KR20130125787A - Ｓａｓｐａｓｅ－ｆｌｇ２ 복합체, 조정제, 및 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 표피 세포 분화 및/또는 증식의 불균형과 연관되는 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 결함의 치료 및/또는 예방용 활성제로서의, 제 1 및 제 2 파트너 단백질 사이의, 또는 상기 단백질의 상동체, 돌연변이체 또는 조각 사이의 상호작용을 조정하는데 적합한 화합물의 용도로서, 상기 제 1 및 제 2 단백질은 SASPase 및 필라그린-2, 또는 FLG2 인 용도에 관한 것이다.

Description

ＳＡＳＰＡＳＥ－ＦＬＧ２ 복합체, 조정제, 및 용도 {SASPASE-FLG2 COMPLEX, MODULATING AGENTS, AND USES}

본 발명은 피부 (skin) 및 그것의 외피 (integument) 에 관해 유용한 신규한 미용적 (cosmetic) 또는 치료적 표적 (therapeutic target), 및 또한 미용적, 치료적 또는 피부과적 관리 (dermatological care) 목적을 위한 그것의 용도에 관한 것이다.

더욱 정확히, 본 발명은 표피 세포 (epidermal cell) 분화 및/또는 증식에 관여되는 신규한 단백질 복합체 (protein complex), 신규한 미용적 또는 치료적 활성제를 스크리닝하기 위한 도구로서의 그것의 용도, 동정된 신규한 활성제, 및 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 결함 (esthetic defect) 또는 병적 장애 (pathological disorder) 를 예방 및/또는 치료하기 위한 그의 용도에 관한 것이다.

용어 "피부 (skin)" 는, 두피 및 점막을 포함하는, 신체의 전체 피부를 의미한다.

용어 "피부 외피 (skin integument)" 는 체모, 속눈썹, 머리털 및 손발톱을 의미한다.

피부, 또는 표피 (epidermis) 는 표피의 배엽을 구성하는 각질형성세포의 기저층, 배엽 위에 위치하는 다면 세포의 여러 층으로 이루어지는 가시층, 별개의 세포질 포함물, 케라토히알린 과립을 함유하는 편평해진 세포로 이루어지는 1 내지 3 개의 "과립" 층, 및 마지막으로, 각질세포로 알려진, 그들의 분화의 마지막 단계에 있는 각질형성세포로 이루어지는, 각화 층 (cornified layer), 또는 각질층 (stratum corneum) 으로 알려진 상부 층의 집합체로 관습적으로 분류된다.

각질세포는 각화 외피로 둘러싸인, 시토케라틴을 함유하는 섬유 물질로 주로 이루어지는 무핵 세포이다. 새로운 각질형성세포는 낙설로 알려진 메카니즘에 의한 각화 층으로부터의 표피 세포의 지속적 손실을 보상하기 위해 영구적 생산을 겪는다. 전체적으로 각질층의 형성 및 그것의 제거를 초래하는 과정은 여러 호르몬 또는 세포 인자에 의해 제어되는 정교하게 조절되는 평형에 적용된다. 이들 인자 중 하나의 불균형은, 신속히 수정되지 않는 경우, 결국 기저층 세포의 생산 및 낙설 속도 사이의 불균형에 반영된다.

피부 또는 그것의 외피의 많은 심미적 결함 또는 병적 장애는 표피 항상성 결함, 특히 세포 증식 및/또는 분화 결함과 연관될 수 있다.

따라서, 표피의 기저층의 세포 증식 및/또는 분화가 낙설 속도에 비해 가속화될 때 또는 낙설 속도가 감속될 때, 각질층은 그 후 두꺼워지는 경향이 있다. 이러한 불균형의 약한 표명의 경우에, 그것은 피부 또는 그것의 외피의 다양한 심미적 결함, 예를 들어 피부 노화의 징후 (sign of aging of the skin), 피부 장벽 기능 결함 (skin barrier function defect), 피부 건조증의 징후 (sign of skin dryness) 또는 피부 과다피지분비의 징후 (sign of cutaneous hyperseborrhea) 의 형태로 나타날 수 있다. 다른 한편으로는, 이러한 불균형의 악화된 표명이 다양한 병적 장애, 예를 들어 과다각화증 (hyperkeratosis), 건조증 (xerosis), 비늘증 (ichthyosis), 건선 (psoriasis), 특정 양성 또는 악성 종양 병변 (certain benign or malignant tumoral lesion), 또는 반응성 과다각화증 (reactional hyperkeratosis) 의 형태로 나타날 수 있다.

반대로, 낙설에 비해 기저층의 세포 증식 및/또는 분화의 감속, 또는 낙설의 가속은, 표피, 더욱 특히 각화 층의 박화 (thinning) 로 나타날 수 있다. 이러한 불균형의 약한 표명은 피부 피복의 과도한 취약성으로, 또는 심지어는 피부 또는 그것의 외피의 다양한 심미적 결함, 예컨대 반흔형성 결함 (cicatrization defect), 또는, 특히 피부 스크러빙 (cutaneous scrubbing) 또는 박피제 처리 (exfoliant treatment) 후, 재-상피화 결함 (re-epithelialization defect) 으로 표현될 수 있다. 이러한 불균형의 악화된 표명은 다양한 병적 장애, 예를 들어, 일반적으로 피부와 하나 이상의 외인성 물질과의 접촉에 의해 유도되는, 면역 기원의 반응의 형태로 나타날 수 있다.

표피 세포의 증식과 분화 사이의 평형 조절의 기저를 이루는 메카니즘의 많은 양상이 아직 확인되지 않았다.

따라서, 각질층의 형성에 관여되는 메카니즘의 세포 및 분자 수준에서의 동정 및 확인은 피부 및/또는 그것의 외피의 미용적 또는 치료적 관리에 관해 유용한 신규한 표적을 제공할 수 있게 할 것이다.

따라서 여전히 각질층의 형성, 특히 표피 세포의 증식 및/또는 분화에 관여되는 신규한 분자 표적에 대한 필요가 존재한다.

또한 표피 세포의 증식 및/또는 분화의 기저를 이루는 대사 및/또는 신호전달 경로에 관여되는 신규한 미용적 및/또는 치료적 표적에 대한 필요가 존재한다.

또한 표피 세포의 증식 및/또는 분화를 조정할 수 있는 활성 화합물을 스크리닝하기 위한 신규한 도구에 대한 필요가 존재한다.

또한 표피의 생리적 기능을 변경, 정정, 회복 및/또는 강화할 수 있는 신규한 활성 화합물에 대한 필요가 존재한다.

또한 피부 또는 그것의 외피에 관해 미용적 또는 치료적 관리 효과를 발휘할 수 있는 신규한 활성 화합물에 대한 필요가 존재한다.

또한 표피 세포 증식 및/또는 분화 결함으로부터 초래되는, 피부 또는 그것의 외피의 심미적 결함 또는 병적 장애를 예방 및/또는 치료할 수 있는 신규한 활성 화합물에 대한 필요가 존재한다.

본 발명의 목적은 이들 필요를 만족시키는 것이다.

따라서, 본 발명은 표피 세포 분화 및/또는 증식의 불균형과 연관되는 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 결함의 치료 및/또는 예방용 활성제로서의, 제 1 및 제 2 파트너 단백질 (partner protein), 상기 단백질의 상동체, 돌연변이체 또는 조각 사이의 상호작용을 조정할 수 있는 하나 이상의 화합물의 미용적 용도로서, 상기 제 1 및 제 2 단백질은 SASPase 및 필라그린-2 (filaggrin-2), 또는 FLG2 인 용도에 관한 것이다.

이하에서, 용어 "단백질" 및 "단백질 서열" 은, 다르게 언급되지 않으면, 단백질, 그의 상동체, 돌연변이체 또는 조각을 나타내는데 동등하고 무차별적으로 사용된다.

발명의 목적을 위해, 용어 "조정" 은 단백질 사이의 상호작용의 촉진, 감소 또는 안정화를 의미한다.

본 발명자들은, 예상외로, 첫번째로, 표피에서, 아스파르트산 프로테아제 SASPase 및 단백질 필라그린-2 또는 FLG2 사이의 상호작용, 더욱 특히 이러한 단백질의 부분 S100 에 해당하는 N-말단 부분을 통한 상호작용의 표명, 및, 두번째로, 이러한 상호작용이 SASPase 의 단백질분해 활성을 촉진함을 입증했다.

FR 2 842 209 는 단백질 SASPase 가 표피에서 강하게 표현되고, 피부 낙설 과정에 관여됨을 교시하고, 이러한 단백질을 피부 장애의 치료에 있어서의 표적으로서 기재한다. 그러나, 상기 문헌은 SASPase-FLG2 상호작용 또는 표피 세포 분화 또는 증식의 조절에 있어서 이러한 단백질 복합체의 관여를 언급하지 않는다.

또한, 본 발명자들은 SASPase-FLG2 상호작용이 다양한 활성 화합물에 의해 조정될 수 있고, 이러한 조정이 표피 세포 분화 및/또는 증식의 불균형 후에 뒤따르는, 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 결함 또는 병적 장애의 예방 및/또는 치료에 유용할 수 있음을 밝혔다.

발명의 목적을 위해, 용어 "표피 세포 증식 및/또는 분화의 조절" 은 이들 2 개의 과정 사이의 생리적 평형의 재확립을 의미한다.

본 발명의 목적을 위해, 용어 "예방" 은 주어진 현상, 즉, 본 발명에서, 표피 세포 분화 및/또는 증식의 불균형과 연관되는 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 결함 또는 병적 장애의 표명의 위험 또는 확률의 감소를 의미한다.

또다른 양상에 따르면, 본 발명은 피부 스크러빙 또는 박피제 처리 후 재-상피화 촉진용 활성제로서의, 앞서 정의된 바와 같은 하나 이상의 화합물의 미용적 용도에 관한 것이다.

또다른 양상에 따르면, 본 발명은 모발 손실 예방 및/또는 치료 및/또는 모발 재성장 촉진용, 또는 체모 재성장 예방용 활성제로서의, 상기 정의된 바와 같은 하나 이상의 화합물의 미용적 용도에 관한 것이다.

또다른 구현예에 따르면, 본 발명은 제 1 및 제 2 단백질 사이의 상호작용을 조정함으로써 표피의 항상성, 특히 표피 세포의 증식 및/또는 분화를 조절할 수 있는 화합물을 스크리닝하기 위한, 서로 상호작용하는 제 1 및 제 2 파트너 단백질을 포함하는 하나 이상의 단백질 복합체의 용도로서, 상기 제 1 및 제 2 단백질은 SASPase 및 필라그린-2, 또는 FLG2, 상기 단백질의 상동체, 돌연변이체 또는 조각인 용도에 관한 것이다.

발명의 목적을 위해, 용어 "표피 세포 증식 및/또는 분화의 조절" 은 이들 2 개의 과정 사이의 생리적 평형의 재확립을 의미한다.

또다른 구현예에 따르면, 본 발명은 적어도 아래 기재된 단계들을 포함하는, 제 1 및 제 2 파트너 단백질, 상기 단백질의 상동체, 돌연변이체 또는 조각 사이의 상호작용을 조정함으로써 표피의 항상성, 특히 표피 세포의 증식 및/또는 분화를 조절할 수 있는 화합물을 스크리닝하는 방법으로서, 상기 제 1 및 제 2 단백질은 SASPase 및 필라그린-2, 또는 FLG2 인 방법에 관한 것이다.

바람직하게는, 발명의 방법 또는 용도는 시험관내, 생체외 또는 생체내, 더욱 바람직하게는 시험관내 또는 생체외에서 실시될 수 있다.

또다른 구현예에 따르면, 본 발명은 표피 세포 분화 및/또는 증식의 불균형과 연관되는 피부 및/또는 그것의 외피의 병적 장애를 예방 및/또는 치료하기 위한, 생리적으로 수용가능한 매질 중에, 유효량 이상의 하나 이상의 발명의 화합물을 포함하는 제약적 또는 피부과적 조성물에 관한 것이다.

또다른 구현예에 따르면, 본 발명은, 활성제로서, 생리적으로 수용가능한 매질 중에, 유효량 이상의 하나 이상의 발명의 화합물, 및 미용적 또는 피부과적 활성제, 보존제, 친수성 또는 친유성 겔화제, 비이온성, 음이온성 또는 양이온성 계면활성제, 항산화제, 염, 향료, 충전제, 냄새 흡수제, 염료, 필름-형성 중합체, 반결정질 중합체, 검 및 휘발성 또는 비휘발성 오일, 및 그들의 혼합물로부터 선택되는 하나 이상의 미용적으로 또는 피부과적으로 수용가능한 성분을 포함하는 미용적 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 목적을 위해, 용어 "생리적으로 수용가능한 매질" 은, 개체에게의, 특히 이러한 개체의 피부 및/또는 그것의 외피 위로 또는 내로의, 투여에 적합성인 매질을 의미한다.

본 발명의 목적을 위해, 용어 발명의 화합물의 "유효량" 은 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 결함 또는 병적 장애에 관해 예방적 및/또는 치료적 효과를 발휘하기에 충분하고 필수적인 이러한 화합물의 양을 의미한다. 그러한 양은 통상의 기술자에게 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 시험관내, 생체외 또는 생체내 시험, 예컨대 임상 시험에 의해, 결정될 수 있다.

또다른 양상에 따르면, 본 발명은 하나 이상의 발명의 화합물을 포함하는 하나 이상의 미용적, 제약적 또는 피부과적 조성물을 함유하는, 미용적, 제약적 또는 피부과적 조성물을 포장 (conditioning) 하기 위한 물품 (article) 에 관한 것이다.

또다른 구현예에 따르면, 본 발명은 개체에게 하나 이상의 발명의 화합물을 투여하는 하나 이상의 단계를 포함하는, 개체에서 표피 세포 분화 및/또는 증식의 불균형과 연관되는 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 결함을 예방 및/또는 치료하기 위한 미용적 방법에 관한 것이다.

또다른 구현예에 따르면, 본 발명은 서로 상호작용하는 제 1 및 제 2 파트너 단백질을 포함하는 단백질 복합체로서, 상기 제 1 및 제 2 단백질은 SASPase 및 필라그린-2, 또는 FLG2, 상기 단백질의 상동체, 돌연변이체 또는 조각인 단백질 복합체에 관한 것이다.

본 발명은 유리하게는 피부 및/또는 그것의 외피에 관한, 특히 피부에 관한, 미용제 또는 치료제에서 사용될 수 있는 신규한 표적을 제공한다.

또한 유리하게는, 본 발명은 피부 및/또는 그것의 외피에 관한 미용제 또는 치료제에서 유용한 신규한 활성제의 탐지에 특히 효과적이고 민감성인 신규한 스크리닝 도구를 제공한다.

본 발명은 유리하게는 표피의 항상성, 특히 표피 세포 증식 및/또는 분화를 조절할 수 있고, 특히 양호한 효능 및 양호한 관용성 (tolerance) 을 갖는, 미용제 또는 치료제에서 유용한 신규한 활성제를 제공한다.

본 발명은 유리하게는 표피 세포 증식 및/또는 분화의 불균형과 연관되는 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 결함 또는 병적 장애에 관해 특히 효과적인 신규한 미용적 또는 치료적 조성물을 제공한다.

마지막으로, 본 발명은 유리하게는 표피 세포 증식 및/또는 분화의 불균형과 연관되는 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 결함에 관해 특히 효과적인 신규한 미용적 치료 또는 예방 방법을 제공한다.

SASPase-FLG2 복합체

앞서 나타낸 바와 같이, 본 발명은 2 개의 단백질, SASPase 및 FLG2 사이의 상호작용으로부터 초래되는 단백질 복합체, 및 표피 세포 분화 및/또는 증식의 생물학적 마커 및 표적으로서의 이러한 복합체의 용도에 관한 것이다.

발명의 복합체는 SASPase 의 제 1 단백질 서열의 전부 또는 일부와 FLG2 의 제 2 단백질 서열의 전부 또는 일부 또는 이러한 제 2 서열의 이량체의 상호작용에 의해 형성될 수 있다.

