KR20150071805A - Method for predicting meat quantity of Hanwoo - Google Patents

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KR20150071805A
KR20150071805A KR1020130158558A KR20130158558A KR20150071805A KR 20150071805 A KR20150071805 A KR 20150071805A KR 1020130158558 A KR1020130158558 A KR 1020130158558A KR 20130158558 A KR20130158558 A KR 20130158558A KR 20150071805 A KR20150071805 A KR 20150071805A
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hanwoo
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snp marker
snp
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KR1020130158558A
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이승환
당창권
김형철
전기준
연성흠
최봉환
장길원
강희설
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대한민국(농촌진흥청장)
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Abstract

The present invention relates to an SNP marker used to predict the conductive substance level in beef, a conductive substance level estimating composition including an agent capable of detecting or amplifying the SNP marker, a microarray or a conductive substance level estimating kit for the beef including the same, and a conductive substance level estimating method including a step of determining a polymorphic area in the SNP marker. The SNP marker according to the present invention is a specific SNP marker capable of estimating the conductive substance level of beef and is used to estimate the conductive substance level which is unpredictable before a slaughter operation, thereby increasing the beef breeding farm income.

Description

한우의 도체량 예측방법{Method for predicting meat quantity of Hanwoo}{Method for predicting meat quantity of Hanwoo}

본 발명은 한우의 도체량 예측방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로 본 발명은 한우의 도체량 수준을 예측할 수 있는 SNP 마커, 상기 SNP 마커를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는 한우의 도체량 예측용 조성물, 상기 조성물을 포함하는 한우의 도체량 예측용 키트 또는 마이크로어레이 및 상기 SNP 마커의 다형성 부위를 결정하는 단계를 포함하는 한우의 도체량 예측방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a method for predicting the carcass amount of a Korean beef cattle, and more particularly, to a method for predicting a carcass amount of a Korean beef cattle including a SNP marker capable of predicting a carcass level of a Korean beef cattle and a preparation capable of detecting or amplifying the SNP marker A kit for predicting the conductance of a Hanwoo or a microarray for predicting the conductance of a Hanwoo containing the composition, and a method for predicting a conductor amount of the Hanwoo including a step of determining a polymorphic site of the SNP marker.

일반적으로 그동안 한우의 육용화 및 육질 고급화를 위한 능력개량은 양적유전학에 기초한 통계육종학적 접근 방법에 전적으로 의존하여 왔다. 이 같은 종래의 한우 육종방법은 대규모 축군에 대한 능력검정을 필요로 하고 후대검정을 통해서 유전능력이 우수한 개체를 선발함으로서 능력개량에 오랜 기간이 소요됨은 물론, 유전과 환경에 의해 지배되는 표현형 측정치에만 의존하여 개체 간 유전능력 차이를 평가하기 때문에 선발의 정확도가 높지 않아 개량 효율성이 크게 감소하는 단점이 있다. 도체 형질 역시 살아 있는 가축에서는 표현형 측정이 어렵고 도축 후 비로소 정확한 측정이 가능하기 때문에, 전통적인 육종방법을 이용할 경우에는 도체형질의 개량이 결코 용이하지 않다. 따라서, 한우의 가장 중요한 개량형질인 도체형질 개량의 효율을 극대화하고 개량성과를 높이기 위한, 새로운 육종기술 개발과 육종전략의 개발이 절실히 요구되고 있다.In general, the ability to improve the breeding and meat quality of Hanwoo has been totally dependent on quantitative genetics - based statistical breeding approaches. This conventional breeding method of Hanwoo requires a capacity test for a large scale group and it is necessary to select individuals with excellent genetic ability through a later test, so that it takes a long time to improve the ability, The accuracy of the selection is not high and the improvement efficiency is greatly reduced. Carcass traits are also difficult to improve phenotypic characteristics in living cattle and to improve carcass traits when using traditional breeding methods, since accurate measurement is possible only after slaughter. Therefore, it is urgently required to develop a new breeding technique and a breeding strategy to maximize the efficiency of carcass trait improvement, which is the most important improved trait of Hanwoo, and to improve the improvement performance.

통상적으로, 쇠고기의 등급은 육질등급과 육량등급으로 구분하여 판정하는데 육질등급은 고기의 질을 근내지방도, 육색, 지방색, 조직감, 성숙도에 따라 1++, 1+, 1, 2, 3 등급으로 판정하는 것으로 소비자가 고기를 선택하는 기준이 되며, 육량등급은 도체에서 얻을 수 있는 고기량을 도체중량, 등지방두께, 등심단면적의 성적을 종합하여 A, B, C 및 D(등외) 등급으로 판정한다. 한우의 경우 타 수입육이나 국내산 젖소육 및 육우보다 월등히 가격이 높기 때문에 육질과 육량이 우수한 한우를 선발하고 육종 및 생산함으로써 소비자들로 하여금 맛 좋은 고급육으로서의 품질 이미지를 구축하고 이를 유지해 나가는 것이 중요하기 때문에, 한우가 경쟁력을 갖추기 위해서는 무엇보다도 타 품종에 비해 월등히 우수한 육질을 가진 한우를 생산하여 맛과 풍미를 높이고, 육량을 증대시켜 생산성이 우수한 고 등급 한우를 조기 진단하여 선발하는 기술의 개발이 필요한 실정이다.Normally, beef is classified into meat quality grade and meat quality grade. The meat quality grade is 1 ++, 1+, 1, 2 or 3 grade according to the degree of muscle fat, meat color, local color, texture and maturity (A), (B), (C), and (D) (outside the class) of the carcass weight, backfat thickness, . Since the price of Korean beef is much higher than other imported meat, domestic cow meat, and beef cattle, it is important for consumers to select, breed and produce high quality meat and meat, In order for Hanwoo to be competitive, it is necessary to develop a technology for early selection and selection of high-grade Korean beef with high productivity by increasing the taste and flavor, to be.

최근 분자유전학 및 생명공학 기술의 발달은 동물의 유전적 개량에 보다 정확하고 강력한 새로운 육종 모델의 개발 가능성을 제공해 주고 있다. 첨단 분자유전학적 기법을 이용한 접근방법은 육종의 소요기간이나 유전능력 평가의 정확도면에서 기존의 전통적인 육종방법이 안고 있는 문제점을 극복할 수 있는 획기적인 정보를 제공함으로써 육종개량사업에 새로운 전기를 마련하고 있다. 특히, 경제형질 관련 DNA 마커 개발 및 이용에 관한 연구는 DNA의 분자 수준에서 동물 개체간의 유전 능력 차이를 직접 확인할 수 있어, 육종가 추정 및 유전능력 평가에 보다 정확한 유전정보의 이용이 가능하게 되었다. DNA 마커는 가축 개량의 기초가 되는 개체식별, 친자감정, 품종식별 및 가계 분석 등에 기본적으로 응용될 수 있지만 가축에서 경제적으로 중요한 형질들과 연관된 DNA 마커로서의 이용이 육종개량 측면에서 더욱 막대한 가치를 지니게 된다. 경제형질 연관 DNA 표지인자를 동물의 육종개량에 이용할 경우 큰 이점은 대부분의 DNA 표지인자가 공우성으로 단순한 멘델의 유전양식을 따르므로 개체의 유전자형을 직접 판정할 수 있고, 성과 연령에 전혀 영향을 받지 않아, 개체의 유전적 잠재능력을 조기에 예측하고 선발할 수 있다는데 있다. 그동안 DNA 마커 분석 기술의 눈부신 진전에 따라 각종 DNA 표지인자를 개발하고 이들 마커와 주요 경제형질들과의 연관성을 분석하여 양적형질에 영향을 미치는 연관 DNA 마커를 검출하고, 이를 지표로 하여 목적으로 하는 특정 유전자형을 보유하고 있는 개체를 직접 선발하는 분자표지 이용 선발법(marker-assisted selection, MAS)의 분자 선발육종 방법의 개발은, 종래의 표현형가에만 의존하던 전통적인 선발육종 체계에서 유전자형 그 자체에 의한 직접 선발육종이 실현 가능해 짐으로써 동물의 육종개량에 신기원을 이루는 계기가 되었다.
Recent developments in molecular genetics and biotechnology have provided new possibilities for the development of more accurate and robust breeding models for animal genetic improvement. The advanced molecular genetic approach provides new information on breeding improvement projects by providing breakthrough information that can overcome the problems of conventional breeding methods in terms of duration of breeding and accuracy of genetic evaluation. have. In particular, studies on the development and utilization of DNA markers related to economic traits can directly identify differences in genetic abilities between animal species at the molecular level of DNA, making it possible to use more accurate genetic information for breeding estimation and genetic evaluation. DNA markers can be applied basically to animal identification, paternal emotion, breed identification, and household analysis, which are the basis of livestock improvement, but their use as DNA markers associated with economically important traits in livestock is of greater value in breeding improvement do. The major advantage of using economic trait-associated DNA markers for breeding in animals is that most DNA markers are homozygous and follow simple Mendelian genetic forms, so the genotype of an individual can be determined directly, And is able to predict and select the genetic potential of an individual early. In the meantime, we have developed various DNA markers according to the remarkable progress of DNA marker analysis technology, and analyzed the relationship between these markers and major economic traits to detect an associated DNA markers affecting quantitative traits, The development of a method for molecular selection and selection of marker-assisted selection (MAS), which directly selects individuals with a specific genotype, is based on the fact that in a conventional selective breeding system dependent on conventional phenotypes alone, The selective breeding became feasible for the epoch-making of animal breeding improvement.

