KR20110117540A - 지유 추출물을 유효성분으로 함유하는 헬리코박터 감염 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강식품 - Google Patents

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이현아
김윤철
정길생
오홍근
박상호
홍선화
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Abstract

본 발명은 지유 추출물을 유효성분으로 포함하는 헬리코박터 세균 감염 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 건강식품에 관한 것이다. 본 발명의 약학 조성물 및 건강식품은 장기간 식품으로 사용되어 안전성이 보장된 천연 식물 중에서 헬리코박터 세균에 대해 항균활성을 가지는 것을 선택하여 개발한 것으로 내성과 부작용의 위험이 적고 인체에 저독성으로 안전하여, 헬리코박터 세균 감염 질환의 예방 또는 치료용으로 사용하기에 적합하다.

Description

지유 추출물을 유효성분으로 함유하는 헬리코박터 감염 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강식품 {A pharmaceutical composition for prevention or treatment of diseases related to Helicobacter infection comprising extracts of Sanguisorba officinalis as an effective component and a health food}
본 발명에서는 지유추출물을 유효성분으로 하는 헬리코박터 감염 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강식품에 제공하고자 한다.
헬리코박터 파이로리는 1983년 호주인 위염환자의 위장 생검조직에서 처음으로 분리, 동정되었다 (참조 : Warren, J. R. and Marshall, B. J., Lancet, 1 : 1273-1275(1983)). 인간에 기생하는 헬리코박터 파이로리 (Helicobacter pylori)는 미호기성의 그람음성 세균으로써, 몇 개의 편모를 가지고 있는 나선형 세균이며, 최적 산소분압은 2~8%이고 CO2 조건하에서 배양할 수 있으며 증식 속도가 느리고 움직임이 빠른 것이 특징이다.
이 세균의 가장 중요한 미생물학적 특성 중의 하나는 강력한 요소분해효소인 우레아제 (urease)생성능으로, 이는 세균이 위장점막에서 살아가는 데 필수적인 구성 성분이다. 우레아제 (urease)는 위액내의 요소 (H2NCONH2, urea) 1 분자를 가수분해하여 2분자의 암모니아 (NH3)를 형성한다. 우레아제가 인체 위장관 표피 세포에 헬리코박터 파이로리균을 감염시키고, 콜로니화 (colonization)를 돕는 것에 대한 밀접한 관련성이 보고되어 있다. 구체적으로, 우레아제를 불활성시킨 헬리코박터 파이로리 균주는 위점막세포에서 콜로니화하지 못하며, 우레아제 활성이 헬리코박터 파이로리의 콜로니화에 필수적이라는 보고가 있으며 (Eaton K.A., et al., Infect Immun., 59, pp2470-2475, 1991), 헬리코박터 파이로리 우레아제에 의해 생성된 암모니아는 위액내 pH를 증가시키고, 위 점액층을 손상시키며 (Sidebotham R.L., et al., J. Clin.Pathol., 44, pp52-57, 1991), 암모니아 자체가 위점액층 세포의 산소 소비와 미토콘드리아의 ATP 생성을 저해하고 (Tsujii M., et al., Gastroenterology, 102, pp1881-1888, 1992), 궁극적으로 암모니아는 모노클로로아민 (monochloroamine)을 형성하여 반응성 산소종 (reactive oxygen species)을 생성하기 때문에 세포 손상을 유발하여 만성염증을 일으키고, 나아가 DNA 손상을 일으켜 암발생 과정을 촉진시킨다는 보고가 있다 (Hahm K.B., et al., Am. J.Gastroenterol., 92, pp1853-1857, 1997).
또한 헬리코박터에 존재하는 어드헤신 (Adhesin)은 점막 표면에 감염을 일으키는 많은 종류의 세균에서 관찰되는 균체성분이다. 헬리코박터 파이로리의 어드헤신 (Adhesin) 성분으로는 사이알릭산- 특이적 헤마글루티닌 (sialic acid-specific hemagglutinin)과 리피드 결합 어드헤신 (lipid-binding adhesin) 등이 보고되어 있으며, 이들 어드헤신이 헬리코박터 파이로리를 위점막 상피세포에 정착 (colonization)시킴으로써 위점막의 염증유발에 중요한 역할을 한다고 알려져 있다.
헬리코박터의 전염은 동물 또는 인간을 통하거나, 의료행위시 부주의 또는 식품 등의 다양한 경로를 통하여 이루어지만 (Dunn, B. E., Cohen, H., and Blaser, M. J. (1997). Clinical Microbiology Reviews, 10 (4), 720-7; Kodaira, M.S., Escobar, A. M. U., & Grisi, S. (2002) Revista de Sade Pade Pblica.36: 356-369), 일단 감염되고 나면 쉽게 박멸되지 않는다.
헬리코박터 파이로리는 인간에게 특이적이며 위장 내의 특정 장소에서 주로 발견되는데, 소화성 궤양 (예를 들면, 위궤양 또는 십이지장 궤양 등), 염증 (예를 들면, 위염 등), 위암 등의 소화관 상부의 질환, MALT (점막-관련 임파조직 (mucosaassociated lymphoid tissue)) 임파종의 병인 또는 만성 심장 질환의 배경 병원성 인자라고 한다. 현재, 헬리코박터 파이로리 감염증 치료에 관한 연구는 활발히 이루어지고 있으며, 그의 치료법으로서는 제거를 목적으로 한 것, 재발 방지를 목적으로 한 것 등 하기와 같이 다수 보고되어 있다.
