KR20150092910A - 항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 고삼, 교맥, 백선피, 사매, 사삼, 송진, 어성초, 오매, 자초, 지부자의 추출물을 혼합하여 조성한 항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 기능의 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 고삼 추출물, 교맥 추출물, 백선피 추출물, 사매 추출물, 사삼 추출물, 송진 추출물, 어성초 추출물, 오매 추출물, 자초 추출물, 지부자 추출물을 혼합하여 조성한 항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 기능이 있는 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 상기한 조성물은 고삼 추출물 100중량부에 교맥 추출물 80~120중량부, 백선피 추출물 80~120중량부, 사매 추출물 110~150중량부, 사삼 추출물 80~120 중량부, 송진 추출물 80~120중량부, 어성초 추출물 110~150중량부, 오매 추출물 80~120중량부, 자초 추출물 110~150중량부, 지부자 추출물 80~120중량부를 혼합하여 조성한 것에 특징이 있는 항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 기능이 있는 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 상기의 아토피 예방 또는 치료용 기능의 조성물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

Description

항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 조성물{a herb extraction composite preventing and treating the atopic dermatitis with the function of anti oxidant and anti infection}

본 발명은 항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 고삼, 교맥, 백선피, 사매, 사삼, 송진, 어성초, 오매, 자초, 지부자의 추출물을 혼합하여 조성한 항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 기능의 조성물에 관한 것이다.

아토피(atopy)는 1925년 코카(Coca)가 선천적으로 음식물과 흡입성 물질에 대한 알레르기 반응의 결과로 피부염이나 천식, 고초열이 나타나는 경향을 아토피라고 기술한 이후부터 쓰이게 된 피부질환으로서, 아토피성 질환에는 아토피 피부염 이외에 천식, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염 등이 있다. 아토피는 알러지 반응을 수반하며 이 중 아토피 피부염은 만성 혹은 재발성 피부염으로, 피부 병변의 특징적인 모양 및 분포와 개인 혹은 가족의 아토피 병력을 가지는 즉, 아토피성 체질(유전적 소인)을 타고난 경우에 발생하는 매우 흔한 피부 질환이다.

대개 아토피 피부염은 영, 유아기, 특히 생후 2개월 전후에 시작되는데, 이 중 약 50%가 생후 2세 이전에 발생하고, 거의 5세 이전에 증상이 나타나는 반면 성인에서 처음 증상이 나타나는 예는 극히 드물다. 대부분 성장과 더불어 증상이 완화되거나 사라지며 유아기 발생 환자의 절반 이상이 2세 전에 호전된다. 현재 일반인의 0.7%, 5세 이하 소아의 3-5%가 아토피 피부염을 앓고 있으며, 환경적인 요인으로 인하여 매년 그 숫자가 급격하게 증가하고 있다.

아토피 피부염은 심한 가려움을 동반한 홍반성 구진과 인설로 시작하여 심해지면 수포 및 장액성 삼출액과 가피를 보이는 급성 증상으로 진행한다. 가장 특징적인 증상인 소양증은 그 정도가 매우 심해서 피가 날 정도로 긁게 되며, 가려움-긁기-가려움의 악순환으로 계속 악화되며, 더 지속되면 피부가 두꺼워지고 주름이 뚜렷해지는 태선화 현상이 나타난다. 대부분의 임상 양상은 긁거나 문지른 결과에 의해 발생하며, 밤에는 소양증이 더욱 심해져 수면장애를 일으킨다. 근래에 전세계적으로 아토피 피부염의 발생 빈도가 증가하는 양상을 보이고 있는데 이는 대기오염, 주거 환경의 변화로 항원에 대한 노출 증가, 모유 수유의 감소, 소아기 감염 질환의 감소 등을 그 원인으로 추정하고 있다.

1995년 대한 소아과 알레르기 및 호흡기학회에서 시행한 전국적 역학 조사에 의하면 초등학생의 경우 12~24%, 중학생의 경우 6~8%에서 아토피 피부염으로 진단받은 적이 있으며, 2000년도에는 초등학생의 24.9%, 중학생의 12.8%가 아토피 피부염을 진단받은 것을 비롯하여 성인 아토피 피부염도 국내에서 그 빈도가 점점 증가하고 있다.

