KR20100115659A - 궤양병에 대한 항생물질을 생산하는 신규한 슈도모나스 에루기노사 νο3 균주, 이의 돌연변이주 및 이들을 이용한 궤양병 치료용 항생물질의 생산방법 - Google Patents

궤양병에 대한 항생물질을 생산하는 신규한 슈도모나스 에루기노사 νο3 균주, 이의 돌연변이주 및 이들을 이용한 궤양병 치료용 항생물질의 생산방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 궤양병에 대한 항생물질을 생산하는 신규한 슈도모나스 에루기노사 NO3 균주, 이의 돌연변이주 및 이들을 이용한 궤양병 치료용 항생물질의 생산방법에 관한 것으로서 보다 상세하게는 궤양병에 대한 항생물질을 생산하는 신규한 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 균주, 슈도모나스 에루기노사 NO3 균주의 돌연변이주로서 궤양병에 대한 항생물질을 생산하며, 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 균주에 miniTn5::tet 트랜스포손(transposon)을 접합시켜 얻은 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P) 균주; 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 및/또는 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P)를 이용한 궤양병 치료용 항생물질의 생산방법에 관한 것이다.
슈도모나스 에루기노사, 천연항생제, 감귤궤양병, 그람 양성균, 항생제내성

Description

궤양병에 대한 항생물질을 생산하는 신규한 슈도모나스 에루기노사 ΝΟ3 균주, 이의 돌연변이주 및 이들을 이용한 궤양병 치료용 항생물질의 생산방법{Antibiotics for bacterial canker of citrus from drug resistance Pseudomonas aeruginosa NO3 and antibiotics, and its application}
본 발명은 궤양병에 대한 항생물질을 생산하는 신규한 슈도모나스 에루기노사 NO3 균주, 이의 돌연변이주 및 이들을 이용한 궤양병 치료용 항생물질의 생산방법에 관한 것으로서 보다 상세하게는 궤양병에 대한 항생물질을 생산하는 신규한 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 균주, 슈도모나스 에루기노사 NO3 균주의 돌연변이주로서 궤양병에 대한 항생물질을 생산하며, 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 균주에 miniTn5::tet 트랜스포손(transposon)을 접합시켜 얻은 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P) 균주; 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 및/또는 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P)를 이용한 궤양병 치료용 항생물질의 생산방법에 관한 것이다.
감귤은 제주특별자치도의 특산품으로 당도가 높고 맛이 좋아 세계적으로 유명하며, 년간 수익이 3000억 원으로 제주도 농산물중 가장 많은 금액을 차지하고 있다. 그러나 경작 면적이 점점 증가함에 따라 생산과잉단계에 이르러 국내 소비량을 웃돌기 때문에 매년 가격 폭락사태를 격는다.
이를 해결하기 위하여는 미국, 일본 등 해외 수출을 추지니하여 실제로 1990년대부터 미국으로 수출을 하였으나, 2002년 12월 미국 식품검역소 검사에서 감귤에 묻어있는 감귤 궤양병(Xanthomonas citri)균이 검출됨으로서 수입 금지 조치가 내려져 있다.
감귤 궤양병(bacterial canker)은 감귤류에서 가장 빈번하게 발생하며, 방제가 어려운 병중에 하나다. 감귤 궤양병은 감귤의 잎, 줄기, 과일에 검은 반점을 만들며, 궤양병이 심하면 병균이 분비하는 점액성 물질이 나무의 수관을 막아 식물이 고사하게된다. 궤양병은 전정 부위나 태풍 및 비바람에 의하여 생긴 상처 부위를 통하여 감염한다.
궤양병은 전염 속도가 매우 빠르게전파되어 2-3년에 농원을 파괴하기에 이르는 맹독성 병원균이다. 궤양병균은 처음 동남아시아, 인도에서 최초 발병한 이래 일본, 중국, 우리나라, 폴리네시안, 미국 남동부, 남아메리카, 중동 및 아프리카에 이르기 까지 전세계에서 발생하고 있다.
미국에서는 1910년 플로리다주의 포도밭, 오렌지밭, 감귤밭에서 처음 발생한 이래 급속히 널리 확산되고 있으며, 현재 켈리포니아주까지 감염되어 감귤 궤양병에 오염된 어떠한 식물도 수입 금지 조치가 내려진 상태다. 이러한 감귤 궤양병을 퇴치하기 위햐여 지금까지 농가에서는 항생제(주로 스트렙토마이신(Streptomycin))가 사용되었으나, 항생제 사용은 내성 병원균의 출현과 인체에 해로우므로 사용이 금지 되었다.
이에 감귤류에 적합한 인체 무독성 친환경 항생물질이 절실히 요구되고 있다. 현재까지 감귤류 궤양병에 대한 친환경 항생제는 알려지지 않고 있다.
어병균이 에드웨드시엘라 속(Edwardsiella sp)균이나 스트렙토코커스 이니에(Streptococcus iniae)는 담수어나 해수어를 밀식하여 양식할 때 상처부위를 통하여 감염되는 균으로 상처부위가 썩고 심하면 죽게된다. 이러한 어병을 치료하기 위하여 말라카이드그린 등이 사용되고 있으나 이물질은 사람에게 암을 일으키는 농약으로 모든 나라에서 사용금지가 되고 있다. 이에 인체에 무해한 친환경 항생물질이 필요하다.
