KR20130041636A - 마카추출물을 유효성분으로 하는 항피로, 염증성 장질환 예방 및 개선용 조성물 - Google Patents
마카추출물을 유효성분으로 하는 항피로, 염증성 장질환 예방 및 개선용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 마카추출물의 신규한 용도에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 마카의 초임계 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 염증성 장질환 예방 및 개선용 식품 조성물 및 마카의 초임계 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항피로용 식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 마카의 초임계 추출물은 항피로에 효과가 있고, 염증성 장질환의 예방 및 개선 효과가 있어 식품 산업적으로 유용한 항피로용 식품조성물 및 염증성 장질환 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공할 수 있다.
Description
본 발명은 마카추출물의 신규한 용도에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 마카의 초임계 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 염증성 장질환 예방 및 개선용 식품 조성물 및 마카의 초임계 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항피로용 식품 조성물에 관한 것이다.
최근 한국인의 평균 수명은 10~20년 전에 비하면 평균 약 10살 이상 연장되었다. 그러나 영양상태가 향상되고 항생제의 발달로 결핵, 폐렴과 같은 감염성 질병에 의한 사망률은 격감되고 있는 반면, 서구식 식생활과 과도한 직장업무에 대한 스트레스와 피로로 인해 각종 성인병에 노출되어 있다. 과로로 인한 피로의 축적은 자칫 만성피로를 유발하고, 만성피로는 간질환, 위장질환, 고혈압 등의 많은 질병의 주요원인이 되고 있는 실정이다.
피로(fatigue) 혹은 스트레스(stress)가 쌓였다고 표현하는 것은 심신의 기능이 원활히 이루어지지 않는 경우를 이르는 것이다. 주로 피로(fatigue)의 경우 근 수축 활동에 요구되는 힘을 충분히 발휘하지 못하는 상태, 즉 운동수행능력이 감소된 상태(Gibson H, et al, Sports Med., 1985. 2(2):120-32)라고 할 수 있으며, 육체적인 피로와는 대조적으로 스트레스(Stress)는 정신적인 과부하로 인해 오는 신체리듬의 불균형으로 이해할 수 있다. 따라서 넓은 의미의 피로는 fatigue와 stress를 모두 포함하는 개념으로 육체적 또는 정신적 활동을 하기 위한 능력의 감소라고 할 수 있다.(식약청 건강기능식품의 피로회복 관련기능성 평가체계 구축, 연구결과보고서). 이러한 피로의 축적으로 인한 만성피로는 다양한 장질환의 근원이 된다.
염증성 장질환 (Inflammatory bowel disease, IBD)은 위장관 내에 만성적인 염증을 유발하는 질환으로, 흔히 궤양성 대장염 (Ulcerative colitis, UC)과 크론병 (Cron's disease, CD)의 2가지 형태로 분류된다. 상기 염증성 장질환의 특징적인 증상은 염증 부위에서 종양괴사인자 (Tumor nerosis cytokine; TNF-α), 인터루킨 (Interluekin; IL) IL-1, IL-6, IL-8 생성이 궤양성 대장염과 크론병 환자에게 현저하게 증가된다는 것이다. 이는 환자들의 싸이토카인에 생산 조절이 염증성 장질환에 있어서 병리 생리학적으로 매우 중요함을 보여 주는 것이다 (Sartor RB, Cher, D. J et al., 1987).
최근 학계 및 산업계에서는 체중 감량, 피로회복, 지구력 증진, 면역력 증대 및 성 호르몬 증대 등을 목적으로 다양한 식물자원의 생리활성을 연구하여 새로운 이용 가능성에 대한 연구를 추진하고 있다.
그 중에서도, 마카 (Lepidium meyenii Walpers, maca)는 십자화과(Brassicaceae)에 속하는 식물로서 주로 페루의 안데스 산맥 해발 4,000m 이상의 고지대에서 재배되는 일년생 식물로 추위, 강풍, 가뭄 등 어려운 자연 환경에서 자라기 때문에 생명력이 매우 강하고, 탄수화물, 단백질, 지질, 비타민, 무기질, 섬유소 등이 함유되어 있어 영양가가 높고 알칼로이드, 스테로이드, 탄닌, 사포닌 등의 다양한 생리기능성 물질이 존재하는 것으로 밝혀지고 있다.
