KR20120004412A

KR20120004412A - 아포리포단백질 ａ-ｉ 모방체

Info

Publication number: KR20120004412A
Application number: KR1020117021736A
Authority: KR
Inventors: 장 루이 다쓰; 애나 쉔드로바 쉔드맨; 링위 주
Original assignee: 쎄레니스 떼라퓨틱스 에스.에이.
Priority date: 2009-02-16
Filing date: 2010-02-12
Publication date: 2012-01-12
Also published as: HRP20170294T1; SI2396017T1; US20160324923A1; US9388232B2; JP2012518006A; US8993597B2; CA2752182A1; CA2982157A1; SMT201500318B; MX2011008599A; EP2396017B1; US8378068B2; EP2939683B1; CN102395375A; RU2014134333A; EP2396017A1; IL240357A; LT2939683T; CN102395375B; IL214576A0

Abstract

본 발명은 펩타이드, 이의 조성물 및 이상지질혈증, 심혈관 질환, 내혈관장애, 거대혈관질환, 또는 미세혈관질환을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.

Description

아포리포단백질 Ａ-Ｉ 모방체{Apolipoprotein A-I Mimics}

신체를 순환하는 콜레스테롤은 혈액에서 지질을 수송하는 복합 지질 및 단백질 조성물의 입자들인 혈장 지질 단백질에 의해 운반된다. 콜레스테롤을 운반하는 두 가지 형태의 혈장 지질 단백질은 저밀도 지질 단백질("LDL") 및 고밀도 지질 단백질("HDL")이다. LDL 입자들은 (콜레스테롤이 합성되거나 음식 원료로부터 얻어지는) 간으로부터 신체의 간이외 조직들로 콜레스테롤을 전달하는 책임이 있다고 생각된다. 반면에, HDL 입자들은 간이외 조직들로부터 간으로 콜레스테롤의 수송을 돕는다고 생각되며, 간에서 콜레스테롤이 이화되고 제거된다. 간이외 조직들로부터 간으로의 콜레스테롤의 이런 수송은 "역 콜레스테롤 수송"으로 불린다.

역 콜레스테롤 수송("RCT") 경로는 세 주요 단계:(i) 콜레스테롤 유출, 즉, 말초 세포들의 여러 풀로부터 콜레스테롤의 최초 제거; (ii) 레스틴:콜레스테롤 아실트랜스페라제("LCAT")의 작용에 의해 콜레스테롤을 에스터화하여, 유출된 콜레스테롤의 세포들 속으로 재진입 억제; 및 (iii) HDL에 의한 콜레스테릴 에스터의 흡수 및 HDL-콜레스테릴 에스터 복합체의 간 세포들로의 전달을 가진다.

RCT 경로는 HDL 입자들에 의해 매개된다. 각 HDL 입자는 지질 성분과 단백질 성분을 가진다. HDL의 지질 성분은 인지질, 콜레스테롤(또는 콜레스테롤 에스터) 또는 트라이글리세리드일 수 있다. HDL의 단백질 성분은 주로 ApoA-I으로 구성된다. ApoA-I는 243개 아미노산 잔기를 가진 성숙한 폴리펩타이드를 생성하기 위해 빠르게 절단되는 프로단백질로 분비되는 프리프로아포리포단백질로서 간과 소장에 의해 합성된다. ApoA-I는 대개 프롤린이며 일부 경우에 여러 잔기들로 구성된 모이어티인 링커 모이어티에 의해 이격된 22개 아미노산으로 구성된 6 내지 8개의 다른 반복단위로 주로 구성된다. ApoA-I는 세 가지 유형의 지질을 가진 안정한 복합체: pre-β-1 HDL로 불리는 소형, 지질-부족 복합체; pre-β-2 HDL로 불리는 극성 지질(인지질 및 콜레스테롤)을 포함하는 평평한 원반 모양 입자들; 및 원형 또는 성숙한 HDL(HDL₃ 및 HDL₂)로 불리는 극성 및 비극성 지질 모두를 포함하는 원형 입자들을 형성한다.

죽상경화성 질환에 대해 보호하기 위해 유전자 재조합으로 ApoA-I를 생산하여 환자들에게 투여하려는 시도들이 이루어져 왔다. 그러나, ApoA-I의 생산과 사용과 관련된 여러 함정이 있어서, ApoA-I를 약물로서 덜 이상적이게 만드는데, 예를 들어, ApoA-I은 생산하기 어렵고 고가인 대형 단백질이며 중요한 제조 및 재생 문제들이 활성 제품의 저장, 전달 및 생체내 반감기 동안의 안정성과 관련하여 극복돼야 한다.

이런 단점들의 관점에서, 생체내에서 ApoA-I의 활성을 모방할 수 있는 펩타이드를 생산하기 위한 시도들이 이루어졌다. 생산하기 간단하고 비용 효율적인 생체내에서 ApoA-I의 활성을 모방할 수 있는 추가 펩타이드들의 개발에 대한 당업계의 요구가 존재한다.

한 실시예에서, 본 발명은 다음 식 I를 가진 22- 내지 29-잔기 펩타이드

R¹-Y¹-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸-X⁹-X¹⁰-X¹¹-X¹²-X¹³-X¹⁴-X¹⁵-X¹⁶-X¹⁷-X¹⁸-X¹⁹-X²⁰-X²¹-X²²-X²³-Y²-R² 식 I

및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며, 여기서:

X¹은 없거나 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X³는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X⁴는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁵는 Gln, Asn, D-Gln, D-Asn, 또는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁶은 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-소수성 아미노산 잔기이며;

X⁸은 비 키랄성인 D- 또는 L-소수성 아미노산 잔기이며;

X⁹는 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁰은 Leu, Trp, Gly, Nal, D-Leu, D-Trp 또는 D-Nal이며;

X¹¹은 Gly 또는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X¹²는 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹³은 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁴는 Leu, Trp, Gly, D-Leu, 또는 D-Trp이며;

X¹⁵는 Leu, Gly 또는 D-Leu이며;

X¹⁶은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁸은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁹는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²⁰은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X²¹은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²²는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X²³은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;

Y¹은 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

Y²는 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;

R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;

여기서:

a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;

b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;

c) 각 키랄 말단 아미노산 잔기 및 이에 바로 인접한 각 키랄 아미노산 잔기의 하나 이상이 D-아미노산 잔기인 것을 제외하고, 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며; 또는

d) 각 키랄 말단 아미노산 잔기 및 이에 바로 인접한 각 키랄 아미노산 잔기의 하나 이상이 L-아미노산 잔기인 것을 제외하고, 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이다.

다른 실시예에서, 본 발명은 다음 식 II를 가진 15- 내지 22-잔기 펩타이드

R¹-Y¹-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸-X⁹-X¹⁰-X¹¹-X¹²-X¹³-X¹⁴-X¹⁵-X¹⁶-X¹⁷-X¹⁸-Y²-R² 식 II

및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며, 여기서:

X¹은 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X²는 Leu 또는 D-Leu이며;

X³는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁴는 Gln, Asn, D-Gln, 또는 D-Asn이며;

X⁵는 Leu, D-Leu 또는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁶은 Leu, Trp, Phe, D-Leu, D-Trp 또는 D-Phe이며;

X⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X⁸은 Asn, D-Asn 또는 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X⁹는 Leu, Trp, D-Leu 또는 D-Trp이며;

X¹⁰은 Leu, Trp, D-Leu 또는 D-Trp이며;

X¹¹은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X¹³은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁴는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁵는 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹⁶은 Leu 또는 D-Leu이며;

X¹⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X¹⁸은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;

Y¹은 없거나 1 내지 4개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

Y²는 없으며;

R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;

R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;

여기서 잔기 X¹ 내지 X¹⁷의 0 내지 3개는 없으며;

여기서:

a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;

b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;

다른 실시예에서, 본 발명은 다음 식 III를 가진 22- 내지 29-잔기 펩타이드

R¹-Y¹-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸-X⁹-X¹⁰-X¹¹-X¹²-X¹³-X¹⁴-X¹⁵-X¹⁶-X¹⁷-X¹⁸-X¹⁹-X²⁰-X²¹-X²²-X²³-Y²-R² 식 III

및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며, 여기서:

X²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X³는 Leu 또는 D-Leu이며;

X⁴는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁵는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁶은 Gln, Asn, D-Gln, 또는 D-Asn이며;

X⁷은 Leu 또는 D-Leu이며;

X⁸은 Ala 또는 D-Ala이며;

X⁹는 Asp 또는 D-Asp이며;

X¹⁰은 Leu, Phe, Gly, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹¹은 Gly, Leu 또는 D-Leu이며;

X¹²는 Arg 또는 D-Arg이며;

X¹³은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹⁴는 Leu, Trp, Gly, D-Leu, 또는 D-Trp이며;

X¹⁵는 Leu 또는 D-Leu이며;

X¹⁶은 Gln 또는 D-Gln이며;

X¹⁷은 Glu, Leu, D-Glu 또는 D-Leu이며;

X¹⁸은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁹는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X²⁰은 Glu 또는 D-Glu이며;

X²¹은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²²는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X²³은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;

Y¹은 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

Y²는 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;

R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;

여기서:

a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;

b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;

식 I, II 또는 III의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염("ApoA-I 모방체")은 이상지질혈증, 심혈관 질환, 내혈관장애, 거대혈관질환, 또는 미세혈관질환(각각은 "병"이 된다)을 치료 또는 예방하는데 유용하다.

다른 실시예에서, 본 발명은 유효량의 ApoA-I 모방체 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 조성물을 제공한다.

다른 실시예에서, 본 발명은 유효량의 ApoA-I 모방체를 병의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여 병을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.

본 발명에 내용 중에 포함되어 있다.

도 1a는 개방된 고리는 친수성 아미노산 잔기를 나타내며 음영의 고리는 소수성 아미노산 잔기를 나타내는 이상화된 양쪽성 α-나선형의 쉬퍼-에드믄슨 나선형 바퀴 다이어그램이다.
도 1b는 도 1a의 이상화된 양쪽성 나선의 나선형 네트 다이어그램이다.
도 1c는 도 1a의 이상화된 양쪽성 나선의 나선형 원통 다이어그램이다.
도 2는 세그레스트 일치(Segrest's consensus) 22-mer 펩타이드(SEQ ID NO.1)의 쉬퍼-에드믄슨 나선 바퀴 다이어그램이다.
도 3a는 AopA-I 모방체들의 3차 등급의 갈라진 네트워크를 도시한다.
도 3b는 AopA-I 모방체들의 4차 등급의 갈라진 네트워크를 도시한다.
도 3c는 AopA-I 모방체들의 혼합 등급의 갈라진 네트워크를 도시한다.
도 3d는 AopA-I 모방체들의 예시적 "Lys-tree" 갈라진 네트워크를 도시한다.
도 4a는 본 발명의 AopA-I 모방체들로 얻을 수 있는 다양한 응집 상태 및 펩타이드-지질 복합체를 도시하는 도면이다. 왼쪽: 여러 펩타이드 나선의 상호작용으로부터 기인하여 정해진 펩타이드 농도, pH 및 이온 강도의 조건하에서 올리고머의 형성을 유도하는 펩타이드의 다중화 과정. 중앙: (응집의 이런 상태들 중 임의의 것에서) ApoA-I 모방체들과 지질 물질들(작은 단일막 리포솜("SUVs"))의 상호작용은 지질 재조직을 유도한다. 오른쪽: 지질:펩타이드 몰 비를 변화시킴으로써, 낮은 지질-펩타이드 비율로 지질-펩타이드 코마이셀로부터 크게 더 높은 지질:펩타이드 비율로 원반 입자들 및 최종적으로 대형 다중막 복합체까지의 다른 형태의 펩타이드-지질 복합체들을 얻을 수 있다.
도 4b는 지질:ApoA-I 모방체 비율의 정해진 범위에서 형성된 원반 ApoA-I 모방체-지질 복합체에 대한 일반적으로 허용된 모델을 도시한다. 디스크 모서리를 둘러싸는 각 ApoA-I 모방체는 이의 두 가장 근접한 이웃과 밀접하게 접촉한다.
도 5는 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이다)에 대한 대표적 겔 투과 크로마토그램이다.
도 6은 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 성분들은 1:1.35:1.35:0.30의 펩타이드 16:스핀고미에린:DPPC:DPPG의 중량비로 존재한다)를 토끼에게 투여 후 전체 콜레스테롤 중 HDL 분획의 기준선 증가의 그래프이다.
도 7은 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)를 토끼에게 투여 후 유리 콜레스테롤 중 HDL 분획의 증가의 그래프이다.
도 8은 기준선(어두운 선)에서와 2.5mg/kg의 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 투여 20분 후에 겔 투과 크로마토그래피 용출 프로파일이다.
도 9는 단식한 토끼에게 0(직사각형), 10(삼각형), 20(원형) 또는 30(마름모꼴)mg/kg의 투여량으로 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 주입 후 혈장 인지질의 증가의 그래프이다. 투여 후 다양한 시간에서, 혈장 인지질 레벨을 측정하였다. 기준선 값(4그룹에 대해 0.96 내지 1.18g/L)을 빼서 혈장 인지질 레벨의 증가를 측정하였다. 그룹당 3마리 동물이 있었다. 투여 30-34시간 후, 값들은 기준선 값으로 또는 그 이하로 되돌아왔다.
도 10a는 단식한 토끼에게 0(직사각형), 10(삼각형), 20(원형) 또는 30(마름모꼴)mg/kg의 투여량으로 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 주입 후 혈장 전체 콜레스테롤의 증가의 그래프이다. 투여 후 다양한 시간에서, 혈장 전체 콜레스테롤 레벨을 측정하였다. 기준선 값을 빼서 콜레스테롤 레벨의 증가를 측정하였다. 기준선 값은 0.59 내지 0.77g/L이었다. 그룹당 3마리 동물이 있었다. 투여 30-34시간 후, 값들은 기준선 값으로 또는 그 이하로 되돌아왔다.
도 10b는 단식한 토끼에게 0(직사각형), 10(삼각형), 20(원형) 또는 30(마름모꼴)mg/kg의 투여량으로 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 주입 후 혈장 유리 콜레스테롤의 증가의 그래프이다. 투여 후 다양한 시간에서, 혈장 유리 콜레스테롤 레벨을 측정하였다. 기준선 값을 빼서 콜레스테롤 레벨의 증가를 측정하였다. 기준선 값은 0.21 내지 0.27g/L이었다. 그룹당 3마리 동물이 있었다. 투여 30-34시간 후, 값들은 기준선 값으로 또는 그 이하로 되돌아왔다.
도 10c는 단식한 토끼에게 0(직사각형), 10(삼각형), 20(원형) 또는 30(마름모꼴)mg/kg의 투여량으로 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 주입 후 혈장 에스터화 콜레스테롤의 증가의 그래프이다. 투여 후 다양한 시간에서, 혈장 에스터화 콜레스테롤 레벨을 측정하였다. 기준선 값을 빼서 콜레스테롤 레벨의 증가를 측정하였다. 기준선 값은 0.39 내지 0.52g/L이었다. 그룹당 3마리 동물이 있었다. 투여 30-34시간 후, 값들은 기준선 값으로 또는 그 이하로 되돌아왔다.
도 11a는 단식한 토끼에게 0(직사각형), 10(삼각형), 20(원형) 또는 30(마름모꼴)mg/kg의 투여량으로 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 주입 후 혈장 HDL 전체 콜레스테롤의 증가의 그래프이다. 투여 후 다양한 시간에서, 혈장 HDL 전체 콜레스테롤을 측정하였다. 기준선 값을 빼서 콜레스테롤 레벨의 증가를 측정하였다. 기준선 HDL 전체 콜레스테롤은 0.33 내지 0.38g/L이었다. 그룹당 3마리 동물이 있었다. 투여 30-34시간 후, 값들은 기준선 값으로 또는 그 이하로 되돌아왔다.
도 11b는 단식한 토끼에게 0(직사각형), 10(삼각형), 20(원형) 또는 30(마름모꼴)mg/kg의 투여량으로 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 주입 후 혈장 HDL 유리 콜레스테롤의 증가의 그래프이다. 투여 후 다양한 시간에서, 혈장 HDL 유리 콜레스테롤을 측정하였다. 기준선 값을 빼서 콜레스테롤 레벨의 증가를 측정하였다. 기준선 HDL 유리 콜레스테롤은 0.11 내지 0.13g/L이었다. 그룹당 3마리 동물이 있었다. 투여 30-34시간 후, 값들은 기준선 값으로 또는 그 이하로 되돌아왔다.
도 11c는 단식한 토끼에게 0(직사각형), 10(삼각형), 20(원형) 또는 30(마름모꼴)mg/kg의 투여량으로 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 주입 후 혈장 LDL 전체 콜레스테롤의 증가의 그래프이다. 투여 후 다양한 시간에서, 혈장 LDL 전체 콜레스테롤을 측정하였다. 기준선 값을 빼서 콜레스테롤 레벨의 증가를 측정하였다. 기준선 LDL 전체 콜레스테롤은 0.17 내지 0.33g/L이었다. 그룹당 3마리 동물이 있었다. 투여 30-34시간 후, 값들은 기준선 값으로 또는 그 이하로 되돌아왔다.
도 11d는 단식한 토끼에게 0(직사각형), 10(삼각형), 20(원형) 또는 30(마름모꼴)mg/kg의 투여량으로 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 주입 후 혈장 LDL 유리 콜레스테롤의 증가의 그래프이다. 투여 후 다양한 시간에서, 혈장 LDL 유리 콜레스테롤을 측정하였다. 기준선 값을 빼서 콜레스테롤 레벨의 증가를 측정하였다. 기준선 LDL 유리 콜레스테롤은 0.06 내지 0.11g/L이었다. 그룹당 3마리 동물이 있었다. 투여 30-34시간 후, 값들은 기준선 값으로 또는 그 이하로 되돌아왔다.
도 11e는 단식한 토끼에게 0(직사각형), 10(삼각형), 20(원형) 또는 30(마름모꼴)mg/kg의 투여량으로 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 주입 후 혈장 VLDL 전체 콜레스테롤의 증가의 그래프이다. 투여 후 다양한 시간에서, 혈장 VLDL 전체 콜레스테롤을 측정하였다. 기준선 값을 빼서 콜레스테롤 레벨의 증가를 측정하였다. 기준선 VLDL 전체 콜레스테롤은 0.04 내지 0.11g/L이었다. 그룹당 3마리 동물이 있었다. 투여 30-34시간 후, 값들은 기준선 값으로 또는 그 이하로 되돌아왔다.
도 11f는 단식한 토끼에게 0(직사각형), 10(삼각형), 20(원형) 또는 30(마름모꼴)mg/kg의 투여량으로 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 주입 후 혈장 VLDL 유리 콜레스테롤의 증가의 그래프이다. 투여 후 다양한 시간에서, 혈장 VLDL 유리 콜레스테롤을 측정하였다. 기준선 값을 빼서 콜레스테롤 레벨의 증가를 측정하였다. 기준선 VLDL 유리 콜레스테롤은 0.02 내지 0.04g/L이었다. 그룹당 3마리 동물이 있었다. 투여 30-34시간 후, 값들은 기준선 값으로 또는 그 이하로 되돌아왔다.
도 12는 단식한 토끼에게 0(직사각형), 10(삼각형), 20(원형) 또는 30(마름모꼴)mg/kg의 투여량으로 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 주입 후 혈장 트라이글리세리드 레벨의 증가의 그래프이다. 투여 후 다양한 시간에서, 혈장 트라이글리세리드 레벨을 측정하였다. 기준선 값(4그룹에 대해 0.40 내지 0.80g/L)을 빼서 혈장 트라이글리세리드 레벨의 증가를 측정하였다. 그룹당 3마리 동물이 있었다.
도 13은 단식한 토끼에게 0(직사각형), 2.5(삼각형), 5(원형) 또는 10(마름모꼴)mg/kg의 투여량으로 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 주입 후 혈장 HDL 유리 콜레스테롤 레벨의 증가의 그래프이다. 기준선에서와 주입 개시 후 5, 20, 40, 60, 90 및 120분에서, 혈장 HDL 유리 콜레스테롤 레벨을 측정하였다. 기준선 값을 빼서 혈장 HDL 유리 콜레스테롤 레벨의 증가를 측정하였다. 그룹당 4마리 동물이 있었다.
도 14a는 기준선(어두운 선)에서와 2.5mg/kg 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 주입 20분 후 HPLC 겔 투과 크로마토그래피 용출 프로파일의 그래프이다. HPLC 겔 투과 크로마토그래피로부터 용출되는 지질 단백질 분획의 인라인(inline) 유리 콜레스테롤 분석으로부터의 흡수가 Y-축에 도시된다. 왼쪽으로부터 오른쪽으로의 피크들의 VLDL, LDL 및 HDL 분획에 해당한다.
도 14b는 기준선(어두운 선)에서와 5.0mg/kg 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 주입 20분 후 HPLC 겔 투과 크로마토그래피 용출 프로파일의 그래프이다. HPLC 겔 투과 크로마토그래피로부터 용출되는 지질 단백질 분획의 인라인 유리 콜레스테롤 분석으로부터의 흡수가 Y-축에 도시된다. 왼쪽으로부터 오른쪽으로의 피크들의 VLDL, LDL 및 HDL 분획에 해당한다.
도 15는 단식한 토끼에게 1mL/min(삼각형) 또는 0.2mL/min(마름모꼴)의 20mg/kg 투여량의 속도로 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)를 주입 후 혈장 HDL 유리 콜레스테롤 레벨의 증가의 그래프이다. 투여 후 다양한 시간에서, 혈장 HDL 유리 콜레스테롤 레벨을 측정하였다. 기준선 값을 빼서 혈장 HDL 유리 콜레스테롤 레벨의 증가를 측정하였다. 펩타이드 16/지질 복합체 치료 그룹당 4마리 동물이 있었고, 부형제 치료 그룹당 2마리 동물이 있었다.
도 16은 0일에 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 1회 복용량 투여 후 수컷 및 암컷 쥐에서 펩타이드 16(상부 패널), 유리 콜레스테롤(중간 패널) 및 인지질(하부 패널)의 키네틱 프로파일의 그래프를 도시한다. 시간에 따른 혈장에서 펩타이드 16 및 인지질 레벨의 감소는 펩타이드 16/지질 복합체의 제거를 나타낸다. 유리 콜레스테롤의 키네틱이 존재한다. 각 데이터 점은 평균±SD(N=3마리 쥐/그룹)을 나타낸다.
도 17은 26일에 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 수회 복용량 투여 후 수컷 및 암컷 쥐에서 펩타이드 16(상부 패널), 유리 콜레스테롤(중간 패널) 및 인지질(하부 패널)의 키네틱 프로파일의 그래프를 도시한다. 이런 동물들은 4주 동안 매 2일에 펩타이드 16/지질 복합체를 투여받았다. 시간에 따른 혈장에서 펩타이드 16 및 인지질 레벨의 감소는 펩타이드 16/지질 복합체의 제거를 나타낸다. 유리 콜레스테롤의 키네틱이 존재한다. 각 데이터 점은 평균±SD(N=3마리 쥐/그룹)을 나타낸다.
도 18은 0일에 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 수회 복용량 투여 후 수컷 및 암컷 필리핀 원숭이에서 펩타이드 16(상부 패널), 유리 콜레스테롤(중간 패널) 및 인지질(하부 패널)의 키네틱 프로파일의 그래프를 도시한다. 시간에 따른 혈장에서 펩타이드 16 및 인지질 레벨의 감소는 펩타이드 16/지질 복합체의 제거를 나타낸다. 유리 콜레스테롤의 키네틱이 존재한다. 각 데이터 점은 평균±SD(N=3마리 쥐/그룹)을 나타낸다.
도 19는 26일에 펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 수회 복용량 투여 후 수컷 및 암컷 필리핀 원숭이에서 펩타이드 16(상부 패널), 유리 콜레스테롤(중간 패널) 및 인지질(하부 패널)의 키네틱 프로파일의 그래프를 도시한다. 이런 동물들은 4주 동안 매 2일에 펩타이드 16/지질 복합체를 투여받았다. 시간에 따른 혈장에서 펩타이드 16 및 인지질 레벨의 감소는 펩타이드 16/지질 복합체의 제거를 나타낸다. 유리 콜레스테롤의 키네틱이 존재한다. 각 데이터 점은 평균±SD(N=3마리 쥐/그룹)을 나타낸다.
도 20a는 제제 A, B, 또는 C로 치료한 후 C57B1/6J 생쥐에서 혈장 전체 콜레스테롤의 투여 전 값으로부터 증가의 %의 그래프이다. 6마리 동물/당 그룹을 다른 시점에서 순차적으로 샘플화하였다.
도 20b는 제제 A, B, 또는 C로 치료한 후 C57B1/6J 생쥐에서 혈장 전체 콜레스테롤의 증가의 그래프이다. 6마리 동물/당 그룹을 다른 시점에서 순차적으로 샘플화하였다.
도 21a는 제제 A, B, 또는 C로 치료한 후 C57B1/6J 생쥐에서 혈장 에스터화 콜레스테롤의 투여 전 값으로부터 증가의 %의 그래프이다. 6마리 동물/당 그룹을 다른 시점에서 순차적으로 샘플화하였다.
도 21b는 제제 A, B, 또는 C로 치료한 후 C57B1/6J 생쥐에서 혈장 에스터화 콜레스테롤의 증가의 그래프이다. 6마리 동물/당 그룹을 다른 시점에서 순차적으로 샘플화하였다.

I. 정의

수 또는 숫자 바로 있을 때 "약"은 수 또는 숫자는 10% 많거나 적은 것을 의미한다. 예를 들어, "약 1:1"은 0.9:1 내지 1.1:1이다.

달리 정의하지 않는 한 본 명세서에서 사용된 "알킬"은 선택적으로 치환된 포화 가지형, 직선형 사슬 또는 고리 탄화수소 라디칼을 의미한다. 통상적인 알킬기는 메틸, 에틸, 프로필, 아이소프로필, 부틸, 아이소부틸, t-부틸, 펜틸, 아이소펜틸, 헥실 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 (C₁-C₆)알킬기이다. 일부 실시예들에서, 알킬기는 (C₁-C₄) 알킬이다. 달리 특정하지 않는 한, 알킬기는 치환되지 않는다.

달리 정의하지 않는 한 본 명세서에서 사용된 "알켄일"은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 가진 불포화 가지형, 직선형 사슬 또는 고리 비 방향족 탄화수소 라디칼을 의미한다. 하나 이상의 이중 결합은 시스 또는 트랜스 형태일 수 있다. 통상적인 알켄일기는 에텐일, 프로펜일, 아이소프로펜일, 부텐일, 아이소부텐일, tert-부텐일, 펜텐일, 헥센일 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 실시예들에서, 알켄일기는 (C₂-C₆) 알켄일이다.

달리 정의하지 않는 한 본 명세서에서 사용된 "알카인일"은 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 가진 불포화 가지형, 직선형 사슬 탄화수소 라디칼을 의미한다. 전형적인 알카인일기는 에탄인일, 프로파인일, 부타인일, 아이소부타인일, 펜타인일, 헥사인일 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 실시예들에서, 알카인일기는 (C₂-C₆) 알카인일기이다.

달리 정의하지 않는 한 본 명세서에서 사용된 "아릴"은 고리 내에 있는 각 원자가 C, O, N 또는 S이어서 헤테로사이클릭 방향족 고리를 포함하는 선택적으로 치환된 방향족 고리 시스템을 의미한다. 전형적인 아릴기는 벤질, 페닐, 나프틸, 안트라실, 퓨란, 이미다졸, 인다졸, 인돌, 아이소퀴놀린, 아이소티아졸, 아이소옥사졸, 피란, 피라진, 피라졸, 피리다진, 피리딘, 피리미딘, 피롤, 피롤리진, 퀴나졸린, 퀴놀린, 퀴놀리진, 퀴녹살린, 티아졸 및 티오펜을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 실시예들에서, 아릴기는 (C₅-C₂₆ 아릴)이다. 일부 실시예들에서, 헤테로아릴기는 5-20원 헤테로아릴이다. 다른 실시예들에서, 헤테로아릴기는 5-10원 헤테로아릴이다. 달리 특정하지 않는 한, 아릴은 치환되지 않는다.

달리 정의하지 않는 한 본 명세서에서 사용된 "아르알킬"은 아릴기로 치환된 알킬기를 의미한다.

달리 정의하지 않는 한 본 명세서에서 사용된 "치환된 알킬 또는 아릴"은 수소 원자들 중 하나 이상이 다른 치환기로 교체되는 알킬 또는 아릴기를 의미한다. 통상적인 치환기들은 -OR^a, -SR^a, -NR^aR^a, -NO₂, -CN, 할로겐, -SO₂R^a, -C(O)R^a, -C(O)OR^a 및 -C(O)NR^aR^a이며, 각 R^a는 독립적으로 수소, 알킬 또는 아릴이다.

달리 정의하지 않는 한 본 명세서에서 사용된 "친수성 표면"은 전체가 완전히 친수성 특성을 가진 나선의 표면을 의미한다.

달리 정의하지 않는 한 본 명세서에서 사용된 "소수성 표면"은 전체가 완전히 소수성 특성을 가진 펩타이드의 표면을 의미한다.

본 발명에서 사용된 대로 ApoA-I 모방체를 언급할 때, 말단-NH₂기들의 수는 0이며 R¹은 아미노기 보호기이며 1이고 R¹은 H이다.

본 발명에서 사용된 대로 ApoA-I 모방체를 언급할 때, 말단 -COOH기들의 수는 0이며 R²는 카복실 보호기이고 1이며 R²는 OH이다.

달리 정의하지 않는 한 본 명세서에서 사용된 "포유류"는 인간, 생쥐, 쥐, 기니 피크, 개, 고양이, 말, 소, 돼지 또는 원숭이, 침팬지 또는 비비와 같은 비인간 영장류를 의미한다. 한 실시예에서, 포유류는 인간이다.

ApoA-I 모방체와 연결해서 사용될 때 "유효량"은 병을 치료 또는 예방하는데 효과적인 양이다.

본 발명에서 사용된 "HDL 유리 콜레스테롤"은 혈청에 있는 HDL 입자들 내에 포함된 유리 수산기를 가진 콜레스테롤("유리 콜레스테롤")의 양을 의미한다. HDL 입자들은 ApoA-I 모방체/지질 복합체로부터 형성될 수 있다.

본 발명에서 사용된 "HDL 전체 콜레스테롤"은 유리 콜레스테롤의 양 더하기 혈청에 있는 HDL 입자들 내에 포함된 에스터화된 수산기를 가진 콜레스테롤("에스터화 콜레스테롤")의 양을 의미한다. HDL 입자들은 ApoA-I 모방체/지질 복합체로부터 형성될 수 있다.

달리 정의하지 않는 한 본 명세서에서 사용된 "아미노산 잔기"는 유전적으로 암호화된 아미노산 잔기들 및 비 유전적으로 암호화된 아미노산 잔기들을 포함한다.

본 발명에 사용된 유전적으로 암호화된 아미노산 잔기들에 대한 약자는 아래 표 1에 나타내었다.

아미노산	한 문자 약자	세 문자 약자
알라닌	A	Ala
아르기닌	R	Arg
아스파라긴	N	Asn
아스파르트산	D	Asp
시스테인	C	Cys
글루타민	Q	Gln
글루탐산	E	Glu
글리신	G	Gly
히스티딘	H	His
아이소루신	I	Ile
루신	L	Leu
리신	K	Lys
메티오닌	M	Met
페닐알라닌	F	Phe
프롤린	P	Pro
세린	S	Ser
트레오닌	T	Thr
트립토판	W	Trp
티로신	Y	Tyr
발린	V	Val

비 유전적으로 암호화된 아미노산 잔기들은 β-알라닌(β-Ala); 2,3-다이아미노프로피온산(Dpr); 니페코트산(Nip); 피페콜산(Pip); 오르니틴(Orn); 시트룰린(Cit); t-부틸알라닌(t-BuA); 2-t-부틸글리신(t-BuG); N-메틸아이소루신(MeIle); 페닐글리신(PhG); 사이클로헥실알라닌(ChA); 로르루신(Nle); 나프틸알라닌(Nal); 4-클로로페닐알라닌(Phe(4-Cl)); 2-플루오로페닐알라닌(Phe(2-F)); 3-플루오로페닐알라닌(Phe(3-F)); 4-플루오로페닐알라닌(Phe(4-F)); 페니실아민(Pen); 1,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀린-3-카복실산(Tic); β-2-티엔일알라닌(Thi); 메티오닌 설폭사이드(MSO); 호모아르기닌(hArg); N-아세틸리신(AcLys); 2,4-다이아미노부티르산(Dbu); 2,3-다이아미노부티르산(Dab); p-아미노페닐알라닌(Phe(pNH₂)); N-메틸 발린(MeVal); 호모시스테인(hCys), 호모페닐알라닌(hPhe); 호모세린(hSer); 하이드록시프롤린(Hyp); 호모프롤린(hPro); 및 상기한 것의 각각의 상응하는 D-거울상입체이성질체, 예를 들어, D-β-Ala, D-Dpr, D-Nip, D-Orn, D-Cit, D-t-BuA, D-t-BuG, D-MeIle, D-PhG, D-ChA, D-Nle, D-Nal, D-Phe(4-Cl), D-Phe(2-F), D-Phe(3-F), D-Phe(4-F), D-Pen, D-Tic, D-Thi, D-MSO, D-hArg, D-AcLys, D-Dbu, D-Dab, D-Phe(pNH₂), D-MeVal, D-hCys, D-hPhe, D-hSer, D-Hyp 및 D-hPro을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 다른 비 유전적으로 암호화된 아미노산 잔기는 3-아미노프로피온산; 4-아미노부티르산; 아이소니페코트산(Inp); 아자-피페콜산(azPip); 아자-프롤린(azPro); α-아미노아이소부티르산(Aib); ε-아미노헥사노산(Aha); δ-아미노발레르산(Ava); N-메틸글리신(MeGly)을 포함한다.

본 발명에서 사용된 "키랄성"은 적어도 하나의 키랄 센터를 가진 아미노산 잔기를 의미한다. 한 실시예에서, 키랄성 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이다. L-아미노산 잔기들의 예는 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val, β-Ala, Dpr, Nip, Orn, Cit, t-BuA, t-BuG, MeIle, PhG, ChA, Nle, Nal, Phe(4-Cl), Phe(2-F), Phe(3-F), Phe(4-F), Pen, Tic, Thi, MSO, hArg, AcLys, Dbu, Dab, Phe(pNH₂), MeVal, hCys, hPhe, hSer, Hyp 및 hPro를 포함하나 이에 제한되지 않는다.

한 실시예에서, 키랄성 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이다. D-아미노산 잔기들의 예는 D-Ala, D-Arg, D-Asn, D-Asp, D-Cys, D-Gln, D-Glu, D-His, D-Ile, D-Leu, D-Lys, D-Met, D-Phe, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Trp, D-Tyr, D-Val, D-β-Ala, D-Dpr, D-Nip, D-Orn, D-Cit, D-t-BuA, D-t-BuG, D-MeIle, D-PhG, D-ChA, D-Nle, D-Nal, D-Phe(4-Cl), D-Phe(2-F), D-Phe(3-F), D-Phe(4-F), D-Pen, D-Tic, D-Thi, D-MSO, D-hArg, D-AcLys, D-Dbu, D-Dab, D-Phe(pNH₂), D-MeVal, D-hCys, D-hPhe, D-hSer, D-Hyp 및 D-hPro를 포함하나 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서 사용된 "비 키랄성"은 키랄 센터를 갖지 않는 아미노산 잔기를 의미한다. 비 키랄성 아미노산 잔기들의 예는 Gly, Inp, Aib, Aha, Ava, MeGly, azPip 및 azPro를 포함하나 이에 제한되지 않는다.

달리 정의하지 않는 한 본 발명에서 사용된 "지방족 아미노산 잔기"는 지방족 탄화수소 측쇄를 가진 아미노산 잔기를 의미한다. 지방족 아미노산 잔기는 Ala(A), Val(V), Leu(L), Ile(I), Pro(P), azPro, Pip, azPip, β-Ala, Aib, t-BuA, t-BuG, MeIle, ChA, Nle, MeVal, Inp, Nip, hPro, D-Ala, D-Val, D-Leu, D-Ile, D-Pro, D-β-Ala, D-t-BuA, D-t-BuG, D-MeIle, D-Nle, D-MeVal, D-Nip, D-Pip, D-ChA 및 D-hPro를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 한 실시예에서, 지방족 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 지방족 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 지방족 아미노산 잔기는 비 키랄성 아미노산 잔기이다.

달리 정의하지 않는 한 본 발명에서 사용된 "친수성 아미노산 잔기"는 아이젠베르크 등., 1984, J. Mol. Biol. 179:125-142의 일반화된 일치 소수성 등급(normalized consensus scale of Einsenberg)에 따라 0 미만의 소수성을 나타내는 아미노산 잔기를 의미한다. 친수성 아미노산 잔기들은 Pro(P), Gly(G), Thr(T), Ser(S), His(H), Glu(E), Asn(N), Gln(Q), Asp(D), Lys(K) Arg(R), Dpr, Orn, Cit, Pen, MSO, hArg, AcLys, Dbu, Dab, Phe(p-NH₂), hCys, hSer, Hyp, D-Pro, D-Thr, D-Ser, D-His, D-Glu, D-Asn, D-Gln, D-Asp, D-Lys, D-Arg, D-Dpr, D-Orn, D-Cit, D-Pen, D-MSO, D-hArg, D-AcLys, D-Dbu, D-Dab, D-Phe(p-NH₂), D-hCys, D-hSer 및 D-Hyp를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 다른 친수성 아미노산 잔기들은 다음 화학식을 가진 C₁ _-4 곁가지 사슬 유사체를 포함하나 이에 제한되지 않는다:

및

여기서, n은 1 내지 4의 정수이다. 한 실시예에서, 친수성 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 친수성 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 친수성 아미노산 잔기는 비 키랄성 아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 친수성 아미노산 잔기는 산성 L-아미노산 잔기, 산성 D-아미노산 잔기, 또는 산성 비 키랄성 아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 친수성 아미노산 잔기는 염기성 L-아미노산 잔기, 염기성 D-아미노산 잔기 또는 염기성 비 키랄성 아미노산 잔기이다.

