KR20150080293A - 오갈피 속 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 허혈-재관류 손상의 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

오갈피 속 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 허혈-재관류 손상의 예방 및 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 오갈피 속 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 허혈-재관류 손상 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 흰털오갈피(Acanthopanax divaricatus vat. albeofructus) 추출물을 투여한 간 허혈-재관류(hepaticischemia-reperfusion) 손상 쥐 모델에서 간 조직의 염증세포 침윤현상이 완화되고, TNF-a, IL-6의 수준이 감소하며, 간기능지표인 혈중 AST, ALT, LDH 활성이 감소하므로, 상기 오갈피 속 추출물을 간 허혈-재관류 손상 예방 및 치료용 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용할 수 있음을 확인하였다.

Description

오갈피 속 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 허혈-재관류 손상의 예방 및 치료용 조성물{Composition for prevention and treatment of hepatic ischemia-reperfusion injury comprising extracts of Acanthopanax sp.}
본 발명은 오갈피 속(Acanthopanax sp .) 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 허혈-재관류(hepetic ischemia-reperfusion, I/R) 손상의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 건강식품에 관한 것이다.
허혈(Ischemia)이란 생리적 기능에 요구되는 산소 요구량보다 산소공급이 부족한 상태로서 국소적 혈류의 감소를 말한다. 재관류(Reperfusion)란 혈액이 다시 조직에 공급되는 것으로, 허혈성 조직의 생존에 필수적이나, 허혈 동안 산화성 손상에 매우 민감한 경향이 있는 조직들의 재산화로 인해 조직의 손상을 더욱 가속화시킨다. 이를 ‘허혈-재관류(I/R) 손상’이라고 부른다. 허혈-재관류의 결과는 가역적 및 비가역적 세포조직 손상, 세포 치사 및 기관 기능의 효율감소 등으로 나타난다. 허혈-재관류는 인간의 생명과 직결되는 질병 즉, 심장관련사망의 주원인인 허혈성 심질환, 뇌졸중, 쇼크뿐만 아니라 암 및 노화 등과 밀접하게 관련되며, 특히 간의 허혈-재관류 손상은 쇼크 후 간부전, 간절제술, 간암 및 간장 이식 시 필연적으로 수반되며, 이는 활성산소종 및 염증매개인자들의 발현을 통해 전신적 염증반응 및 다양한 장기부전을 야기시켜 사망에 까지도 이르게 한다.
간에서의 허혈-재관류는 생체 내 허혈-재관류(warm I/R) 와 장기의 적출 후 저온 보관 시의 재관류(cold-storage/reperfusion) 손상으로 분류된다. 생체 내 허혈-재관류 손상은 간 절제술, 간 이식, 쇼크, 일부 치명적인 간 손상, 정맥-폐색성 질병 및 버드 키아리 증후군(Budd-Chiari syndrome)에서 임상적으로 나타난다. 장기의 적출 후 저온 보관 시의 재관류 손상은 이식 전 장기를 보관하는 기간에 발생한다. 생체 내 허혈-재관류와 장기의 적출 후 저온 보관 시의 재관류 손상의 병리와 병리학적 메카니즘 사이에 많은 유사점이 있으나 명백한 차이점 또한 존재한다. 간에서의 생체 내 허혈에 의한 손상은 초기(재관류 후 2 시간 이내)와 후기(재관류 후 6 시간에서 48 시간 이내)로 구분된다. 간에서의 허혈-재관류 초기에는 간문맥 주위의 간세포 괴사(necrosis)가 주로 나타나나 그 이후에는 간중심정맥 주위의 세포 자멸사(apoptosis)가 주로 일어난다.
전 세계적으로 인체 장기 혈류 개선 및 장기 이식술과 같은 장기의 허혈-재관류 손상을 야기할 수 있는 외과적 시술이 급증하고 있으나, 간의 경우 다른 장기에 비해 기능이 매우 다양하여 임상에서 적용될 수 있는 치료제가 없는 실정이어서 여러 임상적 상황에서 나타날 수 있는 간 손상을 효과적으로 억제할 수 있는 의약품 개발이 절실하다. 또한, 뇌, 심장혈관에서의 허혈과는 달리, 간에서의 허혈-재관류에 대해서는 그 연구가 미비하며, 치료제의 개발 또한 미비한 실정이다.
한편, 오갈피(Acanthopanax) 속에 속하는 식물들은 'The Divine Farmer's Herb-Root Classic' 및 '동의보감'에 기록된 전통적인 약초이다. 오갈피 종은 당뇨병, 위궤양(gastric ulcer), 허혈성심질환(ischemic heart disease), 암, 파킨슨병(Parkinson's disease) 및 간염(hepatitis)과 같은 만성 질환의 치료를 위해 사용된다. 흰털오갈피(Acanthopanax divaricatus vat. Albeofructus)는 한국에서 광범위하게 퍼져있고 쉽게 경작 가능한 오갈피 종의 하나이다. 오갈피 종은 임상학적으로 항염증, 항류마티즘관절염, 및 항당뇨 약물로서 사용되고 인삼과 같은 활성을 가지는 의약용 식물로 인정받고 있으나, 아직까지 약학적 연구가 부족한 실정이다.
