KR20140084023A - 인터페론 알파 결합체를 포함하는 암 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

인터페론 알파 결합체를 포함하는 암 치료용 약학적 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20140084023A
KR20140084023A KR1020147009223A KR20147009223A KR20140084023A KR 20140084023 A KR20140084023 A KR 20140084023A KR 1020147009223 A KR1020147009223 A KR 1020147009223A KR 20147009223 A KR20147009223 A KR 20147009223A KR 20140084023 A KR20140084023 A KR 20140084023A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
interferon alpha
composition
cancer
group
constant region
Prior art date
Application number
KR1020147009223A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101990656B1 (ko
Inventor
정성엽
우영은
임세영
최인영
이재호
권세창
문성환
자왕 리우
Original Assignee
한미사이언스 주식회사
베이징 한미 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한미사이언스 주식회사, 베이징 한미 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드 filed Critical 한미사이언스 주식회사
Publication of KR20140084023A publication Critical patent/KR20140084023A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101990656B1 publication Critical patent/KR101990656B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/642—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a cytokine, e.g. IL2, chemokine, growth factors or interferons being the inactive part of the conjugate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/212—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

본 발명은 인터페론 알파 또는 이의 고분자 중합체 결합체를 포함하는 항암용 약학적 조성물 및 이를 항암제와 병용투여하여 암을 치료하는 용도에 관한 것이다. 본 발명의 인터페론 알파 결합체는 종래의 인터페론 알파에 비하여 증가된 생체 내 반감기 및 보다 우수한 항암활성을 나타내며, 특히 젬시타빈과 같은 항암제와 병용 투여는 암 세포 성장 및 증식에 대해 상승적인 억제 효과를 가져 현저히 우수한 항암 활성을 나타낸다. 또한, 상기 본 발명의 항암용 약학적 조성물은 우수한 생체 내 반감기 및 항암 활성을 가져, 투여 빈도를 현저하게 감소시킬 수 있다. 항암 활성이 우수한 인터페론 알파 결합체와 항암제의 병용 투여는 항암제의 투여 용량을 감소시켜, 항암제 부작용을 감소시키고 치료에 대한 환자의 순응도를 상승시킬 수 있다.