마카 (maca)에 대한 연구로는 마카 추출물 함유 알코올 음료 (대한민국 공개특허 제10-2007-0003979호), 마카 추출물을 포함하며 항산화 작용 및 기억력 증진 효과가 있는 음료 (대한민국 공개특허 제10-2010-0118816호) 및 옥타코사놀 및 마카추출물을 유효성분으로 피부활력 증가 효과가 있는 화장료 조성물 (대한민국 공개특허 제10-2010-0060780호)이 개시된 바 있다.
그러나, 상기 결과들은 마카추출물의 항피로, 염증성 장질환에 대한 효과를 고려하지 않았으며, 항피로, 염증성 장질환 예방 및 개선 효과를 위한 유효용량을 고려하지 않은 제한점이 있다.
이에 본 발명자들은 마카추출물의 기능에 대하여 연구하던 중, 마카추출물이 항피로에 관한 효과가 있고, 특히 염증성 장질환의 예방 및 개선과 관련된 효과가 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 마카추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 염증성 장질환 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 마카추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항피로용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 마카추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 염증성 장질환 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 마카추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항피로용 식품 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 마카추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 염증성 장질환 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공한다. 마카추출물은 구체적으로 마카의 초임계 추출물이다.
본 발명의 마카추출물 추출은 초임계 유체를 이용하여 초임계 상태의 유체가 갖는 여러 장점을 이용하는 추출기술로, 증류(distillation)와 추출(extraction)의 원리가 같이 적용되는 복합 기술로 초임계 유체는 압력 온도의 조작에 의하여 고밀도 상태에서 저밀도 상태의 어떤 조건 설정도 가능하기 때문에 분획 및 분리 등의 선택성이 뛰어나서 고순도의 제품을 얻을 수 있고, 추출 용매를 손실 없이 거의 완전하게 회수할 수 있으며, 잔존 용매가 없는 정제물을 얻을 수 있다.
상기 초임계 유체를 이용하는 마카추출물 추출방법은 기본적으로 건조마카분말을 추출기에 충진하고, 추출기에 초임계 유체를 투입하여 추출된 초임계 유체와 마카추출물을 감압시켜 분리하며, 분리된 유체를 펌프에 의해 가압하여 재순환시키는 공정으로 구성된다. 이때, 마카의 추출 효율을 향상시키기 위하여 마카를 미세입자로 파쇄하는 전처리 공정이 더 추가되는 것이 바람직하다. 또한, 상기 초임계 유체는 이에 제한되지 않으나 이산화탄소를 사용하는 것이 가장 바람직하며, 온도와 압력 또한 이에 제한되지는 않으나 온도는 35 내지 80℃, 압력은 75 내지 600 bar일 수 있다.
본 발명의 일실시예에서 장염증유발 동물모델에 마카추출물을 처리하여 마카추출물 섭취 시, 체중 및 장 길이가 회복되는 효과와 분변의 점도 및 직장의 출혈이 유의하게 감소하는 염증증상 완화 효과를 확인하였다. 아울러, 마카추출물 섭취시 장내의 상피세포 및 술잔세포가 회복되는 장조직의 손상 완화 효과가 관찰되었다.
본 발명의 다른 일실시예에서는 장염증유발 동물모델에 마카추출물을 처리하여 마카추출물 섭취 시, MPO의 활성이 감소하고 염증에 의한 호중구의 침윤 억제 및 염증특이적 단백질의 발현 억제 효과와 염증성 장질환 주요 마커인 S100a8의 발현이 현저히 줄어드는 것을 확인해 염증성 장질환 (inflammatory bowel disease) 억제 효과가 있음을 알 수 있었다.
