KR20110037463A - 노루풀 추출물과 아데노신을 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 노루풀 추출물 또는 노루풀 추출물과 아데노신을 유효성분으로 포함하여 피부 주름 상승 효과와 피부탄력을 증진시키는 효과를 가지는 화장료 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 상기 성분에 의하여 피부 세포의 증식을 촉진시키고 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진 및 분해를 억제하며 인테그린의 발현을 증진시켜 피부 주름을 개선시킬 뿐만아니라 피부탄력을 증진시키는 것이다.

노루풀 추출물, 아데노신, 주름 개선, 탄력 개선, 화장료

Description

노루풀 추출물과 아데노신을 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물{Cosmetic composition for improving skin wrinkles containing Astilbe chinensis Extracts and adenosine}

본 발명은 노루풀 추출물 또는 노루풀 추출물과 아데노신을 유효성분으로 포함하여 피부 주름 상승 효과와 피부탄력을 증진시키는 효과를 가지는 화장료 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 상기 성분에 의하여 피부 세포의 증식을 촉진시키고 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진 및 분해를 억제하며 인테그린의 발현을 증진시켜 피부 주름을 개선시킬 뿐만아니라 피부탄력을 증진시키는 것이다.

피부는 인체의 가장 큰 기관으로서 전체 인체 부피의 약 16%를 차지하고 있고 외부환경과 직접 접해 있으면서 인체 안으로 침입하려는 치명적인 많은 유해인자, 예를 들면, 온도, 습도 및 자외선 등으로부터 인체를 보호하는 중요한 보호막 역할을 담당한다.　그러나, 나이가 들어감에 따라 각종 오염물질, 강한 자외선, 스트레스 및 영양결핍 등으로 인해 피부 세포들이 손상을 입게 되고, 세포 증식이 제대로 이루어지지 않게 되어 피부에 주름 등이 발생한다.　　

피부 진피의 대부분(피부 전체 건조 중량의 약 70-80%)을 차지하는 콜라겐과 신축성이 큰 엘라스틴 단백질은 섬유아세포에서 생성되는 주요 단백질로 피부 진피층에서 피부의 기계적 견고성, 조직의 결합력 및 탄력성 등에 관여한다(Journal of the American academy of dermatology, 21:610-613(1989)).　콜라겐은 연령이 증가할수록, 그리고 자외선에 노출이 많이 될수록 양적 감소를 보인다.　콜라겐은 형태와 구조적 특징에 따라서 분류되는데 이들 중에서, 가장 특징이 잘 알려진 것은 타입 I, II, III 그리고 IV이다.　콜라겐 타입 I과 III는 진피층의 세포간질의 구성성분을 이루고 콜라겐 타입 IV는 DEJ (Dermal Epidermal Junction)의 주요 구성물질이 된다.　DEJ는 피부의 표피층과 진피층 사이에 위치하여 두 층간의 물질 투과와 수송을 조절해주며 인접한 피부세포의 분화를 조절하며 피부의 견고성을 유지시켜준다.　피부의 주요 구조적 성분인 콜라겐과 엘라스틴은 자연적 또는 외부 자극에 의해 구조가 변성되거나 생합성량이 감소하게 되는데 이로 인해 피부의 주름이 가속화된다. 또한 콜라게네이즈의 발현량과 활성 역시 피부 주름을 가속화 시키는 주요 요인이다.

한편, 주름 생성 및 피부 탄력의 저하는 진피층 내의 매트릭스 구조를 형성하고 있는 콜라겐 및 엘라스틴 등의 양뿐만 아니라 상기 성분의 조직화된 상태 또는 매트릭스와 피부 세포간의 상호 작용 정도에 의해서 영향을 받는다.

피부 세포에 존재하는 막 단백질의 한 종류인 인테그린은 피부 세포간 접착 및 세포-단백질간의 상호 작용에 중요한 역할을 하며, 결과적으로 피부 탄력에 영향을 미친다. 인테그린의 발현 정도가 세포 접착 정도, 즉 피부 탄력과 연관되어 있다는 것이 보고되어 있는데, UV-A 및 UV-B 조사를 통해 노화가 유도된 섬유아세 포 표면의 인테그린의 발현 정도를 측정하면 조사된 세포의 인테그린 발현 정도가 조사되지 않은 세포의 인테그린 발현 정도보다 떨어진다고 한다(Cosmetics ＆ Toiletries, 118(1):75-84(2003)).

