KR20140066480A

KR20140066480A - 가공된 파낙스속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈관평활근 증식억제 및 거품세포 생성 억제를 통한 동맥경화 치료 및 예방용 조성물

Info

Publication number: KR20140066480A
Application number: KR1020120133751A
Authority: KR
Inventors: 황귀서; 이혜진; 김진희; 박정일
Original assignee: 가천대학교 산학협력단; 주식회사 진생사이언스
Priority date: 2012-11-23
Filing date: 2012-11-23
Publication date: 2014-06-02

Abstract

본 발명은 진세노사이드 Rg3, Rg5, Rk1의 함량의 합이 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc, Rd의 함량의 합보다 더 큰 파낙스속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 동맥경화 치료 및 예방용 약학 조성물 또는 건강기능 식품에 관한 것으로, 상세하게는 본 발명의 가공된 파낙스속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 대식세포에 oxLDL 을 처리하여 생성되는 거품세포 형성에 대한 효과 실험 및 산화적 인자인 NO생성과 지질과산화에 미치는 영향 실험, 염증유발 및 혈관 평활근세포의 증식 유발 인자인 TNFa, iNOS, ABCA1, CD36, PPAR-gamma, MMP-9 발현에 미치는 영향, 인간 경동맥 평활근 세포를 이용하여 가공인삼 추출물이 평활근 증식 및 세포 이주에 억제효능을 평가한 실험결과를 통하여 탁월한 효능이 확인되어 동맥경화증 질환의 치료 및 예방에 유용하게 사용가능하다.

Description

가공된 파낙스속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈관평활근 증식억제 및 거품세포 생성 억제를 통한 동맥경화 치료 및 예방용 조성물{A composition comprising the extract of processed Panax genus plant for preventing vascular smooth muscle cell proliferation and foam cell formation}

본 발명의 가공된 파낙스속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈관평활근 증식억제 및 거품세포 생성 억제를 통한 동맥경화 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것이다.

[문헌 1] Brenneisen, P., Wenk, J., Klotz. L.O., Wlaschek, M., Briviba, K., Krieg, T., Sies, H., Scharffetter-Kochanek, K., Central role of ferrous/ferric iron in the ultraviolet B irradiation-mediated signaling pathway leading to increased interstitial collagenase (matrix-degrading metalloproteinase (MMP)-1) and stromelysin-1 (MMP-3) mRNA levels in cultured human dermal fibroblasts. J. Biol. Chem. 273, 5279-5287, 1998.

[문헌 2] Masaki, H., Atsumi, T., Sakurai, H., Detection of hydrogen peroxide and hydroxyl radicals in murine skin fibroblasts under UVB irradiation. Biochem . Biophys . Res . Commun .206,pp.474-479,1995.

[문헌 3] 고려삼의 이해, 고려인삼학회, p 9, 1995; Advances in Ginseng Research, 고려인삼학회, p 127, 1998)

[문헌 4] 고려인삼의 이해, 고려인삼학회, pp 9-18, 2008).

[문헌 4] Kim W.Y. et al, Journal of Natural Products, vol.63, pp1702-1704, 2000;

[문헌 5] Kwon S W, et al., J. Chromatogr. A, 921(2), pp 335-339, 2001;

[문헌 6] Park I.H. et. al., Archives of Pharmacal Research, 25, pp.428-432 and 837-841, 2002;

[문헌 7] Yong-Sam Keum, Kwang-Kyun Park, Jong-Min Lee, Kyung-soo Chun., Antioxidant and anti-tumor promoting activities of the methanol extract of heat-processed ginseng. J. CancerLetters .150,PP.41-48,2000.

[문헌 8] Young C. Kim, So R. Kim, George J. Markelonis, Tae H. Oh., Ginsenosides Rb1 and Rg3 Protect Cultured Rat Cortical Cells From Glutamate-Induced Neurodegeneration. J. NeuroscienceRes .53,PP.426-432,1998.

[문헌 9] Keun Young Jung, Dong seon Kim, Platelet Activating Factor Antagonist Activity of Ginsenosides. Biol . Pharm . Bull .21.PP.79-80,1998.

[문헌 10] Kim WY, et al., J. Nat . Prod ., 63(12), pp 1702-1704, 2001 ;

[문헌 11] Kwon SW, et al., J. Chromatogr . A., 921(2), pp 335-339, 2001

[문헌 12] 대한민국 특허 10-0192678 약효가 증강된 가공인삼제품, 1999

동맥경화는 혈관 내부에 지단백질이 침착하고 혈관을 구성하는 혈관 평활근세포의 이상 증식으로 혈관 비후가 유발되어 혈관의 크기가 줄어들고 탄력성이 떨어지는 혈관질환이다. 고지방식의 식사로 인한 고지혈증과 환경적 스트레스 등은 혈관 내피세포의 기능 이상을 초래하는 일차적 원인으로 알려져 있다. 초기 상태의 동맥경화는 산화된 LDL등의 자극으로 대식세포 및 단핵세포가 거품세포로 변하는 것으로부터 시작되며, 거품세포로부터 분비되는 다양한 염증유발 인자로 인해 혈관 내피세포의 손상 및 혈관 평활근세포의 증식이 유발될 수 있다. 또한, 혈관 평활근세포는 기능이상이 초래된 혈관내피세포로부터 분비되는 다양한 세포신호전달물질의 작용으로 혈관 평활근세포의 증식이 유도될 수 있으며, 이 과정에서 평활근세포는 혈관 내부로 이주 또는 침습하고 이는 혈관벽 비후에 결정적인 역할을 한다. 따라서, 혈관평활근 세포의 이상 증식과 대식세포가 거품세포로의 변화는 과정은 동백경화의 초기단계에서 병변을 가속화시키는 핵심적인 작용이라고 할 수 있다.