따라서, 본 발명에서는 마카추출물이 염증성 장질환의 예방 및 개선에 우수한 효과가 있음을 확인하였으며, 이에 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 마카 (maca, Lepidium meyenii Walp)는 남미 페루와 볼리비아 안데스 고지를 원산으로 하는 유채과 일년생 식물로 땅위로 기듯이 잎을 펼쳐 생육하고, 그 뿌리는 순무와 같은 형태를 하고 있다. 마카는, 안데스 지방에서는 거의 2000년 이상 전부터 재배되고 있고, 건강 유지를 위한 식품으로서 식용되어 온 식물이다.
마카의 주요 구성성분은 다당류, 단백질 등이고, 아미노산이 많이 함유되어 있다. 또한, 체내에서 합성되지 않고 식품으로부터 섭취할 필요가 있는 필수 아미노산과 각종 비타민 (비타민 B군, C, E 등)이나 미네랄 (칼슘, 철, 아연 등)등이 풍부하게 함유되어 있다.
염증성 장질환(IBD: Inflammatory Bowel Disease)는 궤양성 대장염 및 크론병으로 대표되는 대장 및 소장의 점막에 만성 염증 및/또는 궤양을 일으키는 원인 불명의 질환의 총칭으로 이에 제한되지 않으나 예를 들어, 장 병변, 궤양성 대장염, 출혈성 직장 궤양 및 회장 낭염(囊炎)일 수 있다.
환자의 상당수는 10대~20대로 비교적 젊은 연령에서 발증하며, 설사, 발열, 복통 등의 임상 증상이나 전신적인 염증 증상을 나타내고, 경구적으로 섭취한 음식물의 영양을 효율적으로 흡수할 수 없게 될 뿐더러, 식이 제한이나 배변 회수가 많아 사회생활이 어려움을 겪는 일이 문제로 되고 있으며, 염증성 장질환의 원인으로서 자기면역 이상설이나 장내 세균설 등이 보고되고 있다.
본 발명은 마카추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항피로용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 일실시예에서 마카추출물을 30 또는 100 mg/kg으로 3주간 섭취시킨 실험군의 혈액에서 생화학적 지표들을 측정하였다. 그 결과, 마카추출물이 간 독성에 영향을 주지 않으며 항피로 효과가 있다는 것을 확인하였다.
본 발명의 다른 일실시예에서는 마카추출물을 30 또는 100 mg/kg으로 3주간 섭취 한 실험군의 간과 근육에서 항산화 지표들을 측정하였다. 그 결과, 마카추출물을 섭취한 실험군에서 항산화 지표 (TBARS, GSH, Catalase)의 변화에 유의적 영향을 줌으로써 운동에 따른 산화적 스트레스 감소가 최대수영시간 증가에 영향을 주는 것을 확인하였다.
따라서, 본 발명에서는 마카추출물이 항피로에 우수한 효과가 있음을 확인하였으며, 이에 이를 유효성분으로 포함하는 항피로용 식품 조성물을 제공한다.
상기 피로는 작업을 할 때 작업능률이 저하되는 상태, 항상성의 혼란이 일어나는 상태, 또는 대뇌피질의 제지작용이 일어나는 상태로서 육체적, 정신적 활동을 하기 위한 능력의 감소라고 할 수 있다. 또한 넓은 의미의 피로는 fatigue와 stress를 모두 포함하는 개념으로 육체적 또는 정신적 활동을 하기위한 능력의 감소로 요약 가능하나, 협의의 fatigue는 주로 육체적 피로로 작업능률이 저하되는 상태, 그리고 stress는 정신적 피로로 항상성의 혼란이 일어나는 상태로 정의할 수 있다.
한편, 본 발명의 조성물은 약학적 조성물 또는 식품 조성물일 수 있다.
본 발명에 따른 식품 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food) 및 식품 첨가제(food additives), 유산균 음료, 발효유 등의 모든 형태를 포함한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당 업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.
예를 들면, 건강식품으로는 본 발명의 마카추출물 자체를 유산균음료, 발효유, 차, 주스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용하도록 하거나, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 본 발명의 마카추출물은 염증성 장질환 예방 및 개선, 항피로에 효과가 있다고 알려진 공지의 물질 또는 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.
또한, 기능성 식품으로는 음료(알코올성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지, 콘비프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게티, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치즈 등), 식용식물유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 본 발명의 마카추출물을 첨가하여 제조할 수 있다.
