KR20140043340A - T 세포의 프라이밍을 위한 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 바이러스 감염 환자에게 투여하기 적합한 T 세포를 프라이밍하기 위한 체외 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 방법에 의하여 얻어지는 조성물 및 그의 용도에 관한 것이다.
Description
본 발명은 면역학 분야 및 전염성 질병의 치료에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 항원 특이적 T 세포의 활성화 방법 및 상기 방법에 의하여 생산된 T 세포에 관한 것이다.
T 세포가 바이러스 및 종양-특이적 항원을 인식하는 메카니즘에 대한 이해가 증가됨에 따라 이는 감염 및 악성 질병에 대한 입양면역치료로서 특이적 T 세포의 용도에 대해 큰 관심을 불러일으켰다. 세포 면역치료란 질병의 치료를 위하여 면역체계의 효과기 세포를 투여하는 것으로 광범위하게 정의될 수 있다. 세포 면역 체계의 제 1 기능은, 극심하고 지속적인 감염을 포함하는 병원균에 대한 보호를 제공한다.
T 세포는 감염된 세포를 인식하고 이들 표적 세포를 사멸시킴으로써 질병의 시작을 방지한다. 그러나, 병원균과 면역 체계의 상호작용은 특이적 T 세포의 존재 하에 발전되는 만성 감염에 의하여 증명되는 바와 같이 복잡하므로, 병원균은 분명 T-세포의 감시를 피할 수 있었다.
어떠한 병원균의 침입이라도 거의 탐지하는 T 세포의 능력은 그의 월등히 다양한 수용체 레퍼토리에 의하여 부여되는 것으로, 이는 T-세포 풀(pool)로 하여금 주조직 적합성 복합체(MHC) 분자에 의하여 제시에 따라 방대한 수의 펩티드를 인식하도록 허용한다. 그럼에도, 공동자극 분자가 증식, 생존, 및 분화(신호 2)에 필수불가결한 신호를 제공하기 때문에, T-세포 수용체(TCR)(신호 1)를 통한 신호는 적절한 T-세포 활성화에 충분하지 않다. 사실상, 신호 2가 없이 신호 1만을 수신하는 미접촉 T 세포는 무력화(무반응성)되거나 또는 세포 사멸을 통하여 죽게 된다. 완전한 T-세포 활성화를 위해서는 신호 1 및 2의 통합이 요구되며, 이들 신호의 강도는 그에 따른 T-세포 풀의 크기를 형성한다. 더욱이, 효과기 T 세포로의 완전한 분화는 유전자적으로 제 3 신호에 의존하며, 이는 항원-제시 세포(APC)에 의하여 가용성 형태로 공급되고 요구되는 효과기 T 세포 유형에 대하여 유익한 신호를 제공한다. 이러한 '3개-신호' 개념은 미접촉 T 세포의 활성화 및 이어지는 효과기 T 세포의 형성에 대한 모델을 제시한다. 그러나, 상기 면역 체계는 과다하게 다양한 공동자극 분자를 제공하며, 이들 다양한 유형의 신호 2 및 3은 모두 그들 자신의 독특한 방식으로 상기 T-세포 반응의 질에 기여한다.
상호자극적 신호 및 신호 3의 가용성 형태는 생존, 세포 주기 연쇄, 개발될 효과기 세포의 유형, 및 효과기 또는 기억 세포로의 분화와 같은 T-세포 활성화의 특정 양상에 대하여 작용가능하다.
장기 지속 기억 CD8+ T 세포를 유도하기 위해서는, 성숙한 항원-제시 수지상 세포(DCs)가, CD4+ T 세포, NK 세포 및 NKT 세포를 포함하여 기타 림프구에 의하여 “도움(help)”받아야 한다는 것이 유전자적으로 받아들여지고 있다. 이러한 “도움”은 성숙한 DCs가 더욱 분화됨, 라이센싱(licensing)으로 주지된 공정을 유도한다. "헬퍼(helper)" 신호는 공동자극 분자의 상향조절, 사이토카인의 분비, 및 여러 항세포자멸 분자의 상향조절을 포함하여 DCs에 대한 많은 효과를 가지며, 이들 효과는 모두 관련이 있는 T 세포, 특히 CD8+ T 세포를 최적으로 활성화하기 위하여 DCs의 능력을 점증적으로 강화한다. 더욱이, "헬퍼" 림프구 또한 T 세포의 생존, 세포 주기 연쇄, 발전될 효과기 세포의 유형, 및 효과기 또는 기억 세포로의 분화에 직접적으로 영향을 미치는 발현 또는 분비 인자가 될 수 있다.
사회에 큰 위협이 되고 있는, HIV, HBV, 또는 HCV와 같은 지속적인 또는 만성 바이러스 감염, 또는 상기 헤르페스 바이러스 CMV 및 EBV, 그리고 감염된 개인의 치료 선택권이 급선무이다. 지속성 바이러스 감염 동안에, 바이러스와 숙주의 면역 반응 사이의 균형은 결정적으로 중요하다. 면역 체계는 바이러스를 지속적으로 견제하고, 바이러스는 반대로 제거되지 않도록 면역반응을 피하여 궁극적으로 바이러스가 좋아하는 쪽으로 균형이 기울어지게 하며 여러 경우에 질병을 유발시킨다. 대부분의 지속적인 바이러스 감염에 있어서, 바이러스성 항원이 계속적으로 존재함은 바이러스-특이적 T 세포로 하여금 제대로 기능하지 못하도록 한다.
지난 20년 동안, 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염은 4000만이 넘는 인구의 감염으로 전국적인 유행병이 되었다. 노출된 비감염자 및 장기간 비진행자로부터의 데이터는 HlV-특이적 CD8+ 및 CD4+ T-세포 기능 모두가 방어 면역에 필수적이라는 사실을 강하게 암시한다. HIV-특이적 CD8(+) T 세포는 바이러스에 대하여 손상된 CD4(+) T 헬퍼 반응에도 불구하고 HIV-감염 환자에게 높은 빈도로 지속되지만, 기타 분화된 효과기 세포독성 T 림프구와는 달리, 대부분 종양 괴사 인자 수용체 패밀리 멤버 CD27을 계속적으로 발현한다. CD27(CD70)에 대한 리간드 역시 HIV-감염 숙주에서 과발현되고, 그러므로, HIV-특이적 CD8(+) T 세포에 대한 CD27 발현의 잠재적 기능성 결과 및 발현 본질이 관심사이다. 동일한 HIV-특이적 클론으로부터 유래되는 CD27(+) 및 CD27(-) T 세포에 대한 분석은, CD27의 보유가 효과기 기능의 수득에 간섭하지 않는다는 것, 그리고, T 세포 수용체 자극 이후, CD27를 통하여 동시에 촉발되는 CD27(+) 세포가 세포 사멸, 인터류킨 2 생산, 및 증식에 대하여 CD27(-) T 세포보다 큰 저항성을 발휘한다는 것이 밝혀졌다. HIV-감염 환자에게로 다시 전이된 후, 자가 HIV-특이적 CD27(-) T 세포는 급속히 사라지지만, 상기 동일한 클론으로부터 유래된 CD27(+) T 세포는 높은 빈도로 지속된다. 그러므로, HIV 감염에 있어서 CD27-CD70 상호작용은 CD27(+) CD8(+) T 세포에 생존에 유리함을 제공할 수 있고 CD8 반응을 유지하는 데에 도움을 주는 CD4(+) T의 제한 또는 부재를 보상할 수 있다 (Ochsenbein et al., Exp Med. 2004 Dec 6;200(1 1): 1407-17).
HIV와 마찬가지로, HIV 이외의 지속적인 바이러스 감염에 감염된 환자 또한 완전히 분화되지 않았으나 CD28뿐만 아니라 CD27도 발현된 중간의 기능성 효과기-기억 T 세포의 부분 집합을 갖는다는 것이 발견되었다. 이들 세포는 CD28 및 CD27가 모두 전혀 없는 성숙한 CD8+ T 세포보다 더욱 높은 증식능력을 갖는다는 것이 밝혀졌다 (Decrion et al., Immunology, 121, 405-415, 2007).
