KR20110091964A - 항균활성과 살충력이 우수한 신규한 스트렙토마이세스속 균주 및 이의 배양방법과 배양물을 이용한 제제 - Google Patents

항균활성과 살충력이 우수한 신규한 스트렙토마이세스속 균주 및 이의 배양방법과 배양물을 이용한 제제 Download PDF

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Abstract

본 발명은 식물병원균, 농업해충, 산림해충, 위생해충에 대하여 우수한 항균활성과 살충력을 갖는 신규한 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(미생물 수탁 번호 : KACC91521P(국립농업과학원 농업유전자원센터)) 및 이의 배양 방법과 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022 균주의 균사, 포자, 배양액 중 적어도 1종 이상을 포함하는 제제에 관한 것으로, 강원도 태백지역 토양으로부터 식물병원균에 대한 항균활성이 우수하고, 농업해충, 산림해충, 위생해충에 우수한 살충력을 갖는 균주를 선별하고, 이를 대량 배양한 후, 균주의 균사, 포자, 배양액 중 적어도 1종 이상을 포함하는 제제를 제조하여 적용함으로써 친환경농업이 가능하도록 하였다.

Description

항균활성과 살충력이 우수한 신규한 스트렙토마이세스속 균주 및 이의 배양방법과 배양물을 이용한 제제{New Strepomyces sp. A1022 having the excellent antibiotic activity and its fermentation method, and a medicine using the its culture}
본 발명은 식물병원균, 농업해충, 산림해충, 위생해충에 대하여 우수한 항균활성과 살충력을 갖는 신규한 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(미생물 수탁 번호 : KACC91521P(국립농업과학원 농업유전자원센터)) 및 이의 배양 방법과 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022 균주의 균사, 포자, 배양액 중 적어도 1종 이상을 포함하는 제제에 관한 것으로, 좀 더 구체적으로는 강원도 태백지역 토양으로부터 식물병원균에 대한 항균활성이 우수하고, 농업해충, 산림해충, 위생해충에 우수한 살충력을 갖는 균주를 선별하고, 이를 대량 배양한 후, 균주의 균사, 포자, 배양액 중 적어도 1종 이상을 포함하는 제제를 제조하여 적용함으로써 친환경농업이 가능하도록 하는 항균활성과 살충력이 우수한 신규한 스트렙토마이세스속 균주 및 이의 배양방법과 배양물을 이용한 제제에 관한 것이다.
우리 나라는 2003년 생물농약 중 미생물농약 관련 법안 통과와 함께 (주)그린바이오텍, (주)KIBC 등과 같은 벤처기업과 (주)동부하이텍과 같은 대기업에서 본격적인 미생물 농약 양산 체제에 돌입하면서 미생물 농약이 가장 먼저 발전하고 있는데, 이는 생화학농약이 발달한 북미나, 천적이 발달한 유럽과는 다소 다른 양상을 보인다.
현재의 미생물농약 시장은 국내,외적으로 BT제가 주도를 하고 있으며, 특히 국내에서는 바실러스속(Bacillus sp .), 패니바실러스속(Paenibacillus sp .) 등과 같은 세균과 암페로마이세스속(Ampelomyces sp .), 비아우베리아속(Beauveria sp.)과 같은 중복기생균주를 공업화 및 상품화하여 시장 전개를 하고 있다(Russell K.H. & Susan, M.B., 2005; Butt, T. M., et al., 2001).
그러나, 기 개발된 1세대 생물농약의 경우 몇몇의 문제점으로 인한 생물농약으로서 한계성 때문에 시장의 전개가 활발히 이뤄지지 않고 있는 실정이여서 이를 극복할 수 있는 적극적인 대책이 요구된다(Samuel G. M. & Graham, A. M., 2003; Copping, L. G., 2001).
즉, 생물농약은 생물농약 개발기간과 개발의 어려움 때문에 제품가격이 화학농약에 비해 2 ∼ 3배 이상 더 비싼 문제점이 있고, 약효는 일부 제품의 경우 화학농약 대비 방제가가 60%에도 미치지 못하는 문제점이 있으며, 일부 제품은 유효성분의 안정성 보증에 문제가 있어, 냉장보관 및 냉장유통과 같은 저온유통체계(cold chain)을 이용해야만 하는 유통상의 문제점이 있다(Burges, H. D., 1998).
또한, 중복기생균을 포함한 일부 균주의 경우에는 약제 살포시기와 살포간격 등에 대한 제한이 있고 살포 후에도 후처리 등의 번거로움이 있다.
생물농약시장을 주도했던 BT제를 포함한 바실러스속(Bacillus sp .) 균을 이용한 제품의 경우, 저항성 에 대한 보고가 있어 새로운 균주를 이용한 차세대 미생물농약의 개발이 절실하다(Samuel G. M. & Graham, A. M., 2003).