또한 마카추출물을 스타터로 이용하여 우유, 곡류, 과일, 채소, 콩류, 당류 등과 단독 또는 혼합 발효하여 마과 식물을 혼합한 음료 형태로 제조할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물 중 상기 마카추출물의 바람직한 함유량으로는 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 최종적으로 제조된 식품 중 0.01 내지 50 중량%이다.
또한, 본 발명의 마카추출물을 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다.
아울러, 본 발명에 따른 마카추출물은 염증성 장질환 예방 및 개선, 항피로를 위한 목적으로 약학적 조성물의 형태로 제공될 수 있다. 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양의 마카추출물을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)이 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 상기에서 '약학적으로 유효한 양'이란 음성 대조군에 비해 그 이상의 반응을 나타내는 양을 말하며 바람직하게는 위장질환을 예방 및 개선하기에 충분한 양을 말한다. 본 발명에 따른 마카추출물의 유효한 양으로는 0.001 내지 1000mg/day/kg체중이며, 이에 한정되는 것은 아니다. 그러나 상기 약학적으로 유효한 양은 질환 및 이의 중증정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등과 같은 여러 인자에 따라 적절히 변화될 수 있다.
본 발명의 조성물은 상기 약학적으로 허용되는 담체와 함께 당업계에 공지된 방법으로 투여경로에 따라 다양하게 제형화될 수 있다. 상기에서 "약학적으로 허용되는" 이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 활성성분의 작용을 저해하지 않으며 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 비독성의 조성물을 말한다. 본 발명의 조성물은 상기 약학적으로 허용되는 담체와 함께 당업계에 공지된 방법으로 투여경로에 따라 다양하게 제형화될 수 있다. 투여 경로로는 이에 한정되지는 않으나 경구적 또는 비경구적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물을 경구 투여하는 경우 본 발명의 약학적 조성물은 적합한 경구 투여용 담체와 함께 당 업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 형태로 제형화될 수 있다. 적합한 담체의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 및 말티톨 등을 포함하는 당류와 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 및 감자 전분 등을 포함하는 전분류, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 등을 포함하는 셀룰로즈류, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 등과 같은 충전제가 포함될 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있다. 나아가, 상기 약학적 조성물은 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
또한, 비경구적으로 투여하는 경우 본 발명의 약학적 조성물은 적합한 비경구용 담체와 함께 당 업계에 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있다.
그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., 1995, Mack Publishing Company, Easton, PA).
나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 염증성 장질환 예방 및 개선, 항피로 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.
이상 살펴본 바와 같이, 본 발명의 마카 추출물은 항피로에 효과가 있고, 염증성 장질환을 효과적으로 예방/개선하여 항피로 및 염증성 장질환 예방/개선에 효과적이다. 따라서, 본 발명의 마카추출물은 염증성 장질환의 예방 및 개선, 항피로의 목적으로 사용될 수 있다.
도 1은 각 실험군별 마카추출물 섭취 후 체중 및 장 길이의 변화를 나타낸다.
도 2는 각 실험군별 마카추출물 섭취 후 분변의 점도 및 직장 출혈 을 나타낸다.
도 3은 각 실험군별 장염증유발 모델에서 마카추출물 섭취 후 장 조직의 변화를 나타낸다.
도 4는 각 실험군별 마카추출물 섭취 후 마이엘로퍼록시데이즈 (myeloperoxidase, MPO) 및 염증특이적 단백질을 나타낸다.
도 5는 각 실험군별 마카추출물 섭취 후 염증성 장질환 (inflammatory bowel disease) 의 주요 마커인 S100a8의 변화를 나타낸다.
도 6은 각 실험군별 마카추출물의 유효용량을 나타낸다.
도 7는 각 실험군별 마카추출물 섭취 후 항산화 지표의 변화를 나타낸다.
도 2는 각 실험군별 마카추출물 섭취 후 분변의 점도 및 직장 출혈 을 나타낸다.
도 3은 각 실험군별 장염증유발 모델에서 마카추출물 섭취 후 장 조직의 변화를 나타낸다.
