KR20120056612A - Ｈｍｇ１７ 유전자 또는 그 발현 단백질, 또는 상기 유전자 발현 감소에 의해 조절되는 단백질을 포함하는 방사선 민감성 마커 - Google Patents

Abstract

본 발명은 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 또는 상기 유전자 발현 감소에 의해 조절되는 단백질을 포함하는 방사선 민감성 마커 및 이의 의학적 용도에 관한 것으로, HMG17 유전자의 발현양이 감소할 때 세포의 방사선 민감성이 증가하여 더 많은 세포가 죽으며, 이러한 세포 사멸 증가의 원인으로 HMG17 유전자의 발현양 감소에 따라 Chk2 및 p-ATM의 발현양이 감소함을 밝혀냄으로써 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 상기 HMG17 유전자 발현 감소에 의해 발현이 감소되는 단백질인 Chk2 및 p-ATM을 방사선 민감성을 평가하는 마커로서 이용함과 동시에 이들의 억제제를 이용하여 방사선 민감성 증진용 조성물을 개발할 수 있다. 나아가 HMG17, Chk2 또는 p-ATM의 발현을 감소시킨 상태에서 방사선 치료를 병용함으로써 암세포의 방사선에 대한 민감도를 증가시켜 암세포 성장을 억제할 수 있으므로 폐암 또는 골육종 등과 같은 다양한 암질환에 있어서 방사선 치료효과를 증진시킬 수 있다.

Description

ＨＭＧ１７ 유전자 또는 그 발현 단백질, 또는 상기 유전자 발현 감소에 의해 조절되는 단백질을 포함하는 방사선 민감성 마커{Radiation sensitive marker comprising HMG17 gene or expression protein thereof, or protein regulated by expression-decreased HMG17 gene}

본 발명은 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 또는 상기 HMG17 유전자 발현 감소에 의해 발현이 조절되는 단백질을 포함하는 방사선 민감성 마커 및 이의 의학적 용도에 관한 것이다.

암의 치료법은 수술, 방사선 치료법 및 화학요법으로 크게 나눌 수 있다. 상기 치료법으로 50% 정도의 완치율을 나타내는데, 현재 암 환자 중 국내의 경우 약 35%, 미국의 경우 약 50% 정도가 방사선 치료를 받고 있으며, 국내에서 방사선 치료를 받는 암환자의 수가 매년 증가하고 있는 추세여서 암치료에 있어 방사선 치료의 중요성 또한 증가하고 있다.

방사선 치료는 현재 다양한 종류의 암에 필수적인 치료 방법으로 알려져 있으나, 암세포의 방사선 내성 획득, 고선량 방사선 치료시 정상 조직의 손상 등이 치료의 효율을 떨어뜨려 방사선 치료의 문제점으로 대두되어 왔다.

따라서, 이러한 방사선 치료의 효율을 증대시키기 위한 증진제에 관한 연구들이 계속 진행되고 있는 실정이며, 다양한 체내 2차 신호전달물질들을 자극하는 세포사멸촉진제나 암세포 특이 수용체를 자극하여 세포사멸을 일으키는 물질, 세포주기 교란물질, 전사인자 억제물질 등을 대상으로 하여 연구를 하고 있다.

현재 항암제로 알려진 탁솔(Taxol)과 5-FU(5-fluorouracil) 등이 방사선치료시 병용투여를 통하여 방사선 치료 효율을 증진시키는 것으로 알려져 있다.

그러나, 상기와 같이 방사선치료 효과를 증진시키기 위해 사용되는 항암제들을 방사선 치료와 병용할 때, 항암제의 독성이 방사선 치료시 나타나는 부작용, 즉, 방사선 치료부위의 염증, 위장장애, 오심, 구토, 설사 등과 복합적으로 나타날 수 있기 때문에 사용에 제한이 있다는 단점이 있다.

방사선 치료의 효과를 최대화시켜 다양한 암 질환을 효과적으로 치료하기 위해서 상기 문제점이 해결되어 부작용이 최소화된 방사선 민감제의 개발이 요구되고 있다.

한편, HMG-17은 크로마틴 관련 고이동성군 단백질(chromatin-associated high mobility group protein)로서, HMGN 패밀리의 일원이며, HMGN 단백질은 핵 및 세포질에서 발현되며 뉴클레오솜 코어 입자(nucleosome core particle)에 결합하여 크로마틴 구조, 히스톤 변형 및 전사 속도를 조절하는 것으로 알려져 있다(Biochem. Sci. 2001; 25: 431-437; EMBO J. 2005; 24: 3038-3048; Mol. Cell. Biol. 1995; 15: 6663-6669). 또한, DNA 손상이 일어났을 때 HMGN 단백질은 크로마틴에 결합하여 크로마틴을 풀어줌으로써 손상 부위에 ATM과 같은 DNA 손상 반응 인자가 결합할 수 있도록 하여 DNA 손상에 따른 이후 신호전달이 일어나도록 하는 것으로 밝혀진 바 있다.

이에, 본 발명자는 HMG17 유전자의 발현양이 감소할 때 세포의 방사선 민감성이 증가하여 더 많은 세포가 죽으며, 이러한 세포 사멸 증가의 원인으로 HMG17 유전자의 발현양 감소에 따라 Chk2 및 p-ATM의 발현양이 감소함을 밝혀냄으로써 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 상기 HMG17 유전자 발현 감소에 의해 발현이 감소되는 단백질인 Chk2 및 인산화-ATM(p-ATM)을 방사선 민감성을 평가하는 마커로서 이용함과 동시에 이들의 억제제를 이용하여 방사선 민감성 증진용 조성물을 개발할 수 있다는 점을 발견함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 상기 HMG17 유전자의 발현 감소에 따라 발현이 조절되는 단백질인 Chk2 및 p-ATM을 포함하는 방사선 민감성 마커를 제공하는 데에 있다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 상기 HMG17 유전자의 발현 감소에 따라 발현이 조절되는 단백질인 Chk2 및 p-ATM을 포함하는 방사선 민감성 진단키트를 제공하는 데에 있다.

또한, 본 발명의 또다른 목적은 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 상기 HMG17 유전자의 발현 감소에 따라 발현이 조절되는 단백질인 Chk2 및 p-ATM으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 억제제를 포함하는 방사선 민감성 증진용 조성물을 제공하는 데에 있다.

또한, 본 발명의 또다른 목적은 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 상기 HMG17 유전자의 발현 감소에 따라 발현이 조절되는 단백질인 Chk2 및 p-ATM으로 이루어진 군에서 선택된 방사선 민감성 마커를 이용한 방사선 민감성 증진용 물질의 스크리닝 방법을 제공하는 데에 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 및 상기 HMG17 유전자의 발현 감소에 따라 발현이 조절되는 단백질로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상을 포함하는 방사선 민감성 마커를 제공한다.

상기 HMG17 유전자의 발현 감소에 따라 조절되는 단백질은 HMG17 유전자의 발현 감소에 따라 발현이 감소되는 단백질로서, Chk2(서열번호 2) 및 p-ATM(ATM: 서열번호 3)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상을 포함할 수 있다.

즉, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 상기 HMG17 유전자 발현 감소에 의해 발현이 감소되는 단백질인 Chk2 및 p-ATM으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상을 포함하는 방사선 민감성 마커를 제공한다.

또한, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 상기 HMG17 유전자 발현 감소에 의해 발현이 감소되는 단백질인 Chk2 및 p-ATM으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상을 포함하는 방사선 민감성 진단키트를 제공한다.

