KR20120006945A - 피부 진단 방법 및 키트 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 피부 또는 피부 분비물을 채취하는 단계; 및 상기에서 채취한 피부 또는 피부 분비물의 바이오 마커(bio marker)를 측정하는 단계를 포함하는 피부 상태 진단 방법을 개시한다. 또한 본 발명은 피부 또는 피부 분비물 채취부; 및 피부 또는 피부 분비물의 바이오 마커(bio marker) 측정부를 포함하는 피부 상태 진단용 키트를 개시한다. 상기의 피부 상태 진단 방법 또는 피부 상태 진단용 키트를 이용하여 쉽고 간편하며 신속하면서도 정확하게 피부 상태를 진단할 수 있다.

Description

피부 진단 방법 및 키트{Method for diagnosis of skin and kit for diagnosis of skin}
본 발명은 피부 진단 방법 및 피부 진단용 키트에 관한 것이다.
바이오 마커(bio marker)는 생물학적 상태의 지표로 사용되는 일반적인 물질을 의미한다. 이는 주로 의학 분야에서 사람이 건강한 상태 또는 병에 걸린 상태인지 여부, 약물 치료에 대한 반응 정도 등을 알기 위한 객관적인 지표로 활용되고 있다. 상기 바이오 마커는 의학 분야뿐만 아니라 다양한 분야에서 활용될 수 있으며, 구체적으로 피부 미용 분야에서는 피부 상태의 지표로 이용될 수 있을 것이다.
미국등록특허 제7,183,057호 명세서
J Invest Dermatol. 2004 Mar;122(3):755-763
본 발명은 쉽고 간편하며 신속하면서도 정확하게 피부 상태를 진단하기 위하여 피부 또는 피부 분비물을 채취하는 단계; 및 상기에서 채취한 피부 또는 피부 분비물의 바이오 마커(bio marker)를 측정하는 단계를 포함하는 피부 상태 진단 방법을 제공하고자 한다. 또한 본 발명은 피부 또는 피부 분비물 채취부; 및 피부 또는 피부 분비물의 바이오 마커(bio marker) 측정부를 포함하는 피부 상태 진단용 키트를 제공하고자 한다.
본 발명의 일측면은 피부 또는 피부 분비물을 채취하는 단계; 및 상기에서 채취한 피부 또는 피부 분비물의 바이오 마커를 측정하는 단계를 포함하는 피부 상태 진단 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 일측면은 피부 또는 피부 분비물 채취부; 및 피부 또는 피부 분비물의 바이오 마커 측정부를 포함하는 피부 상태 진단용 키트를 제공한다.
본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단 방법 및 피부 진단 키트를 이용하여 누구나 어떤 장소에서라도 쉽고 간편하며 신속하게 피부 상태를 진단할 수 있다. 나아가 그 진단 결과를 기초로 각 개인은 자신에게 적합한 피부 관리를 받을 수 있다.
도 1은 락테이트 하이드로게나제를 포함하는 용액과 채취한 피지의 반응 정도를 보여주는 사진이다.
도 2는 각각 폴리비닐알코올(PVA), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(PSM) 및 에탄올(EtOH)을 포함하는 용액의 퍼짐성 및 흡수성을 보여주는 사진이다.
도 3은 락테이트 하이드로게나제 및 농도별 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(PSM)를 포함하는 용액의 반응성을 보여주는 사진이다.
도 4는 락테이트 하이드로게나제를 농도별로 포함하는 용액의 반응성을 보여주는 사진이다.
도 5는 락테이트 하이드로게나제 및 증류수 또는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트를 포함하는 용액의 반응성을 보여주는 사진이다.
본 명세서에서 "피부"라 함은, 동물의 체표를 덮는 조직을 의미하는 것으로서, 얼굴 또는 바디 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발을 포함하는 최광의의 개념이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
사람마다 피부 타입, 피부 상태 등은 제각각이므로, 각 개인에게 적합한 피부 관리가 이루어지기 위해서는 그 사람의 피부 상태를 진단하는 것이 선행되어야 한다. 현재 이용되고 있는 피부 진단 방법으로는 설문 조사를 통한 피부 진단, 부피가 큰 피부 진단 기기를 이용한 피부 진단 등을 들 수 있다. 그 중 설문 조사를 통한 피부 진단은 비교적 간편하고 장소 제약 없이 이루어질 수 있으나, 비과학적이라는 단점을 가진다. 부피가 큰 피부 진단 기기를 이용한 피부 진단은 비교적 정확한 결과를 얻을 수는 있으나, 기기가 있는 곳에서만 진단이 이루어질 수 있어 장소의 제약이 따르며 대부분의 경우 결과를 얻기까지 많은 시간이 소요된다는 단점이 있다. 따라서 피부 진단이 보다 간편하고 신속하면서도 정확하게 이루어질 수 있다면 각 개인은 편리하게 피부를 진단할 수 있을 뿐만 아니라 나아가 그 진단 결과를 기초로 자신에게 적합한 피부 관리를 받을 수 있을 것이다.
본 발명의 일측면은 피부 또는 피부 분비물을 채취하는 단계; 및 상기에서 채취한 피부 또는 피부 분비물의 바이오 마커를 측정하는 단계를 포함하는 피부 상태 진단 방법을 제공한다.