콜라겐 합성 촉진물질로 기존에 레티노인산(retinoic acid), 표피성장인자 (Epidermal growth factor: EGF), 형질전환성장인자(Transforming growth factor: TGF), 동물 태반 유래의 단백질(JP8-231370), 베툴린산(betulinic acid(JP8-208424)), 클로렐라 추출물(JP9-40523, JP10-36283) 등이 알려져 있다. 특히 표피성장인자는 상피세포, 내피세포 및 섬유아세포 증식의 강력한 촉진제로 작용하며, 상피세포 결손 시 상피세포의 이동과 증식을 촉진시키기 때문에 상처치유 효과가 우수하다. 또한 레티놀은 콜라겐 합성과 분해억제에 매우 효과적으로 피부 주름 개선 효과는 미국 특허 제4,603,146호 및 제4,877,805호 등에 명시되어 있다. 그러나 레티놀의 경우 불안정하고, 피부 적용 시 자극, 발적 등의 안전성 문제로 사용량의 제한이 있으며, 클로렐라 추출물 등은 효과가 미미하여 실질적으로 피부의 콜라겐 합성을 촉진하여 피부 기능 개선 효과를 기대할 수 없다. 따라서, 생체에 안전하고 기존의 콜라겐 합성능 촉진 물질보다 효과가 높은 새로운 콜라겐 합성 촉진제의 개발이 절실히 요망되고 있다.

본 발명자들은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위해 노력한 결과 노루풀 추출물이 피부 세포의 증식을 촉진시키고 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진 및 분해를 억제하며 인테그린의 발현을 증진시켜 피부 주름을 개선시키고 피부의 탄력을 증진시킴을 발견하게 되었다. 또한 아데노신이 노루풀추출물에 추가로 혼합하여 사용하였을 때 주름 개선 및 피부탄력을 증진시킴에 시너지 효과를 줌을 발견하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 노루풀 추출물 또는 노루풀 추출물과 아데노신을 유효성분으로 포함하여 피부 주름 상승 효과와 피부탄력을 증진시키는 효과를 가지는 화장료 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명은 상술한 과제를 해결하기 위하여 다음과 같은 수단을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 피부주름 개선용 화장료 조성물은 노루풀 추출물을 유효성분으로 함유한다.

본 발명의 다른 실시예에 따른 피부탄력 개선용 화장료 조성물은 노루풀 추출물을 유효성분으로 함유하여 인테그린의 발현을 촉진시킨다.

상기 화장료 조성물은, 아데노신을 추가로 포함하는 것을 특징으로 한다.

상기 노루풀 추출물은 화장료 조성물 총 중량에 대해서 0.001~20.0 중량%를, 아데노신은 0.001~5.0 중량%를 함유하는 것을 특징으로 한다.

상기 화장료 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패취, 또는 분무제로부터 선택되는 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명은 노루풀 추출물 또는 노루풀 추출물과 아데노신을 유효성분으로 포함하여 피부 주름 상승 효과와 피부탄력을 증진시키는 효과를 가지는 화장료 조성물을 제공하는데 있다. 노루풀 추출물과 아데노신이 피부 세포의 증식을 촉진시키고 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진 및 분해를 억제하며 인테그린의 발현을 증진시켜 피부 주름을 효과적으로 개선시키고, 피부탄력을 증진시킨다.

본 발명은 노루풀 추출물과 아데노신을 함유하여 피부 주름을 효과적으로 개선시키고 피부탄력을 증진시킨다.