본 발명에 따르면, 사람 폐암 세포주 또는 사람 골육종 세포주에 HMG17 shRNA와 같은 HMG17 억제제를 처리하여 HMG17의 발현을 감소시킴에 따라 방사선 민감도가 증가하여 더 많은 암세포가 죽는 것을 확인하였다. 이러한 세포 사멸 증가의 원인으로 세포 주기 체크포인트의 결함과 비정상적인 방사선 유래 DNA 손상 신호 전달을 확인하였고, 특히 HMG17의 발현을 감소시킴에 따라 Chk2 및 p-ATM의 발현이 감소하는 것을 관찰함으로써 이들을 HMG17 유전자 발현 감소에 따른 방사선 민감성 마커로서 활용할 수 있다.

본 발명의 진단키트는 HMG17 유전자의 센스 및 안티센스 프라이머를 포함하거나, HMG17 유전자에 상보적인 프로브를 포함하거나, HMG17, Chk2 또는 p-ATM 단백질에 특이적인 항체를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 HMG17 유전자를 포함하는 방사선 민감성 진단용 마이크로어레이를 제공한다.

본 발명에서 "진단"은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 진단은 폐암세포 또는 골육종세포 등과 같은 암세포에서 방사선 치료에 대한 민감 여부를 확인하는 것이다. 하나의 양태로서, 본 발명은 개체로부터 얻어진 생물학적 샘플로부터 HMG17 유전자의 mRNA 발현 수준 또는 HMG17, Chk2 또는 p-ATM 단백질의 발현 수준을 측정하고, 이를 정상대조군 샘플의 발현 수준과 비교하여 암질환에 대한 방사선 치료 시 방사선 민감 여부를 진단할 수 있다.

본 발명에서 "mRNA 발현 수준 측정"이란 방사선 민감도를 진단하기 위하여 생물학적 샘플에서 HMG17 유전자의 mRNA 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로 mRNA의 양을 측정한다. 이를 위한 분석 방법으로는 RT-PCR, 경쟁적 RT-PCR(Competitive RT-PCR), 실시간 RT-PCR(Real-time RT-PCR), 노던 블롯팅(Northern blotting), DNA 칩 등이 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 검출 방법들을 통하여, 정상대조군에서의 mRNA 발현량과 개체로부터 얻어진 생물학적 샘플에서의 mRNA 발현량을 비교할 수 있고, HMG17 유전자에서 mRNA로의 유의한 발현양의 증가여부를 판단하여 암질환에 대한 방사선 치료 시 방사선 민감 여부를 진단할 수 있다. mRNA 발현 수준 측정은 바람직하게는, HMG17 유전자에 특이적인 프라이머를 이용하는 RT-PCR법을 이용할 수 있다. RT-PCR은 P. Seeburg(Cold Spring Harb Symp Quant Biol 1986, Pt 1:669-677)에 의해 RNA를 분석하는데 도입된 방법으로, mRNA를 역전사하여 얻어진 cDNA를 PCR로 증폭하여 분석한다. 이때 증폭 단계에서 HMG17 유전자에 특이적으로 제조된 프라이머 쌍을 사용하며, RT-PCR 후 전기영동하여 밴드 패턴과 밴드의 두께를 확인함으로써 HMG17 유전자의 mRNA 발현 여부와 발현 수준을 확인할 수 있고 이를 정상대조군과 비교함으로써, 방사선 민감 여부를 간편하게 진단할 수 있다.

본 발명의 "프라이머"는 짧은 자유 3말단 수산화기(free 3' hydroxyl group)를 가지는 핵산 서열로, 상보적인 주형과 염기쌍을 형성할 수 있고 주형 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 핵산 서열을 의미한다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응(즉, DNA 폴리머레이즈 또는 역전사효소)을 위한 시약 및 상이한 4가지 뉴클레오타이드 트리포스페이트의 존재 하에서 DNA 합성을 개시할 수 있다. 본 발명의 프라이머는, HMG17 유전자 특이적인 프라이머로 7개 내지 50개의 뉴클레오타이드 서열을 가진 센스 및 안티센스 핵산일 수 있고, DNA 합성의 개시점으로 작용하는 프라이머의 기본 성질을 변화시키지 않는 한, 추가의 특징을 혼입할 수 있다.

본 발명의 핵산 서열은 또한 검출 가능한 시그날을 직접적으로 또는 간접적으로 제공할 수 있는 표지를 이용하여 변형시킬 수 있다. 표지의 예로는 방사성 동위원소, 형광성 분자, 바이오틴 등이 있다.

본 발명에서 "단백질 발현수준 측정"이란 방사선 민감도를 진단하기 위하여 생물학적 샘플에서의 HMG17, Chk2 또는 p-ATM 단백질의 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로, HMG17, Chk2 또는 p-ATM 단백질에 대하여 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 단백질의 양을 확인할 수 있다.

단백질 발현수준 측정은 바람직하게는, ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)법을 이용할 수 있다. ELISA는 고체 지지체에 부착된 항원을 인지하는 표지된 항체를 이용하는 직접적 ELISA, 고체 지지체에 부착된 항원을 인지하는 항체의 복합체에서 포획 항체를 인지하는 표지된 항체를 이용하는 간접적 ELISA, 고체 지지체에 부착된 항체와 항원의 복합체에서 항원을 인지하는 표지된 또 다른 항체를 이용하는 직접적 샌드위치 ELISA, 고체 지지체에 부착된 항체와 항원의 복합체에서 항원을 인지하는 또 다른 항체와 반응시킨 후 이 항체를 인지하는 표지된 2차 항체를 이용하는 간접적 샌드위치 ELISA 등 다양한 ELISA 방법을 포함한다. 보다 바람직하게는, 고체 지지체에 항체를 부착시키고 시료를 반응시킨 후 항원-항체 복합체의 항원을 인지하는 표지된 항체를 부착시켜 효소적으로 발색시키거나 항원-항체 복합체의 항원을 인지하는 항체에 대해 표지된 2차 항체를 부착시켜 효소적으로 발색시키는 샌드위치 ELISA 방법에 의해서 검출할 수 있고, HMG17, Chk2 또는 p-ATM 단백질과 항체의 복합체 형성 정도를 확인하여, 방사선 민감 여부를 확인할 수 있다.

또한, 바람직하게는, HMG17, Chk2 또는 p-ATM 단백질에 대한 하나 이상의 항체를 이용한 웨스턴 블롯 분석을 이용할 수 있다. 샘플에서 전체 단백질을 분리하고, 이를 전기영동을 하여, 단백질을 크기에 따라 분리한 다음, 니트로셀룰로오즈 막으로 이동시켜 항체와 반응시킨다. 생성된 항원-항체 복합체의 양을 표지된 항체를 이용하여 확인하는 방법으로 HMG17, Chk2 또는 p-ATM 단백질의 양을 확인하여, 방사선 민감 여부를 확인할 수 있다.

상기 검출 방법은 정상대조군에서의 HMG17, Chk2 또는 p-ATM의 발현양과 생물학적 샘플에서의 이들의 발현양을 조사하는 방법으로 이루어질 수 있고, mRNA 또는 단백질 수준은 상기한 마커의 절대적(예: ㎍/㎖) 또는 상대적(예: 시그널의 상대 강도) 차이로 나타낼 수 있다.

