KR20110119483A - 메이스리그난 또는 육두구 추출물을 유효성분으로 하는 가려움증 완화 또는 피부손상 개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 메이스리그난 또는 육두구 추출물의 새로운 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 메이스리그난 또는 이의 염 또는 육두구 추출물을 유효성분으로 포함하는 가려움증 완화 또는 피부손상 개선용 식품 조성물, 화장료 조성물 및 가려움증 또는 피부손상 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 비만세포의 탈과립이나 히스타민의 분비를 현저하게 저해함으로써 가려움증을 완화하는 데에 효과적이며, 피부 손상 부위에 작용하여 정상 표피로 회복시키도록 하므로 매우 유용한 피부 손상 또는 가려움증 예방/치료/개선/경감용 조성물을 제공한다.

Description

메이스리그난 또는 육두구 추출물을 유효성분으로 하는 가려움증 완화 또는 피부손상 개선용 조성물{Composition for alleviating itchiness or improving skin wound comprising macelignan or nutmeg extract as an active ingredient}

본 발명은 메이스리그난 또는 육두구 추출물을 유효성분으로 하는 가려움증 완화 또는 피부손상 개선용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 메이스리그난 또는 이의 염 또는 육두구 추출물을 유효성분으로 포함하는 가려움증 완화 또는 피부손상 개선용 식품 조성물, 화장료 조성물 및 가려움증 또는 피부손상 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

미리스티카 프라그란스(Myristica fragrans)는 열대지방에서 재배되는 다년생 식물로서 메이스(mace)나 육두구(nutmeg)로 알려진 이것의 과실은 오래전부터 향신료로 이용되어 왔다. 메이스리그난(macelignan)은 미리스티카 프라그란스에서 발견되는 대표적인 리그난계 화합물로(Phytochemistry, 59: 169-173, 2002) 아폽토시스(apoptosis)를 유도하는 카스파제(caspase)-3 활성 증진작용(Biol. Pharm. Bull., 27: 1305-1307, 2004), 구강미생물에 대한 항균활성(대한민국특허 공개특허공보 10-2005-0035954), 뇌세포 지질 과산화 및 활성산소 생성 억제 효과(Biochem. Biophys. Res. Commu., 331: 1264-1269) 등이 보고되었다. 그러나 아직까지 메이스리그난 또는 이를 함유하는 육두구 추출물에 대해서 피부 손상의 치료나 가려움증의 치료/경감과 관련된 연구는 보고된 바가 없다.

손상 치유(wound healing)는 손상에 대한 조직의 반응이며, 조직회복의 과정으로 화학주성(chemotaxis), 세포의 분화(cell differentiation) 및 복제(replication), 기질 단백질(matrix protein)의 합성, 혈관신생, 손상의 재구성 등을 포함하는 복잡한 생물학적 과정으로 알려져 있다(Steed, D.L. et al., Clin. Plast. Surg. 25:397, 1998). 손상 치유 과정을 조절하는 대표적인 물질 중의 하나로 성장 인자(growth factor)들을 들 수 있는데, 이들은 손상 치유 과정 전반에 걸쳐 세포의 성장, 분화, 대사 등을 조절하고 손상 주변 환경 또한 조절하므로, 이를 이용한 치료제의 개발이 꾸준히 진행되고 있다. 이외에도 다양한 사이토카인(cytokine)들이 손상 치유에 관여한다고 알려져 있다. 예를 들면, TGF-β(transforming growth factor-β)가 있다. 상기 TGF-β는 여러 가지 세포들의 성장과 분화에 관여하는 물질로, 성장 조절, 면역반응의 조절, 골생성의 자극, 연골-특이적 고분자(cartilage-specific macromolecule)의 유도, 손상치유 촉진 등의 여러 가지 복잡한 기능을 한다고 보고된 바 있다(Bennett, N.T. et al., Am. J.Surg. 165: 728, 1993).

손상은 피부결손의 유무에 의해 두 종류로 나눌 수 있으며, 또한 피부결손의 유무에 의해 치유기전이 다르다. 대부분의 경미한 상해에서와 같이, 피부결손을 수반하지 않는 손상의 경우, 예를 들면, 표피(epidermis)만이 손상된 경우에는 각질 세포(keratinocyte)가 손상의 가장자리로부터 이동하여 결국 손상을 덮어서 표피 및 각질을 재형성시킨다(Knighton, D.R. and Fiegel, V.D., Invest. Radiol 26:604-611, 1991). 그러나, 피부의 모든 층이 손상되거나 파괴된 경우에는, 육아조직 (granulation tissue)이라고 불리는 새로운 결합 조직(connective tissue)이 손상 공간을 충진함과 동시에 손상부위의 주위로부터 재생하여 오는 표피로 손상 부위가 덮여져야 한다. 상기 육아조직은 손상 공간 내로 이동하는 섬유아세포에 의한 세포외 매트릭스 성분(extracellular matrix component), 예를 들어 콜라겐(collagen)의 침착에 의해 형성된다. 이와 같이 손상의 치유기전은 피부결손의 유무에 의해 크게 다르다. 성공적인 손상치유를 위해서는 손상치유의 전체 다단계 과정이 완료되어야만 한다. 손상 치유에 관계하는 성분들 중의 하나 또는 그 이상이 빠지면 치유는 일어나지 않으며, 피부는 복원되지 않고 손상은 노출된 채로 남게 된다. 이와 같이 노출된 손상은 쉽게 감염될 수 있게 되어 치유 과정을 더 지연시키고 피부 상에서 궤양(ulcer) 및 미란(erosion)의 형성을 야기시킬 수 있다. 따라서, 피부결손을 수반하는 손상에 있어서 육아조직의 증식 및 피부의 재생을 촉진시키는 약제의 개발이 요구되어 왔다.