거품세포는 대식세포나 단핵세포가 산화된 LDL를 흡수하여 변형되어 나타나며, 이런 과정에서 염증에 관련된 여러 인자가 유리된다. 거품세포의 생성에는 대식세포 표면에 존재하는 CD36가 중요한 통로로 알려져 있으며, 대식세포에 산화된 LDL이 세포내 유입과 세포내 신호전달과 관련이 있다고 알려져 있다. 거품세포 형성과정에서 생성되는 염증성 인자들인 TNFa, IL-6, iNOS, SR-A 등은 혈관평활근 세포의 증식과 이주를 촉진하여 동맥경화 발병을 심화키는데 중요한 역할을 하게된다. 또한, MMP-9, Cathepsin K 등에 의해 세포 조직의 이상이 초래되고 혈관평활근 세포의 증식이 유발된다.

따라서, 대식세포에서 거품세포의 생성을 억제하거나 혈관평활근세포의 증식 및 이주의 억제는 동맥경화의 치료 및 예방하는 핵심적인 수단이 될 수 있다.

파낙스(Panax)속 식물은 식물 분류학상 오가피과 (Araliaceae)에 속하는 다년생 숙근초로서 지구상에 십여종이 알려져 있다. 대표적인 종으로 고려인삼 (Panax ginseng), 화기삼 (Panax quinquefolia), 전칠삼 (삼칠, Panax notoginseng), 베트남삼 (Panax vietnamensis), 죽절삼 (Panax japonicus) 등이 있으며, (고려삼의 이해, 고려인삼학회, p 9, 1995; Advances in Ginseng Research, 고려인삼학회, p 127, 1998) 기타 파낙스속 식물로는 파낙스 엘레가티오르 (Panax elegatior), 파낙스 완지아누스 (Panax wangianus), 파낙스 비핀나티푸스 (Panax bipinnatifidus), 파낙스 슈도진생 (Panax pseudoginseng) 등이 있다.

파낙스속 식물 중 가장 유명한 인삼은 예로부터 아시아 지역에서 가장 널리 사용되어온 생약 중의 하나로, 피로회복, 자양강장, 인지기능개선, 기억력증가, 혈액순환개선, 항암, 항당뇨, 성기능개선, 노화방지, 면역력증강, 혈소판 응집억제 등 많은 약리효능이 알려져 있다 (고려인삼의 이해, 고려인삼학회, pp 9-18, 2008).

한편, 파낙스속 식물을 가열 가공 처리하거나 또는 약산으로 처리하면 진세노사이드 구조에서 일부 당과 알콜기가 떨어져나가 약효가 더 강력한 새로운 구조의 진세노사이드, 즉, 진세노사이드 Rg3, Rg5, Rk1, Rk2, Rk3, Rs1, Rs2, Rs3, F4, Rh2, Rh3, Rh4 등이 생성되는 것이 알려져 있다 (Kim W.Y. et al, Journal of Natural Products, vol.63, pp1702-1704, 2000; Kwon S W, et al., J. Chromatogr. A, 921(2), pp 335-339, 2001; Park I.H. et. al., Archives of Pharmacal Research, 25, pp.428-432 and 837-841, 2002)

대한민국 등록특허 제192678호 및 미국 등록특허 제5776460호에는 진세노사이드 (Rg3+Rg5+Rk1)의 함량의 합이 (Rb1+Rb2+Rc+Rd)의 함량의 합보다도 더 커진 가공 파낙스속 식물에 대하여 기술되어 있으며, 상기 가공인삼은 인삼(Panaxginseng)을 고열 고압으로 처리하여 약효가 강한 Rg₃,Rg₅,Rk₁의 함량을 획기적으로 높인 가공 인삼이다. 가공 인삼의 약효로는 항암작용(7), 뇌기능 개선작용(8), 혈소판 응집능 차단작용(9) 등이 보고되어있다.

그러나, 상기 문헌들의 어디에도 아직까지 가공된 파낙스속 식물 추출물의 동맥경화 치료 효과에 대해서는 전혀 기재되거나 교시된 바가 없다.

본 발명자들은, 가공 인삼의 추출물을 이용하여 LDL 산화형(oxLDL)을 이용하여 대식세포로부터 생성되는 거품세포 형성을 억제하는 작용에 대해서 평가하고자 하였다. 이를 위하여 대식세포주인 RAW264.7 세포에 oxLDL을 처리하여 생성되는 거품세포 억제 작용을 확인하였으며, 산화적 인자인 iNO생성과 지질과산화에 미치는 영향과 염증유발 인자인 TNFa, IL-6, iNOS, SR-A와 MMP-9, Cathepsin K, TIMP-1의 발현을 측정하여 혈관평활근 증식을 억제할 가능성을 평가하였다. 또한, 인간 경동맥 평활근 세포를 이용하여 가공인삼 추출물이 평활근 증식 및 세포 이주에 억제효능을 평가하였다. 따라서, 가공인삼의 추출물은 거품세포 형성을 억제하고 혈관평활근세포의 증식과 이주를 억제하여 동맥경화의 치료 및 예방에 효과적인 것으로 확인하여 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 해결하기 위해 본 발명은 진세노사이드 Rg3, Rk1, Rg5 함량의 합이 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc, Rd의 함량의 합보다 더 높도록 약효성분을 증가시킨 가공된 파낙스속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 동맥경화증 질환의 치료 또는 예방용 약학조성물을 제공한다.