본 발명에서 "항체"란 항원성 부위에 대해서 지시되는 특이적인 단백질 분자를 의미한다. 본 발명의 목적상, 항체는 HMG17, Chk2 또는 p-ATM 단백질에 대해 특이적으로 결합하는 항체를 의미하며, 다클론 항체, 단클론 항체 및 재조합 항체를 모두 포함하며, HMG17, Chk2 또는 p-ATM 단백질에 대한 항체는 당업계에 널리 공지된 기술을 이용하여 용이하게 제조할 수 있다. 본 발명의 항체는 당 분야에 공지된 통상의 방법에 따라 단클론 항체 또는 다클론 항체로서 제조할 수 있으며, 이러한 항체들을 이용하여 당 분야에 공지된 효소 면역측정법(enzyme linked immunosorbent assay; ELISA), 방사선면역 측정법(radioimmunoassay; RIA), 샌드위치 측정법(sandwich assay), 폴리아크릴 겔상의 웨스턴 블롯팅 또는 면역 블롯팅 등의 방법에 의해 생물학적 샘플 중에 HMG17, Chk2 또는 p-ATM 단백질이 발현되었는지를 확인함으로써 진단할 수 있다.

본 발명에 따른 마이크로어레이는 HMG17 유전자를 이용하여 당업계에서 통상적으로 사용되는 제조방법에 의하여 용이하게 제조될 수 있다.

또한, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 상기 HMG17 유전자 발현 감소에 의해 발현이 감소되는 단백질인 Chk2 및 p-ATM으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 억제제를 포함하는 방사선 민감성 증진용 조성물을 제공한다.

상기 억제제는 암세포의 방사선에 대한 민감도를 증진시킬 수 있으며, 상기 암세포는 폐암세포 또는 골육종세포 중에서 선택된 어느 하나일 수 있다.

상기 억제제로는 HMG17 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 안티센스 핵산 또는 작은 간섭 RNA(small interfering RNA)에서 선택된 어느 하나일 수 있으며, 또한 HMG17, Chk2 또는 p-ATM 단백질에 상보적으로 결합하는 화합물, 펩타이드 및 항체로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다.

일실시예로서, 본 발명의 안티센스 핵산을 세포 내로 도입시켜 암세포의 방사선 민감성을 증진시킬 수 있는데, 여기서 "도입"은 형질감염(transfection) 또는 형질도입(transduction)에 의해 외래 DNA를 세포로 유입시키는 것을 의미한다. 형질감염은 칼슘 포스페이트-DNA 공침전법, DEAE-덱스트란-매개 형질감염법, 폴리브렌-매개 형질감염법, 전기충격법, 미세주사법, 리포좀 융합법, 리포펙타민 및 원형질체 융합법 등의 당업계에 공지된 여러 방법에 의해 수행될 수 있다. 형질도입은 감염(infection)을 수단으로 하여 바이러스 또는 바이러스 벡터 입자를 사용하여 세포 내로 유전자를 전달시키는 것을 의미한다.

본 발명에서 "방사선 민감성 증진"이란 방사선을 이용한 질병 치료에 있어서, 방사선에 대한 세포의 민감성을 증진시키는 것을 의미한다. 이를 통해 방사선 치료 효율을 상승시킬 수 있는데, 특히, 암치료시 병행처리되면 암세포의 방사선 민감성이 증진되어 암세포의 살상 효과 및 증식 억제효과를 나타낼 수 있다.

본 발명의 방사선 민감성 증진용 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있으며, 담체와 함께 제제화될 수 있다.

본 발명에서 "약학적으로 허용가능한 담체"란 생물체를 자극하지 않고 투여 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 의미한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용되는 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.

본 발명의 방사선 민감성 증진용 조성물은 어떠한 제형으로도 적용가능하며, 경구용 또는 비경구용 제형으로 제조할 수 있으며, 투여의 용이성과 투여량의 균일화를 위해 단위 투여 형태로 제형화할 수 있다. 본 발명의 약학적 제형은 구강(oral), 직장(rectal), 비강(nasal), 국소(topical; 볼 및 혀 밑을 포함), 피하, 질(vaginal) 또는 비경구(parenteral; 근육내, 피하 및 정맥 내를 포함) 투여에 적당한 것 또는 흡입(inhalation) 또는 주입(insufflation)에 의한 투여에 적당한 형태를 포함한다.

상기 경구 투여용 제형으로는, 예를 들어 정제, 트로키제, 로렌지, 수용성 또는 유성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제로 제제화할 수 있다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제화하기 위해, 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제, 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕괴제, 스테아르산 마스네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유를 포함할 수 있으며, 캡슐제형의 경우 상기 언급한 물질 외에도 지방유와 같은 액체 담체를 더 함유할 수 있다.

또한, 상기 비경구 투여용 제형으로는, 피하주사, 정맥주사 또는 근육내 주사 등의 주사용 형태, 좌제 주입방식 또는 호흡기를 통하여 흡입이 가능하도록 하는 에어로졸제 등 스프레이용으로 제제화할 수 있다. 주사용 제형으로 제제화하기 위해서는 본 발명의 조성물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여용으로 제제화할 수 있다. 좌제로 주입하기 위해서는, 코코아버터 또는 다른 글리세라이드 등 통상의 좌약 베이스를 포함하는 좌약 또는 체료 관장제와 같은 직장투여용 조성물로 제제화할 수 있다. 에어로졸제 등의 스프레이용으로 제형화하는 경우, 수분산된 농축물 또는 습윤 분말이 분산되도록 추진제 등이 첨가제와 함께 배합될 수 있다.

또한, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 상기 HMG17 유전자 발현 감소에 의해 발현이 감소되는 단백질인 Chk2 및 p-ATM으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 억제제를 포함하는 방사선 민감성 증진용 조성물을 사용하여 암세포의 방사선 민감성을 증진시키는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명의 상기 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 암치료를 위한 방사선 요법을 제공한다.

본 발명에서 "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 예를 들어 안티센스 핵산 분자의 바이러스성 또는 비바이러스성 기술에 의한 운반을 포함한다. 본 발명의 조성물이 암세포 내로 도입되면, HMG17의 발현 수준을 낮추거나 활성을 저해함으로써, 방사선 민감성을 증진시키게 된다.

본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한, 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있으며, 구체적으로, 구강, 직장, 국소, 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 경피, 비측내, 흡입, 안구내 또는 피내경로를 통해 통상적인 방식으로 투여될 수 있다. 바람직하게는 해당 조직에 국소 투여한다.

본 발명의 암치료를 위한 방사선 요법은 본 발명의 방사선 민감성 증진용 조성물을 치료적 유효량으로 투여하는 것을 포함한다. 상기 치료적 유효량은 방사선에 대해 암세포 내의 종양의 민감성을 효과적으로 증진시키는 양을 의미한다. 적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 일이다. 특정 환자에 대한 구체적인 치료적 유효량은 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 경우에 따라 다른 제제가 사용되는지의 여부를 비롯한 구체적 조성물, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 및 조사되는 방사선량을 비롯한 다양한 인자와 의약 분야에 잘 알려진 유사 인자에 따라 다르게 적용하는 것이 바람직하다. 따라서 본 발명의 목적에 적합한 방사선 민감성 증진용 조성물의 유효량은 전술한 사항을 고려하여 결정하는 것이 바람직하다. 또한, 경우에 따라, 본 발명의 방사선 민감성 증진용 조성물과 함께 공지의 항암제를 병용 투여하여 방사선 치료 효과를 포함한 항암 효과를 증대시킬 수 있다.