1928년 플래밍(Fleming)이 페니실린(penicillin)을 발견한 이래 1960년대까지 수많은 항생제가 개발되었고, 드디어 미국은 1967년 모든 병원성 미생물을 퇴치할 수 있다는 "감염증 극복"을 선언하기에 이르렀다. 그러나 새로운 항생제가 출현하면 이에 대응하여 많은 미생물들은 신규 항생제에 대응하기 위하여 항생제 저항성 기작을 통해 내성을 키워왔다. 힝생제 내성 병원성균중 특히 문제가 되는 것은 메테실린 내성 연쇄 포도상 구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 연쇄상 구균(Vancomycin Resistant Staphylococcus aureus, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)등이 심각하다. 이에 2003년 MRSA, MRE, VRSA, VRE와 같은 그람 양성균에 특이적인 항생제가 미국 큐비스트사(Cubist Co)에서 개발되어 큐비신(cubicin)이라는 상표명으로 사용되고 있다. 큐비신(cubicin)은 G(＋)균인 스타필로코커스 오레우스(Staphylococcus aureus와 MRSA), 스트렙토코커스 피오제네스(Streptococcus pyogenes), 스트렙토코커스 아가락티에(Streptococcus agalactiae), 스트렙토코커스 디스카락티에 서브스피시스 이퀴시밀리스(Streptococcus dysgalactiae subsp. equisimilis), 엔테로코커스 피칼리스(Enterococcus faecalis)등에 특효이다. 그러나 그람음성균에는 약효가 없으며 cubicin에 저항성인 돌연변이 출현으로 또 다른 항생제가 필요로 하다.
본 발명은 상기 설명한 바와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로 감귤류의 궤양병, 양만장의 어병균, 식중독균 및 MRSA, VRSA, MRE 및 VRE와 같은 항생제 내성균, 충치균, 여드름균에 대한 항생물질을 생산하는 균주, 이의 돌연변이주 및 이 균주들을 이용하여 상기 궤양병, 어병균, 식중독균 및 MRSA, VRSA, MRE 및 VRE와 같은 항생제 내성균, 충치균, 여드름균에 대한 항생물질의 생산방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 상기 설명한 바와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로 감귤류의 궤양병, 양만장의 어병균, 식중독균 및 MRSA, VRSA, MRE 및 VRE와 같은 항생제 내성균, 충치균, 여드름균에 특이적인 항생물질을 생산하는 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3), 이의 돌연변이주 및 이 균주들을 이용하여 상기 궤양병, 어병균, 식중독균 및 MRSA, VRSA, MRE 및 VRE와 같은 항생제 내성균, 충치균, 여드름균에 대한 항생물질의 생산방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 슈도모나스 에루기노사 NO3(Psuedomonas aeruginosa NO3) 및 이의 변이주 (Psuedomonas aeruginosa NO3-291)들이 생산하는 항균물질은 감귤 궤양병, 참다래 궤양병, 병원성 대장균, VRSA, VRE, MRSA, VRSA, 여드름균 및 충치균 등의 유해균들의 세포막층을 선택적으로 파괴 하므로서 상기 유해균들에 대한 항균물질을 생산하는 균주를 제공할 수 있다.
본 발명은 신규한 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 균주를 나타낸다.
본 발명은 궤양병에 대한 항생물질을 생산하는 신규한 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 균주를 나타낸다.
본 발명은 감귤 궤양병(Xanthomonas citri) 또는 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae)에 대한 항생물질을 생산하는 신규한 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 균주를 나타낸다.
본 발명은 감귤 궤양병(Xanthomonas citri), 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae) 어병균(Edwardsiella sp), 식중독균(Vibrio sp), 병원성 대장균 O157(Escherichia coli O157), 동물병원성균인 바실러스 시리우스(Bacillus cereus), 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 동물 탄저병균인 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 충치원인균인 스트렙토코커스 뮤탄트(Streptococcus mutants,), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus), 여드름균인 프로피오니박테리움 이니에(Propionibacterium iniae), 메티실린 내성 황색포도상구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 스타필로코커스 오레우스(Vancomycin Resistant Staphylococcus aures, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스균(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 균에 대한 항생물질을 생산하는 신규한 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 균주를 나타낸다.
상기에서 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 균주에 의해 생산된 감귤 궤양병(Xanthomonas citri), 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae) 어병균(Edwardsiella sp), 식중독균(Vibrio sp), 병원성 대장균 O157(Escherichia coli O157), 동물병원성균인 바실러스 시리우스(Bacillus cereus), 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 동물 탄저병균인 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 충치원인균인 스트렙토코커스 뮤탄트(Streptococcus mutants,), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus), 여드름균인 프로피오니박테리움 이니에(Propionibacterium iniae), 메티실린 내성 황색포도상구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 스타필로코커스 오레우스(Vancomycin Resistant Staphylococcus aures, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스균(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 균에 대한 항생물질은 필수 지방산의 하나인 리놀레닌 산(linollenic acid)이 포함되는 구조를 나타낸다.
본 발명의 신규한 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 균주는 토양 미생물로부터 분리하여 얻을 수 있다.
본 발명의 신규한 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 균주는 토양 미생물로부터 분리하여 얻을 수 있는데 보다 구체적으로는 토양을 멸균수에 현탁하여 희석한 다음 희석된 토양 멸균수를 LB 아가배지(LB agar medium)에 접종한 후 20∼40℃의 온도에서 10∼15시간, 바람직하게는 37℃의 온도에서 12시간 동안 배양하고 분리하여 얻을 수 있다.
본 발명은 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 균주의 돌연변이주를 포함낸다.
본 발명의 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 균주의 돌연변이주는 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P)에 miniTn5::tet 트랜스포손(transposon)을 접합시켜 얻은 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P)를 나타낸다.
본 발명의 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P)는 궤양병에 대한 항생물질을 생산할 수 있다.