본 발명은 진세노사이드 Rg3, Rk1, Rg5 함량의 합이 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc, Rd의 함량의 합보다 더 높도록 약효성분을 증가시킨 가공된 파낙스속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 동맥경화증 질환의 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본원에서 정의되는 가공된 파낙스속 식물은, 바람직하게는 고려인삼 (Panax ginseng), 화기삼 (Panax quinquefolia), 전칠삼 (삼칠, Panax notoginseng), 베트남삼 (Panax vietnamensis), 죽절삼 (Panax japonicus), 파낙스 엘레가티오르 (Panax elegatior), 파낙스 완지아누스 (Panax wangianus), 파낙스 비핀나티푸스 (Panax bipinnatifidus), 또는 파낙스 슈도진생 (Panax pseudoginseng)을 인위적으로 가공시킨 식물을 포함하며, 보다 바람직하게는 고온에서 가열처리함으로써 약효가 증강된 가공인삼에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 인삼을 120 내지 180의 고온에서 0.5 내지 20시간 동안 가열처리하여 진세노사이드 (Rg3+Rg5)/(Rc+Rd+Rb1+Rb2)의 비율이 1.0이상이 되도록 약효성분을 증가시킨 가공인삼을 포함한다.

본원에서 정의되는 추출물은 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는, 물 또는 10 내지 100% 물 및 에탄올 혼합용매, 보다 바람직하게는, 약 50 내지 90% 물 및 에탄올 혼합용매에 가용한 추출물을 포함한다.

본원에서 정의되는 상기 동맥경화증 질환은 동맥경화증, 죽상동맥경화증, 또는 폐동맥 경화증을 포함하는 것을 특징으로 한다.

이하 본 발명의 추출물을 수득하는 방법을 보다 상세하게 설명한다.

예를 들어, 파낙스속 식물의 열매, 줄기 또는 뿌리를 각각 세척 및 건조시킨 후, 상기 파낙스속 식물은 120 내지 180의 고온에서 0.5 내지 20시간 동안 가열처리한 후에 상기 개개 시료 중량의 약 1배 내지 30배, 바람직하게는 약 5배 내지 15배 (w/v) 부피의 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매로, 바람직하게는 물 또는 에탄올, 보다 바람직하게는 물 또는 50 내지 90% 에탄올을 추출용매로 하여, 약 70 내지 120, 바람직하게는 80 내지 100의 반응온도에서 약 1 내지 8시간, 바람직하게는 3 내지 6시간 동안 가열추출법, 초음파 추출법, 환류 추출법 등의 통상적인 추출방법, 바람직하게는 환류 추출법으로 1 내지 10회, 바람직하게는 2 내지 7회 반복 추출하는 제 2단계; 상기 단계에서 수득한 추출액을 여과 및 감압 농축하는 제 3단계를 통하여 본 발명의 가공된 파낙스속 식물 추출물을 수득가능하다.

또한 본 발명은 상기한 제조방법 및 상기 제조방법으로 제조된 가공된 파낙스속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 동맥경화증 질환의 치료 및 예방을 위한 약학 조성물 및 건강기능식품을 제공한다.

상기에서 제조된 추출물은 LDL 산화형(oxLDL)을 이용하여 대식세포로부터 생성되는 거품세포 억제 작용을 확인하였으며, 산화적 인자인 iNO생성과 지질과산화에 미치는 영향과 염증유발 인자인 산화적 인자인 iNO생성과 지질과산화에 미치는 영향과 염증유발 인자인 TNFa, IL-6, iNOS, SR-A와 MMP-9, Cathepsin K, TIMP-1의 발현을 측정하여 혈관평활근 증식을 억제할 가능성을 평가하였다.

또한, 인간 경동맥 평활근 세포를 이용하여 가공인삼 추출물이 평활근 증식 및 세포 이주에 억제효능을 평가하였다. 따라서, 가공 인삼인 선삼의 추출물은 거품세포 형성을 억제하고 혈관평활근세포의 증식과 이주를 억제하여 동맥경화의 치료 및 예방에 효과적인 것으로 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 생약 추출물을 0.1 내지 50% 중량으로 포함한다.

그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 추출물을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 이에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 추출물은 1일 0.01 mg/kg 내지 10 g/kg으로, 바람직하게는 1 mg/kg 내지 1 g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 그러므로 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 및 직장, 또는 정맥 등의 방법을 통하여 투여할 수 있다.

또한 본 발명은 가공된 파낙스속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 동맥경화증 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 추출물을 포함하는 건강기능식품은 동맥경화증 질환의 예방 및 개선을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

따라서, 또한, 본 발명은 동맥경화증 질환 개선효과를 갖는 가공된 파낙스속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품 및 식품첨가제를 제공한다.

본 발명의 추출물은 간질환의 예방 및 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ml를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물의 혼합물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등)) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ml당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

상기와 같이, 본 발명의 가공된 파낙스속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 대식세포주인 RAW 264.7 세포에 oxLDL 을 처리하여 생성되는 거품세포 형성을 효과적으로 억제하고, 산화적 인자인 NO생성과 지질과산화 생성을 억제하며, 거품세포로부터 TNF-alpha, iNOS, ABCA1, CD36, PPAR-gamma, MMP-9의 발현을 억제하였다. 동시에 인간 경동맥 평활근 세포를 이용한 실험에서 가공인삼 추출물이 평활근 증식 및 세포 이주에 탁원한 억제효능을 나타내어 동맥경화 치료 및 예방에 유용하게 쓰일 수 있다.