SASPase, 또는 피부 아스파르틱 프로테아제 (Skin Aspartic Protease) 는 343 개의 아미노산 (Uniprot/Swissprot: Q53RT3) 을 포함하고 분자량이 약 37 kDa 인, "아스파르트산" 프로테아제 패밀리의 단백질이다.

그것의 짧은 형태는 분자량이 약 28　kDa 인 경우 259 개의 아미노산을 포함하고, 서열 Q53RT3 (Uniprot/Swissprot 레퍼런스) 의 위치 85 에서 위치 343 에 이르는 서열로 표시된다. 바람직하게는, 발명에 유용한 SASPase 의 단백질 서열은 서열 Q53RT3 의 위치 85 에서 위치 343 에 이르는 서열로 표시된다.

필라그린-2, 또는 FLG2 는, 분자량이 약 248 kDa 인 2391-아미노산 단백질이다 (Uniprot/Swissprot ref.: Q5D862).

FLG2 는 구조가 필라그린의 구조와 유사하고, 표피에서 발현되고, 표피 세포 분화, 표피 장벽의 형성, 환경의 공격에 대항하는 피부의 보호, 표피에게 강도를 제공하는 중간 케라틴 필라멘트의 망의 조직화, 및 또한 피부 보습에 관여될 수 있는 있다고 제시되는, "융합된-유형" S100 의 단백질이다 (Wu et al., PLoS One, 2009; 4(4):e5227).

하나의 구현예에 따르면, 발명에 따라 사용되는 FLG2 는 서열 Q5D862 의 위치 2 에서 213, 더욱 우선적으로는 위치 2 에서 95 에 이르는 아미노산 서열, 또는 이들 서열의 이량체로 표시될 수 있다.

발명의 용도는 또한 발명에 사용하기에 적합한 단백질, 단백질의 상동체, 돌연변이체 및 조각을 코딩하는 핵산 서열에까지 확장된다.

표현 단백질 서열 또는 핵산 서열의 "상동체" 는 상기 서열과의 동일성이 85% 이상, 특히 90% 이상, 특히 98% 이상, 더욱 특히 99% 이상이고, 동일한 본질의 생물학적 활성을 가짐을 의미한다.

서열 상동성은 기술분야에서 통상의 기술자에 의해 통상적으로 사용되는 임의이 기술에 의해 확인될 수 있다. 예를 들어, 서열 상동성은 디폴트 파라미터로 구성된, 주소 http://blast.ncbi.nlm.nih.gov 에서 NCBI 웹 사이트에서 입수가능한 BLAST 컴퓨터 인터페이스를 사용하여 측정될 수 있다.

단백질 서열의 상동체는 이러한 서열과, 예를 들어, 아미노산의 하나 이상의 결실(들) 및/또는 삽입(들) 및/또는 하나 이상의 치환(들)에 의해, 상이할 수 있다. 유사하게, 핵산 서열의 상동체는 이러한 서열과, 예를 들어, 염기 또는 코돈의 하나 이상의 결실(들) 및/또는 삽입(들) 및/또는 하나 이상의 치환(들)에 의해 상이할 수 있다. 이들 수식은 조합될 수 있다.

하나의 구현예에 따르면 단백질 또는 핵산 서열의 변이체, 상동체는 아미노산 또는 코돈의 하나 이상의 보존적 치환을 포함할 수 있다.

보존적 치환은 단백질 서열 내의 하나의 아미노산을, 단백질의 특성 및 기능이 영향을 받지 않도록, 또는 실질적으로 영향을 받지 않도록, 원래의 아미노산의 물리화학적 특성과 실질적으로 유사한, 또는 충분히 근사한 물리화학적 특성을 갖는 또다른 아미노산으로 교체하는 것이다. 유사하게, 보존적 치환은 핵산 서열 내의 하나의 코돈을, 코딩된 핵산 서열의 특성 및 기능이 영향을 받지 않도록, 또는 실질적으로 영향을 받지 않도록, 동일한 아미노산 또는 원래의 아미노산의 물리화학적 특성과 실질적으로 유사한, 또는 충분히 근사한 물리화학적 특성을 갖는 아미노산을 코딩하는 또다른 코돈으로 교체하는 것이다.

앞서 제시된 단백질 또는 핵산 서열의 수식은 일반적으로 "돌연변이" 로 언급될 수 있다. 따라서, 발명의 상동체는 또한 발명의 아미노산 또는 핵산 서열의 돌연변이체 및 변이체와 관련된다.

본 발명에서 고려될 수 있는 돌연변이의 예로서, 하나 이상의 아미노산 잔기를, 그러나, 단백질의 생물학적 특성, 특히 그것의 파트너 단백질과의 상호작용 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않으면서, 유사한 소수성 지수를 갖는 아미노산 잔기로 대체하는 것을 언급할 수 있다. 소수성 지수는 아미노산에 그들의 소수성 및 그들의 전하에 따라 부여된 지수이다 (Kyte and Doolittle (1982), J. Mol. Biol., 157: 105).

발명의 단백질은 하나 이상의 번역후 수식(들)을 포함할 수 있다.

용어 "번역후 수식(들)" 은 세포 내에서 펩티드 또는 단백질이 그것의 합성의 마지막에 겪기 쉬운 모든 수식, 예를 들어 하나 이상의 인산화(들), 하나 이상의 당화(들), 하나 이상의 시트룰린화(들), 하나 이상의 지질화(들), 예컨대 파르네실화 또는 팔미토일화, 구조적 재배열 예컨대 다이설파이드 가교 형성 및/또는 단백질 서열 내의 절단을 포괄하는 것으로 의도된다.

서열 상동성은 단백질의 전체 서열 또는 이러한 단백질의 하나 이상의 특징적 서열에 관해 평가될 수 있다.

용어 단백질의 "특징적 서열" 은 단백질의 동일성의 결정인자이고 그것의 생물학적 활성, 예를 들어 그것의 3차원 구조의 유지, 단백질이 통상적으로 상호작용하는 세포 요소, 예컨대 기타 단백질, 핵산 서열, 당 또는 지질과의 그것의 친화도, 그것의 효소적 활성 또는 다른 효소에 관한 기질로서의 그것의 활성에 관여하는 아미노산 서열을 의미한다.

더욱 특히, 발명에서 사용하기에 적합한 SASPase 또는 FLG2 의 특징적 서열은 이들 단백질 서로의 상호작용에 관여되는 서열이다.

하나의 구현예에 따르면, 더욱 특히 고려되는 특징적 서열은 단백질 SASPase 및 FLG2 의 N-말단 서열일 수 있다.

특정 구현예 변이형에 따르면, 발명에서 사용하기에 적합한 SASPase 의 특징적 서열은, 짧은 형태, SASPase 의 N-말단 부분에 포함될 수 있고, 더욱 특히 서열 Q53RT3 (Uniprot/Swissprot 레퍼런스) 의 위치 97 에서 위치 173 에 이르는 서열일 수 있다.

특정 구현예 변이형에 따르면, 발명에서 사용하기에 적합한 FLG2 의 특징적 서열은 FLG2 의 N-말단 부분에 포함될 수 있고, 더욱 특히 서열 Q5D862 (Uniprot/Swissprot 레퍼런스) 의 위치 2 에서 위치 95 에 이르는 서열일 수 있다.

바람직하게는, SASPase 및/또는 FLG2 의 특징적 서열이 유리하게는 발명에서 사용될 수 있다.

용어 발명의 단백질의 "동일한 본질의 생물학적 활성" 은 발명의 제 2 파트너 단백질과 상호작용하는 그것의 능력을 의미한다. 용어 핵산 서열의 "동일한 본질의 생물학적 활성" 은 아미노산 서열로 전사 및 번역되는 그것의 능력을 의미한다.

SASPase 에 관한 동일한 본질의 생물학적 활성은 또한, 특히 코르네오데스모신에 관한, 그것의 단백질분해 활성을 의미할 수 있다.

발명은 또한 그것의 가수분해 활성을 책임지는 활성 자리 내에 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있는 SASPase 돌연변이체의 용도에 관한 것이다. 특히, 발명에서 고려되는 돌연변이는 SASPase 의 단백질분해 활성의 감소 또는 제거를 초래할 수 있다. 이러한 구현예에서, SASPase 에 관한 동일한 본질의 생물학적 활성은 SASPase 의 불활성 돌연변이체와 FLG2, 그의 돌연변이체, 상동체 또는 조각의 상호작용 특성을 의미할 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 돌연변이체 재조합 SASPase 단백질의 예로서, 서열 Q53RT3 (Uniprot/Swissprot 레퍼런스) 의 위치 212 의 아스파르트산의 알라닌 (D212A) 으로의 교체로 이루어지는 돌연변이를 포함하는 단백질이 언급될 수 있다. 이러한 돌연변이는, SASPase 의 28-kDa 형태에서, 돌연변이 D128A 와 동등하다. SASPase 의 돌연변이체 단백질은 통상의 기술자에게 공지된 임의의 분자 생물학 과정을 통해 수득될 수 있다.

FLG2 에 관한 동일한 본질의 생물학적 활성은 또한 SASPase 와 상호작용하고/거나 SASPase 의 단백질분해 활성을 촉진 및 증가시키는 그것의 특성을 의미할 수 있다.

발명의 또다른 변이체에 따르면, 동일한 본질의 생물학적 활성은 또한 표피 세포의 증식 및/또는 분화에 관한 발명의 복합체의 생물학적 활성을 의미할 수 있다.

발명의 또다른 구현예 변이형에 따르면, 발명의 복합체의 2 개의 파트너 단백질 중 하나의 하나 이상의 불활성 돌연변이체의 사용 동안, 용어 "동일한 본질의 생물학적 활성" 은 파트너 단백질들이 함께 상호작용하고 복합체를 형성하는 특성을 의미한다.

따라서, 발명에서 사용하기에 적합한 제 1 및 제 2 파트너 단백질의 돌연변이체, 상동체 또는 조각은 적어도 서로 상호작용하여 발명에서 사용하기에 적합한 복합체를 형성하는 특성을 필수적으로 갖는다.

발명의 목적을 위해, 용어 "단백질의 조각" 은 6 ~ 260 개의 아미노산, 바람직하게는 3 ~ 215 개의 아미노산, 바람직하게는 10 ~ 180 개의 아미노산, 더욱 바람직하게는 20 ~ 140 개, 또는 심지어는 40 ~ 100 개, 또는 60 ~ 100 개의 인접하는 아미노산을 포함하고, 단백질에 의해 표현되는 것과 동일한 본질의 생물학적 활성을 갖는 발명에 따른 단백질의 임의의 부분을 의미한다.

용어 핵산 서열에 관한 "조각" 은 18 ~ 780 개의 염기, 바람직하게는 24 ~ 645 개의 염기, 바람직하게는 30 ~ 540 개의 염기, 더욱더 바람직하게는 6 ~ 420 개의 염기, 또는 심지어는 120 ~ 300 개 또는 180 ~ 300 개의 염기로 이루어지고, 상기 서열에 의해 인코딩되는 아미노산 서열의 조각을 코딩하는, 이러한 서열의 임의의 일부를 나타낸다.

바람직하게는, 발명의 조각은 발명의 단백질의 N-말단 부분에서 유래한다.

하나의 구현예 변이형에 따르면, 발명에서 사용하기에 적합한 SASPase 단백질은 오직 SASPase 단백질 (Uniprot/Swissprot 레퍼런스: Q53RT3) 의 위치 95 에서 160 에 이르는 아미노산 서열만을 포함할 수 있다.

그러한 서열은 SASPase 의 FLG2 과의 상호작용 특성은 보존하나, 단백질분해 활성은 없다.

또다른 구현예에 따르면, 발명에 따라 사용되는 FLG2 는 제 1 100 N-말단 아미노산, 또는 심지어는 제 1 95 N-말단 아미노산으로 이루어질 수 있고, 우선적으로는 서열 Q5D862 (Uniprot/Swissprot) 의 위치 2 에서 95 에 이르는 아미노산 서열로 이루어질 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, 발명에서 사용하기에 적합한 단백질은, 적절한 곳에서, 화학적 또는 생물학적 합성에 의해, 또는, 단백질을 자연적으로 또는 번역 후에 발현하는, 생물학적 조직, 예를 들어 피부로부터의 추출에 의해 수득될 수 있는 천연 또는 합성 단백질, 및 또한 그의 다양한 번역후 형태, 및 또한 그의 상동체, 돌연변이체 또는 조각일 수 있다.

또다른 구현예에 따르면, 발명은 제 2 단백질 서열, 친수성 또는 소수성 표적화제, 생물변환 전구체, 친화도 마커, 예를 들어 형광 마커, 발광 마커, 방사성 마커 또는 비색 마커와 융합된 또는 커플링된 제 1 단백질 서열을 포함하는 키메라 단백질에 관한 것이다.

비제한적 방식으로, 발명에 따른 단백질과 커플링될 수 있는 화합물의 예로서, 형광 단백질 예컨대 녹색 형광 단백질, 형광 화학적 화합물, 예컨대 로다민, 플루오레세인, 또는 텍사스 레드, 인광성 화합물, 방사성 원소, 예컨대 ³H, ³⁵S, ¹²¹I 또는 ¹²⁵I, 또는 비색 마커 예컨대 갈락토시다제, 퍼옥시다제, 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제, 루시퍼라제 또는 알칼리성 포스파타제의 작용에 민감성인 색소생산성 기질, 또는 대안적으로 친화도 마커가 언급될 수 있다.

바람직한 구현예에 따르면, 발명에 따른 단백질은, 특히 마커 Myc, FLAF, His, His-tag, GST (글루타티온 S-트랜스퍼라제), THX (티오레독신), MBP (말토스-결합 단백질), THX-His-tag 또는 THX-His-S-tag 로부터 선택되는, 친화도 마커와 커플링될 수 있다.

발명에 따른 단백질과 커플링될 수 있는 화합물의 본질에 따라, 커플링은 통상의 기술자에게 공지된 임의의 화학적 과정을 통해 또는 임의의 분자 생물학 과정을 통해 실시될 수 있다. 후자의 경우에, 그것은 융합 단백질 또는 키메라 단백질로 언급될 수 있다.

따라서, 하나의 구현예에 따르면, 발명에서 사용하기에 적합한 SASPase 단백질은 특히 친화도 마커와 융합된 재조합 단백질일 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, 발명에서 사용하기에 적합한 재조합 FLG2 단백질은 친화도 마커와 융합된 재조합 단백질일 수 있다.

적절한 곳에서 또다른 단백질, 예를 들어 친화도 마커와 융합된, 돌연변이된 또는 돌연변이되지 않은 형태의, 및 끝이 잘린 (truncated) 또는 끝이 잘리지 않은 (nontruncated) 형태의, 발명의 재조합 단백질은 임의의 분자 생물학 과정을 통해, 특히 Sambrook et al. (Molecular Cloning: laboratory Manual, Ed. Cold Spring Harbor, 2001) 에 의해 기재된 바와 같이, 수득될 수 있다.

발명의 용도는 또한 단백질을 코딩하는 핵산 서열, 발명에서 사용하기에 적합한 단백질의 상동체, 돌연변이체 및 조각에까지 확장된다.

발명에 사용하기에 적합한, SASPase 단백질을 코딩하는 핵산 서열은, 예를 들어, GenBank 레퍼런스 AK055994, AK057813, BC031997, BC094000 또는 BC094002 하에, 바람직하게는 GenBank 레퍼런스 AK055994 하에 동정되는 핵산 서열일 수 있다.

발명에 사용하기에 적합한, FLG2 단백질을 코딩하는 핵산 서열은, 예를 들어, GenBank 레퍼런스 AY827490.1 하에 동정되는 핵산 서열일 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 핵산 서열은 특히 발명에 따른 임의의 단백질의 제조, 더욱 특히 친화도 마커에 융합된 단백질의 제조에 사용될 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 핵산 서열은 임의의 가능한 기원, 즉 동물, 특히 포유류, 더욱더 특히 인간, 또는 식물에서 유래하거나, 또는 미생물, 예를 들어 바이러스, 파지 또는 박테리아, 그렇지 않으면 곰팡이에서 유래할 수 있으며, 상기 유기체에 자연적으로 존재하는지 여부에 대해 어떠한 선입견도 없다.