가려움증이란 긁고 싶어하는 불쾌감을 유발하는 피부의 상태를 일컫는 것으로서, 가벼운 접촉, 온도변화, 스트레스 등의 자극이나 화학적, 물리적, 전기적인 자극으로 유발되며, 아토피와 접촉성 피부염과 같은 피부질환자나 민감성 피부 보유자의 증상으로도 동반된다. 아토피, 건선, 접촉성 피부염과 같이 외부 알러젠에 의해 발생하는 피부 질환 및 가려움은 T 세포, 대식세포 등의 신체내 특정 면역세포들이 활성화하여 TNF-a를 비롯한 여러 싸이토카인 및 가려움의 중재자인 히스타민의 분비를 유도하므로서 가려움증이 일어나는 것으로 알려져 있다(Br J Haematol, 1996; Cancer Biother, 1995). 특히, 히스타민은 가려움증을 매개하는 것으로 가장 잘 알려진 물질로서, 주로 비만세포(mast cell)로부터 유리된다.

이러한 가려움증을 치료하기 위한 요법들에는 국소 및 전신약제, 예를 들면 스테로이드, 항 히스타민제, 면역억제제 등이 사용되고 있으나, 경구투여로 인한 졸림, 면역력 저하 및 국소투여에 따른 피부에 대한 안전성 저하, 피부 외용제 조성물배합시의 안정성 불량 등의 문제점을 안고 있으므로, 그 사용이 제한되고 있다. 따라서, 인체에 부작용이 적으며 자극완화 효과가 있는 새로운 물질이 지속적으로 요구되고 있다.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

이에 본 발명자들은 가려움증이나 피부 손상에 효과적인 물질을 탐색하던 중, 비만세포 탈과립화의 바이오마커인 헥소아미니다아제와 히스타민이 메이스리그난과 육두구추출물 처리로 상당히 감소되며, 세포내로 들어 오는 Ca²⁺ 유입(influx)를 육두구추출물과 메이스리그난 처리에 의해 크게 억제됨을 확인하고, 피부 손상 치유에도 유효한 효과를 보임을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 메이스리그난 또는 육두구 추출물의 새로운 용도를 제공하는 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 메이스리그난 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 가려움증 완화 또는 피부손상 개선용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 메이스리그난 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 가려움증 완화 또는 피부손상 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 메이스리그난 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 가려움증 또는 피부손상 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 육두구(nutmeg) 추출물을 유효성분으로 포함하는 가려움증 완화 또는 피부손상 개선용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 육두구 추출물을 유효성분으로 포함하는 가려움증 완화 또는 피부손상 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 육두구 추출물을 유효성분으로 포함하는 가려움증 또는 피부손상 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 조성물은 메이스리그난, 육두구 추출물 또는 이들의 염을 유효성분으로 포함하며, 가려움증 완화, 경감, 억제 또는 피부손상의 개선, 치료에 효과를 가진다.

본 발명의 메이스리그난(macelignan)은 화학식 1의 구조를 가지며, 천연으로부터 분리 정제하거나, 상업적으로 구입하여 사용하거나 또는 당 업계에 공지된 화학적 합성법으로 제조할 수 있다.

바람직하게 본 발명의 메이스리그난은 천연으로부터 분리 정제될 수 있다. 더 바람직하게는, 미리스티카 프라그란스(Myristica fragrans)로부터 분리 정제될 수 있으며, 가장 바람직하게는 미리스티카 프라그란스의 육두구(nutmeg)나 가종피(aril)로부터 분리 정제될 수 있다. 또한 다른 육두구과 식물인 미리스티카 아르겐티아 워르브(Myristica argentea Warb)에서도 분리정제될 수 있으며(Nat. Prod. Lett., 16: 1-7, 2002), 후박나무(Machilus thunbergii)(Bio. Pharm. Bull., 27: 1305-1307, 2004), 레우카스 아스페라(Leucas aspera) 등에서도 분리정제될 수 있다(Chem. Pharm. Bull., 51: 595-598, 2003).