이러한 배경하에서, 본 발명자들은 한우의 도체중을 예측할 수 있는 유전자 마커를 개발하고자 예의 연구노력한 결과, 염색체 14번에 존재하는 SNP(Hapmap59709-rs29021868)를 한우 거세우의 도체중을 예측할 수 있는 유전자 마커로서 사용할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
Under these circumstances, the present inventors have made extensive efforts to develop a genetic marker capable of predicting the conductance of Hanwoo as a result, and as a result, it has been found that SNP (Hapmap59709-rs29021868) present on chromosome 14 can be used as a genetic marker And the present invention has been completed.

본 발명의 하나의 목적은 한우의 도체량을 예측할 수 있는 SNP 마커를 제공하는 것이다.One object of the present invention is to provide a SNP marker capable of predicting the amount of conduct of a cattle.

본 발명의 다른 목적은 상기 SNP 마커를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는 한우의 도체량 예측용 조성물을 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide a composition for predicting the amount of carbohydrate in a Korean NKU containing a preparation capable of detecting or amplifying the SNP marker.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 한우의 도체량 예측용 키트 또는 마이크로어레이를 제공하는 것이다.Yet another object of the present invention is to provide a kits or a microarray for predicting the conductance of a Hanwoo containing the composition.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 SNP 마커의 다형성 부위를 결정하는 단계를 포함하는 한우의 도체량 예측방법을 제공하는 것이다.
It is still another object of the present invention to provide a method for predicting the amount of carbohydrate in a Hanwoo including a step of determining a polymorphic site of the SNP marker.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 한우의 도체량을 예측할 수 있는 단일염기다형성인 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커를 제공한다.
In one aspect of the present invention, there is provided a single nucleotide polymorphism (SNP) marker which is a single nucleotide polymorphism capable of predicting the amount of conduct of a Korean cattle.

상기 마커는 바람직하게는 한우의 14번 염색체에 존재하는 SNP(Hapmap59709-rs29021868)를 포함하는 전체 또는 일부 폴리뉴클레오티드일 수 있고, 보다 바람직하게는 서열번호 1로 구성된 폴리뉴클레오티드의 전체 또는 일부 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 한우의 도체량을 예측할 수 있는 SNP 마커일 수 있다.
The marker may preferably be all or some of the polynucleotides comprising the SNP (Hapmap 59709-rs29021868) present in the chromosome 14 of Korean cattle, more preferably all or some of the polynucleotides of the polynucleotide consisting of SEQ ID NO: 1 And can be a SNP marker capable of predicting the conductor amount of Hanwoo.

Hapmap59709-rs29021868: atagaacaca aaagacatta aagacatttc cctttggtga aaaatcagt r taaaatttaa aagagtggac caacagagaa tacttggttt ctaatgata(서열번호 1)
Hapmap59709-rs29021868: atagaacaca aaagacatta aagacatttc cctttggtga aaaatcagt r taaaatttaa aagagtggac caacagagaa tacttggttt ctaatgata (SEQ ID NO: 1)

본 발명의 용어 "다형성(polymorphism)"이란, 하나의 유전자 좌위(locus)에 두 가지 이상의 대립유전자(allele)가 존재하는 경우를 의미하며 다형성 부위 중에서, 사람에 따라 단일 염기만이 다른 것을 단일염기 다형성(single nucleotide polymorphism, SNP)이라 한다. 바람직한 다형성 마커는 선택된 집단에서 1% 이상, 더욱 바람직하게는 5% 또는 10% 이상의 발생빈도를 나타내는 두 가지 이상의 대립유전자를 가진다.The term "polymorphism " of the present invention refers to the case where two or more alleles exist in one locus. Of the polymorphic sites, only a single base is different from a polymorphic site, It is called single nucleotide polymorphism (SNP). Preferred polymorphic markers have two or more alleles with a frequency of occurrence of 1% or more, more preferably 5% or 10% or more in the selected population.

본 발명의 용어 "대립유전자(allele)"란, 상동염색체의 동일한 유전자좌위에 존재하는 한 유전자의 여러 타입을 의미한다. 대립유전자는 다형성을 나타내는데 사용되기도 하며, 예컨대, SNP는 두 종류의 대립인자(biallele)를 갖는다.The term "allele " of the present invention refers to various types of a gene existing on the same locus of a homologous chromosome. Alleles are also used to represent polymorphisms, for example, SNPs have two kinds of bialles.

상기 "서열번호 1"은 다형성 부위를 포함하는 다형성 서열(polymorphic sequence)이다. 다형성 서열이란 폴리뉴클레오티드 서열 중에 SNP를 포함하는 다형성 부위(polymorphic site)를 포함하는 서열을 의미한다. 상기 다형성 부위는 바람직하게는 상기 서열번호 1의 폴리뉴클레오티드 서열의 50번째 염기가 될 수 있다.
The "SEQ ID NO. 1" is a polymorphic sequence comprising a polymorphic site. A polymorphic sequence means a sequence comprising a polymorphic site comprising a SNP in a polynucleotide sequence. The polymorphic site may preferably be the 50 < th > base of the polynucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 한우의 도체량에 영향을 미치는 유전형질을 발굴하기 위하여, 한우로부터 유래된 32,692개의 DNA 변이체를 갖는 1,011두의 한우후대검정집단의 데이터를 통계분석모델인 최적선형불편예측법(Best Linear Unbiased Prediction(BLUP)-animal model)에 적용하여, 전장 유전체 연관분석을 수행한 결과, 한우의 도체중에 영향을 미치는 유전변이(Hapmap59709-rs29021868)를 발굴하였다(도 1). 이어, 867두의 한우 상업축을 대상으로 상기 발굴된 유전변이에 해당하는 유전형을 결정하고, 상기 한우 상업축으로부터 얻어진 도체량 데이터와 상기 결정된 유전형의 통계적 연관성을 검정하기 위하여, 선형회귀모델(linear regression models)을 이용한 단일마커 회귀분석(single marker regression)을 수행하여 상기 유전변이의 유전형과 도체량의 상관관계를 분석한 결과, 상기 발굴된 유전변이(Hapmap59709-rs29021868)가 한우의 도체중과 연관됨을 검증할 수 있었다(도 2). According to one embodiment of the present invention, in order to discover genetic traits affecting the conductance of Hanwoo, data of 1,011 Hanwoo later test groups with 32,692 DNA variants derived from Hanwoo were analyzed using the statistical analysis model, The genetic mutation (Hapmap59709-rs29021868), which affects the conductance of the Hanwoo corn, was identified as a result of applying the full linear genome association analysis to the Best Linear Unbiased Prediction (BLUP) -animal model (Fig. 1). Next, to determine the genotype corresponding to the excavated genetic mutation of 867 commercial Hanwoo commercial axes and to test the statistical correlation between the carcass quantity data obtained from the Hanwoo commercial axis and the determined genotype, a linear regression model (Hapmap59709-rs29021868) was related to the conductance of Hanwoo as a result of analyzing the correlation between the genotype and the carcass amount of the genetic mutation by performing a single marker regression using a single marker regression (Fig. 2).