상기의 아토피 피부질환은 정확한 병태생리는 아직까지 완전히 이해되고 있지 않으나 유전적 소인과 함께 면역학적, 비면역학적 기전이 관여하리라고 생각되고 있다. 아토피 피부염의 대부분을 차지하는 외인성 아토피 피부염은 면역 글로불린 E(IgE)와 연관된 면역기전에 의하여 발생되는데, 특정 알레르겐에 대한 속발성 면역 반응보다는 T-세포 이상에 의한 원발성 면역반응이 관여한다는 보고들이 많다. 아토피 피부염 환자에서 세포 매개성 면역기능 장애가 면역 글로불린 E의 증가와 관련이 있음이 밝혀지면서 속발성 면역 반응 외에도 원발성 면역반응이 아토피 피부염의 병인에 관여한다고 주장하는 보고들이 증가하고 있다(이기영, 최신알레르기 진료, 한국의학사, 서울, 2001, pp23~52).

상기와 같이 현재까지 알려진 아토피 피부염의 병인, 기전, 증상 등을 감안하여 아토피 피부염에 대한 치료제가 개발되고 있으며, 그 결과 천연 또는 합성의 면역억제제, 항히스타민제제, 스테로이드 제제 등 다수가 개발되어 있다. 예를 들면, 면역 억제제로는 사이클로스포린(Cyclosporin) A, FK506(타크로리무스, Tacrolimus; Wasik등, Immunopharmacology 20:57-61, 1990)과 SDZ ASM981(피메크로리무스, Pimecrolimus; Grassberger 등, Br.J. Dermatology 141:264-273, 1999) 등이 각광받고 있다. 그러나, 종래 아토피 피부염에 대한 치료제로 사용되는 스테로이드제제와 항히스타민제 등은 증상을 일시적으로 완화해주는 효과는 있으나 외용 또는 경구용 스테로이드 호르몬제의 장기 사용 환자들에 있어서 피부가 엷어지는 현상 및 골다공증의 유발, 어린이의 경우 성장저해 등 그에 따른 국소 및 전신 부작용으로 인하여 임상적으로 문제가 될 수 있으며, 심한 경우에는 호르몬에 의한 전신 증상이 나타날 수 있고 약을 중지하면 오히려 증상이 악화되는 스테로이드제에 대한 내성을 나타낼수도 있다. 따라서, 아토피 치료에 뛰어난 효과를 가지면서도 부작용은 적은 천연물을 이용한 새로운 아토피 치료제의 개발이 요구되고 있는 실정이다.

상기와 같은 요구로 등록특허 10-1226758호(생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물, 이하 "선행기술")로 "고삼, 감초, 금은화, 당귀, 독활, 목향, 방풍, 산조인, 어성초, 연교, 우방자, 음양곽, 인삼, 자근, 지유, 천궁, 현삼 및 호장근을 포함하는 생약 혼합물의 추출물 또는 상기 생약 추출물에 유산균을 접종하여 발효시킴으로써 제조되는 생약 추출물의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강식품"을 제공한 바 있다.

상기한 선행기술 및 종래기술은 여전히 아토피 치료제로서 효능이 떨어지는 문제점이 있었으며 또한 부작용이 존재하였고 그 제조 방법의 복잡함의 문제점이 있었는데 이를 해결하는 천연의 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하고자 한다.

또한 본 발명은 부작용이 거의 없는 천연의 재료를 이용한 아토피 피부염의 예방 또는 치료에 효능이 있는 조성물을 제공하고자 한다.

또한 본 발명은 그 제조방법이 간단하면서도 아토피 피부염의 예방과 치료에 효능이 있는 천연 재료의 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 상기한 문제점 및 요구를 해결하기 위하여,

고삼 추출물, 교맥 추출물, 백선피 추출물, 사매 추출물, 사삼 추출물, 송진 추출물, 어성초 추출물, 오매 추출물, 자초 추출물, 지부자 추출물을 혼합하여 조성한 항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 기능이 있는 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기한 조성물은 고삼 추출물 100중량부에 교맥 추출물 80~120중량부, 백선피 추출물 80~120중량부, 사매 추출물 110~150중량부, 사삼 추출물 80~120 중량부, 송진 추출물 80~120중량부, 어성초 추출물 110~150중량부, 오매 추출물 80~120중량부, 자초 추출물 110~150중량부, 지부자 추출물 80~120중량부를 혼합하여 조성한 것에 특징이 있는 항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 기능이 있는 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기의 아토피 예방 또는 치료용 기능의 조성물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 조성물은 피부 독성 등과 같은 부작용이 없는 효과를 창출한다.