Description

인터페론 알파 결합체를 포함하는 암 치료용 약학적 조성물{A pharmaceutical composition for treating cancer, comprising interferon alpha conjugate}
본 발명은 인터페론 알파 또는 이의 결합체를 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 이를 항암제와 병용 투여하여 암을 치료하는 용도에 관한 것이다.
인간 인터페론은 싸이토카인의 일종으로서, 생체 내 면역반응 활성화 및 암세포의 아폽토시스 활성화를 통하여 바이러스, 암세포 등의 증식을 억제하는 단백질이다. 인터페론을 생성하는 세포의 종류에 기초하여, 인터페론은 인터페론 알파, 인터페론 베타 및 인터페론 감마의 세 하위그룹으로 나누어진다. 특히 인터페론 알파는 B 임파구 세포 (B lymphocytes), 눌 임파구세포 (Null lymphocytes) 및 거식세포 (Macrophage)에 의해 생성되며, 항바이러스 및 항암 활성을 가지고, NK (Nature Killer) 세포를 활성화시키며, 골수세포의 억제 특성을 가진다.
최근, 임상실험들은 재조합 인간 인터페론 알파가 매우 다양한 고형 종양의 치료에 대한 치료적 가능성을 가진다고 보고하였으며, 재조합 DNA 기술에 의하여 제조된 인터페론 2종은 상업적으로 이용가능하다 (인터페론 -2b 재조합체 (인트론-A, 쉐링 코포레이션); 인터페론 -2a 재조합체 (로페론, 호프만-라로쉐 인크)).인트론 A는 수술과 병행하여 악성 흑색종의 치료, 안트라사이클린 화학요법과 병행하여 공격성 소포성 비호지킨 림프종 (aggressive follicular Non-Hodgkin's Lymphoma)의 치료, 첨형 콘딜로마, 털세포 백혈병 및 AIDS-관련 카포시 육종의 병변 내 치료에 사용하는 것으로 권고된다. 로페론은 필라델피아 염색체 양성 (Philadelphia chromosome positive) 만성 골수성 백혈병 (CML) 및 AIDS-관련 카포시 육종의 치료에 사용하기 위하여 처방된다. 그것들은 또한 방광암 (Bladder cancer) (Torti, F.M. et al., J. clin. Onco., 3, 506-512, 1985) 및 신장암 (Vugrin, D. et al., Cancer treat. Rep., 69, 817-820, 1985)에 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 최근 폴리에틸렌글리콜(PEG)로 수식한 인터페론이 악성 흑색종의 치료의 용도로 승인된 바 있다. 그러나 천연형 인터페론 알파 또는 PEG 수식 인터페론 알파는 짧은 반감기와 낮은 효능 때문에 낮은 항암 효과를 보인다고 보고되어 왔다.
암 (cancer)은 세포 증식 및 세포 사멸의 비조절된 균형으로 이끄는, 유전자 발현의 다양한 변화에 의하여 야기되는 비정상적 세포 성장으로서, 인접 조직을 침투 및 파괴하고 먼 위치에 전이하여 결국 죽음에 이르게 한다. 암세포는 비정상적으로 분열하고 분화하며, 신체 내 어느 조직에서나 발생하고, 한 가지 요인 또는 이들의 조합에 의해 유발된다고 알려져 있다. 이러한 요인들에는 매우 다양한 화학물질 또는 방사선과 같은 환경적 요인들, 바이러스 감염과 같은 감염성 질환들 및 유전적 요인들이 있다. 암은 그 관련기관과 암 조직을 이루고 있는 세포에 따라 수 백종으로 분류될 수 있다.
이러한 암을 치료하기 위해서 수술, 방사선 치료 및 화학요법이 사용되고 있지만, 화학요법 및 방사선 치료는 메스꺼움 및 구토, 혈구감소증, 감염, 악액질 골수구제, 점막염, 탈모 등과 같은 심각한 부작용의 문제를 가진다. 특히 화학요법에 의한 부작용은 환자의 생명에 큰 영향을 미칠 수 있으며 환자의 치료 순응도를 급격하게 낮출 수 있다.
한편, 췌장암은 5% 이하의 5년 생존률로 안 좋은 예후를 가진다. 왜냐하면 췌장암은 보통 진행된 병기에 발견되고, 환자의 20% 미만만이 수술할 자격이 있기 때문이다. 절제를 하여도 미세 전이 및 림프절 재발이 2년 내에 환자의 거의 50%까지 발생한다. 췌장암은 모든 소화기암에서 가장 사망률이 높은 암 중의 하나으로 알려져 있으며, 암 사망원인으로 서구에서는 4위를 차지하고 한국에서는 6위를 차지하는 악성종양이다. 비록 췌장암은 모든 암환자의 오직 2~3%에 해당하지만 모든 암 관련 사망의 6%를 차지한다. 화학요법의 종류에도 불구하고 국소 진행성 췌장암과 전이성 췌장암은 각각 8-12개월 및 3-6개월의 중앙 생존값 (median survival)을 가지며, 따라서 췌장암은 매우 치명적인 암이다.
진행성 췌장암의 현재 강력한 치료전략은 인간 췌장암 세포의 세포 사멸을 유도하고 종양의 성장 및 진행을 억제할 수 있는 2'-데옥시시티딘 뉴클레오사이드 유사체인 젬시타빈 (Gemcitabine, Lilly)의 정맥투여이다. 하지만 젬시타빈 단독투여는 5.7개월의 중앙 전체 생존값 (median overall survival) 정도의 낮은 효율을 보인다. 최근 젬시타빈과 조합한 엘로티닙 (erlotinib, Tarceva)은 전이성 췌장암에 대해 승인되었고, 젬시타빈과 엘로티닙의 병용 요법은 젬시타빈 단독투여와 비교하여 췌장암 환자의 1년 생존율을 18%에서 24%로 증가시켰다. 하지만 화학요법의 중요한 요소인 중앙 전체 생존값은 단지 0.33개월 증가될 뿐이었다. 엘로티닙은 저분자량이고 표피성장인자 수용체 (EGFR) 타이로신 카이네이즈 억제제이며 암 세포와 빠르게 분열하는 정상 세포를 구분할 수 없다. 따라서 젬시타빈 단독 투여 보다 높은 독성을 보이며, 장기간 노출 시 저항성을 발생시킨다.
이러한 이유로, 젬시타빈과 엘로티닙의 조합뿐만 아니라, 젬시타빈/인터페론알파, 젬시타빈/시스플라틴, 젬시타빈/카페시타빈, 젬시타빈/아바스틴의 병용 요법도 시도되어 왔다. 그러나 치료 효과는 만족스럽지 못하다.
이에 본 발명자들은 인터페론 알파 및 면역 글로불린 불변영역을 비펩타이드성 중합체로 연결시켜 제조한 인터페론 알파 결합체가 종래 인터페론 알파와 비교하여 긴 생체 내 반감기와 더 우수한 항암 활성을 보이는 것을 발견했으며, 특히 젬시타빈과 같은 항암제와의 병용투여는 현저히 우수한 항암활성을 나타내는 상승 효과를 가짐을 발견하여 본 발명을 완성하였다. 또한 본 발명자들은 항암제와 우수한 항암효과를 가지는 인터페론 알파 결합체의 병용투여가 항암제의 투여 용량을 감소시킴으로써 항암제의 부작용을 줄이고 환자의 치료 순응성을 증가시킴을 발견하였다.
본 발명의 하나의 목적은 인터페론 알파 또는 이의 중합체 결합체를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 인터페론 알파 및 면역글로불린 불변영역이 폴리에틸렌글리콜, 폴리프로필렌글리콜, 에틸렌글리콜-프로필렌글리콜의 공중합체, 폴리옥시에틸화폴리올, 폴리비닐알콜, 폴리사카라이드, 덱스트란, 폴리비닐에틸에테르, 폴리락트산, 폴리락틱-글리콜산, 지질 중합체, 키틴, 히아루론산 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 비펩타이드성 중합체를 통해 연결되어 제조된 인터페론 알파 결합체를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 상기 인터페론 알파 결합체와 함께, Ras 억제제, Raf 억제제, MEK 억제제 및 MAPK 억제제로부터 선택된 항암제를 더 포함하는 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 상기 약학적 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하는 암의 치료 방법을 제공하는 것이다.
하나의 양태로서, 본 발명은 인터페론 알파를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 인터페론 알파는 싸이토카인의 일종으로서, 생체 내 면역반응 및 암세포의 아폽토시스의 활성화를 통하여 바이러스, 암세포 등의 증식을 억제하는 단백질이다. 상기 인터페론 알파는 B 임파구 세포 (B lymphocytes), 눌 임파구세포 (Null lymphocytes) 및 거식세포 (Macrophage)에 의해 생성되며, 항바이러스 및 항암 활성을 가지고, NK (Nature Killer) 세포를 활성화시키며, 골수세포에 대해 억제 특성을 가진다. 상기 인터페론 알파는 바람직하게는 인터페론 알파 2b, 인터페론 알파 2a 등일 수 있다.
인간 인터페론 알파는 17,500에서 21,000의 분자량을 가지며, 단백질 mg당 2 x 108 IU의 매우 높은 역가의 고유활성을 가진다. 생체 내 인터페론 알파는 165개의 아미노산을 포함하는 단백질로서 인터페론 알파 2a(서열번호: 1)와 인터페론 알파 2b(서열번호: 2)는 각각 23번째 위치에 라이신과 아르기닌을 가진다.
본 발명에서 사용되는 인터페론 알파는, 천연형 인터페론 알파, 아고니스트, 유도체, 단편 및 이들의 변이체를 포함하며, 상기 아고니스트는 인터페론 알파의 구조와 상관없이 인터페론 알파의 생체 내 수용체에 결합하여 인터페론 알파와 동일하거나 상응하는 생물학적 활성을 보이는 물질을 의미하고, 상기 유도체는 천연형 인터페론 알파와 최소한 80% 이상 아미노산 서열에서 상동성을 보이며, 아미노산 잔기의 일부 그룹이 화학적으로 치환, 제거 또는 수식될 수 있고, 인터페론 알파 기능을 보유한 펩타이드를 의미한다. 상기 단편은 천연형 인터페론 알파의 N-말단 또는 C-말단에 하나 또는 그 이상 아미노산이 추가 또는 삭제된 형태로서 천연에 존재하지 않는 아미노산 (예 : D-형 아미노산)도 추가될 수 있으며, 인터페론 알파 기능을 보유한 펩타이드를 의미한다. 상기 변이체는 천연형 인터페론 알파와 하나 또는 그 이상 아미노산 서열이 다르며, 인터페론 알파 기능을 보유한 펩타이드를 의미한다. 상기 아고니스트, 유도체, 단편 및 이들의 변이체는 인터페론 알파의 생체 내 수용체에 결합하여 천연형 인터페론 알파와 동일하거나 상응하는 생물학적 활성을 보인다.
본 발명에서 사용될 수 있는 인터페론 알파의 제조 방법은 대한민국 등록특허 제10-0360594호에 개시되어 있다. 상기 명세서 전체는 참고자료로서 본 발명에 포함된다. 다만 상기 인터페론 알파는 상기 대한민국 등록특허 제10-0360594호에 개시된 것에 한정되지 않으며, 당해 분야의 기술범위 내에서 용이하게 제작되는 인터페론 알파는 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 인터페론 알파를 제작하는데 필요한 통상의 기술은 본 발명에 적용 가능하다.
또한 본 발명은 인터페론 알파에 중합체가 연결된, 중합체 결합체를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 용어, "중합체 결합체"는 인터페론 알파에 중합체가 결합된 형태이다. 상기 결합체에 사용된 중합체는 생체 내 반감기 및 치료 효능을 높일 수 있는 모든 중합체를 포함한다. 예를 들어 상기 중합체는 폴리에틸렌글리콜과 같은 중합체일 수 있으며, 항체, 항체 단편, 파이브로넥틴, 알부민, 면역글로불린 단편 또는 엘라스틴과 같은 단백질일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 중합체 결합체에서 상기 인터페론 알파 및 중합체는 서로 직접 연결되거나, 펩타이드성 링커 또는 비펩타이드성 중합체와 같은 비펩타이드성 링커를 통해 연결될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 단백질 중합체 결합체는 유전공학 기술을 이용하여 세포(들)로부터 융합 단백질의 형태로 생산될 수 있으며, 또는 인터페론 알파 및 단백질 중합체는 각기 생산한 다음, 화학적 기술을 이용하여 세포 외 (ex vivo)에서 서로 연결될 수 있다. 인터페론 알파에 중합체가 결합된 인터페론 알파 결합체는 대한민국 등록특허 제10-0725315호에 기재된 방법에 따라 제조될 수 있으며, 상기 명세서 전체는 참고자료로서 본 발명에 포함된다. 다만 상기 인터페론 알파 결합체의 제조 방법은 상기 특허에 개시된 방법에 한정되지 않으며, 인터페론 알파의 반감기를 증대시키기 위하여 중합체를 인터페론 알파와 연결시키는 모든 방법을 포함한다. 따라서 당해 분야의 기술범위 내에서 쉽게 제작되는 인터페론 알파 결합체는 본 발명의 범위에 포함된다.
또한, 상기 중합체 결합체는 인터페론 알파 및 면역글로불린 불변영역이 폴리에틸렌글리콜, 폴리프로필렌글리콜, 에틸렌글리콜-프로필렌글리콜 공중합체, 폴리옥시에틸화폴리올, 폴리비닐알콜, 폴리사카라이드, 덱스트란, 폴리비닐에틸에테르, 지질 중합체, 키틴, 히아루론산 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 비펩타이드성 중합체를 통해 연결된 인터페론 알파 결합체일 수 있다. 본 발명에서 상기 인터페론 알파 및 면역글로불린 불변 영역이 비펩타이드성 중합체를 통해 연결된 중합체 결합체는 인터페론 알파 결합체와 혼용될 수 있다.