이에 따라, 상기 유전변이가 도체중에 어떻게 영향을 미치는지를 확인하기 위하여, 상기 유전변이에서 나타날 수 있는 3가지 유전자형(A/A, A/G 또는 G/G)에 해당하는 3개 그룹으로 한우 상업축을 분류하고, 각 그룹의 평균 도체량을 측정한 결과, 상기 유전변이부위에서 A/A 유전형을 갖는 한우는 A/G 유전형을 갖는 한우 및 G/G 유전형을 갖는 한우보다도 월등하게 많은 도체량을 나타내고, A/G 유전형을 갖는 한우는 G/G 유전형을 갖는 한우보다도 상대적으로 많은 도체량을 나타내며, A/A 유전형을 갖는 한우와 G/G 유전형을 갖는 한우의 도체량 차이는 약 25kg임을 확인하였다(도 3). 추가로, 보증씨수소 538(KPN538) 가계의 한우를 대상으로 상기 유전변이가 도체중에 어떻게 영향을 미치는지를 분석한 결과, 상기 유전변이부위에서 A/A 유전형을 갖는 한우는 A/G 유전형을 갖는 한우 및 G/G 유전형을 갖는 한우보다도 월등하게 많은 도체량을 나타내고, A/A 유전형을 갖는 한우와 G/G 유전형을 갖는 한우의 도체량 차이는 약 43kg임을 확인하였다(도 4).
Accordingly, in order to confirm how the genetic mutation affects the conductors, three groups corresponding to the three genotypes (A / A, A / G, or G / G) As a result of measuring the average conductance of each group, the Hanwoo having the A / A genotype at the genetic mutation region has significantly higher conductance than the Hanwoo having the A / G genotype and Hanwoo having the G / G genotype , And the Hanwoo with A / G genotype showed a relatively larger amount of conduct than the Hanwoo with G / G genotype. The difference in carcass weight between Hanwoo with A / A genotype and Hanwoo with G / G genotype was about 25kg (Fig. 3). In addition, the analysis of how the genetic mutation affects the conductance of the Hanwoo 538 (KPN538) strain of the certified cows 538 (KPN538) showed that the Hanwoo having the A / And the G / G genotype, and the difference in the carcass amount of the Hanwoo having the A / A genotype and the Hanwoo having the G / G genotype was about 43 kg (FIG. 4).

따라서, 본 발명의 SNP 마커는 상기 SNP 마커(서열번호 1)의 50번째 염기에 위치한 다형성 부위 나타낼 수 있는 A/A, A/G 또는 G/G 유전자형을 검출하고, 이에 근거하여 한우의 도체량을 예측할 수 있는데, A/A 유전자형을 갖는 한우가 가장 많은 도체량을 나타내고, G/G 유전자형을 갖는 한우가 가장 적은 도체량을 나타내며, A/G 유전자형을 갖는 한우는 이들의 중간 수준에 해당하는 도체량을 나타낸다고 예측할 수 있다.
Therefore, the SNP marker of the present invention detects A / A, A / G or G / G genotypes that can be represented in the polymorphic site located at the 50 th base of the SNP marker (SEQ ID NO: 1) Hanwoo with A / A genotype shows the most carcass quantity, Hanwoo with G / G genotype shows the least carcass amount, and Hanwoo with A / G genotype has middle level of them It can be predicted that it represents the amount of conductor.

다른 양태로서, 본 발명은 상기 SNP 마커를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는 한우의 도체량 예측용 조성물을 제공한다.
In another aspect, the present invention provides a composition for predicting the conductance of Hanwoo, comprising a preparation capable of detecting or amplifying the SNP marker.

본 발명의 용어 "SNP 마커를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제"란, 상기와 같은 유전자의 다형성 부위를 증폭을 통해 확인하여 한우의 도체량을 예측할 수 있는 조성물을 의미하며, 바람직하게는 상기 SNP 마커의 폴리뉴클레오티드를 특이적으로 증폭할 수 있는 프라이머를 의미한다. 상기 SNP 마커 증폭에 사용되는 프라이머는, 적절한 버퍼 중의 적절한 조건(예를 들면, 4개의 다른 뉴클레오시드 트리포스페이트 및 DNA, RNA 폴리머라제 또는 역전사 효소와 같은 중합제) 및 적당한 온도 하에서 주형-지시 DNA 합성의 시작점으로서 작용할 수 있는 단일가닥 올리고뉴클레오티드가 될 수 있는데, 상기 프라이머의 적절한 길이는 사용 목적에 따라 달라질 수 있으나, 통상 15 내지 30 뉴클레오티드이다. 짧은 프라이머 분자는 일반적으로 주형과 안정한 혼성체를 형성하기 위해서는 더 낮은 온도를 필요로 한다. 상기 프라이머 서열은 상기 SNP 마커와 완전하게 상보적일 필요는 없으나, 상기 SNP 마커와 혼성화 할 정도로 충분히 상보적이어야 하고, 바람직하게는 서열번호 2 또는 3의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있으나, 특별히 이에 제한되지는 않는다.
The term "agent capable of detecting or amplifying a SNP marker" means a composition capable of predicting the amount of a conductor in a Korean womb by confirming the polymorphic site of the gene by amplification. Preferably, the SNP marker Quot; means a primer capable of specifically amplifying a polynucleotide of the present invention. The primers used for the SNP marker amplification can be amplified using appropriate conditions in suitable buffers (for example, four different nucleoside triphosphates and polymerase such as DNA, RNA polymerase or reverse transcriptase) and template-directed DNA Stranded oligonucleotide which can serve as a starting point of synthesis. The appropriate length of the primer may vary depending on the intended use, but is usually 15 to 30 nucleotides. Short primer molecules generally require a lower temperature to form a stable hybrid with the template. The primer sequence need not be completely complementary to the SNP marker but should be sufficiently complementary to hybridise with the SNP marker and preferably comprise the polynucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 or 3, It does not.

본 발명의 용어 "프라이머"란, 짧은 자유 3' 말단 수산화기(free 3' hydroxyl group)를 가지는 염기 서열로 상보적인 템플레이트(template)와 염기쌍(base pair)을 형성할 수 있고 주형 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 서열을 의미한다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응(즉, DNA 폴리머레이즈 또는 역전사효소)을 위한 시약 및 상이한 4가지 뉴클레오사이드 트리포스페이트의 존재하에서 DNA 합성을 개시할 수 있다. 이때, PCR 조건, 센스 및 안티센스 프라이머의 길이는 당업계에 공지된 것을 기초로 변형할 수 있다. The term "primer" of the present invention means a base sequence having a short free 3 'hydroxyl group and can form base pairs with a complementary template, It means a short sequence functioning as a point. The primer can initiate DNA synthesis in the presence of reagents and four different nucleoside triphosphates for polymerization reactions (i.e., DNA polymerase or reverse transcriptase) at appropriate buffer solutions and temperatures. At this time, the PCR conditions, the lengths of the sense and antisense primers can be modified based on those known in the art.

본 발명의 프라이머는 포스포아미다이트 고체 지지체 방법, 또는 기타 공지된 방법을 사용하여 화학적으로 합성할 수 있다. 이러한 핵산 서열은 또한 당해 분야에 공지된 많은 수단을 이용하여 변형시킬 수 있다. 이러한 변형의 비-제한적인 예로는 메틸화, "캡화", 천연 뉴클레오타이드 하나 이상의 동족체로의 치환, 및 뉴클레오타이드 간의 변형, 예를 들면, 하전되지 않은 연결체(예: 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로아미데이트, 카바메이트 등) 또는 하전된 연결체(예: 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)로의 변형이 있다.
The primers of the present invention can be chemically synthesized using the phosphoamidite solid support method, or other known methods. Such nucleic acid sequences may also be modified using many means known in the art. Non-limiting examples of such modifications include, but are not limited to, methylation, "capping ", replacement of natural nucleotides with one or more homologues, and modifications between nucleotides, such as uncharged linkers, such as methylphosphonate, Phosphoamidates, carbamates, etc.) or charged linkages (e.g., phosphorothioates, phosphorodithioates, etc.).

