KR20100122287A

KR20100122287A - 케르세틴 프로드러그 및 그 제조방법

Info

Publication number: KR20100122287A
Application number: KR1020090041253A
Authority: KR
Inventors: 정유훈; 김미경; 박광수
Original assignee: 건국대학교 산학협력단
Priority date: 2009-05-12
Filing date: 2009-05-12
Publication date: 2010-11-22
Also published as: KR101103728B1

Abstract

본 발명은 케르세틴 프로드러그 (prodrug)인 3-디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르 (3-N,N-dimethyl carbamoyl quercetin; DCQ)의 향상된 화학적 안정성 및 약동력학적 (pharmacokinetics) 특성에 관한 것이다.

케르세틴, 3-디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르, 프로드러그

Description

케르세틴 프로드러그 및 그 제조방법{Quercetin prodrug and the preparation method}

본 발명은 케르세틴 프로드러그 및 그 제조방법에 대한 발명으로 더욱 상세하게는 용해도, 화학적 안정성, 세포 투과성 등이 모두 개선된 케르세틴 프로드러그 및 그 제조방법에 관한 것이다.

케르세틴은 식물유래 플라보노이드계 화합물로서 항산화 효과, 항암 효과, 항바이러스 효과를 비롯한 여러 가지 다양한 생리활성을 갖는 것으로 공지되어 있다(Ferry, D. R. et al. Clin. Cancer. Res. 1996, 2(4), 659-668; Lamson, D. W.; Brignall, M. S. Altern. Med. Rev. 2000, 5(3), 196-208).

그러나 케르세틴은 수용성이 낮고, 소장에서의 흡수도가 매우 떨어지는 문제점을 가지고 있다. 또한 케르세틴은 대사효소에 의해 페놀 수산화기에 메틸기, 술폰기, 그리고 글루쿠론산 등이 결합된 대사체로 쉽게 전환되는데, 일반적으로 케르세틴 대사체는 케르세틴이 가지는 생리활성을 가지지 못한다. 따라서, 낮은 수용 성, 낮은 세포흡수도, 그리고 빠른 대사작용으로 인해 케르세틴은 낮은 생물학적 이용 가능성 (bioavailability)을 보이는 문제점을 가지고 있다(Formica, J. V; Regelson, W. Fd. Chem. Toxic. 1995, 33, 1061-1080; Mariusz K. P. BioFactors. 2000, 12, 175-180; O’Leary, K. A.; Day, A. J.; Needs, P. W.; Mellon, F. A.; O’Brien, N. M.; Williamson, G. Biochem. Pharmacol. 2003, 65, 479).

본 발명에서는 아래 [화학식 1]과 같이 케르세틴의 3번 위치에 디메틸포름아미드를 카바메이트 형태로 도입한 3-디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르 (3-N,N-dimethyl carbamoyl quercetin: DCQ)를 합성하여 가수분해에 대한 화학적 안정성과 수용성, 세포흡수도 및 대사 안정성 등에 관한 약물동력학 (pharmacokinetics) 성질을 평가함으로써 케르세틴 프로드러그 (prodrug)로서의 유용성을 입증하고 본 발명을 완성하였다.

[화학식 1]

본 발명은 상기의 문제점을 해결하고, 상기의 필요성에 의하여 안출된 것으로서, 본 발명의 목적은 3-디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르 (3-N,N-dimethyl carbamoyl quercetin; DCQ)를 제작하여 케르세틴의 화학적 안정성과 약동력학적 특성을 개선하기 위한 것이다.

따라서, 본 발명의 주된 목적은 케르세틴과 디메틸포름아미드의 콘쥬게이트 형태인 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르를 합성함으로써 케르세틴의 화학적 안정성 및 약물동력학 (parmacokinetic) 성질을 개선하는 것을 목적으로 한다.

상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 하기 화학식 1 을 갖는 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염을 제공하다.

[화학식 1]

본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 화합물은 케르세틴 프로드러그인 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

또한 본 발명은 상기 본 발명의 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염을 유효성분으로 포함하는 약학 조성물을 제공하다.

