KR20150023419A - 항-ｃｄ２６ 항체 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은, CD26에 결합할 수 있는 신규한 항체 및 약제로서 이의 용도와 관련된 것이다. 게다가, 본 발명은, 이식편대숙주병(GvHD)를 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한, 재생 불량성 빈혈을 치료하는데 사용하기 위한, 및/또는 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착을 촉진하는데 사용하기 위한 항체를 제공한다. 게다가, 본 발명은, 본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고, 키트의 일부(a kit of parts)를 제공한다.

Description

항-ＣＤ２６ 항체 및 이의 용도{ANTI-CD26 ANTIBODIES AND USES THEREOF}
본 발명은, CD26에 결합할 수 있는 신규한 항체, 및 약제로서 이의 용도에 관한 것이다. 게다가, 본 발명은, 이식편대숙주병(Graft-versus-Host Disease, GvHD) 및 재생불량성 빈혈 중의 적어도 하나를 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한 항체, 및 조혈성 줄기 세포 이식(haematopoietic stem cell transplantation) 후에 생착(engraftment)을 촉진하는데 사용하기 위한 항체에 관한 것이다.
CD26은, T-세포 활성 항원(T-cell activation antigen)으로서 초기에 정의된 바와 같은, 널리 분포된 110 kDa 세포 표면 당단백질이다(Fox et al. (1984) J. Immunol. 133, 1250-1256, Fleischer (1987) J. Immunol. 138, 1346-1350, and Morimoto et al. (1989) J. Immunol. 143, 3430-3439). 이러한 분자는, 넓은 조직 분포(wide tissue distribution), 및 이의 세포외 도메인에서 디펩티딜 펩티드가수분해효소 Ⅳ(dipeptidyl peptidase IV)(DPPIV; EC3.4.14.5) 활성도를 갖는 것으로 나타내고 있다(Hegen et al. (1990) J. Immunol. 144, 2908-2914 and Ulmer et al. (1990) J. Immunol. 31, 429-435; WO 2007/014169 A2). CD26 은 인간 T-세포 생리학에서 다수 작용을 갖는다. 예를 들어, CD26이 T-세포 활성을 위한 공동자극 신호(costimulatory signal)를 전달할 수 있음을 증거는 제시한다(Morimoto et al. (1994) Immunologist 2: 4-7 and Fleischer (1994) Immunol. Today 15:180-184). 게다가, CD26는 ADA 결합 단백질로서 확인되고 있고, 상기 CD26/ADA 복합체는 면역계 작용을 조절하는데 중요한 역할을 할 수도 있다(Dong et al. (1996) J Immunol. 156(4):1349-55, Kameoka et al. (1993) Science. 261(5120):466-9, and Morrison et al. (1993) J Exp Med. 177(4):1135-43). CD26과 상기 세포의 단백질 토포이소머라아제(topoisomerase) Ⅱ α 사이의 기능적인 연관성(functional association)은 또한 보고되어 있다(Aytac et al. (2003) British Journal of Cancer 88:455-462). 항-CD26 항체는 예를 들어, WO 2007/014169 A2으로부터 알려져 있다.
조혈성 줄기 세포 이식(Haematopoietic stem cell transplan-tation, HSCT)은, 비-악성의 질병의 상당수 뿐만 아니라, 많은 혈액의 및 수많은 상피의 악성 종양(epithelial malignancies)을 위한 중요한 치료를 나타낸다(Ferrara et al ., 2009, Lancet.; 373: 1550-1561; Sun et al ., 2007, Transl. Res.; 150: 197-214). 이식편대숙주병(GvHD)은 동종이계의 조혈성 줄기 세포 이식(HSCT)의 주요한 합병증이고, 따라서 이러한 중요한 치료의 용도를 한정한다.
조혈성 세포 이식의 두 가지의 주요한 유형이 있다 : 자가 조직(autologous) 및 동종이계(allogeneic). 자가 조직 이식은, 환자로부터의 조혈성 줄기 세포(HSC)의 분리, 상기 줄기 세포의 저장, 몸에 남아있는 줄기 세포를 파괴하는 환자의 의학적 치료, 및 그의 몸으로 상기 환자의 자신의 저장된 줄기 세포(the patient's own stored stem cells)의 회수를 포함한다. 자가 조직의 이식은, 이식편 거부, 감염 및 그 밖의 관련된 질병의 보다 낮은 위험의 장점을 갖는다. 동종 이계 이식은 두 명의 사람을 포함한다: 한 사람은 건강한 기부자(donor)이고, 다른 한 사람은 환자 또는 수용자(recipient)이다. 동종 이계의 HSC 기부자는, 상기 수용자와 일치하는 조직 [HLA 인간 백혈구 항원(HLA human leukocyte antigens)] 타입을 가져야하고, 추가적으로, 상기 수용자는 면역억제성 약물(immunosuppressive medication)을 필요로 한다. 이식을 위한 조혈성 줄기 세포의 세 가지 가능한 소스(sources)가 있다 : 골수(BM), 말초 혈액(PB) 및 상기 제대혈(Umbilical Cord Blood, UCB).
새로운 전략의 개발은, 최근의 몇몇의 연도 동안에 동종 이계의 HSCT를 위한 상기 지표를 확장하기 위해 도움이 된다(Sun et al ., 2007, supra). 전염성 예방에서의 개선, 면역억제성 약물, 보조적인 치료 및 DNA-기초된 조직 타이핑(DNA-based tissue typing)은 또한, 동종 이계의 HSCT 후에 개선된 결과에 기여하고 있다(Ferrara et al ., 2009, supra). 이러한 이유로, 동종이계 세포의 이식의 수는 계속해서 증가한다. 그러나, 이식편대숙주병(GvHD)은 동종이계의 HSCT의 주요한 합병증으로 남아있다.
GvHD 는, 공여체 T 세포가 비-자기(not-self)로서 숙주 세포 상에서 유전적으로 정의된 단백질을 확인하고, 이들을 파괴하기 위해, 면역 반응을 증가시키는 경우에 발생한다(Ferrara et al ., 2009, supra). 이는 HSCT 후에 발생하는 시간에 따라, GvHD는 급성 또는 만성일 수 있다. 급성 GvHD(aGvHD)는 15 % 내지 40 %의 사망률에 책임이 있고, 동종 이계의 HCT 후에 질병률(morbidity)의 주요한 원인인 반면에, 만성 GvHD (cGvHD)는 HCT 후에 3 개월 생존한 환자의 50 %까지 발생한다(Sun et al ., 2007, Transl. Res. ; 150: 150: 197-214).
급성 이식편대숙주병은 일반적으로, 숙주 조직에 대항하여 공여체 면역 세포의 반응으로서 동종 이계의 HSCT 후에 발생한다. 급성 GvHD에 의해 영향을 받는 세 가지의 주요한 조직은, 피부, 간, 및 위장관이다. 임상적으로, 상기 진단은, HSCT의 수용체(recipient)가 하기의 징후 또는 증상의 어떠한 것 또는 모두가 발생한 경우에 추측된다: 피부염(피부 발진), 피부의 물집(cutaneous blisters), 설사와 함께 또는 설사 없는 경련성 복부 통증(crampy abdominal pain), 지속적인 구역질 및 구토, 간염(빌리루빈 및/또는 간 효소의 증가와 함께). 증상의 대부분은, HSCT 후에 100 일 전에, 공여체의 생착과 함께 출발하지만, 나중에 또한 발생할 수도 있다. 급성 GvHD 는, 조직학적 증거에 의해 확인되는 임상적인 진단이다.
급성 GvHD는, 장기 침범(organ involvement)의 수 및 정도에 의해 단계지을 수 있다. 상기 현재의 단계 시스템은, 1974년에 Glucksberg first aGvHD 분류로부터 비롯된다(Glucksberg et al., 1974, Transplantation; 18:4 295-304). 이는 합병증 및 사망률에 대한 위험 범주 내로 환자를 세분화할 수 있기 때문에, 최근의 자료는 상기 등급 시스템의 사용을 지지한다. 이러한 시스템에서, 환자는 세 개의 장기에서 침범의 정도 또는 단계에 따라 4 가지의 등급(Ⅰ-Ⅳ) 중의 하나로 나눠진다. 상기 피부는 포함된 퍼센트 체표면으로 단계짓고, 상기 간은 빌리루빈의 증가의 정도로 단계를 짓고, 상기 위장관은 설사의 양으로 단계를 짓는다. 이러한 기준을 사용한, 단일 등급은 각각의 환자에 할당된다(Jacobsohn et al ., 2007, Orphanet J. of Rare Diseases; 2:35).
GvHD의 다양한 임상적인 징후는 알려져 있다. 가장 빠르고 대부분 공통의 징후는 피부 GvHD이다. 이는 근본적으로, 몸의 어떠한 곳에서 시작할 수 있지만, 손바닥 및 단 하나의 개입으로 자주 출발할 수 있는 반점구진 발진이다(This is essentially a maculopapular rash that can begin anywhere in the body but often start with palm and sole involvement). 상기 환자는 영향을 미친 영역에서 가려움증 또는 무름(tenderness)을 호소할 수도 있다. 몇몇의 경우에, 물집이 발생할 수도 있다. 상기 위장의 징후는, 출혈성, 경련성(cramping), 구역, 구토 및 영양불량증(failure to thrive)이 될 수도 있는, 설사를 포함한다. 게다가, 급성 바이러스성 감염과 같은 간 효소에서의 증가와 함께 GvHD의 간염성 변이체(hepatitic variant)가 인지되고 있을지라도(Akpek et al ., 2002, Blood; 100: 3903-3907), 고빌리루빈혈증으로부터의 황달은, 간 GvHD의 특징이다(Jacobsohn et al., 2007, supra). 만약 메틸프레드니솔론이 이러한 지표를 위한 어떠한 유럽 국가들에서 등록되지 않을지라도, 급성 GvHD의 첫 번째 라인 치료(first line treatment)에서 치료(care)의 고려된 현재의 표준이다.
메틸프레드니솔론 2 mg/kg/day과 함께, 급성 GvHD의 첫 번째 라인 처리는, 환자의 50 % 이상에서 효과적이지만, 환자의 1/3에서만 영속성있는 반응을 생산하였다. 어떠한 반응자도, 이러한 지표에서 등록되지 않은 면역억제제의 조합을 기초로 하는, 두 번째 라인 치료를 제안받지 않았다(Non responders are offered second line therapy, which is based on combinations of immunosuppressive agents not registered in this indication). 두 번째 라인 치료는, 대부분 큰 임상적인 실험에서 30 %의 일년 생존과 함께 주로 만족스럽지 못하다(Second line therapy is largely unsatisfactory with one year survival of 30% in most large clinical trials). 이러한 전략의 어떠한 것도, 치료의 표준이 되기 위해 필요로 하는 성공의 레벨을 달성하지 못하였다. 이식 경험의 30 년 후에, 스테로이드 저항성 급성 GvHD(aGvHD)는 불치병으로 주로 남아있다. 스테로이드 치료에 대해 저항하는 aGvHD 환자는, 매우 한정된 치료학적 선택을 가지고, 이러한 임상적인 상황에 대한 어떠한 권한이 부여된 치료도 없음을 강조되어야 한다. 이러한 증상은, 이러한 환자의 인구에서의 증가된 사망률, 특히, 이차적으로 감염으로 인하여 생명을 위협한다.
이러한 환자 인구에서의 어떠한 임상적으로 관련된 결과는, 스테로이드 저항성 aGvHD 환자에 대한 임상적으로 관련된 장점을 제공하는 것과 같은 중요한 이익일 것이다.
게다가, 조혈성 줄기 세포 이식 후의 생착을 촉진하기 위한 접근은 유용할 것이다. 생착은, 상기 몸의 큰 뼈의 중심에서 상기 골수 공간으로 이들의 길(their way)을 발견하는 과정이다. 그리고 난 다음에, 이식된 줄기 세포는 새로운 혈액 세포를 생산하는 것을 시작할 수 있다. 전문가는 이러한 과정이 어떻게 일어나는 완전하게 확신하지 못하지만, 이는 긴 과정임을 일반적으로 인정한다: 상기 골수가 발생하기 위해 생착을 위해 주입된 후에, 대략 2 내지 4 주가 걸린다. 상기 혈액 줄기 세포가 생착될 때까지, 상기 환자는 감염이 발생되는 위험이 있을 것이다. 이는, 상기 이식된 환자가, 상기 환자의 몸에서 백혈구의 파괴를 결과적으로 나타내는, 방사선 및/또는 화학 요법을 일반적으로 받기 때문이다. 상기 생착을 위해 기다리면서, 이식된 환자는, 골수 이식(BMT) 후에 이식 관련된 사망률의 주요한 원인 중의 하나인, 감염(박테리아, 바이러스 또는 균류에 의해 기인함)으로 인한 심각한 합병증으로 고통받을 수 있다. 이에 따라서, 생착을 개선할 수 있는 제제에 대해 본 분야에서의 필요성이 있다. 이러한 제제는, BM 이식된 환자에 대한 중요한 수치의 것을 가질 것이다(Such an agent will be of significant value for BM transplanted patients). 만약 귀소성(homing) 및 생착이 증가될 수 있다면, 조혈성 혈통(hematopoietic lineages)의 회복을 위한 시간은, 특히, UCB 이식에서, 보다 낮은 생착 실패 및 보다 나은 생존을 결과적으로 발생하면서 감소될 수 있다(Broxmeyer, H. E. (2006)). Umbilical Cord Blood Stem Cells: Collection, Processing, and Transplantation. Blood Banking and Transfusion Medicine: Basic Principles and Practice. C. D. Hillyer et al., Churchill Livingston, an imprint of Elsevier, Inc.: 823-832; Lewis, 2002, Intern Med J 32(12): 601-9).
재생불량성 빈혈은 빈혈의 타입이고, 여기서 골수는 혈액 세포를 보충하기 위한 혈액 세포의 충분한 양을 생산하는데 실패한다. 특히, 재생불량성 빈혈의 선천성 및 후천성 형태(acquired form)가 존재할 수도 있다. 후천성 재생불량성 빈혈(AA)은, 골수 저세포상태(marrow hypocellularity) 및 낮은 말단 혈액 세포 계수(low peripheral blood cell counts)에 의해 특징지어지는 드문 골수 실패 상태(rare bone marrow failure state)이다[Young NS, Maciejewski JP. The pathophysiology of acquired aplastic anemia. N Eng J Med 1997, 336:1365-1372]. 자기면역 발병(autoimmune pathogenesis)의 증거는 대부분 간접적이고, 근본적인 면역 반응의 특징이 주로, 상기 질병-특이적인 저세포 상태를 결과적으로 발생하는 기술적인 어려움으로 인하여 불완전하다. 후천성 재생불량성 빈혈은 면역 매개된 질병(immunomediated disease)으로 생각되어지고, 현재의 표준 비 이식 치료는 항-흉선세포 글루빈(anti-thymocyte globulin, ATG) 플러스 시클로스포린 A(CsA)이다. 무합병증 생존율(event free survival)이 30 내지 40 %를 초과하지 않도록, 실패는, 첫 번째 라인에 반응하지 않는 환자(30 %) 및 첫 번째 반응 후에 재발하는 환자(30 %)를 포함한다(Bacigalupo A., Passweg J., 2009, Hematol Oncol Clin North Am. 23: 159-70).
치료받지 않는 재생불량성 빈혈은, 몇몇의 경우에서 단지 몇몇의 달의 짧은 기간 내에서, 죽음을 유도할 수도 있다. 재생불량성 빈혈의 현재의 치료는, 예를 들어, 골수 이식 또는 면역억제제 약물 치료를 포함한다. 그러나, 면역억제제 약물 치료는 수많은 경우에서 실패하였고, 골수 이식은 적절한 기부자(donor)의 부재로 가능하지 않았다. 따라서, 바람직하게 적어도 하나의 다른 치료에 대해 비-반응성인 환자를 치료하기 위해 효과적일 수도 있는, 재생불량성 빈혈을 치료하기 위한 선택적인 제제(들)(alternative agent)을 제공하기 위해 본 분야에서 또한 필요성이 있다.
본 발명의 간단한 설명
본 발명은, 질병(들), 질환(들) 및 증상(들), 특히 면역계 관련된 질병(들), 질환(들) 및 증상(들)을 치료 및/또는 예방하기 위해 사용될 수 있는 제제의 제공에 관심이 있다. 특히, 본 발명자는, 이식편대숙주병(GvHD) 및 재생불량성 빈혈의 적어도 하나를 치료 및/또는 예방하기 위해 사용될 수도 있거나, 또는 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착(engraftment)을 촉진하기 위해 사용될 수도 있는, 제제의 제공을 목표로 한다. 바람직하게, 이러한 제제는 환자에 의해 필수적으로 잘 용인되어야 한다(this agent should be moreover essentially well tolerated by patients). 특히, 본 발명자는, 다른 치료, 특히 면역억제제의 다른 치료, 예를 들어 스테로이드와의 치료에 대해 비-반응성이거나, 또는 이에 대해 불충분한 반응을 나타내는 환자, 특히 환자의 하나 또는 그 이상의 그룹에서, GvHD 및 재생불량성 빈혈의 적어도 하나를 예방 및/또는 치료하거나, 생착을 촉진하는 제제의 제공을 목표로 한다.
이러한 문제의 해결책으로서, 본 발명자는, 그 중에서도 항체, 약제학적 조성물, 분리된 핵산 분자, 벡터, 항체 혼합물을 포함하는 조성물, 재조합 숙주 세포, 항체를 제조하기 위한 공정 및 부분의 키트(kit of parts)를 제공한다.
첫 번째 측면에 따라, 항체는 CD26, 특히 인간 CD26(human CD26)에 특이적으로 결합할 수 있는 항체가 제공되고, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열 WTVVGPGYFDV(SEQ ID NO: 1)을 포함할 수 있고, 및/또는 상기 경쇄 가변 영역은 서열 QQRSSYPNT(SEQ ID NO: 2) 및/또는 서열 GQGYSYPYT(SEQ ID NO: 3)을 포함할 수 있다. 게다가, 본 발명의 항체는 경쇄 가변 영역을 가질 수 있고, 상기 경쇄 가변 영역은, SEQ ID NOs: 4, 5, 6 내지 21, SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열의 변이체, 및 SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열의 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다(light chain variable region comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 4, 5, 6 to 21, a variant of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, and a variant of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5). 게다가, 본 발명의 항체는 CD26에 특이적으로 결합하고, 중쇄 가변 영역을 가질 수 있고, 중쇄 가변 영역은, SEQ ID NOs: 22 내지 47 및 이의 변이체(들)로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다(heavy chain variable region comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 22 to 47 and variant(s) thereof). 특정한 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 CD26에 특이적으로 결합하고, SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 4 또는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가질 수 있다.
다른 측면에 따라, 본 발명자는, (a) 본 발명의 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열; 또는 (b) (a)에 상보적인 뉴클레오티드 서열;을 포함하는 분리된 핵산 분자를 제공한다. 다른 측면에 따라, SEQ ID NOs: 50 내지 128 및 이의 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된(isolated) 핵산 분자가 제공되고, 상기 변이체는 SEQ ID NOs: 50 내지 128로 이루어진 군으로부터 선택된 상기 뉴클레오티드 서열과 적어도 90 % 서열 동일성을 갖는다(said variant having at least 90% sequence identity to the nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 50 to 128). 다른 측면에 따라, 본 발명자는 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터를 제공하고, 상기 핵산 분자는 발현 조절 서열에 작동적으로 결합된다(said nucleic acid molecule is operatively linked to an expression control sequence). 다른 측면에 따라, 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 재조합 숙주 세포가 제공된다.
다른 측면에 따라, PD　12002로서, Genoa(L.go R. Benzi, 10, Genoa, Italy)의 Centro di Biotecnologie Avanzate (CBA) - Interlab Cell Line Collection (ICLC)에 부다페스트 조약에 의해 2012년 9월 11일에 기탁된 하이브리도마 세포주 또는 상기 하이브리도마 세포주의 유도체로부터 생산된, 항체가 제공된다[an antibody is provided, which is produced from the hybridoma cell line deposited on the 11th September 2012 under the Budapest Treaty at the Centro di Biotecnologie Avanzate (CBA) - Interlab Cell Line Collection (ICLC) of Genoa (L.go R. Benzi, 10, Genoa, Italy) as PD　12002 or a derivative of said hybridoma cell line]. 기탁된 상기 하이브리도마 세포주 물질은, PD 12002 하이브리도마 기탁물로서 짧게 본원에 또한 언급되어 있다. 이러한 기탁물의 이용가능성에 대한 모든 제한은, 본 출원에 대한 우선권의 이익을 청구하는 다른 출원 또는 본 출원의 첫 번째 공개로 철회될 것이다(All restrictions as to the availability of these deposits will be withdrawn upon first publication of this application or another application which claims benefit of priority to this application). 다른 측면에 따라, 본 발명자는, PD　12002로서 Genoa (이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체에 의해 결합된 에피토프에 결합하는 항체(an antibody that binds the epitope bound by an antibody produced by the hybridoma cell line deposited at CBA-ICLC of Genoa (Italy) as PD　12002)를 제공한다.
다른 측면에 따라, 본 발명의 항체를 제조하는 방법이 제공된다.
다른 측면에 따라, 본 발명자는, 본 발명의 적어도 하나의 항체 및 임의적으로(optionally) 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 다른 측면에 따라, 약제(medicament)로서 사용하기 위한 본 발명의 약제학적 조성물이 제공된다. 다른 측면에 따라, 본 발명자는, 조혈성 줄기 세포 이식(haematopoietic stem cell transplantation) 후의 생착(engraftment)을 촉진하는데 사용하기 위한 것, 및/또는 조혈성 줄기 세포 이식 후에, 이식편대숙주병(GvHD)을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한 것, 및/또는 재생 불량성 빈혈을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한 본 발명의 약제학적 조성물을 제공한다.
다른 측면에 따라, 약제로서 사용하기 위한, 본 발명의 항체 또는 항체 혼합물, 특히 본 발명의 항체 혼합물을 포함하는 조성물이 제공된다. 다른 측면에 따라, 본 발명자는, 조혈성 줄기 세포 이식 후의 생착을 촉진하는데 사용하기 위한 것, 및/또는 바람직하게 조혈성 줄기 세포 이식 후에, 이식편대숙주병(GvHD)을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한 것(for use in preventing and/or treating Graft-versus-Host disease (GvHD), preferably after haematopoietic stem cell transplantation), 및/또는 재생 불량성 빈혈, 바람직하게 중증 재생 불량성 빈혈을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한, 본 발명의 항체 또는 항체 혼합물, 특히 항체 혼합물을 포함하는 조성물을 제공한다. 다른 측면에 따라, 하기를 포함하는 일부의 키트가 제공된다: (ⅰ) 본 발명의 적어도 하나의 항체, 특히 본 발명의 항체 혼합물을 포함하는 조성물, 및 추가적으로 (ⅱ) a) 적어도 하나의 면역억제제 약물 또는 b) 적어도 하나의 코르티코스테로이드 및/또는 적어도 하나의 항히스타민제.
도 1a는 완전한 CD26 인간의 서열을 나타낸 것이다.
도 1b는 완전한 CD25 돼지의 서열을 나타낸 것이다.
도 1c는 정렬된 완전한 CD26 인간 및 돼지의 서열을 나타낸 것이다.
도 2a는, 본 발명에 따른 항체에 존재할 수 있는 CD3 서열을 나타낸 것이다.
도 2b는, CD26 특이적 항체의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3의 서열의 목록을 나타낸 것이다.
도 2c는, CD26 특이적 항체의 VH ABR1, VH ABR2, VH ABR3, VL ABR1, VL ABR2, 및 VL ABR3의 서열의 목록을 나타낸 것이다.
도 3a 및 b는, 본 발명에 따른 항체에 존재할 수 있는, 다양한 VH 및 VL 영역에서 나타낸 서열 유사성을 나타낸 것이다. 상기 VH 그룹1(VH group1) 내의 VH 서열, 및 VH 그룹1 내의 VL 서열은 동일한 CDRs를 포함한다.
도 4a는, CDina26의 투여와 관련된 연구에 등록된 환자의 피부 GvHD의 등급(Grading)을 나타낸 도표를 나타낸 것이다.
도 4b는, CDina26의 투여와 관련된 연구에 등록된 환자의 간 GvHD의 등급을 나타낸 도표를 나타낸 것이다.
도 4c는, CDina26의 투여와 관련된 연구에 등록된 환자의 소화관 GvHD의 등급을 나타낸 도표를 나타낸 것이다.
도 5 는, 완전한 CD4 계수를 보여주는 도면을 나타낸 것이다.
도 6 은, 스테로이드, 사이클로스포린 및 CDina26으로 처리된 9 명의 환자와 비교된, 스테로이드, 사이클로스포린 및 다른 면역억제제 약물로 처리된, 등급 Ⅲ-Ⅳ 급성 GvHD를 갖는 13 명의 대조군 환자의 이식 관련된 사망률의 예상된 누적의 발생 정도(projected cumulative incidence)를 나타낸 도표를 나타낸 것이다.
도 7 은, 스테로이드, 사이클로스포린 및 CDina26으로 처리된 9 명의 환자와 비교된, 스테로이드, 사이클로스포린 및 다른 면역억제제 약물로 처리된, 등급 Ⅲ-Ⅳ 급성 GvHD를 갖는 13명의 대조군 환자의 보험통계의 생존(projected actuarial survival)을 나타낸 도표를 나타낸 것이다.
도 8 은, 본 발명에 따른 선호된 항체의 구조를 나타낸 것이다. 상기 도면은, 본 발명의 항체를 형성할 수 있는 경쇄의 두 가지의 상이한 그룹(VL 그룹 1 및 VL 그룹 3)을 나타낸다.
도 9 는, 세포 표면에 표시된 CD26에 결합하기 위한, CDina26의 능력을 결정하기 위해 이용된 유동세포 계수 분석을 나타낸 것이다(FIG. 9 illustrates Flow cytometry analysis utilized to determine the ability of CDina26 to bind to cell surface expressed CD26).
도 10, SEQ ID NOs의 요약. 상기 VL 아미노산 서열의 각각의 하나는, 본 발명의 항체에서 상기 VH 아미노산 서열 중의 하나와 조합으로, 임의적으로(optionally) SEQ ID NO:48을 갖는 상기 CL 아미노산 서열 및 SEQ ID NO:49을 갖는 CH1-CH2-CH3 서열의 조합으로 추가적으로, 존재할 수 있다. 도 10 은 또한, SEQ ID NO:s 4 내지 49을 갖는 아미노산 서열에 상응하는, SEQ ID NO:s 50 내지 128을 갖는 뉴클레오티드 서열을 나타낸 것이다.
도 11은, Biacore® Resonance Units (RU)에서 측정된, 포획된(captured) CDina26에서 인간(왼쪽) 및 돼지(오른쪽) 항원(Ag)의 결합을 나타낸 것이다.
도 12는, CD26에서 상기 7 개의 확인된 불연속적인 결합 영역에 결합하는 CDina26의 막대 그림 비교(bar plot comparison)를 나타낸 것이다: DYDESSGRWNCLVAR (SEQ ID NO: 146); DVTWATQERISLQWL (SEQ ID NO: 147); TTGWVGRFRPSEPHF (SEQ ID NO: 153); TFITKGTWEVIG (SEQ ID NO: 155); DYLYYISNE (SEQ ID NO: 156); SCELNPERCQYY (SEQ ID NO: 157); 및 SGPGLP (SEQ ID NO: 158).
본 발명의 상세한 설명
본 발명으로 이어지는 수많은 실험 동안에, 본 발명자는 놀랍게도, 특히, 이식편대숙주병(GvHD) 및 재생불량성 빈혈 중 적어도 하나를 치료 및/또는 예방하기 위한, 및 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착을 촉진하기 위한, 약제로서 매우 유익한 및 유망한 결과로 사용될 수 있는 항체를 발견하였다. 본 발명의 항체는, CD26, 특히 인간 CD26, 특히, 줄기 세포에 존재하거나, 활성화된 T 림프구 상에 표시된 인간 CD26에 특이적인 결합을 나타낼 수 있다(The antibody of the present invention can exhibit specific binding to CD26, in particular to human CD26, especially human CD26 present on a stem cell or expressed on an activated T lymphocyte). 활성화된 T 림프구[CD16　+　CD3　+　T 및 CD56 + CD3 + T의 특정한 모집단(particular subpopulations)에서] 상에 표시된 인간 CD26에 본 발명의 항체의 결합은, 하기에 기재된 바와 같은, 본 발명의 항체의 특정한 유리한 특성이다. aGvHD 스테로이드 저항을 치료하기 위한 CD26에 대항하는 쥐과 모노클로날 항체의 용도를 위한 이유는, CD26 활성도를 차단하기 위해 이의 능력에 의해 주로 뒷받침된다(The rationale for the use of murine monoclonal antibody against CD26 for treating aGvHD steroid resistant is mainly supported by its ability to block CD26 activity). 본 발명자에 의해 실행된 실험은, CD26이 자극된 T 세포에 표시되고, 자극된 자연 킬러 세포(stimulated Natural Killer cells)에서 더 낮은 양으로 과잉-표시됨(over-expressed)을 나타낸다. 이와 대조적으로, 이러한 분자는, 증식하지 않는 세포 상에 낮게 표시된다(this molecule is low expressed on resting cells). B 세포, 단핵 백혈구 및 수지상 세포는 CD26를 전혀 나타내지 않고, 중간엽 줄기 세포, 내피 세포 및 섬유아세포는 CD26을 전혀 나타내지 않는다(B cells, monocytes and dendritic cells never express CD26, neither do mesenchymal stem cells, endothelial cells and fibroblasts express CD26). 본 발명의 항-CD26은, 면역 반응의 조절에서의 이들의 역할과 이들의 확장을 방해하는, 활성화된 조절성 T 세포에 특이적으로 결합한다. 어떠한 이론에 얽매이지 않으면서, 활성화된 림프구는 항-CD26의 타겟이고, 활성화된 림프구의 부분적인 감소는, 재생불량성 빈혈의, 및 조혈성 줄기 세포 이식 전 및/또는 동안에 및/또는 후에 존재하는 질병(들), 질환(들) 및/또는 증상(들)의, GvHD, 특히 aGvHD, 특히 스테로이드 저항 aGvHD 중 적어도 하나의 임상적으로 관련된 조절을 유도할 수 있고, 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착을 촉진할 수 있다. 어떠한 이론에 얽매이지 않으면서, 이는 공여체 T 림프구가 종양 세포에 직접적으로 대항하는 반응을 여전히 증가시킬 수 있는 것으로 현재 추정된다.
조혈성 줄기 세포 이식(HCT)은 혈액의 질병(hematologic diseases) 및 악성 종양(malignancies)에 대한 표준 치료를 나타낸다.
어떠한 이론에 얽매이지 않으면서, 본 발명의 하나 또는 그 이상의 항체, 특히 CDina26을 투여함으로써 공여체 세포 상에 CD26의 저해 또는 감소(depletion)이, 생착, 특히 단기간의 생착을 증진시킬 수 있고, 예를 들어, 인간 및 마우스에 대한, 재증식(repopulation), 특히 경쟁적 재증식, 이차적인 이식 및 상기 처리된 피검자의 생존을 증진시킬 수 있음이 현재 추정된다. 게다가, 어떠한 이론에 의해 얽매이지 않으면서, 만약 귀소성 및 생착이 본 발명의 적어도 하나의 항체, 특히 CDina26를 투여함으로써 증진된다면, 조혈성 혈통(haematopoietic lineages)의 회복을 위한 시간은, 특히 hUCB (인간 제대혈 세포) 이식에서 보다 낮은 생착 실패 및 보다 나은 생존을 결과적으로 나타내면서 감소할 수 있다.
본 항체를 사용한 치료 또는 약제로서 사용하기 위한 본 발명의 항체는, 조혈성 세포 이식 후에 성공적인 결과의 최고의 변화와 함께 보다 많은 환자를 제공할 수 있다. 게다가, CD26 항원에 대항하는 본 발명의 하나 또는 그 이상의 항체, 특히 CDina26은, 전체적인 생존과 직접적으로 연관된, 스테로이드 저항성 급성 GvHD를 치료하고, 상기 생착을 개선하는 적어도 하나를 위한 조혈성 줄기 세포 이식을 받은 환자에게 중요한 임상적인 이익을 제공할 수 있다.
어떠한 이론에 의해 얽매이지 않으면서, 이는 신호 경로를 조절하는 막 당단백질(membrane glycoprotein)로서 CD26에 결합을 통해, 발명의 적어도 하나의 항체, 특히 CDina26를 투여하는 것이, 유익한 활성, 특히 혈성 줄기 세포 이식 후에 생착을 촉진하고 및/또는 이식편대숙주병 및 재생불량성 빈혈의 적어도 하나를 예방 및/또는 치료를 제공할 수 있다고 추정된다.
놀랍게도, 본 발명자는, 이전에-언급된 문제를 해결하는, 하나 또는 그 이상의 항체, 특히 CDina26을 제공한다.
하나의 측면에 따라, 본 발명은, CD26 당단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 제공한다. 특히, 이러한 항체는, 인간 CD26, 줄기 세포(들)(특히 인간 줄기 세포(들))에 존재하는 인간 CD26 및/또는 T 림프구(특히, CD16 + CD3 + T 및 CD56 + CD3 + T의 부분 모집단), 특히 활성화된 T 림프구(들)(특히 CD16 + CD3 + T 및 CD56 + CD3 + T의 부분 모집단)에 표시된 인간 CD26에 특이적으로 결합할 수 있다. 다른 방식으로 명확하게 나타내지 않는다면, 용어 CD26 및 CD26 당단백질은 본원에 교환가능하게 사용된다.
본 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 본 항체의 상기 중쇄 가변 영역은, SEQ ID NO: 1에 기재된 서열을 포함할 수 있다. 본 항체의 상기 경쇄 가변 영역은, SEQ ID NO: 2에 기재된 서열 또는 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열 또는 SEQ ID NO: 2에 기재된 서열 및 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열 둘 다를 포함할 수 있다. 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 1에 기재된 상기 서열을 포함하는 CDR3을 포함할 수 있다. 상기 경쇄 가변 영역은, SEQ ID NO: 3에 기재된 서열 또는 SEQ ID NO: 2에 기재된 서열 또는 SEQ ID NO: 2에 기재된 서열 및 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열 둘 다를 포함하는 CDR3을 포함할 수 있다. SEQ ID NO: 1에 기재된 서열, 특히 SEQ ID NO: 1에 기재된 서열을 포함하는 CD3을 포함하는 상기 중쇄 가변 영역은, CDR1 및 CDR2를 추가적으로 포함할 수 있고, 상기 중쇄 가변 영역의 CDR1 및 상기 중쇄 가변 영역의 CDR2의 상기 아미노산 서열이 PD　12002로서 Genoa (이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 중쇄 가변 영역의 것들이고, PD　12002로서 CBA-ICLC에 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 상기 중쇄 가변 영역은, SEQ ID NO: 1, 특히 SEQ ID NO: 1을 포함하는 CDR3을 포함한다. SEQ ID NO: 2에 기재된 서열, 특히 SEQ ID NO: 2에 기재된 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역은 CDR1 및 CDR2를 추가적으로 포함할 수 있고, 상기 경쇄 가변 영역의 CDR1 및 상기 경쇄 가변 영역의 CDR2의 상기 아미노산 서열은 PD　12002으로서 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 경쇄 가변 영역의 것들이고, PD　12002로서 CBA-ICLC에 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 2, 특히 SEQ ID NO: 2를 포함하는 CDR3을 포함한다. SEQ ID NO: 3에 기재된 서열, 특히 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 상기 경쇄 가변 영역은, CDR1 및 CDR2를 포함할 수 있고, 상기 경쇄 가변 영역의 CDR1 및 상기 경쇄 가변 영역의 CDR2의 상기 아미노산 서열은, PD　12002로서 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이고, PD　12002로서 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 3, 특히 SEQ ID NO: 3을 포함하는 CDR3을 포함한다. 특히, 상기 경쇄 가변 영역의 CDR1 및 CDR2는 PD　12002로서 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 경쇄 가변 영역의 것들일 수 있고, 상기 중쇄 가변 영역의 CDR1 및 CDR2는 PD　12002로서 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 상기 항체의 중쇄 가변 영역의 것들일 수 있다.
추가적으로 또는 대체적으로, CD26에 특이적으로 결합할 수 있는 항체는, CDR3를 포함하는 중쇄 가변 영역(SEQ ID NO: 1) 및 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역(SEQ ID NO: 2 및/또는 3)을 포함할 수 있고, 상기 중쇄 가변 영역의 CDR3의 상기 아미노산 서열은, PD　12002로서 Genoa (이탈리아)에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 중쇄 가변 영역의 것이고, 상기 경쇄 가변 영역의 CDR3의 상기 아미노산 서열은, PD　12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 경쇄 가변 영역의 것이다. 특히, CD26에 특이적으로 결합할 수 있는 항체는, 이러한 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 이러한 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함할 수 있다. 상기에 언급된 CDR3 서열은 도 2a에 기재되어 있다.
추가적으로 또는 대체적으로, CD26에 특이적으로 결합할 수 있는 항체는, CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있고, 상기 중쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 상기 아미노산 서열은, PD　12002로서 Genoa (이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이고, 상기 경쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 상기 아미노산 서열은, PD　12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다. 특히, CD26에 특이적으로 결합할 수 있는 이러한 항체는, 이러한 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄 및 이러한 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄를 포함할 수 있다. 상기에 언급된 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 도 2b에 기재되어 있다.
추가적으로 또는 대체적으로, CD26에 특이적으로 결합할 수 있는 항체는, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있고, 상기 중쇄 가변 영역의 상기 아미노산 서열은, PD　12002로서 Genoa(이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이고, 상기 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은, PD　12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다. 특히, CD26에 특이적으로 결합할 수 있는 항체는, 이러한 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 이러한 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함할 수 있다. 특히, 상기 중쇄의 상기 아미노산 서열은, PD　12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 중쇄의 아미노산 서열일 수도 있고, 및/또는 상기 경쇄의 아미노산 서열은, PD　12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 이러한 항체의 경쇄의 아미노산 서열일 수 있다. 특히, CD26에 특이적으로 결합할 수 있는 항체는, PD　12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체로서 동일한 중쇄 서열 및 동일한 경쇄 서열을 포함할 수 있다.
추가적으로 또는 대체적으로, CD26에 특이적으로 결합할 수 있는 항체는, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있고, 상기 중쇄 가변 영역의 상기 아미노산 서열은, PD　12002로서 Genoa(이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이고, 상기 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은, PD　12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다. 특정한 실시 형태에서, 본 발명의 항체는, 서열 ID NO: 26를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 ID NO: 4 및/또는 서열 ID NO: 5를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 특히, CD26에 특이적으로 결합할 수 있는 항체는, 이러한 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 이러한 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함할 수 있다. 특히, 상기 중쇄의 상기 아미노산 서열은, PD　12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 중쇄의 아미노산 서열이고, 및/또는 상기 경쇄의 상기 아미노산 서열은, PD　12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 경쇄의 아미노산 서열이다.
바람직한 실시 형태에 따라, 본 발명의 항체는, 선행 기술에 공개된 바와 같은 상기 인간 CD26 서열에 나타낸 바와 같은, 상기 인간 CD26 서열의 아미노산 위치 290 내지 550의 영역에 결합할 수 있다.
추가적인 실시 형태에 따라, 본 발명의 항체는, 돼지의 CD26에 특이적으로 결합하지 않는다. 하나의 실시 형태에 따라, 본 발명의 항-인간 CD26 항체의 에피토프는, 인간과 돼지의 CD26 사이의 차이로부터 기인하는 358 개의 아미노산 잔기 중에 적어도 하나, 예를 들어, 하나, 둘, 셋, 넷, 다섯, 또는 그 이상을 포함한다. 따라서, 본 발명의 이러한 문서에 따라, 상기 항체는 따라서, 인간과 돼지의 CD26 사이의 이러한 상이한 영역을 인식한다.
본 발명의 하나의 실시 형태에 따라, 본 발명의 상기 항체 혼합물은, 인간 CD26에 특이적으로 결합하지 않는 항체를 포함하지 않는다.
추가적으로 또는 대체적으로, CD26에 특이적으로 결합할 수 있는 항체는, ABR1, ABR2, 및 ABR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 ABR1, ABR2, 및 ABR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있고, 상기 중쇄 가변 영역의 ABR1, ABR2 및 ABR3의 상기 아미노산 서열은 PD　12002로서 Genoa(이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이고, 상기 경쇄 가변 영역의 ABR1, ABR2 및 ABR3의 상기 아미노산 서열은 PD　12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다. 상기에 언급된 ABR1, ABR2 및 ABR3 서열은, 도 2c에 기재되어 있다.
본 발명의 하나의 실시 형태에 따라, 하기의 항원 결합 영역(ABRs)은 본 발명의 항체에 존재한다 :
ABR1(경쇄)는 아미노산 서열: SSVSYMN (SEQ ID NO: 135)을 포함하고,
ABR2(경쇄)는 아미노산 서열: LWIYSTSNLAS (SEQ ID NO: 136)을 포함하고,
ABR3(경쇄)는 아미노산 서열: QQRSSYPN (SEQ ID NO: 137)을 포함하고,
여기서 바람직하게 ABR3은 SEQ ID No: 2에 포함되거나,
또는
ABR1(경쇄)는 아미노산 서열: ENVVTYVS(ABR1*)(SEQ ID NO: 138)을 포함하고,
ABR2(경쇄)는 아미노산 서열: LLIYGASNRYT(ABR2*)(SEQ ID NO: 139)을 포함하고,
ABR3(경쇄)는 아미노산 서열: GQGYSYPY(ABR3*)(SEQ ID NO: 140)을 포함하고,
여기서 바람직하게 ABR3은 SEQ ID No: 3에 포함된다.
본 발명의 추가적인 실시 형태에 따라, 서열 ABR1 내지 3 또는 ABR1* 내지 3*은 하기의 항원 결합 영역(ABRs)과 함께 본 발명의 항체에 존재한다:
ABR1(중쇄)는 아미노산 서열: YTFRSYDIN(ABR1h)(SEQ ID NO: 141)을 포함하고,
ABR2(중쇄)는 아미노산 서열: WIGWIFPGDGSTKY(ABR2h)(SEQ ID NO: 142)을 포함하고,
ABR3(중쇄)는 아미노산 서열: RWTVVGPGYFDV(ABR3h)(SEQ ID NO: 143)을 포함하고,
여기서 바람직하게 ABR3(중쇄)은 SEQ ID No:1에 포함된다.
하나의 실시 형태에 따라, 상기 ABRs는, Kunik V, Peters B, Ofran Y (2012) "Structural Consensus among Antibodies Defines the Antigen Binding Site", PLoS Comput Biol 8(2): e1002388.doi:10.1371/journal.pcbi.1002388; Editor: Brian Baker, University of Notre Dame, United States of America; Published February 23, 2012에 발행된 "Paratome tool"에 따라 결정된다; 또한 http://ofranservices.biu.ac.il/site/services/paratome/index.html를 참고하라. 상기에 언급된 VH/VL ABR 서열은 도 2b에 기재되어 있다.
본 발명의 문맥에서 사용된 바와 같은 용어 "항체"는, 전체의 항체 분자, 전장 면역글로불린 분자, 특히 자연적으로 발생하는 전장 면역글로불린 분자 또는 면역글로불린 유전자 단편 재조합 공정에 의해 형성된 전장 면역글로불린 분자 또는 전장 면역글로불린 분자 및 항체의 단편을 포함할 수 있다. 항체 단편은 특히, 적어도 하나의 항체-항원 결합 부위를 포함하는 항체 단편일 수 있다. 항체 단편은 특히, 활성화된 T 림프구(들) 상에, 줄기 세포(특히 인간 줄기 세포)에 존재할 수 있거나 및/또는 T 림프구(들)(특히, CD16 + CD3 + T and CD56 + CD3 + T의 부분모집단)에 표시될 수 있는, CD26, 특히 인간 CD26에 특이적인 결합을 나타낼 수 있다. 게다가, 본 출원의 내용에 사용된 바와 같은 용어 "항체"는, 특히, 줄기 세포에 존재할 수 있거나, 및/또는 T 림프구(들), 특히 활성화된 T 림프구(들)에 나타낼 수 있는, CD26, 특히 인간 CD26에 특이적인 결합을 나타내는, 융합 단백질을 포함할 수 있다. 항체-항원 결합 부위는, 특히 적어도 하나의 CDR 서열을 포함하는 항체의 항원 결합 부위일 수 있다.
상기 용어 "항체"는, 예를 들어, 모노클로날, 폴리클로날, 다가특이성(multispecific)(예를 들어, 이특이성), 재조합, 인간, 키메라 및 인간화된 항체를 포함할 수 있다. 게다가, 용어 "항체"는 또한, 재조합적으로 나타낸 항원 결합 단백질 및 항원 결합 합성 펩티드를 포함할 수 있다. 특히, 상기 용어 "항체"는, 바람직하게 CD26, 특히 인간 CD26에 특이적인 결합을 나타낼 수 있는 모든 것, 예를 들어 미니바디(minibodies), 및 디아바디(diabodies)를 포함할 수 있다. 게다가, 본원에 사용된 바와 같은, 상기 용어 "항체"는, 생체 내에서 생산된 면역글로불린, 생체 외, 특히 하이브리도마에서 생산된 것들을 포함할 수 있다. 게다가, 용어 "항체" 또는 "적어도 하나의 항체"는, 항체 혼합물을 포함할 수 있다. 용어 "항체 혼합물"은, 특히 본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함하는, 특히 CD26, 특히 인간 CD26에 특이적인 결합을 나타내는 둘 또는 그 이상의 항체로 이루어진 또는 포함하는 혼합물을 포함한다. 상기 혼합물에 존재하는 둘 또는 그 이상의 항체는, 둘 또는 그 이상의 상이한 항체, 예를 들어, 동일한 아미노산 서열을 갖지 않는 둘 또는 그 이상의 항체일 수 있다. 특히, 다른 항체와 상이한 항체는 아미노산 서열을 갖는 항체일 수 있고, 적어도 하나의 아미노산 잔기는, 상기 다른 항체의 아미노산 서열과 비교되어, 삭제되거나 삽입되거나 또는 상이한 아미노산 잔기와 교체된다. 본 발명에 따른 특히 유용한 항체 혼합물은, PD　12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체를 포함하거나 상기 항체로 이루어지거나, 또는 PD　12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 적어도 하나를 포함한다.