따라서, 만성 바이러스성 질병에 감염된 대부분의 개인에서 나타나는 바이러스-특이적 CTL 반응의 효능과 특이성 및 바이러스 함유량의 크기 및 임상 결과, 장기간 비진행자의 질병에서의 지체 및 저지, 그리고 일부 바이러스-노출된 개인의 감염으로부터의 보호 사이에는 강한 상관관계가 있다. 바이러스-특이적 CTL 반응의 질과 폭을 증가시키는 것은 만성적으로 감염된 개인에서의 바이러스 컨트롤을 증대시키고 그들의 임상 경과를 안정화 또는 개선하게 된다.
바이러스 감염과 싸우고 CTL 반응을 증가시키기 위한 전략의 하나는 그러므로 입양 T-세포 치료가 될 수 있는데, 이는 숙주 내에서 효과기 T 세포의 전달로 하여금 회복 특이적 T-세포 반응이 회복되게 한다. 입양 세포 전달 치료는 상기 생체외 활성화되고 확대된 자가 바이러스-반응성 T 세포를 투여하는 것이다.
HIV 환자의 입양 면역 요법 방법에서는 전달된 CTLs의 감소로 인한 문제가 있다. 비록 말초 혈액 내에서 전달된 CTLs의 감소가 어느 정도는 림프절 위치로의 이동을 반영하지만, 시간이 지남에 따른 항바이러스성 활성의 상실은 CTLs이 죽거나 이들 HIV 복제 위치에서 제대로 기능하지 못하게 됨을 나타낸다. 전달된 CD8+ CTLs에 도움을 제공하기 위한 전략은 CTL 생존을 개선하고 HIV 감염의 진행 및 또한 기타 바이러스 감염의 진행을 제어하기 위하여 CTLs의 치료적 포텐셜을 해명하는 것이다.
결과적으로, 활성화 동안 항원-특이적 T 세포의 증식 및 생존을 높이는, 바이러스 감염에 대항하는 입양 면역 요법에서의 용도를 위하여 T 세포 집단을 준비하는 개선된 방법이 필요하다.
개요
본 발명은 바이러스 감염 환자에게 투여하기에 적합한 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 프라이밍을 위한 체외 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 상기 치료받을 환자로부터의 표적 T 세포, 수지상 세포, 감염 물질 또는 감염 관련된 단백질 또는 펩티드 및 림프구를 공배양하는 것으로 이루어진다. 상기 림프구는 항원 제시 세포(APCs) 상의 MHC 클래스 I 및/또는 MHC 클래스 II 항원에 대항하여 감작된다. 상기 림프구는 혼합 백혈구반응의 방식으로 감작된다.
본 발명은 또한 상기 방법에 의하여 획득 가능한 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포 및 그의 용도에 관한 것이다.
도 1은 종래의 MLR에서 조사된 동종 말초혈액 단핵구 세포(PBMCs) 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 림프구가, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 성숙한 단핵구-유래 DCs 상에, CD70의 발현을 현저하게 강화시킨다는 것을 도시한다.
도 2는 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 감마-조사된 림프구가, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 성숙한 단핵구-유래 DCs 상에, CD70의 발현을 현저하게 강화시킨다는 것을 도시한다.
도 3은 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 림프구를, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 단핵구-유래 DCs와 6일 동안 공배양하는 것이, 실질적인 IL-12 생산을 유도한다는 것을 도시한다.
도 4는 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 림프구를, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 단핵구-유래 DCs와 6일 동안 공동-배양하는 것이, 실질적인 IFN-감마 생산을 유도한다는 것을 도시한다.
도 5는 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 림프구를, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 단핵구-유래 DCs와 6일 동안 공동-배양하는 것이, 실질적인 IL-2 생산을 유도한다는 것을 도시한다.
도 6는 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 a) 조사된 림프구를, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 b) 단핵구-유래 DCs와 공동-배양하는 것이, 제 3 자 공여자로부터 보다 큰 수의 CD27-발현 동종반응성 CD8+ T 세포를 유도한다는 것을 도시한다.
도 7은 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 조사된 림프구를, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 단핵구-유래 DCs에 추가하는 것이, 제 3 자 공여자로부터 다수의 세포사멸제(아넥신-V 양성) 동종반응성 CD8+ T 세포를 감소시킨다는 것을 도시한다.
도 8은 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 조사된 림프구를, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 단핵구-유래 DCs에 추가하는 것이, 1차 자극 동안 사용된 상기 DCs에 자가유래되는 B-세포로써 재-자극되는 동종반응성 CD8+ 림프구에서 보다 강한 (6-배) 2차 증식성 반응을 유도한다는 것을 도시한다.
도 9는 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 조사된 림프구를, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 단핵구-유래 DCs에 추가하는 것이, 1차 자극 동안 사용된 상기 DCs에 자가유래되는 B-세포로써 재-자극되는 동종반응성 CD8+ 림프구에 의하여 보통의 IFN-감마 생산 증가(3-배)를 유도한다는 것을 도시한다.
도 10은 a) 활성화된 동종 세포 및 항원-함유된 (a, b 및 c)를 갖는 확대, 항원-함유된 자가 DCs는 있으나 활성화된 동종 세포 (d, e 및 f)는 없는 확대, 및 비함유된 자가 DCs (g, h 및 i)로써 활성화된 동종 세포가 있는 확대 이후의 바이러스-특이적 CD8 양성 세포(CMV, EBV 또는 인플루엔자 A 바이러스 각각에 대하여 특이적)의 빈도를 도시한다.
도 2는 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 감마-조사된 림프구가, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 성숙한 단핵구-유래 DCs 상에, CD70의 발현을 현저하게 강화시킨다는 것을 도시한다.
도 3은 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 림프구를, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 단핵구-유래 DCs와 6일 동안 공배양하는 것이, 실질적인 IL-12 생산을 유도한다는 것을 도시한다.
도 4는 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 림프구를, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 단핵구-유래 DCs와 6일 동안 공동-배양하는 것이, 실질적인 IFN-감마 생산을 유도한다는 것을 도시한다.
도 5는 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 림프구를, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 단핵구-유래 DCs와 6일 동안 공동-배양하는 것이, 실질적인 IL-2 생산을 유도한다는 것을 도시한다.
도 6는 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 a) 조사된 림프구를, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 b) 단핵구-유래 DCs와 공동-배양하는 것이, 제 3 자 공여자로부터 보다 큰 수의 CD27-발현 동종반응성 CD8+ T 세포를 유도한다는 것을 도시한다.
도 7은 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 조사된 림프구를, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 단핵구-유래 DCs에 추가하는 것이, 제 3 자 공여자로부터 다수의 세포사멸제(아넥신-V 양성) 동종반응성 CD8+ T 세포를 감소시킨다는 것을 도시한다.
도 8은 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 조사된 림프구를, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 단핵구-유래 DCs에 추가하는 것이, 1차 자극 동안 사용된 상기 DCs에 자가유래되는 B-세포로써 재-자극되는 동종반응성 CD8+ 림프구에서 보다 강한 (6-배) 2차 증식성 반응을 유도한다는 것을 도시한다.
도 9는 종래의 MLR에서 조사된 동종 PBMCs 상에 발현된 MHC 항원에 대항하여 감작된 조사된 림프구를, 상기 초기 감작 MLR 동안 자극기 세포로서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 단핵구-유래 DCs에 추가하는 것이, 1차 자극 동안 사용된 상기 DCs에 자가유래되는 B-세포로써 재-자극되는 동종반응성 CD8+ 림프구에 의하여 보통의 IFN-감마 생산 증가(3-배)를 유도한다는 것을 도시한다.
도 10은 a) 활성화된 동종 세포 및 항원-함유된 (a, b 및 c)를 갖는 확대, 항원-함유된 자가 DCs는 있으나 활성화된 동종 세포 (d, e 및 f)는 없는 확대, 및 비함유된 자가 DCs (g, h 및 i)로써 활성화된 동종 세포가 있는 확대 이후의 바이러스-특이적 CD8 양성 세포(CMV, EBV 또는 인플루엔자 A 바이러스 각각에 대하여 특이적)의 빈도를 도시한다.
