KR20100106029A - 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질을 포함하는 피부 미백용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부 미백용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질을 포함하는 피부 미백용 약학적 조성물 및 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 피부 미백 활성이 있으면서 세포 독성은 없으므로, 피부 미백용 화장품 또는 피부 미백용 약학적 조성물 등의 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

피부 미백, 알파-시뉴클레인, 화장료

Description

알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질을 포함하는 피부 미백용 조성물{Composition for Skin Whitening Comprising Inhibitor for the Expression or Activity of Alpha-Synuclein Gene}

본 발명은 피부 미백용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질을 포함하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.

피부 색소 침착은 멜라닌 세포(melanocyte)의 티로신(tyrosine)이 골지체(Golgi)에서 티로시나제(tyrosinase), 티로시나제-연관 단백질 1(tyrosinase-related protein 1, Tyrp1), 티로시나제-연관 단백질 2(Tyrp2), DCT(dopachrom tautomerase), DHICA(dihyduoxyinkole carboxylic acid) 산화효소 등과 같은 색소 형성 효소에 의해 산화되어 검은색을 내는 유멜라닌(eumelanin)과 황색 또는 적색을 내는 페오멜라닌(pheomelanin)을 생성함으로써 발생하며(T. Ellenberger et al. Genes Dev., 8, 970, 1994), 합성된 멜라닌 색소는 각질형성세포로 이동되어 피부색을 결정하게 된다. 또한, 자외선 조사 등에 의해 멜라닌의 양이 증가되면 과(過)색소 침착이 생기고, 이러한 과색소 침착은 기미, 흑자 등과 같은 피부질환 의 원인이 된다. 우리나라 사람을 비롯한 아시아인의 경우는 백인과 비교하여 색소 침착이 쉽게 일어나며, 따라서 색소 질환의 빈도가 높다.

현재, 이러한 색소 침착을 방지 또는 완화하기 위하여 히드로퀴논(hydroquinone), 레티놀(retinol), 아젤라산(azelaic acid), 코지산(kojic acid) 등의 물질들이 약제나 화장품에 이용되고 있으나, 그 효과가 우수하지 못하여 상기와 같은 색소성 질환을 치료하거나 예방할 수 있는 만족할 만한 물질이 없다. 따라서, 멜라닌 색소 침착을 억제하거나 완화하여 피부 미백 효과를 얻기 위한 효과적인 천연물이나 합성물 소재의 개발이 절실히 요구되고 있는 실정이다.

본 발명은 상기와 같은 종래 피부 미백 관련 제품의 문제점을 개선하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명의 목적은 미백 관련 화장품 또는 약학적 조성물의 형태로 유용하게 사용될 수 있는 알파-시뉴클레인(α-synuclein, SNCA) 유전자의 발현이나 작용을 억제하는 물질을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질을 포함하는 피부 미백용 약학적 조성물을 제공한다.

본 명세서에 있어서, 상기 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질의 범위에는 알파-시뉴클레인 단백질의 활성을 억제하는 물질도 제한없이 포함될 수 있다. 본 발명의 한 바람직한 구현예에서, 상기 알파-시뉴클레인 단백질의 활성을 억제하는 물질의 예로는 상기 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 바람직하게는 단일클론 항체, 또는 상기 항체의 일부를 포함하는 항체 절편을 들 수 있다. 또한, 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질에는 상기 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하거나, 발현된 알파-시뉴클레인 단백질의 활성을 억제할 수 있는 임의의 천연 또는 합성 화합물이 제한없이 포함될 수 있다. 아울러, 상기 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하기 위한 물질로는 상기 유전자 자체의 발현에 영향을 미치는 물질 뿐만 아니라, 신호전달경로 중의 알파-시뉴 클레인 단백질의 상류(upstream)에 위치하는 유전자의 발현 또는 해당 단백질의 활성을 억제하는 물질도 제한없이 포함될 수 있다.

본 발명의 한 구현예에 따르면, 상기 알파-시뉴클레인 단백질은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 가지며, 상기 알파-시뉴클레인 유전자는 상기 알파-시뉴클레인 단백질을 코딩하는 유전자로서, 바람직하게는 서열번호 2로 기재되는 염기서열을 갖는다. 그러나, 본 발명의 피부 미백 효과를 얻을 수 있는 한, 상기 알파-시뉴클레인 단백질 및/또는 이를 코딩하는 유전자에는 소정의 변이가 있어도 무방하다. 본 명세서에 있어서, 상기 "변이"는 하나 이상의 아미노산 또는 뉴클레오티드의 결실, 삽입, 치환, 변형을 포함하는 의미이다. 또한, 상기 알파-시뉴클레인 단백질 및 유전자는 인간 유래인 것이 바람직하지만, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다. 예컨대, 본 발명에 따른 피부 미백 효과를 얻을 수 있는 한, 상기 알파-시뉴클레인 단백질 및 유전자는 동물, 바람직하게는 포유동물 유래일 수 있으며, 포유동물 중에서도 영장류 유래일 수 있다.

본 발명의 한 바람직한 구현예에 따르면, 알파-시뉴클레인 단백질의 발현이 억제되면 멜라닌 합성에 관여하는 티로시나제 및 티로시나제-연관 단백질 1의 발현 또한 억제되고(도 4a 및 도 4b 참조), 알파-시뉴클레인 단백질을 과발현 시키면 상기 티로시나제 및 티로시나제-연관 단백질 1의 발현 또한 증가한다(도 6 참조). 즉, 멜라닌 형성에 관여하는 신호전달 과정에서, 알파-시뉴클레인 단백질의 상류(upstream) 및/또는 하류(downstream) 신호전달 경로에 위치하는 임의의 유전자의 발현을 조절함으로써도 본 발명의 미백 효과를 얻을 수 있음을 유추할 수 있다. 따라서, 이들 알파-시뉴클레인 단백질의 상류 및/또는 하류 신호전달 경로 상의 임의의 유전자의 발현, 또는 해당 단백질의 활성을 조절함으로써 미백 효과를 얻는 조성물 및/또는 방법 또한 본 발명의 사상의 범위 내에 포함된다.