도 1. 본 발명의 가공인삼 추출물이 산화형 지단백으로 처리한 대식 세포로부터 거품 세포가 형성되는 것을 방지하는 효과를 나타낸 도이며 (^##P>0.01, 비산화형 지단백만 처리한 것과 비교, ^*P>0.05, 산화형 지단백만 처리한 것과 비교);
도 2. 본 발명의 가공인삼 추출물이 대식세포에서 거품세포로의 분화과정에서 발현되는 CD36을 억제하는 효과를 나타낸 도이며 (^###P>0.001, 비산화형 지단백을 처리한 세포와 비교, ^***P>0.001, 산화형 지단백을 처리한 세포와 비교);
도 3. 본 발명의 가공인삼 추출물이 대식세포에서 거품 세포로의 분화과정에서 발현되는 ABCA1를 억제하는 효과를 나타낸 도이며 (^###P>0.001, 비산화형 지단백을 처리한 세포와 비교, ^*P>0.05, ^**P>0.01, 산화형 지단백을 처리한 세포와 비교);
도 4. 본 발명의 가공인삼 추출물이 대식세포에서 거품 세포로의 분화과정에서 발현되는 PPAR를 억제하는 효과를 나타낸 도이며 (^##P>0.01, 비산화형 지단백을 처리한 세포와 비교, ^**P>0.01, 산화형 지단백을 처리한 세포와 비교);
도 5. 본 발명의 가공인삼 추출물이 대식세포에서 거품 세포로의 분화과정에서 TNF-알파를 억제하는 효과를 나타낸 도이며 (^###P>0.001, 비산화형 지단백을 처리한 세포와 비교, ^**P>0.01, ^***P>0.001, 산화형 지단백을 처리한 세포와 비교);
도 6. 본 발명의 가공인삼 추출물이 대식세포에서 거품 세포로의 분화과정에서 발현되는 iNOS를 억제하는 효과를 나타낸 도이며 (^###P>0.001, 비산화형 지단백을 처리한 세포와 비교, ^***P>0.001, 산화형 지단백을 처리한 세포와 비교);
도 7. 본 발명의 가공인삼 추출물이 대식세포에서 거품 세포로의 분화과정에서 발현되는 MMP9를 억제하는 효과를 나타낸 도이며 (^##P>0.01, 비산화형 지단백을 처리한 세포와 비교, ^*P>0.05, 산화형 지단백을 처리한 세포와 비교);
도 8. 본 발명의 가공인삼 추출물이 인간 대동맥 평활근 세포의 증식을 억제하는 효과를 나타낸 도이며 (^###P>0.01, 인슐린과 선삼 모두 처리하지 않은 것 (NC)과 비교, ^*P>0.05, ^**P>0.01, ^***P>0.001, 인슐린만 처리한 것과 비교);
도 9. 본 발명의 가공인삼 추출물이 인간 대동맥 평활근 세포의 활성산소종 생성을 증가시키는 효과를 나타낸 도이며 (^*P>0.05, ^**P>0.01, 과산화수소를 처리한 세포와 비교);
도 10. 본 발명의 가공인삼 추출물이 인간 대동맥 평활근 세포의 이동을 억제하는 효과를 나타낸 도이다. (점선으로 표시된 부분이 피펫팁으로 스크래치를 한 부분임).

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의하여 상세히 설명한다. 단, 이는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용은 이에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 가공 인삼 추출물의 제조

김 등의 방법 (Kim WY, et al., J. Nat . Prod ., 63(12), pp 1702-1704, 2001; Kwon SW, et al., J. Chromatogr . A., 921(2), pp 335-339, 2001)에 의하여 특수가공인삼을 제조하였다.

즉, 건조된 인삼(금산 인삼시장)을 잘게 자른 후, 120, 15 기압에서 4시간 동안 수증기를 이용하여 가열하였다. 가공된 인삼(이하 선삼이라 함) 1 kg에 80% 에탄올 2 L를 가하고 수욕상에서 4시간 이상 환류 추출하여 얻어진 추출물을 감압 농축한 다음 동결 건조하여 추출분말 약 300 g 을 수득하였다. 실험 시에는 선삼 추출물(이하 SG라 함)을 DMSO(Sigma D-2650)를 이용하여 배지에 녹인 후, pore size 0.45 의 여과지를 통과시킨 후 사용하였다. 실험에 사용한 선삼 추출물의 (Rg3 + Rg5 + Rk1)/(Rb1 + Rb2 + Rc + Rd)= 6.1 이었다.

실시예 2. 선삼 추출물의 사포닌 함량 분석

실시예 1에서 얻은 본 발명에 따라 제조된 가공인삼에 함유된 인삼사포닌 성분을 다음과 같은 방법에 의해 분석하였다.

40 용적의 스테인레스 스틸 용기 4개에 각각 백삼 5g과 물 5를 가한 후 밀폐하여 각각 110에서 2시간, 120에서 2시간 및 3시간 및 130에서 2시간 동안 가열하였다. 가열이 끝난 가공인삼, 및 시판품인 백삼 및 홍삼 각 5g 씩을 취하여 메탄올 100씩으로 3회 추출하고 농축시킨 후에 물에 현탁시키고 에테르 100씩으로 3회 추출하였다. 남은 수층을 부탄올 100씩으로 3회 추출한 후에 부탄올 분획을 농축시키고, 수득된 농축물을 메탄올에 용해시켜 HPLC(컬럼: LiChro- sorb NH2, 이동상: CH3CN/H2O/i-PrOH=80/5/1580/20/15, 검출기: ELSD(Evaporative light scattering detector))로 분석하였다. 측정된 결과는 다음 표 1에 기재된 바와 같다.