정의
본 발명의 설명에 앞서, 본 발명의 범위는 첨부된 특허청구범위 및 그의 등가물에 의해서만 한정될 것이므로, 여기서 사용된 전문용어는 특정 실시예를 기술하기 위한 목적 이외에 제한적 의미로 의도되지 않은 것임을 이해하여야 한다.
본 명세서 및 첨부된 특허청구범위에 사용된 바, 단수형 "하나의" 및 "상기"는 문맥에서 달리 명시하지 않는 한 복수형도 포함하는 것임을 유념하여야 한다.
또한, "약"이라는 용어는 적용가능한 경우, 소정의 값의 +/- 2%의 편차, 바람직하게는 +/- 5%, 그리고 가장 바람직하게는 상기 수치 값의 +/- 10% 편차를 나타내기 위해 사용된다.
본 발명에서, 용어 "항원-특이적(antigen-specific)"이라는 용어는 제시되는 짧고 독특한 펩티드 서열의 독특한 T 세포 수용체(TCR)에 의한 특이적 인식/결합에 관한 것이다.
본 발명에서, 용어 "프라이밍(priming)" 및 "활성화(activation)"라는 용어는 "헬퍼(helper)" 세포의 동시 발생 유무에 따라 항원-제시세포에 의해 자극되는 비접촉 항원 특이적 T 세포에서 일어나는 프로그램된 활성화 과정에 관한 것이다.
본 발명에서, 용어 "응답(responder)세포 "라는 용어는 활성화 및/또는 증식에 의해 공배양된 동종이계 PBMCs에 응답하는 T 세포, NK 세포 및 NKT 세포를 포함하지만 그에 한정되지 않는 상이한 림프구 아형에 관한 것이다.
본 발명에서, 용어 "감작 세포(sensitized cell)"라는 용어는 PBMCs를 포함하여, 공배양된 동종이계 세포에 의해 예비-활성화된 T 세포, NK 세포 및 NKT 세포를 포함하는 상이한 림프구 아형에 관한 것이다.
본 발명에서, 용어 "표적 세포(target cell)"라는 용어는 동종 또는 자가 APCs 또는 항원-제시 자가 APCs에 의해 자극되는 CD4+ 또는 CD8+ T 세포에 관한 것이다. 환자 림프구(표적 세포) 채집의 위치는, 예를 들면, 말초 혈액 또는 골수일 수 있다.
본 발명에서, 단핵구 유래 DCs와 관련된 "성숙한(mature)"이라는 용어는 LPS와 같은 미생물제제 또는 TNF-알파 및/또는 IL-1 베타와 같은 또는 염증 매개체와 함께 미숙한 DCs의 자극에 의해 유도되는 CD40, CD86, CD83 및 CCR7를 포함하지만 그에 한정되지 않는 "성숙기-표지자(maturity-marker)"의 발현에 관한 것이다.
미숙한 DCs는 높은 식작용 활성 및 낮은 T-세포 활성화 포텐셜을 특징으로 하는 세포이다. 미숙한DCs는 바이러스와 박테리아와 같은 병원체를 찾아 주변 환경을 끊임 없이 조사한다. 미숙한 DCs는 병원균을 식균하고 그들의 단백질을 작은 조각으로 분해하며 성숙에 따라 MHC 분자를 이용하여 병원체 세포 표면에 절편(fragments)을 제시한다. 동시에, 그들은 T-세포를 활성화하는 능력을 매우 강화시키는 CD80, CD86, 및 CD40과 같은 T-세포 활성화에 있어서 보조수용체로서 작용하는 세포-표면 수용체를 상향조절한다. 그들은 또한 수지상 세포로 하여금 혈류를 통해 비장으로 이동하거나 또는 림프계를 통해 림프절로 이동하도록 유도하는 화학주성 수용체인 CCR7을 상향조절한다. 여기에서, 그들은 항원-제시 세포로서의 역할을 하는데: 그들은 비-항원 특이적 공동자극 신호와 함께 병원균으로부터 유래된 항원을 그들에게 제시함으로써 헬퍼 T-세포 및 킬러 T-세포 뿐만 아니라 B-세포를 활성화시킨다. 성숙한 DCs는 단핵구, 체내에서 순환하는 백혈구로부터 유래될 수 있고, 바른 신호에 따라, DCs 또는 대식세포로 변할 수 있다. 단핵구는 결국 골수 내 줄기세포로부터 형성된다. 단핵구-유래 DCs는 말초혈액 단핵구로부터 체외 생성가능하다.
본 발명의 문맥에서, 세포의 "비-증식성"(non-proliferative)"이라는 용어는 자손을 형성하기 위한 세포분열이 불가능해진 세포를 나타내는 데에 사용된다. 그럼에도 불구하고, 상기 세포는 자극, 또는 사이토카인(cytokine)과 같은 세포 생성물의 생합성 및/또는 분비에 반응할 수 있다. 세포를 비증식성으로 만들기 위한 방법은 당업계에 주지되어 있다. 세포를 비-증식성으로 만들기 위한 바람직한 방법은 미토마이신 C(mitomycin C)과 같은 항-증식성 약물, 또는 감마선 조사(gamma irradiation)와 같은 방사선요법으로 치료하는 것이다. 고정되거나 침투가능하게 되었으며 분열이 불가능한 세포 또한 비-증식성 세포의 예이다.
본 발명에서, "혼합 림프구 반응(mixed lymphocyte reaction)", "혼합 림프구 배양(mixed lymphocyte culture)", "MLR" 및 "MLC"라는 용어는 동종이형으로 상이한 최소 두 개의 상이한 세포 집단으로 이루어지는 혼합체를 언급하기 위해 통용된다. 적어도 하나 이상의 동종이형으로 다른 세포는 림프구이다. 상기 세포는 림프구의 자극을 유발시키기 위해 한동안 적절한 조건 하에서 함께 배양된다. MLR의 빈번한 목적은 림프구를 증식을 초기화시킬 수 있는 바와 같은 동종 자극(allogeneic stimulation)을 제공하는 것이다; 그러나, 달리 지시되지 않는 한, 배양 동안의 증식은 요구되지 않는다. 적당한 문맥에서, 이들 용어들은 양자택일적으로 이러한 배양으로부터 유래된 세포의 혼합체를 의미할 수도 있다.
여기서 사용된 바와 같이, "치료" 또는 "처리(treatment)"라는 용어는 치료받을 개인이나 세포의 자연적 과정을 변화시키기 위한 시도에 있어서 임상적 개입을 칭하며, 예방을 위하여 또는 임상병리학 과정 중에 수행될 수 있다. 바람직한 효과는 질병의 발병 또는 재발 방지, 질병 증상의 완화, 및 질병의 직간접적인 병리학적 결과의 축소, 질병 진행률의 저하, 질병 상태의 개선이나 일시적 완화, 및 차도 또는 개선된 예후를 포함한다.
"항원-제시 세포(antigen-presenting cell(s))", "APC" 또는 "APCs" 등의 용어는 치료받을 환자로부터의 APCs 상에 발현된 MHC 클래스 II 항원와 동일한 적어도 하나의 MHC 클래스 II 항원을 발현하는, 상기 치료받을 환자 또는 친족이 아닌 혈액 공여자로부터의 PBMCs, 단핵구, B-세포 또는 단핵구-유래 DCs로 이루어진다.
본 발명에서, "만성 감염"은 숙주의 면역 체계를 피하여 장기간 지속되는 지속적인 감염이다. 만성 감염은 박테리아 또는 바이러스에 의하여 유발될 수 있다. 만성 감염을 유발하는 바이러스에 대한 비-제한적인 예로는 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 간염 B 바이러스(HBV), 간염 C 바이러스(HCV), 거대세포 바이러스(CMV) 및 엡스타인바 바이러스(EBV)가 있다.