또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 한우의 도체량 예측용 키트를 제공한다. 상기 키트는 RT-PCR 키트 또는 DNA 분석용 (예, DNA 칩) 키트일 수 있다.
In another aspect, the present invention provides kits for predicting the conductance of a Hanwoo containing the composition. The kit may be an RT-PCR kit or a kit for DNA analysis (e.g., a DNA chip).

본 발명의 키트는 한우의 도체량 예측용 마커인 SNP 마커를 증폭을 통해 확인하거나, SNP 마커의 발현 수준을 mRNA의 발현 수준을 확인함으로써 한우의 도체량을 예측할 수 있다. 구체적인 일례로서, 본 발명에서 한우의 도체량 예측용 SNP 마커의 mRNA 발현 수준을 측정하기 위한 키트는 RT-PCR을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 키트일 수 있다. RT-PCR 키트는, 상기 SNP 마커의 유전자에 대한 특이적인 각각의 프라이머 쌍 외에도 RT-PCR 키트는 테스트 튜브 또는 다른 적절한 컨테이너, 반응 완충액(pH 및 마그네슘 농도는 다양), 데옥시뉴클레오타이드(dNTPs), Taq-폴리머라아제 및 역전사효소와 같은 효소, DNase, RNAse 억제제, DEPC-수(DEPC-water), 멸균수 등을 포함할 수 있다. 또한 정량 대조군으로 사용되는 유전자에 특이적인 프라이머 쌍을 포함할 수 있다. 또한 바람직하게는, 본 발명의 키트는 DNA 칩을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 한우의 도체량 예측용 키트일 수 있다. DNA 칩 키트는, 일반적으로 편평한 고체 지지판, 전형적으로는 현미경용 슬라이드보다 크지않은 유리 표면에 핵산 종을 격자형 배열(gridded array)로 부착한 것으로, 칩 표면에 핵산이 일정하게 배열되어, DNA 칩 상의 핵산과 칩 표면에 처리된 용액 내에 포함된 상보적인 핵산 간에 다중 혼성화(hybridization) 반응이 일어나 대량 병렬 분석이 가능하도록 하는 도구이다.
The kit of the present invention can predict the amount of conduct of Hanwoo by confirming the SNP marker, which is a marker for predicting the carcass amount of Korean cattle, by amplification or by checking the expression level of SNP marker with the mRNA expression level. As a specific example, in the present invention, a kit for measuring the mRNA expression level of the SNP marker for predicting the carcass amount of Korean beef cattle may be a kit containing essential elements necessary for performing RT-PCR. In addition to the respective primer pairs specific for the genes of the SNP markers, the RT-PCR kit also includes a test tube or other appropriate container, reaction buffer (pH and magnesium concentrations vary), deoxynucleotides (dNTPs) Enzymes such as Taq polymerase and reverse transcriptase, DNase, RNAse inhibitors, DEPC-water, sterile water, and the like. It may also contain a primer pair specific for the gene used as a quantitative control. Also, preferably, the kit of the present invention may be a kit for predicting the carcass amount of a Hanwoo containing essential elements necessary for carrying out a DNA chip. DNA chip kits are those in which nucleic acid species are attached in a gridded array on a generally flat solid support plate, typically a glass surface not larger than a slide for a microscope, and nucleic acids are uniformly arranged on the chip surface, Hybridization reaction occurs between the nucleic acid on the surface and the complementary nucleic acid contained in the solution treated on the surface of the chip to enable a mass parallel analysis.

또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 한우의 도체량 예측용 SNP 마커의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 한우의 도체량 예측용 마이크로어레이를 제공한다.
In another aspect, the present invention provides a microarray for predicting the conductance of a Hanwoo containing the polynucleotide of the SNP marker for predicting the conductance of the Hanwoo.

상기 마이크로어레이는 DNA 또는 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것일 수 있다. 상기 마이크로어레이는 프로브 폴리뉴클레오티드에 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것을 제외하고는 통상적인 마이크로어레이로 이루어진다.The microarray may comprise DNA or RNA polynucleotides. The microarray comprises a conventional microarray except that the polynucleotide of the present invention is contained in the probe polynucleotide.

프로브 폴리뉴클레오티드를 기판상에 고정화하여 마이크로어레이를 제조하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 상기 프로브 폴리뉴클레오티드는 혼성화할 수 있는 폴리뉴클레오티드를 의미하는 것으로, 핵산의 상보성 가닥에 서열 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드를 의미한다. 본 발명의 프로브는 대립유전자 특이적 프로브로서, 같은 종의 두 구성원으로부터 유래한 핵산 단편 중에 다형성 부위가 존재하여, 한 구성원으로부터 유래한 DNA 단편에는 혼성화하나, 다른 구성원으로부터 유래한 단편에는 혼성화하지 않는다. 이 경우 혼성화 조건은 대립유전자간의 혼성화 강도에 있어서 유의한 차이를 보여, 대립유전자 중 하나에만 혼성화 하도록 충분히 엄격해야 한다. 이렇게 함으로써 다른 대립유전자 형태 간에 좋은 혼성화 차이를 유발할 수 있다. 본 발명의 상기 프로브는 대립유전자를 검출하여 한우의 도체량을 예측하는 방법 등에 사용될 수 있다. 상기 판단방법에는 서던 블롯트 등과 같은 핵산의 혼성화에 근거한 검출방법들이 포함되며, DNA 칩을 이용한 방법에서 DNA 칩의 기판에 미리 결합된 형태로 제공될 수도 있다. 상기 혼성화란 엄격한 조건, 예를 들면 1M 이하의 염 농도 및 25 ℃ 이상의 온도 하에서 보통 수행될 수 있다. 예를 들면, 5x SSPE(750 mM NaCl, 50 mM Na Phosphate, 5 mM EDTA, pH 7.4) 및 25-30℃의 조건이 대립유전자 특이적 프로브 혼성화에 적합할 수 있다.Methods for producing microarrays by immobilizing probe polynucleotides on a substrate are well known in the art. The probe polynucleotide means a polynucleotide capable of hybridizing, and means an oligonucleotide capable of binding to the complementary strand of the nucleic acid in a sequence-specific manner. The probe of the present invention is an allele-specific probe in which a polymorphic site exists in a nucleic acid fragment derived from two members of the same species and hybridizes to a DNA fragment derived from one member but does not hybridize to a fragment derived from another member . In this case, the hybridization conditions show a significant difference in the intensity of hybridization between alleles, and should be sufficiently stringent to hybridize to only one of the alleles. This can lead to good hybridization differences between different allelic forms. The probe of the present invention can be used for a method of detecting alleles and predicting the amount of carcass in Hanwoo. The determination method includes detection methods based on hybridization of nucleic acids such as Southern blot, and may be provided in a form pre-bonded to a substrate of a DNA chip in a method using a DNA chip. The hybridization can usually be performed under stringent conditions, for example, a salt concentration of 1 M or less and a temperature of 25 ° C or higher. For example, conditions of 5x SSPE (750 mM NaCl, 50 mM Na Phosphate, 5 mM EDTA, pH 7.4) and 25-30 < 0 > C may be suitable for allele-specific probe hybridization.

본 발명의 한우의 도체량 예측과 연관된 프로브 폴리뉴클레오티드를 기판상에 고정화하는 과정도 또한 이러한 종래 기술을 사용하여 용이하게 수행할 수 있다. 또한, 마이크로어레이 상에서의 핵산의 혼성화 및 혼성화 결과의 검출은 당업계에 잘 알려져 있다. 상기 검출은 예를 들면, 핵산 시료를 형광 물질 예를 들면 Cy3 및 Cy5와 같은 물질을 포함하는 검출가능한 신호를 발생시킬 수 있는 표지 물질로 표지한 다음, 마이크로어레이 상에 혼성화하고 상기 표지 물질로부터 발생하는 신호를 검출함으로써 혼성화 결과를 검출할 수 있다.
The process of immobilizing the probe polynucleotide on the substrate associated with the carcass amount prediction of the present invention can also be easily carried out using this conventional technique. In addition, hybridization of nucleic acids on a microarray and detection of hybridization results are well known in the art. The detection can be accomplished, for example, by labeling the nucleic acid sample with a labeling substance capable of generating a detectable signal comprising a fluorescent material, such as Cy3 and Cy5, and then hybridizing on the microarray and generating The hybridization result can be detected.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 (a) 한우로부터 유래된 시료의 DNA로부터 서열번호 1의 SNP 마커를 증폭시키는 단계; 및 (b) 상기 증폭된 SNP 마커의 50번째 염기의 핵산서열을 결정하는 단계를 포함하는, 한우의 도체량을 예측하는 방법을 제공한다.
(A) amplifying the SNP marker of SEQ ID NO: 1 from DNA of a sample derived from a Korean native cattle; And (b) determining the nucleic acid sequence of the 50 th base of the amplified SNP marker.