바람직하게는 본 발명의 메이스리그난은 육두구에서 당업계에 공지된 용매 추출법 및 크로마토그래피를 이용한 분리방법에 의해 분리, 정제될 수 있다.

육두구에서의 추출은 예를 들어, 물, 에탄올, 메탄올, 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol)과 같은 탄소수 1 내지 6개의 알코올, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 메틸렌클로라이드, 헥산, 시클로헥산, 석유에테르(petrolem ether), 디에틸에테르, 벤젠과 같은 유기용매 중에서 선택된 어느 하나 또는 이들의 혼합용매를 이용하여 추출할 수 있다. 바람직하게는, 물 또는 탄소수 1 내지 6개의 알코올을 사용하여 추출할 수 있다. 가장 바람직하게는, 본 발명의 메이스리그난은 메탄올 또는 에탄올을 용매로 이용하여 추출될 수 있다.

추출시의 육두구와 메탄올 또는 에탄올의 비율은 특별히 한정되지 않으나, 육두구 분말에 메탄올 또는 에탄올을 1배～20배(중량기준)로 첨가할 수 있다 바람직하게는, 추출효율을 증가시키기 위해서 육두구 분말에 대하여 메탄올 또는 에탄올을 2배～5배(중량기준)로 첨가할 수 있다.

추출시 온도는 상압 하의 실온에서 수행하는 것이 바람직하며 추출시간은 추출온도에 따라 다르지만, 6시간 내지 96시간, 바람직하게는 36시간 내지 72시간동안 추출한다. 또한, 추출시 교반기(shaker)로 교반할 경우에 더욱 추출효율을 증대시킬 수 있다.

추출에 사용되는 육두구는 수확한 후 세척하여 그대로 사용하거나 건조하여 사용할 수 있다. 건조방법으로는 양건, 음건, 열풍건조 및 자연 건조하는 방법을 모두 사용할 수 있다. 또한, 추출효율을 증대시키기 위해 육두구 또는 그 건체를 분쇄기로 분쇄하여 사용할 수 있다.

추출물에서 메이스리그난을 분리하는 것은 당업계에 공지된 크로마토그래피를 이용한 분리방법, 예를 들면, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피법을 이용하여 극성에 따른 분획물을 얻고 분리된 특정 분획물을 다시 역상컬럼 크로마토그래피법 및 고속액체크로마토그래피(HPLC)법을 통하여 메이스리그난을 분리할 수 있다.

바람직하게는, 본 발명의 메이스리그난은 건조된 육두구를 20 내지 40mesh의 크기로 분쇄한 다음 상기 육두구 분말에 메탄올을 3배로 첨가하고 48시간동안 상온에서 추출한다. 상기 추출액을 원심 분리하여 침전물을 제거하고 상등액을 회수함으로써 메이스리그난이 함유된 육두구 추출물을 제조할 수 있다. 상기 추출물을 에틸아세테이트, 부탄올, 물 층으로 분획하고 그 중 에틸아세테이트 분획물을 실리카겔 컬럼에 통과시킨 후 헥산과 에틸아세테이트를 10:1(v/v)로 혼합한 용매로 용출시킨 분획물을 제조하였다. 이를 다시 실리카겔 컬럼에 통과시킨 후 헥산과 에틸아세테이트를 20:1(v/v)로 혼합한 용매로 용출시킨 분획물을 제조한 다음, 이를 RP-18 컬럼에 통과시킨 후 80% 메탄올로 용출시켜 메이스리그난을 분리할 수 있다.

한편, 본 발명의 조성물은 육두구의 추출물을 포함할 수도 있으며, 추출용매 및 추출방법에 대해서는 상기 기재한 바와 같다.

본 발명의 조성물 또는 육두구 추출물내의 유효성분인 메이스리그난은 비만세포의 과립화나 히스타민의 분비를 억제하고, 손상된 피부를 빠르게 회복시키므로 가려움증 및 피부 손상의 치료에 효과적이며 이러한 점은 본 발명자들에 의해 처음으로 밝혀졌다.