또한 본 발명은 a)케르세틴을 디페닐디클로로메탄(diphenyl dichloromethane)과 반응시켜서 가리움기가 도입된 케르세틴을 제조하는 단계;b) 상기 가리움기가 도입된 케르세틴을 디메틸 카바모일 클로라이드(Dimethyl carbamoyl chloride)와 소디움 하이드라이드를 첨가하여 비스-디메틸 카바모일 케르세틴 콘쥬게이트를 합성하는 단계; 및 c)상기 비스-디메틸 카바모일 케르세틴 콘쥬게이트에 팔라듐( palladium)/차콜을 첨가하여 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르로 전환하는 단계를 포함하는 하기 화학식 1의 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염의 제조방법을 제공한다.

[화학식 1]

본 발명의 제조방법의 일 구체예에 있어서, 상기 가리움기가 도입된 케르세틴은 하기 화학식 4의 화합물인 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

[화학식 4]

본 발명의 제조방법의 일 구체예에 있어서, 상기 c)단계의 용매는 메탄올, 테트라히드로퓨란 (tetrahydrofuran) 또는 이들의 혼합물인 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

본 발명에서 "프로드러그"라는 용어는 어떤 약물을 화학적으로 변화시켜 물리·화학적 성질을 조절한 약물을 의미하며, 그 자체는 생리 활성을 나타내지 않지만 투여 후 체내에서 화학적으로, 혹은 효소의 작용에 의하여 원래의 약물로 바뀌어 약효를 발휘한다.

본 발명은 또한 본 발명의 프로드러그를 포함하는 액체 및 고체 약학 조제물, 예컨대 주사가능한 용액, 현탁액, 유화액, 정제, 코팅된 정제, 코팅된 정제 코어, 캡슐, 용액, 트로키제, 분산액, 펠렛, 과립, 좌약, 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐 등에 관한 것이다.

본 발명의 약학 조성물은 안정하고 효과적인 조성물을 만들기 위해 당업자에 의해 사용되는 통상적인 절차에 따라 제조된다. 그러한 방법은, 혼합, 교반, 현탁, 분산, 유화, 용해 등에 의한, 약학 보조제, 예컨대 담체, 희석제, 용매 또는 부형제가 있거나 내에 있는 활성 화합물 및 비경구, 경구, 비내, 협측 또는 직장 투여 등을 위해 약학적으로 적당한 형태로 성분을 처리하는 단계를 포함한다. 고체, 액체, 비경구 제형에 있어서, 활성 화합물 또는 활성 성분의 유효량은 목적하는 결과를 도출하는 임의의 양이다. 본 발명에 따르면, 본 발명의 프로드러그의 유리한 용해성 특성이 약학 제형의 조제물에 적용될 수 있음을 발견하였다. 이는 또한 습식 과립화; 또는 통상적인 건식 과립화에 의해 정제를 제조하는데 사용할 수 있다. 또한 수성 제형을 제조하는데 사용할 수도 있다.

제형은 당분야에 인식된 임의의 통상적인 기술에 의해 제조될 수 있으나, 바람직하게는 본 발명의 프로드러그와 나머지 성분들을 혼합하여 조제될 것이다. 고체 경구용 제형을 제조하는데 사용되는 나머지 성분들은 통상적으로 불활성인 성분들, 예컨대 미정질 셀룰로스, 메틸 셀룰로스 등, 필요하다면 이의 적당한 감미료, 착색제 및/또는 착향료, 및 보존제를 포함할 것이다. 현탁액의 제조에 적당한 상기 고체 경구용 제형 또는 건식 조제물은 이들이 본 발명의 화합물의 효과적인 투여량을 함유하도록 조제될 것이다. 통상적으로는, 본 발명의 화합물 100 mg∼1500 mg을 함유하는 고체 제형을 고려한다. 경구 현탁액에 적당한 제제는 유사한 투여량을 함유해야한다.

약학 조제물은, 예를 들어 정제 바인더, 충진제, 보존제, 정제 붕해제, 유동성 조절제, 가소제, 습윤제, 분산제, 유화제, 용매, pH 변화 첨가제, 착향제 등과 같은 약학에 통상 사용되는 보조제 및 첨가제와 함께 조제될 수 있다. 두번째로 바 람직한 방법은 비경구적인 근육 내, 정맥 내 또는 피하 투여이다.