상기 면역글로불린 불변영역은 면역글로불린의 중쇄와 경쇄 가변영역을 제외한 CH1, CH2, CH3 및 CH4 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개 내지 4개 도메인을 의미하며, 또는 경쇄 불변영역 1 (CL1) 및 중쇄 불변영역 1(CH1)을 제외한 중쇄 불변영역 2 (CH2) 및 중쇄 불변영역 3 (CH3)를 의미한다. 또한, 상기 면역글로불린 불변영역은 힌지영역 및 중쇄 불변영역에 힌지 (hinge) 영역을 추가로 포함할 수도 있다. 또한, 상기 면역글로불린 불변영역은 CH2 및/또는 CH3의 아미노산 서열의 비교적 긴 부분을 제거시킨 단편일 수도 있다. 구체적으로, 본 발명의 면역글로불린 불변영역은 1) CH1 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인 및 CH4 도메인, 2) CH1 도메인 및 CH2 도메인, 3) CH1 도메인 및 CH3 도메인, 4) CH2 도메인 및 CH3 도메인, 5) 1개 이상의 도메인과 면역글로불린 힌지 영역(또는 힌지 영역의 일부)과의 조합, 6) 중쇄 불변영역과 경쇄 불변영역의 각 도메인의 이량체일 수 있다.
본 발명의 면역글로불린 불변영역은 IgG, IgA, IgD, IgE 또는 IgM에서 유래될 수 있고, 면역글로불린 불변영역의 각각의 도메인이 IgG, IgA, IgD, IgE 및 IgM로 이루어진 군에서 선택되는 면역글로불린에서 유래된 상이한 기원을 가진 도메인의 하이브리드일 수 있다. 상기 하이브리드 (hybrid)는 상이한 기원의 2 이상의 면역글로불린 불변영역에 해당하는 서열이 단쇄 면역글로불린 불변 영역에 존재하는 것을 의미한다. 본 발명에서는, 여러 형태의 하이브리드가 가능하다. 예를 들어 도메인 하이브리드는 IgG, IgM, IgA, IgE 및 IgD의 CH1, CH2, CH3 및 CH4로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1개 내지 4개 도메인으로 이루어질 수 있으며, 힌지 영역을 포함할 수 있다.
또한 이량체 또는 다량체를 형성할 때, 동일 기원 단쇄 면역글로불린 불변영역을 암호화하는 폴리펩타이드가 상이한 기원의 단쇄 폴리펩타이드와 연결된다. 예를 들어 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE의 불변영역 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 2개 이상의 단편을 조합하여 이량체 또는 다량체가 제조될 수 있다.
바람직하게는, 상기 면역글로불린 불변영역은 인간 혈액에 가장 풍부한 단백질인 IgG 또는 IgM 유래 면역글로불린 불변영역일 수 있다. 본 발명의 구체적인 양태에서는 IgG 유래 면역글로불린 불변영역이 사용되었다. IgG는 또한 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 서브클래스로 나눌 수 있고, 이들의 조합 또는 이들의 하이브리드가 본 발명에서 허용된다. 바람직하게는 IgG2 및 IgG4 서브클래스를 사용될 수 있으며, 본 발명의 구체적인 양태에서는 보체 의존적 독성 (CDC, Complement dependent cytotoxicity)과 같은 이펙터 기능 (effector function)이 없는 IgG4의 Fc 도메인이 사용되었다.
따라서 인간 IgG4의 비당쇄화된 (aglycosylated) Fc 영역은 가장 많이 선호되는 약물 운반체이다. 비인간 기원의 Fc 영역은 체내에서 항원으로 작용하여 이의 항체 생산을 유도할 수 있기 때문에 인간 기원의 Fc 도메인은 이를 뛰어넘는 이점이 있다.
또한, 상기 면역글로불린 불변영역은 천연형 당쇄, 천연형에 비해 증가된 당쇄, 천연형에 비해 감소한 당쇄 또는 당쇄가 제거된 (deglycosylated) 형태일 수 있다. 이러한 면역글로불린 불변영역 당쇄의 증감 또는 제거는 화학적 방법, 효소학적 방법 및 미생물을 이용한 유전 공학적 방법과 같은 당해 기술분야에서 통상적으로 알려진 방법에 의해 달성될 수 있다. 여기서, 면역글로불린 불변영역으로부터 당쇄의 제거는 보체 (c1q)의 결합력을 현저히 저하시키고, 항체-의존성 세포 매개성 세포독성 또는 보체-의존성 세포독성이 감소 또는 제거되는 결과를 가져오므로, 생체 내에서 불필요한 면역반응을 유발하지 않는다. 이런 점에서 당쇄의 화학적 또는 효소학적 제거에 의해 제조된 비당쇄화된 (deglycosylated) 면역글로불린 불변영역, 또는 원핵동물, 바람직하게는 대장균으로부터 생산된 비당쇄화된 (aglycosylated) 면역글로불린 불변영역은 약물의 캐리어로서 본 발명의 목적에 보다 적합할 수 있다.
본 발명의 면역글로불린 불변영역은 천연형 아미노산 서열과 이의 서열 유도체 (mutant)를 포함한다. 아미노산 서열 유도체는 천연 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산 잔기의 결실, 삽입, 비보전적 또는 보전적 치환 또는 이들의 조합에 의해 천연형 아미노산 서열과 상이한 서열이다. 예를 들면, 항체 결합에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 IgG Fc의 214번 내지 238번, 297번 내지 299번, 318번 내지 322번 또는 327번 내지 331번 위치의 아미노산 잔기들이 변형을 위한 적당한 표적으로서 이용될 수 있다. 또한, 이황화 결합을 형성할 수 있는 잔기가 결핍되거나, 천연형 Fc의 몇몇의 N-말단 아미노산들이 결핍되거나 또는 천연형 Fc의 N-말단에 추가적인 메티오닌 잔기를 가지는 다양한 유도체가 가능하다. 또한, 이펙터 기능은 C1q 결합 모티프와 같은 보체 결합 모티프 또는 ADCC (antibody-dependent cell mediated cytotoxicity) 모티프를 제거함으로써 없앨 수 있다. 이러한 면역글로불린 불변영역의 서열 유도체를 제조하는 기술은 국제특허공개 제97/34631호, 국제특허공개 제96/32478호에 개시되어 있다.
분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 단백질 및 펩티드에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다 (H.Neurath, R.L.Hill, The Proteins, Academic Press, New York,1979). 가장 통상적인 교환은 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu 및 Asp/Gly 간에 일어난다.
필요할 경우 아미노산은 인산화 (phosphorylation), 황화 (sulfation), 아크릴화 (acrylation), 당화 (glycosylation), 메틸화 (methylation), 파네실화 (farnesylation), 아세틸화 (acetylation), 아미드화 (amidation) 등으로 수식 (modification)될 수도 있다.
상기 기술한 불변영역 유도체는 본 발명의 불변영역과 동일한 생물학적 활성을 가지고, 예컨대 열, pH 등에 대하여, 증대된 구조적 안정성을 가진다.
또한, 이러한 면역글로불린 불변영역은 인간 또는 소, 염소, 돼지, 마우스, 래빗, 햄스터, 랫트, 기니아을 포함하는 다른 동물로부터 얻을 수 있으며, 바람직하게는 인간으로부터 얻을 수 있다. 비-인간 기원의 불변영역은 생체에서 항원으로 작용하여 이들의 항체 생산을 유도할 수 있기 때문에, 인간 기원의 불변영역이 비-인간 기원의 불변영역에 비해 이점을 가진다.
이러한 Fc 영역은 인간, 및 소, 염소, 돼지, 마우스, 래빗, 햄스터, 랫트, 기니아 픽을 포함하는 다른 동물로부터 분리된 천연형으로부터 얻을 수도 있고, 형질전환된 동물세포 또는 미생물로부터 얻어진 재조합형 또는 이의 유도체일 수 있다. 여기서, Fc 영역은 인간 또는 동물 개체로부터 전체 면역글로불린을 분리하고 단백질 분해효소를 처리하여 천연형 면역 글로불린으로부터 얻을 수 있다. 예를 들어, 파파인은 천연형 면역글로불린을 Fab 및 Fc 영역으로 분해하고, 펩신 처리는 pF'c 및 F(ab)2 단편을 생산하는 결과를 낳는다. 이들 단편들은, 예를 들어, 크기 배제 크로마토그래피 (size-exclusion chromatography)에 적용하여 Fc 또는 pF'c를 분리할 수 있다.
본 발명의 구체적인 양태에서는, 미생물로부터 수득한 재조합 면역글로불린 Fc 영역인 인간 IgG4 유래 비당쇄화된 (aglycosylated) Fc 영역이 사용되었다.
본 발명의 비펩타이드성 중합체는 펩타이드 결합을 제외한 임의의 공유결합에 의해 서로 연결된, 2 이상의 반복 단위를 포함하는 생체 적합성 중합체를 의미한다.
본 발명에 사용가능한 비펩타이드성 중합체는 폴리에틸렌글리콜, 폴리프로필렌글리콜, 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체, 폴리옥시에틸화폴리올, 폴리비닐알콜, 폴리사카라이드, 덱스트란, 폴리비닐에틸에테르, 폴리락트산 ( polylactic acid, PLA) 및 폴리락틱-글리콜산 (polylactic-glycolic acid, PLGA)과 같은 생분해성 고분자, 지질 중합체, 키틴, 히아루론산 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있으며, 바람직하게는 폴리에틸렌글리콜이지만, 이에 제한되지 않는다. 또한 당해 분야에 잘 알려진 이들의 유도체 및 당해 분야의 기술 범위 내에서 용이하게 제조할 수 있는 이들의 유도체들도 본 발명의 범위에 포함된다.
기존 인프레임 퓨전 (inframe fusion) 방법에 의해 수득한 융합 단백질에서 사용된 펩타이드성 링커는 생체 내에서 단백질 분해효소에 의해 용이하게 절단되어 캐리어에 의한 활성 약물의 혈중 반감기를 증가시키는 충분한 효과가 기대만큼 얻어질 수 없다는 단점을 가진다. 그러나 본 발명에서는 단백질 분해효소에 저항성 있는 비펩타이드성 중합체를 사용하여 활성 약물의 혈중반감기를 유지시킬 수 있다. 그러므로 생체 내 단백질분해효소에 저항성을 가지는 중합체이면 어떠한 비펩타이드성 중합체라도 제한 없이 사용될 수 있다. 상기 비펩타이드성 중합체는 1 내지 100 kDa 범위, 바람직하게는 1 내지 20 kDa 범위의 분자량을 가질 수 있다. 또한 본 발명에서의 비펩타이드성 중합체는 한 종류의 중합체 또는 상이한 종류의 중합체들의 조합일 수 있다.
본 발명에 사용되는 비펩타이드성 중합체는 양 말단에 면역글로불린 불변영역 및 인터페론 알파와 결합할 수 있는 반응기를 가진다. 상기 비펩타이드성 중합체는 양 말단에 반응기를 가질 수 있으며, 상기 반응기는 알데히드 그룹, 프로피온 알데히드 그룹, 부틸 알데히드 그룹, 말레이미드 (maleimide) 그룹 및 석시니미드 (succinimide) 유도체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 석시니미드 유도체로는 석시니미딜 프로피오네이트, 하이드록시 석시니미딜, 석시니미딜 카르복시메틸 또는 석시니미딜 카보네이트일 수 있다.
상기 비펩타이드성 중합체의 양 말단 반응기는 서로 같거나 다를 수 있다. 예를 들어, 비펩타이드성 중합체는 한쪽 말단에는 말레이미드 그룹을, 다른 쪽 말단에는 알데히드 그룹, 프로피온 알데히드 그룹, 또는 부틸 알데히드 그룹을 가질 수 있다.
특히, 상기 비펩타이드성 중합체가 양 말단에 알데히드 그룹의 반응기를 갖는 경우, 비특이적 반응을 최소화하면서, 비펩타이드성 중합체의 양 말단에서 인터페론 알파 및 면역글로불린 불변영역을 연결하는데 효과적이다. 알데히드 결합에 의한 환원성 알킬화로 생성된 최종 산물은 아미드 결합으로 연결되었을 때 보다 훨씬 더 안정적이다. 상기 알데히드 반응기는 낮은 pH에서 N-말단에 선택적으로 결합하며, pH 9.0과 같은 높은 pH에서 라이신 잔기에 결합하여 공유결합을 형성한다.본 발명의 인터페론 알파 결합체는 바람직하게는 인터페론 알파의 N-말단에 특이적으로 비펩타이드성 중합체가 연결되어 제조된 결합체일 수 있고, 인터페론 알파의 N-말단의 아민 그룹 또는 티올 그룹 (Thiol group)에 비펩타이드성 중합체가 연결된 것일 수 있다. 본 발명자들은 인터페론 알파의 N-말단에 비펩타이드성 중합체가 연결됨으로써 인터페론 알파의 활성을 증가시킬 수 있음을 확인하였다. N-말단 특이적 결합체의 제조는 pH 조절에 의해서 수행되며, 바람직한 pH 범위는 4.5 내지 7.5이다.