피부가 손상을 입었을 때 손상 부위가 노출됨으로써 외부로부터 독소나 세균의 침입을 받게 되고, 이에 대한 신체의 방어 기능으로 염증이 유발된다. 따라서, 치료를 위해서는 손상 부위에 육아조직이 빨리 돋아나도록 조치하여야 함은 물론이고, 세균 감염이나 필요이상의 염증을 억제하는 일이 무엇보다도 중요하다. 그렇지 않으면 치유 기간이 연장될 뿐 아니라 큰 흉터가 남게 된다. 본 발명에 따른 메이스리그난, 육두구 추출물 또는 이들의 염은 피부 손상을 빨리 아물게 하는데 뛰어난 효과가 있다. 본 발명의 메이스리그난 또는 육두구 추출물은 상처부위 크기에 따라 적정량을 섭취, 투여 또는 도포할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서는 β-헥소아미니다아제 또는 히스타민의 분비에 대한 메이스리그난 또는 육두구추출물의 효과를 확인하였다. 그 결과, A23187에 의해서 증가된 β-헥소아미니다아제 또는 히스타민의 분비가 메이스리그난 또는 육두구 추출물의 처리에 의해서 현저하게 감소됨을 알 수 있었다. β-헥소아미니다아제는 탈과립화의 주된 지표이고, 히스타민은 염증성 반응을 일으켜 가려움증을 유발하는 성분 중의 하나인 점에 비추어 볼 때, 본 발명의 메이스리그난 또는 육두구 추출물이 가려움증을 완화하는 데에 효과적임을 알 수 있었다. 아울러, 비만세포의 탈과립화 메카니즘상 세포내에서 Ca이온이 반드시 필요하나, A23187과 더불어 처리시 세포에서 Ca이온의 흡수(uptake)를 현저히 저해함을 확인하여(A23187 5μM + 메이스리그난 5μM의 경우 A23187 5μM에 비해서 약 35% 감소, A23187 2μM + 메이스리그난 10μM의 경우 A23187 2μM에 비해서 약 45% 감소, A23187 2μM + 메이스리그난 20μM의 경우 A23187 2μM에 비해서 약 48% 감소, A23187 2μM + 육두구 추출물 10ppm의 경우 A23187 2μM에 비해서 약 18% 감소, A23187 2μM + 육두구 추출물 20ppm의 경우 A23187 2μM에 비해서 약 22% 감소, A23187 2μM + 육두구 추출물 40ppm의 경우 A23187 2μM에 비해서 약 33% 감소) 메이스리그난 또는 육두구 추출물이 가려움증을 완화하는 데에 효과적임을 알 수 있었다.

본 발명의 다른 실시예에서는 뒷목 부위에 가려움증을 동반하는 열상을 가지고 있는 44세의 남성을 대상으로 본 발명의 메이스리그난 크림의 상처 치료 효과를 확인하였다. 그 결과, 메이스리그난 크림의 사용 전에는 다수의 열상 부위가 있었고, 가려움증도 심하였는데 비해 메이스리그난 크림의 사용(5주)후에는 열상 부위도 정상 표피로 회복되었으며, 홍반도 확인되지 않았고, 가려움증도 거의 느끼지 않게 됨을 알 수 있었다.

따라서, 본 발명의 조성물은 가려움증 및 피부 손상의 예방, 완화, 경감, 치료 등에 탁월한 효능이 있음을 확인하였다.

본 발명의 조성물은 상술한 바와 같은 효능을 나타낼 뿐만 아니라, 천연물에서 유래한 추출물을 유효 성분으로 포함하고 있기 때문에, 인체에 대한 부작용이 합성 의약보다 극히 적다.

따라서 본 발명의 메이스리그난 또는 육두구 추출물 또는 이의 염은 가려움증 완화 또는 피부 손상의 개선을 위한 목적으로 식품 조성물의 형태로 제공될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food) 및 식품 첨가제(food additives) 등의 모든 형태를 포함한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당 업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.

예를 들면, 건강식품으로는 본 발명의 메이스리그난 또는 육두구 추출물 또는 이의 염 자체를 차, 주스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용하도록 하거나, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 본 발명의 메이스리그난 또는 육두구 추출물과 알레르기성 질환에 개선효과가 있다고 알려진 공지의 물질 또는 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.

또한, 기능성 식품으로는 음료(알코올성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지콘비이프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게티, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치이즈 등), 식용식물유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 본 발명의 메이스리그난 또는 육두구 추출물 또는 이의 염을 첨가하여 제조할 수 있다.

또한, 본 발명의 메이스리그난 또는 육두구 추출물 또는 이의 염을 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다. 이 때에 메이스리그난 또는 육두구 추출물은 최종적으로 제조된 식품 중 0.01 내지 50 중량%가 포함될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 메이스리그난 또는 육두구 추출물을 포함하는 가려움증 완화 또는 피부 손상 개선용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 화장료 조성물은 본 발명의 메이스리그난 또는 육두구 추출물 또는 이들의 염과 함께 화장료 조성물의 제조 분야에서 일반적으로 사용되는 하나 이상의 부형제 및 첨가제를 포함하여 당 분야의 공지의 방법에 따라 용이하게 제조될 수 있다.

보다 구체적으로 본 발명의 화장료 조성물은 본 발명의 메이스리그난, 육두구 추출물 또는 이들의 염을 유효성분으로 함유하며 피부학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 기초 화장품 조성물(화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 보디오일), 색조 화장품 조성물(화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 제품 조성물(샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤) 및 비누 등의 형태로 제조될 수 있다. 상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다.

예를 들면, 본 발명의 메이스리그난 또는 육두구 추출물을 포함하는 세안제 및 비누를 제조하는 경우에는 통상의 세안제 및 비누 베이스에 메이스리그난 또는 육두구 추출물을 첨가하여 용이하게 제조할 수 있다. 크림을 제조하는 경우에는 일반적인 수중유적형(O/W)의 크림베이스에 메이스리그난 또는 육두구 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등과 물성개선을 목적으로 한 단백질, 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연소재를 추가로 첨가할 수 있다.