도 4는 각 실험군별 마카추출물 섭취 후 마이엘로퍼록시데이즈 (myeloperoxidase, MPO) 및 염증특이적 단백질을 나타낸다.
도 5는 각 실험군별 마카추출물 섭취 후 염증성 장질환 (inflammatory bowel disease) 의 주요 마커인 S100a8의 변화를 나타낸다.
도 6은 각 실험군별 마카추출물의 유효용량을 나타낸다.
도 7는 각 실험군별 마카추출물 섭취 후 항산화 지표의 변화를 나타낸다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1>
마카
초임계
추출물의 제조
고압추출기와 감압분리기 및 순환장치 등으로 구성된 초임계 유체 추출기에 건조된 마카분말(Peruvian Nature社, 페루)1kg을 충진하고 초임계 이산화탄소로 추출하였다. 이 때 초임계 이산화탄소의 온도와 압력은 2시간 동안 일정한 비율에 따라 기울기구배로 증가시켰는데, 온도는 초기 35℃에서 80℃까지 분당 0.375℃씩 상승시켰고 압력은 75bar에서 600bar까지 분당 4.375bar씩 증가시키면서 추출하였다. 초임계 이산화탄소 추출시간은 총 3시간이며, 기울기구배의 마지막 구간인 80℃, 600bar에 도달했을 때 온도와 압력을 고정한 뒤 1시간동안 추출을 진행한 후 마카 초임계 추출물을 회수하였다.
마카 초임계 추출물과 일반적인 추출방식인 열수 내지 주정 추출물에 대한 구성성분을 [표 1]에 비교하여 나타내었다.
마카 초임계 추출물 | 마카 열수 추출물 | 마카 주정 추출물 | |
탄수화물(%) | 37.6 | 52.4 | 53.1 |
단백질(%) | 10.3 | 13.4 | 9.5 |
지방(%) | 18.5 | N.D | 3.3 |
수분(%) | 33.2 | 34 | 33.7 |
회분(%) | 0.4 | 0.2 | 0.4 |
<실시예 2>
장염증유발
모델에서
마카추출물
섭취 후 체중 및 장 길이의 변화에 대한 효과
[표 2]에서 보는 바와 같이, 실험동물 (BALB/c, 6주령)을 4개의 실험군으로 나누고 3% DSS (dextran sodium sulfate)를 투여하여 염증을 유발한 장염증유발 동물모델에 마카추출물과 설파살라진 (sulfasalazine)을 처리하였다. 처리 1주후 염증의 주요증상 지표 및 염증의 주요단백질 지표를 조사하였다.
실험군 | 실험물질 | 투여용량 | 동물 수 |
Control | Normal | 11 | |
Vehicle | 3% DSS | 11 | |
MLE30 | 3% DSS + 마카추출물 | 30 mg/kg | 11 |
SAL100 | 3% DSS + Sulfasalazine | 100 mg/kg | 11 |
장염증유발 동물모델을 상기 [표 2]에 기재한 바와 같이 처리하여 체중 및 장 길이의 변화를 측정하였다.
그 결과 [도 1A]와 [도 1B]에서 보는 바와 같이, 3% DSS 처리군은 염증에 대한 현상학적 변화에 따라 대조군에 비해 체중 및 장 길이가 감소하였지만, 마카추출물 섭취 시 체중 및 장 길이가 회복되는 효과를 확인하였다.
<실시예 3>
마카추출물
섭취 후
분변의
점도 및 직장 출혈 측정
장염증유발 동물모델을 상기 [표 2]에 기재한 바와 같이 처리하여 분변의 점도 및 직장의 출혈 정도를 관찰하고 점수화하였다. 분변의 점도 및 직장 출혈의 정도는 Cooper 등이 제시한 장염증의 활동성 지표 (Disease activity index) 기준에 따라 점수화하였다. 분변의 경우 정상 0, 묽은 변 2, 설사의 경우 4점으로 측정하였고, 직장 출혈의 경우 정상 0, 잠혈 2, 심한 출혈시 4점으로 측정하였다.
