KR20140059805A - 조혈 독성을 평가하기 위한 수단 및 방법 - Google Patents

조혈 독성을 평가하기 위한 수단 및 방법 Download PDF

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Abstract

조혈 독성을 진단하는 방법은 a) 조혈 독성을 겪는 것으로 추정되는 대상체의 테스트 샘플에서 1종 이상의 바이오마커의 양을 측정하는 단계, 및 (b) 단계 (a)에서 측정된 양을 기준과 비교함으로써 조혈 독성을 진단하는 단계를 포함한다. 화합물이 대상체에서 이러한 조혈 독성을 유도할 수 있는지를 결정하는 방법, 조혈 독성의 치료 약물을 확인하는 방법, 조혈 독성을 진단하기 위한 장치 및 키트가 또한 기재되어 있다.

Description

조혈 독성을 평가하기 위한 수단 및 방법 {MEANS AND METHODS FOR ASSESSING HEMATOPOIETIC TOXICITY}
본 발명은 조혈 독성의 진단 및 화학적 화합물의 축적 위험성에 대한 독성학적 평가 분야에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 조혈 독성의 진단 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 화합물이 대상체에서 이러한 조혈 독성을 유도할 수 있는지를 결정하는 방법 및 조혈 독성의 치료 약물을 확인하는 방법에 관한 것이다. 추가로, 본 발명은 조혈 독성을 진단하기 위한 장치 및 키트에 관한 것이다.
골수는 신체의 가장 큰 기관 중 하나이고, 화학적 노출의 중요한 잠재적인 표적 기관이다. 골수는 구간골 및 장관골의 중앙강 내에서 발견된다. 이는 소주골의 섬유주 내에 산재된 맥관 공동(sinus)에 의해 둘러싸인 조혈 조직 섬(island) 및 지방 세포로 이루어진다. 골수는 적혈구, 과립구, 단핵구, 림프구 및 혈소판의 생성을 맡고 있는, 주요 조혈 기관 및 1차 림프 조직이다. 골강의 내부 표면 및 강(cavity) 내의 해면골 골편의 외부 표면은 망상 결합 조직의 박층에 의해 지지된 편평한 "골 표면 세포(bone-lining cell)"의 단일층으로 이루어진 골내막 표면으로 덮여 있고; 조골세포 및 파골세포가 또한 골내막 표면에서 발견된다. 장관골에서는, 하나 이상의 영양관이 골피질을 관통하여 사선으로 골수강으로 들어간다. 편평골에서는, 골수가 크고 작은 영양관을 통해 골수로 들어가는 다양한 크기의 다수의 혈관에 의해 제공된다.
골수는 혈액을 다량 공급한다. 또한, 영양 동맥-유래의 모세혈관이 하버스관(Haversian canal)으로 연장되고, 골수강으로 복귀한 다음에, 정맥동으로 이어지는 것으로 보인다. 따라서, 골수강 내에서의 혈류에는 골수강의 중심부에서 골수강의 주변부로, 이어서 다시 중심부로 향하는 원형 패턴이 존재한다. 장관골 및 편평골에서, 골 및 골수로부터 공급되는 혈액은 도관의 골내막 네트워크를 통해 서로 연결된다.
골수 신경분포가 영양관을 통해 들어가는 유수 및 무수 신경에 의해 발생한다. 일부 신경분포는 또한 골단 및 골간단 소공을 통해 발생한다. 신경 다발이 도관의 평활근을 제공하거나, 또는 때로는 조혈 조직에서 조혈 세포 사이에서 끝나는 분지를 갖는 세동맥을 따라 이어진다.
조혈 조직은 혈구 및 그의 전구체, 외막/장벽 세포, 지방 세포, 및 대식세포를 비롯한 다양한 세포 유형으로 이루어진다. 조혈 조직 세포는 무작위 배열되지 않으며, 조직 내에서 특정한 조직화를 보인다. 조혈을 위해서는, 조혈 모세포를 인식하여 보유하고, 결정된 계통에 따라 줄기 세포의 증식, 분화 및 성숙을 보조하기 위해 필요한 인자를 제공할 수 있는 미세환경에 의해 보조받아야만 한다.
조혈은 조혈 조직 내에서의 구획화된 과정으로서, 적혈구 생성이 적혈구 모세포 섬에서 발생하고; 과립구 생성이 명확하게 구분되지 않는 병소에서 발생하며; 거핵구 생성이 공동 내피에 인접한 곳에서 발생한다. 장벽 세포에 의해 조절되는 조혈 세포는, 성숙되면, 정맥동의 벽을 횡단하여 혈류로 유입되고; 혈소판은 공동벽을 관통하여 공동강으로 들어가는 거핵구의 세포질 과정으로부터 혈액으로 직접 방출된다.
혈구의 생성, 분화, 및 성숙은 체액성 인자에 의해 조절된다. 일부 인자는 보다 원시적인 세포에 대하여 작용하며, 일반적인 작용을 하지만, 다른 인자들 (예를 들어, 에리트로포이에틴)은 특정 세포주의 후기 전구세포에 대하여 작용한다. 조혈 인자의 기원은 다양하다.
조혈은 연속적인 과정이지만, 별개의 단계로 분리될 수 있다. 제1 단계는 골수에 함유된 미결정 (다능성) 줄기 세포가 관여한다. 이러한 다능성 세포는 2가지의 주요 기능을 갖는다. 이러한 다능성 세포는, 첫째로 자기 복제 과정을 통해 그의 개체수를 유지하고, 둘째로 모든 조혈 세포를 발생시키는 능력을 갖는다. 이들은 또한 중추로부터 말초적으로, 골 표면 세포 근처에서 다수 존재하는 것으로 보인다.
림프구 생성은 성체 포유동물의 골수 미세환경에서 발생한다. 골수로부터 유래된 B-계통 세포는 세포 크기 및 면역글로불린 사슬의 발현에 있어서의 순차적인 변화에 의해 확인될 수 있다. B-림프구 생성의 증식/성숙 순서는 가용성에 의해 조절되고 골수독성 화학물질에 의한 파괴에 민감하다. 예를 들어, 벤젠의 폴리히드록시 대사산물 (예를 들어, 히드로퀴논)이 B-림프구 생성에 영향을 주는 것으로 확인되었다.
다양한 약물 및 독소에의 노출은 골수 손상을 유도하고 조혈을 변화시킨다. 골수가 대용량의 저장 능력을 가지므로, 광범위하고 심각한 골수 손상만이 말초 혈액에서의 세포수 변화를 초래한다. 골수 손상의 병원성은 대부분의 독성 작용제에 대하여 불명확하다. 일부 작용제, 가장 주목할 만한 것으로는 화학요법제가 급속히 증식하는 골수 전구체의 예측가능한, 용량-의존성 독성을 유도하지만, 다수의 작용제는 특이적인 골수 손상을 초래한다. 직접적인 골수 손상은 골수의 적절한 전신성 반응을 개시하는 능력을 간섭할 수 있다. 그렇지 않으면, 골수 손상은 증식하는 골수 세포주 중 일부 또는 이들 전부의 성숙 이상으로 반영될 수 있다. 이는 결국 다양한 말초 혈액 일탈 및 골수의 형태학적 이상을 초래할 수 있다. 반면에, 골수가 1차 이펙터(effector) 기관일 경우에는, 하나 이상의 세포주의 증식성 반응이 전신성 장애에 대한 보상 반응보다는, 적절하고 직접적인 화합물-관련 효과를 반영할 수 있다.
독성학에 기반한 골수 변화의 해석은 매우 복잡할 수 있고, 독성 및/또는 약리학적 반응의 국부성 및 전신성 발현을 포함할 수 있다. 일반적으로, 골수 변화는 정량적으로 또는 정성적으로 분류될 수 있다. 정량적 이상은 증식하는 세포주의 다양한 과형성 및 저형성을 포함하고, 적절한 해석을 위해서는 말초 혈액 데이터의 동시 평가를 요한다. 정성적 이상은 골수 전구체의 형태학적 일탈 (골수 이형성) 뿐만 아니라, 골수 괴사, 대식세포 과형성, 및 형질구 증가와 같은 변화를 말한다.
골수 독성은 세포질과 핵이 모두 영향을 받을 수 있는, 특별한 유형의 성숙 중지이다. 전신성 독혈증은 모든 증식하는 세포주의 세포 발달에 영향을 줄 수 있으나; 독성은 후기-단계의 과립구 전구체 (후골수구, 대상핵세포, 및 성숙 호중구)에서 가장 용이하게 인식된다. 골수 독성은 순환하는 박테리아 독소와 관련이 있거나 (중증 감염의 경우), 광범위한 조직 괴사 부위로부터 방출된 순환하는 독소에 의해 초래되는, 약물-유도성일 수 있다.
가능한 작용의 다양성 때문에, 억제 및 무기화와 관련하여 골수 독성의 평가는 매우 복잡한 과정이다. 통용되는 방법은 통상적으로 혈액학적 연구, 병리학적 및 조직병리학적 연구 뿐만 아니라, 생화학적 분석을 포함한다. 그러나, 바이오마커는 매우 복잡하게 조절되고, 때로는 어느 정도 진행된 단계에서도 변화가 발생할 수 있다. 조직병리학적 평가의 주요 단점은 외과적이라는 것과, 이들이 임상 병리학/혈액학적 평가와 조합되더라도 이러한 평가는 부분적으로 연구를 수행하는 독물학자 각자의 해석에 근거하므로 신뢰도가 떨어진다는 것이다 (예를 들어, 문헌 [Andrews CM (1998) The haematopoieticy system, in: Target organ pathology, a basic text, Turton J and Hooson J (eds) Taylor & Francis, London, United Kingdom, 1998]; Encyclopedia Britannica Online: http://www.britannica.com/EBchecked/topic/72869/bone/41883/Bone-morphology의 [Heaney RP, Whedon GD (2010) Bone morphology, in: Encyclopedia Britannica. Retrieved October 26, 2010]; [Rebar 1993, Toxicol. Pathol. 21: 118-129]; [Travlos 2006, Toxicol. Pathol. 35: 548-565]; [Weiss 1993, Toxicol. Pathol. 21: 135-140] 참조).
골수 독성, 및 특히 그의 조기 개시를 효율적이고 신뢰할 수 있게 평가하는 감도가 높고 특이적인 방법이 이용가능하지 않지만, 그럼에도 불구하고 높이 평가받을 것이다. 골수 독성의 중요성은, 림프구 생성을 비롯한 조혈에 있어서의 그의 결과를 고려하면 분명해질 수 있다. 게다가, 예를 들어 유럽 공동체의 모든 업계에서 사용되는 화학적 화합물은 이제 REACH (신화학물질 관리규제(Registration, Evaluation and Authorisation of Chemicals))를 따라야 할 것이다. 화학적 화합물이 억제 및 무기화와 관련하여 골수 독성을 유도할 가능성이 화합물의 고위험으로서 간주될 것이고, 결과적으로 화합물은 고도의 안전 표준에 따를 때에 제한된 용도에 대해서만 이용가능할 것임을 알 것이다.
조혈 독성의 영향을 받을 수 있는 또 다른 중요한 조혈 기관은 혈액이다. 혈액은 신체의 가장 큰 기관 중 하나이고, 화학적 노출의 중요한 잠재적인 표적 기관이다. 혈액은 급속히 분열하는 조직이고, 혈액-형성능이 빠른 증가력을 갖는다. 인간의 혈구 회전율은 대략 2 내지 3 x 1011개의 세포/일로 상당하다. 골수는 적혈구, 과립구, 단핵구, 림프구 및 혈소판의 생성을 맡고 있는 주요 조혈 기관이다. 조혈은 조혈 조직 내에서의 구획화된 과정으로서, 적혈구 생성이 적혈구 모세포 섬에서 발생하고; 과립구 생성이 명확하게 구분되지 않는 병소에서 발생하며; 거핵구 생성이 공동 내피에 인접한 곳에서 발생한다. 조혈 세포는, 성숙되면, 정맥동의 벽을 횡단하여 혈류로 유입되고; 혈소판은 공동벽을 관통하여 공동강으로 들어가는 거핵구의 세포질 과정으로부터 혈액으로 직접 방출된다. 혈구의 생성, 분화 및 성숙은 체액성 인자에 의해 조절된다. 적혈구를 제외한, 다른 세포 유형은 그의 기능이 요구되는 위치로 이동하는 중에 있다. 모든 세포 유형은 지속적으로 순환계를 이탈하고 상이한 속도로 대체되고 있다.
적혈구는 순환 혈액량의 40 내지 45%를 구성하고, 폐로부터 말초 조직으로의 산소의 수송을 위한 주요 비히클로서 작용한다. 또한, 적혈구는 조직으로부터 폐로의 이산화탄소의 수송 및 혈액의 일정한 pH 유지에 관여한다. 적혈구는 염증성 반응의 조절을 용이하게 하고/거나 약물 및 독소를 위한 저장소이다. 적혈구 생성은 빈번한 세포 분열 및 고속의 헤모글로빈 합성에 의존하는 연속 과정이다. 헤모글로빈의 합성은 글로빈 사슬 및 헴 잔기의 공동 생성에 의존한다. 헴의 합성은 철의 포르피린 고리로의 도입을 요한다. 철 결핍은 통상적으로 식이 부족 또는 실혈 증가의 결과이다. 실혈에 기여하는 임의의 약물, 예컨대 비스테로이드성 항염증제는, 위장관 궤양 및 출혈의 위험성 증가와 함께, 철 결핍 빈혈의 발병 위험성을 증대시킬 수 있다. 헴의 포르피린 고리의 합성 결손은 철적모구성 빈혈을 유발할 수 있고, 특징적으로 골수 적혈모구에 철이 축적된다.
약물-유도성 재생불량성 빈혈은 생체이물에 대하여 예측가능하거나 특이적인 반응을 나타낼 수 있다. 이러한 생명을 위협하는 장애는 말초 혈액 범혈구 감소, 망상적혈구 감소, 및 골수 저형성을 특징으로 한다. 벤젠 및 방사선과 같은 작용제는 조혈 전구세포에 대하여 예측가능한 작용을 하며, 그에 따른 재생불량성 빈혈은 이들 작용제의 노출 정도에 상응한다. 이와 달리, 특이적인 재생불량성 빈혈은 그러한 과정을 개시하는 작용제의 용량과 관계가 없어 보인다. 재생불량성 빈혈의 발병과 관련있는 수많은 작용제가 존재하며, 이들 중 대다수가 극소수의 환자에게서 보고되었다. 재생불량성 또는 비재생성 빈혈은 빈혈, 범혈구 감소, 및 다양한 정도의 골수 저세포성을 특징으로 하는, 골수 부전과 관련있는 증상이다.