양쪽 말단에 하이드록시 반응기를 갖는 폴리에틸렌글리콜이 비펩타이드성 중합체로 이용되는 경우에는 상기 하이드록시 그룹은 공지의 화학반응에 의해 다양한 반응기로 활성화될 수 있고, 또는 상업적으로 입수 가능한 변형된 반응기를 갖는 폴리에틸렌글리콜이 이용될 수 있다.
본 발명의 인터페론 알파 결합체는 인터페론 알파 단백질 및 면역글로불린 불변영역과 비펩티드성 중합체를 통해 연결되어 제조된 결합체 형태이며, 생체 내 지속성 및 안정성을 유지시키는데 우수한 효과를 가진다. 면역 글로불린 불변영역은 생체 내에서 대사되는 생분해성의 폴리펩타이드이기 때문에 약물의 캐리어로 사용하기에 충분히 안전하다. 또한, 상대적으로 작은 분자량때문에, 상기 면역글로불린 불변영역은 결합체의 제조, 정제 및 수율 면에서 전체 면역글로불린 분자에 비해 이점을 가진다. 더욱이 아미노산 서열이 항체마다 상당히 다른 Fab 부분이 없기 때문에 결합체의 동질성이 크게 증가되고, 항원성의 유발 감소가 기대된다.
본 발명의 인터페론 알파 결합체는 천연형 인터페론 알파에 비하여 증가된 생체 내 반감기 및 우수한 항암 활성을 가진다. 투여 시 본 발명의 인터페론 알파 결합체는 인터페론 알파 수용체에 결합하여 암세포의 아폽토시스를 유도하여 종양의 크기 감소 및 종양 성장 억제를 가져온다. 따라서, 인터페론 알파 또는 이의 결합체를 포함하는 약학적 조성물은 암의 예방 또는 치료에 이용될 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어, “예방”이란 본 발명의 조성물 투여에 의하여 암의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하며, 용어, “치료”란 본 발명의 조성물 투여에 의하여 암의 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 구체적인 일 양태에 따르면, 인간 호지킨 림프종 세포인 Daudi 세포에서 항증식 인 비트로 효력 시험을 수행하였으며, 그 결과 본 발명의 인터페론 알파 결합체는 천연형 인터페론 알파와 비교하여 암세포 증식에 있어 우수한 억제 효과를 가짐을 나타내었다 (표 1, 도 1). 본 발명의 구체적인 일 양태에 따르면, 인간 난소암 세포 (SK-OV-3)가 피하에 이식된 누드마우스에 본 발명의 인터페론 알파 결합체를 투여하였으며, 그 다음 종양의 크기 변화를 관찰하였다. 그 결과 음성 대조군, 천연형 인터페론 알파 및 PEG 수식 인터페론 알파를 비교하였을 때 종양의 크기가 변화가 없음을 나타내었다 (표 2, 도 2).
또한, 본 발명의 인터페론 알파 결합체는 Ras 억제제, Raf 억제제, MEK 억제제 및 MAPK 억제제로부터 선택된 항암제, 바람직하게는 젬시타빈 또는 소라페닙 (Sorafenib, Raf 억제제)과 병용 투여함으로써 우수한 항암 활성을 나타낼 수 있다.
본 발명의 "Ras 억제제"는 Ras (H-Ras, K-Ras 또는 N-Ras 포함)의 발암 원성을 표적으로 하거나, 저하시키거나 억제하는 화합물을 말하며, 예를 들면 L-744832, DK8G557 또는 R115777 (자르네스트라(ZARNESTRA))같은 파르네실 트랜스퍼라제 억제제(farnesyl transferase inhibitor)가 있다.
본 발명의 "Raf 억제제"는 세포 분화, 증식 및 아폽토시스에 있어서 세포 외부 신호-조절 키나제로서 중요한 역할을 하는 Raf 키나제를 표적으로 하거나, 저하시키거나 억제하는 화합물을 의미하며, Raf 억제제의 표적은 이에 제한되지 않지만 RAF1을 포함할 수 있다. 예를 들어 3-(3,5-디브로모-4-히드록시벤질리덴)-5-요오도-1,3-디히드로인돌-2-온; 및 벤즈아미드, 3-(디메틸아미노)-N-[3-[(4-히드록시벤조일)아미노]-4-메틸페닐]-(9Cl)을 포함할 수 있다.
본 발명의 "MEK 억제제"는 MAP 키나제인 MEK의 키나제 활성을 표적으로 하거나, 저하시키거나 억제하는 화합물을 의미하며, MEK 억제제의 표적은 이에 제한되지 않지만 ERK 및 시클린 D1을 포함할 수 있다. MEK 억제제의 예는 이에 제한되지 않지만 부탄디니트릴, 비스[아미노[2-아미노페닐)티오]메틸렌]-(9Cl)을 포함할 수 있다.
본 발명의 "MAPK 억제제"는 MAP를 표적으로 하거나, 저하시키거나 억제하는 화합물을 의미한다. MAP 키나제(MAPK)는 다양한 세포외 자극에 대한 반응으로 활성화되고 세포 표면으로부터 핵으로의 신호 전달을 매개하는 단백질인 세린/트레오닌 키나제 단백질의 군이다. 이것은 염증, 아폽토시스성 세포 사멸, 발암적 변형, 종양 세포 침습 및 전이를 포함하는 여러 생리학적 및 병리학적 세포 현상을 조절한다. MAPK 억제제의 예는 이에 제한되지 않지만, 벤젠술폰아미드, N-[2-[[[3-(4-클로로페닐)-2-프로페닐]메틸]아미노]메틸]페닐]-N-(2-히드록시에틸)-4-메톡시-(9Cl)을 포함할 수 있다.
본 발명의 젬시타빈은 2'-데옥시-2',2'-디플루오로 시티딘의 일반명을 가지는 화합물로서, 비시놀 디플루오라인 치환된 데옥시시티딘 유사체이고, 이의 단일염산염 (monohydrochloride) 및 β-이성질체를 포함할 수 있다. 젬시타빈은 RKIP (Raf kinase inhibitor Protein)을 활성화시켜 Raf 억제제로 작용한다. 종래에 젬시타빈은 췌장암 치료에 있어, 가장 우수한 임상적 활성을 나타내는 약물인 것으로 생각되었다. 그러나 젬시타빈은 암 세포와 빠르게 분열하는 정상 세포 간의 특이성 결여로 야기되는 독성을 갖고, 대부분의 종양 세포에 기 존재하는 내성 또는 후천적인 내성을 가져, 췌장암 상태를 상당히 증진시키지는 못하였다. 젬시타빈/시스플라틴, 젬시타빈/카페시타빈, 젬시타빈/아바스틴, 젬시타빈/인터페론 알파의 병용 요법 역시 시도되었으나 치료 효과는 만족스럽지 않았다.
본 발명자들은 본 발명의 인터페론 알파 결합체를 Ras 억제제, Raf 키나제 억제제, MEK 억제제 및 MAPK 억제제로부터 선택된 항암제 (k-ras 변이를 극복할 수 있는 항암제), 특히 젬시타빈과 병용 투여하는 경우, 매우 현저한 항암 활성을 보이는 것을 확인하였다. Ras -> Raf -> MEK -> MAPK 신호전달경로의 활성화는 세포의 분화 및 성장을 촉진하고, 또한 인터페론 알파 경로 중 하나인 인터페론 알파의 항암활성 (아폽토시스)를 억제하는 STAT를 억제한다. Ras 억제제, Raf 키나제 억제제, MEK 억제제 및 MAPK 억제제로부터 선택된 항암제는 본 발명의 인터페론 알파 결합체와 병용 투여하는 경우 현저한 항암 활성을 나타내었고, 특히 젬시타빈 혹은 인터페론 단독으로 투여하는 경우 반응이 없었던 k-ras 변이를 가지는 Panc1 및 Miapaca2 췌장암 세포주에 대하여 뛰어난 항암 효과를 나타내었다. 더욱이, 상기 현저한 항암 활성은 상기 항암제를 천연형 인터페론 알파 또는 PEG 수식 인터페론 알파와 병용 투여했을 경우에는 확인할 수 없었던 상승 효과에 의한 것이었다. 따라서 본 발명의 인터페론 알파 결합체와 상기 항암제의 병용 투여는 우수한 항암 활성을 나타내는 상승 효과를 유도하는 것이 확인되었다.
본 발명의 구체적인 일 양태에 따르면, 인간 췌장암 세포 (BxPC-3)를 누드마우스의 피하에 이식하였고 본 발명의 인터페론 알파 결합체 단독 투여, 또는 본 발명의 인터페론 알파 결합체와 젬시타빈의 병용 투여를 수행하였으며, 그 후 종양의 크기 변화를 관찰하였다. 그 결과 젬시타빈 또는 PEG 수식 인터페론 알파 단독 투여와 비교하여 음성 대조군보다 종양 크기가 감소한 것을 확인하였다 (표 3, 도 3).
본 발명의 구체적인 일 양태에 따르면, 인간 췌장암 세포 (Panc-1)를 누드마우스의 피하에 이식하였고 본 발명의 인터페론 알파 결합체와 젬시타빈을 병용 투여를 수행하였으며, 그 후 종양의 크기 변화를 관찰하였다. 그 결과 음성 대조군과 비교하여 종양의 크기가 감소한 것을 확인하였으며, 젬시타빈과 본 발명의 인터페론 알파 결합체의 상승 효과 또한 확인하였다 (표 4, 도 4 및 도 5). 본 발명의 구체적인 일 양태에 따르면, 인간 췌장암 세포 (Miapaca-2)를 누드마우스의 피하에 이식하였고, 본 발명의 인터페론 알파 결합체와 젬시타빈의 병용 투여를 수행하였으며, 그 후 종양의 크기 변화를 관찰하였다. 그 결과 음성 대조군과 비교하여 종양의 크기가 감소한 것을 확인하였고, 젬시타빈/PEG 수식 인터페론 알파 병용 투여의 경우와 비교하여, 젬시타빈과 본 발명의 인터페론 알파 결합체의 병용투여가 상승 효과를 보였다 (표 5, 도 6).
본 발명의 항암용 약학적 조성물은 k-ras 변이를 가지는 암의 치료를 위해 사용할 수 있고, 바람직하게는 췌장암, 흑색종, 신장암 또는 난소암의 치료를 위해 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 췌장암 치료를 위해 사용할 수 있다.
본 발명의 항암용 약학적 조성물은 상기 인터페론 알파 결합체가 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강 내 투여, 정맥 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여, 피 내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비 내 투여, 폐 내 투여, 직장 내 투여를 포함하는 다양한 투여 형식이 고려될 수 있으나, 본 발명은 이러한 투여의 예시형식에 제한되지는 않는다. 그러나 경구 투여시 단백질은 소화가 되기 때문에 경구 투여용 조성물의 활성 성분은 코팅되거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화되어야 한다. 바람직하게는 상기 조성물은 주사제 형태로 투여될 수 있다. 또한, 상기 약학적 조성물은 활성 성분이 표적 세포로 이동할 수 있는 특정 장치에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 인터페론 알파 또는 이의 결합체를 포함한 항암용 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 경구투여의 경우 약학적으로 허용되는 담체는 결합제, 활택제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소 및 향료를 포함할 수 있다. 주사제의 경우 약학적으로 허용되는 담체는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장화제 및 안정화제를 포함할 수 있다. 국소투여용의 경우 약학적으로 허용되는 담체는 기제, 부형제, 윤활제 및 보존제를 포함할 수 있다. 본 발명의 항암용 약학적 조성물의 제형은 상술한 바와 같은 약학적으로 허용되는 담체와 조합하여 다양한 제형으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구 투여시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭시르제, 서스펜션, 시럽 또는 웨이퍼로 제형화될 수 있다. 주사제의 경우에는 단위 투약 제형의 앰플 또는 다용량 용기와 같은 다회 투약 제형으로 제형화할 수 있다. 상기 조성물은 또한 용액, 현탁액, 정제, 환약, 캡슐 및 서방형 제제로 제형화할 수 있다.
한편, 제제화에 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 포함한다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료 및 방부제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 항암용 약학적 조성물의 투여량은 항암제의 종류뿐 아니라 치료할 암종, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중증도를 포함하는 여러 관련 인자들에 의해 결정될 수 있다. 본 발명의 항암용 약학적 조성물은 우수한 생체 내 반감기 및 우수한 항암 활성을 가지므로, 투여 횟수 및 용량을 현저하게 감소시킬 수 있다. 항암제와 병용 투여할 경우, 병용 투여되는 항암제의 투여 용량을 감소시킬 수 있으며 그에 따라 항암제 부작용을 감소시키고 환자의 치료 순응도를 상승시킬 수 있다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 인터페론 알파 또는 이의 결합체를 포함하는 항암용 약학적 조성물을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 암의 치료 방법을 제공한다.
상기 인터페론 알파, 약학적 조성물 및 암에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.
