KR20110129833A - 폐렴연쇄상구균의 분비단백질을 포함하는 폐렴 진단용 조성물 - Google Patents

폐렴연쇄상구균의 분비단백질을 포함하는 폐렴 진단용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 폐렴 진단용 마커 및 진단용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로는, 폐렴연쇄상구균의 혼합균주에서 분비되는 단백질을 동정함으로써, 상기 단백질에 특이적인 항체를 포함하는 폐렴 진단용 조성물 및 상기 단백질을 암호화하는 핵산에 특이적인 프라이머 또는 프로브를 포함하는 폐렴 진단용 조성물에 관한 것으로, 폐렴 진단에 유용하게 사용할 수 있다.

Description

폐렴연쇄상구균의 분비단백질을 포함하는 폐렴 진단용 조성물 {Composition for diagnosis of pneumoniae comprising secreted protein of streptococcus pneumoniae}
본 발명은 폐렴 진단용 마커 및 폐렴 진단용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로는, 폐렴연쇄상구균의 혼합 균주에서 분비되는 단백질에 특이적인 항체를 포함하는 폐렴 진단용 조성물 및 상기 단백질을 암호화하는 핵산에 특이적인 프라이머 또는 프로브를 포함하는 폐렴 진단용 조성물에 관한 것이다.
폐렴연쇄상구균은　대표적인　지역감염성（Community-acquired) 폐렴을 일으키는　균으로서,　조건에　따라　치사율이　30％ 이상의 치명적인　질환　원인균이다. 또한, 폐렴연쇄상구균은 중이염, 정맥동염, 만성기관지염의 급성적 악화 및 세균성 폐렴을 포함하는 호흡기계 감염증의 가장 공통적인 세균원이다. 약 50여년 동안 폐렴연쇄상구균의 치료를 위해서 강력한 항생제들이 용이하게 이용되어 왔지만, 전신적 감염증의 이환율 및 사망율은 특히 노인 환자들에서는 거의 그대로 유지되고 있다. 또한, 폐렴연쇄상구균 감염은 공통적으로 재발성이다. 현재 폐렴연쇄상구균의 치료는 시험관내 활성, 항미생물 내성, 및 감염에 대한 증가된 감수성을 갖는 약제의 제한된 효능으로 인하여 문제가 되고 있다.
따라서 신속한 균의 진단이 환자의 생존율에 중요한 요인이 되고 있다.
폐렴연쇄상구균은　그동안　검체를　배양하여　동정하는　방법으로　진단하여 왔는데　최근 면역크로마토그래피법 （Immunochromatography)을　이용하여　폐렴연쇄상구균의　표면항원을　간편하게　진단하는　신속진단방법이　개발되어　사용되기　시작하였다. 현재 사용되는 폐렴연쇄상구균 진단 키트인 미국 Binax, Inc.의 NOW S. pneumoniae™의 경우 다당체(polysaccharide)를 항원으로 활용한 경우이나, 현재까지 단백질 유래한 진단 키트는 상용화 되지 않고 있는 실정이다.
따라서 보다 정확하게 폐렴연쇄상구균의 감염 여부를 진단할 수 있는 마커 및 조성물의 개발이 필요하다.
본 발명자는 상기의 문제점 및 필요성을 인식하고, 폐렴연쇄상구균을 진단할 수 있는 단백질 마커에 대해 예의 연구한 결과, 폐렴연쇄상구균 3종을 혼합한 균주에서 분비되는 단백질을 동정하고, 이를 폐렴 진단을 위해 사용할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
따라서 본 발명의 목적은 폐렴 진단용 마커를 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 마커에 특이적인 항체 또는 마커를 암호화하는 유전자에 특이적인 프라이머 등을 포함하는 폐렴 진단용 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 폐렴 진단을 위한 정보 제공방법을 제공하는데 있다.
본 발명은 폐렴 진단용 마커 및 폐렴 진단용 조성물을 제공한다.
구체적으로, 본 발명은 cell wall-associated serine proteinase precursor PrtA (gi:15902605), cell wall surface anchor family protein (gi:15902119), beta-galactosidase precursor (gi:15902609), endo-beta-N-acetylglucosaminidase (gi:15902484), hyaluronate lyase precursor (hyaluronidase/hyase, gi:15902330), sialidase A precursor (neuraminidase A, gi:15903579), ABC transporter substrate-binding protein (gi:15902127), branched chain amino acid ABC transporter amino acid-binding protein (gi:15902703), transcriptional regulator (gi:15903801), ABC transporter substrate-binding protein- oligopeptide transport (gi:15902371), general stress protein GSP-781 (gi:15904062), ABC transporter substrate-binding protein - manganese transport (gi:15903537), foldase protein PrsA (gi:15902928), ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport (gi:15903749), hypothetical protein spr0554 (gi:15902598), hypothetical protein spr1875 (gi:15903916), beta-N-acetylhexosaminidase (gi:15902101), ABC transporter substrate-binding protein - amino acid transport (gi:15902190), hypothetical protein spr0747 (gi:15902791), iron-compound ABC transporter, iron compound-binding protein (gi:15902978), hypothetical protein spr0931 (gi:15902975), peptidyl-prolyl cis-trans isomerase, cyclophilin-type (gi:15902723), maltose/maltodextrin ABC transporter, maltose/maltodextrin-binding protein (gi:15903959), amino acid ABC transporter amino acid-binding protein (gi:15903396), ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport (gi:15903425), choline binding protein E (gi:15902875), choline binding protein A (gi:15904036), adhesion lipoprotein (gi:15902950), 1,4-beta-N-acetylmuramidase (gi:15903474), sugar ABC transporter, sugar-binding protein (gi:15903570), zinc ABC transporter zinc-binding protein (gi:15904016), pneumococcal histidine triad protein E precursor (gi:15902952), iron-compound ABC transporter, iron-compound-binding protein (gi:15903729), Fructose-bisphosphate aldolase (gene no. spr0530), Serine protease (gene no. spr2045), Glutamyl aminopeptidase (gene no. spr1682), Zinc-containing alcohol dehydrogenase (gene no. spr1866), N-acetylglucosamine-6-phosphate deacetylase (gene no. spr1867), Glucose-6-phosphate isomerase (gene no. spr1882), Glutamine synthetase, type I (gene no. spr0444), Pneumococcal histidine triad protein D precursor (gene no. spr0907), Zinc metalloprotease (gene no. spr0581), Phosphopyruvate hydratase (gene no. spr1036), Aminopeptidase N (gene no. spr0706), Molecular chaperone DnaK (gene no. spr0455), Endopeptidase O (gene no. spr1491) 의 단백질들로 이루어진 그룹 중에서 하나 이상 선택되는 폐렴 진단용 마커를 제공한다.