본 발명자들은 천연에서 자생하는 동식물들을 대상으로 항주름 효능 물질을 탐색하기 위하여 연구를 수행하였고, 그 결과 노루풀 추출물이 피부 세포의 증식 촉진, 콜라겐 합성 촉진 및 분해 억제, 인테그린의 발현 증진이 뛰어난 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

노루풀(Astilbe chinensis var. davidii)은 범의귀과에 속하는 여러해살이풀로서 전국의 산골짜기에서 흔히 볼 수 있고 높이는 30-70cm이고 긴 갈색털이 있으며, 근경은 굵고 옆으로 짧게 뻗는다. 잎은 3개씩 2-3회 갈라지며, 작은잎은 타원형, 길이 3-8cm 나비 2-4cm, 종이처럼 얇고 가장자리에 겹톱니 또는 결각상의 톱니 가 있고 잎자루가 길다. 꽃은 7-8월에 피고 홍자색, 줄기 끝의 원추꽃차례에 길이 30cm 정도로서 많은 꽃이 달리고, 화축에는 갈색 털이 많고, 꽃받침은 5개로 갈라지고 갈라진 조각은 달걀모양이며 꽃잎은 5개로서 선형이고 수술은 10개이며 암술대는 2개이고 삭과는 길이 3-4mm이다. 이 생약의 전초(全草)를 소승마(小升麻) Astilbes Herba라하고 뿌리는 적승마(赤升麻) Astilbe Radix라고 해서 약용에 이용되는데 혈액순환을 좋게 하고, 어혈(瘀血)을 풀어주며, 열을 내리고, 독을 풀어주며, 경련을 멎게 하고, 통증을 멎게 하는 효능이 있어서 과로로 오는 병, 근육과 뼈마디가 시리고 아픈 증상, 타박상, 관절통, 수술 후 통증, 뱀에게 물린 독을 푸는 데 사용한다(한국의 약용식물, 교학사, 2000, p204, 배기환저). 민간에서는 적승마(赤升麻)라 불리는 이것의 근경을 해열, 진통, 소염 등에 사용하였고 소승마(赤小麻)라고 불리는 땅 위에서 자라는 부분은 해열, 진해 작용이 있으므로 감기로 인한 열, 기침, 두통과 몸살 기운이 있을 때 처방하고 사용되었다. 현재 보고 된 바에 의하면 전초에는 시안화수소산, 꽃에는 케르세틴 그리고 근경에는 베르게닌과 탄닌 성분이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다. 이 속(屬)에 속하는 식물로는 그 밖에 진퍼리노루오줌(A. divaricata), 숙은노루오줌(A. koreana), 외잎승마(A. simplicifolia) 등이 있다.

아데노신은 유전자인 DNA를 구성하고 있는 요소 중 하나로 아데닌(Adenine)이라는 염기와 라이보즈(ribose)라는 당이 결합한 화합물로 식품의약품안전청에서 피부의 주름 개선에 도움을 주는 화장품 원료로 규정하고 있다. 또한 당에 세개의 인산(phosphate)이 붙으면 세포 내 에너지의 주 근원인 ATP(adenosine 5'- triphosphate)가 되고 따라서 아데노신은 신체를 구성하면서 모든 대사가 원활하게 진행되는데 결정적인 역할을 하는 중요한 요소로 알려져 있다.

본 발명에서 제공하는 화장료 조성물은 노루풀 추출물과 아데노신을 함유하는 것을 특징으로 한다. 상기에서 노루풀 추출물은 노루풀의 뿌리를 추출용매를 사용하여 추출하는 것이 바람직하다. 본 발명에 의한 노루풀 추출물은 다음과 같이 제조할 수 있다.

노루풀의 근경을 물로 깨끗이 세척한 후, 그늘에서 건조한다. 건조한 노루풀의 근경을 추출용기에 넣고, 적당량의 추출 용매에 적절한 온도에서 일정 시간 추출한다. 상기 추출물은 여과되고, 진공회전증발기 등을 이용하여 농축될 수 있다. 상기 추출 용매로는 당업계에서 공지된 다양한 추출 방법을 이용하여 수득할 수 있으며, 바람직하게는, 물(정제수), 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 극성용매를 추출 용매로 하여 수득할 수 있다.

한편, 본 발명의 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.