조정성 화합물

발명의 목적을 위해, 용어 "조정성 화합물" 은 이러한 복합체의 파트너 단백질 사이의 상호작용을 조정하기 위해 발명의 단백질 복합체에 직접 작용할 수 있는 임의의 화합물을 의미한다.

발명의 목적을 위해, 용어 "조정" 은 이들 단백질 사이의 상호작용의 촉진, 감소 또는 안정화를 의미한다.

발명의 조정성 화합물은 파트너 단백질 중 하나 또는 둘다에 결합할 수 있다. 이러한 결합은, 예를 들어, 상호작용에 관여되는 단백질 도메인(들)에서 일어날 수 있다. 따라서, 발명의 조정성 화합물은 더욱 특히 SASPase 의 짧은 형태의 N-말단 부분, 또는 FLG2 의 N-말단 부분의 도메인과 상호작용할 수 있다. 대안적으로, 조정성 화합물은 복합체의 형성에 관여되는 SASPase 및 FLG2 의 단백질 서열의 도메인에 동시에 결합할 수 있다.

대안적으로, 이러한 결합은 단백질의 상호작용의 자리로부터 멀리에서 일어나서, 알로스테릭적으로 (allosterically) 단백질 중 하나 또는 둘다에서의 입체구조적 변화, 및 2 개의 단백질 사이의 상호작용, 또는 이들 단백질의 기능의 조정을 초래할 수 있다.

고려되는 조정성 화합물에 따라, SASPase 및 FLG2 사이의 상호작용은 강화, 감소, 제거 또는 안정화될 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, 조정성 화합물은 SASPase-FLG2 상호작용을 촉진하거나 그의 작용제일 수 있다. 대안적으로, 조정성 화합물은 SASPase-FLG2 상호작용을 불안정화 또는 대항작용하는 화합물일 수 있다.

SASPase-FLG2 상호작용을 조정하는 화합물의 작용제 또는 대항제 본질은 표피 세포 증식 및/또는 분화에 발휘될 조정성 효과에 따라, 더욱 특히 예방 또는 치료될 피부 또는 그것의 외피의 심미적 결함 또는 병적 장애의 본질에 따라 유지될 것이다.

더욱 특히, 낙설의 불충분 또는 표피 세포 증식 및/또는 분화의 가속과 연관되는 심미적 결함 또는 병적 장애의 맥락에서, SASPase-FLG2 상호작용의 작용제이거나 그것을 촉진하는 조정성 화합물이 바람직할 수 있다.

그러한 화합물은 표피 세포에서 낙설촉진 및/또는 항노화 활성을 발휘하여, 살아 있는 표피의 비후화 (thickening) 를 촉진하고 각질층의 두께를 조절할 수 있다.

대안적으로, 과도한 낙설 또는 표피 세포 증식 및/또는 분화의 불충분에서 초래되는 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 결함 또는 병적 장애에 관해서, SASPase-FLG2 상호작용을 대항작용 또는 불안정화시키는 조정성 화합물이 유리하게는 사용될 수 있다.

그러한 화합물은 표피 세포에서 분화촉진 활성을 발휘하여, 장벽 기능의 성숙을 촉진할 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, 더욱 특히 발명에 따라 고려되는 화합물은 하기 일반식 (Ia) 또는 (Ib) 로 표시되는 화합물 및 그의 생리적으로 수용가능한 염일 수 있다:

[식 중,

- R¹ 은 H, 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₄ 알킬, 또는 -C(O)R⁸ {식 중, R⁸ 은 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₄ 알킬을 나타냄} 을 나타내고;

- R² 은 =O, -OR⁹ 또는 -OC(O)R⁹ {식 중, R⁹ 은 H 또는 포화 C₁-C₂ 알킬을 나타냄} 을 나타내고;

- R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷ 은, 서로 독립적으로, H; -NO₂; -OH; 불소; -CF₃; 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₄ 알킬; 페닐; -OC(O)-CH(Ph)₂; -O-Ph-X {식 중, X 는 H, -OH, -NO₂, 불소, 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₄ 알킬 또는 알콕시를 나타냄}; -O-S(O₂)-Ph-Z {식 중, Z 는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₄ 알킬을 나타냄}; -R⁸OH; -OR⁹; -OC(O)R⁹ {식 중, R⁸ 및 R⁹ 는 앞서 정의된 바와 같음}; -R¹⁰Ph {식 중, R¹⁰ 은 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₄ 알킬렌임}; 또는 -OC(O)-Y_n-Ar₁-(X)_m {식 중,

- n 은 0 또는 1 이고, m 은 0 ~ 4 의 정수이고, 단 n 및 m 이 동시에 0 은 아니고, Y 는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₄ 알킬렌을 나타내고, X 는 앞서 정의된 바와 같고, Ar₁ 은

(식 중, * 는 Y 와의 결합이고, @ 는 X 와의 결합임) 임} 을 나타냄].

R¹ 은 특히 H, 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₃ 알킬, 또는 -C(O)R⁸ {식 중, R⁸ 은 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₃ 알킬을 나타냄} 을 나타낼 수 있다.

바람직하게는, R¹ 은 H, 메틸, 에틸 또는 프로필, 또는 -C(O)R⁸ {식 중, R⁸ 은 메틸, 에틸 또는 프로필을 나타냄} 을 나타낼 수 있다.

더욱더 바람직하게는, R¹ 은 메틸, 에틸 또는 프로필, 바람직하게는 H 를 나타낼 수 있다.

특히, 발명의 화합물은 식 (Ia) {식 중, R¹ 은 H, 메틸, 에틸 또는 프로필을 나타내고, 바람직하게는 H 를 나타냄} 로 표시될 수 있다.

R² 는 =O 또는 -OR⁹ {식 중, R⁹ 는 앞서 정의된 바와 같음} 를 나타낼 수 있다.

유리하게는, R² 는 =O 또는 -OR⁹ {식 중, R⁹ 은 H 또는 메틸을 나타냄} 를 나타낼 수 있다.

바람직하게는, R² 는 =O 를 나타낼 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷ 은, 서로 독립적으로, H; -OH; 불소; 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₃ 알킬; 페닐; -OC(O)-CH(Ph)₂; -O-Ph-X {식 중, X 는 H, -OH, -NO₂, 불소, 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₃ 알킬 또는 알콕시를 나타냄}; -O-S(O₂)-Ph-Z {식 중, Z 는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₃ 알킬을 나타냄}; -R⁸OH; -OR⁹; -OC(O)R⁹ {식 중, R⁸ 은 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₃ 알킬을 나타내고, R⁹ 는 H 또는 메틸을 나타냄}; -R¹⁰Ph {식 중, R¹⁰ 은 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₃ 알킬렌을 나타냄}; 또는 -OC(O)-Y_n-Ar₁-(X)_m {식 중,

- n 은 0 또는 1 이고, m 은 0 ~ 4 의 정수이고, Y 는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₃ 알킬렌을 나타내고, X 는 H, -OH, 불소, 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₃ 알킬 또는 알콕시를 나타내고, Ar₁ 은:

(식 중 * 는 Y 와의 결합이고, @ 는 X 와의 결합임) 임}

을 나타낼 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷ 은, 서로 독립적으로, H; -OH; 불소; 메틸 또는 에틸; 페닐; -OC(O)-CH(Ph)₂; -O-Ph-X {식 중, X 는 H, -OH, 불소, 메틸, 에틸, 메톡시 또는 에톡시를 나타냄}; -O-S(O₂)-Ph-Z {식 중, Z 는 메틸 또는 에틸을 나타냄}; -R⁸OH; -OR⁹; -OC(O)R⁹ {식 중, R⁸ 은 메틸 또는 에틸을 나타내고, R⁹ 는 H 또는 메틸을 나타냄}; -R¹⁰Ph {식 중, R¹⁰ 은 메틸렌 또는 에틸렌임}; 또는 -OC(O)-Y_n-Ar₁-(X)_m {식 중, n, Y, X 및 Ar₁ 는 앞서 정의된 바와 같음} 을 나타낼 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷ 은, 서로 독립적으로, H; -OH; 불소; 메틸 또는 에틸; - R⁸OH {식 중, R⁸ 은 메틸 또는 에틸을 나타냄}; -OR⁹ {식 중, R⁹ 는 H 또는 메틸을 나타냄}; 또는 -OC(O)-Y_n-Ar₁-(X)_n {식 중, n, Y, X 및 Ar₁ 는 앞서 정의된 바와 같음} 을 나타낼 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷ 중 하나는 -OC(O)-Yn-Ar₁-X)_m {식 중, n 은 0 또는 1 이고, m 은 0 ~ 3 의 정수, 특히 1 ~ 2 이고, Y 는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₃ 알킬렌, 특히 메틸렌 또는 에틸렌을 나타내고, X 는 H, -OH, 메틸, 에틸, 메톡시 또는 에톡시, 특히 H, 메틸 또는 메톡시, 바람직하게는 에틸 또는 에톡시를 나타낼 수 있고, Ar₁ 은:

임} 을 나타낼 수 있다.

바람직한 구현예에 따르면, 기 -OC(O)-Y_n-Ar₁-X_m 에서, Ar₁ 은:

{식 중, * 및 @ 은 앞서 정의된 바와 같음} 일 수 있다.

또다른 바람직한 구현예에 따르면, 기 -OC(O)-Y_n-Ar₁-X_m 에서, Y 는 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, 이소프로필렌으로부터 선택될 수 있고, 더욱 우선적으로는 메틸렌 및 이소프로필렌으로부터 선택될 수 있다.

또다른 바람직한 구현예에 따르면, 기 -OC(O)-Y_n-Ar₁-X_m 에서, n 은 0 과 동등할 수 있고, m 은 1 과 동등할 수 있다.

또다른 바람직한 구현예에 따르면, 기 -OC(O)-Y_n-Ar₁-X_m 에서, X 는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₄ 바람직하게는 C₂-C₃ 알킬 또는 알콕시로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, X 는 메틸, 에틸, 메톡시 또는 에톡시로부터 선택될 수 있다. 더욱더 우선적으로는, X 는 메틸 또는 메톡시, 바람직하게는 메틸일 수 있다.

바람직한 구현예에 따르면, 기 -OC(O)-Y_n-Ar₁-X_m 에서, n 은 0 과 동등할 수 있고, m 은 1 과 동등할 수 있고, X 는 메틸 또는 메톡시, 바람직하게는 메틸일 수 있고, Ar₁ 은:

{식 중, * 및 @ 은 앞서 정의된 바와 같음} 일 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷ 중 하나 이하가 앞서 정의된 바와 같은 -OC(O)-Y_n-Ar₁-X_m 을 나타낼 수 있고, 바람직하게는 R⁴ 또는 R⁶ 은 앞서 정의된 바와 같은 -OC(O)-Y_n-Ar₁-X_m 을 나타낸다. 이러한 구현예의 하나의 변이형에 따르면, -OC(O)-Y_n-Ar₁-X_m 은 n 이 0 과 동등할 수 있고, m 이 1 과 동등하고, X 는 앞서 정의된 바와 같고, Ar₁ 은

{식 중 * 는 Y 와의 결합이고, @ 는 X 와의 결합임} 를 나타낼 수 있는 것이다.

하나의 구현예에 따르면, R³, R⁵, R⁷ 및 R⁴ 또는 R⁶ 은, 서로 독립적으로, H; -NO₂; -OH; 불소; 메틸 또는 에틸; 페닐; -R⁸OH; -OR⁹; -OC(O)R⁹ {식 중, R⁸ 은 메틸 또는 에틸을 나타내고, R⁹ 는 H 또는 메틸을 나타냄}; -R¹⁰Ph {식 중, R¹⁰ 은 메틸렌 또는 에틸렌임} 을 나타낼 수 있다.

바람직한 구현예에 따르면 변이체, R³, R⁵, R⁷ 및 R⁴ 또는 R⁶ 은, 서로 독립적으로, H, -OH, 불소, 메틸을 나타낼 수 있고, 바람직하게는 H 를 나타낸다.

하나의 구현예에 따르면, 발명의 화합물은 특히 일반식 (Ia) 로 표시될 수 있다.

발명의 바람직한 유형에 따르면, 발명에서 사용하기에 적합한 화합물은 바람직하게는 하기 식 (II) 의 화합물로 표시될 수 있다:

이러한 화합물은 이하에서 "M7" 로 언급된다.

발명에 따른 일반식 (Ia) 또는 (Ib) 의 화합물의 생리적으로 수용가능한 염은, 유기 암모늄 염기로 수득된 염, 또는 일반식 (Ia) 또는 (Ib) 의 화합물 및 유기 또는 무기 산의 염을 포함하는, 일반식 (Ia) 또는 (Ib) 의 화합물 및 알칼리 금속, 알칼리 토금속 또는 암모늄의 염일 수 있다.

발명에서 사용하기에 더욱 특히 적합한 염은 나트륨, 칼륨, 칼슘 또는 마그네슘 염, 사차 암모늄 염 예컨대 테트라메틸암모늄 또는 테트라에틸암모늄, 및 암모니아 및 생리적으로 수용가능한 유기 아민, 예컨대 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 에틸아민, 트리에틸아민, 에탄올아민 또는 트리스(2-히드록시에틸)아민과의 부가 염일 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 일반식 (Ia) 또는 (Ib) 의 화합물 및 무기 산의 염은 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산 또는 인산으로 수득될 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 일반식 (Ia) 또는 (Ib) 의 화합물 및 유기 산의 염은 카르복시산 및 술폰산 예컨대 포름산, 아세트산, 옥살산, 시트르산, 락트산, 말산, 숙신산, 말론산, 벤조산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산 또는 p-톨루엔술폰산으로 수득될 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 조정성 화합물은 특히 특허 출원 WO 2008/008 704 에 기재된 바와 같이 수득될 수 있다.

대안적으로, 발명에서 사용하기에 적합한 조정성 화합물은 데이타뱅크 ChemDiv Discovery Chemistry Collection Public Database (Order Number: 4477-2039), ChemDiv, Inc. San Diego, USA) 로부터 수득될 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 조정성 화합물은 특히 Tetrahedron Letters, 2005, 46(8):1345-1348 에 기재된 바와 같이, 하기 도식 과정에 따라 수득될 수 있다:

{식 중, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷ 은 바람직하게는 앞서 정의된 바와 같음}.

스크리닝

본 발명은, 특히 앞서 정의된 바와 같은, 신규한 화합물을 스크리닝하기 위한, 발명의 단백질 복합체의 용도에 관한 것이다.

하나의 구현예에 따르면, 본 발명은 제 1 및 제 2 파트너 단백질, 상기 단백질의 상동체, 돌연변이체 또는 조각 사이의 상호작용을 조정함으로써 표피의 항상성, 특히 표피 세포의 증식 및/또는 분화를 조절할 수 있는 화합물의 스크리닝 방법으로서, 상기 제 1 및 제 2 단백질은 SASPase 및 필라그린-2, 또는 FLG2 이고, 하기로 이루어지는 단계를 적어도 포함하는 방법이다:

a) 상기 제 1 및 제 2 단백질을 제 1 및 제 2 단백질 사이의 상호작용에 적합한 조건 하에 두는 단계,

b) 단계 a) 전에 또는 후에, 제 1 및 제 2 단백질 중 하나 이상을 종 (species) 과 조합하는 단계,

상기 단백질은 상기 종과 함께 흥분성 파장에의 노출 후에 신호를 방출할 수 있는 집합체를 형성하고, 단계 a) 및 b) 의 실행은 상기 제 1 및 제 2 파트너 단백질의 상호작용에 의해 복합체의 생성을 초래함,

c) 상기 복합체의 특징인 제 1 신호 S1 을 수득하기 위해 상기 복합체를 상기 흥분성 파장에 적용하는 단계,

d) 상기 신호 S1 을 정량적으로 또는 정성적으로 확인하는 단계,

e) 복합체를 상기 화합물과 상기 복합체 사이의 상호작용에 적합한 조건 하에 스크리닝될 화합물을 함유하는 것으로 추정되는 매질과 접촉되게 두는 단계,

f) 제 2 신호 S2 를 수득하기 위해 단계 e) 에서 수득된 매질을 상기 흥분성 파장에 적용하는 단계,

g) 상기 신호 S2 를 정량적으로 또는 정성적으로 확인하는 단계, 및

h) 스크리닝된 화합물에 의한 제 1 및 제 2 단백질 사이의 상호작용의 가능한 조정과 관련된 결론을 도출하기 위해 제 1 및 제 2 신호 S1 및 S2 를 비교하는 단계.