달리 정의하지 않는 한 본 발명에서 사용된 "친수성 아미노산 잔기"는 아이젠베르크 등., 1984, J. Mol. Biol. 179:125-142의 일반화된 일치 소수성 등급에 따라 0 초과의 소수성을 나타내는 아미노산 잔기를 의미한다. 소수성 아미노산 잔기는 Ile(I), Phe(F), Val(V), Leu(L), Trp(W), Met(M), Ala(A), Gly(G), Tyr(Y), β-Ala, Nip, t-BuA, t-BuG, MeIle, PhG, ChA, Nle, Nal, Phe(4-Cl), Phe(2-F), Phe(3-F), Phe(4-F), Tic, Thi, MeVal, hPhe, hPro, 3-아미노프로피온산, 4-아미노부티르산, Inp, Aib, Aha, Ava, MeGly, D-pro, D-Ile, D-Phe, D-Val, D-Leu, D-Trp, D-Met, D-Ala, D-Tyr, D-β-Ala, D-Nip, D-t-BuA, D-t-BuG, D-MeIle, D-PhG, D-ChA, D-Nle, D-Nal, D-Phe(4-Cl), D-Phe(2-F), D-Phe(3-F), D-Phe(4-F), D-Tic, D-Thi, D-MeVal, D-hPhe 및 D-hPro를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 다른 소수성 아미노산은 다음 화학식을 가진 C₁ _-4 곁가지 사슬 유사체를 포함하나 이에 제한되지 않는다:

및

, 여기서 n은 1 내지 4의 정수이다. 한 실시예에서, 소수성 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 소수성 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 소수성 아미노산 잔기는 비 키랄성 아미노산 잔기이다.

달리 정의하지 않는 한 본 발명에서 사용된 "극성 아미노산 잔기"는 생리적 pH에서 하전되지 않은 측쇄를 가지나 두 원자에 의해 공통으로 공유하는 전자들의 쌍이 원자들의 하나에 더욱 가깝게 고정되는 적어도 하나의 결합을 가지는 친수성 아미노산 잔기를 의미한다. 극성 아미노산 잔기는 Asn(N), Gln(Q), Ser(S), Thr(T), Cit, Pen, MSO, AcLys, hCys, hSer, Hyp, D-Asn, D-Gln, D-Ser, D-Thr, D-Cit, D-Pen, D-MSO, D-AcLys, D-hCys, D-hSer 및 D-Hyp을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 다른 극성 아미노산은 다음 화학식을 가진 C₁ _-4 곁가지 사슬 유사체를 포함하나 이에 제한되지 않는다:

및

, 여기서 n은 1 내지 4의 정수이다. 한 실시예에서, 극성 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 극성 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 극성 아미노산 잔기는 비 키랄성 아미노산 잔기이다.

달리 정의하지 않는 한 본 발명에서 사용된 "산성 아미노산 잔기"는 7 미만의 측쇄 pK 값을 가진 친수성 아미노산 잔기를 의미한다. 산성 아미노산 잔기는 통상적으로 수소 이온의 손실 때문에 생리적 pH에서 음으로 하전된 측쇄들을 가진다. 산성 아미노산 잔기는 Glu(E), Asp(D), D-Glu 및 D-Asp를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 다른 산성 아미노산은 다음 화학식을 가진 C₁ _-4 곁가지 사슬 유사체를 포함하나 이에 제한되지 않는다:

, 여기서 n은 1 내지 4의 정수이다. 한 실시예에서, 산성 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 산성 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 산성 아미노산 잔기는 비 키랄성 아미노산 잔기이다.

달리 정의하지 않는 한 본 발명에서 사용된 "염기성 아미노산 잔기"는 7 초과의 측쇄 pK 값을 가진 친수성 아미노산 잔기를 의미한다. 염기성 아미노산 잔기는 통상적으로 하이드로늄 이온과의 결합 때문에 생리적 pH에서 양으로 하전된 측쇄들을 가진다. 염기성 아미노산 잔기는 His(H), Arg(R), Lys(K), Dpr, Orn, hArg, Dbu, Dab, Phe(p-NH₂), D-His, D-Arg, D-Lys, D-Dpr, D-Orn, D-hArg, D-Dbu, D-Dab, 및 D-Phe(p-NH₂)를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 다른 염기성 아미노산 잔기는 다음 화학식을 가진 C₁ _-4 곁가지 사슬 유사체를 포함하나 이에 제한되지 않는다:

및

, 여기서 n은 1 내지 4의 정수이다. 한 실시예에서, 염기성 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 염기성 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 염기성 아미노산 잔기는 비 키랄성 아미노산 잔기이다.

달리 정의하지 않는 한 본 발명에서 사용된 "비극성 아미노산 잔기"는 생리적 pH에서 하전되지 않은 측쇄를 가지며 두 원자에 의해 공통으로 공유된 전자들의 쌍이 두 원자의 각각에 의해 실질적으로 동일하게 고정되는 결합들을 가지는 소수성 아미노산 잔기를 의미한다(즉, 측쇄는 극성이 아니다). 비극성 아미노산 잔기는 Leu(L), Val(V), Ile(I), Met(M), Gly(G), Ala(A), Pro(P), azPro, Pip, azPip, β-Ala, Nip, t-BuG, MeIle, ChA, Nle, MeVal, hPro, 3-아미노프로피온산, 4-아미노부티르산, Inp, Aib, Aha, Ava, MeGly, D-Leu, D-Val, D-Ile, D-Met, D-Ala, D-Pro, D-β-Ala, D-Inp, D-t-BuG, D-MeIle, D-ChA, D-Nle, D-MeVal, D-Nip, D- Pip 및 D-hPro를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 다른 비극성 아미노산 잔기는 다음 화학식을 가진 C₁ _-4 곁가지 사슬 유사체를 포함하나 이에 제한되지 않는다:

및

, 여기서 n은 1 내지 4의 정수이다. 한 실시예에서, 비극성 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 비극성 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 비극성 아미노산 잔기는 비 키랄성 아미노산 잔기이다.

달리 정의하지 않는 한 본 발명에서 사용된 "방향족 아미노산 잔기"는 적어도 하나의 방향족 또는 이형방향족 고리를 구비한 측쇄를 가진 소수성 아미노산 잔기를 의미한다. 방향족 또는 이형방향족 고리는 -OH, -SH, -CN, -F, -Cl, -Br, -I, -NO₂, -NO, -NH₂, -NHR, -NRR, -C(O)R, -C(O)OH, -C(O)OR, -C(O)NH₂, -C(O)NHR, -C(O)NRR와 같은 하나 이상의 치환기를 포함하며, 여기서 각 R은 독립적으로 (C₁-C₆)알킬, 치환된 (C₁-C₆)알킬, 5-26원 아릴 및 치환된 5-26원 아릴이다. 방향족 아미노산 잔기는 Phe(F), Tyr(Y), Trp(W), PhG, Nal, Phe(4-Cl), Phe(2-F), Phe(3-F), Phe(4-F), Tic, Thi, hPhe, D-Phe, D-Tyr 및 D-Trp, D-PhG, D-Nal, D-Phe(4-Cl), D-Phe(2-F), D-Phe(3-F), D-Phe(4-F), D-Tic, D-Thi 및 D-hPhe를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 다른 방향족 아미노산 잔기는 다음 화학식을 가진 C₁ _-4 곁가지 사슬 유사체를 포함하나 이에 제한되지 않는다:

및

, 여기서 n은 1 내지 4의 정수이다. 한 실시예에서, 방향족 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 방향족 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 방향족 아미노산 잔기는 비 키랄성 아미노산 잔기이다.

상기한 종류에 따른 유전적으로 암호화되고 비 유전적으로 암호화된 아미노산 잔기들의 분류는 아래 표에 요약된다. 다음 표는 단지 설명을 위해서 포함되며 본 명세서에 기술된 ApoA-I 모방체들에 사용될 수 있는 아미노산 잔기들의 포괄적 목록인 것으로 주장하지 않는다는 것을 이해해야 한다. 본 명세서에 구체적으로 개시되지 않은 다른 아미노산 잔기들은 본 명세서에 제공된 정의의 관점에서 이들의 관찰된 물리적 및 화학적 특성들을 기초로 쉽게 분류될 수 있다. 아미노산 잔기들의 일부 분류는 아래 표 2에 포함된다.

일부 아미노산 잔기들의 분류
분류	유전적으로 암호화	비 유전적으로 암호화
소수성
방향족	F, Y, W	PhG, Nal, Thi, Tic, Phe(4-Cl), Phe(2-F), Phe(3-F), Phe(4-F), hPhe
비극성	L, V, I, M, G, A, P	β-Ala, t-BuA, t-BuG, MeIle, Nle, MeVal, ChA, MeGly, Aib, Nip, hPro, 3-아미노프로피온산, 4-아미노부티르산, Inp, Aha, Ava, MeGly, azPro, Pip, azPip
지방족	A, V, L, I, P	β-Ala, Aib, t-BuA, t-BuG, MeIle, ChA, Nle, MeVal, Nip, hPro, Inp, azPro, Pip, azPip
친수성
산성	D, E
염기성	H, K, R	Dpr, Orn, hArg, Phe(p-NH₂), Dbu, Dab, hArg
극성	C, Q, N, S, T	Cit, Pen, AcLys, MSO, bAla, hSer, hCys, hSer, Hyp
나선-파괴	P, G	MeGly, L-아미노산(D-펩타이드에서), D-pro 및 다른 D-아미노산(L-펩타이드에서)

당업자가 알 수 있듯이, 상기한 종류들은 서로 배타적이지 않다. 따라서, 둘 이상의 물리적-화학적 특성을 나타내는 측쇄를 가진 아미노산 잔기는 여러 종류에 포함될 수 있다. 극성 치환기와 추가로 치환되는 방향족 모이어티들을 가진 아미노산 잔기들은 예를 들어, Tyr(Y) 또는 이의 상응하는 D-거울상이성질체는 방향족 소수성 특성 및 극성 또는 친수성 특성 모두를 나타낼 수 있고 따라서 방향족 및 극성 종류 모두에 포함될 수 있다. 임의의 아미노산 잔기의 적절한 종류는 특히 본 명세서에 제공된 설명의 관점에서 당업자에게 명백할 것이다.

또한, 아미노산 잔기 Cys(C) 또는 이의 상응하는 D-거울상이성지체는 다른 Cys(C) 잔기 또는 이들의 상응하는 D-거울상이성질체 또는 다른 설판일-함유 아미노산과 이황화 다리를 형성할 수 있다. 환원된 유리-SH 또는 산화된 이황화-다리 형태로 펩타이드에 존재하는 Cys(C) 잔기들(및 -SH 함유 측쇄들을 가진 다른 아미노산들)의 능력은 Cys(C) 잔기들 또는 이들의 상응하는 D-거울상이성질체들이 순(net) 소수성 또는 친수성 성질을 펩타이드에 제공하는지에 영향을 준다. Cys(C) 잔기 또는 이들의 상응하는 D-거울상이성질체가 아이젠베르크의 일반화된 일치 소수성 등급에 따라 0.29의 소수성을 나타내는 반면(상기, 아이젠베르크, 1984), 본 발명의 목적을 위해 Cys(C) 및 이의 상응하는 D-거울상이성질체는 상기한 일반적인 분류에도 불구하고, 극성 친수성 아미노산으로 분류된다는 것을 이해할 것이다.

II. ApoA-I 모방체

A. 식 I의 펩타이드

한 실시예에서, 본 발명은 다음 식 I를 가진 15- 내지 29-잔기 펩타이드

및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며, 여기서:

X²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X³는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X⁴는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁶은 Gln, Asn, D-Gln, D-Asn, 또는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-소수성 아미노산 잔기이며;

X⁸은 비 키랄성인 D- 또는 L-소수성 아미노산 잔기이며;

X⁹는 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁰은 Leu, Trp, Gly, Nal, D-Leu, D-Trp 또는 D-Nal이며;

X¹²는 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹³은 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁴는 Leu, Trp, Gly, D-Leu, 또는 D-Trp이며;

X¹⁵는 Leu, Gly 또는 D-Leu이며;

X¹⁶은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기 또는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X¹⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁸은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁹는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²⁰은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X²¹은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²²는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X²³은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;

Y¹은 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

Y²는 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;

R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;

여기서 X² 내지 X²²의 0 내지 8개는 없으며;

여기서:

a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;

b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;

다른 실시예에서, 본 발명은 다음 식 I를 가진 22- 내지 29-잔기 펩타이드

및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며, 여기서:

X²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X³는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X⁴는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁶은 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-소수성 아미노산 잔기이며;

X⁸은 비 키랄성인 D- 또는 L-소수성 아미노산 잔기이며;

X⁹는 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁰은 Leu, Trp, Gly, Nal, D-Leu, D-Trp 또는 D-Nal이며;

X¹²는 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹³은 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁴는 Leu, Trp, Gly, D-Leu, 또는 D-Trp이며;

X¹⁵는 Leu, Gly 또는 D-Leu이며;

X¹⁶은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁸은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁹는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²⁰은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X²¹은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²²는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X²³은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;

Y¹은 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

Y²는 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;

R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;

여기서:

a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;

b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;

다른 실시예에서, 본 발명은 다음 식 I를 가진 15- 내지 21-잔기 펩타이드

및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며, 여기서:

X²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X³는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X⁴는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁶은 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-소수성 아미노산 잔기이며;

X⁸은 비 키랄성인 D- 또는 L-소수성 아미노산 잔기이며;

X⁹는 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁰은 Leu, Trp, Gly, Nal, D-Leu, D-Trp 또는 D-Nal이며;

X¹²는 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹³은 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁴는 Leu, Trp, Gly, D-Leu, 또는 D-Trp이며;

X¹⁵는 Leu, Gly 또는 D-Leu이며;

X¹⁶은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁸은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁹는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²⁰은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X²¹은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²²는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X²³은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;

Y¹은 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

Y²는 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;

R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;

여기서 잔기 X² 내지 X²²의 1 내지 8개는 없으며;

여기서:

a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;

b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;

다른 실시예에서, 식 I의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 22개 아미노산 잔기의 길이이며 X¹은 없다.

다음 실시예들은 달리 명시하지 않는 한, 식 I의 ApoA-I 모방체들에 관한 것이다.

한 실시예에서, X² 및 X⁴는 모두 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이다. 다른 실시예에서, X⁵는 Gln, Lys, D-Gln 또는 D-Lys이다. 다른 실시예에서, X⁹는 산성 아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, X¹²는 Glu, Asn, Gln, Arg, D-Glu, D-Asn, D-Gln 또는 D-Arg이다. 다른 실시예에서, X¹³은 Glu, Asn, Gln, Arg, D-Glu, D-Asn, D-Gln 또는 D-Arg이다. 다른 실시예에서, X¹⁶은 산성 아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, X¹⁷은 Arg, Lys, Orn, D-Arg, D-Lys 또는 D-Orn이다. 다른 실시예에서, X²¹은 Leu 또는 D-Leu이다. 다른 실시예에서, X²²는 Ala, Val, Leu, D-Ala, D-Val 또는 D-Leu이다.

다른 실시예에서, X¹은 없고; X¹³은 산성 아미노산 잔기, Arg 또는 D-Arg이며; X¹⁴는 염기성 아미노산 잔기, Asn, Glu, D-Asn 또는 D-Glu이며 X² 내지 X¹² 및 X¹⁵ 내지 X²³은 상기 식 I에 정의한 것과 같다.

다른 실시예에서, X¹은 없고; X²는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며; X³는 Leu 또는 D-Leu이며; X⁴는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며; X⁵는 Lys, Orn, Gln, Asn, D-Lys, D-Orn, D-Gln 또는 D-Asn이며; X⁶는 Lys, Orn, Gln, Asn, D-Lys, D-Orn, D-Gln 또는 D-Asn이며; X⁷는 Leu, Gly, Nal, D-Leu 또는 D-Nal이며; X⁸는 Ala, Trp, Gly, Leu, Phe, Nal, D-Ala, D-Trp, D-Leu, D-Phe 또는 D-Nal; X⁹는 Asp, Glu, Gln, Lys, D-Asp, D-Glu, D-Gln 또는 D-Lys이며; X¹¹은 Leu, Gly, D-Leu 또는 Aib이며; X¹²는 Asp, Glu, Asn, D-Asp, D-Glu 또는 D-Asn이며; X¹³은 Asn, Gln, Glu, Arg, D-Asn, D-Gln, D-Glu 또는 D-Arg이며; X¹⁶은 Asp, Arg, Glu, D-Asp, D-Arg 또는 D-Glu이며; X¹⁷은 Lys, Arg, Orn, Asn, Glu, D-Lys, D-Arg, D-Orn, D-Asn 또는 D-Glu이며; X²⁰은 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이며; 및/또는 X²²는 Ala, Val, Leu, D-Ala, D-Val 또는 D-Leu이며; X¹⁰, X¹⁴, X¹⁵, X¹⁸, X¹⁹, X²¹ 및 X²³는 상기 식 I에서 정의한 것과 같다.

다른 실시예에서, X¹은 없고; X⁹는 Glu 또는 D-Glu이며; X¹²는 Glu 또는 D-Glu이며; X¹³은 Asn, Glu, D-Asn 또는 D-Glu이며; X¹⁴는 Leu 또는 D-Leu이며; X¹⁵는 Leu 또는 D-Leu이며; X¹⁶은 Glu 또는 D-Glu이며; X¹⁷은 Arg, Lys, D-Arg 또는 D-Lys이며; X¹⁸는 Phe 또는 D-Phe이며; X¹⁹는 Leu 또는 D-Leu이며; X²¹은 Leu 또는 D-Leu이며; 및/또는 X²²는 Val 또는 D-Val이며; X² 내지 X⁸, X¹⁰, X¹¹, X²⁰ 및 X²³은 상기 식 I에서 정의한 것과 같다.

다른 실시예에서, X¹은 없고; X²는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며; X³는 Leu 또는 D-Leu이며; X⁴는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며; X⁵는 Lys, Orn, Gln, Asn, D-Lys, D-Orn, D-Gln 또는 D-Asn이며; X⁶는 Lys, Orn, Gln, Asn, D-Lys, D-Orn, D-Gln 또는 D-Asn이며; X⁷은 Leu, Gly, Nal, D-Leu 또는 D-Nal이며; X⁸은 Ala, Trp, Gly, Leu, Phe, Nal, D-Ala, D-Trp, D-Leu, D-Phe 또는 D-Nal이며; X⁹은 Glu 또는 D-Glu이며; X¹¹은 Leu, D-Leu, Gly 또는 Aib이며; X¹²는 Glu 또는 D-Glu이며; X¹³은 Asn, Glu, D-Asn 또는 D-Glu이며; X¹⁴은 Leu 또는 D-Leu이며; X¹⁵는 Leu 또는 D-Leu이며; X¹⁶은 Glu 또는 D-Glu이며; X¹⁷은 Arg, Lys, D-Arg 또는 D-Lys이며; X¹⁸는 Phe 또는 D-Phe이며; X¹⁹는 Leu 또는 D-Leu이며; X²⁰은 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이며; X²¹은 Leu 또는 D-Leu이며; 및/또는 X²²는 Val 또는 D-Val이며; X¹⁰ 및 X²³은 상기 식 I에서 정의한 것과 같다.

다른 실시예에서, X¹은 없고, X⁵ 및 X⁶의 단 하나는 염기성 아미노산 잔기이며 X⁵ 및 X⁶의 다른 하나는 Gln, Asn, D-Gln 또는 D-Asn이다.

다른 실시예에서, Y¹ 또는 Y²는 없거나 1 내지 7개 아미노산 잔기를 가진 서열이다. 다른 실시예에서, 아미노산 서열의 아미노산 잔기들의 하나 이상은 산성 아미노산 잔기이다. 다른 실시예에서, 아미노산 서열의 아미노산 잔기들의 하나 이상은 염기성 아미노산 잔기이다.

다른 실시예에서, X⁵ 및 X⁶의 하나는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며 X⁵ 및 X⁶의 다른 하나는 Gln, Asn, D-Gln 또는 D-Asn이다.

다른 실시예에서, 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이다.

다른 실시예에서, 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이다.

다른 실시예에서, X¹은 없고; X⁷, X⁸, X¹⁰, X¹¹, X¹⁴ 및 X¹⁵은 Gly이며; X¹ 내지 X⁶, X⁹, X¹², X¹³, 및 X¹⁶ 내지 X²³은 Gly 이외의 것이다.

다른 실시예에서, X¹은 없고; X¹¹은 Gly이며; X⁷, X⁸, X¹⁰, X¹⁴ 및 X¹⁵의 각각은 Gly 이외의 것이다.

다른 실시예에서, X¹은 없고; X²는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며; X³는 Leu 또는 D-Leu이며; X⁴는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며; X⁵는 Gln 또는 D-Gln이며; X는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며; X⁷은 Leu, Nal, D-Leu 또는 D-Nal이며; X⁸는 Ala, Trp, D-Ala 또는 D- Trp이며; X⁹은 Glu 또는 D-Glu이며; X¹⁰은 Leu 또는 D-Leu이며; X¹¹은 Gly이며; X¹²는 Glu 또는 D-Glu이며; X¹³는 Asn 또는 D-Asn이며; X¹⁴는 Leu, Trp, D-Leu 또는 D-Trp이며; X¹⁵는 Leu 또는 D-Leu이며; X¹⁶는 Glu 또는 D-Glu이며; X¹⁷은 Arg 또는 D-Arg이며; X¹⁸은 Phe 또는 D-Phe이며; X¹⁹는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며; X²⁰은 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이며; X²¹은 Leu 또는 D-Leu이며; X²²는 Val 또는 D-Val이며; X²³은 Inp이다. 한 실시예에서, 식 I의 펩타이드는 아래 표 3에 나타낸 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다.

다른 실시예에서, X¹은 없고; X¹⁵은 Gly이며 X⁷, X⁸, X¹⁰, X¹¹ 및 X¹⁴의 각각은 Gly 이외의 것이다. 다른 실시예에서, 식 I의 펩타이드는:

펩타이드 10 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Gly-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 10); 또는

펩타이드 102

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Gly-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 102)

펩타이드 222 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Gly-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-azPro (SEQ. ID. NO. 222)

펩타이드 314 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Gly-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Pip (SEQ. ID. NO. 314)

펩타이드 406 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Gly-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-azPip (SEQ. ID. NO. 406)

또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다.

다른 실시예에서, X¹은 없고; X¹⁴은 Gly이며 X⁷, X⁸, X¹⁰, X¹¹ 및 X¹⁵의 각각은 Gly 이외의 것이다. 다른 실시예에서, 식 I의 펩타이드는:

펩타이드 11

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Gly-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 11); 또는

펩타이드 103

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Gly-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 103)

펩타이드 223 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Gly-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-azPro (SEQ. ID. NO. 223)

펩타이드 315 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Gly-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Pip (SEQ. ID. NO. 315)

펩타이드 407 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Gly-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-azPip (SEQ. ID. NO. 407)

또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다.

다른 실시예에서, X¹은 없고; X¹⁰은 Gly이며 X⁷, X⁸, X¹¹, X¹⁴ 및 X¹⁵의 각각은 Gly 이외의 것이다. 다른 실시예에서, 식 I의 펩타이드는:

펩타이드 12 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Gly-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 12); 또는

펩타이드 104 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Gly-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 104)

펩타이드 224 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Gly-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-azPro (SEQ. ID. NO. 224)

펩타이드 316 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Gly-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Pip (SEQ. ID. NO. 316)

펩타이드 408 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Gly-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-azPip (SEQ. ID. NO. 408)

또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다.

다른 실시예에서, X¹은 없고; X⁸은 Gly이며 X⁷, X¹⁰, X¹¹, X¹⁴ 및 X¹⁵의 각각은 Gly 이외의 것이다. 다른 실시예에서, 식 I의 펩타이드는:

펩타이드 13 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Gly-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 13); 또는

펩타이드 105 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Gly-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 105)

펩타이드 225 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Gly-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-azPro (SEQ. ID. NO. 225)

펩타이드 317 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Gly-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Pip (SEQ. ID. NO. 317)

펩타이드 409 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Gly-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-azPip (SEQ. ID. NO. 409)

또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다.

다른 실시예에서, X¹은 없고; X⁷은 Gly이며 X⁸, X¹⁰, X¹¹, X¹⁴ 및 X¹⁵의 각각은 Gly 이외의 것이다. 다른 실시예에서, 식 I의 펩타이드는:

펩타이드 14 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Gly-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 14); 또는

펩타이드 106 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Gly-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 106)

펩타이드 226 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Gly-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-azPro (SEQ. ID. NO. 226)

펩타이드 318 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Gly-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Pip (SEQ. ID. NO. 318)

펩타이드 410 Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Gly-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu- Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-azPip (SEQ. ID. NO. 410)

또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다.

다른 실시예에서, X¹은 없고; X⁷, X⁸, X¹⁰, X¹¹ , X¹⁴ 및 X¹⁵의 각각은 Gly 이외의 것이다.

X¹은 없고; X²는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며; X³는 Leu 또는 D-Leu이며; X⁴는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며; X⁵ 또는 X⁶의 하나는 Gln 또는 D-Gln이며 X⁵ 또는 X⁶의 다른 하나는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며; X⁷은 Leu, Nal, D-Leu 또는 D-Nal이며; X⁸는 Ala, Leu, Trp, Nal, D-Ala, D-Leu, D-Trp 또는 D-Nal; X⁹는 Glu 또는 D-Glu이며; X¹⁰은 Leu, Trp, Nal, D-Leu, D-Trp 또는 D-Nal이며; X¹¹은 Leu, D-Leu 또는 Aib이며; X¹²는 Glu 또는 D-Glu이며; X¹³은 Asn, Gln, D-Asn 또는 D-Gln이며; X¹⁴은 Leu, Trp, D-Leu 또는 D-Trp이며; X¹⁵은 Leu 또는 D-Leu이며; X¹⁶ 은 Glu 또는 D-Glu이며; X¹⁷은 Arg, Lys, D-Arg 또는 D-Lys이며; X¹⁸은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며; X¹⁹은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며; X²⁰은 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이며; X²¹은 Leu 또는 D-Leu이며; X²²는 Val, Leu, D-Val 또는 D-Leu이며 X²³는 Inp이다.

다른 실시에에서, X¹은 없고; X²는 Lys 또는 D-Lys이며; X³는 Leu 또는 D-Leu 이며; X⁴는 Lys 또는 D-Lys이며; X⁵는 Gln 또는 D-Gln이며; X⁶는 Lys 또는 D-Lys이며; X⁷은 Leu 또는 D-Leu이며; X⁸는 Ala 또는 D-Ala이며; X⁹은 Glu 또는 D-Glu이며; X¹⁰은 Leu 또는 D-Leu이며; X¹¹은 Leu 또는 D-Leu이며; X¹²은 Glu 또는 D-Glu이며; X¹³은 Asn 또는 D-Asn이며; X¹⁴은 Leu 또는 D-Leu이며; X¹⁵는 Leu 또는 D-Leu이며; X¹⁶은 Glu 또는 D-Glu이며; X¹⁷은 Arg 또는 D-Arg이며; X¹⁸은 Phe 또는 D-Phe이며; X¹⁹은 Leu 또는 D-Leu이며; X²⁰은 Asp 또는 D-Asp이며; X²¹은 Leu 또는 D-Leu이며; X²²는 Val 또는 D-Val이며; 및/또는 X²³은 Inp이다.

다른 실시예에서, X³는 Lys 또는 D-Lys 이외의 것이며; X⁹는 Trp 또는 D-Trp이외의 것이며; X¹¹은 Glu, Trp, D-Glu 또는 D-Trp 이외의 것이며; X¹²는 Trp, Leu, D-Trp 또는 D-Leu 이외의 것이며; X¹³은 Trp 또는 D-Trp 이외의 것이며; X¹⁵는 Lys, Trp, D-Lys 또는 D-Trp 이외의 것이며; X¹⁶은 Trp 또는 D-Trp 이외의 것이며; X¹⁷은 Trp, Leu, D-Trp 또는 D-Leu 이외의 것이며; X¹⁸은 Trp 또는 D-Trp 이외의 것이며; X¹⁹는 Lys, GIu, Trp, Nal, D-Lys, D-Glu, D-Trp 또는 D-Nal 이외의 것이며; 및/또는 X²²는 Val 또는 D-Val 이외의 것이다.

다른 실시예에서, 식 I의 펩타이드는 아래 표 4에 나타낸 펩타이드들 중 하나 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다.

B. 식 II의 펩타이드

한 실시예에서, 본 발명은 다음 식 II를 가진 14- 내지 22-잔기 펩타이드

및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하며, 여기서:

X¹은 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X²는 Leu 또는 D-Leu이며;

X³는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁴는 Gln, Asn, D-Gln, 또는 D-Asn이며;

X⁶은 Leu, Trp, Phe, D-Leu, D-Trp 또는 D-Phe이며;

X⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X⁹는 Leu, Trp, D-Leu 또는 D-Trp이며;

X¹⁰은 Leu, Trp, D-Leu 또는 D-Trp이며;

X¹¹은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X¹³은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁴는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁵는 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹⁶은 Leu 또는 D-Leu이며;

X¹⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X¹⁸은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;

Y¹은 없거나 1 내지 4개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

Y²는 없거나 1 내지 4개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;

R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;

여기서 잔기 X¹ 내지 X¹⁷의 0 내지 8개는 없으며;

여기서:

a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;

b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;

및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하며, 여기서:

X¹은 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X²는 Leu 또는 D-Leu이며;

X³는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁴는 Gln, Asn, D-Gln, 또는 D-Asn이며;

X⁶은 Leu, Trp, Phe, D-Leu, D-Trp 또는 D-Phe이며;

X⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X⁹는 Leu, Trp, D-Leu 또는 D-Trp이며;

X¹⁰은 Leu, Trp, D-Leu 또는 D-Trp이며;

X¹¹은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X¹³은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁴는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁵는 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹⁶은 Leu 또는 D-Leu이며;

X¹⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X¹⁸은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;

Y¹은 없거나 1 내지 4개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

Y²는 없으며;

R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;

R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;

여기서 잔기 X¹ 내지 X¹⁷의 0 내지 3개는 없으며;

여기서:

a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;

b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;

다른 실시예에서, 본 발명은 다음 식 II를 가진 14-잔기 펩타이드

및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하며, 여기서:

X¹은 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X²는 Leu 또는 D-Leu이며;

X³는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁴는 Gln, Asn, D-Gln, 또는 D-Asn이며;

X⁶은 Leu, Trp, Phe, D-Leu, D-Trp 또는 D-Phe이며;

X⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X⁹는 Leu, Trp, D-Leu 또는 D-Trp이며;

X¹⁰은 Leu, Trp, D-Leu 또는 D-Trp이며;

X¹¹은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X¹³은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁴는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁵는 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹⁶은 Leu 또는 D-Leu이며;

X¹⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X¹⁸은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;

Y¹은 없거나 1 내지 4개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

Y²는 없으며;

R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;

R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;

여기서 잔기 X¹ 내지 X¹⁷의 0 내지 8개는 없으며;

여기서:

a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;

b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;

한 실시예에서, 식 II의 펩타이드는 18-잔기 펩타이드이다.

한 실시예에서, 식 II의 펩타이드는 아래 표 5에 나타낸 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다.

C. 식 III의 펩타이드

다른 실시예에서, 본 발명은 다음 식 III를 가진 15- 내지 29-잔기 펩타이드

및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며, 여기서:

X²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X³는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X⁴는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁵는 Gln, Asn, D-Gln, D-Asn 또는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁶은 Gln, Asn, D-Gln, D-Asn 또는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-소수성 아미노산 잔기이며;

X⁸은 비 키랄성인 D- 또는 L-소수성 아미노산 잔기이며;

X⁹는 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁰은 Leu, Trp, Gly, Nal, D-Leu, D-Trp 또는 D-Nal이며;

X¹²는 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹³은 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁴는 Leu, Trp, Gly, D-Leu, 또는 D-Trp이며;

X¹⁵는 Leu, Gly 또는 D-Leu이며;

X¹⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁸은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁹는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²⁰은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X²¹은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²²는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X²³은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;

Y¹은 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

Y²는 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;

R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;

여기서 잔기 X² 내지 X²²의 0 내지 8개는 없으며

여기서:

a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;

b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;

및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며, 여기서:

X²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X³는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X⁴는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁶은 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-소수성 아미노산 잔기이며;

X⁸은 비 키랄성인 D- 또는 L-소수성 아미노산 잔기이며;

X⁹는 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁰은 Leu, Trp, Gly, Nal, D-Leu, D-Trp 또는 D-Nal이며;

X¹²는 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹³은 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁴는 Leu, Trp, Gly, D-Leu, 또는 D-Trp이며;

X¹⁵는 Leu, Gly 또는 D-Leu이며;

X¹⁶은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁸은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁹는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²⁰은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X²¹은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²²는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X²³은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;

Y¹은 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

Y²는 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;

R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;

여기서:

a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;

b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;

다른 실시예에서, 본 발명은 다음 식 III를 가진 15- 내지 21-잔기 펩타이드

및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하며, 여기서:

X²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X³는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X⁴는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁶은 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-소수성 아미노산 잔기이며;

X⁸은 비 키랄성인 D- 또는 L-소수성 아미노산 잔기이며;

X⁹는 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁰은 Leu, Trp, Gly, Nal, D-Leu, D-Trp 또는 D-Nal이며;

X¹²는 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹³은 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁴는 Leu, Trp, Gly, D-Leu, 또는 D-Trp이며;

X¹⁵는 Leu, Gly 또는 D-Leu이며;

X¹⁶은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-친수성 아미노산 잔기이며;

X¹⁸은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁹는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²⁰은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X²¹은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²²는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X²³은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;

Y¹은 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

Y²는 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;

R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;

여기서 잔기 X² 내지 X²²의 0 내지 8개는 없으며

여기서:

a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;

b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;

다른 실시예에서, 식 III의 펩타이드는 22개 아미노산 잔기의 길이이며 X¹은 없다.

한 실시예에서, 식 III의 펩타이드는 아래 표 6에 나타낸 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다.

다른 실시예들에서, 본 발명은 ApoA-I 모방체들을 포함하며 이의 아마이드 결합의 하나 이상은 치환된 아마이드 또는 아마이드의 동배체(isostere)를 포함하나 이에 제한되지 않는 아마이드 이외의 결합으로 선택적으로 대체된다. 따라서, 식 I, II 및 III 내의 여러 X¹ 내지 X²³, Y¹ 및 Y² 잔기은 본 발명의 특정 실시예들에서 아미노산의 관점에서 기술되며, 비 아마이드 결합은 하나 이상의 아마이드 결합을 대신하여 존재한다.

다른 실시예에서, ApoA-I 모방체들의 아마이드 결합의 하나 이상의 질소 원자는 치환되어, 치환된 아마이드 결합은 식 -C(O)NR'-을 가지며, 여기서 R'는 (C₁-C₆)알킬, (C₂-C₆)알켄일, (C₂-C₆)알카인일, (C₅-C₂₀)아릴, (C₆-C₂₆)알크아릴, 5-20원 헤테로아릴 또는 6-26원 알크헤테로아릴이다. 다른 실시예에서, R'는 -OR, -SR, -NRR, -NO₂, -CN, 할로겐, -SO₂R, -C(O)R, -C(O)OR 및 -C(O)NRR로 치환되며, 여기서 R은 독립적으로 수소, 알킬 또는 아릴이다.

다른 실시예에서, 비 아마이드 결합이 ApoA-I 모방체들의 아마이드 결합을 대체하며 -CH₂NH-, -CH₂S-, -CH₂CH₂-, -CH=CH-(시스 및 트랜스), -C(O)CH₂-, -CH(OH)CH₂- 및 -CH₂SO-를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 이런 비 아마이드 결합을 가진 화합물들 및 이런 화합물들의 제조 방법은 당업계에 주지되어 있다(예를 들어, Spatola, March 1983, Vega Data Vol. 1, Issue 3; Spatola, 1983, "Peptide Backbone Modifications" In: Chemistry 및 Biochemistry of Amino Acids Peptides and Proteins, Weinstein, ed., Marcel Dekker, New York, p. 267 (general review); Morley, 1980, Trends Pharm. Sci. 1:463-468; Hudson et al., 1979, Int. J. Prot. Res. 14:177-185 (-CH₂NH-, -CH₂CH₂-); Spatola et al., 1986, Life Sci. 38:1243-1249 (-CH₂-S); Hann, 1982, J. Chem. Soc. Perkin Trans. I. 1:307-314 (-CH=CH-, cis and trans); Almquist et al., 1980, J. Med. Chem. 23:1392- 1398 (-COCH₂-); Jennings-White et al., Tetrahedron. Lett. 23:2533 (-COCH₂-); 유럽특허출원 EP 45665 (1982) CA 97:39405 (-CH(OH)CH₂-); Holladay et al., 1983, Tetrahedron Lett. 24:4401-4404 (-C(OH)CH₂-); and Hruby, 1982, Life Sci. 31:189-199 (-CH₂-S-) 참조).