아울러, 일부 균주의 경우 독성을 유발하는 것으로 알려져 인간을 포함한 포유독성의 문제, 유용생물에 대한 안전성에 대한 문제가 대두되고 있다(Browun, 1978; 배영석, 2009).
또한, 미생물농약을 이용한 환경친화적인 농법이나 관리를 권장하기 위하여 2003년 친환경농업육성법과 2007년 친환경농자재 관련법이 시행되어 환경농업의 중요 소재인 미생물농약의 개발에 체계적이고 장기적인 지원이 요구되고 있다.
이에 따라, 1세대 생물농약의 한계를 극복하면서 저가이면서 약효가 우수하고(화학농약 대비 80% 이상), 환경에 대한 안전성과 유효 성분의 안정성이 뛰어난 제2세대 생물농약의 개발이 요구되고 있다.
따라서, 본 발명의 목적은 식물 병원균에 대한 활성 뿐만 아니라, 농업해충, 산림해충 및 위생해충에 대하여 동시에 활성을 갖는 스트렙토마이세스 속 A1022(Streptomyces sp.)(미생물 수탁 번호 : KACC91521P(국립농업과학원 농업유전자원센터))를 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 목적의 스트렙토마이세스 속 A1022(Streptomyces sp. : KACC91521P) 균주의 대량 배양 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 식물병원균인 알터나리아 로지프스(Alternaria logipes), 세르코스포라 캐니세스(Cercospora canescece), 콜레토트리큠 오비큘라리에(Colletotrichum orbiculare), 다이아포르테 사이트리(Diaporthe citri), 마그나포르테 그라이시아(Magnaporthe grisea), 파이토프소라 캡사이시(Phytophthora capsici) 등에 의해 발병하는 담배 깨씨무늬병(brown spot), 녹두갈색무늬병, 오이탄저병, 감귤검은점무늬병, 벼도열병 고추역병 등을 효율적으로 방제하고, 농업해충인 배추좀나방(Plutella xylostella)과 산림해충인 소나무재선충(Bursaphelenchus xylophilus), 위생해충인 모기유충 3종, 에이디스 에집타이(Aedes aegypti), 큐렉스 파피엔스(Culex pipiens), 오클레로타투스 토고이(Ochlerotatus togoi) 등을 방제할 수 있는 스트렙토마이세스 속 A1022(Streptomyces sp. : KACC91521P) 균주의 배양물을 주재로 하는 제제 및 이를 이용한 생물적 방제법을 제공하는 데 있다.
상기 목적들 뿐만 아니라 용이하게 표출되는 또 다른 목적들을 용이하게 달성하기 위하여 본 발명에서는 강원도 태백지역 토양으로부터 식물병원균에 대한 항균활성이 우수하고, 농업해충, 산림해충, 위생해충에 우수한 살충력을 갖는 균주를 선별하고, 이를 대량 배양한 후, 균주의 균사, 포자, 배양액 중 적어도 1종 이상을 포함하는 제제를 제조하여 적용함으로써 친환경농업이 가능하도록 하였다.
본 발명은 토양에서 분리한 신균주 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P) 및 이를 이용한 식물병원균 방제제와 해충방제제를 제공함으로 친환경농업의 발전과 저탄소 녹생성장의 환경산업에도 매우 유용하고, 미생물의 대량 배양 기술과 생물농약으로의 제제화 기술을 제공함으로 농약산업의 발전에도 매우 유용한 발명이다.
도 1은 본 발명에 따른 신규한 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P)의 DNA 자이레이스(gyrase : gyrB) 염기서열을 분석(588bp)한 결과를 나타내는 것이고,
도 2는 본 발명에 따른 신규한 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P)의 벼도열병에 대한 항균활성을 나타내는 사진이며,
도 3은 본 발명에 따른 신규한 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P)의 감귤검은점무늬병에 대한 항균활성을 나타내는 사진이고,
도 4는 본 발명에 따른 신규한 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P)의 모기 유충 살충 효과를 나타내는 사진이다.
본 발명에 따른 신규한 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P) 균주는 배양물이 식물병원균인 알터나리아 로지프스(Alternaria logipes), 세르코스포라 캐니세스(Cercospora canescece), 콜레토트리큠 오비큘라리에(Colletotrichum orbiculare), 다이아포르테 사이트리(Diaporthe citri), 마그나포르테 그라이시아(Magnaporthe grisea), 파이토프소라 캡사이시(Phytophthora capsici) 등에 의해 발병하는 담배 깨씨무늬병(brown spot), 녹두갈색무늬병, 오이탄저병, 감귤검은점무늬병, 벼도열병 고추역병 등을 효율적으로 방제하고, 농업해충인 배추좀나방(Plutella xylostella)과 산림해충인 소나무재선충(Bursaphelenchus xylophilus), 위생해충인 모기유충 3종, 에이디스 에집타이(Aedes aegypti), 큐렉스 파피엔스(Culex pipiens), 오클레로타투스 토고이(Ochlerotatus togoi) 등을 방제할 수 있는 것으로 특징지워진다.
