KR20110104625A - 아토피 피부염 예방 및 개선효과를 나타내는 황금 가수분해 추출물의 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 화장품 - Google Patents

아토피 피부염 예방 및 개선효과를 나타내는 황금 가수분해 추출물의 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 화장품 Download PDF

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Abstract

본 발명 아토피 피부염 예방 및 개선효과를 나타내는 황금 가수분해 추출물의 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 화장품에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 황금을 추출 및 가수분해 시킴으로서 유효성분의 항산화 활성을 높이고, 항아토피 효능을 증진시키는 황금 가수분해 추출물을 제조하고, 이를 이용하여 다양한 화장품으로 제조하는 아토피 피부염 예방 및 개선효과를 나타내는 황금 가수분해 추출물의 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 화장품에 관한 것이다.
이를 위한 본 발명에 따른 아토피 피부염 예방 및 개선효과를 나타내는 황금 가수분해 추출물의 제조방법은, 황금 1.0kg을 취하고 에탄올(EtOH) 2리터(L)를 넣어 8시간동안 가끔씩 흔들어 주면서 방치하는 단계; 에탄올 추출용액을 흔들어 주면서 여과지를 사용하여 감압으로 하여 여과하고 여액을 취하여 단계; 여과한 액을 감압농축기에 넣고 50 ~ 60℃에서 일정한 조건으로 감압 농축시켜 연조엑스 상태로 만드는 단계; 베타글루쿠로니다제(β-glucuronidase) 50,000unit를 10밀리리터의 물에 녹여 연조엑스에 가하고, 40~50℃에서 4시간 동안 흔들어 주면서 반응시켜 가수분해시키는 단계;로 이루어진 것을 특징으로 한다.

Description

아토피 피부염 예방 및 개선효과를 나타내는 황금 가수분해 추출물의 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 화장품{.}
본 발명 아토피 피부염 예방 및 개선효과를 나타내는 황금 가수분해 추출물의 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 화장품에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 황금을 추출 및 가수분해 시킴으로서 유효성분의 항산화 활성을 높이고, 항아토피 효능을 증진시키는 황금 가수분해 추출물을 제조하고, 이를 이용하여 다양한 화장품으로 제조하는 아토피 피부염 예방 및 개선효과를 나타내는 황금 가수분해 추출물의 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 화장품에 관한 것이다.
아토피 피부염 (Atopic dermatisis, AD)은 유소아기에 높은 발생 빈도를 보이는 만성 재발성 염증성 피부질환으로 전 인구의 약 10 - 20% 정도에서 나타난다.
우리나라에서도 그 빈도가 점차 증가하여 2000년도에 대한 소아 알레르기 및 호흡기학회에서 전국의 초등학생과 중학생을 대상으로 시행한 설문조사 결과에 의하면 초등학생의 24.9%, 중학생의 12.8%가 아토피 피부염 진단을 받았다고 조사되었다.
아직까지 아토피 피부염의 기전은 완전히 밝혀지지 않았지만, 단순포진이나 종두증과 같은 바이러스 감염에 대한 취약성과 특정 미생물 항원에 대한 지연형 면역 반응의 감소, IgE의 생산 증가, 접촉 알레르겐에 대한 감수성 감소, 분열 촉진제와 항원에 대한 임파구의 반응 감소, 과립구와 단핵구의 화학주성 감소 등 여러 가지 면역학적인 이상 소견들이 보고되어 있다. 또한, 이 질환의 유병율과 난치성 성인 아토피 피부염으로의 진행이 산업화 된 사회에서 점차 증가하는 추세에 있으며, 이는 아토피 피부염의 발생에 유전적 요인과 함께 산업화와 같은 환경적인 요인이 중요하다는 근거가 된다. 이 질환의 특징은 소양증, 가려움, 태선화, 발진, 인설, 전신 건조 등의 증상이 나타나는 것으로 알려져 있다.
현재 대부분의 아토피 피부염 질환 치료는 국소적인 스테로이드제로 항히스타민제인 싸이토클로스포린 A(cyto-closporin A), 타크로리무스(tacrolimus)가 사용되고 있으며, 면역억제제로 피메크로리무스(pimecrolimus)가 이용되고 있다.
그러나 스테로이드제는 장기간 투여할 경우 피부의 위축이나 소아 환자에서 성장 지연의 가능성 등의 여러 가지 부작용이 문제시 되고 있으며, 스테로이드를 함유하지 않는 피메크로리무스(pimecrolimus)를 이용한 치료법은 소아 환자에 효과적인 요법이나 피부에 도포하였을 때 홍반, 가려움과 건조 피부, 부종과 혈종, 짖무름, 그리고 태선화 등의 부작용과 면역력의 약화가 단점이다.
본 발명은 이러한 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명의 목적은 피부알러지, 소양증, 접촉성 피부염, 미생물에 의한 피부염증, 피부발진 및 아토피질환으로부터 손상된 피부를 보호하고 예방하며 개선하기 위하여, 황금 추출물에 효소를 가하여 가수분해시키고, 여기에 알로에, 백장미 나노셀 콜로이드 등을 복합하여 바디로션, 바디클린저, 페이셜크림 및 썬로션 등 다양한 종류의 화장품을 개발하는데 그 목적이 있다.