사포닌 샘플	Rb₁	Rb₂	Rc	Rd	Rg₃	Rg₅	(Rg₃+Rg₅)/ (Rc+Rd+Rb₁+Rb₂)
120/3시간	10.82	6.91	8.52	7.64	28.01	14.01	1.24
120/2시간	10.46	7.74	10.66	5.58	24.12	11.35	1.03
130/2시간	4.06	3.44	3.98	3.82	21.00	16.17	2.43
110/2시간	19.02	11.55	10.68	8.37	7.02	4.39	0.23
백삼	22.15	3.25	5.86	2.47	0.00	0.00	0.00
홍삼	30.11	9.69	12.45	1.76	1.05	1.05	0.01

상기 표 1에 기재된 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따라 가열처리하여 수득한 가공인삼은 수삼, 백삼 및 홍삼 등에는 거의 또는 전혀 존재하지 않는 인삼 사포닌인 Rg 및 Rg 성분의 함량이 현저히 증가하여 우수한 약효를 나타낸다.

상기한 바와 같은 결과에 따라 인삼에 대한 가열온도의 변화에 따른 사포닌 성분, 특히 진세노사이드 Rg 및 Rg의 함량 변화를 더욱 구체적으로 확인하기 위하여 가열을 100, 110, 120, 130, 150, 160, 180 및 200에서 2시간씩 행하여 얻어진 인삼들의 Rg 및 Rg 함량을 측정하여 가열처리하지 않은 인삼(수삼)에서의 함량과 비교하여 보았다. 그 결과는 다음 표 2에 기재한 바와 같다.

가열온도 (시간) 종류	비처리 (수삼)	100 2시간	110 2시간	120 2시간	130 2시간	150 2시간	160 2시간	180 2시간	200 2시간
Rg₃	0.00	0.02	0.08	0.17	0.86	0.44	0.45	0.35	0.23
Rg₅	0.00	0.02	0.05	0.08	0.44	0.53	0.56	0.48	0.38

주) 각각의 성분함량은 사용한 수삼의 양에 대한 함량 %로 나타낸 것이다.

상기에서 보는 바와 같이 본 발명에서와 같이 120 내지 180에서 가열처리된 가공인삼의 경우에 Rg 및 Rg와 같은 진세노사이드의 함량이 비처리 수삼이나 홍삼(100 가열)의 경우에 비해 현저히 증가하였음을 알 수 있다. 실험에 사용한 선삼 추출물의 (Rg3 + Rg5 + Rk1)/(Rb1 + Rb2 + Rc + Rd)= 6.1 이었다.

실험예 1. 대식세포 지단백 분화에 미치는 영향 실험

앞서 기술한 바와 같이 대식 세포가 거품 세포로 분화하는 것은 동맥 경화의 초기 단계로 알려져 있으며, 이를 억제하는 물질들에 대한 탐구가 활발히 진행되고 있다. 대식 세포는 다량의 지질을 세포 내로 포식하여 거품 세포로 분화되게 된다. 그러므로 세포내 지질 축적량을 측정하여 거품 세포로의 변환을 수치화할 수 있다.

세포 내 지질의 축적은 Oil-Red O (ORO)라는, 지질을 특이적으로 염색할 수 있는 시약을 이용하여 육안으로 관찰하거나, 세포 내 지질과 결합되어 있는 염색약을 유기 용매로 추출하여 그 농도를 수치화함으로써 지질의 축적 정도를 파악할 수 있다 (Yang MY, Huang CN, Chan KC, Yang YS, Peng CH, Wang CJ. Mulberry leaf polyphenols possess antiatherogenesis effect via inhibiting LDL oxidation and foam cell formation. J Agric Food Chem. 59(5) pp1985-95, 2011).

여러 실험들을 통해 마우스 유래 대식 세포주인 Raw264.7 세포는 산화형 저밀도 지단백에 의해 거품 세포로 분화되는 것으로 알려져 있다 (Vivancos M, Moreno JJ. Effect of resveratrol, tyrosol and beta-sitosterol on oxidised low-density lipoprotein-stimulated oxidative stress, arachidonic acid release and prostaglandin E2 synthesis by RAW 264.7 macrophages. Br. J. Nutr. 99(6) pp1199-207, 2008).

세포배양

본 실험에서는 플레이트에 4x10⁵수의 마우스의 대식 세포주 Raw264.7 세포를 부착시켜 12 시간 동안 배양기에서 안정화시킨다. 각각 50 μg/mL의 산화되지 않은, 비산화형 저밀도 지단백과 산화형 저밀도 지단백, 그리고 산화형 저밀도 지단백과 10 μg/mL 농도의 가공인삼 추출물을 새로운 DMEM 배지에 함께 첨가하여 2 일간 배양한다.