본 발명에 따른 항체는, 재조합적으로 생산된 항체일 수 있다. 본 발명의 항체는, 모노클로날 및/또는 쥐과 항체, 특히 쥐과 모노클로날 항체일 수 있다. 상기에 언급된 바와 같이, 본 발명의 적어도 하나의 항체는, 특히, PD 12002 하이브리도마 기탁물에 의해 생성된 항체, CDina26를 포함하거나 또는 상기 항체로 이루어진, 본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함하는 항체 혼합물일 수 있다.
용어 "모노클로날 항체"는, 단일 항원 결정기(single antigenic determinant), 또는 에피토프의 매우 특이적인 인식 및 결합을 포함하는 실질적인 동종의 항체 집단을 나타낸다. 이는, 상이한 항원 결정기(antigenic determinants)에게 향하는 상이한 항체를 일반적으로 포함하는 폴리클로날 항체(polyclonal antibodies)에 대한 것이다. 용어 "모노클로날 항체"는, 온전한 및 전장 모노클로날 항체 둘 다 및 항체 단편(ab, Fab', F(ab')2, Fv와 같은), 단쇄 (scFv) 돌연변이, 항체 일부를 포함하는 융합 단백질(fusion proteins), 및 항원 인식 부위를 포함하는 어떠한 다른 변형된 면역글로불린 분자를 포함한다. 게다가, "모노클로날 항체"는, 하이브리도마, 파지 선택(phage selection), 재조합 발현, 및 형질전환 동물을 포함하지만 이로 제한되지 않는 많은 방식으로 만들어진 이러한 항체를 나타낸다.
용어 "인간화된 항체"는, 최소한의 비-인간(예를 들어, 쥐과 동물) 서열을 포함하는, 특정한 면역글로불린 사슬, 키메라 면역글로불린(chimeric immunoglobulins), 또는 이의 단편인, 비인간(예를 들어, 쥐과 동물) 항체의 형태를 나타낸다. 일반적으로, 인간화된 항체는, 상보성 결정 영역(complementary determining region, CDR)으로부터의 잔기가, 원하는 특이성, 친화성, 및 능력을 갖는 비-인간 종(예를 들어, 마우스, 랫, 토끼, 및 햄스터)의 CDR로부터의 잔기로 대체되는 인간 면역글로불린이다(Jones et al., 1986, Nature, 321:522-525; Riechmann et al., 1988, Nature, 332:323-327; Verhoeyen et al., 1988, Science, 239: 1534-1536). 몇몇의 예에서, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 영역(Fv framework region, FR) 잔기는, 원하는 특이성, 친화성, 및 능력을 가지는 비-인간 종으로부터의 항체에서 이에 상응하는 잔기(corresponding residues)로 대체된다. 상기 인간화된 항체는 추가적으로, 항체 특이성, 친화성, 및/또는 능력을 최적화하고 정제하기 위해 상기 대체된 비-인간 잔기 내 및/또는 Fv 프레임워크 영역에서 추가적인 잔기의 치환에 의해 변형될 수 있다. 보통, 상기 인간화된 항체는, 상기 비-인간 면역글로불린에 일치하는 상기 CDR 영역의 모두 또는 실질적인 모두를 포함하는 적어도 하나, 및 일반적으로 둘 또는 셋, 가변 도메인의 실질적인 모두를 포함할 것이지만, 상기 FR 영역의 모두 또는 실질적인 모두는 인간 면역글로불린 공통서열의 것들이다. 상기 인간화된 항체는 또한, 일반적으로 인간 면역글로불린의 것들, 면역글로불린 불변 영역 또는 도메인(Fc)의 적어도 일부를 또한 포함할 수 있다.
용어 "키메라 항체(chimeric antibodies)"는, 면역글로불린 분자의 상기 아미노산 서열이 둘 또는 그 이상의 종으로부터 유도된 항체를 나타낸다. 일반적으로, 경쇄 및 중쇄 둘 다의 가변 영역은, 원하는 특이성, 친화성, 및 능력을 갖는, 60 종의 포유동물(예를 들어, 마우스, 랫, 토끼 등) 중의 하나의 종으로부터 유도된 항체의 가변 영역과 일치하는 반면에, 상기 불변 영역은 이러한 종에서 면역 반응을 일으키는 것을 피하기 위해, 다른 것(일반적으로 인간)으로부터 유도된 항체에서의 서열과 상동이다. 일반적으로, 키메라 항체는, 대부분 인간 도메인을 갖는 항체를 생산하기 위해, 설치류의 가변 영역(VH 및 VL) 및 인간 불변 영역을 이용한다. 이러한 키메라 항체의 생산은 본 분야에서 널리 알려져 있고, 표준 수단에 의해 달성될 수도 있다. 인간 불변 영역의 서열은, 숙련자에게 명백할 것이고, 공용 데이터베이스에서 이용가능하다(예를 들어, National center for Biotechnology Information (NCBI), U.S. National Library of Medicine).
용어 "항체 단편(antibody fragment)"은, 바람직하게 CD26, 특히 인간 CD26 에 특이적인 결합을 나타낼 수 있는 모든 것, F(ab')2, Fab, F(ab)2, Fab', Fv, dAb, scFv, 중쇄 가변 영역 CDR1, 중쇄 가변 영역 CDR2, 중쇄 가변 영역 CDR3, 경쇄 가변 영역 CDR1, 경쇄 가변 영역 CDR2, 경쇄 가변 영역 CDR3, 단쇄 가변 단편(scFv), VH, VL 등과 같은 단편을 나타낼 수 있다. "항체 단편"은, 완전한 항체 또는 전장 항체에 의해 인식되는 동일한 항원에 특이적으로 결합할 수 있다. "항체 단편"은, 특히 온전한 항체의 일부일 수 있다.
특정한 에피토프를 인식하는, 특히 CD26에 특이적으로 결합하는 항체 단편은, 본 분야에 알려진 기술을 적용하는 숙련자에 의해 일반적일 수 있다. 항체의 단편, 특히 예를 들어, PD 12002 하이브리도마 기탁물에 의해 생산된 하나 또는 그 이상의 항-CD26 항체, CDina26의 단편과 같은, CD26, 특히 인간 CD26 에 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 단편은, 항체 단편을 수득하기 위해, 예를 들어, 상기 항체를 효소적으로 처리함으로써 제조될 수 있다. 게다가, 항체 단편은, 예를 들어, E. coli , B. subtilis, P. pastoris, K. lactis와 같은, 숙주에서 단편을 위한 DNA 코딩(DNA coding)의 발현에 의해 생산될 수 있다. 항체 단편은, 예를 들어, 전장 항체의 단백질의 가수분해(proteolytic hydrolysis)에 의해 제조될 수 있다. 항체 단편을 수득하기 위한 효소, 특히 단백질 가수분해 효소는 본 분야의 숙련자에게 알려져 있고, 예를 들어, 파파인, 펩신 및/또는 플라스민을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 것을 포함한다. 특히, 항체 단편은, 예를 들어, US　2010/0196266 A1에서 언급된 바와 같은, 본 분야의 숙련자에게 알려진 절차를 적용함으로써 전장 항체의 펩신 또는 파파인 절단(digestion)에 의해 제조될 수 있다. 이러한 절차는, 본 분야에서 인용된 참고문헌 뿐만 아니라, 예를 들어, Goldenberg, U.S. Pat. Nos. 4,036,945 및 4,331,647에 기재되어 있다. 항체 단편을 제조하기 위한 절차는 본 분야에서 알려져 있고, 예를 들어, Nisonoff et al ., Arch Biochem. Biophys. 89: 230 (1960); Porter, Biochem. J. 73: 119 (1959), Edelman, METHODS IN ENZYMOLOGY VOL. 1, page 422 (Academic Press 1967), and Coligan et al ., CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY, VOL. 1, (John Wiley & Sons 1991), p. 2.8.1-2.8.10 and 2.10.-2.10.4에 기재되어 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "중쇄"는, 바람직하게 CD26, 특히 인간 CD26에 특이적으로 결합할 수 있는, 전장 중쇄 및 이의 단편을 포함한다. 전장 중쇄는 중쇄 가변 영역(heavy chain variable region), VH, 및 세 가지의 영역, CH1, CH2, 및 CH3을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "경쇄"는, 바람직하게 CD26, 특히 인간 CD26에 특이적으로 결합할 수 있는, 전장 경쇄 및 이의 단편을 나타낼 수 있다. 전장 경쇄는, 경쇄 가변 영역(light chain variable region), VL, 및 경쇄 불변 영역(light chain constant region), CL을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 항체의 용어 "가변 영역"은, 항체 경쇄의 가변 영역 또는 항체 중쇄의 가변 영역 또는 상기에 언급된 가변 영역의 조합을 나타낼 수 있다. 상기 경쇄 및 중쇄의 가변 영역은, 세 개의 상보성 결정 영역(CDRs)에 의해 연결된 4 개의 프레임워크 영역(FR)을 각각 포함할 수 있다. CDR 위치의 두 가지의 정의는 본 분야에서 현재 사용에 있다. 상기 첫 번째 하나는, Kabat et al .(참고문헌으로 본원에 포함된, "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 4th ed., Washington, D.C., Public Health Service, N.I.H.)의 "서열 가변성"이다. 바람직한 실시 형태에 따라, Kabat et al .의 정의는 본 출원에 사용된다. 대체적으로, 상기 CDR 영역은 또한, Chothia and Lesk (참고문헌으로 본원에 포함된, Chothia et al ., J. MoI. Biol. 1987, 196(4):901-17)의 구조적 변동성 정의를 사용하여 정의될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 항체의 "불변 영역"은, 상기 항체 경쇄의 불변 영역 또는 상기 항체 중쇄의 불변 영역을 나타내거나 또는 상기-언급된 불변 영역의 조합을 나타낸다.
항체, 특히 인간, 인간화된, 키메라 항체, 및 이의 단편을 생산하기 위해, 참고문헌에 의해 본원에 포함되는 문서, 예를 들어, US 2010/0196266 A1에 기재된 바와 같은 어떠한 방법이 사용될 수 있다.
항체 단편은, 예를 들어, US　2010/0196266 A1에 기재된 바와 같은, 하기의 방법을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 몇몇의 방법에 의해 생산될 수 있다 :
F(ab')2 단편은, 상기 항체 분자의 펩신 소화(pepsin digestion)에 의해 발생될 수 있다. Fab' 단편은, 예를 들어, 상기 F(ab')2 단편의 이황화물 다리를 환원(reducing)시킴으로써 획득될 수 있다. 대체적으로, Fab' 발현 라이브러리(Fab' expression libraries)는, 예를 들어, Huse et al . (Science 1989, 246:1274-1281)에 기재된 바와 같이 구성될 수 있다. Fab' 발현 라이브러리는, 관심있는 특이성을 갖는 모노클로날 Fab' 단편, 특히 CD26에 결합하는 단편의 확인을 가능하게 한다.
F(ab)2 단편은 항체의 파파인 소화(papain digestion)에 의해 생산될 수 있다. Fab 단편은, 이황화물 환원에 의해 수득될 수 있다. "Fab 단편"은 특히, 하나의 중쇄의 가변 영역 및 하나의 경쇄 및 상기 CH1으로 구성된 단편을 나타낸다. Fab 분자의 중쇄는, 다른 중쇄 분자에 이황화결합을 통해 결합되지 않는다.
게다가, 항체 단편은 또한, 단일 상보성-결정 영역(CDR)을 포함하거나 또는 이로 이루어진 단일 가변 영역 또는 펩티드일 수 있다.
게다가, 본 발명의 항체는 디아바디(diabody)일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "디아바디"는, 특히, 두 개의 항원-결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 기재할 수 있고, 상기 단편이 상기 동일한 폴리펩티드(VH-VL)에서 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)를 포함한다. 정반대로 명확하게 언급하지 않는다면, 상기 용어 가변 도메인 및 가변 영역은 교환하여 본원에 사용된다. 디아바디 및 이들의 생산을 위한 기술은, 예를 들어, EP 404 097, WO 93/11161, 및 in Hollinger et al ., 1993, Proc. Natl. Acad Sci. USA 90: 6444-6448에 기재되어 있다.
게다가, 본 발명의 항체는 단쇄 Fv 분자일 수 있다. 단쇄 Fv 분자(scFv로서 축약됨)은, 특히 CD26에 대한 결합 부위를 형성하기 위해 연관될 수 있는, VL 도메인 및 VH 도메인을 포함한다. 이러한 두 개의 도메인은, 예를 들어, 1 내지 25 개의 아미노산 잔기를 포함하는 펩티드에 의한 것과 같이, 펩티드 링커(peptide linker)에 의해 추가적으로 공유결합된다. 이와 대조적으로 명확하게 언급하지 않는다면, 상기 용어 VL 도메인 및 VL 영역은 교환하여 사용된다. 게다가, 이와 대조적으로 명확하게 언급하지 않는다면, 상기 용어 VH 도메인 및 VH 영역은 교환하여 사용된다. scFv 분자를 획득하기 위한 방법은, 예를 들어, US 4,704,692, US 4,946,778, R. Raag and M. Whitlow, "Single Chain Fvs." FASEB Vol. 9:73-80 (1995) and R. E. Bird and B. W. Walker, "Single Chain Antibody Variable Regions," TIBTECH, Vol. 9: 132-137 (1991)에 기재되어 있다.
게다가, 본원에 사용된 바와 같은 용어 항체는 단일 도메인 항체를 또한 포함한다. 단일 도메인 항체(DABs)를 제조하기 위한 방법은 본 분야의 숙련자에게 알려져 있고, 예를 들어, 참고문헌으로 본원에 포함되는, Cossins et al . (2006, Prot Express Purif 51:253-259)에 기재되어 있다.
하나의 실시 형태에 따라, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 단편은, 최소한의 중쇄 CDR3, 및 최소한의 경쇄 CDR3을 함유할 수 있다; 특히 본 발명에 따른 항체 또는 이의 단편은, SEQ ID NO: 1에 기재된 서열 및 SEQ ID NO: 2 및 3에 기재된 서열의 적어도 하나를 포함할 수 있다.
항체 단편은, 적어도 4 개의 아미노산, 적어도 5 개의 아미노산, 적어도 7 개의 아미노산, 적어도 9 개의 아미노산, 특히 적어도 15 개의 아미노산을 포함할 수 있다. 본 발명의 항체 단편은 어떠한 상위 크기 제한을 가질 수 있고, 예를 들어, 이로부터 획득된 전장 항체 미만의 단지 하나의 아미노산 잔기를 가질 수 있다.
본 발명의 항체는, CD26, 특히 인간 CD26에 결합할 수 있는, 이중특이성 항체(bispecific antibody)일 수 있다. 이중특이성 항체는, 예를 들어, Fab' 단편의 하이브리도마 또는 링킹(linking)의 융합을 포함하는 몇몇의 방법에 의해 생산될 수 있다. 이러한 방법은, 예를 들어, Songsivilai et al ., 1990, Clin. Exp. Immunol. 79: 315-321; Kostelny et al ., 1992, J. Immunol. 148: 1547-1553에 기재되어 있다.
실시 형태에 따라, 본 발명의 항체는 모노클로날 항체일 수 있다. 타겟 항원에 대항하는 모노클로날 항체를 제조하기 위한 방법은, 예를 들어, Coligan et al. (eds.), CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY, VOL. 1, pages 2.5.1-2.6.7 (John Wiley & Sons 1991), Kohler and Milstein, Nature 256: 495 (1975), 및 US 2010/0196266 A1으로부터 일 수도 있는 바와 같이, 본 분야에서 알려져 있다. 모노클로날 항체는, 예를 들어, US 2010/0196266 A1에 기재된 바와 같이, 숙련자에게 알려진 방법에 의해 수득가능하다. 특히, 모노클로날 항체는, 하기의 단계의, 하나 또는 그 이상, 바람직하게 모두를 포함하는 방법에 의해 획득가능하다 : 포유동물, 예를 들어 마우스를 항원을 포함하는 조성물로 주사하고, B 림프구를 획득하기 위해 이러한 주사된 포유동물로부터 비장을 제거하고, 하이브리도마를 생산하기 위해, 골수종 세포와 상기 수득된 B-림프구를 융합하고, 상기 하이브리도마를 클로닝(cloning)하고, 상기 항원에 대한 항체를 생산하는 적어도 하나의 양성 클론(positive clone)을 선별하고, 상기 항원에 대한 항체를 생산하는 적어도 하나의 양성 클론을 배양하고, 및 상기 하이브리도마 배양물(hybridoma cultures)로부터 상기 항체를 분리한다.
MAbs(모노클로날 항체)는, US 2010/0196266 A1에 기재된 바와 같이, 공지된 절차를 사용하여 하이브리도마 배양물로부터 분리되고 정제될 수 있다. 특히, 크기 배제 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 특히 단백질-A 세파로오스, 및 이온-교환 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 분리 및/또는 정제 절차가 적용될 수 있다. 항체에 대한 분리 및/또는 정제 기술은, 예를 들어, Baines et al ., "Purification of Immunoglobulin G (IgG)," in METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, VOL. 10, pages 79-104 (The Humana Press, Inc. 1992), 및 Coligan et al ., supra, pages 2.7.1-2.7.12 and pages 2.9.1-2.9.3에 기재되어 있다.
용어 "모노클로날 항체"는, 특히 실질적으로 동종의 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 기재할 수 있고, 상기 개별적인 항체는, 낮은 양으로 존재할 수 있는 가능한 자연적으로 발생하는 돌연변이를 제외하고 동일하다.
면역원에 대한 항체의 초기의 상승 후, 특히 CD26에 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 초기 상승(initial raising) 후에, 상기 항체는 배열 순서를 밝힐 수 있고, 그 다음에, 재조합 기술을 사용하여 생산된다. 비-인간(예를 들어, 쥐과 동물) 항체 및 항체 단편의 인간화 및 키메라화(chimerization)는 본 분야의 숙련자에게 널리 알려져 있다.
본 발명의 항체는 인간화된 항체, 특히 인간화된 모노클로날 항체일 수 있다. 용어 "인간화된 항체"는 특히, 재조합 DNA 기술에 의해 생산된 항체를 포함할 수 있고, 항원 결합에 대해 필요로 하지 않는 인간 면역글로불린 경쇄 또는 중쇄의 아미노산의 몇몇 또는 모두(예를 들어, 가변 도메인의 프레임워크 영역 및 불변 영역의 아미노산의 몇몇 또는 모두와 같은)가 비-인간 포유동물 항체(예를 들어, 쥐과 동물) 항체의 경쇄 및 중쇄로부터 이에 대응하는 아미노산을 위해 치환에 사용된다. 인간화된 모노클로날 항체를 생산하기 위한 방법은 본 분야에 공지되어 있고, 예를 들어, 하기의 발행물에 기재되어 있다 : Jones et al ., Nature 321: 522 (1986), Carter et al ., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 89: 4285 (1992), Riechmann et al ., Nature 332: 323 (1988), Verhoeyen et al., Science 239: 1534 (1988), Sandhu, Crit. Rev. Biotech. 12: 437 (1992), and Singer et al., J. Immun. 150: 2844 (1993). 예를 들어, 키메라 또는 비-인간 포유동물(예를 들어, 쥐과 동물) 모노클로날 항체, 특히 본 발명의 키메라 또는 비-인간 포유동물(예를 들어, 쥐과 동물) 모노클로날 항체와 같은 항체는, 예를 들어, US 2010/0196266 A1에 기재된 바와 같이, 인간 항체의 이에 대응하는 가변 영역 내로 상기 비-인간 포유동물 면역글로불린, 예를 들어, 마우스 면역글로불린의 경쇄 및 중쇄 가변 사슬로부터 비-인간 포유동물(예를 들어, 마우스) CDRs를 이동시킴으로써 인간화될 수 있다. 상기 키메라 모노클로날 항체에서 상기 비-인간 포유동물 프레임워크 영역(FR), 예를 들어, 마우스 프레임워크(FR)은 또한, 인간 FR 서열로 대체될 수 있다. 예를 들어, CD26에 대한 비-인간 포유동물(예를 들어, 쥐과 동물) 항체의 인간화된 버전(humanized version)인 본원 발명의 항체는, 인간 항체의 이의 중쇄 및 경쇄 불변 영역 둘 다 및/또는 비-인간 포유동물(예를 들어, 쥐과 동물) 항체로부터의 CDRs 및/또는, 인간화된 항체의 가변 도메인으로부터의 프레임워크 영역 상에 가질 수 있다.
인간화된 항체의 항체 친화도를 개선하기 위해, 특히 CD26에 결합하는 이의 능력을 개선하기 위해, 추가적인 변형 단계는, 예를 들어 US 2010/0196266 A1에 기재된 바와 같이, 실행될 수 있다. 특히, 인간 FR 영역에서 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기는, 상기 항원에 대한 상기 인간화된 항체의 결합 친화도를 유지하거나 개선하기 위해, 비-인간, 특히 쥐과 동물에서 이에 대응하는 위치에 존재하는 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 본 분야의 숙련자에 의해 적용될 수 있는 방법은, 예를 들어, Tempest et al ., Biotechnology 9:266 (1991), and Verhoeyen et al., Science 239: 1534 (1988)에 기재되어 있다. 예를 들어, 이들의 비-인간 포유동물 대응부(non-human mammal counterparts), 예를 들어, 쥐과 대응부와 상이하고, 하나 또는 그 이상의 CDR 아미노산 잔기에 가깝거나 직접적으로 인접한, 인간 FR(프레임워크 영역) 아미노산 잔기는, 치환을 위한 후보물질을 나타낼 수 있다.
본 발명의 항체는 인간 항체일 수 있다. 용어 "인간 항체"는, 인간에 의해 생산된 항체의 아미노산 서열과 이에 상응하는 아미노산 서열을 갖고/갖거나 인간 항체를 생산하기 위한 공지된 기술을 사용하여 제조되는, 항체를 특히 포함할 수 있다. 특히, 용어 "인간 항체"는, 적어도 하나의 인간 중쇄 폴리펩티드 또는 적어도 하나의 인간 경쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체를 포함할 수 있다.
특히, 본 발명의 항체는 완전 인간 항체(fully human antibody)일 수 있다. 본 출원의 내용에서, 상기 용어 "완전 인간 항체"는 특히, 인간 중쇄 및 인간 경쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체를 나타낼 수 있다. 예를 들어, 인간 면역글로불린 유전자 자리(human immunoglobulin loci)로 형질전환된 조합 접근(combinatorial approach) 또는 트랜스제닉 동물을 사용한, 인간 항체, 특히 완전 인간 항체를 생산하기 위한 방법은, 예를 들어, US　2010/0196266 A1로부터 나타낼 수도 있는 바와 같이, 본 분야의 숙련자에게 알려져 있다. 이러한 방법은, 예를 들어, Conrad and Scheller, 2005, Comb. Chem. High Throughput Screen. 8:117-26; Mancini et al ., 2004, New Microbiol. 27:315-28; Brekke and Loset, 2003, Curr. Opin. Pharmacol. 3:544-50)에 기재되어 있다. 완전한 인간 항체는, 예를 들어, 유전학 또는 염색체의 트랜스펙션 방법을 사용하거나 또는 파지 디스플레인 기술(phage display technology)을 사용하여 또한 수득될 수 있다. 유전자 또는 염색체의 트랜스펙션 방법 뿐만 아니라 파지 디스플레이 기술은 본 분야에 널리 알려져 있고, 예를 들어, McCafferty et al ., 1990, Nature 348:552-553에 기재되어 있다. 특히, 인간 항체는, 예를 들어, 마우스, 염소 또는 소와 같은 트랜스제닉 동물 내로 인간 면역글로불린 유전자 위치를 도입함으로써 또한 수득될 수 있고, 상기 내인성 면역글로불린 유전자는 완전하게 또는 부분적으로 불활성되었다. 이러한 절차는, 예를 들어, US 5,545,806, US 5,633,425, 및 US 5,661,016에 기재되어 있다. 대체적인 절차에 따라, 상기 인간 항체는, 타겟 항원에 직접적으로 대항하는 항체를 생산하고, 특히 CD26에 대한 항체를 생산하는 인간 B 림프구를 불멸하게 함으로써(by immortalizing human B lymphocytes) 수득될 수 있다. 이러한 절차는 본 분야에서 알려져 있고, 예를 들어, Cole et al ., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al ., 1991, J. Immunol.,147 (l):86-95에 기재되어 있다.
특히, 상기 파지 디스플레인 기술은, 본 분야에서 알려지고, 예를 들어, Dantas-Barbosa et al ., 2005, Genet. Mol. Res. 4:126-40 and US　2010/0196266 A1에 기재된 바와 같이, 인간 항체를 생산하기 위해 사용될 수 있다. 인간 항체는, 정상 인간 또는 특정한 질병 상태를 갖는 인간으로부터 생산될 수 있다(Dantas-Barbosa et al ., 2005). 이러한 기술은, 질병에 걸린 개개인으로부터 인간 항체를 구성하는 것을 가능하게 한다.
예를 들어, 골육종 환자로부터 인간 Fab 항체 단편의 파지 디스플레인 라이브러리(phage display library)는, Dantas-Barbosa et al . (2005, supra)에 기재된 바와 같이, 및 예를 들어, US　2010/0196266 A1에서 논의된 바와 같이 구성될 수 있다. 특히, 전체 RNA는 순환하는 혈액 림프구(Id.)로부터 획득될 수 있다. 재조합 Fab는, μ, γ 및 κ 사슬 항체 레퍼토리(chain antibody repertoires)로부터 클론될 수 있고, 파지 디스플레이 라이브러리(Id.) 내로 삽입될 수 있다. RNAs는 cDNAs로 변환될 수 있고, 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 서열에 대한 특정한 프라이머를 사용한 Fab cDNA 라이브러리를 제공하는데 사용될 수 있다(Marks et al ., 1991, J. Mol. Biol. 222:581-97). 그 다음 단계에서, 라이브러리 구성은 본 분야의 숙련자에게 알려진 바와 같이 및 예를 들어, Andris-Widhopf et al . (2000), Phage Display Laboratory Manual, 1st edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, pp. 9.1 to 9.22)에 의해 기재된 바와 같이 실행될 수 있다. 상기 최종의 Fab 단편은 제한 엔도뉴클레아제(restriction endonucleases)로 소화될 수 있고, 상기 파지 디스플레인 라이브러리를 생산하기 위해, 박테리오파지 게놈 내로 삽입된다. 최종적으로, 상기 수득된 라이브러리는, 본 분야에서 알려진 바와 같이 및 예를 들어, Pasqualini and Ruoslahti, 1996, Nature 380:364-366; Pasqualini, 1999, The Quart. J. Nucl. Med. 43:159-162)에 기재된 바와 같이, 표준 파지 디스플레이 방법을 사용하여 선별될 수 있다. 파지 디스플레이는, 예를 들어, Johnson and Chiswell, 1993, Current Opinion in Structural Biology 3:5564-571에서 나타낸 바와 같이, 몇몇의 포맷(formats)으로 실행될 수 있다.
게다가, 인간 항체는 생체외 활성화된 B 세포에 의해 발생될 수 있다. 이러한 절차는, 이들 둘 다 본원에 참고문헌으로 포함되는, 예를 들어, US 5,567,610 및 US 5,229,275에 기재되어 있다.
본 발명의 항체는 키메라 항체일 수 있다. 특히, 키메라 항체는 재조합 단백질일 수 있고, 인간 항체의 상기 가변 영역은, 비-인간 포유동물 항체, 예를 들어 마우스 항체 또는 토끼 항체의 상보성-결정 영역(CDRs), 예를 들어, 마우스 항체 또는 토끼 항체와 같은 비-인간 포유동물 항체의 가변 영역으로 대체되고 있다. 비-인간 포유동물 가변 도메인, 특히 쥐과 면역글로불린 가변 도메인을 클로닝하기 위한 절차는 본 분야에 널리 알려져 있고, 예를 들어, Orlandi et al ., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86: 3833 (1989), 및 US　2010/0196266 A1에 의해 기재된 바와 같다. 키메라 항체를 수득하기 위한 방법은, 예를 들어, Leung et al ., Hybridoma 13:469 (1994)에 나타낼 수도 있는 바와 같이, 본 분야에 공지되어 있고, LL2 키메라의 생산이 기재되어 있다.
본 발명의 항체는, 원하는 기능에 영향을 미치기 위해, 하나 또는 그 이상의 추가적인 모이어티(moieties)를 더 포함할 수 있다. 특히, 상기 항체는, 하나 또는 그 이상의 독소 모이어티(toxin moieties)(예를 들어, 파상풍톡소이드와 같은) 또는 방사선핵종(들), 및/또는 분리 및/또는 검출 및/또는 타겟팅(targeting)을 용이하게 하기 위한, 하나 또는 그 이상의 모이어티[예를 들어, 비오틴, 형광성 모이어티, 방사성 모이어티, 히스티딘 태그(histidine tag) 또는 그 밖의 펩티드 태그]를 포함할 수 있고, 상기 태그는 상기 항체의 결합 특이성을 바람직하게 대처하지 않거나 필수적으로 대처하지 않는다.
용어 "에 대한 특이성을 가진다(has specificity for)", "에 특이적인 결합을 나타낸다(exhibits a specific binding to)", "에 특이적으로 결합할 수 있다(capable of specifically binding to)" 및 "에 특이적으로 결합한다(specifically binds to)"는 본 출원에 교환하여 사용되고, 상기 항체가 보다 나은 지속기간과 함께, 보다 큰 친화력과 함께, 또는 관련되지 않는 단백질을 포함하는, 대체적인 기질보다는, 에피토프 또는 단백질에 대한 상기의 몇몇의 조합과 함께, 보다 자주, 보다 빠르게, 반응하거나 또는 연관된다. 하나의 실시 형태에 따라, "결합하는(binding)" 및 "특이적으로 결합하는(specifically binding)" 뿐만 아니라, 결합하는 항체(antibody binding to)및 "에 특이적으로 결합하는 항체(antibody specifically binding to)는 본 발명의 문맥에서 교환하여 사용될 수도 있다.
특정 실시 형태에서, 본원에 나타낸 항-CD26는, 약 1e-3 내지 1e-5s-1, 바람직하게 5 e-3 내지 5e-4s-1, 보다 바람직하게 8 e-3 내지 3 e-4s-1, 특히 약 1.32 e-4s-1의 동력학적 해리 속도(kinetic dissociation rate)(Koff)를 갖는 인간 CD26에 결합한다.
특정 실시 형태에서, 본원에 나타낸 항-CD26는, 약 5 e-8 내지 5 e-10, 바람직하게 2 e-9 내지 1 e-10 M, 보다 바람직하게 3 e-9 내지 7 e-9 M, 특히 약 5.02 e-9 M의 동력학적 해리 상수(kinetic dissociation constant)(KD)를 갖는 인간 CD26에 결합한다.
특정 실시 형태에서, 본원에 나타낸 항-CD26는, 약 5 e3 내지 1 e5 1/Ms, 바람직하게 1 e4 내지 5 e4 1/Ms, 보다 바람직하게 1.5 e4 내지 3.5 e4 1/Ms, 특히 약 2.63 e4 1/Ms의 동력학적 연합 상수(kinetic association constant)(Kon)를 갖는 인간 CD26에 결합한다.
특정 실시 형태에서, 본원에 기재된 항-CD26 항체는, 약 1 nM 이하, 약 3 nM 이하, 약 6 nM 이하, 약 12 nM 이하, 약 30 nM 이하, 약 60 nM 이하, 약 200 nM 이하의 연합 상수를 갖는 인간 CD26에 결합한다.
몇몇 실시 형태에서, 본원에 기재된 항-CD26 항체는, 약 0,1 nM 내지 약 10 nM, 약 0,1 nM 내지 약 6 nM, 약 0,1 nM 내지 약 3 nM, 또는 약 0,1 nM 내지 약 1 nM의 연합 상수를 갖는 인간 CD26에 결합한다.
본 발명의 항체는, Biacore® 분석, FACS 분석, 면역형광법, 면역세포화학, 웨스턴 블롯(Western blots), 방사면역검정, ELISA, "샌드위치" 면역정량, 면역침강 분석, 침강 반응, 면역확산 검정(immunodiffusion assays), 응집 검정, 보체-고정 검정(complement-fixation assays), 면역방사능동정(immunoradiometric assays), 형광 면역검정, 및 단백질 A 면역검정과 같은 기술을 사용한 경쟁적 및 비-경쟁적 검정 시스템을 포함하지만, 이로 제한되지 않는, 본 분야의 숙련자에게 알려진 어떠한 방법에 의해 특정한 결합에 대해 검정될 수 있다. 이러한 검정은, 이의 전체가 본원의 참고문헌으로 포함되는, 예를 들어, Ausubel et al., eds., 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & Sons, Inc., New York 및 US 7,982,013 B2에 기재되어 있다. 바람직하게, Biacore®분석이 실행될 수도 있다.
본래의 항체(Native antibodies)는, 하나의 중쇄(H) 및 하나의 경쇄(L) 사슬을 각각 포함하는 둘 또는 그 이상의 헤테로다이머 서브유닛(heterodimeric subunits)으로 이루어질 수 있다. 개별적인 본래의 항체는, 헤테로다이머 서브유닛을 형성하기 위해, 이황화 결합에 의해 유지되는, L 사슬의 하나의 타입 및 H 사슬의 하나의 타입을 가질 수 있다.
상기 용어 "펩티드"는 특히 둘 또는 그 이상의 아미노산을 포함하는 화합물을 나타낼 수 있다. 상기 아미노산은, 펩티드 결합에 의해 함께 연결될 수 있다. 펩티드는, 자연적으로 발생하는 아미노산 및/또는 비-자연적으로 발생하는 아미노산을 포함할 수 있다; 특히 펩티드는 L-아미노산 및/또는 D-아미노산을 포함할 수 있다. 짧은 펩티드, 예를 들어, 10 개 미만의 아미노산 유닛을 갖는 펩티드는 때때로 "올리고펩티드"로서 나타낸다. 예를 들어, 100 개 또는 그 이상의 수많은 아미노산 잔기를 갖는 그 밖의 펩티드는 "폴리펩티드"로서 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "폴리펩티드"는, 셋 또는 그 이상의 아미노산을 포함하는 어떠한 펩티드를 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "폴리펩티드"는, 셋 또는 그 이상의 아미노산을 포함하는 어떠한 펩티드를 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "폴리펩티드"에 대한 어떠한 인용은 올리고펩티드를 포함하고, "펩티드"에 대한 어떠한 인용은 폴리펩티드, 올리고폴리펩티드, 및 단백질을 포함한다.
본 발명의 항체는, 어떠한 클래스의 항체일 수 있다. 특히, 본 발명의 항체는, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA, IgD and IgE으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체 아이소타입(antibody isotype)을 가질 수 있다. 특히, 본 발명의 항체는, IgG2 클래스, 특히 IgG 2B 클래스의 것일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "아이소타입"은, 특히 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 코딩되는, 항체 클래스(예를 들어, IgG와 같은)를 나타낼 수 있다. 인간 면역글로불린 불변 영역의 서열은, 본 분야의 숙련자에게 명백할 것이고, 및/또는 공개된 데이터베이스(예를 들어, National Center for Biotechnology Information (NCBI), U.S. National Library of Medicine)에서 입수가능하다.
게다가, 본 발명의 항체는 CD26에 특이적으로 결합하고, 경쇄 가변 영역을 가질 수 있고, 경쇄 가변 영역은, PD 12002로서 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 상기 경쇄 가변 영역의 VL CDR1, VL CDR2, 또는 VL CDR3의 변이체를 포함한다. 게다가, 본 발명의 항체는 CD26에 특이적으로 결합하고, 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있고, 중쇄 가변 영역은, PD 12002로서 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 상기 중쇄 가변 영역의 VH CDR1, VH CDR2, 또는 VH CDR3의 변이체를 포함한다. 하나의 실시 형태에서, 변이체 VH 또는 VL CDR은, PD 12002로서 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 이에 대응하는 VH 또는 VL CDR과 적어도 90 %, 바람직하게 적어도 98 %, 보다 바람직하게 적어도 99 % 서열 동일성을 가질 수 있다. 대체적으로, 변이체 VH 또는 VL CDR은 PD 12002로서 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 VH 또는 VL CDR일 수 있고, 여기서, 많아야 5, 4, 3, 2, 보다 바람직하게 1 개의 아미노산 잔기가 각각 결실되거나, 삽입되거나, 또는 상기 대체된 아미노산 잔기와 상이한 아미노산 잔기로 대체된다. 하나의 실시 형태에서, 상기 아미노산 치환은 보존적 변화이다. 하나의 실시 형태에서, PD 12002로서 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 VH 및 VL CDRs은 도 2b에 기재되어 있다.
게다가, 본 발명의 항체는 CD26에 특이적으로 결합하고, 경쇄 가변 영역을 가질 수 있고, 경쇄 가변 영역은, SEQ ID NOs: 4, 5, 6 내지 21, SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열의 변이체 및 SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열의 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다(light chain variable region comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 4, 5, 6 to 21, a variant of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, and a variant of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5). 게다가, 본 발명의 항체는 CD26에 특이적으로 결합하고, 경쇄 가변 영역을 가질 수 있고, 경쇄 가변 영역은, SEQ ID NOs: 6 내지 21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열의 변이체로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. SEQ ID NO: 4의 변이체는, SEQ ID NO: 4에 대해 적어도 90 %, 바람직하게 적어도 98 %, 보다 바람직하게 적어도 99 % 서열 동일성을 가질 수 있다. SEQ ID NO: 5의 상기 변이체는 SEQ ID NO: 5와 적어도 90 %, 바람직하게 적어도 98 %, 보다 바람직하게 적어도 99 % 서열 동일성을 가질 수 있다. SEQ ID NOs: 6 내지 21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열의 변이체는, SEQ ID NOs: 6 내지 21로 이루어진 군으로부터 선택된 상기 아미노산 서열과 적어도 90 %, 바람직하게 적어도 98 %, 보다 바람직하게 적어도 99 % 서열 동일성을 가질 수 있다. 대체적으로, SEQ ID NOs: 4, 5, 6 내지 21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열의 변이체는, SEQ ID NOs: 4, 5, 6 내지 21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열일 수 있고, 여기서, 많아야 8 개, 바람직하게 많아야 5 개, 보다 바람직하게 1 개의 아미노산 잔기 각각은 결실되거나, 삽입되거나 또는 상기 치환된 아미노산 잔기와 상이한 아미노산 잔기로 치환된다(a variant of an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 4, 5, 6 to 21 can be an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 4, 5, 6 to 21, wherein not more than 8, preferably not more than 5, more preferably 1 amino acid residue(s), respectively, have been deleted, inserted or replaced by an amino acid residue different from the replaced amino acid residue). 하나의 실시 형태에서, 상기 아미노산 치환은 보존적 변화이다. 특히, 본 발명의 항-CD26 항체는 항체일 수 있고, 상기 경쇄 가변 영역은, 예를 들어, 도 3에 나타낸 바와 같이, SEQ ID NOs: 4 내지 21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 이의 변이체로 이루어져 있거나 포함할 수 있다. 게다가, 본 발명의 항체는 CD26에 특이적으로 결합하고, 경쇄 가변 영역을 가질 수 있고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 4 또는 5의 아미노산 잔기 8 내지 104를 포함한다.
"보존적 아미노산 변화(conservative amino acid change)"는 변하고, 하나의 아미노산 잔기는 유사한 곁사슬을 가지는 다른 아미노산 잔기로 치환된다. 상기 용어는 "보존적 아미노산 치환" 또는 "보존적 아미노산 변화체"로 교환가능하게 사용된다. 유사한 곁사슬을 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는, 예를 들어, US 7,982,013 B2, 특히 이의 컬럼 22에 논의된 바와 같이, 염기성 곁사슬, 산성 곁사슬, 비전하성 극성 곁사슬, 비극성 곁사슬, 베타-가지형 곁사슬 및 방향족 곁사슬을 포함하는, 본 분야에 알려져 있다. 예를 들어, 티로신에 대해 페닐알라닌으로의 치환은 보존적 치환이다(substitution of a phenylalanine for a tyrosine is a conservative substitution). 바람직하게, 보존적 치환 후에 생성된 상기 항체는, CD26, 특히 인간 CD26에 특이적으로 결합한다. 항원 결합을 제거하지 않는 뉴클레오티드 및 아미노산 보존적 치환을 확인하기 위한 방법은 본 분야에 알려져 있다(예를 들어, Brummell et al., Biochem. 32: 1180-1 187 (1993); Kobayashi et al., Protein Eng. 12(10):879-884 (1999); and Burks et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417 (1997)를 참고하라).
하나의 실시 형태에 따라, 하나 또는 그 이상의 CDR 서열을 포함하는 아미노산 서열의 변이체에서, 모두 CDR 서열 또는 적어도 모두 CDR3 서열(들)은 변하지않고 남아있을 수 있다. 특히, SEQ ID NOs: 1, 2 및 3에 나타낸 하나 또는 그 이상의 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열의 변이체에서, SEQ ID NOs: 1, 2 및 3에 나타낸 하나 또는 그 이상의 아미노산 서열은 변하지 않는 상태로 남아있을 수 있다. 하나의 실시 형태에 따라, 하나 또는 그 이상의 CDR 서열에 대해 코딩하는 섹션(sections)을 포함하는 뉴클레오티드 서열의 변이체에서, CDR 서열을 코딩하는 모든 섹션 또는 CDR3 서열(들)을 코딩하는 적어도 모두의 뉴클레이티드 서열 섹션은 변하지 않는 상태로 남아있을 수 있다. 특히, SEQ ID NOs: 1, 2 및 3에 기재된 하나 또는 그 이상의 서열을 위해 코딩하는 하나 또는 그 이상의 서열을 포함하는 뉴클레오티드 서열의 변이체에서, SEQ ID NOs: 1, 2 및 3의 하나 또는 그 이상을 코딩하는 적어도 뉴클레오티드 서열 섹션은 변하지 않고 남아있을 수 있다. 하나의 실시 형태에 따라, SEQ ID NOs: 4 내지 21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 항체에서, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 4 또는 5의 아미노산 잔기 8 내지 104를 포함할 수 있고, 및/또는 SEQ ID NOs: 22 내지 47로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 항체에서, 상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 잔기 7 내지 112를 포함할 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드 서열에 대한 "퍼센트 (%) 아미노산 서열 동일성"은, 서열 동일성의 일부로서 어떠한 보존적 치환을 고려하지 않고, 및 최대의 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해, 필요하다면, 상기 서열을 정렬하고, 갭(gap)을 도입한 후에, 상기 아미노산 잔기, 특히, 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드 서열과 동일한, 비교될 관심의 후보물질 서열에서 아미노산 잔기의 퍼센트로서 정의된다(예를 들어, 특정한 폴리펩티드 서열은 서열 목록에서 SEQ. ID. NO.에 의해 특징지어진다). 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하기 위해 실행된 서열 정렬은, 가능한 보존적 치환과 관련된 표 1 및 본원에 사용된 정의와 함께, 예를 들어, 참고문헌에 의해 본원과 함께 포함되는 EP 1 241 179 B1, 특히 page 9, line 35 내지 page 10, line 40에 기재된 바와 같이, 본 분야에서 알려진 절차에 따라 실행될 수 있다. 예를 들어, 본 분야의 숙련자는 공공연하게 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용할 수 있다. 서열 동일성을 결정하기 위한 컴퓨터 프로그램 방법은, BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어로 한정되지 않는다. 하나의 바람직한 실시 형태에 따라, 사용된 상기 소프트웨어 정렬 프로그램은 BLAST일 수 있다. 본 분야의 숙련자는, 비교될 상기 서열의 전장 상에 최대한의 정렬을 달성하기 위해 필요한 어떠한 알고리즘을 포함하는, 정렬을 계산하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 바람직한 실시 형태에 따라, 상기 % 동일성 수치는, 예를 들어, EP 1 241 179 B1에 기재된 바와 같이, WU-BLAST-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 발생될 수 있다(참고문헌으로 본원과 함께 포함되는, Altschul et al ., 1996, Methods in Enzymology 266:460-480). 바람직한 실시 형태에 따라, 상기 WU-BLAST-2 컴퓨터 프로그램을 실행하는 경우에 하기의 파라미터가 사용되었다: 상기 WU-BLAST-2 검색 파라미터의 대부분은, 기본값(default value)으로 설정되어 있다. 상기 조절가능한 파라미터는 하기의 수치와 함께 설정되었다: 오버랩 스팬(overlap span) = 1, 오버랩 분획(overlap fraction) = 0.125, 워드 스레숄드(word threshold)(T) = 11, 및 스코어링 매트릭스(scoring matrix) = BLOSUM62. BLAST-2에 의해 사용된 동력학적 수치(dynamic value)인 상기 HSP S 및 HSP S2 파라미터는, 상기 서열이 조사되는 것에 대한 상기 데이터베이스의 비교 및 관심 서열의 상기 구성요소에 따라 이들 자체로 상기 프로그램에 의해 설정된다. 그러나, 상기 수치는 민감도를 증가시키기 위해 조절될 수 있다. % 서열 동일성 수치는, (b) 비교될 본원에 기재된 바와 같은 상기 폴리펩티드 서열의 아미노산 잔기의 전체 수(예를 들어, 서열목록에서 SEQ. ID. NO.에 의해 특징지어진 특정한 폴리펩티드 서열)를, (a) 비교될 본원에 기재된 바와 같은 특정한 아미노산 서열과 비교될 관심의 후보물질 아미노산 서열과 비교될 본원에 기재된 바와 같은 특정한 아미노산 서열(예를 들어, 서열 목록에서, SEQ. ID. NO.에 의해 특징지어진 특정한 폴리펩티드 서열) 사이의 동일한 아미노산 잔기의 동일한 아미노산 잔기의 일치하는 수, 예를 들어, WU-BLAST-2에 의해 결정된 동일한 아미노산 잔기의 일치하는 수로 나눔으로써 결정될 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드 서열에 대한 "퍼센트 (%) 핵산 서열 동일성"은, 최대의 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해, 필요하다면, 상기 서열을 정렬하고, 갭(gap)을 도입한 후에, 상기 뉴클레오티드, 특히, 본원에 기재된 바와 같은 특정한 핵산 서열과 동일한, 비교될 관심의 후보물질 서열에서 뉴클레오티드의 퍼센트로서 정의된다(예를 들어, 특정한 폴리펩티드 서열은 서열 목록에서 SEQ. ID. NO.에 의해 특징지어진다). 퍼센트 핵산 서열 동일성을 결정하는 목적을 위한 배열은, 예를 들어, EP 1 241 179 B1에 기재된 바와 같이, 본 분야에 알려진 절차에 따라 실행될 수 있다. 예를 들어, 본 분야의 숙련자는, BLAST, BLAST-2, ALIGN or Megalign (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공중의 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하는 것과 같은 공중의 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용할 수 있다. 본 분야의 숙련자는, 비교하기 위한 서열의 전장 상에 최대의 정렬을 달성하기 위해 필요한 어떠한 알고리즘을 포함하는, 정렬을 측정하기 위해 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 바람직한 실시 형태에 따라, % 동일성 수치는, 예를 들어 EP 1 241 179 B1에 기재된 바와 같이, WU-BLAST-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 발생될 수 있다. 바람직한 실시 형태에 따라, 하기의 컴퓨터 프로그램 및 파라미터가 사용되었다: 본원에 사용된 상기 동일성 수치는, 각각, 1 및 0.125로 설정된 오버랩 분획 및 오버랩 스팬과 함께, 디폴트 파라미터로 설정된 WU-BLAST-2의 상기 BLASTN 모듈에 의해 발생된다. % 핵산 서열 동일성 수치는, (b) 비교될 본원에 기재된 바와 같은 상기 특정한 핵산 서열의 폴리뉴클레오티드 잔기의 전체 수(예를 들어, 서열목록에서 SEQ. ID. NO.에 의해 특징지어진 특정한 핵산 서열)를, (a) 비교될 본원에 기재된 바와 같은 특정한 핵산 서열(예를 들어, 서열 목록에서, SEQ. ID. NO.에 의해 특징지어진 특정한 핵산 서열) 및 비교될 관심의 비교 핵산 분자 사이의 동일한 뉴클레오티드의 일치하는 수, 예를 들어, WU-BLAST-2에 의해 결정된 동일한 뉴클레오티드의 일치하는 수로 나눔으로써 결정될 수 있다.