또한 본 발명은 항산화능이 있고, 염증성 사이토카인인 IL-6과 TNF-a에서 가장 효과가 좋았으며, IL-1b와 PGE2에서도 효과가 있어 항염에 매우 현저한 효과가 나타난다.

이와 같이 본 발명에 따른 조성물은 아토피 피부염의 예방과 치료에 현저히 높은 효과가 나타난다.

도 1은 본 발명에 따른 조성물의 세포 독성 실험 결과.
도 2는 본 발명에 따른 조성물의 항산화 활성 측정 결과.
도 3은 본 발명에 따른 조성물의 세포내 ROS 활성 측정 결과.
도 4는 본 발명에 따른 조성물의 항염증 효능 측정(Total Nitric oxide 생성 억제 효과 측정) 결과.
도 5는 본 발명에 따른 조성물의 항염증 효능 측정인 사이토카인 생성량 측정(IL-1β 생성량에 미치는 영향)에 관한 결과.
도 6은 본 발명에 따른 조성물의 항염증 효능 측정인 사이토카인 생성량 측정(IL-6 생성량에 미치는 영향)에 관한 결과.

이하 본 발명은 도면을 참고하여 상세히 설명하고자 한다.

본 발명은 고삼, 교맥, 백선피, 사매, 사삼, 송진, 어성초, 오매, 자초, 지부자의 추출물을 혼합하여 조성한 항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

또한 본 발명의 상기한 조성물은 고삼 추출물, 교맥 추출물, 백선피 추출물, 사매 추출물, 사삼 추출물, 송진 추출물, 어성초 추출물, 오매 추출물, 자초 추출물, 지부자 추출물을 혼합하여 조성한 항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 상기한 조성물은 고삼 추출물 100중량부에 교맥 추출물 80~120중량부, 백선피 추출물 80~120중량부, 사매 추출물 110~150중량부, 사삼 추출물 80~120 중량부, 송진 추출물 80~120중량부, 어성초 추출물 110~150중량부, 오매 추출물 80~120중량부, 자초 추출물 110~150중량부, 지부자 추출물 80~120중량부를 혼합하여 조성한 항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기한 항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 조성물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

따라서 본 발명의 상기한 추출물의 조성은 원재료를 모두 함께 혼합하여 추출하는 방법 또는 각각의 원재료를 개별적으로 추출하여 섞는 방법 모두 사용할 수 있다.

본 발명의 고삼은 도둑놈의 지팡이·너삼·뱀의정자나무라고도 한다. 양지 바른 풀밭에서 자란다. 높이 80∼100cm로 녹색이지만 어릴 때는 검은빛을 띤다. 줄기는 곧고 잎은 어긋나며 홀수깃꼴겹잎이다. 작은잎은 15∼40개이고 긴 타원형 또는 긴 달걀 모양이며 길이 2∼4cm, 나비 7∼15mm이다. 잎자루가 길며 가장자리는 밋밋하다.

한방에서는 뿌리를 말린 것을 고삼이라 하는데, 맛이 쓰고 인삼의 효능이 있어 소화불량·신경통·간염·황달·치질 등에 처방한다. 민간에서는 줄기나 잎을 달여서 살충제로 쓰기도 한다. 같은 속의 식물로 산두근(山豆根)이 있는데 생김새가 매우 비슷하다. 한국·일본·중국·시베리아 등지에 분포한다.

본 발명에서는 주로 뿌리를 말린 것을 사용하는 것이 좋으나, 잎이나 줄기를 사용할 수도 있다.

본 발명의 교맥(蕎麥)은 여귀과에 속하는 일년생 초본식물인 메밀의 종자를 의미한다.