먼저, 길항방선균을 선발하기 위하여 강원도 태백지역의 토양 표토로부터 10cm 깊이의 토양을 채취하였다. 채취한 시료 1g을 멸균수에 넣고 29℃에서 30분간 진탕한 후 토양 희석 한천평판법으로 10-5배까지 희석하여 희석액 0.1㎖를 배넷평판배지(Bennet,s media: 1.0중량% 포도당, 0.2중량% 펩톤, 0.1중량% 소고기 추출물, 0.1중량% 효모추출물, 1.5중량% 한천, 5ppm 니스타틴(Nystatin), 잔량의 증류수)에 도말하여 29℃에서 7일간 배양하고, 단일 균총(single colony)을 순수 분리하여 배넷사면배지에 옮겨 4℃에서 보관하였다. 각각의 균주는 식물병원균에 항균활성을 나타내거나, 각각의 해충에 활성을 나타내는 우수한 균주를 선별하고, 그 중에서 식물병원균에 대한 항균활성이 우수하고, 농업해충, 산림해충, 위생해충에 우수한 살충력을 갖는 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022 균주를 선발하여 2009년 12월 30일에 국립농업과학원 농업유전자원센터에 기탁하였다(미생물 수탁 번호 : KACC91521P).
선별된 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P)의 배지 조성 및 물리적 조건을 검토하고, 통계적 방법에 의해 배지 성분비를 최적화한 결과, 대량 배양을 위한 배지 조건은 대두박(soybean meal) 0.5 ∼ 0.7중량%, 효모추출물(yeast extrct) 0.3 ∼ 0.4중량%, 글루코오스(glucose) 1.5 ∼ 1.8중량%, CaCO3 0.05 ∼ 0.1중량%, MgSO4 0.05 ∼ 0.1중량% 및 잔량의 증류수의 비율이 가장 적합하였고, 기타 물리적 조건으로 종균(seed) 접종량은 0.3 ∼ 0.5중량%, 교반속도 150 ∼ 300rpm, 통기량 0.5 ∼ 1.0vvm, 온도 29℃±1.0, 초기 pH는 6.5가 가장 적합하였다. 또, 배양 중에는 pH조절을 하지않고 96시간 배양하였다.
배양이 끝난 배양액은 액상수화제와 분상수화제의 2가지 형태로 제제화하였다.
액상수화제 형태의 제제화는 배양이 끝난 배양액을 콜로이달 밀러(colloidal miller)를 이용하여 균체를 분쇄한 후, 액상형태의 계면활성제인 폴리옥시에틸렌 노닐페닐 에테르(polyoxyethylene nonylphenyl ether : CAS No. 68412-54-4)를 배양액 전체 중량에 대하여 5 ∼ 10중량% 첨가하고, 보조제로 비타민 C(ascobic acid)와 글리세롤(glycerol)을 배양액 전체 중량에 대하여 각각 0.1 ∼ 0.2중량%, 1 ∼ 5중량%를 첨가하는 방법으로 행하였다.
분상수화제 형태로의 제제화는 배양이 끝난 배양액을 연속원심분리기를 이용하여 배양액의 부피를 약 절반 수준으로 줄인 후, 동결건조기(freezer dryer) 또는 분무건조기(spray dryer) 등 2가지 건조기기를 이용하여 제제화하였다.
동결건조는 배양액에 건조 부재로서 락토오스(Lactose) 15 ∼ 30중량%와 화이트 카본(white carbon) 5 ∼ 10중량%을 첨가한 후 -30 ∼ 20℃로 건조하였다.
분무 건조는 배양이 끝난 배양액에 건조부재로서 화이트 카본 5 ∼ 10중량%, 덱스트린(dextrin) 5 ∼ 10중량%를 각각 첨가한 후, in let 온도 80 ∼ 90℃, out let 온도 120 ∼140℃로 건조하였다.
건조가 완료된 원제에 분상의 계면활성제인 폴리옥시에틸렌 노닐페닐 에테르(polyoxyethylene nonylphenyl ether : CAS No. 68412-54-4)를 배양액 전체 중량에 대하여 5 ∼ 10중량% 첨가하고, 보조제로 비타민 C(ascobic acid)를 배양액 전체 중량에 대하여 0.1 ∼ 0.2중량% 첨가하는 방법으로 분상수화제 형태로의 제제화를 행하였다.
다음의 실시예는 본 발명을 좀 더 상세히 설명하는 것이지만, 본 발명의 범주를 한정하는 것은 아니다.