상기 본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 메이스리그난 또는 육두구 추출물의 함량은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 50 중량% , 바람직하게는 0.01 내지 10 중량% 범위로 함유될 수 있다.

또한, 본 발명은 메이스리그난, 또는 육두구 추출물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 가려움증 또는 피부 손상 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

상기에서 “약학적으로 허용가능한 염”은 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여시 통상적인 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 말하며, 상기 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하다. 상기 유리산은 유기산과 무기산을 사용할 수 있다. 상기 유기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플로오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메타술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탄산 및 아스파르트산을 포함한다. 또한, 상기 무기산은 이에 제한되는 것은 아니나 염산, 브롬산, 황산 및 인산을 포함한다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용되는 담체와 함께 당업계에 공지된 방법으로 투여경로에 따라 다양하게 제형화될 수 있다.

일반적인 의약품의 형태로 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 메이스리그난에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제,시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 연고제, 크림제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사 주입방식 및 경피 투여 방식에 의한다. 주사 주입 방식의 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 메이스리그난을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여형으로 제제화한다. 투약 단위는, 예를 들면 개별 투약량의 1, 2, 3 또는 4배로, 또는 1/2, 1/3 또는 1/4배를 함유할 수 있다. 개별 투약량은 바람직하기로는 유효 약물이 1회에 투여되는 양을 함유하며, 이는 통상 1일 투여량의 전부, 1/2, 1/3 또는 1/4배에 해당한다. 경피 투여제의 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태가 포함된다. 상기에서 "경피 투여"는 약학적 조성물을 국소적으로 피부에 투여하여 약학적 조성물에 함유된 유효한 양의 활성성분이 피부 내로 전달되는 것을 의미한다.

본 발명의 메이스리그난 및 육두구 추출물의 유효 용량은 1회 복용량이 0.1 내지 1,000 mg/kg이고, 바람직하게는 20 내지 800 mg/kg이며, 하루 1 내지 3 회 투여될 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량 수준은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.

이들 제형은 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania)에 기술되어 있다.

그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., 1995, Mack Publishing Company, Easton, PA).

나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 천식, 아토피 피부염과 같은 알레르기성 질환을 예방 및 치료하는 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.

본 발명의 도면은 하기 설명을 참조할 수 있다.

도 1은 RBL-2H3세포로부터의 β-헥소아미니다아제의 분비에 대한 육두구추출물의 효과를 나타낸다. 세포는 서로 다른 농도의 육두구 추출물로 10분간 처리되었고, A23187에 의해 30분간 자극되었다. β-헥소아미니다아제가 상층액에 분비되었고, 세포 융해물을 측정하였다. 데이터는 3회의 실험으로부터 평균 ± 표준 편차로 산출되었다. *p<0.05, **p<0.01는 대조군과 비교하였다.

도 2는 RBL-2H3세포로부터의 히스타민의 분비에 대한 육두구추출물의 효과를 나타낸다. 세포는 서로 다른 농도의 육두구 추출물로 10분간 처리되었고, A23187에 의해 30분간 자극되었다. 히스타민은 히스타민 ELISA 분석 키트에 의해 검출되었다. 데이터는 3회의 실험으로부터 평균 ± 표준 편차로 산출되었다. *p<0.05, **p<0.01는 대조군과 비교하였다.

도 3은 RBL-2H3 세포에서 β-헥소아미니다아제의 분비에 대한 메이스리그난의 효과를 나타낸다. 세포는 각각 다른 농도의 메이스리그난으로 10분간 처리되었고, A23187에 의하여 30분간 자극되었다. β-헥소아미니다아제가 상층액으로 분비되고 세포 분리물을 측정하였다. 데이터는 3회의 실험으로부터 평균 ± 표준 편차로 산출되었다. *p<0.05, **p<0.01는 대조군과 비교하였다.

도 4는 RBL-2H3 세포에서 히스타민의 분비에 대한 메이스리그난의 효과를 나타낸다. 세포는 각각 다른 농도의 메이스리그난으로 10분간 처리되었고, A23187에 의하여 30분간 자극되었다. 히스타민은 히스타민 ELISA 분석 키트에 의해 검출되었다. 데이터는 3회의 실험으로부터 평균 ± 표준 편차로 산출되었다. *p<0.05, **p<0.01는 대조군과 비교하였다.

도 5는 피부 손상 치료에 대한 메이스리그난의 효과를 나타낸 것이다. 서울 소재 44세의 남성을 대상으로 하였고, 매일 1회 메이스리그난 크림을 상처 부위에 골고루 도포하였다. 사용후 가려움증도 현저하게 감소하였고, 피부 상태도 정상으로 돌아왔다.