이러한 헬리코박터 파이로리의 대표적인 치료방법의 일례로는, 테트라사이클린 (tetracycline), 아목시실린 (amoxicillin), 메트로니다졸 (metronidazole) 및 클라리트로마이신 (clarithromycin) 등이 항생제 투여, 수소이온펌프 억제제 및 3종의 약물치료 (삼제요법)등이 있다. 삼제요법은 2종이 항생제와 비스무스 (bismuth) 또는 수소이온펌프 억제제를 처리하는 방법으로, 높은 박멸율로 인하여 헬리코박터와 관련된 위십이지장궤양 질병에 적용되고 있다 (Lind, T., et al., (1996) Helicobacter 1: 138-144). 그러나 삼재요법에 의한 헬리코박터 파이로리의 박멸이 항상 성공적인 것은 아니며, 이러한 약제들의 반복사용은 부작용을 야기하는 것으로 보고되고 있다 (Borody, T. J., Shortis, N.P., Chongnan, J., Reyes, E., and O'Shea, J.E.,(1996), Eradication failure (EF) after H.pylori treatment-further therapies. Gastroenterology 110:A67; Dunn et al., 1997). 즉, 삼재요법은 약 50%의 환자에서 가벼운 부작용을 야기하며, 10% 정도의 여성에게서 질 감염증을 유발한다 (Borody, T. J., Shortis, N.P., Chongnan, J., Reyes, E., and O'Shea, J.E., 1996, Eradication failure (EF) after H.pylori treatment-further therapies. Gastroenterology 110:A67). 또한 항생제의 지속적인 사용은 내성균주 출현을 유발하며 (DKarim, Q. N., & Maxwell, R. H. (1989). Journal of Clinical Pathology. 42(7): 778), 그외 장내세균과 같은 불특정 생물체에 대한 부작용을 야기시킬 수 있다 (Ahn, Y. J., et al., (2000) J. Agric. Food Chem. 48, 2744-2748;Zoppi, G., et al., (2001) Curr. Ther. Res. Clin. E. 62, 418-43).
또한, 현재까지 사람과 동물에서 분리되는 헬리코박터 파이로리와 유사한 세균으로 헬리코박터 파이로리 (Helicobacter pylori), 헬리코박터 카니스 (Helicobacter canis), 헬리코박터 시내디 (Helicobacter cinaedi), 헬리코박터 헤일마니 (Helicobacter heilmannii), 헬리코박터 펠리스 (Helicobacter felis), 헬리코박터 무스틸레 (Helicobacter mustelae), 헬리코박터 페넬리에 (Helicobacter fenelliae), 헬리코박터 라피니 (Helicobacter rappini), 헬리코박터 헤파티쿠스 (Helicobacter hepaticus), 헬리코박터 빌리스 (Helicobacter bilis), 헬리코박터 풀로룸 (Helicobacter pullorum) 등이 알려져 있다.
상기와 같이, 헬리코박터가 소화궤양, 위암 등 각종 질환을 유발하는 심각한 결과와 막대한 경제적 손실을 초래함에도 불구하고, 치료하는 데 직면하는 난점들, 즉 헬리코박터균은 위장점막의 표면이나 위의 점액에 존재하므로 치료 약물이 균이 있는 곳까지 충분히 도달하지 못하는 경우가 많고, 상기 치료법들은 투여 횟수의 빈도가 빈번하고, 상용량 이상의 대량 투여를 필요로 하는 경우가 있으며, 약품 투여에 의한 설사·변비 등의 증상 발생, 내성균의 발생 등이 많아 현재 헬리코박터를 효과적으로 예방할 수 있는 방법이 국내외적으로 전무한 상태이다.
따라서, 인체에 저독성으로 무해하며 헬리코박터에 대한 항균활성을 가짐과 동시에 합성화합물로 이루어진 항생제 사용으로 인한 내성 및 부작용을 방지할 수 있는 새로운 기전의 예방 또는 치료 조성물의 개발이 요구되고 있다.
종래의 헬리코박터 세균 치료제는 주로 합성화합물로 이루어진 항생제로서 장기간 사용시 내성과 심각한 부작용이 유발되었다. 본 발명에서는 장기간 식품으로 사용되어 안전성이 보장된 천연 식물 중에서 헬리코박터 세균에 대해 항균활성을 가지는 것을 선택함으로, 내성과 부작용의 위험이 적고 인체에 저독성으로 안전한 헬리코박터 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강식품을 개발하고자 한다.
상기와 같은 본 발명의 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 지유 추출물을 유효성분으로 포함하는 헬리코박터 감염 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 헬리코박터는 헬리코박터 파이로리 (Helicobacter pylori), 헬리코박터 카니스 (Helicobacter canis), 헬리코박터 시내디 (Helicobacter cinaedi), 헬리코박터 헤일마니 (Helicobacter heilmannii), 헬리코박터 펠리스 (Helicobacter felis), 헬리코박터 무스틸레 (Helicobacter mustelae), 헬리코박터 페넬리에 (Helicobacter fenelliae), 헬리코박터 라피니 (Helicobacter rappini), 헬리코박터 헤파티쿠스 (Helicobacter hepaticus), 헬리코박터 빌리스 (Helicobacter bilis), 헬리코박터 풀로룸 (Helicobacter pullorum)으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
상기 질환은 소화성 궤양, 염증, 임파종, 악성림프 또는 위암이다.
상기 추출물은 물, 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매를 이용하여 추출한 것이 바람직하다.
상기 추출물은 환류냉각 추출방법을 사용하여 추출하는 것이 바람직하다.
상기 유효성분의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.1~50중량%이다.
또한, 본 발명은 지유 추출물을 유효성분으로 포함하는 헬리코박터 세균 감염 질환의 예방 또는 경감을 위한 건강식품을 제공한다.
상기 건강식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐 및 음료로 이루어지는 군으로부터 선택되는 형태인 것이 바람직하다.
본 발명의 지유 추출물은 헬리코박터 세균에 대한 뛰어난 항균 효과를 나타내며 내성과 부작용의 위험이 적고 인체에 저독성으로 안전하므로, 본 발명의 약학 조성물 및 건강식품은 헬리코박터 세균 감염에 의해 유발되는 소화성 궤양, 염증, 임파종, 악성림프 또는 위암 등 다양한 헬리코박터 세균 감염으로 유발되는 질환의 예방, 치료 또는 개선을 위해 이용될 수 있다.
도 1은 시험관내 (in vitro) 항균효력시험으로 헬리코박터 세균에 대한 항균 활성을 나타낸 것이다.
도 2는 생체(in vivo) 실험 처치 구성 및 일정을 나타낸 것이다.