또한 본 발명은 상기의 단백질들로 이루어진 그룹 중에서 선택되는, 하나 이상의 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 폐렴 진단용 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 상기의 단백질들로 이루어진 그룹 중에서 선택되는, 하나 이상의 단백질을 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브를 포함하는 폐렴 진단용 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 상기의 항체로 구성된 조성물, 프라이머 또는 프로브로 구성된 조성물을 포함하는 폐렴 진단용 키트를 제공한다.
아울러, 본 발명은 상기의 키트를 검사하고자 하는 시료와 반응시키는 것을 특징으로 하는 폐렴 진단을 위한 정보 제공방법을 제공한다.
상기 폐렴은 폐렴연쇄상 구균에 감염되어 발병된 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의한 폐렴 진단용 마커 및 조성물은 폐렴 연쇄상구균의 동정 및 진단에 활용할 수 있다. 또한 본 발명의 진단용 조성물은 보다 정확하고 민감하게 폐렴을 진단할 수 있는 바, 폐렴의 조기 치료 및 예방이 가능해진다.
도1은 열처리 균체를 활용하여 제작한 항체의 역가를 측정한 결과로,
비병원성 폐렴연쇄상구균 (BBA255)의 경우보다 병원성 폐렴연쇄상구균에서 항체의 활성이 높음을 확인하였다. 1:500으로 항체를 희석하여 dot blotting 한 경우 50ng까지 항체반응이 일어남을 확인할 수 있었다.
도 2는 병원성 임상 폐렴연쇄상구균 3종의 혼합배양에서 유래한 분비단백질을 항원으로 이용하여 제작된 항체의 역가를 측정한 결과로, 1:500으로 항체를 희석하여 dot blotting 한 경우 1ng까지 항체 반응을 보였다. 즉, 분비단백질의 항체반응이 병원성 미생물의 열처리 균체에 비해 50배의 민감도를 가지고 있음을 알 수 있었다.
도 3은 분비 단백질을 활용하여 이차원 전기영동을 실시한 결과로, 분비단백질에서 154개의 단백질을 확인할 수 있었다.
도4는 이차원 젤에 전개된 분비단백질에 대하여 분비단백질 유래 항체를 이용하여 웨스턴 블롯을 실시한 결과로, 1:4,000으로 희석한 항체를 시용하였을 때 signal이 강한 단백질 54개를 확인할 수 있었다.
본 발명은 cell wall-associated serine proteinase precursor PrtA (gi:15902605), cell wall surface anchor family protein (gi:15902119), beta-galactosidase precursor (gi:15902609), endo-beta-N-acetylglucosaminidase (gi:15902484), hyaluronate lyase precursor (hyaluronidase/hyase, gi:15902330), sialidase A precursor (neuraminidase A, gi:15903579), ABC transporter substrate-binding protein (gi:15902127), branched chain amino acid ABC transporter amino acid-binding protein (gi:15902703), transcriptional regulator (gi:15903801), ABC transporter substrate-binding protein- oligopeptide transport (gi:15902371), general stress protein GSP-781 (gi:15904062), ABC transporter substrate-binding protein - manganese transport (gi:15903537), foldase protein PrsA (gi:15902928), ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport (gi:15903749), hypothetical protein spr0554 (gi:15902598), hypothetical protein spr1875 (gi:15903916), beta-N-acetylhexosaminidase (gi:15902101), ABC transporter substrate-binding protein - amino acid transport (gi:15902190), hypothetical protein spr0747 (gi:15902791), iron-compound ABC transporter, iron compound-binding protein (gi:15902978), hypothetical protein spr0931 (gi:15902975), peptidyl-prolyl cis-trans isomerase, cyclophilin-type (gi:15902723), maltose/maltodextrin ABC transporter, maltose/maltodextrin-binding protein (gi:15903959), amino acid ABC transporter amino acid-binding protein (gi:15903396), ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport (gi:15903425), choline binding protein E (gi:15902875), choline binding protein A (gi:15904036), adhesion lipoprotein (gi:15902950), 1,4-beta-N-acetylmuramidase (gi:15903474), sugar ABC transporter, sugar-binding protein (gi:15903570), zinc ABC transporter zinc-binding protein (gi:15904016), pneumococcal histidine triad protein E precursor (gi:15902952), iron-compound ABC transporter, iron-compound-binding protein (gi:15903729) , Fructose-bisphosphate aldolase (gene no. spr0530), Serine protease (gene no. spr2045), Glutamyl aminopeptidase (gene no. spr1682), Zinc-containing alcohol dehydrogenase (gene no. spr1866), N-acetylglucosamine-6-phosphate deacetylase (gene no. spr1867), Glucose-6-phosphate isomerase (gene no. spr1882), Glutamine synthetase, type I (gene no. spr0444), Pneumococcal histidine triad protein D precursor (gene no. spr0907), Zinc metalloprotease (gene no. spr0581), Phosphopyruvate hydratase (gene no. spr1036), Aminopeptidase N (gene no. spr0706), Molecular chaperone DnaK (gene no. spr0455), Endopeptidase O (gene no. spr1491)의 단백질들로 이루어진 그룹 중에서 하나 이상 선택되는, 폐렴 진단용 마커를 제공한다.
본 발명의 분비 단백질 마커는 폐렴 환자에게서 분리한 폐렴연쇄상구균 3종을 혼합하고 균주를 배양하여 분리될 수 있고, 또는 분비단백질로 2차원 전기영동 및 웨스틴 블롯을 실시하여 signal이 강한 마커를 분리할 수 있다.
본 발명에서 사용된 단백질 마커의 Genbank No. 및 분자량 등의 특징은 실시예 2의 표 1 및 실시예4의 표2에 표시된 바와 같다.
본 발명에서 사용된 용어, "진단"은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 진단은 폐렴 발병 여부를 확인하는 것이다.
