KR20150082588A - Trp 채널 길항제로서 신규한 아세트아마이드 유도체 - Google Patents

Trp 채널 길항제로서 신규한 아세트아마이드 유도체 Download PDF

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KR20150082588A
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크리스틴 이 브라더톤-플레이스
지 첸
숀 데이비드 에릭슨
위민 퀴안
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에프. 호프만-라 로슈 아게
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Abstract

본 발명은 하기 화학식 Ⅰ의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:
[화학식 Ⅰ]
Figure pct00031

상기 식에서,
R1 내지 R3, X 및 Y는 명세서 및 특허청구범위에 정의된 바와 같다.
화학식 Ⅰ의 화합물은 포유동물에서 염증성 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 약제, 특히 일과성 수용체 전위(Transient Receptor Potential: TRP) 채널 길항제로 사용될 수 있다.

Description

TRP 채널 길항제로서 신규한 아세트아마이드 유도체{NOVEL ACETAMIDE DERIVATIVES AS TRP CHANNEL ANTAGONISTS}
본 발명은 포유동물에서 염증성 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방에 유용한 유기 화합물, 특히 일과성 수용체 전위(Transient Receptor Potential: TRP) 채널 길항제 및 이의 제조 및 이를 함유하는 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 특히 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:
[화학식 Ⅰ]
Figure pct00001
상기 식에서,
X는 -CH2- 또는 산소이고;
Y는 -(CH2)n-이고;
R1은 임의적으로 할로겐으로 치환된 페닐이고;
R2는 저급 알킬이고;
R3은 트라이플루오로메틸-페닐, 트라이플루오로메틸-피리디닐, 트라이플루오로메틸-피리다지닐, 트라이플루오로메틸-피리미디닐 또는 트라이플루오로메틸-피라지닐이고;
n은 0 또는 1이되, n은 X가 산소일 경우 0이 아니다.
TRP 채널은 다양한 인간(및 다른 동물) 세포 유형의 원형질막 상에 발견된 이온 채널의 부류이다. 서열 상동성 및 기능에 근거하여 많은 부류 또는 군으로 쪼개지는 28개 이상의 공지된 인간 TRP 채널이 있다. TRPA1은 나트륨, 칼륨 및 칼슘의 유동을 통해 막 전위를 조절하는 비선택적 양이온 전도 채널이다. TRPA1은 인간 후근 신경절 뉴런 및 말초 감각 신경에서 고도로 발현되는 것이 밝혀졌다. 인간에서, TRPA1은 많은 반응성 화합물, 예컨대 아크롤레인, 알릴이소티오시아네이트 및 오존, 뿐만 아니라 비반응성 화합물, 예컨대 니코틴 및 멘톨에 의해 활성화되고, 따라서 '화학적 감각 측정기(chemosensor)'로서 역할을 하는 것으로 생각된다. 공지된 TRPA1 작용제 중 다수는 인간 및 다른 동물에서 통증, 자극 및 신경성 염증을 야기하는 자극물이다. 따라서, TRPA1 채널 활성제의 생물학적 효과를 차단하는 TRPA1 길항제 또는 제제가 질병, 예컨대 천식 및 이의 악화, 만성 기침 및 관련된 병환의 치료, 뿐만 아니라 급성 및 만성 통증의 치료에 유용할 것임이 예상될 것이다. 최근, 조직 손상 및 산화성 스트레스의 생성물, 예를 들어 4-하이드록시노네날 및 관련 화합물이 TRPA1 채널을 활성화시킴이 밝혀졌다. 상기 발견은 조직 손상, 산화성 스트레스 및 기관지 평활근 수축에 관련된 질병, 예컨대 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 직업성 천식 및 바이러스로 유도된 폐 염증의 치료에서 소분자 TRPA1 길항제의 효용에 대한 추가적 근거를 제공한다.
본 발명은 또한 상기 화합물을 포함하는 약학 조성물, 상기 화합물의 이용 방법 및 상기 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
달리 지시하지 않는 한, 명세서 및 특허청구범위에 사용된 하기 특정 용어 및 문구는 하기에 정의되는 바와 같다:
용어 "잔기"는 하나 이상의 화학적 결합에 의해 또 다른 원자 또는 분자에 부착됨으로써 분자의 일부를 형성하는, 화학적으로 결합된 원자의 원자 또는 기를 나타낸다. 예를 들어, 화학식 I의 변수 R1 내지 R3은 공유결합에 의해 화학식 I의 코어 구조에 부착된 잔기를 나타낸다.
하나 이상의 수소 원자를 가지는 특정 잔기에 관하여, 용어 "치환된"은 잔기의 수소 원자 중 하나 이상이 또 다른 치환기 또는 잔기로 대체되는 사실을 나타낸다. 예를 들어, 용어 "할로겐으로 치환된 저급 알킬"은 저급 알킬(하기에 정의됨)의 하나 이상의 수소 원자가 하나 이상의 할로겐 원자로 대체되는 사실을 나타낸다(예를 들어 트라이플루오로메틸, 다이플루오로메틸, 플루오로메틸, 클로로메틸 등).
용어 "알킬"은 1 내지 20개의 탄소 원자의 지방족 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소 잔기를 나타낸다. 특정 실시양태에서, 알킬은 1 내지 10개의 탄소 원자를 가진다.
용어 "저급 알킬"은 1 내지 7개의 탄소 원자를 가지는 알킬 잔기를 나타낸다. 특정 실시양태에서, 저급 알킬은 1 내지 4개의 탄소 원자를 가지고, 다른 특정 실시양태에서, 저급 알킬은 1 내지 3개의 탄소 원자를 가진다. 저급 알킬의 예는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 2차-부틸 및 3차-부틸을 포함한다. 특정 저급 알킬은 메틸, 에틸 및 이소프로필이다.
상호교환적으로 사용될 수 있는 용어 "할로", "할로겐" 및 "할라이드"는 치환된 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도를 나타낸다. 특정 할로겐의 예는 플루오로이다.
달리 지시하지 않는 한, 용어 "수소" 또는 "하이드로"는 수소 원자의 잔기(-H)를 나타내나 H2를 나타내지는 않는다.
달리 지시하지 않는 한, 용어 "화학식의 화합물"은 화학식으로 정의된 화합물의 속으로부터 선택된 임의의 화합물(달리 명시하지 않는 경우 임의의 이러한 화합물의 임의의 약학적으로 허용되는 염 또는 에스테르를 포함함)을 나타낸다.
용어 "약학적으로 허용되는 염"은 유리염기 또는 유리산의 생물학적 유효성 및 특성을 보유한 염을 나타내고, 이는 생물학적으로 또는 달리 바람직하다. 염은 무기산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등, 바람직하게 염산, 및 유기산, 예컨대 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말레산, 말론산, 살리실산, 석신산, 퓨마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 시남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, N-아세틸시스테인 등을 사용하여 형성될 수 있다. 또한, 염은 유리산에 무기염기 또는 유기염기를 첨가함으로써 제조될 수 있다. 무기염기로부터 유도된 염은, 비제한적으로, 나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 칼슘 및 마그네슘 염 등을 포함한다. 유기산으로부터 유도된 염은, 비제한적으로, 1차, 2차 또는 3차 아민, 자연적으로 발생한 치환된 아민을 포함하는 치환된 아민, 환형 아민 및 염기성 이온 교환 수지, 예컨대 이소프로필아민, 트라이메틸아민, 다이에틸아민, 트라이에틸아민, 트라이프로필아민, 에탄올아민, 리신, 아르기닌, N-에틸피페리딘, 피페리딘, 폴리아민 수지 등을 포함한다.