본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단 방법 중 피부 또는 피부 분비물을 채취하는 단계에서 채취는 패치(patch), 기름 종이를 예로 들 수 있는 종이(paper), 필름(film) 및 스트리핑 테이프(stripping tape) 중 하나 이상을 이용할 수 있다. 구체적으로, 상기 단계에서 패치, 종이 또는 필름을 피부에 일정 시간, 즉 피부 또는 피부 분비물 채취에 충분한 시간 동안, 예를 들어 5분 내지 10분, 부착했다가 떼어냄으로써, 피부 또는 피부 분비물을 채취할 수 있다. 또는 상기 단계에서 스트리핑 테이프를 피부에 일정 시간, 즉 피부 또는 피부 분비물 채취에 충분한 시간 동안, 예를 들어 10초 내지 7분, 부착했다가 떼어냄으로써 피부 또는 피부 분비물을 채취할 수 있다.
본 발명의 일측면은 피부 또는 피부 분비물 채취부; 및 피부 또는 피부 분비물의 바이오 마커 측정부를 포함하는 피부 상태 진단용 키트를 제공한다. 본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단용 키트에서, 상기 채취부는 패치, 종이, 필름 및 스트리핑 테이프 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단용 키트는 피부 또는 피부 분비물 채취부 및 피부 또는 피부 분비물의 바이오 마커 측정부를 일체화된 형태 또는 분리된 형태로 포함할 수 있다. 본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단용 키트가 피부 또는 피부 분비물 채취부 및 바이오 마커 측정부를 일체화된 형태로 포함하는 경우, 상기 피부 상태 진단용 키트의 피부 또는 피부 분비물 채취부 및 바이오 마커 측정부는 패치 또는 스트리핑 테이프 형태일 수 있다. 본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단용 키트가 피부 또는 피부 분비물 채취부 및 바이오 마커 측정부를 분리된 형태로 포함하는 경우, 피부 또는 피부 분비물 채취부는 스트리핑 테이프를 포함하고 바이오 마커 측정부는 칩(chip) 내지 센서(sensor) 형태를 포함할 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 피부 상태는 피부 노화 정도, 피부 보습 정도, 피부 산화 정도, 피부 스트레스 정도, 피부 유분 정도, 피부 각질 정도, 피부 민감도, 피부색 및 피부 염증 정도 중 하나 이상을 포함한다. 본 발명의 다른 일측면에서, 피부 상태는 피부 노화 정도, 피부 보습 정도 및 피부 산화 정도 중 하나 이상을 포함한다. 한편, 상기 피부 산화 정도는 시티 스트레스(city stress)를 의미할 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단용 키트는 상기 피부 상태를 진단하기 위한 바이오 마커들 중 하나 이상을 포함한다. 본 발명의 다른 일측면에서, 상기 피부 상태를 진단하기 위한 바이오 마커는 당해 기술 분야에서 각 피부 상태를 진단하기 위해 일반적으로 이용되는 바이오 마커를 모두 포함할 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 피부 보습 정도를 진단하기 위한 바이오 마커는 카텝신(cathepsin) L, 인보루크린(involucrin), 피부 pH, SC 중성 지질(stratum corneum neutral lipids), SC(stratum corneum) 세린 프로테아제(예를 들어, 각질층 트립타제-유사 효소(SC tryptase-like enzyme), 플라스민(plasmin), 유로키나제(urokinase), 트립신-유사 칼리크레인(trypsin-like kallikreins, KLK5) 또는 키모트립신-유사 칼리크레인(chymotrypsin-like kallikreins, KLK7)), 트랜스글루타미나제(transglutaminase, TGase), 데스모글레인 1(desmoglein 1), 로리크린(loricrin), 필라그린(filaggrin), 라멜라체(lamella body), 블레오마이신 하이드로라제(bleomycin hydrolase), 칼페인(calpain), 카스파제-14(caspase-14), 데스모글레인 3(desmoglein 3), PLSCR, SPRR 1B 또는 2B, 락테이트(lactate), 코아굴라아제(coagulase) 및 각질층 카르보닐화 단백질(stratum corneum carbonylated protein, SCCP)로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상을 포함한다.
본 발명의 일측면에서, 피부 노화 정도를 진단하기 위한 바이오 마커는 IL-β1, IL-6, MMP-1, MMP-8, MMP-13, TNF-α, 콜라겐 Ⅰ, 콜라겐 Ⅲ, 히아루론산(hyaluronic acid), 피브로넥틴(fibronectin), 케라틴(keratin) 1, 케라틴 10, 젤라틴나제(gelatinase)-mmp 2,9 및 각질층 카르보닐화 단백질(stratum corneum carbonylated protein, SCCP)로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상을 포함한다.
본 발명의 일측면에서, 피부색을 진단하기 위한 바이오 마커는 MC1R, 엔도텔린 수용체(endothelin receptor), 티로시나제(tyrosinase), TRP 1, TRP 2, MITF(microphthalmia-associated transcription factor), gp100, Mart1, 인터루킨-6(interleukin-6), 프로스타글란딘(prostaglandin), 루코트리엔(leukotriene), SCF, VEGF(Vascular endothelial growth factor), c-kit, EGF-수용체(epidermal growth factor-receptor), 멜라닌(melanin) 및 각질층 카르보닐화 단백질(stratum corneum carbonylated protein, SCCP)로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상을 포함한다.
본 발명의 일측면에서, 피부 산화 정도를 진단하기 위한 바이오 마커는 TRX(thioredoxin) 1, TRX 2, Prx(peroxiredoxin) 1, 2, 3, 4, 5 또는 6, Grx(glutaredoxin) 1, Grx 2, TrxR1(Trx reductase), TrxR2, NQO1, Nrf2, 카탈라아제(catalase), 글루타치온(Glutathion) 및 코티솔(cortisol)로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상을 포함한다.