상술한 목적을 달성하기 위한 본 발명에 따른 아토피 피부염 예방 및 개선효과를 나타내는 황금 가수분해 추출물의 제조방법은, 황금 1.0kg을 취하고 에탄올(EtOH) 2리터(L)를 넣어 8시간동안 가끔씩 흔들어 주면서 방치하는 단계;
에탄올 추출용액을 흔들어 주면서 여과지를 사용하여 감압으로 하여 여과하고 여액을 취하여 단계;
여과한 액을 감압농축기에 넣고 50 ~ 60℃에서 일정한 조건으로 감압 농축시켜 연조엑스 상태로 만드는 단계;
베타글루쿠로니다제(β-glucuronidase) 50,000unit를 10밀리리터의 물에 녹여 연조엑스에 가하고, 40 ~ 50℃에서 4시간 동안 흔들어 주면서 반응시켜 가수분해시키는 단계;로 이루어진 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에 따른 황금 가수분해 추출물을 이용하여 제조되는 화장품은, 상기 황금 가수분해 추출물 200g을 취하고, 알로에베라 2kg과 백장미 콜로이드 500g을 균일하게 혼합하여 황금 가수분해 추출 혼합물을 얻고,
정제수 40kg, 글리세릴스테아레이트 6kg, 피이지100스테아레이트 4kg, 소르비탄스테아레이트 3kg, 폴리소르베이트20 3kg, 디메치콘 0.5kg, 트리에탄올아민 1kg, 카프릴릭카프릴트리글리세라이드 4kg, 카보머941 1kg, 부틸렌글라이콜 1kg, 이소도데칸 0.5kg, 글리세린 5kg, 디에칠헥실카보네이트 3kg, 디카프릴카보네이트 3kg, 스테아릴알코올 5kg, 글리세릴베헤네이트 1kg, 페녹시에탄올 0.5kg, 디스테아디모늄헥토라이트 1kg, 소르비탄세스퀴올레이이트 3kg, 메칠파라벤 0.3kg, 프로필파라벤 0.2kg, 디소디움이디티에이 0.5kg을 혼합하고 70 ~ 75℃에서 4시간 동안 가온하면서 혼합하여 바디 로션기제를 수득한 후 상기 황금 가수분해 추출 혼합물과 함께 호모게나이저에 투입하여 3,000 ~ 3,500 알피엠으로 30분 동안 균질화시켜 바디 로션으로 제조하는 것을 특징으로 한다.
또한, 황금 가수분해 추출물 200g을 취하고, 알로에베라 2kg과 백장미 콜로이드 500g을 균일하게 혼합하여 황금 가수분해 추출 혼합물을 얻고,
정제수 50kg, 라우린산 6kg, 미리스틴산 4kg, 모노알킬포스페이트 1kg, 옥시벤존 0.5kg, 글리콜디스테아레이트 4kg, 트리에탄올아민 1kg, 폴리쿠아테니움 1kg, 라우릴설폰산트리에탄올아민 1kg, 라우라마이드 DEA 1kg, 사이클로메치콘 0.5kg, 코카미드프로필베타인 2kg, K-쿠일가수분해콜라겐 1kg, 부틸렌글라이콜 1kg, 피이지-7-글리세릴코코에이트 5kg, 글리세린 5kg, 글리세릴베헤네이트 1kg, 페녹시에탄올 1kg, 디메치콘 0.5kg, 소르비탄세스퀴올레이이트 3kg, 프로필렌카보네이트 1kg, 메칠파라벤 0.3kg, 프로필파라벤 0.2kg, 디소디움이디티에이 0.5kg을 혼합하고, 70 ~ 75℃에서 4시간 동안 가온하면서 혼합하여 바디클린저 기제를 수득한 후 상기 황금 가수분해 추출 혼합물과 함께 호모게나이저에 투입하여 3,000 ~ 3,500 알피엠으로 30분 동안 균질화시켜 바디클린저로 제조하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 황금 가수분해 추출물 200g을 취하고, 알로에베라 2kg과 백장미 콜로이드 500g을 균일하게 혼합하여 황금 가수분해 추출 혼합물을 얻고,
정제수 35kg, 글리세릴스테아레이트 5kg, 피이지100스테아레이트 3kg, 소르비탄스테아레이트 4kg, 폴리소르베이트20 3kg, 디메치콘 1kg, 트리에탄올아민 1kg, 화이트비스왁스 2kg, 카보머941 1kg, 부틸렌글라이콜 0.5kg, 이소도데칸 1kg, 글리세린 5kg, 디에칠헥실카보네이트 1kg, 디카프릴카보네이트 1kg, 스테아릴알코올 4kg, 글리세릴베헤네이트 1kg, 페녹시에탄올 1kg, 디스테아디모늄헥토라이트 1kg, 소르비탄세스퀴올레이이트 2kg, 메칠파라벤 0.3kg, 프로필파라벤 0.2kg, 디소디움이디티에이 0.5kg을 혼합하고, 70 ~ 75℃에서 4시간 동안 가온하면서 혼합하여 페이셜크림 기제를 수득한 후 상기 황금 가수분해 추출 혼합물과 함께 호모게나이저에 투입하여 3,000 ~ 3,500 알피엠으로 30분 동안 균질화시켜 페이셜크림으로 제조하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 황금 가수분해 추출물 200g을 취하고, 알로에베라 2kg과 백장미 콜로이드 500g을 균일하게 혼합하여 황금 가수분해 추출 혼합물을 얻고,
