 획득하였다.After the reaction was completed, 0.5% to 1.0% (w / v) of a filter aid was added to improve the filterability and 0.1% (w / v) of deodorant and decolorizing activated carbon (A.C) was added. The filtrate was passed through a filter press (compression filter) to filter the solution. The solids content of the solution was 5-6%, and was obtained by adjusting the concentrate (about 30% solids) using a vacuum concentrator.
동결건조 과정을 하기 위해서 예비동결(-70~-80℃) 상태에서 하룻밤 동안 방치하여 두었다. 동결된 해삼 엑기스 분말액을 동결건조기(-70~-80℃)에서 48~72시간 동안 건조 공정을 거쳤다.In order to perform the lyophilization process, it was allowed to stand overnight in pre-freezing (-70 to -80 ° C) state. The frozen sea cucumber extract powder was dried in a freeze dryer (-70 to -80 ° C) for 48 to 72 hours.
동결건조분을 분쇄기 및 mesh(망체)를 통과시켜서 해삼을 이용한 기능성 원료를 엑기스 분말 형태로 획득하였다.The lyophilized powder was passed through a pulverizer and a mesh to obtain a functional raw material using sea cucumber as an extract powder.
<< 비교예Comparative Example > > 해삼 추출물 제조방법How to make sea cucumber extract
해삼에 70%(v/v) 에탄올을 첨가한 후 24시간 동안 추출하였다70% (v / v) ethanol was added to sea cucumber and extracted for 24 hours
상기 추출물을 필터프레스를 통과하도록 하여 여과하였으며 동결건조 과정을 하기 위해서 동결건조 과정을 하기 위해서 예비동결(-70~-80℃) 상태에서 하룻밤 동안 방치하여 두었다.The extract was filtered through a filter press and allowed to freeze overnight (-70 to -80 ° C) for freeze-drying in order to freeze-dry.
동결된 해삼 추축물을 동결건조기(-70~-80℃)에서 48~72시간 동안 건조 공정을 거쳤다.Frozen sea cucumber shrubs were dried in a freeze dryer (-70 to -80 ° C) for 48 to 72 hours.
동결건조분을 분쇄기 및 mesh(망체)를 통과시켜서 추출물 분말을 획득하였다.The lyophilized powder was passed through a pulverizer and a mesh to obtain an extract powder.
<< 실험예Experimental Example > > 해삼을 이용한 기능성 원료의 활성 확인Identification of activity of functional raw materials using sea cucumber
<< 실험예Experimental Example 1> 1> 항염 활성Anti-inflammatory activity
상기 실시예를 통하여 제조한 해삼 기능성 원료 및 비교예의 해삼 추출물을 사용하여 항염 활성 확인 실험을 수행하였다.Tests for confirming anti-inflammatory activity were carried out using the functional ingredients of sea cucumber and the sea cucumber extract of Comparative Example prepared through the above examples.
<1-1> 세포 독성 실험 <1-1> Cytotoxicity experiment
상기 실시예를 통하여 제조한 원료의 세포 독성 여부를 확인하기 위하여 RAW 264.7 대식세포주를 배양하여 사용하였다. RAW 264.7 대식세포주는 면역에 관여하는 세포로, 통상적으로 염증 반응과 관련된 물질의 활성을 측정하기 위하여 사용하는 세포이다. 우태아혈청(fetal bovine serum)이 10% 첨가된 DMEM(Dulbecco's modified Eagle medium) 배지에서 RAW 264.7 세포를 96웰 플레이트에 4.0X10^4 로 분주하고 5% 이산화탄소, 37℃ 항온기에서 12시간 동안 배양하였다.RAW 264.7 macrophage cell line was cultured and used to confirm cytotoxicity of the raw material prepared through the above examples. RAW 264.7 A macrophage cell line is a cell involved in immunity, usually a cell used for measuring the activity of a substance involved in an inflammatory reaction. RAW 264.7 cells were plated in 96-well plates at 4.0 × 10 4 in DMEM supplemented with 10% fetal bovine serum (Dulbecco's modified Eagle medium), and cultured in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. for 12 hours .