구체적으로, 본 발명의 치료 방법은 상기 약학적 조성물을 약학적 유효량으로 암 의심 개체 내에 투여하는 단계를 포함한다. 상기 개체는 개, 소, 말, 토끼, 마우스, 랫트, 닭, 및 인간을 포함한 포유류 전체를 의미하나, 본 발명의 포유류는 상기 예에 의해 한정되는 것은 아니다. 상기 약학적 조성물은 비 경구, 피하, 복강 내, 폐 내, 및 비강 내 경로를 통하여 투여될 수 있다. 국부적 치료를 위해, 필요하다면 병변 내 투여를 포함하는 적합한 방법에 의해 투여될 수 있다. 비 경구 주입에는 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내 또는 피하투여가 포함된다. 바람직한 제형은 정맥 주사, 피하 주사, 피 내 주사제, 근육 주사 또는 점적 주사 제형이다. 본 발명의 상기 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다를 수 있으며, 당업자에 의해 적절하게 결정될 수 있다.
본 발명의 인터페론 알파 결합체는 종래의 인터페론 알파에 비하여 긴 생체 내 반감기 및 보다 우수한 항암 활성을 보이며, 특히 젬시타빈과 같은 항암제와 병용 투여는 암세포 성장과 증식에 대하여 상승적인 억제 효과를 가져 현저히 우수한 항암 활성을 나타낸다. 본 발명의 항암용 약학적 조성물은 우수한 생체 내 반감기 및 항암 활성을 가져 투여빈도를 현저히 감소시킬 수 있다. 항암 활성이 우수한 인터페론 알파 결합체를 항암제와 병용 투여함으로써, 항암제의 부작용을 감소시키고 환자의 치료 순응도를 상승시킬 수 있다.
도 1은 Daudi 세포의 암세포 증식에 대한 인터페론 알파와 본 발명의 일 양태의 인터페론 알파 결합체의 인 비트로 억제 효과를 보여주는 그래프이다.
도 2는 인간 난소암 세포 (SK-OV-3)를 피하에 이식한 누드 마우스 (athymic BALB/c nude)에 본 발명의 일 양태의 인터페론 알파 결합체를 투여한 후, 종양의 크기 변화를 보여주는 그래프이다.
도 3은 인간 췌장암 세포 (BxPC-3)를 피하에 이식한 누드 마우스 (athymic BALB/c nude)에 본 발명의 일 양태의 인터페론 알파 결합체와 젬시타빈을 병용 투여한 후 종양의 크기 변화를 보여주는 그래프이다.
도 4는 인간 췌장암 세포 (Panc-1)를 피하에 이식한 누드 마우스 (athymic BALB/c nude)에 본 발명의 일 양태의 인터페론 알파 결합체와 젬시타빈을 병용 투여한 후 종양의 크기 변화를 보여주는 그래프이다.
도 5는 인간 췌장암 세포 (Panc-1)를 피하에 이식한 누드 마우스 (athymic BALB/c nude)에 본 발명의 일 양태의 인터페론 알파 결합체와 젬시타빈을 병용 투여 한 후, 마우스를 개체별로 부검하여 종양의 크기를 확인한 그림을 보여준다.
도 6은 인간 췌장암 세포 (Miapaca-2)를 피하에 이식한 누드 마우스 (athymic BALB/c nude)에 본 발명의 일 양태의 인터페론 알파 결합체와 젬시타빈을 병용 투여한 후 종양의 크기 변화를 보여주는 그래프이다.
이하, 하기 실시예에 의하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명이 이들 실시예로 한정되고자 하는 것은 아니다.
실시예 1. 인터페론 알파 결합체의 제조
하기 실험에서 사용한 인터페론 알파는 대한민국 등록특허 제10-0360594호에 기재된 방법에 따라 제조하였다. 인터페론 알파 결합체는 상기 제조된 인터페론 알파를 사용하여 대한민국 등록특허 제10-0725315호에 기재된 방법에 따라 제조하였다. 구체적인 대표적 방법은 하기와 같다.
실시예 1-1. 인터페론 알파( IFN α)- PEG -면역글로불린 Fc 단편 결합체의 제조 I
<단계 1> 면역글로불린을 이용한 면역글로불린 Fc 단편의 제조
면역글로불린 Fc 단편은 하기와 같이 제조되었다. 10 mM 인산염 완충액에 용해된 150 kDa의 면역글로불린 G (Immunoglobulin G; IgG, 녹십자) 200㎎에 단백질 가수분해효소 파파인 (Papain, Sigma사)을 2㎎ 처리하여 37℃에서 2시간 동안 천천히 교반하였다. 효소반응 후, 생성된 면역글로불린 Fc 단편의 정제를 위해 슈퍼덱스 컬럼, 단백질 A 컬럼 및 양이온 교환수지 컬럼 크로마토그래피를 순차적으로 사용하는 크로마토그래피에 적용하였다. 구체적으로, 반응액을 10 mM 인산나트륨 완충액 (PBS, pH 7.3)으로 평형화시킨 슈퍼덱스 200 컬럼 (Superdex 200, Pharmacia사)에 로딩하였으며, 동일한 완충액을 이용하여 유속 1㎖/분으로 상기 컬럼에서 용출시켰다. 면역글로불린 Fc 단편보다 분자량이 상대적으로 큰, 미반응 면역글로불린(IgG)과 F(ab')2는 면역글로불린 Fc 단편 보다 먼저 용출되는 특성을 이용하여 제거하였다. 면역글로불린 Fc 단편과 분자량이 유사한 Fab는 단백질 A 컬럼 크로마토그래피로 제거하였다. 슈퍼덱스 200 컬럼에서 용출된 면역글로불린 Fc 단편 함유 분획을, 20 mM 인산염 완충액 (pH 7.0)으로 평형화시킨 단백질 A 컬럼 (Pharmacia 사)에 5 ㎖/분의 유속으로 로딩한 후, 동일 완충액으로 세척하여 컬럼에 결합하지 않은 단백질을 제거하였다. 그리고 단백질 A 컬럼을 100 mM 시트르산 나트륨 (Na citrate, pH 3.0) 완충액으로 용출시켜 고순도의 면역글로불린 Fc 단편을 수득하였다. 단백질 A 컬럼으로 수득한 Fc 분획을 양이온 교환수지 컬럼 (polyCAT, PolyLC사)을 사용하여 최종 정제하였는데, 상기 Fc 분획이 부하된 컬럼은 10 mM 아세테이트 완충액(pH 4.5)을 염화나트륨(NaCl) 0.15M-0.4M의 직선 농도구배로 용출시켜, 고순도의 Fc 분획을 제공하였다. 고순도의 Fc 분획은 12% SDS-PAGE로 분석하였다.
<단계 2> IFN α- PEG 연결체의 제조
양쪽 말단에 알데히드 반응기를 가진 3.4 kDa의 폴리에틸렌 글리콜인 ALD-PEG-ALD (Shearwater사)를 인간 인터페론 알파-2b (hIFNα-2b, MW: 20 kDa)가 5 ㎎/㎖ 농도로 용해된 100 mM 인산염 완충액에 1:1, 1:2.5, 1:5, 1:10 및 1:20의 IFNα:PEG의 몰비로 혼합하였다. 상기 혼합물에 환원제인 시아노보로하이드라이드나트륨 (NaCNBH3, Sigma사)을 최종 농도 20 mM이 되도록 첨가하고, 4℃에서 천천히 교반하면서 3시간 동안 반응시켜 PEG가 인터페론 알파의 아미노 말단 부위에 연결 되도록 하였다. PEG와 인터페론 알파가 1:1로 결합된 연결체를 얻기 위하여 상기 반응 혼합물을 슈퍼덱스알 (SuperdexR, Pharmacia사) 컬럼을 사용한 크기 배제 (size exclusion) 크로마토그래피에 적용하였다. 용출액으로 10 mM 칼륨-포스페이트 완충액 (pH 6.0)을 사용하여 상기 컬럼으로부터 IFNα-PEG 연결체를 용출시켰고, PEG와 결합하지 않은 인터페론 알파, 미반응 PEG 및 2개의 인터페론 알파가 PEG와 연결된 이량체 부산물을 제거하였다. 정제된 IFNα-PEG 연결체는 5 ㎎/㎖ 농도로 농축하였다. 이 실험으로부터 반응성이 가장 좋고 이량체와 같은 부산물이 가장 적은 양이 생산되는 IFNα:PEG의 최적 반응 몰비는 1:2.5 내지 1:5임을 확인하였다.
<단계 3> IFN α- PEG - Fc 결합체 제조
상기 단계 2에서 정제된 IFNα-PEG 연결체를 면역글로블린 Fc 단편의 N 말단에 연결시키기 위하여, 단계 1에서 제조된 면역글로불린 Fc 단편 (약 53 kDa)을 10 mM 인산염 완충액에 용해시킨 후, IFNα-PEG 연결체와 1:1, 1:2, 1:4 및 1:8의 IFNα-PEG 연결체:Fc의 몰비로 혼합하였다. 반응액의 인산염 완충액 농도를 100 mM로 맞춘 후, 환원제로서 NaCNBH3를 최종 농도가 20 mM이 되도록 반응액에 첨가하고 4℃에서 20시간 동안 천천히 교반하면서 반응시켰다. 이 실험으로부터 반응성이 가장 좋고 이량체와 같은 부산물이 가장 적게 생산되는 IFNα-PEG 연결체:Fc의 최적 반응 몰비는 1:2임을 확인하였다.
<단계 4> IFN α- PEG - Fc 결합체의 분리 및 정제
상기 단계 3의 반응 후, 반응 혼합물을 슈퍼덱스 크기 배제 크로마토그래피에 적용하여, 미반응 물질 및 부산물을 제거하고 생성된 IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체를 정제하였다. 반응 혼합물을 농축하고 슈퍼덱스 컬럼에 로딩한 후, 10 mM 인산염 완충액(pH 7.3)을 유속 2.5 ㎖/분으로 컬럼에 통과시켜 결합되지 않은 Fc 및 미반응 물질을 제거하였고, 컬럼 용출을 통해 IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체 분획을 수집하였다. 수집된 IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체 분획에는 소량의 불순물로서 미반응 Fc 및 인터페론 알파 이량체를 포함하고 있기 때문에 양이온 교환수지 크로마토그래피를 수행하여 상기 불순물을 제거하였다. IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체 분획을 10 mM 아세트산 나트륨 (pH 4.5)으로 평형화시킨 PolyCAT LP 컬럼 (PolyLC사)에 로딩하고, 1 M 염화나트륨 (NaCl)을 사용하여 10 mM 아세트산 나트륨 (pH 4.5) 완충액에서 염화나트륨 (NaCl) 0M-0.5M의 직선 농도구배로 컬럼에서 용출시켰다. 마지막으로 음이온 교환컬럼을 사용하여 IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체를 정제하였다. 10 mM Tris-HCl (pH 7.5) 완충액으로 평형화시킨 PolyWAX LP 컬럼 (PolyLC사)에 상기 IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체 분획을 로딩하였고, 1 M 염화나트륨을 사용하여 10 mM Tris-HCl (pH 7.5) 완충액에서 염화나트륨 (NaCl) 0M-0.3M의 직선 농도구배로 컬럼으로부터 용출시켜, 고순도 형태의 IFNα-PEG-Fc 단백질 결합체를 분리하였다.
실시예 1-2. IFN α- PEG - Fc 결합체의 제조 Ⅱ
<단계 1> Fc - PEG 연결체의 제조
양쪽 말단에 알데히드 반응기를 가진, 3.4 kDa의 폴리에틸렌 글리콜인 ALD-PEG-ALD (Shearwater사)과 상기 실시예 1-1의 단계 1에서 제조된 면역글로불린 Fc 단편이 15 ㎎/㎖의 양으로 용해된 100 mM 인산염 완충액을, 1:1, 1:2.5, 1:5, 1:10 및 1:20의 Fc:PEG의 몰비로 혼합하였다. 이 혼합액에 환원제인 NaCNBH3를 최종 농도 20 mM로 첨가한 후, 4℃에서 천천히 교반하면서 3시간 동안 반응시켰다. PEG 및 Fc의 1:1 연결체를 얻기 위하여, 상기 반응 혼합물을 슈퍼덱스κ 컬럼 (Pharmacia사)을 사용한 크기 배제 크로마토그래피에 적용하였다. 용출액으로 10 mM 칼륨-포스페이트 완충액 (pH 6.0)을 사용하여 컬럼으로부터 Fc-PEG 연결체를 용출시켰고, PEG와 연결하지 않은 면역글로불린 Fc 단편, 미반응 PEG 및 2개의 면역글로불린 Fc 단편이 PEG와 연결된 이량체 부산물을 제거하였다. 정제된 Fc-PEG 연결체를 약 15 ㎎/㎖로 농축하였다. 이 실험으로부터 반응성이 가장 좋고 이량체와 같은 부산물이 가장 적게 생성되는 Fc:PEG의 최적 반응 몰비는 1:3 내지 1:10임을 확인하였다.
<단계 2> Fc - PEG 연결체와 인터페론 알파의 결합체 형성 및 정제
상기 단계 1에서 정제된 Fc-PEG 연결체를 IFNα N 말단에 연결시키기 위하여, 10 mM 인산염 완충액에 용해된 인터페론 알파와 Fc-PEG 연결체를 1:1, 1:1.5, 1:3 및 1:6의 Fc-PEG 연결체:IFNα 몰비로 혼합하였다. 반응액의 인산염 완충액 농도를 100mM이 되도록 맞춘 후, 환원제로서 NaCNBH3를 반응액에 최종 농도가 20 mM이 되도록 첨가한 후 4℃에서 20시간 동안 천천히 교반하면서 반응시켰다. 반응 완료 후 실시예 1-1의 단계 4와 동일한 정제 방법에 따라 미반응 물질 및 부산물을 제거하고, 고순도 형태의 Fc-PEG-IFNα 단백질 결합체를 분리하였다.
실시예 2. Daudi 세포에서 인터페론 알파 결합체의 인 비트로 세포 증식 억제 효과 시험