상기 추출 용매의 양은 생약 건조 중량의 2 ~ 10 배로 한다. 상기 추출 방법은 중탕 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출 등의 추출 방법을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 중탕 추출의 추출방법으로 1회 내지 5회 추출될 수 있다. 상기 침적 온도는 30 ~ 70℃ 이며, 보다 바람직하게는 40 ~ 60℃이며, 가장 바람직하게는 50℃ 정도로 유지하는 것이 부패, 변색 및 변취의 예방에 가장 효과적이다. 상기 침 적 시간은 5 ~ 20 시간이며, 바람직하게는 10 시간이다. 상기 노루풀 추출물을 수득한 후, 거름종이 등을 이용하여 고형분을 제거하고, 현탁액을 원심분리 시키고, 상층액을 감압 여과할 수 있다. 상기 여과된 추출물을 진공회전농축기로 20 ~ 100℃, 바람직하게는 50 ~ 70℃에서 감압농축할 수 있다.

또한, 본 발명의 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다.　예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 추출물에 포함되는 것이다.

본 발명의 화장료 조성물은 상기 노루풀 추출물을 전체 화장료 조성물에 대하여 0.001 내지 20.0 중량%를 포함하는 것이 좋다. 본 발명의 화장료 조성물이 0.001 중량 미만으로 상기 추출물을 포함할 경우에는 화장료 조성물의 피부 세포 증식 촉진, 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진, 콜라겐 분해 억제, 인테그린 발현 증진, 피부주름 방지 효과가 미미하며 20.0 중량%를 초과하여 투입할 경우에는 초과투입에 따른 상승 효과가 적어 경제적이지 못하다. 더욱 바람직하기로는 본 발명의 화장료 조성물이 상기 추출물들을 0.01 내지 10.0 중량%, 더더욱 바람직하게는 0.1-5.0 중량%를 포함하는 것이 좋다. 아데노신은 전체 화장료 조성물에 대하여 0.001-5.0 중량%를 포함하는 것이 좋다.

본 발명은 노루풀 추출물과 아데노신의 시너지 효과에 의해 피부 주름을 효과적으로 개선시키는 화장료 조성물에 관한 것으로 이와 같은 사실은 하기의 실시 예에 명시되어 있다.　상기 노루풀 추출물과 아데노신을 함유하는 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이크림, 영양크림, 마사지크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 파우더, 에센스, 팩 등 그 제형에 있어 특별히 한정되지 않고 화장료의 제형 또는 사용 목적 등에 따라 제조될 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다.　이들 실시 예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다. 배합량은 중량%로 나타낸다.

제조예 1: 노루풀 추출물의 제조

깨끗이 씻어 잘 말린 노루풀의 근경 50g을 파쇄기에 작은 조각으로 파쇄하여 에틸알코올 및 물이 7:3으로 섞여 있는 수용액 250ml에 침지시켜 50℃ 수욕조에서 10시간 동안 온탕하였다. 얻어진 추출액을 실온으로 냉각시키고 거름종이로 여과하여 여과액을 취한 후, 회전 감압증발기로 건조하였다. 건조된 노루풀 추출 파우더를 정제수에 용해하여 사용하였다.

실험예 1: 피부 세포 증식 효과

노루풀 추출물이 피부 세포 증식에 미치는 효과를 알아보기 위하여 인체 정상 섬유아세포(한국세포주은행)를 96-웰 마이크로 플레이트(96-well microplate)의 각 웰에 1 x 10⁴ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma사)에서 24시간 동안 37℃에서 배양하였다.　이어, 상기 노루풀 추출물이 최종 농도 0.01%, 0.05%, 0.1%, 0.5% 및 1%로 포함된 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 노루풀 추출물이 포함되지 않은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 24시간 동안 추가로 배양하였다.　그런 다음, MTT 용액(3-(4,5-디메틸티아졸-2-일) 2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드: 5 mg/㎖)을 각각 10 ㎕씩 첨가하고, 4시간 동안 배양한 후, 배지를 제거하고, 각 웰 당 100 ㎕의 DMSO 용액을 가하여 20분 동안 진탕 시키고, 마이크로 플레이트 판독기 (microplate reader, Molecular Devices, 미합중국)를 이용하여 570 nm에서 상층액의 흡광도를 측정하였다.　측정값을 하기의 수학식 1에 대입하여 세포 증식 효과를 산출하고, 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