그 결과 [도 2A]에서 보는 바와 같이 총 7일간 3% DSS를 포함하는 음수를 섭취시킨 실험동물에서 시간이 지남에 따라 장염증이 증가하여 분변의 점도 및 직장의 출혈이 증가되는 것이 관찰되었다. [도 2A] 및 [도 2B]에서 보는 바와 같이, 3% DSS 처리군에서는 분변의 점도 및 직장의 출혈이 시간이 흐름에 따라 대조군에 비하여 상승하나 마카추출물 섭취시 분변의 점도 및 직장의 출혈이 유의하게 감소하여 염증증상을 완화시킴을 확인하였다.
<실시예 4>
장염증유발
모델에서
마카추출물
섭취 후 장
조직의 변화
장염증유발 동물모델을 상기 [표 2]에 기재한 바와 같이 처리하여 장조직의 조직학적 변화 양상을 확인하였다. 적출한 대장조직을 생리식염수로 세척하고 조직학적 관찰을 위해 대장 상부 조직을 10% 중성완충포르말린에 고정한 다음 파라핀 조직 블럭을 제작하였다. 4-5 ㎛ 두께로 조직절편을 제작하고 Hematoxylin & Eosin 염색 후 현미경에서 관찰하였다. 모든 조직 검체는 외부 병리학자에 의해 독립적으로 전체적인 점막의 상태와 음와 (crypt)의 변형, 염증성 세포의 침윤 여부, 부종의 유무 등을 관찰하였다.
그 결과 [도 3]에서 보는 바와 같이, 3% DSS 처리군에서는 음와 (crypt)가 거의 소실되어 있고 점막층(mucosa)에 있는 상피세포 및 술잔세포가 대조군에 비하여 손상되어 있으나, 마카추출물 처리시 상피세포 및 술잔세포가 회복되어 장조직의 손상을 완화시킴을 확인하였다.
<실시예 5>
마카추출물
섭취 후
마이엘로퍼록시데이스
(
myeloperoxidase
,
MPO
) 및 염증특이적 단백질의 측정
장염증유발 동물모델을 상기 [표 2]에 기재한 바와 같이 처리하여 염증에 의한 호중구의 침윤을 알 수 있는 MPO의 활성과 염증특이적 단백질의 변화를 측정하였다. MPO 활성은 Krawisz 등의 방법에 따라 장조직을 균질화 하여 효소원을 얻은 후 효소원에 기질로서 과산화수소와, 수소공여체로서 O-dianisidine을 첨가하여 460 nm에서 흡광도의 변화를 측정하였다. MPO 활성 1 unit은 실온에서 1분간 1 ㎛의 과산화수소가 물로 환원시키는 효소의 양을 의미하며 이를 대장조직 무게로 환산하여 표기하였다. 염증특이적 단백질로서 싸이토카인인 인터루킨-1베타(IL-1β), 티엔에프-알파(TNF-α) 및 인터루킨-6 (IL-6)과 전사조절인자 인산화된 아이카파비 (p-IκB)에 대하여 웨스턴 블랏을 통해 단백질의 발현을 평가하였다. 간략하게, 장조직을 세포용해 완충액에 용해시키고 20 ㎍의 단백질 용해액을 10% SDS-PAGE 젤에 전기영동하였다. 단백질을 젤에서 PVDF 막으로 옮긴 후 각 단백질의 항체와 반응시키고 다시 2차 항체와 반응 후 ECL을 이용하여 X-ray 필름에 감광시켰다.
그 결과 [도 4A]에서 보는 바와 같이, 3% DSS 처리군에서는 MPO의 활성이 대조군에 비하여 증가하나 마카추출물 처리시 MPO의 활성이 감소하고 이를 통해 염증에 의한 호중구의 침윤을 효과적으로 억제함을 확인하였다.
또한 [도 4B]에서 보는 바와 같이, 3% DSS 처리군은 대조군에 비해 염증 특이적으로 발현되는 싸이토카인인 인터루킨-1베타, 티엔에프-알파 및 인터루킨-6과 전사조절인자 인산화된 아이카파비 (p-IκB)의 발현이 증가되지만 마카추출물에 의해 염증특이적 단백질의 발현이 억제됨을 확인하였다.