종자의 열매는 메밀쌀을 만들어 밥을 지어 먹기도 하는데, 녹말작물이면서도 단백질 함량이 높고 비타민 B1 ·B2, 니코틴산 등을 함유하여 영양가와 밥맛이 좋다. 가루는 메밀묵이나 면을 만드는 원료가 되어 한국에서는 옛날부터 메밀묵과 냉면을 즐겨 먹었다. 섬유소 함량이 높고 루틴(rutin)이 들어 있어서 구충제나 혈압강하제로 쓰이는데, 이 루틴을 생산할 목적으로 재배하기도 한다.

본 발명에서의 교맥은 상기한 메밀의 종자를 의미하며 이를 사용한다.

본 발명의 백선피(白鮮皮)는 우리나라에서는 운향과의 백선(Dictamnus dasycarpus Turcz.)의 뿌리껍질을 말한다. 중국에서는 우리나라와 같고 일본에서는 공정생약으로 수재되지 않았다.

백선피는 습열로 인한 피부발진, 피부미란, 습진, 풍진, 가려움증, 알레르기성 피부염, 신경성 피부염과 급성간염으로 인한 황달, 습열성 하지마비에 쓰며 해수, 인후건조, 번갈에도 사용한다.

백선피의 약리작용으로 해열작용과 피부진균 억제작용이 보고되었다.

본 발명의 사매는 뱀딸기를 의미한다.

뱀딸기는 풀밭이나 논둑의 양지에서 자란다. 덩굴이 옆으로 벋으면서 마디에서 뿌리가 내린다. 잎은 어긋나고 뿌리에 달린 잎은 3장의 작은잎이 나온 잎이며 작은잎은 달걀 모양이거나 달걀 모양 원형이며 길이 2∼3.5cm, 너비 1∼3cm이다. 잎가장자리에 이 모양의 톱니가 있고 뒷면에는 긴 털이 난다. 턱잎은 달걀 모양 바소꼴이고 가장자리가 밋밋하다.

그 꽃은 4∼5월에 노란색으로 피며 잎겨드랑이에서 긴 꽃줄기가 나와서 끝에 1개의 꽃이 달린다. 꽃받침조각은 달걀 모양이고 부꽃받침은 5개로 갈라지고 다시 얕게 3개로 갈라진다. 꽃잎은 넓은 달걀 모양이며 길이 5∼10mm이다. 열매는 수과로서 6월에 익으며 둥글고 지름 1cm 정도로 붉게 익으며 먹을 수 있다. 한국·중국·일본·말레이시아·인도 등지에 분포한다.

본 발명의 사매는 주로 열매를 사용하나 잎이나 줄기를 사용할 수도 있다.

본 발명의 사삼은 더덕을 의미하며 인삼(人參), 현삼(玄蔘), 단삼(丹參), 고삼(苦參)과 함께 오삼(五參)이라 부르는데, 이것은 형태는 모두 다르나 치료하는 바는 비슷하기 때문이다. 사삼(沙參)이란 이름은 백색이며 모래땅에서 잘 자라서 붙여진 이름이다. 뿌리에는 흰색 즙이 많아서 이인(俚人)들은 양파내라고도 불렀다.

사삼은 진액을 보충하여 폐를 윤택하게 하고 열을 식히며 담을 없애 인후건조, 마른기침, 가래, 해수, 천식 등에 쓰인다. 위음 부족으로 입안이 마르고 인후가 건조하며 대변이 굳는 변비 증상 등에 사용한다.

약리작용으로 거담작용, 항균작용, 용혈작용, 강심작용 등이 보고되었다.

본 발명의 송진은 소나무과의 나무가 손상을 입었을 때 분비되는 발삼으로 깨끗한 것은 무색 투명한 액체이나 시간이 지나면 희뿌옇고 끈질긴 성질이 생기는 것을 의미한다.

송진은 송지(松脂)라고도 한다. 수지산(樹脂酸)에서 나오는 흰색 고체를 석출한다. 에탄올·클로로폼·아세트산에 녹으나 물에는 녹지 않으며, 수증기를 증류하여 테레빈유(油)를 얻고 나면 로진(rosin)이 남게 된다. 성분은 수지분(로진)이 70∼75%, 정유(精油: 테레빈유)는 18∼22%, 물 기타 불순물 5∼7%인데, 그 중 송진산은 전체의 60∼65%로 레보피마르산·네오아비에틴산 등으로 구성되었다.