또한, 본 발명은 생물학적 샘플에 임의의 화합물을 처리하는 단계; 상기 생물학적 샘플로부터 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 상기 HMG17 유전자 발현 감소에 의해 발현이 감소되는 단백질인 Chk2 및 p-ATM으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 발현 수준을 확인하는 단계; 및 상기 발현 수준을 임의의 화합물을 처리하지 않은 정상대조군에서의 동일 유전자 또는 단백질의 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는, 암세포에서 방사선에 대한 민감도를 증진시키는 화합물 스크리닝 방법을 제공한다.

본 발명에 따르면, HMG17 유전자의 발현양이 감소할 때 세포의 방사선 민감성이 증가하여 더 많은 세포가 죽으며, 이러한 세포 사멸 증가의 원인으로 HMG17 유전자의 발현양 감소에 따라 Chk2 및 p-ATM의 발현양이 감소함을 밝혀냄으로써 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 상기 HMG17 유전자 발현 감소에 의해 발현이 감소되는 단백질인 Chk2 및 p-ATM을 방사선 민감성을 평가하는 마커로서 이용함과 동시에 이들의 억제제를 이용하여 방사선 민감성 증진용 조성물을 개발할 수 있다. 특히, 상기 Chk2 및 p-ATM은 HMG17 발현이 감소된 암세포주에서의 방사선 민감성 평가에 유용하다. 나아가 HMG17, Chk2 또는 p-ATM의 발현을 감소시킨 상태에서 방사선 치료를 병용함으로써 암세포의 방사선에 대한 민감도를 증가시켜 암세포 성장을 억제할 수 있으므로 폐암 또는 골육종 등과 같은 다양한 암질환에 있어서 방사선 치료효과를 증진시킬 수 있다.

도 1은 HMG17의 발현 감소에 따른 방사선 민감도의 증가를 나타낸 것이고,
도 2는 HMG17의 발현 감소에 따른 방사선 조사 후 세포증식의 영향을 검토한 것이고,
도 3은 HMG17의 발현 감소에 따른 G2/M 체크포인트 변화를 나타낸 것이고,
도 4는 HMG17의 발현 감소에 따른 방사선 유래 DNA 손상 신호전달 변화를 나타낸 것이다.

이하, 하기 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 다만, 이러한 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 세포주 처리

사람 폐암 세포주인 NCI-H460 세포와 사람 골육종 세포주인 U2OS 세포를 24-well plate에 2×10⁴ 개씩 분주하여 37℃, 5% CO₂ 조건하에 24 시간 배양한 후, HMG17에 대한 shRNA 플라스미드와 대조군 shRNA 플라스미드를 포함한 렌티바이러스(Lentivirus)는 Santa Cruz 사에서 구입하여 (sc-37988-v) 이를 각각 감염시켰다. 감염 24 시간 후 배양액을 교체하여 48 시간 배양한 다음, 감염된 세포를 24-well plate에 4 - 8 well 씩 재분주하여 24 시간 배양하였다. 24 시간 후 2 μg/ml의 푸로마이신을 포함한 배양액으로 교체한 후 2 - 3일에 한번씩 배양액을 교체하여 살아남는 세포만을 선별하여 이후 실험에 사용하였다.

<실시예 2> HMG17의 발현 감소에 따른 방사선 민감도 변화 검토

HMG17의 발현 감소에 따라 세포의 방사선 민감도를 확인하기 위하여 집락형성 분석법(clonogenic assay)을 수행하였다. 즉, 60 mm 플레이트에 대조군 shRNA와 shHMG17을 발현시킨 H460 세포를 각각 100, 200, 500, 1000, 2000 개의 세포수로 분주한 후 24 시간 배양하였다. 24 시간 후 각 세포에 0, 1, 3, 4 Gy의 방사선을 조사한 다음 10-14일간 배양하였다. 적당한 크기의 콜로니가 형성되면 0.4%의 트립판 블루로 염색하고 콜로니 수를 측정하였다.

그 결과, 도 1과 같이 shHMG17 플라스미드를 이용하여 HMG17의 발현을 감소시킨 세포의 경우 대조군 세포에 비해 콜로니의 형성이 감소하는 것을 확인함으로써 HMG17의 발현이 감소한 세포가 대조군 세포에 비해 방사선 민감도가 증가하는 것을 알 수 있었다.

<실시예 3> HMG17의 발현 감소에 따른 방사선 조사 후 세포증식 변화 검토

HMG17의 발현이 감소하였을 때 방사선 조사 후 세포 증식 변화를 확인하고자 WST-1 분석을 수행하였다. 즉, 96-well plate에 대조군 shRNA와 shHMG17을 발현시킨 U2OS 세포와 H460 세포를 각각 1×10³ 개씩 분주하여 24 시간 배양하였다. 24 시간 배양 후 5 Gy의 방사선을 조사한 후 WST-1 시약을 1/10 부피 첨가하여 37℃에서 1 시간 반응시킨 다음 450 nm에서 흡광도를 측정하여 0 일로 정한 다음 1, 2, 4, 6 일 후 1/10 부피의 WST-1 시약을 첨가하여 450 nm의 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 도 2와 같이 U2OS와 H460 세포 모두 방사선을 조사하였을 경우 조사하지 않은 세포에 비해 세포의 증식이 감소함을 알 수 있었다. U2OS 세포의 경우에는 방사선을 조사한 세포나 조사하지 않은 세포 모두 HMG17의 발현이 감소한 세포의 증식이 더 활발함을 알 수 있었고 이들의 차이는 방사선 조사에는 크게 영향을 받지 않는 것으로 판단되었다. 그러나, H460 세포의 경우 HMG17의 발현을 억제시킨 세포가 U2OS 세포와 마찬가지로 대조군에 비해 더 많이 증식하지만 방사선을 조사하였을 때 조사하지 않았을 때 보다 증식의 차이가 감소한 것으로 보아 HMG17의 발현 억제가 방사선에 의한 세포 증식에의 영향은 세포주에 따라 차이가 있음을 알 수 있었다.

<실시예 4> HMG17의 발현 감소에 따른 G2/M 체크포인트 변화 검토

HMG17의 발현이 감소한 세포에 방사선을 조사하였을 경우 세포주기 체크포인트의 변화를 확인하고자 대조군 세포와 HMG17의 발현을 감소시킨 세포에 0.5 Gy의 방사선을 조사한 후 M phase 표지자인 세포내 Histone H3의 Ser10 인산화의 변화를 확인하였다. 즉, 60 mm 플레이트에 대조군 shRNA와 shHMG17을 발현시킨 H460 세포를 6×10⁵ 개의 세포수로 분주시킨 후 24 시간 배양하였다. 배양 후 0.5 Gy의 방사선을 조사한 다음 0, 0.5, 1, 2 시간째에 세포를 회수하여 90%의 차가운 메탄올로 고정시켰다. 고정시킨 세포는 1ㅧPBS로 수세한 후 FITC-conjugated p-Histone H3(Ser10) 항체를 1/100 희석하여 1 시간 반응시킨 다음 25 μg/ml의 RNase A와 25 μg/ml의 프로피디움 아이오다이드를 첨가하고 FACS 분석을 수행하였다.