본 발명의 화합물은 약학적으로 허용되는 염의 형태로 존재할 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 약학적으로 허용되는 에스테르의 형태(즉, 전구약물로서 사용될 화학식 I의 산의 메틸 또는 에틸 에스테르)로 존재할 수도 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 용매화, 즉 수화될 수 있다. 용매화는 제조 공정의 과정에서 수행될 수 있거나, 즉 초기에 무수물인 화학식 I의 화합물의 흡습성의 결과로서 발생할 수 있다(수화).
동일한 분자식을 가지나 성질이 상이하거나 이들 원자의 결합 순서 또는 공간내 이들 원자의 배열이 상이한 화합물을 "이성질체"라고 칭하고, 이는 본 발명의 범주내에 있다. 공간내 원자의 배열이 상이한 이성질체를 "입체이성질체"라고 칭한다. 부분입체이성질체는 하나 이상의 키랄 중심에서 반대의 배열을 가지는 입체이성질체이고 이는 거울상이성질체가 아니다. 서로 겹쳐질 수 없는 거울상 이미지인 하나 이상의 비대칭 중심을 가지는 입체이성질체를 "거울상이성질체"라고 칭한다. 화합물이 비대칭 중심을 가지는 경우, 예를 들어 탄소 원자가 4개의 상이한 기에 결합되는 경우, 한 쌍의 거울상이성질체가 가능하다. 거울상이성질체는 이의 비대칭 중심의 절대 배열에 의해 특징화될 수 있고, 이는 칸, 인골드 및 프레로그(Cahn, Ingold and Prelog)의 R- 및 S-순서 규칙 또는 분자가 편광판을 회전시키는 방식에 의해 기재되고, 우회전성 또는 좌회전성으로 표시된다(즉, 각각 (+)- 또는 (-)-이성질체). 키랄 화합물은 개별적 거울상이성질체 또는 이들의 혼합물로서 존재할 수 있다. 동일한 비율의 거울상이성질체를 함유하는 혼합물을 "라세미체 혼합물"이라고 칭한다.
용어 화합물의 "치료적 유효량"은 질병의 증상의 예방, 완화 또는 개선에 유효하거나, 치료받을 개체의 생존을 연장하는데 유효한 화합물의 양을 의미한다. 치료적 유효량의 결정은 당분야의 기술이다. 본 발명에 따른 화합물의 치료적 유효량 또는 투여량은 광범위한 한계 내에서 변할 수 있고 당분야에 공지된 방식으로 결정될 수 있다. 이러한 투여량은 투여될 화합물, 투여의 경로, 치료될 질환 및 치료받을 환자를 포함하는 각각의 특정한 경우에서 개별적 요건에 맞추어 조정될 것이다. 일반적으로, 체중 약 70 kg의 성인에게 경구 또는 비경구 투여하는 경우, 약 0.1 내지 약 5,000 mg, 1 내지 약 1,000 mg 또는 1 내지 100 mg의 일일 투여량이 적절할 수 있지만, 권고되는 경우 상기 하한 및 상한이 초과될 수도 있다. 일일 투여량은 단일 투여 또는 분할 투여로서 투여될 수 있거나, 비경구 투여에 대해, 연속 주입으로서 제공될 수 있다.
용어 "약학적으로 허용되는 담체"는 용매, 분산 매질, 코팅, 항균제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제를 포함하는 약학적 투여와 양립할 수 있는 임의의 모든 물질, 및 약학적 투여와 양립할 수 있는 다른 물질 및 화합물을 포함하는 것으로 의도된다. 임의의 종래의 매질 및 제제가 활성 화합물과 양립하지 않음을 제외하고, 본 발명의 조성물에서 이의 용도가 고려된다. 또한, 보충적 활성 화합물이 조성물에 포함될 수 있다.
본원의 조성물의 제조에 유용한 약학적 담체는 고체, 액체 또는 기체일 수 있다; 따라서, 조성물은 정제, 알약, 캡슐, 좌제, 분말, 장용 코팅되거나 다른 보호된 제형(예를 들어 이온교환수지 상에 결합하거나 지질-단백질 비히클에 포장됨), 지효성 제형, 용액, 현탁액, 엘릭서, 에어로졸 등의 형태로 섭취될 수 있다. 담체는 페트롤륨 오일, 동물성 오일, 식물성 오일 또는 합성 기원 오일, 예를 들어 땅콩 오일, 대두 오일, 미네랄 오일, 참깨 오일 등을 포함하는 다양한 오일로부터 선택될 수 있다. 바람직한 액체 담체, 특히 (혈액과 등장인 경우) 주사액용 액체 담체는 물, 염수, 수성 덱스트로스 및 글리콜이다. 예를 들어, 정맥내 투여용 제형은, 고체 활성 성분을 수중에 용해시켜 수용액을 생성하고, 상기 용액을 멸균하여 제조되는 멸균 수용액을 포함한다. 적합한 약학적 부형제는 전분, 셀룰로스, 활석, 글루코스, 락토스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 초크, 실리카, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 염화 나트륨, 건조 탈지 우유, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 조성물은 통상적인 약학적 첨가제, 예컨대 방부제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 삼투압 조절용 염, 완충제 등에 적용될 수 있다. 적합한 약학적 담체 및 이의 제형은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences by E. W. Martin]에 개시되어 있다. 이러한 조성물은 임의의 경우에 수용자에게 적절한 투여를 위해 유효량의 활성 화합물과 함께 적합한 담체를 함유하여 적절한 투여량 형태를 제조한다.
본 발명의 방법의 실행에서, 유효량의 본 발명의 화합물 중 임의의 하나 또는 본 발명의 임의의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 에스테르의 조합은 단독 또는 조합으로 당분야에 공지된 임의의 일반적 및 허용되는 방법을 통해 투여된다. 따라서, 화합물 또는 조성물은 경구(예를 들어 구강), 설하, 비경구(예를 들어 근육내, 정맥내 또는 피하), 직장(예를 들어 좌제 또는 워싱(washing)에 의해), 경피(예를 들어 피부 전기천공법) 또는 흡입(예를 들어 에어로졸에 의해) 투여, 및 정제 및 현탁액을 포함하는 고체, 액체 또는 기체 투여량의 형태로 투여될 수 있다. 투여는 연속 치료법으로 단일 단위 투여량 형태로 또는 임의량으로 단일 투여 치료법으로 수행될 수 있다. 또한, 치료적 조성물은 친유성 염, 예컨대 파모산과 함께 오일, 유화액 또는 분산액의 형태로 또는 피하 또는 근육내 투여용 생분해성 지효성 조성물의 형태로 투여될 수 있다.
본 발명은 특히 하기에 관한 것이다:
X가 -CH2-인 화학식 Ⅰ의 화합물;
X가 산소인 화학식 Ⅰ의 화합물;
n이 0인 화학식 Ⅰ의 화합물;
n이 1인 화학식 Ⅰ의 화합물;
R1이 할로페닐인 화학식 Ⅰ의 화합물;
R1이 플루오로페닐인 화학식 Ⅰ의 화합물;
R2가 메틸, 에틸, 이소프로필 또는 3차-부틸인 화학식 Ⅰ의 화합물;
R2가 메틸, 에틸 또는 이소프로필인 화학식 Ⅰ의 화합물;
R3이 트라이플루오로메틸-페닐 또는 트라이플루오로메틸-피리디닐인 화학식 Ⅰ의 화합물;
R3이 트라이플루오로메틸-페닐인 화학식 Ⅰ의 화합물; 및
R3이 트라이플루오로메틸-피리디닐인 화학식 Ⅰ의 화합물.