<실시예 6>
마카추출물
섭취 후 염증성 장질환 (
inflammatory
bowel
disease
) 의 주요
마커인
S100a8
의 변화 측정
장염증유발 동물모델을 상기 [표 2]에 기재한 바와 같이 처리하여 염증성 장질환 (inflammatory bowel disease)의 주요 마커로 알려진 S100a8의 발현양상과 장조직 및 혈중 S100a8의 농도를 측정하였다. 장조직내 S100a8 단백질의 발현은 <실시예 5> 에서 기술한 바와 같이 웨스턴 블랏을 통해 측정하였고, 장조직 및 혈중 S100a8의 농도는 USCN Life Science사의 효소결합면역측정 (ELISA) 키트를 이용하여 측정하였다. 간략하게, S100a8에 대한 항체가 코팅된 플레이트에 조직 용해액 및 혈청을 넣고 반응 시킨 후 여기에 효소가 결합된 항체를 첨가하여 TMB (3,3',5,5'-tetramethyl bezidine)를 기질로 하는 발색반응을 유도한 후 450 nm에서 흡광도를 측정하여 S100a8 표준용액에 대한 표준곡선으로부터 시료의 농도를 측정하였다.
그 결과 [도 5A]에서 보는 바와 같이, 3% DSS 처리군에서 S100a8의 발현이 대조군에 비해 증가하였지만 마카추출물 처리시 S100a8의 발현이 현저히 줄어드는 것을 확인해 염증성 장질환 (inflammatory bowel disease) 억제 효과를 확인하였다.
또한 [도 5B]에서 보는 바와 같이, 혈중 S100a8의 농도를 확인한 결과 마카추출물이 혈액내의 S100a8 발현을 효과적으로 억제함을 확인하였다.
<실시예 7>
마카추출물
섭취에 따른 최대 수영시간 증가 효과 측정
수영운동 부하모델에서 마카추출물의 유효용량을 측정하기 위해서 실험동물 (SD rat, 6주령)을 수영능력측정 장비에 충분히 적응시킨 후, 각 군당 15마리씩 총 5개의 실험군으로 나누어 마카추출물을 각각 0, 30, 100, 300, 1000 mg/kg·BW/day, p.o.의 양으로 섭취하게 하고, 섭취 후 7일과 21일에 최대수영시간을 측정하였다.
그 결과, [도 6A]와 [도 6B]에서 보는 바와 같이, 마카추출물을 30 내지 100 mg/kg·BW/day, p.o. 용량을 섭취한 실험군에서 수영시간이 증가되는 결과를 확인하였다. 이는 천연 추출물이 순수 정제물과 달리 농도 의존적이지 않은 특징을 나타내주는 것이고, 마카추출물을 3주간 100 mg/kg·BW/day, p.o.씩 섭취한 실험군은 마카추출물을 전혀 섭취하지 않은 대조군에 비해 최대수영시간이 40% 증가하는 결과를 확인하였다.
<실시예 8>
마카추출물
섭취에 따른 체중 및 장기무게의 변화 측정
상기 실시예 7의 실험모델에서 3주 동안 농도별로 마카추출물을 섭취 시킨 실험동물의 체중, 간, 비복근 및 가자미근의 무게를 측정하였다.
대조군 | 마카추출물 (mg/kg) | ||||
30 | 100 | 300 | 1000 | ||
체중 (g) |
334.4±5.10 | 334.8±2.70 | 337.0±6.20 | 336.7±4.3 | 327.2±5.30 |
간 (g/BW·kg) |
38.04±0.5 | 38.35±0.63 | 39.05±0.85 | 37.72±0.75 | 38.97±0.91 |
좌 비복근 (g/BW·kg) |
6.32±0.09 | 6.31±0.09 | 6.30±0.09 | 6.40±0.11 | 6.23±0.07 |
우 비복근 (g/BW·kg) |
6.28±0.09 | 6.11±0.13 | 6.21±0.10 | 6.30±0.08 | 6.13±0.07 |
좌 가자미근 (g/BW·kg) |
0.46±0.02 | 0.45±0.02 | 0.46±0.02 | 0.45±0.02 | 0.44±0.01 |
우 가자미근 (g/BW·kg) |
0.45±0.02 | 0.45±0.01 | 0.46±0.02 | 0.46±0.02 | 0.43±0.01 |
그 결과 [표 3]에서 보는 바와 같이, 3주간의 마카추출물 섭취 후 체중, 간, 비복근 및 가자미근의 무게는 대조군과 비교하여 차이가 없음을 확인하였다.
