KR20120099460A - Ｎ1-피라졸로스피로케톤 아세틸-ｃｏａ 카복실라아제 억제제 - Google Patents

Abstract

본 발명의 하기 화학식 I의 화합물 또는 이러한 화합물의 약학적으로 허용되는 염; 이의 약학 조성물; 및 동물에서 아세틸-CoA 카복실라아제 효소의 억제에 의해 조절되는 질환, 질병 또는 장애의 치료에서 이들의 용도에 관한 것이다:
화학식 I

상기 식에서,
R¹, R², R³ 및 R⁴는 본원에 기재된 바와 같다.

Description

Ｎ1-피라졸로스피로케톤 아세틸-ＣＯＡ 카복실라아제 억제제{N1-PYRAZOLOSPIROKETONE ACETYL-COA CARBOXYLASE INHIBITORS}

본 발명은 아세틸-CoA 카복실라아제의 억제제로서 작용하는 치환된 피라졸로스피로케톤 화합물, 및 아세틸-CoA 카복실라아제 효소의 억제에 의해 조절되는 질병, 질환 또는 장애의 치료에서 이의 용도에 관한 것이다.

아세틸-CoA 카복실라아제(ACC)는 대부분의 종에서 발견되는 효소의 계열이고, 지방산 합성 및 아세틸-CoA로부터 말로닐-CoA 생성의 촉매작용을 통한 신진대사와 연관되어 있다. 포유동물에서, ACC 효소의 2개의 이성질형이 발견되었다. 지방 생성 조직, 예를 들어, 지방 및 간에서 고수준으로 발현되는 ACC1은 장쇄 지방산의 생합성에서 제 1 개입 단계를 제어한다. 아세틸-CoA가 말로닐-CoA를 형성하도록 카복실레이트화 되지 않는 경우, 크렙스(Krebs) 사이클을 통해 대사된다. 간 ACC의 소수 성분이지만 심장 및 골격근에서 주요 이성질형인 ACC2는 미토콘드리아의 시토졸 표면에서 말로닐-CoA의 생성을 촉진하고, 지방산이 카르니틴 팔미토일 전이 효소 억제에 의해 β-산화에서 이용되는 정도를 조절한다. 이처럼, 지방산 이용의 증가, 및 신생 지방산 합성의 증가의 억제에 의해, ACC 억세제(ACC-I)의 만성 투여는 또한 고-지방 또는 저-지방 식이요법을 소비하고, 대상 비만인에서의 간 및 지방 조직 트라이글리세리드(TG) 비축량을 격감시키고, 선택적인 체지방 손실을 야기한다.

아부-에테이가 등(Abu-Etheiga, et al.)에 의해 수행된 연구는, ACC2가 지방산 산화를 조절하는 필수적인 역할을 하고, 비만 및 비만-연관된 질병, 예를 들어, 제 2형 당뇨병에 대한 치료에서 표적을 제공함을 시사하였다(문헌[Abu-Etheiga, L., et al., "Acetyl-CoA carboxylase 2 mutant mice are protected against obesity and diabetes induced by high-fat/high-carbohydrate diets" PNAS, 100(18) 10207-10212(2003)] 참조. 또한, 문헌[Choi, C.S., et al., "Continuous fat oxidation in acetyl-CoA carboxylase 2 knockout mice increases total energy expenditure, reduces fat mass, and improves insulin sensitivity" PNAS, 104(42) 16480-16485(2007)] 참조).

간 지질 축적이 간 인슐린 내성을 야기하고, 제 2형 당뇨병의 발병에 기여하는 것이 점점 더 명확해졌다. 살바지 등(Salvage, et al.)은 ACC1 및 ACC2가 둘 다 간세포에서 지방 산화를 조절하는 것에 연관되어 있는 반면에, 랫 간에서 우성 이성질형인 ACC1이 지방산 합성의 유일한 조절자임을 증명하였다. 추가로, 그들의 모델에서, 두 이성질형의 조합된 감소는 매우 낮은 간 말로닐-CoA 수준을 요구하고, 영양 상태에서 지방 산화를 증가시키고, 지질 축적을 감소시키고, 생체 내에서 인슐린 작용을 향상시킨다. 이처럼, 간 ACC1 및 ACC2 억제제가 비알콜성 지방 간 질환(NAFLD) 및 간 인슐린 내성의 치료에 유용하다는 것을 보여준다(문헌[Savage, D.B., et al., "Reversal of diet-induced hepatic steatosis and hepatic insulin resistance by antisense oligonucleotide inhibitors of acetyl-CoA carboxylases 1 and 2" J Clin Invest doi: 10.1172/JCI27300] 참조. 또한 문헌[Oh, W., et al., "Glucose and fat metabolism in adipose tissue of acetyl-CoA carboxylase 2 knockout mice" PNAS, 102(5) 1384-1389(2005)] 참조).

결과적으로, 지방산 합성을 억제하고, 지방산 산화를 증가함으로써 비만 및 비만-연관된 질병(예를 들어, NAFLD 및 제 2형 당뇨병)을 치료하기 위해 ACC1 및/또는 ACC2 억제제를 포함하는 치료가 필요하다.

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:

[화학식 I]

상기 식에서,

R¹은 (C₁-C₆)알킬, (C₃-C₇)사이클로알킬, 테트라하이드로푸라닐 또는 옥세타닐이고; 상기 (C₁-C₆)알킬은 (C₁-C₃)알콕시, 하이드록시, 할로, 페닐, 테트라하이드로푸라닐 및 옥세타닐로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 선택적으로 치환되고;

R²는 수소, 할로, (C₁-C₃)알킬, 시아노 또는 -C(=NH)(OCH₃)이고;

R³은 각각 독립적으로 수소, 또는 (C₁-C₃)알킬이고;

R⁴는 (C₆-C₁₀)아릴, 5 내지 12원 헤테로아릴 또는 8 내지 12원 융합된 헤테로사이클릭아릴이고; 상기 (C₆-C₁₀)아릴, 5 내지 12원 헤테로아릴 또는 8 내지 12원 융합된 헤테로사이클릭아릴은 (C₁-C₃)알킬, (C₁-C₃)알콕시, 할로, 아미노, (C₁-C₃)알킬아미노, 다이(C₁-C₃)알킬아미노, 하이드록시, 시아노, 아미도, 페닐, 5 또는 6원 헤테로아릴 및 5 또는 6원 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 각각 선택적으로 치환된다.

본 발명의 바람직한 실시양태는 R⁴가 페닐 및 나프틸로부터 선택된 (C₆-C₁₀)아릴이고; 피리디닐, 피라졸릴, 피리미디닐, 트라이아졸릴, 인돌리지닐, 인다졸릴, 피롤로[2,3-b]피리디닐, 피롤로[3,2-b]피리디닐, 피롤로[1,2-a]피라지닐, 이미다조[1,2-a]피리디닐, 이미다조[1,5-a]피리디닐, 벤조[d]이미다졸릴, 피라졸로[3,4-b]피리디닐, 피라졸로[4,3-b]피리디닐, 피라졸로[1,5-a]피리미디닐, 벤조[d]이미다졸-2-온일, 1,6-나프티리디닐, 퀴녹살리닐, 퀴놀린-4-온일 및 이소퀴놀린-1-온일로부터 선택된 5 내지 12원 헤테로아릴; 또는 3,4-다이하이드로퀴놀린-2-온일 및 인돌린-2-온일로부터 선택된 8 내지 12원 융합된 헤테로사이클릭아릴이고; 각각의 R⁴ 기가 (C₁-C₃)알킬, (C₁-C₃)알콕시, 할로, 아미노, (C₁-C₃)알킬아미노, 다이(C₁-C₃)알킬아미노, 하이드록시, 시아노, 아미도, 페닐, 5 또는 6원 헤테로아릴 및 5 또는 6원 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환된 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이다.

본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태는 R¹이 (C₁-C₆)알킬, (C₃-C₇)사이클로알킬 또는 테트라하이드로푸라닐이고; R²가 수소 또는 메틸인 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이다.

본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태는 R¹이 에틸, 이소프로필 또는 t-부틸이고; R⁴가 플루오로, 클로로, 메틸, 아미노, 메틸아미노, 다이메틸아미노, 아미도, 시아노, 페닐, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트라이아졸릴, 피리디닐 및 모폴리닐로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 각각 선택적으로 치환된 페닐, 피라졸릴, 이미다졸릴, 트라이아졸릴, 피리디닐, 피리미디닐, 인돌릴, 벤조피라지닐, 벤조이미다졸릴, 벤조이미다졸로닐, 피롤로피리디닐, 피롤로피리미디닐, 피라졸로피리디닐, 피라졸로피리미디닐, 인다졸릴, 인돌린온일, 나프티리디닐, 퀴놀리닐, 퀴놀린온일, 다이하이드로퀴놀린온일, 옥소-다이하이드로퀴놀린온일, 이소퀴놀리닐, 이소퀴놀린온일, 다이하이드로이소퀴노닐 또는 옥소-다이하이드로이소퀴노닐인 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이다.

본 발명의 추가의 바람직한 실시양태는 R¹이 이소프로필 또는 t-부틸이고; R²가 수소이고; 각각의 R³이 수소인 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이다.

본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태는 R⁴가 인다졸릴, 벤조이미다졸릴, 1-옥소-1,2-다이하이드로이소퀴놀리닐, 1H-피롤로[3,2-b]피리디닐, 2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸릴, 1H-피라졸릴페닐, 1H-피라졸릴피리디닐 또는 1H-이미다졸릴페닐인 1 또는 2개의 메틸, 클로로 또는 플루오로로 선택적으로 치환된 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이다.

본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태는 1-이소프로필-1'-(1-옥소-1,2-다이하이드로이소퀴놀린-6-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1-이소프로필-1'-(1H-피롤로[3,2-b]피리딘-6-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1-(3차-부틸)-1'-(2-메틸-3H-벤조[d]이미다졸-5-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1-(3차-부틸)-1'-(1H-피롤로[3,2-b]피리딘-6-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1-(3차-부틸)-1'-(1H-인다졸-5-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1-(3차-부틸)-1'-(2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1-이소프로필-1'-(2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1'-(7-플루오로-1H-인다졸-5-카보닐)-1-이소프로필-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1-이소프로필-1'-(1-메틸-2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1'-(7-클로로-2-메틸-3H-벤조[d]이미다졸-5-카보닐)-1-이소프로필-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1'-(1H-인다졸-6-카보닐)-1-이소프로필-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1-이소프로필-1'-(3-(1H-피라졸-4-일)벤조일)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1-이소프로필-1'-(2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1'-(1H-인다졸-5-카보닐)-1-이소프로필-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1'-(1H-인다졸-5-카보닐)-1-이소프로필-3-메틸-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1-(3차-부틸)-1'-(2-(1H-피라졸-3-일)피리딘-4-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1-(3차-부틸)-1'-(3-(1H-피라졸-3-일)벤조일)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1-이소프로필-1'-(1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1-(3차-부틸)-1'-(4-(1H-이미다졸-2-일)벤조일)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 1-(3차-부틸)-1'-(3-(1H-이미다졸-2-일)벤조일)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 및 1-(3차-부틸)-1'-(1H-인다졸-6-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이다.

본 발명의 또 다른 양상은 임의의 실시양태에 기재된 바와 같은 소정량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 및 약학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체를 포함하는 약학 조성물이다. 바람직하게는, 조성물은 치료 효과량의 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다. 조성물은 또한 하나 이상의 추가적인 약제를 함유할 수 있다. 바람직한 약품은 당뇨병 치료제 및/또는 비만증 치료제(본원의 하기에 기재됨)를 포함한다.

본 발명의 또 다른 양상은 포유동물에서 아세틸-CoA 카복실라아제 효소의 억제에 의해 매개되는 질병, 질환 또는 장애의 치료 방법이고, 치료 효과량의 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 이의 약학 조성물을 이러한 치료를 필요로 하는 포유동물, 바람직하게는 인간에게 투여하는 단계를 포함한다.

아세틸-CoA 카복실라아제의 억제에 의해 매개되는 질병, 질환 또는 장애는 제 2형 당뇨병 및 당뇨병-연관 질환, 예를 들어, 비알콜성 지방 간 질환(NAFLD), 간 인슐린 내성, 고혈당증, 대사 증후군, 손상된 글루코스 내성, 당뇨병성 신경병증, 당뇨병성 신장증, 당뇨병성 망막증, 비만, 이상지질혈증, 고혈압, 고인슐린 혈증 및 인슐린 내성 증후군을 포함한다. 바람직한 질병, 질환 또는 장애는 제 2형 당뇨병, 비알콜성 지방 간 질환(NAFLD), 간 인슐린 내성, 고혈당증, 손상된 글루코스 내성, 비만 및 인슐린 내성 증후군을 포함한다. 제 2형 당뇨병, 비알콜성 지방 간 질환(NAFLD), 간 인슐린 내성, 고혈당증 및 비만이 더욱 바람직하다. 제 2형 당뇨병이 가장 바람직하다.

바람직한 실시양태는 치료 효과량의 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 이의 조성물을 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서 제 2형 당뇨병 및 당뇨병-연관 질환의 치료(예컨대, 진행 및 발병의 지연)를 위한 방법이다.

또 다른 바람직한 실시양태는 치료 효과량의 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 이의 조성물을 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서 비만 및 비만-연관 질환을 치료하기 위한 방법이다.

또 다른 바람직한 실시양태는 치료 효과량의 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 이의 조성물을 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서 비알콜성 지방 간 질환(NAFLD) 또는 간 인슐린 내성을 치료하기 위한 방법이다.

본 발명의 화합물은 다른 약제(특히, 본원의 하기에 기재된 비만 치료제 및 당뇨병 치료제)와 조합하여 투여될 수 있다. 조합 치료는 (a) 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 본원에 기재된 하나 이상의 추가의 약품 및 약학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체를 포함하는 단일 약학 조성물; 또는 (b) (i) 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 약학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체를 포함하는 제 1 조성물, 및 (ii) 본원에 기재된 하나 이상의 추가의 약제, 및 약학적으로 허용되는 부형제, 희석제 및 담체를 포함하는 제 2 조성물을 포함하는 2개의 별개 약학 조성물로서 투여될 수 있다. 약학 조성물은 동시에 또는 임의의 순서에 의해 순차적으로 투여될 수 있다.

서열번호 1은 트랜스크리너(Transcreener) 시험관 내 어세이에서 사용될 수 있는 재조합 인간 ACC1의 서열(서열번호 1)을 제공하였다.

서열번호 2는 트랜스크리너 시험관 내 어세이에서 사용될 수 있는 재조합 인간 ACC2의 서열(서열번호 2)을 제공하였다.

정의

어구 "치료 효과량"은 (i) 특정한 질병, 질환 또는 장애를 치료하거나 예방하고, (ii) 특정한 질병, 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 약화, 개선 또는 제거하거나, 또는 (iii) 본원에 기재된 특정한 질병, 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 발병을 예방하거나 지연시키는 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 양을 의미한다.

용어 "동물"은 사람(남성 또는 여성), 반려 동물(예컨대, 개, 고양이 및 말), 식품-원 동물, 동물원 동물, 해양 동물, 새 및 다른 유사 동물 종을 나타낸다. "식용 동물"은 식품-원 동물, 예를 들어, 소, 돼지, 양 및 가금류를 나타낸다.

어구 "약학적으로 허용되는"은 기질 또는 조성물이 제형을 포함하는 다른 성분 및/또는 치료되는 포유동물과 화학적으로 및/또는 독물학적으로 상용될 수 있어야 한다.

용어 "치료하는", "치료하다" 또는 "치료"는 예방, 즉, 예방적 처치 및 고식적 치료를 포괄한다.

본원에 사용된 용어 "조절된", "조절하는" 또는 "조절하다"는, 달리 언급하지 않으면, 본 발명의 화합물로 아세틸-CoA 카복실라아제(ACC) 효소의 억제를 나타낸다.

본원에 사용된 용어 "매개된", "매개하는" 또는 "매개하다"는, 달리 언급하지 않으면, (i) 특정한 질병, 질환 또는 장애의 치료 또는 예방, (ii) 특정한 질병, 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 약화, 개선 또는 제거, 또는 (iii) 아세틸-CoA 카복실라아제(ACC) 효소 억제에 의한, 본원에 기재된 특정한 질병, 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 발병의 방지 또는 지연을 나타낸다.

용어 "본 발명의 화합물"(특별하게 달리 언급하지 않으면)은 화학식 I의 화합물 및 이러한 화합물의 임의의 약학적으로 허용되는 염, 및 모든 입체 이성질체(부분입체 이성질체 및 거울상 이성질체를 포함), 호변 이성질체, 형태 이성질체 및 동위원소 표지된 화합물을 나타낸다. 본 발명의 화합물의 수화물 및 용매화물은 본 발명의 조성물로 간주되고, 화합물은 각각 물 또는 용매와 연관되어 있다.

용어 "(C₁-C₆)알킬" 및 "(C₁-C₃)알킬"은 각각 1 내지 6개 또는 1 내지 3개의 탄소인 특정 탄소수의 알킬 기이고, 직쇄 또는 분지쇄일 수 있다. 예를 들어, 용어 "(C₁-C₃)알킬"은 1 내지 3의 탄소수를 갖고, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어져 있다.

용어 "(C₃-C₇)사이클로알킬"은 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖고, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 및 사이클로헵틸로 이루어진 사이클로알킬 기를 의미하였다. 용어 "할로"는 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도를 의미하였다. 용어 "(C₆-C₁₀)아릴"은 페닐 또는 나프틸처럼 6 내지 10개의 탄소 원자로 이루어진 방향족 사이클릭 기를 의미하였다.

용어 "5 내지 12원 헤테로아릴"은 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 함유하는 5 내지 12원 방향족 기를 의미하였다. 본원에 사용된 "5 내지 12원 헤테로아릴" 기의 연결 지점은 그 기의 탄소 원자이다. "5 내지 12원 헤테로아릴" 기는 단환 또는 이환일 수 있다. 단환 헤테로아릴의 바람직한 실시양태는, 제한하지는 않지만, 피라졸릴, 이미다졸릴, 트라이아졸릴, 피리디닐 및 피리미디닐을 포함하였다. 이환 헤테로아릴의 바람직한 실시양태는, 제한하지는 않지만, 하기 고리 시스템의 라디칼을 포함한다:

용어 "8 내지 12원 융합된 헤테로사이클릭아릴"은 비-방향족 헤테로사이클릭 고리가 아릴 고리에 융합된 8 내지 12원 고리 시스템을 의미하였다. 본원에 사용된 "8 내지 12원 융합된 헤테로사이클릭아릴" 기의 연결 지점은 그 기의 탄소 원자이다. 바람직한 실시양태는 다음과 같은 고리 시스템의 라디칼을 포함한다:

본 발명의 화합물은 특히 본원에 포함된 설명에 비추어, 화학 분야에 잘 공지된 유사한 과정을 포함한 합성 경로에 의해 합성될 수 있다. 출발 물질은 알드리치 케미칼(Aldrich Chemicals, 미국 위스콘신주 밀워키 소재)과 같은 상업적인 공급원으로부터 일반적으로 이용할 수 있거나, 또는 당해 분야의 숙련자에게 잘 공지된 방법을 사용하여 쉽게 제조할 수 있다(예를 들어, 문헌[Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, New York(1967-1999 ed.)], 또는 부록을 포함하는 문헌[Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin](또한 베일스테인(Beilstein) 온라인 데이타베이스를 통해 이용할 수 있음)에 기재된 일반적인 방법에 의해 제조함).

설명의 목적으로, 하기 도시된 반응식은 본 발명의 화합물의 합성을 위한 잠재적인 경로뿐만 아니라 주요 중간체를 제공하였다. 개별 반응 단계의 더욱 자세한 도시는 하기 실시예에서 보여진다. 당해 분야의 숙련자들은 다른 합성 경로가 독창적인 화합물을 합성하기 위해 사용될 수 있음을 인정할 것이다. 비록 특정 출발 물질 및 시약이 반응식에서 도시되고 하기에 논의되었지만, 다른 출발 물질 및 시약이 다양한 유도체 및/또는 반응 조건을 제공하기 위해 쉽게 치환될 수 있다. 게다가, 하기 설명된 방법에 의해 제조된 많은 화합물은 당해 분야의 숙련자에게 잘 공지된 통상적인 화학 반응을 사용하여 본원에 비추어 추가로 변경될 수 있다.

본 발명의 화합물의 제조에서, 중간체의 외진 작용기(예를 들어, 1차 또는 2차 아민)의 보호가 필요하다. 그러한 보호의 요구는 외진 작용기의 성질 및 제조 방법의 조건에 따라 다를 것이다. 적합한 아미노-보호기(NH-Pg)는 아세틸, 트라이플루오로아세틸, t-부톡시카보닐(BOC), 벤질옥시카보닐(CBz) 및 9-플루오레닐메틸렌옥시카보닐(Fmoc)을 포함하였다. 유사하게, "하이드록시-보호기"는 하이드록시 작용기를 차단 또는 보호하는 하이드록시 기의 치환기를 나타낸다. 적합한 하이드록실-보호기(O-Pg)는 예를 들어, 알릴, 아세틸, 실릴, 벤질, 파라-메톡시벤질, 트라이틸 등을 포함한다. 그러한 보호의 요구는 당해 분야의 숙련자에 의해 쉽게 결정된다. 보호기의 일반적인 설명 및 그들의 용도에 대해 문헌[T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991]을 참조한다.

하기 반응식인 반응식 I 내지 반응식 IV는 화학식 I의 화합물을 제조하기 위해 사용되는 대표제인 과정을 제공한다. 이러한 반응식이 비-제한 수단으로 간주되고, 도시된 방법의 합당한 변이가 화학식 I의 화합물을 제조하기 위해 사용될 수 있음이 이해되어야 한다.

반응식 I은, R² 및 각각의 R³이 각각 수소인 화학식 I의 화합물인 화학식 Ia를 갖는 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 사용될 수 있는 일반적인 과정을 설명한다. 보호된 스피로피페리딘 유도체(VIIIa)가 메틸 비닐 케톤(IXa)으로 적절하게 보호된 피페리딘 알데하이드(Xa)의 처리에 의해 형성될 수 있다. 기 Pg는 적합한 아민 보호기를 나타내고, 바람직하게는 N-3차-부톡시카보닐(BOC) 또는 카보벤질옥시(Cbz)이다. 이 반응은 문헌[Roy, S. et al., Chem . Eur . J. 2006, 12, 3777-3788 at 3786]에 기재된 유사한 절차에 따라 에탄올계 칼륨 하이드록사이드의 존재 하에 수행될 수 있다. 다르게는, 반응은 목적 생성물(VIIIa)을 수득하기 위해, 환류하는 벤젠 중 파라-톨루엔설폰산(pTSA)의 존재 하에 수행될 수 있다.

[반응식 I]

스피로피페리딘 유도체(VIIIa)는 이어서 에나민 작용화된 스피로피페리딘 유도체(VIIa)를 제공하기 위해 환류하는 톨루엔에서 트리스-(N,N-다이메틸아미노)메탄과 반응될 수 있다. 다르게는, 에나민(VIIa)은 환류 하에 용매로서 N,N-다이메틸포름아마이드 다이메틸 아세탈로 스피로피페리딘(VIIIa) 반응에 의해 제조될 수 있다. 이 반응은 또한 2-프로판올과 같은 알콜성 용매, 톨루엔과 같은 방향족 탄화수소 용매 또는 N,N-다이메틸포름아마이드와 같은 극성 비양성자성 용매에서 실행될 수 있다. 추가로, 이 반응은 4-톨루엔설폰산, 트리스(다이메틸아미노)메탄, 또는 리튬 하이드록사이드, DBU 및 N,N-다이이소프로필에틸아민과 같은 다양한 염기의 첨가에 의해 촉진될 수 있다. 이 변형은 또한 환류 하에 톨루엔 중 t-부톡시 비스(다이메틸아미노)메탄으로, 또는 이와의 반응에 의해 수행될 수 있다.

이어서 화합물 VIIa를 목적하는 환화된 화학식 VIa의 화합물을 제공하기 위해 환류하는 에탄올 또는 톨루엔에 아세트산의 존재 하에 적합한 하이드라진 유도체 R¹NHNH²와 반응시켰다(문헌[Murali Dhar, T.G. et al. Bioorg . Med . Chem . Lett . 2007, 17, 5019-5024 at 5020] 참조). 화학식 VIa의 화합물은 이어서 화학식 Va의 상응하는 브로모 하이드록시 유도체를 제공하기 위해 THF 중 물의 존재 하에 N-브로모숙신이미드(NBS)로 처리될 수 있다. 브로모 하이드록시 유도체(Va)를 이어서 화학식 IVa의 α-브로모 케토 유도체를 제공하기 위해 문헌[Wolinsky, J. et al., J. Org . Chem . 1978, 43(5), 875-881 at 876, 879]에 기재된 유사한 방법에서 존스(Jones) 시약으로 산화하였다. 다르게는 (Va)의 산화를 촉매의 테트라프로필암모늄 페루테네이트 및 N-메틸모폴린 N-옥사이드로 수행할 수 있다. 화학식 IVa의 화합물은 이어서 화학식 IIIa의 화합물을 제공하기 위해 테트라하이드로푸란 중 수성 암모늄 클로라이드의 존재 하에 아연 및 아세트산, 또는, 다르게는 아연으로 처리하는 것과 같은 통상적인 방법을 사용하여 탈브롬화될 수 있다.

화학식 IIIa의 화합물은 이어서 보호기 Pg가 이용되는 것에 의존하는 표준 방법을 사용하여 화학식 IIa의 자유 스피로피페리딘 유도체를 제공하기 위해 탈보호될 수 있다. 예를 들어, Pg가 3차-부틸옥시카보닐(BOC)을 나타낼 경우, 다이옥산 중 4 N 염산, 또는 다이클로로메탄과 같은 적합한 용매 중 트라이플루오로아세트산과 같은 표준 강산 탈보호 조건이 BOC 기를 제거하기 위해 사용될 수 있다. Pg가 카보벤질옥시(CBz)를 나타낼 경우, 에탄올 중 탄소상 팔라듐에서의 수소 첨가, 또는 에탄올 또는 에틸 아세테이트 중 탄소상 팔라듐의 존재 하에 암모늄 포름에이트 또는 1-메틸-1,4-사이클로헥사다이엔과 같은 수소 원으로 처리하는 것은 탈보호를 수행하기 위해 이용될 수 있다.

화학식 IIa의 스피로피페리딘 유도체는 이어서 화학식 Ia의 화합물을 제공하기 위해 표준 방법을 이용함으로써 아실화될 수 있다. 예를 들어, 화합물 Ia를 이어서 목적 카복실산(R⁴CO₂H)으로 표준 펩타이드 커플링 반응을 사용하여 형성할 있다. 예를 들어, 스피로피페리딘 중간체(IIa) 및 카복실산(R⁴CO₂H)은, 예를 들어 O-(7-아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU) 또는 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드 하이드로클로라이드(EDC?HCl)와 같은 펩타이드 커플링제와 카복실산(R⁴CO₂H)을 하이드록시벤조트라이아졸(HOBt)과 같은 활성화제의 존재 또는 부재 하에, N,N-다이이소프로필에틸아민(DIEA), 트라이에틸아민 또는 N-메틸모폴린(NMM)과 같은 적합한 염기의 존재 하에, THF 및/또는 DMF, 다이메틸아세트아마이드(DMA) 또는 다이클로로메탄과 같은 적합한 용매 하에 커플링시킴으로써 활성화된 카복실산 에스터를 형성하고, 이어서 화학식 Ia의 화합물을 형성하기 위해 스피로피페리딘 유도체(IIa)와 활성화된 카복실산 에스터를 접촉시킴으로써, 커플링될 수 있다.

다르게는, 화학식 Ia의 화합물은, 예를 들어, 티오닐 클로라이드와 반응시킴으로써, 카복실산(R⁴CO₂H)을 산 클로라이드(R⁴COCl)로 먼저 전환하고, 이어서 화학식 Ia의 화합물을 형성하기 위해 다이클로로메탄과 같은 적합한 용매에서 트라이에닐아민과 같은 적합한 염기의 존재 하에, 스피로피페리딘 유도체(IIa)와 산 클로라이드를 반응시킴으로써 형성될 수 있다. 여전히 또 다른 방법은 THF 및/또는 DMF와 같은 적합한 용매 중에서 N-메틸모폴린과 같은 적합한 염기의 존재 하에, 2-클로로-4,6-다이메톡시트라이아진으로 카복실산(R⁴CO₂H)을 처리하는 것을 수반하였다. 활성화된 에스터에 THF 및/또는 DMF와 같은 적합한 용매 중에서 스피로피페리딘 유도체(IIa), 및 N-메틸모폴린과 같은 염기의 용액을 첨가하여 화학식 Ia의 화합물을 제공한다.