본 발명은 추가적으로, 특히
2-[에틸-(4-플루오로-벤젠설포닐)-아미노]-N-[1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피페리딘-3-일메틸]-아세트아마이드;
2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피페리딘-3-일메틸]-아세트아마이드;
2-[에틸-(4-플루오로-벤젠설포닐)-아미노]-N-[1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피롤리딘-3-일메틸]-아세트아마이드;
2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피롤리딘-3-일메틸]-아세트아마이드;
2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[(S)-1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피페리딘-3-일메틸]-아세트아마이드;
2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[(R)-1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피페리딘-3-일메틸]-아세트아마이드;
2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-메틸-아미노]-N-[4-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-몰폴린-2-일메틸]-아세트아마이드;
2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[4-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-몰폴린-2-일메틸]-아세트아마이드;
2-[에틸-(4-플루오로-벤젠설포닐)-아미노]-N-[4-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-몰폴린-2-일메틸]-아세트아마이드;
2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[(R)-4-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-몰폴린-2-일메틸]-아세트아마이드;
2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[(S)-4-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-몰폴린-2-일메틸]-아세트아마이드; 및
2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[4-(5-트라이플루오로메틸-피리딘-2-일)-몰폴린-2-일메틸]-아세트아마이드
로부터 선택된 화학식 Ⅰ의 화합물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 하기에 관한 것이다:
치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물;
치료적 활성 물질로서 사용하기 위한 화학식 I의 화합물;
호흡기 장애의 치료 또는 예방을 위한 화학식 I의 화합물의 용도;
호흡기 장애의 치료용 또는 예방용 약제의 제조를 위한 화학식 I의 화합물의 용도;
호흡기 장애의 치료 또는 예방에서 사용하기 위한 화학식 I의 화합물; 및
치료적 유효량의 화학식 I의 화합물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 천식, 알레르기성 비염 및 기관지 경련으로부터 선택된 호흡기 장애의 치료 방법.
호흡기 장애의 예는, 예를 들어 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 천식, 알레르기성 비염 및 기관지 경련이다.
상기 화합물을 제조하는데 사용된 출발 물질 및 시약은 일반적으로 상업적 공급자, 예컨대 알드리치 케미칼 컴퍼니(Aldrich Chemical Co.)로부터 입수가능하거나 참고문헌, 예컨대 문헌[Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis; Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-15]; [Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Elsevier Science Publishers, 1989, Volumes 1-5 and Supplementals] 및 [Organic Reactions, Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-40]에 기재된 절차에 따라 당업자에게 공지된 방법에 의해 제조된다.
하기 합성 반응식은 단지 본 발명의 화합물이 합성될 수 있는 일부 방법의 예시이고, 이러한 반응식에 대한 다양한 변형이 있을 수 있고, 이는 본원에 포함된 개시내용에 관련된 분야의 숙련자에게 제안될 것이다.
합성 반응식의 출발 물질 및 중간체는 필요에 따라 비제한적으로, 여과, 증류, 결정화, 크로마토그래피 등을 포함하는 통상적인 기술을 사용하여 단리 및 정제될 수 있다. 이러한 물질은 물리적 상수 및 스펙트럼 데이터를 포함하는 통상적인 수단을 사용하여 특징화될 수 있다.
달리 명시되지 않는 한, 본원에 개시된 반응은 바람직하게, 불활성 대기하에 대기압에서 약 -78 내지 약 150 ℃ 범위의 온도, 보다 바람직하게 약 0 내지 약 125 ℃, 가장 바람직하고 편리하게 약 실온(주위 온도), 예를 들어 약 20 ℃에서 수행된다.
본 발명의 화합물은 임의의 수의 통상적인 수단에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어 하기 반응식 1에 요약한 과정에 따라 제조될 수 있다.
[반응식 1]
Figure pct00002
상기 반응식 1에 나타낸 바와 같이, 염기, 예를 들어 트라이에틸아민의 존재 하에, N-치환된 글라이신 에스터(ⅱ)는 설포닐 클로라이드(ⅰ)와 반응하여 중간체 설폰아마이드(ⅲ)를 형성할 수 있고, 이때 R은 메틸 또는 에틸 기일 수 있고, R1은 아릴, 헤테로아릴 및 할로겐으로 치환된 아릴일 수 있고, R2는 저급 알킬 기, 예를 들어 메틸, 에틸 또는 이소프로필 기일 수 있다. 온화한 조건, 예컨대 THF 중 수산화 리튬 수용액 하에 에스터(ⅲ)의 가수분해는 원하는 중간체 카복실산(ⅳ)을 제공할 수 있다.
팔라듐 촉매 조건 하에 환형 아민(ⅴ) 및 아릴브로마이드(ⅵ)의 커플링 반응은 N-아릴 중간체(ⅶ)를 제공할 수 있다. R4는 트라이플루오로메틸이다. 일반적인 부흐발트(Buchwald) 아민화 반응 조건이 N-아릴화 반응을 수행하는데 사용될 수 있다. 상세한 설명은 상응하는 중간체의 제조 절차에 나타나 있다. 화합물 (ⅴ)에서, n은 0 또는 1일 수 있다(5- 또는 6-원환 아민). n이 0인 경우, X는 (CH2)이다. n이 1인 경우, X는 (CH2) 또는 산소일 수 있다. 화합물 (ⅵ)에서, X, Y 및 Z는 (CH) 또는 N일 수 있다. (ⅶ)에서 부톡시카보닐 기의 쪼개짐은 상응하는 1차 아민(ⅷ)을 제공하여 이는 유리아민 또는 염산 염으로 저장될 수 있다.
최종적으로, 커플링제의 존재 하에 카르복실산(ⅳ) 및 아민(ⅷ)의 커플링은 목적 화합물 (ⅸ)을 생성할 수 있다. 아마이드 형성을 위한 펩타이드 화학에서 사용된 커플링제가 사용될 수 있다. 상세한 조건은 실시예에서 볼 수 있다.
그러므로, 본 발명은 또한, 하기 화학식 B의 화합물, 커플링제 및 염기의 존재 하에 하기 화학식 A의 화합물을 반응시킴을 포함하는 화학식 Ⅰ의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다:
[화학식 A]
Figure pct00003
[화학식 B]
Figure pct00004
상기 식에서, R1 내지 R3은 상기 정의된 바와 같다.
본 발명의 방법에 유용한 커플링제의 예는 공지된 아마이드 형성 커플링제, 예를 들어 HATU이다.
상기 방법에 적절한 염기의 예는 다이이소프로필에틸아민이다.
또한, 본 발명은 본 발명의 방법에 따라 제조된 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.
이제, 본 발명은 비제한적인 하기 실시예에 의해 예시될 것이다.
실시예
특정 예시적 실시양태가 본원에 도시 및 개시되었지만, 본 발명의 화합물을 적절한 출발 물질을 사용하여 본원에 일반적으로 개시된 방법 및/또는 당업자에게 이용가능한 방법에 따라 제조할 수 있다.