그 결과, 도 3과 같이 방사선 조사 후 30 분이 경과하였을 때에는 대조군과 HMG17을 감소시킨 세포 모두 방사선을 조사하지 않은 세포에 비해 phospho-H3(Ser10)을 발현하는 세포가 약 50% 가량 감소한 것을 확인할 수 있었으나, 1 시간과 2 시간이 경과한 후에는 HMG17의 발현을 감소시킨 세포의 phospho-H3(Ser10)의 발현 감소가 대조군에 비해 적음을 확인함으로써 HMG17의 발현 감소가 방사선을 조사하였을 때 일어나는 G2/M arrest가 적게 일어나게 함을 알 수 있었다.

<실시예 5> HMG17의 발현 감소에 따른 방사선 유래 DNA 손상 신호전달 변화 검토

HMG17의 발현 감소가 방사선에 의한 신호전달에 주는 영향을 확인하기 위하여 대조군 세포와 HMG17의 발현을 감소시킨 세포에 2 Gy와 5 Gy의 방사선을 조사한 후 1 시간, 4 시간째에서 DNA 손상관련 신호를 확인하였다. 즉, 대조군 shRNA와 shHMG17을 발현시킨 H460 세포를 1×10⁶ 개의 세포수로 100 mm 플레이트에 분주하여 24 시간 배양하였다. 배양한 세포를 2 Gy와 5 Gy의 방사선을 조사한 다음 1 시간 과 4 시간 후에 차가운 1ㅧPBS로 두 번 수세한 다음 플레이트에서 긁어내어 세포를 모았다. 모은 세포에 RIPA 완충액 (50 mM Tris-Cl (pH8.0), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS, 0.1% 데옥시콜레이트, 프로테아제 억제제, 포스파타아제 억제제)로 세포를 용해하여 세포내 단백질을 추출하였다. 추출한 단백질은 브래드포드(Bradford) 방법으로 정량하여 웨스턴 블롯(Western blot) 분석을 통하여 단백질의 발현 정도를 확인하였다.

그 결과, 도 4와 같이 대체적으로 대조군과 HMG17 발현을 감소시킨 세포에서의 DNA 손상관련 단백질의 변화는 크게 다르지 않았다. 그러나 5 Gy의 방사선을 조사하였을 경우 Chk2의 인산화가 1 시간째에 감소하였고, ATM과 p53의 인산화는 4 시간째에서 대조군에 비해 줄어듦을 알 수 있었다. 또한 Chk2의 경우 방사선을 조사하지 않은 경우에서 대조군에 비해 줄어들었으며, 5 Gy를 주었을 때 Chk2의 감소가 더 커짐을 확인할 수 있었고, 이로써 HMG17의 감소가 Chk2, p53, ATM 등의 DNA 손상 신호전달에 영향을 줌으로서 세포의 방사선 감수성에 영향을 줄 것으로 판단하였다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