본 발명의 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P)는 감귤 궤양병(Xanthomonas citri) 또는 참다래 궤양 병(Pseudomonas syringae pv actinidiae)에 대한 항생물질을 생산할 수 있다.
본 발명의 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P)는 감귤 궤양병(Xanthomonas citri), 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae) 어병균(Edwardsiella sp), 식중독균(Vibrio sp), 병원성 대장균 O157(Escherichia coli O157), 동물병원성균인 바실러스 시리우스(Bacillus cereus), 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 동물 탄저병균인 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 충치원인균인 스트렙토코커스 뮤탄트(Streptococcus mutants,), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus), 여드름균인 프로피오니박테리움 이니에(Propionibacterium iniae), 메티실린 내성 황색포도상구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 스타필로코커스 오레우스(Vancomycin Resistant Staphylococcus aures, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스균(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 균에 대한 항생물질을 생산할 수 있다.
상기에서 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P)에 의해 생산된 감귤 궤양병(Xanthomonas citri), 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae) 어병균(Edwardsiella sp), 식중독균(Vibrio sp), 병원성 대장균 O157(Escherichia coli O157), 동물병원성균인 바실러스 시리우스(Bacillus cereus), 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 동 물 탄저병균인 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 충치원인균인 스트렙토코커스 뮤탄트(Streptococcus mutants,), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus), 여드름균인 프로피오니박테리움 이니에(Propionibacterium iniae), 메티실린 내성 황색포도상구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 스타필로코커스 오레우스(Vancomycin Resistant Staphylococcus aures, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스균(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 균에 대한 항생물질은 필수 지방산의 하나인 리놀레닌산(linollenic acid)이 포함되는 구조를 나타낸다.
본 발명의 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P)는 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 균주가 생산하는 감귤 궤양병(Xanthomonas citri), 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae) 어병균(Edwardsiella sp), 식중독균(Vibrio sp), 병원성 대장균 O157(Escherichia coli O157), 동물병원성균인 바실러스 시리우스(Bacillus cereus), 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 동물 탄저병균인 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 충치원인균인 스트렙토코커스 뮤탄트(Streptococcus mutants,), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus), 여드름균인 프로피오니박테리움 이니에(Propionibacterium iniae), 메티실린 내성 황색포도상구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 스타필로코커스 오레우스(Vancomycin Resistant Staphylococcus aures, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스균(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 균에 대한 항생물질에 있어서, 생산성이 2배 이상 증가된 항생물질을 생산할 수 있다.
본 발명은 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 및/또는 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P)를 M9 배지에서 배양하여 감귤 궤양병(Xanthomonas citri), 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae), 어병균(Edwardsiella sp), 식중독균(Vibrio sp), 병원성 대장균 O157(Escherichia coli O157), 동물병원성균인 바실러스 시리우스(Bacillus cereus), 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 동물 탄저병균인 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 충치원인균인 스트렙토코커스 뮤탄트(Streptococcus mutants,), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus), 여드름균인 프로피오니박테리움 이니에(Propionibacterium iniae), 메티실린 내성 황색포도상구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 스타필로코커스 오레우스(Vancomycin Resistant Staphylococcus aures, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스균(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 균에 대한 항생물질을 생산하는 방법을 포함한다.
본 발명은 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 및/또는 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P)를 20∼40℃의 온도와 pH 4∼8, 바람직하게는 37℃의 온도와 pH 6.8∼7.4의 M9 액체배지에서 배양하여 감귤 궤양병(Xanthomonas citri), 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae), 어병균(Edwardsiella sp), 식중독균(Vibrio sp), 병원성 대장균 O157(Escherichia coli O157), 동물병원성균인 바실러스 시리우스(Bacillus cereus), 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 동물 탄저병균인 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 충치원인균인 스트렙토코커스 뮤탄트(Streptococcus mutants,), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus), 여드름균인 프로피오니박테리움 이니에(Propionibacterium iniae), 메티실린 내성 황색포도상구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 스타필로코커스 오레우스(Vancomycin Resistant Staphylococcus aures, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스균(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 균에 대한 항생물질을 생산하는 방법을 포함한다.
상기에서 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 및/또는 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3- 291)(KFCC 11445P)를 M9 배지에서 배양하여 감귤 궤양병(Xanthomonas citri), 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae), 어병균(Edwardsiella sp), 식중독균(Vibrio sp), 병원성 대장균 O157(Escherichia coli O157), 동물병원성균인 바실러스 시리우스(Bacillus cereus), 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 동물 탄저병균인 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 충치원인균인 스트렙토코커스 뮤탄트(Streptococcus mutants,), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus), 여드름균인 프로피오니박테리움 이니에(Propionibacterium iniae), 메티실린 내성 황색포도상구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 스타필로코커스 오레우스(Vancomycin Resistant Staphylococcus aures, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스균(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 균에 대한 항생물질은 리놀레닌산(linollenic acid)이 포함되는 구조를 나타낸다.
상기에서 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 및/또는 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P)를 M9 배지에서 배양하여 감귤 궤양병(Xanthomonas citri), 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae), 어병균(Edwardsiella sp), 식중독균(Vibrio sp), 병원성 대장균 O157(Escherichia coli O157), 동물병원성균인 바실러스 시리우스(Bacillus cereus), 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 동물 탄저병균인 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 충치원인균인 스트렙토코커스 뮤탄트(Streptococcus mutants,), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus), 여드름균인 프로피오니박테리움 이니에(Propionibacterium iniae), 메티실린 내성 황색포도상구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 스타필로코커스 오레우스(Vancomycin Resistant Staphylococcus aures, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스균(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 균에 대한 항생물질은 0∼121℃에서 항균활성을 갖는다.