상기 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질로는 상기 유전자 또는 그의 mRNA에 상보적으로 결합하는 핵산, 바람직하게는 DNA 또는 RNA를 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 핵산은 이중쇄 구조 또는 단일쇄 구조 중 어느 형태여도 무방하다. 상기 핵산은 길이가 30개 뉴클레오티드 미만, 일반적으로 19 내지 24개 뉴클레오티드이고, 알파-시뉴클레인 유전자의 mRNA 전사체의 적어도 일부에 대해 실질적으로 상보적인 영역을 갖는 DNA 또는 RNA 쇄(안티센스 쇄)를 포함한다. 이러한 DNA 또는 RNA를 사용함으로써 동물, 바람직하게는 포유동물, 보다 바람직하게는 인간에서 피부 색소의 침착과 관련된 유전자 mRNA의 표적화된 분해를 가능하게 할 수 있다. 따라서, 이러한 핵산을 포함하는 본 발명의 조성물은 멜라닌 형성에 관여하는 유전자를 표적화함으로써, 알파-시뉴클레인 유전자의 발현에 의해 매개되는 병리학적 과정, 예를 들면, 피부 색소 침착을 억제하여 피부 미백 효과를 얻는데 유용하다.

본 명세서에 있어서, "G", "C", "A", "T" 및 "U"는 각각 일반적으로 염기로서 구아닌, 시토신, 아데닌, 티민 및 우라실을 각각 함유하는 뉴클레오티드를 나타내며, "리보뉴클레오티드" 또는 "뉴클레오티드"는 변형된 뉴클레오티드 또는 대체 치환 잔기를 말할 수도 있다. 당업자는 구아닌, 시토신, 아데닌, 티민 및 우라실을 다른 잔기로 치환시키는 경우, 이러한 치환 잔기를 갖는 뉴클레오티드를 포함하 는 올리고뉴클레오티드의 염기쌍 형성 특성은 실질적으로 변화되지 않으면서 치환될 수 있다는 것을 잘 알고 있다. 예를 들면, 이노신을 염기로 포함하는 뉴클레오티드는 아데닌, 시토신 또는 우라실을 함유하는 뉴클레오티드와 염기쌍을 형성할 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에서에 사용되는 "표적 서열"은 1차 전사 생성물의 RNA 프로세싱의 생성물인 mRNA를 포함하는, 알파-시뉴클레인 유전자의 전사 결과로 형성된 mRNA 분자의 뉴클레오티드 서열의 연속된 부분을 말한다.

본 명세서에 있어서, 용어 "상보적인"은 제2 뉴클레오티드 서열과 관련하여 제1 뉴클레오티드 서열을 기술하는데 사용되는 경우, 특정 조건 하에서 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드와 교잡하여 듀플렉스(duplex) 구조를 형성하는 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드의 능력을 말한다.

본 명세서에 있어서, "세포 속으로 도입하는"은 핵산, 바람직하게는 DNA 또는 RNA의 세포 속으로의 섭취 또는 흡수를 용이하게 함을 의미한다. 핵산의 흡수 또는 섭취는 자발적인 확산 또는 능동적인 세포 과정을 통해, 또는 보조제 또는 장치에 의해 일어날 수 있다. 상기 용어의 의미는 시험관내의 세포에 한정되지 않으며, 여기서 세포는 살아있는 유기체의 일부이다. 이 경우, 세포 속으로의 도입은 유기체로의 전달을 포함할 수 있다. 예를 들어, 생체내 전달의 경우, 핵산은 조직 부위 속으로 주사되거나 또는 전신적으로 투여될 수 있다. 세포 속으로의 시험관내 도입 방법으로는 전기천공(electroporation) 및 리포펙션과 같이 당업계에 공지 된 방법이 포함된다.

용어 "사일런스(silence)" 및 "∼의 발현을 억제하는"은 알파-시뉴클레인 유전자의 발현이 적어도 부분적으로 억제되는 것을 말한다. 억제 정도는 알파-시뉴클레인 유전자 전사에 기능적으로 연결된 매개변수, 예를 들면, 세포에 의해 분비된 알파-시뉴클레인 유전자에 의해 암호화된 단백질의 양, 또는 특정 표현형을 나타내는 세포 수의 감소로 표현될 수 있다. 본 발명의 한 바람직한 구현예에서, 알파-시뉴클레인 유전자의 발현은 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하는 핵산, 예컨대 이본쇄 올리고뉴클레오티드의 투여에 의해 약 20%, 25%, 35% 또는 50% 이상 억제된다. 다른 바람직한 구현예에서, 알파-시뉴클레인 유전자의 발현은 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하는 핵산의 투여에 의해 약 60%, 70% 또는 80% 이상 억제된다. 일부 양태에서, 알파-시뉴클레인 유전자의 발현은 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하는 핵산의 투여에 의해 약 85%, 90% 또는 95% 이상 억제된다.