또한, ApoA-I 모방체들의 아마이드 결합의 하나 이상은 펩타이드의 구조 또는 활성을 현저하게 방해하지 않는 하나 이상의 펩타이드 유사 또는 아마이드 유사 모이어티로 대체될 수 있다. 적절한 아마이드 유사 모이어티는, 예를 들어, Olson et al., 1993, J. Med. Chem. 36:3039-3049에 기술되어 있다.

일부 실시예들에서, ApoA-I 모방체는 약학적으로 허용가능한 염의 형태이다. 염은 C-말단 또는 N-말단 또는 산성 또는 염기성 아미노산 잔기 측쇄에 형성될 수 있다.

일부 실시예들에서, 약학적으로 허용가능한 염은 금속염, 유기 아민염 또는 산 첨가염이다.

금속염은 식 I, II 또는 III의 펩타이드에 무기 염기의 첨가로부터 얻을 수 있다. 무기 염기는, 예를 들어, 수산화물, 탄산염, 중탄산염 또는 인산염과 같은 염기성 반대이온과 쌍을 이룬 금속 양이온으로 이루어진다. 금속은 알칼리 금속, 알칼리토금속, 전이 금속 또는 주족 금속일 수 있다. 일부 실시예들에서, 금속은 리튬, 나트륨, 칼륨, 세륨, 마그네슘, 망간, 철, 칼슘, 알루미늄 또는 아연이다.

유기 아민염은 식 I, II 또는 III의 펩타이드에 유기 아민의 첨가로부터 얻을 수 있다. 일부 실시예들에서, 유기 아민은 트라이에틸아민, 에탄올아민, 다이에탄올아민, 트라이에탄올아민, 모르폴린, 피페리딘, N-메틸피페리딘, N-에틸피페리딘, 다이벤질아민, 피페라진, 피리딘, 피라진 또는 피피라진이다.

산 첨가염은 식 I, II 또는 III의 펩타이드에 산의 첨가로부터 얻을 수 있다. 일부 실시예들에서, 산은 유기성이다. 일부 실시예들에서, 산은 무기성이다. 다른 실시예들에서, 산은 염산, 브롬산, 요오드산, 질산, 황산, 아황산, 인산, 아이소니코틴산, 락트산, 살리실산, 타르타르산, 아스코르브산, 겐티신산, 글루콘산, 글루카론산, 사카르산(saccaric acid), 포름산, 벤조산, 글루탐산, 판토텐산, 아세트산, 푸마르산, 숙신산, 메테인설폰산, 에테인설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 시트르산 또는 말레산이다. 또 다른 실시예들에서, 산 첨가염은 염산염, 브롬산염, 요오드산염, 질산염, 황산염, 아황산염, 황산수소염, 인산염, 산 인산염(acid phosphate), 아이소니코틴산염, 락트산염, 살리실산염, 타르타르산염, 중타르타르산염, 아스코르브산염, 겐티신산염, 글루콘산염, 글루카론산염, 사카르산염, 포름산염, 벤조산염, 글루탐산염, 판토텐산염, 아세트산염, 푸마르산염, 숙신산염, 메테인설폰산염, 에테인설폰산염, 벤젠설폰산염, p-톨루일설폰산염, 시트르산염 또는 말레산염이다.

일부 실시예들에서, R¹은 아미노 보호기이다. 일부 실시예들에서, 아미노 보호기는 (C₁-C₆)알킬, (C₂-C₆)알켄일, (C₂-C₆)알카인일, (C₅-C₂₆)아릴, (C₆-C₂₆)아르알킬, 5 내지 20원 헤테로아릴 또는 6 내지 26원 알크헤테로아릴; --C(O)R; --C(O)OR; --SO₂R; 또는 -SR이며, 여기서 R은 H 또는 (C₁-C₆)알킬, (C₂-C₆)알켄일, (C₂-C₆)알카인일, (C₅-C₂₆)아릴, (C₆-C₂₆)아르알킬, 5 내지 20원 헤테로아릴 또는 6 내지 26원 알크헤테로아릴이다. 다른 실시예들에서, (C₁-C₆)알킬, (C₂-C₆)알켄일, (C₂-C₆)알카인일, (C₅-C₂₀)아릴, (C₆-C₂₆)아르알킬, 5 내지 20원 헤테로아릴 또는 6 내지 26원 알크헤테로아릴은 -OR^a, -SR^a, -NR^aR^a, -NO₂, -CN, 할로겐, -SO₂R^a, -C(0)R^a, -C(O)OR^a 및 -C(O)NR^aR^a의 하나 이상으로 치환되며, 여기서 R^a는 독립적으로 수소, 알킬 또는 아릴이다. R¹이 H일 때, ApoA-I 모방체에서 아미노 보호기의 수는 0이고 R¹이 아미노 보호기일 때, ApoA-I 모방체에서 아미노 보호기의 수는 1이다.

다른 실시예들에서, 아미노 보호기는 단실(dansyl); 메톡시카본일; 에톡시카본일; 9-플루오렌일메톡시카본일; 2-클로로에톡시카본일; 2,2,2-트라이클로로에톡시카본일; 2-페닐에톡시카본일; t-부톡시카본일; 벤질옥시카본일; p-메톡시벤질옥시카본일; p-나이트로벤질옥시카본일; o-나이트로벤질옥시카본일; p-브로모벤질옥시카본일; p-클로로벤질옥시카본일; p-아이오도벤질옥시카본일; 2,4-다이클로로벤질옥시카본일; 다이페닐메톡시카본일; 3,5-다이메톡시벤질옥시카본일; 페녹시카본일; 2,4,6-트라이-t-부틸페녹시카본일; 2,4,6-트라이메틸벤질옥시카본일; 포르밀; 아세틸; 클로로아세틸; 트라이클로로아세틸; 트라이플루오로아세틸; 페닐아세틸; 피콜리노일; 벤조일; p-페닐벤조일; 프탈로일; 메틸; t-부틸; 알릴; [2-(트라이메틸실릴)에톡시]메틸; 2,4-다이메톡시벤질; 2,4-다이나이트로페닐; 벤질; 4-메톡시벤질; 다이페닐메틸; 트라이페닐메틸; 벤젠설펜일; o-나이트로벤젠설펜일; 2,4-다이나이트로벤젠설펜일; p-톨루엔설폰일; 벤젠설폰일; 2,3,6-트라이메틸-4-메톡시벤젠설폰일; 2,4,6-트라이메톡시벤젠설폰일; 2,6-다이메틸-4-메톡시벤젠설폰일; 펜타메틸벤젠설폰일; 4-메톡시벤젠설폰일; 2,4,6-트라이메틸벤젠설폰일; 또는 벤질설폰일이다. 다른 실시예들에서, 아미노 보호기는 아세틸, 포름일 또는 단실이다

일부 실시예들에서, R²는 카복실 보호기이다. 일부 실시예들에서, 카복실 보호기는 O-(C₁-C₆)알킬, O-(C₂-C₆)알켄일, O-(C₂-C₆)알카인일, O-(C₅-C₂₆)아릴, O-(C₆-C₂₆)아르알킬, O-(5 내지 20원 헤테로아릴) 또는 O-(6 내지 26원 알크헤테로아릴); 또는 -NRR이며, 여기서 R은 H 또는 (C₁-C₆)알킬, (C₂-C₆)알켄일, (C₂-C₆)알카인일, (C₅-C₂₆)아릴, (C₆-C₂₆)아르알킬, 5 내지 20원 헤테로아릴 또는 6 내지 26원 알크헤테로아릴이다. 다른 실시예들에서, (C₁-C₆)알킬, (C₂-C₆)알켄일, (C₂-C₆)알카인일, (C₅-C₂₆)아릴, (C₆-C₂₆)아르알킬, 5 내지 20원 헤테로아릴 또는 6 내지 26원 알크헤테로아릴은 -OR^a, -SR^a, -NR^aR^a, -NO₂, -CN, 할로겐, -SO₂R^a, -C(0)R^a, -C(O)OR^a 및 -C(O)NR^aR^a의 하나 이상으로 치환되며, 여기서 R^a는 독립적으로 수소, 알킬 또는 아릴이다. R¹이 H일 때, ApoA-I 모방체에서 카복실 보호기의 수는 0이고 R¹이 카복실 보호기일 때, ApoA-I 모방체에서 아미노 보호기의 수는 1이다.

다른 실시예에서, 카복실 보호기는 메톡시; 에톡시; 9-플루오렌일메톡시; 메톡시메톡시; 메틸티오메톡시; 테트라하이드로피라녹시; 테트라하이드로푸라녹시; 메톡시에톡시메톡시; 벤질옥시메톡시; 페나실옥시; p-브로모페나실옥시; α-메틸페나실옥시; p-메톡시페나실옥시; 데실옥시; 2-클로로에톡시; 2,2,2-트라이클로로에톡시; 2-메틸티오에톡시; 2-(p-톨루엔설폰일)메톡시; t-부톡시; 사이클로펜톡시; 사이클로헥스옥시; 알릴옥시; 메탈릴옥시; 시남옥시; α-메틸시남옥시; 페녹시; 2,6-다이메틸페녹시; 2,6-다이아이소프로필페녹시; 벤질옥시; 트라이페닐메톡시; 다이페닐메톡시; 2,4,6-트라이메틸벤질옥시; p-브로모벤질옥시; o-나이트로벤질옥시; N,N-다이메틸아미도; 피롤리딘일; 또는 피페리딘일이다.

또한 본 발명의 범위 내에 ApoA-I 모방체의 보호된 형태, 즉, 이의 -NH₂ 또는 -COOH기가 보호기로 보호된 AopA-I 모방체의 형태가 포함된다. 한 실시예에서, 하나 이상의 -NH₂기가 상기한 대로 아미노 보호기에 의해 보호된다. 다른 실시예에서, 하나 이상의 -COOH기가 상기한 대로 카복실 보호기에 의해 보호된다.

한 실시예에서, ApoA-I 모방체들은 하나 이상의 지질의 존재하에서 양쪽성 α-나선을 형성하는 능력을 가진다. "양쪽성"은 α-나선이 이의 긴 축을 따라 배향된 대향하는 친수성 및 소수성 표면들을 갖는 것을 의미하는데, 즉, 나선의 한 표면은 주로 친수성 측쇄들을 돌출시키는 반면 반대 표면은 주로 소수성 측쇄들을 돌출시킨다. 도 1a 및 1b는 예시적인 이상화된 양쪽성 α-나선의 대향하는 친수성 및 소수성 표면들의 두 예시적 도면을 제공한다. 도 1a는 쉬퍼-에드믄슨 나선형 바퀴 다이어그램이다(Schiffer and Edmundson, 1967, Biophys. J. 7:121-135). 바퀴에서, 나선의 긴 축은 페이지(page)에 수직이다. N-말단으로 시작하여, 연속적인 아미노산 잔기들(원으로 나타냄)은 100°간격으로 원의 주위 근처에 방사상으로 분포된다. 따라서, 아미노산 잔기 n+1은 잔기 n으로부터 100°에 위치하고, 잔기 n+2는 잔기 n+1로부터 100°에 위치하고 기타 등등이다. 100°배치는 이상화된 α-나선에서 통상적으로 관찰되는 회전당 3.6개 아미노산 잔기에 해당한다. 도 1a에서, 나선의 대향하는 친수성 및 소수성 표면들은 분명하게 보이며; 친수성 아미노산 잔기들은 개방된 원으로 표현되고 소수성 아미노산 잔기들은 음영의 원으로 표현된다.

도 1b는 도 1a의 이상화된 양쪽성 나선의 나선형 전체 다이어그램을 제공한다(Lim, 1978, FEBS Lett. 89:10-14). 전형적인 나선형 네트 다이어그램에서, α-나선은 이의 친수성 표면의 중심을 따라 절단되고 납작해진 원기둥으로 나타내어진다. 따라서, 나선의 소수성 모멘트에 의해 측정된 소수성 표면의 중심(Eisenberg et al., 1982, Nature 299:371-374)은 도면의 중앙에 놓이며 페이지의 평면 밖으로 상승하도록 배향된다. 절단되고 납작해지기 전에 나선 원기둥의 그림은 도 1c에 도시된다. 다른 평면들을 따라 원기둥을 절단함으로써, 동일한 양쪽성 나선의 다른 면이 관찰될 수 있고 나선의 특성들에 대한 다른 정보를 얻을 수 있다.

임의의 특정 이론에 한정되지 않으면서, ApoA-I 모방체들에 의해 형성된 양쪽성 나선의 특정 구조적 및/또는 물리적 특성이 활성에 중요할 수 있다고 생각된다. 이런 특성들은 α 나선의 양쪽성의 정도, 전체 소수성, 평균 소수성, 소수성 및 친수성 각도(angle), 소수성 모멘트, 평균 소수성 모멘트 및 순 전하를 포함한다.

ApoA-I 모방체들에 의해 형성된 양쪽성 나선의 양쪽성의 정도(소수성의 비대칭의 정도)은 나선의 소수성 모멘트(μ_H)를 계산함으로써 편리하게 정량화될 수 있다. 특정 펩타이드 서열에 대한 μ_H를 계산하는 방법은 당업계에 주지되어 있고, 예를 들어, 아이젠베르크, 1984, Ann, Rev. Biochem. 53:595-623에 기술된다. 특정 펩타이드에 대해 얻은 실제 μ_H는 펩타이드를 구성하는 아미노산 잔기들의 전체 수에 의존할 것이다. 따라서, 다른 길이의 펩타이드들에 대한 μ_H를 직접 비교하는 것은 일반적으로 유익하지 않다.

다른 길이의 펩타이드들의 양쪽성은 평균 소수성 모멘트(<μ_H>)에 의해 직접 비교될 수 있다. 평균 소수성 모멘트는 나선에서 잔기들의 수로 μ_H를 나눔으로써 얻을 수 있다(즉, <μ_H>=μ_H/N). 일반적으로, 아이젠베르크(Eisenberg, 1984, J. Mol. Biol. 179:125-142)의 일반화된 일치 소수성 등급을 사용하여 측정한, 0.45 내지 0.65 범위의 <μ_H>를 나타내는 ApoA-I 모방체들은 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 생각된다. 한 실시예에서, <μ_H>는 0.50 내지 0.60의 범위이다.

펩타이드의 전체 또는 총 소수성(H₀)은 펩타이드에서 각 아미노산 잔기의 소수성의 대수합을 함으로써 편리하게 계산될 수 있는데(즉, H₀=

H_i, 여기서 N은 펩타이드에서 아미노산 잔기들의 수이며 H_i는 i번째 아미노산 잔기의 소수성이다). 평균 소수성(<H₀>)은 아미노산 잔기들의 수로 나눈 소수성이다(즉, <H₀>=H₀/N). 일반적으로, 아이젠베르크(Eisenberg, 1984, J. Mol. Biol. 179:125-142)의 일반화된 일치 소수성 등급을 사용하여 측정한 -0.050 내지 -0.070의 범위의 평균 소수성을 나타내는 ApoA-I 모방체들은 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 생각된다. 한 실시예에서, 평균 소수성은 -0.030 내지 -0.055의 범위이다.

양쪽성 나선의 소수성 표면의 전체 소수성(H₀ ^pho)은 아래 정의된 소수성 각도에 해당하는 소수성 아미노산 잔기들의 소수성을 합산함으로써 얻을 수 있다(즉, H₀ ^pho=

=1 H_i, 여기서 H_i는 이미 정의한 것과 같으며 N_H는 소수성 표면에서 소수성 아미노산 잔기들의 전체 수이다). 소수성 표면의 평균 소수성(<H₀ ^pho>)은 H₀ ^pho/N_H이며 N_H는 위에서 정의한 것과 같다. 일반적으로, 아이젠베르크(Eisenberg, 1984, 상기; Eisenberg et al., 1982, 상기)의 일반화된 일치 소수성 등급을 사용하여 측정한 0.90 내지 1.20의 범위의 <H₀ ^pho>를 나타내는 ApoA-I 모방체는 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 생각된다. 한 실시예에서, <H₀ ^pho>는 0.94 내지 1.10의 범위이다.

소수성 각도(pho 각도)는 펩타이드가 쉬퍼-에드믄슨 나선 바퀴식 표현법(Schiffer-Edmundson helical wheel representation)으로 배열될 때 소수성 아미노산 잔기들의 최장 연속 거리에 의해 덮인 각도 또는 원호로서 일반적으로 정의된다(즉, 20°곱해진 바퀴 상의 연속된 소수성 잔기들의 수). 친수성 각도(phi 각도)은 360°와 pho 각도 사이의 차이(즉, 360°-pho angle)이다. 당업자는 pho 및 phi 각도는, 펩타이드에서 아미노산 잔기들의 수에 부분적으로 의존할 수 있다는 것을 인식할 것이다. 예를 들어, 도 2를 참조하면, 단지 18개 아미노산 잔기들이 세그레스트 일치(Segrest's consensus) 22-mer 펩타이드 Pro-Val-Leu-Asp-Glu-Phe-Arg-Glu-Lys-Leu-Asn-Glu-Glu-Leu-Glu-Ala- Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Lys (SEQ ID NO. 1)의 쉬퍼-에드믄슨 나선 바퀴의 약 1 회전에 일치하는 것을 볼 수 있다. 더 적은 아미노산 잔기들은 바퀴에 간격을 남기고; 더 많은 아미노산 잔기들은 바퀴의 특정 위치들이 하나 이상의 아미노산 잔기에 의해 차지하게 되게 한다.

15 내지 29개 잔기를 가진 ApoA-I 모방체와 같은 15개 이상의 아미노산 잔기를 가진 펩타이드의 경우에, 소수성 아미노산 잔기들의 "연속" 거리는 둘 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 바퀴를 따라 위치한 적어도 하나의 아미노산 잔기는 소수성 아미노산 잔기라는 것을 의미한다. 따라서, 도 2를 참조하면, pho 각도는 위치 20에 친수성 잔기의 출현에도 불구하고 잔기 16, 2, 6, 17, 10, 3 및 14에 의해 덮인 원호인데, 이는 바퀴 상에 동일한 위치를 공유하는 위치 2에 있는 잔기가 소수성 잔기이기 때문이다. 통상적으로, 160°내지 220°범위의 pho 각도를 가진 ApoA-I 모방체들은 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 생각된다. 일부 실시예들에서, pho 각도는 180°내지 200°범위이다.

펩타이드 16(Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 16)) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에서, 예시적인 ApoA-I 모방체인 양으로 하전된 아미노산 잔기들은 나선의 마지막 N-말단 회전에서 덩어리가 된다. 임의의 특정 이론에 한정되지 않으며, N-말단에 있는 염기성 잔기들의 덩어리는 전하(NH₃ ⁺)-나선 쌍극자 정전기 상호작용을 통해 나선을 안정화시키는 것으로 생각된다. 또한 안정화는 리신 측쇄와 나선 코어 사이의 소수성 상호작용을 통해 일어나는 것으로 생각된다(Groebke et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93:4025-4029; Esposito et al., 1997, Biopolymers 41:27-35 참조).

양으로 하전된 N-말단 덩어리를 제외하고, 펩타이드 16 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에 있는 음 전하들은 소수성 표면의 나머지 상에 분포되며, 회전 당 적어도 하나의 음으로 하전된(산성) 아미노산 잔기를 가져서, 나선의 친수성 표면을 따라 음 전하들을 연속적으로 신장시킨다. 하나의 양극 전하는 잔기 16에 위치하며, 나선 상에 1회전 떨어져 있는 산성 잔기와 염 다리를 형성함으로써 나선 안정성에 잠재적으로 영향을 미친다.

펩타이드 16 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 NMR 연구들은 펩타이드의 아미노산 잔기 13, 14, 17 및 20은 나선의 C-말단 근처에 소수성 덩어리를 형성한다는 것을 나타내는 것으로 생각된다. Phe-17은 이 덩어리의 중심에 있으며 소수성 덩어리를 안정화하는데 중요한 역할을 하는 것으로 생각된다.

임의의 특정 이론에 한정되지 않으면서, 펩타이드 16 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 잔기 13, 14, 17 및 20에 의해 형성된 소수성 덩어리는 지질 결합과 LCAT 활성화에 효과를 미치는데 중요하다고 생각된다. 양쪽성 펩타이드들은 이들의 소수성 표면을 지질 모이어티들의 알칼 사슬로 향하게 함으로써 인지질들을 결합하는 것으로 예상된다. 따라서, 이 매우 소수성인 덩어리는 본 발명의 ApoA-I 모방체들에 대해 관찰된 강한 지질 친화력에 영향을 준다고 생각된다. 지질 결합은 LCAT 활성화에 필요조건이기 때문에, 이 소수성 덩어리는 LCAT 활성화에 필수적이라고 생각된다.

방향족 잔기들은 펩타이드와 단백질을 지질에 연결하는데 중요할 수 있다(De Kruijff, 1990, Biosci. Rep. 10:127-130; O'Neil and De Grado, 1990, Science 250:645-651; Blondelle et al., 1993, Biochim. Biophys. Acta 1202:331-336). 따라서, 소수성 덩어리의 중앙에 위치한 Phe-17은 펩타이드 16 또는 이의 약학적으로허용가능한 염을 지질에 연결하는데 중요한 역할을 하는 것으로 생각된다.

ApoA-I 모방체들에 의해 형성된 α-나선의 긴 축은 통상적으로 전체적으로 굽은 모양을 가진다. 통상적인 양쪽성 나선들에서, 친수성 및 소수성 표면들의 수소 결합의 길이는 변하여 나선의 소수성 면이 오목하다는 것이 발견되었다(Barlow and Thornton, 1988, J. MoI. Biol. 201:601-619; Zhou et al., 1992, J. Am. Chem. Soc. 33:11174-11183; Gesell et al., 1997, J. Biomol. NMR 9:127-135). 이론에 한정되지 않으며, 나선의 소수성 면의 전체 만곡은 원반 복합체들을 결합하는데 중요할 것으로 생각된다 -- 굽은 나선은 펩타이드가 원반 입자들의 모서리 근처에 더 잘 "일치하게"하여, 펩타이드-디스크 복합체의 안정성을 증가시킨다.

ApoA-I의 일반적으로 허용된 구조 모델에서, 양쪽성 α-나선들은 원반 HDL의 모서리 주위에 채워진다(도 4b 참조). 이 모델에서, 나선들은 지질 아실 사슬을 향하고 있는 이들의 소수성 표면들과 정렬될 것으로 생각된다(Brasseur et al., 1990, Biochim. Biophys. Acta 1043:245-252). 나선들은 역평행 방식으로 정렬되고 나선들 사이의 협동 효과는 원반 HDL 복합체의 안정성에 영향을 주는 것으로 생각된다(상기 Brasseur et al.,). HDL 원반 복합체의 안정성에 영향을 주는 한 인자는 인접한 역평행 나선들 상의 잔기들 사이에 분자간(intermolecular) 염 다리 또는 수소 결합을 형성하는 산성 및 염기성 잔기들 사이의 이온성 상호작용의 존재라고 제안되었다. 이 모델에서, 펩타이드들은 단일 분자인 것으로 생각되지 않으며, 적어도 두 개의 다른 이웃한 펩타이드 분자들과 상호작용하고 있는 것으로 생각된다(도 4b)

각각 나선의 위치 i 및 i+3에서 산성 및 염기성 잔기들 사이의 분자내(intramolecular) 수소 결합 또는 염 다리 형성은 나선 구조를 안정화한다고 일반적으로 인정된다(Marqusee et al:, 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84(24):8898-8902).

따라서, ApoA-I 모방체들은 펩타이드들이 지질들과 결합할 때와 같은 경우일 수 있는, 동일한 방향으로 향하고 있는 소수성 표면들과 역평행 방식으로 정렬될 때 서로 분자내 수소 결합을 형성하는 능력을 가진다. ApoA-I 모방체들은 또한 나선의 N- 및 C-말단 근처에 분자내 수소 결합 또는 염 다리를 형성하는 능력을 가진다.

또한, 역평행 방식으로 정렬될 때, 나선들은 밀접하게 채워지며; 나선들 사이의 밀접한 접촉을 방해하는 입체장애가 없다. ApoA-I 모방체들은 역평행 방식으로 지질들에 결합될 때 분자내- 및/또는 분자간 염 다리 및/또는 수소 결합을 형성하기 위해 밀접하게 채워지고 이온적으로 상호작용하는 능력을 가진다.

ApoA-I 모방체들은 자가 결합할 수 있다. 자가 결합 현상은 pH, 펩타이드 농도 및 이온 강도의 조건에 의존하며, 모노머로부터 여러 멀티머 형태까지 여러 상태의 결합을 형성할 수 있다(도 4a). 펩타이드 응집체의 소수성 코어는 지질들과의 소수성 상호작용을 돕는다. 매우 낮은 농도에서도 응집하는 펩타이드들의 능력은 지질들에 대한 이들의 결합을 도울 수 있다. 펩타이드 응집체들의 코어에서 펩타이드-펩타이드 상호작용이 일어나고 지질-펩타이드 상호작용과 경쟁할 수 있다고 생각된다.

ApoA-I 모방체들의 응집체들의 소수성 코어는 지질들과의 소수성 상호작용을 돕는다. 매우 낮은 농도에서도 응집하는 ApoA-I 모방체들의 능력은 지질들에 대한 이들의 결합을 도울 수 있다. ApoA-I 모방체들과 지질들 사이의 상호작용은 펩타이드-지질 복합체의 형성을 유도한다. 도 4a에 도시된 대로, 얻은 복합체의 타입(코미셀(comicelles), 디스크, 소포 또는 다층)은 지질:펩타이드 몰 비에 의존할 수 있고, 코미셀들은 낮은 지질:펩타이드 몰 비에서 일반적으로 형성되며 원반 및 소포 또는 다층 복합체는 지질:펩타이드 몰 비를 증가시킴으로써 형성된다. 미셀들은 통상적으로 약 2 몰의 지질: 약 1 몰의 ApoA-I 또는 약 2 몰의 지질: 약 6 내지 10 몰의 ApoA-I 모방체의 비로 형성된다. 원반 복합체들은 통상적으로 약 50-100 몰의 지질: 약 1 몰의 ApoA-I 또는 약 6 내지 약 10 몰의 ApoA-I 모방체의 비로 형성된다. 소포 복합체들은 통상적으로 약 200 내지 300 몰의 지질: 약 1 몰의 ApoA-I 또는 약 6 내지 약 10 몰의 ApoA-I 모방체의 비로 형성된다. 이런 특성은 양쪽성 펩타이드(Epand, The Amphipathic Helix, 1993) and ApoA-I(Jones, 1992, Structure and Function of Apolipoproteins, Chapter 8, pp. 217-250)에 대해 기술되었다. 지질:펩타이드 몰 비는 또한 복합체들의 크기와 조성물을 결정한다.

D. 식 I, II 및 III의 펩타이드 및 이의 약학적으로 허용가능한 염의 변형 형태

다른 실시예들에서, ApoA-I 모방체들은 22개 또는 그 이하의 아미노산 잔기를 가진다. 사실은, ApoA-I 모방체들에 의해 형성된 양쪽성 나선의 전체 특성 및 성질을 실질적으로 보유하는 21, 20, 19, 18, 17, 16 또는 15개 아미노산 잔기를 포함하는 식 I, II 또는 III의 절단되거나 내부로 결실된 형태는 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 생각된다.

본 발명의 한 실시예에서, ApoA-I 모방체들의 절단된 형태는 N- 및/또는 C-말단으로부터 하나 이상의 아미노산 잔기를 결실시킴으로써 얻어진다. ApoA-I 모방체들의 내부로 결실된 형태는 ApoA-I 모방체들 내의 내부 위치들로부터 하나 이상의 아미노산 잔기를 결실시킴으로써 얻어진다. 결실된 내부 아미노산 잔기들은 연속 잔기 또는 비 연속 잔기일 수 있다.

당업자는 ApoA-I 모방체로부터 내부 아미노산 잔기를 결실시키는 것은 나선의 친수성-소수성 계면의 평면을 결실 지점에서 100°회전시킬 수 있다는 것을 인식할 것이다. 이런 회전은 최종 나선의 양쪽성 성질들을 현저하게 변화시킬 수 있기 때문에, 본 발명의 한 실시예에서, 하나 이상의 아미노산 잔기들은 나선의 전체 긴 축을 따라 소수성-친수성 계면의 평면의 정렬을 실질적으로 유지하도록 결실된다.

이것은 연속 또는 비 연속 아미노산 잔기들의 충분한 수를 결실시킴으로써 편리하게 성취될 수 있으며 그 결과 하나의 완벽한 나선 회전이 결실된다. 이상화된 α-나선은 회전 당 3.6개 잔기를 가진다. 따라서, 한 실시예에서, 3-4 연속 또는 비 연속 아미노산 잔기들의 그룹들이 결실된다. 3개 아미노산 잔기 또는 4개 아미노산 잔기가 결실되는지는 결실될 제 1 잔기의 나선 내의 위치에 의존할 수 있다. 양쪽성 나선 내의 임의의 특정한 출발점으로부터 하나의 완벽한 나선 회전을 구성하는 연속 또는 비 연속 아미노산 잔기들의 적절한 수를 측정하는 것은 당업자의 능력 내에 있다.

ApoA-I 모방체들은 실질적으로 방해하지 않는 다른 아미노산 잔기들에 의해 한 말단 또는 두 말단에서 또는 내부로 연장될 수 있고 일부 실시예들에서, 펩타이드들의 구조적 및/또는 기능적 성질을 더욱 향상시킨다. 사실상, 23, 24, 25, 26, 27, 28 또는 29개 아미노산 잔기들을 포함하는 연장된 ApoA-I 모방체들은 본 발명의 범위 내에 있다. 이런 연장된 ApoA-I 모방체들은 ApoA-I 모방체들의 순 양쪽성 및 다른 성질들을 실질적으로 보유할 수 있다. 물론, 아미노산 잔기들을 내부로 첨가하면 내부 결실에 대해 상기한 것과 유사한 방식으로 삽입 지점에서 소수성-친수성 계면의 평면을 회전시킬 수 있다는 것을 인식할 것이다. 따라서, 내부 결실과 관련하여 위에서 논의한 고려사항은 마찬가지로 내부 첨가에도 적용된다.

한 실시예에서, ApoA-I 모방체들은 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열에 의해 이들의 N- 및/또는 C-말단에서 연장된다.

한 실시예에서, ApoA-I 모방체들은 적어도 하나의 나선 회전에 의해 이들의 N- 및/또는 C-말단에서 연장된다. 이런 연장은 상기한 엔드-캡(end-cap) 아미노산 잔기들 및 단편들과 같은 지질들이 존재하에서 나선형 2차 구조를 안정화시킨다.

다른 실시예에서, ApoA-I 모방체들은 Lys(K)와 같은 단일 염기성 아미노산 잔기에 의해 N-말단에서 연장된다. 한 실시예에서, X¹은 Lys이고, X²는 Lys이고, X³는 Leu이고, X⁴는 Lys이고, X⁵는 Gln이고, X⁶는 Lys이고, X⁷는 Leu이고, X⁸는 Ala이고, X⁹ 는 Glu이고, X¹⁰는 Leu이고, X¹¹은 Leu이고, X¹²는 Glu이고, X¹³은 Asn이고, X¹⁴는 Leu이고, X¹⁵는 Leu이고, X¹⁶은 Glu이고, X¹⁷은 Arg이고, X¹⁸은 Phe이고, X¹⁹는 Leu이고, X²⁰은 Asp이고, X²¹은 Leu이고, X²²는 Val이고 X²³은 Inp이다.

R¹이 아미노 보호기 및/또는 R²가 카복시 보호기인 ApoA-I 모방체들의 형태인 ApoA-I 모방체들의 "보호된" 형태는 또한 본 발명의 범위 내에 포함된다. (N-아실화 펩타이드 아마이드/에스터/하이드라지드/알코올을 합성하고 및 이의 치환에 의해) 18개 이하의 아미노산 잔기를 가진 ApoA-I 모방체들의 N- 및/또는 C-말단 전하들을 제거하면 모방체의 보호되지 않은 형태의 활성에 근접하고, 일부 실시예들에서, 더 초과하는 모방체를 형성할 수 있다고 생각된다. 22개 이상의 아미노산 잔기를 갖는 일부 실시예들에서, N- 또는 C-말단을 차단하면 차단되지 않은 형태보다 더 낮은 활성을 나타내는 ApoA-I 모방체들을 형성할 수 있다고 생각된다. 그러나, 22개 이상의 아미노산 잔기들의 ApoA-I 모방체들의 N- 및 C-말단 모두를 보호하면 활성을 회복시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 한 실시예에서, 18개 이하의 아미노산 잔기를 가진 ApoA-I 모방체들의 N- 및/또는 C-말단(다른 실시예에서, 두 말단)은 보호되는 반면, 22개 이상의 아미노산 잔기를 가진 펩타이드의 N- 및/또는 C-말단은 모두 보호되거나 보호되지 않는다. 전형적인 N-말단 차단 그룹들은 R이 -H인 RC(O)-, (C₁-C₆)알킬, (C₂-C₆)알켄일, (C₂-C₆)알카인일, (C₅-C₂₀)아릴, (C₂-C2₆)알크아릴, 5-20원 헤테로아릴 또는 6-26원 알크헤테로아릴을 포함한다. 특정한 N-말단 차단 그룹들은 아세틸, 포르밀 및 단실을 포함한다. 전형적인 C-말단 차단 그룹들은 각 R이 독립적으로 위에서 정의한 것과 같은 -C(O)NRR 및 -C(O)OR을 포함한다. 특정 C-말단 차단 그룹들은 각 R이 메틸인 것들을 포함한다. 임의의 특정한 이론에 한정되지 않으며, 이런 말단 차단 그룹들은 지질들의 존재하에서 α-나선을 안정화한다고 생각된다(예를 들어, Venkatachelapathi et al., 1993, PROTEINS: Structure, Function and Genetics 15:349-359 참조).

E. 식 I, II 및 III의 펩타이드 및 이의 약학적으로 허용가능한 염의 다이머, 트라이머, 테트라머 및 멀티머

천연 ApoA-I의 구조는 지질들과 결합하는데 협력하는 역할을 하는 것으로 생각되는 8개 나선형 단위를 포함한다(Nakagawa et al., 1985, J. Am. Chem. Soc. 107:7087-7092; Anantharamaiah et al., 1985, J. Biol. Chem. 260:10248-10262; Vanloo et al., 1991, J. Lipid Res. 32:1253-1264; Mendez et al., 1994, J. Clin. Invest. 94: 1698-1705; Palgunari et al., 1996, Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 16:328-338; Demoor et al., 1996, Eur. J. Biochem. 239:74-84). 따라서, ApoA-I 모방체들의 다이머, 트라이머, 테트라머 및 더 높은 등급의 폴리머("멀티머")는 본 발명에 포함된다. 이런 멀미터들은 탠덤 반복체(tandem repeats), 가지 달린 네트워크 또는 이의 조합의 형태일 수 있다. ApoA-I 모방체들은 서로 직접 부착되거나 하나 이상의 링커에 의해 분리될 수 있다.

멀티머들을 포함하는 ApoA-I 모방체들은 식 I, II 또는 III의 펩타이드, 식 I, II 또는 III의 유사체, 식 I, II 또는 III의 변형 형태, 식 I, II 또는 III의 절딘된 형태 또는 내부로 결실된 형태, 식 I, II 또는 III의 연장된 형태 및/또는 이의 조합일 수 있다. ApoA-I 모방체들 및 이의 약학적으로 허용가능한 염은 헤드-투-테일 방식(즉, N-말단 대 C-말단), 헤드-투-헤드 방식(즉, N-말단 대 N-말단), 테일-투-테일 방식(즉, C-말단 대 C-말단) 또는 이의 조합으로 연결될 수 있다.

본 발명의 한 실시예에서, 멀티머들은 2, 3, 4 및 약 10개까지의 ApoA-I 모방체들의 탠덤 반복체들이다. 한 실시예에서, 멀티머들은 2 내지 8개 펩타이드의 탠덤 반복체이다. 따라서, 한 실시예에서, 본 발명은 다음 구조식:

을 가진 멀티머들을 제공하며, 여기서:

각 m은 독립적으로 0 내지 1의 정수이고, 한 실시예에서 m은 1이며;

n은 0 내지 10의 정수이고 한 실시예에서, n은 0 내지 8의 정수이며;

각 "HH"는 독립적으로 ApoA-I 모방체로부터 유도된 라디칼이며;

각 "LL"은 독립적으로 링커를 나타낸다.

구조(IV)에서, 링커 LL은 두 펩타이드를 서로 공유 결합시킬 수 있는 임의의 이기능성 분자일 수 있다. 따라서, 적절한 링커들은 작용기들이 펩타이드의 N- 및/또는 C-말단에 공유 결합될 수 있는 이기능성 분자들이다. 펩타이드의 N- 및/또는 C-말단에 부착하기 적합한 작용기들은 당업계에 주지되어 있고, 이런 공유 결합 형성에 영향을 미치는 적절한 화학반응들도 당업계에 주지되어 있다.