정제수 40kg, 사이클로메치콘 1kg, 에칠헥실메톡시신나메이트 1kg, 실리카 0.5kg, C12-25 알킬벤조에이트 1kg, 징크옥사이드 0.5kg, 부틸렌글라이콜 1kg, 이소도데칸 1kg, 글리세린 5kg, 디에칠헥실카보네이트 1kg, 디카프릴카보네이트 0.5kg, 스테아릭애씨드 3kg, 글리세릴베헤네이트 1kg, 에이코사디오에이트 1kg, 페녹시에탄올 0.5kg, 디스테아디모늄헥토라이트 1kg, 디메치콘 0.5kg, 소르비탄세스퀴올레이이트 3kg, 프로필렌카보네이트 1kg, 메칠파라벤 0.3kg, 프로필파라벤 0.2kg, 디소디움이디티에이 0.5kg을 혼합하고, 70 ~ 75℃에서 4시간 동안 가온하면서 혼합하여 썬로션 기제를 수득한 후 수득된 썬로션 기제에 티타늄디옥사이드 0.5kg을 가한 다음 상기 황금 가수분해 추출 혼합물과 함께 호모게나이저에 투입하여 3,000 ~ 3,500 알피엠으로 30분 동안 균질화시켜 썬로션으로 제조하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 또 다른 목적 및 효과는 이하의 상세한 설명으로부터 명확하게 되고, 본 발명의 바람직한 실시예를 나타내는 상세한 설명 및 실시예는 본 발명의 범주를 제한하는 것이 아니다.
본 발명에 따른 아토피 피부염 예방 및 개선효과를 나타내는 황금 가수분해 추출물 및 그 복합 화장품 제제의 제조방법에 의하면, 피부 알러지, 소양증, 접촉성 피부염, 미생물에 의한 피부염증, 피부발진 및 아토피 질환으로부터 손상된 피부를 보호하고 예방하며 개선하기 위하여, 황금 추출물에 효소를 가하여 가수분해시키고 여기에 알로에, 백장미 나노셀 콜로이드 등을 복합하여 바디로션, 바디클린저, 페이셜크림 및 썬로션 등 다양한 종류의 화장품을 개발한 결과 피부에 대한 침투력이 강하고 높은 항산화작용과 함께 그람양성 및 음성균에 대한 항균력이 높고 집먼지 진드기로 유발된 마우스의 아토피에 대하여 양호한 예방 및 치료가 가능한 효과가 발생한다.
이하, 본 발명에 따른 하나의 바람직한 실시예를 상세히 설명한다.
상술한 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 적용된 황금 (Scutellaria Radix)은 꿀풀과 (Labiatae)에 속하는 다년생 초본식물인 속썩은 풀 (Scutellaria baicalensis GEORGI)의 주피를 벗긴 뿌리로 한방에서는 청열, 해독, 담즙배설 촉진, 항균, 이뇨, 완하, 죽상동맥경화 방지, 위액분비 억제, 진정, 혈압강하 작용 등의 목적으로 사용되어 왔다.
황금의 활성성분은 바이칼린(Baicalin), 바이칼레인(Baicalein) 및 우고닌(Wogonine) 등으로서 약리작용에 대한 연구로는, 흰쥐의 간에서 지질산화작용을 억제함으로써 혈청 중 중성지방과 유리지방산의 함유량을 감소시키고 에탄올(EtOH) 섭취에 의해 유발된 고지혈증에 효과가 있음이 알려졌고, 또한 황금성분의 항산화 작용으로 산화에 의한 세포손상을 보호하고 활성산소 및 프리 레디컬(Free radical))에 의한 피부세포의 산화 및 손상을 방지하는 것으로 보고된 바 있다.
황금의 주성분인 바이칼린(Baicalin)은 플라보노이드 구조를 가지고 있고 항알러지, 항박테리아 및 항바이러스와 같은 다양한 생물학적 활성을 가지며, 그밖에 리포옥시지나제(lipoxygenase)의 저해, 마이크로솜의 지질 과산화반응 억제, 산소라디칼 생성의 저해, 그리고 최근 활성 산소종(H2O2, -OH 및 O2 - ) 으로 유도된 섬유아세포 손상의 억제 등의 항산화 활성이 보고되어 있다.
황금 중에 가장 함유량이 높은 바이칼린은 인체 및 동물의 대장균(E. coli)이 분비하는 베타 글루쿠로니다제(β-glucuronidase)에 의하여 가수분해되어 바이칼레인을 생성하면서 항산화활성, 항염효과, 항알러지효과, 피부손상 억제효과가 현저하게 증강되는 것으로 보고되어 있다.
또한, 본 발명에 주요성분으로 적용되는 알로에는 백합과(Liliaceae)에 속하는 알로에속의 다년생 열대 식물로서 원산지는 주로 아프리카이며 현재 600여종이 세계 각지에 분포 또는 재배되고 있다. 우리나라에서 주로 재배되고 있는 알로에는 알로에 베라(A. barbadensis Mill.)와 알로에 아보레센스(A. arborescens Mill.), 알로에 사포나리아(A. saponaria Haw.) 등이다. 알로에는 오래전부터 민간약으로 사용되기 시작하여 주로 고미 건위 및 완하제로 이용되어 왔다. 모두 정도의 차이는 있으나 항염증작용, 항궤양 및 세포재생작용, 항균 및 항진균작용, 항바이러스작용, 혈당개선작용, 위액분비억제작용, 간세포보호작용, 사하작용, 면역조절작용, 항암작용 등을 가지고 있는 것으로 알려저 있다.