실시예 1 : 길항방선균의 선발
길항방선균을 선발하기 위하여 강원도 태백지역의 토양 표토로부터 10cm 깊이의 토양을 채취하였다. 채취한 시료 1g을 멸균수에 넣고 29℃에서 30분간 진탕한 후 토양 희석 한천평판법으로 10-5배까지 희석하여 희석액 0.1㎖를 배넷평판배지(Bennet,s media: 1.0중량% 포도당, 0.2중량% 펩톤, 0.1중량% 소고기 추출물, 0.1중량% 효모추출물, 1.5중량% 한천, 5ppm 니스타틴(Nystatin), 잔량의 증류수)에 도말하여 29℃에서 7일간 배양하고, 단일 균총(single colony)을 순수 분리하여 배넷사면배지에 옮겨 4℃에서 보관하였다. 각각의 균주는 식물병원균에 항균활성을 나타내거나, 각각의 해충에 활성을 나타내는 우수한 균주를 선별하고, 그 중에서 식물병원균에 대한 항균활성이 우수하고, 농업해충, 산림해충, 위생해충에 우수한 살충력을 갖는 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022 균주를 선발하여 2009년 12월 30일에 국립농업과학원 농업유전자원센터에 기탁하였다(미생물 수탁 번호 : KACC91521P).
실시예 2 : 스트렙토마이세스 속( Streptomyces sp .) A1022( KACC91521P ) 균주의 동정
16S rDNA 염기서열에 기초한 분자계통학적 분석결과, A1022균주는 Streptomyces 속의 종을 포함하는 계통학적 그룹에 속하는 균주로서, Streptomyces odorifer DSM 40347T(Z76682), Streptomyces sampsonii ATCC25495T(D63871), Streptomyces coelicolor DSM40233T(Z76678), Streptomyces limosus DSM 40131T(Z76679), Streptomyces felleus DSM 40130T(Z76681), Streptomyces canescens DSM 40001T(Z76684)와 100%의 높은 상동성을 나타냈다.
16S rDNA는 매우 보존적인 염기서열로서 종과 속간의 분화에 따른 다양성이 크고 세균을 종 수준으로 구분할 수 있는 정보를 담고 있는 영역으로 많이 사용되었으나 Streptomyces group내의 종들은 16S rRNA 유전자 염기서열이 100%의 매우 높은 유사도를 나타내어 16S rDNA 염기서열에 기초한 동정이 불가능하다.
따라서, A1022 균주의 DNA gyrase (gyrB) 염기서열에 기초한 분자계통학적 분석 결과, Streptomyces 속의 종을 포함하는 계통학적 그룹에 속하는 균주로서 Streptomyces sp. M46(DQ445803)와 97.3%의 유연관계를 나타내는 것으로 확인되어 Streptomyces sp.로 동정되었다.
A1022 균주의 균체 지방산조성 분석 결과, 하기의 표 1에 기재된 바와 같이 주요 지방산으로 C15 :0 iso (47.7%), C15 :0 anteiso(28.46%)를 나타내었으며, C13 :0 iso, C14 :0 iso, C16 :0 iso, C17 :0 iso, C17 :0 anteiso 그리고 C17 :0 3OH와 같은 다양한 분지형 지방산을 함유하는 특징을 나타내었다.
지방산 A1022
포화지방산
C13:0 -
C14:0 1.98
C16:0 4.78
C18:0 -
분지쇄 지방산
iso-C14:0 1.68
iso-C15:0 47.4
anteiso-C15:0 28.46
iso-C16:0 2,27
iso 17:1 w5c 2.11
iso-C17:0 3.56
anteiso-C17:0 3.92
iso 17:0 3OH 2.85
실시예 3 : 스트렙토마이세스 속( Streptomyces sp .) A1022( KACC91521P ) 균주 배양액의 식물병원균에 대한 항균활성
실시예 1에서 얻어진 균주의 식물병원균에 대한 항균활성 및 해충에 대한 살충성을 클리어 존 방법(clear zone method)을 이용하여 확인하였다.
즉, 깨씨무늬병(brown spot), 녹두갈색무늬병, 오이탄저병, 감귤검은점무늬병, 벼도열병, 고추역병 등을 유발하는 알터나리아 로지프스(Alternaria logipes ), 세르코스포라 캐니세스 (Cercospora canescece), 보트리티스 시네리에(Botrytis cinerea), 콜레토트리큠 오비큘라리에(Colletotrichum orbiculare), 다이아포르테 사이트리(Diaporthe citri), 푸사리움 옥시스포럼(Fusarium oxysporum), 마그나포르테 그라이시아(Magnaporthe grisea), 파이토프소라 캡사이시(Phytophthora capsici), 라이족토니아 솔라나이(Rhizoctonia solani), 스크레로티니아 스클레티오럼(Sclerotinia soleroforum) 등의 식물병원균을 공지의 감자덱스트로스한천배지에서 배양하였고, 이들 균주를 대상으로 항균활성을 측정하였다.