북아메리카가 주산지로 세계 산출량의 50% 이상을 생산하고, 멕시코·프랑스 등지에서 약간 생산된다. 채취방법은 나무에 상처를 내어 거기서 나오는 송진을 컵 등으로 받는데, 상처에 황산을 뿌리면 수취량(收聚量)이 증가한다. 테레빈유는 주로 연고제·도료 용제(塗料溶劑)·보혁제(保革劑)·구두약, 고무나 방수제의 용매에 쓰이며, 로진은 주로 비누·도료 건조제·살충제·인쇄잉크·제지용 첨가약품·반창고 등의 의약품에 이용된다.

본 발명의 어성초는 우리나라에서는 삼백초과의 약모밀(Houttuynia cordata Thunberg)의 개화기의 지상부를 말한다. 일본에서는 같은 식물을 쓰며 십약(十藥)이라 부른다. 중국에서는 같은 식물을 사용하지만 전초 또는 지상부라고 규정하고 있다.

어성초란 잎에서 고기 비린내가 나기 때문에 붙여진 이름이다. 옛 중국의 진(秦)나라에서는 저자(菹子), 즉 젓갈과 같은 냄새가 나는 식물이라고 불렀는데 저(菹)는 즙과 음이 비슷하여 즙채라고 부르게 되었다.

어성초는 해열, 배농작용이 뛰어나 폐농양으로 인한 기침, 피고름을 토할 때, 폐렴, 급만성기관지염, 장염, 요로감염증, 종기에 쓰며, 열이 많고 소변을 못 볼 때 사용한다.

약리작용으로 항균작용, 면역증강작용, 항염증작용, 이뇨작용, 진해작용이 보고되었다.

본 발명에서의 어성초는 잎, 줄기 또는 뿌리를 사용할 수 있다.

본 발명의 오매는 장미과의 매실나무(Prunus mume Sieb. et Zucc.)의 덜 익은 열매를 매연으로 훈증시킨 약재(한국, 중국, 일본)를 말한다.

다른 이름으로 흑오매(黑烏梅), 매실(梅實), 훈매(薰梅), 황자(黃仔), 행매(杏梅), 합한매(合漢梅), 염매(鹽梅), 산매(酸梅), 산매(山梅), 길매육(桔梅肉), 건지매(乾枝梅) 등이 있다.

오매는 폐기를 수렴시켜 기침과 해수를 멎게 하고 설사를 그치게 하며 진액 부족으로 인한 갈증에 사용하고 회충으로 인한 구토와 복통을 낳게 한다. 소화불량과 식용부진에도 효과가 있다. 매실나무의 꽃인 매화는 신경과민으로 가슴이 답답하고 소화가 안되며, 목 안에 이물질이 걸려 있는 것 같은 증상, 나력창독(癩歷瘡毒) 등에 효과가 있다.

오매의 약리작용으로 면역 증강작용, 항균 작용, 자궁경부암 억제작용이 보고되었다.

본 발명의 자초(紫草)는 지치 또는 지초라고도 하며, 산과 들의 풀밭에서 자란다. 뿌리는 굵고 자주색이며 땅속으로 깊이 들어간다. 줄기는 곧게 서고 가지가 갈라지며 높이가 30∼70cm이고 전체에 위로 향한 잔털이 많다. 잎은 어긋나고 길이 3∼7cm의 바소꼴 또는 긴 타원 모양의 바소꼴이며 끝이 뾰족하고 밑 부분이 좁아 잎자루 같으며 거친 털이 빽빽이 있다. 잎 앞면은 잎맥을 따라 깊게 주름이 있고, 가장자리는 밋밋하며, 잎자루는 없다.

한방에서는 뿌리를 자초(紫草)라는 약재로 쓰는데, 토혈·코피·소변 출혈·홍역에 효과가 있고, 화상·동상·습진·발진·피부궤양 등에 소독약으로 외용한다.

본 발명에서는 상기한 지치 또는 지초의 뿌리인 자초를 사용한다.

본 발명은 지부자는 낙추자, 독추, 백지초, 소추 등으로 불리며, 댑싸리의 열매(과실)를 의미한다.