도 3은 위 병변의 육안점수를 나타낸 것이다. Ⅰ은 헬리코박터+지유 처리군, Ⅱ는 헬리코박터 처리군, Ⅲ은 지유 처리군, Ⅳ는 무처리군을 각각 나타낸다.
도 4는 위 병변의 병리조직 점수를 나타낸 것이다. Ⅰ은 헬리코박터+지유 처리군, Ⅱ는 헬리코박터 처리군, Ⅲ은 지유 처리군, Ⅳ는 무처리군을 각각 나타낸다.
도 5는 헬리코박터 감염 확인 PCR 결과를 나타낸 것이다. M은 100bp marker; P는 H. pylori ATCC 43504의 DNA; N은 negative control(Ⅳ군); 1과 2는 H. pylori 감염 후 지유 추출물 적용군 (Ⅰ군); 3과 4는 H. pylori 감염 후 지유 추출물 무처리 적용군(Ⅱ군)을 나타낸다.
도 6은 헬리코박터 감염 확인 신속요소분해효소검사 결과를 나타낸 것이다. 위는 헬리코박터+지유 처리군, 아래는 헬리코박터 처리군을 각각 나타낸다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 지유 추출물을 유효성분으로 하는 헬리코박터 세균 감염 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
지유 (Sanguisorba officinalis)는 잎을 뜯어서 코에 대어 보면 오이 또는 수박 내음이 물씬 나는 풀로, 진짜 오이보다 오이냄새가 더 진하게 나서 오이풀이라고도 불리며, 뿌리는 굵고 딱딱하며 줄기는 곧게 서고 털은 없다. 긴 잎자루 끝에 작은 잎이 5~13장이 나며, 잎 모양은 긴 타원형으로 끝이 무디고 가장자리는 거친 톱니가 있으며, 지유 잎에는 탄수화물, 단백질, 지방 및 칼슘, 철, 구리, 아연 등의 미량 원소가 고루 들어 있으므로 나물로 먹으면 좋다. 꽃은 7~10월에 피어 8~11월에 씨앗이 익으며, 가을철에 뿌리를 캐어 잔뿌리를 떼어 내고 잘게 썰어 말려서 약으로 쓰일 수 있다.
지유는 설사, 대장염, 출혈, 악창, 화상 등에 중요하게 쓰는 민간약으로, 특히 지혈작용이 강하여 갖가지 출혈에 피를 멎게 하는 데 많이 쓴다. 오이즙을 화상에 바르면 효과가 있듯 오이 내음이 나는 지유의 잎이나 뿌리, 줄기를 짓찧어 붙이면 화상에도 효과가 있어 많이 쓰이고 있다. 지유는 피를 멎게 하는 작용도 있어 대변에 피가 섞여 나오는데, 자궁출혈, 월경과다, 장출혈 등에도 사용한다.
본 발명의 상기 헬리코박터 세균은 특별히 한정되는 것은 아니고 헬리코박터 종 (species)에 포함되는 모든 세균을 포함할 수 있으나, 바람직하게는 헬리코박터 파이로리 (Helicobacter pylori), 헬리코박터 카니스 (Helicobacter canis), 헬리코박터 시내디 (Helicobacter cinaedi), 헬리코박터 헤일마니 (Helicobacter heilmannii), 헬리코박터 펠리스 (Helicobacter felis), 헬리코박터 무스틸레 (Helicobacter mustelae), 헬리코박터 페넬리에 (Helicobacter fenelliae), 헬리코박터 라피니 (Helicobacter rappini), 헬리코박터 헤파티쿠스 (Helicobacter hepaticus), 헬리코박터 빌리스 (Helicobacter bilis), 헬리코박터 풀로룸 (Helicobacter pullorum)으로 구성된 세균으로부터 선택된 것일 수 있다.
또한, 본 발명에서의 헬리코박터 세균 감염 질환은 상기 헬리코박터 세균에 의해 유발되는 모든 질환을 의미하는 것으로, 바람직하게는 소화성 궤양 (예를 들면, 위궤양 또는 십이지장 궤양 등), 염증 (예를 들면, 위염 등), 위암 등의 소화관 상부의 질환, MALT (점막-관련 임파조직 (mucosaassociated lymphoid tissue)) 임파종의 병인, 위선암 또는 만성 심장 질환일 수 있다. 이 외에도 특발성 혈소판 감소성 자판병, 소아의 철 결핍성 빈혈, 만성 두드러기 등 위외성 질환일 수 있다.
본 발명의 지유 추출물은 다양한 추출용매를 사용할 수 있어 그 종류에 있어 특별히 한정되는 것은 아니나, 물, 저급 알코올, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 에틸렌글리콜, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 부틸 아세테이트 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 정제수, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 물과 에틸알코올의 혼합용매를 사용하는 것이다.
본 발명의 추출방법으로는 냉침추출, 열추출, 초음파추출, 환류냉각 추출 등 당업계에서 당업자에 의해 통상적으로 사용하는 모든 추출방법을 사용할 수 있으나, 환류냉각 추출방법을 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 바람직한 일례로, 건조된 지유를 세절하여 건조중량의 1 내지 20 배, 바람직하게는 2 내지 6배의 60 내지 80 중량%의 에틸알코올 수용액으로, 20 내지 150, 바람직하게는 70 내지 120의 추출온도에서 약 1시간 내지 10일, 바람직하게는 약 2시간 내지 5시간 동안 환류냉각 추출방법으로 추출한 후 감압 농축할 수 있다.
또한, 본 발명의 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함할 수 있다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함될 수 있다.
본 발명의 헬리코박터 세균 감염 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 지유 추출물은 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.
본 발명의 지유 추출물을 유효성분으로 함유하는 헬리코박터 세균 감염 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 약학조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며 (예: 문헌 [Remington's Pharmaceutical Science, 최신판; Mack Publishing Company, Easton PA), 예를 들면 과립제, 세립제, 산제, 경질캡슐제, 연질캡슐제, 시럽제, 유제, 현탁제 또는 액제 등의 경구 투여용 약학 조성물로서 투여해도 되고, 정맥내 투여, 근육내 투여, 또는 피하 투여용 주사제, 점액제, 좌제, 경피흡수제, 경점막 흡수제, 점비제, 점이제, 점안제, 흡입제, 크림제, 연고제, 파프제 등의 비경구 투여용 의약조성물로서 투여하는 것도 가능하다. 분말형태의 약학조성물로서 조제된 제제를 사용시에 용해하여 주사제 또는 점액제로서 사용해도 된다. 특히, 본 발명의 약학조성물은 페이스트 연고, 크림, 밀크, 파프제, 분제, 침투 패드, 용액, 겔, 분무제, 로션 또는 현탁액 형태의 제형인 것이 바람직할 수 있다.