알로에 중에 함유되어 있는 활성성분으로는 barbaloin, aloesin, aloenin, isobarbaloin, isoaloeresin, aloe-emodin 등이 보고되고 있다.
알로에베라 추출물에 대한 약리활성에 관한 연구로는 알로에 추출물이 carrageenan으로 유발된 흰쥐의 족부종에 대하여 뚜렷한 억제효과를 나타내고 시험관 내 실험(in vitro)에서 PGE2의 생성을 억제시켰다고 발표된 바 있으며, 인체 직장점막에 대한 알로에 베라 겔의 항염효과에 대한 연구로서 알로에를 투여하였을 때 PGE2의 생성을 억제시킴으로써 항염효과를 나타내는 것으로 보고되어 있다.
알로에베라 겔의 마우스에 대한 면역조절작용 연구로는 알로에베라 추출물을 투여 시 항체생성을 촉진시키고 반점형성세포(plaque forming cell)의 수를 증가시킨다고 보고되어 있고, 알로에베라에 함유된 다당류의 면역조절에 대한 화학적 특성에 대한 연구에서는 알로에 중에 함유된 다당류성분들을 효소 및 산 가수분해를 통하여 구조적 특성을 규명한바 있다.
또한, 본 발명에 주요성분으로 적용되는 백장미 오일의 효능은 모세혈관 수축, 피부노화방지, 항알러지, 진정작용, 스트레스 해소작용 등이 알려져 있으며, 국산 백장미 오일을 나노셀 콜로이드로 할 경우 피부친화력을 높여주고 투과 속도를 증가시킴으로서 항알러지 효과를 나타낼뿐 아니라 천연향으로써 피부표면에 아름다운 향기를 지속시킬수 있다.
따라서 본 발명은 화장품제제의 주성분으로서 황금 가수분해추출물에 알로에베라 및 백장미오일 나노셀 콜로이드를 복합시킴으로써 항산화작용과 함께 항염, 항알러지, 소양억제, 접촉성 피부염 개선과 함께 항아토피효과를 증강시킬 수 있고, 또한, 화장품의 기제는 알코올과 색소를 전혀 가하지 않고 어린이 및 유아의 피부에도 자극과 손상을 주지 않으며 독성이 없고 자극이 적은 안전한 기제를 사용함으로써 여성 및 민감성 피부에도 전혀 거부반응을 나타내지 않고 피부보습과 유연성을 유지하면서 피부노화를 지연시킬 수 있는 처방을 구성하여 바디로션, 바디클린저, 페이셜크림 및 썬로션 등의 제제를 개발하였다.
상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명의 특징은 아래와 같으며, 구성비율은 본원 발명에 해당되는 것이고, 구성량에 대해서는 ± 10% 범위에서 실시가 가능하다.
이하 본 발명에 따른 혼합물 또는 조성물의 작용 및 실험결과에 대해 설명한다.
1. 황금 추출물의 HPLC 에 의한 주성분의 확인 및 정량 방법
황금 에탄올 추출엑스 50mg에 메탄올을 가해 용해시키고, 전량을 50㎖로 한후 검액으로 하였으며, 따로 바이칼린(baicalin), 바이칼레인(baicalein) 표준품 50mg을 각각 메탄올 50㎖에 녹인후 표준액으로 사용하였다.
칼럼은 μ-Bondapak C18(Waters, ID 3.9mm × 30cm, U.S.A), 이동 용매로는 acetonitril : 0.5% phosphoric acid(27 : 73 v/v)을 사용하였으며 검출기는 UV detector로서 파장은 328nm, 유속은 1.2 ㎖/min, 20㎕를 injection하였고, 얻어진 크로마토그램의 면적을 측정하여 검량선법에 의해 함량을 계산하였다.
황금 추출물 중 바이칼린(baicalin)과 바이칼레인(baicalein)의 유지시간은 8.30분과 27.3분으로 표준품과 같은 유지시간을 나타내었다. (그림 1 참조)
그림 1. 바이칼린 및 바이칼레인의 HPLC 크로마토그램
Figure pat00001
Chromatogram of baicalin and baicalein by HPLC determination.HPLC conditions :
Column; μ-Bondapak C18 (Waters, ID 3.9mm × 30cm, U.S.A.)
Dector; UV-Detecter (328 nm)
Mobile phase; acetonitrile : 0.5% phosphoric acid = 27 : 73 v/v%
Temperature: room
Flow rate: 1.2 ㎖/min
Injection ; 20 ㎕
황금 중 바이칼린(Baicalin)의 함량은 3.5%이었고, 황금 가수분해물 중 바이칼린(Baicalin)의 함량은 1.1%인 반면 바이칼레인(Baicalein)의 함량은 2.4%로 나타났다. 따라서 황금 항산화 가수분해 조작으로 바이칼린(Baicalin) 중 약 68%가 바이칼레인(Baicalein)으로 가수분해 되었다.