세포증식효과 (%) = [(실험군 흡광도 - 대조군의 흡광도)/대조군의 흡광도] x 100

노루풀 추출물 (%)	흡광도(570nm)	세포증식효과(%)
대조군	0.581	-
0.01	0.655	12.7
0.05	0.723	24.4
0.1	0.834	43.5
0.5	0.964	65.9
1	1.027	76.8

상기 표 1에서 알 수 있듯이, 노루풀 추출물을 처리하지 않은 대조군과 비교하여, 노루풀 추출물이 처리된 실험군의 경우 매우 높은 섬유아세포 증식 효과를 나타낸다.

실험예 2: 콜라겐 합성 증진 효과

인체 정상 섬유아세포(한국세포주은행)를 96-웰 마이크로 플레이트의 각 웰에 2 x 10⁴ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 37℃에서 24시간 동안 배양하였다.　이어, 상기 제조한 노루풀 추출물이 최종 농도 0.01, 0.05 및 0.10%로 포함된 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 추출물이 포함되지 않은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 48시간 동안 추가로 배양하였다.　배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 키트 (Takara, 일본국)를 이용하여 측정함으로써 새로 합성된 콜라겐 양을 측정하였다.　PICP 양은 ng/2x10⁴ 세포로 환산하였으며, 그 결과는 하기 표 2에 나타나 있다.

노루풀 추출물 (%)	콜라겐 합성량 (ng/2 x 104)
대조군	102
0.01	119
0.05	148
0.10	192

상기 표 2에서 볼 수 있듯이, 본 발명의 노루풀 추출물의 농도가 증가함에 따라 콜라겐의 합성이 증가함을 알 수 있고, 이에 본 발명의 노루풀 추출물이 탁월한 콜라겐 합성 증진 효과를 나타냄을 알 수 있다.

실험예 3: 콜라게네이즈 억제 효과

상기 노루풀 추출물의 콜라게네이즈 생성 저해능을 측정하였다. 시험은 2.5 %의 우태아 혈청이 함유된 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지가 함유된 96웰 평판배양기 (96-well microtiter plate)에 인간의 섬유아세포를 2x10⁴ 세포/웰(well)이 되도록 넣고, 70~80% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그리고 노루풀 추출물을 농도별로 24시간 동안 처리한 후, 세포배양액을 채위하였다. 채위한 세포배양액을 상업적으로 이용 가능한 콜라게네이즈 측정기구 (미국 아머샴파마샤 사. Catalog #: RPN 2610)를 이용하여 콜라게네이즈 생성 정도를 측정하였다. 먼저 1차 콜라게네이즈 항체가 균일하게 도포된 96-웰 평판 (96-well plate)에 채위된 세포 배양액을 넣고 3시간 동안 항원-항체 반응을 항온조에서 실시하였다. 3시간 후 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96-웰 평판 (96-well plate)에 넣고 다시 15분간 반응시켰다. 15분 후 발색유발물질을 넣어 실온에서 15분간 발색을 유발시키고, 다시 1M 황산을 넣어 반응(발색)을 중지시키면 반응액의 색깔은 노란색을 띄며 반응 진행의 정도에 따라 노란색의 정도가 다르게 나타난다. 노란색을 띈 96-웰 평판 (96-well plate)의 흡광도를 흡광계를 이용하여 405nm에서 측정하고 콜라게네이즈의 합성 정도를 계산하였다. 이때 추출물을 처리하지 않은 군의 채위된 세포배양액의 반응 흡광도를 대조군으로 하였다. 세포에서의 콜라게네이즈 발현의 저해를 측정한 결과 in vitro 에서 상기 물질은 표 3과 같이 콜라게네이즈 발현을 저해함을 확인하였다. 발현 저해능은 비처리군의 합성능을 100으로 하여 대비한 것이다.