하나의 구현예에 따르면, 발명에서 사용하기에 적합한 종은 표면 플라스몬 공명에 적합한 지지체, 형광 마커, 항체 또는 1차 및 2차 항체의 조합 (상기 항체 또는 상기 2차 항체는 형광 마커를 보유함) 으로부터 선택될 수 있다.

발명의 단백질은 통상의 기술자에게 공지된 임의의 방법을 통해 종과 조합되고, 단백질과 함께 조합될 지지체의 본질에 적응될 수 있다. 커플링 방법은 자연적으로 발명의 단백질 서로와의 상호작용의 특성에 영향을 미치지 않도록 선택될 것이다.

하나의 구현예에 따르면, 종 및 발명의 단백질 사이의 조합은 화학적 커플링, 분자 생물학 또는 특이적 고친화도 상호작용(들)에 의해 수행될 수 있다.

특히, 조합은 화학적 커플링을 통해, 특히 반응성 화학적 관능기를 이용하여, 또는 분자 생물학 과정을 통해 수행될 수 있다.

화학적 과정을 통한 조합의 사용 동안, 반응될 화학적 관능기는 단백질 및 조합된 종에 자연적으로 존재할 수 있거나, 또는 화학 반응에 앞서 단백질 및 종에 도입될 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 반응성 화학적 관능기의 예로서, 예를 들어, "클릭 화학" 반응에서 종래에 사용된 것이 언급될 수 있다.

종 및 발명의 단백질 사이의 조합에 적합한 분자 생물학 과정의 예로서, 특히 적합한 핵산 서열의 제조, 그의 결찰 및 적합한 발현 벡터, 예를 들어 플라스미드 내로의 그의 도입, 및 키메라 재조합 단백질의 발현 및 생산을 가능하게 할 수 있는 숙주 세포 내로의 플라스미드의 트랜스펙션을 포함하는, 클로닝 과정에서 종래에 실시된 것들이 언급될 수 있다.

또다른 구현예에 따르면, 발명에서 사용하기에 적합한 종 및 단백질은 하나 이상의 특이적 고친화도 상호작용을 이용하여 서로 조합될 수 있다.

발명에 따른 스크리닝 방법은 형광 에너지 전달 (FRET), 생물발광 에너지 전달 (BRET) 또는 표면 플라스몬 공명 (SPR) 을 사용할 수 있고, 더욱 특히 형광 에너지 전달을 사용할 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, 특히 발명에서 사용하기에 적합한 종은 항체 또는 1차 및 2차 항체의 조합일 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 항체는 통상의 기술자에게 공지된 임의의 과정을 통해, 특히 Antibodies: Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990) 에 기재된 바와 같이, 수득될 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 항체로서, 항원에 결합할 수 있고, 통상의 기술자에게 공지된 임의의 유전자 조작 기술에 의해 또는 온전한 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성될 수 있는, 모노클로날 또는 폴리클로날 또는 재조합 항체, 및 또한 면역글로불린 조각이 언급될 수 있다.

더욱 특히, 발명에서 사용하기에 적합한 항체는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, "이중체", scFv 항체, F(ab')² 항체, Fab' 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 및 재조합 항체로부터 선택될 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, 발명에서 사용하기에 적합한 항체는 그것이 지향되는 단백질의 일부 또는 그 단백질에 의해 보유되는 특이적 친화도 마커에 대해 친화성을 가질 수 있다. 특히, 사용하기에 적합한 항체는 하기 실시예에서 기재된 바와 같은 항체일 수 있다.

본 발명의 하나의 구현예에 따르면, 발명의 하나 이상의 단백질(들)은 항체에 의해 인지되는 친화도 마커를 보유할 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 친화도 마커는 특히 앞서 명시된 친화도 마커로부터 선택될 수 있다.

또다른 구현예에 따르면, 제 1 및 제 2 단백질은, 각각, 제 1 및 제 2 종과 조합되고, 상기 종은, 각각, 형광 기 A 및 형광 기 B 를 포함하고, 상기 기 A 및 B 는 그것의 형광 에너지가 형광 공명에 의한 에너지 전달을 수행하기에 적합한 수용체-공여체 쌍을 규정한다.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 수용체-공여체 쌍의 예로서, 비제한적 방식으로, 쌍 BFP (Blue 형광 단백질)/GFP (녹색 형광 단백질), CFP (시안 형광 단백질)/YFP (황색 형광 단백질), CFP/DsRed (적색 형광 단백질), GFP/DsRed 및 EuK (유로퓸 크립테이트)/XL665 가 언급될 수 있다. 바람직하게는, 발명에서 사용하기에 적합한 수용체-공여체 쌍은 EuK/XL665 일 수 있다.

하나의 구현예 변이형에 따르면, 제 1 및 제 2 종은 형광 마커일 수 있다. 그러한 형광 마커는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 형광 분자 또는 형광 단백질로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 사용되는 형광 마커는 분자 생물학에 의해, 특히 앞서 명시된 바와 같이, 발명의 단백질에 융합된 형광 단백질로부터 선택될 수 있다.

또다른 구현예 변이형에 따르면, 제 1 및 제 2 종은 형광 마커를 보유하는 항체일 수 있고, 각각, 상기 제 1 및 제 2 단백질에 의해 보유되는 제 1 및 제 2 친화도 마커에, 각각, 결합하기에 적합할 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, 발명에 따른 방법의 단계 d) 에서 정량적으로 또는 정성적으로 결정되는 신호 S1 은 형광 에너지 공여체의 흥분성 파장에서의 조사 (irradiation) 에 의해 수득된 형광 신호일 수 있다.

방법의 단계 f) 에서 정량적으로 또는 정성적으로 결정되는, 신호 S2 는 형광 에너지 공여체의 흥분성 파장에서의 조사에 의해 수득되는 형광 신호일 수 있다.

형광 신호 S1 및 S2 는 통상의 기술자에게 공지된 발명에서 사용하기에 적합한 임의의 장치를 사용하여 측정될 수 있다. 발명에서 사용하기에 적합한 장치의 예로서, 마이크로플레이트 판독기, 형광 현미경, 분광형광계 또는 형광 스캐너가 언급될 수 있다.

바람직한 구현예에 따르면, 발명의 방법은 높은 처리율로, 마이크로플레이트에서 실시될 수 있고, 형광 신호의 측정은 마이크로플레이트 판독기, 예를 들어 PHERAstar (BMG) 판독기를 사용하여 실시될 수 있다.

스크리닝될 화합물의 존재시에, 신호 S1 보다 상당히 더 강렬한 신호 S2 는 SASPase-FLG2 상호작용을 촉진하는 또는 그것의 작용제인 화합물의 지표일 수 있다.

반면에, 스크리닝될 화합물의 존재시에, 신호 S1 보다 상당히 더 약한 신호 S2 는 SASPase-FLG2 상호작용을 불안정화 또는 대항작용하는 화합물의 지표일 수 있다.

발명에 따른 방법 또는 용도에 의해 스크리닝되는 화합물은 제 1 및 제 2 단백질 사이의 상호작용의 작용제 또는 대항제일 수 있다.

발명의 바람직한 구현예에 따르면, 스크리닝된 화합물은 표피 세포 분화 및/또는 증식 결함과 연관되는 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 장애 또는 병적 장애를 치료 및/또는 예방할 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, 발명의 스크리닝 방법은 표피 세포의 분화 및/또는 증식을 조정하는 스크리닝된 화합물의 특성을 평가하는 것에 있는 하나 이상의 단계를 또한 포함할 수 있다.

그러한 평가는, 특히 배양 중인 표피 세포에 대해, 시험관내 또는 생체외에서 실시될 수 있다. 세포는 세포주의, 즉 불멸화시키기 위한 종양 기원의 또는 바이러스에 의해 형질전환된 세포일 수 있다. 대안적으로, 세포는 1차 배양 세포일 수 있으며, 즉 살아있는 유기체로부터 채취한 조직, 예를 들어 인간 표피에서 유래할 수 있다. 바람직하게는, 배양 세포는 각질형성세포이거나, 또는 심지어는 섬유아세포와 연합, 특히 계층화될 수 있다. 세포 배양물은 통상의 기술자에게 공지된 임의의 방법에 따라 제조될 수 있다.

또한, 시험관내 평가는 재구성된 표피의 모델에 대해 실시될 수 있다. 그러한 표피 모델은 상업적으로 입수가능할 수 있으며, 예를 들어 Episkin^® 모델이다.

발명에 따른 스크리닝된 화합물의 시험관내 또는 생체외 평가는 시험 화합물의 소정의 효과를 대조군 또는 표준 값과 비교하기 위한 통상의 기술자에게 공지된 임의의 프로토콜을 통해 실시될 수 있다.

시험관내 또는 생체외에서, 발명에 따른 스크리닝된 화합물의 효과는 표피 세포의 분화 및/또는 증식과 특이적으로 연관되는 것으로 알려진 생물학적 마커를 측정함으로써 확인될 수 있다.

그러한 마커는, 예를 들어, 각질층의 두께, 그것의 장벽 기능의 측정, 또는 트랜스글루타미나제 I, 필라그린, 카스파제 14, SASPase, 코르네오데스모신, 데스모글레인 1 또는 단백질 Ki67 의 발현 및/또는 활성화의 측정으로부터 선택될 수 있다.

이들 마커는, 예를 들어, qPCR, 웨스턴 블롯팅 또는 면역형광에 의해 통상의 기술자에게 공지된 임의의 프로토콜에 따라 측정될 수 있다.

징후 (indications)

발명의 화합물은 유리하게는 피부 및/또는 그것의 외피에서 표피 세포 분화 및/또는 증식의 불균형을 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다.

본 발명은, 두피 및 점막을 포함하는, 모든 신체 피부, 바람직하게는, 얼굴, 목둘레선, 목, 팔 및 팔뚝, 및 입술의 피부, 또는 더욱더 바람직하게는 얼굴, 목둘레선 및 목 및 입술의 피부를 대상으로 한다.

또다른 구현예에 따르면, 본 발명은 머리 모발, 체모, 속눈썹 및 손발톱과 관련된다. 바람직하게는, 본 발명은 더욱 특히 머리 모발, 속눈썹 및 체모를 대상으로 한다.

하나의 구현예에 따르면, 발명에서 고려되는 심미적 결함은 피부 노화의 징후, 표피 장벽 기능의 장애, 피부 건조증의 징후, 피부 낙설 장애, 및 반흔형성 및/또는 재-상피화 결함으로부터 선택될 수 있다.

또다른 구현예에 따르면, 발명에서 고려되는 심미적 결함은 과도발한 및/또는 체취 문제로부터 선택될 수 있다.

또다른 구현예에 따르면, 발명의 화합물은 피부 스크러빙 또는 박피제 처리 후 재-상피화 촉진용 활성제로서 미용제에서 사용될 수 있다.

발명의 조정성 화합물은 따라서 유리하게는 공격적일 수 있는 미용적 처리 후 표피의 장벽 특성을 더욱 신속히 회복시키고, 그것의 보호를 개선하는 것을 가능하게 한다.

또다른 구현예에 따르면, 발명의 화합물은 모발 손실 예방 및/또는 치료 및/또는 모발 재성장 촉진용 활성제로서 미용제에서 사용될 수 있다.

또다른 구현예에 따르면, 발명의 화합물은 체모 재성장 예방용 활성제로서 미용제에서 사용될 수 있다.

또다른 구현예에 따르면, 병적 장애는 암, 건선, 백반증, 장미증 및 아토피성 피부염으로부터 선택될 수 있다.

발명에서 더욱 특히 고려되는 피부 노화의 징후는, 그것이 생활연령에 따른 것이든 및/또는 광유도된 것이든지 간에, 노화에 의해 야기된 피부 외관의 임의의 변화, 예를 들어, 축 늘어진 및 주름진 피부 외관을 초래하는, 주름 및 잔주름, 주름이 쪼글쪼글한 피부, 느슨해진 피부, 피부 탄력성 및/또는 긴장성의 결여, 진피의 박화 및/또는 콜라겐 섬유의 붕괴일 수 있다. 변화된 외관에 자연히 반영되지 않는 피부의 임의의 내부 변화, 예를 들어, 자외선에의 노출 후에 뒤따르는, 피부, 특히 엘라스틴 섬유, 또는 탄성 섬유의 임의의 내부 붕괴가 또한 고려된다.

특히, 발명에 의해 표적화되는 피부 노화의 징후는 표피의 박화 및/또는 표피의 견고성, 탄력성, 밀도 및/또는 긴장성의 결여 및/또는 주름 및 잔주름의 형성과 관련된다.

발명에서 고려되는 표피 장벽 기능 장애는 특히 자극성 물질, 예를 들어 세제, 산, 염기, 산화제, 환원제, 농축 용제, 유독 가스 또는 연기, 기계적 응력, 예를 들어, 특히 박피 과정, 표피 표면의 박리, 먼지 또는 입자의 투사, 면도 또는 제모 후에 뒤따르는, 마찰, 충격, 마모, 열 또는 기후 불균형, 예를 들어 감기, 건조증, 방사선, 생체이물질, 특히 원치 않는 미생물, 알레르기원에 의해 야기되는 유형의 외부 공격, 또는 심리적 스트레스와 같은 유형의 내부 공격으로부터 초래될 수 있다.

발명의 조정성 화합물은 따라서 표피의 장벽 특성 및 보호를 개선하는 것을 가능하게 해준다.

표피 장벽 기능 장애는 특히 피부 불편함, 감각 현상, 특히 불쾌한 현상, 특히 찌름, 팽팽함, 열 및 가려움에 반영될 수 있다.

하나의 병적 형태에서, 장벽 기능 장애는 아토피성 피부염의 형태로 표명될 수 있다.

발명에서 더욱 특히 고려되는 피부 건조증의 징후는 표피, 특히 피부의, 그것의 탈수로 인한, 외관의 임의의 변화일 수 있다. 건조한 피부는 거친 느낌을 갖고, 낙설상이거나 또는 인설로 뒤덮히고, 감소된 유연성 및 탄력성와 연결된, 팽팽함 및/또는 긴장성의 감각으로 본질적으로 표명된다.

건조한 피부는 병적 또는 비-병적일 수 있다. 병적 건조한 피부는 아토피성 피부염 및 비늘증으로 나타날 수 있다.

비-병적 건조한 피부는, 특히 나이가 들어감에 따른 피부 대사의 전반적인 감소가 특징인, 노인성 피부, 외부 인자에 매우 민감성인 피부가 특징이고, 종종 홍반 및 장미증을 동반할 수 있는, 취약성 피부, 및 주로 얼굴, 사지 및 손등에서 표명되는 아마도 유전적 기원의 보통 건조증으로 나타날 수 있다.

더욱 특히 발명에서 고려되는 낙설 장애는 피부 또는 두피의 낙설 장애일 수 있다.

두피 낙설 장애는 비듬, 특히 건성 비듬의 형태로 나타날 수 있다.

건성 비듬은 표피로부터 쉽게 탈리되고 임상 검사시 염증성으로 보이지 않는 작은 인설로부터 형성된다.

발명에서 고려되는 반흔형성 및 재-상피화 결함은 특히 수술적 개입으로부터 초래되거나 또는 표피의 심미적 또는 병적 장애 후에 뒤따르는 표피 손상 또는 표피의 흉터 결함, 예컨대 여드름 흉터 또는 임신선의 징후의 형태로 표명될 수 있다. 발명에서 고려되는 재-상피화 결함은 또한 피부의 화학적 또는 기계적 박피 후에 또는 노인 피부의 경우에 발생할 수 있다. 박피 전에 또는 후에 조정성 화합물이 사용되어 표피의 장벽 기능의 재-확립을 촉진할 수 있다.

발명에서 고려되는 체취는 특히 그것을 생성하는 사람 및/또는 그의 근처에 있는 사람들에 의해 역겨운 것으로, 또는 심지어는 정상적인 생활을 하지 못하게 만드는 것으로 감지될 수 있는 임의의 원치 않는 냄새일 수 있다.