약학 조성물이 주사가능한 제제로 조제되는 경우, 용액 또는 현탁액의 형태로 약학 조성물을 조제할 때, 시중에 사용되는 모든 희석제를 사용할 수 있다. 적당한 희석제의 예로는 물, 에틸 알콜, 폴리프로필렌 글리콜, 에톡시화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨, 및 소르비탄 에스테르가 있다. 염화나트륨, 포도당 또는 글리세롤은 치료제로 혼입될 수 있다. 주사가능한 제제 중 활성 성분의 농도는 0.1 mg/㎖∼100 mg/㎖의 범위인 것이 바람직하다.

상기 제시된 일반적인 제형 이외에도, 본 발명의 화합물은 또한 제어된 방출 수단 및/또는 전달 장치 등은 미국 특허 번호 3,845,770; 3,916,899; 3,536,809; 3,598,123 및 4,008,719에 기술된 것에 의해 투여될 수 있다.

총 1일 투여량의 범위는 통상 약 200 mg∼약 5000 mg의 본 발명의 프로드러그이다. 바람직하게는, 본 발명의 프로드러그 300 mg∼3000 mg(총 1일 투여량 범위)이다. 하지만, 투여량은 환자의 요구 및 병태에 따라 많아지거나 적어질 수 있다.

이하 본 발명을 설명한다.

케르세틴의 프로드러그를 개발하여 약동력학적 특성을 개선하기 위한 많은 노력이 있어 왔으나 대부분의 경우에 케르세틴 에스테르의 형태를 갖는 프로드러그들은 화학적 가수분해 및 효소에 의한 가수분해에 의해 빠르게 케르세틴으로 전환되는 단점을 가지고 있어 매우 제한된 효용을 가지고 있었다. 이러한 단점을 개선하고자 에스테르보다 안정한 형태인 카바메이트 (carbamate)류의 프로드러그인 케 르세틴 글리신 카바메이트 (quercetin-glycine carbamate prodrug) QC12 [화학식 2]가 개발되어 임상 실험된 바 있다 (Mulholland, P. J.; Ferry, D. R.; Anderson, D.; Hussain, S. A.; Young, A. M.; Cook, J. E.; Hodgkin, E.; Seymour, L. W.; Kerr, D. J. Ann. Oncol. 2001, 12, 245).

QC12는 케르세틴과 비교하여 월등히 향상된 수용성을 가지고 있으며 37 ℃ 물에서 천천히 케르세틴으로 가수분해 (반감기 16.9 시간) 되는 등 프로드러그로서의 우수한 특성을 가지고 있으나 생체 내에서 가수분해 효소에 의해 매우 빠르게 가수분해 (반감기 0.39 시간) 되어 경구 투여제로 개발될 수 없는 한계를 가지고 있었다(Mulholland, P. J.; Ferry, D. R.; Anderson, D.; Hussain, S. A.; Young, A. M.; Cook, J. E.; Hodgkin, E.; Seymour, L. W.; Kerr, D. J. Ann. Oncol. 2001, 12, 245).

[화학식 2]

케르세틴-아미노산 콘쥬게이트 (quercetin-amino acid conjugate)[화학식 3] 는 가장 최근에 개발된 (Mi Kyoung Kim, Kwang-su Park, Woon-seok YeO, Hyunah Choo, Youhoon Chong. Bioorg. Med. Chem. 2009, 17, 1164-1171) 케르세틴 프로드러그로서, 케르세틴과 다양한 아미노산의 콘쥬게이트를 카바메이트 형태로 형성함으로써 6배 (Qu-K)에서 52배 (Qu-E)에 이르는 수용성의 증가는 물론, 세포투과성 또한 케르세틴에 비해 향상됨을 보였다. 또한, 케르세틴-아미노산 콘쥬게이트들은 세포 용해물(cell lysate)에 포함된 다양한 가수분해 효소에 노출시켰을 때, 약 1시간 30분 (Qu-D, Qu-A 및 Qu-F)에서 3시간 (Qu-K, Qu-E)의 반감기를 갖는 것으로 확인되어 가수분해 효소에 대한 케르세틴-아미노산 콘쥬게이트의 안정성이 확연히 증가한 것을 보여주었다. 그러나, 케르세틴-아미노산 콘쥬게이트는 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) cell culture medium에서 10분에서 60분 이내에 매우 빨리 화학적으로 가수분해되는 단점(Mi Kyoung Kim, Kwang-su Park, Woon-seok YeO, Hyunah Choo, Youhoon Chong. Bioorg. Med. Chem. 2009, 17, 1164-1171)을 가지고 있어서 케르세틴 프로드러그의 화학적 안정성에 대한 보완이 요구되어졌다.