이상 살펴본 바와 같이, 본 발명은 메이스리그난 또는 육두구 추출물의 피부 손상 또는 가려움증 경감, 치료용 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 비만세포의 탈과립이나 히스타민의 분비를 현저하게 저해함으로써 가려움증을 완화하는 데에 효과적이며, 피부 손상 부위에 작용하여 정상 표피로 회복시키도록 하므로 매우 유용한 피부 손상 또는 가려움증 예방/치료/개선/경감용 조성물을 제공한다.

도 1은 RBL-2H3세포로부터의 β-헥소아미니다아제의 분비에 대한 육두구추출물의 효과를 나타낸 것이다.
도 2는 RBL-2H3세포로부터의 히스타민의 분비에 대한 육두구추출물의 효과를 나타낸 것이다.
도 3은 RBL-2H3 세포에서 β-헥소아미니다아제의 분비에 대한 메이스리그난의 효과를 나타낸 것이다.
도 4는 RBL-2H3 세포에서 히스타민의 분비에 대한 메이스리그난의 효과를 나타낸 것이다.
도 5는 피부 손상 치료에 대한 메이스리그난의 효과를 나타낸 것이다.

이하. 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

<실험방법>

1. 식물 재료

건조된 미리스티카 프라그란스(Myristica fragrans Houtt)는 인도네시아 자카르타에서 채집하였고, 경희대학교 한약 재료 및 제조 학과(용인, 대한민국) 백남인 박사에 의해 동정되었다. 증빙 표본은 연세대학교 생명공학과에 기탁하였다.(서울, 대한민국)

2. 육두구 추출물 제조 및 메이스리그난의 분리

건조 분쇄한 육두구 100 g에 75% 메탄올 400 ㎖을 가하여 상온에서 이틀 동안 방치하였다. 추출된 용액을 여과하고 진공 농축하여 육두구 추출물(7 g)을 제조하였다.

상기 추출물을 에틸아세테이트, 부탄올, 물로 분획하였다. 에틸아세테이트 분획물(4.2 g)을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 헥산과 에틸아세테이트를 10:1(v/v)의 비율로 혼합한 용매로 용출시켜 분획물 Ⅲ(1 g)를 얻었다. 분획물 Ⅲ를 헥산과 에틸아세테이트 20:1(v/v)의 비율로 혼합한 용매로 컬럼 크로마토그래피하여 분획물 Ⅲ-B(0.52 g)을 얻었다. 이후, 분획물 Ⅲ-B를 Rp-18 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 80% 메탄올로 용출시켜 단일물질 분획 Ⅲ-B-2(0.5 g)을 얻었다.

상기 분리된 단일물질 Ⅲ-B-2의 구조를 결정하기 위하여 ¹H-NMR 스펙트럼과 ¹³C-NMR 스펙트럼을 각각 600MHz 와 150MHz(용매: DMSO)에서 측정하였다. ¹³C-NMR 스펙트럼과 ¹H-NMR 스펙트럼의 결과를 토대로 ¹H-¹H의 상관관계와 ¹H-¹³C의 상관관계를 측정하기 위하여 ¹H-¹H COSY 스펙트럼과 ¹H-¹³C HMBC 스펙트럼을 측정하였다.

상기 분리된 단일물질의 질량 분석을 위해 EI/MS로 측정한 결과, 본 화합물은 EI/MS에서 [M]+가 m/z 328에서 관측되어 분자량이 328로 판명되었고, 분자식은 C₂₀H₂₄O₄이었다.

아울러, 상기 분리된 단일물질 Ⅲ-B-2 20mg을 클로로포름(CHCl₃) 2ml에 녹인 후 Polarimeter(Automatic Polarimeter, APⅢ-589, Rodulph, NJ, USA)로 비선광도([α]D) 값을 측정한 결과 [α]D = +4.0 (CHCl3, c=1.0)으로 나타났다.

이상의 ¹H-NMR, ¹³C-NMR, ¹H-¹H COSY, ¹H-¹³C HMBC, EI/MS 및 [α]D 에 대한 결과와 기존에 발표된 연구보고(Woo, W.S. et al., Phytochemistry, 26: 1542-1543, 1987)를 비교 분석하여 동정한 결과, 분리된 단일 물질은 화학식 1로 표시되는 메이스리그난(macelignan, (8R, 8'S)-7-(3,4-methylenedioxyphenyl)-7'-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-8,8'-dimethylbutane))인 것으로 확인되었다.

3. 기기 장치

NMR 스펙트럼은 내부 표준에 따라 ¹H-600MHz와 TMS와 함께 CDCl₃의 ¹³C-NMR에서 Bruker Avance-500 분광계(Rheinstein, Germany)에 의하여 기록되었다. 완전한 양성자와 탄소 배치는 1D(¹H-, ¹³C-, ¹³C-DEPT)와 2D(¹H-¹H COSY, ¹H-¹³C HSQC, ¹H-¹³C HMBC) NMR 실험에 기초하였다. 질량 스펙트럼(FAB-MS)은 JMS-700(Jeol Ltd., 도쿄, 일본)을 사용하여 측정되었다.