그것은 더욱 특히, 대부분의 땀샘, 특히 아포크린샘이 존재하는, 심한 발한을 겪는 신체 부위, 더욱 특히 액와 부위, 특히 겨드랑이, 또는 발, 유륜 및 항문주위 영역에서 감지되는 냄새의 경우이다.

체취는 특히 발한, 또는 심지어는 과도발한으로부터, 및/또는 땀 더욱 특히 아포크린 땀의 박테리아성 분해로부터 발생한다.

조성물

발명의 화합물은 유리하게는 의도되는 징후 및 투여 모드에 통상적으로 이용가능한 임의의 생약 형태일 수 있는 조성물로 제형화될 수 있다.

발명에 따른 조성물은 생리적으로 또는 제약적으로 수용가능한 매질을 포함한다.

발명에 따른 조성물은 경구적으로, 비경구적으로 또는 국소적으로 투여될 수 있다.

바람직하게는, 발명의 조성물은 국소적으로 투여될 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, 발명에 따른 국소적 조성물은 유리하게는 피부 및 점막의 관리에 적합한 임의의 생약 형태로 제형화될 수 있고, 연고, 크림, 밀크, 포마드, 파우더, 함침 패드, 용액, 겔, 스프레이, 로션 또는 현탁액의 형태일 수 있다. 그것은 또한 제어성 방출을 허용하는 지질 또는 중합체성 미세구체, 나노구체 또는 소포 또는 중합체 패치 및 하이드로겔의 형태일 수 있다. 이들 국소적 조성물은 피부미용적 지시에 따라 무수 형태 또는 수성 형태 중 하나일 수 있다.

국소적 투여가 의도되는 조성물은 수성, 수성-알코올성 또는 유성 용액, 로션 또는 세럼 유형의 용액 또는 분산물, 지방상을 수성 상에 분산시켜 (O/W) 또는 정반대로 (W/O) 수득되는, 밀크 유형의 액체 또는 반액체 점조도의 에멀전, 크림 유형 또는 수성 또는 무수 겔 유형의 연질, 반고체 또는 고체 점조도의 현탁액 또는 에멀전, 다중 에멀전 (W/O/W 또는 O/W/O), 마이크로에멀전, 나노에멀전, 마이크로캡슐 제제, 마이크로입자 제제, 이온성 및/또는 비이온성 유형의 소포 분산물, 또는 왁스/수성 상 분산물일 수 있다.

바람직한 구현예에 따르면, 국소적 조성물은 추진제를 함유하는 용액, 크림, 겔, 에멀전, 거품 또는 에어로졸 조성물의 형태일 수 있다.

바람직한 구현예에 따르면, 국소적 조성물은 또한 경피적으로 활성제(들)의 능동 또는 수동 방출을 허용하는 경피 시스템의 형태, 예를 들어 패치 또는 패치 겔 (하이드로겔) 유형일 수 있다.

이들 조성물은 통상의 방법에 따라 제조된다.

발명에 따른 조성물은 피부 또는 두피 치료 또는 관리용 조성물, 또는 항태양 또는 인공 태닝 조성물, 또는 대안적으로 피부 클렌징 또는 메이크업-제거 제품, 데오더런트 제품 또는 방향 화합물, 클렌징, 보호, 약용 또는 관리 크림, 피부관리 로션, 겔 또는 거품, 클렌징 또는 소독제 로션, 목욕 조성물 또는 데오더런트 조성물을 구성할 수 있다. 그것은 또한 염색 또는 비-염색, 약용 또는 비-약용 샴푸, 또는 헤어 컨디셔너의 형태일 수 있다. 발명에 따른 조성물은 또한 비누 또는 클렌징 비누를 구성하는 고체 제제로 이루어질 수 있다.

그러한 조성물은 그때 무색 또는 약간 유색일 수 있고, 특히 아래 명시된 바와 같은, 부가적 미용적 또는 피부과적 활성제를 임의로 함유할 수 있다. 그것은 그때 피부 또는 입술용 관리 베이스로서, 예를 들어 추위 및/또는 햇빛 및/또는 바람에 대항하여 입술을 보호하기 위한 립밤, 예컨대 얼굴 및/또는 신체 피부용 낮 또는 밤 관리 크림 형태로 사용될 수 있다.

발명에 따른 조성물은 또한 유색 미용적 조성물, 특히 피부 및/또는 점막용 메이크업 조성물을 구성할 수 있고, 특히 그러한 조성물은, 임의로 관리 또는 치료 특성을 갖는, 파운데이션, 블러셔, 얼굴 파우더, 아이섀도우, 스틱 형태의 컨실러 화합물, 립스틱 또는 립글로스일 수 있다. 바람직하게는, 그것은 안색 보정용 유색 (베이지색 또는 녹색) 메이크업 조성물일 수 있다.

발명에 따른 조성물은 또한 손발톱 또는 속눈썹 메이크업 또는 관리용 조성물을 구성할 수 있다.

발명의 조성물이 에멀전일 때, 지방상의 비율은 조성물의 총 중량에 대해 5 중량% ~ 80 중량% 바람직하게는 10 중량% ~ 50 중량% 일 수 있다. 에멀전 형태의 조성물에 사용되는 오일, 유화제 및 보조유화제는 미용제 및/또는 피부과에서 종래에 사용되는 것으로부터 선택된다. 유화제 및 보조유화제는 조성물 중에 조성물의 총 중량에 대해 0.3 중량% ~ 30 중량% 바람직하게는 0.5 중량% ~ 20 중량% 의 비율로 존재할 수 있다.

발명의 조성물이 유성 용액 또는 겔일 때, 지방상은 조성물의 총 중량의 90% 초과를 차지할 수 있다.

경구 투여용 발명에 따른 조성물의 경우, 섭취가능한 지지체의 사용이 바람직하다.

섭취가능한 지지체는 고려 중인 조성물의 유형에 따라 다양한 성질을 가질 수 있다.

따라서 정제, 겔 캡슐 또는 로젠지, 현탁액, 건조 형태의 경구 보충제 및 액체 형태의 경구 보충제가 식품 지지체로서 사용하기에 특히 적합하다.

우유, 요구르트, 치즈, 발효유, 우유계 발효 제품, 아이스크림, 시리얼계 제품 또는 발효 시리얼계 제품, 우유계 분말, 영유아식, 과자류, 초콜렛 또는 시리얼 유형의 식품, 및 특히 애완동물용 동물 사료가 또한 식품 지지체로서 적합하다.

용어 "경구 조성물" 은, 예를 들어, 발명에 따른 하나 이상의 화합물을 포함하는 영양, 기능식품, 의약화장품 또는 제약적 조성물을 의미한다.

발명에 따른 경구 조성물의 제형화는 마실 수 있는 용액, 코팅된 정제, 겔 캡슐, 겔, 에멀전, 삼키거나 씹을 수 있는 정제, 캡슐, 특히 연질 또는 경질 캡슐, 용해성 과립, 시럽, 제어성 방출을 허용하는 하이드로겔 및 고체 또는 액체 식품, 식품 바 (food bar), 압축 또는 비압축 형태의, 분말, 액체 용액 또는 현탁액, 과자류, 발효유, 발효 치즈, 츄잉 검, 치약 또는 스프레이 용액을 생산하기 위한 통상의 기술자에게 공지된 임의의 통상적 과정을 통해 실시될 수 있다.

경구 조성물은 피부미용적 지시에 따라 무수 형태 또는 수성 형태 중 하나일 수 있다.

발명의 화합물은 더욱이 그러한 경구 조성물 또는 식품 보충제용의 통상적 부형제 및 성분, 즉 특히 지방 및/또는 수성 성분, 습윤제, 증점제, 보존제, 질감제 (texture agent), 조미료 (taste agent) 및/또는 피막제, 및/또는 항산화제와 함께 제형화될 수 있다.

경구 조성물용, 특히 식품 보충제용 제형화제 및 부형제는 기술분야에 공지되어 있고 여기 상세한 설명의 주제가 아닐 것이다.

특히, 발명에 따른 조성물은 인간 소비용 식품 조성물일 수 있다. 이는, 특히, 영양 완전 식품, 음료, 광천수, 수프, 식이 보충제 및 대체 식품, 영양 바, 과자류, 발효 또는 비발효 우유계 제품, 요구르트, 우유계 분말, 경장 영양 제품, 영 및/또는 유아 조성물, 발효 또는 비발효 시리얼계 제품, 아이스크림, 초콜렛, 커피, "조리용" 제품 예컨대 마요네즈, 토마토 퓨레 또는 샐러드 드레싱일 수 있다.

발명에 따른 조성물은 또한 동물, 특히 애완동물, 예컨대 고양이 및 개를 위해 의도될 수 있고, 동물 사료 또는 동물 사료 보충제의 형태로 제형화될 수 있다.

또다른 구현예에 따르면, 발명에서 사용하기에 적합한 화합물은 비경구적으로, 특히 피하 또는 피내에, 사용될 수 있다.

그러한 용도에서, 발명에서 사용하기에 적합한 활성제는 멸균 분말, 예를 들어 동결 건조된 분말 (이는 그 후 그것의 사용시에 주사용 멸균 용액 또는 분산물의 형태로 재구성됨) 을 사용하여, 투여 직전에, 적절한 곳에서, 제조되는 분산물, 현탁액 또는 에멀전의 형태의, 수성 또는 비수성 멸균 등장성 용액의 형태로 포장될 수 있다.

용어 "멸균" 은 제형에 표피내 및/또는 피내 및/또는 피하 투여에 요구되는 무해성을 보장할 수 있는 자격을 주기 위한 것이다.

발명에서 사용하기에 적합한 조성물은 주사용 멸균 용액의 분야에서 통상적으로 사용되는 임의의 부형제를 포함할 수 있다.

발명의 조성물의 비경구 투여는 표피내 및/또는 피내 및/또는 피하 주입에 적합한 임의의 주입 기술 및/또는 장치를 통해 실시될 수 있다. 따라서, 그러한 투여는 또한 메소테라피 (mesotherapy) 에 의해 실시될 수 있다.

비경구 경로를 통하는, 전신 패치를 사용하는 투여가 바람직할 수 있다.

발명에 따른 조성물은 또한 하나 이상의 미용적으로 또는 피부과적으로 수용가능한 성분을 포함할 수 있다. 이들 다양한 성분들의 양은 고려되는 기술분야에서 종래에 사용되던 양이고, 특히 발명의 화합물 또는 발명의 조성물에 요구되는 특성에 영향을 미치지 않도록 결정된다.

발명에서 사용하기에 적합한 미용적 또는 피부과적 활성제는 보습제, 비타민, 필수 지방산, 스핑고지질, UV-차단제, 항산화제, 항여드름제, 항염증제, 태닝제 (UV 복사의 부재시), 탈색소제, 소광제 (matting agent), 단백질 또는 단백질 가수분해물, 아미노산, 폴리올, 요소, 알란토인, 당 및 당 유도체, 수용성 비타민, 식물 추출물 및 히드록시산, 레티놀 및 그의 유도체, 토코페롤 및 그의 유도체, 필수 지방산, 세라마이드, 에센셜 오일, 살리실산 및 그의 유도체, 비타민 D3 및 그의 유도체, 레티노이드 및 그의 유도체, PPAR-감마 작용제, 탈모 대항제 또는 모발 재성장제 예컨대 칼륨 채널 개방제, 및 항안드로겐제, 및 그들의 혼합물로부터 선택될 수 있다.

발명의 조성물은 기술분야에서 통상적으로 사용되는 임의의 제형화제를 포함할 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 친수성 겔화제로서, 카르복시중합체 예컨대 카르보머, 아크릴 공중합체 예컨대 아크릴레이트/알킬 아크릴레이트 공중합체, 폴리아크릴아미드 특히 SEPPIC 사에 의해 명칭 Sepigel 305^® 으로 판매되는 폴리아크릴아미드, C_13-14 이소파라핀 및 라우레쓰-7 의 혼합물, 다당류, 예를 들어 셀룰로스 유도체 예컨대 히드록시알킬셀룰로스, 특히 히드록시프로필셀룰로스 및 히드록시에틸셀룰로스, 천연 검 예컨대 구아 검, 로커스트 콩 검 및 잔탄 검, 및 점토가 언급될 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 친유성 겔화제로서, 개질 점토, 예를 들어 벤톤, 지방산의 금속 염, 예를 들어 알루미늄 스테아레이트 및 소수성 실리카, 그렇지 않으면 에틸셀룰로스 및 폴리에틸렌이 언급될 수 있다.

발명에서 사용될 수 있는 계면활성제로서, 예를 들어, 글리세릴 스테아레이트, 폴리소르베이트 60, Henkel 사에 의해 명칭 Sinnowax AO^® 으로 판매되는 33 mol 의 에틸렌 옥시드로 옥시에틸렌화된 세틸스테아릴 알코올/세틸스테아릴 알코올의 혼합물, Gattefosse 사에 의해 명칭 Tefose^® 63 으로 판매되는 PEG-6/PEG-32/글리콜 스테아레이트의 혼합물, PPG-3 미리스틸 에테르, 실리콘 유화제 예컨대 세틸 디메티콘 코폴리올, 및 소르비탄 모노스테아레이트 또는 트리스테아레이트, PEG-40 스테아레이트 및 옥시에틸렌화 (20 OE) 소르비탄 모노스테아레이트가 언급될 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 충전제로서, 활성, 운모, 이산화규소, 고령토, 침전 칼슘 카르보네이트, 마그네슘 카르보네이트, 탄산수소 마그네슘, 히드록시아마타이트, 질화 분소, 폴리아미드 분말 (Atochem 사제 Nylon^® Orgasol), poly-β-알라닌 분말 및 폴리에틸렌 분말, 폴리테트라플루오로에틸렌 분말 (Teflon^®, 라우로일라이신, 전분, 테트라플루오로에틸렌 중합체 분말, 중공 중합체 미세구체 예컨대 Expancel (Nobel Industrie), 탄소수가 8 ~ 22, 바람직하게는 12 ~ 18 인 유기 카르복시산에서 유래하는 금속 비누, 예를 들어 아연 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트 또는 리튬 스테아레이트, 아연 라우레이트 또는 마그네슘 미리스테이트, Polypore^® L 200 (Chemdal Corporation), 실리콘 수지 미세구슬 (예를 들어, Toshiba 사제 Tospearl^®), 폴리우레탄 분말, 특히 트리메틸올 헥실락톤을 포함하는 공중합체를 포함하는 가교된 폴리우레탄의 분말이 언급될 수 있다. 그것은 특히 헥사메틸렌 디이소시아네이트/트리메틸올 헥실락톤 중합체일 수 있다. 적합한 입자는 특히, 예를 들어, Toshiki 사에서 명칭 Plastic Powder D-400^® 또는 Plastic Powder D-800^® 으로 판매 중인 것, 및 그들의 혼합물이다.

발명에서 사용하기에 적합한 냄새 흡수제로서, 제올라이트 및 시클로덱스트린이 언급될 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 염료는 적합한 미용적 매질에 충분한 양으로 배합될 때 유색 광학 효과를 나타낼 수 있는 화합물이다. 사용될 수 있는 염료로서, 색소, 진주층 (nacre), 반짝이 조각, 지용성 염료 및 수용성 염료, 및 그들의 혼합물이 언급될 수 있다.

색소는 무기 색소, 유기 색소 및 복합 색소 (즉 무기 및/또는 유기 물질에 기초하는 색소) 로부터 선택될 수 있다. 색소는 단색 색소, 레이크 (lake), 진주층, 및 광학적 효과가 있는 색소, 예를 들어 반사 색소 및 색깔이 변하는 (goniochromatic) 색소로부터 선택될 수 있다.

발명에서 사용하기에 적합한 필름-형성 중합체는 라디칼 중합체, 중축합물 및 천연 기원의 중합체, 및 그들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 용어 "중합체" 는 2 종 이상의 반복 단위, 바람직하게는 3 종 이상의 반복 단위 더욱 특히 10 종 이상의 반복 단위를 포함하는 화합물을 의미한다. 라디칼 중합체는, 예를 들어, 아크릴 중합체 및/또는 비닐 중합체로부터 선택될 수 있다. 발명에 따라, 중축합물은 폴리우레탄, 폴리에스테르, 폴리에스테르 아미드, 폴리아미드, 지방 사슬 폴리에스테르 및 에폭시 에스테르 수지, 및 그들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 언급될 수 있는 천연 기원의 중합체는 셸락 및 산다락 검을 포함한다.