세포가 안정화된 후에 각 시료를 0, 10, 50, 100ug/ml의 농도로 처리하고 24시간 동안 배양한 후, WST-1 assay kit를 사용하여 반응시켰다. 450nm에서 흡광도를 측정하였으며 아무것도 처리하지 않은 군(0ug/ml)에 대한 백분율로 세포 생존율을 [표 1]에 나타내었다.After the cells were stabilized, each sample was treated at 0, 10, 50, and 100 ug / ml, cultured for 24 hours, and then reacted using the WST-1 assay kit. The absorbance at 450 nm was measured and the cell survival rate as a percentage of the untreated group (0 ug / ml) is shown in Table 1.
상기 [표 1]에서 확인할 수 있듯이, 실시예의 해삼 효소처리물과 비교예의 해삼 추출물은 세포 독성을 10 ~ 100ug/ml 농도 범위 내에서 세포 독성을 나타내지 않음을 알 수 있다. As shown in the above Table 1, it can be seen that the treated sea cucumber enzyme of the example and the sea cucumber extract of the comparative example do not show cytotoxicity within a concentration range of 10 to 100 ug / ml.
<1-2> NO 생성 억제 효과 확인 <1-2> Confirmation of inhibitory effect on NO formation
LPS(lipopolysaccharide)는 대식세포에서 염증반응을 일으키며 이에 따라 과산화질소 및 NF-α(Tumor necrosis factor-α), IL-6(Interleukin-6), IL-1β(Interleukin-1β) 등과 같은 염증성 사이토카인을 생성하는 작용이 알려져 있다. LPS (lipopolysaccharide) causes an inflammatory response in macrophages, and thus inflammatory cytokines such as NOS and NF-α, IL-6 (Interleukin-6) and IL-1β (Interleukin-1β) Is known.
상기 실시예를 통하여 제조한 해삼 기능성 원료의 항염효과를 확인하기 위하여 RAW 264.7 대식세포주를 사용하여 NO 생성을 확인하는 실험을 수행하였다. RAW 264.7 세포를 1.0 X 10^4 으로 96웰 플레이트에 분주하고 24시간 동안 배양한 후 각 시료를 0, 10, 50, 100ug/ml의 농도로 처리하였다. 동시에 LPS를 1ug/ml의 농도로 처리하였으며 24시간 동안 추가로 배양하였다. 배양액으로 유리되는 NO의 양을 확인하기 위하여 50ul의 배양액을 동량의 그리스 시약(Griess reagent, Sigma사)과 혼합하였으며 15분간 상온에서 반응시킨 후 ELISA를 이용하여 540 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 검량선은 NaNO3를 사용하여 작성하였다. 아무것도 처리하지 않은 군(0ug/ml)에 대한 백분율로 NO 생성율을 하기의 [표 2]에 나타내었다.In order to confirm the anti-inflammatory effect of the functional ingredients of the sea cucumber prepared through the above examples, experiments were conducted to confirm NO production using RAW 264.7 macrophage line. RAW 264.7 cells were seeded in 96-well plates at 1.0 × 10 ^ 4 and cultured for 24 hours. Each sample was treated at 0, 10, 50, and 100 μg / ml. At the same time, LPS was treated at a concentration of 1 ug / ml and further cultured for 24 hours. To determine the amount of NO liberated in the culture medium, 50 ul of the culture solution was mixed with the same amount of a grease reagent (Griess reagent, Sigma), reacted at room temperature for 15 minutes, and the absorbance at 540 nm was measured by ELISA. The calibration curve was prepared using NaNO3. The NO production rate as a percentage of the non-treated group (0 ug / ml) is shown in Table 2 below.