본 발명의 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 및/또는 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P)을 이용하여 감귤 궤양병(Xanthomonas citri), 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae), 어병균(Edwardsiella sp), 식중독균(Vibrio sp), 병원성 대장균 O157(Escherichia coli O157), 동물병원성균인 바실러스 시리우스(Bacillus cereus), 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 동물 탄저병균인 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 충치원인균인 스트렙토코커스 뮤탄트(Streptococcus mutants,), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus), 여드름균인 프로피오니박테리움 이니에(Propionibacterium iniae), 메티실린 내성 황색포도상구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 스타필로코커스 오레우스(Vancomycin Resistant Staphylococcus aures, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스균(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 균에 대한 항생물질을 생산시 다양한 조건에 의해 조사한바, 본 발명의 목적을 달성하기 위해서는 상기에서 언급한 조건으로 실시하는 것이 바람직하다.
이하 본 발명의 내용을 실시예 및 시험예를 통하여 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들은 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것으로 본 발명의 권리범위가 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> Psuedomonas aeruginosa NO3의 동정
본 발명에서 토양으로부터 슈도모나스 에루기노사 NO3(Psuedomonas aeruginosa NO3) 균주를 분리하였다.
토양을 멸균수에 현탁하여 희석한 다음 희석된 토양 멸균수를 Luria-Bertani 액체배지(LB : Tryptone 10g/ℓ, Yeast extract 5g/ℓ, NaCl 10g/ℓ)에 15％ agar를 첨가한 LB 아가배지(Luria-Bertani agar medium)에 접종한 후 37℃의 온도에서 12시간 동안 배양하고 분리하여 얻었다.
상기에서 분리한 균주에 대해 QIAGEN KIT를 사용하여 Genomic DNA를 추출하 였다. 이 추출한 DNA를 정방향 프라이머(forward primer) 5'-TCC CTC AGA ACG AAC GCT-3') 및 역방향 프라이머(reverse primer) 5'-CCC ACT GCT GCC TCC CGT-3'를 이용하여 PCR 처리를 실시한 다음 일반적으로 보급되어있는 그람 음성균의 universial 16s rRNA primer를 이용하여 염기서열을 분석하여 서열목록 1과 같은 염기서열을 얻었으며, 상기 서열목록 1의 염기서열에 대해 상동성을 조사한자 서열목록 1의 염기서열이 Pseudomonas aeruginosa strain SL-73과 98％ 상동성(homology)을 가짐을 확인하여(표 1 참조) 이 균주를 슈도모나스 에루기노사 NO3(Psuedomonas aeruginosa NO3) 균주로 명명하고 상기 슈도모나스 에루기노사 NO3(Psuedomonas aeruginosa NO3) 균주를 2009년 3월 25일 미생물보존센타에 기탁번호 KFCC11444P로 기탁하였다.
표 1. Psuedomonas aeruginosa NO3의 16s rRNA의 염기서열이 가장 유사한 균주
Strain Accession
No.		 similarity
(％)
Pseudomonas aeruginosa strain SL-73 FJ449848.1 98
Pseudomonas aeruginosa strain RE7 FJ472580.1 98
Pseudomonas aeruginosa strain MB2 EU272868.1 98
Pseudomonas aeruginosa strain SC1 FJ171923.1 98
Pseudomonas aeruginosa strain Tokybay-1276 EU710869.1 98
Pseudomonas aeruginosa strain TL12 FJ361190.1 98
Pseudomonas aeruginosa strain D2 EU915713.1 98
Pseudomonas aeruginosa strain RRLJH 1 EU428822.1 98
Pseudomonas aeruginosa strain XN-80-2 EU668172.1 98
Pseudomonas aeruginosa sp. XP-M2 EU410508.1 98
<실시예 2> Psuedomonas aeruginosa NO3의 길항력 시험(1)
상기 실시예 1에서 얻은 Psuedomonas aeruginosa NO3(KFCC11444P)에 대해 감 귤궤양병 균주인 Xantomonas citri에의 항균력 확인은 37℃에서 12시간 동안 LB 액체배지에서 배양된 균을 LB 한천배지에 도말하여 37℃에서 1시간 동안 키운 후 시료를 적신 페이퍼 디스크(paper disc)를 이용하여 확인하였다.
Psuedomonas aeruginosa NO3(KFCC11444P) 균주는 LB 한천배지에서 배양(37℃, standing incubator)하였고, 10㎖ LB 액체배지에서 12시간 동안 배양하였다(37℃, 150rpm shaking incubator).
항균물질은 M9 액체배지(Na2HPO4 6g/ℓ, KH2PO4 3g/ℓ, NH4Cl 1g/ℓ, NaCl 0.5g/ℓ, 40％ glucose 10㎖/ℓ, 1M MgSO4·7H20 1㎖/ℓ, 0.5M CaCl2 1㎖/ℓ) 1ℓ에 Psuedomonas aeruginosa NO3(KFCC11444P) 균주 1㎖을 접종하여 32시간 동안 배양(37℃, 150rpm shaking incubator)하여 생산하였다.
상기에서 Psuedomonas aeruginosa NO3(KFCC11444P) 균주가 생산하는 항균물질에 대해 감귤궤양병 균주인 Xantomonas citri에 대한 길항력은 도 1에 나타내었다.
도 1에서 crude는 Psuedomonas aeruginosa NO3(KFCC11444P) 균주가 생산하는 항균물질을 HPLC로 정제하기 전의 항균력을 나타낸 것이고, peak1 내지 peak4는 하기의 HPLC 분리 정제에 의해 순차적으로 분리된 피크(peak)의 항균물질에 대한 항균력을 나타낸 것으로서 peak1 내지 peak4 중에서 peak4의 항균력이 가장 큰 것을 나타내고 있다.