용어 "반결정질 중합체" 는 결정화가능 부분, 결정화가능 펜던트 사슬 또는 백본 내의 결정화가능 블록, 및 백본 내의 무정형 부분을 포함하고, 특히 용융 (고체-액체 전이) 의, 일차 가역 상-변화 온도를 갖는 중합체를 의미한다. 반결정질 중합체는 하나 이상의 결정화가능 블록 및 하나 이상의 무정형 블록을 포함하는 블록 공중합체, 반복 단위 1 개 당 하나 이상의 결정화가능 측쇄를 보유하는 단독중합체 및 공중합체, 및 그들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 그러한 중합체는, 예를 들어, EP 1 396 259 에 기재되어 있다. 발명에 따라 사용될 수 있는 구조화 반결정질 중합체의 특별한 예로서, 브로슈어 Intelimer ^® 중합체, Landec IP22 (Rev. 4-97) 에 기재된 Landec 사제 Intelimer^® 제품이 언급될 수 있다. 이들 중합체는 실온 (25℃) 에서 고체 형태이다. 그들은 결정화가능 측쇄를 보유한다.

발명에서 사용될 수 있는 지방 물질로서, 휘발성 오일 및 비휘발성 오일, 예를 들어 무기 오일 예컨대 수소첨가 폴리이소부텐 및 액체 페트롤륨 젤리, 식물 오일, 예를 들어 시어 버터의 액체 분획, 해바라기 기름 및 행인유, 동물 오일, 예를 들어 퍼히드로스쿠알렌, 합성 오일, 특히 푸르셀린 오일, 이소프로필 미리스테이트 및 에틸헥실 팔미테이트, 불포화 지방산, 실리콘 오일 및 플루오로 오일, 예를 들어 퍼플루오로폴리에테르가 언급될 수 있다.

발명의 조성물에 존재할 수 있는 반죽성 (pasty) 또는 고체 지방 물질은, 예를 들어, 탄소수가 8 ~ 30 인 지방산으로부터 선택되는 지방산, 예컨대 스테아르산, 라우르산, 팔미트산 및 올레산; 천연 왁스 예컨대 라놀린, 밀랍, 카르나우바 왁스 또는 칸델릴라 왁스, 파라핀 왁스, 리그나이트 왁스 또는 미세결정질 왁스, 세레신 또는 지랍, 합성 왁스 예컨대 폴리에틸렌 왁스 및 피셔-트로프슈 왁스로부터 선택되는 왁스; 실리콘 검 (디메티콘올), 반죽성 화합물, 예를 들어 중합체성 또는 비중합체성 실리콘, 올리고머성 글리세롤의 에스테르, 아라키딜 프로피오네이트 및 지방산 트리글리세리드로부터 선택되는 검, 및 그들의 유도체, 및 그들의 혼합물일 수 있다.

발명에서 사용될 수 있는 용매로서, 저급 알코올, 예를 들어 에탄올, 이소프로판올 및 프로필렌 글리콜이 언급될 수 있다.

발명의 조성물은 또한 유리하게는, 특히 Vittel 물, Vichy Basin 으로부터의 물, 및 la Roche Posay 물로부터 선택되는, 용천수 및/또는 광천수를 함유할 수 있다.

포장 물품 (conditioning article)

발명의 포장 물품은 포장될 조성물의 생약 형태에 따라 통상의 기술자에 의해 자연히 선택될 것이다.

따라서, 액체 조성물의 경우, 조성물 공급 수단을 포함하는 견고한 엔벨로프로 이루어지는 용기가 사용될 수 있다. 이들 공급 수단은, 제거가능한 뚜껑으로 차단되어 있는, 단순한 구멍, 또는 용기에 함유된 조성물의 일부를 배출하기 위한 펌프와 연합된 누름 단추일 수 있다. 액체 형태의 발명의 조성물은 또한 에어로졸 캔 유형의 용기 내에 포장될 수 있다.

반액체 또는 반죽 형태의 발명의 조성물은 유리하게는 단지 (jar), 크림의 튜브 내에, 또는 유연한 또는 변형가능한 벽이 있고 제거가능한 뚜껑으로 막을 수 있는 구멍이 있는 용기 내에 포장될 수 있고, 조성물은 벽, 또는 앞서 명시된 바와 같이 누름 버튼 및 펌프를 갖춘 병을 누름으로써 구멍을 통해 배출된다.

특정 구현예에 따르면, 발명에 따른 조성물을 수용하기에 적합한 포장 물품은 유리, 금속, 합금, 코팅된 종이 예컨대 왁스-코팅된 종이, 예를 들어, 특히 천연 보존제로서의 특성을 갖는, 밀랍으로 코팅된 종이로 만들어질 수 있다.

대안적으로, 발명에 따른 조성물은 진공 하에, 용봉한 기밀 구획, 예컨대, 예를 들어, 식품 부문에서 통상적으로 사용되는, 진공 하의 브릭-카톤 (brick-carton) 내에 저장될 수 있다.

포장 물품은 적어도 부분적으로 플라스틱 또는 기타 적합한 중합체성 물질로 만들어질 수 있다.

특정 구현예에 따르면, 발명에 따른 조성물은 "보호성 대기 하에" 포장될 수 있다. "보호성 대기 하에" 포장은 그것의 내용물의 유통기한을 개선하려는 목적으로 포장재의 내부 대기의 조성을 변화시키는 것에 있다. 이러한 기술은 호기성 생물 형태의 성장 및 산화 반응을 감속시키기 위해 산소의 수준을 감소시키는 것에 있다. 제거된 산소는 다른 기체로 대체될 수 있다.

특정 구현예에 따르면, 포장 물품은 또한 임의의 광원으로부터 조성물을 고립시키는 것을 가능하게 하는 물질을 사용하여 만들어질 수 있다.

포장 물품은 또한 적어도 부분적으로 단열재로 만들어질 수 있다. 이러한 유형의 물질의 예로서, 천, 실리콘으로 코팅된 유리 섬유로 만들어진 천, 셀룰로스 섬유, 세라믹 섬유에 기초하는 직물, 폴리스티렌, 스티로폼 및 포장용 필름이 언급될 수 있다. 차가운 겔 또는 액체가 또한 단열재로서 사용될 수 있다.

특정 구현예에 따르면, 포장 물품은 일회용이고 그것의 사용 직전에 소비자에 의해 개봉될 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, 고체 형태로 제형화된 발명의 조성물은, 예를 들어, 단지 또는 스틱용 튜브, 예를 들어 립스틱 튜브 내에 포장될 수 있다.

미용적 처리 방법

앞서 명시된 바와 같이, 본 발명은 표피 세포 분화 및/또는 증식 결함과 연관되는 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 결함이 있는 개체를 위한 미용적 방법에 관한 것이다.

발명의 미용적 처리 방법과 관련되는 개체는 자연히, 앞서 정의된 바와 같은 하나 이상의 미용적 관리 징후를 갖는, 또는 갖기 쉬운 개체이다.

발명의 방법은 앞서 정의된 바와 같은 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 결함을 치료하는 것을 가능하게 한다.

발명에 따른 방법은 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 결함의 감소 또는 심지어는 소멸, 또는 대안적으로 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 외관의 개선을 관찰하는 것에 있는 단계를 또한 포함할 수 있다.

바람직하게는, 발명에 따른 방법은 국소적으로, 경구적으로 또는 비경구적으로 실시될 수 있다.

더욱더 우선적으로는, 발명에 따른 방법은 국소적으로 또는 경구적으로 실시된다.

발명에 따른 방법은, 특히, 활성제로서, 하나 이상의 발명의 화합물을 포함하는 미용적 또는 피부과적 조성물, 더욱 특히 앞서 정의된 바와 같은 미용적 조성물의 하나 이상의 코트 (coat) 를 피부 및/또는 그것의 외피에 적용함으로써, 국소적으로 실시될 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, 발명의 방법은, 활성제로서, 하나 이상의 발명의 화합물을 포함하는 미용적 또는 피부과적 조성물의 하나 이상의 코트를, 신체의 피부, 특히 얼굴 또는 목둘레선의 피부에, 또는 두피, 입술, 머리, 속눈썹 또는 손발톱에 적용하는 단계를 포함할 수 있다.

바람직하게는, 발명의 방법은, 발명의 조성물의 하나 이상의 코트의, 피부 또는 입술, 특히 얼굴 및 목둘레선의 피부에의 국소적 적용을 포함할 수 있다.

유리하게는, 발명의 국소적 방법은, 특히 얼굴 피부에의, 예를 들어 마스크 형태의, 발명에 따른 조성물의 적용을 포함할 수 있다.

그러한 투여는 이들 조성물을 사용하기 위한 통상의 기술에 따라 실시될 수 있다. 예를 들어, 그것은 피부 또는 점막에의 크림, 겔, 세럼 또는 로션의 적용으로 이루어질 수 있다.

발명에 따른 국소적 미용적 방법은 매일 예를 들어, 1 일에 단일 투여 또는 하나의 투여를 1 일 2 회, 예를 들어 아침에 1 회 및 밤에 1 회의 속도로 실시될 수 있다.

발명에 따른 국소적 미용적 방법은 1 주 ~ 수주, 또는 심지어는 수개월의 시간에 걸쳐 실시될 수 있고, 더욱이 이 기간은 수개월 또는 심지어는 수년 동안, 처리 없는 기간 후 반복될 수 있다.

예를 들어, 발명에 따른 화합물의 국소적 투여는, 예를 들어, 1 일에 2 ~ 3 회 이상 및 일반적으로 4 주 이상, 또는 심지어는 4 ~ 15 주의 장기간에 걸쳐, 적절한 곳에서, 하나 이상의 중단 기간을 두고 반복될 수 있다.

발명의 방법은 유리하게는 피부 및/또는 그것의 외피의 관리 또는 메이크업을 위해 의도되는 발명의 조성물과 구별되는 부가적 미용적 또는 피부과적 조성물의 투여와, 조합되어, 동시에, 연속적으로 또는 시간의 흐름에 따라 별도로, 발명의 조성물을 적용하는 것을 포함할 수 있다.

임의의 부가적 미용적 또는 피부과적 조성물이, 당연히, 발명의 조성물과 그것의 조합이 발명의 조성물에 요구되는 특성에 영향을 미치지 않는다는 조건 하에, 발명에서 사용하기에 적합할 수 있다. 통상의 기술자는, 그의 지식에 기초하여, 사용하기에 적합할 수 있는 부가적 미용적 또는 피부과적 조성물에 어떻게 접근하는지를 안다.

하나의 구현예에 따르면, 이러한 부가적 조성물은 피부 및/또는 그것의 외피에 국소적으로 투여될 수 있다.

또다른 구현예에 따르면, 발명의 방법은 부가적 미용적 또는 피부과적 조성물의 상기 피부 및/또는 상기 외피에의 연속적 국소적 적용과 조합된 발명의 조성물의 피부 및/또는 그것의 외피에의 적용을 포함할 수 있다.

발명의 조성물 및 부가적 조성물은 "투-스트로크 적용 (two-stroke application)" 미용적 작용으로 하나를 다른 하나 위에 적용할 수 있다.

하나의 구현예에 따르면, 발명에 따른 방법은 발명의 조성물의 제 1 코트 또는 "베이스 코트" 로서의 피부 및/또는 그것의 외피에의 적용, 및 앞서 정의된 바와 같은 부가적 조성물의 제 2 코트 또는 "탑 코트" 로서의 적용을 포함할 수 있다.

하나의 구현예 변이형에 따르면, 제 1 코트는 부가적 조성물을 포함할 수 있고, 제 2 코트는 발명의 조성물을 포함할 수 있다.

발명의 미용적 방법은, 특히 활성제로서 하나 이상의 발명의 화합물을 포함하는 하나 이상의 미용을 위한 식품 조성물, 특히 앞서 정의된 바와 같은 미용을 위한 식품 조성물의 투여에 의해 경구적으로 실시될 수 있다.

발명에 따른 조성물은 1 일에 단일 투여물로 또는 1 일에 걸쳐 분할된 투여물들로, 예를 들어 1 일 2 ~ 3 회 투여될 수 있다.

경구 미용적 방법은 1 주 ~ 수주, 또는 심지어는 수개월의 기간에 걸쳐 실시될 수 있고, 더욱이 이러한 기간은, 수개월 또는 심지어는 수년 동안, 처리 없는 기간 후 반복될 수 있다.

예를 들어, 발명에 따른 화합물의 활성제로서의 경구 투여는, 예를 들어, 1 일 3 회의 속도로, 더욱 일반적으로는 4 주 이상, 또는 심지어는 4 ~ 15 주의 장기간에 걸쳐, 임의로 하나 이상의 중단 기간을 포함하거나 중단 기간 후에 반복하여, 실시될 수 있다.

발명에 따른 미용적 방법은 또한 비경구적으로 실시될 수 있다. 발명의 미용적 방법의 비경구적 실행은 임의의 수술적 개입을 배제하여 실시되고, 단지 심미적 목적으로 피부의 표면 처리를 실시하는 것을 목적으로 한다.

비경구적 투여는, 예를 들어, 표피내 및/또는 피내 및/또는 피하 주입에 적합한 임의의 주입 기술 또는 장치에 의해 실시될 수 있다. 그러한 투여는 메소테라피에 의해 실시될 수 있다.

대안적으로, 비경구적으로, 전신 패치를 사용하는 투여가 선호될 수 있다.

예를 들어, 발명의 화합물의 비경구적 투여는, 예를 들어, 1 달에 1 회 이상, 또는 심지어는 1 주에 1 회 이상, 더욱 일반적으로는 1 일에 1 회 이상, 예를 들어, 4 주 이상, 또는 심지어는 4 ~ 15 주일 수 있는 다소 장기간에 걸쳐, 임의로 하나 이상의 중단 기간을 포함하거나 중단 기간 후에 반복하여, 실시될 수 있다.

또다른 양상에 따르면, 본 발명은, 특히 표피 또는 점막 유형의, 다층 세포 모델, 특히 재구성된 피부의 모델의 제조 및/또는 개선을 위한, 유효량의 하나 이상의 발명의 화합물의 용도에 관한 것이다.

유리하게는, 발명의 화합물은 다층 세포 모델이 배양되고 있는 배양 배지에 첨가된다. 발명의 화합물의 존재 하에서의 세포 모델의 인큐베이션의 시기 및 지속시간은 수득될 세포 모델 및 사용된 화합물의 함수로서 통상의 기술자에 의해 자연히 적응된다.

발명의 목적을 위해, 용어 "재구성된 피부의 모델" 은 그안에서 다양한 세포 유형, 특히 예컨대 피부의 자연적 구성요소, 예를 들어 각질형성세포, 섬유아세포, 랑게르한스 세포 및 멜라닌세포가 조합되어 있는 모델을 의미하기 위해 의도된다. 섬유아세포 유형의 세포는 임의로 방사선조사될 수 있다.

그러한 모델 및 그의 제조는 통상의 기술자에게 공지되어 있다.

상세한 설명 및 하기 실시예에서, 다르게 언급되지 않으면, 백분율은 중량 백분율이고, "... 와 ... 사이" 형태로 기재된 수치 범위는 언급된 상한 및 하한을 포함한다.

본 발명의 목적을 위해, "하나" 는, 다르게 명시되지 않으면, "하나 이상" 의 의미로 이해되어야 한다.

하기 실시예는 발명의 비제한적 설명으로서 제시된다.

도면

도 1 : 초기 SASPase 농도 (0.025 ㎎/㎖) 의 배수 (0; 0.01; 0.02; 0.04; 0.06; 0.16; 0.3; 0.63; 1.25; 2.50; 5.00 및 10.00) 로 표현된 증가하는 농도의 활성 재조합 FLG2 (Hs 복합체 = 티오레독신-His-S.Tag-FLG2 _2-213 ; 흑색 막대그래프) 또는 불활성 재조합 FLG2 (AbD 복합체 = 티오레독신-His-S.Tag-FLG2 _81-212 ; 회색 막대그래프) 의 존재 하에 재조합 SASPase (28 kDa) 에 의한 형광 기질 Dabcyl-QIDRIMEK-Edans 의 효소적 가수분해의 진전을 도시한다. 효소적 반응은 아세테이트/아세트산 완충액 중에서 실시된다. 도면은 중복 실시된 실험의 평균±sem 을 도시한다.