본 발명의 일측면에서, 피부 민감도를 진단하기 위한 바이오 마커는 코아굴라아제(coagulase)를 포함한다.
보다 구체적으로, 본 발명의 일측면에서, 피부 노화 정도를 진단하기 위한 바이오 마커는 젤라틴나제(gelatinase) 및 각질층 카르보닐화 단백질(stratum corneum carbonylated protein, SCCP) 중 하나 이상을 포함한다. 본 발명의 다른 일측면에서, 피부 보습 정도를 진단하기 위한 바이오 마커는 각질층 카르보닐화 단백질(stratum corneum carbonylated protein, SCCP), 락테이트(lactate), pH, 각질층 트립타제-유사 효소(SC tryptase-like enzyme), 플라스민(plasmin), 트립신-유사 칼리크레인(trypsin-like kallikreins, KLK5), 키모트립신-유사 칼리크레인(chymotrypsin-like kallikreins, KLK7) 및 트랜스글루타미나제(transglutaminase, TGase)로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상을 포함한다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 상기 피부 산화 정도를 진단하기 위한 바이오 마커는 카탈라아제(catalase), 글루타치온(glutathione) 및 카텝신 L(cathepsin L)로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상을 포함한다.
보다 더 구체적으로, 본 발명의 일측면에서, 피부 상태를 진단하기 위한 바이오 마커는 락테이트를 포함한다. 락테이트는 천연 보습 인자(Natural Moisture Factor, NMF) 중 하나로, 아미노산과 이온 다음으로 많은 양(약 12%)를 차지한다. 락테이트는 세라마이드 생합성을 촉진하여 피부 장벽 기능을 강화하고 피부 수분량, 피부 pH, 피부 강도(stiffness)에 영향을 준다고 알려져 있다(J Invest Dermatol. 2004 Mar;122(3):755-763). 따라서 피부 중 락테이트 정도가 높은 경우 피부 보습 정도를 예로 들 수 있는 피부 상태가 바람직한 것으로 진단될 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 피부 또는 피부 분비물은 피부 각질을 포함한다. 일반적으로 락테이트를 예로 들 수 있는 상기 바이오 마커들은 피부 각질층에 존재한다고 알려져 있다. 따라서 피부 각질을 채취한 후 그에 포함된 락테이트 등과 같은 바이오 마커의 양을 측정하여 피부 상태를 진단할 수 있다.
본 발명의 다른 일측면에서, 피부 또는 피부 분비물은 피지를 포함한다. 얼굴의 각질을 채취하기 위해서는 화장을 한 여성의 경우 세안을 하여야 한다. 이는 매우 번거로운 과정이며, 세안 후 각질 중 락테이트 등의 양이 감소한다고 알려져 있으므로 세안이 정확한 진단에 방해 요인이 될 수도 있다. 피지를 예로 들 수 있는 피부 분비물은 씻지 않고도 용이하게 통증 없이 채취 가능하며, 피부 각질 및 피부 분비물 내의 락테이트 양은 서로 유사하므로, 피부 분비물에 포함된 락테이트 등 바이오 마커의 양을 측정하여 피부 상태를 진단할 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 피부 또는 피부 분비물은 얼굴의, 구체적으로 얼굴 T존의 피부 또는 피부 분비물을 포함한다.
일반적으로 피부 상태를 진단할 때에는 피부 각질을 채취하고 채취한 피부 각질을 물 또는 SDS 버퍼로 추출한 후 흡광도를 측정하여 표준 곡선과 비교함으로써 바이오 마커의 양을 정량하고 그 결과를 기초로 피부 상태를 진단한다. 이러한 기존의 방법은 번거롭고 시간 및 비용이 많이 소모된다. 반면, 본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단 방법은 추출 및 정량 과정 없이 효소, 기질 및 계면 활성제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 조성물, 즉 반응 용액과 피부 또는 피부 분비물 내 바이오 마커를 반응시켜 조성물에 대한 바이오 마커의 반응 정도를 측정함으로써, 바이오 마커의 농도 또는 양을 측정할 수 있다. 이와 같이 본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단 방법은 추출 및 정량 과정을 거치지 않고 용이하면서도 효율적으로 피부 상태를 진단할 수 있다. 본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단용 키트의 바이오 마커 측정부는 효소, 기질 및 계면 활성제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하며, 효소, 기질 및 계면 활성제 중 하나 이상과 바이오 마커를 반응시켜 그 반응 정도를 측정함으로써, 즉각적으로 용이하게 피부 상태를 진단할 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 상기 효소 또는 기질은 측정하고자 하는 바이오 마커와 특이적으로 반응하는 짝 효소 또는 짝 기질일 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 상기 효소 또는 기질은 측정하고자 하는 바이오 마커에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 측정하고자 하는 바이오 마커가 락테이트인 경우, 그에 대응하는 효소는 락테이트와 특이적으로 반응하여 피루베이트(pyruvate)를 생산하는 락테이트 디하이드로게나제(Lactate Dehydrogenase)일 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 상기 조성물은 0.05 mg/ml 초과, 구체적으로 0.2 mg/ml 이상이고, 10 mg/ml 이하, 구체적으로 5 mg/ml 이하의 농도를 가지는 효소 또는 기질을 포함할 수 있다. 상기 범위의 농도로 포함할 경우 본 발명의 의도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위의 농도로 포함하는 것이 적절할 수 있다. 구체적으로 0.05 mg/ml의 효소를 사용하는 경우에는 반응 시간이 30분 이상 소요되나, 본 발명의 일측면에서는 0.05 mg/ml보다 높은 농도의 효소를 사용하여 20분 이내에 반응을 완료할 수 있으므로 보다 신속하게 피부 상태를 진단할 수 있다. 또한 0.05 mg/ml보다 높은 농도의 효소를 사용하는 경우 반응성이 높아져 반응 정도를 나안으로도 용이하게 판단 가능하다.