재생불량성 빈혈은 그의 개시가 기인될 수 있는 공지된 원인, 예를 들어 이온화 방사선, 약물, 또는 화학적 노출에 따라, 특발성 또는 이차성으로 분류된다. 재생불량성 빈혈은 개체수의 소진 또는 분화 결손에 의한 줄기 세포 조절의 장애로서, 혈구를 재생시킬 수 없다. 기질 세포 결손 또한 만성 골수 부전에서 중요한 역할을 할 수 있다. 이러한 사례 중 일부의 경우에는, 클론 기원의 재생불량성 빈혈을 지지하는 증거가 있다. 재생불량성 빈혈의 동물 모델은 상대적으로 적으며, 바이러스, 부술판, 방사선 조사, 또는 벤젠에 의해 유도되는 것들로 거의 제한된다. 골수는 개, 원숭이 및 마우스를 비롯한 다수의 종에서 방사선-유도성 재생불량성 빈혈에 특히 민감한 것으로 오랫동안 인식되어 왔다. 재생불량성 빈혈은 또한 때로는 클로람페니콜, 카르바마제핀, 펠바메이트, 페니토인, 퀴닌, 및 페닐부타존을 비롯한 약물에 대한 노출과 관련있다.
납은 특히 다수의 혈액학적 영향을 미치며, 철결합효소(ferrochelatase) 활성을 감소시킨다. 상기 효소는 제1철 이온의 포르피린 고리 구조로의 도입에 대하여 촉매작용을 한다. 철이 프로토포르피린에 삽입되지 못하면 헴 형성의 억제가 초래된다. 과잉 프로토포르피린이 헤모글로빈 분자의 헴 위치를 차지하고, 프로토포르피린을 함유하는 적혈구가 순환할 때, 아연이 분자의 중심부에서, 통상적으로 철이 차지하는 위치에서 킬레이트화된다. 아연-프로토포르피린을 함유하는 적혈구는 강력한 형광성이고, 납 독성을 진단하는 데에 사용될 수 있다. 헴 합성의 억제는 헴 합성 경로의 제1 단계의 활성율을 증가시키는 자극인 것으로 생각된다.
지혈은 맥관 손상 부위로부터의 실혈 방지 및 순환 혈액의 유동 상태로의 유지를 맡고 있는 다요소 시스템이다. 지혈 시스템의 주요 구성요소는 순환 혈소판, 다양한 혈장 단백질, 및 맥관 내피 세포를 포함한다. 혈소판은 맥관 손상에 대한 반응으로 안정한 지혈 플러그(plug)의 형성에 있어서 필수적이다. 이는 다배체 세포인 성숙 거핵구로부터 형성된다. 혈소판이 방출되는 메카니즘은 불명확하지만, 세포질의 단편화에 의한 것으로 보인다. 시토카인, 트롬보포이에틴이 거핵구 증식, 혈소판 생성, 및 일반적인 줄기 세포로부터의 분화를 자극한다. 혈소판의 수명은 종별로 다양하며: 인간은 10일이고, 개는 8일이고, 래트는 4.5일이고, 마우스는 4일이다. 마찬가지로, 인간보다 설치류에서 평균 혈소판 부피가 더 작고 (또한, 혈소판수는 더 많음); 인간보다 개 및 고양이에서 혈소판 부피가 더 크다. 혈소판은 초기에 폰빌레브란트 인자 (von Willebrand factor; vWF)의 혈소판 당단백질 Ib/IX/V (GP Ib/IX/V) 수용체 복합체와의 결합을 통해 손상된 벽에 부착된다.
생체이물은 혈소판 감소를 초래하거나 혈소판 기능을 간섭함으로써 혈소판 반응을 간섭할 수 있고; 일부 작용제는 혈소판의 개체수와 기능 모두에 영향을 줄 수 있다. 혈소판 기능은 다수의 생화학적 반응 경로의 공동의 상호작용에 의존한다. 다양한 약물 및 식품이 혈소판 기능을 억제하는 것으로 밝혀졌다. 혈소판 기능에 영향을 주는 주요 약물 그룹은 비스테로이드성 항염증제, 베타-락탐-함유 항생물질, 심혈관 약물, 특히 베타 차단제, 향정신성 약물, 마취제, 항히스타민제, 및 일부 화학요법제를 포함한다. 응고는, 궁극적으로 트롬빈의 형성을 초래하는 일련의 세린 프로테아제의 순차적인 활성화에 따른 결과이다. 트롬빈은 피브리노겐을 피브린으로 전환시키는 다기능 효소이고; 인자 V, VIII, XI, XIII, 단백질 C, 및 혈소판을 활성화시키고; 다양한 세포와 상호작용한다. 생체이물의 피브린 혈괴 형성에 대한 가장 일반적인 독성 영향은 이러한 과정에 필수적인 중요 단백질 중 1종 이상의 수준 감소와 관련있다. 응혈 인자 활성의 감소는 단백질(들) 합성의 감소 또는 순환계로부터의 클리어런스(clearance) 증가 때문일 수 있다. 응고 캐스케이드에 관여하는 대부분의 단백질은 간에서 합성된다. 따라서, 간 기능을 손상시키는 임의의 작용제는 응고 인자 생성의 감소를 초래할 수 있다.
다양한 약물 및 독소에 대한 노출은, 특히 재생불량성 빈혈, 혈소판 응집의 억제 및 포르피린 합성의 억제를 특징으로 하는 혈독성을 유도한다. 가능한 작용의 다양성 때문에, 혈독성의 평가는 매우 복잡한 과정이다. 통용되는 방법은 통상적으로 혈액학적 연구, 병리학적 및 조직병리학적 연구 뿐만 아니라, 생화학적 분석을 포함한다. 그러나, 바이오마커는 매우 복잡하게 조절되고, 때로는 어느 정도 진행된 단계에서도 변화가 발생할 수 있다. 조직병리학적 평가의 주요 단점은 외과적이라는 것과, 이들이 임상 병리학/혈액학적 평가와 조합되더라도 이러한 평가는 부분적으로 연구를 수행하는 독물학자 각자의 해석에 근거하므로 신뢰도가 떨어진다는 것이다 (예를 들어, 문헌 [Aksoy 1989, Environ. Health Perspect. 82: 193 - 197]; [Andrews CM (1998) The haematopoieticy system, in: Target organ pathology, a basic text, Turton J and Hooson J (eds) Taylor & Francis, London, United Kingdom, 1998]; [Bloom JC, Brandt JT (2008) Chapter 11, Toxic responses of the blood, in: Casarett & Doull's Toxicology, The basic science of poisons, Klaassen CD (ed.), McGraw-Hill P, 7th revised edition, New York (2008)]; [Haschek WM, Wallig MA, Rousseaux (2010) Fundamentals of toxicologic pathology, 2nd edition, Academic Press, Elsevier, London, UK] 참조).
재생불량성 빈혈, 혈소판 응집 억제 및 포르피린 합성 억제와 관련하여 혈액 독성, 및 특히 그의 조기 개시를 효율적으로 신뢰할 수 있게 평가하는 감도가 높고 특이적인 방법은 이용가능하지 않지만, 그럼에도 불구하고 높게 평가받을 것이다. 혈액 독성의 중요성은 재생불량성 빈혈, 혈소판 응집 억제 및 포르피린 합성 억제와 같은 그의 결과를 고려하면 분명해질 수 있다. 게다가, 예를 들어 유럽 공동체의 모든 업계에서 사용되는 화학적 화합물은 이제 REACH (신화학물질 관리규제)를 따라야 할 것이다. 화학적 화합물이 혈액 독성, 특히 재생불량성 빈혈, 혈소판 응집 억제 또는 포르피린 합성 억제를 유도할 가능성이 화합물의 고위험으로서 간주될 것이고, 결과적으로 화합물은 고도의 안전 표준에 따를 때에 제한된 용도에 대해서만 이용가능할 것임을 알 것이다.
화학적 화합물의 독성학적 특성, 및 특히 조혈 독성을 효율적이고 신뢰할 수 있는 방식으로 평가하는 감도가 높고 특이적인 방법이 아직 이용가능하지 않지만, 그럼에도 불구하고 높게 평가받을 것이다.
따라서, 본 발명의 근간이 되는 기술상의 문제점은 상기에 언급된 요구에 부응하는 수단 및 방법의 제공으로 볼 수 있다. 이러한 기술상의 문제점은 특허청구범위에서 특징화되고 본원에서 하기에 기재된 실시양태에 의해 해결된다.
따라서, 본 발명은
(a) 조혈 독성을 겪는 것으로 추정되는 대상체의 테스트 샘플에서 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 또는 9 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커의 양을 측정하는 단계, 및
(b) 단계 (a)에서 측정된 양을 기준과 비교함으로써, 조혈 독성을 진단하는 단계
를 포함하는, 조혈 독성을 진단하는 방법에 관한 것이다.
상기에 언급된 방법의 바람직한 실시양태에서, 상기 대상체는 조혈 독성을 유도할 수 있는 것으로 추정되는 화합물과 접촉하였다.
본 발명은 또한
(a) 조혈 독성을 유도할 수 있는 것으로 추정되는 화합물과 접촉한 대상체의 샘플에서 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 또는 9 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커의 양을 측정하는 단계, 및
(b) 단계 (a)에서 측정된 양을 기준과 비교함으로써, 화합물의 조혈 독성 유도 능력을 결정하는 단계
를 포함하는, 화합물이 대상체에서 조혈 독성을 유도할 수 있는지를 결정하는 방법에 관한 것이다.
상기에 언급된 방법의 바람직한 실시양태에서, 상기 화합물은 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물이다.
본 발명의 방법의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 기준은 (i) 조혈 독성을 겪는 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 본질적으로 동일한 것이 조혈 독성의 지표이다.
본 발명의 방법의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 기준은 (i) 조혈 독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 조혈 독성의 지표이다.
본 발명의 방법의 또 다른 실시양태에서, 상기 기준은 대상체 집단에 대하여 계산된 바이오마커의 기준이다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 조혈 독성의 지표이다.
본 발명은 또한
(a) 조혈 독성을 겪고 있으며 조혈 독성을 치료할 수 있는 것으로 추정되는 후보 물질과 접촉한 대상체의 샘플에서 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커의 양을 측정하는 단계, 및
(b) 단계 (a)에서 측정된 양을 기준과 비교함으로써, 조혈 독성을 치료할 수 있는 물질을 확인하는 단계
를 포함하는, 조혈 독성의 치료 물질을 확인하는 방법을 고려한다.
상기에 언급된 방법의 바람직한 실시양태에서, 상기 기준은 (i) 조혈 독성을 겪는 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 상이한 것이 조혈 독성을 치료할 수 있는 물질의 지표이다.
상기에 언급된 방법의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 기준은 (i) 조혈 독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 본질적으로 동일한 것이 조혈 독성을 치료할 수 있는 물질의 지표이다.
상기에 언급된 방법의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 기준은 대상체 집단에 대하여 계산된 바이오마커의 기준이다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 본질적으로 동일한 것이 조혈 독성을 치료할 수 있는 물질의 지표이다.
본 발명은 또한 대상체의 샘플에서 조혈 독성을 진단하는 데 있어서, 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커 또는 상기 바이오마커에 대한 검출제의 용도에 관한 것이다.
추가로, 본 발명은
(a) 샘플에 존재하는 바이오마커의 양을 측정하도록 하는, 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커에 대한 검출제를 포함하는 분석 유닛; 및 이에 작동가능하게 연결된,
(b) 분석 유닛에 의해 측정된 상기 1종 이상의 바이오마커의 양을 저장된 기준과 비교하도록 함으로써 조혈 독성을 진단하는, 저장된 기준 및 데이터 프로세서를 포함하는 평가 유닛
을 포함하는, 조혈 독성을 겪는 것으로 추정되는 대상체의 샘플에서 조혈 독성을 진단하기 위한 장치에 관한 것이다.
본 발명의 장치의 바람직한 실시양태에서, 상기 저장된 기준은 조혈 독성을 겪는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 기준이고, 상기 데이터 프로세서는 분석 유닛에 의해 측정된 1종 이상의 바이오마커의 양을 저장된 기준과 비교하기 위한 명령을 실행하고, 여기서 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 본질적으로 동일한 것이 조혈 독성 존재의 지표이거나, 또는 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 조혈 독성 부재의 지표이다.
본 발명의 장치의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 저장된 기준은 조혈 독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 기준이고, 상기 데이터 프로세서는 분석 유닛에 의해 측정된 1종 이상의 바이오마커의 양을 저장된 기준과 비교하기 위한 명령을 실행하고, 여기서 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 조혈 독성 존재의 지표이거나, 또는 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 본질적으로 동일한 것이 조혈 독성 부재의 지표이다.
추가로, 본 발명은 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커에 대한 검출제, 및 조혈 독성을 겪는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 조혈 독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 1종 이상의 바이오마커의 농도에 대한 표준을 포함하는, 조혈 독성을 진단하기 위한 키트에 관한 것이다.
특히, 본 발명은
(a) 골수 독성을 겪는 것으로 추정되는 대상체의 테스트 샘플에서 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 또는 1f 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커의 양을 측정하는 단계, 및
(b) 단계 (a)에서 측정된 양을 기준과 비교함으로써, 골수 독성을 진단하는 단계
를 포함하는, 골수 독성을 진단하는 방법에 관한 것이다.
상기에 언급된 방법의 바람직한 실시양태에서, 상기 대상체는 골수 독성을 유도할 수 있는 것으로 추정되는 화합물과 접촉하였다.
본 발명은 또한
(a) 골수 독성을 유도할 수 있는 것으로 추정되는 화합물과 접촉한 대상체의 샘플에서 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 또는 1f 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커의 양을 측정하는 단계, 및
(b) 단계 (a)에서 측정된 양을 기준과 비교함으로써, 화합물의 골수 독성 유도 능력을 결정하는 단계
를 포함하는, 화합물이 대상체에서 골수 독성을 유도할 수 있는지를 결정하는 방법에 관한 것이다.
상기에 언급된 방법의 바람직한 실시양태에서, 상기 화합물은 아드리아마이신 히드로클로라이드, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 이부프로펜, 및 옥살리플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물이다.
본 발명의 방법의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 기준은 (i) 골수 독성을 겪는 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 아드리아마이신 히드로클로라이드, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 이부프로펜, 및 옥살리플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 본질적으로 동일한 것이 골수 독성의 지표이다.
본 발명의 방법의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 기준은 (i) 골수 독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 아드리아마이신 히드로클로라이드, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 이부프로펜, 및 옥살리플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 골수 독성의 지표이다.
본 발명의 방법의 또 다른 실시양태에서, 상기 기준은 대상체 집단에 대하여 계산된 바이오마커의 기준이다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 골수 독성의 지표이다.
본 발명은 또한
(a) 골수 독성을 겪고 있으며 골수 독성을 치료할 수 있는 것으로 추정되는 후보 물질과 접촉한 대상체의 샘플에서 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 또는 1f 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커의 양을 측정하는 단계, 및
(b) 단계 (a)에서 측정된 양을 기준과 비교함으로써, 골수 독성을 치료할 수 있는 물질을 확인하는 단계
를 포함하는, 골수 독성의 치료 물질을 확인하는 방법을 고려한다.