링커는 멀티머의 원하는 성질들에 따라 유연하고, 단단하고 또는 약간 단단할 수 있다. 적절한 링커들은, 예를 들어, Pro, azPro, Pip, azPip 또는 Gly 또는 약 2 내지 약 5, 10, 15 또는 20 또는 그 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 펩타이드 단편들과 같은 아미노산 잔기, n은 1 내지 12의 정수인 H₂N(CH₂)_nCOOH, HO(CH₂)nCOOH, 및 HO(CH₂CH₂O)nCH₂CH₂COOH와 같은 이기능성 유기 화합물들 등을 포함한다. 이런 링커와 이를 포함하는 화합물들의 제조 방법뿐만 아니라 이런 링커들의 예들은 당업계에 주지되어 있다(예를 들어, Hunig et al., 1974, Chem. Ber. 100:3039-3044; Basak et al., 1994, Bioconjug. Chem. 5(4):301-305 참조).

본 발명의 한 실시예에서, 탠덤 반복체들은 단일 프롤린 잔기에 의해 내부로 중단된다(internally punctuated). ApoA-I 모방체들은 N- 또는 C-말단 프롤린 잔기를 포함하지 않는 경우에, LL은 Pro, D-Pro, azPro, Pip, D-Pip 또는 azPip일 수 있고 m은 1이다.

본 발명의 일부 실시예들에서, 특정 조건들 하에서 하나 이상의 나선형 단편(HH)의 방출을 허용하는 절단가능한 링커를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 적절한 절단가능한 링커들은 프로테아제에 의해 인식되는 아미노산 잔기들의 서열들을 가진 펩타이드, 엔도뉴클레아제에 의해 절단될 수 있는 올리고뉴클레오티드 및 산성, 염기성 또는 다른 조건하에서 화학적 수단을 통해 절단될 수 있는 유기 화합물들을 포함한다. 통상적으로, 절단 조건은 멀티머를 구성하는 나선 단편들 및/또는 절단되지 않은 링커를 변형하거나 분해하지 않도록 비교적 온화할 것이다.

링커들을 절단하기 위한 수단뿐만 아니라 선택적으로 절단될 수 있는 펩타이드 및 올리고뉴클레오티드는 주지되어 있고 당업자에게 쉽게 명백해질 것이다. 선택적으로 절단될 수 있는 적절한 유기 화합물 링커들은 당업자에게 명백할 것이고, 예를 들어, 상기한 참조문헌들뿐만 아니라 WO 94/08051에 기술된 것들을 포함한다.

한 실시예에서, 사용된 링커들은 내인성 순환 효소를 위한 기질들인 펩타이드여서, 멀티머들이 생체내에서 선택적으로 절단되게 한다. 링커들을 절단하는데 적합한 내인성 효소는, 예를 들어, 프로아포리포단백질 A-I 프로펩티다아제이다. 적절한 효소들뿐만 아니라 이런 효소들을 위한 기질들로서 작용하는 펩타이드 단편들은 당업계에 주지되어 있다(예를 들어, Edelstein et al., 1983, J. Biol. Chem. 258:11430-11433; Zanis, 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:2574-2578 참조).

한 실시예에서, 충분한 길이와 유연성의 링커들은 구조(II)의 나선형 단편(HH)가 역평행 방식으로 정렬되게 하도록 사용되며 지질들의 존재하에서 분자간 수소 결합 또는 염 다리를 형성한다. 충분한 길이와 유연성의 링커들은 Pro, D-Pro, azPro, Pip, D-Pip, D-Pip, azPip, Gly, Cys-Cys, n은 1 내지 12 또는 4 내지 6인 H₂N(CH₂)_nCOOH, HO(CH₂)nCOOH, 또는 HO(CH₂CH₂O)nCH₂CH₂COOH, H₂N-아릴-COOH 및 탄수화물의 잔기 또는 라디칼을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

또한, 천연 아포리포단백질은 역평행 나선형 단편들 사이에 협동적인 결합을 허용하기 때문에, 예를 들어, ApoA-I, ApoA-II, ApoA-IV, ApoC-I, ApoC-II, ApoC-III, ApoD, ApoE 및 ApoJ를 포함하는 천연 아포리포단백질의 인접 나선들을 연결하는 펩타이드 단편들에 제 1 서열에서 해당하는 펩타이드 링커들은 식 I의 ApoA-I 모방체들을 연결하는데 편리하게 사용될 수 있다. 이런 서열들은 당업계에 주지되어 있다(예를 들어, Rosseneu et al., "Analysis of the Primary and of the Secondary Structure of the Apolipoproteins," In: Structure and Function of Lipoproteins, Ch. 6, 159-183, CRC Press, Inc., 1992 참조).

역평행 나선형 단편들의 탠덤 반복체들 사이에 분자간 수소 결합 또는 염 다리의 형성을 허용하는 다른 링커들은 β-회전 및 γ-회전과 같은 펩타이드 역회전들(reverse turns)뿐만 아니라 펩타이드 β-회전 및/또는 γ-회전의 구조들을 모방하는 유기 분자들을 포함한다. 일반적으로, 역회전들은 단일 폴리펩타이드 사슬이 역평행 β-시트 또는 역평행 α-나선형 구조의 영역들을 채택하도록 하기 위해 폴리펩타이드 사슬의 방향을 역전하는 펩타이드의 단편들이다. β-회전은 일반적으로 4개의 아미노산 잔기들로 구성되고 γ-회전은 일반적으로 3개의 아미노산 잔기들로 구성된다.

여러 펩타이드 β-회전의 형태들과 서열들은 당업계에 잘 기술되었고, 예를 들어, 타입-I, 타입-I', 타입-II, 타입-II', 타입-III, 타입-Ill', 타입-IV, 타입-V, 타입-V', 타입-VIa, 타입-VIb, 타입-VII 및 타입-VIII을 포함하나 이에 제한되지 않는다(Richardson, 1981, Adv. Protein Chem. 34:167-339; Rose et al., 1985, Adv. Protein Chem. 37: 1-109; Wilmot et al., 1988, J. MoI. Biol. 203:221-232; Sibanda et al., 1989, J. MoI. Biol. 206:759-777; Tramontano et al., 1989, Proteins: Struct. Funct. Genet. 6:382-394 참조).

β-회전과 같은 짧은 펩타이드 회전의 구체적인 형태들은 회전에 있는 특정 아미노산 잔기들(대개 Gly, Asn 또는 Pro)의 위치들에 주로 의존한다. 일반적으로, 타입-I β-회전은 Pro가 위치 3에서 발생할 수 없는 것을 제외하고, 회전의 위치 1 내지 4에 있는 임의의 아미노산 잔기와 사용될 수 있다. Gly가 위치 4에서 우위를 차지하며 Pro가 타입-I 및 타입-II 회전의 위치 2에서 우위를 차지한다. Asp, Asn, Ser 및 Cys 잔기들은 이들의 측쇄들이 잔기 3의 NH에 종종 수소 결합하는 주로 위치 1에서 발생한다.

타입-II 회전에서, Gly 및 Asn은 위치 3에서 가장 빈번하게 발생하는데, 이는 이들은 필요한 주쇄 각도들 가장 쉽게 채택하기 때문이다. 이상적으로, 타입-I' 회전들은 위치 2 및 3에 Gly를 가지며 타입-II' 회전들은 위치 2에 Gly를 가진다. 타입-III 회전들은 대부분의 아미노산 잔기들을 가질 수 있으나, 타입-III' 회전들은 주로 위치 2 및 3에 Gly를 필요로 한다. 타입-VIa 및 VIb 회전들은 일반적으로 cis 펩타이드 결합과 내부 잔기로서 Pro를 가진다. 단백질과 펩타이드에서 β-회전들의 다른 타입들과 서열들의 재검토를 위해서, 독자는 Wilmot et al., 1988, J. Mol. Biol. 203:221-232를 참조하기 바란다.

여러 펩타이드 γ-회전들의 형태와 서열들은 당업계에 잘 기술되었다(예를 들어, Rose et al., 1985, Adv. Protein Chem. 37: 1-109; Wilmer-White et al., 1987, Trends Biochem. Sci. 12:189-192; Wilmot et al., 1988, J. MoI. Biol. 203:221-232; Sibanda et al., 1989, J. MoI. Biol. 206:759-777; Tramontano et al., 1989, Proteins: Struct. Funct. Genet. 6:382-394 참조). β-회전 및 γ-회전 구조들 및 이들의 상응하는 서열들뿐만 아니라 이후에 발견된 펩타이드 β-회전 및 γ-회전 구조들 및 서열들의 이런 타입들의 전부는 본 발명에 구체적으로 포함된다.

선택적으로, 링커(LL)는 펩타이드 β-회전 또는 γ-회전의 구조를 모방하는 유기 분자 또는 모이어티를 포함할 수 있다. 이런 β-회전 및/또는 γ-회전 모방체 모이어티들뿐만 아니라 이런 모이어티들을 포함하는 펩타이드들의 합성 방법은 당업계에 주지되어 있고, 다른 것들 중에서, Giannis and Kolter, 1993 Angew. Chem. Intl. Ed. Eng. 32:1244-1267; Kahn et al., 1988, J. Molecular Recognition 1:75-79; 및 Kahn et al., 1987, Tetrahedron Lett. 28: 1623-1626에 기술된 것들을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 멀티머들은 가지 달린 네트워크의 형태이다(예를 들어, 도 3 참조). 이런 네트워크들은 둘 이상의 나선형 단위들이 간단한 연결 모이어티에 부착하게 하는 다기능 연결 모이어티들을 사용하여 편리하게 얻는다. 따라서, 가지 달린 네트워크들은 펩타이드의 N- 및/또는 C-말단에 공유결합할 수 있는 셋, 넷 또는 그 이상의 작용기를 가진 분자들을 사용한다. 적절한 연결 모이어티들은, 예를 들어, 하이드록실, 설판일, 아미노, 카복실, 아마이드 및/또는 에스터 작용기를 포함하는 측쇄들을 가진 아미노산들의 잔기들, 예를 들어, Ser(S), Thr(T), Cys(C), Tyr(Y), Asn(N), Gln(Q), Lys(K), Arg(R), Orn, Asp(D) 및 Glu(E)뿐만 아니라 상기한 것의 각각의 상응하는 D-거울상이성질체 또는 이런 작용기들을 포함하는 다른 유기 분자들의 잔기들을 포함한다.

단일 연결 모이어티에 부착된 나선형 단편들은 유사 말단을 통해 부착될 필요가 없다. 사실상, 일부 실시예들에서, 나선형 단편들은 역평행 방식으로 정렬되도록 하기 위해 단일 연결 모이어티에 부착되는데, 즉, 나선들의 일부는 이들의 N-말단을 통해 부착되고 나머지는 이들의 C-말단을 통해 부착된다.

나선형 단편들은 상기한 대로 연결 모이어티에 직접 부착될 수 있거나 하나 이상의 이기능성 링커(LL)에 의해 연결 모이어티로부터 이격될 수 있다.

도 3a 및 3b를 참조하면, 가지 달린 네트워크는 네트워크를 포함하는 "노드(nodes)"의 수의 면에서 기술될 수 있으며, 네트워크에서 각 다기능성 연결 모이어티가 노드를 구성한다는 것을 볼 수 있다. 도 3a 및 3b에서, 나선형 단편들(즉, ApoA-I 모방체들)은 원통으로 예시되고 다기능성 연결 모이어티(또는 노드)는 원(●)으로 예시되며, 원으로부터 나오는 선들의 수는 다기능성 연결 모이어티의 "등급(order)"(또는 작용기들의 수)를 나타낸다.

네트워크에서 노드들의 수는 일반적으로 나선형 단편들의 전체 원하는 수에 의존할 것이고 통상적으로 약 1 내지 2일 것이다. 물론, 원하는 나선형 단편들의 소정의 수의 경우에, 더 높은 등급의 연결 모이어티들을 가진 네트워크들은 더 적은 노드를 가질 것이라고 이해될 것이다. 예를 들어, 도 3a 및 3b를 참조하면, 7개 나선형 단위의 3차 네트워크(즉, 삼기능성 연결 모이어티를 가진 네트워크)는 3개의 노드를 갖는 반면(도 3a), 7개 나선형 단위의 4차 네트워크(즉, 사기능성 연결 모이어티를 가진 네트워크)는 단지 2개의 노드를 가진다(도 3b).

네트워크는 균일한 등급일 수 있는데, 즉, 모든 노드들이, 예를 들어, 삼기능성 또는 사기능성 모이어티인 네트워크일 수 있거나 혼합 등급일 수 있는데, 예를 들어, 노드들이, 예를 들어, 삼기능성 및 사기능성 연결 모이어티들의 혼합체인 네트워크일 수 있다. 물론, 균일한 등급의 네트워크에서도 연결 모이어티들은 동일할 필요가 없다고 이해될 것이다. 3차 등급 네트워크는, 예를 들어, 둘, 셋, 넷 또는 그 이상의 다른 삼기능성 연결 모이어티를 사용할 수 있다.

선형 멀티머들과 같이, 가지 달린 네트워크를 포함하는 나선형 단편들은 동일할 필요는 없으나 동일할 수 있다.

이런 혼합 등급 가질 달린 네트워크의 한 예는 도 3c에 예시된다. 도 3c에서, 나선형 단편들(즉, ApoA-I 모방체들)은 원기둥으로 예시되고 다기능성 연결 모이어티들은 원(●)으로 예시되며, 원으로부터 나오는 선들의 수는 다기능성 연결 모이어티의 "등급(order)"(또는 작용기들의 수)를 나타낸다. 나선형 단편들을 연결하는 선들은 상기한 대로 이기능성 링커 LL를 나타낸다. 가지 달린 네트워크들을 포함하는 나선형 단편들은 상기한 대로 ApoA-I 모방체들이 탠덤 반복체일 수 있다.

한 예시적 실시예에서, 본 발명의 가지 달린 네트워크는 다음 식으로 기술되며,

여기서:

각 X는 독립적으로 다음 식의 멀티머로부터 유도된 라디칼이며:

여기서:

각 HH는 독립적으로 식 I의 ApoA-I 모방체로부터 유도된 라디칼이며;

각 LL은 독립적으로 이기능성 링커이며;

각 m은 독립적으로 0 내지 1의 정수이며;

각 n은 독립적으로 0 내지 8의 정수이며;

N_ya 및 N_yb는 각각 독립적으로 다기능성 연결 모이어티이며 y_a 및 y_b는 각각 N_ya 및 N_yb 상의 작용기들의 수를 나타내며;

각 y_a 및 y_b는 독립적으로 3 내지 8의 정수이며; 및

p는 0 내지 7의 정수이다.

한 실시예에서, 가지 달린 네트워크는 "Lys 트리(tree)"를 포함하는데, 즉, 다기능성 연결 모이어티가 하나 이상의 Lys(K) 잔기들인 네트워크를 포함한다(예를 들어, 도 3d 참조).

한 예시적 실시예에서, 본 발명의 "Lys 트리" 가지 달린 네트워크는 다음 식으로 기술되며:

(VIII) 및

(VII)

여기서:

각 HH는 독립적으로 ApoA-I 모방체로부터 유도된 라디칼이며;

각 LL은 독립적으로 이기능성 링커이며;

각 n은 독립적으로 0 내지 8의 정수이며;

각 m은 독립적으로 0 내지 1의 정수이며;

R₁은 -OR 또는 -NRR이며; 및

각 R은 독립적으로 -H, (C₁-C₆)알킬, (C₂-C₆)알켄일, (C₂-C₆)알카인일 또는 (C₅-C₂₆)아릴이다.

일부 다른 예시적 ApoA-I 모방체들 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 아래 표 7에 나타내었다.

아세틸화된 N-말단 및 아마이드화된 C-말단을 가진 일부 예시적 ApoA-I 모방체들 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 아래 표 8 및 9에 나타내었다:

III. ApoA-I 모방체들의 합성

ApoA-I 모방체들은 펩타이드의 제조를 위한 당업계에 공지된 사실상 임의의 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, ApoA-I 모방체들은 통상적인 단계적 해결책 또는 고체상 펩타이드 합성 또는 재조합 DNA 기술을 사용하여 제조될 수 있다.

A. 화학적 합성

ApoA-I 모방체들은 통상적인 단계적 해결책 또는 고체상 합성을 사용하여 제조될 수 있다(예를 들어, Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, Williams et al., Eds., 1997, CRC Press, Boca Raton FIa., and references cited therein; Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach, Atherton & Sheppard, Eds., 1989, IRL Press, Oxford, England, 및 본 발명에서 인용한 참조문헌 참조).

선택적으로, ApoA-I 모방체들은, 예를 들어, Liu et al., 1996, Tetrahedron Lett. 37(7):933-936; Baca, et al., 1995, J. Am. Chem. Soc. 117:1881-1887; Tam et al., 1995, Int. J. Peptide Protein Res. 45:209-216; Schnolzer and Kent, 1992, Science 256:221-225; Liu and Tam, 1994, J. Am. Chem. Soc. 116(10):4149-4153; Liu and Tam, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:6584-6588; Yamashiro and Li, 1988, Int. J. Peptide Protein Res. 31:322-334에 기술된 것과 같이 단편 응축에 의해 제조될 수 있다. 이것은 특히 글리신잔기를 가진 펩타이드들에 대한 경우이다. ApoA-I 모방체들을 합성하는데 유용한 다른 방법들은Nakagawa et al., 1985, J. Am. Chem. Soc. 107:7087-7092에 기술된다.

N- 및/또는 C-말단 캐핑 그룹을 가진 ApoA-I 모방체들은 유기 화학의 표준 기술들을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 펩타이드의 N-말단을 아실화하는 방법 또는 펩타이드의 C-말단을 아마이드화 또는 에스터화하는 방법은 당업계에 주지되어 있다. N- 및/또는 C-말단에서 다른 변형을 수행하는 방식들은 당업자에게 명백할 것이고, 임의의 측쇄 작용기들을 보호하는 방식도 말단 차단 그룹을 부착하는데 필수적이기 때문에 당업자에게 명백할 것이다.

약학적으로 허용가능한 염들(카운터 이온들)은 이온 교환 크로마토그래피 또는 당업계에 주지된 것 다른 방법들에 의해 편리하게 제조될 수 있다.

탠덤 멀티머들의 형태인 ApoA-I 모방체들은 합성의 적절한 단계에서 펩타이드에 링커(들)을 첨가하여 편리하게 합성될 수 있다. 선택적으로, 나선형 단편들은 합성될 수 있고 각 단편은 링커와 반응할 수 있다. 물론, 실제 합성방법은 링커의 조성에 의존할 것이다. 적절한 보호 체계들과 화학반응들이 당업자에게 주지되어 있고 명백할 것이다.

가지 달린 네트워크의 형태인 ApoA-I 모방체들은 Tam, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5409-5413 및 Demoor et al., 1996, Eur. J. Biochem. 239:74-84에 기술된 트라이머 및 테트라머 수지들 및 화학반응들을 사용하여 편리하게 합성될 수 있다. 더 높거나 낮은 등급의 가지 달린 네트워크 또는 다른 ApoA-I 모방체 나선형 단편들의 조합을 포함하는 가지 달린 네트워크를 합성하기 위해 합성 수지들과 전략들을 변형하는 것은 펩타이드 화학 및/또는 유기 화학의 당업자의 능력 내에 있다.

바람직한 경우, 이황화 결합의 형성은 온화한 산화제들의 존재하에서 수행될 수 있다. 화학적 산화제들이 사용될 수 있거나 ApoA-I 모방체들은 이런 결합들에 영향을 주기 위해 대기 산소에 간단히 노출될 수 있다. 예를 들어, Tam et al., 1979, Synthesis 955-957; Stewart et al., 1984, Solid Phase Peptide Synthesis, 2d Ed., Pierce Chemical Company Rockford, 111.; Ahmed et al., 1975, J. Biol. Chem. 250:8477-8482; 및 Pennington et al., 1991 Peptides 1990 164- 166, Giralt and Andreu, Eds., ESCOM Leiden, The Netherlands에 기술된 것들을 포함하는 다양한 방법들이 당업계에 주지되어 있다. 다른 대안은 Kamber et al., 1980, Helv. Chim. Acta 63:899-915에 기술된다. 고체 지지체들에 대해 수행된 방법은 Albericio, 1985, Int. J. Peptide Protein Res. 26:92-97에 기술된다. 이런 방법들 중 임의의 것이 본 발명의 펩타이드들에 이황화 결합들을 형성하는데 사용될 수 있다.

하나 이상의 내부 글리신 잔기들을 가진 ApoA-I 모방체들은 단편 응축에 의해 비교적 높은 수율로 합성될 수 있어서, 대용량 생산에 장점들을 제공한다. 단편 응축, 즉, 더 큰 펩타이드 사슬을 형성하기 위해 작은 구성 펩타이드 사슬들을 같이 결합하는 것은 ApoA-I의 44개 아미노산 잔기 모방체들을 포함하는 여러 생물학적으로 활성인 펩타이드를 제조하는데 사용되었다(예를 들어, Nakagawa et al., 1985, J. Am Chem. Soc. 107:7087-7083; Nokihara et al., 1989, Peptides 1988:166-168; Kneib-Cordonnier et al., 1990, Int. J. Pept. Protein Res. 35:527-538 참조).

단편 응축을 통한 합성의 장점들은 용액 상에서 미리 형성된 단편들을 응축하는 능력과 최종 생성물의 정제의 용이함을 포함한다. 이 방법의 단점들은 응축 단계에서 낮은 결합 효율과 수율 및 특정 펩타이드 서열의 낮은 용해도를 포함한다. 응축 단계의 결합 효율은 결합 시간을 증가시킴으로써 증가될 수 있다. 통상적으로, 결합 시간을 증가시키면 생성물의 증가된 라세미화를 일으킨다(Sieber et al., 1970, HeIv. Chim. Acta 53:2135-2150). 그러나, 글리신은 키랄 센터가 없기 때문에, 라세미화가 일어나지 않는다(프롤린 잔기도, 입체 장애 때문에, 긴 결합 시간에 적은 라세미화가 일어나거나 라세미화가 일어나지 않는다). 따라서, 내부 글리신 잔기들을 포함하는 실시예들은 글리신 잔기들은 라세미화가 일어나지 않는다는 사실을 이용하는 구성요소 단편들을 합성함으로써 단편 응축을 통해 높은 수율로 대량 합성될 수 있다. 따라서, 하나 이상의 내부 글리신 잔기들을 가진 ApoA-I 모방체들은 대량 제조에 대한 합성 장점들을 제공한다.

B. 재조합 합성

만일 ApoA-I 모방체들이 유전적으로 암호화된 아미노산 잔기들로 전적으로 구성되거나 일부가 이로 구성되는 경우, ApoA-I 모방체들 또는 관련 부분은 통상적인 재조합 유전공학 기술들을 사용하여 합성될 수 있다.

재조합 생산을 위해서, 펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열은 적절한 발현 수단, 즉, 삽입된 암호화 서열의 전사와 번역을 위한 필수 요소들 또는 RNA 바이러스성 벡터인 경우, 복제와 번역을 위한 필수 요소들을 포함하는 벡터 속에 삽입된다. 그런 후에 발현 수단은 펩타이드를 발현할 적절한 표적 세포 속으로 트렌스펙트된다. 사용된 발현 시스템에 따라, 발현된 펩타이드는 당업계에 잘 정립된 절차들에 의해 분리된다. 재조합 단백질 및 펩타이드 생산 방법들은 당업계에 주지되어 있다(예를 들어, Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y.; and Ausubel et al., 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y. 참조, 이의 각각은 전문이 참조로 본 명세서에 포함된다).

생산 효율을 증가시키기 위해서, 폴리뉴클레오티드는 효소 절단 위치들에 의해 분리된 펩타이드의 여러 단위를 암호화하도록 설계될 수 있다--각각 호모폴리머(반복하는 펩타이드 단위) 또는 헤테로폴리머(함께 배열된 다른 펩타이드)는 이런 방식으로 처리될 수 있다. 결과로 얻은 폴리펩타이드는 펩타이드 단위들을 회복하기 위해서 (예를 들어, 적절한 효소에 의한 처리에 의해) 절단될 수 있다. 이것이 단일 프로모터에 의해 유도된 펩타이드들의 수율을 증가시킬 수 있다. 한 실시예에서, 폴리시스트론 폴리뉴클레오티드는 단일 mRNA가 캡-독립적(cap-independent) 번역 제어 서열; 예를 들어, 각 암호화 영역이 내부 리보솜 입구 위치(IRES)에 작동가능하게 연결된 여러 펩타이드(즉, 호모폴리머 또는 헤테로폴리머)를 암호화하는 단일 mRNA가 전사되도록 설계될 수 있다. 적절한 바이러스성 발현 시스템들에서 사용될 때, mRNA에 의해 암호화된 각 펩타이드의 번역은, 예를 들어, IRES에 의해 전사체의 내부로 명령되어진다. 따라서, 폴리시스트론 구조체는 단일의, 대형 폴리시스트론 mRNA의 전사를 명령하고, 이것이 차례로 여러 개의, 개별 펩타이드들의 번역을 명령한다. 이런 방법은 폴리단백질들의 생산과 처리를 배제하며 단일 프로모터에 의해 유도된 펩타이드의 수율을 현저하게 증가시킬 수 있다.

다양한 호스트-발현 벡터 시스템들이 ApoA-I 모방체들을 발현하는데 사용될 수 있다. 이들은, 적절한 암호화 서열을 포함하는 재조합 박테리오파아지 DNA 또는 플라스미드 DNA 발현 벡터들에 의해 변형된 박테리아; 적절한 암호화 서열을 포함하는 재조합 효모 또는 곰팡이 발현 벡터들에 의해 변형된 효모 또는 섬사상 곰팡이와 같은 미생물; 적절한 암호화 서열을 포함하는 재조합 바이러스 발현 벡터(예를 들어, 바큘로바이러스)에 의해 감염된 곤충 세포 시스템; 적절한 암호화 서열을 포함하는 재조합 바이러스 발현 벡터(예를 들어, 꽃양배추 모자이크 바이러스 또는 담배 모자이크 바이러스)에 의해 감염된 또는 재조합 플라스미드 발현 벡터(예를 들어, Ti 플라스미드)에 의해 변형된 식물 세포 시스템; 또는 동물 세포 시스템을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

발현 시스템들의 발현 요소들은 이들의 강도와 특이성이 변할 수 있다. 사용된 호스트/벡터 시스템에 따라, 구조성 및 유도성 프로모터들을 포함하는 여러 적절한 전사 및 번역 요소들 중 임의의 것이 발현 벡터에 사용될 수 있다. 예를 들어, 박테리아 시스템들에서 복제될 때, 박테리오파아지 λ의 pL, plac, ptrp, ptac(ptrp-lac 하이브리드 프로모터) 및 등과 같은 유도성 프로모터들이 사용될 수 있고; 곤충 세포 시스템들에서 복제될 때, 바큘로바이러스 다각체 프로모터와 같은 프로모터들이 사용될 수 있고; 식물 세포 시스템들에서 복제될 때, 식물 세포들의 게놈으로부터 유도된 프로모터들(예를 들어, 열 충격 프로모터; RUBISCO의 소형 서브유닛을 위한 프로모터; 클로로필 a/b 결합 단백질을 위한 프로모터) 또는 식물 바이러스들로부터 유도된 프로모터들(예를 들어, CaMV의 35S RNA 프로모터; TMV의 외피 단백질 프로모터)이 사용될 수 있고; 포유류 세포 시스템들에서 복제될 때, 포유류 세포들의 게놈으로부터 유도된 프로모터들(예를 들어, 메탈로티오네인 프로모터) 또는 포유류 바이러스들로부터 유도된 프로모터들(예를 들어, 아데노바이러스 후기 프로모터; 백신 바이러스 7.5K 프로모터)가 사용될 수 있고; 발현 생성물의 여러 복사체들을 포함하는 세포주들을 생성할 때, SV40-, BPV- 및 EBV-기초 바이러스들이 적절한 선별 마커와 함께 사용될 수 있다.

식물 발현 벡터들이 사용되는 경우에, ApoA-I 모방체들를 암호화하는 서열들의 발현은 여러 프로모터 중 임의의 것에 의해 유도될 수 있다. 예를 들어, CaMV의 35S RNA 및 19S RNA 프로모터(Brisson et al., 1984, Nature 310:511-514)와 같은 바이러스성 프로모터들 또는 TMV의 외피 단백질 프로모터들(Takamatsu et al., 1987, EMBO J. 6:307-311)이 사용될 수 있고; 선택적으로, RUBISCO의 소형 서브유닛(Coruzzi et al., 1984, EMBO J. 3: 1671-1680; Broglie et al., 1984, Science 224:838-843) 또는 열 충격 프로모터들, 예를 들어, 대두 hsp17.5-E 또는 hsp17.3-B(Gurley et al., 1986, MoI. Cell. Biol. 6:559-565)와 같은 식물 프로모터들이 사용될 수 있다. 이런 구조체들은 Ti 플라스미드, Ri 플라스미드, 식물 바이러스 벡터, 직접 DNA 변형, 미세주사, 전기천공 등을 사용하여 식물 세포들 속에 주입될 수 있다. 이런 기술들의 재검토를 위해서, 예를 들어, Weissbach & Weissbach, 1988, Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, N. Y., Section VIII, pp. 421-463; 및 Grierson & Corey, 1988, Plant Molecular Biology, 2d Ed., Blackie, London, Ch. 7-9를 참조하기 바란다.

ApoA-I 모방체들을 생산하는데 사용될 수 있는 한 곤충 발현 시스템에서, 오토그라파 캘리포니아 핵다각체병 바이러스(AcNPV)가 외래 유전자들을 발현하기 위한 벡터로 사용된다. 이 바이러스들은 도둑나방(spodoptera frugiperda) 세포들에서 성장한다. 암호화 서열은 바이러스의 비 필수 영역(예를 들어 다면체 유전자) 속에 복제될 수 있으며 AcNPV 프로모터의(예를 들어, 다면체 프로모터)의 제어하에 놓일 수 있다. 암호화 서열의 성공적인 삽입은 다면체 유전자의 불활성화 및 막하지 않은 재조합 바이러스(즉, 다면체 유전자에 의해 암호화된 단백질 외피가 없는 바이러스)의 생산을 일으킬 것이다. 그런 후에 이런 재조합 바이러스들은 삽입된 유전자가 발현되는 도둑나방 세포들을 감염시키는데 사용된다(예를 들어, Smith et al., 1983, J. Virol. 46:584; Smith, U.S. Pat. No. 4,215,051). 이런 발현 시스템의 다른 예들은 Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 2, Ausubel et al., eds., Greene Publish. Assoc. & Wiley Interscience에서 발견할 수 있다.

포유류 호스트 세포들에서, 여러 바이러스-기초 발현 시스템이 사용될 수 있다. 아데노바이러스가 발현 벡터로 사용되는 경우에, 암호화 서열은 아데노바이러스 전사/번역 제어 복합체, 예를 들어, 후기 프로모터 및 3자 리더 서열(tripartite leader sequence)에 결찰될 수 있다. 이 키메릭 유전자는 생체외 또는 생체내 재조합에 의해 아데노바이러스 게놈에 삽입될 수 있다. 바이러스 게놈의 비 필수 영역(예를 들어, 영역 E1 또는 E3)에서의 삽입은 감염된 호스트들에서 생장할 수 있고 펩타이드를 발현할 수 있는 재조합 바이러스를 생성할 것이다(예를 들어, Logan & Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 81:3655-3659 참조). 선택적으로, 백신 7.5K 프로모터가 사용될 수 있다(예를 들어, Mackett et al., 1982, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 79:7415-7419; Mackett et al., 1984, J. Virol. 49:857-864; Panicali et al., 1982, Proc. Natl. Acad. Sci. 79:4927-4931 참조).

ApoA-I 모방체들을 생산하기 위한 다른 발현 시스템들은 당업자에게 명백할 것이다.

C. 정제

ApoA-I 모방체들은 역상 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 겔 전기영동, 친화성 크로마토그래피 등과 같은 당업계에 공지된 기술들에 의해 정제될 수 있다. 특정 ApoA-I 모방체를 정제하는데 사용된 실제 조건들은 합성 전략 및 순 전하, 소수성, 친수성 등과 같은 인자에 부분적으로 의존할 수 있고 당업자에게 명백할 것이다. 멀티머 가지 달린 펩타이드들은, 예를 들어, 이온 교환 또는 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다.

친화성 크로마토그래피 정제를 위해서, ApoA-I 모방체에 특이적으로 결합하는 임의의 항체가 사용될 수 있다. 항체들의 생산을 위해서, 토끼, 생쥐, 쥐 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 호스트 동물들은 펩타이드를 주사하여 면역화될 수 있다. 펩타이드는 측쇄 작용기 또는 측쇄 작용기에 부착된 링커들에 의해 BSA와 같은 적절한 담체에 부착될 수 있다. 프루인드(완전 및 불완전), 수산화 알루미늄과 같은 미네랄 겔, 리소레시틴, 플루론 폴리올, 폴리음이온, 펩타이드, 오일 에멀젼, 키홀 림펫 헤모시아닌, 다이나이트로페놀과 같은 표면 활성 물질 및 BCG(바실리스 칼메트-구에린(bacilli Calmette-Guerin) 및 코리네박테리윰 파르범( Corynebacterium parvum)과 같은 잠재적으로 유용한 인간 보조제를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 보조제(adjuvant)들이, 호스트 종들에 따라, 면역반응을 증가시키는데 사용될 수 있다.

ApoA-I 모방체에 대한 단클론 항체들은 배양액에서 연속적인 세포주들에 의해 항체 분자들의 생산을 위해 제공되는 임의의 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 이들은 Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495-497, or Kaprowski, 본 발명에 참조로 포함된 미국특허 4,376,110에 기술된 하이브리도마 기술; 인간 B-세포 하이브리도마 기술(Kosbor et al., 1983, Immunology Today 4:72; Cote et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80:2026-2030); 및 EBV-하이브리도마 기술(Cole et al., 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96 (1985))을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 또한, 적절한 생물학적 활성의 인간 항체 분자로부터의 유전자들과 함께 적절한 항원 특이성의 생쥐 항체 분자로부터의 유전자들을 접합함으로써 "키메릭 항체들"의 생산을 위해 개발된 기술들(Morrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81:6851-6855; Neuberger et al., 1984, Nature 312:604-608; Takeda et al., 1985, Nature 314:452-454, 본 발명에 참조로 포함된 보스, 미국특허 4,816,397; 카빌리 미국특허 4,816,567)을 사용할 수 있다. 또는 "인간화된" 항체들을 제조할 수 있다(예를 들어, 본 발명에 참조로 포함된 퀸 미국특허 5,585,089 참조). 선택적으로, 단일 사슬 항체들의 생산을 위해 기술된 기술들(미국특허 4,946,778)은 펩타이드-특이적 단일 사슬 항체들을 생산하는데 적합하게 될 수 있다.

특이적 결합 위치들의 결실을 포함하는 항체 단편들은 공지된 기술들에 의해 발생할 수 있다. 예를 들어, 이런 단편들은 항체 분자의 펩신 소화에 의해 생산될 수 있는 F(ab')₂ 단편들 및 F(ab')₂ 단편들의 이황화 다리들을 환원시킴으로써 발생할 수 있는 Fab 단편들을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 선택적으로, Fab 발현 라이브러리들은 관심 펩타이드에 대한 원하는 특이성을 가진 단클론 Fab 단편들의 빠르고 쉬운 확인을 허용하도록 만들어질 수 있다(Huse et al., 1989, Science 246:1275-1281).

원하는 ApoA-I 모방체에 대해 특이적인 항체 또는 항체 단편은, 예를 들어, 아가로스에 부착될 수 있고 항체-아가로스 복합체는 본 발명의 펩타이드들을 정제하기 위해 면역크로마토그래피에서 사용된다. Scopes, 1984, Protein Purification: Principles and Practice, Springer- Verlag New York, Inc., N. Y., Livingstone, 1974, Methods In Enzymology: Immunoaffinity Chromatography of Proteins 34:723-731 참조.

IV. 조성물

한 실시예에서, 본 발명은 유효량의 ApoA-I 모방체 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 조성물들을 제공한다.

조성물들은 주사에 의해 포유류에 투여하기 위해 제제화될 수 있다. 주사 제제들은 수성 또는 유성 부형제들에 활성 성분의 살균 현탁액, 용액 또는 에멀젼을 포함한다. 조성물들은 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제제화 물질을 포함할 수 있다. 주사용 제제들은 단위 제형, 예를 들어, 앰풀 또는 수회 복용 용기에 제공될 수 있고, 첨가된 방부제들을 포함할 수 있다.

선택적으로, 주사 제제는 사용 전에 살균 발열원 제거수, 버퍼, 덱스트로스 용액 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 적절한 부형제와 재구성하기 위해 분말 형태로 제공될 수 있다. 이를 위해서, ApoA-I 모방체는 동결건조될 수 있거나 공동 동결건조된 펩타이드-지질 복합체가 제조될 수 있다. 저장된 제제들은 단위 제형으로 공급될 수 있고 생체내에서 사용 전에 재구성될 수 있다.

지속된 전달을 위해서, 조성물은, 예를 들어, 피하, 피내, 또는 근육내 주사와 같은 주입에 의한 투여를 위해 데포 제제(depot preparation)로 제제화될 수 있다. 따라서, 예를 들어, ApoA-I 모방체는 적절한 폴리머 또는 소수성 물질들(예를 들어, 허용가능한 오일 속 에멀젼 또는 이온 교환 수지 또는 약한 용해성 유도체들; 예를 들어, ApoA-I 모방체의 약한 용해성 염 형태)로 제제화될 수 있다.