중간체 및 최종 화합물을 플래쉬 크로마토그래피 및/또는 역상 분취 HPLC(고성능 액체 크로마토그래피)에 의해 정제하였다. 달리 언급하지 않는 한, 플래쉬 크로마토그래피를 하기를 사용하여 수행하였다: (1) 바이오티지(Biotage) SP1(상표)시스템 및 쿼드(Quad) 12/25 카트리지 모듈(바이오티지 AB로부터 입수), (2) ISCO 콤비플래쉬(CombiFlash, 등록상표) 크로마토그래피 기기(텔레다인 이스코 인코포레이티드(Teledyne Isco, Inc.)로부터 입수), 또는 (3) 아나로직스(Analogix, 등록상표) 인텔리플래쉬(IntelliFlash)280(상표)크로마토그래피 기기(아나로직스 인코포레이티드(배리언 인코포레이티드(Varian Inc.) 자회사)로부터 입수). 달리 언급하지 않는 한, 사용된 실리카겔 브랜드 및 공극 크기는 하기와 같았다: (1) KP-SIL(상표)60 Å, 입자 크기: 40 내지 60 μm(바이오티지 AB로부터 입수); (2) 실리카겔 CAS 등록 번호: 63231-67-4, 입자 크기: 47 내지 60 μm; 또는 (3) ZCX(큉다오 하이양 케미칼 컴퍼니 리미티드(Qingdao Haiyang Chemical Co., Ltd)로부터 입수), 공극 크기: 200 내지 300 메쉬(mesh) 또는 300 내지 400 메쉬. 역상 분취 HPLC를 하기 컬럼 중 하나 이상을 사용하는 워터스(Waters, 등록상표) 델타-프렙(Delta-Prep, 상표)3000 HPLC 시스템(워터스 코포레이션으로부터 입수)을 사용하여 수행하였다: 배리언 퍼슈트(Varian Pursuit, 등록상표) C-18 컬럼(10 μm, 20 x 150 mm, 배리언 인코포레이티드로부터 입수), 엑스브릿지(Xbridge, 상표) 프렙 C18 컬럼(5 μm, OBD(상표) 20 × 100 mm, 워터스 코포레이션으로부터 입수), 또는 선파이어(SunFire, 상표) 프렙 C18 컬럼(5 μm, OBD(상표) 30 × 100 mm, 워터스 코포레이션으로부터 입수).
질량 분광법(MS) 또는 고분해능 질량 분광법(HRMS)을 워터스(등록상표) ZQ(상표) 4000(워터스 코포레이션으로부터 입수), 워터스(등록상표) 콰트로 마이크로(Quattro micro, 상표) API(워터스 코포레이션으로부터 입수), 마이크로매스(Micromass, 등록상표) 플랫폼 II(마이크로매스(워터스 코포레이션의 분할)로부터 입수), 4.7 테슬라(Tesla) 자석을 가진 브루커(Bruker, 등록상표) 아펙스(Apex, 등록상표)II FTICR(브루커 코포레이션으로부터 입수), 워터스(등록상표) 앨리언스(Alliance, 등록상표) 2795-ZQ(상표)2000(워터스 코포레이션으로부터 입수), 또는 MDS 사이엑스(Sciex, 상표) API-2000(상표)n API(MDS 인코포레이티드로부터 입수)를 사용하여 수행하였다. 달리 언급하지 않는 한, 질량 스펙트럼 데이터는 일반적으로 모이온만을 지시한다. MS 또는 HRMS 데이터는 지시된 특정 중간체 또는 화합물에 대해 제공되었다.
핵자기 공명 분광(NMR)을 모두 배리언 인코포레이티드로부터 입수한 배리언(등록상표) 머큐리(Mercury)300 NMR 분광계(300 MHz에서 수득한 1H NMR 스펙트럼) 및 배리언(등록상표) 이노바(Inova)400 NMR 분광계(400 MHz에서 수득한 1H NMR 스펙트럼)를 사용하여 수행하였다. NMR 데이터는 지시된 특정 중간체 또는 화합물에 대하여 제공되었다.
공기-민감 시약을 포함하는 모든 반응을 불활성 대기하에 수행하였다. 달리 언급하지 않는 한, 시약을 상업적 공급자로부터 공급받은 대로 사용하였다.
부여된 절대 입체화학은 공지된 절대 배열의 키랄 빌딩 블록으로부터 제조된 유사체에 대한, 생물학적 효능의 비교 및/또는 실리카겔 TLC 및 크로마토그래피 상의 상대 체류 시간에 기초한다.
중간체
[(4- 플루오로 - 벤젠설포닐 )- 메틸 -아미노]-아세트산
Figure pct00005
4-플루오로벤젠-1-설포닐 클로라이드(1.95 g, 10 mmol) 및 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드(1.54 g, 10 mmol)를 다이클로로메탄(50 mL)에 현탁시켰다. 얼음 배스 하에서, 트라이에틸아민(4.2 mL)을 첨가하고 생성된 혼합물을 4 시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 증발시키고 잔여물을 에틸 아세테이트(60 mL)로 처리하고 물, 중탄산 나트륨 용액 및 최종적으로 희석한 염산 용액으로 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하고 건조시켰다. 용매를 증발시키고 잔여물을 진공에서 건조시켜 [(4-플루오로-벤젠설포닐)-메틸-아미노]-아세트산 에틸 에스터로서 유성(oily)의 물질(2.27 g)을 생성하였다.
에틸 2-(4-플루오로-N-메틸페닐설폰아미도)아세테이트(2.27 g)를 THF(20 mL)에 용해시키고 0.5 N LiOH 용액(20 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 5 시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고 잔여물을 수중에 용해시키고 여과하고 염산으로 산성화시켰다. 백색 고체를 여과하여 [(4-플루오로-벤젠설포닐)-메틸-아미노]-아세트산(1.68 g)을 생성하였다. C9H10FN04S에 대한 LRMS 계산치(m/e) 247.0; 실측치 246.1(ES-).
[에틸-(4- 플루오로 - 벤젠설포닐 )-아미노]-아세트산
Figure pct00006
[(4-플루오로-벤젠설포닐)-메틸-아미노]-아세트산의 제조에 대해 기재한 바와 동일한 절차를 이용하여 본 중간체를 제조하였다. C10H12FN04S에 대한 LRMS 계산치(m/e) 261.0; 실측치 260.1(ES-).
[(4- 플루오로 - 벤젠설포닐 )-이소프로필-아미노]-아세트산
Figure pct00007
[(4-플루오로-벤젠설포닐)-메틸-아미노]-아세트산의 제조에 대해 기재한 바와 동일한 절차를 이용하여 본 중간체를 제조하였다. C11H14FN04S에 대한 LRMS 계산치(m/e) 275.0; 실측치 274.1(ES-).
[1-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )-피페리딘-3- 일메틸 ]- 카르밤산 3차-부틸 에스터
Figure pct00008
25 ℃에서 톨루엔(5 mL) 중의 피페리딘-3-일메틸-카르밤산 3차-부틸 에스터(1.00 g, 4.67 mmol), 1-브로모-4-트라이플루오로메틸-벤젠(1.15 g, 5.13 mmol),나트륨 3차-부톡사이드(673 mg, 7.00 mmol), (R)-(+)-2,2'-비스(다이페닐포스피노)-1,1'-바이나프틸(291 mg, 0.47 mmol) 및 트리스(다이벤질리덴아세톤)-다이팔라듐(0) (214 mg, 0.23 mmol) 용액을 질소 기체로 퍼지(purge)하고 3 회 배기하였다. 상기 용액을 밀봉하고 14시간 동안 120 ℃까지 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 25 ℃까지 냉각시키고 개봉하고 물에 부었다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 3 회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 황산 마그네슘으로 건조시켰다. 여과 후 진공에서 농축하여 경유로서 조질의 [1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피페리딘-3-일메틸]-카르밤산 3차-부틸 에스터(1.5 g, 90 % 조질)를 얻었다.