알파-시뉴클레인 유전자의 발현과 관련하여 본 명세서에서 사용되는 용어 "치료하다", "치료" 등의 용어는 알파-시뉴클레인 유전자의 발현에 의해 매개되는 병리학적 과정으로부터의 경감 또는 이의 완화를 말한다. 예컨대, 상기 병리학적 과정의 경감 또는 완화는 피부 미백 효과를 의미할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 "치료학적 유효량" 및 "예방학적 유효량"이라는 표현은 알파-시뉴클레인 유전자의 발현에 의해 매개되는 병리학적 과정의 명백한 증상의 치료, 예방 또는 관리에 있어서 치료학적 이점을 제공하는 양을 의미한다. 치료학적으로 유효한 특정 양은 통상의 의학 전문의에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 예를 들면, 치료학적 유효량은 알파-시뉴클레인 유전자의 발현에 의해 매개되는 병리학적 과정의 유형, 대상의 연령, 알파-시뉴클레인 유전자의 발현에 의해 매개되는 병리학적 과정의 단계와 같은 당업계에 공지된 요인에 따라 달라질 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 "약학적 조성물"은 약리학적 유효량의 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하는 물질 또는 알파-시뉴클레인 단백질의 활성을 억제시키는 물질, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 "약리학적 유효량", "치료학적 유효량" 또는 간단히 "유효량"은 의도하는 약리학적, 치료학적 또는 예방학적 결과를 달성하는데 유효한 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하는 물질 또는 알파-시뉴클레인 단백질의 활성을 억제시키는 물질의 양을 말한다.

용어 "약학적으로 허용되는 담체"는 치료제의 투여를 위한 담체를 말한다. 이러한 담체에는 염수, 완충염수, 덱스트로스, 물, 글리세롤, 에탄올 및 이들의 배합물이 포함되지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 경구 투여되는 약물의 경우, 약학적으로 허용되는 담체에는 약학적으로 허용되는 부형제, 예를 들면 불활성 희석제, 붕해제, 결합제, 윤활제, 감미제, 풍미제, 착색제 및 보존제가 포함되지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 적당한 불활성 희석제에는 탄산나트륨 및 탄산칼슘, 인산나트륨 및 인산칼슘, 및 락토스가 포함되는 반면에, 옥수수 전분 및 알긴산은 적당한 붕해제이다. 결합제에는 전분 및 젤라틴이 포함할 수 있는 반면에, 윤활제는 일반적으로 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 활석(talc)일 것이다. 경우에 따라, 정제는 위장관에서의 흡수를 지연시키기 위하여, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 물질로 피복할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 "형질전환된 세포"는 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하는 물질, 바람직하게는 핵산, 보다 바람직하게는 DNA 또는 RNA 분자가 발현될 수 있도록 벡터가 도입된 세포이다.

본 발명의 한 바람직한 구현예에서, 본 발명은 세포 또는 포유동물에서 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하기 위한 핵산, 바람직하게는 DNA 또는 RNA 분자를 제공하며, 여기서 상기 DNA 또는 RNA 분자는 알파-시뉴클레인 유전자의 발현시 형성된 mRNA의 적어도 일부에 대해 상보적인 상보성 영역을 포함하는 안티센스 쇄를 포함한다. 상기에서, 상보성 영역은 일반적으로 길이가 30개 뉴클레오티드 미만, 일반적으로 길이가 19 내지 24개 뉴클레오티드이고, 상기 안티센스 DNA 또는 RNA를 상기 알파-시뉴클레인 유전자를 발현하는 세포와 접촉시키면 상기 알파-시뉴클레인 유전자의 발현이 예컨대 40% 이상 억제된다. 본 발명의 한 구현예에서, 이중쇄 RNA(이하, "dsRNA"라 함)는 교잡되어 듀플렉스 구조를 형성하기에 충분히 상보적인 2개의 RNA 쇄를 포함한다. dsRNA의 하나의 쇄(안티센스 쇄)는 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 동안 형성된 mRNA 서열로부터 유래된 표적 서열에 대해 실질적으로 상보적이며, 일반적으로 완전히 상보적인 영역을 포함한다. 다른 쇄(센스 쇄)는 안티센스 쇄에 대해 상보적인 영역을 포함함으로써, 2개의 쇄는 적당한 조건 하에서 배합되는 경우 하이브리드화되어 듀플렉스 구조를 형성한다. 일반적으로, 듀플렉스 구조는 길이가 15 내지 30개, 보다 일반적으로 18 내지 25개, 보다 더 일반적으로 19 내지 24개, 가장 일반적으로 19 내지 21개 염기쌍이다. 이와 유사하게, 표적 서열에 대한 상보성 영역은 길이가 15 내지 30, 보다 일반적으로 18 내지 25, 보다 더 일반적으로 19 내지 24, 가장 일반적으로 19 내지 21개 뉴클레오티드이다. 본 발명의 dsRNA는 하나 이상의 일본쇄 뉴클레오티드 오버행(들)을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하는 물질, 바람직하게는 핵산, 보다 바람직하게는 DNA 또는 RNA 분자는 표적 서열에 대해 하나 이상의 미스매치를 함유할 수 있다. 한 바람직한 구현예에서, 상기 DNA 또는 RNA는 3개 이하의 미스매치를 함유한다. 본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 상기 DNA 또는 RNA를 화학적으로 변형시켜 안정성을 향상시킨다. 제공된 화합물 내의 모든 위치를 균일하게 변형시킬 필요는 없으며, 실제로는 앞서 언급한 변형 중 하나 이상을 DNA 또는 RNA 내의 단일 화합물 또는 심지어 단일 뉴클레오사이드에 혼입시킬 수 있다.