즉, 각 식물병원균의 플레이트(plate)에 멸균수를 첨가하여 포자만 회수한 다음, 이를 0.5% 소프트 아가(soft agar)에 포자수가 1.0E + 6 포자/㎖ 수준이 되도록 혼합한 후, PDA 배지에 중층배지를 만들어 약 2시간 가량 건조하여 사용하였다.
검정시료는 배양이 완료된 배양액에 동량의 메탄올을 첨가한 후, 24시간 메탄올 추출하여 상등액만 시험에 사용하였다. 배양상등액 65㎕를 페이퍼 디스트(paper disc)에 흡수시켜 건조한 후, 건조된 중층배지위에 올려놓고 25℃에서 배양하면서 항균활성을 확인하여 그 결과를 표 2에 기재하였고, 벼도열병에 대한 항균활성을 실험한 사진을 도 2에, 감귤검은점무늬병에 대한 항균활성을 실험한 사진을 도 3에 도시하였다.
(단위 : mm)
병원균 A1022 + 대조구 + 대조구의 품명
알터나리아 로지프스 16 17 Kasugamycin, Sigma
보트리티스 시네리에 - 16 Procymidone(프로파수화제), 동방아그로
세르코스포라 캐니세스 20 15 Chlorothalonil(타로닐수화제), 경농
콜레토트리큠 오비큘라리에 22 20 Azocxystrobin, Sygenta
다이아포르테 사이트리 35 15 Mancozeb(만코지수화제), 바이엘
푸사리움 옥시스포럼 - 15 Polyoxin, Sigma
마그나포르테 그라이시아 35 30 Kasugamycin, Sigma
파이토프소라 캡사이시 19 15 Azocxystrobin, Sygenta
라이족토니아 솔라나이 - 14 Azocxystrobin, Sygenta
스크레로티니아 스클레티오럼 - 15 Polyoxin, Sigma
표 2로부터 알 수 있는 바와 같이 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022 배양액은 세르코스포라 캐니세스(Cercospora canescece), 콜레토트리큠 오비큘라리에(Colletotrichum orbiculare), 다이아포르테 사이트리(Diaporthe citri), 마그나포르테 그라이시아(Magnaporthe grisea) 등의 식물병원균에 대하여서는 강한 활성을 나타내는 반면, 알터나리아 로지프스(Alternaria logipes)와 파이토프소라 캡사이시(Phytophthora capsici)에 대해서는 다소 약한 활성을 보였다.
또, 보트리티스 시네리에(Botrytis cinerea), 푸사리움 옥시스포럼(Fusarium oxysporum), 라이족토니아 솔라나이(Rhizoctonia solani), 스크레로티니아 스클레티오럼(Sclerotinia soleroforum)에 대해서는 활성을 나타내지 않는 특성을 보였다.
실시예 4 : 스트렙토마이세스 속( Streptomyces sp .) A1022( KACC91521P ) 균주 배양액의 해충에 대한 살충성
파밤나방(Spodoptera exigua)과 배추좀나방(Plutella xylostella)은 25 ± 1 ℃, 광주기 L16/D8, 상대습도 55-65%의 조건을 유지하고, 인공사료를 섭식시키면서 계대사육한 유충을 실험에 사용하였고, 소나무재선충(Bursaphelenchus xylophilus)은 25 ± 1 ℃, 암상태에서 계대사육한 소나무재선충을 실험에 사용하였다.
파밤나방과 배추좀나방 실험법은 일반적인 섭식시험을 실시하였는데, 먹이인 배추잎을 침지법에 의해 약제처리하였다. 즉, 10배 희석한 배양액에 배추잎을 담궜다가 건져서 완전히 풍건 후 사용하였고, 대조약제는 사용희석배수 만큼 희석한 후 같은 방법으로 약제 처리하였다.
소나무재선충은 사육하는 물에 100ppm의 농도로 배양액을 투여하였다.
스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022의 살충력 검정 결과, 파밤나방에는 살충력이 약하게 나타났으나, 배추좀나방과 소나무재선충에서는 약 70% 정도의 살충력이 확인되었다.
(단위 : %)
해 충 A1022 + 대조구 - 대조구(무처리구)
파밤나방 13 ± 7.2 82.01) 0.0
배추좀나방 71 ± 1.4 97.02) 0.0
소나무재선충 69 ± 1.2 95.33) 0.0
* 1. Emamectin benzoate (에이팜), 신젠타
2. Bacillus thuringiensis sub. aizawai (쎈타리), 크롭사이언스
3. Cinamon oil, Berj(B;oomfield, NJ, USA)
모기유충 사육은 30 ± 1 ℃, 광주기 L16/D8, 상대습도 90%의 조건을 유지하면서 계대사육한 유충을 실험에 사용하였다.