Daudi 세포를 사용하였고, 배양 배지와 시험 배지는 RPMI1640에 10% FBS 및 10% PS를 첨가한 배지를 사용하였다. 96 웰 둥근 바닥 플레이트에서 인터페론 알파와 본 발명의 인터페론 알파 결합체를 4배씩 시험 배지에 10개 농도로 희석하였다. 희석한 시험 배지를 각각 50μL씩 96 웰 편평한 바닥 플레이트로 옮겼다. Daudi 세포를 1000rpm 에 5분간 원심 분리 후 PBS 50mL로 코니칼 (cornical) 튜브에서 세척하였다. 상기 세포를 1000rpm에 5분간 원심 분리 후 시험용 배지를 넣고 세포의 수를 계수하였다. Daudi 세포를 5x105 cell/mL 농도로 희석 후 각 웰당 100μL 씩 넣어주고, 37℃에서 72시간 배양하였다. 그 후 CCK-8을 각 웰당 20μL씩 넣어주고 3시간 후 450nm에서 흡광도를 측정하였다.
인터페론 알파와 본 발명의 인터페론 알파 결합체 (지속형 인터페론 알파 결합체)의 인 비트로 암세포 증식 억제 효과를 EC50으로 확인하였다 (표 1, 도 1). 그 결과, 본 발명의 인터페론 알파 결합체는 인터페론 알파와 비교하여 우수한 암세포 증식 억제 효과를 보였다.
시험군 EC50(pg/mL)
인터페론 알파 21.7
지속형 인터페론 알파 결합체 229.7
실시예 3. 인간 난소암 세포 이식 마우스에서 인터페론 알파 결합체 단독투여의 인 비보 항암 효과 시험
상기 실시예 1에서 제조한 인터페론 알파 결합체의 인 비보 항암 효과를 측정하기 위하여 인간 난소암 세포 (SK-OV-3)를 피하에 이식한 마우스에서 종양의 크기 변화를 확인하였다.
5주령의 Athymic BALB/c 누드 마우스에 인 비트로에서 배양한 SK-OV-3 세포를 1x 108/4 mL 양만큼 피하 주사한 후 배양하였다. 이후 30mm2 크기의 고형암을 마우스 피하에 이식하였다. 이후 마우스를 군당 5 마리씩 피하에 이식된 암의 크기에 따라 4개의 군 (G1, G2, G3, G4)으로 분류하였다.
대조군 (Vehicle), 인터페론 알파 (30 mcg/kg, Q1D x 5회 x 4 주, 피하주사), PEG 수식 인터페론 알파 (150 mcg/kg, QW x 4 주, 피하주사) 및 본 발명의 인터페론 알파 결합체 (150 mcg/kg, QW x 4주, 피하주사)를 상기 군에 단독 투여하였다. 상기 시험물질 투여 후 상기 각 군의 종양의 크기 변화를 4주 동안 측정하여, 대조군 대비 종양 억제 비율을 결정하였다 (표 2).
그 결과, 본 발명의 인터페론 알파 결합체의 투여 군은, 음성 대조군 (Vehicle), 천연형 인터페론 알파 및 PEG 수식 인터페론 알파 투여군과 비교하여 종양의 크기가 증가되지 않음을 확인하였다 (도 2).
투여군 복용량(mcg/kg) 종양 성장 저해율
(%, vehicle 대비)
인터페론 알파 30(Q1D*5)*4주 63.84
PEG 인터페론 알파 150 X 4주 55.49
지속형 인터페론 알파 결합체 150 X 4주 93.37
실시예 4. 인간 췌장암 세포 이식 마우스에서 인터페론 알파 결합체 단독투여의 인 비보 항암 효과 시험
상기 실시예 1에서 제조한 인터페론 알파 결합체의 인 비보 항암 효과를 측정하기 위하여 인간 췌장암 세포 (BxPC3)를 피하에 이식한 마우스에서 종양의 크기 변화를 확인하였다.
5 주령의 Athymic BALB/c 누드 마우스에 인 비트로에서 배양한 BxPC3 세포를 1x 108/4 mL 양만큼 피하 주사한 후 배양하였다. 이후 30mm2 크기의 고형암을 마우스 피하에 이식하였다. 이후 마우스를 군당 6 마리씩 피하에 이식된 암의 크기에 따라 5개의 군(G1, G2, G3, G4, G5)으로 분류하였다.
상기 군에 대조군 (Vehicle), 젬시타빈 (30 mg/kg, Q3D, 4주, 정맥주사), PEG 수식 인터페론 알파 (30 mcg/kg, QW x 4주, 피하주사) 및 본 발명의 인터페론 알파 결합체 (30 mcg/kg, QW, 4주, 피하주사)를 단독 투여하고, 젬시타빈 (30 mg/kg, Q3D, 4주, 정맥주사)과 본 발명의 인터페론 알파 결합체 (30 mcg/kg, QW, 4주, 피하주사)를 병용 투여하였다. 상기 시험물질 투여 후 상기 각 군의 종양의 크기 변화를 4주 동안 측정하여, 대조군 대비 종양 억제 비율을 결정하였다 (표 3).
그 결과, 본 발명의 인터페론 알파 결합체의 투여군, 및 젬시타빈과 본 발명의 인터페론 알파 결합체의 병용투여 군에서, 젬시타빈 단독 투여군 및 PEG 수식 인터페론 알파 단독 투여군과 비교하여, 음성 대조군 (Vehicle) 대비 종양의 크기가 감소한 것을 확인하였다 (도 3).
투여군 복용량 종양 성장 저해율
(%, vehicle 대비)
젬시타빈 30 mg/kg, Q3D X 4주 20
지속형 인터페론 알파 결합체 30 mcg/kg, QW X 4주 57
젬시타빈 + 지속형 인터페론 알파 결합체 30 mg/kg, Q3D X 4주 +
30 mcg/kg, QW X 4주		 64
PEG 인터페론 알파 30 mcg/kg, QW X 4주 22
실시예 5. 인간 췌장암 세포 이식 마우스에서 인터페론 알파 결합체 단독투여의 인 비보 항암 효과 시험
상기 실시예 1에서 제조한 인터페론 알파 결합체의 인 비보 항암 효과를 측정하기 위하여 인간 췌장암 세포 (Panc-1)를 피하에 이식한 마우스에서 종양의 크기 변화를 확인하였다.
5주령의 Athymic BALB/c 누드 마우스에 인 비트로에서 배양한 Panc-1 세포를 1x 108/4 mL 양만큼 피하 주사한 후 배양하였다. 이후 30mm2 크기의 고형암을 다시 마우스 피하에 이식하였다. 이후 마우스를 군당 6 마리씩 피하에 이식된 암의 크기에 따라 5개의 군 (G1, G2, G3, G4, G5)으로 분류하였다.
상기 군에 대조군 (Vehicle), 젬시타빈 (40 mg/kg, Q3D, 3주, 정맥주사), PEG 수식된 인터페론 알파 (30 mcg/kg, QW x 3주, 피하주사), 본 발명의 인터페론 알파 결합체 (30 mcg/kg, QW, 3주, 피하주사)를 단독 투여하고, 젬시타빈 (40 mg/kg, Q3D, 3주, 정맥주사)과 본 발명의 인터페론 알파 결합체 (30 mcg/kg, QW, 3주, 피하주사)를 병용 투여하였다. 상기 시험물질 3주간 투여 후 상기 각 군의 종양의 크기 변화를 4주 동안 측정하여, 대조군 대비 종양 억제 비율을 결정하였다(표 4).
그 결과, 젬시타빈과 본 발명의 인터페론 알파 결합체의 병용 투여 군에서 대조군 (Vehicle) 대비 종양의 크기가 감소된 것을 확인하였고, 젬시타빈과 본 발명의 인터페론 알파 결합체의 상승 효과를 확인하였다(도 4 및 5).
투여군 투여량 종양 성장 억제율
(%, vehicle 대비)
젬시타빈 40 mg/kg, Q3D X 3주 60
지속형 인터페론 알파 결합체 30 mcg/kg, QW X 3주 14
젬시타빈 + 지속형 인터페론 알파 결합체 40 mg/kg, Q3D X 3주 +
30 mcg/kg, QW X 3주		 98
PEG 인터페론 알파 30 mcg/kg, QW X 3주 -23
실시예 6. 인간 췌장암 세포 이식 마우스에서 인터페론 알파 결합체 단독투여의 인 비보 항암 효과 시험
상기 실시예 1에서 제조한 인터페론 알파 결합체의 인 비보 항암 효과를 측정하기 위하여 인간 췌장암 세포 (Miapaca-2)를 피하에 이식한 마우스에서 종양의 크기 변화를 확인하였다.
5주령의 Athymic BALB/c 누드 마우스에 인 비트로에서 배양한 Miapaca-2 세포를 1x108/4 mL 양만큼 피하 주입한 후 배양하였다. 이후 30mm2 크기의 고형암을 다시 마우스 피하에 이식하였다. 이후 마우스를 군당 7 마리씩 피하에 이식된 암의 크기에 따라 5개의 군 (G1, G2, G3, G4, G5)으로 분류하였다.
상기 군에 대조군 (Vehicle), 젬시타빈 (40 mg/kg, Q3D, 3주, 정맥주사), PEG 수식 인터페론 알파 (30 mcg/kg, QW x 4주, 피하주사), 본 발명의 인터페론 알파 결합체 (30 mcg/kg, QW, 4주, 피하주사)를 단독 투여하고, 젬시타빈 (40 mg/kg, Q3D, 4주, 정맥주사)과 본 발명의 인터페론 알파 결합체 (30 mcg/kg, QW, 4주, 피하주사)를 병용 투여하였다. 상기 시험물질 투여 후 상기 각 군의 종양의 크기 변화를 4주 동안 측정하여, 대조군 대비 종양 억제 비율을 결정하였다 (표 5).
그 결과, 젬시타빈과 본 발명의 인터페론 알파 결합체의 병용투여 군에서 음성 대조군과 비교하여 종양의 크기가 감소된 것을 확인하였고, 젬시타빈/PEG 수식 인터페론 알파 병용 투여의 경우와 비교하여, 젬시타빈과 본 발명의 인터페론 알파 결합체의 상승 효과를 확인하였다 (도 6).
투여군 투여량 종양 성장 억제율
(% vehicle 대비)
젬시타빈 40 mg/kg, Q3D X 4주 17
지속형 인터페론 알파 결합체 30 mcg/kg, QW X 4주 19
젬시타빈 + 지속형 인터페론 알파 결합체 40 mg/kg, Q3D X 4주 +
30 mcg/kg, QW X 4주		 75
PEG 인터페론 알파 30 mcg/kg, QW X 4주 19
젬시타빈 + PEG 인터페론 알파 40 mg/kg, Q3D X 4주 +
30 mcg/kg, QW X 4주		 36
<110> HANMI SCIENCE CO., LTD. BEIJING HANMI PHARMACEUTICAL CO., LTD. <120> A pharmaceutical composition for treating cancer, comprising interferon alpha conjugate <130> IKPA140004 <150> CN 201110269277.0 <151> 2011-09-05 <160> 2 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 165 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> human interferon alpha 2a <400> 1 Cys Asp Leu Pro Glu Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met 1 5 10 15 Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Arg Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln 35 40 45 Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe 50 55 60 Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu 65 70 75 80 Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu 85 90 95 Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys 100 105 110 Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu 115 120 125 Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg 130 135 140 Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser 145 150 155 160 Leu Arg Ser Lys Glu 165 <210> 2 <211> 165 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> human interferon alpha 2b <400> 2 Cys Asp Leu Pro Glu Thr His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met 1 5 10 15 Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp 20 25 30 Arg Arg Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln 35 40 45 Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe 50 55 60 Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu 65 70 75 80 Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu 85 90 95 Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys 100 105 110 Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu 115 120 125 Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg 130 135 140 Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser 145 150 155 160 Leu Arg Ser Lys Glu 165