상기 시료로는 털, 뇨, 혈액, 각종 체액, 분리된 조직, 분리된 세포 또는 타액과 같은 시료 등이 될 수 있으나, 이에 특별히 제한되지는 않는다.The sample may be, but is not limited to, hair, urine, blood, various body fluids, separated tissues, separated cells or saliva, and the like.

상기 (a) 단계의 DNA로부터 상기 SNP 마커의 다형성 부위를 증폭하는 단계는 당업자에게 알려진 어떠한 방법이든 사용 가능하다. 예를 들면, 표적 핵산을 PCR을 통하여 증폭하고 이를 정제하여 얻을 수 있다. 그 외 리가제 연쇄 반응(LCR)(Wu 및 Wallace, Genomics 4, 560(1989), Landegren 등, Science 241, 1077(1988)), 전사증폭(transcription amplification)(Kwoh 등, Proc. Natl.Acad. Sci. USA 86, 1173(1989)) 및 자가유지 서열 복제(Guatelli 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 1874(1990)) 및 핵산에 근거한 서열 증폭(NASBA)이 사용될 수 있다. The step of amplifying the polymorphic site of the SNP marker from the DNA of step (a) may be any method known to those skilled in the art. For example, the target nucleic acid can be obtained by PCR amplification and purification thereof. Other ligase chain reaction (LCR) (Wu and Wallace, Genomics 4, 560 (1989), Landegren et al., Science 241, 1077 (1988)), transcription amplification (Kwoh et al., Proc. Natl. Acad. Sequence amplification based on nucleic acids (NASBA) can be used as well as self-sustaining sequence replication (Guatelli et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 1874 (1990)).

상기 방법 중 (b)단계의 SNP 마커의 핵산서열을 결정하는 것은 서열 분석, 마이크로어레이(microarray)에 의한 혼성화, 대립유전자 특이적인 PCR(allele specific PCR), 다이나믹 대립유전자 혼성화 기법(dynamic allele-specifichybridization, DASH), PCR 연장 분석, PCR-SSCP, PCR-RFLP 분석 또는 TaqMan 기법, SNPlex 플랫폼(Applied Biosystems), 질량 분석법(예를 들면, Sequenom의 MassARRAY 시스템), 미니-시퀀싱(mini-sequencing) 방법, Bio-Plex 시스템(BioRad), CEQ and SNPstream 시스템(Beckman), Molecular Inversion Probe 어레이 기술(예를 들면, Affymetrix GeneChip), 및 BeadArray Technologies(예를 들면, Illumina GoldenGate 및 Infinium 분석법) 등을 이용하여 수행될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지는 않는다. 상기 방법들 또는 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자에게 이용 가능한 다른 방법에 의해, 상기 SNP 마커에서의 하나 이상의 대립유전자를 확인할 수 있다. 이와 같은 SNP 마커의 핵산서열을 결정하는 것은 바람직하게는 DNA 칩을 통해 수행할 수 있다.Determination of the nucleic acid sequence of the SNP marker of step (b) of the above method can be performed by sequence analysis, microarray hybridization, allele specific PCR, dynamic allele-specifichybridization , DASH), PCR extension analysis, PCR-SSCP, PCR-RFLP analysis or TaqMan technique, SNPlex platform (Applied Biosystems), mass spectrometry (e.g. MassenRAY system from Sequenom), mini- Be performed using Bio-Plex system (BioRad), CEQ and SNPstream system (Beckman), Molecular Inversion probe array technology (e.g. Affymetrix GeneChip), and BeadArray Technologies (e.g. Illumina GoldenGate and Infinium assay) But is not limited thereto. One or more alleles in the SNP marker can be identified by the methods described above or other methods available to those skilled in the art to which the invention pertains. The determination of the nucleic acid sequence of such SNP markers can be performed preferably through a DNA chip.

본 발명의 용어 "DNA 칩"이란, 수십만 개의 DNA의 각 염기를 한번에 확인할 수 있는 DNA 마이크로어레이의 하나를 의미한다.The term "DNA chip" of the present invention means one of DNA microarrays capable of confirming each base of hundreds of thousands of DNAs at a time.

상기 TaqMan 방법은 (1) 원하는 DNA 단편을 증폭할 수 있도록 프라이머 및 TaqMan 탐침을 설계 및 제작하는 단계; (2) 서로 다른 대립유전자의 탐침을 FAM 염료 및 VIC 염료로 표지(Applied Biosystems)하는 단계; (3) 상기 DNA를 주형으로 하고, 상기의 프라이머 및 탐침을 이용하여 PCR을 수행하는 단계; (4) 상기의 PCR 반응이 완성된 후, TaqMan 분석 플레이트를 핵산 분석기로 분석 및 확인하는 단계; 및 (5) 상기 분석결과로부터 단계 (1)의 폴리뉴클레오티들의 유전자형을 결정하는 단계를 포함한다.The TaqMan method comprises the steps of (1) designing and preparing a primer and a TaqMan probe to amplify a desired DNA fragment; (2) labeling probes of different alleles with FAM dyes and VIC dyes (Applied Biosystems); (3) performing PCR using the DNA as a template and using the primer and the probe; (4) after completion of the PCR reaction, analyzing and confirming the TaqMan assay plate with a nucleic acid analyzer; And (5) determining the genotype of the polynucleotides of step (1) from the analysis results.

상기 시퀀싱 분석은 염기서열 결정을 위한 통상적인 방법을 사용할 수 있으며, 자동화된 유전자분석기를 이용하여 수행될 수 있다. 또한, 대립유전자 특이적 PCR은 SNP가 위치하는 염기를 3' 말단으로 하여 고안한 프라이머를 포함한 프라이머 세트로 상기 SNP가 위치하는 DNA 단편을 증폭하는 PCR 방법을 의미한다. 상기 방법의 원리는, 예를 들어, 특정 염기가 A에서 G로 치환된 경우, 상기 A를 3' 말단염기로 포함하는 프라이머 및 적당한 크기의 DNA 단편을 증폭할 수 있는 반대 방향 프라이머를 고안하여 PCR 반응을 수행할 경우, 상기 SNP 위치의 염기가 A인 경우에는 증폭반응이 정상적으로 수행되어 원하는 위치의 밴드가 관찰되고, 상기 염기가 G로 치환된 경우에는 프라이머는 주형 DNA에 상보결합할수 있으나, 3' 말단 쪽이 상보결합을 하지 못함으로써 증폭반응이 제대로 수행되지 않는 점을 이용한 것이다. DASH는 통상적인 방법으로 수행될 수 있고, 바람직하게는 프린스 등에 의한 방법에 의하여 수행될 수 있다.The sequencing analysis can be performed using a conventional method for nucleotide sequencing, and can be performed using an automated gene analyzer. The allele-specific PCR means a PCR method in which a DNA fragment in which the SNP is located is amplified with a primer set including a primer designed with the base at the 3 'end at which the SNP is located. The principle of the above method is that, for example, when a specific base is substituted by A to G, an opposite primer capable of amplifying a primer containing the A as a 3 'terminal base and a DNA fragment of an appropriate size is designed, In the case where the base at the SNP position is A, the amplification reaction is normally performed and a band at a desired position is observed. When the base is substituted with G, the primer can be complementarily bound to the template DNA, And the amplification reaction is not performed properly due to the inability of complementary binding at the terminal. DASH can be performed by a conventional method, preferably by a method such as Prince et al.