본 발명의 일측면에서, 바이오 마커와 반응시키는 조성물은 계면 활성제를 포함함으로써, 퍼짐성이 높아져 바이오 마커와의 접촉 면적을 넓히고, 바이오 마커에 대한 흡수성을 높여 바이오 마커와의 반응성을 향상시킬 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 계면 활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(Polyoxyethylene Sorbitan Monooleate)(tween 80®, tween 60®, tween 40® 또는 tween 20®를 포함한다.
본 발명의 일측면에서, 상기 조성물은 0.1% 이상, 구체적으로 0.5% 이상, 더 구체적으로 5% 이상이면서, 100% 미만, 구체적으로 20% 이하, 더 구체적으로 10% 이하의 농도를 가지는 계면 활성제를 포함할 수 있다. 상기 범위의 농도로 포함할 경우 본 발명의 의도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위의 농도로 포함하는 것이 적절할 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 효소 또는 기질로 측정 가능한 바이오 마커는 젤라틴나제, 각질층 트립타제-유사 효소, 트립신-유사 칼리크레인(KLK5), 키모트립신-유사 칼리크레인(KLK7), 플라스민 및 카텝신 L 중 하나 이상을 포함한다.
본 발명의 일측면에서, 효소 또는 기질 그리고 계면 활성제로 측정 가능한 바이오 마커는 락테이트, 카탈라아제, 글루타치온(Glutathion) 및 트랜스글루타미나제(TGase) 중 하나 이상을 포함한다.
본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단 방법에서, 피부 또는 피부 분비물의 바이오 마커를 측정하는 단계는 바이오 마커와 시약(reagent)을 반응시키고 시약에 대한 바이오 마커의 반응 정도를 측정하는 과정을 더 포함할 수 있다. 상기 시약은 반응 조성물과 바이오 마커의 반응 정도를 형광 또는 색상으로 나타내는 화학 물질을 포함하며, 이는 측정하고자 하는 바이오 마커, 그에 따른 효소 또는 기질에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 시약은 상기의 반응 조성물에 포함되어 존재하거나 혹은 별도로 존재할 수 있다. 본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단용 키트는 채취한 피부 또는 피부 분비물의 바이오 마커를 측정하기 위한 시약을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단 방법의 바이오 마커를 측정하는 단계 및 피부 상태 진단용 키트의 바이오 마커 측정부에서, 바이오 마커 측정은 형광 발색법(Fluorescence assay) 또는 비색법(Colormetric assay)으로 이루어질 수 있다. 구체적으로, 채취한 바이오 마커를 일정 시간 동안 상기 반응 조성물과 반응시킨 후 나타나는 형광 또는 색상으로 상기 반응 조성물에 대한 바이오 마커의 반응 정도를 측정할 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 형광 발색법을 이용하여 측정 가능한 바이오 마커는 젤라틴나제, 각질층 카르보닐화 단백질(SCCP), 카텝신 L, 각질층 트립타제-유사 효소, 플라스민, 트립신-유사 칼리크레인(KLK5) 및 키모트립신-유사 칼리크레인(KLK7) 중 하나 이상을 포함한다. 본 발명의 다른 일측면에서, 비색법을 이용하여 측정 가능한 바이오 마커는 락테이트, 카탈라아제, 글루타치온(Glutathion) 및 트랜스글루타미나제(TGase) 중 하나 이상을 포함한다.
본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단 방법에서 바이오 마커 측정 결과는 형광 또는 색상으로 표시될 수 있다. 표시된 형광 또는 색상은 형광 분석기 또는 나안으로 확인할 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단용 키트에서 바이오 마커 측정부는 형광 또는 색상 표시부를 포함할 수 있으며, 상기 형광 또는 색상 표시부는 측정한 바이오 마커 유무 또는 정도를 형광 또는 색상으로 표시할 수 있다. 구체적으로, 바이오 마커와 기질이 일정 시간 반응하고 그 반응 정도가 형광 또는 색상 표시부에 형광 또는 색상으로 표시될 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 측정된 바이오 마커의 정도에 따라 형광 또는 색상 표시 정도가 변할 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 측정된 바이오 마커의 정도가 높을수록 형광 또는 색상 정도가 강하게 나타나거나 약하게 나타날 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 바이오 마커 측정부에 복수 개의 형광 또는 색상 표시부가 존재하고, 상기 복수 개의 바이오 마커 측정부에서 각 바이오 마커는 서로 다른 농도를 가지고 있어, 피부 상태에 따라 바이오 마커 측정부의 형광 또는 색상이 표시되는 숫자가 달라질 수 있으며, 이를 통해 피부 상태가 어떠한지를 판단할 수 있다. 예를 들어, 2개 이상의 복수 개로 형광 또는 색상 표시부가 존재하고, 측정된 바이오 마커의 농도가 높을수록 형광 또는 색상이 표시되는 형광 또는 색상 표시부의 개수가 증가할 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 형광 또는 색상 표시부는 측정된 바이오 마커의 정도에 따라 형광 또는 색상을 표시할 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 측정된 바이오 마커의 정도가 정상 범위인 경우에는 형광 또는 색상이 표시되지 않을 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 측정된 바이오 마커의 정도가 정상 범위가 아닌 경우에는 형광 또는 색상이 표시될 수 있다. 상기에서 바이오 마커의 "정도"는 바이오 마커의 농도 또는 양을 의미할 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 형광 또는 색상 표시 여부 또는 강도에 따라 피부 상태를 진단할 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 형광 또는 색상이 표시되지 않거나 그 표시 강도가 약할수록 피부 상태가 바람직하거나 바람직하지 않은 것으로 진단할 수 있다. 강도가 강할수록 피부 상태가 바람직하거나 바람직하지 않은 것으로 진단할 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 성별 또는 연령별로 분류한 정상 표시 강도와 측정된 강도를 비교한 후 그 결과를 바탕으로 피검자의 피부 상태가 바람직하거나 바람직하지 않은 것으로 진단할 수 있다.