<HPLC 분리 정제 공정>
Psuedomonas aeruginosa NO3(KFCC11444P) 균주가 생산하는 항균물질은 ZORBAX 300SB-C18 reverse-phase column (4.6mmID × 250mm L, 5㎛ particle diameter, Agilent Co.)을 이용한 semi-prep HPLC를 사용하여 분리 정제하였다. 시료는 5㎕가 주입되었고, 0.1％ Trifluoroacetic acid(TFA)를 함유한 10％ acetonitrile에 0.1％ TFA를 함유한100％ acetonitrile까지 1분당 1㎖씩 60분간 농도구배를 주어 흘려줌으로써 분리 정제하였다.
<실시예 3> Psuedomonas aeruginosa NO3의 길항력 시험(2)
상기 실시예 1에서 얻은 Psuedomonas aeruginosa NO3(KFCC11444P)에 대한 항균력 확인은 37℃에서 12시간 동안 LB 액체배지에서 배양된 균을 LB 한천배지에 도말하여 37℃에서 1시간 동안 키운 후 시료를 적신 페이퍼 디스크(paper disc)를 이용하여 확인하였다.
Psuedomonas aeruginosa NO3(KFCC11444P) 균주는 LB 한천배지에서 배양(37℃, standing incubator)하였고, 10㎖ LB 액체배지에서 12시간 동안 배양하였다(37℃, 150rpm shaking incubator).
항균물질은 M9 액체배지(Na2HPO4 6g/ℓ, KH2PO4 3g/ℓ, NH4Cl 1g/ℓ, NaCl 0.5g/ℓ, 40％ glucose 10㎖/ℓ, 1M MgSO4·7H20 1㎖/ℓ, 0.5M CaCl2 1㎖/ℓ) 1ℓ에 Psuedomonas aeruginosa NO3(KFCC11444P) 균주 1㎖을 접종하여 32시간 동안 배양(37℃, 150rpm shaking incubator)하여 생산하였다.
상기에서 Psuedomonas aeruginosa NO3(KFCC11444P) 균주가 생산하는 항균물질에 대해 여러 병원성 균주에 대한 길항력은 도 2 및 표 2에 나타내었다.
도 2는 Psuedomonas aeruginosa NO3가 생산하는 항균물질의 추출물을 Staphlycoccus aureus (KACC 10778)에 대한 Disc test 결과를 나타낸 것으로서 도 1에서처럼 Psuedomonas aeruginosa NO3가 생산한 항균물질이 항균력이 있음을 나타내고 있다. 도 2에서 A는 메탄올(MeOH) 추출물에 대한 항균물질의 항균력을 나타낸 것이고, B는 크루드 추출물(crude extract)에 대한 항균물질의 항균력을 나타낸 것이다.
표 2. 여러 가지 병원성 균주에 대한 Psuedomonas aeruginosa NO3 균주가 생산하는 항균물질의 항균력
Pathogenic bacteria G(-) or G(+) clear zone
(mm)		 growth inhibition
Edwardsiella tarda G(-) 20 +++
Escherichia coli 0157 " 13 ++
Salmonella sp. " 0 -
Vibrio ordalii " 22 +++
Bacillus thuringiensis CMB 26 G(+) 14 ++
Streptococcus iniae 36 " 16 ++
Staphylococcus aureus KACC10778 " 19 ++
Methicillin resistance Staphylococcus aureus (MRSA) 1 " 16 ++
MRSA 2 " 21 +++
MRSA 3 " 21 +++
MRSA 4 " 26 ++++
MRSA 5 " 21 +++
MRSA 6 " 21 +++
MRSA 7 " 28 ++++
MRSA 8 " 16 ++
MRSA 9 " 16 ++
MRSA 10 " 18 ++
MRSA 11 " 14 ++
MRSA 12 " 25 ++++
MRSA 13 " 19 ++
상기 표 2에서 보는바와 같이 Pseudomonas sp. NO3는 그람 양성(G(+)), 그람 음성(G(-))에 관계없이 실험균에 대하여 항균력을 나타냈다. 항균력 측정은 생육 저해환(Inhibition zone)의 직경을 측정하였다.
상기 표 2에서처럼 특히 어병 및 식중독균인 Edwardsiella tarda, Vibrio ordalii, Escherichia coli 0157, BT toxin을 분비하여 곤충을 사멸시키는 Bacillus thuringiensis에 강한 길항력을 보였고 Salmonella sp.에는 길항력을 나타내지 않았다. 또한 여러 가지 항생제에 대한 저항성균(multidrug resistance pathogens)들인 Staphylococcus aureus, 메티실린에 저항성을 가지는 Methicillin resistance Staphylococcus aureus에도 길항력을 보였다.
<실시예 4> 배양시간 별 항균물질 생산량변화 측정
항균물질을 생산하는 M9 배지에 Psuedomonas aeruginosa NO3을 접종 후 4시간마다 항균물질의 생산량 변화(OD600)와 활성을 측정하고 그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에서처럼 M9 배지에 Psuedomonas aeruginosa NO3을 접종 후 32시간 배양 시 항균물질의 생산량이 가장 많았고 활성도 뛰어남을 확인하였다.
도 3에서 점선(◆)은 광밀도(optical density)을 나타내고, 실선(-◆-)은 성장 저해(growth inhibition)를 나타낸다.