상기에 언급된 방법의 바람직한 실시양태에서, 상기 기준은 (i) 골수 독성을 겪는 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 아드리아마이신 히드로클로라이드, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 이부프로펜, 및 옥살리플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 상이한 것이 골수 독성을 치료할 수 있는 물질의 지표이다.
상기에 언급된 방법의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 기준은 (i) 골수 독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 아드리아마이신 히드로클로라이드, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 이부프로펜, 및 옥살리플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 본질적으로 동일한 것이 골수 독성을 치료할 수 있는 물질의 지표이다.
상기에 언급된 방법의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 기준은 대상체 집단에 대하여 계산된 바이오마커의 기준이다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 본질적으로 동일한 것이 골수 독성을 치료할 수 있는 물질의 지표이다.
본 발명은 또한 대상체의 샘플에서 골수 독성을 진단하는 데 있어서, 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 또는 1f 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커 또는 상기 바이오마커에 대한 검출제의 용도에 관한 것이다.
추가로, 본 발명은
(a) 샘플에 존재하는 바이오마커의 양을 측정하도록 하는, 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 또는 1f 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커에 대한 검출제를 포함하는 분석 유닛; 및 이에 작동가능하게 연결된,
(b) 분석 유닛에 의해 측정된 상기 1종 이상의 바이오마커의 양을 저장된 기준과 비교하도록 함으로써 골수 독성을 진단하는, 저장된 기준 및 데이터 프로세서를 포함하는 평가 유닛
을 포함하는, 골수 독성을 겪는 것으로 추정되는 대상체의 샘플에서 골수 독성을 진단하기 위한 장치에 관한 것이다.
본 발명의 장치의 바람직한 실시양태에서, 상기 저장된 기준은 골수 독성을 겪는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 아드리아마이신 히드로클로라이드, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 이부프로펜, 및 옥살리플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 기준이고, 상기 데이터 프로세서는 분석 유닛에 의해 측정된 1종 이상의 바이오마커의 양을 저장된 기준과 비교하기 위한 명령을 실행하고, 여기서 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 본질적으로 동일한 것이 골수 독성 존재의 지표이거나, 또는 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 골수 독성 부재의 지표이다.
본 발명의 장치의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 저장된 기준은 골수 독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 아드리아마이신 히드로클로라이드, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 이부프로펜, 및 옥살리플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 기준이고, 상기 데이터 프로세서는 분석 유닛에 의해 측정된 1종 이상의 바이오마커의 양을 저장된 기준과 비교하기 위한 명령을 실행하고, 여기서 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 골수 독성 존재의 지표이거나, 또는 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 본질적으로 동일한 것이 골수 독성 부재의 지표이다.
추가로, 본 발명은 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 또는 1f 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커에 대한 검출제, 및 골수 독성을 겪는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 골수 독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 1종 이상의 바이오마커의 농도에 대한 표준을 포함하는, 골수 독성을 진단하기 위한 키트에 관한 것이다.
특히, 본 발명은
(a) 혈독성을 겪는 것으로 추정되는 대상체의 테스트 샘플에서 표 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커의 양을 측정하는 단계, 및
(b) 단계 (a)에서 측정된 양을 기준과 비교함으로써, 혈독성을 진단하는 단계
를 포함하는, 혈독성을 진단하는 방법에 관한 것이다.
상기에 언급된 방법의 바람직한 실시양태에서, 상기 대상체는 혈독성을 유도할 수 있는 것으로 추정되는 화합물과 접촉하였다.
본 발명은 또한
(a) 혈독성을 유도할 수 있는 것으로 추정되는 화합물과 접촉한 대상체의 샘플에서 표 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커의 양을 측정하는 단계, 및
(b) 단계 (a)에서 측정된 양을 기준과 비교함으로써, 화합물의 혈독성 유도 능력을 결정하는 단계
를 포함하는, 화합물이 대상체에서 혈독성을 유도할 수 있는지를 결정하는 방법에 관한 것이다.
상기에 언급된 방법의 바람직한 실시양태에서, 상기 화합물은 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스 및 트리에탄올아민으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물이다.
본 발명의 방법의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 기준은 (i) 혈독성을 겪는 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스 및 트리에탄올아민으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 본질적으로 동일한 것이 혈독성의 지표이다.
본 발명의 방법의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 기준은 (i) 혈독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스 및 트리에탄올아민으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 혈독성의 지표이다.
본 발명의 방법의 또 다른 실시양태에서, 상기 기준은 대상체 집단에 대하여 계산된 바이오마커의 기준이다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 혈독성의 지표이다.
본 발명은 또한
(a) 혈독성을 겪고 있으며 혈독성을 치료할 수 있는 것으로 추정되는 후보 물질과 접촉한 대상체의 샘플에서 표 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커의 양을 측정하는 단계, 및
(b) 단계 (a)에서 측정된 양을 기준과 비교함으로써, 혈독성을 치료할 수 있는 물질을 확인하는 단계
를 포함하는, 혈독성의 치료 물질을 확인하는 방법을 고려한다.
상기에 언급된 방법의 바람직한 실시양태에서, 상기 기준은 (i) 혈독성을 겪는 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스 및 트리에탄올아민으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 상이한 것이 혈독성을 치료할 수 있는 물질의 지표이다.
상기에 언급된 방법의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 기준은 (i) 혈독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스 및 트리에탄올아민으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 본질적으로 동일한 것이 혈독성을 치료할 수 있는 물질의 지표이다.
상기에 언급된 방법의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 기준은 대상체 집단에 대하여 계산된 바이오마커의 기준이다. 상기 방법의 보다 바람직한 실시양태에서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 본질적으로 동일한 것이 혈독성을 치료할 수 있는 물질의 지표이다.
본 발명은 또한 대상체의 샘플에서 혈독성을 진단하는 데 있어서, 표 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커 또는 상기 바이오마커에 대한 검출제의 용도에 관한 것이다.
추가로, 본 발명은
(a) 샘플에 존재하는 바이오마커의 양을 측정하도록 하는, 표 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커에 대한 검출제를 포함하는 분석 유닛; 및 이에 작동가능하게 연결된,
(b) 분석 유닛에 의해 측정된 상기 1종 이상의 바이오마커의 양을 저장된 기준과 비교하도록 함으로써 혈독성을 진단하는, 저장된 기준 및 데이터 프로세서를 포함하는 평가 유닛
을 포함하는, 혈독성을 겪는 것으로 추정되는 대상체의 샘플에서 혈독성을 진단하기 위한 장치에 관한 것이다.
본 발명의 장치의 바람직한 실시양태에서, 상기 저장된 기준은 혈독성을 겪는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스 및 트리에탄올아민으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 기준이고, 상기 데이터 프로세서는 분석 유닛에 의해 측정된 1종 이상의 바이오마커의 양을 저장된 기준과 비교하기 위한 명령을 실행하고, 여기서 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 본질적으로 동일한 것이 혈독성 존재의 지표이거나, 또는 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 혈독성 부재의 지표이다.
본 발명의 장치의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 저장된 기준은 혈독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스 및 트리에탄올아민으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 기준이고, 상기 데이터 프로세서는 분석 유닛에 의해 측정된 1종 이상의 바이오마커의 양을 저장된 기준과 비교하기 위한 명령을 실행하고, 여기서 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 혈독성 존재의 지표이거나, 또는 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 본질적으로 동일한 것이 혈독성 부재의 지표이다.
추가로, 본 발명은 표 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커에 대한 검출제, 및 혈독성을 겪는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 혈독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 1종 이상의 바이오마커의 농도에 대한 표준을 포함하는, 혈독성을 진단하기 위한 키트에 관한 것이다.
특히, 본 발명은 또한 하기의 특정 방법, 용도, 장치 및 키트를 고려한다.
하기의 정의 및 설명이, 필요에 따라 수정되어, 본 발명의 상기 실시양태 및 하기에 기재된 실시양태 모두에 적용된다.
본 발명에 따른 방법은 상기에 언급된 단계로 본질적으로 이루어질 수 있거나 또는 추가 단계를 포함할 수 있다. 추가 단계는 샘플 전처리 또는 본 발명의 방법에 의해 얻어진 진단 결과의 평가와 관련있을 수 있다. 바람직한 추가 평가 단계는 본원의 다른 곳에서 설명될 것이다. 본 발명의 방법은 부분적으로 또는 전적으로 자동화의 보조를 받을 수 있다. 예를 들어, 바이오마커의 양을 측정하는 것과 관련된 단계는 로봇식 및 자동화 판독기 장치에 의해 자동화될 수 있다. 마찬가지로, 양을 비교하는 것과 관련된 단계는, 실행되면 자동으로 비교를 수행하는 프로그램 코드를 포함하는 적합한 데이터 프로세싱 장치, 예컨대 컴퓨터에 의해 자동화될 수 있다. 이러한 경우에, 기준은 저장된 기준, 예를 들어 데이터베이스로부터 제공될 것이다. 본 발명의 방법이 바람직하게는 대상체의 샘플에 대하여 생체외에서 수행되는, 즉 인체 또는 동물체에 대하여 실행되지 않는 방법임을 알아야 한다.
본원에서 사용된 용어 "진단하는"이란 대상체가 본원에서 언급된 상태, 예컨대 중독, 질환 또는 장애를 겪고 있거나, 또는 그러한 상태에 대한 소인을 가질 확률을 평가하는 것을 말한다. 소인의 진단은 때로는, 대상체가 추후에 사전에 한정된 시간창 내에 상태를 발달시킬 가능성의 예후 또는 예측이라고도 할 수 있다. 당업자가 알고 있는 바와 같이, 이러한 평가는 통상적으로 진단하고자 하는 대상체의 100%에 대하여 정확하지 않을 수 있지만, 대상체의 100%에 대하여 정확한 것이 바람직하다. 그러나, 상기 용어는 대상체의 통계학적으로 유의한 비율이 상태를 겪고 있거나 상태에 대한 소인을 갖는 것으로 확인될 수 있을 것을 요한다. 비율이 통계학적으로 유의한지는 다양한 널리 공지된 통계학적 평가 툴, 예를 들어 신뢰 구간 결정, p-값 결정, 스튜던트(Student) t-검정법, 만-휘트니(Mann-Whitney) 검정법 등을 사용하여 당업자에 의해 추가 어려움 없이 결정될 수 있다. 상세한 내용은 문헌 [Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983]에서 찾아볼 수 있다. 바람직한 신뢰 구간은 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상 또는 95% 이상이다. p-값은 바람직하게는 0.2, 0.1, 0.05이다.
본 발명에 따른 진단은 또한 상태 또는 그의 증상 뿐만 아니라, 그에 대한 소인의 모니터링, 확인, 및 분류를 포함한다. 모니터링은 이미 진단받은 상태 또는 소인을 추적하는 것을 말한다. 모니터링은, 예를 들어 상태 또는 소인의 진행 측정, 특정 치료법의 상태의 진행에 대한 영향 또는 예방학적 조치, 예컨대 예방학적 치료법 또는 식이요법의 소인을 갖는 대상체의 상태 발달에 대한 영향 측정을 포함한다. 확인은 다른 지표(indicator) 또는 마커를 사용하여, 이미 결정된 상태 또는 상태에 대한 소인의 진단을 보강하거나 입증하는 것과 관련있다. 분류는 (i) 상태를, 예를 들어 상태에 동반되는 증상의 강도에 상응하는 상이한 클래스로 배정하는 것, 또는 (ii) 상태에 동반되는 상이한 단계, 질환 또는 장애를 구별하는 것과 관련있다. 상태에 대한 소인은 위험도, 즉 대상체가 상태를 추후에 발달시킬 확률에 따라 분류될 수 있다. 또한, 분류는 바람직하게는 본 발명의 방법에 의해 테스트할 화합물에 작용 방식을 배정하는 것을 포함한다. 구체적으로, 본 발명의 방법은 작용 방식이 아직 공지되지 않은 화합물의 특정 작용 방식을 결정하는 것을 허용한다. 이는 바람직하게는 1종 이상의 바이오마커에 대하여 측정된 양 또는 상기 화합물에 대하여 대표적인 바이오마커 프로파일을, 기준으로서 작용 방식이 공지된 화합물에 대하여 측정된 바이오마커의 양 또는 바이오마커 프로파일과 비교함으로써 달성된다. 작용 방식의 분류는 화합물 독성의 보다 더욱 신뢰할 수 있는 평가를 허용하는데, 그 이유는 화합물의 분자 표적이 확인되기 때문이다.
본원에서 사용된 용어 "조혈 독성"은 조혈 기능 장애, 특히 조혈 장애 또는 적혈구 또는 면역계 세포, 예컨대 백혈구의 기능 장애를 초래하는, 조혈 시스템의 기관 또는 세포의 손상 또는 장애에 대한 것이다. 바람직하게는, 골수에서의 조혈 또는 면역계의 기능이 조혈 독성에 의해 영향을 받는다. 따라서, 본원에서 사용된 용어 조혈 독성은 일반적으로 골수 독성 및 혈독성을 포함한다. 바람직하게는, 본원에서 사용된 조혈 독성은 화학적 화합물 또는 약물의 투여에 의해 유도되거나 그러한 투여의 결과이며, 즉 소위 독소-유도성 조혈 독성이다.
조혈 독성의 상기에 언급된 발현의 증상 및 임상학적 징후는 당업자에게 널리 공지되어 있으며, 독성학의 표준 문헌, 예를 들어 문헌 [H. Marquardt, S. G. Schaefer, R. O. McClellan, F. Welsch (eds.), "Toxicology", Chapter 13: The Liver, 1999, Academic Press, London]에 상세히 개시되어 있다.
본원에서 사용된 골수 독성은 바람직하게는 골수 기능의 장애를 말한다. 바람직하게는, 골수 독성은 골수에서의 다능성 줄기 세포의 증식 또는 분화 (림프구 생성) 감소를 동반한다. 골수 독성은 바람직하게는 급속히 증식하는 골수 전구체의 독성 또는 특이적인 골수 손상을 동반할 수 있다. 직접적인 골수 손상은 골수의 적절한 전신성 반응을 개시하는 능력을 간섭할 수 있다. 그렇지 않으면, 골수 손상은 증식하는 골수 세포주 중 일부 또는 이들 전부의 성숙 이상으로 반영될 수 있다. 이는 결국 다양한 말초 혈액 일탈 및 골수의 형태학적 이상을 초래할 수 있다. 반면에, 골수가 1차 이펙터 기관일 경우에는, 하나 이상의 세포주의 증식성 반응이 전신성 장애에 대한 보상 반응보다는, 적절하고 직접적인 화합물-관련 효과를 반영할 수 있다. 일반적으로, 골수 독성 및 동반되는 골수 변화는 정량적으로 또는 정성적으로 분류될 수 있다. 정량적 이상은 증식하는 세포주의 다양한 과형성 및 저형성을 포함하고, 적절한 해석을 위해서는 말초 혈액 데이터의 동시 평가를 요한다. 정성적 이상은 골수 전구체의 형태학적 일탈 (골수 이형성) 뿐만 아니라, 골수 괴사, 대식세포 과형성, 및 형질구 증가와 같은 변화를 말한다. 골수 독성은 세포질과 핵이 모두 영향을 받을 수 있는, 특별한 유형의 성숙 중지로 볼 수 있다. 전신성 독혈증은 모든 증식하는 세포주의 세포 발달에 영향을 줄 수 있으나; 독성은 바람직하게는 후기-단계의 과립구 전구체 (후골수구, 대상핵세포, 및 성숙 호중구)에서 가장 용이하게 인식된다. 골수 독성은 순환하는 박테리아 독소와 관련있거나 (중증 감염의 경우), 광범위한 조직 괴사 부위로부터 방출된 순환하는 독소에 의해 초래되는, 약물-유도성일 수 있다.