본 발명의 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하는 물질, 바람직하게는 DNA 또는 RNA 분자는 세포내에서 재조합 바이러스 벡터로부터 발현될 수도 있다. 상기 재조합 바이러스 벡터는 본 발명의 DNA 또는 RNA를 암호화하는 서열 및 상기 DNA 또는 RNA 서열을 발현시키는데 적합한 임의의 프로모터를 포함한다. 적합한 프로모터에는, 예를 들면, U6 또는 H1 RNA pol Ⅲ 프로모터 서열 및 사이토메갈로바이러스 프로모터가 포함된다. 또한, 본 발명의 재조합 바이러스 벡터는 특정 조 직 또는 특정 세포내 환경에서의 상기 DNA 또는 RNA를 발현시키기 위한 유도성 또는 조절성 프로모터를 포함할 수도 있다. 본 발명에 있어서, 발현될 DNA 또는 RNA 분자(들)에 대한 암호화 서열을 수용할 수 있는 임의의 바이러스 벡터로는 특별히 한정되지 않으며, 예를 들면 아데노바이러스(AV); 아데노-관련 바이러스(AAV); 레트로바이러스(예: 렌티바이러스(LV), 라브도바이러스, 쥐 백혈병 바이러스); 헤르페스 바이러스 등을 사용할 수 있다.

본 발명에서 사용하기에 적합한 재조합 바이러스 벡터의 선택, 상기 DNA 또는 RNA 발현용 핵산 서열을 벡터 내로 삽입시키는 방법, 및 바이러스 벡터를 목적한 세포로 전달하는 방법은 당업계의 기술 범위 내에 있다. 바람직한 바이러스 벡터는 AV 및 AAV로부터 유래된 것들이다. 본 발명의 DNA 또는 RNA를 발현시키기에 적합한 AV 벡터, 재조합 AV 벡터를 작제하는 방법, 및 당해 벡터를 표적 세포 속으로 전달하는 방법은 종래 문헌에 기술되어 있다(Xia H et al., Nat. Biotech., 2002, 20: 1006-1010 참조).

또한, 본 발명은 상기에서 기술된 바와 같은 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질, 바람직하게는 DNA 또는 RNA 분자 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 피부 미백용 약학적 조성물을 제공한다. 이러한 약학적 조성물은 전달 방식을 기준으로 제형화된다. 한 예로는 비경구 전달을 통한 전신 투여용으로 제형화된 조성물이 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하는데 충분한 용량으로 투여된다. 일반적으로, dsRNA의 적합한 투여량은 하루에 수용자의 체중 ㎏당 0.01 내지 5.0 ㎎의 범위, 일반적으로 하루에 체중 ㎏당 1 ㎍ 내지 1 ㎎의 범위일 것이다. 약학적 조성물은 하루에 1회 투여되거나, 또는 dsRNA는 하루에 2회, 3회 이상의 소용량으로 적절한 간격으로, 또는 제어 방출 제형을 통한 연속 주입 또는 전달도 사용하여 투여할 수 있다. 이러한 경우, 각각의 소용량에 함유된 dsRNA는 총 1일 용량이 달성되도록 상응하게 더 작아야 한다. 용량 단위는, 예를 들면, 수일 동안에 걸쳐 dsRNA의 지속적인 방출을 제공하는 통상적인 서방성 제형을 사용하여, 수일에 걸쳐 전달되도록 복합될 수 있다. 서방성 제형은 당업계에 익히 공지되어 있고, 본 발명의 제제와 함께 사용될 수 있는 바와 같이 특정 부위에 제제를 전달하는데 특히 유용하다.

또한, 본 발명은 본 발명의 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질, 바람직하게는 상기 알파-시뉴클레인 유전자 또는 그의 mRNA에 상보적으로 결합하는 핵산 분자를 포함하는 약학적 조성물 및 제형을 포함한다. 본 발명의 약학적 조성물은 국소 또는 전신 치료가 바람직한지에 따라, 그리고 치료되는 부위에 따라 다양한 방법으로 투여될 수 있다. 투여는 국소 투여, 폐 투여, 예를 들면, 분무기에 의한 투여를 포함하는 분말 또는 에어로졸의 흡입 또는 통기에 의한 폐 투여; 기관내, 비강내, 상피 및 경피, 경구 또는 비경구 투여일 수 있다. 비경구 투여에는 정맥내, 동맥내, 피하, 복강내 또는 근육내 주사 또는 주입; 또는 두개내, 예를 들면, 경막내 또는 뇌실내 투여가 포함된다.

국소 투여용의 약학적 조성물 및 제형에는 경피 패치제, 연고제, 로션제, 크림제, 겔제, 점적제, 좌제, 분무제, 용액제 및 산제가 포함될 수 있다. 통상적인 약학적 담체, 수성, 분말 또는 유성 기제, 증점제 등이 요구될 수 있다. 바람직한 국소 제형에는 본 발명의 DNA 또는 RNA가 지질, 리포좀, 지방산, 지방산 에스테르, 스테로이드, 킬레이트제 및 계면활성제와 같은 국소 전달제와 혼합된 제형이 포함된다. 바람직한 지질 및 리포좀에는 중성(예: 디올레오일포스파티딜 DOPE 에탄올아민, 디미리스토일포스파티딜 콜린 DMPC, 디스테아로일포스파티딜 콜린), 음성(예: 디미리스토일포스파티딜 글리세롤 DMPG) 및 양이온성(예: 디올레오일테트라메틸아미노프로필 DOTAP 및 디올레오일포스파티딜 에탄올아민 DOTMA)이 포함된다. 본 발명의 DNA 또는 RNA는 리포좀 내에 캡슐화되거나, 또는 이에 대해, 특히 양이온성 리포좀에 대해 착화될 수 있다. 또는, dsRNA는 지질, 특히 양이온성 지질과 착화될 수 있다. 바람직한 지방산 및 에스테르에는 아라키돈산, 올레산, 에이코사노산, 라우르산, 카프릴산, 카프르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 리놀산, 리놀렌산, 디카프레이트, 트리카프레이트, 모노올레인, 딜라우린, 글리세릴 1-모노카프레이트, 1-도데실아자사이클로헵탄-2-온, 아크릴카르니틴, 아실콜린 또는 C_1-10 알킬 에스테르(예: 이소프로필미리스테이트 IPM), 모노글리세라이드, 디글리세라이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 포함되지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