상기 [표 2]에 나타나듯이, 실시예를 통하여 제조한 해삼 기능성 원료를 사용하였을 경우 대식세포의 NO 생성이 감소한 것을 확인할 수 있었다.As shown in the above Table 2, when the functional raw material of sea cucumber prepared by the examples was used, it was confirmed that NO production of macrophages was decreased.
<1-3> 염증성 사이토카인 분비 억제효과 확인 <1-3> Confirmation of inflammatory cytokine secretion inhibitory effect
상기 실시예를 통하여 제조한 해삼 기능성 원료가 염증성 사이토카인 분비에 끼치는 영향을 확인하기 위하여 RAW 264.7 세포에서 IL-6 및 IL-8의 생성량을 확인하였다. RAW 264.7 세포를 2.0 X 10^5 으로 24웰 플레이트에 분주하고 24시간 동안 배양한 후 각 시료를 0, 10, 50, 100ug/ml의 농도로 처리하였다. 동시에 LPS를 1ug/ml의 농도로 처리하였으며 24시간 동안 추가로 배양한 후 ELISA 방법(R&D systems)을 이용하여 450nm에서 IL-6 및 IL-8의 농도를 측정하였다. 해당 결과를 아무것도 처리하지 않은 군(0ug/ml)에 대한 백분율로 하기의 [표 3] 및 [표 4]에 나타내었다.The amount of IL-6 and IL-8 produced in the RAW 264.7 cells was determined in order to confirm the effect of the functional ingredients of the sea cucumber prepared by the above examples on inflammatory cytokine secretion. RAW 264.7 cells were seeded in 24-well plates at 2.0 × 10 ^ 5 and cultured for 24 hours. Each sample was treated at 0, 10, 50, and 100 μg / ml. At the same time, LPS was treated at a concentration of 1 ug / ml and further cultured for 24 hours. IL-6 and IL-8 concentrations were measured at 450 nm using ELISA (R & D systems). The results are shown in the following [Table 3] and [Table 4] as a percentage of the untreated group (0 ug / ml).
상기 [표 4] 및 [표 5]에서 나타나듯이, IL-6 및 IL-8 염증성 사이토카인의 분비가 실시예의 해삼 기능성 원료를 사용하였을 경우에 비교예에 비하여 확연하게 감소하였다.As shown in [Table 4] and [Table 5], secretion of IL-6 and IL-8 inflammatory cytokines was markedly decreased when the functional material of the sea cucumber of the Example was used.
따라서, 본 발명의 해삼 기능성 원료를 사용하는 경우, 해삼 일반 추출물보다 뛰어난 항염 활성을 보이는 것을 확인할 수 있다.Therefore, when the functional raw material of the sea cucumber of the present invention is used, it can be confirmed that it exhibits superior anti-inflammatory activity than the ordinary extract of sea cucumber.
<< 실험예Experimental Example 2> 2> 피부 미백 활성Skin whitening activity
상기 실시예를 통하여 제조한 해삼 기능성 원료 및 비교예의 해삼 추출물을 사용하여 피부 미백 활성 확인 실험을 수행하였다. The skin whitening activity confirmation experiment was carried out using the functional ingredients of the sea cucumber prepared by the above examples and the sea cucumber extract of the comparative example.
피부의 색은 혈관 분포와 혈색소, 각질층의 두께 및 카로틴, 멜라닌(melanin) 등 여러가지에 의하여 좌우되는데 멜라닌의 분포상태 및 양이 주된 영향을 끼친다. 따라서 미백 효과를 검증하기 위해서는 멜라닌 생성 억제 여부를 증명하는 것이 중요하다.Skin color is influenced by various factors such as vascular distribution, hemoglobin, thickness of stratum corneum, carotene, melanin, and the distribution and state of melanin. Therefore, it is important to demonstrate inhibition of melanin production in order to verify the whitening effect.