이에 본 발명자들은 간 허혈-재관류 손상 치료제를 개발하기 위해 노력한 결과, 흰털오갈피 추출물을 투여한 간 허혈-재관류(hepatic ischemia-reperfusion) 손상 쥐 모델에서 간 조직 손상에 의한 염증 반응이 완화되고, 간기능지표인 혈중 AST, ALT, LDH 활성이 감소하므로, 상기 오갈피 속 추출물을 간 허혈-재관류 손상 예방 및 치료용 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 오갈피 속(Acanthopanax sp .) 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 허혈-재관류(hepatic ischemia-reperfusion) 손상 예방 및 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 오갈피 속(Acanthopanax sp.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 허혈-재관류(hepatic ischemia-reperfusion) 손상 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 오갈피 속 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 허혈-재관류 손상 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
본 발명의 오갈피 추출물은 간 허혈-재관류(hepatic ischemia-reperfusion) 손상 쥐 모델에서 간 조직의 손상을 개선하고 간 조직을 보호하는 효과를 나타내므로, 간 허혈-재관류 손상 예방 및 치료용 조성물의 유효성분으로 유용하게 이용할 수 있다.
도 1a는 흰털오갈피 추출물(Acanthopanax divaricatus vat. Albeofructus, AE)을 투여한 간 허혈-재관류(hepaticischemia-reperfusion) 손상 쥐 모델에서 혈청 TAS(total antioxidant status) 변화를 나타낸 도이다:
Con 군 : 정상군;
SHAM 군: 허위(sham-operated) 군;
I/R 군: I/R 손상 모델 군;
AE150 군: 150 mg/kg체중으로 AE 사전처리 + I/R 손상 군;
AE300 군: 300 mg/kg체중으로 AE 사전처리 + I/R 손상 군; 및
AE600 군: 600 mg/kg체중으로 AE 사전처리 + I/R 손상 군.
도 1b는 흰털오갈피 추출물을 투여한 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델에서 SOD(superoxide dismutase) 활성 변화를 나타낸 도이다.
도 1c는 흰털오갈피 추출물을 투여한 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델에서 카탈라아제(catalase) 활성 변화를 나타낸 도이다.
도 1d는 흰털오갈피 추출물을 투여한 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델에서 GSH-Px(hepatic glutathion peroxidase) 활성 변화를 나타낸 도이다.
도 2a는 생체 외(in vitro) 흰털오갈피 및 지리산오갈피의 농도별 총 폴리페놀 함량 변화를 나타낸 도이다.
도 2b는 생체 외 흰털오갈피 및 지리산오갈피의 농도별 총 플라보노이드(flavonoid) 함량 변화를 나타낸 도이다.
도 2c는 생체 외 흰털오갈피 및 지리산오갈피의 농도별 ABTS 라디칼 소거능(radical scavenging) 활성 변화를 나타낸 도이다.
도 2d는 생체 외 흰털오갈피 및 지리산오갈피의 농도별 FRAP(ferric reducing antioxidant power)값 변화를 나타낸 도이다.
도 2e는 생체 외 DPPH'(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazul) 라디칼 소거능 활성 변화를 나타낸 도이다.
도 3은 LPS를 처리한 세포에서 흰털오갈피 및 지리산오갈피의 농도별 항산화 효과를 나타낸 도이다.
도 4a는 흰털오갈피 추출물을 투여한 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델의 간에서 p38 MAPK의 인산화 변화를 나타낸 도이다.
도 4b는 흰털오갈피 추출물을 투여한 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델의 간에서 JNK의 인산화 변화를 나타낸 도이다.
도 5a는 흰털오갈피 추출물을 투여한 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델의 간에서 IL-10의 수준 변화를 나타낸 도이다.
도 5b는 흰털오갈피 추출물을 투여한 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델의 간에서 IL-6의 수준 변화를 나타낸 도이다.
도 5c는 흰털오갈피 추출물을 투여한 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델의 간에서 TNF-α의 수준 변화를 나타낸 도이다.
도 5d는 흰털오갈피 추출물을 투여한 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델의 혈청 내 IL-6의 수준 변화를 나타낸 도이다.
도 6a는 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델 중 대조군에서 간의 형태학적 변화를 나타낸 도이다.
도 6b는 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델 중 허위군에서 간의 형태학적 변화를 나타낸 도이다.
도 6c는 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델 중 간 허혈-재관류 손상 군에서 간의 형태학적 변화를 나타낸 도이다.
도 6d는 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델 중 150 mg/kg체중으로 흰털오갈피 추출물을 사전투여한 간 허혈-재관류 손상 군에서 간의 형태학적 변화를 나타낸 도이다.
도 6e는 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델 중 300 mg/kg체중으로 흰털오갈피 추출물을 사전투여한 간 허혈-재관류 손상 군에서 간의 형태학적 변화를 나타낸 도이다.
도 6f는 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델 중 600 mg/kg체중으로 흰털오갈피 추출물을 사전투여한 간 허혈-재관류 손상 군에서 간의 형태학적 변화를 나타낸 도이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 오갈피 속(Acanthopanax sp .) 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 허혈-재관류 손상 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 유효성분인 오갈피 속 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다:
1) 오갈피 속에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계;
3) 단계 2)의 여과물을 감압 농축하는 단계; 및
4) 단계 3)의 농축물을 건조하는 단계.