특히, 서열 동일성은, SEQ ID NO: 50 내지 128 중 하나에 기재된 바와 같은, 각각의 뉴클레오티드 서열의 전장 상에 또는 SEQ ID NO: 1 내지 49 중 하나에 기재된 바와 같은 각각의 아미노산 서열의 전장 상에서 결정될 수 있다.
EP 1 241 179 B1 및 상기에 기재된 바와 같이 실행된 서열 비교의 내용에서, 상기 용어 "포지티브(positives)"는, 동일하지 않지만 동일한 특성을 가지는 비교된 서열에서의 잔기를 포함한다(예를 들어, 보존적 치환의 결과로서). 포지티브의 % 수치는, 상기 배열된 영역에서 잔기의 전체 수로 나눠진 상기 BLOSUM 62 매트릭스에서 포지티브 수치로 점수 매겨진 잔기의 분획에 의해 결정된다.
게다가, 본 발명의 항체는 CD26을 특이적으로 결합하고, 중쇄 가변 영역을 가질 수 있고, 상기 중쇄 가변 영역은, SEQ ID NOs: 22 내지 47 및 이의 변이체(들)로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다(heavy chain variable region comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 22 to 47 and variant(s) thereof). SEQ ID NOs: 22 내지 47로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열의 변이체는, SEQ ID NOs: 22 내지 47로 이루어진 군으로부터 선택된 상기 아미노산 서열과 적어도 90 %, 바람직하게 적어도 98 %, 보다 바람직하게 적어도 99 % 서열 동일성을 가질 수 있다. 대체적으로, SEQ ID NOs: 22 내지 47로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열의 변이체는 아미노산 서열일 수 있고, 여기서, 많아야 8 개, 바람직하게 많아야 5 개, 보다 바람직하게 1 개의 아미노산 잔기 각각은, 결실되고, 삽입되거나 또는 상기 치환된 아미노산 잔기와 상이한 아미노산 잔기로 치환된다. 하나의 실시 형태에서, 상기 아미노산 치환은 보존적 변화이다. 특히, 본 발명의 항-CD26 항체는 항체일 수 있고, 상기 중쇄 가변 영역은, SEQ ID NOs: 22 to 47로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 이의 변이체로 이루어지거나 또는 이를 포함할 수 있다. 게다가, 본 발명의 항체는 CD26에 특이적으로 결합하고, 중쇄 가변 영역을 가질 수 있고, 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 잔기 7 내지 112를 포함한다. 하나의 실시 형태에서, 본 발명의 항체는, 인간 경쇄 및 중쇄 불변 영역을 포함하는 키메라 항체일 수 있다.
게다가, 본 발명의 항체는, SEQ ID NO: 48 및 이의 변이체(들)로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있다. SEQ ID NO: 48에 기재된 바와 같은 상기 아미노산 서열의 변이체는, SEQ ID NO: 48과 적어도 90 %, 바람직하게 적어도 98 %, 보다 바람직하게 적어도 99 % 서열 동일성을 가질 수 있다. 대체적으로, SEQ ID NO: 48의 변이체는 SEQ ID NO: 48의 아미노산 서열일 수 있고, 여기서, 많아야 8 개, 바람직하게 많아야 5 개, 보다 바람직하게 1 개의 아미노산 잔기 각각은, 결실되거나, 삽입되거나, 또는 상기 치환된 아미노산 잔기와 상이한 아미노산 잔기로 치환된다. 하나의 실시 형태에서, 상기 아미노산 치환은 보존적 변화이다. 특히, 본 발명의 항체는 항체일 수 있고, 여기서 상기 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 48에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체로 이루어지거나 이를 포함할 수 있다(wherein the light chain constant region can comprise or consist of an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 48 or a variant thereof).
대체적인 실시 형태에서, 본 발명의 항체는, 인간 경쇄 불변 영역을 포함하는 키메라 항체일 수 있다.
게다가, 본 발명의 항체는, SEQ ID NO: 49에 기재된 아미노산 서열, 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다. SEQ ID NO: 49에 기재된 바와 같은 상기 아미노산 서열의 변이체는, SEQ ID NO: 49과 적어도 90 %, 바람직하게 적어도 98 %, 보다 바람직하게 적어도 99 % 서열 동일성을 가질 수도 있다. 대체적으로, SEQ ID NO: 49의 변이체는 아미노산 서열일 수 있고, 여기서, 많아야 8 개, 바람직하게 많아야 5 개, 보다 바람직하게 1 개의 아미노산 잔기 각각은, 결실되거나, 삽입되거나 또는 상기 치환된 아미노산 잔기와 상이한 아미노산 잔기로 치환된다. 하나의 실시 형태에서, 상기 아미노산 치환은 보존적 변화이다. 특히, 본 발명의 항체는 항체일 수 있고, 상기 CH1-CH2-CH3 사슬은, SEQ ID NO: 49에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체로 이루어지거나 이를 포함할 수 있다.
대체적인 실시 형태에서, 본 발명의 항체는, 인간 중쇄 불변 영역을 포함하는 키메라 항체일 수 있다.
특히, 본 발명의 항체는 IgG 2B 클래스일 수 있고, 상기에 정의된 바와 같은, SEQ ID NO: 49에 기재된 아미노산 서열, 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다(an antibody of the present invention can be of IgG 2B class, and can comprise an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 49, or a variant thereof, as defined supra).
병합된 상기 서열 목록으로부터 나타낼 수도 있는 바와 같이, 서열의 그룹은, 중쇄 가변 영역(VH)에 대해 확인되고, 서열의 2 개의 상이한 그룹은 경쇄 가변 영역(VL)에 대해 확인되고 있다. 이들의 유사성을 나타낸, 각각의 그룹의 서열의 정렬은 도 3에 기재되어 있다. 본 발명의 항체에서 높은 빈도로 존재하는 VL 서열(SEQ. ID. NO: 4)은 확인되고 있고, 상기 이에 대응하는 CL 서열(SEQ. ID. NO: 48)은 인지되고 있다. 높은 빈도로 존재하는 VH 서열은 확인되었고(SEQ. ID. NO: 26), 이에 대응하는 CH1-CH2-CH3 서열(SEQ. ID. NO: 49)은 인지되고 있다.
본 발명의 항체는 CD26에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있고, 이는 SEQ ID NO: 4에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체 및/또는 SEQ ID NO: 5에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, SEQ ID NO: 48에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 본 발명의 항체는, CD26에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있고, 이는 SEQ ID NO: 26에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, SEQ ID NO: 49에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 CH1-CH2-CH3 사슬을 포함한다. 게다가, 본 발명의 항체는 CD26에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있고, 이는 SEQ ID NO: 4에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, SEQ ID NO: 48에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 불변 영역을 임의적으로(optionally) 추가로 포함하고, SEQ ID NO: 49에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 CH1-CH2-CH3 사슬을 임의적으로(optionally) 추가로 포함하고, SEQ ID NO: 26에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 중쇄 가변 영역을 임의적으로(optionally) 추가로 포함한다. 특히, 본 발명의 항체는, SEQ ID NO: 4에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 48에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 불변 영역, SEQ ID NO: 49에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 CH1-CH2-CH3 사슬 및 SEQ ID NO: 26에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 대체적으로, 본 발명의 항체는, 인간 경쇄 및/또는 중쇄 불변 영역을 포함하는 키메라 항체일 수 있다.
특히, 본 발명의 항체는 CD26에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있고, 이는 SEQ ID NO: 4의 아미노산 잔기 8 내지 104를 포함하는 경쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 48에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 49에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 CH1-CH2-CH3 사슬 및 SEQ ID NO: 26의 아미노산 잔기 7 내지 112를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 대체적으로, 본 발명의 항체는 인간 경쇄 및/또는 중쇄 불변 영역을 포함하는 키메라 항체일 수 있다.
특히, 본 발명의 항체는 CD26에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있고, 이는 SEQ ID NO: 5에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역, SEQ ID NO: 49에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 CH1-CH2-CH3 사슬 및 SEQ ID NO: 22의 아미노산 잔기 7 내지 112를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 대체적으로, 본 발명의 항체는, 인간 경쇄 및/또는 중쇄 불변 영역을 포함하는 키메라 항체일 수 있다.
본 발명의 항체는 특히 CD26에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있고, 이는, SEQ ID NOs: 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, SEQ ID NO: 48에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함하고, SEQ ID NO: 49에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 CH1-CH2-CH3 사슬을 포함한다; 임의적으로(optionally), 이러한 항체는 추가적으로, SEQ ID NO: 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 대체적으로, 본 발명의 항체는 인간 경쇄 및/또는 중쇄 불변 영역을 포함하는 키메라 항체일 수 있다.
본 발명의 항체는 특히 CD26에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있고, SEQ ID NO: 4에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, SEQ ID NO: 48에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함하고, SEQ ID NO: 49에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 CH1-CH2-CH3 사슬을 포함한다; 임의적으로(optionally), 게다가 이러한 항체는, SEQ ID NO: 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 대체적으로, 본 발명의 항체는 인간 경쇄 및/또는 중쇄 불변 영역을 포함하는 키메라 항체일 수 있다.
본 발명의 항체는 특히 CD26에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있고, SEQ ID NO: 5에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체(들)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, SEQ ID NO: 49에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 CH1-CH2-CH3 사슬을 포함한다; 게다가, 이러한 항체는 SEQ ID NO: 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 이의 변이체(들)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 임의적으로(optionally) 포함할 수 있다. 대체적으로, 본 발명의 항체는, 인간 경쇄 및/또는 중쇄 불변 영역을 포함하는 키메라 항체일 수 있다.
본 발명의 항체는 특히 CD26에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있고, SEQ ID NO: 26에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체(들)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, SEQ ID NO: 48에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함하고, SEQ ID NO: 49에 기재된 아미노산 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 CH1-CH2-CH3 사슬을 포함한다; 게다가, 이러한 항체는 임의적으로(optionally), SEQ ID NOs: 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 이의 변이체(들)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 대체적으로, 본 발명의 항체는, 인간 경쇄 및/또는 중쇄 불변 영역을 포함하는 키메라 항체일 수 있다.
서열 SEQ ID NO: 1 내지 128의 군으로부터 선택된 서열 중의 어떠한 하나의 변이체는, 상기 군의 서열(said group of sequences)로부터 선택된 상기 서열과 적어도 90 %, 바람직하게 적어도 98 %, 보다 바람직하게 적어도 99 % 서열 동일성을 가질 수 있다.
게다가, 본 발명의 항체는 CD26에 특이적으로 결합하고, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있고, 상기 중쇄 가변 영역의 상기 아미노산 서열은, PD　12002로서 Genoa (이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 중쇄 가변 영역의 것들이고, 상기 경쇄 가변 영역의 상기 아미노산 서열은, PD　12002로서 Genoa (이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 경쇄 가변 영역의 것들이다. 특히, 상기 중쇄의 아미노산 서열은, PD 12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 중쇄의 것들일 수 있고, 및/또는 상기 경쇄의 아미노산 서열은, PD 12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 경쇄의 것들일 수 있다. 특히, CD26에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항체는 PD 12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체로서 동일한 중쇄 서열 및 동일한 경쇄 서열을 포함할 수 있다. 대체적으로, 본 발명의 항체는 인간 경쇄 및/또는 중쇄 불변 영역을 포함하는 키메라 항체일 수 있다.
본 발명의 항-CD26 항체(예를 들어, CD26에 특이적으로 결합하고, SEQ ID NO:1을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 및/또는 SEQ ID NO:2 및/또는 SEQ ID NO:3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체)는 항체일 수 있고, 게다가, 상기 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은, PD　12002로서 Genoa (이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 중쇄 가변 영역의 것들일 수 있고, 상기 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은, PD　12002로서 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 경쇄 가변 영역의 것들일 수 있다. 임의적으로(optionally), 상기 중쇄 가변 영역의 상기 CDR3의 상기 아미노산 서열은, PD　12002로서 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 중쇄 가변 영역의 것들일 수 있다. 임의적으로(optionally), 상기 경쇄 가변 영역의 CDR3의 상기 아미노산 서열은, PD　12002로서 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 경쇄 가변 영역의 것들일 수 있다. 대체적으로, 본 발명의 항체는 인간 경쇄 및/또는 중쇄 불변 영역을 포함하는 키메라 항체일 수 있다.
상기 용어 "하이브리도마 세포주"는 또한, 상기 자손이 형태학적 또는 유전자 구성(genetic make-up)이 동일한지 아닌지 여부와 관계없이, 상기 하이브리도마 세포주의 자손(progeny)을 포함한다. 예를 들어, 돌연변이 및/또는 환경적인 영향으로 인하여, 특정한 변형이 발생할 수도 있기 때문에, 이러한 자손은 상기 모 세포주(parent cell line)와 동일하지 않을 수도 있다. 바람직하게, 이러한 하이브리도마 세포주의 세포 자손은, CD26, 특히 인간 CD26에 결합할 수 있는, 항체 또는 항체 단편을 생산할 것이고, 특히 본 발명의 항체를 생산할 것이다. 게다가, 상기 용어 "하이브리도마 세포주"는 항체 혼합물을 생산하는, 하이브리도마 세포주의 혼합물을 또한 포함할 수 있다.
또 다른 측면에 따라, 본 발명은 항체 혼합물을 제공한다. 본 발명은 또한,상기 항체 혼합물을 포함하는, 조성물, 특히 분리된 조성물을 제공한다. 이러한 항체 혼합물은 적어도 두 개의 상이한 항체를 포함할 수 있고, 적어도 두 개의 상이한 항체는 바람직하게, CD26, 특히 인간 CD26에 특이적으로 결합한다. 임의적으로(optionally), CD26에 결합하지 않는 적어도 하나의 항체는 항체 혼합물에 존재할 수 있다. 하나의 실시 형태에 따라, 상기 조성물의 적어도 2 개 또는 모두의 항체는 CD26, 특히 인간 CD26에 특이적으로 결합할 수 있다. 특히, 상기 항체 혼합물에 존재하는 항체의 하나 또는 그 이상 또는 모두는 본 발명의 항체일 수 있고, 임의적으로(optionally) 상기에 기재된 바와 같은 본 발명의 항체의 추가적인 특징을 가질 수 있다. 이러한 항체 혼합물은 제1 항체 및 제2 항체를 포함할 수 있고, 상기 제1 항체는, SEQ ID NO: 2에 기재된 상기 서열 및/또는 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열, 특히 SEQ ID NO: 3에 기재된 상기 서열을 포함하고, 상기 제2 항체는, SEQ ID NO: 2에 기재된 상기 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 상기 제1 항체 및/또는 제2 항체는 본 발명의 항체일 수 있고, 상기에 상세하게 논의된 바와 같은 본 발명의 항체의 하나 또는 그 이상의 추가적인 특성을 임의적으로(optionally) 가질 수 있다. 하나의 실시 형태에서, 상기 항체 혼합물은, SEQ ID NO: 133의 VH CDR1, SEQ ID NO: 134의 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 1의 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 가지는 항체로 이루어지거나 또는 이를 포함한다.
본 발명의 바람직한 실시 형태에 따라, 상기 항체 혼합물은, 서열의 하기의 조합을 갖는 두 개의 항체로 이루어지거나 포함하거나 또는 적어도 하나를 포함한다(하기에 기재된 상기 중쇄 서열과 함께 하기에 나타낸 상기 경쇄 서열의 하나를 포함하는 각각의 항체):
하기의 두 개의 상이한 경쇄 중의 하나는,
a) SEQ ID NO: 48을 포함하는 경쇄 불변 영역과 함께, SEQ ID NO: 4, 또는 SEQ ID NO: 4의 변이체, 특히 SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO: 21 중 특히 어떠한 하나를 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
b) SEQ ID NO: 5를 포함하는 경쇄 가변 영역,
를 포함한다.
하기를 포함하는 중쇄와 함께:
SEQ ID NO: 49을 포함하는 중쇄 불변 영역(CH1-CH2-CH3)과 함께, SEQ ID NO: 26 또는 SEQ ID NO: 26의 변이체, 특히 SEQ ID NO: 22 내지 SEQ ID NO: 25 및 SEQ ID NO: 27 내지 SEQ ID NO: 47로부터 선택된 어떠한 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역.
하나의 실시 형태에서, 상기 항체 혼합물은, 상기 PD 12002 하이브리도마 기탁물에 의해 생산된 항체로 이루어지거나 포함한다. 하나의 실시 형태에서, 상기 분리된 조성물은, 상기 PD 12002 하이브리도마 기탁물에 의해 생산된 항체의 적어도 하나를 포함하고, 특히 상기 PD 12002 하이브리도마 기탁물에 의해 생산된 항체를 포함한다.
본 발명자에 의해 실행된 상기 수많은 실험 동안에, 상기 PD 12002 하이브리도마 기탁물에 의해 생산된 상기 항체는, 약제로서 사용하기 위해, 특히, 조혈성 줄기 세포 이식 후의 생착을 촉진하기 위해, 및/또는 재생 불량성 빈혈 및 이식편대숙주병 중 적어도 하나를 예방 치료하기 위해, 이로운 활성을 놀랍게도 나타낸다.
기탁된 바와 같은 상기 PD 12002 하이브리도마 세포주는 저장 및 배양에서 안정적이고, 5 년 이상 배양되고 안정성 및 독자성(identity)에 대해 확인되고 있다.
다른 측면에서, 본 발명은, 경쟁적 결합 검정(competitive binding assay)에서(예를 들어, 생체외 경쟁적 결합 검정) 항체와, CD26, 특히 인간 CD26와 특이적으로 결합하기 위해 경쟁하는 제제(특히 항체 또는 이의 단편)을 제공하고, 상기 항체는 본 발명의 항체이다; 특히 이러한 제제는, 하기를 포함할 수 있는 항체와, CD26, 특히 인간 CD26에 특이적인 결합에 대해 경쟁할 수 있다:
a) SEQ ID NO: 1에 기재된 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NO: 2에 기재된 서열 및/또는 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
b) PD12002로서 이탈리아, Genoa, CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 중쇄 가변 영역 및 PD12002로서 이탈리아, Genoa, CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 상기 항체의 경쇄 가변 영역. 하나의 실시 형태에 따라, 상기 항체는 하기를 포함할 수 있는 항체일 수 있다:
a) SEQ ID NOs: 22 내지 47 및 이의 변이체(들)로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 SEQ ID NOs: 4, 5, 6 내지 21 및 이의 변이체(들)로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 또는 하기를 포함할 수 있는 항체:
b) PD12002로서 이탈리아 Genoa, CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 중쇄 및 경쇄. 바람직한 실시 형태에 따라, 본 발명은, 중쇄 가변 영역 서열 ID NO: 26 및 경쇄 가변 영역 서열 ID NO: 4 및/또는 서열 ID NO: 5를 포함하는 항체와 경쟁적 결합 검정에서(예를 들어, 생체외 경쟁적 결합 검정에서) CD26, 특히 인간 CD26에 특이적인 결합을 경쟁하는 제제(특히, 항체 또는 이의 단편)를 제공한다. 경쟁적 결합 검정은, 두 개의 항체가 동일한 또는 입체 구조로 이루어진 오버래핑 에피토프를 인식함으로써 동일한 에피토프에 결합하는지 아닌지를 결정하는데 사용될 수 있다(Dong et . al 1998). 본 분야의 숙련자에게 알려진 어떠한 경쟁적 결합 검정은, 본 발명의 항체와 CD26과 특이적인 결합에 대해 경쟁하는 제제를 확인하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, CD26 항원이 다수-웰 플레이트 상에 고정되고, 표시된 항체의 결합을 차단하기 위해 표시되지 않는 항체의 능력을 측정하는 검정이 사용될 수 있다. 이러한 경쟁 검정을 위한 공통의 표시는 방사성 표지(radioactive label) 또는 효소 표지이다.
다른 측면에 따라서, (a) 본 발명의 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열 또는 (b) (a)에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자는 상기 발명지에 의해 제공된다.
본 발명의 내용에서, 상기 용어 "핵산 분자"는 본 분야에서 알려진 바와 같이 사용되고, 특히 공유 결합에 의해 결합된 둘 또는 그 이상의 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유사체를 나타낼 수 있다. 상기 용어 "핵산 분자"는, 많아야 약 50 개의 뉴클레오티드를 일반적으로 포함하는 올리고뉴클레오티드, 및 필수적으로 어떠한 길이를 가질 수 있는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 게다가, 용어 "핵산 분자"는 cDNA 또는 유전자와 같은 DNA 또는 RNA를 포함할 수 있다. 핵산 분자를 포함하는 상기 뉴클레오티드는, 예를 들어, 자연적으로 발생하는 데옥시리보뉴클레오티드(deoxyribo-nu-cleotides), 리보뉴클레오티드(ribonu-cleotides) 및 비-자연적으로 발생하는 합성의 뉴클레오티드 또는 변형된 자연적으로 발생하는 뉴클레오티드와 같은 뉴클레오티드 유사체를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다. 뉴클레오티드 유사체는 본 분야에 알려져 있고, 예를 들어, Lin et al ., 1994, Nucl. Acids Res. 22:5220-5234; Jellinek et al ., 1995, Biochem. 34:11363-11372; Pagratis et al., 1997, Nature Biotechnol. 15:68-73에 기재되어 있다.
예를 들어, 폴리펩티드, 항체, 핵산 분자, 벡터, 세포, 또는 이의 혼합물과 같은, "분리된" 화합물 또는 조성물은, 특히, 자연에서 발견되지 않는 형태로 존재하는 화합물 또는 조성물일 수 있다. 분리된 화합물(예를 들어, 폴리펩티드, 핵산 분자, 항체, 벡터, 세포) 또는 조성물은, 이들이 더 이상 자연에서 발견되는 형태로 있지 않는 정도로 정제된 것들을 포함한다(Isolated compounds or compositions include those which have been purified to an extent that they are no longer in a form in which they are found in nature).
본 발명은, SEQ ID NOs: 50 내지 128 및 이의 변이체(들)로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자를 또한 제공한다. SEQ ID NOs: 50 내지 128로 이루어진 군으로부터 선택된 상기 뉴클레오티드 서열의 변이체는, SEQ ID NOs: 50 내지 128로 이루어진 군으로부터 선택된 상기 뉴클레오티드 서열과 적어도 90 %, 바람직하게 적어도 98 %, 보다 바람직하게 적어도 99 % 서열 동일성을 가질 수 있다. SEQ ID NOs: 50 내지 77로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열 또는 이의 변이체는, 경쇄 가변 영역(VL) 또는 이의 섹션을 코딩할 수 있다(A nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 50 to 77 or a variant thereof can encode a light chain variable region (VL) or a section thereof). 대체적으로, SEQ ID NOs: 50 내지 77로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열의 변이체는, SEQ ID NOs: 50 내지 128로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열일 수 있고, 여기서, 많아야 12 개, 바람직하게 많아야 5 개, 보다 바람직하게 많아야 1 개의 뉴클레오티드 잔기(들) 각각은, 결실되거나, 삽입되거나 또는 상기 치환된 뉴클레오티드 잔기와 상이한 뉴클레오티드 잔기로 치환된다. SEQ ID NOs: 78 내지 126로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열 또는 이의 변이체는, 중쇄 가변 영역(VH) 또는 이의 섹션을 코딩할 수 있다. SEQ ID NO: 127에 기재된 상기 뉴클레오티드 서열 또는 이의 변이체는, 경쇄 불변 영역(CL) 또는 이의 섹션을 코딩할 수 있다. SEQ ID NO: 128에 기재된 상기 뉴클레오티드 서열 또는 이의 변이체는 CH1-CH2-CH3 사슬 또는 이의 섹션을 코딩할 수 있다. 실시 형태에 따라, 상기 VL 사슬을 코딩하는 상기 뉴클레오티드 서열은, 생산하는 IGK[Ig 카파 유전자자리(Ig kappa locus)] 재배열된 서열[인-프레임 접합 및 종결 코돈 없음(in-frame junction and no stop codon)]일 수 있다. 실시 형태에 따라, 상기 VH 사슬을 코딩하는 상기 뉴클레오티드 서열은, 생산하는 IGH (Ig 중쇄 유전자) 재배열된 서열(인-프레임 접합 및 종결 코돈 없음)일 수 있다.
상기 핵산 분자의 상기에 언급된 변이체는, 항체의 몇몇의 특성, 예를 들어 친화력을 개선하면서, CD26에 대한 결합 특이성을 유지하기 위해 실행된, 예를 들어, "인색한 돌연변이 유발(parsimonious mutagenesis)"(Shier, R., et al ., 1996, Gene 169: 147)에 의해 또는 본 발명의 뉴클레오티드 서열의 임의적인(random) 또는 직접적인 돌연변이 유발의 다른 방법에 의한 것일 수 있다.
본 발명의 상기 핵산 분자는 이들의 증폭, 추가적으로 돌연변이 유발 또는 변형 또는 발현에 적절한 벡터에서 클론될 수 있다. 본 발명은 또한, 본 발명의 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터를 제공한다. 바람직하게, 상기 벡터는, 본 발명에 따른 항체를 효과적으로 발현할 수 있다. 특히, 핵산 벡터는, 상기 벡터를 포함하는 숙주가 상기 제1 핵산 분자에 의해 코드되는 상기 폴리펩티드를 발현하도록, 제2 핵산 분자와 공유적으로 및 작동적으로 결합된 제1 핵산 분자를 포함할 수 있고, 상기 제1 핵산 분자는 본 발명에 따라 핵산 분자이고, 특히, 핵산 분자는, SEQ ID NOs: 50 내지 128 및 이의 변이체(들)로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 이러한 벡터는, 본 발명에 공지된 하기의 방법 및 적절한 숙주에서 키메라 단백질의 또는 재조합 단백질의 제조를 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 현재의 바람직한 실시 형태에 따라, 상기 재조합 항체는 바람직하게 원핵세포 또는 진핵 숙주 세포에서 클론되고 발현된다: E. coli가 특히 바람직하지만, 또한 B. subtilis, P. pastoris, K. lactis와 같은 다른 원핵세포, 또는 식물 또는 동물 기원, 특히 쥐과 동물 기원의 진핵 세포가 사용될 수 있다.
다른 측면에 따라, 상기 핵산 분자가 발현 조절 서열(expression control sequence)에 작동적으로 결합된, 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터가 제공된다.
상기 용어 "벡터"는 특히, 숙주 세포로 코딩 정보를 전달하는데 사용된, 분자, 예를 들어, 핵산 분자, 플라스미드, 또는 바이러스를 나타낼 수 있다. 특히, "벡터"는, 숙주 세포 사이에 및/또는 숙주 세포 내로 삽입된 핵산 분자를 이동할 수 있는, 핵산 분자, 바람직하게 자기 복제(self-replicating)일 수 있다. 벡터의 예는 바이러스성 벡터(viral vector)를 포함하지만, 이로 제한되지 않고, 추가적인 DNA 단편(들)은 상기 바이러스성 게놈, 있는 그대로의 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 리포솜에 갭슐화된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 예를 들어, 추가적인 DNA 단편(들)이 연결될 수 있는 원형의 이중 표준 DNA 루프와 같은 플라스미드, 코스미드(cosmid) 또는 파지 벡터(phage vector), 상기 벡터가 도입되는 숙주 세포에서 자율 복제(autonomous replication)를 할 수 있는, 벡터, 및 양이온성 축합제와 연결된 DNA 또는 RNA 발현 벡터 내로 연결될 수 있다. 특히, 벡터는, 이러한 것이 상기 숙주 게놈과 함께 나중에 복제되는 것을 허용하는 것, 상기 숙주 세포 내로 도입시에 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있다. 특히, 상기 용어 "벡터"는 발현 벡터를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "발현 벡터"는 특히, 상기 발현 벡터가 작동적으로 결합된 하나 또는 그 이상의 유전자(들)의 발현을 직접적으로 할 수 있는 벡터를 나타낼 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 벡터는, 숙주 세포에서의 발현, 특히 적절한 조절 영역, 프로모터, 전사가능한 종결자(transcriptional terminators) 또는 활성자, 또는 복제 원점의 삽입에 의해 발현에 대해 최적화될 수 있다.
본 출원의 내용에서, "작동적으로 결합된(operatively linked)" 구성요소는, 이들의 의도된 방식으로 작동하기 위해, 관계에서 상기 구성요소를 허용하는 특정한 구성요소일 수 있다. 코딩 서열에 작동적으로 결합된 발현 조절 서열은, 상기 코딩 서열의 발현이 하나 또는 그 이상의 발현 조절 서열(들)과 양립할 수 있는 조건 하에서 달성되도록, 특히 연결될 수 있다. 용어 "발현 조절 서열(expression control sequence)"은, 상기 발현 조절 서열이 작동적으로 결합된 뉴클레오티드 서열의 발현을 조절하는 하나 또는 그 이상의 뉴클레오티드 서열(들)을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 작동적으로 결합된 발현 조절 서열은, 관심 유전자를 조절하기 위한 간격(distance)에서 또는 트랜스( trans )에서 작용하는, 관심의 유전자 및 발현 조절 서열과 인접한 발현 조절 서열을 포함할 수 있지만 이로 제한되지 않는다(Operatively linked expression control sequences can include, but are not limited to, expression control sequences that are contiguous with the gene of interest and expression control sequences that act in trans or at a distance for controlling a gene of interest).
하나의 실시 형태에 따라, 핵산 서열에 작동적으로 결합된 발현 조절 서열은 전사, 적절하다면 핵산 서열의 번역을 통제하고 조절할 수 있다. 발현 조절 서열은, 프로모터 서열, 인핸서 서열(enhancer sequences), 전사 종결자, 만약 인트론(들)이 존재한다면, 인트론(들)에 대한 스플라이싱 신호(splicing signal), 특히, 단백질-코딩 유전자의 앞에서의 개시 코돈, mRNA의 적절한 번역을 보장하는 서열, 및 종결 코돈으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 서열을 포함할 수 있지만, 이로 제한되지 않는다. 하나의 실시 형태에 따라, 발현 벡터는, 예를 들어, 복제 원점, 프로모터, 및 임의적으로(optionally) 형질전환된 세포의 표현형 선별을 가능하게 하는 하나 또는 그 이상의 유전자를 포함할 수 있다.
다른 측면에 따라, 본 발명은, 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 재조합 숙주 세포를 제공한다.
본 출원의 내용에서, 상기 용어 "숙주 세포"는 형질전환된 세포를 특히 나타낼 수 있거나, 또는 핵산 서열과 형질전환될 수 있다. 형질전환된 숙주 세포를 가진 후에, 숙주 세포는 관심의 선택된 유전자를 발현할 수 있다. 상기 용어 "숙주 세포"는, 형질전환 후에 수득된 세포를 포함할 수 있을 뿐만 아니라, 또한 상기 자손은 원래의 모 세포와 형태학적 또는 유전적인 구성에서 동일한지 여부와 관계없이, 형질전환 후에 수득된 세포의 자손을 또한 포함할 수 있다. 예를 들어, 돌연변이 및/또는 환경적인 영향으로 인하여, 특정한 변형이 발생할 수도 있기 때문에, 이러한 자손은 상기 모 세포와 동일하지 않을 수도 있다. 바람직하게, 상기 자손은, CD26, 특히 인간 CD26에 결합할 수 있는, 항체 또는 항체 단편을 생산한다. 상기 용어 "숙주 세포"는 숙주 세포의 혼합물을 또한 포함할 수 있다. 숙주 세포의 혼합물에서, 상기 숙주 세포는, 하나의 항체 또는 이의 단편 또는 둘 또는 그 이상의 상이한 항체 또는 이의 단편을 생산할 수도 있다.
본 발명의 항체는, PD　12002로서 Genoa (이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주로부터 생산된 항체 또는 상기 하이브리도마 세포주의 유도체일 수 있다. 특히, PD 12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주의 유도체는, SEQ ID NOs: 50 내지 128 중 하나 또는 그 이상의 변이체인, 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포주이다. 본 발명의 항체는, PD 12002로서 Genoa (이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체에 결합하는 상기 에피토프를 결합하는 항체일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "에피토프"는 특정한 항체에 의해 특이적으로 결합하고 인식할 수 있는 항원의 일부를 특히 나타낼 수도 있다. 일반적으로, 에피토프는, 특정한 공간 입체배열로 적어도 3 개, 및 적어도 4 개, 또는 8 내지 10 개의 아미노산을 포함할 수 있다. 항체는 이의 3차 형태로 항원의 펩티드 또는 폴리펩티드를 인식할 수 있기 때문에, 에피토프를 포함하는 상기 아미노산은 인접한 것을 필요로 하지 않고, 몇몇의 경우에, 상기 동일한 펩티드 사슬에서도 아닐 수도 있다(Since an antibody can recognize an antigenic peptide or polypeptide in its tertiary form, the amino acids comprising an epitope need not be contiguous, and in some cases, may not even be on the same peptide chain). 본 발명에서, 본 발명의 항체를 인식하는 펩티드 또는 폴리펩티드 에피토프는, CD26의 적어도 4 개, 적어도 5 개, 적어도 6 개, 적어도 7 개, 적어도 8 개, 적어도 9 개, 적어도 10 개, 적어도 15 개, 적어도 20 개, 적어도 25 개, 또는 약 5 내지 30 개 사이, 약 10 개 내지 약 30 개 또는 약 15개 내지 약 35 개의 인접한 또는 비-인접한 아미노산(contiguous or non-contiguous amino acids)의 서열을 포함한다.
하나의 실시 형태에서, 본 발명의 항-CD26 모노클로날 항체는, SEQ ID NO: 146 내지 159로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 아미노산 서열을 포함하는 CD26 에피토프를 결합할 수 있다. 특정 실시 형태에서, 상기 에피토프는 연속적 에피토프(continuous epitope) 또는 불연속적 에피토프(discontinuous epitope)일 수 있다. 하나의 실시 형태에서, 본 발명의 항-CD26 모노클로날 항체는, SEQ ID NO: 146-148, 152, 154, 158, 및 159로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 아미노산 서열을 포함하는 CD26 에피토프를 결합할 수 있다. 하나의 실시 형태에서, 본 발명의 항-CD26 모노클로날 항체는, SEQ ID NO: 146 내지 148, 152, 154, 158, 및 159로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CD26 에피토프를 결합할 수 있다. 다른 실시 형태에서, 본 발명의 항-CD26 모노클로날 항체는, SEQ ID NO: 146을 포함하는 CD26 에피토프를 결합할 수 있다. 추가적인 실시 형태에서, 본 발명의 항-CD26 모노클로날 항체는, SEQ ID NO: 146를 포함하는 항-CD26 에피토프 및 SEQ ID NO: 147, 148, 152, 154, 및 159로 이루어진 군으로부터 선택된 그 이상의 아미노산 서열을 결합할 수 있다. 특정한 실시 형태에서, 본 발명의 항-CD26 모노클로날 항체는, SEQ ID NOs: 146, 147, 및 148; 또는 SEQ ID NOs 146, 147, and 152; 또는 SEQ ID NOs 146 및 147; 또는 SEQ ID NOs 146 및 152를 포함하는 CD26 에피토프를 결합할 수 있다.
다른 측면에 따라, 본 발명자는, PD 12002로서 Genoa (이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 하이브리도마 세포주 또는 상기 하이브리도마 세포주의 유도체로부터 생산된 항체를 제공한다(the present inventors provide an antibody produced from the hybridoma cell line deposited at CBA-ICLC of Genoa (Italy) as PD　12002 or a derivative of said hybridoma cell line).
다른 측면에 따라, PD　12002로서 Genoa (이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체에 결합된 상기 에피토프를 결합하는 항체가 제공된다.
다른 측면에 따라, 본 발명의 항체를 제조하는 방법이 제공된다. 이러한 공정은 하기의 단계를 포함한다:
(ⅰ) 본 발명의 숙주 세포, 특히 PD　12002로서 Genoa (이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 상기 하이브리도마 세포를 제공하는 단계;
(ⅱ) 배양 배지에서 본 발명의 상기 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
(ⅲ) 상기 배지로부터 상기 항체를 수득하는 단계;
(ⅳ) 예를 들어, 여과 및/또는 나노여과(nanofiltration)에 의해, 상기 항체를 임의적으로(optionally) 정제하는 단계.
하나의 실시 형태에 따라, 항체, 특히 인간 항체를 생산하기 위해 유전적으로 조작된 트랜스제닉 동물은, 본 출원에서 언급된 바와 같은 면역성의 타겟(immunogenic target)에 대항하는 항체, 특히 CD26에 대한 항체를 생산하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 트랜스제닉 동물에 의해 생산된 트랜스제닉 동물 및 항체는, 예를 들어, US　2010/0196266 A1에 기재된 바와 같이, 특히, 표준 면역 프로토콜을 사용한 본 분야에서 공지된 기술을 사용하여 수득될 수 있다. 트랜스제닉 동물, 특히 트랜스제닉 마우스로부터 인간 항체를 수득하기 위한 방법은, 예를 들어, Green et al ., Nature Genet. 7:13 (1994), Lonberg et al ., Nature 368:856 (1994), 및 Taylor et al ., Int. Immun. 6:579 (1994)에 기재되어 있다. 항체를 생산하는 트랜스제닉 동물, 특히 인간 항체에 대한 비-제한적인 예는, 예를 들어, Green et al ., 1999, J. Immunol. Methods 231:11-23)에 기재된 바와 같은, 트랜스제닉 동물, 특히 Abgenix로부터의 XenoMouse®(Fremont, Calif., USA)이다. XenoMouse®과 같은 트랜스제닉 동물에서, 유전적으로 조작된 비-인간 포유동물의 상기 항체 유전자, 예를 들어 상기 마우스 항체 유전자는 불활성되고, 기능적인 인간 항체 유전자로 치환되면서, 유전적으로 조작된 상기 비-인간 포유동물의 면역계, 예를 들어 마우스의 면역계의 나머지(remainder)는 온전하게 남아있다.
트랜스제닉 동물에 의해 생산된 인간 항체는 치료 가능성을 나타낼 수 있으면서, 정상 인간 항체의 약동학적 특성을 유지한다(Green et al ., 1999, supra , US　2010/0196266 A1). 상기 XenoMouse®시스템의 사용은, 항체를 생산하기 위한 본 출원에서 단지 예시적으로 언급되고 있다. 본 분야에서 일반적인 지식을 기초로, 숙련자는 또한, 본 발명의 항체, 특히 인간 항체를 생산하기 위한, 다른 트랜스제닉 동물, 특히 예를 들어, 트랜스제닉 설치류, 양, 염소 또는 소에서 사용될 수 있다.
다른 방식으로 명확하게 나타내지 않는다면, 모든 상기에 언급된 기술은 대표적인 기술이고, 항체 또는 항체의 단편을 생산하기 위한 어떠한 공지된 방법이 사용될 수 있다. 본 발명을 실행하기 위해, 다른 방식으로 나타내지 않는다면, 세포 생물학, 유기 화학, 생화학, 분자 생물학, 세포 배양, 미생물, 단백질 화학, 재조합 DNA, 및 면역학의 통상적인 기술이 사용될 수 있다. 이러한 통상적인 기술은, 예를 들어, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition (Sambrook et al ., Eds.), 1989; Oligonucleotide Synthesis, (M. J. Gait, Ed.), 1984; US 4,683,195 (Mullis et al .); Nucleic Acid Hybridization, (B. D. Hames et al .), 1984; Methods in Enzymology, Volumes 154 and 155 (Wu et al .), Academic Press, New York; Transcription and Translation, (B. D. Hames and S. J. Higgins), 1984; Culture of Animal Cells (R. I. Freshney, ed.), 1987; Immobilized Cells and Enzymes, IRL Press, 1986; A Practical Guide to Molecular Cloning (B. Perbal), 1984; Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. H. Miller and M. P. Calos, Eds.), 1987; Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology (Mayer and Walker, eds.), 1987; Handbook of Experiment Immunology, Volumes I-IV (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds.), 1986; Manipulating the Mouse Embryo, 1986에 기재되어 있다.
문맥에서 다른 방식을 요구하지 않다면, 단수형 용어는 복수형을 포함할 것이고, 복수형 용어는 단수형을 포함할 것이다.
다른 측면에 따라, 본 발명의 항체는 약제로서 사용을 위한 항체이다. 특히, 본 발명의 항체는, 바람직하게, 조혈성 줄기 세포 이식 후에, 이식편대숙주병(GvHD)을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한 항체이다. 게다가, 본 발명의 항체는, 재생 불량성 빈혈, 바람직하게 중증 재생 불량성 빈혈을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한 항체이다. 게다가, 본 발명의 항체는, 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착을 촉진하는데 사용하기 위한 항체일 수 있다. 본 발명의 항체는 또한 바람직하게, 조혈성 중기 세포 이식 후에 이식편대숙주병(GvHD)을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한, 재생 불량성 빈혈, 바람직하게 중증 재생 불량성 빈혈을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한, 및 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착을 촉진하는데 사용하기 위한 것인 항체일 수도 있다.
조혈성 줄기 세포 이식 전 및/또는 동안에 및/또는 후에 피검자의 이식편대숙주병, 재생 불량성 빈혈 및 증상은, CD26 매개된 질병(들), 질환(들) 또는 증상(들), 즉 제제, 특히 CD26, 특히 인간 CD26에 특이적으로 결합할 수 있는 하나 또는 그 이상의 항체의 투여에 의해 치료된 및/또는 예방될 수 있는 질병(들), 질환(들) 또는 증상(들)로서 고려된다.