한편, PCR 연장 분석은 먼저 SNP가 위치하는 염기를 포함하는 DNA 단편을 프라이머 쌍으로 증폭을 한 다음, 반응에 첨가된 모든 뉴클레오티드를 탈인산화시킴으로써 불활성화시키고, 여기에 특이적 연장 프라이머, dNTP 혼합물, 디디옥시뉴클레오티드, 반응 완충액 및 DNA 중합효소를 첨가하여 프라이머 연장반응을 수행함으로써 이루어진다. 이때, 연장 프라이머는 SNP가 위치하는 염기의 5' 방향의 바로 인접한 염기를 3' 말단으로 삼으며, dNTP 혼합물에는 디디옥시뉴클레오티드와 동일한 염기를 갖는 핵산이 제외되고, 상기 디디옥시뉴클레오티드는 SNP를 나타내는 염기 종류 중 하나에서 선택된다. 예를 들어, A에서 G로의 치환이 있는 경우, dGTP, dCTP 및 TTP 혼합물과 ddATP를 반응에 첨가할 경우, 상기 치환이 일어난 염기에서 프라이머는 DNA 중합효소에 의하여 연장되고, 몇 염기가 지난 후 A 염기가 최초로 나타나는 위치에서 ddATP에 의하여 프라이머 연장반응이 종결된다. 만일 상기 치환이 일어나지 않았다면, 그 위치에서 연장반응이 종결되므로, 상기 연장된 프라이머의 길이를 비교함으로써 SNP를 나타내는 염기 종류를 판별할 수 있게 된다.On the other hand, the PCR extension analysis first amplifies a DNA fragment containing a base in which a SNP is located to a pair of primers, inactivates all the nucleotides added to the reaction by dephosphorylation, and adds a specific extension primer, a dNTP mixture, Followed by primer extension reaction by adding digoxin nucleotide, reaction buffer, and DNA polymerase. At this time, the extension primer has a base immediately adjacent to the 5 'direction of the base in which the SNP is located at the 3' terminus, and the nucleic acid having the same base as the dodecoxynucleotide is excluded in the dNTP mixture, and the dodecoxynucleotide indicates the SNP Base type. For example, when dGTP, dCTP and TTP mixture and ddATP are added to the reaction in the presence of substitution from A to G, the primer is extended by the DNA polymerase in the base in which the substitution has occurred, The primer extension reaction is terminated by ddATP at the position where the base first appears. If the substitution has not occurred, the extension reaction is terminated at the position, so that it is possible to discriminate the type of the base representing the SNP by comparing the lengths of the extended primers.

이때, 검출방법으로는 연장 프라이머 또는 디디옥시뉴클레오티드를 형광 표지한 경우에는 일반적인 염기서열 결정에 사용되는 유전자 분석기(예를 들어, ABI사의 Model 3700 등)를 사용하여 형광을 검출함으로써 상기 SNP를 검출할 수 있으며, 무-표지된 연장 프라이머 및 디디옥시뉴클레오티드를 사용할 경우에는 MALDI-TOF(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight) 기법을 이용하여 분자량을 측정함으로써 상기 SNP를 검출할 수 있다.
At this time, as a detection method, when the extension primer or the dideoxy nucleotide is fluorescence-labeled, the SNP is detected by detecting fluorescence using a gene analyzer (for example, Model 3700 of ABI Co., Ltd.) used for general nucleotide sequence determination And when the unlabeled extension primer and the didyxin nucleotide are used, the SNP can be detected by measuring the molecular weight using MALDI-TOF (matrix assisted laser desorption ionization-time of flight) technique.

바람직하게, 상기 (b) 단계에서 결정된 SNP 부위인 50번째 염기의 유전자형이 A/A인 한우는, 상기 유전자 형이 A/G 또는 G/G인 한우 보다도 도체량이 많을 것으로 예측할 수 있고, 상기 유전자형이 A/G인 한우는, 상기 유전자 형이 A/A인 한우보다는 도체량이 적지만, G/G인 한우 보다도 도체량이 많을 것으로 예측할 수 있으며, 상기 유전자형이 G/G인 한우는, 상기 유전자 형이 A/A 또는 A/G인 한우 보다도 도체량이 적을 것으로 예측할 수 있다.
Preferably, the Hanwoo having the genotype of the 50 th base, which is the SNP site determined in the step (b), is predicted to have a larger amount of conductance than the Hanwoo having the genotype A / G or G / G, It can be predicted that the amount of cargo is higher than that of Hanwoo which is G / G, although the carcass amount of the A / G Hanwoo which is the genotype is less than that of Hanwoo which is A / A. It can be predicted that the amount of conductor is smaller than that of A / A or A / G Hanwoo.

본 발명의 SNP 마커는 한우의 도체량을 예측하는 특이적 SNP 마커로서, 도축이전에 예상할 수 없는 한우의 도체량을 예측할 수 있는 수단으로 사용되므로, 한우사육 농가의 소득향상에 이바지할 수 있을 것이다.
The SNP markers of the present invention are specific SNP markers for predicting the carcass quantity of Hanwoo, and can be used as a means for predicting the amount of carbohydrate in an unpredictable Hanwoo before slaughter, will be.

도 1은 한우후대검정집단의 한우 검정우에서 한우의 도체량에 영향을 미치는 유전형질을 발굴한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 한우 상업축에서 SNP 마커(Hapmap59709-rs29021868)의 유전형과 도체량의 상관관계를 선형회귀모델을 이용한 단일마커 회귀분석법으로 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 한우 상업축에서 SNP 마커(Hapmap59709-rs29021868)에 대한 유전자형(A/A, A/G 또는 G/G)에 따른 도체량의 변화를 나타내는 그래프이다.
도 4는 보증씨수소 538(KPN538) 가계의 한우에서 SNP 마커(Hapmap59709-rs29021868)에 대한 유전자형(A/A, A/G 또는 G/G)에 따른 도체량의 변화를 나타내는 그래프이다.
FIG. 1 is a graph showing the results of finding genetic traits affecting the carcass quantity of Korean beef cattle in Hanwoo beef cattle test group.
FIG. 2 is a graph showing the results of analyzing the correlation between the genotype and the amount of the conductor of the SNP marker (Hapmap59709-rs29021868) in the Hanwoo commercial axis by a single marker regression analysis using a linear regression model.
3 is a graph showing changes in the amount of conductors according to the genotype (A / A, A / G or G / G) for the SNP marker (Hapmap59709-rs29021868)
4 is a graph showing changes in the amount of conductors according to the genotype (A / A, A / G or G / G) for the SNP marker (Hapmap59709-rs29021868) in the Hanwoo of the certified cows 538 (KPN538)

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. However, these examples are for illustrative purposes only, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

실시예Example 1: 한우  1: Hanwoo 검정우에서Black Wu 도체량Amount of conductor 관련  relation DNADNA 마커Marker 발굴 excavation

한우의 도체량에 영향을 미치는 유전형질을 발굴하기 위하여, 한우로부터 유래된 32,692개의 DNA 변이체를 갖는 1,011두의 한우후대검정집단의 데이터를 통계분석모델인 하기의 최적선형불편예측모델(Best Linear Unbiased Prediction(BLUP)-animal model)에 적용하여, 전장 유전체 연관분석(Genome wide association study)을 수행하였다(도 1). 이때, 통계적 유의성을 검정하기 위하여 Bonferroni correction의 p-value(0.000001)를 적용하였다.
In order to identify genetic traits affecting the carcass quantity of Hanwoo, data of 1,011 Hanwoo test groups with 32,692 DNA variants derived from Hanwoo were analyzed using the following optimal linear uncompensated model (Best Linear Unbiased Prediction (BLUP) -animal model) to perform a genome wide association study (Fig. 1). The p-value of Bonferroni correction (0.000001) was applied to test statistical significance.

BLUP - animal model : y = Xb + Za + eBLUP - animal model: y = Xb + Za + e

상기 식에서 In the above formula

y는 도체시 성별과 연령이 포함된 고정효과에 대한 표현형 벡터를 나타내고;y represents a phenotypic vector for a fixed effect including sex and age at the time of conduction;

X는 SNP에 대한 incidence matirx를 나타내며,X represents the incidence matirx for the SNP,

b는 32,692개의 SNP 유전자형에 대한 회귀계수 벡터를 나타내고, b represents the regression coefficient vector for 32,692 SNP genotypes,

Z는 animal 효과에 대한 incidence matrix를 나타내며, Z represents the incidence matrix for the animal effect,

e는 잔차에 대한 벡터를 나타낸다.
e represents the vector of the residual.

도 1에서 보듯이, 한우의 도체량과 연관된 유전형질로서 한우의 염색체 14번에 존재하는 SNP의 일종인 유전변이(Hapmap59709-rs29021868)가 검출되었다.
As shown in Fig. 1, a genetic mutation (Hapmap59709-rs29021868), which is a kind of SNP present on chromosome 14 of Korean cattle, was detected as a genetic trait associated with the conductance of Hanwoo.