본 발명의 제조방법에 있어서, 단계 1)의 오갈피 속은 재배한 것 또는 시판되는 것을 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 오갈피 속은 흰털오갈피(Acanthopanax divaricatus vat. Albeofructus), 지리산오갈피(Acanthopanax chiisanensis), 털오갈피(Acanthopanax rufinerve), 가시오갈피(Acanthopanax senticosus), 서울오갈피(Acanthopanax seoulense nakai), 섬오갈피(Acanthopanax koreanum nakai) 및 오갈피나무(Acanthopanax sessiliforus seem)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1)의 추출용매는 물, 알코올을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코올로는 C1 내지 C4의 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 추출방법으로는 진탕추출, Soxhelt 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 상기 추출용매를 건조된 오갈피 속 분량의 1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 6 내지 8배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하다. 추출 온도는 20℃ 내지 110℃인 것이 바람직하며, 20℃ 내지 105℃인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 또한 추출시간은 1 내지 48시간이 바람직하며, 2 내지 10시간이 더욱 바람직하고, 2 내지 6시간이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 아울러 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3 내지 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하고, 3회인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
상기 오갈피 속 추출물은 혈청 ALT(aspartate aminotransferase), AST(alanine aminotransferase), T-BIL(total bilirubin), ALP(alkaline phosphatase) 및 LDH(lactate dehydrogenase) 수준을 감소시키는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 오갈피 속 추출물은 TNF-α 및 IL-6의 수준을 감소시키고 간 조직의 염증세포 침윤현상을 완화하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 오갈피 속 추출물은 혈청 TAS(total antioxidant status), SOD(superoxide dismutase), 카탈라아제(catalse, CAT) 및 GSH-Px 활성을 증가시키는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 간 허혈-재관류 손상은 간 부전, 간 절제, 간암 또는 간 이식에 의해 발생하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명자들은 구체적인 실시예에서, 오갈피 속 추출물의 효과를 확인하기 위하여, 6 그룹의 쥐 모델, 대조군(Con), 허위군(SHAM), 간 허혈-재관류 손상 군(hepatic ischemia-reperfusion injury, I/R), 150 mg/kg체중 농도의 흰털오갈피 추출물(AE)을 사전 투여한 I/R 군(AE150), 300 mg/kg체중 농도의 AE를 사전 투여한 I/R 군(AE300) 및 600 mg/kg체중 농도의 AE를 사전 투여한 I/R 군(AE600)으로 나누어 간 손상 동물 모델을 제작하였다.
또한, 본 발명자들은 상기 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델에서 흰털오갈피 추출물(AE)이 간에 미치는 영향을 확인한 결과, 상기 AE를 투여한 모델에서 간기능지표인 ALT, AST, T-BIL, ALP 및 LDH 수준이 감소하는 것을 확인함으로써, AE가 간 허혈-재관류 손상 개선 및 보호 효과가 있음을 확인하였다(표 1 참조).
또한, 본 발명자들은 AE에 의한 항산화 효과를 확인한 결과, 상기 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델에서 AE를 사전투여한 경우 혈청 TAS 증가하고, SOD(superoxide dismutase), 카탈라아제(catalase) 및 GSH-Px 활성도가 증가하는 것을 확인하였다(도 1a 내지 도 1d 참조). 또한, 생체 외(in vitro) 흰털오갈피 및 지리산오갈피의 항산화 활성 효과를 확인한 결과, 흰털오갈피 및 지리산오갈피 모두 농도의존적으로 총 폴리페놀(polyphenol) 함량, 총 플라보노이드(flavonoid) 함량이 많아지고, ABST 라디칼 소거능, 철 환원 항산화 활성(FRAP) 및 DPPH'(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazul) 라디칼 소거 활성이 높아지며, 세포 내 항산화 활성이 증가하는 것을 확인하였다(도 2a 내지 도 2e, 및 도 3 참조). 따라서, 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델 및 생체 외(in vitro)에서 오갈피의 항산화 효과를 확인하였다.
또한, 본 발명자들은 상기 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델에서 AE에 의한 염증 신호 조절 및 항염증 효과를 확인한 결과, 염증 신호에서 JNK/SAPK 인산화가 감소하며, 간에서 TNF-α, IL-6 수준이 감소하고, IL-10 수준이 증가하는 것을 확인함으로써, AE가 간 허혈-재관류 손상에 의한 염증 신호 활성 및 염증 반응을 완화함을 확인하였다(도 4a 및 도 4b, 및 도 5a 내지 도 5d 참조).
또한, 본 발명자들은 상기 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델에서 간 조직의 형태학적 변화를 확인한 결과, AE를 사전투여한 간 허혈-재관류 손상 쥐 그룹에서 정상 쥐와 유사한 간 조직 형태를 나타냄을 확인함으로써, AE가 간 허혈-재관류 손상을 예방 및 개선하는 효과를 보임을 확인하였다(도 6a 내지 도 6f 참조).
따라서, 본 발명의 오갈피 속 추출물은 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델에서 간 조직의 손상을 개선하고 간 조직을 보호하는 효과를 나타내며, 항산화 및 항염증 효과가 있으므로, 간 허혈-재관류 손상 예방 및 치료용 조성물의 유효성분으로 유용하게 이용할 수 있다.
상기 본 발명의 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
상기 본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하며, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 본 발명의 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 혼합생약재에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 상기 조성물은 1일 0.0001 내지 1 g/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 200 mg/kg으로 투여하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 오갈피 속 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 허혈-재관류 손상 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
상기 오갈피는 흰털오갈피, 지리산오갈피, 털오갈피, 가시오갈피, 서울오갈피, 섬오갈피 및 오갈피나무로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 오갈피 속 추출물은 혈청 ALT, AST, T-BIL, ALP 및 LDH 수준을 감소시키는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 오갈피 속 추출물은 TNF-α 및 IL-6의 수준을 감소시키고 간 조직의 염증세포 침윤현상을 완화하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 오갈피 속 추출물은 혈청 TAS, SOD, 카탈라아제(CAT) 및 GSH-Px 활성을 증가시키는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 간 허혈-재관류 손상은 간 부전, 간 절제, 간암 또는 간 이식에 의해 발생하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 오갈피 속 추출물은 간 허혈-재관류 손상 쥐 모델에서 간 조직의 손상을 개선하고 간 조직을 보호하는 효과를 나타내며, 항산화 및 항염증 효과가 있으므로, 간 허혈-재관류 손상 예방 및 개선용 건강식품의 유효성분으로 유용하게 이용할 수 있다.