실험방법은 300㎖의 컵에 200㎖의 증류수를 넣고, 모기 유충을 20 ∼ 30마리 정도 넣은 후 배양액을 100ppm 농도로 처리하였다. 대조약제는 사용 희석배수 만큼 희석한 희석액에 모기유충을 같은 방법으로 처리하였다.
스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022는 모기유충에 대하여서도 살충력을 보였는데, 모기유충은 종(stain)에 따라 살충력이 차이나는 것으로 확인되었다. 에이디스 에집타이(Aedes aegypti)와 큐렉스 파피엔스(Culex pipiens)에서는 각각 50%, 68%의 살충력을 보인 반면, 오클레로타투스 토고이(Ochlerotatus togoi)에서는 97%의 살충력을 보이는 특성을 나타냈다.
(단위 : %)
모기유충 A1022 + 대조구1 ) - 대조구(무처리구)
Aedes aegypti 50 90 0
Culex pipiens 68 90 0
Ochlerotatus togoi 97 90 0
* 1. Bacillus thuringiensis sub. aizawai (슈리사이드), 바이엘
실시예 5 : 스트렙토마이세스 속( Streptomyces sp .) A1022( KACC91521P ) 균주의 배양조건
선별된 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P)의 배지 조성 및 물리적 조건을 검토하고, 통계적 방법에 의해 배지 성분비를 최적화한 결과, 대량 배양을 위한 배지 조건은 대두박(soybean meal) 0.5 ∼ 0.7중량%, 효모추출물(yeast extrct) 0.3 ∼ 0.4중량%, 글루코오스(glucose) 1.5 ∼ 1.8중량%, CaCO3 0.05 ∼ 0.1중량%, MgSO4 0.05 ∼ 0.1중량% 및 잔량의 증류수의 비율이 가장 적합하였고, 기타 물리적 조건으로 종균(seed) 접종량은 0.3 ∼ 0.5%, 교반속도 150 ∼ 300rpm, 통기량 0.5 ∼ 1.0vvm, 온도 29℃±1.0, 초기 pH는 6.5가 가장 적합하였다. 또, 배양 중에는 pH조절을 하지 않고 96시간 배양하는 것이 바람직하였다.
실시예 6 : 스트렙토마이세스 속( Streptomyces sp .) A1022( KACC91521P ) 균주의 배양물의 제제화
배양이 끝난 배양액은 액상수화제와 분상수화제의 2가지 형태로 제제화하였다.
액상수화제 형태의 제제화는 배양이 끝난 배양액을 콜로이달 밀러(colloidal miller)를 이용하여 균체를 분쇄한 후, 액상형태의 계면활성제인 폴리옥시에틸렌 노닐페닐 에테르(polyoxyethylene nonylphenyl ether : CAS No. 68412-54-4)를 배양액 전체 중량에 대하여 5 ∼ 10중량% 첨가하고, 보조제로 비타민 C(ascobic acid)와 글리세롤(glycerol)을 배양액 전체 중량에 대하여 각각 0.1 ∼ 0.2중량%, 1 ∼ 5중량%를 첨가하는 방법으로 행하였다.
분상수화제 형태로의 제제화는 배양이 끝난 배양액을 연속원심분리기를 이용하여 배양액의 부피를 약 절반 수준으로 줄인 후, 동결건조기(freezer dryer) 또는 분무건조기(spray dryer) 등 2가지 건조기기를 이용하여 제제화하였다.
동결건조는 배양액에 건조 부재로서 락토오스(Lactose) 15 ∼ 30중량%와 화이트 카본(white carbon) 5 ∼ 10중량%를 첨가한 후 -30℃, -20℃,-10℃에서 각각 3시간씩 건조하고, 0℃, 10℃, 15℃에서 각각 4시간씩 건조하여 총 21시간 건조한 후, 20℃에서 7시간 이상 안정화시켰다. 즉, 28시간 이상 건조 공정을 진행하였다.
분무 건조는 배양이 끝난 배양액에 건조부재로서 화이트 카본 5 ∼ 10중량%, 덱스트린(dextrin) 5 ∼ 10중량%를 각각 첨가한 후, in let 온도 80 ∼ 90℃, out let 온도 120 ∼140℃로 건조하였다.
건조가 완료된 원제에 분상의 계면활성제인 폴리옥시에틸렌 노닐페닐 에테르(polyoxyethylene nonylphenyl ether : CAS No. 68412-54-4)를 배양액 전체 중량에 대하여 5 ∼ 10중량% 첨가하고, 보조제로 비타민 C(ascobic acid)를 배양액 전체 중량에 대하여 각각 0.1 ∼ 0.2중량% 첨가하는 방법으로 분상수화제 형태로의 제제화를 행하였다.
제조된 제제의 식물병원균에 대한 활성과 균수 보존성을 측정하여 표 5에 기재하였다.