B16F10 마우스 멜라노마(melanoma) 세포를 6웰 플레이트에 5.0×10^4 cell/㎖씩 분주하였으며 10 % FBS와 1 %의 항생제를 첨가한 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO2로 5% 농도의 CO2 배양기에 37℃로 24시간 동안 배양하였다. 배양했다. 다음날, 기존의 배지를 제거하고 새로운 배지에 시료를 농도별(0, 10, 50, 100ug/ml)로 멜라닌 생성 반응을 유도하는 α-MSH(200nM)와 함께 처리하였다. 2일간 배양 후 새 배지로 교체하여 2일간 더 배양하였다. 배양액을 제거한 후 인산완충용액(PBS)로 2회 세척하였으며 10% 디메틸설폭시화물(dimethyl sulfoxide, DMSO)가 포함된 1 N 수산화나트륨(NaOH)을 처리하여 80℃에서 한 시간 동안 배양하였다. 그런 후 마이크로플레이트 리더(microplate reader)를 이용하여 475 nm에서 흡광도를 측정하였다. 합성한 멜라닌 용액을 이용하여 스탠다드 곡선을 그린 후, 측정값을 대입하여 멜라닌 생성량을 계산하였으며 아무것도 처리하지 않은 군(0ug/ml)에 대한 백분율 평균값을 [표 6]에 나타내었다. α-MSH을 처리하지 않은 군을 대조군으로 사용하였다.B16F10 mouse melanoma cells were seeded at a density of 5.0 × 10 4 cells / ml in a 6-well plate and cultured in DMEM medium supplemented with 10% FBS and 1% antibiotic at 37 ° C in 5% CO2 at 5% Lt; RTI ID = 0.0 > 37 C < / RTI > for 24 hours. Lt; / RTI > On the next day, the old medium was removed and the sample was treated with α-MSH (200 nM) to induce melanogenesis by concentrations (0, 10, 50, 100 ug / ml) in fresh medium. After 2 days of incubation, the medium was replaced with fresh medium and cultured for 2 days. After the culture medium was removed, the cells were washed twice with phosphate buffered saline (PBS), treated with 1 N sodium hydroxide (NaOH) containing 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) and incubated at 80 ° C for one hour. The absorbance was then measured at 475 nm using a microplate reader. Melanin production was calculated by plotting standard curves using the synthesized melanin solution, and the measured values were used to calculate the melanin production. The percentage averaged values for the untreated group (0 ug / ml) are shown in Table 6. A group without α-MSH treatment was used as a control group.
상기 [표 6]의 결과에 나타나듯이, 실시예를 통하여 제조한 해삼 기능성 원료를 사용할 경우 멜라닌 생성을 억제하는 효과가 비교예의 해삼 추출물보다 높았으며 농도 의존적으로 활성이 증가하는 경향을 나타내었다. As shown in the results of the above Table 6, when the functional ingredients of the sea cucumber prepared by the examples were used, the effect of suppressing melanin production was higher than that of the sea cucumber extract of the comparative example and the activity tended to increase in a concentration dependent manner.
<< 실험예Experimental Example 3> 3> 주름 개선 활성Wrinkle improving activity
상기 실시예를 통하여 제조한 해삼 기능성 원료 및 비교예의 해삼 추출물을 사용하여 피부 주름 개선 활성 확인 실험을 수행하였다. Experiments were conducted to confirm skin wrinkle improving activity using the functional ingredients of sea cucumber and the sea cucumber extract of Comparative Example prepared through the above examples.
<3-1> 엘라스타제 활성 저해 효과 확인 ≪ 3-1 > Confirmation of Elastase Inhibitory Effect
피부에서 엘라스틴(elastin)은 콜라겐(collagen)과 함께 주요한 탄력 섬유 구성성분 중 하나이다. 따라서 엘라스틴을 분해하는 효소인 엘라스타제(elastase)의 억제 활성을 통하여 피부 주름 개선 효과를 확인할 수 있다. Elastin in the skin is one of the major elastic fiber components with collagen. Therefore, it is possible to confirm the effect of improving the wrinkles of the skin through the inhibitory activity of elastase, an enzyme that decomposes elastin.