본 발명의 문맥에서 "배양(culturing)"이라는 용어는 다양한 종류의 배지에서의 세포 또는 유기체의 체외 증식을 칭한다. 배양에서 성장된 세포의 후손은 친세포와 (형태상으로, 유전적으로, 또는 표현형적으로) 완전히 동일할 수는 없는 것으로 이해되고 있다. 적합한 배양 배지는 당업자에 의해 선택가능하며, 그러한 배지의 예로는 RPMI 배지 또는 이글의 최소 필수 배지(Eagles Minimal Essential Medium EMEM)가 있다.
"주조직 적합성 복합체" 및 "MHC"라는 용어는 T 세포에 대한 항원 제시 및 급속한 이식편 거부반응에 요구되는 세포-표면 분자를 인코딩하는 유전자 복합체를 칭한다. 인간에 있어서, MHC 복합체는 또한 HLA 복합체라고도 공지되어 있다. MHC 복합체에 의해 인코딩되는 단백질은 "MHC 분자"라고 공지되어 있고, 클래스 I 및 클래스 II MHC 분자로 구분된다. 클래스 I MHC 분자는 베타2-마이크로글로불린(ß2-microglobulin)과 비-공유 결합으로 연관되는 MHC에서 인코딩되는 사슬로 구성되는 막 이종이량체 단백질을 포함한다. 클래스 I MHC 분자는 거의 모든 유핵세포에 의하여 발현되고 CD8+ T 세포에 대한 항원 제시에서 기능하는 것으로 나타났다. 클래스 I 분자는 인간에 있어서 HLA-A, -B, 및 -C를 포함한다. 클래스 I 분자는 일반적으로 길이에 있어서 펩티드 8-10 아미노산을 결합한다. 클래스 II MHC 분자 또한 막 이종이량체 단백질을 포함한다.
클래스 II MHCs는 CD4+ T 세포에 대한 항원 제시에 참여하는 것으로 알려져 있고, 인간에 있어서 HLA-DP, -DQ, 및 DR을 포함한다. 클래스 II 분자는 일반적으로 길이에 있어서 펩티드 12-20개의 아미노산 잔기를 결합한다. "MHC 제한"이라는 용어는 T 세포가 항원이 처리된 이후에만 항원을 인식하도록 하는 T 세포의 특성을 칭하고, 그 결과적인 항원성 펩티드는 자기 클래스 I 또는 자기 클래스 II MHC 분자와 연관되어 표시된다.
여기에서 "백신(vaccine)", "면역원(immunogen)", 또는 "면역성 조성물(immunogenic composition)"이라는 용어는 사람 또는 동물 대상에 투여될 때 어느 정도의 특이면역을 부여할 수 있는 화합물 또는 조성물을 칭하는 데에 사용된다. 본 발명에서 사용된 바와 같이 "세포성 백신(cellular vaccine)"또는 "세포성 면역원(cellular immunogen)"은 적어도 하나의 세포 집단으로 이루어지는 조성물을 칭하며, 이는 유효성분으로서 선택적으로 비활성화된다. 본 발명의 면역원 및 면역성 조성물은 활성이고, 이는 면역원 및 면역원성 조성물이 숙주의 면역 체계에 의해 적어도 부분적으로 매개되는 특이적 면역 반응(항-바이러스 항원 또는 항-바이러스 반응과 같은)을 자극할 수 있음을 의미한다. 상기 면역 반응은 항체, 면역 반응성 세포(헬퍼/유도 또는 세포독성 세포와 같은), 또는 그의 조합으로 이루어질 수 있고, 바람직하기로는 치료가 행해지는 바이러스 상에 존재하는 항원에 대해 행해진다. 상기 반응은 일회 또는 반복 투여랑의 투여로써 대상에서 유도되거나 재자극될 수 있다.
화합물 또는 조성물은: a)미접촉 개체에서 항원(바이러스성 항원과 같은)에 대항하여 면역 반응을 생성하거나; 또는 b) 상기 화합물 또는 조성물이 투여되지 않았을 경우 일어날 수 있는 것 이상으로 개체에서 면역 반응을 재구성, 증진 또는 유지할 수 있는 경우에 "면역성(immunogenic)"이다. 조성물은 일회 또는 반복 투여량으로 투여될 때 이들 기준 중 어느 하나에 이를 수 있는 경우 면역성이다.
설명
본 발명은 수지상 세포(DCs)를 포함하여 항원-제시 세포에 의한 활성화 동안 항원-특이적 T 세포의 증가된 증식 및 생존을 촉진하기 위하여 동종-감작된 동종 림프구(ASALs)의 생성에 관한 것이다.
본 발명은 항원 특이적 인간 CD8+ T 세포 반응의 유도에 있어서 ASALs에 대한 양성 조절 역할이 입증되었던 건강한 혈액 공여자로부터의 말초혈액 단핵구 세포(PBMCs) 및 그의 아형을 사용하는 체외 연구에 기초한다. 동종 체외 모델을 이용할 때, ASALs의 존재 하에서 동종반응성 CD8+ T 세포의 증식 및 생존을 지켜보면, 재-자극 이후 증식 능력은 5배 이상 증가했고 신경세포사(apoptotic cell death)는 10%에서 5%로 감소했다.
ASALs의 추가는 항원-제시 DCs 상에 공동자극 분자 CD70의 강력히 상향 조절된 발현을 유발하고, 유형 1 CD4+ 및 CD8+ T 세포 내 T 세포 투입에 주지의 양성 효과를 갖는 두 인자인 IL-12 및 IFN-감마의 생성을 이끌어낸다. 더욱이, ASALs의 추가는 또한 T 세포에 대해 공지된 성장인자인 IL-2의 발현을 이끌어냈다. 특히, 최근에, CD70-매개된 상호작용이 최근 연속적인 수차례의 분할을 통해 활성화된 T 세포의 생존을 촉진하여 그럼으로써 효과기 T 세포의 축적에 공헌한다는 것이 밝혀졌다.
본 발명은 바이러스 감염 환자에게 투여하기 적합한 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 프라이밍하기 위한 체외 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 치료받을 환자로부터의 표적 T 세포를, DCs, 바람직하기로는 단핵구-유래 DCs, 자가 또는 동종 감염 물질 또는 감염 관련된 단백질 또는 펩티드, 항원 제시 세포(APCs)상에서 MHC 클래스 I 및/또는 MHC 클래스 II 항원에 대항하여 감작된 림프구와 공배양하는 것으로 이루어지며, 상기 APCs는 바람직하기로는 상기 림프구에 대하여 동종이며, 상기 DCs는 자가 또는 동종으로 될 수 있다.
본 발명은 또한 표적 항원을 인식하는 T 세포 수용체 또는 키메릭 T 세포 수용체를 발현하도록 개발(바이러스성 형질도입, 형질주입, 유전 물질을 도입하기 위한 전기천공법 또는 기타 방법에 의하여)된 T 세포; 항-CD3 항체 및 감작 림프구의 존재하에 이들 개발된 T 세포를 항원-함유된 DCs로 활성화하고; 이들 표적 세포를 배양에서 확대하고; 그리고, 이들 세포를 환자에 다시 재도입하는: 것으로 이루어지는 입양 면역 요법에서의 용도를 위하여 T 세포 집단을 준비하는 방법을 제공한다.
더욱 구체적으로는, 바이러스 감염 환자에게 투여하기 적합한 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 프라이밍을 위한 체외 방법으로, 상기 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 유전적으로 조작된다. 상기 방법은 치료받을 환자로부터의 바이러스성 항원 수용체 형질주입된 표적 T 세포를 DCs(바람직하기로는 단핵구-유래),항-CD3 항체, 및 항원 제시 세포(APCs)상에서 MHC 클래스 I 및/또는 MHC 클래스 II 항원에 대항하여 감작된 림프구와 공배양하는 것으로 이루어진다.