[1-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )-피페리딘-3-일]-메틸아민
Figure pct00009
25 ℃에서 에틸 아세테이트(5 mL) 중의 [1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피페리딘-3-일메틸]-카르밤산 3차-부틸 에스터(500 mg, 1.4 mmol 조질) 용액을 1 M의 염화수소 수용액(1 mL)으로 처리하였다. 상기 반응 혼합물을 2 시간 동안 50 ℃까지 가열하였다. 이어서, 반응 혼합물을 25 ℃까지 냉각시키고 물에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 수성 층을 수산화 암모늄 수용액으로 약 9 내지 10의 pH까지 조정하고 에틸 아세테이트로 3 회 추출하였다. 이어서, 합한 유기 층을 황산 마그네슘으로 건조시키고 여과하고 진공에서 농축하여 오일로서 [1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피페리딘-3-일]-메틸아민(100 mg, 28%, 조질)을 얻었다. [MH]+ = 259.0.
[1-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )- 피롤리딘 -3- 일메틸 ]- 카르밤산 3차-부틸 에스터
Figure pct00010
25 ℃에서 톨루엔(5 mL) 중의 피롤리딘-3-일메틸-카르밤산 3차-부틸 에스터(0.50 g, 2.50 mmol), 1-브로모-4-트라이플루오로메틸-벤젠(0.62 g, 2.75 mmol), 나트륨 3차-부톡사이드(0.36 g, 3.47 mmol), (R)-(+)-2,2'-비스(다이페닐포스피노)-1,1'-바이나프틸(155 mg, 0.25 mmol) 및 트리스(다이벤질리덴아세톤)-다이팔라듐(0)(114 mg, 0.13 mmol) 용액을 질소 기체로 퍼지하고 3 회 배기하였다. 상기 용액을 밀봉하고 14시간 동안 120 ℃까지 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 25 ℃까지 냉각시키고 개봉하고 물에 부었다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 3 회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 황산 마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 증발시키고 잔여물을 플래시(flash) 컬럼 크래마토그래피(80/20 헥산/에틸 아세테이트)로 정제하여 경유로서 [1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피롤리딘-3-일메틸]-카르밤산 3차-부틸 에스터(500 mg, 58%)를 얻었다.
[1-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )- 피롤리딘 -3-일]-메틸아민
Figure pct00011
25 ℃에서 에틸 아세테이트(5 mL) 중의 [1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피롤리딘-3-일메틸]-카르밤산 3차-부틸 에스터(500 mg, 1.45 mmol) 용액을 1 M의 염화수소 수용액(1 mL)으로 처리하였다. 상기 반응 혼합물을 2 시간 동안 50 ℃까지 가열하였다. 이어서, 상기 반응 혼합물을 물에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 수성 층을 수산화 암모늄 수용액으로 약 9 내지 10의 pH까지 조정하였다. 상기 수성 층을 에틸 아세테이트로 3 회 추출하였다. 이어서, 유기 층을 황산 마그네슘으로 건조시키고 여과하고 진공에서 농축하여 오일로서 조질의 [1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피롤리딘-3-일]-메틸아민(100 mg, 28%, 조질)을 얻었다. [MH]+ = 245.0.
[4-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )- 몰폴린 -2- 일메틸 ]- 카르밤산 3차-부틸 에스터
Figure pct00012
3차-부틸 몰폴린-2-일메틸카바에이트(1.0 g, 4.62 mmol), 1-브로모-4-(트라이플로오로메틸)벤젠(1.04 g, 4.62 mmol), Pd(dba)2(133 mg, 0.23 mmol), X-Phos (220 mg, 0.46 mmol) 및 나트륨 3차-부톡사이드(533 mg, 5.55 mol)를 밀봉관에서 10 mL의 건조 톨루엔 중에 혼합하였다. 생성된 혼합물을 아르곤으로 탈기하고 이어서 4 시간 동안 105 ℃에서 교반하였다. 상기 혼합물을 셀라이트(Celite) 층을 통해 여과시키고 THF로 헹구었다. 용매를 증발시키고 잔여물을 물 및 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고 농축하였다. 잔여물을 ISCO 플래시 컬럼 크래마토그래피(50 g의 실리카겔, 0 % 내지 80 %의 헥산 중의 에틸 아세테이트)로 정제하여 목적 화합물을 얻었다(727 mg, 44%).
[4-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )- 몰폴린 -2-일]-메틸아민 하이드로클로라이드
Figure pct00013
3차-부틸 (4-(4-(트라이플루오로메틸)페닐)몰폴린-2-일)메틸카바메이트(720 mg)를 다이클로로메탄(4 mL)에 용해시키고 TFA(3 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1 시간 동안 실온에서 교반하고 용매를 증발시켰다. 잔여물을 다이클로로메탄 및 톨루엔으로 처리하였다. 용매를 증발시켰다. 잔여물을 다이클로로메탄(10 mL)에 용해시키고 에터 중의 1N의 염화수소(10 mL)를 첨가하였다. 용매를 증발시키고 잔여물을 건조 에터로 마쇄하고 여과하여 목적 염산 염을 얻었다(485 mg, 82%). [MH]+ = 261.
[4-(5- 트라이플루오로메틸 -피리딘-2-일)- 몰폴린 -2- 일메틸 ]- 카르밤산 3차-부틸 에스터
Figure pct00014
3차-부틸 몰폴린-2-일메틸카바메이트(1.0 g, 4.62 mmol), 2-클로로-5-(트라이플루오로메틸)피리딘(839 mg, 4.62 mmol), Pd(dba)2(133 mg, 0.23 mmol), 나트륨 3차-부톡사이드(533 mg, 5.55 mmol) 및 X-Phos(220 mg, 0.46 mmol)를 톨루엔(10 mL) 중에서 혼합하였다. 생성된 혼합물을 5 분 동안 질소로 탈기하고 밀봉하였다. 생성된 혼합물을 12 시간 동안 100 ℃에서 교반하였다. 상기 혼합물을 여과하고 THF로 헹구었다. 용매를 증발시키고 잔여물을 ISCO 플래시 컬럼 크래마토그래피(0 % 내지 35 %의 헥산 중의 에틸 아세테이트)로 정제하여 옅은 갈색의 왁스성 물질로서 목적 화합물을 얻었다(350 mg, 21%). [MH]+ = 362.1.
[4-(5- 트라이플루오로메틸 -피리딘-2-일)- 몰폴린 -2-일]-메틸아민 하이드로클로라이드
Figure pct00015
3차-부틸(4-(5-(트라이플루오로메틸)피리딘-2-일)몰폴린-2-일)메틸카바메이트(350 mg)를 다이클로로메탄(3 mL)에 용해시키고 TFA(1.5 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1 시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 증발시키고 잔여물을 건조시켰다. 잔여물을 다이클로로메탄에 재용해시키고 에터 중의 1N의 염산(6 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 농축하고 건조시켰다. 잔여물을 건조 에터에 현탁시키고 상층을 따라내었다. 고체 물질을 진공에서 건조시켜 목적 염산 염을 얻었다(312 mg, 97%). [MH]+ = 262.1.
실시예 1
2-[에틸-(4- 플루오로 - 벤젠설포닐 )-아미노]-N-[1-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )-피페리딘-3- 일메틸 ]- 아세트아마이드
Figure pct00016
25 ℃에서 다이클로로메탄(5 mL) 중의 조질의 [1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피페리딘-3-일]메틸아민(30.0 mg, 0.12 mmol, 조질) 및 [에틸-(4-플루오로-벤젠설포닐)-아미노]-아세트산(30.0 mg, 0.12 mmol) 용액을 HATU(43.7 mg, 0.12 mmol)로 처리하였다. N,N-다이이소프로필에틸아민(29.7 mg, 0.23 mmol)을 상기 용액에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 2 시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0.2 M의 수성 KHSO4 용액에 부었고 에틸 아세테이트로 3 회 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 3회, 염수로 1회 세척하였다. 이어서, 유기 층을 황산 마그네슘으로 건조시키고 여과하고 진공에서 농축하였다. 플래시 컬럼 크로마토그래피(50/50의 헥산/에틸 아세테이트)하여 백색 고체로서 2-[에틸-(4-플루오로-벤젠설포닐)-아미노]-N-[1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피페리딘-3-일메틸]-아세트아마이드를 제공하였다(10.2 mg, 18%). [MH]+ = 502.0.