본 발명의 건강식품은 상기 오갈피 속 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 비스켓, 떡, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명에 따른 오갈피 속 추출물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강식품 중의 상기 오갈피 속 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량으로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 오갈피 속 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
상기 외에 본 발명의 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 오갈피 속 추출물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 오갈피 속 추출물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명을 실시예 및 제조예에 의하여 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 제조예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 흰털오갈피 추출물 제조
흰털오갈피(Acanthopanax divaricatus vat. Albeofructus) 추출물(AE)은 (주)수신오가피(천안, 한국)에서 제공받았다. 흰털오갈피의 뿌리 및 줄기를 1:4의 비율로 건조시킨 후, 건조된 흰털오갈피를 파쇄하여 멸균수(흰털오갈피:멸균수=1:7)를 넣고 105℃에서 6 시간 동안 진탕하고 여과시켜 추출물을 획득하고, 추출물을 진공 농축한 후, 농축액은 동결건조하였다.
< 실시예 2> 간 허혈-재관류 손상( hepatic ischemia - reperfusion injury ) 동물 모델 제조
오리엔트 바이오에서 구매한 4주 된 수컷 Sprague-Dawley 쥐를 12 시간씩 낮/밤 주기 및 22.0±2.0℃, 50±15% 습도가 유지된 조건에서 물과 먹이는 자유롭게 섭취하도록 하여 1주일 동안 적응시켰다, 실험을 위해 체중 200-220g으로 맞추어 쥐를 각각 8 마리씩 무작위로 6 군, 대조군(Con), 허위군(SHAM), 간 허혈-재관류 손상 군(hepatic ischemia-reperfusion injury, I/R), 150 mg/kg체중 농도의 흰털오갈피 추출물(AE)을 사전 투여한 I/R 군(AE150), 300 mg/kg체중 농도의 AE를 사전 투여한 I/R 군(AE300) 및 600 mg/kg체중 농도의 AE를 사전 투여한 I/R 군(AE600)으로 나누어 간 손상 동물 모델을 제작하였다.
구체적으로, I/R 수술하기 전에 3 주 동안 매일 1 번씩 각 군에 해당하는 농도로 멸균수에 용해한 AE, 또는 전달체(vehicle)를 경구투여하였다. AE를 경구투여 2 주 후, I/R 수술을 위해 쥐를 37℃ 열패드(heating pad)에서 따뜻하게 한 상태로 미세혈관 겸자(microvascular clamp)로 눌러 간문맥을 폐쇄한 후 60분 뒤 제거한다. 1 주일의 회복기 가진 후, 상기 각 군의 쥐를 하루 동안 단식시키고 마취하여 심장천자에서 혈액을 뽑았다. 혈액 샘플은 3000×g, 4℃, 30 분 동안 원심분리하여 혈장 또는 혈청을 분리하였다. 원심분리한 혈액은 실험을 위해 -80℃에서 보관하였다. 간, 신장, 비장, 및 췌장을 적출하고 무게를 측정한 후, 실험을 위해 액체질소로 동결하고 -80℃에 보관하였다.
< 실시예 3> 흰털오갈피 추출물에 의한 혈청 ALT , AST , T- BIL , ALP 및 LDH 수준 변화 확인
간 허혈-재관류 손상에 있어서 AE가 간에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 간 I/R 손상 모델에서 간기능지표인 혈청 ALT, AST, T-BIL, ALP 및 LDH 수준을 하기와 같이 측정하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 2>에 기재된 방법으로 획득한 6 군의 쥐 모델 혈청 AST(aspartate aminotransferase) 및 ALT(alanine aminotransferase) 활성은 Reitman-Frankel colorimetric kits(Asan Pharmaceutical, Korea)를 이용하여 제조사의 절차에 따라 측정하였고, 혈청 T-BIL(total bilirubin)은 Jendrassik-Grof enzymatic assay kit(BioAssay Systems, Hayward, CA, USA)를 이용하여 제조사의 절차에 따라 정량하였고, 혈청 ALP(alkaline phosphatase) 활성은 colorimetric assay kit(BioVision Inc., Milpitas, CA, USA)를 이용하여 측정하였고, 혈청 LDH(lactate dehydrogenase) 활성은 젖산이 탈수소화되어 만들어진 피루빈산을 ELISA법으로 측정하여 확인하였다.
그 결과, 표 1에 나타낸 바와 같이, 대조군(CON)에 비해 I/R 군의 혈청 ALT, T-BIL, ALP, 및 LDH 수준이 유의적으로 증가하는 반면, AE를 사전처리한 모든 군, AE150, AE300 및 AE600 군의 혈청 AST, T-BIL 및 ALP 수준이 감소하는 것을 확인하였다. 특히, AE300 군의 경우, I/R 군과 비교하여 혈청 ALT 및 LDH 수준이 가장 현저하게 감소하는 것을 확인함으로써, AE가 간 허혈-재관류 손상 개선 및 보호 효과가 있음을 확인하였다(표 1).