바람직하게는, 조혈 독성이 골수 독성일 경우에, 본 발명의 방법으로 측정되어야 할 1종 이상의 바이오마커는 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 또는 1f 중 어느 하나로부터 선택된다. 보다 바람직하게는, 상기 골수 독성은 골수 억제이고, 가장 바람직하게는 플라틴, 예컨대 옥살리플라틴 유도성 골수 억제이다.
본원에서 사용된 혈독성은 바람직하게는 혈액 기능 장애를 말한다. 바람직하게는, 적혈구 기능 및/또는 백혈구 기능이 장애가 있을 수 있다. 바람직하게는, 혈독성은 말초 혈액 범혈구 감소, 망상적혈구 감소, 및 골수 저형성을 특징으로 하는, 약물-유도성 재생불량성 빈혈을 포함한다. 벤젠 및 방사선과 같은 작용제는 조혈 전구세포에 대하여 예측가능한 작용을 하며, 그에 따른 재생불량성 빈혈은 이들 작용제의 노출 정도에 상응한다. 이와 달리, 특이적인 재생불량성 빈혈은 그러한 과정을 개시하는 작용제의 용량과 관계가 없어 보인다. 재생불량성 빈혈의 발병과 관련있는 수많은 작용제가 존재하며, 이들 중 대다수가 극소수의 환자에게서 보고되었다. 재생불량성 또는 비재생성 빈혈은 빈혈, 범혈구 감소, 및 다양한 정도의 골수 저세포성을 특징으로 하는, 골수 부전과 관련있는 증상이다. 재생불량성 빈혈은 그의 개시가 기인될 수 있는 공지된 원인, 예를 들어 이온화 방사선, 약물, 또는 화학적 노출에 따라, 특발성 또는 이차성으로 분류된다. 재생불량성 빈혈은 개체수의 소진 또는 분화 결손에 의한 줄기 세포 조절의 장애로서, 이러한 줄기 세포는 혈구를 재생시킬 수 없다. 기질 세포 결손 또한 만성 골수 부전에서 중요한 역할을 할 수 있다. 이러한 사례 중 일부의 경우에는, 클론 기원의 재생불량성 빈혈을 지지하는 증거가 있다. 재생불량성 빈혈의 동물 모델은 상대적으로 적으며, 바이러스, 부술판, 방사선 조사, 또는 벤젠에 의해 유도되는 것들로 거의 제한된다. 골수는 개, 원숭이 및 마우스를 비롯한 다수의 종에서 방사선-유도성 재생불량성 빈혈에 특히 민감한 것으로 오랫동안 인식되어 왔다. 재생불량성 빈혈은 또한 때로는 클로람페니콜, 카르바마제핀, 펠바메이트, 페니토인, 퀴닌, 및 페닐부타존을 비롯한 약물에 대한 노출과 관련있다. 또한, 용어 혈독성은 납 독성을 포함한다. 납은 특히 다수의 혈액학적 영향을 미치며, 철결합효소 활성을 감소시킨다. 상기 효소는 제1철 이온의 포르피린 고리 구조로의 도입에 대하여 촉매작용을 한다. 철이 프로토포르피린에 삽입되지 못하면 헴 형성의 억제가 초래된다. 과잉 프로토포르피린이 헤모글로빈 분자의 헴 위치를 차지하고, 프로토포르피린을 함유하는 적혈구가 순환할 때, 아연이 분자의 중심부에서, 통상적으로 철이 차지하는 위치에서 킬레이트화된다. 아연-프로토포르피린을 함유하는 적혈구는 강력한 형광성이고, 납 독성을 진단하는 데에 사용될 수 있다. 헴 합성의 억제는 헴 합성 경로의 제1 단계의 활성율을 증가시키는 자극인 것으로 생각된다. 또한, 혈독성은 바람직하게는 혈소판 및/또는 혈소판 기능에 영향을 줄 수 있다. 특히, 혈독성은 혈소판 감소를 초래하거나 혈소판 기능을 간섭함으로써 혈소판 반응 장애를 초래할 수 있고; 일부 작용제는 혈소판의 개체수와 기능 모두에 영향을 줄 수 있다. 혈소판 기능은 바람직하게는 혈소판의 응고 기능을 평가하는 응혈 분석법으로 측정될 수 있다. 따라서, 본원에서 사용된 혈독성은 바람직하게는 재생불량성 빈혈, 납 독성, 혈소판 응집 억제 및/또는 포르피린 합성 억제를 포함한다.
바람직하게는, 조혈 독성이 혈독성일 경우에, 본 발명의 방법으로 측정되어야 할 1종 이상의 바이오마커는 표 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된다.
보다 바람직하게는, 1종 이상의 바이오마커가 표 2a, 2b, 12a 또는 12b에 나타낸 바이오마커로부터 선택될 경우에, 상기 혈독성은 혈액 빈혈을 특징으로 한다. 특히, 표 12a 및/또는 12b의 바이오마커는 혈액 빈혈의 조기 인디케이터인 것으로 밝혀졌다. 래트가 본 발명의 방법에서 대상체로서 사용될 경우에, 상기 바이오마커는 2-클로로아닐린, 아닐린 또는 4-클로로-3-니트로아닐린 중 어느 하나에 의한 자극 후에 7일 정도의 조기에 변화한다.
보다 바람직하게는, 1종 이상의 바이오마커가 표 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f 또는 3g에 나타낸 바이오마커로부터 선택될 경우에, 상기 혈독성은 포르피린 합성의 억제를 특징으로 한다.
또한 보다 바람직하게는, 1종 이상의 바이오마커가 표 4a, 4b, 4c 또는 4d에 나타낸 바이오마커로부터 선택될 경우에, 상기 혈독성은 메트헤모글로빈 수준 장애를 특징으로 한다.
보다 바람직하게는, 1종 이상의 바이오마커가 표 5a, 5b, 5c 또는 5d에 나타낸 바이오마커로부터 선택될 경우에, 상기 혈독성은 비장 혈철증을 특징으로 한다.
보다 바람직하게는, 1종 이상의 바이오마커가 표 6a 또는 6b에 나타낸 바이오마커로부터 선택될 경우에, 상기 혈독성은 조혈 시스템 세포의 전신성 증식 장애 (억제)를 특징으로 한다.
보다 바람직하게는, 1종 이상의 바이오마커가 표 7a 또는 7b에 나타낸 바이오마커로부터 선택될 경우에, 상기 혈독성은 혈액 재생불량성 빈혈을 특징으로 한다.
보다 바람직하게는, 1종 이상의 바이오마커가 표 8a 또는 8b에 나타낸 바이오마커로부터 선택될 경우에, 상기 혈독성은 면역억제를 특징으로 한다.
보다 바람직하게는, 1종 이상의 바이오마커가 표 9에 나타낸 바이오마커로부터 선택될 경우에, 상기 혈독성은 비장 조혈을 특징으로 한다.
본 발명에 따라서, 표에 나열된 각각의 바이오마커는 분명히 진단에 있어서 통계학적으로 독립 예측변수이므로, 바이오마커 1종 초과의 조합이 진단을 더욱 보강함이 밝혀졌다. 게다가, 마커 존재비에 대한 다른 조직으로부터의 영향력이 상쇄되므로, 조혈 독성에 대한 특이성 또한 상당히 증가한다. 따라서, 본원에서 사용된 용어 "1종 이상"은 바람직하게는, 첨부된 표 중 어느 하나에서 언급된 바이오마커 중 2종 이상, 3종 이상, 4종 이상, 5종 이상, 6종 이상, 7종 이상, 8종 이상, 9종 이상 또는 10종 이상의 조합을 말한다. 바람직하게는, 표 중 어느 하나에서 인용된 모든 바이오마커가 본 발명의 방법에 따라 조합되어 측정되어야 한다.
각각의 표의 조혈 독성 및 표에서 언급된 징후에 대한 바이오마커의 바람직한 그룹 또는 조합은 하기와 같다.
표 1a, 1b: 프로게스테론, 4-히드록시페닐피루베이트, 21-히드록시프로게스테론 (11-데옥시코르티코스테론), 18-히드록시-11-데옥시코르티코스테론 또는 시트레이트;
표 1c, 1d: 콜린 플라스마로겐 No 02, 발린, 류신, 이소류신 또는 케토류신;
표 1e, 1f: 트립토판, 오르니틴, 14-메틸헥사데칸산, 글루코스-6-포스페이트 또는 18-히드록시-11-데옥시코르티코스테론;
표 2a, 2b: 리발, 시토신, 18-히드록시-11-데옥시코르티코스테론, TAG (C16:0,C18:2) 또는 TAG No 02;
표 3a, 3b: 발린, 우레아, 페닐알라닌, 히스티딘 또는 TAG (C16:0,C18:1,C18:3);
표 3c, 3d: 리신, 스핑고미엘린 (d18:2,C18:0), 말레이트, DAG (C18:1,C18:2) 또는 이소류신;
표 3e, 3f: 이소류신, 메티오닌, 류신, 세린 또는 트레온산;
표 3g: 이소류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 류신 또는 발린;
표 4a, 4b: 세린, 리발, 시토신, 트레오닌 또는 도코사헥사엔산 (C22:시스[4,7,10,13,16,19]6);
표 4c, 4d: 트레오닌, 세린, 우레아, 팔미톨레산 (C16:시스[9]1) 또는 글리신;
표 5a, 5b: 리놀레산 (C18:시스[9,12]2), 도코사헥사엔산 (C22:시스[4,7,10,13,16,19]6), 헵타데칸산 (C17:0), 피토스핑고신 또는 시토신;
표 5c, 5d: 리발, 도코사헥사엔산 (C22:시스[4,7,10,13,16,19]6), 시토신, 트레온산 또는 팔미톨레산 (C16:시스[9]1);
표 6a, 6b: 조효소 Q9, 조효소 Q10, 시토신, 만노스 또는 리발;
표 7a, 7b: 감마-리놀렌산 (C18:시스[6,9,12]3), 스핑고미엘린 (d18:1,C24:0), 히스티딘, 콜린 플라스마로겐 No 01 또는 시토신;
표 8a, 8b: 콜레스테롤에스테르 No 01, 케토류신, 글루타메이트, 아스파르테이트 또는 18-히드록시-11-데옥시코르티코스테론;
표 9a, 9b: 요산, 시토신, 우라실, 아스코르브산 또는 리발.
그러므로, 바람직하게는, 1종 이상의 바이오마커는 상기에 언급된 그룹으로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커이거나, 또는 1종 이상의 바이오마커는 상기에 언급된 바이오마커 그룹으로 이루어지거나 그를 포함하는 바이오마커의 조합이다. 상기에 언급된 바이오마커 및 바이오마커의 조합은 첨부된 실시예에서 보다 상세히 설명된 바와 같이 특히 높은 진단적 유용성을 갖는 핵심 바이오마커로서 확인되었다.
추가로, 공지된 대사산물, 유전적 돌연변이, 전사물 및/또는 단백질 양 또는 효소 활성을 비롯한 다른 바이오마커 또는 임상학적 파라미터 또한 측정될 수 있다. 본 발명의 방법에 따라 측정될 수 있는, 이러한 추가의 임상학적 또는 생화학적 파라미터는 당업계에 널리 공지되어 있다.
본원에서 사용된 용어 "바이오마커"는 샘플 중의 그의 존재 또는 농도가 본원에서 언급된 상태, 바람직하게는 조혈 독성의 존재 또는 부재 또는 강도에 대한 지표인 화학적 화합물을 말한다. 화학적 화합물은 바람직하게는 대사산물 또는 그로부터 유래된 분석물이다. 분석물은 유기체에서 발견되는 실제 대사산물과 동일할 수 있는 화학적 화합물이다. 그러나, 상기 용어는 또한 내인성으로 발생하거나 단리 또는 샘플 전처리 동안에 또는 본 발명의 방법을 수행한 결과, 예를 들어 정제 및/또는 측정 단계 동안에 발생하는 대사산물의 유도체도 포함한다. 특별한 경우에, 분석물은 또한 화학적 특성, 예컨대 용해도에 의해 특징화된다. 상기 특성 때문에, 분석물은 정제 및/또는 측정 과정 중에 수득된 극성 또는 지질 분획에서 발생할 수 있다. 따라서, 화학적 특성, 및 바람직하게는 용해도는 정제 및/또는 측정 과정 중에 수득된 극성 또는 지질 분획에서의 분석물의 발생을 초래할 것이다. 그러므로, 정제 및/또는 측정 과정 중에 수득된 극성 또는 지질 분획에서의 분석물의 발생으로서 고려되는 상기 화학적 특성, 및 특히 용해도는 분석물을 추가로 특징화하고 그의 확인을 보조할 것이다. 이러한 화학적 특성을 측정하여 고려할 수 있는 방법에 관한 상세한 내용은 하기에 기재된 첨부 실시예에서 찾아볼 수 있다. 바람직하게는, 분석물은 정성적 및 정량적 방식으로 대사산물을 나타내고, 따라서 필연적으로 대상체 또는 적어도 상기 대상체의 테스트 샘플에서의 대사산물의 존재 또는 부재 또는 그 양에 대한 결론을 내릴 수 있게 한다. 바이오마커, 분석물 및 대사산물은 본원에서 단수형으로 언급되지만, 복수형 용어도 또한 포함되는데, 즉 동일한 분자종의 복수 개의 바이오마커, 분석물 또는 대사산물 분자도 나타낸다. 또한, 본 발명에 따른 바이오마커가 반드시 한 분자종에 상응하는 것은 아니다. 오히려, 바이오마커는 화합물의 입체이성질체 또는 거울상이성질체를 포함할 수 있다. 또한, 바이오마커는 이성질체 분자의 생물학적 클래스의 모든 이성질체를 나타낼 수 있다. 상기 이성질체가 일부 경우에는 동일한 분석학적 특징을 나타낼 것이므로, 하기에 기재된 첨부 실시예에서 적용된 것들을 비롯한 다양한 분석 방법으로 이들을 구별할 수 없다. 그러나, 이성질체는 적어도 동일한 약식 화학식 파라미터를 공유할 것이고, 따라서 예를 들어 지질의 경우에는, 지방산 및/또는 스핑고 염기 잔기의 동일한 사슬 길이 및 동일한 개수의 이중 결합을 공유할 것이다.