본 발명에서 사용된 용어 “폐렴 (pneumoniae)" 은 세균이나 바이러스, 곰팡이 등의 미생물로 인한 감염으로 발생하는 폐의 염증을 의미하며, 바람직하게는 폐렴연쇄상구균 (Streptococcus pneumoniae)에 의해 감염된 폐렴이다.
본 발명에 따른 폐렴 진단용 마커를 이용한 폐렴 진단은 생물학적 샘플 중 본 발명의 마커 단백질 또는 핵산의 존재여부를 확인함으로써 수행될 수 있다.
본 발명의 마커 단백질의 존재 여부를 확인하는 방법으로는 당업계에 공지된 다양한 분석방법을 사용할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 마커 단백질에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시켜 항원-항체 복합체의 형성여부를 측정함으로써 생물학적 샘플 중에서 본 발명의 마커 단백질의 존재여부를 확인할 수 있다. 본 발명에서 사용된 용어 "항원-항체 복합체"란 생물학적 샘플 중의 특정 단백질과 이를 특이적으로 인지하는 항체의 결합물을 의미한다.
따라서 본 발명은 cell wall-associated serine proteinase precursor PrtA (gi:15902605), cell wall surface anchor family protein (gi:15902119), beta-galactosidase precursor (gi:15902609), endo-beta-N-acetylglucosaminidase (gi:15902484), hyaluronate lyase precursor (hyaluronidase/hyase, gi:15902330), sialidase A precursor (neuraminidase A, gi:15903579), ABC transporter substrate-binding protein (gi:15902127), branched chain amino acid ABC transporter amino acid-binding protein (gi:15902703), transcriptional regulator (gi:15903801), ABC transporter substrate-binding protein- oligopeptide transport (gi:15902371), general stress protein GSP-781 (gi:15904062), ABC transporter substrate-binding protein - manganese transport (gi:15903537), foldase protein PrsA (gi:15902928), ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport (gi:15903749), hypothetical protein spr0554 (gi:15902598), hypothetical protein spr1875 (gi:15903916), beta-N-acetylhexosaminidase (gi:15902101), ABC transporter substrate-binding protein - amino acid transport (gi:15902190), hypothetical protein spr0747 (gi:15902791), iron-compound ABC transporter, iron compound-binding protein (gi:15902978), hypothetical protein spr0931 (gi:15902975), peptidyl-prolyl cis-trans isomerase, cyclophilin-type (gi:15902723), maltose/maltodextrin ABC transporter, maltose/maltodextrin-binding protein (gi:15903959), amino acid ABC transporter amino acid-binding protein (gi:15903396), ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport (gi:15903425), choline binding protein E (gi:15902875), choline binding protein A (gi:15904036), adhesion lipoprotein (gi:15902950), 1,4-beta-N-acetylmuramidase (gi:15903474), sugar ABC transporter, sugar-binding protein (gi:15903570), zinc ABC transporter zinc-binding protein (gi:15904016), pneumococcal histidine triad protein E precursor (gi:15902952), iron-compound ABC transporter, iron-compound-binding protein (gi:15903729) , Fructose-bisphosphate aldolase (gene no. spr0530), Serine protease (gene no. spr2045), Glutamyl aminopeptidase (gene no. spr1682), Zinc-containing alcohol dehydrogenase (gene no. spr1866), N-acetylglucosamine-6-phosphate deacetylase (gene no. spr1867), Glucose-6-phosphate isomerase (gene no. spr1882), Glutamine synthetase, type I (gene no. spr0444), Pneumococcal histidine triad protein D precursor (gene no. spr0907), Zinc metalloprotease (gene no. spr0581), Phosphopyruvate hydratase (gene no. spr1036), Aminopeptidase N (gene no. spr0706), Molecular chaperone DnaK (gene no. spr0455), Endopeptidase O (gene no. spr1491)로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 하나 이상의 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는 폐렴 진단용 조성물을 제공한다.
본 발명에서 "항체"란 항원성 부위에 대해서 지시되는 특이적인 단백질 분자를 의미한다. 본 발명에 사용되는 항체는 단클론 또는 다클론 항체, 면역학적으로 활성인 단편 (예를 들어, Fab 또는 (Fab)2 단편), 항체 중쇄, 인간화 항체, 항체 경쇄, 유전자 조작된 단일쇄 Fν 분자, 키메릭 항체 등일 수 있다.
본 발명에 사용되는 항체는 상기 마커 단백질을 항원으로 하여 면역학 분야에서 널리 알려져 있는 통상의 방법으로 제조할 수 있다. 본 발명에 따른 항체의 항원으로서 사용되는 단백질은 천연에서 추출하거나 합성될 수 있으며, DNA 서열을 기초로 하여 재조합 방법에 의해 제조될 수 있다. 유전자 재조합 기술을 이용할 경우 단백질을 코딩하는 핵산을 적절한 발현 벡터에 삽입하고, 재조합 발현 벡터로 형질전환된 형질전환체에서 목적으로 하는 단백질이 발현되도록 숙주 세포를 배양한 후 형질전환체로부터 목적으로 하는 단백질을 회수함으로써 수득될 수 있다. 예를 들어, 다클론 항체는 단백질 항원을 동물에 주사하고 동물로부터 채혈하여 항체를 포함하는 혈청을 수득하는 방법에 의해 생산할 수 있다. 이러한 항체는 말, 소, 염소, 양, 개, 닭, 칠면조, 토끼, 마우스 또는 래트와 같은 여러 온혈동물을 이용하여 제조할 수 있다. 단클론 항체도 공지된 융합방법 (fusion method)(Kohler and Milstein, European J. Immnunol. 6:511-519 1976), 재조합 DNA 방법(미국특허 제4816567호) 및 파지 항체 라이브러리(Clackson et al., Nature, 352, 624-628, 1991; Marks et al., J. Mol. Biol. 222, 58:1-597, 1991) 기술을 이용하여 제조할 수 있다.