시그마 社에서 구입한 저밀도 지단백을 10 μM 황산구리와 함께 37°C에서 48 시간 동안 배양하여 산화시키면 산화형 지단백을 얻을 수 있다. 6-웰 플레이트에 4x10⁴수의 마우스의 대식 세포주 Raw264.7 세포를 부착시켜 12 시간 동안 배양기에서 안정화시킨다. 각각 50 μg/mL의 산화되지 않은, 비산화형 저밀도 지단백과 산화형 저밀도 지단백, 그리고 산화형 저밀도 지단백과 10 μg/mL 농도의 선삼 추출물을 새로운 DMEM 배지에 함께 첨가하여 2 일간 배양한다. 배양이 끝나면 배지를 제거하고, 생리 식염수로 세척하고, 10% 포르말린 용액에서 1 시간 방치한다. 다시, 식염수로 세척하고, 60% 이소프로필 에탄올로 탈수시킨 후 ORO 용액을 가하여 1 시간 동안 세포를 염색한다. 염색이 끝나면 염색약을 제거하고 4% Nonidet-P40이 첨가된 이소프로필 에탄올로 반응액을 추출한 다음, 마이크로 플레이트 리더 (GENios A5082, TECAN, Maennedort, Switzerland)를 이용해 490 nm 파장에서 색도를 측정하였다. 또한, 도립 현미경 (Inverted microscope OLYMPUS, IX 51 (Olympus Co., Tokyo, JAPAN))을 이용해 관찰하고 그 이미지를 획득하였다.

실험 결과

산화형 지단백 처리시, 거품 세포로 분화되었으며, 가공 인삼 추출물 10 μg/mL은 거품세포 형성을 억제하였다(도 1).

실험예 2. PPARγ과 ABCA1의 유전자 발현에 미치는 영향 실험.

RNA 추출과 실시간 중합 효소 연쇄 반응 ( Quantitative real time PCR )

가공인삼 처리한 세포를 식염수로 2회 세척하고, RNAiso 시약을 400 μl 첨가하여 세포를 용해시켰다.

얻어진 세포 용해액을 원심 분리하여 RNA층을 분리하고, 클로로포름을 가하여 단백질을 제거한 다음, 알코올로 RNA만을 침전시켰다.

얻어진 총 RNA는 NonoDropND-1000 (NanoDrop Technologies, Inc.,RocklandDE)기기를 사용해 농도와 순도를 측정하였다.

1 mg 이하의 총 RNA를 주형으로 사용해서 그에 상보적인 cDNA를 만들었다. cDNA는 타카라 사 (일본)의 cDNA using PrimeScript^TM 1^ststrand cDNAsynthsis 키트를 이용해 합성하였다.

간략하게 말하면, 5 mM random 6-프라이머, 각 1 mM의 dNTP 용액, 그리고 주형 RNA를 65°C에서 5분간 반응시키고, 얼음으로 옮긴 다음, 반응액에 1 U/ml RNase 저해제, 10 U/ml PrimeCscript^TM 역전사 효소, 그리고 PrimeScript^TM역전사 효소 버퍼를 첨가했다. 이를 30°C에서 10분, 다시 42°C 에서 60분 간 반응시켰다. 거품 세포로 분화 동안 변화하는 유전자들의 발현 양상을 비교하기 위해, 합성된 cDNA로 실시간 중합 효소 연쇄 반응을 수행하였다.

반응은 타카라 社의 SYBR premix Ex Taq^TM키트를 이용하였으며, TAKARA Dice Real Time System 기기로 결과를 분석하였다. 반응 초반, cDNA를 95°C에서 10초간 변성시키고, 95°C 5 sec, 55 - 60°C 30 sec에서 40 cycles로 증폭하였다. 증폭된 유전자들의 발현 수준은 β-actin 유전자의 전령 RNA 수준과 비교, 분석하였다.

유전자 발현 분석

대식 세포가 산화형 지단백을 유입하는 과정은 여러 가지가 있으나 가장 대표적인 것으로 CD36 수용체에 의한 것이다.

많은 실험에서 저밀도 지단백 을 처리하였을 때 거품 세포로 변화하면서 CD36 수용체의 발현이 증가함이 보고 되었다 (Mulberry leaf polyphenolspossess antiatherogenesis effect via inhibiting LDL oxidation and foam cell formation. Yang MY, Huang CN, Chan KC, Yang YS, Peng CH, Wang CJ. J Agric Food Chem. 2011 Mar 9;59(5):1985-95, Salvianolic acid B inhibits macrophage uptake of modified low density lipoprotein (mLDL) in a scavenger receptor CD36-dependent manner. Bao Y, Wang L, Xu Y, Yang Y, Wang L, Si S, Cho S, Hong B. Atherosclerosis. 2012 Jul;223(1):152-9).

수용체를 통해 유입된 지단백은 정상 대식 세포의 경우, PPARγ-LXR-ABCA1/ABCG1 경로를 통해 세포 밖으로 나가게 된다 ( Xu Y, Lai F, Xu Y, Wu Y, Liu Q, Li N, Wei Y, Feng T, Zheng Z, Jiang W, Yu L, Hong B, Si S. Biochem Biophys Res Commun. 2011, 414(4):779-82). 지단백중의 지질이 전사 인자 PPARγ를 활성화시켜 여러 하위 단백질들의 전사를 촉진시키며, LXR 혹은 RXR등의 핵내 전사 인자를 이중체를 만들어 지질을 세포 외로 유출시키는 수송체인 ATP-binding casette (ABC) 수송체, 특히 ABC A1(ABCA1) 유형의 유전자 발현을 증가시킨다 (Tall AR, Yvan-Charvet L, Terasaka N, Pagler T, Wang N. Cell Metab. 2008, 7(5):365-75). ABCA1에 의해 세포 밖으로 나온 지질은 고밀도 지단백을 구성하여 지질 항상성을 유지한다. 이처럼 지단백 내 지질의 유입과 유출은 잘 조절되어 항상성이 유지되어야 하나, 이 중 하나가 과도하거나 부족하면 세포 내 콜레스테롤의 농도가 높아지고 지질이 축적되어 결과적으로 거품 세포가 만들어지게 되는 것이다.