본 발명의 다른 일측면에서, 측정하는 바이오 마커가 젤라틴나제 또는 각질층 카르보닐화 단백질(SCCP)인 경우, 형광 또는 색상이 표시되고 그 강도가 강할수록 피부 노화가 많이 진행된 것으로 진단할 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 측정하는 바이오 마커가 각질층 카르보닐화 단백질(SCCP), pH, 각질층 트립타제-유사 효소, 플라스민, 트립신-유사 칼리크레인(KLK5) 및 키모트립신-유사 칼리크레인(KLK7) 중 하나 이상인 경우, 형광 또는 색상이 표시되고 그 강도가 강할수록 피부 보습 정도가 낮은 것으로 진단할 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 측정하는 바이오 마커가 락테이트 또는 트랜스글루타미나제(TGase)인 경우, 형광 또는 색상이 표시되고 그 강도가 강할수록 피부 보습 정도가 높은 것으로 진단할 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 측정하는 바이오 마커가 카텝신 L인 경우, 형광 또는 색상이 표시되고 그 강도가 강할수록 피부 산화 정도가 높은 것으로 진단할 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 측정하는 바이오 마커가 글루타치온(Glutathion) 또는 카탈라아제인 경우, 형광 또는 색상이 표시되고 그 강도가 강할수록 피부 산화 정도가 낮은 것으로 진단할 수 있다. 즉, 측정하는 바이오 마커에 따라 형광 또는 색상 표시 여부 및 그 강도와 피부 상태가 바람직한지 여부의 관계가 달라질 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단용 키트는 형광 또는 색상 변화를 관찰할 수 있는 판독기를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 상기 판독기는 형광도를 측정할 수 있는 휴대용 형광 수명 측정기(Fluorescence image application)일 수 있다.
본 발명의 다른 일측면에 따른 피부 상태 진단용 키트는 키트 사용법 설명, 피부 상태 지표 및 피부 관리 방법 중에서 선택된 적어도 하나를 포함하는 지시서를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단 방법은 본 발명의 다른 일측면에 따른 피부 상태 진단용 키트를 사용하여 행해질 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 피부 상태 진단 방법 및 피부 상태 진단용 키트를 이용하는 경우, 바이오 마커라는 객관적인 지표를 이용한 과학적인 피부 상태 진단 결과를 약 20분 이내로 신속하게 얻을 수 있다. 또한 비전문가도 쉽고 간편하게 피부 상태를 진단 할 수 있다. 나아가 상기 피부 상태 진단 결과를 기초로 각 개인은 자신에게 적합한 화장품 및 피부 관리 방법을 선택할 수 있다.
[실험예 1] 피부 각질 및 피지의 바이오 마커 양 비교
(1) 세정에 따른 각질의 바이오 마커 양 비교
일반적으로 피부 상태를 진단하기 위한 바이오 마커는 피부 각질층에 존재한다고 알려져 있다. 각질을 채취하기 위해서는 일반적으로 먼저 피부를 세정하는 것이 필요하다. 이하, 바이오 마커 중 락테이트를 대상으로 세정이 피부 각질 내 바이오 마커 양 측정에 방해 요소가 될 수 있는지 여부를 살펴 보았다.
20세 이상 성인 남녀를 대상으로 한쪽 이마는 세정하고 반대쪽 이마는 세정하지 않은 상태에서 각 부분에 피부 각질 채취용 스트리핑 테이프(D-Squam, CuDerm으로부터 입수)를 10초간 붙였다가 떼어내는 방법으로 각질을 채취하였다. 각 스트리핑 테이프를 5% SDS-버퍼 용액에 넣어 30분 동안 반응시킨 후 원심 분리하였다. 반응 용기에 각 스트리핑 테이프로부터 수득한 시료 50㎕와 락테이트 기질 및 효소를 포함하는 반응 용액 50㎕를 넣고 30분 동안 암반응 시킨 후 450 nm에서 O.D.를 측정하였다. 측정한 O.D. 값의 평균을 아래 표에 나타내었다(95% 신뢰 수준 유의함).
O.D.값(평균) 표준편차 p 값
세정한 경우 0.2510 0.0699 0.0334
세정하지 않은 경우 0.3612 0.0836
상기 결과에서 볼 수 있듯이, 세정하지 않은 경우의 락테이트 양이 세정한 경우에 비해 더 높았다. 따라서, 피부 세정은 각질 중 바이오 마커의 양을 감소시킨다는 것을 알 수 있다. 화장한 여성의 경우 피부 각질을 채취할 때 세정이 요구되므로, 세정을 하지 않고도 정확하게 바이오 마커 양을 측정하는 방법이 필요하다.