2. 황금 엑스 추출물의 히드로솔의 피부투과량 측정방법
황금엑스 가수분해물을 함유한 히드로솔 1g을 취하여 생쥐(Hairless mouse) 피부에 도포한 후 바이칼린(baicalin) 및 바이칼레인(baicalein)의 피부투과량을 측정하기 위하여 Franz modified diffusion cell (area : 1.77㎠, effective vol. : 11.5 ㎖)을 이용하였다.
생쥐 피부는 복부를 절개하고 피하지방 및 모세혈관을 조심스럽게 제거한 후 사용하였다. 시험액은 pH 7.4 완충용액을 사용하였다. Franz modified diffusion cell에 생쥐 피부를 장착하고 LR, GF, GLC 및 GLN gel 제제를 도포한 후 채취시간마다 시험액 100㎕씩을 채취하고 새로운 시험액을 동량 보충하였다.
시험액은 37± 0.2℃를 유지하도록 하였으며 cell 내의 교반속도는 600rpm으로 고정하였다.
피부의 단위 면적당 통과한 주성분의 양을 시간에 대한 함수로 나타낸 후 다음의 식을 이용하여 투과 파라메터들을 구하였다.
Figure pat00002
Figure pat00003
Js는 평형 상태에서의 투과 속도 (㎍/㎠/hr)이고, A는 투과가 일어나는 피부의 면적(㎠), (dQ/dt)ss는 평형 상태에서의 단위 시간당 피부를 통과하는 약물의 양(㎍/hr), C는 제제중의 약물 농도(㎍/㎖)이고, K는 약물의 분배계수(피부/기제), h는 피부의 두께(㎝), D는 피부를 통한 약물의 확산 계수(㎠/hr)이며, TL은 lag time(hr)이다.
황금 가수분해물을 히드로솔로 만들어 마우스 피부에 도포한 다음 7시간 후에 바이칼린이 80.56㎍인 반면 바이칼레인의 투과량은 253.36으로 약 3배 정도 높아졌으며 단위시간당 투과량은 바이칼린이 13.42㎍이고 바이칼레인은 35.56㎍으로 나타났다. (표 1, 그림 2 참조)
표 1. 바이칼린과 바이칼레인의 마우스 피부투과율 비교
Figure pat00004
그림 2. 황금추출물과 가수분해물에 대한 마우스 피부 침투효과 비교
Figure pat00005

3. 황금 동결건조 엑스 및 히드로솔의 항균력을 13종의 그람 양성균 및 그람 음성균에 대한 실험
먼저 시험용 균을 뉴트리언트 한천(Nutrient agar) 및 구연산 디스옥시콜린한천(Desoxycholate citrate agar) 배양액의 탁도가 표준탁도기준(Tubidity Standard, Transmittance 35%)과 같도록 조절하여 시험균액으로 하였다.
시료용액으로 황금엑스와 히드로솔을 수욕상에서 가온하여 녹이고 멤브란필터(membrane filter) 0.2㎛를 통과시킨 후 200, 100, 50, 25, 12.5 및 6.25㎍/㎖가 되도록 2배씩 단계적으로 희석하여 각각 2㎖씩 뮬러힌톤한천배지(Mueller Hinton agar medium) 18㎖와 잘 혼화하여 굳힌 다음, 시험균액 5㎕씩을 자동분주기로 접종하고 37℃에서 18시간 배양한 후 각 균에 대한 최소발육저지농도를 관찰하였다.
따로 멸균한 시험관에 뮬러힌톤브로스(Mueller Hinton broth) 8㎖, 시험균액 1㎖, 시료용액 (1000㎍/㎖) 1㎖씩을 가하여 37℃에서 18시간 배양한 다음 600nm에서 각각의 투과도를 측정하고 다음식에 의하여 세균의 성장억제율을 산출하였다. 시료를 가하지 않고 균액만 배양시킨 것을 대조군(Control)으로 하였다.
Figure pat00006
C : Transmittance of Control
S : Transmittance of Sample
황금 항산화 추출물과 히드로솔의 그람 양성 및 음성균에 대한 세균 성장 억제율을 비교해보면 황금 추출물은 황색 포도상구균, 표피 포도상구균 등 그람 양성균에서 비교적 높은 항균력을 나타내었고 그람 음성균에서는 낮은 수치를 보여주었다. 한편 히드로솔의 항균력은 그람 양성 및 음성균에 모두 항균력을 나타내었으나 그 성장억제율은 낮은 편이었다.(표 2 참조)
표 2. 그람양성 및 그람음성균에 대한 황금엑스 및 히드로솔의 항균효과 비교(%)
Figure pat00007

4. 아토피 피부염 유도 및 시료처리와 NC / Nga 생쥐에 유발된 아토피 피부염 억제효과 관찰 결과
먼저 8주령 된 NC/Nga 생쥐의 목, 귀, 등 인접 부위를 깨끗하게 제모한 후 제모가 끝나면 피부의 미세 상처가 치유되도록 24시간 방치하였다.
그리고 4% SDS 용액 제모 부위에 spray한 후, 0.5 % Tween 20과 PBS로 배양액을 만들어 영기에 집먼지 진드기(D. pteronyssinus)추출물(DPE, 연세대학교 미생물학교실, 서울) 항원을 넣어 만들었다. 1주일에 3번씩 8주간 10 mg/ml, 50 ㎕를 도포하였고, 실험군 SBE를 5%, 1%를 적당한 농도로 8주간 투여하였다 (8주부터 16주).