Figure pat00001
< 실시예 4> 흰털오갈피 추출물에 의한 항산화 효과 확인
<4-1> 생체 내( in vivo ) 흰털오갈피 추출물에 의한 혈청 및 간 항산화 활성 변화 확인
간 허혈-재관류 손상에 있어서 AE의 혈청 및 간 항산화 활성 효과를 확인하기 위하여, 간 I/R 손상 모델에서 혈청 TAS, SOD 활성, 카탈라아제 활성 및 GSH-Px 활성을 하기와 같이 측정하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 2>에 기재된 방법으로 획득한 6 군의 쥐 모델 혈청 TAS(total antioxidant status) 활성은 키트(Randox Laboratories Ltd., Antrim, UK)를 이용하여 측정하였고(도 1a), SOD(superoxide dismutase) 활성(도 1b) 및 혈청 카탈라아제(catalse, CAT) 활성(도 1c)은 키트(Cayman Chemical Co., USA)를 이용하여 측정하였고, GSH-Px 활성은 과산화수소의 환원으로 생성되는 산화형 글루타티온을 ELISA법으로 측정하여 확인하였다(도 1d).
그 결과, 도 1a에 나타낸 바와 같이, CON 군 및 SHAM 군에 비해 I/R 군은 간 허혈-재관류 손상으로 인해 혈청 TAS가 현저히 감소하는 반면, AE150 및 AE300 군은 간 허혈-재관류 손상으로 감소한 TAS가 AE 사전투여로 증가하는 것을 확인하였다(도 1a).
또한, 도 1b에 나타낸 바와 같이, CON 군 및 SHAM 군에 비해 I/R 군은 간 허혈-재관류 손상으로 인해 혈청 SOD 활성도가 감소하는 반면, AE150 및 AE300 군은 I/R 군에 비해 현저하게 SOD 활성도가 증가하는 것을 확인하였다(도 1b).
또한, 도 1c에 나타낸 바와 같이, I/R 군은 CON 군 및 SHAM 군에 비해 카탈라아제 활성이 현저하게 감소하는 반면, AE300 및 AE600 군에서 카탈라아제 활성도가 투여 농도에 따라 증가하는 것을 확인하였다(도 1c).
또한, 도 1d에 나타낸 바와 같이, I/R 군은 간 허혈-재관류 손상으로 GSH-Px 활성도가 감소하는 반면, 모든 AE 사전투여 군, AE150, AE300 및 AE600 군의 GSH-Px 활성도가 증가하는 것을 확인하였다(도 1d). 따라서, 상기 결과를 통해 AE가 간 허혈-재관류 손상 동물에서 항산화 활성 개선 효과가 있음을 확인하였다.
<4-2> 생체 외( in vitro ) 오갈피의 항산화 활성 변화 확인
생체 외(in vitro) AE의 항산화 활성 효과를 확인하기 위하여, 오갈피를 이용하여 총 폴리페놀 분석(total polyphenol assay), 총 플라보노이드 분석(total flavonoid assay), ABTS 라디칼 소거 활성(ABTS radical scavenging activity), 철 환원 항산화 활성(Ferric reducing antioxidant capacity) 및 DPPH'(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazul) 라디칼 소거 활성을 하기와 같이 측정하였다.
구체적으로, 총 폴리페놀 분석을 수행하기 위하여 갈릭산(galic acid) 400 ㎍/㎖를 1/2로 8 번 희석하고, 갈릭산 300 ㎍/㎖를 1/2로 8 번 희석하여 표준 용액을 제조하였다. 그 다음, 상기 각 농도별 갈릭산 300 ㎕에 300 ㎕의 에탄올에 용해한 흰털 오갈피(천안, 한국) 1000 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖, 250 ㎍/㎖, 125 ㎍/㎖ 또는 62.5 ㎍/㎖, 또는 300 ㎕의 지리산오갈피(정선, 강원도) 1000 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖, 250 ㎍/㎖, 125 ㎍/㎖ 또는 62.5 ㎍/㎖를 혼합하고, 2N folin-ciocalteau 시약 160 ㎕를 추가 혼합한 다음 실온에서 5 분간 방치하였다. 그 다음, 10 % Na2CO3 용액 300 ㎕를 혼합하여 30 분간 실온에서 방치한 후, 96 웰 플레이트에 각각 200 ㎕씩 3 번 분주하고 흡광광도계로 750 nm 파장에서 흡광도를 측정하여 그래프화하였다. 실험결과는 SPSS 통계 프로그램을 이용하여 평균 및 오차(S.E)를 계산하였고, Duncan's multiple range(GLM)을 이용하여 p<0.05 수준에서 유의성을 검증하였다(도 2a).
또한, 총 플라보노이드 분석을 수행하기 위하여 상기와 같이 각 농도별 흰털오갈피 또는 지리산오갈피에 5% NaNO2를 혼합하여 상온에서 5 분간 방치한 후, 10% AlCl3을 추가 혼합하여 상온에서 6 분간 방치하였다. 그 다음, 1M NaOH를 첨가하고 96 웰 플레이트로 각각 3 번 분주한 후, 흡광 광도계로 510 nm 파장에서 흡광도를 측정하여 그래프화하였다. 실험결과는 SPSS 통계 프로그램을 이용하여 평균 및 오차(S.E)를 계산하였고, Duncan's multiple range(GLM)을 이용하여 p<0.05 수준에서 유의성을 검증하였다(도 2b).