<실시예 5> 항균물질의 정제
배양한 균체는 6N HCl를 이용하여 pH2.0으로 맞춘 후 4℃에서 12시간 놓아두었다. 원심분리(8,000rpm, at 4℃, for 40min)하여 상층액은 버리고 침전물을 얻었다. 이 침전물에 에틸에테르를 넣고 1시간 동안 섞어준 후 에틸에테르 층만 모아 증발기(evaporator)를 사용하여 증발시켰다. 샘플을 최소량의 메탄올 농도(10∼90％) 녹여낸 다음 0.20㎛ non-pyrogenic hydrophilic filter를 이용하여 여과하였다. 메탄올 농도별 활성을 비교하여 본 결과 60％ 메탄올에 물질을 녹였을 때 활성이 가장 큼을 확인하였다(도 4 참조).
(1)HPLC
항균력이 있는 샘플은 ZORBAX 300SB-C18 reverse-phase column (4.6mmID × 250mm L, 5㎛ particle diameter, Agilent Co.)을 이용한 semi-prep HPLC를 사용하여 분리 정제하였다. 시료는 5㎕가 주입되었고, 0.1％ Trifluoroacetic acid(TFA)를 함유한 10％ acetonitrile에 0.1％ TFA를 함유한100％ acetonitrile까지 1분당 1㎖씩 60분간 농도구배를 주어 흘려줌으로써 분리 정제하였다. 214nm에서 흡광도의 변화로 시료의 용출을 확인하였고, 각 분획별로 물질을 모아 건조 시킨 후 최소량의 메탄올에 녹여 이중 20㎕를 이용하여 항균력을 확인하였다. 항균활성 결과 50∼55분 사이에서 활성이 나타나 이 분획을 다시 HPLC를 수행하였다. ZORBAX 300SB-C18 reverse-phase column를 이용하여 methanol : acetonitril : 30mM Tris = 95:2.5:2.5의 비율로 섞어준 용매를 농도구배 없이 분당 1㎖씩 흘려주어 활성이 있는 단일 피크를 얻었다(도 5, 도 6 참조).
도 5는 Psuedomonas aeruginosa NO3을 에틸에테르로 추출한 항균물질을 HPLC를 통하여 분리한 것이다(A:NO3 crude extract HPLC, B: active peak re-HPLC).
도 6은 Psuedomonas aeruginosa NO3을 HPLC를 통하여 분리 정제 후 활성과 TLC을 확인한 것이다(A: HPLC 후 단일 peak 활성테스트, B-a: crude extract HPLC, B-b: HPLC 후 단일 peak TLC).
(2)ESI-LC/MS
HPLC를 통해 분리한 활성이 있는 분획을 ESI-LC/MS를 통하여 분자량 및 구조를 분석하였다. 70％에서 95％ acetonitrile를 농도구배를 주면서 90분간 흘려주었다. 214nm에서 흡광도의 변화를 통해 활성있는 물질의 분자량이 m/z 338임을 확인하였다. 또한 Psuedomonas aeruginosa NO3가 지방산을 포함하는 것을 확인하였다(도 7 참조).
도 7은 HPLC를 통해 분리한 단일 물질을 ESI-LC/MS를 통하여 분자량과 구조를 분석한 것이다.
(3)Thin layer chromatography
분석을 위해 활성이 있는 샘플을 silica gel DC 60 plates(20×20㎠, 200㎛ particle, thickness 0.2㎜)에서 분리하였다. 이동상 용매는 클로로포름(chloroform)-메탄올(methanol)-물(H2O)=65:25:4를 사용하였고 확인을 위해 UV확 인 및 water spry, 40％ H2SO4, 0.2％ 닌히드린, anisaldehyde를 뿌린 후 200℃에서 5∼30분간 발색시켰다(도 8 참조).
이 물질은 여러 가지 반응 결과 lipid, carbohydrate를 포함하며 적어도 3가지 이상의 물질이 섞여 있음을 알 수 있었다.
도 8은 Psuedomonas aeruginosa NO3을 에틸에테르로 추출한 후 crude extract 상태로 TLC로 분리한 것이다(A: UV 254nm, B: Water spray, C: anisaldehyde, D: 40％ H2SO4).
<실시예 6> 최소억제농도 및 최소살균농도
Psuedomonas aeruginosa NO3가 생산하는 항균물질에 대한 MRSA의 tolerance를 평가하기 위하여 최소억제농도(MIC : minimal inhibition concentration) 및 최소살균농도(MBC : minimum bactericidal concentration)를 알아보았다. 먼저 준비된 crude antibiotics를 연속적으로 2 폴드 딜루션(2 fold dilution)하여 준비한 후 피검균인 MRSA와 함께 LB 액체배지에 접종하였다. 성장대조군으로 MRSA를 항균물질이 들어있지 않은 동량의 LB 액체배지에 접종하였다. 접종 후, 각각의 배지를 37℃에서 12시간 배양하여, MRSA에 대한 균의 성장이 억제된 최소억제농도와 최소살균농도를 결정하였다(도 9 참조).
도 9는 Psuedomonas aeruginosa NO3을 에틸에테르로 추출한 후 MRSA에 대한 최소억제농도와 최소살균농도를 측정한 것이다. 대조군으로 ampicillin을 사용하였 다(A: 최소억제농도, B: 최소살균농도).
<실시예 7> 트랜스포손을 이용한 슈도모나스 에루기노사 NO3의 돌연변이주 선발
상기 실시예 1에서 얻은 Psuedomonas aeruginosa NO3(KFCC11444P) 균주가 생산하는 항생물질의 생산 능력이 뛰어난 돌연변이주를 선발하기 위하여 Wilson등(1998)의 방법을 이용하여 Psuedomonas aeruginosa NO3(KFCC11444P) 균주의 돌연변이주를 제조하였다.