표적 T 세포는 T 세포 수용체(TCR) 코딩 유전자로써 또는 비-MHC-제한 방식으로 T 세포에 흥분성 신호를 전달할 수 있는 키메릭 항원 수용체(CAR)의 사용을 통하여 형질전환될 수 있다. 세포내의 T-세포 활성화 도메인에 융합된 세포외 항원 인식 도메인으로 이루어지는 이들 잡종 단백질은, 그러므로, 그들의 인간 백혈구항원 유전자형에 무관하게 환자에게 사용될 수 있다. 형질주입에 앞서, 상기 표적 T 세포는 바람직하기로는 후속의 형질도입을 최적화하기 위하여 항-CD3 항체로 재-자극된다. 본 발명에서는 임의의 적합한 CAR가 사용될 수 있다. 상기 CAR 리간드는 상기 바이러스에 의하여 발현되어야 한다. 적합한 CAR의 선택 및 준비는 당업자의 기술 범위 이내이다.
TCR- 또는 CAR-코딩 유전자의 T 세포 내 형질도입은 바이러스성 또는 비 바이러스성 벡터와 같이 당업자에게 주지된 임의의 적합한 방법을 이용함으로써 수행가능하다 (예를 들면, Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rd ed., vol. 1 -3, Cold. Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY 참조). 바이러스성 벡터의 비-제한적 예에는 레트로, 렌티, 아데노, 아데노-연관 바이러스성 벡터가 포함되며, 비-제한적인 비-바이러스성 벡터 시스템에는 플라스미드 및 트랜스포존/트랜스포사제 시스템의 전기이동이 포함된다.
확대될 상기 환자로부터의 림프구는 말초 혈액 또는 골수로부터 유래될 수 있다.
바이러스 감염은 만성 바이러스 감염으로 될 수 있다. 만성 바이러스 감염을 유발하는 바이러스의 비-제한적인 예로는 HIV, HBV, HCV, CMV 및 EBV가 있다. 만성 바이러스 감염을 갖는 환자는 비활성 바이러스 특이적 CTLs을 가지며, 그러므로, 항원 특이적 Th1 세포 또는 CTLs을 프라이밍하는 본 발명 방법에 적합한 표적이다. 비활성 HIV 특이적 CTLs은 HIV 환자에게서 높은 농도로 나타난다. 상기 비활성 CTLs은 CD 70 수용체, CD27을 높은 수준으로 발현하여, 본 발명의 프라이밍된 항원 특이적 Th1 세포 또는 CTLs가 HIV 환자에 투여하기에 특히 적합하도록 한다.
ASALs는 DCs 및 표적 세포와 함께 배양되는 혼합 백혈구반응으로부터 얻어지는 응답 세포이다. 표적 T 세포가 유전적으로 조작될 때, 항-CD3 항체 또한 상기 배양에 추가된다. ASALs는 CD4+ T 세포를 포함하는 말초 혈액 림프구, CD8+ T 세포 및 자연적 킬러(NK) 세포로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 표적 세포는 바람직하기로는 상기 DCs에 자가유래된 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포이며, 상기 DCs는 바람직하기로는 단핵구-유래된 것이다. 상기 단핵구-유래 DCs는 바이러스 물질 또는 바이러스에 결합된 단백질 또는 펩티드 또는 바이러스 유래 항원이 부착된다.
ASALs의 추가는 또한 높은 수준의 CD27을 발현하는 표적 CD8+ T 세포 집단을 강화하게 한다. CD27+ CD8+ T 세포는 입양 면역 요법에 대하여 잠재적으로 더욱 효과적인 CTLs(세포독성 T 세포)를 나타내는데, 이는 이들이 증식을 위한 항원-항원-구동 자가분비 신호를 제공하기 때문이다. 이러한 헬퍼-독립적인 CD8 T 세포는 생존 및 확장을 위하여 IL-2 또는 CD4+ T 세포의 형태로 외인성의 도움을 필요로 하지 않는다. 따라서, 본 발명은 IL-2, 또는 CD4+ T 세포와 같은 추가의 사이토카인의 부재 또는 감소된 존재 하에서 강한 세포독성 활성을 위하여 프로그램된 CD8+ T 세포 집단을 갖는 대상을 제공함으로써 면역-매개되는 질병을 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 세포용해, 바이러스-특이적 CD8+ T 세포의 생체외 확대를 위하여 특히 유용하지만, 바이러스-특이적 CD4+ T 세포의 확대에도 또한 유용할 수 있다.
CD8+ T 림프구의 전체의 백분율로서 발현된 세포용해 항원-특이적 CD8+ T 세포의 백분율은 바람직하기로는 적어도 약 5%, 더욱 바람직하기로는 적어도 약 10%, 더욱 바람직하기로는 적어도 약 15%, 더욱 바람직하기로는 적어도 약 20%, 더 더욱 바람직하기로는 적어도 약 25%, 더 더욱 바람직하기로는 적어도 약 30%, 및 가장 바람직하기로는 적어도 약 35%이다.
더욱 구체적으로, 본 발명의 방법은 바이러스 감염 환자에게 투여하기 적합한 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 프라이밍하기 위한 체외 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은:
a) 비-증식성 항원 제시 세포에 대하여 동종인 말초혈액 단핵구 세포와 함께 비-증식성 항원 제시 세포를 배양하고,
b) 단핵구가 DCs를 성숙시키도록 조성물 내에서 상기 단핵구를 배양하고 (상기 조성물은 아래에 더욱 설명됨), 그리고
c) 단계 a)로부터의 CD4+T 세포, CD8+ T 세포 및/또는 자연적 킬러(NK) 세포에 제한되지 않으나 이를 포함하는 림프구를 단계 b)로부터의 성숙한 DCs와 함께 배양하는 단계로 이루어진다.
상기 단핵구-유래 DCs는, 미숙한 DCs를 얻기 위하여 GM-CSF 및 IL-4로 이루어지는 조성물 내에서 단핵구를 약 2-7일 동안, 바람직하기로는 약 5일 동안 1차 배양하고, 이어서 상기 미숙한 DCs가 성숙한 DCs가 될 수 있도록 하는 제 2 조성물을 추가하여 적어도 약 12 내지 72 시간 및 바람직하기로는 약 24-48 시간 동안 배양함으로써 얻어진다. 상기 제 2 조성물은 상기 미숙한 DCs가 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 활성화하는 데에 사용될 수 있는 성숙한 단핵구-유래 DCs가 되도록 하는 성분으로 이루어진다. 제 1 실시예에서, 상기 제 2 조성물은 TNF 알파, IL-1 베타, 인터페론 감마, 인터페론 베타 및 폴리-I:C와 같은 TLR3 리간드로 이루어진다 (Mailliard et al., Alpha-type-1 polarized DCs: a novel immunization tool with optimized CTL-inducing activity. Cancer Res. 2004;64:5934-5937). 또 다른 실시예에서, 상기 제 2 조성물은 인터페론 감마, TLR 3 및/또는 TLR 4 리간드 및 TLR7 및/또는 TLR 8 리간드 및/또는 TLR9 리간드로 이루어진다. TLR 3 리간드의 비-제한적인 예로는 폴리-I:C가 있고, TLR7/ 8 리간드의 비-제한적인 예로는 R848가 있으며, TLR9 리간드의 비-제한적인 예로는 CpG가 있다.
동종 림프구의 감작은 비활성화된 항원 제시 세포를 상기 항원 제시 세포에 대하여 동종인 말초혈액 단핵구 세포(PBMCs)와 배양하는 것으로 이루어지는 전통적인 혼합 백혈구반응(MLR 또는 MLC - 혼합 백혈구배양)에 의하여 유도된다. MLR의 성능은 당업자에 주지되어 있다(Jordan WJ, Ritter MA. Optimal analysis of composite cytokine reactions during alloreactivity.J Immunol methods 2002;260: 1-14). 2명의 개인으로부터의 MLR 말초 혈액 림프구는 며칠 동안 조직 배양에 함께 혼합된다. 불친화성 개인들로부터의 림프구는 서로 자극하여 크게 급증되며(예를 들면 삼중수소화 티미딘 섭취로 측정함), 반면에 친화성 개인들로부터의 림프구는 그렇지 않다. 일방향 MLC에서, 상기 개인들 중 한 명으로부터의 림프구는 비활성화되어(일반적으로, 미토마이신과 같은 독소, 또는 감마선 조사와 같은 조사로 인한 치료에 의하여), 외래 조직적합성 항원에 대응하여 비치료된 잔류 세포 집단만이 급증되도록 한다.