또한, ABTS 라디칼 소거 활성을 확인하기 위하여 7 mM ABTS 시약 5 ㎖ 및 140 mM 포타슘 퍼설페이트(potassium persulfate) 88 ㎕를 혼합하여 암 조건에서 16 시간 방치한 후, 상기 혼합 용액 1 ㎖ 및 에탄올 88 ㎖를 혼합하여 ABTS 용액을 제조하였다. 상기와 같이 각 농도별 흰털오갈피 또는 지리산오갈피 50 ㎕에 제조한 ABTS 시약 1 ㎖를 혼합하여 96 웰 플레이트에 200 ㎕씩 3 번 분주하고 2 분 30 초 동안 방치한 후, 흡광광도계로 734 nm 파장에서 흡광도를 측정하여 그래프화하였다. 실험결과는 SPSS 통계 프로그램을 이용하여 평균 및 오차(S.E)를 계산하였고, Duncan's multiple range(GLM)을 이용하여 p<0.05 수준에서 유의성을 검증하였다(도 2c).
또한, 철 환원 항산화 활성을 측정하기 위하여 대조군으로 FRAP 시약(300 mM 아세테이트(acetate) 버퍼(pH 3.6), 40 mM HCl, 10mM TPTZ 및 20 mM 염화철(III))을 96 웰 플레이트에 분주하고, 실험군으로 상기와 같이 각 농도별 흰털오갈피 또는 지리산오갈피 20 ㎕, 및 아스코르브산(ascorbic acid) 20 ㎕를 혼합하여 96 웰 플레이트에 분주한 후, 흡광광도계를 이용하여 593 nm 파장에서 흡광도를 측정하여 그래프화하였다. 실험결과는 SPSS 통계 프로그램을 이용하여 평균 및 오차(S.E)를 계산하였고, Duncan's multiple range(GLM)을 이용하여 p<0.05 수준에서 유의성을 검증하였다(도 2d).
또한, DPPH' 라디칼 소거 활성을 측정하기 위하여 대조군으로 0.1 mM DPPH 용액 150 ㎕ 및 에탄올 50 ㎕를 혼합하여 96 웰 플레이트에 분주하고, 실험군으로 상기와 같이 각 농도별 흰털오갈피 또는 지리산오갈피 50 ㎕ 및 DPPH 150 ㎕를 혼합하여 96 웰 플레이트에 분주한 후, 30 분 동안 방치하였다. 그 다음, 흡광광도계를 이용하여 515 nm 파장에서 흡광도를 측정하여 그래프화하였다. 실험결과는 SPSS 통계 프로그램을 이용하여 평균 및 오차(S.E)를 계산하였고, Duncan's multiple range(GLM)을 이용하여 p<0.05 수준에서 유의성을 검증하였다(도 2e).
그 결과, 도 2a에 나타낸 바와 같이, 흰털오갈피 및 지리산오갈피 모두 농도가 높아질수록 폴리페놀 함량이 많아지고, 특히, 흰털오갈피의 총 폴리페놀 함량이 지리산오갈피의 총 폴리페놀 함량보다 높은 경향을 보임을 확인하였다(도 2a).
또한, 도 2b에 나타낸 바와 같이, 250, 125 및 62.5 ㎍/㎖ 농도에서 흰털오갈피 및 지리산오갈피의 총 플라보노이드 함량이 유의적인 차이를 보이지 않았으나, 500 및 1000 ㎍/㎖의 높은 농도에서는 흰털오갈피의 총 플라보노이드 함량이 높아짐을 확인하였다(도 2b).
또한, 도 2c에 나타낸 바와 같이, 흰털오갈피 및 지리산오갈피 모두 농도의존적으로 ABTS 라디칼 소거능이 높아지는 경향을 나타냄을 확인하였다(도 2c).
또한, 도 2d에 나타낸 바와 같이, ABTS에서와 마찬가지로 흰털오갈피 및 지리산오갈피 모두 농도가 높아질수록 FRAP값이 증가하는 것을 확인하였다. FRAP값과 환원력은 비례하며 FRAP값이 높을수록 항산화능이 높다. 따라서, 500 및 1000 ㎍/㎖에서 흰털오갈피의 농도가 높아질수록 항산화능이 유의적으로 높아지나, 250, 125 및 62.5 ㎍/㎖에서 흰털오갈피 및 지리산오갈피의 항산화력에 유의한 차이가 없음을 확인하였다(도 2d).
또한, 도 2e에 나타낸 바와 같이, 농도의존적으로 흰털오갈피 및 지리산오갈피 모두 DPPH 라디칼 소거능이 증가하는 것을 확인하였고, 각 농도별 흰털오갈피 및 지리산오갈피 간 DPPH 라디칼 소거능에 유의적 차이가 없이 동일한 효과를 보임을 확인하였다(도 2e).
<4-3> 세포 내 흰털오갈피에 의한 항산화 활성 변화 확인
흰털오갈피가 세포 내 항산화 활성에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 오갈피를 이용하여 DCF-DA 분석을 수행하였다.
구체적으로, RAW 264.7 세포를 1×104개/180 ㎕ 농도로 8 웰 플레이트에 분주하고, 대조군 및 LPS군은 배지 20 ㎕를 처리하고, 실험군에 흰털 오갈피 1000 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖, 250 ㎍/㎖, 125 ㎍/㎖ 또는 62.5 ㎍/㎖, 또는 지리산오갈피 1000 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖, 250 ㎍/㎖, 125 ㎍/㎖ 또는 62.5 ㎍/㎖ 20 ㎕를 처리하여 2 시간 동안 배양하였다. 그 다음, 대조군에는 배지 20 ㎕를 처리하고, 대조군을 제외한 모든 군에는 LPS 40 ㎍/㎖를 웰당 20 ㎕씩 처리하여 48시간 동안 배양하였다. 그 다음, 상층액을 제거하고 DPBS로 2 회 세척한 후, 100 μM DCF-DA를 처리하여 1 시간 동안 배양하였다. 그 다음, 다시 상층액을 제거하고 DPBS로 2회 세척한 후 형광현미경으로 관찰하였다. 형광현미경으로 관찰 시 형광을 띄는 부분이 적을수록 생성되는 활성산소(ROS)가 줄어든다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, LPS군에서는 형광을 띄는 부분이 많이 나타나는 반면, 흰털오갈피 및 지리산오갈피 처리 군의 경우 형광을 띄는 부분이 감소하는 것을 확인함으로써, 상기 두 오갈피 모두 LPS에 의해 유도되는 ROS 생성을 감소시킴을 확인하였다(도 3).