DPE를 도포하여 피부염이 유발된 생쥐를 3개의 그룹으로 나누고, 대조군에는 생리식염수를, 양성대조군에는 시클로스포린 A(cyclosporin A), 실험군에는 황금가수분해물을 5%, 1%의 농도로 8주간 (8주에서 16주까지) 피부에 도포 하였다. 약물 처리 4주 간격으로, 관능 평가를 실시하였는데, NC/Nga 생쥐의 피부염은 아토피성 피부염에서 일반적으로 사용되는 윌콕손방법(Wilcoxon test)을 이용하였다.
육안 평가지수는 다음의 5가지 항목을 각각 평가한 점수의 총 합으로 나타내었다. 평가 항목은 홍반 (Erythema), 가려움과 건조 피부 (Pruritus & Dry skin), 부종과 혈종 (Edema & escoriation), 짖무름 (Erosion), 그리고 태선화 (Lichenification)로 나누었다. 이 각각의 항목은 없음 (0), 약함 (1), 중증도 (2), 심함 (3)으로 채점하였다.
그림 3. 집먼지 진드기로 유도된 NC/Nga 마우스의 아토피 피부염에 대한 황금 가수분해물의 치료효과
Figure pat00008

표 3. 집먼지 진드기로 유도된 NC/Nga 마우스의 아토피 피부염에 대한 황금 가수분해물의 육안평가지수
Figure pat00009
Effects of Scutellariae extracts on clinical skin features and severity in DPE-induced dermatitis model of NC/Nga mice Clinical skin index of dermatitis was defined as the sum of the individual scores graded as 0 (none), 1 (mild), 2 (moderate) and 3 (severe) for each of five signs and symptoms (itch, erythema/hemorrhage, edema, excoriation/erosion and scaling /dryness) : Symptoms were evaluated by skin dryness, eruption and wound on the three parts of the body: ear, face and head, and back Statistically significant value compared with NC/Nga-CT mice grouup by t-test (***p<0001)
상기 그림 3을 참조하면, NC/Nga 생쥐에 유발된 아토피 피부염 억제 효과를 관찰해보면 그림 3A는 8 주령이 된 NC/Nga 생쥐의 등 부위의 사진이며, 그림 3B는 제모한 후 DPE를 8주간 도포한 후 사진으로, 각화현상이 진행되어 피부 염증이 심하게 나타내었다. 이에 반해 양성대조군인 CSA(그림 3C)는 복강 내 주사하였고, 상당한 호전현상을 나타내었다. 실험군인 황금가수분해물은 8주간 피부에 도포(그림 4D)한 결과, 대조군에 비하여 긁는 행동이 상대적으로 감소하였고, 또한, 각화, 태선화, 피부탈락 증상, 피부염 증상 등이 현저히 호전되었음을 확인할 수 있었다.
또한, 상기 표 3을 참조하면, 4주마다 피부염의 심화 정도를 관능적 방법에 의하여 측정한 결과, 대조군은 8주 2.1 ± 0.4, 12주 2.5 ± 0.16, 16주 2.6 ± 0.2, CsA는 8주 1.8 ± 0.41, 12주 1.7 ± 0.25, 16주 0.9 ± 0.4, 황금 가수분해물 5% 는 8주 1.5 ± 0.16, 12주 1.7 ± 0.3, 16주 0.8 ± 0.1,황금가수분해물 1% 는 8주 1.4 ± 0.24로, 12주 2.0 ± 0.35, 16주 1.6 ± 0.4로 12주부터 유의성 있는 감소 효과를 나타내었다.
5. 아토피 피부염 유도 및 시료처리와 NC / Nga 생쥐의 피부 및 귀의 현미경관찰 결과
실험 종료 후에, 왼쪽 귀 끝부분, 등 쪽 목 부분의 피부을 떼어내어 10% 파라포름알데히드(paraformaldehyde)에서 2시간 동안 고정하였다.
그 조직을 파라핀으로 포맷하였고, 5μm 부분의 두께로 블록(block)을 만들었다.
조직 부분은 염증을 일으키는 표피(epidermis), 진피(dermis), 케라티노사이트(keratinocytes), 호증구(neutrophils), 에오시노필(eosinophil) 및 그 외 다른 세포와 부종을 식별하는 헤마톡실린 및 에오신(hematoxyline and eosin, H&E) 염색과 비만세포 (mast cells)를 염색하는 톨루이딘(toluidine) 염색을 시행하였다.
면역화학 조직염색 (immuno histochemical stain)은 블록(block)을 만들고, 여기에 랫트안티마우스(rat anti-mouse) CD4 mAb (RM4-5; PharMingen, San Diego, CA), 랫트안티마우스(rat anti-mouse) CCR3 mAb (53-6.7; Becton Dickinson, Mountain View, CA) 항체를 사용하였다.
조직 절편을 4μm 두께로 세절한 후 프루브온 플러스 슬라이드(probe-on plus slide, Fisher Scientific, U.S.A)에 부착시켜 건조시켰다.