상기 MLR에 사용되는 항원 제시 세포는 PBMCs 및 단핵구-유래 DCs로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 상기 단핵구-유래 DCs는 환자로부터 또는 건강한 공여자로부터의 것이며, 즉, 자가유래 또는 동종가능하다.
상기 감염 물질 또는 감염 관련된 단백질 또는 펩티드는 환자로부터의 사독 바이러스성 입자, 환자의 바이러스 감염과 동일한 유형의 동종 바이러스성 입자 및 분리된 및 정제된 바이러스성 단백질 또는 펩티드로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 분리 및 정제된 바이러스성 단백질 또는 펩티드는 당업자에게 주지되어 있다. 일 실시예에서, 상기 바이러스성 물질은 바이러스성 단백질을 인코딩하는 mRNA를 형질주입함으로써 상기 단핵구-유래 DCs에 함유된 바이러스성 단백질이다.
본 발명 방법에 있어서, 상기 세포(치료받을 환자로부터의 T 세포, 단핵구-유래 수지상 세포, 바이러스 물질 또는 바이러스에 연합된 단백질 또는 펩티드 및 림프구에 대하여 동종인 항원 제시 세포(APCs) 상에서 MHC 클래스 I 및/또는 MHC 클래스 II 항원에 대항하여 감작된 상기 림프구)는 적어도 약 20일, 바람직하기로는 약 6 내지 20일 및 더욱 바람직하기로는 약 8 내지 14일 동안 공배양된다.
본 발명 방법의 일 실시예에서, 항-CD3 항체, 외인성의 IL-2, IL-7, IL-15, 항-IL-4 및/또는 IL-21은 세포 증식 및 생존을 최적화하기 위하여 상기 세포 배양에 추가된다.
새로운 DCs, 새로운 감작 림프구와 함께 상기 세포를 배양함, 및 항-CD3 항체 및/또는 외인성의 IL-2, IL-7, IL-15, 항-IL-4 및/또는 IL-21를 상기 세포 배양에 선택적으로 추가함에 의하여, 프라이밍된 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 재작극하는 것 또한 가능하다.
본 발명은 또한 상술된 방법에 의하여 획득할 수 있는 면역성 조성물 뿐만 아니라 상술된 방법에 의하여 획득할 수 있는 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포에 관한 것이다.
상기 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 환자에게 투여하기에 적합하며, 바람직하기로는 다음의 특징 중 적어도 하나를 갖는다:
- 급속한 세포 사멸에 이르지 않으면서 급증하는 능력
- 세포 사멸 표지자 아넥신-V를 낮은 수준으로 발현함
- 그들의 세포 표면에 CD27 및/또는 CD28를 발현함.
본 발명은 또한 의약으로서의 용도뿐만 아니라 의약 제조에서의 용도를 위하여 본 발명 방법에 의하여 획득되는 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포에 관한 것이다.
더욱이, 본 발명은 본 발명 방법에 의하여 획득 가능한 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 용도, 또는 만성 바이러스 감염과 같은 바이러스 감염의 치료에서의 용도를 위해서나 인간에게서 항-감염성 면역반응을 이끌어내기 위하여 그리고 만성 바이러스 감염과 같은 바이러스 감염의 치료를 위한 의약의 제조를 위해서나 인간에게서 항바이러스의 면역반응을 이끌어내기 위하여 위에서 정의된 바와 같은 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 용도에 관한 것이다. 상기 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 제 1 자극 이후 또는 양자택일적으로 재자극 이후에 투여될 수 있다. 일 실시예에서, 상기 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 치료적 항바이러스성 백신과의 조합으로 투여된다.
인간 대상의 치료에 있어서 입양 세포 치료를 위한 T 세포 집단의 사용 방법은 당업자에게 주지되어 있다. 여기에 설명되고 당업계에 주지된 방법에 의하여 준비된 T 세포 집단은 이러한 방법에서 사용 가능하다. 예를 들면, CMV 감염의 치료를 위하여 CMV-특이적 T 세포를 사용하는 입양 세포 치료(Einsele et al, Blood; 2002(99) 3916-3922) 및 HIV-감염 환자내의 HIV-특이적 CD8+ T 세포(Ochsenbein et al., J. Exp. Med.; 2004(200) 1407-1417).
항원-프라이밍된 T 세포는 그들의 초기 DC-매개되는 체외 프라이밍 동안 ASALs에 노출될 때 재-자극에 따라 증가된 증식 및 감소된 세포 사멸을 겪는다. 따라서, 백신접종 이전 및/또는 동안에 환자에게 다시 입양 전달되면 백신접종에 따른 2차 T 세포 반응을 강화하기 위한 방법 또한 본 발명에 의하여 연구된다.
본 발명은 또한 바이러스성 백신 치료를 개선하기 위한 방법을 제공한다. 많은 바이러스는 잠재적으로 면역 체계에 의하여 파괴 표적의 역할을 할 수 있는 외래 항원을 발현한다. 바이러스성 백신은 체액성 및 세포성 성분 모두로 이루어지는 대상에서 체계적인 바이러스-특이적 면역 반응을 발생시킨다. 상기 반응은 백신 조성물을 피하, 근육내 또는 경구 투여함으로써 대상 자신의 면역 체계로부터 유도된다. 항체 또는 면역 세포는 상기 바이러스 항원을 결합하고 상기 바이러스를 용해한다. 그러나, 바이러스 감염으로 고생한 환자의 백신접종에 따라, 증가된 T-세포 반응성에 대한 필요성이 남는다. 백신접종 이전에 또는 백신접종 시에, 높은 증식성 잠재력을 갖는 미리 활성화된 세포 사멸-저항 바이러스-특이적 T 세포의 입양전달은 그러므로 생체 내에서 백신-매개되는 면역반응을 강화할 수 있다.
본 발명에 의한 조성물은 치료적 항-바이러스 백신과의 조합으로 투여될 수 있다.
본 발명 방법에 의하여 획득가능한 세포는 그들의 활성화 동안 항원-특이적 T 세포의 증식 및 생존을 위하여 인간과 같은 유기체에 직접적으로 투여가능하다. 종종 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 이루어지는 이들 세포의 투여는 세포가 궁극적으로 포유동물의 혈액 또는 조직세포와 접촉되도록 도입하는 데에 통상 사용되는 루트 중 임의의 것에 의하여 이루어진다.
비경구 투여에 적합한 제제, 예를 들면, 정맥주사, 근육내, 피내, 복강내, 피하 경로에 의해서와 같은 비경구 투여에 적합한 제제 및 담체는 수성의 등삼투압 멸균 주사 용액을 포함하고, 상기 주사 용액은 산화방지제, 완충제, 세균 발육 저지제, 상기 제제를 예정된 수신자의 혈액과 등삼투압으로 만드는 용질, 및 현탄제, 용해제, 농후제, 안정화제 및 방부제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 포함한다. 정맥주사 투여는 본 발명의 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포 투여의 바람직한 방법이다.
환자에게 투여되는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 투여량은 본 발명에서 상기 환자에게서 면역 반응을 강화시키기에 충분해야한다. 따라서, 세포는 바이러스 항원에 대한 효과적인 면역 반응을 유도하기 위하여 및/또는 질병의 증상 및/또는 합병증을 완화, 경감, 치료하거나, 적어도 부분적으로 저지하기 위하여 충분한 양으로 환자에게 투여된다. 이를 달성하기 위해 적합한 양은 "치료상으로 효과적인 투여량"으로 정의된다. 투여량은 생성된 세포의 활성 및 환자의 상태 뿐만 아니라 치료받을 환자의 체중 또는 표면적 뿐에 의해 결정될 것이다. 질병의 치료나 예방에 있어서 투여될 세포의 효과적인 양을 결정함에 있어서, 의사는 질병의 진행 및 임의의 관련 바이러스 항원에 대한 면역 반응 유도를 평가할 필요가 있다.