경구 투여용 조성물 및 제형에는 산제 또는 과립제, 미립제, 나노미립제, 물 또는 비-수성 매질 중의 현탁액제 또는 용액제, 캡슐제, 겔 캡슐제, 사세제(sachet), 정제 또는 미니정제(minitablet)가 포함된다. 증점제, 풍미제, 희석제, 유화제, 분산 보조제 또는 결합제가 바람직할 수 있다. 바람직한 경구 제형 은, 본 발명의 DNA 또는 RNA가 하나 이상의 침투 향상제, 계면활성제 및 킬레이트제와 함께 투여되는 것들이다. 또한, 본 발명의 DNA 또는 RNA는 분무 건조된 입자를 포함하는 과립 형태로 경구 전달되거나, 또는 착화되어 마이크로입자 또는 나노입자를 형성할 수 있다. 비경구, 수막내, 뇌실내 또는 간내 투여용 조성물 및 제형에는 완충제, 희석제 및 침투 향상제, 담체 화합물 및 기타 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 기타 적합한 첨가제를 함유할 수도 있는 멸균 수용액이 포함될 수 있다.

또한, 본 발명의 약학적 조성물에는 용액, 에멀젼 및 리포좀-함유 제형이 포함되지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 이들 조성물은 예비형성된 액체, 자가-유화성 고체 및 자가-유화성 반고체가 포함되지만, 이에 한정되지 않는 다양한 성분으로부터 생성될 수 있다. 단위 투여형으로 편리하게 제공될 수 있는 본 발명의 약학적 제형은 약제 산업에 익히 공지된 통상적인 기술에 따라 제조할 수 있다. 이러한 기술은 활성 성분을 약학적 담체(들) 또는 부형제(들)와 배합하는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 활성 성분을 액체 담체 또는 미분된 고체 담체 또는 이들 둘 모두를 균질하고 긴밀하게 배합하고 나서, 경우에 따라, 제품을 성형하여 제조한다. 또한, 본 발명의 조성물은 정제, 캡슐제, 겔 캡슐제, 액체 시럽제, 연질 겔제, 좌제 및 관장제와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 임의의 많은 가능한 투여형으로 제형화될 수 있다. 본 발명의 조성물은 또한 수성, 비-수성 또는 혼합 매질 중의 좌제로서 제형화될 수 있다. 수성 현탁액제는, 예를 들면, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 소르비톨 및/또는 덱스트란을 포함하는, 현탁액제의 점도를 증가시키는 물질을 추가로 함유할 수 있다.

본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 본 발명은 포유동물, 바람직하게는 인간에서 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하는 방법을 제공한다. 당해 방법은 본 발명의 조성물을 포유동물에게 투여함으로써 표적 알파-시뉴클레인 유전자의 발현이 사일런싱되게 되도록 하는 것을 포함한다. 높은 특이성으로 인하여, 본 발명의 DNA 또는 RNA는 표적 알파-시뉴클레인 유전자의 표적 RNA(1차 또는 프로세싱된 RNA)를 특이적으로 표적화할 수 있다.

또한, 본 발명은 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물에 있어서, 상기 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하는 물질, 바람직하게는 상기 알파-시뉴클레인 유전자 또는 그의 mRNA에 상보적으로 결합하는 핵산, 바람직하게는 DNA 또는 RNA는 조성물 총 중량에 대하여 0.005 내지 50 중량% 함유되는 것이 바람직하지만, 미백 효과가 있고 독성이 나타나지 않는 범위에서 사용 용도에 따라서 상기 범위 이상 또는 이하로도 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물은 상기 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하는 물질 이외에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물로 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화 장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물은 화장품 이외에도 피부 과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱(conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물은 상기 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고 상기의 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이 섀도 등의 제형을 포함한다.

본 발명의 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질을 포함하는 조성물은 피부 미백 활성이 있으면서 세포 독성은 없으므로, 피부 미백용 화장품 또는 피부 미백용 약학적 조성물 등의 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 피부 미백에 관여하는 유전자의 선별

백모와 흑모를 동시에 가진 노인 자원자 3명을 대상으로 모발을 채취한 후 마이크로어레이(microarray)를 통해 백모에 비해 흑모에서 2배 이상 증가한 유전자를 선별하였다. 구체적으로, 마이크로어레이와 그 밖의 RNA 관련 실험을 위해 최소 2 ㎍의 농도가 되도록 Trizol(Invitrogen)을 이용하여 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA를 서린바이오사이언스에 의뢰하여 Affymatrix Human U133 Plus 2.0(Total probe;54675)을 토대로 분석하였다. 그 결과, 흑모에서 발현이 증가한 유전자로 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 알파-시뉴클레인 단백질을 발굴하였다. 알파-시뉴클레인 단백질의 발현량은 흑모에서 299, 306, 223으로 나타났고, 백모에서는 128, 123, 156의 발현량로 나타났다(표 1).

실시예 2. qPCR을 통한 알파-시뉴클레인 유전자 발현의 정량 분석

다음으로, qPCR를 통해 백모 및 흑모에서의 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 정도를 확인하였다. 구체적으로, Trizol(Invitrogen)을 이용하여 총 RNA를 분리하였고, cDNA는 cDNA 합성 키트(Fermentas)를 사용하여 합성하였다. RTPCR은 10 pM의 서열번호 3 및 서열번호 4로 기재되는 염기서열을 갖는 센스 및 안티센스 프라이머를 이용하여 프리믹스(Premix, Bioneer)로 실행하였다. 이때, 열 사이클 프로필은 95℃에서 30초(변성), 60℃에서 30초(어닐링), 72℃에서 30초(연장)를 30회 사이클로 실시하였다. 또한, qPCR은 7500 Real time PCR system (Applied Biosystems)를 이용하여 실시하였다. 증폭은 SYBR Premix Ex Taq (TaKaRa)를 사용하여 수행하였으며, 작동 프로토콜은 95℃에서 2분(전변성), 95℃에서 15초(증폭 및 정량 프로그램), 60℃에서 1분(어닐링)으로 40회 사이클로 실시하였다.