즉, 트랜스포손(transposon) 공여주(donor)로 E. coli S17-1 람다-pir(pUTmini-Tn5::tet)를 사용하여 수용주 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3, 기탁번호 KFCC11444P)와 접합시켜 돌연변이 접합체(transconjugant)를 획득하였다. 450개 접합체중 생산성이 가장 높은 균주를 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)로 명명하고, 상기 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Psuedomonas aeruginosa NO3) 균주를 2009년 3월 25일 미생물보존센타에 기탁번호 KFCC11445P로 기탁하였다.
슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Psuedomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC11445P) 균주는 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC11444P)에 비해 항균활성이 우수하여 항균물질의 생산성이 약 2배 증가하였다(도 10 참조).
상술한 바와 같이, 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만 해당 기술 분야의 숙련된 당업자라면 하기의 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다.
본 발명에 의해 감귤 궤양병(Xanthomonas citri), 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae), 어병균(Edwardsiella sp), 식중독균(Vibrio sp), 병원성 대장균 O157(Escherichia coli O157), 동물병원성균인 바실러스 시리우스(Bacillus cereus), 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 동물 탄저병균인 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 충치원인균인 스트렙토코커스 뮤탄트(Streptococcus mutants,), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus), 여드름균인 프로피오니박테리움 이니에(Propionibacterium iniae), 메티실린 내성 황색포도상구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 스타필로코커스 오레우스(Vancomycin Resistant Staphylococcus aures, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스균(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 균에 대한 항생물질을 생산하는 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 균주 및/또는 슈도모나스 에루기노 사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P) 균주와 상기 항생물질을 생산하는 방법을 제공할 수 있다.
도 1은 Psuedomonas aeruginosa NO3(KFCC11444P) 균주가 생산하는 항균물질에 대해 감귤궤양병 균주인 Xantomonas citri의 항균력을 나타낸 것이다.
도 2는 Psuedomonas aeruginosa NO3가 생산하는 항균물질의 추출물을 Staphlycoccus aureus (KACC 10778)에 대한 Disc test 결과를 나타낸 것이다.(A:MeOH, B:crude extract)
도 3은 Psuedomonas aeruginosa NO3을 Staphlycoccus aureus (KACC 10778)에 대한 시간별 활성물질의 생산량과 활성의 정도를 나타낸 것이다.
도 4는 Psuedomonas aeruginosa NO3에서 추출한 항균물질을 메탄올 농도별로 녹여 활성을 측정한 것이다.
도 5는 Psuedomonas aeruginosa NO3을 에틸에테르로 추출한 항균물질을 HPLC를 통하여 분리한 것이다(A:NO3 crude extract HPLC, B: active peak re-HPLC).
도 6은 Psuedomonas aeruginosa NO3을 HPLC를 통하여 분리 정제 후 활성과 TLC을 확인한 것이다(A: HPLC 후 단일 peak 활성테스트, B-a: crude extract HPLC, B-b: HPLC 후 단일 peak TLC).
도 7은 HPLC를 통해 분리한 단일 물질을 ESI-LC/MS를 통하여 분자량과 구조를 분석한 것이다.
도 8은 Psuedomonas aeruginosa NO3을 에틸에테르로 추출한 후 crude extract 상태로 TLC로 분리한 것이다(A: UV 254nm, B: Water spray, C: anisaldehyde, D: 40％ H2SO4).
도 9는 Psuedomonas aeruginosa NO3을 에틸에테르로 추출한 후 MRSA에 대한 최소억제농도와 최소살균농도를 측정한 것이다. 대조군으로 ampicillin을 사용하였다(A: 최소억제농도, B: 최소살균농도).
도 10는 Psuedomonas aeruginosa NO3 균주에 트렌스포손 miniTn5::tet를 이용하여 선발한 돌연변이체 Psuedomonas aeruginosa NO3-291 균주의 활성을 나타낸 것이다(A:Psuedomonas aeruginosa NO3 균주, B: Psuedomonas aeruginosa NO3-291 균주)
<110> INDUSTRY FOUNDATION OF CHONNAM NATIONAL UNIVERSITY <120> Antibiotics for bacterial canker of citrus from drug resistance Pseudomonas aeruginosa NO3 and antibiotics, its application <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1419 <212> DNA <213> Pseudomonas aeruginosa NO3 <400> 1 tgactaccat gcaagtcgag cggatgaagg gagcttgctc ctggattcag cggcggacgg 60 gtgagtaatg cctaggaatc tgcctggtag tgggggataa cgtccggaaa cgggcgctaa 120 taccgcatac gtcctgaggg agaaagtggg ggatcttcgg acctcacgct atcagatgag 180 cctaggtcgg attagctagt tggtggggta aaggcctacc aaggcgacga tccgtaactg 240 gtctgagagg atgatcagtc acactggaac tgagacacgg tccagactcc tacgggaggc 300 agcagtgggg aatattggac aatgggcgaa agcctgatcc agccatgccg cgtgtgtgaa 360 gaaggtcttc ggattgtaaa gcactttaag ttgggaggaa gggcagtaag ttaatacctt 420 gctgttttga cgttaccaac agaataagca ccggctaact tcgtgccagc agccgcggta 480 atacgaaggg tgcaagcgtt aatcggaatt actgggcgta aagcgcgcgt aggtggttca 540 gcaagttgga tgtgaaatcc ccgggctcaa cctgggaact gcatccaaaa ctactgagct 600 agagtacggt agagggtggt ggaatttcct gtgtagcggt gaaatgcgta gatataggaa 660 ggaacaccag tggcgaaggc gaccacctgg actgatactg acactgaggt gcgaaagcgt 720 ggggagcaaa caggattaga taccctggta gtccacgccg taaacgatgt cgactagccg 780 ttgggatcct tgagatctta gtggcgcagc taacgcgata agtcgaccgc ctggggagta 840 cggccgcaag gttaaaactc aaatgaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt 900 ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt acctggcctt gacatgctga gaactttcca 960 gagatggatt ggtgccttcg ggaactcaga cacaggtgct gcatggctgt cgtcagctcg 1020 tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgtaa cgagcgcaac ccttgtcctt agttaccagc 1080 acctcgggtg ggcactctaa ggagactgcc ggtgacaaac cggaggaagg tggggatgac 1140 gtcaagtcat catggccctt acggccaggg ctacacacgt gctacaatgg tcggtacaaa 1200 gggttgccaa gccgcgaggt ggagctaatc ccataaaacc gatcgtagtc cggatcgcag 1260 tctgcaactc gactgcgtga agtcggaatc gctagtaatc gtgaatcaga atgtcacggt 1320 gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc atgggagtgg gttgctccag 1380 aagtagctag tctaaccgca agggggacgg tatcacgga 1419

Claims (11)

  1. 궤양병에 대한 항생물질을 생산하는 신규한 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P).