반응 반응식 II는 화학식 VIa의 중간체로부터 시작하는 화학식 Ia의 화합물의 다른 합성을 제공한다. 화학식 VIa의 화합물을 화학식 Vb의 메톡시 브로모 스피로피페리딘 유도체를 제공하기 위해 THF 중 메탄올의 존재 하에, 또는 바람직하게는 메탄올에서 N-브로모숙신이미드(NBS)로 처리하였다(문헌[Nishima, T. et al. Org. Lett. 2008, 10(18), 4057-4060 at 4059]). 염기를 THF 중 칼륨 3차-부톡사이드와 같은 강염기로 처리하는 화학식 Vb의 화합물의 염기 유도된 제거는 화학식 IVb의 화합물을 제공하고, 이어서 화학식 IIIa의 화합물을 제공하기 위해 THF를 2 N 염산과 같은 강산으로 처리하였다. 화학식 IIIa의 화합물은 이어서, 화학식 Ia에 화합물을 제공하기 위해 반응식 I에 이전에 기재된 바와 같이 탈보호되었고, 아실화되었다.

[반응식 II]

반응식 III은 R²가 브로모이고, 각각의 R³이 수소인 화학식 I의 화합물인 화학식 Ib의 화합물의 합성을 제공한다. 화학식 VIa의 화합물을 화학식 Vc의 다이브로모 메톡시 스피로피페리딘 유도체를 제공하기 위해 메탄올의 존재 하에 N-브로모숙신이미드 약 2 당량과 반응시켰다. 이어서 화학식 Vc의 화합물을 화학식 IVc의 화합물을 제공하기 위해 적합한 용매에서 칼륨 3차-부톡사이드와 같은 강염기로 처리함으로써 제거 조건을 거치게 하였다. 2 N 염산과 같은 강산으로 화학식 IVc의 화합물을 처리하여 화학식 IIIb의 화합물을 제공한다. 화학식 IIb의 화합물을 제공하기 위해 화학식 IIIb의 화합물을 탈보호하고 이어서 화학식 Ib의 화합물을 제공하기 위해 아실화하는 것은 반응식 I에 대해 이전에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다.

[반응식 III]

반응식 IV는 이전에 도시된 특정 중간체로부터 화학식 I에 속하는 특정 다른 화합물의 제조를 도시한다. 반응식 IV에서 첫번째 변형은 화학식 IIIc의 화합물을 제공하기 위해 칼륨 카보네이트 및 물의 존재 하에 팔라듐 테트라키스 트라이페닐포스핀과 같은, 적합한 팔라듐 촉매의 존재 하에 다이메틸포름아마이드 중 트라이메틸보록신과 화학식 IIIb의 브로모 스피로피페리딘 유도체를 반응시킴으로써 R² 위치에서 메틸 기의 도입을 보여준다. 다른 알킬 기는 유사한 수단으로 R² 위치에 도입될 수 있다. 화학식 IIIc의 화합물은 이어서 이전에 기재된 바와 같이 탈보호될 수 있고 아실화될 수 있다. 반응식 IV에서 두번째 변형은 R² 위치에서 시아노 기의 도입을 도시한다. 브로모 스피로피페리딘 화합물 IIIb은 화학식 IIId의 화합물을 제공하기 위해 아연 및 적합한 팔라듐 촉매의 존재 하에 아연 시아나이드와 반응시키고, 이어서 화학식 Id의 화합물을 제공하기 위해 탈보호될 수 있고 아실화될 수 있다. 반응식 IV의 세번째 변형은 화학식 IIIe의 화합물의 R³ 위치에서 적합한 기의 도입을 도시한다. 화학식 IIIe의 화합물은 리튬 헥사메틸다이실아지드(LHMDS)와 같은 강염기로, 적합한 무수의 조건 하에, 적합한 용매에서, 바람직하게는 저온에서 양성자가 제거되었다. 이처럼 형성된 에놀레이트는 이어서 적합한 친전자체 R³Lg와 반응하였고, 이때 Lg는 화학식 IIIf의 화합물을 제공하기 위해 적합한 이탈기(예를 들어, R³Lg가 알킬 할라이드일 경우, 할라이드임)를 나타내고, R³은 알킬 기와 같은 적합한 기이다. 이어서 화학식 IIIf의 양자제거 및 또 다른 R³Lg와의 반응은 필요에 따라 다시 수행될 수 있다. 이어서 화합물 IIIf의 화합물은 화학식 Ie의 화합물을 제공하기 위해 이전에 기재된 바와 같이 탈보호 및 아실화될 수 있다.

[반응식 IV]

본 발명의 화합물을 단리할 수 있고, 그 자체로 또는 그들의 약학적으로 허용되는 염의 형태로 사용될 수 있다. 본 발명에 따라, 다중 염기 질소 원자를 가진 화합물이 산의 당량("eq.")이 다른 염을 형성할 수 있다. 모든 그러한 염은 본 발명의 범위에 속하는 것으로 당업자에게 이해될 것이다.

본 발명의 화합물과 관련되어 본원에 사용되는 약학적으로 허용되는 염은 이러한 화합물의 약학적으로 허용되는 무기 염 및 유기 염을 포함하였다. 이러한 염은 화합물의 최종 단리 및 정제 중에, 또는 이의 화합물을 적합한 유기 산 또는 무기 산과 개별적으로 반응시키고 이렇게 형성된 염을 단리함으로써, 동일 반응계에서 제조될 수 있다. 대표적인 염은, 이에 국한되지 않지만, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드로요오다이드, 설페이트, 바이설페이트, 니트레이트, 아세테이트, 트라이플루오로아세테이트, 옥살에이트, 베실레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 말론에이트, 스테아레이트, 라우레이트, 말레이트, 보레이트, 벤조에이트, 락테이트, 포스페이트, 헥사플루오로포스페이트, 벤젠 설포네이트, 토실레이트, 포름에이트, 시트레이트, 말레에이트, 푸마레이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 나프틸레이트, 메실레이트, 글루코헵토네이트, 락토바이오네이트 및 라우릴설포네이트 염 등을 포함하였다. 이는 또한 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등과 같은 알칼리 금속 및 알칼리 토금속에 기초한 양이온뿐만 아니라, 이에 국한되지 않지만, 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸암모늄, 다이메틸암모늄, 트라이메틸암모늄, 트라이에틸암모늄, 에틸암모늄 등을 포함하는 비-독성 암모늄, 4차 암모늄 및 아민 양이온을 포함한다. 추가의 예는, 예를 들어, 베르거 등(Berge, et al.)의 문헌[J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1997)]을 참조한다.

본 발명의 화합물은 하나 초과의 결정 형태에서 존재할 수 있다. 화학식 I의 화합물의 다형체 및 이들의 염(용매화물 및 수화물을 포함)은 본 발명의 부분을 형성하고, 상이한 조건 하에 본 발명의 화합물의 결정화에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 재결정화를 위한 상이한 용매 또는 용매 혼합물; 상이한 온도에서의 결정화; 결정화 동안 매우 빠른 냉각부터 매우 느린 냉각까지의 범위에 이르는 다양한 냉각 방식이 사용된다. 다형체는 또한 본 발명의 화합물을 가열 또는 용해하고, 이어서 점진적으로 또는 빠르게 냉각함으로써 수득되었다. 다형체의 존재는 고체 프로브 핵자기공명(NMR) 분광법, 적외선(IR) 분광법, 시차 주사 열량계, 분말 X-선 분석기 또는 다른 기술에 의해 결정될 수 있다.

본 발명은 또한 화학식 I에 의해 상기 기재된 것과 동일한 동위원소-표지된 화합물을 포함하지만, 실제로 하나 이상의 원자는 일반적으로 자연에서 발견되는 원자량 또는 질량수와는 상이한 원자량 또는 질량수를 가진 원자에 의해 대체되었다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 각각 ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷O, ³⁵S, ³⁶Cl, ¹²⁵I, ¹²⁹I 및 ¹⁸F와 같은 수소, 탄소, 질소, 산소, 황 및 불소의 동위원소를 포함하였다. 예를 들어, ³H 및 ¹⁴C와 같은 방사성 동위원소 안에 혼입된 것과 같은, 본 발명의 특정 동위원소-표지된 화합물이 약물 및/또는 기질 조직 분포 어세이에서 이용된다. 3중 수소(즉, ³H) 및 탄소-14(즉, ¹⁴C) 동위원소는 제조의 용이성 및 검출 가능성에 기인하여 특히 바람직하다. 추가로, 듀테륨(즉, ²H)처럼 더 무거운 동위원소에 의한 치환기는, 예를 들어, 생체 내 반감기의 증가 또는 필요 투여량의 감소 등과 같은 보다 큰 대사의 안정성으로부터 초래되는 특정한 치료 장점을 제공할 수 있고, 이에 따라 일부의 환경에서 바람직하다. 본 발명의 동위원소 표지된 화합물을 일반적으로 하기 반응식 및/또는 실시예에 개시된 절차를 수행함으로써 제조할 수 있고, 비-동위원소 표지된 시약을 쉽게 이용할 수 있는 동위원소 표지된 시약으로 치환함으로써 제조할 수 있다.

본 발명의 화합물은 입체 중심을 함유할 수 있다. 이러한 화합물은 거울상 이성질체의 혼합물로서, 또는 순수 거울상 이성질체로서 존재할 수 있다. 화합물이 입체 중심을 포함할 때, 화합물은 당해 분야의 숙련된 기술자들에게 공지된 방법, 예를 들어, 결정화에 의해 분리될 수 있는 부분입체 이성질체 염의 형성; 예를 들어, 결정화, 기체-액체 크로마토그래피 또는 액체 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있는 입체 이성질체 유도체 또는 복합체의 형성; 거울상 이성질체-특이적 시약과의 하나의 거울상 이성질체의 선택적인 반응, 예를 들어, 효소에 의한 에스테르화; 또는 키랄 환경에서 예를 들어, 카랄 지지체, 예를 들어, 결합된 키랄 리간드를 갖는 실리카 상에서 또는 키랄 용매의 존재 하의 기체-액체 크로마토그래피 또는 액체 크로마토그래피에 의해 순수 거울상 이성질체로 분해될 수 있다. 목적 거울상 이성질체가 상기 기재된 분리 과정 중 하나에 의해 또 다른 화합물로 전환되었고, 추가 단계가 목적 거울상 이성질체 형태를 유리하기 위해 필요하다는 것이 인정될 것이다. 다르게는, 특정한 입체 이성질체가 광학적인 활성 출발 물질의 사용에 의해, 광학적인 활성제, 기질, 촉매 또는 용매를 사용하는 비대칭 합성에 인해, 또는 하나의 입체 이성질체를 비대칭 변형에 의해 다른 것으로 전환시킴으로써 합성될 수 있다.

본 발명의 화합물은 분리될 수 있는 상이한 안정된 입체 배좌의 형태로 존재할 수 있다. 비대칭의 단일 결합 주위의 제한된 회전, 예를 들어, 입체 장애 또는 고리 스트레인으로 인한 비틀림 비대칭은, 상이한 형태 이성질체의 분리를 가능하게할 수 있다. 본 발명의 화합물은 화학식 I의 화합물의 각각의 형태 이성질체 및 이의 혼합물을 추가로 포함하였다.

본 발명의 화합물은 아세틸-CoA 카복실라아제 효소(특히, ACC1 및 ACC2)의 억제에 의해 조절되는 질병, 질환 및/또는 장애를 치료하기 위해 사용하였다. 본 발명의 또 다른 실시양태는, 본 발명의 화합물의 치료 효과량 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 및 약학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체를 포함하는 약학 조성물이다. 본 발명의 화합물(본원에 사용된 조성물 및 방법을 포함)은 또한 본원에 기재된 치료적인 적용을 위한 약제의 제조에서 사용될 수 있다.

전형적인 제형은 본 발명의 화합물 및 담체, 희석제 또는 부형제의 혼합에 의해 제조되었다. 적합한 담체, 희석제 및 부형제는 당해 분야의 숙련자들에게 잘 공지되어 있고, 탄수화물, 왁스, 수용성 중합체 및/또는 수팽윤성 중합체, 친수성 물질 또는 소수성 물질, 젤라틴, 오일, 용매, 물 등과 같은 물질을 포함하였다. 본 발명의 화합물을 위한 수단과 목적에 따라 사용된 특정 담체, 희석제 또는 부형제가 적용되었다. 용매는 일반적으로 포유동물에 투여하기 위해 안전하다고 당해 분야의 숙련자들에게 인지된 용매(GRAS)에 기초해서 선택되었다. 일반적으로, 안전 용매는 물과 같은 비-독성 수성 용매 및 물에 녹거나 섞이는 다른 비-독성 용매이다. 적합한 수성 용매는 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜(예컨대, PEG400, PEG300) 등 및 이의 혼합물을 포함하였다. 또한 제형은 하나 이상의 완충액, 안정화제, 계면활성제, 습윤제, 윤활제, 유화제, 현탁제, 보존제, 산화방지제, 불투명제, 유동성 개선제, 가공첨가제, 착색제, 감미료, 향료제, 착향료 및 약물의 특별한 보존을 제공하기 위한 다른 공지된 첨가제(즉, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 이의 약학 조성물) 또는 약학 제품을 제조하는 목적(즉, 약제의 제조와 같은 의학에서 용도)을 포함하였다.

제형은 통상적인 용해 및 혼합 과정에 의해 제조된다. 예를 들어, 원료 약물(즉, 본 발명의 화합물 또는 화합물의 안정화된 형태(예를 들어, 사이클로덱스트린 유도체의 혼합물 또는 다른 공지된 복합화제))은 상기 기재된 하나 이상의 부형제의 존재 하에 적합한 용매에 용해되었다. 저조한 수용성 화합물의 용해율은 분무-건조된 분산액의 사용에 의해 강화될 수 있고, 이는 본원에 혼입된 참고 문헌, 예를 들어, 문헌[Takeuchi, H., et al. in "Enhancement of the dissolution rate of a poorly water-soluble drug(tolbutamide) by a spray-drying solvent deposition method and disintegrants" J. Pharm . Pharmacol ., 39, 769-773(1987)]; 및 유럽특허 제0901786 B1호(미국특허출원 제2002/009494호)에 기재되어 있다. 본 발명의 화합물은 쉽게 제어 가능한 약물의 복용량을 제공하고 환자에게 품격있고 쉽게 다룰 수 있는 제품을 주기 위해 약학적인 투여 형태로 전형적으로 제형화된다.

약학 조성물은 또한 본 발명의 화합물의 용매화물 및 수화물을 포함한다. 용어 "용매화물"은 하나 이상의 용매 분자를 가진 화학식 I의 화합물(이의 약학적으로 허용되는 염을 포함)의 분자 착물을 나타낸다. 상기 용매 분자는 약학 분야에서 통상적으로 사용되는 용매 분자이고, 이는 물, 에탄올, 에틸렌 글리콜 등처럼 수용인에게 무해하다고 알려져 있다. 용어 "수화물"은 용매 분자가 물인 착물을 나타낸다. 용매화물 및/또는 수화물은 바람직하게는 결정 형태로 존재한다. 다른 용매는 더욱 바람직한 용매화물, 예를 들어, 메탄올, 메틸 t-부틸 에터, 에틸 아세테이트, 메틸 아세테이트, (S)-프로필렌 글리콜, (R)-프로필렌 글리콜, 1,4-부틴-다이올 등의 제조에서 중간체 용매화물로서 사용될 수 있다.

적용을 위한 약학 조성물(또는 제형)은 약물을 투여하기 위해 사용되는 방법에 따라 다양한 방식으로 포장될 수 있다. 일반적으로, 배포를 위한 제품은 적절한 형태로 포함되는 약학 제형을 갖는 용기를 포함한다. 적합한 용기는 당해 분야의 숙련자들에게 잘 공지되었고, 병(플라스틱 및 유리), 사쉐, 앰풀, 플라스틱 가방, 금속 실린더 등과 같은 물질을 포함한다. 또한 용기는 포장 내용물에 부주의하게 접촉하는 것을 막기 위한 쉽게 조작할 수 없는 조립체를 포함한다. 또한, 용기에 용기의 내용물을 설명하는 라벨을 포함하였다. 라벨은 또한 적합한 경고를 포함한다.

본 발명은 치료 효과량의 본 발명의 화합물, 또는 효과량의 본 발명의 화합물 및 약학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체를 포함하는 약학 조성물을 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 투여함을 포함하는, 동물에서 아세틸-CoA 카복실라아제 효소의 억제에 의해 조절되는 질병, 질환 및/또는 장애를 치료하는 방법을 추가로 제공하였다. 이 방법은 아세틸-CoA 카복실라아제 효소의 억제로부터 이득을 보는 질병, 질환 및/또는 장애를 치료하는데 특히 유용하다.

본 발명의 하나의 양상은 비만, 및 비만-연관된 질환(예컨대, 과체중, 체중 증가 또는 체중 유지)의 치료이다. 비만 및 과체중은 통상적으로 신체 용적 지수(BMI)에 의해 정의되고, 이는 총 체지방과 연관성이 있고 질병의 상대적 위험도를 추정하였다. BMI는 1 제곱 미터 당 kg(kg/m²)으로 중량 단위로 계산된다. 과체중은 통상적으로 25 내지 29.9 kg/m²의 BMI로서 정의되고, 비만은 통상적으로 30 kg/m²의 BMI로서 정의된다(예컨대, 문헌[National Heart, Lung, and Blood Institute, Clinical Guidelines of the Identification, Evaluation, and Treatment of Overweight and Obesity in Adults, The Evidence Report, Washington, DC: U.S. Department of Health and Human Services, NIH publication no. 98-4083 (1998)] 참조).

본 발명의 다른 양상은 제 1형 당뇨병(인슐린-의존성 당뇨병, 또는 "IDDM"으로 지칭됨)및 제 2형 당뇨병(비인슐린-의존성 당뇨병, 또는 "NIDDM"으로 지칭됨), 손상된 글루코스 내성, 인슐린 내성, 고혈당증 및 당뇨 합병증(예컨대, 아테롬성 동맥 경화증, 관상 동맥성 심장병, 뇌졸중, 말초혈관 질환, 신증, 고혈압, 신경 장애 및 망막증)을 포함하는 당뇨병 또는 당뇨병-연관 질환의 진행 또는 발병을 치료 또는 지연하는 것에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 양상은 대사 증후군과 같은 비만 중복이환 치료에 관한 것이다. 대사 증후군은 이상지질혈증, 고혈압, 인슐린 내성, 당뇨병(예를 들어, 제 2형 당뇨병), 관상 동맥 질환 및 심부전과 같은 질병, 질환 또는 장애를 포함한다. 대사 증후군에 관한 더욱 자세한 정보는 예를 들어, 문헌[Zimmet, P.Z., et al., "The Metabolic Syndrome: Perhaps an Etiologic Mystery but Far From a Myth - Where Does the International Diabetes Federation Stand?," Diabetes & Endocrinology, 7(2), (2005)]; 및 문헌[Alberti, K.G., et al., "The Metabolic Syndrome - A New Worldwide Definition," Lancet, 366, 1059-62 (2005)]을 참조한다. 바람직하게는, 본 발명의 화합물의 투여는 약물을 포함하지 않는 비히클 대조군과 비교하여, 하나 이상의 심장혈관계 질병 위험 요소, 예를 들어, 플라스마 렙틴, C-반응성 단백질(CRP) 및/또는 콜레스테롤의 저하에서 통계적으로 의미있는(p<0.05) 감소를 제공한다. 본 발명의 화합물의 투여는 또한, 글루코스 혈청 수준에서 통계적으로 의미있는(p<0.05) 감소를 제공한다.

본 발명의 또 다른 양상은 비알콜성 지방 간 질환(NAFLD) 및 간 인슐린 내성의 치료이다.

약 100 kg의 체중의 정상적인 성인 인간의 경우, 체중 1 kg 당 약 0.001 mg 내지 약 10 mg의 범위의 투여량이 통상적으로 충분하고, 바람직하게는 약 0.01 mg/kg 내지 약 5.0 mg/kg, 더욱 바람직하게는 약 0.01 mg/kg 내지 약 1 mg/kg의 범위가 충분하다. 그러나, 일반적인 투여량 범위에서 일부 가변성이 치료되는 대상의 연령 및 체중, 투여 경로, 투여되는 특정 화합물 등에 따라 요구될 수 있다. 특정 환자를 위한 투여량 범위 및 최적의 투여량의 결정은 즉각적인 공시의 이점을 가진 당해 분야의 통상적인 기술의 능력 안에서 잘 이루어진다. 또한 본 발명의 화합물이 지속 방출, 또한 당해 분야의 통상적인 숙련자에게 잘 공지되어 있는 제어된 방출 및 지연된 방출에 사용될 수 있다는 점을 유의한다.

본 발명의 화합물은 또한 상기 기재된 질병, 질환 및/또는 장애의 치료를 위한 다른 약제와 함께 사용될 수 있다. 그러므로, 다른 약제와 조합하여 본 발명의 화합물을 투여함을 포함하는 치료 방법이 또한 제공된다. 본 발명의 화합물과 조합하여 사용될 수 있는 적합한 약제는 비만 치료제(식욕 억제제 포함), 당뇨병 치료제, 혈당 억제제, 지질 저하제 및 고혈압 치료제를 포함하였다.

적합한 비만 치료제는 11β-하이드록시 스테로이드 탈수소효소-1(11β-HSD 유형 1) 억제제, 스테아로일-CoA 불포화효소-1(SCD-1) 억제제, MCR-4 작용제, 콜레시스토키닌-A(CCK-A) 작용제, 모노아민 재흡수 억제제(예를 들어, 시부트라민), 교감신경 흥분제, β₃ 아드레날린 작용제, 도파민 작용제(예를 들어, 브로모크립틴), 멜라노사이트-자극 호르몬 유사체, 5HT2c 작용제, 멜란닌 농축 호르몬 길항제, 렙틴(OB 단백질), 렙틴 유사체, 렙틴 작용제, 갈라닌 길항제, 리파아제 억제제(예를 들어, 테트라하이드로립스타틴, 즉, 비만 방지약), 식욕 감퇴제(예를 들어, 봄베신 작용제), 뉴로펩타이드-Y 길항제(예컨대, NPY Y5 길항제), PYY_{3 -36}(이의 유사체를 포함), 유사 갑상선 호르몬제, 데하이드로에피안드로스테론 또는 이의 유사체, 글루코코티코이드 작용제 또는 길항제, 오렉신 길항제, 글루카곤-유사 펩타이드-1 작용제, 모양체 신경 추성 인자(예를 들어, 리제네론 파마수티칼스 인코포레이티드(Regeneron Pharmaceuticals, Inc., 미국 뉴욕주 타리타운 소재) 및 프록터 앤 갬블 컴퍼니(Procter & Gamble Company, 미국 오하이오주 신시네티 소재)에서 시판중인 악소킨(Axokine: 상표)), 인간 아구티-연관 단백질(AGRP) 억제제, 그렐린 길항제, 히스타민 3 길항제 또는 역 작용제, 뉴로메딘 U 작용제, MTP/ApoB 억제제(예를 들어, 디를로타파이드와 같은 거트-선택성 MTP 억제제), 오피오이드 길항제, 오렉신 길항제 등을 포함한다.

본 발명의 조합 양상에서 사용하기 위한 바람직한 비만 치료제는 거트-선택성 MTP 억제제(예를 들어, 디를로타파이드, 미트라타파이드 및 임플리타파이드, R56918(CAS 번호 403987) 및 CAS 번호 913541-47-6), CCKa 작용제(예를 들어, 국제특허출원공개 제2005/116034호 또는 미국출원공개 제2005-0267100 A1호에 기재된 N-벤질-2-[4-(1H-인돌-3-일메틸)-5-옥소-1-페닐-4,5-다이하이드로-2,3,6,10b-테트라아자-벤조[e]아줄렌-6-일]-N-이소프로필-아세트아마이드), 5HT2c 작용제(예를 들어, 로카세린), MCR4 작용제(예를 들어, 미국특허 제6,818,658호에 기재된 화합물), 리파아제 억제제(예를 들어, 세틸리스타트), PYY_{3 -36} (본원에 사용된 "PYY_{3 -36}"은 유사체, 예를 들어, 페글레이팅된 PYY_{3 -36} 예컨대, 미국특허공개 제2006/0178501호에 기재됨), 오피오이드 길항제(예를 들어, 날트렉손), 올레오일-에스트론(CAS 번호 180003-17-2), 오비네피타이드(TM30338), 프람린타이드(심린(등록상표)(Symlin: 등록상표), 테소펜신(NS2330), 렙틴, 리라글루타이드, 브로모크립틴, 오를리스타트, 엑센아타이드(바이타(등록상표)(Byetta: 등록상표), AOD-9604(CAS 번호 221231-10-3) 및 시부트라민을 포함하였다. 바람직하게는, 본 발명의 화합물 및 조합 치료는 운동 및 실용적인 식이요법과 함께 투여되었다.

적합한 당뇨병 치료제는 나트륨-글루코스 공-운반체(SGLT) 억제제, 포스포다이에스터라아제(PDE)-10 억제제, 다이아실글리세롤 아실트랜스퍼라아제(DGAT) 1 또는 2 억제제, 설포닐우레아(예를 들어, 아세토헥사마이드, 클로르프로파마이드, 다이아비네스, 글리벤클아미드, 글리피자이드, 글리부라이드, 글리메피라이드, 글리클라자이드, 글리펜타이드, 글리퀴돈, 글리솔아미드, 톨라즈아마이드 및 톨부타마이드), 메글리티나이드, α-아밀라아제 억제제(예를 들어, 텐다미스타트, 트레스타틴 및 AL-3688), α-글루코사이드 하이드롤라아제 억제제(예를 들어, 아카르보즈), α-글루코시다아제 억제제(예를 들어, 아디포신, 카미글리보즈, 에미글리테이트, 미글리톨, 보글리보즈, 프라다이마이신-Q 및 살보스타틴), PPARγ 작용제(예를 들어, 발라글리타존, 시글리타존, 다르글리타존, 엔글리타존, 이사글리타존, 피오글리타존, 로시글리타존 및 트로글리타존), PPAR α/γ 작용제(예를 들어, CLX-0940, GW-1536, GW-1929, GW-2433, KRP-297, L-796449, LR-90, MK-0767 및 SB-219994), 바이구아나이드(예를 들어, 메트포르민), 글루카곤-유사 펩타이드 1(GLP-1) 작용제(예를 들어, 바이타: 등록상표, 엑센딘-3 및 엑센딘-4), 단백질 티로신 포스파타아제-1B(PTP-1B) 억제제(예를 들어, 트로더스쿠에민, 하이르티오살 추출물 및 문헌[Zhang, S., et al., Drug Discovery Today, 12(9/10), 373-381 (2007)]에 기재된 화합물), SIRT-1 억제제(예를 들어, 레세르바트롤), 다이펩티딜 펩티데아제 IV(DPP-IV) 억제제(예를 들어, 시타글립틴, 빌다글립틴, 알로글립틴 및 삭사글립틴), 인슐린 시크레아타고그, 지방산 산화 방지 억제제, A2 길항제, c-준 아미노-말단 키나아제(JNK) 억제제, 인슐린, 인슐린 유사체, 글리코겐 포스포릴아제 억제제, VPAC2 수용체 작용제 및 글루코키나아제 활성화제를 포함한다. 바람직한 당뇨병 치료제는 메트포르민, 글루카곤-유사 펩타이드 1(GLP-1) 작용제(예를 들어, 바이타: 등록상표) 및 DPP-IV 억제제(예를 들어, 시타글립틴, 빌다글립틴, 알로글립틴 및 삭사글립틴)이다.

실시예에 참고된 모든 기술적 고시를 포함하는, 모든 인용된 미국특허 및 문헌은 이의 전체가 참고로서 본원에 혼입되었다.

본원의 하기 실시예는 예시적인 목적으로만 제시된다. 본원에 반영된 조성물, 방법 및 다양한 파라미터는 발명의 다양한 양상 및 실시양태의 예시로만 의도되었고, 어떠한 방식으로든지 본 발명의 청구범위의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.

실시예

하기 기재된 화합물 및 중간체는 통상적으로 유기 화합물의 명명법 및 CAS 색인 규칙 상의 IUPAC(국제순수?응용화학연합) 권고에 따라 명명되었다. 별도로 명시하지 않는 한, 모든 반응물을 상업적으로 수득하였다.

플래시 크로마토그래피를 문헌[Still et al., J. Org. Chem., 1978, 43, 2923]에 기재된 방법에 따라 수행하였다.

본원에 기재된 모든 바이오타지(Biotage: 등록상표) 정제를 KP-SIL 실리카(40 내지 63 μＭ, 60 옹스트롬)(바이오타지 AB; 스웨덴 웁살라 소재)를 함유하는 40M 또는 40S 바이오타지(등록상표) 컬럼을 사용하여 수행하였다.

본원에 기재된 모든 콤비플래시(CombiFlash: 등록상표) 정제를 포장된 레디셉(RediSep: 등록상표) 실리카 컬럼을 사용하는 콤비플래시(등록상표) 콤파니온(Companion) 시스템(텔레딘 이스코(Teledyne Isco: 미국 네브라스카주 링컨 소재)을 사용하여 수행하였다.

질량 분석은 워터스(Waters)(워터스 코포레이티드(Waters Corp.); 미국 매사추세츠주 밀포드 소재) 마이크로매스 플래폼 II(Micromass Platform II) 분광계 상에 기록되었다. 별도로 명시하지 않는 한, 질량 분석은 워터스(미국 매사추세츠주 밀포드 소재) 마이크로매스 플래폼 II 분광계 상에 기록되었다.