그 결과, 상기 알파-시뉴클레인 유전자는 백모보다 흑모에서 그 발현량이 2.2배 증가한 것을 확인하였다(도 1).

실시예 3. UV 처리시의 알파-시뉴클레인 유전자 발현량 변화 조사

멜라노사이트(melanocytes)에 100 mJ/㎠의 UV를 처리하여 멜라닌 생성(melanogenesis)을 유도한 후, 알파-시뉴클레인 유전자의 발현량 변화를 상기 실시예 2와 동일하게 qPCR을 수행하여 확인하였다. 그 결과, 알파-시뉴클레인의 발현이 시간-의존적으로 증가하는 것을 확인하였다(도 2).

실시예 4. 알파-시뉴클레인 유전자의 발현과 멜라닌 생성과의 관계 조사

멜라닌 세포주인 B16F10 마우스 흑색종 세포에 대하여, 상기에서 발굴된 알파-시뉴클레인 유전자에 상보적인 siRNA를 처리해 낙-다운(knockdown)시킨 후, 세포의 변화를 확인하였다. 이를 위하여, B16F10 마우스 흑색종 세포는 37℃, 5% CO₂를 포함하는 배양기에서 10% FBS와 항생제가 첨가된 고 포도당 DMEM에서 배양한 후, 서열번호 5 및 서열번호 6으로 기재되는 염기서열을 갖는 알파-시뉴클레인의 siRNA(주식회사 바이오니아)를 처리하였다.

그 결과, 배지의 색이 연하게 변하였으며, 멜라닌 생성을 증가시키는 물질인 0.1 mM 이소부틸메틸크산틴(isobutylmethylxantine, IBMX)과 5 μM 포스콜린(forskolin)을 처리하여도 배지의 색이 연하게 변하였다(도 3).

실시예 5. 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 억제와 멜라닌 합성에 관여하는 유전자들의 발현량과의 관계 조사

다음으로, 멜라닌 합성에 관여하는 티로시나제 및 티로시나제-연관 단백질 1의 mRNA 및 단백질 발현량의 변화를 관찰하였다. 이를 위하여, 상기 실시예 4와 동일하게 알파-시뉴클레인 유전자에 대한 siRNA를 처리한 후 qPCR 및 웨스턴 블롯(Western blot) 분석을 수행하였다. 상기 qPCR은 프라이머로 서열번호 7 및 서열번호 8로 기재되는 염기서열을 갖는 마우스 알파-시뉴클레인 유전자용 프라이머를 사용한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일하게 수행하였다. 또한, 웨스턴 블롯 분석은 세포를 PBS (Phosphate-buffered Saline)로 2회 세척한 후, 용해 버퍼(20 mM TrisHCl, 1 mM EGTA, 1 mM EDTA, 10 mM NaCl, 0.1 mM PMSF, 1 mM Na₃VO₄(Sodium Vanadate), 30 mM 나트륨 피로포스페이트, 25 mM β글리세롤 포스페이트 및 1% 트리톤 X100, pH7.4)를 이용하여 세포 용해물을 용해하였다. 이렇게 준비된 시료를 12% SDSPAGE 겔에 동량을 로딩(loading)하고 PVDF 막에 전달하였다. 막을 5% 탈지유로 블록한 후, 알파-시뉴클레인, 티로시나제 및 티로시나제-연관 단백질 1 및 액틴에 대한 1차 항체로 배양하고, 양고추냉이 퍼옥시다제(Horseradish peroxidase, HRP)결합 IgG 2차 항체로 배양한 후, 화학발광 웨스턴 블롯팅 시스템(ECL plus, Amersham Bioscience)을 이용하여 시각화하였다.

그 결과, 알파-시뉴클레인 유전자의 발현이 억제될 경우, 멜라닌 합성에 관여하는 티로시나제와 티로시나제-연관 단백질 1의 mRNA 레벨과 단백질 레벨이 모두 감소한 것을 확인하였다(도 4a 및 도 4b).

실시예 6. 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 억제와 세포 사멸과의 관계 조사

알파-시뉴클레인 유전자의 발현 억제 세포의 사멸을 일으키는지 여부를 확인하기 위하여, 실시예 4의 방법에 따라 B16F10 마우스 흑색종 세포에 알파-시뉴클레인 유전자의 siRNA를 도입한 후, MTT 분석 및 유세포 분석을 수행하였다. 먼저, MTT 분석은 세포를 PBS로 2회 세척한 후, 100 ㎕ MTT (0.5 ㎎/㎖)을 첨가하고 37℃에서 2시간 배양하였다. 살아있는 세포에 의해 생성된 포르마잔 과립(formazan granule)을 100 ㎕ DMSO (dimethylsulfoxide)에 용해시킨 후, 570 nm 파장에서 마이크로플레이트 분광광도계를 이용하여 분석하였다. 또한, 유세포 분석은 세포에 트립신을 처리하여 수확한 후 차가운 PBS로 1회 세척하고, 0.5% 트윈-20이 포함된 70% 에탄올에 고정하여 4℃에서 밤새 방치하였다. 고정한 세포를 차가운 PBS로 1회 세척한 후, 50 ㎍/㎖ 프로피움 아이오다이드(propidum iodide, PI), 0.1 ㎎/㎖ RNase A 용액으로 혼합하여 37℃에서 30분간 배양하였다. 이후, PI를 섭취한 세포를 유세포분석기(Beckman Coulter)를 이용하여 분석하였다.