본 발명의 진단용 조성물은 단백질에 특이적인 항체이외에 면역학적 분석에 사용되는 당업계에 공지된 시약을 추가로 포함할 수 있다. 상기에서 면역학적 분석은 항원과 항체의 결합을 측정할 수 있는 있는 방법이라면 모두 포함될 수 있다. 이러한 방법들은 당 분야에 공지되어 있으며 예를 들어, 면역세포화학 및 면역조직화학, 방사선 면역 분석법(radioimmunoassays), 효소결합면역법(ELISA: Enzyme Linked Immunoabsorbent assay), 면역 블롯 (immunoblotting), 파아르 분석법(Farr assay), 면역침강, 라텍스 응집, 적혈구 응집, 비탁계법, 면역확산법, 카운터-전류 전기영동법, 단일 라디칼 면역확산법, 면역크로마토그래피법, 단백질 칩 및 면역형광법이 있다.
면역학적 분석에 사용되는 시약으로는 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지, 용해제, 세정제가 포함된다. 또한, 표지물질이 효소인 경우에는 효소활성을 측정할 수 있는 기질 및 반응 정지제를 포함할 수 있다. 상기에서 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지는 항원-항체 복합체의 형성을 정성 또는 정량적으로 측정가능하게 하며, 이의 예로는 효소, 형광물질, 리간드, 발광물, 미소입자(microparticle), 레독스 분자 및 방사성 동위원소 등을 사용할 수 있다. 효소로는 β-글루쿠로니다제, β-D-글루코시다제, 우레아제, 퍼옥시다아제, 알칼라인 포스파타아제, 아세틸콜린에스테라아제, 글리코즈 옥시다아제, 헥소키나제, 말레이트 디하이드로게나아제, 글루코스-6-인산디하이드로게나아제, 인버타아제 등을 사용할 수 있다. 형광물로는 플루오레신, 이소티오시아네이트, 로다민, 피코에리테린, 피코시아닌, 알로피코시아닌, 플루오르신이소티옥시아네이트 등을 사용할 수 있다. 리간드로는 바이오틴 유도체 등이 있으며, 발광물로는 아크리디늄 에스테르, 루시페린, 루시퍼라아제 등이 있다. 미소입자로는 콜로이드금, 착색된 라텍스 등이 있고 레독스 분자로는 페로센, 루테늄 착화합물, 바이올로젠, 퀴논, Ti 이온, Cs 이온, 디이미드, 1,4-벤조퀴논, 하이드로퀴논 등이 있다. 방사성 동위원소로는 3H, 14C, 32P, 35S, 36Cl, 51Cr, 57Co, 58Co, 59Fe, 90Y, 125I, 131I, 186Re 등이 있다. 그러나 상기 예시된 것들 외에 면역학적 분석법에 사용할 수 있은 것이라면 어느 것이라도 사용할 수 있다.
한편, 본 발명의 진단용 조성물은 진단의 신속도 및 편리성을 높이기 위해, 적합한 담체 또는 지지체상에 공지된 다양한 방법을 이용하여 고정화된 상태로 제공될 수 있다 (Antibodies: A Labotory Manual, Harlow ＆ Lane; Cold SpringHarbor, 1988). 적합한 담체 또는 지지체의 예로는 아가로스, 셀룰로즈, 니트로셀룰로즈, 덱스트란, 세파덱스, 세파로즈, 리포솜, 카복시메틸 셀룰로즈, 폴리아크릴아미드, 폴리스테린, 반려암, 여과지, 이온교환수지, 플라스틱 필름, 플라스틱 튜브, 유리, 폴리아민-메틸 비닐-에테르-말레산 공중합체, 아미노산 공중합체, 에틸렌-말레산 공중합체, 나일론, 컵, 플랫 팩(flat packs) 등 이 포함된다. 그 외의 다른 고체 기질로는 세포 배양 플레이트, ELISA 플레이트, 튜브 및 폴리머성 막이 있다. 상기 지지체는 임의의 가능한 형태, 예를 들어 구형(비드), 원통형(시험관 또는 웰 내면), 평면형(시트, 시험 스트립)을 가질 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 폐렴 진단용 조성물은 진단용 키트, 마이크로어레이, 단백질 칩의 형태로 제공될 수 있다. 상기 진단용 키트로는 예를 들면, 샘플 중의 특정 단백질을 검출하기 위해 면역크로마토그래피법을 기초로 하는 측방 유동 검정 키트(lateral flow assay kit)의 형태로 제공될 수 있다. 측방 유동 검정 키트는 샘플에 적용되는 샘플패드 (sample pad), 탐지용 항체가 코팅되어 있는 방출패드(releasing pad), 샘플이 이동하여 분리되고 항원-항체 반응이 일어나는 전개용 막 (예를 들어 니트로셀룰로스) 또는 스트립, 그리고 흡수패드 (absorption pad)로 이루어져 있다.
또한 본 발명은 cell wall-associated serine proteinase precursor PrtA (gi:15902605), cell wall surface anchor family protein (gi:15902119), beta-galactosidase precursor (gi:15902609), endo-beta-N-acetylglucosaminidase (gi:15902484), hyaluronate lyase precursor (hyaluronidase/hyase, gi:15902330), sialidase A precursor (neuraminidase A, gi:15903579), ABC transporter substrate-binding protein (gi:15902127), branched chain amino acid ABC transporter amino acid-binding protein (gi:15902703), transcriptional regulator (gi:15903801), ABC transporter substrate-binding protein- oligopeptide transport (gi:15902371), general stress protein GSP-781 (gi:15904062), ABC transporter substrate-binding protein - manganese transport (gi:15903537), foldase protein PrsA (gi:15902928), ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport (gi:15903749), hypothetical protein spr0554 (gi:15902598), hypothetical protein spr1875 (gi:15903916), beta-N-acetylhexosaminidase (gi:15902101), ABC transporter substrate-binding protein - amino acid transport (gi:15902190), hypothetical protein spr0747 (gi:15902791), iron-compound ABC transporter, iron compound-binding protein (gi:15902978), hypothetical protein spr0931 (gi:15902975), peptidyl-prolyl cis-trans isomerase, cyclophilin-type (gi:15902723), maltose/maltodextrin ABC transporter, maltose/maltodextrin-binding protein (gi:15903959), amino acid ABC transporter amino acid-binding protein (gi:15903396), ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport (gi:15903425), choline binding protein E (gi:15902875), choline binding protein A (gi:15904036), adhesion lipoprotein (gi:15902950), 1,4-beta-N-acetylmuramidase (gi:15903474), sugar ABC transporter, sugar-binding protein (gi:15903570), zinc ABC transporter zinc-binding protein (gi:15904016), pneumococcal histidine triad protein E precursor (gi:15902952), iron-compound ABC transporter, iron-compound-binding protein (gi:15903729) , Fructose-bisphosphate aldolase (gene no. spr0530), Serine protease (gene no. spr2045), Glutamyl aminopeptidase (gene no. spr1682), Zinc-containing alcohol dehydrogenase (gene no. spr1866), N-acetylglucosamine-6-phosphate deacetylase (gene no. spr1867), Glucose-6-phosphate isomerase (gene no. spr1882), Glutamine synthetase, type I (gene no. spr0444), Pneumococcal histidine triad protein D precursor (gene no. spr0907), Zinc metalloprotease (gene no. spr0581), Phosphopyruvate hydratase (gene no. spr1036), Aminopeptidase N (gene no. spr0706), Molecular chaperone DnaK (gene no. spr0455), Endopeptidase O (gene no. spr1491) 로 이루어진 그룹 중에서 선택되는, 하나 이상의 단백질을 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브를 포함하는 폐렴 진단용 조성물을 제공한다.