게다가, 본 발명은, 약제로서 사용하기 위한, 본 발명의 항체 혼합물, 특히, 본 발명의 항체 혼합물을 포함하는 조성물, 특히 분리된 조성물을 또한 제공한다. 본 발명의 상기 항체 혼합물, 특히, 본 발명의 항체 혼합물을 포함하는 분리된 조성물은, 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착을 촉진하는데 사용하기 위한, 및/또는 바람직하게 조혈성 줄기 세포 이식 후에, 이식편대숙주병(GvHD)을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한, 및/또는 재생 불량성 빈혈, 바람직하게 중증 재생 불량성 빈혈을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한 것일 수 있다. 특히, 상기 항체 혼합물은 본 발명의 제1 항체 및 제2 항체를 포함할 수 있고, 상기 제1 항체는 SEQ ID NO: 2에 기재된 서열 및/또는 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열, 특히 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 제2 항체는 SEQ ID NO: 2에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 하나의 실시 형태에서, 상기 항체 혼합물은 PD 12002 하이브리도마 기탁물에 의해 생산된 상기 항체로 이루어지거나 이를 포함한다. 게다가, 상기 항체 혼합물은, PD12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 모두 6 개의 CDRs 서열을 포함하는 본 발명의 항체(예를 들어, 인간 또는 인간화된 항체)를 포함할 수 있다.
후천성 재생불량성 빈혈(AA)은, 골수 저세포상태(marrow hypocellularity) 및 낮은 말단 혈액 세포 계수(low peripheral blood cell counts)에 의해 특징지어지는 드문 골수 실패 상태(rare bone marrow failure state)이다[Young N.S. et al., 1997 N Eng J Med 336:1365-1372]. 다른 자가 면역 질환과 유사한, 항원-특이성 T 세포는 AA 환자의 골수로부터 확장될 수 있고, 조혈성 골수 세포(haematopoietic stem cells) 및 간세포(progenitor cells)로 조직-특이성 세포독성을 매개할 가능성이 있다[Nakao S. et al ., Blood 1997, 89:3691-3699].
BM-침윤성 T-세포에서 배타적으로 발견되고 있는, 별도로 발현된 유전자는, 몇몇의 작용적인 카테고리 내로 분류되고 있었다. 이러한 별도로 발현된 유전자는, PF-4, CD26, Ncf-1, CCR2로서 면역 반응에 포함된 분자 및 다른 케모카인 수용체 및 리간드를 포함한다. 게다가, AA 는 타겟 항원을 조장하는 인식하는 T-세포에 의해 매개된 간세포 및 조혈성 줄기 세포의 자가 면역 파괴가 원인인 것으로 추정되고 있다(it has been supposed that AA results from auto aggressive destruction of haematopoietic stem cells and progenitors mediated by T-cells recognizing inciting target antigens)[Young N.S. et al ., 1997, supra]. 몇몇의 그룹은, 항원-유도된 T-세포 반응을 지지하는, 클론성 T-세포 확장(clonal T-cell expansion)[Zeng W. et al ., Blood 1999, 93(9):3008-3016; Zeng W. et al ., J Clin Invest 2001, 108(5):765-773; Risitano A.M. et al ., Blood 2002, 100(1):178-183], 전염증성 사이토카인 생산(proinflammatory cytokine production)[Maciejewski J.P. et al ., Blood 1995, 85:3183-3190] 및 CD34+ 줄기 세포에 대한 T-세포 매개된 세포독성[Nakao S. et al ., 1997, supra; Maciejewski J.P., Selleri C., Sato T. et al ., Br J Haematol 1995, 91:245-252]을 확인하고 있다. 483 유전자의 조절은, 상기 골수 기능부전(bone marrow failure)이 케모카인, 사이토카인, 성장 인자, 및 이들의 수용체를 포함하는 오히려 복잡한 유전 프로그램으로부터 기인함을 또한 나타낸다. Franzke 및 그의 동료는, CD26, Th1 분화된 T-세포 상에 높은 레벨로 발현된 표면-결합된 엑토펩티다아제[Dang N.H. et al ., Histol Histopathol 2002, 17(4):1213-1226; Willheim M. et al ., J Allergy Clin Immunol 1997, 100:348-255], 다발성 경화증과 같은 다른 자가면역 질환에서 또한 중요한[Lock C. et al ., Nat Med 2002, 8(5):500-508; Jee Y. et al ., J Neuroimmunol 2002, 128(1-2):49-57], CCR2 및 CX3CR1[Charo I.F. et al ., Microcirculation 2003, 10(3-4):259-264; Fraticelli P. et al ., J Clin Invest 2001, 107(9):1173-1181]와 같은, Th1 면역 반응의 조절[Anke Franzke et al ., BMC Genomics 2006, 7:263]에서 중요한 역할을 하는 몇몇의 분자의 도입을 확인한다.
어떠한 이론에도 얽매이지 않으면서, CD26에 결합할 수 있는, 특히, CD26, 특히 인간 CD26에 특이적으로 결합하는, 본 발명의 항체가, 면역억제 후에 혈액 생성(haematopoiesis)의 회복 및 AA의 면역발병기전(immunpathogenesis)에서 중요한 역할을 할 수 있는 것으로 현재 추정된다.
따라서, CD26 항원에 대항하는 모노클로날 항체는, 재생 불량성 빈혈(특히, 선천적 또는 후천적 재생 불량성 빈혈), 특히 중증 재생 불량성 빈혈을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
본 출원에 사용된 바와 같은, 용어 "치료(treatment)" 및 "예방(prevention)"는 특히, 질병, 질환 또는 증상, 특히, 이식편대숙주병(GvHD) 및 재생 불량성 빈혈 중 적어도 하나를 발전시키는 위험에 처한 또는 질병, 질환 또는 증상으로 고통받는 피검자에게 이익을 주는, 치료 또는 예방의 어떠한 타입을 나타낼 수 있다. 게다가, 상기 용어 "치료" 및 "예방"은, 조혈성 줄기 세포의 이식 후에 생착(engraftment)에 대한 사람에게 이익을 부여하는 어떠한 타입의 치료 또는 예방을 또한 나타낼 수 있다. 상기 치료 또는 예방에 의해 부여된 이익은, 상기 피검자의 증상에서의 개선(예를 들어, 하나 또는 그 이상의 증상에서)을 제공, 치료되거나 및/또는 예방될 상기 질병, 질환 또는 증상의 진행에서의 지연을 예방하는 이익, 하나 또는 그 이상의 증상을 지연시키는 이익, 치료되거나 및/또는 예방될 상기 질병, 질환 또는 증상을 완화하는 이익, 및/또는 증상의 보다 느린 진행을 제공하는 이익 등일 수 있다. 게다가, 본 출원에 사용된 바와 같은, 상기 용어 "치료" 및 "예방"은 증상의 치료 또는 완전한 제거를 나타내는 것을 필수적으로 의미하지는 않는다.
상기 용어 "이식편대숙주병"은, 급성 및/또는 만성 이식편대숙주병, 특히 조혈성 줄기 세포 이식 후의 이식편대숙주병을 포함한다. 상기 용어 "재생 불량성 빈혈"은 후천성 및 선천성 재생 불량성 빈혈 둘 다 뿐만 아니라 중증 재생 불량성 빈혈을 포함한다.
본 발명의 항체의 사용은, 인간 피검자, 특히 의료적인 목적, 및 동물 피검자, 특히 수의학과 및 약물 선별 및 개발 목적을 위한 치료 및/또는 예방을 제공할 수 있다. 적절한 동물 피검자는, 예를 들어 토끼, 영장류, 소(bovines) 등과 같은 포유동물을 포함한다. 인간 피검자는 가장 바람직하다. 인간 피검자는 신생아, 유아, 청소년 및 성인 피검자를 포함한다. 상기 용어 "환자" 및 "피검자"는 본원에서 교환하여 사용된다. 본원에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "환자"는 인간을 나타낼 수 있지만, 인간으로 한정되는 것은 아니다.
다른 측면에 따라, 본 발명은, 본 발명의 적어도 하나의 항체(예를 들어, 본원 발명의 하나의 항체, 또는 둘 또는 그 이상, 셋 또는 그 이상의 항체), 본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함하는 항체 혼합물 또는 본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함하는 분리된 조성물, 및 임의적으로(optionally) 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 하나의 실시 형태에서, 약제학적 조성물은, PD 12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체(예를 들어, 인간 또는 인간화된 항체)의 상기 6 CDRs 서열을 포함하는 항체를 포함할 수 있다. 다른 실시 형태에서, 약제학적 조성물은, PD 12002로서 기탁된 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 VH 및 VL 영역을 포함하는 항체(예를 들어, 키메라 항체)를 포함할 수 있다. 추가적인 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 본 발명의 제1 항체 및 본 발명의 제2 항체를 포함하는 항체 혼합물을 포함할 수 있고, 상기 제1 항체는 SEQ ID NO: 2에 기재된 서열 및/또는 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열, 특히 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 제2 항체는, SEQ ID NO: 2에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 상기 제1 및 제2 항체는 상이한 항체일 수 있고, 특히 상기 제2 항체는 아미노산 서열을 가질 수 있고, 상기 제1 항체의 아미노산 서열과 비교한 경우에, 적어도 하나의 아미노산 잔기가 결실되거나, 삽입되거나 또는 상이한 아미노산 잔기와 교체된다. 상기 약제학적 조성물은, 유효 성분으로서, 본 발명의 적어도 하나의 항체, 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 항체 혼합물, 또는 본 발명의 분리된 조성물을 포함할 수 있다. 특히, 상기 약제학적 조성물은, 바람직하게 조혈성 줄기 세포 이식 후에, 적어도 하나의 이식편대숙주병, 및 재생 불량성 빈혈, 바람직하게 중증 재생 불량성 빈혈을 치료 및/또는 예방하기 위해 유효한 양으로 본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함할 수 있다. 게다가, 상기 약제학적 조성물은, 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착을 촉진하기 위한 유효한 양으로 본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함할 수 있다.
본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함하는 상기 약제학적 조성물은, 약제로서 사용하기 위한 약제학적 조성물이다. 특히, 본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함하는 약제학적 조성물은, 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착을 촉진하는데 사용하기 위한, 및/또는 바람직하게 조혈성 줄기 세포 이식 후에, 이식편대숙주병(GvHD)을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한, 및/또는 재생 불량성 빈혈, 바람직하게 중증 재생 불량성 빈혈을 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한, 약제학적 조성물이다.
본 발명의 약제학적 조성물은 임의적으로(optionally), 하나 또는 그 이상의 부형제, 바람직하게 약제학적으로 허용가능한 부형제, 특히 하나 또는 그 이상의 희석제, 바람직하게 약제학적으로 허용가능한 희석제를 포함할 수 있다. 적절한 부형제(들), 특히 약제학적으로 허용가능한 부형제(들)은, 본 출원에서 제공된 내용(teachings)을 기초로 및 본 분야에서의 일반적인 지식을 기초로 본 분야의 숙련자에 의해 선택될 수 있다. 상기 희석제는, 예를 들어 물과 같은, 약제학적으로 허용가능한 용매 또는 약제학적으로 허용가능한 용매 혼합물일 수 있다. 적절한 부형제, 특히 희석제의 예는 본 분야에서 널리 알려져 있고, 예를 들어, 약제학적으로 허용가능한 완충 시스템(buffering system)을 포함하는 유체, 특히 약제학적으로 허용가능한 완충 시스템을 포함하는 용액, 예를 들어, 인산 완충 식염수 용액, 물, 염수, 특히 생리 식염수, 오일/물 에멀젼과 같은 에멀젼, 하나 또는 그 이상의 습윤제, 멸균 용액 등을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다. 약제학적 조성물은 또한, 하나 또는 그 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체를 함유할 수 있다.
하나의 실시 형태에 따라, 본 발명의 약제학적 조성물은, 적어도 하나의 예를 들어, 모노클로날 또는 예를 들어, 쥐과 또는 예를 들어, 본 발명의 모노클로날 및 쥐과의 항-CD26 항체와 같은 본 발명의 적어도 하나의 항체, 및 물 및 인산 완충용액, 바람직하게 M'H2PO4 및 M''M'''HPO4를 포함하는 완충용액을 포함할 수 있고, 이 식에서, M', M'' 및 M'''는 독립적으로 Na 및 K로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 이러한 약제학적 조성물은, NaCl, KCl 및 NaCl 및 KCl를 포함하는 혼합물의 하나 또는 그 이상을 임의적으로(optionally) 포함할 수 있다. 본 발명의 적어도 하나의 항체는, PD 12002 하이브리도마 기탁물에 의해 생산된 항체 또는 이의 적어도 하나의 항체로 이루어지거나 또는 이를 포함할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은, 정맥내 투여, 특히 정맥내 주사 또는 정맥내 주입을 위한 것일 수 있다. 특정한 실시 형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은, 상기 PD 12002 하이브리도마 기탁물 및 DPBS에 의해 생산된 항체로 이루어지거나 이를 포함할 수 있다.
하나의 실시 형태에 따라서, 본 발명의 약제학적 조성물은, 본 발명의 적어도 하나의 항체, 예를 들어, 본 발명에 따른 모노클로날 항체 항-CD26, 특히 상기 PD 12002 하이브리도마 기탁물에 의해 생산된 항체 또는 적어도 하나의 이의 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시 형태에서, 상기 약제학적 조성물은, 본 발명의 적어도 하나의 항체, 예를 들어, PD 12002 하이브리도마 기탁물에 의해 생산된 항체 또는 적어도 하나의 이의 항체, 하나 또는 그 이상의 코르티코스테로이드, 하나 또는 그 이상의 항히스타민 및 염분, 예를 들어, 생리식염수(특히, 약 0.9%w/v NaCl을 포함하는 염분)를 포함할 수 있다. 특히, 이러한 수성의 약제학적 조성물은, 주입, 특히 느린 주입(slow infusion), 특히 정맥내 투여에 의해 투여될 수 있다.
하나의 실시 형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은, 1 mg/ml 내지 10 mg/ml, 1 mg/ml 내지 50 mg/ml, 1 mg/ml 내지 100 mg/ml, 10 mg/ml 내지 100 mg/ml, 또는 50 mg/ml 내지 100 mg/ml의 농도 범위로 본 발명의 항체를 포함한다. 특정한 실시 형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은, 본 발명의 항체의 적어도 약 1 mg/ml, 적어도 약 1 mg/ml, 적어도 약 5 mg/ml, 적어도 약 10 mg/ml, 적어도 약 20 mg/ml, 적어도 약 30 mg/ml, 적어도 약 40 mg/ml, 적어도 약 50 mg/ml, 또는 적어도 약 100 mg/ml를 포함할 수 있다.
하나의 실시 형태에서, 약제학적 조성물은, 이식편대숙주병의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 하루 당 1 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적과 하루 당 4.5 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적 사이의 양으로 본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함할 수 있거나, 또는 재생 불량성 빈혈의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 하루 당 1 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적과 하루 당 2 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적 사이의 양으로 본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함할 수 있다. 게다가, 하나의 실시 형태에 따라, 상기 약제학적 조성물은, 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 적어도 하나의 양 및 현재의 바람직한 범위의 양을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "약제학적으로 허용가능한"은, 상기 "약제학적으로 허용가능한" 화합물 또는 "약제학적으로 허용가능한" 조성물이, 상기 치료의 필요성 및 상기 질병의 심각성(severity)을 고려하여 지나치게 해로운 부작용 없이, 질병, 질환 또는 증상, 특히 이식편대숙주병 및 재생 불량성 빈혈 중 적어도 하나를 치료 및/또는 예방하는 것을 달성하기 위해 또는 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착의 촉진을 달성하기 위해, 피검자(subject)에게 투여하기 위해 적절한 것임을 특히 나타낼 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "유효량(effective amount)"은, 질병, 질환 또는 증상, 특히 이색편대숙주병 및 재생 불량성 빈혈 중 적어도 하나로 고통받는 환자에게 바람직한 효과를 생산하기 위해, 또는 환자의 증상(예를 들어, 하나 또는 그 이상의 증후군)에서 개선, 상기 질병의 진행에서의 지연 등을 포함하는 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착과 관련하여 환자에서의 바람직한 효과를 생산하기 위해 충분한, 본 발명의 적어도 하나의 항체, 예를 들어 항체 또는 항체 혼합물의 양을 특히 나타낼 수 있다. 본원에 기재된 항체의 유효량은 특히, 이식편대숙주병 및/또는 재생 불량성 빈혈을 개선, 역전(reverse), 안정화, 느린 및/또는 지연 진행을 위해 충분한 양일 수 있다. 본 분야에서 알려진 바와 같이, 예를 들어, 본 발명에 따른 항체의 유효량은, 그중에서도, 환자의 병력, 예방 또는 치료 목적을 위한 투여, 타겟 표시(target indication)(이식편대숙주병, 재생 불량성 빈혈 등), 뿐만 아니라 상기 항체의 타입(및/또는 투여량)과 같은 다른 요소에 따라 다양할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 고체 형태 또는 액체 형태일 수 있고, 그 중에서도, 하나 또는 그 이상의 분말(들), 하나 또는 그 이상의 정제(들), 하나 또는 그 이상의 유체들, 특히 하나 또는 그 이상의 용액(들), 또는 하나 또는 그 이상의 에어로졸(들)의 형태일 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은, 예를 들어, 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착을 촉진하기 위한 활성제(들)(active agent) 또는 이식편대숙주병 및 재생 불량성 빈혈 중 적어도 하나의 치료 및/또는 예방에서의 사용을 위한 활성제와 같은, 하나 또는 그 이상의 추가적인 생물학적인 활성제(들)을 또한 포함할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 투여는, 예를 들어, 복강내, 정맥내(intravenous), 비경구(parenteral), 신장내(intrarenal), 피하의(subcutaneous), 국부의(topical), 기관지내(intrabronchial), 폐내(intrapulmonary) 및 비강내(intranasal) 투여 및, 국소 치료를 위한 것이 바람직하다면, 병소내 투여(intralesional administration)로 이루어진 군으로부터 선택된 투여일 수 있다. 비경구 투여는, 예를 들어, 복강내, 피내, 근육내, 피하, 정맥내 또는 동맥내 투여일 수 있다. 본 발명의 상기 조성물은 또한, 질병, 질환 또는 증상, 특히 이식편대숙주병으로 고통받는 특정한 기관과 같은, 예를 들어, 상기 타겟 부위로의 바이오리스틱 전달(biolistic delivery), 타겟 부위로 직접적으로 투여될 수 있다.
특히, 상기 투여는, 예를 들어, 정맥내 또는 복강내 주사 또는 주입과 같은 주사 및/또는 주입 및/또는 전달에 의해 실행될 수 있다. 상기 약제학적 조성물은, 주입에 의한 투여를 위해 투여 형태 또는 주사가능한 투여 형태, 특히 정맥내 또는 복강내 주사를 위한 주사가능한 투여량 형태 또는 정맥내 또는 복강내 투여를 위한 주입 투여량의 형태로 존재할 수 있다.
약제학적 조성물, 특히 주사가능한 투여량 형태의 형태에서 약제학적 조성물은, 예를 들어 물과 같은 하나 또는 그 이상의 약제학적으로 허용가능한 용매를 포함할 수 있고, 및/또는 예를 들어, 현탁액, 에멀젼 또는 용액의 형태에서 유체의 형태로 있을 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은, 예를 들어, 보존제 및 항균제(antimicrobials), 항-산화제, 킬레이트제, 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착을 촉진하기 위한 이식편대숙주병 및 재생 불량성 빈혈의 적어도 하나를 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한 활성제(들) 또는 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착을 촉진하기 위한 활성제(들) 및 비활성 가스 등으로 이루어진 군으로부터 선택된 다른 첨가제, 및/또는 특히 인간 기원에서 예를 들어 혈청 알부민 또는 면역글로불린과 같은 단백질성 담체(proteinaceous carriers)와 같은, 방부제 및 다른 첨가제를 또한 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은, 적절한 투여량으로 상기 피검자에게 투여될 수 있다. 상기 투여량의 투약 방식은, 예를 들어 의사의 진료에 의해 결정될 수 있다. 본 분야에서 널리 알려진 바와 같이, 환자의 투여량은, 환자의 크기, 체표면적, 나이, 몸무게, 예방 또는 치료 목적을 위한 투여, 타겟 표시(이식편대숙주병, 재생 불량성 빈혈 등), 투여될 특정한 화합물, 일반적인 건강, 및 동시에 투여될 다른 약물과 같은 많은 요소에 따라 달라질 수 있다. 하나의 실시 형태에 따라, 특히 이식편대숙주병의 치료 및/또는 예방에서 사용을 위한, 본 발명의 적어도 하나의 항체(예를 들어, 본 발명의 하나, 둘 또는 셋 또는 그 이상의 항체)는, 하루 당 1 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적과 하루 당 4.5 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적 사이의 양으로, 특히, 하루 당 2 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적과 하루 당 4.5 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적 사이의 양으로, 환자에게 투여될 수 있다. 특히, 하루 당 약 2 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적의 양 또는 하루 당 약 3 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적의 양 또는 하루 당 약 4.5 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적의 양은 환자에게 투여될 수 있다. 본 발명의 적어도 하나의 항체는, 약제학적 조성물에서 상기에 언급된 양으로 존재할 수도 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "적어도 하나의 항체"는 하나의 항체 또는 둘 또는 그 이상(예를 들어, 셋 또는 그 이상) 항체를 포함한다.
하나의 실시 형태에 따라서, 본 발명의 약제학적 조성물은, 하이브리도마 세포주 기탁물 PD 12002에 의해 생산된 항체 혼합물, 및 임의적으로(optionally) 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물일 수 있다.
상기 약제학적 조성물은, - 하나의 실시 형태에 따라- 하루 당 1 mg의 상기 항체 혼합물(하이브리도마 세포주 기탁물 PD　12002에 의해 생산됨)/m2 체표면적과 하루 당 4.5 mg의 상기 항체 혼합물(하이브리도마 세포주 기탁물 PD　12002에 의해 생산됨)/m2 체표면적 사이의 양, 특히, 하루 당 2 mg의 상기 항체 혼합물(하이브리도마 세포주 기탁물 PD　12002에 의해 생산됨)/m2 체표면적과 하루 당 4.5 mg의 상기 항체 혼합물(하이브리도마 세포주 기탁물 PD　12002에 의해 생산됨)/m2 체표면적 사이의 양으로, 특히, 환자에게 투여를 위한 이식편대숙주병의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 하이브리도마 세포주 기탁물 PD　12002에 의해 생산된 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시 형태에 따라, 하루 당 약 2 mg의 상기 항체 혼합물/m2 체표면적의 양 또는 하루 당 약 3 mg의 상기 항체 혼합물/m2 체표면적의 양 또는 하루 당 약 4.5 mg의 상기 항체 혼합물/m2 체표면적의 양은 환자에게 투여될 수 있다. 하루 당 2, 3 또는 4.5 mg의 하이브리도마 세포주 기탁물 PD　12002에 의해 생산된 항체 혼합물/m2 체표면적은 임상적인 세팅에서 성공적으로 사용되었다. 추가적인 실시 형태에 따라, 환자에게 투여하기 위한 약제학적 조성물은, 하루 당 0.1 내지 10 mg/m2 체표면적의 양으로 항체를 포함한다.
하나의 실시 형태에 따라, 본 발명의 약제학적 조성물의 투여는, 정맥내 투여, 예를 들어, 정맥내 주입 또는 정맥내 주사이다. 임의적으로(optionally) 추가적으로, 예를 들어, 코르티코스테로이드, 및 사이클로스포린(특히 사이클로스포린 A)로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 면역억제제 약물은, 상기 항체와 함께 또는 별도로 환자에게 투여될 수 있다.
체표면적(BSA)는 공지된 방법에 따라 계산될 수 있다. 예를 들어, 환자의 상기 체표면적은, BSA (m2) = ([Height (cm) x Weight (kg)]/3600)1/2의 체표면적 계산식(참고문헌으로 본원에 포함된, Mosteller R D., N Engl J Med 1987 Oct. 22; 317(17):1098)에 따라, 또는 BSA (m2) = 0.20247 x Height (m)0.725 x Weight (kg)0.425 의 DuBois and DuBois 공식(참고문헌으로 본원에 포함된, DuBois D; DuBois E F., Arch Int Med 1916 17:863-71)에 따라, 계산될 수 있다. 바람직한 실시 형태에 따라, 상기 Mosteller 공식은 환자의 상기 체표면적(BSA)를 계산하기 위해 사용된다.
재생 불량성 빈혈의 치료에서 사용하기 위한 약제학적 조성물은, 본 발명의 적어도 하나의 항체, 및 임의적으로(optionally) 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함할 수 있다. 본 발명의 상기 적어도 하나의 항체(예를 들어, 하나 또는 둘 또는 그 이상의 항체)는, 특히, 재생 불량성 빈혈의 치료에서 사용하기 위한, 하루 당 1 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적과 하루 당 2 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적 사이의 양으로, 특히 하루 당 약 2 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적의 양으로, 환자에게 투여될 수 있다. 본 발명의 적어도 하나의 항체는, 상기에-언급된 양 또는 양의 범위로 약제학적 조성물에 존재할 수 있다. 특히, 상기 약제학적 조성물은, 정맥내 투여, 예를 들어, 주입 또는 주사에 의해 투여될 수 있다. 임의적으로(optionally), 추가적으로 적어도 하나의 면역-억제제 약물, 특히 사이클로스포린 A 는, 적어도 하나의 항체와 함께 또는 별도로 상기 환자에게 투여될 수 있다. 하나의 실시 형태에 따라, 재생 불량성 빈혈의 치료에 사용하기 위한 상기 약제학적 조성물은, 하이브리도마 세포주 기탁물 PD　12002에 의해 생산된 항체 혼합물 및 임의적으로(optionally) 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함할 수 있다.
하나의 실시 형태에 따라, 하이브리도마 세포주 기탁물 PD 12002에 의해 생산된 항체 혼합물은, 하루 당 1 mg의 상기 항체 혼합물(하이브리도마 세포주 기탁물 PD　12002에 의해 생산됨)/m2 체표면적과 하루 당 2 mg의 상기 항체 혼합물(하이브리도마 세포주 기탁물 PD　12002에 의해 생산됨)/m2 체표면적 사이의 양으로, 특히 하루 당 약 2 mg의 상기 항체 혼합물(하이브리도마 세포주 기탁물 PD　12002에 의해 생산됨)/m2 체표면적의 양으로 환자에게 재생 불량성 빈혈의 치료에 사용하기 위해 투여될 수 있다.
게다가, 상기에 나타낸 대표적인 범위의 이상 또는 이하의 본 발명의 항체의 투여량은, 예를 들어, 이식편대숙주병 및 재생 불량성 빈혈 중 적어도 하나를 치료 및/또는 예방하기 위한, 또는 특히, 상기에 언급된 인자(the aforementioned factor)를 고려하여, 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착을 촉진하기 위해, 투여될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은, 단기간 작용하는(short-acting), 빠르게 방출하는(fast-releasing), 장시간 작용하는(long-acting), 또는 서방성 방출(sustained-releasing)할 수 있다.
게다가, 본 발명의 약제학적 조성물은, 상기 약제학적 조성물의 의도된 용도에 따라, 생물학적으로 활성 제제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은, 적어도 하나의 면역억제제 약물, 특히 적어도 하나의 면역억제제 약물의 유효량을 더 포함할 수 있다. 상기 면역억제제 약물은, 예를 들어, 코르티코스테로이드, 특히 6-메틸프레드니솔론, 및 사이클로스포린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 약물, 특히 사이클로스포린 A 일 수 있다. 게다가, 상기 약제학적 조성물은, 상기 제2 유효 성분이 상기 항-CD26 항체로서 상기 동일한 조성물에 포함되는 경우에 치료의 병용(combination)을 포함할 수 있다.
하나의 실시 형태에서, 본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함하는, 본 발명의 상기 약제학적 조성물(예를 들어, 이식편대숙주병 및 재생 불량성 빈혈 중 적어도 하나를 치료 및/또는 예방하기 위한 또는 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착을 촉진하기 위한), 특히 본 발명의 항체 혼합물은, 하나 또는 그 이상의 코르티코스테로이드, 하나 또는 그 이상의 항히스타민제, 물 및 염화 나트륨을 포함할 수 있다. 특히, 상기 약제학적 조성물은, 하나 또는 그 이상의 코르티코스테로이드, 하나 또는 그 이상의 항히스타민제 및 염수, 예를 들어, 생리적 식염수(특히, 약 0.9 %w/v NaCl를 포함하는 염수)를 더 포함할 수 있다. 특히, 이러한 수성의 약제학적 조성물은, 주입, 특히 느린 주입(slow infusion), 특히 정맥내 투여에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 적어도 하나의 항체, 특히 하이브리도마 세포주 기탁물 PD12002에 의해 생산된 상기 항체, 하나 또는 그 이상의 코르티코스테로이드, 및 하나 또는 그 이상의 항히스타민제는, 각각 단독으로 또는 조합으로, 치료학적인 유효량으로 바람직하게 존재할 수 있다. 특히, 상기 약제학적 조성물은, 이식편대숙주주병의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위해, 하루 당 1 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적과 하루 당 4.5 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적 사이의 양으로 본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함할 수 있거나, 또는 재생 불량성 빈혈의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위해, 하루 당 1 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적과 하루 당 2 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적 사이의 양으로 본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함할 수 있다. 게다가, 상기 약제학적 조성물은, 본 발명의 적어도 하나의 항체, 특히 본원에 기재된 바와 같은 항체 혼합물의 양 및 양의 현재의 바람직한 범위를 포함할 수 있다. 게다가, 상기 약제학적 조성물은, 제2 유효 성분이 상기 항-CD26 항체로서 상기 동일한 조성물에 포함되지 않는 경우에, 치료의 병용(combination)을 포함할 수 있다.
코르티코스테로이드는 본 분야에서 널리 알려져 있고, 특히 무기질 코르티코이드 및 당질코르티코이드(glucocorticoids)를 포함할 수 있다. 당질코르티코이드는 항-염증성 제제(anti-inflammatory agents)일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 상기 용어 코르티코스테로이드는, 척추동물의 부신피질에서 특히 생산될 수 있는 스테로이드를 포함할 수 있을 뿐만 아니라, 합성 코르티코스테로이드 또는 예를 들어, 코르티손 및 히드로코르티손과 같은, 천연의 합성 호르몬의 활성도를 모방하는 화합물을 포함하는, 합성 또는 천연 코르티코스테로이드 유사체를 포함할 수 있다. 코르티코스테로이드 유사체는 특히, 상기 부신 피질에 의해 자세히 설명된 자연적으로 발생하는 스테로이드의 어떠한 작용 및/또는 구조에서 유사한 합성 또는 천연의 화학적 화합물을 포함할 수도 있다.
하나 또는 그 이상의 코르티코스테로이드는, 알클로메타손(alclometasone) 디프로피오네이트(dipropionate), 암시노니드(amcinonide), 암시나펠(amcinafel), 암시나피드(amcinafide), 벡클라메타손(beclamethasone), 베타메타손(betamethasone), 베타메타손 디프로피오네이트(betamethasone dipropionate), 베타메타손 발레레이트(betamethasone valerate), 클로베타손 프로피오네이트(clobetasone propionate), 클로로프레드니손(chloroprednisone), 클로코르테론(clocortelone), 코르티솔, 코르티손, 코르토독손(cortodoxone), 디플루오로손 디아세테이트(difluorosone diacetate), 디스시놀론(descinolone), 데소나이드(desonide), 디플루프레드네이트(defluprednate), 디히드록시코르티손(dihydroxycortisone), 데속시메타손(desoximetasone), 데사메타손(dexamethasone), 디플라자코트(deflazacort), 디플로라손(diflorasone), 디플로라손 디아세테이트, 디클로리손(dichlorisone), 베타메타손의 에스테르, 플루아자코르트(fluazacort), 플루세토나이드(flucetonide), 플루클로로나이드(flucloronide), 플루드로티손(fludrotisone), 플루오로코르티손(fluorocortisone), 플루메타손(flumethasone), 플루니솔리드(flunisolide), 플루오시노니드(fluocinonide), 플루시놀론(fluocinolone), 플루시놀론 아세토나이드(fluocinolone acetonide), 플루코르톨론(flucortolone), 플루페롤론(fluperolone), 플루프레드니솔론(fluprednisolone), 플루로안드레놀론 아세토나이드(fluroandrenolone acetonide), 플루시놀론 아세토나이드(fluocinolone acetonide), 플루란드레놀라이드(flurandrenolide), 플루오라메톨론(fluorametholone), 플루티카손 프로피오네이트(fluticasone propionate), 히드로코르티손(hydrocortisone), 히드로코르티손 부티레이트(hydrocortisone butyrate), 히드로코르티손 발레레이트(hydrocortisone valerate), 히드로코르타메이트(hydrocortamate), 로테프렌돌(loteprendol), 메드리손(medrysone), 메프레드니손(meprednisone), 메틸프레드니손(methylprednisone), 메틸프레드니솔론(methylprednisolone), 6-메틸프레드니솔론(6-methylprednisolone), 모메타손 푸로에이트(mometasone furoate), 파라메타손(paramethasone), 파라메타손 아세테이트, 프레드니손, 프레드니솔론, 프레드니돈(prednidone), 프레드니카르베이트(prednicarbate), 트리암시놀론 아세토나이드(triamcinolone acetonide), 트리암시놀론 헥사카토나이드(triamcinolone hexacatonide), 티솔코르톨 프레드니솔론(tixocortol prednisolone), 및 트리암시놀론(triamcinolone), 및 이의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
항히스타민제는 본 분야에서 알려져 있고, 히스타민의 작용을 감소시키거나 이의 작용에 대응할 수 있는, 특히 약제학적 약물일 수 있다. 특히, 항히스타민은 H1-수용체 길항물질(H1-receptor antagonist)일 수 있다.
하나 또는 그 이상의 항히스타민제 약물은 특히, 아스테미졸(astemizole), 아젤라스틴(azelastine), 부클리진(buclizine), 브롬페니라민(brompheniramine), 클로르페니라민(chlorpheniramine), 세티리진(cetirizine), 클레마스틴(clemastine), 시클리진(cyclizine), 데스로라티딘(desloratidine), 데스브롬페니라민(dexbrompheniramine), 디펜히드라민(diphenhydramine), 도실아민(doxylamine), 에바스틴(ebastine), 에메다신(emedastine), 에피나신(epinastine), 페소페나딘(fexofenadine), 히드록시진(hydroxyzine), 케토티펜(ketotifen), 레보카바스틴(levocabastine), 레보세티리진(levocetirizine), 롤라티딘(loratidine), 메퀴타진(mequitazine), 미졸라스틴(mizolastine), 올로파타딘(olopatadine), 옥사토미드(oxatomide), 페닌다민(phenindamine), 페니라민(pheniramine), 피릴라민(pyrilamine), 테르페니딘(terfenidine), 트리프롤리딘(triprolidine), 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 이성질체 또는 이의 프로드러그(prodrugs)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
또 다른 측면에 따라, 본 발명은, (ⅰ) 본 발명의 적어도 하나의 항체, 특히 본 발명의 항체 혼합물 또는 본 발명의 항체를 포함하는 조성물; 및 추가적으로 (ⅱ) a) 적어도 하나의 면역억제제 약물, 예를 들어, 코르티코스테로이드, 및 사이클로스포린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 면역억제제 약물, 특히 사이클로스포린 A, 또는 b) 적어도 하나의 코르티코스테로이드 및 적어도 하나의 항히스타민제;를 포함하는 키트를 제공한다. 상기 적어도 하나의 항체는, 하이브리도마 세포주 기탁물 PD 12002에 의해 생산된 항체를 포함하거나 이로 구성될 수 있다. 특히, 상기 키트는, 이식편대숙주병의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 하루 당 1 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적과 하루 당 4.5 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적 사이의 양으로 본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함할 수 있거나, 또는 재생 불량성 빈혈의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 하루 당 1 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적과 하루 당 2 mg의 상기 적어도 하나의 항체/m2 체표면적 사이의 양으로 본 발명의 적어도 하나의 항체를 포함할 수 있다. 게다가, 상기 약제학적 조성물은, 본원에 논의된 바와 같은 본 발명의 적어도 하나의 항체의 양 및 양의 현재의 바람직한 범위를 포함할 수 있다(the pharmaceutical composition can comprise currently preferred ranges of amounts and amounts of at least one antibody of the present invention as discussed herein).
상기 키트는 약제로서 사용하기 위한 키트, 특히 바람직하게 조혈성 줄기 세포 이식 후의 이식편대숙주병(GvHD)을 예방 및/또는 치료하기 위한 키트, 및/또는 재생 불량성 빈혈, 특히 중증 재생 불량성 빈혈을 치료하는데 사용하기 위한 키트, 및/또는 조혈성 줄기 세포 이식 후에 생착을 촉진하기 위한 키트일 수 있다. 상기 용어 키트의 일부 및 키트는 본원에서 교환하여 사용된다.
본 분야의 숙련자에게 널리 알려진 방법으로 본 발명에 기재된, 본 발명에 기재된 상기 뉴클레오티드 서열 중 적어도 하나를 사용한, 비-인간 동물, 특히 비-인간 포유동물의 유전적 조작에 의해 수득된, 트랜스제닉 동물에서의 본 발명의 항체의 생채 내 및 생체 외 생산은, 본 발명의 범위 내에 또한 포함된다.
다음과 같이, 본 발명은, 하기의 비-제한적인 예와 관련하여 보다 상세하게 기재될 것이다. 그러나, 이는 본 발명이 하기의 실시예로 한정하는 것을 의미하는 것은 아니다.
실시예
실시예 1
뉴클레오티드 서열의 결정
이러한 공정은 세 가지 단계 내로 요약될 수 있다:
단계 Ⅰ( Phase I)- 항체 사슬에 대해 코딩하는 유전자의 클로닝( Cloning of genes encoding for antibody chains )
● CDina26을 생산하는 하이브리도마 세포로부터의 전체 RNA의 추출(상기 참고번호 PD 12002 하의 하이브리도마 세포주, 상기를 참고하라);
● 역전사(Reverse transcription);
● 프라이머로서 특정한 올리고뉴클레오티드를 사용하여 관심의 유전자의 증폭;
● 원핵생물 벡터를 사용한 유전자의 클로닝;
● 박테리아성 형질전환;
● 클로닝 절차의 조절, 적절한 형질전환된 클론의 선별(Control of cloning procedure, selecting suitable transformed clones).
단계 Ⅱ - 항체 가변 사슬에 대해 코딩하는 유전자의 서열분석 및 생물정보학적 분석( Sequencing of genes encoding for antibody variable chains and bioinformatics analysis ):
● VH 및 VL 사슬 둘 다에 대한 100 개의 클론의 선택(Picking) 및 서열분석;
● 서열의 생물정보학적 분석;
● 상기 VL 및 VH 사슬에 대해, 요구된다면, 공통 서열의 발생 및 염기와 상이한 상기 공통 서열의 표시 및 이들의 퍼센트(Generation of a consensus sequence, if required, for the VL and VH chains and indication of the consensus sequence differing bases and their percentage).
단계 Ⅲ - 항체 불변 사슬에 대해 코딩하는 유전자의 서열분석( equencing of genes encoding for antibody Constant chains )
● VL 사슬에 대한 이에 대응하는 CL 사슬의 서열 분석(sequencing of the corresponding CL chain for VL chain);
● VH 사슬에 대한 이에 대응하는 CH1-CH2-CH3 사슬의 서열 분석.
상기 결과는, VL 사슬 서열의 세 가지의 그룹(VL group 1, VL group 2 and VL group 3) 및 VH 사슬 서열의 두 가지의 그룹(VH group 1 and VH group 2)의 mRNA 샘플에서의 존재를 나타낸다.
아미노산 서열을 결정하는 것( Determining the amino acid sequence )
질량 분석기 분석 및 N-말단 서열분석(N-terminal sequencing)은, CDina26 샘플에서 존재하는 상기 아미노산 서열을 확인하기 위해 사용되었다. CDina26에서, 샘플은, 이의 CH1-CH2-CH3 사슬과 관련된 VH 그룹 1의 및 VL 그룹의 3 개의 사슬의, 이의 관련된 CL 서열 및 VL 그룹 1의 존재를 보여주었다(In CDina26 sample was confirmed the presence of VL group 1 and its related CL sequence, of VL group 3 chain and of VH group 1 related to its CH1-CH2-CH3 chain). VL 서열 그룹 2 또는 VH 서열 그룹 2의 어떠한 것도, 상기 CDina26 항체의 샘플에서 아미노산성 서열로서 측정되지 않았다(Neither VL Sequences group 2 nor VH sequences group 2 have been detected as aminoacidic sequences in the CDina26 antibody sample).
실시예 2
인간 및 돼지 CD26 에 결합하는 CDina26
인간 CD26에 대한 CDina26의 결합은, 다중 파라미터의 유세포분석기(multiparametric flow cytometry) 및 Biacore®검정에 의한 미니돼지 CD26(minipig CD26)에 대한 이의 결합과 비교되고 있다. CDina26는, 어떠한 것도 T 림프구 상에 발현된 막단백질(transmembrane protein)로서 또는 수용성 단백질(soluble protein)로서 돼지의 항원을 인식할 수 없다.
1. 유세포 분석은, 세포 표면 발현된 CD26에 결합하기 위한, CDina26의 능력을 결정하기 위해 사용되었다.
림프구는 밀도 기울기(gradient density)에서 원심분리에 의해 인간 또는 미니돼지의 말초 혈액 샘플로부터 분리되었다. 인간 T 림프구에 대한 CDina26의 결합은, 다중파라미터의 유세포 분석기에 의해 분석되었다(The Binding of CDina26 to human T Lymphocytes was analyzed by multiparametric flow cytometry).
CD3 마커를 발현하는 인간 T 림프구의 45 % 이상은, CDina26에 결합한다(More than 45% of Human T lymphocytes expressing CD3 marker bind to CDina26). 이와 대조적으로, CD3 마커를 발현하는 돼지의 T 림프구의 단지 2 %만이 CDina26에 결합한다. 이는 도 9로부터 알 수 있다.
2. 인간 또는 돼지의 항원(Sigma CAT# D4943 및 D 7052로부터 구입됨)에 대한 CDina26의 결합은 Biacore®에 의해 분석되었다.
CDina26 은, Biacore® T100 센서 칩의 유동 세포에서의 이전에 고정된 폴리클로날 항-마우스 Ig 항체에 의해 상기 매트릭스 상에 포획되었다. 인간 또는 돼지의 항원은 상기 고정된 CDina26 상에서 용액으로 주사되었다.
고정된 CDina26 상에서 두 가지의 농도로 주사된, 인간 항원은, 2.8 x 10-5 s-1의 동력학적 해리 속도에 의해 나타낸, 높은 친화도 결합과 함께 투여량 의존적인 반응을 제공한다.
고정화된 CDina26 상에 주사된, 돼지의 항원은 어떠한 결합도 제공하지 않았다.
도 11은, BiacoreResonance 유닛(RU)으로 측정된, 포획된 CDina26 상의 인간(왼쪽) 및 돼지(오른쪽) 항원 (Ag)의 결합을 나타낸 것이다.
실시예 3
항체 생산
CDina26는 참고번호 PD　12002 하에서의 Genoa (이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된다. 상기 하이브리도마는 혈청 유리 배지에서 배양될 수도 있다. CDina26은 쥐과의 항체의 혼합물을 포함한다. 특히, CDina26은, 인간 CD26에 특이적으로 결합하고, IgG 2B 클래스의 것인, 쥐과, 모노클로날 항체를 포함한다.
CDina26을 포함하는 약제학적 조성물은, 용액이 정맥내 주입을 위해 사용될 수 있는, CDina26을 포함하는 무색의 투명한 용액의 형태로 존재한다(예를 들어, 1 mg의 CDina26/1 ml의 용액; 상기 용액은 바이알에 포함될 수 있다).
실시예 4
생체 외 약력학적 연구
생체외 약력학적 연구는, CD26에 대항하는 쥐과 모노클로날 항체의 특성에 대해, 특히, CDina26으로서 본원에 나타낸, PD 12002 하이브리도마 세포주 기탁물에 의해 생산된 항체의 특성에 대해 실행되었다.
이러한 연구의 목적은, 면역 반응에 포함된 세포 집단의 표면 상에 CD26에 특이적인 결합 및 이의 발현을 평가하기 위한 것이다, 특히:
- T 림프구
- B 림프구
- NK (자연 킬러) 세포
- 단핵구(Monocytes)
- 수지상 세포
실시예 4a
CDina26 항원 발현은, 5 개의 건강한 공여체(표 1 에서 "ESP.1" 내지 "ESP.5"에 해당됨)로부터 정제된 증식하지 않는 T, B 및 NK 세포(resting T, B and NK cells)(T0)에서 평가된 다음에, 동종이계 자극(allogeneic stimuli)(혼합된 림프구 배양(MLC)), 미토겐 자극[식물성 적혈구 응집소(phytohemagglutinin), PHA] 또는 항원성 자극[칸디다 알비칸스(Candida albicans)]을 통해 활성화된 세포에서 평가된다.
본 출원에서, 축약 MFIR은, 본 분야에서 알려진 바와 같은 평균 상대적인 형광 강도(mean Relative Fluorescence Intensity)에 대한 약어로서 사용된다.
[표 1]
PHA 와 함께 미토겐 자극( mitogenic stimuli ) 전 및 후에 건강한 공여체에서 림프구 부분모집단( lymphocyte subpopulations ) 내의 CDina26 + 세포 및 MFIR 인덱스의 퍼센트의 측정
"% CD26" 및 "MFIR"로 각각 명명된 컬럼(columns)에서, 상기 제1 수치는 TO에 대응하고, 상기 화살표 후에 제2 수치는 상기 자극된 세포에 대응한다:
A, 발현의 퍼센트 또는 수치에서의 증가(MFIR)
D, 발현의 퍼센트 또는 수치에서의 감소(MFIR)
TO는 Time 0, 즉, 상기 세포의 자극 바로 전의 시점에 대한 약어이다.
Figure pct00001