그 결과, 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하여도 세포 사멸에는 영향을 미치지 않음을 확인하였다(도 5).

실시예 7. 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 증가와 멜라닌 합성에 관여하는 유전자들의 발현량과의 관계 조사

Lipofectamine 2000(Invitrogen)을 이용하여 제조사의 지침에 따라 알파-시뉴클레인 유전자를 포함하는 플라스미드(서울대학교 의과대학 약리학교실 서유헌 교수로부터 제공받음)를 B16F10 세포에 일시 전달감염(transient transfection)시켜 상기 세포 내에서 알파-시뉴클레인 유전자를 과발현시켰다. 이후, 프라이머로 티로시나제의 경우에는 서열번호 9 및 서열번호 10로 기재되는 염기서열쌍을, 티로시나제-연관 단백질 1의 경우에는 서열번호 11 및 서열번호 12로 기재되는 염기서열쌍을 사용한 것을 제외하고는 상기 실시예 5와 동일한 방법으로 qPCR을 수행하여 티로시나제 및 티로시나제-연관 단백질 1의 mRNA 발현량을 조사하였다.

그 결과, 알파-시뉴클레인 단백질의 과발현에 의해 티로시나제 및 티로시나제-연관 단백질 1의 mRNA 레벨이 증가된 것을 확인하였다(도 6).

도 1은 백모보다 흑모에서 알파-시뉴클레인 유전자의 발현량이 증가된 것을 보여주는 그래프이다.

도 2는 멜라닌 세포주에 UV 처리시 알파-시뉴클레인 유전자의 발현이 시간-의존적으로 증가하는 것을 보여주는 그래프이다.

도 3은 멜라닌 세포주에 알파-시뉴클레인 유전자를 낙-다운시킴으로써 배지의 색이 연하게 변하는 것을 보여주는 사진으로서, IBMX는 이소부틸메틸크산틴, FORS는 포스콜린을 나타낸다.

도 4a는 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 억제와 멜라닌 합성에 관여하는 유전자들의 발현량의 상관관계를 보여주는 것으로서, 알파-시뉴클레인 유전자의 siRNA 처리에 따른 알파-시뉴클레인 mRNA의 발현량(A), 티로시나제 mRNA의 발현량(B) 및 티로시나제-연관 mRNA의 발현량(C)을 나타내는 것으로서, SNCA는 알파-시뉴클레인 유전자, GAPDH는 대조군인 글리세르알데히드-3-포스페이트 디히드로게나제(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)를 나타낸다.

도 4b는 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 억제와 멜라닌 합성에 관여하는 단백질들의 상관관계를 보여주는 것는 웨스턴 블롯 사진으로서, TYR은 티로시나제, TRP-1은 티로시나제-연관 단백질 1을 나타낸다.

도 5는 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 억제와 세포 사멸과의 상관관계를 보여주는 것으로서, MTT 분석 결과(A) 및 유세포분석 결과(B)를 나타낸다.

도 6은 알파-시뉴클레인 유전자의 과발현과 멜라닌 합성에 관여하는 유전자 들의 발현량의 상관관계를 보여주는 것으로서, 알파-시뉴클레인 유전자의 일시 전달감염에 따른 알파-시뉴클레인 mRNA의 발현량(A), 티로시나제 mRNA의 발현량(B) 및 티로시나제-연관 mRNA의 발현량(C)을 나타낸다.