양성자 NMR 화학적 이동은 테트라메닐실란으로부터 다운필드로 100만 당 부로 제공되었고, 바리안 유니티(Varian Unity) 400 또는 500 MHz(메가헤르츠) 분광계 상에 기록되었다(바리안 인코포레이티드(Varian Inc.); 미국 캘리포니아주 팔로 알토 소재). NMR 화학적 이동은 테트라메틸실란(양성자를 위함) 또는 플루오로트라이클로로메탄(불소를 위함)으로부터 다운필드로 100만 당 부로 제공되었다.

하기 기재된 제조 방법을 하기 실시예에서 예시된 화합물의 합성에 사용하였다.

출발 물질 및 중간체 제조

카복실산 출발 물질

하기의 상업적으로 이용할 수 있는 카복실산을 본 발명의 예시적인 화합물을 제조하기 위해 사용하였다: 4-클로로-3-메틸벤조산(알파 아에사(Alfa Aesar), 미국 매사추세츠주 와드 힐 소재), 1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카복실산(스핀크스 사이언티픽 래보라토리 프로덕트 리스트(Sphinx Scientific Laboratory Product List)), 1-메틸-1H-인다졸-6-카복실산(파마블록 알앤디 프로덕트 리스트(PharmaBlock R & D Product List)), 1H-벤즈이미다졸-5-카복실산(어피니티스 파마 엘엘씨(Affinitis Pharma LLC), 미국 코넷티컷주 뉴 헤이븐 소재), 1H-인다졸-5-카복실산(타이거 사이언티픽 인코포레이티드(Tyger Scientific, Inc.), 미국 뉴저지주 유잉 소재), 4-아미노-2-메틸피리미딘-5-카복실산(타이거 사이언티픽 인코포레이티드, 미국 뉴저지주 유잉 소재), 2-(메틸아미노)이소니코틴산(오로라 빌딩 블록스(Aurora Building Blocks)), 1H-피롤로[3,2-b]피리딘-6-카복실산(매트릭스 사이언티픽(Matrix Scientific)), 2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-카복실산(아폴로 사이언티픽 인터메디에이트스 포 리서치 앤드 디벨롭먼트(Apollo Scientific Intermediates for Research and Development)), 7H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산(리안 사이언티픽 프로덕트 리스트(Ryan Scientific Product List)), 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-카복실산(매트릭스 사이언티픽), 2-옥소인돌린-5-카복실산(아폴로 사이언티픽 인터메디에이트스 포 리서치 앤드 디벨롭먼트), 2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤즈이미다졸-5-카복실산(아코스 빌딩 블록스 프로덕트 리스트(AKos Building Blocks Product List)), 2-옥소-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-7-카복실산(아코스 빌딩 블록스 프로덕트 리스트), 2-아미노-1,6-나프티리딘-3-카복실산(에이씨이에스 파마 프로덕트 리스트(ACES Pharma Product List)), 3-아미노퀴녹살린-2-카복실산(아시스켐 스크리닝 라이브러리(AsisChem Screening Library)), 7-아미노피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-카복실산(리안 사이언티픽 프로덕트 리스트), 1-메틸-2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤즈이미다졸-5-카복실산(아코스 빌딩 블록스 프로덕트 리스트), 4-(1H-이미다졸-2-일)벤조산(스핀크스 사이언티픽 래보라토리 프로덕트 리스트), 3-(1H-이미다졸-4-일)벤조산(아폴로 사이언티픽 인터메디에이트스 포 리서치 앤드 디벨롭먼트), 5-아미노-2-페닐-2H-1,2,3-트라이아졸-4-카복실산(리안 사이언티픽 스크리닝 라이브러리), 8-메틸-4-옥소-1,4-다이하이드로퀴놀린-2-카복실산(오로라 빌딩 블록스), 2-카바모일니코틴산(제이앤케이 사이언티픽 프로덕트 리스트(J & K Scientific Product List)), 8-메틸이미다조[1,2-a]피리딘-2-카복실산(오로라 빌딩 블록스), 3-(1H-피라졸-3-일)벤조산(메이브릿지(Maybridge), 영국 콘웰 소재), 3-(1H-피라졸-1-일)벤조산(아코스 스크리닝 라이브러리), 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카복실산(알드리치(Aldrich)), 6-모폴린-4-일니코틴산(리안 사이언티픽 프로덕트 리스트), 7-메틸이미다조[1,2-a]피리딘-2-카복실산(오로라 빌딩 블록스), 이미다조[1,2-a]피리딘-2-카복실산(오로라 빌딩 블록스), 5-피리딘-3-일-1H-피라졸-3-카복실산(아코스 스크리닝 라이브러리), 6-메틸-2-(메틸아미노)니코틴산(오로라 빌딩 블록스), 이미다조[1,5-a]피리딘-7-카복실산(베팜 프로덕트 리스트(Bepharm Product List)), 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-6-카복실산(스핀크스 사이언티픽 래보라토리 프로덕트 리스트), 7-하이드록시피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-카복실산(부트 파크 스크리닝 라이브러리(Butt Park Screening Library)), 인돌리진-2-카복실산(리안 사이언티픽 프로덕트 리스트), 2-피리딘-2-일-1H-이미다졸-5-카복실산(암빈터 스톡 스크리닝 콜렉션(Ambinter Stock Screening Collection)), 3-(1H-이미다졸-2-일)벤조산(그린켐 인스티튜트 프로덕트 리스트(Greenchem Institute Product List)), 피롤로[1,2-c]피리미딘-3-카복실산(밀스톤 팜테크 프로덕트 리스트(Milestone PharmTech Product List)), 1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-카복실산(아자신트 빌딩 블록스(Azasynth Building Blocks)), 1H-피롤로[3,2-c]피리딘-2-카복실산(오로라 빌딩 블록스), 이미다조[1,2-a]피리딘-7-카복실산(베팜 프로덕트 리스트), 4-(1H-1,2,4-트라이아졸-1-일)벤조산(아코스 빌딩 블록스 프로덕트 리스트), 1-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-카복실산(아코스 빌딩 블록스 프로덕트 리스트), 6-(1H-피라졸-1-일)니코틴산(부트 팍 스크리닝 라이브러리), 1,6-나프티리딘-2-카복실산(베팜 프로덕트 리스트), 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-5-카복실산(스핀크스 사이언티픽 래보라토리 프로덕트 리스트), 1-메틸-4-옥소-4,7-다이하이드로-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카복실산(오로라 스크리닝 라이브러리), 이미다조[1,2-a]피리딘-6-카복실산(아폴로 사이언티픽 인터메디에이트스 포 리서치 앤 디벨롭먼트), 1H-피롤로[2,3-c]피리딘-2-카복실산(파크웨이 사이언티픽 프로덕트 리스트(Parkway Scientific Product List)), 1H-인다졸-6-카복실산(알드리치) 퀴녹살린-2-카복실산(알드리치), 3-아세트아미도벤조산(아폴로 사이언티픽 인터메디에이트스 포 리서치 앤 디벨롭먼트), 4-클로로-1H-인다졸-6-카복실산(시노바 프로덕트 리스트(Sinova Product List)), 2-모폴리노피리미딘-5-카복실산(아코스 스크리닝 라이브러리), 1H-이미다조[1,2-b]피라졸-6-카복실산(오로라 빌딩 블록스), 3-하이드록시퀴놀린-4-카복실산(아코스 스크리닝 라이브러리), 8-하이드록시퀴놀린-7-카복실산(티씨아이 래보라토리 케미칼스(TCI Laboratory Chemicals)) 및 3-(1H-피라졸-4-일)벤조산(아코스 빌딩 블록스 프로덕트 리스트).

하기의 카복실산(하기 실시예에 기재된 화합물을 제조하기 위해 사용됨)을 이전에 공개된 수단에 의해 제조하였다: 3-하이드록시-6-메틸피콜린산(문헌[P.Korovchenko et al., Catalysis Today 2007, 121, 13-21]); 4-하이드록시-1,3-다이메틸-1H-피라졸-5-카복실산(문헌[Tet . Let. 1971, 19, 1591]); 3-아미노-2,6-다이메틸이소니코틴산(문헌[Gulland, J.M., Robinson, R. J. Chem . Soc ., Trans. 1925, 127, 1493-503]); 5-하이드록시퀴놀린-6-카복실산(문헌[Bogert, M. T.; Fisher, Harry L. Orig . Com . 8 th Intern . Cangr . Appl . Chem . 1912, 6, 37-44]); 5-하이드록시이소퀴놀린-6-카복실산(상응하는 메틸 에스터의 가수분해에 의해 제조될 수 있음: 문헌[Dyke, S. F.; White, A. W. C.; Hartley, D. Tetrahedron 1973, 29, 857-62]); 3-메틸-1-(피리딘-3-일)-1H-피라졸-5-카복실산(문헌[J. Het . Chem. 1999, 36, 217]과 유사한 화학 반응에 의해 제조될 수 있음).

하기의 카복실산 출발 물질(하기 실시예에 기재된 화합물을 제조하기 위해 사용됨)을 하기 기재된 바와 같이 제조하였다.

산 제조 방법 1: 4-클로로-1H-벤즈이미다졸-6-카복실산

아세트산(100 mL) 중 4-아미노-3-니트로벤조산(10 g, 56 mmol)의 혼합물에 0℃에서 설퍼릴 클로라이드(8.98 g, 66 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 상온까지 가온시켰고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 얼음물에 부었고, 여과하였고, 공기 건조하여 황색 고체로서 4-아미노-5-클로로-3-니트로벤조산(7.35 g, 62%)을 수득하였다.

메탄올(150 mL) 중 4-아미노-5-클로로-3-니트로벤조산(7.35 g, 34 mmol)의 현탁액을 농축된 황산(40 mL)으로 처리하였다. 현탁액을 환류하기 위해 밤새 가열하였다. 반응 용액을 진공에서 농축하여 황색 고체를 수득하였고, 이를 에틸 아세테이트(200 mL) 및 물(30 mL)에 용해시켰다. 용액을 0℃까지 냉각하였고, 칼륨 카보네이트를 물(30 mL)에 첨가하였다(12.4 g). 층을 분리하였고, 수층을 에틸 아세테이트(200 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 진공에서 농축하여 황색 고체로서 메틸 4-아미노-5-클로로-3-니트로벤조에이트를 수득하였다.

에탄올(115 mL), 물(250 mL) 및 테트라하이드로푸란(200 mL) 중 메틸 4-아미노-5-클로로-니트로벤조에이트(4.29 g, 18.6 mmol)의 용액에 나트륨 하이드로설파이트(80 g, 391 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물에 물(55 mL)을 첨가하였다. 추가로 1시간 동안 교반한 후, 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트(140 mL)를 반응물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 여과하였고, 여과액을 에틸 아세테이트(각각 200 mL)로 2회 추출하였다. 유기 추출물을 합하였고, 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트(100 mL)로 세척하였고, 이어서 포화된 수성 나트륨 클로라이드(100 mL)로 세척하였다. 유기층을 진공에서 최종 용량이 100 mL가 될 때까지 농축하였고, 이어서 상온에서 밤새 위치시켜 침전물을 수득하였다. 혼합물을 여과하였고, 질소 증기 하에 건조하여 메틸 3,4-다이아미노-5-클로로벤조에이트(973 mg, 26%)를 수득하였다. 여과액을 진공에서 농축하여 메틸 3,4-다이아미노-5-클로로벤조에이트(2.45 g, 66%)를 수득하였다.

3,4-다이아미노-5-클로로벤조에이트(1.2 g, 6 mmol)를 물(10 mL) 및 포름산(826 mg, 18 mmol)에 첨가하였고, 환류 하에 4시간 동안 가열하였다. 반응물을 상온까지 냉각하였고, 수성 칼륨 하이드록사이드를 첨가하였다(21 mL, 1 M). 반응 용액을 에틸 아세테이트(각각 2 x 25 mL)로 세척하였다. 수층을 수성 염산(1 N)으로 pH가 5가 될 때까지 산화시켜 침전물을 수득하였고, 이를 여과하였고, 물로 세척하였고, 질소 증기 하에 건조하여 표제 화합물(439 mg, 37%)을 수득하였다.

산 제조 방법 2: 7-클로로-2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실산

3,4-다이아미노-5-클로로벤조에이트(산 제조 방법 1로부터, 100 mg, 0.50 mmol) 및 카보닐 다이이미다졸(89 mg, 0.55 mmol)을 테트라하이드로푸란(2 mL) 중에서 합하였고, 16시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 60℃까지 3시간 동안 가열하였다. 반응물에 카보닐 다이이미다졸(81 mg, 0.50 mmol)을 첨가하였고, 반응을 60℃에서 2시간 동안 계속하였다. 반응물을 실온까지 냉각시켰고, 16시간 동안 교반하였다. 침전물을 형성하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과액을 진공에서 농축하였고, 잔사를 에틸 아세테이트로 슬러리화하였다. 슬러리를 본래 여과와 같은 필터 상에서 여과하였다. 수집된 고체를 에틸 아세테이트의 일 분획으로 세척하였고, 이어서 질소 증기 하에 건조하여 백색 고체(93 mg, 82%)로서 메틸 7-클로로-2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실레이트를 수득하였다.

메틸 7-클로로-2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실레이트(351 mg, 1.55 mmol), 1 M 수성 리튬 하이드록사이드(0.774 mL, 1.55 mmol) 및 테트라하이드로푸란(5 mL)을 합하였고, 50℃까지 2시간 동안 가열하였다. 반응물에 1 M 수성 리튬 하이드록사이드(0.774 mL, 1.55 mmol) 및 메탄올(10 mL)을 첨가하였고, 반응물을 환류하기 위해 6시간 동안 가열하였고, 이어서 상온까지 밤새 냉각시켰다. 반응 용액을 진공에서 농축하여 테트로하이드로푸란 및 메탄올을 제거하였다. 잔여 수층을 에틸 아세테이트(2 mL)로 추출하였다. 수층에 물(2 mL), 에틸 아세테이트(2 mL) 및 3 M 수성 염산을 첨가하였다. 침전물을 형성하였다. 혼합물을 여과하였고, 고체를 물 및 에틸 아세테이트로 세척하였다. 고체를 질소 증기 하에 건조하여 표제 화합물(296 mg, 90%)을 수득하였다.

산 제조 방법 3: 4-플루오로-1H-벤조[d]이미다졸-6-카복실산

2.5 내지 5 mL 마이크로파 튜브에, 탈기된 1,4-다이옥산(1.5 mL)에 현탁된 6-브로모-4-플루오로-1H-벤조[d]이미다졸(160 mg, 0.744 mmol)을 첨가하였다. 이에 트랜스-다이(u-아세타토)비스[o-(다이-o-톨릴포스피노)벤질]다이-팔라듐(II)(26 mg, 0.043 mmol) 및 몰리브데늄 헥사카보닐(100 mg, 0.38 mmol)을 탈기된 물(2 mL)에 용해된 나트륨 카보네이트(237 mg, 2.23 mmol)와 함께 첨가하였다. 혼합물을 20초 동안 교반하였고, 이어서 마이크로파에서 10분 동안 155℃에서 가열하였고, 압력을 16바 미만으로 유지하였다. 다루기 전에 용기를 환기하였고, 상온에서 밤새 방치하였다. 물(2 mL) 및 에틸 아세테이트(3 mL)를 반응물에 첨가하였고, 이어서 혼합물을 셀라이트(등록상표)(Celite: 등록상표)를 통해 여과하였다. 여과액을 에틸 아세테이트로 분배하고 분리하였다. 수성 분획을 에틸 아세테이트로 한번 더 세척하였고, 합하였다. 유기층을 한쪽에 두었다. 다른 부분의 물(5 mL)을 수층에 첨가하였고, pH 3이 되도록 0.5 M HCl로 산성화시켰고; 갈색 침전물이 형성되었다. 혼합물을 4℃에서 1시간 동안 냉장기에 위치시켰다. 혼합물을 여과하였고, 물로 세척하여 회색 고체로서 4-플루오로-1H-벤조[d]이미다졸-6-카복실산을 수득하였다.

산 제조 방법 4: 1-옥소-1,2-다이하이드로이소퀴놀린-6-카복실산

톨루엔(1000 mL) 중 (E)-3-(3-브로모페닐)아크릴산(100 g, 0.44 mol) 및 트라이에틸아민(0.48 mol)의 혼합물에 다이페닐포스포릴 아자이드(127.4 g, 0.45 mol)를 0 내지 10℃에서 적가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 박막 크로마토그래피(석유 에터/에틸 아세테이트 = 8:1)는 반응 완료를 나타내었다. 생성된 혼합물을 1 N 나트륨 하이드록사이드(500 mL)로 세척하였고, 에틸 아세테이트(2000 mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 농축하여 조질 (E)-1-아지도-3-(3-브로모페닐)프로프-2-엔-1-온을 수득하였고, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다.

조질 (E)-1-아지도-3-(3-브로모페닐)프로프-2-엔-1-온(약 120 g 조질) 및 톨루엔(200 mL)의 혼합물을 2시간 동안 환류하였다. 박막 크로마토그래피(석유 에터/에틸 아세테이트 = 8:1)는 대부분의 출발 물질이 소비되었음을 나타내었다. 혼합물을 농축하여 조질 (E)-1-브로모-3-(2-이소시아나토비닐)벤젠(100 g, 94%)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다.

톨루엔(200 mL) 중 (E)-1-브로모-3-(2-이소시아나토비닐)벤젠(100 g, 0.44 mol)의 용액을 트라이부틸아민(100 mL) 및 옥시다이벤젠(500 mL)의 혼합물에 190 ℃에서 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 210℃에서 추가로 2시간 동안 가열하였다. 박막 크로마토그래피(석유 에터/에틸 아세테이트 = 1:1)는 반응의 완료를 나타내었다. 혼합물을 실온까지 냉각하였고, 여과하였고, 고체를 에틸 아세테이트(50 mL x 3)로 세척하였다. 고체를 진공 하에 건조하여 연황색 고체로서 조질 6-브로모이소퀴놀린-1(2H)-온(30 g, 30%)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다.

메탄올(300 mL) 중 6-브로모이소퀴놀린-1(2H)-온(30 g, 134 mmol), 트라이에틸아민(17.6 g, 174 mmol), 팔라듐(II) 클로라이드(0.24 g, 1.34 mmol) 및 (S)-(-)-2,2'-비스(다이페틸포스피노)-1,1'-바이나프틸(0.84 g, 1.34 mmol)의 혼합물을 2 MPa의 일산화탄소 하에 100℃에서 가열하였고, 12시간 동안 교반하였다. 박막 크로마토그래피(석유 에터/에틸 아세테이트 = 1:1)가 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 농축하였고, 잔사를 물로 세척하였고, 고체를 여과하였고, 진공에서 건조하여 황색 고체로서 조질 메틸 1-옥소-1,2-다이하이드로이소퀴놀린-6-카복실레이트(23.8 g, 95%)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다.

메틸 1-옥소-1,2-다이하이드로이소퀴놀린-6-카복실레이트(25 g, 0.133 mol), 테트라하이드로푸란(200 mL) 및 물(200 mL)의 혼합물에 리튬 하이드록사이드(16.8 g, 0.40 mol)를 실온에서 첨가하였고, 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 박막 크로마토그래피(석유 에터/에틸 아세테이트 = 1:1)가 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL x 3)로 추출하여 불순물을 제거하였다. 수층을 4 N 수성 HCl로 pH 5까지 산성화하였고, 여과하였다. 고체를 진공에서 건조하여 연황색 고체로서 1-옥소-1,2-다이하이드로이소퀴놀린-6-카복실산(11.3 g, 48%)을 수득하였다.

산 제조 방법 5: 1-옥소-1,2-다이하이드로이소퀴놀린-7-카복실산

1-옥소-1,2-다이하이드로이소퀴놀린-7-카복실산을 1-옥소-1,2-다이하이드로이소퀴놀린-6-카복실산(산 제조 방법 4)과 유사한 방식으로 제조하였다.

산 제조 방법 6: 5-(1H-이미다졸-1-일)피콜린산

5-브로모피콜리노니트릴(2.0 g, 10.9 mmol), 이미다졸(818 mg, 12 mmol), 칼륨 카보네이트(1.66 g, 12 mmol) 및 다이메틸포름아마이드(40 mL)를 합하였고, 130℃까지 20시간 동안 가열하였다. 반응 용액을 증발시켰고, 잔사를 다이클로로메탄(150 mL) 및 물(100 mL) 사이에 분배하였다. 상을 분리하였고, 유기상을 물(50 mL)로 세척하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 증발시켜 잔사를 수득하였고, 이를 다이클로로메탄 구배 중 2 내지 3 % 메탄올로 용리하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 5-(1H-이미다졸-1-일)피콜리노니트릴(1.23 g, 66%)을 수득하였다.

5-(1H-이미다졸-1-일)피콜리노니트릴(136 mg, 0.80 mmol)을 6 N 수성 염산(10 mL)에서 2시간 동안 가열 환류하였다. 반응 혼합물을 증발시켰고, 잔사를 3개의 분획의 톨루엔으로 공비 혼합하여 잔사를 수득하였고, 이를 물 구배 중 0 내지 10% 피리딘으로 용리하는 이온 교환 컬럼(AG-50 바이오라드(Biorad))상에서 정제하여 백색 고체(128 mg, 84%)로서 표제 화합물을 수득하였다.

산 제조 방법 7: 7-클로로-1H-인다졸-5-카복실산

클로로포름(50 mL) 중 4-아미노-3-클로로-5-메틸-벤조니트릴(3.0 g, 18.0 mmol)의 혼합물에 아세트산 무수물(3.92 mL, 41.4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 환류 하에 5시간 동안 가열하였고, 이어서 실온까지 냉각하였다. 혼합물에 칼륨 아세테이트(530 mg, 5.4 mmol) 및 이소아밀 니트라이트(5.28 mL, 39.6 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 환류 하에 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각하였고, 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트로 추출하였고, 유기물을 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 진공에서 농축하여 갈색 오일을 수득하였다. 오일을 메탄올(25 mL)에 용해시켰고, 농축 염산(25 mL)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 22시간 동안 교반하였고, 메탄올을 진공에서 농축하였다. 남은 수층을 pH 7까지 조절하였고, 생성된 침전물을 여과하여 갈색 고체를 수득하였고, 이를 용리액으로서 헵탄 중 50% 다이클로로메탄을 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 고체(585 mg, 18%)로서 7-클로로-1H-인다졸-5-카보니트릴을 수득하였다:

에탄올(52.5 mL) 중 7-클로로-1H-인다졸-5-카보니트릴(1.36 g, 7.66 mmol)의 혼합물에 물(17.5 mL) 및 칼륨 하이드록사이드(6.44 g, 115 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 하에 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각하였고, 에틸 에터로 2회 추출하였고, 수층을 1 N 염산으로 산성화하였고, 생성된 침전물을 여과하여 갈색 고체(900 mg, 60%)로서 7-클로로-1H-인다졸-5-카복실산을 수득하였다:

산 제조 방법 8: 5-모폴리노피콜린산

다이에틸 말론에이트(151 g, 0.944 mol)를 무수 테트라하이드로푸란(1 L) 중에서 미네랄 오일(37.8 g, 0.944 mol) 중 60% 나트륨 하이드라이드에 교반하면서 적가하였다. 수소 방출을 중단한 후, 2-클로로-5-니트로피리딘(125 g, 0.787 mol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 환류하였고, 이어서 테트라하이드로푸란을 진공에서 증발시켜 조질 다이에틸 (5-니트로피리딘-2-일)말론에이트를 수득하였고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

조질 다이에틸 (5-니트로피리딘-2-일)말론에이트를 첨가하여 교반 하에 65% 질산(1.5 L)을 비등시켰다. 반응 혼합물을 교반 하에 15시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 생성된 고체를 클로로포름으로 세척하여 5-니트로피리딘-2-카복실산(수율 65%, 85.9 g)을 수득하였다.

5-니트로피리딘-2-카복실산(100 g, 0.60 mol)을 메탄올(1 L) 및 황산(57 mL)에서 환류 하에 5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각하였고, 진공에서 용량을 절반까지 감소시켰고, 잔사를 나트륨 카보네이트 용액으로 중화하였다. 생성된 침전물을 여과하여 메틸 5-니트로피리딘-2-카복실레이트(수율 89%, 98 g)를 수득하였다.

메틸 5-니트로피리딘-2-카복실레이트(182 g, 1 mol)를 피페리딘(250 mL) 중에서 1시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하여 조질 5-니트로-2-(피페리딘-1-일카보닐)피리딘을 수득하였고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계를 위해 사용하였다.

조질 5-니트로-2-(피페리딘-1-일카보닐)피리딘을 아세트산(500 mL) 중 탄소(4 g) 상에 10% 팔라듐의 존재 하에 대기압 하에 수소에 의해 환원시켰다. 촉매를 여과에 의해 단리하였고, 용매를 진공에서 증발시켜 조질 6-(피페리딘-1-일카보닐)피리딘-3-아민을 수득하였고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계를 위해 사용하였다.

농축된 염산(1.5 L) 중 나트륨 니트라이트(69 g)의 용액을 조질 6-(피페리딘-1-일카보닐)피리딘-3-아민에 0℃에서 첨가하였고, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 우레아(20 g)를 첨가하였고, 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 나트륨 요오다이드(150 g)를 첨가하였고, 생성물을 여과에 의해 단리하였고, 에탄올로부터 재결정화하여 5-요오드-2-(피페리딘-1-일카보닐)피리딘(메틸 5-니트로피리딘-2-카복실레이트에 대해 계산된 수율 23%, 71 g)을 수득하였다.

톨루엔(400 mL) 중 5-요오도-2-(피페리딘-1-일카보닐)피리딘(71 g, 0.23 mol), 팔라듐(II) 아세테이트(1.03 g, 46 mmol), 2-(다이-3차-부틸포스피노)바이페닐(2.76 g, 92 mmol), 모폴린(23.7 g, 0.28 mol) 및 나트륨 3차-부톡사이드(27.8 g, 0.28 mol)의 혼합물을 아르곤 하에 95℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성물을 크로마토그래피(실리카 겔, 에틸 아세테이트)에 의해 단리하였고, 에탄올로부터 재결정화하여 4-[6-(피페리딘-1-일카보닐)피리딘-3-일]모폴린(수율 37%, 22 g)을 수득하였다.

25% KOH(100 mL)를 4-[6-(피페리딘-1-일카보닐)피리딘-3-일]모폴린(18.3 g)에 첨가하였고, 혼합물을 환류하였고, 이어서 HCl로 중화시켰다. 용액을 진공에서 증발시켰고, 생성물을 뜨거운 이소프로판올로 추출하여 표제 화합물(수율 71%, 11.5 g)을 수득하였다.

산 제조 방법 9: 7-클로로-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실산

2 N 염산(8 mL)을 에탄올(20 mL) 중 3,4-다이아미노-5-클로로벤조에이트(산 제조 방법 1로부터 435 mg, 2.17 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 환류하기 위해 가열하고, 이어서 황색 용액에 아세틸아세톤(437 mg, 4.37 mmol)을 첨가하였다. 첨가 시, 황색 용액이 보라색으로 변하였다. 환류 하에 1시간 동안 교반하고, 용액이 다시 황색으로 돌아왔다. 환류 하에 추가로 1시간 동안 교반하였다. 용매를 농축하여 무색 잔사를 수득하였다. 물(20 mL)을 첨가하였다. 현탁액을 에틸 아세테이트(20 mL)로 추출하였다. 수층을 2 N 나트륨 하이드록사이드(약 8 mL)로 pH가 약 10이 되도록 염기화하였다. 에틸 아세테이트(3 x 15 mL)로 추출하였다. 염기 추출로부터 합한 유기물을 염수(5 mL)로 세척하였다. 마그네슘 설페이트 상에서 건조하고, 여과하고, 농축하고, 고진공 하에서 건조하여 무색 고체로서 메틸 7-클로로-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실레이트(290 mg, 59%)를 수득하였다.

2 N 나트륨 하이드록사이드(5 mL, 5 mmol)를 메탄올(7.5 mL) 중 메틸 7-클로로-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실레이트(280 mg, 1.25 mmol)의 용액에 첨가하였다. 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 메탄올을 진공에서 농축하였고, 잔여 수층을 에틸 아세테이트(10 mL)로 추출하였다. 수층을 pH 약 4까지 1 N 염산(약 5 mL)으로 산성화하였다. 무색 침전물을 여과하였고, 고진공하에 건조하여 표제 화합물(189 mg, 72%)을 수득하였다.

산 제조 방법 10: 7-클로로-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실산

환저 플라스크를 5-브로모-3-플루오로벤젠-1,2-다이아민(400 mg, 2 mmol) 및

30 mL 에탄올로 충전하였다. 5 N 염산(8 mL, 40 mmol)을 이어서 첨가하였다. 이 혼합물을 가열 환류하였고, 2,4-펜탄다이온을 첨가하였다. 반응 혼합물이 진한 보라색으로 전환하였고, 이어서 천천히 황갈색으로 다시 전환하였다. 반응을 3시간 동안 계속해서 진행시켰고, 이어서 냉각하였고, 포화된 나트륨 바이카보네이트 용액으로 중화시켰다. 반응 혼합물을 이어서 다이클로로메탄으로 3회 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 여과하였고, 진공에서 농축하였다. 조질 혼합물을 다이에틸 에터 중에서 마쇄하였고, 이어서 여과하여 황갈색 고체로서 6-브로모-4-플루오로-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸(375 mg, 82%)을 수득하였다.