4. 세포 배양

랫트의 호염기성 백혈병 세포주, RBL-2H3 세포는 한국세포주은행(KCLB 서울, 대한민국)으로부터 구입하였다. 세포는 10% FBS(소태아혈청)(Gibco, Rocksville, MD, U.S.A.)와 항생제(100 U/ml 페니실린A와 100 U/ml의 스트렙토마이신)을 첨가한 DMEM(Delbecco's Modified Eagle's Media)에서 5%CO₂/95%air를 함유한 습식배양기에 37℃에서 배양되었다. 세포는 매일 계대배양되었다.

5. β-헥소아미다아제의 측정

RBL-2H3 세포는 24웰 미세적정판에 1ml의 DMEM 배지에서 세포가 부착되도록 6시간동안 웰 당 1×10⁶개씩 배양되었다. 메이스리그난을 처리하기 전에, DMEM 배지는 PIPES 완충액(119mM NaCl, 5mM KCl, 5.6mM 글루코오스, 0.4mM MgCl₂, 2.5mM PIPES(piperazin-N'N-bis(2-ethanesulfonic acid)), 0.1% BSA(Bovine srum albumin) 및 pH 7.2의 40mM NaOH)으로 바꾸고, 200㎕의 PIPES 완충액에서 메이스리그난과 함께 추가로 37℃에서 10분동안 배양하였다. 탈과립 조사를 위하여, 비만세포에서 칼슘 이온 수준을 증가시키는 칼슘 이온 투과 담체 A23187을 30분 동안 처리하였다. 1 mM의 30㎕ p-니트로페닐-N-아세틸-β-D-글루코사이니드 (p-nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosaminide)가 있는 0.1M 시트르산 나트륨(pH 4.5)과 비만세포의 상층액을 혼합하고 37℃에서 1시간동안 배양하였다. 배양의 마지막 단계에, 0.1M 시트르산 나트륨(pH 4.5)을 포함하는 탄산염 완충액 250㎕를 추가하고, 37℃에서 1시간동안 배양하였다.

6. 히스타민의 측정

RBL-2H3 세포는 24웰 미세적정판에 1ml의 DMEM 배지에서 세포가 부착되도록 6시간동안 웰당 1×10⁶개씩 배양되었다. A23187로 37℃에서 30분동안 RBL-2H3 세포를 자극한 후에 상층액을 분리하고, 제조사의 지침에 따라 상층액에 포함된 히스타민 함유물을 ELISA 키트(ICN Phamaceutical, Costa, Mesa, CA, U.S.A.)를 사용하여 확인하였다. 세포는 0.05% Triton X-100에 용해되고, 추출물의 히스타민을 측정하였다.

7. 피부도포용 크림의 제조

크림의 제조는 스테아릴 알코올(stearyl alcohol) 및 화이트 바세린(white vaselin), 메이스리그난(macelignan) (또는 육두구 추출물(nutmeg extract))를 75℃로 한 비이커에 중탕으로 가온하고 다른 비이커엔 트윈 80(tween 80), 프로필렌 글리콜(propylene glycol), 정제수를 중탕 가온한 다음 호모믹서(homomixer)로 균질하게 혼합하여 냉장하였다. 각 재료에 대한 비율은 하기 표 1과 같다.

Praparation	Low (%)	High (%)
Stearyl alcohol	20	20
White vaselin	10	10
Tween 80	3.5	3.5
Propylene glycol	10	10
Distilled water	56	55
Macelignan/Nutmeg extract	0.5	1.5
Total	100	100

8. 통계

3번의 독립된 실험이 시행되었다. 모든 데이터는 평균 ± 표준 편차로 산출되었다. 결과 분석은 일원변량분석(ANOVA)을 사용하여 산출되었다. 또한 처리군과 대조군의 차이는 Duncan test(SPSS 12.0)에 의하여 분석되었다. *p<0.05, **p<0.01는 통계학적으로 유의하게 관찰되었다.

<실험결과>

1. RBL -2 H3 세포로부터 분비되는 β- 헥소아미니다아제에서 육두구추출물의 효과

β-헥소아미니다아제는 탈과립화의 주된 지표이다. (Ishihara Y., Furuno T., Nakanishi M. (2006) RBL-2H3 세포의 탈과립화에서 포스파티딜이노시톨 4-키나아제 Ⅱ 알파 형의 역할. Inflamm. Ras. 5, 465-468) β-헥소아미니다아제의 분비에 대한 육두구 추출물의 조절 효과를 확인하기 위해 RBL-2H3 세포를 서로 다른 농도의 육두구 추출물로 10분간 처리되었고, A23187(10㎕)을 30분간 처리하였다. β-헥소아미니다아제가 상층액에 분비되었고, 세포 용해물을 측정하였다.