실시예 2
2-[(4- 플루오로 - 벤젠설포닐 )-이소프로필-아미노]-N-[1-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )-피페리딘-3- 일메틸 ]- 아세트아마이드
Figure pct00017
25 ℃에서 다이클로로메탄(5 mL) 중의 조질의 [1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피페리딘-3-일]메틸아민(47.0 mg, 0.18 mmol, 조질) 및 [(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-아세트산(50.0 mg, 0.18 mmol) 용액을 HATU(69.1 mg, 0.18 mmol)로 처리하였다. N,N-다이이소프로필에틸아민(46.9 mg, 0.36 mmol)을 상기 용액에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 2 시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0.2 M의 수성 KHSO4 용액에 부었고 에틸 아세테이트로 3 회 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 3회, 염수로 1회 세척하였다. 이어서, 유기 층을 황산 마그네슘으로 건조시키고 여과하고 진공에서 농축하였다. 플래시 컬럼 크로마토그래피(50/50의 헥산/에틸 아세테이트)하여 백색 고체로서 2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피페리딘-3-일메틸]-아세트아마이드를 제공하였다(50.0 mg, 53%). [MH]+ = 516.2.
실시예 3
2-[에틸-(4- 플루오로 - 벤젠설포닐 )-아미노]-N-[1-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )- 피롤리딘 -3- 일메틸 ]- 아세트아마이드
Figure pct00018
25 ℃에서 다이클로로메탄(5 mL) 중의 조질의 [1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피롤리딘-3-일]-메틸아민(28.0 mg, 0.12 mmol, 조질) 및 [에틸-(4-플루오로-벤젠설포닐)-아미노]-아세트산(30.0 mg, 0.12 mmol) 용액을 HATU(43.7 mg, 0.12 mmol)로 처리하였다. N,N-다이이소프로필에틸아민(29.7 mg, 0.23 mmol)을 상기 용액에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 2 시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0.2 M의 수성 KHSO4 용액에 부었고 에틸 아세테이트로 3 회 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 3회, 염수로 1회 세척하였다. 이어서, 유기 층을 황산 마그네슘으로 건조시키고 여과하고 진공에서 농축하였다. 플래시 컬럼 크로마토그래피(50/50의 헥산/에틸 아세테이트)하여 백색 고체로서 2-[에틸-(4-플루오로-벤젠설포닐)-아미노]-N-[1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피롤리딘-3-일메틸]-아세트아마이드를 제공하였다(9.0 mg, l6%). [MH]+ = 488.0.
실시예 4
2-[(4- 플루오로 - 벤젠설포닐 )-이소프로필-아미노]-N-[1-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )- 피롤리딘 -3- 일메틸 ]- 아세트아마이드
Figure pct00019
25 ℃에서 다이클로로메탄(5 mL) 중의 조질의 [1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피롤리딘-3-일]-메틸아민(26.6 mg, 0.11 mmol, 조질) 및 [(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-아세트산(30.0 mg, 0.11 mmol) 용액을 HATU(41.4 mg, 0.11 mmol)로 처리하였다. N,N-다이이소프로필에틸아민(28.2 mg, 0.22 mmol)을 상기 용액에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 2 시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0.2 M의 수성 KHSO4 용액에 부었고 에틸 아세테이트로 3 회 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 3회, 염수로 1회 세척하였다. 이어서, 유기 층을 황산 마그네슘으로 건조시키고 여과하고 진공에서 농축하였다. 플래시 컬럼 크로마토그래피(50/50의 헥산/에틸 아세테이트)하여 백색 고체로서 2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피롤리딘-3-일메틸]-아세트아마이드를 제공하였다(24.2 mg, 44%). [MH]+ = 502.1.
실시예 5
2-[(4- 플루오로 - 벤젠설포닐 )-이소프로필-아미노]-N-[(S)-1-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )-피페리딘-3- 일메틸 ]- 아세트아마이드
Figure pct00020
카이랄 컬럼(카이랄 테크놀로지스(Chiral Technologies)로부터의 IA 컬럼, 3x25 cm, 이산화탄소 중의 메탄올)을 이용하여 (실시예 2로부터) 상응하는 라세메이트의 SFC 분리로부터 본 화합물을 얻었다. 두번째 분획을 농축하고 (S)-이성질체로 지정하였다. [MH]+ = 515.9.
실시예 6
2-[(4-플 루오로 - 벤젠설포닐 )-이소프로필-아미노]-N-[(R)-1-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )-피페리딘-3- 일메틸 ]- 아세트아마이드
Figure pct00021
실시예 5에 기술된 것과 같은 카이랄 컬럼을 이용하여 (실시예 2로부터) 상응하는 라세메이트의 SFC 분리로부터 본 화합물을 얻었다. 첫번째 분획을 농축하고 (R)-이성질체로 지정하였다. [MH]+ = 515.9.
실시예 7
2-[(4- 플루오로 - 벤젠설포닐 )- 메틸 -아미노]-N-[4-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )- 몰폴린 -2- 일메틸 ]- 아세트아마이드
Figure pct00022
(4-(4-(트라이플루오로메틸)페닐)몰폴린-2-일)메틸아민 하이드로클로라이드(99 mg, 0.34 mmol), 2-(4-플루오로-N-메틸페닐설폰아미도)아세트산(82.5 mg, 0.34 mmol), BOP 시약(148 mg, 0.34 mmol) 및 TEA(0.2 mL)를 다이클로로메탄(5 mL) 중에서 혼합하였다. 생성된 혼합물을 밤새 교반하고 용매를 증발시켰다. 잔여물을 에틸 아세테이트 및 물로 추출하였다. 유기 층을 중탄산 나트륨 용액으로 세척하고 건조시켰다. 용매를 증발시키고 잔여물을 ISCO 플래시 컬럼 크래마토그래피(11 g의 실리카겔, 0 % 내지 80 %의 헥산 중의 에틸 아세테이트)로 정제하여 백색 고체로서 목적 화합물을 얻었다(140 mg, 86%). [MH]+ = 489.9.
실시예 8
2-[(4- 플루오로 - 벤젠설포닐 )-이소프로필-아미노]-N-[4-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )- 몰폴린 -2- 일메틸 ]- 아세트아마이드
Figure pct00023
(4-(4-(트라이플루오로메틸)페닐)몰폴린-2-일)메틸아민 하이드로클로라이드(99 mg, 0.34 mmol), 2-[(4-플루오로-N-메틸페닐설폰)-이소프로필-아미노]-아세트산(96 mg, 0.35 mmol), BOP 시약(154 mg, 0.35 mmol) 및 TEA(0.2 mL)를 다이클로로메탄(5 mL) 중에서 혼합하였다. 생성된 혼합물을 밤새 교반하고 용매를 증발시켰다. 잔여물을 에틸 아세테이트 및 물로 추출하였다. 유기 층을 중탄산 나트륨 용액으로 세척하고 건조시켰다. 용매를 증발시키고 잔여물을 ISCO 플래시 컬럼 크래마토그래피(11 g의 실리카겔, 0 % 내지 50 %의 헥산 중의 에틸 아세테이트)로 정제하여 백색 고체로서 목적 화합물을 얻었다(133 mg, 74%). [MH]+ = 517.9.