댑싸리는 중국 원산의 한해살이풀이다. 줄기는 나무처럼 빳빳하고 곧게 서며 많은 가지를 쳐서 1.5m 정도의 높이까지 자란다. 많은 잎은 서로 어긋나게 자리잡고 있으며 피침 꼴 또는 줄 꼴 모양을 하고 있다. 잎자루는 없고 가장자리는 밋밋하다. 암꽃과 수꽃이 각기 다른 포기에 피어나며 잎겨드랑이에 2~3송이의 꽃이 밀착한다. 꽃잎은 없으며 다섯 갈래로 갈라진 꽃받침이 꽃처럼 보인다. 꽃 바로 밑에는 잎처럼 생긴 받침잎이 붙어 있고 수꽃은 5개의 수술을 가지고 있다. 암꽃은 1개의의 암술을 가지고 있는데 암술대(花柱)는 두 갈래로 갈라진다. 꽃의 빛깔은 초록빛이고 지름은 3mm 안팎이다.

본 발명은 상기한 댑싸리의 열매를 이용한다.

본 발명은 상기한 원재료를 건조시켜 사용하는 것이 좋으나, 건조시키지 않은 것을 사용하여도 무방하다.

본 발명의 추출물은 상기한 원재료를 일정한 크기로 절단하여 물에 침지시키고 가열하여 추출물을 수득하는 방법이 사용될 수 있다.

본 발명은 상기한 원재료를 상기한 추출물의 중량비대로 혼합한 것 100중량부를 기주능로 70~90% 에탄올 0.5~1.5L 정도에 넣고 2~5시간 동안 환류 추출하는 방법으로 추출할 수도 있다.

상기의 환류 추출하여 나온 여액을 rotary evaporator를 이용하여 로 감압, 농축하여 동결 건조한 후 완전 건조된 조성물을 냉동 보관한 후에 사용할 수 있다.

본 발명은 상기한 방법으로 제조한 조성물을 아래와 같은 독성 실험 및 동물 실험을 통하여 아토피 피부염의 예방과 치료에 효과가 있음을 알 수가 있다.

<실시예>

고삼 6g, 교맥 6g, 백선피 6g, 사매 8g, 사삼 6g, 송진 6g, 어성초 8g, 오매 6g, 자초 8g, 지부자 6g을 준비하여 혼합한다.

(이와 같은 구성 약재들은 (주)옴니허브(Daegu, Korea)에서 구입하였고, 대전대학교 지역혁신센터 난치성 면역질환의 동서생명의학 연구센터(TBRC)에서 정선 후 사용하였다)

상기의 혼합한 원재료를 80% 에탄올 1 ℓ에 넣고, 3시간 동안 환류추출 하였다. 그 여액을 rotary evaporator를 이용하여 50 ml로 감압, 농축하여 동결 건조한 후 완전 건조된 조성물을 냉동 보관하여 사용하였다.

1. 세포독성 실험

(1) 세포 준비 및 세포독성 측정

실험에 사용된 RAW 264.7 세포는 한국세포주은행에서 구입하였다.

Raw 264.7 세포는 96 well plate에 104 cells/well로 분주하여 24시간 동안 배양 하였다. 실험을 하기 전에 새로운 배양액으로 교체하였고, 조성물을 50 ㎍/㎖의 농도로 처리하여 다시 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 10 ㎕의 WST solution을 첨가하여 세포배양기 (37℃, 5% CO2)에서 30분간 반응시켰다. 반응 후 450 nm에서 흡광도의 변화를 측정하여 대조군에 대한 세포 생존율을 백분율로 표시 하였다.

(2) 세포독성 결과

Raw 264.7 세포에서 대조군의 세포생존율을 100 ± 10.5 (%)로 하였을 때, 조성물을 50 ㎍/㎖ 농도로 투여한 결과, 86% 이상의 세포 생존률을 나타내었다 (도 1)

2. 항산화 활성 측정

(1) 총 폴리페놀 함량 측정

총 폴리페놀 함량은 Folin-Ciocalteu 시약을 이용하는 방법으로 측정하였다. 조성물 1 ㎖에 50% Foiln-Ciocalteu's phenol reagent 0.5 ㎖를 가하여 실온에서 3분간 반응시켰다. 반응용액에 Na2CO3 포화용액 1 mL와 7.5 ㎖ 증류수를 차례로 혼합하여 30분간 정치시킨 뒤, 12,000 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상등액을 취해 760 nm에서 흡광도를 측정하였다. 총 폴리페놀 함량은 gallic acid를 표준물질로 이용하여 작성한 검량선에 따라 함량을 구하였으며 측정단위로는 GAE(Gallic acid equivalent)/g을 사용하였다.