다른 실시예에서, 조성물들은 정맥 내로 투여된다. 선택적으로, 경피 흡수를 위해 활성 성분을 느리게 방출하는 접착성 디스크 또는 패치로서 제조된 경피 전달 시스템이 사용될 수 있다. 이를 위해서, 흡수 향상제들이 ApoA-I 모방체의 경피 투과를 용이하게 하는데 사용될 수 있다. 특별한 효과는 허혈성 심장질환 또는 고콜레스테롤혈증과 같은 질병을 가진 포유류에 사용하기 위해 ApoA-I 모방체를 나이트로글리신 패치 속에 포함시켜 얻을 수 있다.

경구 투여를 위해서, 조성물들은, 예를 들어, 접합제(예를 들어, 호화 옥수수 전분(pregelatinized maize starch), 폴리바이닐피롤리돈 또는 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스); 충전제(예를 들어, 락토오스, 미세결정 셀룰로오스 또는 인산수소칼슘); 윤활제(예를 들어, 스테아르산 마그네슘, 활석 또는 실리카); 분해제(예를 들어, 감자 전분 또는 글리콜산 나트륨 전분); 또는 습윤제(예를 들어, 황산 라우릴 나트륨)와 같은 약학적으로 허용가능한 부형제들로 통상적인 수단에 의해 제조된 정제 또는 캡슐의 형태를 가질 수 있다. 정제들은 당업계에 주지된 방법들에 의해 코팅될 수 있다. 경구 투여를 위한 액체 제제들은, 예를 들어, 용액, 시럽 또는 현탁액의 형태를 가질 수 있거나 사용 전에 물 또는 다른 적절한 부형제로 구성하기 위한 건조 제품으로 제공될 수 있다. 이런 액체 제제들은 현탁제(예를 들어, 소르비톨 시럽, 셀룰로오스 유도체 또는 수소화된 식용 지방); 유화제(예를 들어, 레시틴 또는 아카시아); 비 수성 부형제(예를 들어, 아몬드 오일, 유성 에스터, 에틸 알코올 또는 분획된 식물유); 및 방부제(예를 들어, 메틸 또는 프로필-p-하이드록시벤조산염 또는 소르브산)와 같은 약학적으로 허용가능한 첨가제들로 통상적인 수단에 의해 제조될 수 있다. 제제들은 적절한 대로 버퍼 염, 향료, 착색제 및 향신료를 포함할 수 있다. 경구 투여를 위한 제제들은 ApoA-I 모방체의 서방형 방출을 제공하도록 적절하게 제제화될 수 있다.

구강 투여를 위해서, 조성물들은 통상적인 방식으로 제제화된 정제 또는 마름모꼴의 형태를 가질 수 있다. 직장 및 질 경로 투여를 위해서, 활성 성분은 용액(정체 관장을 위해) 좌약 또는 연고로 제제화될 수 있다.

흡입 투여를 위해서, ApoA-I 모방체는 적절한 추진체, 예를 들어, 다이클로로다이플루오로메테인, 트라이클로로플루오로메테인, 다이클로로테트라플루오로에테인, 이산화 탄소 또는 다른 적절한 기체를 사용하여, 압축 팩 또는 분무기로부터 에어로졸 스프레이 제공의 형태로 편리하게 전달될 수 있다. 압축 에어로졸의 경우에, 투약량은 계량된 양을 전달하는 밸브를 제공함으로써 결정될 수 있다. 예를 들어, 흡입기 또는 살포기에서 사용하기 위한 젤라틴의 캡슐 및 카트리지들은 ApoA-I 모방체의 분말 믹스 및 락토오스 또는 전분과 같은 적절한 분말 베이스를 포함하도록 제제화될 수 있다.

조성물들은, 원하는 경우, ApoA-I 모방체를 포함하는 하나 이상의 단위 제형을 포함할 수 있는 팩 또는 디스펜서 장치에 제공될 수 있다. 블리스터 팩과 같은 팩은 예를 들어 금속 또는 플라스틱 호일을 포함할 수 있다. 팩 또는 디스펜서 장치는 투여를 위한 지시사항이 첨가될 수 있다.

일부 실시예들에서, ApoA-I 모방체를 지질과의 복합체로서 제제화 또는 투여할 수 있다. 따라서, 본 발명은 ApoA-I 모방체/지질 복합체들, 이의 조성물들 및 이들의 투여 방법을 포함한다. 복합체들은 여러 장점을 가질 수 있는데 복합체가 HDL 및 특히 pre-β-1 또는 pre-β-2 HDL 개체와 유사한 크기와 밀도를 가질 때 순환에서 증가된 반감기를 가질 수 있기 때문이다. 복합체들은 하기한 여러 방법 중 임의의 것을 사용하여 편리하게 제조될 수 있다. 비교적 긴 사용기간을 가진 적절한 제제들은 동결건조에 만들 수 있다--아래 기술된 공동 동결건조 절차가 한 실시예이다. 동결건조된 복합체들은 약학적 재구성을 위해 대량으로 제조하거나 피험자에게 투여하기 전에 살균수 또는 적절한 버퍼 용액에 의한 재탈수에 의해 재구성될 수 있는 개개의 분취량 또는 투약량을 제조하는데 사용될 수 있다.

당업자에게 주지된 다양한 방법들이 복합체들을 제조하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 리포솜 또는 프로테오리포솜을 제조하기 위한 여러 이용가능한 기술들이 사용될 수 있다. 예를 들어, ApoA-I 모방체는 복합체들을 형성하기 위해 적절한 지질들에 의해 (바스 또는 프로브 초음파처리기를 사용하여) 공동초음파처리될 수 있다. 선택적으로 ApoA-I 모방체는 미리 형성된 지질 소포들과 결합되어 펩타이드-지질 복합체들의 자발적 형성을 일으킬 수 있다. 또 다른 대안에서, 복합체들은 세제 투석 방법에 의해 형성될 수 있는데, 예를 들어, ApoA-I 모방체, 지질 및 세제는 세제를 제거하기 위해 투석되고 복합체들을 형성하기 위해 재구성된다(예를 들어, Jonas et al., 1986, Methods in Enzymol. 128:553-582 참조).

선택적으로, 복합체들은 이의 전체 내용이 본 발명에 참조로 포함된 미국특허 6,004,925("925 특허")에 개시된 방법들에 의해 제조될 수 있다. '925 특허의 방법들에서, ApoA-I 모방체 및 지질은 각 성분을 공동 용해시키고 동결건조에 의해 완전히 제거될 수 있는 용매 시스템에서 혼합된다. 이를 위해서, 용매 쌍들이 ApoA-I 모방체 및 지질 모두의 공동 용해도를 확보하도록 선택된다. 한 실시예에서, 복합체의 ApoA-I 모방체는 수성 또는 유기 용매 또는 용매들의 혼합물(용매 1)에 용해될 수 있다. 인지질과 같은 지질 성분은 용매 1과 혼합될 수 있는 수성 또는 유기 용매 또는 용매들의 혼합물(용매 2)에 용해되며, 두 용액은 혼합된다. 선택적으로, ApoA-I 모방체 및 지질은 공동 용매 시스템; 즉, 혼합가능한 용매들의 혼합물 속에 포함될 수 있다. 선택적으로, ApoA-I 모방체 및 지질은 용매 또는 용매들의 혼합물에 현탁될 수 있다. 한 실시예에서, 용매들의 혼합물은 유기 용매와 물의 혼합물이다. 용매 혼합물들의 예들은 아세트산, 자일렌, 사이클로헥세인 및 메탄올을 포함하나 이에 제한되지 않는다. ApoA-I 모방체 대 지질들의 적절한 비율은 결과로 얻은 복합체들은 적절한 물리적 및 화학적 성질을 갖도록; 즉, 주로(필수적은 아님) HDL과 크기가 유사하도록 먼저 실험적으로 정해질 수 있다. 결과로 얻은 혼합물은 건조될 때까지 동결되고 동결건조된다. 때때로 추가 용매가 혼합물에 첨가되어 동결건조를 용이하게 한다. 이런 동결건조된 생성물은 장기간 저장될 수 있고 통상적으로 안정하게 보존될 것이다.

선택적으로, 복합체들은 용액 또는 현탁액에서 펩타이드와 ApoA-I 모방체의 공동 동결건조에 의해 제조될 수 있다. 유기 용매 또는 유기 용매 혼합물 속의 특별히 선택한 펩타이드 및 인지질의 균질 용액이 동결건조될 수 있고, 펩타이드/인지질 복합체들은 수성 버퍼에 의한 동결건조된 분말의 수화에 의해 자발적으로 형성될 수 있다.

동결건조된 생성물은 복합체의 용액 또는 현탁액을 얻기 위해 재구성될 수 있다. 이를 위해서, 동결건조된 분말은 수용액으로 적절한 부피(주로 정맥 주사에 편리한 5-20mg 펩타이드/mL)로 재수화된다. 한 실시예에서, 동결건조된 분말은 인산 버퍼 식염수, 중탄산 식염수 또는 생리 식염수로 재수화된다. 혼합물의 pH는 7.5-8.5로 조절될 수 있다. 혼합물은 재수화를 용이하게 하도록 교반 또는 와류될 수 있고, 대부분의 경우에, 재구성 단계는 복합체들의 지질 성분의 상 전이 온도와 동일하거나 이보다 큰 온도에서 수행될 수 있다. 수분 내에, 재구성된 지질-단백질 복합체들의 투명한 제제가 생성된다.

결과로 얻은 재구성된 제제의 분취량은 제제에 있는 복합체들이 원하는 크기 분포; 예를 들어, HDL의 크기 분포를 갖는다는 것을 확인시키는 특징을 나타낼 수 있다. 재구성 제제의 특징 부여는, 크기 배제 여과 크로마토그래피, 겔 투과 크로마토그래피, 컬럼 여과 크로마토그래피, 겔 투과 크로마토그래피 및 네이티브 페이지 전기영동(native page electrophoresis)을 포함하나 이에 제한되지 않는 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 한 실시예에서, 재구성된 제제는 겔 투과 크로마토그래피에 의해 특징을 나타낸다. 결과로 얻은 복합체들의 크기는 이들의 효과를 결정할 수 있다. 아래 기술된 예들에서, 파마시아 수퍼로스(Pharmacia Superose) 6 FPLC 겔 투과 크로마토그래피 시스템이 사용된다. 사용된 버퍼는 한 실시예에서 약 7.0 내지 약 9의 pH이고, 다른 실시예에서 7.5-8.5의 pH인 50mM 인산염 버퍼에 150mM NaCl을 포함한다. 전형적인 샘플 부피는 5mg 펩타이드/mL를 포함하는 복합체들의 20 내지 200 마이크로리터이다. 컬럼 유속은 0.5mL/min이다. 공지된 분자량과 스토크스 직경(stoke's diameter)뿐만 아니라 인간 HDL의 일련의 단백질들이 컬럼을 보정하기 위한 기준으로서 사용된다. 단백질들 및 지질 단백질 복합체들은 파장의 254 또는 280nm의 빛의 흡수 또는 산란에 의해 관찰된다.

재구성된 제제는 결과로 얻은 용액의 농도, 최종 pH 및 삼투압뿐만 아니라 펩타이드 및 개별 지질들의 농도와 무결성을 측정하도록 특징을 나타낼 수 있다. 복합체의 ApoA-I 모방체와 지질 농도는 단백질 및 인지질 분석법 및 고성능 액체 크로마토그래피("hPLC"), 겔 여과 크로마토그래피, 가스 크로마토그래피("GC")와 같은 크로마토그래피 방법을 포함하나 이에 제한되지 않는 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 측정될 수 있다. 크로마토그래프들은 질량 분석기, UV 또는 다이오드-어레이, 형광 및 탄성 광 산란 탐지기를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 탐지기와 결합될 수 있다. 복합체들에서 ApoA-I 모방체 및 지질의 무결성은 상기한 크로마토그래피 기술들뿐만 아니라 아미노산 분석, 박층 크로마토그래피 및 지질들에 대한 지질 산화를 측정하는 표준 분석법에 의해 측정될 수 있다.

ApoA-I 모방체/지질 복합체의 지질은, 포화, 불포화, 천연 및 합성 지질 및 인지질 및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 지질들의 하나 이상일 수 있다. 전형적인 염들은, 나트륨, 칼슘, 마그네슘 및 칼륨 염들을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

ApoA-I 모방체/지질 복합체들의 적절한 지질들은 (C₁-C₆)알킬 사슬 인지질, 포스파티딜콜린(PC), 달걀 포스파티딜콜린, 대두 포스파티딜콜린, 다이팔미토일포스파티딜콜린, 다이미리스토일포스파티딜콜린, 다이스테아로일포스파티딜콜린, 1-미리스토일-2-팔미토일포스파티딜콜린, 1-팔미토일-2-미리스토일포스파티딜콜린, 1-팔미토일-2-스테아로일포스파티딜콜린, 1-스테아로일-2-팔미토일포스파티딜콜린, 1-팔미토일-2-올레오일포스파티딜콜린, 1-올레오일-2-팔미틸포스파티딜콜린, 다이올레오일포스파티딜콜린, 다이올레오일포스파티딜에탄올아민, 다이라우로일포스파티딜글리세롤 포스파티딜콜린, 포스파티딜세린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨, 스핀고미엘린, 스핀코지질, 포스파티딜글리세롤, 다이포스파티딜글리세롤, 다이미리스토일포스파티딜글리세롤, 다이팔미토일포스파티딜글리세롤, 다이스테아로일포스파티딜글리세롤, 다이올레오일포스파티딜글리세롤, 다이미리스토일포스파티드산, 다이팔미토일포스파티드산, 다이미리스토일포스파티딜에탄올아민, 다이팔미토일포스파티딜에탄올아민, 다이미리스토일포스파티딜세린, 다이팔미토일포스파티딜세린, 뇌 포스파티딜세린, 스핀고미에린, 뇌 스핀고미에린, 다이팔미토일스핀고미에린, 다이스테아로일스핀고미에린, 포스파티드산, 갈락토세레브로사이드, 갱글리오사이드, 세레브로사이드, 다이라우릴포스파티딜콜린, (1,3)-D-만노실-(1,3)다이글리세라이드, 아미노페닐글리코사이드, 3-클로에스테릴-6'-(글리코실티오)헥실 에터 글리코지질 및 콜레스테롤 및 이의 유도체를 포함하나 이에 제한되지 않는다.

한 실시예에서, ApoA-I 모방체/지질 복합체의 지질은 중성 인지질이다. 중성 인지질은 생리적 pH에서 약 0의 순 전하를 가지는 임의의 인지질일 수 있다. 일부 실시예들에서, 중성 인지질은 생리적 pH에서 약 0의 순 전하를 가지는 쌍극성 이온이다.

다른 실시예에서, 중성 인지질은 레시틴(또한 포스파티딜콜린으로 공지됨)이다. 일부 실시예들에서, 중성 인지질은 약 5 내지 약 100중량% 레시틴을 포함하는 중성 인지질들의 혼합물이다. 다른 실시예들에서, 중성 인지질들의 혼합물은 약 100중량% 레시틴을 포함한다. 일부 실시예들에서, 중성 인지질은 약 5 내지 약 100몰% 레시틴을 포함하는 중성 인지질들의 혼합물이다. 다른 실시예들에서, 중성 인지질들의 혼합물은 약 100몰% 레시틴을 포함한다.

다른 실시예에서, 중성 인지질은 스핀고미에린이다. 일부 실시예들에서, 중성 인지질은 약 5 내지 약 100중량% 스핀고미에린을 포함하는 중성 인지질들의 혼합물이다. 다른 실시예들에서, 중성 인지질들은 약 100중량% 스핀고미에린을 포함하는 혼합물이다. 일부 실시예들에서, 중성 인지질은 약 5 내지 약 100몰% 스핀고미에린을 포함하는 중성 인지질들의 혼합물이다. 다른 실시예들에서, 중성 인지질들의 혼합물은 약 100몰% 스핀고미에린을 포함하는 중성 인지질들의 혼합물이다.

다른 실시예에서, ApoA-I 모방체/지질 복합체의 중성 인지질은 레시틴과 스핀고미에린을 포함하는 중성 인지질들의 혼합물이다. 레시틴 대 스핀고미에린의 몰 비는 변할 수 있으나, 통상적으로 약 20:약 1 내지 약 1:약 20이다. 일부 실시예들에서, 레시틴:스핀고미에린 몰 비는 약 10:약 3 대 약 10:약 6이다. 다른 실시예들에서, 레시틴:스핀고미에린 몰 비는 약 1:약 20 내지 약 3:약 10이다.

다른 실시예에서, ApoA-I 모방체/지질 복합체의 중성 인지질은 레시틴, 스핀고미에린 및 하나 이상의 다른 중성 인지질을 포함하는 중성 인지질의 혼합물이다. 통상적으로, 다른 중성 인지질은 혼합물의 약 5 내지 약 100중량%를 구성한다.

다른 실시예에서, ApoA-I 모방체/지질 복합체의 지질은 하전된 인지질이다. 적절한 하전된 인지질들은 포스파티딜이노시톨, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤 및 포스파티드산을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

한 실시예에서, ApoA-I 모방체/지질 복합체의 지질은 적어도 하나의 중성 인지질과 적어도 하나의 하전된 인지질의 혼합물이다. 지질 혼합물에서 하전된 인지질(들)의 총량은 변할 수 있으나, 통상적으로 지질 혼합물의 약 0.2 내지 약 10중량%이다. 일부 실시예들에서, 지질 혼합물에서 하전된 인지질(들)의 총량은 지질 혼합물의 약 0.2 내지 약 2중량%, 약 0.2 내지 약 3중량%, 약 0.2 내지 약 4중량%, 약 0.2 내지 약 5중량%, 약 0.2 내지 약 6중량%, 약 0.2 내지 약 7중량%, 약 0.2 내지 약 8중량% 또는 약 0.2 내지 약 9중량%이다. 일부 실시예들에서, 하전된 인지질(들)의 총량은 지질 혼합물의 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9, 약 2.0, 약 2.1, 약 2.2, 약 2.3, 약 2.4, 약 2.5, 약 2.6, 약 2.7, 약 2.8, 약 2.9 또는 약 3.0, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9 또는 약 10중량%이다. 지질 혼합물에서 중성 인지질(들)의 총량은 변할 수 있고 하전된 인지질(들)과 포함된 임의의 다른 지질들의 양에 의존할 수 있다. 한 실시예에서, 지질 혼합물에서 중성 인지질(들)의 총량은 지질 혼합물의 약 90 내지 99.8중량%이다. 한 실시예에서, ApoA-I 모방체/지질 복합체의 지질은 스핀고미에린과 하전된 인지질의 혼합물이다. 다른 실시예에서, ApoA-I 모방체/지질 복합체의 지질은 스핀고미에린, 다이팔미토일포스파티딜콜린("DPPC") 및 하전된 인지질의 혼합물이다.

한 실시예에서, ApoA-I 모방체/지질 복합체의 지질은 스핀고미에린이다. 다른 실시예에서, 스핀고미에린은 우유, 달걀 또는 뇌로부터 얻거나 합성으로 만들어진다. 다른 실시예에서, ApoA-I 모방체/지질 복합체의 지질은 스핀고미에린 유사체 또는 유도체이다. 적절한 스핀고미에린 유사체들 또는 유도체들은 팔미토일스핀고미에린, 스테아로일스핀고미에린, D-에리스로스-스핀고미에린 및 D-에리스로스-다이하이드로스핀고미에린을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

다른 실시예에서, 스핀고미에린은 한 특정한 포화 또는 불포화 아실 사슬에서 인공적으로 풍부해진다. 예를 들어, 우유 스핀고미에린(아반티 인지질, 알라바스터, 알라)은 긴 포화 아실 사슬들을 가진다. 우유 스핀고미에린은 80%의 C16:0을 포함하는 달걀 스핀고미에린에 비해 약 20%의 C16:0(16개 탄소, 포화) 아실 사슬을 포함한다. 용매 추출을 사용하면, 우유 스핀고미에린은, 예를 들어, 우유 스핀고미에린에 필적할만한 아실 사슬 농도를 가진 조성물을 얻기 위해 한 특정 아실 사슬에서 풍부해질 수 있다. 본 발명에 사용될 수 있는 아실 사슬들은 포화 아실 사슬(예를 들어, 다이팔미토일, 다이스테아로일, 다이아라키돈일 및 다이벤조일 아실 사슬), 불포화 사슬(예를 들어, 다이올코일 사슬), 포화 및 불포화 아실 사슬(예를 들어, 팔미토일 또는 올레오일 사슬)의 혼합 사슬들, 혼합된 길이의 포화 및/또는 불포화 사슬들 및 포화 및 불포화 아실 사슬들의 에터 유사체들을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

스핀고미에린은 반-합성일 수 있어서 특정 아실 사슬을 가진다. 예를 들어, 우유 스핀고미에린은 먼저 우유로부터 정제될 수 있고, 그런 후에 하나의 특정 아실 사슬, 예를 들어, C16:0 아실 사슬이 절단되어 다른 아실 사슬(예를 들어, 팔미트산 또는 올레산)로 대체될 수 있다.

스핀고미에린은, 예를 들어, 대용량 합성에 의해 전적으로 합성될 수 있다. 예를 들어, Dong et al, U.S. Pat. No. 5,220,043; Weis, 1999, Chem. Phys. Lipids 102(l-2):3-12 참조. 한 실시예에서, 미리 정한 포화 수준과 지방산 조성은 합성 스핀고미에린에 대해 선택된다.

다른 실시예에서, ApoA-I 모방체/지질 복합체의 지질은 스핀고미에린 및 다른 지질의 혼합물이다. 이 실시예에서, 스핀고미에린은 통상적으로 혼합물의 약 25 내지 75%를 구성한다.

다른 실시예에서, ApoA-I 모방체/지질 복합체의 지질은 스핀고미에린 및 DPPC의 혼합물이다. 다른 실시예에서, ApoA-I 모방체/지질 복합체의 지질은 스핀고미에린, DPPC 및 다이팔미토일포스파티딜글리세롤("DPPG")의 혼합물이다. 한 실시예에서, DPPG는 혼합물의 약 0 내지 약 10몰% 또는 중량%로 존재한다. 다른 실시예에서, DPPG는 혼합물의 약 2 내지 약 4몰% 또는 중량%로 존재한다. 다른 실시예에서, 스핀고미에린과 DPPG는 약 1: 약 1의 중량비 또는 몰 비로 혼합물에 존재한다. 다른 실시예에서, 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG는 각각 약 1: 약 1: 약 0.06의 중량비 또는 몰 비로 존재한다. 다른 실시예에서, 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG는 각각 약 1.04: 1: 0.061의 몰 비로 존재한다. 다른 실시예에서, 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG는 각각 약 1: 1: 0.062의 몰 비로 존재한다. 다른 실시예에서, 혼합물은 약 48.5 몰% 또는 중량% 스핀고미에린, 약 48.5 몰% 또는 중량% DPPC 및 약 3 몰% 또는 중량% DPPG이다.

다른 실시예에서, ApoA-I 모방체/지질 복합체는 하나 이상의 다른 펩타이드를 포함한다. 한 실시예에서, 다른 펩타이드는 ApoA-I이다.

한 실시예에서, 각 ApoA-I 모방체/지질 복합체에서 전체 펩타이드 대 지질의 중량비는 약 1: 약 0.5 대 약 1: 약 5이다. 다른 실시예에서, 각 ApoA-I 모방체/지질 복합체에서 전체 펩타이드 대 지질의 중량비는 약 1: 약 1 대 약 1: 약 5이다. 다른 실시예에서, 각 ApoA-I 모방체/지질 복합체에서 전체 펩타이드 대 지질의 중량비는 약 1: 약 2 대 약 1: 약 5이다. 다른 실시예에서, 각 ApoA-I 모방체/지질 복합체에서 전체 펩타이드 대 지질의 중량비는 약 1: 대 약 2.5이다. 다른 실시예에서, 각 ApoA-I 모방체/지질 복합체에서 전체 펩타이드 대 지질의 중량비는 약 1: 약 3 대 약 1: 약 5이다. 다른 실시예에서, 각 ApoA-I 모방체/지질 복합체에서 전체 펩타이드 대 지질의 몰 비는 약 1: 약 2.5 대 약 1: 약 20이다. 다른 실시예에서, 각 ApoA-I 모방체/지질 복합체에서 전체 펩타이드 대 지질의 몰 비는 약 1: 대 약 9.2이다.

ApoA-I 모방체/지질 복합체의 지질이 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG의 혼합물인 경우, 펩타이드: 스핀고미에린: DPPC: DPPG 중량비는 통상적으로 각각 약 1: 약 1: 약 1: 약 0.08이다. 한 실시예에서, 펩타이드: 스핀고미에린: DPPC: DPPG 중량비는 각각 1: 1.2125: 1.2125: 0.075이다. 펩타이드: 스핀고미에린: DPPC: DPPG 몰 비는 통상적으로 각각 약 1: 약 4: 약 4: 약 0.03이다. 한 실시예에서, 스핀고미에린: DPPC: DPPG 몰 비는 각각 1: 4.55: 4.36: 0.27이다.

다른 실시예에서, ApoA-I 모방체/지질 복합체는 약 40 내지 약 85중량% 지질 및 약 15 내지 약 60중량% 펩타이드를 포함한다.

다른 실시예에서, 각 ApoA-I 모방체/지질 복합체는 지름이 약 2 내지 약 12nm이다.

V. 질병을 치료 또는 예방하는 방법

임의의 특정한 이론에 한정되지 않으며, 본 발명의 ApoA-I 모방체들에 의해 형성된 나선은 지질-결합, 콜레스테롤 유출 및/또는 LCAT 활성화에 영향을 미치는데 중요한 천연 ApoA-I의 양쪽성 나선형 영역의 구조적 및 기능적 성질들을 밀접하게 모방하여, 높은 ApoA-I-유사 활성을 나타내는 펩타이드를 생성하게 된다고 생각된다. 한 실시예에서, ApoA-I 모방체들은 (지질의 존재하에서) 양쪽성 나선을 형성하고, 지질들을 결합하고, pre-β-유사 또는 HDL-유사 복합체를 형성하고, LCAT를 활성화하고, 혈청 HDL 농도를 증가시키고 콜레스테롤 유출을 향상시킴으로써 기능한다.

한 실시예에서, ApoA-I 모방체들은 LCAT를 활성화한다. 다른 실시예에서, ApA-I 모방체들은 LCAT를 활성화하지 않는다. 다른 실시예에서, ApoA-I 모방체들은 LCAT를 활성화하나, 콜레스테롤 에스터화의 가속화를 일으키지 않는 정도로만 활성화한다. 다른 실시예에서, ApoA-I 모방체들은 LCAT를 활성화하고, 따라서 콜레스테롤 에스터화를 활성화하나, LCAT 활성화에 의한 콜레스테롤 에스터화의 가속화는, 더 가속화되지 않으면, 질병을 치료 또는 예방하는데 불충분하다.

한 실시예에서, 본 발명은 유효량의 ApoA-I 모방체를 질병의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여 질병을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.

이상지질혈증의 예들은 혈청 HDL 농도를 증가시키고, LCAT를 활성화하고 콜레스테롤 유출을 향상시키는 것이 필요한 임의의 이상을 포함하며 RCT가 효과적이다. 이런 이상들은, 고단백혈증(과유미지립혈증), 높은 저 밀도 리포단백질 혈청 농도, 높은 매우 저 밀도 리포단백질 혈청 농도, 고지혈증((고콜레스테롤혈증) 또는 고글리세라이드혈증(고트라이글리세라이드혈증)), 낮은 고 밀도 리포단백질 혈청 농도, 고콜레스테롤혈증, 무베타지질단백혈증(Abetalipoproteinemia), ApoA-I 결핍증 및 탄지에르병(tangier disease)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

심혈관 질환의 예들은 대사이상, 허혈성 심장질환, 죽상경화증, 재협착(예를 들어, 풍선 혈관성형술과 같은 의료 절차의 결과에 의해 발생하는 죽상경화성 플라크를 예방 또는 치료), 내독소혈증(패혈증 쇼크를 주로 일으킴), 울혈성 심부전(만성 또는 급성 심부전), 순환 쇼크, 심근병증, 심장이식, 심근경색, 심장 부정맥(심방세동), 상심실성 빈맥(supraventricular tachycardia), 동맥류, 앙기나, 뇌혈관 사고(스트로크), 말초혈관질환, 심방조동, 심방성 발작성 빈맥(paroxysmal atrial tachycardia), 뇌혈관질환, 신장질환, 죽종발생, 죽상경화증, 급성 췌장염 및 관상동맥질환을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

혈관내피이상은 내피에 의해 발생된 혈관 확장 및 혈관 수축 인자와 성장-억제 및 성장-촉진 인자 사이의 임의의 불균형이다. 내피이상은 통상적으로 혈관의 팽창하는 능력을 손상시킨다.

거대혈관질환의 예들은 대형 혈관의 임의의 질환이다. 이런 질환은 일과성 허혈발작, 스트로크, 앙기나, 심근경색증, 심부전 및 말초혈관질환을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

미세혈관질환의 예들은 소형 혈관의 임의의 질환이다. 이런 질환은 당뇨병성 망막증(비 확장성, 확장성, 황반부종), 미세알부민뇨증, 거대알부민뇨증, 말기 신질환, 발기부전, 자율신경병증, 밀초신경병증, 골수염 및 만성하지허혈증을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

ApoA-I 모방체들은 단독으로 또는 질환을 치료하는데 유용한 하나 이상의 다른 약물과 조합으로 투여될 수 있다. 이런 치료들은, 관련 약물들의 동시 또는 순차 투여를 포함하나 이에 제한되지 않는다.

한 실시예에서, 질환의 치료 또는 예방 방법들은 하나 이상의 다음 종류로부터의 하나 이상의 약물을 투여하는 단계를 포함한다: ACE(안지오텐신 전환 효소) 억제제, 베타 차단제, 질산염, 칼슘 채널 차단제, 이뇨제, 혈전용해제 및 혈액 콜레스테롤 저하제. 다른 실시예에서, 질환의 치료 또는 예방 방법들은 다음 중 하나 이상을 투여하는 단계를 더 포함한다: 콜레스티르아민, 콜레스티폴, 콜레세비람, 겜피브로질, 시프로피브레이트, 클로피브레이트, 페노피브레이트, 벤자피브레이트, 이제티미브, 라미프릴, 베라파밀, 니카르디핀, 딜티아젬, 카르베딜올, 나돌올, 아이소소르비드 모노나이트레이트, 프로프라놀올, 아이소소르비드 다이나이트레이트, 다이곡신, 푸로세미드, 메토프롤올 타르트레이트, 트란도라프릴, 나이트로글리세린, 아밀로다이핀 베실레이트, 옥시코돈, 클로피도그렐, 니페디핀, 아테놀올, 리시노프릴, 아스피린 및 라녹신.

또 다른 실시예에서, 질환의 치료 또는 예방 방법들은 당업자에게 공지된 콜레스테롤 저하제들의 하나 이상을 투여하는 단계를 더 포함한다; 예를 들어, 담즙 산 수지, 니아신, 및/또는 아토르바스타틴, 심바스타틴, 프라바스타틴, 플루바스타틴 및 피타바스타틴과 같은 스타틴. 이런 요법은 각 약물이 콜레스테롤 합성과 수송에서 다른 표적에 대해 작용하기 때문에 특히 유익한 치료 효과들을 생산할 수 있다; 즉, 담즙 산은 콜레스테롤 재순환, 클로마이크론 및 LDL 개체에 영향을 주고; 니아신은 주로 VLDL 및 LDL 개체에 영향을 주고; 스타틴은 콜레스테롤 합성을 억제하여, LDL 개체를 감소시키고 (아마도 LDL 수용체 발현을 증가시킨다); 반면에 ApoA-I 모방체들은 RCT에 영향을 주고, HDL을 증가시키고, LCAT 활성을 증가시키고 콜레스테롤 유출을 촉진시킨다.

다른 실시예에서, 질환의 치료 또는 예방 방법들은 클리노피브레이트, 클로피브레이트, 심피브레이트, 페노피브레이트 및 벤자피브레이트와 같은 피브레이트를 투여하는 단계를 더 포함할 수 있다.

또 다른 실시예에서, 질환의 치료 또는 예방 방법들은, 예를 들어, 내독소에 의해 유발된 패혈증 쇼크를 치료하는데 유용한 항균제 및/또는 항염제를 투여하는 단계를 더 포함할 수 있다.

ApoA-I 모방체들은 순환에서 생체이용성을 확보하는 임의의 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다. 이것은 정맥(IV), 근내(IM), 피내, 피하(SC) 및 복강(IP) 주사를 포함하는 투여의 비경구 투여에 의해 성취될 수 있다. 그러나, 투여의 다른 경로가 사용될 수 있다. 예를 들어, 위장관을 통한 흡수는 적절한 제제들(예를 들어, 장용제)이, 예를 들어, 경구 점막, 위 및/또는 소장의 가혹한 환경에서, 펩타이드의 분해를 피하거나 최소화하기 위해 사용되는 경우, 경구 투여 경로(섭취, 입 및 설하 경로)에 의해 완성될 수 있다. 또한, 질 및 직장 형태의 투여와 같은 점막 조직을 통한 투여는 위장관에서의 분해를 피하거나 최소화하기 위해 사용될 수 있다. 또 다른 대안에서, 본 발명의 제제들은 경피로(예를 들어, 피부로), 눈으로 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 투여 경로는 복용자의 상태, 나이 및 순응성에 따라 변할 수 있다는 것을 알 것이다.

사용된 ApoA-I 모방체의 실제 복용량은 투여 경로에 따라 변할 수 있고 100mg/L 내지 2g/L의 순환하는 혈장 농도를 얻기 위해 조절될 수 있다. 한 실시예에서, ApoA-I 모방체의 복용량은 투여 이후 적어도 24시간 동안 투여 이전의 기준(최초) 수준보다 더 높은 약 10mg/dL 내지 300mg/dL의 범위인 유리 또는 복합체화된 ApoA-I 모방체의 혈청 수준을 얻기 위해 조절된다.

ApoA-I 모방체들은 다양한 다른 처리 요법으로 처리될 수 있다. 한 실시예에서, ApoA-I 모방체는 한 주에 한 번 0.5mg/kg 내지 100mg/kgd의 복용량으로 주사에 의해 투여된다. 다른 실시예에서, 바람직한 혈청 수준은 ApoA-I 모방체의 약 0.5mg/kg/hr 내지 100mg/kg/hr를 제공하는 연속 주입 또는 단속 주입에 의해 유지될 수 있다. 한 실시예에서, ApoA-I 모방체는 약 20mg/kg의 복용량으로 투여된다.

다른 실시예에서, ApoA-I 모방체는 일일당 1회 이상 정맥 주사에 의해 투여된다. 다른 실시예에서, ApoA-I 모방체는 매 3 내지 15일, 매 5 내지 10일 또는 매 10일에 한 번 주사에 의해 투여된다. 다른 실시예에서, ApoA-I 모방체는 일련의 유지 주사(maintenace injections)로 투여되며, 여기서 일련의 유지 주사는 매 6월 내지 1년에 한 번 투여된다. 일련의 유지 주사는, 예를 들어, 하루 동안(복합체들의 지정된 혈청 수준을 유지하는 주사), 수일(예를 들어, 8일의 기간 동안 4회 주사) 또는 수주(4주의 기간 동안 4회 주사) 동안 투여될 수 있다.

또 다른 실시예에서, ApoA-I 모방체의 증가하는 복용량은 투여 당 약 50mg 내지 약 200mg의 양으로 약 1 내지 5회 복용으로 시작하여, 투여 당 약 200mg 내지 약 1g의 반복된 복용으로 투여될 수 있다. 환자의 필요에 따라, 투여는 한 시간 이상의 기간으로 느린 주입, 한 시간 미만의 빠른 주입으로 또는 단일 급속 주입에 의할 수 있다.

ApoA-I 모방체들의 독성 및 치료 효과는 LD₅₀(개체의 50%에 치명적인 복용량) 및 ED₅₀(개체의 50%에 치료적으로 효과적인 복용량)을 측정하기 위해 세포 배양액 또는 실험 동물에서 표준 약학적 절차를 사용하여 측정될 수 있다. 독성과 치료 효과들 사이의 복용량 비율은 치료 지수이고 비율 LD₅₀/ED₅₀으로 표현될 수 있다. 한 실시예에서, ApoA-I 모방체들은 큰 치료 지수들을 나타낸다.

VI. 분석 방법

ApoA-I 모방체들은 지질들의 존재하에서 α-나선들을 형성하고, 지질들을 결합하고, 지질들과 복합체들을 형성하고, LCAT를 활성화하고, 콜레스테롤 유출 등을 촉진시키는 이들의 능력에 대해 분석될 수 있다.

ApoA-I 모방체들의 구조 및/또는 기능을 분석하는 방법 및 분석법은 당업계에 주지된다. 여러 방법이 아래에 제공된다. 예를 들어, 아래 예들에서 기술된 원편광 이색성(CD) 및 핵자기공명(NMR) 분석법은 ApoA-I 모방체들의 구조 및 특히 지질들의 존재하에서 나선형의 정도를 분석하는데 사용될 수 있다. 지질들을 결합하는 능력은 아래 예들에서 기술된 형광 현미경 분석법을 사용하여 측정될 수 있다. LCAT를 활성화하는 펩타이드 및/또는 펩타이드 유사체들의 능력은 아래 예들에 기술된 LCAT 활성화를 사용하여 쉽게 측정될 수 있다. 아래 예들에 기술된 생체외 및 생체내 분석법은 반감기, 분포, 콜레스테롤 유출 및 RCT에 대한 효과를 평가하는데 사용될 수 있다.