본원에서 사용된 용어 "테스트 샘플"은 본 발명의 방법으로 조혈 독성을 진단하기 위해 사용되는 샘플을 말한다. 바람직하게는, 상기 테스트 샘플은 생물학적 샘플이다. 생물학적 기원의 샘플 (즉, 생물학적 샘플)은 통상적으로 복수 종의 대사산물을 포함한다. 본 발명의 방법에 사용될 바람직한 생물학적 샘플은 체액, 바람직하게는 혈액, 혈장, 혈청, 타액, 담즙, 요 또는 뇌척수액으로부터의 샘플, 또는 예를 들어 생검에 의해, 세포, 조직 또는 기관, 바람직하게는 간으로부터 유래된 샘플이다. 보다 바람직하게는, 샘플은 혈액, 혈장 또는 혈청 샘플이고, 가장 바람직하게는 혈장 샘플이다. 생물학적 샘플은 본원의 다른 곳에서 특정된 대상체로부터 유래된다. 상기에 언급된 상이한 유형의 생물학적 샘플을 수득하는 기술은 당업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 혈액 샘플은 채혈에 의해 수득될 수 있고, 반면에 조직 또는 기관 샘플은, 예를 들어 생검에 의해 수득될 것이다.
상기에 언급된 샘플은 본 발명의 방법에 사용되기 전에, 전처리되는 것이 바람직하다. 하기에 보다 상세히 설명된 바와 같이, 상기 전처리는 화합물을 방출시키거나 분리하기 위해 또는 과잉 물질 또는 부산물을 제거하기 위해 필요한 처리를 포함할 수 있다. 적합한 기술은 화합물의 원심분리, 추출, 분별, 한외여과, 단백질 침전에 이은 여과 및 정제 및/또는 풍부화를 포함한다. 또한, 화합물 분석에 적합한 형태 또는 농도로 화합물을 제공하기 위해 다른 전처리가 수행된다. 예를 들어, 질량분석법과 커플링된 기체-크로마토그래피가 본 발명의 방법에서 사용된다면, 상기 기체 크로마토그래피 전에 화합물을 유도체화할 필요가 있을 것이다. 적합하고 필수적인 전처리는 본 발명의 방법을 수행하기 위해 사용되는 수단에 따라 좌우되고, 당업자에게 널리 공지되어 있다. 상기에 기재된 바와 같이 전처리된 샘플 또한 본 발명에 따라 사용되는 용어 "샘플"에 포함된다.
본원에서 사용된 용어 "대상체"는 동물, 바람직하게는 포유동물, 예컨대 마우스, 래트, 기니아 피그(guinea pig), 토끼, 햄스터, 돼지, 양, 개, 고양이, 말, 원숭이 또는 소에 대한 것이고, 또한 바람직하게는 인간에 대한 것이다. 보다 바람직하게는, 대상체는 설치류이고, 가장 바람직하게는 래트이다. 본 발명의 방법을 적용하여 진단할 수 있는 다른 동물은 어류, 조류 또는 파충류이다. 바람직하게는, 상기 대상체는 조혈 독성을 유도할 수 있는 것으로 추정되는 화합물과 접촉 상태에 있거나 그와 접촉하였다. 조혈 독성을 유도하는 것으로 추정되는 화합물과 접촉한 대상체는, 예를 들어 화합물의 독성에 대한 스크리닝 분석법에 사용되는, 예를 들어 실험용 동물, 예컨대 래트일 수 있다. 조혈 독성을 유도할 수 있는 화합물과 접촉한 것으로 추정되는 대상체 또한 적합한 요법을 선택하기 위해 진단해야 할 대상체일 수 있다. 바람직하게는, 본원에서 사용된 바와 같이 조혈 독성을 유도할 수 있는 화합물은 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 또는 이부프로펜이다.
바람직하게는, 대상체가 암컷이라면, 본 발명의 방법으로 측정되어야 할 1종 이상의 바이오마커는 표 1a, 1b, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 4a, 4b, 5a, 5b, 6a 또는 6b 중 어느 하나로부터 선택된다. 암컷 대상체에서의 조혈 독성에 대한 바이오마커의 바람직한 그룹 또는 조합은 18-히드록시-11-데옥시코르티코스테론, 21-히드록시프로게스테론 (11-데옥시코르티코스테론), 4-히드록시페닐피루베이트, 시트레이트, 조효소 Q10, 조효소 Q9, 시토신, DAG (C18:1,C18:2), 도코사헥사엔산 (C22:시스[4,7,10,13,16,19]6), 헵타데칸산 (C17:0), 히스티딘, 이소류신, 리놀레산 (C18:시스[9,12]2), 리신, 말레이트, 만노스, 페닐알라닌, 피토스핑고신, 프로게스테론, 리발, 세린, 스핑고미엘린 (d18:2,C18:0), TAG (C16:0,C18:1,C18:3), TAG (C16:0,C18:2), TAG No 02, 트레오닌, 우레아, 및 발린이다.
바람직하게는, 대상체가 수컷이라면, 본 발명의 방법으로 측정되어야 할 1종 이상의 바이오마커는 표 1c, 1d, 1e, 1f, 3e, 3f, 3g, 4c, 4d, 5c, 5d, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된다. 수컷에서의 조혈 독성에 대한 바이오마커의 바람직한 그룹 또는 조합은 14-메틸헥사데칸산, 18-히드록시-11-데옥시코르티코스테론, 아스코르브산, 아스파르테이트, 콜레스테롤에스테르 No 01, 콜린 플라스마로겐 No 01, 콜린 플라스마로겐 No 02, 시토신, 도코사헥사엔산 (C22:시스[4,7,10,13,16,19]6), 감마-리놀렌산 (C18:시스[6,9,12]3), 글루코스-6-포스페이트, 글루타메이트, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 케토류신, 류신, 메티오닌, 오르니틴, 팔미톨레산 (C16:시스[9]1), 페닐알라닌, 리발, 세린, 스핑고미엘린 (d18:1,C24:0), 트레온산, 트레오닌, 트립토판, 우라실, 우레아, 요산, 및 발린이다.
본원에서 사용된 용어 "양을 측정하는"이란 바이오마커, 즉 대사산물 또는 분석물의 하나 이상의 특유의 특징을 측정하는 것을 말한다. 본 발명에 따른 특유의 특징은 바이오마커의 생화학적 특성을 비롯한 물리적 및/또는 화학적 특성을 특징화하는 특징이다. 이러한 특성에는, 예를 들어 분자량, 점도, 밀도, 전하, 스핀, 광학 활성, 색상, 형광, 화학발광, 원소 조성, 화학 구조, 다른 화합물과의 반응능, 생물학적 판독 시스템에서의 반응 도출능 (예를 들어, 리포터(reporter) 유전자의 유도) 등이 포함된다. 상기 특성들의 값이 특유의 특징으로서 사용될 수 있고, 당업계에 널리 공지된 기술로 측정가능하다. 또한, 특유의 특징은 표준 작업, 예를 들어 수학적 계산, 예컨대 곱셈, 나눗셈 또는 로그 계산에 의해 바이오마커의 물리적 및/또는 화학적 특성 값으로부터 유도된 임의의 특징일 수 있다. 가장 바람직하게는, 하나 이상의 특유의 특징에 의해 바이오마커 및 그의 양의 측정 및/또는 화학적 확인이 가능해진다. 따라서, 특유의 값은 바람직하게는 특유의 값이 유도된 바이오마커의 존재비에 관한 정보를 또한 포함한다. 예를 들어, 바이오마커의 특유의 값은 질량 스펙트럼의 피크일 수 있다. 이러한 피크는 바이오마커의 특유의 정보, 즉 m/z (단위 전하 당 질량) 정보 뿐만 아니라, 샘플 중의 상기 바이오마커의 존재비 (즉, 그의 양)와 관련있는 강도 값을 함유한다.
상기에 논의된 바와 같이, 본 발명의 방법에 따라 측정되어야 할 1종 이상의 바이오마커는 바람직하게는 정량적으로 또는 반정량적으로 측정될 수 있다. 정량적 측정에서는, 본원에서 상기에 언급된 특유의 특징(들)에 대하여 측정된 값에 근거하여 바이오마커의 절대량 또는 정확한 양이 측정되거나, 바이오마커의 상대량이 측정될 것이다. 상대량은 바이오마커의 정확한 양이 측정될 수 없거나 측정되지 않을 경우에 측정될 수 있다. 상기의 경우에, 바이오마커가 존재하는 양이, 상기 바이오마커를 제2의 양으로 포함하는 제2의 샘플에 비하여 증가하였는지 또는 감소하였는지가 측정될 수 있다. 따라서, 바이오마커의 정량적 분석은 때로는 바이오마커의 반정량적 분석이라고도 언급되는 것을 또한 포함한다.
게다가, 본 발명의 방법에 사용되는 측정은 바람직하게는 상기에 언급된 분석 단계 전에 화합물 분리 단계를 사용하는 것을 포함한다. 바람직하게는, 상기 화합물 분리 단계는 샘플에 포함된 1종 이상의 바이오마커의 시간 분해 분리를 초래한다. 따라서, 본 발명에 따라 바람직하게 사용될 분리에 적합한 기술은 모든 크로마토그래피 분리 기술, 예컨대 액체 크로마토그래피 (LC), 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC), 기체 크로마토그래피 (GC), 박층 크로마토그래피, 크기 배제 또는 친화성 크로마토그래피를 포함한다. 이들 기술은 당업계에 널리 공지되어 있으며, 추가 어려움 없이 당업자에 의해 적용될 수 있다. 가장 바람직하게는, LC 및/또는 GC가 본 발명의 방법에 의해 고려되는 크로마토그래피 기술이다. 바이오마커의 이러한 측정에 적합한 장치는 당업계에 널리 공지되어 있다. 바람직하게는, 질량분석법, 특히 기체 크로마토그래피 질량분석법 (GC-MS), 액체 크로마토그래피 질량분석법 (LC-MS), 직접 주입 질량분석법 또는 푸리에(Fourier) 변환 이온-시클로트론-공명 질량분석법 (FT-ICR-MS), 모세관 전기영동 질량분석법 (CE-MS), 고성능 액체 크로마토그래피 커플링 질량분석법 (HPLC-MS), 사중극자 질량분석법, 임의의 순차적으로 커플링된 질량분석법, 예컨대 MS-MS 또는 MS-MS-MS, 유도 커플링된 플라즈마 질량분석법 (ICP-MS), 열분해 질량분석법 (Py-MS), 이온 이동성 질량분석법 또는 비행 시간 질량분석법 (TOF)이 사용된다. 가장 바람직하게는, LC-MS 및/또는 GC-MS가 하기에 상세히 설명된 바와 같이 사용된다. 상기 기술은, 예를 들어 문헌 [Nissen 1995, Journal of Chromatography A, 703: 37-57], US 4,540,884 또는 US 5,397,894에 개시되어 있으며, 이들의 개시내용은 본원에 참고로 포함된다. 별법으로 또는 질량분석법 기술에 대하여 추가적으로, 다음 기술이 화합물 측정을 위해 사용될 수 있다: 핵자기 공명 (NMR), 자기 공명 영상법 (MRI), 푸리에 변환 적외선 분석 (FT-IR), 자외선 (UV) 분광법, 굴절율 (RI), 형광 검출, 방사화학적 검출, 전기화학적 검출, 광산란 (LS), 분산성 라만(Raman) 분광법 또는 화염 이온화 검출 (FID). 이들 기술은 당업자에게 널리 공지되어 있으며, 추가 어려움 없이 적용될 수 있다. 본 발명의 방법은 바람직하게는 자동화의 보조를 받을 것이다. 예를 들어, 샘플 프로세싱 또는 전처리가 로봇식으로 자동화될 수 있다. 데이터 프로세싱 및 비교는 바람직하게는 적합한 컴퓨터 프로그램 및 데이터베이스의 보조를 받는다. 본원에서 상기에 기재된 자동화는 고효율의 접근법으로 본 발명의 방법을 사용하는 것을 허용한다.
추가로, 바이오마커는 또한 특정 화학적 또는 생물학적 분석에 의해 측정될 수 있다. 상기 분석은 샘플 중의 바이오마커를 특이적으로 검출가능하게 하는 수단을 포함할 것이다. 바람직하게는, 상기 수단은 바이오마커의 화학 구조를 특이적으로 인식할 수 있거나 다른 화합물과의 반응능 또는 생물학적 판독 시스템에서의 반응 도출능 (예를 들어, 리포터 유전자의 유도)에 따라 바이오마커를 특이적으로 확인할 수 있다. 바이오마커의 화학 구조를 특이적으로 인식할 수 있는 수단은 바람직하게는 바이오마커에 특이적으로 결합하는 검출제, 보다 바람직하게는 화학 구조와 특이적으로 상호작용하는 항체 또는 다른 단백질, 예컨대 수용체 또는 효소, 또는 압타머이다. 예를 들어, 특이적 항체가 항원으로서 바이오마커를 사용하여 당업계에 널리 공지된 방법으로 수득될 수 있다. 본원에서 언급된 항체는 다중클론 및 단일클론 항체 뿐만 아니라, 항원 또는 합텐과 결합할 수 있는 그의 단편, 예컨대 Fv, Fab 및 F(ab)2 단편을 포함한다. 본 발명은 또한 목적하는 항원-특이성을 나타내는 비-인간 공여 항체의 아미노산 서열이 인간 수용 항체의 서열과 조합된 인간화 혼성 항체를 포함한다. 또한, 단일 사슬 항체도 포함한다. 공여 서열은 통상적으로 공여체의 항원-결합 아미노산 잔기를 적어도 포함할 것이지만, 또한 공여 항체의 다른 구조적 및/또는 기능적으로 관련된 아미노산 잔기도 포함할 수 있다. 이러한 혼성물은 당업계에 널리 공지된 다수의 방법으로 제조될 수 있다. 대사산물을 특이적으로 인식할 수 있는 적합한 단백질은 바람직하게는 상기 바이오마커의 대사성 전환에 관여하는 효소이다. 상기 효소는 기질로서 바이오마커, 예를 들어 대사산물을 사용할 수 있거나, 또는 기질을 바이오마커, 예를 들어 대사산물로 전환시킬 수 있다. 또한, 상기 항체는 바이오마커를 특이적으로 인식하는 올리고펩티드를 생성하기 위한 기재로서 사용될 수 있다. 이러한 올리고펩티드는, 예를 들어 상기 바이오마커를 위한 효소의 결합 도메인 또는 포켓(pocket)을 포함할 것이다. 적합한 항체 및/또는 효소 기반 분석법은 RIA (방사선면역분석법), ELISA (효소-결합 면역흡착 분석법), 샌드위치 효소 면역 테스트, 전기화학발광 샌드위치 면역분석법 (ECLIA), 해리-강화 란타나이드 플루오로 면역 분석법 (DELFIA) 또는 고체상 면역 테스트일 수 있다. 바이오마커에 특이적으로 결합하는 압타머는 당업계에 널리 공지된 방법으로 생성할 수 있다 (문헌 [Ellington 1990, Nature 346:818-822]; [Vater 2003, Curr Opin Drug Discov Devel 6(2): 253-261]). 또한, 바이오마커는 그의 다른 화합물과의 반응능, 즉 특이적 화학 반응에 의해 확인될 수 있다. 추가로, 바이오마커는 샘플에서 생물학적 판독 시스템에서의 그의 반응 도출능 때문에 측정될 수 있다. 생물학적 반응은 샘플에 포함된 대사산물의 존재 및/또는 그 양을 나타내는 판독치로서 검출될 것이다. 생물학적 반응은, 예를 들어 세포 또는 유기체의 유전자 발현 또는 표현형 반응의 유도일 수 있다.