(2) DPPH radical 소거능 측정

자유라디칼 소거 활성 시험은 안정한 자유라디칼 DPPH를 사용하는 방법으로 에탄올에 용해시킨 0.2 mM의 DPPH 용액 150 ul와 조성물 50 ㎍/㎖을 100 ul씩 각각 혼합하여 37℃에서 30분간 반응 시킨 후, 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료액 대신 물을 넣어 보정 값을 얻었다. 자유라디칼 소거율은 아래의 식에 따라 계산하였다.

소거율(%)=[(대조군의 흡광도-시료 첨가군의 흡광도)/(대조군의 흡광도)]*100

(3) ABTS radical 소거능 측정

ABTS assay 방법은 기존에 보고된 방법을 96 well plate에 맞게 수정하여 실시하였다. ABTS 용액은 7.4 mM ABTS (2,2azinobis- (3-ethyl benzothiazoline-6-sulfonic acid))와 2.6 mM potassium persulphate를 제조한 후, 암소에 하루 동안 방치하여 양이온 (ABTS+)을 형성시킨 다음 734 nm에서 흡광도를 측정하여 흡광도 값이 1.5 이하가 나오도록 희석하고, 희석된 ABTS+ 용액 150 ㎕와 조성물 5 ㎕를 혼합하고, 실온에서 10분간 반응시킨 후, 734nm에서 흡광도를 측정하였다. 항산화능은 증류수를 대조군으로 하여 대조군에 대한 ABTS 라디칼 소거능을 백분율로 나타내었다.

소거율(%) = (1-(시료대조군의 흡광도)/(대조군의 흡광도))*100

(3) 실험결과

조성물에 존재하는 총 폴리페놀 함량을 gallic acid를 표준물질로 하여 측정한 결과, 36.3mg/g으로 나타났으며, 조성물 50 ㎍/㎖의 농도에서 DPPH 소거능은 45.0 ± 5.7 (%), ABTS 소거능은 12.4 ± 3.0 (%)로 나타났다 (도 2).

3. 세포내 ROS 활성 측정

(1) Raw 264.7 세포 내에서 reactive oxygen speies (ROS)를 측정하기 위하여 2′,7′-dichlorofluorescin diacetate (DCF-DA)를 이용하였다. 12well plate에 Raw 264.7 세포를 1.5×10 cells/well이 되게 분주하였다. 24시간 동안 배양 한 후, 조성물 50 ㎍/㎖을 처리하고, LPS 1 ㎍/㎖을 처리하여, 다시 24시간 동안 37℃, 5% CO 배양기에서 배양하였다. 배양 후, 1,200 rpm에서 5분간 원심분리하여 모은 세포를 차가운 PBS로 2회 세척한 후, DCF-DA 10 μM이 되도록 첨가하여 15분 동안 빛이 차단된 37℃에서 염색하였다. 염색 후 차가운 PBS를 넣어 1,200 rpm에서 5분간 원심분리한 다음 상청액을 제거하고 다시 PBS 400 ㎕를 부유시켜 유세포 분석기 (Flow cytometer, Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ USA)를 이용하여 형광강도의 세기에 따른 변화를 분석하였다.

(2) 결과

조성물을 50 ㎍/㎖ 농도로 투여한 결과, 정상군은 31.8 ± 11.4 (%), 대조군은 100.0 ± 12.1 (%)로 나타났으며, 조성물에서 76.7 ± 3.8(%)로 대조군에 비하여 유의성 있는 (*, p<0.05) 감소를 나타내었다 (도 3).