노루풀 추출물 (%)	콜라게네이즈 발현 정도 (%)
대조군	100
0.01	85
0.05	75
0.10	69

상기 표 3에서 볼 수 있듯이, 본 발명의 노루풀 추출물의 농도가 증가함에 따라 콜라게네이즈의 발현 정도가 감소함을 알 수 있고, 이에 본 발명의 노루풀 추출물이 탁월한 콜라겐 합성 증진 효과를 나타냄을 확인할 수 있다.

실험예 4: 인테그린 β1 발현 증진 효과

인체 정상 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트의 각 웰에 1 x 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 이어, 상기 노루풀 추출물이 최종 농도 0.01%, 0.05%, 0.1%, 0.5% 및 1%로 포함된 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 노루풀 추출물이 포함되지 않은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 24시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, EIA(Enzyme immnoassay)법에 따라 인테그린 β1의 발현 정도를 측정하였다(MK008 키트, Takara, 일본). 상술하면, 원심분리로 세포를 회수하고 세포추출액을 제조한 후 항-인테그린 β1 항체가 코팅되어있는 웰에 상기 세포추출액을 처리하였다. 이차 항체를 첨가하고 4℃에서 45분간 반응시킨 후 OPD(ο-Phenylenediamine-HCl)로 검출하였다. 염색되어있는 OPD를 OPD 용해액으로 용해한 후 530nm에서 엘라이자 리더로 흡광도를 측정하였다.

노루풀 추출물 (%)	흡광도(530nm)
0.01	0.592
0.05	0.614
0.10	0.650
0.50	0.736
1.00	0.841

표 4에 나타난 바와 같이 노루풀 추출물은 농도 의존적으로 세포의 접착에 중요한 작용을 수행하는 인테그린 β1의 합성을 촉진하는 것을 확인하였고, 이로 인해 피부의 탄력을 증진시킬 수 있음을 발견하였다.

실험예 5: 항산화 효과

본 발명의 제조예에 따라 얻어진 노루풀 추출물의 항산화 효과를 알아보기 위하여 자유라디칼 소거활성 실험(Free Radical Scavenging Activity Test)을 실시하였다.　자유라디칼 소거활성 실험은 Kim 등(Kor. J. Pharmacogn., 24(4), 299-303(1993))의 방법을 변형한 것으로써, 안정한 자유라디칼인 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl, 시그마사) 시약을 사용하였다.　0.2mM DPPH 용액(Blank인 경우는 에탄올) 150 ㎕에 상기 추출물을 다양한 농도로 제작하여, 이들을 각각 150 ㎕ 첨가하여 혼합하고, 실온에서 30분간 방치한 후 517 nm에서 흡광도를 측정하는 실험군을 설정하였으며, 이에 대한 대조군으로는 정제수를 이용한 경우로 설정하였다.　상기 실험군과 대조군에 대한 흡광도 측정 후, 하기 수학식 2를 이용하여 자유라디칼 소거활성 효과를 구하여 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.

노루풀 추출물(%)	자유라디칼소거효과(%)
0.01	18.5
0.05	30.1
0.10	48.6
0.50	69.8
1.00	86.2

상기 표 5에 나타낸 결과를 통해 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 추출물은 자유라디칼 소거능력이 매우 탁월하다는 것을 확인할 수 있었다.

제조예 2: 실시예 및 비교예

본 발명의 노루풀 추출물과 아데노신을 함유하는 화장료의 피부 주름 및 탄력 개선 효과에 대한 임상 시험을 실시하기 위해 실시예 및 비교예를 제조하였다.

성분	함량(중량%)
	실시예1	실시예2	비교예1	비교예2
바셀린	7.0	7.0	7.0	7.0
유동파라핀	5.0	5.0	5.0	5.0
밀납	2.0	2.0	2.0	2.0
폴리솔베이트-60	2.0	2.0	2.0	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	2.5	2.5	2.5	2.5
스쿠알란	3.0	3.0	3.0	3.0
프로필렌글리콜	6.0	6.0	6.0	6.0
글리세린	4.5	4.5	4.5	4.5
트리에탄올아민	0.5	0.5	0.5	0.5
카르복시비닐폴리머	0.5	0.5	0.5	0.5
토코페롤아세테이트	0.1	0.1	0.1	0.1
정제수	To 100	To 100	To 100	To 100
노루풀 추출물	3.0	3.0	-	-
아데노신	0.04	-	0.04	-
향, 방부제	미량	미량		미량