5 mL 마이크로파 바이알을 6-브로모-4-플루오로-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸(187 mg, 0.815 mmol)로 충전하였고, 탈기된 다이옥산(2 mL), 트랜스-다이-μ-아세타토비스[2-(다이-O-톨릴포스피노)벤질]다이팔라듐(II)(28 mg, 0.048 mmol) 및

몰리브데늄헥사카보닐(110 mg, 0.417 mmol)에 현탁하였다. 이어서 탈기된 10% 수성 나트륨 카보네이트(2.45 mL, 2.45 mmol)를 첨가하였다. 이어서 반응물을 마이크로파에 155℃에서 초고흡수 하에 10분 동안 반응시키기 전에 20초 동안 교반하였다. 용기를 이어서 환기시켰고, 실온에서 밤새 위치시켰다. 물(2 mL) 및 에틸 아세테이트(3 mL)를 이어서 첨가하였고, 혼합물을 셀라이트(등록상표)를 통해 여과하였다. 층을 분리하였고, 수층을 에틸 아세테이트(2회)로 세척하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 따로 두었다. 물(5 mL)을 수층에 첨가하였고, 이어서 0.5 M 염산으로 pH 3까지 산성화시켰고, 이어서 4℃까지 냉각하였다. 형성된 고체를 여과하였고, 물로 세척하여 황색 고체로서 표제 화합물(61 mg, 37%)을 수득하였다. 형성된 제 2 수확물을 이어서 여과하여 표제 화합물(100 mg, 63%)을 수득하였다.

산 제조 방법 11: 1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-6-카복실산

다이메틸포름아마이드(75 mL) 중 나트륨 하이드라이드(5.08 g, 127 mmol)의 현탁액에 다이에틸 말론에이트(19.26 mL, 127 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 용액을 이어서 상온에서 30분 동안 교반하였고, 다이메틸포름아마이드(75 mL) 중 5-브로모-2-클로로-3-니트로피리딘(30 g, 127 mmol)의 용액을 적가하였다. 이어서 진한 갈색 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였고, 상온까지 냉각시키고, 암모늄 클로라이드(500 mL)의 포화된 용액으로 0℃에서 급랭시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 500 mL)로 추출하였고, 합한 유기물을 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였다. 용매를 진공에서 제거하여 진한 갈색 오일을 수득하였고, 이를 플래시 컬럼 크로마토그래피(10% 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여 갈색 고체(31.8 g, 88 mmol, 69%)로서 다이에틸 2-(5-브로모-3-니트로피리딘-2-일)말론에이트를 수득하였다.

수성 염산(6 M, 1.4 L) 중 다이에틸 2-(5-브로모-3-니트로피리딘-2-일)말론에이트(31.8 g, 88 mmol)의 혼합물을 환류 하에 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 상온까지 냉각하였고, 수성 나트륨 바이카보네이트(4 L)의 포화된 수용액에 0℃에서 매우 천천히 첨가하였다. 혼합물을 이어서 다이클로로메탄(7 L)으로 추출하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 용매를 진공에서 제거하여 주황색 오일(13.8 g, 63.9 mmol, 72%)로서 5-브로모-2-메틸-3-니트로피리딘을 수득하였고, 이를 방치하여 고체화시켰다.

산업용 메틸화된 알콜(330 mL) 중 5-브로모-2-메틸-3-니트로피리딘(13.8 g, 63.9 mmol)의 용액에 40℃에서 철분(20 g)을 첨가하였고(뭉침을 막기 위해 분할식으로), 이어서 수성 염산(5 mL)으로 농축하였다. 진한 갈색 혼합물을 환류 하에 2시간 동안 격렬히 교반하였고, 이어서 냉각하였고, 셀라이트(등록상표)를 통해 여과하였다(이를 1 L의 산업용 메틸화된 알콜로 세척하였음). 용매를 이어서 진공에서 제거하였고, 잔사를 에틸 아세테이트(200 mL)에 용해시켰고, 나트륨 바이카보네이트(200 mL)의 포화된 수용액으로 세척하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 용매를 진공에서 제거하여 주황색 고체로서 5-브로모-2-메틸피리딘-3-아민을 수득하였다(10.7 g, 57.5 mmol, 89.9%).

다이클로로메탄(575 mL) 중 5-브로모-2-메틸피리딘-3-아민(10.7 g, 57.5 mmol)의 용액에 아세트산 무수물(12 mL, 126.5 mmol)을 0℃에서 첨가하였고, 이어서 트라이에틸아민(22 mL, 158 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 상온까지 가온시켰고, 18시간 동안 교반하였고, 추가로 동량의 아세트산 무수물(6 mL, 63 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 상온에서 추가로 72시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 나트륨 바이카보네이트(500 mL)의 포화된 수용액으로 급랭하였고, 유기층을 포화된 수성 나트륨 클로라이드(500 mL)로 세척하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 진공에서 농축하여 갈색 고체를 수득하였다. 이 고체를 헥산 중 30% 에틸 아세테이트로 마쇄하여 회백색 고체로서 N-(5-브로모-2-메틸피리딘-3-일)아세트아마이드를 수득하였다(8.28 g, 36 mmol, 63%).

클로로포름(550 mL) 중 N-(5-브로모-2-메틸피리딘-3-일)아세트아마이드(8.28 g, 36 mmol)의 용액에 상온에서 칼륨 아세테이트(4.32 g, 43.6 mmol), 아세트산(2.5 mL, 43.6 mmol)을 첨가하였고, 이어서 아세트산 무수물(6.86 mL, 72.6 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 40℃까지 가열시키기 전에 상온에서 15분 동안 교반하였다. 이소아밀니트라이트를 이어서 적가하였다. 반응물을 이어서 60℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 천천히 포화된 나트륨 바이카보네이트(500 mL) 용액에 0℃에서 부었다. 유기층을 보유하였고, 수층을 다이클로로메탄(500 mL)으로 추출하였다. 합한 유기물을 이어서 갈색 오일로 농축하였고, 이를 메탄올(500 mL)에 용해하였다. 수성 나트륨 하이드록사이드(2 M, 500 mL)를 0℃에서 첨가하였고, 혼합물을 메탄올을 진공에서 제거하기 전에 상온에서 1시간 동안 교반하였다 수성 혼합물을 이어서 에틸 아세테이트(3 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기물을 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 용매를 진공에서 제거하여 연갈색 고체(5.5 g, 27.9 mmol, 77%)로서 6-브로모-1H-피라졸로[4,3-b]피리딘을 수득하였다.

메탄올(125 mL) 중 6-브로모-1H-피라졸로[4,3-b]피리딘(5.5 g, 27.9 mmol)의 용액 및 아세토니트릴(75 mL)에 트라이에틸아민(22 mL, 156 mmol), 2,2'-비스(다이페닐포스피노)-1,1'-바이나프틸(1.98 g, 3.07 mmol), 팔라듐 다이클로라이드(1.23 g, 6.98 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20바의 일산화탄소에 위치시켰고, 100℃까지 가열하였고, 18시간 동안 격렬히 교반하였다. 반응 혼합물을 상온까지 냉각하였고, 용매를 진공하에 제거하여 갈색 오일을 수득하기 전에 셀라이트(등록상표)를 통해 여과하였다. 이 조질 오일을 이어서 플래시 컬럼 크로마토그래피(1:1, 에틸 아세테이트:헥산)에 의해 정제하여 연황색 고체(4.52 g, 92% 수율)로서 메틸 1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-6-카복실레이트를 수득하였다.

메탄올(250 mL) 및 물(190 mL) 중 메틸 1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-6-카복실레이트(3.52 g, 20 mmol)의 용액에 0℃에서 수성 나트륨 하이드록사이드(2 M, 64 mL, 128 mmol)를 적가하였다. 현탁액을 이어서 상온까지 가온시켰고, 18시간 동안 교반하였다. 이어서 메탄올을 진공에서 제거하였고, 수성 혼합물을 수성 염산(2 M, 70 mL)으로 산화시키기(pH 5 내지 6까지) 전에 에틸 아세테이트(250 mL)로 추출하였다. 침전된 크림색 고체를 이어서 여과하였고, 건조기에서 건조하여 표제 화합물(0.675 g, 4.16 mmol, 21% 수율)을 수득하였다.

산 제조 방법 12: 3-시아노-1H-인다졸-5-카복실산

(2-니트로페닐)-아세토니트릴(30 g, 185 mmol)의 현탁액 및 아세트산(450 mL) 중 탄소 상 10% 팔라듐(2 g)을 30 psi 압력 하에 파르(Parr) 장치에 상온에서 2시간 동안 수소화하였다. 혼합물을 셀라이트(등록상표) 패드를 통해 여과하였고, 여과액을 진공에서 농축하였다. 수득된 잔사를 에틸 아세테이트(250 mL)에 용해하였다. 생성된 용액을 물(2 x 100 mL) 및 포화된 나트륨 클로라이드(50 mL)로 세척하였고, 이어서 무수의 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 진공에서 농축하여 생성물을 수득하였다. 조질 물질을 용리액으로서 석유 에터 중 8% 에틸 아세테이트를 사용하는 컬럼 크로마토그래피(100 내지 200 메쉬 실리카 겔)에 의해 정제하여 고체로서 (2-아미노페닐)아세토니트릴(13.5 g, 55%)을 수득하였다.

0℃의 다이메틸포름아마이드(150 mL) 중 (2-아미노페닐)아세토니트릴(13 g, 98 mmol)의 냉각된 용액에 N-브로모숙신이미드(19.3 g, 108 mmol)를 30분 동안 분할식으로 첨가하였고, 0℃에서 1시간 동안 유지하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(300 mL)로 희석하였고, 물(3 x 100 mL) 및 포화된 나트륨 클로라이드(50 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수의 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 진공에서 농축하였다. 수득한 조질 생성물을 용리액으로서 석유 에터 중 10% 에틸 아세테이트를 사용하는 컬럼 크로마토그래피(100 내지 200 메쉬 실리카 겔)에 의해 정제하여 고체로서 (2-아미노-5-브로모페닐)아세토니트릴(11 g, 53%)을 수득하였다.

-50℃의 농축된 염산(110 mL) 중 (2-아미노-5-브로모페닐)아세토니트릴(11 g, 52 mmol)의 냉각된 용액에, 물(20 mL) 중 나트륨 니트라이트(3.9 g, 57 mmol)의 용액을 천천히 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 -50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 33% 암모늄 하이드록사이드로 0℃에서 중화하였고, 에틸 아세테이트(3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 포화된 나트륨 클로라이드(100 mL)로 세척하였고, 무수의 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 농축하였다. 수득된 조질 생성물을 용리액으로서 석유 에터 중 10% 에틸 아세테이트를 사용하는 컬럼 크로마토그래피(100 내지 200 메쉬 실리카 겔)에 의해 정제하여 고체로서 5-브로모-3-시아노인다졸(7 g, 60%)을 수득하였다.

메탄올(100 mL) 중 5-브로모-3-시아노인다졸(3 g, 13.51 mmol), 팔라듐 다이클로라이드 1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센(1.76 g, 2.16 mmol), 나트륨 아세테이트(3.32 g, 40.5 mmol), 다이메틸포름아마이드(1 mL)의 현탁액을 탈기하였고, 일산화탄소(80 psi) 압력 하에 멸균기에 80℃에서 16시간 동안 유지하였다. 혼합물을 물(50 mL)로 희석하였고, 셀라이트(등록상표) 베드를 통해 여과하였고, 여과액을 농축하였다. 수득된 잔사를 10% 시트르산 용액으로 산성화하였고, 에틸 아세테이트(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(50 mL)로 세척하였고, 무수의 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 농축하였다. 조질 생성물을 용리액으로서 클로로포름 중 10% 에틸 아세테이트를 사용하는 컬럼 크로마토그래피(100 내지 200 메쉬 실리카 겔)에 의해 정제하여 고체로서 메틸 3-시아노-1H-인다졸-5-카복실레이트(1.8 g, 68 %)를 수득하였다.

에탄올(40 mL) 중 메틸 3-시아노-1H-인다졸-5-카복실레이트(2.5 g, 12 mmol)의 용액에 물(15 mL) 중 리튬 하이드록사이드(1.04 g, 24.9 mmol)의 용액을 첨가하였고, 상온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하였고, 수득된 잔사를 물(25 mL)에 용해하였고, 에틸 아세테이트(20 mL)로 세척하였다. 수층을 10% 시트르산 용액으로 산성화하였고, 수득된 침전물을 여과하였고, 석유 에터(2 x 10 mL) 중 50% 에틸 아세테이트로 세척하였고, 건조하여 갈색 고체로서 표제 화합물(1.9 g, 82%)을 수득하였다.

산 제조 방법 13: 2-(1H-피라졸-3-일)이소니코틴산

150 mL 농축된 황산 중 29.0 g(69 mmol)의 2-브로모-4-메틸피리딘의 교반된 용액에 67.9 g(231 mmol)의 칼륨 다이크로메이트를 분할식으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 빙욕에서 냉각하였고, 온도를 20 내지 50℃로 유지하였다. 첨가를 완료한 후, 교반을 실온에서 추가로 2시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 이어서 2 L 얼음물에 천천히 부었고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 결정을 여과에 의해 수집하였고, 세척액이 무색이 될 때까지 물로 세척하였고, 진공에서 건조하여 30.0 g(88%)의 2-브로모이소니코틴산을 수득하였다.

다이클로로메탄(500 mL) 및 메탄올(35 g, 1.08 mol) 중 2-브로모이소니코틴산(73 g, 0.361 mol)의 얼음 냉각된 용액에 분할식으로 1-에틸-3-[3-(다이메틸아미노)프로필]카보다이이미드 하이드로클로라이드(67 g, 0.434 mol)를 첨가하였다. 혼합물을 상온에서 밤새 교반하였다. 이어서 120 g의 실리카 겔을 첨가하였고, 용매를 증발시켰다. 잔사를 석유 에터 중 5% 에틸 아세테이트로 용리하는, 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 백색 고체로서 58 g(75%)의 메틸 2-브로모이소니코티네이트를 수득하였다.

메틸 2-브로모이소니코티네이트(216 g, 1 mol), 무수 아세토니트릴(1.7 L), 에티닐(트라이메틸)실란(117 g, 1.2 mol), 다이이소프로필아민(122 g, 1.2 mol) 및 다이클로로비스(트라이페닐포스틴)팔라듐(36 g, 0.05 mol)을 웰에 위치시켰고, 질소 증기로 2회 퍼징된 3목 플라스크를 건조시켰다. 반응 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였고, 10℃까지 냉각하였고, 구리 요오다이드(19 g, 0.1 mol)를 질소 증기 하에 첨가하였다. 20℃에서, 반응 혼합물은 진하고 검게 되었고, 발열 반응이 관찰되었고, 이어서 침전물을 형성하였다. 구리 요오다이드를 첨가한 후, 반응 혼합물을 추가로 2시간 동안 상온에서 교반하였다. 침전된 잔사를 여과에 의해 분리하였고, 다이에틸 에터(800 mL)로 2회 세척하였다. 여과액을 포화된 암모늄 클로라이드(2 x 300 mL) 및 염수(2 x 300 mL)로 세척하였다. 나트륨 설페이트 상에서 건조한 후, 용매를 증발시켰다. 잔사를 헥산 및 이어서 석유 에터 중 5% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 컬럼을 사용하여 정제하여 191 g(82%)의 메틸 2-((트라이메틸실릴)에티닐)이소니코티네이트를 수득하였다.

농축된 황산(60 mL, 1.1 mol)을 테트라하이드로푸란(600 mL) 및 수은 아세테이트(51.5 g, 0.16 mol) 중 메틸 2-((트라이메틸실릴)에티닐)이소니코티네이트(127 g, 0.54 mol)의 현탁액에 첨가하였다. 현탁액을 3시간 동안 50℃에서 교반하였고, 밤새 방치하였다. 반응 혼합물을 다이에틸 에터(1.5 L)로 희석하였고, 황산을 포화된 나트륨 바이카보네이트(150 g, 1.7 mol)로 중화하였다. 수은 염의 잔사를 여과에 의해 분리하였다. 에터 용액을 물로 세척하였고, 나트륨 설페이트 상에서 건조하였다. 용매를 제거하여 오일로서 메틸 2-아세틸이소니코티네이트를 수득하였고, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다.

2 L의 3목 플라스크에 메틸 2-아세틸이소니코티네이트(160 g, 0.894 mol), 다이메틸포름아마이드-다이메틸아세트아마이드(350 mL) 및 톨루엔(350 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 약 5시간 동안 딘-스타크(Dern-Stark) 트랩으로 환류하여 생성된 메탄올을 제거하였다. 추가의 다이메틸포름아마이드-다이메틸아세트아마이드 및 톨루엔을 첨가하여 약 800 내지 900 mL의 반응 용량을 유지하였다. 액체 크로마토그래피-질량 분광기가 반응 완성을 나타낼 때, 용매를 제거하여 어두운 고체로서 조질 (Z)-메틸 2-(3-(다이메틸아미노)아크릴오일)이소니코티네이트를 수득하였다. 조질 고체를 다음 단계에 직접 사용하였다.

2 L의 3목 플라스크에 (Z)-메틸 2 -(3-(다이메틸아미노)아크릴오일)이소니코티네이트(0.894 mol), 하이드라진 하이드레이트(48.8 g), 무수의 에탄올(1 L)을 첨가하였다. 현탁액을 20℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하였다. 잔사를 농축된 염산(600 mL)에 용해시켰고, 2시간 동안 가열 환류하였다. 혼합물을 상온까지 냉각하였다. 생성된 침전물을 여과하였고, 물, 에탄올 및 아세톤으로 세척하였고, 건조하여 갈색 고체로서 78.6 g의 표제 화합물을 수득하였다.

산 제조 방법 14: 3-메틸-2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실산

나트륨 하이드로설파이트(17.4 g, 물 80 mL 중 100 mmol)의 수용액을 테트라하이드로푸란(70 mL) 중 메틸-3-(메틸아미노)-4-니트로벤젠 카복실레이트(855 mg, 4.75 mmol) 및 에탄올(30 mL)에 0℃에서 첨가하였다. 첨가 시, 주황색 용액이 주황색 현탁액으로 전환되었다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이 시간에 걸쳐서 주황색 현탁액이 황색 현탁액으로 전환되었다. 포화된 나트륨 바이카보네이트(100 mL)를 첨가하고 이어서 황색 현탁액이 무색으로 전환되었다. 혼합물을 에틸 아세테이트(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기물을 염수(30 mL)로 세척하였다. 마그네슘 설페이트 상에서 건조하고, 여과하고, 농축하고, 고진공 하에 건조하여 황색 오일로서 메틸 4-아미노-3-(메틸아미노)벤조에이트(586 mg, 68%)를 수득하였다. 생성된 오일은 10분 방치 후에 결정화를 시작하였다.

카보닐 다이이미다졸(567 mg, 3.50 mmol)을 테트라하이드로푸란(20 mL) 중 메틸 4-아미노-3-(메틸아미노)벤조에이트(586 mg, 3.19 mmol)의 용액에 실온에서 첨가하였다. 황색 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 카보닐 다이이미다졸(500 mg, 0.96)을 첨가하였다. 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트(75 mL)를 첨가하였다. 10% 시트르산(5 mL), 1 N 나트륨 하이드록사이드(5 mL) 및 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기물을 마그네슘 설페이트 상에서 건조하고, 여과하고, 농축하고, 고진공 하에 건조하여 조질 황색 고체(690 mg, 100%)를 수율하였다. 이 조질 고체를 에틸 아세테이트(10 mL)로 마쇄하였다. 침전물을 여과하고, 고진공 하에 건조하여 메틸 3-메틸-2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실레이트(422 mg, 64%)를 수율하였다.

1 N 나트륨 하이드록사이드(6.1 mL, 6.1 mmol)를 메탄올(10 mL) 중 메틸 3-메틸-2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실레이트(420 mg, 2.04 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 1 N 나트륨 하이드록사이드의 첨가 시, 현탁액은 용액으로 전환하였다. 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온까지 냉각하고 이어서 농축하여 메탄올을 제거하였다. 수용액을 에틸 아세테이트(5 mL)로 추출하였다. 수층을 2 N 염화수소(3 mL)로 pH 약 2까지 산성화시킨다. 수층을 고체가 되도록 농축하였다. 고체를 물(3 mL)로 마쇄하였다. 침전물을 여과하고, 고진공 하에 건조하여 연한 갈색 고체로서 표제 화합물(234 mg, 59%)을 수득하였다.

산 제조 방법 15: 7-브로모-2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실산

메탄올(100 mL) 중 메틸 4-아미노-3-브로모-5-니트로벤조에이트(10 g, 36.3 mmol) 및 주석(II) 클로라이드(33 g, 14.5 mmol)의 현탁액을 60℃까지 가열하였고, 4시간 동안 유지하였다. 반응 매스를 상온까지 냉각하였고, 농축하여 잔사를 수득하였다; 잔사를 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트로 pH가 11이 될 때까지 염기화하였고, 수층을 다이클로로메탄(3 x 200 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 수성의 포화된 나트륨 클로라이드(200 mL)로 세척하였고, 무수의 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 농축하여 회백색 고체(5 g, 58%)로서 메틸 3,4-다이아미노-5-브로모벤조에이트를 수득하였다.

다이클로로메탄(6 mL) 중 3,4-다이아미노-5-브로모벤조에이트(1 g, 4.0 mmol) 및 트라이에틸아민(0.4 g, 4.0 mmol)의 용액을 0℃까지 냉각하였다. 다이클로로메탄(15 mL) 중 트라이포스젠(1.2 g, 4.08 mmol)의 용액을 이 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 상온까지 가온시켰고, 18시간 동안 유지하였다. 반응 매스를 물(3 mL)로 급랭시켰고, 에틸 아세테이트(3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 수성의 포화된 나트륨 클로라이드(50 mL)로 세척하였고, 무수의 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 농축하여 회백색 고체(500 mg, 45%)로서 메틸 7-브로모-2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실레이트를 수득하였다.

메틸 7-브로모-2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실레이트(238 mg, 0.878 mmol) 및 2 N 수성의 나트륨 하이드록사이드(1.50 mL, 3.0 mmol)를 메탄올(5 mL)에서 합하였고, 50℃까지 90분 동안 가열하였다. 반응 용액을 농축하여 메탄올을 제거하였다. 반응 잔사에 에틸 아세테이트(5 mL)를 첨가하였다. 생성된 용액을 1N 수성 염산(1.5 mL)으로 산성화시켜 최종 pH 4를 수득하였다. 형성된 침전물을 여과하였고, 진공 하에 건조하여 고체로서 표제 화합물(226 mg, 100 %)을 수득하였다.

산 제조 방법 16: 2-(3-메틸-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)이소니코틴산

아세토니트릴(2 mol), 하이드록실아민 하이드로클로라이드(2 mol) 및 나트륨 메톡사이드(2 mol)의 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반하였고, 이어서 여과하였고, 여과액을 20℃ 미만에서 농축하여 백색 고체로서 (Z)-N'-하이드록시아세티미드아미드(150 g)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 직접 이용하였다.

메탄올(800 mL), 칼륨 하이드록사이드(44 g, 0.95 mol) 및 다이메틸 피리딘-2,4-다이카복실레이트(켐퍼시픽(ChemPacific))(156 g, 0.79 mol)의 혼합물을 0.5시간 동안 환류하였고, 이어서 진공에서 증발시켜 황색 고체로서 4-(메톡시카보닐)피콜린산(144 g)을 수득하였다.

다이클로로메탄(500 mL) 중 4-(메톡시카보닐)피콜린산(150 g, 1.62 mol)에 옥살릴 클로라이드(400 mL)를 첨가하였고, 3일 동안 25 내지 30℃의 온도를 유지하였다. 반응물을 진공에서 증발시켜 황색 오일로서 메틸 2-(클로로카보닐)이소니코티네이트를 수득하였다.

다이클로로메탄(500 mL) 중 메틸 2-(클로로카보닐)이소니코티네이트의 용액에 (Z)-N'-하이드록시아세트이미드아마이드 및 트라이에틸아민을 첨가하였고, 1일 동안 25 내지 30℃의 온도를 유지하였다. 반응물을 진공에서 농축하여 황색 고체로서 (Z)-메틸 2-((1-아미노에틸리덴아미노옥시)카보닐)이소니코티네이트를 수득하였다.

톨루엔(1 L) 중 (Z)-메틸 2-((1-아미노에틸리덴아미노옥시)카보닐)이소니코티네이트의 용액을 환류 하에 밤새 가열하였다. 수득된 혼합물을 증발시켰고, 실리카-겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 백색 고체로서 메틸 2-(3-메틸-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)이소니코티네이트를 수득하였다.

리튬 하이드록사이드(15 g, 0.35 mol), 에탄올(500 mL) 및 메틸 2-(3-메틸-1,2,4-옥사다이아졸-5-일)이소니코티네이트(52 g, 0.23 mol)의 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였고, 이어서 혼합물을 진공에서 농축하였다. 물을 첨가하였고, 이어서 에틸 아세테이트로 추출하였다. 수층을 pH 1.5까지 1 N 염산 용액으로 가져왔고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 진공에서 농축하여 백색 고체(42 g)로서 표제 화합물을 수득하였다.

제제 I-1A-1a : 3차-부틸 9-옥소-3-아자스피로[5.5]운덱-7-엔-3-카복실레이트

[화학식 I-1A-1a]

메틸 비닐 케톤(146 mL)을 테트라하이드로푸란(18 L) 중 3차-부틸 4-포름일피페리딘-1-카복실레이트(375 g)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 -5℃까지 냉각하였고, 에탄올(3 N, 0.243 L) 중 칼륨 하이드록사이드 용액을 10분에 걸쳐서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 가온시켰고, 16시간 동안 교반하였다. 사이클로헥산(10 L)을 첨가하였고, 용액을 포화된 나트륨 클로라이드(3 x 10 L)로 세척하였다. 유기층을 농축하여 오일을 수득하였다. 이 오일을 2 L의 80:20 사이클로헥산/에틸 아세테이트에 용해하였고, 셀라이트(등록상표)를 통해 여과하여 불용성 물질을 제거하였다. 여과액을 플래시 컬럼 크로마토그래피(70:30 헥산/에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 오일로서 생성물을 수득하였다. 오일을 헥산에서 마쇄하여 백색 고체(131 g, 28%)로서 목적 생성물을 수득하였다.

제제 I-1A-1b: (E)-3차-부틸 10-((다이메틸아미노)메틸렌)-9-옥소-3-아자스피로[5.5]운덱-7-엔-3-카복실레이트

[화학식 I-1A-1b]

제제 I-1A-1a(101 g) 및 트리스(다이메틸아미노메탄)(133 mL)을 톨루엔(800 mL)에 용해하였고, 17시간 동안 가열 환류하였다. 반응 혼합물을 최소의 교반 용량까지 농축하였고, 에틸 아세테이트(600 mL)를 첨가하였다. 이 혼합물을 가열 환류하였고, 헵탄(1.2 L)을 20분에 걸쳐서 첨가하였다. 뜨거운 용액을 실온까지 3시간에 걸쳐 냉각하였다. 고체를 조질 유리 프릿을 통해 여과하였고, 헵탄(300 mL)으로 세척하였다. 생성된 고체를 40℃에서 3시간 동안 진공 오븐에서 건조하여 황색 고체(107 g)로서 목적 생성물을 수득하였다.

제제 I-1A-1c: 3차-부틸 1-이소프로필-1,4-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-1A-1c]

제제 I-1A-1b(107 g)를 톨루엔(700 mL)에 용해시켰고, 이소프로필 하이드라진(44.4 g)을 첨가하였다. 반응물을 환류 하에 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온까지 냉각하였고, 에틸 아세테이트를 첨가하였다(500 mL). 반응 용액을 시트르산(2 x 300 mL, 10% 수성) 및 물(400 mL)로 세척하였다. 유기층을 진공에서 농축하여 황색 고체(109 g)로서 I-1A-1c를 수득하였다.

제제 I-1A-1d: 3차-부틸 1-이소프로필-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-1A-1d]

메탄올(1 L) 중 제제 I-1A-1c(109 g)의 용액에 N-브로모 숙신이미드(61.4 g)를 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 나트륨 티오설페이트(300 mL 물 중 10 g)로 급랭시켰고, 이어서 500 mL의 최종 용량까지 증류하였다. 용액을 상온까지 냉각하였고, 2-메틸 테트라하이드로푸란(1 L) 및 물(100 mL)을 첨가하였다. 유기층을 제거하였고, 수층을 2-메틸 테트라하이드로푸란으로 추출하였다. 유기층을 합하였고, 수성 나트륨 하이드록사이드(1 N, 250 mL), 물 및 포화된 수성 나트륨 클로라이드로 세척하였다. 유기층을 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 여과하였고, 농축하여 주황색 오일을 수득하였다. 오일을 테트라하이드로푸란(500 mL)에 용해하였고, 테트라하이드로푸란(500 mL) 중 칼륨 3차-부톡사이드(76.8 g)를 첨가하였다. 용액을 60℃까지 가열하였고, 1시간 동안 교반하였다. 수성 염산(1 N, 1 L)을 첨가하였고, 용액을 30분 동안 교반하였다. 상을 분리하였고, 수층을 에틸 아세테이트(700 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하였고, 물(400 mL) 및 포화된 수성 나트륨 클로라이드(100 mL)로 세척하였다. 유기층을 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 여과하였고, 진공에서 농축하여 잔사를 수득하였다. 잔사를 40℃에서 16시간 동안 진공 오븐에서 건조하여 주황색 왁스로서 표제 화합물(117 g)을 수득하였다.