용어 "기준"은 1종 이상의 바이오마커의 특유의 특징의 값, 및 바람직하게는 조혈 독성과 관련있을 수 있는 상기 바이오마커의 양을 나타내는 값을 말한다.
이러한 기준은 바람직하게는 조혈 독성을 겪는 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 샘플, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 또는 이부프로펜과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 샘플로부터 얻는다. 대상체 또는 대상체 그룹은, 화합물이 생체이용가능한 한, 국부성 또는 전신성 투여 방식에 의해 상기 화합물과 접촉할 수 있다.
바람직하게는, 상기에 언급된 화합물은 하기의 첨부된 실시예 및 표에서 설명된 바와 같이 기준이 유래된 대상체 또는 대상체 그룹의 개체에 투여될 수 있다.
특히, 본원에서 언급된 아드리아마이신 히드로클로라이드, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 이부프로펜, 및 옥살리플라틴은 골수 독성을 유도할 수 있는 화합물인 반면에, 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스 또는 트리에탄올아민은 혈독성을 유도할 수 있을 것이다.
별법으로, 기준을 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 또는 이부프로펜과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 조혈 독성, 및 보다 바람직하게는 다른 질환과 관련하여서도 건강한 대상체 또는 그러한 대상체 그룹으로부터 유래된 샘플로부터 얻을 수 있으며, 또한 이것이 바람직하다.
바이오마커의 양에 대한 기준은 상기에 기재된 바와 같이 측정될 수 있다. 특히, 기준은 바람직하게는, 본원에서 언급된 대상체 그룹의 샘플로부터, 그룹의 각 개체들로부터의 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커(들) 각각의 상대량 또는 절대량을 측정하고, 별도로 후속적으로 본원의 다른 곳에서 언급된 통계학 기술을 사용하여 상기 상대량 또는 절대량의 중앙값 또는 평균값 또는 그로부터 유래된 임의의 파라미터를 측정함으로써 얻는다. 별법으로, 기준은 바람직하게는, 본원에서 언급된 대상체 그룹의 샘플의 혼합물로부터 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커 각각의 상대량 또는 절대량을 측정함으로써 얻을 수 있다. 이러한 혼합물은 바람직하게는 상기 그룹의 각 개체들로부터 수득된 샘플로부터의 동일한 부피의 분량으로 이루어진다.
또한, 기준은 바람직하게는 개체의 집단으로부터 유래된 1종 이상의 바이오마커 각각의 상대량 또는 절대량에 대하여 계산된 기준, 가장 바람직하게는 평균값 또는 중앙값일 수 있다. 상기 개체 집단은 본 발명의 방법으로 연구하고자 하는 대상체가 기원하는 집단이다. 그러나, 계산된 기준을 측정하기 위해 연구하고자 하는 대상체 집단이 바람직하게는 건강해 보이는 대상체 (예를 들어, 비치료)로 이루어지거나, 또는 상기 집단에 테스트 대상체(들)가 존재하는 것으로 인한 유의한 평균값 또는 중앙값 변화를 통계학적으로 상쇄시키기에 충분히 큰 개체수의 건강해 보이는 대상체를 포함함을 알아야 한다. 집단의 상기 개체의 1종 이상의 바이오마커의 절대량 또는 상대량은 본원의 다른 곳에서 특정된 바와 같이 측정될 수 있다. 적합한 기준 값, 바람직하게는 평균값 또는 중앙값을 계산하는 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다. 적합한 기준을 계산하는 다른 기술에는, 당업계에 널리 공지되어 있고 추가 어려움 없이 대상체의 해당 코호트(cohort)에 대하여 주어진 특이성 및 감도를 갖는 분석 시스템을 위해 수행될 수 있는, 수용자 조작 특성 (ROC) 곡선 계산법을 사용하는 최적화가 포함된다. 상기에 언급된 대상체의 집단 또는 그룹은 복수의 대상체, 바람직하게는 적어도 5, 10, 50, 100, 1,000 또는 10,000 대상체 내지 전체 집단을 포함할 것이다. 보다 바람직하게는, 이러한 경우에 언급된 대상체 그룹은 해당 집단에 대하여 통계학적으로 대표적인 크기를 갖는 대상체 그룹, 즉 통계학적으로 대표적인 샘플이다. 본 발명의 방법으로 진단하고자 하는 대상체 및 상기 복수의 대상체의 대상체는 동일한 종이고, 바람직하게는 동일한 성별을 가짐을 알아야 한다.
보다 바람직하게는, 기준은 적합한 데이터 저장 매체, 예컨대 데이터베이스에 저장될 것이고, 따라서 추후의 진단을 위해서도 이용가능하다. 이는 또한, 상응하는 기준 샘플을 수득한 대상체에서 (실제로) 조혈 독성이 발생하였음이 확인되면 (추후) 적합한 기준 결과를 데이터베이스에서 찾을 수 있으므로, 조혈 독성에 대한 소인을 효율적으로 진단하는 것도 허용한다.
용어 "비교하는"이란 1종 이상의 바이오마커의 정성적 또는 정량적 측정량이 기준과 동일한지 또는 기준과 상이한지를 평가하는 것을 말한다.
기준 결과를 조혈 독성을 겪는 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 또는 이부프로펜과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 샘플로부터 얻은 경우에, 조혈 독성은 테스트 샘플로부터 얻은 양과 상기에 언급된 기준 사이의 동일하거나 유사한 정도에 기초하여, 즉 1종 이상의 바이오마커의 동일한 정성적 또는 정량적 조성에 기초하여 진단될 수 있다. 동일한 양은 통계학적으로 유의한 방식으로 상이하지 않은 양을 포함하고, 바람직하게는 적어도 기준의 1번째 내지 99번째 백분위수, 5번째 내지 95번째 백분위수, 10번째 내지 90번째 백분위수, 20번째 내지 80번째 백분위수, 30번째 내지 70번째 백분위수, 40번째 내지 60번째 백분위수 사이의 구간 내에 있고, 보다 바람직하게는 기준의 50번째, 60번째, 70번째, 80번째, 90번째 또는 95번째 백분위수이다. 조혈 독성을 진단하거나 화합물이 대상체에서 조혈 독성을 유도할 수 있는지를 결정하기 위해, 조혈 독성을 겪는 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 또는 이부프로펜과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 샘플로부터 얻은 기준이 본 발명의 방법에서 적용될 수 있다. 이러한 경우에, 바람직하게는, 기준과 본질적으로 동일한 1종 이상의 바이오마커의 양이 조혈 독성 존재 또는 조혈 독성을 유도할 수 있는 화합물의 지표일 것이고, 반면에 기준과 상이한 1종 이상의 바이오마커의 양이 조혈 독성 부재 또는 조혈 독성을 유도할 수 없는 화합물의 지표일 것이다.
또한, 조혈 독성을 겪는 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 또는 이부프로펜과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 샘플로부터 얻은 기준은 조혈 독성의 치료 물질을 확인하기 위해 적용될 수 있다. 이러한 경우에, 바람직하게는, 기준과 상이한 1종 이상의 바이오마커의 양이 조혈 독성을 치료하는 데에 적합한 물질의 지표일 것이고, 반면에 기준과 본질적으로 동일한 1종 이상의 바이오마커의 양이 조혈 독성을 치료할 수 없는 물질의 지표일 것이다.
기준 결과를 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 또는 이부프로펜과 접촉하지 않았거나 조혈 독성을 겪지 않는 대상체 또는 대상체 그룹의 샘플로부터 얻은 경우에, 상기 조혈 독성은 테스트 샘플로부터 얻은 테스트 양과 상기에 언급된 기준 사이의 차이, 즉 1종 이상의 바이오마커의 정성적 또는 정량적 조성의 차이에 기초하여 진단될 수 있다.
상기에 특정된, 계산된 기준이 사용될 경우에도 마찬가지로 적용된다.
차이는 1종 이상의 바이오마커의 절대량 또는 상대량의 증가일 수 있거나 (때로는 바이오마커의 상향-조절이라 함; 또한 실시예 참조), 바이오마커의 상기 양의 감소 또는 검출가능한 양의 부재일 수 있다 (때로는 바이오마커의 하향-조절이라 함; 또한 실시예 참조). 바람직하게는, 상대량 또는 절대량의 차이는 유의하며, 즉 기준의 45번째 내지 55번째 백분위수, 40번째 내지 60번째 백분위수, 30번째 내지 70번째 백분위수, 20번째 내지 80번째 백분위수, 10번째 내지 90번째 백분위수, 5번째 내지 95번째 백분위수, 1번째 내지 99번째 백분위수 구간의 밖에 있다.
조혈 독성을 진단하거나 화합물이 대상체에서 조혈 독성을 유도할 수 있는지를 결정하기 위해, 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 또는 이부프로펜과 접촉하지 않았거나 조혈 독성을 겪지 않는 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 샘플로부터 얻은 기준이 본 발명의 방법에서 적용될 수 있다. 이러한 경우에, 바람직하게는, 기준과 상이한 1종 이상의 바이오마커의 양이 조혈 독성 존재 또는 조혈 독성을 유도할 수 있는 화합물의 지표일 것이고, 반면에 기준과 본질적으로 동일한 1종 이상의 바이오마커의 양이 조혈 독성 부재 또는 조혈 독성을 유도할 수 없는 화합물의 지표일 것이다. 또한, 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 또는 시타라빈과 접촉하지 않았거나 조혈 독성을 겪지 않는 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 샘플로부터 얻은 기준은 조혈 독성의 치료 물질을 확인하기 위해 적용될 수 있다. 이러한 경우에, 바람직하게는, 기준과 본질적으로 동일한 1종 이상의 바이오마커의 양이 조혈 독성을 치료하는 데에 적합한 물질의 지표일 것이고, 반면에 기준과 상이한 1종 이상의 바이오마커의 양이 조혈 독성을 치료하는 데에 적합하지 않은 물질의 지표일 것이다.
바람직한 기준은 첨부된 표에서 언급된 것들 또는 첨부된 실시예에 따라 얻을 수 있는 것들이다. 또한, 개별 바이오마커 양의 상대적인 차이, 즉 증가 또는 감소는 바람직하게는 하기 표에 언급된 것들이다. 또한, 바람직하게는, 관찰된 차이, 즉 증가 또는 감소의 정도는 하기 표에 나타낸 비율에 따른 증가 또는 감소이다.
바람직하게는, 표 1a, 1c, 1e, 2a, 3a, 3c, 3e, 4a, 4c, 5a, 5c, 6a, 7a, 8a 또는 12b로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 또는 이부프로펜과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 샘플, 또는 건강한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 수득한 샘플로부터 얻은 기준에 비해 상기 표에 나타낸 바와 같이 증가한다.
바람직하게는, 표 1b, 1d, 1f, 2b, 3b, 3d, 3f, 3g, 4b, 4d, 5b, 5d, 6b, 7b, 8b, 9 또는 12a로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 또는 이부프로펜과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 샘플, 또는 건강한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 수득한 샘플로부터 얻은 기준에 비해 상기 표에 나타낸 바와 같이 감소한다.
비교는 바람직하게는 자동화의 보조를 받는다. 예를 들어, 2개의 상이한 데이터 세트 (예를 들어, 특유의 특징(들)의 값을 포함하는 데이터 세트)의 비교 알고리즘을 포함하는 적합한 컴퓨터 프로그램이 사용될 수 있다. 이러한 컴퓨터 프로그램 및 알고리즘은 당업계에 널리 공지되어 있다. 그럼에도 불구하고, 비교는 또한 수동으로 수행될 수도 있다.
용어 "조혈 독성의 치료 물질"은 본 명세서의 다른 곳에서 언급된 조혈 독성을 유도하는 생물학적 메카니즘을 직접적으로 간섭할 수 있는 화합물을 말한다. 별법으로, 화합물은 조혈 독성과 관련있는 증상의 발생 또는 진행을 간섭할 수 있으며, 이것이 또한 바람직하다. 본 발명의 방법에 의해 확인하고자 하는 물질은 유기 및 무기 화학물질, 예컨대 소분자, 폴리뉴클레오티드, 올리고뉴클레오티드, 예를 들어 siRNA, 리보자임 또는 마이크로 RNA 분자, 펩티드, 폴리펩티드, 예를 들어 항체 또는 다른 합성 또는 생물학적 중합체, 예컨대 압타머일 수 있다. 바람직하게는, 물질은 약물, 전구약물, 또는 약물 또는 전구약물의 개발을 위한 유도 물질로서 적합하다.
본 발명의 방법이 조혈 독성 요법용 약물을 확인하기 위해 또는 화합물의 독성학적 평가를 위해 (즉, 화합물이 조혈 독성을 유도할 수 있는지를 결정하기 위해) 사용된다면, 통계학적 이유로 복수의 대상체의 테스트 샘플이 연구될 수 있음을 알아야 한다. 바람직하게는, 테스트 대상체의 이러한 코호트 내의 대사체는, 예를 들어 연구하고자 하는 화합물 이외의 인자에 의해 초래되는 차이를 피하기 위해 가능한 한 유사할 것이다. 상기 방법을 위해 사용되는 대상체는 바람직하게는 실험용 동물, 예컨대 설치류이고, 보다 바람직하게는 래트이다. 또한, 상기 실험용 동물을 바람직하게는 본 발명의 방법을 완료한 후에 안락사시킬 것임을 알아야 한다. 코호트 테스트의 모든 대상체 및 기준 동물은 상이한 주위의 영향을 피하기 위해 동일한 조건하에 유지될 것이다. 이러한 동물을 제공하는 적합한 조건 및 방법은 WO2007/014825에 상세히 개시되어 있다. 상기 조건은 본원에 참고로 포함된다.