엘라스타제를 50 mM tris-HCl buffer(pH 8.6)에 녹여 2.5 unit/ml의 용액을 만들었다. N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide 5 mg을 50 mM tris-HCl buffer 1 ml에 녹여 스탁 용액(stock solution)을 만들고, N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide(0.5 mg/ml)로 희석하여 사용하였다. 96 웰 플레이트에 시료를 농도별(0, 10, 50, 100ug/ml)로 첨가한 후 엘라스타제를 가하고 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide를 100ul씩 첨가했다. 반응액은 37℃에서 20분간 배양한 후에 410 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 하기의 식과 같이 엘라스타제 저해율을 계산하였다. 그 결과는 [표 7]에 나타내었다.
Elastase was dissolved in 50 mM tris-HCl buffer (pH 8.6) to prepare a 2.5 unit / ml solution. N-succinyl- (L-Ala) 3-p-nitroanilide (5 mg) was dissolved in 1 ml of 50 mM tris-HCl buffer to prepare a stock solution. (0.5 mg / ml). Samples were added to the 96-well plate at concentrations of 0, 10, 50, and 100 ug / ml. Elastase was added and 100 μl of N-succinyl- (L-Ala) 3-p-nitroanilide was added. The reaction solution was incubated at 37 ° C for 20 minutes, and the absorbance at 410 nm was measured. The inhibition rate of elastase was calculated by the following equation. The results are shown in Table 7.
엘라스타제 저해율(%) = (1-시료 농도별 흡광도/무첨가군(0ug/ml)의 흡광도) × 100
Elastase inhibition rate (%) = (1-absorbance per sample concentration / absorbance of no-added group (0 ug / ml)) x 100
상기 [표 7]에 나타난 바와 같이, 실시예를 통하여 제조한 해삼 기능성 원료를 사용할 경우 엘라스타제 활성을 억제하는 효과가 비교예의 해삼 추출물보다 높았으며 농도 의존적인 결과를 나타내었다. As shown in the above Table 7, when the functional ingredients of the sea cucumber prepared by the examples were used, the effect of suppressing the activity of elastase was higher than that of the sea cucumber extract of the comparative example and the concentration-dependent results were obtained.
<3-2> 세포내 콜라게나제 활성 억제 효과 확인 <3-2> Intracellular Confirming collagenase activity inhibitory effect
피부의 탄력을 부여하는데 주요하게 작용하는 콜라겐을 분해하는 콜라게나제(collagenase)의 활성 억제 효과를 세포 실험을 통하여 확인하였다.The inhibitory effect of collagenase (collagenase), which plays a major role in imparting elasticity to skin, was confirmed by cell experiments.
인간 정상섬유아세포(Human normal fibroblast)를 DMEM 배지가 들어있는 6웰 플레이트에 2.0 x 10^5 세포로 분주하고 5% 농도의 CO2 배양기에 37℃로 24시간 동안 배양하였다. 각 웰에서 배지를 제거하고 농도별(0, 10, 50, 100ug/ml)로 시료를 처리하였으며 콜라게나제 활성 유도 물질인 phorbol myristate acetate(PMA,Sigma)도 함께 처리하였다. 추가적으로 24시간 동안 배양한 후, 세포 배지를 수집하여 샘플을 제조하였다. 콜라겐을 분해하는 효소인 콜라게나제의 활성 정도를 측정하기 위하여 콜라게나제에 대한 항체를 사용하여 실험을 수행하였다. Biotrak™ MMP-1 활성 어세이 키트(GE healthcare)의 프로토콜에 따라 실험을 수행하였으며, 405nm의 흡광도로 측정하였다. 콜라게나제의 활성을 해당 결과를 아무것도 처리하지 않은 군(0ug/ml)에 대한 백분율로 하기의 [표 8]에 나타내었다.Human normal fibroblasts were plated in 2.0 × 10 5 cells in 6 well plates containing DMEM medium and cultured in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. for 24 hours. The medium was removed from each well and the samples were treated with concentrations (0, 10, 50, 100 ug / ml) and treated with phorbol myristate acetate (PMA, Sigma), which is a collagenase activity inducer. After an additional 24 hours of culture, the cell culture medium was collected to prepare a sample. In order to measure the activity of collagenase, an enzyme that degrades collagen, an experiment was conducted using an antibody against collagenase. Experiments were performed according to the protocol of the Biotrak ™ MMP-1 Activity Assay Kit (GE healthcare) and measured by absorbance at 405 nm. The activity of collagenase is shown in the following Table 8 as a percentage of the group (0ug / ml) in which the results were not treated.