실험예 6: 피부주름 개선 효과

본 발명의 노루풀 추출물과 아데노신을 함유하는 화장료 조성물의 피부주름 개선 효과를 건강한 37세에서 51세의 여성 40명을 대상으로 측정하였다. 먼저 네 그룹으로 나누고, A 그룹에는 실시예 1을, B 그룹에는 실시예2를, C 그룹에는 비교예 1을, D그룹에는 비교예 2의 제형을 안면부에 하루 2회씩 (아침 및 저녁) 3개월간 도포하였다. 3개월 후 주름의 개선 정도를 피험자의 설문 및 주름의 영상 분석을 통해 평가하였다.

피험자의 설문은 사용전과 비교하여 개선 없음, 약간의 개선, 중등도의 개선, 상당한 개선의 4단계로 판단하였으며 결과는 표7에 나타내었다.

주름의 영상분석에 의한 평가는 실험이 시작되기 전 눈 밑의 레플리카를 채취하고 실험이 종료된 직후의 레플리카를 눈 밑의 동일 부위에서 채취하여 영상분석을 통해 주름의 2차원적 분석으로 주름의 밀도를 측정하였다. 영상분석에 의한 주름 밀도의 측정 결과는 사용 전에 대한 주름 밀도에 대한 감소율로 표 8에 나타내었다.

시료	개선없음	약간의 개선	중등도의 개선	상당한 개선
실시예1	0	1	3	6
실시예2	1	1	4	4
비교예 1	3	5	2
비교예 2	7	3	-	-

시료	주름 밀도 감소율 (%)
실시예1	62
실시예2	45
비교예 1	15
비교예 2	10

표 7, 8의 결과에서와 같이, 노루풀 추출물이 함유된 실시예 2에서 주름밀도가 감소하고, 특히 노루풀 추출물과 아데노신을 함유한 실시예1의 피부주름 개선 효과가 매우 우수함을 알 수 있었다.

실험예 6: 피부탄력효과

본 발명의 노루풀 추출물과 아데노신을 함유하는 화장료 조성물의 피부 탄력 증진효과를 측정하였다. 20세 이상의 건강한 여성 40명(평균연령 39세)을 네 그룹으로 나누고, A 그룹에는 실시예1을, B 그룹에는 실시예 1을, C 그룹에는 비교예 1을 D그룹에는 비교예 2의 제형을 눈가를 중심으로 하루 2회씩 (아침 및 저녁) 12주간 도포한 후, 피부탄력 측정기(Cutometer MPA580, Conrage + Khazaka사, 독일연방국)를 이용하여 온도 24-26℃, 습도 45의 조건에서 피부탄력을 측정하였다.　시험결과는 cutometer MPA580의 R5(R5(12주)-R5(0주)) 값으로 기재하였는데, R5 값은 순수탄성도 (Net elasticity)의 성질을 나타내며, 결과는 하기 표 9에 기재되어 있다.

실험 제형	피부탄력효과
실시예1	0.21
실시예2	0.16
비교예 1	0.04
비교예 2	0.02

표 9의 결과에서와 같이, 노루풀 추출물이 함유된 실시예 2의 피부탄력 효과는 비교예1,2에 비해 증가함을 확인할 수 있었다. 특히 노루풀 추출물과 아데노신을 함유한 실시예1의 피부탄력 개선 효과가 매우 우수함을 알 수 있었다.

실험예 7: 제형의 안정성 시험

상기 본 발명의 노루풀 추출물과 아데노신을 함유한 화장료에 대한 안정성 시험을 하기의 방법으로 실시하였다.