[화학식 3]

Qu-A	R₁=CH₃	R₂=OH
Qu-V	R₁=CH(CH₃)₂	R₂=OH
Qu-K	R₁=CH₂CH₂CH₂CH₂NH₂	R₂=OH
Qu-F	R₁=CH₂Ph	R₂=OH
Qu-D	R₁=CH₂CO2H	R₂=OH
Qu-M	R₁=CH₂CH₂SCH₃	R₂=OH
Qu-E	R₁=CH₂CH₂CO₂H	R₂=OH
Qu-AD	R₁=CH₃	R2=(S)-NHCH(CH₂CO₂H)CO₂H
Qu-AE	R₁=CH₃	R2=(S)-NHCH(CH₂CH₂CO₂H)CO₂H

이하, 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

본 발명은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 상기 [화학식 1] 로 표기되는 디디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르 (N,N-dimethyl carbamoyl quercetin; DCQ)를 합성하였다.

구체적으로, [도 1]은 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르 (N,N-dimethyl carbamoyl quercetin)를 시중 구입 가능한 출발물질로부터 합성하는 과정을 그림으 로 나타낸 것이다.

케르세틴에서 가장 반응성이 좋은 수산화기는 B-ring의 3′과 4′ 위치의 수산화기이므로 이 두 작용기를 가리우면 C-ring의 3번 위치에 위치 선택적으로 치환기를 도입할 수 있다. 시중에서 구입가능한 케르세틴 (시그마알드리치)을 180 ℃에서 디페닐디클로로메탄(diphenyl dichloromethane)과 반응 시키면 케르세틴의 3′위치의 수산화기와 4′의 수산화기에 가리움기가 도입된 케르세틴으로 전환된다. 가리움기가 도입된 케르세틴을 0 ℃에서 dimethyl carbamoyl chloride와 sodium hydride 존재하에서 반응시키면 케르세틴의 A-ring의 7번과 C-ring의 3번 위치의 수산화기에 디메틸포름아미드가 치환된 bis-디메틸 카바모일 케르세틴 콘쥬게이트로 변한다. 얻어진 물질을 palladium/charcoal (10%)와 수소 존재하에 반응시키면 3′위치와 4′위치의 가리움기와 A-ring의 7번 위치에 치환된 디메틸포름아미드가 함께 제거되어 목적하는 3번 위치에 디메틸포름아미드기가 도입된 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르로 전환된다. 이 때, 용매를 메탄올과 테트라히드로퓨란 (tetrahydrofuran)을 섞어서 사용하면 수율을 높일 수 있다.

이하, 합성된 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르의 약동력학적 특성을 분석한 결과를 상세히 설명한다.

합성된 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르의 수용성을 측정한 결과는 [도 2]에 나타낸 바와 같다. 용해도가 케르세틴보다 14배 정도 향상됨을 알 수 있다.

[도 3]은 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르의 세포투과성을 측정한 결과이다. 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르의 세포투과성은 케르세틴보다 1.6배 정 도 향상되었음을 규명하였다.

세포용해물(cell lysate)에 포함된 다양한 가수분해 효소에 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르를 노출시켰을 때, 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르가 가수분해되어 케르세틴으로 전환되는 반응의 속도를 반감기로 나타낸 [도 4]에서 보이는 바와 같이 30분의 반감기를 가진다. QC12가 생체 내에서 가수분해 효소에 의해 가수분해 되는 속도 (반감기 0.39 시간)과 비교해 보았을 때, 약 1.3배 이상 느려진 것을 의미하며, 가수분해 효소에 대한 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르의 안정성이 증가한 것을 보여준다.