그리고 탈파라핀 (Deparaffinized) 후 함수시키고, 0.01M 구연산 완충액(citrate buffer pH 6.0)을 이용해 마이크로웨이브오븐(microwave oven)에 15분간 전처리 하였다.
조직 내 과산화효소의 작용을 억제하기 위하여 3% 과신화수소수에 10분간 처리한 후, 조직 내의 항원과 비특이적 단백결합을 억제하기 위해 정상 혈청으로 단백질을 차단시켰다. 그리고 일차 단일 항체에 1시간 동안 부착시킨 다음 완충액으로 수세하였다.
그림 4. 아토피 피부염으로 유도된 NC/Nga 생쥐의 피부 및 귀의 현미경 관찰 결과
Ear
H & E toluidine blue
Figure pat00010
Figure pat00011
Skin
H & E toluidine blue
Figure pat00012
Figure pat00013
Histologic examination of ear and skin lesion in DPE-induced dermatitis model of NC/Nga mice The animals were administrated with saline (control) or SBE for 8 weeks Ear, skin biopsy was stained with hematoxylin and eosin (H&E) and toluidine blue (A, E; normal B, F: cotrol, C, G: CsA, D, H; SBE) for examining inflammatory cells and mast cell, respectively Bright microscopy (Nikon, Japan, orignal magnification, ear x 200, skin x 400 )
실험 종료 후 마우스의 피부와 귀의 일부를 절단한 후 헤마톡실린 및 에오신(hematoxylin and eosin) 염색과 톨루이딘(toluidine blue) 염색을 통하여 조직의 일반형태 변화와 귀의 두께를 관찰한 결과 H&E 염색을 한 대조군(그림 4 B)의 피부와 귀에서는 표피(epidermis/dermis)가 부종으로 현저하게 확장되었고, 백혈구의 침윤도 관찰되었다.
이에 비해 황금 가수분해물(SBE) 투여군 (그림 4 D)에서는 대조군에 비하여 표피의 두께가 상대적으로 줄었고, 백혈구의 침윤이 현저히 감소하여 부종이 감소됨을 알 수 있었다.
비만세포(mast cell)를 염색하는 톨루이딘(toluidine) 염색에서는 대조군 (그림 4 F)은 진피(dermis) 주변에 비만세포 (화살표)가 많이 침윤된 것을 알 수 있다.
그러나 황금 가수분해물(SBE)투여군 (그림 4 H)에서는 사진에서 나타난 바와 같이 대조군에 비하여 비만세포를 거의 관찰 할 수 없었다.
또한, 400배 광학 현미경에서 화석해성 장치를 통해 귀조직의 두께를 측정한 결과, 정상군은 21.1 ± 1.4 (x10/μm), 대조군이 129.5 ± 2.5 (x10/μm), CsA는 57.4 ± 7.3 (x10/μm), 황금 가수분해물(SBE) 5% 투여군이 37.1 ± 0.3 (x10/μm), 황금 가수분해물(SBE) 1% 투여군이 62.2 ± 1.5 (x10/μm)로 나타나 대조군에 비하여 황금 가수분해물(SBE) 투여군에서 귀의 두께가 유의적으로 감소하는 것으로 나타났다. (표 4 참조)
표 4. 아토피 피부염으로 유도된 NC/Nga 생쥐의 귀 두께 비교
Figure pat00014
Ear thickness of NC/Nga mice by DPE stimulation After atopy dermatitis ear in NC/Nga mice model followedby the administration ofCsA, and Scutellariae extracts for 8 weeks (Nikon, Japan, orignal magnification, ear x 400)

Claims (5)

  1. 황금 1.0kg을 취하고 에탄올(EtOH) 2리터(L)를 넣어 8시간동안 가끔씩 흔들어 주면서 방치하는 단계;
    에탄올 추출용액을 흔들어 주면서 여과지를 사용하여 감압으로 하여 여과하고 여액을 취하여 단계;
    여과한 액을 감압농축기에 넣고 50 ~ 60℃에서 일정한 조건으로 감압 농축시켜 연조엑스 상태로 만드는 단계;
    베타글루쿠로니다제(β-glucuronidase) 50,000unit를 10밀리리터의 물에 녹여 연조엑스에 가하고, 40~50℃에서 4시간 동안 흔들어 주면서 반응시켜 가수분해시키는 단계;로 이루어진 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 예방 및 개선효과를 나타내는 황금 가수분해 추출물의 제조방법.
  2. 제1항에 의해 제조된 황금 가수분해 추출물 200g을 취하고, 알로에베라 2kg과 백장미 콜로이드 500g을 균일하게 혼합하여 황금 가수분해 추출 혼합물을 얻고,
    정제수 40kg, 글리세릴스테아레이트 6kg, 피이지100스테아레이트 4kg, 소르비탄스테아레이트 3kg, 폴리소르베이트20 3kg, 디메치콘 0.5kg, 트리에탄올아민 1kg, 카프릴릭카프릴트리글리세라이드 4kg, 카보머941 1kg, 부틸렌글라이콜 1kg, 이소도데칸 0.5kg, 글리세린 5kg, 디에칠헥실카보네이트 3kg, 디카프릴카보네이트 3kg, 스테아릴알코올 5kg, 글리세릴베헤네이트 1kg, 페녹시에탄올 0.5kg, 디스테아디모늄헥토라이트 1kg, 소르비탄세스퀴올레이이트 3kg, 메칠파라벤 0.3kg, 프로필파라벤 0.2kg, 디소디움이디티에이 0.5kg을 혼합하고 70 ~ 75℃에서 4시간 동안 가온하면서 혼합하여 바디 로션기제를 수득한 후 상기 황금 가수분해 추출 혼합물과 함께 호모게나이저에 투입하여 3,000 ~ 3,500 알피엠으로 30분 동안 균질화시켜 바디 로션으로 제조하는 것을 특징으로 하는 황금 가수분해 추출물을 이용하여 제조된 화장품.