표 1로부터 나타낼 수도 있는 바와 같이, 활성된 림프구 상에서 CD26 발현은, 실험 번호 1("ESP 1")에서 T CD3+CD4+ 및 T CD3+CD8+를 제외하고, T0 와 비교된 바와 같은 PHA와 함께 자극 후에 CD26+세포의 증가된 퍼센트를 나타낸다. 발현의 레벨(MFRI 인덱스 수치)은 상기 상이한 T, B 및 NK 부분모집단 및 상기 5 개의 건강한 공여체 중에서 다양하다.
게다가, 미토겐 자극은, MFIR의 수치를 적당하게 증가하는 것 같다(표 1).
실시예 4b
표 2에 나타낸 결과의 분석은, 모든 건강한 공여체의 CD3 + CD4 + T 부분모집단을 제외한, 분석된 모든 부분집합에서, 미토겐의 자극 후에 CDina26을 발현하는 림프구의 퍼센트에서의 증가가 있음을 나타내었다.
하나("ESP. 5")를 제외한 모든 실험에서, MFIR 수치의 증가가 있었다. 시간 O과 비교된 바와 같은 MFIR 수치의 증가는 PHA와 자극된 이러한 것들보다 칸디다로 자극된 배양물에서 더 높음을 또한 나타낼 수도 있다. 상기 칸디다 항원 자극은, 특히 부분모집단 T CD3 + CD16+ 및 T CD56 + CD3 +에서, 세포 막 상에 CD26 분자의 발현을 특이적으로 증가한다.
[표 2]
칸디다 알비칸스 와 함께 항원성 자극 전 및 후에 건강한 공여체에서 림프구의 부분모집단 내에 CDina26 + 세포 및 MFIR 인덱스의 퍼센트의 측정.
명명된 "% CD26" 및 "MFIR" 각각 명명된 컬럼(columns)에서, 상기 제1 수치는 TO에 대응하고, 상기 화살표 후에 제2 수치는 상기 자극된 세포에 대응한다:
A, 발현의 퍼센트 또는 수치에서의 증가(MFIR)
D, 발현의 퍼센트 또는 수치에서의 감소(MFIR)
Figure pct00002