실시예 9
2-[에틸-(4- 플루오로 - 벤젠설포닐 )-아미노]-N-[4-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )- 몰폴린 -2- 일메틸 ]- 아세트아마이드
Figure pct00024
(4-(4-트라이플루오로메틸)페닐)몰폴린-2-일)메틸아민 하이드로클로라이드 (99 mg, 0.34 mmol), [에틸-(4-플루오로-벤젠설포닐)-아미노]-아세트산(87.2 mg, 0.34 mmol), BOP 시약(148 mg, 0.34 mmol) 및 TEA(0.2 mL)를 다이클로로메탄(5 mL) 중에서 혼합하였다. 생성된 혼합물을 밤새 교반하고 용매를 증발시켰다. 잔여물을 에틸 아세테이트 및 물로 추출하였다. 유기 층을 중탄산 나트륨 용액으로 세척하고 건조시켰다. 용매를 증발시키고 잔여물을 ISCO 플래시 컬럼 크래마토그래피(11 g의 실리카겔, 0 % 내지 60 %의 헥산 중의 에틸 아세테이트)로 정제하여 백색 고체로서 목적 화합물을 얻었다(125 mg, 74%). [MH]+ = 504.0.
실시예 10
2-[(4- 플루오로 - 벤젠설포닐 )-이소프로필-아미노]-N-[(R)-4-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )- 몰폴린 -2- 일메틸 ]- 아세트아마이드
Figure pct00025
카이랄 컬럼(다이아셀(Diacel) IA 3.0x25 cm, CO2 중 40 %의 메탄올)을 이용하여 (실시예 8로부터) 상응하는 라세메이트의 SFC 분리로부터 본 화합물을 얻었다. 첫번째 분획을 농축하고 (R)-이성질체로 지정하였다. [MH]+ = 517.9.
실시예 11
2-[(4- 플루오로 - 벤젠설포닐 )-이소프로필-아미노]-N-[(S)-4-(4- 트라이플루오로메틸 - 페닐 )- 몰폴린 -2- 일메틸 ]- 아세트아마이드
Figure pct00026
카이랄 컬럼(다이아셀(Diacel) IA 3.0x25 cm, C02 중 40 %의 메탄올)을 이용하여 (실시예 8로부터) 상응하는 라세메이트의 SFC 분리로부터 본 화합물을 얻었다. 두번째 분획을 농축하고 (S)-이성질체로 지정하였다. [MH]+ = 517.9.
실시예 12
2-[(4- 플루오로 - 벤젠설포닐 )-이소프로필-아미노]-N-[4-(5- 트라이플루오로메틸 -피리딘-2-일)- 몰폴린 -2- 일메틸 ]- 아세트아마이드
Figure pct00027
2-(4-플루오로-N-이소프로필페닐설폰아미도)아세트산(108 mg, 0.39 mmol), 4-(5-(트라이플루오로메틸)피리딘-2-일)몰폴린-2-일)메틸아민 다이하이드로클로라이드(131 mg, 0.39 mmol) 및 TEA (0.22 mL)를 다이클로로메탄(6 mL) 중에서 혼합하였다. 생성된 교반된 용액에 BOP 시약(174 mg, 0.39 mmol)을 첨가하였다. 생성된혼합물을 6 시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 증발시키고 잔여물을 에틸 아세테이트 및 물로 추출하고, 중탄산 나트륨 용액으로 세척하고 건조시켰다. 용매를 증발시켰다. 잔여물을 ISCO 플래시 컬럼 크래마토그래피(0 % 내지 100 %의 헥산 중의 에틸 아세테이트)로 정제하여 백색 분말로서 목적 화합물을 얻었다(160 mg, 79%). [MH]+ = 519.0.
실시예 13
IC 50 결정
투여 응답 분석: hTRPA1 - CHO 안정한 형질감염된 세포주 챈( Chan ) 시험
세포 배양 및 분석 시약
햄(Ham) F12 : 깁코(GIBCO) 번호 11765-047
테트라사이클린-미함유 소태아 혈청: 클론테크(ClonTech)번호 631106, 로트 A301097018
블라스티시딘(10 mg/ml 모액): 깁코 번호 A11139-02
제오신(Zeocin, 100 mg/ml 모액): 깁코 번호 R250-01
독시사이클린: 시그마(SIGMA) 번호 D9891
페니실린-스프렙토마이신 용액(100X): 깁코 번호 15140-122
글루타맥스(GlutaMAX, 100X): 깁코 번호 35050
트립신-EDTA : 깁코 번호 25200-056
PBS(칼슘 및 마그네슘 미함유): 깁코 번호 14190
HBSS: 깁코 번호 14025
헤페스(Hepes): 깁코 번호 15630
BSA(지방산 미함유, 내독소 저함량): 시그마 번호 A8806-5G
DMSO: 시그마 번호 D2650
AP-18 : 시그마 번호 A7232
시남알데하이드: 시그마 번호 W228613
ATP: 시그마 번호 A-6419
2-아미노에틸 다이페닐보리네이트: 시그마 번호 D9754
멘톨: 시그마 번호 M2772
FLIPR 칼슘 3 분석 키트: 몰레큘러 디바이시즈(Molecular Devices) 번호 R8108
프로베네시드: 인비트로겐(INVITROGEN) 번호 36400
플레이트: BD 번호 35-3962
CHO - K1 Tet - On HOMSA TRPA1 클론 20
중국 햄스터 난소 세포, 유도가능한 발현
클론 # 20, 계대 #26에서 수령
상기 세포주에서 채널 발현은 80 계대 이상에서 안정한 것으로 나타났다.
미코앨럿 키트(MycoAlert Kit)를 사용하여 확인된 미코플라스마 미함유
세포주 확장 및 집적
성장 조건:
CHO - K1 Tet - On HOMSA TRPA1 클론 20에 대한 성장 배지
10 % 테트라사이클린 미함유 FBS를 가지는 햄 F-12
1X 페니실린-스트렙토마이신
1X 글루타맥스
0.01 mg/ml 블라스티시딘
0.40 mg/ml 제오신
세포주 이배증가 속도는 약 15시간이었다. 배양 플레이트는 80 % 세포 합류(confluency)를 초과하지 않았다.
발현을 유도하기 위해, 테트라사이클린을 1 μg/ml의 최종 농도에서 블라스티시딘/제오신-미함유 배지에 첨가하였다. 실험을 유도 후 24 시간에서 수행하였다.
CHOK1 / TRPA1 세포의 플레이팅 조건
0.025 % 트립신/EDTA를 사용하여 세포를 채취함.
선택 항생제없이 성장 배지에서 세포를 재현탁화함.
세포 밀도를 측정하고 384 웰 흑색/투명한 조직 배양-처리된 플레이트에 1 μg/ml 독시사이클린 플레이트 25 μl/웰을 함유하는 배지에 2.4x105 세포/ml로 희석함.
37 ℃에서 밤새 배양함.
칼슘 유동 분석:
분석일:
시약:
대체 완충제: 행크(Hank) 평형 염 용액, 20 mM 헤페스, 및 0.005 % BSA 및 2x 프로베네시드
염료 로딩 완충제: 20 mM 헤페스를 함유하는 500 ml의 행크 평형 염 용액으로 하나의 바이알의 내용물을 용해시켜 Cal-3 NW 칼슘 염료를 제조하였다.
- CHOK1 / TRPA1 세포에 대한 대조군 화합물:
AP-18, 모용액 10 mM, 화합물 완충제(HBSS/20 mM 헤페스/0.005 % BSA)에 3.5X 화합물 희석하여 제조 - 최종 농도 10 μM.