제제 I-1A-1e: 1-이소프로필-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온

[화학식 I-1A-1e]

제제 I-1A-1d(23.5 g)를 에틸 아세테이트(260 mL) 및 메탄올(70 mL)에 현탁하였다. 반응 용액을 2℃ 미만까지 냉각하였고, 아세틸 클로라이드(33.6 mL)를 20분에 걸쳐서 적가하였다. 반응물을 실온까지 천천히 가열시켰고, 4시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 0℃까지 냉각하였고, 침전물을 여과하였다. 침전물을 에틸 아세테이트(200 mL)로 세척하였고, 진공 오븐(40℃, 10 mm Hg)에서 16시간 동안 건조하여 연황색 고체로서 표제 화합물을 수득하였다.

1-이소프로필-4,6- 다이하이드로스피로 [ 인다졸 -5,4'-피페리딘]-7(1H)-온(제제 I-1A-1e)의 다른 제조 방법:

I-1A-1e

3차-부틸 9-옥소-3-아자스피로[5.5]운덱-7-엔-3-카복실레이트(250 g) 및 트리스(다이메틸아미노메탄)(325 mL)을 톨루엔(1.9 L)에 용해하였고, 환류 하에 4시간 동안 가열하였다. 혼합물을 증류하였고, 최소 교반 용량(110℃)까지 농축하였고, 이어서 톨루엔(1.9 L)을 첨가하였다. 반응물을 최소 교반 용량까지 재증류하였고, 실온까지 냉각하였다. 톨루엔(1.8 L) 및 이소프로필 하이드라진 하이드로클로라이드(135 g)를 첨가하였고, 용액을 5시간 동안 가열 환류하였다. 반응물을 실온까지 냉각하였고, 이어서 시트르산(10% 수성, 2 x 150 mL) 및 물(200 mL)로 세척하였고, 이어서 유기층을 최소 교반 용량까지 증류하였다. 메탄올(2 L)을 첨가하였고, 최소 교반 용량까지 증류하였다. 이를 메탄올(2 L)로 반복하였다. 용액을 메탄올(2.5 L)에 재용해하였고, N-브로모숙신이미드(176 g)를 하나의 분획으로 첨가하였다. 용액을 23℃에서 2시간 동안 교반하였다. 수성 나트륨 티오설페이트 용액(5중량%, 0.5 L)을 첨가하였고, 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증류(45℃, 210 mm Hg)를 통해 약 0.5 L까지 농축하였고, 이어서 2-메틸 테트라하이드로푸란(2.5 L)을 첨가하였다. 15분 동안 교반한 후 수층을 버렸다. 유기층을 약 0.2 L까지 농축하였고, 테트라하이드로푸란(0.5 L)을 첨가하였다. 혼합물에 테트라하이드로푸란 중 칼륨 3차-부톡사이드 용액(1.9 L, 1 M 용액)을 첨가하였다. 용액을 60℃까지 가열하였고, 1시간 동안 교반하였다. 실온까지 냉각한 후, 수성 염산(1 N, 2.2 L)을 20분에 걸쳐서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였고, 이어서 층을 분리시켰다. 수층을 제거하였고, 다시 에틸 아세테이트(1.75 L)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(1 L)로 세척하였고, 유기층을 증류(4 L 용매 제거함)를 통해 농축하였다. 에틸 아세테이트(1.8 L)를 첨가하였고, 용액을 최소 교반 용량까지 농축하였다. 에틸 아세테이트(3 L) 및 메탄올(0.8 L)을 첨가하였고, 용액을 0℃까지 냉각하였다. 아세틸 클로라이드(401 mL)를 20분에 걸쳐서 적가하였고, 용액을 0℃에서 4시간 동안 교반하였다. 침전물을 질소 하에 여과에 의해 수집하였다. 여과액을 에틸 아세테이트(0.5 L)로 세척하였고, 진공 오븐에서 40℃에서 건조하여 회백색 고체(241 g)로서 I-1A-1e를 수득하였다.

제제 I-1A-2: 벤질 9-옥소-3-아자스피로[5.5]운덱-7-엔-3-카복실레이트

[화학식 I-1A-2]

딘-스타크 트랩을 갖춘 2 L의 3목 플라스크에서 교반하는 벤질 4-포름일피페리딘-1-카복실레이트(90.0 g, 363.9 mmol)의 벤젠(700 mL) 용액에 p-톨루엔설폰산(6.92 g, 36.4 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 70℃까지 가열하였고, 3-부텐-2-온(61.8 mL, 753 mmol)을 첨가하였고, 혼합물을 트랩에서 배출된 물을 수집하면서 24시간 동안 환류 하에 가열하였다. 반응물을 실온까지 냉각하였고, 500 mL의 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트로 세척하였다. 유기층을 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 여과하였고, 농축하였다. 생성된 진한 갈색 오일을 200 mL의 다이클로로메탄에 용해시켰고, 2 L 헵탄, 이어서 3 L의 50% 에틸 아세테이트/헵탄 및 이어서 3 L 에틸 아세테이트로 용리하는, 실리카 패드(600 mL 실리카)를 통해 여과하였고, 이어서 1 L 분획으로 수집하였다. 투명한 생성물을 함유하는 분획을 합하였고, 농축하여 탁한 갈색 오일로서 68.1 g의 표제 화합물을 수득하였다. 불순물이 섞인 생성물을 함유하는 분획을 합하였고, 농축하였고, 플래시 크로마토그래피(10 내지 80% 에틸 아세테이트/헵탄, 340 g 실리카 겔)에 의해 정제하여 탁한 갈색 오일로서 추가로 23.6 g의 표제 화합물을 수득하였다. 91.7 g(94.1 %)의 합한 수율을 달성하였다.

제제 I-1A-2a: 벤질 10-((다이메틸아미노)메틸렌)-9-옥소-3-아자스피로[5.5]운덱-7-엔-3-카복실레이트

[화학식 I-1A-2a]

9-옥소-3-아자-스피로[5.5]운덱-7-엔-3-카복실산 벤질 에스터, 제제 I-1A-2(15.2 g, 51 mmol)를 180 mL의 톨루엔에 용해하였고, 트리스(다이메틸아미노)메탄(22.2 g, 27 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 5시간 동안 가열 환류하였고, 이어서 실온까지 밤새 냉각시켰다. 반응 용액을 진공에서 농축하여 표제 화합물(18.0 g, 100%)을 수득하였다.

제제 I-1A-2b: 벤질 1-3차-부틸-1,4-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-1A-2b]

제제 I-1A-2a(59.2 g, 167 mmol)를 835 mL의 에탄올에 용해하였다. 반응 용액에 아세트산(20 mL, 345 mmol) 및 3차-부틸하이드라진 하이드로클로라이드(29.1 g, 234 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 가열 환류하였다. 반응 용액을 실온까지 냉각하였고, 이어서 진공에서 농축하여 주황색 오일을 수득하였고, 이를 용리액으로서 헵탄 중 20 내지 40% 에틸 아세테이트를 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 연한 황색 고체(50 g, 79%)로서 표제 화합물을 수득하였다.

제제 I-1A-2c: 벤질 6-브로모-1-3차-부틸-7-하이드록시-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-1A-2c]

제제 I-1A-2b(50 g, 132 mmol)를 1 L의 테트라하이드로푸란에 용해하였다. 반응물에 N-브로모숙신이미드(24.6 g, 138 mmol) 및 250 mL의 물을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트 및 물 사이에 분배하였다. 상을 분리하였고, 유기상을 물로 추가로 2회 및 포화된 수성 나트륨 클로라이드로 1회 세척하였다. 유기층을 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 진공에서 농축하였고, 에터로부터 결정화하여 크림색 고체(60.7 g, 97%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

제제 I-1A-2d: 벤질 6-브로모-1-3차-부틸-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-1A-2d]

제제 I-1A-2c(57.9 g, 122 mmol)를 1 L의 아세톤에 용해하였고, 이어서 빙욕에서 0℃까지 냉각하였다. 용액에 122 mL의 존스 리에이전트(Jones Reagent)(문헌[Fillion, E. Tetrahedron Letters 2004, 46, 1091-1094])를 첨가하였다. 빙욕을 제거하였고, 반응물을 실온까지 가온시켰고, 이때 45분 동안 교반하였다. 포화된, 수성 나트륨 바이카보네이트를 가스 방출이 추가로 관찰되지 않고, pH가 7에 도달할 때까지 첨가하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 헹구면서 셀라이트(등록상표)의 패드를 통해 여과하였다. 여과층을 분리하였고, 수층을 다시 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 합하였고, 물로 2회, 포화된 수성 나트륨 클로라이드로 1회 세척하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 진공에서 농축하였다. 잔사를 에틸 아세테이트/헵탄으로부터 결정화하여 표제 화합물(50.4 g, 87%)을 수득하였다:

제제 I-1A-2e: 벤질 1-3차-부틸-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-1A-2e]

제제 I-1A-2d(50.4 g, 106 mmol)를 600 mL의 테트라하이드로푸란에 용해하였고, 이에 포화된 수성 암모늄 클로라이드(600 mL) 및 아연 분말(20.8 g, 319 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 셀라이트(등록상표)를 통해 여과하였고, 상을 분리하였고, 유기층을 물 및 포화된 수성 나트륨 클로라이드로 세척하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 진공에서 농축하여 포말을 수득하였다. 포말을 에틸 아세테이트/헵탄에서 1회 및 에터에서 1회 마쇄하였고, 여과하여 백색 고체(40.4 g, 96%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

제제 I-1A-2f: 1-3차-부틸-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온(I-1A-2f)

[화학식 I-1A-2f]

제제 I-1A-2e(46.6 g, 118 mmol)를 730 mL의 에탄올에 용해하였고, 용액을 탄소 상 10% 팔라듐(9.4 g)에 첨가하였다. 이에 1-메틸-1,4-사이클로헥사다이엔(90 mL, 769 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 환류 하에 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온까지 냉각하였고, 셀라이트(등록상표)를 통해 여과하였다. 여과액을 진공에서 농축하여 회색 고체를 수득하였다. 고체를 150 mL의 에틸 아세테이트에 용해하였고, 이에 다이옥산 중 35 mL의 4 M 염산을 첨가하였다. 침전물을 형성하였고, 여과에 의해 수집하여 백색 고체(34 g, 97%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

제제 I-2A-42a: 3차-부틸 1-(2-에톡시-2-옥소에틸)-1,4-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-2A-42a]

에틸하이드라지노아세테이트 하이드로클로라이드(0.92 g, 5.95 mmol)를 에탄올(30 mL) 중 제제 I-1A-2a(1.25 g, 3.90 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 환류 하에 1시간 동안 교반하였다. 분취액은 ¹H NMR에 의해 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각하였고, 고진공하에 농축하여 갈색 오일을 수득하였다. 오일을 다이에틸 에터(50 mL)로 마쇄하였다. 침전물을 여과하였고, 여과액을 농축하였고, 고진공하에 건조하여 갈색 오일로서 표제 화합물(1.50 g, 100%)을 수득하였다.

제제 I-2A-42b: 다이에틸 2-(1'-(3차-부톡시카보닐)스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1(4H)-일)말론에이트

[화학식 I-2A-42b]

톨루엔(5 mL) 중 제제 I-2A-42a(1.45 g, 3.86 mmol)를 다이에틸 카보네이트(30 mL) 중 나트륨 하이드라이드(0.148 g, 미네랄 오일 중 60% 분산액)의 현탁액에 80℃에서 30분에 걸쳐서 적가하였다. 반응물을 환류 하에 1.5시간 동안 교반하였다. ¹H NMR은 출발 물질이 소비되었고, 목적 생성물을 형성되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각하였다. 메탄올(1 mL)을 첨가하였고, 용액을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 물(5 mL)을 첨가하였다. 용액을 pH 약 3까지 2 N 수성 염산(3 mL)으로 산성화하였고, 이어서 다이클로로메탄(3 x 15 mL)으로 추출하였다. 합한 유기물을 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 여과하였고, 농축하였고, 고진공 하에 건조하여 갈색 검(1.59 g, 92%)을 수득하였다. 조질 물질을 1:1 다이에틸 에터:헵탄(50 mL)으로 마쇄하였다. 침전물을 여과하였다. 여과액을 농축하였고, 고진공 하에 건조하여 표제 화합물(1.25 g, 72%)을 수율하였다.

제제 I-2A-42c: 3차-부틸 1-(1,3-다이하이드록시프로판-2-일)-1,4-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-2A-42c]

테트라하이드로푸란(40 mL)을 질소 주입기 및 온도계 장비를 갖춘 3목 125 mL 환저 플라스크에서 리튬 알루미늄 하이드라이드(900 mg)에 첨가하였다. 용액을 -2℃까지 냉각하였다. 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 제제 I-2A-42b(1 g)를 5분에 걸쳐서 적가하였다. 온도를 첨가하는 동안 -0.2℃보다 높게 하지 않았다. 반응물을 0℃에서 3시간 동안 교반하였고, 이어서 반응물을 물(1.0 mL), 15% 수성 나트륨 하이드록사이드(1.0 mL) 및 물(3 mL)의 순차적인 첨가를 통해 급랭시켰다. 내부 온도를 첨가하는 동안 3.2℃보다 높게 하지 않았다. 이어서 반응물을 실온까지 15분에 걸쳐서 가온시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트(등록상표)를 통해 여과하였고, 다이에틸 에터(3 x 20 mL)로 세척하였다. 합한 유기물을 염수(5 mL)로 세척하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 여과하였고, 농축하였고, 고진공 하에 건조하여 연황색 유리(548 mg, 76%)를 수득하였다. 이 물질을 0.1% 암모늄 하이드록사이드와 함께 다이클로로메탄 중 2 내지 8% 메탄올로 용리하는 25 g의 실리카 상에서 30분에 걸쳐서 크로마토그래피하여 표제 화합물(133 mg, 16%)을 수득하였다.

제제 I-2A-42d: 3차-부틸 1-(옥세탄-3-일)-1,4-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-2A-42d]

헥산 중 2.5 M n-부틸 리튬(0.33 ml, 165 ㎕)을 테트라하이드로푸란(8 mL) 중 제제 I-2A-42c(150 mg, 0.41 mmol)의 용액에 -6.2℃에서 첨가하였다. 온도를 첨가하는 동안 -3.7℃보다 크게 하지 않았다. 용액을 -8℃에서 30분 동안 교반하였다. 테트라하이드로푸란(2 mL) 중 p-톨루엔설포닐 클로라이드(79 mg)의 용액을 -5℃에서 반응 혼합물에 첨가하였다. 온도를 첨가하는 동안 -2℃보다 크게 하지 않았다. 반응물을 -5℃에서 1시간 동안 교반하였고, 이어서 반응 혼합물을 -6℃까지 냉각하였고, 헥산(0.33 mL, 165 ㎕) 중 2.5 M n-부틸 리튬을 2분에 걸쳐서 첨가하였다. 온도를 첨가하는 동안 -3.5℃보다 크게 하지 않았다. 냉욕을 제거하였고, 반응물을 60℃의 내부 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각하였고, 에틸 아세테이트(20 mL)를 첨가하였다. 반응 용액을 물(35 mL)로 세척하였고, 수층을 에틸 아세테이트(15 mL)로 추출하였다. 합한 유기물을 염수(5 mL)로 세척하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 여과하였고, 농축하였고, 고진공 하에 건조하여 황색 고체를 수득하였다. 고체를 헵탄 중 25 내지 75% 에틸 아세테이트로 용리하는 8 g의 실리카 상에서 크로마토그래피에 의해 36분에 걸쳐서 정제하여 표제 화합물(58 mg, 40%)을 수득하였다.

제제 I-2A-42e: 3차-부틸 6-브로모-7-메톡시-1-(옥세탄-3-일)-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-2A-42e]

N-브로모숙신이미드(30 mg, 0.17 mmol)를 메탄올(1.0 mL) 중 제제 I-2A-42d(56 mg, 0.17 mmol)에 실온에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였고, 이어서 N-브로모숙신이미드(4.5 mg)를 첨가하였고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소 증기 하에 농축하여 잔사를 수득하였다. 에틸 아세테이트(15 mL)를 첨가하였고, 반응 용액을 10% 시트르산(3 mL), 1 N 나트륨 하이드록사이드(3 mL) 및 염수(3 mL)로 세척하였다. 유기층을 농축하였고, 고진공 하에 건조하여 무색 고체로서 표제 화합물(74 mg, 100%)을 수득하였다.

제제 I-2A-42f: 3차-부틸 1-(옥세탄-3-일)-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-2A-42f]

테트라하이드로푸란 중 1 M 칼륨 3차-부톡사이드(0.320 mL)를 테트라하이드로푸란(1.0 mL) 중 제제 I-2A-42e(72 mg, 0.16 mmol)의 용액에 실온에서 첨가하였다. 첨가 시 무색 용액이 황색으로 전환하였다. 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 1 N 수성, 염화수소(0.475 mL, 3 당량)를 첨가하였고, 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 테트라하이드로푸란을 질소 증기 하에 농축하였다. 수상을 에틸 아세테이트(3 x 5 mL)로 추출하였다. 합한 유기물을 염수(3 mL)로 세척하였고, 이어서 유기층을 농축하였고, 고진공 하에 건조하여 연황색 고체(54 mg, 96%)로서 표제 화합물을 수득하였다.

제제 I-2A-42g: 1-(옥세탄-3-일)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온

[화학식 I-2A-42g]

트라이플루오로아세트산(0.2 mL)을 다이클로로메탄(2 mL) 중 제제 I-2A-42f(50 mg, 0.14 mmol)의 용액에 0℃에서 첨가하였다. 냉욕을 제거하였고, 반응물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 잔사를 위해 질소 증기 하에서 농축하였고, 고진공 하에 20분 동안 건조하였다. 잔사를 다이에틸 에터(5 mL)로 마쇄하였다. 용매를 경사 분리하였고, 생성된 침전물을 고진공 하에 건조하여 연황색 고체로서 표제 화합물(52 mg, 100%)을 수율하였다.

제제 I-2A-75a: 벤질 1-이소프로필-1,4-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-2A-75a]

제제 I-1A-2a(6.38 g, 18 mmol)를 90 mL의 에탄올에 용해하였다. 반응 용액에 아세트산(2.16 g, 36 mmol) 및 1-이소프로필하이드라진 하이드로클로라이드(2.79 g, 25 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 가열 환류하였고, 이어서 반응 용액을 실온까지 냉각하였고, 진공에서 농축하여 주황색 오일을 수득하였고, 이를 용리액으로서 헵탄 중 12 내지 100% 에틸 아세테이트를 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 황색 검(6.58 g, 69%)으로서 표제 화합물을 수득하였다:

제제 I-2A-75b: 벤질 3,6-다이브로모-1-이소프로필-7-메톡시-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-2A-75b]

제제 I-2A-75a(679 mg, 1.86 mmol)를 15 mL 메탄올에 용해하였고, N-브로모숙신이미드(728 mg, 4.09 mmol)로 처리하였고, 반응물을 상온에서 18시간 동안 교반하였다. 메탄올을 감압 하에 제거하였다. 생성된 황갈색 포말을 50 mL 에틸 아세테이트에 용해시켰고, 0.5 M 나트륨 하이드록사이드(2 x 50 mL) 및 20 mL 포화된 수성 나트륨 티오설페이트로 세척하였다. 유기층을 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 여과하였고, 농축하였다. 생성된 오일을 플래시 크로마토그리피하여(25 g 실리카, 10 내지 80% 에틸 아세테이트/헵탄 구배), 백색 포말로서 784 mg(76%)의 표제 화합물을 수득하였다:

제제 I-2A-75c: 벤질 3-브로모-1-이소프로필-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-2A-75c]

제제 I-2A-75b(784 mg, 1.4 mmol)를 15 mL 테트라하이드로푸란에 용해하였다. 칼륨 t-부톡사이드(2.82 mL, 2 당량, 1 M 테트라하이드로푸란)를 첨가하였고, 반응물을 상온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물에 25 mL 2 N 염산을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 상온에서 교반하였다. 혼합물을 25 mL 물로 희석하였고, 에틸 아세테이트(2 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하였고, 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 여과하였고, 농축하였다. 생성된 오일을 플래시 크로마토그래피하여(50 g 실리카, 8 내지 66% 에틸 아세테이트/헵탄 구배), 백색 포말로서 612 mg의 표제 화합물을 수득하였다:

제제 I-2A-75d: 3차-부틸 3-브로모-1-이소프로필-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-2A-75d]

제제 I-2A-75c(612 mg, 1.33 mmol)를 10 mL의 33% 하이드로브롬산/아세트산에 용해하였고, 혼합물을 60분 동안 상온에서 교반하였다. 용매를 증발시켰고, 적색-주황색 잔사를 50 mL 물에 용해시켰고, 포화된 수성 나트륨 카보네이트로 염기성으로 만들었고, 에틸 아세테이트(2 x 50 mL)로 추출하였다. 유기상을 20 mL까지 농축하였고, 20 mL 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트 및 다이-3차-부틸 다이카보네이트(348 mg)로 처리하였다. 이상 혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반하였다. 층을 분리하였고, 유기상을 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 여과하였고, 감압 하에 농축하였다. 생성된 오일을 플래시 크로마토그리피하여(10 내지 70% 에틸 아세테이트/헵탄, 10 g 실리카) 364 mg의 표제 화합물을 수율하였다.

제제 I-2A-75e: 3차-부틸 1-이소프로필-3-메틸-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-2A-75e]

제제 I-2A-75d(440 mg, 1.03 mmol), 팔라듐 테트라키스 트라이페닐포스핀(119 mg, 0.103 mmol), 칼륨 카보네이트(146 mg, 1.03 mmol) 및 물(94 mg, 5.16 mmol)을 다이메틸포름아마이드(2 mL)에서 합하였고, 질소로 2분 동안 탈기하였다. 반응 바이알을 밀봉하였고, 마이크로파 반응기에서 30분 동안 100℃에서 가열하였다. 바이알을 마이크로파 반응기로부터 제거하였고, 이어서 100℃까지 통상적인 히팅 블록에서 4일 동안 가열하였다. 반응물을 진공에서 농축하였고, 이어서 물(5 mL) 및 에틸 아세테이트(5 mL) 사이에 분배하였다. 상을 분리하였고, 유기층을 농축하였고, 이어서 헵탄 구배 중 20 내지 40% 에틸 아세테이트로 용리하는 40 g 컬럼 상에서 크로마토그래피하여 268 mg(72%)의 표제 화합물을 수득하였다.

제제 I-2A-75f: 1-이소프로필-3-메틸-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온

[화학식 I-2A-75f]

제제 I-2A-75e(375 mg, 1.04 mmol)를 3 mL 다이에틸 에터에 용해하였고, 다이옥산(1 mL) 중 4 M 염화수소로 처리하였다. 용액을 1시간 동안 교반하였고, 이어서 진공에서 농축하여 백색 포말로서 300 mg의 표제 화합물을 수득하였다:

제제 I-2A-76a: 3차-부틸 3-시아노-1-이소프로필-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-2A-76a]

질소로 플러싱된 슈렌 튜브에 제제 I-2A-75d(250 mg, 0.59 mmol), 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)-클로로포름 부가물(23.8 mg, 0.02 mmol), 아연 가루(9.6 mg, 0.15 mmol), 아연 시아나이드(75.7 mg, 0.65 mmol) 및 1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센(26.1 mg, 0.05 mmol)을 첨가하였다. 무수의 다이메틸아세트아마이드(3.5 mL)를 첨가하였고, 플라스크를 질소로 플러싱하였고, 이어서 테플론(등록상표)(Teflon: 등록상표) 스크류 탑으로 뚜껑을 덮었다. 반응물을 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 냉각하였고, 이어서 에틸 아세테이트로 세척하면서 셀라이트(등록상표)의 패드를 통해 여과하였다. 여과액을 물로 세척하였고, 수상을 다시 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기상을 포화된 수성 나트륨 클로라이드로 세척하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 진공에서 농축하였다. 잔사를 헵탄 구배 중 5 내지 30% 에틸 아세테이트를 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 고체(93%)로서 204 mg의 표제 화합물을 수득하였다:

제제 I-8a-1b: 1-이소프로필-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-3-카보니트릴

[화학식 I-2A-76b]

제제 I-2A-76a(70 mg, 0.19 mmol)를 다이클로로메탄(3 mL) 및 트라이플루오로아세트산(0.2 mL)에 용해하였고, 상온에서 90분 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 농축하였고, 잔사를 톨루엔으로 공-증류하였고, 이어서 에틸 아세테이트로 공-증류하여 황색 고체로서 149 mg(100%)의 표제 화합물을 수득하였다:

제제 I-4A-1a: 벤질 6-브로모-7-하이드록시-1-이소프로필-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-4A-1a]

제제 I-2A-75a(4.20 g, 11 mmol)를 130 mL의 테트라하이드로푸란에 용해하였다. 반응물에 N-브로모숙신이미드(2.49 g, 14 mmol) 및 30 mL 물을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트 및 포화된 수성 나트륨 클로라이드 사이에 분배하였다. 유기상을 분리하였고, 이어서 포화된 수성 나트륨 클로라이드로 추가로 세척하였다. 유기상을 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 진공에서 농축하여 회백색 포말(5.31 g, 100%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

제제 I-4A-1b: 벤질 6-브로모-1-이소프로필-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-4A-1b]

제제 I-4A-1a(5.30 g, 11 mmol)를 53 mL 아세톤에 용해하였고, 이어서 빙욕에서 0℃까지 냉각하였다. 용액에 83 mL의 존스 리에이전트(문헌[Fillion, E. Tetrahedron Letters 2004, 46, 1091-1094])를 첨가하였다. 빙욕을 제거하였고, 반응물을 45분 동안 교반하면서 실온까지 가온시켰다. 반응물을 빙욕에서 0℃까지 냉각하였고, 이어서 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트를 추가의 가스 방출이 관찰되지 않을 때까지 첨가하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 헹구면서 셀라이트(등록상표)의 패드를 통해 여과하였다. 여과액 층을 분리하였고, 수층을 다시 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 합하였고, 물로 2회, 포화된 수성 나트륨 클로라이드로 1회 세척하였고, 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 진공에서 농축하여 표제 화합물(5.27 g, 100%)을 수득하였다:

제제 I-4A-1c: 벤질 6-브로모-1-이소프로필-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-4A-1c]

제제 I-4A-1b(5.63 g, 12 mmol)를 55 mL 아세트산에 용해하였고, 이에 아연 분말(2.40 g, 37 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 35분 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 진공에서 농축하였고, 이어서 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트 및 에틸 아세테이트 사이에 분배하였다. 상을 분리하였고, 수상을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 합하였고, 물 및 포화된 수성 나트륨 클로라이드로 세척하였고, 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 진공에서 농축하여 오일을 수득하였다. 오일을 용리액으로서 헵탄 중 12 내지 100% 에틸 아세테이트를 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 오일(2.25 g, 48%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

제제 I-4A-1d: 벤질 1-이소프로필-6-메틸-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-4A-1d]

테트라하이드로푸란(8 mL) 중 제제 I-4A-1c(397 mg, 1.04 mmol)를 -70℃까지 냉각하였다. 이에 테트라하이드로푸란 중 1.0 M 용액으로서 리튬 비스(트라이메틸실릴)아마이드(1.56 mL, 1.56 mmol)를 10분의 기간에 걸쳐서 첨가하였다. 생성된 황색 용액을 30분 동안 -70℃에서 교반하였다. 1,3-다이메틸-3,4,5,6-테트라하이드로-2(1H)-피리미디논(1.6 mL)을 반응물에 첨가하였고, 교반을 -70℃에서 10분 동안 계속하였다. 반응물에 요오도메탄(746 mg, 5.2 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 18시간 동안 교반하면서 실온까지 가온시켰다. 반응물에 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트(2 mL)를 첨가하였고, 혼합물을 이어서 물(20 mL) 및 에틸 아세테이트(150 mL)에 분배하였다. 층을 단리하였고, 수층을 에틸 아세테이트(150 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 여과하였고, 이어서 농축하여 투명한 오일을 수득하였다. 오일을 용리액으로서 헵탄 중 10 내지 40% 에틸 아세테이트를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 백색 고체(351 mg, 85%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

제제 I-4A-1e: 1-이소프로필-6-메틸-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온

[화학식 I-4A-1e]

표제 화합물을 제제 I-1A-2f와 유사한 방식으로 제제 I-4A-1d로부터 제조하였다.