<실시예 9>
마카추출물
섭취에 따른
항피로
효과 측정
마카추출물을 30 또는 100 mg/kg으로 3주간 섭취시킨 실험군을 디에틸 에테르(diethyl ether)로 마취하고, 복부 대동맥으로부터 주사기를 이용하여 전혈을 채혈하였다.
채혈한 혈액에서 AST 및 ALT는 340nm에서 NADH의 흡광도 변화를 측정하는 UV법을 사용하였고, ALP는 Diethanolamine (DEA) buffer와 P-nitrophenyphosphate를 기질로 사용한 Bessy-Lowry법, FFA, LDH는 효소법을 각각 이용하여 측정하였다. 그리고 BUN은 urease-indophenol법을 이용하여 Hitachi 747 자동화학 분석기(Hitachi Co. Japan)로 각각 측정하였다.
대조군 | 마카추출물 (mg/kg) | ||
30 | 100 | ||
AST (U/L) | 96.7±2.9 | 98.0±2.3 | 96.2±2.3 |
ALT (U/L) | 55.0±1.6 | 57.8±1.5 | 57.0±1.5 |
LDH (U/L) | 426±53 | 316±16 | 300±12* |
CK (U/L) | 254±9 | 246±9 | 252±11 |
BUN (mg/dL) | 18.0±0.6 | 16.6±0.4 | 17.9±0.5 |
Glucose (mg/dL) | 242±12 | 243±10 | 265±12 |
FFA (mg/dL) | 429±18 | 415±23 | 420±26 |
Lactate (mg/dL) | 21.5±0.7 | 21.4±0.9 | 21.7±0.9 |
IP (mg/dL) | 14.0±0.3 | 14.2±0.3 | 14.3±0.3 |
Glycogen, muscle (mg/g) | 23.7±1.8 | 21.6±1.8 | 25.6±1.3 |
Glycogen, liver (mg/g) | 2.2±0.2 | 2.2±0.2 | 2.3±0.2 |
*P<0.05 compared to the control
그 결과 [표 4]에서 보는 바와 같이, 마카추출물을 3주간 섭취하더라도 간 독성 지표인 AST 및 ALT가 대조군과 비교하여 차이가 없는 결과를 확인하였다.
또한, 최대수영시간의 유의적 증가에도 불구하고 마카추출물을 섭취한 실험군에서 근육 내 저장에너지인 글리코겐의 함량이 변하지 않고 혈액내 피로 물질인 lactate가 증가하지 않았다. LDH의 수치는 마카추출물을 100 mg/kg으로 섭취한 실험군에서 대조군에 비해 30% 감소하는 결과를 확인하였다. 이는 마카추출물이 간 독성에 영향을 주지 않으며 항피로 효과가 있다는 것을 나타낸다.
이상 살펴본 바와 같이, 본 발명의 마카의 초임계 추출물은 항피로에 효과가 있고, 염증성 장질환의 예방 및 개선 효과가 있어 식품 산업적으로 유용한 항피로용 식품조성물 및 염증성 장질환 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공할 수 있다.
Claims (4)
- 마카의 초임계 추출물을 유효성분으로 하는 것을 특징으로 하는 염증성 장질환 예방 및 개선용 식품 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 염증성 장질환은 장 병변, 궤양성 대장염, 출혈성 직장 궤양 및 회장 낭염 (囊炎)으로 이루어진 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 조성물.
- 마카의 초임계 추출물을 유효성분으로 하는 것을 특징으로 하는 항피로용 식품 조성물.
- 제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 마카의 초임계 추출물은 마카를 30분 내지 5시간 동안 35 내지 80℃, 75 내지 600bar로 초임계 이산화탄소 추출하는 것을 특징으로 하는 조성물.
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