시남알데하이드의 제조(작용제 첨가)
FW = 132.16
비중 = 1.046 gm/cc
1.32 gm/1.046 gm/cc = 1.26 ml의 모액
1.74 ml DMSO 첨가 = 3.3 M 모액
작업 용액 4.5X(화합물 완충제 중 최종 100 μM: HBSS/20 mM 헤페스/0.005 % BSA)
화합물 희석을 5 또는 10 mM 모액(100 % DMSO)으로부터 준비하였다
목적하는 최종 분석 농도를 반영하기 위한 적정시 부피 및 농도의 조정을 수행하였다.
화합물을 20 μM 3배 희석 11 단계 이후 또는 30 μM 2배 희석 11 단계 이후 시험하였다.
3 μl의 희석된 화합물을 바이트만(Weidmann) 384-웰 플레이트에 2개로 나란히 옮겼다.
100 μl의 HBSS/20 mM 헤페스/0.005 % BSA 완충제(화합물 완충제)를 사용하여 화합물 플레이트를 재현탁화하였다:
· 컬럼 1A-H: 완충제/DMSO(bk)
· 컬럼 2A-H: AP-18(CHOK1 TRPA1 세포에 대한 대조군 길항제)
· 컬럼 1I-P: ATP(CHOK1 테톤 세포에 대한 대조군)
· 컬럼 2I-P: 2APB(CHOK1/TRPM8 세포에 대한 대조군 길항제).
성장 배지를 세포 플레이트로부터 제거하고(20 μl), 20 μl의 대체 완충제를 첨가한 후에 25 μl의 희석된 염료를 첨가하였다. 모든 3단계를 플레이트 워셔 바이오텍(Plate Washer BioTek) 407을 사용하여 수행하였다. 이어서, 플레이트를 실온에서 30'동안 배양하였다.
배양 후에, 세포 및 화합물 플레이트 둘 다를 FLIPR에 제공하고, 20 μl의 희석된 화합물/길항제/bk를 FLIPR에 의해 세포 플레이트에 옮겼다. 이어서, 플레이트를 실온에서 30'동안 배양하였다. 30'동안 배양한 후에, 플레이트를 FLIPR에 다시 옮기고 20 μl의 4.5X 시남알데하이드를 세포 플레이트에 첨가하였다. 화합물 첨가 및 작용제 첨가 동안, 형광 판독을 동시에 세포 플레이트의 모든 384 웰로부터 1.5초마다 수행하였다. 5회의 판독을 수행하여 안정한 베이스라인을 설정한 후에, 20 μl의 샘플을 신속히(30 μl/초) 동시에 세포 플레이트의 각각의 웰에 첨가하였다. 총 경과시간 100초(화합물 첨가) 및 120초(작용제 첨가) 동안 샘플/작용제를 첨가 전, 첨가 동안 및 첨가 후에 형광을 연속적으로 모니터링하였다. 작용제 첨가 후 각각의 웰의 응답(피크 형광의 증가)을 결정하였다. 리간드 자극 전에 각각의 웰로부터 초기 형광 판독을 상기 웰의 데이터에 대한 0(영) 베이스라인 값으로 사용하였다. 응답을 하기 표 1에 나타낸 바와 같이 억제제 대조군의 억제율(%)로 나타냈다:
실시예 h-TRPA1 IC50 (μM)
1 0.494
2 0.233
3 0.634
4 0.425
5 0.307
6 0.504
7 1.516
8 0.193
9 0.226
10 1.31
11 0.151
12 0.385
상기에 개시된 본 발명의 특정 실시양태는 변형될 수 있고 청구범위의 범주 내에 속하므로, 본 발명은 상기 특정 실시양태로 제한되지 않음이 이해되어야 한다.

Claims (22)

  1. 하기 화학식 Ⅰ의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    [화학식 Ⅰ]
    Figure pct00028

    상기 식에서,
    X는 -CH2- 또는 산소이고;
    Y는 -(CH2)n-이고;
    R1은 할로겐으로 임의적으로 치환된 페닐이고;
    R2는 저급 알킬이고;
    R3은 트라이플루오로메틸-페닐, 트라이플루오로메틸-피리디닐, 트라이플루오로메틸-피리다지닐, 트라이플루오로메틸-피리미디닐 또는 트라이플루오로메틸-피라지닐이고;
    n은 0 또는 1이되, n은 X가 산소일 경우 0이 아니다.
  2. 제 1 항에 있어서,
    X가 -CH2-인 화합물.
  3. 제 1 항에 있어서,
    X가 산소인 화합물.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    n이 0인 화합물.
  5. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    n이 1인 화합물.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1이 할로페닐인 화합물.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1이 플루오로페닐인 화합물.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R2가 메틸, 에틸, 이소프로필 또는 3차-부틸인 화합물.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R2가 메틸, 에틸 또는 이소프로필인 화합물.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R3이 트라이플루오로메틸-페닐 또는 트라이플루오로메틸-피리디닐인 화합물.
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R3이 트라이플루오로메틸-페닐인 화합물.
  12. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R3이 트라이플루오로메틸-피리디닐인 화합물.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    2-[에틸-(4-플루오로-벤젠설포닐)-아미노]-N-[1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피페리딘-3-일메틸]-아세트아마이드;
    2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피페리딘-3-일메틸]-아세트아마이드;
    2-[에틸-(4-플루오로-벤젠설포닐)-아미노]-N-[1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피롤리딘-3-일메틸]-아세트아마이드;
    2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피롤리딘-3-일메틸]-아세트아마이드;
    2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[(S)-1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피페리딘-3-일메틸]-아세트아마이드;
    2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[(R)-1-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-피페리딘-3-일메틸]-아세트아마이드;
    2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-메틸-아미노]-N-[4-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-몰폴린-2-일메틸]-아세트아마이드;
    2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[4-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-몰폴린-2-일메틸]-아세트아마이드;
    2-[에틸-(4-플루오로-벤젠설포닐)-아미노]-N-[4-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-몰폴린-2-일메틸]-아세트아마이드;
    2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[(R)-4-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-몰폴린-2-일메틸]-아세트아마이드;
    2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[(S)-4-(4-트라이플루오로메틸-페닐)-몰폴린-2-일메틸]-아세트아마이드; 및
    2-[(4-플루오로-벤젠설포닐)-이소프로필-아미노]-N-[4-(5-트라이플루오로메틸-피리딘-2-일)-몰폴린-2-일메틸]-아세트아마이드
    로부터 선택된 화합물.
  14. 하기 화학식 B의 화합물, 커플링제 및 염기의 존재 하에 하기 화학식 A의 화합물을 반응시킴을 포함하는 화학식 Ⅰ의 화합물의 제조 방법:
    [화학식 A]
    Figure pct00029

    [화학식 B]
    Figure pct00030

    상기 식에서,
    R1 내지 R3은 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같다.
  15. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
    제 14 항의 방법에 따라 제조된 화합물.
  16. 치료적 유효량의 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 화합물 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물.
  17. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
    치료적 활성 물질로서 사용하기 위한 화합물.
  18. 호흡기 장애의 치료 또는 예방을 위한, 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
  19. 호흡기 장애의 치료용 또는 예방용 약제의 제조를 위한, 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
  20. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
    호흡기 장애의 치료 또는 예방을 위해 사용되는 화합물.
  21. 치료적 유효량의 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 천식, 알레르기성 비염 및 기관지 경련으로부터 선택된 호흡기 장애의 치료 방법.
  22. 상기에 개시된 바와 같은 발명.
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