일반적으로, 아래 표 10에 나열한 특성들을 나타내는 본 발명에 따른 ApoA-I 모방체들은 특히 유용한 것으로 생각된다.

	범위 1	범위 2
지질들의 존재하에서 % 나선형(R _i = 30)(22개아미노산 잔기들을 가진 차단되지 않은 펩타이드)	≥60%	≥80%
지질들의 존재하에서 % 나선형(R _i = 30)(18개아미노산 잔기들을 가진 차단되지 않은 펩타이드)	≥40%	≥60%
지질들의 존재하에서 % 나선형(R _i = 30)(18개 이하의 아미노산 잔기들을 가진 차단되지 않은 펩타이드)	≥60%	≥80%
지질 결합(작은 단일막 리포솜("SUVs")의 존재하에서)	0.5-10μM 펩타이드 (R _i =1-50)
LCAT 활성화	≥38%	≥80%

R _i 는 지질:펩타이드 몰 비이다.

지질들의 존재하에서 α-나선을 형성하는 ApoA-I 모방체의 능력은 아래 기술된 CD 분석법을 사용하여 증명될 수 있다. 적어도 40% 나선형(18개 이하의 아미노산 잔기를 포함하는 차단되지 않은 펩타이드) 또는 60% 나선형(18개 이하의 아미노산 잔기를 포함하는 차단된 펩타이드; 22개 이하의 아미노산 잔기를 포함하는 차단되지 않은 펩타이드)이며 지질(약 5μM의 농도 및 약 30의 지질:펩타이드 몰 비), 특히 형광 Trp(W) 또는 Nal 잔기를 포함하는 이런 ApoA-I 모방체들에 결합하는 이런 펩타이드들은 아래 기술된 형광 분석법을 사용하여 확인할 수 있다. 그러나, 형광 잔기들을 포함하지 않는 ApoA-I 모방체들의 경우, 지질들에 대한 결합은 나선형이 지질들의 존재하에서 증가할 때 관찰된다.

본 발명의 한 실시예에서, ApoA-I 모방체들, 특히 SUVs의 존재하에서 지질 결합을 나타내는 것들(0.5-10μM 펩타이드; 1 내지 50의 지질:펩타이드 몰 비)은 LCAT를 활성화하는 펩타이드들이 본 발명에 기술된 방법들에서 특히 유용하기 때문에, LCAT를 활성화하는 이들의 능력에 대해 선별된다. 한 실시예에서, ApoA-I 모방체들은 천연 인간 ApoA-I와 비교하여 적어도 약 38% LCAT 활성화를 나타낸다(본 발명에 기술된 LCAT 활성화 분석법을 사용하여 측정함). 다른 실시예에서, ApoA-I 모방체들은 천연 인간 ApoA-I 모방체와 비교하여 50%, 60%, 70%, 80% 또는 심지어 90% LCAT 활성을 나타낸다.

VII. 다른 용도들

ApoA-I 모방체들은 혈청 HDL를 측정하기 위해, 예를 들어, 진단 목적으로 생체외 분석법에 유용하다. ApoA-I 모방체들은 혈청의 HDL 성분과 통상적으로 결합하기 때문에, 모방체들은 HDL 개체에 대한 "마커"로 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 혈청 HDL을 혈청 HDL과 결합하는 ApoA-I 모방체의 양을 접촉하고 ApoA-I-결합 HDL의 양을 정량화하는 것을 포함하는, 혈청 HDL 농도를 측정하기 위한 방법들에 관한 것이다. 또한, ApoA-I 모방체들은 역 콜레스테롤 수송("RCT")에 효과적인 HDL의 하부개체에 대한 마커로서 사용될 수 있다. 이를 위해서, ApoA-I 모방체는 HDL을 포함하는 포유류 혈청 샘플에 첨가되거나 이와 혼합될 수 있고; 적절한 배양 시간 후, HDL 성분은 포함된 ApoA-I 모방체를 탐지함으로써 분석될 수 있다. 이것은 표지화된 ApoA-I 모방체(예를 들어, 방사선레이블, 형광레이블, 효소레이블, 염료 등)를 사용하여 또는 ApoA-I 모방체에 대해 특이적인 항체들(또는 항체 단편들)을 사용하는 면역분석법에 의해 완성될 수 있다.

선택적으로, 표지화된 ApoA-I 모방체들은 순환 시스템을 시각화하기 위해 또는 RCT를 관찰하기 위해 또는 지방 줄무늬, 죽상동맥 경화반 등에서 HDL의 축적을 시각화하기 위해 이미징 절차(예를 들어, CAT 스캔, MRI 스캔)에서 유용하다(여기서 HDL은 콜레스테롤 유출에서 활성화되어야 한다).

본 발명은 다음 비 제한적인 예시적 실시예들을 더 포함한다.

실시예들

실시예 1: ApoA-I 모방체들의 합성

ApoA-I 모방체들은 Fmoc(9-플루오렌일메틸옥시카본일) 화학물질을 사용하여 고체 상 펩타이드 합성(SPPS)에 의해 제조된다. C-말단 잔기는 4-메틸벤즈하이드릴아민(MBHA) 수지에 공유 결합한다. 다른 아미노산 잔기들은 Fmoc 보호기의 반복적 제거와 보호된 아미노산의 결합에 의해 포함된다. 펩타이드의 고체상 결합 후, 펩타이드는 트라이플루오로아세트산(TFA)에 의해 수지로부터 절단된다. 미정제 펩타이드는 침전화에 의해 회수되고 건조된다. 미정제 펩타이드의 정체는 MS 분석과 아미노산 분석에 의해 확인된다.

실시예 2: ApoA-I 모방체들의 정제

실시예 1에 따라 제조된 ApoA-I 모방체들의 정제는 물/아세토나이트릴 농도 구배(0.1% TFA 카운터 이온을 가짐)를 사용하여 C18 고정상(그라프트화된 실리카, 15㎛ 입자 크기, 120Å 구멍 크기)을 가진 분취용 역상 HPLC에 의해 수행한다. 용출 분획들은 220nm에서 UV 흡수에 의해 탐지된다. 각각의 런(run)은 대략 15g의 미정제 펩타이드를 처리하며, 순수한 분획들은 합쳐지고 회전 증발기에서 농축된다. 펩타이드 용액은 제 1 정제 단계에서 사용된 C18 HPLC 컬럼을 사용하여 추가로 정제된다. 펩타이드 용액은 아세트나이트릴을 제거하기 위해 회전 증발기에서 농축되고 동결건조된다.

다음으로, 동결건조된 펩타이드 분말은 90% 물/10% 아세토나이트릴에서 재용해되고 카운터 이온은 이온 교환 크로마토그래피(다우엑스 수지, 90% 물 / 10% 아세토나이트릴 용출 매질)를 통해 아세테이트와 교환된다. 아세테이트 카운터 이온을 가진 정제된 펩타이드는 살균 0.22 마이크로미터 막을 통해 여과하고 동결건조된다.

실시예 3: 펩타이드 16의 합성

펩타이드 16은 Fmoc(9-플루오렌일메틸옥시카본일) 화학물질을 사용하여 고체 상 지지체 상에서 합성하였다. C-말단 아이소니페코틴일 잔기는 왕 타입 링커를 통해 수지에 공유결합되었다. 아미노산들에 대해 사용된 보호기들은 Glu와 Asp에 대해 t-부틸기, Lys에 대해 Boc기, Arg에 대해 Pbf기, Asn 및 Gln에 대해 Trt기 이었다.

펩타이드의 고체상 결합은 소결 디스크가 장착된 601 반응기에서 수동으로, 기계적 교반과 질소 버블링을 수행하였다. 수지, p-메틸-벤즈하이드릴아민 수지(폴리스티렌-1%-다이바이닐벤젠)을 팽창시키고 다이클로로메테인(DCM)/다이메틸포름아마이드(DMF)(95/5)로 세척하였다. C-말단 잔기의 포함은 C-말단 아이소니페코트산의 결합과 MPPA 링커(왕 타입 링커) 상에서 에스터화하여 성취하였다. 결합 반응은 DMF/DCM(50/50)에서 1.35eq의 Fmoc-Inp-MPPA-링커, 1.35eq의 N-하이드록시벤조트라이아졸(HOBt), 벤조트라이아졸-1-일-옥시트라이피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBOP) 및 4.05eq의 다이아이소프로필에틸아민(DIEA)로 수행하였다. 결합 후에, 수지를 DMF로 3회 세척하였다.

펩타이드 사슬을 Fmoc 보호기의 반복적 제거와 보호된 아미노산의 결합에 의해 수지상에 결합되었다. 모든 아미노산들은 다음 동일한 사이클을 따라 결합되었다: 먼저, Fmoc 보호기를 3회 반복 사이클에 의해 피페리딘(DMF에서 35%)에서 제거하였다(Fmoc 탈보호 반응은 약 16분 걸렸다). Fmoc 보호기의 제거 후, 수지를 9회 반복 사이클로 DMF로 세척하였다. 그런 후에 Fmoc 보호 아미노산 잔기들(2eq)을 DMF와 DCM(50/50)의 혼합물에 2 당량의 N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)/HOBt와 결합시켰다. (결합 단계는 약 1시간 내지 하룻밤이 걸렸다). 닌하이드린 검사는 결합 반응이 완료되었는 지를 측정하는데 사용되었다. 닌하이드린 검사가 결합 반응이 완료되지 않았다는 것을 나타내는 경우, 결합은 DMF/DCM 및 DIEA에서 더 낮은 과량(0.5-1eq)의 아미노산, PYBOP, HOBt로 반복하였다. 결합 단계 이후, 수지는 3회 반복 사이클로 DMF로 세척하였다.

그런 후에 펩타이드를 수지로부터 절단하고 탈보호하였다. 수지로부터의 절단과 탈보호는 실온에서 2.5시간 동안 수지에 대해 5ml/g의 펩타이드의 농도로 TFA/물/아니솔(90/5/5 v/v/v)의 혼합물에서 배치로 수행되었다. 시약 혼합물에 수지의 점진적 첨가 동안, 온도는 25℃ 이하로 유지하도록 조절하였다. 펩타이드는 TFA에서 가용성이었고 소결 디스크를 통해 여과에 의해 수지로부터 추출되었다. 회전 증발기에서 농축 후, 펩타이드를 차가운 메틸-t-부틸 에터(MTBE)(0℃±5℃)에서 침전시켰고 여과하였다. 미정제 펩타이드를 MTBE로 세척하고 30℃의 오븐에서 감압하에서 건조하였다.

마지막 Fmoc 보호기의 제거 후, 펩타이드를 측쇄 보호기들의 절단과 제거를 위해 TFA/H₂O로 처리하였다. 그런 후에 미정제 펩타이드를 차가운 에터로 침전시키고 여과에 의해 수집하였다.

실시예 4: 펩타이드 16의 정제

실시예 3에 따라 제조된 펩타이드 16을 물/아세토나이트릴 농도 구배(TFA 카운터 이온을 가짐)를 사용하여 C18 고정상으로 분취용 역상 HPLC(고압 액체 크로마토그래피)에 의해 정제하였다. 프로크롬 LC110 컬럼을 새로운 또는 전용 고정상 C18 상(그라프트화된 실리카, 15 마이크론 입자 크기, 120Å 구멍 크기)으로 채웠다. 컬럼의 채움은 판들의 수와 테일링 인자(tailing factor)에 대해 SST에 의해 제어하였다.

프로크롬 LC110 컬럼 상에서, 각각의 런에 대해 주사된 펩타이드의 양은 대략 75g/L의 농도로 물/아세토나이트릴(80/20)에 용해된 약 15g의 미정제 펩타이드이었다. 컬럼은 다음 조건하에서 버퍼 A 속 버퍼 B의 농도 구배(유속 대략 450mL/min 및 220nm에서 UV 탐지): 버퍼 A=물속 0.1% TFA; 버퍼 B=아세토나이트릴/물속 0.1% TFA(80/20)로 흘렸다:

용출 인자들은 분석용 HPLC로 분석하였고 4개 항목으로 합쳤다: 미리 정한 세목에 따라 폐기물, 전면 불순(front impure), 순수 및 후면 순수(back impure). 분획들을 풀로 분류하기 위한 인-프로세스 HPLC 순도 세목은 다음이다:

생성물의 더 좋은 회수율을 얻기 위해서, 순수한 분획들에 유사한 불순 분획들(전면 불순 및 후면 불순)은 동일한 컬럼 상에서 재순환 런을 받게 하였다. "순수한 풀들(pure pools)"은 아세토나이트릴을 제거하기 위해 회전 증발기 상에서 농축하였다.

실시예 5: 펩타이드 16의 카운터 이온 교환 및 건조

실시예 4의 순수한 풀들을 혼합하고 균질화를 위해 교반하였다. 순수한 펩타이드 16의 농축은 정제를 위해 사용된 분취용 컬럼 상에서 역상 HPLC를 사용하여 수행하였다.

프로크롬 LC110 컬럼 상에서, 각각의 런에 대해 주사된 순수한 펩타이드의 부피는 대략 5g/L의 농도로 약 20L이었다. 컬럼은 다음 조건하에서 버퍼 A 속 버퍼 B의 급한 농도 구배(유속 대략 450mL/min 및 220nm에서 UV 탐지): 버퍼 A=물속 0.1% TFA; 버퍼 B=아세토나이트릴/물속 0.1% TFA(80/20)로 흘렸다.

전체 피크에 대한 용매 부피를 수집하였고, 아세토나이트릴을 제거하기 위해 회전 증발기 상에서 농축하였고 병 동결 건조기 상에서 동결건조하였다. 미정제 펩타이드의 결과로 얻은 동결건조된 풀들을 80g/L의 농도의 물/아세토나이트릴(90/10)에서 혼합하였고 다우엑스 아세테이트, 강염기, 50-100 메시 수지상에서 이온 교환 크로마토그래피 전에 완전히 용해하기 위해 교반하였다(다우엑스 아세테이트는 다우엑스 C1 수지를 1N NaOH로 처리하고, 정제수로 세척하고, AcOH/H₂O(25/75)로 처리하고 정제수로 세척하여 얻었다). 샘플을 물/아세토나이트릴(90/10)로 용출하였다. 전체 피크에 대한 용매 부피를 수집하였고, 용출 부피가 너무 큰 경우 회전 증발기 상에서 농축하였다. 정제된 펩타이드 용액을 살균 여과 캡슐(0.22 마이크로미터)을 통해 여과하였고 선반 동결 건조기 상에서 동결건조하였다.

실시예 6: 펩타이드 16의 순도 분석

펩타이드 16의 순도는 분석용 역상 HPLC 분석을 사용하여 측정하였다. 순도는 모든 피크의 면적들의 통합에 의해 규정하였다(면적 표준화). 분석은 듀얼 피스톤 펌프, 가스제거기, 자동 주사 시스템, 펠티어 제어 컬럼 오븐으로 구성된 모듈 2695; UV 탐지기 모듈 2487; 및 임파워 프로 버젼 5.00 소프트웨어를 구비한 워터스 얼라이언스 HPLC 시스템을 사용하여 수행하였다. 사용된 컬럼은 Symmetry C18(5μ) 또는 등가물, 250 x 4.6mm 컬럼이었다. 컬럼 온도 60℃이었다. 주사는 1mL/min의 유속으로 농도 구배 프로파일 상에서 용출하였다. 용출액 A는 밀리-Q 물속 0.1% TFA(예를 들어, Acros 13972)인 반면, 용출액 B는 아세토나이트릴 HPLC 농도 구배 등급(예를 들어, SDS 00637G) 속 0.1% TFA이다. 농도 구배 프로파일은 아래에 도시된다:

펩타이드 16은 210nm에서 UV 흡수로 탐지하였다. 런 타임은 45분이었고, 컬럼 세척을 위한 주사들 사이에 22분의 지연이 있었다. 펩타이드 16은 HPLC 병에 계량하였고 대략 1.2mg/mL의 농도를 제공하기 위해서 정제수에 용해하였다. 펩타이드 용액을 20μL 주사하였다.

실시예 7: LC-MS에 의한 ApoA-I 모방체들의 특징 묘사

표준의 구입할 수 있는 트리플 스테이지 사중극자 질량 분석계(모델 TSQ 700; Finnigan MAT, San Jose Calif., USA)를 질량 측정에 사용한다. 공기압 지원 전자분무(pneumatically assisted electrospray)(ESI) 계면을 질량 분석계의 대기압 이온화 소스에 대한 샘플 주입을 위해 사용한다. 계면 분무기는 4.5kV의 양성 전위에서 작동한다. 강 모세관의 온도는 200℃로 유지하는 반면, 매니폴드는 70℃로 유지한다. 이 이온 증발 공정에 의해 발생된 양성 이온들은 질량 분석계의 분석기에 들어간다. 증폭기는 1000V로 조절된다. 질량 분석계의 분석기 격실은 4E-6에 있다. 모든 취득물은 해상도 <1μ에서 수행한다.

ApoA-I 모방체들은 주사기 펌프(모델 140B), UV 탐지기(모델 785A) 및 오븐/주사기(모델 112A)로 구성된 ABI(Applied Biosystems) 마이크로보어 시스템을 사용하여 정제된 ApoA-I 모방체들의 직접 주입에 의해 분석한다. 용매 시스템은 물(용매 A) 및 아세토나이트릴(용매 B)로 구성되며, 각각 0.1% TFA를 포함한다. ApoA-I 모방체들은 농도 구배 또는 등용매 조건을 사용하여 주입되며 Aquapore C18 컬럼으로부터 용출된다. 유속은 통상적으로 300μL/min이다. 각 ApoA-I 모방체의 농도는 약 0.03mg/mL이며, 이의 20μL가 주사된다(예를 들어, 30pmol).

풀 스캔 MS 실험값들은 4s에 m/z 500-1500으로부터 사중극자 1을 스캐닝함으로써 얻어진다. 데이터는 알파 DEC 스테이션을 사용하여 얻어지고 Finnigan MAT(BIOWORKS)에 의해 제공된 소프트웨어 패키지를 사용하여 처리된다.

실시예 8: LC-MS에 의한 펩타이드 16의 특징 묘사

질량 스펙트럼 분석은 Thermo-Finnigan LCQ Advantage 장치를 사용하여 수행하였다. 소스는 전자분무 이온화(ESI-MS)이었다. 매개변수 MS: 질소 가스 흐름 = 30 임의단위, 분an 전압 = 5.2V, 모세관 온도 = 270℃, 모세관 전압 = 38V, 튜브 렌즈 오프셋 = 55V. 메탄올/몰/포름산 47/47/6//v/v/v 속 펩타이드 16의 100㎍/mL 요액의 검사 용액을 분석하였다(500μL 주사기로 5μL/min 주사의 유속으로 MS에 직접 주입). 디컨볼루션 후 얻은 결과는 이론값과 일치하였다.

실시예 9: ApoA-I 모방체들의 아미노산 분석

아미노산 분석은 ABI(Applied Biosystems) 420 아미노산 분석기를 사용하여 수행한다. 이 시스템은 세 개 모듈: 가수분해 및 유도화 장치, 역상 HPLC 및 데이터 시스템으로 구성된다. 펩타이드 샘플들을 다공성 유리 슬라이드 상에 도포하고(3중으로(in triplicate) 3회) 뒤이어 기체 상 조건(155℃., 90분)하에서 가수분해한다. HCl의 제거 후, 결과로 얻은 아미노산들을 PITC(페닐아이소티오시아네이트)를 사용하여 PTC-AA(페닐티오카바모일-아미노산)로 변환한다. HPC 샘플 루프에 전달한 후, 결과로 얻은 혼합물들을 온도 제어의 조건하에서 농도 구배 모드(용매 A: 물속 50mmol 암모늄 아세테이트(NH₄Ac), pH 5.4; 용매 B: 수성 아세토나이트릴 속 32mmol의 소듐 아세테이트(NaOAc))를 사용하여 Auapore C18 컬럼 상에 분획한다. HPLC 데이터는 어플라이드 바이오시스템에 의해 제공된 소프트웨어 패키지에 의해 처리된다. 정량화는 어플라이드 바이오시스템에 의해 제공된 펩타이드 표준에 비례하여 수행된다.

실시예 10: 펩타이드 16의 아미노산 분석

펩타이드 16(약 700㎍)을 20시간 동안 110℃에서 100μL 6N HCl(예를 들어, Pierce 24308)로 구조성 아미노산으로 가수분해하였고, 유도화 후, 분리하고 아미노산들의 표준 혼합물에 대해 정량화하였다(아미노산 표준 H 예를 들어, Pierce 20088). 아미노산들을 o-프탈알데하이드(OPA-시약, 예를 들어, Fluka 5061-3335) 및 9-플루오렌일메틸크롤로포르메이트(Fmoc-시약, 예를 들어, Fluka 5061-3337)를 사용하여 유도한 후 C-18 HPLC-컬럼 상에 주사하였다. UV 탐지기와 켐스테이션 소프트웨어를 구비한 애질런트 1100 HPLC를 분석에 사용하였다. 사용된 컬럼은 Hypersil ODS 컬럼 200 x 2.1mm, 5㎛이었다. 사용된 농도 구배는 0.45mL/min의 유속에서 17분에 0-60% B에서 7분 동안 100% B까지이었다. 버퍼 A = 1000mL H₂O + 180μL 트라이에틸아민 속 2.3g 소듐 아세테이트, 2% 아세트산 용액 + 3.3ml 테트라하이드로퓨란으로 7.2로 조절된 pH. 버퍼 B = 200ml H₂0 속 2.3g 소듐 아세테이트, 2% 아세트산 용액 + 400mL 아세토나이트릴 + 400mL 메탄올로 7.2로 조절된 pH. 아미노산 측정은 3중으로 수행하였고, 아미노산들은 368 및 262nm에서 UV 흡수로 탐지하였다. 피어스 표준 용액을 펩타이드 샘플의 3중 주사 이전 및 이후 모두에 주사하였다.

실시예 11: 공동 동결건조에 의한 펩타이드/지질 복합체들의 제조

50mg의 ApoA-I 모방체를 뚜껑을 가진 1mL 투명 유리병 속 1mL의 매우 찬 아세트산에 용해한다. 펩타이드의 용해는 실온에서 10분의 기간 동안 가끔의 와류에 의해 보조한다. 50mg의 다이팔미톨일 포스파티딜콜린(DPPC; 아반티 폴라 지질, 99% 순도, 제품 #850355) 및 50mg의 달걀 스핀고미에린(NOF)를 1mL의 매우 찬 아세트산에 용해한다. DPPG를 10mg/mL의 농도로 90% 매우 찬 아세트산 10% 물 혼합물(v/v)에 용해한다. DPPG 용해는 37℃에서 배양하여 보조한다. ApoA-I 모방체, 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG 용액을 혼합하여 각각 1:1.35:1.35:0.30의 ApoA-I 모방체: 스핀고미에린:DPPC:DPPG의 중량비를 얻었다. 결과로 얻은 용액을 -20℃에서 동결하고 12시간 동안 오븐에서 동결건조한다.

동결건조된 분말을 중탄산 식염수 버퍼(20mM 중탄산나트륨, 130mM NaCl, pH 8.2)에서 가수분해하여 10mg/mL 최종 농도의 ApoA-I 모방체를 얻는다. 혼합물을 교반하여 재수화를 촉진한다. 수화 이후 pH를 1N NaOH 용액으로 pH 7.4로 조절한다. 복합체 형성을 돕기 위해 수화된 분말을 15분 동안 50℃에서 수조에서 배양하고 실온에서 15분 동안 유지한다. 가열과 냉각은 버퍼 속 ApoA-I 모방체/인지질 복합체들의 투명 내지 반투명 용액이 얻어질 때까지 반복한다.

실시예 12: 균질화에 의한 펩타이드 16/지질 복합체의 제조

인산 나트륨 버퍼(12mM, pH 8.2)를 제조하고 50℃로 가열하였다.

DPPG 분산액을 45mg/mL의 농도로 버퍼에 DPPG를 분산함으로써 제조하였다. 펩타이드 용액을 버퍼에 30mg/ml의 농도로 펩타이드 16을 용해함으로써 제조하였다. 펩타이드 용액이 pH는 NaOH의 첨가에 의해 약 8.2로 조절하였다. 그런 후에 펩타이드 용액을 DPPG 분산액과 혼합하였고 투명 용액이 관찰될 때까지 50℃에서 배양하여, 펩타이드/DPPG 용액을 형성하였다.

스핀고미에린/DPPC 분산액을 버퍼에 각각의 스핀고미에린 및 DPPC의 38.3mg/mL의 농도로 스핀고미에린과 DPPC를 분산시킴으로써 제조하였다. 그런 후에 스핀고미에린/DPPC 분산액을 고 전단력 혼합을 사용하여 혼합하였다.

펩타이드/DPPG 용액 및 스핀고미에린/DPPC 용액을 혼합하고 고압 균질기(Avestin C3)를 사용하여 용액이 반투명해지고 복합체들이 형성될 때까지 균질화하였다. 균질화 이후, 등장제를 첨가한다(130mM NaCl). 그런 후에 이 용액을 살균 여과하고 유리병에 채웠다. 용액 속 펩타이드 16의 최종 농도는 15mg/mL이었다.

실시예 13: 펩타이드 16/지질 복합체의 분석

a. 복합체의 크기 분포

실시예 12에 따라 제조된 펩타이드 16/지질 복합체의 정체를 확인하였고 복합체들의 크기 분포는 겔 흡수 크로마토그래피(GPC)를 사용하여 측정하였다. Tosoh TSK-GEL G3000SW_XL(7.8mm ID, 30cm 길이)를 분리에 사용하였다. 주사액들은 150mM NaCl(pH 7.4)를 포함하는 6mM 인산염 버퍼 및 1ml/min의 등용매 유속을 사용하여 용출하였다. 샘플들을 이동상으로 20x 희석하여 제조하였고 100μL의 주사 부피를 사용하였다. 컬럼 성능은 4개 분자량 표준의 주사에 의해 각 런 이전에 확인하였다. 복합체는 220nm 파장에서 UV에 의해 탐지되었다. 복합체의 정체는 참조 표준에 대한 복합체의 잔류 시간의 비교에 의해 확인하였다. 복합체의 크기 분포는 크로마토그램에 전체 피크 면적의 백분율로 나타내었다. 실시예 12에 따라 제조된 펩타이드 16/지질 복합체에 대한 대표적 GPC 크로마토그램은 도 5에 도시된다.

b. 복합체의 펩타이드 16의 정체, 순도 및 함량

복합체의 펩타이드 16의 정체, 순도 및 함량은 초고성능 액체 크로마토그래피("UPLC")를 사용하여 215nm 파장에서 UV 탐지에 의해 측정하였다. 2.1mm의 I.D와 1.7㎛의 입자 크기를 가진 Acquity BEH C18 100mm 컬럼을 이 분리에 사용하였다. 주사액들은 52.5/22.5/22(v/v/v) 비에서 메탄올/아세토나이트릴/물속 0.1%(v/v) TFA 및 56/24/20 (v/v/v) 비에서 메탄올/아세토나이트릴/물속 0.1%(v/v) TFA의 2중 농도 구배 이동상을 사용하여 용출하였다. 샘플들은 20x 희석으로 제조하였고 7.5μL 주사 부피를 사용하여 주사하였다. 이동상 유기 용매들의 조합은 복합체들을 용해하고 복합체의 지질들로부터 펩타이드 16을 분리하였다. 펩타이드 16의 정체는 참조 표준에 대한 이의 잔류 시간의 비교에 의해 확인하였다. 펩타이드 16의 순도는 크로마토그램에 전체 피크 면적의 백분율로 나타내었다. 펩타이드 16의 함량은 펩타이드 16의 참조 표준의 희석 용액으로부터 만든 보정 곡선을 사용하여 계산하였다.

c. 복합체에서 지질 함량의 측정

실시예 12에 따라 제조된 펩타이드 16/지질 복합체의 지질 함량은 DAOS 방법을 사용하는 효소 분석법을 사용하여 측정하였다. 분석 키트는 와코 퓨어 케미컬 인더스트리, Ltd에 의헤 제조되었다(인지질 C 키트). 샘플들을 인산염 버퍼를 사용하여 75x 희석하였다. 분석 키트에 있는 효소들은 스핀고미에린과 DPPC를 가수분해하여 콜린을 방출하였고, 그런 후에 여러 다른 효소들과 반응하여 청색 안료를 활성화하였다. 청색 안료는 분광분석적으로 탐지하였다. 샘플들을 소듐 콜레이트와 청색 안료의 희석으로부터 만든 보정 곡선으로부터 정량화하였다. 가수분해된 스핀고미에린과 DPPC 모두는 콜린을 포함하였고 따라서 이 방법에 의해 정량화된다.

실시예 14: 인간 HDL의 수퍼로스 6 겔 여과 크로마토그래피

인간 HDL₂는 다음과 같이 제조한다: 300mL 동결된 인간 혈장(Mannheim Blutspendzentrale #1185190)를 해동하고, 고체 브롬화 칼륨을 사용하여 밀도 1.25로 조절하고 20℃에서 Ti45 로터(Beckman)를 사용하여 40,000 RPM에서 45시간 동안 원심분리한다. 결과로 얻은 유동층을 수집하고, 증류수에 대해 투석하고 고체 브롬화 칼륨을 사용하여 밀도 1.07로 조절하고 70시간 동안 상기한 대로 원심분리한다. 바닥층(튜브 바닥 위 1cm의 높이)을 수집하고, 0.01% 소듐 아지드를 첨가하고 층을 4일 동안 4℃에서 저장한다. 20μL의 HDL₂를 컬럼 용출액으로 0.9% NaCl를 사용하는 파마시아 수퍼로스 6 FPLC 겔 투과 크로마토그래피 시스템 위에 적재한다. 컬럼 유속은 0.5mL/min이다. 컬럼 용출액은 파장 254nm의 빛의 흡수 또는 산란에 의해 관찰한다. 공지된 분자량과 스토크스 직경의 일련의 단백질들을 입자들의 스토크스 직경의 계산을 위한 컬럼을 보정하기 위한 표준으로서 사용한다(Pharmacia Gel Filtration Calibration Kit Instruction Manual, Pharmacia Laboratory Separation, Piscataway, NJ., revised April 1985).

실시예 15: 액체 크로마토그래피와 탠덤 질량 분석계 탐지(LC-MS/MS)에 의한 단백질 침전화를 사용하여 쥐와 원숭이 혈장에서 펩타이드 16의 측정

펩타이드 16의 농도는 블랭크 매트릭스를 사용하여 농도 범위 1 내지 500㎍/mL에 걸쳐 쥐 또는 원숭이 혈장에서 측정하였다. 동위원소적으로 표지화된 펩타이드 16을 내부 표준 용액으로서 사용하였고 해동된 혈장 샘플들에 첨가하였다. 그런 후에 샘플들을 물:아세토나이트릴:TFA(70:20:10 v/v/v)를 사용하여 단백질 침전화를 거치게 하였고, 이후 혼합하고 원심분리하였다. 상청액을 깨끗한 96 웰 플레이트에 옮겼고 물:아세토나이트릴:TFA(70:30:0.1 v/v/v)를 각 웰에 첨가하였고 LC-MS/MS 분석 이전에 혼합하고 원심분리하였다. LC 조건들은 Acquity UPLC 및 터보 이온스프레이(양성 이온)(MS/MS)이었고, 물:아세토나이트릴:TFA 0.1%의 농도 구배를 흘리는 BEH Shield RP 18 컬럼을 사용하였다.

보정 표준과 QC 샘플들에서 펩타이드 16의 농도는 가중치로서 농도의 역수(1/x)로 최소 자승 선형 회귀분석을 사용하여 측정하였다.

실시예 16: 쥐들에서 펩타이드 16/지질 복합체의 약물 동태학의 측정

펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 약물 동태학은 윈드스타 쥐들에서 평가하였다.

그룹당 성별당 9마리 동물이 약물 동태학의 평가를 위해 포함되었다. 부형제 대조 표준 그룹에 있는 동물들은 12mM 인산염 버퍼 속 130mM 염화나트륨, pH 8.2, 20mL/kg으로 정맥으로 받았다. 펩타이드 16/지질 복합체 치료 그룹들에 있는 동물들은 정맥 주입에 의해 하루걸러 투여된 15, 30 또는 60mg/kg을 받았다. 대략 0.5mL의 혈액을 아이소플로레인 마취하에서 후안 구동(retro-orbital sinus)으로부터 채취하고 항응혈제로서 Na₃EDTA를 포함하는 튜브에 기준선에서 및 0일 및 26일에 복용 후 0.0833, 0.5, 1, 2, 6, 12, 24 및 48시간에서 그룹당 3마리의 그룹으로부터 수집하였다. 따라서, 동물들의 각 그룹은 3회 다른 시점에서 혈액을 채취하였다. 혈장은 원심분리에 의해 분리하고 분석할 때까지 -20℃에서 동결하여 저장하였다. 펩타이드 수준은 실시예 8에 기술한 대로 LC-MS/MS에 의해 분석하였다. 약물 동태학 매개변수들은 Kinetica 4.4.1을 사용하여 모델비의존형방법(non compartmental analysis)에 의해 개개의 혈장 농도로부터 측정하였다. 펩타이드 16의 혈장 수준은 복용 이후 빠르게 증가하였고, 15 및 30mg/kg 복용량으로 펩타이드 16/지질 복합체를 투여받은 동물들에서 주입의 종료 이후 6시간까지 정량화가능하였다. 펩타이드 16의 탐지가능한 수준은 두 성별에서 60mg/kg으로 치료한 동물들에서 12시간까지 관찰하였다. 정맥내 투여된 약물에 대해 예상한 대로, T_max는 복용 직후이었다. 펩타이드 16의 순환 수준의 예상 반감기는 두 성별의 쥐들에서 0.5 내지 5 시간이었고 복용량 의존방식으로 증가하는 것으로 보였다. 분포의 제거 및 부피는 복용량이 증가함에 따라 감소하였다. 분포의 부피를 기초로, 펩타이드 16/지질 복합체는 혈장에 일반적으로 분포되었다고 결론내릴 수 있겠다.

실시예 17: 원숭이들에서 펩타이드 16/지질 복합체의 약물 동태학의 측정

펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 약물 동태학은 시고몰루스 원숭이들에서 평가하였다.

부형제 대조 표준 그룹에 있는 동물들은 12mM 인산염 버퍼 속 130mM 염화나트륨, pH 8.2, 10mL/kg으로 정맥으로 받았다. 펩타이드 16/지질 복합체 치료 그룹들에 있는 동물들은 정맥 주입에 의해 하루걸러 투여된 15, 30 또는 60mg/kg을 받았다. 혈액을 항응혈제로서 Na₃EDTA를 포함하는 튜브에 기준선에서, 주입의 종료시에서 및 복용 후 1, 2, 6, 12, 24 및 48시간에서 수집하였다. 각 시점에서, 대략 1mL의 혈액을 대퇴부 혈관으로부터 채취하면서, 동물은 어떠한 마취제 없이 활동이 제약되었다. 혈장은 원심분리에 의해 분리하고 분석할 때까지 -20℃에서 동결하여 저장하였다. 펩타이드 16 수준은 실시예 8에 기술한 대로 LC-MS/MS에 의해 분석하였다. 약물 동태학 매개변수들은 Kinetica 4.4.1을 사용하여 모델비의존형방법(non compartmental analysis)에 의해 개개의 혈장 농도로부터 측정하였다. 펩타이드 16은 두 성별에서 15mg/kg에서 펩타이드 16/지질 복합체를 투여받은 동물들에서 주입의 종료 이후 12시간까지 동안 혈장에서 탐지하였다. 펩타이드 16의 탐지가능한 수준은 30 및 60 mg/kg으로 치료한 동물들에서 24시간까지 관찰하였다. 인지질 수준은 복용 이후 증가하였고, 펩타이드 16의 타임프레임과 유사한 타임프레임 동안 기준선 수준으로 되돌아왔다. 정맥내 투여된 약물에 대해 예상한 대로, T_max는 복용 직후이었다. 펩타이드 16의 순환 수준의 예상 반감기는 두 성별의 원숭이들에서 2 내지 7 시간이었고 복용량 의존방식으로 증가하는 것으로 보였다. 분포의 제거 및 부피는 복용량이 증가함에 따라 감소하였다. 분포의 부피를 기초로, 펩타이드 16/지질 복합체는 혈장 부분에 주로 분포되었다고 결론내릴 수 있겠다.

실시예 18: 토끼들에서 콜레스테롤 유동화

a. 펩타이드 16/지질 복합체의 제조

펩타이드 16은 실시예 3에 따라 F-moc 합성에 의해 합성하였고 실시예 4에 따라 역상 크로마토그래피에 의해 정제하였다.

그런 후에 펩타이드 16을 매우 찬 아세트산:물 혼합물 속 펩타이드 16, 스핀고미에린, DPPG 및 DPPC의 공동 동결건조에 의해 스핀고미에린, DPPG 및 DPPC의 혼합물과 복합체를 형성하였다. 결과로 얻은 동결건조된 분말을 버퍼(소듐 포스페이트 버퍼, 12mM, pH 8.2)로 재구성하여 1:1.35:1.35:0.30이 펩타이드 16:스핀고미에린:DPPC:DPPG의 중량비를 가진 펩타이드 16/지질 복합체의 현탁액을 형성하였다.

b. 펩타이드 16/지질 복합체의 토끼들에 대한 투여

3 내지 4kg 체중의 뉴질랜드 수컷 토끼들을 사용하여 펩타이드 16/지질 복합체에 의한 콜레스테롤 유동화를 입증하였다.