상기 [표 8]의 결과에 나타나듯이, 실시예와 같이 제조한 해삼 기능성 원료를 처리했을 경우 일반 해삼 추출물을 처리했을 때보다 콜라게나제 활성이 큰 폭으로 감소하는 것을 확인할 수 있었다. As shown in the results of the above Table 8, it was confirmed that when the functional raw material of sea cucumber prepared in the same manner as the example was treated, the collagenase activity was greatly reduced as compared with that of the ordinary sea cucumber extract.
따라서, 본 발명의 해삼 기능성 원료를 사용하는 경우, 해삼 일반 추출물보다 뛰어난 주름 개선 효과를 보일 수 있다.Therefore, when the functional raw material of the sea cucumber of the present invention is used, it is possible to exhibit a wrinkle improving effect superior to that of the sea cucumber general extract.
Claims (7)
(b) 상기 세린 프로테아제 처리된 해삼을 여과 및 농축하는 단계, 및
(c) 상기 여과 및 농축된 해삼을 동결건조하는 단계를 포함하는
해삼을 이용한 기능성 원료 제조 방법.
(a) treating the sea crumbs with serine protease,
(b) filtering and concentrating the serine protease-treated sea cucumber, and
(c) lyophilizing said filtration and concentrated sea cucumber
Method for manufacturing functional materials using sea cucumber.
상기 세린 프로테아제를 처리하는 단계는 내장이 제거된 해삼 분쇄물에 세린 프로테아제를 총 부피의 0.01%(v/v) ~ 5%(v/v)의 농도로 20℃ ~ 80℃ 의 온도에서 30분 ~ 12시간 동안 처리하는 것을 특징으로 하는 해삼을 이용한 기능성 원료 제조 방법.
The method according to claim 1,
The step of treating the serine protease comprises contacting sericin protease with a concentration of 0.01% (v / v) to 5% (v / v) of the total volume at a temperature of 20 ° C to 80 ° C for 30 minutes To 12 hours. ≪ RTI ID = 0.0 > 8. < / RTI >
상기 세린 프로테아제를 처리하는 단계는 내장이 제거된 해삼 분쇄물에 세린 프로테아제를 총 부피의 0.1%(v/v) ~ 1%(v/v)의 농도로 55℃ ~ 70℃ 의 온도에서 1시간 ~ 3시간 동안 처리하는 것을 특징으로 하는 해삼을 이용한 기능성 원료 제조 방법.
The method according to claim 1,
The step of treating the serine protease comprises contacting sericin protease with a concentration of 0.1% (v / v) to 1% (v / v) of the total volume at a temperature of 55 ° C to 70 ° C for 1 hour To about 3 hours. ≪ RTI ID = 0.0 > 5. < / RTI >
An anti-inflammatory food composition comprising the functional ingredient obtained by the production method according to any one of claims 1 to 3 as an active ingredient.
A cosmetic composition for antiinflammation comprising the functional ingredient obtained by the production method according to any one of claims 1 to 3 as an active ingredient.
A whitening cosmetic composition comprising a functional raw material obtained by the production method according to any one of claims 1 to 3 as an active ingredient.
A cosmetic composition for improving wrinkles, comprising a functional raw material obtained by the production method according to any one of claims 1 to 3 as an active ingredient.
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