실시예

실시예 1

FLG2 에 의한 SASPase 의 효소적 활성화

a- 물질 및 방법

티오레독신-His-S.Tag (THX-His-S-tag) 친화도 마커에, 그들의 N-말단에서, 융합된 Q5D862 (Uniprot/Swissprot ref.) 의 아미노산 서열 2-213, 활성 형태, 및 81-212, 불활성 형태에, 각각, 상응하는 2 가지 형태의 재조합 필라그린-2 (FLG2) 를 부모 플라스미드 pET32c (Novagen) 또는 pEB6 (HBGX) (FLG2_2-213-S-His-THX 및 FLG2_81-212-S-His-THX) 내에 제조했다.

이들 재조합 키메라 단백질은 이하에서 명칭 FLG2-Hs = FLG2_2-213-S-His-THX (활성 형태) 및 FLG2-AbD = FLG2_81-212-S-His-THX (불활성 형태) 로 식별된다.

서열 Q53RT3 (Uniprot/Swissprot ref.) 의 아미노산 서열 85 ~ 343 에 상응하는 28-kDa 재조합 SASPase 를 Bernard et al. (J. Invest. Dermatol., 2005, 125: 278-287) 에 기재된 바와 같이 제조했다 (SASPase_85-343).

SASPase 를 PBS 완충액에 용해시키고 최종 농도 0.025 ㎎/㎖ 로 최종 농도 0.01 mM 의 비색 기질 Dabcyl-QIDRIMEK-Edans 의 존재 하에 사용했다 (Production Jerini Peptide Ref. D17: JPT Peptide Technologies GmbH).

FLG2-Hs 및 FLG2-AbD 를 SASPase 의 최종 농도, 즉 0.025 ㎎/㎖ 의 0.01, 0.02, 0.04, 0.08, 0.16, 0.31, 0.63, 1.25, 2.5, 5 또는 10 배에 상응하는 농도로 사용한다.

SASPase 및 FLG2-Hs, 또는 FLG2-AbD 를 Dabcyl-QIDRIMEK-Edans 의 존재 하에 150 mM 의 NaCl 을 함유하는 pH 5.5 의 0.1 M 아세테이트/아세트산 완충액 중에 37℃ 에서 인큐베이팅했다.

활성화된 SASPase 에 의한 비색 기질의 가수분해는 Edans 형광색소 및 그것의 Dabcyl 탈활성제 (또는 ?처 (quencher)) 의 분리, 및 Edans 의 형광의 증가를 초래한다.

형광 신호의 측정을 λ_ex 340 ㎚/λ_em 490 ㎚ 에서 실시한다. 형광을 Spectramax M5e (Molecular Devices) 로, 37℃ 에서 1 시간 30 분 동안 매 10 분 마다 판독한다.

b- 결과

수득된 결과는 SASPase 의 효소적 활성이 증가하는 농도의 활성 FLG2-Hs 의 존재 하에 유의하게 증가하지만, 불활성 FLG2-AbD 의 존재 하에서는 거의 변화하지 않음을 보여준다 (도 1 참조).

이들 결과는 FLG2 가 SASPase 와 상호작용하고, 그것의 단백질분해 활성을 자극함을 보여준다. 그러한 활성화는 SASPase 의 농도와 동등한 FLG2 농도 이상에서 수득된다.

실시예 2

SASPase-FLG2 상호작용을 조정하는 작용제의 스크리닝

SASPase-FLG2 상호작용, 및 그로부터 초래되는 SASPase 의 단백질분해 활성의 자극을, 이러한 상호작용을 조정할 수 있는 활성 화합물의 스크리닝 방법에서 이용했다.

개발된 방법은 FLG2-SASPase 상호작용에 기초하고 균일 시간 분해 형광 (또는 HTRF) 기술을 사용한다.

그것의 활성 자리 (Q53RT3 의 D212A) 에서 돌연변이되고 그것의 C-말단에서 GST (일본주혈흡충 (Schistosoma japonicum) 으로부터의 글루타티온 S-트랜스퍼라제) 친화도 마커와 융합된 재조합 SASPase 단백질 (Q53RT3 의 아미노산 서열 85-343 을 포함함) 을 벡터 pGEX-4-T3 (GenBank U13855) (SASPase_85-343D212A-GST) 내에 제조했다. SASPase 를 불활성화시키고 FLG2 와의 안정적 상호작용을 촉진하는 D212A 돌연변이를 도입했다.

그것의 N-말단에서 티오레독신-His-S.Tag 친화도 마커에 융합된 재조합 FLG2 단백질 (Q5D862 의 아미노산 서열 2-213 을 포함함) 를 다음과 같이 제조했다 (FLG2_2-213-S-His-Thx).

수득된 플라스미드를 사용하여 적격 대장균 BL21DE3 박테리아를 형질전환시킨다. 박테리아 내의 단백질에 상응하는 플라스미드의 형질전환 후, 4 ㎖ 의 전배양물을 교반 (250 rpm) 하면서 37℃ 에서 밤새 인큐베이팅했다. 전배양물을 100 ㎖ 의 배양 배지 (LB + 암피실린) 에 첨가하고, 집합체를 0.8 이상의 600 ㎚ 에서의 광학 밀도가 수득될 때까지 교반하면서 37℃ 에서 두었다.

그 후 형질전환된 박테리아를 교반하면서 16℃ 에서 밤새 1 mM IPTG 의 존재 하에 유도한 후, 원심분리하고 초음파처리에 의해 용균시킨다. 키메라 펩티드를 적합한 수지 상의 HIS 또는 GST tag 에 대한 친화도에 의해 정제한 후, pH 8, 1×PBS 완충액에 대해 투석했다. 수득된 키메라 단백질을 그 후 Bradford 방법에 의해 검정했다.

각각, 친화도 마커 GST 또는 His-S.Tag 를 인지하고, 각각, EuK 형광 공여체 기 (유로퓸 크립테이트 λ_ex 337 ㎚/λ_em 620 ㎚) 또는 XL1665 형광 수용체 기 (λ_ex 570-630 ㎚/λ_em 665 ㎚) 를 보유하는 항체를 사용하여 펩티드-SASPase 상호작용을 모니터링한다.

그러한 항체는, 예를 들어 Cisbio International 사로부터 레퍼런스 61GSTKLB (항-GST K 항체) 또는 61HISKLB (항-6HIS K 항체) 하에 상업적으로 입수가능하다.

SASPase-FLG2 상호작용을 형광 마커 Euk 와 XL1665 사이의 형광 에너지 전달 (FRET) 에 의해 관찰했다. Euk 형광 공여체는 λ_ex 337 ㎚ 에서 여기되었고, XL1665 형광 수용체의 형광 방출은 λ_em 665 ㎚ 에서 측정되었다.

SASPase 와 FLG2 사이의 상호작용과 독립적으로 일어나는, λ_em 620 ㎚ 에서의 Euk 형광 방출을 사용하여 신호를 정규화했다. 따라서, 각각의 점에 대해, 비 λ_em 665 / λ_em 620 를 측정한다.

스크리닝 방법을 pH 7.4 의 PBS 포스페이트 완충액 중에서 Perkin-Elmer 로부터의 Janus 로봇을 사용하여 384-웰 플레이트에서 실시했다.

시험을 4 회 반복실시한다. 양성 대조군 (100% 신호) 은 재조합 단백질, DMSO 및 형광단으로 라벨링된 항체의 존재 하에 수득된다. 음성 대조군 (0% 신호 또는 배경) 은 단백질 희석 완충액 (단백질이 없음), DMSO 및 형광단으로 라벨링된 항체의 존재 하에 수득된다.

DMSO 를 최종 농도 2.5% 로 사용한다.

재조합 단백질 SASPase_85-343D212A-GST 및 FLG2_2-213-S-His-THX 를 각각의 최종 농도 50 nM 및 200 nM 로 사용했다.

시험 화합물을 최종 농도 5×10^-9 M; 1.5×10^-8 M; 4.6×10^-8 M; 1.4×10^-7 M; 4.1×10^-7 M; 1.2×10^-6 M; 1.1×10^-5 M; 3.3×10^-5 M 및 1×10^-4 M 로 사용했다.

완충액, 또는 화합물이 없는 희석 용액을 대조군으로서 사용했다.

SASPase_85-343D212A-GST 및 시험 화합물을 60 분 동안 4℃ 에서 프리인큐베이팅한 후, FLG2-His-THX 를 첨가하고, 집합체를 밤새 4℃ 에서 인큐베이팅했다.

그 후 각각의 키메라 단백질에 대한 특이적 항체를 KF (플루오르화 칼륨) 완충액 (Acros ref. 20135) 중 1/400 의 최종 희석률로 첨가했다.

혼합물을 Pherastar 판독기 (BMG) 를 사용하여 형광 (λ_ex 337 ㎚/λ_em 665 ㎚, 및 λ_em 620 ㎚ 에서 정규화) 을 판독하기 전에 4℃ 에서 밤새 인큐베이팅했다.

결과의 산출을 다음과 같이 수행한다.

양성 대조군에 대한 비 λ_em 665/ λ_em 620 의 평균을 확인한다: S.

음성 대조군에 대한 비 λ_em 665/ λ_em 620 의 평균을 확인한다: B.

시험 화합물의 농도 범위의 각각의 점에 대한 비 λ_em 665/ λ_em 620 의 평균을 확인한다: C.

시험 화합물의 농도 범위의 각각의 점에 대해, 활성 백분율 A 를 하기 식을 통해 확인한다: A = (C - B) / (S - B).

투여량-반응 곡선을 소프트웨어 GraphPad Prism^® V.5.02 로 소프트웨어 내의 지침에 따라, 변수 구배 계수와 함께 S 자형 투여량-반응 곡선의 등식을 사용하여 확립했다.

IC₅₀ (효과의 50% 를 저해하는 농도) 또는 EC₅₀ (효과의 50% 를 활성화시키는 농도) 를 수득된 곡선의 바닥과 정점지속기 사이에서, 중간 높이 농도를 취함으로써 확인한다.

A 의 감소는 SASPase 와 FLG2 사이의 상호작용을 예방 또는 불안정화시킬 수 있는 화합물의 존재에 대한 지표이다.

A 의 증가는 SASPase 와 FLG2 사이의 상호작용을 안정화 또는 촉진시킬 수 있는 화합물의 존재에 대한 지표이다.

분자 데이타뱅크 HBGXS10 (ChemDiv Discovery Chemistry Collection Public Database (Order Number: 4477-2039), ChemDiv, Inc. San Diego, USA) 의 스크리닝으로 하기 식 (II) 의, "M7" 로 언급되는, 화합물을 동정하는 것이 가능했다:

이 화합물은 SASPase-FLG2 상호작용의 저해를 초래했고 IC₅₀ 가 약 2 μM 이다.

따라서 발명의 스크리닝 프로토콜은 SASPase-FLG2 상호작용을 양성적으로 또는 음성적으로 조정할 수 있는 신규한 활성 화합물을 동정하는데 특히 유리하는 것으로 판명되었다.

신규한 화합물은 유리하게는 표피 세포 증식 및/또는 분화의 불균형, 특히 피부의 노화 및 피부 건조증으로부터 초래되는 피부 및 그것의 외피의 심미적 결함 또는 병적 장애에 관해 사용될 수 있다.

실시예 3

표피 세포의 분화 및/또는 증식에 대한 화합물 "M7" 의 효과

a- 물질 및 방법

재구성된 인간 표피 Episkin J6 (레퍼런스 09-EPIS-015) 의 모델을 37℃, 5% CO₂ 의 오븐 내에서 인서트 (insert) 하에 Episkin 분화 배지, 3.5 ㎖ 에 침지시켜 배양했고, 배지를 매 2 일 마다 교체했다.

화합물을 시험 농도로 포함하는 Episkin^® 에 의해 공급되는 분화 배양 배지 또는 대조군으로서의 완충 용액 (0.1% 최종에서 DMSO) 과 함께 표피 모델을 인큐베이팅함으로써 화합물 "M7" 을 농도 10 μM, 1 μM 및 0.5 μM 에서 시험했다.

표피 세포의 분화 및/또는 증식에 대한 화합물 "M7" 의 효과를 각질층 두께의 측정, 및 트랜스글루타미나제 I (TGI), 카스파제 14, SASPase, 코르네오데스모신, 데스모글레인 1 또는 단백질 Ki67 의 발현 및/또는 활성화의 측정에 의해 평가한다.

각질층의 두께를 슬라이스에 대한 조직학적 관찰에 의해 추정했다.

TGI, 필라그린, 카스파제 14, SASPase, 코르네오데스모신 및 데스모글레인 1 의 활성화, 발현 및 성숙을 웨스턴 블롯팅에 의해 확인했다.

Ki67 의 활성화, 발현 및 성숙을 동결된 슬라이스에 대한 면역형광에 의해 확인했다.

웨스턴 블롯팅을 위해, 가용성 단백질, TGI, 카스파제 14, 코르네오데스모신 및 SASPase 를 1 ㎖ 의 "선천 +" 완충액 (TBS, 1M NaCl, 0.1% Tween 20) 중에서 수동 포터 (manual potter) 로 2 개의 Episkin^® 나셀로부터 추출했다. 추출물을 10 분 동안 4℃ 에서 14 000 rpm 에서 원심분리한다. 수득된 상청액을 0.45　㎛ Millipore 필터 (millex) 를 통해 여과한 후, 단백질을 BCA 방법 (Pierce) 에 의해 정량화한다. 단백질 농도를 625 ㎍/㎖ 최종으로 평형시킨다.

추출물을 10-20% Criterion 겔 (ref.: 345-0044 Bio-Rad) 위에 공급사의 프로토콜에 따라 침착시킨 후, 반-건식 방법을 통해 PVDF 막 위로 전달한다.

웨스턴 블롯팅 면역화학적 탐지를 표적에 특이적인 1차 항체 및 HRP 에 커플링된 2차 항체로 수행되는 표준 프로토콜에 따라 실시한다. 레벨레이션 (Revelation) 을 키트 ECL; ECL 플러스; ECL 어드밴스드 (Amersham) 로 필요한 감도에 따라 그리고 공급사의 프로토콜에 따라 실시한다. 사용된 광자 영상화 장비는 FluorS Multilmager (Bio-Rad) 이다.

TGI 의 경우, 1차 항체: Covalab pab 0061, 1/100 에서, 토끼에서 생산됨; 2차 항체: HRP-커플링된 힝-토끼 항체, 1/4000 에서: Bio-rad 170-6515

카스파제 14 의 경우, 1차 항체: Santa Cruz sc-5628, 1/500 에서, 토끼에서 생산됨; 2차 항체: HRP-커플링된 힝-토끼 항체, 1/400 에서: Bio-rad 170-6515

코르네오데스모신의 경우, 1차 항체: Abnova 1041-M01, 1/5000 에서, 마우스에서 생산됨; 2차 항체: HRP-커플링된 항-마우스 항체, 1/4000 에서: Bio-rad 170-6516

SASPase 의 경우, 1차 항체: Covalab 7H9a105, 1/2000 에서, 마우스에서 생산됨; 2차 항체: HRP-커플링된 항-마우스 항체, 1/4000 에서: Bio-rad 170-6516

필라그린 및 데스모글레인 1 의 웨스턴 블롯팅을 위해, 이들 단백질을 "가용성" 단백질의 추출 동안 수득된 펠렛으로부터 추출한다. 펠렛을 200 ㎕ 의 전체 Laemmli 완충액 (0.0625 mM Tris; 2% SDS; 200 mM DTT; 10% 글리세롤) 중에서 전기 포터로 분쇄한 후, 10 분 동안 90℃ 에서 가열하고, 마지막으로 실온에서 14 000 rpm 에서 10 분 동안 원심분리한다.