동물 우리 조건들은 다음과 같았다: 온도, 22±2℃; 상대 습도, 55±15%; 및 12시간 밝음/12시간 어두움 사이클.

동물들을 연구 시작 전에 적어도 7일 동안 적응시켰다. 동물들은 매일 자유롭게 제어된 펠릿 사료를 먹었다. 물은 연구 동안 자유롭게 이용할 수 있었다.

펩타이드 16/지질 복합체의 투여 이전에, 동물들을 밤새 단식시켰다. 펩타이드 16/지질 복합체의 투여 직전에, 동물들을 계량하였다. 펩타이드 16/지질 복합체는 20mg/kg의 복용 속도로 정맥으로 주사하였다. 투여된 부피는 체중을 기준으로 하였다. 사료제공은 펩타이드 16/지질 복합체의 투여 대략 6시간 이후에 재개하였다.

c. 혈액 샘플들의 분석

혈액 샘플들의 수집 이전에, 동물들을 밤새 단식시켰다. 혈액을 주입 개시 이후, 기준선에서, 5분, 15분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 8시간, 30시간 및 34시간에서 수집하였다. 혈액 샘플들을 경정맥으로부터 또는 귀의 변연 정맥으로부터 채취하였다. 혈액은 EDTA(샘플링 시간당 대략 혈액의 1mL)를 가진 바늘이 장착된 주사기를 사용하여 경정맥으로부터 채취하였다. 수집 직후, 혈액 샘플들을 혈액 샘플의 변형을 피하기 위해 대략 4℃에서 보관하였다. 혈액 표본들을 원심분리하였다(대략 5℃에서 10분 동안 3500g). 혈장 표본들을 분리하였고 분취하고(적어도 200μL의 세 분취량(분취량 A, B, C)) 대략 -80℃에서 저장하였다. 잔존하는 혈액 덩어리를 버렸다.

혈청 인지질(Phospholipid B, Kit # 990-54009, Wako Chemicals GmbH, Neuss, Germany), 트라이글리세리드(Triglycerides, Kit # 1488872, Boehringer Mannheim Corporation, Indianapolis, Ind), 전체 콜레스테롤 및 에스터화되지 않은 콜레스테롤을 히타치 912 자동 분석기(Roche Diagnostics Corporation, Indianapolis, Ind)를 위한 구입가능한 키트들을 사용하여 측정하였다.

리포단백질 프로파일들은 키에프트 등(J Lipid Res 1991; 32:859-866, 1991)에 기술된 대로 전체 또는 유리 콜레스테롤에 대한 온라인 탐지기가 장착된 수퍼로스 6HR 1x30 cm 컬럼 상에서 겔 여과 크로마토그래피를 사용하여 분석하였다. VLDL, LDL 및 HDL의 크기들을 가진 리포단백질들에 해당하는 피크들 아래의 면적을 통합하였다. 각 피크의 유리 또는 전체 콜레스테롤의 분획을 VLDL, LDL 및 HDL 유리 및 전체 콜레스테롤을 측정하기 위해서 자동 분석기로 측정한 전체 혈장 콜레스테롤 또는 유리 콜레스테롤과 곱했다. 혈청과 리포단백질 분획 VLDL, LDL 및 HDL에서 에스터화된 콜레스테롤은 전체 콜레스테롤 값들로부터 유리 콜레스테롤을 뺌으로써 계산하였다.

복합체들의 주입 이후 전체 콜레스테롤의 HDL 분획의 증가는 시간의 함수로서 그래프로 나타내었고 도 6에 도시된다. 토끼들의 전체 HDL 콜레스테롤은 펩타이드 16/지질 복합체의 투여 직후 증가하였고, 조직 콜레스테롤 유동화와 HDL에 대한 전달을 나타내었다.

실시예 19: 토끼들에서 콜레스테롤 유동화

a. 펩타이드 16/지질 복합체의 제조

펩타이드 16/지질 복합체는 실시예 12에 따라 제조하였다. 펩타이드 16/지질 복합체는 1:1.2125:1.2125:0.075의 펩타이드 16:스핀고미에린:DPPC:DPPG의 중량비와 1:2.5의 펩타이드:지질의 중량비를 가졌다.

b. 펩타이드 16/지질 복합체의 토끼들에 대한 투여

펩타이드 16/지질 복합체의 투여 이전에, 동물들을 밤새 단식시켰다. 펩타이드 16/지질 복합체의 투여 직전에, 동물들을 계량하였다. 콜레스테롤 유동화가 탐지될 수 있는 최소 복용량을 조사하기 위해서, 동물들은 펩타이드 16/지질 복합체 또는 인산염 버퍼 식염수 대조 표준의 2.5, 5 및 10mg/kg을 복용시켰다. 복용 그룹당 4마리 동물을 연구하였다. 사료제공은 펩타이드 16/지질 복합체 또는 인산염 버퍼 식염수 대조 표준의 투여 대략 6시간 이후에 재개하였다.

c. 혈액 샘플들의 분석

리포단백질 프로파일들은 키에프트 등(J Lipid Res 1991; 32:859-866, 1991)에 기술된 대로 전체 또는 유리 콜레스테롤에 대한 온라인 탐지기가 장착된 수퍼로스 6HR 1x30 cm 컬럼 상에서 겔 여과 크로마토그래피를 사용하여 분석하였다. VLDL, LDL 및 HDL의 크기들을 가진 리포단백질들에 해당하는 피크들 아래의 면적을 통합하였다. 각 피크의 유리 또는 전체 콜레스테롤의 비율을 VLDL, LDL 및 HDL 유리 및 전체 콜레스테롤을 측정하기 위해서 자동 분석기로 측정한 전체 혈장 콜레스테롤 또는 유리 콜레스테롤과 곱했다. 혈청과 리포단백질 분획 VLDL, LDL 및 HDL에서 에스터화된 콜레스테롤은 전체 콜레스테롤 값들로부터 유리 콜레스테롤을 뺌으로써 계산하였다.

복합체들의 주입 이후 전체 콜레스테롤의 HDL 분획의 증가는 시간의 함수로서 그래프로 나타내었고 도 7에 도시된다. 기준선 보다 많은 HDL 유리 콜레스테롤의 분명한 증가는 2.5mg/kg의 복용량에서 명백하였고, 펩타이드 16/지질 복합체의 높은 효능을 나타내었다. 주입 시작 후 5 및 20분에서, 콜레스테롤은 기준선 30% 이상으로 증가하였다. 이런 증가들은 통계적으로 현저하였다(쌍을 이룬 두 개의 테일드 스튜던트 T 검사에 의해 p<0.05). 반대로, 플라시보 처리 그룹에서 기준선으로부터의 변화가 없었다.

2.5mg/kg 복용량에서 펩타이드 16/지질 복합체의 약리학적 효과는 HPLC 크기 배제 컬럼으로부터 용출된 리포단백질 분획들의 원래 스캔과 비교함으로써 더욱 명백하였고, 도 8에 도시된다. 주사 이후 HPLC 크로마토그램의 HDL 유리 콜레스테롤 분획에서 상대 기준선에 분명한 증가가 있다.

실시예 20: 펩타이드 16/지질 복합체의 복용량 반응

펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 복용량 반응은 뉴질랜드 흰색 토끼들에서 평가하였다.

단식한 뉴질랜드 백색 토끼 콜레스테롤 유동화 모델에서, 5, 10 또는 15mg/mL(펩타이드 농도를 기준)의 펩타이드 16/지질 복합체 또는 인산염 버퍼 식염수 부형제 대조 표준을 2mL/kg의 주입 부피로 단식한 동물들에게 1mL/min의 속도로 정맥으로 투여하였다. 복용 그룹당 3마리 동물이 있었다. 최종 복용량은 0, 10, 20 또는 30mg/kg이었다. 혈액은 기준선에서, 주입의 개시 후 5분, 15분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 8시간, 30시간 및 34시간에서 수집하였다. 혈장 지질과 리포단백질 수준을 측정하였다. 리포단백질 수준은 Usui, S., Hara, Y., Hosaki, S., and Okazaki, M., A new on-line dual enzymatic method for simultaneous quantification of cholesterol and triglycerides in lipoproteins by HPLC. J. Lipid Res. 43, 805-814 (2002)에 의해 기술된 방법에 따라 인라인 유리 및 전체 콜레스테롤 탐지에 의해 HPLC 크기 배제 분획화에 의해 측정하였다. VLDL, LDL 및 HDL의 크기들을 가진 리포단백질들에 해당하는 주요 피크들 아래의 면적을 통합하였다. 각 피크의 유리 또는 전체 콜레스테롤의 분획을 각 분획에서 콜레스테롤의 수준을 측정하기 위해서 전체 혈장 콜레스테롤 또는 유리 콜레스테롤과 곱했다. 각 분획에서 콜레스테롤 에스터 수준은 각 분획의 전체 콜레스테롤로부터 유리 콜레스테롤을 뺌으로써 측정하였다. 이 모델에서, 혈장 또는 HDL 콜레스테롤 수준의 증가는 조직 콜레스테롤 유동화 및 HDL로의 전달을 나타낸다.

도 9는 펩타이드 16/지질 복합체의 토끼들에 대한 주입 이후 혈장 인지질의 복용량 의존성 증가를 나타낸다. 이 증가는 펩타이드 16/지질 복합체의 순환하는 수준을 나타내는데, 이는 인지질은 펩타이드 16/지질 복합체의 성분이기 때문이다. 펩타이드 16 수준은 처음 30분 내에 최고가 되었다가 기준선 수준으로 감소하였다. 콜레스테롤 유동화의 복용량 의존성 증가가 또한 관찰되었다. 이것은 전체 혈장 콜레스테롤(도 10a) 및 전체 HDL 콜레스테롤 수준(도 11a) 모두의 증가에 의해 명백하였다. 대부분의 콜레스테롤 증가는 유리 콜레스테롤의 형태이었다(도 10 및 11).

LDL 분획에서 전체 및 유리 콜레스테롤의 증가(도 11c 및 11d)는 두 개의 최고 복용량에서 관찰되었다. 유리 콜레스테롤의 증가는 전체 콜레스테롤의 증가와 대략 동일하였고, 이 분획에서 콜레스테롤 에스터의 약간 증가를 나타낸다. 콜레스테롤 에스터의 증가 없이, LDL 분획에서 유리 콜레스테롤의 증가는 이런 증가가 전형적인 콜레스테롤 에스터 풍부 LDL의 증가를 나타내지 않는다는 것을 보여준다. 이런 리포단백질 분획에서 보이는 복합체들은 콜레스테롤 유동화 과정을 통해 콜레스테롤을 얻는 주입된 펩타이드 16/지질 복합체의 생성물과 유사하다. VLDL 콜레스테롤의 관찰된 증가는 에스터화된 및 에스터화되지 않은 콜레스테롤 분획 사이에 분포되었다. 트라이글리세리드 수준은 모든 펩타이드 16/지질 복합체 복용량에서 처음 4시간 내지 6시간 동안 일시적으로 증가하였다(도 12). 복용량과 트라이글리세리드 증가 사이에 명백한 상관관계가 없었다.

실시예 21: 펩타이드 16/지질 복합체의 최소 유효 복용량

펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 최소 유효 복용량을 뉴질랜드 흰색 토끼들에서 평가하였다.

콜레스테롤 유동화가 탐지될 수 있는 최소 복용량을 조사하였다. 동물들에게 0, 2.5, 5 및 10mg/kg의 펩타이드 16/지질 복합체를 복용하였다. 복용 그룹당 4마리 동물을 연구하였다. 약리학적 효과는 기준선 수준과 비교하여 HDL 분획에서 유리 콜레스테롤의 증가에 의해 가장 명백하였다(도 13). 이것은 예상되었는데 이는 펩타이드 16/지질 복합체의 주입 이후 대부분의 최초 콜레스테롤 증가는 HDL 분획에서 유리 콜레스테롤이기 때문이다. 또한, 유리 콜레스테롤은 전체 HDL 콜레스테롤의 약 1/3을 차지하여, 이 분획에서 증가를 탐지하기 더 쉽게 만든다. 기준선 보다 많은 HDL 유리 콜레스테롤의 분명한 증가는 2.5mg/kg의 복용량에서 명백하였다.주입 시작 후 5 및 20분에서, 콜레스테롤은 기준선 30% 이상으로 증가하였다. 이런 증가들은 통계적으로 현저하였다(쌍을 이룬 두 개의 테일드 스튜던트 T 검사에 의해 p<0.05). 반대로, 대조 표준 그룹에서 기준선으로부터의 변화가 없었다.

2.5mg/kg 또는 5mg/kg 복용량에서 펩타이드 16/지질 복합체의 약리학적 효과는 HPLC 크기 배제 컬럼으로부터 용출된 리포단백질 분획들의 원래 스캔과 비교함으로써 더욱 명백하였다. 이런 두 실시예에서 볼 수 있듯이, 도 14에서, HPLC 크로마토그램의 HDL 분획에서 유리 콜레스테롤 상대 기준선에 분명한 증가가 있다. 이것은 기준선에서 HDL 피크 아래의 면적(도 14의 어두운 라인)과 비교된 펩타이드 16/지질 복합체의 주입 개시 후 20분에 수집된 샘플에 대한 HDL 피크 아래 면적(도 14의 밝은 라인)의 증가에 의해 나타난다.

실시예 22: 펩타이드 16/지질 복합체의 효능에 대한 주입 속도의 효과

펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 효능에 대한 주입 속도의 효과를 뉴질랜드 흰색 토끼들에서 평가하였다.

콜레스테롤 유동화에 대한 펩타이드 16/지질 복합체의 주입의 속도의 효과를 조사하였다. 10mg/mL(펩타이드 농도를 기준)의 농도의 펩타이드 16/지질 복합체 또는 인산염 버퍼 식염수 부형제 대조 표준을 1mL/min 또는 0.2mL/min의 속도로 2mL/kg의 복용량 부피로 주입하였다. 펩타이드 16/지질 복합체의 최종 복용량은 20mg/kg이었다. 네 마리 동물을 펩타이드 16/지질 복합체 그룹에서 연구하였고 두 마리 동물을 부형제 대조 표준 그룹에서 연구하였다. 토끼들은 2.2-2.8kg의 크기이었다.

펩타이드 16/지질 복합체의 주입으로부터 발생하는 혈장 인지질의 증가의 속도와 후속 콜레스테롤 유동화로부터 발생하는 혈장 콜레스테롤의 증가의 속도는 펩타이드 16/지질 복합체가 더 느린 속도로 주입되었던 동물들에서 더 느렸다. 그러나, 최대 인지질 및 콜레스테롤 유동화 수준은 유사하였다. 도 15는 1mL/min 또는 0.2mL/min의 속도로 펩타이드 16/지질 복합체의 주입 이후 HDL 유리 콜레스테롤의 증가는 유사하였다는 것을 나타낸다. 따라서 이 모델에서, 검사된 속도에 대해, 펩타이드 16/지질 복합체 주입 속도는 콜레스테롤 유동화에 적은 효과를 갖거나 효과가 없다.

실시예 23: 쥐들과 원숭이들에서 펩타이드 16/지질 복합체에 대한 약물 동태학 연구

펩타이드 16/지질 복합체(지질은 1:1.2125:1.2125:0.075의 중량비의 스핀고미에린, DPPC 및 DPPG이고 펩타이드:지질 중량비는 1:2.5이다)의 약물 동태학은 쥐들과 원숭이들에서 평가하였다.

a. 분석 방법

생쥐 및 원숭이 혈장에서 펩타이드 16/지질 복합체의 농도들은 탠덤 질량 분석계(LC-MS/MS) 기술에 의해 액체 크로마토그래피를 사용하여 측정하였다. 펩타이드 16/지질 복합체의 성분인 펩타이드 16은 아세토나이트릴에 의해 단백질 분획의 침전화 이후 EDTA를 포함하는 혈장으로부터 추출하였다. 이 방법은 추출된 펩타이드 16 및 동위원소적으로 표지화된 펩타이드 16의 내부 표준을 측정한다. 추출물들을 재구성하였고 펩타이드는 탠덤 질량 분석계(MS/MS)와 결합된 초고성능 액체 크로마토그래피에 의해 분석하였다. 이 방법의 보정 범위는 25μL의 샘플 부피로 1 - 500㎍/mL이다. 펩타이드 추출과 LC-MS/MS 방법은 생분석 방법 입증에 대한 일반적인 권고사항들에 의해 그리고 GLP(Good Laboratory Practice)에 따라 입증하였다. 입증 데이터는 이 방법들은 쥐 및 원숭이 혈장에서 펩타이드 16/지질 복합체의 측정을 위해 충분히 민감하고, 특이적이며, 정확하고 정밀하다는 것을 나타내었다.

b. 쥐들에서 약물 동태학 연구들

그룹당 성별당 9마리 동물이 0일(처음 복용) 및 26일에 복용량 투여 이후 펩타이드 16/지질 복합체의 독성 동태학의 평가를 위해 포함되었다. 부형제 대조 표준 그룹에 있는 동물들은 12mM 인산염 버퍼 속 130mM 염화나트륨, pH 8.2, 20mL/kg으로 정맥으로 받았다. 펩타이드 16/지질 복합체 치료 그룹들에 있는 동물들은 정맥 주입에 의해 매 2일에 제공된 15, 30 또는 60mg/kg을 받았다. 대략 0.5mL의 혈액을 아이소플로레인 마취하에서 후안 구동(retro-orbital sinus)으로부터 채취하고 항응혈제로서 Na₃EDTA를 포함하는 튜브에 기준선에서 및 0일 및 26일에 복용 후 0.0833, 0.5, 1, 2, 6, 12, 24 및 48시간에서 그룹당 3마리의 그룹으로부터 수집하였다. 따라서, 동물들의 각 그룹은 3회 다른 시점에서 혈액을 채취하였다. 혈장은 원심분리에 의해 분리하고 코반스(UK)에서 분석할 때까지 -20℃에서 동결하여 저장하였다. 펩타이드 수준은 LC-MS/MS에 의해 분석하였다. 독성 동태학 매개변수들은 Kinetica 4.4.1을 사용하여 모델비의존형방법(non compartmental analysis)에 의해 개개의 혈장 농도로부터 측정하였다.

도 16 및 17에 도시된 대로, 펩타이드 16의 혈장 수준은 복용 이후 빠르게 증가하였고, 15 및 30mg/kg 복용량으로 펩타이드 16/지질 복합체를 제공받은 동물들에서 주입의 종료 이후 6시간까지 정량할 수 있었다. 펩타이드의 탐지가능한 수준은 두 성별에서 60 mg/kg으로 치료한 동물들에서 12시간까지 관찰하였다. 인지질 수준은 복용 이후 증가하였고, 펩타이드의 타임프레임과 유사한 타임프레임 동안 기준선 수준으로 되돌아왔다. 유리 콜레스테롤(에스터화되지 않음)은 복용량 의존 방식으로 주입 이후 증가하였고 콜레스테롤 유동화를 나타낸다. 이후에 콜레스테롤의 감소를 이어졌고 펩타이드 16/지질 복합체 입자들은 순환으로부터 콜레스테롤을 효과적으로 제거한다는 것을 나타내었다. 유사한 패턴들이 0일 및 26일에 관찰되었다.

0일(처음 복용) 및 26일(마지막 복용)에 펩타이드 16/지질 복합체에 대한 평균 독성 동태학 매개변수들은 아래 표 11에 제공된다.

^┽쥐에서 펩타이드 16/지질 복합체 독성 동태학 매개변수

일 복용량 성별 C_max T_max AUC₀ _-12 T₁ _/2 CL Vd
(mg/kg) (㎍/mL) (h) (㎍·h/mL) (h) (mL/Kg/h) (mL/Kg)

0일 15 수컷 341 0.0833 851 1.36 18.0 35.4
0일 30 수컷 663 0.0833 2291 1.28 13.1 24.1
0일 60 수컷 1390 0.0833 7497 2.16 7.90 24.7

0일 15 암컷 287 0.0833 671 0.835 22.5 27.1
0일 30 암컷 688 0.0833 2106 1.35 14.6 28.3
0일 60 암컷 1427 0.0833 6689 1.72 8.93 22.1

26일 15 수컷 422 0.0833 1176 1.71 13.0 32.1
26일 30 수컷 858 0.0833 3188 1.62 9.37 21.9
26일 60 수컷 1870 1.00 9889 2.56 5.86 21.6

26일 15 암컷 386 0.0833 841 1.01 18.1 26.3
26일 30 암컷 815 0.0833 2490 1.41 12.3 25.1
26일 60 암컷 1537 0.0833 7804 1.79 7.64 19.7

^┽시간에 따라 혈장에서 펩타이드 16 수준으로부터 계산된 매개변수들.

T_max는 복용 직후이었다. 펩타이드 16의 순환 수준의 예상 반감기는 두 성별의 쥐들에서 0.835 내지 2.56 시간이었고, 복용량 의존 방식으로 증가하는 것으로 보였다. 분포의 제거 및 부피는 복용량이 증가함에 따라 감소하였다. 분포의 부피를 기초로, 펩타이드 16/지질 복합체는 혈장 부분에 일반적으로 분포되었다고 결론내릴 수 있겠다(쥐에서 참조 혈장 부피 = 30mL/Kg). Davies, B and Morris, T. Physiological parameters in laboratory animals and human, Pharmaceutical Research, 10, 1093-1095, 1993 참조.

복용의 증가(15mg/kg 복용량을 기준)에 따른 AUC_(0-12h) 및 C_max의 증가는 표 12에 제공된다. C_max 값들은 두 성별에서 복용량 비례적이었고 AUC_(0-12h)값들은 복용량 비례적 이상으로 증가하여서, 복용량이 증가함에 따라 순환에서 펩타이드 16/지질 복합체의 잔류 시간은 더 길다는 것을 나타낸다.

펩타이드 16/지질 복합체의 복용량의 증가에 따른 AUC 및 C_max의 증가

복용량

15mg/kg 30mg/kg 60mg/kg

암컷 수컷 암컷 수컷 암컷 수컷

0일
복용량 증가 1 1 2 2 4 4
AUC_(0-12h)의 증가 - - 2.69 3.14 8.81 9.96
C_max의 증가 - - 1.94 2.4 4.07 4.98

26일
복용량 증가 1 1 2 2 4 4
AUC_(0-12h)의 증가 - - 2.71 2.96 8.4 9.28
C_max의 증가 - - 2.03 2.11 4.43 3.98

1회 복용량 및 수회 복용량 투여 이후 약물 동태학 프로파일, AUCs 또는 C_max에 중요한 성별-관련 차이점들이 없었다.

C_max와 AUCs을 기준으로, 펩타이드 16 또는 펩타이드 16/지질 복합체의 축적은 4주 투여 기간 동안 관찰되지 않았다.

c. 원숭이들에서 약물 동태학의 연구들

펩타이드 16/지질 복합체의 독성 동태학은 0일(처음 복용) 및 26일에 원숭이들에 복용량 투여 이후 평가하였다. 부형제 대조 표준 그룹에 있는 동물들은 12mM 인산염 버퍼 속 130mM 염화나트륨, pH 8.2, 10mL/kg으로 정맥으로 받았다. 펩타이드 16/지질 복합체 치료 그룹들에 있는 동물들은 정맥 주입에 의해 매 2일에 제공된 15, 30 또는 60mg/kg을 받았다. 혈액을 항응혈제로서 Na₃EDTA를 포함하는 튜브에 기준선에서, 주입의 종료시에 및 0일 및 26일에 복용 후 1, 2, 6, 12, 24 및 48시간에서 그룹당 3마리의 그룹으로부터 수집하였다. 각 시점에서, 대략 1mL의 혈액을 대퇴부 혈관으로부터 채취하면서, 동물은 어떠한 마취제 없이 활동이 제약되었다. 혈장은 원심분리에 의해 분리하고 분석할 때까지 -20℃에서 동결하여 저장하였다. 펩타이드 수준은 LC-MS/MS에 의해 분석하였다. 약물 동태학 매개변수들은 Kinetica 4.4.1을 사용하여 모델비의존형방법(non compartmental analysis)에 의해 개개의 혈장 농도로부터 측정하였다.

도 18 및 19에 도시된 대로, 펩타이드 16은 두 성별에서 15mg/kg 복용량으로 펩타이드 16/지질 복합체를 제공받은 동물들에서 주입의 종료 이후 12시간까지 혈장에서 탐지할 수 있었다. 펩타이드의 탐지가능한 수준은 30 및 60mg/kg으로 치료한 동물들에서 24시간까지 관찰하였다. 인지질 수준은 복용 이후 증가하였고, 펩타이드의 타임프레임과 유사한 타임프레임 동안 기준선 수준으로 되돌아왔다. 유리 콜레스테롤(에스터화되지 않음)은 복용량 의존 방식으로 주입 이후 증가하였고 콜레스테롤 유동화를 나타낸다. 이후에 콜레스테롤의 감소를 이어졌고 펩타이드 16/지질 복합체 입자들은 순환으로부터 콜레스테롤을 효과적으로 제거한다는 것을 나타내었다. 유사한 패턴들이 0일 및 26일에 관찰되었다.

0일(처음 복용) 및 26일(마지막 복용)에 펩타이드 16/지질 복합체에 대한 평균 독성 동태학 매개변수들은 아래 표 13에 제공된다.

^┽원숭이에서 펩타이드 16/지질 복합체 독성 동태학 매개변수

일 복용량 성별 C_max T_max AUC₀ _-24h T₁ _/2 CL Vd
(mg/kg) (㎍/mL) (h) (㎍·h/mL) (h) (mL/Kg/h) (mL/Kg)

0일 15 수컷 341 0.0167 1346 2.42 11.50 39.6
0일 30 수컷 735 0 4337 2.96 6.90 29.3
0일 60 수컷 1540 0 13787 4.58 4.27 28.1

0일 15 암컷 365 0 1383 2.37 11.4 38.3
0일 30 암컷 736 0 4337 3.04 6.81 29.4
0일 60 암컷 1508 0 13168 3.24 4.54 21.1

26일 15 수컷 443 0 1539 2.66 10.00 38.8
26일 30 수컷 824 0 3890 2.19 8.58 26.3
26일 60 수컷 1674 0 12182 2.82 5.07 20.8

26일 15 암컷 408 0 1437 2.11 10.90 32.8
26일 30 암컷 690 0 3416 2.50 8.85 32.0
26일 60 암컷 1608 0 13596 3.63 4.51 22.9

T = 0은 주입의 종료시점이다.

T_max는 복용 직후이었다. 펩타이드 16의 순환 수준의 예상 반감기는 두 성별의 원숭이들에서 2.11 내지 4.58 시간이었고, 복용량 의존 방식으로 증가하는 것으로 보였다. 분포의 제거 및 부피는 복용량이 증가함에 따라 감소하였다. 분포의 부피를 기초로, 펩타이드 16/지질 복합체는 혈장 부분에 주로 분포되었다고 결론내릴 수 있겠다(영장류에서 혈장 부피 = 45mL/Kg). Davies, B and Morris, T. Physiological parameters in laboratory animals and human, Pharmaceutical Research, 10, 1093-1095, 1993 참조.

복용의 증가(15mg/kg 복용량을 기준)에 따른 AUC_(0-24h) 및 C_max의 증가는 표 14에 제공된다. C_max 값들은 두 성별에서 복용량 비례적이었고 AUC_(0-12h)값들은 복용량 비례적 이상으로 증가하여서, 복용량이 증가함에 따라 순환에서 펩타이드 16/지질 복합체의 잔류 시간은 더 길다는 것을 나타낸다.

복용량

15mg/kg 30mg/kg 60mg/kg

암컷 수컷 암컷 수컷 암컷 수컷

0일
복용량 증가 1 1 2 2 4 4
AUC_(0-24h)의 증가 - - 3.22 3.31 10.2 9.52
C_max의 증가 - - 2.15 2.01 4.51 4.13

26일
복용량 증가 1 1 2 2 4 4
AUC_(0-12h)의 증가 - - 2.53 2.38 7.91 9.46
C_max의 증가 - - 1.86 1.68 3.78 3.94

실시예 24: 생쥐에서 펩타이드 16 및 펩타이드 16/지질 복합체들에 대한 약물 동태학 연구들

세 펩타이드 제제 중 하나의 주사 이후 혈장에서 전체 콜레스테롤, 에스터화되지 않은 콜레스테롤 및 콜레스테롤 에스터(전체 및 에스터화되지 않은 콜레스테롤 값들 사이의 차이로서)를 측정하였다.

펩타이드 제제: (A) 펩타이드 16; (B) 펩타이드 16/DPPC 복합체(1:2 중량비); (C) 펩타이드 16/DPPC 복합체(1:2.5 중량비). 제제 A, B 및 C는 15mg//ml의 농도로 용액으로 각각 제공되었다.

20 C57B1/6J 생쥐를 60% kcal% 지방을 가진 설치류 사료(연구 사료 - D12492)로 적어도 2주 동안 단식시켰다. 음료수는 5% 글루코오스로 제공하였다. 3시간 단식 후, 펩타이드 제제를 30mg/kg으로 복용하였고(IV 주사 - 50㎕) 혈액을 15, 30, 60, 120 및 240분에서 견본을 만들었다. 하나의 복용 전 샘플을 주사 이전에 실행하였다.

혈장 샘플들을 전체 콜레스테롤 및 에스터화되지 않은 콜레스테롤에 대해 분석하였다(Biolabo의키트 - CEROOX- SOP002, CER00X-SOP003). 콜레스테롤 에스터는 전체 콜레스테롤과 에스터화되지 않은 콜레스테롤 사이의 차이로서 계산하였다.

결과들은 도 21과 22에 도시된다.

여러 참조문헌이 본 발명에 개시되며, 이의 각각은 전문이 참조로 본 발명에 포함된다.

다음은 본 발명의 일부 예시적 실시예들이다:

1. 다음 식 I을 가지는 22- 내지 29-잔기 펩타이드

또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서:

X¹은 없거나 염기성 비 키랄성 아미노산 잔기, 염기성 D-아미노산 잔기 또는 염기성 L-아미노산 잔기이며;

X²는 염기성 비 키랄성 아미노산 잔기, 염기성 D-아미노산 잔기 또는 염기성 L-아미노산 잔기이며;

X³는 지방족 비 키랄성 아미노산 잔기, 지방족 D-아미노산 잔기 또는 지방족 L-아미노산 잔기이며;

X⁴는 염기성 비 키랄성 아미노산 잔기, 염기성 D-아미노산 잔기 또는 염기성 L-아미노산 잔기이며;

X⁵는 Gln, Asn, D-Gln, D-Asn, 또는 염기성 비 키랄성 아미노산 잔기, 염기성 D-아미노산 잔기 또는 염기성 L-아미노산 잔기이며;

X⁶은 염기성 비 키랄성 아미노산 잔기, 염기성 D-아미노산 잔기 또는 염기성 L-아미노산 잔기이며;

X⁷은 소수성 비 키랄성 아미노산 잔기, 소수성 D-아미노산 잔기 또는 소수성 L-아미노산 잔기이며;

X⁸은 소수성 비 키랄성 아미노산 잔기, 소수성 D-아미노산 잔기 또는 소수성 L-아미노산 잔기이며;

X⁹는 친수성 비 키랄성 아미노산 잔기, 친수성 D-아미노산 잔기 또는 친수성 L-아미노산 잔기이며;

X¹⁰은 Leu, Trp, Gly, Nal, D-Leu, D-Trp 또는 D-Nal이며;

X¹¹은 Gly 또는 지방족 비 키랄성 아미노산 잔기, 지방족 D-아미노산 잔기 또는 지방족 L-아미노산 잔기이며;

X¹²는 친수성 비 키랄성 아미노산 잔기, 친수성 D-아미노산 잔기 또는 친수성 L-아미노산 잔기이며;

X¹³은 친수성 비 키랄성 아미노산 잔기, 친수성 D-아미노산 잔기 또는 친수성 L-아미노산 잔기이며;

X¹⁴는 Leu, Trp, Gly, D-Leu, 또는 D-Trp이며;

X¹⁵는 Leu, Gly 또는 D-Leu이며;

X¹⁶은 산성 비 키랄성 아미노산 잔기, 산성 D-아미노산 잔기 또는 산성 L-아미노산 잔기이며;

X¹⁷은 친수성 비 키랄성 아미노산 잔기, 친수성 D-아미노산 잔기 또는 친수성 L-아미노산 잔기이며;

X¹⁸은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁹는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²⁰은 산성 비 키랄성 아미노산 잔기, 산성 D-아미노산 잔기 또는 산성 L-아미노산 잔기이며;

X²¹은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²²는 지방족 비 키랄성 아미노산 잔기, 지방족 D-아미노산 잔기 또는 지방족 L-아미노산 잔기이며;

X²³은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;

Y¹은 없거나 1 내지 7개 아미노산 잔기들의 서열이며, 서열의 각 잔기는 독립적으로 비 키랄성 D- 또는 L-아미노산 잔기이며;

Y²는 없거나 1 내지 7개 아미노산 잔기들의 서열이며, 서열의 각 잔기는 독립적으로 비 키랄성 D- 또는 L-아미노산 잔기이며;

R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;

R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;

여기서:

a) 말단 아미노산 잔기 및 이에 바로 인접한 잔기를 제외하고, 모든 아미노산 잔기는 비 키랄성 또는 L-아미노산 잔기이며; 또는 b) 말단 아미노산 잔기 및 이에 바로 인접한 잔기를 제외하고, 모든 아미노산 잔기는 비 키랄성 또는 D-아미노산 잔기이다.

2. 실시예 1의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서:

X³는 Leu 또는 D-Leu이며;

X⁷는 Leu, Gly, Nal, D-Leu 또는 D-Nal이며;

X⁸는 Ala, Nal, Trp, Gly, Leu, Phe, D-Ala, D-Nal, D-Trp, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹¹은 Leu, Gly, Aib 또는 D-Leu이며; 그리고

X²²는 Ala, Leu, Val, D-Ala, D-Leu, 또는 D-Val이다.

3. 실시예 1의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서:

X¹은 없고, Lys 또는 D-Lys이며;

X²는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X⁴는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X⁵는 Gln, Asn, Lys, Orn, D-Gln, D-Asn, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X⁶는 Gln, Asn, Lys, Orn, D-Gln, D-Asn, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X⁹는 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이며;

X¹²는 Glu, Asp, D-Asp 또는 D-Glu이며;

X¹³은 Asn, Gln, D-Asn 또는 D-Gln이며;

X¹⁶은 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이며;

X¹⁷은 Lys, Arg, Orn, D-Lys, D-Arg 또는 D-Orn이며; 그리고

X²⁰은 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이다.

4. 실시예 3의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹⁸은 Phe 또는 D-Phe이다.

5. 실시예 1의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는 22- 또는 23-잔기 펩타이드이다.

6. 실시예 5의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 R¹은 H이고 R²는 OH이다.

7. 실시예 5의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서:

X¹는 없고, Lys 또는 D-Lys이며;

X²는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X³는 Leu 또는 D-Leu이며;

X⁴는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X⁵는 Gln, Asn, Lys, Orn, D-Gln, D-Asn, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X⁶는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X⁷은 Gly, Leu, Nal, D-Leu 또는 D-Nal이며;

X⁸는 Ala, Nal, Trp, Leu, Phe, Gly, D-Ala, D-Nal, D-Trp, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X⁹는 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이며;

X¹¹은 Gly, Leu, Aib 또는 D-Leu이며;

X¹²는 Glu, Asp, D-Glu 또는 D-Asp이며;

X¹³은 Asn, Gln, D-Asn 또는 D-Gln이며;

X¹⁶은 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이며;

X¹⁷은 Lys, Arg, Orn, D-Lys, D-Arg 또는 D-Orn이며;

X²⁰은 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이며; 그리고

X²²는 Ala, Val, Leu, D-Ala, D-Val 또는 D-Leu이다.

8. 실시예 7의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서: X⁵ 는 Gln, Asn, D-Gln 또는 D-Asn이며 X⁶는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며; 또는 X⁵는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며 X⁶는 Gln, Asn, D-Gln 또는 D-Asn이다.

9. 실시예 7의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹은 없고 펩타이드는 22-잔기 펩타이드이다.

10. 실시예 9의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X⁷, X⁸, X¹⁰, X¹¹, X¹⁴ 및 X¹⁵의 각각은 Gly 이외의 것이다.

11. 실시예 9의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X⁷, X⁸, X¹⁰, X¹¹, X¹⁴ 및 X¹⁵ 중 단지 하나는 Gly이다.

12. 실시예 9의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서:

X² 및 X⁴는 모두 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X⁵은 Gln, Lys, D-Gln 또는 D-Lys이며;

X⁹는 산성 비 키랄성 아미노산 잔기, 산성 D-아미노산 잔기 또는 산성 L-아미노산 잔기이며;

X¹²는 Glu, Asn, Gln, Arg, D-Glu, D-Asn, D-Gln 또는 D-Arg이며;

X¹³은 Glu, Asn, Gln, Arg, D-Glu, D-Asn, D-Gln 또는 D-Arg이며;

X¹⁷은 Arg, Lys, Orn, D-Arg, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X²¹은 Leu 또는 D-Leu이며; 그리고

X²²는 Ala, Val, Leu, D-Ala, D-Val 또는 D-Leu이다.