약학 조성물의 제조에는 고체 또는 액체의 제제용 첨가물을 사용할 수 있다. 제제용 첨가물은 유기 또는 무기 중 어느 것이어도 된다. 즉, 경구용 고형제제를 제조하는 경우는, 주약에 부형제, 추가로 필요에 따라 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제 등을 첨가한 후, 통상적인 방법에 의해 정제, 피복정제, 과립제, 산제, 캡슐제 등 형태의 제제를 조제할 수 있다. 사용되는 부형제로서는 예를 들면 유당, 자당, 백당, 포도당, 옥수수 전분 (corn starch), 전분, 탈크, 소르비트, 결정 셀룰로오스, 덱스트린, 카올린, 탄산칼슘, 이산화규소 등을 들 수 있다. 결합제로서는 예를 들면 폴리비닐알코올, 폴리비닐에테르, 에틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 아라비아고무, 트래거캔스 (tragacanth), 젤라틴, 셀락 (shellac), 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 구연산칼슘, 덱스트린, 펙틴 (pectin) 등을 들 수 있다. 활택제로서는 예를 들면 스테아린산마그네슘, 탈크, 폴리에틸렌글리콜, 실리카, 경화식물유 등을 들 수 있다. 착색제로서는 통상 의약품에 첨가하는 것이 허가되어 있는 것이라면 모두 사용할 수 있다. 이들의 정제, 과립제에는 당의 (糖衣), 젤라틴코팅, 기타 필요에 따라 적절히 코팅할 수 있다. 또한, 필요에 따라 방부제, 항산화제 등을 첨가할 수 있다.
경구 투여를 위한 액체제제, 예를 들면 유제, 시럽제, 현탁제, 액제의 제조에는 일반적으로 사용되는 불활성인 희석제, 예를 들면 물 또는 식물유를 사용할 수 있다. 이 제제에는 불활성인 희석제 이외에 보조제, 예를 들면 습윤제, 현탁 보조제, 감미제, 방향제, 착색제 또는 보존제를 배합할 수 있다. 액체제제를 조제한 후, 젤라틴과 같은 흡수될 수 있는 물질의 캡슐 속에 충전해도 된다. 비경구 투여용 제제, 예를 들면 주사제 또는 좌제 등의 제조에 사용되는 용제 또는 현탁제로서는, 예를들면 물, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 벤질알코올, 올레산에틸, 레시틴을 들 수 있다. 좌제의 제조에 사용되는 기제로서는, 예를 들면 카카오버터, 유화 카카오버터, 라우린버터, 위텝졸을 들 수 있다. 제제의 조제방법은 특별히 한정되지 않고, 당업계에서 범용되고 있는 방법은 모두 이용 가능하다.
주사제의 형태로 하는 경우에는, 담체로서 예를 들면 물, 에틸알코올, 마크로골 (macrogol), 프로필렌글리콜, 구연산, 초산, 인산, 젖산, 젖산나트륨, 황산 및 수산화나트륨 등의 희석제; 구연산나트륨, 초산나트륨 및 인산나트륨 등의 pH 조정제 및 완충제; 피로아황산나트륨, 에틸렌디아민사초산, 티오글리콜산 및 티오젖산 등의 안정화제 등을 사용할 수 있다. 또한, 이 경우, 등장성 용액을 조제하기 위해 충분한 양의 식염, 포도당, 만니톨 또는 글리세린을 제제 중에 배합해도 되고, 통상의 용해 보조제, 무통화제 또는 국소 마취제 등을 사용하는 것도 가능하다.
연고제, 예를 들면 페이스트, 크림 및 겔의 형태로 하는 경우에는, 통상 사용되는 기제, 안정제, 습윤제 및 보존제 등을 필요에 따라 배합할 수 있어, 통상적인 방법에 의해 성분을 혼합하여 제제화할 수 있다. 기제로서는 예를 들면 백색 바셀린, 폴리에틸렌, 파라핀, 글리세린, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘 및 벤토나이트 등을 사용할 수 있다. 보존제로서는 파라옥시안식향산 메틸, 파라옥시안식향산 에틸, 파라옥시안식향산 프로필 등을 사용할 수 있다. 첩부제 (貼付劑)의 형태로 하는 경우에는, 통상의 지지체에 상기 연고, 크림, 겔 또는 페이스트 등을 통상적인 방법에 의해 도포할 수 있다. 지지체로서는 면, 스테이플 파이버 (staple fiber) 및 화학섬유로 되는 직포 또는 부직포 ; 연질 염화비닐, 폴리에틸렌 및 폴리우레탄 등의 필름 또는 발포체 시트를 적합하게 사용할 수 있다.
본 발명의 약학의 투여량은 특별히 한정되지 않지만, 경구 투여의 경우에는 성인 1일당 유효성분인 상기 물질의 중량으로서 통상 1kg당 0.1 내지 500mg/kg, 바람직하게는 1~100 mg/kg일 수 있다. 이 투여량을 환자의 연령, 병태, 증상에 따라 적절히 증감(增減)하는 것이 바람직하다. 상기 1일량은 1일에 1회, 또는 적당한 간격을 두고 하루에 2~3회에 나눠 투여해도 되고, 수일 (數日) 간격으로 간헐 (間歇)투여해도 된다. 주사제로서 사용하는 경우에는, 성인 1일당 유효성분인 상기 물질의 중량으로서 통상 1kg당 0.01 내지 10 mg/kg, 바람직하게는 0.1~1 mg/kg 정도일 수 있다.
그러나, 본 발명의 약제학적 조성물의 상기 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다.