디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르는 pH 7.0의 PBS (phosphate buffered saline) buffer에서 17 시간 이상 동안 가수분해 되지 않고 안정하게 유지되었으며, 또한 Vitamin C를 첨가한 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) cell culture medium에서 18시간 이상 동안 가수분해 되지 않고 안정하게 유지되는 것을 알 수 있음을 [도 5]에 나타냈다. 이전에 발표된 케르세틴-아미노산 콘쥬게이트들이 Vitamin C를 첨가한 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) cell culture medium에서 케르세틴으로 가수분해 되는 반감기가 10분에서 60분 정도였던 것에 비해 월등히 향상된 화학적 안정성을 확인할 수 있다. 따라서, 케르세틴의 3번 수산화기 위치에 치환된 카바메이트는 화학적 가수분해에서는 안정하며, 다양한 가수분해 효소 존재 하에 선택적으로 특별히 가수분해 된다는 것을 보여준다.

이상과 같이 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르는 케르세틴, QC12 및 케르세틴-아미노산 콘쥬게이트에 비해 향상된 약동력학적 특징을 가지는 바, 케르세틴 과 QC12 그리고, 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르의 약동력학적 성질을 비교하면 표 1과 같다.

표 1은 3-케르세틴, QC12 그리고 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르(DCQ)의 약동력학적 성질에 대한 비교를 표로 나타낸 것이다.

본 발명에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명은 플라보노이드계 화합물인 케르세틴의 프로드러그로서 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르인 DCQ를 제조하여 이들의 생물학적 이용 가능성 (bioavailability)을 검증하였다. DCQ는 용해도, 화학적 안정성, 세포 투과성 모두 증가하여 케르세틴 프로드러그로서 이용 가능함을 검증하였다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 아니하는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 3′과 4′의 수산화기가 가리워진 케르세틴 (2)의 제조:

케르세틴 (1) (3.3 mmol)에 dichlorodiphenylmethane (9.9 mmol)을 첨가하여 얻어진 혼합물을 180 ℃에서 10분 동안 환류 가열하였다. 얻어진 반응물을 실리카겔 관컬럼크로마토그래피 (디클로로메탄 : 에틸아세테이트 = 6 : 1)로 정제하여 3′과 4′의 수산화기가 가리워진 케르세틴 (2) (수율 38%)을 노란색 가루 형태로 얻었다: ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d6) δ (ppm) 12.18 (s, 1H), 7.89-7.92 (m, 2H), 7.63-7.69 (m, 5H), 7.45-7.49 (m, 5H), 7.19 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 6.58 (s, 1H), 6.28 (s, 1H).

실시예 2: 3′과 4′의 수산화기가 가리워진 bis-디메틸 카바모일 케르세틴 콘쥬게이트 (3)의 제조:

3′과 4′의 수산화기가 가리워진 케르세틴 (2) (1.1 mmol)을 테트라히드로퓨란 (5 mL)에 녹인 후, 0 ℃로 냉각시킨다. 이 혼합물에 sodium hydride (1.1 mmol)을 첨가하고, 30분 후, Dimethyl carbamoyl chloride (1.1 mmol)을 첨가한다. 이 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 ammonium chloride로 중화 시킨 후, 디메틸클로로메탄 50 mL로 세 번 추출하고, 유기층에 MgSO₄를 첨가하여 물을 제거한 뒤 반응물을 걸러냈다. 얻어진 반응물을 실리카겔 관컬럼크로마토그래피 (헥산 : 에틸아세테이트 = 1 : 2)로 정제하여 3′과 4′의 수산화기가 가리워진 bis-디메틸 카바모일 케르세틴 콘쥬게이트 (3) (수율 50%)을 어두운 노란색 가루 형태로 얻었다: ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d6) δ (ppm) 12.28 (s, 1H), 7.57-7.62 (m, 6H), 4.47 (d, J = 1.79 Hz, 1H), 7.40-7.42 (m, 5H), 6.98 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 3.15 (s, 3H), 3.03 (s, 6H).