<110> SNU R&DB FOUNDATION <120> Composition for Skin Whitening Comprising Inhibitor of the Expression of Alpha-Synuclein Gene <130> 2009-dpa-0011 <160> 12 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 140 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Asp Val Phe Met Lys Gly Leu Ser Lys Ala Lys Glu Gly Val Val 1 5 10 15 Ala Ala Ala Glu Lys Thr Lys Gln Gly Val Ala Glu Ala Ala Gly Lys 20 25 30 Thr Lys Glu Gly Val Leu Tyr Val Gly Ser Lys Thr Lys Glu Gly Val 35 40 45 Val His Gly Val Ala Thr Val Ala Glu Lys Thr Lys Glu Gln Val Thr 50 55 60 Asn Val Gly Gly Ala Val Val Thr Gly Val Thr Ala Val Ala Gln Lys 65 70 75 80 Thr Val Glu Gly Ala Gly Ser Ile Ala Ala Ala Thr Gly Phe Val Lys 85 90 95 Lys Asp Gln Leu Gly Lys Asn Glu Glu Gly Ala Pro Gln Glu Gly Ile 100 105 110 Leu Glu Asp Met Pro Val Asp Pro Asp Asn Glu Ala Tyr Glu Met Pro 115 120 125 Ser Glu Glu Gly Tyr Gln Asp Tyr Glu Pro Glu Ala 130 135 140 <210> 2 <211> 1543 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 ggagtggcca ttcgacgaca gtgtggtgta aaggaattca ttagccatgg atgtattcat 60 gaaaggactt tcaaaggcca aggagggagt tgtggctgct gctgagaaaa ccaaacaggg 120 tgtggcagaa gcagcaggaa agacaaaaga gggtgttctc tatgtaggct ccaaaaccaa 180 ggagggagtg gtgcatggtg tggcaacagt ggctgagaag accaaagagc aagtgacaaa 240 tgttggagga gcagtggtga cgggtgtgac agcagtagcc cagaagacag tggagggagc 300 agggagcatt gcagcagcca ctggctttgt caaaaaggac cagttgggca agaatgaaga 360 aggagcccca caggaaggaa ttctggaaga tatgcctgtg gatcctgaca atgaggctta 420 tgaaatgcct tctgaggaag ggtatcaaga ctacgaacct gaagcctaag aaatatcttt 480 gctcccagtt tcttgagatc tgctgacaga tgttccatcc tgtacaagtg ctcagttcca 540 atgtgcccag tcatgacatt tctcaaagtt tttacagtgt atctcgaagt cttccatcag 600 cagtgattga agtatctgta cctgccccca ctcagcattt cggtgcttcc ctttcactga 660 agtgaataca tggtagcagg gtctttgtgt gctgtggatt ttgtggcttc aatctacgat 720 gttaaaacaa attaaaaaca cctaagtgac taccacttat ttctaaatcc tcactatttt 780 tttgttgctg ttgttcagaa gttgttagtg atttgctatc atatattata agatttttag 840 gtgtctttta atgatactgt ctaagaataa tgacgtattg tgaaatttgt taatatatat 900 aatacttaaa aatatgtgag catgaaacta tgcacctata aatactaaat atgaaatttt 960 accattttgc gatgtgtttt attcacttgt gtttgtatat aaatggtgag aattaaaata 1020 aaacgttatc tcattgcaaa aatattttat ttttatccca tctcacttta ataataaaaa 1080 tcatgcttat aagcaacatg aattaagaac tgacacaaag gacaaaaata taaagttatt 1140 aatagccatt tgaagaagga ggaattttag aagaggtaga gaaaatggaa cattaaccct 1200 acactcggaa ttccctgaag caacactgcc agaagtgtgt tttggtatgc actggttcct 1260 taagtggctg tgattaatta ttgaaagtgg ggtgttgaag accccaacta ctattgtaga 1320 gtggtctatt tctcccttca atcctgtcaa tgtttgcttt atgtattttg gggaactgtt 1380 gtttgatgtg tatgtgttta taattgttat acatttttaa ttgagccttt tattaacata 1440 tattgttatt tttgtctcga aataattttt tagttaaaat ctattttgtc tgatattggt 1500 gtgaatgctg tacctttctg acaataaata atattcgacc atg 1543 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer for human alpha-synuclein gene <400> 3 aaaaccaagg agggagtggt 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for human alpha-synuclein gene <400> 4 cccaactggt cctttttgac 20 <210> 5 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> mouse alpha-synuclein siRNA sense strand <400> 5 gcuuugucaa gaaggacca 19 <210> 6 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> mouse alpha-synuclein siRNA antisense strand <400> 6 ugguccuucu ugacaaagc 19 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer for mouse alpha-synuclein gene <400> 7 aggcagctgg aaagacaaaa 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for mouse alpha-synuclein gene <400> 8 cagctccctc cactgtcttc 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer for tyrosinase gene <400> 9 cctcctggca gatcatttgt 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for tyrosinase gene <400> 10 ggcaaatcct tccagtgtgt 20 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer for tyrosinase-related protein 1 gene <400> 11 acatgcaggt cgggagttta 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for tyrosinase-related protein 1 gene <400> 12 tcagtgagga gaggctggtt 20

Claims (18)

1. 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질을 포함하는 피부 미백용 조성물.
2. 청구항 1에 있어서,

   상기 조성물은 피부 미백용 약학적 조성물 또는 피부 미백용 화장료 조성물의 형태인 것을 특징으로 하는 조성물.
3. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,

   상기 알파-시뉴클레인 유전자는 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 알파-시뉴클레인 단백질을 코딩하는 것을 특징으로 하는 조성물.
4. 청구항 3에 있어서,

   상기 알파-시뉴클레인 유전자는 서열번호 2로 기재되는 염기서열을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
5. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,

   상기 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질은 알파-시뉴클레인 유전자 또는 그의 mRNA에 상보적으로 결합하는 핵산인 것을 특징으로 하 는 조성물.
6. 청구항 5에 있어서,

   상기 핵산은 DNA 또는 RNA인 것을 특징으로 하는 조성물.
7. 청구항 6에 있어서,

   상기 핵산은 이중쇄 구조 또는 단일쇄 구조인 것을 특징으로 하는 조성물.
8. 청구항 6 또는 청구항 7에 있어서,

   상기 핵산은 길이가 19 내지 30개 뉴클레오티드인 것을 특징으로 하는 조성물.
9. 청구항 6 또는 청구항 7에 있어서,

   상기 핵산은 알파-시뉴클레인 유전자 또는 그의 mRNA에 대해 1개 내지 3개의 미스매치를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
10. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,

    상기 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질은 알파-시뉴클레인 단백질의 활성을 억제하는 물질인 것을 특징으로 하는 조성물.
11. 청구항 10에 있어서,

    상기 알파-시뉴클레인 단백질의 활성을 억제시키는 물질은 상기 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 상기 항체의 절편인 것을 특징으로 하는 조성물.
12. 청구항 11에 있어서,

    상기 항체는 단일클론항체인 것을 특징으로 하는 조성물.
13. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,

    상기 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질은 상기 알파-시뉴클레인 유전자의 발현을 억제하거나, 발현된 알파-시뉴클레인 단백질의 활성을 억제하는 천연 또는 합성 화합물인 것을 특징으로 하는 조성물.
14. 청구항 2에 있어서,

    상기 피부 미백용 약학적 조성물은 알파-시뉴클레인 유전자의 발현 또는 작용을 억제하는 물질 이외에 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
15. 청구항 14에 있어서,

    상기 약학적으로 허용되는 담체는 염수, 완충염수, 덱스트로스, 물, 글리세롤, 에탄올 및 이들의 배합물로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
16. 청구항 2에 있어서,

    상기 피부 미백용 화장료 조성물은 유화 제형 또는 가용화 제형의 형태인 것을 특징으로 하는 조성물.
17. 청구항 16에 있어서,

    상기 유화 제형의 화장품은 영양화장수, 크림 및 에센스로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
18. 청구항 16에 있어서,

    상기 가용화 제형의 화장품은 유연화장수인 것을 특징으로 하는 조성물.

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