제제 I-6A-1a: 벤질 1-이소프로필-6,6-다이메틸-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-6A-1a]

1 mL 테트라하이드로푸란 중 제제 I-4A-1d(84 mg, 0.21 mmol)의 용액을 -70℃까지 냉각하였고, 이어서 테트라하이드로푸란 중 1.0 M 용액으로서 리튬 비스(트라이메틸실릴)아마이드(0.318 mL, 0.318 mmol)로 10분에 걸쳐 처리하였다. 이어서 1,3-다이메틸-3,4,5,6-테트라하이드로-2(1H)-피리미디논(0.2 mL)을 반응물에 첨가하였다. 10분 동안 -70℃에서 계속 교반하였고, 이어서 요오도메탄(152 mg, 1.06 mmol)을 반응물에 첨가하였다. 혼합물을 실온까지 가온시키고, 4시간 동안 유지하였다. 반응물에 포화된 수성 암모늄 클로라이드(1 mL)를 첨가하였고, 혼합물을 이어서 물(2 mL) 및 에틸 아세테이트(10 mL) 사이에 분배하였다. 층을 분리하였고, 수층을 에틸 아세테이트(5 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 여과하였고, 이어서 농축하여 투명한 황색 오일을 수득하였다. 오일을 용리액으로서 헵탄 중 10 내지 40% 에틸 아세테이트를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 투명한 오일(58 mg, 67%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

제제 I-6A-1b: 1-이소프로필-6,6-다이메틸-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온

[화학식 I-6A-1b]

제제 I-6A-1b를 제조 I-1A-2f와 유사한 방식으로 제제 I-6A-1a로부터 제조하였다.

제제 I-13A-1a: 3차-부틸 1-3차-부틸-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-13A-1a]

제제 I-1A-2f(1040 mg, 3.492 mmol)의 하이드로클로라이드 염, 다이-3차-부틸 다이카보네이트(800 mg, 3.67 mmol) 및 트라이에틸아민(730 mg, 7.2 mmol)을 다이클로로메탄(30 mL)에서 합하였다. 반응 용액을 상온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물에 다이클로로메탄(20 mL)을 첨가하였다. 반응 용액을 1 N 수성 염산(5 mL), 물(5 mL) 및 포화된 수성 나트륨 클로라이드(5 mL)로 세척하였다. 유기상을 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 농축하여 I-13A-1a(1262 mg, 100%)를 수득하였다:

제제 I-13A-1b: 3차-부틸 3-브로모-1-3차-부틸-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-1'-카복실레이트

[화학식 I-13A-1b]

제제 I-13A-1a(1090 mg, 3.015 mmol) 및 나트륨 아세테이트(1050 mg, 12.80 mmol)를 에탄올(40 mL) 및 물(10 mL)에서 합하였다. 이 용액에 브롬(1870 mg, 11.7 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물에 에탄올(40 mL)을 첨가하였다. 반응물을 16시간 이상 동안 교반하였다. 반응 용액을 물(20 mL)에 부었고, 에틸 아세테이트(각각 75 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 추출물을 수성 포화된 나트륨 티오설페이트(각각 25 mL) 및 포화된 수성 나트륨 클로라이드(25 mL)로 2회 세척하였다. 유기상을 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 20 mL의 최종 용량까지 농축하여 침전물을 수득하였다. 혼합물을 여과하였고, 고체를 수집하여 고체(679 mg, 51%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

제제 I-13A-1c: 3-브로모-1-3차-부틸-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온

[화학식 I-13A-1c]

제제 I-13A-1b(670 mg, 1.52 mmol) 및 다이옥산(8 mL) 중 4 M 염화수소를 합하였고, 2.5시간 동안 교반하였다. 반응물에 다이에틸 에터(20 mL)를 첨가하였다. 형성된 침전물을 여과하였고, 고체를 수집하여 I-3A-1c(573 mg, 97%)를 수득하였다:

실시예 1

1-이소프로필-1'-(4- 클로로 -3- 메틸벤조일 )-4,6- 다이하이드로스피로 [ 인다졸 -5,4'-피페리딘]-7-(1H)-온(1A-1)의 제조:

[화학식 1A-1]

4-클로로-3-메틸벤조산(253 mg, 1.48 mmol)을 티오닐 클로라이드(3000 mg, 30 mmol)에 현탁하였고, 30분 동안 가열 환류하였다. 용액을 다이클로로메탄의 존재 하에 진공에서 농축하여 잔사를 수득하였다. 잔사를 1 mL 다이클로로메탄에 용해하였고, 8 mL 다이클로로메탄 중 다이이소프로필 에틸아민(890 mg, 6.9 mmol) 및 제제 I-1A-1e(104 mg, 0.83 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 10분 동안 교반하였다. 반응물을 다이클로로메탄 및 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트 사이에 분배하였다. 유기상을 분리하였고, 이어서 포화된 수성 나트륨 클로라이드로 세척하였다. 유기층을 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 진공에서 농축하여 오일을 수득하였다. 오일을 용리액으로서 헵탄 중 15 내지 100% 에틸 아세테이트를 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 백색 포말(153 mg, 46%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

하기 표 1에 열거된 화합물을 상업적으로 이용할 수 있거나, 당해 업자에게 잘 공지된 제조 방법을 사용하여 제조하거나, 또는 다른 중간체에 대해 상기 기재된 경로와 유사한 방식으로 제조한 적합한 출발 물질을 사용하는 실시예 1의 화합물 1A-1의 합성에 대해 상기 기재된 바와 유사한 제조 방법을 사용하여 제조하였다.

[표 1]

실시예 2

1-이소프로필-1'-(1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘 -5- 카보닐 )-4,6-다이하이드로스피로[ 인다졸 -5,4'-피페리딘]-7(1H)-온(2A-1)의 제조:

[화학식 2A-1]

제제 I-1A-1e(80 mg, 0.28 mmol)의 하이드로클로라이드 염, 1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카복실산(46 mg, 0.28 mmol), O-(아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(107 mg, 0.28 mmol) 및 트라이에틸아민(115 mg, 1.13 mmol)을 3 mL의 다이메틸포름아마이드에서 합하였고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 10 mL 에틸 아세테이트 및 10 mL 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트 사이에 분배하였다. 유기상을 분리하였고, 이어서 농축하여 오일을 수득하였다. 오일을 용리액으로서 헵탄 중 50 내지 100% 에틸 아세테이트를 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 고체(48 mg, 44%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

하기 표 2에 열거된 화합물을 상업적으로 이용할 수 있거나, 당해 분야의 숙련자에게 널리 공지된 제조 방법을 사용하여 제조되거나, 또는 다른 중간체에 대해 상기 기재된 경로와 유사한 수단으로 제조된 적합한 출발 물질을 사용하는 화합물 2A-1의 합성에 대해 상기 기재된 제조 방법과 유사한 과정을 사용하여 제조하였다. 하기 열거된 화합물을 자유 염기로서 처음에 단리하였고, 시험을 위해 그들의 상응하는 하이드로클로라이드 염으로 전환할 수 있다.

[표 2]

실시예 3

1-이소프로필-1'-(2- 메틸 -1H- 벤조[d]이미다졸 -5- 카보닐 )-4,6-다이하이드로스피로[ 인다졸 -5,4'-피페리딘]-7(1H)-온(3A-1)의 제조:

[화학식 3A-1]

2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-카복실산(15 g)을 테트라하이드로푸란(500 mL)에 용해시켰고, 다이메틸포름아미드(329 ㎕) 및 옥살릴 클로라이드(22.1 mL)를 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 16시간 동안 교반하였다. 용액을 진공에서 농축하였고, 잔사를 다이클로로메탄에 용해시켰고, 감압 하에 농축하였다(2회). 생성된 산 클로라이드에 테트라하이드로푸란(500 mL), 제제 I-1A-1e(25.9 g) 및 트라이에틸아민(71.2 mL)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물에 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트(250 mL)를 첨가하였고, 용액을 5분 동안 교반하였다. 층을 분리하였고, 수층을 1:1 에틸 아세테이트/테트라하이드로푸란으로 추출하였다. 유기층을 합하였고, 에틸 아세테이트(1 L)로 희석하였고, 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트(200 mL) 및 포화된 수성 나트륨 클로라이드로 세척하였다. 유기층을 나트륨 설페이트 상에서 건조하였고, 여과하였고, 연황색 고체를 위해 진공에서 농축하였다. 고체를 뜨거운 메탄올(300 mL)에 용해하였고, 이어서 가열 환류하였다. 용액에 350 mL 에틸 아세테이트를 첨가하였고, 300 mL 용매를 증류에 의해 제거하였다. 추가로 에틸 아세테이트를 내부 온도가 70℃에 도달할 때까지 적가하였다. 용액을 실온까지 3시간에 걸쳐 냉각하였다. 고체를 여과에 의해 수집하였고, 진공 오븐(40℃)에서 16시간 동안 건조하여 백색 고체(20.5 g, 59%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

본 실시예에서, 본 실시예에서 사용했던 출발 물질 2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-카복실산이 또한 그것의 호변 이성질체의 형태 2-메틸-1H-벤즈이미다졸-6-카복실산(또한 2-메틸-3H-벤즈이미다졸-5-카복실산으로 공지됨)으로서 존재하고, 각각은 동일안 CAS 번호 709-19-3에 의해 지정되었음이 이해된다. 본 실시예가 2-메틸 벤즈이미다졸릴 기에 대하여 화합물의 2개의 호변 이성질체 형태 중 하나로서 상기 도시되었고, 표제 화합물이 하기 도시된 호변 이성질체 형태 1-이소프로필-1'-(2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온과 동의어라는 것이 추가로 이해되어진다:

실시예 4

1'-(1H- 인다졸 -5- 카보닐 )-1-이소프로필-6- 메틸 -4,6-다이하이드로스피로[ 인다졸 -5,4'-피페리딘]-7(1H)-온(4A-1)의 제조:

[화학식 4A-1]

제제 I-4A-1e(177 mg, 0.677 mmol), 1H-인다졸-5-카복실산(110 mg, 0.677 mmol), O-(아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N, N' , N' -테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(257 mg, 0.677 mmol) 및 트라이에틸아민(138 mg, 1.35 mmol)을 3 mL의 다이메틸포름아마이드에서 합하였고, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물에 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트(2 mL)를 첨가하였다. 반응물을 에틸 아세테이트(80 mL) 및 물(20 mL) 사이에 분배하였다. 상을 분리하였고, 수층을 에틸 아세테이트(50 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 농축하여 오일을 수득하였다. 오일을 용리액으로서 다이클로로메탄 중 0 내지 5% 메탄올을 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 고체(196 mg, 72%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

실시예 5

(+)-1'-(1H- 인다졸 -5- 카보닐 )-1-이소프로필-6- 메틸 -4,6-다이하이드로스피로[인 다졸 -5,4'-피페리딘]-7(1H)-온(5A-1) 및 (-)-1'-(1H- 인다졸 -5- 카보닐 )-1-이소프로필-6- 메틸 -4,6- 다이하이드로스피로 [ 인다졸 -5,4'-피페리딘]-7(1H)-온(5A-2)의 제조:

[화학식 5A-1 및 5A-2]

라세미 화합물 실시예 4(화합물 4A-1)를 분리하여 상응하는 2개의 거울상 이성질체를 키랄 HPLC를 사용하여 수득하였다: [키랄파클(Chiralpakl) AD-H(10 x 250); 이동상: 70:30(CO₂/에탄올), 유속=10 mL/분]. 화합물 5A-1: 체류 시간 = 4.17 분; 광학 회전 결과: c= 에탄올 중 0.0053 g/mL; 경로 길이 = 1 dcm; 관찰된 회전 = +0.202(20℃에서 나트륨 램프(589 mm)의 D 라인); 특이적 회전 = +38.1. 화합물 5A-2: 체류 시간 = 5.47 분; 광학 회전 결과: c= 에탄올 중 0.0053 g/mL; 경로 길이 = 1 dcm; 관찰된 회전 = -0.184(20℃에서 나트륨 램프(589 nm)의 D 라인; 특이적 회전 = -34.1.

실시예 6

1'-(1H- 인다졸 -5- 카보닐 )-1-이소프로필-6,6- 다이메틸 -4,6-다이하이드로스피로[ 인다졸 -5,4'-피페리딘]-7(1H)-온(6A-1)의 제조:

[화학식 6A-1]

다이메틸포름아마이드(2 mL) 중 1H-인다졸-5-카복실산(27 mg, 0.167 mmol)의 용액을 N-메틸 모폴린(51 mg, 0.167 mmol)으로 처리하였고, 이어서 2-클로로-4,6-다이메톡시-1,3,5-트라이아진(29 mg, 167 mmol)으로 처리하였다. 용액을 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물에 다이메틸포름아마이드(2 mL) 중 용액으로서 제제 I-6A-1b(46 mg, 0.17 mmol) 및 N-메틸 모폴린(34 mg, 0.334 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물에 수성의 포화된 암모늄 클로라이드(1 mL)를 첨가하였다. 반응물을 에틸 아세테이트(30 mL) 및 물(5 mL) 사이에 분배하였다. 상을 분리하였고, 수층을 에틸 아세테이트(30 mL)로 추출하였다. 유기상을 합하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 농축하여 오일을 수득하였다. 오일을 용리액으로서 다이클로로메탄 중 0 내지 5% 메탄올을 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 고체(39 mg, 56%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

실시예 7

1'-(1H- 벤조[d]이미다졸 -5- 카보닐 )-1-이소프로필-3- 메틸 -4,6-다이하이드로스피로[ 인다졸 -5,4'-피페리딘]-7(1H)-온(7A-1)의 제조:

[화학식 7A-1]

제제 I-2A-75f(150 mg, 0.50 mmol), 1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실산(82 mg, 0.50 mmol), O-(아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(198 mg, 0.50 mmol) 및 트라이에틸아민(103 mg, 1.01 mmol)을 3 mL의 다이메틸포름아마이드에 합하였고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 10 mL의 에틸 아세테이트 및 10 mL의 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트 사이에 분배하였다. 유기상을 분리하였고, 이어서 농축하여 오일을 수득하였다. 오일을 용리액으로서 다이클로로메탄 중 5 내지 10% 에탄올을 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 고체(82 mg, 40%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

실시예 8

1'-(1H- 벤조[d]이미다졸 -5- 카보닐 )-1-이소프로필-7-옥소-1,4,6,7-테트라하이드로스피로[ 인다졸 -5,4'-피페리딘]-3- 카보니트릴(8A-1)의 제조:

[화학식 8A-1]

제제 I-2A-76b(50 mg, 0.18 mmol), 1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실산(30 mg, 0.18 mmol), O-(아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(77 mg, 0.20 mmol) 및 트라이에틸아민(56 mg, 0.55 mmol)을 2.3 mL의 다이클로로메탄에서 합하였고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물에 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트(3 mL)를 첨가하였다. 상을 분리하였고, 수상을 추가적인 다이클로로메탄의 분획으로 추출하였다. 유기상을 합하였고, 농축하여 잔사를 수득하였다. 잔사를 메탄올에 용해하였고, 칼륨 카보네이트(49 mg, 0.36 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 상온에서 5분 동안 교반하였다. 반응물을 추가의 포화된 수성 암모늄 클로라이드(2 mL)로 급랭시켰고, 메탄올을 진공에서 농축하여 잔사를 수득하였다. 잔사를 물 및 다이클로로메탄 사이에 분배하였고, 이어서 상을 분리하였다. 유기층을 포화된 수성 나트륨 클로라이드로 세척하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 진공에서 농축하여 잔사를 수득하였고, 이를 용리액으로서 에틸 아세테이트 중 0 내지 10% 메탄올을 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 고체(17 mg, 22%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

실시예 9

1'-(1H- 인다졸 -5- 카보닐 )-1-( 옥세탄 -3-일)-4,6- 다이하이드로스피로 [ 인다졸 -5,4'-피페리딘]-7(1H)-온(9A-1)의 제조:

[화학식 9A-1]

제제 I-2A-42g(12.4 mg, 0.042 mmol), 1H-인다졸-5-카복실산(7 mg, 0.043 mmol), O-(아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(16 mg, 0.042 mmol) 및 트라이에틸아민(14 mg, 0.14 mmol)을 3 mL의 다이메틸포름아마이드에서 합하였고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트로 희석하였고, 시트르산(물 중 0.5 M), 포화된 수성 나트륨 클로라이드 및 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트로 각각 1회 세척하였다. 유기상을 분리하였고, 이어서 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 여과하였고, 농축하여 잔사를 수득하였다. 잔사를 용리액으로서 에틸 아세테이트 중 0 내지 20% 메탄올을 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 오일(7 mg, 40%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

실시예 10

1'-(1H- 인다졸 -5- 카보닐 )-1-이소프로필-4,6- 다이하이드로스피로 [ 인다졸 -5,4'-피페리딘]-7(1H)-온(10A-1)의 제조:

[화학식 10A-1]

제제 I-1A-1e(30.3 g, 94.6 mmol) 및 1H-인다졸-5-카복실산(16.96 g, 104.6 mmol)을 다이메틸 아세트아마이드(430 mL)에 현탁하였고, 1-에틸-3-[3-(다이메틸아미노)프로필]카보다이이미드 하이드로클로라이드(22.3 g, 115 mmol)를 첨가하였고, 이어서 추가로 트라이에틸아민(65 mL, 475 mmol)을 적가하였다. 1-하이드록시벤조트라이아졸 하이드레이트(16.2 g, 106 mmol)를 이어서 첨가하였고, 반응 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화된 수성 암모늄 클로라이드(500 mL)의 절반에 부었고, 에틸 아세테이트(1 x 1 L, 2 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 수성 나트륨 바이카보네이트(2 x 500 mL), 물(3 x 500 mL) 및 수성 포화된 나트륨 클로라이드(1 x 500 mL)로 세척하였다. 유기층을 나트륨 설페이트상에서 건조하였고, 여과하였고, 감압 하에 농축하여 오일을 수득하였다. 오일을 플래시 컬럼 크로마토그래피(다이클로로메탄 중 1 내지 6% 메탄올)에 의해 정제하여 목적 생성물(27.1 g)을 수득하였다. 에틸 아세테이트/헵탄을 사용하여 소량을 결정화하였다. 이를 다음의 결정화를 위한 시드(seed)로 사용하였다. 생성물을 에틸 아세테이트(100 mL)에 용해하였고, 용액이 뿌옇게 될 때까지 가열 환류하였다. 소량의 시드 결정을 첨가하였다. 혼합물을 실온까지 냉각하였고, 침전물을 형성하였고, 80시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하였고, 차가운 에틸 아세테이트(2 x 30 mL)로 세척하였다. 물질을 공기 건조하였고, 이어서 추가로 고진공 하에 건조하여 회백색 고체(23 g, 62%)로서 목적 표제 생성물을 수득하였다.

실시예 11

1'-(4-(1H- 이미다졸 -2-일) 벤조일 )-1-이소프로필-4,6-다이하이드로스피로[ 인 다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온(11A-1)의 제조:

[화학식 11A-1]

4-(1H-이미다졸-2-일)벤조산(1.4 mg, 75 umol), 무수의 아세토니트릴(400 ㎕), 제조 I-1A-1f(1.9 mg, 75 ㎕), 트라이에틸아민(21 ㎕, 150 μmol) 및 O-(아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(2.9 mg, 75 μmol)를 합하였고, 30℃까지 14시간 동안 가열하였다. 반응 용액을 진공에서 농축하였고, 분취용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 분취용 HPLC 방법: 컬럼 = 루나(Luna) 5u 100 x 21.2 mm, 용매상 A = 물 중 0.1% 트라이플루오로아세트산, 상 B = 아세토니트릴, 유속 = 23 mL/분 및 검출기 = UV.

구배:

분석적인 HPLC 방법: 컬럼 = 웰치(welch) 물질 XB-C18 2.1*50 mm, 용매상 A = H₂O(0.5 mL NH₃?H₂O를 갖는 1L H₂O), 용매상 B = 아세토니트릴, 유속: 0.8 mL/분. 체류 시간 = 2.419분.

구배:

질량 파라미터: 질량 범위 = 170-1000 프레그멘터 = 50 기체 흐름 = 10 L/분

무수 기체 온도 = 350℃, 모세혈관 전압(v) = 2500 M+H= 418

하기 표 3에 열거된 화합물은 상업적으로 이용할 수 있거나, 당해 분야의 숙련자에게 널리 공지된 제조 방법을 사용하여 제조하였거나, 또는 다른 중간체에 대해 상기 기재된 경로에 유사한 방식으로 제조한 적합한 출발 물질을 사용하는 실시예 11의 화합물 11A-1의 합성에 대해 상기 기재된 제조 방법과 유사한 과정을 사용하여 제조하였다. 하기 열거된 화합물은 자유 염기로서 처음에 단리되었고, 시험하기 위해 그들의 상응하는 하이드로클로라이드 염으로 전환될 수 있다. 화합물을 실시예 11의 화합물 11A-1을 위해 참고된 동일한 분석적 HPLC 방법(방법 A)에 의해 특징지었거나, 또는 물 중 0.05% 트라이플루오로아세트산으로 용매 상 A를 치환하는 방법(방법 B)으로 특징지었다.

[표 3]

실시예 12

1-3차-부틸-1'-(1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카보닐 )-4,6-다이하이드로스피로[ 인다졸 -5,4'-피페리딘]-7(1H)-온의 제조:

[화학식 12A-1]

제제 I-1a-2f(88 mg, 0.3 mmol), 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카복실산(48 mg, 0.3 mmol), O-(아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(116 mg, 0.3 mmol) 및 트라이에틸아민(0.83 mL, 0.59 mmol)을 3 mL의 다이메틸포름아마이드에서 합하였고, 실온에서 30시간 동안 교반하였다. 반응물을 10 mL의 에틸 아세테이트 및 10 mL의 포화된 수성 암모늄 클로라이드 사이에 분배하였다. 유기상을 분리하였고, 이어서 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트 및 포화된 수성 나트륨 클로라이드로 세척하였고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 농축하여 크림색 고체를 수득하였다. 고체를 용리액으로서 에틸 아세테이트 중 0 내지 20% 메탄올을 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 백색 고체(91 mg, 76%)로서 표제 화합물을 수득하였다:

실시예 13

3- 브로모 -1'-(7- 브로모 -2-옥소-2,3- 다이하이드로 -1H- 벤조[d]이미다졸 -5- 카보닐 )-1-3차-부틸-4,6- 다이하이드로스피로 [ 인다졸 -5,4'-피페리딘]-7(1H)-온의 제조:

[화학식 13A-1]

제제 I-13A-1c(190 mg, 0.504 mmol), 7-브로모-2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카복실산(130 mg, 0.506 mmol), O-(아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(205 mg, 0.52 mmol) 및 트라이에틸아민(100 mg, 1.0 mmol)을 다이클로로메탄(10 mL)에서 합하였고, 상온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 에틸 아세테이트(30 mL)를 첨가하였다. 반응 용액을 10% 중량/중량 수성 시트르산(5 mL), 포화된 수성 나트륨 바이카보네이트(5 mL) 및 포화된 수성 나트륨 클로라이드(5 mL)로 세척하였다. 유기상을 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였고, 농축하여 잔사를 수득하였고, 이를 다이클로로메탄 구배 중 2 내지 8% 메탄올을 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 13A-1(52 mg, 18 %)을 수득하였다:

약학적 데이타

생물학적 프로토콜

본 발명의 화합물의 유용성은, 동물, 바람직하게는 포유 동물(예컨대, 인간)중 질병(예를 들어 본원에 상세히 기재됨)의 치료에서 당해 분야의 숙련자에게 공지된 통상적인 어세이, 예컨대 하기 기재된 시험관내 및 생체내 어세이에서 이들의 활성에 의해 증명될 수 있다. 그러한 어세이는 또한 본 발명의 화합물의 활성이 다른 공지된 화합물의 활성과 비교될 수 있는 수단을 제공하였다.

ACC1 및 ACC2 의 활성의 직접적인 억제

본 발명의 화합물의 ACC 억제 활성은 표준 과정에 기초한 방법에 의해 증명된다. 예를 들어 ACC 활성의 직접 억제를, 화학식 I의 화합물의 경우, 재조합 인간 ACC1(rhACC1) 및 재조합 인간 ACC2(rhACC2)의 제조를 사용하여 증명하였다. 어세이에서 사용될 수 있는 재조합 인간 ACC1 및 ACC2의 대표제인 서열을 도 1(서열 번호 1) 및 도 2(서열 번호 2)에서 각각 제공하였다.

[1] rhACC1의 제조. 전장 인간 ACC1 cDNA를 함유하는 재조합 배큘로바이러스로 감염된 2 L의 SF9 세포를, 빙랭 용해 완충액(25 mM 트리스, pH 7.5; 150 mL NaCl; 10% 글리세롤; 5 mM 이미다졸(이엠디 바이오사이언스(EMD Bioscience); 미국 뉴저지주 깁스타운 소재); 2mM TCEP(바이오벡트라(BioVectra); 캐나다 샤롯데타운 소재); 벤조나아제(Bensonase) 뉴클레아제(10000 U/100 g 세포 페이스트; 노바젠(Novagen); 미국 위스콘신주 매디슨 소재); EDTA-자유 프로테아제 억제제 칵테일(1 tab/50 mL; 로슈 다이아그노스틱스(Roche Diagnostics); 독일 만하임 소재)에 현탁하였다. 세포를 3 주기의 동결-융해에 의해 용해하였고, 40,000 x g에서 40분 동안(4℃) 원심분리하였다. 상청액을 직접적으로 히스트랩(HisTrap) FF 조질 컬럼(지이 헬스케어(GE Helthcare); 미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재) 위에 적재하였고, 0.5 M 초과 20 컬럼 용량(CV)까지의 이미다졸 구배로 용리하였다. ACC1-함유하는 분획을 모았고, 25 mM 트리스, pH 7.5, 2 mM TCEP, 10% 글리세롤로 1:5 희석하였고, 직접 캡토큐(CaptoQ)(지이 헬스케어) 컬럼 위에 적재하였고, 1 M 초과 20 컬럼 용량까지의 NaCl 구배로 용리하였다. 포스페이트 기를 람다 포스파타아제(100 U/10 μＭ 표적 단백질; 뉴 잉글랜드 바이오랩스(New England Biolabs; 미국 매사추세츠주 버벌리 소재)로 14시간 동안 4℃에서 항온처리함으로써 정제된 ACC1로부터 제거하였고; 포스포타아제를 억제하기 위해 오카다산을 첨가(1 μＭ 최종 농도; 로슈 다이아그노스틱스)하였다. 정제된 ACC1을 25 mM 트리스, pH 7.5, 2 mM TCEP, 10% 글리세롤, 0.5 M NaCl 안으로 4℃에서 6시간 까지 투석함으로써 교환하였다. 분취액을 제조하고, -80℃에서 얼렸다.

[2] rhACC1 억제의 측정. hACC1을 50 μＭ ATP 반응을 위한 제조업자의 추천 조건을 사용하여 트랜스크리너(Transcreener) ADP 검출 FP 어세이 키트(벨브룩 랩스(Bellbrook Labs), 미국 위스콘신주 매디슨 소재)를 사용하여 코스타 3676(코스타, 미국 매사추세츠주 캠브리지 소재) 384-웰 플레이트에서 어세이하였다. 어세이를 위한 최종 조건은 50 mM HEPES, pH 7.2, 10 mM MgCl₂, 7.5 mM 트라이칼륨 시트레이트, 2 mM DTT, 0.1 mg/mL BSA, 30 μＭ 아세틸-CoA, 50 μＭ ATP 및 10 mM KHCO₃였다. 전형적으로, 10 ㎕ 반응을 120분 동안 25℃에서 실행하였고, 10 ㎕의 트랜스크리너 중단 및 검출 완충액을 첨가하였고, 조합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 항온처리하였다. 데이타를 620 여기 Cy5 FP 일반적인 이중 거울, 620 여기 Cy5 FP 필터, 688 방출(S) 및 688(P) 방출 필터를 사용하여 엔비젼 플루오르센스(Envision Fluroscence) 판독기(펄킨엘머(Perkinelmer)) 상에서 수득하였다.

[3] rhACC2의 제조. 인간 ACC2 억제제를 정제된 재조합 인간 ACC2(hrACC2)를 사용하여 측정하였다. 명확하게, ACC2의 전장 사이토맥스(Cytomax) 클론을 캠브리지 바이오사이언스 리미티드로부터 구입하였고, 시퀀싱하였고, PCDNA5 FRT TO-TOPO(인비트로젠, 미국 캘리포니아주 칼스배드 소재)에 서브클로닝하였다. ACC2를 테트라사이클린 유도제에 의해 CHO 세포에서 발현시켰고, 글루타민, 바이오틴, 하이그로마이신 및 블라스티시딘을 1 ㎍/㎕ 테트라사이클린(인비트로젠)과 함께 갖는 5 L의 DMEM/F12에서 수확하였다. ACC2를 함유하는 적합한 배지를 이어서 소프트링크 소프트 릴리스 아비딘 컬럼(Softlink Soft Release Avidin column)(프로메가(Promega), 미국 위스콘신주 소재)에 적용하였고, 5 mM 바이오틴으로 용리하였다. 4 mgs의 ACC2를 95%의 추정 순도(A280에 의해 결정됨)를 갖는 0.05 mg/mL(A280에 의해 결정됨)의 농도에서 용리하였다. 정제된 ACC2를 50 mM 트리스, 200mM NaCl, 4 mM DTT, 2 mM EDTA 및 5% 글리세롤에서 투석하였다. 모아진 단백질을 냉동하였고, 해동으로 인한 활성의 손실 없이, -80℃에서 저장하였다. ACC2의 활성을 측정하고, ACC2 억제를 평가하기 위해, 시험 화합물을 DMSO에 용해하였고, 1%의 최종 DMSO 농도를 갖는 5x 저장액인 rhACC2 효소에 첨가하였다.