실시예 3: 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르 (4)의 제조:

3′과 4′의 수산화기가 가리워진 bis-디메틸 카바모일 케르세틴 콘쥬게이트 (3) (0.6 mmol)을 메탄올 (1 mL), 테트라히드로퓨란 (2.5 mL)에 녹인 후, palladium/charcoal (10% 0.06 mmol)을 첨가한다. 이 혼합물을 수소 존재 하에 24시간 동안 교반한다. 이 반응물을 아세톤을 사용하여 규조토에 걸러낸 후, 감압농축 한다. 이 농축액을 실리카겔 관컬럼크로마토그래피 (헥산 : 에틸아세테이트 = 1 : 1)로 정제하여 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르 (4) (수율 85%)을 어두운 노란색 가루 형태로 얻었다: ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d6) δ (ppm) 12.48 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.40 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.29 (s, 1H), 3.15 (s, 3H), 2.97 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/z Found: 374.1 [M + H]⁺; Calcd for C₁₈H₁₅NO₈: 273.08.

실시예 4: 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르의 용해도 검증:

디메틸 카르바민산 케르세틴 에스테르를 1% 디메틸설폭사이드 (DMSO, dimethyl sulfoxide)에 녹이고 99%의 PBS 버퍼로 묽혀 100 μM, 250 μM, 500 μM, 1000 μM, 1500 μM, 2000 μM 그리고 2500 μM의 용액으로 만든다. 이들을 96 well 플레이트에 250 ㎕ 씩 옮겨서 NEPHELOstar 기계로 용해도를 측정한다.

실시예 5. 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르의 투과성 검증:

96-well multiScreen Caco-2 plate에 MDCK cell을 2.5×10⁴ cells/well 로 배양한다. 이 플레이트 (plate)를 37 ℃, 5% CO₂ 에서 2~4일 동안 인큐베이션시킨다. 모노레이어(monolayer)가 형성되었는지 알기 위하여 Millicell-ERS voltohmmeter를 이용하여 저항을 측정한다. 이때의 저항은 991~1055 정도여야 한다. donor 플레이트에 1% 디메틸설폭사이드에 녹아있는 디메틸 카바모일 케르세틴 콘쥬게이트를 첨가하여 2시간 후에 UV/VIS (340 nm)를 이용하여 투과성을 측정한다.

실시예 6. 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르의 안정성 검증:

96-well 플레이트에 개신장세포주[Madin-Darby canine kidney (MDCK) cell]을 2.5×10⁴ cells/well 하루동안 배양한다. 여기에 라이시스 (lysis) 버퍼 (1 mM)를 첨가하고 1시간 후, 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르를 첨가하여 37 ℃에서 배양한다. 이들을 각각 10분 마다 HPLC를 사용하여 반감기를 측정한다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통 상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

도 1은 3-디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르의 제조 방법을 요약해 보여준다.

도 2는 3-디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르의 수용성을 설명한다.

도 3은 3-디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르의 세포 투과성을 설명한다.

도 4는 3-디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르의 세포용해물 (cell lysate) 에서의 안정성을 반감기로 나타내었다.

도 5는 3-디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르의 화학적 안정성을 반감기로 나타내었다.

Claims

하기 화학식 1 을 갖는 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염.

[화학식 1]
제 1항에 있어서, 상기 화합물은 케르세틴 프로드러그인 것을 특징으로 하는 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염.
제 1항 또는 제2항의 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염을 유효성 분으로 포함하는 약학 조성물.
a)케르세틴을 디페닐디클로로메탄(diphenyl dichloromethane)과 반응시켜서 가리움기가 도입된 케르세틴을 제조하는 단계;

b) 상기 가리움기가 도입된 케르세틴을 디메틸 카바모일 클로라이드(Dimethyl carbamoyl chloride)와 소디움 하이드라이드를 첨가하여 비스-디메틸 카바모일 케르세틴 콘쥬게이트를 합성하는 단계; 및

c)상기 비스-디메틸 카바모일 케르세틴 콘쥬게이트에 팔라듐( palladium)/차콜을 첨가하여 디메틸카르바민산 케르세틴 에스테르로 전환하는 단계를 포함하는

하기 화학식 1의 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염의 제조방법.

[화학식 1]
제 4항에 있어서, 상기 가리움기가 도입된 케르세틴은 하기 화학식 4의 화합물인 것을 특징으로 하는 상기 화학식 1의 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염의 제조방법.

[화학식 4]
제 4항에 있어서, 상기 c)단계의 용매는 메탄올, 테트라히드로퓨란 (tetrahydrofuran) 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 상기 화학식 1의 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염의 제조방법.