실시예Example 2: 한우  2: Hanwoo 상업축에서On the commercial axis 도체량Amount of conductor 관련  relation DNADNA 마커Marker 검증 Verification

상기 실시예 1에서 검출된 유전변이(Hapmap59709-rs29021868)가 실제로 한우의 도체량과 연관되는지를, 한우 상업축을 대상으로 하여 검증하였다.Whether the genetic variation detected in Example 1 (Hapmap59709-rs29021868) is actually related to the amount of conduct of Hanwoo was verified for Hanwoo commercial axis.

구체적으로, 867두의 한우 상업축을 대상으로 상기 검출된 유전변이(Hapmap59709-rs29021868)의 유전자형을 결정하였다. 상기 유전자형은 TaqMan probe(Applied Biosystems, Korea)와 ABI 7500 Real-Time PCR system을 이용한 Real-Time PCR 반응을 다음과 같이 수행하여 결정하였다: 한우 상업축으로부터 수득한 2㎕(50ng/㎕)의 DNA에 각각 1㎕(100pm/㎕)의 프라이머(서열번호 2 및 3), 10㎕의 TaqMan Master mix(Applied Biosystems, Korea), 및 6㎕ 증류수를 가하여 20㎕의 혼합물을 수득하였다. 이어, 95℃에서 5분 및 40 cycle(60℃ 30초 및 72℃ 1분)의 조건으로 Real-Time PCR을 수행하고, 융해온도(melting temperature) 분석을 통해 유전자형을 결정하였다.
Specifically, the genotype of the detected genetic variation (Hapmap59709-rs29021868) was determined on 867 Korean commercial axis. The genotypes were determined by performing a Real-Time PCR reaction using a TaqMan probe (Applied Biosystems, Korea) and ABI 7500 Real-Time PCR system as follows: 2 μl of DNA (50 ng / (SEQ ID NOS: 2 and 3), 10 μl of TaqMan Master mix (Applied Biosystems, Korea), and 6 μl of distilled water were added to each well to obtain 20 μl of a mixture. Real-time PCR was then performed at 95 ° C for 5 minutes and 40 cycles (60 ° C for 30 seconds and 72 ° C for 1 minute), and the genotype was determined by melting temperature analysis.

Sense primer: 5'-atagaacaca aaagacatta-3'(서열번호 2)Sense primer: 5'-atagaacaca aaagacatta-3 '(SEQ ID NO: 2)

Antisense primer: 5'-tatcattaga aaccaagtat-3'(서열번호 3)
Antisense primer: 5'-tatcattaga aaccaagtat-3 '(SEQ ID NO: 3)

상기 결정된 유전자형과 상기 한우 상업축으로부터 얻어진 도체량 데이터의 통계적 연관성을 검정하기 위하여, 하기의 선형회귀모델(linear regression models)을 이용한 단일마커 회귀분석(single marker regression)을 수행하여 상기 유전변이의 유전형과 도체량의 상관관계를 분석하였다(도 2).
In order to test the statistical correlation between the determined genotypes and the carcass quantity data obtained from the Hanwoo commercial axis, a single marker regression using the following linear regression models was performed to determine the genotype of the genetic mutation And the amount of conductor was analyzed (FIG. 2).

선형회귀모델 : y = Xb + eLinear regression model: y = Xb + e

상기 식에서,In this formula,

y는 도체시 성별과 연령이 포함된 고정효과에 대한 표현형 벡터를 나타내고;y represents a phenotypic vector for a fixed effect including sex and age at the time of conduction;

X는 SNP에 대한 incidence matirx를 나타내며; X represents the incidence matirx for the SNP;

b는 single SNP 유전자형에 대한 회귀계수 벡터를 나타내고; 및,b represents the regression coefficient vector for the single SNP genotype; And

e는 잔차에 대한 벡터를 나타낸다.
e represents the vector of the residual.

도 2에서 보듯이, 상기 실시예 1에서 검출된 유전변이는 한우 상업축의 도체량과 밀접한 연관성이 있음을 확인하였다.
As shown in FIG. 2, it was confirmed that the genetic variation detected in Example 1 was closely related to the amount of conductors in the Hanwoo commercial shaft.

상기 실시예 1 및 2의 결과를 종합하면, 한우의 염색체 14번에 존재하는 SNP(Hapmap59709-rs29021868)는 한우의 도체량을 예측할 수 있는 마커로서 사용할 수 있음을 알 수 있었다.
The results of Examples 1 and 2 indicate that SNPs (Chapmap 59709-rs29021868) existing on chromosome 14 of Hanwoo can be used as markers capable of predicting the amount of carcasses in Hanwoo.

실시예Example 3: 한우  3: Hanwoo 상업축에서On the commercial axis 유전변이와  Genetic variation 도체량의Amount of conductor 연관성 분석 Association analysis

상기 실시예 2에서 결정한 867두의 한우 상업축의 SNP 마커(Hapmap59709-rs29021868)에 대한 유전자형(A/A, A/G 또는 G/G)에 따라 3종의 그룹으로 상기 한우 상업축을 분류하고, 각 그룹에 포함된 한우 상업축의 평균 도체량을 산출하였으며, 상기 SNP 마커의 유전자형에 따른 도체량의 변화를 비교하였다(도 3). 이때, 상기 867두의 한우 상업축의 평균 도체량을 기준으로 하여, 증가된 값과 감소된 값으로 표시하였다.The Hanwoo commercial axis was classified into three groups according to the genotype (A / A, A / G or G / G) of 867 pairs of commercial axis SNP markers (Hapmap59709-rs29021868) determined in Example 2, The average amount of conductors of the commercial axis of Hanwoo included in the group was calculated and the changes in the amount of conductors according to the genotypes of the SNP markers were compared (FIG. 3). At this time, based on the average amount of conductors of the commercial shaft of the 867 Korean beef cattle, the increased and decreased values were expressed.

도 3에서 보듯이, 한우 상업축에 포함된 한우 중에서, A/A 유전형을 갖는 한우는 평균 440.6kg의 도체량을 나타내고, A/G 유전형을 갖는 한우는 평균 428.9kg의 도체량을 나타내며, G/G 유전형을 갖는 한우는 평균 414.3kg의 도체량을 나타냄을 확인하였다. 상기 한우 상업축의 평균 도체량(427.9kg)을 중심으로 상기 측정된 값을 비교하면, A/A 유전형을 갖는 한우는 평균 12.7kg의 도체량이 증가하였고, A/G 유전형을 갖는 한우는 평균 0.96kg의 도체량이 증가한 반면, G/G 유전형을 갖는 한우는 평균 13.6kg의 도체량이 감소되었음을 알 수 있었다.As shown in FIG. 3, in the Hanwoo commercial axis, the Hanwoo having the A / A genotype showed an average carcass amount of 440.6 kg, the Hanwoo having the A / G genotype had the average carcass amount of 428.9 kg, and the G Hanwoo with / G genotype showed average carcass amount of 414.3kg. When the measured values were compared with the average conductor amount (427.9 kg) of the Hanwoo commercial axis, the average amount of carcasses of A / A genotype was increased to 12.7 kg, and the average of A / G genotype of Hanwoo was 0.96 kg , Whereas the carcass amount of G / G genotype was decreased by 13.6kg.

따라서, A/A 유전형을 갖는 한우는 A/G 유전형을 갖는 한우 및 G/G 유전형을 갖는 한우보다도 월등하게 많은 도체량을 나타내고, A/G 유전형을 갖는 한우는 G/G 유전형을 갖는 한우보다도 상대적으로 많은 도체량을 나타내며, A/A 유전형을 갖는 한우와 G/G 유전형을 갖는 한우의 도체량 차이는 평균 25kg임을 알 수 있었다.
Therefore, Hanwoo with A / A genotype showed significantly higher carcass quantity than Hanwoo with A / G genotype and Hanwoo with G / G genotype. Hanwoo with A / G genotype showed more carcass than Hanwoo with G / The average carcass weight of Hanwoo with A / A genotype and Hanwoo with G / G genotype were 25kg on average.