[4] 인간 ACC2 억제의 측정. hACC2를 50 μＭ ATP 반응을 위한 제조업자의 추천 조건을 사용하여 트랜스트리너 ADP 검출 FP 어세이 키트(벨브룩 랩스, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)를 사용하는 코스타 3676(코스타, 미국 매사추세츠주 캠브릿지 소재) 384-웰 플레이트에서 어세이하였다. 어세이를 위한 최종 조건은 50 mM HEPES, pH 7.2, 5 mM MgCl₂, 5 mM 트라이칼륨 시트레이트, 2 mM DTT, 0.1 mg/mL BSA, 30 μＭ 아세틸-CoA, 50 μＭ ATP 및 8 mM KHCO₃이었다. 전형적으로, 10 ㎕ 반응을 50분 동안 25℃에서 실행하였고, 10 ㎕의 트랜스크리너 중단 및 검출 완충액을 첨가하였고, 조합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 항온처리하였다. 데이타를 620 여기 Cy5 FP 일반적인 이중 거울, 620 여기 Cy5 FP 필터, 688 방출(S) 및 688(P) 방출 필터를 사용하는 엔비젼 플루오르센스 판독기(펄킨엘머) 상에서 수득하였다.

상기 기재된 재조합 hACC1 및 재조합 hACC2 트랜스크리너 어세이를 사용하는 결과를 상기 실시예 중 예시된 화학식 I의 화합물에 대해 하기 표에 요약하였다.

실험 동물에서 ACC 억제의 급성 생체내 측정

본 발명의 화합물의 ACC 억제 활성을 처리된 동물로부터 간 및 근육 조직에서 말로닐-CoA의 수준을 감소시키는 그들의 능력을 평가함으로써 생체내에서 확인할 수 있다.

실험 동물에서 말로닐-CoA 생성 억제를 측정하였다. 이 방법에서, 임의로(225 내지 275 g) 표준 먹이와 물을 유지하는, 수컷 스프라그-다울레이(Sprague-Dawley) 래트를 연구하기 전에 임의로 선택하였다. 동물을 실험을 시작하기 전에 18시간 동안 먹이를 주거나 또는 단식을 시켰다. 빛 주기에 2시간은 동물에게 5 mL/kg 용량으로 경구 투여하였거나(0.5% 메틸 셀룰로즈; 비히클) 또는 적합한 화합물로 경구 투여하였다(비히클에 제조됨). 먹이 비히클 조절은 말로닐-CoA 수준의 기준 조직을 측정하기 위해 포함되었지만, 단식한 동물은 말로닐-CoA 수준에서 효과적인 단식을 측정하기 위해 포함되었다. 화합물 투여 1시간 후에 동물을 CO₂로 질식시켰고, 조직을 제거하였다. 구체적으로, 혈액을 심장천자에 의해 수집하였고, EDTA(비디 바이오사이언시스)를 함유하는 비디 마이크로테이너 튜브에 위치시켰고, 합하였고, 얼음에 위치시켰다. 혈장을 약물 노출을 결정하기 위해 사용하였다. 간 및 사두근을 제거하였고, 즉시 급속냉동 고정하였고, 박으로 싸서 액체 질소에 보관하였다.

조직을 샘플링에서 균일성을 보장하기 위해 액체 질소 하에 분쇄하였다. 말로닐-CoA를 패스트프렙(FastPrep) FP120(서모 사이언티픽(Thermo Scientific), 속도=5.5; 45초 동안) 중 라이싱 매트릭스(Lysing Matrix) A(엠피 바이오메티칼스(MP biomedicals), PN 6910)에 5 용량의 10% 트라이카복실산으로 조직(150 내지 200 mg)으로부터 추출하였다. 말로닐-CoA를 함유하는 상청액을 15000 x g에서 30분 동안 원심 분리(에펜도르프 센트리퓨즈(Eppendorf Centrifuge) 5402) 후에 세포 파편으로부터 제거하였다. 샘플을 분석이 완료될 때까지 -80℃에서 안정하게 냉동하였다.

간 및 근육 조직에서 말로닐 CoA 수준의 분석은 하기 방법론을 사용하여 평가될 수 있다.

방법은 하기의 재료를 이용한다: 이소텍(Isotec)(미국 오하이오주 마이애미스버그 소재)으로부터 구입한 말로닐-CoA 테트라리튬 염 및 말로닐-¹³C₃-CoA 트라이리튬 염, 나트륨 퍼클로레이트(시그마, 카탈로그 번호 410241), 트라이클로로아세트산(아크로스(ACROS), 카탈로그 번호 42145), 인산(제이.티. 베이커(J.T. Baker), 카탈로그 번호 0260-01), 암모늄 포메이트(플루카(Fluka), 카탈로그 번호 17843), 메탄올(HPLC 등급, 제이.티. 베이커, 카탈로그 번호 9093-33) 및 물(HPLC 등급, 제이.티. 베이커, 4218-03)을 필수적인 이동상을 만들기 위해 사용하였다. 스트라타-X 온라인 고체상 추출 컬럼, 25 ㎛, 20 mm x 2.0 mm I.D.(카탈로그 번호 00M-S033-B0-CB)를 페노메넥스(Phenomenex, 미국 캘리포니아주 토랜스 소재)로부터 수득하였다. 선파이어(SunFire) C18 역상 컬럼, 3.5 ㎛, 100 mm x 3.0 mm I.D.(카탈로그 번호 186002543)를 워터스 코포레이션(Waters Corporation, 미국 매사추세츠주 밀포드 소재)으로부터 구입하였다.

이 방법을 하기 장비를 이용하여 수행하였다. 2차원 크로마토그래피는 아질런트(Agilent) 1100 2원 펌프, 아질런트 1100 4원 펌프 및 2 발코 케미너트(Valco Cheminert) 6-포트 2 위치 밸브를 사용하였다. 샘플을 10℃에서 유지되는 펠티에르(Peltier) 냉각 스택 및 20 ㎕ 샘플링 루프를 갖춘 LEAP HTC PAL 자동 샘플러를 통해 도입하였다. 자동샘플러를 위한 바늘 세척액은 세척 1을 위해서는 물(중량/용적) 중 10% 트라이클로로아세트산이고, 세척 2를 위해서는 90:10 메탄올:물이다. 분석 컬럼(선파이어)을 마이크로테크 사이언티픽 마이크로-LC 컬럼 오븐을 사용하여 35℃에서 유지하였다. 용리액을 터보 이온 스프레이(Turbo Ion Spray)를 갖춘 ABI 사이엑스(Sciex) API3000 삼중 4극자 질량 분광계에서 분석하였다.

2차원 크로마토그래피를 온라인 고체상 추출을 위한 뚜렷한 구배 용리 조건 및 역상 크로마토그래피를 사용하여 동시에 수행하였다. 방법의 일반적인 디자인은 샘플 정화 및 해당 분석물의 캡쳐, 제 1차원으로부터 제 2차원으로의 용기를 위한 2개의 차원의 간결한 커플링을 가능하게 하는 것이다. 차원을 순차적으로 분리하는 것은 연속하는 정량을 위한 제 2차원으로부터의 분석물의 구배 용리를 가능하게 하면서, 다음 샘플을 위한 제 1차원을 동시에 제조하였다. 두 차원을 함께 간결히 커플링하였을 때, 최적의 피크 폭, 피크 모양 및 용리 시간에 따라, 제 1차원에서 이동 상의 흐름을 제 2차원으로의 분석물 용리로 역전시켰다.

HPLC 시스템의 제 1차원은 페노메넥스 스트라타-X 온라인 고체상 추출 컬럼을 사용하였고, 이동상은 용매 A를 위한 100 mM의 나트륨 퍼클로레이트/0.1%(용량/용량) 인산 및 용매 B를 위한 메탄올로 이루어졌다.

HPLC 시스템의 2차원은 워터스 선파이어 C18 역상 컬럼을 사용하였고, 이동상은 용매 A를 위한 100 mM 암모늄 포름에이트 및 용매 B를 위한 메탄올로 이루어졌다. 구배의 초기 조건을 2분 동안 유지하였고, 이 시간 동안 분석물을 분석적 컬럼에 옮겼다. 초기 조건이 분석적으로 조건을 유지하는 동안, 온라인 SPE 컬럼으로부터 분석물을 용리하기 위한 충분한 강도라는 것은 중요하다. 그 후에 구배는 세척 및 재-평형 단계 전에 4.5분 안에 74.5% A까지 선형적으로 증가하였다.

HPLC와 연결되었을 때 질량 분석계는 복합 매트릭스에서 분석물을 정량적으로 측정하기 위한 매우 선택적이고 민감한 방법이지만, 여전히 충돌 및 억제를 거친다. 2차원 HPLC와 질량 분석계의 연결에 의해, 이러한 간섭은 매우 감소되었다. 추가로, 삼중 4극자 질량 분석계의 다중 반응 모니터링(MRM) 특징을 이용함으로써, 신호-대-잡음 비가 상당히 향상되었다.

이 어세이를 위해, 질량 분석계를 2250V의 터볼론스프레이(TurbolonSpray) 전압으로 양성 이온 모드에서 조작하였다. 분무하는 기체를 450℃까지 가열하였다. 탈클러스터링 가능성(DP), 포커싱 가능성(FP) 및 충돌 에너지(CE)를 각각 60, 340 및 42 V로 설정하였다. 4극자 1(Q1) 해상도를 낮게 설정된 4극자 3(Q3)을 갖는 단위 해상도로 설정하였다. CAD 기체를 8로 설정하였다. MRM 전이를 말로닐 CoA를 위해 모니터링하였다: 854.1→347.0 m/z(문헌[L. Gao et al. (2007) J. Chromatogr. B 853,303-313]); 및 말로닐-¹³C₃-CoA: 200 ms의 체류 시간을 갖는 857.1→350.0 m/z. 용리액을 분석물을 위한 예상된 용리 시간 가까이에 질량 분석계를 우회시켰고, 다르게는 공급원의 보존을 돕기 위해 폐기물을 우회하였고, 기기의 견고성을 향상하기 위해 우회하였다. 생성된 크로마토그램을 애널리스트(Analyst) 소프트웨어(어프라이드 바이오시스템스(Applied Biosystems))를 사용하여 통합하였다. 말로닐 CoA에 대한 조직 농도를 물 중 트라이클로로아세트산의 10% 용액에서 제조된 표준 곡선으로부터 측정하였다.

조직 추출물에서의 말로닐-CoA의 정량을 위해 표준 곡선을 포함하는 샘플을 10%(중량/용적) 트라이클로로아세트산(TCA)에서 제조하였고, 0.01 내지 1 pmol/㎕의 범위였다. 말로닐-¹³C₃-CoA(0.4 pmol/㎕의 최종 농도)를 내부 표준으로서 각각의 표준 곡선 성분 및 샘플에 첨가하였다.

6개 내부-어세이 품질 대조군을 준비하였다; 모아진 추출물로부터 3개를 단식 동물로부터 준비하였고, 모아서 만든 것으로부터 3개를 먹이를 먹은 동물로부터 준비하였다. 이를 0, 0.1 또는 0.3 pmol/㎕ ¹²C-말로닐-CoA뿐만 아니라 말로닐-¹³C₃-CoA(0.4 pmol/㎕)을 섞은 독립적인 샘플로서 실행하였다. 각각의 내부-어세이 품질 대조군은 내부 표준(0.4 pmol/㎕) 및 ¹²C-말로닐-CoA에 의해 기여된 잔여 부분을 가진 85%의 수성 조직 추출물을 함유하였다. 내부 어세이 대조군이 각각에서 실행에서 포함되었다; 하나는 먹이를 먹고, 하나는 단식한 사두근의 샘플, 및/또는 하나는 먹이를 먹고, 하나는 단식한 간의 샘플로 이루어져있다. 모든 각각의 대조군은 말로닐-¹³C₃-CoA(0.4 pmol/㎕)가 섞여 있었다.