즉, 각 식물병원균의 플레이트(plate)에 멸균수를 첨가하여 포자만 회수한 다음, 이를 0.5% 소프트 아가(soft agar)에 포자수가 1.0E + 6 포자/㎖ 수준이 되도록 혼합한 후, PDA 배지에 중층배지를 만들어 약 2시간 가량 건조하여 사용하였다.
검정시료는 배양이 완료된 배양액에 동량의 메탄올을 첨가한 후, 24시간 메탄올 추출하여 상등액만 시험에 사용하였다. 배양상등액 65㎕를 페이퍼 디스트(paper disc)에 흡수시켜 건조한 후, 건조된 중층배지위에 올려놓고 25℃에서 배양하면서 항균활성을 확인하였다.
시간(월)
 0 2 4 6 8 10 12

액상수화제(S.C.)		 포자수
(cfu/mL)		 5.0E+7 4.3E+7 2.7E+7 1.2E+7 9.5E+6 8.2E+6 6.3E+6
항균활성
(mm)		 20 20 19 18 17 16 15



분상수화제
(W.P.)
분무
건조		 포자수
(cfu/mL)		 2.5E+8 1.7E+8 9.6E+7 7.5E+7 6.0E+7 5.2E+7 3.7E+7
항균활성
(mm)		 25 23 21 20 19 18 17

동결
건조		 포자수
(cfu/mL)		 5.0E+8 4.1E+8 2.9E+8 1.1E+8 8.9E+7 8.2E+7 7.0E+7
항균활성
(mm)		 26 25 24 22 20 19 18
Figure pat00001

Claims (9)

  1. 식물병원균, 농업해충, 산림해충, 위생해충에 대하여 우수한 항균활성과 살충력을 갖는 신규한 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(미생물 수탁 번호 : KACC91521P(국립농업과학원 농업유전자원센터)).
  2. 대두박(soybean meal) 0.5 ∼ 0.7중량%, 효모추출물(yeast extrct) 0.3 ∼ 0.4중량%, 글루코오스(glucose) 1.5 ∼ 1.8중량%, CaCO3 0.05 ∼ 0.1중량%, MgSO4 0.05 ∼ 0.1중량% 및 잔량의 증류수로 구성되는 배지에 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P)를 접종하되 종균(seed) 접종량은 0.3 ∼ 0.5중량%로 하고, 교반속도 150 ∼ 300rpm, 통기량 0.5 ∼ 1.0vvm, 온도 29℃±1.0, 초기 pH 6.5로 배양하며, 배양 중에는 pH조절을 하지않고 96시간 배양하는 것을 특징으로 하는 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P)의 배양 방법.
  3. 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P) 배양액을 콜로이달 밀러(colloidal miller)를 이용하여 균체를 분쇄한 후, 액상 형태의 계면활성제인 폴리옥시에틸렌 노닐페닐 에테르(polyoxyethylene nonylphenyl ether : CAS No. 68412-54-4)를 배양액 전체 중량에 대하여 5 ∼ 10중량% 첨가하고, 보조제로 비타민 C(ascobic acid)와 글리세롤(glycerol)을 배양액 전체 중량에 대하여 각각 0.1 ∼ 0.2중량%, 1 ∼ 5중량%를 첨가하는 것을 특징으로 하는 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P) 배양액 주재의 액상수화제.
  4. 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P) 배양액을 건조한 원제에 분상의 계면활성제인 폴리옥시에틸렌 노닐페닐 에테르(polyoxyethylene nonylphenyl ether : CAS No. 68412-54-4)를 배양액 전체 중량에 대하여 5 ∼ 10중량% 첨가하고, 보조제로 비타민 C(ascobic acid)를 배양액 전체 중량에 대하여 0.1 ∼ 0.2중량% 첨가하는 것을 특징으로 하는 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P) 배양액 주재의 분상수화제.
  5. 청구항 4에 있어서, 배양액의 건조는 동결건조 또는 분무건조로 행함을 특징으로 하는 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P) 배양액 주재의 분상수화제.
  6. 청구항 5에 있어서, 동결건조는 건조 부재로서 락토오스(Lactose) 15 ∼ 30중량%와 화이트 카본(white carbon) 5 ∼ 10중량%를 첨가한 후 -30 ∼ 20℃로 건조하는 것을 특징으로 하는 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P) 배양액 주재의 분상수화제.
  7. 청구항 5에 있어서, 분무건조는 건조부재로서 화이트 카본 5 ∼ 10중량%, 덱스트린(dextrin) 5 ∼ 10중량%를 각각 첨가한 후, in let 온도 80 ∼ 90℃, out let 온도 120 ∼ 140℃로 건조하는 것을 특징으로 하는 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) A1022(KACC91521P) 배양액 주재의 분상수화제.