프라이머를 이용한 특정 핵산의 검출은 PCR과 같은 증폭 방법을 사용하여 목적 유전자의 서열을 증폭한 다음 당 분야에 공지된 방법으로 유전자의 증폭여부를 확인함으로써 수행될 수 있다. 또한, 프로브를 이용한 특정 핵산의 검출은 적합한 조건하에서 시료 핵산을 프로브와 접촉시킨 후 하이브리드화되는 핵산의 존재여부를 확인함으로써 수행될 수 있다.
상기 "프라이머"란 짧은 자유 수산화기를 가지는 핵산서열로서 상보적인 템플레이트와 염기쌍을 형성할 수 있고, 템플레이트 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능하는 짧은 핵산서열을 말한다. 본 발명의 프라이머는 예를 들면, 포스포르아미다이트 고체 지지체 방법과 같은 당 분야에 공지된 방법을 이용하여 화학적으로 합성할 수 있다.
상기 "프로브"는 mRNA와 특이적으로 결합할 수 있는 수개 내지 수백 개의 염기로 이루어진 RNA 또는 DNA 등의 핵산 단편을 의미하며 라벨링되어 있어 특정 mRNA의 존재유무를 확인할 수 있다. 프로브는 올리고뉴클레오타이드 프로브, 단쇄 DNA 프로브, 이중쇄 DNA 프로브, RNA 프로브 등의 형태로 제작될 수 있고 비오틴, FITC, 로다민, DIG 등으로 표지되거나 방사선 동위 원소 등으로 표지될 수 있다.
또한, 상기 프로브는 검출 가능한 물질 예를 들면, 적합한 신호를 제공하고 충분한 반감기를 갖는 방사성 표지로 표지할 수 있다. 표지된 프로브는 문헌 (Sambook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Mannual, 1989)에 공지된 바와 같은 고체 지지체 상의 핵산에 하이브리드화시킬 수 있다.
본 발명의 프라이머 또는 프로브는 포스포르아미다이트고체 지지체 방법, 또는 기타 널리 공지된 방법을 사용하여 화학적으로 합성될 수 있다. 또한, 공지된 방법으로 메틸화, 캡화 등으로 변형시킬 수 있다.
상기 본 발명의 폐렴 진단용 조성물은 상술한 핵산을 검출하는 방법에 일반적으로 사용되는 시약을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들면, PCR 반응에 요구되는 dNTP(deoxynulceotide triphosphate), 내열성 중합효소(polymerase), 염화마그네슘 등의 금속이온염이 포함할 수 있으며, 시퀀싱에 요구되는 dNTP, 시쿼나제 (sequenase) 등을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기의 폐렴 진단용 조성물들을 포함하는 페렴 진단용 키트를 제공한다.
또한 본 발명은 상기의 폐렴 진단용 키트를 검사하고자 하는 시료와 반응시키는 것을 특징으로 하는 폐렴 진단을 위한 정보 제공방법에 관한 것이다. 상기 방법은 폐렴연쇄상구균에 감염되어 발병된 폐렴을 진단하는 것이 바람직하다.
이하, 실시예를 통해 분비단백질의 분리 및 항체반응성이 높은 단백질 유래 바이오마커 발굴 과정을 자세히 설명하도록 한다. 하기 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 폐렴연쇄상구균 혼합 균주 배양 및 ammonium sulfate 침전을 통한 분비단백질 분리정제
병원성 폐렴연쇄상구균의 보편적인 분비단백질을 분리하기 위해, 여러 종 (3종)의 임상균을 혼합하여 균주를 배양하고 분비단백질 분리하였다. 균주는 500ml Thdd-Hewitt broth(BD, USA)에 0.5% yeast extract(THY)를 첨가한 다음 37℃, 5% CO2 조건에서 OD 0.9까지 정체 배양을 하였다. 다 자란 균은 4℃에서 8,000rpm으로 20분 원심분리 하여 배지 성분과 세포를 분리하였다. 배지 성분을 교반기로 섞어주면서 ammonium sulfate를 80%까지 섞어주었다. 이것을 4℃에서 14,000rpm으로 20분 원심 분리하여 상등액을 제거하고 침전체 (pellet)를 모았다. 침전체에 존재하는 황산암모늄 (ammonium sulfate)은 20mM Tris-HCl (pH 8.0)를 이용한 투석 (dialysis)을 통해 제거 하였다. 투석 후 투석 막 속에 있는 단백질들은 5,000 Da Viva spin을 사용하여 4℃, 3,500rpm에서 40분씩 원심분리를 하여 농축을 한 다음 분석에 사용하였다.
실시예 2: 분비단백질의 전기 영동 및 질량분석을 통한 동정
12% SDS-PAGE를 사용하여 분비 단백질을 전개 시킨 후, 트립신 (trypsin)으로 in-gel digestion을 수행하였다. 각각의 펩타이드는 LCQ DECA XP plus (Thermo Finnigan. USA)와 FT-ICR(Thermo Finnigan. USA)를 사용하여 분석하였다. 단백질의 동정은 MASCOT software (ver.2.2)를 사용하였고 여기에 필요한 유전자 데이터베이스는 NCBI의 S. pneumoniae R6와 D-39를 사용하였다. 단백질의 정량은 emPAI 계산법에 의해 농도를 계산하였고, Signal P, TMHMM, SecretomeP 등 프로그램을 이용하여 동정 단백질의 특성을 분석하였다. 3가지의 병원성 폐렴연쇄상구균 임상균을 혼합균주로 사용한 분비 단백질에서 33개의 세포벽 단백질 (cell wall proteins)과 세포외 단백질 (extracellular protein)을 확인하였으며, 이를 표 1에 나타내었다. 그 외 30여개의 막단백질과 200여개의 세포질 단백질도 확인하였다.