4. 항염증 효능 측정

(1) Total Nitric oxide 생성 억제 효과 측정

1) NO의 농도는 배양액 내의 nitrite 농도를 Griess Reagent System을 이용하여 측정하였다. Raw 264.7 cells은 96well plates에 10⁴ cells/well로 분주하여 24시간 동안 배양 한 후, 조성물 50 ㎍/㎖을 처리하고, LPS 1 ㎍/㎖을 처리하여, 다시 24시간 동안 37℃, 5% CO 배양기에서 배양하였다. N1 buffer를 50 ㎕를 각 well에 처리한 후, 10분간 상온에서 암소 반응 후, N2 buffer 50 ㎕를 각 well에 처리하고, 10분간 반응시킨 후, 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. Nitrite standard의 농도별 표준곡선을 이용하여 배양액의 NO 농도를 결정하였다.

2) 결과

조성물을 50 ㎍/㎖ 농도로 투여한 결과, 정상군은 29.9 ± 5.8 (%), 대조군은 100.0 ± 11.2 (%)로 나타났으며, 조성물에서는 감소를 나타내지 않았다 (도 4).

(2) 사이토카인 생성량 측정

1) Raw 264.7 cells을 12 well plates에 1.5×10⁵ cells/㎖이 되도록 분주하고, 24시간 동안 배양한 후, 조성물 50 ㎍/㎖을 처리하고, LPS 1 ㎍/㎖을 처리하였다. 다시 24시간 동안 37℃, 5% CO 배양기에서 배양한 후 세포배양액을 수거하여 배양액에 함유된 IL-1β, IL-6, TNF-α를 custom-made 4-plex cytokine Milliplex panel을 이용하여 측정하였다. 분석은 Milliplex analyst를 통해 이루어 졌다.

2) 결과

① IL-1β 생성량에 미치는 영향

조성물을 50 ㎍/㎖ 농도로 투여한 결과, 정상군은 6.9 ± 1.6 (%), 대조군은 100.0 ± 2.2 (%)로 나타났으며, 조성물에서는 78.6 ± 0.9(%)로 대조군에 비하여 유의성 있는 (*, p<0.05) 감소를 나타내었다 (도 5).

② IL-6 생성량에 미치는 영향

조성물을 50 ㎍/㎖ 농도로 투여한 결과, 정상군은 0.8 ± 1.6 (%), 대조군은 100.0 ± 1.3 (%)로 나타났으며, 조성물에서 48.4 ± 3.7(%)로 대조군에 비하여 유의성 있는 (***, p<0.001) 감소를 나타내었다 (도 6).

본 발명은 상기의 실험한 결과와 같이 항산화능이 있고, 염증성 사이토카인인 IL-6과 TNF-a에서 가장 효과가 좋았으며, 그 외에도 IL-1b와 PGE2에서도 효과가 있어 항염에 효과가 있음을 알 수가 있다.

이와 같이 본 발명의 상기한 조성물은 세포 독성 등과 같은 부작용이 없으면서도 아토피 피부염의 예방과 치료에 매우 효과적인 것을 알 수가 있다.

본 발명은 이와 같이 부작용이 없으면서도 아토피 피부염의 예방과 치료에 매우 효과적인 천연 조성물 및 이를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 생약, 약초를 이용하여 아토피 피부염을 치료하는 기능성 식품, 약제 등을 생산, 가공, 유통, 판매하는 산업에 매우 유용하다.

Claims (3)

1. 고삼 추출물, 교맥 추출물, 백선피 추출물, 사매 추출물, 사삼 추출물, 송진 추출물, 어성초 추출물, 오매 추출물, 자초 추출물, 지부자 추출물을 혼합하여 조성한 항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기한 조성물은 고삼 추출물 100중량부에 교맥 추출물 80~120중량부, 백선피 추출물 80~120중량부, 사매 추출물 110~150중량부, 사삼 추출물 80~120 중량부, 송진 추출물 80~120중량부, 어성초 추출물 110~150중량부, 오매 추출물 80~120중량부, 자초 추출물 110~150중량부, 지부자 추출물 80~120중량부를 혼합하여 조성한 것에 특징이 있는 항산화 및 항염증 효능이 있는 아토피 예방 또는 치료용 조성물.
   
3. 제1항 또는 제2항이 아토피 예방 또는 치료용 조성물을 포함하는 약제학적 조성물.
   
   

Images