(2) 피부 각질 및 피지의 바이오 마커 양 비교
피부 각질 채취와 달리 피지 채취는 화장을 한 경우에도 미리 세정을 하지 않아도 되므로 간편하며, 채취시 통증이 적다. 따라서 피지의 바이오 마커 양과 피부 각질의 바이오 마커 양이 서로 동일 범위 내라면, 피지를 채취하여 그의 바이오 마커 양을 측정함으로써 피부 상태를 진단할 수 있을 것이다. 이하, 바이오 마커 중 락테이트를 대상으로 피부 각질 및 피지의 바이오 마커 양을 각각 비교해 보았다.
20세 이상 성인 남녀를 대상으로 이마의 한쪽 부분에서 피부 각질 채취용 스트리핑 테이프(D-Squam)로 각질을 채취하고, 다른 한쪽 부분에서 기름 종이(Oil blotting film, Sebutape® Cuderm으로부터 입수)로 피지를 채취하였다. 채취한 시료 각각을 5% SDS 버퍼 용액에 넣어 30분 동안 반응시킨 후 원심 분리하였다. 반응 용기에 상기 시료 50㎕와 락테이트 기질 및 효소를 포함하는 반응 용액 50㎕를 각각 넣고 30분 동안 암반응 시킨 후 450 nm에서 O.D.를 측정하였다. 측정한 O.D. 값을 표준 곡선과 비교하여 락테이트 양을 정량한 결과를 아래 표에 나타내었다(95% 신뢰 수준 유의함).
락테이트 평균값(nmol/cm2) 표준편차 p 값
각질 2.957 0.788 0.127
피지 3.591 1.132
상기 결과에서 볼 수 있듯이, 각질보다 피지의 락테이트 함량이 높았으며, 양자의 p값은 차이가 없었다. 즉, 피지를 채취하여 그 바이오 마커를 측정하는 경우, 피부 각질 내 바이오 마커를 측정하는 경우만큼 혹은 그 이상으로 현재 피부 상태를 잘 반영한 결과를 얻을 수 있음을 알 수 있다. 또한 앞서 살펴본 바와 같이 피지 채취는 간편하며, 채취시 통증이 적다는 장점이 있다.
[실험예 2] 피지 채취 방법에 따른 평가
피부 상태를 진단하기 위해 피지를 채취할 때 피지 채취용 필름을 이용하는 방법과 기름 종이(oil-blotting paper)를 이용하는 방법 중 어느 것이 현재 피부 상태를 보다 잘 반영한 진단 결과를 얻을 수 있는지 확인하고자 아래와 같은 실험을 실시하였다.
20세 이상 성인 남녀를 대상으로 이마에 피지 채취용 필름(Sebutape® CuDerm으로부터 입수)과 기름 종이(아모레퍼시픽으로부터 입수)를 각각 5분간 붙였다가 떼어내는 방법으로 피지를 채취하였다. 각각을 5% SDS-버퍼 용액에 넣어 30분 동안 반응시킨 후 원심 분리하였다. 반응 용기에 피지 채취용 필름과 기름 종이로부터 수득한 시료 50㎕와 락테이트 기질 및 락테이트 디하이드로세나제를 포함하는 반응 용액 50㎕를 넣고 30분 동안 암반응 시킨 후 450 nm에서 O.D.를 측정하였다. 측정한 O.D. 값을 표준 곡선과 비교하여 락테이트 양을 정량한 결과를 아래 표에 나타내었다.
O.D.값 표준편차 p 값
피지 채취용 필름 0.3608 0.0785 0.9431
기름 종이 0.3604 0.1188
상기 결과에서 볼 수 있듯이, 피지 채취용 필름 및 기름 종이로 채취한 피지는 서로 유사한 양의 락테이트를 포함함을 확인하였다. 즉, 피지 채취용 필름 또는 기름 종이를 이용하여 피지를 채취하고 피부 상태를 진단하는 경우 둘 다 현재의 피부 상태를 잘 반영한 결과를 얻을 수 있음을 알 수 있다.
[실험예 3] 반응 용액에 따른 평가
(1) 반응 용액을 사용한 방법
일반적으로 피부 상태를 진단할 때에는 채취한 피부를 SDS 버퍼 등으로 추출한 후 흡광도를 측정하여 표준 곡선과 비교함으로써 바이오 마커의 양을 정량하고 그 결과를 기초로 피부 상태를 진단한다. 이러한 기존의 방법은 번거롭고 시간 및 비용이 많이 소모된다. 이에 본 발명자들은 추출 과정 없이 반응 조성물을 피부 바이오 마커와 반응시키는 간단한 방법으로 피부 상태를 진단할 수 있는지 실험해 보았다.
20세 이상 성인 남녀 3명(실험군 A, B, C)의 피지가 많은 얼굴 T존 부위에 피지 채취용 필름(Sebutape®, CuDerm으로부터 입수)을 5분간 부착한 후 떼어내었다. 락테이트 기질 및 락테이트 디하이드로게나제를 포함하는 반응 용액이 든 반응 용기에 필름 그대로를 넣고 30분간 암반응 시켰다. 이후 반응 용기의 사진을 도 1에 나타내었다.
도 1에서 볼 수 있듯이, 피지를 채취한 실험군 A, B, C 모두에서 락테이트 반응으로 인한 발색을 확인하였으며, 이는 피지를 채취하지 않은 필름인 대조군에서는 관찰되지 않는 결과이다. 또한 이는 채취한 피부를 SDS-버퍼로 추출한 후 얻을 수 있는 결과와 동일한 결과이다. 즉 채취한 피부와 반응 용액을 반응시킴으로써, SDS-버퍼로 추출하는 과정 없이 간편하고 신속하게 피부를 진단할 수 있음을 알 수 있다.