실시예Example 4:  4: 보증씨수소Assurance sushi 538( 538 ( KPN538KPN538 ) 가계의 ) Household 한우에서Hanwoo 유전변이와  Genetic variation 도체량의Amount of conductor 연관성 분석 Association analysis

상기 실시예 3에 추가적으로, 보증씨수소 538(KPN538) 가계의 한우만을 대상으로 상기 SNP 마커(Hapmap59709-rs29021868)에 대한 유전자형(A/A, A/G 또는 G/G)을 결정하고, 상기 결정된 유전자형에 따라 3종의 그룹으로 상기 한우 상업축을 분류하였으며, 각 그룹에 포함된 한우 상업축의 평균 도체량을 산출하고, 상기 SNP 마커의 유전자형에 따른 도체량의 변화를 비교하였다(도 4). 이때, 상기 보증씨수소 538(KPN538) 가계의 한우의 평균 도체량을 기준으로 하여, 증가된 값과 감소된 값으로 표시하였다.(A / A, A / G or G / G) for the SNP marker (Hapmap59709-rs29021868) on Hanwoo of the certified cows 538 (KPN538) family in addition to the above Example 3, , The average commercial carcass axis of the Hanwoo commercial shaft included in each group was calculated and the change in the carcass amount according to the genotype of the SNP marker was compared (FIG. 4). At this time, based on the average conductor amount of Hanwoo of the assurance dunn 538 (KPN538) family, the increase and decrease values are indicated.

도 4에서 보듯이, 보증씨수소 538(KPN538) 가계의 한우 중에서, A/A 유전형을 갖는 한우는 평균 485.7kg의 도체량을 나타내고, A/G 유전형을 갖는 한우는 평균 467.2kg의 도체량을 나타내며, G/G 유전형을 갖는 한우는 평균 442.9kg의 도체량을 나타냄을 확인하였다. 또한, 상기 보증씨수소 538(KPN538) 가계의 한우의 평균 도체량(465.3kg)을 중심으로 상기 측정된 값을 비교하면, A/A 유전형을 갖는 한우는 평균 20.41kg의 도체량이 증가하였고, A/G 유전형을 갖는 한우는 평균 1.94kg의 도체량이 증가한 반면, G/G 유전형을 갖는 한우는 평균 22.36kg의 도체량이 감소되었음을 알 수 있었다.As shown in Fig. 4, Hanwoo having A / A genotype shows an average carcass amount of 485.7 kg, Hanwoo having A / G genotype shows average carcass amount of 467.2 kg, , And Hanwoo with G / G genotype showed average carcass amount of 442.9kg. In addition, when the measured values were compared with the average conductor amount (465.3 kg) of the Hanwoo of the assured dorsal root gusset 538 (KPN538), the average amount of conductors of the A / A genotype was increased to 20.41 kg, It was found that the average amount of cargoes with G genotype increased by 1.94 kg, while that of G / G genotype decreased by 22.36 kg.

따라서, 한우 상업축의 결과와 동일하게 보증씨수소 538(KPN538) 가계의 한우에서도, A/A 유전형을 갖는 한우는 A/G 유전형을 갖는 한우 및 G/G 유전형을 갖는 한우보다도 월등하게 많은 도체량을 나타내고, A/G 유전형을 갖는 한우는 G/G 유전형을 갖는 한우보다도 상대적으로 많은 도체량을 나타냄을 알 수 있었다. 특히, 보증씨수소 538(KPN538) 가계의 한우는 유의성이 더욱 뛰어나, A/A 유전형을 갖는 한우와 G/G 유전형을 갖는 한우의 도체량 차이는 평균 43kg임을 알 수 있었다.
Therefore, in Hanwoo 538 (KPN538), Hanwoo with A / A genotype has significantly higher carbohydrate than Hanwoo with A / G genotype and Hanwoo with G / G genotype. , And that the Hanwoo with A / G genotype showed a relatively larger amount of cargo than the Hanwoo with G / G genotype. In particular, the Hanwoo 538 (KPN538) strain of Hanwoo steers was found to be significantly more effective, and the difference in carcass weight between Hanwoo with A / A genotype and Hanwoo with G / G genotype was 43kg on average.

<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> Method for predicting meat quantity of Hanwoo <130> PA131074/KR <160> 3 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 99 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Hapmap59709-rs29021868 <400> 1 atagaacaca aaagacatta aagacatttc cctttggtga aaaatcagtr taaaatttaa 60 aagagtggac caacagagaa tacttggttt ctaatgata 99 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer <400> 2 atagaacaca aaagacatta 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer <400> 3 tatcattaga aaccaagtat 20 <110> REPUBLIC OF KOREA (MANAGEMENT: RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> Method for predicting meat quantity of Hanwoo <130> PA131074 / KR <160> 3 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 99 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Hapmap59709-rs29021868 <400> 1 atagaacaca aaagacatta aagacatttc cctttggtga aaaatcagtr taaaatttaa 60 aagagtggac caacagagaa tacttggttt ctaatgata 99 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer <400> 2 atagaacaca aaagacatta 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer <400> 3 tatcattaga aaccaagtat 20

Claims (10)

서열번호 1로 표시되는 한우의 도체량 예측용 SNP(single nucleotide polymorphism) 마커.
A single nucleotide polymorphism (SNP) marker for predicting the carcass amount of Hanwoo which is represented by SEQ.
제1항의 한우의 도체량 예측용 SNP 마커를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는, 한우의 도체량 예측용 조성물.
A composition for predicting the amount of carbohydrate of Hanwoo comprising the agent according to claim 1 capable of detecting or amplifying the SNP marker for predicting the conductor amount of the Hanwoo.
제2항에 있어서,
상기 제제는 서열변호 2 및 3의 염기서열을 갖는 프라이머인 것인 조성물.
3. The method of claim 2,
Wherein the agent is a primer having a nucleotide sequence of SEQ ID NOs: 2 and 3.
제2항 또는 제3항의 조성물을 포함하는 한우의 도체량 예측용 키트.
A kit for predicting carcass amount of Hanwoo containing the composition of claim 2 or 3.
제4항에 있어서,
상기 키트는 RT-PCR 키트 또는 DNA 칩 키트인 것인 한우의 도체량 예측용 키트.
5. The method of claim 4,
Wherein the kit is an RT-PCR kit or a DNA chip kit.
제1항의 SNP 마커를 포함하는 한우의 도체량 예측용 마이크로어레이.
A microarray for predicting the conductance of a Hanwoo including the SNP marker of claim 1.
(a) 한우로부터 유래된 시료의 DNA로부터 서열번호 1의 SNP 마커를 증폭시키는 단계; 및
(b) 상기 증폭된 SNP 마커의 50번째 염기의 핵산서열을 결정하는 단계를 포함하는, 한우의 도체량을 예측하는 방법.
(a) amplifying the SNP marker of SEQ ID NO: 1 from the DNA of a sample derived from a cattle; And
(b) determining the nucleic acid sequence of the 50 th base of the amplified SNP marker.
제7항에 있어서,
상기 SNP 마커의 50번째 염기의 유전자형이 A/A 인 한우는 상기 유전자형이 A/G 또는 G/G인 한우에 비하여 도체량이 많을 것으로 판정하는 것인 방법.
8. The method of claim 7,
Wherein the Hanwoo having the genotype of the 50th base of the SNP marker is A / A is judged to have a larger amount of conductors than Hanwoo having the genotype of A / G or G / G.
제7항에 있어서,
상기 SNP 마커의 50번째 염기의 유전자형이 A/G 인 한우는 상기 유전자형이 A/A인 한우에 비하여 도체량이 적고, G/G인 한우에 비하여 도체량이 많을 것으로 판정하는 것인 방법.
8. The method of claim 7,
Wherein the genetic form of the 50th base of the SNP marker is A / G, and the amount of the conductor is smaller than that of the genotype A / A, and the amount of the conductor is determined to be larger than that of G / G.
제7항에 있어서,
상기 SNP 마커의 50번째 염기의 유전자형이 G/G 인 한우는 상기 유전자형이 A/A 또는 A/G인 한우에 비하여 도체량이 적을 것으로 판정하는 것인 방법.
8. The method of claim 7,
Wherein the genetic form of the 50 th base of the SNP marker is G / G, and the amount of the carbohydrate is determined to be smaller than that of the genetically modified Hanwoo which is A / A or A / G.
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