<110> KOREA INSTITUTE OF RADIOLOGICAL & MEDICAL SCIENCES <120> Radiation sensitive marker comprising HMG17 gene or expression protein thereof, or protein regulated by expression-decreased HMG17 gene <130> DP-2010-0589 <160> 3 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 90 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Pro Lys Arg Lys Ala Glu Gly Asp Ala Lys Gly Asp Lys Ala Lys 1 5 10 15 Val Lys Asp Glu Pro Gln Arg Arg Ser Ala Arg Leu Ser Ala Lys Pro 20 25 30 Ala Pro Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Lys Lys Ala Pro Ala Lys Lys 35 40 45 Gly Glu Lys Val Pro Lys Gly Lys Lys Gly Lys Ala Asp Ala Gly Lys 50 55 60 Glu Gly Asn Asn Pro Ala Glu Asn Gly Asp Ala Lys Thr Asp Gln Ala 65 70 75 80 Gln Lys Ala Glu Gly Ala Gly Asp Ala Lys 85 90 <210> 2 <211> 543 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Ser Arg Glu Ser Asp Val Glu Ala Gln Gln Ser His Gly Ser Ser 1 5 10 15 Ala Cys Ser Gln Pro His Gly Ser Val Thr Gln Ser Gln Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Gln Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ser Ser Thr Ser Thr Met Pro Asn 35 40 45 Ser Ser Gln Ser Ser His Ser Ser Ser Gly Thr Leu Ser Ser Leu Glu 50 55 60 Thr Val Ser Thr Gln Glu Leu Tyr Ser Ile Pro Glu Asp Gln Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Gln Glu Pro Glu Glu Pro Thr Pro Ala Pro Trp Ala Arg Leu 85 90 95 Trp Ala Leu Gln Asp Gly Phe Ala Asn Leu Glu Cys Val Asn Asp Asn 100 105 110 Tyr Trp Phe Gly Arg Asp Lys Ser Cys Glu Tyr Cys Phe Asp Glu Pro 115 120 125 Leu Leu Lys Arg Thr Asp Lys Tyr Arg Thr Tyr Ser Lys Lys His Phe 130 135 140 Arg Ile Phe Arg Glu Val Gly Pro Lys Asn Ser Tyr Ile Ala Tyr Ile 145 150 155 160 Glu Asp His Ser Gly Asn Gly Thr Phe Val Asn Thr Glu Leu Val Gly 165 170 175 Lys Gly Lys Arg Arg Pro Leu Asn Asn Asn Ser Glu Ile Ala Leu Ser 180 185 190 Leu Ser Arg Asn Lys Val Phe Val Phe Phe Asp Leu Thr Val Asp Asp 195 200 205 Gln Ser Val Tyr Pro Lys Ala Leu Arg Asp Glu Tyr Ile Met Ser Lys 210 215 220 Thr Leu Gly Ser Gly Ala Cys Gly Glu Val Lys Leu Ala Phe Glu Arg 225 230 235 240 Lys Thr Cys Lys Lys Val Ala Ile Lys Ile Ile Ser Lys Arg Lys Phe 245 250 255 Ala Ile Gly Ser Ala Arg Glu Ala Asp Pro Ala Leu Asn Val Glu Thr 260 265 270 Glu Ile Glu Ile Leu Lys Lys Leu Asn His Pro Cys Ile Ile Lys Ile 275 280 285 Lys Asn Phe Phe Asp Ala Glu Asp Tyr Tyr Ile Val Leu Glu Leu Met 290 295 300 Glu Gly Gly Glu Leu Phe Asp Lys Val Val Gly Asn Lys Arg Leu Lys 305 310 315 320 Glu Ala Thr Cys Lys Leu Tyr Phe Tyr Gln Met Leu Leu Ala Val Gln 325 330 335 Tyr Leu His Glu Asn Gly Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Pro Glu Asn 340 345 350 Val Leu Leu Ser Ser Gln Glu Glu Asp Cys Leu Ile Lys Ile Thr Asp 355 360 365 Phe Gly His Ser Lys Ile Leu Gly Glu Thr Ser Leu Met Arg Thr Leu 370 375 380 Cys Gly Thr Pro Thr Tyr Leu Ala Pro Glu Val Leu Val Ser Val Gly 385 390 395 400 Thr Ala Gly Tyr Asn Arg Ala Val Asp Cys Trp Ser Leu Gly Val Ile 405 410 415 Leu Phe Ile Cys Leu Ser Gly Tyr Pro Pro Phe Ser Glu His Arg Thr 420 425 430 Gln Val Ser Leu Lys Asp Gln Ile Thr Ser Gly Lys Tyr Asn Phe Ile 435 440 445 Pro Glu Val Trp Ala Glu Val Ser Glu Lys Ala Leu Asp Leu Val Lys 450 455 460 Lys Leu Leu Val Val 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115 120 125 Asp Ser Ser Asn Gly Ala Ile Tyr Gly Ala Asp Cys Ser Asn Ile Leu 130 135 140 Leu Lys Asp Ile Leu Ser Val Arg Lys Tyr Trp Cys Glu Ile Ser Gln 145 150 155 160 Gln Gln Trp Leu Glu Leu Phe Ser Val Tyr Phe Arg Leu Tyr Leu Lys 165 170 175 Pro Ser Gln Asp Val His Arg Val Leu Val Ala Arg Ile Ile His Ala 180 185 190 Val Thr Lys Gly Cys Cys Ser Gln Thr Asp Gly Leu Asn Ser Lys Phe 195 200 205 Leu Asp Phe Phe Ser Lys Ala Ile Gln Cys Ala Arg Gln Glu Lys Ser 210 215 220 Ser Ser Gly Leu Asn His Ile Leu Ala Ala Leu Thr Ile Phe Leu Lys 225 230 235 240 Thr Leu Ala Val Asn Phe Arg Ile Arg Val Cys Glu Leu Gly Asp Glu 245 250 255 Ile Leu Pro Thr Leu Leu Tyr Ile Trp Thr Gln His Arg Leu Asn Asp 260 265 270 Ser Leu Lys Glu Val Ile Ile Glu Leu Phe Gln Leu Gln Ile Tyr Ile 275 280 285 His His Pro Lys Gly Ala Lys Thr Gln Glu Lys Gly Ala Tyr Glu Ser 290 295 300 Thr Lys Trp Arg Ser Ile Leu Tyr Asn Leu Tyr Asp Leu Leu Val Asn 305 310 315 320 Glu Ile Ser His Ile Gly Ser Arg Gly Lys Tyr Ser Ser Gly Phe Arg 325 330 335 Asn Ile Ala Val Lys Glu Asn Leu Ile Glu Leu Met Ala Asp Ile Cys 340 345 350 His Gln Val Phe Asn Glu Asp Thr Arg Ser Leu Glu Ile Ser Gln Ser 355 360 365 Tyr Thr Thr Thr Gln Arg Glu Ser Ser Asp Tyr Ser Val Pro Cys Lys 370 375 380 Arg Lys Lys Ile Glu Leu Gly Trp Glu Val Ile Lys Asp His Leu Gln 385 390 395 400 Lys Ser Gln Asn Asp Phe Asp Leu Val Pro Trp Leu Gln Ile Ala Thr 405 410 415 Gln Leu Ile Ser Lys Tyr Pro Ala Ser Leu Pro Asn Cys Glu Leu Ser 420 425 430 Pro Leu Leu Met Ile Leu Ser Gln Leu Leu Pro Gln Gln Arg His Gly 435 440 445 Glu Arg Thr Pro Tyr Val Leu Arg Cys Leu Thr Glu Val Ala Leu Cys 450 455 460 Gln Asp Lys Arg Ser Asn Leu Glu Ser Ser Gln Lys Ser Asp Leu Leu 465 470 475 480 Lys Leu Trp Asn Lys Ile Trp Cys Ile Thr Phe Arg Gly Ile Ser Ser 485 490 495 Glu Gln Ile Gln Ala Glu Asn Phe Gly Leu Leu Gly Ala Ile Ile Gln 500 505 510 Gly Ser Leu Val Glu Val Asp Arg Glu Phe Trp Lys Leu Phe Thr Gly 515 520 525 Ser Ala Cys Arg Pro Ser Cys Pro Ala Val Cys Cys Leu Thr Leu Ala 530 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745 750 Gln Cys Ala Gly Glu Ser Ile Thr Leu Phe Lys Asn Lys Thr Asn Glu 755 760 765 Glu Phe Arg Ile Gly Ser Leu Arg Asn Met Met Gln Leu Cys Thr Arg 770 775 780 Cys Leu Ser Asn Cys Thr Lys Lys Ser Pro Asn Lys Ile Ala Ser Gly 785 790 795 800 Phe Phe Leu Arg Leu Leu Thr Ser Lys Leu Met Asn Asp Ile Ala Asp 805 810 815 Ile Cys Lys Ser Leu Ala Ser Phe Ile Lys Lys Pro Phe Asp Arg Gly 820 825 830 Glu Val Glu Ser Met Glu Asp Asp Thr Asn Gly Asn Leu Met Glu Val 835 840 845 Glu Asp Gln Ser Ser Met Asn Leu Phe Asn Asp Tyr Pro Asp Ser Ser 850 855 860 Val Ser Asp Ala Asn Glu Pro Gly Glu Ser Gln Ser Thr Ile Gly Ala 865 870 875 880 Ile Asn Pro Leu Ala Glu Glu Tyr Leu Ser Lys Gln Asp Leu Leu Phe 885 890 895 Leu Asp Met Leu Lys Phe Leu Cys Leu Cys Val Thr Thr Ala Gln Thr 900 905 910 Asn Thr Val Ser Phe Arg Ala Ala Asp Ile Arg Arg Lys Leu Leu Met 915 920 925 Leu Ile Asp Ser Ser Thr Leu Glu Pro Thr Lys Ser Leu His Leu His 930 935 940 Met Tyr Leu Met Leu Leu Lys Glu Leu Pro Gly Glu Glu Tyr Pro Leu 945 950 955 960 Pro Met Glu Asp Val Leu Glu Leu Leu Lys Pro Leu Ser Asn Val Cys 965 970 975 Ser Leu Tyr Arg Arg Asp Gln Asp Val Cys Lys Thr Ile Leu Asn His 980 985 990 Val Leu His Val Val Lys Asn Leu Gly Gln Ser Asn Met Asp Ser Glu 995 1000 1005 Asn Thr Arg Asp Ala Gln Gly Gln Phe Leu Thr Val Ile Gly Ala Phe 1010 1015 1020 Trp His Leu Thr Lys Glu Arg Lys Tyr Ile Phe Ser Val Arg Met Ala 1025 1030 1035 1040 Leu Val Asn Cys Leu Lys Thr Leu Leu Glu Ala Asp Pro Tyr Ser Lys 1045 1050 1055 Trp Ala Ile Leu Asn Val Met Gly Lys Asp Phe Pro Val Asn Glu Val 1060 1065 1070 Phe Thr Gln Phe Leu Ala Asp Asn His His Gln Val Arg Met Leu Ala 1075 1080 1085 Ala Glu Ser Ile Asn Arg Leu Phe Gln Asp Thr Lys Gly Asp Ser Ser 1090 1095 1100 Arg Leu Leu Lys Ala Leu Pro Leu Lys Leu Gln Gln Thr Ala Phe Glu 1105 1110 1115 1120 Asn Ala Tyr Leu Lys Ala Gln Glu Gly Met Arg Glu Met Ser His Ser 1125 1130 1135 Ala Glu Asn Pro Glu Thr Leu Asp Glu Ile Tyr Asn Arg Lys Ser Val 1140 1145 1150 Leu Leu Thr Leu Ile Ala Val Val Leu Ser 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1360 Ser Thr Asp Leu Cys Asp Phe Ser Gly Asp Leu Asp Pro Ala Pro Asn 1365 1370 1375 Pro Pro His Phe Pro Ser His Val