(2) 반응 용액 성분에 따른 평가
본 발명의 일측면에서, 피부 바이오 마커와 반응 조성물을 반응시켜 조성물에 대한 바이오 마커의 반응 정도를 측정하여 피부 상태를 진단한다. 이 때 반응 조성물의 퍼짐성이 높은 경우 바이오 마커와의 접촉 면적이 넓어지므로 바이오 마커와의 반응성을 향상시킬 수 있고, 반응 조성물의 바이오 마커에 대한 흡수성이 높은 경우에도 반응 조성물과 바이오 마커와의 반응성을 향상시켜 보다 정확한 진단 결과를 얻을 수 있다. 이하, 바이오 마커가 락테이트인 경우를 대표적인 예로 하여, 반응 조성물의 성분을 변경하는 실험을 통해 반응 조성물이 어떠한 성분을 포함하였을 때 바이오 마커와의 반응성이 향상될 수 있는지 살펴 보았다.
각각 10%의 폴리비닐알코올(PVA), 에탄올(EtOH) 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(PSM, Tween 20®를 포함하는 용액을 제조한 후 피지 채취용 필름(3M Oil blotting film, 3M에서 입수) 위에 한 방울씩 놓고 15분 및 30분 후 퍼짐성 및 흡수성을 관찰하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에서 볼 수 있듯이, 10%의 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트를 포함하는 용액이 가장 우수한 퍼짐성 및 흡수성을 나타내었다. 즉, 퍼짐성과 흡수성 면에서 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트가 가장 우수함을 알 수 있다.
(3) 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트에 의한 영향 평가
바이오 마커가 락테이트인 경우 대응 효소로 사용될 수 있는 락테이트 디하이드로게나제와 각각 0.1%, 0.5% 및 1%의 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트를 포함하는 반응 용액을 제조한 후 피지 채취용 필름(3M Oil blotting film, 3M에서 입수) 위에 한 방울씩 놓고 30분 후 반응성, 퍼짐성 및 흡수성을 관찰하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에서 볼 수 있듯이, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트는 각 농도 모두에서 상당한 발색을 나타내어 락테이트의 반응성에 영향을 미치지 않으며, 또한 모두에서 상당한 퍼짐성 및 흡수성을 나타냄을 알 수 있다.
이상의 결과로부터, 반응 용액이 계면 활성제인 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트를 포함하는 경우 우수한 반응성, 퍼짐성 및 흡수성을 가지므로 보다 향상된 피부 상태 진단 결과를 얻을 수 있음을 알 수 있다.
[실험예 4] 효소 농도에 따른 평가
본 발명의 일측면에서, 피부 바이오 마커와 효소를 포함하는 반응 조성물을 반응시켜 조성물에 대한 바이오 마커의 반응 정도를 측정함으로써, 피부 상태를 진단한다. 이에 효소 농도에 따라 조성물에 대한 바이오 마커의 반응 정도가 어떻게 달라지는지 평가하였다.
(1) 효소 농도에 따른 평가
각각 0.01 mg/ml, 0.05 mg/ml, 0.1 mg/ml 및 0.2 mg/ml의 락테이트 디하이드로게나제를 포함하는 용액을 제조한 후 피지 채취용 필름(3M Oil blotting film, 3M에서 입수) 위에 한 방울씩 놓고 30분 후 반응성을 관찰하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다. 도 4에서 볼 수 있듯이, 0.2 mg/ml의 락테이트 디하이드로게나제를 포함하는 용액이 가장 진한 발색을 나타내어 가장 우수한 반응성을 가짐을 알 수 있다. 또한 0.2 mg/ml의 락테이트 디하이드로게나제를 사용하는 경우 신속하게 반응 결과를 얻을 수 있으며, 나안으로도 결과를 관찰할 수 있어 관찰이 용이하다는 장점을 가진다.
즉, 기존에 사용되는 0.05 mg/ml의 효소보다 0.2 mg/ml의 효소를 사용하는 경우에 보다 향상된 피부 상태 진단 결과를 신속하고 용이하게 얻을 수 있음을 알 수 있다.
(2) 반응 용액에의 적용
각각 0.05 mg/ml 및 0.2 mg/ml의 락테이트 디하이드로게나제와 증류수를 포함하는 반응 용액 및 0.2 mg/ml의 락테이트 디하이드로게나제와 0.1%의 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(PSM, Tween 20®를 포함하는 반응 용액을 제조하였다. 20세 이상 성인 남녀 4명의 피지를 채취한 피지 채취용 필름(Sebutape®, CuDerm으로부터 입수) 위에 상기 제조한 반응 용액을 한 방울씩 각각 놓고 30분 후 반응성을 관찰하였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다(도면 상단의 번호: 피검자 식별 번호, A: 0.05 mg/ml의 락테이트 디하이드로게나제와 증류수, B: 0.2 mg/ml의 락테이트 디하이드로게나제와 증류수, C: 0.2 mg/ml의 락테이트 디하이드로게나제와 0.1%의 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트). 도 5에서 볼 수 있듯이, 0.2 mg/ml의 락테이트 디하이드로게나제와 0.1%의 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(PSM, Tween 20®를 포함하는 반응 용액이 가장 진한 발색을 나타내어 가장 우수한 반응성을 가짐을 알 수 있다.
이상의 결과로부터, 계면 활성제 및 기존보다 고농도의 효소를 포함하는 반응 용액을 사용하는 경우 보다 향상된 피부 상태 진단 결과를 신속하고 용이하게 얻을 수 있음을 알 수 있다.