  3. 제1항에 의해 제조된 황금 가수분해 추출물 200g을 취하고, 알로에베라 2kg과 백장미 콜로이드 500g을 균일하게 혼합하여 황금 가수분해 추출 혼합물을 얻고,
    정제수 50kg, 라우린산 6kg, 미리스틴산 4kg, 모노알킬포스페이트 1kg, 옥시벤존 0.5kg, 글리콜디스테아레이트 4kg, 트리에탄올아민 1kg, 폴리쿠아테니움 1kg, 라우릴설폰산트리에탄올아민 1kg, 라우라마이드 DEA 1kg, 사이클로메치콘 0.5kg, 코카미드프로필베타인 2kg, K-쿠일가수분해콜라겐 1kg, 부틸렌글라이콜 1kg, 피이지-7-글리세릴코코에이트 5kg, 글리세린 5kg, 글리세릴베헤네이트 1kg, 페녹시에탄올 1kg, 디메치콘 0.5kg, 소르비탄세스퀴올레이이트 3kg, 프로필렌카보네이트 1kg, 메칠파라벤 0.3kg, 프로필파라벤 0.2kg, 디소디움이디티에이 0.5kg을 혼합하고, 70 ~ 75℃에서 4시간 동안 가온하면서 혼합하여 바디클린저 기제를 수득한 후 상기 황금 가수분해 추출 혼합물과 함께 호모게나이저에 투입하여 3,000 ~ 3,500 알피엠으로 30분 동안 균질화시켜 바디클린저로 제조하는 것을 특징으로 하는 황금 가수분해 추출물을 이용하여 제조된 화장품.
  4. 제1항에 의해 제조된 황금 가수분해 추출물 200g을 취하고, 알로에베라 2kg과 백장미 콜로이드 500g을 균일하게 혼합하여 황금 가수분해 추출 혼합물을 얻고,
    정제수 35kg, 글리세릴스테아레이트 5kg, 피이지100스테아레이트 3kg, 소르비탄스테아레이트 4kg, 폴리소르베이트20 3kg, 디메치콘 1kg, 트리에탄올아민 1kg, 화이트비스왁스 2kg, 카보머941 1kg, 부틸렌글라이콜 0.5kg, 이소도데칸 1kg, 글리세린 5kg, 디에칠헥실카보네이트 1kg, 디카프릴카보네이트 1kg, 스테아릴알코올 4kg, 글리세릴베헤네이트 1kg, 페녹시에탄올 1kg, 디스테아디모늄헥토라이트 1kg, 소르비탄세스퀴올레이이트 2kg, 메칠파라벤 0.3kg, 프로필파라벤 0.2kg, 디소디움이디티에이 0.5kg을 혼합하고, 70 ~ 75℃에서 4시간 동안 가온하면서 혼합하여 페이셜크림 기제를 수득한 후 상기 황금 가수분해 추출 혼합물과 함께 호모게나이저에 투입하여 3,000 ~ 3,500 알피엠으로 30분 동안 균질화시켜 페이셜크림으로 제조하는 것을 특징으로 하는 황금 가수분해 추출물을 이용하여 제조된 화장품.
  5. 제1항에 의해 제조된 황금 가수분해 추출물 200g을 취하고, 알로에베라 2kg과 백장미 콜로이드 500g을 균일하게 혼합하여 황금 가수분해 추출 혼합물을 얻고,
    정제수 40kg, 사이클로메치콘 1kg, 에칠헥실메톡시신나메이트 1kg, 실리카 0.5kg, C12-25 알킬벤조에이트 1kg, 징크옥사이드 0.5kg, 부틸렌글라이콜 1kg, 이소도데칸 1kg, 글리세린 5kg, 디에칠헥실카보네이트 1kg, 디카프릴카보네이트 0.5kg, 스테아릭애씨드 3kg, 글리세릴베헤네이트 1kg, 에이코사디오에이트 1kg, 페녹시에탄올 0.5kg, 디스테아디모늄헥토라이트 1kg, 디메치콘 0.5kg, 소르비탄세스퀴올레이이트 3kg, 프로필렌카보네이트 1kg, 메칠파라벤 0.3kg, 프로필파라벤 0.2kg, 디소디움이디티에이 0.5kg을 혼합하고, 70 ~ 75℃에서 4시간 동안 가온하면서 혼합하여 썬로션 기제를 수득한 후 수득된 썬로션 기제에 티타늄디옥사이드 0.5kg을 가한 다음 상기 황금 가수분해 추출 혼합물과 함께 호모게나이저에 투입하여 3,000 ~ 3,500 알피엠으로 30분 동안 균질화시켜 썬로션으로 제조하는 것을 특징으로 하는 황금 가수분해 추출물을 이용하여 제조된 화장품.
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