< 실시예 5> 흰털오갈피 추출물에 의한 염증 신호 조절 및 항염증 효과 확인
<5-1> 흰털오갈피 추출물에 의한 염증 신호 조절 효과 확인
간 허혈-재관류 손상에 있어서 AE에 의한 염증 신호 조절 효과를 확인하기 위하여, 웨스턴 블럿팅(western blotting)을 수행하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 2>에 기재된 방법으로 획득한 간 조직을 용해 완충용액(Intron Biotech, Seoul, Korea)을 이용하여 균질화하였다. 그 다음, BioRad protein assay kit(BioRad Laboratories, CA, USA)로 단백질 농도를 측정하고, 40 ㎍ 단백질을 10% SDS-PAGE로 전기영동한 후, PVDF 막(Bio-rad, Hercules, CA, USA)으로 전달시켰다. 그 다음, 3% BSA(bovin serum albumin) 및 TBS(Tween/Tris-buffered saline)로 용해한 5% 스킴밀크(skim milk)로 120 분간 블라킹(blocking)한 후, TBS로 세 번 세척하였다. 그 다음, 1차 항체로 래빗 항-p-p38 MAPK(1:1000; Cell Signaling Technology, USA), 마우스 항-p-JNK/SAPK(1:2000; Cell Signaling Technology, USA) 및 마우스 항-β-액틴(1:1000;Santa Cruz Biotechnology, USA)를 4℃에서 하루 동안 처리하였다. 상기 막에 붙은 일차 항체(primary antibody)에 HRP가 접합된 이차 항체(HRP-conjugated secondary antibody)를 붙이고, 이를 ECL을 이용하여 확인하였다(도 4a 및 도 4b).
그 결과, 도 4a에 나타낸 바와 같이, I/R 군과 비교하여 AE 투여군의 간에서 인산화된 p38 MAPK 발현이 증가하는 것을 확인하였다. 하지만, p-p38/p38 단백질량에 대한 인산화된 p38 단백질량의 비율을 고려하였을 때, AE150 및 AE300군에서만 그 비율이 증가하고, 특히, AE300 군에서 비율이 최대로 증가하는 것을 확인하였다(도 4a).
또한, 도 4b에 나타낸 바와 같이, I/R 군은 간 허혈-재관류 손상으로 인해 간에서 JNK/SAPK의 인산화가 증가한 반면, AE 투여군은 JNK/SAPK의 인산화가 감소하는 것을 확인하였다. 이와 유사하게, I/R 군의 JNK에 대한 인산화된 JNK의 비율이 증가하는 반면, 모든 농도의 JNK에 대한 인산화된 JNK의 비율이 감소하며, 특히, AE150 및 AE600군에서 그 비율이 현저히 감소하는 것을 확인하였다. 따라서, 상기 결과를 통해 AE에 의하여 간 허혈-재관류 손상에 의한 염증 신호 활성을 억제함을 확인하였다(도 4b).
<5-2> 흰털오갈피 추출물에 의한 항염증 효과 확인
AE의 항염증 효과를 확인하기 위하여, 사이토카인(cytokine) 생성량 측정을 수행하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 2>에 기재된 방법으로 획득한 혈청에 존재하는 IL-6를 ELISA kit(R&D Systems, Minneapolis, USA)를 이용하여 측정하고, 상기 <실시예 2>에 기재된 방법으로 획득한 간 조직에 존재하는 TNF-α, IL-6 및 IL-10을 DuoSet ELISA development kit(R&D Systems, USA)를 이용하여 측정하였다(도 5a 내지 도 5d).
그 결과, 도 5a에 나타낸 바와 같이, CON 및 SHAM 군에 비해 I/R 군의 간 내 IL-10 생성량이 감소하는 반면, 모든 AE 투여군의 간 내 IL-10 생성량이 증가하는 것을 확인하였다. 특히, AE300 군의 경우, 대조군에 비해 IL-10 수준이 현저히 높아짐을 확인하였다(도 5a).
또한, 도 5b 내지 도 5d 에 나타낸 바와 같이, CON 및 SHAM 군에 비해 I/R 군의 간 내 TNF-α 및 IL-6 생성량이 현저히 증가하는 반면, 모든 AE 투여군의 간 내 IL-6 및 TNF-α 생성량이 감소하는 것을 확인하였다(도 5b 및 도 5c). 또한, 모든 AE 투여군의 혈청 IL-6 생성량도 감소함을 확인하였다(도 5d). 따라서, 상기 결과를 통해 AE가 간 허혈-재관류 손상으로 인한 염증 반응을 완화함을 확인하였다.
< 실시예 6> 간 허혈- 재관류 손상 동물 모델에서 흰털오갈피 추출물에 의한 간조직 변화 확인
AE가 손상된 간에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 면역조직화학염색법(immunohistochemistry)을 수행하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 2>에 기재된 방법으로 획득한 간 허혈-재관류 손상 쥐로부터 간 조직을 적출하였다. 그 다음, 상기 적출한 뇌를 포르말린(formalin)으로 고정하고 동결한 후, 70-100% 에틸알코올(ethyl alchol)로 탈수하고, 파라핀(paraffin)으로 침투한 후, 5 ㎛ 두께로 섹션화 하였다. 그 다음, 헤마톡실린-에이오신(H&E) 염색하여 Olympus 51 현미경으로 관찰하고 촬영하였다(도 6a 내지 도 6f).