Claims (27)

  1. 인터페론 알파를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 인터페론 알파는 생체 내 수용체에 결합하여 야생형 인터페론 알파와 동일하거나 상응하는 생물학적 활성을 나타내는 물질로서, 야생형 인터페론 알파, 인터페론 알파 유도체, 인터페론 알파 변이체 또는 이들의 단편인 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 인터페론 알파는 인터페론 알파와 중합체가 결합된, 중합체 결합체 형태인 것인 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 중합체는 폴리에틸렌글리콜, 항체, 항체 단편, 면역글로불린 불변영역, 파이브로넥틴, 알부민 및 엘라스틴으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  5. 제3항에 있어서, 상기 중합체 결합체는 인터페론 알파와 면역글로불린 불변영역이, 폴리에틸렌글리콜, 폴리프로필렌글리콜, 에틸렌글리콜-프로필렌글리콜 공중합체, 폴리옥시에틸화폴리올, 폴리비닐알콜, 폴리사카라이드, 덱스트란, 폴리비닐에틸에테르, 폴리락트산, 폴리락틱-글리콜산, 지질 중합체, 키틴, 히아루론산 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 비펩타이드성 중합체를 통해 서로 연결되어 제조된 것인 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 Ras 억제제, Raf 억제제, MEK 억제제 및 MAPK 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 항암제를 추가로 포함하는 것인 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 젬시타빈 또는 소라페닙을 추가로 포함하는 것인 조성물.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서, 상기 조성물은 k-ras 변이를 갖는 암의 치료에 사용되기 위한 것인 조성물.
  9. 제6항 또는 제7항에 있어서, 상기 조성물은 췌장암, 흑색종, 신장암 또는 난소암 치료에 사용되기 위한 것인 조성물.
  10. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 면역글로불린 불변영역은 면역글로불린 Fc 영역인 조성물.
  11. 제1항에 있어서, 상기 인터페론 알파는 인터페론 알파 2a 또는 인터페론 알파 2b인 것인 조성물.
  12. 제5항에 있어서, 상기 비펩타이드성 중합체는 중합체 결합체에서 인터페론 알파의 N-말단에 연결된 것인 조성물.
  13. 제5항에 있어서, 상기 비펩타이드성 중합체는 중합체 결합체에서 인터페론 알파의 N-말단의 아민 그룹 또는 티올 그룹에 연결된 것인 조성물.
  14. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 면역글로불린 불변영역은 비당쇄화된 것인 조성물.
  15. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 면역글로불린 불변영역은 CH1, CH2, CH3 및 CH4 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개 내지 4개 도메인으로 이루어진 것인 조성물.
  16. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 면역글로불린 불변영역은 CH1, CH2, CH3 및 CH4 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 불변영역 및 경쇄 불변영역의 이량체로 이루어진 것인 조성물.
  17. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 면역글로불린 불변영역은 힌지 영역을 포함하는 것인 조성물.
  18. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 면역글로불린 불변영역은 IgG, IgA, IgD, IgE 또는 IgM에서 유래된 것인 조성물.
  19. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 면역글로불린 불변영역의 각각의 도메인이 IgG, IgA, IgD, IgE 및 IgM로 이루어진 군에서 선택되는 면역글로불린에서 유래된 상이한 기원을 가진 도메인 하이브리드(domain hybrid)인 것인 조성물.
  20. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 면역글로불린 불변영역은 동일한 기원의 도메인으로 이루어진 단쇄 면역글로불린으로 이루어진 이량체 또는 다량체인 조성물.
  21. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 면역글로불린 불변영역은 IgG4 Fc 영역인 것인 조성물.
  22. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 면역글로불린 불변영역은 인간 비당쇄화 IgG4 Fc 영역인 조성물.
  23. 제5항에 있어서, 상기 비펩타이드성 중합체는 1kDa 내지 100 kDa 범위의 분자량을 갖는 것인 조성물.
  24. 제5항에 있어서, 상기 비펩타이드성 중합체의 반응기가 알데히드 그룹, 프로피온 알데히드 그룹, 부틸 알데히드 그룹, 말레이미드 그룹 및 석시니미드 유도체로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  25. 제24항에 있어서, 상기 석시니미드 유도체가 석시니미딜 프로피오네이트, 석시니미딜 카르복시메틸, 하이드록시 석시니미딜 또는 석시니미딜 카보네이트인 조성물.
  26. 제5항에 있어서, 상기 비펩타이드성 중합체는 양 말단에 알데히드 반응기를 갖는 것인 조성물.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 암의 치료 방법.
KR1020147009223A 2011-09-05 2012-09-05 인터페론 알파 결합체를 포함하는 암 치료용 약학적 조성물 KR101990656B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201110269277 2011-09-05
CN201110269277.0 2011-09-05
PCT/KR2012/007113 WO2013036032A1 (en) 2011-09-05 2012-09-05 A pharmaceutical composition for treating cancer, comprising interferon alpha conjugate