Ile Lys Ala Thr Phe Ala Tyr Ile 1380 1385 1390 Ser Asn Cys His Lys Thr Lys Leu Lys Ser Ile Leu Glu Ile Leu Ser 1395 1400 1405 Lys Ser Pro Asp Ser Tyr Gln Lys Ile Leu Leu Ala Ile Cys Glu Gln 1410 1415 1420 Ala Ala Glu Thr Asn Asn Val Tyr Lys Lys His Arg Ile Leu Lys Ile 1425 1430 1435 1440 Tyr His Leu Phe Val Ser Leu Leu Leu Lys Asp Ile Lys Ser Gly Leu 1445 1450 1455 Gly Gly Ala Trp Ala Phe Val Leu Arg Asp Val Ile Tyr Thr Leu Ile 1460 1465 1470 His Tyr Ile Asn Gln Arg Pro Ser Cys Ile Met Asp Val Ser Leu Arg 1475 1480 1485 Ser Phe Ser Leu Cys Cys Asp Leu Leu Ser Gln Val Cys Gln Thr Ala 1490 1495 1500 Val Thr Tyr Cys Lys Asp Ala Leu Glu Asn His Leu His Val Ile Val 1505 1510 1515 1520 Gly Thr Leu Ile Pro Leu Val Tyr Glu Gln Val Glu Val Gln Lys Gln 1525 1530 1535 Val Leu Asp Leu Leu Lys Tyr Leu Val Ile Asp Asn Lys Asp Asn Glu 1540 1545 1550 Asn Leu Tyr Ile Thr Ile Lys Leu Leu 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1760 Ala Tyr Leu Gln Pro Phe Arg Thr Ser Arg Lys Lys Phe Leu Glu Val 1765 1770 1775 Pro Arg Phe Asp Lys Glu Asn Pro Phe Glu Gly Leu Asp Asp Ile Asn 1780 1785 1790 Leu Trp Ile Pro Leu Ser Glu Asn His Asp Ile Trp Ile Lys Thr Leu 1795 1800 1805 Thr Cys Ala Phe Leu Asp Ser Gly Gly Thr Lys Cys Glu Ile Leu Gln 1810 1815 1820 Leu Leu Lys Pro Met Cys Glu Val Lys Thr Asp Phe Cys Gln Thr Val 1825 1830 1835 1840 Leu Pro Tyr Leu Ile His Asp Ile Leu Leu Gln Asp Thr Asn Glu Ser 1845 1850 1855 Trp Arg Asn Leu Leu Ser Thr His Val Gln Gly Phe Phe Thr Ser Cys 1860 1865 1870 Leu Arg His Phe Ser Gln Thr Ser Arg Ser Thr Thr Pro Ala Asn Leu 1875 1880 1885 Asp Ser Glu Ser Glu His Phe Phe Arg Cys Cys Leu Asp Lys Lys Ser 1890 1895 1900 Gln Arg Thr Met Leu Ala Val Val Asp Tyr Met Arg Arg Gln Lys Arg 1905 1910 1915 1920 Pro Ser Ser Gly Thr Ile Phe Asn Asp Ala Phe Trp Leu Asp Leu Asn 1925 1930 1935 Tyr Leu Glu Val Ala Lys Val Ala Gln Ser Cys Ala Ala His Phe Thr 1940 1945 1950 Ala Leu Leu Tyr Ala Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Lys Ser Met Asp Asp 1955 1960 1965 Gln Glu Lys Arg Ser Leu Ala Phe Glu Glu Gly Ser Gln Ser Thr Thr 1970 1975 1980 Ile Ser Ser Leu Ser Glu Lys Ser Lys Glu Glu Thr Gly Ile Ser Leu 1985 1990 1995 2000 Gln Asp Leu Leu Leu Glu Ile Tyr Arg Ser Ile Gly Glu Pro Asp Ser 2005 2010 2015 Leu Tyr Gly Cys Gly Gly Gly Lys Met Leu Gln Pro Ile Thr Arg Leu 2020 2025 2030 Arg Thr Tyr Glu His Glu Ala Met Trp Gly Lys Ala Leu Val Thr Tyr 2035 2040 2045 Asp Leu Glu Thr Ala Ile Pro Ser Ser Thr Arg Gln Ala Gly Ile Ile 2050 2055 2060 Gln Ala Leu Gln Asn Leu Gly Leu Cys His Ile Leu Ser Val Tyr Leu 2065 2070 2075 2080 Lys Gly Leu Asp Tyr Glu Asn Lys Asp Trp Cys Pro Glu Leu Glu Glu 2085 2090 2095 Leu His Tyr Gln Ala Ala Trp Arg Asn Met Gln Trp Asp His Cys Thr 2100 2105 2110 Ser Val Ser Lys Glu Val Glu Gly Thr Ser Tyr His Glu Ser Leu Tyr 2115 2120 2125 Asn Ala Leu Gln Ser Leu Arg Asp Arg Glu Phe Ser Thr Phe Tyr Glu 2130 2135 2140 Ser Leu Lys Tyr Ala Arg Val Lys Glu Val Glu Glu Met Cys Lys Arg 2145 2150 2155 2160 Ser Leu Glu Ser Val Tyr Ser Leu Tyr Pro Thr Leu Ser Arg Leu Gln 2165 2170 2175 Ala Ile Gly Glu Leu Glu Ser Ile Gly Glu Leu Phe Ser Arg Ser Val 2180 2185 2190 Thr His Arg Gln Leu Ser Glu Val Tyr Ile Lys Trp Gln Lys His Ser 2195 2200 2205 Gln Leu Leu Lys Asp Ser Asp Phe Ser Phe Gln Glu Pro Ile Met Ala 2210 2215 2220 Leu Arg Thr Val Ile Leu Glu Ile Leu Met Glu Lys Glu Met Asp Asn 2225 2230 2235 2240 Ser Gln Arg Glu Cys Ile Lys Asp Ile Leu Thr Lys His Leu Val Glu 2245 2250 2255 Leu Ser Ile Leu Ala Arg Thr Phe Lys Asn Thr Gln Leu Pro Glu Arg 2260 2265 2270 Ala Ile Phe Gln Ile Lys Gln Tyr Asn Ser Val Ser Cys Gly Val Ser 2275 2280 2285 Glu Trp Gln Leu Glu Glu Ala Gln Val Phe Trp Ala Lys Lys Glu Gln 2290 2295 2300 Ser Leu Ala Leu Ser Ile Leu Lys Gln Met Ile Lys Lys Leu Asp Ala 2305 2310 2315 2320 Ser Cys Ala Ala Asn Asn Pro Ser Leu Lys Leu Thr Tyr Thr Glu Cys 2325 2330 2335 Leu Arg Val Cys Gly Asn Trp Leu Ala Glu Thr Cys Leu Glu Asn Pro 2340 2345 2350 Ala Val Ile Met Gln Thr Tyr Leu Glu Lys Ala Val Glu Val Ala Gly 2355 2360 2365 Asn Tyr Asp Gly Glu Ser Ser Asp Glu Leu Arg Asn Gly Lys Met Lys 2370 2375 2380 Ala Phe Leu Ser Leu Ala Arg Phe Ser Asp Thr Gln Tyr Gln Arg Ile 2385 2390 2395 2400 Glu Asn Tyr Met Lys Ser Ser Glu Phe Glu Asn Lys Gln Ala Leu Leu 2405 2410 2415 Lys Arg Ala Lys Glu Glu Val Gly Leu Leu Arg Glu His Lys Ile Gln 2420 2425 2430 Thr Asn Arg Tyr Thr Val Lys Val Gln Arg Glu Leu Glu Leu Asp Glu 2435 2440 2445 Leu Ala Leu Arg Ala Leu Lys Glu Asp Arg Lys Arg Phe Leu Cys Lys 2450 2455 2460 Ala Val Glu Asn Tyr Ile Asn Cys Leu Leu Ser Gly Glu Glu His Asp 2465 2470 2475 2480 Met Trp Val Phe Arg Leu Cys Ser Leu Trp Leu Glu Asn Ser Gly Val 2485 2490 2495 Ser Glu Val Asn Gly Met Met Lys Arg Asp Gly Met Lys Ile Pro Thr 2500 2505 2510 Tyr Lys Phe Leu Pro Leu Met Tyr Gln Leu Ala Ala Arg Met Gly Thr 2515 2520 2525 Lys Met Met Gly Gly Leu Gly Phe His Glu Val Leu Asn Asn Leu Ile 2530 2535 2540 Ser Arg Ile Ser Met Asp His Pro His His Thr Leu Phe Ile Ile Leu 2545 2550 2555 2560 Ala Leu Ala Asn Ala Asn Arg Asp Glu Phe Leu Thr Lys Pro Glu Val 2565 2570 2575 Ala Arg Arg Ser Arg Ile Thr Lys Asn Val Pro Lys Gln Ser Ser Gln 2580 2585 2590 Leu Asp Glu Asp Arg Thr Glu Ala Ala Asn Arg Ile Ile Cys Thr Ile 2595 2600 2605 Arg Ser Arg Arg Pro Gln Met Val Arg Ser Val Glu Ala Leu Cys Asp 2610 2615 2620 Ala Tyr Ile Ile Leu Ala Asn Leu Asp Ala Thr Gln Trp Lys Thr Gln 2625 2630 2635 2640 Arg Lys Gly Ile Asn Ile Pro Ala Asp Gln Pro Ile Thr Lys Leu Lys 2645 2650 2655 Asn Leu Glu Asp Val Val Val Pro Thr Met Glu Ile Lys Val Asp His 2660 2665 2670 Thr Gly Glu Tyr Gly Asn Leu Val Thr Ile Gln Ser Phe Lys Ala Glu 2675 2680 2685 Phe Arg Leu Ala Gly Gly Val Asn Leu Pro Lys Ile Ile Asp Cys Val 2690 2695 2700 Gly Ser Asp Gly Lys Glu Arg Arg Gln Leu Val Lys Gly Arg Asp Asp 2705 2710 2715 2720 Leu Arg Gln Asp Ala Val Met Gln Gln Val Phe Gln Met Cys Asn Thr 2725 2730 2735 Leu Leu Gln Arg Asn Thr Glu Thr Arg Lys Arg Lys Leu Thr Ile Cys 2740 2745 2750 Thr Tyr Lys Val Val Pro Leu Ser Gln Arg Ser Gly Val Leu Glu Trp 2755 2760 2765 Cys Thr Gly Thr Val Pro Ile Gly Glu Phe Leu Val Asn Asn Glu Asp 2770 2775 2780 Gly Ala His Lys Arg Tyr Arg Pro Asn Asp Phe Ser Ala Phe Gln Cys 2785 2790 2795 2800 Gln Lys Lys Met Met Glu Val Gln Lys Lys Ser Phe Glu Glu Lys Tyr 2805 2810 2815 Glu Val Phe Met Asp Val Cys Gln Asn Phe Gln Pro Val Phe Arg Tyr 2820 2825 2830 Phe Cys Met Glu Lys Phe Leu Asp Pro Ala Ile Trp Phe Glu Lys Arg 2835 2840 2845 Leu Ala Tyr Thr Arg Ser Val Ala Thr Ser Ser Ile Val Gly Tyr Ile 2850 2855 2860 Leu Gly Leu Gly Asp Arg His Val Gln Asn Ile Leu Ile Asn Glu Gln 2865 2870 2875 2880 Ser Ala Glu Leu Val His Ile Asp Leu Gly Val Ala Phe Glu Gln Gly 2885 2890 2895 Lys Ile Leu Pro Thr Pro Glu Thr Val Pro Phe Arg Leu Thr Arg Asp 2900 2905 2910 Ile Val Asp Gly Met Gly Ile Thr Gly Val Glu Gly Val Phe Arg Arg 2915 2920 2925 Cys Cys Glu Lys Thr Met Glu Val Met Arg Asn Ser Gln Glu Thr Leu 2930 2935 2940 Leu Thr Ile Val Glu Val Leu Leu Tyr Asp Pro Leu Phe Asp Trp Thr 2945 2950 2955 2960 Met Asn Pro Leu Lys Ala Leu Tyr Leu Gln Gln Arg Pro Glu Asp Glu 2965 2970 2975 Thr Glu Leu His Pro Thr Leu Asn Ala Asp Asp Gln Glu Cys Lys Arg 2980 2985 2990 Asn Leu Ser Asp Ile Asp Gln Ser Phe Asn Lys Val Ala Glu Arg Val 2995 3000 3005 Leu Met Arg Leu Gln Glu Lys Leu Lys Gly Val Glu Glu Gly Thr Val 3010 3015 3020 Leu Ser Val Gly Gly Gln Val Asn Leu Leu Ile Gln Gln Ala Ile Asp 3025 3030 3035 3040 Pro Lys Asn Leu Ser Arg Leu Phe Pro Gly Trp Lys Ala Trp Val 3045 3050 3055