또한, 본 발명은 지유 추출물을 유효성분으로 포함하는 헬리코박터 세균 감염 질환의 예방 또는 경감에 효과가 있는 건강식품을 제공한다.
상기 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있을 수 있으며, 또한 발효유와 같은 건강식품 음료 조성물이 있을 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 지유 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.1~90중량 %로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100을 기준으로 0.1~90g을 사용할 수 있다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 지유 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 중량부 당 일반적으로 약 1 내지 20 중량부, 바람직하게는 약 5 내지 12 중량부일 수 있다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적일 수 있다.
본 발명을 하기의 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 지유 추출물의 제조
익산시 대학한약국으로부터 구입한 건조된 지유를 분쇄기 (대성아트론, DA700)를 이용하여 입자의 크기가 30메시 (mesh, pore size 00㎛) 이하가 되도록 분쇄하여 지유 분말을 수득한 후, 상기에서 수득한 건조된 지유 분말 (1 kg) 질량의 3배 (v/w)에 해당하는 증류수를 포함하는 70% 에틸알콜 수용액을 가하여 100℃에서 3시간 동안 환류 냉각 추출하고 여과 및 감압 농축한 후, 동결건조하여 분말상태의 지유 추출물 600 g을 수득하여 하기 실험예의 시료로 사용하였다 (이하, “CC-1”이라 명명함).
실시예 2. 실험 준비
본 발명은 기존 문헌에 기재된 실험 방법 (Ishizone et al., Int J Med Sci. 4, pp.203-208, 2007)을 응용하여 하기와 같은 방법으로 실험을 수행하였다.
실험에 사용된 모래쥐 (Mongolian gerbil) 모델은 사람의 헬리코박터 세균인 헬리코박터 파이로리 세균 감염이 유발되며 사람에서의 병태 양상을 가장 근접하게 재현하는 시험계이기 때문에 헬리코박터 세균의 항균효과를 알아보기 위한 생체 (in vivo) 실험으로 가장 적합한 모델이다.
실시예 2-1. 실험동물 및 헬리코박터 균 준비
원광대학교 동물자원개발연구센터에서 계통이 유지되고 있는 모래쥐 (Mongolian gerbil, Meriones unguiculatus)를 6주령에 공급받아 1주일 동안 원광대학교 동물자원개발연구센터 실험동물 사육실에서 순화사육한 후 실험에 사용하였다. 사육기간 중 온도는 23± 1℃, 습도 50± 5%, 소음 60 phone 이하, 조명시간 08:00-20:00 (1일 12시간), 환기 시간당 10-12회의 환경에서 사육되었고, 사료는 실험동물전용사료 (샘타코)를 자유급식시켰으며, 음수는 멸균수를 자유 급수하였다. 본 연구에 사용된 실험동물에 관련된 모든 실험과정과 절차는 원광대학교 동물실험윤리위원회 (Institutional Animal Care & Use Committee, IACUC)의 규정을 준수하며 수행되었다.
헬리코박터 파이로리 (ATCC 43504, American Tissue Culture Collection, Rockville, MD) 균주를 10% calf serum이 첨가된 브루셀라 한천배지에 접종 후, 10% CO2, 100% 습도가 유지되는 37℃ 항온기에서 3일간 배양하였다. 배양된 헬리코박터 파이로리를 멸균된 PBS (pH 7.2)가 들어있는 튜브에 모은 후, 1 ml 당 2.0×109 colony-forming unit (CFU)의 균 수를 포함하게 준비하여 실험에 사용하였다.
실시예 2-2. 군 구성
상기 실시예 2-1에서 1주일간 순화 사육한 7주령의 건강한 수컷 모래쥐 40두를 실험에 사용하였다. 각 군당 10두의 동물들을 사용하여 하기 표 1에 나타난 바와 같이, 헬리코박터 파이로리 감염 후 지유 추출물 적용군 (I군), 헬리코박터 파이로리 감염 후 지유 추출물 무처치 적용군 (II군) 및 헬리코박터 파이로리 감염 없이 지유 추출물 적용군 (III군), 헬리코박터 파이로리 감염 없이 지유 추출물 무처치 적용군 (IV군)의 4개 군으로 나누어 실험을 수행하였다. 실험에 사용된 7주령 모래쥐를 12시간 절식 시킨 후, I군 및 II군의 동물들은 1 ml 당 2.0×109 colony-forming unit (CFU)의 헬리코박터 파이로리 균 수가 포함되게 준비된 배양액을 두당 0.5 ml씩 마우스용 존대를 이용하여 경구 (p.o.)로 투여하여 헬리코박터 파이로리 감염을 유발하였다. III군 및 IV군의 동물들은 12시간 절식 후 멸균 PBS (pH 7.2)를 0.5ml씩 경구로 투여하였다. 투여 후 각 군의 동물들은 12시간의 절식 후 사료를 급여하였다. 절식 동안에 음수는 자유 급이할 수 있도록 하였다. 헬리코박터 파이로리 또는 PBS를 투여한 I군과 III군의 동물들은 2주일 후인 9주령부터 상기 실시예에서 수득한 지유 추출물을 체중 기준으로 400mg/kg 용량으로 경구 투여를 4주간, 즉 13주령까지 연일 투여하였다. 이 기간 동안 II군 및 IV군의 동물들은 다른 처치 없이 사료와 음수를 자유 급여하였다 (도 2). 9주령에서 13주령까지 각 시험군의 동물들은 1주에 1회 체중을 측정하고 실험 종료일인 13주령에 각 개체를 12시간 절식한 후 에테르 마취 하에 안락사 시킨 후 위를 적출하여 육안병변 점수를 구하고, PCR 검사와 신속요소분해효소검사를 통하여 감염 여부를 확인하였으며, 추가적인 병리조직학적 검사를 통하여 조직병변의 점수를 구하여 지유 추출물 투여가 헬리코박터 세균 감염에 미치는 영향을 평가하였다.