Claims (18)

  1. 피부 또는 피부 분비물을 채취하는 단계; 및
    상기에서 채취한 피부 또는 피부 분비물의 바이오 마커(bio marker)를 측정하는 단계를 포함하는 피부 상태 진단 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    피부 상태는 피부 노화 정도, 피부 보습 정도 및 피부 산화 정도 중 하나 이상인 피부 상태 진단 방법.
  3. 제 2 항에 있어서,
    피부 노화 정도를 진단하기 위해 측정하는 바이오 마커는 젤라틴나제(gelatinase) 및 각질층 카르보닐화 단백질(stratum corneum carbonylated protein, SCCP) 중 하나 이상을 포함하고;
    피부 보습 정도를 진단하기 위해 측정하는 바이오 마커는 각질층 카르보닐화 단백질(stratum corneum carbonylated protein, SCCP), 락테이트(lactate), pH, 각질층 트립타제-유사 효소(SC tryptase-like enzyme), 플라스민(plasmin), 트립신-유사 칼리크레인(trypsin-like kallikreins, KLK5), 키모트립신-유사 칼리크레인(chymotrypsin-like kallikreins, KLK7) 및 트랜스글루타미나제(transglutaminase, TGase)로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상을 포함하며;
    피부 산화 정도를 진단하기 위해 측정하는 바이오 마커는 카탈라아제(catalase), 글루타치온(glutathione) 및 카텝신 L(cathepsin L)로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상을 포함하는 피부 상태 진단 방법.
  4. 제 1 항에 있어서,
    피부 또는 피부 분비물은 피부 각질 및 피지 중 하나 이상을 포함하는 피부 상태 진단 방법.
  5. 제 1 항에 있어서,
    상기 피부 또는 피부 분비물을 채취하는 단계에서, 채취는 패치(patch), 종이, 필름(film) 및 스트리핑 테이프(stripping tape) 중 하나 이상을 이용하는 피부 상태 진단 방법.
  6. 제 1 항에 있어서,
    상기 바이오 마커를 측정하는 단계에서, 효소, 기질 및 계면 활성제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 반응 조성물과 바이오 마커를 반응시킨 후 조성물에 대한 바이오 마커의 반응 정도를 측정하며,
    상기 효소 또는 기질은 측정하는 바이오 마커와 특이적으로 반응하는 효소 또는 기질인 피부 상태 진단 방법.
  7. 제 1 항에 있어서,
    상기 바이오 마커를 측정하는 단계에서, 바이오 마커 측정은 형광 발색법 또는 비색법을 이용하는 피부 상태 진단 방법.
  8. 피부 또는 피부 분비물 채취부; 및
    피부 또는 피부 분비물의 바이오 마커(bio marker) 측정부를 포함하는 피부 상태 진단용 키트.
  9. 제 8 항에 있어서,
    피부 상태는 피부 노화 정도, 피부 보습 정도 및 피부 산화 정도 중 하나 이상인 피부 상태 진단용 키트.
  10. 제 9 항에 있어서,
    피부 노화 정도를 진단하기 위한 바이오 마커는 젤라틴나제(gelatinase) 및 각질층 카르보닐화 단백질(stratum corneum carbonylated protein, SCCP) 중 하나 이상을 포함하고;
    피부 보습 정도를 진단하기 위한 바이오 마커는 각질층 카르보닐화 단백질(stratum corneum carbonylated protein, SCCP), 락테이트(lactate), pH, 각질층 트립타제-유사 효소(SC tryptase-like enzyme), 플라스민(plasmin), 트립신-유사 칼리크레인(trypsin-like kallikreins, KLK5), 키모트립신-유사 칼리크레인(chymotrypsin-like kallikreins, KLK7) 및 트랜스글루타미나제(transglutaminase, TGase)로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상을 포함하며;
    피부 산화 정도를 진단하기 위한 바이오 마커는 카탈라아제(catalase), 글루타치온(glutathione) 및 카텝신 L(cathepsin L)로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상을 포함하는 피부 상태 진단용 키트.
  11. 제 8 항에 있어서,
    피부 또는 피부 분비물은 피부 각질 및 피지 중 하나 이상을 포함하는 피부 상태 진단용 키트.
  12. 제 8 항에 있어서,
    피부 또는 피부 분비물 채취부는 패치(patch), 종이, 필름 및 스트리핑 테이프(stripping tape) 중 하나 이상을 포함하는 피부 상태 진단용 키트.
  13. 제 8 항에 있어서,
    바이오 마커 측정부는 효소, 기질 및 계면 활성제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하며,
    상기 효소 또는 기질은 측정하는 바이오 마커와 특이적으로 반응하는 효소 또는 기질인 피부 상태 진단용 키트.
  14. 제 8 항에 있어서,
    바이오 마커 측정부는 형광 또는 색상 표시부를 포함하는 피부 상태 진단용 키트.
  15. 제 14 항에 있어서,
    형광 또는 색상 표시부는 측정된 바이오 마커의 정도에 따라 형광 또는 색상을 표시하는 피부 상태 진단용 키트.
  16. 제 14 항에 있어서,
    형광 또는 색상 표시부는 측정된 바이오 마커의 정도에 따라 형광 또는 색상 표시 정도가 변하는 피부 상태 진단용 키트.
  17. 제 8 항에 있어서,
    키트는 형광 또는 색상 변화를 관찰할 수 있는 판독기를 더 포함하는 피부 상태 진단용 키트.
  18. 제 8 항 또는 제 17 항에 있어서,
    키트는 사용 설명, 피부 상태 지표 및 피부 관리 방법 중에서 선택된 적어도 하나를 포함하는 지시서를 더 포함하는 피부 상태 진단용 키트.
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