본 발명은 위에 개시된 실시예의 임의의 조합을 망라한다.
본 발명은 다음의 비-제한적인 예에 의하여 더욱 설명된다.
예
예 1.
CD
70의 발현
재료 및 방법. 건강한 혈액 공여자로부터의 감마 조사된 PBMC를 동종 공여자(상기 건강한 혈액 공여자에 대하여)로부터의 비-조사된 PBMCs와 함께 1:1의 비율로 조직 배양 플라스크 내 무혈청 X-VIVO 15 배지에서 5-7일 동안 공배양함으로써 표준 일방향 혼합 백혈구반응(MLR)에서 동종감작된 동종 림프구를 생성하였다. 미숙한DCs의 증식을 위하여, 건강한 혈액 공여자로부터 얻은 말초혈액 단핵구 세포(PBMCs)를 밀도구배(density gradients)로 분리하였다(Lymphoprep, Nycomed, Oslo, Norway). 분리된 PBMCs을 웰 당 2.5 × 106 세포의 24-웰 플라스틱 배양판에 플레이팅된 AIM-V 배지(Invitrogen, Paisley, UK)에서 재부유시키고, 2 시간 동안 접착을 허용하였다. 비-접착성 세포를 제거하였고, 나머지 접착성 단핵구를, 재조합체 인간 GM-CSF 및 IL-4(R&D Systems, Abingdon, UK; 모두 1,000 U/mL)로 보충된 AIM-V 배지에서 4-6일 동안 배양하였다. 마지막 24 시간의 인큐베이션 동안에, 상기 배양 배지를 IFN-α(3,000 U/mL), IFN-γ(1,000 U/mL), TNF-α(50 ng/mL), IL-1β(25 ng/mL)(모두 R&D Systems) 및 p-I:C(Sigma-Aldrich; 20 ㎍/mL)로 보충함으로써 미숙한DC의 성숙을 유도하였다.
성숙한 DC 집단은 FACS 분석에 의해 결정된 바와 같이 모두 CD83+ DCs를 70%를 초과하여 함유하였다.
세척 후, 성숙한 DCs를 24시간 동안 X-VIVO 15 배지에서 동종감작된 비-조사된 또는 감마-조사된(25 Grey) 동종 림프구와 공배양하였고, FACS에 의하여 분석하였다. 동종반응성 림프구의 감작은 자극기 세포로서의 감마-조사된 PBMCs와 응답 세포로서의 비-조사된 PBMCs와 함께 5-6일 동안 무혈청 배양 배지(X-VIVO 15)에서 1차 일방향 MLR을 수행함으로써 실시하였다. PE-복합 항-인간 CD70을 FACS 연구에 이용하였다.
결과: 도 1에 나타낸 바와 같이, 조사된 PBMCs(동종-감작 동종 림프구, ASALs)에 대항하여 종래의 MLR에서 프라이밍된 동종 림프구는 상기 MLR에서 사용된 상기 조사된 PBMCs에 자가유래되는 성숙한 단핵구-유래 DCs 상에 CD70의 발현을 현저하게 강화한다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 감마-조사된 동종 림프구도 마찬가지로 CD70의 발현을 강화한다.
도 3, 4 및 5에 나타낸 바와 같이, 성숙한 DCs의 감작 동종 림프구와의 공배양은 IL-12, IFN-감마 및 IL-2의 실질적인 생산을 유도한다.
예 2.
재료 및 방법: 예 1에서 M&M 참조.
DCs, 조사된 동종감작된 림프구 및 PBMCs(상기 DCs에 동종)를 6일 동안 공배양한 이후에 CD8+ 림프구를 분리하였고(항체-코팅된 마그네틱 비드로써 음성선택을 이용함으로써), 이어서 B-세포(1차 자극 동안 사용된 DCs에 자가유래)로 재자극하였고, CD27 및 아넥신-V의 발현을 위하여 염색하였다. 이어지는 분석은 FACS로 수행하였다.
결과:
도 6에 나타낸 바와 같이, 1차 자극 동안 동종감작된 림프구를 추가하는 것은 상기 CD8+ 세포가 B-세포로 재자극될 때 CD27의 발현을 실질적으로 증가시켰다.
1차 자극 동안 동종감작된 림프구를 추가하는 것은 상기 CD8+ 세포가 B-세포로 재자극될 때 아넥신-V(세포 사멸 표지자)의 발현을 실질적으로 감소시켰다 (도 7 참조).
예 3
재료 및 방법: 예 2에서 M&M 참조.
B-세포로 재자극하기 이전에 상기 프라이밍되고 분리된 CD8+ 세포를 3H-티미딘으로 펄스시켰다.
결과:
도 8에 나타낸 바와 같이, 1차 자극 동안 동종감작된 림프구를 추가하는 것은 재자극 이후 CD8+ 세포의 증식성 반응(3H-티미딘 편입에 의하여 측정함, cpm/min, 3일째 날)을 강력하게 증가시켰다.
예 4
재료 및 방법: 예 3에서 M&M 참조.
B-세포 및 예비-활성화된 CD8+ 세포의 2일 배양 동안의 공배양 이후, 상청액을 수집하여 종래의 ELISA(R&D Systems)에 의하여 IFN-감마 생산에 대하여 분석하였다.
결과:
1차 자극 동안 동종감작된 림프구를 추가하는 것은 재자극 이후 상기 CD8+ 세포에 의하여 IFN-감마의 생성을 실질적으로 증가시켰다. (도 7 참조).
예 5:
ASALs
는 1차 체외 자극 후속으로
발생된
항원-특이적
CD8
+ T 세포의 빈도를 증가시킨다
재료 & 방법: 건강한 혈액 공여자로부터의 말초혈액 단핵구 세포(PBMC)를 밀도 배지(density medium)를 이용하여 분리하였고 표준절차에 따라 단일클론의 항체 및 유세포 분석기로 HLA-A2를 위한 유형으로 하여 냉동시켰다. 해동 후, 플라스틱 접착에 의하여 단핵구를 강화하기 위하여 플라스틱 웰에서 PBMC를 인큐베이션하고, 헹굼 후, GM-CSF 및 IL-4를 함유하는 세포 배양 배지에서 5일 동안 비-접착성 세포 인큐베이션을 수행하였다. 그리고, 미숙한 DC를 사이토카인 칵테일(IL-1 β, TNF-α, IFN-α, 및 INF-γ 함유) 및 CMV, EBV 및 인플루엔자 A-바이러스(PX14 ProMix CEF pool(standard); a peptide library from Proimmune LTD, Oxford, UK. 이 혼합물의 사용은 하나의 HLA 유형에 한정되지 않음.)로부터의 항원의 중첩 MHC 클래스 l-결합 펩티드 혼합물과 48 시간 동안 인큐베이션하였다(DC의 성숙 및 항원성 펩티드로써의 펄싱).
동시에, 혼합 백혈구 반응; MLR;에서 상이한 혈액 공여자로부터의 PBMC로 활성화된 동종 PBMC를 생성하였다. 7일째 날 새로운 배치(batch)의 PBMC를 해동하여 상기 펄싱된 DC 및 상기 활성화된 동종 PBMC로 상술된 바와 같이 7일 동안 확대하였다.