Group Treatment n
헬리코박터 파이로리 지유추출물 기 간
Ⅰ Test (o) (o) 6 weeks 10
Ⅱ Positive control (o) (x) 6 weeks 10
Ⅲ Vehicle control (x) (o) 6 weeks 10
Ⅳ Negative control (x) (x) 6 weeks 10
1-3. 통계 분석
각 시험 군의 통계학 유의성은 95% 신뢰구간 (confidential interval, CI)이 MINITAB software (Minitab Inc, USA)를 사용하여 구해졌다. 각 군의 신뢰구간이 헬리코박터 감염 양성대조군 II군과 차이가 있으면 통계적으로 유의한 것으로 판단되었다 (p<0.05).
실시예 3. 항균 효과
상기 실시예 1에서 수득한 지유 추출물에 의한 헬리코박터 세균 배양 플레이트에 적용한 디스크 각각의 주변 클리어 존의 형성을 관찰하고 형성된 클리어 존의 지름을 기존 문헌에 기재된 실험 방법 (Narayan et al., Phytother Res. 21, pp.190-193, 2007)으로 측정하여 하기와 같이 실험을 수행하였다.
헬리코박터 파이로리 (ATCC 43504, American Tissue Culture Collection, Rockville, MD) 균주를 10% calf serum이 첨가된 브루셀라 한천 배지 플레이트에 도말(streak)하고 대조를 위한 항생제 디스크 겐타마이신 (바이엘동물약품, 한국), 가나마이신 (바이엘동물약품, 한국) 및 엔로플록사신 (바이엘동물약품, 한국)을 적용용량으로는 각각 0.25 mg, 0.5mg, 0.25mg씩 적용하였다. 또한 상기 실시예 1에서 수득한 지유 추출물 30mg을 DMSO 100ul에 녹여 300mg/ml 농도로 디스크 여과지에 5ul씩 100 (원액)(적용용량 1.5mg), 10-1 (0.15mg)과 용매대조를 위한 dimethyl sulfoxide (DMSO)를 각각 적용하였다. 본 실험에서는 균이 접종된 배지에 멸균된 디스크 (지름 0.7 mm)를 배치하고, 이후 10% CO2, 100% 습도가 유지되는 항온기에서 배양하고 4일 후 평가하였다. 균을 접종한 후 6시간, 12시간, 24시간, 48시간 및 60시간 후 각각 표준자를 이용하여 클리어 존의 지름으로 표현되는 억제범위 (the zone of inhibition)를 측정하여 균이 자라지 않은 투명한 원의 지름 (clear zone)을 관찰하였다. 디스크는 각 균주 당 5개씩 검사하여 억제 범위의 평균값을 분석하였다. 결과의 평가는 항생제 디스크 각각의 주변 클리어 존 형성 관찰하고 형성된 클리어 존의 지름을 측정하여 지름이 클수록 항균 효과가 높은 것으로 판정하였다.
클리어 존의 지름 크기
Treatment Clear zone (mm)
6 hrs 12 hrs 24 hrs 48 hrs 60 hrs
DMSO 0 0 0 0 0
Gentamycin 6 9 7 7 7
Ganamycin 5 8 8 7 7
Enrofloxacin 9 13 13 12 9
Sanguisorba officinalis 100
(1.5 mg)		 8 13 12 12 10
10-1
(0.15 mg)		 4 6 6 5 5
표 2 및 도 1에 나타난 바와 같이, 헬리코박터 균주를 가지고 지유의 항균 감수성을 관찰한 결과, 지유추출물은 대표적 항생제로 널리 알려진 겐타마이신, 가나마이신 및 엔로플록사신 보다도 우수한 수준의 억제 범위를 보였다.
실시예 4. 지유 추출물에 의한 헬리코박터 세균 감염 동물의 체중 변화
상기 실시예 1에서 수득한 지유 추출물을 헬리코박터 세균 감염 및 비감염 동물에 투여한 후, 체중변화를 확인하여 하기 표 3과 같은 결과를 얻었다.
Group Treatment Body weights (gram)
O w.p.i.a 1 w.p.i. 2 w.p.i 3 w.p.i 4 w.p.i
Ⅰ H. pylori
+ Sanguisorbab 		132.5±2.00 136.0±2.10 140.0±2.05* 142.5±1.55* 144.0±1.05*
Ⅱ H. pylori
+ PBS		 132.5±1.50 135.0±2.00 135.0±2.05 135.5±2.00 136.5±1.55
Ⅲ PBS
+ Sanguisorba		 133.0±2.10 138.0±2.05 142.0±2.00* 144.5±2.00* 145.0±2.50*
Ⅳ PBS
+ PBS		 133.5±2.05 138.5±1.05 143.0±1.50* 145.0±2.00* 146.0±2.50*
실시예 5. 지유 추출물에 의한 위 병변 육안점수 변화
상기 실시예 1에서 수득한 지유 추출물을 헬리코박터 세균 감염과 비감염 동물에 투여한 후, 위 육안병변 점수를 확인하기 위하여 하기와 같이 실험하였다. 상기 참고예 1-2의 실험동물을 각 시험 군별로 실험 종료일에 위를 적출한 후, 대만부를 따라 절개하여 펼친 후에 실체현미경(×10)을 사용하여 병변을 관찰하고, 육안 병변의 점수를 산정하였다. 육안병변의 점수는 위궤양 병변의 가로길이 × 세로길이(mm2)의 총합으로 계산하였다. 각 개체의 점수를 구한 후, 각 군별로 평균 점수를 구하였다.
도 3에 나타난 바와 같이, 헬리코박터 파이로리 감염 없이 지유 추출물 적용군(III군), 헬리코박터 파이로리 감염 없이 지유 추출물 무처치 적용군(IV군)의 경우에 위궤양 병변이 관찰되지 않아 육안점수 0의 값을 얻었다. 반면, 헬리코박터 파이로리 감염 후 지유 추출물 무처치 적용군(II군)은 95± 5.5의 육안점수를 보여 헬리코박터 파이로리 감염 후 지유 추출물 적용군(I군)의 12± 3.5 보다 유의한 변화를 보였다 (p<0.05).
실시예 6. 지유 추출물에 의한 위병변 병리조직점수 변화
상기 실시예 1에서 수득한 지유 추출물을 헬리코박터 세균 감염과 비감염 동물에 투여하고 위 병리조직병변 점수를 확인하기 위하여 하기와 같이 실험하였다.