수득된 상청액을 Bradford 방법 (세포골격) 을 통해 단백질에 대해 검정한다. 총 단백질 농도를 1 ㎎/㎖ 최종으로 평형시킨다. 이전 것과 동일한 웨스턴 블롯팅 프로토콜을 적용한다.

필라그린의 경우, 1차 항체: Abcam ab24584, 1/1000 에서, 토끼에서 생산됨; 2차 항체: HRP-커플링된 힝-토끼 항체, 1/4000 에서: Bio-rad 170-6515

데스모글레인 1 의 경우, 1차 항체: Progen 61002, 1/100 에서 , 마우스에서 생산됨; 2차 항체: HRP-커플링된 항-마우스 항체, 1/4000 에서: Bio-rad 170-6516

동결된 슬라이스에 대한 면역형광 라벨링을 표준 프로토콜을 사용하여 1차 및 2차 항체의 세정 및 인큐베이션 단계 동안 PBS 완충액; 0.2% BSA 로, 그리고 비특이적 자리 차단 단계 동안 PBS 완충액; 5% BSA 로 실시한다.

Ki67 의 탐지를 위해, 1차 항체: Novocastra mm1, 1/20 에서, 마우스에서 생산됨; 2차 항체: AlexaFLuor A488-커플링된 항-마우스 항체, 1/1000 에서 (Molecular Probes A11017). 시각화 및 영상 캡쳐 장비는 Leica^® 광학 현미경이다.

b- 결과

화합물 "M7" 의 적용은 각질층의 비후화를 초래했으며, 이는 시험된 최저 농도 이상에서, 광학 현미경에 의해 조직학적 슬라이스에서 관찰가능했다.

TGI, 카스파제 14, SASPase, 코르네오데스모신 및 데스모글레인의 발현 및 활성화의 증가가 "M7" 의 존재 하에 배양된 Episkin 표피에서 관찰되었다.

이들 단백질의 발현은 표피 내의 세포의 분화와 조합된다.

단백질 Ki67 의 활성화 및 발현의 감소가 또한 관찰되었다. 이 단백질은 표피 세포의 증식의 중단과 연관된다.

각질층의 비후화 및 단백질 트랜스글루타미나제 I, 카스파제 14, SASPase, 코르네오데스모신 및 데스모글레인의 발현 및 활성화의 증가는 표피의 후기 분화의 특징이다.

따라서 화합물 "M7" 은 표피 세포의 증식 및 분화를 조정하는 특성을 갖는 것으로 판명되었다.

따라서 그러한 화합물은 표피 세포 분화 및/또는 증식의 불균형을 수반하는 피부 및/또는 그것의 외피의 병적 장애 또는 심미적 결함을 예방 또는 치료하는데 특히 유리한 것으로 판명되었다.

Claims (32)

1. 표피 세포 분화 및/또는 증식의 불균형과 연관되는 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 결함의 치료 및/또는 예방용 활성제로서의, 제 1 및 제 2 파트너 단백질, 상기 단백질의 상동체, 돌연변이체 또는 조각 사이의 상호작용을 조정할 수 있는 하나 이상의 화합물의 미용적 용도로서, 상기 제 1 및 제 2 단백질은 SASPase 및 필라그린-2, 또는 FLG2 인 용도.
2. 제 1 항에 있어서, 심미적 결함이 피부 노화의 징후, 표피 장벽 기능의 장애, 피부 건조증의 징후, 피부 낙설 장애, 및 반흔형성 및/또는 재-상피화 결함으로부터 선택되는 용도.
3. 제 1 항에 있어서, 장애가 과도발한 및/또는 체취 문제로부터 선택되는 용도.
4. 피부 스크러빙 또는 박피제 처리 후 재-상피화 촉진용 활성제로서의, 제 1 및 제 2 파트너 단백질, 상기 단백질의 상동체, 돌연변이체 또는 조각 사이의 상호작용을 조정할 수 있는 하나 이상의 화합물의 미용적 용도로서, 상기 제 1 및 제 2 단백질은 SASPase 및 필라그린-2, 또는 FLG2 인 용도.
5. 모발 손실 예방 및/또는 치료 및/또는 모발 재성장 촉진용, 또는 체모 재성장 예방용 활성제로서의, 제 1 및 제 2 파트너 단백질, 상기 단백질의 상동체, 돌연변이체 또는 조각 사이의 상호작용을 조정할 수 있는 하나 이상의 화합물의 미용적 용도로서, 상기 제 1 및 제 2 단백질은 SASPase 및 필라그린-2, 또는 FLG2 인 용도.
6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 하기 일반식 (Ia) 또는 (Ib) 로 표시되는 화합물 및 그의 생리적으로 수용가능한 염인 용도:
   

   

   
   [식 중,
   - R¹ 은 H, 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₄ 알킬, 또는 -C(O)R⁸ {식 중, R⁸ 은 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₄ 알킬을 나타냄} 을 나타내고;
   - R² 은 =O, -OR⁹ 또는 -OC(O)R⁹ {식 중, R⁹ 은 H 또는 포화 C₁-C₂ 알킬을 나타냄} 을 나타내고;
   - R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷ 은, 서로 독립적으로, H; -NO₂; -OH; 불소; -CF₃; 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₄ 알킬; 페닐; -OC(O)-CH(Ph)₂; -O-Ph-X {식 중, X 는 H, -OH, -NO₂, 불소, 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₄ 알킬 또는 알콕시를 나타냄}; -O-S(O₂)-Ph-Z {식 중, Z 는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₄ 알킬을 나타냄}; -R⁸OH; -OR⁹; -OC(O)R⁹ {식 중, R⁸ 및 R⁹ 는 앞서 정의된 바와 같음}; -R¹⁰Ph {식 중, R¹⁰ 은 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₄ 알킬렌임}; 또는 -OC(O)-Y_n-Ar₁-(X)_m {식 중,
   - n 은 0 또는 1 이고, m 은 0 ~ 4 의 정수이고, 단 n 및 m 이 동시에 0 은 아니고, Y 는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₄ 알킬렌을 나타내고, X 는 앞서 정의된 바와 같고, Ar₁ 은
   

   

   
   (식 중, * 는 Y 와의 결합이고, @ 는 X 와의 결합임) 임} 을 나타냄].
7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 식 중, R¹ 은 H, 메틸, 에틸 또는 프로필, 또는 -C(O)R⁸ {식 중, R⁸ 은 메틸, 에틸 또는 프로필을 나타냄} 을 나타내는 용도.
8. 제 6 항 또는 제 7 항에 있어서, 식 중, R² 은 =O 또는 -OR⁹ {식 중, R⁹ 는 제 6 항에서 정의된 바와 같음} 을 나타내고, 바람직하게는 =O 을 나타내는 용도.
9. 제 6 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 식 중, R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷ 은, 서로 독립적으로, H; -OH; 불소; 메틸 또는 에틸; 페닐; -OC(O)-CH(Ph)₂; -O-Ph-X {식 중, X 는 H, -OH, 불소, 메틸, 에틸, 메톡시 또는 에톡시를 나타냄}; -O-S(O₂)-Ph-Z {식 중, Z 는 메틸 또는 에틸을 나타냄}; -R⁸OH; -OR⁹; -OC(O)R⁹ {식 중, R⁸ 은 메틸 또는 에틸을 나타내고, R⁹ 는 H 또는 메틸을 나타냄}; -R¹⁰Ph {식 중, R¹⁰ 은 메틸렌 또는 에틸렌임}; 또는 -OC(O)-Y_n-Ar₁-(X)_m {식 중, n, Y, X 및 Ar₁ 은 제 6 항에서 정의된 바와 같음} 을 나타내는 용도.
10. 제 6 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 식 중, R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷ 중 하나 이하가 -OC(O)-Y_n-Ar₁-X_m {식 중, Y, n, Ar₁, X 및 m 은 제 6 항에서 정의된 바와 같음} 을 나타내고, 특히 R⁴ 또는 R⁶ 은 -OC(O)-Y_n-Ar₁-X_m {식 중, Y, n, Ar₁, X 및 m 은 제 6 항에서 정의된 바와 같음} 을 나타내는 용도.
11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, n 은 0 과 동등하고, m 은 1 과 동등하고, X 는 메틸 또는 메톡시, 바람직하게는 메틸이고, Ar₁ 은:
    

    

    
    (식 중 * 는 Y 와의 결합이고, @ 는 X 와의 결합임) 인 용도.
12. 제 6 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 식 중, R³, R⁵, R⁷ 및 R⁴ 또는 R⁶ 은, 서로 독립적으로, H; -NO₂; -OH; 불소; 메틸 또는 에틸; 페닐; -R⁸OH; -OR⁹; -OC(O)R⁹ {식 중, R⁸ 은 메틸 또는 에틸을 나타내고, R⁹ 는 H 또는 메틸을 나타냄}; -R¹⁰Ph {식 중, R¹⁰ 은 메틸렌 또는 에틸렌을 나타냄} 을 나타내는 용도.
13. 제 6 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 하기 식 (II) 로 표시되는 용도:
    

    

    .
14. 제 1 및 제 2 단백질 사이의 상호작용을 조정함으로써 표피 세포의 증식 및/또는 분화를 조절할 수 있는 화합물을 스크리닝하기 위한, 서로 상호작용하는 제 1 및 제 2 파트너 단백질을 포함하는 하나 이상의 단백질 복합체의 시험관내 또는 생체외 용도로서, 상기 제 1 및 제 2 단백질은 SASPase 및 필라그린-2, 또는 FLG2, 상기 단백질의 상동체, 돌연변이체 또는 조각인 용도.
15. 제 1 및 제 2 파트너 단백질, 상기 단백질의 상동체, 돌연변이체 또는 조각 사이의 상호작용을 조정함으로써 표피 세포의 증식 및/또는 분화를 조절할 수 있는 화합물의 시험관내 또는 생체외 스크리닝 방법으로서, 상기 제 1 및 제 2 단백질은 SASPase 및 필라그린-2, 또는 FLG2 이고, 적어도 하기로 이루어지는 단계를 포함하는 방법:
    a) 상기 제 1 및 제 2 단백질을 제 1 및 제 2 단백질 사이의 상호작용에 적합한 조건 하에 두는 단계,
    b) 단계 a) 전에 또는 후에, 제 1 및 제 2 단백질 중 하나 이상을 종과 조합하는 단계,
    상기 단백질은 상기 종과 함께 흥분성 파장에의 노출 후에 신호를 방출할 수 있는 집합체를 형성하고, 단계 a) 및 b) 의 실행은 상기 제 1 및 제 2 파트너 단백질의 상호작용에 의해 복합체의 생성을 초래함,
    c) 상기 복합체의 특징인 제 1 신호 S1 을 수득하기 위해 상기 복합체를 상기 흥분성 파장에 적용하는 단계,
    d) 상기 신호 S1 을 정량적으로 또는 정성적으로 확인하는 단계,
    e) 복합체를 상기 화합물과 상기 복합체 사이의 상호작용에 적합한 조건 하에 스크리닝될 화합물을 함유하는 것으로 추정되는 매질과 접촉되게 두는 단계,
    f) 제 2 신호 S2 를 수득하기 위해 단계 e) 에서 수득된 매질을 상기 흥분성 파장에 적용하는 단계,
    g) 상기 신호 S2 를 정량적으로 또는 정성적으로 확인하는 단계, 및
    h) 스크리닝된 화합물에 의한 제 1 및 제 2 단백질 사이의 상호작용의 가능한 조정과 관련된 결론을 도출하기 위해 제 1 및 제 2 신호 S1 및 S2 를 비교하는 단계.
16. 제 15 항에 있어서, 상기 단백질이 상기 종과 화학적 커플링, 분자 생물학 또는 특이적 고친화도 상호작용(들)에 의해 조합되는 방법.
17. 제 15 항 또는 제 16 항에 있어서, 상기 종이 표면 플라스몬 공명에 적합한 지지체, 형광 마커, 항체 또는 1차 및 2차 항체의 조합으로부터 선택되고, 상기 항체 또는 상기 2차 항체는 형광 마커를 보유하는 방법.
18. 제 15 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 종이 항체 또는 1차 및 2차 항체의 조합인 방법.
19. 제 17 항 또는 제 18 항에 있어서, 상기 항체(들)이 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, "이중체 (diabody)", scFv 항체, F(ab')² 항체, Fab' 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 및 재조합 항체로부터 선택되는 방법.
20. 제 16 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 제 1 및 제 2 단백질 중 하나 이상이 항체에 의해 인지되는 친화도 마커를 보유하고, 바람직하게는 상기 마커는 마커 Myc, FLAF, His, His-tag, GST (글루타티온 S-트랜스퍼라제), THX (티오레독신), MBP (말토스-결합 단백질), THX-His-tag 또는 THX-His-S-tag 로부터 선택되는 방법.
21. 제 16 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서, 제 1 및 제 2 단백질은 각각 제 1 및 제 2 종과 조합되고, 상기 종은 각각 형광 기 A 및 형광 기 B 를 포함하고, 상기 기 A 및 B 는 그것의 형광 에너지가 형광 공명에 의한 에너지 전달을 수행하기에 적합한 수용체-공여체 쌍을 규정하는 스크리닝 방법.
22. 제 21 항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 종은 형광 마커를 보유하는 항체이고, 상기 제 1 및 제 2 단백질에 의해 각각 보유되는 제 1 및 제 2 친화도 마커 각각에의 결합에 적합한 스크리닝 방법.
23. 제 21 항 또는 제 22 항에 있어서, 상기 신호 S1 이 형광 에너지 공여체의 흥분성 파장에서의 조사에 의해 수득된 형광 신호인 방법.
24. 제 21 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 신호 S2 가 형광 에너지 공여체의 흥분성 파장에서의 조사에 의해 수득된 형광 신호인 방법.
25. 제 15 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서 상기 스크리닝된 화합물이 상기 제 1 및 제 2 단백질 사이의 상호작용의 작용제 또는 대항제인 방법.
26. 제 15 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스크리닝된 화합물이 표피 세포 분화 및/또는 증식 결함과 연관되는 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 장애 또는 병적 장애를 치료 및/또는 예방할 수 있는 방법.
27. 표피 세포 분화 및/또는 증식의 불균형과 연관되는 피부 및/또는 그것의 외피의 병적 장애를 예방 및/또는 치료하기 위한, 생리적으로 수용가능한 매질 중에, 유효량 이상의 제 1 항 및 제 6 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에서 정의된 하나 이상의 화합물을 포함하는, 제약적 또는 피부과적 조성물.
28. 제 27 항에 있어서, 장애가 암, 건선, 백반증, 장미증 및 아토피성 피부염으로부터 선택되는 조성물.
29. 활성제로서, 생리적으로 수용가능한 매질 중에, 유효량 이상의 제 1 항 및 제 6 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에서 정의된 하나 이상의 화합물, 및 미용적 또는 피부과적 활성제, 보존제, 친수성 또는 친유성 겔화제, 비이온성, 음이온성 또는 양이온성 계면활성제, 항산화제, 염, 향료, 충전제, 냄새 흡수제, 염료, 필름-형성 중합체, 반결정질 중합체, 검 및 휘발성 또는 비휘발성 오일, 및 그들의 혼합물로부터 선택되는 하나 이상의 미용적으로 또는 피부과적으로 수용가능한 성분을 포함하는 미용적 조성물.
30. 제 1 항 및 제 6 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에서 정의된 하나 이상의 화합물을 포함하는 하나 이상의 미용적, 제약적 또는 피부과적 조성물을 함유하는, 미용적, 제약적 또는 피부과적 조성물을 포장하기 위한 물품.
31. 개체에게 제 1 항 및 제 6 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에서 정의된 하나 이상의 화합물을 투여하는 하나 이상의 단계를 포함하는, 개체에서 표피 세포 분화 및/또는 증식의 불균형과 연관되는 피부 및/또는 그것의 외피의 심미적 결함의 예방 및/또는 치료를 위한 미용적 방법.
32. 서로 상호작용하는 제 1 및 제 2 파트너 단백질을 포함하는 단백질 복합체로서, 상기 제 1 및 제 2 단백질은 SASPase 및 필라그린-2, 또는 FLG2, 상기 단백질의 상동체, 돌연변이체 또는 조각인 단백질 복합체.

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