폐렴연쇄상구균 혼합균주에서 확인한 cell wall proteins과 extracellular protein
SignalP
Accession No. Protein name
발굴 단백질		 Cell locat by LocateP
세포내 위치		 NN TMM MW
분자량		 pI
등전점		 emPAI
gi|15902605 cell wall-associated serine proteinase precursor PrtA Cell Wall Y Y 240290 5.84 0.134
gi|15902119 cell wall surface anchor family protein Cell Wall Y Y 123326 5.36 0.376
gi|15902609 beta-galactosidase precursor Cell Wall N Y 246632 5.81 0.025
gi|15902484 endo-beta-N-acetylglucosaminidase, putative Cell Wall Y Y 182996 5.24 0.032
gi|15902330 hyaluronate lyase precursor (hyaluronidase/hyase) Cell Wall Y Y 122101 5.77 0.038
gi|15903579 sialidase A precursor (neuraminidase A) Cell Wall N Y 114671 5.98 0.050
gi|15902127 ABC transporter substrate-binding protein Extracellular Y Y 57190 5.94 0.092
gi|15902703 branched chain amino acid ABC transporter amino acid-binding protein Extracellular Y Y 40389 5.29 0.628
gi|15903801 transcriptional regulator Extracellular Y Y 37543 5.11 0.147
gi|15902371 ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport Extracellular Y Y 72958 5 0.377
gi|15904062 general stress protein GSP-781 Extracellular Y Y 41672 5.85 0.449
gi|15903537 ABC transporter substrate-binding protein - manganese transport. Extracellular Y Y 34573 5.3 1.360
gi|15902928 foldase protein PrsA Extracellular Y Y 34419 5.04 2.384
gi|15903749 ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport Extracellular Y Y 72460 4.95 0.961
gi|15902598 hypothetical protein spr0554 Extracellular Y Y 26522 5.13 0.581
gi|15903916 hypothetical protein spr1875 Extracellular Y Y 40541 4.29 0.410
gi|15902101 beta-N-acetylhexosaminidase Extracellular Y Y 144695 5.09 0.116
gi|15902190 ABC transporter substrate-binding protein - amino acid transport Extracellular Y Y 30609 5.14 0.715
gi|15902791 hypothetical protein spr0747 Extracellular N Y 39481 5.46 2.412
gi|15902978 iron-compound ABC transporter, iron compound-binding protein Extracellular Y Y 37483 5.38 0.147
gi|15902975 hypothetical protein spr0931 Extracellular Y Y 35377 5.46 0.705
gi|15902723 peptidyl-prolyl cis-trans isomerase, cyclophilin-type Extracellular Y Y 28991 5.47 0.335
gi|15903959 maltose/maltodextrin ABC transporter, maltose/maltodextrin-binding protein Extracellular Y Y 45339 5.1 0.564
gi|15903396 amino acid ABC transporter amino acid-binding protein Extracellular Y Y 31000 4.83 0.185
gi|15903425 ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport Extracellular Y Y 72517 5.24 0.153
gi|15902875 choline binding protein E Extracellular Y Y 72073 5.29 0.084
gi|15904036 choline binding protein A Extracellular Y Y 79049 7.53 0.096
gi|15902950 adhesion lipoprotein Extracellular Y Y 34678 5.27 0.168
gi|15903474 1,4-beta-N-acetylmuramidase Extracellular Y Y 58644 6.07 0.136
gi|15903570 sugar ABC transporter, sugar-binding protein Extracellular Y Y 48273 5.31 0.123
gi|15904016 zinc ABC transporter zinc-binding protein Extracellular Y Y 56237 5.05 0.214
gi|15902952 pneumococcal histidine triad protein E precursor Extracellular Y Y 114555 5.55 0.047
gi|15903729 iron-compound ABC transporter, iron-compound-binding protein Extracellular Y Y 34841 5.55 0.142
실시예 3: 분비단백질을 이용한 항체 생산 및 항체의 역가 측정
3-1. 항체제작 및 혈청 분리 분비
단백질, 열처리한 균체 (Whole cell)를 항원으로 이용하여 항체를 제조하였다. 항원 (분비단백질, 열처리한 균체)의 양은 1mg이상을 사용하였다. 1차 주사는 Freund's complete adjuvant(SIGMA, USA)와 1:1로 섞고, 2차 주사는 incomplete adjuvant와 1:1로 섞어 수행하였다. 1차 주사 후 14일째 2차 주사를 하였고, 다시 14일 후에 토끼 귀에서 채혈을 하여 dot-blotting을 이용해 항체의 역가 (titer)를 측정 한 후 역가가 높을 때 채혈을 실시하였다. 채혈된 혈액은 37℃에서 1시간 반응하여 굳힌 다음, 4℃에서 overnight 하여 clotting을 확실하게 하여 4,000rpm으로 원심 분리하여 혈병을 제거하고 혈청을 얻었다.
3-2. 항체분리·정제
혈청에서 IgG를 분리하기 위해 1:1의 비율로 20mM Tris-HCl(pH 7.0)과 섞은 후 4℃에서 12,000rpm으로 10분 원심분리 하였다. 상등액을 HiTrap PROTEIN G column(GE, USA)에 통과 시킨 후, 0.1M glycine-HCl (pH 2.7) buffer를 이용하여 column에 붙어있는 IgG를 분리하였다. 이렇게 분리된 IgG 분획은 Viva spin(10 kDa)를 이용하여 buffer exchange를 실시하여 정제하였다.
3-3. 항체의 역가 측정
항체는 각각 1:500과 1:2,000으로 희석하여 dot blotting을 통해 분석하였다. 분비 단백질 유래 항체가 열처리 균체유래 항체에 비해 50배의 민감도를 가짐을 확인하였다 (도 1, 도2). 이를 통해 분비 단백질 내에 민감한 항체반응성을 가진 단백질이 포함되어 있음을 확인하였다.