　화장료의 안정성을 시험하기 위해 상기 실시예1,2 및 비교예 1, 2를 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관하고 또한 4℃로 일정하게 유지되는 완전히 차광된 냉장고 내에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관한 후, 변색 및 변취, 분리정도를 비교 측정하였다.　그 결과는 하기 표 10에 정리되어 있다.　이 때 제품 변색 및 변취, 분리정도를 다음의 6등급으로 분류하여 평가하였다: 0 : 변화없음; 1 : 극히 조금 분리(변색); 2 : 조금 분리(변색);　 3 : 조금 심하게 분리(변색); 4 :심하게 분리(변색); 및 5 : 극히 심하게 분리(변색).

구 분	제형의 안정성
	실시예1		실시예2		비교예 1		비교예 2
	45℃	4℃	45℃	4℃	45℃	4℃	45℃	4℃
변색	0	0	0	0	0	0	0	0
변취	0	0	0	0	0	0	0	0
분리	0	0	0	0	0	0	0	0

표 10에서 알 수 있는 바와 같이, 실시예와 비교예 모두 변색이나 변취, 분리 현상이 거의 없이 안정함을 알 수 있다.

이하 상기한 실험예의 결과를 근거로 하여 본 발명의 노루풀 추출물과 아데노신을 함유하는 화장료를 조성하여 제시한다.　그러나, 본 발명의 조성물을 하기의 제형예들로 한정하고자 하는 것은 아니다.

제형예 1: 유연화장수(스킨로션)

하기 표에 나타난 바와 같이 유연화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
노루풀 추출물	0.5
아데노신	0.04
1.3-부틸렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
올레일알코올	0.1
폴리솔베이트 20	0.5
에탄올	15.0
벤조페논-9	0.05
향,방부제	미량
정제수	to 100

제형예 2. 영양화장수(밀크로션)

하기 표에 나타난 바와 같이 영양화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
노루풀 추출물	2.0
아데노신	0.04
프로필렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
트리에탄올아민	1.2
토코페닐아세테이트	3.0
유동파라핀	5.0
스쿠알란	3.0
마카다이아너트오일	2.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.0
카르복시비닐 폴리머	1.0
비에치티이	0.01
EDTA-2Na	0.01
향,방부제	미량
정제수	to 100

제형예 3. 영양크림

하기 표에 나타난 바와 같이 영양크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
노루풀 추출물	3.0
세토스테아릴알콜	2.0
글리세릴스테아레이트	1.5
트리옥타노인	5.0
폴리솔베이트 60	1.2
솔비탄스테아레이트	0.5
스쿠알란	5.0
유동 파라핀	3.0
싸이클로메치콘	3.0
비에이치티이	0.05
델타-토코페롤	0.2
농글리세린	4.0
1,3-부틸렌글리콜	2.0
산타검	0.1
EDTA-2Na	0.05
향, 방부제	미량
정제수	to 100

제형예 4. 마사지크림

하기 표에 나타난 바와 같이 마사지크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
노루풀 추출물	1.0
아데노신	0.04
프로필렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
트리에탄올아민	0.5
밀납	2.0
토코페릴아세테이트	0.1
폴리솔베이트 60	3.0
솔비탄세스퀴올레이트	2.5
세테아릴알코올	2.0
유동파라핀	30.0
카르복시비닐폴리머	0.5
향, 방부제	미량
정제수	to 100

제형예 5. 팩

하기 표에 나타난 바와 같이 팩을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
노루풀 추출물	2.0
아데노신	0.04
프로필렌글리콜	2.0
글리세린	4.0
카르복시비닐 폴리머	0.3
에탄올	7.0
피이지-40 히드로게네이티드 캐스터 오일	0.8
트리에탄올아민	0.3
비에치티이	0.01
EDTA-2Na	0.01
향, 방부제	미량
정제수	to 100

Claims (5)

1. 노루풀 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 화장료 조성물.
2. 노루풀 추출물을 유효성분으로 함유하여 인테그린의 발현을 촉진하는 피부탄력 개선용 화장료 조성물.
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은,

   아데노신을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
4. 제 3 항에 있어서, 상기 노루풀 추출물은 화장료 조성물 총 중량에 대해서 0.001~20.0 중량%를, 아데노신은 0.001~5.0 중량%를 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
5. 제 4 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패취, 또는 분무제로부터 선택되는 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.