그 결과, 도 6a 내지 도 6f에 나타낸 바와 같이, CON 군 및 SHAM 군의 경우, 간소엽(hepatic lobule)과 간세포의 형태가 정상적임을 확인하였다(도 6a 및 6b). 반면, I/R 군의 간에서는 염좌(distortion), 출혈(hemorrhage), 광범위한 괴사(necrosis) 및 염증세포 침윤 현상을 관찰하였다(도 6c). AE150 군과 AE300 군의 간 조직의 형태는 I/R 처리를 하지 않은 군의 쥐와 유사함을 확인하였다(도 6d 및 도 6e). 또한, AE600 군은 CON군과 비교하여 약간의 괴사와 중심정맥 주변으로 구조적 장애가 나타나지만 I/R 처리 군과 비교하여 간 손상이 완화됨을 확인하였다(도 6f). 따라서, 상기 결과를 통해 AE는 간 허혈-재관류로 인한 간 조직의 손상으로부터 보호 및 개선 효과가 있음을 확인하였다.
하기에 본 발명의 조성물을 위한 제조예를 예시한다.
< 제조예 1> 오갈피 속 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 제제의 제조
<1-1> 산제의 제조
본 발명의 오갈피 속 추출물 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<1-2> 정제의 제조
본 발명의 오갈피 속 추출물 100 mg
옥수수전분 100 mg
유 당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<1-3> 캡슐제의 제조
본 발명의 오갈피 속 추출물 100 mg
옥수수전분 100 mg
유 당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<1-4> 환의 제조
본 발명의 오갈피 속 추출물 1 g
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 g이 되도록 제조하였다.
<1-5> 과립의 제조
본 발명의 오갈피 속 추출물 150 mg
대두 추출물 50 mg
포도당 200 mg
전분 600 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 mg을 첨가하여 섭씨 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
<제조예 2> 오갈피 속 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강식품의 제조
본 발명의 오갈피 속 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.
<2-1> 밀가루 식품의 제조
본 발명의 오갈피 속 추출물의 0.5 내지 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
<2-2> 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명의 오갈피 속 추출물의 0.1 내지 5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
<2-3> 그라운드 비프(ground beef)의 제조
본 발명의 오갈피 속 추출물의 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
<2-4> 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 오갈피 속 추출물의 5 내지 10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
<2-5> 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 오갈피 속 추출물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 누에 체액을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),
종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),
본 발명의 누에 체액(3 중량부),
영지(0.5 중량부),
지황(0.5 중량부)
<제조예 3> 오갈피 속 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강음료의 제조
<3-1> 건강음료의 제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명의 오갈피 속 추출물 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.
<3-2> 야채 주스의 제조
본 발명의 오갈피 속 추출물 5 g을 토마토 또는 당근 주스 1,000 ㎖에 가하여 야채 주스를 제조하였다.
<3-3> 과일 주스의 제조
본 발명의 오갈피 속 추출물 1 g을 사과 또는 포도 주스 1,000 ㎖에 가하여 과일 주스를 제조하였다.

Claims (11)

  1. 오갈피 속(Acanthopanax sp .) 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 허혈-재관류 손상 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 오갈피 속은 흰털오갈피(Acanthopanax divaricatus vat. Albeofructus), 지리산오갈피(Acanthopanax chiisanensis), 털오갈피(Acanthopanax rufinerve), 가시오갈피(Acanthopanax senticosus), 서울오갈피(Acanthopanax seoulense nakai), 섬오갈피(Acanthopanax koreanum nakai) 및 오갈피나무(Acanthopanax sessiliforus seem)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 간 허혈-재관류 손상 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C4 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출되는 것을 특징으로 하는 간 허혈-재관류 손상 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 간 허혈-재관류 손상 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 오갈피 속 추출물은 혈청 ALT(aspartate aminotransferase), AST(alanine aminotransferase), T-BIL(total bilirubin), ALP(alkaline phosphatase) 및 LDH(lactate dehydrogenase) 수준을 감소시키는 것을 특징으로 하는 간 허혈-재관류 손상 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 오갈피 속 추출물은 TNF-α 및 IL-6의 수준을 감소시키고 간 조직의 염증세포 침윤현상을 완화하는 것을 특징으로 하는 간 허혈-재관류 손상 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  7. 제 1항에 있어서, 상기 오갈피 속 추출물은 혈청 TAS(total antioxidant status), SOD(superoxide dismutase), 카탈라아제(catalse, CAT) 및 GSH-Px 활성을 증가시키는 것을 특징으로 하는 간 허혈-재관류 손상 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  8. 제 1항에 있어서, 상기 간 허혈-재관류 손상은 간 부전, 간 절제, 간암 또는 간 이식에 의해 발생하는 것을 특징으로 하는 간 허혈-재관류 손상 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  9. 오갈피 속 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 허혈-재관류 손상 예방 및 개선용 건강식품.
  10. 제 9항에 있어서, 상기 추출물은 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매로 추출되는 것을 특징으로 하는 간 허혈-재관류 손상 예방 및 개선용 건강식품.
  11. 제 9항에 있어서, 상기 간 허혈-재관류 손상은 간 부전, 간 절제, 간암 또는 간 이식에 의해 발생하는 것을 특징으로 하는 간 허혈-재관류 손상 예방 및 개선용 건강식품.
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