본 발명의 방법은 바람직하게는 본 발명의 장치에 의해 실행될 수 있다. 본원에서 사용된 장치는 적어도 상기에 언급된 유닛을 포함할 것이다. 장치의 유닛은 서로 작동가능하게 연결된다. 유닛을 작동 방식으로 연결하는 방법은 장치에 포함되는 유닛의 유형에 따라 좌우될 것이다. 예를 들어, 1종 이상의 바이오마커를 정성적으로 또는 정량적으로 자동 측정하기 위한 수단이 분석 유닛에서 적용될 경우에, 상기 자동으로 작동하는 유닛에 의해 얻어진 데이터는 진단을 용이하게 하기 위해 평가 유닛, 예를 들어 데이터 프로세서인 컴퓨터에서 실행되는 컴퓨터 프로그램에 의해 프로세싱될 수 있다. 바람직하게는, 유닛은 이러한 경우에 단일 장치에 포함된다. 그러나, 분석 유닛 및 평가 유닛은 또한 물리적으로 분리될 수도 있다. 이러한 경우에, 작동적 연결은 데이터 전송을 허용하는 유닛 사이의 유선 및 무선 접속을 통해 달성될 수 있다. 무선 접속은 무선 LAN (WLAN) 또는 인터넷을 사용할 수 있다. 유선 접속은 유닛 사이의 광학 및 비-광학 케이블 접속에 의해 달성될 수 있다. 유선 접속을 위해 사용되는 케이블은 바람직하게는 대용량 데이터 전송에 적합하다.
1종 이상의 바이오마커를 측정하기 위한 바람직한 분석 유닛은 본원의 다른 곳에서 특정된 바와 같이 1종 이상의 바이오마커를 특이적으로 인식하는 검출제, 예컨대 항체, 단백질 또는 압타머, 및 상기 검출제를 테스트하고자 하는 샘플과 접촉시키기 위한 구역을 포함한다. 검출제는 접촉 구역에 고정될 수 있거나 샘플이 로딩된 후에 상기 구역에 적용될 수 있다. 분석 유닛은 바람직하게는 검출제와 1종 이상의 바이오마커의 복합체의 양을 정성적 및/또는 정량적으로 측정하도록 적합화될 것이다. 검출제가 1종 이상의 바이오마커에 결합하면, 1종 이상의 바이오마커, 검출제 또는 이들 둘다의 하나 이상의 측정가능한 물리적 또는 화학적 특성이 변화하여, 이러한 변화가, 바람직하게는 분석 유닛에 포함된 검출기에 의해 측정될 수 있음을 알 것이다. 그러나, 분석 유닛, 예컨대 테스트 스트립(stripe)이 사용될 경우에는, 검출기 및 분석 유닛이 측정하는 동안에만 합쳐지는 독립 요소일 수 있다. 하나 이상의 측정가능한 물리적 또는 화학적 특성의 검출된 변화에 기초하여, 분석 유닛은 본원의 다른 곳에서 특정된 바와 같이 1종 이상의 바이오마커의 강도 값을 계산할 수 있다. 그 후에, 상기 강도 값이 추가 프로세싱 및 평가를 위해 평가 유닛으로 전송될 수 있다. 가장 바람직하게는, 1종 이상의 바이오마커의 양은 본원의 다른 곳에서 특정된 바와 같이 검출제를 사용하여 ELISA, EIA, 또는 RIA 기반 기술에 의해 측정될 수 있다. 별법으로, 본원에서 언급된 분석 유닛은 바람직하게는 바이오마커를 분리하기 위한 수단, 예컨대 크로마토그래피 장치, 및 바이오마커 측정 수단, 예컨대 분광광도법 장치를 포함한다. 적합한 장치가 상기에 상세히 설명되었다. 본 발명의 시스템에 사용되는 화합물의 분리를 위한 바람직한 수단은 크로마토그래피 장치, 보다 바람직하게는 액체 크로마토그래피, HPLC, 및/또는 기체 크로마토그래피 장치를 포함한다. 화합물을 측정하기 위한 바람직한 장치는 질량분석법 장치, 보다 바람직하게는 GC-MS, LC-MS, 직접 주입 질량분석법, FT-ICR-MS, CE-MS, HPLC-MS, 사중극자 질량분석법, 순차적으로 커플링된 질량분석법 (예를 들어, MS-MS 또는 MS-MS-MS), ICP-MS, Py-MS 또는 TOF 장치를 포함한다. 분리 및 측정 수단은 바람직하게는 서로 커플링된다. 가장 바람직하게는, LC-MS 및/또는 GC-MS가 본 발명에 따른 분석 유닛에 사용된다.
본 발명의 장치의 평가 유닛은 바람직하게는 본원의 다른 곳에서 특정된 바와 같이 비교를 수행하기 위한 명령을 실행하도록 적합화된 데이터 프로세싱 장치 또는 컴퓨터를 포함한다. 게다가, 평가 유닛은 바람직하게는 저장된 기준을 갖는 데이터베이스를 포함한다. 본원에서 사용된 데이터베이스는 적합한 저장 매체에 데이터 집합체를 포함한다. 또한, 데이터베이스는 바람직하게는 데이터베이스 관리 시스템을 추가로 포함한다. 데이터베이스 관리 시스템은 바람직하게는 네트워크-기반의, 계층형 또는 객체-지향형 데이터베이스 관리 시스템이다. 추가로, 데이터베이스는 연합형 또는 통합형 데이터베이스일 수 있다. 보다 바람직하게는, 데이터베이스는 분산형 (연합형) 시스템, 예를 들어 클라이언트-서버-시스템(Client-Server-System)으로서 실행될 것이다. 보다 바람직하게는, 데이터베이스는 테스트 데이터 세트를 데이터 집합체에 포함된 데이터 세트와 비교하기 위해 검색 알고리즘을 허용하도록 구성된다. 구체적으로, 이러한 알고리즘을 사용함으로써, 데이터베이스는 조혈 독성에 대한 지표인 유사하거나 동일한 데이터 세트를 검색할 수 있다 (예를 들어, 질의어 검색). 따라서, 동일하거나 유사한 데이터 세트를 데이터 집합체에서 찾을 수 있다면, 테스트 데이터 세트는 조혈 독성과 관련이 있을 것이다. 평가 유닛은 또한 조혈 독성의 확정 진단에 기초하여 치료적 또는 예방적 중재 또는 생활방식 개선을 위한 권장사항을 갖는 추가 데이터베이스를 포함하거나 그러한 데이터베이스에 작동가능하게 연결될 수 있다. 상기 추가 데이터베이스는 바람직하게는, 조혈 독성을 치료하거나 예방하기 위해 테스트 샘플을 수득한 대상체에게 적합한 권장사항을 찾도록 평가 유닛에 의해 얻어진 진단 결과로 자동으로 검색될 수 있다.
본 발명의 장치의 바람직한 실시양태에서, 상기 저장된 기준은 조혈 독성을 겪는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 기준이고, 상기 데이터 프로세서는 분석 유닛에 의해 측정된 1종 이상의 바이오마커의 양을 저장된 기준과 비교하기 위한 명령을 실행하고, 여기서 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 본질적으로 동일한 것이 조혈 독성 존재의 지표이거나, 또는 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 조혈 독성 부재의 지표이다.
본 발명의 장치의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 저장된 기준은 조혈 독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 사플루페나실, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 기준이고, 상기 데이터 프로세서는 분석 유닛에 의해 측정된 1종 이상의 바이오마커의 양을 저장된 기준과 비교하기 위한 명령을 실행하고, 여기서 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 조혈 독성 존재의 지표이거나, 또는 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 본질적으로 동일한 것이 조혈 독성 부재의 지표이다.
따라서, 장치는, 특히 권장사항을 갖는 전문 시스템이 포함될 경우에 특별한 의학적 지식 없이도 의료인 또는 연구원 또는 환자가 사용할 수 있다. 장치는 또한 휴대용 포맷으로 적합화될 수 있으므로 환자-근접 적용에 적합하다.
용어 "키트"는, 바람직하게는 별도로 또는 단일 용기 내에 제공된, 상기에 언급된 요소의 집합체를 말한다. 용기는 또한 본 발명의 방법의 수행 지침을 포함한다. 이러한 지침은 매뉴얼의 형태일 수 있거나, 컴퓨터 또는 데이터 프로세싱 장치에서 실행하였을 때 본 발명의 방법에서 언급된 비교를 수행하여, 그에 따라 진단을 확정할 수 있는 컴퓨터 프로그램 코드에 의해 제공될 수 있다. 컴퓨터 프로그램 코드는 데이터 저장 매체 또는 장치, 예컨대 광학 또는 자기 저장 매체 (예를 들어, 콤팩트 디스크 (CD), CD-ROM, 하드 디스크, 광학 저장 매체, 또는 디스켓)에 또는 컴퓨터 또는 데이터 프로세싱 장치에 직접적으로 제공될 수 있다. 본 발명의 키트와 관련하여 언급된 "표준"은 (i) 조혈 독성을 겪는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹에 존재하거나, 또는 (ii) 조혈 독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 1종 이상의 바이오마커의 양과 유사한, 용액 중에 존재하거나 사전에 한정된 부피의 용액에 용해된 1종 이상의 바이오마커의 양이다.
유리하게도, 본원에서 특정된 1종 이상의 바이오마커의 양이 조혈 독성, 특히 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜에 의해 유도된 조혈 독성의 진단을 허용함이 본 발명의 근간이 되는 연구에서 밝혀졌다. 본 발명의 방법의 특이성 및 정확성은 상기에 언급된 바이오마커의 수를 증가시키거나 또는 바이오마커를 모두 측정함으로써 훨씬 더 개선될 것이다. 이러한 특이적 바이오마커와 관련하여 대사체의 정량적 및/또는 정성적 조성의 변화는 조혈 독성의 다른 징후가 임상학적으로 분명해지기 전에도 상기 독성의 지표가 된다. 조혈 독성의 진단을 위해 현재 통용되고 있는 형태학적, 생리학적 및 생화학적 파라미터는 본 발명에 의해 제공된 바이오마커 측정과 비교하여 덜 특이적이고 감도가 낮다. 본 발명으로 인해, 화합물의 조혈 독성이 더욱 효율적으로 신뢰할 수 있게 평가될 수 있다. 또한, 상기에 언급된 발견에 기초하여, 조혈 독성 요법에 유용한 약물의 스크리닝 분석이 실현가능하다. 일반적으로, 본 발명은 조혈 독성을 진단하거나, 화합물이 조혈 독성을 유도할 수 있는지를 결정하거나, 또는 조혈 독성을 치료할 수 있는 물질을 확인하는 데 있어서, 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 대상체 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커 또는 상기 바이오마커에 대한 검출제의 용도를 고려한다. 추가로, 본 발명은 일반적으로 조혈 독성의 치료에 민감한 대상체를 식별하는 데 있어서, 대상체 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커 또는 그에 대한 검출제의 용도를 고려한다. 본 발명의 이러한 경우에 사용되는 바람직한 검출제는 본원의 다른 곳에서 언급된 것들이다. 게다가, 본 발명의 방법은 유리하게 장치로 실시될 수 있다. 추가로, 본 발명의 방법을 수행하는 것을 허용하는 키트가 제공될 수 있다.
본 발명은 또한 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나에서 언급된 바이오마커의 특유의 값을 포함하는 데이터 집합체에 관한 것이다. 용어 "데이터 집합체"는 물리적 및/또는 논리적으로 함께 분류될 수 있는 데이터의 집합체를 말한다. 따라서, 데이터 집합체는 단일 데이터 저장 매체에서 또는 서로 작동가능하게 연결되고 물리적으로 분리된 데이터 저장 매체에서 실행될 수 있다. 바람직하게는, 데이터 집합체는 데이터베이스에 의해 실행된다. 따라서, 본원에서 사용된 데이터베이스는 적합한 저장 매체에의 데이터 집합체를 포함한다. 게다가, 데이터베이스는 바람직하게는 데이터베이스 관리 시스템을 추가로 포함한다. 데이터베이스 관리 시스템은 바람직하게는 네트워크-기반의, 계층형 또는 객체-지향형 데이터베이스 관리 시스템이다. 추가로, 데이터베이스는 연합형 또는 통합형 데이터베이스일 수 있다. 보다 바람직하게는, 데이터베이스는 분산형 (연합형) 시스템, 예를 들어 클라이언트-서버-시스템으로서 실행될 것이다. 보다 바람직하게는, 데이터베이스는 테스트 데이터 세트를 데이터 집합체에 포함된 데이터 세트와 비교하기 위해 검색 알고리즘을 허용하도록 구성된다. 구체적으로, 이러한 알고리즘을 사용함으로써, 데이터베이스는 조혈 독성의 지표인 유사하거나 동일한 데이터 세트를 검색할 수 있다 (예를 들어, 질의어 검색). 따라서, 동일하거나 유사한 데이터 세트를 데이터 집합체에서 찾을 수 있다면, 테스트 데이터 세트는 조혈 독성과 관련이 있을 것이다. 결과적으로, 데이터 집합체로부터 얻은 정보는 대상체로부터 얻은 테스트 데이터 세트에 기초하여 조혈 독성을 진단하는 데에 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 데이터 집합체를 포함하는 데이터 저장 매체에 관한 것이다. 본원에서 사용된 용어 "데이터 저장 매체"는 단일 물리적 개체에 기반한 데이터 저장 매체, 예컨대 CD, CD-ROM, 하드 디스크, 광학 저장 매체, 또는 디스켓을 포함한다. 또한, 상기 용어는 상기에 언급된 데이터 집합체를, 바람직하게는 질의어 검색에 적합한 방식으로 제공하도록, 서로 작동가능하게 연결되고 물리적으로 분리된 개체로 이루어진 데이터 저장 매체를 추가로 포함한다.
본 발명은 또한
(b) 본 발명의 데이터 저장 매체
에 작동가능하게 연결된,
(a) 샘플의 1종 이상의 바이오마커의 특유의 값을 비교하기 위한 수단을 포함하는 시스템에 관한 것이다.
본원에서 사용된 용어 "시스템"은 서로 작동가능하게 연결된 상이한 수단에 대한 것이다. 상기 수단은 단일 장치에서 실행될 수 있거나, 서로 작동가능하게 연결되고 물리적으로 분리된 장치에서 실행될 수 있다. 바이오마커의 특유의 값을 비교하기 위한 수단은 바람직하게는 상기에 언급된 비교 알고리즘에 기반하여 작동한다. 데이터 저장 매체는 바람직하게는 상기에 언급된 데이터 집합체 또는 데이터베이스를 포함하고, 여기서 저장된 데이터 세트는 각각 조혈 독성의 지표이다. 따라서, 본 발명의 시스템은 테스트 데이터 세트가 데이터 저장 매체에 저장된 데이터 집합체에 포함되는지를 확인가능하게 한다. 결과적으로, 본 발명의 시스템은 조혈 독성을 진단하는 데에 있어서 진단 수단으로서 적용될 수 있다. 시스템의 바람직한 실시양태에서, 샘플의 바이오마커의 특유의 값을 측정하기 위한 수단이 포함된다. 용어 "바이오마커의 특유의 값을 측정하기 위한 수단"은 바람직하게는 상기에 언급된 바이오마커 측정 장치, 예컨대 질량분석법 장치, ELISA 장치, NMR 장치 또는 분석물의 화학적 또는 생물학적 분석을 수행하기 위한 장치에 대한 것이다.
상기에 언급된 모든 참고문헌은 그의 전체 개시내용 뿐만 아니라, 상기의 발명의 상세한 설명에서 명백하게 언급된 그의 특정 개시내용과 관련하여 본원에 참고로 포함된다.