실시예 4c
표 3은, 모든 실험에서, CDina26 항원에 대한 림프구 양성의 퍼센트는, CD3 + CD4 + T 부분모집단을 제외하고, 혼합된 림프구 배양물과 함께 자극 후에 존재하는 모든 림프구 부분모집단에서 증가됨을 나타내었다.
[표 3]
MLC(혼합된 림프구 배양물)와 함께 항원성 자극 전 및 후에 건강한 공여체에서 림프구 부분모집단 내의 CDina26 + 세포 및 MFIR 인덱스의 퍼센트의 평가.
"% CD26" 및 "MFIR"로 각각 명명된 컬럼에서, 상기 제1 수치는 TO에 대응하고, 상기 화살표 후에 제2 수치는 상기 자극된 세포에 대응한다:
A, 발현의 퍼센트 또는 수치에서의 증가(MFIR)
D, 발현의 퍼센트 또는 수치에서의 감소(MFIR)
Figure pct00003

상기 MFIR 인덱스는, 실험 번호 2("ESP.2") 및 번호 5("ESP.5")에서의 CD4 + CD3 + T의 부분모집단을 제외하고, 모든 부분집합 및 모든 실험에서 시간 0와 비교된 바와 같은 자극 후에 증가된다.
칸디다와 함께 상기 자극과 유사한, 상기 항원성 자극은, 대부분의 림프구 부분모집단에서 MFIR 인덱스 및 CDina26 항원의 발현을 끊임없이 증가한다. 중요한 증가는, CD16 + CD3 + T 및 CD56 + CD3 + T 실험 번호 3("ESP.3")의 부분모집단에서 주로 관찰되었다.
실시예 4d
최종적으로, CDina26 항원의 발현은, allo-HSCT 후에 환자에서 백혈구 부분모집단 상에서 조사되었다. 특히, 두 명의 환자는, 이식 후 면역 재구성(immune reconstitution post-transplant)을 모니터링하기 위한 조기 테스트 동안에 측정된 반면에, 급성 GvHD가 진전된 4 명의 환자에서, GvHD의 발병 동안 및 상기 해결 후 둘 다에서 평가의 실행은 가능했다.
대조군과 비교된, 환자는, 이식 후에 몇 달에 발생하는 조혈 재구성(haematopoietic reconstitution)의 과정과 양립가능될 수 있는, T, NK 및 B 부분모집단의 매우 가변적인 분포를 나타낸다(표 4).
[표 4]
5 개 건강한 공여체를 평가함으로써 수득된 범위와 함께 비교되고, 면역 재구성의 시간에서 평가된 HSCT 를 받은 6 명의 환자에서 림프구 부분모집단의 분포(%로서 측정됨).
Figure pct00004