  2. 제1항에 있어서, 궤양병은 감귤 궤양병(Xanthomonas citri) 또는 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae)인 것을 특징으로 하는 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P).
  3. 제1항에 있어서, 궤양병 이외에 어병균(Edwardsiella sp), 식중독균(Vibrio sp), 병원성 대장균 O157(Escherichia coli O157), 동물병원성균인 바실러스 시리우스(Bacillus cereus), 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 동물 탄저병균인 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 충치원인균인 스트렙토코커스 뮤탄트(Streptococcus mutants,), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus), 여드름균인 프로피오니박테리움 이니에(Propionibacterium iniae), 메티실린 내성 황색포도상구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 스타필로코커스 오레우스(Vancomycin Resistant Staphylococcus aures, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스균(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 균에 대한 항생물질을 생산하는 것을 특징으로 하는 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P).
  4. 제1항 또는 제3항에 있어서, 항생물질은 리놀레닌산(linollenic acid)이 포함되는 것을 특징으로 하는 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P).
  5. 궤양병에 대한 항생물질을 생산하며, 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P)에 miniTn5::tet 트랜스포손(transposon)을 접합시켜 얻은 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P).
  6. 제5항에 있어서, 궤양병은 감귤 궤양병(Xanthomonas citri) 또는 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae)인 것을 특징으로 하는 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P).
  7. 제5항에 있어서, 궤양병 이외에 어병균(Edwardsiella sp), 식중독균(Vibrio sp), 병원성 대장균 O157(Escherichia coli O157), 동물병원성균인 바실러스 시리우스(Bacillus cereus), 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 동물 탄저병균인 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 충치원인균인 스트렙토코커스 뮤 탄트(Streptococcus mutants,), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus), 여드름균인 프로피오니박테리움 이니에(Propionibacterium iniae), 메티실린 내성 황색포도상구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 스타필로코커스 오레우스(Vancomycin Resistant Staphylococcus aures, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스균(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 균에 대한 항생물질을 생산하는 것을 특징으로 하는 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P).
  8. 제5항 또는 제7항에 있어서, 항생물질은 리놀레닌산(linollenic acid)이 포함되는 것을 특징으로 하는 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P).
  9. 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 또는 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P)를 M9 배지에서 배양하여 감귤 궤양병(Xanthomonas citri), 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae), 어병균(Edwardsiella sp), 식중독균(Vibrio sp), 병원성 대장균 O157(Escherichia coli O157), 동물병원성균인 바실러스 시리우스(Bacillus cereus), 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 동 물 탄저병균인 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 충치원인균인 스트렙토코커스 뮤탄트(Streptococcus mutants,), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus), 여드름균인 프로피오니박테리움 이니에(Propionibacterium iniae), 메티실린 내성 황색포도상구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 스타필로코커스 오레우스(Vancomycin Resistant Staphylococcus aures, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스균(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 균에 대한 항생물질을 생산하는 방법.
  10. 제9항에 있어서, 슈도모나스 에루기노사 NO3(Pseudomonas aeruginosa NO3)(KFCC 11444P) 또는 슈도모나스 에루기노사 NO3-291(Pseudomonas aeruginosa NO3-291)(KFCC 11445P)를 20∼40℃의 온도와 pH 4∼8의 M9 액체배지에서 배양하여 감귤 궤양병(Xanthomonas citri), 참다래 궤양병(Pseudomonas syringae pv actinidiae), 어병균(Edwardsiella sp), 식중독균(Vibrio sp), 병원성 대장균 O157(Escherichia coli O157), 동물병원성균인 바실러스 시리우스(Bacillus cereus), 바실러스 마이코이데스(Bacillus mycoides), 동물 탄저병균인 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 충치원인균인 스트렙토코커스 뮤탄트(Streptococcus mutants,), 스트렙토코커스 소브리너스(Streptococcus sobrinus), 여드름균인 프로피오니박테리움 이니에(Propionibacterium iniae), 메 티실린 내성 황색포도상구균(Methicillin Resistant Straphylococcus aureus, MRSA), 메티실린 내성 엔터로코커스균(Methicillin Resistant Enterococcus, MRE), 반코마이신 내성 스타필로코커스 오레우스(Vancomycin Resistant Staphylococcus aures, VRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스균(Vancomycin Resistant Enterococcus, VRE)의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 균에 대한 항생물질을 생산하는 방법.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서, 항생물질은 리놀레닌산(linollenic acid)이 포함되는 것을 특징으로 하는 방법.
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