상기 실험예 3에서 각 군의 동물들로부터 육안병변 관찰과 병변 점수를 구한 후, 위 조직을 10% 중성 포르말린에 고정하였다. 위 조직 검사를 위하여 선위(glandular stomach) 부위를 가로 방향으로 5 mm 간격으로 잘라, 3개 부위를 검사하고 병변의 등급을 결정하였다. 위의 선별된 부위들은 다른 개체들 간에 서로 동일한 부위가 되도록 주의하여 선정하였다. 선정된 부위들의 조직들은 병리조직학적 검사를 위한 통상적인 방법을 사용하여 파라핀 포매한 후, 4㎛ 두께로 절편하여 H & E 염색 후 병리조직학적인 검사를 수행하였다. 각 조직 소견의 병변에 대한 평가를 수행하여 이들의 정도를 4단계 {0(no lesion), 1(mild), 2(moderate), 3(severe)}의 점수로 나누어 기록하고, 3개 부위의 점수의 합을 구한 후, 위의 병리조직학적 소견에 대한 각 군의 평균 점수를 구하였다.
도 4에 나타난 바와 같이, 헬리코박터 파이로리 감염 없이 지유 추출물 적용군 (III군), 헬리코박터 파이로리 감염 없이 지유 추출물 무처치 적용군 (IV군)의 경우에 병리조직학적 병변이 관찰되지 않아 육안점수 0의 값을 얻었다. 반면, 헬리코박터 파이로리 감염 후 지유 추출물 무처치 적용군 (II군)은 8.0± 1.50의 육안점수를 보여 헬리코박터 파이로리 감염 후 지유 추출물 적용군 (I군)의 2.0± 0.50 보다 유의한 변화를 보였다(p<0.05).
실시예 7. PCR 에 의한 헬리코박터 병원체 검사
상기 실시예 1에서 수득한 지유 추출물을 헬리코박터 세균 감염과 비감염 동물에 투여한 후, 헬리코박터 세균 치료에 의한 제거 효과를 확인하기 위하여 실험 종료일에 해당 개체들의 위 유문부 점막 일부를 무균 채취하여 DNA를 추출한 후 헬리코박터 파이로리 감염 유지를 확인하기 위한 PCR을 수행하였다. DNA 추출은 bead beater-phenol extraction method를 사용하였다. 검체를 1 ml 멸균 증류수가 들어있는 Mini-Bead Beater(Biospec product) 전용 2 ml 튜브에 무균 채취하여 세절한 후 멸균 3차 증류수에 부유시킨 glass bead(0.1 mm size, Biospec product) 200μl와 phenol-chlorform-isoamyl alcohol 용액(50:49:1(v/v/v)) 200μl를 넣어 Mini-Bead Beater(Biospec product)로 30초간 5,000rpm으로 진탕하였다. 진탕 후 4 ℃에서 12,000 rpm으로 15분간 원심분리한 후 상층액을 멸균 2ml 튜브에 옮겼다. 3 M 초산나트륨(sodiumacetate) 10 μl와 ice-cold 에탄올 250μl를 넣어 -20℃에서 10분간 정체시킨 후, 15,000rpm으로 15분간 원심분리 하였다. 침전물은 70% 알코올로 세척하여 실온에서 건조시키고 Tris EDTA(pH 8.0) 60μl에 용해시켜 실험에 사용하였다. 헬리코박터 속(Genus Helicobacter)의 rpoB DNA 분절을 증폭시킬 수 있는 프라이머 쌍을 사용하여 PCR을 수행하였다. Forward primer(HF; 5' ACTTTAACGCATGAAGATAT 3')와 Reverse primer(HR; 5' ATATTTTGACCTTCTGGGGT 3')를 사용하여 PCR은 Taq DNA polymerase 1U, 각 dNTP 250μM, 50mM Tris-HCl(pH 8.3), 40mM KCl, 1.5mM MgCl2를 포함하는 AccuPower PCR Premix(Bioneer)를 이용하였다. 추출된 DNA를 template로 50ng, 각 프라이머 20 pmol을 AccuPower PCR Premix tube에 넣고 멸균 증류수로 최종 부피를 20μl로 맞춘 후, 94℃ 30초, 52℃ 30초, 72℃ 45초의 30cycle의 PCR을 수행한 후, 1.2% 아가로스 겔에서 458 bp의 특이 밴드의 유무를 확인하였다.
Group Inoculationa n Positive reaction (Positive percent) b Therapeutic No.
(Therapeutic percent)
H. pylori Treatment
I Yes Sanguisorba 10 0*
( 0 %, CI c 0-25.9)		 10*
( 100 %, CI 74.1-100)
II Yes PBS 10 10
( 100 %, CI 74.1-100)		 0
( 0 %, CI 0-25.9)
III No Sanguisorba 10 0*
(0 %, CI 0-25.9)		 -
IV No PBS 10 0*
(0 %, CI 0-25.9)		 -
표 4 및 도 5에 나타난 바와 같이, 헬리코박터 파이로리 감염 없이 지유 추출물 적용군 (III군) 및 헬리코박터 파이로리 감염 없이 지유 추출물 무처치 적용군 (IV군)의 경우에 PCR 검사에 의하여 헬리코박터 세균 DNA가 검출되지 않았다. 반면, 헬리코박터 파이로리 감염 후 지유 추출물 무처치 적용군 (II군)은 10마리 개체 모두에서 헬리코박터 세균 DNA가 검출되었으며, 헬리코박터 파이로리 감염 후 지유 추출물 적용군 (I군)은 10마리 모두에서 음성의 결과를 보여 헬리코박터 감염 양성대조군 II군과 유의한 변화를 보였다(p<0.05).
실시예 8. 신속요소분해효소검사에 의한 헬리코박터 세균 병원체 검사
상기 실시예 1에서 수득한 지유 추출물을 헬리코박터 세균 감염과 비감염 동물에 투여하고 헬리코박터 세균의 치료에 의한 제거 효과를 확인하기 위하여 하기와 같이 실험하였다.