도표
하기 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이다. 실시예는 어떠한 경우이든지 어떠한 측면에서도 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 해석해서는 안된다.
실시예
실시예: 조혈 독성과 관련있는 바이오마커
각각 5마리의 수컷 및 암컷 래트 그룹에 지시된 화합물 (화합물, 적용량 및 투여에 관한 세부사항은 하기 표 10 참조)을 28일에 걸쳐서 1일 1회 투여하였다.
연구에서 각각의 투여 그룹은 암수별로 5마리의 래트로 이루어졌다. 각각 5마리의 수컷 및 암컷 동물로 이루어진 또 다른 그룹을 대조군으로서 사용하였다. 처치 기간을 시작하기 전에, 제공받았을 때 62-64일령이었던 동물을 하우징 및 주위 조건에 7일간 적응시켰다. 동물 집단의 모든 동물을 동일한 일정한 온도 (20-24 ± 3℃) 및 동일한 일정한 습도 (30-70%)하에 유지하였다. 동물 집단의 동물은 자유 급이하였다. 사용되는 사료에는 화학적 또는 미생물 오염물질이 본질적으로 함유되지 않았다. 식수 역시 자유 급이하였다. 그러므로, 식수에는 유럽 식수 지침(European Drinking Water Directive) 98/83/EG에 규정된 바와 같이 화학적 및 미생물 오염물질이 함유되지 않았다. 조명 기간은 12시간의 명기에 이어서, 12시간의 암기였다 (6:00부터 18:00까지의 12시간의 명기, 및 18:00부터 6:00까지의 12시간의 암기). 연구는 독일 동물 복지법(German Animal Welfare Act) 및 유럽 공동체 지침(European Council Directive) 86/609/EE에 따라 AAALAC-승인 실험실에서 수행하였다. 테스트 시스템을 설치류에 대한 28일간의 반복 투여 경구 독성 연구에서의 화학물질 테스트에 대한 OECD 407 지침에 따라 배열하였다. 하기 표 1 내지 9의 테스트 물질 (화합물)을 상기 표 10에 기재된 바와 같은 용량으로 투여하였다.
7일, 14일, 및 28일째의 아침에, 금식시키고 마취시킨 동물의 후안와 정맥총으로부터 혈액을 채혈하였다. 각각의 동물로부터, 혈액 1 ml를 항응고제로서 EDTA와 함께 수집하였다. 샘플을 원심분리시켜 혈장을 생성하였다. 모든 혈장 샘플을 N2 분위기로 만든 후에, 분석할 때까지 -80℃에서 보관하였다.
질량분석법-기반 대사산물 프로파일링 분석을 위해, 혈장 샘플을 추출하고 극성 및 비극성 (지질) 분획을 수득하였다. GC-MS 분석을 위해, 비극성 분획을 산성 조건하에 메탄올로 처리하여 지방산 메틸 에스테르를 수득하였다. 두 분획을 O-메틸-히드록시아민 히드로클로라이드 및 피리딘으로 추가로 유도체화하여 옥소기를 O-메틸옥심으로 전환시키고, 이어서 실릴화제로 처리한 다음에 분석하였다. LC-MS 분석에서는, 두 분획을 적절한 용매 혼합물로 재구성하였다. HPLC를 역상 분리 컬럼에서 구배 용리에 의해 수행하였다. 전체 스크리닝 분석과 병행하여 표적 및 고감도 MRM (다중 반응 모니터링) 프로파일링을 허용하는 질량분석법 검출을 WO2003073464에 개시된 바와 같이 적용하였다.
스테로이드 및 그의 대사산물을 온라인 SPE-LC-MS (고체상 추출-LC-MS)에 의해 측정하였다. 카테콜아민 및 그의 대사산물을 야마다(Yamada) 등에 의해 개시된 바와 같이 (문헌 [Yamada 2002, Journal of Analytical Toxicology, 26(1): 17-22]) 온라인 SPE-LC-MS에 의해 측정하였다.
포괄적인 분석 인증 단계 후에, 각각의 분석물에 대한 데이터를 풀(pool) 샘플로부터의 데이터에 대하여 정규화하였다. 이들 샘플을 프로세스 변동성을 설명하기 위해 전체 프로세스를 통해 병행하여 구동하였다. 암수, 처치 기간 및 대사산물에 대하여 특이적인 처치군 값의 유의성을, 처치군의 평균과 각각의 미처치 대조군의 평균을 웰치(WELCH)-검정법을 사용하여 비교함으로써 결정하고, 대조군과 비교한 처치군 비율 및 p-값으로 정량화하였다.
독성 패턴마다 가장 중요한 바이오마커의 확인은 하기 표의 분석물을 등급을 매김으로써 수행되었다. 따라서, 해당 패턴의 기준 처치에서의 대사산물의 변화 (표에 나타나 있음)를 다른 관련없는 처치에서의 동일한 대사산물의 변화와 비교하였다. 기준 및 대조 처치에 대하여 각각의 대사산물의 T-값을 얻고, 웰치 검정법으로 비교하여 이들 두 그룹이 유의하게 상이한지를 평가하였다. 각각의 T값의 최고 절대값을 채택하여 패턴에 있어서의 가장 중요한 대사산물을 나타냈다.
래트의 처치 후에 조혈 독성의 지표인 혈장 대사산물 그룹의 변화를 하기 표에 나타냈다.
표 1a: 암컷 래트에서의 혈독성 마커; 유의한 상향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다. 골수 억제를 유도하는 옥살리플라틴은 저용량으로 투여하였다.
Figure pct00001
표 1b: 암컷 래트에서의 혈독성 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다. 골수 억제를 유도하는 옥살리플라틴은 저용량으로 투여하였다.
Figure pct00002
표 1c: 수컷 래트에서의 혈독성 마커; 유의한 상향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00003
표 1d: 수컷 래트에서의 혈독성 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00004
표 1e: 수컷 래트에서의 혈독성 마커; 유의한 상향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00005
표 1f: 수컷 래트에서의 혈독성 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00006
표 2a: 암컷 래트에서의 혈독성 (혈액 빈혈) 마커; 유의한 상향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.15)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00007
표 2b: 암컷 래트에서의 혈독성 (혈액 빈혈) 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.15)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00008
표 3a: 암컷 래트에서의 혈독성 (혈액 포르피린 억제) 마커; 유의한 상향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00009
표 3b: 암컷 래트에서의 혈독성 (혈액 포르피린 억제) 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00010
표 3c: 암컷 래트에서의 혈독성 (혈액 포르피린 억제) 마커; 유의한 상향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00011
표 3d: 암컷 래트에서의 혈독성 (혈액 포르피린 억제) 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00012
표 3e: 수컷 래트에서의 혈독성 (혈액 포르피린 억제) 마커; 유의한 상향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00013
표 3f: 수컷 래트에서의 혈독성 (혈액 포르피린 억제) 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00014
표 3g: 수컷 래트에서의 혈독성 (혈액 포르피린 억제) 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00015
표 4a: 암컷 래트에서의 혈독성 (비장 메트헤모글로빈) 마커; 유의한 상향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.1)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00016
표 4b: 암컷 래트에서의 혈독성 (비장 메트헤모글로빈) 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.1)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00017
표 4c: 수컷 래트에서의 혈독성 (비장 메트헤모글로빈) 마커; 유의한 상향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.1)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00018
표 4d: 수컷 래트에서의 혈독성 (비장 메트헤모글로빈) 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.1)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00019
표 5a: 암컷 래트에서의 혈독성 (비장 혈철증) 마커; 유의한 상향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00020
표 5b: 암컷 래트에서의 혈독성 (비장 혈철증) 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00021
표 5c: 수컷 래트에서의 혈독성 (비장 혈철증) 마커; 유의한 상향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00022
표 5d: 수컷 래트에서의 혈독성 (비장 혈철증) 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00023
표 6a: 암컷 래트에서의 혈독성 (전신성 증식 억제) 마커; 유의한 상향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.1)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다. 옥살리플라틴은 고용량으로 투여하였다.
Figure pct00024
표 6b: 암컷 래트에서의 혈독성 (전신성 증식 억제) 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.1)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다. 옥살리플라틴은 고용량으로 투여하였다.
Figure pct00025
표 7a: 수컷 래트에서의 혈독성 (혈액 재생불량성 빈혈) 마커; 유의한 상향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.1)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00026
표 7b: 수컷 래트에서의 혈독성 (혈액 재생불량성 빈혈) 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.1)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00027
표 8a: 수컷 래트에서의 혈독성 (면역억제) 마커; 유의한 상향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00028
표 8b: 수컷 래트에서의 혈독성 (면역억제) 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00029
표 9: 수컷 래트에서의 혈독성 (비장 조혈) 마커; 유의한 하향-조절 변화 (p-값 ≤ 0.2)가 표시되어 있다 (*). 일부 대사산물의 경우에는 (#로 표시됨), 추가 정보가 표 11에 제공되었다.
Figure pct00030
표 10: 화합물 및 투여법 (CMC = 카르복시메틸 셀룰로스)
Figure pct00031
Figure pct00032
표 11: 선택된 분석물의 화학적/물리적 특성. 이들 바이오마커는 본원에서 화학적 및 물리적 특성에 의해 특징화된다.
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
표 12a: 수컷 래트에서의 혈독성 (혈액 빈혈) 마커; 모든 대사산물은 유의한 하향-조절 변화를 나타냈다 (p-값 ≤ 0.2).
Figure pct00038
표 12b: 수컷 래트에서의 혈독성 (혈액 빈혈) 마커; 모든 대사산물은 유의한 상향-조절 변화를 나타냈다 (p-값 ≤ 0.2).
Figure pct00039

Claims (20)

  1. (a) 조혈 독성을 겪는 것으로 추정되는 대상체의 테스트 샘플에서 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커의 양을 측정하는 단계, 및
    (b) 단계 (a)에서 측정된 양을 기준과 비교함으로써, 조혈 독성을 진단하는 단계
    를 포함하는, 조혈 독성을 진단하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 대상체가 조혈 독성을 유도할 수 있는 것으로 추정되는 화합물과 접촉한 것인 방법.
  3. (a) 조혈 독성을 유도할 수 있는 것으로 추정되는 화합물과 접촉한 대상체의 샘플에서 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커의 양을 측정하는 단계, 및
    (b) 단계 (a)에서 측정된 양을 기준과 비교함으로써, 화합물의 조혈 독성 유도 능력을 결정하는 단계
    를 포함하는, 화합물이 대상체에서 조혈 독성을 유도할 수 있는지를 결정하는 방법.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 화합물이 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물인 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 기준이 (i) 조혈 독성을 겪는 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 것인 방법.
  6. 제5항에 있어서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 본질적으로 동일한 것이 조혈 독성의 지표인 방법.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 기준이 (i) 조혈 독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 것인 방법.
  8. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 기준이 대상체 집단에 대하여 계산된 바이오마커의 기준인 방법.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 조혈 독성의 지표인 방법.
  10. (a) 조혈 독성을 겪고 있으며 조혈 독성을 치료할 수 있는 것으로 추정되는 후보 물질과 접촉한 대상체의 샘플에서 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커의 양을 측정하는 단계, 및
    (b) 단계 (a)에서 측정된 양을 기준과 비교함으로써, 조혈 독성을 치료할 수 있는 물질을 확인하는 단계
    를 포함하는, 조혈 독성의 치료 물질을 확인하는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 기준이 (i) 조혈 독성을 겪는 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 것인 방법.
  12. 제11항에 있어서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 상이한 것이 조혈 독성을 치료할 수 있는 물질의 지표인 방법.
  13. 제10항에 있어서, 상기 기준이 (i) 조혈 독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 것인 방법.
  14. 제10항에 있어서, 상기 기준이 대상체 집단에 대하여 계산된 바이오마커의 기준인 방법.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 테스트 샘플 중의 바이오마커의 양이 기준과 본질적으로 동일한 것이 조혈 독성을 치료할 수 있는 물질의 지표인 방법.
  16. 대상체의 샘플에서 조혈 독성을 진단하는 데 있어서, 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커 또는 상기 바이오마커에 대한 검출제의 용도.
  17. (a) 샘플에 존재하는 바이오마커의 양을 측정하도록 하는, 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커에 대한 검출제를 포함하는 분석 유닛; 및 이에 작동가능하게 연결된,
    (b) 분석 유닛에 의해 측정된 상기 1종 이상의 바이오마커의 양을 저장된 기준과 비교하도록 함으로써 조혈 독성을 진단하는, 저장된 기준 및 데이터 프로세서를 포함하는 평가 유닛
    을 포함하는, 조혈 독성을 겪는 것으로 추정되는 대상체의 샘플에서 조혈 독성을 진단하기 위한 장치.
  18. 제17항에 있어서,
    상기 저장된 기준이 조혈 독성을 겪는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 기준이고,
    상기 데이터 프로세서가 분석 유닛에 의해 측정된 1종 이상의 바이오마커의 양을 저장된 기준과 비교하기 위한 명령을 실행하고, 여기서 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 본질적으로 동일한 것이 조혈 독성 존재의 지표이거나, 또는 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 조혈 독성 부재의 지표인, 장치.
  19. 제17항에 있어서,
    상기 저장된 기준이 조혈 독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 기준이고,
    상기 데이터 프로세서가 분석 유닛에 의해 측정된 1종 이상의 바이오마커의 양을 저장된 기준과 비교하기 위한 명령을 실행하고, 여기서 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 상이한 것이 조혈 독성 존재의 지표이거나, 또는 테스트 샘플 중의 1종 이상의 바이오마커의 양이 기준과 비교하여 본질적으로 동일한 것이 조혈 독성 부재의 지표인, 장치.
  20. 표 1a, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 2a, 2b, 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 4a, 4b, 4c, 4d, 5a, 5b, 5c, 5d, 6a, 6b, 7a, 7b, 8a, 8b, 9, 12a 또는 12b 중 어느 하나로부터 선택된 1종 이상의 바이오마커에 대한 검출제, 및
    (i) 조혈 독성을 겪는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉한 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 (ii) 조혈 독성을 겪지 않는 것으로 공지된 대상체 또는 대상체 그룹, 또는 1,3-디니트로벤젠, 1,4-디니트로벤젠, 2-부톡시에탄올, 2-클로로아닐린, 시클로헥사논 옥심 (CHO), 4-클로로-3-니트로아닐린, 아드리아마이신 히드로클로라이드, 아닐린, 시클로스포린 A, 에폭시코나졸, 플루타미드, 납 아세테이트 삼수화물, 리누론, 리토콜산, 메티마졸, 메틸프레드니솔론, 옥살리플라틴, 프로베네시드, 타크롤리무스, 트리에탄올아민, 카르보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드 일수화물, 시타라빈, 및 이부프로펜으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 화합물과 접촉하지 않은 대상체 또는 대상체 그룹으로부터 유래된 1종 이상의 바이오마커의 농도에 대한 표준
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