실시예 4: 분비단백질을 활용한 이차원 전기영동과 western blotting 을 통한 강한 감도를 보이는 항원 단백질의 발굴
4-1. 분비단백질을 활용한 이차원 전기영동
분비 단백질들로부터 각 단위 단백질의 분리 및 항체 반응성을 측정하기 위해 이차원 전기영동을 수행하였다 (Yun et al., J Microbiol. 2006). 분비단백질 100㎍을 사용하여 1-DE는 IPGphor™ (Amersham Biosciences Co.)을 이용하여 수행하였으며, 2-DE는 DALT 2-D electrophoresis system (Hoefer Co.)을 이용하여 실시하였다. 그 결과 분비단백질에서 154개의 단백질이 확인되었다 (도3).
4-2. 2D gel 의 western blotting
이차원 젤에 전개된 분비 단백질은 PVDF막으로 옮긴 후 분비 단백질 유래 항체를 이용하여 웨스턴 블롯팅 (western blotting)을 실시하였다. 웨스턴 블롯팅 결과 signal이 강한 단백질을 선별하여 동정하였다. 발굴 단백질의 동정은 In-gel digestion 이후 MALDI TOF/TOF를 이용하여 수행하였다. 웨스턴 블롯팅 결과 1:4,000으로 희석한 항체를 사용하였을 때 signal이 강한 단백질이 54개가 확인되었고 이를 선별하여 동정하였다. 그 결과를 하기의 표2에 나타내었다.
Spot No Gene No. Description of identified protein
(발굴된 단백질)		 MW(Da)
(분자량)		 pI
(등전점)		 SignalP Location
(세포내위치)
1 spr0530 Fructose-bisphosphate aldolase 31382 5 N Cytoplasmic
2 spr2045 Serine protease 42262 6.15 Y Membrane
3 spr1682 Glutamyl aminopeptidase 37995 5.46 N Cytoplasmic
4 spr1866 Zinc-containing alcohol dehydrogenase 38067 5.24 N Cytoplasmic
5 spr1867 N-acetylglucosamine-6-phosphate deacetylase 41671 5.11 N Cytoplasmic
6 spr2021 General stress protein GSP-781 41672 5.85 Y Extracellular
7 spr1882 Glucose-6-phosphate isomerase 49847 5 N Cytoplasmic
8 spr0444 Glutamine synthetase, type I 50290 4.93 N Cytoplasmic
9 spr1707 ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport 72460 4.95 Y Extracellular
10 spr0907 Pneumococcal histidine triad protein D precursor 95168 5.22 Y Membrane
11 spr0581 Zinc metalloprotease 210928 5.3 Y Membrane
12 spr0530 Fructose-bisphosphate aldolase 31382 5 N Cytoplasmic
15 spr2045 Serine protease 42262 6.15 Y Membrane
16 spr1036 Phosphopyruvate hydratase 47074 4.7 N Cytoplasmic
17 spr1882 Glucose-6-phosphate isomerase 49847 5 N Cytoplasmic
18 spr0444 Glutamine synthetase, type I 50290 4.93 N Cytoplasmic
19 spr0444 Glutamine synthetase, type I 50290 4.93 N Cytoplasmic
20 spr0706 Aminopeptidase N 95291 4.79 N Cytoplasmic
21 spr0455 Molecular chaperone DnaK 64772 4.63 N Cytoplasmic
22 spr1491 Endopeptidase O 71870 4.72 N Cytoplasmic
23 spr0581 Zinc metalloprotease 210928 5.3 Y Membrane

Claims (6)

  1. cell wall-associated serine proteinase precursor PrtA (gi:15902605), cell wall surface anchor family protein (gi:15902119), beta-galactosidase precursor (gi:15902609), endo-beta-N-acetylglucosaminidase (gi:15902484), hyaluronate lyase precursor (hyaluronidase/hyase, gi:15902330), sialidase A precursor (neuraminidase A, gi:15903579), ABC transporter substrate-binding protein (gi:15902127), branched chain amino acid ABC transporter amino acid-binding protein (gi:15902703), transcriptional regulator (gi:15903801), ABC transporter substrate-binding protein- oligopeptide transport (gi:15902371), general stress protein GSP-781 (gi:15904062), ABC transporter substrate-binding protein - manganese transport (gi:15903537), foldase protein PrsA (gi:15902928), ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport (gi:15903749), hypothetical protein spr0554 (gi:15902598), hypothetical protein spr1875 (gi:15903916), beta-N-acetylhexosaminidase (gi:15902101), ABC transporter substrate-binding protein - amino acid transport (gi:15902190), hypothetical protein spr0747 (gi:15902791), iron-compound ABC transporter, iron compound-binding protein (gi:15902978), hypothetical protein spr0931 (gi:15902975), peptidyl-prolyl cis-trans isomerase, cyclophilin-type (gi:15902723), maltose/maltodextrin ABC transporter, maltose/maltodextrin-binding protein (gi:15903959), amino acid ABC transporter amino acid-binding protein (gi:15903396), ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport (gi:15903425), choline binding protein E (gi:15902875), choline binding protein A (gi:15904036), adhesion lipoprotein (gi:15902950), 1,4-beta-N-acetylmuramidase (gi:15903474), sugar ABC transporter, sugar-binding protein (gi:15903570), zinc ABC transporter zinc-binding protein (gi:15904016), pneumococcal histidine triad protein E precursor (gi:15902952), iron-compound ABC transporter, iron-compound-binding protein (gi:15903729), Fructose-bisphosphate aldolase (gene no. spr0530), Serine protease (gene no. spr2045), Glutamyl aminopeptidase (gene no. spr1682), Zinc-containing alcohol dehydrogenase (gene no. spr1866), N-acetylglucosamine-6-phosphate deacetylase (gene no. spr1867), Glucose-6-phosphate isomerase (gene no. spr1882), Glutamine synthetase, type I (gene no. spr0444), Pneumococcal histidine triad protein D precursor (gene no. spr0907), Zinc metalloprotease (gene no. spr0581), Phosphopyruvate hydratase (gene no. spr1036), Aminopeptidase N (gene no. spr0706), Molecular chaperone DnaK (gene no. spr0455), Endopeptidase O (gene no. spr1491)의 단백질들로 이루어진 그룹 중에서 하나 이상 선택되는, 폐렴 진단용 마커.