  8. 청구항 3 내지 청구항 7 중 어느 한 항의 수화제를 적용하여 알터나리아 로지프스(Alternaria logipes), 세르코스포라 캐니세스(Cercospora canescece), 콜레토트리큠 오비큘라리에(Colletotrichum orbiculare), 다이아포르테 사이트리(Diaporthe citri), 마그나포르테 그라이시아(Magnaporthe grisea), 파이토프소라 캡사이시(Phytophthora capsici)에 의해 발병하는 담배 깨씨무늬병, 녹두갈색무늬병, 오이탄저병, 감귤검은점무늬병, 벼도열병, 고추역병 중 1종 이상을 방제함을 특징으로 하는 식물병원균 방제 방법.
  9. 청구항 3 내지 청구항 7 중 어느 한 항의 수화제를 적용하여 농업해충인 배추좀나방(Plutella xylostella), 산림해충인 소나무재선충(Bursaphelenchus xylophilus), 모기유충인 에이디스 에집타이(Aedes aegypti), 큐렉스 파피엔스(Culex pipiens), 오클레로타투스 토고이(Ochlerotatus togoi) 중 1종 이상을 방제함을 특징으로 하는 해충 방제 방법.
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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KR20150137689A (ko) * 2014-05-30 2015-12-09 ㈜엠알이노베이션 천연물과 미생물을 이용한 시설원예 병해충 복합 방제제 조성물 및 그 제조방법
KR102110875B1 (ko) * 2019-02-12 2020-05-15 한국생명공학연구원 스트렙토마이세스 속 ae170027 균주 또는 상기 균주로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 소나무재선충병 방제용 조성물
KR20200098427A (ko) * 2019-02-12 2020-08-20 한국생명공학연구원 신규 스트렙토마이세스 속 균주 또는 이로부터 분리된 화합물을 함유하는 소나무재선충병 방제용 조성물
CN114766499A (zh) * 2022-05-07 2022-07-22 重庆大学 东莨菪碱及其与化学农药联用在防治植物晚疫病害中的新用途
KR102509351B1 (ko) * 2022-05-03 2023-03-14 한국화학연구원 스트렙토마이세스 속 돌연변이주 u67-46 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 작물관리용 조성물 및 이를 이용한 해충방제 방법
KR102509349B1 (ko) * 2022-05-03 2023-03-14 한국화학연구원 스트렙토마이세스 속 돌연변이주 u67-46 균주를 이용한 작물관리용 조성물의 제조방법

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102650962B1 (ko) * 2021-08-30 2024-03-25 전남대학교 산학협력단 스트렙토마이세스 에스피 jck-6131 균주의 배양액 또는 이의 추출물을 포함하는 식물 병해충 방제용 조성물, 이의 제조 방법 및 식물 병해충 방제 방법
KR102480072B1 (ko) * 2022-05-03 2022-12-23 한국화학연구원 스트렙토마이세스 속 돌연변이주 u67-46 균주

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100197077B1 (ko) * 1997-02-05 1999-06-15 서형원 항균성 미생물제제, 그 제조방법 및 처리방법
KR20050072341A (ko) * 2004-01-06 2005-07-11 학교법인고려중앙학원 식물병원 진균에 항균활성을 가지는 스트렙토마이세스로제오플라브스 엘에스에이-24 균주 및 이 균주로부터생산되는 항생물질
KR100612041B1 (ko) * 2006-05-09 2006-08-11 고려대학교 산학협력단 식물병원균에 항균활성을 가지는 신규 스트렙토마이세스고양엔시스 브이케이-에이60 균주 및 이 균주로부터생산되는 살균제

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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KR20150137689A (ko) * 2014-05-30 2015-12-09 ㈜엠알이노베이션 천연물과 미생물을 이용한 시설원예 병해충 복합 방제제 조성물 및 그 제조방법
KR102110875B1 (ko) * 2019-02-12 2020-05-15 한국생명공학연구원 스트렙토마이세스 속 ae170027 균주 또는 상기 균주로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 소나무재선충병 방제용 조성물
KR20200098427A (ko) * 2019-02-12 2020-08-20 한국생명공학연구원 신규 스트렙토마이세스 속 균주 또는 이로부터 분리된 화합물을 함유하는 소나무재선충병 방제용 조성물
KR102509351B1 (ko) * 2022-05-03 2023-03-14 한국화학연구원 스트렙토마이세스 속 돌연변이주 u67-46 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 작물관리용 조성물 및 이를 이용한 해충방제 방법
KR102509349B1 (ko) * 2022-05-03 2023-03-14 한국화학연구원 스트렙토마이세스 속 돌연변이주 u67-46 균주를 이용한 작물관리용 조성물의 제조방법
CN114766499A (zh) * 2022-05-07 2022-07-22 重庆大学 东莨菪碱及其与化学农药联用在防治植物晚疫病害中的新用途
CN114766499B (zh) * 2022-05-07 2024-03-15 重庆大学 东莨菪碱及其与化学农药联用在防治植物晚疫病害中的新用途

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