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20140084023A true KR20140084023A (ko) 2014-07-04
KR101990656B1 KR101990656B1 (ko) 2019-06-18

Family

ID=47832402

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020147009223A KR101990656B1 (ko) 2011-09-05 2012-09-05 인터페론 알파 결합체를 포함하는 암 치료용 약학적 조성물

Country Status (11)

Country Link
US (1) US9789202B2 (ko)
EP (1) EP2753348B1 (ko)
JP (1) JP6284478B2 (ko)
KR (1) KR101990656B1 (ko)
CN (2) CN103611163A (ko)
AU (1) AU2012305062B2 (ko)
BR (1) BR112014005091A2 (ko)
CA (1) CA2847837A1 (ko)
MX (1) MX358491B (ko)
RU (1) RU2622077C2 (ko)
WO (1) WO2013036032A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019112243A1 (ko) * 2017-12-08 2019-06-13 아주대학교산학협력단 인터페론 감마를 유효성분으로 함유하는 신경섬유육종 예방 또는 치료용 조성물

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10350188B2 (en) * 2011-11-04 2019-07-16 Myron R. Szewczuk Use of Neu1 sialidase inhibitors in the treatment of cancer
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
WO2014179760A1 (en) * 2013-05-03 2014-11-06 The Regents Of The University Of California Cyclic di-nucleotide induction of type i interferon
AR096890A1 (es) * 2013-07-12 2016-02-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Conjugando fc de inmunoglobulina, que mantiene la afinidad de unión del fragmento fc de la inmunoglobulina a fcrn
KR102385120B1 (ko) * 2014-03-31 2022-04-12 한미약품 주식회사 면역글로불린 Fc 단편 결합을 이용한 단백질 및 펩타이드의 용해도를 개선시키는 방법
JPWO2015182625A1 (ja) * 2014-05-26 2017-06-08 国立大学法人京都大学 Ｒａｓ活性阻害薬及びその用途
EP3006045B3 (en) * 2014-10-07 2021-03-17 Cyprumed GmbH Pharmaceutical formulations for the oral delivery of peptide or protein drugs
US10226484B2 (en) 2014-12-01 2019-03-12 Peter Y Novak Pharmaceutical composition for improving health, cure abnormalities and degenerative disease, achieve anti-aging effect of therapy and therapeutic effect on mammals and method thereof
WO2016096577A1 (en) * 2014-12-16 2016-06-23 Invivogen Combined use of a chemotherapeutic agent and a cyclic dinucleotide for cancer treatment
CN107148424B (zh) * 2014-12-16 2021-01-08 凯拉治疗股份公司 用于诱导细胞因子的环状二核苷酸
EP3290048B1 (en) 2015-04-30 2020-09-23 Toray Industries, Inc. Immunity-inducing agent
KR102231217B1 (ko) * 2015-09-24 2021-03-24 한미약품 주식회사 면역글로불린 단편의 특정 위치를 연결 부위로 이용한 단백질 결합체
US10183041B2 (en) * 2017-04-12 2019-01-22 Vector Vitale Ip Llc Antibacterial composition and its use in treating bacterial infections
CN112245570A (zh) * 2019-07-22 2021-01-22 厦门特宝生物工程股份有限公司 一种基于干扰素的疾病治疗方法
EP4282427A1 (en) * 2021-01-21 2023-11-29 Xiamen Amoytop Biotech Co., Ltd. Interferon-based cancer treatment method, and pharmaceutical combination
WO2022256211A1 (en) * 2021-06-04 2022-12-08 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Interferons and nuclear export inhibitors for use in methods of treating cancer

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060275254A1 (en) * 2003-11-13 2006-12-07 Hanmi Pharm. Ind. Co., Ltd. Pharmaceutical composition comprising an immunoglobulin fc region as a carrier
EP2186830A1 (en) * 2007-09-04 2010-05-19 Biosteed Gene Expression Tech. CO., LTD. Polyethylene glycol modified interferon alpha 2b and preparation method and applicatioins thereof
EP2196475A1 (en) * 2007-09-04 2010-06-16 Biosteed Gene Expression Tech. CO., LTD. INTERFERON ALPHA 2a MODIFIED BY POLYETHYLENE GLYCOL, ITS SYNTHESIS PROCESS AND APPLICATION

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE69324671D1 (de) 1992-02-10 1999-06-02 Interferon Sciences Inc Verbesserte alpha-interferon-zusammensetzung und verfahren zu ihrer herstellung aus leukocyten des menschlichen peripheren blute
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
WO1997034631A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
KR100360594B1 (ko) 2000-01-19 2002-11-13 한미약품공업 주식회사 인간 인터페론 알파의 발현 분비벡터 및 이를 이용한인터페론 알파의 생산 방법
RU2179859C1 (ru) * 2001-05-22 2002-02-27 Центральный научно-исследовательский рентгено-радиологический институт Способ лечения почечно-клеточного рака
US20050176108A1 (en) 2003-03-13 2005-08-11 Young-Min Kim Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life
US20040197312A1 (en) 2003-04-02 2004-10-07 Marina Moskalenko Cytokine-expressing cellular vaccine combinations
WO2005123113A2 (en) * 2004-06-14 2005-12-29 Intermune, Inc. Interferon compositions and methods of use thereof
EP1771197A2 (en) 2004-06-30 2007-04-11 Egen Corporation Pegylated interferon alpha-1b
US20090068146A1 (en) 2005-10-31 2009-03-12 Scott Wilhelm Diaryl ureas and combinations
ES2336873B1 (es) * 2007-11-07 2011-01-24 Proyecto De Biomedicina Cima, S.L. Composicion farmaceutica para el tratamiento de cancer.
MX2011000861A (es) * 2008-07-23 2011-06-21 Hanmi Holdings Co Ltd Un complejo polipeptidico que consiste en un polimero no-peptidil que posee tres terminaciones funcionales.
KR101303388B1 (ko) * 2010-10-26 2013-09-03 한미사이언스 주식회사 지속형 인터페론 알파 결합체의 액상 제제

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060275254A1 (en) * 2003-11-13 2006-12-07 Hanmi Pharm. Ind. Co., Ltd. Pharmaceutical composition comprising an immunoglobulin fc region as a carrier
EP2186830A1 (en) * 2007-09-04 2010-05-19 Biosteed Gene Expression Tech. CO., LTD. Polyethylene glycol modified interferon alpha 2b and preparation method and applicatioins thereof
EP2196475A1 (en) * 2007-09-04 2010-06-16 Biosteed Gene Expression Tech. CO., LTD. INTERFERON ALPHA 2a MODIFIED BY POLYETHYLENE GLYCOL, ITS SYNTHESIS PROCESS AND APPLICATION

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Fuxius,S. 등, Anti-Cancer Drugs. 2002, 제13권 제9호 제899-905면* *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019112243A1 (ko) * 2017-12-08 2019-06-13 아주대학교산학협력단 인터페론 감마를 유효성분으로 함유하는 신경섬유육종 예방 또는 치료용 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
MX2014002555A (es) 2014-09-22
MX358491B (es) 2018-08-22
EP2753348B1 (en) 2019-12-11
AU2012305062A1 (en) 2014-03-27
AU2012305062B2 (en) 2017-06-22
EP2753348A1 (en) 2014-07-16
WO2013036032A1 (en) 2013-03-14
EP2753348A4 (en) 2015-05-27
CN103611163A (zh) 2014-03-05
RU2014108725A (ru) 2015-10-20
US20140219961A1 (en) 2014-08-07
JP6284478B2 (ja) 2018-02-28
KR101990656B1 (ko) 2019-06-18
BR112014005091A2 (pt) 2017-06-13
US9789202B2 (en) 2017-10-17
CN111053918A (zh) 2020-04-24
JP2014526460A (ja) 2014-10-06
CA2847837A1 (en) 2013-03-14
RU2622077C2 (ru) 2017-06-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101990656B1 (ko) 인터페론 알파 결합체를 포함하는 암 치료용 약학적 조성물
TWI423813B (zh) 使用免疫球蛋白片段之長效β干擾素製劑
TWI772252B (zh) 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
ES2438098T3 (es) Composición farmacéutica que comprende un Fc de inmunoglobulina como vehículo
KR101895047B1 (ko) 면역글로불린 단편을 이용한 위치 특이적 글루카곤 유사 펩타이드-2 약물 결합체
BRPI0408331B1 (pt) Conjugado de proteína, processo para preparação do dito conjugado de proteína, composição farmacêutica e processo para prolongar a meia vida útil in vivo de umpolipeptídeo fisiologicamente ativo
TW201305195A (zh) 包含調酸素與免疫球蛋白片段之複合物及其用途
CN110092837B (zh) Uti融合蛋白
US20230159607A1 (en) Pharmaceutical composition for preventing or treating mucositis induced by radiotherapy, chemotherapy, or combination thereof, comprising glp-2 derivatives or long-acting conjugate of same
KR101746686B1 (ko) 면역글로불린 단편을 이용한 글루카곤 유사 펩타이드―２（ｇｌｐ―２）약물 결합체
KR20190013615A (ko) 이두로네이트 2-설파타제 결합체
AU2022302907A1 (en) Antibody-drug conjugates comprising humanized antibodies targeting urokinase type plasminogen activator receptor associated protein (uparap)
TW202400246A (zh) 免疫調節抗體-藥物結合物

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant