CN103338744A - SASPase-FLG2复合物、及其调节剂和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及适于调节第一伙伴蛋白和第二伙伴蛋白之间或者所述蛋白的同源物、突变体或片段之间的相互作用的化合物，所述第一蛋白和第二蛋白分别为天冬氨酸蛋白酶SASPase和丝聚合蛋白-2或FLG2，所述化合物作为用于治疗和/或预防与表皮细胞的分化和/或增殖的不平衡相关联的皮肤和/或其覆盖物的审美缺陷的活性剂。

Description

SASPase-FLG2复合物、及其调节剂和用途
技术领域
本发明涉及一种对于皮肤及其覆盖物有用的新型美容靶点或治疗靶点，并且还涉及其用于美容、治疗或皮肤病学护理的目的的用途。
更精确地，本发明涉及表皮细胞分化和/或增殖中所涉及的新型蛋白质复合物、其作为用于筛选新型美容或治疗活性剂的工具的用途、所识别的新型活性剂以及所述新型活性剂用于预防和/或治疗皮肤和/或其覆盖物的审美缺陷或病理失调的用途。
背景技术
术语“皮肤”指身体的全部皮肤，包括头皮和粘膜。
术语“皮肤覆盖物”指体毛、睫毛、头发和指甲。
皮肤或表皮通常被划分成构成表皮的生发层的角化细胞基底层、由定位在该生发层上的数层多边形细胞构成的棘层、由包含不同的细胞质内含物和透明角质颗粒的扁平细胞构成的一到三个颗粒层、以及最后称为角质层或者角质层（其由在角化细胞分化的末期的角化细胞（称为角质细胞）构成）的上层组合。
角质细胞为角质化包膜围绕的、主要由含有细胞角蛋白的纤维材料构成的无核细胞。新的角化细胞进行恒定形成以补偿由称为脱皮的机制引起的角质层的表皮细胞的持续损失。引起角质层形成和角质层去除的整个过程服从于数个激素因素或细胞因素控制的精细调控平衡。这些因素中的一个因素出现不平衡，如果不迅速进行校正，最终反映为基底层细胞的产生和脱皮速率之间的不平衡。
皮肤或其覆盖物的许多审美缺陷或病理失调可与表皮的内稳态缺陷相关，尤其与细胞增殖和/或分化缺陷相关。
因此，当表皮的基底层的细胞增殖和/或分化相对于脱皮的速率加快时，或者当脱皮的速率减慢时，角质层具有变厚的趋势。在该不平衡轻微表现的情况下，其可以以皮肤或其覆盖物的各种审美缺陷形式出现，例如皮肤老化迹象、皮肤屏障功能缺陷、皮肤干燥迹象或皮肤的皮脂分泌过多迹象。另一方面，该不平衡的加重表现可以以各种病例失调的形式出现，例如角化过度、干燥病、鱼鳞癣,银屑病,某些良性或恶性肿瘤斑、或反应性角化过度。
反过来，相对于脱皮，基底层的细胞增殖和/或分化的减慢、或者脱皮的加快，可表现为表皮的变薄，更具体地角质层变薄。该不平衡的轻微表现可表示为皮肤覆盖的过度易脆、或者甚至表示为皮肤或其覆盖物的各种审美缺陷，例如瘢痕形成缺陷或者表皮细胞再生缺陷，尤其在皮肤的擦洗或去角质处理后。该不平衡的恶化表现可以以各种病理失调形式出现，例如免疫源反应，通常由于皮肤接触一种或多种外部试剂引起的病理失调。
基于表皮细胞的增殖和分化之间的平衡的调节的机制的许多方面仍有待于确定。
因此，角质层形成所涉及的机制的细胞学水平和分子水平的识别和测定会提供对于皮肤和/或其覆盖物的美容或治疗护理有用的新的靶点。
因此，仍需要角质层形成、尤其表皮细胞的增殖和/或分化方面所涉及的新的分子靶点。
还需要基于表皮细胞的增殖和/或分化的代谢途径和/或信号转导途径所涉及的新型美容和/或治疗靶点。
还需要用于筛选能够调节表皮细胞的增殖和/或分化的活性化合物的新型工具。
还需要能够改变、校正、恢复和/或增强表皮的生理功能的新型活性化合物。
还需要能够对于皮肤或其覆盖物施加美容或治疗护理效果的新型活性化合物。
还需要能够预防和/或治疗由表皮细胞增殖和/或分化缺陷产生的皮肤或其覆盖物的审美缺陷或病理失调的新型活性化合物。
发明内容
本发明的目的是满足这些需求。
因此，本发明涉及能够调节第一伙伴蛋白和第二伙伴蛋白之间、所述蛋白的同源物、突变体或片段之间的相互作用的至少一种化合物的美容用途，所述第一蛋白和第二蛋白为SASPase和丝聚合蛋白-2或FLG2，所述化合物的美容用途为作为活性剂用于治疗和/或预防表皮细胞的分化和/或增殖的不平衡所关联的皮肤和/或其覆盖物的审美缺陷。
在下文中，除非另有说明，术语“蛋白质”和“蛋白质序列”等效地或无差别地用于表示蛋白质、其同源物、其突变体或其片段。
出于本发明的目的，术语“调节”指促进、降低或稳定蛋白质之间的相互作用。
出乎意料地，发明人首先证明了表皮中的天冬氨酸蛋白酶SASPase和蛋白质丝聚合蛋白-2或FLG2之间的相互作用的表现，更具体地通过与该蛋白质的S100部分对应的N-末端部分相互作用；其次，证明了该相互作用促进SASPase的蛋白水解活性。
法国专利FR2842209教导了蛋白质SASPase在表皮中强烈表达，且涉及在皮肤脱皮过程中；且描述了该蛋白质作为治疗皮肤失调中的靶点。然而，所述文献并没有提到SASPase-FLG2相互作用或者该蛋白质复合物涉及调节表皮细胞分化或增值。
另外，本发明人已经示出可通过各种活性化合物调节SASPase-FLG2相互作用，并且该调节可用于预防和/或治疗在表皮细胞分化和/或增殖的不平衡之后发生的皮肤和/或其覆盖物的审美缺陷或病理失调。
出于本发明的目的，术语“调节表皮细胞增殖和/或分化”指重建这些两个过程之间的生理平衡。
出于本发明的目的，术语“预防”指降低在本发明中给出的现象（即，与表皮细胞分化和/或增殖的不平衡相关联的皮肤和/或其覆盖物的审美缺陷或病理失调）的出现的风险或可能性。
根据另一方面，本发明涉及如先前所限定的至少一种化合物作为用于在皮肤的擦洗或去角质处理后促进表皮细胞再生的活性剂的美容用途。
根据又一方面，本发明涉及如上所限定的至少一种化合物作为用于预防和/或治疗毛发损失和/或促进毛发生长、或用于预防体毛再生的活性剂的美容用途。
根据另一实施方式，本发明涉及包括彼此相互作用的第一伙伴蛋白（partnerprotein）和第二伙伴蛋白的至少一种蛋白质复合物的用途，所述第一蛋白为SASPase和第二蛋白为丝聚合蛋白-2或FLG2、所述蛋白的同源物、突变体或片段，所述用途为用于筛分能够通过调节所述第一蛋白和第二蛋白之间的相互作用来调节表皮的内稳态、尤其表皮细胞的增殖和/或分化的化合物。
出于本发明的目的，术语“调节表皮细胞增殖和/或分化”指重建这两个过程之间的生理平衡。
根据另一实施方式，本发明涉及一种用于筛选能够通过调节第一伙伴蛋白所述第一伙伴蛋白的同源物、突变体或片段和第二伙伴蛋白、所述第二伙伴蛋白的同源物、突变体或片段之间的相互作用来调节表皮的内稳态、尤其表皮细胞的增殖和/或分化的化合物的方法，所述第一蛋白为SASPase和第二蛋白为丝聚合蛋白-2或FLG2，所述方法至少包括以下描述的步骤。
优选地，本发明的方法或使用可在体外、间接体内或体内进行，更优选地体外或间接体内进行。
根据另一实施方式，本发明涉及药物组合物或皮肤病用组合物，其包括在生理上可接受的介质中的至少有效量的至少一种本发明的化合物，该组合物用于预防和/或治疗与表皮细胞分化和/或增殖的不平衡相关联的皮肤和/或其覆盖物的病理失调。
根据另一实施方式，本发明涉及一种美容组合物，其包括在生理上可接受的介质中的至少有效量的至少一种本发明的化合物（作为活性剂）和至少一种美容上或皮肤病学上可接受的成分，所述成分选自美容或皮肤病学上的活性剂、防腐剂、亲水胶凝剂或亲脂胶凝剂、非离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂或阳离子型表面活性剂、抗氧化剂、盐、香料、填料、气味吸收剂、染料、成膜聚合物、半结晶聚合物、树胶和挥发性油或非挥发性油、及其混合物。
出于本发明的目的，术语“生理上可接受的介质”指适合施用至个体、尤其适合施用至该个体的皮肤和/或其覆盖物上或皮肤和/或其覆盖物内的介质。
出于本发明的目的，术语“有效量”的本发明的化合物指该化合物的量对于关于皮肤和/或其覆盖物的审美缺陷或病理失调产生预防和/或治疗效果是足够且必要的。本领域技术人员可通过任何已知的方法来确定这样的量，例如通过体外试验、间接体内试验或体内试验，例如临床试验。
根据又一方面，本发明涉及一种用于盛放美容的、药物的或皮肤病用的组合物的物件，所述组合物包含至少一种包含至少一种本发明的化合物的美容的、药物的或皮肤病用的组合物。
根据另一实施方式，本发明涉及一种用于预防和/或治疗个体中与表皮细胞分化和/或增殖的不平衡相关联的皮肤和/或其覆盖物的审美缺陷的美容方法，该方法包括至少一个将本发明的至少一种化合物施用至所述个体的步骤。
根据另一实施方式，本发明涉及包括彼此相互作用的第一伙伴蛋白和第二伙伴蛋白的蛋白质复合物，所述第一蛋白为SASPase和第二蛋白为丝聚合蛋白-2或FLG2、所述蛋白的同源物、突变体、或片段。
本发明有利地提供一种可用在关于皮肤和/或其覆盖物、尤其关于皮肤的美容或治疗中的新型靶点。
还有利地，本发明提供了一种对于用在关于皮肤和/或其覆盖物的美容或治疗中的新型活性剂的检测特别有效且灵敏的新型筛选工具。
本发明有利地提供了可用于美容或治疗中的新型活性剂，其能够调节表皮的内稳态，尤其调节表皮细胞增殖和/或分化，且特别具有良好的功效和良好的耐受性。
本发明有利地提供了新型美容组合物或治疗组合物，该组合物对于表皮细胞增殖和/或分化的不平衡所关联的皮肤和/或其覆盖物的审美缺陷或病理失调特别有效。
最后，本发明有利地提供了一种新型的美容治疗或预防方法，该方法对于表皮细胞增殖和/或分化的不平衡相关联的皮肤和/或其覆盖物的审美缺陷特别有效。
SASPase-FLG2复合物
如先前所示，本发明涉及一种由两种蛋白SASPase和FLG2之间的相互作用产生的蛋白质复合物，并且涉及该复合物作为表皮细胞分化和/或增殖的生物标记和靶点的用途。
本发明的复合物可通过SASPase的第一蛋白质序列的全部或部分与FLG2的第二蛋白质序列的全部或部分或该第二序列的二聚体的相互作用而形成。
SASPase或皮肤天冬氨酸蛋白酶，是“天冬氨酸”蛋白酶家族中的一种蛋白质，其包括343个氨基酸（Uniprot/Swissprot：Q53RT3）且分子量约为37kDa。
SASPase的简短形式包括259个氨基酸，分子量约为28kDa，且由从序列Q53RT3（Uniprot/Swissprot编号）的位置85延伸到位置343的序列表示。优选地，可用于本发明的SASPase的蛋白质序列由从序列Q53RT3的位置85延伸到位置343的序列表示。
丝聚合蛋白-2或FLG2，为包含2391个氨基酸的蛋白质，其分子量约为248kDa（Uniprot/Swissprot编号：Q5D862）。
FLG2为一种“融合类型”的S100蛋白，其结构与丝聚合蛋白的结构类似，在表皮中表达，且表示为能够涉及表皮细胞分化、表皮屏障的形成、皮肤抵抗环境侵蚀的保护、给予表皮强度的角蛋白中间丝的网的组织、以及还涉及皮肤湿润（Wu等,PLoS One,2009;4(4):e5227）。
根据一个实施方式，根据本发明使用的FLG2可由从序列Q5D862的位置2延伸到位置213、更优选地从位置2延伸到位置95的氨基酸序列或者这些序列的二聚体表示。
本发明的使用还延伸至适合用在本发明中的核酸序列，该核酸序列编码所述蛋白质、所述蛋白质的同源物、突变体或片段。
蛋白质序列或核酸序列的“同源物”这一词语表示与所述序列具有至少85%、尤其至少90%、尤其至少98%、且更特定地至少99%的序列同一性且具有相同性质的生物活性。
序列同源性可通过本领域人员在本领域中通常使用的任一技术进行识别。例如，序列同源性可通过使用地址http://blast.ncbi.nlm.nih.gov在NCBI网站可买到的配置有默认参数的BLAST计算机界面来确定。
蛋白质序列的同源物可与该蛋白质序列不同，例如不同之处在于氨基酸的一个或多个缺失和/或插入和/或一个或多个替换。类似地，核酸序列的同源物可与该核酸序列不同，例如，不同之处在于碱基或密码子的一个或多个缺失和/或插入和/或一个或多个替换。这些修饰可进行组合。
根据一个实施方式变型，蛋白质序列或核酸序列的同源物可包括氨基酸或密码子的一个或多个保守替换。
在蛋白质序列中，保守替换为一个氨基酸被另一个氨基酸取代，所述另一个氨基酸具有与原始氨基酸的物理化学性质基本上类似或者充分接近的物理化学性质，且该蛋白质的性质和功能不受影响或者基本上不受影响。类似地，在核酸序列中，保守替换为一个密码子被另一密码子取代，该另一密码子编码同一氨基酸、或与原始氨基酸的物理化学性质基本上类似或充分接近的氨基酸，其中被编码的核酸序列的性质和功能不受影响或者基本上不受影响。
上文所述的蛋白质序列或核酸序列的修饰通常可被称为“突变”。因此，本发明的同源物还涉及本发明的氨基酸序列或核酸序列的突变体和变型。
作为在本发明中可考虑的突变的示例，可提到利用具有类似的亲水性指数的氨基酸残基来取代一个或多个氨基酸残基，然而基本上不影响蛋白质的生物学性质，尤其不影响该蛋白质与其伙伴蛋白相互作用的性质。亲水性指数为根据氨基酸的疏水性及其电荷分配给氨基酸的指数（Kyte和Doolittle(1982),J.Mol.Biol.,157:105）。
本发明的蛋白质可包括一种或多种转译后的变型。
术语“转译后的变型”指包括在细胞中肽或蛋白质合成结束时易于经受的全部变型，例如一个或多个磷酸化、一个或多个糖基化、一个或多个瓜氨酸化、一个或多个脂化（例如法尼基化或棕榈酰化）、结构重排（例如二硫键形成和/或蛋白质序列内的断裂）。
可相对于蛋白质的完整序列或该蛋白质的一个或多个特征序列来评估序列同源性。
蛋白质的“特征序列”这一术语指决定蛋白质的同一性且涉及蛋白质的生物活性的氨基酸序列，所述生物活性例如为维持蛋白质的三维结构、维持所述蛋白质与该蛋白质通常所相互作用的细胞元素（诸如其它蛋白质、核酸序列、糖或脂）的亲和力、维持蛋白质的酶活性，或者维持相对于其它酶该蛋白质作为基底的活性。
更具体地，适合用在本发明中的SASPase的特征序列或FLG2的特征序列为这些蛋白质彼此相互作用所涉及的序列。
根据一个实施方式，更具体地考虑的特征序列可为SASPase蛋白和FLG2蛋白的N-末端序列。
根据具体的实施方式变型，适合用在本发明中的SASPase的特征序列可包括在SASPase的N-末端部分中（简短形式），且更具体地，可为从Q53RT3（Uniprot/Swissprot编号）序列的位置97延伸至位置173的序列。
根据另一实施方式变型，适合用在本发明中的FLG2的特征序列可包括在FLG2的N-末端部分中，且更具体地，可为从Q5D862（Uniprot/Swissprot编号）序列的位置2延伸至位置95的序列。
优选地，SASPase的特征序列和/或FLG2的特征序列可有利地用在本发明中。
本发明的蛋白质的“相同性质的生物活性”这一术语指该蛋白质与本发明的第二伙伴蛋白相互作用的能力。核酸序列的“相同性质的生物活性”这一术语尤其指该核酸序列被转录且被转译成氨基酸序列的能力。
关于SASPase，相同性质的生物活性也可指其蛋白水解活性，尤其对于角膜锁链蛋白而言。
本发明还涉及使用SASPase突变体，该SASPase突变体可包括在负责其水解活性的活性位点中的一个或多个突变。尤其，本发明中所考虑的突变可导致SASPase的蛋白水解活性的下降或去除。在该实施方式中，关于SASPase的相同性质的生物活性则可指SASPase的无活性突变体与FLG2、其突变体、同源物或片段相互作用的性质。
作为适合用在本发明中的突变重组SASPase蛋白的示例，可提到包括突变的蛋白，该突变由以下组成：利用丙氨酸替换序列Q53RT3（Uniprot/Swissprot编号）的位置212处的天冬氨酸（D212A）。以SASPase的28-kDa形式，该突变等同于突变D128A。通过本领域技术人员已知的分子生物方法可得到SASPase的突变蛋白。
关于FLG2，相同性质的生物活性也可指FLG2与SASPase相互作用和/或促进和增强SASPase的蛋白水解活性的性质。
根据本发明的另一变型，相同性质的生物活性也可指本发明的复合物相对于表皮细胞的增殖和/或分化的生物活性。
根据本发明的另一实施方式变型，在使用本发明的复合物的两个伙伴蛋白之一的至少一种无活性突变体期间，术语“相同性质的生物活性”指伙伴蛋白一起相互作用且形成复合物的性质。
因此，适合用在本发明中的第一伙伴蛋白和第二伙伴蛋白的突变体、同源物或片段必须至少具有彼此相互作用以形成适合用在本发明中的复合物的性质。
出于本发明的目的，术语“蛋白质的片段”指根据本发明的蛋白质的任一部分，其包括6至260个氨基酸，优选地3至215个氨基酸、优选地10至180个氨基酸、更优选地20至140个、或者甚至40到100个、或者60到100个连续氨基酸，且具有与该蛋白质表现的性质相同的性质的生物活性。
关于核酸序列的术语“片段”表示该核酸序列的任何部分，其由18至780个碱基、优选地24至645个碱基、优选地30至540个碱基、且更优选地6至420个碱基、或者甚至120至300个碱基、或者180至300个碱基组成，且编码由所述核酸序列编码的氨基酸序列的片段。
优选地，本发明的片段来自本发明的蛋白质的N-末端部分。
根据一个实施方式变型，适合用在本发明中的SASPase蛋白可仅包括从SASPase蛋白（Uniprot/Swissprot编号：Q53RT3）的位置95延伸至位置160的氨基酸序列。
这样的序列保留了SASPase与FLG2的相互作用的特性，但缺少了蛋白水解活性。
根据另一实施方式，根据本发明所使用的FLG2可由100个第一N-末端氨基酸或95个第一N-末端氨基酸组成，且可优选地由从序列Q5D862（Uniprot/Swissprot）的位置2延伸至位置95的氨基酸序列组成。
根据一个实施方式，适合用在本发明中的蛋白质可为天然蛋白质或合成蛋白质，在合适的条件下，其可通过化学合成或生物合成、或者通过从生物组织（诸如皮肤）中提取而获得，该蛋白质表示天然地蛋白质或转译后的蛋白质、以及其各种转译后形式、以及其同源物、突变体或片段。
根据另一实施方式，本发明涉及嵌合蛋白，其包括与第二蛋白质序列融合或偶联的第一蛋白质序列、亲水靶向剂或疏水靶向剂、生物转化前体、亲和性标记物（例如荧光标记物）、发光标记物、放射性标记物或比色标记物。
在非限制性方式中，作为可与根据本发明的蛋白质偶联的化合物的示例，可提到荧光蛋白（例如绿色荧光蛋白）、荧光化合物（例如若丹明、荧光素或德克萨斯红）、磷光化合物、放射性元素（例如3H、35S、121I或125I）或者比色标记物（例如对半乳糖苷酶、过氧化物酶、氯霉素乙酰转移酶、荧光素酶或者碱性磷酸酶的作用灵敏的显色底物）、或者可替选的亲和标记物。
根据优选的实施方式，根据本发明的蛋白质可与亲和标记物偶联，所述亲和标记物尤其选自标记物Myc、FLAF、His、His-tag、GST（谷胱甘肽S转移酶）、THX（硫氧还蛋白）、MBP（麦芽糖-结合蛋白）、THX-His-tag或者THX-His-S-tag。
根据可与根据本发明的蛋白质偶联的化合物的性质，可通过本领域技术人员已知的任何化学方法或通过任何分子生物学方法来执行偶联。在利用分子生物学方法的情况下，该化合物可称为融合蛋白或嵌合蛋白。
因此，根据一个实施方式，适合用在本发明中的SASPase蛋白可尤其为与亲和标记物融合的重组蛋白。
根据一个实施方式，适合用在本发明中的重组FLG2蛋白可为与亲和标记物融合的重组蛋白。
本发明的重组蛋白，以突变形式或非突变形式、以截断形式或非截断形式、在适当条件下与另一蛋白（例如亲和标记物）融合，可通过任何分子生物方法得到，尤其如Sambrook等描述的方法（Molecular Cloning:A laboratory Manual,Ed.Cold Spring Harbor,2001）。
本发明的用途还延伸至编码适合用在本发明中的蛋白质、所述蛋白质的同源物、突变体或片段的核酸序列。
例如，适合用在本发明中的编码SASPase蛋白的核酸序列可为以GenBank标号AK055994、AK057813、BC031997、BC094000或BC094002识别的核酸序列，优选以GenBank标号AK055994识别的核酸序列。
例如，适合用在本发明中的编码FLG2蛋白的核酸序列可为GenBank参标号AY827490.1识别的核酸序列。
适合用在本发明中的核酸序列可尤其用于制备根据本发明的任一蛋白质，更具体地用于制备与亲和标记物融合的蛋白质。
适合用在本发明中的核酸序列可为任何可能的来源，即：动物，尤其哺乳动物和甚至更具体地人类；或者植物；、或者来自微生物，例如病毒、噬菌体或细菌、或者来自真菌，而对于其是否天然存在于所述生物体中无任何预见。
调节化合物
出于本发明的目的，术语“调节化合物”指任何能够直接作用于本发明的蛋白质复合物以调节该复合物的伙伴蛋白之间的相互作用的化合物。
出于本发明的目的，术语“调节”指促进、降低或稳定这些蛋白之间的相互作用。
本发明的调节化合物可与伙伴蛋白之一或全部结合。例如，该结合可发生在相互作用所涉及的蛋白域上。因此，本发明的调节组合物可尤其与SASPase的简短形式的N-末端部分的域相互作用、或者与FLG2的N-末端部分的域相互作用。可替选地，调节化合物可同时与涉及复合物形成的SASPase的蛋白质序列的域以及FLG2的蛋白质序列的域结合。
可替选地，该结合可远离蛋白质的相互作用位点发生，其变构地导致所述蛋白质之一或全部发生构象变化，且导致两种蛋白质之间的相互作用的调节、或者这些蛋白质的功能的调节。
根据所考虑的调节化合物，可增强、减弱、消除或稳定SASPase和FLG2之间的相互作用。
根据一个实施方式，调节化合物可促进SASPase-FLG2相互作用或者作为SASPase-FLG2相互作用的兴奋剂。可替选地，调节化合物可为使SASPase-FLG2相互作用不稳定或者促进SASPase-FLG2相互作用的化合物。
将根据在表皮细胞增殖和/分化上待产生的调节效果、更具体地根据待预防或待治疗的皮肤或其覆盖物的审美缺陷或病理失调的性质,保持调节SASPase-FLG2相互作用的化合物的激动剂性质或拮抗剂性质。
更具体地，在与脱皮不充分或表皮细胞增殖和/或分化加速相关联的审美缺陷或病理失调的情况下，作为SASPase-FLG2相互作用的激动剂的调节化合物或者促进SASPase-FLG2相互作用的调节化合物可是优选的。
这样的化合物可对表皮细胞产生促脱皮和/或抗老化活性，从而促进活表皮的增厚以及调节角质层的厚度。
可替选地，对于过度脱皮或表皮细胞增殖和/或分化不充分导致的皮肤和/或其覆盖物的审美缺陷或病理失调，可有利地使用拮抗SASPase-FLG2相互作用或者使SASPase-FLG2相互作用不稳定的调节化合物。
这样的化合物可对表皮细胞产生促进分化的活性，从而促进屏障功能的成熟。
根据一个实施方式，根据本发明特别考虑的化合物可以下面的通式（Ia）或（Ib）表示：
其中：
-R1表示H，直链的或支链的、饱和的或不饱和的C1-C4烷基，或者-C(O)R8，其中R8表示直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烷基；
-R2表示=O、-OR9或-OC(O)R9，其中R9表示H或C1-C2烷基；
-R3、R4、R5、R6和R7彼此独立地表示：H；-NO2；-OH；氟；-CF3；直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烷基；苯基；-OC(O)-CH(Ph)2；-O-Ph-X，其中X表示H、-OH、-NO2、氟、直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烷基或烷氧基；-O-S(O2)-Ph-Z，其中Z表示直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烷基；-R8OH；-OR9；-OC(O)R9，其中R8和R9如先前所限定；-R10Ph，其中R10为直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4亚烷基；或者-OC(O)-Yn-Ar1-(X)m，其中
-n为0或1，且m为0至4范围内的整数，条件是n和m不同时为0，Y表示直链的或支链的、饱和的或不饱和的C1-C4亚烷基，X如先前所限定，且Ar1为
Figure BDA00003628731900132
或
其中，*为与Y连接的键，为与X连接的键，
及其生理上可接受的盐。
R1可尤其表示H，直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C3烷基或者-C(O)R8，其中R8表示直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C3烷基。
优选地，R1可表示H、甲基、乙基或丙基或者-C(O)R8，其中R8表示甲基、乙基或丙基。
甚至更优选地，R1可表示甲基、乙基或丙基，且优选H。
尤其，本发明的化合物可以由式（Ia）表示，其中R1表示H、甲基、乙基或丙基，且优选H。
R2可表示=O或-OR9，R9如先前所限定。
有利地，R2可表示=O或-OR9，其中R9表示H或甲基。
有利地，R2表示=O。
根据一个实施方式，R3、R4、R5、R6和R7可彼此独立地表示：H；-OH；氟；直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C3烷基；苯基；-OC(O)-CH(Ph)2；-O-Ph-X，其中X表示H、-OH、-NO2、氟、直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C3的烷基或烷氧基；-O-S(O2)-Ph-Z，其中Z表示直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C3烷基；-R8OH；-OR9；-OC(O)R9，其中R8表示直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C3烷基，R9表示H或者甲基；-R10Ph，其中R10为直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C3亚烷基；或者，-OC(O)-Yn-Ar1-(X)m，其中
-n为0或1，且m为0至4范围内的整数，Y表示直链的或支链的、饱和的或不饱和的C1-C3亚烷基，X表示H、-OH、氟、直链的或支链的、饱和的或不饱和的C1-C3的烷基或烷氧基，Ar1为：
Figure BDA00003628731900141
或
其中，*为与Y连接的键，为与X连接的键。
根据一个实施方式，R3、R4、R5、R6和R7可彼此独立地表示：H；-OH；氟；甲基或乙基；苯基；-OC(O)-CH(Ph)2；-O-Ph-X，其中X表示H、-OH、氟、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；-O-S(O2)-Ph-Z，其中Z表示甲基或乙基；-R8OH；-OR9；-OC(O)R9，其中R8表示甲基或乙基且R9表示H或甲基；-R10Ph，其中R10为亚甲基或乙烯基、或者-OC(O)-Yn-Ar1-(X)m，其中n、Y、X和Ar1如先前所述。
根据一个实施方式，R3、R4、R5、R6和R7可彼此独立地表示：H；-OH；氟、甲基、乙基；-R8OH，其中R8表示甲基或乙基；-OR9，其中R9表示H或甲基；或者，-OC(O)-Yn-Ar1-(X)n，其中n、Y、X和Ar1如先前所限定。
根据一个实施方式，R3、R4、R5、R6和R7之一可表示-OC(O)-Yn-Ar1-X)m，其中n为0或1，且m为0至3范围内的整数、尤其为1至2的整数；Y表示直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C3亚烷基、尤其是亚甲基或乙烯基；X可表示H、-OH、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基，尤其H、甲基或甲氧基，且优选地乙基或乙氧基，且Ar1为：
Figure BDA00003628731900151
或
Figure BDA00003628731900152
根据优选的实施方式，在基团-OC(O)-Yn-Ar1-Xm中，Ar1可为：
Figure BDA00003628731900153
其中*和如先前所限定。
根据另一优选的实施方式，在基团-OC(O)-Yn-Ar1-Xm中，Y可选自亚甲基、乙烯基、丙烯基、异丙烯基、且更优选地可选自亚甲基和异丙烯基。
根据另一优选的实施方式，在基团-OC(O)-Yn-Ar1-Xm中，n可等于0且m可等于1。
根据另一优选的实施方式，在基团-OC(O)-Yn-Ar1-Xm中，X可选自直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4的、优选C2-C3的烷基或烷氧基。优选地，X可选自甲基、乙基、甲氧基或乙氧基。甚至更优选地，X可为甲基或甲氧基，且优选甲基。
根据优选的实施方式，在基团-OC(O)-Yn-Ar1-Xm中，n可等于0，m可等于1，X可为甲基或甲氧基、优选甲基，而Ar1可为：
Figure BDA00003628731900161
其中，*和如先前所限定。
根据一个实施方式，R3、R4、R5、R6和R7中的至多一个可表示如先前所限定的-OC(O)-Yn-Ar1-Xm，且优选地，R4或R6表示如先前所限定的-OC(O)-Yn-Ar1-Xm。根据该实施方式的一个变型，-OC(O)-Yn-Ar1-Xm可为这样：n可等于0，m等于1,X如先前所限定，且Ar1可表示
其中，*为与Y连接的键，为与X连接的键。
根据一个实施方式，R3、R5、R7和R4或R6可彼此独立地表示：H；-NO2；-OH；氟；甲基或乙基；苯基；-R8OH；-OR9；-OC(O)R9，其中R8表示甲基或乙基，R9表示H或甲基；-R10Ph，其中R10为亚甲基或乙烯基。
根据优选的实施方式变型，R3、R5、R7和R4或R6可彼此独立地表示H、-OH、氟、甲基，且优选地表示H。
根据一个实施方式，本发明的化合物可尤其以通式（Ia）表示。
根据本发明的优选模式，适合用在本发明中的化合物可优选地由下面的式（II）的化合物表示：
Figure BDA00003628731900171
在下文中该化合物被称为“M7”。
根据本发明，通式（Ia）或（Ib）的化合物的生理上可接受的盐可为：通式（Ia）或（Ib）的化合物与碱金属、碱土金属或铵的盐，包括利用有机铵基得到的盐；或者通式（Ia）或（Ib）的化合物与有机酸或无机酸的盐。
更具体地，适合用在本发明中的盐可为：钠盐、钾盐、钙盐或镁盐；季铵盐，如四甲基铵或四乙胺；以及具有氨和生理上可接受的有机胺的加成盐，例如甲胺、二甲氨、三甲胺、乙胺、三乙胺、乙醇胺或三（2-羟乙基）胺。
适合用在本发明中的通式（Ia）或（Ib）的化合物与无机酸的盐可利用盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸或磷酸获得。
适合用在本发明中的通式（Ia）或（Ib）的化合物与有机酸的盐可利用羧酸或磺酸得到，例如甲酸、乙酸、草酸、柠檬酸、乳酸、苹果酸、琥珀酸、丙二酸、苯甲酸、马来酸、富马酸、酒石酸、甲磺酸、苯磺酸或对甲苯磺酸。
适合用在本发明中的调节化合物可尤其按照专利申请WO2008/008704所描述得到。
可替选地，适合用在本发明中的调节化合物可从数据库ChemDiv发现化学采集公共数据库（ChemDivDiscovery Chemistry Collection Public Database）（序号：4477-2039,ChemDiv,Inc.San Diego,USA）获得。
适合用在本发明中的调节化合物可尤其按照Tetrahedron Letters,2005,46(8):1345-1348所述描述得到，根据下面的示意过程：
固相合成
Figure BDA00003628731900181
脂相合成
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7可优选地如上所限定。
筛选
本发明涉及本发明的蛋白质复合物用于筛选新型化合物的用途，尤其如先前所限定的新型化合物。
根据一个实施方式，本发明涉及一种用于筛选化合物的方法，所述化合物能够通过调节第一伙伴蛋白和第二伙伴蛋白、所述蛋白的同源物、突变体或片段之间的相互作用来调节表皮的内稳态、尤其表皮细胞的增殖和/或分化，所述第一蛋白为SASPase和第二蛋白为丝聚合蛋白-2或FLG2，所述方法至少包括在于以下的步骤：
a)使所述第一蛋白和第二蛋白处于适合于所述第一蛋白和所述第二蛋白之间的相互作用的条件下；
b)在步骤a）之前或在步骤a）之后，使第一蛋白和第二蛋白中的至少一种蛋白与一物种组合；
所述蛋白和所述物种形成在暴露于激发波长中后能够发出信号的组合体，且实施步骤a）和步骤b）导致由所述第一伙伴蛋白和第二伙伴蛋白相互作用引起产生复合物；
c)使所述复合物经受所述激发波长以得到表示所述复合物的特征的第一信号S1；
d)定量地或定性地确定所述信号S1；
e)在适合于化合物和所述复合物之间的相互作用的条件下，将所述复合物与假定包含所述化合物的介质接触；
f)使在步骤e）中得到的介质经受所述激发波长以得到第二信号S2；
g)定量地或定性地确定所述信号S2，和
h)比较所述第一信号S1和第二信号S2，以得出关于所述筛选的化合物可以调节第一蛋白和第二蛋白之间的相互作用的结论。
根据一个实施方式，适合用在本发明的物种可选自适合表面等离子体共振的载体、荧光标记物、抗体或初级抗体和二级抗体的组合，所述抗体或所述二级抗体携带有荧光标记物。
本发明的蛋白质可通过本领域技术人员已知的任何方法与物种组合，且可适合于待与该蛋白质组合的载体的性质。偶联方法将自然地选择，使得该方法不影响本发明的蛋白质彼此相互作用的特性。
根据一个实施方式，本发明的物种和蛋白质的组合可通过化学偶联、通过分子生物学、或者通过独特的高亲和性相互作用而执行。
尤其，可通过化学偶联、特别通过反应性化学官能团、或者借助分子生物方法而进行组合。
在使用通过化学方法进行组合期间，待反应的化学官能团可自然地存在于蛋白质以及组合的物种上，或者可在化学反应之前引入到蛋白质上和物种上。
作为可适合用在本发明中的反应性化学官能团的示例，例如可提到通常用在“点击化学”反应中的那些化学官能团。
作为可适合于本发明的物种和蛋白质之间的组合的分子生物学方法的示例，可提到通常在克隆方法中而进行的那些方法，尤其包括合适的核酸序列的制备、核酸序列的连接及其导入合适的表达载体（例如质粒）、以及将质粒转染到能够允许表达和产生嵌合重组蛋白的宿主细胞内。
根据另一实施方式，可适合用在本发明中的物种和蛋白可通过一种或多种独特的高亲和性相互作用而彼此组合。
根据本发明的筛选过程可使用荧光能量转移（FRET）、生物发光能量转移（BRET）或表面等离子体共振（SPR），且更具体地可使用荧光能量转移。
根据一个实施方式，可尤其适合用在本发明中的物种可为抗体或者初级抗体和二级抗体的组合。
可适合用在本发明中的抗体可通过本领域技术人员已知的任何方法得到，尤其如在Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,冷泉港，纽约(1990)中所述。
作为可适合用在本发明中的抗体，可提到单克隆抗体或多克隆抗体或重组抗体以及免疫球蛋白片段，该免疫球蛋白片段能够结合抗原且可以通过本领域技术人员已知的基因工程技术或者通过完整抗体的酶裂解或化学裂解产生。
更具体地，可适合用在本发明中的抗体可选自单克隆抗体、多克隆抗体、双价抗体、scFv抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、嵌合抗体、人源化抗体和重组抗体。
根据一个实施方式，可适合用在本发明中的抗体可对该抗体所针对的蛋白的一部分具有亲和性或者对于该蛋白所承载的独特的亲和性标记物具有亲和性。尤其，适合用在本发明中的抗体可为在下面详细的实施例中所描述的抗体。
根据本发明的一个实施方式，本发明的一个或多个蛋白可承载抗体识别的亲和性标记物。
可适合用在本发明中的亲和性标记物可尤其选自先前所指出的亲和性标记物。
根据另一实施方式，第一蛋白和第二蛋白分别与第一物种和第二物种组合，所述物种分别包括荧光基团A和荧光基团B，所述基团A和基团B限定了其荧光能量适合于通过荧光共振执行能量转移的受体-供体对。
作为可根据本发明使用的受体-供体对的示例，可以非限定的方式提到BFP（蓝色荧光蛋白）/GFP（绿色荧光蛋白）对、CFP（青色荧光蛋白）/YFP（黄色荧光蛋白）对、CFP/DsRed（红色荧光蛋白）对、GFP/DsRed和对EuK（铕穴状化合物）/XL665对。优选地，可适合用在本发明的受体-供体对为EuK/XL665。
根据一个实施方式变型，第一物种和第二物种可以是荧光标记物。此类荧光标记物可以选自于通常在本领域中使用的荧光分子或荧光蛋白。优选地，所使用的荧光标记物可以选自于尤其是正如先前指出的通过分子生物学融合至本发明的蛋白的荧光蛋白。
根据另一个实施方式变型，第一物种和第二物种可以是携带有荧光标记物的抗体，并且可以适合于分别结合至由所述第一蛋白和所述第二蛋白分别所携带的第一亲和标记物和第二亲和标记物。
根据一个实施方式，在根据本发明的方法的步骤d）中定量地或定性地确定定的信号S1可以是通过在激发波长下对荧光能量供体照射而获得的荧光信号。
在本方法的步骤f）中定量地或定性地确定的信号S2可以是通过在激发波长下对荧光能量供体照射而获得的荧光信号。
可以采用适合于用于本发明的且为本领域的技术人员所熟知的任何装置测量荧光信号S1和荧光信号S2。作为适合用于本发明的装置的示例，可提到酶标仪、荧光显微镜、荧光分光计或荧光扫描仪。
根据一个优选的实施方式，本发明的方法可以在微孔板中以高通量进行，荧光信号的测量可以使用酶标仪（例如PHERAstar（BMG）酶标仪）而执行。
在待筛选化合物的存在下，信号S2明显强于信号S1可指示促进SASPase-FLG2相互作用的化合物或者作为SASPase-FLG2相互作用的激动剂的化合物。
另一方面，在待筛选化合物的存在下，信号S2明显弱于信号S1可指示使SASPase-FLG2相互作用不稳定或者拮抗SASPase-FLG2相互作用的化合物。
根据本发明的方法或用途筛选的化合物可为第一蛋白和第二蛋白之间相互作用的激动剂或拮抗剂。
根据本发明的优选的实施方式，所筛选的化合物可能够治疗和/或预防与表皮细胞分化和/或增值缺陷相关联的皮肤和/其覆盖物的审美失调或病理失调。
根据一个实施方式，本发明的筛选方法还可包含至少一个在于评估所筛选的化合物调节表皮细胞的分化和/增殖的特性的步骤。
这样的评估可在体外或间接体内进行，尤其对于培养中的表皮细胞。该细胞可以是细胞系中的细胞，即，利用病毒转化的细胞，或肿瘤来源的细胞，以便使细胞不死。可替选地，该细胞可以是原代培养细胞，即，取自于活的生物体组织的细胞（例如，来自于人类的表皮）。优选地，培养细胞可以是角化细胞，或者甚至与成纤维细胞关联，尤其该细胞是分层的。可以根据本领域的技术人员熟知的任何方法准备细胞培养物。
同样地，体外评价可以在重建的表皮模型上进行。该表皮模型可以是市场上可买到的（例如，
Figure BDA00003628731900221
模型）。
根据本发明的所筛选的化合物的体外或间接体内的评估可以通过本领域的技术人员熟知的任何方案而进行，目的在于将由测试化合物给出的效果与对照值或标准值进行比较。
在体外或间接体内，根据本发明的所筛选的化合物的效果可以通过测量与表皮细胞的分化和/或增殖特定关联的已知的生物标记而被确定。
例如，此类标记可以选自测量角质层的厚度、测量角质层的屏障功能、测量谷氨酰胺转移酶I、丝聚合蛋白、半胱天冬酶14、SASPase、角膜锁链蛋白、桥粒芯糖蛋白1或Ki67蛋白的表达和/或活化。
例如，这些标记可以根据本领域的技术人员熟知的任何方案，通过qPCR、免疫印迹或免疫荧光而确定。
指示
本发明的化合物可有利地用于治疗和/或预防皮肤和/或其覆盖物中的表皮细胞分化和/或增殖不平衡。
本发明目的在于全部身体皮肤，包括头皮和粘膜，优选地面部、领口、颈部、手臂和前臂、以及唇部的皮肤，或者甚至更优选地面部、领口和颈部以及唇部的皮肤。
根据另一实施方式，本发明涉及头发、体毛、睫毛和指甲。优选地，本发明更具体地指向头发、睫毛和体毛。
根据一个实施方式，本发明所考虑的审美缺陷可选自皮肤老化症状、表皮屏障功能障碍、皮肤干燥症状、皮肤脱皮症、以及瘢痕形成缺陷和/或表皮细胞再生缺陷。
根据另一实施方式，本发明所考虑的审美缺陷可选自过度出汗和/或体臭问题。
根据另一实施方式，本发明的化合物可作为活性剂用在化妆品中，该活性剂用于在皮肤擦洗或去角质处理后促进表皮皮肤细胞再生。
因此，本发明的调节化合物有利地可在可侵袭性的化妆处理后更迅速地修复表皮的屏障性能、以改善以保护作用。
根据另一实施方式，本发明的化合物可作为活性剂用在化妆品中，该活性剂用于预防和/或治疗毛发缺失和/或促进毛发再生。
根据另一实施方式，本发明的化合物可作为活性剂用在化妆品中，该活性剂用于预防体毛再生。
根据另一实施方式，病理失调可选自癌、银屑病、白癜风、酒糟鼻和特应性皮炎。
本发明中特别所考虑的皮肤老化的症状可为老化导致的皮肤外观的任何改变，不论该改变是按照时间发生和/或光诱导发生的，例如皱纹和细线、干瘪的皮肤、松弛的皮肤、缺乏皮肤弹性和/或紧度、真皮变薄和/或胶原纤维降解，其导致松弛且起皱的皮肤外观。并非由改变的外观所自动反映的任何皮肤的内部改变也是值得考虑的，例如任何的皮肤内部退化、尤其是在暴露于紫外线中后弹性蛋白纤维或弹性纤维的退化。
尤其，本发明所针对的皮肤老化的症状涉及表皮的变薄和/或表皮缺乏硬度、弹性、密度和/或紧度，和/或皱纹和细线的形成。
本发明中所考虑的表皮屏障功能障碍可尤其源自以下引起的类型的外部攻击：刺激剂，例如洗涤剂、酸、碱、氧化剂、还原剂、浓缩溶剂、毒气或毒烟雾；机械应力，例如摩擦、冲击、磨损（尤其在表皮脱落后过程后的磨损）、表皮表面的脱皮、灰尘或颗粒的凸出、刮或脱毛；热不平衡或者气候失衡，例如冷、干燥、辐射、异型生物质（尤其是不期望的微生物）、变应原、或者例如心理紧张类型的内部攻击。
因此，本发明的调节化合物可改善表皮的屏障特性和保护作用。
表皮屏障功能障碍可尤其反应为皮肤不适、感官现象和尤其是不愉快的现象，尤其是刺痛、绷紧、发热和发痒。
在一个病理形式中，屏障功能障碍可表现为特应性皮炎的形式。
本发明中特别考虑的皮肤干燥的症状可以是表皮外观的任何改变，尤其是尤其皮肤脱水而引起的外观的改变。干燥皮肤具有粗糙感，且是鳞状的或者覆盖有鳞屑，且基本上表现为绷紧和/或拉紧的感觉，该感觉与降低的柔度和弹性有关。
干燥的皮肤可以是病态的或非病态的。病态干燥皮肤可表示为特应性皮炎和鱼鳞癣。
非病态干燥皮肤可表示为：老年性皮肤，其特征尤其在于皮肤代谢随着年龄而普遍降低；脆弱皮肤，其特征可在于皮肤对外部因素极其敏感且经常伴随有红斑和酒糟鼻；以及普通干燥病，其可能具有遗传来源且主要表现在面部、四肢和手背上。
本发明特别考虑的脱皮症可为皮肤的脱皮症或头皮的脱皮症。
头皮脱皮症可具有头皮屑、尤其是干头皮屑的形式。
干头皮屑由从表皮容易脱离的小鳞片形成，且在临床检查上不显现出炎性。
本发明中所考虑的瘢痕形成缺陷和表皮细胞再生缺陷可尤其表现为外科手术所导致的或者在表皮的审美失调或病理失调之后的表皮损伤或者表皮的瘢痕缺陷的形式，例如座疮疤痕或者妊娠纹症状。本发明中所考虑的表皮细胞再生缺陷也可在皮肤表皮的化学剥离或机械剥离之后发生或者在年老的皮肤的情况下发生。调节化合物可在表皮脱落之前或表皮脱落之后使用以促进表皮屏障功能的重建。
本发明中所考虑的体臭可尤其是任何可认为是令人讨厌的、或者甚至使人丧失能力的不期望的气味，该气味由产生该气味的人和/或在其附近的人所引起。
更具体地，气味出现在进行大量出汗的身体区域且更具体地腋部区域（尤其腋窝）、或者脚部、乳晕和肛周区域，在这些地方发现了大量的汗腺、尤其是大汗腺。
体臭尤其是出汗、甚至过度出汗、和/或汗液的细菌降解且更特别是大汗腺产生的体臭。
组合物
本发明的化合物有利地配制成组合物，该组合物可为通常对于目标症状以及施用模式可得到的任何剂型。
根据本发明的组合物包含生理上可接受的介质或药学上可接受的介质。
根据本发明的组合物可口服、肠道施用或者局部施用。
优选地，本发明的组合物可局部施用。
根据一个实施方式，根据本发明的局部用组合物可有利地配制成适于护理皮肤和护理粘膜的任何剂型，且可呈软膏、霜剂、乳剂、润发油、粉末、浸渍垫、溶液、凝胶、喷雾剂、洗液、或混悬剂的形式。该组合物还可呈允许受控释放的脂类微球或聚合物微球、纳米球或囊或聚合物贴片、以及水凝胶的形式。根据真皮指征，这些局部用组合物可以是无水形式或者含水形式。
用于局部施用的组合物可以是：水溶液，含水的醇溶液或者油性溶液，洗液或浆液类型的溶液或分散剂，乳类型的液体稠度或半液体稠度的乳剂（其通过将脂肪相分散到水相（O/W）或相反（W/O）而获得），霜剂类型的或者含水凝胶型或无水凝胶类型的、软稠度、半固体稠度或固体稠度的混悬剂或乳剂，复合乳剂（W/O/W或O/W/O）、微乳剂、纳米乳剂、微胶囊制剂、微粒制剂、离子型和/或非离子型的囊泡分散剂、或者蜡相/水相分散剂。
根据优选的实施方式，局部用组合物可呈溶液、霜剂、凝胶、乳剂、泡沫剂或包含推进剂的气溶胶组合物的形式。
根据优选的实施方式，局部用组合物还可呈允许活性剂经皮主动释放或被动释放的经皮系统的形式，例如贴片类型或者贴片凝胶（水凝胶）类型的形式。
根据常用的方法制备这些组合物。
根据本发明的组合物可构成用于治疗或护理皮肤或头皮的组合物，或者防晒组合物或人工晒黑组合物，或者可替选地皮肤清洁产品或者卸妆产品，除臭产品或香味化合物，清洁霜、防护霜、药用霜或护肤霜，护理洗液，凝胶或泡沫剂，清洁洗液或消毒洗液，浴液组合物或除臭组合物。该组合物还可呈彩色的或者非彩色的、药用或非药用的香波，或者护发剂。根据本发明的组合物还可由构成肥皂或洁面皂的固体制剂组成。
因此，这样的组合物可以是无色的或者淡色的，且可选地可包括附加的化妆用活性剂或皮肤病用活性剂，尤其如下文所述。因此，该组合物可被用作皮肤或唇部的护肤基底，例如以唇膏的形式用于保护唇部免受冷和/或阳光和/或风的影响，例如用于面部皮肤和/或身体皮肤的日用护理霜或夜用护理霜。
根据本发明的组合物还可构成彩色的美容组合物，尤其是用于皮肤和/或粘膜的化妆组合物，并且特别地，此类组合物可以是粉底、腮红、扑面粉、眼影、棒形式的遮瑕膏化合物、口红或者润唇膏，可选地具有护理特性或治疗特性。优选地，该组合物可以是用于校正肤色的彩色的（米色的或绿色的）化妆组合物。
根据本发明的组合物还可构成用于对指甲或睫毛化妆或护理的组合物。
当本发明的组合物为乳剂时，相对于组合物的总重量，脂肪相的比例按重量计可为5%至80%，优选地10%至50%。在乳剂形式的组合物中使用的油、乳化剂和辅助乳化剂选自那些通常在化妆品和/或皮肤病学中使用的油、乳化剂和辅助乳化剂。相对于组合物的总重量，乳化剂和辅助乳化剂按重量计可以以0.3%至30%、优选0.5%至20%的比例存在于该组合物中。
当本发明的组合物为油性溶液或凝胶时，脂肪相可占组合物的总重量的大于90%。
在根据本发明的组合物用于口服的情况下，优选地使用可吸收载体。
根据所考虑的组合物的类型，可吸收载体可具有不同的性质。
因此，片剂、凝胶胶囊或锭剂、混悬剂、干形式的口服补充剂和液体形式的口服补充剂可尤其适合用作食品载体。
牛奶、酸奶、乳酪、发酵牛奶、基于牛奶的发酵品、冰激凌、基于谷物的产品或者发酵的基于谷物的产品、基于牛奶的粉末、婴幼儿配方、糖果类型、巧克力类型或谷物类型的食品、以及特别用于宠物的动物饲料，也适合用作食品载体。
例如，术语“口服组合物”指包含至少一种根据本发明的化合物的营养组合物、功能性组合物、美容组合物或药用组合物。
根据本发明的口服组合物的配制可通过本领域技术人员已知的用于制备可饮用溶液、包衣片、凝胶胶囊、凝胶、乳剂、吞咽片或咀嚼片、胶囊（尤其软胶囊或硬胶囊）、溶解颗粒、糖浆、固体食物或液体食物以及允许受控释放的水凝胶、食物棒、压实形式的或非压实形式的粉末、液体溶液或混悬剂、糖果、发酵奶、发酵乳酪、口香糖、牙膏或喷雾液的任何常规方法来执行。
根据护肤指征，口服组合物可以是无水形式或者含水形式。
此外，本发明的化合物可与通常用于此类口服组合物或食品补充剂的赋形剂和成分（即尤其含脂肪的成分和/或含水成分、保湿剂、增稠剂、防腐剂、纹理剂、味觉剂和/或包衣剂、和/或抗氧化剂）进行配制。
用于口服组合物且尤其用于食品补充剂的配制剂和赋形剂在该领域中是已知的且在不是本文所详细描述的主题。
尤其是，根据本发明的组合物可以是用于人消耗的食品组合物。这可尤其是营养的天然食品、饮料、矿物质水、汤、膳食补充剂和替代食品、营养棒、糖果、发酵的或未发酵的基于奶的产品、酸奶、基于奶的粉末、经肠营养产品、幼儿组合物和/或婴儿组合物、发酵的或未发酵的基于谷物的产品、冰激凌、巧克力、咖啡、“烹调”产品，例如蛋黄酱、番茄酱或色拉调味品。
根据本发明的组合物还可用于动物、尤其宠物，诸如猫和狗，且可以配制成动物饲料和饲料补充剂的形式。
根据另一实施方式，可适合用在本发明中的化合物可肠胃外使用，尤其皮下使用或皮内使用。
在这样的使用中，可适合用在本发明中的活性剂可被调制成含水无菌等渗溶液或不含水的无菌等渗溶液的形式、所制备的分散剂、混悬剂、或乳剂的形式，在合适的情况下，恰好在施用活性剂前，使用无菌粉末，例如冻干粉末，然后该冻干粉末在使用时以可注射的无菌溶液或者分散剂的形式重新构建。
术语“无菌的”指限定配制，使该配制能够确保对于表皮内施用和/或皮内施用和/或皮下施用所需的无害性。
适合用在本发明中的组合物可包括在可注射的无菌溶液领域中通常使用的任何赋形剂。
本发明的组合物的肠胃外施用可通过任何注射技术和/或适合表皮内注射和/或皮内注射和/或皮下注射的装置来执行。因此，此类施用也可通过美塑疗法（mesotherapy）来执行。
通过肠胃外路径，可优选地使用全身型贴片进行施用。
根据本发明的组合物还可包括至少一种美容上可接受的成分或者皮肤病学上可接受的成分。这些各种成分的量为所考虑的领域中常规使用的量，且特别确定以不会影响本发明的化合物的所需的性能或者本发明的组合物的所需的性能。
可适合用在本发明中的美容用活性剂或皮肤病用活性剂可选自湿润剂、维生素、必需脂肪酸、鞘脂类、紫外线屏蔽剂、抗氧化剂、抗座疮剂、消炎剂、晒黑剂（在不存在紫外线照射时）、脱色剂、哑光剂、蛋白质或水解蛋白、氨基酸、多元醇、脲、尿囊素、糖和糖衍生物、水溶性维生素、植物提取物和羟基酸、视黄醇及其衍生物、生育酚及其衍生物、必需脂肪酸、神经酰胺、精油、水杨酸及其衍生物、维生素D3及其衍生物、类视黄醇及其衍生物、PPAR-γ兴奋剂、抗脱发剂或者毛发再生剂（诸如钾通道开放剂和抗雄激素物质）、及其混合物。
本发明的组合物可包括在本领域中通常使用的任何配制剂。
作为可适合用在本发明中的亲水胶凝剂，可提到：羧基聚合物，例如卡波姆；丙烯酸共聚物，例如丙烯酸酯/烷基丙烯酸酯共聚物；聚丙烯酰胺且尤其是由SEPPIC公司出售的名称为Sepigel的聚丙烯酰胺、C13-14异链烷烃和Laureth-7（月桂醇醚-7）的混合物；多糖，例如纤维素衍生物，诸如羟烷基纤维素且尤其是羟丙基纤维素和羟乙基纤维素；天然树胶，例如瓜尔胶、刺槐豆胶和黄原胶；以及粘土。
作为可适合用在本发明中的亲脂胶凝剂，可提到：改性粘土，例如膨润土；脂肪酸的金属盐，例如硬脂酸铝和疏水性二氧化硅；或者乙基纤维素和聚乙烯。
作为可用在本发明中的表面活性剂，例如，可提到硬脂酸甘油酯、聚山梨醇酯60、由Henkel 公司以名称Sinnowax
Figure BDA00003628731900292
出售的鲸蜡硬脂醇/利用33mol的环氧乙烷进行氧乙烯化的鲸蜡硬脂醇的混合物、由Gattefosse公司以名称
Figure BDA00003628731900293
63出售的PEG-6/PEG-32/硬脂酸乙二醇酯的混合物、PPG-3肉豆蔻醚、硅酮乳化剂（例如鲸蜡基二甲基硅氧烷共聚醇）、和山梨醇酐单硬脂酸酯或山梨醇酐三硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯和氧乙烯化的（20 OE）山梨醇酐单硬脂酸酯。
作为可适合用在本发明中的填料，可提到滑石粉、云母、二氧化硅、高岭土、沉淀碳酸钙、碳酸镁、碳酸氢镁、羟磷灰石、氮化硼、聚酰胺粉末（来自Atochem的
Figure BDA00003628731900294
Orgasol）、聚-β-丙氨酸粉末和聚乙烯粉末、聚四氟乙烯粉末（
Figure BDA00003628731900295
）、月桂酰赖氨酸、淀粉、四氟乙烯聚合物粉末、中空聚合物微球（诸如Expancel（Nobel Industrie））、由包含8至22个碳原子、优选包含12至18个碳原子的有机羧酸得到的金属皂（例如硬脂酸锌、硬脂酸镁或硬脂酸锂、月桂酸锌或豆蔻酸镁）、L 200（Chemdal Corporation）、硅酮树脂微珠（例如来自Toshiba 的
Figure BDA00003628731900297
）、聚氨酯粉末（尤其包含共聚物的交联聚氨酯的粉末，所述共聚物包含三羟甲基己基内酯）。该填料可尤其是己二异氰酸酯/三羟甲基己基内酯聚合物。这样颗粒可尤其从市场上可得到，例如来自Toshiki 公司的名称为Plastic Powder或者名称为Plastic Powder
Figure BDA00003628731900299
的粉末、及其混合物。
作为可适合用在本发明中的气味吸收剂，可提到沸石和环糊精。
可适合用在本发明中的染料为当其以足够量配制在合适的化妆介质中时，能够产生彩色光学效应的化合物。作为可使用的染料，可提到颜料、珠母贝、闪光片、脂溶性染料和水溶性染料、及其混合物。
颜料可选自矿物性颜料、有机颜料和复合颜料（即，基于矿物质和/或有机物的颜料）。颜料可选自单色颜料、色淀、珠母贝、以及具有光学效果的颜料，例如反射性颜料和视角闪色颜料。
可适合用在本发明中的成膜聚合物可选自自由基聚合物、缩聚物和天然来源的聚合物、及其混合物。术语“聚合物”指包含至少两个重复单元、优选至少3个重复单元、且更具体地至少10个重复单元的化合物。
例如，自由基聚合物可选自丙烯酸聚合物和/或乙烯基聚合物。根据本发明，缩聚物可选自聚氨酯、聚酯、聚酰胺酯、聚酰胺、脂肪链聚酯和环氧酯树脂、及其混合物。可提到的天然来源的聚合物包括虫胶和香松树胶。
术语“半结晶聚合物”指包含在主链中的可结晶部分（可结晶悬垂链或者可结晶嵌段）以及主链中的无定形部分的聚合物，该聚合物具有一阶的可逆相变温度，尤其熔化温度（固液转变）。半结晶聚合物可选自包含至少一个可结晶嵌段和至少一个无定形嵌段的嵌段共聚物、每个重复单元具有至少一个可结晶侧链的均聚物和每个重复单元具有至少一个可结晶侧链的共聚物、及其混合物。例如，在EP1396259中所描述的这类聚合物。作为构造根据本发明可使用的半结晶聚合物的示例，可提到在手册
Figure BDA00003628731900301
polymers,Landec IP22(Rev.4-97)中描述的来自Landec公司的
Figure BDA00003628731900302
产品。这些聚合物在室温（25℃）下为固体形式。这些聚合物携带有可结晶的侧链。
作为可用在本发明中的脂肪物质，可提到挥发性油和非挥发性油，例如：矿物油，例如氢化聚异丁烯和液体凡士林；植物油，例如，牛油树脂的液体部分、向日葵油和杏仁油；动物油，例如角鲨烷；合成油，尤其是鸭子尾脂腺油、肉豆蔻酸异丙酯和棕榈酸乙基己酯；不饱和脂肪酸；硅酮油和氟油，例如全氟聚醚。
例如，可存在于本发明的组合物中的糊状脂肪物质或固体脂肪物质可为：脂肪酸，该脂肪酸选自包含8至30个碳原子的脂肪酸，例如硬脂酸、月桂酸、棕榈酸、和油酸；蜡，其选自诸如羊毛脂、蜂蜡、巴西棕榈蜡或小烛树蜡、石蜡、褐煤蜡或微晶蜡、纯白地蜡或地蜡，以及合成蜡（诸如聚乙烯蜡和费托合成蜡）的蜡；树胶，其选自硅酮橡胶（聚二甲基硅氧烷醇）；糊状化合物，例如聚合硅酮或非聚合硅酮、低聚甘油的酯、花生醇丙酸酯和脂肪酸甘油三酯、及其衍生物；及其混合物。
作为可用在本发明中的溶剂，可提到低级醇，例如乙醇、异丙醇和丙二醇。
本发明的组合物还可有利地包含矿泉水和/或矿物质水，尤其选自Vittel水、Vichy Basin的水、以及la Roche Posay水的矿泉水和/或矿物质水。
盛放物件（Article de conditionnement）
本发明的盛放物件将由本领域技术人员根据待盛放的组合物的剂型进行自然选择。
因此，对于液体组合物，可使用刚性外壳组成的容器，该刚性外壳包括用于分配组合物的器件。这些分配器件可为简单的孔（其被可去除帽封堵）或者与泵相关联的按钮，该泵用于排出包含在容器中的组合物的一部分。液体形式的本发明的组合物还可盛放在气溶胶罐型的容器中。
半液体形式或糊状形式的本发明的组合物可有利地盛放在罐中；盛放在霜剂管中；或者盛放在具有柔软壁或可变形壁且具有能够被可去除盖子堵塞的孔的容器中，该组合物通过按压壁而穿过孔排出；或者盛放在配备有如先前所述的按钮和泵的瓶中。
根据具体的实施方式，可适于容纳根据本发明的组合物的盛放物件可由玻璃、金属、合金、或涂料纸（诸如覆蜡纸，如覆盖有蜂蜡的纸，该蜂蜡尤其具有作为天然防腐剂的特性）制成。
可替选地，根据本发明的组合物可真空保存在气封隔室中，例如真空保存在通常用在食品部门的砖式纸板箱内。
盛放物件可至少部分地由塑料或者其它适合的聚合材料制成。
根据具体的实施方式，根据本发明的组合物可盛放在“保护性气氛下”。盛放在“保护性气氛下”在于改变包装物的内部环境的组成，以改善其内容物的使用寿命。该技术在于减少氧气含量以减缓需氧生命形式的生长和氧化反应。所述去除的氧可用其他气体替代。
根据具体实施方式，盛放物件还可使用可将组合物与任何光源隔离的材料制成。
盛放物件还可至少部分地由绝热材料制成。作为这种类型的材料，可提到织物，由覆盖有硅酮的玻璃纤维制成的织物，基于陶瓷纤维的纺织品，纤维素纤维，聚苯乙烯，泡沫聚苯乙烯和包装薄膜。冷凝胶或液体也可用作绝热材料。
根据具体的实施方式，盛放物件可是一次性的且仅在消费者使用之前打开。
根据一个实施方式，以固体形式配制的本发明的组合物可盛放在例如罐中、在用于条状物的管（例如唇膏管）中。
美容治疗方法
如先前所示，本发明涉及一种针对具有与表皮细胞分化和/或增值缺陷相关联的皮肤和/或覆盖物的审美缺陷的个体的美容方法。
本发明的美容治疗方法所涉及的个体自然地为具有或者易于具有至少一个如先前所限定的美容护理指征的个体。
本发明的方法可治疗如先前所限定的皮肤和/或其覆盖物的审美缺陷。
根据本发明的方法还可包括这样的步骤，其在于观察皮肤和/或其覆盖物的审美缺陷的减少或甚至消失，或者，可替选地观察皮肤和/或其覆盖物的审美外观的改善。
优选地，根据本发明的方法可局部进行、口服进行或者肠胃外用进行。
甚至更优选地，根据本发明的方法局部进行或者口服进行。
根据本发明的方法可经局部用而进行，尤其通过将美容组合物或者皮肤病用组合物的至少一个涂层涂敷至皮肤和/或其覆盖物上，该组合物包括本发明的至少一种化合物作为活性剂；且更具体地，将如先前所限定的美容组合物涂敷至皮肤和/或其覆盖物上。
根据一个实施方式，本发明的方法可包括这样的步骤：将包含作为活性剂的本发明的至少一种化合物的美容组合物或皮肤病用组合物的至少一个涂层涂敷至身体的皮肤（尤其是面部皮肤或领口皮肤）上、或者头皮上、唇部、头发、睫毛或指甲上。
优选地，本发明的方法可包括将本发明的组合物的至少一个涂层局部涂敷至皮肤或唇部，尤其是面部皮肤或领口皮肤。
有利地，本发明的局部用方法可包括将根据本发明的组合物例如以面膜的形式施用至尤其面部皮肤上。
根据用于使用这些组合物的通常技术来执行这样的施用。例如，施用可包括将霜剂、凝胶剂、浆液或者洗液涂敷到皮肤或者粘膜上。
例如，根据本发明的局部用美容方法可每天以（例如）每天施用一次或者一天施用两次(例如早上一次和晚上一次)的速率进行。
根据本发明的局部用美容方法可在一周至数周的时间段内进行、或者甚至几个月的时间段内进行，此外，该时间段可在没有进行治疗的几个月或者甚至几年的时间段后重复进行，。
例如，根据本发明的化合物的局部施用可一天重复2至3次或者更多，通常持续至少4周、或者4周至15周的时间段，在合适的情况下，可中断一个时间段或者多个时间段。
本发明的方法可有利地包括将本发明的组合物的涂敷与另外的美容组合物或皮肤病用组合物的施用组合进行、同时进行、相继进行或者间隔一段时间分别进行，该另外的美容组合物或皮肤病用组合物与本发明的组合物不同且用于护理或者修复皮肤和/或其覆盖物。
任何另外的美容组合物或皮肤病用组合物可适合用在本发明中，当然条件是该另外的组合物与本发明的组合物的组合不会影响本发明的组合物所需的特性。本领域技术人员基于其知识知道如何得到可适合使用的另外的美容组合物或皮肤病用组合物。
根据一个实施方式，该另外的组合物可局部施用至皮肤和/或其覆盖物。
根据另一实施方式，本发明的方法可包括将本发明的组合物涂敷至皮肤和/或其覆盖物上，以及将另外的美容组合物或皮肤病用组合物相继局部涂敷到所述皮肤和/或所述覆盖物上。
本发明的组合物和另外的组合物可以以“二次涂敷”美容方式将一组合物涂敷到另一组合物上。
根据一个实施方式，根据本发明的方法可包括将本发明的组合物作为第一涂层或“底层”以及如先前所限定的另外的组合物的涂层作为第二涂层或“顶涂层”涂敷至皮肤和/或覆盖物上。
根据实施方式变型，第一涂层可包括所述另外的组合物，而第二涂层可包括本发明的组合物。
本发明的美容方法可经口进行，尤其通过施用包含作为活性剂的本发明的至少一种化合物的至少一种针对美容的食品组合物，且尤其是如上所限定的针对美容的食品组合物。
根据本发明的组合物可以每天一次剂量或者一天分次剂量（如一天两次至三次）的方式进行施用。
口服美容方法可在一周至几周、或者甚至几个月的时间段内进行，该时间段还可在没有进行治疗的几个月或者甚至几年的时间段后重复进行，。
例如，口服施用作为活性剂的根据本发明的化合物可以以例如一天三次的速率进行，一般来讲可持续至少4周、或者甚至4至15周，可选地包括一个或多个中断期或者在中断期后重复进行。
根据本发明的美容方法还可肠胃外进行。进行本发明的美容方法的肠胃外实施，排除了任何手术干预且仅仅出于审美目的进行皮肤的表面治疗。
例如，可通过任何注射技术或者可适于表皮内注射和/或皮内注射和/或皮下注射的装置进行肠胃外施用。这样的施用可通过美塑疗法而进行。
可替选地，可在肠胃外使用全身型贴片以有利于施用。
例如，本发明的化合物的肠胃外施用可一个月至少一次、或者甚至一周至少一次、且一般来讲一天至少一次进行，且持续或多或少的时间段，该时间段例如可为至少四周，或者甚至4至15周，可选地包括一个或多个中断期或者在中断期后重复该施用。
根据另一方面，本发明涉及有效量的本发明的至少一种化合物在制备和/或改进多层细胞模型、尤其表皮的或粘液类型的多层细胞模型、且特别是重建皮肤的模型的用途。
有利地，本发明的化合物被添加到培养多层细胞模型的培养基中。根据待得到的细胞模型以及所使用的化合物，本领域技术人员可自然地调整在本发明的化合物存在下的细胞模型的培育时间和持续时间。
为了本发明的目的，术语“重建皮肤的模型”用于表示组合有各种细胞类型的模型，尤其例如皮肤的天然成分，例如角化细胞、成纤维细胞、朗格汉斯细胞和黑素细胞。可选地，可照射成纤维细胞类型的细胞。
这样的模型及其制造方法对于本领域技术人员是已知的。
在下面的描述和实施例中，除非另有说明，否则百分比为重量百分比且以“在…和…之间”的形式描述的值的范围包括所陈述的下限值和上限值。
出于本发明的目的，“一个”应当被理解成“至少一个”的含义，除非另有说明。
以本发明的非限定说明方式示出下面给出的实施例。
附图说明
图1：示出在以初始SASPase浓度（0.025mg/ml）的倍数（0；0.01；0.02；0.04；0.06；0.16；0.3；0.63；1.25；2.50；5.00和10.00）表达的活性重组FLG2（Hs复合物=硫氧还蛋白-His-S.Tag-FLG22-213；黑色柱状图）或非活性重组FLG2（AbD复合物=硫氧还蛋白-His-S.Tag-FLG281-212；灰色柱状图）的增大的浓度存在下，重组SASPase（28kDa）引起的荧光底物Dabcyl-QIDRIMEK-Edans的酶水解的演化。在醋酸盐/醋酸缓冲液中进行酶反应。图示出了重复进行的试验的均值±平均数标准误差。
具体实施方式
实施例1
FLG2引起的SASPase的酶活化
a-材料和方法
在亲本质粒pET32c（Novagen）或pEB6（HBGX）中制备两种形式的重组丝聚合蛋白-2（FLG2），分别对应于Q5D862(Uniprot/Swissprot ref.)的在其N-末端处融合至硫氧还蛋白-His-S.Tag(THX-His-S-tag)亲和性标记物的氨基酸序列2-213（活性形式）和氨基酸序列81-212（非活性形式）(FLG22-213-S-His-THX和FLG281-212-S-His-THX)。
这些重组嵌合蛋白在下文中以名称FLG2-Hs=FLG22-213-S-His-THX（活性形式）和FLG2-AbD=FLG281-212-S-His-THX（非活性形式）表示。
对应于序列Q53RT3（Uniprot/Swissprot ref.）的氨基酸序列85至343的28-kDa的重组SASPase按照Bernard等（J.Invest.Dermatol.,2005,125:278-287）（SASPase85-343）所描述的进行制备。
将SASPase溶解在PBS缓冲液中，且在最终浓度为0.01mM的比色底物Dabcyl-QIDRIMEK-Edans（Production Jerini Peptide Ref.D17:JPT PeptideTechnologies GmbH）的存在下，以最终浓度0.025mg/ml进行使用SASPase。
以相当于SASPase的最终浓度（即0.025mg/ml）的0.01倍、0.02倍、0.04倍、0.08倍、0.16倍、0.31倍、0.63倍、1.25倍、2.5倍、5倍或10倍的浓度使用FLG2-Hs和FLG2-AbD。
在Dabcyl-QIDRIMEK-Edans存在下，在包含150mM的NaCl的0.1M的醋酸盐/醋酸缓冲液（pH5.5）中，在37℃下，培养SASPase和FLG2-Hs或FLG2-AbD。
由激活的SASPase引起的比色底物的水解导致Edans荧光染料和其Dabcyl钝化剂（或淬灭剂）的分离、以及导致Edans荧光的增加。
以λex340nm/λem490nm进行荧光信号的测量。利用Spectramax M5e（Molecular Devices（分子学装置）），在37℃下每10分钟读取荧光，持续1小时30分钟。
b-结果
所得到的结果显示在增大浓度的活性FLG2-Hs存在下，SASPase的酶活性显著增强，然而在非活性FLG2-AbD存在下，SASPase的酶活性实际上保持不变（参见图1）。
这些结果表明FLG2与SASPase相互作用，且刺激SASPase的蛋白水解活性。在与SASPase浓度相等或高于SASPase浓度的FLG2浓度下，得到这样的活化。
实施例2
调节SASPase-FLG2相互作用的试剂的筛选
SASPase-FLG2相互作用、以及由此对SASPase蛋白水解活性的刺激作用用于筛选能够调节该相互作用的活性化合物的方法中。
所建立的方法基于FLG2-SASPase相互作用，且使用均相时间分辨荧光（或HTRF）技术。
重组SASPase蛋白（包含Q53RT3的氨基酸序列85-343），在其活性位点（Q53RT3的D212A）突变，且在其C末端处与GST（来自日本血吸虫（Schistosoma japonicum）的谷胱甘肽S转移酶）亲和性标记物融合，在载体pGEX-4-T3(GenBank U13855)中进行制备（SASPase85-343D212A-GST）。引入D212A突变以使SASPase失活且促进与FLG2的稳定相互作用。
如下制备在其N-末端与硫氧还蛋白-His-S.Tag亲和性标记物融合的重组FLG2蛋白（包括Q5D862的氨基酸序列2-213）（FLG22-213-S-His-Thx）。
所得到的质粒用于转化合格的大肠杆菌BL21DE3（E.coli BL21DE3）细菌。在将与该蛋白对应的质粒在细菌中转化后，将4ml的预培养物在37℃下搅拌（250rpm）培养过夜。将预培养物加到100mL的培养基（LB+氨苄青霉素）中，将该组合体37℃放置、搅拌，直到获得600nm的光密度至少为0.8。
然后，在16℃下，在1mM IPTG存在下搅拌过夜、诱导转化的细菌，然后离心、超声溶解。通过嵌合肽对在合适的树脂上的HIS tag或GST tag的亲和性，来纯化嵌合肽，然后利用pH8的1×PBS的缓冲液进行透析。然后所得到的嵌合蛋白利用Bradford方法进行测定。
使用分别识别亲和性标记物GST或His-S.Tag并且分别携带EuK荧光供体基团（铕穴状化合物λex337nm/λem620nm）或XL1665荧光受体基团(λex570-630nm/λem665nm)的抗体来监控肽-SASPase相互作用。
这样的抗体从市场上可得到，例如来自Cisbio International公司的编号为61GSTKLB（抗-GST K抗体）或61HISKLB（抗-6HIS K抗体）的抗体。
通过在荧光标记物Euk和XL1665之间的荧光能量转移（FRET）来观察SASPase-FLG2相互作用。以λex337nm激发Euk荧光供体，且以λem665nm测量XL1665荧光受体的荧光发射。
其发生与SASPase和FLG2之间的相互作用无关的在λem620nm处的Euk荧光发射被用于标准化信号。因此，对于每一点，确定λem665/λem620的比率。
使用来自Perkin-Elmer的Janus机器人，在pH7.4的PBS磷酸盐缓冲液中，在384-孔板中，进行筛选过程。
一式四份进行测试。在重组蛋白、DMSO和标记有荧光团的抗体的存在下，得到阳性对照（100%信号）。在蛋白稀释缓冲液（不含蛋白）、DMSO和标记有荧光团的抗体的存在下，得到阴性对照（0%信号或背景）。
DMSO以2.5%的最终浓度使用。
分别以最终浓度50nM和200nM使用重组蛋白SASPase85-343D212A-GST和FLG22-213-S-His-THX。
测试化合物以最终浓度5×10-9M、1.5×10-8M、4.6×10-8M、1.4×10-7M、4.1×10-7M、1.2×10-6M、1.1×10-5M、3.3×10-5M和1×10-4M使用。
不含有化合物的缓冲液或稀释液用作对照。
SASPase85-343D212A-GST和测试化合物在4℃下预培养60分钟，然后添加FLG2-His-THX，组合体在在4℃下培养过夜。
然后在KF（氟化钾）缓冲液（Acros ref.20135）中以最终稀释比1/400添加用于每一嵌合蛋白特定的抗体。
在使用Pherastar reader（BMG）读取荧光值（λex337nm/λem665nm，在λem620nm标准化）前，混合物在4℃培养过夜。
如下执行结果的计算。
确定对于阳性对照的λem665/λem620比率的均值为S。
确定对于阴性对照的λem665/λem620比率的均值为B。
确定对于测试化合物的浓度范围的每一点的λem665/λem620比率的均值为C。
对于测试化合物的浓度范围的每一点，通过公式A=(C–B)/(S–B)确定活性百分比A。
利用软件Graph Pad
Figure BDA00003628731900392
V.5.02，根据该软件的指示，使用具有可变梯度系数的S形剂量-响应曲线的方程，建立剂量-响应曲线。
通过在所得到的曲线的底部和平稳期之间确定中间高度的浓度，来确定IC50（抑制该效应的50%的浓度）或EC50（激活该效应的50%的浓度）。
A减小表示存在能够预防SASPase和FLG2之间的相互作用或使SASPase和FLG2之间的相互作用不稳定的化合物。
A增大表示存在能够稳定SASPase和FLG2之间的相互作用或促进SASPase和FLG2之间的相互作用的化合物。
分子数据库HBGXS10（ChemDiv Discovery Chemistry Collection PublicDatabase（序号：4477-2039），ChemDiv,Inc.圣地亚哥，USA）的筛选可识别具有以下式（II）且称作为“M7”的化合物：
Figure BDA00003628731900391
该化合物引起对SASPase-FLG2相互作用的抑制且IC50大约2μM。
因此，证明本发明的筛选方案对于识别能够正调节或负调节SASPase-FLG2相互作用的新型活性化合物是特别有利的。
对于由表皮细胞增殖和/或分化的不平衡引起的皮肤和其覆盖物的审美缺陷或病理失调，且尤其是皮肤老化和皮肤干燥，可有利地使用新型化合物。
实施例3
化合物“M7”对于表皮细胞的分化和/或增殖的效应
a-材料和方法
将重建的人表皮Episkin J6（编号09-EPIS-015）的模型浸在插入于37℃的烘箱（含有5%CO2）中的3.5ml的Episkin分化培养基中进行培养，培养基每2天换一次。
通过利用
Figure BDA00003628731900401
提供的分化培养基（包括测试浓度的化合物或作为对照的缓冲溶液（0.1%最终浓度的DMSO））培养表皮模型，以10μM、1μM和0.5μM的浓度测试化合物“M7”。
通过测量角质层的厚度、以及测量谷氨酰胺转移酶I（TGI）、半胱天冬酶14、SASPase、角膜锁链蛋白、桥粒芯糖蛋白1或蛋白Ki67的表达和/或活化来评估化合物“M7”对表皮细胞的分化和/或增殖的效应。
通过对切片的组织学观察来评估角质层的厚度。
通过蛋白质印迹法确定TGI、丝聚合蛋白、半胱天冬酶14、SASPase、角膜锁链蛋白和桥粒芯糖蛋白1的活化、表达和成熟。
通过对冷冻切片的免疫荧光检验来确定Ki67的活化、表达和成熟。
对于蛋白质印迹法，利用工匠手动从两个
Figure BDA00003628731900402
吊篮的1ml的“天然的+”缓冲液（TBS,1M NaCl,0.1%Tween20）中提取可溶性蛋白，即TGI、半胱天冬酶14、角膜锁链蛋白和SASPase。提取物在4℃下以14000rpm离心10分钟。通过0.45μm的微孔过滤器（微孔滤膜）过滤所得到上清液，然后通过BCA方法（Pierce）定量测定蛋白质。蛋白质最终浓度平衡至625μg/ml。
根据供应商的方案，提取物沉积在10-20%的标准凝胶（编号：345-0044Bio-Rad）上，然后借助半干方法转移至PVDF膜上。
根据利用专用于靶的初级抗体和与HRP连接的二级抗体进行的标准方案，执行蛋白质印迹免疫化学检测。根据必须的灵敏度和根据供应商的方案，利用试剂盒ECL、ECL plus、ECL advanced（Amersham）进行显示。所使用的光子成像装置为FluorS Multilmager（Bio-Rad）。
对于TGI，初级抗体：在兔子中产生的1/100的Covalab pab0061；二级抗体：1/4000的HRP-连接的抗兔抗体：Bio-rad170-6515。
对于半胱天冬酶14，初级抗体：在兔子中产生的1/500的Santa Cruz sc-5628；二级抗体：1/400的HRP-连接的抗兔抗体：Bio-rad170-6515。
对于角膜锁链蛋白，初级抗体：在小鼠中产生的1/5000的Abnova1041-M01；二级抗体：1/4000的HRP-连接的抗小鼠抗体：Bio-rad170-6516。
对于SASPase，初级抗体：在小鼠中产生的1/2000的Covalab7H9a105；二级抗体：1/4000的HRP-连接的抗小鼠抗体：Bio-rad170-6516。
对于丝聚合蛋白和桥粒芯糖蛋白1的蛋白质印迹，这些蛋白质在“可溶性”蛋白质提取期间所得到的小球中进行提取。利用电potter，在200μl的全Laemmli缓冲液（0.0625mM Tris；2%SDS；200mM DTT；10%甘油）中研磨这些小球，然后在90℃下加热10分钟，最后在室温下以14000rpm离心运行10分钟。
通过Bradford方法（细胞骨架）对所得到的上清液进行蛋白质分析。总蛋白浓度最终平衡至1mg/ml。应用与先前一致的蛋白质印迹方案。
对于丝聚合蛋白，初级抗体：在兔子中产生的1/1000的Abcam ab24584；二级抗体：1/4000的HRP-连接的抗兔抗体：Bio-rad170-6515。
对于桥粒芯糖蛋白1，初级抗体：在小鼠中产生的1/100的Progen61002；二级抗体：1/4000的HRP-连接的抗小鼠抗体：Bio-rad170-6516。
使用标准方案，利用PBS缓冲液，对冷冻切片进行免疫荧光标记；0.2%BSA与PBS缓冲液一起用于冲洗和培育初级抗体和二级抗体的步骤；5%BSA用于阻断非特异性位点的步骤。
对于Ki67的检测，初级抗体：在小鼠中产生的1/20的Novocastra mm1；二级抗体：1/1000的AlexaFLuor A488-连接的抗小鼠抗体（分子探针A11017）。可视化和图像捕获装置为
Figure BDA00003628731900411
光学显微镜。
b-结果
以所测试的最低浓度或高于所测试的最低浓度时，应用化合物“M7”导致角质层的增厚，这可通过光学显微镜在组织切片上观察到。
在“M7”存在下，在所培养的Episkin表皮中观察到TGI、半胱天冬酶14、SASPase、角膜锁链蛋白和桥粒芯糖蛋白的表达和活化的增加。
这些蛋白的表达与表皮中的细胞的分化相结合。
还观察到蛋白Ki67的活化和表达的下降。该蛋白与表皮细胞的增殖的中断相关联。
角质层的增厚和蛋白质—谷氨酰胺转移酶I、半胱天冬酶14、SASPase、角膜锁链蛋白和桥粒芯糖蛋白的表达和活化的增加以表皮的晚期分化为特征。
因此，证实化合物“M7”具有调节表皮细胞的增殖和分化的特性。
因此，证实这样的化合物对于预防或治疗表皮细胞分化和/或增殖的不平衡所涉及的皮肤和/或其覆盖物的病理失调或审美缺陷是特别有利的。

Claims (32)

1.至少一种化合物作为用于治疗和/或预防与表皮细胞的分化和/或增殖的不平衡相关联的皮肤和/或其覆盖物的审美缺陷的活性剂的美容用途，所述化合物能够调节第一伙伴蛋白、其同源物、突变体或片段和第二伙伴蛋白、其同源物、突变体或片段之间的相互作用，所述第一伙伴蛋白为天冬氨酸蛋白酶SASPase并且所述第二伙伴蛋白为丝聚合蛋白-2或FLG2。
2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述审美缺陷选自皮肤老化症状、表皮屏障功能失调、皮肤干燥症状、皮肤脱皮失调、和瘢痕形成缺陷和/或表皮细胞再生缺陷。
3.根据权利要求1所述的用途，其中，所述失调选自过度出汗和/或体臭问题。
4.至少一种化合物作为用于在皮肤擦洗或去角质处理后促进表皮细胞再生的活性剂的美容用途，所述化合物能够调节第一伙伴蛋白、其同源物、突变体或片段和第二伙伴蛋白、其同源物、突变体或片段之间的相互作用，所述第一伙伴蛋白为天冬氨酸蛋白酶SASPase并且所述第二伙伴蛋白为丝聚合蛋白-2或FLG2A。
5.至少一种化合物作为用于预防和/或治疗脱发和/或促进毛发再生、或预防体毛再生的活性剂的美容用途，所述化合物能够调节第一伙伴蛋白、其同源物、突变体或片段和第二伙伴蛋白、其同源物、突变体或片段之间的相互作用，所述第一伙伴蛋白为天冬氨酸蛋白酶SASPase并且所述第二伙伴蛋白为丝聚合蛋白-2或FLG2。
6.根据前述权利要求中的任一项所述的用途，其中，所述化合物由以下通式（Ia）或（Ib）表示：
Figure FDA00003628731800021
其中：
-R1表示H，直链的或支链的、饱和的或不饱和的C1-C4烷基，或者-C(O)R8，其中R8表示直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烷基；
-R2表示=O、-OR9或-OC(O)R9，其中R9表示H或饱和的C1-C2烷基；
-R3、R4、R5、R6和R7彼此独立地表示：H；-NO2；-OH；氟；-CF3；直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烷基；苯基；-OC(O)-CH(Ph)2；-O-Ph-X，其中X表示H、-OH、-NO2、氟、直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烷基或C1-C4烷氧基；-O-S(O2)-Ph-Z，其中Z表示直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烷基；-R8OH；-OR9；-OC(O)R9，其中R8和R9如先前所限定；-R10Ph，其中R10为直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4亚烷基；或者-OC(O)-Yn-Ar1-(X)m，其中
-n为0或1，且m为0至4范围内的整数，条件是n和m不同时为0，Y表示直链的或支链的、饱和的或不饱和的C1-C4亚烷基，X如先前所限定，且Ar1为
Figure FDA00003628731800022
或
其中，*为与Y连接的键，为与X连接的键，
及其生理上可接受的盐。
7.根据前一项权利要求所述的用途，其中，R1表示H、甲基、乙基或丙基或者-C(O)R8，其中R8表示甲基、乙基或丙基。
8.根据权利要求6或权利要求7所述的用途，其中，R2表示=O或-OR9，其中R9为如权利要求6中所限定的，优选地表示=O。
9.根据权利要求6至8中的任一项所述的用途，其中，R3、R4、R5、R6和R7彼此独立地表示：H；-OH；氟；甲基或乙基；苯基；-OC(O)-CH(Ph)2；-O-Ph-X，其中X表示H、-OH、氟、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；-O-S(O2)-Ph-Z，其中Z表示甲基或乙基；-R8OH；-OR9；-OC(O)R9，其中R8表示甲基或乙基且R9表示H或甲基；-R10Ph，其中R10为亚甲基或乙烯基；或-OC(O)-Yn-Ar1-(X)m，其中n、Y、X和Ar1如权利要求6中所限定的。
10.根据权利要求6至9中的任一项所述的用途，其中，R3、R4、R5、R6和R7中的至多一个表示-OC(O)-Yn-Ar1-Xm，其中Y、n、Ar1、X和m如权利要求6中所限定，且尤其R4或R6表示-OC(O)-Yn-Ar1-Xm，其中Y、n、Ar1、X和m如权利要求6中所限定。
11.根据前一项权利要求所述的用途，其中，n等于0，m等于1，X为甲基或甲氧基，优选地为甲基，且Ar1为：
Figure FDA00003628731800031
其中，*为与Y连接的键，为与X连接的键。
12.根据权利要求6至11中的任一项所述的用途，其中，R3、R5、R7和R4或R6彼此独立地表示：H；-NO2；-OH；氟；甲基或乙基；苯基；-R8OH；-OR9；-OC(O)R9，其中R8表示甲基或乙基，R9表示H或甲基；-R10Ph，其中R10为亚甲基或乙烯基。
13.根据权利要求6至12中的任一项所述的用途，其中，所述化合物由下式（II）表示：
Figure FDA00003628731800041
14.至少一种蛋白质复合物用于筛选能够通过调节第一伙伴蛋白和第二伙伴蛋白之间的相互作用而调节表皮细胞的增殖和/或分化的化合物的体外用途或间接体内用途，所述至少一种蛋白质复合物包括彼此相互作用的所述第一伙伴蛋白和所述第二伙伴蛋白，所述第一伙伴蛋白为SASPase、其同源物、突变体或片段，并且所述第二伙伴蛋白为丝聚合蛋白-2或FLG2、其同源物、突变体或片段。
15.一种用于体外筛选或间接体内筛选化合物的方法，所述化合物能够通过调节第一伙伴蛋白、其同源物、突变体或片段和第二伙伴蛋白、其同源物、突变体或片段之间的相互作用而调节表皮细胞的增殖和/或分化，所述第一伙伴蛋白为SASPase，并且所述第二伙伴蛋白为丝聚合蛋白-2或FLG2，所述方法至少包括以下步骤，所述步骤在于：
a)使所述第一伙伴蛋白和所述第二伙伴蛋白处于适合于所述第一伙伴蛋白和所述第二伙伴蛋白之间的相互作用的条件下；
b)在步骤a）之前或在步骤a）之后，使所述第一伙伴蛋白和所述第二伙伴蛋白中的至少一种与一物种组合；
所述蛋白与所述物种形成在暴露在激发波长中之后能够发出信号的组合体，且实施步骤a）和步骤b）导致由所述第一伙伴蛋白和所述第二伙伴蛋白相互作用产生复合物；
c)使所述复合物经受所述激发波长以得到表示所述复合物的特征的第一信号S1；
d)定量地或定性地确定所述信号S1；
e)在适合于待筛选的化合物和所述复合物之间的相互作用的条件下，使所述复合物与假定包含所述化合物的介质接触；
f)使在步骤e）中得到的所述介质经受所述激发波长以得到第二信号S2；
g)定量地或定性地确定所述信号S2，和
h)比较所述第一信号S1和所述第二信号S2，以得出关于所筛选的化合物能够调节所述第一伙伴蛋白和所述第二伙伴蛋白之间的相互作用的结论。
16.根据前一项权利要求所述的方法，其中，所述蛋白通过化学偶联、通过分子生物学或者通过独特的高亲和性相互作用与所述物种组合。
17.根据权利要求15或权利要求16所述的方法，其中，所述物种选自适合于表面等离子体共振的载体、荧光标记物、抗体或初级抗体和二级抗体的组合，所述抗体或所述二级抗体携带有荧光标记物。
18.根据权利要求15至17中的任一项所述的方法，其中，所述物种为抗体或者初级抗体和二级抗体的组合。
19.根据权利要求17或权利要求18所述的方法，其中，所述抗体选自单克隆抗体、多克隆抗体、“双价抗体”、scFv抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、嵌合抗体、人源化抗体和重组抗体。
20.根据权利要求16至19中的任一项所述的方法，其中，所述第一伙伴蛋白和/或所述第二伙伴蛋白携带有由抗体识别的亲和性标记物，且优选地，所述标记物选自标记物Myc、FLAF、His、His-tag、GST（谷胱甘肽s-转移酶）、THX（硫氧还蛋白）、MBP（麦芽糖-结合蛋白）、THX-His-tag或THX-His-S-tag。
21.根据权利要求16至20中的任一项所述的筛选方法，其中，所述第一伙伴蛋白和所述第二伙伴蛋白分别与第一物种和第二物种组合，所述第一物种和所述第二物种分别包括荧光基团A和荧光基团B，所述基团A和所述基团B限定了受体-供体对，所述受体-供体对的荧光能量适合于通过荧光共振进行能量转移。
22.根据前一项权利要求所述的筛选方法，其中，所述第一物种和所述第二物种为携带有荧光标记物的抗体且适合分别与第一亲和性标记物和第二亲和性标记物结合，所述第一亲和性标记物和第二亲和性标记物分别由所述第一伙伴蛋白和所述第二伙伴蛋白携带。
23.根据权利要求21或权利要求22所述的方法，其中，所述信号S1为通过以激发波长照射荧光能量供体所得到的荧光信号。
24.根据权利要求21至23中的任一项所述的方法，其中，所述信号S2为通过以激发波长照射荧光能量供体所得到的荧光信号。
25.根据权利要求15至24中的任一项所述的方法，其中，所述所筛选的化合物为所述第一伙伴蛋白和所述第二伙伴蛋白之间的相互作用的激动剂或拮抗剂。
26.根据权利要求15至25中的任一项所述的方法，其中，所述所筛选的化合物能够治疗和/或预防与表皮细胞分化和/或增殖缺陷相关联的皮肤和/或其覆盖物的审美失调或病理失调。
27.一种药物组合物或皮肤病用组合物，所述药物组合物或皮肤病用组合物包括在生理上可接受的介质中的至少有效量的至少一种如权利要求1和权利要求6至13中的任一项所限定的化合物，用于预防和/或治疗与表皮细胞分化和/或增殖的不平衡相关联的皮肤和/或其覆盖物的病理失调。
28.根据前一项权利要求所述的组合物，其中，所述失调选自癌、银屑病、白癜风、酒糟鼻和特应性皮炎。
29.一种美容组合物，所述美容组合物包括在生理上可接受的介质中的作为活性剂的至少有效量的至少一种如权利要求1和权利要求6至13中的任一项所限定的化合物以及至少一种美容上或皮肤病学上可接受的成分，所述成分选自美容活性剂或皮肤病学活性剂、防腐剂、亲水胶凝剂或亲脂胶凝剂、非离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂或阳离子型表面活性剂、抗氧化剂、盐、香料、填料、气味吸收剂、染料、成膜聚合物、半结晶聚合物、树胶和挥发性油或非挥发性油、及其混合物。
30.一种用于盛放美容组合物、药物组合物或皮肤病用组合物的物件，所述组合物包含至少一种含有根据权利要求1和权利要求6至13中的任一项所述的至少一种化合物的美容组合物、药物组合物或皮肤病用组合物。
31.一种用于预防和/或治疗个体中与表皮细胞分化和/或增殖的不平衡相关联的皮肤和/或其覆盖物的审美缺陷的美容方法，所述方法包括将根据权利要求1和权利要求6至13中的任一项所述的至少一种化合物施用至所述个体的至少一个步骤。
32.一种蛋白复合物，所述蛋白复合物包括彼此相互作用的第一伙伴蛋白和第二伙伴蛋白，所述第一伙伴蛋白为SASPase、其同源物、突变体或片段并且所述第二伙伴蛋白为丝聚合蛋白-2或FLG2、其同源物、突变体或片段。
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