상기 세포 표면에 T 세포 수용체가 다시 나타나게 하기 위하여 IL-2를 함유하는 세포 배양 배지에서 상기 세포를 7일 동안 인큐베이션 하였다 (활성화 동안 상기 T 세포는 그들의 수용체를 내면화한다). 그리고 펄싱된 DC로 상기 세포를 재작극하였고 (상술된 바와 같이), 1시간 후 펜타머 염색을 수행하였으며, 24시간 후 상기 제조사의 지시에 따라 IFN-γ-형성 세포(ELISpot PLUS for human lnterferon-γ, Mabtech, Stockholm, Sweden)의 검사(assay)를 수행하였다. 바이러스-특이적 세포의 수를 추가된 IFN-γ-스폿으로 106세포 당 측정하였다. CMV에 대한 피코에리트린-복합 펜타머 A*02:01 -NLVPMVATV, EBV에 대한 A*02:01 - GLCTLVAML 및 인플루엔자 A 바이러스에 대한 A*02:01 -NLVPMVATV (모두 Proimmune Ltd)을 추가하였고, 상온에서 10분 동안 어둠 속에세 인큐베이션 한 후, CD3 및 CD8(BD Biosciences, San Jose, CA, USA)에 대하여 단일클론의 항체를 추가하였다. 어둠 속에서 20분 동안 얼음 위에서 인큐베이션 한 후, 유세포 분석기(FACDdiva 소프트웨어를 사용하는 FACSCanto, BD Biosciences)에서 상기 세포를 분석하였다. 바이러스-특이적 T-세포의 빈도는 CD8-양성 세포의 %로서 발현하였다.
결과: 그 결과를 도 10 및 아래의 표 1에 나타낸다.
바이러스-특이적 CD8 양성 세포(CMV, EBV 또는 인플루엔자 A 바이러스 각각에 대하여 특이적)의 빈도는 활성화된 동종 세포로써의 확대 및 활성화된 동종 세포가 없이 제어 배양에서의 인큐베이션 이후 증가한다. 도 10에 나타낸 바와 같이
| 실험 | IFN-γ-생성 (세포/106) (ELISPOT) |
| 활성화된 동종이계 PBMC에 의하여 확대되고 펄스된 DC로 재자극된 CMV-특이 세포 |
>5000 |
| 활성화된 동종이계 PBMC가 없이 확대되고 펄스된 DC로 재자극된 CMV-특이 세포 |
250 |
| 활성화된 동종이계 PBMC로 확대되고 펄스된 DC로 재자극된 비-바이러스-특이 세포 |
60* |
*DC만이 68 세포 /106의 배경을 제공함.
비록 여기에서는 특정 실시예들을 기술하였으나, 이는 예시를 위한 목적으로 예로써
설명된 것이며 후술되는 첨부된 특허 청구의 범위의 범주를 제한하고자 의도된 것이 아니다. 특히, 본 발명자는 특허 청구의 범위에 정의된 바 본 발명의 요지 및 범위를 벗어나지 않으면서 본 발명에 대하여 다양한 대체, 변경 및 수정이 이루어질 수 있는 것으로 생각한다.
Claims (27)
- 치료받을 환자로부터의 표적 T 세포, 단핵구-유래 수지상 세포, 바이러스 물질 또는 바이러스에 연합된 단백질 또는 펩티드, 및 림프구로서 상기 림프구에 대하여 동종인 항원 제시 세포(APCs) 상에서 MHC 클래스 I 및/또는 MHC 클래스 II 항원에 대항하여 감작된 림프구를 공-배양하는 것으로 이루어지는,
바이러스 감염 환자에게 투여하기 적합한 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 프라이밍(priming)을 위한 체외 방법.
- 청구항 1에 있어서, 상기 감작은 비-증식성 항원 제시 세포를 말초혈액 단핵구 세포(PBMCs)로 배양하는 것으로 이루어지는 혼합 백혈구반응에 의하여 유도되며, 상기 PBMCs는 상기 비-증식성 항원 제시 세포에 대하여 동종임을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 2에 있어서, 상기 항원 제시 세포는 PBMCs 및 단핵구 유래 수지상 세포로 구성되는 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 3에 있어서, 상기 단핵구 유래 수지상 세포는 상기 환자 또는 건강한 공여자로부터의 것임을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 1에 있어서, 상기 단핵구-유래 수지상 세포는 미숙한 수지상 세포를 얻기 위하여 약 1-7일 동안 GM-CSF 및 IL-4로 이루어지는 조성물에서 단핵구를 1차 배양하고 이어서 상기 미숙한 수지상 세포가 성숙한 수지상 세포가 될 수 있도록 하는 제 2 조성물을 추가하여 적어도 약 12 시간 동안 배양함으로써 얻어짐을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 5에 있어서, 상기 제 2 조성물은 TNF 알파, IL-1 베타, 인터페론 감마, 인터페론 알파 또는 베타, 및 폴리-I:C 및/또는 TLR 4 리간드와 같은 TLR3 리간드로 이루어짐을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 5에 있어서, 상기 제 2 조성물은 TNF 알파, 인터페론 감마, TLR 3 및/또는 TLR 4 리간드, 및 TLR7 및/또는 TLR 8 작용물질로 이루어짐을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 7에 있어서, 상기 TLR 3 리간드는 폴리-I:C이고, 상기 TLR 8 작용물질은 R848임을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 1에 있어서, 상기 감염 물질 또는 감염 관련된 단백질 또는 펩티드는 상기 환자로부터의 사독 바이러스 입자, 상기 환자의 바이러스와 동일한 유형의 동종 바이러스 입자, 및 주지의 분리되고 정제된 바이러스 단백질 또는 펩티드로 이루어지는 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 9에 있어서, 상기 바이러스 물질은 mRNA 인코딩 상기 바이러스 단백질로써 형질주입에 의하여 상기 성숙한 수지상 세포에 함유된 바이러스 단백질임을 특징으로 하는 방법.
- 선행 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 적어도 약 20일 동안, 바람직하기로는 약 6 내지 20일 동안, 그리고 더욱 바람직하기로는 약 8 내지 14일 동안 배양됨을 특징으로 하는 방법.
- 선행 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 항-CD3 항체 및/또는 외인성의 IL-2, IL-7, IL-15, 항-IL-4 및/또는 IL-21는 상기 세포 배양에 추가됨을 특징으로 하는 방법.
- 선행 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 프라이밍된 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 새로운 수지상 세포, 새로운 감작 림프구와 함께 상기 세포를 배양함으로써 그리고 상기 세포에 항-CD3 항체 및/또는 외인성의 IL-2, IL-7, IL-15, 항-IL-4 및/또는 IL-21을 선택적으로 추가하여 재자극됨을 특징으로 하는 방법.
- 선행 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이러스 감염은 만성 바이러스 감염임을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 14에 있어서, 상기 만성 바이러스 감염은 HIV, HBV, HCV, CMV 및 EBV로 이루어지는 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 1-15 중 어느 한 항에 의한 방법에 의하여 얻어지는 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포.
- 환자에게 투여하기에 적합한 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포로서,
상기 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는:
- 급속한 세포 사멸에 이르지 않으면서 급증하는 능력을 가지며
- 아넥신-V이 낮은 수준으로 발현되고, 및/또는
- 그들의 세포 표면에 CD27 및/또는 CD28가 발현됨을 특징으로 하는,
환자에게 투여하기에 적합한 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포.
- 의약으로서의 용도를 위한 청구항 16 또는 17에 의한 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포.
- 사람의 바이러스 감염의 치료 또는 항바이러스성 면역반응을 이끌어내기 위한 용도를 위한 청구항 16 또는 17에 의한 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포.
- 청구항 19에 있어서, 상기 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 치료적 바이러스성 백신과의 조합으로 투여됨을 특징으로 하는, 상기 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포.
- 청구항 18-20 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 제 1 자극 이후에 투여됨을 특징으로 하는, 상기 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포.
- 청구항 18-20 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 재자극 이후에 투여됨을 특징으로 하는, 상기 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포.
- 의약의 제조를 위한, 청구항 16 또는 17 중 어느 한 항에 의한 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 용도.
- 사람의 만성 바이러스 감염의 치료 또는 항바이러스성 면역반응을 이끌어내기 위한 의약의 제조를 위한, 청구항 16 또는 17 중 어느 한 항에 의한 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 용도.
- 청구항 24에 있어서, 상기 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 치료적 항바이러스성 백신과의 조합으로 투여됨을 특징으로 하는 용도.
- 청구항 24-25 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 제 1 자극 이후에 투여됨을 특징으로 하는 용도.
- 청구항 24-25 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 재자극 이후에 투여됨을 특징으로 하는 용도.
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Cited By (1)
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