<110> Pfizer Inc. <120> N1-Pyrazolospiroketone Acetyl-CoA Carboxylase Inhibitors <130> PC33982 <140> PCT/IB2010/054908 <141> 2010-10-29 <150> US 61/259,823 <151> 2009-11-10 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 2356 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ala His His His His His His Asp Glu Val Asp Asp Glu Pro Ser 1 5 10 15 Pro Leu Ala Gln Pro Leu Glu Leu Asn Gln His Ser Arg Phe Ile Ile 20 25 30 Gly Ser Val Ser Glu Asp Asn Ser Glu Asp Glu Ile Ser Asn Leu Val 35 40 45 Lys Leu Asp Leu Leu Glu Lys Glu Gly Ser Leu Ser Pro Ala Ser Val 50 55 60 Gly Ser Asp Thr Leu Ser Asp Leu Gly Ile Ser Ser Leu Gln Asp Gly 65 70 75 80 Leu Ala Leu His Ile Arg Ser Ser Met Ser Gly Leu His Leu Val Lys 85 90 95 Gln Gly Arg Asp Arg Lys Lys Ile Asp Ser Gln Arg Asp Phe Thr Val 100 105 110 Ala Ser Pro Ala Glu Phe Val Thr Arg Phe Gly Gly Asn Lys Val Ile 115 120 125 Glu Lys Val Leu Ile Ala Asn Asn Gly Ile Ala Ala Val Lys Cys Met 130 135 140 Arg Ser Ile Arg Arg Trp Ser Tyr Glu Met Phe Arg Asn Glu Arg Ala 145 150 155 160 Ile Arg Phe Val Val Met Val Thr Pro Glu Asp Leu Lys Ala Asn Ala 165 170 175 Glu Tyr Ile Lys Met Ala Asp His Tyr Val Pro Val Pro Gly Gly Pro 180 185 190 Asn Asn Asn Asn Tyr Ala Asn Val Glu Leu Ile Leu Asp Ile Ala Lys 195 200 205 Arg Ile Pro Val Gln Ala Val Trp Ala Gly Trp Gly His Ala Ser Glu 210 215 220 Asn Pro Lys Leu Pro Glu Leu Leu Leu Lys Asn Gly Ile Ala Phe Met 225 230 235 240 Gly Pro Pro Ser Gln Ala Met Trp Ala Leu Gly Asp Lys Ile Ala Ser 245 250 255 Ser Ile Val Ala Gln Thr Ala Gly Ile Pro Thr Leu Pro Trp Ser Gly 260 265 270 Ser Gly Leu Arg Val Asp Trp Gln Glu Asn Asp Phe Ser Lys Arg Ile 275 280 285 Leu Asn Val Pro Gln Glu Leu Tyr Glu Lys Gly Tyr Val Lys Asp Val 290 295 300 Asp Asp Gly Leu Gln Ala Ala Glu Glu Val Gly Tyr Pro Val Met Ile 305 310 315 320 Lys Ala Ser Glu Gly Gly Gly Gly Lys Gly Ile Arg Lys Val Asn Asn 325 330 335 Ala Asp Asp Phe Pro Asn Leu Phe Arg Gln Val Gln Ala Glu Val Pro 340 345 350 Gly Ser Pro Ile Phe Val Met Arg Leu Ala Lys Gln Ser Arg His Leu 355 360 365 Glu Val Gln Ile Leu Ala Asp Gln Tyr Gly Asn Ala Ile Ser Leu Phe 370 375 380 Gly Arg Asp Cys Ser Val Gln Arg Arg His Gln Lys Ile Ile Glu Glu 385 390 395 400 Ala Pro Ala Thr Ile Ala Thr Pro Ala Val Phe Glu His Met Glu Gln 405 410 415 Cys Ala Val Lys Leu Ala Lys Met Val Gly Tyr Val Ser Ala Gly Thr 420 425 430 Val Glu Tyr Leu Tyr Ser Gln Asp Gly Ser Phe Tyr Phe Leu Glu Leu 435 440 445 Asn Pro Arg Leu Gln Val Glu His Pro Cys Thr Glu Met Val Ala Asp 450 455 460 Val Asn Leu Pro Ala Ala Gln Leu Gln Ile Ala Met Gly Ile Pro Leu 465 470 475 480 Tyr Arg Ile Lys Asp Ile Arg Met Met Tyr Gly Val Ser Pro Trp Gly 485 490 495 Asp Ser Pro Ile Asp Phe Glu Asp Ser Ala His Val Pro Cys Pro Arg 500 505 510 Gly His Val Ile Ala Ala Arg Ile Thr Ser Glu Asn Pro Asp Glu Gly 515 520 525 Phe Lys Pro Ser Ser Gly Thr Val Gln Glu Leu Asn Phe Arg Ser Asn 530 535 540 Lys Asn Val Trp Gly Tyr Phe Ser Val Ala Ala Ala Gly Gly Leu His 545 550 555 560 Glu Phe Ala Asp Ser Gln Phe Gly His Cys Phe Ser Trp Gly Glu Asn 565 570 575 Arg Glu Glu Ala Ile Ser Asn Met Val Val Ala Leu Lys Glu Leu Ser 580 585 590 Ile Arg Gly Asp Phe Arg Thr Thr Val Glu Tyr Leu Ile Lys Leu Leu 595 600 605 Glu Thr Glu Ser Phe Gln Met Asn Arg Ile Asp Thr Gly Trp Leu Asp 610 615 620 Arg Leu Ile Ala Glu Lys Val Gln Ala Glu Arg Pro Asp Thr Met Leu 625 630 635 640 Gly Val Val Cys Gly Ala Leu His Val Ala Asp Val Ser Leu Arg Asn 645 650 655 Ser Val Ser Asn Phe Leu His Ser Leu Glu Arg Gly Gln Val Leu Pro 660 665 670 Ala His Thr Leu Leu Asn Thr Val Asp Val Glu Leu Ile Tyr Glu Gly 675 680 685 Val Lys Tyr Val Leu Lys Val Thr Arg Gln Ser Pro Asn Ser Tyr Val 690 695 700 Val Ile Met Asn Gly Ser Cys Val Glu Val Asp Val His Arg Leu Ser 705 710 715 720 Asp Gly Gly Leu Leu Leu Ser Tyr Asp Gly Ser Ser Tyr Thr Thr Tyr 725 730 735 Met Lys Glu Glu Val Asp Arg Tyr Arg Ile Thr Ile Gly Asn Lys Thr 740 745 750 Cys Val Phe Glu Lys Glu Asn Asp Pro Ser Val Met Arg Ser Pro Ser 755 760 765 Ala Gly Lys Leu Ile Gln Tyr Ile Val Glu Asp Gly Gly His Val Phe 770 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985 990 Met Lys Ala Val Val Met Asp Leu Leu Arg Gln Tyr Leu Arg Val Glu 995 1000 1005 Thr Gln Phe Gln Asn Gly His Tyr Asp Lys Cys Val Phe Ala Leu 1010 1015 1020 Arg Glu Glu Asn Lys Ser Asp Met Asn Thr Val Leu Asn Tyr Ile 1025 1030 1035 Phe Ser His Ala Gln Val Thr Lys Lys Asn Leu Leu Val Thr Met 1040 1045 1050 Leu Ile Asp Gln Leu Cys Gly Arg Asp Pro Thr Leu Thr Asp Glu 1055 1060 1065 Leu Leu Asn Ile Leu Thr Glu Leu Thr Gln Leu Ser Lys Thr Thr 1070 1075 1080 Asn Ala Lys Val Ala Leu Arg Ala Arg Gln Val Leu Ile Ala Ser 1085 1090 1095 His Leu Pro Ser Tyr Glu Leu Arg His Asn Gln Val Glu Ser Ile 1100 1105 1110 Phe Leu Ser Ala Ile Asp Met Tyr Gly His Gln Phe Cys Ile Glu 1115 1120 1125 Asn Leu Gln Lys Leu Ile Leu Ser Glu Thr Ser Ile Phe Asp Val 1130 1135 1140 Leu Pro Asn Phe Phe Tyr His Ser Asn Gln Val Val Arg Met Ala 1145 1150 1155 Ala Leu Glu Val Tyr Val Arg Arg Ala Tyr Ile Ala Tyr Glu Leu 1160 1165 1170 Asn Ser Val Gln His Arg Gln Leu Lys Asp Asn Thr Cys Val Val 1175 1180 1185 Glu Phe Gln Phe Met Leu Pro Thr Ser His Pro Asn Arg Gly Asn 1190 1195 1200 Ile Pro Thr Leu Asn Arg Met Ser Phe Ser Ser Asn Leu Asn His 1205 1210 1215 Tyr Gly Met Thr His Val Ala Ser Val Ser Asp Val Leu Leu Asp 1220 1225 1230 Asn Ser Phe Thr Pro Pro Cys Gln Arg Met Gly Gly Met Val Ser 1235 1240 1245 Phe Arg Thr Phe Glu Asp Phe Val Arg Ile Phe Asp Glu Val Met 1250 1255 1260 Gly Cys Phe Ser Asp Ser Pro Pro Gln Ser Pro Thr Phe Pro Glu 1265 1270 1275 Ala Gly His Thr Ser Leu Tyr Asp Glu Asp Lys Val Pro Arg Asp 1280 1285 1290 Glu Pro Ile His Ile Leu Asn Val Ala Ile Lys Thr Asp Cys Asp 1295 1300 1305 Ile Glu Asp Asp Arg Leu Ala Ala Met Phe Arg Glu Phe Thr Gln 1310 1315 1320 Gln Asn Lys Ala Thr Leu Val Asp His Gly Ile Arg Arg Leu Thr 1325 1330 1335 Phe Leu Val Ala Gln Lys Asp Phe Arg Lys Gln Val Asn Tyr Glu 1340 1345 1350 Val Asp Arg Arg Phe His Arg Glu Phe Pro Lys Phe Phe Thr Phe 1355 1360 1365 Arg Ala Arg Asp Lys Phe Glu Glu Asp Arg Ile Tyr Arg His Leu 1370 1375 1380 Glu Pro Ala Leu Ala Phe Gln Leu Glu Leu Asn Arg Met Arg Asn 1385 1390 1395 Phe Asp Leu Thr Ala Ile Pro Cys Ala Asn His Lys Met His Leu 1400 1405 1410 Tyr Leu Gly Ala Ala Lys Val Glu Val Gly Thr Glu Val Thr Asp 1415 1420 1425 Tyr Arg Phe Phe Val Arg Ala Ile Ile Arg His Ser Asp Leu Val 1430 1435 1440 Thr Lys Glu Ala Ser Phe Glu Tyr Leu Gln Asn Glu Gly Glu Arg 1445 1450 1455 Leu Leu Leu Glu Ala Met Asp Glu Leu Glu Val Ala Phe Asn Asn 1460 1465 1470 Thr Asn Val Arg Thr Asp Cys Asn His Ile Phe Leu Asn Phe Val 1475 1480 1485 Pro Thr Val Ile Met Asp Pro Ser Lys Ile Glu Glu Ser Val Arg 1490 1495 1500 Ser Met Val Met Arg Tyr Gly Ser Arg Leu Trp Lys Leu Arg Val 1505 1510 1515 Leu Gln Ala Glu Leu Lys Ile Asn Ile Arg Leu Thr Pro Thr Gly 1520 1525 1530 Lys Ala Ile Pro Ile Arg Leu Phe Leu Thr Asn Glu Ser Gly Tyr 1535 1540 1545 Tyr Leu Asp Ile Ser Leu Tyr Lys Glu Val Thr Asp Ser Arg Thr 1550 1555 1560 Ala Gln Ile Met Phe Gln Ala Tyr Gly Asp Lys Gln Gly Pro Leu 1565 1570 1575 His Gly Met Leu Ile Asn Thr Pro Tyr Val Thr Lys Asp Leu Leu 1580 1585 1590 Gln Ser Lys Arg Phe Gln Ala Gln Ser Leu Gly Thr Thr Tyr Ile 1595 1600 1605 Tyr Asp Ile Pro Glu Met Phe Arg Gln Ser Leu Ile Lys Leu Trp 1610 1615 1620 Glu Ser Met Ser Thr Gln Ala Phe Leu Pro Ser Pro Pro Leu Pro 1625 1630 1635 Ser Asp Met Leu Thr Tyr Thr Glu Leu Val Leu Asp Asp Gln Gly 1640 1645 1650 Gln Leu Val His Met Asn Arg Leu Pro Gly Gly Asn Glu Ile Gly 1655 1660 1665 Met Val Ala Trp Lys Met Thr Phe Lys Ser Pro Glu Tyr Pro Glu 1670 1675 1680 Gly Arg Asp Ile Ile Val Ile Gly Asn Asp Ile Thr Tyr Arg Ile 1685 1690 1695 Gly Ser Phe Gly Pro Gln Glu Asp Leu Leu Phe Leu Arg Ala Ser 1700 1705 1710 Glu Leu Ala Arg Ala Glu Gly Ile Pro Arg Ile Tyr Val Ser Ala 1715 1720 1725 Asn Ser Gly Ala Arg Ile Gly Leu Ala Glu Glu Ile Arg His Met 1730 1735 1740 Phe His Val Ala Trp Val Asp Pro Glu Asp Pro Tyr Lys Gly Tyr 1745 1750 1755 Arg Tyr Leu Tyr Leu Thr Pro Gln Asp Tyr Lys Arg Val Ser Ala 1760 1765 1770 Leu Asn Ser Val His Cys Glu His Val Glu Asp Glu Gly Glu Ser 1775 1780 1785 Arg Tyr Lys Ile Thr Asp Ile Ile Gly Lys Glu Glu Gly Ile Gly 1790 1795 1800 Pro Glu Asn Leu Arg Gly Ser Gly Met Ile Ala Gly Glu Ser Ser 1805 1810 1815 Leu Ala Tyr Asn Glu Ile Ile Thr Ile Ser Leu Val Thr Cys Arg 1820 1825 1830 Ala Ile Gly Ile Gly Ala Tyr Leu Val Arg Leu Gly Gln Arg Thr 1835 1840 1845 Ile Gln Val Glu Asn Ser His Leu Ile Leu Thr Gly Ala Gly Ala 1850 1855 1860 Leu Asn Lys Val Leu Gly Arg Glu Val Tyr Thr Ser Asn Asn Gln 1865 1870 1875 Leu Gly Gly Ile Gln Ile Met His Asn Asn Gly Val Thr His Cys 1880 1885 1890 Thr Val Cys Asp Asp Phe Glu Gly Val Phe Thr Val Leu His Trp 1895 1900 1905 Leu Ser Tyr Met Pro Lys Ser Val His Ser Ser Val Pro Leu Leu 1910 1915 1920 Asn Ser Lys Asp Pro Ile Asp Arg Ile Ile Glu Phe Val Pro Thr 1925 1930 1935 Lys Thr Pro Tyr Asp Pro Arg Trp Met Leu Ala Gly Arg Pro His 1940 1945 1950 Pro Thr Gln Lys Gly Gln Trp Leu Ser Gly Phe Phe Asp Tyr Gly 1955 1960 1965 Ser Phe Ser Glu Ile Met Gln Pro Trp Ala Gln Thr Val Val Val 1970 1975 1980 Gly Arg Ala Arg Leu Gly Gly Ile Pro Val Gly Val Val Ala Val 1985 1990 1995 Glu Thr Arg Thr Val Glu Leu Ser Ile Pro Ala Asp Pro Ala Asn 2000 2005 2010 Leu Asp Ser Glu Ala Lys Ile Ile Gln Gln Ala Gly Gln Val Trp 2015 2020 2025 Phe Pro Asp Ser Ala Phe Lys Thr Tyr Gln Ala Ile Lys Asp Phe 2030 2035 2040 Asn Arg Glu Gly Leu Pro Leu Met Val Phe Ala Asn Trp Arg Gly 2045 2050 2055 Phe Ser Gly Gly Met Lys Asp Met Tyr Asp Gln Val Leu Lys Phe 2060 2065 2070 Gly Ala Tyr Ile Val Asp Gly Leu Arg Glu Cys Cys Gln Pro Val 2075 2080 2085 Leu Val Tyr Ile Pro Pro Gln Ala Glu Leu Arg Gly Gly Ser Trp 2090 2095 2100 Val Val Ile Asp Ser Ser Ile Asn Pro Arg His Met Glu Met Tyr 2105 2110 2115 Ala Asp Arg Glu Ser Arg Gly Ser Val Leu Glu Pro Glu Gly Thr 2120 2125 2130 Val Glu Ile Lys Phe Arg Arg Lys Asp Leu Val Lys Thr Met Arg 2135 2140 2145 Arg Val Asp Pro Val Tyr Ile His Leu Ala Glu Arg Leu Gly Thr 2150 2155 2160 Pro Glu Leu Ser Thr Ala Glu Arg Lys Glu Leu Glu Asn Lys Leu 2165 2170 2175 Lys Glu Arg Glu Glu Phe Leu Ile Pro Ile Tyr His Gln Val Ala 2180 2185 2190 Val Gln Phe Ala Asp Leu His Asp Thr Pro Gly Arg Met Gln Glu 2195 2200 2205 Lys Gly Val Ile Ser Asp Ile Leu Asp Trp Lys Thr Ser Arg Thr 2210 2215 2220 Phe Phe Tyr Trp Arg Leu Arg Arg Leu Leu Leu Glu Asp Leu Val 2225 2230 2235 Lys Lys Lys Ile His Asn Ala Asn Pro Glu Leu Thr Asp Gly Gln 2240 2245 2250 Ile Gln Ala Met Leu Arg Arg Trp Phe Val Glu Val Glu Gly Thr 2255 2260 2265 Val Lys Ala Tyr Val Trp Asp Asn Asn Lys Asp Leu Ala Glu Trp 2270 2275 2280 Leu Glu Lys Gln Leu Thr Glu Glu Asp Gly Val His Ser Val Ile 2285 2290 2295 Glu Glu Asn Ile Lys Cys Ile Ser Arg Asp Tyr Val Leu Lys Gln 2300 2305 2310 Ile Arg Ser Leu Val Gln Ala Asn Pro Glu Val Ala Met Asp Ser 2315 2320 2325 Ile Ile His Met Thr Gln His Ile Ser Pro Thr Gln Arg Ala Glu 2330 2335 2340 Val Ile Arg Ile Leu Ser Thr Met Asp Ser Pro Ser Thr 2345 2350 2355 <210> 2 <211> 2458 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Val Leu Leu Leu Cys Leu Ser Cys Leu Ile Phe Ser Cys Leu Thr 1 5 10 15 Phe Ser Trp Leu Lys Ile Trp Gly Lys Met Thr Asp Ser Lys Pro Ile 20 25 30 Thr Lys Ser Lys Ser Glu Ala Asn Leu Ile Pro Ser Gln Glu Pro Phe 35 40 45 Pro Ala Ser Asp Asn Ser Gly Glu Thr Pro Gln Arg Asn Gly Glu Gly 50 55 60 His Thr Leu Pro Lys Thr Pro Ser Gln Ala Glu Pro Ala Ser His Lys 65 70 75 80 Gly Pro Lys Asp Ala Gly Arg Arg Arg Asn Ser Leu Pro Pro Ser His 85 90 95 Gln Lys Pro Pro Arg Asn Pro Leu Ser Ser Ser Asp Ala Ala Pro Ser 100 105 110 Pro Glu Leu Gln Ala Asn Gly Thr Gly Thr Gln Gly Leu Glu Ala Thr 115 120 125 Asp Thr Asn Gly Leu Ser Ser Ser Ala Arg Pro Gln Gly Gln Gln Ala 130 135 140 Gly Ser Pro Ser Lys Glu Asp Lys Lys Gln Ala Asn Ile Lys Arg Gln 145 150 155 160 Leu Met Thr Asn Phe Ile Leu Gly Ser Phe Asp Asp Tyr Ser Ser Asp 165 170 175 Glu Asp Ser Val Ala Gly Ser Ser Arg Glu Ser Thr Arg Lys Gly Ser 180 185 190 Arg Ala Ser Leu Gly Ala Leu Ser Leu Glu Ala Tyr Leu Thr Thr Gly 195 200 205 Glu Ala Glu Thr Arg Val Pro Thr Met Arg Pro Ser Met Ser Gly Leu 210 215 220 His Leu Val Lys Arg Gly Arg Glu His Lys Lys Leu Asp Leu His Arg 225 230 235 240 Asp Phe Thr Val Ala Ser Pro Ala Glu Phe Val Thr Arg Phe Gly Gly 245 250 255 Asp Arg Val Ile Glu Lys Val Leu Ile Ala Asn Asn Gly Ile Ala Ala 260 265 270 Val Lys Cys Met Arg Ser Ile Arg Arg Trp Ala Tyr Glu Met Phe Arg 275 280 285 Asn Glu Arg Ala Ile Arg Phe Val Val Met Val Thr Pro Glu Asp Leu 290 295 300 Lys Ala Asn Ala Glu Tyr Ile Lys Met Ala Asp His Tyr Val Pro Val 305 310 315 320 Pro Gly Gly Pro Asn Asn Asn Asn Tyr Ala Asn Val Glu Leu Ile Val 325 330 335 Asp Ile Ala Lys Arg Ile Pro Val Gln Ala Val Trp Ala Gly Trp Gly 340 345 350 His Ala Ser Glu Asn Pro Lys Leu Pro Glu Leu Leu Cys Lys Asn Gly 355 360 365 Val Ala Phe Leu Gly Pro Pro Ser Glu Ala Met Trp Ala Leu Gly Asp 370 375 380 Lys Ile Ala Ser Thr Val Val Ala Gln Thr Leu Gln Val Pro Thr Leu 385 390 395 400 Pro Trp Ser Gly Ser Gly Leu Thr Val Glu Trp Thr Glu Asp Asp Leu 405 410 415 Gln Gln Gly Lys Arg Ile Ser Val Pro Glu Asp Val Tyr Asp Lys Gly 420 425 430 Cys Val Lys Asp Val Asp Glu Gly Leu Glu Ala Ala Glu Arg Ile Gly 435 440 445 Phe Pro Leu Met Ile Lys Ala Ser Glu Gly Gly Gly Gly Lys Gly Ile 450 455 460 Arg Lys Ala Glu Ser Ala Glu Asp Phe Pro Ile Leu Phe Arg Gln Val 465 470 475 480 Gln Ser Glu Ile Pro Gly Ser Pro Ile Phe Leu Met Lys Leu Ala Gln 485 490 495 His Ala Arg His Leu Glu Val Gln Ile Leu Ala Asp Gln Tyr Gly Asn 500 505 510 Ala Val Ser Leu Phe Gly Arg Asp Cys Ser Ile Gln Arg Arg His Gln 515 520 525 Lys Ile Val Glu Glu Ala Pro Ala Thr Ile Ala Pro Leu Ala Ile Phe 530 535 540 Glu Phe Met Glu Gln Cys Ala Ile Arg Leu Ala Lys Thr Val Gly Tyr 545 550 555 560 Val Ser Ala Gly Thr Val Glu Tyr Leu Tyr Ser Gln Asp Gly Ser Phe 565 570 575 His Phe Leu Glu Leu Asn Pro Arg Leu Gln Val Glu His Pro Cys Thr 580 585 590 Glu Met Ile Ala Asp Val Asn Leu Pro Ala Ala Gln Leu Gln Ile Ala 595 600 605 Met Gly Val Pro Leu His Arg Leu Lys Asp Ile Arg Leu Leu Tyr Gly 610 615 620 Glu Ser Pro Trp Gly Val Thr Pro Ile Ser Phe Glu Thr Pro Ser Asn 625 630 635 640 Pro Pro Leu Ala Arg Gly His Val Ile Ala Ala Arg Ile Thr Ser Glu 645 650 655 Asn Pro Asp Glu Gly Phe Lys Pro Ser Ser Gly Thr Val Gln Glu Leu 660 665 670 Asn Phe Arg Ser Ser Lys Asn Val Trp Gly Tyr Phe Ser Val Ala Ala 675 680 685 Thr Gly Gly Leu His Glu Phe Ala Asp Ser Gln Phe Gly His Cys Phe 690 695 700 Ser Trp Gly Glu Asn Arg Glu Glu Ala Ile Ser Asn Met Val Val Ala 705 710 715 720 Leu Lys Glu Leu Ser Ile Arg Gly Asp Phe Arg Thr Thr Val Glu Tyr 725 730 735 Leu Ile Asn Leu Leu Glu Thr Glu Ser Phe Gln Asn Asn Asp Ile Asp 740 745 750 Thr Gly Trp Leu Asp Tyr Leu Ile Ala Glu Lys Val Gln Ala Glu Lys 755 760 765 Pro Asp Ile Met Leu Gly Val Val Cys Gly Ala Leu Asn Val Ala Asp 770 775 780 Ala Met Phe Arg Thr Cys Met Thr Asp Phe Leu His Ser Leu Glu Arg 785 790 795 800 Gly Gln Val Leu Pro Ala Asp Ser Leu Leu Asn Leu Val Asp Val Glu 805 810 815 Leu Ile Tyr Gly Gly Val Lys Tyr Ile Leu Lys Val Ala Arg Gln Ser 820 825 830 Leu Thr Met Phe Val Leu Ile Met Asn Gly Cys His Ile Glu Ile Asp 835 840 845 Ala His Arg Leu Asn Asp Gly Gly Leu Leu Leu Ser Tyr Asn Gly Asn 850 855 860 Ser Tyr Thr Thr Tyr Met Lys Glu Glu Val Asp Ser Tyr Arg Ile Thr 865 870 875 880 Ile Gly Asn Lys Thr Cys Val Phe Glu Lys Glu Asn Asp Pro Thr Val 885 890 895 Leu Arg Ser Pro Ser Ala Gly Lys Leu Thr Gln Tyr Thr Val Glu Asp 900 905 910 Gly Gly His Val Glu Ala Gly Ser Ser Tyr Ala Glu Met Glu Val Met 915 920 925 Lys Met Ile Met Thr Leu Asn Val Gln Glu Arg Gly Arg Val Lys Tyr 930 935 940 Ile Lys Arg Pro Gly Ala Val Leu Glu Ala Gly Cys Val Val Ala Arg 945 950 955 960 Leu Glu Leu Asp Asp Pro Ser Lys Val His Pro Ala Glu Pro Phe Thr 965 970 975 Gly Glu Leu Pro Ala Gln Gln Thr Leu Pro Ile Leu Gly Glu Lys Leu 980 985 990 His Gln Val Phe His Ser Val Leu Glu Asn Leu Thr Asn Val Met Ser 995 1000 1005 Gly Phe Cys Leu Pro Glu Pro Val Phe Ser Ile Lys Leu Lys Glu 1010 1015 1020 Trp Val Gln Lys Leu Met Met Thr Leu Arg His Pro Ser Leu Pro 1025 1030 1035 Leu Leu Glu Leu Gln Glu Ile Met Thr Ser Val Ala Gly Arg Ile 1040 1045 1050 Pro Ala Pro Val Glu Lys Ser Val Arg Arg Val Met Ala Gln Tyr 1055 1060 1065 Ala Ser Asn Ile Thr Ser Val Leu Cys Gln Phe Pro Ser Gln Gln 1070 1075 1080 Ile Ala Thr Ile Leu Asp Cys His Ala Ala Thr Leu Gln Arg Lys 1085 1090 1095 Ala Asp Arg Glu Val Phe Phe Ile Asn Thr Gln Ser Ile Val Gln 1100 1105 1110 Leu Val Gln Arg Tyr Arg Ser Gly Ile Arg Gly Tyr Met Lys Thr 1115 1120 1125 Val Val Leu Asp Leu Leu Arg Arg Tyr Leu Arg Val Glu His His 1130 1135 1140 Phe Gln Gln Ala His Tyr Asp Lys Cys Val Ile Asn Leu Arg Glu 1145 1150 1155 Gln Phe Lys Pro Asp Met Ser Gln Val Leu Asp Cys Ile Phe Ser 1160 1165 1170 His Ala Gln Val Ala Lys Lys Asn Gln Leu Val Ile Met Leu Ile 1175 1180 1185 Asp Glu Leu Cys Gly Pro Asp Pro Ser Leu Ser Asp Glu Leu Ile 1190 1195 1200 Ser Ile Leu Asn Glu Leu Thr Gln Leu Ser Lys Ser Glu His Cys 1205 1210 1215 Lys Val Ala Leu Arg Ala Arg Gln Ile Leu Ile Ala Ser His Leu 1220 1225 1230 Pro Ser Tyr Glu Leu Arg His Asn Gln Val Glu Ser Ile Phe Leu 1235 1240 1245 Ser Ala Ile Asp Met Tyr Gly His Gln Phe Cys Pro Glu Asn Leu 1250 1255 1260 Lys Lys Leu Ile Leu Ser Glu Thr Thr Ile Phe Asp Val Leu Pro 1265 1270 1275 Thr Phe Phe Tyr His Ala Asn Lys Val Val Cys Met Ala Ser Leu 1280 1285 1290 Glu Val Tyr Val Arg Arg Gly Tyr Ile Ala Tyr Glu Leu Asn Ser 1295 1300 1305 Leu Gln His Arg Gln Leu Pro Asp Gly Thr Cys Val Val Glu Phe 1310 1315 1320 Gln Phe Met Leu Pro Ser Ser His Pro Asn Arg Met Thr Val Pro 1325 1330 1335 Ile Ser Ile Thr Asn Pro Asp Leu Leu Arg His Ser Thr Glu Leu 1340 1345 1350 Phe Met Asp Ser Gly Phe Ser Pro Leu Cys Gln Arg Met Gly Ala 1355 1360 1365 Met Val Ala Phe Arg Arg Phe Glu Asp Phe Thr Arg Asn Phe Asp 1370 1375 1380 Glu Val Ile Ser Cys Phe Ala Asn Val Pro Lys Asp Thr Pro Leu 1385 1390 1395 Phe Ser Glu Ala Arg Thr Ser Leu Tyr Ser Glu Asp Asp Cys Lys 1400 1405 1410 Ser Leu Arg Glu Glu Pro Ile His Ile Leu Asn Val Ser Ile Gln 1415 1420 1425 Cys Ala Asp His Leu Glu Asp Glu Ala Leu Val Pro Ile Leu Arg 1430 1435 1440 Thr Phe Val Gln Ser Lys Lys Asn Ile Leu Val Asp Tyr Gly Leu 1445 1450 1455 Arg Arg Ile Thr Phe Leu Ile Ala Gln Glu Lys Glu Phe Pro Lys 1460 1465 1470 Phe Phe Thr Phe Arg Ala Arg Asp Glu Phe Ala Glu Asp Arg Ile 1475 1480 1485 Tyr Arg His Leu Glu Pro Ala Leu Ala Phe Gln Leu Glu Leu Asn 1490 1495 1500 Arg Met Arg Asn Phe Asp Leu Thr Ala Val Pro Cys Ala Asn His 1505 1510 1515 Lys Met His Leu Tyr Leu Gly Ala Ala Lys Val Lys Glu Gly Val 1520 1525 1530 Glu Val Thr Asp His Arg Phe Phe Ile Arg Ala Ile Ile Arg His 1535 1540 1545 Ser Asp Leu Ile Thr Lys Glu Ala Ser Phe Glu Tyr Leu Gln Asn 1550 1555 1560 Glu Gly Glu Arg Leu Leu Leu Glu Ala Met Asp Glu Leu Glu Val 1565 1570 1575 Ala Phe Asn Asn Thr Ser Val Arg Thr Asp Cys Asn His Ile Phe 1580 1585 1590 Leu Asn Phe Val Pro Thr Val Ile Met Asp Pro Phe Lys Ile Glu 1595 1600 1605 Glu Ser Val Arg Tyr Met Val Met Arg Tyr Gly Ser Arg Leu Trp 1610 1615 1620 Lys Leu Arg Val Leu Gln Ala Glu Val Lys Ile Asn Ile Arg Gln 1625 1630 1635 Thr Thr Thr Gly Ser Ala Val Pro Ile Arg Leu Phe Ile Thr Asn 1640 1645 1650 Glu Ser Gly Tyr Tyr Leu Asp Ile Ser Leu Tyr Lys Glu Val Thr 1655 1660 1665 Asp Ser Arg Ser Gly Asn Ile Met Phe His Ser Phe Gly Asn Lys 1670 1675 1680 Gln Gly Pro Gln His Gly Met Leu Ile Asn Thr Pro Tyr Val Thr 1685 1690 1695 Lys Asp Leu Leu Gln Ala Lys Arg Phe Gln Ala Gln Thr Leu Gly 1700 1705 1710 Thr Thr Tyr Ile Tyr Asp Phe Pro Glu Met Phe Arg Gln Ala Leu 1715 1720 1725 Phe Lys Leu Trp Gly Ser Pro Asp Lys Tyr Pro Lys Asp Ile Leu 1730 1735 1740 Thr Tyr Thr Glu Leu Val Leu Asp Ser Gln Gly Gln Leu Val Glu 1745 1750 1755 Met Asn Arg Leu Pro Gly Gly Asn Glu Val Gly Met Val Ala Phe 1760 1765 1770 Lys Met Arg Phe Lys Thr Gln Glu Tyr Pro Glu Gly Arg Asp Val 1775 1780 1785 Ile Val Ile Gly Asn Asp Ile Thr Phe Arg Ile Gly Ser Phe Gly 1790 1795 1800 Pro Gly Glu Asp Leu Leu Tyr Leu Arg Ala Ser Glu Met Ala Arg 1805 1810 1815 Ala Glu Gly Ile Pro Lys Ile Tyr Val Ala Ala Asn Ser Gly Ala 1820 1825 1830 Arg Ile Gly Met Ala Glu Glu Ile Lys His Met Phe His Val Ala 1835 1840 1845 Trp Val Asp Pro Glu Asp Pro His Lys Gly Phe Lys Tyr Leu Tyr 1850 1855 1860 Leu Thr Pro Gln Asp Tyr Thr Arg Ile Ser Ser Leu Asn Ser Val 1865 1870 1875 His Cys Lys His Ile Glu Glu Gly Gly Glu Ser Arg Tyr Met Ile 1880 1885 1890 Thr Asp Ile Ile Gly Lys Asp Asp Gly Leu Gly Val Glu Asn Leu 1895 1900 1905 Arg Gly Ser Gly Met Ile Ala Gly Glu Ser Ser Leu Ala Tyr Glu 1910 1915 1920 Glu Ile Val Thr Ile Ser Leu Val Thr Cys Arg Ala Ile Gly Ile 1925 1930 1935 Gly Ala Tyr Leu Val Arg Leu Gly Gln Arg Val Ile Gln Val Glu 1940 1945 1950 Asn Ser His Ile Ile Leu Thr Gly Ala Ser Ala Leu Asn Lys Val 1955 1960 1965 Leu Gly Arg Glu Val Tyr Thr Ser Asn Asn Gln Leu Gly Gly Val 1970 1975 1980 Gln Ile Met His Tyr Asn Gly Val Ser His Ile Thr Val Pro Asp 1985 1990 1995 Asp Phe Glu Gly Val Tyr Thr Ile Leu Glu Trp Leu Ser Tyr Met 2000 2005 2010 Pro Lys Asp Asn His Ser Pro Val Pro Ile Ile Thr Pro Thr Asp 2015 2020 2025 Pro Ile Asp Arg Glu Ile Glu Phe Leu Pro Ser Arg Ala Pro Tyr 2030 2035 2040 Asp Pro Arg Trp Met Leu Ala Gly Arg Pro His Pro Thr Leu Lys 2045 2050 2055 Gly Thr Trp Gln Ser Gly Phe Phe Asp His Gly Ser Phe Lys Glu 2060 2065 2070 Ile Met Ala Pro Trp Ala Gln Thr Val Val Thr Gly Arg Ala Arg 2075 2080 2085 Leu Gly Gly Ile Pro Val Gly Val Ile Ala Val Glu Thr Arg Thr 2090 2095 2100 Val Glu Val Ala Val Pro Ala Asp Pro Ala Asn Leu Asp Ser Glu 2105 2110 2115 Ala Lys Ile Ile Gln Gln Ala Gly Gln Val Trp Phe Pro Asp Ser 2120 2125 2130 Ala Tyr Lys Thr Ala Gln Ala Ile Lys Asp Phe Asn Arg Glu Lys 2135 2140 2145 Leu Pro Leu Met Ile Phe Ala Asn Trp Arg Gly Phe Ser Gly Gly 2150 2155 2160 Met Lys Asp Met Tyr Asp Gln Val Leu Lys Phe Gly Ala Tyr Ile 2165 2170 2175 Val Asp Gly Leu Arg Gln Tyr Lys Gln Pro Ile Leu Ile Tyr Ile 2180 2185 2190 Pro Pro Tyr Ala Glu Leu Arg Gly Gly Ser Trp Val Val Ile Asp 2195 2200 2205 Ala Thr Ile Asn Pro Leu Cys Ile Glu Met Tyr Ala Asp Lys Glu 2210 2215 2220 Ser Arg Gly Gly Val Leu Glu Pro Glu Gly Thr Val Glu Ile Lys 2225 2230 2235 Phe Arg Lys Lys Asp Leu Ile Lys Ser Met Arg Arg Ile Asp Pro 2240 2245 2250 Ala Tyr Lys Lys Leu Met Glu Gln Leu Gly Glu Pro Asp Leu Ser 2255 2260 2265 Asp Lys Asp Arg Lys Asp Leu Glu Gly Arg Leu Lys Ala Arg Glu 2270 2275 2280 Asp Leu Leu Leu Pro Ile Tyr His Gln Val Ala Val Gln Phe Ala 2285 2290 2295 Asp Phe His Asp Thr Pro Gly Arg Met Leu Glu Lys Gly Val Ile 2300 2305 2310 Ser Asp Ile Leu Glu Trp Lys Thr Ala Arg Thr Phe Leu Tyr Trp 2315 2320 2325 Arg Leu Arg Arg Leu Leu Leu Glu Asp Gln Val Lys Gln Glu Ile 2330 2335 2340 Leu Gln Ala Ser Gly Glu Leu Ser His Val His Ile Gln Ser Met 2345 2350 2355 Leu Arg Arg Trp Phe Val Glu Thr Glu Gly Ala Val Lys Ala Tyr 2360 2365 2370 Leu Trp Asp Asn Asn Gln Val Val Val Gln Trp Leu Glu Gln His 2375 2380 2385 Trp Gln Ala Gly Asp Gly Pro Arg Ser Thr Ile Arg Glu Asn Ile 2390 2395 2400 Thr Tyr Leu Lys His Asp Ser Val Leu Lys Thr Ile Arg Gly Leu 2405 2410 2415 Val Glu Glu Asn Pro Glu Val Ala Val Asp Cys Val Ile Tyr Leu 2420 2425 2430 Ser Gln His Ile Ser Pro Ala Glu Arg Ala Gln Val Val His Leu 2435 2440 2445 Leu Ser Thr Met Asp Ser Pro Ala Ser Thr 2450 2455

Claims (15)

1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
   화학식 I
   

   

   
   상기 식에서,
   R¹은 (C₁-C₆)알킬, (C₃-C₇)사이클로알킬, 테트라하이드로푸라닐 또는 옥세타닐이고; 상기 (C₁-C₆)알킬은 (C₁-C₃)알콕시, 하이드록시, 플루오로, 페닐, 테트라하이드로푸라닐 및 옥세타닐로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 선택적으로 치환되고;
   R²는 수소, 할로, (C₁-C₃)알킬 또는 시아노이고;
   R³은 각각 독립적으로 수소 또는 (C₁-C₃)알킬이고;
   R⁴는 (C₆-C₁₀)아릴, 5 내지 12원 헤테로아릴 또는 8 내지 12원 융합된 헤테로사이클릭아릴이고; 상기 (C₆-C₁₀)아릴, 5 내지 12원 헤테로아릴 또는 8 내지 12원 융합된 헤테로사이클릭아릴은 (C₁-C₃)알킬, (C₁-C₃)알콕시, 할로, 아미노, (C₁-C₃)알킬아미노, 다이(C₁-C₃)알킬아미노, 하이드록시, 시아노, 아미도, 페닐, 5 또는 6원 헤테로아릴 및 5 또는 6원 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 각각 선택적으로 치환된다.
2. 제 1 항에 있어서,
   R¹이 (C₁-C₆)알킬, (C₃-C₇)사이클로알킬 또는 테트라하이드로푸라닐이고;
   R²가 수소 또는 메틸인
   화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
3. 제 2 항에 있어서,
   R¹이 에틸, 이소프로필 또는 t-부틸이고;
   각각의 R³이 수소이고;
   R⁴가 플루오로, 클로로, 메틸, 메톡시, 아미노, 메틸아미노, 다이메틸아미노, 아미도, 시아노, 페닐, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트라이아졸릴, 피리디닐 및 모폴리닐로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 각각 선택적으로 치환된, 페닐, 피라졸릴, 이미다졸릴, 트라이아졸릴, 피리디닐, 피리미디닐, 인돌릴, 벤조피라지닐, 벤조이미다졸릴, 벤조이미다졸로닐, 피롤로피리디닐, 피롤로피리미디닐, 피라졸로피리디닐, 피라졸로피리미디닐, 인다졸릴, 인돌리노닐, 나프티리디닐, 퀴놀리닐, 퀴놀리노닐, 다이하이드로퀴놀리노닐, 옥소-다이하이드로퀴놀리노닐, 이소퀴놀리닐, 이소퀴놀리노닐, 다이하이드로이소퀴노닐 또는 옥소-다이하이드로이소퀴노닐인
   화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
4. 제 3 항에 있어서,
   R¹이 이소프로필 또는 t-부틸이고;
   R²가 수소인
   화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
5. 제 4 항에 있어서,
   R⁴가 1 또는 2개의 메틸, 클로로 또는 플루오로로 각각 선택적으로 치환된, 인다졸릴, 벤조이미다졸릴, 1-옥소-1,2-다이하이드로이소퀴놀리닐, 1H-피롤로[3,2-b]피리디닐, 2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸릴, 1H-피라졸릴페닐, 1H-피라졸릴피리디닐 또는 1H-이미다졸릴페닐인
   화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
6. 1-이소프로필-1'-(1-옥소-1,2-다이하이드로이소퀴놀린-6-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1-이소프로필-1'-(1H-피롤로[3,2-b]피리딘-6-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1-(3차-부틸)-1'-(2-메틸-3H-벤조[d]이미다졸-5-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1-(3차-부틸)-1'-(1H-피롤로[3,2-b]피리딘-6-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1-(3차-부틸)-1'-(1H-인다졸-5-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1-(3차-부틸)-1'-(2-옥소-2,3-다이하이드로드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1-이소프로필-1'-(2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1'-(7-플루오로-1H-인다졸-5-카보닐)-1-이소프로필-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1-이소프로필-1'-(1-메틸-2-옥소-2,3-다이하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-5-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1'-(7-클로로-2-메틸-3H-벤조[d]이미다졸-5-카보닐)-1-이소프로필-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1'-(1H-인다졸-6-카보닐)-1-이소프로필-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1-이소프로필-1'-(3-(1H-피라졸-4-일)벤조일)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1-이소프로필-1'-(2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1'-(1H-인다졸-5-카보닐)-1-이소프로필-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1'-(1H-인다졸-5-카보닐)-1-이소프로필-3-메틸-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1-(3차-부틸)-1'-(2-(1H-피라졸-3-일)피리딘-4-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1-(3차-부틸)-1'-(3-(1H-피라졸-3-일)벤조일)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1-이소프로필-1'-(1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1-(3차-부틸)-1'-(4-(1H-이미다졸-2-일)벤조일)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1-(3차-부틸)-1'-(3-(1H-이미다졸-2-일)벤조일)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 및
   1-(3차-부틸)-1'-(1H-인다졸-6-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온
   으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
7. 제 6 항에 있어서,
   1-이소프로필-1'-(2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-카보닐)-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온;
   1'-(1H-인다졸-6-카보닐)-1-이소프로필-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온; 및
   1'-(1H-인다졸-5-카보닐)-1-이소프로필-4,6-다이하이드로스피로[인다졸-5,4'-피페리딘]-7(1H)-온
   으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
8. 치료 효과량의 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 약학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체를 포함하는 약학 조성물.
9. 제 8 항에 있어서,
   하나 이상의 추가적인 당뇨병 치료제를 추가로 포함하는 약학 조성물.
10. 제 9 항에 있어서,
    당뇨병 치료제가 메트포민, 아세토헥스아마이드, 클로로프로프아마이드, 다이아비네스, 글리벤클아마이드, 글리피자이드, 글리부라이드, 글리메피라이드, 글리클아자이드, 글리펜타이드, 글리퀴돈, 글리솔아마이드, 톨라즈아마이드, 톨부트아마이드, 텐다미스타트, 트레스타틴, 아카보스, 아디포신, 카미글리보스, 에미글리테이트, 미글리톨, 보글리보스, 프라디미신-Q, 살보스타틴, 발라글리타존, 시글리타존, 다르글리타존, 엔글리타존, 이사글리타존, 피오글리타존, 로시글리타존, 트로글리타존, 엑센딘-3, 엑센딘-4, 트로더스쿠에민, 레세르바트롤, 하이르티오살 추출물, 시타글립틴, 빌다글립틴, 알로글립틴 및 삭사글립틴으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약학 조성물.
11. 치료 효과량의 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서 제 2형 당뇨병 또는 당뇨병-연관된 질병의 진행 또는 발병의 치료 또는 지연 방법.
12. 치료 효과량의 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서 비알콜성 지방 간 질환(NAFLD) 또는 간 인슐린 내성의 치료 방법.
13. 제 8 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물을 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서 제 2형 당뇨병 또는 당뇨병-연관된 질환의 진행 및 발병의 치료 또는 지연 방법.
14. 제 13 항에 있어서,
    제 2형 당뇨병 및 당뇨병-연관된 질환의 진행 또는 발병이 지연되는 방법.
15. 제 8 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물을 이러한 치료를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서 비알콜성 지방 간 질환(NAFLD) 또는 간 인슐린 내성의 치료 방법.
    
    
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