모든 환자에서 CD26의 퍼센트를 분석하여(표 5), 상기 대조군 범위와 비교된 부분모집단 T CD16 + CD3 + 및 T CD56 + CD3 + 및 NK 내의 이러한 분자의 발현의 증가가 있었다.
[표 5]
5 개의 건강한 공여체에 의해 평가된 바와 같이 수득된 범위와 비교되고 면역 재구성( immune reconstitution )의 시간에서 평가된 HSCT 를 받은 6 명의 환자에서 림프구의 부분모집단에서 CDina26 + 세포의 분포(%로서 평가됨).
Figure pct00005

aGvHD가 발병된 환자에서, 몇몇의 경우에서, 상기 퍼센트의 수치는 이러한 합병증(CK, IP)이 없는 두 명의 환자에서보다 더 높았다. 상기 환자 DF는, 모든 부분 집합에서 CD26의 현저하게 보다 높은 퍼센트를 나타내었고, 세포의 활성화의 인덱스가 매우 선언되었고, 이는 상기 분자 CD26 MFIR의 인덱스를 추정할 가능성이 있지 않다(The patient DF showed significantly higher percentages of CD26 in all subsets, an index of cellular activation was very pronounced and it was not possible to estimate the index of the molecule CD26 MFIR).
aGvHD가 발병하지 않는 두 명의 환자에서, 상기 인덱스는 대조군의 범위에 포함되는 MFIR 수치를 나타낸 반면에, 진행 중인 aGvHD를 갖는 세 명의 환자에서, MFIR 수치는 대부분 모든 부분집합에서, 및 특히 상기 sub-T CD3 + CD16 + and CD3 + T CD56 +에서 증가되었다(표 6).
[표 6]
5 명의 건강한 공여체를 평가함으로써 수득된 범위와 함께 비교되고 면역 재구성의 시간에서 평가된 HSCT 를 받은 6명의 환자에서 림프구 부분모집단에서 CDina26 + 세포의 분포( MFIR 로서 측정됨)
Figure pct00006

실시예 4e
CD26의 발현은 또한, 간엽성 줄기 세포(mesenchymal stem cells), 내피 세포 및 섬유아세포에서 연구되었다.
세 개의 실험은, 세 명의 건강한 성인의 골수로부터 유도된 생체외 증식된, 중간엽 줄기 세포(MSCs)를 사용하여 설정되었다. 그러나, CD13 및 CD73에 대한 세포 양성, MSCs의 마커 특성이, CD26(CDina26 항원)의 발현에 대해 음성임을 유세포 분석에 의한 분석은 나타낸다. 세 개의 실험은, 세 명의 건강한 피검자의 탯줄로부터 내피세포(DC)를 사용하여 설정되었다. 내피세포는 CD26(CDina26 항원)의 발현에 대해 음성이다.
세 개의 실험은, 세 명의 건강한 성인으로부터 유도된 피부 섬유아세포를 사용하여 설정되었다. 유세포 분석기에 의한 분석은, 40 %의 섬유아세포는 4 내지 13의 MFIR 인덱스와 함께 CD26(범위 32 % 내지 45 %)을 발현함을 보여준다.
세 개의 실험은, 생체외에서 분화되는 수지상 세포를 사용하여 설정되었다. 그러나, 생체외 분화되는 DC의 마커 특성, CD1a에 대한 세포 양성이 CD26의 발현에 대해 음성임을 유세포 분석은 나타내었다.
상기 유세포 분석은, CD14에 대한 양성의 단핵백혈구 세포가 CD26의 발현에 대해 양성(범위 97 % 내지 100 %), 1 내지 17의 MFIR 인덱스 변수임을 나타낸다.
이러한 데이터는, T 및 NK 부분모집단이 막 표면 상에 CDina26 항원(MFIR)의 발현 또는 퍼센트 둘 다를 증가시킴을 나타낸다.
aGvHD 환자에서, CD26의 증가된 발현은, 건강한 공여체와 비교된 바와 같이, T CD3+CD16+, T CD3+CD56+ 및 NK에서 관찰될 수 있다.
이러한 데이터는, aGvHD에서 면역 반응의 조절에서 이들의 역할과 함께 및 이들의 확장을 간섭하는, 조절성 T 세포를 활성화하기 위해 특이적으로 결합하기 위한, CDina26의 모노클로날 항체 항 CD26의 능력을 요약한다.
실시예 5
임상 연구: 이식편대숙주병(GvHD)의 치료
임상 연구는, aGvHD(급성 이식편대숙주병) 환자에서 CDina26의 안정성 및 효율성을 확립하기 위해 실행되고 있다.
요약
환자는, 연이어 5 일 동안 2 mg/day(하루 당 평균 1,11 mg/m2에 해당하는)의 CDina26의 고정된 투여량을 받은 연구에 등록되었다. 환자에 투여된 상기 조성물은, 코르티코스테로이드 및 항히스타면제와 함께 100 ml의 멸균의 생리식염수에 희석된 체표면적에 따라 2 내지 100 mg 사이의 범위에서 본 발명의 항체를 포함한다. 환자는 이들의 표준 GvHD 치료(treatment)(6-메틸프레드니솔론 1 내지 2mg/kg/day i.v., 및 사이클로스포린)를 받도록 지속되었다. 보조적인 치료는, 통상적인 항균성, 항진균성 및 항바이러스성 치료이었다. 본 출원에서, 상기 단위 mg/m2 및 mg/(m2 체표면적)는 교환하여 사용된다.
이러한 연구의 주요한 평가는, 치료의 5 일 후에 10 일에 평가된, 상기 연구된 치료에 "반응하는(responding)" 환자의 빈도이었다.
반응성의 정의는 하기의 기준을 기준을 기초로 한다:
● 완전한 반응(COMPLETE RESPONSE, CR)→ GvHD의 모든 징후의 해결
● 부분적인 반응(PARTIAL RESPONSE,PR)→ GvHD의 등급(grading)에서의 개선
● 불변(STABILITY) → GvHD의 등급에서의 변화 없음
● 악화(AGGRAVATION) → GvHD의 등급에서의 악화
완전한 또는 부분적인 반응을 갖는 환자는 반응하는 것으로 간주되었다.
[표 7]
Figure pct00007

[표 8]
Figure pct00008

추가적인 평가는 하기와 같은 것을 포함한다:
● GvHD의 시작, 기관에 대한 기관(organ for organ)(이러한 평가는 일 +10(day +10) 및 일 +30에서 실행되었음)
● 감염(infection), 출혈(bleeding), 수혈 필요(transfusion necessity)와 같은 합병증 발생(이러한 평가는 일 +30에서 입원기간이 끝날 때까지 실행되었다);
● 1 년 방문 동안에 하기의 파라미터가 기록되었다: 생존 상태, 카르노프스키 지수(Karnofsky index), 만성의 GvHD, 이식이 실행된 동안에 조혈성 질병의 가능한 재발, 새로운 종양의 가능한 출현(possible appearance).
인구통계학적 및 다른 베이스라인 특성( Demographic and Other Baseline Characteristics )
11 명의 환자는, 효능 평가를 위한 데이터 세트에 포함되었다. 7 명의 환자는 등급 Ⅲ aGavH를 가지고, 한 명의 환자는 등급 Ⅳ GvHD를 가지고, 한 명의 환자는 등급 Ⅱ GvHD를 가졌다.
aGvHD의 시작에 대한 중간의 시접은 10 일이었다(범위 4 내지 73일).
모든 이러한 환자는, 내장 기관 포함(visceral organ involvement) 때문에, 높은 위험으로 고려되는 aGvHD를 가졌다.
효능 평가: 433일 후의 현재 중간에서, 연이은 5 일 동안 매일, 투여된, 2 mg의 CDina26 i.v.에 "반응하는" 환자의 빈도는, 20 명에서 11명(90 %)이었다[the frequency of patients "responding" to 2 mg of CDina26 i.v. daily, administered for five consecutive days, at the current median follow up of 433 days is 11 on 12 (90%)]: 6 명(6) 완전한 반응, 5 명(5) 부분적인 반응 및 1 명(1) 반응 없음.
Glucksberg 급성 GvHD 등급화에서 4 명의 환자(pt. 01, 03, 12, 14)에서의 하기의 데이터. 상기 하기의 약어는 하기의 표에 사용되었다:
pre CDina26은 CDina26으로 처리 전에 환자의 GvHD 등급을 나타내고; best CDina26은 CDina26으로 처리 후에 best patients' GvHD 등급을 나타내고; final CDina26은 가장 최근의 환자의 GvHD 등급 수치를 나타내고; Follow up 수치는 CDina26 처리 후의 날을 나타낸 것이다.
[표 9]
Figure pct00009

도 4a는, 상기 연구에서 환자의 day 1, 10, 30 및 마지막 날(last day) (도 4a에서 "last")에서의 피부 GvHD의 등급화를 나타낸 것이다. 도 4b는, 연구에서 환자의 day 1, 10, 30 및 마지막 날에서 간 GvHD의 등급화를 나타낸 것이다. 도 4c는, 연구에서 환자의 day 1, 10, 30 및 마지막 날에서 소화관 GvHD의 등급화를 나타낸 것이다.
면역 회복( Immune recovery )
면역 결핍은, 급성 GvHD를 갖는 환자에게, 특히, 스테로이드와 장기적인 치료 후에 일반적이고, 감염은, 심각한 조합된 면역 결핍의 결과이다. 도 5는, 6 명의 환자에서 완전한 CD4 계수(absolute CD4 counts)를 나타낸 것이다. CD4 계수는, 상기 항체의 강한 세포용해 활성(strong cytolytic activity)의 경우에 예상되는 바와 같이, 감소(decline)를 나타내는 대신에, CDina26 치료 후에 증가되거나 필수적으로 안정된 상태로 남아있는 경향이 있다. 상기 단위 "counts/ul"는 환자의 혈액의 마이크로리터 당 계수(counts)를 나타낸다.
부작용( adverse events )의 간단한 요약
CDina26의 안정성은 부작용의 검토를 통해 조사되었다. 상기 조혈성 및 호흡기관을 포함하는 심각한 유독성은, 조건부 투약계획(conditioning regimen) 및 이식 처리(transplant process)의 예상된 경과로서 간주되었다. 전체적인 8의 심각한 및 26의 비-심각한 부작용은, CDina26 처리와 관련되지 않은 것으로 보고되었다. 가장 흔하게 보고된 부작용은, 상기 SOCs(기관계, System Organ Classes) "감염 및 체내 침입(infections and infestations)"(n=5), "신장 및 비교기의 질환"(n=5), "호흡기, 흉부 및 종격 질환(Respiratory, thoracic and mediastinal disorders)"(n=5) 및 "피부 및 피하 조직 질환(subcutaneous tissue disorders)"(n=4)에 관한 것이었다.
감염은 급성 GvHD 및 스테로이드 치료의 빈번한 합병증이다. 따라서, 이는 상기 환자에서 다수의 전염성 에피소드를 나타내는 것으로 예상되었다.
8 명의 치명적인 부작용은 Day +100 후에 발생되었다. 이들 중에 어떠한 것도 CDina26과 치료와 관련된 것으로 간주되지 않았다.
동종이계 조혈성 줄기 세포 이식 후에 스테로이드-저항 급성 이식편대숙주병이 높은 사망률과 연관되어 있는 사실로 인하여, 상기 이식 관련된 사망률(aGvHD와 연관된 것의 대다수, 이식 관련된 합병증으로 인한 사망)이 평가되었다.
CDina26으로 처리된 모든 환자를 고려하여, 상기 치료로부터 6 개월 후에, 이식 관련된 사망률(TRM)의 발생 정도는 25 % 이다(12 명 중의 3 명). TRM 중에, 두 명의 환자가 GvHD로부터 사망하였다. 이러한 것들 중에 어떠한 것도 CDina26과의 처리와 관련되어 있다.
도 6은, 스테로이드 사이클로스포린 및 CDina26으로 처리된 9 명의 환자와 비교된, 스테로이드, 사이클로스포린 및 다른 면역억제제 약물로 처리된, 등급 Ⅲ-Ⅳ 급성 GvHD로 13 명의 대조군 환자의 이식 관련된 사망률의 계획된 누적 발생률을 나타낸다.
CDina26를 받은 9 명의 환자에서 이식 관련된 사망률의 누적 발생률은, CDina26를 받지 않은 일치된 대조군에 대한 62 %와 비교된, 현재 12 % 이다(p=0.02).
도 7은, 스테로이드, 사이클로스포린 및 CDina26로 처리된 9 명의 환자와 비교된, 스테로이드, 사이클로스포린 및 다른 면역억제제 약물로 처리된, 등급 Ⅲ-Ⅳ 급성 GvHD를 갖는 13 명의 대조군 환자의 계획된 보험통계의 생존률(projected actuarial Survival)을 나타낸다. 상기 p 수치는 0.2 이다.
결론적으로, CDina26 환자는, 비-CDina26 환자, 즉 CDina26로 처리되지 않은 환자보다 더 낮은 사망률을 나타내었다.
결론
11 명의 환자에서 스테로이드 난치 급성 GvHD에 대한 CD26 치료에 대항하는 쥐과 모노클로날 항체의 결과는 반응 및 생존의 면에서 둘 다, 매우 권장된다. 이러한 환경에서 어떠한 효과적인 치료학적 측정의 결여가 제공됨, 및 지난 30 년 간의 CDina26 상의 결과 및 치료에서의 어떠한 개선의 결여가 제공됨, 생존하는 환자의 높은 비율 및 반응의 높은 속도를 결과적으로 나타낸다(Given the lack of any effective therapeutic measure in these circumstances, and given the lack of any improvement in therapy and outcome over the past 3 decades CDina26 resulted in a high rate of responses and a high proportion of surviving patients). 이식 사망률(TRM)이 상기 이식에 직접적으로 기여하고, 이의 합병증은 CD26에 대항하는 쥐과의 모노클로날 항체를 받지 않은 GvHD Ⅲ-Ⅳ과 함께 대조군 환자에 대해 62 %이고, CDina26을 받은 환자에 대해 25 %임을 주목하여야 한다. 우리는, 이러한 결과가 임상의에게 유망한 것으로 여겨진다.
실시예 6
본 발명의 적어도 하나의 항체, 특히 PD　12002 하이브리도마 세포주 기탁물에 의해 생산된 항체, CDina26를 포함하는 약제학적 조성물은, 예를 들어 하기의 구성(composition)을 갖는다:
[표 10]
Figure pct00010

이러한 약제학적 조성물은, 특히 정맥 주사에 의해 투여될 수 있다.
실시예 7
SSA (중증 재생 불량성 빈혈)의 치료
후천성 SSA를 갖는 한 명의 환자는, 동종이계 HSCT 후에 범혈구감소증(pancytopenia)이 발병되었다. 상기 환자는, 무형성증(aplasia)을 일으키는, 자동-공격성 T 세포의 지속성을 나타내는 혼합된 CD3 키메라 현상(chimerism)[37 % 자가 조직(autologous)]을 갖는다. 골수 세포에서의 공여체 키메라 현상은 100 % 공여체이었다.
상기 환자는 데이 호스피털(Day Hospital)에서, 통원환자로서, 5 일 동안 항-CD26 모노클로날 항체 CDina26, 2 mg/day i.v.(정맥내 투여를 위한 용액의 형태로 제공된 2 mg의 CDina26)의 코스를 받았다. 치료는 어떠한 부작용 없이 잘 용인되었다.
치료 후의 환자의 혈구 계수(blood count)는 하기와 같다:
Hb WBC Pt
치료 전 120 일 10 1.7 70
치료 전 7 일 8,9 1,6 12
5일 동안에 항- CD26 항체로의 처리가 실행되었다.
치료 후 6 일 8,4 2,6 22
치료 후 20 일 7,6 2,5 22
치료 후 31 일 10,4 4,8 32
치료 후 48 일 9,2 3,9 42
치료 후 87 일 9,7 4,4 66
(혈구 계수는, 항-CD26 항체와, 처리 후 87 일, 즉 처리 후에 거의 3 달에 수득되었다). 하기의 약어가 사용되었다: Hb (헤모글로빈), WBC (백혈구), Pt (혈소판). 상기 데이터는, CD26의 저해가 줄기 세포 귀소성(stem cell homing)에서의 역할, 및 이의 면역 조절 효과(immunomodulatory effect)로 인하여, 후천성 SAA를 갖는 환자에게 유익할 수 있음을 나타낸다.
실시예 8
PD 12002 에피토프의 맵핑( Mapping )
PD 12002로서 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 상기 CDina26에 의해 인식된 상기 에피토프는, CLIPSTM 에피토프 맵핑 기술에 의해 확인되고 있다. 예를 들어, 이의 전체가 참고문헌으로 본원에 포함되는, US 7863239 및 US 7972993를 참고하라. 간단하게, CLIPSTM 기술은, 정의된 삼차원 구조 내로 펩티드를 구조적으로 고정한다. 이는, 대부분 복잡한 결합 부위에서의 기능적인 모방(functional mimics)을 결과적으로 나타낸다. 상기 CLIPSTM 반응은, 상기 CLIPSTM 스케폴드의 브로모 기(bromo group)와 시스테인의 티올 곁사슬 사이에 발생한다. 상기 반응은 온화한 조건(mild condition) 하에서 빠르고 특이적이다(Timmerman et al., J. Mol. Recognit. 2007; 20: 283-29).
CLIPSTM 라이브러리 스크리닝(library screening)은, 조합의 매트릭스 디자인(combinatorial matrix design)을 사용한, 펩티드 구조물의 중복된 라이브러리 내로 상기 인간 CD26 타겟 단백질의 전환(conversion)과 함께 출발한다. 고체의 캐리어 상에, 공간적으로 정의된 CLIPSTM 구조물 내로 그 다음에 형성된, 선형 펩티드의 매트릭스는 합성되었다. 정확한 형태에서의 불연속적인 에피토프의 몇몇의 부분을 나타내는 구조물은, 검출되고 정량화되는, 높은 친화력을 갖는 항체에 결합한다. 상기 불완전한 에피토프를 나타내는 구조물은 더 낮은 친화도를 갖는 상기 항체에 결합하는 반면에, 상기 에피토프를 포함하지 않는 구조물은 모두에 결합하지 않는다. 친화력 정보는, 상세하게 에피토프의 형태 및 서열을 정의하기 위해 반복 스크린(iterative screens)에 사용된다.
첫 째로, 상기 인간 CD26 단백질 서열의 아데노신 디아미나제 결합 도메인(adenosine deaminase binding domain)(SEQ ID NO: 144의 잔기 356 내지 522)은, 상세한 분석(in-depth analysis)을 위해 선택되었다. CD26의 이러한 영역은 확장되고, SEQ ID NO: 144의 잔기 260 내지 400, 및 380 내지 538의, 두 개의 중복되는 도메인 내로 분열되었다. 경쟁적 결합 검정은, CDina26이 인간 CD26의 잔기 R358에 가깝게 배치된 에피토프를 인식함을 나타낸다(SEQ ID NO: 144).
둘째로, CD26의 전체 5833 중복하는 펩티드는 합성되었고, CDina26에 의한 특이적인 결합에 대해 테스트되었다. 선형 펩티드의 분석은, CDina26에 의해 특이적으로 인식되는 다수의 영역을 확인하였다. CD26의 4 개의 영역은 특정한 결합을 나타낸다:
WWSPNGTFLAYAQ (SEQ ID NO: 144의 잔기 215 내지 227에 대응하는 SEQ ID NO: 148),
QLRCSGPGLPLYTLH (SEQ ID NO: 144의 잔기 466 내지 483에 대응하는 SEQ ID NO: 149)
LNETKFWYQMILP (SEQ ID NO: 144의 잔기 519 내지 531에 대응하는 SEQ ID NO: 150)
MGFVDNKRIAIWGWSY (SEQ ID NO: 144의 잔기 616 내지 631에 대응하는 SEQ ID NO: 151).
CD26의 이러한 4 개의 영역은, 상기 공개된 결정 구조에서 간격으로 간격을 둔 것으로 보이고, 따라서 CDina26에 대한 단일 불연속 에피토프를 모두 형성할 수도 없다. 게다가, 상기 공개된 CD26 결정 구조를 기초로, 4 개의 영역 중 3 개는, CD26 내에 전체적으로 파묻힌 것으로 보이다. 상기 예외는, PNGTF(SEQ ID NO: 144의 잔기 218 내지 222에 대응하는 SEQ ID NO: 152) 잔기에서 적어도 노출된 표면인, WWSPNGTFLAYAQ(SEQ ID NO: 148)이다.
셋째로, CD26의 세 가지 별개의 표면 영역은 불연속적인 에피토프의 분석에 대해 선택되었다. 매트릭스 1 은, 상기 촉매 영역(SEQ ID NO: 144의 잔기 260 내지 400에 대응함)의 근처에서의 촉매 영역 및 N-말단 영역을 포함한다(cover). 매트릭스 2는, 세트 매트릭스 1(SEQ ID NO: 144의 잔기 380 내지 538에 대응함)과 부분적으로 중복하는 상기 촉매 영역에 근접하여 상기 촉매 영역 및 C-말단 영역을 포함한다. 최종적으로, 매트릭스 3은, 면역-우세 구조(SEQ ID NO: 144의 잔기 226 내지 252에 대응함)를 형성하는, CD26으로부터의 특정한 돌출 루프(specific protruding loop)를 포함한다.
선형 펩티드와 비교된, 상기 불연속적인 펩티드는 상대적으로 더 낮은 신호를 나타내는 반면에, 상기 신호는 보다 일관되었다. 3 개의 매트릭스로 수득된 결과가 함께 취해진 경우에, CD26의 다수의 CDina26 결합 영역이 확인되었다.
SEQ ID NO: 144의 잔기 226 내지 252에 대응하는 CD26의 돌출 루프에 집중된, 매트릭스 3은, 중요한 CDina26 결합과 함께 어떠한 영역을 확인하지 않았다.
매트릭스 1[SEQ ID NO: 144의 잔기 260 내지 400에 대응하는 집중 영역(focus region)의 N-말단]은 3 CDina26 결합 영역을 산출하였다(yielded):
DYDESSGRWNCLVAR (SEQ ID NO: 144의 잔기 329 내지 343에 대응하는 SEQ ID NO: 146),
DVTWATQERISLQWL (SEQ ID NO: 144의 잔기 302 내지 316에 대응하는 SEQ ID NO: 147),
TTGWVGRFRPSEPHF (SEQ ID NO: 144의 잔기 350 내지 364에 대응하는 SEQ ID NO: 153).
가장 강한 결합은, DYDESSGRWNCLVAR (SEQ ID NO: 146)에서 관찰되었다. DYDESSGRWNCLVAR (SEQ ID NO: 146)을 포함하는 펩티드가 단지 고려되지 않은 경우에, 최고의 펩티드는, RFRPSEPHF (SEQ ID NO: 144의 잔기 356 내지 364에 대응하는 SEQ ID NO: 154)를 또한 포함하는 것들이었다. RFRPSEPHF (SEQ ID NO: 154)는 상기에 언급된 특정한 R358 잔기를 포함한다. 결합에서 상기 특정한 부가 효과는, DYDESSGRWNCLVAR(SEQ ID NO: 146) 및 TTGWVGRFRPSEPHF(SEQ ID NO: 153)을 포함하는 불연속적인 에피토프를 타겟팅(targeting)하는 CDina26 항체와 일관되었다. 다른 실시 형태에서, 상기 에피토프는 DVTWATQERISLQWL(SEQ ID NO: 147)를 더 포함한다.
매트릭스 2는 4 개의 결합 영역을 산출하였다:
TFITKGTWEVIG (SEQ ID NO: 144의 잔기 395 내지 406에 대응하는 SEQ ID NO: 155)
DYLYYISNE (SEQ ID NO: 144의 잔기 413 내지 421에 대응하는 SEQ ID NO: 156)
SCELNPERCQYY (SEQ ID NO: 144의 잔기 446 내지 457에 대응하는 SEQ ID NO: 157)
SGPGLP (SEQ ID NO: 144의 잔기 473 내지 478에 대응하는 SEQ ID NO: 158).
상기 매트릭스 2 영역에 결합하는 CDina26은, DYDESSGRWNCLVAR (SEQ ID NO: 146)에 결합하는 것보다 더 약했다. 상기 공개된 CD26 결정 구조를 기초로, 영역 DYLYYISNE (SEQ ID NO: 156) 및 SGPGLP (SEQ ID NO: 158)는, 상기 단백질 내로 주로 감춰진 것 같다. 영역 TFITKGTWEVIG (SEQ ID NO: 155) 및 SAELNPERCQYY (SEQ ID NO: 157)는 표면 노출되고, 항체에 의해 접근가능하다.
CD26에서 상기 7 개의 확인된 불연속적인 결합 영역에 결합하는 CDina26의 시각 비교(visual comparison)에서, 상기 7 개는, 하나의 상기 확인된 결합 서열을 포함하는 모두 불연속적인 펩티드에 대한 상기 평균 결합을 나타내는 도 12에 기재되어 있다. 여기서, DYDESSGRWNCLVAR (SEQ ID NO: 146)는 가장 강한 결합인 반면에, DVTWATQERISLQWL (SEQ ID NO: 147)는 TTGWVGRFRPSEPHF (SEQ ID NO: 153)보다 약간 더 강하다.
상기 가장 강한 결합 영역, DYDESSGRWNCLVAR (SEQ ID NO: 146)은, 상기 공개된 CD26 결정 구조를 기초로 하는 상기 표면에 주로 노출되었다. 영역 TTGWVGRFRPSEPHF (SEQ ID NO: 153)은 상기 단백질 내로 거의 완전하게 숨겨져 있다. 영역 DVTWATQERISLQWL (SEQ ID NO: 147)은 ATQER (SEQ ID NO: 144의 잔기 306 내지 310에 대응하는 SEQ ID NO: 159)에 부분적으로 노출되고, DYDESSGRWNCLVAR (SEQ ID NO: 146)에 인접하여 위치된다.
상기 에피토프 맵핑 결과는, DYDESSGRWNCLVAR (SEQ ID NO: 146)를 포함하는 CD26의 불연속적인 에피토프를 특이적으로 결합하는 CDina26과 일관되었다. 하나의 실시 형태에서, 상기 불연속적인 에피토프는, DVTWATQERISLQWL (SEQ ID NO: 147) 및 PNGTF (SEQ ID NO: 152)의 하나 또는 둘 다를 더 포함한다. PNGTF (SEQ ID NO: 152)가 인간과 돼지 CD26 사이에 보존되어 있는 반면에, 상기 에피토프의 다른 성분에서 상기 서열 차이점[인간과 돼지 사이에 보존되지 않은, DYDESSGRWNCLVAR (SEQ ID NO: 146)와 같은]은 원래의 돼지 CD26(native pig CD26)에 대한 CDina26의 결합을 파괴하는데 충분하다. 다른 실시 형태에서, 상기 에피토프는 WWSPNGTFLAYAQ (SEQ ID NO: 148)를 더 포함한다.
실시예 9
CD26 에 대한 CDina26 의 결합 친화력
표면 플라즈몬 공명 시스템(Surface Plasmon Resonance system)(Biacore®)은, 표준 프로토콜에 따라 인간 CD26에 대한 CDina26의 친화력을 결정하는데 사용되었다. 친화력 측정은 25 ℃에서 취해지고, 항-IgG2b 항체(GE Healthcare, 22-0648-97 AC)의 카르복시메틸 덱스트란 칩(CM5) 10.000 RU 상에 고정화되었다. CDina26은, 50 ㎍/ml의 최종의 농도에서 HBS-EP (0.01M HEPES, pH 7.4, 0.15M NaCl, 3 mM EDTA, 0.005 % 계면활성제 P20) 러닝 완충용액(running buffer)에서 스톡(stock)으로서 제조되었고, 각각의 실험에 대해, 2.000 RU는, 180 초의 기간에 10 μl/min의 흐름과 함께 주사에 의해 상기 칩 상에 가역적으로 고정화되었다(reversibly immobilized).
정제된 재조합 인간 CD26(rhDipeptidyl peptidase IV; Creative BioMart; CAT# DPP4-116H)는 5,8x10-6 M의 스톡 농도로 제조되었다. CD26은 30x10-9, 90x10-9 M,270x10-9 M 및 810x10-9 M의 증가하는 농도로 주사되었다. 상기 CD26 샘플은, 러닝 완충용액으로서 사용된 HBS-EP 완충용액과 함께; 10 μl/분의 유량(flow)으로 주사되었다. 일반적인 기록은, 상기 CD26의 주사의 3 분의 기간 다음에 분리의 8 분의 기간을 포함한다(A typical recording included a 3 minutes period of injection of the CD26 followed by a period of 8 minutes of dissociation). 가공처리되지 않은 결합 데이터(raw binding data)는 표준 방법에 따라 분석되었다. 항-IgG2b 항체와 함께 CM5 칩은, 60 초의 기간 및 20 μl/min 의 주사의 유량과 함께 10 mM Glycin-HCl pH 1.7의 주사에 의해 재생되었다.
CDina26에 대한 상기 친화력 측정의 결과는 하기에 나타낸 것이다. 출원인은, 상기 CDina26이 상기 선행기술 항체와 비교된 보다 우수한 결합 특성을 보유하고 있고, 따라서 상기 선행기술 이상의 현저한 향상을 나타내는 것으로 여겨진다.
Figure pct00011