Claims (9)

1. 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 및 상기 HMG17 유전자의 발현 감소에 따라 발현이 조절되는 단백질로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상을 포함하는 방사선 민감성 마커.
2. 청구항 1에 있어서, 상기 HMG17 유전자의 발현 감소에 따라 조절되는 단백질은 HMG17 유전자의 발현 감소에 따라 발현이 감소되는 단백질로서, Chk2(서열번호 2) 및 p-ATM(ATM: 서열번호 3)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 방사선 민감성 마커.
3. 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 상기 HMG17 유전자의 발현 감소에 따라 발현이 감소되는 Chk2 및 p-ATM로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상을 포함하는 방사선 민감성 진단키트.
4. 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 상기 HMG17 유전자의 발현 감소에 따라 발현이 감소되는 Chk2 및 p-ATM로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 억제제를 포함하는 방사선 민감성 증진용 조성물.
5. 청구항 4에 있어서, 상기 억제제는 암세포의 방사선에 대한 민감도를 증진시키는 것을 특징으로 하는 방사선 민감성 증진용 조성물.
6. 청구항 5에 있어서, 상기 암세포는 폐암세포 또는 골육종세포 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 방사선 민감성 증진용 조성물.
7. 청구항 4 또는 청구항 5에 있어서, 상기 억제제는 HMG17 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 안티센스 핵산 또는 작은 간섭 RNA(small interfering RNA)에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 방사선 민감성 증진용 조성물.
8. 청구항 4 또는 청구항 5에 있어서, 상기 억제제는 HMG17, Chk2 및 p-ATM로 이루어진 군에서 선택된 단백질에 상보적으로 결합하는 화합물, 펩타이드 및 항체로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 방사선 민감성 증진용 조성물.
9. 생물학적 샘플에 임의의 화합물을 처리하는 단계; 상기 생물학적 샘플로부터 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 HMG17 유전자 또는 그 발현 단백질, 상기 HMG17 유전자의 발현 감소에 따라 발현이 감소되는 Chk2 및 p-ATM로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 발현 수준을 확인하는 단계; 및 상기 발현 수준을 임의의 화합물을 처리하지 않은 정상대조군에서의 동일 유전자 또는 단백질의 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는, 암세포에서 방사선에 대한 민감도를 증진시키는 화합물 스크리닝 방법.

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