  2. cell wall-associated serine proteinase precursor PrtA (gi:15902605), cell wall surface anchor family protein (gi:15902119), beta-galactosidase precursor (gi:15902609), endo-beta-N-acetylglucosaminidase (gi:15902484), hyaluronate lyase precursor (hyaluronidase/hyase, gi:15902330), sialidase A precursor (neuraminidase A, gi:15903579), ABC transporter substrate-binding protein (gi:15902127), branched chain amino acid ABC transporter amino acid-binding protein (gi:15902703), transcriptional regulator (gi:15903801), ABC transporter substrate-binding protein- oligopeptide transport (gi:15902371), general stress protein GSP-781 (gi:15904062), ABC transporter substrate-binding protein - manganese transport (gi:15903537), foldase protein PrsA (gi:15902928), ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport (gi:15903749), hypothetical protein spr0554 (gi:15902598), hypothetical protein spr1875 (gi:15903916), beta-N-acetylhexosaminidase (gi:15902101), ABC transporter substrate-binding protein - amino acid transport (gi:15902190), hypothetical protein spr0747 (gi:15902791), iron-compound ABC transporter, iron compound-binding protein (gi:15902978), hypothetical protein spr0931 (gi:15902975), peptidyl-prolyl cis-trans isomerase, cyclophilin-type (gi:15902723), maltose/maltodextrin ABC transporter, maltose/maltodextrin-binding protein (gi:15903959), amino acid ABC transporter amino acid-binding protein (gi:15903396), ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport (gi:15903425), choline binding protein E (gi:15902875), choline binding protein A (gi:15904036), adhesion lipoprotein (gi:15902950), 1,4-beta-N-acetylmuramidase (gi:15903474), sugar ABC transporter, sugar-binding protein (gi:15903570), zinc ABC transporter zinc-binding protein (gi:15904016), pneumococcal histidine triad protein E precursor (gi:15902952), iron-compound ABC transporter, iron-compound-binding protein (gi:15903729), Fructose-bisphosphate aldolase (gene no. spr0530), Serine protease (gene no. spr2045), Glutamyl aminopeptidase (gene no. spr1682), Zinc-containing alcohol dehydrogenase (gene no. spr1866), N-acetylglucosamine-6-phosphate deacetylase (gene no. spr1867), Glucose-6-phosphate isomerase (gene no. spr1882), Glutamine synthetase, type I (gene no. spr0444), Pneumococcal histidine triad protein D precursor (gene no. spr0907), Zinc metalloprotease (gene no. spr0581), Phosphopyruvate hydratase (gene no. spr1036), Aminopeptidase N (gene no. spr0706), Molecular chaperone DnaK (gene no. spr0455), Endopeptidase O (gene no. spr1491)로 이루어진 그룹 중에서 선택되는, 하나 이상의 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 폐렴 진단용 조성물.
  3. cell wall-associated serine proteinase precursor PrtA (gi:15902605), cell wall surface anchor family protein (gi:15902119), beta-galactosidase precursor (gi:15902609), endo-beta-N-acetylglucosaminidase (gi:15902484), hyaluronate lyase precursor (hyaluronidase/hyase, gi:15902330), sialidase A precursor (neuraminidase A, gi:15903579), ABC transporter substrate-binding protein (gi:15902127), branched chain amino acid ABC transporter amino acid-binding protein (gi:15902703), transcriptional regulator (gi:15903801), ABC transporter substrate-binding protein- oligopeptide transport (gi:15902371), general stress protein GSP-781 (gi:15904062), ABC transporter substrate-binding protein - manganese transport (gi:15903537), foldase protein PrsA (gi:15902928), ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport (gi:15903749), hypothetical protein spr0554 (gi:15902598), hypothetical protein spr1875 (gi:15903916), beta-N-acetylhexosaminidase (gi:15902101), ABC transporter substrate-binding protein - amino acid transport (gi:15902190), hypothetical protein spr0747 (gi:15902791), iron-compound ABC transporter, iron compound-binding protein (gi:15902978), hypothetical protein spr0931 (gi:15902975), peptidyl-prolyl cis-trans isomerase, cyclophilin-type (gi:15902723), maltose/maltodextrin ABC transporter, maltose/maltodextrin-binding protein (gi:15903959), amino acid ABC transporter amino acid-binding protein (gi:15903396), ABC transporter substrate-binding protein - oligopeptide transport (gi:15903425), choline binding protein E (gi:15902875), choline binding protein A (gi:15904036), adhesion lipoprotein (gi:15902950), 1,4-beta-N-acetylmuramidase (gi:15903474), sugar ABC transporter, sugar-binding protein (gi:15903570), zinc ABC transporter zinc-binding protein (gi:15904016), pneumococcal histidine triad protein E precursor (gi:15902952), iron-compound ABC transporter, iron-compound-binding protein (gi:15903729) , Fructose-bisphosphate aldolase (gene no. spr0530), Serine protease (gene no. spr2045), Glutamyl aminopeptidase (gene no. spr1682), Zinc-containing alcohol dehydrogenase (gene no. spr1866), N-acetylglucosamine-6-phosphate deacetylase (gene no. spr1867), Glucose-6-phosphate isomerase (gene no. spr1882), Glutamine synthetase, type I (gene no. spr0444), Pneumococcal histidine triad protein D precursor (gene no. spr0907), Zinc metalloprotease (gene no. spr0581), Phosphopyruvate hydratase (gene no. spr1036), Aminopeptidase N (gene no. spr0706), Molecular chaperone DnaK (gene no. spr0455), Endopeptidase O (gene no. spr1491)로 이루어진 그룹 중에서 선택되는, 하나 이상의 단백질을 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브를 포함하는 폐렴 진단용 조성물.
  4. 제 2항 또는 제 3항의 조성물을 포함하는 폐렴 진단용 키트.
  5. 제 4항의 키트를 검사하고자 하는 시료와 반응시키는 것을 특징으로 하는 폐렴 진단을 위한 정보 제공방법.
  6. 제 5항에 있어서, 상기 폐렴은 폐렴연쇄상구균에 감염되어 발병된 것을 특징으로 하는 정보 제공방법.

KR1020110050134A 2010-05-26 2011-05-26 폐렴연쇄상구균의 분비단백질을 포함하는 폐렴 진단용 조성물 KR101311886B1 (ko)

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