13. 실시예 1의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Trp-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 2);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 3);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Nal-Ala-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 4);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Trp-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 5);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Trp-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 6);

Orn-Leu-Orn-Gln-Orn-Leu-Ala-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu- Asp-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 7);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Phe- Asp-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 8);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Glu-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 9);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Gly-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 10);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Gly-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 11);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Gly-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 12);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Gly-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu- Asp-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 13);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Gly-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 14);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Nal-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 15);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 16);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Aib-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 18);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 19);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Nal-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 20);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Gln-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 21);

Orn-Leu-Orn-Gln-Orn-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu- Asp-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 22);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Trp-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 23);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Leu-Leu-Asp-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 24);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Gln-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe- Leu-Glu-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 25);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Gln-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe- Leu-Glu-Leu-Leu-Inp (SEQ. ID. NO. 26);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Aib-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Phe- Asp-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 28);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Leu-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu- Asp-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 29);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Nal-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 30);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Trp-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu- Asp-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 31);

Orn-Leu-Orn-Gln-Orn-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Orn-Phe-Leu- Asp-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 32);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Phe-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 33);

Lys-Leu-Lys-Gln-Arg-Leu-Ala-Asp-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe-Leu-Glu-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 36);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Gln-Leu-Leu-Asp-Lys-Phe- Leu-Glu-Leu-Ala-Inp (SEQ. ID. NO. 40);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Trp-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 94);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 95);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Nal-Ala-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 96);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Trp-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 97);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Trp-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 98);

Orn-Leu-Orn-Gln-Orn-Leu-Ala-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 99);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Phe-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 100);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Glu-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 101);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Gly-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 102);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Gly-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 103);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Gly-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 104);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Gly-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 105);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Gly-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 106);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Nal-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 107);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 108);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Aib-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 110);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 111);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Nal-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 112);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Gln-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 113);

Orn-Leu-Orn-Gln-Orn-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 114);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Trp-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 115);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Leu-Leu- Asp-Leu- Val-Nip (SEQ. ID. NO. 116);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Gln-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe- Leu-Glu-Leu- Val-Nip (SEQ. ID. NO. 117);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Gln-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe- Leu-Glu-Leu-Leu-Nip (SEQ. ID. NO. 118);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Aib-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Phe-Asp-Leu- Val-Nip (SEQ. ID. NO. 120);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Leu-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu- Val-Nip (SEQ. ID. NO. 121);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Nal-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu- Val-Nip (SEQ. ID. NO. 122);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Trp-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu- Val-Nip (SEQ. ID. NO. 123);

Orn-Leu-Orn-Gln-Orn-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Orn-Phe-Leu-Asp-Leu- Val-Nip (SEQ. ID. NO. 124);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Phe-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu- Val-Nip (SEQ. ID. NO. 125);

Lys-Leu-Lys-Gln-Arg-Leu-Ala-Asp-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe-Leu-Glu-Leu- Val-Nip (SEQ. ID. NO. 128); 또는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Gln-Leu-Leu-Asp-Lys-Phe- Leu-Glu-Leu-Ala-Nip (SEQ. ID. NO. 132) 또는

상기한 것들 중 하나의 약학적으로 허용가능한 염이다.

14. 실시예 5의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는 23-잔기 펩타이드이다.

15. 실시예 14의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는

Lys-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg- Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 17); 또는

Lys-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 109), 또는

상기한 것들 중 하나의 약학적으로 허용가능한 염이다.

16. 실시예 5의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹은 없고 펩타이드는 22-잔기 펩타이드이다.

17. 실시예 16의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는

Lys-Leu-Lys-Lys-Gln-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Leu-Leu-Asp-Asn- Phe-Leu-Glu-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 34);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Leu-Leu-Asp-Asn- Phe-Leu-Glu-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 35);

Lys-Leu-Lys-Lys-Gln-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Leu-Leu-Asp-Asn- Phe-Leu-Glu-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 126); 또는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Leu-Leu-Asp-Asn- Phe-Leu-Glu-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 127) 또는

상기한 것들 중 하나의 약학적으로 허용가능한 염이다.

18. 실시예 16의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서

X⁹은 Gln, Lys, D-Gln, D-Lys, 산성 비 키랄성 아미노산 잔기, 산성 D-아미노산 잔기 또는 산성 L-아미노산 잔기이며;

X¹²는 Asn, D-Asn, 산성 비 키랄성 아미노산 잔기, 산성 D-아미노산 잔기 또는 산성 L-아미노산 잔기이며;

X¹⁷은 Asn, Glu, D-Asn, D-Glu, 염기성 비 키랄성 아미노산 잔기, 염기성 D-아미노산 잔기 또는 염기성 L-아미노산 잔기이다.

19. 실시예 16의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서

20. 실시예 16의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서

X²는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X³는 Leu 또는 D-Leu이며;

X⁴는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X⁵는 Lys, Orn, Gln, Asn, D-Lys, D-Orn, D-Gln 또는 D-Asn이며;

X⁶는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X⁷은 Leu, Gly, Nal, D-Leu 또는 D-Nal이며;

X⁸은 Ala, Trp, Gly, Leu, Phe, Nal, D-Ala, D-Trp, D-Leu, D-Phe 또는 D-Nal이며;

X⁹는 Asp, Glu, Gln, Lys, D-Asp, D-Glu, D-Gln 또는 D-Lys이며;

X¹¹은 Leu, Gly, Aib 또는 D-Leu이며;

X¹²는 Asp, Glu, Asn, D-Asp, D-Glu 또는 D-Asn이며;

X¹³은 Asn, Gln, Glu, Arg, D-Asn, D-Gln, D-Glu 또는 D-Arg이며;

X¹⁶은 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이며;

X¹⁷은 Lys, Arg, Orn, Asn, Glu, D-Lys, D-Arg, D-Orn, D-Asn 또는 D-Glu이며;

X²⁰은 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이며; 그리고

X²²는 Ala, Val, Leu, D-Ala, D-Val 또는 D-Leu이다.

21. 실시예 16의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서

X⁹는 Glu 또는 D-Glu이며;

X¹²는 Glu 또는 D-Glu이며;

X¹³은 Asn, Glu, D-Asn 또는 D-Glu이며;

X¹⁴는 Leu 또는 D-Leu이며;

X¹⁵는 Leu 또는 D-Leu이며;

X¹⁶은 Glu 또는 D-Glu이며;

X¹⁷은 Arg, Lys, D-Arg 또는 D-Lys이며;

X¹⁸은 Phe 또는 D-Phe이며;

X¹⁹는 Leu 또는 D-Leu이며;

X²¹은 Leu 또는 D-Leu이며; 그리고

X²²는 Val 또는 D-Val이다.

22. 실시예 16의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹¹은 Gly이며 X⁷, X⁸, X¹⁰, X¹⁴ 및 X¹⁵의 각각은 Gly 이외의 것이다.

23. 실시예 16의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서:

X²는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X³는 Leu 또는 D-Leu이며;

X⁴는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X⁵는 Gln 또는 D-Gln이며;

X⁶는 Lys, Orn, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X⁷은 Leu, Nal, D-Leu 또는 D-Nal이며;

X⁸은 Ala, Trp, D-Ala 또는 D-Trp이며;

X⁹는 Glu 또는 D-Glu이며;

X¹⁰은 Leu 또는 D-Leu이며;

X¹¹은 Gly이며;

X¹²은 Glu 또는 D-Glu이며;

X¹³은 Asn 또는 D-Asn이며;

X¹⁴는 Leu, Trp, D-Leu 또는 D-Trp이며;

X¹⁵는 Leu 또는 D-Leu이며;

X¹⁶은 Glu 또는 D-Glu이며;

X¹⁷은 Arg 또는 D-Arg이며;

X¹⁸은 Phe 또는 D-Phe이며;

X¹⁹는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²⁰은 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이며;

X²¹은 Leu 또는 D-Leu이며; 그리고

X²²는 Val 또는 D-Val이다.

24. 실시예 20의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는

Orn-Leu-Orn-Gln-Orn-Leu-Ala-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg- Phe-Leu- Asp-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 7);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Phe-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 100); 또는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Gly-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Glu-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 101), 또는

상기한 것들 중 하나의 약학적으로 허용가능한 염이다.

25. 실시예 16의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹⁵는 Gly이며 X⁷, X⁸, X¹⁰, X¹¹ 및 X¹⁴의 각각은 Gly 이외의 것이다.

26. 실시예 25의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Gly-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 10); 또는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Gly-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 102), 또는

상기한 것들 중 하나의 약학적으로 허용가능한 염이다.

27. 실시예 16의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹⁴는 Gly이며 X⁷, X⁸, X¹⁰, X¹¹ 및 X¹⁵의 각각은 Gly 이외의 것이다.

28. 실시예 27의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Gly-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 11); 또는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Gly-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 103), 또는

상기한 것들 중 하나의 약학적으로 허용가능한 염이다.

29. 실시예 16의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서

X¹⁰은 Gly이며 X⁷, X⁸, X¹¹, X¹⁴ 및 X¹⁵의 각각은 Gly 이외의 것이다.

30. 실시예 29의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Gly-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 12); 또는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Gly-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 104), 또는

상기한 것들 중 하나의 약학적으로 허용가능한 염이다.

31. 실시예 16의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X⁸은 Gly이며 X⁷, X¹⁰, X¹¹, X¹⁴ 및 X¹⁵의 각각은 Gly 이외의 것이다.

32. 실시예 31의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Gly-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg- Phe-Leu- Asp-Leu- Val-Inp (SEQ. ID. NO. 13); 또는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Gly-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 105), 또는

상기한 것들 중 하나의 약학적으로 허용가능한 염이다.

33. 실시예 16의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X⁷은 Gly이며 X⁸, X¹⁰, X¹¹, X¹⁴ 및 X¹⁵의 각각은 Gly이외의 것이다.

34. 실시예 33의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Gly-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 14); 또는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Gly-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 106), 또는

상기한 것들 중 하나의 약학적으로 허용가능한 염이다.

35. 실시예 1의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 16); 또는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Ala-Glu-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe- Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 108), 또는

상기한 것들 중 하나의 약학적으로 허용가능한 염이다.

36. 다음 식 II를 가지는 15- 내지 22-잔기 펩타이드

R¹-Y¹-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸-X⁹-X¹⁰-X¹¹X¹²-X¹³-X¹⁴-X¹⁵-X¹⁶-X¹⁷-X¹⁸-Y²-R², 식 II

또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서:

X¹은 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X²는 Leu 또는 D-Leu이며;

X³는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁴는 Gln, Asn, D-Gln, 또는 D-Asn이며;

X⁶은 Leu, Trp, Phe, D-Leu, D-Trp 또는 D-Phe이며;

X⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X⁹는 Leu, Trp, D-Leu 또는 D-Trp이며;

X¹⁰은 Leu, Trp, D-Leu 또는 D-Trp이며;

X¹¹은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X¹³은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁴는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁵는 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹⁶은 Leu 또는 D-Leu이며;

X¹⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X¹⁸은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;

Y¹은 없거나 1 내지 4개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

Y²는 없으며;

R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;

R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;

여기서 잔기 X¹ 내지 X¹⁷의 0 내지 3개는 없으며;

여기서:

a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;

b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;

37. 실시예 36의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹⁷은 Ala, Leu, Val, D-Ala, D-Leu 또는 D-Val이다.

38. 실시예 36의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서

X¹은 His, Lys, Arg, D-His, D-Lys 또는 D-Arg이며;

X³은 Lys, Arg, Orn, D-Lys, D-Arg 또는 D-Orn;

X⁵는 Lys, Arg, Orn, D-Lys, D-Arg 또는 D-Orn이며;

X⁷은 Glu 또는 D-Glu이며;

X⁸은 Asn, Glu, D-Asn 또는 D-Glu이며;

X¹¹은 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이며;

X¹²는 Arg, Lys, Orn, D-Arg, D-Lys 또는 D-Orn이며; 그리고

X¹⁵은 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이다.

39. 실시예 38의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹³은 Phe 또는 D-Phe이다.

40. 실시예 36의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는 18-잔기 펩타이드이다.

41. 실시예 40의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 R¹은 H이고 R²는 OH이다.

42. 실시예 41의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서:

X¹은 Arg, Lys, Orn, D-Arg, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X³은 Arg, Lys, Orn, D-Arg, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X⁵는 Arg, Lys, Orn, D-Arg, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X⁷은 Glu 또는 D-Glu이며;

X⁸은 Glu, Asn, D-GIu 또는 D-Asn이며;

X¹¹은 Glu, Asp, D-Glu 또는 D-Asp이며;

X¹²는 Arg, Lys, Orn, D-Arg, D-Lys 또는 D-Orn이며;

X¹⁵는 Asp, Glu, D-Asp 또는 D-Glu이며; 그리고

X¹⁷은 Ala, Val, Leu, D-Ala, D-Val 또는 D-Leu이다.

43. 실시예 36의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는

Lys-Leu-Lys-Gln-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 53);

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val- Inp (SEQ. ID. NO. 54);

Lys-Leu-Lys-Gln-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 145); 또는

Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val- Nip (SEQ. ID. NO. 146), 또는

상기한 것들 중 하나의 약학적으로 허용가능한 염이다.

44. 실시예 36의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Leu-Leu-Asp-Leu-Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 65);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 66);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 67);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Glu-Leu- Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 68);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe-Leu-Glu-Leu-Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 69);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Asn-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 70);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Leu-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 71);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Trp-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 72);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe-Leu-Asp-Leu-Leu-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 73);

H₃C(O)C-Arg-Leu-Lys-Gln-Arg-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Asp-Lys-Phe-Leu-Glu-Leu-Ala-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 74);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Phe-Asp-Leu-Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 75);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Trp-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 76);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Leu-Leu-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 77);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Leu-Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 78);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Arg-Gln-Arg-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Asp-Lys-Phe-Leu-Glu-Leu-Ala-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 79);

H₃C(O)C-Orn-Leu-Orn-Gln-Orn-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 80);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Orn-Gln-Orn-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Orn-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 81);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Arg-Gln-Arg-Phe-Glu-Glu-Leu-Leu-Asp-Lys-Phe-Leu-Glu-Leu- Ala-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 82);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Trp-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 83);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 84);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe-Leu-Glu-Leu-Leu-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 87);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 88);

H₃C(O)C-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Inp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 89);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Alg-Leu-Leu-Asp-Leu-Val-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 157);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 158);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 159);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Glu-Leu-Val-NiP-NH₂ (SEQ. ID. NO. 160);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe-Leu-Glu-Leu-Val-NiP-NH₂ (SEQ. ID. NO. 161);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Asn-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 162);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Leu-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 163);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Trp-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 164);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe-Leu-Asp-Leu-Leu-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 165);

H₃C(O)C-Arg-Leu-Lys-Gln-Arg-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Asp-Lys-Phe-Leu-Glu-Leu- Ala-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 166);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Phe-Asp-Leu-Val-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 167);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Leu-Leu-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 168);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Leu-Val-Mp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 169);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Arg-Gln-Arg-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Asp-Lys-Phe-Leu-Glu-Leu-Ala-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 170);

H₃C(O)C-Orn-Leu-Orn-Gln-Orn-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 171);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Orn-Gln-Orn-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Orn-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 172);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Arg-Gln-Arg-Phe-Glu-Glu-Leu-Leu-Asp-Lys-Phe-Leu-Glu-Leu-Ala-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 173);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Trp-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 174);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Leu-Leu-Glu-Asn-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 175);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Gly-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 176);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys-Phe-Leu-Glu-Leu-Leu-Nip-NH₂ (SEQ. ID. NO. 179);

H₃C(O)C-Lys-Leu-Lys-Gln-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Mp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 180); 또는

H₃C(O)C-Lys-Gln-Lys-Leu-Glu-Glu-Leu-Leu-Glu-Arg-Phe-Leu-Asp-Leu-Val-Mp-NH₂ (SEQ. ID. NO. 181), 또는

상기한 것들 중 하나의 약학적으로 허용가능한 염이다.

45. 다음 식 III를 가진 22- 내지 29-잔기 펩타이드

또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서:

X²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X³는 Leu 또는 D-Leu이며;

X⁴는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁵는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;

X⁶은 Gln, Asn, D-Gln, 또는 D-Asn이며;

X⁷은 Leu 또는 D-Leu이며;

X⁸은 Ala 또는 D-Ala이며;

X⁹는 Asp 또는 D-Asp이며;

X¹⁰은 Leu, Phe, Gly, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹¹은 Gly, Leu 또는 D-Leu이며;

X¹²는 Arg 또는 D-Arg이며;

X¹³은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;

X¹⁴는 Leu, Trp, Gly, D-Leu, 또는 D-Trp이며;

X¹⁵는 Leu 또는 D-Leu이며;

X¹⁶은 Gln 또는 D-Gln이며;

X¹⁷은 Glu, Leu, D-Glu 또는 D-Leu이며;

X¹⁸은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X¹⁹는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X²⁰은 Glu 또는 D-Glu이며;

X²¹은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;

X²²는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;

X²³은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;

Y¹은 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

Y²는 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;

R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;

R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;

여기서:

a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;

b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;

46. 실시예 45의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는 22- 또는 23-잔기 펩타이드이다.

47. 실시예 46의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는 22-잔기 펩타이드이다.

48. 실시예 47의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X²²는 Val, Leu, D-Val 또는 D-Lue이다.

49. 실시예 47의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서:

X²는 Lys 또는 D-Lys이며;

X⁴는 Lys 또는 D-Lys이며;

X⁵는 Lys 또는 D-Lys이며;

X¹³은 Glu 또는 D-Glu이며;

X¹⁸는 Phe 또는 D-Phe이며;

X¹⁹는 Leu 또는 D-Leu이며; 그리고

X²²는 Ala, Leu, Val, D-Ala, D-Leu 또는 D-Val이다.

50. 실시예 47의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서:

X²는 Lys 또는 D-Lys이며;

X⁴는 Lys 또는 D-Lys이며;

X⁵는 Lys 또는 D-Lys이며;

X¹³은 Glu 또는 D-Glu이며;

X¹⁸은 Phe 또는 D-Phe이며;

X¹⁹는 Leu 또는 D-Leu이며; 그리고

X²²는 Ala, Leu, Val, D-Ala, D-Leu 또는 D-Val이다.

51. 실시예 47의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹³과 X¹⁷은 Glu 또는 D-Glu이다.

52. 실시예 46의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서:

X¹는 없고;

X²는 Lys 또는 D-Lys이며;

X⁴는 Lys 또는 D-Lys이며;

X⁵는 Lys 또는 D-Lys이며;

X¹⁸는 Phe 또는 D-Phe이며;

X¹⁹는 Leu 또는 D-Leu이며; 그리고

X²²는 Val 또는 D-Val이다.

53. 실시예 47의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹³ 또는 X¹⁷은 Glu 또는 D-Glu이다.

54. 실시예 47의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X²² 는 Val 또는 D-Val이며 X⁶는 Gln 또는 D-Gln이다.

55. 실시예 47의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X²² 는 Val 또는 D-Val이며 또는 X⁶는 Gln 또는 D-Gln이다.

56. 실시예 47의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹⁰, X¹¹ 및 X¹⁴의 하나만이 Gly이다.

57. 실시예 47의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드는

Lys-Leu-Lys-Lys-Gln-Leu- Ala- Asp-Leu-Leu-Arg-Glu-Leu-Leu-Gln-Glu-Phe- Leu-Glu-Leu-Val-Inp (SEQ. ID. NO. 197); 또는

Lys-Leu-Lys-Lys-Gln-Leu-Ala-Asp-Leu-Leu-Arg-Glu-Leu-Leu-Gln-Glu-Phe- Leu-Glu-Leu-Val-Nip (SEQ. ID. NO. 211), 또는

상기한 것들 중 하나의 약학적으로 허용가능한 염이다.

58. 실시예 47의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹⁰ 은 Gly이고 X¹⁷은 Glu 또는 D-Glu이다.

59. 실시예 47의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹⁰, X¹¹ 및 X¹⁴의 각각은 Gly이외의 것이다.

60. 실시예 47의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹⁷은 Leu 또는 D-Leu이다.

61. 실시예 60의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹⁴ 는 Trp 또는 D-Trp이며 X¹⁰은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이다.

62. 실시예 60의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 X¹⁴ 는 Trp 또는 D-Trp이며 또는 X¹⁰은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이다.

63. 실시예 45의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 R¹ 은 H이고 R²는 OH이다.

64. 실시예 1 내지 63 중 어느 하나에 있어서, 펩타이드는 약학적으로 허용가능한 염의 형태이다.

65. 실시예 64에 있어서, 염은 금속염 또는 유기 아민 염이다.

66. 실시예 65에 있어서, 금속은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속이다.

67. 실시예 65에 있어서, 금속은 리튬, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘, 알루미늄 또는 아연이다.

68. 실시예 65에 있어서,

유기 아민은 트라이에틸아민, 에탄올아민, 다이에탄올아민, 트라이에탄올아민, 모르폴린, N-메틸피페리딘, N-에틸피페리딘 또는 다이벤질아민이다.

69. 실시예 64에 있어서, 염은 산 첨가염이다.

70. 실시예 69에 있어서, 산 첨가염은 염산염, 브롬산염, 요오드산염, 질산염, 황산염, 아황산염, 황산수소염, 인산염, 산 인산염(acid phosphate), 아이소니코틴산염, 락트산염, 살리실산염, 타르타르산염, 중타르타르산염, 아스코르브산염, 겐티신산염, 글루콘산염, 글루카론산염, 사카르산염, 포름산염, 벤조산염, 글루탐산염, 판토텐산염, 아세트산염, 푸마르산염, 숙신산염, 메테인설폰산염, 에테인설폰산염, 벤젠설폰산염, p-톨루일설폰산염, 시트르산염 또는 말레산염이다.

71. 실시예 1 내지 63 중 어느 하나에 있어서, R¹은 아미노 보호기이다.

72. 실시예 71의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 아미노 보호기는 단실(dansyl); 메톡시카본일; 에톡시카본일; 9-플루오렌일메톡시카본일; 2-클로로에톡시카본일; 2,2,2-트라이클로로에톡시카본일; 2-페닐에톡시카본일; t-부톡시카본일; 벤질옥시카본일; p-메톡시벤질옥시카본일; p-나이트로벤질옥시카본일; o-나이트로벤질옥시카본일; p-브로모벤질옥시카본일; p-클로로벤질옥시카본일; p-아이오도벤질옥시카본일; 2,4-다이클로로벤질옥시카본일; 다이페닐메톡시카본일; 3,5-다이메톡시벤질옥시카본일; 페녹시카본일; 2,4,6-트라이-t-부틸페녹시카본일; 2,4,6-트라이메틸벤질옥시카본일; 포르밀; 아세틸; 클로로아세틸; 트라이클로로아세틸; 트라이플루오로아세틸; 페닐아세틸; 피콜리노일; 벤조일; p-페닐벤조일; 프탈로일; 메틸; t-부틸; 알릴; [2-(트라이메틸실릴)에톡시]메틸; 2,4-다이메톡시벤질; 2,4-다이나이트로페닐; 벤질; 4-메톡시벤질; 다이페닐메틸; 트라이페닐메틸; 벤젠설펜일; o-나이트로벤젠설펜일; 2,4-다이나이트로벤젠설펜일; p-톨루엔설폰일; 벤젠설폰일; 2,3,6-트라이메틸-4-메톡시벤젠설폰일; 2,4,6-트라이메톡시벤젠설폰일; 2,6-다이메틸-4-메톡시벤젠설폰일; 펜타메틸벤젠설폰일; 4-메톡시벤젠설폰일; 2,4,6-트라이메틸벤젠설폰일; 또는 벤질설폰일이다.

73. 실시예 1 내지 63 중 어느 하나의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 R²는 카복실 보호기이다.

74. 실시예 73의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염,

여기서 카복실 보호기는 메톡시; 에톡시; 9-플루오렌일메톡시; 메톡시메톡시; 메틸티오메톡시; 테트라하이드로피라녹시; 테트라하이드로푸라녹시; 메톡시에톡시메톡시; 벤질옥시메톡시; 페나실옥시; p-브로모페나실옥시; α-메틸페나실옥시; p-메톡시페나실옥시; 데실옥시; 2-클로로에톡시; 2,2,2-트라이클로로에톡시; 2-메틸티오에톡시; 2-(p-톨루엔설폰일)메톡시; t-부톡시; 사이클로펜톡시; 사이클로헥스옥시; 알릴옥시; 메탈릴옥시; 시남옥시; α-메틸시남옥시; 페녹시; 2,6-다이메틸페녹시; 2,6-다이아이소프로필페녹시; 벤질옥시; 트라이페닐메톡시; 다이페닐메톡시; 2,4,6-트라이메틸벤질옥시; p-브로모벤질옥시; o-나이트로벤질옥시; N,N-다이메틸아미도; 피롤리딘일; 또는 피페리딘일이다.

75. 실시예 1 내지 63 중 어느 하나의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서 펩타이드의 -NH₂ 또는 -COOH기의 하나 이상은 보호기에 의해 보호된다.

76. 유효량의 실시예 1 내지 75 중 어느 하나의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 조성물.

77. 이상지질혈증의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 실시예 1 내지 75 중 어느 하나의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 이상지질혈증을 치료 또는 예방하는 방법.

78. 실시예 77에 있어서, 이상지질혈증은 고단백혈증, 높은 저 밀도 리포단백질 혈청 농도, 높은 매우 저 밀도 리포단백질 혈청 농도, 고지혈증, 낮은 고 밀도 리포단백질 혈청 농도, 고콜레스테롤혈증, 무베타지질단백혈증(Abetalipoproteinemia), ApoA-I 결핍증 및 탄지에르병(tangier disease)이다.

79. 실시예 77에 있어서, 이상지질혈증은 고단백혈증, 고콜레스테롤혈증, ApoA-I 결핍증 또는 고트라이글리세라이드혈증이다.

80. 실시예 77에 있어서, 치료는 혈청 고 밀도 리포단백질 농도를 증가시키는 단계를 포함한다.

81. 심혈관질환의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 실시예 1 내지 75 중 어느 하나의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 심혈관질환을 치료 또는 예방하는 방법.

82. 실시예 81에 있어서, 심혈관질환은 대사이상, 허혈성 심장질환, 죽상경화증, 재협착, 내독소혈증, 울혈성 심부전, 순환 쇼크, 심근병증, 심장이식, 심근경색, 심장 부정맥(심방세동), 상심실성 빈맥(supraventricular tachycardia), 심방조동, 심방성 발작성 빈맥(paroxysmal atrial tachycardia), 동맥류, 앙기나, 뇌혈관 사고(스트로크), 말초혈관질환, 뇌혈관질환, 신장질환, 죽종발생, 죽상경화증, 급성 췌장염 또는 관상동맥질환이다.

83. 실시예 81에 있어서, 심혈관 질환은 죽상경화증, 재협착 또는 대사이상이다.

84. 혈관내피이상의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 실시예 1 내지 75 중 어느 하나의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 혈관내피이상을 치료 또는 예방하는 방법.

85. 거대혈관질환의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 실시예 1 내지 75 중 어느 하나의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 거대혈관질환을 치료 또는 예방하는 방법.

86. 실시예 85에 있어서, 거대혈관질환은 일과성 허혈발작, 스트로크, 앙기나, 심근경색증, 심부전 또는 말초혈관질환이다.

87. 미세혈관질환의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 실시예 1 내지 75 중 어느 하나의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 미세혈관질환을 치료 또는 예방하는 방법.

88. 실시예 87에 있어서, 미세혈관질환은 당뇨병성 망막증, 미세알부민뇨증, 거대알부민뇨증, 말기 신질환, 발기부전, 자율신경병증, 밀초신경병증, 골수염 또는 만성하지허혈증이다.

89. 실시예 77 내지 88 중 어느 하나에 있어서, 포유류는 인간이다.

90. 실시예 77 내지 88 중 어느 하나에 있어서, 투여는 경구, 정맥, 근내, 수막, 피하, 설하, 비강, 피부, 경피, 안구 또는 흡입을 통해 이루어진다.

Claims

다음 식 I을 가지는 22- 내지 29-잔기 펩타이드
R¹-Y¹-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸-X⁹-X¹⁰-X¹¹-X¹²-X¹³-X¹⁴-X¹⁵-X¹⁶-X¹⁷-X¹⁸-X¹⁹-X²⁰-X²¹-X²²-X²³-Y²-R² 식 I
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서:
X¹은 없거나 염기성 비 키랄성 아미노산 잔기, 염기성 D-아미노산 잔기 또는 염기성 L-아미노산 잔기이며;
X²는 염기성 비 키랄성 아미노산 잔기, 염기성 D-아미노산 잔기 또는 염기성 L-아미노산 잔기이며;
X³는 지방족 비 키랄성 아미노산 잔기, 지방족 D-아미노산 잔기 또는 지방족 L-아미노산 잔기이며;
X⁴는 염기성 비 키랄성 아미노산 잔기, 염기성 D-아미노산 잔기 또는 염기성 L-아미노산 잔기이며;
X⁵는 Gln, Asn, D-Gln, D-Asn, 또는 염기성 비 키랄성 아미노산 잔기, 염기성 D-아미노산 잔기 또는 염기성 L-아미노산 잔기이며;
X⁶은 염기성 비 키랄성 아미노산 잔기, 염기성 D-아미노산 잔기 또는 염기성 L-아미노산 잔기이며;
X⁷은 소수성 비 키랄성 아미노산 잔기, 소수성 D-아미노산 잔기 또는 소수성 L-아미노산 잔기이며;
X⁸은 소수성 비 키랄성 아미노산 잔기, 소수성 D-아미노산 잔기 또는 소수성 L-아미노산 잔기이며;
X⁹는 친수성 비 키랄성 아미노산 잔기, 친수성 D-아미노산 잔기 또는 친수성 L-아미노산 잔기이며;
X¹⁰은 Leu, Trp, Gly, Nal, D-Leu, D-Trp 또는 D-Nal이며;
X¹¹은 Gly 또는 지방족 비 키랄성 아미노산 잔기, 지방족 D-아미노산 잔기 또는 지방족 L-아미노산 잔기이며;
X¹²는 친수성 비 키랄성 아미노산 잔기, 친수성 D-아미노산 잔기 또는 친수성 L-아미노산 잔기이며;
X¹³은 친수성 비 키랄성 아미노산 잔기, 친수성 D-아미노산 잔기 또는 친수성 L-아미노산 잔기이며;
X¹⁴는 Leu, Trp, Gly, D-Leu, 또는 D-Trp이며;
X¹⁵는 Leu, Gly 또는 D-Leu이며;
X¹⁶은 산성 비 키랄성 아미노산 잔기, 산성 D-아미노산 잔기 또는 산성 L-아미노산 잔기이며;
X¹⁷은 친수성 비 키랄성 아미노산 잔기, 친수성 D-아미노산 잔기 또는 친수성 L-아미노산 잔기이며;
X¹⁸은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;
X¹⁹는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;
X²⁰은 산성 비 키랄성 아미노산 잔기, 산성 D-아미노산 잔기 또는 산성 L-아미노산 잔기이며;
X²¹은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;
X²²는 지방족 비 키랄성 아미노산 잔기, 지방족 D-아미노산 잔기 또는 지방족 L-아미노산 잔기이며;
X²³은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;
Y¹은 없거나 1 내지 7개 아미노산 잔기들의 서열이며, 서열의 각 잔기는 독립적으로 비 키랄성 D- 또는 L-아미노산 잔기이며;
Y²는 없거나 1 내지 7개 아미노산 잔기들의 서열이며, 서열의 각 잔기는 독립적으로 비 키랄성 D- 또는 L-아미노산 잔기이며;
R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;
R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;
여기서:
a) 말단 아미노산 잔기 및 이에 바로 인접한 잔기를 제외하고, 모든 아미노산 잔기는 비 키랄성 또는 L-아미노산 잔기이며; 또는 b) 말단 아미노산 잔기 및 이에 바로 인접한 잔기를 제외하고, 모든 아미노산 잔기는 비 키랄성 또는 D-아미노산 잔기이다.
다음 식 II를 가지는 15- 내지 22-잔기 펩타이드
R¹-Y¹-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸-X⁹-X¹⁰-X¹¹X¹²-X¹³-X¹⁴-X¹⁵-X¹⁶-X¹⁷-X¹⁸-Y²-R², 식 II
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서:
X¹은 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;
X²는 Leu 또는 D-Leu이며;
X³는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;
X⁴는 Gln, Asn, D-Gln, 또는 D-Asn이며;
X⁵는 Leu, D-Leu 또는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;
X⁶은 Leu, Trp, Phe, D-Leu, D-Trp 또는 D-Phe이며;
X⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;
X⁸은 Asn, D-Asn 또는 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;
X⁹는 Leu, Trp, D-Leu 또는 D-Trp이며;
X¹⁰은 Leu, Trp, D-Leu 또는 D-Trp이며;
X¹¹은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;
X¹²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;
X¹³은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;
X¹⁴는 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;
X¹⁵는 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;
X¹⁶은 Leu 또는 D-Leu이며;
X¹⁷은 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;
X¹⁸은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;
Y¹은 없거나 1 내지 4개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;
Y²는 없으며;
R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;
R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;
여기서 잔기 X¹ 내지 X¹⁷의 0 내지 3개는 없으며;
여기서:
a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;
b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;
c) 각 키랄 말단 아미노산 잔기 및 이에 바로 인접한 각 키랄 아미노산 잔기의 하나 이상이 D-아미노산 잔기인 것을 제외하고, 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며; 또는
d) 각 키랄 말단 아미노산 잔기 및 이에 바로 인접한 각 키랄 아미노산 잔기의 하나 이상이 L-아미노산 잔기인 것을 제외하고, 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이다.
다음 식 III을 가지는 22- 내지 29-잔기 펩타이드
R¹-Y¹-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸-X⁹-X¹⁰-X¹¹-X¹²-X¹³-X¹⁴-X¹⁵-X¹⁶-X¹⁷-X¹⁸-X¹⁹-X²⁰-X²¹-X²²-X²³-Y²-R² 식 III
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 여기서:
X¹은 없거나 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;
X²는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;
X³는 Leu 또는 D-Leu이며;
X⁴는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;
X⁵는 비 키랄성인 D- 또는 L-염기성 아미노산 잔기이며;
X⁶은 Gln, Asn, D-Gln, 또는 D-Asn이며;
X⁷은 Leu 또는 D-Leu이며;
X⁸은 Ala 또는 D-Ala이며;
X⁹는 Asp 또는 D-Asp이며;
X¹⁰은 Leu, Phe, Gly, D-Leu 또는 D-Phe이며;
X¹¹은 Gly, Leu 또는 D-Leu이며;
X¹²는 Arg 또는 D-Arg이며;
X¹³은 비 키랄성인 D- 또는 L-산성 아미노산 잔기이며;
X¹⁴는 Leu, Trp, Gly, D-Leu, 또는 D-Trp이며;
X¹⁵는 Leu 또는 D-Leu이며;
X¹⁶은 Gln 또는 D-Gln이며;
X¹⁷은 Glu, Leu, D-Glu 또는 D-Leu이며;
X¹⁸은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;
X¹⁹는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;
X²⁰은 Glu 또는 D-Glu이며;
X²¹은 Leu, Phe, D-Leu 또는 D-Phe이며;
X²²는 비 키랄성인 D- 또는 L-지방족 아미노산 잔기이며;
X²³은 Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip 또는 D-Pip이며;
Y¹은 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;
Y²는 없거나 1 내지 7개 잔기를 가진 아미노산 서열이며;
R¹은 H 또는 아미노 보호기이며;
R²는 OH 또는 카복실 보호기이다;
여기서:
a) 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며;
b) 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이며;
c) 각 키랄 말단 아미노산 잔기 및 이에 바로 인접한 각 키랄 아미노산 잔기의 하나 이상이 D-아미노산 잔기인 것을 제외하고, 각 키랄 아미노산 잔기는 L-아미노산 잔기이며; 또는
d) 각 키랄 말단 아미노산 잔기 및 이에 바로 인접한 각 키랄 아미노산 잔기의 하나 이상이 L-아미노산 잔기인 것을 제외하고, 각 키랄 아미노산 잔기는 D-아미노산 잔기이다.
유효량의 제 1 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 조성물.
유효량의 제 2 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 조성물.
유효량의 제 3 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 조성물.
이상지질혈증의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 제 1 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 이상지질혈증을 치료 또는 예방하는 방법.
이상지질혈증의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 제 2 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 이상지질혈증을 치료 또는 예방하는 방법.
이상지질혈증의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 제 3 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 이상지질혈증을 치료 또는 예방하는 방법.
심혈관질환의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 제 1 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 심혈관질환을 치료 또는 예방하는 방법.
심혈관질환의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 제 2 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 심혈관질환을 치료 또는 예방하는 방법.
심혈관질환의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 제 3 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 심혈관질환을 치료 또는 예방하는 방법.
혈관내피이상의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 제 1 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 혈관내피이상을 치료 또는 예방하는 방법.
혈관내피이상의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 제 2 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 혈관내피이상을 치료 또는 예방하는 방법.
혈관내피이상의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 제 3 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 혈관내피이상을 치료 또는 예방하는 방법.
거대혈관질환의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 제 1 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 거대혈관질환을 치료 또는 예방하는 방법.
거대혈관질환의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 제 2 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 거대혈관질환을 치료 또는 예방하는 방법.
거대혈관질환의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 제 3 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 거대혈관질환을 치료 또는 예방하는 방법.
미세혈관질환의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 제 1 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 미세혈관질환을 치료 또는 예방하는 방법.
미세혈관질환의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 제 2 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 미세혈관질환을 치료 또는 예방하는 방법.
미세혈관질환의 치료 또는 예방이 필요한 포유류에게 유효량의 제 3 항의 펩타이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 미세혈관질환을 치료 또는 예방하는 방법.