그러므로 CD36 수용체와 PPARγ-LXR-ABCA1 경로에서 중요한 역할을 하는 PPARγ과 ABCA1의 유전자 발현이 선삼 추출물을 처리했을 때 어떤 변화를 보이는지 평가하였다.

실험 결과

도 2는 가공인삼 추출물은 지질 축적에 관여하는 거품세포의 CD36 발현을 농도 의존적으로 억제한 도이며, 도 3는 지질 축적을 억제하는 ABCA1 조절 인자의 유전자 발현을 가공인삼 추출물이 증가시킨 결과를 나타낸 도이며, 도 4에는 지질대사에 관여하는 PPARγ 발현을 가공인삼 추출물이 현저히 억제한 결과를 나타낸 도이다.

동맥 경화는 혈관 세포 벽의 급성 면역 반응으로도 이해할 수 있다. 실제 동맥 경화 환자의 혈장에는 많은 양의 염증 매개 물질 즉, 인터루킨, tumor necrosis factor (TNF)-알파 그리고 염증성 일산화질소가 검출된다. 특히 TNF-알파는 동맥 경화증이 진전되면서 더욱 증가한 산화형 지단백, 면역 세포, matrix metallo proteinase (MMP)등에 의해 분비량이 증가하여 염증 반응을 심화시킨다. 어떤 연구에 의하면, 혈장 지단백질인 apoE의 유전적 결함이 있는 마우스 모델에 경우, TNF-알파의 수용체를 억제하거나 TNF-알파 분비를 억제할 경우, 동맥 경화 크기가 감소됨이 보고된 바 있다 (Inhibition of tumor necrosis factor-alpha reduces atherosclerosis in apolipoprotein E knockout mice. Andrie RP, Becher UM, Frommold R, Tiyerili V, Schrickel JW, Nickenig G, Schwab JO. Crit Care. 2012;16(4):R152, Inhibition of tumor necrosis factor-alpha reduces atherosclerosis in apolipoprotein E knockout mice. Branen L, Hovgaard L, Nitulescu M, Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2004, 24(11):2137-42.).

도 5는 거품 세포에서 증가하는 TNF-알파의 발현을 가공인삼 추출물이 현저히 억제한 결과를 나타낸 도이다.

중요한 염증 매개 물질인 일산화 질소는 유도성 일산화 질소 합성 효소 (iNOS)에 의해 만들어진다. 혈장 지단백질인 apoE의 유전적 결함이 있는 마우스 모델에서 iNOS 합성을 억제할 경우 동맥 경화가 억제된다.

도 6는 거품 세포에서 증가하는 염증성 인자인 iNOS의 발현을 가공인삼이 현저히 억제한 결과를 나타낸 도이다.

거품세포는 MMP9의 분비를 촉진하여 혈관 투과성을 증가시키고 동맥경화 부위에 거품 세포와 및 다른 혈관근육세포들의 증식을 촉진하여 세포외 결합조직이 거품세포와 함께 혈관 죽종 형성을 촉진한다(Human monocyte-derived macrophages induce collagen breakdown in atherosclerotic fibrous caps: potential role of matrix degrading metalloproteinases and implication for plaque rupture. Circulation. Shah PK, Falk E, Badimon JJ, Levy G, Ortiz AF, Mailhac A, Levy GV, Fallon JT, Regnstrom J, Fuster V. Circulation. 1995;92:15651569).

도 7는 거품세포에서 MMP9의 발현 증가를 가공인삼 추출물이 억제하는 결과를 나타낸 도이다.

상기 실험 결과, 본 발명에서 발명된 가공인삼 추출물은 거품세포의 수용체를 억제하여 지질축적을 억제하여 거품세포 분화를 감소시키고, 동시에 죽종 형성인자의 발현을 억제하여 동맥경화를 억제할 수 있음을 확인하였다.

실험예 3. 평활 근육 세포의 증식에 대한 가공인삼 추출물의 영향 평가

본 발명에서 얻어진 가공인삼 추출물이 평활 근육 세포의 증식에 미치는 영향을 평가하기 위하여 인간 대동맥에서 분리된 평활근세포를 이용하였다.

구체적으로는, 평활 근육 세포를 플레이트에 웰당 4X10³ 분주하여 배양 후, DMEM 배지에서 24시간을 더 배양하였다. 가공인삼 추출물과 100 nM 인슐린을 처리하여 더 48시간 배양하였다. 세포를 세척한 후, MTT 용액을 100 μl 가하고 3시간후 식염수로 세척하고, 100 μl의 DMSO로 추출하고 530 nm 파장에서 색도를 측정하였다(GENios A5082, TECAN, Maennedort, Switzerland).

평활근세포의 증식을 억제하는 효능은 동맥경화를 예방하고 진행을 늦추는 작용을 한다.

도 8는 인슐린 처리 평활근세포의 증식을 가공인삼 추출물이 현저히 억제한 결과를 나타낸 도이다.

실험예 4. 평활 근육 세포에서, 활성 산소종 생성에 대한 가공인삼 추출물의 영향

배양된 평활근세포의 배지를 제거하고 식염수로 세척한 후, 0.5 mM의 과산화수소를 첨가한 후, 가공인삼 추출물을 첨가하여 다시 24 시간 배양하였다. 배지를 제거하고 식염수로 세포를 세척한 후, 50uM의 DCF-DA 시약을 가하여 30 분간 방치하였다. 반응 후 형광 분광 광도계(GENios A5082, TECAN, Maennedort, Switzerland)를 이용해 여기파장(excitation), 530 nm과 방출파장(emission) 485 nm 에서 측정하였다.