본 발명의 상기 기재된 조성물 및 방법의 다양한 변형 및 변화는, 본 발명의 범위 및 본질로부터 벗어남이 없이 본 분야의 숙련자에게 명백할 것이다. 상기 발명이 특정한 실시 형태와 관련하여 기재되었을지라도, 이는 이러한 특정한 실시 형태로 지나치게 한정되지 말아야 함을 이해하여야 한다. 실제로, 상기 관련된 분야에서 이러한 것들에 대한 명백한, 본 발명을 실행하기 위한 상기 기재된 방법의 다양한 변형은, 하기의 특허청구범위의 범위 내에 있음을 의도한다.
참고문헌
이들이 이미 포함되지 않은 정도로, 예를 들어, 특허 공개, 특허 출원, 교과서, 과학 출판물을 포함하는, 본원에서 인용된 모든 참고문헌은, 이들의 전체에서 참고문헌으로 본원에 의해 포함된다. 게다가, 상기 하기의 참고문헌은, 이러한 참고문헌에 인용된 참고문헌을 포함하는, 이들의 전체가 본원에 참고문헌에 의해 또한 포함된다 :
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
SEQUENCE LISTING <110> ADIENNE Srl <120> Anti-CD 26 antibodies and uses thereof <130> 6459-X-2972 EP <150> EP13425029 <151> 2013-02-19 <160> 159 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-H3 Heavy <400> 1 Trp Thr Val Val Gly Pro Gly Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L3 Light Group1 <400> 2 Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Asn Thr 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L3 Light Group3 <400> 3 Gly Gln Gly Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 4 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL prevalent group 1 <400> 4 Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile 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PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ABR2* Light group 3 <400> 139 Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr 1 5 10 <210> 140 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ABR3* Light group 3 <400> 140 Gly Gln Gly Tyr Ser Tyr Pro Tyr 1 5 <210> 141 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ABR1h Heavy group 1 <400> 141 Tyr Thr Phe Arg Ser Tyr Asp Ile Asn 1 5 <210> 142 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ABR2h Heavy group 2 <400> 142 Trp Ile Gly Trp Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr 1 5 10 <210> 143 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ABR3h Heavy group 3 <400> 143 Arg Trp Thr Val Val Gly Pro Gly Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 144 <211> 766 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> >gi|197692677|dbj|BAG70302.1| dipeptidylpeptidase IV <400> 144 Met Lys Thr Pro Trp Lys Val Leu Leu Gly Leu Leu Gly Ala Ala Ala 1 5 10 15 Leu Val Thr Ile Ile Thr Val Pro Val Val Leu Leu Asn Lys Gly Thr 20 25 30 Asp Asp 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Leu Gln Tyr Pro Lys Thr Val Arg Val Pro Tyr 245 250 255 Pro Lys Ala Gly Ala Val Asn Pro Thr Val Lys Phe Phe Val Val Asn 260 265 270 Thr Asp Ser Leu Ser Ser Val Thr Asn Ala Thr Ser Ile Gln Ile Thr 275 280 285 Ala Pro Ala Ser Met Leu Ile Gly Asp His Tyr Leu Cys Asp Val Thr 290 295 300 Trp Ala Thr Gln Glu Arg Ile Ser Leu Gln Trp Leu Arg Arg Ile Gln 305 310 315 320 Asn Tyr Ser Val Met Asp Ile Cys Asp Tyr Asp Glu Ser Ser Gly Arg 325 330 335 Trp Asn Cys Leu Val Ala Arg Gln His Ile Glu Met Ser Thr Thr Gly 340 345 350 Trp Val Gly Arg Phe Arg Pro Ser Glu Pro His Phe Thr Leu Asp Gly 355 360 365 Asn Ser Phe Tyr Lys Ile Ile Ser Asn Glu Glu Gly Tyr Arg His Ile 370 375 380 Cys Tyr Phe Gln Ile Asp Lys Lys Asp Cys Thr Phe Ile Thr Lys Gly 385 390 395 400 Thr Trp Glu Val Ile Gly Ile Glu Ala Leu Thr Ser Asp Tyr Leu Tyr 405 410 415 Tyr Ile Ser Asn Glu Tyr Lys Gly Met Pro Gly Gly Arg Asn Leu Tyr 420 425 430 Lys Ile Gln Leu Ser Asp Tyr Thr Lys Val Thr Cys Leu Ser Cys Glu 435 440 445 Leu Asn Pro Glu Arg Cys Gln Tyr Tyr Ser Val Ser Phe Ser Lys Glu 450 455 460 Ala Lys Tyr Tyr Gln Leu Arg Cys Ser Gly Pro Gly Leu Pro Leu Tyr 465 470 475 480 Thr Leu His Ser Ser Val Asn Asp Lys Gly Leu Arg Val Leu Glu Asp 485 490 495 Asn Ser Ala Leu Asp Lys Met Leu Gln Asn Val Gln Met Pro Ser Lys 500 505 510 Lys Leu Asp Phe Ile Ile Leu Asn Glu Thr Lys Phe Trp Tyr Gln Met 515 520 525 Ile Leu Pro Pro His Phe Asp Lys Ser Lys Lys Tyr Pro Leu Leu Leu 530 535 540 Asp Val Tyr Ala Gly Pro Cys Ser Gln Lys Ala Asp Thr Val Phe Arg 545 550 555 560 Leu Asn Trp Ala Thr Tyr Leu Ala Ser Thr Glu Asn Ile Ile Val Ala 565 570 575 Ser Phe Asp Gly Arg Gly Ser Gly Tyr Gln Gly Asp Lys Ile Met His 580 585 590 Ala Ile Asn Arg Arg Leu Gly Thr Phe Glu Val Glu Asp Gln Ile Glu 595 600 605 Ala Ala Arg Gln Phe Ser Lys Met Gly Phe Val Asp Asn Lys Arg Ile 610 615 620 Ala Ile Trp Gly Trp Ser Tyr Gly Gly Tyr Val Thr Ser Met Val Leu 625 630 635 640 Gly Ser Gly Ser Gly Val Phe Lys Cys Gly Ile Ala Val Ala Pro Val 645 650 655 Ser Arg Trp Glu Tyr Tyr Asp Ser Val Tyr Thr Glu Arg Tyr Met Gly 660 665 670 Leu Pro Thr Pro Glu Asp Asn Leu Asp His Tyr Arg Asn Ser Thr Val 675 680 685 Met Ser Arg Ala Glu Asn Phe Lys Gln Val Glu Tyr Leu Leu Ile His 690 695 700 Gly Thr Ala Asp Asp Asn Val His Phe Gln Gln Ser Ala Gln Ile Ser 705 710 715 720 Lys Ala Leu Val Asp Val Gly Val Asp Phe Gln Ala Met Trp Tyr Thr 725 730 735 Asp Glu Asp His Gly Ile Ala Ser Ser Thr Ala His Gln His Ile Tyr 740 745 750 Thr His Met Ser His Phe Ile Lys Gln Cys Phe Ser Leu Pro 755 760 765 <210> 145 <211> 766 <212> PRT <213> Sus scrofa <220> <221> misc_feature <223> >gi|47523582|ref|NP_999422.1| dipeptidyl peptidase 4 <400> 145 Met Lys Thr Pro Trp Lys Val Leu Leu Gly Leu Leu Gly Ile Ala Ala 1 5 10 15 Leu Val Thr Val Ile Thr Val Pro Val Val Leu Leu Asn Lys Gly Thr 20 25 30 Asp Asp Ala Ala Ala Asp Ser Arg Arg Thr Tyr Thr Leu Thr Asp Tyr 35 40 45 Leu Lys Ser Thr Phe Arg Val Lys Phe Tyr Thr Leu Gln Trp Ile Ser 50 55 60 Asp His Glu Tyr Leu Tyr Lys Gln Glu Asn Asn Ile Leu Leu Phe Asn 65 70 75 80 Ala Glu Tyr Gly Asn Ser Ser Ile Phe Leu Glu Asn Ser Thr Phe Asp 85 90 95 Glu Leu Gly Tyr Ser Thr Asn Asp Tyr Ser Val Ser Pro Asp Arg Gln 100 105 110 Phe Ile Leu Phe Glu Tyr Asn Tyr Val Lys Gln Trp Arg His Ser Tyr 115 120 125 Thr Ala Ser Tyr Asp Ile Tyr Asp Leu Asn Lys Arg Gln Leu Ile Thr 130 135 140 Glu Glu Arg Ile Pro Asn Asn Thr Gln Trp Ile Thr Trp Ser Pro Val 145 150 155 160 Gly His Lys Leu Ala Tyr Val Trp Asn Asn Asp Ile Tyr Val Lys Asn 165 170 175 Glu Pro Asn Leu Ser Ser Gln Arg Ile Thr Trp Thr Gly Lys Glu Asn 180 185 190 Val Ile Tyr Asn Gly Val Thr Asp Trp Val Tyr Glu Glu Glu Val Phe 195 200 205 Ser Ala Tyr Ser Ala Leu Trp Trp Ser Pro Asn Gly Thr Phe Leu Ala 210 215 220 Tyr Ala Gln Phe Asn Asp Thr Glu Val Pro Leu Ile Glu Tyr Ser Phe 225 230 235 240 Tyr Ser Asp Glu Ser Leu Gln Tyr Pro Lys Thr Val Arg Ile Pro Tyr 245 250 255 Pro Lys Ala Gly Ala Glu Asn Pro Thr Val Lys Phe Phe Val Val Asp 260 265 270 Thr Arg Thr Leu Ser Pro Asn Ala Ser Val Thr Ser Tyr Gln Ile Val 275 280 285 Pro Pro Ala Ser Val Leu Ile Gly Asp His Tyr Leu Cys Gly Val Thr 290 295 300 Trp Val Thr Glu Glu Arg Ile Ser Leu Gln Trp Ile Arg Arg Ala Gln 305 310 315 320 Asn Tyr Ser Ile Ile Asp Ile Cys Asp Tyr Asp Glu Ser Thr Gly Arg 325 330 335 Trp Ile Ser Ser Val Ala Arg Gln His Ile Glu Ile Ser Thr Thr Gly 340 345 350 Trp Val Gly Arg Phe Arg Pro Ala Glu Pro His Phe Thr Ser Asp Gly 355 360 365 Asn Ser Phe Tyr Lys Ile Ile Ser Asn Glu Glu Gly Tyr Lys His Ile 370 375 380 Cys His Phe Gln Thr Asp Lys Ser Asn Cys Thr Phe Ile Thr Lys Gly 385 390 395 400 Ala Trp Glu Val Ile Gly Ile Glu Ala Leu Thr Ser Asp Tyr Leu Tyr 405 410 415 Tyr Ile Ser Asn Glu His Lys Gly Met Pro Gly Gly Arg Asn Leu Tyr 420 425 430 Arg Ile Gln Leu Asn Asp Tyr Thr Lys Val Thr Cys Leu Ser Cys Glu 435 440 445 Leu Asn Pro Glu Arg Cys Gln Tyr Tyr Ser Ala Ser Phe Ser Asn Lys 450 455 460 Ala Lys Tyr Tyr Gln Leu Arg Cys Phe Gly Pro Gly Leu Pro Leu Tyr 465 470 475 480 Thr Leu His Ser Ser Ser Ser Asp Lys Glu Leu Arg Val Leu Glu Asp 485 490 495 Asn Ser Ala Leu Asp Lys Met Leu Gln Asp Val Gln Met Pro Ser Lys 500 505 510 Lys Leu Asp Val Ile Asn Leu His Gly Thr Lys Phe Trp Tyr Gln Met 515 520 525 Ile Leu Pro Pro His Phe Asp Lys Ser Lys Lys Tyr Pro Leu Leu Ile 530 535 540 Glu Val Tyr Ala Gly Pro Cys Ser Gln Lys Val Asp Thr Val Phe Arg 545 550 555 560 Leu Ser Trp Ala Thr Tyr Leu Ala Ser Thr Glu Asn Ile Ile Val Ala 565 570 575 Ser Phe Asp Gly Arg Gly Ser Gly Tyr Gln Gly Asp Lys Ile Met His 580 585 590 Ala Ile Asn Arg Arg Leu Gly Thr Phe Glu Val Glu Asp Gln Ile Glu 595 600 605 Ala Thr Arg Gln Phe Ser Lys Met Gly Phe Val Asp Asp Lys Arg Ile 610 615 620 Ala Ile Trp Gly Trp Ser Tyr Gly Gly Tyr Val Thr Ser Met Val Leu 625 630 635 640 Gly Ala Gly Ser Gly Val Phe Lys Cys Gly Ile Ala Val Ala Pro Val 645 650 655 Ser Lys Trp Glu Tyr Tyr Asp Ser Val Tyr Thr Glu Arg Tyr Met Gly 660 665 670 Leu Pro Thr Pro Glu Asp Asn Leu Asp Tyr Tyr Arg Asn Ser Thr Val 675 680 685 Met Ser Arg Ala Glu Asn Phe Lys Gln Val Glu Tyr Leu Leu Ile His 690 695 700 Gly Thr Ala Asp Asp Asn Val His Phe Gln Gln Ser Ala Gln Leu Ser 705 710 715 720 Lys Ala Leu Val Asp Ala Gly Val Asp Phe Gln Thr Met Trp Tyr Thr 725 730 735 Asp Glu Asp His Gly Ile Ala Ser Asn Met Ala His Gln His Ile Tyr 740 745 750 Thr His Met Ser His Phe Leu Lys Gln Cys Phe Ser Leu Pro 755 760 765 <210> 146 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> >CD26 EPITOPE 1 <400> 146 Asp Tyr Asp Glu Ser Ser Gly Arg Trp Asn Cys Leu Val Ala Arg 1 5 10 15 <210> 147 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> >CD26 EPITOPE 2 <400> 147 Asp Val Thr Trp Ala Thr Gln Glu Arg Ile Ser Leu Gln Trp Leu 1 5 10 15 <210> 148 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> >CD26 EPITOPE 3 <400> 148 Trp Trp Ser Pro Asn Gly Thr Phe Leu Ala Tyr Ala Gln 1 5 10 <210> 149 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> >CD26 EPITOPE 4 <400> 149 Gln Leu Arg Cys Ser Gly Pro Gly Leu Pro Leu Tyr Thr Leu His 1 5 10 15 <210> 150 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> >CD26 EPITOPE 5 <400> 150 Leu Asn Glu Thr Lys Phe Trp Tyr Gln Met Ile Leu Pro 1 5 10 <210> 151 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> >CD26 EPITOPE 6 <400> 151 Met Gly Phe Val Asp Asn Lys Arg Ile Ala Ile Trp Gly Trp Ser Tyr 1 5 10 15 <210> 152 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> >CD26 EPITOPE 7 <400> 152 Pro Asn Gly Thr Phe 1 5 <210> 153 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> > CD26 EPITOPE 8 <400> 153 Thr Thr Gly Trp Val Gly Arg Phe Arg Pro Ser Glu Pro His Phe 1 5 10 15 <210> 154 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> >CD26 EPITOPE 9 <400> 154 Arg Phe Arg Pro Ser Glu Pro His Phe 1 5 <210> 155 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> >CD26 EPITOPE 10 <400> 155 Thr Phe Ile Thr Lys Gly Thr Trp Glu Val Ile Gly 1 5 10 <210> 156 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> >CD26 EPITOPE 11 <400> 156 Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ile Ser Asn Glu 1 5 <210> 157 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> >CD26 EPITOPE 12 <400> 157 Ser Cys Glu Leu Asn Pro Glu Arg Cys Gln Tyr Tyr 1 5 10 <210> 158 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> >CD26 EPITOPE 13 <400> 158 Ser Gly Pro Gly Leu Pro 1 5 <210> 159 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> >CD26 EPITOPE 14 <400> 159 Ala Thr Gln Glu Arg 1 5

Claims (40)

  1. 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, CD26에 특이적으로 결합하는 분리된 항체로서,
    상기 중쇄 가변 영역은 서열 WTVVGPGYFDV(SEQ ID NO: 1)을 포함하고, 및/또는 상기 경쇄 가변 영역은 서열 QQRSSYPNT(SEQ ID NO: 2) 및/또는 서열 GQGYSYPYT(SEQ ID NO: 3)을 포함하는 것인, 항체.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 1에 기재된 서열을 포함하는 CDR3을 포함하고, 및/또는 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열 및/또는 SEQ ID NO: 2에 기재된 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 것인, 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 중쇄 가변 영역은, PD 12002로서 Genoa(이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 것인, 항체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 중쇄 가변 영역은, SEQ ID NO: 133에 기재된 서열을 포함하는 VH CDR1 및 SEQ ID NO: 134에 기재된 서열을 포함하는 VH CDR2, 및 SEQ ID NO: 1에 기재된 서열을 포함하는 VH CDR3를 포함하는 것인, 항체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 경쇄 가변 영역은, PD 12002로서 Genoa(이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 것인, 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 경쇄 가변 영역은, SEQ ID NO: 129 또는 131에 기재된 서열을 포함하는 VL CDR1, SEQ ID NO: 130 또는 132에 기재된 서열을 포함하는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 2 또는 3에 기재된 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함하는 것인, 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 경쇄 가변 영역은,
    a. SEQ ID NO: 129에 기재된 서열을 포함하는 VL CDR1, SEQ ID NO: 130에 기재된 서열을 포함하는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 2에 기재된 서열을 포함하는 VL CDR3; 또는
    b. SEQ ID NO: 131에 기재된 서열을 포함하는 VL CDR1, SEQ ID NO: 132에 기재된 서열을 포함하는 VL CDR2, 및 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열을 포함하는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인, 항체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 경쇄 가변 영역은, SEQ ID NOs: 4, 5, 및 6 내지 21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열의 변이체, 및 SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열의 변이체를 포함하고, SEQ ID NO: 4의 상기 변이체는 SEQ ID NO: 4와 적어도 90 % 서열 동일성을 가지고, SEQ ID NO: 5의 상기 변이체는 SEQ ID NO: 5와 적어도 90 % 서열 동일성을 가지는 것인, 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 경쇄 가변 영역은, SEQ ID NOs: 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인, 항체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 중쇄 가변 영역은, SEQ ID NOs: 22 내지 47 및 이의 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 변이체는 SEQ ID NOs: 22 내지 47로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90 % 서열 동일성을 갖는 것인, 항체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 항체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는, PD 12002로서 Genoa(이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체로서 동일한 중쇄 서열 및 동일한 경쇄 서열을 포함하는 것인, 항체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 경쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 48 및 이의 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 변이체는 SEQ ID NO: 48과 적어도 90 % 서열 동일성을 갖는 것인, 항체.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA, IgD 및 IgE로 이루어진 군으로부터 선택된 항체 이소타입(antibody isotype)을 갖는 것인, 항체.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 IgG 2B 클래스의 것이고(said antibody being of IgG 2B class), 및/또는 상기 항체는 SEQ ID NO: 49에 기재된 아미노산 서열, 또는 이의 변이체를 포함하고, 상기 변이체는 SEQ ID NO: 49와 적어도 90 % 서열 동일성을 갖는 것인, 항체.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는, 재조합 항체, 모노클로날 항체, 키메라 항체(chimeric antibody), 인간화 항체, 인간 항체, 항체 단편, 이중특이성 항체(bispecific antibody), 단일특이성 항체(monospecific antibody), 또는 일가 항체(monovalent antibody)인 것인, 항체.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    인간 CD26에 특이적으로 결합하는 것인, 항체.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    돼지의 CD26에 특이적으로 결합하지 않는 것인, 항체.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체를 포함하는 항체 혼합물을 포함하는 분리된 조성물로서,
    바람직하게 상기 혼합물은 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 적어도 두 개의 상이한 항체를 포함하고, 특히, 상기 항체 혼합물은. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 제1 항체, 및 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 제2 항체를 포함하고, 상기 제1 항체는 SEQ ID NO: 3에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 제2 항체는 SEQ ID NO: 2에 기재된 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인, 조성물.
  20. 항체 혼합물을 포함하는 분리된 조성물로서,
    상기 항체 혼합물은, PD 12002로서 Genoa(이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 하이브리도마 세포주 또는 상기 하이브리도마 세포주의 유도체에 의해 생산된 항체를 포함하거나, 상기 항체로 구성된 것인, 조성물.
  21. (a) 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열; 또는
    (b) (a)에 상보적인 뉴클레오티드 서열;
    을 포함하는 분리된 핵산 분자.
  22. SEQ ID NOs: 50 내지 128 및 이의 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자로서,
    상기 변이체는, SEQ ID NOs: 50 내지 128로 이루어진 군으로부터 선택된 상기 뉴클레오티드 서열과 적어도 90 % 서열 동일성을 갖는 것인, 분리된 핵산 분자.
  23. 제21항 또는 제22항에 따른 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터로서,
    상기 핵산 분자는 발현 조절 서열에 작동적으로 결합된 것인, 발현 벡터.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 핵산 분자 또는 발현 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포.
  25. PD 12002로서 Genoa(이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 하이브리도마 세포주 또는 상기 하이브리도마 세포주의 변이체로부터 생산된 항체.
  26. PD 12002로서 Genoa(이탈리아)의 CBA-ICLC에 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 항체에 의해 결합된 에피토프에서 인간 CD26에 특이적으로 결합하는 항체.
  27. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항체에 의해 결합하는 에피토프에서 인간 CD26에 특이적으로 결합하는 항체.
  28. SEQ ID NO: 146, 147, 149-151, 및 153-159로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 아미노산 서열을 포함하는 CD26 에피토프를 결합할 수 있는, CD26에 특이적으로 결합하는 분리된 모노클로날 항체.
  29. 제28항에 있어서,
    SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열을 포함하는 CD26 에피토프를 결합할 수 있는 것인, 모노클로날 항체.
  30. 제29항에 있어서,
    상기 에피토프는, SEQ ID NO: 147, 148, 152, 154, 및 159로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 아미노산 서열을 더 포함하는 것인, 모노클로날 항체.
  31. 제29항에 있어서,
    상기 에피토프는, SEQ ID NO: 147 및 152의 아미노산 서열을 더 포함하는 것인, 모노클로날 항체.
  32. 제1항 내지 제12항 및 제25항 중 어느 한 항에 따른 항체와 인간 CD26에 특이적으로 결합하기 위해 경쟁(compete)하는 항체.
  33. 약 2·e-9 내지 6·e-9 M의 KD를 갖는 인간 CD26에 특이적으로 결합하는 분리된 모노클로날 항체.
  34. 제1항 내지 제18항 및 제25항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체를 제조하는 방법.
  35. 제1항 내지 제18항 및 제25항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체, 및 임의적으로 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  36. 제35항에 있어서,
    약제로서 사용하기 위한 것인, 약제학적 조성물.
  37. 제36항에 있어서,
    조혈성 줄기 세포 이식(haematopoietic stem cell transplantation) 후의 생착(engraftment)을 촉진하는데 사용하기 위한 것, 및/또는 바람직하게 조혈성 줄기 세포 이식 후에, 이식편대숙주병(GvHD)을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한 것, 및/또는 재생 불량성 빈혈, 바람직하게 중증 재생 불량성 빈혈을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한 것인, 약제학적 조성물.
  38. 제1항 내지 제18항 및 제25항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 제19항 또는 제20항에 따른 조성물로서,
    약제로서 사용하기 위한 것인, 항체 또는 조성물.
  39. 제1항 내지 제18항 및 제25항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 제19항 또는 제20항에 따른 조성물로서,
    조혈성 줄기 세포 이식 후의 생착을 촉진하는데 사용하기 위한 것, 및/또는 바람직하게 조혈성 줄기 세포 이식 후에, 이식편대숙주병(GvHD)을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한 것, 및/또는 재생 불량성 빈혈, 바람직하게 중증 재생 불량성 빈혈을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한 것인, 항체 또는 조성물.
  40. (ⅰ) 제1항 내지 제18항 및 제25항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체, 및 특히 제19항 또는 제20항에 따른 조성물, 및 추가적으로
    (ⅱ) a) 적어도 하나의 면역억제제 약물, 또는
    b) 적어도 하나의 코르티코스테로이드 및 적어도 하나의 항히스타민제,
    를 포함하는 키트.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180053467A (ko) * 2016-11-11 2018-05-23 대한민국(농촌진흥청장) 사람 유래 dpp-4 유전자를 이용한 당뇨 질환 모델용 형질전환돼지 및 이의 용도

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2767549A1 (en) * 2013-02-19 2014-08-20 Adienne S.A. Anti-CD26 antibodies and uses thereof
US11242399B2 (en) * 2013-02-19 2022-02-08 Adienne S.A. Anti-CD26 antibodies
US10630229B2 (en) * 2016-10-11 2020-04-21 Kevin Stapleton Panel mounting bracket with grounding mid-clamp and related methods
CN111433604B (zh) * 2017-12-22 2023-12-08 瑞士商艾迪安纳股份有限公司 用于确定抗cd26配体的生物活性的定量细胞方法
CN109709337B (zh) * 2018-12-28 2021-09-14 江苏众红生物工程创药研究院有限公司 人cd26的免疫组化检测试剂盒及其临床应用
US20230295328A1 (en) * 2020-07-28 2023-09-21 Adienne S.A. Treatment of idiopathic inflammatory myopathies
JP2024517337A (ja) 2021-05-13 2024-04-19 アディエンネ・ソチエタ・アノニマ 移植片対宿主病を処置する方法
BR112023022312A2 (pt) 2021-05-13 2023-12-26 Adienne S A Métodos de tratamento de dermatomiosite

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007014169A2 (en) * 2005-07-22 2007-02-01 Y's Therapeutics Co, Ltd. Anti-cd26 antibodies and methods of use thereof

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4036945A (en) 1976-05-03 1977-07-19 The Massachusetts General Hospital Composition and method for determining the size and location of myocardial infarcts
US4331647A (en) 1980-03-03 1982-05-25 Goldenberg Milton David Tumor localization and therapy with labeled antibody fragments specific to tumor-associated markers
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4704692A (en) 1986-09-02 1987-11-03 Ladner Robert C Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ES2241710T3 (es) 1991-11-25 2005-11-01 Enzon, Inc. Procedimiento para producir proteinas multivalentes de union a antigeno.
NL9400309A (nl) * 1993-11-04 1995-06-01 Eurogenetics Nv Ligande die in staat is te binden aan de adenosine deaminase bindingsplaats van CD26.
ATE335005T1 (de) 1998-04-15 2006-08-15 Genentech Inc Menschliches protein mit in vitro antiproliferativer aktivität.
EP1197755A1 (en) 2000-10-11 2002-04-17 Pepscan Systems B.V. Identification of protein binding sites
EP1392361A4 (en) * 2001-05-11 2009-08-05 Univ Texas THERAPY BASED ON ANTI-CD26 MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST DISORDERS ASSOCIATED WITH CELLS EXPRESSING CD26
EP1844337B1 (en) 2005-01-24 2013-07-03 Pepscan Systems B.V. Binding compounds, immunogenic compounds and peptidomimetics
US7612180B2 (en) 2005-03-03 2009-11-03 Immunomedics, Inc. Humanized L243 antibodies
MY159522A (en) * 2005-09-14 2017-01-13 Takeda Pharmaceuticals Co Administration of dipeptidyl peptidase inhibitors
US8846393B2 (en) * 2005-11-29 2014-09-30 Gamida-Cell Ltd. Methods of improving stem cell homing and engraftment
RU2331881C1 (ru) * 2007-03-09 2008-08-20 ГОУ ВПО "Красноярская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" Способ определения риска развития атопических заболеваний у новорожденных детей
WO2010037041A2 (en) 2008-09-26 2010-04-01 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Frizzled-binding agents and uses thereof
KR101833204B1 (ko) * 2010-08-18 2018-03-02 테레사 데이셔 림프양 조직에 줄기 세포와 조상 세포 결합을 저해하고, 그리고 림프 조직에서 배 중심을 재생하기 위한 조성물과 방법
EP2767549A1 (en) * 2013-02-19 2014-08-20 Adienne S.A. Anti-CD26 antibodies and uses thereof

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007014169A2 (en) * 2005-07-22 2007-02-01 Y's Therapeutics Co, Ltd. Anti-cd26 antibodies and methods of use thereof

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180053467A (ko) * 2016-11-11 2018-05-23 대한민국(농촌진흥청장) 사람 유래 dpp-4 유전자를 이용한 당뇨 질환 모델용 형질전환돼지 및 이의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
HRP20191277T8 (hr) 2019-11-01
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