실험 종료일에 해당 개체들의 위 유문부 점막 일부를 무균 채취하여 신속요소분해효소검사 (rapid urease test)를 실시하였다. 신속요소분해효소검사는 CLO test 키트 (Asan Pharmaceutical Co., Korea)를 사용하여 제조회사의 설명서에 따라 실온에서 배양하여 노란색 배지가 적색으로 변하는 경우를 양성으로 판정하였다. 신속요소효소분해검사인 CLO test의 결과는 검체에 감염된 헬리코박터 세균 성장 시 요소효소분해와 제공된 배지의 요소와의 반응 결과로 유도되는 색깔 변화로 감염 여부를 손쉽게 알 수 있는 방법이다.
Group Inoculationa n Positive reaction (Positive percent) b Therapeutic No.
(Therapeutic percent)
H. pylori Treatment
I Yes Sanguisorba 10 0*
( 0 %, CI c 0-25.9)		 10*
( 100 %, CI 74.1-100)
II Yes PBS 10 10
( 100 %, CI 74.1-100)		 0
( 0 %, CI 0-25.9)
III No Sanguisorba 10 0*
(0 %, CI 0-25.9)		 -
IV No PBS 10 0*
(0 %, CI 0-25.9)		 -
표 5 및 도 6에 나타난 바와 같이, 헬리코박터 파이로리 감염 없이 지유 추출물 적용군(III군), 헬리코박터 파이로리 감염 없이 지유 추출물 무처치 적용군(IV군)의 경우에 신속요소분해효소검사에 의하여 헬리코박터 세균에 음성 결과를 보였다. 반면, 헬리코박터 파이로리 감염 후 지유 추출물 무처치 적용군(II군)은 10마리 개체 모두에서 헬리코박터 세균 양성반응이 검출되었다. 헬리코박터 파이로리 감염 후 지유 추출물 적용군(I군)은 10두 모두에서 음성의 결과를 보여 헬리코박터 감염 양성대조군 II군과 유의한 변화를 보였다(p<0.05).
실시예 9. 시험물질에 의한 독성여부 평가
실시예 1의 지유 추출물을 오랜 기간 섭취함으로 인해 독성발현으로 의심되는 세포 손상이 있는지 알아보기 위해 하기와 같은 실험을 수행하였다.
실험은 9주령 수컷 모래쥐를 사용하여 수행되었으며, 28일 동안 매일 400mg/kg 용량으로 시험물질을 경구 투여하였다. 실험 종료일 에테르 마취하에 안락사하여 부검을 실시하고 각 실질 장기의 육안병변을 관찰한 후, 대뇌(cerebrum), 소뇌(cerebellum), 연수(pons), 고환(Testis), 심장(Heart), 간(Liver), 폐장(Lung), 신장(Kidney), 근육(Muscle), 비장((Spleen), 전립선(Prostate), 췌장(Pancreas), 흉선(Thymus), 부신(Adrenal gland), 소장(Small Intestine), 대장(Large Intestine), 골수(Bone marrow), 갑상선(Thyroid gland) 및 정낭(seminal vesicle)을 적출하여 10 % 중성완충 포르말린용액(neutral buffered formalin)에 고정하였다. 고정이 완료된 조직들은 병리조직학적 검사를 위한 통상적인 방법을 사용하여 파라핀 포매한 후, 4 ㎛ 두께로 절편하여 H & E 염색 후 병리조직학적인 검사를 수행하였다.
Group 실험군 n Gross lesion Pathological lesion
지유 추출물 투여군 10 0 0
대조군 10 0 0
실험결과, 하기 표 6에 나타난 바와 같이, 실질장기에 별다른 세포손상은 관찰되지 않음을 확인할 수 있었다.
본 발명의 지유 추출물을 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 산제의 제조
지유 추출물 (CC-1) 20 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
제제예 2. 정제의 제조
지유 추출물 (CC-1) 10 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
제제예 3. 캅셀제의 제조
지유 추출물 (CC-1) 10 mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
제제예 4. 주사제의 제조
지유 추출물 (CC-1) 10 mg
만니톨 180 mg
주사용 멸균 증류수 2974 mg
Na2HPO4,12H2O 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
제제예 5. 액제의 제조
지유 추출물 (CC-1) 20 mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 제조한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예 6. 건강 식품의 제조
지유 추출물 (CC-1) 1000 ㎎
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 ㎎
비타민 B1 0.13 ㎎
비타민 B2 0.15 ㎎
비타민 B6 0.5 ㎎
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 ㎎
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 ㎎
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 ㎎
산화아연 0.82 ㎎
탄산마그네슘 25.3 ㎎
제1인산칼륨 15 ㎎
제2인산칼슘 55 ㎎
구연산칼륨 90 ㎎
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예 7. 건강 음료의 제조
지유 추출물 (GM-1) 1000 ㎎
구연산 1000 ㎎
고당 100 g
올리매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수 전체 900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한다.

Claims (8)

  1. 지유 추출물을 유효성분으로 포함하는 헬리코박터 감염 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 헬리코박터는 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori ), 헬리코박터 카니스 (Helicobacter canis), 헬리코박터 시내디 (Helicobacter cinaedi), 헬리코박터 헤일마니(Helicobacter heilmannii ), 헬리코박터 펠리스(Helicobacter felis), 헬리코박터 무스틸레(Helicobacter mustelae ), 헬리코박터 페넬리에(Helicobacter fenelliae), 헬리코박터 라피니(Helicobacter rappini ), 헬리코박터 헤파티쿠스( Helicobacter hepaticus ), 헬리코박터 빌리스(Helicobacter bilis ) 및 헬리코박터 풀로룸(Helicobacter pullorum )으로 이루어지는 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 질환은 소화성 궤양, 염증, 임파종, 악성림프 또는 위암인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 추출물은 물, 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매를 이용하여 추출한 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 추출물은 환류냉각 추출방법을 사용하여 추출한 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 유효성분의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 50중량%인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  7. 지유 추출물을 유효성분으로 포함하는 헬리코박터 세균 감염 질환의 예방 또는 경감을 위한 건강식품.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 건강식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐 및 음료로 이루어지는 군으로부터 선택되는 형태인 것을 특징으로 하는 건강식품.















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