활성 산소종은 호흡 과정에서 자연적으로 발생하며, 소량의 경우는 체내의 여러 항산화 효소나 글루타티온등의 항산화 물질등에 의해 제거되어지나, 노화나 자외선들의 내적, 외적 자극에 의해 일정량을 초과하게 되면 세포 내에 축적되어, 세포의 자가 사멸, 세포 괴사 등을 촉진하며 결과적으로 동맥 경화를 포함한 여러 질병들을 야기한다 (Manea A, Simionescu M. Nox enzymes and oxidative stress in atherosclerosis. Front Biosci (Schol Ed). 1(4) pp651-70, 2012).

도 9는 평활근세포에의 활성 산소종이 생성을 가공인삼 추출물이 현저히 억제한 결과를 나타낸 도이다.

실험예 5. 스크래치 분석법을 통한, 선삼 추출물에 의한 평활 근육 세포 이동 변화 관찰

배양한 평활근세포를 웰당 3X10⁴개로 분주하여 12시간 배양하고 피펫팁으로 긁어서 배흔적을 만든 다음, 가공인삼 추출물과 100 nM 농도의 인슐린을 처리하고 48 시간 배양한 후 관찰하여 평활근 세포들의 이동을 도립현미경(Inverted microscope OLYMPUS, IX 51 (Olympus Co., Tokyo, JAPAN)을 이용해 관찰하고 그 이미지를 획득하였다.

도 10는 스크래치된 부위로의 평활근세포의 이동을 가공인삼 추출물이 억제하는 결과를 나타낸 도이다.

본 발명에서 가공임삼 추출물은 거품세포 생성을 억제하고, 평활근세포의 증식과 이동을 감소시켜 동맥 경화를 예방 또는 치료에 효과를 나타낸다.

통계처리

모든 실험 결과는 일원변량 분석을 이용하여 통계 처리하였고, 유의성이 인정될 경우 Student-Newman-Keuls Test를 사용하여 p < 0.05 수준 이하에서 유의성 검정을 실시하였다.

실험예 6. 단회투여독성 시험

마우스를 사용하여 상기 실시예에서 제조한 가공인삼 추출물을 이용하여 단회투여독성 시험을 실시하였다. 단회투여독성 시험 결과, 상기 추출의 경우 ICH에서 정하고 있는 투여 가능 용량인 2 g/kg에서 2주간 사망예를 전혀 관찰할 수 없었으며, 체중 증가, 사료 섭취량 등에서 전혀 유의한 이상을 발견할 수 없었다. 따라서 본 발명의 각 추출물은 안전한 약물임을 알 수 있었다.

하기에 본 발명의 추출물을 함유하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

가공인삼 추출물 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

가공인삼 추출물 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

가공인삼 추출물 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캅셀제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캅셀제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

가공인삼 추출물 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO₄ _,12H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

가공인삼 추출물 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ml로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

가공인삼 추출물 1000 mg

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70

비타민 E 1.0

비타민 B1 0.13

비타민 B2 0.15

비타민 B6 0.5

비타민 B12 0.2

비타민 C 10

비오틴 10

니코틴산아미드 1.7

엽산 50

판토텐산 칼슘 0.5

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75

산화아연 0.82

탄산마그네슘 25.3

제1인산칼륨 15

제2인산칼슘 55

구연산칼륨 90

탄산칼슘 100

염화마그네슘 24.8

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

가공인삼 추출물 1000 mg

구연산 1000

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2l 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims

진세노사이드 Rg3, Rk1, Rg5 함량의 합이 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc, Rd의 함량의 합보다 더 높도록 약효성분을 증가시킨 가공된 파낙스속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 동맥경화증 질환의 치료 또는 예방용 약학조성물.
제 1항에 있어서,
상기 파낙스속 식물은 고려인삼 (Panax ginseng), 화기삼 (Panax quinquefolia), 전칠삼 (삼칠, Panax notoginseng), 베트남삼 (Panax vietnamensis), 죽절삼 (Panax japonicus), 파낙스 엘레가티오르 (Panax elegatior), 파낙스 완지아누스 (Panax wangianus), 파낙스 비핀나티푸스 (Panax bipinnatifidus), 또는 파낙스 슈도진생 (Panax pseudoginseng)을 인위적으로 가공시킨 식물을 특징으로 하는 약학조성물.
제 1항에 있어서,
상기 파낙스속 식물은 인삼을 120 내지 180의 고온에서 0.5 내지 20시간 동안 가열처리하여 진세노사이드 (Rg3+Rg5)/(Rc+Rd+Rb₁+Rb₂)의 비율이 1.0 이상이 되도록 약효성분을 증가시킨 가공인삼임을 특징으로 하는 약학조성물.
제 1항에 있어서,
상기 추출물은 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매인 약학 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 동맥경화증 질환은 동맥경화증, 죽상동맥경화증, 또는 폐동맥 경화증인 약학조성물.
가공된 파낙스속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 동맥경화증 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품.
제 6항에 있어서, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 건강기능식품.
동맥경화증 질환 개선효과를 갖는 가공된 파낙스속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품.
제 8항에 있어서, 상기 식품 형태는 캔디류를 포함한 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 또는 건강보조 식품류인 식품.
동맥경화증 질환 개선효과를 갖는 가공된 파낙스속 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품첨가제.