그 결과, 도 1에서 보듯이, A23187은 현저하게 β-헥소아미니다아제의 분비를 증가시키고, 육두구추출물(5, 10, 20/ml)은 β-헥소아미니다아제의 분비를 현저하게 억제함을 확인할 수 있었다. A23187이 처리된 대조군과 비교하여 억제율은 약 25%이었다.

2. RBL -2 H3 세포로부터 분비되는 히스타민에 대한 육두구추출물의 효과

히스타민은 염증성 반응을 일으켜 가려움증을 유발하는 성분 중의 하나이다.(Jeffery P.K. and Haahtela T. (2006) 알레르기성 비염과 천식: 하나의 질환 군 조건에서의 염증. BMC Pulm. Med. 30, 1-5) 히스타민 분비에 대한 육두구 추출물의 효과를 RBL-2H3 비만세포에서 확인하였다. 각 세포를 서로 다른 농도의 육두구 추출물로 10분간 처리하였고, A23187(10㎕)을 30분간 처리하였다. 상층액의 히스타민 농도를 ELISA를 사용하여 분석하였다.

그 결과 도 2에서 보듯이, 육두구추출묵(5, 10, 20 /ml)은 용량 의존적인 형태로 히스타민의 분비를 감소시켰다. 억제율은 A23187을 처리한 대조군과 비교하여 약 20%이었다.

3. RBL -2 H3 세포로부터 β- 헥소아미니다아제 분비에 대한 메이스리그난의 효과

β-헥소아미니다아제의 분비에 대한 메이스리그난의 조절 효과를 확인하기 위해 RBL-2H3 세포를 서로 다른 농도의 육두구 추출물로 10분간 처리되었고, A23187(10㎕)을 30분간 처리하였다. β-헥소아미니다아제가 상층액에 분비되었고, 세포 용해물을 측정하였다.

그 결과, 도 3에서 보듯이, A23187은 처리되지 않은 RBL-2H3과 비교하여 현저하게 β-헥소아미니다아제의 분비를 증가시켰고, 메이스리그난(5, 10, 20 )은 현저하게 β-헥소아미니다아제를 억제하였다. 억제율은 A23187이 처리된 대조군과 비교하여 약 25%이었다.

4. RBL -2 H3 세포로부터 히스타민 분비에 대한 메이스리그난의 효과

히스타민 분비에 대한 육두구 추출물의 효과를 RBL-2H3 비만세포에서 확인하였다. 각 세포를 서로 다른 농도의 육두구 추출물로 10분간 처리하였고, A23187(10㎕)을 30분간 처리하였다. 상층액의 히스타민 농도를 ELISA를 사용하여 분석하였다.

그 결과, 도 4에서 보듯이, A23187은 처리되지 않은 RBL-2H3과 비교하여 현저하게 히스타민의 분비를 증가시켰고, 메이스리그난(5, 10, 20 )은 현저하게 히스타민을 억제하였다. 억제율은 A23187이 처리된 대조군과 비교하여 약 25%이었다.

5. 메이스리그난 크림의 상처치료 효과

뒷목 부위에 가려움증을 동반하는 열상을 가지고 있는 44세의 남성을 대상으로 본 발명의 메이스리그난 크림의 상처 치료 효과를 확인하였다.

그 결과, 도 5에서 보듯이, 메이스리그난 크림의 사용 전에는 다수의 열상 부위가 있었고, 가려움증도 심하였는데 비해 메이스리그난 크림의 사용(5주)후에는 열상 부위도 정상 표피로 회복되었으며, 홍반도 확인되지 않았고, 가려움증도 거의 느끼지 않게 됨을 알 수 있었다.

이상 살펴본 바와 같이, 본 발명은 메이스리그난 또는 육두구 추출물의 피부 손상 또는 가려움증 경감, 치료용 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 비만세포의 탈과립이나 히스타민의 분비를 현저하게 저해함으로써 가려움증을 완화하는 데에 효과적이며, 피부 손상 부위에 작용하여 정상 표피로 회복시키도록 하므로 매우 유용한 피부 손상 또는 가려움증 예방/치료/개선/경감용 조성물을 제공한다.

Claims (6)

1. 하기 화학식 1로 표시되는 메이스리그난 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 가려움증 완화 또는 피부손상 개선용 식품 조성물.
   <화학식 1>
   

   

   
   
2. 화학식 1로 표시되는 메이스리그난 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 가려움증 완화 또는 피부손상 개선용 화장료 조성물.
   
3. 화학식 1로 표시되는 메이스리그난 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 가려움증 또는 피부손상 치료용 약학적 조성물.
   
4. 육두구(nutmeg) 추출물을 유효성분으로 포함하는 가려움증 완화 또는 피부손상 개선용 식품 조성물.
   
5. 육두구 추출물을 유효성분으로 포함하는 가려움증 완화 또는 피부손상 개선용 화장료 조성물.
   
6. 육두구 추출물을 유효성분으로 포함하는 가려움증 또는 피부손상 치료용 약학적 조성물.

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